BR112019013215A2 - vírus oncolítico, composição farmacêutica, produto de fabricação, método para tratar câncer e uso - Google Patents

vírus oncolítico, composição farmacêutica, produto de fabricação, método para tratar câncer e uso Download PDF

Info

Publication number
BR112019013215A2
BR112019013215A2 BR112019013215A BR112019013215A BR112019013215A2 BR 112019013215 A2 BR112019013215 A2 BR 112019013215A2 BR 112019013215 A BR112019013215 A BR 112019013215A BR 112019013215 A BR112019013215 A BR 112019013215A BR 112019013215 A2 BR112019013215 A2 BR 112019013215A2
Authority
BR
Brazil
Prior art keywords
virus
immune
inhibitor
fact
seq
Prior art date
Application number
BR112019013215A
Other languages
English (en)
Inventor
Stuart Coffin Robert
Original Assignee
Replimune Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Replimune Ltd filed Critical Replimune Ltd
Publication of BR112019013215A2 publication Critical patent/BR112019013215A2/pt

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
    • A61K35/768—Oncolytic viruses not provided for in groups A61K35/761 - A61K35/766
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
    • A61K35/761—Adenovirus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
    • A61K35/763—Herpes virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
    • A61K35/765—Reovirus; Rotavirus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
    • A61K35/766—Rhabdovirus, e.g. vesicular stomatitis virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16611—Simplexvirus, e.g. human herpesvirus 1, 2
    • C12N2710/16632—Use of virus as therapeutic agent, other than vaccine, e.g. as cytolytic agent
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16611—Simplexvirus, e.g. human herpesvirus 1, 2
    • C12N2710/16641—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/16643—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

a presente invenção refere-se a um vírus oncolítico que codifica um inibidor de ctla-4, como um anticorpo anti-ctla-4 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.

Description

“VÍRUS ONCOLÍTICO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, PRODUTO DE FABRICAÇÃO, MÉTODO PARA TRATAR CÂNCER E USO”
Campo da Invenção [001] A invenção refere-se a um agente imunoterapêutico oncolítico e ao uso do agente imunoterapêutico oncolítico no tratamento de câncer.
Antecedentes da Invenção [002] Os vírus têm uma capacidade única para entrar nas células com alta eficiência. Após entrar nas células, genes virais são expressos e o vírus se replica. Isso geralmente resulta na morte da célula infectada e na liberação dos componentes antigênicos da célula à medida que a célula se rompe quando ela morre. Como resultado, a morte celular mediada por vírus tende a resultar em uma resposta imune a estes componentes celulares, incluindo tanto aqueles derivados da célula hospedeira como aqueles codificados ou incorporados no próprio vírus, e reforçada devido ao reconhecimento pelo hospedeiro dos chamados padrões moleculares associados a danos (DAMPs), que ajuda na ativação da resposta imune.
[003] Os vírus também se envolvem com vários mediadores da resposta imune inata como parte da resposta do hospedeiro para o reconhecimento de uma infecção viral, por exemplo, através de receptores tolllike e sinalização cGAS/STING e o reconhecimento de padrões moleculares associados a patógenos (PAMPs), resultando na ativação de respostas ao interferon e inflamação, que são também sinais imunogênicos para o hospedeiro. Essas respostas imunes podem resultar no benefício imunogênico para pacientes com câncer, de modo que respostas imunes aos antígenos tumorais fornecem um benefício global sistêmico, resultando no tratamento de tumores que não foram infectados com o vírus, incluindo doença micrometastática, e fornecem vacinação contra a recidiva.
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 72/145
2/52 [004] Os efeitos diretos combinados (oncolíticos) do vírus, e respostas imunes contra antígenos tumorais (incluindo neo-antígenos não autoantígenos, isto é, derivados a partir dos genes mutados específicos nos tumores individuais) são denominados “imunoterapia oncolítica”.
[005] Os vírus também podem ser usados como veículos de entrega (“vetores”) para expressar genes heterólogos inseridos no genoma viral em células infectadas. Estas propriedades tornam os vírus úteis para uma variedade de aplicações médicas e em biotecnologia. Por exemplo, vírus que expressam genes terapêuticos heterólogos podem ser usados para terapia gênica. No contexto de imunoterapia oncolítica, genes distribuídos podem incluir aqueles que codificam antígenos tumorais específicos, genes destinados a induzir respostas imunes ou aumentar a imunogenicidade de antígenos liberados após replicação viral e morte celular, genes destinados a moldar a resposta imune que é gerada, genes para aumentar o estado de ativação imune geral do tumor ou genes para aumentar as propriedades oncolíticas diretas (isto é, efeitos citotóxicos) do vírus. Com importância, os vírus têm a capacidade para distribuir moléculas codificadas que se destinam a ajudar a iniciar, melhorar ou moldar resposta imune sistêmica antitumoral diretamente e seletivamente para tumores, o que pode ter benefícios, por exemplo, de toxicidade reduzida ou de efeitos benéficos de concentração nos tumores (incluindo os não infectados pelo vírus) em vez de efeitos fora do alvo em tecidos normais (isto é, não cancerosos), em comparação à administração sistêmica dessas mesmas moléculas ou administração sistêmica de outras moléculas de direcionamento das mesmas vias.
[006] Demonstrou-se que uma série de vírus, incluindo, por exemplo, vírus herpes simples (HSV) tem utilidade no tratamento oncolítico de câncer. O HSV para uso no tratamento oncolítico de câncer deve ser inativado, de modo que não seja mais patogênico, mas ainda possa entrar e matar células
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 73/145
3/52 tumorais. Uma série de mutações de inativação para HSV, incluindo ruptura dos genes que codificam ICP34.5, ICP6 e/ou timidina quinase, foram identificadas, as quais não evitam que o vírus se replique em cultura ou no tecido tumoral in vivo, mas evitam a replicação significativa no tecido normal. HSVs nos quais somente os genes ICP34.5 foram rompidos se replicam em muitos tipos de células tumorais in vitro, e se replicam seletivamente em tecido tumoral, mas não nos tecidos circundantes, em modelos de tumor em camundongos. Ensaios clínicos de ICP34.5 deletado ou ICP34.5 e ICP6 deletados, o HSV também mostrou segurança e replicação seletiva no tecido tumoral em humanos.
[007] Conforme discutido acima, um vírus oncolítico, incluindo o HSV, também pode ser usado para distribuir um gene terapêutico no tratamento de câncer. Um vírus ICP34.5 deletado deste tipo adicionalmente deletado para ICP47 e que codifica um gene heterólogo para GM-CSF também foi testado em ensaios clínicos, incluindo um ensaio de Fase 3 em melanoma, no qual a segurança e a eficácia no homem foram mostradas. GM-CSF é uma citocina próinflamatória que tem múltiplas funções, incluindo a estimulação de monócitos para sair da circulação e migrar para o tecido onde eles se proliferam e amadurecem para macrófagos e células dendríticas. GM-CSF é importante para a proliferação e maturação das células apresentadoras de antígeno, a atividade da qual é necessária para a ativação de uma resposta imune antitumoral. Os dados de ensaio demonstraram que as respostas tumorais puderam ser observadas em tumores injetados, e a uma medida menor em tumores não injetados. As respostas tendem a ser altamente duráveis (meses até anos), e um benefício de sobrevida pareceu ser obtido em pacientes respondedores. Cada um destes indicou envolvimento do sistema imune no tratamento de câncer, em adição ao efeito oncolítico direto. No entanto, estes e outros dados com vírus oncolíticos mostraram que, em geral, todos os tumores que não respondem ao tratamento, e não todos os pacientes obtêm uma vantagem de sobrevida. Dessa
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 74/145
4/52 forma, aprimoramentos para a técnica de terapia oncolítica são claramente necessários.
[008] Recentemente, mostrou-se que a imunoterapia oncolítica pode resultar em efeitos terapêuticos aditivos ou sinérgicos em conjunto com o bloqueio da via coinibitória imune (isto é, inibição ou “antagonismo” de vias de pontos de controle (checkpoint) imunológicos, também chamadas de vias coinibitórias). O bloqueio da via coinibitória imune destina-se a bloquear os mecanismos inibitórios imunes do hospedeiro que normalmente servem para prevenir a ocorrência de autoimunidade. No entanto, em pacientes com câncer estes mecanismos também podem servir para inibir a indução ou bloquear os efeitos potencialmente benéficos de qualquer resposta imune induzida para tumores.
[009] O bloqueio sistêmico dessas vias por agentes que direcionam molécula associada a linfócito T citotóxico -4 (CTLA-4), PD-1 ou PDL1 têm mostraram eficácia de uma série de tipos de tumor, incluindo melanoma e câncer de pulmão. No entanto, sem surpresas, com base no mecanismo de ação, a toxicidade fora do alvo pode ocorrer devido à indução de autoimunidade. Mesmo assim, estes agentes são suficientemente toleráveis para fornecer grande utilidade clínica. Outra via coinibitória imune e alvos relacionados para cujos agentes (principalmente anticorpos) estão em desenvolvimento incluem LAG-3, TIM-3, VISTA, CSF1 R, IDO, CEACAM1, CD47. A atividade clínica ótima destes agentes, por exemplo, PD1, PDL1, LAG-3, TIM-3, VISTA, CSF1R, IDO, CD47, CEACAM1, pode exigir a administração sistêmica ou a presença em todos os tumores, devido ao mecanismo de ação, incluindo direcionamento da interface de células efetoras imunes com tumores ou outros mecanismos imunes inibitórios em/de tumores. Em alguns casos, a presença mais localizada, por exemplo, somente em alguns tumores ou em alguns linfonodos também pode ser efetiva da melhor forma, por exemplo, para agentes de direcionamento de
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 75/145
5/52
CTLA-4.
[010] Uma abordagem alternativa para aumentar a resposta imune antitumoral em pacientes com câncer é direcionar (ativar) vias coestimulatórias imunes, isto é, ao contrário de inibir vias coinibitórias imunes. Essas vias enviam sinais de ativação para as células T e outras células imunes, geralmente resultante da interação dos ligantes relevantes nas células apresentadoras de antígenos (APCs) e nos receptores relevantes sobre a superfície de células T e outras células imunes. Estes sinais, dependendo do ligante/receptor, podem resultar na ativação aumentada de células T e/ou APCs e/ou células NK e/ou células B, incluindo subtipos particulares, diferenciação e proliferação aumentada de células T e/ou APCs e/ou células NK e/ou células B, incluindo subtipos particulares, ou supressão da atividade de células T inibitórias como células T reguladoras. Espera-se, portanto, que a ativação dessas vias resulte em respostas imunes antitumorais melhoradas, mas também pode-se esperar que a ativação sistêmica dessas vias, isto é, a ativação de respostas imunes, em geral, ao invés de respostas imunes antitumorais especificamente ou seletivamente, resultaria em toxicidade fora do alvo considerável em tecido não-tumoral, o grau de toxicidade fora do alvo dependendo da via coestimulatória imune sendo direcionada. No entanto, agentes (principalmente anticorpos agonistas ou menos frequentemente o ligante solúvel do receptor em questão) que direcionam vias coestimulatórias imunes, incluindo agentes que direcionam GITR, 4-1-BB, 0X40, CD40 ou ICOS, CD40 ou ICOS, e destinados para uso sistêmico (isto é, distribuição intravenosa) foram propostos ou estão em desenvolvimento clínico.
[011] Para que muitas dessas abordagens que direcionam as vias coinibitórias ou coinibitórias imunes sejam bem sucedidas, respostas imunes pré-existentes aos tumores são necessárias, isto é, de modo que uma resposta imune pré-existente possa ser potencializada ou um bloqueio para uma resposta
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 76/145
6/52 imune antitumoral possa ser aliviado. A presença de um microambiente tumoral inflamado, o que é indicativo dessa resposta em curso, também é necessária. Respostas imunes pré-existentes aos neoantígenos parecem ser particularmente importantes para a atividade de drogas de bloqueio e relacionadas à via coinibitória imune. Somente alguns pacientes podem ter uma resposta imunológica contínua aos antígenos tumorais incluindo neoantígenos e/ou um microambiente tumoral inflamado, ambos dos quais são necessários para a atividade ótima dessas drogas. Portanto, os agentes oncolíticos que podem induzir respostas imunes aos antígenos tumorais, incluindo neoantígenos e/ou que podem induzir um microambiente tumoral inflamado são atraentes para uso em combinação com drogas que potencializam o bloqueio da via coinibitória e imune. Isso provavelmente explica os efeitos antitumorais combinados promissores de agentes oncolíticos e de bloqueio da via coinibitória imune em camundongos e humanos que foram observados até agora.
[012] A discussão acima demonstra que ainda há muito espaço para o aprimoramento de agentes oncolíticos e terapias de câncer que utilizam agentes oncolíticos, respostas imunes antitumorais e drogas que direcionam vias coinibitórias ou coestimulatórias imunes.
Descrição Resumida da Invenção [013] A presente invenção fornece vírus oncolítico que expressa um inibidor de CTLA-4. O vírus ainda pode compreender outros agentes imunomodulatórios. Em particular, os vírus podem compreender GM-CSF e/ou pelo menos uma molécula que direciona uma via coestimulatória imune. O inibidor de CTLA-4 age para bloquear uma via coinibitória, isto é, interfere na interação entre CTLA-4 e B7. GM-CSF auxilia na indução de um microambiente tumoral inflamatório e estimula a proliferação e maturação de células apresentadoras de antígeno, incluindo células dendríticas que auxiliam na indução de uma resposta imune antitumoral. Estas respostas imunes podem ser
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 77/145
7/52 amplificadas através da ativação de uma via coestimulatória imune ou vias que usam uma molécula que ativa a via coestimulatória imune ou moléculas também distribuídas pelo vírus oncolítico.
[014] Vírus oncolíticos se replicam dentro de tumores, causando a lise de células tumorais e liberação de antígenos tumorais, combinado com inflamação local e ativação de respostas imunes inatas, todas as quais são benéficas para a ativação de uma resposta imune antitumoral e para a atividade de inibidores da interação de CTLA-4/B7.
[015] A distribuição de moléculas que inibem a interação de CTLA4/B7 diretamente em um tumor que inicia resposta imune, incluindo onde esperase que trafegue para linfonodos de drenagem, concentre-se na potencialização imune pelo inibidor no tumor e, portanto, nos antígenos tumorais presentes dentro deste, reduza a toxicidade sistêmica e bloqueie a ativação de células T reguladoras (Treg) que, de outro modo, inibem a ativação de células T no local de iniciação de resposta imune. O uso de um vírus oncolítico para distribuir moléculas que direcionam CTLA-4 e, opcionalmente, moléculas que direcionam vias coestimulatórias imunes a tumores focam na amplificação de efeitos imunes nas respostas imunes antitumorais, e reduz a amplificação de respostas imunes a antígenos não tumorais. Dessa forma, as células imunes em tumores e linfonodos de drenagem do tumor são seletivamente afetadas pelas moléculas expressas pelo vírus, ao invés de células imunes em geral. Isto resulta em eficácia melhorada da estimulação celular imune, e também pode resultar em toxicidade reduzida fora do alvo. É também importante focar nos efeitos de bloqueio da via coinibitória imune sistêmica combinada e ativação da via coestimulatória imune em tumores, isto é, de modo que respostas imunes amplificadas a partir das quais bloqueios coinibitórios são liberados sejam respostas imunes antitumorais, ao invés de respostas a antígenos não tumorais.
[016] A invenção utiliza o fato de que, quando distribuído por um
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 78/145
8/52 vírus oncolítico, o local de ação de bloqueio de CTLA-4 e, opcionalmente, a ativação da via coestimulatória e a expressão de GM-CSF é o tumor e/ou linfonodos de drenagem do tumor, mas os resultados dessa ativação sistêmica antitumoral (uma resposta imune antitumoral sistêmica amplificada) são sistêmicos. Isso atinge tumores alvo em geral, e não apenas tumores para os quais o vírus oncolítico distribuiu a molécula ou moléculas imunomoduladoras. Vírus oncolíticos da invenção, portanto, fornecem tratamento aprimorado de câncer através da geração de respostas imunes aprimoradas focadas no tumor. O vírus oncolítico da invenção também oferece efeitos estimulantes imunes antitumorais aprimorados, de modo que os efeitos imune-mediados em tumores que não são destruídos pela oncólise, incluindo as doenças micrometastáticas, são melhorados, resultando na destruição mais efetiva destes tumores, e vacinação antitumoral de longo prazo mais efetiva para prevenir futuras recidivas e aprimorar a sobrevida global.
[017] A eficácia antitumoral é aprimorada quando um vírus oncolítico da invenção é usado como um único agente e também quando o vírus é usado em combinação com outras modalidades anticâncer, incluindo quimioterapia, tratamento com agentes direcionados, radiação e, em realizações preferenciais, drogas de bloqueio de pontos de controle imunológicos (isto é, antagonistas de uma via coinibitória imune, por exemplo, anticorpos contra PD1 ou PD-L1) e/ou agonistas de uma via coestimulatória imune.
[018] Consequentemente, a presente invenção fornece um vírus oncolítico que codifica um inibidor de CTLA-4. O inibidor de CTLA-4 é preferencialmente um anticorpo anti-CTLA-4 ou molécula similar ao anticorpo, ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
[019] O vírus ainda pode compreender: (i) um gene codificador de GM-CSF; e/ou (ii) uma molécula que ativa a via coestimulatória imune ou um gene codificador de uma molécula que ativa a via coestimulatórias imune. O vírus
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 79/145
9/52 pode codificar mais do que uma molécula/um gene que ativa a via coestimulatória imune.
[020] A molécula que ativa a via coestimulatória imune é preferencialmente GITRL, 4-1-BBL, OX40L, ICOSL ou CD40L ou uma versão modificada de qualquer uma dessas. Exemplos de versões modificadas incluem agonistas de uma via coestimulatória, que são secretadas ao invés de estarem ligadas à membrana, e/ou agonistas modificadas de modo que multímeros da proteína sejam formados.
[021] O vírus pode ser um isolado clínico modificado, como um isolado clínico modificado de um vírus, em que o isolado clínico mata duas ou mais linhagens de células tumorais mais rapidamente e/ou em uma dose mais baixa in vitro do que um ou mais isolados clínicos de referência da mesma espécie de vírus.
[022] O vírus é preferencialmente um vírus herpes simples (HSV), como o HSV1. O HSV tipicamente não expressa ICP34.5 funcional e/ou ICP47 funcional e/ou expressa o gene US11 como um gene inicial imediato.
[023] A invenção também fornece:
uma composição farmacêutica que compreende um vírus da invenção e um carreador ou diluente farmaceuticamente aceitável;
o vírus da invenção para uso em um método para tratar o corpo humano ou animal por terapia;
o vírus da invenção para uso em um método para tratar câncer, em que o método opcionalmente compreende administrar um agente anticâncer adicional;
um produto de fabricação que compreende um vírus da invenção, em um frasco estéril, ampola ou seringa;
um método para tratar câncer, que compreende administrar uma quantidade terapeuticamente efetiva de um vírus, um produto farmacêutico
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 80/145
10/52 ou uma composição da invenção para um paciente com necessidade do mesmo, em que o método opcionalmente compreende administrar um agente anticâncer adicional;
uso de um vírus da invenção na fabricação de um medicamente para uso em um método para tratar câncer, em que o método opcionalmente compreende administrar um agente anticâncer adicional.
Breve Descrição das Figuras [024] A Figura 1 representa as estruturas dos vírus usados para construir vírus exemplares da invenção que compreendem constructos antiCTLA-4 humano ou anti-camundongo, que são moléculas scFv secretadas códon-otimizadas ligadas a regiões Fc de IgG 1 humana ou de camundongo. As scFvs contêm cadeias variáveis leves e pesadas de 9D9 (o primeiro anticorpo de camundongo inicialmente usado para validar CTLA-4; documento WO 2007/123737 versão de camundongo) ou de ipilimumabe. (documento WO 2014/066532; versão humana) ligado pelo 15-mer [G4Ô]3 (GGGGSGGGGSGGGGS). Os vírus são versões modificadas da linhagem HSV1 RH018A (linhagem clínica 18). Os genes ICP34.5 e ICP47 são inativados nos vírus. O gene US11 é colocado sob o controle do ICP47 promotor inicial de gene imediato por deleção do promotor ICP47. Um cassete de expressão é inserido nos loci do gene ICP34.5. No vírus 17, o cassete de expressão inclui o gene GM-CSF humano sob o controle de um promotor de CMV e o gene GALV sob o controle de um promotor RSV. O vírus 16 é o mesmo que o vírus 17, exceto que GM-CSF humano está incluído ao invés de GM-CSF de camundongo. Os vírus 25 e 29 são os mesmos que os vírus 16 e 17, respectivamente, exceto que cada um deles compreender adicionalmente um gene GFP sob o controle de um promotor de MMLV no cassete de expressão. Os vírus 27 e 31 são os mesmos que os vírus 25 e 29, respectivamente, exceto que o gene GFP é substituído pelo anti-CTLA4 de camundongo e pelo anti-CTLA4 humano, respectivamente.
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 81/145
11/52 [025] A Figura 2 representa as estruturas dos plasmídeos usados para construir os vírus exemplares da invenção.
[026] A Figura 3 mostra a estrutura de constructos anti-CTLA-4 humano ou anti-camundongo que são moléculas scFv secretadas códonotimizadas ligadas a regiões Fc de lgG1 humana ou de camundongo. As scFvs contêm cadeias variáveis leves e pesadas ([G4S]s) ligadas de 9D9 (o primeiro anticorpo de camundongo inicialmente usado para validar CTLA-4; patente US 2011044953 versão de camundongo) ou de ipilimumabe (patente US 20150283234; versão humana). A estrutura resultante do inibidor de CTLA-4 também é mostrada.
[027] A Figura 4 é um Western blot demonstrando que o antiCTLA-4 de camundongo é expresso a partir do vírus 27. O gel usado foi um gel tris-glicina de membrana de PVDF desnaturada reduzido. Anti-CTLA-4 foi detectado com o uso de um anticorpo anti-lgG1 de camundongo marcado com fosfatase alcalina. Pista 1: escada de ampla gama de espectro; pista 2 vírus 27 sobrenadante puro; pista 3 vírus 27 sobrenadante diluído 1 em 2; pista 4 vírus 27 sobrenadante diluído 1 em 4; pista 5 vírus 27 sobrenadante diluído 1 em 8; pista 6 vírus 27 sobrenadante diluído 1 em 16; pista 7 vírus 27 sobrenadante diluído 1 em 32; pista 8 vírus de controle negativo (sobrenadante puro). O tamanho esperado de anti-CTLA-4 (reduzido) é de 57 kDa.
[028] A Figura 5 mostra o controle tumoral superior e o encolhimento em tumores não injetados de um vírus que expressa anti-mCTLA4 (vírus 27), em comparação a um vírus idêntico que de outro modo não expressa CTLA-4 (vírus 16). A dose de vírus usada foi de 5 x 104 pfu (50 uL de 1 x 106 pfu/mL em cada caso), dada três vezes durante uma semana. Este nível de dose de vírus é subterapêutico para tumores não injetados para vírus 16, o que permite que benefícios da distribuição da molécula adicional codificada pelo vírus 27 sejam claramente vistos.
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 82/145
12/52 [029] A Figura 6 mostra o controle tumoral superior e encolhimento em ambos, tumores injetados e não injetados, de um vírus que expressa antimCTLA-4 (vírus 27), em comparação a um vírus idêntico que de outro modo não expressa CTLA-4 (vírus 16). A dose do vírus usado foi de 5 x 104 pfu durante uma semana no tumor direito, de um vírus que expressa anti-mCTLA-4 (vírus 27) em comparação a um vírus idêntico que de outro modo não expressa CTLA4 (vírus 16). Cada linha representa um camundongo diferente.
[030] A Figura 7 mostra o efeito do tratamento combinado de tumores bilaterais de camundongo A20 com o uso de anti-PD1 e vírus 27 que expressa mGM-CSF, GALVR e anti-mCTLA-4. O painel superior mostra o efeito de anti-PD1 sozinho em ambos, tumores injetados (direita) e não injetados (esquerda). O painel do meio mostra o efeito do vírus 27 sozinho em ambos, tumores injetados (direita) e não injetados (esquerda). O painel inferior mostra o controle tumoral superior do tumor e o encolhimento obtido quando o anti-PD1 e o vírus 27 são ambos injetados no tumor direito. O efeito anti-tumoral aprimorado do tratamento combinado é observado em ambos os tumores, injetado (direita) e não injetado (esquerda). Cada linha representa um camundongo diferente.
[031 ] A Figura 8 mostra o controle tumoral superior e os efeitos de encolhimento obtidos do vírus 31 que expressa hGM-CSF, GALVR e anti-CTLA4 humano, em comparação ao vírus 17 que expressa somente hGM-CSF e GALVR em tumores MC38 de camundongo knock-in que expressam CTLA-4 humano. Os efeitos antitumorais do vírus 31 são observados quando o vírus é administrado isoladamente ou em combinação com anti-PD1. Controle tumoral superior e encolhimento em tumores injetados com vírus 31 que expressa antiCTLA-4 humano, em comparação ao vírus idêntico que não expressa anti-CTLA4 humano (painel esquerdo). Este efeito é ainda mais melhorado quando o tratamento com o vírus é combinado com o tratamento com anti-PD1. O controle tumoral superior e o encolhimento também são observados em tumores não
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 83/145
13/52 injetados (painel direito) quando o tratamento com ambos os vírus é combinado com o tratamento com anti-PD1. Este aprimoramento é mais acentuado para o vírus 31 que expressa anti-CTLA-4 do que para o vírus 17, que não o faz. Cada linha representa um camundongo diferente.
Breve Descrição da Listagem de Sequências [032] SEQ ID NO: 1 é a sequência de aminoácidos de região variável de cadeia leve do anticorpo CTLA-4 humano usada nos Exemplos.
[033] SEQ ID NOs: 2 é a sequência de aminoácidos de cadeia leve completa que compreende a sequência de aminoácidos de região variável de cadeia leve do anticorpo CTLA-4 humano usada nos Exemplos.
[034] SEQ ID NO: 3 é a sequência de aminoácidos de região variável de cadeia pesada do anticorpo CTLA-4 humano usada nos Exemplos.
[035] SEQ ID NO: 4 é a sequência de aminoácidos CH1 de cadeia pesada do anticorpo CTLA-4 humano usada nos Exemplos.
[036] SEQ ID NO: 5 é a sequência de aminoácidos CH2/3 de cadeia pesada do anticorpo CTLA-4 humano usada nos Exemplos.
[037] SEQ ID NO: 6 é a sequência de aminoácidos de cadeia pesada completa do anticorpo CTLA-4 humano usada nos Exemplos.
[038] SEQ ID NO: 7 é a sequência de aminoácidos do peptídeo sinal presente nos anticorpos CTLA-4 dos Exemplos.
[039] SEQ ID NO: 8 é a sequência de aminoácidos do ligante presente entre a região variável de cadeia leve da região variável de cadeia pesada nos anticorpos CTLA-4 dos Exemplos.
[040] SEQ ID NO: 9 é a sequência de aminoácidos do anticorpo CTLA-4 scFv humana dos Exemplos.
[041] SEQ ID NO: 10 é a sequência de nucleotídeos do anticorpo CTLA-4 scFv humana dos Exemplos.
[042] SEQ ID NO: 11 é a sequência de aminoácidos de região
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 84/145
14/52 variável de cadeia leve do anticorpo CTLA-4 murino usada nos Exemplos.
[043] SEQ ID NO: 12 é a sequência de aminoácidos de região variável de cadeia pesada do anticorpo CTLA-4 murino usada nos Exemplos.
[044] SEQ ID NO: 13 é a sequência de aminoácidos de cadeia pesada completa do anticorpo CTLA-4 murino usada nos Exemplos.
[045] SEQ ID NO: 14 é a sequência de aminoácidos do anticorpo CTLA-4 scFv murino dos Exemplos.
[046] SEQ ID NO: 15 é a sequência de nucleotídeos do anticorpo CTLA-4 scFv murino dos Exemplos.
[047] SEQ ID NO: 16 é a sequência de nucleotídeos do anticorpo CTLA-4 scFv murino dos Exemplos com sítios de restrição inseridos para propósitos de clonagem localizados nas terminações N e C, que está presente no vírus exemplar. Os sítios de restrição são os seis primeiros e os oito últimos nucleotídeos da sequência.
[048] SEQ ID NO: 17 é a sequência de nucleotídeos do anticorpo CTLA-4 scFv humano dos Exemplos com sítios de restrição inseridos para propósitos de clonagem localizados nas terminações N e C, que está presente no vírus exemplar. Os sítios de restrição são os seis primeiros e os oito últimos nucleotídeos da sequência.
[049] SEQ ID NO: 18 é a sequência de nucleotídeos de GM-CSF de camundongo.
[050] SEQ ID NO: 19 é a sequência de nucleotídeos de uma versão códon-otimizada de GM-CSF de camundongo.
[051] SEQ ID NO: 20 é a sequência de nucleotídeos de GM-CSF humano.
[052] SEQ ID NO: 21 é a sequência de nucleotídeos de uma versão códon-otimizada de GM-CSF humano.
[053] SEQ ID NO: 22 é a sequência de aminoácidos de GM-CSF
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 85/145
15/52 de camundongo.
[054] SEQ ID NO: 23 é a sequência de aminoácidos de GM-CSF humano.
[055] SEQ ID NO: 24 é a sequência de nucleotídeos de GALV-R[056] SEQ ID NO: 25 é a sequência de nucleotídeos de uma versão códon-otimizada de GALV-R-.
[057] SEQ ID NO: 26 é a sequência de aminoácidos de GALV-R-.
[058] SEQ ID NO: 27 é a sequência de nucleotídeos uma versão códon-otimizada de uma versão ligada à membrana de híbrido humano/camundongo de CD40L.
[059] SEQ ID NO: 28 é a sequência de aminoácidos de uma versão ligada à membrana de híbrido humano/camundongo de CD40L.
[060] SEQ ID NO: 29 é a sequência de nucleotídeos de uma versão códon-otimizada de uma versão secretada multimérica de CD40L humano.
[061] SEQ ID NO: 30 é a sequência de aminoácidos de uma versão secretada multimérica de CD40L humano.
[062] SEQ ID NO: 31 é a sequência de nucleotídeos de uma versão códon-otimizada de uma versão secretada multimérica de CD40L de camundongo.
[063] SEQ ID NO: 32 é a sequência de aminoácidos de uma versão secretada multimérica de CD40L de camundongo.
[064] SEQ ID NO: 33 é a sequência de nucleotídeos de CD40L humano tipo selvagem.
[065] SEQ ID NO: 34 é a sequência de aminoácidos de CD40L humano tipo selvagem.
[066] SEQ ID NO: 35 é a sequência de nucleotídeos de CD40L de
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 86/145
16/52 camundongo tipo selvagem.
[067] SEQ ID NO: 36 é a sequência de aminoácidos de CD40L de camundongo tipo selvagem.
[068] SEQ ID NO: 37 é a sequência de nucleotideos do promotor de CMV.
[069] SEQ ID NO: 38 é a sequência de nucleotideos do promotor de RSV.
[070] SEQ ID NO: 39 é a sequência de nucleotideos de polyA BGH.
[071] SEQ ID NO: 40 é a sequência de nucleotideos de polyA final SV40.
[072] SEQ ID NO: 41 é a sequência de nucleotideos de polyA beta-globulina de coelho.
[073] SEQ ID NO: 42 é a sequência de nucleotideos de GFP.
[074] SEQ ID NO: 43 é a sequência de nucleotideos de LTR retroviral de MMLV.
[075] SEQ ID NO: 44 é a sequência de nucleotideos de promotor EF1a.
[076] SEQ ID NO: 45 é a sequência de nucleotideos de promotor SV40.
[077] SEQ ID NO: 46 é a sequência de nucleotideos de polyA HGH.
Descrição Detalhada da Invenção
Vírus Oncolítico [078] O vírus da invenção é oncolítico. Um vírus oncolítico é um vírus que infecta e se replica nas células tumorais, de modo que as células tumorais são mortas. Portanto, o vírus da invenção é competente à replicação. Preferencialmente, o vírus é seletivamente competente à replicação em tumores.
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 87/145
17/52
Um vírus é seletivamente competente à replicação no tecido tumoral se ele se replicar de maneira mais efetiva no tecido tumoral do que no tecido não tumoral. A capacidade de um vírus se replicar em diferentes tipos de tecidos pode ser determinada com o uso técnicas padrão.
[079] O vírus da invenção pode ser qualquer vírus que tem estas propriedades, incluindo um vírus herpes, poxvirus, adenovirus, retrovirus, rabdovirus, paramixovirus ou reovírus, ou qualquer espécie ou linhagem dentro destes grupos maiores. Os vírus da invenção podem ser tipo selvagem (isto é, inalterados a partir das espécies de vírus espécie parentais) ou com interrupções de genes ou adições de genes. Qual desses é o caso, dependerá da espécie de vírus para ser usada. Preferencialmente, o vírus é uma espécie de vírus herpes, mais preferencialmente uma linhagem de HSV, incluindo linhagens de HSV1 e HSV2, e é com a máxima preferência uma linhagem de HSV1. Em realizações particularmente preferenciais, o vírus da invenção é baseado em um isolado clínico da espécie de vírus a ser usada. O isolado clínico pode ter sido selecionado com base nele, tendo propriedades particularmente vantajosas para o tratamento de câncer.
[080] O vírus pode ser um isolado clínico modificado, em que o isolado clínico mata duas ou mais linhagens celulares tumorais mais rapidamente e/ou em uma dose mais baixa in vitro do que um ou mais isolados clínicos de referência da mesma espécie de vírus. Tipicamente, o isolado clínico mata duas ou mais linhagens células tumorais dentro de 48 horas, preferencialmente dentro de 24 horas, de infecção em multiplicidades de infecção (MOI) menores ou iguais a 0,1. Preferencialmente, o isolado clínico mata uma ampla variedade de linhagens celulares tumorais, como 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou, por exemplo, todas as seguintes linhagens celulares tumorais humanas a seguir: U87MG (glioma), HT29 (colorretal), LNCaP (próstata), MDAMB-231 (mama), SK-MEL-28 (melanoma), Fadu (carcinoma de células
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 88/145
18/52 escamosas), MCF7 (mama), A549 (pulmão), MIAPACA-2 (pâncreas), CAPAN1 (pâncreas), HT1080 (fibrossarcoma).
[081] Em uma realização preferencial, o vírus da invenção é uma linhagem selecionada a partir da:
• linhagem RH018A que tem o número de acesso ECCAC 16121904;
• linhagem RH004A que tem o número de acesso ECCAC 16121902;
• linhagem RH031A que tem o número de acesso ECCAC 16121907;
• linhagem RH040B que tem o número de acesso ECCAC 16121908;
• linhagem RH015A que tem o número de acesso ECCAC 16121903;
• linhagem RH021A que tem o número de acesso ECCAC 16121905;
• linhagem RH023A que tem o número de acesso ECCAC 16121906; e • linhagem RH047A que tem o número de acesso ECCAC 16121909.
[082] Mais preferencialmente, o vírus da invenção é uma linhagem selecionada a partir da:
• linhagem RH018A que tem o número de acesso ECCAC 16121904;
• linhagem RH004A que tem o número de acesso ECCAC 16121902;
• linhagem RH031A que tem o número de acesso ECCAC 16121907;
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 89/145
19/52 • linhagem RH040B que tem o número de acesso ECCAC 16121908; e • linhagem RH015A que tem o número de acesso ECCAC 16121903.
[083] Com a máxima preferência, o vírus da invenção é da linhagem RH018A que tem o número de acesso EACC 16121904. Qualquer uma das linhagens depositadas pode ser modificada conforme definido no presente pedido.
[084] Um HSV da invenção é capaz de se replicar seletivamente em tumores, como tumores humanos. Tipicamente, um HSV se replica de forma eficiente em tumores alvo mas não se replica de forma eficiente em tecido não tumoral. Este HSV pode compreender uma ou mais mutações em um ou mais genes virais que inibem a replicação em tecido normal, mas ainda permite a replicação em tumores. A mutação, por exemplo, pode ser uma mutação que previne a expressão de ICP34.5 funcional, ICP6 e/ou timidina quinase pelo HSV.
[085] Em uma realização preferencial, os genes que codificam ICP34.5 são mutados para conferir atividade oncolítica seletiva no HSV. Mutações dos genes que codificam ICP34.5 que previnem a expressão de ICP34.5 funcional são descritas em Chou et al. (1990) Science 250:1262-1266, Maclean etal. (1991) J. Gen. Virei. 72:631-639 e Liu etal. (2003) Gene Therapy 10:292-303, que são incorporadas ao presente pedido como referência. O gene codificador de ICP6 e/ou gene codificador de timidina quinase também pode ser inativado, tal como outros genes, desde que essa inativação não impeça o vírus de infectar ou se replicar em tumores.
[086] O HSV pode conter uma mutação ou mutações adicionais que melhoram a replicação do HSV em tumores. A melhoria resultante de replicação viral em tumores não só resulta em morte de células tumorais “oncolíticas” diretas melhoradas pelo vírus, mas também melhora o nível de
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 90/145
20/52 expressão gênica heteróloga (isto é, um gene inserido no vírus, no caso dos vírus dos genes da invenção que codificam um inibidor de CTLA-4, GM-CSF e/ou uma molécula(s) que ativa(m) a(s) via(s) coestimulatória(s) imune(s)) e aumenta a quantidade de antígeno tumoral liberado como células tumorais mortas, ambos os quais também podem aprimorar as propriedades imunogênicas da terapia para o tratamento de câncer. Por exemplo, em uma realização preferencial da invenção, a deleção do gene codificador de ICP47 de modo que coloca o gene US11 sob o controle do promotor inicial imediato que normalmente controla a expressão do gene codificador de ICP47 levando à replicação melhorada em tumores (consulte Liu et al., 2003, que é incorporada ao presente pedido como referência).
[087] Outras mutações que colocam a sequência de codificação US11, que é um gene tardio de HSV, sob o controle de um promotor que não é dependente da replicação viral também pode ser introduzido em um vírus da invenção. Essas mutações permitem expressão de US11 antes de ocorrer replicação de HSV e melhorar a replicação viral em tumores. Em particular, essas mutações melhoram a replicação de HSV desprovido de genes que codificam ICP34.5 funcionais.
[088] Consequentemente, em uma realização, o HSV da invenção compreende um gene US11 ligado de maneira funcional a um promotor, em que a atividade do promotor não é dependente da replicação viral. O promotor pode ser um promotor inicial imediato (IE) ou um promotor sem HSV que ativo em mamíferos, preferencialmente humanos, células tumorais. O promotor pode, por exemplo, ser um promotor eucarionte, como um promotor derivado a partir do genoma de um mamífero, preferencialmente um humano. O promotor pode ser um promotor onipresente (como um promotor de β-actina ou tubulina) ou um promotor célula-específico, como promotor tumor-específico. O promotor pode ser um promotor viral, como a repetição terminal longa do vírus de leucemia
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 91/145
21/52 murina Moloney (MMLV LTR) ou o promotor IE de citomegalovírus (CMV) humano ou de camundongo. Promotores iniciais imediatos (IE) de HSV são bem conhecidos na técnica. O promotor IE de HSV pode ser o promotor que direciona expressão de ICPO, ICP4, PIC22, PIC27 ou ICP47.
[089] Os genes citados acima, a inativação funcional de que fornece a propriedade de seletividade tumoral para o vírus, podem se tornar funcionalmente inativos por qualquer método adequado, por exemplo, por deleção ou substituição de todo ou de parte do gene e/ou sequência de controle do gene ou por inserção de um ou mais ácidos nucleicos em ou no lugar do gene e/ou a sequência de controle do gene. Por exemplo, métodos de recombinação homóloga, que são padrão na técnica, podem ser usados para gerar o vírus da invenção. De maneira alternativa, podem ser usadas abordagens baseadas em cromossomos artificiais bacterianos (BAC).
[090] Como usado no presente pedido, o termo “gene” se destina a significar a sequência de nucleotídeos que codifica uma proteína, isto é, a sequência codificadora do gene. Os vários genes citados acima podem se tornar não funcionais por mutação do próprio gene ou das sequências de controle de flanqueamento do gene, por exemplo, a sequência promotora. As deleções podem remover uma ou mais porções do gene, o gene inteiro ou o gene inteiro e todas ou algumas das sequências de controle. Por exemplo, pode ser feita deleção de somente um nucleotídeo dentro do gene, resultando em uma alteração no quadro de leitura. No entanto, pode ser feita uma deleção maior, por exemplo, pelo menos cerca de 25%, mais preferencialmente pelo menos cerca de 50% da sequência codificadora e/ou não codificadora total. Em uma realização preferencial, o gene que está se tornando funcionalmente inativo é deletado. Por exemplo, o gene inteiro e opcionalmente algumas das sequências de flanqueamento podem ser removidas do vírus. Quando duas ou mais cópias do gene estão presentes no genoma viral ambas as cópias do gene tornam-se
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 92/145
22/52 funcionalmente inativas.
[091] Um gene pode ser inativado, substituindo outras sequências, por exemplo, substituindo toda ou parte do gene endógeno com um gene heterólogo e opcionalmente uma sequência promotora. Quando nenhuma sequência promotora é substituída, o gene heterólogo pode ser inserido de modo que seja controlado pelo promotor do gene que está se tornando não funcional. Em um HSV da invenção, prefere-se que genes que codificam ICP34.5 se tornam não funcionais pela inserção de um gene ou genes heterólogos e uma sequência ou sequências promotoras ligada de maneira funcional a aos mesmos, e opcionalmente outros elementos reguladores como sequências de poliadenilação, em cada um dos loci do gene que codifica ICP34.5.
[092] Um vírus da invenção é usado para expressar um inibidor de CTLA-4, e opcionalmente GM-CSF e/ou uma molécula que ativa a via coestimulatória imune, em tumores. Isto é tipicamente obtido inserindo um gene heterólogo que codifica um inibidor de CTLA-4, e opcionalmente um gene heterólogo que codifica GM-CSF e/ou um gene heterólogo que codifica a molécula que ativa a via coestimulatória imune, no genoma de um vírus seletivamente competente para replicação onde cada gene está sob o controle de uma sequência promotora. Como a replicação desse vírus ocorrerá seletivamente no tecido tumoral, a expressão do inibidor de CTLA-4 e, se presente, a expressão do GM-CSF e/ou proteína de ativação coestimulatória imune pelo vírus, também são melhoradas no tecido tumoral em comparação ao tecido não tumoral no corpo. A expressão melhorada ocorre onde a expressão é maior em tumores em comparação a outros tecidos do corpo. Também se espera que proteínas expressas pelo vírus oncolítico também estejam presentes em linfonodos de drenagem de tumor infectado por vírus oncolítico, incluindo devido ao tráfego de proteína expressa e de vírus em ou nas células apresentadoras de antígenos do tumor. Consequentemente, a invenção fornece benefícios de
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 93/145
23/52 expressão do inibidor de CTLA-4 e qualquer GM-CSF coexpressa e/ou molécula que ativa a via coestimulatória imune seletivamente em tumores e linfonodos de drenagem de tumor combinados com o efeito antitumoral fornecido pela replicação de vírus oncolítico.
[093] O vírus da invenção compreende um inibidor de CTLA-4. O inibidor de CTLA-4 é uma molécula, tipicamente um peptídeo ou proteína que se liga a CTLA-4 e reduz ou bloqueia sinalização através de CTLA-4. Reduzindo a sinalização de CTLA-4, o inibidor reduz ou remove o bloco de vias estimulatórias imunes pelo CTLA-4.
[094] O inibidor de CTLA-4 é preferencialmente um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
[095] O termo “anticorpo”, conforme citado no presente pedido inclui anticorpos inteiros e qualquer fragmento de ligação ao antígeno (isto é, “porção de ligação ao antígeno”) ou cadeias únicas do mesmo. Um anticorpo se refere a uma glicoproteína que compreende pelo menos duas cadeias pesadas (H) e duas cadeias leves (L) (kappa) interconectadas por ligação bissulfeto ou uma porção de ligação ao antígeno do mesmo. Cada cadeia pesada é compreendida de uma região variável de cadeia pesada (abreviada no presente pedido como VH) e uma região constante de cadeia pesada. Cada cadeia leve é compreendida de uma região variável de cadeia leve (abreviada no presente pedido como VL) e uma região constante de cadeia leve. As regiões variáveis das cadeias pesadas e leves contêm um domínio de ligação que interage com um antígeno. As regiões VH e VL ainda podem ser subdivididas em regiões de hipervariabilidade, denominadas regiões determinantes de complementaridade (CDR), intercaladas com regiões que são mais conservadas, denominadas regiões de estrutura (FR). As regiões constantes dos anticorpos podem mediar a ligação da imunoglobulina a tecidos hospedeiros ou fatores, incluindo várias células do sistema imune (por exemplo, células efetoras) e o primeiro
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 94/145
24/52 componente (Clq) do sistema complemento clássico.
[096] O anticorpo é tipicamente um anticorpo monoclonal. O anticorpo pode ser um anticorpo quimérico. O anticorpo é preferencialmente um anticorpo humanizado e é mais preferencialmente um anticorpo humano.
[097] O termo “fragmento de ligação ao antígeno” de um anticorpo refere-se a um ou mais fragmentos de um anticorpo que mantém a capacidade de se ligar especificamente a CTLA-4. O fragmento de ligação ao antígeno também mantém a capacidade de inibir CTLA-4 e, então, reduzir ou remover o bloqueio de CTLA-4 de uma resposta imune estimulatória. Exemplos de fragmentos adequados incluem um fragmento Fab, um fragmento F(ab’)2, um fragmento fragmento Fab’, um fragmento Fd, um fragmento Fv, um fragmento dAb e uma região determinante de complementaridade isolada (CDR). Anticorpos de cadeia única, como scFv e anticorpos de cadeia pesada como VHH e anticorpos de camelo também são destinados a estarem englobados dentro do termo “porção de ligação ao antígeno” de um anticorpo. Em uma realização preferencial, o anticorpo é um scFv. Exemplos de moléculas de scFv são divulgadas, por exemplo, nos documentos WO 2007/123737 e WO 2014/066532, que são incorporados ao presente pedido como referência.
[098] As sequências codificadoras de anticorpo codificam tipicamente um anticorpo ou fragmento de anticorpo que tem uma sequência sinal N-terminal. A sequência sinal pode ter a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 7. Por exemplo, esta sequência sinal está incluída em um scFv que tem a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 9 e codificada pela sequência de nucleotídeo mostrada na SEQ ID NO: 10, e em um scFv que tem a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 14 e codificada pela sequência de nucleotídeo mostrada na SEQ ID NO: 15.
[099] No anticorpo ou fragmento de anticorpo, as sequências de cadeia leve e cadeia pesada podem estar unidas por um ligante aminoácido. O
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 95/145
25/52 ligante compreende tipicamente de cerca de 15 a cerca de 25 aminoácidos, como cerca de 18 ou 20 aminoácidos. Qualquer ligante adequado pode ser usado, como ligantes que compreendem resíduos de glicina e serina, por exemplo, a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 8. Por exemplo, este ligante é incluído em um scFv que tem a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 9 e codificada pela sequência de nucleotídeo mostrada na SEQ ID NO: 10, e em um scFv que tem a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 14 e codificada pela sequência de nucleotídeo mostrada na SEQ ID NO: 15. Ambos são fragmentos de anticorpos preferenciais para uso na invenção.
[100] Outros fragmentos de anticorpos que têm estruturas similares também são preferenciais. Consequentemente, o vírus da invenção pode codificar um anticorpo ou fragmento que compreende, ou consiste essencialmente em, uma região variável de cadeia leve, um ligante, uma região variável de cadeia pesada, um domínio CH1 de cadeia pesada, um domínio CH2 de cadeia pesada e um domínio CH3 de cadeia pesada. O vírus ainda pode codificar uma sequência sinal na terminação N do anticorpo.
[101] Os anticorpos ou fragmentos de anticorpos da invenção podem preferencialmente compreender uma região Fc que é uma região lgG1, lgG2, lgG3 ou lgG4, mais preferencialmente uma região lgG1. Preferencialmente, o anticorpo é um anticorpo scFv na qual o scFv é ligado aos domínios CH2 e CH3 de cadeia pesada de IgG.
[102] Um anticorpo ou fragmento de CTLA-4 compreende a região variável de cadeia pesada mostrada na SEQ ID NO: 3 e /ou a região variável de cadeia leve mostrada na SEQ ID NO: 1 ou a região variável de cadeia pesada mostrada na SEQ ID NO: 11 e /ou a região variável de cadeia leve mostrada na SEQ ID NO: 12. O anticorpo pode compreender o domínio CH1 de cadeia pesada que tem a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 4 e/ou
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 96/145
26/52 os domínios CH2/CH3 mostrados na SEQ ID NO: 5. O anticorpo pode compreender a sequência de aminoácidos de cadeia leve mostrada na SEQ ID NO: 2. Um anticorpo da invenção pode compreender opcionalmente uma variante de uma destas regiões variáveis de cadeia pesada ou leve, ou sequências de CDR. Por exemplo, uma variante pode ser uma variante de substituição, deleção ou adição de qualquer uma das sequências de aminoácidos acima.
[103] Um anticorpo variante pode compreender 1, 2, 3, 4, 5, até 10, até 20, até 30 ou mais substituições de aminoácidos e/ou deleções das sequências específicas e fragmentos discutidos acima, enquanto mantendo a atividade dos anticorpos descritos no presente pedido. Variantes de “deleção” podem compreender a deleção, por exemplo, de 1, 2, 3, 4 ou 5 aminoácidos individuais ou de um ou mais grupos de aminoácidos pequenos, como 2, 3, 4 ou 5 aminoácidos. Variantes de “substituição” envolvem preferencialmente a substituição de um ou mais aminoácidos com o mesmo número de aminoácidos e produzindo substituições de aminoácidos conservativas. Por exemplo, um aminoácido pode ser substituído por um aminoácido alternativo que tem propriedades similares, por exemplo, outro aminoácido básico, outro aminoácido ácido, outro aminoácido neutro, outro aminoácido carregado, outro aminoácido hidrofílico, outro aminoácido hidrofóbico, outro aminoácido polar, outro aminoácido aromático ou outro aminoácido alifático.
[104] O vírus da invenção compreende uma ou mais sequências de polinucleotídeos que codificam o inibidor de CTLA-4. A sequência de polinucleotídeos está sob o controle de um promotor adequado. O vírus pode compreender uma primeira sequência de polinucleotídeos que codifica uma região variável de cadeia pesada do anticorpo e um segundo polinucleotídeo que codifica uma região variável de cadeia leve do anticorpo. O primeiro polinucleotídeo pode codificar uma cadeia pesada inteira e/ou o segundo
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 97/145
27/52 polinucleotídeo pode codificar uma cadeia leve inteira. O primeiro e segundo polinucleotídeos podem estar sob o controle de um promotor único, opcionalmente um IRES, ou podem estar sob o controle de dois promotores separados. Os promotores separados podem ser os mesmos ou diferentes.
[105] O primeiro polinucleotídeo pode compreender, consiste essencialmente em ou consiste na região variável de cadeia pesada que codifica a sequência mostrada na SEQ ID NO: 9 e/ou o segundo polinucleotídeo pode compreender, consiste essencialmente em ou consiste na região variável de cadeia pesada que codifica a sequência mostrada na SEQ ID NO: 10. O primeiro polinucleotídeo pode compreender, consiste essencialmente em ou consiste na região variável de cadeia pesada que codifica a sequência mostrada na SEQ ID NO: 19 e/ou o segundo polinucleotídeo pode compreender, consiste essencialmente em ou consiste na região variável de cadeia pesada que codifica a sequência mostrada na SEQ ID NO: 20.
[106] Uma primeira e/ou segunda sequências de polinucleotídeos pode ser uma variante de SEQ ID NO: 9,10,19 ou 20. Por exemplo, uma variante pode ser uma variante de substituição, deleção ou adição de qualquer uma destas sequências de aminoácidos. Um polinucleotídeo variante pode compreender 1,2, 3, 4, 5, até 10, até 20, até 30, até 40, até 50, até 75 ou mais substituições de ácidos nucleicos e/ou deleções de SEQ ID NO: 9,10, 19 ou 20.
[107] Variantes adequadas podem ser pelo menos 70% homólogas a um polinucleotídeo de qualquer uma das sequências de ácidos nucleicos divulgadas no presente pedido, preferencialmente pelo menos 80 ou 90%, e mais preferencialmente pelo menos 95%, 97% ou 99% homóloga às mesmas. Preferencialmente homologia e identidade a estes níveis está presente pelo menos em relação às regiões codificadoras de polinucleotídeos. Métodos para medir homologia são bem conhecidos na técnica e serão entendidos pelos técnicos no assunto que, no presente contexto, homologia é calculado com base
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 98/145
28/52 na identidade de ácidos nucléicos. Essa homologia pode existir sobre uma região de pelo menos 15, preferencialmente pelo menos 30, por exemplo, pelo menos 40, 60, 100, 200 ou mais nucleotídeos contíguos. Essa homologia pode existir ao longo do comprimento inteiro da sequência de polinucleotídeos não modificada.
[108] Métodos para medir homologia ou identidade de polinucleotídeos são conhecidos na técnica. Por exemplo, o pacote UWGCG fornece o programa BESTFIT que pode ser usado para calcular homologia (por exemplo, usado em sua configuração padrão) (Devereux et al (1984) Nucleic Acids Research 12, páginas 387-395).
[109] Os algoritmos PILEUP e BLAST também podem ser usados para calcular sequências de homologia ou de alinhamento (tipicamente em suas configurações padrão), por exemplo, conforme descrito em Altschul S.F. (1993) J Mol Evol 36:290-300; Altschul, S, F et al (1990) J Mol Biol 215:403-10.
[110] O software para realizar análise BLAST está publicamente disponível através do National Centre for Biotechnology Information (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/). Este algoritmo envolve a primeira identificação do par de sequência de alta pontuação (HSPs) identificando palavras curtas de comprimento W na sequência de consulta que corresponde tanto como satisfaz algumas pontuações T de limite de valor positivo quando alinhadas com uma palavra do mesmo comprimento em uma sequência de dados. T é citado como o limite de pontuação de palavra vizinha (Altschul et al, acima). Estes primeiros acertos de palavra vizinhas agem como sementes para iniciar buscar para encontrar HSPs que as contenham. Os acertos de palavras são estendidos em ambas as direções ao longo de cada sequência tão longe quanto a pontuação do alinhamento cumulativa possa ser aumentada. Extensões para os acertos de palavra em cada direção são interrompidas quando: a pontuação do alinhamento cumulativo vai a zero ou abaixo, devido ao acúmulo de um ou mais alinhamentos
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 99/145
29/52 de resíduo de pontuação negativa; ou o final de ambas as sequências é alcançado. Os parâmetros W, T e X de algoritmo BLAST determinam a sensibilidade e a velocidade do alinhamento. O programa BLAST usa como padrão um comprimento de palavra (W) de 11, a matriz de pontuação BLOSUM62 (consulte Henikoff e Henikoff (1992) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 89:10915-10919) alinhamentos (B) de 50, expectativa (E) de 10, M = 5, N = 4, e uma comparação de ambas as fitas.
[111] O algoritmo BLAST realiza uma análise estatística da similaridade entre duas sequências; consulte, por exemplo, Karlin e Altschul (1993) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 90:5873-5787. Uma medida de similaridade fornecida pelo algoritmo BLAST é a menor probabilidade de soma (P(N)), que fornece uma indicação da probabilidade pela qual uma correspondência entre duas sequências de nucleotideos ou de aminoácidos ocorra ao acaso. Por exemplo, uma sequência é considerada similar a outra sequência se a menor probabilidade de soma em comparação da primeira sequência para a segunda sequência for menor que cerca de 1, preferencialmente menor que cerca de 0,1, mais preferencialmente pelo menos cerca de 0,01 e, com a máxima preferência, menor que cerca de 0,001.
[112] Em uma realização, uma variante sequência pode variar das sequências específicas dadas na listagem de sequências em virtude da redundância do código genético. O código do DNA tem 4 resíduos de ácidos nucleicos principais (A, T, C e G) e usa os mesmos para “soletrar” códons de três letras que representam os aminoácidos das proteínas codificadas pelos genes de um organismo. A sequência linear de códons ao longo da molécula de DNA é traduzida para a sequência linear de aminoácidos na(s) proteína(s) codificada(s) por esses genes. O código é altamente degenerado, com 61 códons que codificam os 20 aminoácidos naturais e 3 códons que representam sinais de “parada”. Dessa forma, a maioria dos aminoácidos são codificados por
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 100/145
30/52 mais de um códon, na realidade vários são codificados por quatro ou mais códons diferentes. Um polinucleotídeo variante da invenção pode, portanto, codificar a mesma sequência de polipeptídeos que outra sequência de polinucleotídeos da invenção, mas pode ter uma sequência de ácido nucleico diferente devido ao uso de diferentes códons para codificar os mesmos aminoácidos. Os códons podem ser otimizados de modo a aumentar os níveis de expressão das proteínas codificadas nas células-alvo, em comparação se a sequência inalterada é usada.
[113] O vírus da invenção preferencialmente compreende GMCSF. A sequência do gene codificador de GM-CSF pode ser códon-otimizada, de modo a aumentar os níveis de expressão das respectivas proteínas nas células-alvo, em comparação se a sequência inalterada é usada.
[114] O vírus da invenção preferencialmente compreende um ou mais moléculas que ativam a via coestimulatória imune e/ou um ou mais genes que codificam uma molécula que ativa a via coestimulatória imune. Moléculas que ativam a via coestimulatória imune incluem proteínas e moléculas de ácido nucleico (por exemplo, sequências de aptâmero). Exemplos de moléculas que ativam a via coestimulatória imune incluem ligante CD40, ligante GITR, ligante 4-1-BB, ligante 0X40, ligante ICOS, ligante flt3, TL1A, ligante CD30, CD70 e anticorpos de cadeia única que direcionam os respectivos receptores para essas moléculas (CD40, GITR, 4-1-BB, 0X40, ICOS, flt3, DR3, CD30, CD27).
[115] Ativadores da via coestimulatória imune incluem ligantes mutantes ou tipo selvagem, solúveis, secretados e/ou ligados à membrana, e anticorpos agonistas incluindo anticorpos de cadeia única. Os vírus da invenção preferencialmente codificam um ou mais dentre CD40L, ICOSL, 4-1-BBL, GITRL ou OX40L.
[116] Os vírus da invenção podem codificar uma ou mais moléculas que ativam a via coestimulatória imune, preferencialmente 1,2, 3 ou
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 101/145
31/52 moléculas que ativam a via coestimulatória imune, mais preferencialmente 1 ou 2 moléculas que ativam a via coestimulatória imune.
[117] A sequência do gene codificador da molécula de ativação coestimulatória imune pode ser códon-otimizada, de modo a aumentar os níveis de expressão da(s) respectiva(s) proteína(s) nas células-alvo, em comparação se a sequência inalterada é usada.
[118] O vírus da invenção pode compreender um ou mais genes heterólogos adicionais, em adição a um inibidor de CTLA-4 e GM-CSF e/ou uma molécula que ativa a via coestimulatória imune. Em uma realização preferencial, o vírus pode ainda compreender uma proteína fusogênica como GALVR-.
[119] A proteína fusogênica pode ser qualquer proteína heteróloga capaz de promover a fusão de uma célula infectada com o vírus da invenção para outra célula. Uma proteína fusogênica, preferencialmente uma glicoproteína viral tipo selvagem ou modificada (isto é, modificada para aumentar suas propriedades fusogênicas), é uma proteína que é capaz de induzir a célula à fusão celular (formação de sincicia) de células na qual ela é expressa. Exemplos de glicoproteínas fusogênicas incluem VSV-G, sincitina-1 (do retrovirus endógeno humano-W (HERV-W)) ou sincitina-2 (de HERVFRDE1), F de paramixovirus SV5, H do vírus de sarampo, F do vírus de sarampo, RSV-F, a glicoproteína de um retrovirus ou lentivírus, como do vírus da leucemia de macaco gibão (GALV), vírus da leucemia murina (MLV), vírus do macaco MasonPfizer (MPMV) e vírus da anemia infecciosa equina (EIAV) com o peptídeo R transmembrana removido (versões R-). Em uma realização preferencial, a proteína fusogênica é de GALV e tem o peptídeo R- removido (GALV-R-).
[120] O vírus da invenção pode opcionalmente compreender múltiplas cópias do gene que codifica proteína fusogênica, preferencialmente 1 ou 2 cópias. O vírus pode compreender duas ou mais proteínas fusogênicas diferentes, incluindo qualquer uma das proteínas fusogênicas listadas acima.
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 102/145
32/52 [121] A proteína ou proteínas fusogênicas opcionalmente expressas por um vírus da invenção pode ser idêntica a uma proteína que ocorre naturalmente, ou pode ser uma proteína modificada.
[122] O gene que codifica a proteína (gene fusogênico) pode ter uma sequência de ácido nucleico que ocorre naturalmente ou uma sequência modificada. A sequência do gene fusogênico pode ser, por exemplo, modificada para aumentar as propriedades fusogênicas da proteína codificada, ou para fornecer otimização de códon e, portanto, aumentar a eficiência de expressão da proteína codificada.
[123] |A invenção também fornece um vírus, como um poxvirus ou um HSV, preferencialmente HSV1, que expressa pelo menos três genes heterólogos, em que cada um dos três genes heterólogos é dirigido por um promotor diferente selecionado a partir do promotor de CMV, promotor de RSV, promotor de Ef 1 a, promotor de SV40 e um promotor LTR retroviral. O vírus pode, por exemplo, expressar quatro genes heterólogos, em que cada um dos quatro genes heterólogos é dirigido por um promotor diferente selecionado a partir do promotor de CMV, promotor de RSV, promotor de EF1a e um promotor LTR retroviral. O LTR retroviral é preferencialmente de MMLV. Os genes heterólogos podem ser terminados por sequências de poliadenilação. As sequências de poliadenilação podem ser as mesmas ou diferentes. Preferencialmente cada gene heterólogo é terminada por uma sequência de poliadenilação diferente, que é preferencialmente selecionada a partir das sequências de poliadenilação de BGH, SV40, HGH e RBG.A invenção também fornece um vírus, como um poxvirus ou um HSV, preferencialmente HSV1, que expressa pelo menos três genes heterólogos, em que cada um dos três genes heterólogos é terminada por uma sequência de poliadenilação diferente selecionada a partir das sequências de poliadenilação de BGH, SV40, HGH e RBG. O vírus pode, por exemplo, expressar quatro genes heterólogos terminados por cada uma das sequências
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 103/145
33/52 de poliadenilação de BGH, SV40, HGH e RBG, respectivamente.
[124] Pelo menos três os genes heterólogos podem, por exemplo, ser selecionados a partir um inibidor de CTLA-4, um gene que codifica GM-CSF, um gene que codifica uma molécula que ativa a via coestimulatória imune e um gene fusogênico. Exemplos dos três genes heterólogos são um inibidor de CTLA-4, um gene que codifica GM-CSF e um gene que codifica uma molécula que ativa a via coestimulatória imune; um inibidor de CTLA-4, um gene que codifica GM-CSF e um gene fusogênico; e um inibidor de CTLA-4, um gene que codifica uma molécula que ativa a via coestimulatória imune e um gene fusogênico. Os quatro genes heterólogos podem, por exemplo, ser um inibidor de CTLA-4, um gene que codifica GM-CSF, um gene que codifica uma molécula que ativa a via coestimulatória imune e um gene fusogênico. Os três ou quatro genes heterólogos podem compreender, por exemplo, dois ou mais genes que codificam moléculas que ativam a via coestimulatória imune e/ou dois ou mais genes fusogênicos.
[125] Em uma realização, os promotores que controlam a expressão dos três genes heterólogos são os promotores de CMV, RSV e MMLV. Por exemplo, um vírus preferencial pode compreender um gene GM-CSF sob o controle de um promotor de CMV, um gene GALV sob o controle de um promotor RSV e um inibidor de CTLA-4 sob o controle de um promotor de MMLV.
[126] Em uma realização, a sequência de poliadenilação terminadora de pelo menos três genes heterólogos são sequências de poliadenilação de SV40, BGH e RBG e que controla a expressão dos três genes heterólogos são os promotores de CMV, RSV e MMLV. Por exemplo, um vírus preferencial pode compreender um gene GM-CSF terminado por uma sequência de poliadenilação de BGH, um gene GALV terminado por uma sequência de poliadenilação de SV40 e um inibidor de CTLA-4 terminado por uma sequência poliadenilação de RGB.
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 104/145
34/52 [127] Qualquer combinação dos vários promotores e de poliadenilação podem ser usados com qualquer um dos genes heterólogos. Por exemplo, um vírus preferencial pode compreender um gene GM-CSF sob o controle de um promotor de CMV e terminado por uma sequência de poliadenilação de BGH, um gene GALV sob o controle de um promotor RSV e terminado por uma sequência de poliadenilação de SV40, e um inibidor de CTLA4 sob o controle de um promotor de MMLV terminado por uma sequência de poliadenilação de RGB.
Produção de Vírus [128] Os vírus da invenção são construídos com o uso de métodos bem conhecidos na técnica. Por exemplo, plasmídeos (para vírus menores e vírus com RNA competente de genoma múltiplo e único) ou BACs (para vírus com DNA maior incluindo vírus herpes) que codificam o genoma a viral a ser empacotado, incluindo os genes que codificam as moléculas fusogênicas e estimulatórias imunes sob o controle regulador adequado, podem ser construídos por técnicas de biologia molecular padrão e transfectados para células permissivas a partir das quais os vírus recombinantes podem ser recuperados.
[129] Alternativamente, em uma realização preferencial, os plasmídeos contendo regiões do DNA flanqueando o sítio de inserção pretendido podem ser construídas e, em seguida, cotransfectados em células permissivas com DNA genômico viral, de modo que ocorra a recombinação homóloga entre as regiões que flanqueiam o sítio de inserção alvo no plasmídeo e as mesmas regiões no vírus parental. Os vírus recombinantes podem então ser selecionados e purificados através da perda ou adição de uma função inserida ou deletada pelo plasmídeo usado para modificação, por exemplo, inserção ou deleção de um gene marcador como GFP ou lacZ do vírus parental no sítio de inserção pretendido. Em uma realização com a máxima preferência, o sítio de inserção é
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 105/145
35/52 o locus ICP34.5 de HSV e, portanto, o plasmideo usado para manipulação contém sequências de HSV que flanqueiam este sítio de inserção, entre as quais estão um cassete de expressão que codifica GM-CSF e a molécula que ativa a via coestimulatória imune. Neste caso, o vírus parental pode conter um cassete que codifica GFP no lugar de ICP34.5 e placas de vírus recombinantes são selecionadas através da perda de expressão de GFP. Em uma realização com a máxima preferência, o gene US11 de HSV também é expresso como um gene IE. Isso pode ser realizado através da deleção da região codificadora de ICP47, ou por outros meios.
[130] O inibidor de CTLA-4, e opcionalmente as sequências codificadoras de GM-CSF e as sequências codificadoras da molécula que ativa a via coestimulatória imune e/ou sequência codificadora da proteína adicional, como uma sequência que codifica uma proteína fusogênica como GALVR-, são inseridas no genoma viral sob controle regulatório apropriado. Este pode estar sob o controle regulatório de promotores naturais das espécies de vírus usados da invenção, dependendo da espécie e local de inserção ou, de preferência, sob o controle de promotores heterólogos. Promotores heterólogos adequados incluem promotores de mamíferos, como o promotor IEF2a ou o promotor de actina. Mais preferenciais são promotores virais fortes como o promotor IE de CMV, o LTR de RSV, o LTR do MMLV, outros promotores LTR retrovirais, ou promotores derivados de SV40. Preferencialmente cada gene exógeno (por exemplo, que codifica GM-CSF e a molécula que ativa a via coestimulatória imune) estará sob o controle do promotor separado, mas pode também ser expresso a partir de um único transcrito de RNA, por exemplo, através da inserção de sítios internos de entrada do ribossomo (IRES) entre sequências codificadoras de proteínas. O RNA derivado de cada promotor é tipicamente terminado com o uso de uma sequência de poliadenilação (por exemplo, sequências de mamíferos, como sequência de poliA de hormônio de crescimento
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 106/145
36/52 bovino ou humano (BGH), sequências de poliadenilação sintéticas, sequência de poliadenilação de betaglobina de coelho ou sequências virais como sequência de poliadenilação inicial ou final de SV40).
[131] Cada um dos genes heterólogos no vírus está tipicamente sob o controle de um promotor. Os promotores que controlam a expressão dos genes heterólogos podem ser os mesmos ou diferentes. Por exemplo, o antiCTLA-4, e um ou mais dentre GM-CSF, gene fusogênico e gene codificador de molécula que ativa a via coestimulatória imune podem estar, cada um, sob o controle do promotor de CMV, promotor de RSV, promotor de EF1a, promotor de SV40 ou um promotor LTR retroviral. Alternativamente, por exemplo, o antiCTLA-4 pode estar sob o controle de um promotor LTR retroviral como o promotor de MMLV, o gene GM-CSF pode estar sob o controle do promotor de CMV e/ou o gene fusogênico, como GALVR- pode estar sob o controle do promotor de RSV.
Composições Farmacêuticas [132] A invenção fornece uma composição farmacêutica que compreende o vírus e um carreador ou diluente farmaceuticamente aceitável. Carreadores e diluentes adequados incluem soluções salinas isotônicas, por exemplo, solução salina tamponada com fosfato. A composição ainda pode compreender outros constituintes como açúcares ou proteínas para aprimorar as propriedades como estabilidade do produto. De maneira alternativa, uma formulação liofilizada pode ser usada, a qual é reconstituída em um carreador ou diluente farmaceuticamente aceitável antes do uso.
[133] A escolha do carreador, se necessário, é frequentemente uma função da rota de distribuição da composição. Dentro desta invenção, as composições podem ser formuladas para qualquer rota e meios de administração adequados. Carreadores ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis são aqueles usados em composições adequadas para administração
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 107/145
37/52 intratumoral, administração intravenosa/intra-arterial, administração no cérebro ou administração em uma cavidade do corpo (por exemplo, bexiga, cavidade pleural ou por administração intraperitoneal). A composição pode ser administrada de qualquer forma adequada, preferencialmente como um líquido.
[134] A presente invenção também fornece um produto de fabricação que compreende um vírus da invenção em um frasco, ampola ou seringa estéril.
Usos Médicos/Métodos para Tratamento [135] A invenção fornece o vírus da invenção para uso no tratamento do corpo humano ou animal por terapia, particularmente para uso em um método para tratar câncer. O câncer é tipicamente em um mamífero, preferencialmente em um humano. O vírus mata as células tumorais infectadas por lise e fazendo com que as células tumorais infectadas se fundam umas com as outras. O vírus da invenção também obtém uma resposta imune antitumoral sistêmica, aumentada através da expressão do inibidor de CTLA-4, e opcionalmente GM-CSF e a molécula que ativa a via coestimulatória imune, que também matam células cancerosas.
[136] A invenção também fornece um método para tratar câncer, o método compreendendo administrar uma quantidade terapeuticamente efetiva do vírus da invenção a um indivíduo com necessidade do mesmo.
[137] A invenção adicionalmente fornece o uso do vírus da invenção na fabricação de um medicamento para tratar câncer.
[138] O vírus da invenção é particularmente útil no tratamento de qualquer tumor sólido, incluindo qualquer adenocarcinoma, carcinoma, melanoma ou sarcoma. Por exemplo, o vírus da invenção é útil no tratamento de cânceres de cabeça e pescoço, próstata, mama, ovário, pulmão, fígado, endométrio, bexiga, vesícula biliar, pâncreas, cólon, rim, estômago/esôfago gástrico ou cervical, mesotelioma, melanoma ou outro câncer de pele, linfoma,
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 108/145
38/52 glioma ou outro câncer do sistema nervoso, ou sarcomas, como sarcoma de tecido macio.
[139] O vírus da invenção pode ser usado para tratar tumores malignos, incluindo tumores metastasiados a partir do tumor original. Nesta realização, o vírus pode ser administrado ao tumor primário ou a um ou mais tumores secundários.
[140] O vírus da invenção pode ser administrado em combinação com outros agentes terapêuticos, incluindo quimioterapia, terapia direcionada, imunoterapia (incluindo bloqueio de pontos de controle imune, isto é, administração de um ou mais antagonista de uma via coestimulatória imune, e/ou um ou mais agonistas de uma via coestimulatória imune) e/ou em combinação com radioterapia e/ou em combinação com qualquer combinação dos mesmos. O agente terapêutico é preferencialmente um agente anticâncer.
[141] O vírus da invenção pode ser administrado em combinação com um segundo vírus, como um segundo vírus oncolítico.
[142] Por exemplo, o agente terapêutico pode compreender um imunógeno (incluindo um antígeno recombinante ou que ocorre naturalmente, incluindo esse antígeno ou combinação de antígenos distribuídos como DNA ou RNA na qual ele/eles são codificados), para estimular ainda uma resposta imune, como uma resposta imune celular ou humoral, para células tumorais, particularmente neoantígenos tumorais. O agente terapêutico podem ser um agente destinado a aumentar ou potencializar uma resposta imune, como uma citocina, um agente destinado a inibir uma via de ponto de controle imune ou estimular uma via de potencialização imune ou um agente que inibe a atividade de células T reguladoras (Tregs) ou células supressoras derivadas de mieloides (MDSCs).
[143] O agente terapêutico pode ser um agente conhecido para uso em um tratamento terapêutico de câncer existente. O agente terapêutico
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 109/145
39/52 pode ser radioterapia ou um agente quimioterapêutico. O agente terapêutico pode ser selecionado a partir de ciclofosfamida, como agentes similares a alquilantes como cisplatina ou melfalano, alcalóides vegetais e terpenoides como vincristina ou paclitaxel (Taxol), antimetabólitos como 5-fluorouracil, inibidores de topoisomerase tipo I ou II como camptotecina ou doxorrubicina, antibióticos citotóxicos como actinomicina, antraciclinas como epirrubicina, glicocorticoides como triancinolona, inibidores de proteína, síntese de DNA e/ou RNA como metotrexato e dacarbaxina, inibidores de histona desacetilase (HDAC), ou qualquer outro agente de quimioterapia.
[144] O agente terapêutico pode ser um, ou uma combinação dentre: imunoterapêuticos ou imunomoduladores, como agonistas de TLR; agentes que infrarregulam células T reguladoras como ciclofosfamida; ou agentes projetados para bloquear pontos de verificação imunes ou estimular as vias de potencialização imunes, incluindo, mas não se limitando a anticorpos monoclonais, como um inibidor de CTLA-4, um inibidor de PD-1, um inibidor de PD-L1, um inibidor de LAG-3, um inibidor de TIM-3, um inibidor de VISTA, um inibidor da CSF1R, um inibidor de IDO, um inibidor de CEACAM1, um agonista de GITR, um agonista de 4-1-BB, um inibidor de KIR, um inibidor de SLAMF7, um agonista de 0X40, um agonista de CD40, um agonista de ICOS ou um inibidor de CD47. Em uma realização preferencial, o agente terapêutico é um inibidor de CTLA-4 como um anticorpo anti-CTLA-4, um inibidor de PD1, como um anticorpo anti-PD-1 ou um inibidor de PD-L1 como um anticorpo anti-PD-L1. Esses inibidores, agonistas e anticorpos podem ser gerados e testados por métodos padrão conhecidos na técnica.
[145] Agentes imunoterapêuticos também podem incluir anticorpos biespecíficos, células dendríticas baseadas em terapias à base de células, células NK ou células T elaboradas geneticamente como células CAR-T ou células T que expressam receptores de células T elaborados geneticamente.
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 110/145
40/52
Agentes imunoterapêuticos também incluem agentes que direcionam uma mutação genética específica que ocorre em tumores, agentes destinados a induzir respostas imunes aos antígenos tumorais específicos ou combinações de antígenos tumorais, incluindo neoantígenos e/ou agentes destinados a ativar a via de STING/cGAS, TLR ou outra resposta imune inata e/ou via inflamatória, incluindo agentes intratumorais.
[146] Por exemplo, pode ser usado um vírus da invenção: em combinação com dacarbazina, um inibidor de BRAF e/ou bloqueio de PD1 ou PD-L1 para tratar melanoma; em combinação com taxol, doxorrubicina, vinorelbina, ciclofosfamida e/ou gencitabina para tratar câncer de mama; em combinação com 5-fluorouracil e opcionalmente leucovorina, irinoteacano e/ou oxaliplatina para tratar câncer colorretal; em combinação com taxol, carboplatina, vinorelbina e/ou gencitabina, bloqueio de PD-1 ou PD-L1 para tratar câncer de pulmão; em combinação com cisplatina e/ou radioterapia para tratar câncer de cabeça e pescoço.
[147] O agente terapêutico pode ser um inibidor da via de idoleamina 2,3-dioxigenase (IDO). Exemplos de inibidores de IDO incluem epacadostate (INCB024360), 1-metil-triptofano, indoximode (1-metil-Dtriptofano), GDC-0919 ou F001287.
[148] O mecanismo de ação de IDO na supressão de respostas imunes antitumorais também pode suprimir respostas imunes geradas após terapia com vírus oncolítico. A expressão de IDO é induzida pela ativação de receptores toll like (TLR) e interferon-γ, ambos os quais podem resultar da infecção pelo vírus oncolítico. Uma realização do uso da terapia de vírus oncolítico para tratamento de câncer inclui a combinação de um vírus oncolítico, incluindo um vírus que expressa um inibidor de CTLA-4, e opcionalmente GMCSF e/ou uma molécula ou moléculas que ativam a via coestimulatória imune e/ou uma ou mais sequências codificadoras da proteína adicional, como uma
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 111/145
41/52 sequência que codifica uma proteína fusogênica como GALVR-, com um inibidor da via de IDO e opcionalmente um antagonista adicional de uma via coinibitória imune e/ou um ou mais agonistas de uma via coestimulatória imune, incluindo as que direcionam PD-1 e/ou PD-L1.
[149] Quando um agente terapêutico e/ou a radioterapia são usados em conjunto com um vírus da invenção, a administração do vírus e o agente terapêutico e/ou a radioterapia pode ser ao mesmo tempo ou separada. A composição da invenção pode ser administrada antes, juntamente ou após o agente terapêutico ou radioterapia. O método para tratar câncer pode compreender múltiplas administrações do vírus da invenção e/ou do agente terapêutico e/ou radioterapia. Em realizações preferenciais, no caso de combinação com bloqueio de pontos de controle imune ou outros agentes de potencialização imune, o vírus da invenção é administrado uma vez ou várias vezes antes da administração concomitante do bloqueio de pontos de controle imune ou outro agente ou agentes potencialização imune, posteriormente ou concomitante com a administração do bloqueio de pontos de controle imune ou outro agente ou agentes de potencialização imune sem administração prévia do vírus da invenção.
[150] O vírus da invenção pode ser administrado a um sujeito por uma rota adequada. Tipicamente, um vírus da invenção é administrado por injeção intratumoral direta. A injeção intratumoral inclui injeção direta na pele superficial, subcutânea ou tumores nodais, e injeção guiada por imagem (incluindo CT, MRI ou ultrassom) em depósitos mais profundos ou mais difícil de localizar, incluindo órgãos viscerais e em outras partes. O vírus pode ser administrado em uma cavidade do corpo, por exemplo, na cavidade pleural, bexiga ou por administração intraperitoneal. O vírus pode ser injetado em um vaso sanguíneo, preferencialmente um vaso sanguíneo que supre um tumor.
[151] Agentes terapêuticos que podem ser combinados com um
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 112/145
42/52 vírus da invenção podem ser administradas a um sujeito humano ou animal in vivo com o uso de uma variedade de rotas e técnicas conhecidas. Por exemplo, a composição pode ser fornecida como uma solução injetável, suspensão ou emulsão e administrada por via parenteral, subcutânea, oral, epidérmica, intradérmica, intramuscular, interarterial, intraperitoneal, intravenosa, com o uso de uma agulha e seringa convencionais, ou com o uso de um sistema de injeção de jato de líquido. A composição pode ser administrada topicamente à pele ou tecido da mucosa, como por via nasal, intratraqueal, intestinal, sublingual, retal ou vaginal, ou fornecida como uma pulverização finamente dividida adequada para administração respiratória ou pulmonar. Em realizações preferenciais, as composições são administradas por infusão intravenosa, por via oral ou diretamente em um tumor.
[152] O vírus e/ou agente terapêutico podem ser administrados a um sujeito em uma quantidade que é compatível com a composição de dosagem que será terapeuticamente efetiva. A administração do vírus da invenção é para um “propósito terapêutico”. Como usado no presente pedido, o termo “terapêutico” ou “tratamento” inclui qualquer um ou mais dos seguintes como seu objetivo: a prevenção de qualquer ocorrência de metástase ou de metástases adicional; a redução ou eliminação de sintomas; a redução ou eliminação completa de um tumor ou câncer, um aumento no tempo para progressão do câncer do paciente; um aumento no tempo de recidiva após o tratamento; ou a um aumento no tempo de sobrevida.
[153] O tratamento terapêutico pode ser dado aos cânceres de Estágio I, II, III ou IV, Preferencialmente Estágio II, III ou IV, mais preferencialmente Estágio III ou IV, pré- ou pós-intervenção cirúrgica (isto é, após recorrência ou remoção incompleta de tumores após cirurgia), preferencialmente antes de qualquer intervenção cirúrgica (tanto por ressecção de doença primária ou recorrente/metastática), ou após recorrência após cirurgia
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 113/145
43/52 ou após remoção cirúrgica incompleta da doença, isto é, enquanto permanece o tumor residual.
[154] O tratamento terapêutico pode ser realizado após injeção direta da composição do vírus no tecido alvo, que pode ser no tumor, em uma cavidade do corpo ou em um vaso sanguíneo. Como um guia, a quantidade de vírus administrada, é no caso de HSV na faixa a partir de 104 a 1010 pfu, preferencialmente de 105 a 109 pfu. No caso de HSV, uma dose inicial mais baixa (por exemplo, 104 a 107 pfu) pode ser dada a pacientes para soroconversão em pacientes que são soronegativos para HSV e estimular a imunidade naqueles que são soropositivos, seguido por uma dose maior, em seguida, sendo dada posteriormente (por exemplo, 106 a 109 pfu). Tipicamente, até 20 mL de uma composição farmacêutica que consiste essencialmente no vírus e um carreador ou diluente adequado farmaceuticamente aceitável podem ser usados para injeção direta em tumores, ou até 50 mL para administração em uma cavidade do corpo (que podem estar sujeitos a diluição adicional em um diluente apropriado antes da administração) ou na corrente sanguínea. No entanto, para algumas aplicações de terapia oncolítica, volumes maiores ou menores também podem ser usados, dependendo do tumor e da rota ou local de administração.
[155] As rotas de administração e doses descritas são destinadas apenas como orientação, visto que um técnico no assunto será capaz de determinar rapidamente a melhor rota de administração e dosagem. A dosagem pode ser determinada de acordo com vários parâmetros, especialmente de acordo com a localização do tumor, o tamanho do tumor, a idade, o peso e a condição do paciente a ser tratado e a rota de administração. Preferencialmente, o vírus é administrado por injeção direta no tumor ou em uma cavidade do corpo. O vírus também pode ser administrado por injeção em um vaso sanguíneo. A melhor rota de administração, dependerá da localização e tamanho do tumor. Podem ser necessárias doses múltiplas para se obter um efeito imunológico ou
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 114/145
44/52 clínico, que, se necessário, será tipicamente administrada entre 2 dias a 12 semanas de intervalo, preferencialmente de 3 dias a 3 semanas de intervalo. Repetições de doses até 5 anos ou mais podem ser dadas, preferencialmente por até um mês a dois anos dependendo da velocidade de resposta do tipo de tumor a ser tratado e a resposta de um paciente particular, e qualquer terapia de combinação que também pode estar sendo dado.
[156] Os Exemplos a seguir ilustram a invenção.
Exemplo 1
Construção de um Vírus da Invenção [157] A espécie de vírus usada para exemplificar a invenção é o HSV, especificamente o HSV1.
[158] Os diagramas dos plasmídeos usados são mostrados na Figura 2. Os diagramas dos vírus são mostrados na Figura 1. Todos os vírus foram construídos o uso da linhagem RH018A de HSV1. Os plasmídeos usados para construção de vírus foram gerados por uma combinação de síntese e subclonagem de gene, conduzida pela Genscript Inc.
[159] Vírus que expressam anti-CTLA4 de camundongo juntamente com GM-CSF de camundongo e GALV foram construídos por cotransfecção de Plasmídeo 77 com DNA de Vírus 16, de modo a inserir GFP no Vírus 16 por seleção de placas que expressam GFP para dar Vírus 25. A GFP foi inativada do Vírus 25 por cotransfecção de DNA de Vírus 25 com Plasmídeo 119. Isto resultou em Vírus 27.
[160] Vírus que expressam anti-CTLA4 humano juntamente com GM-CSF humano e GALV foram construídos por cotransfecção de Plasmídeo 78 com DNA de Vírus 17, de modo a inserir GFP no Vírus 17 por seleção de placas que expressam GFP para dar Vírus 29. A GFP foi inativada do Vírus 29 por cotransfecção de DNA de Vírus 29 com Plasmídeo 122. Isto resultou em Vírus 31.
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 115/145
45/52 [161] Vírus que expressam anti-CTLA-4 de camundongo e ligantes coestimulatórios juntamente com GM-CSF de camundongo e GALV foram construídos por cotransfecção de um plasmídeo que codifica GFP dirigido por um promotor de SV40 entre o GM-CSF de camundongo e as sequências codificadoras de anti-CTLA-4 de camundongo com Vírus 27. A GFP foi então inativada do vírus resultante com um plasmídeo que codifica cada um dos ligantes coestimulatórios de camundongo individuais no lugar de GFP.
[162] Os vírus que expressam anti-CTLA-4 humano e ligantes coestimulatórios juntamente com GM-CSF humano e GALV foram construídos por cotransfecção de um plasmídeo que codifica GFP dirigida por um promotor de SV40 entre o GM-CSF humano e sequências codificadoras anti-CTLA-4 humano com Vírus 31. A GFP foi então inativada do vírus resultante com um plasmídeo que codifica cada um dos ligantes coestimulatórios humanos individuais no lugar de GFP.
[163] A Figura 4 mostra um Western blot que demonstra expressão de anti-CTLA-4 de camundongo de Vírus 27.
Exemplo 2 O Efeito da Expressão Combinada de GALV, GM-CSF e Anti-CTLA4 a Partir de um Vírus Oncolítico [164] A utilidade da invenção é demonstrada da maneira a seguir. Células A20 são administradas em ambos os flancos de camundongos Balb/c e os tumores A 20 são deixados crescer até aproximadamente 0,5 cm de diâmetro.
[165] Os seguintes tratamentos são, em seguida, administrados para grupos de camundongos, em um flanco de cada camundongo somente (tumor direito) 3 vezes por semana por uma semana:
pL de veículo (1 grupo);
pL de 106 pfu/mL do HSV somente com GM-CSF de camundongo e GALVR- inserido (Vírus 16);
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 116/145
46/52 μΙ_ de 106 pfu/mL do HSV com GALVR-, GM-CSF de camundongo e o anticorpo anti-CTLA-4 de camundongo inserido (Virus 27);
[166] Os efeitos sobre o crescimento tumoral são então observados por até um mês. A dose de vírus usada foi de 5 x 104 pfu (50 uL de 1 x 106 pfu/mL em cada caso), dada três vezes durante uma semana. Este nível de dose de vírus é subterapêutico para tumores não injetados para vírus 16, o que permite que os benefícios da distribuição das moléculas adicionais codificadas pelo vírus 27 sejam claramente vistos. As Figuras 5 e 6 mostram o controle tumoral superior e o encolhimento em tumores não injetados com o vírus que expressa anti-CTLA-4 em comparação com o vírus 16, que não expressa CTLA-4.
Exemplo 3
O Efeito da Expressão Combinada de GALV, GM-CSF e Anti-CTLA4 a Partir DE UM VÍRUS ONCOLÍTICO COM ANTI-PD-1 [167] Células A20 são administradas em ambos os flancos de camundongos Balb/c e os tumores A 20 são deixados crescer até aproximadamente 0,5 cm de diâmetro.
[168] Os seguintes tratamentos são, em seguida, administrados para grupos de camundongos (10 por grupo), em um flanco de cada camundongo somente 3 vezes por semana por uma semana:
pL de veículo;
Anti-PD1 de camundongo intraperitoneal (Bioxcell RMP-114 10 mg/kg a cada três dias);
pL de 107 pfu/mL do HSV com GALVR-, GM-CSF de camundongo e o anticorpo anti-CTLA-4 de camundongo inserido (Vírus 27);
pL de 107 pfu/mL, do HSV com GALVR-, GM-CSF de camundongo e o anti-CTLA-4 de camundongo inserido (Vírus 27) juntamente com anti-PD1 de camundongo intraperitoneal (10 mg/kg a cada três dias) (3
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 117/145
47/52 grupos).
[169] Os efeitos sobre o crescimento tumoral são então observados por até 80 dias. Controle tumoral superior e encolhimento em ambos os tumores injetado e não injetado quando o tratamento com o vírus é tratamento combinado com anti-PD1. Estes dados são mostrados na Figura 7.
Exemplo 4
O Efeito da Expressão Combinada de GALV, GM-CSF e Anti-CTLA4 Humano a Partir de um Vírus Oncolítico Sozinho e em Combinação com Anti-PD-1 [170] Células MC38 são administradas em ambos os flancos de camundongos C57BL/6 elaborados geneticamente por edição de gene para expressar CTLA-4 humano ao invés de camundongo. Isso torna os camundongos suscetíveis a anticorpos anti-CTLA-4 humano como ipilimumabe. Os tumores MC38 são deixados crescer até aproximadamente 0,5 cm de diâmetro.
[171] Os seguintes tratamentos são, em seguida, administrados para grupos de camundongos (10 por grupo), em um flanco de cada camundongo somente 3 vezes por semana por duas semanas:
pL de veículo;
pL de 108 pfu/mL de Vírus 17 (isto é, que expressa hGMCSFe GALV);
pL de 108 pfu/mL de Vírus 31 (isto é, que expressa hGMCSF, GALV e anti-CTLA-4 humano);
pL de 108 pfu/mL de Vírus 17 juntamente com anti-PD1 de camundongo intraperitoneal (10 mg/kg a cada três dias);
pL de 108 pfu/mL de Vírus 31 juntamente com anti-PD1 de camundongo intraperitoneal (10 mg/kg a cada três dias).
[172] Os efeitos sobre o crescimento tumoral são então observados por até 35 dias. Observou-se controle tumoral superior e
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 118/145
48/52 encolhimento em tumores injetados com o vírus que expressa anti-CTLA-4 humano, que é ainda melhorado com tratamento combinado com anti-PD1. É observado controle tumoral superior e encolhimento em tumores não injetados quando o tratamento com qualquer um dos vírus é combinado com tratamento anti-PD1. O aprimoramento é mais acentuado para o vírus que expressa anti CTLA4. Estes dados são mostrados na Figura 8.
Exemplo 5
O Efeito da Expressão Combinada de GALV, GM-CSF e Anti-CTLA4 a Partir DE UM VÍRUS ONCOLÍTICO COM ANTI-PD-1 [173] Células A20 são administradas em ambos os flancos de camundongos Balb/c e os tumores A 20 são deixados crescer até aproximadamente 0,5 cm de diâmetro.
[174] Os seguintes tratamentos são, em seguida, administrados para grupos de camundongos (10 por grupo), em um flanco de cada camundongo somente 3 vezes por semana por duas semanas:
pL de veículo (1 grupo);
Anti-PD1 de camundongo intraperitoneal (Bioxcell RMP-114 10 mg/kg a cada três dias);
pL de 105 pfu/mL, 106 pfu/mL ou 107 pfu/mL do HSV somente com GM-CSF de camundongo e GALVR- inserido (3 grupos);
pL de 105 pfu/mL, 106 pfu/mL ou 107 pfu/mL do HSV com GALVR-, GM-CSF de camundongo e o anti-CTLA-4 de camundongo inserido juntamente com anti-PD1 de camundongo intraperitoneal (10 mg/kg a cada três dias) (3 grupos);
pL de 105 pfu/mL, 106 pfu/mL ou 107 pfu/mL do HSV somente com GM-CSF de camundongo e GALVR- inserido junto com anti-PD1 de camundongo (10 mg/kg a cada três dias) (3 grupos);
pL de 105 pfu/mL, 106 pfu/mL ou 107 pfu/mL do HSV com
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 119/145
49/52
GALVR-, GM-CSF de camundongo e o anti-CTLA-4 de camundongo inserido juntamente com anti-PD1 de camundongo intraperitoneal (10 mg/kg a cada três dias) (3 grupos).
[175] Os efeitos sobre o crescimento tumoral são então observados por até um mês. Observou-se controle tumoral superior e encolhimento em ambos os tumores injetados e não injetados com o vírus que expressa anti-CTLA-4, que é ainda melhorado com tratamento combinado com anti-PD1, em comparação a outros grupos é observado, incluindo através de uma curva de dose-resposta aprimorada.
Exemplo 6
O Efeito da Expressão Combinada de GALV, GM-CSF e Anti-CTLA4 Humano a Partir de um Vírus Oncolítico Sozinho e em Combinação com Anti-PD-1 [176] Células MC38 são administradas em ambos os flancos de camundongos C57BL/6 elaborados geneticamente por edição de gene para expressar CTLA-4 humano ao invés de camundongo. Isso torna os camundongos suscetíveis a anticorpos anti-CTLA-4 humano como ipilimumabe. Os tumores MC38 são deixados crescer até aproximadamente 0,5 cm de diâmetro.
[177] Os seguintes tratamentos são, em seguida, administrados para grupos de camundongos (10 por grupo), em um flanco de cada camundongo somente 3 vezes por semana por duas semanas:
pL de veículo (1 grupo);
Anti-PD1 de camundongo intraperitoneal (Bioxcell RMP-114 10 mg/kg a cada três dias);
pL de 105 pfu/mL, 106 pfu/mL ou 107 pfu/mL do HSV somente com GM-CSF de camundongo e GALVR- inserido (3 grupos);
pL de 105 pfu/mL, 106 pfu/mL ou 107 pfu/mL do HSV com GALVR-, GM-CSF de camundongo e o anti-CTLA-4 de camundongo inserido
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 120/145
50/52 juntamente com anti-PD1 de camundongo intraperitoneal (10 mg/kg a cada três dias) (3 grupos);
pL de 105 pfu/mL, 106 pfu/mL ou 107 pfu/mL do HSV somente com GM-CSF de camundongo e GALVR- inserido junto com anti-PD1 de camundongo (10 mg/kg a cada três dias) (3 grupos);
μΙ_ de 105 pfu/mL, 106 pfu/mL ou 107 pfu/mL do HSV com GALVR-, GM-CSF de camundongo e o anti-CTLA-4 de camundongo inserido juntamente com anti-PD1 de camundongo intraperitoneal (10 mg/kg a cada três dias) (3 grupos).
[178] Os efeitos sobre o crescimento tumoral são então observados por até um mês. Observou-se controle tumoral superior e encolhimento em ambos os tumores injetados e não injetados com o vírus que expressa anti-CTLA-4, que é ainda melhorado com tratamento combinado com anti-PD1, em comparação a outros grupos é observado, incluindo através de uma curva de dose-resposta aprimorada.
Exemplo 7
O Efeito de Expressão Combinada de GALV. GM-CSF, Anti-CTLA4 e uma Molécula de Ativação da Via Coestimulatória Imune de um Vírus Oncolítico [179] O experimento no Exemplo 3 acima é repetido, mas os camundongos são dosados com o vírus que expressa adicionalmente os ligantes da via coestimulatória imune bem como que expressam GALV, mGM-CSF e antiCTLA4.
[180] Mais especificamente, os grupos de camundongos receberam:
(1) Veículo;
(2) Anti-PD1 de camundongo intraperitoneal;
(3) HSV com mGM-CSF, GALVR- e anti-CTLA4 inserido como no Exemplo 2;
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 121/145
51/52 (4) HSV com mGM-CSF, GALVR-, anti-CTLA4 e CD4OL de camundongo inserido;
(5) HSV com mGM-CSF, GALVR-, anti-CTLA4 e 4-1 BBL de camundongo inserido;
(6) HSV com mGM-CSF, GALVR-, anti-CTLA4 e GITRL de camundongo inserido;
(7) HSV com mGM-CSF, GALVR-, anti-CTLA4 e OX40L de camundongo inserido;
(8) HSV com mGM-CSF, GALVR-, anti-CTLA4 e ICOSL de camundongo inserido;
(9) HSV com mGM-CSF, GALVR- e anti-CTLA4 inserido como no Exemplo 2, juntamente com anti-PD1 intraperitoneal;
(10) HSV com mGM-CSF, GALVR-, anti-CTLA4 e CD40L de camundongo inserido juntamente com anti-PD1 intraperitoneal;
(11) HSV com mGM-CSF, GALVR-, anti-CTLA4 e 4-1 BBL de camundongo inserido juntamente com anti-PD1 intraperitoneal;
(12) HSV com mGM-CSF, GALVR-, anti-CTLA4 e GITRL de camundongo inserido juntamente com anti-PD1 intraperitoneal;
(13) HSV com mGM-CSF, GALVR-, anti-CTLA4 e OX40L de camundongo inserido juntamente com anti-PD1 intraperitoneal; ou (14) HSV com mGM-CSF, GALVR-, anti-CTLA4 e ICOSL de camundongo inserido juntamente com anti-PD1 intraperitoneal.
[181] Observou-se controle tumoral superior com os virus que expressam os ligantes coestimulatórios imunes.
Informações de Depósito [182] As seguintes linhagens de HSV1 foram depositadas na
ECACC, Culture Collections, Public Health England, Porton Down, Salisbury, SP4 OJG, Reino Unido em 19 de dezembro de 2016 por Replimune Limited e
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 122/145
52/52 foram alocados os números de acesso indicados:
[183] RH004A - Número de Acesso 16121902 [184] RH015A - Número de Acesso 16121903 [185] RH018A - Número de Acesso 16121904 [186] RH021A - Número de Acesso 16121905 [187] RH023A - Número de Acesso 16121906 [188] RH031A - Número de Acesso 16121907 [189] RH040B - Número de Acesso 16121908 [190] RH047A - Número de Acesso 16121909.
Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 123/145

Claims (53)

  1. Reivindicações
    1. VÍRUS ONCOLÍTICO, caracterizado pelo fato de codificar um inibidor de CTLA-4.
  2. 2. VÍRUS, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato do inibidor de CTLA-4 ser um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
  3. 3. VÍRUS, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato do fragmento compreender uma molécula scFv.
  4. 4. VÍRUS, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato do fragmento ser uma molécula scFv ligada a uma ou mais regiões constantes de lgG1.
  5. 5. VÍRUS, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a
    4, caracterizado pelo fato do anticorpo ou fragmento compreender uma sequência de região variável de cadeia leve ligada a uma cadeia pesada de IgG.
  6. 6. VÍRUS, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a
    5, caracterizado pelo fato do anticorpo ou fragmento compreender (a) a sequência de região variável de cadeia leve mostrada na SEQ ID NO: 1 e a sequência de região variável de cadeia pesada mostrada nas SEQ ID NOs: 3; ou (b) a sequência de região variável de cadeia leve mostrada na SEQ ID NO: 11 e a sequência de região variável de cadeia pesada mostrada na SEQ ID NO:
    12.
  7. 7. VÍRUS, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato do anticorpo ou fragmento compreender (a) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 9; ou (b) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 14.
  8. 8. VÍRUS, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato do anticorpo ou fragmento ser codificado pela (a) sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 10; ou (b) sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 15.
  9. 9. VÍRUS, de acordo com qualquer uma das reivindicações
    Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 124/145
    2/8 anteriores, caracterizado pelo fato do vírus ainda compreender um gene codificador de GM-CSF.
  10. 10. VÍRUS, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato do vírus ainda compreender uma molécula que ativa a via coestimulatória imune ou um gene codificador da molécula que ativa a via coestimulatória imune.
  11. 11. VÍRUS, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato do gene codificador da molécula que ativa a via coestimulatória imune codificar ligante CD40 (CD40L), ligante ICOS, ligante GITR, ligante 4-1-BB, ligante 0X40, TL1A, ligante CD30, ligante CD27 ou flt3 ou uma versão modificada de qualquer um destes.
  12. 12. VÍRUS, de acordo com a reivindicação 10 ou 11, caracterizado pelo fato do gene codificador da molécula que ativa a via coestimulatória imune codificar ligante CD40, ligante GITR, ligante 4-1-BB, ligante 0X40, ligante ICOS ou uma versão modificada de qualquer um destes.
  13. 13. VÍRUS, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de ainda compreender um gene codificador de proteína fusogênica.
  14. 14. VÍRUS, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato da proteína fusogênica ser selecionada a partir do grupo que consiste em proteína G do vírus da estomatite vesicular (VSV), sincitina-1, sincitina-2, proteína F do vírus símio 5 (SV5), proteína H do vírus do sarampo (MV), proteína F do MV, proteína F do vírus sincicial respiratório (RSV) e uma glicoproteína do vírus da leucemia de macaco gibão (GALV), vírus da leucemia murina (MLV), vírus do macaco Mason-Pfizer (MPMV) ou vírus da anemia infecciosa equina (EIAV) a partir das quais o peptídeo R foi deletado.
  15. 15. VÍRUS, de acordo com a reivindicação 13 ou 14, caracterizado pelo fato da proteína fusogênica ser a glicoproteína de vírus da
    Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 125/145
    3/8 leucemia de macaco gibão (GALV) e ter o peptídeo transmembrana R mutado ou removido (GALV-R-).
  16. 16. VÍRUS, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de codificar mais do que uma molécula que ativa a via coestimulatória imune.
  17. 17. VÍRUS, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de ser derivado de um isolado clínico de um vírus.
  18. 18. VÍRUS, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de ser um isolado clínico modificado de um vírus, em que o isolado clínico mata duas ou mais linhagens de células tumorais mais rapidamente e/ou em uma dose mais baixa in vitro do que um ou mais isolados clínicos de referência da mesma espécie de vírus.
  19. 19. VÍRUS, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de ser selecionado a partir do grupo que consiste em vírus herpes, poxvirus, adenovirus, retrovirus, rabdovírus, paramixovirus e reovirus.
  20. 20. VÍRUS, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de ser um vírus herpes simples (HSV).
  21. 21. VÍRUS, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de ser um HSV1.
  22. 22. VÍRUS, de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo fato do HSV:
    (a) não expressar ICP34.5 funcional;
    (b) não expressar ICP47 funcional; e/ou (c) expressar o gene US11 como um gene inicial imediato.
  23. 23. VÍRUS, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 22, caracterizado pelo fato de um gene codificador da proteína inibidora anti
    Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 126/145
    4/8
    CTLA-4 ter sido inserido no locus codificador de ICP34.5 por inserção, deleção parcial ou deleção completa.
  24. 24. VÍRUS, de acordo com a reivindicação 23, caracterizado pelo fato do gene codificador da proteína inibidora anti-CTLA-4 ser incluído em um cassete que também inclui um ou mais genes estimuladores da imunidade como GM-CSF e/ou uma molécula que ativa a via coestimulatória imune e/ou um gene codificador de proteína fusogênica.
  25. 25. VÍRUS, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato da sequência codificadora do inibidor de CTLA-4, a sequência codificadora de uma molécula que ativa a via coestimulatória imune e/ou a sequência codificadora da proteína fusogênica serem códon-otimizadas, de modo a aumentar os níveis de expressão nas células alvo.
  26. 26. VÍRUS, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de expressar três genes heterólogos, em que cada um dos três genes heterólogos é dirigido por um promotor diferente selecionado a partir do promotor de CMV, promotor de RSV, promotor de SV40 (SEQ ID) e um promotor LTR retroviral.
  27. 27. VÍRUS, de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de expressar quatro genes heterólogos dirigidos por cada um dentre promotor de CMV, promotor de RSV, promotor de SV40 e um promotor LTR retroviral.
  28. 28. VÍRUS, de acordo com a reivindicação 26 ou 27, caracterizado pelo fato do LTR retroviral ser de MMLV (SEQ ID).
  29. 29. VÍRUS, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de expressar três genes heterólogos, em que cada um dos três genes heterólogos é terminado por uma sequência de poliadenilação diferente selecionada a partir das sequências de poliadenilação
    Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 127/145
    5/8 de BGH, SV40, HGH e RBG.
  30. 30. VÍRUS, de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo fato de expressar genes heterólogos terminados por cada uma das sequências de poliadenilação de BGH, SV40, HGH e RBG, respectivamente.
  31. 31. VÍRUS, de acordo com qualquer uma das reivindicações 26 a 30, caracterizado pelo fato de ser um poxvirus.
  32. 32. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, caracterizada pelo fato de compreender um vírus, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 31, e um carreador ou diluente farmaceuticamente aceitável.
  33. 33. VÍRUS, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 31, caracterizado pelo fato de ser para uso em um método para tratar o corpo humano ou animal por terapia.
  34. 34. VÍRUS, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 31, caracterizado pelo fato de ser para uso em um método para tratar câncer.
  35. 35. VÍRUS, para uso de acordo com a reivindicação 34, caracterizado pelo fato do método compreender administrar um agente anticâncer adicional.
  36. 36. VÍRUS, para uso de acordo com a reivindicação 35, caracterizado pelo fato do agente anticâncer adicional ser selecionado a partir de um agente de direcionamento de uma via coinibitória imune ou via coestimulatória imune, radiação e/ou quimioterapia, um agente que direciona uma mutação genética específica que ocorre em tumores, um agente destinado a induzir uma resposta imune a um ou mais antígenos ou neoantígenos tumorais, um produto celular derivado de células T ou células NK, um agente destinado a estimular STING, cGAS, TLR ou outra resposta imune inata e/ou via inflamatória, um segundo vírus, opcionalmente um vírus oncolítico, e combinações dos mesmos.
  37. 37. VÍRUS, para uso de acordo com a reivindicação 36,
    Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 128/145
    6/8 caracterizado pelo fato do agente de direcionamento de uma via coinibitória imune ser um inibidor de PD-1, um inibidor de PD-L1, um inibidor de LAG-3, um inibidor de TIM-3, um inibidor de VISTA, um inibidor de CSF1R, um inibidor de IDO, um inibidor de KIR, um inibidor de SLAMF7, um inibidor de CEACAM1 ou um inibidor de CD47 e/ou o agente de direcionamento de uma via coestimulatória imune ser um agonista de GITR, um agonista de 4-1 -BB, um agonista de 0X40, um agonista de CD40 ou um agonista de ICOS.
  38. 38. VÍRUS, para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 37, caracterizado pelo fato do agente anticâncer adicional ser um anticorpo.
  39. 39. VÍRUS, para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 38, caracterizado pelo fato do compreender administrar um inibidor da via da indoleamina 2,3-dioxigenase (IDO) e um antagonista adicional de uma via coinibitória imune ou um agonista de uma via coestimulatória imune.
  40. 40. VÍRUS, para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 34 a 39, caracterizado pelo fato do vírus e do(s) agente(s) anticâncer adicional(is) serem administrados separadamente.
  41. 41. VÍRUS, para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 34 a 39, caracterizado pelo fato do vírus e do(s) agente(s) anticâncer adicional(is) serem administrados ao mesmo tempo.
  42. 42. VÍRUS, para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 34 a 41, caracterizado pelo fato do câncer ser um tumor sólido.
  43. 43. PRODUTO DE FABRICAÇÃO, caracterizado pelo fato de compreender um vírus, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 31, em um frasco estéril, ampola ou seringa.
  44. 44. MÉTODO PARA TRATAR CÂNCER, caracterizado pelo fato de compreender administrar uma quantidade terapeuticamente efetiva do vírus, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 31, ou uma composição
    Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 129/145
    7/8 farmacêutica, de acordo com a reivindicação 32, para um paciente com necessidade do mesmo.
  45. 45. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de ainda compreender administrar uma quantidade efetiva de um agente anticâncer adicional para um paciente com necessidade do mesmo.
  46. 46. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 45, caracterizado pelo fato do agente anticâncer adicional ser selecionado a partir do grupo que consiste em um agente de direcionamento de uma via coinibitória imune ou via coestimulatória imune, radiação e/ou quimioterapia, um agente que direciona uma mutação genética específica que ocorre em tumores, um agente destinado a induzir uma resposta imune a um ou mais antígenos ou neoantígenos tumorais, um produto celular derivado de células T ou células NK, um agente destinado a estimular STING, cGAS, TLR ou outra resposta imune inata e/ou via inflamatória, um segundo vírus, opcionalmente um vírus oncolítico, e combinações dos mesmos.
  47. 47. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 46, caracterizado pelo fato do agente de direcionamento de uma via coinibitória imune ser um inibidor de PD-1, um inibidor de PD-L1, um inibidor de LAG-3, um inibidor de TIM-3, um inibidor de VISTA, um inibidor de CSF1R, um inibidor de IDO, um inibidor de KIR, um inibidor de SLAMF7, um inibidor de CEACAM1 ou um inibidor de CD47 e/ou o agente de direcionamento de uma via coestimulatória imune ser um agonista de GITR, um agonista de 4-1-BB, um agonista de 0X40, um agonista de CD40 ou um agonista de ICOS.
  48. 48. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 45 a 47, caracterizado pelo fato do agente anticâncer adicional compreender um anticorpo.
  49. 49. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 45 a 48, caracterizado pelo fato do vírus e do(s) agente(s) anticâncer adicional(is)
    Petição 870190058870, de 25/06/2019, pág. 130/145
    8/8 serem administrados separadamente.
  50. 50. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 45 a 48, caracterizado pelo fato do vírus e do(s) agente(s) anticâncer adicional(is) serem administrados ao mesmo tempo.
  51. 51. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 44 a 50, caracterizado pelo fato do câncer ser um tumor sólido.
  52. 52. USO, do vírus de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 31, caracterizado pelo fato de ser para fabricação de um medicamento para uso em um método para tratar câncer.
  53. 53. USO, de acordo com a reivindicação 52, caracterizado pelo fato do método compreender administrar um agente anticâncer adicional.
BR112019013215A 2017-01-09 2018-01-09 vírus oncolítico, composição farmacêutica, produto de fabricação, método para tratar câncer e uso BR112019013215A2 (pt)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB1700350.0A GB201700350D0 (en) 2017-01-09 2017-01-09 Altered virus
PCT/GB2018/050048 WO2018127713A1 (en) 2017-01-09 2018-01-09 Altered virus

Publications (1)

Publication Number Publication Date
BR112019013215A2 true BR112019013215A2 (pt) 2019-12-10

Family

ID=58463943

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BR112019013215A BR112019013215A2 (pt) 2017-01-09 2018-01-09 vírus oncolítico, composição farmacêutica, produto de fabricação, método para tratar câncer e uso

Country Status (12)

Country Link
US (1) US20190343903A1 (pt)
EP (1) EP3565568A1 (pt)
JP (1) JP2020503871A (pt)
KR (1) KR20190104055A (pt)
CN (1) CN110198724A (pt)
AU (1) AU2018205763A1 (pt)
BR (1) BR112019013215A2 (pt)
CA (1) CA3049496A1 (pt)
GB (1) GB201700350D0 (pt)
IL (1) IL267949A (pt)
MX (1) MX2019008146A (pt)
WO (1) WO2018127713A1 (pt)

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2831080T5 (es) 2016-01-08 2023-10-30 Replimune Ltd Virus oncolítico modificado
EP4089166A1 (en) 2016-01-27 2022-11-16 Oncorus, Inc. Oncolytic viral vectors and uses thereof
SG11201811600PA (en) 2016-06-30 2019-01-30 Oncorus Inc Pseudotyped oncolytic viral delivery of therapeutic polypeptides
RU2771110C2 (ru) 2017-07-26 2022-04-26 Онкорус, Инк. Онколитические вирусные векторы и их применение
CN118126157A (zh) 2017-08-03 2024-06-04 美国安进公司 白介素-21突变蛋白和治疗方法
EP4141005B1 (en) 2017-09-08 2024-04-03 Amgen Inc. Inhibitors of kras g12c and methods of using the same
WO2019133847A1 (en) 2017-12-29 2019-07-04 Oncorus, Inc. Oncolytic viral delivery of therapeutic polypeptides
TW201930344A (zh) 2018-01-12 2019-08-01 美商安進公司 抗ｐｄ-１抗體及治療方法
CN109762068A (zh) * 2018-08-09 2019-05-17 源道隆（苏州）医学科技有限公司 一种可靶向ctla4和pd-1的单基因双特异性抗体及其应用
JP2022516077A (ja) 2018-12-27 2022-02-24 アムジェン インコーポレイテッド 凍結乾燥ウイルス製剤
EP3935182A1 (en) 2019-03-05 2022-01-12 Amgen Inc. Use of oncolytic viruses for the treatment of cancer
TW202102543A (zh) 2019-03-29 2021-01-16 美商安進公司 溶瘤病毒在癌症新輔助療法中之用途
WO2020228828A1 (zh) * 2019-05-15 2020-11-19 郑州威瑞生物技术有限公司 诱导免疫细胞活性的组合物及使用该组合物治疗疾病的方法
CA3142145A1 (en) * 2019-05-29 2020-12-03 Orbis Health Solutions, Llc Delivery vectors and particles for expressing chimeric receptors and methods of using the same
CN110218707B (zh) * 2019-05-29 2021-10-22 上海市公共卫生临床中心 一种新型溶瘤病毒及其制备方法和应用
KR20220041884A (ko) * 2019-08-16 2022-04-01 임비라 컴퍼니 리미티드 전신 투여용 종양용해성 단순 포진 바이러스를 포함하는 약학적 조성물
CN110982795B (zh) * 2020-03-05 2020-06-16 北京唯源立康生物科技有限公司 一种单纯疱疹病毒及其用途
CN110982794B (zh) * 2020-03-05 2020-06-16 北京唯源立康生物科技有限公司 一种修饰的单纯疱疹病毒
CN114075574A (zh) * 2020-08-19 2022-02-22 广东东阳光药业有限公司 构建体、溶瘤病毒及其应用
WO2024134495A1 (en) * 2022-12-20 2024-06-27 Janssen Biotech, Inc. Oncolytic virus and uses thereof

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0317511D0 (en) * 2003-07-25 2003-08-27 Biovex Ltd Viral vectors
US9868961B2 (en) 2006-03-30 2018-01-16 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for localized secretion of anti-CTLA-4 antibodies
US20150190505A1 (en) * 2012-07-30 2015-07-09 Alex Wah Hin Yeung Live and in-vivo tumor specific cancer vaccine system developed by co-administration of either at least two or all three of the following components such as tumor cells, an oncolytic virus vector with transgenic expression of gm-csf and an immune checkpoint modulator
US9789182B2 (en) 2012-10-23 2017-10-17 Bristol-Myers Squibb Company Combination of anti-KIR and anti-CTLA-4 antibodies to treat cancer
RS57043B1 (sr) * 2013-10-25 2018-05-31 Psioxus Therapeutics Ltd Onkolitički adenovirusi snabdeveni heterologus genima
ES2781852T3 (es) * 2013-10-28 2020-09-08 Univ Pittsburgh Commonwealth Sys Higher Education Vector de HSV oncolítico
US10933106B2 (en) * 2014-02-25 2021-03-02 Deutsches Krebsforschungszentrum RNA viruses for immunovirotherapy
CA3190510A1 (en) * 2014-07-16 2016-01-21 Transgene Sa Oncolytic virus for expression of immune checkpoint modulators
ES2831080T5 (es) * 2016-01-08 2023-10-30 Replimune Ltd Virus oncolítico modificado
EP3380621A4 (en) * 2016-04-22 2019-05-08 Immvira Co., Limited CONSTRUCTION OF THE VECTOR OF OBLIGATES ONCOLYTIC HERPES SIMPLEX VIRUSES (OHSV) AND CANCER THERAPY CONSTRUCTIONS

Also Published As

Publication number Publication date
GB201700350D0 (en) 2017-02-22
CA3049496A1 (en) 2018-07-12
JP2020503871A (ja) 2020-02-06
AU2018205763A1 (en) 2019-06-20
CN110198724A (zh) 2019-09-03
WO2018127713A1 (en) 2018-07-12
IL267949A (en) 2019-09-26
MX2019008146A (es) 2019-10-09
KR20190104055A (ko) 2019-09-05
EP3565568A1 (en) 2019-11-13
US20190343903A1 (en) 2019-11-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7295192B2 (ja) 改変された腫瘍溶解性ウイルス
BR112019013215A2 (pt) vírus oncolítico, composição farmacêutica, produto de fabricação, método para tratar câncer e uso
US20210252135A1 (en) Treatment using oncolytic virus
JP2024095709A (ja) 改変ウイルス

Legal Events

Date Code Title Description
B350 Update of information on the portal [chapter 15.35 patent gazette]