BR112018073601B1 - Método para produzir um produto entomopatogênico fúngico e método para produzir um entomopatógeno fúngico - Google Patents

Abstract

Trata-se de cepas entomopatogênicas fúngicas, composições, e métodos e composições para produzir e usar as cepas para reduzir dano geral causado por inseto.

Description

CAMPO

[0001] As cepas entomopatogênicas fúngicas, composições e métodos e composições para produzir e usar as cepas entomopatogênicas fúngicas para reduzir dano geral causado por inseto.

ANTECEDENTES

[0002] Há uma antiga necessidade por composições e métodos ecológicos para controlar ou erradicar pragas de insetos de significância agrícola, isto é, métodos que são seletivos, ambientalmente inertes, não persistentes e biodegradáveis, e que se encaixam bem nos esquemas de gerenciamento de praga de inseto. Ademais, há uma necessidade de produzir tais composições em grande escala para uso comercial.

SUMÁRIO

[0003] Em uma modalidade, um método de produção de um produto entomopatogênico fúngico em cultura líquida é revelado. Em uma modalidade, um método de produção de um produto entomopatogênico que compreende cepas entomopatogênicas fúngicas selecionadas dentre o grupo que consiste em Metarhizium anisopliae 15013-1 (NRRL 67073), Metarhizium robertsii 23013-3 (NRRL 67075), Metarhizium anisopliae 3213-1 (NRRL 67074), ou quaisquer combinações das mesmas, é revelado. Em uma outra modalidade, um método de produção de esporos em cultura líquida é revelado. Em uma modalidade, um método de produção de microslerócios em cultura líquida é revelado. Em uma outra modalidade, um método de produção de conidiósporos ou blastósporos em cultura líquida é revelado. Em uma modalidade adicional, um método de produção de esporos submersos em cultura líquida é revelado. Em uma outra modalidade, um método de produção de micélio vegetativo em cultura líquida é revelado. Em uma modalidade adicional, um método compreende obter um produto entomopatogênico fúngico a partir de um meio líquido. Em uma outra modalidade, uma composição pode ser o produto de um método de produção revelado.

[0004] Em uma modalidade, um método de produção de um produto entomopatogênico fúngico em cultura líquida que compreende obter conidiósporos aéreos de um entomopatógeno fúngico, inocular os conidiósporos aéreos em um meio líquido para gerar uma cultura de semente entomopatogênica fúngica por meio de fermentação, e inocular a cultura de semente de entomopatógeno fúngico em um meio líquido para gerar um produto entomopatogênico fúngico por meio de fermentação, em que o meio líquido compreende uma primeira fonte de carbono, uma segunda fonte de carbono, e uma fonte de nitrogênio, é revelado. Em uma modalidade adicional, um método compreende obter um produto entomopatogênico fúngico a partir de um meio líquido.

[0005] Em uma outra modalidade, uma composição compreende um produto entomopatogênico fúngico, em que o produto entomopatogênico fúngico tem atividade inseticida. Um produto de fermentação pode compreender meios ou caldo utilizados, um entomopatógeno fúngico, um esporo, um micélio, um microescleródio, um conidiósporo, um blastósporo, um esporo submerso, um micélio vegetativo ou qualquer outro componente substancialmente puro dos meios ou lisato de fermentação.

[0006] Em uma outra modalidade, um método de produção de um entomopatógeno fúngico em uma cultura líquida com o uso de uma fonte de carbono e uma fonte de nitrogênio é revelado. Em uma outra modalidade, um método de produção de um entomopatógeno fúngico em uma cultura líquida com o uso de uma primeira fonte de carbono, uma segunda fonte de carbono e uma fonte de nitrogênio é revelado. Em uma outra modalidade, um método de produção de um entomopatógeno fúngico em uma cultura líquida com o uso de duas ou mais fontes de carbono e uma fonte de nitrogênio é revelado. Em uma modalidade, uma fonte de carbono pode incluir uma fonte de carbono de glicose, uma frutose, uma galactose, um sorbitol, uma sorbose, uma sacarose, uma arabinose, uma maltodextrina, uma ribose ou uma xilose e combinações dos mesmos. Em uma outra modalidade, uma segunda fonte de carbono compreende uma fonte de carbono de uma frutose, uma galactose, um sorbitol, uma sorbose, uma sacarose, uma arabinose, uma maltodextrina, uma ribose ou uma xilose e combinações dos mesmos. Em uma modalidade adicional, uma segunda fonte de carbono cria uma condição de estresse ou não ideal que altera o estado fisiológico de um entomopatógeno fúngico. Em uma modalidade, uma primeira fonte de carbono está em uma concentração limitante para facilitar uma condição de estresse ou não ideal de um entomopatógeno fúngico. Em uma modalidade, uma primeira fonte de carbono compreende 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35 ou 40% da quantidade de fonte de carbono total (peso/volume). Em uma modalidade, uma segunda fonte de carbono não está em uma concentração limitante.

[0007] Em uma outra modalidade, um método de produção de um entomopatógeno fúngico em uma cultura líquida com o uso de uma fonte de carbono e uma fonte de nitrogênio e de controle de um parâmetro de fermentação, em que o controle do parâmetro de fermentação cria uma condição de estresse ou não ideal que altera um estado fisiológico de um entomopatógeno fúngico,, é revelado. Em uma modalidade, um parâmetro de fermentação pode incluir um nível de pH, uma taxa de evolução de dióxido de carbono, uma porcentagem de oxigênio dissolvido, um perfil de agitação, uma taxa de alimentação de açúcar ou qualquer outro parâmetro medido de uma fermentação de um entomopatógeno fúngico que pode criar uma condição de estresse ou não ideal que resulta em uma alteração de um estado fisiológico de um entomopatógeno fúngico. Em uma modalidade adicional, um método de produção de um entomopatógeno fúngico em uma cultura líquida com o uso de uma primeira fonte de carbono, uma segunda fonte de carbono e uma fonte de nitrogênio, em que a segunda fonte de carbono cria uma condição de estresse ou não ideal que altera um estado fisiológico de um entomopatógeno fúngico, é revelado.

[0008] Em uma modalidade, um meio para produzir um produto entomopatogênico fúngico que compreende uma primeira fonte de carbono, uma segunda fonte de carbono e uma fonte de nitrogênio, em que a segunda fonte de carbono cria uma condição de estresse ou não ideal de um entomopatógeno fúngico, é revelado. Em uma modalidade, uma fonte de carbono pode incluir uma fonte de carbono de glicose, uma frutose, uma galactose, um sorbitol, uma sorbose, uma sacarose, uma arabinose, uma maltodextrina, uma ribose ou uma xilose e combinações dos mesmos. Em uma outra modalidade, uma segunda fonte de carbono compreende uma frutose, uma galactose, um sorbitol, uma sorbose, uma sacarose, uma arabinose, uma maltodextrina, uma ribose ou uma xilose e combinações dos mesmos. Em uma modalidade, uma primeira fonte de carbono está em uma concentração limitante para facilitar uma condição de estresse não ideal de um entomopatógeno fúngico. Em uma modalidade, uma primeira fonte de carbono compreende 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35 ou 40% da quantidade de fonte de carbono total (peso/volume). Em uma modalidade, uma segunda fonte de carbono não está em uma concentração limitante.

DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0009] Figura 1. Produção de propágulos fúngicos da cepa Metarhizium anisopliae 15013-1 durante fermentação líquida em escala de frasco de agitação; A. Produção de microescleródio (MS) após 3, 5 e 7 dias de fermentação líquida em soja 10 C (25% de glicose + 75% de frutose):meio 1 N a 300 rpm e 28 °C, e B. Produção de esporo submerso (SS) após 3, 5 e 7 dias de fermentação líquida em soja 10 C (25% de glicose + 75% de frutose):meio 1 N a 300 rpm e 28 °C.

[0010] Figura 2. Condições de processo de fermentação durante a produção de propágulos fúngicos da cepa Metarhizium anisopliae 15013-1 em 2 l de escala laboratorial; A. perfil de CER, e B. perfil de % de DO.

[0011] Figura 3. Condições de processo de fermentação durante a produção de propágulos fúngicos da cepa Metarhizium anisopliae 15013-1 em 2 l de escala laboratorial; A. perfil de concentração de amônia, e B. perfil de pH.

[0012] Figura 4. Produção de biomassa e propágulos fúngicos da cepa de Metarhizium anisopliae 15013-1 durante a fermentação em 2 l de escala laboratorial; A. Perfil de Peso Seco Celular (DCW), e B. Perfil de produção de microescleródio (MS).

[0013] Figura 5. Perfil de produção de esporo submerso (SS) da cepa de Metarhizium anisopliae 15013-1 durante a fermentação em 2 l de escala laboratorial.

[0014] Figura 6. Condições de processo de fermentação durante a produção de propágulos fúngicos da cepa de Metarhizium anisopliae 15013-1 sem alimentação; A. perfil de CER, e B. perfil de % de DO.

[0015] Figura 7. Condições de processo de fermentação durante a produção de propágulos fúngicos da cepa de Metarhizium anisopliae sem alimentação 15013-1; A. perfil de concentração de amônia, e B. perfil de pH.

[0016] Figura 8. Produção de biomassa e propágulos fúngicos da cepa de Metarhizium anisopliae 15013-1 durante a fermentação sem alimentação; A. perfil de Peso Seco Celular (DCW), e B. Perfil de produção de microescleródio (MS).

[0017] Figura 9. Perfil de produção de esporo submerso (SS) da cepa de Metarhizium anisopliae 15013-1 durante a fermentação sem alimentação.

[0018] Figura 10. Condições de processo de fermentação durante a produção de propágulos fúngicos da cepa de Metarhizium anisopliae 15013-1 com alimentação; A. perfil de CER, e B. perfil de % de DO.

[0019] Figura 11. Condições de processo de fermentação durante a produção de propágulos fúngicos da cepa de Metarhizium anisopliae 15013-1 com alimentação; A. Perfil de concentração de amônia, e B. perfil de taxa de alimentação de açúcar específico suavizado.

[0020] Figura 12. Condições de processo de fermentação durante a produção de propágulos fúngicos da cepa de Metarhizium anisopliae 15013-1 com alimentação a; A. perfil de pH, e B. perfil de Peso Seco Celular (DCW).

[0021] Figura 13. Produção de propágulos fúngicos da cepa de Metarhizium anisopliae 15013-1 durante a fermentação com alimentação; A. Perfil de produção de microescleródio (MS), e B. Perfil de produção de esporo submerso (SS).

[0022] Figura 14. Condições de processo de fermentação durante produção de propágulos fúngicos da cepa de Metarhizium anisopliae 15013-1 enriquecida por esporo submerso (SS); A. perfil de CER, e B. perfil de % de DO.

[0023] Figura 15. Condições de processo de fermentação durante a produção de propágulos fúngicos da cepa de Metarhizium anisopliae 15013-1 enriquecida por SS; A. Perfil de concentração de amônia, e B. perfil de pH.

[0024] Figura 16. Produção de biomassa e propágulos fúngicos da cepa de Metarhizium anisopliae 15013-1 durante a fermentação enriquecida por produção de esporo submerso (SS); A. perfil de Peso Seco Celular (DCW), e B. Perfil de produção de microescleródio (MS).

[0025] Figura 17. Perfil de produção de esporo submerso (SS) da cepa de Metarhizium anisopliae 15013-1 durante a fermentação enriquecida por produção de SS.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[0026] As modalidades da invenção não se limitam aos métodos e materiais exemplificativos revelados, e quaisquer métodos e materiais semelhantes ou equivalentes àqueles descritos podem ser usados na prática ou no teste de modalidades desta invenção. As faixas numéricas incluem os números que definem as faixas.

[0027] Os cabeçalhos fornecidos não são limitações das várias modalidades desta invenção, que podem ser tidos a título de referência ao relatório descritivo.

[0028] As definições de termos aparecerem ao longo do relatório descritivo. Deve-se compreender que as modalidades da invenção não se limitam às modalidades específicas descritas e as modalidades adicionais podem variar. Deve-se compreender também que a terminologia usada deve descrever as modalidades apenas, e não se destina a ser limitante, uma vez que o escopo das modalidades da invenção será limitado apenas pelas reivindicações anexas e equivalentes das mesmas.

[0029] Os artigos “um” e “uma” são usados para se referir a um ou mais de um (isto é, pelo menos um) do objeto gramatical do artigo. Por exemplo, “um elemento” significa um ou mais elementos.

[0030] Conforme usado no presente documento, os termos “fermentação líquida” e “fermentação” se referem ao crescimento do entomopatógeno fúngico em meio líquido para produzir várias estruturas celulares. Conforme usado no presente documento, o termo “cultura de semente” se refere a uma cultura líquida ou produto de fermentação de estado sólido usado para acumular a biomassa necessária para começar uma cultura de produção. Conforme usado no presente documento, o termo “biomassa” inclui todas as estruturas que podem ser formadas pelo entomopatógeno fúngico em meio líquido. Conforme usado no presente documento, o termo “peso seco celular” (DCW) se refere a gramas de peso seco por quilograma de caldo, e será usado como uma medição de acúmulo de biomassa. Conforme usado no presente documento, o termo CER se refere à taxa de dióxido de carbono produzido no biorreator definido como mmol de CO2/l de caldo/h (Buckland et al., 1985 BioTechnology). Conforme usado no presente documento, o termo “oxigênio dissolvido de fermentação” (% de DO) é expresso em % de saturação de ar.

[0031] Conforme usado no presente documento, o termo uma “fonte de carbono” se refere a qualquer carboidrato complexo ou simples com capacidade de sustentar a sobrevivência, o crescimento ou a produção de estruturas fúngicas específicas de um entomopatógeno fúngico. Em uma modalidade, uma fonte de carbono pode ser fornecida em uma fermentação através de uma alimentação. Em uma modalidade adicional, a fonte de carbono fornecida em uma alimentação compreende glicose ou frutose. Conforme usado no presente documento, uma “concentração limitante” de uma fonte de carbono significa que uma fonte de carbono principal, glicose, por exemplo, é esgotada e o organismo deve mudar para usar uma segunda fonte de carbono para sobrevivência, crescimento ou produção de estruturas fúngicas específicas. Conforme usado no presente documento, uma “fonte de nitrogênio” se refere a uma fonte de nitrogênio complexa que pode compreender carbono, mas não é uma fonte de carbono com capacidade de sustentar a sobrevivência, o crescimento ou a produção de estruturas fúngicas específicas de um entomopatógeno fúngico. Em uma modalidade, uma fonte de nitrogênio compreende soja, farinha desengordurada, concentrado de proteína, isolado de proteína, um hidrolisato, extrato de levedura ou outro extrato, melaços ou uma combinação dos mesmos.

[0032] Conforme usado no presente documento, o termo “produto de fermentação” se refere a uma composição que compreende um micélio vegetativo, um esporo, um conidiósporo, um blastósporo, um conidiósporo aéreo, um conidiósporo submerso, um blastósporo submerso e/ou um microescleródio de um entomopatógeno fúngico que é produzido através de um processo de fermentação. Em uma modalidade, um produto de fermentação compreende um entomopatógeno fúngico de Metarhizium. Em uma outra modalidade, um produto de fermentação compreende uma cepa entomopatogênica fúngica selecionada dentre o grupo que consiste em Metarhizium anisopliae 15013-1, Metarhizium robertsii 23013-3, Metarhizium anisopliae 3213-1. Um produto de fermentação pode ser obtido a partir de um processo de fermentação com o uso de secagem a vácuo. Em uma modalidade, um produto de fermentação tem capacidade de sobreviver ou de ser resistente à dessecação para aplicações ou formulações a jusante.

[0033] Em uma modalidade da invenção, um método de produção de um produto de entomopatógeno fúngico em uma fermentação líquida é revelado. Em uma modalidade, um método consiste, primeiro, em gerar conidiósporos aéreos de um entomopatógeno fúngico em um meio de ágar e, então, inocular os conidiósporos aéreos em um meio líquido para gerar um produto de entomopatógeno fúngico. Em uma outra modalidade, um método consiste, primeiro, em gerar conidiósporos aéreos de um entomopatógeno fúngico em um substrato sólido, incluindo, mas sem limitação, um meio de ágar ou outro meio sólido de composição adequada, seguido pela inoculação dos conidiósporos aéreos em um meio líquido para gerar uma cultura de semente de entomopatógeno fúngico, seguido pela inoculação da cultura de semente de entomopatógeno fúngico em um meio líquido para gerar um produto de entomopatógeno fúngico. Em uma outra modalidade, uma primeira cultura de semente de entomopatógeno fúngico pode ser usada para gerar uma segunda cultura de semente de entomopatógeno fúngico, em que a segunda cultura de semente é usada para inocular em um meio líquido para gerar um produto de entomopatógeno fúngico. Um meio líquido usado para produzir um produto de entomopatógeno fúngico pode conter minerais, vitaminas, uma fonte de carbono e uma fonte de nitrogênio complexa. Em uma outra modalidade, uma fonte de nitrogênio é uma fonte complexa que compreende carbono, mas não é uma fonte de carbono. Em uma modalidade, um método para produzir um produto de entomopatógeno fúngico que compreende um esporo, um micélio vegetativo, um esporo submerso e/ou um microescleródio é revelado. Em uma modalidade, uma composição compreende um produto de fermentação de um entomopatógeno fúngico de uma fermentação líquida. Um produto de fermentação pode ser seco a vácuo para uso para controlar patógenos vegetais, pragas ou insetos.

[0034] Em uma modalidade da invenção, um método de produção de um produto de entomopatógeno fúngico em uma fermentação líquida, em que a fermentação líquida compreende um meio líquido que compreende minerais, vitaminas, uma fonte de carbono e uma fonte de nitrogênio, é revelado. Em uma modalidade, um método de produção de um entomopatógeno fúngico em uma cultura líquida com o uso de uma fonte de carbono e uma fonte de nitrogênio é revelado. Em uma outra modalidade, um método de produção de um entomopatógeno fúngico em uma cultura líquida com o uso de duas fontes de carbono e uma fonte de nitrogênio é revelado. Em uma outra modalidade, um método de produção de um entomopatógeno fúngico em uma cultura líquida com o uso de duas ou mais fontes de carbono e uma fonte de nitrogênio é revelado. Em uma modalidade, uma fonte de carbono é glicose. Em uma outra modalidade, uma fonte de carbono compreende uma molécula de frutose, galactose, sorbitol, sorbose, sacarose, arabinose, uma maltodextrina, ribose ou xilose e combinações das mesmas. Em uma outra modalidade, uma primeira fonte de carbono está em uma concentração limitante. Em uma modalidade adicional, uma segunda fonte de carbono cria uma condição de estresse ou não ideal que altera um estado fisiológico de um entomopatógeno fúngico. Em uma outra modalidade, um método de produção de um entomopatógeno fúngico em uma cultura líquida com o uso de uma fonte de carbono, uma primeira fonte de nitrogênio, e uma segunda fonte de nitrogênio, em que a primeira fonte de nitrogênio está em uma concentração limitante, é revelado.

[0035] Em uma outra modalidade, um método de produção de um entomopatógeno fúngico em uma cultura líquida com o uso de uma fonte de carbono e uma fonte de nitrogênio e de controle de um parâmetro de fermentação, em que o controle do parâmetro de fermentação cria uma condição de estresse ou não ideal que altera um estado fisiológico de um entomopatógeno fúngico,, é revelado. Em uma modalidade, um parâmetro de fermentação pode incluir um nível de pH, uma taxa de evolução de dióxido de carbono, uma porcentagem de oxigênio dissolvido, um perfil de agitação, uma taxa de alimentação de açúcar ou qualquer outro parâmetro medido de uma fermentação de um entomopatógeno fúngico que pode criar uma condição de estresse ou não ideal que resulta em uma alteração de um estado fisiológico de um entomopatógeno fúngico. As alterações fisiológicas (mudança para ciclo assexual) podem ocorrer como resultado de condições de estresse ou não ideais impostas em um entomopatógeno fúngico. (Consulte Steyaert et al. (2010), Microbiol. e Gao et al. (2007) Mycol. Res). Em uma outra modalidade, um método de produzir um entomopatógeno fúngico em uma cultura líquida com o uso de pelo menos duas fontes de carbonos e uma fonte de nitrogênio e controlar um parâmetro de fermentação, em que o controle do parâmetro de fermentação cria uma condição de estresse ou não ideal que resulta em uma alteração de um estado fisiológico de um entomopatógeno fúngico, é revelado. Em uma modalidade, a obtenção de conidiósporos aéreos de um entomopatógeno fúngico compreende, primeiro, gerar conidiósporos aéreos do entomopatógeno fúngico em um meio de ágar ou um meio de estado sólido (Dorta e Arcas (1998), Enzyme Microb. Technol.).

[0036] Uma modalidade da invenção se refere a um método para produzir um entomopatógeno fúngico, em que o entomopatógeno fúngico compreende ou consiste essencialmente em uma cepa entomopatogênica fúngica selecionada dentre o grupo que consiste em: Metarhizium anisopliae 15013-1, Metarhizium robertsii 230133 e Metarhizium anisopliae 3213-1. Em uma outra modalidade, um método compreende, consiste em ou consiste essencialmente em pelo menos duas ou mais cepas entomopatogênicas fúngicas selecionadas dentre o grupo que consiste em: Metarhizium anisopliae 15013-1, Metarhizium robertsii 23013-3, Metarhizium anisopliae 3213-1.

[0037] Em uma modalidade, um método para produzir um produto entomopatogênico fúngico compreende a geração de conidiósporos aéreos (AC) usados como um inóculo para culturas líquidas ou fermentações líquidas. Tais métodos incluem, mas sem limitação, a geração de ACs inoculando-se uma cepa de entomopatógeno fúngico em PDA grande ou placas VM e incubando-se a 28 °C por cerca de 2 a 3 semanas; inundando-se as placas com uma solução de 0,05% de Tween 80; e suspendendo-se ACs na solução raspando- se gentilmente a superfície da cultura da placa. Em uma modalidade, uma suspensão de AC pode ser filtrada, e os ACs agrupados em uma alta concentração. Em uma modalidade adicional, uma concentração de AC pode ser determinada com o uso de um hemocitômetro, os ACs centrifugados, e o pélete de AC é ressuspenso com o uso de uma solução de 15% de glicerol em 0,05% de Tween 80. Em uma outra modalidade, os conidiósporos aéreos também podem ser obtidos por meio de fermentação de estado sólido (Dorta e Arcas (1998), Enzyme Microb. Technol.).

[0038] Em uma modalidade, a produção de um produto de entomopatógeno fúngico em uma cultura líquida pode compreender volumes médios de 50 ml em escala de fermentação de frasco de agitação, 1 l em 2 l de escala de fermentação laboratorial e 10 l em escala de fermentação de biorreator ou até 600.000 l de escala de fermentação. Os meios para culturas de semente ou de produção podem compreender componentes conforme mostrado nas Tabelas 1, 2 e 3. Em escala de frasco de agitação os meios podem ser inoculados diretamente com conidiósporos aéreos (AC) em uma concentração final de cerca de 5 x 106 AC/ml. Os meios em escala laboratorial ou em biorreator podem ser inoculados com o uso de uma cultura de semente de cerca de 40 ml ou 400 ml de cultura de semente, respectivamente. Uma cultura de semente pode ser produzida para acumular biomassa para uma cultura de produção. As culturas de semente podem ser geradas incubando-se, adicionalmente, uma cultura de cerca de 1 a 7 dias a cerca de 28 °C, e agitando-se de cerca de 100 a 300 rpm. Mediante a adição de um inóculo, as culturas de produção podem ser incubadas de cerca de 4 a 7 dias em cerca de 16 °C a 32 °C em um agitador orbital a cerca de 300 rpm em escala de frasco de agitação; cerca de 500 a 1.200 rpm de agitação em escala laboratorial; ou com velocidades de agitação equivalentes à velocidade da ponta do propulsor laboratorial em escala de biorreator. Em determinadas modalidades, a água pode ser adicionada para reduzir a viscosidade de um caldo durante a fermentação. A pressão em um tanque de fermentação pode ser definida em cerca de 0,05 a 0,1 MPa (0,5 a 1 bar). Em determinadas modalidades, uma solução de frutose de 50% (p/p) pode ser fornecida após uma solução de glicose e frutose inicial ser exaurida. Em determinadas modalidades, uma cultura de semente ou de produção pode não ter controle de pH, controle de pH unilateral (adição de base apenas) ou controle de pH bilateral (adição de base e ácido). Durante uma fermentação e/ou no fim de uma fermentação, uma variedade de parâmetros pode ser registrada, como, mas sem limitação, produção de microescleródio (MS), produção de esporo submerso (SS), acúmulo de biomassa expresso através de gramas de peso seco celular por quilograma de caldo (DCW), taxa de evolução de carbono (CER), taxa de admissão de oxigênio (OUR), oxigênio dissolvido (DO), concentração de amônia, pH, taxa de alimentação, teor de fonte de carbono e agitação. Tabela 1. Vitaminas presentes em todos os meios. Tabela 2. Sais basais presentes em todas os meios. Tabela 3. Fontes de carbono e nitrogênio em diferentes meios líquidos.

[0045]Em alguns casos, a farinha de soja foi substituída por outras fontes de nitrogênio, como, mas sem limitação, farinha de semente de algodão, extrato de levedura ou ácidos de Casamino; em alguns casos, a razão entre carbono (C) e nitrogênio (N) era 30:1 ou 50:1.

[0046] Em determinadas modalidades, a recuperação e formulação de um produto de entomopatógeno fúngico (Metarhizium spp.) de uma cultura líquida compreendem resfriar e colher um caldo de fermentação. Um fermentador pode ser enxaguado com cerca de 1x a 2x o volume de um caldo de fermentação, e o caldo diluído pode ser agrupado com o caldo puro. Um material fúngico entomopatogênico diluído em um caldo de fermentação pode ser tratado com DE Admix. Um caldo de fermentação tratado pode ser filtrado através de um filtro Büchner. Uma torta de filtro pode ser processada imediatamente ou armazenada em uma sala fria até o processamento. Uma torta de filtro úmida pode ser quebrada e seca em um secador a vácuo por cerca de 48 h a 5 dias. Uma torta de filtro seca pode ser triturada para criar um produto em pó seco fúngico entomopatogênico.

[0047] Conforme usado no presente documento, “administrar” se refere à ação de introduzir uma cepa e/ou uma composição em um ambiente para inibição de patógeno, praga ou inseto ou para aprimorar o desempenho da planta.

[0048] Conforme usado no presente documento, o termo “compostos agroquimicamente ativos” se refere a qualquer substância que seja ou possa ser comumente usada para tratar plantas incluindo, mas sem limitação, fungicidas, bactericidas, inseticidas, acaricidas, nematicidas, moluscicidas, protetores, reguladores de crescimento de planta e nutrientes de planta, assim como, micro-organismos.

[0049] Conforme usado no presente documento, uma composição pode ser um líquido, uma mistura heterogênea, uma mistura homogênea, um pó, uma solução, uma dispersão ou qualquer combinação dos mesmos.

[0050] Conforme usado no presente documento, “quantidade eficaz” se refere a uma quantidade de uma cepa entomopatogênica fúngica ou uma composição suficiente para inibir o crescimento de um micro-organismo patogênico ou para impedir a taxa de crescimento. Em uma outra modalidade, o termo “quantidade eficaz” se refere a uma quantidade de uma cepa entomopatogênica fúngica ou uma composição suficiente para aprimorar o desempenho da planta. Em uma outra modalidade, o termo “quantidade eficaz” se refere a uma quantidade de uma cepa entomopatogênica fúngica ou uma composição suficiente para controlar, exterminar, inibir e reduzir o número, a emergência ou o crescimento de um patógeno, praga ou inseto. Em uma outra modalidade, o termo “quantidade eficaz” se refere a uma quantidade de uma cepa entomopatogênica fúngica ou uma composição suficiente para prevenir danos de um patógeno, praga ou inseto. Um versado na técnica reconhecerá que uma quantidade eficaz de uma cepa entomopatogênica fúngica ou uma composição pode não reduzir os números de patógenos, pragas ou insetos, mas é eficaz na diminuição de danos às plantas como resultado de um patógeno, praga ou inseto. Por exemplo, uma quantidade eficaz em termos de pesticida pode reduzir a emergência de patógeno, praga ou inseto, ou danos às sementes, raízes, brotos ou folhagem de plantas que são tratadas em comparação com aquelas que não são tratadas.

[0051] Conforme usado no presente documento, o termo “inibir” se refere a destruir, prevenir, reduzir, resistir, controlar, diminuir, retardar ou, de outro modo, interferir com o crescimento ou a sobrevivência de um patógeno, praga ou inseto quando comparado ao crescimento ou à sobrevivência do patógeno, praga ou inseto em um controle não tratado. Quaisquer dos termos dentre inibir, destruir, prevenir, controlar, diminuir, retardar, interferir, resistir ou reduzir podem ser usados intercambiavelmente. Em uma modalidade, “inibir” é destruir, prevenir, controlar, reduzir, resistir, diminuir, retardar ou, de outro modo, interferir com o crescimento, a emergência ou sobrevivência de um patógeno, praga ou inseto por pelo menos cerca de 3% a pelo menos cerca de 100%, ou qualquer valor entre, por exemplo, pelo menos cerca de 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% ou 100% quando em comparação com o crescimento ou a sobrevivência do patógeno, praga ou inseto em um controle não tratado. A quantidade de inibição pode ser medida conforme descrito no presente documento ou pelos outros métodos conhecidos na técnica. Conforme usado no presente documento, “proteger uma planta, parte de planta ou semente de um patógeno, praga ou praga de inseto” se destina a significar a limitação ou eliminação de dano relacionado a patógeno, praga ou inseto a uma planta, parte de planta ou semente, por exemplo, inibindo-se a habilidade de o patógeno, praga ou inseto crescer, emergir, alimentar e/ou reproduzir ou exterminando-se o patógeno, praga ou inseto. Conforme usado no presente documento, atividade pesticida e/ou inseticida se refere a uma atividade de um composto, uma composição e/ou um método que protege uma planta, uma parte de planta ou uma semente de um patógeno, praga ou inseto.

[0052] Em uma modalidade da invenção, inibição de um patógeno, praga ou inseto dura ou fornece proteção por mais de um dia, dois dias, três dias, quatro dias, cinco dias, seis dias, uma semana, duas semanas, três semanas, um mês ou mais após uma cepa entomopatogênica fúngica ou uma composição revelada no presente documento ser aplicada ao material da matéria. Em uma outra modalidade, a inibição de um patógeno, praga ou inseto dura de um a sete dias, de sete a 14 dias, de 14 a 21 dias ou de 21 a 30 dias ou mais. Em uma outra modalidade, a inibição do crescimento de um patógeno, praga ou inseto dura ou fornece proteção por mais do que o tempo da aplicação à emergência de adulto do patógeno, praga ou inseto.

[0053] Conforme usado no presente documento, o termo “geneticamente modificado” ou “geneticamente manipulado” se destina a significar quaisquer espécies que contém um traço, loci ou sequência genética que não foi encontrada na espécie ou cepa antes da manipulação. Uma planta geneticamente modificada pode ser transgênica, cis-gênica, editada por genoma ou melhorada para conter um traço, loci ou sequência genética. Uma planta geneticamente modificada pode ser preparada por meios conhecidos por aqueles versados na técnica, como transformação por meio de bombardeamento e/ou mediação bacteriana, por um sistema Cas/CRISPR ou TALENS ou por meio de técnicas de melhoramento. Conforme usado no presente documento, um "traço” é um locus ou sequência nova ou modificada de uma planta geneticamente modificada, incluindo, mas sem limitação, uma planta transgênica. Um traço pode fornecer resistência a herbicida, patógeno, praga ou inseto ou qualquer outra característica agronomicamente desejável, como resistência à seca ou utilização de nitrogênio aumentada para a planta geneticamente modificada.

[0054] Conforme usado no presente documento, o termo “ambiente de uma planta, parte de planta ou uma semente” se destina a significar a área que circunda a planta, parte de planta ou semente, incluindo, mas sem limitação, o solo, o ar ou o sulco. O ambiente de uma planta, parte de planta ou semente pode estar em muita proximidade, tocando, adjacente ou no mesmo campo que a planta, parte de planta ou semente. Uma composição descrita no presente documento pode ser aplicada ao ambiente da planta, parte de planta ou semente como um tratamento de semente, como uma aplicação foliar, como uma aplicação em sulco, como uma aplicação granular, como uma aplicação ao solo ou como uma aplicação encapsulada. Conforme usado no presente documento, “em sulco” se destina a significar dentro ou perto da área em que uma semente é plantada. A composição revelada no presente documento pode ser aplicada em sulco concomitante ou simultaneamente com uma semente. Em uma outra modalidade, uma composição revelada no presente documento pode ser aplicada sequencialmente, antes ou depois de uma semente ser plantada.

[0055] Conforme usado no presente documento, o termo “modo de ação diferente” é usado para se referir a uma composição pesticida que controla um patógeno, uma praga ou um inseto através de uma trajetória ou receptor que é diferente de uma outra composição pesticida. Conforme usado no presente documento, o termo “modo de ação diferente” inclui os efeitos pesticidas de uma ou mais composições pesticidas para diferentes locais de ligação (isto é, diferentes receptores de toxina e/ou diferentes locais no mesmo receptor de toxina) nas membranas do traço gastrointestinal de insetos ou através da trajetória de interferência de RNA para diferentes genes-alvo.

[0056] Conforme usado no presente documento, o termo “patógeno, praga ou inseto” inclui, mas sem limitação, fungos patogênicos, bactérias, ácaros, carrapatos, micro-organismos patogênicos, e nematódeos, assim como inseto das ordens Coleoptera, Lepidoptera, Mallophaga, Homoptera, Hemiptera, Orthroptera, Thysanoptera, Dermaptera, Isoptera, Anoplura, Siphonatpera, Trichoptera e outras, incluindo, mas sem limitação, Diabrotica virgifera virgifera, Diabrotica undecimpunctata howardi e Diabrotica barberi.

[0057] As modalidades da presente invenção são úteis na inibição de larvas e adultos da ordem Coleóptera das famílias Anthribidae, Bruchidae e Curculionidae (incluindo, mas sem limitação: Anthonomus grandis Boheman (bicudo-do-algodoeiro); Lissorhoptrus oryzophilus Kuschel (gorgulho da água do arroz); Sitophilus granarius Linnaeus (gorgulho do celeiro); S. oryzae Linnaeus (gorgulho do arroz); Hypera punctata Fabricius (gorgulho da folha de trevo); Cylindrocopturus adspersus LeConte (gorgulho do caule de girassol); Smicronyx fulvus LeConte (gorgulho vermelho da semente de girassol); S. sordidus LeConte (gorgulho cinzento da semente de girassol); Sfenophorus maidis Chittenden (gorgulho do maís); besouros-pulga, besouros do pepino, vermes da raiz, besouros da folha, besouros da batata e lagartas mineiras na família Chrysomelidae (incluindo, mas sem limitação: Leptinotarsa decemlineata Say (besouro do Colorado da batata); Diabrotica virgifera virgifera LeConte (verme de raiz do milho ocidental); D. barberi Smith e Lawrence (verme de raiz do milho do norte); D. undecimpunctata howardi Barber (verme de raiz do milho do sul); Chaetocnema pulicaria Melsheimer (besouro-pulga do milho); Phyllotreta cruciferae Goeze (besouro-pulga crucífero); Phyllotreta striolata (besouro-pulga listrado); Colaspis brunnea Fabricius (colaspis da uva); Oulema melanopus Linnaeus (besouro da folha de cereal); Zygogramma exclamationis Fabricius (besouro do girassol); besouros da família Coccinellidae (incluindo, mas sem limitação: Epilachna varivestis Mulsant (besouro do feijão do México); escaravelhos e outros besouros da família Scarabaeidae (incluindo, sem limitação: Popillia japonica Newman (besouro japonês); Cyclocephala borealis Arrow (escaravelho mascarado do norte, escaravelho branco); C. immaculata Olivier (escaravelho mascarado do sul, escaravelho branco); Rhizotrogus majalis Razoumowsky (escaravelho europeu); Phyllophaga crinita Burmeister (escaravelho branco); Ligyrus gibbosus De Geer (besouro da cenoura); besouros de carpete da família Dermestidae; larvas-arame da família Elateridae, Eleodes spp., Melanotus spp.; Conoderus spp.; Limonius spp.; Agriotes spp.; Ctenicera spp.; Aeolus spp.; besouros da casca da família Scolytidae e besouros da família Tenebrionidae.

[0058] Métodos para medir a atividade pesticida e/ou a inibição de um patógeno, praga ou inseto são bem conhecidos na técnica. Consulte, por exemplo, Czapla e Lang, (1990) J. Econ. Entomol. 83:2.480 a 2.485; Andrews, et al., (1988) Biochem. J. 252:199 a 206; Marrone, et al., (1985) J. of Economic Entomology 78:290 a 293 e Patente n° US 5.743.477, todos os quais são incorporados ao presente documento a título de referência em sua totalidade. Geralmente, o pesticida é misturado e usado em ensaios de alimentação. Consulte, por exemplo Marrone, et al., (1985) J. of Economic Entomology 78:290 a 293. Tais ensaios podem incluir colocar as plantas em contato com um ou mais patógenos, pragas ou insetos e determinar a habilidade da planta de sobreviver e/ou causar a morte dos patógenos, pragas ou insetos.

[0059] Conforme usado no presente documento, o termo "planta" se refere a todas as plantas, partes de planta e populações de planta, como plantas selvagens, cultivares, plantas transgênicas e variedades de plantas desejáveis e indesejáveis (na possibilidade ou não de poderem ser protegidas pela variedade de planta ou pelos direitos do melhorador de planta). Os cultivares e variedades de plantas podem ser plantas obtidas por meio de propagação convencional e métodos de melhoramento que podem ser auxiliados ou complementados por um ou mais métodos biotecnológicos como com o uso de haploides duplos, fusão de protoplasto, mutagênese aleatória e direcionada, marcadores moleculares ou genéticos ou por meio de métodos de bioengenharia e engenharia genética.

[0060] As modalidades da invenção podem, em geral, ser usadas para quaisquer espécies de planta, incluindo, mas sem limitação, monocotiledôneas e dicotiledôneas. Os exemplos de plantas de interesse incluem, mas sem limitação, milho (Zea mays), Brassica sp. (por exemplo, B. napus, B. rapa, B. juncea), particularmente aquelas espécies de Brassica úteis como fontes de óleo de semente, alfafa (Medicago sativa), arroz (Oryza sativa), centeio (Secale cereale), sorgo (Sorghum bicolor, Sorghum vulgare), milhete (por exemplo, milhete-pérola (Pennisetum glaucum), milho miúdo (Panicum miliaceum), milho painço (Setaria italica), capim-pé-de-galinha-gigante (Eleusine coracana)), girassol (Helianthus annuus), cártamo (Carthamus tinctorius), trigo (Triticum aestivum), soja (Glycine max), tabaco (Nicotiana tabacum), batata (Solanum tuberosum), amendoins (Arachis hypogaea), algodão (Gossypium barbadense, Gossypium hirsutum), batata doce (Ipomoea batatus), mandioca (Manihot esculenta), café (Coffea spp.), coco (Cocos nucifera), abacaxi (Ananas comosus), árvores de citrinos (Citrus spp.), cacau (Theobroma cacao), chá (Camellia sinensis), banana (Musa spp.), abacate (Persea americana), figueira (Ficus casica), goiaba (Psidium guajava), manga (Mangifera indica), oliveira (Olea europaea), papaia (Carica papaya), caju (Anacardium occidentale), macadâmia (Macadamia integrifolia), amêndoa (Prunus amygdalus), beterraba sacarina (Beta vulgaris), cana-de-açúcar (Saccharum spp.), aveia, cevada, plantas ornamentais e coníferas.

[0061] Conforme usado no presente documento, o termo “partes de planta” se refere a todas as partes acima e abaixo do solo e órgãos de plantas como broto, folha, flor e raiz, por exemplo, folhas, agulhas, caules, flores, corpos frutíferos, frutas e sementes, assim como raízes, tubérculos, cormos e rizomas estão incluídos. Culturas e material de propagação vegetativo e generativo, por exemplo, cortes, cormos, rizomas, tubérculos, mudas e sementes também são partes de planta.

[0062] Conforme usado no presente documento, o termo “esporo” inclui, mas sem limitação, conidiósporos, conidiósporos aéreos, esporos submersos, blastósporos, esporos, conídios, micélios, micélio vegetativo, microescleródio, e/ou qualquer outro estágio de ciclo de vida ou mistura de estágios de ciclo de vida de um entomopatógeno fúngico. Um “conidiósporo aéreo” (AC) se refere a conidiósporos formados pelo ciclo de desenvolvimento assexual na superfície de um meio de ágar ou outro substrato sólido de composição adequada. Conforme usado no presente documento, o termo “esporos submersos” se refere a conidiósporos e/ou blastoesporos submersos que se desenvolvem em cultura líquida.

[0063] Conforme usado no presente documento, o termo “viável” se refere a uma célula microbiana, propágulo ou esporo que é metabolicamente ativo ou tem capacidade de crescer e se diferenciar. Desse modo, propágulos, como esporos, são “viáveis” quando estão dormentes e têm capacidade de germinar.

[0064] Controle biológico de patógenos, pragas ou insetos de significância agrícola com o uso de um agente microbiano, como fungos, bactérias ou uma outra espécie de inseto ou um composto biológico ou um agente biológico derivado de fungos, bactérias, insetos e plantas produz um pesticida químico alternativo a sintético ecológico e comercialmente atraente. De modo geral, o uso de biopesticidas apresenta um risco mais baixo de poluição e riscos ambientais e biopesticidas fornecem especificidade alvo maior do que é característico de inseticidas e pesticidas químicos de amplo espectro tradicionais. Além disso, biopesticidas muitas vezes custam menos para produzir e, assim, aprimoram o rendimento econômico para uma ampla variedade de culturas.

[0065] Determinadas espécies de micro-organismos do gênero Bacillus são conhecidas por terem atividade pesticida contra uma gama de pragas de insetos incluindo Lepidóptera, Díptera, Coleóptera, Hemíptera e outras. Bacillus thuringiensis (Bt) e Bacillus popilliae estão dentre os agentes de biocontrole mais bem-sucedidos descobertos até hoje. A patogenicidade de inseto também foi atribuída a cepas de B. larvae, B. lentimorbus, B. sphaericus e B. cereus. Os inseticidas microbianos, particularmente aqueles obtidos a partir de cepas de Bacillus, tiveram uma função importante na agricultura como alternativas ao controle químico de pragas.

[0066] As plantas de cultura foram desenvolvidas com a resistência a insetos aprimorada modificando-se geneticamente as plantas de cultura para produzir proteínas pesticidas a partir de Bacillus. Por exemplo, as plantas de milho e de algodão foram geneticamente modificadas para produzir proteínas pesticidas isoladas das cepas de Bt. Essas culturas geneticamente modificadas são, agora, amplamente usadas na agricultura e dotaram o agricultor de uma alternativa ecologicamente correta para os métodos tradicionais de controle de insetos. Embora tenham demonstrado ser muito bem-sucedidas comercialmente, essas plantas de cultura resistentes a insetos geneticamente modificadas fornecem resistência a apenas uma faixa estreita das pragas de inseto economicamente importantes. Em alguns casos, os insetos podem desenvolver resistência a compostos inseticidas diferentes, o que gera a necessidade de identificar agentes de controle biológico alternativos para controle de patógeno, praga ou inseto.

[0067] Uma modalidade da invenção se refere a uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição e um método de produção e uso da cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição. Em uma modalidade, as cepas entomopatogênicas encontraram uso na inibição, no controle ou extermínio de um patógeno, praga ou inseto, incluindo, mas sem limitação, fungos, fungos patogênicos, bactérias, ácaros, carrapatos, micro-organismos patogênicos e nematódeos, assim como insetos das ordens Coleoptera, Diptera, Hymenoptera, Lepidoptera, Mallophaga, Homoptera, Hemiptera Orthroptera, Thysanoptera, Dermaptera, Isoptera, Anoplura, Siphonaptera, Trichoptera, etc., particularmente Coleoptera, incluindo, mas sem limitação, Diabrotica virgifera, Diabrotica undecimpunctata howardi e Diabrotica barberi, e para produzir composições com atividade pesticida.

[0068] Em uma modalidade, a cepa (ou cepas) entomopatogênica fúngica é selecionada dentre o grupo que consiste em: Metarhizium anisopliae 15013-1, Metarhizium robertsii 23013-3, Metarhizium anisopliae 3213-1 e combinações das mesmas.

[0069] Metarhizium anisopliae 15013-1 (NRRL 67073) foi depositada em 18 de junho de 2015 na Coleção de Cultura de Serviço de Pesquisa Agrícola (NRRL), 1815 North University Street, Peoria, Ill., 67073 e recebeu o número de acesso NRRL 67073. Os depósitos foram realizados sob as provisões do Tratado de Budapeste sobre o Reconhecimento Internacional do Depósito de Micro-organismos para Efeitos do Procedimento em Matéria de Patentes.

[0070] Metarhizium robertsii 23013-3 (NRRL 67075) foi depositada em 18 de junho de 2015 na Coleção de Cultura de Serviço de Pesquisa Agrícola (NRRL), 1815 North University Street, Peoria, Ill., 61604 e recebeu o número de acesso NRRL 67075. Os depósitos foram realizados sob as provisões do Tratado de Budapeste sobre o Reconhecimento Internacional do Depósito de Micro-organismos para Efeitos do Procedimento em Matéria de Patentes.

[0071] Metarhizium anisopliae 3213-1 (NRRL 67074) foi depositada em 18 de junho de 2015 na Coleção de Cultura de Serviço de Pesquisa Agrícola (NRRL), 1815 North University Street, Peoria, Ill., 61604 e recebeu o número de acesso NRRL 67074. Os depósitos foram realizados sob as provisões do Tratado de Budapeste sobre o Reconhecimento Internacional do Depósito de Micro-organismos para Efeitos do Procedimento em Matéria de Patentes.

[0072] Uma modalidade da invenção se refere a uma composição que compreende ou consiste em ou consiste essencialmente em uma cepa entomopatogênica fúngica selecionada dentre o grupo que consiste em: Metarhizium anisopliae 15013-1, Metarhizium robertsii 23013-3, e Metarhizium anisopliae 3213-1 e combinações das mesmas. Em uma outra modalidade, uma composição compreende, consiste em ou consiste essencialmente em pelo menos duas ou mais cepas entomopatogênicas fúngicas selecionadas dentre o grupo que consiste em: Metarhizium anisopliae 15013-1, Metarhizium robertsii 23013-3, Metarhizium anisopliae 3213-1. Em uma modalidade adicional, uma composição compreende, consiste em, ou consiste essencialmente em uma cepa entomopatogênica fúngica selecionada dentre o grupo que consiste em: Metarhizium anisopliae 15013-1, Metarhizium robertsii 23013-3, e Metarhizium anisopliae 3213-1 e combinações das mesmas. Em uma modalidade, uma composição é uma cultura biologicamente pura de Metarhizium anisopliae 15013-1, Metarhizium robertsii 23013-3 e Metarhizium anisopliae 3213-1 e combinações das mesmas.

[0073] Uma modalidade da invenção se refere a uma composição que compreende uma cepa entomopatogênica fúngica revelada no presente documento e um composto ou agente selecionado dentre o grupo que consiste em: compostos agroquimicamente ativos, agentes de biocontrole, compostos de lipo-quito-oligossacarídeo (LCOs), isoflavonas, quinazolinas, compostos inseticidas, azolopirimidinilaminas, compostos poliméricos, compostos iônicos, tiofenos substituídos, ditiínas substituídas, fluopiram, compostos de enaminocarbonila, compostos de estrigolactona, e compostos ditiino-tetracarboximida e combinações dos mesmos.

[0074] Uma modalidade adicional se refere ao uso de uma primeira composição que compreende uma cepa entomopatogênica fúngica revelada no presente documento e uma segunda composição que compreende um composto ou um agente selecionado dentre o grupo que consiste em: compostos agroquimicamente ativos, agentes de biocontrole, compostos de lipo-quito-oligossacarídeo (LCOs), isoflavonas, quinazolinas, compostos inseticidas, azolopirimidinilamina, compostos poliméricos, compostos iônicos, tiofenos substituídos, ditiínas substituídas, fluopiram, compostos de enaminocarbonila, compostos de estrigolactona, e compostos ditiino-tetracarboximida e combinações dos mesmos.

[0075] Em uma modalidade, uma composição que compreende uma cepa entomopatogênica fúngica revelada no presente documento e um agente de biocontrole é revelada. Conforme usado no presente documento, o termo “agente de biocontrole” (“BCA”) inclui bactérias, fungos ou leveduras, protozoários, vírus, nematódeos entomopatogênicos e extratos botânicos, ou produtos produzidos por micro-organismos que incluem proteínas ou metabólitos secundários, e inoculantes que têm uma ou mais das seguintes características: (1) os mesmo inibe ou reduz infestação de planta e/ou crescimento de patógenos, pragas ou insetos, incluindo, mas sem limitação, fungos patogênicos, bactérias e nematódeos, assim como pragas artrópodes, como insetos, aracnídeos, quilópodes, diplópodes, ou o mesmo inibe a infestação de planta e/ou o crescimento de uma combinação de patógenos de planta, pragas ou insetos; (2) o mesmo aprimora o desempenho da planta; (3) o mesmo aprimora o rendimento da planta; (4) o mesmo aprimora o vigor da planta; e (5) o mesmo aprimora a saúde da planta.

[0076] Em uma modalidade, uma composição que compreende uma cepa entomopatogênica fúngica revelada no presente documento e um composto agroquimicamente ativo é revelada. Compostos agroquimicamente ativos são substâncias que são ou podem ser usadas para tratar uma semente, uma planta, uma parte de planta ou o ambiente da semente ou planta ou parte de planta incluindo, mas sem limitação, fungicidas, bactericidas, inseticidas, acaricidas, nematicidas, moluscicidas, protetores, reguladores de crescimento de planta, nutrientes de planta, entidades químicas com um mecanismo de ação conhecido, micro-organismos adicionais e agentes de biocontrole e combinações dos mesmos.

[0077] Em uma outra modalidade, uma primeira composição que compreende uma cepa entomopatogênica fúngica revelada no presente documento e uma segunda composição que compreende um composto agroquimicamente ativo, em que a primeira e a segunda composições podem inibir patógenos de planta, pragas ou insetos e/ou podem aprimorar o desempenho da planta são reveladas.

[0078] Em uma modalidade, uma primeira e uma segunda composições reveladas no presente documento podem ser aplicadas ao mesmo tempo a uma semente, uma planta, uma parte de planta ou o ambiente de uma semente, uma planta ou uma parte de planta. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada a uma semente, uma planta, uma parte de planta ou o ambiente de uma semente, uma planta ou uma parte de planta seguido pela aplicação de uma segunda composição a uma semente, uma planta, uma parte de planta ou o ambiente de uma semente, uma planta ou uma parte de planta. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada a uma semente, uma planta, uma parte de planta ou o ambiente de uma semente, uma planta ou uma parte de planta seguido pela aplicação de uma primeira composição a uma semente, uma planta, uma parte de planta ou o ambiente de uma semente, uma planta ou uma parte de planta.

[0079] Em uma modalidade, uma primeira e uma segunda composições reveladas no presente documento podem ser aplicadas ao mesmo tempo a uma semente. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada a uma semente seguido pela aplicação de uma segunda composição à semente. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada a uma semente, e, em seguida, pela aplicação de uma primeira composição à semente. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada a uma semente seguido pela aplicação de uma segunda composição a uma planta. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada a uma semente seguido pela aplicação de uma primeira composição a uma planta. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada a uma semente seguido pela aplicação de uma segunda composição a uma parte de planta. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada a uma semente seguido pela aplicação de uma primeira composição a uma parte de planta. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada a uma semente seguido pela aplicação de uma segunda composição ao ambiente da semente. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada a uma semente seguido pela aplicação de uma primeira composição ao ambiente da semente. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada a uma semente seguido pela aplicação de uma segunda composição ao ambiente de uma planta. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada a uma semente seguido pela aplicação de uma primeira composição ao ambiente de uma planta. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada a uma semente seguido pela aplicação de uma segunda composição ao ambiente de uma parte de planta. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada a uma semente seguido pela aplicação de uma primeira composição ao ambiente de uma parte de planta.

[0080] Em uma modalidade, uma primeira e uma segunda composições reveladas no presente documento podem ser aplicadas ao mesmo tempo a uma planta. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada a uma planta seguido pela aplicação de uma segunda composição à planta. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada a uma planta seguido pela aplicação de uma primeira composição à planta. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada a uma planta seguido pela aplicação de uma segunda composição a uma semente. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada a uma planta seguido pela aplicação de uma primeira composição a uma semente. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada a uma planta seguido pela aplicação de uma segunda composição a uma parte de planta. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada a uma planta seguido pela aplicação de uma primeira composição a uma parte de planta. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada a uma planta seguido pela aplicação de uma segunda composição ao ambiente de uma semente. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada a uma planta seguido pela aplicação de uma primeira composição ao ambiente de uma semente. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada a uma planta seguido pela aplicação de uma segunda composição ao ambiente da planta. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada a uma planta seguido pela aplicação de uma primeira composição ao ambiente da planta. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada a uma planta seguido pela aplicação de uma segunda composição ao ambiente de uma parte de planta. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada a uma planta seguido pela aplicação de uma primeira composição ao ambiente de uma parte de planta.

[0081] Em uma modalidade, uma primeira e uma segunda composições reveladas no presente documento podem ser aplicadas ao mesmo tempo a uma parte de planta. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada a uma parte de planta seguido pela aplicação de uma segunda composição à parte de planta. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada a uma parte de planta seguido pela aplicação de uma primeira composição à parte de planta. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada a uma parte de planta seguido pela aplicação de uma segunda composição a uma semente. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada a uma parte de planta seguido pela aplicação de uma primeira composição a uma semente. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada a uma parte de planta seguido pela aplicação de uma segunda composição a uma parte de planta. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada a uma parte de planta seguido pela aplicação de uma primeira composição a uma parte de planta. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada a uma parte de planta seguido pela aplicação de uma segunda composição ao ambiente de uma semente. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada a uma parte de planta seguido pela aplicação de uma primeira composição ao ambiente de uma semente. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada a uma parte de planta seguido pela aplicação de uma segunda composição ao ambiente de uma planta. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada a uma parte de planta seguido pela aplicação de uma primeira composição ao ambiente de uma planta. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada a uma parte de planta seguido pela aplicação de uma segunda composição ao ambiente da parte de planta. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada a uma parte de planta seguido pela aplicação de uma primeira composição ao ambiente da parte de planta.

[0082] Em uma modalidade, uma primeira e uma segunda composições reveladas no presente documento podem ser aplicadas ao mesmo tempo ao ambiente de uma semente. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada ao ambiente de uma semente seguido pela aplicação de uma segunda composição ao ambiente da semente. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada ao ambiente de uma semente seguido pela aplicação de uma primeira composição ao ambiente da semente. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada ao ambiente de uma semente seguido pela aplicação de uma segunda composição a uma semente. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada ao ambiente de uma semente seguido pela aplicação de uma primeira composição a uma semente. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada ao ambiente de uma semente seguido pela aplicação de uma segunda composição a uma planta. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada ao ambiente de uma semente seguido pela aplicação de uma primeira composição a uma planta. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada ao ambiente de uma semente seguido pela aplicação de uma segunda composição a uma parte de planta. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada ao ambiente de uma semente seguido pela aplicação de uma primeira composição a uma parte de planta. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada ao ambiente de uma semente seguido pela aplicação de uma segunda composição ao ambiente de uma planta. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada ao ambiente de uma semente seguido pela aplicação de uma primeira composição ao ambiente de uma planta. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada ao ambiente de uma semente seguido pela aplicação de uma segunda composição ao ambiente de uma parte de planta. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada ao ambiente de uma semente seguido pela aplicação de uma primeira composição ao ambiente de uma parte de planta.

[0083] Em uma modalidade, uma primeira e uma segunda composições reveladas no presente documento podem ser aplicadas ao mesmo tempo ao ambiente de uma planta. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada ao ambiente de uma planta seguido pela aplicação de uma segunda composição ao ambiente da planta. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada ao ambiente de uma planta seguido pela aplicação de uma primeira composição ao ambiente da planta. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada ao ambiente de uma planta seguido pela aplicação de uma segunda composição a uma semente. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada ao ambiente de uma planta seguido pela aplicação de uma primeira composição a uma semente. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada ao ambiente de uma planta seguido pela aplicação de uma segunda composição a uma planta. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada ao ambiente de uma planta seguido pela aplicação de uma primeira composição a uma planta. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada ao ambiente de uma planta seguido pela aplicação de uma segunda composição a uma parte de planta. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada ao ambiente de uma planta seguido pela aplicação de uma primeira composição a uma parte de planta. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada ao ambiente de uma planta seguido pela aplicação de uma segunda composição ao ambiente de uma semente. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada ao ambiente de uma planta seguido pela aplicação de uma primeira composição ao ambiente de uma semente. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada ao ambiente de uma planta seguido pela aplicação de uma segunda composição ao ambiente de uma parte de planta. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada ao ambiente de uma planta seguido pela aplicação de uma primeira composição ao ambiente de uma parte de planta.

[0084] Em uma modalidade, uma primeira e uma segunda composições reveladas no presente documento podem ser aplicadas ao mesmo tempo ao ambiente de uma parte de planta. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada ao ambiente de uma parte de planta seguido pela aplicação de uma segunda composição ao ambiente da parte de planta. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada ao ambiente de uma parte de planta seguido pela aplicação de uma primeira composição ao ambiente da parte de planta. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada ao ambiente de uma parte de planta seguido pela aplicação de uma segunda composição a uma semente. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada ao ambiente de uma parte de planta seguido pela aplicação de uma primeira composição a uma semente. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada ao ambiente de uma parte de planta seguido pela aplicação de uma segunda composição a uma planta. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada ao ambiente de uma parte de planta seguido pela aplicação de uma primeira composição a uma planta. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada ao ambiente de uma parte de planta seguido pela aplicação de uma segunda composição ao ambiente de uma semente. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada ao ambiente de uma parte de planta seguido pela aplicação de uma primeira composição ao ambiente de uma semente. Em uma outra modalidade, uma primeira composição pode ser aplicada ao ambiente de uma parte de planta seguido pela aplicação de uma segunda composição ao ambiente de uma planta. Em ainda uma outra modalidade, uma segunda composição pode ser aplicada ao ambiente de uma parte de planta seguido pela aplicação de uma primeira composição ao ambiente de uma planta.

[0085] Em uma modalidade, o uso de uma cepa fúngica entomopatológica revelada no presente documento com uma composição que compreende uma proteína inseticida de Pseudomonas sp. como PSEEN3174 (Monalysin; (2011) PLoS Pathogens 7:1 a 13); da cepa de Pseudomonas protegens CHA0 e Pf-5 (anteriormente fluorescens) (Pechy-Tarr, (2008) Environmental Microbiology 10:2.368 a 2.386; n° de acesso no GenBank EU400157); de Pseudomonas taiwanensis (Liu, et al., (2010) J. Agric. Food Chem., 58:12.343 a 12.349) e de Pseudomonas pseudoalcligenes (Zhang, et al., (2009) Annals of Microbiology 59:45 a 50 e Li, et al., (2007) Plant Cell Tiss. Organ Cult. 89:159 a 168); proteínas inseticidas de Photorhabdus sp. e Xenorhabdus sp. (Hinchliffe, et al., (2010) The Open Toxicology Journal 3:101 a 118 e Morgan, et al., (2001) Applied and Envir. Micro. 67:2.062 a 2.069); Patente número US 6.048.838, e Patente número US 6.379.946; um polipeptídeo PIP-1 da Publicação de Patente US20140007292 ; um polipeptídeo AfIP-1A e/ou AfIP-1B da Publicação de Patente US20140033361; um polipeptídeo PHI-4 do Número de Série US 13/839702; um polipeptídeo PIP-47 do PCT Número de Série PCT/US14/51063, um polipeptídeo PIP-72 do PCT Número de Série PCT/US14/55128, e δ-endotoxinas incluindo, mas sem limitação, as classes Cry1, Cry2, Cry3, Cry4, Cry5, Cry6, Cry7, Cry8, Cry9, Cry10, Cry11, Cry12, Cry13, Cry14, Cry15, Cry16, Cry17, Cry18, Cry19, Cry20, Cry21, Cry22, Cry23, Cry24, Cry25, Cry26, Cry27, Cry 28, Cry 29, Cry 30, Cry31, Cry32, Cry33, Cry34, Cry35,Cry36, Cry37, Cry38, Cry39, Cry40, Cry41, Cry42, Cry43, Cry44, Cry45, Cry 46, Cry47, Cry49, Cry 51 e Cry55 de genes de δ-endotoxina e os genes de Cyt1 e Cyt2 citolíticos de B. thuringiensis, é revelado.

[0086] Em uma modalidade, uma composição revelada no presente documento compreende um construto de silenciamento de um polinucleotídeo de interesse que resulta na supressão de um patógeno-alvo, praga ou polipeptídeos de inseto. Por “elemento de silenciamento” entende-se que signifique um polinucleotídeo que, quando em contato com ou ingerido por uma praga, tem capacidade de reduzir ou eliminar o nível ou a expressão de um polinucleotídeo-alvo ou o polipeptídeo codificado pela mesma. O elemento de silenciamento empregado pode reduzir ou eliminar o nível de expressão da sequência-alvo influenciando o nível da transcrição de RNA-alvo ou, alternativamente, influenciando a tradução e, assim, afetando o nível do polipeptídeo codificado. Os elementos de silenciamento podem incluir, mas sem limitação, um elemento de supressão de senso, um elemento de supressão antissenso, um RNA de filamento duplo, um siRNA, um amiRNA, um miRNA ou um elemento de supressão de grampo.

[0087] Em uma outra modalidade, uma composição revelada no presente documento compreende moléculas de ácido nucleico que incluem elementos de silenciamento para alvejar a subunidade de ATPase H vacuolar, útil para controlar uma população de praga de coleópteros e infestação conforme descrito na Publicação de Pedido de Patente US 2012/0198586. Em uma modalidade, uma composição revelada no presente documento compreende ácido ribonucleico (RNA ou RNA de filamento duplo) que inibe ou regula de modo decrescente a expressão de um gene-alvo que codifica: uma proteína ribossômica de inseto, como a proteína ribossômica L19, a proteína ribossômica L40 ou a proteína ribossômica S27A; uma subunidade de proteassoma de inseto, como a proteína Rpn6, a Pros 25, a proteína Rpn2, a proteína de subunidade beta 1 de proteassoma ou a proteína Pros beta 2; um β-coat0mero de inseto da vesícula COPI, o Y—coatômero da vesícula COPI, a proteína de β'-coat0mero ou o Z-coatômero da vesícula COPI; um proteína Tetraspanina 2 A de inseto que é uma proteína de domínio de transmembrana putativa; uma proteína de inseto que pertence à família de actina, como Actina 5C; uma proteína ubiquitina-5E de inseto; uma proteína Sec23 de inseto que é um ativador de GTPase envolvido em transporte de proteína intracelular; uma proteína plissada de inseto que é uma miosina não convencional que está envolvida em atividade motora; uma proteína crooked neck de inseto que está envolvida na regulação de união de mRNA alternativo nuclear; uma proteína de subunidade G de H+-ATPase vacuolar de inseto e uma Tbp-1 de inseto, como uma proteína de ligação de Tat, conforme descrito na Publicação PCT WO 2012/055982. Em uma outra modalidade, uma composição revelada no presente documento compreende ácido ribonucleico (RNA ou RNA de filamento duplo) que inibe ou regula para baixo a expressão de um gene-alvo que codifica Snf7 conforme descrito na publicação PCT WO 2007/035650. Em uma modalidade, uma composição revelada no presente documento compreende elementos de silenciamento de polinucleotídeo que alveja RPS10 descrito na publicação de Pedido de Patente US 2011/0054007. Em uma outra modalidade, uma composição revelada no presente documento compreende elementos de silenciamento de polinucleotídeo que alveja RyanR e PAT3 descrito nas publicações de Pedido de Patente 2014/0275208 e US 2015/057389. Em uma modalidade, uma composição revelada no presente documento compreende os ácidos ribonucleicos interferentes (RNA ou RNA de filamento duplo) que funcionam mediante absorção por uma espécie de praga de inseto para regular de modo descendente a expressão de um gene-alvo na dita praga de inseto, em que o RNA compreende pelo menos um elemento de silenciamento, em que o elemento de silenciamento é uma região de RNA de filamento duplo que compreende filamentos complementares anelados, em que um filamento compreende ou consiste em uma sequência de nucleotídeos que é pelo menos parcialmente complementar a uma sequência-alvo de nucleotídeo dentro do gene-alvo, conforme descrito nas Publicações de Pedido de Patente US 2012/029750, US 20120297501 e 2012/0322660. Em uma outra modalidade, uma composição revelada no presente documento compreende alvos potenciais para ácidos ribonucleicos de filamento duplo interferentes para inibir pragas invertebradas incluindo: uma Sequência Homóloga Chd3, uma Sequência Homóloga de Beta-Tubulina, uma Sequência Homóloga de ATPase V de 40 kDa, uma Sequência Homóloga de EF1α, uma Sequência Homóloga p28 de Subunidade de Proteassoma 26S, uma Sequência Homóloga de Hidrolase de Epóxido de Hormônio Juvenil, uma Sequência Homóloga de Proteína de Canal de Cloreto Dependente de Inchaço, uma Sequência Homóloga de Proteína Glicose-6-Fosfato 1- Desidrogenase, uma Sequência Homóloga de Proteína Act42A, uma Sequência Homóloga de Fator 1 de Ribosilação de ADP, uma Sequência Homóloga de Proteína de Fator IIB de Transcrição, Sequências Homólogas de Quitinase, uma Sequência Homóloga de Enzima de Conjugação de Ubiquitina, uma Sequência Homóloga de Gliceraldeído-3-Fosfato Desidrogenase, uma Sequência Homóloga de Ubiquitina B, um Homólogo de Esterase de Hormônio Juvenil e uma Sequência Homóloga de Alfa Tubulina, conforme descrito na Publicação de Pedido de Patente US 2012/0164205.

[0088] Uma modalidade da invenção compreende um componente adicional, que pode ser um carreador, um adjuvante, um agente de solubilização, um agente de suspensão, um diluente, um estabilizador, um sequestrador de oxigênio, um antioxidante, um material alimentício, um agente anticontaminante ou combinações dos mesmos

[0089] Em uma outra modalidade, um componente (ou componentes) adicional pode ser necessário para uma aplicação para a qual uma cepa ou composição entomopatogênica fúngica revelada no presente documento deve ser utilizada. Por exemplo, se uma cepa ou uma composição tiver que ser utilizada sobre ou em um produto agrícola, o componente (ou componentes) adicional pode ser um carreador, um excipiente ou um diluente agricolamente aceitável. Igualmente, se uma cepa ou uma composição tiver que ser utilizada sobre ou em um gênero alimentício o componente (ou componentes) adicional pode ser um carreador, excipiente ou diluente comestível e combinações dos mesmos.

[0090] “Carreadores” ou “veículos” significa materiais adequados para administração de composto e incluem quaisquer tais materiais conhecidos na técnica como, por exemplo, qualquer líquido, gel, solvente, diluente líquido, solubilizador ou semelhante, que é não tóxico e não interage com quaisquer componentes de uma composição de uma maneira prejudicial.

[0091] Exemplos de carreadores nutricionalmente aceitáveis ou comestíveis incluem, por exemplo, água, soluções de sal, álcool, silicone, ceras, vaselina, óleos vegetais, polietilenoglicóis, propilenoglicol, lipossomos, açúcares, gelatina, lactose, amilose, estearato de magnésio, talco, tensoativos, ácido silícico, parafina viscosa, óleo de perfume, monoglicerídeos e diglicerídeos de ácidos graxos, ésteres de ácidos graxos de petroetral, hidroximetil-celulose, polivinilpirrolidina e semelhantes e combinações dos mesmos.

[0092] Exemplos de excipientes incluem, mas sem limitação, celulose microcristalina e outras celuloses, lactose, citrato de sódio, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio dibásico, glicina, amido, açúcar do leite e polietilenoglicóis com alto peso molecular e combinações dos mesmos.

[0093] Exemplos de diluentes incluem, mas sem limitação, água, etanol, propilenoglicol e glicerina, e combinações dos mesmos.

[0094] Componentes adicionais podem ser usados simultaneamente com uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição revelada no presente documento (por exemplo, quando as mesmas estão em mistura por adição juntas ou mesmo quando são liberadas por vias diferentes) ou sequencialmente (por exemplo, podem ser liberadas por vias diferentes).

[0095] Uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição revelada no presente documento e/ou seu diluente também pode conter agentes quelantes como EDTA, ácido cítrico, ácido tartárico, etc. Além do mais, uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição revelada no presente documento e/ou seu diluente pode conter agentes ativos selecionados a partir de ésteres de ácidos graxos, como mono e diglicerídeos, tensoativos não iônicos, como polissorbatos, fosfolipídeos, etc. Uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição revelada no presente documento e/ou seu diluente também pode conter emulsificantes, que podem intensificar a estabilidade de uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição, especialmente após diluição.

[0096] Uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição revelada no presente documento pode ser usada de qualquer forma adequada, independentemente de ser usada por si só ou quando presente em uma composição. Uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição revelada no presente documento pode ser formulada de qualquer modo para garantir que a composição compreenda uma cepa entomopatogênica fúngica ativa.

[0097] Uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição do presente documento pode estar na forma de um pó seco que pode ser polvilhada em ou misturada com um produto. As cepas entomopatogênicas fúngicas e/ou composições das modalidades da invenção reveladas no presente documento na forma de um pó seco podem incluir um aditivo como celulose microcristalina, goma tragacanto, gelatina, amido, lactose, ácido algínico, Primojel® ou amido de milho (que pode ser usado como um agente de desintegração).

[0098] Em ainda uma outra modalidade, uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição revelada no presente documento pode ser um fermentado seco por aspersão ressuspenso em H2O a uma porcentagem selecionada dentre os seguintes: 0,05 a 1, 1 a 3, 3 a 5, 5 a 7, 7 a 10, 10 a 15, 15 a 20 e maior que 20%. Em uma outra modalidade, uma etapa (ou etapas) de clarificação pode ser realizada antes da secagem por aspersão.

[0099] Em uma modalidade, as composições reveladas no presente documento podem compreender uma suspensão de propágulos, como esporos, de uma cepa entomopatogênica fúngica revelada no presente documento. Em uma modalidade, uma suspensão de propágulos, como esporos, pode estar em uma faixa de 1 x 103 a 1 x 1013 CFU/ml.

[0100] Em uma modalidade, as composições reveladas no presente documento podem compreender propágulos concentrados e secos, como esporos, de uma cepa entomopatogênica fúngica revelada no presente documento. Em uma modalidade, os esporos concentrados e secos podem estar em uma faixa de 1 x 103 a 1 x 1013 CFU/g.

[0101] Em uma modalidade, uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição revelada no presente documento pode ser aplicada em uma forma úmida ou uma forma parcial ou completamente dessecada ou em uma pasta fluida, um gel ou uma outra forma.

[0102] Em pelo menos algumas modalidades, uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição revelada no presente documento pode ser seca por congelamento ou liofilizada. Em pelo menos algumas modalidades, uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição revelada no presente documento pode ser misturada com um carreador. Um carreador inclui, mas sem limitação, trigo, maltodextrina, sacarose, dextrose, calcário (carbonato de cálcio), cascas de arroz, cultura de levedura, amido seco, argila e sílico aluminato de sódio. No entanto, não é necessário secar por congelamento uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição revelada no presente documento antes de usar a mesma. Uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição revelada no presente documento também pode ser usada com ou ser conservantes ou em uma forma concentrada, uma forma não concentrada ou uma forma diluída. Em uma modalidade, uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição revelada no presente documento pode estar na forma de um pélete ou um pélete biologicamente puro.

[0103] Uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição revelada no presente documento pode ser adicionada a um carreador. Quando usado, o carreador (ou carreadores) e uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição revelada no presente documento podem ser adicionados a um misturador de fita ou pá e misturados por cerca de 15 minutos, embora a temporização possa ser aumentada ou diminuída. Os componentes são mesclados de modo que uma mistura uniforme de uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição revelada no presente documento e carreador (ou carreadores) seja produzida. O produto final é, de preferência, um pó seco e fluidificável.

[0104] Em uma modalidade, uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição pode ser formulada como um líquido, um pó seco ou um grânulo. Um pó seco ou grânulos podem ser preparados por meios conhecidos por aqueles versados na técnica, como em um revestidor de leito fluidizado por aspersão superior, em um Wurster de aspersão inferior ou por uma granulação de tambor (por exemplo, granulação de alto cisalhamento), uma extrusão, um revestimento em recipiente ou em um misturador de microingredientes.

[0105] Em uma outra modalidade, uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição pode ser fornecida como um pó seco por aspersão ou seco por congelamento.

[0106] Em ainda uma outra modalidade, uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição está em uma formulação líquida. Tal formulação líquida pode conter um ou mais dentre os seguintes: um tampão, um sal, sorbitol e/ou glicerol.

[0107] Em uma modalidade, uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição revelada no presente documento pode ser formulada com um carreador fisiologicamente aceitável selecionado dentre maltodextrina, argila (ilita) calcinada, calcário (carbonato de cálcio), ciclodextrina, trigo ou um componente de trigo, sacarose, amido, Na2SO4, talco, PVA, sorbitol, benzoato, sorbato, glicerol, sacarose, propileno glicol, 1,3-propano diol, glicose, parabenos, cloreto de sódio, citrato, acetato, fosfato, cálcio, metabissulfito, formato e misturas dos mesmos.

[0108] Em uma modalidade, uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição revelada no presente documento pode ser formulada por meio de tecnologia de encapsulação para aprimorar a estabilidade de propágulo fúngico, como esporos, e como um modo de proteger os propágulos fúngicos dos fungicidas aplicados à semente. Em uma modalidade, a tecnologia de encapsulação pode compreender um polímero em microesfera para a liberação temporizada de propágulos fúngicos, como esporos, ao longo do tempo. Em uma modalidade, uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição encapsulada pode ser aplicada em uma aplicação separada de microesferas em sulcos às sementes. Em uma outra modalidade, uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição encapsulada pode ser coaplicada simultaneamente com as sementes.

[0109] Um agente de revestimento utilizável para a liberação sustentada de micropartículas de uma modalidade de encapsulação de uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou composição revelada no presente documento pode ser uma substância que é útil para revestir uma forma microgranular com a substância a ser sustentada no mesmo. Qualquer agente de revestimento que pode formar um revestimento dificilmente permeável para a substância sustentada pode ser usado em geral, sem qualquer limitação específica. Por exemplo, ácido graxo saturado superior, cera, resina termoplástica, resina termorrígida e semelhantes podem ser usados.

[0110] Exemplos de ácidos graxos saturados superiores incluem ácido esteárico, estearato de zinco, amido de ácido esteárico e amida de ácido etilenobis-esteárico. Exemplos de ceras incluem ceras sintéticas como cera de polietileno, cera de carbono, cera Hoechst e éster de ácido graxo; ceras naturais como cera de carnaúba, cera de abelhas e cera japonesa; e ceras de petróleo como cera de parafina e petrolato. Exemplos de resinas termoplásticas incluem resina de éster acrílico, poliolefinas, como polietileno, polipropileno, polibuteno e poliestireno; polímeros de vinila, como acetato de polivinila, cloreto de polivinila, cloreto de polivinilideno, ácido poliacrílico, ácido polimetacrílico, poliacrilato e polimetacrilato; polímeros de dieno, como polímero de butadieno, polímero de isopreno, polímero de cloropeno, copolímero de butadieno-estireno, copolímero de etileno-propileno-dieno, copolímero de estireno- isopreno, copolímero de MMA-butadieno e copolímero de acrilonitrila-butadieno; copolímeros de poliolefina, como copolímero de etileno-propileno, copolímero de buteno-etileno, copolímero de buteno-propileno, copolímero de etileno-acetato de vinila, copolímero de etileno-ácido acrílico, copolímero de ácido estirenoacrílico, copolímero de etileno-ácido metacrílico, copolímero de etileno-metacrílico, copolímero de etileno-monóxido de carbono, copolímero de etileno-acetato de vinila-monóxido de carbono, copolímero de etileno-acetato de vinila-cloreto de vinila e copolímero etileno-acetato de vinila- ácido acrílico; e copolímeros de cloreto de vinila, como copolímero de cloreto de vinila-acetato de vinila e copolímero de cloreto de vinilideno-cloreto de vinila. Exemplos de resinas termorrígida incluem resina de poliuretano, resina epóxi, resina alquídica, resina de poliéster insaturada, resina fenólica, resina de ureia-melamina, resina de ureia e resina de silicone. Dessas resinas, a resina de éster acrílico termoplástico, resina de copolímero de butadieno-estireno, resina de poliuretano termorrígida e resina de epóxi são preferenciais, e dentre essas resinas preferenciais, a resina de poliuretano termorrígida é particularmente preferencial. Os agentes de revestimento podem ser usados unicamente ou em combinações.

[0111] Em uma modalidade, uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição pode incluir uma semente, uma parte de uma semente, uma planta ou uma parte de planta.

[0112] Todas as plantas, partes de planta, sementes, partes de semente ou solo podem ser tratadas com uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição e por meio de um método revelado no presente documento. Uma composição revelada no presente documento pode incluir uma planta, uma parte de planta, uma semente, uma parte de semente, solo ou o ambiente de uma planta, uma parte de planta, uma semente ou uma parte de semente. Uma cepa entomopatogênica fúngica, uma composição e um método revelados no presente documento podem ser aplicadas a uma semente, uma parte de semente, uma planta, uma parte de planta, uma fruta, o ambiente de uma semente, uma parte de semente, uma planta, uma parte de planta ou uma fruta ou o solo em que uma semente, uma parte de semente, uma planta, uma parte de planta ou uma fruta crescem.

[0113] Uma modalidade da invenção se refere a um método para reduzir danos de patógeno vegetal, praga ou inseto a uma semente, uma planta ou uma parte de planta que compreende: (a) tratar uma semente com uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição revelada no presente documento antes do plantio. Em uma outra modalidade, o método compreende adicionalmente: (b) tratar uma planta, uma parte de planta ou o ambiente de uma planta ou uma parte de planta obtida a partir da semente com uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição revelada no presente documento. A cepa entomopatogênica fúngica e/ou a composição usada na etapa (a) pode ser a mesma ou diferente da cepa entomopatogênica fúngica ou da composição usada na etapa (b).

[0114] Uma modalidade da invenção se refere a um método para reduzir danos de patógeno vegetal, praga ou inseto a uma semente, uma planta ou uma parte de planta que compreende: (a) tratar o solo ao redor de uma semente, uma planta ou uma parte de planta com uma cepa entomopatogênica fúngica ou uma composição revelada no presente documento. Em uma outra modalidade, o método compreende adicionalmente: (b) tratar uma semente, uma planta, uma parte de planta, ou o ambiente de uma semente, uma planta ou uma parte de planta com uma cepa entomopatogênica fúngica ou uma composição revelada no presente documento. A cepa entomopatogênica fúngica ou a composição usada na etapa (a) pode ser a mesma ou diferente da cepa entomopatogênica fúngica ou da composição usada na etapa (b).

[0115] Uma modalidade da invenção se refere a um método para reduzir danos de patógeno vegetal, praga ou inseto a uma semente, uma planta ou uma parte de planta que compreende: (a) tratar uma semente antes do plantio com uma cepa entomopatogênica fúngica ou uma composição revelada no presente documento. Em uma outra modalidade, o método compreende adicionalmente: (b) tratar o solo ao redor de uma semente, uma planta ou uma parte de planta ou o ambiente de uma planta ou uma parte de planta com uma cepa entomopatogênica fúngica ou uma composição revelada no presente documento. Em ainda uma outra modalidade, o método compreende adicionalmente: (c) tratar uma planta, uma parte de planta ou o ambiente de uma planta ou uma parte de planta de uma planta produzida a partir da semente com uma cepa entomopatogênica fúngica ou uma composição revelada no presente documento. A cepa entomopatogênica fúngica ou a composição usada na etapa (a) pode ser a mesma ou diferente da cepa entomopatogênica fúngica ou da composição usada na etapa (b). A cepa entomopatogênica fúngica ou a composição usada na etapa (a) pode ser a mesma ou diferente da cepa entomopatogênica fúngica ou da composição usada na etapa (c). A cepa entomopatogênica fúngica ou a composição usada na etapa (b) pode ser a mesma ou diferente da cepa entomopatogênica fúngica ou da composição usada na etapa (c).

[0116] Em uma modalidade, as espécies de planta selvagens e cultivares de planta ou aquelas obtidas através de melhoramento biológico convencional, como cruzamento ou fusão de protoplasto, sementes e partes de planta dos mesmos, podem ser tratadas com uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição e um método revelado no presente documento. Em uma outra modalidade, as plantas transgênicas e cultivares de planta obtidos por meio de engenharia genética, sementes e partes de planta das mesmas, podem ser tratadas com uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição e um método revelado no presente documento.

[0117] Em uma outra modalidade, uma semente, uma planta, uma parte de planta ou um cultivar de planta (obtido por meio de métodos de biotecnologia de planta como engenharia genética) que podem ser tratados com uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição e um método revelado no presente documento são plantas tolerantes a herbicida ou resistentes a herbicida, isto é, plantas tornadas tolerantes ou resistentes a um ou mais herbicidas. Tais plantas podem ser obtidas por meio de modificação genética ou por meio de seleção de plantas que contém uma mutação que confere tal tolerância ou resistência a herbicida. As plantas resistentes a herbicida são, por exemplo, plantas tolerantes a glifosato, isto é, plantas tornadas tolerantes a glifosato herbicida ou sais do mesmo. As plantas podem ser tornadas tolerantes a glifosato através de diferentes meios. Por exemplo, plantas tolerantes a glifosato podem ser obtidas transformando-se a planta com um gene que codifica a enzima 5-enolpiruvilshilcimato-3-fosfato sintase (EPSPS).

[0118] Sementes, plantas, partes de planta ou cultivares de planta (obtidos por meio de métodos de biotecnologia vegetal como engenharia genética) que também podem ser tratados com uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição e um método revelado no presente documento são plantas geneticamente modificadas resistentes a inseto (ou plantas transgênicas), isto é, plantas tornadas resistentes ao ataque por determinados insetos-alvo. Tais sementes, plantas, partes de planta ou cultivares de planta podem ser obtidos por meio de transformação genética ou por meio de seleção de plantas que contêm uma mutação que confere tal resistência a inseto.

[0119] Em uma outra modalidade, sementes, plantas, partes de planta ou cultivares de planta (obtidos por métodos de biotecnologia de planta como engenharia genética) que podem ser tratados com uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição e um método revelado no presente documento são tolerantes aos estresses abióticos. Tais sementes, plantas, partes de planta ou cultivares de planta podem ser obtidos por meio de transformação genética ou por meio de seleção de sementes, plantas, partes de planta ou cultivares de planta que contêm uma mutação que confere tal resistência ao estresse.

[0120] Em uma outra modalidade, sementes, plantas, partes de planta ou cultivares de planta (obtidos por meio de métodos de biotecnologia vegetal como engenharia genética) que podem ser tratados com uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou composição e um método revelado no presente documento são convencionalmente melhorados, produzidos por meio de mutagênese ou geneticamente modificados para conter uma combinação ou uma pilha de traços valiosos, incluindo, mas sem limitação, tolerância a herbicida, resistência a inseto e tolerância a tensão abiótica. As cepas entomopatogênicas fúngicas, composições e métodos das modalidades da invenção podem ser usados para tratar variedades de planta que serão desenvolvidas, ou comercializadas, no futuro e que têm esses traços genéticos ou traços a serem desenvolvidos no futuro.

[0121] Conforme usado no presente documento, a aplicação de uma cepa entomopatogênica fúngica ou uma composição a uma semente, uma planta, ou parte de planta, ou o ambiente de uma semente, uma planta ou uma parte de planta inclui colocar em contato a semente, a planta ou a parte de planta, ou o ambiente da semente, a planta ou a parte de planta direta e/ou indiretamente com as cepas entomopatogênicas fúngicas ou as composições reveladas no presente documento. Em uma modalidade, uma cepa entomopatogênica fúngica ou uma composição pode ser diretamente aplicada a uma semente, uma planta ou uma parte de planta, ou o ambiente de uma semente, uma planta ou uma parte de planta como uma aspersão, um enxágue ou um pó ou qualquer combinação dos mesmos. Uma etapa de contato pode ocorrer enquanto uma semente, uma planta ou uma parte de planta está sendo cultivada, enquanto uma planta ou uma parte de planta está sendo fertilizada, enquanto uma planta ou uma parte de planta está sendo colhida, após uma planta ou uma parte de planta ter sido colhida, enquanto uma planta ou uma parte de planta está sendo processada, enquanto uma planta ou uma parte de planta está sendo empacotada ou enquanto uma planta ou uma parte de planta está sendo armazenada em depósito ou em uma prateleira em uma loja.

[0122] Conforme usado no presente documento, uma aspersão se refere a uma névoa de partículas de líquido que contém uma cepa entomopatogênica fúngica ou uma composição de uma modalidade revelada no presente documento. Em uma modalidade, uma aspersão que contém uma cepa entomopatogênica fúngica ou uma composição de uma modalidade revelada no presente documento pode ser aplicada a uma semente antes ou no momento do plantio. Em uma modalidade, uma aspersão pode ser aplicada a uma planta ou uma parte de planta enquanto a planta ou a parte de planta está sendo cultivada. Em uma outra modalidade, uma aspersão pode ser aplicada a uma planta ou uma parte de planta enquanto a planta ou a parte de planta está sendo fertilizada. Em uma outra modalidade, uma aspersão pode ser aplicada a uma planta ou uma parte de planta enquanto a planta ou a parte de planta está sendo colhida. Em uma outra modalidade, uma aspersão pode ser aplicada a uma planta ou uma parte de planta após a planta ou a parte de planta ter sido colhida. Em uma outra modalidade, uma aspersão pode ser aplicada a uma planta ou uma parte de planta enquanto a planta ou a parte de planta está sendo processada. Em uma outra modalidade, uma aspersão pode ser aplicada a uma planta ou uma parte de planta enquanto a planta ou a parte de planta está sendo empacotada. Em uma outra modalidade, uma aspersão pode ser aplicada a uma planta ou uma parte de planta enquanto a planta ou a parte de planta está sendo armazenada.

[0123] Em uma outra modalidade, uma cepa entomopatogênica fúngica ou uma composição revelada no presente documento pode ser aplicada diretamente a uma semente, uma planta ou uma parte de planta ou ao ambiente de uma semente, uma planta ou uma parte de planta como um enxágue. Conforme usado no presente documento, um enxaguante é um líquido que contém uma cepa entomopatogênica fúngica ou uma composição revelada no presente documento. Tal enxágue pode ser derramado em uma semente, uma planta ou uma parte de planta ou o ambiente de uma semente, uma planta ou uma parte de planta. Uma semente, uma planta ou uma parte de planta também pode ser imersa ou submersa no enxaguante, então, removida e permitida a secar.

[0124] Em uma outra modalidade, uma cepa entomopatogênica fúngica ou uma composição revelada no presente documento pode ser aplicada a uma semente, uma planta ou uma parte de planta ou o ambiente de uma semente, uma planta ou uma parte de planta e pode cobrir 50% da área superficial da semente, da planta ou da parte de planta ou do ambiente de uma semente, uma planta ou uma parte de planta. Em uma outra modalidade, uma cepa entomopatogênica fúngica ou uma composição pode ser aplicada a uma semente, uma planta ou uma parte de planta ou ao ambiente de uma semente, uma planta ou uma parte de planta e pode cobrir uma porcentagem da área de superfície da semente, da planta ou da parte de planta ou do ambiente de uma semente, uma planta ou uma parte de planta selecionada dentre o grupo que consiste em: de 50% a cerca de 95%, de 60% a cerca 95%, de 70% a cerca de 95%, de 80% a cerca de 95% e de 90% a cerca de 95%.

[0125] Em uma outra modalidade, uma cepa entomopatogênica fúngica ou uma composição revelada no presente documento pode cobrir de cerca de 20% a cerca de 30%, de cerca de 30% a cerca de 40%, de cerca de 40% a cerca de 50%, de cerca de 50% a cerca de 60%, de cerca de 60% a cerca de 70%, de cerca de 70% a cerca de 80%, de cerca de 80% a cerca de 90%, de cerca de 90% a cerca de 95%, de cerca de 95% a cerca de 98%, de cerca de 98% a cerca de 99% ou 100% da área de superfície de uma semente, uma planta ou uma parte de planta ou do ambiente de uma semente, uma planta ou uma parte de planta.

[0126] Em uma outra modalidade, uma cepa entomopatogênica fúngica ou uma composição revelada no presente documento pode ser aplicada diretamente a uma semente, uma planta ou uma parte de planta ou ao ambiente de uma semente, uma planta ou uma parte de planta como um pó. Conforme usado no presente documento, um pó é um sólido a granel seco ou quase seco composto por um grande número de partículas muito finas que podem fluir livremente quando agitadas ou tituladas. Uma composição em pó seca ou uma quase seca revelada no presente documento, de preferência, contém uma porcentagem baixa de água, como, por exemplo, menor que 5%, menor que 2,5% ou menor que 1% em peso.

[0127] Em uma outra modalidade, uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou composição revelada no presente documento pode ser aplicada indiretamente a uma semente, uma planta ou uma parte de planta ou ao ambiente de uma semente, uma planta ou uma parte de planta. Por exemplo, uma semente, uma planta ou uma parte de planta ou o ambiente de uma semente, uma planta ou uma parte de planta que tem uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição revelada no presente documento já aplicada pode estar tocando uma outra semente, uma outra planta ou uma outra parte de planta para que uma cepa entomopatogênica fúngica ou uma composição se propague em uma semente, planta ou parte de planta. Em uma modalidade adicional, uma cepa entomopatogênica fúngica ou uma composição revelada no presente documento pode ser aplicada com o uso de um aplicador. Em algumas modalidades, um aplicador pode incluir, mas sem limitação, uma seringa, uma esponja, uma toalha de papel ou um pano ou qualquer combinação dos mesmos.

[0128] Em uma outra modalidade, uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição revelada no presente documento pode ser uma dispersão coloidal. Uma dispersão coloidal é um tipo de mistura química em que uma substância é dispersa uniformemente através uma das outras. As partículas da substância dispersas são apenas suspensas na mistura, ao contrário de uma solução, na qual as mesmas são completamente dissolvidas em um solvente. Isso ocorre devido ao fato de que as partículas em uma dispersão coloidal são maiores que as partículas em uma solução, as mesmas são pequenas o suficiente para serem dispersas uniformemente e para manter uma aparência homogênea, mas são grandes o bastante para dispersar a luz e não se dissolver. As dispersões coloidais são um intermediário entre misturas homogêneas e heterogêneas e são, às vezes, classificadas como "homogêneas" ou "heterogêneas" com base em sua aparência.

[0129] Em uma modalidade, uma cepa entomopatogênica fúngica, uma composição e um método revelados no presente documento são adequados para uso com uma semente. Em uma outra modalidade, uma cepa entomopatogênica fúngica, uma composição e um método revelados no presente documento são adequados para uso com uma semente de uma ou mais de qualquer uma das plantas ou das partes de planta citadas anteriormente.

[0130] Em ainda uma outra modalidade, uma cepa entomopatogênica fúngica, uma composição e um método revelados no presente documento podem ser usados para tratar semente transgênica ou geneticamente modificada. Uma semente transgênica se refere a semente de plantas que contém pelo menos um gene heterólogo que permite a expressão de um polipeptídeo ou proteína não encontrada naturalmente na planta. O gene heterólogo em semente transgênica pode se originar, por exemplo, de micro-organismos das espécies Bacillus, Rhizobium, Pseudomonas, Serratia, Trichoderma, Clavibacter, Glomus ou Gliocladium.

[0131] Em uma modalidade, uma semente é tratada em um estado em que é suficientemente estável para que o tratamento não cause qualquer dano. Em geral, o tratamento de uma semente pode ocorrer em qualquer momento no tempo entre a colheita e semeadura. Em uma modalidade, uma semente a ser tratada com uma cepa entomopatogênica fúngica, uma composição ou um método revelado no presente documento é separada de uma planta e liberada de espigas, conchas, caules, coberturas, pelos ou da carne de uma fruta. Então, é possível usar, por exemplo, uma semente que foi colhida, limpa e seca. Alternativamente, também é possível usar uma semente que, após secagem, foi tratada, por exemplo, com água e, então, seca novamente.

[0132] Em uma modalidade, uma semente é tratada com uma cepa entomopatogênica fúngica, uma composição e um método revelados no presente documento de tal modo que a germinação da semente não seja adversamente afetada e/ou uma planta resultante não seja danificada.

[0133] Em uma modalidade, uma cepa entomopatogênica fúngica, uma composição e um método revelados no presente documento podem ser aplicados diretamente a uma semente. Por exemplo, uma cepa entomopatogênica fúngica, uma composição e um método revelados no presente documento podem ser aplicados sem componentes adicionais e sem terem sido diluídas.

[0134] Em uma outra modalidade, uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição reveladas no presente documento são aplicadas a uma semente na forma de uma formulação adequada. Formulações e métodos adequados para o tratamento de uma semente são conhecidos pela pessoa versada na técnica e são descritos, por exemplo, nos seguintes documentos: US 4.272.417 A, US 4.245.432 A, US 4.808.430 A, US 5.876.739 A, US 2003/0176428 A1, WO 2002/080675 A1, WO 2002/028186 A2.

[0135] Uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição revelada no presente documento pode ser convertida em formulações de peliculização de semente comuns, como soluções, emulsões, suspensões, pós, espumas, pastas fluidas, dispersões coloidais ou outros materiais de revestimento para semente e também formulações de ULV. Essas formulações são preparadas de uma maneira conhecida misturando-se uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição e revelada no presente documento com aditivos comuns, como, por exemplo, extensores comuns e também solventes ou diluentes, colorantes, agentes umectantes, dispersantes, emulsificantes, antiespumantes, conservantes, espessantes secundários, adesivos, giberlinas e água também.

[0136] Em outra modalidade, os colorantes adequados podem estar presentes em uma formulação de peliculização de semente incluindo todos os colorantes comuns a tais propósitos. Pode-se fazer uso tanto de pigmentos, que têm solubilidade modesta em água, quanto de corantes, que são solúveis em água. Exemplos incluem os colorantes conhecidos sob as designações Rodamina B, C.I. Pigmento Vermelho 112 e C.I. Solvente Vermelho 1.

[0137] Em outra modalidade, os agentes umectantes adequados podem estar presentes em uma formulação de peliculização de semente incluindo todas as substâncias que promovem o umedecimento em uma formulação de substâncias agroquímicas ativas. O uso de alquilnaftaleno-sulfonatos, como di-isopropil- ou di-isobutilnaftaleno-sulfonatos é preferencial.

[0138] Em ainda uma outra modalidade, dispersantes e/ou emulsificantes adequados podem estar presentes em uma formulação de peliculização de semente incluindo todos os dispersantes não iônicos, aniônicos e catiônicos. Em uma modalidade, dispersantes não iônicos ou aniônicos ou misturas de dispersantes não iônicos ou aniônicos podem ser usados. Em uma modalidade, dispersantes não iônicos incluem, mas sem limitação, polímeros em bloco de óxido de etileno-óxido de propileno, éteres de alquilfenol poliglicol e éteres de triestirilfenol poliglicol e seus derivados fosfatados ou sulfatados.

[0139] Em ainda uma outra modalidade, os antiespumantes podem estar presentes em uma formulação de peliculização de semente que incorpora uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição de uma modalidade da invenção que inclui todos os compostos inibidores de espuma incluindo, mas sem limitação, antiespumantes de silicone, estearato de magnésio, emulsões de silicone, álcoois de cadeia longa, ácidos graxos e seus sais, e compostos de organoflúor e misturas dos mesmos.

[0140] Em ainda uma outra modalidade, os espessantes secundários podem estar presentes em uma formulação de peliculização de semente incluindo todos os compostos que podem ser usados para tais propósitos em uma composição agroquímica, incluindo, mas sem limitação, derivados de celulose, derivados de ácido acrílico, polissacarídeos, como goma xantana ou Veegum®, argilas modificadas, filossilicatos, como atapulgita e bentonita, e também finamente ácidos silícicos finamente divididos.

[0141] Em uma outra modalidade, adesivos podem estar presentes em uma formulação de peliculização de semente que incorpora uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição revelada no presente documento que inclui todos os aglutinantes comuns que podem ser usados em peliculizações de semente. Polivinilpirrolidona, acetato de polivinila, álcool polivinílico e tilose são preferenciais.

[0142] Em ainda uma outra modalidade, uma formulação de peliculização de semente que incorpora uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição revelada no presente documento pode ser usada diretamente ou após diluição em água para tratar uma semente de qualquer tipo de semente. Uma formulação de peliculização de semente ou sua preparação diluída também pode ser usada para peliculizar uma semente de plantas transgênicas. Nesse contexto, efeitos sinérgicos podem surgir na interação da formulação de peliculização de semente com substâncias formadas pela expressão transgênica.

[0143] O equipamento de mistura adequado para tratar uma semente com uma formulação de peliculização de semente ou preparações preparadas a partir dessa adicionando-se água inclui todo o equipamento de mistura que pode ser comumente usado para peliculização. O procedimento específico adotado quando se realiza a peliculização compreende introduzir uma semente em um misturador, adicionando-se uma quantidade desejada específica de formulação de peliculização de uma semente, seja como é ou seguindo-se a diluição em água, e realizando-se a mistura até que a formulação seja uniformemente distribuída na semente. Opcionalmente, uma operação de secagem segue a operação de tratamento.

[0144] Em uma modalidade, uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição ou uma formulação revelada no presente documento pode ser adicionada a uma planta, uma parte de planta e/ou uma semente a uma taxa de cerca de 1 x 103 a 1 x 1013 unidades de formação de colônia (cfu) por semente, incluindo cerca de 1 x 103 cfu/semente, ou cerca de 1 x 104 cfu/semente, 1 x 105 cfu/semente, ou cerca de 1 x 106 cfu/semente, ou cerca de 1 x 107 cfu/semente, ou cerca de 1 x 108 cfu/semente, ou cerca de 1 x 109 cfu/semente, ou cerca de 1 x 1010 cfu/semente, ou cerca de 1 x 1011 cfu/semente, ou cerca de 1 x 1012 cfu/semente, ou cerca de 1 x 1013 cfu/semente incluindo cerca de 1 x 103 a 1 x 108 cfu/semente cerca de 1 x 103 a 1 x 107 cfu/semente, cerca de 1 x 103 a 1 x 105 cfu/semente, cerca de 1 x 103 a 1 x 106 cfu/semente, cerca de 1 x 103 a 1 x 104 cfu/semente, cerca de 1 x 103 a 1 x 109 cfu/semente, cerca de 1 x 103 a 1 x 1010 cfu/semente, cerca de 1 x 103 a 1 x 1011 cfu/semente, cerca de 1 x 103 a 1 x 1012 cfu/semente, cerca de 1 x 103 a 1 x 1013 cfu/semente, cerca de 1 x 104 a 1 x 108 cfu/semente cerca de 1 x 104 a 1 x 107 cfu/semente, cerca de 1 x 104 a 1 x 105 cfu/semente, cerca de 1 x 104 a 1 x 106 cfu/semente, cerca de 1 x 104 a 1 x 109 cfu/semente, cerca de 1 x 104 a 1 x 1010 cfu/semente, cerca de 1 x 1011 a 1 x 109 cfu/semente, cerca de 1 x 104 a 1 x 1012 cfu/semente cerca de 1 x 104 a 1 x 1013 cfu/semente, cerca de 1 x 105 a 1 x 107 cfu/por semente, cerca de 1 x 105 a 1 x 106 cfu/por semente, cerca de 1 x 105 a 1 x 108 cfu/por semente, cerca de 1 x 105 a 1 x 109 cfu/por semente, cerca de 1 x 105 a 1 x 1010 cfu/por semente, cerca de 1 x 105 a 1 x 1011 cfu/por semente, cerca de 1 x 105 a 1 x 1012 cfu/por semente, cerca de 1 x 105 a 1 x 1013 cfu/por semente, cerca de 1 x 106 a 1 x 108 cfu/por semente, cerca de 1 x 106 a 1 x 107 cfu/por semente, cerca de 1 x 106 a 1 x 109 cfu/por semente, cerca de 1 x 106 a 1 x 1010 cfu/por semente, cerca de 1 x 106 a 1 x 1011 cfu/por semente, cerca de 1 x 106 a 1 x 1012 cfu/por semente, cerca de 1 x 106 a 1 x 1013 cfu/por semente, cerca de 1 x 107 a 1 x 108 cfu/por semente, cerca de 1 x 107 a 1 x 109 cfu/por semente, cerca de 1 x 107 a 1 x 1010 cfu/por semente, cerca de 1 x 107 a 1 x 1011 cfu/por semente, cerca de 1 x 107 a 1 x 1012 cfu/por semente, cerca de 1 x 107 a 1 x 1013 cfu/por semente, cerca de 1 x 108 a 1 x 109 cfu/por semente, cerca de 1 x 108 a 1 x 1010 cfu/por semente, cerca de 1 x 108 a 1 x 1011 cfu/por semente, cerca de 1 x 108 a 1 x 1012 cfu/por semente, cerca de 1 x 108 a 1 x 1013 cfu/por semente, cerca de 1 x 109 a 1 x 1010 cfu/por semente, cerca de 1 x 109 a 1 x 1011 cfu/por semente, cerca de 1 x 109 a 1 x 1012 cfu/por semente, cerca de 1 x 109 a 1 x 1013 cfu/por semente, cerca de 1 x 1010 a 1 x 1011 cfu/por semente, cerca de 1 x 1010 a 1 x 1012 cfu/por semente, cerca de 1 x 1010 a 1 x 1013 cfu/por semente, cerca de 1 x 1011 a 1 x 1012 cfu/por semente, cerca de 1 x 1011 a 1 x 1013 cfu/por semente, e cerca de 1 x 1012 a 1 x 1013 cfu/por semente. Conforme usado no presente documento, o termo “unidade de formação de colônia” ou “cfu” é uma unidade que contém estruturas entomopatogênicas fúngicas com capacidade de crescer e produzir uma colônia em condições favoráveis. A contagem de cfu serve como uma estimativa do número de estruturas viáveis ou células em uma amostra.

[0145] Em uma modalidade, uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição pode ser formulada como um tratamento de semente líquida que compreende uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou composição revelada no presente documento. As sementes são revestidas de modo substancialmente uniforme com uma ou mais camadas de uma cepa ou uma composição entomopatogênica, com o uso de métodos convencionais de mistura, aspersão ou uma combinação dos mesmos. A aplicação é feita com o uso de equipamento que aplica, de modo preciso, seguro e eficaz, um produto de tratamento de semente a uma semente. Tal equipamento usa vários tipos de tecnologia de revestimento como revestidores giratórios, revestidores de tambor, técnicas de leito fluidizado, leitos borrifados, névoas giratórias ou uma combinação dos mesmos.

[0146] Em uma modalidade, uma aplicação é feita por meio de um disco de “atomizador” rotatório ou um bocal de aspersão que distribui uniformemente um tratamento de semente em uma semente à medida que se move através do padrão de aspersão. Em ainda uma outra modalidade, uma semente é, então, misturada ou revolvida por um período de tempo adicional para obter a distribuição de tratamento e secagem adicionais. Uma semente pode ser preparada ou não preparada antes do revestimento com uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição revelada no presente documento para aumentar a uniformidade da germinação e emergência. Em uma modalidade alternativa, uma composição em pó seco pode ser medida em uma semente em movimento.

[0147] Em ainda uma outra modalidade, uma semente pode ser revestida por meio de um processo de revestimento contínuo ou em batelada. Em um processo de revestimento contínuo, o equipamento de fluxo contínuo mede, simultaneamente, tanto o fluxo de semente quanto os produtos de tratamento de semente. Uma porta corrediça, um cone e um orifício, roda de semente ou dispositivo de pesagem (correia ou desviador) regula o fluxo de semente. Uma vez que a taxa de fluxo de semente através do equipamento de tratamento é determinada, a taxa de fluxo dos produtos de tratamento de semente é calibrada para a taxa de fluxo da semente a fim de liberar a dose desejada para uma semente à medida que flui através do equipamento de tratamento de semente. Adicionalmente, um sistema de computador pode monitorar a entrada de semente na máquina de revestimento, mantendo, desse modo, um fluxo constante da quantidade adequada de uma semente.

[0148] Em um processo de revestimento em batelada, o equipamento de tratamento em batelada pesa uma quantidade prescrita de uma semente e coloca a semente em uma câmara ou cúpula de tratamento fechada em que uma quantidade correspondente de tratamento de semente é, então, aplicada. A semente e o tratamento de semente são, então, misturados para obter um revestimento substancialmente uniforme em cada semente. Essa batelada é, então, descartada da câmara de tratamento na preparação para o tratamento de uma próxima batelada. Com sistemas de controle de computador, esse processo em batelada é automatizado possibilitando que o mesmo repita continuamente um processo de tratamento em batelada.

[0149] Uma variedade de aditivos pode ser adicionada a um tratamento de semente. Os aglutinantes podem ser adicionados e incluem aqueles compostos, de preferência, por um polímero adesivo que pode ser natural ou sintético sem efeito fitotóxico em uma semente a ser revestida. Uma variedade de colorantes pode ser empregada, incluindo cromóforos orgânicos classificados como nitroso, nitro, azo, incluindo monoazo, bisazo e poliazo, difenilmetano, triarilmetano, xanteno, metano, acridina, tiazol, tiazina, indamina, indofenol, azina, oxazina, antraquinona e ftalocianina e combinações dos mesmos. Outros aditivos podem ser adicionados incluindo nutrientes de traço como sais de ferro, manganês, boro, cobre, cobalto, molibdênio e zinco e combinações dos mesmos. Um polímero ou outro agente de controle de poeira pode ser aplicado para conter um tratamento em uma superfície da semente.

[0150] Outros aditivos de tratamento de semente convencionais incluem, mas sem limitação, agentes de revestimento, agentes umectantes, agentes de tamponamento e polissacarídeos. Um carreador agricolamente aceitável pode ser adicionado a uma formulação de tratamento de semente como água, sólidos ou pós secos. Um pó seco pode ser derivado de uma variedade de materiais como cascas de madeira, carbonato de cálcio, gesso, vermiculite, talco, húmus, carvão ativado e vários compostos fosforosos.

[0151] Em uma modalidade, um revestimento de semente pode compreender uma carga, que é um componente orgânico ou inorgânico, natural ou sintético com o qual uma cepa fúngica entomopatológica e/ou uma composição da mesma é combinada para facilitar sua aplicação em uma semente. Em uma modalidade, uma carga é um sólido inerte como argilas, silicatos naturais ou sintéticos, sílica, resinas, ceras, fertilizantes sólidos (por exemplo, sais de amônio), minerais de solo naturais, como caulins, argilas, talco, cal, quartzo, atapulgita, montmorillonita, bentonita ou terras diatomáceas ou minerais sintéticos, como sílica, alumina ou silicatos, em silicatos de alumínio ou magnésio específicos e combinações dos mesmos.

[0152] Em uma modalidade, uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição revelada no presente documento pode ser formulada por meio de tecnologia de encapsulação para aprimorar a estabilidade de esporos fúngicos, e como um modo de proteger os esporos fúngicos dos fungicidas aplicados à semente. Em uma modalidade, a tecnologia de encapsulação pode compreender um polímero em microesfera para liberação temporizada de uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição revelada no presente documento ao longo do tempo. Em uma modalidade, a tecnologia de encapsulação pode compreender um material de zeólito. Em uma modalidade, uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição encapsulada revelada no presente documento pode ser aplicada em uma aplicação separada de microesferas em sulcos às sementes. Em uma outra modalidade, uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição encapsulada revelada no presente documento pode ser coaplicada juntamente com as sementes de modo simultâneo.

[0153] O gerenciamento de resistência a inseto (IRM) é um termo usado para descrever práticas que visam reduzir o potencial de pragas de inseto se tornarem resistentes a uma tática de gerenciamento de inseto. A manutenção da eficácia de uma Bt (proteína pesticida derivada de Bacillus thuringiensis), uma outra proteína pesticida, um produto químico ou um agente biológico é necessária para o controle eficaz de inseto. O IRM é de grande importância na manutenção de controle eficaz de inseto devido à ameaça que a resistência a inseto impõe ao uso futuro de protetores pesticidas incorporados à planta e tecnologia de traço inseticida como um todo. As estratégias de IRM específicas, como uma estratégia de refúgio, mitigam a resistência a inseto para proteínas inseticidas específicas produzidas no milho, soja, algodão e outras culturas. No entanto, tais estratégias resultam em porções de culturas que são deixadas suscetíveis a uma ou mais pragas de inseto a fim de garantir que insetos não resistentes se desenvolvam e se tornem disponíveis para acasalar com quaisquer pragas de inseto resistentes produzidas em uma cultura protegida. Consequentemente, de uma perspectiva do fazendeiro/produtor, é altamente desejável ter refúgio tão pequeno quanto possível e ainda gerenciar a resistência inseto, a fim de que a maior produtividade seja obtida enquanto ainda mantém a eficiência do método de controle de praga de inseto usado, na possibilidade de o método ser uma proteína pesticida Bt, uma proteína pesticida diferente, um produto químico, um agente biológico, algum outro composto ou método, ou combinações dos mesmos.

[0154] Uma estratégia de IRM frequentemente usada é a plantação de um refúgio (uma porção da área em acres total com o uso de semente de traço não Bt/pesticida), conforme se acredita comumente que isso atrasará o desenvolvimento da resistência a inseto a traços pesticidas mantendo-se a suscetibilidade de inseto. A base teórica da estratégia de refúgio para atrasar a resistência depende da suposição de que a frequência e a recessividade da resistência a inseto são inversamente proporcionais à suscetibilidade de praga de inseto; a resistência será rara e recessiva apenas quando as pragas de inseto forem muito suscetíveis a uma toxina, e, ao contrário, a resistência será mais frequente e menos recessiva quando as pragas de inseto não forem muito suscetíveis. Ademais, a estratégia supõe que a resistência a um traço inseticida seja recessiva e seja conferida por um único locus com dois alelos resultando em três genótipos: homozigotos susceptíveis (SS), heterozigotos (RS) e homozigotos resistentes (RR). Supõe-se também que haverá uma baixa frequência de alelo de resistência inicial e que haverá acasalamento aleatório extensivo entre adultos resistentes e suscetíveis. Mediante circunstâncias ideais, apenas indivíduos RR raros sobreviverão a uma toxina pesticida produzida por uma cultura. Tanto indivíduos SS quanto RS serão suscetíveis à toxina pesticida. Um refúgio estruturado é uma porção de traço de não Bt/inseticida de um campo do produtor ou conjunto de campos que fornece a produção de insetos suscetíveis (SS) que podem acasalar aleatoriamente com insetos resistentes raros (RR) que sobrevivem à cultura de traço inseticida, que pode ser uma cultura de traço de Bt, para produzir heterozigotos RS suscetíveis que serão exterminados pela cultura de traço de Bt/inseticida. Um refúgio integrado é uma determinada porção do campo de um produtor ou conjunto de campos de plantas de traço de não Bt/inseticida que estabelece a produção de insetos suscetíveis (SS) que podem se acasalar aleatoriamente com insetos resistentes raros (RR) que sobrevivem à cultura de traço inseticida para produzir heterozigotos de RS suscetíveis que serão exterminados pela cultura de traço pesticida. Cada estratégia de refúgio removerá os alelos resistentes (R) de uma população de inseto e atrasará a evolução da resistência.

[0155] Outra estratégia para reduzir a necessidade por um refúgio é a pirâmide de traços com diferentes modos de ação contra um patógeno-alvo, uma praga ou um inseto. Por exemplo, as toxinas de Bt que têm diferentes modos de ação piramidados em uma planta transgênica têm capacidade de ter requisitos de refúgio reduzidos devido ao risco de resistência reduzido. Diferentes modos de ação em uma combinação de pirâmide também prolonga a durabilidade de cada traço, na medida em que a resistência é mais lenta para se desenvolver a cada traço.

[0156] Atualmente, o tamanho, a colocação e o gerenciamento de um refúgio são frequentemente considerados críticos para o sucesso de estratégias de refúgio para mitigar a resistência de inseto a um traço de Bt/pesticida produzido em milho, algodão, soja e outras culturas. Por causa da diminuição na produtividade em áreas de plantação de refúgio, alguns fazendeiros escolhem evitar os requisitos de refúgio, e outros não seguem os requisitos de tamanho e/ou colocação. Esses problemas resultam em nenhum refúgio ou em refúgio menos eficaz, e um risco correspondente de um aumento no desenvolvimento de pragas resistentes.

[0157] Consequentemente, permanece uma necessidade de métodos para gerenciar resistência a praga em uma plotagem de plantas de cultura resistentes à praga. Seria útil fornecer um método aprimorado para a proteção de plantas, especialmente milho e soja, assim como outras plantas de cultura, contra danos de alimentação por pragas. Seria particularmente útil se tal método reduzisse a taxa de aplicação necessária de pesticidas e inseticidas químicos convencionais e limitasse o número de operações em campo separadas necessárias para o plantio e cultivo de cultura. Além disso, um método de implantação de um agente de biocontrole que aumenta a durabilidade de um traço inseticida/pesticida ou aumenta a eficácia de uma estratégia de gerenciamento de resistência seria útil.

[0158] Uma modalidade se refere a um método de redução ou prevenção do desenvolvimento de resistência a uma composição inseticida/pesticida vegetal de uma praga em uma população de pragas que compreende fornecer uma composição de proteção de planta, como uma proteína inseticida/pesticida de Bt, uma proteína inseticida/pesticida transgênica, uma outra proteína pesticida, um pesticida químico, ou um agente biológico pesticida, para uma semente, uma planta, uma parte de planta ou uma área plantada ou um traço inseticida e que fornece uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição, e/ou um método descrito no presente documento para a semente, a planta, a parte de planta ou a área plantada ou o traço inseticida. Uma outra modalidade se refere a um método de redução ou prevenção do desenvolvimento de resistência a um traço pesticida/inseticida de planta que compreende fornecer uma composição que compreende um traço pesticida/inseticida vegetal e uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição descrita no presente documento. Uma modalidade adicional se refere a um método de redução ou prevenção do desenvolvimento da resistência a um traço inseticida Coleóptero vegetal que compreende uma composição que compreende um traço inseticida Coleóptero vegetal e uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição descrita no presente documento. Uma outra modalidade se refere a um método de redução ou prevenção do desenvolvimento da resistência a um traço inseticida de Diabrotica virgifera virgifera vegetal que compreende fornecer um traço inseticida de Diabrotica virgifera virgifera vegetal e uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição descrita no presente documento.

[0159] Uma modalidade adicional se refere a um método de aumento da durabilidade de composições de praga vegetal que compreende fornecer uma composição de proteção de planta a uma semente, uma planta, uma parte de planta ou uma área plantada, e fornecer uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição e/ou um método descrito no presente documento à semente, à planta, à parte de planta ou à área plantada, em que a cepa entomopatogênica fúngica e/ou a composição e/ou o método descrito no presente documento tem um modo diferente de ação da composição de proteção de planta.

[0160] Em ainda uma modalidade adicional, um refúgio necessário pode ser reduzido ou eliminado pela presença de uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição e/ou um método descrito no presente documento quando aplicado a uma planta de não refúgio. Em uma outra modalidade, um refúgio pode incluir uma cepa entomopatogênica fúngica e/ou uma composição e/ou um método descrito no presente documento como uma aspersão, uma isca ou como um modo de ação diferente.

[0161] Em uma modalidade da invenção, uma composição que aumenta a resistência a um patógeno, uma praga ou um inseto compreende uma cepa entomopatogênica fúngica revelada no presente documento e um traço inseticida não Bt. Em uma outra modalidade, uma cepa entomopatogênica fúngica é selecionada dentre o grupo que consiste em: Metarhizium anisopliae 15013-1, Metarhizium robertsii 23013-3 e Metarhizium anisopliae 3213-1. Em uma outra modalidade, um traço inseticida de não Bt compreende uma proteína inseticida derivada de planta, uma proteína inseticida derivada de bactéria/arquea não de um Bt (como uma proteína inseticida de Pseudomonas), uma proteína inseticida derivada de animal ou um elemento de silenciamento. Em uma outra modalidade da invenção, uma composição que aumenta a durabilidade de um traço inseticida de não Bt compreende uma cepa entomopatogênica fúngica e um traço inseticida de não Bt. Em uma outra modalidade, um traço inseticida de não Bt compreende um polipeptídeo PIP-72 de número de série PCT PCT/US14/55128. Em uma outra modalidade, um traço inseticida de não Bt compreende um elemento de silenciamento de polinucleotídeo que alveja RyanR (publicação de Pedido de Patente US 2014/0275208). Em uma outra modalidade, um traço inseticida de não Bt compreende um elemento de silenciamento de polinucleotídeo que alveja RyanR (publicação de Pedido de Patente US 2014/0275208) e um polipeptídeo PIP-72 do PCT Número de Série PCT/US14/55128.

[0162] Em uma modalidade adicional, uma composição que aumenta a resistência a um patógeno, uma praga ou um inseto compreende uma cepa entomopatogênica fúngica revelada no presente documento e um traço inseticida de Bt. Essas composições podem fornecer a um aditivo de semente, uma planta ou uma parte de planta ou resistência sinérgica a um patógeno, uma praga ou um inseto. Um traço inseticida de Bt pode ter atividade para pragas da planta Coleóptera, como Diabrotica virgifera virgifera. Em uma modalidade da invenção, uma composição compreende uma cepa entomopatogênica fúngica revelada no presente documento e um traço inseticida de Bt, em que o traço inseticida de Bt compreende uma toxina de Cry3B revelada na Patente número US 8.101.826, Publicações PCT WO 2002/028184, WO 2002/030205, WO 2002/028185 e WO 2000/011185, uma toxina mCry3B revelada na Patente número US 8.269.069 e Publicação PCT WO 1999/031248, uma toxina mCry3A revelada na Publicação PCT WO 2003/018810 e Patente número US 8.269.069, ou uma toxina Cry34/35 revelada nas Patentes número US 7.309.785, 7.524.810, 7.985.893 e 7.939.651 e Publicação PCT WO 2001/014417, e eventos transgênicos que contêm essas toxinas inseticidas de Bt e outros traços inseticidas de Bt ativos para Coleóptera, por exemplo, evento MON863 revelado na Publicação PCT WO 2004/011601, evento MIR604 revelado na Publicação PCT WO 2005/103301, evento 5307 revelado na Patente número US 9.133.474, evento DAS-59122 revelado na Publicação PCT WO 2006/039376, evento DP-4114 revelado na Publicação PCT WO 2013/147018, evento MON 87411 revelado na Publicação PCT WO 2013/169923, e evento MON88017 revelado na Publicação PCT WO 2005/059103 todos os quais são incorporados no presente documento a título de referência.

[0163] As cepas entomopatogênicas fúngicas, composições e métodos serão adicionalmente compreendidos a título de referência aos Exemplos não limitantes a seguir. Os Exemplos a seguir são fornecidos para propósitos ilustrativos apenas. Os Exemplos estão incluídos somente para auxiliar em uma compreensão mais completa das modalidades descritas da invenção. Os Exemplos não se limitam ao escopo das modalidades da invenção descritos ou reivindicados.

EXEMPLO 1

[0164] Cultivo de cepa de Metarhizium anisopliae 15013-1 em cultura líquida em escala de frasco de agitação Frascos de agitação de 4-defletores siliconado com 50 ml de soja 10 C (25% de glicose + 75% de frutose):meio 1 N (Tabela 3) foram inoculados com 5 x 106 AC/ml de cepa de M. anisopliae 15013-1 em duplicada. A cultura foi incubada a 300 rpm e 28 °C por 7 dias, as amostras foram extraídas nos dias 3, 5 e 7, e os parâmetros de fermentação foram registrados. No fim da fermentação do dia 7 6,825 x 104 microescleródio (MS)/ml ± 0,849 x 104 MS/ml, 8,000 x 107 Esporos Submersos (SS)/ml ± 2,828 x 107 SS/ml, e DCW de 43,07 g/kg ± 2,91 g/kg foram produzidos na cultura. Além disso, um pH de 7,0 ± 0 e concentração de glicose de 54 mg/ml ± 16 mg/ml foram registrados na cultura (Figura 1 e Tabela 4). Tabela 4. DCW, pH e concentração de glicose no fim da fermentação líquida da cepa de M. anisopliae 15013-1 em soja 10 C (25% de glicose + 75% de frutose):meio 1 N após 7 dias de incubação a 300 rpm e 28 °C, em escala de frasco de agitação.

EXEMPLO 2

[0165] Cultivo de cepa de Metarhizium anisopliae 15013-1 em cultura líquida em 2 l de escala laboratorial Um frasco de agitação de 250 ml siliconado contendo 50 ml de semente de algodão 10 C:meio 1 N foi inoculado com conidiósporos aéreos (AC) da cepa de M. anisopliae 15013-1 em uma concentração final de 5 x 106 AC/ml. A cultura de semente foi cultivada a 28 °C, 200 rpm por 2 dias. Após registrar as concentrações de MS e SS, 40 ml da cultura de semente foi inoculada em 1 l de Soja 10 C:meio 1 N (25% de glicose + 75% de frutose). Durante a produção, 10% de NaOH foi usado para prevenir o pH de falhar sob pH 5,5. A agitação foi iniciada a 800 RPM, e foi aumentada para manter o DO acima de 30% com uma RPM máxima de 1.200. A temperatura era 28 °C por toda a fermentação, e a duração da fermentação era de 7 dias. Vários parâmetros foram monitorados durante a fermentação e incluem, mas não se limitaram a CER, DO, concentrações de amônia, pH, DCW, produção de MS, e produção de SS (Figuras 2 a 5). No fim da fermentação, 1,368 x 105 MS/ml ± 0,046 x 105 MS/ml, 7,000 x 107 SS/ml ± 0,354 x 107 SS/ml e DCW de 24,8 g/kg foram produzidos na cultura.

EXEMPLO 3

[0166] Cultivo de cepa de Metarhizium anisolpliae 15013-1 em biorreator sem alimentação de cultura líquida Uma cultura de semente foi iniciada inoculando-se 500 ml de semente de algodão 10 C:meio 1 N com cepa de Metarhizium anisopilae 15013-1 em uma concentração final de 5 x 106 AC/ml. As culturas de semente foram incubadas a 180 rpm e 28 °C por 2 dias. Um volume de 400 ml da cultura de semente foi misturado com 600 ml de água estéril e inoculado em cada tanque para levar o volume final para 10 l de soja 10 C (25% de glicose + 75% de frutose):meio 1 N. O pH de cultura de produção foi controlado a pH 5,5 com NaOH para adição de base e H2SO4 para adição de ácido. A pressão no tanque foi definida a 0,1 MPa (1 bar) e a agitação foi permitida a subir para um máximo de 850 RPM para manter o oxigênio dissolvido de 20%. Vários parâmetros foram monitorados durante a fermentação e incluem, mas não se limitaram a CER, DO, concentrações de amônia, pH, DCW, produção de MS, e produção de SS (Figuras 6 a 9). No fim da fermentação, 9,433 x 104 MS/ml ± 1,366 x 104 MS/ml, 2,750 x 107 SS/ml ± 1,061 x 107 SS/ml e DCW de 25,0 g/kg foram produzidos na cultura.

[0167] Cultivo de cepa de Metarhizium anisopliae 15013-1 biorreator de em cultura líquida com alimentação de fonte de carbono Uma cultura de semente foi iniciada inoculando-se 500 ml de semente de algodão 10 C:meio 1 N com cepa de Metarhizium anisopilae 15013-1 em uma concentração final de 5 x 106 AC/ml. As culturas de semente foram incubadas a 180 rpm e 28 °C por 2 dias. Um volume de 400 ml da cultura de semente foi misturado com 600 ml de água estéril e inoculado em cada tanque para levar o volume final para 10 l de meio de produção adequado. O pH de cultura de produção foi controlado a pH 5,5 com NaOH para adição de base e H2SO4 para adição de ácido. A pressão no tanque foi definida a 0,1 MPa (1 barg) e a agitação foi permitida a subir para um máximo de 850 RPM para manter o oxigênio dissolvido de 20%. Em 88,5 h, a água foi adicionada ao tanque em uma tentativa de soltar o caldo e liberar uma parte do material na placa principal para permitir que a base seja adicionada para o controle de pH. Uma solução de frutose de 50% (p/p) foi fornecida após a glicose e a frutose inicial serem exauridas. Vários parâmetros foram monitorados durante a fermentação e incluem, mas não se limitaram a CER, DO, concentrações de amônia, pH, DCW, produção de MS, e produção de SS (Figuras 10 a 13). No fim da fermentação, 1,928 x 105 MS/ml ± 0,074 x 105 MS/ml, 6,250 x 106 SS/ml ± 1,768 x 106 SS/ml e DCW de 38,1 g/kg foram produzidos na cultura.

[0168] Cultivo de cepa de Metarhizium anisopliae 15013-1 para enriquecimento para produção de esporo submerso em biorreator de cultura líquida Uma cultura de semente foi iniciada inoculando-se 500 ml de semente de algodão 10 C:meio 1 N com cepa de Metarhizium anisopilae 15013-1 em uma concentração final de 5 x 106 AC/ml. A cultura de semente foi incubada a 100 rpm e 28 °C por 2 dias. Um volume de 400 ml da cultura de semente foi misturado com 600 ml de água estéril e inoculado em cada tanque para levar o volume final para 10 l de soja 10 C (25% de glicose + 75% de frutose):meio 1 N. O pH de cultura de produção foi controlado a pH 5,5 com NaOH para adição de base e H2SO4 para adição de ácido. A agitação foi definida a 350 RPM e o oxigênio dissolvido foi permitido a cair. Essa redução em agitação criou uma condição de estresse, mais provavelmente uma redução na disponibilidade de oxigênio, que resultou em um aumento na produção de esporos submersos durante a fermentação da produção. Vários parâmetros foram monitorados durante a execução e incluem, mas sem limitação, CER (taxa de evolução de dióxido de carbono), OUR (taxa de absorção de oxigênio), DO (oxigênio dissolvido), pH, DCW (peso seco celular), concentração de microescleródio (MS) e concentração de esporo submerso (SS) (Figuras 14 a 17). No fim da fermentação, 4,500 x 103 MS/ml ± 1,146 x 103 MS/ml, 4,294 x 108 SS/ml ± 0,186 x 108 SS/ml e DCW de 50,8 g/kg foram produzidos na cultura.

[0169] Todas as publicações, patentes e pedidos de patente mencionados no relatório descritivo indicam o nível daqueles versados na técnica aos quais esta revelação pertence. Todas as publicações, patentes e pedidos de patente são incorporados a título de referência até o mesmo ponto como se cada publicação patente ou pedido de patente individual fosse específica e individualmente indicado como incorporado a título de referência.

[0170] Embora a revelação supracitada tenha sido descrita em alguns detalhes a título de ilustração e exemplo com propósitos de clareza de entendimento, certas alterações e modificações podem ser praticadas dentro do escopo das reivindicações anexas.

Claims (15)

1. Método para produzir um produto entomopatogênico fúngico caracterizado pelo fato de que compreende: a) obter conidiósporos aéreos de um entomopatógeno fúngico; b) inocular os conidiósporos aéreos em um meio líquido para gerar uma cultura de semente entomopatogênica fúngica através de fermentação; c) inocular a cultura de semente de entomopatógeno fúngico em um meio líquido para gerar um produto entomopatogênico fúngico através de fermentação, sendo que o meio líquido compreende uma primeira fonte de carbono, uma segunda fonte de carbono e uma fonte de nitrogênio; em que o produto entomopatogênico fúngico é um microsclerotium; em que o entomopatógeno fúngico é selecionado dentre cepas de Metarhizium anisopliae 15013-1, Metarhizium robertsii 23013-3 e Metarhizium anisopliae 3213-1; em que a primeira fonte de carbono compreende de 10 a 35 por cento em peso/volume do meio total; em que a primeira fonte de carbono compreende uma molécula de glicose; em que a segunda fonte de carbono compreende uma molécula de frutose, galactose, sorbitol, sorbose, sacarose, arabinose, maltodextrina, ribose ou xilose; e em que a fonte de nitrogênio compreende soja, farinha desengordurada, concentrado de proteína, isolado de proteína, um hidrolisato, extrato de levedura ou outro extrato, melaços, semente de algodão, ácidos de Casamino ou uma combinação dos mesmos.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente obter o produto entomopatogênico fúngico a partir do meio líquido.

3. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a primeira fonte de carbono está em uma concentração limitante para facilitar uma condição de estresse do entomopatógeno fúngico.

4. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a segunda fonte de carbono está em uma concentração não limitante.

5. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a segunda fonte de carbono cria uma condição de estresse do entomopatógeno fúngico.

6. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente ajustar um parâmetro de fermentação para criar uma condição de estresse que resulta em uma alteração de um estado fisiológico do entomopatógeno fúngico, em que o parâmetro de fermentação é selecionado dentre o grupo que consiste em nível de pH, taxa de evolução de dióxido de carbono, porcentagem de oxigênio dissolvido, perfil de agitação e taxa de alimentação de fonte de carbono.

7. Método, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que obter o produto entomopatogênico fúngico a partir do meio líquido compreende secagem a vácuo.

8. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que obter conidiósporos aéreos de um entomopatógeno fúngico compreende, primeiro, gerar conidiósporos aéreos do entomopatógeno fúngico em meios de ágar ou meios de estado sólido.

9. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende ainda: d) ajustar um parâmetro de fermentação para criar uma condição de estresse que resulta em uma alteração de um estado fisiológico do entomopatógeno fúngico a um microsclerotium; em que o parâmetro de fermentação é selecionado dentre o grupo que consiste em nível de pH, taxa de evolução de dióxido de carbono, porcentagem de oxigênio dissolvido, perfil de agitação e taxa de alimentação de fonte de carbono.

10. Método para produzir um produto entomopatogênico fúngico caracterizado pelo fato de que compreende inocular uma cepa de entomopatógeno fúngico selecionada dentre o grupo que consiste em Metarhizium anisopliae 15013-1, Metarhizium robertsii 23013-3 e Metarhizium anisopliae 3213-1 em um meio líquido para gerar um produto entomopatogênico fúngico através de fermentação, sendo que o meio líquido compreende uma primeira fonte de carbono, uma segunda fonte de carbono e uma fonte de nitrogênio; em que a primeira fonte de carbono compreende de 10 a 35 por cento em peso/volume do meio total; em que a primeira fonte de carbono compreende uma molécula de glicose; em que a segunda fonte de carbono compreende uma molécula de frutose, galactose, sorbitol, sorbose, sacarose, arabinose, maltodextrina, ribose ou xilose; em que o produto entomopatogênico fúngico é um microsclerotium; e em que a fonte de nitrogênio compreende soja, farinha desengordurada, concentrado de proteína, isolado de proteína, um hidrolisato, extrato de levedura ou outro extrato, melaços, semente de algodão, ácidos de Casamino ou uma combinação dos mesmos.

11. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente obter o produto entomopatogênico fúngico a partir do meio líquido.

12. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que a primeira fonte de carbono está em uma concentração limitante para facilitar uma condição de estresse do entomopatógeno fúngico.

13. Método, de acordo com a reivindicação 109, caracterizado pelo fato de que a segunda fonte de carbono cria uma condição de estresse do entomopatógeno fúngico.

14. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente ajustar um parâmetro de fermentação para criar uma condição de estresse que resulta em uma alteração de um estado fisiológico do entomopatógeno fúngico a um microsclerotium; em que o parâmetro de fermentação é selecionado dentre o grupo que consiste em nível de pH, taxa de evolução de dióxido de carbono, porcentagem de oxigênio dissolvido, perfil de agitação e taxa de alimentação de fonte de carbono.

15. Método, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que obter o produto entomopatogênico fúngico a partir do meio líquido compreende secagem a vácuo.