BR112019020235A2 - molécula de ácido nucleico, composição, e, métodos para tratar uma doença num indivíduo e para induzir uma resposta imunológica num indivíduo. - Google Patents

molécula de ácido nucleico, composição, e, métodos para tratar uma doença num indivíduo e para induzir uma resposta imunológica num indivíduo. Download PDF

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Abstract

trata-se de uma composição que inclui uma sequência de ácidos nucleicos recombinante que codifica um anticorpo para um antígeno de hiv. é também revelado no presente documento um método para gerar um anticorpo sintético em um indivíduo administrando-se a composição ao indivíduo. a revelação também fornece um método para prevenir e/ou tratar uma infecção por hiv num indivíduo usando a referida composição e método de geração.

Description

MOLÉCULA DE ÁCIDO NUCLEICO, COMPOSIÇÃO, E, MÉTODOS PARA TRATAR UMA DOENÇA NUM INDIVÍDUO E PARA INDUZIR UMA RESPOSTA IMUNOLÓGICA NUM INDIVÍDUO
REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS [001] Este pedido reivindica prioridade do pedido provisório US n°
62/477.217, depositado em 27 de março de 2017, pedido provisório US n° 62/477.227, depositado em 27 de março de 2017, e cada um dos quais é incorporado ao presente documento em sua totalidade.
CAMPO DA TÉCNICA [002] A presente invenção se refere a uma composição que compreende uma sequência de ácidos nucleicos recombinante para gerar um ou mais anticorpos sintéticos e fragmentos funcionais dos mesmos, in vivo, e um método para prevenção e/ou tratamento de infecção viral num indivíduo administrando-se a referida composição.
FUNDAMENTOS [003] A força dos anticorpos amplamente neutralizantes (bNabs) para proteger ou controlar HIV-1 está bem estabelecida em modelos animais. Embora estes anticorpos sejam potentes e possam prevenir infecções ou controlar cargas virais, o custo de produção podería limitar gravemente a capacidade de usar estes anticorpos no campo. Adicionalmente, as abordagens de vacina atuais falharam na indução de anticorpos similares.
[004] Deste modo, há uma necessidade na técnica de terapêutica aprimorada que previna e/ou trate a infecção por HIV. A invenção atual satisfaz esta necessidade.
SUMÁRIO [005] A presente invenção se refere a uma molécula de ácido nucleico que codifica um ou mais anticorpos sintéticos, em que a molécula de ácido nucleico compreende pelo menos um selecionado a partir do grupo que consiste em a) uma sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo sintético anti
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HIV; e b) uma sequência de nucleotídeos que codifica um fragmento de um anticorpo sintético anti-HIV.
[006] Numa modalidade, a molécula de ácido nucleico compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica um domínio de clivagem.
[007] Numa modalidade, a molécula de ácido nucleico compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica uma ou mais de uma região de cadeia pesada variável e uma região de cadeia leve variável de um anticorpo anti-HIV.
[008] Numa modalidade, a molécula de ácido nucleico compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica uma ou mais sequências de aminoácidos pelo menos 90% idênticas a uma sequência de aminoácidos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO: 11 ou SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:39 SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:43, SEQ ID NO:45, SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:49 SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:53, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:57, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO:63, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:69, SEQ ID NO:71, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:75, SEQ ID NO:77, SEQ ID NO:79, SEQ ID NO:81, SEQ ID NO:83, SEQ ID NO:85, SEQ ID NO:87, SEQ ID NO:89, SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:93, SEQ ID NO:95, SEQ ID NO:97, SEQ ID NO:99, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 119, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO: 123, SEQ ID NO: 125, SEQ ID NO: 127, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 131 ou SEQ ID NO: 133.
[009] Numa modalidade, a molécula de ácido nucleico compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 95% idêntica à SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ
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ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:54, SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO:72, SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:78, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:84, SEQ ID NO:86, SEQ ID NO:88, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO:92, SEQ ID NO:94, SEQ ID NO:96, SEQ ID NO:98, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 114, SEQ ID NO: 116, SEQ ID NO: 118, SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 122, SEQ ID NO: 124, SEQ ID NO: 126, SEQ ID NO: 128, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 132 ou SEQ ID NO: 134.
[0010] Numa modalidade, a molécula de ácido nucleico compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica uma região de cadeia pesada variável e uma região de cadeia leve variável de um anticorpo anti-HIV.
[0011] Numa modalidade, a molécula de ácido nucleico compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos 95% idêntica à SEQ ID NO:3, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:63, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:71, SEQ ID NO:75, SEQ ID NO:79, SEQ ID NO:83, SEQ ID NO:87, SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:95, SEQ ID NO:99, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 119, SEQ ID NO: 123, SEQ ID NO: 127 ou SEQ ID NO: 131.
[0012] Numa modalidade, a sequência de nucleotídeos que codifica uma cadeia pesada compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 95% idêntica à SEQ ID NO:4, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 18, SEQ ID
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4/126
NO:26, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:72, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:80, SEQ ID NO:84, SEQ ID NO:88, SEQ ID NO:92, SEQ ID NO:96, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 116, SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 124, SEQ ID NO: 128 ou SEQ ID NO: 132.
[0013] Numa modalidade, a molécula de ácido nucleico compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos 95% idêntica à SEQ ID NO:5, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:57, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:69, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:77, SEQ ID NO:81, SEQ ID NO:85, SEQ ID NO:89, SEQ ID NO:93, SEQ ID NO:97, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO: 125, SEQ ID NO: 129 ou SEQ ID NO: 133.
[0014] Numa modalidade, a sequência de nucleotídeos que codifica uma cadeia leve compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 95% idêntica à SEQ ID NO:6, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:70, SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:86, SEQ ID NO:90, SEQ ID NO:94, SEQ ID NO:98, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 114, SEQ ID NO: 118, SEQ ID NO: 122, SEQ ID NO: 126, SEQ ID NO: 130 ou SEQ ID NO: 134.
[0015] Numa modalidade, a molécula de ácido nucleico compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica uma polipeptídeo que compreende uma região de cadeia pesada variável; um elemento IRES; e uma região de cadeia leve variável. Numa modalidade, o elemento IRES é um dentre IRES viral ou IRES eucariótico.
[0016] Numa modalidade, a sequência de nucleotídeos codifica uma sequência líder. Numa modalidade, a molécula de ácido nucleico compreende
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5/126 um vetor de expressão.
[0017] A invenção fornece ainda uma composição que compreende qualquer uma das moléculas de ácido nucleico descritas no presente documento.
[0018] Numa modalidade, a composição compreende um excipiente farmaceuticamente aceitável.
[0019] A invenção se refere ainda a um método para prevenção ou tratamento de uma doença num indivíduo, sendo que o método compreende administrar ao indivíduo uma molécula de ácido nucleico ou uma composição conforme descrito no presente documento.
[0020] Numa modalidade, a doença é uma infecção por HIV.
[0021] Numa modalidade, o método compreende ainda administrar um agente antibiótico ao indivíduo. Numa modalidade, um antibiótico é administrado menos de 10 dias após a administração da molécula de ácido nucleico ou composição.
[0022] Numa modalidade, o método compreende ainda administrar um agente antibiótico ao indivíduo. Numa modalidade, um antibiótico é administrado menos de 10 dias após a administração da molécula de ácido nucleico ou composição.
[0023] A invenção se refere ainda a um método para gerar uma resposta imune num indivíduo, sendo que o método compreende administrar ao indivíduo uma molécula de ácido nucleico ou uma composição, conforme descrito no presente documento.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS [0024] A Figura 1, que compreende a Figura IA a Figura 1B, mostra o conceito e projeto de dMAb. A Figura IA mostra um esquema de projeto de dMAb. As sequências de anticorpos passam por múltiplas rodadas de otimizações para aumentar o nível de produção de dMAb incluindo otimização de códon e RNA, modificação de sequência de aminoácidos, alterações na
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6/126 cadeia principal e formulação. A Figura 1B mostra um diagrama de produção de dMAb in vivo. O DNA de plasmídeo que expressa o anticorpo é injetado no músculo seguido de eletroporação. As células musculares, então produzem o anticorpo funcional que é secretado na circulação.
[0025] A Figura 2, que compreende a Figura 2A a Figura 2C, mostra resultados experimentais que demonstram expressão in vitro de construtos de dMAb IgGl de HIV. Células 293T foram transfectadas com diferentes plasmídeos de dMAb de HIV. Quarenta e oito horas depois, o meio celular ou lisado foram colhidos e quantificados por meio de ELISA. A Figura 2A mostra a expressão de construtos de dMAB de HIV em meio celular. A Figura 2B mostra a expressão de construtos de dMAB de HIV em lisado celular. A Figura 2C mostra a análise western blot do meio a partir de dois construtos para assegurar o processamento adequado da cadeia pesada e leve.
[0026] A Figura 3, mostra resultados experimentais que demonstram a expressão in vivo de construtos de dMAb de HIV. Camundongos BalbC foram injetados, seguido de eletroporação com construtos de dMAb de HIV. Tantos os anticorpos amplamente neutralizantes como os anticorpos não neutralizantes expressam em camundongos.
[0027] A Figura 4 mostra resultados experimentais que demonstram como dois plasmídeos que expressam a cadeia pesada e leve da IgGl em plasmídeos separados podem aumentar os níveis de expressão através de um único plasmídeo que expressa tanto a IgGl de cadeia pesada como leve através de múltiplos dMAbs de HIV.
[0028] A Figura 5, que compreende a Figura 5A a Figura 5C mostra resultados experimentais que demonstram como diferentes isotipos de IgG humana podem levar a alterações nos níveis de expressão in vivo de dMAbs. A Figura 5A mostra níveis de expressão in vitro de isotipos de IgGl, IgG2, IgG3 e IgG4 humana para neutralizar amplamente VRC01 de anticorpo tanto para o meio como lisado. A Figura 5B mostra níveis de expressão de isotipos de IgG
Petição 870190121038, de 21/11/2019, pág. 13/163 /126 humana para dMAbs VRC01 em camundongos imunocompetentes ao longo do curso de mais de um mês. A Figura 5C mostra níveis de expressão de isotipos de IgG humana para dMAbs VRC01 em camundongos balbC imunocompetentes.
[0029] A Figura 6, que compreende a Figura 6A a Figura 6B, mostra resultados experimentais que demonstram os níveis de expressão in vitro de múltiplos anticorpos amplamente neutralizantes expressos como dMAbs de IgGl humana ou IgG4 humana. A Figura 6A mostra níveis de expressão in vitro em meio celular transfectado 293T. A Figura 6B mostra níveis de expressão in vitro em lisado celular transfectado 293T.
[0030] A Figura 7, que compreende a Figura 7A a Figura 7B, mostra resultados experimentais que demonstram os níveis de expressão in vivo aumentados para múltiplos dMAbs de HIV com o uso de isotipo IgG4 em comparação com IgGl. A Figura 7A mostra níveis de expressão in vivo ao longo do tempo para 5 dMAbs de HIV, PG9, PGT128, 3BNC117, NIH45-46 e VRC01 comparando o camundongos balbC injetados com plasmídeos que expressam a isoforma de IgGl ou IgG4. A Figura 7B, mostra níveis de expressão de pico no dia 7.
[0031] A Figura 8, que compreende a Figura 8A a Figura 8B mostra resultados experimentais que demonstram que a mutação S228P no fundo de IgG4 não interrompe os níveis de expressão. A Figura 8 A mostra níveis de expressão de IgG4 e IgG4mut(S228P) in vitro após a transfecção de células 293T. A Figura 8B mostra níveis de expressão in vivo em camundongos balbC injetados com plasmídeos IgG4 ou IgG4mut(S228P) para PGT128, VRC01 ou 3BNC117.
[0032] A Figura 9 mostra resultados experimentais que demonstram que dois sistemas de plasmídeo aumentam os níveis de dMAb in vivo através daquela única IgG4 de plasmídeo.
[0033] A Figura 10, que compreende a Figura 10A a Figura 10B mostra
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8/126 resultados experimentais que demonstram a expressão de longo prazo de dMAb e como modificações podem aumentar os níveis de expressão ao longo do tempo. A Figura 10A mostra níveis de expressão de dMAb in vivo quando os camundongos balbC estão imunocomprometidos e injetados com plasmídeo que expressa PGT128 na cadeia principal de IgGl ou IgG4 entregue como 1 ou 2 plasmídeos. A Figura 10B mostra a generalização de expressão de 2 plasmídeos de IgG4 através de 5 dMAbs de HIV.
[0034] A Figura 11, que compreende a Figura 11A a Figura 11B mostra resultados experimentais que demonstram que as modificações e otimizações de dMAb mantêm a funcionalidade. A Figura 11A mostra concentrações IC50 relatadas para um painel de vírus de camada 2 contra vários bNabs. A Figura 11B mostra a concentração de neutralização (IC50) para dMAb original e modificado produzido in vitro para induzir a funcionalidade após a modificação.
[0035] A Figura 12 mostra resultados experimentais que demonstram que dMAbs de HIV IgG4 produzidos in vivo são funcionais conforme medidos por capacidade de neutralização no ensaio TzmBl. Soro a partir dos camundongos balbC injetados com VRC01, 3BNC117, NIH45-46 ou PGT128 é capaz de neutralizar múltiplos vírus pseudotípicos a níveis similares aos relatados na literatura.
[0036] A Figura 13 mostra a expressão de múltiplos dMAbs de HIV num único camundongo. Os camundongos foram injetados com plasmídeo único ou dois plasmídeos que expressam anticorpos diferentes. A expressão de hlgG foi determinada no dia 7.
DESCRIÇÃO DETALHADA [0037] A presente invenção se refere a composições que compreendem uma sequência de ácidos nucleicos recombinante que codifica um anticorpo, um fragmento do mesmo, uma variante do mesmo ou uma combinação do mesmo. A composição pode ser administrada a um indivíduo que necessite da
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9/126 mesma para facilitar a expressão in vivo e a formação de um anticorpo sintético. [0038] Em particular, os polipeptídeos de cadeia pesada e cadeia leve expressos a partir da sequência de ácidos nucleicos recombinante podem se reunir no anticorpo sintético. O polipeptídeo de cadeia pesada e o polipeptídeo de cadeia leve podem interagir entre si de modo que o conjunto resulte no anticorpo sintético capaz de se ligar ao antígeno, que é mais imunogênico em comparação a um anticorpo não montado, conforme descrito no presente documento, e que é capaz de provocar ou induzir uma resposta imune contra o antígeno.
[0039] Adicionalmente, estes anticorpos sintéticos são gerados mais rapidamente no indivíduo que os anticorpos que são produzidos em resposta à resposta imune induzida por antígeno. Os anticorpos sintéticos são capazes de se ligar eficazmente e neutralizar uma faixa de antígenos. Os anticorpos sintéticos também são capazes de proteger eficazmente contra e/ou promover a sobrevivência de doença.
[0040] Uma listagem de sequências fornecida aqui contém uma lista de sequências que inclui o seguinte:
SEQ ID NO: 1 é a sequência de aminoácidos de anticorpo IgGl humano 3BNC117. SEQ ID NO: 2 é a sequência de nucleotídeos de anticorpo IgGl humano 3BNC117.
[0041] SEQ ID NO: 3 é a sequência de aminoácidos de anticorpo IgGl humano 3BNC117 (cadeia pesada),
SEQ ID NO: 4 é a sequência de nucleotídeos de anticorpo IgGl humano 3BNC117 (cadeia pesada),
SEQ ID NO: 5 é a sequência de aminoácidos de anticorpo IgGl humano 3BNC117 (cadeia leve).
[0042] SEQ ID NO: 6 é a sequência de nucleotídeos de anticorpo IgGl humano 3BNC 117 (cadeia leve).
[0043] SEQ ID NO: 7 é a sequência de aminoácidos de IgG4 humana
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10/126
3BNC117.
[0044] SEQ ID NO: 8 é a sequência de nucleotídeos de IgG4 humana 3BNC117.
[0045] SEQ ID NO: 9 é a sequência de aminoácidos de IgG4 humana 3BNC 117 (S228P).
[0046] SEQ ID NO: 10 é a sequência de nucleotídeos de IgG4 humana 3BNC 117 (S228P).
[0047] SEQ ID NO: 11 é a sequência de aminoácidos de IgG4 humana 3BNC117 (cadeia pesada).
[0048] SEQ ID NO: 12 é a sequência de nucleotídeos de IgG4 humana 3BNC117 (cadeia pesada).
[0049] SEQ ID NO: 13 é a sequência de aminoácidos de IgG4 humana 3BNC117 (cadeia leve).
[0050] SEQ ID NO: 14 é a sequência de nucleotídeos de IgG4 humana 3BNC117 (cadeia leve).
[0051] SEQ ID NO: 15 é a sequência de aminoácidos de IgGl humana PGT128.
[0052] SEQ ID NO: 16 é a sequência de nucleotídeos de IgGl humana PGT128.
[0053] SEQ ID NO: 17 é a sequência de aminoácidos de IgGl humana PGT128 (cadeia pesada).
[0054] SEQ ID NO: 18 é a sequência de nucleotídeos de IgGl humana PGT128 (cadeia pesada).
[0055] SEQ ID NO: 19 é a sequência de aminoácidos de IgGl humana PGT128 (cadeia leve).
[0056] SEQ ID NO: 20 é a sequência de nucleotídeos de IgGl humana PGT128 (cadeia leve).
[0057] SEQ ID NO: 21 é a sequência de aminoácidos de IgG4 humana
PGT128. SEQ ID NO: 22 é a sequência de nucleotídeos de IgG4 humana
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PGT128.
[0058] SEQ ID NO: 23 é a sequência de aminoácidos de IgG4mut
humana PGT128 (S228P).
[0059] SEQ ID NO: 24 é a sequência de nucleotídeos de IgG4mut
humana PGT128 (S228P).
[0060] SEQ ID NO: 25 é a sequência de aminoácidos de cadeia pesada
IgG4 humana PGT128.
[0061] SEQ ID NO: 26 é a sequência de nucleotídeos de cadeia pesada
de IgG4 humana PGT128.
[0062] SEQ ID NO: 27 é a sequência de aminoácidos de cadeia leve de
IgG4 humana PGT128.
[0063] SEQ ID NO: 28 é a sequência de nucleotídeos de cadeia leve de
IgG4 humana PGT128.
[0064] SEQ ID NO: 29 é a sequência de aminoácidos de IgGl PG9.
[0065] SEQ ID NO: 30 é a sequência de nucleotídeos de IgGl PG9.
[0066] PG9. SEQ ID NO: 31 é a sequência de aminoácidos de IgG4 humana
[0067] PG9. SEQ ID NO: 32 é a sequência de nucleotídeos de IgG4 humana
[0068] SEQ ID NO: 33 é a sequência de aminoácidos de anticorpo
IgGl humana NIH45-46.
[0069] SEQ ID NO: 34 é a sequência de nucleotídeos de anticorpo
IgGl humana NIH45-46.
[0070] SEQ ID NO: 35 é a sequência de aminoácidos de anticorpo
IgG4 humana NIH45-46.
[0071] SEQ ID NO: 36 é a sequência de nucleotídeos de anticorpo
IgG4 humana NIH45-46.
[0072] VRC01. SEQ ID NO: 37 é a sequência de aminoácidos de IgGl humana
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12/126 [0073] SEQ ID NO: 38 é a sequência de nucleotídeos de IgGl humana VRC01.
[0074] SEQ ID NO: 39 é a sequência de aminoácidos de IgGl humana VRC01 (cadeia pesada).
[0075] SEQ ID NO: 40 é a sequência de nucleotídeos de IgGl humana VRC01 (cadeia pesada).
[0076] SEQ ID NO: 41 é a sequência de aminoácidos de IgGl humana VRC01 (cadeia leve).
[0077] SEQ ID NO: 42 é a sequência de nucleotídeos de IgGl humana VRC01 (cadeia leve).
[0078] SEQ ID NO: 43 é a sequência de aminoácidos de IgG4 humana VRC01.
[0079] SEQ ID NO: 44 é a sequência de nucleotídeos de IgG4 humana VRC01.
[0080] SEQ ID NO: 45 é a sequência de aminoácidos de mut IgG4 humana VRC01 (S228P).
[0081] SEQ ID NO: 46 é a sequência de nucleotídeos de mut IgG4 humana VRC01 (S228P).
[0082] SEQ ID NO: 47 é a sequência de aminoácidos de IgG4 humana VRC01 (cadeia pesada).
[0083] SEQ ID NO: 48 é a sequência de nucleotídeos de IgG4 humana VRC01 (cadeia pesada).
[0084] SEQ ID NO: 49 é a sequência de aminoácidos de IgG4 humana VRC01 (cadeia leve).
[0085] SEQ ID NO: 50 é a sequência de nucleotídeos de IgG4 humana VRC01 (cadeia leve).
[0086] SEQ ID NO: 51 é a sequência de aminoácidos de IgG2 humana VRC01.
[0087] SEQ ID NO: 52 é a sequência de nucleotídeos de IgG2 humana
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VRC01.
[0088] SEQ ID NO: 53 é a sequência de aminoácidos de IgG3 humana VRC01
SEQ ID NO: 54 é a sequência de nucleotídeos de IgG3 humana VRC01.
[0089] SEQ ID NO: 55 é a sequência de aminoácidos de Cadeia Pesada
PGT145
SEQ ID NO: 56 é a sequência de nucleotídeos de Cadeia Pesada
PGT145
SEQ ID NO: 57 é a sequência de aminoácidos de Kappa
PGT145
SEQ ID NO: 58 é a sequência de nucleotídeos de Kappa
PGT145
SEQ ID NO: 59 é a sequência de aminoácidos de Cadeia Pesada
PGT151
SEQ ID NO: 60 é a sequência de nucleotídeos de Cadeia Pesada
PGT151
SEQ ID NO: 61 é a sequência de aminoácidos de Kappa
PGT151
SEQ ID NO: 62 é a sequência de nucleotídeos de Kappa
PGT151
SEQ ID NO: 63 é a sequência de aminoácidos de Cadeia Pesada
PGDM1400
SEQ ID NO: 64 é a sequência de nucleotídeos de Cadeia Pesada
PGDM1400
SEQ ID NO: 65 é a sequência de aminoácidos de Kappa
PGDM1400
SEQ ID NO: 66 é a sequência de nucleotídeos de Kappa
PGDM1400
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14/126
SEQ ID NO: 67 é a sequência de aminoácidos de Cadeia Pesada
12A21 SEQ ID NO: 68 é a sequência de nucleotídeos de Cadeia Pesada
12A21 SEQ ID NO: 69 é a sequência de aminoácidos de Kappa 12A21 SEQ ID NO: 70 é a sequência de nucleotídeos de Kappa 12A21 SEQ ID NO: 71 é a sequência de aminoácidos de Cadeia Pesada
VRC3401 SEQ ID NO: 72 é a sequência de nucleotídeos de Cadeia Pesada
VRC3401 SEQ ID NO: 73 é a sequência de aminoácidos de Kappa
VRC3401 SEQ ID NO: 74 é a sequência de nucleotídeos de Kappa
VRC3401 SEQ ID NO: 75 é a sequência de aminoácidos de Cadeia Pesada
ΙΟΜΑ SEQ ID NO: 76 é a sequência de nucleotídeos de Cadeia Pesada
ΙΟΜΑ SEQ ID NO: 77 é a sequência de aminoácidos de Lambda
ΙΟΜΑ SEQ ID NO: 78 é a sequência de nucleotídeos de Lambda
ΙΟΜΑ SEQ ID NO: 79 é a sequência de aminoácidos de Cadeia Pesada
PGT130 SEQ ID NO: 80 é a sequência de nucleotídeos de Cadeia Pesada
PGT130 SEQ ID NO: 81 é a sequência de aminoácidos de Lambda
PGT130 SEQ ID NO: 82 é a sequência de nucleotídeos de Lambda
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15/126
PGT130
PGT121
PGT121
PGT121
PGT121
2219
2219
3074
3074
4025
4025
2557
SEQ ID NO. 83 é a sequência de aminoácidos de Cadeia Pesada
SEQ ID NO: 84 é a sequência de nucleotídeos de Cadeia Pesada
SEQ ID NO: 85 é a sequência de aminoácidos de Lambda
SEQ ID NO: 86 é a sequência de nucleotídeos de Lambda
SEQ ID NO: 87 é a sequência de aminoácidos de Cadeia Pesada
SEQ ID NO: 88 é a sequência de nucleotídeos de Cadeia Pesada
SEQ ID NO: 89 é a sequência de aminoácidos de Lambda 2219
SEQ ID NO: 90 é a sequência de nucleotídeos de Lambda 2219
SEQ ID NO: 91 é a sequência de aminoácidos de Cadeia Pesada
SEQ ID NO: 92 é a sequência de nucleotídeos de Cadeia Pesada
SEQ ID NO: 93 é a sequência de aminoácidos de Lambda 3074
SEQ ID NO: 94 é a sequência de nucleotídeos de Lambda 3074
SEQ ID NO: 95 é a sequência de aminoácidos de Cadeia Pesada
SEQ ID NO: 96 é a sequência de nucleotídeos de Cadeia Pesada
SEQ ID NO: 97 é a sequência de aminoácidos de Lambda 4025
SEQ ID NO: 98 é a sequência de nucleotídeos de Lambda 4025
SEQ ID NO: 99 é a sequência de aminoácidos de Cadeia Pesada
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SEQ ID NO: 100 é a sequência de nucleotídeos de Cadeia
Pesada 2557
SEQ ID NO: 101 é a sequência de aminoácidos de Lambda 2557
SEQ ID NO: 102 é a sequência de nucleotídeos de Lambda 2557
SEQ ID NO: 103 é a sequência de aminoácidos de Cadeia
Pesada F425-B4e8
SEQ ID NO: 104 é a sequência de nucleotídeos de Cadeia
Pesada F425-B4e8
SEQ ID NO: 105 é a sequência de aminoácidos de Kappa F425B4e8
SEQ ID NO: 106 é a sequência de nucleotídeos de Kappa F425B4e8
SEQ ID NO: 107 é a sequência de aminoácidos de Cadeia
Pesada 17b
SEQ ID NO: 108 é a sequência de nucleotídeos de Cadeia
Pesada 17b
SEQ ID NO: 109 é a sequência de aminoácidos de Kappa 17b
SEQ ID NO: llOéa sequência de nucleotídeos de Kappa 17b
SEQ ID NO: 111 é a sequência de aminoácidos de Cadeia
Pesada Fl05
SEQ ID NO: 112 é a sequência de nucleotídeos de Cadeia
Pesada F 105
SEQ ID NO: 113 é a sequência de aminoácidos de Kappa F 105
SEQ ID NO: 114 é a sequência de nucleotídeos de Kappa F105
SEQ ID NO: 115 é a sequência de aminoácidos de Cadeia
Pesada b 12
SEQ ID NO: 116 é a sequência de nucleotídeos de Cadeia
Pesada b 12
SEQ ID NO: 117éa sequência de aminoácidos de Kappa b!2
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SEQ ID NO: 118éa sequência de nucleotideos de Kappa bl2
SEQ ID NO: 119 é a sequência de aminoácidos de Cadeia Pesada B6
SEQ ID NO: 120 é a sequência de nucleotideos de Cadeia Pesada B6
SEQ ID NO: 121 é a sequência de aminoácidos de Kappa B6
SEQ ID NO: 122 é a sequência de nucleotideos de Kappa B6
SEQ ID NO: 123 é a sequência de aminoácidos de Cadeia Pesada 11A
SEQ ID NO: 124 é a sequência de nucleotideos de Cadeia Pesada 11 A
SEQ ID NO: 125 é a sequência de aminoácidos de Kappa 11 A
SEQ ID NO: 126 é a sequência de nucleotideos de Kappa 11 A
SEQ ID NO: 127 é a sequência de aminoácidos de Cadeia Pesada 12N
SEQ ID NO: 128 é a sequência de nucleotideos de Cadeia Pesada 12N
SEQ ID NO: 129 é a sequência de aminoácidos de Kappa 12N
SEQ ID NO: 130 é a sequência de nucleotideos de Kappa 12N
SEQ ID NO: 131 é a sequência de aminoácidos de Cadeia Pesada 39F
SEQ ID NO: 132 é a sequência de nucleotideos de Cadeia Pesada 39F
SEQ ID NO: 133 é a sequência de aminoácidos de Lambda pF 39F
SEQ ID NO: 134 é a sequência de nucleotideos de Lambda pF 39F
SEQ ID NO: 135éa sequência de nucleotideos de Envelope de Consenso do Subtipo A com um líder de IgE.
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18/126 [0090] SEQ ID NO: 136éa sequência de aminoácidos de Envelope de Consenso do Subtipo A com um líder de IgE.
[0091] SEQ ID NO: 137éa sequência de nucleotideos de Envelope de Consenso do Subtipo B com um líder de IgE.
[0092] SEQ ID NO: 138éa sequência de aminoácidos de Envelope de Consenso do Subtipo B com um líder de IgE.
[0093] SEQ ID NO: 139 é a sequência de nucleotideos de Envelope de Consenso do Subtipo C com um líder de IgE.
[0094] SEQ ID NO: 140 é a sequência de aminoácidos de Envelope de Consenso do Subtipo C com um líder de IgE.
[0095] SEQ ID NO: 141éa sequência de nucleotideos de Envelope de Consenso do Subtipo D com um líder de IgE.
[0096] SEQ ID NO: 142 é a sequência de aminoácidos de Envelope de Consenso do Subtipo D com um líder de IgE.
[0097] SEQ ID NO: 143 é a sequência de nucleotideos de Nef-Rev de Consenso do Subtipo B com um líder de IgE.
[0098] SEQ ID NO: 144 é a sequência de aminoácidos de Nef-Rev de Consenso do Subtipo B com um líder de IgE.
[0099] SEQ ID NO: 145 é a sequência de nucleotideos de sequência de DNA de Consenso de Gag do subtipo A, B, C e D com um líder de IgE.
[00100] SEQ ID NO: 146 é a sequência de aminoácidos de sequência de DNA de Consenso de Gag do subtipo A, B, C e D com um líder de IgE.
[00101] SEQ ID NO: 147 é a sequência de aminoácidos de Envelope de Consenso do Subtipo A sem um líder de IgE.
[00102] SEQ ID NO: 148 é a sequência de aminoácidos de Envelope de Consenso do Subtipo B sem um líder de IgE.
[00103] SEQ ID NO: 149 é a sequência de aminoácidos de Envelope de Consenso do Subtipo C sem um líder de IgE.
[00104] SEQ ID NO: 150éa sequência de aminoácidos de Envelope de
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Consenso do Subtipo D sem um líder de IgE.
[00105] SEQ ID NO: 151 é a sequência de aminoácidos de Nef-Rev de Consenso do Subtipo B sem um líder de IgE.
[00106] SEQ ID NO: 152éa sequência de aminoácidos de sequência de DNA de Consenso de Gag do subtipo A, B, C e D sem um líder de IgE.
1. DEFINIÇÕES [00107] Exceto caso definido de outro modo, todos os termos técnicos e científicos usados no presente documento têm o mesmo significado conforme comumente entendido por uma pessoa de conhecimento comum na técnica. Em caso de conflito, o presente documento, incluindo as definições, prevalecerá. Os métodos e materiais são descritos abaixo, embora os métodos e materiais similares ou equivalentes àqueles descritos no presente documento possam ser usados na prática ou teste da presente invenção. Todas as publicações, publicações de patente, patentes e outras referências mencionadas no presente documento são incorporadas a título de referência em sua totalidade. Os materiais, métodos e exemplos divulgados no presente documento são apenas ilustrativos e não se destinam a ser limitativos.
[00108] Os termos “compreende (ou compreendem),” “inclui (ou incluem)”, “tem (ou têm), “pode (ou podem)”, “contém (ou contêm)” e variantes dos mesmos, conforme usado no presente documento, se destinam a ser frases, termos ou palavras de transição abertas que não impedem a possibilidade de ações ou estruturas adicionais. As formas no singular “um/a”, “e” e “o/a” incluem referências no plural, exceto se o contexto indicar claramente o contrário. A presente divulgação também contempla outras modalidades “que compreendem”, “que consistem em” e “que consistem essencialmente em”, as modalidades ou elementos apresentados no presente documento, sejam explicitamente estabelecidos ou não.
[00109] “Anticorpo” pode significar um anticorpo de classes IgG, IgM, IgA, IgD ou IgE ou fragmentos, fragmentos ou derivados dos mesmos,
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20/126 incluindo Fab, F(ab’)2, Fd e anticorpos de cadeia única e derivados dos mesmos. O anticorpo pode ser um anticorpo isolado da amostra de soro de mamífero, um anticorpo policlonal, anticorpo purificado por afinidade ou misturas dos mesmos que exibe especificidade de ligação suficiente para um epítopo desejado ou uma sequência derivada do mesmo.
[00110] “Fragmento de anticorpo” ou “fragmento de um anticorpo” conforme usado de maneira intercambiável no presente documento se refere a uma porção de um anticorpo intacto que compreende o sítio de ligação ao antígeno ou região variável. A porção não inclui os domínios de cadeia pesada constantes (isto é, CH2, CH3 ou CH4, dependendo do isotipo de anticorpo) da região Fc do anticorpo intacto. Exemplos de fragmentos de anticorpo incluem, porém sem limitação, fragmentos Fab, fragmentos Fab’, fragmentos Fab’-SH, fragmentos F(ab’)2, fragmentos Fd, fragmentos Fv, diacorpos, moléculas Fv (scFv) de cadeia única, polipeptídeos de cadeia única contendo apenas um domínio variável de cadeia leve, polipeptídeos de cadeia única contendo as três CDRs do domínio variável de cadeia leve, polipeptídeos de cadeia única contendo apenas uma região variável de cadeia pesada e polipeptídeos de cadeia única contendo as três CDRs da região variável de cadeia pesada.
[00111] “Antígeno” se refere a proteínas que têm a capacidade de gerar uma resposta imune num hospedeiro. Um antígeno pode ser reconhecido e ligado por um anticorpo. Um antígeno pode se originar do corpo ou a partir do ambiente externo.
[00112] “Sequência de codificação” ou “ácido nucleico de codificação”, conforme usado no presente documento, pode se referir ao ácido nucleico (molécula de RNA ou DNA) que compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo conforme estabelecido no presente documento. A sequência de codificação pode incluir ainda sinais de iniciação e terminação operacionalmente ligados a elementos reguladores que incluem um sinal de promotor e poliadenilação capaz de direcionar a expressão nas células de um
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[00113] “Complemento” ou “complementar”, conforme usado no presente documento, pode significar um ácido nucleico que pode significar pareamento de bases de Watson-Crick (por exemplo, A-T/U e C-G) ou Hoogsteen entre nucleotídeos ou análogos de nucleotídeos de moléculas de ácido nucleico.
[00114] “Corrente constante”, conforme usado no presente documento, para definir uma corrente que é recebida ou experimentada por um tecido, ou células que definem o referido tecido, ao longo da duração de um pulso elétrico distribuído para mesmo tecido. O pulso elétrico é distribuído a partir dos dispositivos de eletroporação descritos no presente documento. Esta corrente permanece a uma amperagem constante no referido tecido ao longo da vida útil de um pulso elétrico, devido ao fato de que o dispositivo de eletroporação fornecido no presente documento tem um elemento de retroalimentação, de preferência que tem retroalimentação instantânea. O elemento de retroalimentação pode medir a resistência do tecido (ou células) ao longo da duração do pulso e fazer com que o dispositivo de eletroporação altere sua saída de energia elétrica (por exemplo, aumente a tensão), de modo que a corrente no mesmo tecido permaneça constante ao longo do pulso elétrico (na ordem de microssegundos) e de pulso a pulso. Em algumas modalidades, o elemento de retroalimentação compreende um controlador.
[00115] “Retroalimentação de corrente” ou “retroalimentação”, conforme usado no presente documento, pode ser usado de modo intercambiável e pode significar a resposta ativa dos dispositivos de eletroporação fornecidos, que compreende medir a corrente no tecido entre eletrodos e alterar a saída de energia distribuída pelo dispositivo EP, consequentemente, a fim de manter a corrente num nível constante. Este nível
Petição 870190121038, de 21/11/2019, pág. 28/163 me constante é predefinido por um usuário antes da iniciação de uma sequência de pulsos ou tratamento elétrico. A retroalimentação pode ser realizada pelo componente de eletroporação, por exemplo, controlador, do dispositivo de eletroporação, à medida que o circuito elétrico no mesmo é capaz de monitorar continuamente a corrente no tecido entre eletrodos e comparar corrente monitorada (ou corrente dentro do tecido) a uma corrente predefinida e efetuar continuamente ajustes de saída de energia para manter a corrente monitorada em níveis predefinidos. O circuito de retroalimentação pode ser instantâneo como uma retroalimentação de circuito fechado.
[00116] “Corrente descentralizada”, conforme usado no presente documento, pode significar o padrão de correntes elétricas distribuídas a partir das várias matrizes de eletrodos de agulha dos dispositivos de eletroporação descritos no presente documento, em que os padrões minimizam ou, de preferência eliminam a ocorrência de estresse por calor relacionado à eletroporação em qualquer área do tecido que é eletroporada.
[00117] “Eletroporação”, “eletropermeabilização” ou “aprimoramento eletrocinético” (“EP”) conforme usado de modo intercambiável no presente documento pode se referir ao uso de um pulso de campo elétrico transmembranar para induzir rotas microscópicas (poro) numa biomembrana; sua presença permite que biomoléculas, tais como plasmídeos, oligonucleotídeos, siRNA, fármacos e água passem de um lado da membrana celular para o outro.
[00118] “Anticorpo endógeno”, conforme usado no presente documento, pode se referir a um anticorpo que é gerado num indivíduo ao qual uma dose eficaz de um antígeno é administrada para indução de uma resposta imune humoral.
[00119] “Mecanismo de retroalimentação”, conforme usado no presente documento, pode se referir a um processo realizado por software ou hardware (ou firmware), cujo processo recebe e compara a impedância do tecido desejado
Petição 870190121038, de 21/11/2019, pág. 29/163 / 126 (antes, durante e/ou após a entrega de pulso de energia) com um valor presente, de preferência atual, e ajusta o pulso de energia distribuída para obter o valor predefinido. Um mecanismo de retroalimentação pode ser realizado por um circuito fechado analógico.
[00120] “Fragmento” pode significar um fragmento de polipeptídeo de um anticorpo que é funcional, isto é, pode se ligar ao alvo desejado e ter o mesmo efeito pretendido que um anticorpo de comprimento total. Um fragmento de um anticorpo pode ser 100% idêntico ao comprimento total, exceto pela ausência de pelo menos um aminoácido do terminal N e/ou C, em cada caso, com ou sem peptídeos de sinalização e/ou uma metionina na posição 1. Os fragmentos podem compreender 20% ou mais, 25% ou mais, 30% ou mais, 35% ou mais, 40% ou mais, 45% ou mais, 50% ou mais, 55% ou mais, 60% ou mais, 65% ou mais, 70% ou mais, 75% ou mais, 80% ou mais, 85% ou mais, 90% ou mais, 91% ou mais, 92% ou mais, 93% ou mais, 94% ou mais, 95% ou mais, 96% ou mais, 97% ou mais, 98% ou mais, 99% ou mais por cento do comprimento do anticorpo de comprimento total particular, excluindo qualquer peptídeo de sinalização heterólogo adicionado. O fragmento pode compreender um fragmento de um polipeptídeo que é 95% ou mais, 96% ou mais, 97% ou mais, 98% ou mais ou 99% ou mais idêntico ao anticorpo e compreender adicionalmente uma metionina N terminal ou peptídeo de sinalização heterólogo que não é incluído ao calcular a identidade percentual. Os fragmentos podem compreender adicionalmente uma metionina N terminal e/ou um peptídeo de sinalização, tal como um peptídeo de sinalização de imunoglobulina, por exemplo um peptídeo de sinalização de IgE ou IgG. A metionina N terminal e/ou peptídeo de sinalização podem ser ligados a um fragmento de um anticorpo.
[00121] Um fragmento de uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um anticorpo pode ser 100% idêntico ao comprimento total, exceto pela ausência de pelo menos um nucleotídeo a partir da extremidade 5’ e/ou 3’,
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24/126 em cada caso, com ou sem sequências que codificam peptídeos de sinalização e/ou uma metionina na posição 1. Os fragmentos podem compreender 20% ou mais, 25% ou mais, 30% ou mais, 35% ou mais, 40% ou mais, 45% ou mais, 50% ou mais, 55% ou mais, 60% ou mais, 65% ou mais, 70% ou mais, 75% ou mais, 80% ou mais, 85% ou mais, 90% ou mais, 91% ou mais, 92% ou mais, 93% ou mais, 94% ou mais, 95% ou mais, 96% ou mais, 97% ou mais, 98% ou mais, 99% ou mais por cento do comprimento da sequência de codificação de comprimento total particular, excluindo qualquer peptídeo de sinalização heterólogo adicionado. O fragmento pode compreender um fragmento que codifica um polipeptídeo que é 95% ou mais, 96% ou mais, 97% ou mais, 98% ou mais ou 99% ou mais idêntico ao anticorpo e compreender de maneira adicionalmente opcional a sequência que codifica uma metionina N terminal ou peptídeo de sinalização heterólogo que não é incluído ao calcular a identidade percentual. Os fragmentos podem compreender ainda sequências de codificação para uma metionina N terminal e/ou um peptídeo de sinalização, tal como um peptídeo de sinalização de imunoglobulina, por exemplo, um peptídeo de sinalização de IgE ou IgG. A sequência de codificação que codifica a metionina N terminal e/ou peptídeo de sinalização pode ser ligada a um fragmento da sequência de codificação.
[00122] “Construto genético”, conforme usado no presente documento se refere às moléculas de DNA ou RNA que compreendem uma sequência de nucleotídeos que codifica uma proteína, tal como um anticorpo. A sequência de codificação inclui sinais de iniciação e terminação operacionalmente ligados aos elementos reguladores que incluem um sinal promotor e de poliadenilação capaz de direcionar a expressão nas células do indivíduo ao qual a molécula de ácido nucleico é administrada. Conforme usado no presente documento, o termo “forma expressível” se refere aos construtos de gene que contêm os elementos reguladores necessários operacionalmente ligados a uma sequência de codificação que codifica uma proteína, de modo que, quando presente na
Petição 870190121038, de 21/11/2019, pág. 31/163 / 126 célula do indivíduo, a sequência de codificação seja expressa.
[00123] “Idênticas” ou “identidade”, conforme usado no presente documento no contexto de duas ou mais sequência de ácidos nucleicos ou polipeptídeos, pode significar que as sequências têm uma porcentagem especificada de resíduos que são iguais através de uma região especificada. A porcentagem pode ser calculada alinhando-se idealmente as duas sequências, comparando-se as duas sequências através da região especificada, determinando-se o número de posições nas quais o resíduo idêntico ocorre em ambas as sequências para produzir o número de posições correlacionadas, dividindo-se o número de posições correlacionadas pelo número total de posições na região especificada e multiplicando-se o resultado por 100 para produzir a porcentagem da identidade de sequência. Nos casos em que as duas sequências são de comprimentos diferentes ou o alinhamento produz uma ou mais extremidades escalonadas e a região de comparação especificada inclui apenas uma única sequência, os resíduos da única sequência são incluídos no denominador, porém não no numerador do cálculo. Quando se compara DNA e RNA, timina (T) e uracila (U) podem ser consideradas equivalentes. A identidade pode ser realizada manualmente ou com o uso de um algoritmo de sequência de computador, tal como BLAST ou BLAST 2.0.
[00124] “Impedância”, conforme usado no presente documento, pode ser usada quando se discute o mecanismo de retroalimentação e pode ser convertida num valor de corrente de acordo com a lei de Ohm permitindo, deste modo comparações com a corrente predefinida.
[00125] “Resposta imune”, conforme usado no presente documento, pode significar a ativação do sistema imune de um hospedeiro, por exemplo, aquele de um mamífero, em resposta à introdução de um ou mais ácidos nucleicos e/ou peptídeos. A resposta imune pode ser sob a forma de uma resposta celular ou humoral, ou ambas.
[00126] “Ácido nucleico” ou “oligonucleotídeo” ou “polinucleotídeo”,
Petição 870190121038, de 21/11/2019, pág. 32/163 / 126 conforme usado no presente documento, pode significar pelo menos dois nucleotídeos covalentemente ligados entre si. A representação de uma única fita também define a sequência da fita complementar. Deste modo, um ácido nucleico também abrange a fita complementar de uma fita simples mostrada. Muitas variantes de um ácido nucleico podem ser usadas para o mesmo propósito como um determinado ácido nucleico. Deste modo, um ácido nucleico também abrange ácidos nucleicos substancialmente idênticos e complementos dos mesmos. Uma fita simples fornece uma sonda que pode hibridizar com uma sequência alvo sob condições de hibridização estringentes. Deste modo, um ácido nucleico também abrange uma sonda que hibridiza sob condições de hibridização estringentes.
[00127] Os ácidos nucleicos podem ser de fita simples ou de fita dupla, ou podem conter porções tanto da sequência de fita dupla como de fita simples. O ácido nucleico pode ser DNA, tanto genômico como cDNA, RNA, ou híbrido, em que o ácido nucleico pode conter combinações de desoxirribo e ribonucleotídeos, e combinações de bases incluindo uracila, adenina, timina, citosina, guanina, inosina, xantina, hipoxantina, isocitosina e isoguanina. Os ácidos nucleicos podem ser obtidos por métodos de síntese química ou por métodos recombinantes.
[00128] ‘Operacionalmente ligado”, conforme usado no presente documento, pode significar que a expressão de um gene e sob o controle de um promotor ao qual o mesmo é espacialmente conectado. Um promotor pode ser posicionado 5’ (a montante) ou 3’ (a jusante) de um gene sob seu controle. A distância entre o promotor e um gene pode ser aproximadamente igual à distância entre este promotor e o gene que o mesmo controla no gene a partir do qual o promotor é derivado. Conforme conhecido na técnica, a variação nesta distância pode ser acomodada sem perda da função de promotor.
[00129] Um “peptídeo”, “proteína” ou “polipeptídeo”, conforme usado no presente documento, pode significar uma sequência de aminoácidos ligada
Petição 870190121038, de 21/11/2019, pág. 33/163 / 126 e pode ser natural, sintética ou uma modificação ou combinação de natural e sintética.
[00130] “Promotor”, conforme usado no presente documento, pode significar uma molécula sintética ou naturalmente derivada que é capaz de conferir, ativar ou melhorar a expressão de um ácido nucleico numa célula. Um promotor pode compreender uma ou mais sequências reguladoras transcricionais específicas para melhorar ainda mais a expressão e/ou alterar a expressão espacial e/ou expressão temporal do mesmo. Um promotor também pode compreender elementos intensificadores ou repressores distais, que podem ser localizados até vários milhares de pares de bases a partir do sítio de transcrição inicial. Um promotor pode ser derivado de fontes que incluem fontes virais, bacterianas, fúngicas, vegetais, de insetos e animais. Um promotor pode regular a expressão de um componente de gene constitutivamente, ou de modo diferente em relação à célula, ao tecido ou órgão no qual a expressão ocorre ou, em relação ao estágio de desenvolvimento no qual a expressão ocorre ou, em resposta a estímulos externos, tais como estresses fisiológicos, patógenos, íons metálicos ou agentes indutores. Os exemplos representativos de promotores incluem o promotor de bacteriófago T7, promotor de bacteriófago T3, promotor de SP6, promotor de operador de lac, promotor de tac, promotor tardio SV40, promotor precoce de SV40, promotor de RSV-LTR, promotor de CMV IE, promotor precoce de SV40 ou promotor tardio de SV 40 e o promotor de CMV IE.
[00131] “Peptídeo de sinalização” e “sequência líder” são usados de forma intercambiável no presente documento e se referem a uma sequência de aminoácidos que pode ser ligada no terminal amino de uma proteína estabelecida no presente documento. Os peptídeos de sinalização/sequências líderes direcionam tipicamente a localização de uma proteína. Os peptídeos de sinalização/sequências líderes usados no presente documento facilitam preferencialmente a secreção da proteína a partir da célula na qual a mesma é
Petição 870190121038, de 21/11/2019, pág. 34/163 / 126 produzida. Os peptídeos de sinalização/sequências líderes são frequentemente clivados a partir do restante da proteína, muitas vezes chamada de proteína madura, mediante a secreção da célula. Os peptídeos de sinalização/sequências líderes são ligados no N terminal da proteína.
[00132] “Condições de hibridização estringentes”, conforme usado no presente documento, podem significar condições sob as quais uma primeira sequência de ácidos nucleicos (por exemplo, sonda) irá hibridizar com uma segunda sequência de ácidos nucleicos (por exemplo, alvo), tal como numa mistura complexa de ácidos nucleicos. As condições estringentes são dependentes de sequência e serão diferentes em circunstâncias diferentes. As condições estringentes podem ser selecionadas a cerca de 5 a 10 °C inferior ao ponto de fusão térmica (Tm) para a sequência específica num pH de força iônica definido. O Tm pode ser a temperatura (sob força iônica, pH e concentração nucleica definidos) na qual 50% das sondas complementares ao alvo hibridizam com a sequência alvo equilíbrio (como as sequências alvo estão presentes em excesso, no Tm, 50% das sondas estão ocupadas em equilíbrio). As condições estringentes podem ser aquelas em que a concentração de sal é menor que cerca de íon de sódio 1,0 M, tal como cerca de concentração de íon de sódio 0,01 a 1,0 M (ou outros sais) a pH 7,0 a 8,3 e a temperatura é pelo menos cerca de 30 °C para sondas curtas (por exemplo, cerca de 10 a 50 nucleotídeos) e pelo menos cerca de 60 °C para sondas longas (por exemplo, maiores que cerca de 50 nucleotídeos). As condições estringentes também podem ser obtidas com a adição de agentes desestabilizantes, tal como formamida. Para hibridização seletiva ou específica, um sinal positivo pode ser pelo menos 2 a 10 vezes a hibridização de fundo. As condições de hibridização estringentes exemplificativas incluem o seguinte: 50% de formamida, 5x SSC, e 1% de SDS, incubação a 42 °C, ou, 5x SSC, 1% de SDS, incubação a 65 °C, com lavagem em 0,2x SSC, e 0,1% de SDS a 65 °C.
[00133] “Indivíduo” e “paciente”, conforme usado no presente
Petição 870190121038, de 21/11/2019, pág. 35/163 /126 documento, se referem de modo intercambiável a qualquer vertebrado, incluindo, porém sem limitação, um mamífero (por exemplo, vaca, porco, camelo, lhama, cavalo, cabra, coelho, ovelha, hamsters, porquinho da índia, gato, cachorro, rato e camundongo, um primata não humano (por exemplo, um macaco, tal como macaco cinomolgo ou rhesus, chimpanzé, etc.) e um ser humano). Em algumas modalidades, o indivíduo pode ser um ser humano ou um não humano. O indivíduo ou paciente pode estar passando por outras formas de tratamento.
[00134] “Substancialmente complementar” conforme usado no presente documento pode significar que uma primeira sequência é pelo menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81 %, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica ao complemento de uma segunda sequência através de uma região de 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100 ou mais nucleotídeos ou aminoácidos, ou que as duas sequências hibridizam sob condições de hibridização estringentes.
[00135] “Substancialmente idêntica”, conforme usado no presente documento, pode significar que uma primeira e uma segunda sequências estão pelo menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% sobre uma região de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100 ou mais nucleotídeos ou aminoácidos, ou em relação aos ácidos nucleicos, se a primeira sequência é substancialmente complementar ao complemento da segunda sequência.
[00136] “Anticorpo sintético”, conforme usado no presente documento, se refere a um anticorpo que é codificado pela sequência de ácidos nucleicos recombinante descrita no presente documento e é gerado num indivíduo.
[00137] “Tratamento” ou “tratar”, conforme usado no presente
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30/126 documento, pode significar proteger um indivíduo contra uma doença através de meios para prevenir, suprimir, reprimir ou eliminar completamente a doença. A prevenção da doença envolve administrar uma vacina da presente invenção a um indivíduo antes do início da doença. A supressão da doença envolve administrar uma composição da presente invenção a um indivíduo após a indução da doença, porém antes de seu surgimento clínico. A repressão da doença envolve administrar uma composição da presente invenção a um indivíduo após o surgimento clínico da doença.
[00138] “Variante” usado no presente documento em relação a um ácido nucleico pode significar (i) uma porção ou fragmento de uma sequência de nucleotídeos citada; (ii) o complemento de uma sequência de nucleotídeos citada ou porção do mesmo; (iii) um ácido nucleico que é substancialmente idêntico a um ácido nucleico citado ou o complemento do mesmo; ou (iv) um ácido nucleico que hibridiza sob condições estringentes com o ácido nucleico citado, complemento do mesmo ou uma sequência substancialmente idêntica ao mesmo.
[00139] “Variante” em relação a um peptídeo ou polipeptídeo que difere na sequência de aminoácidos pela inserção, deleção ou substituição conservadora de aminoácidos, porém retém pelo menos uma atividade biológica. Variante também pode significar uma proteína com uma sequência de aminoácidos que é substancialmente idêntica a uma proteína citada com uma sequência de aminoácidos que retém pelo menos uma atividade biológica. Uma substituição conservadora de um aminoácido, isto é, substituir um aminoácido por um aminoácido diferente com propriedades similares (por exemplo, hidrofilicidade, grau e distribuição de regiões carregadas) reconhecido na técnica como envolvendo tipicamente uma alteração menor. Estas alterações menores podem ser identificadas, em parte, considerando-se o índice hidropático dos aminoácidos, conforme compreendido na técnica. Kyte et al, J. Mol. Biol. 157: 105-132 (1982). O índice hidropático de um aminoácido se
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31/126 baseia numa consideração de sua hidrofobicidade e carga. É conhecido na técnica que os aminoácidos de índices hidropáticos similares podem ser substituídos e ainda reter função de proteína, num aspecto, os aminoácidos que têm índices hidropáticos de ±2 são substituídos. A hidrofilicidade dos aminoácidos também pode ser usada para revelar substituições que podem resultar em proteínas que retêm função biológica. Uma consideração da hidrofilicidade de aminoácidos no contexto de um peptídeo permite o cálculo da maior hidrofilicidade média local deste peptídeo, uma medida útil que foi relatada como se correlacionando bem com a antigenicidade e a imunogenicidade. Patente US n° 4.554.101, totalmente incorporada no presente documento a título de referência. A substituição de aminoácidos que têm valores de hidrofilicidade similares pode resultar em peptídeos que retêm atividade biológica, por exemplo imunogenicidade, conforme é entendido na técnica. As substituições podem ser realizadas com aminoácidos que têm valores de hidrofilicidade dentro de ± 2 de cada um. Tanto o índice de hidrofobicidade como o valor de hidrofilicidade dos aminoácidos são influenciados pela cadeia lateral particular deste aminoácido. Consistente com esta observação, entende-se que as substituições de aminoácidos que são compatíveis com a função biológica, dependem aminoácido da similaridade relativa dos aminoácidos, e particularmente das cadeias laterais destes aminoácidos, conforme revelado pela hidrofobicidade, hidrofilicidade, carga, tamanho e outras propriedades.
[00140] Uma variante pode ser uma sequência de ácidos nucleicos que é substancialmente idêntica ao longo do comprimento total da sequência de genes total ou um fragmento da mesma. A sequência de ácidos nucleicos pode ser 80%, 81 %, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica ao longo do comprimento total da sequência de genes ou um fragmento da mesma. Uma variante pode ser uma sequência de aminoácidos que é substancialmente
Petição 870190121038, de 21/11/2019, pág. 38/163 /126 idêntica ao longo do comprimento total da sequência de genes ou um fragmento da mesma. A sequência de aminoácidos pode ser 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica ao longo do comprimento total da sequência de aminoácidos ou um fragmento da mesma.
[00141] “Vetor”, conforme usado no presente documento pode significar uma sequência de ácidos nucleicos que contém uma origem de replicação. Um vetor pode ser um plasmídeo, bacteriófago, cromossomo artificial bacteriano ou cromossomo artificial de levedura. Um vetor pode ser um vetor de DNA ou RNA Um vetor pode ser um vetor extracromossômico autorreplicante ou um vetor que se integra num genoma hospedeiro.
[00142] Para a menção de faixas numéricas no presente documento, cada número intercalado entre as mesmas com o mesmo grau de precisão é explicitamente contemplado. Por exemplo, para a faixa de 6 a 9, os números 7 e 8 são contemplados além de 6 e 9, e para a faixa de 6,0 a 7,0, os números 6,0, 6,1, 6,2, 6,3, 6,4, 6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6,9 e 7,0 são explicitamente contemplados.
2. COMPOSIÇÃO [00143] A presente invenção se refere a uma composição que compreende uma sequência de ácidos nucleicos recombinante que codifica um anticorpo, um fragmento do mesmo, uma variante do mesmo ou uma combinação do mesmo. A composição, quando administrada a um indivíduo que necessite da mesma, pode resultar na geração de um anticorpo sintético no indivíduo. O anticorpo sintético pode se ligar a uma molécula alvo (isto é, um antígeno) presente no indivíduo. Tal ligação pode neutralizar o antígeno, bloquear o reconhecimento do antígeno por outra molécula, por exemplo, uma proteína ou ácido nucleico e provocar ou induzir uma resposta imune ao antígeno.
[00144] Numa modalidade, a composição compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo sintético. Numa modalidade, a
Petição 870190121038, de 21/11/2019, pág. 39/163 / 126 composição compreende uma molécula de ácido nucleico que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um primeiro anticorpo sintético e uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um segundo anticorpo sintético. Numa modalidade, a molécula de ácido nucleico compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica um domínio de divagem.
[00145] Numa modalidade, a molécula de ácido nucleico compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo anti-HIV. Numa modalidade, o anticorpo anti-HIV é um anticorpo anti-HIV amplamente neutralizante.
[00146] Numa modalidade, a sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo anti-HIV compreende uma ou mais sequências de ácidos nucleicos otimizados por códon que codificam uma sequência de aminoácidos pelo menos 95% homóloga a uma sequência de aminoácidos, conforme estabelecido na SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:39 SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:43, SEQ ID NO:45, SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:53, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:57, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO:63, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:69, SEQ ID NO:71, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:75, SEQ ID NO:77, SEQ ID NO:79, SEQ ID NO:81, SEQ ID NO:83, SEQ ID NO:85, SEQ ID NO:87, SEQ ID NO:89, SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:93, SEQ ID NO:95, SEQ ID NO:97, SEQ ID NO:99, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 119, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO: 123, SEQ ID NO: 125, SEQ ID NO: 127, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 133, ou um fragmento dos
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34/126 mesmos.
[00147] Numa modalidade, a sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo anti-HIV compreende uma ou mais sequências de RNA transcritas a partir de uma ou mais sequências de DNA que codificam uma sequência de aminoácidos pelo menos 95% homólogas a uma sequência de aminoácidos, conforme estabelecido na SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:39 SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:43, SEQ ID NO:45, SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:53, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:57, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO:63, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:69, SEQ ID NO:71, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:75, SEQ ID NO:77, SEQ ID NO:79, SEQ ID NO:81, SEQ ID NO:83, SEQ ID NO:85, SEQ ID NO:87, SEQ ID NO:89, SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:93, SEQ ID NO:95, SEQ ID NO:97, SEQ ID NO:99, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 119, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO: 123, SEQ ID NO: 125, SEQ ID NO: 127, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 133, ou um fragmento dos mesmos.
[00148] Numa modalidade, a sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo anti-HIV compreende uma ou mais sequências de ácidos nucleicos otimizados por códon pelo menos 95% homólogas a uma sequência de ácidos nucleicos conforme estabelecido na SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:42, SEQ
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ID NO:44, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:54, SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO:72, SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:78, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:84, SEQ ID NO:86, SEQ ID NO:88, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO:92, SEQ ID NO:94, SEQ ID NO:96, SEQ ID NO:98, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 114, SEQ ID NO: 116, SEQ ID NO: 118, SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 122, SEQ ID NO: 124, SEQ ID NO: 126, SEQ ID NO: 128, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 134, ou um fragmento dos mesmos.
[00149] Numa modalidade, a sequência de nucleotideos que codifica um anticorpo anti-HIV compreende uma ou mais sequências de RNA transcritas a partir de uma ou mais sequências de DNA pelo menos 95% homólogas a uma sequência de ácidos nucleicos conforme estabelecido na SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:54, SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO:72, SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:78, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:84, SEQ ID NO:86, SEQ ID NO:88, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO:92, SEQ ID NO:94, SEQ ID NO:96, SEQ ID NO:98, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 114, SEQ ID NO: 116, SEQ ID NO: 118, SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 122, SEQ ID NO: 124, SEQ ID NO: 126, SEQ ID NO: 128, SEQ ID NO: 130, SEQ
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ID NO: 132, SEQ ID NO: 134, ou um fragmento dos mesmos.
[00150] Numa modalidade, a composição compreende a sequência de nucleotídeos que codifica uma cadeia pesada anti-HIV sintética. Numa modalidade, a composição compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica uma cadeia leve anti-HIV sintética. Numa modalidade, a composição compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo antiHIV sintético. Numa modalidade, a sequência que codifica um anticorpo sintético anti-HIV compreende uma primeira sequência que codifica uma cadeia pesada anti-HIV sintética e uma segunda sequência que codifica uma cadeia leve anti-HIV sintética.
[00151] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:3 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 5. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO:3 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO:5.
[00152] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 11 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 13. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 11 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 13.
[00153] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 17 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 19. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 17 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 19.
[00154] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos
Petição 870190121038, de 21/11/2019, pág. 43/163 / 126 codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 25 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 27. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 25 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO:27.
[00155] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 39 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:41. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 39 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO:41.
[00156] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 47 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:49. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 47 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 49.
[00157] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 55 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 57.
[00158] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 55 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO:57. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 59 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:61. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 59 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO:61.
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38/126 [00159] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 63 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 65. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 63 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 65.
[00160] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 67 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:69. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 67 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 69.
[00161] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 71 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:73. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 71 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO:73.
[00162] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:75 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:77. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO:75 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO:77.
[00163] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:79 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:81. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO:79 e a segunda
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39/126 sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO:81.
[00164] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 83 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:85. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 83 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 85.
[00165] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 87 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 89. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 87 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 89.
[00166] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 91 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 93. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 91 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 93.
[00167] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 95 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 97. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 95 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO:97.
[00168] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 99 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 101. Numa
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40/126 modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 99 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 101.
[00169] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 103 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 105. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 103 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 105.
[00170] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 107 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 109. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 107 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 109.
[00171] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 111 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 113. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 111 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 113.
[00172] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 115 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 117. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 115 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 117.
[00173] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 119 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de
Petição 870190121038, de 21/11/2019, pág. 47/163 / 126 aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 121. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 119 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 121.
[00174] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 123 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 125. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 123 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 125.
[00175] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 1207 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 129. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 1207 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 129.
[00176] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 131 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 133. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 131 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica a SEQ ID NO: 133.
[00177] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:4 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 6. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO:4 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 6.
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42/126 [00178] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 12 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 14. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 12 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 14.
[00179] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 18 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 20. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 18 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO:20.
[00180] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 26 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:28. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO:26 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO:28.
[00181] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 40 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 42.
[00182] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos
Petição 870190121038, de 21/11/2019, pág. 49/163 / 126 compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO:40 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO:42. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:48 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 50. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO:48 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO:50.
[00183] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 56 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 58. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO:56 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO:58.
[00184] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 60 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 62. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO:60 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 62.
[00185] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ
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ID NO: 64 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 66. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO:64 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 66.
[00186] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:68 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 70. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO:68 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO:70.
[00187] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 72 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 74. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO:72 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 74.
[00188] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:76 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 78. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO:76 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos
Petição 870190121038, de 21/11/2019, pág. 51/163 / 126 conforme estabelecido na SEQ ID NO:78.
[00189] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotideos compreende uma sequência de nucleotideos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 80 e a segunda sequência de nucleotideos compreende uma sequência de nucleotideos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 82. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotideos compreende uma sequência de nucleotideos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 80 e a segunda sequência de nucleotideos compreende uma sequência de nucleotideos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 82.
[00190] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotideos compreende uma sequência de nucleotideos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 84 e a segunda sequência de nucleotideos compreende uma sequência de nucleotideos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 86. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotideos compreende uma sequência de nucleotideos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 84 e a segunda sequência de nucleotideos compreende uma sequência de nucleotideos conforme estabelecido na SEQ ID NO:86.
[00191] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotideos compreende uma sequência de nucleotideos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 88 e a segunda sequência de nucleotideos compreende uma sequência de nucleotideos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 90. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotideos compreende uma sequência de nucleotideos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 88 e a segunda sequência de nucleotideos compreende uma sequência de nucleotideos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 90.
[00192] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotideos compreende uma sequência de nucleotideos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:92 e a segunda sequência de nucleotideos compreende uma sequência de nucleotideos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 94. Numa
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46/126 modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO:92 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 94.
[00193] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 96 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 98. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO:96 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO:98.
[00194] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 100 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 102. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 100 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 102.
[00195] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 104 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 106. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 104 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 106.
[00196] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos
Petição 870190121038, de 21/11/2019, pág. 53/163 / 126 compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 108 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 110. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 108 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 110.
[00197] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 112ea segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 114. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 112 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 114.
[00198] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 116ea segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 118. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 116 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 118.
[00199] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 120 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 122. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 120 e a segunda
Petição 870190121038, de 21/11/2019, pág. 54/163 / 126 sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 122.
[00200] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 124 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 126. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 124 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 126.
[00201] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 128 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 130. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 128 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 130.
[00202] Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 132ea segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 134. Numa modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 132 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 134.
[00203] A composição da invenção pode tratar, prevenir e/ou proteger contra qualquer doença, distúrbio ou afecção associada à infecção por HIV. Em determinadas modalidades, a composição pode tratar, prevenir e/ou proteger
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49/126 contra infeção viral. Em determinadas modalidades, a composição pode tratar, prevenir e/ou proteger contra afecção associada à infecção por HIV.
[00204] Numa modalidade, a presente invenção se refere a composição que compreende uma sequência de ácidos nucleicos recombinante que codifica um anticorpo IgG4. Numa modalidade, o anticorpo IgG4 compreende uma substituição de aminoácido Ser288Pro. Numa modalidade, substituição de aminoácido Ser288Pro IgG4 impede a comutação de braço Fab de IgG4. O anticorpo sintético IgG4 pode ser um antígeno estranho ou um autoantígeno. Por exemplo, o anticorpo sintético IgG4 pode ser um antígeno viral, um antígeno bacteriano, um antígeno parasítico, um antígeno fúngico ou antígeno cancerígeno. Exemplos de antígenos estranhos e autoantígenos são descritos na publicação de pedido de patente n° US2015/0284448, cujo conteúdo é incorporado em sua totalidade.
[00205] A composição que compreende uma sequência de ácidos nucleicos recombinante que codifica um anticorpo IgG4, quando administrada a um indivíduo que necessite da mesma, pode resultar na geração de um anticorpo sintético no indivíduo. O anticorpo sintético pode se ligar a uma molécula alvo (isto é, um antígeno) presente no indivíduo. Tal ligação pode neutralizar o antígeno, bloquear o reconhecimento do antígeno por outra molécula, por exemplo, uma proteína ou ácido nucleico e provocar ou induzir uma resposta imune ao antígeno.
[00206] A composição pode resultar na geração do anticorpo sintético no indivíduo dentro de pelo menos cerca de 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 7 horas, 8 horas, 9 horas, 10 horas, 11 horas, 12 horas, 13 horas, 14 horas, 15 horas, 20 horas, 25 horas, 30 horas, 35 horas, 40 horas, 45 horas, 50 horas ou 60 horas de administração da composição ao indivíduo. A composição pode resultar na geração do anticorpo sintético no indivíduo dentro de pelo menos cerca de 1 dia, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 6 dias, 7 dias, 8 dias, 9 dias ou 10 dias de administração da composição ao indivíduo. A composição
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50/126 pode resultar na geração do anticorpo sintético no indivíduo dentro de cerca de 1 hora a cerca de 6 dias, cerca de 1 hora a cerca de 5 dias, cerca de 1 hora a cerca de 4 dias, cerca de 1 hora a cerca de 3 dias, cerca de 1 hora a cerca de 2 dias, cerca de 1 hora a cerca de 1 dia, cerca de 1 hora a cerca de 72 horas, cerca de 1 hora a cerca de 60 horas, cerca de 1 hora a cerca de 48 horas, cerca de 1 hora a cerca de 36 horas, cerca de 1 hora a cerca de 24 horas, cerca de 1 hora a cerca de 12 horas ou cerca de 1 hora a cerca de 6 horas de administração da composição ao indivíduo.
[00207] A composição, quando administrada ao indivíduo que necessite da mesma, pode resultar na geração do anticorpo sintético no indivíduo mais rapidamente que a geração de um anticorpo endógeno num indivíduo ao qual é administrado um antígeno para induzir uma resposta imune humoral. A composição pode resultar na geração do anticorpo sintético pelo menos cerca de 1 dia, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 6 dias, 7 dias, 8 dias, 9 dias ou 10 dias antes da geração do anticorpo endógeno no indivíduo ao qual foi administrado um antígeno para induzir uma resposta imune humoral.
[00208] A composição da presente invenção pode ter recursos exigidos de composições eficazes, tal como ser segura, de modo que a composição não cause doença ou morte; ser protetora contra doença; e proporcionar facilidade de administração, poucos efeitos colaterais, estabilidade biológica e baixo custo por dose.
3. SEQUÊNCIA DE ÁCIDOS NUCLEICOS RECOMBINANTE [00209] Conforme descrito acima, a composição pode compreender uma sequência de ácidos nucleicos recombinante. A sequência de ácidos nucleicos recombinante pode codificar o anticorpo, um fragmento do mesmo, uma variante do mesmo ou uma combinação do mesmo. O anticorpo é descrito em mais detalhes abaixo.
[00210] A sequência de ácidos nucleicos recombinante pode ser uma sequência de ácidos nucleicos heteróloga. A sequência de ácidos nucleicos
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51/126 recombinante pode incluir uma ou mais sequências de ácidos nucleicos heterólogas.
[00211] A sequência de ácidos nucleicos recombinante pode ser uma sequência de ácidos nucleicos otimizada. Tal otimização pode aumentar ou alterar a imunogenicidade do anticorpo. A otimização também pode aprimorar a transcrição e/ou tradução. A otimização pode inclui um ou mais do seguinte: sequência líder de baixo teor GC para aumentar a transcrição; estabilidade de mRNA e otimização de códon; adição de uma sequência de kozak (por exemplo, GCC ACC) para tradução aumentada; adição de uma sequência líder de imunoglobulina (Ig) que codifica um peptídeo de sinalização; adição de uma sequência IRES interna e eliminação, na medida do possível, de motivos de sequência de atuação cis (isto é, caixas TATA internas).
A. CONSTRUTO DE SEQUÊNCIA DE ÁCIDOS NUCLEICOS RECOMBINANTE [00212] A sequência de ácidos nucleicos recombinante pode incluir um ou mais construtos de sequência de ácidos nucleicos recombinante. O construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante pode incluir um ou mais componentes, que são descritos em mais detalhes abaixo.
[00213] O construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante pode incluir uma sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica um polipeptídeo de cadeia pesada, um fragmento do mesmo, uma variante do mesmo ou uma combinação do mesmo. O construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante pode incluir uma sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica um polipeptídeo de cadeia leve, um fragmento do mesmo, uma variante do mesmo ou uma combinação do mesmo. O construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante também pode incluir uma sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica um sítio de divagem de protease ou peptidase. O construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante também pode incluir uma sequência de ácidos nucleicos
Petição 870190121038, de 21/11/2019, pág. 58/163 /126 heteróloga que codifica um sítio de entrada de ribossoma interno (IRES). Um IRES pode ser um IRES viral ou um IRES eucariótico. O construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante pode uma ou mais sequências líderes, em que cada sequência líder codifica um peptídeo de sinalização. O construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante pode incluir um ou mais promotores, um ou mais introns, uma ou mais regiões de terminação de transcrição, um ou mais códons de iniciação, um ou mais códon de terminação ou parada e/ou um ou mais sinais de poliadenilação. O construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante também pode incluir uma ou mais sequências ligantes ou de etiqueta. A sequência de etiqueta pode codificar uma etiqueta de hemaglutinina (HA).
(1) POLIPEPTÍDEO DE CADEIA PESADA [00214] O construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante pode incluir o ácido nucleico heterólogo que codifica o polipeptídeo de cadeia pesada, um fragmento do mesmo, uma variante do mesmo ou uma combinação do mesmo. O polipeptídeo de cadeia pesada pode incluir uma região de cadeia pesada variável (VH) e/ou pelo menos uma região de cadeia pesada constante (CH). A pelo menos uma região de cadeia pesada constante pode incluir uma região de cadeia pesada constante 1 (CHI), uma região de cadeia pesada constante 2 (CH2) e uma região de cadeia pesada constante 3 (CH3) e/ou uma região de dobradiça.
[00215] Em algumas modalidades, o polipeptídeo de cadeia pesada pode incluir uma região VH e uma região CH. Em outras modalidades, o polipeptídeo de cadeia pesada pode incluir uma região VH, uma região CH, uma região de dobradiça, uma região CH2 e uma região CH3.
[00216] O polipeptídeo de cadeia pesada pode incluir um conjunto de regiões determinantes de complementaridade (“CDR”). O conjunto CDR pode conter três regiões hipervariáveis da região VH.
[00217] Prosseguindo a partir do N-terminal do polipeptídeo de cadeia
Petição 870190121038, de 21/11/2019, pág. 59/163 / 126 pesada, estas CDRs são indicadas como “CDR1”, “CDR2” e “CDR3”, respectivamente. CDR1, CDR2 e CDR3 do polipeptídeo de cadeia pesada podem contribuir para a ligação ou reconhecimento do antígeno.
[00218] Numa modalidade, o polipeptídeo de cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos 95% idêntica à SEQ ID NO:3, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:63, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:71, SEQ ID NO:75, SEQ ID NO:79, SEQ ID NO:83, SEQ ID NO:87, SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:95, SEQ ID NO:99, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 119, SEQ ID NO: 123, SEQ ID NO: 127 ou SEQ ID NO: 131.
[00219] Numa modalidade, o polipeptídeo de cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos conforme estabelecido na SEQ ID NO:3, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:63, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:71, SEQ ID NO:75, SEQ ID NO:79, SEQ ID NO:83, SEQ ID NO:87, SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:95, SEQ ID NO:99, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 119, SEQ ID NO: 123, SEQ ID NO: 127 ou SEQ ID NO: 131.
[00220] Numa modalidade, o polipeptídeo de cadeia pesada é codificado por uma sequência de nucleotídeos pelo menos 95% idêntica à SEQ ID NO:4, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:72, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:80, SEQ ID NO:84, SEQ ID NO:88, SEQ ID NO:92, SEQ ID NO:96, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 116, SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 124, SEQ ID NO: 128 ou SEQ ID NO: 132.
[00221] Numa modalidade, o polipeptídeo de cadeia pesada é codificado por uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO:4,
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54/126
SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:72, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:80, SEQ ID NO:84, SEQ ID NO:88, SEQ ID NO:92, SEQ ID NO:96, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 116, SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 124, SEQ ID NO: 128 ou SEQ ID NO: 132.
(2) POLIPEPTÍDEO DE CADEIA LEVE [00222] O construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante pode incluir a sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica ο polipeptídeo de cadeia leve, um fragmento do mesmo, uma variante do mesmo ou uma combinação do mesmo. O polipeptídeo de cadeia leve pode incluir uma região de cadeia leve variável (VL) e/ou uma região cadeia leve constante (CL). [00223] O polipeptídeo de cadeia leve pode incluir um conjunto de regiões determinantes de complementaridade (“CDR”). O conjunto CDR pode conter três regiões hipervariáveis da região VL. Prosseguindo a partir do Nterminal do polipeptídeo de cadeia leve, estas CDRs são indicadas “CDR1”, “CDR2” e “CDR3”, respectivamente. CDR1, CDR2 e CDR3 do polipeptídeo de cadeia leve podem contribuir para a ligação ou reconhecimento do antígeno. [00224] Numa modalidade, o polipeptídeo de cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos 95% idêntica à SEQ ID NO:5, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:57, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:69, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:77, SEQ ID NO:81, SEQ ID NO:85, SEQ ID NO:89, SEQ ID NO:93, SEQ ID NO:97, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO: 125, SEQ ID NO: 129 ou SEQ ID NO: 133.
[00225] Numa modalidade, o polipeptídeo de cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos conforme estabelecido na SEQ ID NO:5, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:49,
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SEQ ID NO:57, SEQ ID N0:61, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:69, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:77, SEQ ID N0:81, SEQ ID NO:85, SEQ ID NO:89, SEQ ID NO:93, SEQ ID NO:97, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO: 125, SEQ ID NO: 129 ou SEQ ID NO: 133.
[00226] Numa modalidade, o polipeptídeo de cadeia leve é codificado por uma sequência de nucleotídeos pelo menos 95% idêntica à SEQ ID NO:6, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:70, SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:86, SEQ ID NO:90, SEQ ID NO:94, SEQ ID NO:98, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 114, SEQ ID NO: 118, SEQ ID NO: 122, SEQ ID NO: 126, SEQ ID NO: 130 ou SEQ ID NO: 134.
[00227] Numa modalidade, o polipeptídeo de cadeia leve é codificado por uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO:6, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:70, SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:86, SEQ ID NO:90, SEQ ID NO:94, SEQ ID NO:98, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 114, SEQ ID NO: 118, SEQ ID NO: 122, SEQ ID NO: 126, SEQ ID NO: 130 ou SEQ ID NO: 134.
(3) SÍTIO DE CLIVAGEM DE PROTEASE [00228] O construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante pode incluir a sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica um sítio de divagem de protease. O sítio de divagem de protease pode ser reconhecido por uma protease ou peptidase. A protease pode ser uma endopeptidase ou endoprotease, por exemplo, porém sem limitação, furina, elastase, HtrA, calpaína, tripsina, quimotripsina, tripsina e pepsina. A protease pode ser furina. Em outras modalidades, a protease pode ser uma protease de serina, uma
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56/126 protease de treonina, protease de cisteina, protease de aspartato, metaloprotease, protease de ácido glutâmico ou qualquer protease que clive uma ligação peptídica interna (ou seja, não clive a ligação peptídica N-terminal ou C-terminal).
[00229] O sítio de divagem de protease pode incluir uma ou mais sequências de aminoácidos que promovam ou a aumentem a eficiência de divagem. As uma ou mais sequências de aminoácidos podem promover ou aumentar a eficiência da formação ou geração de polipeptídeos distintos. As uma ou mais sequências de aminoácidos podem incluir uma sequência de peptídeos 2A.
(4) SEQUÊNCIA LIGANTE [00230] O construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante pode incluir uma ou mais sequências ligantes. A sequência ligante pode separar ou ligar espacialmente um ou mais componentes descritos no presente documento. Em outras modalidades, a sequência ligante pode codificar uma sequência de aminoácidos que separa ou liga espacialmente dois polipeptídeos.
(5) PROMOTOR [00231] O construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante pode incluir um ou mais promotores. Os um ou mais promotores podem ser qualquer promotor que seja capaz de acionar a expressão de genes e regular a expressão de genes. Tal promotor é um elemento de sequência de atuação cis exigido para transcrição através de uma polimerase de RNA dependente de DNA. A seleção do promotor usado para direcionar a expressão de genes depende da aplicação particular. O promotor pode ser posicionado aproximadamente na mesma distância do início da transcrição no construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante, como ocorre a partir do sítio inicial de transcrição em sua configuração natural. Entretanto, a variação nesta distância pode ser acomodada sem perda da função de promotor.
[00232] O promotor pode ser operacionalmente ligado à sequência de
Petição 870190121038, de 21/11/2019, pág. 63/163 / 126 ácidos nucleicos heteróloga que codifica o polipeptídeo de cadeia pesada e/ou polipeptídeo de cadeia leve. O promotor pode ser um promotor mostrado eficaz para a expressão em células eucarióticas. O promotor operacionalmente ligado à sequência de codificação pode ser um promotor CMV, um promotor do vírus símio 40 (SV40), tal como promotor precoce de SV40 e promotor tardio de SV40, um promotor de vírus de tumor mamário em camundongo (MMTV), um promotor de vírus da imunodeficiência humana (HIV), tal como o promotor de repetição terminal longa (LTR) de vírus da imunodeficiência bovina (BIV), um promotor de vírus Moloney, um promotor de vírus da leucose aviária (ALV), um promotor de citomegalovírus (CMV), tal como o promotor precoce imediato de CMV, promotor de vírus Epstein Barr (EBV) ou um promotor de vírus de sarcoma de Rous (RSV). O promotor também um promotor de gene humano, tal como actina humana, miosina humana, hemoglobina humana, creatina muscular humana, poliedrina humana ou metalotioneína humana.
[00233] O promotor pode ser um promotor constitutivo ou um promotor induzível, que inicia a transcrição apenas quando a célula hospedeira a algum estímulo externo particular. No caso de um organismo multicelular, o promotor também pode ser específico para um tecido, órgão ou estágio de desenvolvimento. O promotor também pode ser um promotor específico de tecido, tal como um promotor específico de músculo ou pele, natural ou sintético. Exemplos de tais promotores são descritos na publicação de pedido de patente n° US20040175727, cujo conteúdo está incorporado ao presente documento em sua totalidade.
[00234] O promotor pode ser associado a um intensificador. O intensificador pode se situar a montante da sequência de codificação. O intensificador pode ser actina humana, miosina humana, hemoglobina humana, creatina muscular humana ou um intensificador viral, tal como um dentre CMV, FMDV, RSV ou EBV. As melhorias da função de polinucleotídeo são descritas nas patentes nos U.S. 5.593.972, 5.962.428 e W094/016737, cujo conteúdo de
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58/126 cada uma está totalmente incorporado a título de referência.
(6) ÍNTRON [00235] O construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante pode incluir um ou mais introns. Cada íntron pode incluir sítios doadores e receptores de emenda funcionais. O íntron pode incluir um intensificador de splicing. O íntron pode incluir um ou mais sinais necessários para splicing eficiente.
(7) REGIÃO DE TERMINAÇÃO DE TRANSCRIÇÃO [00236] O construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante pode incluir uma ou mais regiões de terminação de transcrição. A região de terminação de transcrição pode se situar a jusante da sequência de codificação para fornecer terminação eficiente. A região de terminação de transcrição pode ser obtida a partir do mesmo gene que o promotor descrito acima ou pode ser obtida a partir de um ou mais genes diferentes.
(8) CÓDON DE INICIAÇÃO [00237] O construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante pode incluir um ou mais códons de iniciação. O códon de iniciação pode se situar a montante da sequência de codificação. O códon de iniciação pode estar enquadrado com a sequência de codificação. O códon de iniciação pode ser associado a um ou mais sinais necessários para iniciação de tradução eficiente, por exemplo, porém sem limitação, um sítio de ligação ao ribossomo.
(9) CÓDON DE TERMINAÇÃO [00238] O construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante pode incluir um ou mais códons de terminação ou parada. O códon de terminação pode se situar a jusante da sequência de codificação. O códon de terminação pode estar enquadrado com a sequência de codificação. O códon de terminação pode ser associado a um ou mais sinais necessários para terminação de tradução eficiente.
(10) SINAL DE POLIADENILAÇÃO
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59/126 [00239] O construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante pode incluir um ou mais sinais de poliadenilação. O sinal de poliadenilação pode incluir um ou mais sinais necessários para poliadenilação eficiente da transcrição. O sinal de poliadenilação pode ser posicionado a jusante da sequência de codificação. O sinal de poliadenilação pode ser um sinal de poliadenilação SV40, sinal de poliadenilação LTR, sinal de poliadenilação de hormônio do crescimento bovino (bGH), sinal de poliadenilação do hormônio do crescimento humano (hGH) ou sinal de poliadenilação de β-globina humana. O sinal de poliadenilação SV40 pode ser um sinal de poliadenilação de um plasmídeo pCEP4 (Invitrogen, San Diego, CA).
(11) SEQUÊNCIA LÍDER [00240] O construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante pode incluir uma ou mais sequências líderes. A sequência líder pode codificar um peptídeo de sinalização. O peptídeo de sinalização pode ser um peptídeo de sinalização de imunoglobulina (Ig), por exemplo, porém sem limitação, um peptídeo de sinalização de IgG e um peptídeo de sinalização de IgE.
B. DISPOSIÇÃO DO CONSTRUTO DE SEQUÊNCIA DE ÁCIDOS NUCLEICOS RECOMBINANTE [00241] Conforme descrito acima, a sequência de ácidos nucleicos recombinante pode incluir um ou mais construtos de sequência de ácidos nucleicos recombinante, em que cada construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante pode incluir um ou mais componentes. Os um ou mais componentes são descritos em detalhes acima. Os um ou mais componentes, quando incluídos no construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante, podem ser dispostos em qualquer ordem um em relação ao outro. Em algumas modalidades, os um ou mais componentes podem ser dispostos no construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante, conforme descrito abaixo.
(1) DISPOSIÇÃO 1 [00242] Numa disposição, um primeiro construto de sequência de ácidos
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60/126 nucleicos recombinante pode incluir a sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica o polipeptídeo de cadeia pesada e um segundo construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante pode incluir a sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica o polipeptídeo de cadeia leve.
[00243] Por exemplo, numa modalidade, a primeira sequência de ácidos nucleicos recombinante codifica um polipeptídeo de cadeia pesada que tem uma sequência de aminoácidos pelo menos 95% homóloga à SEQ ID NO:3, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:63, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:71, SEQ ID NO:75, SEQ ID NO:79, SEQ ID NO:83, SEQ ID NO:87, SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:95, SEQ ID NO:99, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 119, SEQ ID NO: 123, SEQ ID NO: 127 ou SEQ ID NO: 131.
[00244] Numa modalidade, a primeira sequência de ácidos nucleicos recombinante compreende uma sequência de ácidos nucleicos pelo menos 95% homóloga à SEQ ID NO:4, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:72, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:80, SEQ ID NO:84, SEQ ID NO:88, SEQ ID NO:92, SEQ ID NO:96, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 116, SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 124, SEQ ID NO: 128 ou SEQ ID NO: 132.
[00245] Numa modalidade, a segunda sequência de ácidos nucleicos recombinante codifica um polipeptídeo de cadeia leve que tem uma sequência de aminoácidos pelo menos 95% homóloga à SEQ ID NO:5, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:57, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:69, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:77, SEQ ID NO:81, SEQ ID NO:85, SEQ ID NO:89, SEQ ID NO:93, SEQ ID NO:97, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO: 125, SEQ ID
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NO: 129 ou SEQ ID NO: 133.
[00246] Numa modalidade, a segunda sequência de ácidos nucleicos recombinante compreende uma sequência de ácidos nucleicos pelo menos 95% homóloga à SEQ ID NO:6, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:70, SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:86, SEQ ID NO:90, SEQ ID NO:94, SEQ ID NO:98, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 114, SEQ ID NO: 118, SEQ ID NO: 122, SEQ ID NO: 126, SEQ ID NO: 130 ou SEQ ID NO: 134.
[00247] O primeiro construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante pode ser colocado num vetor. O segundo construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante pode ser colocado num segundo vetor ou vetor separado. A colocação do construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante no vetor é descrita em mais detalhes abaixo.
[00248] O primeiro construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante também pode incluir o promotor, íntron, região de terminação de transcrição, códon de iniciação, códon de terminação e/ou sinal de poliadenilação. O primeiro construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante pode incluir ainda a sequência líder, em que a sequência líder se situa a montante (ou 5’) da sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica o polipeptídeo de cadeia pesada. Consequentemente, o peptídeo de sinalização codificado pela sequência líder pode ser ligado por uma ligação de peptídeo ao polipeptídeo de cadeia pesada.
[00249] O segundo construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante também pode incluir o promotor, códon de iniciação, códon de terminação e sinal de poliadenilação. O segundo construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante pode incluir ainda a sequência líder, em que a sequência líder se situa a montante (ou 5’) da sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica o polipeptídeo de cadeia leve. Consequentemente, o
Petição 870190121038, de 21/11/2019, pág. 68/163 /126 peptídeo de sinalização codificado pela sequência líder pode ser ligado por uma ligação de peptídeo ao polipeptídeo de cadeia leve.
[00250] Consequentemente, um exemplo da disposição 1 pode incluir o primeiro vetor (e, deste modo o primeiro construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante) que codifica o polipeptídeo de cadeia pesada que inclui VH e CHI, e o segundo vetor (e, deste modo o segundo construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante) que codifica o polipeptídeo de cadeia leve que inclui VL e CL. Um segundo exemplo da disposição 1 pode incluir o primeiro vetor (e, deste modo o primeiro construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante) que codifica o polipeptídeo de cadeia pesada que inclui VH, CHI, região de dobradiça, CH2 e CH3, e o segundo vetor (e, deste modo o segundo construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante) que codifica o polipeptídeo de cadeia leve que inclui VL e CL.
(2) DISPOSIÇÃO 2 [00251] Numa segunda disposição, o construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante pode incluir a sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica o polipeptídeo de cadeia pesada e a sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica o polipeptídeo de cadeia leve. A sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica o polipeptídeo de cadeia pesada pode ser posicionada a montante (ou 5’) da sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica o polipeptídeo de cadeia leve. Altemativamente, a sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica o polipeptídeo de cadeia leve pode ser posicionada a montante (ou 5’) da sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica o polipeptídeo de cadeia pesada.
[00252] O construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante pode ser colocado no vetor conforme descrito em mais detalhes abaixo.
[00253] O construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante pode incluir a sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica o sítio de divagem de protease e/ou a sequência ligante. Se incluída no construto de
Petição 870190121038, de 21/11/2019, pág. 69/163 / 126 sequência de ácidos nucleicos recombinante, a sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica o sítio de divagem de protease pode ser posicionada entre a sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica o polipeptídeo de cadeia pesada e a sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica o polipeptídeo de cadeia leve. Consequentemente, o sítio de divagem de protease permite a separação do polipeptídeo de cadeia pesada e do polipeptídeo de cadeia leve em polipeptídeos distintos mediante a expressão. Em outras modalidades, se a sequência ligante for incluída no construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante, então a sequência ligante pode ser posicionada entre a sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica o polipeptídeo de cadeia pesada e a sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica o polipeptídeo de cadeia leve.
[00254] O construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante também pode incluir o promotor, íntron, região de terminação de transcrição, códon de iniciação, códon de terminação e/ou sinal de poliadenilação. O construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante pode incluir um ou mais promotores. O construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante pode incluir dois promotores de modo que um promotor possa ser associado à sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica o polipeptídeo de cadeia pesada e o segundo promotor possa ser associado à sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica o polipeptídeo de cadeia leve. Em ainda outras modalidades, o construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante pode incluir um promotor que é associado à sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica o polipeptídeo de cadeia pesada e à sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica o polipeptídeo de cadeia leve.
[00255] O construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante pode incluir ainda duas sequências líderes, em que uma primeira sequência líder se situa a montante (ou 5’) da sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica o polipeptídeo de cadeia pesada e uma segunda sequência líder se
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64/126 situa a montante (ou 5’) da sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica o polipeptídeo de cadeia leve. Consequentemente, um primeiro peptídeo de sinalização codificado pela primeira sequência líder pode ser ligado por uma ligação de peptídeo ao polipeptídeo de cadeia pesada e um segundo peptídeo de sinalização codificado pela segunda sequência líder pode ser ligado por uma ligação de peptídeo ao polipeptídeo de cadeia leve.
[00256] Consequentemente, um exemplo da disposição 2 pode incluir o vetor (e, deste o modo construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante) que codifica o polipeptídeo de cadeia pesada que inclui VH e CHI, e o polipeptídeo de cadeia leve que inclui VL e CL, em que a sequência ligante é posicionada entre a sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica o polipeptídeo de cadeia pesada e a sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica o polipeptídeo de cadeia leve.
[00257] Um segundo exemplo da disposição 2 pode incluir o vetor (e, deste modo construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante) que codifica o polipeptídeo de cadeia pesada que inclui VH e CHI, e o polipeptídeo de cadeia leve que inclui VL e CL, em que a sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica o sítio de divagem de protease é posicionada entre a sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica o polipeptídeo de cadeia pesada e a sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica o polipeptídeo de cadeia leve.
[00258] Um terceiro exemplo da disposição 2 pode incluir o vetor (e, deste modo o construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante) que codifica o polipeptídeo de cadeia pesada que inclui VH, CHI, região de dobradiça, CH2 e CH3, e o polipeptídeo de cadeia leve que inclui VL e CL, em que a sequência ligante é posicionada entre a sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica o polipeptídeo de cadeia pesada e a sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica o polipeptídeo de cadeia leve.
[00259] Um quarto exemplo da disposição 2 pode incluir o vetor (e,
Petição 870190121038, de 21/11/2019, pág. 71/163 / 126 deste modo o construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante) que codifica o polipeptídeo de cadeia pesada que inclui VH, CHI, região de dobradiça, CH2 e CH3, e o polipeptídeo de cadeia leve que inclui VL e CL, em que a sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica o sítio de divagem de protease é posicionada entre a sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica o polipeptídeo de cadeia pesada e a sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica o polipeptídeo de cadeia leve.
C. EXPRESSÃO A PARTIR DO CONSTRUTO DE SEQUÊNCIA DE ÁCIDOS NUCLEICOS RECOMBINANTE [00260] Conforme descrito acima, o construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante pode incluir, entre os um ou mais componentes, a sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica o polipeptídeo de cadeia pesada e/ou a sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica o polipeptídeo de cadeia leve. Consequentemente, o construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante pode facilitar a expressão do polipeptídeo de cadeia pesada e/ou do polipeptídeo de cadeia leve.
[00261] Quando a disposição 1, conforme descrito acima, é utilizada, o primeiro construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante pode facilitar a expressão do polipeptídeo de cadeia pesada e o segundo construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante pode facilitar a expressão do polipeptídeo de cadeia leve. Quando a disposição 2, conforme descrito acima, é utilizada, o construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante pode facilitar a expressão do polipeptídeo de cadeia pesada e do polipeptídeo de cadeia leve.
[00262] Mediante a expressão, por exemplo, porém sem limitação, numa célula, organismo ou mamífero, o polipeptídeo de cadeia pesada e o polipeptídeo de cadeia leve podem se reunir no anticorpo sintético. Em particular, o polipeptídeo de cadeia pesada e o polipeptídeo de cadeia leve podem interagir entre si de modo que o conjunto resulte no anticorpo sintético
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66/126 que é capaz de se ligar ao antígeno. Em outras modalidades, o polipeptídeo de cadeia pesada e o polipeptídeo de cadeia leve podem interagir entre si de modo que o conjunto resulte no anticorpo sintético que é mais imunogênico em comparação a um anticorpo não montado conforme descrito no presente documento. Em ainda outras modalidades, o polipeptídeo de cadeia pesada e o polipeptídeo de cadeia leve podem interagir entre si de modo que o conjunto resulte no anticorpo sintético ser capaz de provocar ou induzir uma resposta imune contra o antígeno.
D. VETOR [00263] O construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante descrito acima pode ser colocado num ou mais vetores. Os um ou mais vetores podem conter uma origem de replicação. Os um ou mais vetores podem ser um plasmídeo, bacteriófago, cromossomo artificial bacteriano ou cromossomo artificial de levedura. Os um ou mais vetores podem ser um vetor extracromossômico de autorreplicação, ou um vetor que se integra num genoma hospedeiro.
[00264] Os um ou mais vetores podem ser um construto de expressão heterólogo, que é geralmente um plasmídeo que é usado para introduzir um gene específico numa célula alvo. Uma vez que o vetor de expressão está dentro da célula, o polipeptídeo de cadeia pesada e/ou polipeptídeo de cadeia leve que são codificados pelo construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante são produzidos pelos complexos ribossômicos de mecanismo de transcrição e tradução celular. Os um ou mais vetores podem expressar grandes quantidades de RNA mensageiro estável e, portanto, proteínas.
(1) VETOR DE EXPRESSÃO [00265] Os um ou mais vetores podem ser um plasmídeo circular ou um ácido nucleico linear. O plasmídeo circular e ácido nucleico linear são capazes de direcionar a expressão de uma sequência de nucleotídeos particular numa célula do indivíduo adequada. Os um ou mais vetores que compreendem o
Petição 870190121038, de 21/11/2019, pág. 73/163 / 126 construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante podem ser quiméricos, significando que pelo menos um de seus componentes é heterólogo em relação a pelo menos um de seus outros componentes.
(2) PLASMÍDEO [00266] Os um ou mais vetores podem ser um plasmídeo. O plasmídeo pode ser útil para transfecção de células com o construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante. O plasmídeo pode ser útil para introduzir o construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante no indivíduo. O plasmídeo também pode compreender uma sequência reguladora, que pode ser bem adequada para expressão de genes numa célula na qual o plasmídeo é administrado.
[00267] Plasmídeo também pode compreender uma origem de replicação de mamífero a fim de manter o plasmídeo extracromossomicamente e produzir múltiplas cópias do plasmídeo numa célula. O plasmídeo pode ser pVAXl, pCEP4 ou pREP4 disponível junto à Invitrogen (San Diego, CA), que pode compreender a origem de replicação de vírus Epstein Barr e região de codificação nuclear de antígeno nuclear EBNA-1, que pode produzir replicação epissomal de alta cópia sem integração. A cadeia principal do plasmídeo pode ser pAV0242. O plasmídeo pode ser um plasmídeo de adenovirus do tipo 5 (Ad5) com replicação defeituosa.
[00268] O plasmídeo pode ser pSE420 (Invitrogen, San Diego, Ca), que pode ser usado para produção de proteína em Escherichia coli (E.coli). O plasmídeo também pode ser pYES2 (Invitrogen, San Diego, Ca), que pode ser usado para produção de proteína em cepas de levedura de Saccharomyces cerevisiae. O plasmídeo também pode ser do sistema de expressão de baculovírus completo MAXBAC™ (Invitrogen, San Diego, Ca), que pode ser usado para produção de proteína em células de insetos. O plasmídeo também pode ser pcDNAI ou pcDNA3 (Invitrogen, San Diego, Ca), que pode ser usado para produção de proteína em células de mamífero, tais como células de ovário
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(3) RNA [00269] Numa modalidade, o ácido nucleico é uma molécula de RNA. Numa modalidade, a molécula de RNA é transcrita a partir de uma sequência de DNA descrita no presente documento. Por exemplo, em algumas modalidades, a molécula de RNA é codificada por uma sequência de DNA pelo menos 90% homóloga a uma dentre a SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:39 SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:43, SEQ ID NO:45, SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:53, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:57, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO:63, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:69, SEQ ID NO:71, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:75, SEQ ID NO:77, SEQ ID NO:79, SEQ ID NO:81, SEQ ID NO:83, SEQ ID NO:85, SEQ ID NO:87, SEQ ID NO:89, SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:93, SEQ ID NO:95, SEQ ID NO:97, SEQ ID NO:99, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 119, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO: 123, SEQ ID NO: 125, SEQ ID NO: 127, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 131 ou SEQ ID NO: 133, ou uma variante do mesmo ou um fragmento do mesmo.
[00270] Em outra modalidade, a sequência de nucleotideos compreende uma sequência de RNA transcrita por uma sequência de DNA que codifica uma sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:42, SEQ
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ID NO:44, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:54, SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO:72, SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:78, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:84, SEQ ID NO:86, SEQ ID NO:88, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO:92, SEQ ID NO:94, SEQ ID NO:96, SEQ ID NO:98, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 114, SEQ ID NO: 116, SEQ ID NO: 118, SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 122, SEQ ID NO: 124, SEQ ID NO: 126, SEQ ID NO: 128, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 132 ou SEQ ID NO: 134, ou uma variante do mesmo ou um fragmento do mesmo.
[00271] Consequentemente, numa modalidade, a invenção fornece uma molécula de RNA que codifica um ou mais DMAbs. O RNA pode ser de fita positiva. Consequentemente, em algumas modalidades, a molécula de RNA pode ser traduzida por células sem precisar de quaisquer etapas de replicação intercaladas, tal como transcrição reversa. Uma molécula de RNA útil para a invenção pode ter um cap 5’ (por exemplo uma 7-metilguanosina). Este cap pode aprimorar a tradução in vivo do RNA. O nucleotídeo 5’ de uma molécula de RNA útil para a invenção pode ter um grupo trifosfato 5 ’. num RNA com cap este pode ser ligado a uma 7-metilguanosina através de uma ponte 5’ a 5’. Uma molécula de RNA pode ter uma cauda 3’ poli-A. Esta também pode incluir uma sequência de reconhecimento de poli-A polimerase (por exemplo AAUAAA) próxima à sua extremidade 3’. Uma molécula de RNA útil para a invenção pode ser de fita simples. A molécula de RNA útil para a invenção pode compreender RNA sintético. Em algumas modalidades, a molécula de RNA é uma molécula de RNA nu. Numa modalidade, a molécula de RNA é compreendida dentro de um vetor.
[00272] Numa modalidade, o RNA tem UTRs 5’ e 3’. Numa modalidade, a UTR 5’ se situa entre zero e 3000 nucleotídeos de comprimento.
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O comprimento de sequências UTR 5’ e 3’ a serem adicionadas à região de codificação pode ser alterado por métodos diferentes, incluindo, porém sem limitação, projetar iniciadores para PCR que hibridizam em regiões diferentes das UTRs. Com o uso desta abordagem, uma pessoa de habilidade comum na técnica pode modificar os comprimentos de UTR 5’ e 3’ necessários para obter a eficiência de tradução ideal seguida de transfecção do RNA transcrito. [00273] As UTRs 5’ e 3’ podem ser de ocorrência natural, UTRs 5’ e 3’ para o gene de interesse. Altemativamente, as sequências UTR que não são endógenas ao gene de interesse podem ser adicionadas incorporando-se as sequências UTR nos iniciadores direto e reverso ou através de quaisquer outras modificações do modelo. O uso de sequências UTR que não são endógenas ao gene de interesse podem ser úteis para modificar a estabilidade e/ou eficiência de tradução do RNA. Por exemplo, sabe-se que os elementos ricos em AU em sequências UTR 3’ podem diminuir a estabilidade do RNA. Portanto, UTRs 3’ podem ser selecionadas ou projetadas para aumentar a estabilidade do RNA transcrito com base nas propriedades de UTRs que são bem conhecidas na técnica.
[00274] Numa modalidade, a 5 ’ UTR pode conter a sequência de Kozak do gene endógeno. Altemativamente, quando uma UTR 5’ que não é endógena ao gene de interesse está sendo adicionada por PCR conforme descrito acima, uma sequência de Kozak de consenso pode ser redesignada adicionando-se a sequência UTR 5’. As sequências de Kozak podem aumentar a eficiência de tradução de algumas transcrições de RNA, porém não parece ser necessário para todos os RNAs para permitir a tradução eficiente. O requisito para sequências de Kozak para muitos RNAs é conhecido na técnica. Em outras modalidades, a UTR 5’ pode ser derivada de um vírus de RNA cujo genoma de RNA é estável em células. Em outras modalidades, vários análogos de nucleotídeo podem ser usados na UTR 3’ ou 5’ para impedir a degradação de exonuclease do RNA.
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71/126 [00275] Numa modalidade, o RNA tem tanto um cap na extremidade 5’ como uma cauda 3 ’ poli (A) que determina a ligação de ribossomo, iniciação de tradução e estabilidade de RNA na célula.
[00276] Numa modalidade, o RNA é um RNA modificado por nucleosídeo. O RNA modificado por nucleosídeo tem vantagens particulares em relação ao RNA não modificado, incluindo, por exemplo, estabilidade aumentada, imunogenicidade inata baixa ou ausente e tradução aumentada.
(4) VETOR CIRCULAR E LINEAR [00277] Os um ou mais vetores podem ser plasmídeos circulares, que podem transformar uma célula alvo através da integração no genoma celular ou existir extracromossomicamene (por exemplo, plasmídeo de replicação autônoma com uma origem de replicação). O vetor pode ser pVAX, pcDNA3.0 ou provax, ou qualquer outro vetor de expressão capaz de expressar o polipeptídeo de cadeia pesada e/ou polipeptídeo de cadeia leve codificado pelo construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante.
[00278] Também é fornecido, no presente documento, um ácido nucleico linear ou cassete de expressão linear (“LEC”) que é capaz de ser eficientemente distribuído para um indivíduo através de eletroporação e expressão do polipeptídeo de cadeia pesada e/ou polipeptídeo de cadeia leve codificado pelo construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante. O LEC pode ser qualquer DNA linear desprovido de qualquer cadeia principal de fosfato. O LEC pode não conter nenhum gene de resistência a antibióticos e/ou uma cadeia principal de fosfato. O LEC pode não conter outras sequências de ácidos nucleicos não relacionadas à expressão de genes desejada.
[00279] O LEC pode ser derivado de qualquer plasmídeo capaz de ser linearizado. O plasmídeo pode ser capaz de expressar o polipeptídeo de cadeia pesada e/ou polipeptídeo de cadeia leve codificado pelo construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante. O plasmídeo pode ser pNP (Puerto Rico/34) ou pM2 (New Caledonia/99). O plasmídeo pode ser WLV009, pVAX,
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72/126 pcDNA3.0 ou provax, ou qualquer outro vetor de expressão capaz de expressar o polipeptídeo de cadeia pesada e/ou polipeptídeo de cadeia leve codificado pelo construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante.
[00280] O LEC pode ser pcrM2. O LEC pode ser pcrNP. pcrNP e pcrMR podem ser derivados de pNP (Puerto Rico/34) e pM2 (New Caledonia/99), respectivamente.
(5) VETORES VIRAIS [00281] Numa modalidade, são fornecidos no presente documento vetores virais que são capazes de distribuir um ácido nucleico da invenção para uma célula. O vetor de expressão pode ser fornecido para uma célula sob a forma de um vetor viral. A tecnologia de vetor viral é bem conhecida na técnica e é descrita, por exemplo, em Sambrook et al. (2001), e em Ausubel et al. (1997), e em outros manuais de virologia e biologia molecular. Os vírus que são úteis como vetores incluem, porém sem limitação, retrovirus, adenovirus, adenovirus associado, vírus herpes e lentivírus. Em geral, um vetor adequado contém uma origem de replicação funcional em pelo menos um organismo, uma sequência promotora, sítios de endonuclease de restrição conveniente e um ou mais marcadores selecionáveis. (Consulte, por exemplo, os documentos WO 01/96584; WO 01/29058; e a patente US n° 6.326.193. Os vetores virais e especialmente, vetores retrovirais, se tomaram o método mais amplamente usado para inserir genes em mamíferos, por exemplo, células humanas. Outros vetores virais podem ser derivados de lentivírus, poxvirus, vírus herpes simplex I, adenovirus e adenovirus associado e similares. Consulte, por exemplo, as patentes nos U.S. 5.350.674 e 5.585.362.
(6) MÉTODO DE PREPARAÇÃO DO VETOR [00282] E fornecido no presente documento um método para preparar os um ou mais vetores, em que o construto de sequência de ácidos nucleicos recombinante foi colocado. Após a etapa de subclonagem final, o vetor pode ser usado para inocular uma cultura celular num tanque de fermentação em
Petição 870190121038, de 21/11/2019, pág. 79/163 / 126 larga escala, com o uso de métodos conhecidos na técnica.
[00283] Em outras modalidades, após a etapa de subclonagem final, o vetor pode ser usado com um ou mais dispositivos de eletroporação (EP). Os dispositivos EP são conforme descrito abaixo em mais detalhes.
[00284] Os um ou mais vetores podem ser formulados ou fabricados com o uso de uma combinação de dispositivos e técnicas conhecidas, porém eles são preferencialmente fabricados com o uso de uma técnica de fabricação plasmídeo que é descrita num pedido provisório U.S. copendente licenciado n° de série U.S. 60/939.792, que foi depositado em 23 de março de 2007. Em alguns exemplos, os plasmídeos de DNA descritos no presente documento podem ser formulados em concentrações maiores ou iguais a 10 mg/ml. As técnicas de fabricação também incluem ou incorporam vários dispositivos e protocolos que são comumente conhecidos para aqueles de conhecimento comum na técnica, além daqueles descritos no documento número de série U.S. 60/939792, incluindo aqueles descritos numa patente licenciada, patente US ri 7.238.522, que foi expedida em 3 de julho de 2007. O pedido e a patente mencionados acima, ri de série U.S. 60/939.792 e a patente US n° 7.238.522, respectivamente, estão aqui incorporados em sua totalidade.
4. ANTICORPO [00285] Conforme descrito acima, a sequência de ácidos nucleicos recombinante pode codificar o anticorpo, um fragmento do mesmo, uma variante do mesmo ou uma combinação do mesmo. O anticorpo pode se ligar ou reagir com o antígeno, que é descrito em mais detalhes abaixo.
[00286] O anticorpo pode compreender conjunto de regiões determinantes de complementaridade de cadeia pesada e cadeia leve (“CDR”), respectivamente interposto entre um conjunto de estruturas de cadeia pesada e cadeia leve (“FR”) que fornece suporte para as CDRs e define a relação espacial das CDRs uma em relação à outra. O conjunto de CDR pode conter três regiões hipervariáveis de uma região V de cadeia pesada ou leve. Prosseguindo a partir
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74/126 do N-terminal de uma cadeia pesada ou leve, estas regiões podem ser indicadas como “CDR1”, “CDR2” e “CDR3”, respectivamente. Um sítio de ligação ao antígeno, portanto, pode incluir seis CDRs, que compreendem a CDR definida a partir cada uma dentre uma região V cadeia pesada e leve.
[00287] A enzima proteolítica papaína cliva preferencialmente as moléculas de IgG para produzir vários fragmentos, dois dos quais (os fragmentos F(ab)) compreendem, cada um, um heterodímero covalente que inclui um sítio de ligação ao antígeno intacto. A enzima pepsina é capaz de clivar moléculas de IgG para fornecer vários fragmentos, incluindo o fragmento F(ab’)2, que compreende ambos os sítios de ligação ao antígeno. Consequentemente, o anticorpo pode ser o Fab ou F(ab’)2· O Fab pode incluir o polipeptídeo de cadeia pesada e o polipeptídeo de cadeia leve. O polipeptídeo de cadeia pesada do Fab pode incluir a região VH e a região CHI. A cadeia leve do Fab pode incluir a região VL e a região CL.
[00288] O anticorpo pode ser uma imunoglobulina (Ig). A Ig pode ser, por exemplo, IgA, IgM, IgD, IgE e IgG. A imunoglobulina pode incluir o polipeptídeo de cadeia pesada e o polipeptídeo de cadeia leve. O polipeptídeo de cadeia pesada da imunoglobulina pode incluir uma região VH, uma região CHI, uma região de dobradiça, uma região CH2 e uma região CH3. O polipeptídeo de cadeia leve da imunoglobulina pode incluir uma região VL e região CL.
[00289] O anticorpo pode ser um anticorpo policlonal ou monoclonal. O anticorpo pode ser um anticorpo quimérico, um anticorpo de cadeia única, um anticorpo maturado por afinidade, um anticorpo humano, um anticorpo humanizado ou um anticorpo totalmente humano. O anticorpo humanizado pode ser um anticorpo a partir de uma espécie não humana que liga o antígeno desejado que tem uma ou mais regiões determinantes de complementaridade (RDCs) (CDRs) a partir das espécies não humanas e regiões de estrutura a partir de uma molécula de imunoglobulina humana.
Petição 870190121038, de 21/11/2019, pág. 81/163 / 126 [00290] O anticorpo pode ser um anticorpo IgGl, um anticorpo IgG2, um anticorpo IgG3 ou um anticorpo IgG4. O anticorpo pode ser uma quimera de qualquer um dentre um anticorpo IgGl, um anticorpo IgG2, um anticorpo IgG3 ou um anticorpo IgG4. Em algumas modalidades, o domínio de dobradiça de anticorpo é modificado. Por exemplo, numa modalidade, o anticorpo inclui a substituição de aminoácido Ser288Pro. Numa modalidade, incluir a substituição de aminoácido Ser288Pro impede a comutação de braço de Fab IgG4.
[00291] O anticorpo pode ser um anticorpo biespecífico, conforme descrito abaixo em mais detalhes. O anticorpo pode ser um anticorpo bifuncional conforme também conforme descrito abaixo em mais detalhes.
[00292] Conforme descrito acima, o anticorpo pode ser gerado no indivíduo mediante a administração da composição ao indivíduo. O anticorpo pode ter uma meia-vida dentro do indivíduo. Em algumas modalidades, o anticorpo pode ser modificado para prolongar ou encurtar sua meia-vida dentro do indivíduo. Tais modificações são conforme descrito abaixo em mais detalhes.
[00293] O anticorpo pode ser desfucosilado conforme descrito em mais detalhes abaixo.
A. ANTICORPO BIESPECÍFICO [00294] A sequência de ácidos nucleicos recombinante pode codificar um anticorpo biespecífico, um fragmento do mesmo, uma variante do mesmo ou uma combinação do mesmo. O anticorpo biespecífico pode se ligar ou reagir com dois antígenos, por exemplo, dois dos antígenos conforme descrito abaixo em mais detalhes. O anticorpo biespecífico pode ser compreendido de dois dos anticorpos descritos no presente documento permitindo, assim que o anticorpo biespecífico se ligue ou reaja com duas moléculas alvo desejadas, que podem incluir o antígeno, que é conforme descrito abaixo em mais detalhes, um ligante, incluindo um ligante para um receptor, um receptor, incluindo um sítio
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76/126 de ligação ao ligante no receptor, um complexo ligante-receptor e um marcador.
B. ANTICORPO BIFUNCIONAL [00295] A sequência de ácidos nucleicos recombinante pode codificar um anticorpo bifuncional, um fragmento do mesmo, uma variante do mesmo ou uma combinação do mesmo. O anticorpo bifuncional pode se ligar ou reagir com o antígeno descrito abaixo. O anticorpo bifuncional também pode ser modificado para conferir uma funcionalidade adicional ao anticorpo além do reconhecimento e ligação ao antígeno. Tal modificação pode incluir, porém sem limitação, acoplamento ao fator H ou um fragmento do mesmo. O fator H é um regulador solúvel de ativação complementar e, deste modo, pode contribuir para uma resposta imune por meio de lise mediada por complemento (CML).
C. EXTENSÃO DE MEIA-VIDA DE ANTICORPO [00296] Conforme descrito acima, o anticorpo pode ser modificado para estender ou encurtar a meia-vida do anticorpo no indivíduo. A modificação pode estender ou encurtar a meia-vida do anticorpo no soro do indivíduo.
[00297] A modificação pode estar presente numa região constante do anticorpo. A modificação pode ser uma ou mais substituições de aminoácido numa região constante do anticorpo que estende a meia-vida do anticorpo em comparação a uma meia-vida de um anticorpo que não contém as uma ou mais substituições de aminoácido. A modificação pode ser uma ou mais substituições de aminoácido no domínio CH2 do anticorpo que estendem a meia-vida do anticorpo em comparação a uma meia-vida de um anticorpo que não contém as uma ou mais substituições de aminoácido.
[00298] Em algumas modalidades, as uma ou mais substituições de aminoácido na região constante podem incluir substituir um resíduo de metionina na região constante por um resíduo de tirosina, um resíduo de serina na região constante por um resíduo de treonina, um resíduo de treonina na região constante por um resíduo de glutamato, ou qualquer combinação dos mesmos estendendo, deste modo a meia-vida do anticorpo.
Petição 870190121038, de 21/11/2019, pág. 83/163 / 126 [00299] Em outras modalidades, as uma ou mais substituições de aminoácido na região constante podem incluir substituir um resíduo de metionina no domínio CH2 por um resíduo de tirosina, um resíduo de senna no domínio CH2 por um resíduo de treonina, um resíduo de treonina no domínio CH2 por um resíduo de glutamato, ou qualquer combinação dos mesmos estendendo, deste modo a meia-vida do anticorpo.
D. DESFUCOSILAÇÃO [00300] A sequência de ácidos nucleicos recombinante pode codificar um anticorpo que não é fucosilado (isto é, um anticorpo desfucosilado ou um anticorpo não fucosilado), um fragmento do mesmo, uma variante do mesmo ou uma combinação do mesmo. A fucosilação inclui a adição da fucose de açúcar a uma molécula, por exemplo, a ligação de fucose a N-glicanos, Oglicanos e glicolipídios. Consequentemente, num anticorpo desfucosilado, a fucose não é ligada às cadeias de carboidrato da região constante. Por sua vez, esta falta de fucosilação pode melhorar a ligação FcyRIIIa e a atividade citotóxica celular direcionada ao anticorpo (ADCC) pelo anticorpo em comparação ao anticorpo fucosilado. Portanto, em algumas modalidades, o anticorpo não fucosilado pode exibir atividade ADCC aumentada em comparação ao anticorpo fucosilado.
[00301] O anticorpo pode ser modificado a fim de impedir ou inibir a fucosilação do anticorpo. Em algumas modalidades, tal anticorpo modificado pode exibir atividade ADCC aumentada em comparação ao anticorpo não modificado. A modificação pode se situar na cadeia pesada, cadeia leve ou uma combinação das mesmas. A modificação pode ser uma ou mais substituições de aminoácido na cadeia pesada, uma ou mais substituições de aminoácido na cadeia leve ou uma combinação das mesmas.
5. ANTÍGENO [00302] O anticorpo sintético é dirigido ao antígeno ou fragmento ou variante do mesmo. O antígeno pode ser uma sequência de ácidos nucleicos,
Petição 870190121038, de 21/11/2019, pág. 84/163 / 126 uma sequência de aminoácidos, um polissacarídeo ou uma combinação dos mesmos. A sequência de ácidos nucleicos pode ser DNA, RNA, cDNA, uma variante dos mesmos, um fragmento dos mesmos ou uma combinação dos mesmos. The sequência de aminoácidos pode ser uma proteína, um peptídeo, uma variante dos mesmos, um fragmento dos mesmos ou uma combinação dos mesmos. O polissacarídeo pode ser um polissacarídeo codificado por ácido nucleico.
[00303] O antígeno pode ser proveniente de um vírus. O antígeno pode ser associado à infecção viral. Numa modalidade, o antígeno pode ser associado a uma infecção por HIV. Numa modalidade, o antígeno pode ser antígeno de HIV.
[00304] Numa modalidade, um anticorpo sintético da invenção tem como alvo dois ou mais antígenos. Numa modalidade, pelo menos um antígeno de um anticorpo biespecífico é selecionado a partir dos antígenos descritos no presente documento. Numa modalidade, os dois ou mais antígenos são selecionados a partir dos antígenos descritos no presente documento.
A. ANTÍGENOS VIRAIS [00305] O antígeno viral pode ser um antígeno viral ou fragmento ou variante do mesmo. O vírus pode ser um vírus causador de doenças. O vírus pode ser o vírus da imunodeficiência humana.
[00306] O antígeno pode ser um antígeno viral do HIV, ou um fragmento do mesmo ou uma variante do mesmo. O antígeno do HIV pode ser a partir de um fator que permite que o vírus se replique, infecte ou sobreviva. Os fatores que permitem que o HIV se replique ou sobreviva incluem, porém sem limitação proteínas estruturais e proteínas não estruturais. Tal proteína pode ser uma proteína de envelope ou uma glicoproteína.
[00307] Em algumas modalidades, o antígeno do HIV pode ser uma proteína de envelope sub tipo A, proteína de envelope subtipo B, proteína de envelope subtipo C, proteína de envelope subtipo D, proteína Nef-Rev subtipo
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B, proteína Gag subtipo A, B, C ou D, proteína MPol, um ácido nucleico on sequências de aminoácidos de Env A, Env B, Env C, Env D, Nef-Rev B, Gag, ou qualquer combinação dos mesmos. Numa modalidade, uma proteína de envelope é uma glicoproteína de HIV. Numa modalidade, a glicoproteína de HIV (gp) é gpl20 de HIV, gp41 de HIV ou gp!60.
[00308] Um anticorpo sintético específico para HIV pode incluir um fragmento Fab que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:3, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO:4, SEQ ID NO: 5, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 6, sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 12 ou SEQ ID NO: 13, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 14. O anticorpo sintético pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 1, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO:2, a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:7, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO:8, ou a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:9, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 10.
[00309] Um anticorpo sintético específico para HIV pode incluir um fragmento Fab que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 17, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO:20, sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:25, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO:26, ou SEQ ID NO: 27, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO:28. O anticorpo sintético pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 15, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 16, a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:21, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO:22, ou a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:23, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID
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NO:24.
[00310] Um anticorpo sintético específico para HIV pode incluir um fragmento Fab que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 39, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO:40, SEQ ID NO: 41, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO:42, sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:47, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO:48, ou SEQ ID NO: 49, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO:50. O anticorpo sintético pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:37, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO:38, a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:43, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 44, a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 45, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO:46, a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:51, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 52, ou a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:53, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO:54.
[00311] O anticorpo sintético pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:29, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO:30, a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:31, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 32, a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:33, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO:34, ou a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:35 que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO:36.
[00312] Um anticorpo sintético específico para HIV pode incluir uma Ig que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 1,
A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:7, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 8.
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A Ig pode compreender a sequência de ammoacidos da SEQ ID NO: 9, que e codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 10. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 15, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 16. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 21, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO:22. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 23, que é nucleicos da SEQ ID NO: 24. A Ig aminoácidos da SEQ ID NO: 29, que é nucleicos da SEQ ID NO: 30. A Ig aminoácidos da SEQ ID NO:31, que é nucleicos da SEQ ID NO: 32. A Ig aminoácidos da SEQ ID NO:33, que é nucleicos da SEQ ID NO: 34. A Ig aminoácidos da SEQ ID NO:35, que é nucleicos da SEQ ID NO: 36. A Ig aminoácidos da SEQ ID NO:37, que é nucleicos da SEQ ID NO: 38. A Ig aminoácidos da SEQ ID NO:43, que é nucleicos da SEQ ID NO: 44. A Ig aminoácidos da SEQ ID NO:45, que é nucleicos da SEQ ID NO: 46. A Ig aminoácidos da SEQ ID NO:51, que é nucleicos da SEQ ID NO: 52. A Ig aminoácidos da SEQ ID NO:53, que é nucleicos da SEQ ID NO: 54. A Ig aminoácidos da SEQ ID NO:55, que é nucleicos da SEQ ID NO: 56. A Ig aminoácidos da SEQ ID NO:57, que é codificada pela sequência de ácidos pode compreender a sequência de codificada pela sequência de ácidos pode compreender a sequência de codificada pela sequência de ácidos pode compreender a sequência de codificada pela sequência de ácidos pode compreender a sequência de codificada pela sequência de ácidos pode compreender a sequência de codificada pela sequência de ácidos pode compreender a sequência de codificada pela sequência de ácidos pode compreender a sequência de codificada pela sequência de ácidos pode compreender a sequência de codificada pela sequência de ácidos pode compreender a sequência de codificada pela sequência de ácidos pode compreender a sequência de codificada pela sequência de ácidos pode compreender a sequência de codificada pela sequência de ácidos
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82/126 nucleicos da SEQ ID NO: 58. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:59, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 60. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:61, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 62. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 64. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:65, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 66. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:67, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 68. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:69, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 70. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:71, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 72. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:73, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 74. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:75, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 76. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:77, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 78. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:79, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 80. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:81, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 82. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:83, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 84. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 85, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 86. A Ig pode compreender a sequência de
Petição 870190121038, de 21/11/2019, pág. 89/163 / 126 aminoácidos da SEQ ID NO:87, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 88. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 89, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 90. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:91, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 92. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:93, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 94. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:95, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 96. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:97, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 98. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 99, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 100. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 101, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 102. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 103, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 104. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 105, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 106. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 107, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 108. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 109, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 110. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 111, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 112. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 113, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 114. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 115, que é codificada pela sequência de ácidos
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84/126 nucleicos da SEQ ID NO: 116. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 117, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 118. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 119, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 120. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 121, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 122. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 123, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 124. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 125, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 126. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 127, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 128. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 129, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 130. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 131, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 132. A Ig pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 133, que é codificada pela sequência de ácidos nucleicos da SEQ ID NO: 134.
6. EXCIPIENTES E OUTROS COMPONENTES DA COMPOSIÇÃO [00313] A composição pode compreender ainda um excipiente farmaceuticamente aceitável. O excipiente farmaceuticamente aceitável pode ser moléculas funcionais, tais como veículos, carreadores ou diluentes. O excipiente farmaceuticamente aceitável pode ser um agente facilitador de transfecção, que pode incluir agentes ativos de superfície, tais como complexos imunoestimulantes (ISCOMS), adjuvante incompleto de Freunds, análogo de LPS incluindo monofosforil lipídio A, peptídeos de muramila, análogos de quinona, vesículas, tais como esqualeno e esqualeno, ácido hialurônico, lipídios, lipossomas, íons de cálcio, proteínas virais, poliânions, policátions ou
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[00314] O agente facilitador de transfecção é um poliânion, policátion, incluindo poli-L-glutamato (LGS) ou lipídio. O agente facilitador de transfecção é poli-L-glutamato, e o poli-L-glutamato pode estar presente na composição a uma concentração menor que 6 mg/ml. O agente facilitador de transfecção também pode incluir agentes ativos de superfície, tais como complexos imunoestimulantes (ISCOMS), adjuvante incompleto de Freunds, análogo de LPS incluindo monofosforil lipídio A, peptídeos de muramila, análogos de quinona, vesículas, tais como esqualeno e esqualeno e ácido hialurônico também podem ser usados administrados em conjunto com a composição. A composição também pode incluir um agente facilitador de transfecção, tais como lipídios, lipossomas, incluindo lipossomas de lecitina ou outros lipossomas conhecidos na técnica, como uma mistura de DNAlipossoma (consulte por exemplo W09324640), íons de cálcio, proteínas virais, poliânions, policátions ou nanopartículas ou outros agentes facilitadores de transfecção conhecidos. O agente facilitador de transfecção é um poliânion, policátion, incluindo poli-L-glutamato (LGS) ou lipídio. A concentração do agente de transfecção na vacina é menor que 4 mg/ml, menor que 2 mg/ml, menor que 1 mg/ml, menor que 0,750 mg/ml, menor que 0,500 mg/ml, menor que 0,250 mg/ml, menor que 0,100 mg/ml, menor que 0,050 mg/ml ou menor que 0,010 mg/ml.
[00315] A composição pode compreender ainda um agente facilitador genético conforme descrito no documento número de série U.S. 021.579, depositado em 1 de abril de 1994, que é totalmente incorporado a título de referência.
[00316] A composição pode compreender DNA em quantidades de cerca de 1 nanograma a 100 miligramas; cerca de 1 micrograma a cerca de 10 miligramas; ou, de preferência, cerca de 0,1 micrograma a cerca de 10 miligramas; ou, mais preferencialmente, cerca de 1 miligrama a cerca de 2
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86/126 miligramas. Em algumas modalidades preferenciais, a composição de acordo com a presente invenção compreende cerca de 5 nanogramas a cerca de 1000 microgramas de DNA. Em algumas modalidades preferenciais, a composição pode conter cerca de 10 nanogramas a cerca de 800 microgramas de DNA. Em algumas modalidades preferenciais, a composição pode conter cerca de 0,1 a cerca de 500 microgramas de DNA. Em algumas modalidades preferenciais, a composição pode conter cerca de 1 a cerca de 350 microgramas de DNA. Em algumas modalidades preferenciais, a composição pode conter cerca de 25 a cerca de 250 microgramas, de cerca de 100 a cerca de 200 microgramas, de cerca de 1 nanograma a 100 miligramas; de cerca de 1 micrograma a cerca de 10 miligramas; de cerca de 0,1 micrograma a cerca de 10 miligramas; de cerca de 1 miligrama a cerca de 2 miligramas, de cerca de 5 nanogramas a cerca de 1000 microgramas, de cerca de 10 nanogramas a cerca de 800 microgramas, de cerca de 0,1 a cerca de 500 microgramas, de cerca de 1 a cerca de 350 microgramas, de cerca de 25 a cerca de 250 microgramas, de cerca de 100 a cerca de 200 microgramas de DNA.
[00317] A composição pode ser formulada de acordo com o modo de administração a ser usado. Uma composição farmacêutica injetável pode ser estéril, livre de pirogênio e livre de particulado. Uma formulação ou solução isotônica pode ser usada. Aditivos para isotonicidade podem incluir cloreto de sódio, dextrose, manitol, sorbitol e lactose. A composição pode compreender um agente de vasoconstrição. As soluções isotônicas podem incluir solução salina tamponada com fosfato. A composição pode compreender adicionalmente estabilizantes incluindo gelatina e albumina. Os estabilizantes podem permitir que a formulação seja estável à temperatura ambiente ou do meio ambiente por períodos de tempo prolongados, incluindo LGS, policátions ou poliânions.
7. MÉTODO DE GERAÇÃO DO ANTICORPO SINTÉTICO [00318] A presente invenção também se refere a um método para gerar
Petição 870190121038, de 21/11/2019, pág. 93/163 / 126 o anticorpo sintético. O método pode incluir administrar a composição ao indivíduo que necessite da mesma com o uso do método para distribuição descrito em mais detalhes abaixo. Consequentemente, o anticorpo sintético é gerado no indivíduo ou in vivo após a administração da composição ao indivíduo.
[00319] O método também pode incluir introduzir a composição numa ou mais células e, portanto, o anticorpo sintético pode ser gerado ou produzido nas uma ou mais células. O método pode incluir ainda introduzir a composição nos um ou mais tecidos, por exemplo, porém sem limitação, pele e músculo e, portanto, o anticorpo sintético pode ser gerado ou produzido nos um ou mais tecidos.
8. MÉTODO DE IDENTIFICAÇÃO OU TRIAGEM PARA O ANTICORPO [00320] A presente invenção se refere ainda a um método de identificação ou triagem para o anticorpo descrito acima, que é reativo ou se liga ao antígeno descrito acima. O método de identificação ou triagem para o anticorpo pode usar o antígeno em metodologias conhecidas por aqueles versados na técnica para identificar ou realizar a triagem para o anticorpo. Tais metodologias podem incluir, porém sem limitação, a seleção do anticorpo a partir de uma biblioteca (por exemplo, apresentação em fago) e imunização de um animal seguido de isolamento e/ou purificação do anticorpo.
9. MÉTODO DE DISTRIBUIÇÃO DA COMPOSIÇÃO [00321] A presente invenção também se refere a um método de distribuição da composição ao indivíduo que necessite da mesma. O método de distribuição pode incluir, administrar a composição ao indivíduo. A administração pode incluir, porém sem limitação, injeção de DNA com e sem eletroporação in vivo, distribuição mediada por lipossoma e distribuição facilitada por nanopartícula.
[00322] O mamífero que recebe a distribuição da composição pode ser
Petição 870190121038, de 21/11/2019, pág. 94/163 / 126 um ser humano, primata, primata não humano, vaca, gado, ovelha, cabra, antílope, bisonte, búfalo d’água, bisonte, bovídeos, veado, ouriços, elefantes, lhama, alpaca, camundongos, ratos e frango.
[00323] A composição pode ser administrada por diferentes vias incluindo oral, parenteral, sublingual, transdérmica, retal, transmucosa, tópica, por meio de inalação, por meio de administração oral, intrapleural, intravenosa, intra-arterial, intraperitoneal, subcutânea, intramuscular, intranasal intratecal, e intra-articular ou combinações dos mesmos. Para uso veterinário, a composição pode ser administrada como uma formulação farmaceuticamente aceitável de acordo com a prática veterinária normal. O veterinário pode determinar prontamente o regime de dosagem e a via de administração que é mais adequada para um animal particular. A composição pode ser administrada por seringas tradicionais, dispositivos de injeção sem agulha, “pistolas de genes de bombardeamento de microprojéteis”, ou outros métodos físicos, tais como eletroporação (“EP”), “método hidrodinâmico” ou ultrassom.
A. ELETROPORAÇÃO [00324] A administração da composição através de eletroporação pode ser realizada com o uso de dispositivos de eletroporação que podem ser configurados para distribuir para um tecido desejado de um mamífero, um pulso de energia eficaz para fazer com que os poros reversíveis se formem nas membranas celulares, e de preferência, o pulso de energia é uma corrente constante similar a uma corrente predefinida inserida por um usuário. O dispositivo de eletroporação pode compreender um componente de eletroporação e um conjunto de eletrodo ou conjunto de manipulo. O componente de eletroporação pode incluir e incorporar um ou mais dos vários elementos do dispositivos de eletroporação, incluindo: controlador, gerador de forma de onda de corrente, testador de impedância, registrador de forma de onda, elemento de entrada, elemento de relatório de situação, porta de comunicação, componente de memória, fonte de alimentação e chave de
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89/126 alimentação. A eletroporação pode ser realizada com o uso de um dispositivo de eletroporação in vivo, por exemplo sistema CELLECTRA EP (Inovio Pharmaceuticals, Plymouth Meeting, PA) ou eletroporador Elgen (Inovio Pharmaceuticals, Plymouth Meeting, PA) para facilitar a transfecção de células pelo plasmídeo.
[00325] O componente de eletroporação pode funcionar como um elemento dos dispositivos de eletroporação, e os outros elementos são elementos separados (ou componentes) em comunicação com o componente de eletroporação. O componente de eletroporação pode funcionar como mais de um elemento dos dispositivos de eletroporação, que pode ficar em comunicação com ainda outros elementos dos dispositivos de eletroporação separados do componente de eletroporação. Os elementos dos dispositivos de eletroporação existentes como partes de um dispositivo eletromecânico ou mecânico podem não ser limitados, à medida que os elementos podem funcionar como um dispositivo ou como elementos separados em comunicação uns com os outros. O componente de eletroporação pode ser capaz de distribuir o pulso de energia que produz a corrente constante no tecido desejado, e inclui um mecanismo de retroalimentação. O conjunto de eletrodo pode incluir uma matriz de eletrodos que tem uma pluralidade de eletrodos numa disposição espacial, em que o conjunto de eletrodo recebe o pulso de energia do componente de eletroporação e distribui o mesmo para o tecido desejado através dos eletrodos. Pelo menos um dentre a pluralidade de eletrodos é neutro durante a distribuição do pulso de energia e mede a impedância no tecido desejado e comunica a impedância para o componente de eletroporação. O mecanismo de retroalimentação pode receber a impedância medida e pode ajustar o pulso de energia distribuído pelo componente de eletroporação para manter a corrente constante.
[00326] Uma pluralidade de eletrodos pode distribuir o pulso de energia num padrão descentralizado. A pluralidade de eletrodos pode distribuir o pulso de energia no padrão descentralizado através do controle dos eletrodos sob uma
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90/126 sequência programada, e a sequência programada é inserida por um usuário no componente de eletroporação. A sequência programada pode compreender uma pluralidade de pulsos distribuídos em sequência, em que cada pulso da pluralidade de pulsos é distribuído por pelo menos dois eletrodos ativos com um eletrodo ativo que mede a impedância e em que um pulso subsequente da pluralidade de pulsos é distribuído por um diferente dentre pelo menos dois eletrodos ativos com um eletrodo neutro que mede a impedância.
[00327] O mecanismo de retroalimentação pode ser realizado por hardware ou software. O mecanismo de retroalimentação pode ser realizado por um circuito fechado analógico. A retroalimentação ocorre a cada 50 ps, 20 ps, 10 ou 1 ps, porém é preferencialmente uma retroalimentação em tempo real ou instantânea (isto é, substancialmente instantânea conforme determinado por técnicas disponíveis para determinar o tempo de resposta). O eletrodo neutro pode medir a impedância no tecido desejado e comunica a impedância para o mecanismo de retroalimentação, e o mecanismo de retroalimentação responde à impedância e ajusta o pulso de energia para manter a corrente constante num valor similar à corrente predefinida. O mecanismo de retroalimentação pode manter a corrente constante de maneira contínua e instantânea durante a distribuição do pulso de energia.
[00328] Exemplos de dispositivos de eletroporação e métodos de eletroporação que podem facilitar a distribuição da composição da presente invenção, incluem aqueles descritos na patente US ri 7.245.963, de DraghiaAkli, et al, publicação de patente US n° 2005/0052630, enviada por Smith, et al., cujo conteúdo está aqui incorporado a título de referência em sua totalidade. Outros dispositivos de eletroporação e métodos de eletroporação que podem ser usados para facilitar a distribuição da composição incluem aqueles fornecidos na publicação de patente de propriedade comum e copendente número de série U.S. 11/874072, depositada em 17 de outubro de 2007, que reivindica o benefício disposto no título 35 do USC 119(e) dos pedidos
Petição 870190121038, de 21/11/2019, pág. 97/163 / 126 provisórios números de série U.S. 60/852.149, depositado em 17 de outubro de 2006 e 60/978.982, depositado em 10 de outubro de 2007, todos os quais estão aqui incorporados em sua totalidade.
[00329] A patente US n° 7.245.963, de Draghia-Akli, et al. Descreve sistemas de eletrodo modular e seu uso para facilitar a introdução de uma biomolécula nas células de um tecido selecionado num corpo ou planta. Os sistemas modulares de eletrodo podem compreender uma pluralidade de eletrodos de agulha; uma agulha hipodérmica; um conector elétrico que fornece um enlace condutivo a partir do controlador de pulso de corrente constante para a pluralidade de eletrodos de agulha; e uma fonte de alimentação. Um operador pode segurar a pluralidade de eletrodos de agulha que são montados numa estrutura de suporte e inserir firmemente os mesmos no tecido selecionado num corpo ou planta. As biomoléculas são, então, distribuídas através da agulha hipodérmica para o tecido selecionado. O controlador de pulso de corrente constante programável é ativado e o pulso elétrico de corrente constante é aplicado à pluralidade de eletrodos de agulha. O pulso elétrico de corrente constante aplicado facilita a introdução da biomolécula na célula entre a pluralidade de eletrodos. O conteúdo total da patente US n° 7.245.963 está aqui incorporado a título de referência.
[00330] A publicação de patente US n° 2005/0052630, enviada por Smith, et al. descreve um dispositivo de eletroporação que pode ser usado para facilitar eficazmente a introdução de uma biomolécula nas células de um tecido selecionado num corpo ou planta. O dispositivo de eletroporação compreende um dispositivo eletrocinético (“dispositivo EKD”) cuja operação é especificada por software ou firmware. O dispositivo EKD produz uma série de padrões de pulso de corrente constante programáveis entre eletrodos numa matriz baseada no controle de usuário e entrada dos parâmetros de pulso, e permite o armazenamento e aquisição de dados de formas de onda de corrente. O dispositivo de eletroporação também compreende um disco de eletrodo
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92/ 126 substituível que tem uma matriz de eletrodos de agulha, um canal de injeção central para uma agulha de injeção e um disco de guia removível. Todo o conteúdo da publicação de patente US n° 2005/0052630 está aqui incorporado a título de referência.
[00331] As matrizes de eletrodo e os métodos descritos na patente US n° 7.245.963 e na publicação de patente US n° 2005/0052630 podem ser adaptadas para penetração profunda não apenas em tecidos, tais como músculos, mas também outros tecidos ou órgãos. Devido à configuração da matriz de eletrodos, a agulha de injeção (para fornecer a biomolécula de escolha) também é inserida completamente no órgão alvo e a injeção é administrada perpendicular ao tecido alvo, na área que é pré-delineada pelos eletrodos. Os eletrodos descritos na patente US ri 7.245.963 e publicação de patente US n° 2005/005263 têm preferencialmente 20 mm de comprimento e 21 de calibre.
[00332] Adicionalmente, dispositivos de eletroporação são contemplados em algumas modalidades que incorporam dispositivos de eletroporação e usos dos mesmos, que são aqueles descritos nas seguintes patentes: patente US n° 5.273.525 expedida em 28 de dezembro de 1993, patentes nos U.S. 6.110.161, expedida em 29 de agosto de 2000, 6.261.281, expedido em 17 de julho de 2001 e 6.958.060, expedida em 25 de outubro de 2005, e patente US n° 6.939.862, expedida em 6 de setembro de 2005. Além disto, as patentes que cobrem a matéria fornecida na patente US ri 6.697.669, expedida em 24 de fevereiro de 2004, que se refere à distribuição de DNA com o uso de qualquer um dentre uma variedade de dispositivos, e patente US n° 7.328.064, expedida em 5 de fevereiro de 2008, esboçada para o método de injeção de DNA são contempladas no presente documento. As patentes acima são incorporadas a título de referência em sua totalidade.
10. MÉTODO DE TRATAMENTO [00333] Um método para tratar, proteger contra e/ou prevenir doença
Petição 870190121038, de 21/11/2019, pág. 99/163 / 126 num indivíduo que necessite do mesmo gerando-se o anticorpo sintético no indivíduo também é fornecido no presente documento. O método pode incluir administrar a composição ao indivíduo. A administração da composição ao indivíduo pode ser realizada com o uso do método de distribuição descrito acima.
[00334] Em determinadas modalidades, a invenção fornece um método para tratar, proteger contra e/ou prevenir uma infecção por HIV. Numa modalidade, o método trata, protege contra e/ou previne uma doença associada a HIV.
[00335] Mediante a geração do anticorpo sintético no indivíduo, o anticorpo sintético pode se ligar ou reagir com o antígeno. Tal ligação pode neutralizar o antígeno, bloque o reconhecimento do antígeno por outra molécula, por exemplo, uma proteína ou ácido nucleico e provocar ou induzir uma resposta imune ao antígeno tratando, protegendo contra e/ou prevenindo, deste modo, a doença associada ao antígeno no indivíduo.
[00336] A composição dose pode se situar entre 1 pg e 10 mg de componente ativo por kg de peso corporal/tempo, e pode ser de 20 pg a 10 mg de componente/kg de peso corporal/tempo. A composição pode ser administrada a cada 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 ou 31 dias. O número de doses de composição para tratamento eficaz pode ser 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10.
11. USO EM COMBINAÇÃO COM ANTIRRETROVIRAIS [00337] A presente invenção também fornece um método para tratar, proteger contra e/ou prevenir doença num indivíduo que necessite do mesmo administrando-se uma combinação do anticorpo sintético e um agente antirretroviral terapêutico.
[00338] O anticorpo sintético e um agente antirretroviral pode ser administrado com o uso de qualquer método adequado de modo que a combinação tanto do anticorpo sintético como do agente antirretroviral esteja
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94/126 presente no indivíduo. Numa modalidade, o método pode compreender a administração de uma primeira composição que compreende um anticorpo sintético da invenção por meio de qualquer um dos métodos descritos em detalhes acima e a administração de uma segunda composição que compreende um agente antirretroviral menos de 1, menos de 2, menos de 3, menos de 4, menos de 5, menos de 6, menos de 7, menos de 8, menos de 9 ou menos de 10 dias após a administração do anticorpo sintético. Numa modalidade, o método pode compreender a administração de uma primeira composição que compreende um anticorpo sintético da invenção por meio de qualquer um dos métodos descritos em detalhes acima e a administração de uma segunda composição que compreende um agente antirretroviral mais de 1, mais de 2, mais de 3, mais de 4, mais de 5, mais de 6, mais de 7, mais de 8, mais de 9 ou mais de 10 dias após a administração do anticorpo sintético. Numa modalidade, o método pode compreender a administração de uma primeira composição que compreende um agente antirretroviral e a administração de uma segunda composição que compreende um anticorpo sintético da invenção por meio de qualquer um dos métodos descritos em detalhes acima menos de 1, menos de 2, menos de 3, menos de 4, menos de 5, menos de 6, menos de 7, menos de 8, menos de 9 ou menos de 10 dias após a administração do agente antirretroviral. Numa modalidade, o método pode compreender a administração de uma primeira composição que compreende um agente antirretroviral e a administração de uma segunda composição que compreende um anticorpo sintético da invenção por meio de qualquer um dos métodos descritos em detalhes acima mais de 1, mais de 2, mais de 3, mais de 4, mais de 5, mais de 6, mais de 7, mais de 8, mais de 9 ou mais de 10 dias após a administração do agente antirretroviral. Numa modalidade, o método pode compreender a administração de uma primeira composição que compreende um anticorpo sintético da invenção por meio de qualquer um dos métodos descritos em detalhes acima e uma segunda composição que compreende um agente
Petição 870190121038, de 21/11/2019, pág. 101/163 / 126 antirretroviral simultaneamente. Numa modalidade, o método pode compreender a administração de uma primeira composição que compreende um anticorpo sintético da invenção por meio de qualquer um dos métodos descritos em detalhes acima e uma segunda composição que compreende um agente antirretroviral simultaneamente. Numa modalidade, o método pode compreender a administração de uma única composição que compreende um anticorpo sintético da invenção e um agente antirretroviral.
[00339] Exemplos não limitativos de antirretrovirais que podem ser usados em combinação com o anticorpo sintético da invenção incluem Inibidores de Transcriptase Reversa de Nucleosídeos (NRTIs), Inibidores de Transcriptase Reversa de Não Nucleosídeos (NNRTIs), Inibidores de Protease (Pis), Inibidores de Fusão, Antagonistas de CCRF, Inibidores de Integrase, Inibidores Pós-fixação, Inibidores Farmacocinéticos e qualquer combinação dos mesmos. Antirretrovirais exemplificativos incluem, porém sem limitação abacavir, emtricitabina, lamivudina, tenofovir, zidovudina, efavirenz, etravirina, nevirapina, rilpivirina, atazanavir, darunavir, fosamprenavir, ritonavir, saquinavir, tipranavir, enfuvirtida, maraviroc, dolutegravir, raltegravir, ibalizumabe e cobicistat. A presente invenção tem múltiplos aspectos, ilustrados pelos seguintes exemplos não limitadores.
12. GERAÇÃO DE ANTICORPOS SINTÉTICOS IN VITRO E EX VIVO [00340] Numa modalidade, o anticorpo sintético é gerado in vitro ou ex vivo. Por exemplo, numa modalidade, um ácido nucleico que codifica um anticorpo sintético pode ser introduzido e expresso numa célula in vitro ou ex vivo. Métodos para introduzir e expressar genes numa célula são conhecidos na técnica. No contexto de um vetor de expressão, o vetor pode ser prontamente introduzido numa célula hospedeira, por exemplo, célula de mamífero, bacteriana, levedura ou inseto por qualquer método na técnica. Por exemplo, o vetor de expressão pode ser transferido para uma célula hospedeira por meios físicos, químicos ou biológicos.
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96/126 [00341] Os métodos físicos para introduzir um polinucleotídeo numa célula hospedeira incluem precipitação com fosfato de cálcio, lipofecção, bombardeio de partículas, microinjeção, eletroporação e similares. Os métodos para produzir células que compreendem vetores e/ou ácidos nucleicos exógenos são bem conhecidos na técnica. Consulte, por exemplo, Sambrook et al. (2012, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York). Um método preferido para a introdução de um polinucleotídeo numa célula hospedeira é a transfecção de fosfato de cálcio.
[00342] Os métodos biológicos para a introdução de um polinucleotídeo de interesse numa célula hospedeira incluem o uso de vetores de DNA e RNA. Os vetores virais e especialmente, vetores retrovirais, se tomaram o método mais amplamente usado para inserir genes em mamíferos, por exemplo, células humanas. Outros vetores virais podem ser derivados de lentivírus, poxvirus, vírus herpes simplex I, adenovirus e adenovirus associado e similares. Consulte, por exemplo, as patentes nos U.S. 5.350.674 e 5.585.362.
[00343] Os meios químicos para introduzir um polinucleotídeo numa célula hospedeira incluem sistemas de dispersão coloidal, tais como complexos de macromoléculas, nanocápsulas, microesferas, esferas e sistemas à base de lipídio, incluindo emulsões de óleo em água, micelas, micelas mistas e lipossomas. Um sistema coloidal exemplificador para uso como um veículo de distribuição in vitro e in vivo é um lipossoma (por exemplo, uma vesícula de membrana artificial).
[00344] No caso em que um sistema de distribuição não viral é utilizado, um veículo de distribuição exemplificador é um lipossoma. O uso de formulações de lipídio é contemplado para a introdução dos ácidos nucleicos numa célula hospedeira (in vitro, ex vivo ou in vivo). Em outro aspecto, o ácido nucleico pode ser associado a um lipídio. O ácido nucleico associado a um lipídio pode ser encapsulado no interior aquoso de um lipossoma, intercalado dentro da bicamada de lipídio de um lipossoma, ligado a um lipossoma através
Petição 870190121038, de 21/11/2019, pág. 103/163 / 126 de uma molécula de ligação que é associada tanto ao lipossoma como ao oligonucleotídeo, aprisionado num lipossoma, complexado com um lipossoma, disperso numa solução contendo um lipídio, misturado com um lipídio, combinado com um lipídio, contido como uma suspensão num lipídio, contido ou complexado com uma micela ou, de outro modo, associado a um lipídio. As composições associadas a lipídio, lipídio/DNA ou lipídio/vetor de expressão não se limitam a nenhuma estrutura particular na solução. Por exemplo, elas podem estar presentes numa estrutura de bicamada, como micelas ou com uma estrutura “achatada”. Elas também podem ser simplesmente intercaladas numa solução, formando possivelmente agregados que não são uniformes em tamanho ou formato. Lipídios são substâncias graxas que podem ser lipídios de ocorrência natural ou sintéticos. Por exemplo, os lipídios incluem as gotículas graxas que ocorrem naturalmente no citoplasma, assim como a classe de compostos que contém hidrocarbonetos alifáticos de cadeia longa e seus derivados, tais como ácidos graxos, álcoois, amina, aminoálcoois e aldeídos.
13. USO EM COMBINAÇÃO COM VACINAS [00345] A presente invenção também fornece um método para tratar, proteger contra, prevenir doença e/ou induzir uma resposta imune num indivíduo que necessite do mesmo administrando-se uma combinação do anticorpo sintético e uma vacina. Numa modalidade, a vacina é uma vacina de DNA.
[00346] O anticorpo sintético e a vacina podem ser administrados com o uso de qualquer método adequado, de modo que uma combinação tanto do anticorpo sintético como da vacina esteja presente no indivíduo. Numa modalidade, o método pode compreender a administração de uma primeira composição que compreende um anticorpo sintético da invenção por meio de qualquer um dos métodos descritos em detalhes acima e a administração de uma segunda composição que compreende uma vacina menos de 1, menos de 2, menos de 3, menos de 4, menos de 5, menos de 6, menos de 7, menos de 8,
Petição 870190121038, de 21/11/2019, pág. 104/163 / 126 menos de 9 ou menos de 10 dias após a administração do anticorpo sintético. Numa modalidade, o método pode compreender a administração de uma primeira composição que compreende um anticorpo sintético da invenção por meio de qualquer um dos métodos descritos em detalhes acima e a administração de uma segunda composição que compreende uma vacina mais de 1, mais de 2, mais de 3, mais de 4, mais de 5, mais de 6, mais de 7, mais de 8, mais de 9 ou mais de 10 dias após a administração do anticorpo sintético. Numa modalidade, o método pode compreender a administração de uma primeira composição que compreende uma vacina e a administração de uma segunda composição que compreende um anticorpo sintético da invenção por meio de qualquer um dos métodos descritos em detalhes acima menos de 1, menos de 2, menos de 3, menos de 4, menos de 5, menos de 6, menos de 7, menos de 8, menos de 9 ou menos de 10 dias após a administração da vacina. Numa modalidade, o método pode compreender a administração de uma primeira composição que compreende uma vacina e a administração de uma segunda composição que compreende um anticorpo sintético da invenção por meio de qualquer um dos métodos descritos em detalhes acima mais de 1, mais de 2, mais de 3, mais de 4, mais de 5, mais de 6, mais de 7, mais de 8, mais de 9 ou mais de 10 dias após a administração da vacina. Numa modalidade, o método pode compreender a administração de uma primeira composição que compreende um anticorpo sintético da invenção por meio de qualquer um dos métodos descritos em detalhes acima e uma segunda composição que compreende uma vacina simultaneamente. Numa modalidade, o método pode compreender a administração de uma primeira composição que compreende um anticorpo sintético da invenção por meio de qualquer um dos métodos descritos em detalhes acima e uma segunda composição que compreende uma vacina simultaneamente. Numa modalidade, o método pode compreender a administração de uma composição única que compreende um anticorpo sintético da invenção e uma vacina.
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99/126 [00347] Numa modalidade, a vacina é uma vacina de DNA. Numa modalidade, o anticorpo sintético é um DMAb.
[00348] A vacina de DNA e o DMAb podem ser administrados ao mesmo tempo ou em tempos diferentes. Numa modalidade, a vacina de DNA e o DMAb são administrados simultaneamente. Numa modalidade, a vacina de DNA é administrada antes do DMAb. Numa modalidade, o DMAb é administrado antes da vacina de DNA.
[00349] Em determinadas modalidades, a vacina de DNA é administrada
I ou mais dias, 2 ou mais dias, 3 ou mais dias, 4 ou mais dias, 5 ou mais dias, 6 ou mais dias, 7 ou mais dias, 8 ou mais dias, 9 ou mais dias, 10 ou mais dias,
II ou mais dias, 12 ou mais dias, 13 ou mais dias ou 14 ou mais dias após o DMAb ser administrado. Em determinadas modalidades, a vacina de DNA é administrada 1 ou mais semanas, 2 ou mais semanas, 3 ou mais semanas, 4 ou mais semanas, 5 ou mais semanas, 6 ou mais semanas, 7 ou mais semanas, 8 ou mais semanas, 9 ou mais semanas ou 10 ou mais semanas após o DMAb ser administrado. Em determinadas modalidades, a vacina de DNA é administrada 1 ou mais meses, 2 ou mais meses, 3 ou mais meses, 4 ou mais meses, 5 ou mais meses, 6 ou mais meses, 7 ou mais meses, 8 ou mais meses, 9 ou mais meses, 10 ou mais meses, 11 ou mais meses ou 12 ou mais meses após o DMAb ser administrado.
[00350] Em determinadas modalidades, o DMAb é administrado 1 ou mais dias, 2 ou mais dias, 3 ou mais dias, 4 ou mais dias, 5 ou mais dias, 6 ou mais dias, 7 ou mais dias, 8 ou mais dias, 9 ou mais dias, 10 ou mais dias, 11 ou mais dias, 12 ou mais dias, 13 ou mais dias ou 14 ou mais dias após a vacina de DNA ser administrada. Em determinadas modalidades, o DMAb é administrado 1 ou mais semanas, 2 ou mais semanas, 3 ou mais semanas, 4 ou mais semanas, 5 ou mais semanas, 6 ou mais semanas, 7 ou mais semanas, 8 ou mais semanas, 9 ou mais semanas ou 10 ou mais semanas após a vacina de DNA ser administrada. Em determinadas modalidades, o DMAb é
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100/126 administrado 1 ou mais meses, 2 ou mais meses, 3 ou mais meses, 4 ou mais meses, 5 ou mais meses, 6 ou mais meses, 7 ou mais meses, 8 ou mais meses, 9 ou mais meses, 10 ou mais meses, 11 ou mais meses ou 12 ou mais meses após a vacina de DNA ser administrada.
[00351 ] Em determinadas modalidades, o DMAb e a vacina de DNA são administrados uma vez. Em determinadas modalidades, o DMAb e/ou a vacina de DNA são administrados mais de uma vez. Em determinadas modalidades, a administração do DMAb e da vacina de DNA fornece uma resposta imune persistente e sistêmica.
[00352] A composição pode compreender 1 ou mais, 2 ou mais, 3 ou mais, 4 ou mais, 5 ou mais, 6 ou mais, 7 ou mais, 8 ou mais, 9 ou mais ou 10 ou mais vacinas de DNA que codificam um antígeno. A composição pode compreender 1 ou mais, 2 ou mais, 3 ou mais, 4 ou mais, 5 ou mais, 6 ou mais, 7 ou mais, 8 ou mais, 9 ou mais ou 10 ou mais anticorpos sintéticos codificados por DNA ou fragmentos dos mesmos.
A. VACINA DE DNA [00353] A vacina pode ser uma vacina de DNA, uma vacina peptídica ou um DNA de combinação e vacina peptídica. A vacina de DNA pode incluir uma sequência de ácidos nucleicos que codifica o antígeno. A sequência de ácidos nucleicos pode ser DNA, RNA, cDNA, uma variante dos mesmos, um fragmento dos mesmos ou uma combinação dos mesmos. A sequência de ácidos nucleicos também pode incluir sequências adicionais que codificam as sequências ligantes, líderes ou de etiqueta que são ligadas ao antígeno por uma ligação de peptídeo. A vacina peptídica pode incluir um peptídeo antigênico, uma proteína antigênica, uma variante dos mesmos, um fragmento dos mesmos ou uma combinação dos mesmos. O DNA de combinação e a vacina peptídica podem incluir a sequência de ácidos nucleicos descrita acima que codifica o antígeno e o peptídeo ou proteína antigênica, em que o peptídeo ou proteína antigênica e o antígeno codificado têm a mesma sequência de aminoácidos
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101/126 [00354] A vacina pode induzir uma resposta imune humoral no indivíduo que a vacina foi administrada. A resposta imune humoral induzida pode ser específica para o antígeno. A resposta imune humoral induzida pode ser reativa com o antígeno. A resposta imune humoral pode ser induzida no indivíduo que a vacina foi administrada cerca de 1,5 vez a cerca de 16 vezes, cerca de 2 vezes a cerca de 12 vezes ou cerca de 3 vezes a cerca de 10 vezes. A resposta imune humoral pode ser induzida no indivíduo que vacina foi administrada pelo menos cerca de 1,5 vez, pelo menos cerca de 2,0 vezes, pelo menos cerca de 2,5 vezes, pelo menos cerca de 3,0 vezes, pelo menos cerca de
3.5 vezes, pelo menos cerca de 4,0 vezes, pelo menos cerca de 4,5 vezes, pelo menos cerca de 5,0 vezes, pelo menos cerca de 5,5 vezes, pelo menos cerca de 6,0 vezes, pelo menos cerca de 6,5 vezes, pelo menos cerca de 7,0 vezes, pelo menos cerca de 7,5 vezes, pelo menos cerca de 8,0 vezes, pelo menos cerca de
8.5 vezes, pelo menos cerca de 9,0 vezes, pelo menos cerca de 9,5 vezes, pelo menos cerca de 10,0 vezes, pelo menos cerca de 10,5 vezes, pelo menos cerca de 11,0 vezes, pelo menos cerca de 11,5 vezes, pelo menos cerca de 12,0 vezes, pelo menos cerca de 12,5 vezes, pelo menos cerca de 13,0 vezes, pelo menos cerca de 13,5 vezes, pelo menos cerca de 14,0 vezes, pelo menos cerca de 14,5 vezes, pelo menos cerca de 15,0 vezes, pelo menos cerca de 15,5 vezes ou pelo menos cerca de 16,0 vezes.
[00355] A resposta imune humoral induzida pela vacina pode incluir um nível aumentado de anticorpos neutralizantes associados ao indivíduo no qual a vacina foi administrada em comparação a um indivíduo no qual a vacina não foi administrada. Os anticorpos neutralizantes podem ser específicos para o antígeno. Os anticorpos neutralizantes podem ser reativos com o antígeno. Os anticorpos neutralizantes podem fornecer proteção contra e/ou tratamento para infecção e suas patologias associadas ao indivíduo no qual a vacina foi administrada.
[00356] A resposta imune humoral induzida pela vacina pode incluir um
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102/126 nível aumentado de anticorpos IgG associados ao indivíduo no qual a vacina foi administrada em comparação a um indivíduo no qual a vacina não foi administrada. Estes anticorpos IgG podem ser específicos para o antígeno. Estes anticorpos IgG podem ser reativos com o antígeno. De preferência, a resposta humoral é reativamente cruzada contra duas ou mais cepas do antígeno. O nível de anticorpo IgG associado ao indivíduo no qual a vacina foi administrada pode ser aumentado em cerca de 1,5 vez a cerca de 16 vezes, cerca de 2 vezes a cerca de 12 vezes ou cerca de 3 vezes a cerca de 10 vezes em comparação ao indivíduo no qual a vacina não foi administrada. O nível de anticorpo IgG associado ao indivíduo no qual a vacina foi administrada pode ser aumentado pelo menos cerca de 1,5 vez, pelo menos cerca de 2,0 vezes, pelo menos cerca de 2,5 vezes, pelo menos cerca de 3,0 vezes, pelo menos cerca de 3,5 vezes, pelo menos cerca de 4,0 vezes, pelo menos cerca de 4,5 vezes, pelo menos cerca de 5,0 vezes, pelo menos cerca de 5,5 vezes, pelo menos cerca de 6,0 vezes, pelo menos cerca de 6,5 vezes, pelo menos cerca de 7,0 vezes, pelo menos cerca de 7,5 vezes, pelo menos cerca de 8,0 vezes, pelo menos cerca de 8,5 vezes, pelo menos cerca de 9,0 vezes, pelo menos cerca de 9,5 vezes, pelo menos cerca de 10,0 vezes, pelo menos cerca de 10,5 vezes, pelo menos cerca de 11,0 vezes, pelo menos cerca de 11,5 vezes, pelo menos cerca de 12,0 vezes, pelo menos cerca de 12,5 vezes, pelo menos cerca de 13,0 vezes, pelo menos cerca de 13,5 vezes, pelo menos cerca de 14,0 vezes, pelo menos cerca de 14,5 vezes, pelo menos cerca de 15,0 vezes, pelo menos cerca de 15,5 vezes ou pelo menos cerca de 16,0 vezes em comparação ao indivíduo no qual a vacina não foi administrada.
[00357] A vacina pode induzir uma resposta imune celular no indivíduo no qual a vacina foi administrada. A resposta imune celular induzida pode ser específica para o antígeno. A resposta imune celular induzida pode ser reativo ao antígeno. De preferência, a resposta celular é reativamente cruzada contra duas ou mais cepas do antígeno. A resposta imune celular induzida pode incluir
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103 / 126 provocar uma resposta de células T CD8+. A resposta de células T CD8+ provocadas pode ser reativa com o antígeno. A resposta de células T CD8+ provocadas pode ser polifuncional. A resposta imune celular induzida pode incluir provocar uma resposta de células T CD8+, em que as células T CD8+ produzem interferon-gama (IFN-γ), fator de necrose tumoral alfa (TNF-α), interleucina-2 (IL-2) ou uma combinação de IFN-γ e TNF-a.
[00358] A resposta imune celular induzida pode incluir uma resposta de células T CD8+ associadas ao indivíduo no qual a vacina foi administrada em comparação ao indivíduo no qual a vacina não foi administrada. A resposta de células T CD8+ associadas ao indivíduo no qual a vacina foi administrada pode ser aumentada cerca de 2 vezes a cerca de 30 vezes, cerca de 3 vezes a cerca de 25 vezes ou cerca de 4 vezes a cerca de 20 vezes em comparação ao indivíduo no qual a vacina não foi administrada. A resposta de células T CD8+ associadas ao indivíduo no qual a vacina foi administrada pode ser aumentada pelo menos cerca de 1,5 vez, pelo menos cerca de 2,0 vezes, pelo menos cerca de 3,0 vezes, pelo menos cerca de 4,0 vezes, pelo menos cerca de 5,0 vezes, pelo menos cerca de 6,0 vezes, pelo menos cerca de 6,5 vezes, pelo menos cerca de 7,0 vezes, pelo menos cerca de 7,5 vezes, pelo menos cerca de 8,0 vezes, pelo menos cerca de 8,5 vezes, pelo menos cerca de 9,0 vezes, pelo menos cerca de 9,5 vezes, pelo menos cerca de 10,0 vezes, pelo menos cerca de 10,5 vezes, pelo menos cerca de 11,0 vezes, pelo menos cerca de 11,5 vezes, pelo menos cerca de 12,0 vezes, pelo menos cerca de 12,5 vezes, pelo menos cerca de 13,0 vezes, pelo menos cerca de 13,5 vezes, pelo menos cerca de 14,0 vezes, pelo menos cerca de 14,5 vezes, pelo menos cerca de 15,0 vezes, pelo menos cerca de 16,0 vezes, pelo menos cerca de 17,0 vezes, pelo menos cerca de 18,0 vezes, pelo menos cerca de 19,0 vezes, pelo menos cerca de 20,0 vezes, pelo menos cerca de 21,0 vezes, pelo menos cerca de 22,0 vezes, pelo menos cerca de 23,0 vezes, pelo menos cerca de 24,0 vezes, pelo menos cerca de 25,0 vezes, pelo menos cerca de 26,0 vezes, pelo menos cerca de 27,0 vezes, pelo menos cerca de 28,0 vezes,
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104 / 126 pelo menos cerca de 29,0 vezes ou pelo menos cerca de 30,0 vezes em comparação ao indivíduo no qual a vacina não foi administrada.
[00359] A resposta imune celular induzida pode incluir uma frequência aumentada de células T CD3+ CD8+ que produzem IFN-y+. A frequência de células T CD3+ CD8+ IFN-y+ associadas ao indivíduo no qual a vacina foi administrada pode ser aumentada pelo menos cerca de 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes, 11 vezes, 12 vezes, 13 vezes, 14 vezes, 15 vezes, 16 vezes, 17 vezes, 18 vezes, 19 vezes ou 20 vezes em comparação ao indivíduo no qual a vacina não foi administrada.
[00360] A resposta imune celular induzida pode incluir uma frequência aumentada de células T CD3+ CD8+ que produzem TNF-α. A frequência de células T CD3+ CD8+ TNF-a+ associadas ao indivíduo no qual a vacina foi administrada pode ser aumentada pelo menos cerca de 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes, 11 vezes, 12 vezes, 13 vezes ou 14 vezes em comparação ao indivíduo no qual a vacina não foi administrada.
[00361] A resposta imune celular induzida pode incluir uma frequência aumentada de células T CD3+ CD8+ que produzem IL-2. A frequência de células T CD3+ CD8+ IL-2+ associadas ao indivíduo no qual a vacina foi administrada pode ser aumentada pelo menos cerca de 0,5 vez, 1,0 vez, 1,5 vez, 2,0 vezes, 2,5 vezes, 3,0 vezes, 3,5 vezes, 4,0 vezes, 4,5 vezes ou 5,0 vezes em comparação ao indivíduo no qual a vacina não foi administrada.
[00362] A resposta imune celular induzida pode incluir uma frequência aumentada de células T CD3+ CD8+ que produzem tanto IFN-γ como TNF-a. A frequência de células T CD3+ CD8+ IFN-y+ TNF-a+ associadas ao indivíduo no qual a vacina foi administrada pode ser aumentada pelo menos cerca de 25 vezes, 30 vezes, 35 vezes, 40 vezes, 45 vezes, 50 vezes, 55 vezes, 60 vezes, 65 vezes, 70 vezes, 75 vezes, 80 vezes, 85 vezes, 90 vezes, 95 vezes, 100 vezes, 110 vezes, 120 vezes, 130 vezes, 140 vezes, 150 vezes, 160 vezes, 170 vezes
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105 / 126 ou 180 vezes em comparação ao indivíduo no qual a vacina não foi administrada.
[00363] A resposta imune celular induzida pela vacina pode incluir provocar uma resposta de células T CD4+. A resposta de células T CD4+ provocada pode ser reativa com o antígeno desejado. A resposta de células T CD4+ provocada pode ser polifuncional. A resposta imune celular induzida pode incluir provocar uma resposta de células T CD4+, em que as células T CD4+ produzem IFN-γ, TNF-α, IL-2, ou uma combinação de IFN-γ e TNF-a.
[00364] A resposta imune celular induzida pode incluir uma frequência aumentada de células T CD3+ CD4+ que produzem IFN-γ. A frequência de células T CD3+ CD4+ IFN-y+ associadas ao indivíduo no qual a vacina foi administrada pode ser aumentada pelo menos cerca de 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes, 11 vezes, 12 vezes, 13 vezes, 14 vezes, 15 vezes, 16 vezes, 17 vezes, 18 vezes, 19 vezes ou 20 vezes em comparação ao indivíduo no qual a vacina não foi administrada.
[00365] A resposta imune celular induzida pode incluir uma frequência aumentada de células T CD3+ CD4+ que produzem TNF-α. A frequência de células T CD3+ CD4+ TNF-a+ associadas ao indivíduo no qual a vacina foi administrada pode ser aumentada pelo menos cerca de 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes, 11 vezes, 12 vezes, 13 vezes, 14 vezes, 15 vezes, 16 vezes, 17 vezes, 18 vezes, 19 vezes, 20 vezes, 21 vezes ou 22 vezes em comparação ao indivíduo no qual a vacina não foi administrada.
[00366] A resposta imune celular induzida pode incluir uma frequência aumentada de células T CD3+ CD4+ que produzem IL-2. A frequência de células T CD3+ CD4+ IL-2+ associadas ao indivíduo no qual a vacina foi administrada pode ser aumentada pelo menos cerca de 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes, 11 vezes, 12 vezes, 13 vezes, 14 vezes, 15 vezes, 16 vezes, 17 vezes, 18 vezes, 19 vezes, 20 vezes, 21
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106 / 126 vezes, 22 vezes, 23 vezes, 24 vezes, 25 vezes, 26 vezes, 27 vezes, 28 vezes, 29 vezes, 30 vezes, 31 vezes, 32 vezes, 33 vezes, 34 vezes, 35 vezes, 36 vezes, 37 vezes, 38 vezes, 39 vezes, 40 vezes, 45 vezes, 50 vezes, 55 vezes ou 60 vezes em comparação ao indivíduo no qual a vacina não foi administrada.
[00367] A resposta imune celular induzida pode incluir uma frequência aumentada de células T CD3+ CD4+ que produzem tanto IFN-γ como TNF-a. A frequência de células T CD3+ CD4+ IFN-y+ TNF-a+ associadas ao indivíduo no qual a vacina foi administrada pode ser aumentada pelo menos cerca de 2 vezes, 2,5 vezes, 3,0 vezes, 3,5 vezes, 4,0 vezes, 4,5 vezes, 5,0 vezes, 5,5 vezes, 6,0 vezes, 6,5 vezes, 7,0 vezes, 7,5 vezes, 8,0 vezes, 8,5 vezes, 9,0 vezes, 9,5 vezes, 10,0 vezes, 10,5 vezes, 11,0 vezes, 11,5 vezes, 12,0 vezes, 12,5 vezes, 13,0 vezes, 13,5 vezes, 14,0 vezes, 14,5 vezes, 15,0 vezes, 15,5 vezes, 16,0 vezes, 16,5 vezes, 17,0 vezes, 17,5 vezes, 18,0 vezes, 18,5 vezes, 19,0 vezes, 19,5 vezes, 20,0 vezes, 21 vezes, 22 vezes, 23 vezes 24 vezes, 25 vezes, 26 vezes, 27 vezes, 28 vezes, 29 vezes, 30 vezes, 31 vezes, 32 vezes, 33 vezes, 34 vezes ou 35 vezes em comparação ao indivíduo no qual a vacina não foi administrada.
[00368] A vacina da presente invenção pode ter recursos exigidos de vacinas eficazes, tal como ser segura de modo que a própria vacina não cause doença ou morte; ser protetora contra doença que resulta da exposição a patógenos vivos, tais como vírus ou bactérias; induzir o anticorpo neutralizante a prevenir a infecção de células; induzir células T protetoras contra patógenos intracelulares; e proporcionar facilidade de administração, poucos efeitos colaterais, estabilidade biológica e baixo custo por dose.
[00369] A vacina pode induzir ainda uma resposta imune quando administrada a diferentes tecidos, tal como músculo ou pele. A vacina pode induzir ainda uma resposta imune quando administrada através de eletroporação, ou injeção, ou subcutaneamente ou intramuscularmente
B. ANTÍGENO
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107 / 126 [00370] O antígeno da vacina pode ser o mesmo antígeno através de subtipos de HIV diferentes. A vacina pode compreender 1 ou mais, 2 ou mais, 3 ou mais, 4 ou mais, ou 5 ou mais sequências de DNA que codificam uma sequência de proteínas particulares isoladas de HIV subtipos A, B, C, D ou outros subtipos de HIV, ou uma combinação ou variante dos mesmos. O antígeno da vacina pode ser o mesmo antígeno através de subtipos de HIV diferentes. A vacina pode compreender 1 ou mais, 2 ou mais, 3 ou mais, 4 ou mais, ou 5 ou mais sequências de DNA de consenso que codificam uma sequência de proteínas particulares isoladas de subtipos de HIV A, B, C, D ou outros subtipos de HIV ou uma combinação ou variante das mesmas. A vacina pode compreender uma sequência de DNA que codifica uma sequência de proteínas particulares isoladas de HIV subtipo A, uma segunda sequência de DNA que codifica uma sequência de proteínas particulares isoladas de HIV subtipo B, uma terceira sequência de DNA que codifica uma sequência de proteínas particulares isoladas de HIV subtipo C, uma quarta sequência de DNA que codifica uma sequência de proteínas particulares isoladas de HIV subtipo D ou uma combinação das mesmas. A vacina pode compreender uma sequência de DNA de consenso que codifica uma sequência de proteínas particulares isoladas de HIV subtipo A, uma segunda sequência de DNA de consenso que codifica uma sequência de proteínas particulares isoladas de HIV subtipo B, uma terceira sequência de DNA de consenso que codifica uma sequência de proteínas particulares isoladas de HIV subtipo C, uma quarta sequência de DNA de consenso que codifica uma sequência de proteínas particulares isoladas de HIV subtipo D ou uma combinação das mesmas. A vacina pode compreender uma sequência de DNA de consenso ou variante da mesma que codifica uma sequência de proteínas particulares de HIV subtipo A ou uma variante da mesma, uma segunda sequência de DNA de consenso ou variante da mesma que codifica uma sequência de proteínas de HIV subtipo B particulares ou variante da mesma, uma terceira sequência de DNA de consenso
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108 / 126 ou variante da mesma que codifica uma sequência de proteínas de HIV subtipo C particular ou variante da mesma, uma quarta sequência de DNA de consenso ou variante da mesma que codifica uma sequência de proteínas de HIV subtipo D particular ou variante da mesma. Em algumas modalidades, o antígeno de HIV pode ser um construto de sequência de DNA de envelope de consenso subtipo A, uma sequência líder de IgE ligada a uma sequência de consenso para proteína de envelope subtipo A, ou uma sequência de proteínas de envelope de consenso subtipo A.
[00371] Em outras modalidades, o antígeno de HIV pode ser um construto de sequência de DNA de envelope de consenso subtipo B, uma sequência líder de IgE ligada a uma sequência de consenso para proteína de envelope subtipo B, ou uma sequência de proteínas de envelope de consenso subtipo B.
[00372] Em ainda outras modalidades, o antígeno de HIV pode ser um construto de sequência de DNA de envelope de consenso subtipo C, uma sequência líder de IgE ligada a uma sequência de consenso para proteína de envelope subtipo C, ou uma sequência de proteínas de envelope de consenso subtipo C.
[00373] Em modalidades adicionais, o antígeno de HIV pode ser um construto de sequência de DNA de envelope de consenso subtipo D, uma sequência líder de IgE ligada a uma sequência de consenso para proteína de envelope subtipo D, ou uma sequência de proteínas de envelope de consenso subtipo D.
[00374] Em algumas modalidades, o antígeno de HIV pode ser um construto de sequência de DNA de envelope de consenso Nef-Rev subtipo A, uma sequência líder de IgE ligada a uma sequência de consenso para proteína Nef-Rev subtipo A, ou uma sequência de proteínas de consenso Nef-Rev subtipo A.
[00375] Em algumas modalidades, o antígeno de HIV pode ser um
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109 / 126 construto de sequência de DNA de envelope de consenso Nef-Rev subtipo B, uma sequência líder de IgE ligada a uma sequência de consenso para proteína Nef-Rev subtipo B, ou uma sequência de proteínas de consenso Nef-Rev subtipo B.
[00376] Em algumas modalidades, o antígeno de HIV pode ser um construto de sequência de DNA de envelope de consenso Nef-Rev subtipo C, uma sequência líder de IgE ligada a uma sequência de consenso para proteína Nef-Rev subtipo C, ou uma sequência de proteínas de consenso Nef-Rev subtipo C.
[00377] Em algumas modalidades, o antígeno de HIV pode ser um construto de sequência de DNA de envelope de consenso Nef-Rev subtipo D, uma sequência líder de IgE ligada a uma sequência de consenso para proteína Nef-Rev subtipo D, ou uma sequência de proteínas de consenso Nef-Rev subtipo D.
[00378] Em outras modalidades, o antígeno de HIV pode ser uma sequência de DNA de consenso Gag de construto de sequência de DNA subtipo A, B, C e D, uma sequência líder de IgE ligada a uma sequência de consenso para proteína de consenso Gag subtipo A, B, C e D ou uma sequência de proteínas de consenso Gag subtipos A, B, C e D.
[00379] Em ainda outras modalidades, o antígeno de HIV pode ser uma sequência de DNA MPol ou uma sequência de proteínas MPol. O antígeno de HIV pode ser sequências de ácidos nucleicos ou aminoácidos de Env A, Env B, Env C, Env D, Nef-Rev B, Gag, MPol, ou qualquer combinação dos mesmos.
[00380] Em outras modalidades, o antígeno de HIV pode ser uma sequência de DNA ou sequência de consenso de subtipo A, B, C ou D que codifica gpl40 ou proteína gpl40 de consenso. Em outras modalidades, o antígeno de HIV pode ser uma sequência de DNA ou sequência de consenso de subtipo A, B, C ou D que codifica gpl40 ou proteína gpl20 de consenso. Em outras modalidades, a sequência de peptídeos gpl40 de antígeno de HIV ou
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110/126 sequência de peptídeos gpl40 de consenso de subtipo A, B, C ou D. Em outras modalidades, a sequência de peptídeos gpl20 de antígeno de HIV ou a sequência de peptídeos de consenso gpl40 de subtipo A, B, C ou D.
[00381] Exemplos de vacinas de DNA que codificam antígenos de HIV incluem aqueles descritos na patente US n° 8.168.769 e WO2015/073291, cujo conteúdo de cada um está totalmente incorporado a título de referência. Em algumas modalidades, uma vacina de DNA que codifica um antígeno de HIV pode incluir uma sequência de ácidos nucleicos que codifica uma sequência de aminoácidos que compreende uma dentre a SEQ ID NO: 136, SEQ ID NO: 138, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 147, SEQ ID NO: 148, SEQ ID NO: 149, SEQ ID NO: 150, SEQ ID NO: 151 ou SEQ ID NO: 152. Em algumas modalidades, a vacina de DNA que codifica um antígeno de HIV pode incluir uma sequência de ácidos nucleicos que compreende a sequência de uma dentre a SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 137, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 143 ou SEQ ID NO: 145.
[00382] O antígeno pode afetar um mamífero, que pode ser um ser humano, chimpanzé, cachorro, gato, cavalo, vaca, camundongo ou rato. O antígeno pode ser contido numa proteína de um mamífero, que pode ser um ser humano, chimpanzé, cachorro, gato, cavalo, vaca, porco, ovelha, camundongo ou rato.
C. DNA [00383] A composição pode compreender o DNA. Um DNA que codifica o antígeno conforme descrito acima também é fornecido no presente documento. O DNA pode incluir uma sequência de codificação que codifica o antígeno. O DNA também pode incluir sequências adicionais que codificam as sequências ligantes ou de etiqueta que são ligadas ao antígeno por uma ligação de peptídeo.
D. VETOR
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Ill / 126 [00384] A composição pode compreender um vetor que inclui o DNA que codifica o antígeno. O vetor pode ser capaz de expressar o antígeno. O vetor pode ser um construto de expressão, que é geralmente um plasmídeo que é usado para introduzir um gene específico numa célula alvo. Uma vez que o vetor de expressão está dentro da célula, a proteína que é codificada pelo gene é produzida pelos complexos ribossômicos de mecanismo de transcrição e tradução celular. O plasmídeo é muitas vezes geneticamente modificado para conter sequências reguladoras que atuam como regiões de intensificador e promotor e levam à transcrição eficiente do gene transportado no vetor de expressão. Os vetores da presente invenção expressam grandes quantidades de RNA mensageiro estável e, portanto, proteínas.
[00385] Os vetores podem ter sinais de expressão, tal como um promotor forte, um códon de terminação forte, ajuste da distância entre o promotor e o gene clonado, e a inserção de uma sequência de terminação de transcrição e uma PTIS (sequência de iniciação de tradução portátil).
I. VETORES DE EXPRESSÃO [00386] O vetor pode ser plasmídeo circular ou uma vacina de ácido nucleico linear. O plasmídeo circular e ácido nucleico linear são capazes de direcionar a expressão de uma sequência de nucleotídeos particular numa célula do indivíduo adequada. O vetor pode ter um promotor operacionalmente ligado à sequência de nucleotídeos de codificação de antígeno, que pode ser operacionalmente ligada a sinais de terminação. O vetor também pode conter sequências necessárias para a tradução adequada da sequência de nucleotídeos. O vetor que compreende a sequência de nucleotídeos de interesse pode ser quimérico, significando que pelo menos um de seus componentes é heterólogo em relação a pelo menos um de seus outros componentes. A expressão da sequência de nucleotídeos no cassete de expressão pode estar sob controle de um promotor constitutivo de um promotor induzível que inicia a transcrição apenas quando a célula hospedeira é exposta a algum estímulo externo
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112/126 particular. No caso de um organismo multicelular, o promotor também pode ser específico para um tecido, órgão ou estágio de desenvolvimento.
II. VETORES CIRCULARES E LINEARES [00387] O vetor pode ser plasmídeo circular, que pode transformar uma célula alvo pela integração no genoma celular ou existir extracromossomicamente (por exemplo, plasmídeo de replicação autônoma com uma origem de replicação).
[00388] O vetor pode ser pVAX, pcDNA3.0 ou provax, ou qualquer outro vetor de expressão capaz de expressar o DNA e permitir que uma célula traduza a sequência para um antígeno que é reconhecido pelo sistema imune. O vetor pode ser combinado com o antígeno numa razão de massa entre 5: 1 e 1:5, ou entre 1: 1 e 2: 1.
[00389] Uma vacina de ácido nucleico linear ou cassete de expressão linear (“LEC”), que é capaz de ser eficientemente distribuído para um indivíduo através de eletroporação e que expressa um ou mais antígenos desejados também é fornecida no presente documento. O LEC pode ser qualquer DNA linear desprovido de qualquer cadeia principal de fosfato. O DNA pode codificar um ou mais antígenos. O LEC pode conter um promotor, um íntron, um códon de parada, um sinal de poliadenilação. A expressão do antígeno pode ser controlada pelo promotor. O LEC pode não conter nenhum gene de resistência a antibióticos e/ou uma cadeia principal de fosfato. O LEC pode não conter outras sequências de ácidos nucleicos não relacionadas à expressão de genes de antígeno desejada.
[00390] O LEC pode ser derivado de qualquer plasmídeo capaz de ser linearizado. O plasmídeo pode ser capaz de expressar o antígeno. O plasmídeo pode ser pNP (Puerto Rico/34) ou pM2 (New Caledonia/99). Consultar a Figura 1. O plasmídeo pode ser pVAX, pcDNA3.0 ou provax, ou qualquer outro vetor de expressão capaz de expressar o DNA e que permite que uma célula traduza a sequência para um antígeno que é reconhecido pelo sistema imune.
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113/126 [00391 ] O LEC pode ser pcrM2. O LEC pode ser pcrNP. pcrNP e pcrMR podem ser derivados de pNP (Puerto Rico/34) e pM2 (New Caledonia/99), respectivamente. Consultar a Figura 34. O LEC pode ser combinado com antígeno numa razão de massa entre 5: 1 e 1:5, ou entre 1:1 e 2: 1.
III. PROMOTOR, ÍNTRON, CÓDON DE PARADA E SINAL DE POLIADENILAÇÃO [00392] O vetor pode ter um promotor. Um promotor pode ser qualquer promotor que seja capaz de acionar a expressão de genes e regular a expressão do ácido nucleico isolado. Tal promotor é um elemento de sequência de atuação cis necessário para transcrição através de uma polimerase de RNA dependente de DNA, que transcreve a sequência de antígeno descrita no presente documento. A seleção do promotor usada para direcionar a expressão de um ácido nucleico heterólogo depende da aplicação particular. O promotor pode ser posicionado aproximadamente na mesma distância a partir do início da transcrição no vetor que a partir do sítio de início de transcrição em sua configuração natural. Entretanto, a variação nesta distância pode ser acomodada sem perda da função de promotor.
[00393] O promotor pode ser operacionalmente ligado à sequência de ácidos nucleicos que codifica o antígeno e sinais necessários para a poliadenilação eficiente da transcrição, sítios de ligação a ribossoma e terminação de tradução. O promotor pode ser um promotor de CMV, promotor precoce de SV40, promotor tardio de SV40, promotor de metalotioneína, promotor de vírus de tumor mamário murino, promotor de vírus de sarcoma de Rous, promotor de poliedrina ou outro promotor eficaz para expressão em células eucarióticas.
[00394] O vetor pode incluir um intensificador e um intron com sítios doadores e receptores de emenda funcionais. O vetor pode conter uma região de terminação de transcrição a jusante do gene estrutural para fornecer terminação eficiente. A região de terminação pode ser obtida a partir do mesmo
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114/126 gene que a sequência promotora ou pode ser obtida a partir de genes diferentes.
E. OUTROS COMPONENTES DE ADJUVANTES, EXCIPIENTES DE VACINA [00395] A composição pode compreender ainda um excipiente farmaceuticamente aceitável. O excipiente farmaceuticamente aceitável pode ser moléculas funcionais, tais como veículos, adjuvantes, carreadores ou diluentes. O excipiente farmaceuticamente aceitável pode ser um agente facilitador de transfecção, que pode incluir agentes ativos de superfície, tais como complexos imunoestimulantes (ISCOMS), adjuvante incompleto de Freunds, análogo de LPS incluindo monofosforil lipídio A, peptídeos de muramila, análogos de quinona, vesículas, tais como esqualeno e esqualeno, ácido hialurônico, lipídios, lipossomas, íons de cálcio, proteínas virais, poliânions, policátions ou nanopartículas, ou outros agentes facilitadores de transfecção conhecidos.
[00396] O agente facilitador de transfecção é um poliânion, policátion, incluindo poli-L-glutamato (LGS) ou lipídio. O agente facilitador de transfecção é poli-L-glutamato, e o poli-L-glutamato pode estar presente na vacina a uma concentração menor que 6 mg/ml. O agente facilitador de transfecção também pode incluir agentes ativos de superfície, tais como complexos imunoestimulantes (ISCOMS), adjuvante incompleto de Freunds, análogo de LPS incluindo monofosforil lipídio A, peptídeos de muramila, análogos de quinona, vesículas, tais como esqualeno e esqualeno e ácido hialurônico também podem ser usados administrados em conjunto com o construto genético. As vacinas de plasmídeo de DNA também podem incluir um agente facilitador de transfecção, como lipídios, lipossomas, incluindo lipossomas de lecitina ou outros lipossomas conhecidos na técnica, como uma mistura de DNA-lipossoma (consulte por exemplo W09324640), íons de cálcio, proteínas virais, poliânions, policátions ou nanopartículas, ou outros agentes facilitadores de transfecção conhecidos. O agente facilitador de
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115/126 transfecção é um poliânion, policátion, incluindo poli-L-glutamato (LGS) ou lipídio. A concentração do agente de transfecção na vacina é menor que 4 mg/ml, menor que 2 mg/ml, menor que 1 mg/ml, menor que 0,750 mg/ml, menor que 0,500 mg/ml, menor que 0,250 mg/ml, menor que 0,100 mg/ml, menor que 0,050 mg/ml ou menor que 0,010 mg/ml.
[00397] O excipiente farmaceuticamente aceitável pode ser um adjuvante. O adjuvante pode ser outros genes que são expressos no plasmídeo alternativo ou são distribuídos como proteínas em combinação com o plasmídeo acima na vacina. O adjuvante pode ser selecionado a partir do grupo que consiste em: a-interferon (IFN-a), β-interferon (IFN-β), γ-interferon, fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF), TNFa, ΤΝΡβ, GM-CSF, fator de crescimento epidérmico (EGF), quimiocina de atração de células T cutânea (CTACK), quimiocina epitelial expressa em timo (TECK), quimiocina epitelial associada a mucosas (MEC), IL-12, IL-15, MHC, CD80, CD86 incluindo IL15 que tem a sequência de sinais deletada e incluindo opcionalmente o peptídeo de sinalização a partir de IgE. O adjuvante pode ser IL-12, IL-15, IL-28, CTACK, TECK, fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF), TNFa, ΤΝΕβ, GM-CSF, fator de crescimento epidérmico (EGF), IL-1, IL-2, IL-4, IL5, IL-6, IL-10, IL-12, IL-18, ou uma combinação dos mesmos.
[00398] Outros genes que podem ser adjuvantes úteis incluem aqueles que codificam: MCP-1, MIP-la, MIP-lp, IL-8, RANTES, L-selectina, Pselectina, E-selectina, CD34, GlyCAM-1, MadCAM-1, LFA-1, VLA-1, Macri pl50.95, PECAM, ICAM-1, ICAM-2, ICAM-3, CD2, LFA-3, M-CSF, GCSF, IL-4, formas mutantes de IL-18, CD40, CD40L, fator de crescimento vascular, fator de crescimento fibroblasto, IL-7, fator de crescimento nervoso, fator de crescimento endotelial vascular, Fas, receptor de TNF, Fit, Apo-1, p55, WSL-1, DR3, TRAMP, Apo-3, AIR, LARD, NGRF, DR4, DR5, KILLER, TRAIL-R2, TRICK2, DR6, Caspase ICE, Fos, c-jun, Sp-1, Ap-1, Ap-2, p38, p65Rel, MyD88, IRAK, TRAF6, IkB, NIK inativo, SAP K, SAP-1, JNK, genes
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116/126 de resposta de interferon, NFkB, Bax, TRAIL, TRAILrec, TRAILrecDRC5, TRAIL-R3, TRAIL-R4, RANK, RANK LIGAND, 0x40, 0x40 LIGAND, NKG2D, MICA, MICB, NKG2A, NKG2B, NKG2C, NKG2E, NKG2F, TAPI, TAP2 e fragmentos funcionais dos mesmos.
[00399] A vacina pode compreender ainda um agente genético facilitador de vacina conforme descrito no documento número de série U.S. 021.579, depositado em 1 de abril de 1994, que é totalmente incorporado a título de referência.
[00400] A vacina pode ser formulada de acordo com o modo de administração a ser usado. Uma composição farmacêutica de vacina injetável pode ser estéril, livre de pirogênio e livre de particulado. Uma formulação ou solução isotônica pode ser usada. Aditivos para isotonicidade podem incluir cloreto de sódio, dextrose, manitol, sorbitol e lactose. A vacina pode compreender um agente de vasoconstrição. As soluções isotônicas podem incluir solução salina tamponada com fosfato.
[00401] A vacina pode compreender ainda estabilizantes incluindo gelatina e albumina. Os estabilizantes podem permitir que a formulação seja estável à temperatura ambiente ou do meio ambiente por períodos de tempo prolongados, incluindo LGS, policátions ou poliânions.
14. EXEMPLOS [00402] A presente invenção é adicionalmente ilustrada nos exemplos a seguir. Deve-se compreender que estes Exemplos, embora indiquem modalidades preferenciais da invenção, são fornecidos apenas a título de ilustração. A partir da discussão acima e destes exemplos, alguém versado na técnica pode verificar as características essenciais desta invenção, e sem se afastar do espírito e escopo da mesma, pode realizar várias alterações e modificações da invenção para adaptar a mesma a vários usos e condições. Deste modo, várias modificações da invenção além daquelas mostradas e descritas no presente documento serão evidentes para aqueles versados na
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117/126 técnica a partir da descrição anterior. Tais modificações pretendem ser abrangidas pelo escopo das reivindicações anexas.
EXEMPLO 1 [00403] Os estudos apresentados no presente documento demonstram produção in vivo de anticorpos amplamente neutralizantes e não neutralizantes contra HIV-1 por meio da tecnologia de mAb codificado por DNA inovadora. [00404] Conforme descrito no presente documento, foi projetada uma plataforma de vetor de DNA sintético otimizada (dMAb) para distribuir anticorpos amplamente neutralizantes (bNabs) e anticorpos não neutralizantes (non-Nabs) de codificação contra HIV. Foram projetados plasmídeos que codificam a cadeia pesada e leve de vários bNabs. Com o uso de várias estratégias de otimização incluindo modificação de sequência, de formulação, estruturais e de distribuição, altos níveis (1 a 100 pg/ml) de bNabs de soro foram gerados em camundongos. Os níveis de anticorpos são detectáveis no soro no máximo dois dias após a injeção de DNA por eletroporação. Além disto, estes anticorpos do soro retêm capacidades funcionais, incluindo a ligação ao Env e a neutralização, conforme medido pelo ensaio de neutralização de TZMbl. Para reduzir a possibilidade de fuga viral num cenário clínico, múltiplos bNabs de HIV-1 podem ser codificados e expressos simultaneamente.
EXEMPLO 2 - DMABs QUE CODIFICAM bnAbs de HIV [00405] Os estudos apresentados no presente documento demonstram que os anticorpos monoclonais de DNA são capazes de codificar bNabs e não Nabs de HIV.
[00406] Alguns dMAbs de HIV expressam em níveis muito baixos (Figura 3), deste modo, procurou-se inicialmente determinar se os níveis de dMAb poderíam aumentar quando a alteração pesada e leve fosse codificada em plasmídeos separados. A codificação da cadeia pesada e leve em dois plasmídeos separados aumenta a produção de dMAb in vivo de vários bNabs de HIV em relação à injeção de plasmídeo única (Figura 4).
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118/126 [00407] Diferentes IgGs têm diferentes funções e distribuições efetoras. Portanto, foi determinado se os dMAbs que expressam várias IgGs têm expressão diferencial, assim como funções efetoras. Todos os isotipos de VRC01 se expressam in vitro (Figura 5 A). Em camundongos sem pelos, a IgG4 tem o nível de expressão mais alto (Figura 5B). Em camundongos BALB/c, a IgG4 aumenta significativamente a expressão de VRC01 (Figura 5C). Devido à expressão limitada in vivo de dMAbs de HIV e ao aumento de VRC01 com o isotipo IgG4, observou-se que a otimização de IgG4 podería ser amplamente aplicada para aumentar os níveis de expressão de dMAb. Todos os construtos de IgG4 expressos in vitro tanto no lisado celular como meios de células transfectadas 293T (Figura 6). Além disto, IgG4 aumentou a expressão de cada um dentre PG9, 3BNC17, NIH 45-46, VRC01, PGT218 em relação à IgGl (Figures 7).
[00408] Para aumentar ainda mais o nível de expressão de dMAbs, uma mutação foi realizada na região de núcleo-dobradiça, Ser228Pro, para bloquear a troca de braço Fab. A Figura 8 demonstra que a mutação S228P não interrompe os níveis de expressão. Adicionalmente, a codificação da cadeia pesada e leve de IgG4 em plasmídeos separados aumentou ainda mais os níveis de expressão e a cinética dos dMAbs de HIV (Figura 9). De modo importante, não houve alteração na funcionalidade destes anticorpos durante o teste no ensaio de TzmBL (Figura lie Figura 12).
[00409] Pode ser benéfico expressar múltiplos bnAbs do HIV para ter mais de um sítio direcionado que pode diminuir a probabilidade de escape viral. Demonstrou-se que múltiplos dMAbs que expressam dois bNab de HIV diferentes podem ser expressos num único camundongo (Figura 13).
EXEMPLO 3- MODIFICAÇÃO GENÉTICA DE ANTICORPOS DE HIV-1 E IMUNOADESINAS PARA PRODUÇÃO IN VIVO AUMENTADA COM O USO DE TECNOLOGIA DE ANTICORPO MONOCLONAL CODIFICADO POR DNA
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119/126 [00410] A capacidade de anticorpos amplamente neutralizantes específicos de HIV (bNabs) para proteger ou controlar HIV-1 está bem estabelecida em modelos animais. Embora estes anticorpos sejam potentes e possam prevenir infecções ou controlar cargas virais, o custo de produção podería limitar gravemente a capacidade de usar estes anticorpos no campo. Adicionalmente, as abordagens de vacina atuais falharam na indução de anticorpos similares. Um modo inovador para codificar e produzir bNabs in vivo é descrito no presente documento com o uso de uma plataforma de anticorpo monoclonal codificado por DNA sintético (dMab).
[00411] Os plasmídeos geneticamente modificados que codificam a cadeia pesada e leve de mais de 20 anticorpos específicos de Envelope (Env) de HIV foram produzidos e distribuídos intramuscularmente para camundongos por meio de eletroporação. Os níveis de produção inicial de muitos dos anticorpos eram baixos; entretanto, com o uso de várias estratégias de otimização, incluindo sequência, formulação, modificações estruturais e distribuição, pode-se gerar altos níveis (mais de 80 ug/ml) de dMabs de soro em camundongos. dMabs são detectáveis no soro no máximo dois dias após a injeção e são mantidos por mais de 6 meses. Adicionalmente, estes anticorpos retêm capacidades funcionais incluindo ligação ao Env e neutralização conforme medidos pelo ensaio de neutralização de TZM-bl. Os dMabs produzidos in vivo têm perfil e potência de neutralização similares conforme relatados com os bNabs monoclonais purificados recombinantes. Para reduzir a possibilidade de escape viral, usando a plataforma dMab, pode-se codificar e expressar múltiplos bNabs de HIV-1 simultaneamente num único camundongo. Além disto, explora-se a capacidade de codificar e produzir anticorpos biespecíficos ou outras imunoadesinas para aumentar a potência e impedir escape.
[00412] A plataforma dMab representa uma técnica inovadora para produção de anticorpos in vivo contra HIV-1 e possivelmente outros alvos
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120/126 imunes.
EXEMPLO 4 - IMUNIDADE RÁPIDA E DE LONGO PRAZO PROVOCADA POR PROFILAXIA DE ANTICORPOS CODIFICADOS POR DNA E VACINAÇÃO DE DNA CONTRA HIV [00413] Sabe-se que a vacinação exibe uma fase de atraso antes da geração de imunidade; deste modo, há um intervalo de tempo durante a infecção antes que uma resposta imune tenha efeito. A seguir, são fornecidas abordagens inovadoras específicas que utilizam o benefício das vacinas e da resposta imune nativa, juntamente com uma rápida geração de imunidade eficaz com o uso dos anticorpos sintéticos de DNA ou dMabs.
[00414] Uma profilaxia/terapia baseada em anticorpos que envolve a distribuição mediada por eletroporação de plasmídeos sintéticos, que codifica o mAb do vírus da imunodeficiência humana biologicamente ativo (HIV) (designado dMAb), é projetada e avaliada quanto à eficácia antiviral, assim como à capacidade de superar deficiências inerentes à vacinação ativa convencional por uma estratégia de base imune passiva inovadora. Uma injeção intramuscular do dMAb de HIV produz anticorpos in vivo mais rapidamente do que a vacinação ativa com uma vacina de DNA de HIV. Este dMAb neutralizou diversos isolados clínicos de HIV e protegeu camundongos contra o desafio viral. Combinações de ambos geraram proteção rápida, assim como de longa duração.
[00415] Uma estratégia de dMAb baseada em DNA induz a proteção rápida contra uma infecção viral emergente, que pode ser combinada com a vacinação de DNA, fornecendo uma proteção exclusiva de curto e longo prazo contra esta doença infecciosa emergente. Estes estudos têm implicações para o tratamento de patógenos e estratégias de controle.
QUANTIFICAÇÃO DE IgG DE dMAb E ENSAIOS DE LIGAÇÃO [00416] Os ensaios ELISA são realizados com soros de indivíduos nos quais foram administrados dMAb de HIV para quantificar a cinética de
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121/126 expressão e direcionar a ligação ao antígeno.
ANÁLISE DE IgG GERADA POR dMAb [00417] A expressão de IgG de células infectadas com HIV é analisada por western blot. Para análise de imunofluorescência, as células infectadas com HIV são avaliadas visualmente por microscopia confocal e analisadas quantitativa ou semiquantitativamente.
ADMINISTRAÇÃO DE PLASMÍDEO DE DNA DE dMAb E ANÁLISE IN VIVO [00418] A cinética e funcionalidade de expressão foram avaliadas em indivíduos após injeção de controle ou dMAb de HIV. Para estudos que incluem a vacina de DNA, o plasmídeo de vacina de DNA de HIV é administrado.
ESTUDO DE DESAFIO [00419] Indivíduos recebem injeção aprimorada por eletroporação de dMAb de HIV ou plasmídeos de controle. A vacina de DNA de HIV foi distribuída conforme descrito acima. Após a distribuição de DNA, os indivíduos foram desafiados com HIV. Os animais são monitorados quanto à sobrevivência e sinais de infecção. Amostras de soro são coletadas para quantificação de citocinas e outras análises imunes. As amostras de sangue são coletadas após os níveis de infecção e viremia serem medidos.
ANÁLISE DE ANTICORPO NEUTRALIZANTE [00420] São determinados os títulos de anticorpos neutralizantes antiHIV de indivíduos nos quais foram administrados dMAb de HIV. Os títulos de neutralização podem ser calculados como o recíproco da maior diluição, mediando uma redução de 100% dos efeitos citopáticos nas células.
ANÁLISE QUANTITATIVA DE CITOCINA [00421] Os soros são coletados a partir de dMAb de HIV, e a vacina de DNA de HIV injetada em indivíduos, assim como indivíduos desafiados com HIV. Os níveis de citocina de soros TNF-a, IL-Ιβ e IL-6 serão medidos.
PROJETO DE DMABS ΑΝΤΙ-HIV E CONFIRMAÇÃO DE
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EXPRESSÃO [00422] Os plasmídeos sintéticos otimizados construídos a partir do mAb neutralizante anti-HIV foram projetados para os anticorpos IgG e Fab. As células são transfectadas com o plasmídeo de IgG de HIV ou com o plasmídeo de Fab de HIV (VL, VH ou combinado) para validar a expressão in vitro. Ο Fab de HIV e IgG de HIV expressaram anticorpos no músculo que pareciam ser adequadamente montados e biologicamente funcionais in vitro.
EXPRESSÃO E QUANTIFICAÇÃO IN VIVO DE DMAB ANTI-HIV [00423] Após a confirmação de expressão in vitro, a capacidade de Fab HIV ou IgG HIV para produzir os anticorpos anti-HIV in vivo é medida. Ambos os construtos geram mAbs. Os indivíduos são administrados com IgG de HIV ou Fab de HIV, e os níveis de anticorpo no soro serão avaliados através de um ELISA de ligação. Os soros coletados após a injeção tanto de IgG de HIV como de Fab de HIV se ligam à proteína de HIV, mas não a um antígeno de controle não relacionado. Estes dados indicam que anticorpos anti-HIV produzidos in vivo a partir de construtos de IgG de HIV ou Fab de HIV têm características biológicas similares aos anticorpos específicos de antígeno convencionalmente produzidos.
ESPECIFICIDADE IN VIVO E ATIVIDADE AMPLAMENTE NEUTRALIZANTE EM SOROS DE INDIVÍDUOS INJETADOS COM DMAB ANTI-HIV [00424] mAbs gerados por dMAb anti-HIV são testados quanto à especificidade e atividade neutralizante anti-HIV. Os anticorpos de soros se ligam às células infectadas com HIV. Existe uma forte especificidade do anticorpo gerado a partir do plasmídeo de dMAb anti-HIV.
[00425] Além disto, a atividade neutralizante anti-HIV nos soros de indivíduos que receberam dMAb anti-HIV é medida em relação à das cepas de HIV. Os soros de indivíduos injetados com dMAb anti-HIV neutralizam eficazmente os isolados de HIV, demonstrando que uma única injeção pode
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123 / 126 produzir níveis neutralizantes significativos de IgG anti-HIV humana. Deste modo, os anticorpos produzidos in vivo por construtos de dMAb anti-HIV têm atividade biológica relevante (isto é, atividade de ligação e neutralizante contra HIV).
INJEÇÃO DE DMAB ANTI-HIV PROTEGE CAMUNDONGOS CONTRA O DESAFIO DE HIV LETAL [00426] Para determinar se os anticorpos gerados a partir do dMAb antiHIV fornecem proteção contra a exposição precoce ao HIV, grupos de 10 indivíduos recebem um controle ou dMAb anti-HIV no dia 0. Cada grupo é subsequentemente desafiado subcutaneamente com vírus para imitar a infecção natural por HIV. A sobrevivência e alterações de peso do indivíduo são subsequentemente registradas. Os plasmídeos de dMAb anti-HIV conferem imunidade protetora.
[00427] A longevidade da proteção imune é posteriormente avaliada. Um segundo grupo de indivíduos foi desafiado com o HIV após a injeção com dMAb anti-HIV ou plasmídeo controle no dia 0. Os indivíduos são monitorados quanto à sobrevivência. dMAb anti-HIV fornece um grau mais durável de proteção imune.
[00428] dMAb anti-HIV protege os indivíduos tanto contra o desafio viral subcutâneo como o desafio viral intranasal em comparação com os indivíduos de controle injetados, demonstrando que os dMAbs anti-HIV podem proteger contra infecções sistêmicas e das mucosas.
[00429] Um estudo de eficácia comparando a eficácia protetora da administração de dMAb anti-HIV versus uma vacina de DNA de HIV (DNA de HIV) é realizado a seguir. Uma nova vacina de DNA baseada em consenso foi desenvolvida em laboratório e é capaz de fornecer proteção contra o desafio de HIV A vacina de DNA também induziu tanto respostas imunes celulares mensuráveis, assim como respostas de anticorpo neutralizante potentes. Uma única injeção dMAb de anti-HIV, DNA de HIV ou pVaxl é administrada a
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124/126 grupos de indivíduos, seguida de desafio viral. O dMAb anti-HIV confere imunidade protetora mais rapidamente do que a vacina de DNA de HIV.
COMPARAÇÃO ENTRE IMUNIDADE PROTETORA IN VIVO CONFERIDA PELA ADMINISTRAÇÃO DE DMAB ANTI-HIV E VACINAÇÃO DE DNA DE HIV [00430] A seguir, foi realizado um estudo de proteção de desafio de HIV de longo prazo após a vacinação com a vacina de DNA de HIV ou a administração de dMAb anti-HIV no dia 0. DNA de HIV confere mais imunidade protetora que o dMAb anti-HIV.
CODISTRIBUIÇÃO DE DMAB ANTI-HIV E A vacina de DNA de HIV PRODUZ IMUNIDADE HUMORAL SISTÊMICA, IMUNIDADE MEDIADA POR CÉLULAS E PROTEÇÃO IN VIVO [00431 ] Um problema potencial de combinar a distribuição de anticorpo com abordagens de vacinação consiste no fato de que os anticorpos podem neutralizar muitas vacinas tradicionais e, deste modo, são plataformas incompatíveis. O efeito de coadministração de dMAb anti-HIV e DNA de HIV na sobrevivência do indivíduo no contexto de desafio de HIV é avaliado. São administrados aos indivíduos no dia 0 dMAb anti-HIV e DNA de HIV. Subsequentemente, alguns animais são desafiados com HIV no dia 2 e outros no dia 35. A sobrevivência nestes grupos é seguida em função do tempo. dMAb anti-HIV media a proteção contra infecções, com a porcentagem de sobrevivência diminuindo para aproximadamente 30% 4 dias após o desafio em animais de controle (pVaxl). A IgG induzida por dMAb anti-HIV e vacina de DNA de HIV é detectada. dMAb anti-HIV media a proteção rápida contra infecções e a morte após o desafio com HIV.
[00432] Além disto, as respostas das células T induzidas em indivíduos injetados com dMAb anti-HIV, DNA de HIV ou dMAb anti-HIV mais DNA de HIV são avaliadas. O DNA de HIV provoca fortes respostas de células T, independentemente da codistribuição com dMAb anti-HIV, mostrando a falta
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125 / 126 de interferência destas abordagens. Por outro lado, os animais nos quais foram administrados apenas anti-HIV dMAb não desenvolvem respostas de células T. Tanto dMAb anti-HIV como a vacina de DNA de HIV podem ser administradas simultaneamente sem interferência recíproca, fornecendo proteção imediata e de longa duração através de imunidade humoral e celular sistêmica.
DISTRIBUIÇÃO MEDIADA POR ELETROPORAÇÃO DE PLASMÍDEOS DE DNA OTIMIZADOS PARA A PRODUÇÃO RÁPIDA IN VIVO DE mAbs biologicamente funcionais [00433] Os indivíduos nos quais foram administrados dMAbs anti-HIV são totalmente protegidos contra o desafio viral logo após a administração, enquanto os indivíduos não sobrevivem à infecção após uma única imunização com a vacina de DNA de HIV, presumivelmente devido a um tempo insuficiente para aumentar a imunidade protetora. Entretanto, o DNA de HIV fornece proteção completa após um regime de imunização seguido de desafio em pontos no tempo posteriores. Um nível similar de proteção ocorre em indivíduos nos quais foi administrada uma única dose de dMAbs anti-HIV, embora a proteção diminua com o tempo. Notavelmente, a codistribuição de dMAbs anti-HIV e DNA de HIV produz imunidade humoral e celular rápida e persistente, sugerindo que uma abordagem de combinação possa ter efeitos aditivos e sinérgicos. De modo importante, a codistribuição de dMAbs antiHIV e DNA de HIV não é antagônica em termos do desenvolvimento de respostas imunes protetoras de curto ou longo prazo.
[00434] Entende-se que a descrição detalhada anterior e exemplos anexos são meramente ilustrativos e não devem ser tomados como limitações do escopo da invenção, que é definido exclusivamente pelas reivindicações anexas e seus equivalentes.
[00435] Várias alterações e modificações nas modalidades divulgadas serão evidentes para aqueles versados na técnica. Tais alterações e modificações, incluindo sem limitação àquelas que se referem às estruturas
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126/126 químicas, substituintes, derivados, intermediários, sínteses, composições, formulações ou métodos de uso da invenção, podem ser realizadas sem que se afaste do espírito e escopo da mesma.

Claims (24)

  1. REIVINDICAÇÕES
    1. Molécula de ácido nucleico que codifica um ou mais anticorpos sintéticos, caracterizada pelo fato de que a molécula de ácido nucleico compreende pelo menos um selecionado a partir do grupo que consiste em
    a) uma sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo sintético anti-HIV;
    b) uma sequência de nucleotídeos que codifica um fragmento de um anticorpo sintético anti-HIV.
  2. 2. Molécula de ácido nucleico de acordo com a reivindicação
    1, caracterizada pelo fato de que compreende, ainda, uma sequência de nucleotídeos que codifica um domínio de d ivagem.
  3. 3. Molécula de ácido nucleico de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a molécula de ácido nucleico compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo sintético anti-HIV.
  4. 4. Molécula de ácido nucleico de acordo com a reivindicação
    3, caracterizada pelo fato de que a sequência de nucleotídeos codifica uma ou mais sequências de aminoácidos pelo menos 95% homóloga a uma sequência de aminoácidos do grupo que consiste em SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO: 11 ou SEQ ID
    NO: 13, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:39 SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:43, SEQ ID NO:45, SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:49 SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:53, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:57, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO:63, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:69, SEQ ID NO:7i, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:75, SEQ ID NO:77,
    SEQ ID NO:79, SEQ ID NO:81, SEQ ID NO:83, SEQ ID NO:85, SEQ ID
    NO:87, SEQ ID NO:89, SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:93, SEQ ID NO:95,
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    2/ 14
    SEQ ID NO:97, SEQ ID NO:99, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 103, SEQ ID
    NO: 105, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 111, SEQ ID
    NO: 113, SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 119, SEQ ID
    NO: 121, SEQ ID NO: 123, SEQ ID NO: 125, SEQ ID NO: 127, SEQ ID
    NO: 129, SEQ ID NO: 131 e SEQ ID NO: 133.
  5. 5. Molécula de ácido nucleico de acordo com a reivindicação
    4, caracterizada pelo fato de que uma sequência de nucleotídeos codifica uma ou mais sequências de aminoácidos selecionadas a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO: 11 ou SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:39 SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:43, SEQ ID NO:45, SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:49 SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:53, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:57, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO:63, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:69, SEQ ID NO:71, SEQ ID
    NO:73, SEQ ID NO:75, SEQ ID NO:77, SEQ ID NO:79, SEQ ID NO:81,
    SEQ ID NO:83, SEQ ID NO:85, SEQ ID NO:87, SEQ ID NO:89, SEQ ID
    NO:91, SEQ ID NO:93, SEQ ID NO:95, SEQ ID NO:97, SEQ ID NO:99, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO:107,
    SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO:115,
    SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 119, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO:123,
    SEQ ID NO: 125, SEQ ID NO: 127, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 131 e
    SEQ ID NO: 133.
  6. 6. Molécula de ácido nucleico de acordo com a reivindicação
    3, caracterizada pelo fato de que a molécula de ácido nucleico compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 95% homóloga a uma sequência de ácidos nucleicos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID
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    3/ 14
    NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:54, SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO:72, SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:78, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:84, SEQ ID NO:86, SEQ ID NO:88, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO:92, SEQ ID NO:94, SEQ ID NO:96, SEQ ID NO:98, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 108, SEQ ID
    NO: 110, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 114, SEQ ID NO: 116, SEQ ID
    NO: 118, SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 122, SEQ ID NO: 124, SEQ ID
    NO: 126, SEQ ID NO: 128, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 132 e SEQ ID
    NO: 134.
  7. 7. Molécula de ácido nucleico de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que a molécula de ácido nucleico compreende uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:54, SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO:72, SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:78, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 84, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 88, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO:92, SEQ ID NO:94, SEQ ID NO:96, SEQ ID NO:98, SEQ ID NO: 100,
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    4 / 14
    SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO:108,
    SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 114, SEQ ID NO:116,
    SEQ ID NO: 118, SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 122, SEQ ID NO:124,
    SEQ ID NO: 126, SEQ ID NO: 128, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 132 e
    SEQ ID NO: 134.
  8. 8. Molécula de ácido nucleico de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que a molécula de ácido nucleico compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica uma cadeia pesada antiHIV sintética e uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica uma cadeia leve anti-HIV sintética.
  9. 9. Molécula de ácido nucleico de acordo com a reivindicação
    8, caracterizada pelo fato de que a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga a uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO:3, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:63, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:71, SEQ ID NO:75, SEQ ID NO:79, SEQ ID NO:83, SEQ ID NO:87, SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:95, SEQ ID NO:99, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 119, SEQ ID NO: 123, SEQ ID NO: 127 e SEQ ID NO: 131.
  10. 10. Molécula de ácido nucleico de acordo com a reivindicação
    9, caracterizada pelo fato de que a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga a uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO:4, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:4(), SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:72, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:80, SEQ ID NO:84, SEQ ID NO:88, SEQ ID NO:92, SEQ ID NO:96, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 116, SEQ ID
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    5/ 14
    NO: 120, SEQ ID NO: 124, SEQ ID NO: 128 e SEQ ID NO: 132.
  11. 11. Molécula de ácido nucleico de acordo com a reivindicação
    8, caracterizada pelo fato de que a segunda sequência de nucleotideos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga a uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO:5, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:57, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:69, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:77, SEQ ID NO:81, SEQ ID NO:85, SEQ ID NO:89, SEQ ID NO:93, SEQ ID NO:97, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO: 125, SEQ ID NO: 129 e SEQ ID NO: 133.
  12. 12. Molécula de ácido nucleico de acordo com a reivindicação
    11, caracterizada pelo fato de que a segunda sequência de nucleotideos compreende a sequência de nucleotideos pelo menos 90% homóloga a uma sequência de nucleotideos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:7(), SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:86, SEQ ID NO:90, SEQ ID NO:94, SEQ ID NO:98, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 114, SEQ ID NO: 118, SEQ ID NO: 122, SEQ ID NO: 126, SEQ ID NO: 130 e SEQ ID NO: 134.
  13. 13. Molécula de ácido nucleico de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que a primeira sequência de nucleotideos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:3, e a segunda sequência de nucleotideos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:5;
    a primeira sequência de nucleotideos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 11 e a segunda
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    6 / 14 sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 13;
    a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 17 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 19;
    a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:25, e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 27;
    a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:39, e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:41;
    a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:47, e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:49;
    a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:55, e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:57;
    a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:59, e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:61;
    a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:63, e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo
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    Ί / 14 menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 65;
    a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:67, e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:69;
    a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:71, e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 73;
    a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:75, e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 77;
    a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:79, e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 81;
    a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 83 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 85;
    a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 87 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 89;
    a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:91, e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 93;
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    8/ 14 a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:95, e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 97;
    a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:99, e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 101;
    a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 103 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 105;
    a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 107 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 109;
    a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: Ill e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 113;
    a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 115 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 117;
    a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 119 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 121;
    a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência
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    9 / 14 de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 123 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 125;
    a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 1207 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 129; ou a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 131 e a segunda sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 133.
  14. 14. Molécula de ácido nucleico de acordo com a reivindicação
    13, caracterizada pelo fato de que a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:4, e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:6;
    a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 12 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 14;
    a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 18 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:2();
    a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:26, e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 28;
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    10 / 14 a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:40, e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:42;
    a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:48, e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:50;
    a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:56, e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 58;
    a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:60, e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:62;
    a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:64, e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:66;
    a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:68, e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:70;
    a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:72, e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:74;
    a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma
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    11/14 sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:76, e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:78;
    a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 80 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 82;
    a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 84 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 86;
    a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:88, e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:90;
    a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:92, e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:94;
    a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO:96, e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 98;
    a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 100 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 102;
    a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 104 e a
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    12 / 14 segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 106;
    a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 108 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 110;
    a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 112 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 114;
    a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 116 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 118;
    a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 120 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 122;
    a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 124 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 126;
    a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 128 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 130; ou a primeira sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 132 e a segunda sequência de nucleotídeos compreende uma sequência de
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    13 / 14 nucleotídeos pelo menos 90% homóloga à SEQ ID NO: 134.
  15. 15. Molécula de ácido nucleico de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a sequência de nucleotídeos codifica uma sequência líder.
  16. 16. Molécula de ácido nucleico de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizada pelo fato de que a molécula de ácido nucleico compreende um vetor de expressão.
  17. 17. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende a molécula de ácido nucleico como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 16.
  18. 18. Composição de acordo com a reivindicação 17, caracterizada pelo fato de que compreende, ainda, um excipiente farmaceuticamente aceitável.
  19. 19. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende:
    a) uma primeira molécula de ácido nucleico, em que a molécula de ácido nucleico codifica um antígeno de HIV consenso; e
    b) uma segunda molécula de ácido nucleico que codifica um ou mais anticorpos sintéticos, em que a molécula de ácido nucleico compreende pelo menos uma selecionada a partir do grupo que consiste em
    i) uma sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo sintético anti-HIV; e ii) uma sequência de nucleotídeos que codifica um fragmento de um anticorpo sintético anti-HIV.
  20. 20. Método para tratar uma doença num indivíduo, caracterizado pelo fato de que o método compreende administrar ao indivíduo a molécula de ácido nucleico como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 16, ou uma composição como definida em qualquer uma das reivindicações 17 a 19.
  21. 21. Método de acordo com a reivindicação 20, caracterizado
    Petição 870190122567, de 25/11/2019, pág. 20/21
    14 / 14 pelo fato de que a doença é uma infecção por HIV.
  22. 22. Método para induzir uma resposta imunológica num indivíduo, caracterizado pelo fato de que o método compreende administrar ao indivíduo a molécula de ácido nucleico como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 16, ou uma composição como definida em qualquer uma das reivindicações 17 a 19.
  23. 23. Molécula de ácido nucleico que codifica um ou mais anticorpos sintéticos, caracterizada pelo fato de que a molécula de ácido nucleico compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo sintético IgG4, em que o anticorpo IgG4 compreende uma substituição de aminoácido Ser288Pro.
  24. 24. Molécula de ácido nucleico de acordo com a reivindicação 23, caracterizada pelo fato de que a substituição de aminoácido Ser288Pro impede a comutação de braço Fab de IgG4.
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