BR112019018234B1 - Métodos de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de soja, de trigo, de amendoim e de arroz, formulação microbiana agroquimicamente ativa e composição sintética - Google Patents

Abstract

Esta invenção se refere a métodos e materiais para modular as características de uma planta, em que a referida planta é disposta, de forma heteróloga, em um organismo endófito ou em uma pluralidade de organismos endófitos, ou derivada de um elemento reprodutor vegetal disposto, de forma heteróloga, em um organismo endófito ou uma pluralidade de organismos endófitos.

Description

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS

[0001] Esse pedido reivindica prioridade ao Pedido Provisório N. 62/556,288, depositado em 8 de setembro de 2017; Pedido Provisório N. 62/467,740, depositado em 6 de março de 2017; Pedido Provisório N. 62/467,742, depositado em 6 de março de 2017; Pedido Provisório N. 62/467,755, depositado em 6 de março de 2017; Pedido Provisório N. 62/466,253, depositado em 2 de março de 2017; Pedido Provisório N. 62/465,834, depositado em 2 de março de 2017; Pedido Provisório N. 62/466,256, depositado em 2 de março de 2017; Pedido Provisório N. 62/465,797, depositado em 1 de março de 2017; Pedido Provisório N. 62/465,819, depositado em 1 de março de 2017; e Pedido Provisório N. 62/465,798, depositado em 1 de março de 2017, cujas divulgações estão incorporadas neste documento a título de referência em sua totalidade.

LISTAGEM DE SEQUÊNCIA

[0002] O pedido imediato contém uma Listagem de Sequência com 71 sequências que foi submetida através de EFS-Web e está incorporada a título de referência por meio deste documento em sua totalidade. A referida cópia ASCII, criada em 29 de novembro de 2017, é denominada 39061_10101_Sequence_Listing.txt e tem 54.920 bytes de tamanho.

CAMPO DA INVENÇÃO

[0003] A presente invenção refere-se a composições e métodos para aprimorar os traços de plantas, particularmente plantas importantes para o consumo humano ou animal, por exemplo arroz (Oryza sativa e variedades relacionadas), soja (Glycine max e variedades relacionadas), trigo (Triticum aestivum e variedades relacionadas) e milho (Zea mays e variedades relacionadas). Por exemplo, esta invenção descreve micróbios que são capazes de viver dentro ou dispostos de forma heteróloga para uma planta, e que podem ser usados para conferir traços aprimorados para as plantas com os quais eles estão ou foram dispostos de forma heteróloga. A invenção divulgada também descreve métodos para aprimorar as características dos elementos vegetais pela introdução de micróbios às plantas de origem. Além disso, esta invenção também fornece métodos de tratamento de elementos vegetais com micróbios que são capazes de viver dentro de uma planta, particularmente arroz, soja, trigo e milho, para conferir melhor rendimento e outras características agronômicas a essa planta.

FUNDAMENTOS

[0004] Segundo a Organização das Nações Unidas para Agricultura e Alimentação (“United Nations Food and Agricultural Organization”), a população mundial será superior a 9,6 bilhões de pessoas até 2050, o que exigirá melhorias significativas na agricultura para atender à crescente demanda por alimentos. Há uma necessidade de vegetais agrícolas aprimorados que permitam a demanda quase duplicada de produção de alimentos com menos recursos e insumos mais sustentáveis do ponto de vista ambiental, para plantas com respostas aprimoradas a vários estresses abióticos.

[0005] Atualmente, o desempenho das culturas é otimizado, principalmente, por meio de tecnologias direcionadas à interação entre o genótipo das culturas (por exemplo, reprodução vegetal, culturas geneticamente modificadas (GM)) e seu ambiente circundante (por exemplo, fertilizantes, herbicidas sintéticos, pesticidas). Embora esses paradigmas tenham ajudado a dobrar a produção global de alimentos nos últimos cinquenta anos, as taxas de rendimento da produção estagnaram em muitas culturas importantes e as mudanças no clima foram ligadas à instabilidade da produção, bem como à mudança das pressões de pragas e doenças, levando a uma necessidade urgente por novas soluções para aprimoramento das culturas. Além de seus longos cronogramas regulatórios e de desenvolvimento, os temores públicos de culturas GM e produtos químicos sintéticos têm desafiado seu uso em muitos países e culturas chaves, resultando na falta de aceitação de muitos traços GM e na exclusão de culturas GM e muitas químicas sintéticas de alguns mercados globais. Assim, há uma necessidade significativa por abordagens inovadoras, eficazes, ambientalmente sustentáveis e publicamente aceitáveis para melhorar o rendimento e outras características agronomicamente importantes das plantas.

[0006] Neste documento, são fornecidos métodos e composições para aprimorar características agronomicamente importantes das plantas, associando essas plantas a endófitos divulgados.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0007] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de milho compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de milho em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Exserohilum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NO: 60, 61 e 62, em que o elemento vegetal de milho é a variedade Stine 9734 ou uma variedade intimamente relacionada a esta.

[0008] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de soja, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de soja em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Exserohilum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 60, 61 e 62.

[0009] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento um traço de importância agronômica em uma planta de soja, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de soja em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a um planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Exserohilum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 60, 61 e 62 e em que a planta de soja é a variedade selecionada do grupo que consiste em Pfister 38R25, Dairyland DSR1808R2Y, Stine 3920 e variedades intimamente relacionadas a estas.

[0010] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de trigo, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de trigo em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Exserohilum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 60, 61 e 62.

[0011] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de trigo compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de trigo em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Exserohilum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NO: 60, 61 e 62, em que o elemento vegetal de trigo é a variedade selecionada do grupo que consiste em SDSU Focus, SDSU Select, e variedades intimamente relacionadas a estas.

[0012] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de amendoim, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de amendoim em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Exserohilum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 60, 61 e 62.

[0013] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de amendoim, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de amendoim em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a um planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Exserohilum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 60, 61 e 62 e em que a planta de amendoim é uma variedade selecionada do grupo que consiste em AT-9899, FloRun 107, Tamnut OL06, Georgia-06G e variedades intimamente relacionadas a estas.

[0014] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de soja, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de soja em uma quantidade eficaz para aprimorar um traço de importância agronômica selecionado do grupo que consiste em área da raiz, comprimento da raiz e peso seco da raiz na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Epicoccum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 63, 64 e 71.

[0015] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de soja, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de soja em uma quantidade eficaz para aprimorar um traço de importância agronômica selecionado do grupo que consiste em área da raiz, comprimento da raiz e peso seco da raiz na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Epicoccum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 63, 64 e 71, e em que a soja é da variedade Stine 33E22 ou uma variedade intimamente relacionada a esta.

[0016] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de amendoim, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de amendoim em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Epicoccum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 63, 64 e 71.

[0017] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de amendoim, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de amendoim em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a um planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Epicoccum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 63, 64 e 71, e em que a planta de amendoim é uma variedade selecionada do grupo que consiste em FloRun 107, Georgia-06G e variedades intimamente relacionadas a estas.

[0018] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de arroz, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de arroz em uma quantidade eficaz para aumentar o comprimento da raiz na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Epicoccum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 63, 64 e 71.

[0019] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de trigo, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de trigo em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Coniochaeta e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 38, 39, 40 e 41.

[0020] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de canola, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de canola em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Epicoccum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica à SEQ ID NO: 70, em que a planta de canola é a variedade Brett Young 552 ou uma variedade intimamente relacionada a esta.

[0021] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de soja, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de soja em uma quantidade eficaz para aprimorar um traço de importância agronômica selecionado do grupo que consiste em área da raiz, comprimento da raiz e rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Curvularia e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 65 e 66.

[0022] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de soja, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de soja em uma quantidade eficaz para aprimorar um traço de importância agronômica selecionado a partir do grupo que consiste em área da raiz, comprimento da raiz e rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Curvularia e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 65 e 66, e em que o traço de importância agronômica é o rendimento e a planta de soja é uma variedade selecionada do grupo que consiste em Pfister 38R25, Stine 3920 e variedades intimamente relacionadas a estas.

[0023] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de trigo, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de trigo em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Curvularia e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 65 e 66.

[0024] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de trigo, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de trigo em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Curvularia e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 65 e 66, em que a planta de trigo é uma variedade selecionada do grupo consistindo de SDSU Focus, SDSU Select e variedades intimamente relacionadas a estas.

[0025] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de soja, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de soja em uma quantidade eficaz para aprimorar um traço de importância agronômica selecionado do grupo que consiste em área da raiz, comprimento da raiz, biomassa do broto seco e rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Curvularia e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 42, 43, 44 e 45.

[0026] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de soja, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de soja em uma quantidade eficaz para aprimorar um traço de importância agronômica selecionado a partir do grupo que consiste em área da raiz, comprimento da raiz, biomassa do broto seco e rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Curvularia e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 42, 43, 44 e 45, e em que o traço de importância agronômica é o rendimento e a planta de soja é uma variedade selecionada do grupo que consiste em Pfister 38R25, Stine 3920 e variedades intimamente relacionadas a estas.

[0027] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de trigo, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de trigo em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Curvularia e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 42, 43, 44 e 45.

[0028] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de trigo, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de trigo em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Curvularia e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 42, 43, 44 e 45, em que a planta de trigo é a variedade selecionada do grupo consistindo de SDSU Focus, SDSU Select e variedades intimamente relacionadas a estas.

[0029] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de milho, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de milho em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica à SEQ ID NO: 67, em que a planta de milho é a variedade Stine 9734 ou uma variedade intimamente relacionada a esta.

[0030] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de soja, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de soja em uma quantidade eficaz para aprimorar um traço de importância agronômica selecionado do grupo que consiste em área da raiz, comprimento da raiz e rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica à SEQ ID NO: 67.

[0031] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de soja, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de soja em uma quantidade eficaz para aprimorar um traço de importância agronômica selecionado a partir do grupo que consiste em área da raiz, comprimento da raiz e rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica à SEQ ID NOs: 67, e em que o traço de importância agronômica é o rendimento e a planta de soja é uma variedade selecionada do grupo que consiste em Pfister 38R25, Stine 3920 e variedades intimamente relacionadas a estas.

[0032] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de trigo compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de trigo em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratada relativa a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica à SEQ ID NO: 67.

[0033] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de trigo, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de trigo em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica à SEQ ID NOs: 67, em que a planta de trigo é a variedade selecionada do grupo consistindo de SDSU Focus, SDSU Select e variedades intimamente relacionadas a estas.

[0034] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de canola, caracterizado pelo fato de que compreende dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de canola em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Paecilomyces e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica à SEQ ID NO: 69.

[0035] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de canola, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de canola em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Paecilomyces e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica à SEQ ID NO: 69, em que a planta de canola é a variedade NCC1015 ou uma variedade intimamente relacionada a esta.

[0036] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de soja, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de soja em uma quantidade eficaz para aprimorar um traço de importância agronômica selecionado do grupo que consiste em área da raiz, comprimento da raiz e rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Acremonium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50, e 51.

[0037] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de soja, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de soja em uma quantidade eficaz para aprimorar um traço de importância agronômica selecionado do grupo que consiste em área da raiz, comprimento da raiz e rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Acremonium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50, e 51, em que o traço de importância agronômica é o rendimento e a planta de soja é a variedade Pfister 38R25 ou uma variedade intimamente relacionada a esta.

[0038] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de trigo, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de trigo em uma quantidade eficaz para aprimorar um traço de importância agronômica selecionado do grupo que consiste em diminuir a umidade do grão e aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Acremonium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50, e 51.

[0039] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de trigo, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de trigo em uma quantidade eficaz para aprimorar o traço de importância agronômica selecionado do grupo que consiste em diminuir a umidade do grão e aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Acremonium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50, e 51, em que a planta de trigo é a variedade selecionada do grupo que consiste de SDSU Focus, SDSU Select e variedades intimamente relacionadas a estas.

[0040] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de amendoim, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de amendoim em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Acremonium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50, e 51, e a planta de amendoim é a variedade Georgia-06G ou uma variedade intimamente relacionada.

[0041] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de arroz, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de arroz em uma quantidade eficaz para aumentar a biomassa do broto seco na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Acremonium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50 e 51.

[0042] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de trigo, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um primeiro organismo endófito e um segundo organismo endófito para um elemento vegetal de trigo em uma quantidade eficaz para melhorar um traço de importância agronômica selecionado do grupo que consiste em altura da planta, peso da raiz fresca e peso do broto fresco na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o primeiro organismo endófito é um membro do gênero Acremonium e compreende pelo menos um sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50 e 51, e o segundo organismo endófito é um membro do gênero Coniochaeta e compreende pelo menos um sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 38, 39, 40 e 41.

[0043] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento um traço de importância agronômica em uma planta de arroz, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um primeiro organismo endófito e um segundo organismo endófito para um elemento vegetal de arroz em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o primeiro organismo endófito é um membro do gênero Acremonium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50 e 51, e o segundo organismo endófito é um membro do gênero Coniochaeta e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 38, 39, 40 e 41.

[0044] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de soja compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de soja em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica à SEQ ID NO: 68.

[0045] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de soja, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de soja em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica à SEQ ID NOs: 68, em que a planta de soja é a variedade selecionada do grupo que consiste de Pfister 38R25, Stine 3920 e variedades intimamente relacionadas a estas.

[0046] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de trigo compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de trigo em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica à SEQ ID NO: 68.

[0047] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de trigo, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de trigo em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica à SEQ ID NOs: 68, em que a planta de trigo é a variedade selecionada do grupo que consiste em SDSU Focus, SDSU Select e variedades intimamente relacionadas a estas.

[0048] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento do traço de importância agronômica em uma planta de amendoim, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de amendoim em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica à SEQ ID NO: 68 e a planta de amendoim é a variedade AT-9899 ou uma variedade intimamente relacionada a esta.

[0049] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento um traço de importância agronômica em uma planta de soja, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um primeiro organismo endófito e um segundo organismo endófito para um elemento vegetal de soja em uma quantidade eficaz para aumentar a biomassa de raiz seca na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o primeiro organismo endófito é um membro do gênero Epicoccum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 63, 64 e 71, o segundo organismo endófito é um membro do gênero Chaetomium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58 e 59, e a planta de soja é a variedade Stine 33E22 ou uma variedade intimamente relacionada.

[0050] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de milho, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de milho em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Chaetomium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58 e 59.

[0051] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de soja, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de soja em uma quantidade eficaz para aprimorar um traço de importância agronômica selecionado do grupo que consiste em área da raiz, comprimento da raiz, biomassa do broto seco e rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Chaetomium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, e 59.

[0052] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de soja, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de soja em uma quantidade eficaz para aprimorar um traço de importância agronômica selecionado do grupo que consiste em área da raiz, comprimento da raiz, biomassa do broto seco e rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Chaetomium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, e 59, em que o traço de importância agronômica é o rendimento e a planta de soja é a variedade Pfister 38R25 ou uma variedade intimamente relacionada a esta.

[0053] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de trigo, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de trigo em uma quantidade eficaz para aprimorar um traço de importância agronômica selecionado do grupo que consiste em comprimento da raiz e rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Chaetomium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58 e 59.

[0054] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de trigo, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de trigo em uma quantidade eficaz para aprimorar um traço de importância agronômica selecionado do grupo que consiste no comprimento da raiz e rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Chaetomium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, e 59, em que a planta de trigo é a variedade selecionada do grupo consistindo em SDSU Focus, SDSU Select e variedades intimamente relacionadas a estas.

[0055] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de milho compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de milho em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Exserohilum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NO: 60, 61 e 62, em que o elemento vegetal de milho é a variedade Stine 9734 ou uma variedade intimamente relacionada a esta, em que o elemento vegetal é uma semente, opcionalmente uma semente modificada.

[0056] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de soja, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de soja em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Exserohilum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 60, 61 e 62, em que o elemento vegetal é uma semente, opcionalmente uma semente modificada.

[0057] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de trigo, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de trigo em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Exserohilum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 60, 61 e 62, em que o elemento vegetal é uma semente, opcionalmente uma semente modificada.

[0058] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de amendoim, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de amendoim em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Exserohilum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 60, 61 e 62, em que o elemento vegetal é uma semente, opcionalmente uma semente modificada.

[0059] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de soja, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de soja em uma quantidade eficaz para aprimorar um traço de importância agronômica selecionado do grupo que consiste em área da raiz, comprimento da raiz e peso seco da raiz na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Epicoccum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 63, 64 e 71, em que o elemento vegetal é uma semente, opcionalmente uma semente modificada.

[0060] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de amendoim, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de amendoim em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Epicoccum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 63, 64 e 71, em que o elemento vegetal é uma semente, opcionalmente uma semente modificada.

[0061] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de arroz, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de arroz em uma quantidade eficaz para aumentar o comprimento da raiz na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Epicoccum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 63, 64 e 71, em que o elemento vegetal a uma semente, opcionalmente uma semente modificada.

[0062] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de trigo, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de trigo em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Coniochaeta e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 38, 39, 40, e 41, em que o elemento vegetal é uma semente, opcionalmente uma semente modificada.

[0063] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de canola, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de canola em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Epicoccum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica à SEQ ID NO: 70, em que a planta de canola é a variedade Brett Young 552 ou uma variedade intimamente relacionada a esta, em que o elemento vegetal é uma semente, opcionalmente uma semente modificada.

[0064] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de soja, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de soja em uma quantidade eficaz para aprimorar um traço de importância agronômica selecionado do grupo que consiste na área da raiz, comprimento da raiz e rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Curvularia e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 65 e 66, em que o elemento vegetal é uma semente, opcionalmente uma semente modificada.

[0065] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de trigo, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de trigo em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Curvularia e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 65 e 66, em que o elemento vegetal é uma semente, opcionalmente uma semente modificada.

[0066] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de soja, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de soja em uma quantidade eficaz para aprimorar um traço de importância agronômica selecionado do grupo que consiste em área da raiz, comprimento da raiz, biomassa do broto seco e rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Curvularia e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 42, 43, 44 e 45, em que o elemento vegetal é uma semente, opcionalmente uma semente modificada.

[0067] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de trigo, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de trigo em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Curvularia e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 42, 43, 44, e 45, em que o elemento vegetal é uma semente, opcionalmente uma semente modificada.

[0068] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de milho, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de milho em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica à SEQ ID NO: 67, em que a planta de milho é a variedade Stine 9734 ou uma variedade intimamente relacionada a esta, em que o elemento vegetal é uma semente, opcionalmente uma semente modificada.

[0069] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de soja, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de soja em uma quantidade eficaz para aprimorar um traço de importância agronômica selecionado do grupo que consiste em área da raiz, comprimento da raiz e rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica à SEQ ID NO: 67, em que o elemento vegetal é uma semente, opcionalmente uma semente modificada.

[0070] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de trigo compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de trigo em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica à SEQ ID NO: 67, em que o elemento vegetal é uma semente, opcionalmente uma semente modificada.

[0071] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de canola, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de canola em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Paecilomyces e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica à SEQ ID NO: 69, em que o elemento vegetal é uma semente, opcionalmente uma semente modificada.

[0072] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de soja, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de soja em uma quantidade eficaz para aprimorar um traço de importância agronômica selecionado do grupo que consiste em área da raiz, comprimento da raiz e rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Acremonium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50, e 51, em que o elemento vegetal é uma semente, opcionalmente uma semente modificada.

[0073] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de trigo, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de trigo em uma quantidade eficaz para aprimorar um traço de importância agronômica selecionado do grupo que consiste em diminuir a umidade do grão e aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Acremonium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50, e 51, em que o elemento vegetal é uma semente, opcionalmente uma semente modificada.

[0074] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de amendoim, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de amendoim em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Acremonium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50, e 51, e a planta de amendoim é a variedade Georgia-06G ou uma variedade intimamente relacionada, em que o elemento vegetal é uma semente, opcionalmente uma semente modificada.

[0075] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de arroz, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de arroz em uma quantidade eficaz para aumentar a biomassa do broto seco na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Acremonium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50 e 51, em que o elemento vegetal é uma semente, opcionalmente uma semente modificada.

[0076] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento um traço de importância agronômica em uma planta de trigo, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um primeiro organismo endófito e um segundo organismo endófito para um elemento vegetal de trigo em uma quantidade eficaz para melhorar um traço de importância agronômica selecionado do grupo que consiste em altura da planta, peso da raiz fresca e peso do broto fresco na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o primeiro organismo endófito é um membro do gênero Acremonium e compreende pelo menos um sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50 e 51, e o segundo organismo endófito é um membro do gênero Coniochaeta e compreende pelo menos um sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 38, 39, 40 e 41, em que o elemento vegetal é uma semente, opcionalmente uma semente modificada.

[0077] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento um traço de importância agronômica em uma planta de arroz, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um primeiro organismo endófito e um segundo organismo endófito para um elemento vegetal de arroz em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o primeiro organismo endófito é um membro do gênero Acremonium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50 e 51, e o segundo organismo endófito é um membro do gênero Coniochaeta e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 38, 39, 40 e 41, em que o elemento vegetal é uma semente, opcionalmente uma semente modificada.

[0078] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de soja compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de soja em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica à SEQ ID NO: 68, em que o elemento vegetal é uma semente, opcionalmente uma semente modificada.

[0079] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de trigo compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de trigo em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica à SEQ ID NO: 68, em que o elemento vegetal é uma semente, opcionalmente uma semente modificada.

[0080] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento do traço de importância agronômica em uma planta de amendoim, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de amendoim em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica à SEQ ID NO: 68 e a planta de amendoim é a variedade AT-9899 ou uma variedade intimamente relacionada a esta, em que o elemento vegetal é uma semente, opcionalmente uma semente modificada.

[0081] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento um traço de importância agronômica em uma planta de soja, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um primeiro organismo endófito e um segundo organismo endófito para um elemento vegetal de soja em uma quantidade eficaz para aumentar a biomassa de raiz seca na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o primeiro organismo endófito é um membro do gênero Epicoccum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 63, 64 e 71, o segundo organismo endófito é um membro do gênero Chaetomium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58 e 59, e a planta de soja é a variedade Stine 33E22 ou uma variedade intimamente relacionada a esta, em que o elemento vegetal é uma semente, opcionalmente uma semente modificada.

[0082] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de milho, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de milho em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Chaetomium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58 e 59, em que o elemento vegetal é uma semente, opcionalmente uma semente modificada.

[0083] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de soja, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de soja em uma quantidade eficaz para aprimorar um traço de importância agronômica selecionado do grupo que consiste em área da raiz, comprimento da raiz, biomassa do broto seco e rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Chaetomium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58 e 59, em que o elemento vegetal é uma semente, opcionalmente uma semente modificada.

[0084] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de trigo, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de trigo em uma quantidade eficaz para aprimorar um traço de importância agronômica selecionado do grupo que consiste em comprimento da raiz e rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Chaetomium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58 e 59, em que o elemento vegetal é uma semente, opcionalmente uma semente modificada.

[0085] Em algumas modalidades, qualquer um dos organismos endófitos é disposto de forma heteróloga para o elemento vegetal em uma formulação, cuja formulação compreende adicionalmente um ou mais dos seguintes: um estabilizador, um conservante, um carreador, um surfactante, fungicida, um nematicida, um bactericida, um inseticida ou herbicida, ou qualquer combinação destes.

[0086] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de milho compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de milho em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Exserohilum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NO: 60, 61 e 62, em que o elemento vegetal de milho é a variedade Stine 9734 ou uma variedade intimamente relacionada a esta, em que a porcentagem de identidade é determinada sobre uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400, ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0087] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de soja compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de soja em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Exserohilum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NO: 60, 61 e 62, e em que a porcentagem de identidade é determinada sobre uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400 ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0088] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de trigo compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de trigo em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Exserohilum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NO: 60, 61 e 62, em que a porcentagem de identidade é determinada sobre uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400, ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0089] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de amendoim compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de amendoim em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Exserohilum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NO: 60, 61 e 62, em que a porcentagem de identidade é determinada sobre uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400, ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0090] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de soja compreendendo a disposição heteróloga de um endófito a um elemento vegetal de soja em uma quantidade eficaz para melhorar um traço de importância agronômica selecionada a partir do grupo que consiste na área da raiz, comprimento das raízes, e peso seco da raiz na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Epicoccum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 63, 64, e 71, em que a porcentagem de identidade é determinada sobre uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400 ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0091] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de amendoim compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de amendoim em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Epicoccum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NO: 63, 64 e 71, e em que a porcentagem de identidade é determinada sobre uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400, ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0092] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de arroz, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de arroz em uma quantidade eficaz para aumentar o comprimento da raiz na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Epicoccum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 63, 64 e 71, em que a porcentagem de identidade é determinada sobre uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400 ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0093] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de trigo compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de trigo em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Coniochaeta e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NO: 38, 39, 40, e 41, e em que a porcentagem de identidade é determinada sobre uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400, ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0094] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de canola compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito a um elemento vegetal de canola em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a um planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Epicoccum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 70 e a planta de canola é a variedade Brett Young 552 ou uma variedade intimamente relacionada a esta, em que a percentagem de identidade é determinada sobre uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400 ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0095] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de soja compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de soja em uma quantidade eficaz para melhorar um traço de importância agronômica selecionado a partir do grupo que consiste na área da raiz, comprimento das raízes, e rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Curvularia e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 65 e 66, em que a porcentagem de identidade é determinada sobre uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400 ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0096] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de trigo compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de trigo em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Curvularia e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NO: 65 e 66, em que a porcentagem de identidade é determinada sobre uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400, ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0097] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de soja compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de soja em uma quantidade eficaz para melhorar um traço de importância agronômica selecionado a partir do grupo que consiste na área da raiz, comprimento das raízes, biomassa do broto seco e rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Curvularia e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 42, 43, 44, e 45, em que a porcentagem de identidade é determinada sobre uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400 ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0098] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de trigo compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de trigo em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Curvularia e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NO: 42, 43, 44, e 45, e em que a porcentagem de identidade é determinada sobre uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400, ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0099] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de milho compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de milho em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a um planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 67 e a planta de milho é a variedade Stine 9734 ou uma variedade intimamente relacionada, em que a percentagem de identidade é determinada sobre uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400 ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0100] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de soja compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de soja em uma quantidade eficaz para melhorar um traço de importância agronômica selecionado do grupo que consiste na área da raiz, comprimento das raízes, e rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 67, em que a porcentagem de identidade é determinada sobre uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400 ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0101] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de trigo compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de trigo em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 67, em que a porcentagem de identidade é determinada sobre uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400, ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0102] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de canola compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de canola em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a um planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Paecilomyces e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 69, em que a percentagem de identidade é determinada sobre uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400 ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0103] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de soja compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de soja em uma quantidade eficaz para melhorar um traço de importância agronômica selecionado a partir do grupo que consiste em área da raiz, comprimento das raízes, e rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Acremonium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50, e 51, em que a porcentagem de identidade é determinada sobre uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400 ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0104] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de trigo compreendendo a disposição heteróloga de um endófito a um elemento vegetal de trigo em uma quantidade eficaz para melhorar um traço de importância agronômica selecionado do grupo que consiste na diminuição da umidade do grão e aumento do rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Acremonium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica de pelo menos 97%, pelo menos 98%, em pelo menos 99% ou 100% idêntico a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50 e 51, em que a porcentagem de identidade é determinada sobre uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400, ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0105] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de amendoim compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de amendoim em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a um planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Acremonium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NO: 46, 47, 48, 49, 50, e 51, e a planta de amendoim é a variedade Georgia- 06G ou uma variedade intimamente relacionada, em que a percentagem de identidade é determinada sobre uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400 ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0106] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de arroz compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de arroz em uma quantidade eficaz para aumentar a biomassa de broto seco na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Acremonium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50, e 51, em que a porcentagem de identidade é determinada sobre uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400 ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0107] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de trigo, compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um primeiro organismo endófito e um segundo organismo endófito para um elemento vegetal de trigo em uma quantidade eficaz para aprimorar um traço de importância agronômica selecionado do grupo que consiste em altura da planta, peso da raiz fresca e peso do broto fresco na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o primeiro organismo endófito é um membro do gênero Acremonium e compreende pelo menos um sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50 e 51, e o segundo organismo endófito é um membro do gênero Coniochaeta e compreende pelo menos um sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 38, 39, 40 e 41, em que a porcentagem de identidade é determinada sobre uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400, ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0108] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de arroz, compreendendo a disposição heteróloga de um primeiro organismo endófito e um segundo organismo endófito para um elemento vegetal de arroz em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o primeiro organismo endófito é um membro do gênero Acremonium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50 e 51, e o segundo organismo endófito é um membro do gênero Coniochaeta e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 38, 39, 40 e 41, em que a porcentagem de identidade é determinada sobre uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400 ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0109] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de soja compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de soja em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 68, em que a porcentagem de identidade é determinada sobre uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400, ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0110] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de trigo compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de trigo em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativo a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 68, em que a porcentagem de identidade é determinada sobre uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400, ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0111] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de amendoim compreendendo a disposição heteróloga de um organismo endófito a um elemento vegetal de amendoim em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado em relação a um planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 68 e a planta de amendoim é a variedade AT-9899 ou uma variedade intimamente relacionada, em que a percentagem identificada é determinada em uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400 ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0112] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de soja compreendendo a disposição heteróloga de um primeiro organismo endófito e um segundo organismo endófito para um elemento vegetal de soja em uma quantidade eficaz para aumentar a biomassa de raiz seca na planta derivada do elemento vegetal tratado em relação a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o primeiro organismo endófito é um membro do gênero Epicoccum e compreende pelo menos uma sequência de polinucleotídeo pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% idêntico a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 63, 64 e 71, o segundo organismo endófito é um membro do gênero Chaetomium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% idêntico a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58 e 59, e a planta de soja é a variedade Stine 33E22 ou uma variedade intimamente relacionada, em que a percentagem de identificação é determinada em uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400 ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0113] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de milho compreendendo dispor, de forma heteróloga, de um organismo endófito para um elemento vegetal de milho em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado relativa a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Chaetomium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58 e 59, em que a percentagem de identificação é determinada em uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400 ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0114] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de soja compreendendo a disposição heteróloga de um organismo endófito a um elemento vegetal de soja em uma quantidade eficaz para aprimorar um traço de importância agronômica selecionada a partir do grupo que consiste na área da raiz, comprimento das raízes, biomassa de parte seca e rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado em relação a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Chaetomium e compreende pelo menos uma sequência de polinucleotídeos pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% idêntico a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58 e 59, em que a percentagem identificada é determinada em uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400 ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0115] Em um aspecto, a invenção fornece um método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de trigo compreendendo a disposição heteróloga de um organismo endófito a um elemento vegetal de trigo em uma quantidade eficaz para aprimorar um traço de importância agronômica selecionada do grupo que consiste no comprimento da raiz e rendimento na planta derivada do elemento vegetal tratado em relação a uma planta derivada de um elemento vegetal de referência, em que o organismo endófito é um membro do gênero Chaetomium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica de pelo menos 97%, pelo menos 98%, em pelo menos 99% ou 100% idêntico a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58 e 59, em que a percentagem identificada é determinada em uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400 ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0116] Em um aspecto, a invenção fornece uma formulação microbiana agroquimicamente ativa compreendendo pelo menos um óleo, surfactante, polímero e um ingrediente ativo microbiano, em que o ingrediente ativo microbiano compreende um primeiro organismo endófito do gênero Exserohilum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 60, 61 e 62.

[0117] Em um aspecto, a invenção fornece uma formulação microbiana agroquimicamente ativa compreendendo pelo menos um óleo, surfactante, polímero e um ingrediente ativo microbiano, em que o ingrediente ativo microbiano compreende um primeiro organismo endófito do gênero Epicoccum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 63, 64 e 71.

[0118] Em um aspecto, a invenção fornece uma formulação microbiana agroquimicamente ativa compreendendo pelo menos um óleo, surfactante, polímero e um ingrediente ativo microbiano, em que o ingrediente ativo microbiano compreende um primeiro organismo endófito do gênero Exserohilum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica em pelo menos 97% idêntico a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 60, 61 e 62 compreendendo ainda um segundo organismo endófito, em que o segundo organismo endófito é do gênero Chaetomium e compreende pelo menos uma sequência de polinucleotídeos pelo menos 97% idêntico a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58 e 59.

[0119] Em um aspecto, a invenção fornece uma formulação microbiana agroquimicamente ativa compreendendo pelo menos um óleo, surfactante, polímero e um ingrediente ativo microbiano, em que o ingrediente ativo microbiano compreende um primeiro organismo endófito do gênero Coniochaeta e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 38, 39, 40, e 41.

[0120] Em um aspecto, a invenção fornece uma formulação microbiana agroquimicamente ativa compreendendo pelo menos um óleo, surfactante, polímero e um ingrediente ativo microbiano, em que o ingrediente ativo microbiano compreende um primeiro organismo endófito do gênero Epicoccum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica à SEQ ID NO: 70.

[0121] Em um aspecto, a invenção fornece uma formulação microbiana agroquimicamente ativa compreendendo pelo menos um óleo, surfactante, polímero e um ingrediente ativo microbiano, em que o ingrediente ativo microbiano compreende um primeiro organismo endófito do gênero Curvularia e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 42, 43, 44, 45, 65, e 66.

[0122] Em um aspecto, a invenção fornece uma formulação microbiana agroquimicamente ativa compreendendo pelo menos um óleo, surfactante, polímero e um ingrediente ativo microbiano, em que o ingrediente ativo microbiano compreende um primeiro organismo endófito do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 67 e 68.

[0123] Em um aspecto, a invenção fornece uma formulação microbiana agroquimicamente ativa compreendendo pelo menos um óleo, surfactante, polímero e um ingrediente ativo microbiano, em que o ingrediente ativo microbiano compreende um primeiro organismo endófito do gênero Paecilomyces e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica à SEQ ID NO: 69.

[0124] Em um aspecto, a invenção fornece uma formulação microbiana agroquimicamente ativa compreendendo pelo menos um óleo, surfactante, polímero e um ingrediente ativo microbiano, em que o ingrediente ativo microbiano compreende um primeiro organismo endófito do gênero Acremonium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50, e 51.

[0125] Em um aspecto, a invenção fornece uma formulação microbiana agroquimicamente ativa compreendendo pelo menos um óleo, surfactante, polímero e um ingrediente ativo microbiano, em que o ingrediente ativo microbiano compreende um primeiro organismo endófito do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica em menos 97% idêntico a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 67 e 68 e em que o ingrediente ativo microbiano compreende ainda um segundo organismo endófito, em que o segundo organismo endófito é do gênero Coniochaeta e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica em pelo menos 97% idêntico a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 38, 39, 40 e 41.

[0126] Em um aspecto, a invenção fornece uma formulação microbiana agroquimicamente ativa compreendendo pelo menos um óleo, surfactante, polímero e um ingrediente ativo microbiano, em que o ingrediente ativo microbiano compreende um primeiro organismo endófito do gênero Chaetomium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, e 59.

[0127] Em algumas modalidades, o óleo de formulação compreende colza, NEEM ou ácido erúcico, ou compreende propriedades herbicidas ou inseticidas. Em algumas modalidades, o surfactante de formulação é um detergente não iônico, Tween 20 ou Triton X-100. Em algumas modalidades, o polímero de formulação é Flo Rite®, DISCOTM ou Kannar® Universal Wonder. Em algumas modalidades, o ingrediente ativo microbiano da formulação compreende uma suspensão de esporos, esporos secos por pulverização ou caldo de células inteiras. Em algumas modalidades, a formulação compreende ainda um ou mais dos seguintes itens: fungicida, nematicida, bactericida, inseticida, herbicida, estabilizador, conservante, transportador, agente anticomplexo ou qualquer combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, o organismo endófito da formulação é estável na prateleira

[0128] Em um aspecto, a invenção fornece uma formulação microbiana agroquimicamente ativa compreendendo pelo menos um óleo, surfactante, polímero e um ingrediente ativo microbiano, em que o ingrediente ativo microbiano compreende um primeiro organismo endófito do gênero Exserohilum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica em pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% idêntico a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 60, 61 e 62, em que a percentagem identificada é determinada em uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400 ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0129] Em um aspecto, a invenção fornece uma formulação microbiana agroquimicamente ativa compreendendo pelo menos um óleo, surfactante, polímero e um ingrediente ativo microbiano, em que o ingrediente ativo microbiano compreende um primeiro organismo endófito do gênero Epicoccum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica em pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% idêntico a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 63, 64 e 71, em que a percentagem identificada é determinada em uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400 ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0130] Em um aspecto, a invenção fornece uma formulação microbiana agroquimicamente ativa compreendendo pelo menos um óleo, surfactante, polímero e um ingrediente ativo microbiano, em que o ingrediente ativo microbiano compreende um primeiro organismo endófito do gênero Exserohilum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica em pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% idêntico a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 60, 61 e 62 compreendendo ainda um segundo organismo endófito, em que o segundo organismo endófito é do gênero Chaetomium e compreende pelo menos uma sequência de polinucleotídeos pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% idêntico a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58 e 59, em que a percentagem de identificação é determinada em uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400 ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0131] Em um aspecto, a invenção fornece uma formulação microbiana agroquimicamente ativa compreendendo pelo menos um óleo, surfactante, polímero e um ingrediente ativo microbiano, em que o ingrediente ativo microbiano compreende um primeiro organismo endófito do gênero Coniochaeta e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica em pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% idêntico a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 38, 39, 40, e 41, em que a percentagem identificada é determinada em uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400 ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0132] Em um aspecto, a invenção fornece uma formulação microbiana agroquimicamente ativa compreendendo pelo menos um óleo, surfactante, polímero e um ingrediente ativo microbiano, em que o ingrediente ativo microbiano compreende um primeiro organismo endófito do gênero Epicoccum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica em pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% idêntico a SEQ ID NO: 70, em que a percentagem identificada é determinada em uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400 ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0133] Em um aspecto, a invenção fornece uma formulação microbiana agroquimicamente ativa compreendendo pelo menos um óleo, surfactante, polímero e um ingrediente ativo microbiano, em que o ingrediente ativo microbiano compreende um primeiro organismo endófito do gênero Curvularia e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica em pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% idêntico a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 42, 43, 44, 45, 65, e 66, em que a percentagem identificada é determinada em uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400 ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0134] Em um aspecto, a invenção fornece uma formulação microbiana agroquimicamente ativa compreendendo pelo menos um óleo, surfactante, polímero e um ingrediente ativo microbiano, em que o ingrediente ativo microbiano compreende um primeiro organismo endófito do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica em pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% idêntico a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 67 e 68, em que a percentagem identificada é determinada em uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400 ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0135] Em um aspecto, a invenção fornece uma formulação microbiana agroquimicamente ativa compreendendo pelo menos um óleo, surfactante, polímero e um ingrediente ativo microbiano, em que o ingrediente ativo microbiano compreende um primeiro organismo endófito do gênero Paecilomyces e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica em pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% idêntico a SEQ ID NO: 69, em que a percentagem identificada é determinada em uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400 ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0136] Em um aspecto, a invenção fornece uma formulação microbiana agroquimicamente ativa compreendendo pelo menos um óleo, surfactante, polímero e um ingrediente ativo microbiano, em que o ingrediente ativo microbiano compreende um primeiro organismo endófito do gênero Acremonium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica em pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% idêntico a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50, e 51, em que a percentagem identificada é determinada em uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400 ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0137] Em um aspecto, a invenção fornece uma formulação microbiana agroquimicamente ativa compreendendo pelo menos um óleo, surfactante, polímero e um ingrediente ativo microbiano, em que o ingrediente ativo microbiano compreende um primeiro organismo endófito do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica em menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% idêntico a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 67 e 68 e em que o ingrediente ativo microbiano compreende ainda um segundo organismo endófito, em que o segundo organismo endófito é do gênero Coniochaeta e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica em pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% idêntico a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 38, 39, 40 e 41, em que a percentagem de identificação é determinada em uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400 ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0138] Em um aspecto, a invenção fornece uma formulação microbiana agroquimicamente ativa compreendendo pelo menos um óleo, surfactante, polímero e um ingrediente ativo microbiano, em que o ingrediente ativo microbiano compreende um primeiro organismo endófito do gênero Chaetomium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica em pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% idêntico a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, e 59, em que a percentagem identificada é determinada em uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400 ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0139] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de maneira heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Exserohilum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 60, 61 e 62, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito.

[0140] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito heterologamente disposto, em que o organismo endófito é um membro do gênero Exserohilum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 60, 61 e 62, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que o elemento vegetal é um elemento vegetal de milho e o traço aprimorado de importância agronômica é o rendimento.

[0141] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de maneira heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Exserohilum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 60, 61 e 62, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que o elemento vegetal é um elemento vegetal de soja.

[0142] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito heterologamente disposto, em que o organismo endófito é um membro do gênero Exserohilum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 60, 61 e 62, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que o elemento vegetal é uma variedade de soja selecionada do grupo que consiste em: Pfister 38R25, Dairyland DSR1808R2Y, Stine 3920 e variedades intimamente relacionadas, e o traço aprimorado de importância agronômica é o rendimento.

[0143] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de maneira heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Exserohilum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 60, 61 e 62, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que o elemento vegetal é um elemento vegetal de trigo e o traço aprimorado de importância agronômica é o rendimento.

[0144] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de maneira heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Exserohilum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 60, 61 e 62, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que o elemento vegetal é um elemento vegetal de amendoim e o traço aprimorado de importância agronômica é o rendimento.

[0145] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de maneira heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Exserohilum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 60, 61 e 62, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que elemento vegetal é uma variedade de amendoim selecionada do grupo que consiste em: AT9899, FloRun 107, Georgia-06G, Tamnut OL06 e variedades intimamente relacionadas.

[0146] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de maneira heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Epicoccum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 63, 64 e 71, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito.

[0147] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito heterologamente disposto, em que o organismo endófito é um membro do gênero Epicoccum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 63, 64 e 71, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que o elemento vegetal é um elemento vegetal de soja e o traço aprimorado de importância agronômica é selecionado do grupo que consiste em área, comprimento e peso seco da raiz.

[0148] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de maneira heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Epicoccum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 63, 64, e 71, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que o elemento vegetal é uma variedade de soja Stine 33E22 ou uma variedade intimamente relacionada da mesma.

[0149] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de maneira heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Epicoccum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 63, 64 e 71, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que o elemento vegetal é um elemento vegetal de amendoim e o traço aprimorado de importância agronômica é o rendimento.

[0150] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de maneira heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Epicoccum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 63, 64 e 71, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que o elemento vegetal é um elemento vegetal de amendoim é selecionado do grupo que consiste na variedade FloRun 107, Georgia-06G, e suas variedades intimamente relacionadas e o traço aprimorado de importância agronômica é o rendimento.

[0151] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito heterologamente disposto, em que o organismo endófito é um membro do gênero Epicoccum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 63, 64 e 71, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento de planta de referência que não compreende ainda mais o organismo endófito e compreende ainda um segundo organismo endófito, em que o segundo organismo endófito é do gênero Chaetomium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste na SEQ ID NO: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58 e 59, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento de planta de referência que não compreende ainda o organismo endófito.

[0152] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de maneira heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Epicoccum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 63, 64, e 71, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que o elemento vegetal é a variedade de soja Stine 33E22 e o traço de importância agronômica é a biomassa da raiz seca.

[0153] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de maneira heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Coniochaeta e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 38, 39, 40 e 41, que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito.

[0154] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de maneira heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Coniochaeta e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 38, 39, 40 e 41, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que o elemento vegetal é um elemento vegetal de trigo e traço de importância agronômica é o rendimento.

[0155] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética que compreende um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de forma heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Epicoccum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica à SEQ ID NO: 70, em que a referida composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com o elemento vegetal de referência que não compreende adicionalmente o organismo endófito.

[0156] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética que compreende um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de forma heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Epicoccum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica à SEQ ID NO: 70, em que a referida composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com o elemento vegetal de referência que não compreende adicionalmente o organismo endófito, em que o elemento vegetal é a variedade de canola Brett Young 5525 ou uma variedade intimamente relacionada

[0157] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de maneira heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Curvularia e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 42, 43, 44, 45, 65, e 66, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito.

[0158] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito heterologamente disposto, em que o organismo endófito é um membro do gênero Curvularia e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 42, 43, 44, 45, 65 e 66, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que o elemento vegetal é um elemento vegetal da soja e o traço de importância agronômica é selecionado do grupo que consiste em área, comprimento e rendimento da raiz.

[0159] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito heterologamente disposto, em que o organismo endófito é um membro do gênero Curvularia e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 42, 43, 44, 45, 65, e 66, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que o elemento vegetal é uma variedade de soja selecionada do grupo que consiste em Pfister 38R25, Stine 3920 e suas variedades intimamente relacionadas, e o traço de importância agronômica é selecionada do grupo que consiste em área de raiz, comprimento de raiz e rendimento.

[0160] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de maneira heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Curvularia e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 42, 43, 44, 45, 65, e 66, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que o elemento vegetal é um elemento vegetal de trigo e o traço de importância agronômica é o rendimento.

[0161] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito heterologamente disposto, em que o organismo endófito é um membro do gênero Curvularia e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 42, 43, 44, 45, 65 e 66, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que o elemento vegetal é uma variedade de trigo selecionada do grupo que consiste em SDSU Focus, SDSU Select e variedades intimamente relacionadas, e o traço de importância agronômica é o rendimento.

[0162] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de forma heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica à SEQ ID NO: 67, em que a referida composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com o elemento vegetal de referência que não compreende adicionalmente o organismo endófito.

[0163] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto heterologamente, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência de polinucleotídeo pelo menos 97% idêntica à SEQ ID NO: 67, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que o elemento vegetal é um elemento vegetal de soja e o traço de importância agronômica é selecionado a partir do grupo que consiste em área da raiz, comprimento da raiz e rendimento.

[0164] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto heterologamente, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência de polinucleotídeo pelo menos 97% idêntica à SEQ ID NO: 67, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que o elemento vegetal é uma variedade de soja selecionada do grupo que consiste em Pfister 38R25, Stine 3920 e variedades intimamente relacionadas e o traço de importância agronômica é selecionado a partir do grupo que consiste em área da raiz, comprimento da raiz e rendimento.

[0165] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de maneira heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 67 e 68, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito.

[0166] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de maneira heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 67 e 68, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que o elemento vegetal é um elemento vegetal de milho e o traço de importância agronômica é o rendimento.

[0167] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de maneira heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 67 e 68, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que o elemento vegetal é a variedade de milho Stine 9734 e o traço de importância agronômica é o rendimento.

[0168] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto heterologamente, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência de polinucleotídeo pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 67 e 68, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que o elemento vegetal é um elemento vegetal de soja e o traço de importância agronômica é selecionado a partir do grupo que consiste em área da raiz, comprimento da raiz e rendimento.

[0169] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto heterologamente, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência de polinucleotídeo pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 67 e 68, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que o elemento vegetal é uma variedade de soja selecionada do grupo que consiste em Pfister 38R25, Stine 3920 e variedades intimamente relacionadas e o traço de importância agronômica é rendimento.

[0170] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de maneira heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 67 e 68, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que o elemento vegetal é um elemento vegetal de trigo e o traço de importância agronômica é o rendimento.

[0171] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de maneira heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 67 e 68, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que o elemento vegetal é uma variedade de trigo selecionada do grupo que consiste em SDSU Focus, SDSU Select e variedades intimamente relacionadas e o traço de importância agronômica é o rendimento.

[0172] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito heterologamente disposto, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 67 e 68, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que o organismo endófito compreende pelo menos uma sequência de polinucleotídeo pelo menos 97% idêntico à SEQ ID NO: 68, o elemento vegetal é um amendoim da variedade AT9899 e o traço de importância agronômica é o rendimento.

[0173] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de forma heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Paecilomyces e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica à SEQ ID NO: 69, em que a referida composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com o elemento vegetal de referência que não compreende adicionalmente o organismo endófito.

[0174] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de forma heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Paecilomyces e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica à SEQ ID NO: 69, em que a referida composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com o elemento vegetal de referência que não compreende adicionalmente o organismo endófito, em que o elemento vegetal é a variedade de canola NCC1015 e o traço de importância agronômica é o rendimento.

[0175] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de maneira heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Acremonium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50, e 51, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito.

[0176] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de maneira heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Acremonium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs:46, 47, 48, 49, 50, e 51, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que o elemento vegetal é um elemento vegetal de soja e o traço de importância agronômica é a biomassa de broto seco.

[0177] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito heterologamente disposto, em que o organismo endófito é um membro do gênero Acremonium e compreende pelo menos uma sequência de polinucleotídeo pelo menos 97% idêntica a uma sequência de polinucleotídeo selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50 e 51, e em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que elemento vegetal é um elemento vegetal do trigo e o traço de importância agronômica é a umidade ou o rendimento dos grãos.

[0178] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de maneira heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50, e 51, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que o elemento vegetal é a variedade de trigo SDSU Select e o traço de importância agronômica é o rendimento.

[0179] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de maneira heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Acremonium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs:46, 47, 48, 49, 50, e 51, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que o elemento vegetal é a variedade de amendoim Georgia-06G e o traço de importância agronômica é o rendimento.

[0180] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de maneira heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Acremonium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs:46, 47, 48, 49, 50, e 51, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que o elemento vegetal é um elemento vegetal de arroz e o traço de importância agronômica é a biomassa de broto seco.

[0181] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito heterologamente disposto, em que o organismo endófito é um membro do gênero Acremonium e compreende pelo menos uma sequência de polinucleotídeo pelo menos 97% idêntica a uma sequência de polinucleotídeo selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50 e 51, e em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento de planta de referência que não compreende ainda o organismo endófito e compreende ainda um segundo organismo endófito, em que o segundo organismo endófito é do gênero Coniochaeta e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 38, 39, 40 e 41, em que o composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito.

[0182] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito heterologamente disposto, em que o organismo endófito é um membro do gênero Acremonium e compreende pelo menos uma sequência de polinucleotídeo pelo menos 97% idêntica a uma sequência de polinucleotídeo selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50 e 51, e em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito e compreende ainda um segundo organismo endófito, em que o segundo organismo endófito é do gênero Coniochaeta e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 38, 39, 40 e 41, em que o composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que o elemento vegetal é um elemento vegetal de trigo e o traço de importância agronômica é selecionado do grupo que consiste em altura da planta, biomassa de raiz fresca e peso do broto fresco.

[0183] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito heterologamente disposto, em que o organismo endófito é um membro do gênero Acremonium e compreende pelo menos uma sequência de polinucleotídeo pelo menos 97% idêntica a uma sequência de polinucleotídeo selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50 e 51, e em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito e compreende ainda um segundo organismo endófito, em que o segundo organismo endófito é do gênero Coniochaeta e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 38, 39, 40 e 41, em que o composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que o elemento vegetal é um elemento vegetal de arroz e o traço de importância agronômica é o rendimento.

[0184] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de maneira heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Chaetomium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, e 59, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito.

[0185] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito heterologamente disposto, em que o organismo endófito é um membro do gênero Chaetomium e compreende pelo menos uma sequência de polinucleotídeo pelo menos 97% idêntica a uma sequência de polinucleotídeo selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58 e 59, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que o elemento vegetal é um elemento vegetal de soja e o traço de importância agronômica é selecionado do grupo que consiste em área de raiz, comprimento de raiz, biomassa de broto seco e rendimento.

[0186] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto heterologamente, em que o organismo endófito é um membro do gênero Chaetomium e compreende pelo menos uma sequência de polinucleotídeo pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, e 59, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que o elemento vegetal é uma variedade de soja selecionada do grupo que consiste em Pfister 38R25, Stine 3920 e variedades intimamente relacionadas e o traço de importância agronômica é rendimento.

[0187] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito heterologamente disposto, em que o organismo endófito é um membro do gênero Chaetomium e compreende pelo menos uma sequência de polinucleotídeo pelo menos 97% idêntica a uma sequência de polinucleotídeo selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58 e 59, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que o elemento vegetal é um elemento vegetal de trigo e o traço de importância agronômica é o comprimento ou o rendimento da raiz.

[0188] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de maneira heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, e 59, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que o elemento vegetal é uma variedade de trigo selecionada do grupo que consiste em SDSU Focus, SDSU Select e variedades intimamente relacionadas e o traço de importância agronômica é o rendimento.

[0189] Em algumas modalidades, qualquer uma das composições sintéticas aqui descritas compreende ainda um elemento vegetal é uma semente, opcionalmente em que a semente é modificada. Em algumas modalidades, em que o traço aprimorado de importância agronômica é conferido sob condições normais de irrigação. Em algumas modalidades, o elemento vegetal é colocado em um substrato que promove o crescimento da planta, opcionalmente no solo. Em algumas modalidades, uma pluralidade dos referidos elementos vegetais é colocada no solo em fileiras, com espaçamento substancialmente igual entre cada semente dentro de cada fileira.

[0190] Em algumas modalidades, qualquer uma das composições sintéticas aqui descritas compreende ainda uma formulação que compreende um ou mais dos seguintes: estabilizador, conservante, transportador, surfactante, agente anticomplexador ou qualquer combinação dos mesmos e/ou um ou mais dos seguintes: fungicida, nematicida, bactericida, inseticida ou herbicida. Em algumas modalidades, qualquer uma das composições sintéticas aqui descritas está confinada a um objeto selecionado do grupo que consiste em: garrafa, frasco, ampola, pacote, vaso, bolsa, saco, caixa, lixeira, envelope, caixa de papelão, recipiente, silo, container de expedição, cama de caminhão ou estojo. Em algumas modalidades, qualquer uma das composições sintéticas aqui descritas é estável em prateleira.

[0191] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de maneira heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Exserohilum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 60, 61 e 62, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que a percentagem de identificação é determinada em uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400 ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0192] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de maneira heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Epicoccum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 63, 64 e 71, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que a percentagem de identificação é determinada em uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400 ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0193] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética que compreende um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de forma heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Coniochaeta e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% idêntica a uma sequência selecionada dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 38, 39, 40, e 41, em que a referida composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com o elemento vegetal de referência que não compreende adicionalmente o organismo endófito, em que a percentagem de identidade é determinada ao longo de uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400, ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0194] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de maneira heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Exserohilum e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% idêntica a SEQ ID NOs: 70, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que a percentagem de identificação é determinada em uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400 ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0195] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de maneira heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Curvularia e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% idêntica a uma sequência polinucleotídica selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 42, 43, 44, 45, 65, e 66, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que a percentagem de identificação é determinada em uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400 ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0196] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética que compreende um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de forma heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% idêntica a uma sequência selecionada dentre o grupo que consiste na SEQ ID NO: 67, em que a referida composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com o elemento vegetal de referência que não compreende adicionalmente o organismo endófito, em que a percentagem de identidade é determinada ao longo de uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400, ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0197] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética que compreende um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de forma heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Cladosporium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% idêntica a uma sequência selecionada dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 67 e 68, em que a referida composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com o elemento vegetal de referência que não compreende adicionalmente o organismo endófito, em que a percentagem de identidade é determinada ao longo de uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400, ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0198] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética compreendendo um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de maneira heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Paecilomyces e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% idêntica a SEQ ID NOs: 69, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende ainda o organismo endófito, em que a percentagem de identificação é determinada em uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400 ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0199] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética que compreende um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de forma heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Paecilomyces e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% idêntica a uma sequência selecionada dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50, e 51, em que a referida composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com o elemento vegetal de referência que não compreende adicionalmente o organismo endófito, em que a percentagem de identidade é determinada ao longo de uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400, ou pelo menos 500 nucleotídeos.

[0200] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição sintética que compreende um elemento vegetal e um organismo endófito disposto de forma heteróloga, em que o organismo endófito é um membro do gênero Chaetomium e compreende pelo menos uma sequência polinucleotídica pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% idêntica a uma sequência selecionada dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, e 59, em que a referida composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com o elemento vegetal de referência que não compreende adicionalmente o organismo endófito, em que a percentagem de identidade é determinada ao longo de uma região de alinhamento de pelo menos 100, 200, 300, 400, ou pelo menos 500 nucleotídeos.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0201] A Figura 1A mostra plantas de arroz exemplares cultivadas como descrito no Exemplo 29. O vaso à esquerda contém plantas de arroz de controle não tratadas. O vaso à direita mostra plantas de arroz tratadas com MIC-68178.

[0202] A Figura 2 mostra as raízes lavadas de plantas de arroz exemplares cultivadas como descrito no Exemplo 29. As raízes das plantas de arroz de controle não tratadas estão à esquerda. As raízes das plantas de arroz tratadas comMIC- 68178 estão à direita.

[0203] A Figura 3 mostra raízes de soja exemplares de plantas de soja cultivadas como descrito no Exemplo 29. As raízes das plantas de arroz de controle não tratadas estão à esquerda. As raízes das plantas de soja tratadas com uma combinação de MIC-68178 e MIC-33414 estão à direita.

[0204] A Figura 4 mostra o pedigree da variedade de trigo SDSU Focus.

[0205] A Figura 5 mostra o pedigree da variedade de trigo SDSU Select.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[0206] Como demonstrado neste documento, as plantas agrícolas são heterologamente dispostas em micro-organismos simbióticos, denominados organismos endófitos, particularmente bactérias e fungos, que contribuem para a sobrevivência, desempenho e características das plantas.

[0207] São descritos neste documento organismos endófitos que são capazes de viver dentro ou de outro modo heterologamente dispostos em plantas para aprimorar as características da planta. São descritos neste documento métodos de usar organismos endófitos que são dispostos de forma heteróloga em plantas para transmitir características novas a uma planta hospedeira, bem como distinguir elementos de planta da planta hospedeira. Em algumas modalidades, as composições endofíticas são isoladas e purificadas a partir de fontes de plantas ou de fungos e dispostas de forma heteróloga com um elemento vegetal para transmitir potencial agronômico aprimorado e/ou traços agronômicos aprimorados à planta hospedeira. Em algumas modalidades, os organismos endófitos que são capazes de viver dentro das plantas são isolados e purificados a partir das suas fontes nativas e dispostos heterologamente, por exemplo, manualmente, mecanicamente ou artificialmente combinados, com um elemento vegetal, para conferir um melhor potencial agronômico e/ou traços agronômicos aprimorados para a planta hospedeira ou elementos de planta hospedeira. Tais organismos endófitos que são capazes de viver dentro das plantas podem ser adicionalmente manipulados ou combinados com elementos adicionais antes da combinação com os elementos de planta.

[0208] Como descrito neste documento, os organismos endófitos podem ser robustos derivados de fontes heterólogas, homólogas ou manipuladas, opcionalmente cultivadas, aplicadas manualmente, mecanicamente ou artificialmente aplicada heterologamente a elementos vegetais, por exemplo, dispostas heterologamente e, como resultado da aplicação manual, mecânica ou artificial, conferem várias propriedades benéficas. Isto é surpreendente, dada a variabilidade observada na técnica no isolamento de micróbios endofíticos e as observações anteriores de colonização ineficiente de patógenos de elementos de plantas de tecidos de planta hospedeira.

[0209] Em parte, a presente invenção fornece preparações de organismos endófitos que são capazes de viver dentro de plantas, e a criação de composições sintéticas de elementos de plantas e/ou plântulas com organismos endófitos dispostos de forma heteróloga, e formulações compreendendo as composições sintéticas, bem como o reconhecimento de que composições sintéticas apresentam uma diversidade de propriedades benéficas e inesperadas presentes nas plantas agrícolas e/ou nas populações de organismos endófitos heterólogos. As propriedades benéficas incluem, mas não se limitam a, metabolismo, expressão de transcritos, alterações proteômicas, morfologia, resiliência a uma variedade de estresses ambientais e qualquer combinação de tais propriedades. A presente invenção também fornece métodos de uso de organismos endófitos descritos neste documento para beneficiar a planta hospedeira com a qual estão dispostos de forma heteróloga.

Definições

[0210] Os termos usados nas reivindicações e nas especificações são definidos conforme estabelecido abaixo, a menos que especificado de outra forma.

[0211] Deve-se notar que, conforme usado neste relatório descritivo e nas reivindicações anexas, as formas singulares "um" "uma" e "o/a" incluem referentes plurais, a menos que o contexto dite claramente de outra forma.

[0212] Um "organismo endófito" é um organismo capaz de viver em um elemento vegetal (por exemplo, rizoplano ou filosfera) ou dentro de um elemento vegetal, ou em uma superfície próxima física de um elemento vegetal, por exemplo, a rizosfera, ou em uma semente. Um organismo endófito “benéfico” não causa doença ou prejudica a planta hospedeira. Os organismos endófitos podem ocupar os espaços intracelulares ou extracelulares do tecido vegetal, incluindo as folhas, caules, flores, frutos, sementes ou raízes. Um organismo endófito pode ser, por exemplo, um organismo bacteriano ou fúngico e pode conferir uma propriedade benéfica à planta hospedeira, como um aumento no rendimento, biomassa, resistência ou aptidão. Um organismo endófito pode ser um fungo ou uma bactéria. Como usado neste documento, o termo "micróbio" às vezes é usado para descrever um organismo endófito.

[0213] Uma “população” de organismos endófitos, ou uma “população endofítica”, refere-se a um ou mais organismos endófitos que compartilham uma derivação genética comum, por exemplo, um ou mais propágulos de um único organismo endófito, isto é, organismos endófitos criados a partir de uma única colônia escolhida. Em algumas modalidades, uma população refere-se a organismos endófitos de taxonomia idêntica. Em alguns casos, uma população de organismos endófitos refere-se a um ou mais organismos endófitos do mesmo gênero. Em alguns casos, uma população de organismos endófitos refere-se a um ou mais organismos endófitos da mesma OTU.

[0214] Uma “pluralidade de organismos endófitos” significa dois ou mais tipos de entidades endofíticas, por exemplo, de bactérias ou fungos, ou destas combinações. Em algumas modalidades, os dois ou mais tipos de entidades endofíticas são dois ou mais organismos endofíticos individuais, independentemente da derivação genética ou da relação taxonômica. Em algumas modalidades, os dois ou mais tipos de entidades endofíticas são duas ou mais populações de organismos endófitos. Em outras modalidades, os dois ou mais tipos de entidades endofíticas são duas ou mais espécies de organismos endófitos. Em ainda outras modalidades, os dois ou mais tipos de entidades endófitas são dois ou mais gêneros de organismos endófitos. Em ainda outras modalidades, os dois ou mais tipos de entidades endófitas são duas ou mais famílias de organismos endófitos. Em outras modalidades, os dois ou mais tipos de entidades endofíticas são duas ou mais ordens de organismos endófitos. Em outras modalidades, os dois ou mais tipos de entidades endofíticas são duas ou mais classes de organismos endófitos. Em ainda outras modalidades, os dois ou mais tipos de entidades endófitas são dois ou mais filos de organismos endófitos. Em algumas modalidades, uma pluralidade refere-se a três ou mais organismos endófitos, organismos individuais distintos ou membros distintos de derivação genética diferente ou táxons. Em algumas modalidades, uma pluralidade refere-se a quatro ou mais organismos endofíticos individuais distintos ou membros distintos de diferentes derivações ou táxons genéticos. Em algumas modalidades, uma pluralidade refere-se a cinco ou mais, dez ou mais, ou um número ainda maior de organismos endofíticos individuais distintos ou membros distintos de diferentes derivações genéticas ou táxons. Em algumas modalidades, o termo “consórcio” ou “consórcio” pode ser usado como um substantivo coletivo sinônimo de “pluralidade”, ao descrever mais de uma população, espécie, gênero, família, ordem, classe ou filo de organismos endófitos.

[0215] Como usado neste documento, o termo "micróbio" ou "microrganismo" refere-se a qualquer espécie ou táxon de microrganismo, incluindo, mas não limitado a archaea, bactérias, microalgas, fungos (incluindo mofo e espécies de leveduras), micoplasmas, micrósporos, nanobactérias, oomicetos e protozoários. Em algumas modalidades, um micróbio ou microrganismo é um organismo endófito, por exemplo, um organismo endófito bacteriano ou fúngico, que é capaz de viver dentro de uma planta. Em algumas modalidades, um micróbio ou microrganismo abrange células individuais (por exemplo, microrganismos unicelulares) ou mais de uma célula (por exemplo, microorganismo multicelular). Uma “população de micro-organismos” pode, portanto, referir-se a múltiplas células de um único microrganismo, no qual as células compartilham uma derivação genética comum.

[0216] Como usado neste documento, o termo “bactéria” ou “bactéria” refere-se em geral a qualquer organismo procariótico, e pode referenciar um organismo a partir de Eubactérias do Reino (Bactérias), Arqueobactérias do Reino (Archae), ou ambos. Em alguns casos, os gêneros bacterianos foram reatribuídos devido a várias razões (tais como, mas não se limitando ao campo em evolução do sequenciamento do genoma completo), e entende-se que tais reatribuições de nomenclatura estão dentro do escopo de qualquer gênero reivindicado. Por exemplo, certas espécies do gênero Erwinia foram descritas na literatura como pertencentes ao gênero Pantoea (Zhang, Y. & Qiu, S. Antonie van Leeuwenhoek (2015) 108: 1037).

[0217] O termo 16S refere-se à sequência de DNA da sequência de RNA ribossômico 16S (rRNA) de uma bactéria. O sequenciamento do gene 16S rRNA é um método bem estabelecido para o estudo da filogenia e taxonomia de bactérias.

[0218] Como usado neste documento, o termo "fungo" ou "fungo" refere-se em geral a qualquer organismo do Reino Fungi. A classificação taxonômica histórica dos fungos está de acordo com a apresentação morfológica. A partir de meados de 1800, reconheceu-se que alguns fungos têm um ciclo de vida pleomórfico e que designações de nomenclatura diferentes estavam sendo usadas para formas diferentes do mesmo fungo. Em 1981, o Congresso de Sydney da International Mycological Association (Associação Micológica Internacional) estabeleceu regras para a nomeação de fungos de acordo com seu status como anamorfo, teleomorfo ou holomorfo (Taylor JW. One Fungus = One Name: DNA and fungal nomenclature twenty years after PCR. IMA Fungus 2(2):113-120. 2011.). Com o desenvolvimento do sequenciamento genômico, ficou evidente que a classificação taxonômica baseada na filogenética molecular não se alinhava com a nomenclatura morfológica (Shenoy BD, Jeewon R, Hyde KD. Impact of DNA sequence-data on the taxonomy of anamorphic fungi. Fungal Diversity 26(10) 1-54. 2007). Como resultado, em 2011, o International Botanical Congress (Congresso Internacional de Botânica) adotou uma resolução aprovando o Código Internacional de Nomenclatura para Algas, Fungos e Plantas (Código de Melbourne) (Código Internacional de Nomenclatura para Algas, Fungos e Plantas (Código de Melbourne), adotado pelo Décimo oitavo Congresso Botânico Internacional de Melbourne, Austrália, julho de 2011), com o resultado declarado de designar “One Fungus = One Name” (Hawksworth DL. Managing and coping with names of pleomorphic fungi in a period of transition. IMA Fungus 3(1):15-24. 2012.). No entanto, os especialistas em sistemática não se alinharam na nomenclatura comum para todos os fungos, nem todos os bancos de dados e recursos de informação existentes incluem taxonomias atualizadas. Como tal, muitos fungos referidos neste documento podem ser descritos pela sua forma anamórfica mas entende-se que, com base em sequenciamento genômico idêntico, qualquer estado pleomórfico desse fungo pode ser considerado o mesmo organismo. Por exemplo, o gênero Alternaria é a forma anamórfica do teleomorfismo Lewia (Kwasna H e Kosiak B. Lewia avenicola sp. nov. and its Alternaria anamorph from oat grain, with a key to the species of Lewia. Mycol Res 2003; 107 (Pt 3): 371-6.), portanto, ambos seriam entendidos como o mesmo organismo com a mesma sequência de DNA. Por exemplo, entende-se que o gênero Acremonium também é relatado na literatura como o gênero Sarocladium, bem como o gênero Tilachilidium (Summerbell R. C., C. Gueidan, H-J. Schroers3, G.S. de Hoog, M. Starink, Y. Arocha Rosete, J. Guarro e J.A. Scott. Acremonium phylogenetic overview and revision of Gliomastix, Sarocladium, and Trichothecium. Studies in Mycology 68: 139-162. 2011.). Por exemplo, o gênero Cladosporium é um anamorfo do gênero teleomorfo Davidiella (Bensch K, Braun U, Groenewald JZ, Crous PW. The genus Cladosporium. Stud Mycol. 15 de junho de 2012; 72 (1): 1-401.) e é entendido como descrevendo o mesmo organismo. Em alguns casos, os gêneros fúngicos foram reatribuídos devido a várias razões, e entende-se que tais reatribuições de nomenclatura estão dentro do escopo de qualquer gênero reivindicado.

[0219] “Espaçador Interno Transcrito” (ITS) refere-se ao DNA espaçador (DNA não codificante) situado entre os genes RNA ribossômicos de subunidade pequena (rRNA) e rRNA de subunidade grande (LSU) no cromossomo ou a região transcrita correspondente na região transcrita no transcrito precursor de rRNA policistrônico. O sequenciamento de genes ITS é um método bem estabelecido para o estudo da filogenia e taxonomia de fungos. Em alguns casos, a sequência “Large SubUnit” (LSU) é usada para identificar fungos. O sequenciamento genético da LSU é um método bem estabelecido para o estudo de filogenia e taxonomia de fungos. Alguns organismos endófitos fúngicos podem ser descritos por uma sequência ITS e alguns podem ser descritos por uma sequência LSU. Ambos são entendidos como igualmente descritivos e precisos para determinar a taxonomia.

[0220] Como usado neste documento em relação a fungos e bactérias, o termo "gene marcador" refere-se a um gene conservado compreendendo variação de sequência entre organismos relacionados, por exemplo, uma sequência polinucleotídica 16S (para bactérias) ou ITS (para fungos) do organismo, gene fusA ou regiões genômicas, pelas quais um micróbio pode ser especificamente identificado e designado a uma nomenclatura taxonômica. Em algumas modalidades, os genes marcadores incluem, entre outros, actina, fator de alongamento G (fusA), tubulina, subunidade maior do RNA polimerase II (RPB1), gene rRNA da subunidade longa (LSU), segunda subunidade maior do RNA polimerase II (RPB2), gene de rRNA de subunidade pequena (SSU), fosfoglicerato quinase, beta-tubulina e combinações dos mesmos.

[0221] Os termos “patógeno” e “patogênico” em referência a uma bactéria ou fungo incluem qualquer organismo desse tipo que seja capaz de causar ou afetar uma doença, distúrbio ou condição de um hospedeiro compreendendo o organismo.

[0222] Um “esporo” ou uma população de “esporos” refere-se a bactérias ou fungos que geralmente são viáveis, mais resistentes a influências ambientais como calor e agentes bactericidas ou fungicidas do que outras formas da mesma bactéria ou fungos, e tipicamente capazes de germinação e crescimento. Bactérias e fungos que são “capazes de formar esporos” são aquelas bactérias e fungos que compreendem os genes e outras habilidades necessárias para produzir esporos sob condições ambientais adequadas.

[0223] “Biomassa” significa a massa total ou peso (fresco ou seco), em um dado momento, de um tecido vegetal, tecidos vegetais, uma planta inteira ou uma população de plantas. A biomassa é geralmente dada como peso por unidade de área. O termo também pode se referir a todas as plantas ou espécies da comunidade (biomassa comunitária).

[0224] O termo "isolado" destina-se a referir especificamente um organismo, célula, tecido, polinucleotídeo ou polipeptídeo que é removido da sua fonte original.

[0225] Como usado neste documento, um organismo endófito ou micróbio isolado é um organismo endófito ou micróbio que foi removido de seu meio natural. “Culturas puras” ou “culturas isoladas” são culturas nas quais os organismos presentes são apenas de um gênero e espécie em particular. Isso contrasta com as "culturas mistas", que são culturas nas quais mais de um gênero e/ou espécie de microrganismo estão presentes. Como tal, o termo “isolado” não reflete necessariamente a extensão em que o micróbio foi purificado. Uma “cultura substancialmente pura” do micróbio refere-se a uma cultura que não contém substancialmente nenhum outro organismo endófito ou micróbio do que o organismo endófito ou micróbio desejado. Por outras palavras, um organismo endófito substancialmente puro ou cultura microbiana é substancialmente livre de outros contaminantes, que podem incluir contaminantes microbianos. Além disso, como usado neste documento, "biologicamente puro" pretende significar o organismo endófito ou micróbio separado dos materiais com os quais é normalmente encontrado na natureza. Um micróbio ou organismo endófito disposto de forma heteróloga para outros micróbios ou organismos endófitos, ou com compostos ou materiais com os quais normalmente não é encontrado na natureza, ainda é definido como "biologicamente puro". Uma monocultura é, naturalmente, "biologicamente pura". Como usado neste documento, o termo "cultura enriquecida" de um micróbio ou organismo endófito isolado refere-se a uma cultura que contém mais de 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou 95% do organismo endófito ou micróbio isolado.

[0226] Uma “planta hospedeira” inclui qualquer planta, particularmente uma planta de importância agronômica, dentro da qual ou sobre a qual um micróbio, como um organismo endófito, é disposto de forma heteróloga. Como usado neste documento, diz-se que um micróbio coloniza uma planta, elemento vegetal ou semente, quando pode existir como um organismo endófito em relação com uma planta ou elemento vegetal durante pelo menos parte do ciclo de vida da planta ou do micróbio. Em algumas modalidades, diz-se que um organismo endófito "coloniza" uma planta ou elemento vegetal quando pode ser detectado estavelmente dentro da planta ou elemento vegetal durante um período de tempo, como um ou mais dias, semanas, meses ou anos. Algumas das composições e métodos descritos neste documento envolvem uma pluralidade de micróbios em uma quantidade eficaz para colonizar uma planta.

[0227] Um “alvo não hospedeiro” significa um organismo ou composto químico que é alterado de alguma forma após entrar em contato com uma planta hospedeira que compreende um organismo endófito, como resultado de uma propriedade conferida à planta hospedeira pelo organismo endófito.

[0228] Como usado neste documento, um ácido nucleico tem "homologia" ou é "homólogo" a um segundo ácido nucleico se a sequência de ácido nucleico tiver uma sequência semelhante à segunda sequência de ácido nucleico. Os termos “identidade”, “identidade percentual”, “identidade de sequência percentual” ou “idêntico” no contexto de sequências de ácido nucleico referem-se aos nucleotídeos nas duas sequências que são os mesmos quando alinhados para correspondência máxima. Existem algoritmos diferentes conhecidos na técnica que podem ser usados para medir identidade de sequência nucleotídica. A identidade da sequência nucleotídica pode ser medida por um alinhamento local ou global, implementando preferencialmente um algoritmo ótimo de alinhamento global local ou ótimo. Por exemplo, um alinhamento global pode ser gerado usando uma implementação do algoritmo Needleman-Wunsch (Needleman, SB & Wunsch, CD (1970) Journal of Molecular Biology. 48(3):443-53). Por exemplo, um alinhamento local pode ser gerado usando uma implementação do algoritmo de SmithWaterman (Smith TF & Waterman, MS (1981) Journal of Molecular Biology. 147(1):195-197). Alinhamentos globais ótimos usando o algoritmo Needleman- Wunsch e alinhamentos locais ótimos usando o algoritmo Smith-Waterman são implementados em USEARCH, por exemplo, USEARCH versão v8.1.1756_i86osx32.

[0229] Uma lacuna é uma região de um alinhamento em que uma sequência não se alinha a uma posição na outra sequência do alinhamento. Em alinhamentos globais, as lacunas terminais são descartadas antes que a identidade seja calculada. Para alinhamentos locais e globais, as lacunas internas são contadas como diferenças. Uma lacuna terminal é uma região que começa no final de uma sequência em um alinhamento em que o nucleotídeo na posição terminal dessa sequência não corresponde a uma posição de nucleotídeo na outra sequência do alinhamento e que se estende para todas as posições contíguas nessa sequência em que os nucleotídeos dessa sequência não correspondem a uma posição de nucleotídeo na outra sequência do alinhamento. Uma lacuna interna é uma lacuna em um alinhamento que é flanqueado nas extremidades 3 'e 5' por posições em que as sequências alinhadas são idênticas.

[0230] Em algumas modalidades, a sequência de ácido nucleico a ser alinhada é um gene completo. Em algumas modalidades, a sequência de ácido nucleico a ser alinhada é um fragmento de gene. Em algumas modalidades, a sequência de ácido nucleico a ser alinhada é uma sequência intergênica. Em uma modalidade preferida, a inferência de homologia a partir de um alinhamento de sequência é feita onde a região de alinhamento é pelo menos 85% do comprimento da sequência de consulta.

[0231] O termo “homologia substancial” ou “similaridade substancial”, quando se refere a um ácido nucléico ou fragmento deste, indica que, quando otimamente alinhado com inserções de nucleotídeos apropriados ou deleções com outro ácido nucleico (ou sua cadeia complementar), há identidade de sequência nucleotídica em pelo menos cerca de 76%, 80%, 85%, ou pelo menos cerca de 90%, ou pelo menos cerca de 95%, 96%, pelo menos 97%, 98%, 99% ou 100% das posições do alinhamento, em que a região de alinhamento pelo menos cerca de 50%, 60%, 70%, 75%, 85% ou pelo menos cerca de 90%, ou pelo menos cerca de 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% do comprimento da sequência de consulta. Em uma modalidade preferida, a região de alinhamento contém pelo menos 100 posições, incluindo quaisquer lacunas internas. Em algumas modalidades, a região de alinhamento compreende pelo menos 100 nucleotídeos da sequência de consulta. Em algumas modalidades, a região de alinhamento compreende pelo menos 200 nucleotídeos da sequência de consulta. Em algumas modalidades, a região de alinhamento compreende pelo menos 300 nucleotídeos da sequência de consulta. Em algumas modalidades, a região de alinhamento compreende pelo menos 400 nucleotídeos da sequência de consulta. Em algumas modalidades, a região de alinhamento compreende pelo menos 500 nucleotídeos da sequência de consulta. Em algumas modalidades, a sequência de consulta é selecionada dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 38-59.

[0232] Como usado neste documento, os termos “unidade taxonômica operacional”, “OTU”, “táxon”, “cluster hierárquico” e “cluster” são usados de forma intercambiável. Uma unidade de táxon operacional (OTU) refere-se a um grupo de um ou mais organismos que compreende um nó em uma árvore de agrupamento. O nível de um agrupamento é determinado por sua ordem hierárquica. Em algumas modalidades, uma OTU é um grupo provisoriamente considerado como sendo um táxon válido para fins de análise filogenética. Em uma outra modalidade, uma OTU é qualquer uma das unidades taxonômicas existentes em estudo. Em ainda outra modalidade, um OTU recebe um nome e uma classificação. Por exemplo, uma OTU pode representar um domínio, um subdomínio, um reino, um sub-reino, um filo, um sub-filo, uma classe, uma subclasse, uma ordem, uma sub-ordem, uma família, uma subfamília, um gênero, um subgênero ou uma espécie. Em algumas modalidades, as OTUs podem representar um ou mais organismos dos reinos Eubacteria, Bacteria, Protista ou Fungi, em qualquer nível de uma ordem hierárquica. Em algumas modalidades, uma OTU representa uma ordem procariótica ou fúngica.

[0233] Em algumas modalidades, a presente invenção contempla as composições sintéticas compreendendo a combinação de um elemento vegetal, plântulas ou plantas inteiras e uma população endofítica, na qual a população endofítica é “heterologamente disposta”. Em algumas modalidades, um ou mais organismos endófitos da composição sintética são dispostos de forma heteróloga ou de forma manual, inoculados artificialmente ou dispostos em um elemento de planta, mudas, plantas ou em um meio de crescimento de plantas ou numa ou mais formulação de tratamento de modo a que o organismo endófito exista sobre o ou no referido elemento de planta, plântula, planta, meio de crescimento vegetal ou formulação de tratamento de uma maneira não encontrada na natureza antes da aplicação de um ou mais organismos endófitos, por exemplo, a referida combinação que não é encontrada na natureza. Em algumas modalidades, tal maneira é contemplada para ser selecionada dentre o grupo que consiste em: a presença do organismo endófito; presença do organismo endófito em um número diferente de células, concentração ou quantidade; a presença do organismo endófito em um elemento vegetal, tecido, tipo de célula ou outra localização física diferente na planta; a presença do organismo endófito em períodos de tempo diferentes, por exemplo, fase de desenvolvimento da planta ou elemento vegetal, hora do dia, época da estação e combinações destes. Em algumas modalidades, um ou mais organismos endófitos de uma composição sintética são dispostos heterologamente quando um ou mais organismos endófitos são artificialmente inoculados, por exemplo, são manualmente ou mecanicamente inoculados, ou aplicados artificialmente, por exemplo, manualmente ou mecanicamente aplicados, a um elemento vegetal diferente ou um estágio de desenvolvimento diferente daquele com o qual um ou mais organismos endófitos são encontrados naturalmente ou em uma concentração, número ou quantidade maior do que aquele que é encontrado naturalmente no ou sobre o referido elemento vegetal, muda ou planta. Em algumas modalidades, “disposto de forma heteróloga” refere-se à relação entre o organismo endófito e a planta hospedeira inoculada em comparação com o tipo de planta hospedeira com a qual o referido organismo endófito está normalmente associado. Em um exemplo, os organismos endófitos usados em uma composição sintética podem ser obtidos a partir de uma planta individual diferente da mesma variedade que a da planta hospedeira inoculada para a qual ela se torna heteróloga, uma planta de uma variedade diferente, mas do mesmo gênero e espécie, planta de uma cultivar diferente ou planta de um gênero diferente. Em uma modalidade, o organismo endófito é um micróbio endofítico isolado de uma planta diferente da planta inoculada. Por exemplo, em uma modalidade, o organismo endófito é um organismo endófito isolado de uma planta diferente da mesma espécie que a planta inoculada. Em alguns casos, o organismo endófito é isolado de uma espécie relacionada à planta inoculada. Em outro exemplo, os organismos endófitos usados em uma composição sintética podem ser obtidos de plantas individuais diferentes da mesma variedade, cada uma das quais foram submetidas a condições de crescimento diferentes. Por exemplo, um organismo endófito derivado de uma planta afetada pela seca de uma variedade pode ser isolado e revestido no elemento vegetal que foi derivado de uma planta da mesma variedade não submetida à seca. Em tais casos, o organismo endófito considerado como sendo disposto heterologamente no elemento vegetal sobre o qual aplicado manualmente, mecanicamente ou artificialmente. Em algumas modalidades, "disposição heteróloga" significa que o organismo endófito aplicado a um tecido ou tipo de célula diferente do elemento vegetal é aquele em que o micróbio é encontrado naturalmente. Em algumas modalidades, um organismo endófito é heterologamente disposto em uma plântula se esse organismo endófito é normalmente encontrado no estágio de florescimento de uma planta e não em um estágio de muda. Em algumas modalidades, um organismo endófito é disposto heterologamente, o organismo endófito é normalmente encontrado no tecido da raiz de um elemento vegetal, mas não no tecido da folha, e o organismo endófito é aplicado à folha. Ainda em outro exemplo não limitativo, se um organismo endófito é encontrado naturalmente na camada de mesofilo do tecido da folha, mas está a ser aplicado na camada epitelial, o organismo endófito seria considerado como sendo disposto de forma heteróloga. Em algumas modalidades, “disposto de forma heteróloga” significa que o elemento vegetal nativo, a muda ou a planta não contém níveis detectáveis do micróbio nesse mesmo elemento vegetal, muda ou planta. Por exemplo, se o referido elemento vegetal ou muda ou planta não tiver naturalmente o organismo endófito disposto de forma heteróloga e o organismo endófito for aplicado, o organismo endófito seria considerado como disposto de forma heteróloga. Em algumas modalidades, "disposto de forma heteróloga" significa que o organismo endófito a ser aplicado está em maior concentração, número ou quantidade em relação ao elemento vegetal, muda ou planta, do que aquele que é encontrado naturalmente no referido elemento vegetal, muda ou planta. Por exemplo, um organismo endófito é disposto de forma heteróloga quando presente em uma concentração que é pelo menos 1,5 vezes maior, entre 1,5 e 2 vezes maior, 2 vezes maior, entre 2 e 3 vezes maior, 3 vezes maior, entre 3 e 5 vezes maior, 5 vezes maior, entre 5 e 7 vezes maior, 7 vezes maior, entre 7 e 10 vezes maior, 10 vezes maior, ou até maior que 10 vezes maior número, quantidade ou concentração do que a concentração que estava presente antes da disposição do referido organismo endófito. Em algumas modalidades, "disposto de forma heteróloga" significa que o organismo endófito é aplicado a um estágio de desenvolvimento do elemento vegetal, muda ou planta em que o organismo endófito não é encontrado naturalmente, mas pode estar associado em outros estágios. Em algumas modalidades, “disposto de forma heteróloga” significa que o organismo endófito foi isolado de plantas ou elementos de planta sob uma condição ambiental diferente daquela normalmente encontrada (por exemplo, mas não limitada a: pH do solo diferente, temperatura média do ar diferente, temperatura do solo diferente, diferentes condições de precipitação, diferentes composições de nutrientes no solo ou diferentes salinidades ambientais). Em um exemplo, se um organismo endófito é normalmente encontrado no estágio de floração de uma planta e nenhum outro estágio, um organismo endófito aplicado no estágio de muda pode ser considerado como sendo disposto de forma heteróloga. Em outro exemplo, um organismo endófito que é normalmente disposto de forma heteróloga para o tecido foliar de uma planta é considerado heterólogo a um tecido foliar de outra planta que naturalmente não tem o referido organismo endófito. Em outro exemplo, um organismo endófito que é normalmente encontrado em níveis baixos em uma planta é considerado heterólogo àquela planta se uma concentração mais alta desse organismo endófito for introduzida na planta. Em ainda outro exemplo, um organismo endófito que é disposto de forma heteróloga para uma espécie de gramíneas tropicais seria considerado heterólogo para uma espécie de gramínea diferente que naturalmente não tem o referido organismo endófito.

[0234] Uma planta ou elemento vegetal "inoculado" foi artificialmente introduzido em um organismo endófito heterólogo em algum ponto durante o crescimento ou desenvolvimento da planta ou elemento vegetal (incluindo fases vegetativas ou reprodutivas). Em algumas modalidades, o organismo endófito heterólogo é incorporado de forma transitória ou permanente na planta ou no elemento vegetal e é detectável usando métodos conhecidos na técnica ou descritos neste documento. Em algumas modalidades, uma semente é inoculada com um organismo endófito por contato manual ou mecânico com a semente com uma formulação compreendendo o referido organismo endófito, que é detectável na ou sobre a semente. Em algumas modalidades, diz-se que uma planta é inoculada com um organismo endófito se for cultivada a partir de um elemento reprodutivo (por exemplo, uma semente) que foi contatada manual ou mecanicamente com uma formulação compreendendo o referido organismo endófito, que é subsequentemente detectável na planta. Em algumas modalidades, diz-se que uma planta é inoculada com um organismo endófito se algum ou mais se seus elementos de planta (por exemplo, folha, caule ou raiz) são contatados manual ou mecanicamente com uma formulação compreendendo o referido organismo endófito, que é subsequentemente detectável no mesmo elemento de planta que foi originalmente contatado com a referida formulação ou em um elemento vegetal diferente dessa planta. O termo “inoculação” também pode se referir ao contato manual ou mecânico de uma população endofítica com qualquer substância, que seja detectável na ou sobre a referida substância após o contato com o organismo endófito. Em um exemplo, a referida substância é o solo ou outro meio de crescimento de plantas. Em outro exemplo, a referida substância é um meio de armazenamento tal como glicerol. Em alguns casos, "inoculação" pode se referir ao contato de uma população de organismos endófitos com um organismo vivo não vegetal, por exemplo, mas não limitado a um inseto ou fungo.

[0235] O termo “isolinhagem” é um termo comparativo e faz referência a organismos que são geneticamente idênticos, mas que podem diferir no tratamento. Em um exemplo, dois embriões de plantas de milho geneticamente idênticas podem ser separados em dois grupos diferentes, um recebendo um tratamento (como a transformação com um polinucleotídeo heterólogo, para criar uma planta geneticamente modificada) e um controle, por exemplo, referência, que não recebe tal tratamento. Quaisquer diferenças fenotípicas entre os dois grupos podem, portanto, ser atribuídas apenas ao tratamento e não a qualquer herança da composição genética da planta. Em outro exemplo, duas sementes de soja geneticamente idênticas podem ser tratadas com uma formulação, uma que introduz uma composição endofítica e outra que não. Quaisquer diferenças fenotípicas entre as plantas derivadas (por exemplo, cultivadas ou obtidas a partir) dessas sementes podem ser atribuídas ao tratamento com organismos endófitos, formando assim uma comparação de isolinhagens.

[0236] Do mesmo modo, pelo termo “planta agrícola de referência” entende- se uma planta agrícola da mesma espécie, variedade ou cultivar, para a qual um tratamento, formulação, composição ou preparação de organismo endófito como descrito neste documento não é administrada/contatada. Uma planta agrícola de referência, portanto, é idêntica à planta tratada com a exceção da presença do endófito e pode servir como controle para detectar os efeitos do organismo endófito que é conferido à planta. Em algumas modalidades, o termo "planta de isolinhagem de referência" é usado neste documento para descrever uma planta de referência que é geneticamente idêntica e sujeita às mesmas condições, isto é, uma planta de controle, à planta tratada.

[0237] Um "ambiente de referência" refere-se ao ambiente, tratamento ou condição da planta na qual é feita uma medição. Por exemplo, a produção de um composto em uma planta disposta heterologamente a um organismo endófito pode ser medida em um ambiente de referência de estresse hídrico e comparada com os níveis do composto em uma planta agrícola de referência nas mesmas condições de estresse hídrico. Alternativamente, os níveis de um composto em plantas heterologamente dispostos para um organismo endófito e planta agrícola de referência podem ser medidos sob condições idênticas de ausência de tensão.

[0238] Um "elemento vegetal" destina-se a referenciar genericamente uma planta inteira ou um componente de planta, incluindo, entre outros, tecidos, partes e tipos de células da planta. Um elemento vegetal é preferencialmente um dos seguintes: planta inteira, plântula, tecido meristemático, tecido moído, tecido vascular, tecido dérmico, semente, folha, raiz, broto, caule, flor, fruto, estolho, bulbo, tubérculo, cormo, keikis, gomo. Como usado neste documento, um "elemento vegetal" é sinônimo de uma "porção" de uma planta e refere-se a qualquer parte da planta, e pode incluir tecidos e/ou órgãos distintos e pode ser usado de forma intercambiável com o termo "tecido" ao longo deste documento.

[0239] De forma semelhante, um "elemento reprodutivo de planta" destina- se a referenciar genericamente qualquer parte de uma planta que seja capaz de iniciar outras plantas por meio de reprodução sexual ou assexual dessa planta, por exemplo, mas não se limitando a: semente, muda, raiz, broto, corte, enxerto, enxerto, estolho, bulbo, tubérculo, cormo, keikis ou gomo.

[0240] Uma "semente de progênie", como usada neste documento, refere- se à semente produzida por uma planta hospedeira que foi inoculada com, ou disposta heterologamente, um organismo endófito. Por exemplo, na presente invenção, uma semente, elemento vegetal ou planta inteira pode tornar-se disposto de forma heteróloga a um organismo endófito, e a planta que é cultivada a partir da referida semente, ou planta que é cultivada em associação heteróloga com o referido organismo endófito, pode produzir ela própria sementes de progênie que compreendem composição nutricional alterada em comparação com sementes obtidas de plantas que não foram cultivadas a partir de um elemento vegetal disposta de forma heteróloga a um organismo endófito ou obtido de uma planta (hospedeira) parental que se tornou disposto de forma heteróloga a um organismo endófito em algum ponto do seu ciclo de vida. No sentido geral, a frase “semente de progênie” pode ser interpretada como representando qualquer unidade de propagação de planta produzida pela planta hospedeira que seja capaz de se tornar outro indivíduo dessa mesma espécie de planta.

[0241] Uma “população” de plantas refere-se a mais de uma planta, que são da mesma categoria taxonômica, tipicamente da mesma espécie, e normalmente também compartilham uma derivação genética comum.

[0242] Como usado neste documento, uma “semente agrícola” é uma semente usada para cultivar uma planta tipicamente usada na agricultura (uma “planta agrícola”). As sementes podem ser de uma planta monocotiledônea e podem ser plantadas para a produção de um produto agrícola, por exemplo, alimentos para animais, alimentos, fibras, combustíveis, usos industriais, etc. Como usado neste documento, uma semente agrícola é uma semente que é preparada para o plantio, por exemplo, em fazendas para cultivo.

[0243] “Plantas agrícolas” ou “plantas de importância agronômica incluem plantas que são cultivadas por seres humanos para alimentação, ração, fibra, combustível e/ou fins industriais. Em algumas modalidades, plantas (incluindo sementes e outros elementos de planta) tratadas de acordo com a presente invenção são monocotiledôneas. Em algumas modalidades, as plantas (incluindo sementes ou outros elementos de plantas) tratadas de acordo com a presente invenção são dicotiledôneas, excluindo algodão e sorgo. Em algumas modalidades, as plantas tratadas de acordo com a presente invenção incluem, mas não estão limitadas a: linha agrícola, plantas de capim agrícola ou outras culturas de campo: trigo, arroz, cevada, trigo sarraceno, feijão (soja, ervilha-torta, seca), milho (grãos, sementes, milho doce, silagem, pipoca, óleo alto), canola, ervilhas (secas, suculentas), amendoins, açafrão, girassol, feno de alfafa, forrageiras (alfafa, trevo, ervilhaca e trevo), bagas e frutas pequenas (amoras, mirtilos, passas de groselha, sabugueiro, groselha, mirtilo, mirtilo, framboesa, morango, banana e uva), cultivos de bulbo (alho, alho-poró, cebola, cebolinha, chalota e bulbos ornamentais), frutas cítricas (híbridos cítricos, toranjas, kumquat, linhas, laranjas e pummelos), vegetais de abóbora (pepinos, melões, cabaças, abóboras e abóboras), flores, roupas de cama, plantas ornamentais, legumes frutíferos (berinjela, pimentão e pimentão, tomatillos e tomate), ervas, especiarias, hortelã, culturas hidropônicas (pepinos, tomates, alface, ervas e especiarias), vegetais folhosos e culturas de cevada (rúcula, aipo, cerefólio, endívia, erva-doce, alface (cabeça e folha), salsa, radicchio, ruibarbo, espinafre, acelga, brócolis, couve de bruxelas, couve, couve-flor, couve, couve, couve-rábano e mostarda), aspargos, leguminosas e culturas de campo (feijão verde e seco, lentilhas, ervilhas suculentas e secas e amendoins), frutos de pomo (peras e marmelo), culturas de raiz (beterraba, beterraba sacarina, beterrabas vermelhas, cenouras, aipo-rábano, chicória, raiz-forte, pastinaga, rabanete rutabaga, barba-de-bode e nabos), árvores de folha caduca (bordo e carvalho), pinheiro, centeio, trigo, milho, frutas de caroço (damascos, cerejas, nectarinas, pêssegos, ameixas e ameixas), nozes (amêndoas, castanhas, castanhas, castanhas, castanhas, avelãs, nozes de nogueira, nozes de macadâmia, nozes, pistácios e nozes) e tubérculos (batatas, batatas doces, inhame, alcachofra, mandioca e gengibre). Em uma modalidade específica, a planta agrícola é selecionada do grupo que consiste em arroz (Oryza sativa e variedades relacionadas), soja (Glycine max e variedades relacionadas), trigo (Triticum aestivum e variedades relacionadas), milho (Zea mays e variedades relacionadas), amendoim (Arachis hypogaea e variedades relacionadas), canola (Brassica napus, Brassica rapa e variedades relacionadas), café (Coffea spp.), cacau (Theobroma cacao), melão e tomate (Solanum lycopsersicum e variedades relacionadas).

[0244] Uma "variedade intimamente relacionada" compreende uma derivação genética comum com uma variedade de plantas. Em algumas modalidades, uma variedade intimamente relacionada tem pelo menos uma linhagem de origem dupla em comum com a variedade de plantas. Em algumas modalidades, uma variedade intimamente relacionada tem pelo menos uma linhagem parental em comum com a variedade da planta. Em algumas modalidades, uma variedade intimamente relacionada tem pelo menos 60%, 70%, 80%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, 99,7%, 99,9%, 99,99% dos mesmos SNPs detectados na variedade da planta. Em algumas modalidades, uma variedade intimamente relacionada tem pelo menos 1, pelo menos 2, pelo menos 3, pelo menos 4, pelo menos 5, pelo menos 6, pelo menos 7, pelo menos 8, pelo menos 9, pelo menos 10, pelo menos 11, pelo menos 12, pelo menos 13, pelo menos 14, pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, ou 20 ou mais dos mesmos SNPs detectados na variedade da planta. Em algumas modalidades, uma variedade intimamente relacionada tem pelo menos 20, pelo menos 30, pelo menos 40, pelo menos 50, pelo menos 60, pelo menos 70, pelo menos 80, pelo menos 90, pelo menos pelo menos 100, pelo menos 200, pelo menos 300, pelo menos 400, pelo menos 500, pelo menos 600, pelo menos 700, pelo menos 800, pelo menos 900, ou 100 ou mais dos mesmos SNPs detectados na variedade da planta. Em algumas modalidades, uma variedade intimamente relacionada tem pelo menos 1000, pelo menos 2000, pelo menos 3000, pelo menos 4000, pelo menos 5000, pelo menos 6000, pelo menos 7000, pelo menos 8000, pelo menos 9000 ou 10000 ou mais de os mesmos SNPs detectados na variedade da planta. Em algumas modalidades, uma variedade intimamente relacionada tem pelo menos 10000, pelo menos 20000, pelo menos 30000, pelo menos 40000, pelo menos 50000, pelo menos 60000, pelo menos 70000, pelo menos 80000, pelo menos 90000 ou 100000 ou mais de os mesmos SNPs detectados na variedade da planta.

[0245] Uma “composição sintética” compreende um ou mais organismos endófitos combinados pelo esforço humano com um elemento vegetal disposto de forma heteróloga ou uma formulação de tratamento, a referida combinação que não é encontrada na natureza. Em algumas modalidades, o termo “composição sintética” significa um ou mais elementos de planta ou componentes de formulação combinados por esforço humano com uma composição de organismo endófito isolada e purificada. Em algumas modalidades, a referida composição de organismo endófito purificada é mecanicamente ou manualmente aplicada, artificialmente inoculada ou disposta em um elemento vegetal de uma maneira que não é encontrada ou no elemento vegetal antes da aplicação da composição de organismo endófito purificada, por exemplo, a referida combinação ou associação que não é encontrada na natureza.

[0246] Em algumas modalidades, "composição sintética" usada para referir uma formulação de tratamento compreendendo uma população isolada e purificada de organismos endófitos dispostos de forma heteróloga a um elemento vegetal. Em algumas modalidades, "composição sintética" refere-se a uma população purificada de organismos endófitos em uma formulação de tratamento compreendendo composições adicionais com as quais os referidos organismos endófitos não são encontrados na natureza.

[0247] Uma "formulação de tratamento" refere-se a uma mistura de produtos químicos que facilitam a estabilidade, armazenamento e/ou aplicação das composições de organismo endófito. As formulações de tratamento podem compreender qualquer um ou mais agentes tais como: surfactante, um tampão, um promotor de aderência, um estabilizador microbiano, um fungicida, um agente anticomplexo, um herbicida, um nematicida, um inseticida, um regulador de crescimento da planta, um rodenticida, um dessecante, um nutriente, um excipiente, um agente umectante, um sal.

[0248] Em algumas modalidades, um “transportador compatível com a agricultura” pode ser usado para formular uma formulação agrícola ou outra composição que inclua uma preparação de organismo endófito purificada. Como usado neste documento, um "carreador compatível com agricultura" refere-se a qualquer material, além da água, que pode ser adicionado a um elemento vegetal sem causar ou ter um efeito adverso sobre o elemento vegetal (por exemplo, reduzindo a germinação das sementes) ou a planta que cresce a partir do elemento vegetal ou similar.

[0249] “Saúde da planta” é demonstrada pela presença ou aprimoramento de um traço de importância agronômica encontrada em uma planta ou elemento vegetal em comparação com uma planta ou elemento vegetal de referência. As composições e métodos descritos neste documento podem fornecer uma "característica agronômica" ou "característica de importância agronômica" aprimorada para uma planta hospedeira, que incluem, mas não estão limitados a resistência a doenças, tolerância à seca, tolerância ao calor, tolerância ao frio, tolerância à salinidade, metal tolerância, tolerância a herbicidas, eficiência aprimorada no uso da água, utilização aprimorada de nitrogênio, fixação aprimorada de nitrogênio, resistência a pragas, resistência a herbívoros, resistência a patógenos, aprimoramento de rendimento, melhoria da saúde, aprimoramento do vigor, aprimoramento do crescimento, aprimoramento da capacidade fotossintética, aprimoramento da nutrição, conteúdo de proteína alterado, conteúdo de óleo alterado, biomassa aumentada, comprimento da parte aérea aumentada, comprimento da raiz aumentada, área da raiz aumentada, arquitetura radicular aprimorada, modulação de um metabólito, modulação do proteoma, aumento do peso da semente, composição alterada de carboidratos da semente, composição alterada de carboidratos da semente, composição alterada do óleo da semente, proteína alterada da semente composição alterada dos nutrientes das sementes e combinações destes, em comparação com a planta de referência derivada de uma semente sem a referida formulação de tratamento de sementes.

[0250] Em algumas modalidades, um tratamento é disposto de modo heterólogo em um elemento vegetal em uma quantidade eficaz para aprimorar um traço de importância agronômica. Em algumas modalidades, os tratamentos capazes de aprimorar a saúde das plantas são aplicados em uma quantidade eficaz para aprimorar um traço de importância ou tolerância agronômica em pelo menos 0,1%, pelo menos 0,5%, pelo menos 1%, pelo menos 2%, pelo menos 3%, entre 3% e 5%, pelo menos 5%, entre 5% e 10%, pelo menos 10%, entre 10% e 15%, por exemplo, pelo menos 15%, entre 15% e 20%, pelo menos 20%, entre 20% e 30%, pelo menos 30%, entre 30% e 40%, pelo menos 40%, entre 40% e 50%, pelo menos 50%, entre 50% e 60%, pelo menos 60%, entre 60% e 75%, pelo menos 75%, entre 75% e 100%, pelo menos 100%, entre 100% e 150%, pelo menos 150%, entre 150% e 200%, pelo menos 200%, entre 200% e 300%, pelo menos 300% ou mais, em comparação com um elemento vegetal de referência que não compreende adicionalmente o referido organismo endófito.

[0251] Em algumas modalidades, uma melhoria em um traço de importância agronômica é medida pela "taxa de ganho". A taxa de vitórias é a proporção de repetições em que o tratamento mostra um aprimoramento em um traço de importância agronômica em relação às réplicas de referência. Em algumas modalidades, as réplicas são plantas individuais. Em algumas modalidades, réplicas são parcelas, por exemplo, parcelas replicadas dentro de um teste de campo randomizado, completo, de campo. Em algumas modalidades, as réplicas são ensaios de campo conduzidos em diversas geografias.

[0252] Em algumas modalidades, o organismo endófito é capaz de aprimorar um traço de importância agronômica em concentrações detectadas no ou no elemento vegetal tratado de pelo menos 10A2 UFC ou esporos por elemento vegetal, entre 10A2 e 10A3 UFC ou esporos por elemento vegetal, cerca de 10A3 UFC ou esporos por elemento vegetal, entre IOA3 e IOA4 UFC ou esporos por elemento vegetal, cerca de 10A4 UFC ou esporos por elemento vegetal, ou entre 10A4, de cerca de 10A5 UFC ou esporos por elemento vegetal, pelo menos 10A5 UFC ou esporos por elemento vegetal, entre 10A5 e 10A6 UFC ou esporos por elemento vegetal, cerca de 10A6 UFC ou esporos por elemento vegetal, entre 10A6 e 10A7 UFC ou esporos por elemento vegetal, cerca de 10A7 UFC ou esporos por elemento vegetal, entre 10A7 e 10A8 UFC ou esporos por elemento vegetal, cerca de 10A8 UFC ou esporos por elemento vegetal, ou mesmo superior a 10A8 UFC ou esporos por elemento vegetal. Em algumas modalidades, o elemento vegetal é uma semente.

[0253] O termo "característica da qualidade nutricional" inclui qualquer parâmetro mensurável de uma semente que influencia direta ou indiretamente o valor (nutricional ou econômico) da referida semente, por exemplo, mas não se limitando a: proteínas, gorduras, carboidratos, cinzas, umidade, fibra e calorias. Em alguns casos, “traço de qualidade nutricional” é sinônimo de “traço de qualidade nutricional” ou “traço de qualidade nutricional de sementes”, e pode se referir a qualquer composição do elemento vegetal associado, mais particularmente composições fornecendo benefício a outros organismos que consomem ou usam o referido elemento vegetal. Como usado neste documento, “óleo” e “gordura” são usados de forma intercambiável.

[0254] Um “rendimento de sementes” aumentado pode se referir a qualquer aumento no peso, tamanho ou abundância de sementes ou frutos por unidade de medida, por exemplo, por planta, por número de plantas, por massa de plantas, por acre plantado, por acre coletado. Em algumas modalidades, o rendimento de semente é relatado como libras ou alqueires de sementes produzidas por acre coletado. Os termos semente e grão são usados neste documento intercambiavelmente. O rendimento também pode referir-se à recuperação de um componente em particular de um tecido da planta ao processar, por exemplo, a quantidade de óleo que pode ser extraída por unidade de semente. Tipicamente, a característica em particular é designada quando se refere ao aumento do rendimento, por exemplo, aumento do rendimento de sementes ou aumento do rendimento de óleo. Onde a característica não é especificada, pode-se presumir que o rendimento se refere ao rendimento de sementes e os termos podem ser usados de intercambiavelmente.

[0255] Como usado neste documento, os termos “condição com pouca água” e “condição de seca”, ou “pouca água” e “seca”, podem ser usados intercambiavelmente. Por exemplo, um método ou composição para aprimorar a capacidade de uma planta de crescer em condições de seca significa o mesmo que a capacidade de crescer em condições com pouca água. Em tais casos, pode-se dizer adicionalmente que a planta apresenta tolerância aprimorada à tensão hídrica.

[0256] Como usado neste documento, os termos "rega normal" e "bem regada" são usados intercambiavelmente, para descrever uma planta cultivada sob condições típicas de crescimento sem restrição de água.

[0257] Além disso, “função metabólica alterada” ou “função enzimática alterada” pode incluir, mas não se limitar a: alteração da produção de auxina, alteração da fixação de nitrogênio, alteração da produção de um composto antimicrobiano, alteração da produção de um sideróforo, alteração do mineral de solubilização de fosfato, produção alterada de uma celulase, produção alterada de uma quitinase, produção alterada de uma xilanase, produção alterada de acetoína, utilização alterada de uma fonte de carbono.

[0258] "Nutriente" ou "nutriente de semente" refere-se a qualquer composição do elemento vegetal associado, mais particularmente composições que fornecem benefício a outros organismos que consomem ou utilizam o referido elemento vegetal.

[0259] “Potencial de traço agronômico” significa uma capacidade de um elemento vegetal de exibir um fenótipo, preferencialmente um traço agronômico aprimorado, em algum momento do seu ciclo de vida, ou transportar o referido fenótipo para outro elemento vegetal ao qual está associado na mesma planta. Por exemplo, um elemento vegetal pode compreender um organismo endófito que fornecerá benefício ao tecido foliar de uma planta da qual o elemento vegetal é cultivado; em tal caso, o elemento vegetal compreendendo esse organismo endófito tem o potencial de traço agronômico para um fenótipo em particular (por exemplo, biomassa aumentada na planta) mesmo se o próprio elemento vegetal não exibir o referido fenótipo.

[0260] Em alguns casos, a presente invenção contempla o uso de composições que são “compatíveis” com produtos químicos agrícolas, incluindo, mas não limitados a um fungicida, um composto anti-complexo, um bactericida, um virucida, um herbicida, um nematicida, um parasiticida, um pesticida ou qualquer outro agente amplamente usado na agricultura que tenha o efeito de matar ou, de outro modo, interferir no crescimento ótimo de outro organismo. Como usado neste documento, uma composição é “compatível” com um produto químico agrícola quando o organismo é modificado, tal como por modificação genética, por exemplo, contém um transgene que confere resistência a um herbicida, ou é adaptado para crescer ou sobreviver a concentração do produto químico agrícola usado na agricultura. Por exemplo, um organismo endófito disposto na superfície de um elemento vegetal é compatível com o fungicida metalaxil se for capaz de sobreviver às concentrações que são aplicadas na superfície do elemento vegetal.

[0261] Como usado neste documento, uma “unidade formadora de colônia” (“UFC”) é usada como uma medida de microrganismos viáveis em uma amostra. Uma UFC é uma célula viável individual capaz de formar em um meio sólido uma colônia visível cujas células individuais são derivadas por divisão celular de uma célula parental. Em algumas modalidades, uma célula é um esporo de fungos.

[0262] Os termos “diminuído”, “menos”, “mais lento” e “aumentado”, “mais rápido”, “potencializado”, “maior” como usado neste documento refere-se a uma diminuição ou aumento em uma característica do elemento de planta tratado com organismo endófito ou planta resultante em comparação com um elemento vegetal não tratado ou planta resultante. Por exemplo, uma diminuição em uma característica pode ser de pelo menos 1%, pelo menos 2%, pelo menos 3%, pelo menos 4%, pelo menos 5%, entre 5% e 10%, pelo menos 10%, entre 10% e 20%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, entre 20% e 30%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, entre 30% e 40%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, entre 40% e 50%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, entre 50% e 60%, pelo menos cerca de 60%, entre 60% e 70%, entre 70% e 80%, pelo menos 75%, pelo menos cerca de 80%, entre 80% e 90%, pelo menos cerca de 90%, entre 90% e 100%, pelo menos 100%, entre 100% e 200%, pelo menos 200%, pelo menos cerca de 300%, pelo menos cerca de 400% ou mais abaixo do controle não tratado e um aumento pode ser de pelo menos 1%, pelo menos 2%, pelo menos 3%, pelo menos 4%, pelo menos 5%, entre 5% e 10%, pelo menos 10%, entre 10% e 20%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, entre 20% e 30%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, entre 30% e 40%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, entre 40% e 50%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, entre 50% e 60%, pelo menos cerca de 60%, entre 60% e 70%, entre 70% e 80%, pelo menos 75%, pelo menos cerca de 80%, entre 80% e 90%, pelo menos cerca de 90%, entre 90% e 100%, pelo menos 100%, entre 100% e 200%, pelo menos 200%, pelo menos cerca de 300%, pelo menos cerca de 400% ou mais superior ao controle não tratado.

[0263] Como usado neste documento, um micróbio ou planta ou elemento vegetal é “modificado” quando compreende uma “modificação” genética ou epigenética introduzida artificialmente. Em algumas modalidades, a modificação é introduzida por uma tecnologia de manipulação do genoma. Em algumas modalidades, a modificação é introduzida por uma nuclease direcionada. Em algumas modalidades, nucleases direcionadas incluem, mas não estão limitadas a nuclease com efetores do tipo ativador transcricional (TALEN), nuclease de dedo de zinco (ZNF), repetições palindrômicas curtas interespaciais reguladas agrupadas (CRISPR), CRISPR/Cas9, CRISPR/CPF1 e combinações destes. Em algumas modalidades, a modificação é uma modificação epigenética. Em algumas modalidades, a modificação é introduzida por tratamento com um inibidor de DNA metiltransferase, tal como 5-azacitidina, ou um inibidor de histona desacetilase, tal como 2-amino-7-metoxi-3H-fenoxazin-3-ona. Em algumas modalidades, a modificação é introduzida através da cultura de tecidos. Em algumas modalidades, um micróbio ou planta ou elemento vegetal modificado compreende um transgene.

Composições Endofíticas

[0264] Os organismos endófitos descritos neste documento fornecem várias vantagens inesperadas e significativas a plantas agriculturais sobre outros micróbios associados a plantas, como demonstrado nos Exemplos.

[0265] Novas composições de endófitos são aqui descritas. Em algumas modalidades, o organismo endófito é selecionado a partir da Tabela 4. Em algumas modalidades, o organismo endófito é selecionado a partir da Tabela 6.

[0266] Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende uma sequência polinucleotídica que é pelo menos 97% idêntica a pelo menos uma sequência selecionada dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 67. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende uma sequência polinucleotídica que é entre 97% e 98% idêntica, pelo menos 98% idêntica, entre 98,0% idêntica e 99,5% idêntica, pelo menos 99,5% idêntica ou 100% idêntica a pelo menos uma sequência selecionada dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 67.

[0267] Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende uma sequência polinucleotídica que é pelo menos 97% idêntica a pelo menos uma sequência selecionada dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 68. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende uma sequência polinucleotídica que é entre 97% e 98% idêntica, pelo menos 98% idêntica, entre 98,0% idêntica e 99,5% idêntica, pelo menos 99,5% idêntica ou 100% idêntica a pelo menos uma sequência selecionada dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 68.

[0268] Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende uma sequência polinucleotídica que é pelo menos 97% idêntica a pelo menos uma sequência selecionada dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 69. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende uma sequência polinucleotídica que é entre 97% e 98% idêntica, pelo menos 98% idêntica, entre 98,0% idêntica e 99,5% idêntica, pelo menos 99,5% idêntica ou 100% idêntica a pelo menos uma sequência selecionada dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 69.

[0269] Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende uma sequência polinucleotídica que é pelo menos 97% idêntica a pelo menos uma sequência selecionada dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 70. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende uma sequência polinucleotídica que é entre 97% e 98% idêntica, pelo menos 98% idêntica, entre 98,0% idêntica e 99,5% idêntica, pelo menos 99,5% idêntica ou 100% idêntica a pelo menos uma sequência selecionada dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 70.

[0270] Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende uma sequência polinucleotídica que é pelo menos 97% idêntica a pelo menos uma sequência selecionada dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 65 e 66. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende uma sequência polinucleotídica que é entre 97% e 98% idêntica, pelo menos 98% idêntica, entre 98,0% idêntica e 99,5% idêntica, pelo menos 99,5% idêntica ou 100% idêntica a pelo menos uma sequência selecionada dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 65 e 66. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos duas sequências polinucleotídicas que são pelo menos 97% idênticas a pelo menos duas sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 65 e 66. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos duas sequências polinucleotídicas que são entre 97% e 98% idênticas, pelo menos 98% idênticas, entre 98,0% idênticas e 99,5% idênticas, ou pelo menos 99,5% idênticas ou 100% idênticas a pelo menos duas sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 65 e 66.

[0271] Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende uma sequência polinucleotídica que é pelo menos 97% idêntica a pelo menos uma sequência selecionada dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 63, 64 e 71. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende uma sequência polinucleotídica que é entre 97% e 98% idêntica, pelo menos 98% idêntica, entre 98,0% idêntica e 99,5% idêntica, pelo menos 99,5% idêntica ou 100% idêntica a pelo menos uma sequência selecionada dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 63, 64 e 71. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos duas sequências polinucleotídicas que são pelo menos 97% idênticas a pelo menos duas sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 63,64 e 71. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos duas sequências polinucleotídicas que são entre 97% e 98% idênticas, pelo menos 98% idênticas, entre 98,0% idênticas e 99,5% idênticas, ou pelo menos 99,5% idênticas ou 100% idênticas a pelo menos duas sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 63, 64 e 71. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos três sequências polinucleotídicas que são pelo menos 97% idênticas a pelo menos três sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 63, 64 e 71. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos três sequências polinucleotídicas que são entre 97% e 98% idêntica, pelo menos 98% idêntica, entre 98,0% idêntica e 99,5% idêntica, ou pelo menos 99,5% idêntica ou 100% idêntica a pelo menos três sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 63,64 e 71.

[0272] Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende uma sequência polinucleotídica que é pelo menos 97% idêntica a pelo menos uma sequência selecionada dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 60, 61 e 62. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende uma sequência polinucleotídica que é entre 97% e 98% idêntica, pelo menos 98% idêntica, entre 98,0% idêntica e 99,5% idêntica, pelo menos 99,5% idêntica ou 100% idêntica a pelo menos uma sequência selecionada dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 60, 61 e 62. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos duas sequências polinucleotídicas que são pelo menos 97% idênticas a pelo menos duas sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 60, 61 e 62. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos duas sequências polinucleotídicas que são entre 97% e 98% idênticas, pelo menos 98% idênticas, entre 98,0% idênticas e 99,5% idênticas, ou pelo menos 99,5% idênticas ou 100% idênticas a pelo menos duas sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 60, 61 e 62. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos três sequências polinucleotídicas que são pelo menos 97% idênticas a pelo menos três sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 60, 61 e 62. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos três sequências polinucleotídicas que são entre 97% e 98% idêntica, pelo menos 98% idêntica, entre 98,0% idêntica e 99,5% idêntica, ou pelo menos 99,5% idêntica ou 100% idêntica a pelo menos três sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 60, 61 e 62.

[0273] Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende uma sequência polinucleotídica que é pelo menos 97% idêntica a pelo menos uma sequência selecionada dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 38, 39, 40, e 41. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende uma sequência polinucleotídica que é entre 97% e 98% idêntica, pelo menos 98% idêntica, entre 98,0% idêntica e 99,5% idêntica, pelo menos 99,5% idêntica ou 100% idêntica a pelo menos uma sequência selecionada dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 38, 39, 40, e 41. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos duas sequências polinucleotídicas que são pelo menos 97% idênticas a pelo menos duas sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 38, 39, 40, e 41. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos duas sequências polinucleotídicas que são entre 97% e 98% idênticas, pelo menos 98% idênticas, entre 98,0% idênticas e 99,5% idênticas, ou pelo menos 99,5% idênticas ou 100% idênticas a pelo menos duas sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 38, 39, 40, e 41. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos três sequências polinucleotídicas que são pelo menos 97% idênticas a pelo menos três sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 38, 39, 40 e 41. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos três sequências polinucleotídicas que são entre 97% e 98% idêntica, pelo menos 98% idêntica, entre 98,0% idêntica e 99,5% idêntica, ou pelo menos 99,5% idêntica ou 100% idêntica a pelo menos três sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 38, 39, 40, e 41. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos quatro sequências polinucleotídicas que são pelo menos 97% idênticas a pelo menos quatro sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 38, 39, 40, e 41. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos quatro sequências polinucleotídicas que são entre 97% e 98% idênticas, pelo menos 98% idênticas, entre 98,0% idênticas e 99,5% idênticas, ou pelo menos 99,5% idênticas ou 100% idênticas a pelo menos quatro sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 38, 39, 40, e 41.

[0274] Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende uma sequência polinucleotídica que é pelo menos 97% idêntica a pelo menos uma sequência selecionada dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 42, 43, 44, e 45. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende uma sequência polinucleotídica que é entre 97% e 98% idêntica, pelo menos 98% idêntica, entre 98,0% idêntica e 99,5% idêntica, pelo menos 99,5% idêntica ou 100% idêntica a pelo menos uma sequência selecionada dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 42, 43, 44, e 45. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos duas sequências polinucleotídicas que são pelo menos 97% idênticas a pelo menos duas sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 42, 43, 44, e 45. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos duas sequências polinucleotídicas que são entre 97% e 98% idênticas, pelo menos 98% idênticas, entre 98,0% idênticas e 99,5% idênticas, ou pelo menos 99,5% idênticas ou 100% idênticas a pelo menos duas sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs:42, 43, 44, e 45. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos três sequências polinucleotídicas que são pelo menos 97% idênticas a pelo menos três sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 42, 43, 44 e 45. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos três sequências polinucleotídicas que são entre 97% e 98% idêntica, pelo menos 98% idêntica, entre 98,0% idêntica e 99,5% idêntica, ou pelo menos 99,5% idêntica ou 100% idêntica a pelo menos três sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 42, 43, 44, e 45. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos quatro sequências polinucleotídicas que são pelo menos 97% idênticas a pelo menos quatro sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 42, 43, 44, e 45. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos quatro sequências polinucleotídicas que são entre 97% e 98% idênticas, pelo menos 98% idênticas, entre 98,0% idênticas e 99,5% idênticas, ou pelo menos 99,5% idênticas ou 100% idênticas a pelo menos quatro sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs:42, 43, 44, e 45.

[0275] Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende uma sequência polinucleotídica que é pelo menos 97% idêntica a pelo menos uma sequência selecionada dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50, e 51. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende uma sequência polinucleotídica que é entre 97% e 98% idêntica, pelo menos 98% idêntica, entre 98,0% idêntica e 99,5% idêntica, pelo menos 99,5% idêntica ou 100% idêntica a pelo menos uma sequência selecionada dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50, e 51. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos duas sequências polinucleotídicas que são pelo menos 97% idênticas a pelo menos duas sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50, e 51. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos duas sequências polinucleotídicas que são entre 97% e 98% idênticas, pelo menos 98% idênticas, entre 98,0% idênticas e 99,5% idênticas, ou pelo menos 99,5% idênticas ou 100% idênticas a pelo menos duas sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50, e 51. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos três sequências polinucleotídicas que são pelo menos 97% idênticas a pelo menos três sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50, e 51. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos três sequências polinucleotídicas que são entre 97% e 98% idêntica, pelo menos 98% idêntica, entre 98,0% idêntica e 99,5% idêntica, ou pelo menos 99,5% idêntica ou 100% idêntica a pelo menos três sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50, e 51. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos quatro sequências polinucleotídicas que são pelo menos 97% idênticas a pelo menos quatro sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50, e 51. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos quatro sequências polinucleotídicas que são entre 97% e 98% idênticas, pelo menos 98% idênticas, entre 98,0% idênticas e 99,5% idênticas, ou pelo menos 99,5% idênticas ou 100% idênticas a pelo menos quatro sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50, e 51. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos cinco sequências polinucleotídicas que são pelo menos 97% idênticas a pelo menos cinco sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50, e 51. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos cinco sequências polinucleotídicas que são entre 97% e 98% idênticas, pelo menos 98% idênticas, entre 98,0% idênticas e 99,5% idênticas, ou pelo menos 99,5% idênticas ou 100% idênticas a pelo menos cinco sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50, e 51. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos seis sequências polinucleotídicas que são pelo menos 97% idênticas a pelo menos seis sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50, e 51. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos seis sequências polinucleotídicas que são entre 97% e 98% idênticas, pelo menos 98% idênticas, entre 98,0% idênticas e 99,5% idênticas, ou pelo menos 99,5% idênticas ou 100% idênticas a pelo menos seis sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, 50, e 51.

[0276] Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende uma sequência polinucleotídica que é pelo menos 97% idêntica a pelo menos uma sequência selecionada dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, e 59. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende uma sequência polinucleotídica que é entre 97% e 98% idêntica, pelo menos 98% idêntica, entre 98,0% idêntica e 99,5% idêntica, pelo menos 99,5% idêntica ou 100% idêntica a pelo menos uma sequência selecionada dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, e 59. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos duas sequências polinucleotídicas que são pelo menos 97% idênticas a pelo menos duas sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, e 59. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos duas sequências polinucleotídicas que são entre 97% e 98% idênticas, pelo menos 98% idênticas, entre 98,0% idênticas e 99,5% idênticas, ou pelo menos 99,5% idênticas ou 100% idênticas a pelo menos duas sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, e 59. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos três sequências polinucleotídicas que são pelo menos 97% idênticas a pelo menos três sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, e 59. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos três sequências polinucleotídicas que são entre 97% e 98% idêntica, pelo menos 98% idêntica, entre 98,0% idêntica e 99,5% idêntica, ou pelo menos 99,5% idêntica ou 100% idêntica a pelo menos três sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, e 59. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos quatro sequências polinucleotídicas que são pelo menos 97% idênticas a pelo menos quatro sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, e 59. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos quatro sequências polinucleotídicas que são entre 97% e 98% idênticas, pelo menos 98% idênticas, entre 98,0% idênticas e 99,5% idênticas, ou pelo menos 99,5% idênticas ou 100% idênticas a pelo menos quatro sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, e 59. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos cinco sequências polinucleotídicas que são pelo menos 97% idênticas a pelo menos cinco sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, e 59. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos cinco sequências polinucleotídicas que são entre 97% e 98% idênticas, pelo menos 98% idênticas, entre 98,0% idênticas e 99,5% idênticas, ou pelo menos 99,5% idênticas ou 100% idênticas a pelo menos cinco sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, e 59. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos seis sequências polinucleotídicas que são pelo menos 97% idênticas a pelo menos seis sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, e 59. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos seis sequências polinucleotídicas que são entre 97% e 98% idênticas, pelo menos 98% idênticas, entre 98,0% idênticas e 99,5% idênticas, ou pelo menos 99,5% idênticas ou 100% idênticas a pelo menos seis sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, e 59. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos sete sequências polinucleotídicas que são pelo menos 97% idênticas a pelo menos sete sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, e 59. Em algumas modalidades, o organismo endófito compreende pelo menos sete sequências polinucleotídicas que são entre 97% e 98% idênticas, pelo menos 98% idênticas, entre 98,0% idênticas e 99,5% idênticas, ou pelo menos 99,5% idênticas ou 100% idênticas a pelo menos sete sequências selecionadas dentre o grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, e 59.

[0277] Em algumas modalidades, o endófito é um Exserohilum rostrata. Em algumas modalidades, o organismo endófito é uma Curvularia spicifera. Em algumas modalidades, o endófito é uma Curvularia protuberata. Em algumas modalidades, o endófito é um Acremonium alternatum. Em algumas modalidades, o endófito é um Cladosporium oxysporum. Em algumas modalidades, o endófito é um Chaetomium globosum. Em algumas modalidades, o endófito é um Epicoccum nigrum. Em algumas modalidades, o endófito é um Paecilomyces inflatus. Em algumas modalidades, o endófito é da taxonomia Coniochaeta prunicola.

[0278] Em alguns casos, o organismo endófito, ou um ou mais componentes do mesmo, é de origem monoclonal, fornecendo alta uniformidade genética da população de organismos endófitos em uma formulação agrícola ou dentro de um elemento de planta ou combinação sintética com o organismo endófito.

[0279] Em algumas modalidades, o organismo endófito pode ser cultivado em um meio de cultura ou pode ser adaptado à cultura em um meio de cultura.

[0280] As composições sintéticas neste documento fornecidas são preferencialmente estáveis. O organismo endófito pode ser estável em armazenamento, onde pelo menos 0,01% das UFC são viáveis após armazenamento em forma dessecada (isto é, conteúdo de umidade de 30% ou menos) para 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou mais de 10 semanas a 4 ou temperatura ambiente. Opcionalmente, uma formulação de longa duração está em uma formulação seca, em uma formulação em pó ou em uma formulação liofilizada. Em algumas modalidades, a formulação é formulada para fornecer estabilidade para a população de organismos endófitos. Em uma modalidade, a formulação é substancialmente estável a temperaturas entre cerca de -20°C e cerca de 50°C durante pelo menos cerca de 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 dias, ou 1, 2, 3 ou 4 semanas, ou 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12 meses, ou um ou mais anos. Em outra modalidade, a formulação é substancialmente estável a temperaturas entre cerca de 4°C e cerca de 37°C por pelo menos cerca de 5, 10, 15, 20, 25, 30 ou mais de 30 dias.

Organismos Endófitos e Composições Sintéticas com Plantas e Elementos de Plantas

[0281] Está contemplado que os métodos e composições sintéticas podem ser usados para aprimorar uma característica de importância agronômica a uma planta.

[0282] Os métodos descritos neste documento também podem ser usados com plantas transgênicas compreendendo um ou mais transgenes exógenos, por exemplo, para produzir benefícios de traço adicionais conferidos pelos micróbios endofíticos recentemente introduzidos.

[0283] Por exemplo, o endófito pode fornecer um benefício ou tolerância aprimorada a uma planta que seja de pelo menos 3%, entre 3% e 5%, pelo menos 5%, entre 5% e 10%, pelo menos 10%, entre 10% e 15%, por exemplo, pelo menos 15%, entre 15% e 20%, pelo menos 20%, entre 20% e 30%, pelo menos 30%, entre 30% e 40%, pelo menos 40%, entre 40% e 50%, pelo menos 50%, entre 50% e 60%, pelo menos 60%, entre 60% e 75%, pelo menos 75%, entre 75% e 100%, pelo menos 100%, entre 100% e 150%, pelo menos 150%, entre 150% e 200%, pelo menos 200%, entre 200% e 300%, pelo menos 300% ou mais, quando comparado com plantas não inoculadas cultivadas nas mesmas condições.

[0284] Em uma modalidade, é contemplado que a planta da presente invenção seja arroz (Oryza spp.), em particular O. sativa e O. glaberrima, e membros das principais subespécies de O. sativa japonica, javanica e indica. Numa modalidade, é contemplado que a planta da presente invenção seja a variedade de arroz Rex e suas variedades intimamente relacionadas. Em algumas modalidades, a presente invenção contempla o uso de organismos endófitos que podem conferir um traço de benefício agronômico sobre um elemento de planta de arroz ou planta de arroz à qual é disposta de forma heteróloga.

[0285] Em uma modalidade, é contemplado que a planta da presente invenção seja milho (Zea spp.), em particular Zea mays ssp, tal como Zea mays indenata, Zea mays indurata, Zea mays amylacea, Zea mays saccharata e Zea mays everta. Numa modalidade, é contemplado que a planta da presente invenção seja a variedade de milho Stine 9734 e variedades intimamente relacionadas. Em algumas modalidades, a presente invenção contempla o uso de organismos endófitos que podem conferir um traço de benefício agronômico sobre um elemento de planta de milho ou planta de milho à qual é disposta de forma heteróloga.

[0286] Numa modalidade, está contemplado que a planta da presente invenção seja trigo (Triticum spp.), incluindo as espécies T. aestivum e T. durum. Numa modalidade, é contemplado que a planta da presente invenção seja vermelho duro de inverno (HRW), duro vermelho de primavera (HRS), branco duro (HW), durum, branco macio (SW) ou vermelho suave de inverno (SRW). Numa modalidade, é contemplado que a planta da presente invenção seja a variedade de trigo SDSU Focus, SDSU Select, e suas variedades intimamente relacionadas. Em algumas modalidades, a presente invenção contempla o uso de organismos endófitos que podem conferir um traço de benefício agronômico sobre um elemento de planta de trigo ou planta de trigo à qual é disposta de forma heteróloga.

[0287] Em uma modalidade, é contemplado que a planta da presente invenção seja soja (Glycine max). Numa modalidade, é contemplado que a planta da presente invenção seja a variedade de soja Dairyland DSR1808R2Y, Pfister 38R25, Stine 3920, Stine 33E22 ou variedades intimamente relacionadas.

[0288] Em algumas modalidades, a presente invenção contempla o uso de organismos endófitos que podem conferir um traço de benefício agronômico sobre um elemento de planta de soja ou planta de soja à qual é disposta de forma heteróloga.

[0289] Numa modalidade, é contemplado que a planta da presente invenção seja amendoim (Arachis hypogaea). Numa modalidade, é contemplado que a planta da presente invenção seja a variedade de amendoim AT9899, FloRun 107, Georgia-06G, Tamnut OL06 ou variedades intimamente relacionadas. Em algumas modalidades, a presente invenção contempla o uso de organismos endófitos que podem conferir um traço de benefício agronômico sobre um elemento de planta de amendoim ou planta de amendoim à qual é disposta de forma heteróloga.

[0290] Numa modalidade, é contemplado que a planta da presente invenção seja um membro do gênero Brassica. Numa modalidade, é contemplado que a planta da presente invenção seja Brassica napus. Numa modalidade, é contemplado que a planta da presente invenção seja uma cultivar de Brassica napus com baixo teor de ácido erúcico e baixo teor de glucosinolato. Numa modalidade, é contemplado que a planta da presente invenção seja canola. Numa modalidade, é contemplado que a planta da presente invenção seja a variedade de canola Brett Young 5525, NCC1015, ou variedades intimamente relacionadas. Em algumas modalidades, a presente invenção contempla o uso de organismos endófitos que podem conferir um traço de benefício agronômico sobre um elemento de planta de canola ou planta de canola à qual é disposta de forma heteróloga.

[0291] Em alguns casos, os organismos endófitos descritos neste documento são capazes de passar de um tipo de tecido para outro. Por exemplo, a detecção e o isolamento de organismos endófitos da presente invenção nos tecidos maduros das plantas após o revestimento no exterior de um elemento vegetal demonstra sua capacidade de mover-se a partir do elemento planta para os tecidos vegetativos de uma planta em maturação. Portanto, em algumas modalidades, a população de endófitos é capaz de se mover do exterior do elemento vegetal para os tecidos vegetativos de uma planta. Em algumas modalidades, o endófito que é revestido sobre o elemento vegetal de uma planta é capaz, após a germinação do elemento vegetal em um estado vegetativo, de se localizar num tecido diferente da planta. Por exemplo, os endófitos podem ser capazes de localizar qualquer um dos tecidos da planta, incluindo: a raiz, raiz adventícia, raiz seminal, pelo radicular, broto, folha, flor, gomo (botão), pendão, meristema, pólen, pistilo, ovários, estame, fruta, estolão, rizoma, nódulo, tubérculo, tricoma, células-guarda, hidátodo, pétala, sépala, gluma, raque, câmbio vascular, floema e xilema. Numa forma de realização, o endófito é capaz de se localizar na raiz e/ou nos pelos radiculares da planta. Noutra modalidade, o endófito é capaz de se localizar nos tecidos fotossintéticos, por exemplo, folhas e brotos da planta. Em outros casos, o endófito é localizado nos tecidos vasculares da planta, por exemplo, no xilema e no floema. Ainda em outra modalidade, o endófito é capaz de se localizar nos tecidos reprodutivos (flor, pólen, pistilo, ovário, estame, fruto) da planta. Em outra modalidade, o endófito é capaz de se localizar na raiz, brotos, folhas e tecidos reprodutivos da planta. Ainda noutra forma de realização, o endófito coloniza um tecido de elemento de fruto ou planta da planta. Em ainda outra modalidade, o endófito é capaz de colonizar a planta de modo que esteja presente na superfície da planta (isto é, sua presença está detectável presente no exterior da planta ou na episfera da planta). Ainda noutras modalidades, o endófito é capaz de se localizar substancialmente em todo ou todos os tecidos da planta. Em certas modalidades, o endófito não está localizado na raiz de uma planta. Em outros casos, o endófito não está localizado nos tecidos fotossintéticos da planta.

[0292] Em alguns casos, os endófitos são capazes de se replicar dentro da planta hospedeira e colonizar a planta.

[0293] As populações de endófitos descritas neste documento são capazes de colonizar uma planta hospedeira. A colonização bem-sucedida pode ser confirmada pela detecção da presença da população endofítica dentro da planta. Por exemplo, depois de se aplicar o endófito aos elementos da planta, altos títulos do endófito podem ser detectados nas raízes e brotos das plantas que germinam dos elementos de planta. Detectar a presença do endófito no interior da planta pode ser realizado medindo-se a viabilidade do endófito após a esterilização da superfície do elemento vegetal ou planta: a colonização do endófito resulta em uma localização interna do endófito, tornando-o resistente às condições de esterilização da superfície. A presença e quantidade de endófitos também podem ser estabelecidas usando outros meios conhecidos na técnica, por exemplo, microscopia de imunofluorescência usando anticorpos específicos para micróbios ou hibridização in situ por fluorescência. Alternativamente, sondas de ácido nucleico específicas que reconhecem sequências conservadas de um endófito podem ser empregues para amplificar uma região, por exemplo por PCR quantitativa, e correlacionadas com UFCs por meio de uma curva padrão.

[0294] Em outra modalidade, o endófito é disposto heterologamente, por exemplo, na superfície de um elemento reprodutivo de uma planta agrícola, em uma quantidade eficaz para ser detectável na planta agrícola madura. Em algumas modalidades, o endófito está disposto heterologamente numa quantidade eficaz para ser detectável numa quantidade de pelo menos cerca de 100 UFC, entre 100 e 200 UFC, pelo menos cerca de 200 UFC, entre 200 e 300 UFC, pelo menos cerca de 300 UFC, entre 300 e 400 UFC, pelo menos cerca de 500 UFC, entre 500 e 1.000 UFC, pelo menos cerca de 1.000 UFC, entre 1.000 e 3.000 UFC, pelo menos cerca de 3.000 UFC, entre 3.000 e 10.000 UFC, pelo menos cerca de 10.000 UFC, entre 10.000 e 30.000 UFC, pelo menos cerca de 30.000 UFC, entre 30.000 e 100.000 UFC, pelo menos cerca de 100.000 UFC ou mais na planta agrícola madura.

[0295] Em alguns casos, o endófito é capaz de colonizar determinados elementos de planta ou tipos de tecidos da planta. Em uma modalidade, o endófito é disposto heterologamente no elemento vegetal ou muda em uma quantidade eficaz para ser detectável dentro de um tecido alvo da planta agrícola madura selecionada a partir de uma fruta, semente, folha, raiz ou parte delas. Por exemplo, o endófito pode ser detectado numa quantidade de pelo menos cerca de 100 UFC, pelo menos cerca de 200 UFC, pelo menos cerca de 300 UFC, pelo menos cerca de 500 UFC, pelo menos cerca de 1.000 UFC, pelo menos cerca de 3000 UFC, pelo menos cerca de 10.000 UFC, pelo menos cerca de 30.000 UFC, pelo menos cerca de 100.000 UFC ou mais, no tecido alvo da planta agrícola madura.

Organismos endófitos compatíveis com agroquímicos

[0296] Em certas modalidades, o endófito é selecionado com base na sua compatibilidade com agroquímicos comumente usados. Como descrito neste documento, plantas, particularmente plantas agrícolas, podem ser tratadas com uma vasta gama de agroquímicos, incluindo fungicidas, biocidas (agentes anticomplexo), herbicidas, inseticidas, nematicidas, rodenticidas, bactericidas, virucidas, fertilizantes e outros agentes.

[0297] Em algumas modalidades, os endófitos exibem tolerância a um agroquímico selecionado do grupo que consiste em: Aeris®, Avicta® DuoCot 202, Cruiser®, Syntenta CCB® (A), Clariva®, Albaugh, Dynasty®, Apron®, Maxim®, Gaucho®, Provoke® ST, Syngenta CCB®, Trilex®, WG Purple, WG Silver, Azoxistrobina, Carboxina, Difenoconazol, Fludioxonil, fluxapiroxade, Ipconazol, Mefenoxam, Metalaxil, Miclobutanil, Penflufen, piraclostrobina, Sedaxano, TCMTB, Tebuconazol, Triadimenol (Baytan®), Trifloxistrobina, Triticonazol, Tolclofos-metil, PCNB, Abamectina, Clorpirifos, Clotianidina, Imidacloprid, Tiametoxam, Tiodicarbe.

[0298] Em alguns casos, pode ser importante para o endófito ser compatível com agroquímicos, particularmente aqueles com propriedades anticomplexo, a fim de persistir na planta, embora, como descrito neste documento, existem muitos desses agentes anticomplexo que não penetram na planta, pelo menos em uma concentração suficiente para interferir com o endófito. Portanto, quando um agente anticomplexo sistêmico é utilizado na planta, a compatibilidade do endófito a ser inoculado com tais agentes será um critério importante.

[0299] Em uma modalidade, isolados naturais de endófitos que são compatíveis com produtos agroquímicos podem ser usados para inocular as plantas de acordo com os métodos descritos neste documento. Por exemplo, os endófitos que são compatíveis com os agentes anticomplexo utilizados na agricultura podem ser isolados colocando-se uma cultura de endófitos em uma placa de Petri compreendendo uma concentração eficaz do agente anticomplexo e isolando colônias de endófitos compatíveis com o agente anticomplexo. Em outra modalidade, um endófito que é compatível com um agente anticomplexo é usado para os métodos descritos neste documento.

[0300] Endófitos compatíveis com bactericidas também podem ser isolados por seleção em meio líquido. A cultura de endófitos pode ser plaqueadas em placas de Petri sem quaisquer formas de mutagênese; alternativamente, os endófitos podem ser mutagenizados utilizando quaisquer meios conhecidos na técnica. Por exemplo, as culturas de endófitos podem ser expostas a luz UV, irradiação gama ou agentes mutagênicos químicos, como etilmetanossulfonato (EMS), brometo de etídio (EtBr) diclorvós (DDVP, metil metano sulfonal (MMS), trietilfosfato (TEP), trimetilfosfato (TMP)) ácido nitroso ou análogos de bases de DNA, antes da seleção em meios compreendendo fungicidas. Finalmente, quando o mecanismo de ação de um bactericida específico é conhecido, o gene alvo pode sofrer mutação especificamente (por deleção de genes, substituição de genes, mutagênese direcionada ao sítio etc.) para gerar um endófito que é resiliente contra aquele produto químico em particular. Note-se que os métodos acima descritos podem ser utilizados para isolar endófitos que são compatíveis tanto com compostos bacteriostáticos como bactericidas.

[0301] Também será apreciado por aquele versado na técnica que uma planta pode ser exposta a vários tipos de compostos anticomplexo, simultaneamente ou em sucessão, por exemplo, em diferentes estágios do crescimento da planta. Onde é provável que a planta alvo seja exposta a múltiplos agentes anticomplexo, um endófito que é compatível com muitos ou todos esses agroquímicos pode ser usado para inocular a planta. Um endófito que é compatível com vários agentes pode ser isolado, por exemplo, por seleção serial. Um endófito compatível com o primeiro agente pode ser isolado como descrito acima (com ou sem mutagênese prévia). Uma cultura do endófito resultante pode então ser selecionada pela capacidade de crescer em meios líquidos ou sólidos compreendendo o segundo agente (novamente, com ou sem mutagênese prévia). Colônias isoladas da segunda seleção são então testadas para confirmar sua compatibilidade para ambos os agentes.

[0302] Da mesma forma, endófitos que são compatíveis com biocidas (incluindo herbicidas como glifosato ou compostos anticomplexos, sejam bacteriostáticos ou bactericidas) que são empregados na agricultura podem ser isolados usando métodos semelhantes aos descritos para isolar endófitos compatíveis. Em algumas modalidades, a mutagênese da população de endófitos pode ser realizada antes da seleção com um agente anticomplexo. Em outra modalidade, a seleção é realizada na população de endófitos sem mutagênese prévia. Ainda noutra forma de realização, a seleção em série é realizada num endófito: o endófito é primeiro selecionado para compatibilidade com um primeiro agente anticomplexo. O endófito compatível isolado é então cultivado e selecionado por compatibilidade com o segundo agente anticomplexo. Qualquer colônia assim isolada é testada quanto à compatibilidade de cada um ou ambos os agentes anticomplexo para confirmar a compatibilidade com esses dois agentes.

[0303] A compatibilidade com um agente antimicrobiano pode ser determinada por vários meios conhecidos na técnica, incluindo a comparação da concentração inibitória mínima dos endófitos não modificados e modificados. Em algumas modalidades, a presente invenção divulga um endófito modificado isolado, em que o endófito é modificado de modo a exibir pelo menos 3 vezes mais, por exemplo, pelo menos 5 vezes mais, entre 5 e 10 vezes mais, pelo menos 10 vezes mais, entre 10 e 20 vezes mais, pelo menos 20 vezes mais, entre 20 e 30 vezes mais, pelo menos 30 vezes mais ou mais concentração inibitória mínima a um agente antimicrobiano quando comparado com o endófito não modificado.

[0304] Em uma modalidade específica, são divulgados neste documento endófitos com compatibilidade aprimorada com o herbicida glifosato. Em algumas modalidades, o endófito tem um tempo de duplicação em meio de crescimento compreendendo pelo menos 1 mM de glifosato, por exemplo, entre 1 mM e 2 mM de glifosato, pelo menos 2 mM de glifosato, entre 2 mM e 5 mM de glifosato, pelo menos 5 mM de glifosato, entre 5 mM e 10 mM de glifosato, pelo menos 10 mM de glifosato, entre 10 mM e 15 mM de glifosato, pelo menos 15 mM de glifosato ou mais, que não é mais do que 250%, entre 250% e 100%, por exemplo, não mais do que 200%, entre 200% e 175%, não mais do que 175%, entre 175% e 150%, não mais do que 150%, entre 150% e 125%, ou não mais do que 125%, do tempo de duplicação do endófito no mesmo meio de crescimento que não compreende nenhum glifosato. Numa modalidade particular, o endófito tem um tempo de duplicação no meio de crescimento compreendendo glifosato a 5mM que não é superior a 150% do tempo de duplicação do endófito no mesmo meio de crescimento que não compreende glifosato.

[0305] Em outra modalidade, o endófito tem um tempo de duplicação em um tecido de planta compreendendo pelo menos 10 ppm de glifosato, entre 10 e 15 ppm, por exemplo, pelo menos 15 ppm de glifosato, entre 15 e 10 ppm, pelo menos 20 ppm de glifosato, entre 20 e 30 ppm, pelo menos 30 ppm de glifosato, entre 30 e 40 ppm, pelo menos 40 ppm de glifosato ou mais, que não é mais do que 250%, entre 250% e 200%, por exemplo, não mais que 200%, entre 200% e 175%, não mais que 175%, entre 175% e 150%, não mais que 150%, entre 150% e 125%, ou não mais que 125%, do tempo de duplicação do endófito em um tecido de planta de referência que não compreende glifosato. Numa forma de realização particular, o endófito tem um tempo de duplicação num tecido de planta compreendendo 40 ppm de glifosato que não é mais do que 150% do tempo de duplicação do endófito num tecido de planta de referência que não compreende nenhum glifosato.

[0306] O processo de seleção descrito acima pode ser repetido para identificar isolados de endófitos que sejam compatíveis com uma multiplicidade de agentes.

[0307] Os isolados candidatos podem ser testados para garantir que a seleção por compatibilidade com agroquímicos não resulte na perda da bioatividade desejada. Isolados de endófitos que são compatíveis com agentes comumente empregados podem ser selecionados como descrito acima. O endófito compatível resultante pode ser comparado com o endófito parental nas plantas em termos de sua capacidade de promover a germinação.

[0308] Os endófitos compatíveis com agroquímicos gerados como descrito acima podem ser detectados em amostras. Por exemplo, quando um transgene foi introduzido para tornar o endófito compatível com o(s) agroquímico(s), o transgene pode ser usado como um gene alvo para amplificação e detecção por PCR. Além disso, quando mutações pontuais ou deleções para uma porção de um gene específico ou vários genes resultam em compatibilidade com o(s) agroquímico(s), as mutações pontuais únicas também podem ser detectadas por PCR ou outros meios conhecidos na técnica. Tais métodos permitem a detecção do endófito, mesmo que não seja mais viável. Assim, produtos commodity de planta produzidos utilizando os endófitos compatíveis com produtos agroquímicos descritos neste documento podem ser facilmente identificados empregando estes e métodos relacionados de detecção de ácido nucleico.

Atributos Benéficos de Composições Sintéticas de Elementos de Plantas e Organismos Endófitos

[0309] A presente invenção contempla o estabelecimento de uma relação entre um simbionte e um elemento vegetal. Em algumas modalidades, a associação de endófitos resulta em uma mudança detectável no elemento vegetal ou em toda a planta. A mudança detectável pode ser um aprimoramento em vários traços agronômicos (por exemplo, melhoria da saúde geral, aumento da resposta a estresses bióticos ou abióticos ou aumento das propriedades da planta ou de um elemento vegetal, incluindo frutas e grãos). Alternativamente, a alteração detectável pode ser uma alteração fisiológica ou biológica que pode ser medida por métodos conhecidos na técnica. As alterações detectáveis são descritas com mais detalhes nas seções abaixo. Como utilizado neste documento, considera-se que um endófito conferiu um traço agrícola aprimorada, independentemente de o traço aprimorado ter surgido ou não da planta, do endófito ou da ação combinada entre a planta e o endófito. Portanto, por exemplo, se um hormônio benéfico ou produto químico é produzido pela planta ou pelo endófito, por propósitos, o endófito será considerado como tendo conferido um traço agrícola aprimorado à planta hospedeira, em comparação com uma planta de isolinhagem que não tenha sido heterologamente disposta ao referido endófito.

[0310] Em algumas modalidades, fornecidas neste documento, estão métodos para produzir um elemento vegetal a partir de uma planta com um traço hereditariamente alterado. O traço da planta pode ser alterado sem modificação genética conhecida do genoma da planta, e compreende as seguintes etapas. Primeiro, uma preparação de um endófito isolado que é heterologamente disposto ao elemento vegetal da planta é fornecida e opcionalmente processada para produzir uma formulação de endófito. A formulação de endófito é então contatada com a planta. As plantas são então deixadas a semear e as sementes são coletadas.

Saúde geral melhorada

[0311] Também são descritas neste documento plantas e campos de plantas que são heterologamente dispostos a endófitos benéficos, de tal modo que a aptidão geral, produtividade ou saúde da planta ou uma porção dela, é mantida, aumentada e/ou melhorada ao longo de um período de tempo. A melhoria na saúde geral da planta pode ser avaliada usando vários parâmetros fisiológicos incluindo, mas não limitado a altura, biomassa total, biomassa da raiz e/ou do broto, emergência, germinação de sementes, sobrevivência de mudas, eficiência fotossintética, taxa de transpiração, número de sementes/frutos ou massa, rendimento de grãos, teor de clorofila foliar, taxa fotossintética, comprimento de raiz ou qualquer combinação destes.

Tolerância à seca

[0312] Em alguns casos, uma planta resultante de sementes ou outros elementos de planta tratados com um endófito pode apresentar uma alteração fisiológica, como uma compensação da redução induzida pelo estresse na atividade fotossintética. Fv/Fm testa se o estresse da planta afeta ou não o fotossistema II em um estado escuro adaptado. Fv/Fm é um dos parâmetros de medição de fluorescência de clorofila mais utilizados. O teste Fv/Fm foi projetado para permitir que a quantidade máxima de energia luminosa siga o caminho da fluorescência. Ele compara o estado fluorescente pré-fotossintético das folhas adaptadas ao escuro, chamado fluorescência mínima, ou Fo, à fluorescência máxima denominada Fm. Na fluorescência máxima, o número máximo de centros de reação foi reduzido ou fechado por uma fonte de luz saturante. Em geral, quanto maior o estresse da planta, menos centros de reação abertos disponíveis e a razão Fv/Fm é reduzida. Fv/Fm é um protocolo de medição que funciona para muitos tipos de estresse da planta. Por exemplo, haveria uma diferença no Fv/Fm após a exposição de uma planta endofítica tratada que tivesse sido submetida a condições de choque térmico ou seca, em comparação com um controle correspondente, uma planta geneticamente idêntica que não contém os endófitos cultivados nas mesmas condições. Em alguns casos, a planta inoculada como divulgada neste documento pode exibir uma mudança aumentada na atividade fotossintética ΔFv (ΔFv/Fm) após tratamento por choque térmico ou por estresse hídrico, por exemplo 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 dias ou mais após o tratamento por choque térmico ou por estresse hídrico, ou até a cessação da fotossíntese, em comparação com a planta controle correspondente de estágio de desenvolvimento similar, mas que não compreende endófitos. Por exemplo, uma planta com um endófito capaz de conferir calor e/ou tolerância à seca pode exibir um ΔFv/Fm de cerca de 0,1 a cerca de 0,8 após exposição a choque térmico ou seca ou um intervalo ΔFv/Fm de cerca de 0,03 a cerca de 0,8 em um dia, ou em 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou mais de 7 dias após o tratamento por choque térmico ou seca ou até a cessação da fotossíntese. Em algumas modalidades, as reduções induzidas por estresse na atividade fotossintética podem ser compensadas em pelo menos cerca de 0,25% (por exemplo, pelo menos cerca de 0,5%, entre 0,5% e 1%, pelo menos cerca de 1%, entre 1% e 2%, pelo menos cerca de 2%, entre 2% e 3%, pelo menos cerca de 3%, entre 3% e 5%, pelo menos cerca de 5%, entre 5% e 10%, pelo menos cerca de 8%, pelo menos cerca de 10%, entre 10% e 15%, pelo menos cerca de 15%, entre 15% e 20%, pelo menos cerca de 20%, entre 20% e 25%, pelo menos cerca de 25%, entre 25% e 30%, pelo menos cerca de 30%, entre 30% e 40%, pelo menos cerca de 40%, entre 40% e 50%, pelo menos cerca de 50%, entre 50% e 60%, pelo menos cerca de 60%, entre 60% e 75%, em pelo menos cerca de 75%, entre 75% e 80%, pelo menos cerca de 80%, entre 80% e 85%, pelo menos cerca de 85%, entre 85% e 90%, pelo menos cerca de 90%, entre 90% e 95%, pelo menos cerca de 95%, entre 95% e 99%, pelo menos cerca de 99% ou pelo menos 100%) em comparação com a diminuição da atividade fotossintética em uma planta agrícola correspondente de referência após condições de choque térmico. A significância da diferença entre plantas agrícolas inoculadas e de referência pode ser estabelecida ao se demonstrar significância estatística, por exemplo, p < 0,05 com uma estatística paramétrica ou não paramétrica apropriada, por exemplo, teste qui-quadrado, teste t de Student, teste de Mann- Whitney ou teste F baseado na suposição ou em fatos conhecidos de que a planta inoculada e a planta agrícola de referência têm genomas idênticos ou quase idênticos (comparação de isolinhagens).

[0313] Em algumas modalidades, as plantas compreendem endófitos capazes de aumentar o calor e/ou a tolerância à seca em quantidade suficiente, de tal modo que seja observado crescimento aumentado ou recuperação melhorada do murchamento sob condições de estresse por calor ou seca. Por exemplo, uma população de endófitos descrita neste documento pode estar presente em quantidade suficiente em uma planta, resultando em aumento do crescimento em comparação com uma planta que não contém endófitos, quando cultivada em condições de seca ou choque térmico, ou seguindo tais condições. O aumento da tolerância ao calor e/ou à seca pode ser avaliado com parâmetros fisiológicos, incluindo, entre outros, aumento de altura, biomassa geral, biomassa de raízes e/ou brotos, germinação de sementes, sobrevivência de mudas, eficiência fotossintética, taxa de transpiração, número de sementes/frutos ou massa, rendimento de grãos ou frutos das plantas, teor de clorofila foliar, taxa fotossintética, comprimento das raízes, recuperação da murchidão, pressão do turgor ou qualquer combinação destes, em comparação com uma planta agrícola de referência cultivada em condições semelhantes. Por exemplo, o endófito pode fornecer um benefício ou tolerância melhorada a uma planta que seja de pelo menos 3%, entre 3% e 5%, pelo menos 5%, entre 5% e 10%, pelo menos 10%, entre 10% e 15%, por exemplo, pelo menos 15%, entre 15% e 20%, pelo menos 20%, entre 20% e 30%, pelo menos 30%, entre 30% e 40%, pelo menos 40%, entre 40% e 50%, pelo menos 50%, entre 50% e 60%, pelo menos 60%, entre 60% e 75%, pelo menos 75%, entre 75% e 100%, pelo menos 100%, entre 100% e 150%, pelo menos 150%, entre 150% e 200%, pelo menos 200%, entre 200% e 300%, pelo menos 300% ou mais, quando comparado com plantas não inoculadas cultivadas nas mesmas condições.

[0314] Em várias modalidades, os endófitos dispostos heterologamente na planta podem conferir vários benefícios à planta, incluindo mas não limitados a: tolerância térmica, tolerância a herbicida, resistência à seca, resistência a insetos, resistência a fungos, resistência a vírus, resistência a bactérias, esterilidade masculina, tolerância ao frio, tolerância ao sal, rendimento aumentado, maior eficiência no uso de nutrientes, aumento da eficiência de uso de nitrogênio, aumento do teor de proteína, aumento do teor de carboidratos fermentáveis, redução do teor de lignina, aumento do teor de antioxidantes, aumento da eficiência de uso da água, aumento da germinação, biomassa aumentada, razão de biomassa raiz-broto alterada, retenção de água no solo aprimorada ou uma combinação destes. Uma diferença entre a planta inoculada (por exemplo, uma planta à qual um ou mais endófitos foram dispostos de forma heteróloga) e uma planta agrícola de referência pode também ser medida utilizando outros métodos conhecidos na técnica.

Formulações para Uso Agrícola

[0315] Pretende-se que as populações de endófitos descritas neste documento sejam úteis no aprimoramento de plantas agrícolas e, como tal, podem ser formuladas com outras composições como parte de um carreador compatível com a agricultura. Considera-se que tais carreadores podem incluir, mas não se limitam a: tratamento de sementes, lavagem de raízes, encharcamento de mudas, aplicação foliar, inóculos do solo, aplicação no sulco, aplicação em cobertura lateral, pré-tratamento do solo, inoculação por ferida, irrigação por gotejamento, mediação vetorial por meio de um polinizador, injeção, osmocondicionamento, hidroponia, aquaponia, aeroponia. A composição de carreador com as populações de endófitos pode ser preparada para aplicação agrícola como uma formulação líquida, sólida ou gasosa. A aplicação na planta pode ser conseguida, por exemplo, como um pó para deposição superficial em folhas de plantas, como um spray para toda a planta ou elemento vegetal selecionado, como parte de um gotejamento no solo ou raízes, ou como um revestimento no elemento vegetal antes do plantio. Tais exemplos pretendem ser ilustrativos e não limitativos do âmbito da invenção.

[0316] A formulação útil para estas modalidades geralmente e tipicamente inclui pelo menos um membro selecionado do grupo consistindo de um tampão, um "taquificante", um estabilizador microbiano, um fungicida, um agente anticomplexo, um herbicida, um nematicida, um inseticida, um bactericida, um virucida, um regulador de crescimento vegetal, um rodenticida, um dessecante e um nutriente.

[0317] O carreador pode ser um carreador sólido ou carreador líquido, e em várias formas incluindo microesferas, pós, emulsões e semelhantes. O carreador pode ser um ou mais de um número de carreadores que conferem uma variedade de propriedades, tais como maior estabilidade, molhabilidade ou capacidade de dispersão. Agentes umectantes, tais como surfactantes naturais ou sintéticos, que podem ser surfactantes não iônicos ou iônicos, ou uma sua combinação, podem ser incluídos numa composição da invenção. As emulsões de água em óleo também podem ser usadas para formular uma composição que inclua a população purificada (ver, por exemplo, Patente US N° 7.485.451). Formulações adequadas que podem ser preparadas incluem pós molháveis, grânulos, géis, tiras de ágar ou péletes, espessantes, biopolímeros e semelhantes, partículas microencapsuladas e semelhantes, líquidos tais como fluidos aquosos, suspensões aquosas, emulsões de água em óleo etc. A formulação pode incluir produtos de grãos ou leguminosas, por exemplo, grãos moídos ou feijões, caldos ou farinha derivados de grãos ou feijões, amido, açúcar ou óleo.

[0318] Em algumas modalidades, o carreador agrícola pode ser solo ou um meio de crescimento de planta. Outros carreadores agrícolas que podem ser utilizados incluem água, fertilizantes, óleos à base de plantas, umectantes ou combinações destes. Alternativamente, o carreador agrícola pode ser um sólido, tal como terra de diatomáceas, barro, sílica, alginato, argila, bentonita, vermiculita, vagens de semente, outros produtos vegetais e animais, ou combinações, incluindo grânulos, péletes ou suspensões. Misturas de quaisquer dos ingredientes acima mencionados são também contempladas como carreadores, tais como, mas não limitados a pesta (farinha e argila de caulina), ágar ou péletes à base de farinha em barro, areia ou argila etc. As formulações podem incluir fontes de alimento para os organismos cultivados, como cevada, arroz, trigo ou outros materiais biológicos, como sementes, elementos vegetais, bagaço de cana, casca ou caules do processamento de grãos, material vegetal moído ou madeira dos rejeitos de uma obra, serragem ou pequenas fibras de reciclagem de papel, tecido ou madeira. Outras formulações adequadas serão conhecidas pelos versados na técnica.

[0319] Numa forma de realização, a formulação pode incluir um taquificante ou aderente. Tais agentes são úteis para combinar a população complexa da invenção com carreadores que podem conter outros compostos (por exemplo, agentes de controle que não são biológicos), para render uma composição de revestimento. Tais composições ajudam a criar revestimentos em torno da planta ou do elemento vegetal para manter o contato entre o endófito e outros agentes com a planta ou elemento vegetal. Em algumas modalidades, os aderentes são selecionados do grupo que consiste em: alginato, gomas, amidos, lecitinas, formononetina, álcool polivinílico, formononetinato alcalino, hesperetina, acetato de polivinil, cefalinas, goma arábica, goma xantana, carragenina, PGA, outros biopolímeros, Óleo Mineral, Polietilenoglicol (PEG), Polivinilpirrolidona (PVP), Arabino-galactano, Metilcelulose, PEG 400, Quitosana, Poliacrilamida, Poliacrilato, Poliacrilonitrila, Glicerol, Trietilenoglicol, Acetato de Vinil, Goma de Gelana, Poliestireno, Polivinil, Carboximetilcelulose, Goma Ghatti e copolímeros em bloco de polioxietileno-polioxibutileno. Outros exemplos de composições aderentes que podem ser utilizadas na preparação sintética incluem os descritos em EP 0818135, CA 1229497, WO 2013090628, EP 0192342, WO 2008103422 e CA 1041788.

[0320] É também contemplado que a formulação pode ainda compreender um agente antiaglomerante.

[0321] A formulação também pode conter um agente surfactante, umectante, emulsificante, estabilizador ou antiespumante. Exemplos não limitativos de surfactantes incluem misturas de nitrogênio-surfactante tais como Prefer 28 (Cenex), Surf-N (EUA), Inhance (Brandt), P-28 (Wilfarm) e Patrol (Helena); os óleos de sementes esterificados incluem Sun-It II (AmCy), MSO (UAP), Scoil (Agsco), Hasten (Wilfarm) e Mes-100 (Drexel); e surfactantes de organo-silicone incluem Silwet L77 (UAP), Silicina (Terra), Dyne-Amic (Helena), Cinica (Helena), Sylgard 309 (Wilbur-Ellis) e Century (Precision), polissorbato 20, polissorbato 80, Tween 20, Tween 80, Scattics, Alktest TW20, Canarcel, Peogabsorb 80, Triton X-100, Conco NI, Dowfax 9N, Igebapl CO, Makon, Neutronyx 600, Nonipol NO, Plytergent B, Renex 600, Solar NO, Sterox, Serfonic N, T-DET-N, Tergitol NP, Triton N, IGEPAL CA-630, Nonident P-40, Pluronic. Em algumas modalidades, o surfactante está presente em uma concentração entre 0,01% v/v a 10% v/v.. Noutra modalidade, o surfactante está presente em uma concentração entre 0,1% v/v a 1% v/v.. Um exemplo de um agente antiespumante seria o Antiespumante-C.

[0322] Em certos casos, a formulação inclui um estabilizador microbiano. Tal agente pode incluir um dessecante. Como utilizado neste documento, um "agente dessecante" pode incluir qualquer composto ou mistura de compostos que possam ser classificados como dessecantes, independentemente de o composto ou compostos serem utilizados em concentrações tais que tenham de fato um efeito de dessecação no inoculante líquido. Tais dessecantes são idealmente compatíveis com a população utilizada e devem promover a capacidade da população endofítica de sobreviver a aplicação nas sementes e sobreviver a dessecação. Exemplos de dessecantes adequados incluem um ou mais de trealose, sacarose, glicerol e metilenoglicol. Outros dessecantes adequados incluem, mas não estão limitados a açúcares não redutores e álcoois de açúcar (por exemplo, manitol ou sorbitol). A quantidade de dessecante introduzida na formulação pode variar de cerca de 5% a cerca de 50% em peso/volume, por exemplo, entre cerca de 10% a cerca de 40%, entre cerca de 15% e cerca de 35%, ou entre cerca de 20% e cerca de 30%. Em algumas modalidades, componentes de um estabilizador microbiano à base de açúcar incluem, mas não estão limitados a glicose, sacarose, polivinilpirrolidona K 30 (PVP30K), óleo mineral, lecitina de soja, peptona, fosfato monopotássico (KH2PO4) e fosfato dipotássico (K2HPO4). Em uma modalidade alternativa, os componentes de um estabilizador microbiano sem açúcar incluem, mas não estão limitados a polivinilpirrolidona K 30 (PVP30K), polivinilpirrolidona/acetato de vinil (PVP-VA), lecitina de soja, peptona, óleo mineral, hidroxipropil-guar (HP-Guar), fosfato monopotássico (KH2PO4) e fosfato dipotássico (K2HPO4). Os componentes de estabilizadores microbianos exemplares para uso com a invenção descrita neste documento estão representados na Tabela 1 e na Tabela 2.Tabela 1. Estabilizador Microbiano à Base de Açúcar Exemplar Tabela 2: Estabilizador Microbiano Não Baseado em Açúcar Exemplar

[0323] Em alguns casos, é vantajoso que a formulação contenha agentes tais como um fungicida, um agente anticomplexo, um herbicida, um nematicida, um inseticida, um regulador de crescimento de plantas, um rodenticida, um bactericida, um virucida ou um nutriente. Tais agentes são idealmente compatíveis com o elemento vegetal agrícola ou a muda na qual a formulação é aplicada (por exemplo, não deve ser prejudicial ao crescimento ou à saúde da planta). Além disso, o agente é idealmente aquele que não causa preocupações de segurança para uso humano, animal ou industrial (por exemplo, sem problemas de segurança, ou o composto é suficientemente lábil para que o produto vegetal derivado da planta contenha quantidades desprezíveis do composto).

[0324] Na forma líquida, por exemplo, soluções ou suspensões, as populações endofíticas podem ser misturadas ou suspensas em água ou em soluções aquosas. Diluentes ou carreadores líquidos adequados incluem água, soluções aquosas, destilados de petróleo ou outros carreadores líquidos.

[0325] As composições sólidas podem ser preparadas dispersando-se as populações de endófitos da invenção em um carreador sólido adequadamente dividido, como turfa, trigo, farelo, vermiculita, argila, talco, bentonita, terra de diatomáceas, terra de fuller, solo pasteurizado e similares. Quando essas formulações são utilizadas como pós molháveis, podem ser utilizados agentes dispersantes biologicamente compatíveis, tais como agentes emulsionantes e dispersantes não iônicos, aniônicos, anfotéricos ou catiônicos.

[0326] Em alguns casos, um polímero de fluidez, também conhecido como polímero de plantabilidade, como Flo Rite® por exemplo, Flo-Rite® 1706 (BASF, Ludwigshafen, Alemanha). Em algumas modalidades, um polímero de fluidez ou plantabilidade é DISCOTM AG (Incotec, Enkhuizen, Países Baixos). Em algumas modalidades, um polímero de fluidez ou plantabilidade é Kannar® Universal Wonder (Kannar Earth Science, Ltd., Buford, GA).

[0327] Os carreadores sólidos usados na formulação incluem, por exemplo, carreadores minerais, como argila de caulim, pirofilita, bentonita, montmorilonita, terra de diatomáceas, solo branco ácido, vermiculita e perlita e sais inorgânicos, como sulfato de amônio, fosfato de amônio, nitrato de amônio, ureia, cloreto de amônio e carbonato de cálcio. Além disso, podem ser utilizados pós finos orgânicos, tais como farinha de trigo, farelo de trigo e farelo de arroz. Os carreadores líquidos incluem óleos vegetais tais como óleo de soja, óleo de nim, óleo de semente de algodão e outras composições tais como glicerol, etilenoglicol, polietilenoglicol, propilenoglicol, polipropilenoglicol etc.

[0328] Numa forma de realização, a formulação é idealmente adequada para o revestimento de uma população de endófitos nos elementos da planta. As populações de endófitos descritas na presente invenção são capazes de conferir muitos benefícios de aptidão às plantas hospedeiras. A capacidade de conferir tais benefícios revestindo as populações na superfície dos elementos da planta tem muitas vantagens potenciais, particularmente quando usadas em escala comercial (agrícola).

[0329] As populações de endófitos neste documento podem ser combinadas com um ou mais dos agentes descritos acima para produzir uma formulação adequada para combinação com um elemento vegetal agrícola, muda ou outro elemento vegetal. As populações de endófitos podem ser obtidas a partir do crescimento em cultura, por exemplo, usando um meio de crescimento sintético. Além disso, os endófitos podem ser cultivados em meio sólido, por exemplo em placas de Petri, raspados e suspensos na preparação. Endófitos em diferentes fases de crescimento podem ser usados. Por exemplo, endófitos em fase de retardo, fase de log inicial, fase de meio log, fase de log final, fase estacionária, fase de morte precoce ou fase de morte podem ser usados. Os esporos endofíticos podem ser utilizados para a presente invenção, por exemplo, mas não se limitando a: artrósporos, esporangiósporos, conídios, clamadosporos, picnidiosporos, endosporos, zoósporos.

[0330] As formulações compreendendo populações de endófitos contêm tipicamente entre cerca de 0,1 e 95% em peso, por exemplo, entre cerca de 1% e 90%, entre cerca de 3% e 75%, entre cerca de 5% e 60%, entre cerca de 10% e 50% em peso úmido da população. É preferível que a formulação contenha pelo menos cerca de 10A3 UFC por ml de formulação, por exemplo, pelo menos cerca de 10A4, pelo menos cerca de 10A5, pelo menos cerca de 10A6, pelo menos cerca de 10A7 UFC, pelo menos cerca de 10A8 UFC por ml de formulação. É preferível que a formulação seja aplicada ao elemento vegetal a cerca de 10A2 UFC/semente, entre 10A2 e 10A3 UFC, pelo menos cerca de 10A3 UFC, entre 10A3 e 10A4 UFC, a menos cerca de IOA4 UFC, entre 10A4 e 10A5 UFC, pelo menos cerca de 10A5 UFC, entre 10A5 e 10A6 UFC, pelo menos cerca de 10A6 UFC, entre 10A6 e 10A7 UFC, pelo menos cerca de 10A7 UFC, entre 10A7 e 10A8 UFC, ou mesmo mais que 10A8 UFC por semente.

Populações de Elementos de Planta

[0331] Em outra modalidade, a invenção fornece uma população substancialmente uniforme de composições sintéticas compreendendo elementos de planta (PEs), compreendendo dois ou mais PEs compreendendo a população endofítica, como descrito neste documento, acima. A uniformidade substancial pode ser determinada de várias maneiras. Em alguns casos, pelo menos 10%, entre 10% e 20%, por exemplo, pelo menos 20%, entre 20% e 30%, pelo menos 30%, entre 30% e 40%, pelo menos 40%, entre 40% e 50%, pelo menos 50%, entre 50% e 60%, pelo menos 60%, entre 60% e 70%, pelo menos 70%, entre 70% e 75%, pelo menos 75%, entre 75% e 80%, pelo menos 80%, entre 80% e 90%, pelo menos 90%, entre 90% e 95%, pelo menos 95% ou mais dos PEs na população, compreendem a população endofítica em uma quantidade eficaz para colonizar uma planta ou plantas derivadas dos referidos PEs quando dispostas na superfície dos PEs. Em outros casos, pelo menos 10%, entre 10% e 20%, por exemplo, pelo menos 20%, entre 20% e 30%, pelo menos 30%, entre 30% e 40%, pelo menos 40%, entre 40% e 50%, pelo menos 50%, entre 50% e 60%, pelo menos 60%, entre 60% e 70%, pelo menos 70%, entre 70% e 75%, pelo menos 75%, entre 75% e 80%, pelo menos 80%, entre 80% e 90%, pelo menos 90%, entre 90% e 95%, pelo menos 95% ou mais dos elementos de planta da população, contêm pelo menos 1, entre 10 e 10, 10, entre 10 e 100, ou 100 UFC na superfície do elemento vegetal ou por grama de elemento vegetal, por exemplo, entre 100 e 200 UFC, pelo menos 200 UFC, entre 200 e 300 UFC, pelo menos 300 UFC, entre 300 e 1.000 UFC, pelo menos 1.000 UFC, entre 1.000 e 3.000 UFC, pelo menos 3.000 UFC, entre 3.000 e 10.000 UFC, pelo menos 10.000 UFC, entre 10.000 e 30.000 UFC, pelo menos 30.000 UFC, entre 30.000 e 100.000 UFC, pelo menos 100.000 UFC, entre 100.000 e 300.000 UFC, pelo menos 300.000 UFC, entre 300.000 e 1.000.000 UFC, ou pelo menos 1.000.000 UFC por elemento vegetal ou mais.

[0332] Numa forma de realização particular, a população dos elementos de planta é embalada num saco ou recipiente adequado para venda comercial. Esse saco contém um peso unitário ou contagem dos elementos de planta compreendendo a população endofítica como descrita neste documento e compreendendo ainda um rótulo. Numa forma de realização, o saco ou recipiente contém pelo menos 100 elementos de planta, entre 100 e 1.000 elementos de planta, 1.000 elementos de planta, entre 1.000 e 5.000 elementos de planta, por exemplo, pelo menos 5.000 elementos de planta, entre 5.000 e 10.000 elementos de planta, pelo menos 10.000 elementos de planta, entre 10.000 e 20.000 elementos de planta, pelo menos 20.000 elementos de planta, entre 20.000 e 30.000 elementos de planta, pelo menos 30.000 elementos de planta, entre 30.000 e 50.000 elementos de planta, pelo menos 50.000 elementos de planta, entre 50.000 e 70.000 elementos de planta, pelo menos 70.000 elementos de planta, entre 70.000 e 80.000 elementos de planta, pelo menos 80.000 elementos de planta, entre 80.000 e 90.000, pelo menos 90.000 elementos de planta ou mais. Em outra modalidade, o saco ou recipiente pode compreender um peso discreto de elementos de planta, por exemplo, pelo menos 1 libra, entre 1 e 2 libras, pelo menos 2 libras, entre 2 e 5 libras, pelo menos 5 libras, entre 5 e 10 libras, pelo menos 10 libras, entre 10 e 30 libras, pelo menos 30 libras, entre 30 e 50 libras, pelo menos 50 libras, entre 50 e 70 libras, pelo menos 70 libras ou mais. O saco ou recipiente compreende um rótulo que descreve os elementos de planta e/ou a referida população endofítica. O rótulo pode conter informações adicionais, por exemplo, as informações selecionadas do grupo que consiste em: peso líquido, número do lote, origem geográfica dos elementos da planta, data do teste, taxa de germinação, conteúdo de matéria inerte e quantidade de ervas daninhas nocivas, se houver. Recipientes ou embalagens adequadas incluem aqueles tradicionalmente usados na comercialização de sementes de planta. A invenção também contempla outros recipientes com capacidades de armazenamento mais sofisticadas (por exemplo, com invólucros microbiologicamente apertados ou com contenções à prova de gás ou água).

[0333] Em alguns casos, uma subpopulação de sementes compreendendo a população endofítica é ainda selecionada com base no aumento de uniformidade, por exemplo, com base na uniformidade da população microbiana. Por exemplo, elementos de plantas individuais de grupos coletados de espigas individuais, plantas individuais, lotes de terra individuais (representando plantas inoculadas no mesmo dia) ou campos individuais podem ser testados quanto à uniformidade da densidade microbiana, e somente aqueles grupos que atendem às especificações (por exemplo, pelo menos 80% dos elementos de planta testados têm densidade mínima, conforme determinado pelos métodos quantitativos descritos em outros lugares) são combinados para fornecer a subpopulação de sementes agrícolas.

[0334] Os métodos descritos neste documento podem também compreender uma etapa de validação. A etapa de validação pode envolver, por exemplo, o crescimento de alguns elementos de planta coletados das plantas inoculadas em plantas agrícolas maduras, e testar essas plantas individuais quanto à uniformidade. Essa etapa de validação pode ser realizada em sementes individuais coletadas de espigas, plantas individuais, lotes de terra individuais (representando plantas inoculadas no mesmo dia) ou campos individuais, e testadas conforme descrito acima para identificar grupos que atendam às especificações exigidas.

[0335] Em algumas modalidades, os métodos descritos neste documento incluem o plantio de uma composição sintética descrita neste documento. Plantadores adequados incluem um aparelho fertilizante e/ou semeadora a ar utilizado em operações agrícolas para aplicar materiais particulados incluindo um ou mais dos seguintes, sementes, fertilizantes e/ou inoculantes no solo durante a operação de plantio. Os aparelhos fertilizantes/semeadora podem incluir uma barra de ferramentas que tem abridores de engate no solo, atrás dos quais é rebocado um carrinho com rodas que inclui um ou mais tanques de contenção ou recipientes e meios de medição associados para, respectivamente, conter e medir, a partir deles, materiais particulados.

[0336] Em certas modalidades, uma composição descrita neste documento pode estar na forma de um líquido, uma suspensão, um sólido ou um pó (pó molhável ou pó seco). Noutra forma de realização, uma composição pode estar na forma de um revestimento de sementes. As composições no estado líquido, suspensão ou pó (por exemplo, pó molhável) forma pode ser apropriada para revestimento de elementos de planta. Quando usada para revestir elementos de planta, a composição pode ser aplicada aos elementos de planta e deixada a secar. Em modalidades em que a composição é um pó (por exemplo, um pó molhável), pode ser necessário adicionar um líquido, tal como água, ao pó, antes da aplicação a uma semente.

[0337] Ainda noutra forma de realização, os métodos podem incluir a introdução no solo de um inóculo de uma ou mais das populações de endófitos descritas neste documento. Tais métodos podem incluir a introdução no solo de uma ou mais das composições descritas neste documento. O(s) inóculo(s) ou composições podem(m) ser introduzido(s) no solo de acordo com métodos conhecidos por aqueles versados na técnica. Exemplos não limitativos incluem introdução no sulco, pulverização, revestimento de sementes, introdução foliar, etc. Em uma modalidade específica, a etapa de introdução compreende a introdução em sulco do inóculo ou composições descritas neste documento.

[0338] Numa modalidade, os elementos da planta podem ser tratados com a(s) composição(ões) descrita(s) neste documento de várias maneiras, mas de preferência por pulverização ou gotejamento. Tratamento por pulverização e gotejamento pode ser conduzido formulando composições descritas neste documento e pulverizando ou gotejando a(s) composição(s) em (uma) semente(s) por meio de um sistema de tratamento contínuo (que é calibrado para aplicar tratamento a uma taxa predefinida em proporção ao fluxo contínuo de semente), tal como um tipo de tambor de tratador. Sistemas de grupo, em que um tamanho de lote predeterminado de sementes e composição(ões), tal como descritos neste documento, são entregues num misturador, podem também ser empregues.

[0339] Em outra modalidade, o tratamento envolve o revestimento de elementos da planta. Um desses processos envolve revestir a parede interna de um recipiente redondo com a(s) composição(ões) descrita(s) neste documento, adicionar elementos de planta e depois fazer rodar o recipiente para fazer com que os elementos de planta entrem em contato com a parede e a(s) composição(ões), um processo conhecido na técnica como "revestimento de recipiente". Os elementos da planta podem ser revestidos por combinações de métodos de revestimento. A imersão envolve tipicamente o uso de formas líquidas das composições descritas. Por exemplo, os elementos da planta podem ser encharcados por cerca de 1 minuto a cerca de 24 horas (por exemplo, por pelo menos 1 min, entre 1 e 5 min, 5 min, entre 5 e 10 min, 10 min, entre 10 e 20 min, 20 min, entre 20 e 40 min, 40 min, entre 40 e 80 min, 80 min, entre 80 min e 3 h, 3h, entre 3 h e 6 h, 6 h, entre 6 h e 12 h, 12 h, entre 12 h e 24 h, 24 h).

População de Plantas/Campos Agrícolas

[0340] Um dos principais focos dos esforços de aprimoramento de culturas tem sido selecionar variedades com traços que forneçam, além do maior retorno, a maior homogeneidade e uniformidade. Se por um lado endogamia pode produzir plantas com identidade genética substancial, heterogeneidade em relação à altura da planta, tempo de floração e tempo de semente, há impedimentos que permanecem para a obtenção de um campo homogêneo de plantas. A inevitável variabilidade de planta a planta é causada por inúmeros fatores, incluindo condições ambientais e práticas de manejo irregulares. Outra possível fonte de variabilidade pode, em alguns casos, ser devido à heterogeneidade da população endofítica que habita as plantas. Ao fornecer populações endofíticas aos elementos reprodutivos da planta, as plantas resultantes geradas pela germinação dos elementos reprodutivos da planta têm uma coleção de endófitos mais consistente e, portanto, espera-se que produzam uma população de plantas mais uniforme.

[0341] Por conseguinte, em outra forma de realização, a invenção fornece uma população substancialmente uniforme de plantas. A população pode incluir pelo menos 5 plantas, entre 5 e 10 plantas, pelo menos 10 plantas, entre 10 e 100 plantas, por exemplo, pelo menos 100 plantas, entre 100 e 300 plantas, pelo menos 300 plantas, entre 300 e 1.000 plantas, pelo menos 1.000 plantas, entre 1.000 e 3.000 plantas, pelo menos 3.000 plantas, entre 3.000 e 10.000 plantas, pelo menos 10.000 plantas, entre 10.000 e 30.000 plantas, pelo menos 30.000 plantas, entre 30.000 e 100.000 plantas, pelo menos 100.000 plantas ou mais. As plantas podem ser derivadas de elementos reprodutivos de plantas que compreendem populações de endófitos como descritas neste documento. As plantas são cultivadas em grupos substancialmente uniformes, por exemplo, em fileiras, bosques, blocos, círculos ou outra disposição de plantio.

[0342] A uniformidade das plantas pode ser medida de várias maneiras diferentes. Em algumas modalidades, há uma uniformidade aumentada em relação aos endófitos dentro da população de plantas. Por exemplo, em algumas modalidades, uma parcela substancial da população de plantas, por exemplo pelo menos 10%, entre 10% e 20%, pelo menos 20%, entre 20% e 30%, pelo menos 30%, entre 30% e 40%, pelo menos 40%, entre 40% e 50%, pelo menos 50%, entre 50% e 60%, pelo menos 60%, entre 60% e 70%, pelo menos 70%, entre 70% e 75%, pelo menos 75%, entre 75% e 80%, pelo menos 80%, entre 80% e 90%, pelo menos 90%, entre 90% e 95%, pelo menos 95% ou mais dos elementos ou plantas em uma população contêm um número limite de uma população de endófitos. O número limite pode ser pelo menos 10 UFC, entre 10 e 100 UFC, pelo menos 100 UFC, entre 100 e 300 UFC, por exemplo, pelo menos 300 UFC, entre 300 e 1.000 UFC, pelo menos 1.000 UFC, entre 1.000 e 3.000 UFC, pelo menos 3.000 UFC, entre 3.000 e 10.000 UFC, pelo menos 10.000 UFC, entre 10.000 e 30.000 UFC, pelo menos 30.000 UFC, entre 30.000 e 100.000 UFC, pelo menos 100.000 UFC ou mais, na planta ou em uma parte da planta. Alternativamente, em uma porção substancial da população de plantas, por exemplo, empelo menos 1%, entre 1% e 10%, pelo menos 10%, entre 10% e 20%, pelo menos 20%, entre 20% e 30%, pelo menos 30%, entre 30% e 40%, pelo menos 40%, entre 40% e 50%, pelo menos 50%, entre 50% e 60%, pelo menos 60%, entre 60% e 70%, pelo menos 70%, entre 70% e 75%, pelo menos 75%, entre 75% e 80%, pelo menos 80%, entre 80% e 90%, pelo menos 90%, entre 90% e 95%, pelo menos 95% ou mais das plantas na população, a população endófita que é fornecida à semente ou muda representa pelo menos 0,1%, entre 0,1% e 1% pelo menos 1%, entre 1% e 5%, pelo menos 5%, entre 5% e 10%, pelo menos 10%, entre 10% e 20%, pelo menos 20%, entre 20% e 30%, pelo menos 30%, entre 30% e 40%, pelo menos 40%, entre 40% e 50%, pelo menos 50%, entre 50% e 60%, pelo menos 60%, entre 60% e 70%, pelo menos 70%, entre 70% e 80%, pelo menos 80%, entre 80% e 90%, pelo menos 90%, entre 90% e 95%, pelo menos 95%, entre 95% e 99%, pelo menos 99%, entre 99% e 100%, ou 100% da população total de endófitos na planta/semente.

[0343] Numa forma de realização, existe uma uniformidade genética aumentada de uma proporção substancial ou de todos os endófitos detectáveis dentro da taxa, gênero ou espécie de um componente relativamente a um controle não inoculado. Essa uniformidade aumentada pode ser um resultado do endófito ser de origem monoclonal ou derivado de uma população que compreende uma sequência mais uniforme do genoma e repertório plasmidial do que aquela que estaria presente na população de endófitos uma planta que deriva sua comunidade endófita principalmente por meio de assimilação de diversos simbiontes do solo.

[0344] Noutra modalidade, há uma uniformidade aumentada em relação a um parâmetro fisiológico das plantas dentro da população. Em alguns casos, pode haver uma uniformidade aumentada na altura das plantas quando comparada com uma população de plantas agrícolas de referência cultivadas nas mesmas condições. Por exemplo, pode haver uma redução no desvio padrão na altura das plantas na população de pelo menos 5%, entre 5% e 10%, por exemplo, pelo menos 10%, entre 10% e 15%, menos 15%, entre 15% e 20%, pelo menos 20%, entre 20% e 30%, pelo menos 30%, entre 30% e 40%, pelo menos 40%, entre 40% e 50%, pelo menos 50%, entre 50% e 60%, pelo menos 60% ou mais, quando comparado com uma população de plantas agrícolas de referência cultivadas nas mesmas condições. Em outros casos, pode haver uma redução no desvio padrão no tempo de floração das plantas na população de pelo menos 5%, entre 5% e 10%, por exemplo, pelo menos 10%, entre 10% e 15%, pelo menos 15%, entre 15% e 20%, pelo menos 20%, entre 20% e 30%, pelo menos 30%, entre 30% e 40%, pelo menos 40%, entre 40% e 50%, em pelo menos 50%, entre 50% e 60%, pelo menos 60% ou mais, quando comparado com uma população de plantas agrícolas de referência cultivadas nas mesmas condições.

Produtos de Commodity Vegetais

[0345] A presente invenção fornece um produto commodity de planta, bem como métodos para produzir um produto commodity de planta, que é derivado de uma planta. Como utilizado neste documento, um “produto commodity de planta” refere-se a qualquer composição ou produto que é constituído por material derivado de uma planta, semente, célula vegetal ou elemento vegetal da presente invenção. Os produtos commodity de planta podem ser vendidos aos consumidores e podem ser viáveis ou não viáveis. Produtos commodities não viáveis incluem, mas não se limitam a elementos de planta e grãos inviáveis; sementes processadas, partes de sementes e elementos de planta; tecido vegetal desidratado, tecido vegetal congelado e tecido vegetal processado; sementes e elementos de planta transformados para alimentação animal para consumo terrestre e/ou aquático de animais, óleo, farelo, farinha, flocos, farelada, fibras, papel, chá, café, silagem, triturados de grãos integrais e qualquer outro alimento para uso humano ou animal consumo, como a fruta ou outra porção comestível da planta; e biomassas e combustíveis; e matéria-prima na indústria.

[0346] Os usos industriais de óleos derivados das plantas agrícolas descritas neste documento incluem ingredientes para tintas, plásticos, fibras, detergentes, cosméticos, lubrificantes e combustível de biodiesel. Os óleos vegetais podem ser separados, interesterificados, sulfurados, epoxidados, polimerizados, etoxilados ou clivados. Projetar e produzir derivados de óleo vegetal com funcionalidade aprimorada e oleoquímica aprimorada é um campo em rápido crescimento. Por exemplo, uma mistura de triglicerídeos é geralmente dividida e separada em ácidos graxos puros, que são então combinados com álcoois ou ácidos derivados de petróleo, nitrogênio, sulfonatos, cloro ou com álcoois graxos derivados de gorduras e óleos para produzir o tipo desejado de óleo ou gordura. Os produtos commodity de planta também incluem compostos industriais, como uma grande variedade de resinas usadas na formulação de adesivos, películas, plásticos, tintas, revestimentos e espumas.

Métodos de Utilização de Organismos Endófitos e Composições Sintéticas Compreendendo Organismos Endófitos

[0347] Como descrito neste documento, as populações de endófitos purificados e composições sintéticas que as compreendem (por exemplo, formulações) podem ser utilizadas para conferir traços benéficos para a planta hospedeira.

[0348] A invenção será descrita adicionalmente nos exemplos a seguir, que não limitam o escopo da invenção descrito nas reivindicações. Cada pedido de patente, artigo de revista, citação e outras referências são incorporados neste documento por referência na sua totalidade, como se cada um tivesse sido incorporado por referência individualmente.

EXEMPLOS Exemplo 1. Isolamento e Identificação de Organismos Endófitos

[0349] O isolamento e cultivo de micróbios endofíticos de plantas agrícolas foi realizado utilizando métodos bem conhecidos na técnica. O DNA foi extraído dos tecidos moídos usando o kit de extração de DNA DNeasy (Qiagen, Hilden, Alemanha) de acordo com as instruções do fabricante. Os endófitos foram caracterizados pelas sequências de regiões genômicas, estas sequências estão listadas na Tabela 4. Os primers que amplificam regiões genômicas dos endófitos da presente invenção estão listados na Tabela 3.Tabela 3. Sequências de primer úteis na identificação de micróbios da presente invenção Tabela 4. Sequências exemplificativas de endófitos da presente invenção

Exemplo 2: Isolamento e Identificação de Organismos Endófitos Usando Sequências de Genes Marcadores.

[0350] Os organismos endófitos fúngicos da presente invenção podem ser identificados pela sequência de um ou mais dos seguintes locais: rRNA da subunidade longa (LSU), rRNA da subunidade pequena (SSU), maior subunidade da RNA polimerase II (RPB1), segunda maior subunidade de RNA polimerase II (RPB2), beta-tubulina, actina, fosfoglicerato quinase (PGK). A amplificação por PCR da maior subunidade da RNA polimerase I (RPB1) usando as sequências de primer RPB1-Af (SEQ ID NO: 21) e RPB1-Cr (SEQ ID NO: 22) é descrita em Cendejas-Bueno E, Kolecka A, Alastruey- Izquierdo A, et al. Reclassificação do Complexo Candida haemulonii como Candida haemulonii (C. haemulonii Grupo I), C. duobushaemulonii sp. nov. (C. haemulonii Grupo II) e C. haemulonii var. vulnera var. nov .: Três leveduras patogênicas humanas multiresistentes. Jornal de Microbiologia Clínica. 2012; 50 (11): 3641-3651. A amplificação por PCR da segunda maior subunidade da RNA polimerase II (RPB2) usando as sequências de primer fRPB2-5F (SEQ ID NO: 26) e fRPB2-7.1R (SEQ ID NO: 25) é descrita em Riess K, Oberwinkler F, Bauer R, Garnica S. High genetic diversity at the regional scale and possible speciation in Sebacina epigaea and S. incrustans. BMC Evolutionary Biology. 2013;13:102. doi:10.1186/1471-2148-13-102. A amplificação por PCR da beta-tubulina utilizando sequências de primers Btub2Fd (SEQ ID NO: 30) e Btub4Rd (SEQ ID NO: 31) é descrita em Aveskamp et al. (2009) DNA phylogeny reveals polyphyly of Phoma section Peyronellaea e multiple taxonomic novelties Mycologia, 101 (3):363-382. A amplificação por PCR da LSU utilizando as sequências de primer LR0R (SEQ ID NO: 23) e LR5 (SEQ ID NO: 24) é descrita em Stielow JB, Lévesque CA, Seifert KA, et al. One fungus, which genes? Development and assessment of universal primers for potential secondary fungal DNA barcodes. Persoonia: Molecular Phylogeny and Evolution of Fungi. 2015;35:242-263. doi:10.3767/003158515X689135. A amplificação por PCR da SSU utilizando as sequências de primer SR1R (SEQ ID NO: 29) e NS4 (SEQ ID NO: 28) é descrita em Zhu et al. (2016) Helminthosporium velutinum and H. aquaticum sp. nov. from aquatic habitats in Yunnan Province, China. Phytotaxa 253 (3): 179-190. A amplificação por PCR da Actina usando as sequências de primer ACT512f (SEQ ID NO: 17) e ACT783r (SEQ ID NO: 18) é descrita em Carbone, I. & Kohn, LM (1999). A method for designing primer sets for speciation studies in filamentous ascomycetes. Mycologia, 91 (3): 552-556. A amplificação por PCR da maior subunidade da RNA polimerase II (RPB1) usando as sequências de primer RPB1-Af (SEQ ID NO: 21) e RPB1-Cr (SEQ ID NO: 22) é descrita em Urbina H, Blackwell M (2012) Multilocus Phylogenetic Study do clade de levedura de Scheffersomyces e caracterização da região N-terminal do gene da xilose redutase. PLoS ONE 7(6): e39128.

[0351] MIC-68390 pode ser identificado por uma ou mais das seguintes sequências exemplares: Sequência RPB2 (SEQ ID NO: 61). MIC-68178 pode ser identificado por uma ou mais das seguintes sequências exemplares: sequência de beta-tubulina (SEQ ID NO: 64). MIC-07010 pode ser identificado por uma ou mais das seguintes sequências exemplares: sequência de fosfoglicerato quinase (SEQ ID NO: 66). MIC-96038 pode ser identificado por uma ou mais das seguintes sequências exemplares: sequência de actina (SEQ ID NO: 47), sequência de beta- tubulina (SEQ ID NO: 48), sequência RPB2 (SEQ ID NO: 49), sequência RPB1 (SEQ ID NO: 50). MIC-33414 pode ser identificado por uma ou mais das seguintes sequências exemplares: sua sequência de actina (SEQ ID NO: 53), sequência RPB1 (SEQ ID NO: 55), sequência de beta-tubulina (SEQ ID NO: 58), LSU sequência (SEQ ID NO: 54), sequência SSU (SEQ ID NO: 56), sequência SSU (SEQ ID NO: 57). MIC-31593 pode ser identificado por uma ou mais das seguintes sequências exemplares: sua sequência RPB2 (SEQ ID NO: 43), sequência de beta- tubulina (SEQ ID NO: 44). Sequências exemplares de LSU e SSU de MIC-19994 são SEQ ID NO: 39 e SEQ ID NO: 40, respectivamente.

Exemplo 3: Isolamento e identificação de endófitos bacterianos e fúngicos usando a sequência ITS

[0352] A classificação da cepa fúngica usando sequências ITS foi feita pela seguinte metodologia.

[0353] O DNA genômico total foi extraído de isolados individuais de fungos, usando o DNeasy Plant Mini Kit (Qiagen, Germantown, MD). Utilizou-se Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) para amplificar uma região genômica que incluir os espaçadores transcritos internos (ITS) ribossomais nucleares utilizando um par de iniciadores ITS_1 (5'-CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAA-3') (SEQ ID NO: 5) e LR5 (5'-TCCTGAGGGAAACTTCG-3') (SEQ ID NO: 8). Cada mistura de reação de 25 microlitros incluía 22,5 microlitros da supermistura Invitrogen Platinum Taq, 0,5 microlitros de cada primer (10 μM) e 1,5 microlitros de modelo de DNA (~2-4 ng). As reações de ciclização foram realizadas com termocicladores PTC da MJ Research e consistiram em 94°C por 5 min, 35 ciclos de 94°C por 30 s, 54°C por 30 s e 72°C por 1 min, e 72°C por 10 min. O sequenciamento de Sanger foi realizado em Genewiz (South Plainfield, NJ) utilizando sequências de primer: ITS_1 (5'-CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAA -3') (SEQ ID NO: 5), ITS_2 (5'- GCTGCGTTCTTCATCGATGC-3') (SEQ ID NO: 6), ITS_3 (5'- GCATCGATGAAGAACGCAGC-3') (SEQ ID NO: 7) e LR5 (5'- TCCTGAGGGAAACTTCG-3') (SEQ ID NO: 8). Os primers de sequenciamento foram escolhidos de modo que as regiões sobrepostas fossem sequenciadas. Os cromatogramas brutos foram convertidos em sequências, e as pontuações de qualidade correspondentes foram atribuídas usando TraceTuner v3.0.6beta (US 6.681.186). Essas sequências foram filtradas em termos de qualidade, e uma sequência de consenso foi gerada usando Geneious v 8.1.8 (Biomatters Limited, Auckland NZ).

[0354] As classificações taxonômicas foram atribuídas às sequências usando a maior probabilidade de atribuição com base nos resultados das ferramentas de classificação taxonômica padrão do setor: LCA (executa USEARCH (Edgar, RC (2010) Bioinformtics. 26(19):2460-2461) com a opção search_global e, em seguida, para todos os melhores resultados de correspondência, retorna a classificação taxonômica mais baixa compartilhada por todos os melhores resultados de uma consulta), SPINGO (Allard et al. (2015) BMC Bioinformtics. 16: 324), e UTAX (Edgar, R.C., 2016), utilizando o trainset 1 WARCUP Fungal ITS (Deshpande et al. (2016) Mycologia 108(1):1-5) e UNITE (Koljalg et al. (2013) Molecular Ecology, 22: 5271-5277). As combinações de classificador e banco de dados listadas na Tabela 5 foram usadas para atribuir taxonomia a sequências fúngicas.Tabela 5: As combinações de classificador e banco de dados usadas para classificar sequências ITS Tabela 6. Classificação taxonômica dos endófitos da presente invenção

[0355] MIC-68390 pode ser identificado pela sequência de sua sequência ITS (SEQ ID NO: 60). MIC-68178 pode ser identificado pela sequência de sua sequência ITS (SEQ ID NO: 63). MIC-07010 pode ser identificado pela sequência de sua sequência ITS (SEQ ID NO: 65). MIC-31593 pode ser identificado pela sequência de sua sequência ITS (SEQ ID NO: 42). MIC-48747 pode ser identificado pela sequência de sua sequência ITS (SEQ ID NO: 67). MIC-96038 pode ser identificado pela sequência de sua sequência ITS (SEQ ID NO: 46). MIC-50414 pode ser identificado pela sequência de sua sequência ITS (SEQ ID NO: 68). MIC33414 pode ser identificado pela sequência de sua sequência ITS (SEQ ID NO: 52). MIC-85555 pode ser identificado pela sequência de sua sequência ITS (SEQ ID NO: 70). MIC-50989 pode ser identificado pela sequência de sua sequência ITS (SEQ ID NO: 69).

Exemplo 4. Avaliação das Características da Planta Aprimorada, Vigor de Mudas Ensaio do vigor de mudas de soja

[0356] Preparação das sementes: A qualidade do lote das sementes de soja foi avaliada testando a germinação de 100 sementes. As sementes foram colocadas, 8 sementes por placa de Petri, em papel de filtro em placas de Petri, foram adicionadas 12 mL de água a cada placa e as placas incubadas por 3 dias a 24°C. A percentagem de germinação foi maior que 95%. Mil sementes de soja foram então esterilizadas na superfície por co-incubação com gás cloro em um recipiente de 20 x 30 cm colocado em um exaustor químico por 16 horas. A percentagem de germinação de 50 sementes, por lote de esterilização, foi testada como acima e confirmada como superior a 95%.

[0357] Preparação e disposição heteróloga de endófitos: As soluções de esporos foram feitas enxaguando e raspando os esporos do ágar inclinado que já crescem há cerca de 1 mês. A lavagem foi feita com 0,05% de Silwet. Soluções foram passadas através do Miracloth para filtrar micélios. Esporos por ml foram contados sob um microscópio usando um hemocitômetro. A suspensão estoque foi então diluída em 10A6 esporos/ml utilizando água. Foram utilizados 3 de suspensões de esporos por semente de soja (~ 10A3 UFCs/semente são obtidos). Os tratamentos de controle foram preparados adicionando volumes equivalentes de água estéril às sementes.

[0358] Ensaio do vigor das mudas: Dois pedaços de papel de germinação enrolados foram colocados em um frasco de vidro estéril com 50 mL de água estéril e depois removidos quando completamente saturados. Depois os papéis foram separados e as sementes inoculadas foram colocadas a intervalos de aproximadamente 1 cm ao longo do comprimento de uma folha de papel de germinação umedecida, a pelo menos 2,5 cm da parte superior do papel e a 3,8 cm da margem do papel. A segunda folha foi colocada em cima das sementes de soja e os papéis e sementes em camadas foram enrolados sem precisão em uma forma de tubo. Cada tubo foi preso com um elástico ao redor do seu meio e colocado em um único frasco de vidro estéril e coberto com uma tampa. Para cada tratamento, foram preparados três frascos com 15 sementes por frasco. A posição dos frascos com a câmara de crescimento foi randomizada. Os frascos foram incubados a 60% de umidade relativa e 22°C dia, 18°C à noite com 12 horas de luz e 12 horas de escuridão por 4 dias e, em seguida, as tampas foram removidas e os frascos incubados por mais 7 dias. Em seguida, as mudas de soja germinadas foram pesadas e fotografadas e o comprimento radicular e a área superficial da raiz foram pontuados da seguinte maneira.

[0359] Sujeira, excesso de água, sementes e outros detritos foram removidos das mudas para permitir uma varredura precisa das raízes. As mudas individuais foram dispostas em bandejas de plástico transparente e as bandejas são dispostas em um scanner Epson Expression 11000XL (Epson America, Inc., Long Beach CA). As raízes foram organizadas manualmente para reduzir a quantidade de sobreposição. Para as medidas das raízes, os brotos foram removidos se a forma do broto fez com que ele se sobrepusesse às raízes.

[0360] A versão do software WinRHIZO Arabidopsis Pro2016a (Regents Instruments, Quebec, Canadá) foi usada com as seguintes configurações de aquisição: imagem em escala de cinza de 4000 dpi, "speed priority" (prioridade de velocidade), "overlapping" (sobreposição) (1 objeto), Root Morphology ("Morfologia da Raiz"): Precision ("Precisão") (padrão), Crossing Detection ("Detecção de Cruzamento") (normal). A área de digitalização foi definida como a área máxima do scanner. Quando o escaneamento foi concluído, a área de raiz foi selecionada e o comprimento da raiz e a área de superfície da raiz foram medidos.

[0361] A análise estatística foi realizada utilizando R (R Core Team, 2016. R: A language and environment for statistical computing. R Foundation for Statistical Computing, Viena, Áustria. R-project.org/). Os resultados estão resumidos nas Tabelas 7 e 8.Tabela 7. Traços radiculares de mudas de soja tratadas e não tratadas com endófitos. Tabela 8. Aumento percentual no comprimento das raízes de mudas de soja do tratamento com endófitos em relação aos controles não tratados.

Ensaio do vigor de mudas de milho

[0362] Preparação das sementes: A qualidade do lote das sementes de milho é avaliada primeiro quanto à germinação por transferência de 100 sementes e com 3,5 mL de água para uma placa de Petri revestida com papel de filtro. As sementes são incubadas por 3 dias a 24°C e para garantir que a percentagem de germinação seja superior a 95%. Mil sementes de milho são então esterilizadas na superfície por co-incubação com gás cloro em um recipiente de 20 x 30 cm em um exaustor químico por 12 horas. A percentagem de germinação de 50 sementes, por lote de esterilização, é testada como acima e confirmada como superior a 95%.

[0363] Preparação opcional de reagente: PEG 6000 a 7,5% (Calbiochem, San Diego, CA) é preparado adicionando-se 75 g de PEG a 1000 mL de água e depois agitado em uma chapa aquecedora em estado morno até o PEG estar completamente dissolvido. A solução é então autoclavada.

[0364] Preparação e disposição heteróloga de endófitos: As soluções de esporos são feitas enxaguando e raspando os esporos do ágar inclinado que já crescem há cerca de 1 mês. A lavagem é feita com 0,05% de Silwet. Soluções são passadas através do Miracloth para filtrar micélios. Esporos por ml são contados sob um microscópio usando um hemocitômetro. A suspensão estoque é então diluída em 10A6 esporos/ml utilizando água. São utilizados 3 de suspensões de esporos por semente de milho (~ 10A3 UFCs/semente são obtidos). Os tratamentos de controle são preparados adicionando volumes equivalentes de água estéril às sementes.

[0365] Ensaio do vigor das mudas: 25 ml de água estéril (ou, opcionalmente, 25 ml de solução de PEG, conforme preparado acima) são adicionados a cada bolsa de germinação CygTM (Mega International, Newport, MN) e colocados no suporte de bolsas (Mega International, Newport, MN). Pinça estéril é usada para colocar sementes de milho preparadas como acima em todas as outras perfurações na bolsa de germinação. As sementes são encaixadas em cada perfuração para garantir que elas não mudem ao mover das bolsas. Antes e entre os tratamentos, os fórceps são esterilizados usando álcool e chama e o espaço de trabalho é removido com etanol a 70%. Para cada tratamento, são preparadas três bolsas com 15 sementes por bolsa. Os suportes de germinação com bolsas de germinação são colocados em cubas de plástico e cobertos com plástico perfurado para evitar a secagem. As cubas são incubadas a 60% de umidade relativa e a 22°C ao dia, 18°C à noite com 12 horas de luz e 12 horas de escuro durante 6 dias para permitir a germinação e crescimento do comprimento da raiz. A colocação de bolsas dentro de prateleiras e prateleiras/cubas dentro da câmara de crescimento é aleatória para minimizar o efeito posicional. No final de 6 dias, as sementes de milho são pontuadas manualmente quanto à germinação, comprimento de broto e raiz.

[0366] A análise estatística é realizada utilizando R (R Core Team, 2016. R: A language and environment for statistical computing. R Foundation for Statistical Computing, Viena, Áustria. R-project.org/).

Ensaio do vigor de mudas de trigo

[0367] Preparação das sementes: O lote de sementes de trigo foi avaliado pela primeira vez quanto à germinação por transferência de 100 sementes e com 8 mL de água para uma placa de Petri revestida com papel de filtro. As sementes foram incubadas por 3 dias a 24°C e a porcentagem de germinação foi superior a 95%. As sementes de trigo foram então esterilizadas à superfície por co-incubação com gás cloro em um recipiente de 20 x 30 cm em um exaustor químico durante 12 horas. A percentagem de germinação de 50 sementes, por lote de esterilização, foi testada como acima e confirmada como superior a 95%.

[0368] Preparação do reagente: Preparou-se 7,5% de polietilenoglicol (PEG) adicionando-se 75 g de PEG a 1000 mL de água e depois agitando-os numa chapa aquecedora em estado morno até o PEG estar completamente dissolvido. A solução foi então autoclavada.

[0369] Preparação e disposição heteróloga de endófitos: As soluções de esporos foram feitas enxaguando e raspando os esporos do ágar inclinado que já cresciam há cerca de 1 mês. A lavagem foi feita com 0,05% de Silwet. Soluções foram passadas através do Miracloth para filtrar micélios. Esporos por ml foram contados sob um microscópio usando um hemocitômetro. A suspensão estoque foi então diluída em 10A6 esporos/ml utilizando água. Foram utilizados 3 μl de suspensões de esporos por semente de trigo (~10A3 UFCs/semente foram obtidos). Sementes e esporos foram combinados com um tubo falcon de 50 mL e agitados suavemente por 5 a 10 segundos até estarem completamente revestidos. Os tratamentos de controle foram preparados adicionando volumes equivalentes de água estéril às sementes.

[0370] Ensaio do vigor das mudas: As placas de Petri foram preparadas adicionando-se quatro folhas de papel para germinação de sementes estéril pesado, depois adicionando-se 50 mL de solução de PEG como preparada acima a cada placa, permitindo que o líquido mergulhasse completamente em todas as folhas. As folhas foram posicionadas e depois dobradas de modo que a parte de trás da placa e uma parede lateral fossem cobertas, duas folhas foram então removidas e colocadas numa superfície estéril. Ao longo da borda da placa em frente à parede lateral coberta, 15 sementes de trigo inoculadas foram colocadas uniformemente a pelo menos uma polegada do topo da placa e a meia polegada dos lados. As sementes foram colocadas com o lado liso para cima e com a ponta apontada para a parede lateral da placa coberta por papel de germinação. As sementes foram cobertas pelas duas folhas reservadas, e as camadas úmidas de papel foram suavizadas para remover bolhas de ar e prender as sementes, e a tampa foi recolocada. Para cada tratamento, pelo menos três placas com 15 sementes por placa foram preparadas. As placas foram então distribuídas aleatoriamente em pilhas de 8 a 12 placas e uma placa sem sementes foi colocada no topo. As pilhas foram incubadas a 60% de umidade relativa e 22°C dia, 18°C noite com 12 horas de luz e 12 horas de escuridão durante 24 horas, depois cada placa foi virada para uma posição semivertical com a parede lateral coberta por papel no fundo. As placas foram incubadas por mais 5 dias, depois as sementes de trigo foram marcadas manualmente para germinação, comprimento de broto e raiz.

[0371] A análise estatística foi realizada utilizando R (R Core Team, 2016. R: A language and environment for statistical computing. R Foundation for Statistical Computing, Viena, Áustria. R-project.org/). Os resultados estão resumidos na Tabela 9. Tabela 9. Aumento percentual no comprimento das raízes de mudas de trigo do tratamento com endófitos em relação aos controles não tratados.

Exemplo 5: Preparações de culturas e disposição heteróloga de endófitos para experiências em estufa

[0372] As cepas podem ser cultivadas pelos métodos aqui descritos e métodos bem conhecidos na técnica.

Preparação de biomassa fúngica Método 1

[0373] A biomassa para MIC-19994 e MIC-96038 foi produzida crescendo por duas semanas em meio líquido (PDB). A biomassa resultante foi homogeneizada por sonicação (50% de amplitude por 30 segundos) ou em um FastPrep-24 (MP Biomedicals, Santa Ana, CA, EUA) ajustado em 4,5m/s por 30 segundos. Método 2 As soluções de esporos foram feitas lavando e raspando os esporos dos ágares inclinados, os quais crescem há cerca de 1 mês. A lavagem foi feita com 0,05% de Silwet. Soluções foram passadas através do Miracloth para filtrar micélios. Esporos por ml foram contados sob um microscópio usando um hemocitômetro. A suspensão estoque foi então diluída em 10A6 esporos/ml utilizando água. Foram utilizados 3 de suspensões de esporos por semente (~ 10A3 UFCs/semente são obtidos). Os tratamentos de controle foram preparados adicionando volumes equivalentes de água estéril às sementes.

Método 3

[0374] Preparação: O caldo de melaço foi preparado dissolvendo 30 g de melaço e 5 g de extrato de levedura por litro de água deionizada em um recipiente autoclavável e autoclave (15 psi, 121° C) por 45min. As placas de ágar de dextrose (PDA) foram preparadas dissolvendo 39,0 g PDA em pó por litro de água deionizada em um recipiente autoclavável e autoclave (15 psi, 121° C) por 45 min. Deixou-se o ágar arrefecer até 50-60°C, antes de vertê-los em placas de Petri estéreis (30 mL por placa de 90 mm).

[0375] Biomassa líquida: Todos os equipamentos e consumíveis foram completamente esterilizados e os procedimentos realizados em um gabinete de biossegurança. O inoculante é preparado colocando-se 1 tampão de um material criopreservado em uma placa PDA fresca, vedando-se a placa com Parafilm® e incubando-a à temperatura ambiente no escuro por 5 a 10 dias. Em seguida, os tampões de ~5x5 mm foram cortados das placas PDA e os 10-12 tampões foram transferidos para frascos contendo o caldo de melaço estéril, depois cobertos, fixados em um agitador e incubados por pelo menos 10 dias com agitação a ~130 rpm. Em seguida, a cultura foi colocada em um liquidificador por 5 segundos e 1 mL da mistura foi centrifugado e o sobrenadante foi descartado e o sedimento ressuspenso em 0,5 mL de solução salina tamponada com fosfato (PBS) 1x para gerar inóculo.

[0376] Biomassa seca: Todos os equipamentos e consumíveis foram completamente esterilizados e os procedimentos realizados em um armário de biossegurança. O inoculante é preparado colocando-se 1 tampão de um material criopreservado em uma placa PDA fresca, vedando-se a placa com Parafilm® e incubando-a à temperatura ambiente no escuro por 5 a 10 dias. Em seguida, os tampões de ~5x5 mm foram cortados das placas PDA e os 10-12 tampões foram transferidos para frascos contendo o caldo de melaço estéril, depois cobertos, fixados em um agitador e incubados por pelo menos 10 dias com agitação a ~130 rpm. Em condições estéreis, a cultura líquida foi cuidadosamente decantada usando papel de filtro estéril de 150 mm num funil de Buchner esterilizado sobre um frasco estéril. Depois de todo o líquido ter passado pelo funil, o sedimento foi lavado com água estéril até o filtrado ficar limpo. Quando seco, o sedimento foi transferido para um armário de secagem e secado até se tornar frágil. O sedimento foi então moído em pó fino e a amostra usada para gerar contagens de UFC.

Inoculação de sementes

[0377] A menos que especificado de outra forma, o inóculo foi adicionado às sementes para atingir uma dose direcionada de 10A4 UFC. Onde doses baixas, médias e altas são indicadas, e de outra forma não especificada, uma dose alta é 10A5 UFC/semente, uma dose média é 10A4 UFC/semente e uma dose baixa 10A3 UFC/semente. As sementes foram agitadas para dispersar o inóculo uniformemente nas sementes. Os tratamentos de controle de formulação foram preparados usando volumes equivalentes de PBS. As sementes foram deixadas secar por aproximadamente 2 minutos, depois foram adicionadas 2 onças fluidas por kg de semente de Flo-Rite® 1706 (BASF, Ludwigshafen, Alemanha) e as sementes foram agitadas para dispersar o pó uniformemente nas sementes.

Exemplo 6. Avaliação de Características da Planta Aprimorada: Estufa Arroz

[0378] As sementes de arroz da variedade Rex foram tratadas com tratamento fungicida e inseticida comercial CruiserMaxx® Rice (Syngenta, Basel, Suíça). As sementes foram dispostas heterologamente com as formulações de endófito e o controle da formulação (sem qualquer endófito), como descrito no Exemplo 28, sementes sem tratamento (falta de formulação e endófito) foram também plantadas. A dose carregada de cada micróbio é mostrada na Tabela 42. O tratamento endofítico MIC-68178/MIC-33414 foi co-inoculado com MIC-68178 e MIC-33414. No tratamento de co-inoculação, o MIC-68178 representou 17,45% da dose carregada, e o MIC-33414 representou 82,55% da dose carregada.Tabela 10. Doses carregadas (UFC por semente) de sementes de soja tratadas com endófitos.

[0379] Cada vaso foi preenchido com o tipo Cahaba/Wickham, solo arenoso fino e areia e duas sementes foram semeadas uniformemente espaçadas em cada vaso. Dez vasos foram plantados por tratamento/controle. O design experimental exigiu um padrão completamente aleatório de cada tratamento dentro de cada bloco/réplica. As plantas foram regadas duas vezes por dia. Após o surgimento de folhas verdadeiras, as plantas foram fertilizadas semanalmente a 250 PPM N usando o fertilizante solúvel em água Peat-Lite 20-1020 de Peter.

[0380] No dia 7, os vasos foram diluídos para 1 muda/vaso. O tecido da raiz foi colhido do experimento seis semanas após o plantio e o solo foi lavado das raízes. Os tecidos de cada planta foram colocados em um saco de papel sem forro. O tecido foi seco em um forno a 85°C durante 3 dias. Depois de completamente seca, a biomassa de raiz de plantas individuais foi pesada e registrada.

[0381] O MIC-68178 demonstrou um aumento de 51,5% no peso da raiz seca em comparação com o controle não tratado, com mais de 80% de confiança pela análise Bayesiana.Tabela 11. Diferença percentual no peso seco das raízes na variedade de arroz Rex em condições de estufa

Soja

[0382] A argila arenosa foi misturada na proporção de 60% e 40% de argamassa. Antes da mistura, ambos os meios de plantio foram peneirados através de uma malha quadrada de aço de 3/8” para remover partículas maiores e detritos. Sementes de soja da variedade Stine 33E22 foram tratadas com tratamento fungicida e inseticida comercial CruiserMaxx® Soy (Syngenta, Basel, Suíça). As sementes foram dispostas heterologamente com as formulações de endófito e o controle da formulação (sem qualquer endófito), como descrito no Exemplo 28, sementes sem tratamento (falta de formulação e endófito) foram também plantadas.

[0383] Cada vaso foi enchido com 1000 mL de solo, regado com 225 mL de água e uma semente semeada por vaso. Dez vasos foram plantados por tratamento/controle. O design experimental exigiu um padrão completamente aleatório de cada tratamento dentro de cada bloco/réplica. As condições ambientais foram definidas no fotoperíodo de 12h, na temperatura de 23/20°C durante o período diurno/noturno e a intensidade da luz foi definida a 550 μMol m-2 s-1. Após o plantio, as sementes foram regadas para manter aproximadamente 75% da capacidade do solo.

[0384] O tecido da raiz foi colhido do experimento três semanas após o plantio e o solo foi lavado das raízes. Os tecidos de cada planta foram colocados em um saco de papel sem forro. O tecido foi seco em um forno a 85°C durante 3 dias. Depois de completamente seca, a biomassa de raiz de plantas individuais foi pesada e registrada.

[0385] As raízes tratadas com o organismo endófito MIC-68178 demonstraram um aumento de 16,9% em peso da raiz seca em comparação com o controle não tratado, mas com menos de 80% de confiança pela análise Bayesiana. As raízes tratadas com o organismo endófito MIC-33414 demonstraram uma diminuição de 23,5% em peso da raiz seca em comparação com o controle não tratado, mas com menos de 80% de confiança pela análise Bayesiana. No entanto, a formulação de organismo endófito compreendendo MIC-68178 e MIC33414 demonstrou um aumento em peso da raiz seca de 36,8% em comparação com o controle não tratado, com mais de 80% de confiança pela análise Bayesiana. Uma foto tirada antes da secagem do controle não tratado exemplificativo e das raízes de soja tratadas com MIC-68178 e MIC-33414 é mostrada na Figura 3.Tabela 12. Diferença de porcentagem no peso seco da raiz na variedade de soja Stine 33E22 em condições de estufa.

Exemplo 7: Cultivo de Plantas Tratadas com Endófitos no Experimento com Estufa 1 Trigo

[0386] Um barro arenoso e um solo de envasamento comercial (Farfard®, Agawam, MA) foram utilizados neste experimento. O barro arenoso foi misturado na proporção de 60% de barro e 40% de areia de argamassa (Northeast Nursery, Peabody, MA). Antes da mistura, ambos os meios de plantio foram peneirados através de uma malha quadrada de aço de 3/8” para remover partículas maiores e detritos. Sementes de trigo foram tratadas com fungicida comercial e tratamento inseticida. As sementes foram dispostas heterologamente com as formulações de endófito e o controle da formulação (sem qualquer endófito), como descrito no Exemplo 5, sementes sem tratamento (falta de formulação e endófito) foram também plantadas. Os tratamentos com endófitos foram aplicados às sementes em três doses-alvo: alta (10A5 UFC/semente), média (10A4 UFC/semente), baixa (10A3 UFC/semente). Cada vaso foi preenchido com 600 mL de seu respectivo solo, regado com 200 mL de água e, em seguida, nove sementes foram semeadas uniformemente em cada vaso (em um padrão 3x3). O solo foi então coberto sobre as sementes (profundidade de plantio média estimada de 1 polegada) e um adicional de 110 mL de água foi adicionado para umedecer o substrato de solo sobreposto. O design experimental exigiu um padrão completamente aleatório de cada tratamento dentro de cada bloco/réplica. As condições ambientais foram definidas no fotoperíodo de 12h, na temperatura de 22/18°C durante o período diurno/noturno e a intensidade da luz foi definida a 650 μMol m-2 s-1. Após o plantio, as sementes foram regadas para manter aproximadamente 80% da capacidade do solo.

[0387] A emergência de mudas de trigo foi registrada nos dias 4, 5 e 7 após o plantio, com os dias 4 e 5 representando a percentagem de emergência precoce e o dia 7 representando a percentagem de emergência final. No dia 7, todos os vasos foram diluídos para 3 mudas/vaso. O tecido acima do solo foi colhido do experimento três semanas após o plantio. Os tecidos dos tratamentos individuais (vasos) foram reunidos e colocados em um saco de papel sem forro. Todos os tecidos foram secos num forno a 85°C durante 3 dias. Depois de completamente seca, a biomassa de broto das repetições de tratamento individual (vasos) foi pesada e registrada.

[0388] Os tratamentos MIC-96038, MIC-96038/MIC-19994 co-cultivados e MIC-19994 aumentaram a biomassa de broto de planta seca na dose média. O tratamento com MIC-19994 resultou em um aumento de 6% (p < 0,05) na biomassa de broto seco a 10A4 UFC/semente.Tabela 13. Biomassa de broto seco de trigo tratado com endófitos

Soja

[0389] Um substrato de crescimento de barro arenoso foi misturado na estufa e consistia em 60% de argila e 40% de argamassa de areia (Northeast Nursery, Peabody, MA). Antes da mistura, o barro foi peneirado através de uma peneira de malha quadrada de 3/8” para remover partículas e detritos maiores. As sementes de soja foram tratadas com tratamento fungicida e inseticida comercial CruiserMaxx® Vibrance (Syngenta, Basel, Suíça) de acordo com as instruções do fabricante. As sementes foram dispostas heterologamente com as formulações de endófito e o controle da formulação (sem qualquer endófito), como descrito no Exemplo 11, sementes sem tratamento (falta de formulação e endófito) foram também plantadas. Os tratamentos com endófitos foram aplicados às sementes em três doses-alvo: alta (10A5 UFC/semente), média (10A4 UFC/semente), baixa (10A3 UFC/semente). Cada vaso foi preenchido com 600 mL de seu respectivo solo, regado com 200 mL de água e, em seguida, nove sementes foram semeadas uniformemente em cada vaso (em um padrão 3x3). O solo foi então coberto sobre as sementes (profundidade de plantio média estimada de 1 polegada) e um adicional de 110 mL de água foi adicionado para umedecer o substrato de solo sobreposto. O design experimental exigiu um padrão completamente aleatório de cada tratamento dentro de cada bloco/réplica. As condições ambientais foram definidas no fotoperíodo de 12h, na temperatura de 22/18C durante o período diurno/noturno e a intensidade da luz foi definida a 650 μMol m-2 s-1. Após o plantio, as sementes cultivadas em condições normais de irrigação foram regadas para manter aproximadamente 80% da capacidade do solo e as sementes cultivadas em condições de seca foram regadas para manter aproximadamente 40% da capacidade do solo. O tecido acima do solo foi colhido do experimento três semanas após o plantio. Os tecidos dos tratamentos individuais (vasos) foram reunidos e colocados em um saco de papel sem forro. Todos os tecidos foram secos num forno a 85°C durante 3 dias. Depois de completamente seca, a biomassa de broto das repetições de tratamento individual (vasos) foi pesada e registrada.Tabela 14. Tratamentos de endófitos associados ao aumento da biomassa de broto seco em condições normais de irrigação em relação à formulação para soja tratada com endófitos

Arroz

[0390] Um substrato de crescimento de barro arenoso foi misturado na estufa e consistia em 60% de argila peneirada e 40% de argamassa de areia (Northeast Nursery, Peabody, MA). Antes da mistura, o barro foi peneirado através de uma peneira de malha quadrada de 3/8 polegadas para remover partículas e detritos maiores.

[0391] Sementes tratadas com endófitos e sementes de controle (sem endófitos) preparadas no Exemplo 26 foram plantadas em uma experiência em sala de crescimento. Para cada tratamento ou controle, 20 réplicas foram preparadas como se segue. Cada vaso foi preenchido com 600 mL de solo, regado com 200 mL de água e, em seguida, seis sementes foram semeadas uniformemente em duas linhas (em um padrão 2x3). O solo foi então coberto sobre as sementes (profundidade de plantio média estimada de 0,5 polegadas) e um adicional de 100 mL de água foi adicionado para umedecer o substrato sobreposto. O design experimental exigiu um padrão completamente aleatório de cada tratamento dentro de cada bloco/réplica. As condições ambientais foram definidas no fotoperíodo de 12h, na temperatura de 22/18C durante o período diurno/noturno e a intensidade da luz foi definida a 650 μMol m-2 s-1. Após o plantio, as sementes foram regadas com 200 mL de água em dias alternados. Os vasos foram diluídos para 3 mudas aproximadamente 9 dias após o plantio.

[0392] A emergência foi registrada nos dias 4, 5, 7, 8 e 9 dias após o plantio, com os dias 4 e 5 representando a porcentagem de emergência precoce e o dia 9 representando a porcentagem de emergência final. O tecido acima do solo foi colhido do experimento três semanas após o plantio. Os tecidos dos tratamentos individuais (vasos) foram reunidos e colocados em um saco de papel sem forro. Todos os tecidos foram secos num forno a 85°C durante 3 dias. Depois de completamente seca, a biomassa de broto das repetições de tratamento individual (vasos) foi pesada e registrada.Tabela 15. São mostradas a biomassa seca média (g) de sementes tratadas com Flo Rite® Tabela 16. São mostradas a biomassa seca média (g) de sementes não tratadas com Flo Rite®

Exemplo 8: Formulação à Base de Óleo de Tratamentos com Sementes de Endófitos

[0393] As composições de endófitos foram geradas compreendendo um óleo rico em ácido erúcico, um surfactante não iônico e um polímero de plantabilidade. MIC-31593 e MIC-33414 foram preparados em três formulações diferentes (A_2, B_2, C_2) e MIC-96038 foi preparado na formulação A_1, descrita na Tabela 15.Tabela 17. Componentes de composições de endófito, volumes por 50 g de semente

Exemplo 9. Avaliação do Vigor no Experimento com Estufa 2 Trigo

[0394] Inóculos de endófitos, conforme preparado no Exemplo 5, foram aplicados a sementes de trigo que não haviam sido previamente tratadas com inseticida ou fungicida químico. As sementes tratadas com endófitos foram preparadas em 5 doses-alvo: 10A1, 10A2, 10A3, 10A4, 10A5 UFC/semente. Dez réplicas biológicas cada foram plantadas para cada condição de tratamento e controle (sem endófitos) em recipientes individuais contendo meios de envasamento comerciais.

[0395] A emergência foi registrada aos 7 dias após o plantio e a altura da planta (cm) pontuada aos 7, 14, 21 e 28 dias após o plantio. O tecido acima e abaixo do solo foi colhido do experimento quatro semanas após o plantio. O peso fresco das raízes e brotos foi registrado e, em seguida, as amostras foram secas em um forno a 85°C durante 3 dias. Depois de completamente seca, a biomassa de raíz e broto foi pesada e registrada.Tabela 18. Porcentagem de germinação, altura e peso das plantas dos controles de formulação de trigo tratados com endófitos. DAP = Dias após o plantio Tabela 19. Variação percentual sobre o controle da formulação da porcentagem de germinação, altura e peso da planta no trigo tratado com endófitos. DAP = Dias após o plantio

Arroz

[0396] Inóculos de endófitos, conforme preparado no Exemplo 4, foram aplicados a sementes de arroz que não haviam sido previamente tratadas com inseticida ou fungicida químico. As sementes tratadas com endófitos foram preparadas em 5 doses-alvo: 10A1, 10A2, 10A3, 10A4, 10A5 UFC/semente. Dez réplicas biológicas cada foram plantadas para cada condição de tratamento e controle (sem endófitos) em recipientes individuais contendo meios de envasamento comerciais.

[0397] A emergência foi registrada aos 7 dias após o plantio e a altura da planta (cm) pontuada aos 7, 14, 21 e 28 dias após o plantio. O tecido acima e abaixo do solo foi colhido do experimento quatro semanas após o plantio. O peso fresco das raízes e brotos foi registrado e, em seguida, as amostras foram secas em um forno a 85°C durante 3 dias. Depois de completamente seca, a biomassa de raiz e broto foi pesada e registrada.Tabela 20. Porcentagem de germinação, altura e peso das plantas dos controles de formulação de arroz tratados com endófitos. DAP = Dias após o plantio Tabela 21. Variação percentual sobre o controle da formulação da porcentagem de germinação, altura e peso da planta no arroz tratado com endófitos. DAP = Dias após o plantio

Exemplo 10: Cultivo de Plantas Tratadas com Endófitos no Experimento com Estufa 2

[0398] Um substrato de crescimento de barro arenoso foi misturado na estufa e consistia em 60% de argila e 40% de argamassa de areia (Northeast Nursery, Peabody, MA). Antes da mistura, o barro foi peneirado através de uma peneira de malha quadrada de 3/8” para remover partículas e detritos maiores. As sementes de soja foram tratadas com tratamento fungicida e inseticida comercial CruiserMaxx® Vibrance (Syngenta, Basel, Suíça) de acordo com as instruções do fabricante. As sementes foram dispostas heterologamente com as formulações de endófito e o controle da formulação (sem qualquer endófito), como descrito no Exemplo 14, sementes sem tratamento (falta de formulação e endófito) foram também plantadas. Cada vaso foi preenchido com 600 mL de seu respectivo solo, regado com 200 mL de água e, em seguida, nove sementes foram semeadas uniformemente em cada vaso (em um padrão 3x3). O solo foi então coberto sobre as sementes (profundidade de plantio média estimada de 1 polegada) e um adicional de 110 mL de água foi adicionado para umedecer o substrato de solo sobreposto. O design experimental exigiu um padrão completamente aleatório de cada tratamento dentro de cada bloco/réplica. As condições ambientais foram definidas no fotoperíodo de 12h, na temperatura de 22/18C durante o período diurno/noturno e a intensidade da luz foi definida a 650 μMol m-2 s-1. Após o plantio, as sementes foram regadas para manter aproximadamente 80% da capacidade do solo. O tecido acima do solo foi colhido do experimento três semanas após o plantio. Os tecidos dos tratamentos individuais (vasos) foram reunidos e colocados em um saco de papel sem forro. Todos os tecidos foram secos num forno a 85°C durante 3 dias. Depois de completamente seca, a biomassa de broto das repetições de tratamento individual (vasos) foi pesada e registrada.

Resultados

[0399] Todas as formulações testadas em soja resultaram em uma mudança de menos de 5% na biomassa de broto seco. A formulação C2 era neutra (-0,09%). As formulações A2 e A4 tiveram um leve efeito negativo na biomassa do broto seco (-3,57% e -1,8%, respectivamente). A diferença entre a formulação que teve um leve efeito benéfico (B_2) e um leve efeito negativo (A_2) estava nos concentradores de óleo e Triton X-100. O MIC-31593 teve o melhor desempenho geral com as formulações testadas nessa experiência; o maior efeito foi observado com “B_2 dose baixa”, “A2 dose média” e “C_2 dose baixa”, nessa ordem, com um aumento da biomassa de broto seco em 6,9%, 6,87% e 5,26%; respectivamente, comparado ao controle. O MIC-33414 demonstrou o maior efeito positivo quando emparelhado com a Formulação C_2 em “dose média”, seguido de “A_2 dose média”, “A_2 dose alta” e “A_2 dose baixa”, nessa ordem de magnitude, com um aumento da biomassa de broto seco em 6,52%, 5,27% e 3,96% e 3,23; respectivamente, comparado ao controle não tratado. O MIC-96038 emparelhado com a Formulação A_f1, exibiu um ligeiro aumento na biomassa nas doses Alta e Baixa (2,05% e 4,25%, respectivamente).Tabela 22. Biomassa de broto seco de soja tratada com endófitos cultivada em solo de barro arenoso, usando três formulações diferentes

Exemplo 11: Cultivo de Plantas Tratadas com Endófitos no Experimento com Estufa 3

[0400] Um substrato de crescimento de barro arenoso foi misturado na estufa e consistia em 60% de argila e 40% de argamassa de areia (Northeast Nursery, Peabody, MA). Antes da mistura, o barro foi peneirado através de uma peneira de malha quadrada de 3/8” para remover partículas e detritos maiores. As sementes de soja foram tratadas com tratamento fungicida e inseticida comercial CruiserMaxx® Vibrance (Syngenta, Basel, Suíça) de acordo com as instruções do fabricante. As sementes foram dispostas heterologamente com as formulações de endófito e o controle da formulação (sem qualquer endófito), como descrito no Exemplo 11, sementes sem tratamento (falta de formulação e endófito) foram também plantadas. Os tratamentos com endófitos foram aplicados às sementes em duas doses-alvo: alta (10A5 UFC/semente), média (10A4 UFC/semente). Cada vaso foi preenchido com 600 mL de seu respectivo solo, regado com 200 mL de água e, em seguida, nove sementes foram semeadas uniformemente em cada vaso (em um padrão 3x3). O solo foi então coberto sobre as sementes (profundidade de plantio média estimada de 1 polegada) e um adicional de 110 mL de água foi adicionado para umedecer o substrato de solo sobreposto. O design experimental exigiu um padrão completamente aleatório de cada tratamento dentro de cada bloco/réplica. As condições ambientais foram definidas no fotoperíodo de 12h, na temperatura de 22/18C durante o período diurno/noturno e a intensidade da luz foi definida a 650 μMol m-2 s-1. Após o plantio, as sementes cultivadas em condições normais de irrigação foram regadas para manter aproximadamente 80% da capacidade do solo e as sementes cultivadas em condições de seca foram regadas para manter aproximadamente 40% da capacidade do solo. O tecido acima do solo foi colhido do experimento três semanas após o plantio. Os tecidos dos tratamentos individuais (vasos) foram reunidos e colocados em um saco de papel sem forro. Todos os tecidos foram secos num forno a 85°C durante 3 dias. Depois de completamente seca, a biomassa de broto das repetições de tratamento individual (vasos) foi pesada e registrada.Tabela 23. Biomassa seca de broto de mudas de trigo tratadas com endófitos cultivadas em solo de barro arenoso sob condições normais

Exemplo 12. Métodos de Preparação de Biomassa Fúngica e Tratamento de Sementes para Experiências de Campo Preparação de endófitos fúngicos

[0401] Preparação do caldo de melaço e ágar de batata dextrose: O caldo de melaço foi preparado dissolvendo 30 g de melaço e 5 g de extrato de levedura por litro de água deionizada em um recipiente autoclavável e autoclavando-o (15 psi, 121°C) por 45 min. As placas de ágar de batata dextrose (PDA) foram preparadas dissolvendo 39,0 g de PDA em pó por litro de água deionizada em um recipiente autoclavável e autoclavando-o (15 psi, 121°C) por 45 min. Deixou-se o agar arrefecer a 50-60°C, antes de se vertê-lo em placas de petri estéreis (30 mL por placa de 90 mm).

[0402] Biomassa líquida: Todos os equipamentos e consumíveis foram completamente esterilizados e os procedimentos realizados em um gabinete de biossegurança. O inoculante é preparado colocando-se 1 tampão de um material criopreservado em uma placa PDA fresca, vedando-se a placa com Parafilm® e incubando-a à temperatura ambiente no escuro por 5 a 10 dias. Em seguida, os tampões de ~5x5 mm foram cortados das placas PDA e os 10-12 tampões foram transferidos para frascos contendo o caldo de melaço estéril, depois cobertos, fixados em um agitador e incubados por pelo menos 10 dias com agitação a ~130 rpm. Em seguida, a cultura foi colocada em um liquidificador por 5 segundos e 1 mL da mistura foi centrifugado e o sobrenadante foi descartado e o sedimento ressuspenso em 0,5 mL de solução salina tamponada com fosfato (PBS) 1x para gerar inóculo.

[0403] Biomassa seca: Todos os equipamentos e consumíveis foram completamente esterilizados e os procedimentos realizados em um armário de biossegurança. O inoculante é preparado colocando-se 1 tampão de um material criopreservado em uma placa PDA fresca, vedando-se a placa com Parafilm® e incubando-a à temperatura ambiente no escuro por 5 a 10 dias. Em seguida, os tampões de ~5x5 mm foram cortados das placas PDA e os 10-12 tampões foram transferidos para frascos contendo o caldo de melaço estéril, depois cobertos, fixados em um agitador e incubados por pelo menos 10 dias com agitação a ~130 rpm. Em condições estéreis, a cultura líquida foi cuidadosamente decantada usando papel de filtro estéril de 150 mm num funil de Buchner esterilizado sobre um frasco estéril. Depois de todo o líquido ter passado pelo funil, o sedimento foi lavado com água estéril até o filtrado ficar limpo. Quando seco, o sedimento foi transferido para um armário de secagem e secado até se tornar frágil. O sedimento foi então moído em pó fino e a amostra usada para gerar contagens de UFC. Preparação de alginato de sódio e talco para tratamentos de sementes

[0404] Uma solução de alginato de sódio a 2% em peso/volume para os revestimentos de sementes é preparada pelo método a seguir. Um balão de Erlenmeyer é enchido com o volume apropriado de água deionizada e aquecido a 50 graus Celsius em uma chapa aquecedora com agitação usando uma barra de agitação. A massa apropriada de pó de alginato de sódio para a solução de concentração final desejada é lentamente adicionada até se dissolver. A solução é autoclavada a 121 graus Celsius a 15 PSI por 30 minutos para esterilizar.

[0405] O pó de talco para os revestimentos de sementes em pó é preparado pelo método seguinte. O pó de talco é aliquotado em sacos Ziploc ou tubos falcon de 50 mL, e autoclavado em ciclo seco (121 graus Celsius a 15 PSI durante 30 minutos) para esterilizar.

[0406] As sementes foram dispostas heterologamente a cada endófito de acordo com o seguinte protocolo de tratamento.

[0407] Formulação líquida: A solução de alginato de sódio a 2% preparada acima adicionada às sementes a uma taxa de 15 ml por kg de sementes. A cultura fúngica líquida como preparada no Exemplo 10 foi adicionada às sementes a uma taxa de 8,3 ml por kg de sementes. Os tratamentos de controle foram preparados usando volumes equivalentes de caldo estéril. As sementes foram então agitadas para dispersar a solução uniformemente nas sementes.

[0408] Em seguida, 12,5 g de pó de talco por kg de semente foram adicionados e as sementes foram agitadas para dispersar uniformemente o pó nas sementes. Em seguida, foram adicionados 17 ml por kg de semente de Flo-Rite® 1706 (BASF, Ludwigshafen, Alemanha) e as sementes foram agitadas para dispersar o pó uniformemente nas sementes. A concentração final de endófito foi estimada em pelo menos 10A4 UFC. As sementes tratadas foram deixadas secar durante a noite em um espaço bem ventilado antes do plantio.

[0409] Formulação seca: A solução de alginato de sódio a 2% preparada acima foi adicionada às sementes a uma taxa de 20 ml por kg de sementes. Partes iguais do pó do fungo preparada e o talco preparado acima foram misturadas. A solução é aplicada às sementes preparadas de modo que um equivalente de 12,5 g de pó de fungos seja aplicado por kg de sementes. Os tratamentos de controle foram preparados usando volumes equivalentes de talco. As sementes foram então agitadas para dispersar a solução uniformemente nas sementes.

[0410] Em seguida, foram adicionados 17 ml por kg de semente de Flo-Rite® 1706 (BASF, Ludwigshafen, Alemanha) e as sementes foram agitadas para dispersar o pó uniformemente nas sementes. A concentração final de endófito foi estimada em pelo menos 10A4 UFC. As sementes tratadas foram deixadas secar durante a noite em um espaço bem ventilado antes do plantio.

Disposição heteróloga de endófitos em sementes de soja ou amendoim

[0411] As sementes foram dispostas heterologamente a cada endófito de acordo com o seguinte protocolo de tratamento.

[0412] Formulação líquida: A solução de alginato de sódio a 2% preparada no Exemplo 10 foi adicionada às sementes a uma taxa de 8,3 ml por kg de sementes. A cultura fúngica líquida como preparada no Exemplo 9 foi adicionada às sementes a uma taxa de 8,3 ml por kg de sementes. Os tratamentos de controle foram preparados usando volumes equivalentes de caldo estéril. As sementes foram então agitadas para dispersar a solução uniformemente nas sementes.

[0413] Então, foram adicionados 15 g por kg de semente do pó de talco preparado no Exemplo 10 e as sementes foram agitadas para dispersar o pó uniformemente nas sementes. Em seguida, foram adicionados 13,3 ml por kg de semente de Flo-Rite® 1706 (BASF, Ludwigshafen, Alemanha) e as sementes foram agitadas para dispersar o pó uniformemente nas sementes. A concentração final de endófito foi estimada em pelo menos 10A4 UFC. As sementes tratadas foram deixadas secar durante a noite em um espaço bem ventilado antes do plantio.

[0414] Formulação seca: A solução de alginato de sódio a 2% preparada no Exemplo 10 foi adicionada às sementes a uma taxa de 16,6 ml por kg de sementes. Partes iguais do pó do fungo preparada no Exemplo 9 e o talco preparado no Exemplo 10 foram misturadas. A solução foi aplicada de modo que um equivalente de 10 g de pó fúngico foram aplicados por kg de sementes. Os tratamentos de controle foram preparados usando volumes equivalentes de talco. As sementes foram então agitadas para dispersar a solução uniformemente nas sementes.

[0415] Em seguida, foram adicionados 13,3 ml por kg de semente de FloRite® 1706 (BASF, Ludwigshafen, Alemanha) e as sementes foram agitadas para dispersar o pó uniformemente nas sementes. A concentração final de endófito foi estimada em pelo menos 10A4 UFC. As sementes tratadas foram deixadas secar durante a noite em um espaço bem ventilado antes do plantio.

Disposição heteróloga de endófitos em sementes de milho

[0416] As sementes foram dispostas heterologamente a cada endófito de acordo com o seguinte protocolo de tratamento.

[0417] Formulação seca: A solução de alginato de sódio a 2% preparada conforme acima foi adicionada às sementes a uma taxa de 23 ml por kg de sementes. Partes iguais do pó do fungo e do talco conforme preparadas acima foram misturadas. A solução foi aplicada de modo que um equivalente de 10 g de pó fúngico foram aplicados por kg de sementes. Os tratamentos de controle foram preparados usando volumes equivalentes de talco. As sementes foram então agitadas para dispersar a solução uniformemente nas sementes.

[0418] Em seguida, foram adicionados 16,6 ml por kg de semente de FloRite® 1706 (BASF, Ludwigshafen, Alemanha) e as sementes foram agitadas para dispersar o pó uniformemente nas sementes. A concentração final de endófito foi estimada em pelo menos 10A4 UFC. As sementes tratadas foram deixadas secar durante a noite em um espaço bem ventilado antes do plantio.

Disposição heteróloga de endófitos em arroz

[0419] As sementes foram tratadas com o produto fungicida e inseticida comercial Sativa® IMF MAX (Nufarm Americas, Alsip, IL) de acordo com as instruções do fabricante (3,4 oz/cwt). As sementes de arroz tratadas quimicamente foram dispostas heterologicamente para cada endófito de acordo com um dos dois protocolos de formulação diferentes (Protocolo de Formulação A, Protocolo de Formulação B). Também foi preparado um controle de formulação de sementes correspondente, sem qualquer endófito, para cada tipo de formulação. Sementes adicionais sem qualquer formulação e endófito foram plantadas como um controle de linha de base não tratado. A Formulação A incluiu apenas preparações diluentes a 0,05% de silwet e microbianas. A Formulação B incluiu o mesmo diluente e o polímero de plantabilidade de sementes Flo Rite® 1706 aplicado a 2,0 oz/cwt de sementes pelo fabricante. Micróbio e polímero foram aplicados sequencialmente.

[0420] Para endófitos formulados pelo Protocolo de Formulação A, foram aplicadas preparações microbianas às sementes a uma taxa de 1 μL/semente e as sementes foram agitadas por pelo menos 20 segundos para dispersar o micróbio.

[0421] Para os endófitos formulados pelo Protocolo de Formulação B, foram aplicadas preparações microbianas às sementes a uma taxa de 1 μL/semente. Em seguida, o polímero de plantabilidade Flo Rite® 1706 foi aplicado às sementes por sugestão do fabricante (2,0 oz/cwt de semente) e agitado por 20 segundos para dispersar o polímero.

Exemplo 13: Cultivo de Plantas Tratadas com Endófitos em Experimento de Campo 1 Ensaio do rendimento de sementes em condições de campo, soja

[0422] Os ensaios de campo foram conduzidos sob condições não irrigadas (terras secas) em múltiplos locais, preferencialmente em diversas regiões geográficas. As sementes foram preparadas com as formulações de endófito, conforme descrito no Exemplo 12 e sementes não tratadas (falta de formulação e endófito) foram também plantadas. No final do ensaio de campo, empregando tratamento com endófitos e plantas de tratamento de controle, os lotes foram colhidos à máquina com uma combinação de pesquisa de 5 pés e o rendimento foi calculado pelo computador de bordo. Somente as duas fileiras do meio das quatro fileiras foram colhidas para apresentar efeitos de borda. As sementes foram semeadas em fileiras regularmente espaçadas no solo, com uma densidade de 40.000 de sementes/acres. Em cada local, pelo menos 3 lotes replicados foram plantados por tratamento com endófito ou controle em um design de blocos completos randomizados. Cada lote consistia em quatro fileiras de 15,24 m (40 pés), cada uma separada por 76,2 cm (30 polegadas).

[0423] No final do ensaio de campo, empregando tratamento com endófitos e plantas de tratamento de controle, os lotes foram colhidos à máquina com uma combinação de pesquisa de 5 pés e o rendimento foi calculado pelo computador de bordo. Somente as duas fileiras do meio das quatro fileiras foram colhidas para prevenir efeitos de borda.Tabela 24. Rendimento de soja tratada com endófito tratado e não tratado e controles de formulação, Experimento de Campo 1

Ensaio do rendimento de sementes em condições de campo, trigo

[0424] Os ensaios de campo foram conduzidos sob condições não irrigadas (terras secas) em múltiplos locais, preferencialmente em diversas regiões geográficas. Sementes de trigo foram tratadas com fungicida comercial e tratamento inseticida. As sementes foram dispostas heterologamente com as formulações de endófito descritas acima no Exemplo 12 e sementes não tratadas (falta de formulação e endófito) foram também plantadas. As sementes foram semeadas em fileiras regularmente espaçadas no solo, com uma densidade de 1,2 milhões de sementes/acres. Em cada local, pelo menos 3 lotes replicados foram plantados para cada tratamento com endófito ou controle em um design de blocos completos randomizados. Cada lote consistia em sete fileiras de 15,24 m (40 pés).

[0425] No final do ensaio de campo, empregando tratamento com endófitos e plantas de tratamento de controle, os lotes foram colhidos à máquina com uma combinação de pesquisa de 5 pés e o rendimento foi calculado pelo computador de bordo.Tabela 25. Rendimento médio por local de trigo de primavera tratado com endófito e de controle de formulação e controle não tratado, Experimento de Campo 1Tabela 26. Rendimento médio por variedade de planta de trigo de primavera tratado com endófito e de controle de formulação e controle não tratado, Experimento de Campo 1

Ensaio do rendimento de sementes em condições de campo, Arroz

[0426] As sementes foram preparadas com as formulações de endófito e o controle de formulação (sem nenhum endófito) como descrito no Exemplo 12. As sementes foram semeadas com uma broca de grãos dimensionados de pesquisa a uma taxa de plantio de 45 libras por acre. Quatro lotes replicados de 30x175 pés foram plantados por tratamento com endófito ou controle em um design de blocos completos randomizados. Os lotes foram inundados, as ervas daninhas e os insetos foram controlados com práticas padrão locais.

[0427] No final do ensaio de campo, empregando tratamento com endófitos e plantas de tratamento de controle, os lotes foram colhidos à máquina com uma combinação de pesquisa de 5 pés e o rendimento foi calculado pelo computador de bordo.Tabela 27. Rendimento de arroz endófito tratado e não tratado e controles, Experimento de Campo 1

Exemplo 14: Cultivo de Plantas Tratadas com Endófitos em Experimento de Campo 2 Ensaio do rendimento de sementes em condições de campo, trigo

[0428] Os ensaios de campo foram conduzidos sob condições não irrigadas (terras secas). Duas variedades de sementes de trigo da primavera foram tratadas com fungicida comercial e tratamento inseticida. As sementes foram dispostas heterologamente com as formulações de endófito e o controle da formulação (sem qualquer endófito), como descrito no Exemplo 12, sementes sem tratamento (falta de formulação e endófito) foram também plantadas. As sementes foram semeadas em fileiras regularmente espaçadas no solo, com uma densidade de 1,2 milhões de sementes/acres. Em cada local, lotes replicados foram plantados para cada tratamento com endófito ou controle em um design de blocos completos randomizados. Cada lote consistia em sete fileiras de 15,24 m (40 pés).

[0429] No final do ensaio de campo, empregando tratamento com endófitos e plantas de tratamento de controle, os lotes foram colhidos à máquina com uma combinação de pesquisa de 5 pés e o rendimento e a umidade por cento do grão foram calculados pelo computador de bordo.Tabela 28. Percentual de emergência por local de trigo de primavera tratado com endófito e controle não tratado e controle de formulação, Experimento de Campo 2Tabela 29. Umidade de grãos por local de trigo de primavera tratado com endófito e controle não tratado e controle de formulação, Experimento de Campo 2Tabela 30. Percentual de proteína por local de trigo de primavera tratado com endófito e controle não tratado e controle de formulação, Experimento de Campo 2 Tabela 31. Rendimento por local de trigo de primavera tratado com endófito e controle não tratado e controle de formulação, Experimento de Campo 2

Exemplo 15. Cultivo de Plantas Tratadas com Endófitos em Experimento de Campo 3

[0430] Os ensaios de campo foram conduzidos em 2016, sob condições não irrigadas (terras secas). Sementes de trigo foram tratadas com fungicida comercial e tratamento inseticida. As sementes foram dispostas heterologamente com as formulações de endófito e o controle da formulação (sem qualquer endófito), como descrito no Exemplo 12, sementes sem tratamento (falta de formulação e endófito) foram também plantadas. As sementes foram semeadas em fileiras regularmente espaçadas no solo, com uma densidade de 1,2 milhões de sementes/acres. Em cada local, lotes replicados foram plantados para cada tratamento com endófito ou controle em um design de blocos completos randomizados. Cada lote consistia em sete fileiras de 15,24 m (40 pés).

[0431] No final do ensaio de campo, empregando tratamento com endófitos e plantas de tratamento de controle, os lotes foram colhidos à máquina com uma combinação de pesquisa de 5 pés e o rendimento foi calculado pelo computador de bordo.Tabela 32. Rendimento por local de trigo tratado com endófito e controle não tratado e controle de formulação, experimento de campo 3

Exemplo 16. Avaliação das Características da Planta Melhorada: Condições de Campo Ensaio do rendimento de sementes em condições de campo, trigo

[0432] Os ensaios de campo foram conduzidos sob condições não irrigadas (terras secas) em múltiplos locais, preferencialmente em diversas regiões geográficas. Sementes de trigo foram tratadas com fungicida comercial e tratamento inseticida. As sementes foram dispostas heterologamente com as formulações de endófito seco conforme descrito no Exemplo 12 e sementes não tratadas (falta de formulação e endófito) foram também plantadas. As sementes foram semeadas em fileiras regularmente espaçadas no solo, com uma densidade de 1,2 milhões de sementes/acres. Em cada local, pelo menos 3 lotes replicados foram plantados para cada tratamento com endófito ou controle em um design de blocos completos randomizados. Cada lote consistia em sete fileiras de 15,24 m (40 pés).

[0433] No final do ensaio de campo, empregando tratamento com endófitos e plantas de tratamento de controle, os lotes foram colhidos à máquina com uma combinação de pesquisa de 5 pés e o rendimento foi calculado pelo computador de bordo.

[0434] Os tratamentos de endófitos, cada um compreendendo um dos seguintes micróbios: MIC-68390, MIC-68178, MIC-07010, MIC-31593, MIC-48747, MIC-96038, MIC-50414 ou MIC-33414 , resultaram em aumentos médios no rendimento de 7-16% na variedade de trigo SDSU Focus. Os tratamentos de endófitos, cada um compreendendo um dos seguintes micróbios: MIC-68390, MIC68178, MIC-07010, MIC-31593, MIC-48747, MIC-96038, MIC-50414 ou MIC33414, resultaram em aumentos médios no rendimento de 14-22% na variedade de trigo SDSU Select.Tabela 33: Rendimento médio do trigo tratado com endófitos em ensaios de campo

Ensaio do rendimento de sementes em condições de campo, milho

[0435] Os ensaios de campo foram conduzidos em múltiplos locais, preferencialmente em diversas regiões geográficas. Os lotes de terra não eram irrigados (terras secas) ou eram mantidos com irrigação abaixo do ideal a uma taxa que visava uma redução de aproximadamente 25% no rendimento. As sementes foram preparadas com as formulações (secas) de endófito e o controle da formulação (seco, sem qualquer endófito), como descrito no Exemplo 12, sementes sem tratamento (falta de formulação e endófito) foram também plantadas. As sementes foram semeadas em fileiras espaçadas regularmente no solo em densidades de plantio típicas para cada região. Em cada local, 3 lotes replicados foram plantados por tratamento com endófito ou controle em um design de blocos completos randomizados. Cada lote consistia em quatro fileiras de 15,24 m (40 pés), cada uma separada por 76,2 cm (30 polegadas).

[0436] No final do ensaio de campo, empregando tratamento com endófitos e plantas de tratamento de controle, os lotes foram colhidos à máquina com uma combinação de pesquisa de 5 pés e o rendimento foi calculado pelo computador de bordo. Somente as duas fileiras do meio das quatro fileiras foram colhidas para prevenir efeitos de borda.

[0437] Os tratamentos com endófitos, cada um compreendendo um dos seguintes micróbios: MIC-68390, MIC-48747, ou MIC-33414, resultaram em aumentos médios no rendimento de 0,9-1,5% em relação ao controle da formulação e em aumentos médios no rendimento de 1,0-1,6% em relação ao controle não tratado, na variedade de milho Stine 9734.Tabela 34: Rendimento médio da variedade de milho Stine 9734 tratado com endófitos em ensaios de campo

Ensaio do rendimento de sementes em condições de campo, soja

[0438] Os ensaios de campo foram conduzidos sob condições não irrigadas (terras secas) em múltiplos locais, preferencialmente em diversas regiões geográficas. As sementes foram preparadas com as formulações de endófito, conforme descrito no Exemplo 12 e sementes não tratadas (falta de formulação e endófito) foram também plantadas. MIC-68178 e MIC-33414 foram formulados com a formulação seca; MIC-68390, MIC-07010, MIC-31593, MIC-48747, MIC-96038, e MIC-50414 foram formulados com a formulação líquida.

[0439] As sementes foram semeadas em fileiras regularmente espaçadas no solo, com uma densidade de 40.000 de sementes/acres. Em cada local, pelo menos 3 lotes replicados foram plantados por tratamento com endófito ou controle em um design de blocos completos randomizados. Cada lote consistia em quatro fileiras de 15,24 m (40 pés), cada uma separada por 76,2 cm (30 polegadas).

[0440] No final do ensaio de campo, empregando tratamento com endófitos e plantas de tratamento de controle, os lotes foram colhidos à máquina com uma combinação de pesquisa de 5 pés e o rendimento foi calculado pelo computador de bordo. Somente as duas fileiras do meio das quatro fileiras foram colhidas para prevenir efeitos de borda.

[0441] Os tratamentos com endófitos, cada um compreendendo um dos seguintes micróbios: MIC-68390 MIC-31593, ou MIC-33414, resultaram em aumentos médios no rendimento de 1,5-6,2% na variedade de soja Dairyland DSR1808R2Y. Os tratamentos com endófitos, cada um compreendendo um dos seguintes micróbios: MIC-68390, MIC-31593, ou MIC-33414, resultaram em aumentos médios no rendimento de 1,5-6,2% na variedade de soja Dairyland DSR1808R2Y. Os tratamentos de endófitos, cada um compreendendo um dos seguintes micróbios: MIC-68390, MIC-68178, MIC-07010, MIC-31593, MIC-48747, MIC-96038, MIC-50414, ou MIC-33414, resultaram em aumentos médios em rendimento de 2,5-15% na variedade de soja Pfister 38R25. Os tratamentos de endófitos, cada um compreendendo um dos seguintes micróbios: MIC-68390, MIC68178, MIC-07010, MIC-31593, MIC-48747, MIC-50414, ou MIC-33414, resultaram em aumentos médios no rendimento de 1,1- 6% na variedade de soja Stine 3920.Tabela 35: Rendimento médio da variedade de soja Dairyland DSR1808R2Y tratada com endófitos em ensaios de campoTabela 36. Rendimento médio da variedade de soja Pfister 38R25 tratada com endófitos em ensaios de campo Tabela 37. Rendimento médio da variedade de soja Stine 3920 tratada com endófitos em ensaios de campo

Ensaio do rendimento de sementes em condições de campo, canola

[0442] Os ensaios de campo foram conduzidos em múltiplos locais, preferencialmente em diversas regiões geográficas. Os lotes de terra não eram irrigados (terras secas) ou eram mantidos com irrigação abaixo do ideal a uma taxa que visava uma redução de aproximadamente 25% no rendimento. Sementes de canola foram tratadas com fungicida comercial e tratamento inseticida. As sementes foram preparadas com as formulações líquidas de endófito e o controle da formulação líquida (sem qualquer endófito), conforme descrito no Exemplo 12 e sementes sem tratamento (falta de formulação e endófito) foram também plantadas. Em cada local, pelo menos 3 lotes replicados foram plantados para cada tratamento com endófito ou controle em um design de blocos completos randomizados.

[0443] No final do ensaio de campo, empregando tratamento com endófitos e plantas de tratamento de controle, os lotes foram colhidos à máquina com uma combinação de pesquisa de 5 pés e o rendimento foi calculado pelo computador de bordo.

[0444] Os tratamentos com endófitos compreendendo MIC-85555 resultaram em um aumento médio no rendimento de 0,3% em relação ao controle da formulação e um aumento médio no rendimento em 0,2% em relação ao controle não tratado, na variedade de canola Brett Young 5525. Os tratamentos com endófitos compreendendo MIC-50989 resultaram em um aumento médio no rendimento de 8,2% em relação ao controle da formulação e um aumento médio no rendimento em 10,3% em relação ao controle não tratado, na variedade de canola NCC1015.Tabela 38. Rendimento médio da variedade de canola Brett Young 5525 tratada com endófitos em ensaios de campoTabela 39. Rendimento médio da variedade de canola NCC1015 tratada com endófitos em ensaios de campo

Ensaio do rendimento de sementes em condições de campo, Amendoim

[0445] Os ensaios de campo foram conduzidos em múltiplos locais, preferencialmente em diversas regiões geográficas. Os lotes de terra não eram irrigados (terras secas) ou eram mantidos com irrigação abaixo do ideal a uma taxa que visava uma redução de aproximadamente 25% no rendimento. Sementes de amendoim foram tratadas com fungicida comercial e tratamento inseticida. As sementes foram preparadas com as formulações de endófito e o controle da formulação (sem qualquer endófito), conforme descrito no Exemplo 12 e sementes sem tratamento (falta de formulação e endófito) foram também plantadas. MIC68390 foi formulado com a formulação seca e líquida; MIC-50414, MIC-68178, e MIC-96038 foram formulados com a formulação líquida. Em cada local, pelo menos 3 lotes replicados foram plantados para cada tratamento com endófito ou controle em um design de blocos completos randomizados.

[0446] No final do ensaio de campo, empregando tratamento com endófitos e plantas de tratamento de controle, os lotes foram colhidos à máquina com uma combinação de pesquisa de 5 pés e o rendimento foi calculado pelo computador de bordo.

[0447] Na formulação seca, os tratamentos com endófitos compreendendo MIC-68390 resultaram em um aumento médio no rendimento de 9,1% em relação ao controle da formulação e um aumento médio no rendimento em 0,7% em relação ao controle não tratado, na variedade de amendoim AT-9899. Na formulação líquida, os tratamentos de endófitos compreendendo MIC-50414 resultaram em um aumento médio no rendimento de 3,8% em relação ao controle da formulação e em um aumento médio no rendimento de 0,7% em relação ao controle não tratado, na variedade de amendoim AT-9899. Na formulação líquida, os tratamentos com endófitos, cada um compreendendo um dos seguintes micróbios: MIC-68390 ou MIC-68178, resultaram em um aumento médio no rendimento de 4,1-4,5% em relação ao controle da formulação e um aumento médio no rendimento de 10,010,5% em relação ao controle não tratado, na variedade de amendoim FloRun 107. No entanto, em formulações secas, os tratamentos com endófitos compreendendo MIC-68390 resultaram em uma diminuição média no rendimento de 6,3% na variedade de amendoim FloRun 107. Na formulação líquida, os tratamentos de endófitos, cada um compreendendo um dos seguintes micróbios: MIC-68390, MIC68178, ou MIC-96038, resultaram em um aumento médio no rendimento de 0,23,6% em relação ao controle da formulação e um aumento médio com rendimento de 6,4-10,0% em relação ao controle não tratado, na variedade de amendoim Georgia-06G. No entanto, em formulações secas, os tratamentos com endófitos compreendendo MIC-68390 resultaram em uma redução média no rendimento de 4,9% na variedade de amendoim Georgia-06G. Na formulação líquida, os tratamentos com endófitos compreendendo MIC-68390 resultaram em um aumento médio no rendimento de 11,2% em relação ao controle da formulação e em um aumento médio no rendimento em 4,9% em relação ao controle não tratado, na variedade de amendoim Tamnut OL06. No entanto, em formulações secas, os tratamentos com endófitos compreendendo MIC-68390 resultaram em uma diminuição média no rendimento de 0,4% na variedade de amendoim Tamnut OL06.Tabela 40. Rendimento médio da variedade de amendoim AT-9899 tratado com endófitos em formulação seca em ensaios de campoTabela 41. Rendimento médio da variedade de amendoim AT-9899 tratado com endófitos em formulação líquida em ensaios de campoTabela 42. Rendimento médio da variedade de amendoim FloRun 107 tratado com endófitos em formulação líquida em ensaios de campoTabela 43. Rendimento médio da variedade de amendoim Georgia-06G tratado com endófitos em formulação líquida em ensaios de campoTabela 44. Rendimento médio da variedade de amendoim Tamnut OL06 tratado com endófitos em formulação líquida em ensaios de campo

Exemplo 17. Identificação de variantes de sequência entre os genes principais

[0448] A análise filogenômica de sequências genômicas inteiras de endófitos pode ser usada para identificar variantes de sequência distintivas. Conjuntos de genes adequados para análise filogenômica, bem como métodos para identificá-los, são bem conhecidos na técnica, por exemplo Floutas et al. (2012) The Paleozoic origin of enzymatic lignin decomposition reconstructed from 31 fungal genomes. Science, 336(6089):1715-9. doi: 10.1126/science.1221748 e James TY, Pelin A, Bonen L, Ahrendt S, Sain D, Corradi N, Stajich JE. Shared signatures of parasitism and phylogenomics unite Cryptomycota and microsporidia. Curr Biol. 2013;23(16):1548-53. doi: 10.1016/j.cub.2013.06.057. Os genes ortólogos ao conjunto de referências são identificados em bancos de dados de proteínas derivadas do genoma de cada espécie. Os genes ortólogos podem ser identificados nos genomas usando métodos bem conhecidos, incluindo os melhores hits recíprocos (Ward N, Moreno- Hagelsieb G. Quickly Finding Orthologs as Reciprocal Best Hits with BLAT, LAST, and UBLAST: How Much Do We Miss? de Crécy-Lagard V, ed. PLoS ONE. 2014;9(7):e101850. doi:10.1371/journal.pone.0101850) e Modelos de Markov Ocultos (HMMs). Os melhores hits são extraídos e um alinhamento de múltiplas sequências é gerado para cada conjunto de genes ortólogos. Os alinhamentos são usados para construir árvores filogenéticas usando métodos bem conhecidos na técnica, incluindo inferência bayesiana e métodos de máxima verossimilhança, por exemplo, usando ferramentas de software MrBayes (Huelsenbeck, J.P. & Ronquist (2001) MRBAYES: Bayesian inference of phylogenetic trees. Bioinformatics, 17 (8): 754-755) e RAxML (Stamatakis, A. (2014) RAxML version 8: a tool for phylogenetic analysis and post-analysis of large phylogenies. Bioinformatics, 30 (9): 1312-1313. doi: 10.1093/bioinformatics/btu033). Variantes de sequências que distinguem entre espécies intimamente relacionadas são identificadas.

Exemplo 18. Identificação de genes únicos em um endófito de interesse

[0449] A análise do genoma completo de endófitos pode ser usada para identificar genes cuja presença, ausência ou supra ou subrepresentação (“abundância diferencial”) está associada a fenótipos desejáveis. Para identificar genes com abundância diferencial no genoma de um endófito de interesse, sequências de proteínas previstas a partir dos genomas do endófito e espécies intimamente relacionadas são comparadas em uma comparação de par em par de todos com todos (por exemplo, usando BLAST), seguida de clusterização das sequências de proteínas com base em pontuações de alinhamento (por exemplo, usando MCL: Enright A.J., Van Dongen S., Ouzounis C.A. An efficient algorithm for large-scale detection of protein families. Nucleic Acids Research 30(7):1575-1584 (2002)). As ferramentas de software adicionais úteis para esta análise são bem conhecidas na técnica e incluem OMA, OrthoMCL e TribeMCL (Roth AC, Gonnet GH, Dessimoz C. Algorithm of OMA for large-scale orthology inference. BMC Bioinformatics. 2008;9:518. doi: 10.1186/1471-2105-9-518, Enright AJ, Kunin V, Ouzounis CA. Protein families and TRIBES in genome sequence space. Nucleic Acids Res. 2003;31(15):4632-8.; Chen F, Mackey AJ, Vermunt JK, Roos DS. Assessing performance of orthology detection strategies applied to eukaryotic genomes. PLoS One. 2007;2(4):e383.). Os clusters de proteínas são consultados para identificar aglomerados com abundância diferencial de proteínas derivadas de endófitos com fenótipos desejáveis. As proteínas destes clusters definem as propriedades únicas destes endófitos, e a abundância de genes que codificam estas proteínas pode ser utilizada para identificar endófitos da presente invenção.

[0450] Tendo ilustrado e descrito os princípios da presente invenção, deve ser evidente para as pessoas versadas na técnica que a invenção pode ser modificada no arranjo e nos detalhes, sem se desviar de tais princípios. Deve ser entendido que embora a invenção tenha sido descrita em conjunto com sua descrição detalhada, a descrição anterior destina-se a ilustrar e não a limitar o escopo da invenção, o qual está definido pelo escopo das reivindicações anexas. Outras modalidades, vantagens e modificações estão dentro do escopo das reivindicações a seguir.

Claims (14)

1. Método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de soja, caracterizado pelo fato de que compreende dispor, de forma heteróloga, de um endófito para um elemento de planta de soja em uma quantidade eficaz para aumentar um traço de importância agronômica selecionado do grupo que consiste em área da raiz, comprimento da raiz e rendimento na planta derivada do elemento da planta tratada relativo a uma planta derivada de um elemento de planta de referência, em que o endófito é um membro do gênero Acremonium e compreende uma sequência polinucleotídica de SEQ ID NO: 51, opcionalmente em que o traço de importância agronômica é o rendimento e a planta de soja é uma variedade Pfister 38R25.

2. Método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de trigo, caracterizado pelo fato de que compreende dispor, de forma heteróloga, de um endófito para um elemento de planta de trigo em uma quantidade eficaz para aumentar um traço de importância agronômica selecionado do grupo que consiste em diminuir a umidade do grão e aumentar o rendimento na planta derivada do elemento de planta tratado relativo a uma planta derivada de um elemento de planta de referência, em que o endófito é um membro do gênero Acremonium e compreende uma sequência polinucleotídica de SEQ ID NO: 51, opcionalmente em que a planta de trigo é uma variedade selecionada do grupo que consiste em SDSU Focus ou SDSU Select.

3. Método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de amendoim, caracterizado pelo fato de que compreende dispor, de forma heteróloga, de um endófito para um elemento de planta de amendoim em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento de planta tratado relativo a uma planta derivada de um elemento de planta de referência, em que: a. o endófito é um membro do gênero Acremonium e compreende uma sequência polinucleotídica de SEQ ID NO: 51, e b. a planta de amendoim é uma variedade de Georgia-06G.

4. Método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de arroz, caracterizado pelo fato de que compreende dispor, de forma heteróloga, de um endófito para um elemento de planta de arroz em uma quantidade eficaz para aumentar a biomassa do broto seco na planta derivada do elemento de planta tratado relativo a uma planta derivada de um elemento de planta de referência, em que o endófito é um membro do gênero Acremonium e compreende uma sequência polinucleotídica de SEQ ID NO: 51.

5. Método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de trigo, caracterizado pelo fato de que compreende dispor, de forma heteróloga, de um primeiro endófito e um segundo endófito a um elemento de planta de trigo em uma quantidade eficaz para aumentar um traço de importância agronômica selecionada do grupo que consiste em altura da planta, peso da raiz fresca e peso do broto fresco na planta derivada do elemento de planta tratado relativo a uma planta derivada de um elemento de planta de referência, em que: a. o primeiro endófito é um membro do gênero Acremonium e compreende uma sequência polinucleotídica de SEQ ID NO: 51, e b. o segundo endófito é um membro do gênero Coniochaeta e compreende uma sequência polinucleotídica de SEQ ID NOs: 38, 39, 40 e 41.

6. Método de aprimoramento de um traço de importância agronômica em uma planta de arroz, caracterizado pelo fato de que compreende dispor, de forma heteróloga, de um primeiro endófito e um segundo endófito a um elemento de planta de arroz em uma quantidade eficaz para aumentar o rendimento na planta derivada do elemento de planta tratado relativo a uma planta derivada de um elemento de planta de referência, em que: a. o primeiro endófito é um membro do gênero Acremonium e compreende uma sequência polinucleotídica de SEQ ID NO: 51, e b. o segundo endófito é um membro do gênero Coniochaeta e compreende uma sequência polinucleotídica de SEQ ID NOs: 38, 39, 40 e 41.

7. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que o elemento de planta é uma semente, opcionalmente uma semente modificada e/ou em que o endófito é disposto de forma heteróloga ao elemento de planta em uma formulação, cuja formulação compreende adicionalmente um ou mais dos seguintes: um estabilizador, um conservante, um carreador, um tensoativo, um fungicida, um nematicida, um bactericida, um inseticida ou herbicida, ou qualquer combinação destes.

8. Formulação microbiana agroquimicamente ativa, caracterizada pelo fato de que compreende pelo menos um óleo, tensoativo, polímero e um ingrediente microbiano ativo, em que o ingrediente ativo microbiano compreende um primeiro endófito do gênero Acremonium e compreende uma sequência polinucleotídica de SEQ ID NO: 51.

9. Formulação, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que o óleo compreende colza, NEEM, ácido erúcico, ou propriedades herbicidas ou inseticidas; o tensoativo é um detergente não-iônico, Tween 20 ou Triton X-100; o polímero é FloRite®, DISCOTM ou Kannar® Universal Wonder; o ingrediente microbiano ativo compreende uma suspensão de esporo, esporos secos por pulverização, ou caldo de célula inteira; a formulação compreende ainda um ou mais de nematicida, bactericida, inseticida ou herbicida, estabilizante, conservante, carreador, agente anticomplexo ou qualquer combinação destes, e/ou o endófito é estável em prateleira.

10. Composição sintética caracterizada pelo fato de que compreende uma semente de planta e um endófito disposto de forma heteróloga que é manualmente ou mecanicamente disposto na semente de planta, em que o endófito é um membro do gênero Acremonium e compreende uma sequência polinucleotídica de SEQ ID NO: 51, e em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço aprimorado de importância agronômica em comparação com uma semente de planta de referência que não compreende ainda o endófito, em que a composição sintética compreende um aderente selecionado do grupo que consiste em: alginato, gomas, amidos, lecitinas, formononetina, álcool polivinílico, formononetinato alcalino, hesperetina, acetato de polivinil, cefalinas, goma arábica, goma xantana, carragenina, PGA, outros biopolímeros, Óleo Mineral, Polietilenoglicol (PEG), Polivinilpirrolidona (PVP), Arabino-galactano, Metilcelulose, PEG 400, Quitosana, Poliacrilamida, Poliacrilato, Poliacrilonitrila, Glicerol, Trietilenoglicol, Acetato de Vinil, Goma de Gelana, Poliestireno, Polivinil, Carboximetilcelulose, Goma Ghatti e copolímeros em bloco de polioxietileno-polioxibutileno

11. Composição sintética, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo fato de que o elemento de planta é um elemento de planta de soja e o traço de importância agronômica é a biomassa do broto seco; o elemento de planta é um elemento de planta de trigo e o traço de importância agronômica é a umidade ou rendimento do grão, opcionalmente em que o elemento de planta é a variedade de trigo SDSU Select e o traço de importância agronômica é o rendimento; o elemento de planta é a variedade de amendoim Georgia-06G e o traço de importância agronômica é o rendimento; ou, o elemento de planta é um elemento de planta de arroz e o traço de importância agronômica é a biomassa do broto seco.

12. Composição sintética, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo fato de que compreende ainda um segundo endófito, em que o segundo endófito é do gênero Coniochaeta e compreende uma sequência polinucleotídica de SEQ ID NOs: 38, 39, 40 e 41, em que a composição sintética é capaz de fornecer um traço de importância agronômica em comparação com um elemento de planta de referência que não compreende ainda o endófito.

13. Composição sintética, de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo fato de que o elemento de planta é um elemento de planta de trigo e o traço de importância agronômica é selecionado do grupo que consiste em altura de planta, biomassa fresca de raiz e peso de broto fresco; ou, o elemento de planta é um elemento de planta de arroz e o traço de importância agronômica é o rendimento.

14. Composição sintética, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 13, caracterizada pelo fato de que o traço aprimorado de importância agronômica é conferido em condições normais de irrigação; e/ou, o elemento de planta é uma semente, opcionalmente uma semente modificada; e/ou, o elemento de planta é colocado em um substrato que promove o crescimento da planta, opcionalmente solo; e/ou, uma pluralidade dos referidos elementos de planta é colocada no solo em fileiras, com espaçamento substancialmente igual entre cada semente dentro de cada fileira; e/ou, a composição compreende ainda uma formulação que compreende um ou mais dos seguintes: estabilizador, conservante, carreador, tensoativo, agente anticomplexo ou qualquer combinação dos mesmos e/ou um ou mais dos seguintes: fungicida, nematicida, bactericida, inseticida ou herbicida; e/ou, as referidas composições estão confinadas dentro de um objeto selecionado do grupo que consiste em: garrafa, frasco, ampola, pacote, vaso, bolsa, caixa, lixeira, envelope, caixa de papelão, recipiente, silo, container de expedição, cama de caminhão ou estojo; e/ou as combinações sintéticas são estáveis em prateleira.