BR112017027048B1

BR112017027048B1 - Processo para extração de pectina

Info

Publication number: BR112017027048B1
Application number: BR112017027048-0A
Authority: BR
Inventors: Hans Christian Buchholt
Original assignee: Dupont Nutrition Biosciences Aps
Priority date: 2015-06-17
Filing date: 2016-06-17
Publication date: 2022-09-06
Also published as: BR112017027048A2; US20190218313A1; GB201510623D0; CN116836311A; EP3310817A1; WO2016202986A1; CN107771185A

Abstract

A presente invenção descreve um processo para a extração de pectina a partir de um material de partida contendo pectina, compreendendo: uma extração ácida, em que o referido material de partida é submetido a extração usando uma solução ácida extraindo um primeiro extrato e deixando um primeiro resíduo, em que o referido primeiro extrato compreende pectina; e um tratamento enzimático, em que o referido primeiro resíduo é submetido a um tratamento enzimático utilizando uma solução contendo enzima que resulta em um segundo extrato e um segundo resíduo em que o referido segundo extrato compreende pectina. A invenção descreve ainda o uso da pectina obtida por este processo para a estabilização de bebidas, estruturação de produtos lácteos acidificados, tal como uma fibra alimentar, um agente gelificante, um estabilizante em sobremesas lácteas e/ou um agente de complexação proteica.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO

[001] A presente invenção diz respeito a um processo para a extração de pectina a partir de um material de partida contendo pectina. A invenção diz respeito ainda ao uso da pectina obtida neste processo.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[002] A pectina é um aditivo de uso comum na indústria de alimentos. Ela é útil, por exemplo, como agente estabilizante, espessante e agente gelificante, por exemplo, geleias e outros produtos à base de frutas, bem como em produtos à base de leite coalhado, tal como iogurtes. A pectina também encontra outras utilizações na indústria de alimentos, por exemplo, como um substituto de gordura.

[003] A pectina é um polissacarídeo estrutural tipicamente encontrado na forma de uma substância péctica insolúvel em água - protopectina - na parede celular primária e na lamela média de plantas terrestres verdes, como frutíferas e vegetais. As principais fontes de produtos comerciais de pectina são cascas de citrinos e bagaço de maçã em que a protopectina representa 10-40% em peso da matéria seca.

[004] A pectina é a designação genérica para compostos solúveis em água que resultam da hidrólise restrita da protopectina. A natureza exata da protopectina não é completamente compreendida. No entanto, é geralmente reconhecido que a protopectina é uma estrutura complexa na qual a pectina está ligada a outros componentes da parede celular tais como celulose, proteína da parede celular e hemicelulose por ligações covalentes, ligações de hidrogênio e/ou interações iônicas.

[005] A pectina compreende cadeias de galacturonanas lineares (polímero do ácido D-galacturônico ligado em α-(1-4) que são rompidas com as cadeias principais ramnogalacturonanas (polímeros da repetição de dissacarídeos ácido a-(1-4)-D-galacturônico-a-(1-2)-L-ramnose), que muitas vezes tem cadeias laterais de arabinogalactanos poliméricos com ligações glicosídicas nas posições O-3 ou O-4 da L-ramnose. As sequências de galacturonana podem ter D-xilose e D-apiose glicosídicas-ligadas às suas posições O-2 ou O-3, que também podem ser substituídas com grupos acetila ligados a éster. As cadeias longas de resíduos de ácido D-galacturônico em ligações α-(1-4) são comumente referidas como “regiões lisas”, enquanto que as regiões ramnogalacturonanas altamente ramificadas são comumente referidas como as “regiões cabeludas” (hairy regions).

[006] As moléculas de pectina têm um peso molecular de até mais de 200 000 Da e um grau de polimerização até mais do que 1000 unidades. Uma proporção dos grupos de ácido carboxílico das unidades de ácido galacturônico é esterificada com metila. Nas plantas, os grupos carboxila residuais são parcialmente ou completamente neutralizados com cátions de cálcio, potássio e magnésio que, inerentemente, estão contidos nos tecidos vegetais.

[007] O “grau de esterificação” (DE) significa a extensão em que os grupos de ácido carboxílico livres contidos nas unidades de ácido galacturônico da pectina foram esterificados com metila. A pectina resultante é referida como “pectina de alto teor de éster” (abreviado como “pectina HE”) se mais de 50% dos grupos carboxila estiverem esterificados. A pectina resultante é referida como “pectina de baixo teor de éster” (abreviado como “pectina LE”) se menos de 50% dos grupos carboxila estiverem esterificados. Se a pectina não contém nenhum - ou apenas alguns - grupos esterificados, ela geralmente é referida como ácido péctico.

[008] A fonte de pectina também irá governar até certo ponto se outros grupos éster estão ou não presentes na estrutura da pectina. A este respeito, sabe-se que algumas pectinas compreendem grupos acetila. Em tais pectinas os grupos hidroxila em C2 ou C3 podem tipicamente estar acetilados. A título de exemplo, a pectina da beterraba-sacarina é até certo ponto acetilada em O-2 e/ou O-3 dos resíduos de ácido galacturônico.

[009] A estrutura da pectina, em particular o grau de esterificação, determina suas propriedades físicas e/ou químicas. Por exemplo, a gelificação da pectina depende da natureza química da pectina, especialmente do grau de esterificação e do grau de polimerização. Além disso, no entanto, a gelificação da pectina também depende da concentração de pectina e condições ambientais como o teor de sólidos solúveis, concentração de íons de cálcio e pH.

[010] Além disso, de acordo com o Food Chemicals Codex, para ser utilizada na indústria alimentar, a pectina deve ter um teor mínimo de 65% de ácido galacturônico em base seca e sem cinzas. Assim, a pectina obtida pelo processo da presente invenção é adequada para aplicações alimentares.

[011] A pectina é comumente extraída como uma fração de pectina extraída em massa que mostra variabilidade molecular e seguindo uma variada interação entre íons de cálcio e moléculas de pectina separadas com afinidade variável em relação aos íons de cálcio e outras partículas carregadas. Os produtos de pectina extraídos em massa compreendem moléculas que representam uma ampla distribuição do grau de esterificação e moléculas com padrão de esterificação metila não aleatório e aleatório. Isso afeta os parâmetros de qualidade importantes para a pectina, como a resistência à ruptura dos géis, a definição do perfil de temperatura, as interações com proteínas ou cátions e a solubilidade da pectina em aplicações de fabricação de alimentos.

[012] No entanto, muitas aplicações de pectina requerem frações de pectina homogêneas, mas isso resulta em um rendimento de pectina relativamente baixo e altos custos de produção.

[013] Existe uma demanda no setor para obter formas de obtenção de alto rendimento de extração, além da funcionalidade de pectina melhorada, tanto do ponto de vista ambiental quanto sustentável e econômico devido ao uso eficiente dos recursos contendo pectina.

OBJETO DA INVENÇÃO

[014] É o objeto da invenção prover um processo para extração e/ou isolamento de pectina, em que o processo resulta em um alto rendimento de extração de pectina.

[015] O objetivo da presente invenção é proporcionar também o uso da pectina alimentar com um mínimo de 65% de ácido galacturônico (GA) obtido pelo processo reivindicado para a estabilização de bebidas, tais como leite acidificado ou sucos de frutas diluídos, também para a estruturação de produtos lácteos acidificados, como uma fibra alimentar, um agente gelificante, um estabilizante em sobremesas lácteas e/ou um agente complexante de proteínas.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[016] Este objetivo pode ser conseguido por um processo para extração de pectina a partir de um material de partida contendo pectina, compreendendo: a. uma extração ácida, em que o referido material de partida é submetido a extração usando uma solução ácida extraindo um primeiro extrato e deixando um primeiro resíduo, em que o referido primeiro extrato compreende pectina; b. um tratamento enzimático, em que o referido primeiro resíduo é submetido a um tratamento enzimático utilizando uma solução contendo enzima que resulta em um segundo extrato e um segundo resíduo, em que o referido extrato compreende pectina.

[017] Aqui pode ser obtida uma fração de pectina homogênea com uma distribuição estreita dos ésteres metílicos. Além disso, é extraído um alto rendimento de pectina a partir do material de partida contendo pectina.

[018] O termo “pectina” deve ser entendido como uma forma solúvel em água de substância péctica obtida pela separação da pectina a partir de um material vegetal.

[019] O termo “pectina de grau alimentar” deve ser entendido como uma pectina aprovada para ser usada como aditivo alimentar com um mínimo de 65% de ácido galacturônico (GA) em base seca e sem cinzas.

[020] “Sensibilidade ao cálcio” é uma propriedade da pectina, que resulta em aumento da viscosidade de uma solução de pectina na presença de íons de cálcio. Assim, a pectina tolerante ao cálcio ou pectina não sensível ao cálcio (NCSP) é conhecida por ter uma menor viscosidade intrínseca do que a pectina sensível ao cálcio (CSP).

[021] Em termos da presente invenção, a “pectina tolerante ao cálcio” deve ser entendida como semelhante à “pectina não sensível ao cálcio”.

[022] O teor de pectina sensível ao cálcio em um produto de pectina HE pode ser descrito como a “proporção de pectina sensível ao cálcio” (proporção CSP ou CSPR), que é a fração de pectina sensível ao cálcio em um produto de pectina. A pectina sensível ao cálcio pura, teoricamente, tem CSPR = 1,0, uma pectina que tem 50% de sensibilidade ao cálcio tem CSPR = 0,5 e uma pectina tolerante ao cálcio pura possui CSPR = 0.

[023] O material de partida de pectina pode, preferencialmente, ser obtido a partir de frutas cítricas, maçãs, beterraba-sacarina, girassol, produtos hortícolas ou resíduos de plantas como maçãs, beterrabas-sacarinas, cenouras, cebolas, pêssegos, bagos de uva, mangas, goiabas, abóbora, moranga, tomates, damascos, bananas, feijões, batatas, girassol ou frutas cítricas. Exemplos de frutas cítricas são limas, limões, toranjas, mandarinas, tangerinas, pomelos e laranjas.

[024] Para obter o material de partida de pectina, as frutas e vegetais são tratados de acordo com o tipo de fruta e vegetais de uma maneira comumente conhecida pelos especialistas na técnica. Isto pode compreender uma desintegração ou pressão do material para separar suco e óleo, seguido de várias lavagens com água para remover sólidos solúveis como açúcares e resíduos de óleo e gordura. O material lavado pode ser pressionado e usado diretamente para extração de pectina ou seco para mais de 85% de matéria seca para estar seguro para o transporte ou armazenamento.

[025] Em um aspecto, os materiais de partida incluem a casca seca de frutas cítricas, com um teor de matéria seca de aproximadamente 85% em peso ou mais, de preferência sob a forma de peças com pelo menos 2 cm de comprimento, que são obtidas conforme descrito acima após o processamento da casca pressionada a partir da indústria de sucos, após a extração do suco cítrico e dos óleos essenciais. Estes materiais têm um alto teor de substâncias pécticas sob a forma de protopectina insolúvel em água. A casca de frutas cítricas com um teor de pectina extraível na faixa de 20-35% em peso com base na matéria seca é particularmente interessante.

[026] Em uma primeira etapa, uma extração ácida é realizada com uma solução ácida, resultando em uma extração de pectina, tanto de pectina tolerante ao cálcio como de pectina sensível ao cálcio na solução a partir do material de partida de pectina. Esta solução ácida forma um primeiro extrato a partir do qual a pectina pode ser purificada utilizando técnicas como as adicionalmente descritas abaixo. A primeira etapa deixa ainda um primeiro resíduo, que é o material de partida contendo pectina menos a fração extraída pela solução ácida.

[027] Em um aspecto, o pH da referida solução ácida é de 1,5 a 2,5. Em um aspecto adicional, o pH da referida solução ácida é de 2 a 2,5.

[028] Para aumentar o rendimento da pectina extraída, a temperatura de extração e o tempo de extração podem ser ajustados.

[029] Em um aspecto, a temperatura da referida solução ácida está entre 15-100 °C. Em um aspecto adicional, a temperatura da referida solução ácida está entre 65-75 °C.

[030] Em um aspecto, a extração ácida é realizada durante um período de tempo de 0,5 a 10 horas. Em um aspecto adicional, a extração ácida é realizada durante um período de tempo de 1 a 8 horas.

[031] A quantidade de solução de extração a ser utilizada na extração ácida depende, por exemplo, da origem e da condição de material contendo a pectina a ser extraída e do teor de pectina extraível no material.

[032] De acordo com a invenção, a quantidade de material contendo pectina e solução de extração em cada etapa de extração, que é realizada enquanto se agita suavemente a suspensão de material contendo pectina, é escolhida para que a suspensão tenha um teor de matéria seca no intervalo de 1% a 20% em peso, por exemplo, no intervalo de 2% a 15% em peso, tal como no intervalo de 2% a 6%.

[033] Podem ser utilizados ácidos orgânicos ou inorgânicos para a extração ácida. Ácidos úteis incluem ácidos inorgânicos fortes ou médios fortes como, mas não se limitando a, ácido clorídrico, ácido sulfúrico, ácido sulfuroso, ácido nítrico ou ácido fosfórico. Os ácidos orgânicos incluem, mas não estão limitados a, ácido fórmico, ácido acético, ácido propiônico, ácido cítrico, ácido malônico, ácido succínico, ácido tartárico, ácido oxálico, ácido glioxálico, ácido lático, ácido glicerolico, ácido maleico, ácido fumárico e ácido benzóico. Deve- se compreender que misturas de ácidos podem ser utilizadas.

[034] A extração ácida é seguida por um tratamento enzimático, em que o primeiro resíduo obtido a partir da extração ácida é submetido a um tratamento enzimático por meio de uma solução contendo enzima. O tratamento enzimático resulta em uma extração de pectina do primeiro resíduo resultando em um segundo resíduo que é o primeiro resíduo menos a fração de pectina extraída. A pectina extraída e a solução contendo enzima formam um segundo extrato a partir do qual a pectina pode ser purificada utilizando técnicas como as descritas adicionalmente abaixo.

[035] Surpreendentemente verificou-se que uma extração contendo enzima após uma extração ácida resulta na liberação de uma quantidade adicional de pectina além da pectina extraída pela extração ácida. Desse modo, o rendimento de pectina obtida a partir de um material de partida contendo uma determinada pectina pode ser aumentado.

[036] Em um exemplo de realização, o tratamento com enzimas pode resultar em uma fração de pectina que é uma pectina tolerante ao cálcio quase pura. Assim, uma fração de pectina muito homogênea pode ser obtida pela purificação da pectina obtida pelo tratamento enzimático. Isto pode ser obtido, por exemplo, se a enzima é galacturonase ou pectato liase.

[037] Em um aspecto, o pH da referida solução contendo enzima é superior ao pH da referida solução ácida. Assim, o pH durante o tratamento enzimático é maior do que o pH durante a extração ácida. Deste modo, obtém- se um rendimento ainda maior de pectina.

[038] Além disso, em um pH mais elevado, o efeito de hidrolização é inferior em um pH inferior, em que a perda da viscosidade e desesterificação será menor, resultando em pectina com uma maior funcionalidade.

[039] O pH durante o tratamento enzimático dependerá da enzima utilizada no processo. Se o pH utilizado durante o tratamento enzimático for próximo do ótimo pH da enzima, a eficiência da enzima será maior do que quando o pH não está em pH ótimo para a enzima. Isto resulta, por exemplo, em uma maior quantidade de pectina obtida a partir do material de partida de pectina ou uma quantidade menor de enzima pode ser utilizada para se obter a mesma quantidade de pectina.

[040] Em um aspecto adicional, a solução contendo enzima compreende uma ou mais enzimas. Por uma ou mais enzimas deve ser compreendido que a solução contendo enzima compreende uma enzima, uma mistura de duas enzimas, uma mistura de três enzimas, uma mistura de quatro enzimas, uma mistura de cinco enzimas ou uma mistura de mais de cinco enzimas.

[041] Em um aspecto, a solução contendo enzima compreende uma enzima. Pela presente invenção, a modificação da pectina pode ser mais bem controlada e uma menor quebra da pectina é observada. Portanto, pode ser obtida uma fração de pectina homogênea.

[042] Em um aspecto adicional, a solução contendo enzima compreende uma mistura de enzimas. Pela presente invenção, as vantagens de diversos processos enzimáticos diferentes podem ser utilizadas e/ou um rendimento ainda maior pode ser obtido.

[043] Como exemplo, a pectina pode ser especificamente modificada durante o processo, tal como o aumento da desesterificação pela pectina metilesterase e, consequentemente, obtendo-se uma pectina LE. A pectina metilesterase pode ser adicionada juntamente com a celulase que aumenta a liberação de pectina a partir do resíduo. Assim, um alto rendimento de pectina LE pode ser obtido misturando estas duas enzimas.

[044] Exemplos de enzimas que podem ser utilizadas de acordo com a presente invenção são, por exemplo, pectinase, exopoligalacturonase, endopoligalacturonase, pectina liase, pectato liase, ramnogalacturonase, pectina metilesterase, pectina acetilesterase, exo-celulase, endo-celulase, hemicelulase, xilanase.

[045] Em um aspecto, a solução contendo enzima compreende uma enzima que degrada a pectina tal como a poligalacturonase, ramnogalacturonase ou pectinase.

[046] Em um aspecto adicional, a solução contendo enzima compreende galacturonases.

[047] Em um aspecto adicional, a solução contendo enzima compreende celulase. A celulase degrada a celulose a partir do material de partida contendo a pectina. A degradação da celulose permite a liberação de pectina ligada no primeiro resíduo.

[048] Em um aspecto, o pH da referida solução contendo enzima é de 2,5 a 10. Em um aspecto adicional, o pH da referida solução contendo enzima é de 2,5 a 7. Em um aspecto adicional, o pH da referida solução contendo enzima é de 3 a 5.

[049] Para otimizar ainda mais a extração da pectina, a temperatura de extração e o tempo de extração podem ser ajustados.

[050] Em um aspecto, o tratamento com enzima é realizado por um período de tempo de 0,5 a 5 horas.

[051] Em outro aspecto, a temperatura da referida solução contendo enzima está entre 15-75 °C. Em um aspecto adicional, a temperatura da referida solução contendo enzima está entre 30-60°C.

[052] Em um aspecto adicional, pelo menos uma lavagem é realizada entre a referida extração ácida (a) e o referido tratamento enzimático (b). Pela presente invenção, o primeiro resíduo é lavado para remover restos da solução ácida assim como do primeiro extrato.

[053] Em um aspecto adicional, pelo menos uma lavagem é realizada após o referido tratamento com enzimas (b). Por este meio, o segundo resíduo é lavado para remover restos da pectina extraída liberada pelo tratamento enzimático. Esta pectina pode então ser purificada a partir da solução de lavagem para obter um rendimento ainda maior.

[054] Por pelo menos uma lavagem deve ser entendido que o primeiro ou segundo resíduo pode ser lavado uma vez, que o primeiro ou segundo resíduo pode ser lavado duas vezes ou que o primeiro ou segundo resíduo pode ser lavado três vezes, etc.

[055] A lavagem pode ser realizada usando, por exemplo, lavagem em contracorrente contínua ou lavagem por um processo de percolação. A lavagem pode, por exemplo, ser realizada como uma lavagem contínua em um filtro estacionário ou como uma lavagem em contracorrente.

[056] Em um aspecto, a(s) solução(ões) de uma ou mais lavagens são misturadas em um lote. A pectina pode ser purificada a partir deste lote usando técnicas, tais como as descritas abaixo.

[057] O número de lavagens necessárias depende do material de partida contendo pectina, bem como dos parâmetros de extração, ou seja, pH, temperatura, solução, tempo de extração, etc. Assim, o número de lavagens deve ser ajustado em conformidade para garantir que traços da solução ácida e/ou a solução contendo enzima sejam removidos.

[058] A quantidade de solução de lavagem a ser utilizada na pelo menos uma lavagem depende da origem e da condição do material de partida contendo pectina, da solução de lavagem, da solução ácida, da solução contendo enzima e do conteúdo de pectina extraível no material.

[059] Em um aspecto, a pelo menos uma lavagem é realizada em uma proporção de solução de lavagem:material vegetal seco de 5:1 a 50:1. Por isso, deve ser entendido que, se for utilizado 100 kg de material vegetal seco como material de partida contendo pectina, ele deve ser lavado com 500 a 5000 kg de solução de lavagem.

[060] Em um aspecto adicional, a lavagem é realizada em uma proporção de solução de lavagem:material vegetal seco em torno de 15:1.

[061] Em um aspecto adicional, a lavagem é realizada a uma temperatura entre 20 °C a 90 °C. Em outro aspecto, a lavagem é realizada a uma temperatura entre 65°C a 75°C.

[062] Em um aspecto, pelo menos uma das referidas lavagens é realizada com água. Em outro aspecto, pelo menos uma das referidas lavagens é realizada com água a uma temperatura entre 50-80 °C.

[063] Alternativamente, a lavagem pode ser realizada utilizando água fracamente acidificada ou água fracamente acidificada quente, com um pH mais elevado do que o pH da solução ácida e/ou solução contendo enzima utilizada na primeira e/ou segunda etapa de extração.

[064] A pelo menos uma lavagem é realizada em um determinado pH e com uma solução por um tempo e a uma temperatura, que permite uma lavagem ideal para que os restos sejam removidos de maneira eficiente.

[065] Em outro aspecto, o referido primeiro extrato e o referido segundo extrato são misturados.

[066] Por isso, a quantidade de pectina no extrato misturado final é maior e, consequentemente, o rendimento finalmente obtido será maior, bem como a carga de trabalho pela purificação de um extrato em vez de dois ou mais será menor.

[067] Em outro aspecto, o primeiro extrato e/ou o segundo extrato são misturados com a solução de lavagem.

[068] Em outro aspecto, o primeiro extrato é separado do primeiro resíduo e o segundo extrato é separado do segundo resíduo por peneiração, peneiração úmida, decantação ou centrifugação.

[069] Os processos de separação são realizados por técnicas conhecidas pelo especialista na técnica e podem, como tal, serem realizadas por estes especialistas pelo uso do conhecimento geral comum. A separação é realizada entre as etapas separadas do processo antes de isolar a pectina a partir dos extratos ou usar os resíduos em etapas adicionais no processo.

[070] Em um aspecto adicional, o material de partida foi submetido a um pré-tratamento.

[071] O pré-tratamento pode ser realizado de modo a alterar a distribuição do tamanho da partícula da matéria-prima por moagem da casca seca ou cortando o material em uma suspensão aquosa de casca.

[072] Em um aspecto adicional, o material de partida está em estado fresco, congelado ou seco.

[073] A secagem do material pode ser realizada por meio de qualquer equipamento de secagem convencional, tal como um forno de secagem, um secador de correia, um secador de tambor ou um secador de leito fluidizado por um período de tempo suficiente para obter um teor de matéria seca no material de pelo menos 80% em peso. Em um aspecto, o teor de matéria seca no material é de pelo menos 90% em peso. A secagem é realizada a uma temperatura que varia desde a temperatura ambiente até acima de 100 °C durante um período de no máximo 36 horas. Em aspecto, a secagem é realizada a uma temperatura na faixa de 40 °C a 100 °C, durante um período de no máximo 36 horas. Em um aspecto, a secagem pode ser realizada em pressões abaixo da pressão atmosférica, nas quais é possível usar uma temperatura de secagem relativamente menor ou um período de secagem comparativamente mais curto resultando em um tratamento mais gentil.

[074] Em outro aspecto, a pectina é adicionalmente purificada a partir do referido extrato por centrifugação, filtração, troca de íons, concentração, precipitação, lavagem, prensagem, secagem e moagem.

[075] A pectina extraída pode ser recuperada a partir dos extratos individuais, ou seja, do primeiro e/ou segundo extrato, a partir das soluções de lavagem contendo pectina a partir de pelo menos uma lavagem e/ou a partir dos extratos misturados por qualquer método conveniente.

[076] Todos estes métodos podem ser realizados conforme conhecido pelo especialista na técnica.

[077] Em outro aspecto, a precipitação é realizada utilizando 2- propanol.

[078] A precipitação da pectina pode ser realizada com qualquer solução que seja miscível com água e em que a pectina seja substancialmente insolúvel. A pectina precipitada é separada a partir do líquido por qualquer método conveniente, tal como, por exemplo, por decantação, centrifugação ou filtração, e o precipitado pode então ser pressionado e lavado no filtro para remover sais solúveis e impurezas. Finalmente, a pectina pode ser seca e, opcionalmente, triturada antes do uso.

[079] A precipitação de pectina por 2-propanol ou outras soluções alternativas a partir do extrato pode ser precedida pela concentração da pectina, por exemplo, por filtração por membrana ou por evaporação sob pressão reduzida.

[080] As soluções alternativas para a precipitação da pectina podem ser álcool monohídrico, por exemplo metanol, etanol, terc-butanol, secbutanol, n-butanol, álcool terc-amílico, álcool neopentílico, álcool sec-amílico ou dietilcarbinol; um álcool dihídrico, por exemplo, etilenoglicol, propileno glicol ou tetrametilenoglicol; uma cetona, por exemplo acetona, metiletilcetona, metilisobutilcetona ou metil terc-butilcetona; ou um éter de glicol, por exemplo éter monometílico de dietilenoglicol, éter monoetílico de etilenoglicol, éter monometílico de dietilenoglicol ou éter dimetílico de trietilenoglicol. Misturas de duas ou mais dessas soluções também podem ser usadas na precipitação da pectina.

[081] A presente invenção descreve ainda o uso da pectina obtida pelo processo descrito acima, em que a pectina é utilizada para a estabilização de bebidas, estruturação de produtos lácteos acidificados, tal como uma fibra alimentar, um agente gelificante, um estabilizante em sobremesas lácteas e/ou um agente de complexação proteica.

[082] Além disso, é descrito um uso onde a bebida é leite acidificado ou suco de frutas diluído.

[083] Em um exemplo de realização, os produtos lácteos acidificados são selecionados a partir de produtos lácteos acidificados, por exemplo, possuindo um pH de 3,5 a 5, tal como leite acidificado, iogurte e iogurte com frutas.

[084] Os produtos lácteos acidificados compreendem produtos lácteos obtidos por acidificação, seja por fermentação com bactérias vivas produtoras de ácido ou pela adição de sucos de frutas ou ácidos alimentares.

[085] Além disso, é descrito um uso onde a pectina é usada como estabilizante em sobremesas lácteas.

[086] A pectina pode ainda utilizada como fibra solúvel (opcionalmente: como sal de Ca), transportadora de nutrientes (Fe, Ca, Zn), aglutinante de radionuclídeos em alimentos, precursor de pectina convencional de baixo teor de éster ou pectina amidada, ligante de proteína para recuperação de proteínas a partir da água do processo em plantas alimentares e floculante de proteínas em águas residuais de vegetais, agente de encapsulamento e aglutinante de corante.

EXEMPLOS MÉTODOS DETERMINAÇÃO DO GRAU DE ESTERIFICAÇÃO (DE) E TEOR DE ÁCIDO GALACTURÔNICO (GA)

[087] O grau de esterificação foi determinado de acordo com os procedimentos fornecidos no Food Chemicals Codex, Terceira Edição, National Academic Press, Washington 1981, página 216.

[088] Pesar 5 g da amostra de pectina para o mais próximo de 0,1 mg em um copo de 250 mL e fazer a adição de uma mistura de 100 mL de 2- propanol aquoso a 60% e 5 mL de solução concentrada de ácido clorídrico. Agitar em um agitador magnético por 10 minutos. Filtrar através de um funil de filtro de vidro grosso seco e pré-pesado de 30 ml com vácuo reduzido. Lavar com seis porções de 15 ml de mistura de 2- propanol HCl-60%. Em seguida, lavar com 2- propanol aquoso a 60% (6-8 porções de 20 ml) até que o filtrado esteja isento de cloreto (teste com uma solução de 1,7 g de nitrato de prata em 100 ml de água destilada). Finalmente, lavar com aproximadamente 30 mL de 2- propanol 100%. Secar durante 2 horas e meia em forno a 105 °C. Resfriar em um dessecador. Pesar.

[089] Pipetar 20,00 mL de hidróxido de sódio 0,5 N usando uma pipeta volumétrica de 20 mL em um béquer e misturar com 20,00 ml de ácido clorídrico 0,5 N, que foi transferido usando uma pipeta volumétrica de 20 mL. Adicionar duas gotas de uma solução de fenolftaleína (1 g de fenolftaleína é dissolvida em 100 ml de etanol a 96%) indicador e titulação com hidróxido de sódio 0,1 N. Registrar o volume V0.

[090] Pesar exatamente um décimo da pectina lavada e seca em um frasco Erlenmeyer de 250 mL e umedecer com 2 mL de etanol a 96%. Colocar o balão em um agitador magnético e adicionar lentamente 100 mL de água deionizada fervida e arrefecida. Evite esparramar. Agitar até que toda a pectina esteja completamente dissolvida. Adicionar cinco gotas da solução de fenolftaleína e titular com hidróxido de sódio 0,1 N. O volume é registrado como V1 em mL. Adicionar 20,00 mL de hidróxido de sódio 0,5 N e agitar vigorosamente. Deixar o conteúdo descansar por 15 minutos para saponificar os grupos éster. Adicionar 20,00 mL de ácido clorídrico 0,5 N e agitar até a cor rosa desaparecer. Adicionar três gotas da solução de fenolftaleína e titular com hidróxido de sódio 0,1 N até atingir uma fraca cor rosa persistente, registrando o volume de hidróxido de sódio 0,1 N como V2 em mL.

DETERMINAÇÃO DA VISCOSIDADE INTRÍNSECA

[091] A viscosidade intrínseca foi determinada pela extrapolação da função de viscosidade reduzida dividida pela concentração para pectina zero. Em uma determinada concentração, a viscosidade reduzida foi:

onde nc é a viscosidade da solução de pectina, nr é a viscosidade do solvente (solução aquosa a 1% de polifosfato de sódio, pH 4,75). As viscosidades foram medidas em um viscosímetro C (Haake, Gmbh), a 21,0 °C, com uma esfera de vidro.

DETERMINAÇÃO DA RELAÇÃO CSP (CSPR)

[092] 2,00 g de pectina foram dissolvidos em aprox. 90 g de água desmineralizada a 70 °C. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, o pH foi aumentado para 4,0 pela adição de 20% em peso de solução de carbonato de sódio sob agitação. Adicionou-se água desmineralizada a 100,0 g de peso total e a amostra foi misturada.

[093] 15,00 g da amostra foram misturados lentamente em 30,00 g de 2-propanol aquoso a 80% em peso em um tubo de centrifugação com tampa de rosca de 50 mL para precipitar a pectina. Após uma hora com agitação frequente, o material precipitado foi coletado após centrifugação a 2800 g durante 20 minutos e decantado. Ao material precipitado adicionou-se aprox. 25 ml de 2- propanol aquoso a 60 % em peso e foi completamente misturado. Após uma hora sob frequente mistura, o precipitado foi separado conforme descrito acima. A lavagem com 60% em peso de 2-propanol foi repetida mais uma vez e após a separação final, o excesso de líquido foi pressionado manualmente e o resíduo pressionado foi transferido para uma bandeja e seco durante a noite a 60 °C em um forno ventilado. A pectina isolada foi pesada (a grama) e a matéria seca a’ foi determinada no material pela secagem a 105 °C durante 2 horas e meia.

[094] Em um tubo de centrífuga de 50 mL com tampa de rosca foram adicionados 25,00 g de CaCl2 60mM em água desmineralizada contendo 16% em peso de 2-propanol e misturados com 25,00 g da amostra de pectina preparada. A mistura foi agitada à velocidade mais baixa em um IKA MTS2 Schütler, que foi conectado a um temporizador para permitir uma mistura por 1 dentre 15 minutos. Após 24 horas a mistura foi centrifugada a 2800 g durante 20 minutos e o líquido foi sifonado através de um pano. O material precipitado no tubo de ensaio foi pesado e adicionou-se uma quantidade igual de 30 mM de CaCl2 em água desmineralizada contendo 8% em peso ol 2-propan e misturado. O tubo foi lentamente agitado por mais 24 horas e centrifugado a 2800 g durante 20 minutos e o líquido sifonado através de um pano. A lavagem do CSP precipitado foi repetida mais uma vez. O resíduo no tubo foi finalmente misturado com duas partes de 2-propanol aquoso a 80 % em peso, e depois de uma hora separada no pano de algodão e depois da drenagem transferida de volta para o tubo e novamente misturada com duas vezes a quantidade igual de 60% peso de 2-propanol aquoso e após uma hora drenada e pressionada no pano. O resíduo prensado foi transferido para uma bandeja e seco durante a noite a 60 °C em um forno ventilado. O resíduo foi pesado (b grama) e a matéria seca b' do material foi determinada por secagem a 105 °C durante 2 horas e meia.

[095] A relação CSP foi determinada a partir de:

[096] As figuras CSPR acima de 1,0 podem ser alcançadas porque a precipitação de pequenas moléculas de pectina na presença de cálcio é mais quantitativa do que a precipitação com 2-propanol. Uma figura CSPR acima de 1,0 indica que a amostra é pectina sensível ao cálcio pura.

RENDIMENTO DE PECTINA

[097] O rendimento de pectina a partir de uma etapa de extração/lavagem é a quantidade de pectina (calculada como matéria seca de pectina), que durante a etapa de extração/lavagem é transformada de protopectina insolúvel em pectina solúvel, calculada como porcentagem do material de casca (calculado como matéria seca).

[098] O rendimento de pectina é determinado para cada etapa de extração/lavagem determinando a concentração de pectina no extrato clarificado (por precipitação de uma quantidade pesada de concentrado em 1,2 volumes de 2-propanol, lavagem do precipitado com 60% em peso de 2- propanol, secagem a 100% de matéria seca e pesagem do resíduo). A partir da quantidade total de extrato/líquido de lavagem e concentração de pectina determinada, a quantidade total de pectina solúvel é calculada. A partir desta, a pectina solúvel transferida com o resíduo de casca da extração/lavagem anterior é calculada a partir da quantidade de resíduo de casca transferida e da concentração de pectina no líquido clarificado, determinado a partir da etapa anterior de extração/lavagem. Esta quantidade de pectina transferida da etapa anterior de extração/lavagem é subtraída da quantidade total de pectina encontrada na etapa de extração/lavagem, e a diferença dá o rendimento de pectina da etapa de extração ou lavagem.

EXPERIMENTO 1: COM E SEM TRATAMENTO ENZIMÁTICO MATERIAIS

[099] Foram suspensos 400,0 g de casca de laranja seca em 11 L de água desmineralizada quente e o pH foi ajustado para 2,00 com adição de ácido nítrico (mínimo técnico 68% BDH/Prolabo) para atingir um nível estável a 70,0 °C. A mistura foi lentamente agitada a 70,0 °C durante três horas. O teor no reator foi pesado e a mistura foi separada em um escorredor em uma fase de sedimentos e uma fase líquida que foi pesada. A fase de sedimentos foi transferida para o reator e lavada durante uma hora a 70,0 °C pela adição de água desmineralizada quente a 6 L. O peso total foi pesado e separado novamente em uma fase de sedimentos e fase líquida, que foram pesados. Metade da quantidade do lodo (sedimentos) foi transferida para um reator de 5 L, e adicionou-se água a aprox. 4L no total. O pH foi aumentado para 4,0 com adição de solução aquosa a 20% de carbonato de sódio e a temperatura foi mantida a 50 °C pela utilização de um termostato. Foram adicionados 10,05 g de celulase (Multifect B da Genencor) e a mistura foi agitada a 50 °C e pH 4,00 durante três horas. Em seguida, o conteúdo do reator foi pesado e separado em um escorredor. As quantidades de sedimento e filtrado foram pesadas. O mesmo procedimento foi realizado com a outra metade da quantidade de sedimento, exceto que não foi adicionada nenhuma enzima celulase.

[100] Cada tipo de filtrado foi purificado por centrifugação e uma quantidade pesada de centrifugado foi precipitada pela adição a 1,2 volumes de 2-propanol e agitada durante aprox. 1 hora a 30-40 °C. Em seguida, a pectina precipitada foi separada por filtração através de um pano. O precipitado coletado foi lavado pela suspensão em 0,6 volume de 2- propanol 60 vol% de durante meia hora. Em seguida, o material foi drenado em um pano e pressionado em uma prensa de pistão hidráulico. A pectina pressionada foi seca a 40 °C durante a noite em um forno ventilado. A pectina seca foi pesada e moída para passar em uma peneira de 0,5 mm.

[101] A atividade da celulase foi a seguinte: - Atividade da celulase: 7652 U/ml, - Atividade da galacturonase: 0,1 U/ml, - Atividade da pectina liase: 0,5 U/ml, - Atividade de Ramnogalaturonase: 1 U/ml.

RESULTADOS

[102] O rendimento de pectina, o grau de esterificação, a viscosidade intrínseca e a relação de pectina sensível ao cálcio foram mensurados. Os parâmetros foram mensurados conforme descrito em materiais e métodos. TABELA 1 COM TRATAMENTO ENZIMÁTICO

DE: grau de esterificação; GA: ácido galacturônico; Rendimento: rendimento gerado por etapa; cRendimento: rendimento acumulado de pectina; CSPR: proporção de pectina sensível ao cálcio TABELA 2 SEM TRATAMENTO ENZIMÁTICO

DE: grau de esterificação; GA: ácido galacturônico; Rendimento: rendimento gerado por etapa; cRendimento: rendimento acumulado de pectina; CSPR: proporção de pectina sensível ao cálcio

[103] Um maior rendimento de pectina é liberado quando se trata com enzima em contraste com o tratamento sem enzima (10,1% vs. 5,5%). A fração purificada resulta em uma CSPR relativamente alta sem enzima (0,93). No entanto, quando tratamos com esta enzima esta proporção é muito baixa (0,05).

EXPERIMENTO 2: TRATAMENTO ENZIMÁTICO SOZINHO MATERIAIS

[104] Foram suspensos 200,0 g de casca de laranja seca em 5,5 L de água desmineralizada a 50 °C e o pH foi ajustado para 4,00 com adição de algumas gotas de ácido nítrico (mínimo técnico 68% BDH/Prolabo) para atingir um nível estável. Foram adicionados 10,00 g de celulase (Multifect B da Genencor) e a mistura foi agitada a 50 °C por tr~es horas em pH 4,00. O teor no reator foi pesado e a mistura foi separada em um escorredor em uma fase de sedimentos e uma fase líquida que foi pesada. O filtrado foi purificado por centrifugação e uma quantidade pesada de centrifugado foi precipitada pela adição a 1,2 volumes de 2-propanol e agitada durante aprox. 1 hora a 30-40 °C. Em seguida, a pectina precipitada foi separada por filtração através de um pano. O precipitado coletado foi lavado pela suspensão em 0,6 volume de 2-propanol aquoso 60 vol% de durante meia hora. Em seguida, o material foi drenado em um pano e pressionado em uma prensa de pistão hidráulico. A pectina pressionada foi seca a 40 °C durante a noite em um forno ventilado. A pectina seca foi pesada e moída para passar em uma peneira de 0,5 mm.

[105] A atividade da celulase foi a seguinte: - Atividade da celulase: 7652 U/ml, - Atividade da galacturonase: 0,1 U/ml, - Atividade da pectina liase: 0,5 U/ml, - Atividade de Ramnogalaturonase: 1 U/ml.

RESULTADOS

[106] O rendimento de pectina, o grau de esterificação, a viscosidade intrínseca e a relação de pectina sensível ao cálcio foram mensurados. Os parâmetros foram mensurados conforme descrito em materiais e métodos. TABELA 3 TRATAMENTO ENZIMÁTICO SOZINHO

[107] Um rendimento acumulado mais baixo de pectina é liberado das cascas quando tratadas apenas com enzima, em contraste com um processo em duas etapas, as cascas são tratadas com ácido antes do tratamento com a enzima (13,8% vs. 36,9% (Tabela 1)). A fração de pectina obtida mostra uma CSPR baixa (0,06), que ilustra que a pectina obtida é principalmente pectina não sensível ao cálcio.

EXPERIMENTO 3: COM E SEM TRATAMENTO ENZIMÁTICO MATERIAIS

[108] Foram suspensos 400,0 g de casca de laranja seca em 11 L de água desmineralizada quente e o pH foi ajustado para 2,00 com adição de ácido nítrico (mínimo técnico 68% BDH/Prolabo) para atingir um nível estável a 70,0 °C. A mistura foi lentamente agitada a 70,0 °C durante 3 horas. O teor no reator foi pesado e a mistura foi separada em um escorredor em uma fase de sedimentos e uma fase líquida que foi pesada. A fase de sedimentos foi transferida para o reator e lavada durante uma hora a 70,0 °C pela adição de água desmineralizada quente a 6 L. O peso total foi pesado e separado novamente em uma fase de sedimentos e fase líquida, que foram pesados. Metade da quantidade do lodo (sedimentos) foi transferida para um reator de 5 L, e adicionou-se água a aprox. 4L no total. O pH foi aumentado para 4,0 com adição de solução aquosa a 20% de carbonato de sódio e a temperatura foi mantida a 50 °C pela utilização de um termostato. Foram adicionados 1,3 μL de galacturonase comercial (Rhoament PL de Rohm, Darmstadt) e a mistura foi agitada a 50 °C em pH 4,0 durante três horas. Em seguida, o conteúdo do reator foi pesado e separado em um escorredor. As quantidades de sedimento e filtrado foram pesadas. O mesmo procedimento foi realizado com a outra metade da quantidade de sedimento, exceto que não foi adicionada nenhuma galacturonase.

[109] Cada tipo de filtrado foi purificado por centrifugação e uma quantidade pesada de centrifugado foi precipitada pela adição a 1,2 volumes de 2-propanol e agitada durante aprox. 1 hora a 30-40 °C. Em seguida, a pectina precipitada foi separada por filtração através de um pano. O precipitado coletado foi lavado pela suspensão em 0,6 volume de 2- propanol 60 vol% de durante meia hora. Em seguida, o material foi drenado em um pano e pressionado em uma prensa de pistão hidráulico. A pectina pressionada foi seca a 40 °C durante a noite em um forno ventilado. A pectina seca foi pesada e moída para passar em uma peneira de 0,5 mm. TABELA 4 COM TRATAMENTO COM GALACTURONASE

DE: grau de esterificação; GA: ácido galacturônico; Rendimento: rendimento gerado por etapa; cRendimento: rendimento acumulado de pectina; CSPR: proporção de pectina sensível ao cálcio TABELA 5 SEM TRATAMENTO ENZIMÁTICO

EXPERIMENTO 4

[110] O mesmo procedimento que o Experimento 3, porém foram adicionadas doses mais altas de galacturonase. TABELA 6 COM TRATAMENTO COM GALACTURONASE

EXPERIMENTO 5

[111] O mesmo procedimento do Experimento 3, mas foi adicionado ácido oxálico na segunda extração. TABELA 7 TRATAMENTO COM GALACTURONASE

DE: grau de esterificação; GA: ácido galacturônico; Rendimento: rendimento gerado por etapa; cRendimento: rendimento acumulado de pectina; CSPR: proporção de pectina sensível ao cálcio TABELA 8 SEM TRATAMENTO ENZIMÁTICO

PARÁGRAFOS DE RESUMO

[112] A presente invenção será agora descrita por meio de parágrafos numerados. 1. Processo para extração de pectina a partir de um material de partida contendo pectina, compreendendo: a. uma extração ácida, em que o referido material de partida é submetido a extração usando uma solução ácida extraindo um primeiro extrato e deixando um primeiro resíduo, em que o referido primeiro extrato compreende pectina; b. um tratamento enzimático, em que o referido primeiro resíduo é submetido a um tratamento enzimático utilizando uma solução contendo enzima que resulta em um segundo extrato e um segundo resíduo, em que o referido segundo extrato compreende pectina. 2. O processo de acordo com o parágrafo 1, caracterizado pelo pH da referida solução contendo enzima ser superior ao pH da referida solução ácida. 3. O processo de acordo com o parágrafo 1 ou 2, caracterizado por pelo menos uma lavagem ser realizada entre a referida extração ácida (a) e o referido tratamento enzimático (b). 4. O processo de acordo com os parágrafos 1-3, caracterizado pela solução contendo enzima compreender uma ou mais enzimas. 5. O processo de acordo com os parágrafos 1-4, caracterizado pelo pH da referida solução ácida estar entre 1,5 a 2,5. 6. O processo de acordo com o parágrafo 5, caracterizado pelo pH da referida solução ácida ser um pH de 2 a 2,5. 7. O processo de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes, caracterizado pelo pH da referida solução contendo enzima ser de 2,5 a 10. 8. O processo de acordo com o parágrafo 7, caracterizado pelo pH da referida solução contendo enzima ser um pH de 3 a 5. 9. O processo de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes, caracterizado pela pelo menos uma lavagem ser realizada após o referido tratamento enzimático (b). 10. O processo de acordo com os parágrafos 3-9, caracterizado por pelo menos uma das referidas lavagens ser realizada com água. 11. O processo de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes, caracterizado pelo referido primeiro extrato e o referido segundo extrato serem misturados. 12. O processo de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes, caracterizado pelo referido primeiro extrato ser separado do referido primeiro resíduo e o referido segundo extrato ser separado do segundo resíduo por peneiração, peneiração úmida, decantação ou centrifugação. 13. O processo de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes, caracterizado pela referida solução contendo enzima compreender celulase. 14. O processo de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes, caracterizado pela temperatura da referida solução ácida estar entre 15-100 °C. 15. O processo de acordo com o parágrafo 14, caracterizado pela temperatura da referida solução ácida estar entre 65 a 75 °C. 16. O processo de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes, caracterizado pela temperatura da referida solução contendo enzima estar entre 15-75 °C. 17. O processo de acordo com o parágrafo 16, caracterizado pela temperatura da referida solução contendo enzima estar entre 30 a 60 °C. 18. O processo de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes, caracterizado pela referida extração ácida ser realizada durante um período de tempo de 0,5 a 10 horas. 19. O processo de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes, caracterizado pelo referido tratamento enzimático ser realizado durante um período de tempo de 0,5 a 5 horas. 20. O processo de acordo com os parágrafos 3 a 19, caracterizado pela referida pelo menos uma etapa de lavagem ser realizada em uma proporção de solução de lavagem:material vegetal seco de 5:1 a 50:1. 21. O processo de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes, caracterizado pelo referido material de partida ter sido submetido a um pré-tratamento. 22. O processo de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes, caracterizado pelo referido material de partida estar em estado fresco, congelado ou seco. 23. O processo de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes, caracterizado pela referida pectina ser adicionalmente purificada do referido extrato por centrifugação, filtração, troca iônica, concentração, precipitação, lavagem, prensagem, secagem e moagem. 24. O processo de acordo com o parágrafo 23, caracterizado pela precipitação ser realizada utilizando 2-propanol. 25. Um uso de pectina obtida por um processo de acordo com qualquer um dos parágrafos 1-24 para a estabilização de bebidas, estruturação de produtos lácteos acidificados, tal como uma fibra alimentar, um agente gelificante, um estabilizante em sobremesas lácteas e/ou um agente de complexação proteica. 26. O uso de acordo com o parágrafo 25, caracterizado pela bebida ser leite acidificado ou suco de frutas diluído.

Claims

1. PROCESSO PARA EXTRAÇÃO DE PECTINA, a partir de um material de partida contendo pectina, caracterizado por compreender: a) uma extração ácida, em que o referido material de partida é submetido a extração usando uma solução ácida extraindo um primeiro extrato e deixando um primeiro resíduo, em que a referida extração ácida é realizada por um período de tempo de 0,5 a 10 horas, em que o referido primeiro extrato compreende pectina; b) um tratamento enzimático, em que o referido primeiro resíduo é submetido a um tratamento enzimático utilizando uma solução contendo enzima, que compreende uma ou mais enzimas, resultando em um segundo extrato e um segundo resíduo, em que o referido segundo extrato compreende pectina; em que o pH da referida solução contendo enzima é superior ao pH da referida solução ácida, e o pH da solução contendo enzima é de 2,5 a 7.

2. PROCESSO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por pelo menos uma lavagem ser realizada entre a referida extração ácida (a) e o referido tratamento enzimático (b).

3. PROCESSO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2, caracterizado pelo pH da referida solução ácida ser de 1,5 a 2,5.

4. PROCESSO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado por pelo menos uma lavagem ser realizada após o referido tratamento enzimático (b).

5. PROCESSO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo referido primeiro extrato e o referido segundo extrato serem misturados.

6. PROCESSO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo referido primeiro extrato ser separado do referido primeiro resíduo e o referido segundo extrato ser separado do segundo resíduo por peneiração, peneiração úmida, decantação ou centrifugação.

7. PROCESSO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pela referida solução contendo enzima compreender celulase.

8. PROCESSO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pela referida solução contendo enzima compreender galacturonases.

9. PROCESSO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pela temperatura da referida solução ácida estar entre 15-100 °C.

10. PROCESSO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pela temperatura da referida solução contendo enzima estar entre 15-75 °C.

11. PROCESSO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 10, caracterizado pela referida pelo menos uma etapa de lavagem ser realizada em uma proporção de solução de lavagem:material vegetal seco de 5:1 a 50:1.

12. PROCESSO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pela referida pectina ser adicionalmente purificada a partir do referido extrato por centrifugação, filtração, troca iônica, concentração, precipitação, lavagem, prensagem, secagem e moagem, em que a precipitação é realizada usando 2-propanol.