BR112019022106A2 - método e composição para melhorar a aquisição de nutriente de plantas - Google Patents

Abstract

a presente invenção refere-se a um método para melhorar a nutrição de plantas com um ou mais minerais, compreendendo a administração de pelo menos uma fonte de amônio a, pelo menos uma espécie de bactéria ou fúngica com propriedades de solubilização de fosfato e/ou promoção do crescimento da raiz, e pelo menos um inibidor de nitrificação c a um substrato s no qual as plantas são cultivadas ou destinadas ao cultivo. além disso, a presente invenção refere-se a uma composição e um kit utilizáveis para este propósito.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para MÉTODO E COMPOSIÇÃO PARA MELHORAR A AQUISIÇÃO DE NUTRIENTE DE PLANTAS.

[0001] A presente invenção refere-se a um método para melhorar a nutrição de plantas com um ou mais minerais, compreendendo a administração de pelo menos uma fonte de amônio A, pelo menos uma bactéria ou espécie fúngica B com propriedades de solubilização de fosfato e/ou promotoras de crescimento de raiz e pelo menos um inibidor de nitrificação C em um substrato S no qual as plantas são cultivadas ou se destinam a ser cultivadas. Além disso, a presente invenção refere-se a uma composição e um kit utilizável para este propósito. [0002] Desde muito mais de cem anos, é habitualmente sabido que as plantas necessitam de certas quantidades de minerais (também designadas como traços de minerais ou nutrientes vegetais) para o seu crescimento e manutenção da sua saúde. De acordo com a Lei do Mínimo, estabelecida por Justus von Liebig, o crescimento das plantas é limitado pelo mineral mais escasso, e não pela quantidade total de recursos minerais disponíveis. Por conseguinte, um solo de uso agrícola no qual as plantas de interesse são cultivadas ou se destinam a ser cultivadas deve conter quantidades suficientes de todos os minerais requeridos pelas plantas de interesse. Cultivar culturas por um maior período de tempo esgota o solo de vários minerais. Qualquer escassez de um único mineral envolvido no crescimento das plantas de forma acessível às plantas limita o crescimento das plantas e, portanto, diminui a colheita obtenível.

[0003] Consequentemente, a agricultura normalmente envolve e frequentemente requer fertilização. Tradicionalmente, os sais de nitrogênio e fosfato estão entre os fatores mais limitantes na maioria dos solos. Portanto, os fertilizantes com base em nitrogênio são amplamente utilizados, os quais podem ser com base em fertilizantes sintéti

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2/80 cos, como sais de amônio ou nitrato, ou resíduos orgânicos, como esterco, composto, lodo de limpeza, resíduo úmido de repouso de uma usina de biogás ou similar.

[0004] Quando fertilizando plantas com quantidades suficientes desses fertilizantes com base em nitrogênio, tipicamente pelo menos algum outro mineral se torna o fator limitante, tal como frequentemente fósforo (P, geralmente fosfato), ferro (Fe), zinco (Zn) e/ou manganês (Μη). A falta desses minerais na forma de uma planta disponível é um problema muito difundido para muitas culturas.

[0005] Ao contrário do nitrogênio, o teor total desses minerais no solo é frequentemente teoricamente suficiente. Entretanto, a grande maioria desses minerais está presente no solo em uma forma não acessível pelas plantas, tal como na forma de rochas pouco solúveis ou essencialmente insolúveis. Portanto, frequentemente há escassez de minerais acessíveis fósforo (tipicamente fosfato), ferro, zinco e/ou manganês em solos de uso agrícola. Tradicionalmente, essa escassez é compensada suplementando-se as plantas não apenas com fertilizantes com base em nitrogênio, porém também com fertilizantes que compreendem tais sais bem solúveis desses minerais (por exemplo, por aplicação foliar ou no solo).

[0006] Entretanto, particularmente para fertilização com fosfato, forte fixação nos solos em combinação com o baixo potencial de aquisição de muitas culturas, limita a eficiência atual de uso de fertilizantes de fosfato a aproximadamente 20%, associada a um alto risco de super fertilização não sustentável e ecologicamente problemática. Evidentemente, isso traz várias desvantagens significativas. Primeiro, a produção de tais sais requer quantidades significativas de recursos naturais, energéticos e econômicos. Além disso, a adição de sais mais bem solúveis desses minerais ao solo geralmente leva à rápida lixiviação desses sais do solo. Alternativamente, dependendo dos contra

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3/80 ions presentes no solo, a adição de sais mais bem solúveis desses minerais também pode levar à rápida formação de sais pouco solúveis ou essencialmente insolúveis. Nos dois casos, a eficácia a longo prazo da fertilização é bastante pobre.

[0007] Está bem documentado que as comunidades microbianas do solo compreendem populações com efeitos tanto benéficos, quanto inibitórios, sobre o cultivo de planta. Muitos micro-organismos benéficos são capazes de aumentar a disponibilidade de nutrientes minerais das plantas por mobilização química ou por estimulação do crescimento radicular, enquanto outros são eficazes na supressão de patógenos. Tentativas de suplementar solos com quantidades adicionais de microorganismos promotores de crescimento de plantas mostraram alguma atividade benéfica. Entretanto, o sucesso foi limitado, uma vez que as condições que promovem o estabelecimento bem-sucedido dessas populações não são bem entendidas e obviamente afetadas por muitos fatores externos.

[0008] Em vista do exposto, existe ainda uma necessidade de métodos eficazes e sustentáveis de melhorar a nutrição de plantas de interesse com minerais de solubilidade limitada, tais como o fósforo (tipicamente fosfato), ferro, zinco e/ou manganês, porém também para aumentar a eficiência de uso geral de fertilizantes, preferivelmente reduzindo a necessidade de adição de sais solúveis desses minerais.

[0009] Surpreendentemente, verificou-se que a suplementação combinada de uma fonte de amônio, uma espécie bacteriana e/ou fúngica que promove o crescimento radicular e/ou mobilização de fosfatos, e um inibidor da nitrificação frequentemente leva à melhora desejada na mobilização de minerais com solubilidade limitada e devido à promoção do crescimento radicular adicionalmente aumentaram a eficiência da aquisição de nutrientes em geral.

[0010] Por conseguinte, um primeiro aspecto da invenção refere

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4/80 se a um método para melhorar a nutrição de plantas com um ou mais minerais moderadamente solúveis selecionados do grupo que consiste em fósforo, ferro, zinco e manganês, o referido método compreendendo as seguintes etapas:

(i) fornecer os seguintes componentes:

(A) pelo menos uma fonte de amônio A (componente A), em que pelo menos 50% em mol do teor total de nitrogênio de A está presente como amônio e/ou nitrogênio organicamente ligado, (B) pelo menos uma bactéria ou espécie fúngica B com propriedades de solubilização de fosfato e/ou promotoras de crescimento radicular (componente B), em que B não faz parte de A, e (C) pelo menos um inibidor de nitrificação C (componente C);

ii) aplicação dos componentes A, B e C a um substrato S de uso agrícola no qual as plantas são cultivadas ou se destinam a ser cultivadas; e (iii) possibilitando o crescimento das plantas no substrato S obtido da etapa (ii).

[0011] O método de acordo com a presente invenção possibilita melhorar a nutrição das plantas sem a necessidade de aplicar o substrato S com sais solúveis dos minerais (moderadamente solúveis), tais como minerais selecionados do grupo que consiste em fósforo (tipicamente fosfato), ferro, zinco e manganês. Por conseguinte, o método preferivelmente não compreende uma etapa de adição de tais sais solúveis ao substrato S. Em uma modalidade preferida, o substrato S não é suplementado com sais solúveis dos minerais (pouco solúveis), tais como minerais selecionados do grupo que consiste de fósforo (tipicamente fosfato), ferro, zinco e manganês. Desse modo, em uma modalidade preferida, o substrato S não é suplementado com (quantidades consideráveis, isto é, mais do que traços de) sais solúveis de

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5/80 fósforo (tipicamente fosfato). A pessoa versada na técnica notará que os componentes tipicamente podem compreender traços de fósforo (tipicamente fosfato). Em outras palavras, de preferência, os componentes A, B e C, como aqui descrito, não são essencialmente fornecidos em combinação com um mineral selecionado do grupo que consiste em fósforo (tipicamente fosfato), ferro, zinco e manganês, em particular não são essencialmente fornecidos em combinação com fósforo (tipicamente fosfato). Em uma modalidade preferida, os componentes A, B e C não são (essencialmente) fornecidos em combinação com tais sais na forma sólida e/ou de origem sintética.

[0012] Em uma modalidade preferida, a quantidade de fósforo (por exemplo, presente como fosfato) fornecida ao substrato S é inferior a 10% em peso (p/p), com base na soma do peso dos componentes A, B e C fornecidos em um substrato S dentro de um mês, uma semana ou um mês a partir do momento em que os componentes A, B e C são fornecidos ao substrato A. Em uma modalidade preferida, a quantidade de fósforo fornecida ao substrato S é inferior a 5% ( p/p), preferivelmente abaixo de 1% (p/p) ou abaixo de 0,1% (p/p), com base na soma do peso dos componentes A, B e C fornecidos em um substrato S dentro de uma semana a partir do momento de fornecimento dos componentes A, B e C ao substrato A.

[0013] Quando aqui usado, o termo moderadamente solúvel pode ser entendido no sentido mais amplo como não sendo bem solúvel em água. Tipicamente, um mineral moderadamente solúvel será entendido como um sal ou complexo com uma solubilidade em água de <0,1 g por litro, preferivelmente não superior a 100 mg por litro, mais preferivelmente não superior a 10 mg por litro, em particular não superior a 10 mg por litro (à temperatura ambiente de 20°C). Nas soluções do solo, moderadamente solúvel geralmente significa uma solubilidade não superior a 1 mg por litro, mesmo em solos bem fertilizados.

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6/80 [0014] O método de acordo com a presente invenção também consegue melhorar a efetividade das bactérias ou espécies fúngicas B. Por outras palavras, as bactérias ou espécies fúngicas B (também designadas como bioestimulantes) são fomentadas (isto é, promovidas) por meio da aplicação em combinação das mesmas em combinação com pelo menos uma fonte de amônio A e pelo menos um inibidor de nitrificação C. Verificou-se que essas bactérias ou espécies fúngicas B são capazes de converter sais minerais essencialmente inacessíveis (tal como sais de fósforo pouco acessíveis (tipicamente fosfato), ferro, zinco e/ou manganês) aos seus contrapartes, que são acessíveis pelas plantas. Desse modo, as bactérias e/ou o fungo B são, em princípio, capazes de mobilizar os respectivos minerais. Surpreendentemente, descobriu-se que as bactérias são particularmente eficazes quando trabalhando em combinação com os componentes A e C.

[0015] O método de acordo com a presente invenção também consegue melhorar a efetividade da fertilização com uma fonte de amônio A e um inibidor de nitrificação C. Em outras palavras, a combinação dos componentes A e C é fomentada por meio da aplicação da mesma em combinação com bactérias ou espécies fúngicas B.

[0016] A pelo menos uma bactéria ou espécie fúngica B, de acordo com a presente invenção possui propriedades de solubilização de fosfato e/ou de promoção de crescimento radicular. Em outras palavras, o componente B pode compreender (ou consistir em) pelo menos uma bactéria ou espécie fúngica B com propriedades de solubilização de fosfato e/ou de promoção de crescimento radicular; e/ou pelo menos uma espécie fúngica B com propriedades de solubilização de fosfato e/ou promoção de crescimento radicular. Por exemplo, a pelo menos uma bactéria ou espécie fúngica B, de acordo com a invenção podem ser selecionada da lista que consiste em:

- uma espécie de bactéria com propriedades de solubilizaPetição 870190106782, de 22/10/2019, pág. 19/111

7/80 ção de fosfato;

- uma espécie de bactéria com propriedades de promoção de crescimento radicular;

- uma espécie de bactéria com propriedades de solubilização de fosfato e promotoras do crescimento radicular;

- uma mistura de duas, três, quatro, cinco ou mais espécies de bactérias, cada uma com propriedades de solubilização de fosfato e/ou promotoras de crescimento radicular;

- uma mistura de duas, três, quatro, cinco ou mais espécies de bactérias, cada uma com propriedades de solubilização de fosfato;

- uma mistura de duas, três, quatro, cinco ou mais espécies de bactérias, cada uma com propriedades de promoção de crescimento radicular;

- uma mistura de duas, três, quatro, cinco ou mais espécies de bactérias, cada uma com propriedades de solubilização do fosfato e de promoção do crescimento radicular; e propriedades de promoção de crescimento radicular;

- uma bactéria ou espécie fúngica B com propriedades de promoção do crescimento radicular;

- uma bactéria ou espécie fúngica B com propriedades de solubilização de fosfato e de promoção do crescimento radicular;

- uma espécie fúngica com propriedades de solubilização de fosfato;

- uma espécie fúngica com propriedades de promoção de crescimento radicular;

- uma espécie fúngica com propriedades de solubilização de fosfato e de promoção do crescimento radicular;

- uma mistura de duas, três, quatro, cinco ou mais espécies fúngicas, cada uma com propriedades de solubilização de fosfato e/ou de promoção do crescimento radicular;

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- uma mistura de duas, três, quatro, cinco ou mais espécies fúngicas, cada uma com propriedades de solubilização de fosfato;

- uma mistura de duas, três, quatro, cinco ou mais espécies fúngicas, cada uma com propriedades de promoção de crescimento radicular;

- uma mistura de duas, três, quatro, cinco ou mais espécies fúngicas, cada uma com propriedades de solubilização de fosfato e de promoção de crescimento radicular; e

- uma mistura de uma ou mais espécies de bactérias com uma ou mais espécies fúngicas, conforme descrito acima.

[0017] Quando usado aqui, promoção do crescimento radicular pode ser entendido no sentido mais amplo como qualquer método que estimula o crescimento radicular (rizoma). Além disso, considera-se que a nutrição com amônio pode promover a produção microbiana de auxinas como principal fator hormonal para indução do crescimento radicular. Uma variedade de bactérias e espécies fúngicas que promovem o crescimento radicular são bem conhecidas na arte.

[0018] Quando usado neste documento, solubilização P (solubilização de fosfato) pode ser entendida no sentido mais amplo, como tomando planta de fosfato (ânions) disponível, em outras palavras, possibilita que as plantas absorvam o fosfato do substrato S e melhorem a usabilidade das fontes de fosfato do substrato S para o crescimento da planta. Tipicamente, o fosfato de rocha presente em muitos solos não é solúvel em água e também não ou moderadamente disponível para plantas. Desse modo, o fosfato de rocha contém ânions fosfato presentes no substrato S, porém é ainda (essencialmente) inacessível e utilizável pelas plantas. As bactérias ou espécies fúngicas B de acordo com a presente invenção com propriedades de solubilização de fosfato tornam o fosfato disponível para as plantas. Tipicamente, a solubilização (isto é, mobilização) de fosfato ocorre diretamente em pro

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9/80 ximidade da rizosfera das plantas. Portanto, tipicamente, o fosfato solubilizado pelas bactérias e/ou fungos B é rapidamente absorvido pelas raízes das plantas.

[0019] Em uma modalidade altamente preferida, a pelo menos uma bactéria ou espécie fúngica B de acordo com a presente invenção possui propriedades de solubilização de fosfato.

[0020] Em uma modalidade particularmente preferida, a pelo menos uma bactéria ou espécie fúngica B de acordo com a presente invenção possui propriedades de solubilização de fosfato e de promoção de crescimento radicular.

[0021] Em uma modalidade preferida, o método da invenção é para melhorar a nutrição de plantas com fósforo (tipicamente fosfato). Alternativa ou adicionalmente, o método da invenção é para melhorar a nutrição de plantas com ferro. Alternativa ou adicionalmente, o método da invenção é para melhorar a nutrição de plantas com zinco. Alternativa ou adicionalmente, o método da invenção é para melhorar a nutrição de plantas com manganês. Em outra modalidade preferida, o método da invenção é para melhorar a nutrição de plantas com fósforo (tipicamente fosfato) e ferro. Em outra modalidade preferida, o método da invenção é para melhorar a nutrição de plantas com fósforo (tipicamente fosfato) e zinco. Em outra modalidade preferida, o método da invenção é para melhorar a nutrição de plantas com fósforo (tipicamente fosfato) e manganês. Em outra modalidade preferida, o método da invenção é para melhorar a nutrição de plantas com fósforo (tipicamente fosfato), ferro e zinco. Em outra modalidade preferida, o método da invenção é para melhorar a nutrição de plantas com fósforo (tipicamente fosfato), ferro e manganês. Em outra modalidade preferida, o método da invenção é para melhorar a nutrição de plantas com fósforo (tipicamente fosfato), zinco e manganês. Em uma modalidade particularmente preferida, o método da invenção é para melhorar a nutrição

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10/80 de plantas com fósforo (tipicamente fosfato), ferro, zinco e manganês. [0022] De acordo com a presente invenção, pelo menos uma bactéria ou espécie fúngica B não faz parte da fonte de amônio A, preferivelmente não faz parte de A ou substrato S (isto é, não faz parte de A ou S). Isso significa que o teor bacteriano e/ou fúngico opcionalmente presente de componente A é enriquecido/suplementado por pelo menos uma bactéria ou espécie fúngica B. Em outras palavras, o componente B não é inerentemente compreendido no componente A, porém é adicionado adicionalmente. Portanto, o componente A pode ou não compreender uma ou mais bactérias e/ou espécies fúngicas opcionalmente possuindo propriedades de solubilização de fosfato e/ou de promoção de crescimento radicular. Em qualquer caso, pelo menos uma (adicional) bactéria ou espécie fúngica B é fornecida ao substrato

S. Isso não exclui que os componentes A e B e opcionalmente C e opcionalmente outros componentes sejam pré-misturados antes de ser fornecidos ao substrato S. Se o componente A for, por exemplo, lodo de limpeza, resíduo úmido de repouso de uma usina de biogás ou uma mistura de dois ou mais dos mesmos, esse componente A tipicamente compreenderá bactérias e, opcionalmente, espécies fúngicas. No entanto, de acordo com a presente invenção, pelo menos uma bactéria ou espécie fúngica B adicional é adicionada.

[0023] Preferivelmente, uma quantidade de espécies B que não faz parte de A ou S é empregada no método da invenção.

[0024] Quando usados aqui, os termos mineral, sal mineral, nutriente, traço de mineral, nutriente vegetal e similares devem ser entendidos alternadamente no sentido mais amplo como qualquer entidade inorgânica (isto é, átomo, molécula ou, em particular, sal ou íon) compreendendo pelo menos um elemento quando refere-se a (isto é, fósforo (tipicamente fosfato), ferro, zinco e/ou manganês). Será entendido que o termo minerais no contexto de fósforo (tipicamente

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11/80 fosfato), ferro, zinco e manganês refere-se a qualquer tipo de sal mineral compreendendo um ou mais dos átomos mencionados acima. Tipicamente, estes átomos não são encontrados como elementos da natureza, porém de preferência como íons de ligação molecular. Por exemplo, um mineral fosforoso no contexto da presente invenção pode compreender ânions como fosfato (PO4^3-, HPO4^2- (também designado como fosfato de hidrogênio) ou H2PO⁴· (também designado como fosfato de di-hidrogênio)). Quando aqui usado, fosfato de hidrogênio e fosfato de di-hidrogênio também são considerados como fosfato(s). Mais tipicamente, 0 fosfato é PO4³·. O contraíon de tal ânion pode ser qualquer cátion. Opcionalmente, 0 mineral fosforoso também pode fazer parte de um complexo. Por exemplo, um mineral de ferro no contexto da presente invenção pode compreender cátions como Fe²⁺ ou Fe³⁺. O contraíon de tal cátion pode ser qualquer ânion. Opcionalmente, 0 mineral de ferro também pode fazer parte de um complexo. Mais tipicamente, 0 ferro está presente como a forma hidratada de óxido de ferro. Exemplarmente, um mineral de zinco no contexto da presente invenção pode compreender um cátion como Zn²⁺. O contra-íon de tal cátion pode ser qualquer ânion. Opcionalmente, 0 mineral de zinco também pode fazer parte de um complexo. Por exemplo, um mineral de manganês no contexto da presente invenção pode apresentar um estado de oxidação de 0, +1, +2, +3, +4, +5 +6 ou +7. O parceiro de ligação, parceiro de complexação ou contraíon de tal átomo ou cátion pode ser qualquer átomo, molécula ou cátion suficiente para esse propósito. Opcionalmente, 0 mineral de manganês também pode fazer parte de um complexo.

[0025] O termo melhorar a nutrição das plantas pode ser entendido no sentido mais amplo como melhorar a absorção do respectivo mineral. Isso também pode ser designado como fertilizar as plantas. Tipicamente, a melhora da nutrição leva a um melhor crescimento e/ou

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12/80 saúde da planta. Além disso, o teor do mineral na planta é preferivelmente aumentado.

[0026] A pessoa versada na técnica entenderá direta e inequivocamente o que se entende por termos (relativos) como melhorando, melhor ou aumentar no contexto da presente invenção. Estes termos referem-se à comparação de uma planta cultivada em um substrato S submetido ao método de acordo com a presente invenção com um substrato S* comparável (isto é, um (essencialmente) idêntico) não submetido ao método de acordo com a presente invenção, em que as plantas são cultivadas em ambos os solos S e S* em condições comparáveis (isto é, (essencialmente) as mesmas) obtidas após um dado tempo (idêntico). Desse modo, um crescimento mais forte da planta ou um maior teor de minerais significa uma melhora.

[0027] Crescimento da planta pode ser entendido no sentido mais amplo como altura da planta (por exemplo, em centímetros (cm)) obtida após um determinado tempo e/ou peso de biomassa (por exemplo, em gramas (g) ou quilogramas (kg)) após um determinado período de tempo e/ou diâmetro do caule (por exemplo, em milímetros (mm)) após um determinado período de tempo. Alternativamente, também a quantidade de culturas pode ser tomada como um parâmetro para determinar o crescimento da planta. Conteúdo de mineral pode opcionalmente ser fornecido em miligramas do mineral por quilograma de massa total da planta ou massa seca da planta (fornecido em massa mineral [mg]/massa seca total da planta [kg]).

[0028] Uma fonte de amônio A pode ser qualquer molécula ou composição molecular compreendendo íons de amônio (NH4⁺) ou compreendendo (ou consistindo em) compostos que servem como precursores para íons de amônio, tais como compostos que são tipicamente metabolizados (por exemplo, por bactérias) ou quimicamente transformados para íons de amônio, em particular nitrogênio organi

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13/80 camente ligado (em particular, grupos amino primários, grupos amino secundários e grupos amino terciários). Por exemplo, tais precursores podem ser selecionados do grupo que consiste em ureia, ácido úrico e amoníaco.

[0029] Como mencionado anteriormente, de acordo com a presente invenção, pelo menos 50% em mol (ou seja, > 50% da quantidade total de átomos de nitrogênio presentes na fonte de amônio A) está presente como a soma de amônio e/ou nitrogênio organicamente ligado. Em uma modalidade preferida, pelo menos 55% em mol, mais preferivelmente pelo menos 60% em mol, pelo menos 65% em mol, pelo menos 70% em mol ou mais de 75% em mol da quantidade total do nitrogênio de A está presente como amônio e nitrogênio organicamente ligado. De preferência, não mais de 50% em mol (ou seja, < 50% da quantidade total de átomos de nitrogênio presentes na fonte de amônio A), preferivelmente não mais que 45% em mol, mais preferivelmente não mais que 40% em mol, em particular não mais de 40% em mol ou menos, está presente como a soma de nitrato e nitrito.

[0030] Em uma modalidade preferida, a pelo menos uma fonte de amônio A é um fertilizante químico que compreende (ou consiste em) pelo menos um sal de amônio, esterco (esterco líquido ou sólido, em particular líquido), lodo de limpeza, resíduo úmido de uma usina de biogás ou uma mistura de dois ou mais dos mesmos.

[0031] Em uma modalidade mais preferida, a pelo menos uma fonte de amônio A é um fertilizante químico compreendendo (ou consistindo em) pelo menos um sal de amônio.

[0032] Em uma modalidade particularmente preferida, a pelo menos uma fonte de amônio A é um fertilizante químico que compreende (ou consiste em) sulfato de amônio.

[0033] Será entendido que os componentes A, B e C podem ser aplicados separadamente, um do outro, ou A e B podem ser pré

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14/80 misturados e C pode ser aplicado separadamente, ou A e C podem ser pré-misturados e B pode ser aplicado separadamente, ou B e C podem ser pré-misturados e A pode ser aplicado separadamente.

[0034] Por último, quando aplicados ao substrato S, os componentes A, B e C formarão inerentemente uma solução aquosa no substrato

S. Quando misturando os componentes em uma solução aquosa, ou seja, adicionando os componentes A, B e C à água (que é inicialmente neutra, ou seja, tem um pH de aproximadamente 7), a solução aquosa obtida pode ter características específicas, incluindo qualquer pH.

[0035] A pelo menos uma bactéria ou espécie fúngica B com propriedades de solubilização de fosfato e/ou de promoção de crescimento radicular pode ser qualquer bactéria ou espécie fúngica adequada para este propósito.

[0036] Em uma modalidade preferida, a pelo menos uma espécie de bactéria e espécie fúngica B é selecionada do grupo que consiste em espécie Trichoderma, espécie Pseudomonas, espécie Bacillus e combinações das mesmas.

[0037] Em uma modalidade mais preferida, a pelo menos uma bactéria ou espécie fúngica B compreende bactérias selecionadas do grupo que consiste em Paenibacillus mucilaginosus, Trichoderma harzianum, Pseudomonas sp. DMSZ 13134, Pseudomonas fluorescens, Bacillus subtilis, Bacillus amyloliquefaciens e combinações das mesmas.

[0038] Em uma modalidade altamente preferida, a pelo menos uma bactéria ou espécie fúngica B compreende bactérias selecionadas do grupo que consiste em Paenibacillus mucilaginosus, Trichoderma harzianum, Pseudomonas sp. DMSZ 13134, Pseudomonas fluorescens, Bacillus subtilis e combinações das mesmas.

[0039] Exemplarmente, essas bactérias ou espécies fúngicas B podem ser exemplificadas na seção Exemplo abaixo e/ou podem ser

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15/80 obtidas com os fornecedores exemplificados na seção Exemplo abaixo.

[0040] Em uma modalidade altamente preferida, o componente B compreende pelo menos uma espécie Bacillus (por exemplo, Bacillus subtilis e/ou Bacillus amyloliquefaciens) e é mais preferivelmente (essencialmente) livre de outras bactérias.

[0041] Em uma modalidade alternativa preferida, a pelo menos uma bactéria ou espécie fúngica B não é Bacillus amyloliquefaciens. Em outra modalidade preferida, a pelo menos uma bactéria ou espécie fúngica B não é uma espécie Bacillus.

[0042] Em outra modalidade altamente preferida, o componente B compreende pelo menos uma espécie de Bacillus (por exemplo, Bacillus subtilis e/ou Bacillus amyloliquefaciens) e pelo menos uma espécie de Trichoderma (por exemplo, Trichoderma harzianum) e é mais preferivelmente (essencialmente) livre de outras bactérias.

[0043] Por exemplo, um produto de combinação de Bacillus/Trichoderma (por exemplo, Trichoderma harzianum (OMG16) e Bacillus subtilis) ou um Tríchoderma/Pseudomonas/Bacillus (por exemplo, Trichoderma harzianum (OMG 16), Pseudomonas fluorescens e Bacillus subtilis), opcionalmente também compreendendo zinco e/ou manganês (Zn/Mn), pode ser utilizado no contexto da presente invenção. As bactérias e/ou fungos também podem estar comercialmente disponíveis como misturas tais como, por exemplo, Proradix (Soucon Padena, Tübingen Alemanha; Pseudomonas sp. DMSZ 13134), VitalinSPI (Vitalin Pflanzengesundheit, Oberamstadt, Alemanha); mistura de Bacillus subtilis, Streptomyces sp, Pseudomonas sp, extrato de Ascophyllum nodosum e ácidos húmicos), Rhizovital (ABITEP GmbH, Berlim, Alemanha; Bacillus amyloliquefaciens FZB42) ou CombifectorA (compreendendo: Trichoderma harzianum OMG16is, Pseudomonas fluorescens, Bacillus subtilis). Outros exemplos específicos são fornecidos na

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16/80 seção de exemplos abaixo.

[0044] Particularmente preferivelmente, a pelo menos uma bactéria e/ou espécie fúngica B é usada na composição como uma formulação de esporo. Em uma modalidade preferido, as bactérias e/ou espécies fúngicas são armazenadas em estado seco, em particular como esporos secos ou liofilizados. Tal formulação pode apresentar maior resistência ao estresse e ter uma vida útil mais longa.

[0045] O inibidor de nitrificação C pode ser qualquer inibidor de nitrificação conhecido na técnica. Por exemplo, um inibidor de nitrificação C pode ser selecionado e preparado como descrito nos documentos WO 2011/032904, WO 2014/053401, WO 2013/121384, EP-B 0 808 297, EP-B 1 021 416, EP-B 2 748 148, EP -B 1 120 388, WO 1996/024566, WO 2015/086823, EP-B 0 974 585, WO 2015/158853 e literatura aqui citada. Por exemplo, o inibidor de nitrificação C pode ser selecionado do grupo que consiste em fosfato de 3,4-di-metilpirazol (DMPP), nitrapirina, etridiazol e 2-cianoguanidina. De preferência, o inibidor de nitrificação C (essencialmente) não possui propriedades antibacterianas ou antifúngicas, isto é, de preferivelmente não é bacteriozida ou bacteriostática, fungicida ou interrompe a proliferação fúngica, a fim de evitar danos às bactérias e/ou fungos do componente B .

[0046] Em uma modalidade preferida, em que pelo menos um inibidor de nitrificação C é um composto selecionado do grupo consistindo em compostos contendo um resíduo de pirazol que pode ser substituído em sua estrutura, 1H-1,2,4-triazol, 2-cloro-6-(triclorometil)piridina, 5-etóxi-3-triclorometil-1,2,4-tiadiazol, 2-amino-4-cloro-6-metilpirimidina, 2-mercapto-benzotiazol, 2-sulfanilamidotiazol, tioureia, 4amino-1,2,4-triazol, 3-mercapto-1,2,4-triazol, 2,4-diamino-6-triclorometil-5-triazina, bissulfeto de carbono, tiossulfato de amônio, tritiocarbonato de sódio, 2,3-di-hidro-2,2-dimetil-7-benzofuranol metil carbamaPetição 870190106782, de 22/10/2019, pág. 29/111

17/80 to e N-(2,6-dimetilfenil)-N-(metoxiacetil)-alanina metil éster.

[0047] Em uma modalidade preferida, pelo menos um inibidor de nitrificação C pode ser selecionado do grupo consistindo em 3,4dimetilpirazolfosfato (DMPP), ácido 2-(3,4-dimetil-pirazol-1 -il)-succínico, 3,4-dimetilpirazol (DMP), 1H-1,2,4-triazol, 3-metilpirazol (3-MP), 2-cloro-6-(triclorometil)-piridina, 5-etóxi-3-triclorometil-1,2,4-tiadiazol, 2amino-4-cloro-6-metil-pirimidina, 2-mercapto-benzotiazol, 2-sulfanilamidotiazol, tioureia, 1-hidroxipirazol, 2-metilpirazol-1-carboxamida, 4amino-1,2,4-triazol, 3-mercapto-1,2,4-triazol, 2,4-diamino-6-triclorometil-5-triazina, bissulfeto de carbono, tiossulfato de amônio, tritiocarbonato de sódio, 2,3-di-hidro-2,2-dimetil-7-benzofuranol metil carbamate e N-(2,6-dimetilfenil)-N-(metoxiacetil)-alanina metil éster.

[0048] Em uma modalidade preferida, pelo menos um inibidor de nitrificação C é um composto de fórmula (I)

ou um estereoisômero, sal, tautômero ou N-óxido do mesmo, em que

A é arila ou hetarila, em que o anel aromático pode em cada caso ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes, que são independentemente um do outro selecionados de R^1A e R^2A independentemente um do outro selecionados de H e Ci-C2-alquila; e

R^3A é H, Ci-C4-haloalquila, Ci-C4-hidroxialquila, etinilhidroximetila, fenilhidroximetila, ou arila, em que o anel aromático pode ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes, que são independentemente um do outro selecionados de R^B;

e em que

R^Aé

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18/80 (i) halogênio, CN, NR^aR^b, OR^C, SR^C, C(=Y¹)R^C, C(=Y¹)OR^C,

C(=Y¹)SR^C, C(=Y¹)NR^aR^b, Y²C(=Y¹)R^c, Y²C(=Y¹)OR^C, Y²C(=Y¹)SR^c, Y²C(=Y¹)NR^aR^b, Y³Y²C(=Y¹)R^c, NR^gN=C(R^d)(R^e), C(=N-OR^c)R^g, C(=NOR^c)R^g, C(=N-SR^c)R^g, C(=N-NR^aR^b)R^g, S(=O)2R^f, NR^gS(=O)2R^f, S(=O)2Y²C(=Y¹)R^c, S(=O)2Y²C(=Y¹)OR^c, S(=O)₂Y²C(=Y¹)SR^c,

S(=O)₂Y²C(=Y¹)NR^aR^b, NO₂, NON-CN, Ci-C₆-alquila, C₂-C₆-alquenila, C₂-C6-alquinila, Ci-C4-haloalquila, Ci-C4-cianoalquila, Ci-C4-hidroxialquila, Ci-C4-alcóxi, C₂-C4-alquinil-Ci-C₂-hidroxialquila, C₂-C4-alquinilóxi;

(ii) Ci-C4-alquileno-C(=Y¹)R^c, C2-C4-alquenileno-C(=Y¹)R^c, Ci-C4-alquileno-C(=Y¹)OR^c, C2-C4-alquenileno-C(=Y¹)OR°, Ci-C4-alquileno-C(=Y¹)SR^c, C2-C4-alquenileno-C(=Y¹)SR^c, Ci-C4-alquilenoC(=Y¹)NR^aNR^b, C2-C₄-alquenileno-C(=Y¹)NR^aNR^b, Ci-C4-alquileno-Y²C(=Y¹)R^C, C2-C₄-alquenileno-Y²-C(=Y¹)R^c, Ci-C4-alquileno-NR^aR^b, C2C4-alquenileno-NR^aR^b, Ci-C4-alquileno-OR^c, C2-C4-alquenileno-OR^c, Ci-C4-alquileno-SR^c, C2-C4-alquenileno-SR^c, em que a cadeia de CiC4-alquileno ou C₂-C4-alquenileno pode em cada caso ser não substituída ou pode ser parcialmente ou totalmente substituída por OR^g, CN, halogênio ou fenila;

(iii) arila, aril-Ci-C₂-alquila, hetarila ou hetaril-Ci-C₂-alquila, em que o anel aromático do grupo arila ou hetarila pode ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes, que são independentemente um do outro selecionados de R^h;

(iv) um heterociclo ou carbociclo saturado ou insaturado de 3 a 14 membros, que pode conter 1, 2, ou 3 heteroátomos que, independentemente um do outro, são selecionados de NR^1b, O, e S, em que S pode ser oxidado e/ou em que o carbociclo ou heterociclo pode ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes que, independentemente um do outro, são selecionados de R'; e em que R^1b é H, Ci-C4-alquila, C₂-C4-alquenila, Cs-Ce-ciclo-

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19/80 alquila, Cs-Ce-cicloalquilmetila, ou OR^g; ou (v) L-B, em que

L é -CH₂-, -CH=CH-, -CEC-, -C(=O)- ou -CH=, e

B é arila ou hetarila, em que o anel aromático do grupo arila ou hetarila pode ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes, que são independentemente um do outro selecionados de R^h; ou um heterociclo ou carbociclo saturado ou insaturado de 3 a 14 membros, que pode conter 1, 2, ou 3 heteroátomos que, independentemente um do outro, são selecionados de NR^1b, O, e S, em que S pode ser oxidado e/ou em que o carbociclo ou heterociclo pode ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes que, independentemente um do outro, são selecionados de R'; e em que R^1b é H, Ci-C4-alquila, C2-C4-alquenila, Cs-Ce-cicloalquila, Cs-Ce-cicloalquilmetila, ou OR^g; ou (vi) dois substituintes R^A juntos representam um anel carbocíclico ou heterocíclico, que é fundido a A e pode conter 1, 2, ou 3 heteroátomos que, independentemente um do outro, são selecionados de NR^1c, O, e S, em que S pode ser oxidado e/ou em que o carbociclo ou heterociclo pode ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes que, independentemente um do outro, são selecionados de R¹; e em que R^1c é H, Ci-C4-alquila, C₂C4-alquenila, Cs-Ce-cicloalquila, Cs-Ce-cicloalquilmetila, Cs-Ce-heterociclila, Cs-Ce-heterociclilmetila ou OR^g;

e em que

R^B é NH-C(=O)-(Ci-C₄-alquila), NH-C(=O)-(C₂-C₄-alquenila), NH-C(=O)-(Ci-C₂-alcóxi-Ci-C₂- alquila), NH-C(=O)-(C3-C6-cicloalquila), NH-S(=O)₂-(C1-C4-alquila), ou NO₂; e em que

Y¹, Y² e Y³ são independentemente um do outro selecionados de O, S e NR^1a, em que R^1a é em cada caso independentemente

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20/80

H, Ci-C4-alquila, C2-C4-alquenila, Cs-Ce-cicloalquila, Cs-Ce-cicloalquilmetila, OR^g, SR^g ou NR^mRⁿ;

R^a e R^b são independentemente um do outro selecionados de (i) H, NRR^k, OR¹, SR¹, Ci-C4-alquila, C2-C4-alquenila, C2C4-alquinila, Ci-C4-hidroxialquila, Ci-C4-alcóxi, C(=Y¹)R', C(=Y¹)OR', C(=Y¹)SR', C(=Y¹)NRJR^k, C(=Y¹)C(=Y²) R¹, S(=O)₂R^f;

(ii) arila ou hetarila, em que 0 anel aromático do grupo arila ou hetarila pode ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes, que são independentemente um do outro selecionados de R^b; ou

R^a e R^b juntamente com 0 átomo de nitrogênio ao qual eles são ligados formam (iii) um grupo hetarila que pode ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes, que são independentemente um do outro selecionados de R^b; ou (iv) um heterociclo saturado ou insaturado de 3 a 10 membros, que pode conter 1, 2, ou 3 heteroátomos que, independentemente um do outro, são selecionados de NR^1b, O, e S, em que S pode ser oxidado e/ou em que 0 heterociclo pode ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes que, independentemente um do outro, são selecionados de R'; e em que R^1b é H, Ci-C4-alquila, C2-C4-alquenila, Cs-Ce-cicloalquila, Cs-Ce-cicloalquilmetila, ou OR^g;

R^cé (i) H, Ci-C4-alquila, C2-C4-alquenila, C2-C4-alquinila, C(=O)OR', C(=O)SR', C(=O)NRJR^k;

(ii) Ci-C4-alquileno-C(=O)R', Ci-C4-alquileno-C(=O)OR', em que a cadeia de Ci-C4-alquileno pode em cada caso ser não substituída ou pode ser parcialmente ou totalmente substituída por OR^g, CN,

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21/80 halogênio, ou fenila;

(iii) arila, aril-Ci-C2-alquila, hetarila, ou hetaril-Ci-C2-alquila, em que o anel aromático do grupo arila ou hetarila pode ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes, que são independentemente um do outro selecionados de R^h; ou (iv) um heterociclo ou carbociclo saturado ou insaturado de 3 a 10 membros, que pode conter 1, 2, ou 3 heteroátomos que, independentemente um do outro, são selecionados de NR^1b, O, e S, em que S pode ser oxidado e/ou em que o carbociclo ou heterociclo pode ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes que, independentemente um do outro, são selecionados de Rl; e em que R^1b é H, Ci-C4-alquila, C2-C4-alquenila, C3-C6cicloalquila, Cs-Ce-cicloalquilmetila, ou OR^g;

R^d e R^e são independentemente selecionados de C1-C4alquila, Ci-C₄-haloalquila, NR^jR^k, OR', SR', CN, C(=Y¹)R', C(=Y¹)OR', C(=Y¹)SR', ou C(=Y¹)NRJR^k;

R^f é Ci-C4-alquila, Ci-C4-haloalquila, NR^jR^k, OR¹, SR¹, arila ou hetarila, em que 0 anel aromático do grupo arila ou hetarila pode ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes, que são independentemente um do outro selecionados de R^h;

R^g é H ou Ci-C4-alquila;

R^h é halogênio, CN, NO2, NR^jR^k, OR¹, SR¹, Ci-C4-alquila, C₂C4-alquenila, C2-C4-alquinila, Ci-C4-haloalquila, Ci-C4-alcóxi, C2-C4alquinilóxi, C(=Y¹)RI, C(=Y¹)OR', C(=Y¹)SR', C(=Y¹)NR^jR^k, arila, arilóxi, hetarila e hetarilóxi;

R' é (i) halogênio, CN, C1-C4-alquila, C2-C4-alquenila, C2-C4alquinila, Ci-C4-haloalquila, C2-C4-haloalquenila;

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22/80 (ii) =NR^1d, em que R^1d é H, Ci-C4-alquila, C2-C4-alquenila, Cs-Ce-cicloalquila, C₃-C6-cicloalquilmetila, ou OR^g;

(iii) =0, =S, NRJR^k, OR¹, SR¹, C(=Y¹)R', C(=Y¹)OR', C(=Y¹)SR', C(=Y¹)NRJR^k;

(iv) arila, aril-Ci-C2-alquila, hetarila, ou hetaril-Ci-C2-alquila, em que o anel aromático do grupo arila ou hetarila pode ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes, que são independentemente um do outro selecionados de halogênio, CN, Ci-C4-alquila, C1-C4-haloalquila, Ci-C4-alcóxi, C2C4-alquinilóxi, OR^g, e SR^g; ou (vi) Cs-Ce-cicloalquila, ou heterociclila de 3 a 6 membros, em que 0 anel cicloalquila ou 0 anel heterociclila pode ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes, que são independentemente um do outro selecionados de halogênio, CN, Ci-C4-alquila, OR^g, e SR^g;

R^j e R^k são independentemente selecionados de H, OR^g, SR^g, C(=Y¹)R^g, C(=Y¹)OR^g, C(=Y¹)SR^g, C(=Y¹)NR^mRⁿ, Ci-C₄-alquila, C2-C4-alquenila, C2-C4-alquinila, Ci-C4-haloalquila, arila ou hetarila, em que 0 anel aromático do grupo arila ou hetarila pode ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes, que são independentemente selecionados de halogênio, CN, C1C4-alquila, Ci-C4-haloalquila, Ci-C4-alcóxi, C2-C4-alquinilóxi, OR^g, e SR^g;

R¹ é H, Ci-C4-alquila, C2-C4-alquenila, C2-C4-alquinila, C1C₄-haloalquila, C(=Y¹)R^g, C(=Y¹)OR^g, C(=Y¹)SR^g, C(=Y¹)NR^mRⁿ, arila ou hetarila, em que 0 anel aromático do grupo arila ou hetarila pode ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes, que são independentemente selecionados de halogênio, CN, Ci-C4-alquila, Ci-C4-haloalquila, Ci-C4-alcóxi, C2-C4-alquinilóxi, OR^g, e SR^g; e

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23/80

R^m e Rⁿ são independentemente selecionados de H e CiC4-alquila.

[0049] Em uma modalidade preferida, em referido composto de fórmula (I), A é fenila ou uma hetarila de 6 membros, preferivelmente fenila, em que o anel aromático pode em cada caso ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes, que são independentemente um do outro selecionados de R^A.

[0050] Em uma modalidade mais preferida, em referido composto de fórmula (I), R¹ e R² ambos representam hidrogênio.

[0051] Em outra modalidade preferida, em referido composto de fórmula (I), R³ é hidrogênio, Ci-C4-haloalquila ou etinilhidroximetila, e preferivelmente R³ é hidrogênio.

[0052] Em outra modalidade preferida, em referido composto de fórmula (I), R^A, se presente, é (i) halogênio, CN, NR^aR^b, OR^C, C(=Y¹)R^C, C(=Y¹)OR^C, C(=Y¹)SR^C, C(=Y¹)NR^aR^b, Y²C(=Y¹)R^C, Y²C(=Y¹)NR^aR^b, NR^gN=C(R^d)(R^e), S(=O)2R^f, NO2, Ci-Ce-alquila, C2-C6- ou Ci-C4-haloalquila, C1-C4- alcóxi, C2-C4-alquinil-Ci-C2-hidroxialquila, C2-C4-alquinilóxi;

(ii) C2-C4-alquenileno-C(=Y¹)R^c, C2-C4-alquenileno-Y²C(=Y¹)R^C, em que a cadeia de Ci-C4-alquileno ou C2-C4-alquenileno pode em cada caso ser não substituída ou pode ser parcialmente ou totalmente substituída por CN ou halogênio;

arila, em que 0 anel aromático do grupo arila pode ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes, que são independentemente um do outro selecionados de R^h; ou (iii) um heterociclo saturado ou insaturado de 3 a 14 membros, que pode conter 1, 2, ou 3 heteroátomos que, independentemente um do outro, são selecionados de NR^1b, O, e S, em que S pode ser oxidado e/ou em que 0 heterociclo pode ser não substituído ou pode

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24/80 ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes que, independentemente um do outro, são selecionados de R'; e em que R^1b é H, Ci-C4-alquila, C2-C4-alquenila, Cs-Ce-cicloalquila, Cs-Ce-cicloalquilmetila, ou OR^g, em que preferivelmente

Y¹, Y² e Y³ são independentemente um do outro selecionados de O, S e NR^1a, em que R^1a é em cada caso independentemente H, Ci-C4-alquila, OH, ou NH2.

R^a e R^b são independentemente um do outro selecionados de (i) Η, NH2, Ci-C4-alquila, Ci-C4-hidroxialquila, C(=O)H, C(=S)H, C(=N-H)H, C(=N-(Ci-C₄)alquil))H, C(=N-OH)H, C(=N-NH₂)H, ou R^a e R^b juntamente com 0 átomo de nitrogênio ao qual eles são ligados formam (iv) um heterociclo saturado ou insaturado de 3 a 10 membros, que pode conter 1, 2, ou 3 heteroátomos que, independentemente um do outro, são selecionados de NR^1b, O, e S, em que S pode ser oxidado e/ou em que 0 heterociclo pode ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes que, independentemente um do outro, são selecionados de Ci-C4-alquila, C1C4-haloalquila, C2-C4-haloalquenila, e =0; e em que R^1b é H, C1-C4alquila, ou OH;

R^cé (i) H, Ci-C4-alquila; ou (iv) um carbociclo ou heterociclo saturado ou insaturado de 3 a 10 membros, que pode conter 1, 2, ou 3 heteroátomos que, independentemente um do outro, são selecionados de NR^1b, O, e S, em que S pode ser oxidado e/ou em que 0 carbociclo ou heterociclo pode ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes que, independentemente um do outro, são selecionados de Ci-C4-alquila, Ci-C4-haloalquila, C2-C4-haloalquenila, e =0; e

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25/80 em que R^1b é preferivelmente H, Ci-C4-alquila, ou OH;

R^d e R^e são independentemente selecionados de NH2 e C(=O)OH;

R^f é Ci-C4-alquila;

R^g é H;

R^h é halogênio ou C¹-C⁴-alcóxi; e

R' é (i) Ci-C4-alquila, Ci-C4-haloalquila, C2-C4-haloalquenila; ou (iii) =0.

[0053] Em uma modalidade preferida, em referido composto de fórmula (I),

R¹ e R² ambos representam hidrogênio,

R³ é hidrogênio, e

A é fenila, em que 0 anel aromático é substituído por 1, 2, ou 3 substituinte(s) R^A, em que 0 substituinte(s) R^A é/são independentemente um do outro selecionados de halogênio, CN, NH2, C(=O)NR^aR^b, NHC(=0)NR^aR^b, NHC(=S)NR^aR^b, NHC(=O)H, Ci-C₄-alcóxi, C2-C4-alquinil-Ci-C2-hidroxialquila, e C2-C4-alquinilóxi, em que R^a e R^b são em cada caso independentemente um do outro selecionados de H, Ci-C2-alquila, NH2, Ci-C2-hidroxialquila, ou em que R^a e R^b podem juntamente com 0 átomo de nitrogênio ao qual eles são ligados formar um anel morfolina.

[0054] Em uma modalidade mais preferida, pelo menos um inibidor de nitrificação C é selecionado do grupo consistindo em 3,4-dimetilpirazolefosfato (DMPP), ácido 2-(3,4-dimetil-pirazol-1-il)-succínico, 3,4dimetilpirazol (DMP), 1H-1,2,4-triazol, 3-metilpirazol (3-MP), 2-cloro-6(triclorometil)-piridina e 5-etóxi-3-triclorometil-1,2,4-tiadiazol.

[0055] Será entendido que as fórmulas mostradas aqui também compreendem a forma de ácido, bem como, a forma neutralizada, em sais de álcali particulares das mesmas (por exemplo, 0 respectivo sal

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26/80 de sódio, potássio ou lítio).

[0056] Em uma modalidade altamente preferida, pelo menos um inibidor de nitrificação C é selecionado do grupo consistindo em 3,4dimetilpirazolefosfato (DMPP) e ácido 2-(3,4-dimetil-pirazol-1 -il)succínico ou um sal dos mesmos, em particular um sal de álcali dos mesmos.

[0057] Em uma modalidade altamente preferida, pelo menos um inibidor de nitrificação C é um composto de fórmula geral (II)

ou sais de adição de ácido do mesmo, onde os radicais R¹, R², R³ e R⁴ independentemente de outro têm os seguintes significados:

R¹, R², R³ e R⁴ podem ser hidrogênio, Ci- a C2o-alquila, C3- a Cscicloalquila, C5- a C2o-arila ou alquilarila, sendo possível para estes 4 radicais serem monossubstituídos ou dissubstituídos por halogênio e/ou hidroxila,

R¹, R², R³ podem também ser halogênio ou nitro;

R⁴ podem também ser um radical tendo a fórmula (III)

R5 — c—- R7

R⁶ (III) onde

- R⁵ e R⁶ independentemente de outro são hidrogênio, C1- a C2o-alquila que podem ser monossubstituídos ou dissubstituídos por halogênio e/ou hidroxila, um grupo carboxila, um grupo carboximetila ou um derivado funcional dos dois últimos grupos mencionados, e

- R⁷ é um radical carboxila ou um radical carbóxi-(Ci- a C3alquila) ou um derivado funcional destes grupos, ou é selecionado do grupo consistindo em 1H-1,2,4-triazol,

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2-cloro-6-(triclorometil)-piridina e 5-etóxi-3-triclorometil-1,2,4-tiadiazol. [0058] Em uma modalidade particularmente preferida, pelo menos um inibidor de nitrificação C é fosfato de 3,4-dimetilpirazol (DMPP).

[0059] Opcionalmente, as plantas podem ser também fornecidas com um ou mais sais adicionais também melhorando nutrição de plantas como componente E. Tais sais adicionais E podem ser escolhidos para reduzir estresse das plantas. Tais sais adicionais E podem exemplarmente ser selecionados da lista consistindo em um ou mais sais de zinco, um ou mais sais de magnésio, um ou mais extratos de algas, e combinações dos mesmos.

[0060] A planta pode, em geral, ser qualquer planta que deve ser desenvolvida. Preferivelmente, a planta é uma planta que é usada na agricultura, incluindo agricultura e horticultura.

[0061] Adequadamente, em uma modalidade preferida, as plantas são plantas de colheita, em particular, plantas de colheita selecionadas do grupo consistindo em milho, trigo e tomate.

[0062] Em uma modalidade particularmente preferida, a planta é milho. O substrato S de uso agrícola no qual as plantas são cultivadas ou destinadas ao cultivo pode ser qualquer tipo de substrato incluindo qualquer tipo de solo e qualquer tipo de substrato de planta artificial (por exemplo, agregado de argila expandida, lã mineral, gel de seet, perlita, polímeros (por exemplo, styromull, poliestireno, poliuretano, etc.) ou combinações de dois ou mais dos mesmos, opcionalmente também compreendendo aditivos, tais como, por exemplo, superabsorvente). Antes de conduzir o método de acordo com a presente invenção, ela pode ter qualquer pH. Exemplarmente, o pH pode ser na faixa de 4 a 10. Preferivelmente, o pH do substrato S, antes de conduzir o método de acordo com a presente invenção, é na faixa de 5 a 9, mais preferivelmente na faixa de 5.0 a 8.5, ainda mais preferivelmente na faixa de 5 a 8, em particular na faixa de 5.5 a 7.5, tais como, por

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28/80 exemplo, na faixa de 5.5 a 6.0, de 6.0 a 6.5, de 6.5 a 7.0, ou de 7.0 a 7.5.

[0063] Preferivelmente, o pH do substrato S, após conduzir o método de acordo com a presente invenção, é diminuído (isto é, o solo é acidificado), permaneceu inalterado, ou apenas ligeiramente aumentado por não mais do que 1 unidade de pH, mais preferivelmente diminuído, permaneceu inalterado, ou aumentado por não mais do que 0,5 unidades de pH, em particular diminuído, permaneceu inalterado, ou aumentado por não mais do que 0,1 unidades de pH. Em outras palavras, a concentração de próton (H⁺) no substrato S é preferivelmente aumentada ao conduzir o método de acordo com a presente invenção, permaneceu inalterada, ou é diminuída por não mais do que um fator de 10, 3 ou 1,3.

[0064] Mais preferivelmente, o pH do substrato S, após conduzir o método de acordo com a presente invenção, é diminuído (isto é, o solo é acidificado), em que a diminuição pode exemplarmente ser uma diminuição de até 4 unidades de pH, até 3 unidades de pH, até 2 unidades de pH, até 1 unidade de pH, 0,1 a 3 unidades de pH, 0,2 a 2 unidades de pH, ou 0,5 a 1 unidades de pH. Em outras palavras, a concentração de próton (H⁺) no substrato S é preferivelmente aumentada ao conduzir o método de acordo com a presente invenção, em que o aumento é um aumento da concentração de próton no substrato S de até 10000 vezes, até 1000 vezes, até 100 vezes, até 10 vezes, por 1,3 a 1000 vezes, por 1,6 a 100 vezes, ou 3 a 10 vezes.

[0065] Em uma modalidade preferida, a relação de peso entre o nitrogênio em pelo menos uma fonte de amônio A e pelo menos um inibidor de nitrificação C (A:C) é na faixa de entre 20:1 e 10000:1, preferivelmente na faixa de entre 20:1 e 5000:1, na faixa de entre 50:1 e 1000:1, ou na faixa de entre 75:1 e 200:1. Por exemplo, a quantidade usada do inibidor de nitrificação C é entre 0,1 e 20% (peso/peso), prePetição 870190106782, de 22/10/2019, pág. 41/111

29/80 ferivelmente entre 0,2 e 12% (peso/peso) ou entre 0,5 e 1% (peso/peso), referido o teor total de nitrogênio contida em uma ou mais fontes de amônio A (conjunto de N total = 100%). Por exemplo, a quantidade usada do inibidor de nitrificação C pode ser 0,6% (peso/peso), 0,7% (peso/peso), 0,8% (peso/peso), 0,9% (peso/peso), 1,0% (peso/peso), 1,1% (peso/peso), 1,2% (peso/peso), 1,3% (peso/peso), 1,4% (peso/peso), 1,5% (peso/peso), 1,6% (peso/peso), 1,7% (peso/peso), 1,8% (peso/peso), 1,9% (peso/peso), 2% (peso/peso), 3% (peso/peso), 3% (peso/peso), 4% (peso/peso), 5% (peso/peso), 6% (peso/peso), 7% (peso/peso), 8% (peso/peso), 9% (peso/peso), 10% (peso/peso), 11% (peso/peso), ou 12% (peso/peso), referido o teor total de nitrogênio contido em uma ou mais fontes de amônio A (conjunto de N total = 100%). Nas composições de Novatec Solub (Compo) exemplificadas, a quantidade do inibidor de nitrificação DMPP é tipicamente na faixa de 0,8% (peso/peso), referido o teor total de nitrogênio (conjunto = 100%). As quantidades de inibidor de nitrificação C, serão adaptadas aos compostos químicos individuais. Por exemplo, pode ser adaptada ao peso molecular. As quantidades acima podem ser particularmente benéficas para um inibidor de nitrificação tipo DMPP.

[0066] Uma ou mais espécies de bactéria ou fúngica B com propriedades de solubilização de fosfato e/ou promoção de crescimento de raiz pode ser usada em qualquer quantidade. Em uma modalidade preferida, entre 10⁷ e 10¹¹ unidades formadoras de colônia (cfu) kg^-1 substrato S são usados, preferivelmente entre 10⁸ e 10⁸ cfu kg^-1 substrato S são usados. Exemplarmente, 10⁹ cfu kg^-1 substrato S são usados.

[0067] Uma diminuição do pH do solo pode opcionalmente também estar ligada a uma maior extensão espacial da acidificação da rizosfera induzida pelas raízes como consequência de um sistema raPetição 870190106782, de 22/10/2019, pág. 42/111

30/80 dicular maior.

[0068] Preferivelmente, o substrato S é um solo contendo sais pouco solúveis de pelo menos um mineral que pode ser mobilizado preferivelmente por bactérias ou espécies fúngicas B.

[0069] O substrato S pode ou não compreender pelo menos um sal de fosfato ou produto fertilizante de reciclagem inorgânico (cinzas, lesmas).

[0070] A nutrição insuficiente de plantas com um ou mais minerais pouco solúveis (por exemplo, fósforo (tipicamente fosfato), ferro, zinco e/ou manganês) pode ter razões diferentes. Por exemplo, pode ser devido à baixa disponibilidade das plantas dos minerais do substrato S e/ou pode ser devido ao desenvolvimento insuficiente dos sistemas radiculares das plantas.

[0071] Em uma modalidade preferida, antes de executar a etapa (ii), o substrato S compreende menos de 50 mg, mais preferivelmente não mais do que 30 mg, em particular não mais do que 20 mg, fosfato de planta disponível por kg de substrato S.

[0072] O fosfato de planta disponível é determinado de acordo com o método de extração de lactato de acetato de cálcio (CAL) (alemão), conduzido a pH 6,5-8,5) (com ou sem aditivos de fertilizantes P pouco solúveis, como o rocha-P ou a cinza de lodo de esgoto). A determinação de CAL de minerais pouco solúveis, em particular fosfato (Pcal, CAL P), como aqui usada significa a determinação de acordo com a planilha de dados VDLUFA I, P e K, CAL-lõslich, A 6.2.1.1 em Handbuch der Bodenuntersuchung: Termologie, Verfahrensvorschriften und Datenblâtter; physikalishe, chemische, biologische Untersuchungsverfahren: gesetzliche Regel-werke. Hrsg. DIN, Deutsches Instituí für Normung e. V., Beuth Verlag, 2000, ISBN 3-410-14590-7. Isso é exemplificado ainda mais na seção de exemplos.

[0073] O termo fosfato de planta disponível como usado aqui po

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31/80 de ser entendido no sentido mais amplo como a usabilidade do fosfato para o crescimento da planta. Tipicamente, o fosfato de rocha presente em muitos solos não é solúvel em água e também não ou pouco disponível para as plantas. Assim, o fosfato de rocha contém ânions de fosfato presentes no substrato S, mas ainda é (essencialmente) inacessível e utilizável por plantas.

[0074] Tipicamente, em concentrações de aproximadamente 50 mg ou mais de fosfato de planta disponível por kg do substrato S (CAL P/kg de solo), o fosfato é, para muitas plantas, tipicamente não mais um fator limitador de crescimento em condições de campo.

[0075] Em uma modalidade preferida, as plantas apresentam sistemas radiculares insuficientes para captação eficiente de nutrientes, em particular porque as plantas mostram crescimento inicial da raiz e/ou foram submetidas a condições de estresse, como baixa temperatura da zona radicular.

[0076] Em seguida, o método da presente invenção pode promover a aquisição de nutrientes críticos em condições em que os conteúdos do solo são suficientes, mas a capacidade do sistema radicular para a aquisição de nutrientes é limitada. Como usado aqui, uma temperatura baixa pode ser exemplarmente uma temperatura na faixa de abaixo de 15°C, exemplarmente na faixa de 0 a 20°C, preferivelmente na faixa de 5 a 15°C, em particular faixa de 10 a 15°C, exemplarmente na faixa de 12 a 14°C.

[0077] O método da presente invenção também é adequado para usos fitossanitários, como o aumento da resistência da planta contra patógenos, como por exemplo, fungos, bactérias e (ou vírus), em particular na rizosfera, mas também em toda a planta.

[0078] Como indicado acima, o método é particularmente útil para o substrato S com escassez de pelo menos um mineral. Assim, antes de conduzir o método da presente invenção, o substrato S preferivel

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32/80 mente compreende apenas quantidades baixas de sais solúveis disponíveis de planta do mineral.

[0079] A etapa (ii) do método, isto é, fornecer os componentes A, B e C ao substrato S, pode ser realizada por qualquer meio. Em uma modalidade preferida, uma composição líquida pode ser preparada e aplicada a plantas e/ou sementes de plantas por imersão. Por exemplo, a aplicação inicial de linha de sementes por fertirrigação ou imersão do substrato S em vasos de viveiro pode ser usada. Também pode ser usada a colocação de sementes de formulações granuladas mostrando eficiência superior de colonização das raízes. O curativo de sementes pode ser usado. Particularmente preferivelmente, é utilizada a fertirrigação de formulações líquidas. Alternativamente, um, dois ou todos os componentes A, B e C podem ser aplicados a plantas como um ou mais pós ou péletes/grânulos. Como usado aqui, os termos pélete e grânulo podem ser entendidos de forma intercambiável como qualquer partícula sólida na faixa de milímetro ou micrômetro (por exemplo, na faixa de 0,01 a 1 mm, 0,1 a 2 mm ou 0,5 a 5 mm). Esses pós ou grânulos também podem ser colocados incorporados ao substrato S próximo às raízes. Alternativamente, um, dois ou todos os componentes A, B e C podem ser aplicados a plantas como um depósito. Esse depósito também pode ser colocado enterrado perto das raízes.

[0080] Conforme indicado acima, os componentes A, B e C podem ser aplicados em combinação com outros ou podem ser combinados partidos com outros ou podem ser administrados separadamente de outros.

[0081] Em uma modalidade preferida, o método compreende a etapa (i-l) de pré-misturar os componentes A, B e C formando a mistura ABC, opcionalmente em uma suspensão aquosa ou em estado

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33/80 sólido (por exemplo, como uma pélete/grânulo), subsequente à etapa (i) e antes da realização da etapa (ii), em que etapa (ii) é (ii) aplicar a mistura ABC ao substrato S de uso agrícola, no qual as plantas são cultivadas ou destinadas ao cultivo.

[0082] A composição pré-misturada obtida da etapa (i-l) pode ser um líquido, um pó ou um xarope. Opcionalmente, um, dois ou todos os componentes A, B e/ou C também podem ser granulados, ou formar péletes compreendendo um, dois ou todos os componentes A, B e/ou C. Isso dependerá dos componentes e opcionais outros ingredientes, em particular da fonte de amônio A (que é tipicamente o maior volume) e da presença opcional de um solvente como a água na qual os componentes podem ser dissolvidos. Em uma modalidade preferida, os componentes A, B e C formam uma suspensão aquosa, em que preferivelmente componentes A e C são pelo menos parcialmente dissolvidos e as bactérias e/ou fungos B são suspensos.

[0083] Em uma modalidade particularmente preferida, as péletes/grânulos que compõem os componentes A e C são preparados e revestidos com o componente B, por exemplo, por imersão ou aspersão do componente B nas péletes/grânulos que compreendem os componentes A e C.

[0084] Em uma modalidade altamente preferida, a mistura ABC, em particular quando fornecida em estado sólido (por exemplo, como uma pélete/grânulo), pode ser adicionada à rizosfera, por exemplo, como um reservatório/depósito.

[0085] Em uma modalidade alternativa preferida, o método compreende a etapa (i-ll) da pré-mistura dos componentes A e C formando a mistura AC, opcionalmente em solução ou suspensão aquosa, subsequente à etapa (i) e antes de realizar a etapa (ii), em

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34/80 que a etapa (ii) compreende as etapas (ii-a) aplicação da mistura AC ao substrato S de uso agrícola, no qual as plantas são cultivadas ou destinadas ao cultivo, e (ii-b) aplicação do componente B ao substrato S de uso agrícola, no qual, as plantas são cultivadas ou destinadas ao cultivo, em que a etapa (ii-a) pode ser realizada concomitantemente com, antes ou depois da etapa (ii-b).

[0086] Dependendo da escolha dos organismos, a aplicação das etapas (ii-a) e (ii-b) separadamente de outra (isto é, não concomitantemente) pode minimizar os riscos de toxicidade para os micro-organismos do componente B e pode fornecer maior flexibilidade para combinações.

[0087] Em uma modalidade particularmente preferida, a aplicação do componente B ao substrato S do uso agrícola pode ser realizada embebendo uma muda da planta e depois plantando as plantas. Em seguida, a mistura AC pode ser fornecida ao substrato S posteriormente a esta etapa.

[0088] Em outra modalidade particularmente preferida, a aplicação do componente B ao substrato S do uso agrícola pode ser realizada fornecendo reservatórios (depósitos) compreendendo o componente B na rizosfera e a mistura AC pode ser adicionalmente adicionada ao substrato S por qualquer meio.

[0089] As sementes das plantas podem ser aplicadas ao substrato S antes, concomitantemente ou subsequentemente a etapa (ii).

[0090] Em uma modalidade preferida, a aplicação de pelo menos um dos componentes A, B e/ou C ao substrato S de acordo com a etapa (ii) é realizada em conformidade com a aplicação de sementes da planta ao substrato S.

[0091] Em seguida, as etapas (ii) e (ii) se referem a:

(ii) aplicação dos componentes A, B e C e sementes de

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35/80 plantas (concomitantemente) ao substrato S de uso agrícola no qual as plantas são destinadas ao cultivo; e (iii) possibilitando (iniciando) o crescimento de plantas no substrato S obtido da etapa (ii).

[0092] Por exemplo, aplicação do componente A ao substrato S de acordo com a etapa (ii) é conduzida concomitantemente com a aplicação de sementes da planta ao substrato S. Alternativamente, aplicação do componente B ao substrato S de acordo com a etapa (ii) é conduzida concomitantemente com a aplicação de sementes da planta ao substrato S. Alternativamente, a aplicação do componente C ao substrato S de acordo com a etapa (ii) é realizada concomitantemente com a aplicação de sementes da planta ao substrato S. Alternativamente, a aplicação de uma combinação dos componentes A e B (AB) ao substrato S de acordo com a etapa (ii) é realizada concomitantemente com a aplicação de sementes da planta ao substrato S. Alternativamente, aplicação de uma combinação dos componentes A e C (AC) ao substrato S de acordo com a etapa (ii) é realizada concomitantemente com a aplicação de sementes da planta ao substrato S. Alternativamente, a aplicação de uma combinação dos componentes B e C (BC) ao substrato S de acordo com a etapa (ii) é realizada concomitantemente com a aplicação de sementes da planta ao substrato S. Alternativamente, a aplicação de uma combinação dos componentes A, B e C (ABC) ao substrato S de acordo com a etapa (ii) é realizada concomitantemente com a aplicação de sementes da planta ao substrato S. Em cada um desses casos de aplicação de um ou mais dos componentes ao substrato S de acordo com a etapa (ii) concomitante à aplicação das sementes, as sementes e uma ou mais das sementes podem ser aplicadas independentemente de outras ou combinadas com outras. Os outros componentes são adicionados separadamente, o que pode ser conduzido concomitantemente, antes ou depois.

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36/80 [0093] Em uma modalidade preferida, a semente é revestida com uma composição que compreende um ou mais dos componentes A, B e/ou C.

[0094] Por exemplo, a semente pode ser revestida com uma composição compreendendo o componente A, ou uma composição compreendendo o componente B, ou uma composição compreendendo o componente C, ou uma composição compreendendo os componentes A e B (AB), ou uma composição compreendendo componentes A e C (AC), ou uma composição compreendendo componentes C e B (CB), ou uma composição compreendendo componentes A, B e C (ABC). Será bem entendido que um revestimento pode compreender opcionalmente outros ingredientes, como os selecionados para o grupo consistindo em aglutinantes (por exemplo, um ou mais açúcares), cargas, minerais que promovem o crescimento das plantas, bactérias e/ou nutrientes fúngicos e combinações de dois ou mais dos mesmos. A pessoa versada na técnica conhecerá vários ingredientes utilizáveis em tais revestimentos. Os outros componentes são adicionados separadamente, o que pode ser realizado concomitantemente, antes ou depois.

[0095] Por exemplo, as sementes podem ser revestidas com uma composição compreendendo pelo menos uma espécie de bactéria ou fúngica B com propriedades promotoras de crescimento de raízes e/ou solubilizantes de fosfato (componente B) e uma combinação de uma fonte de amônio (componente A) compreendendo inibidor de nitrificação (componente C) pode ser adicionada adicionalmente. Neste exemplo, as etapas (ii) e (ii) se referem a:

(ii) aplicação de (a) sementes revestidas com uma composição que compreende pelo menos uma espécie de bactéria ou fúngica B com propriedades promotoras de crescimento de raízes e/ou solubilizantes de

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37/80 fosfato, e (b) uma composição compreendendo pelo menos uma fonte de amônio A e pelo menos um inibidor de nitrificação (por exemplo, DMPP) ao substrato S de uso agrícola no qual as plantas são destinadas ao cultivo; e (iii) possibilitando (iniciando) o crescimento de plantas no substrato S obtido da etapa (ii).

[0096] Em uma modalidade alternativa preferida, o substrato S é preparado por meio do método de acordo com a presente invenção antes da semeadura das plantas. Em seguida, as etapas (ii) e (ii) se referem a:

(ii) aplicação dos componentes A, B e C ao substrato S de uso agrícola, no qual as plantas são destinadas ao cultivo;

(ii*) aplicação de sementes das plantas ao substrato S obtido da etapa (ii); e (iii) possibilitando (iniciando) o crescimento de plantas no substrato S obtido da etapa (ii).

[0097] Em uma modalidade alternativa preferida, as plantas já são cultivadas antes de conduzir o método de acordo com a presente invenção, a etapa (iii) significa permitir novos crescimentos de plantas no substrato S obtido na etapa (ii). Em seguida, as etapas (ii) e (ii) se referem a:

(ii) aplicar os componentes A, B e C ao substrato S de uso agrícola, no qual as plantas são (já) cultivadas; e (iii) possibilitando crescimento adicional de plantas no substrato S obtido da etapa (ii).

[0098] Como indicado acima, em uma modalidade preferida, o método é para melhorar o crescimento radicular das plantas.

[0099] Como indicado acima, a invenção baseia-se na interação

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38/80 dos componentes A, B e C. Adequadamente, a aplicação pretendida dos referidos componentes, em particular a suplementação concomitante dos referidos componentes ao substrato S é abrangida pela presente invenção.

[00100] Como usado aqui, o termo raiz da planta pode ser interpretado no sentido mais amplo como crescimento de qualquer parte da rizosfera, isto é, crescimento da raiz. Particularmente preferivelmente, a biomassa das raízes (peso total e/ou seco da mesma) é realçada em comparação com a biomassa obtida para as raízes de uma planta cultivada em substrato S* comparável em condições comparáveis não submetidas ao método de acordo com a presente invenção.

[00101] Em uma modalidade particularmente preferida, o método é para melhorar a raiz das plantas. Portanto, o crescimento das raízes é preferivelmente estimulado. A biomassa das raízes (peso total e/ou seco da mesma) é realçada em comparação com a de uma planta comparável cultivada em substrato S* comparável sob condições comparáveis não submetidas ao método de acordo com a presente invenção. Será entendido que um crescimento radicular promovido também pode promover a absorção de nutrientes, a absorção de água e/ou o crescimento total das plantas, em particular o crescimento radicular.

[00102] Um aspecto adicional da presente invenção refere-se ao uso de (uma combinação de) pelo menos uma fonte de amônio A, em que pelo menos 50 % em mol do teor total de nitrogênio de A está presente como amônio e/ou nitrogênio ligado organicamente, pelo menos uma espécie de bactéria ou fúngica B com propriedades promotoras de crescimento da raiz e/ou solubilizantes de fosfato, em que B não faz parte de A e pelo menos um inibidor de nitrificação C para melhorar a nutrição de plantas com um ou mais minerais pouco solúveis, selecionados do grupo consistindo em fósforo (tipicamente fosfato), ferro,

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39/80 zinco e manganês.

[00103] Será entendido que todas as definições e modalidades preferidas estabelecidas no contexto do método de acordo com a presente invenção mutatis mutandis também se aplicam ao uso. Assim, o uso é preferivelmente caracterizado ainda por uma ou mais características, conforme exposto no contexto do método aqui descrito.

[00104] Como usado no contexto do uso, o termo combinação de pode ser entendido no sentido mais amplo quando usando todos os componentes A, B e C. Isso não significa necessariamente que esses ingredientes estejam compostos em uma única composição. Podem também ser aplicados separadamente de outros.

[00105] Outro aspecto adicional da presente invenção refere-se a uma composição utilizável para um método de acordo com a presente invenção, a referida composição compreendendo (em particular consistindo em):

(A) uma ou mais fontes de amônio A, (B) uma ou mais bactérias ou espécies fúngicas B com propriedades promotoras de crescimento de raiz e/ou solubilizantes de fosfato, (C) um ou mais inibidores de nitrificação C, (D) opcionalmente água, (E) opcionalmente um ou mais sais adicionais também melhorando a nutrição de plantas, e (F) opcionalmente um ou mais aditivos selecionados do grupo que consiste em conservantes, corantes, bactérias e/ou nutrientes fúngicos, solventes orgânicos e cargas, em que pelo menos 50 % em mol do teor total de nitrogênio da composição está presente como amônio e/ou nitrogênio ligado organicamente, e em que a composição não compreende uma fonte de amô

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40/80 nio A compreendendo espécies de bactérias ou fúngicas com propriedades promotoras de crescimento radicular e/ou solubilizantes de fosfato.

[00106] Será entendido que todas as definições e modalidades preferidas estabelecidas no contexto do método de acordo com a presente invenção mutatis mutandis também se aplicam à composição da presente invenção.

[00107] Como indicado acima, em uma modalidade preferida, a composição não compreende quantidades consideráveis de sais solúveis de minerais (pouco solúveis), tais como minerais selecionados do grupo consistindo em fósforo (tipicamente fosfato), ferro, zinco e manganês. Será entendido que os componentes podem compreender vestígios de tais sais. Em uma modalidade preferida, a composição (essencialmente) não compreende sais selecionados do grupo consistindo em sais de fósforo (tipicamente fosfato), ferro, zinco e manganês, em particular (essencialmente) não compreende esses sais na forma sólida e/ou de origem sintética, sais de fósforo (tipicamente fosfato) na forma sólida e/ou de origem sintética. Em uma modalidade preferida, a composição (essencialmente) não compreende esses sais na forma sólida e/ou de origem sintética, em particular (essencialmente) não compreende sais de fósforo (tipicamente fosfato) na forma sólida e/ou de origem sintética.

[00108] Em uma modalidade preferida, a quantidade de fósforo na composição é abaixo de 10% (peso/peso), preferivelmente abaixo de 5% (peso/peso), mais preferivelmente abaixo de 1% (peso/peso) ou abaixo de 0,1% (peso/peso), com base na soma do peso dos componentes A, B e C.

[00109] Em uma modalidade preferida, pelo menos uma espécie de bactéria ou fúngica B não é Bacillus amyloliquefaciens e a quantidade de fósforo na composição é abaixo de 10% (peso/peso), preferivel

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41/80 mente abaixo de 5% (peso/peso), mais preferivelmente abaixo de 1% (peso/peso) ou abaixo de 0,1% (peso/peso), com base na soma do peso dos componentes A, B e C e na quantidade total de fósforo.

[00110] Será entendido que a composição está livre dessas fontes de amônio A, compreendendo espécies de bactérias ou fúngicas com propriedades promotoras de crescimento de raiz e/ou solubilizantes de de fosfato. Portanto, a composição será tipicamente exemplarmente livre de adubo, lodo de limpeza, resíduo de repouso úmido de uma usina de biogás e solo. Em uma modalidade preferida, uma ou mais fontes de amônio A é/são um ou mais sais de amônio, mais preferivelmente um produto químico fertilizado que compreende pelo menos um sal de amônio, em particular sulfato de amônio.

[00111] Em uma modalidade preferida, os componentes A e B podem ou não ser separados espacialmente de outro. Em uma modalidade preferida, A e B são pós mistos. Em outra modalidade preferida, A e B são fornecidos em recipientes ou sacos separados espacialmente.

[00112] Opcionalmente, tal composição também pode ser usada como revestimento para sementes das plantas. Adequadamente, a presente invenção também se refere a sementes revestidas com uma composição de acordo com a presente invenção (tipicamente (essencialmente) sem água).

[00113] Opcionalmente, tal composição também pode ser granulada. Adequadamente, a presente invenção também se refere a péletes que compreendem (ou consistem em) uma composição de acordo com a presente invenção.

[00114] Em uma modalidade preferida, a composição compreende um ou mais sais adicionais também melhorando a nutrição de plantas como componente E. Tais sais adicionais E podem ser escolhidos para reduzir o estresse das plantas. Tais sais adicionais E podem ser

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42/80 exemplarmente selecionados da lista consistindo em um ou mais sais de zinco (Zn), um ou mais sais de magnésio (Mg), um ou mais sais de manganês (Mn), um ou mais extratos de algas e combinações dos mesmos. Em uma modalidade preferida, o componente E compreende (ou consiste em) uma mistura de Zn/Mn (isto é, uma mistura de sal(is) de Zn e Mn).

[00115] A composição pode ser um pó, um líquido ou um xarope. Opcionalmente, pode ser um produto comercial. De preferência, o usuário completa a composição imediatamente antes da sua utilização, isto é, antes de aplicar a composição ao substrato S de uso agrícola no qual as plantas são cultivadas ou se destinam a ser cultivadas. Particularmente preferível, o usuário adiciona os componentes B, C e, opcionalmente, D, E e/ou F a uma ou mais fontes de amônio A, uso prévio. A presente invenção também se refere a uma unidade de empacotamento, como um tanque ou uma sachê/bolsa compreendendo a composição de acordo com a presente invenção.

[00116] Em uma modalidade particularmente preferida, a composição é uma pélete/grânulo compreendendo os componentes A, B e C e, opcionalmente, um ou mais dos componentes C, D e/ou E. Por exemplo, o núcleo de tal pélete/grânulo pode compreendem os componentes A e C e a casca pode compreender o componente B. Isso pode opcionalmente ser alcançado por pulverização ou embebimento de péletes/grânulos precursores que compreendem os componentes A e C por uma suspensão compreendendo o componente B.

[00117] Dependendo dos microrganismos do componente B (isto é, a uma ou mais bactérias ou espécies fúngicas B com propriedades de solubilização de fosfato e/ou promotoras de crescimento radicular), será escolhida a pré-mistura opcional dos componentes e/ou a formulação da aplicação. Por exemplo, o uso separado de formulações líquidas compreendendo os componentes A e C, podem ser usados

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43/80 inoculantes microbianos líquidos para aplicação em fileira de sementes, incorporação de solo ou encharcamento de vasos de viveiro. Por exemplo, podem ser utilizadas formulações granuladas (por exemplo, produto misturado com grânulos separados para fertilizantes e microorganismos, por exemplo, para colocação de sementes).

[00118] Outro aspecto adicional da presente invenção refere-se a um kit para uso em um método de acordo com a presente invenção compreendendo pelo menos uma bactéria ou espécie fúngica B com propriedades de solubilização de fosfato e/ou promotoras de crescimento radicular, em que B não formam parte de A e pelo menos um inibidor de nitrificação C e, opcionalmente, uma ou mais fontes de amônio A.

[00119] Será entendido que todas as definições e modalidades preferidas apresentadas acima no contexto do método e da composição de acordo com a presente invenção, mutatis mutandis, também se aplicam ao kit da presente invenção.

[00120] Em uma modalidade preferida, pelo menos uma bactéria e/ou espécies fúngicas B estão presentes no kit como uma formulação de esporos. Em uma modalidade particularmente preferida, as bactérias e/ou espécies fúngicas são armazenadas no estado seco, em particular como esporos secos ou liofilizados. Essa formulação pode ser portadora de maior resistência ao estresse e ter uma vida útil mais longa. As bactérias e/ou espécies fúngicas (esporos) podem ser empacotados de qualquer forma, por exemplo, em um recipiente ou um sachê.

[00121] Opcionalmente, o kit pode compreender um, dois ou todos os componentes A, B e/ou C na forma peletizada (granulada), separados ou em combinação com outro, como descrito acima.

[00122] Em uma modalidade preferida, o kit compreende (ou consiste em), como componentes funcionais:

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44/80 (B) uma ou mais bactérias ou espécies fúngicas B com propriedades de solubilização de fosfato e/ou promotoras do crescimento radicular, (C) um ou mais inibidores de nitrificação C, (A) opcionalmente, uma ou mais fontes de amônio A, (D) opcionalmente água, (E) opcionalmente, um ou mais sais adicionais, também melhorando a nutrição de plantas, (F) opcionalmente, um ou mais aditivos selecionados do grupo que consiste em conservantes, cores, bactérias e/ou nutrientes fúngicos, solventes e cargas orgânicos, e [00123] Será entendido que o kit tipicamente compreenderá ainda meios para empacotar os componentes funcionais.

[00124] Em uma modalidade preferida, o kit compreende ainda instruções do usuário para conduzir um método de acordo com a presente invenção.

[00125] Em uma modalidade preferida, o kit de acordo com a presente invenção não compreende (isto é, é (essencialmente) livre de) outras espécies de bactérias X que não as bactérias ou espécies fúngicas B.

[00126] O kit de acordo com a presente invenção pode compreender (ou consistir em), como componentes funcionais:

A dois ou mais componentes pré-misturados com outro e um ou mais outros componentes fornecidos separadamente;

B uma composição pré-misturada compreendendo (ou consistindo em) componentes B e C e, opcionalmente, A, D, E e/ou F;

C todos os componentes B e C e, opcionalmente, A D, E e/ou F fornecidos separadamente.

[00127] Em uma modalidade particularmente preferida, o kit compreende (ou consiste em):

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45/80 (I) um pó compreendendo (ou consistindo em) componente B e, opcionalmente, componentes E e/ou F;

(II) um pó compreendendo (ou consistindo em) componente C e, opcionalmente, componente F; e (III) opcionalmente, uma composição compreendendo (ou consistindo em) qualquer um dos componentes A e/ou F.

[00128] Em uma modalidade preferida alternativa, o kit compreende (ou consiste em):

(l-ll) um pó compreendendo (ou consistindo em) componentes B e C e, opcionalmente, componentes E e/ou F; e (III) opcionalmente, uma composição compreendendo (ou consistindo em) qualquer um dos componentes A e/ou F.

[00129] Em uma modalidade preferida alternativa, o kit compreende (ou consiste em):

(I*) uma composição líquida ou xarope compreendendo (ou consistindo em) componente B e, opcionalmente, componentes E e/ou F;

(II) um pó compreendendo (ou consistindo em) componente C e, opcionalmente, componente F; e (III) opcionalmente, uma composição compreendendo (ou consistindo em) qualquer um dos componentes A e/ou F.

[00130] Em uma modalidade preferida alternativa, o kit compreende (ou consiste em):

(I) uma composição em pó compreendendo (ou consistindo em) componente B e, opcionalmente, componentes E e/ou F;

(II*) uma composição líquida ou xarope compreendendo (ou consistindo em) componente C e, opcionalmente, componente F; e (III) opcionalmente, uma composição compreendendo (ou consistindo em) qualquer um dos componentes A e/ou F.

[00131] Em uma modalidade preferida alternativa, o kit compreende

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46/80 (ou consiste em):

(I*) uma composição líquida ou xarope compreendendo (ou consistindo em) componente B e, opcionalmente, componentes E e/ou F;

(II*) uma composição líquida ou xarope compreendendo (ou consistindo em) componente C e, opcionalmente, componente F; e (III) opcionalmente, uma composição compreendendo (ou consistindo em) qualquer um dos componentes A e/ou F.

[00132] Em uma modalidade preferida alternativa, o kit compreende (ou consiste em):

(l-ll*) uma composição líquida ou xarope compreendendo (ou consistindo em) componentes B e C e, opcionalmente, componentes E e/ou F; e (III) opcionalmente, uma composição compreendendo (ou consistindo em) qualquer um dos componentes A e/ou F.

[00133] Tanto quanto apropriado e desejado, a mistura dos componentes com outro pode ser realizada por qualquer meio conhecido na técnica. Por exemplo, a mistura pode ser conduzida em estado não dissolvido/não diluído (por exemplo, como mistura de um ou mais pós secos e/ou um ou mais xaropes com outro) ou pode ser total ou parcialmente dissolvida e/ou diluída antes da mistura, por exemplo, em um solvente aquoso, tal como a água.

[00134] Quando se destina a usar fertilizantes químicos líquidos compreendendo pelo menos um sal de amônio, esterco, lodo de depuração, resíduo úmido de uma usina de biogás ou uma mistura de dois ou mais dos mesmos, em particular sulfato de amônio, como fonte de amônio (componente A), o kit compreende preferivelmente (ou consiste em) componentes (I) e (II), (I*) e (II), (I) e (II*), (I*) e (II*), (l-ll) ou (III*) apenas, e o usuário adiciona um ou ambos desses componentes ao componente A de interesse imediatamente antes de fornecer o

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47/80 substrato S com o mesmo.

[00135] Em uma modalidade preferida alternativa, o kit compreende (ou consiste em) (l-ll-lll): um pó que compreende (ou consiste em) componentes A, B e C e, opcionalmente, componentes E e/ou F.

[00136] Em uma modalidade preferida alternativa, o kit compreende (ou consiste em) (l-ll-lll*): uma composição líquida ou xarope que compreende (ou consiste em) componentes A, B e C e, opcionalmente, componentes E e/ou F .

[00137] Em outra modalidade preferida, o kit de acordo com a presente invenção compreende (ou consiste em) uma composição de acordo com a presente invenção. Aqui, como descrito acima, a composição pode ser uma suspensão aquosa ou pode ser um pó.

[00138] Outro aspecto da presente invenção refere-se a uma composição compreendendo ou consistindo em:

(A) uma ou mais fontes de amônio A de origem sintética, (B) uma ou mais bactérias ou espécies fúngicas B com propriedades de solubilização de fosfato e/ou promotoras do crescimento radicular, (C) um ou mais inibidores de nitrificação C, (D) opcionalmente água, (E) opcionalmente, um ou mais sais adicionais, também melhorando a nutrição de plantas, e (F) opcionalmente, um ou mais aditivos selecionados do grupo que consiste em conservantes, cores, bactérias e/ou nutrientes fúngicos, solventes e cargas orgânicas e enchimentos, em que preferivelmente pelo menos 50% em mol do teor total de nitrogênio da composição está presente como amônio e/ou nitrogênio ligado organicamente.

[00139] Os componentes são definidos como acima. A presença das fontes de amônio A como sendo de origem sintética pode ser en

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48/80 tendida no sentido mais amplo, em que as fontes de amônio A fazem parte ou são fertilizantes químicos. Esta composição pode ou não compreender mais de 20% (p/p), 10% (p/p), 5% (p/p), 1% (p/p) ou 0,1% (p/p) de fosfato (tipicamente na forma de fosfato), com base no peso total da composição como um todo.

[00140] Em uma modalidade preferida, a composição é uma composição sólida compreendendo os componentes A, B e C e, opcionalmente, E e, opcionalmente F, como pós misturados. Então, preferivelmente, água está preferivelmente (essencialmente) ausente na composição armazenável. Água pode opcionalmente ser adicionada imediatamente antes de fornecer um substrato S com a composição. Os termos são definidos como apresentados ao longo da presente invenção.

[00141] Em uma modalidade preferida, uma composição da presente invenção pode compreender ou consistir em:

(A) 5 a 99,9% (p/p), de preferência 5 a 50% (p/p) de uma ou mais fontes de amônio A, (B) 0,05 a 1% (p/p) de uma ou mais bactérias ou espécies fúngicas B, (C) 0,05 a 20% (p/p) de um ou mais inibidores de nitrificação C, referentes à composição total, preferivelmente entre 0,1 e 10% (p/p), mais entre 0,2 e 12% (p/p), refere-se ao teor total de nitrogênio em uma ou mais fontes de amônio A, (D) 0 a 80% (p/p) de água, (E) 0 a 80% (p/p) de um ou mais sais adicionais, melhorando a nutrição de plantas, e (F) 0 a 80% (p/p) de um ou mais aditivos selecionados do grupo que consiste em conservantes, cores, bactérias e/ou nutrientes fúngicos, solventes orgânicos e enchimentos.

[00142] Em uma modalidade preferida, uma composição da presenPetição 870190106782, de 22/10/2019, pág. 61/111

49/80 te invenção pode compreender ou consistir em:

(A) 5 a 99,85% (p/p), preferivelmente 5 a 20% (p/p) de nitrogênio compreendido em uma ou mais fontes de amônio A;

(B) 0,05 a 1% (p/p) de uma ou mais bactérias ou espécies fúngicas B, (C) 0,1 a 2% (p/p) de um ou mais inibidores de nitrificação C, referentes à composição total, preferivelmente entre 0,1 e 10% (p/p), mais entre 0,2 e 12% (p/p), referente ao teor total de nitrogênio em uma ou mais fontes de amônio A, (D) 0 a 80% (p/p) de água, (E’) 0 a 50% (p/p) de fosfato em sais contendo fosfato, (E”) 0 a 50% (p/p) de um ou mais outros sais adicionais, que não contêm fosfato, para melhorar ainda mais a nutrição das plantas, e (F) 0 a 80% (p/p) de um ou mais aditivos selecionados do grupo que consiste em conservantes, cores, bactérias e/ou nutrientes fúngicos, solventes orgânicos e cargas.

[00143] Em uma modalidade preferida, uma composição da presente invenção pode compreender ou consistir em:

(A) 5 a 99,83% (p/p), preferivelmente 7 a 15% (p/p) de nitrogênio compreendido em uma ou mais fontes de amônio A;

(B) 0,07 a 0,5% (p/p) de uma ou mais bactérias ou espécies fúngicas B, (C) 0,1 a 5% (p/p) de um ou mais inibidores de nitrificação C, referentes à composição total, preferivelmente entre 0,1 e 20% (p/p), mais entre 0,2 e 12% (p/p), referente ao teor total de nitrogênio em uma ou mais fontes de amônio A, (D) 0 a 1% (p/p) de água, (E’) 0 a 40% (p/p) de fosfato em sais contendo fosfato, (E”) 0 a 50% (p/p) de um ou mais outros sais adicionais,

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50/80 que não contêm fosfato, para melhorar ainda mais a nutrição das plantas, e (F) 0 a 10% (m/m) de um ou mais aditivos selecionados do grupo que consiste em conservantes, cores, bactérias e/ou nutrientes fúngicos, solventes orgânicos e cargas.

[00144] As quantidades, em particular a quantidade de inibidor de nitrificação C, serão adaptadas aos compostos químicos individuais.

[00145] Será entendido que os exemplos a seguir não se destinam a limitar o escopo das reivindicações. Os exemplos a seguir são fornecidos para exemplificar ainda mais a invenção e fornecer modalidades específicas da mesma.

Breve Descrição das Figuras [00146] Figura 1 demonstra os efeitos da capacidade de tamponamento do solo no estímulo do crescimento de milho por solubilização de Ca-P induzida por biofertilizante microbiano em um substrato com Ca-P e Rocha-P como fontes exclusivas de P seis semanas após a semeadura (Nkebiwe, 2017). (No. BEs = fosfato de rocha sem biofertilizantes microbianos (controle negativo); + P = P solúvel 150 mg P kg^-1 de solo como Ca(H2PO4)2, (controle positivo); Pseu = Pseudomonas sp. DMSZ 13134 = Proradix® (Soucon Padena, Tübingen, Alemanha); SP11 = VitalinSPI® (Vitalin Pflanzengesundheit, Oberamstadt, Alemanha): Mistura de Bacillus subtilis, Streptomyces sp, Pseudomonas sp, extrato de Ascophyllum nodosum, ácidos húmicos; Penic = Penicillium sp.' Paenibac = Paenibacillus mucilagenosus' Três inoculações semanais) [00147] Figura 2 demonstra a formação de rizobainha de milho sob condições de campo e ao longo de raízes únicas em um sistema de cultura de rizocaixa com janela de observação de raízes.

[00148] Figura 3 mostra o efeito sinérgico de um inibidor de nitrificação (DMPP), biofertilizantes microbianos e fertilização de amônio.

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Esta figura mostra a comparação entre os efeitos sinérgicos de diferentes biofertilizantes microbianos. (Aqui: NoP = controle de fundo sem fonte de fosfato; NoBE = fosfato de rocha sem biofertilizantes microbianos (controle negativo); Trianum P = Trichoderma harzianum T22 (N° de depósito: ATCC 20847); Proradix = Pseudomonas sp. (N° de depósito.: DMSZ 13134); Combifector A compreendendo: Trichoderma harzianum OMG16, Pseudomonas fluorescens, Bacillus subtilis e micronutrientes; Rhizovital = Rhizovital FZB42: Bacillus amyloliquefacienssubsp. plantarum, sinônimo: Bacillus velezensis FZB42 (ID de Taxonomia: 326423; N° de depósito.: DSM23117); Paenibacillus = Paenibacillus mucilaginosusy, BFOD = Penicillium bilaíí, VitSP11 = Vitalin SP11; NOs' = sal de nitrato adicionado; NhV = sal de amônio adicionado; Rocha-P = fosfatos de cálcio pouco solúveis como fonte exclusiva de P; Solub-P = fonte de fósforo solúvel adicionada). A estrela (*) indica que 0 teste t é significativo (0,05 alfa) comparado ao NoBE.

[00149] Figura 4 mostra 0 efeito sinérgico de um inibidor de nitrificação (DMPP), biofertilizantes microbianos e fertilização de amônio na geração de auxina no milho (aqui: NoBE = fosfato de rocha sem biofertilizantes microbianos (controle negativo); Rhizovital = Rhizovital FZB42: Bacillus amyloliquefaciens subsp. plantarum, sinônimo: Bacillus velezensis FZB42 (ID de taxonomia: 326423; n° de depósito: DSM23117); NOs' = sal de nitrato adicionado; NH4⁺ = sal de amônio adicionado). As letras minúsculas indicam grupos estatisticamente distinguíveis.

[00150] Figura 5 mostra 0 efeito sinérgico sinérgico de um inibidor de nitrificação (DMPP), biofertilizantes microbianos e fertilização de amônio a diferentes valores de pH no crescimento das plantas, (aqui: 1: fosfato de rocha sem biofertilizantes microbianos (controle negativo); 2: combinação do inibidor de nitrificação DMPP e sal de amônio; 3: combinação do inibidor de nitrificação DMPP, sal de amônio e Rhi

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52/80 zovital FZB42; 4: fonte de fósforo solúvel adicionada e nitrato adicionado). As letras minúsculas indicam grupos estatisticamente distinguíveis.

[00151] Figura 6 mostra o efeito sinérgico dos biofertilizantes microbianos e da fertilização de amônio no comprimento radicular do milho. As letras minúsculas indicam grupos estatisticamente distinguíveis.

[00152] Figura 7 mostra o efeito da fertilização de amônio estabilizada e da inoculação de microestimulantes microbianos (FZB42) no P disponível na planta (P extraível por CAL) na rizosfera de um solo com baixo P com pH 5,6. (1: não fertilizado; 2: rocha-P, NhV, 3: rocha-P, NH₄ ⁺, FZB42 (Bacillus amyloliquefaciens); 4: P solúvel, NO3 ). As letras minúsculas indicam grupos estatisticamente distinguíveis.

EXEMPLOS

Antecedentes [00153] Os inoculantes microbianos específicos são introduzidos na rizosfera da cultura-alvo, onde podem se propagar pelo suprimento de exsudatos de raízes de plantas como fonte de energia e aumentar a disponibilidade de nutrientes para a planta hospedeira (Menziesef al. 2011; Sharma et al., 2013). Uma faixa de produtos chamados biofertilizantes microbianos já está disponível comercialmente. Entretanto, reprodutibilidade limitada dos efeitos fertilizantes desejados sob condições práticas ainda representa um grande problema não resolvido (Menziesef al. 2011).

[00154] Portanto, em um projeto de pesquisa recente sobre microorganismos solubilizantes de P, mais de 10 experimentos realizados em oito países com quatro culturas (milho, trigo, cevada, tomate) e 13 produtos comerciais ou biofertilizantes bacterianos e fúngicos recémdesenvolvidos, revelaram que não há indicações para mobilização de formas P pouco solúveis na rizosfera, embora todas as cepas microbi

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53/80 anas apresentem potencial de solubilização de P em ensaios de rastreamento laboratorial em meios de crescimento artificiais (SánchezEsteva et al. 2016; Lekfeldt et al. 2016, Nkebiwe , 2017; Thonar et al., 2017). Investigações adicionais sugeriram que uma alta capacidade de tamponamento de muitos solos de campo é um fator importante, que limita a expressão de modificações induzidas por micróbios na química do solo suportando a solubilização de P (Fig. 1).

[00155] No solo calcário altamente tamponado (B), apenas o P solúvel (+ P) estimula crescimento do milho, enquanto os microrganismos solubilizantes de P (Pseu, SP11, Penic, Paenibac) foram ineficazes (Fig. 1B). Entretanto, redução da capacidade de tamponamento de pH do substrato por adição de areia de quartzo (70% p/p) estimula a promoção do crescimento das plantas, em especial a promoção do crescimento radicular, pelos inoculantes microbianos (A) [00156] O potencial da estratégia com base em fertilizantes para aumentar a eficiência de biofertilizantes microbianos como inoculantes de plantas foi investigado.

[00157] Bactérias foram escolhidas para permitir a acidificação do solo por raízes de plantas, que é induzida pela fertilização dominada por amônio, que pode aumentar a disponibilidade de fosfato (P) e micronutrientes nas plantas, particularmente em solos neutros e alcalinos (Marschner, 1995; Neumann e Rõmheld 2002). Esses microrganismos do solo foram identificados como também capazes de usar o amônio como fonte de nitrogênio catiônico, associado à extrusão de prótons para equilíbrio de carga, o que resulta em acidificação média (Menzies etal., 2011; Nkebiwe 2017).

[00158] Nos presentes exemplos, foram documentados os efeitos da fertilização com amônio combinada com inibição da nitrificação na morfologia da raiz, incluindo o alongamento dos pêlos radiculares, o que está associado com uma maior capacidade de ligação das partícu

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54/80 las do solo para a formação das chamadas rizobainhas, melhorando o contato com o solo radicular e aumentando a extensão radial da rizosfera para aquisição de nutrientes e interações planta-micróbio.

[00159] Inoculantes microbianos com base em cepas de Bacillus, Pseudomonas e Trichoderma, representativos para muitos biofertilizantes comerciais, foram caracterizados pela solubilização de Ca-P em meios de crescimento artificiais e utilização de sulfato de amônio como fonte de nitrogênio. DMPP (dimetilpirazolfosfato) foi identificado como um dos exemplos adequados para inibidores de nitrificação sem efeitos negativos no crescimento dos respectivos inoculantes (Nkebiwe 2017).

[00160] Resumidamente, verificou-se surpreendentemente que o potencial de crescimento de plantas/raízes de inoculantes microbianos com base em cepas de Pseudomonas, Bacillus e Trichoderma pode ser induzido e sinergicamente aumentado por combinação com fertilização de DMPP-Amônio. Os efeitos foram demonstrados para produtos de biofertilizantes contendo três cepas diferentes de Pseudomonas, três cepas de Trichoderma e cinco cepas de Bacillus e combinações das mesmas, até agora com três culturas diferentes (milho, trigo, tomate).

[00161] As bactérias ou espécies fúngicas B foram obtidas dos seguintes fornecedores:

Trianum P; Trichodermaharzianum T22 (N° de depósito: ATCC 20847; Koppert Biological Systems Nederland, Veilingweg 14, 2651 BE Berkel en Rodenrijs, Holanda)

Rhizovital FZB42: Bacillus amyloliquefaciens sub sp. Plantarum, sinônimo: Bacillus velezensis FZB42 (ID de taxonomia: 326423; N° de depósito: DSM23117; ABiTEP GmbH, GlienickerWeg 185, 12489 Berlin, Alemanha)

Bacillus atrophaeus (ABI02A1, N° de depósito: DSM 32019;

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ABiTEP GmbH, GlienickerWeg 185, 12489 Berlin, Alemanha)

Paenibacillus mucilaginosus (ABiTEP GmbH, GlienickerWeg 185, 12489 Berlin, Alemanha)

Proradix; Pseudomonas sp., (N° de depósito: DMSZ 13134; Sourcon Padena GmbH & Co. KG, Hechinger Str. 262, 72072 Tübingen, Alemanha)

Biological Fertilizer OD, Penicillium sp. (Bayer CropScience Biologies GmbH, Inselstr. 12, 23999 Malchow/Poel, Alemanha)

Trichoderma harzianum OMG16 (Anhalt University of Applied Sciences Center of Life Sciences, Institute of Bioanalytical Sciences (IBAS) Strenzfelder Allee 28, 06406 Bernburg, Alemanha)

Vitalin SP11 (Vitalin Pflanzengesundheit GmbH, PragelatostraBe 113, 64372 Ober-Ramstadt, Alemanha)

Estatísticas: se não indicado separadamente, análises estatísticas foram realizadas de uma maneira ANNOVA com teste Tukey, p=0,05 Interação sinérgica de fertilização de DMPP-amônio e Pseudomonas sp. na promoção do crescimento de plantas [00162] Usando o biofertilizante à base de Pseudomonas Proradix® (Sourcon Padena, Tübingen, Alemanha) como inoculante modelo, um efeito sinérgico com fertilização com sulfato de amônio estabilizada por DMPP foi demonstrado sobre a produção de biomassa de milho, cultivado em um substrato de areia-solo pH 7,5 com fosfatos de cálcio moderadamente solúveis como fonte de P exclusiva (Rocha-P) com e sem tamponamento com pH aumentado por adubação de 20% de (Ca(CO₃)₂ (p/p) (Tabela 1).

Tabela 1: Produção de biomassa de broto (planta g^_1) de milho (cv Colisee) em um substrato de areia-solo (subsolo de calcário Loess pH 7,6; Pcal5 mg kg^-1 de solo) com diferentes níveis de adubação (0 e 25% de Ca(CO₃)₂) e Ca-fosfatos pouco solúveis como fonte exclusiva de P (120 mg de P kg^-1 de substrato como Rocha-P). Efeito

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56/80 da fertilização de nitrato e DMPP-amônio (substrato 100 mg N kg^-1 como Ca (NOs)2 ou DMPP-(NH4)2SO4 Novatec Solub, Compo, Alemanha) e três inoculações semanais com Proradix (10⁹ cfu kg^-1 de substrato).

Tratamento de Fertilização	Substrato fracamente tamponado (70 % de areia/30% de solo com baixo P)	Substrato altamente tamponado 70% de areia/30% de solo com baixo P 25% de Ca(CO3)2
RochaP -100% de NOy	12,3 b	9,3c
RochaP - 80% de NHÚ/20% de NOy	20,5 ab	16,9 b
RochaP - 80% de NHU/20% de NOy
+ Proradix	22,9 a	20,4 a

[00163] O mesmo efeito sinérgico foi detectado também em quatro experimentos de estufa com milho em solos de campo real (pH 6,8 a 7,5) com baixa disponibilidade de P (< 20 mg Pcal kg^-1 de substrato) e Rocha-P como fertilizante de P pouco solúvel (Tabela 2). Em média, a combinação de DMPP-Amônio com Proradix aumentou produção de biomassa de brotos de milho em aproximadamente 53% em comparação com a fertilização com nitrato, e um aumento de 21% pode ser atribuído ao efeito de Proradix.

Tabela 2: Produção de matéria seca de broto (g planta^-1) de milho (cv Colisee) em dois diferentes solos de campo de argila-barro com baixa disponibilidade de P (< 20 mg Pcal kg^-1 de substrato) fornecido com Rocha-P (RP) (120 mg de P kg^-1 de substrato) como fonte exclusiva de P. O efeito da fertilização com nitrato e DMPP-amônio (100 mg N kg^-1 de substrato como Ca(NOs)2 ou DMPP-(NH4)2SO4 Novatec Solub, Compo, Alemanha) e três inoculações semanais por fertirrigação com Proradix (10⁹cfu kg^-1 de substrato)

Experimento	NO RP 3	NO RP 3 Proradix	NH RP 4	NH RP 4 Proradix	NO P 3 sol
Mpanga (2015)	n.d	6,9c	7,8c	9,8b	11,3a
Kar(2015)	n.d	10,4c	13,0b	15,2a	14,1a
Gomez (2016)	4,3b	4,6ab	8,1ab	9,6a	9,5a
Gomez (2016)	3,3b	3,7b	3,5b	4,3b	8,0a

n.d. = não determinado

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57/80 [00164] Efeitos sinérgicos entre a fertilização com Proradix e DMPP-Amônio no estímulo do crescimento de plantas não se restringem ao milho e podem ser demonstrados similarmente em um experimento de pote com trigo de primavera em um solo de agricultura orgânica com baixo teor de argila (pH 6,4, Pcal: 7 mg kg^-1) fornecido com Rocha-P (RP) como fonte de P pouco solúvel. Inoculação com Proradix em combinação com DMPP-Amônio aumentou significativamente a produção final de grãos em 34% em comparação com o controle não inoculado, enquanto o efeito de Proradix em combinação com a fertilização com nitrato não foi significativo (+ 8%).

Tabela 3: Produção de biomassa e produção de grãos de trigo da primavera (cv Schirocco) em um solo de agricultura orgânica com baixo teor de argila (pH 7,6; 7 mg Pcal kg^-1 de solo) fornecido com Rocha-P (RP) (150 mg P kg^-1 de substrato) como fonte exclusiva de P. Efeito de fertilização com nitrato e DMPP-amônio (100 mg N kg^-1 de substrato como Ca(NOs)2 ou DMPP-(NH4)2SO4 Novatec Solub, Compo, Alemanha) e três inoculações por fertirrigação com Proradix (Pro, 10⁹cfu kg^-1 de substrato) nos dias 0, 24 e 34.

Tratamento	Broto DM (estágio de inicialização) g planta'1	Raiz DM g pote'1	Palha DM g pote'1	Grão DM g pote'1
NOs RP	0,96	1,28	17,25	12,48 a
NO3 RP Proradix	1,04	1,23	17,84	13,47 ab
NH4 RP	0,97	1,28	16,80	11,42 b
NH4 RP Proradix	1,24	1,73	20,10	15,44 a

Promoção do crescimento de plantas por combinação de DMPPamônio com diferentes inoculantes microbianos [00165] Uma faixa de sete produtos biofertilizantes microbianos, com base em cepas de Bacillus, Pseudomonas Trichoderma, Penicillin m e combinações dos mesmos, foi testada quanto ao seu potencial de promoção de crescimento de plantas com cv Colisee de milho em combinação com fertilização com DMPP-Amônio em um solo de agricultura orgânica de barro/argila com baixo P solo pH 6,8 (P disponível:

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58/80 mg CAL-P kg^-1 de solo) fornecido com Rocha-P (100 mg P kg^-1 de solo) como fonte de fósforo pouco solúvel. Variantes sem fertilização com P (sem P) e com fornecimento de P solúvel (100 mg P kg^-1 no solo como Ca(H2PO4)2) foram incluídas como controle negativo e positivo, respectivamente. Tabela 3 mostra os efeitos dos inoculantes microbianos em combinação com o DMPP-Amônio como alterações relativas (%) em comparação com a fertilização com P solúvel completa e suprimento de nitrato (NO3 P solúvel = 100%, controle positivo) e 0 controle negativo não fertilizado (Sem P = 0%).

[00166] DMPP-amônio com fertilização com Rocha-P, mas sem biofertilizantes (NH4_RP) induziu aproximadamente 60% da produção de biomassa dos brotos em comparação com plantas de milho fornecidas com fertilização com P solúvel total (NOs_P Solúvel). Entretanto, DMPP-amônio em combinação com todos os produtos biofertilizantes testados com base em cepas de Pseudomonas, Bacillus e Trichoderma (Tabela 4) aumentou significativamente a produção de biomassa de brotos, mesmo para aqueles produtos que antes foram provados ineficazes anteriormente em combinação com fertilização com nitrato (Fig.1; Tabela 3). A única exceção foi 0 biofertilizante com base em Penicillium (BFOD). No caso dos produtos de combinação Vit SP11 e CombifectorA, 0 aumento de biomassa obtido não foi significativamente menor do que 0 controle positivo com fertilização de P solúvel (Tabela 3). Com exceção do biofertilizante Trianum-P com base em Trichoderma, estímulo de crescimento de brotos foi associado com uma promoção de crescimento radicular e 0 conteúdo de brotos de P atingiu 80 a 90% em comparação com 0 controle positivo com 0 suprimento de P solúvel (Tabela 4).

Tabela 4: Efeitos sinérgicos da fertilização com amônia estabilizada (NH4) e inoculação com biofertilizantes fúngicos e bacterianos no crescimento e aquisição de P de rocha-P pouco solúvel (RP)

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59/80 em milho (cv Colisee) em urn solo de agricultura orgânica com baixo P. Valores relativos (%) comparados com fertilização convencional com base em nitrato com suprimento total de P solúvel (NO₃_P solúvel =

100%). (NO₃_P solúvel = 100%).

Tratamento	Biomassa de broto	Comprimento radicular	Conteúdo de P	de broto
NO3 P solúvel	100% (111 g)	100% (4900 cm)	100% (24 mg planta1)
NO3 Sem P	0%	104	0%
NH4 RH			/’à
NO3 RP Proradix	52	107 a	73
NH4 RP Proradix	82 b	141	89 b
NH4 RP TrianumP	75 b	117	84
NH< RP PhÍ7n\/ital	R1 h	1RR	R1
NH4 RP Paenibacillus	83 b	151	84
NH4 RP BFOD	70	147	73
NH4 RP VitalinSP11	85 ab	146	85
NH4 RP CombifectA	86 ab	190 b	78

a = não significantemente diferente de P solúvel; b = significantemente diferente de NFU RP [00167] Biofertilizantes fúngicos: Trianum.P (Trichoderma harzianum T22), BFOD (Penicillium bilaiiy, Biofertilizantes bacterianos: Proradix (Pseudomonas sp DMSZ13134), Rhizovital (Bacillus amyloliquefaciens FZB42), Paenibacillus mucilaginosus', Produtos de combinação: Vit SP 11 (Bacillus subtilis, Pseudomonas sp., Streptomyces spp., Ácidos húmicos, extrato de Ascophyllum nodosum), CombiFectA (Trichoderma harzianum OMG16, 3 cepas de Bacillus, Pseudomonas sp Zn e Mn).

[00168] A estrutura preta mostra exemplarmente o efeito sinérgico de DMPP-Amônio e Proradix em comparação com DMPP-Amônio ou com o Proradix combinado com fertilização de nitrato.

[00169] Além de P, também a aquisição de outros nutrientes minerais, como N, K e Mn, foi melhorada pela combinação de DMPPAmônio com biofertilizantes microbianos, em comparação com a fertilização exclusiva com DMPP-Amônio/Rocha-P (Tabela 5). Esses achados demonstram que não apenas a nutrição de P, mas o estado nutricional das plantas em geral, pode ser melhorado pelos efeitos sinérgicos da fertilização com DMPP-amônio e inoculantes microbianos no

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60/80 crescimento radicular e na solubilização de nutriente.

Tabela 5: Efeitos da fertilização com DMPP-Amônio e

DMPP-Amônio combinado com biofertilizantes microbianos no conteúdo de nutrientes de broto de milho (cv Colisee) em um solo de agricultura orgânica com baixo P fornecido com Rocha-P como fonte de P pouco solúvel. Alterações relativas (%) comparadas com fertilização convencional à base de nitrato com suprimento total de P solúvel (NOs_P solúvel = 100%, controle positivo). Para mais detalhes, consulte Tabela 3.

Tratamento	N (mg planta'1)	P (mg planta'1)	K (mg planta'1)	Mn (mg planta'1)
NOs P solúvel	100% (239)	100% (24)	100% (443)	100% (0,26)
NH4 RP	93 a	73	70	94 a
NH4 RP TrianumP	109 a	84	85 b	111a
NH4 RP Proradix	117 ab	89 b	102 ab	139 ab
NH4 RP Rhizovital	116 ab	81	90 ab	117 ab
NH4 RP Paenibac.	106 a	84	89 ab	111a
NH4 RP BFOD	112 a	73	81	106 a
NH4 RP VitalinSPH	121 ab	95	87 ab	117 ab
NH4 RP Combifect.	122 ab	78	87 ab	128 ab

a = não significantemente diferente de P solúvel; b = significantemente diferente de Nhh RP [00170] Uma seleção de biofertilizantes com base em Pseudomonas, Bacillus e Trichoderma (Proradix, Rhizovital, Paenibacillus mucilaginosus, Trianum-P) usados nos experimentos de milho descritos em combinação com a fertilização de DMPP-Amônio, exerceu também efeitos semelhantes em um experimento de pote conduzido com trigo de primavera, cultivado em um Cambisol com baixo P, com aumento de 14 a 28% na produção de biomassa de broto e um aumento de 26 a 35% na produção de grãos.

Tabela 6: Efeitos de bioefetores microbianos na produção de biomassa e na produção de grãos em um experimento de pote P com trigo da primavera (cv. Schirocco, KWS, Alemanha) em um solo d de solo e agricultura orgânica com baixo P (Pcal 7 mg kg^-1 solo), barro lodoso Cambisol, pH 6,4 com fertilização de amônio estabilizada com DMPP (solo NH4150 mg N kg^-1, colocado por injeção pontual) e fosfato de rocha (RP 150 mg P kg^-1 solo)) como fertilizante P.

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Matéria Seca de Broto (g planta1 em fase de inicialização)	Meio	Teste-t para controle (NH4 RP)
NH4 rp	0,97	A
NH4 RP Proradix	1,24
NH4 RP TrianumP	1,17
NH4 RP Rhizovital	1,12
NH4 RP Paenibacillus	1,11
Matéria Seca de Broto (g pote1 em maturidade)
NH4 RP	16,80
NH4 RP Proradix	20,10
NH4 RP TrianumP	18,89
NH4 RP Rhizovital	18,09
NH4 RP Paenibacillus	18,45
Matéria Seca de Grão (g pote1 em maturidade)
NH4 RP	11,42
NH4 RP Proradix	15,44	a
NH4 RP TrianumP	14,42
NH4 RP Rhizovital	14,61
NH4 RP Paenibacillus	15,05	a

a = significantemente diferente quando comparado com os controles não inoculados

Proradix= Pseudomonas sp. DSMZ13134; Rhizovital = Bacillus amyloliquefaciens FZB42; Paenibacillus =, Paenibacillus mucilagenosus (3 vezes 10⁹ CFU kg^-1 de solo); e Trianum P =Trichoderma harzianum T22 (3 vezes 10⁸ CFU kg^_1de solo).

Promoção do crescimento de planta em milho suprido com diferentes fontes de P por combinação de DMPP-amõnio com inoculantes microbianos com base em em cepas de Bacillus, Pseudomonas e Trichoderma.

[00171] Testar o potencial dos inoculantes microbianos investigados em combinação com fertilização com DMPP-amônio para promover a aquisição de plantas P de diferentes fontes de P pouco solúveis (solo nativo P, Rocha-P, fertilizantes inorgânicos de reciclagem, como cinzas de lodo de esgoto e estruvita derivada de digeridos de biogás processados), milho (cv Colisee) foi cultivado em solo de agricultura orgânica de argila com baixo P, pH 6,8 (P disponível: 20 mg de CAL-P kg^-1 de solo) fornecido com as várias fontes pouco solúveis de P (100 mg P kg^-1 de solo). Uma variante com suprimento de P solúvel (100 mg P kg^-1 de

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62/80 solo como Ca(H2PO4)2) foi incluída como controle positivo. Proradix e CombifectorA foram usados como inoculantes microbianos, devido ao seu potencial superior de promoção de crescimento de planta demonstrado na Tabela 4.

[00172] Os resultados demonstraram que todos os tratamentos com fertilizantes ou biofertilizantes poderíam aumentar a produção de biomassa da planta para um nível não significativamente diferente de plantas de controle positivo supridas com fertilização de nitrato e P solúvel total (Tabela 5). Proradix combinado com amônio teve efeitos significativos de promoção de crescimento em plantas fornecidas com Rocha-P e sem fertilização com P em comparação com a nutrição exclusiva com DMPP-amônio, enquanto o CombifectorA melhorou o crescimento das plantas com cinzas de lodo de esgoto (SSA). O acúmulo de broto P foi melhorado significativamente em Rocha-P por Proradix e CombifectorA e em Struvita por CombifectorA, associado a um intenso estímulo particular do crescimento radicular no caso do CombifectorA (Tabela 5). Os dados demonstram que a combinação de fertilização com DMPP-amônio com biofertilizantes microbianos com base em cepas de Pseudomonas, Bacillus e Trichoderma não apenas promove o crescimento das plantas e a aquisição de P a partir de fosfato de rocha, mas também de outras formas de P moderadamente solúveis no solo e de produtos fertilizantes de reciclagem inorgânicos.

Tabela 7: Efeitos de fertilizantes de P inorgânicos (rocha-P, cinzas de lodo de esgoto SSA, estruvita, P solúvel) e inoculação com biofertilizantes microbianos (Proradix; CombifectorA) sobre cultivo e acúmulo de P no broto de milho (cvColisee), cultivado em solo de agricultura orgânica de argila de barro, de baixo P, pH 6,8 com amônio estabilizado por DMPP como fonte de nitrogênio. Resultados são expressos como alterações relativas (%) em comparação com a fertilização com P solúvel total (= 100%) com suprimento de nitrato.

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Tratamento	Broto DM	Densidade de comprimento radicular	Conteúdo de broto P
Sem P, sem BE	79 b	94	75 b
Sem P, Proradix	89 a	95	84
Sem P, CombifectorA	87	91	89
Rocha-P, NoBE	92	102	92
Rocha-P, Proradix	108 a	100	110a
Rocha-P, CombifectorA	97	95	99 a
estruvita, NoBE	111	101	101
estruvita, Proradix	113	106	117a
estruvita, CombifectorA	109	104	98
SSA, NoBe	102	110	99
SSA, Proradix	101	110	109
SSA, CombifectorA	111 a	137 a	93

b - significativamente diferente do controle positivo fornecido com fertilização com nitrato e P solúvel.

a - significativamente diferente dos respectivos controles sem aplicação de biofertilizante

DMPP-amônio para aumentar o desempenho de inoculantes microbianos como protetores de estresse pelo frio no milho.

[00173] A baixa temperatura do solo na primavera é uma grande restrição para o cultivo de plantas tropicais e subtropicais em climas temperados e está associada com inibição do crescimento e atividade das raízes. Várias estratégias foram propostas como medidas práticas para combater o estresse por baixa temperatura nas culturas, incluindo: (i) colocação de fertilizantes (P, micronutrientes, como Zn e Mn) próximos às raízes das mudas; (ii) aplicação de extratos de plantas e algas com antioxidantes e propriedades protetoras da membrana e (iii) melhoramento do crescimento radicular e a aquisição de nutrientes das plantas por inoculação com micro-organismos promotores do crescimento de plantas (Bradacova et al. 2016). Em uma configuração experimental com temperatura controlada da zona radicular, o produto de combinação CombifectorA com base em Zn/Mn-Bacillus/Trichoderma foi testado em comparação com outros inoculantes microbianos (BCSB = inoculante com base em Penicillium; ABI02 = cepa Bacillus tolerante ao frio) com milho sob fertilização com amônio estabilizado com DMPP e nitrato exposta a estresse pelo frio (temperatura da zona da raiz controlada de 12 a 14°C). O dano oxidativo das folhas (forma

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64/80 ção de necrose, clorose e antocianina) comparado aos controles não inoculados diminuiu na ordem: Nenhum biofertilizante > ABI02 + ZnMn > ZnMn sozinho = BFOD + ZnMn > CombifectorA > controle não resfriado. O dano das folhas foi geralmente mais expresso sob o suprimento de nitrato em comparação com a fertilização com amônio (Tabela 8). A maior produção de biomassa de broto foi alcançada pelo CombifectorA (77g), seguido pelo BFOD (70g) sob fertilização com amônio e estresse pelo frio, que foi significativamente maior que todas as outras variantes testadas e controles não tratados (Tabela 8)

Tabela 8: Efeitos de inoculantes microbianos (Abi02, Bacillus atrophaeus resistente ao frio; BFOD Penicillium sp.; CombifectorA e curativo de sementes de Zn/Mn (Lebosol GmbH, Alemanha) no peso fresco de produção de biomassa de brotos (FW g planta^-1) e dano de folha oxidativo (número de clorlótico/necrótico) folha de planta^-1) no milho, induzida por duas semanas de exposição a temperaturas de zona radicular de 12 a 14 °C em um solo de campo de argila-barro com pH 6,8 com fertilização com nitrato ou sulfato de amônio estabilizado por DMPP.

Tratamento	Nitrato Broto FW	Dano nas folhas	dmpp-nh4 Broto FW	Dano nas folhas
Não tratado 12°C	55,4 b	5,6 a	60,0 b	3,6 ab
Zn/Mn 12°C	53,4 b	4,4 ab	58,2 b	3,2 b
Zn/Mn ABI02 12°C	55,2 b	4,6 ab	57,6 b	3,8 ab
Zn/Mn BFOD 12°C	54,8 b	4,4 ab	69,9 a	3,2 b
CombifectorA 12°C	53,3 b	3,4 b	75,7 a	2,4 b
Não tratado não resfriado	54,8 b	1,1 c	58,0 b	1,1 c

[00174] O efeito supressor de estresse por frio de CombifectorA também foi refletido pelo aumento significativo da atividade da superóxido dismutase (SOD) e do conteúdo de polifenólicos no tecido do broto do milho, que era mais expresso em amônio quando comparado com fertilização com nitrato (não mostrada), refletindo uma maior expressão de mecanismos de defesa contra o estresse oxidativo depen

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65/80 dendo dos micronutrientes (Zn, Mn, Cu, Fe) como co-fatores enzimáticos. Consequentemente, um estado crítico de micronutrientes foi identificado como fator limitante do crescimento em plantas de milho expostas a baixa temperatura na zona da raiz (Tabela 9). Aplicação de sementes de micronutrientes, os inoculantes microbianos e a acidificação da rizosfera induzida pela fertilização de amônio estabilizada com DMPP, obviamente aumentaram a disponibilidade da planta dos micronutrientes críticos na rizosfera (Tabela 9), desse modo estimulando a expressão da defesa de estresse antioxidante.

[00175] Como os mesmos mecanismos de defesa também estão envolvidos na tolerância de planta a outros fatores de estresse abióticos e bióticos, atualmente são realizadas investigações comparáveis também para plantas expostas à limitação de água.

Tabela 9: Efeitos de inoculantes microbianos (Abi02, Bacillus atrophaeus resistente ao frio; BFOD Penicillium sp.; Combifector A e Zn/Mn (Zn/MnS, Lebosol GmbH, Alemanha) no estado nutricional de Zn e Mn e alterações no pH do solo da rizosfera (relativo ao pH do solo a granel) no milho, induzido por duas semanas de exposição a temperaturas da zona radicular de 12 a 14 °C em um solo de campo de argila-barro, pH 6,8 com fertilização com nitrato ou sulfato de amônio estabilizado com DMPP. NoBE = controle não tratado.

Tratamentos	Δ pH Rizosfera vs solo a granel	Zinco [mg kg'1 de Broto DM)	Manganésio [mg kg'1 de Broto DM)
NO3 12°C Não tratado	+0,3	24 c	35 c
ZnMn	+0,3	40 b	47 b
ABI02 + ZnMn	+0,2	37 b	48 b
BFOD + ZnMn	+0,1	38 b	49 b
Combifector A	+0,1	48 b	48 b
NO3 não resfriado Não tratado	+0,4	46 b	50 b
NH412°C Não tratado	-0,2	59 a	51 b
ZnMn	-0,2	59 a	54 ab
ABI02 + ZnMn	-0,3	53 ab	55 ab
BFOD + ZnMn	-0,4	58 a	59 a
Combifector A	-0,3	59 a	64 a
NH4 não resfriado Não tratado	-0,2	58 a	53 ab

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Desempenho de campo [00176] Para investigar o potencial de DMPP-Amônio em combinação com biofertilizantes com base em Bacillus, Trichoderma, e Pseudomonas para melhorar aquisição de P de culturas em condições reais de prática, experimentos de campo foram realizados em solos com disponibilidade de P baixa a moderada para produção de milho para silagem (Alemanha, República Tcheca, Sul da Itália) e trigo de inverno (Alemanha).

Produção de milho para silagem [00177] Sítios de campo (Tabela 10) na Alemanha e na República Checa foram caracterizados por solos de barro lodoso para areia-barro com disponibilidade de P média (~50 mg Pcal kg^-1 de solo) e pH moderadamente acídico (5,2 a 5,9), enquanto o experimento na Itália foi conduzido solo de argila-barro com pH elevado (8,6) e disponibilidade de P moderadamente baixa (11 mg Poisen kg^-1 de solo). Produção de biomassa de variedades de milho locais foi determinada para fertilização por DMPP-Amônio/Rocha-P com e sem inoculação de Bacillus/Trichoderma e biofertilizantes com base em Pseudomonas em comparação com práticas de agriculta locais e uma fertilização com P solúvel total com Superfosfato ou Triplo-Superfosfato.

Tabela 10: Características de sítio para experimentos de campo de milho para silagem

	Alemanha	República Tcheca	Itália
Localização
Variedade de Milho	Jessy, S230	Kartagos, S230	LG 30.600, K600
Textura do solo	Barro de lodo	Barro de areia	Barro de argila
Solo	pH 5,9	pH 5,2	pH 8,6
Química	52 mg Pcal kg'1 de solo 1,1% Co^	58 mg Pcal kg-1 de solo 1,5% Oorg	11 mg Poisen kg'1 de solo 1,1 % Cong
Clima	8,7 °C AMT 876 mm AAP	6,5 °C AMT 667 mm AAP	15,6 °C AMT 879 mm AAP

[00178] No solo alcalino com baixo P na Itália, biofertilizantes com base em Bacillus (FZB42) em combinação com ácidos húmicos e extratos de algas marinhas, bem como produtos de combinação de Baci

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67/80 llus-Trichoderma enriquecidos com Zn/Mn (Cobifector A/B) foram testados. Em combinação com o DMPP-Amônio, todos os biofertilizantes estimularam o crescimento do milho em uma extensão semelhante em comparação com os controles não inoculados. Nas variantes sem fertilização com P, dependendo do P de solo nativo, produção de biomassa foi aumentada pelos inoculantes, em média, 34,5%. Mesmo para o Rocha-P, que exibe solubilidade particularmente baixa em solos alcalinos, os inoculantes aumentaram a produção de biomassa em 11,5% e em comparação com a prática dos agricultores com base na fertilização de fosfato de uréia/diamônio não estabilizada (50 kg P ha^-1), produção de biomassa aumentou 22,4% (Tabela 11).

Tabela 11: Matéria seca de broto [g planta^-1] de milho cv Limagrain (LG) 30.600 no sítio de campo Castel Volturno, Itália, como determinado por diferentes formas de fertilização e inoculação de N e P com Bacillus (FZB42) e biofertilizantes microbianos com base em Bacillus + Trichoderma CombifectA/B

Tratamento com Biofertilizante	Prática dos agricultores (Urea+DAP)	DMPP-NH 4 Solo de P nativo	DMPP-NH 4 Rocha-P	DMPP-NH 4 Super-P Triplo
Não inoculado	36,6 c	33,3 d	37,3 be	41,2 ab
CombifectA	nd	42,4 ab	38,8 abc	nd
CombifectB	nd	46,7 a	41,9 a	nd
FZB42+HA	nd	44,4 a	43,0 a	nd
FZB42+SW	nd	45,6 a	42,5 a	nd

[00179] Por outro lado, nos solos mais ácidos com disponibilidade moderada de P na Alemanha e na República Tcheca, a comparação com variantes não fertilizadas revelou que apenas N, mas não P, era um fator limitante do crescimento. Sob essas condições, inoculantes microbianos com base em Paenibacillus mucilaginosus, Pseudomonas sp e o produto de combinação Bacillus/Trichoderma CombifectorA não exerceram efeitos promotores de crescimento significativos em combinação com DMPP-amônio.

Produção de trigo de inverno

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68/80 [00180] Uma experiência de campo com trigo de inverno (cv. Kometus) para testar a combinação do produto de biofertilizante com base en Pseudomonas Proradix com diferentes fertilizantes de nitrogênio e fosfato foi realizada em 2015/2016 em um sítio de campo de conversão de pastagens perto de Horb am Neckar, sudoeste da Alemanha, com pH do solo levemente ácido de 6,6 (CaCb) e baixa disponibilidade de fósforo (21 mg de CAL P kg^-1 de solo). Proradix foi aplicado como suspensão aquosa com incorporação no topo do solo antes da semeadura e no topo das plantas de trigo no início da vegetação após o inverno em taxas de 23 kg ha^-1. As diferentes variantes de fertilização estão resumidas na Tabela 12.

Tabela 12: Aplicação de fertilizantes no ensaio de campo de trigo de inverno 2015/16 Horb, sudoeste da Alemanha - (ASN = sulfato de amônio/nitrato; CAN = nitrato de cálcio-amônio, AS = sulfato de amônio; AS = sulfato de amônio; MP = péletes de estrume de galinha, Agriges, Itália)

Tratamentos com fertilizante orgânico e mineral (Zero = nenhum fertilizante aplicado)

Prática agrícola atual - 65 kg N ha^-1 como ASN após o inverno (Padrão) - 81 kg N ha^-1 como CAN em alongamento do tronco (BBCH 30)

- 57 kg N ha^-1 como CAN em emergência de inflorescência (BBCH 55)

Padrão Reduzido - 60 kg N ha^-1 como ASN após inverno

- 80 kg N ha^-1 como CAN em emergência de inflorescência (BBCH55)

DAP - 18 kg N + 20 kg P ha^-1 + 20 kg P ha^-1 como fosfato de diamônio (DAP) antes da semeadura

- 60 kg N ha^-1 como ASN após inverno.

- 62 kg N ha^-1 como CAN em emergência de inflorescência.

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Péletes de estrume - 46 kg N + 20 kg P ha^-1 como péletes de estrume (MP; 3% N, 1,3% P) + adição de inibidor de nitrificação (DMPP) antes da semeadura.

- 60 kg N ha^-1 como ASN após inverno.

- 34 kg N ha^-1 como como CAN em emergência de inflorescência.

Rocha P - 20 kg P ha^-1 como fosfato de rocha (Naturphosphat 26, Timac AGRO) + 46 KG n ha^-1 como AS + DMPP (Nova Tec® solub 21) antes da semeadura.

+ 154 kg N ha^-1 como NovaTec® solub 21 após inverno.

Controle Positivo - 100 kg P como Super Fosfato (SP, Triferto) antes da semeadura.

- N fertilização como Padrão Reduzido.

[00181] Inoculação com Proradix mostrou uma tendência ao aumento da produção de grãos (+ 9 a 11%), tanto em combinação com fosfato de rocha e fertilização por DMPP-amônio quanto com fertilizante orgânico de estrume de frango estabilizado com DMPP, mas não com fertilização DAP padrão e não estabilizada (Tabela 13), confirmando os resultados dos experimentos com vasos relacionados. Entretanto, comparando todas as estratégias de fertilização testadas, apenas Proradix + Rocha P com amônio estabilizada com DMPP podería competir com a prática padrão de fertilização (Tabela 13).

Tabela 13: Produção de grãos (1000 kg ha^-1) de um ensaio de campo de trigo de inverno em 2015/16 em Horb, sudoeste da Alemanha, como determinado por diferentes formas de fertilização e inoculação de N e P com o biofertilizante microbiano Proradix com base em Pseudomonas. Os dados representam valores médios ± erro padrão da média (SEM; n = 5). Diferenças significativas são indicadas por caracteres diferentes (teste de Tukey, p < 0,05).

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Variante	Não inoculado	Proradix
Sem fertilização	5,5 b	nd
FP (Prática dos agricultores)	10,6 a	nd
FP reduzida	8,8 a	8,8 a
FP reduzida + Super-P	9,0 a	nd
DAP	9,5 a	8,8 a
Rocha-P + DMPP-NH4	9,4 a	10,5 a
Estrume +DMPP	8,9 a	9,7 a

n.d = não determinado

Modo de ação [00182] Os efeitos relatados são muito provavelmente uma consequência de interações complexas e múltiplas planta-fertilizantesmicróbios no nível da química da rizosfera, efeitos hormonais e alterações na morfologia das raízes.

Acidificação da rizosfera induzida por amônio [00183] Nutrição com amônio induz a acidificação da rizosfera devido à extrusão de prótons induzida pela raiz para o equilíbrio de carga da captação de amônio (Tabela 14), com os efeitos bem documentados sobre o aumento da solubilidade de fosfatos de Ca, rocha P e micronutrientes, com particular importância em solos levemente ácidos a alcalinos com solubilidade limitada dos respectivos nutrientes (Neumann e Rõmheld 2002). Em princípio, micro-organismos também liberam prótons em resposta à captação de amônio (Menziesef al., 2011). Entretanto, no exemplo mostrado na Tabela 14, a inoculação de plantas de milho cultivadas em solo orgânico com baixo P (pH 6,8), com o biofertilizante Proradix à base de Pseudomonas, obviamente não contribuiu significativamente para a intensidade da acidificação da rizosfera, embora amônio seja uma fonte eficiente de nitrogênio para a bactéria inoculada (Nkebiwe, 2017). Entretanto, Proradix pode induzir acidificação rizoesférica de maior duração (Tabela 14). Juntamente com a estimulação do crescimento radicular, isso leva a um sistema radicular acidificante maior e a uma tensão temporal da acidificação da rizosfera induzida por amônio. Entretanto, os resultados apresentados na Tabe

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71/80 la 9 sugerem que outros inoculantes microbianos também podem ser capazes de intensificar localmente a acidificação induzida por amônio no solo da rizosfera.

Tabela 14: Alterações no pH da rizosfera (em relação ao solo a granel) ao longo das raízes seminais de milho fornecidas com fertilização com rocha P e nitrato ou amônio estabilizada por DMPP com ou sem inoculação com o biofertilizante Proradix à base de Pseudomonas em um orgânico com baixo teor de argila solo agrícola, pH 6,8. Medições realizadas com microeletrodos de antimônio, 1 mm de diâmetro (Hãussling etal., 1985).

	Alterações no pH da Rizosfera (relativo ao solo a granel) Dia 14 Dia 20 Dia 29 Dia 36
RP NO3 RP NOsProradix RP NH4 RP NHáProradix	+0,5 +0,5 -0,1 -0,1	0 +0,4 -0,7 -0,6	+0,2 +0,1 -0,6 -0,2	+0,1 +0,5 -0,1 -0,5

Expansão espacial da rizosfera [00184] A formação dos chamados rizobainhas, formadas por partículas do solo ligadas a uma matriz de exopolissacarídeos liberada pelas raízes das plantas e por micro-organismos da rizosfera, que podem cobrir grandes partes do sistema radicular (Figura 2) é uma característica típica de muitas gramíneas, mas também de espécies de plantas adaptadas à seca (McCully, 1999).

[00185] A formação de rizobainhas melhora o contato do solo com as raízes (Fig. 2), com efeitos positivos na captação e na mobilização de nutrientes moderadamente disponíveis na rizosfera. Além disso, ligação de solo nas rizobainhas mostra uma maior capacidade de retenção de água em comparação com o solo a granel como um benefício importante sob condições de limitação da água (Huang et al. 1993). O tamanho das rizobainhas e assim a extensão da rizosfera é amplamente determinada pelo comprimento dos pêlos radiculares (Fig. 2; Hailing et al., 2014). Respostas de crescimento radicular, incluindo a

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72/80 formação de pêlos radiculares, são fortemente determinadas pela disponibilidade de nutrientes com variabilidade particularmente alta em resposta à fertilização com amônio, dependendo da dosagem, pH do solo, localização do fertilizante e genótipo (Kania et al., 2007; Pan et al. 2016).

[00186] Investigando as respostas de crescimento radicular do milho à fertilização com DMPP-amônio versus nitrato estabilizada (ambos 100 mg N kg^-1 de solo) com e sem inoculação com Proradix (Pseudomonas sp). em solo de agricultura orgânica de baixo P (pH 6,8) fornecido com fosfato de rocha como fertilizante P revelou uma estimulação do alongamento capilar das raízes e uma extensão correspondente do diâmetro da rizobainha induzida pela fertilização com DMPP-amônio (Tabela 15). Embora a inoculação com Proradix não tenha efeitos significativos no comprimento e na extensão das rizobainhas (Tabela 15), o número total de pêlos radiculares foi aumentado pela estímulo da proliferação radicular.

Tabela 15: Efeitos da forma N (nutrição com nitrato vs amônio estabilizado com DMPP) e inoculação com Proradix (Pseudomonas sp. DMSZ13134) no desenvolvimento dos pêlos radiculares e no diâmetro da rizobainha do milho, cultivados em solo de agricultura orgânica com baixo teor de argila P e pH 6,8 com Fertilização com Rocha-P.

Tratamento	Diâmetro da Rizobainha [mm]	Comprimento de pêlos radiculares [mm]
RochaP NO — 3	1,6 b	0,67 b
RochaP NO Proradix — 3”	2,1ab	0,82 b
RochaP NH4	2,5 a	0,98 a
RochaP NH4 Proradix	2,5 a	0,98 ab
P solúvel	1,9 ab	0,86 ab

[00187] Acredita-se que estímulo do crescimento radicular por inoculantes microbianos seja mediada pela produção microbiana de fatores hormonais (principalmente auxinas) ou interferência nos sistemas

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73/80 de sinalização hormonal da planta (por meio de sinais de detecção de quorum ou degradação de precursores de etileno). Entretanto, o potencial das respectivas atividades metabólicas em inoculantes microbianos é mais frequentemente demonstrado em meios de crescimento artificiais em placas de ágar e investigações sob condições de rizosfera são raras.

[00188] Como uma abordagem de rastreamento alternativa, nos estudos da rizosfera realizados com milho, como descrito acima, populações bacterianas foram novamente isoladas da rizosfera das plantas de milho, fornecidas com fertilização com nitrato ou amônio estabilizada com DMPP, com ou sem pré-inoculação de diferentes biofertilizantes microbianos, e subsequentemente o potencial de produção de auxina das populações novamente isoladas foi testado com um ensaio padrão (Bharucha et al., 2013). Tabela 16 mostra os resultados de três experimentos realizados em três solos de campo diferentes com dois produtos de biofertilizantes microbianos diferentes (Proradix; ECAG2895) como inoculantes. Em todos os casos, a produção de auxinas das populações bacterianas novamente isoladas de plantas préinoculadas fornecidas com fertilização com amônio foi maior do que sem pré-inoculação, com efeitos significativos particularmente para o produto de combinação microbiana ECAG2895) e isso foi associado a efeitos promotores do crescimento radicular nos respectivos tratamentos. Os achados promovem ainda um papel da produção de auxina microbiana como fator putativo para estímulo do crescimento radicular. O efeito sinérgico da fertilização estabilizada com amônio está alinhado com os relatórios da literatura sobre o aumento da produção de auxinas por Pseudomonades fornecidas com amônio como fonte de nitrogênio em meios de crescimento artificiais (Bharuchaet al. 2013)

Tabela 16: Produção de auxina de biomassa microbiana g^_1 (valores de referência, ensaio de Salkowski) de populações bacteria

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74/80 nas novamente isoladas do solo da ritosfera ligada às raízes de plantas de milho cultivadas em três solos de campo diferentes (argilabarro-barro lodoso, pH 60,8 a 7,5 ) e fertilização com nitrato ou amônio estabilizada com DMPP (DMPP Nhk), com e sem inoculantes microbianos (Proradix; ECAG2895) e fosfato de rocha (RP) ou Ca(H2PO4)2 (Psol) como fertilizantes P.

Tratamento	Nitrato	DMPP NH 4
RP 21 DAS	n.d.	63,3 a
RP Proradix 21 DAS	n.d.	83,9 a
RP 35 DAS	n.d.	79,2 a
RP Proradix 35 DAS	n.d.	109,0 a
RP	26,9 a	24,8 a
RP Proradix	21,8 a	34,8 a
Psol 24 DAS	47,1	41,0 a
Psol ECAG2895 24 DAS	86,6	144,6 b

[00189] Entretanto, este não é um princípio geral. Os efeitos sinérgicos da fertilização com amônia estabilizada com DMPP e diferentes inoculantes microbianos podem depender de diferentes modos de ação. Como mostrado no experimento descrito na Tabela 4, o biofertilizante à base de Trichoderma (Trianum P) melhorou o crescimento das plantas e a aquisição de P da rocha P no milho em combinação com DMPP-amônio. Nesse caso, a aquisição melhorada de P não foi associada a nenhuma promoção do crescimento radicular, sugerindo um efeito direto na solubilização do P por meio de alterações químicas na rizosfera. Por outro lado, a promoção do crescimento das plantas induzida pelo efeito combinado de DMPP-amônio e o produto de combinação Combillector A de Bacillus/Tríchoderma/Zn/Mn foi associada a uma promoção maciça do crescimento radicular (Tabela 4), com efeitos positivos significativos na aquisição de diferentes nutrientes, como N, K e Mn (tabela 5). Isso também pode oferecer a explicação para a ampla expressão de efeitos sinérgicos entre a fertilização com amônio

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75/80 e uma ampla gama de diferentes inoculantes microbianos documentados até o momento. Independentemente de seu modo de ação, ambos os BEs estimuladores do crescimento radicular e solubilizantes de P podem sinergicamente apoiar a mobilização de nutrientes mediada pela raiz induzida pela extrusão de prótons desencadeada por amônio (Tabela 14) como resposta geral em todas as culturas, e também pela extensão da rizosfera induzida por amônio demonstrada na Tabela 15.

Efeito sinérgico de um inibidor de nitrificação (DMPP), biofertilizantes microbianos e fertilização com amônio no crescimento das plantas - comparação entre diferentes biofertilizantes microbianos [00190] Este exemplo foi conduzido conforme descrito acima. DMPP é usado como inibidor de nitrificação nas amostras. Como mostrado na Figura 3, os biofertilizantes microbianos mostram um impacto benéfico estatisticamente significativo no crescimento das plantas em solos que contém fosfatos de cálcio pouco solúveis como fonte exclusiva de P. Efeitos sinérgicos de amônio similares também foram encontrados após a inoculação com outras bactérias e fungos pertencentes aos gêneros Trichoderma, Penicillium, Pseudomonas, Bacillus, Paenibacillus e Streptomyces. Este exemplo mostra o efeito positivo de uma combinação de biofertilizantes microbianos (bioestimulantes) e nitrogênio de amônio estabilizado no crescimento das plantas por aumento da captação induzida de P de fosfato de rocha. Fertilização estabilizada com amônio estabilizada apóia sinergicamente a promoção do crescimento de plantas em milho fornecidas com Ca-P (Rocha-P) pouco solúvel. Este exemplo mostra o efeito positivo de uma combinação de bioestimulantes e amônio N estabilizado no crescimento de planta por captação de P aumentada induzida de fosfato de rocha em um solo argiloso com pH 6,9. Este efeito não foi encontrado em solos onde o amônio é substituído por nitrato; em outras palavras, quantidaPetição 870190106782, de 22/10/2019, pág. 88/111

76/80 des maiores de sais de nitrato são adicionadas.

Efeito sinérgico de um inibidor de nitrificação (DMPP), biofertilizante microbiano e fertilização com amônio na produção de auxinas e no crescimento radicular [00191] Este exemplo foi conduzido conforme descrito acima. O DMPP é usado como inibidor de nitrificação nas amostras. O potencial de produção de rizosfera-bacteriana do fator de crescimento auxina (determinado após Glickmann&Dessaux, 1995) é significativamente aumentado pela combinação de um bioestimulante (FZB42) com fertilização com amônia estabilizada (cf. Figura 4), resultando em um aumento de plantas e crescimento das raízes das respectivas plantas (cf. Figura 6). Verificou-se que a produção do fator de crescimento auxina no milho é significativamente aumentada por uma combinação com um biofertilizante microbiano (bioestimulante) (FZB42) com fertilização com amônia estabilizada, resultando em um aumento no crescimento de plantas e raízes. Os resultados estão representados na Figura 4. Amônio como fonte de N aumentou o potencial de produção de auxina de cepas bacterianas, in vitro (A) e após re-isolamento da rizosfera de milho.

[00192] Além dos efeitos estimulantes sobre o potencial de produção de auxina das bactérias da rizosfera (cf. Figura 4), a fertilização com amônia estabilizada também aumentou os níveis internos dos hormônios do crescimento das plantas, tais como auxina (ácido indol acético), citocininas (zeatina) e ácido giberrélico no tecido da parte aérea das plantas de milho em comparação com o controle fertilizado com nitrato (Tabela 17, determinado pela análise UHPLC-MS de acordo com Moradtalab et al. 2018). Níveis internos aumentados de hormônios de crescimento induzidos por amônio podem aumentar a capacidade de resposta das plantas hospedeiras à produção hormonal de inoculantes microbianos.

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Tabela 17: Níveis de fito-hormônio em brotos de milho (3 semanas após a semeadura) em solo argiloso com pH 6,9 afetado pela forma de fertilização nitrogenada (nitrato de Ca ou sulfato de amônio estabilizado)

Broto con. [ng g1]	Nitrato	DMPP-Amônio
Auxina (IAA)	56,0 b	83,0 a
Ácido giberélico	40,7 b	76,7 a
Citocinina (Zeatina)	2,1 b	3,3 a

Efeito sinérgico de um inibidor de nitrificação (DMPP), biofertilizante microbiano e fertilização com amônio no crescimento das plantas a diferentes valores de pH [00193] Este exemplo foi conduzido conforme descrito acima. DMPP é usado como inibidor de nitrificação nas amostras. Verificou-se que o efeito sinérgico é aumentado em pH elevado do solo em comparação com valores mais baixos de pH, onde o crescimento geral das plantas de milho é, entretanto, menor. Sem estar ligado a esta teoria, supõe-se que a solubilidade do fosfato de rocha seja maior com um valor de pH mais baixo. Este exemplo demonstra que a presente invenção tem um efeito particularmente alto em valores de pH neutros e ligeiramente básicos. Crescimento de milho em dois solos africanos com pH contrastante fornecido com fertilização com amônio estabilizada e inoculado com Bacillus amyloliquefaciens FZB42.

[00194] O efeito sinérgico de uma combinação de fosfato de rocha bioestimulante - amônio estabilizado com inibidor de nitificação (Nl) é muito claro em pH neutro ao alcalino do solo em comparação com ambientes de pH mais baixo (cf. Figura 5), porque neste último caso a solubilidade de fosfatos de rocha é melhor de qualquer maneira. Entretanto, os efeitos benéficos na disponibilidade de P ainda são detectáveis mesmo em solos mais ácidos, embora não se traduzam necessariamente em melhor crescimento das plantas devido ao suprimento já suficiente de P nos tratamentos sem bioestimulantes (cf. Figura 7).

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Claims (17)

1. REIVINDICAÇÕES

   1. Método para melhorar a nutrição de plantas com um ou mais minerais pouco solúveis selecionados do grupo consistindo em fósforo, ferro, zinco e manganês, caracterizado pelo fato de o referido método compreender as seguintes etapas:

   (i) fornecer os seguintes componentes:

   (A) pelo menos uma fonte de amônio A, em que pelo menos 50 % em mol do conteúdo de nitrogênio total de A está presente como amônio e/ou nitrogênio organicamente ligado, (B) pelo menos uma espécie de bactéria ou fúngica B com propriedades de promoção de crescimento de raiz e/ou solubilizante de fosfato, em que B não forma parte de A, e (C) pelo menos um inibidor de nitrificação C;

   (ii) fornecer os componentes A, B e C a um substrato S de uso agrícola no qual as plantas são cultivadas ou destinadas ao cultivo;

   e (iii) possibilitar crescimento das plantas no substrato S obtido de etapa (ii).
2. 2. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de pelo menos uma fonte de amônio A ser um fertilizante químico compreendendo pelo menos um sal de amônio, estrume, lodo de limpeza, resíduo de repouso úmido de uma usina de, ou uma mistura de dois ou mais dos mesmos, mais preferivelmente um fertilizante químico compreendendo pelo menos uma sal de amônio, em particular sulfato de amônio.
3. 3. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de pelo menos uma espécie de bactéria e fúngica B ser selecionada do grupo consistindo em espécie Trichoderma, espécie Pseudomonas, espécie Bacillus, e combinações das mesmas.

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4. 4. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações

   1 a 3, caracterizado pelo fato de pelo menos uma espécie de bactéria ou fúngica B compreender bactéria selecionada do grupo consistindo em Paenibacillus mucilaginosus, Trichoderma harzianum, Pseudomonas sp. DMSZ 13134, Pseudomonas fluorescens, Bacillus subtilis, Bacillus amiloliquefaciens, e combinações das mesmas.
5. 5. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações

   1 a 4, caracterizado pelo fato de pelo menos um inibidor de nitrificação C não ser tóxico para pelo menos uma espécie de bactéria ou fúngica B, em particular inibindo a amônia mono-oxigenase de amônio oxidante de bactéria.
6. 6. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações

   1 a 5, caracterizado pelo fato de pelo menos um inibidor de nitrificação C ser um composto selecionado do grupo consistindo em compostos contendo um resíduo de pirazol que pode ser substituído em sua estrutura, 1H-1,2,4-triazol, 2-cloro-6-(triclorometil)-piridina, 5-etóxi-3triclorometil-1,2,4-tiadiazol, 2-amino-4-cloro-6-metil-pirimidina, 2-mercapto-benzotiazol, 2-sulfanilamidotiazol, tioureia, 4-amino-1,2,4-triazol, 3-mercapto-1,2,4-triazol, 2,4-diamino-6-triclorometil-5-triazina, bissulfeto de carbono, tiossulfato de amônio, tritiocarbonato de sódio, 2,3-dihidro-2,2-dimetil-7-benzofuranol metil carbamato e N-(2,6-dimetilfenil)N-(metoxiacetil)-alanina metil éster, ou um composto de fórmula (I)

   

   ou um estereoisômero, sal, tautômero ou N-óxido dos mesmos, em que

   A é arila ou hetarila, em que o anel aromático pode em cada caso ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes, que são independentemente um do outro

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   3/12 selecionados de R^1A e R^2A independentemente um do outro selecionados de H e d-C2-alquila; e

   R^3A é H, Ci-C4-haloalquila, Ci-C4-hidroxialquila, etinilhidroximetila, fenilhidroximetila, ou arila, em que o anel aromático pode ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes, que são independentemente um do outro selecionados de R^B;

   e em que

   R^A é (i) halogênio, CN, NR^aR^b, OR^C, SR^C, C(=Y¹)R^C,

   C(=Y¹)OR^C, C(=Y¹)SR^C, C(=Y¹)NR^aR^b, Y²C(=Y¹)R^c, Y²C(=Y¹)OR^C, Y²C(=Y¹)SR^c, Y²C(=Y¹)NR^aR^b, Y³Y²C(=Y¹)R^c, NR^gN=C(R^d)(R^e),

   C(=N-OR^c)R^g, C(=N-OR^c)R^g, C(=N-SR^c)R^g, C(=N-NR^aR^b)R^g,

   S(=0)₂R^f, NR^gS(=0)2R^f, S(=0)2Y²C(=Y¹)R^c, S(=0)2Y²C(=Y¹)OR^c, S(=0)2Y²C(=Y¹)SR^c, S(=0)2Y²C(=Y¹)NR^aR^b, N02, NON-CN, Ci-C₆-alquila, C₂-C6-alquenila, C₂-C6-alquinila, Ci-C4-haloalquila, Ci-C4-cianoalquila, Ci-C4-hidroxialquila, Ci-C4-alcóxi, C₂-C4-alquinil-Ci-C₂-hidroxialquila, C₂-C4-alquinilóxi;

   (ii) Ci-C4-alquileno-C(=Y¹)R^c, C2-C4-alquenileno-C(=Y¹)R^c, C1-C4- alquileno-C(=Y¹)OR^c, C2-C4-alquenileno-C(=Y¹)OR°, CI-C4alquileno-C(=Y¹)SR^c, C2-C4-alquenileno-C(=Y¹)SR^c, C1-C4-alquilenoC(=Y¹)NR^aNR^b, C2-C₄-alquenileno-C(=Y¹)NR^aNR^b, Ci-C4-alquileno-Y²C(=Y¹)R^C, C2-C₄-alquenileno-Y²-C(=Y¹)R^c, Ci-C4-alquileno-NR^aR^b, C2C4-alquenileno-NR^aR^b, C1-C4-alquileno-OR^c, C2-C4-alquenileno-OR^c, Ci-C4-alquileno-SR^c, C2-C4-alquenileno-SR^c, em que a cadeia de C1C4-alquileno ou C₂-C4-alquenileno pode em cada caso ser não substituída ou pode ser parcialmente ou totalmente substituída por OR^g, CN, halogênio ou fenila;

   (iii) arila, aril-C1-C₂-alquila, hetarila ou hetaril-C1-C₂-alquila, em que 0 anel aromático do grupo arila ou hetarila pode ser não

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   4/12 substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes, que são independentemente um do outro selecionados de R^h;

   (iv) um heterociclo ou carbociclo saturado ou insaturado de 3 a 14 membros, que pode conter 1, 2, ou 3 heteroátomos que, independentemente um do outro, são selecionados de NR^1b, O, e S, em que S pode ser oxidado e/ou em que o carbociclo ou heterociclo pode ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes que, independentemente um do outro, são selecionados de R'; e em que R^1b é H, Ci-C4-alquila, C2-C4-alquenila, C3-C6cicloalquila, Cs-Ce-cicloalquilmetila, ou OR^g; ou (v) L-B, em que

   L é -CH2-, -CH=CH-, -CEC-, -C(=0)- ou -CH=, e

   B é arila ou hetarila, em que 0 anel aromático do grupo arila ou hetarila pode ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes, que são independentemente um do outro selecionados de R^h; ou um heterociclo ou carbociclo saturado ou insaturado de 3 a 14 membros, que pode conter 1, 2, ou 3 heteroátomos que, independentemente um do outro, são selecionados de NR^1b, O, e S, em que S pode ser oxidado e/ou em que 0 carbociclo ou heterociclo pode ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes que, independentemente um do outro, são selecionados de R'; e em que R^1b é H, Ci-C4-alquila, C2C4-alquenila, Cs-Ce-cicloalquila, Cs-Ce-cicloalquilmetila, ou OR^g; ou (vi) dois substituintes R^A juntos representam um anel carbcíclico ou heterocíclico, que é fundido a A e pode conter 1, 2, ou 3 heteroátomos que, independentemente um do outro, são selecionados de NR^1c, O, e S, em que S pode ser oxidado e/ou em que 0 carbociclo ou heterociclo pode ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes que, independentemente um

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   5/12 do outro, são selecionados de R'; e em que R^1c é H, Ci-C4-alquila, C₂C4-alquenila, Cs-Ce-cicloalquila, Cs-Ce-cicloalquilmetila, Cs-Ce-heterociclila, Cs-Ce-heterociclilmetila ou OR^g; e em que

   R^B é NH-C(=0)-(C1-C₄-alquila), NH-C(=0)-(C₂-C₄-alquenila), NH-C(=0)-(C1-C2-alcóxi-C1-C2- alquila), NH-C(=0)-(C3-C6-cicloalquila), NH-S(=0)2-(C1-C4-alquila), ou N0₂; e em que

   Y¹, Y² e Y³ são independentemente um do outro selecionados de O, S e NR^1a, em que R^1a é em cada caso independentemente H, Ci-C4-alquila, C2-C4-alquenila, Cs-Ce-cicloalquila, Cs-Ce-cicloalquilmetila, OR^g, SR^g ou NR^mRⁿ;

   R^a e R^b são independentemente um do outro selecionados de (i) H, NRR^k, OR¹, SR¹, Ci-C4-alquila, C2-C4-alquenila, C2C4-alquinila, Ci-C4-hidroxialquila, Ci-C4-alcóxi, C(=Y¹)R', C(=Y¹)OR', C(=Y¹)SR', C(=Y¹)NRJR^k, C(=Y¹)C(=Y²) R¹, S(=0)₂R^f;

   (ii) arila ou hetarila, em que 0 anel aromático do grupo arila ou hetarila pode ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes, que são independentemente um do outro selecionados de R^b; ou R^a e R^b juntamente com 0 átomo de nitrogênio ao qual eles são ligados formam (iii) um grupo hetarila que pode ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes, que são independentemente um do outro selecionados de R^b; ou (iv) um heterociclo saturado ou insaturado de 3 a 10 membros, que pode conter 1, 2, ou 3 heteroátomos que, independentemente um do outro, são selecionados de NR^1b, O, e S, em que S pode ser oxidado e/ou em que 0 heterociclo pode ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes que, independentemente um do outro, são selecionados de R';

   e em que R^1b é H, Ci-C4-alquila, C2-C4-alquenila, C3-C6Petição 870190106782, de 22/10/2019, pág. 98/111

   6/12 cicloalquila, Cs-Ce-cicloalquilmetila, ou OR^g; R^cé (i) H, C1-C4-alquila, C2-C4-alquenila, C2-C4-alquinila, C(=0)OR', C(=0)SR', C(=0)NRJR^k;

   (ii) Ci-C4-alquileno-C(=0)R', Ci-C4-alquileno-C(=0)OR', em que a cadeia de Ci-C4-alquileno pode em cada caso ser não substituída ou pode ser parcialmente ou totalmente substituída por OR^g, CN, halogênio, ou fenila;

   (iii) arila, aril-C1-C2-alquila, hetarila, ou hetaril-Ci-C2-alquila, em que o anel aromático do grupo arila ou hetarila pode ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes, que são independentemente um do outro selecionados de R^h; ou (iv) um carbociclo ou heterociclo saturado ou insaturado de 3 a 10 membros, que pode conter 1, 2, ou 3 heteroátomos que, independentemente um do outro, são selecionados de NR^1b, O, e S, em que S pode ser oxidado e/ou em que o carbociclo ou heterociclo pode ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes que, independentemente um do outro, são selecionados de R¹; e em que R^1b é H, Ci-C4-alquila, C2-C4-alquenila, C3-C6cicloalquila, Cs-Ce-cicloalquilmetila, ou OR^g;

   R^d e R^e são independentemente selecionados de C1-C4alquila, Ci-C4-haloalquila, NR^jR^k, OR', SR', CN, C(=Y¹)R', C(=Y¹)OR', C(=Y¹)SR', ou C(=Y¹)NRJR^k; R^f é Ci-C4-alquila, Ci-C₄-haloalquila, NR^jR^k, OR¹, SR¹, arila ou hetarila, em que 0 anel aromático do grupo arila ou hetarila pode ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes, que são independentemente um do outro selecionados de R^h;

   R^g é H ou Ci-C4-alquila;

   R^h é halogênio, CN, N02, NR^jR^k, OR¹, SR¹, Ci-C4-alquila, C2-C4-alquenila, C2-C4-alquinila, Ci-C4-haloalquila, Ci-C4-alcóxi, C2-C4

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7. 7/12 alquinilóxi, C(=Y¹)RI, C(=Y¹)OR', C(=Y¹)SR', C(=Y¹)NRJR^k, arila, arilóxi, hetarila e hetarilóxi;

   R' é (i) halogênio, CN, Ci-C4-alquila, C2-C4-alquenila, C2-C4alquinila, Ci-C4-haloalquila, C2-C4-haloalquenila;

   (ii) =NR^1d, em que R^1d é H, Ci-C4-alquila, C2-C4-alquenila, Cs-Ce-cicloalquila, Cs-Ce-cicloalquilmetila, ou OR^g;

   (iii) =0, =S, NRJR^k, OR¹, SR¹, C(=Y¹)R', C(=Y¹)OR', C(=Y¹)SR', C(=Y¹)NRJR^k;

   (iv) arila, aril-Ci-C2-alquila, hetarila, ou hetaril-Ci-C2-alquila, em que 0 anel aromático do grupo arila ou hetarila pode ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes, que são independentemente um do outro selecionados de halogênio, CN, Ci-C4-alquila, Ci-C4-haloalquila, Ci-C4-alcóxi, C2C4-alquinilóxi, OR^g, e SR^g; ou (vi) Cs-Ce-cicloalquila, ou heterociclila de 3 a 6 membros, em que 0 anel cicloalquila ou 0 anel heterociclila pode ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes, que são independentemente um do outro selecionados de halogênio, CN, Ci-C4-alquila, OR^g, e SR^g;

   R^j e R^k são independentemente selecionados de H, OR^g, SR^g, C(=Y¹)R^g, C(=Y¹)OR^g, C(=Y¹)SR^g, C(=Y¹)NR^mRⁿ, Ci-C₄-alquila, C2-C4-alquenila, C2-C4-alquinila, Ci-C4-haloalquila, arila ou hetarila, em que 0 anel aromático do grupo arila ou hetarila pode ser não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes, que são independentemente selecionados de halogênio, CN, C1C4-alquila, Ci-C4-haloalquila, Ci-C4-alcóxi, C2-C4-alquinilóxi, OR^g, e SR^g; R¹ é H, Ci-C4-alquila, C2-C4-alquenila, C2-C4-alquinila, C1-C4haloalquila, C(=Y¹)R^g, C(=Y¹)OR^g, C(=Y¹)SR^g, C(=Y¹)NR^mRⁿ, arila ou hetarila, em que 0 anel aromático do grupo arila ou hetarila pode ser

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8. 8/12 não substituído ou pode ser parcialmente ou totalmente substituído por substituintes, que são independentemente selecionados de halogênio, CN, Ci-C4-alquila, Ci-C4-haloalquila, Ci-C4-alcóxi, C2-C4-alquinilóxi, OR^g, e SR^g; e R^me Rⁿ independentemente selecionados de H e C1-C4alquila.

   7. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de pelo menos um inibidor de nitrificação C ser um composto de fórmula geral (II) r²^ |^^{R3 R1} (ii) ou sais de adição de ácido do mesmo, onde os radicais R¹, R², R³ e

   R⁴ independentemente de outro têm os seguintes significados:

   R¹, R², R³ e R⁴ podem ser C1- a C2o-alquila, hidrogênio, C3a Cs-cicloalquila, C5- a C2o-arila ou alquilarila, sendo possível para estes 4 radicais serem monossubstituídos ou dissubstituídos por halogênio e/ou hidroxila,

   R¹, R², R³ podem também ser halogênio ou nitro;

   R⁴ pode também ser um radical tendo a fórmula (III)

   RS

   --ç _—

   R⁶ (III) onde

   - R⁵ e R⁶ independentemente de outro são hidrogênio, C1- a C2o-alquila que podem ser monossubstituídos ou dissubstituídos por halogênio e/ou hidroxila, um grupo carboxila, um grupo carboximetila ou um derivado funcional dos dois últimos grupos mencionados, e

   - R⁷ é um radical carboxila ou um radical carbóxi-(Ci- a C3alquil) ou um derivado funcional destes grupos,

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9. 9/12 ou é selecionado do grupo consistindo em 1H-1,2,4-triazol, 2-cloro-6-(triclorometil)-piridina e 5-etóxi-3-triclorometil-1,2,4-tiadiazol, em particular é fosfato de 3,4-dimetilpirazol (DMPP) ou ácido 2-(3,4dimetil-pirazol-1-il)-succínico ou um sal dos mesmos.

   8. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações

   1 a 7, caracterizado pelo fato de, antes de conduzir etapa (ii), o substrato S compreende menos do que 50 mg, preferivelmente não mais do que 30 mg, em particular não mais do que 20 mg, fosfato disponível de planta por kg do substrato S.

   9. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações

   1 a 8, caracterizado pelo fato de as plantas suportarem sistemas de raiz insuficientes para eficiente captação de nutriente, em particular em que as plantas mostram crescimento inicial de raiz e/ou foram submetidas às condições de estresse, tal como, baixa temperatura da zona radicular.
10. 10. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de referido método compreender etapas (i-l) de pré-mistura dos componentes A, B e C assim formando mistura ABC, opcionalmente em uma suspensão aquosa ou em estado sólido, subsequente à etapa (i) e antes de realizar etapa (ii), em que etapa (ii) é (ii) fornecer a mistura ABC ao substrato S de uso agrícola no qual as plantas são cultivadas ou destinadas ao cultivo.
11. 11. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de o referido método comprender as etapas:

    (i-ll) de pré-mistura dos componentes A e C assim formando mistura AC, opcionalmente em uma suspensão ou solução aquosa, subsequente à etapa (i) e antes de realizar a etapa (ii), em que a etapa

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    10/12 (ii) compreende as etapas (ii-a) fornecer a mistura AC ao substrato S de uso agrícola no qual as plantas são cultivadas ou destinadas ao cultivo, e (ii-b) fornecer o componente B ao substrato S de uso agrícola no qual as plantas são cultivadas ou destinadas ao cultivo, em que etapa (ii-a) pode ser conduzida concomitante com, antes de ou subsequente à etapa (ii-b).
12. 12. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de o método ser para melhorar crescimento de raiz das plantas.
13. 13. Uso de pelo menos uma fonte de amônio A, caracterizado pelo fato de pelo menos 50% em mol do conteúdo de nitrogênio total de A estar presente como amônio e/ou nitrogênio ligado organicamente, pelo menos uma espécie de bactéria ou fúngica B com propriedades de promoção de crescimento de raiz e/ou solubilizante de fosfato, em que B não faz parte de A, e pelo menos um inibidor de nitrificação C para melhorar nutrição de plantas com um ou mais minerais pouco solúveis selecionados do grupo consistindo em fósforo, ferro, zinco e manganês, em particular em que o uso compreende as características como definidas em quaisquer das reivindicações 1 a 12.
14. 14. Composição caracterizada pelo fato de ser utilizável para um método como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 12 ou para o uso como definido na reivindicação 13, referida composição consistindo em (A) uma ou mais fontes de amônio A, (B) uma ou mais bactérias ou espécies fúngicas B com propriedades promotoras de crescimento de raiz e/ou solubilizantes de fosfato, (C) um ou mais inibidores de nitrificação C, (D) opcionalmente água,

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    11/12 (E) opcionalmente um ou mais sais adicionais também melhorando nutrição de plantas, e (F) opcionalmente um ou mais aditivos selecionados do grupo consistindo em conservantes, colorantes, bactéria e/ou nutrientes fúngicos, solventes orgânicos e cargas, em que pelo menos 50 % em mol do conteúdo de nitrogênio total da composição estão presentes como amônio e/ou nitrogênio organicamente ligado, em que a composição não compreende uma fonte de amônio A compreendendo espécie de bactéria ou fúngica com propriedades de promoção de crescimento de raiz e/ou solubilizantes de fosfato.
15. 15. Kit para uso em um método como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 12 ou para o uso como definido na reivindicação13, caracterizado pelo fato de compreender pelo menos uma espécie de bactéria ou fúngica B com propriedades de promoção de crescimento de raiz e/ou solubilizante de fosfato, em que B não faz parte de A, e pelo menos um inibidor de nitrificação C, e opcionalmente uma ou mais fontes de amônio A.
16. 16. Composição caracterizada pelo fato de compreender:

    (A) uma ou mais fontes de amônio A de origem sintética, (B) uma ou mais espécie de bactéria ou fúngica B com propriedades de promoção de crescimento de raiz e/ou solubilizante de fosfato, (C) um ou mais inibidores de nitrificação C, (D) opcionalmente água, (E) opcionalmente um ou mais sais adicionais também melhorando nutrição de plantas, e (F) opcionalmente um ou mais aditivos selecionados do grupo consistindo em conservantes, colorantes, bactéria e/ou nutrientes fúngicos, solventes orgânicos e cargas, em que preferivelmente pelo menos 50% em mol do conteúdo de nitrogênio total da composi-

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    12/12 ção está presente como amônio e/ou nitrogênio organicamente ligado.
17. 17. Composição de acordo com a reivindicação 14 ou 16, caracterizada pelo fato da composição ser uma composição sólida compreendendo os componentes A, B e C e, opcionalmente, E e, opcionalmente, como pós misturados.