BR112017018775B1 - Métodos e composições para previsão da eficácia terapêutica dos tratamentos e prognósticos de câncer - Google Patents

Abstract

MÉTODOS E COMPOSIÇÕES PARA PREVISÃO DA EFICÁCIA TERAPÊUTICA DOS TRATAMENTOS E PROGNÓSTICOS DE CÂNCER. A presente invenção se refere, de uma forma geral, a métodos e composições para a previsão da eficácia terapêutica dos tratamentos contra o câncer e o prognóstico de câncer. A invenção divulga marcadores que estão associados com resultados favoráveis e desfavoráveis, respectivamente, em certos tratamentos contra o câncer e são úteis como marcadores de prognósticos para o câncer. Os métodos envolvendo esses marcadores são divulgados para prever o benefício da terapia e prognóstico de câncer do resultado clínico para pacientes com câncer.

Description

CAMPO TÉCNICO DA INVENÇÃO

[001] A invenção se refere, de uma forma geral, a métodos e composições para a previsão da eficácia terapêutica de tratamentos contra o câncer e o prognóstico de câncer. A invenção revela marcadores que estão associados com resultados favoráveis e desfavoráveis, respectivamente, em certos tratamentos do câncer e são úteis como marcadores de prognóstico para câncer. Métodos envolvendo estes marcadores são divulgados para prever benefício da terapia do câncer e prognosticar o resultado clínico em pacientes com câncer.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[002] Cânceres do estômago e do esôfago (gastroesofágico; GE) estão entre as neoplasias malignas de maior necessidade médica não satisfeitas. O câncer gástrico é a segunda principal causa de morte em todo o mundo. A incidência de câncer de esôfago tem aumentado nas últimas décadas e a taxa de sobrevivência global em cinco anos para o câncer GE é de 20 - 25%, apesar da agressividade do tratamento padrão estabelecido associado a efeitos colaterais significativos. A necessidade médica de pacientes que sofrem deste tipo de câncer é alta e medicamentos inovadores são necessários.

[003] A molécula de junção forte Claudina 18 isotipo 2 (CLDN18.2) é uma variante splice Claudina 18 associada ao câncer [Niimi, T., et al., Mol Cell Biol, 2001. 21 (21): p. 7380-90; Tureci, O., et al., Gene, 201 1. 481 (2): p. 83-92]. CLDN18.2 é uma proteína transmembranar de 27,8 kDa compreendendo quatro domínios de extensão de membrana com dois pequenos laços extracelulares (loop I abraçado pela região hidrofóbica 1 e região hidrofóbica 2; loop2 abraçado por regiões hidrofóbicas 3 e 4). CLDN18.2 é um antígeno de linhagem gástrica altamente seletivo, exclusivamente expresso em células epiteliais gástricas diferenciadas de curta duração e não detectável em qualquer outro tecido humano normal. O antígeno é expresso ectopicamente em níveis significativos em uma diversidade de cânceres humanos, incluindo câncer gastroesofágico e pancreático [Sahin, U., et al., Clin Cancer Res, 2008. 14 (23): p. 7624-34]. A proteína CLDN18.2 também é frequentemente detectada em metástases linfonodais de câncer gástrico e em metástases distantes. O CLDN18.2 parece estar envolvido na proliferação de células tumorais positivas CLDN18.2, uma vez que a regulação negativa do alvo pela tecnologia de siRNA resulta na inibição da proliferação de células de câncer gástrico.

[004] IMAB362 é um anticorpo monoclonal quimérico de IgGl dirigido contra o subtipo CLDN18.2. IMAB362 reconhece o primeiro domínio extracelular de CLDN18.2 com elevada afinidade e especificidade e não se liga a qualquer outro membro da família Claudina incluindo a variante 1 de splicing de um intimamente relacionado Claudina 18 (CLDN18.1).

[005] Em xenoenxertos humanos que expressam regressões benéficas de sobrevivência CLDN18.2 e tumorais foram observados em camundongos após a administração de IMAB362. Quando administrado por via intravenosa em espécies animais relevantes, nenhuma toxicidade em tecido gástrico é observada como o epítopo alvo não é acessível. No entanto, o alvo do tumor torna-se acessível para IMAB362 durante a transformação maligna. IMAB362 empacota quatro mecanismos altamente potentes de ação independentes: (i) citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC), (ii) citotoxicidade dependente do complemento (CDC), (iii) indução de apoptose induzida por ligação cruzada do alvo na superfície do tumor e (iv) inibição direta da proliferação.

[006] Um estudo anterior de fase I avaliou IMAB362 como monoterapia em uma única dose em pacientes com câncer gastroesofágico em estágio tardio. Neste teste, foram aplicadas cinco doses de IMAB362 (33, 100, 300, 600 e 1000 mg / m2) como monoterapia. Este estudo mostra que uma única administração deste anticorpo é segura e bem tolerada em uma dosagem de até 1000 mg / m2, pois não foram observadas diferenças relevantes no perfil AE e outros parâmetros de segurança entre os grupos de dose (AE = evento adverso) . Os melhores resultados em relação à atividade antitumoral foram obtidos para os grupos de 300 mg / m2 e 600 mg / m2. Em dois pacientes do grupo de 300 mg / m2, a doença foi controlada e, como eles tiveram apenas lesões não alvo, foram classificados como não-CR, não-PD (CD = resposta completa, PD = doença progressiva). A duração do não-CR, não-PD foi de cerca de dois meses e seis semanas, respectivamente. Os níveis de tumores destes três pacientes permaneceram estáveis. Um paciente no grupo de 600 mg / m2 apresentou doença estável (SD). A duração do SD foi de cerca de 2 meses.

[007] Na base de mecanismos altamente potentes de ação para a morte celular induzida de IMAB362, o benefício de sobrevivência de camundongos portadores de IMAB362 -tratados um tumor 18,2-positivo CLDN, a ausência de qualquer indicação de toxicidade IMAB362 -relacionados, e os resultados promissores do ensaio de fase I de um estudo de fase Ila foi inicializado. Este estudo clínico de fase IIa foi conduzido para determinar a segurança, tolerabilidade e actividade anti-tumoral de doses repetitivas de IMAB362 em pacientes com metástases, doença refratária ou recorrente avançado de adenocarcinoma do estômago ou do esôfago inferior comprovada por histologia.

[008] Neste ensaio de fase IIa, o medicamento de investigação foi aplicado em três coortes, que foram recrutados sequencialmente. Um primeiro coorte de três pacientes recebeu doses repetidas de IMAB362 em um nível de dose mais baixo (área de superfície corporal de 300 mg / m2). O anticorpo foi administrado como uma infusão intravenosa de 2 h. Como nenhuma indicação de toxicidade relacionada ao IMAB362 foi detectada no primeiro coorte, a dose IMAB362 da segunda coorte (três pacientes) foi aumentada para 600 mg / m2 de área de superfície corporal. Em uma terceira coorte, 19 pacientes foram alocados com a mesma dose (aplicação repetitiva de 600 mg / m2 de área de superfície corporal). As amostras de pacientes desta coorte foram analisadas para várias análises que acompanham, isto é, ADCC, CDC, imunofenotipagem e polimorfismos imunes genéticos. Todos os pacientes de todas as coortes receberam doses repetidas de 1MAB362 a cada duas semanas nas visitas 2, 5, 6, 7 e 8 (5 aplicações).

[009] A discrepância de tumores positivos para o antígeno (que super-expressam o antígeno alvo para extensão semelhante) no que diz respeito à capacidade de resposta à intervenção com anticorpos monoclonais terapêuticos, tais como 1MAB362 sugere que existem fatores adicionais que estão associadas com o resultado da terapia. Isso exige seleção cuidadosa dos pacientes que podem ter um benefício da terapia de anticorpos.

[0010] Portanto, existe uma necessidade para desenvolver um ensaio para medir a elegibilidade de pacientes para terapia com anticorpos. A presente invenção aborda esta necessidade proporcionando marcadores, que são associados com resultados favoráveis e desfavoráveis, respectivamente, na terapia com anticorpos. Além disso, a presente invenção demonstra que estes marcadores são úteis como marcadores para prognóstico de resultados clínicos para os pacientes com câncer.

[0011] Os resultados aqui apresentados podem ser usados para selecionar um tratamento apropriado para um doente de câncer e, em particular, para decidir se a terapia de anticorpo deve ser administrada a um paciente com câncer. SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0012] A presente invenção proporciona métodos de SNP (polimorfismo de um único nucleotídeo), tais como genotipagem para utilização na avaliação da probabilidade de um indivíduo responder a um tratamento terapêutico para o câncer, na seleção de um tratamento ou regime preventivo (por exemplo, para decidir se deve ou não administrar um agente terapêutico particular a um indivíduo tendo câncer ou que está em risco aumentado de desenvolver câncer no futuro), ou para avaliar uma prognóstico do indivíduo para a gravidade e recuperação da doença.

[0013] A presente invenção se baseia na constatação de que certos genótipos para SNPs estão associados com sensibilidade / insensibilidade do câncer para o tratamento de anticorpo, tal como o tratamento de câncer positivo para CLDN18.2, em particular, câncer gastroesofágico CLDN18.2 positiva com 1MAB362. A presente invenção é ainda baseada na descoberta de que certos genótipos para os SNPs são associados com o resultado clínico em pacientes com câncer e, assim, são úteis para o prognóstico do câncer.

[0014] Em um aspecto, a invenção se refere a um método de avaliação (i) se um paciente com câncer com um tumor antígeno- positivo é um tumor que responde ao tratamento com um anticorpo contra o antígeno tumoral, e / ou (ii) se um paciente com câncer, de um modo preferido, um doente com câncer com um tumor antígeno-positivo do tumor, irá experimentar sobrevida livre de progressão, o referido método compreende a determinação do genótipo para um ou mais polimorfismos de um único nucleotídeo selecionados do grupo que consiste em FCGR2A rs1801274, MUC1 rs4072037, IL-10 rs1800896, DNMT3A rs1550117, SMAD4 rs12456284, EGF rs4444903, CDH1 rs16260, ERCC1 rs11615, and FCGR3A rs396991 em uma amostra obtida do paciente.

[0015] Em uma concretização, a presença do genótipo heterozigótico rsl FCGR2A 801274 [CT] indica um risco reduzido de um doente com câncer não ser um respondedor ao tratamento com o anticorpo e / ou uma redução do risco de um doente com câncer não experimentar sobrevida livre de progressão.

[0016] Em uma concretização, a presença do genótipo homozigótico rsl FCGR2A 801274 [TT] e / ou o genótipo homozigótico FCGR2A rsl 801274 [CC] indica um aumento do risco de um doente com câncer não ser um respondedor ao tratamento com o anticorpo e / ou um aumento do risco de um paciente com câncer não experimentar sobrevida livre de progressão.

[0017] Em uma concretização, a presença do genótipo homozigótico MUC1 rs4072037 [AA] indica um risco reduzido de um paciente com câncer não ser um respondedor para o tratamento com o anticorpo e / ou um risco reduzido de um paciente com câncer não experimentar uma sobrevida livre de progressão.

[0018] Em uma concretização, a presença do genótipo homozigótico MUC1 rs4072037 [GG] indica um aumento do risco de um doente com câncer não ser um respondedor ao tratamento com o anticorpo e / ou um aumento do risco de um doente com câncer não tendo uma sobrevida livre de progressão.

[0019] Em uma concretização, a presença do genótipo homozigótico IL-10 rs1800896 [GG] indica um risco reduzido de um paciente com câncer não ser um respondedor para o tratamento com o anticorpo e / ou um risco reduzido de um paciente com câncer que não sofra de sobrevida livre de progressão .

[0020] Em uma concretização, a presença do genótipo heterozigótico ODMT3A rs1550117 [GA] indica um risco reduzido de um paciente com câncer não ser um respondedor para o tratamento com o anticorpo e / ou um risco reduzido de um paciente com câncer que não experimenta uma sobrevida livre de progressão.

[0021] Em uma concretização, a presença do genótipo heterozigótico SMG4 rs12456284 [GA] indica um risco reduzido de um paciente com câncer não ser um respondedor para o tratamento com o anticorpo e / ou um risco reduzido de um paciente com câncer que não sofra de sobrevida livre de progressão.

[0022] Em uma concretização, a presença do genótipo homozigótico EGF rs4444903 [AA] indica um risco reduzido de um paciente com câncer não ser um respondedor para o tratamento com o anticorpo e / ou um risco reduzido de um paciente com câncer que não experimenta uma sobrevivência sem progressão.

[0023] Em uma concretização, a presença do genótipo homozigótico CDH1 RS 16260 [AA] indica um risco reduzido de um doente com câncer não ser um respondedor ao tratamento com o anticorpo e / ou uma redução do risco de um doente com câncer não tendo uma sobrevida livre de progressão.

[0024] Em uma concretização, a presença do genótipo homozigótico ERCCl rsl 1615 [TT] indica um risco reduzido de um paciente com câncer não ser um respondedor para o tratamento com o anticorpo e / ou um risco reduzido de um paciente com câncer que não experimenta sobrevida livre de progressão.

[0025] Em uma concretização, a presença do genótipo heterozigótico rs396991 FCGR3A [TG] e / ou do genótipo homozigático rs396991 FCGR3A [TT] indica um risco reduzido de um doente com câncer não ser um respondedor ao tratamento com o anticorpo e / ou uma redução do risco de um paciente com câncer não experimentar sobrevida livre de progressão.

[0026] Em uma concretização, a presença dos genótipos homozigóticos rs396991 FCGR3A [GG] indica um aumento do risco de um doente com câncer não ser um respondedor ao tratamento com o anticorpo e / ou um aumento do risco de um doente com câncer não tendo uma sobrevida livre de progressão.

[0027] Em uma concretização, o antígeno tumoral é a proteína CLDN18.2.

[0028] Em um aspecto, a invenção refere-se a um método de avaliação i. ) se um paciente com câncer com um tumor CLDN18.2- positivo é um respondedor ao tratamento com um anticorpo contra a proteína CLDN18.2, e / ou j. i) se um paciente com câncer, de um modo preferido, um doente com câncer com um tumor CLDN18,2-positivo irá experimentar sobrevida livre de progressão, o referido método compreende a determinação do genótipo para um ou mais polimorfismos de um único nucleotídeo seleccionados do grupo que consiste em FCGR2A rs1801274, MUC1 rs4072037, IL-10 rs1800896, DNMT3A rs1550117, SMAD4 rs12456284, EGF rs4444903, CDH1 rs16260, ERCC1 rs11615 e FCGR3A rs396991 em uma amostra obtida de um paciente.

[0029] Em uma concretização, a presença do genótipo heterozigótico FCGR2A rs1801274 [CT] indica um risco reduzido de um doente com câncer não ser um respondedor ao tratamento com o anticorpo e / ou uma redução do risco de um doente com câncer não tendo uma sobrevida livre de progressão.

[0030] Em uma concretização, a presença do genótipo homozigótico FCGR2A rs1801274 [TT] e / ou do genótipo homozigótico FCGR2A rs1801274 [CC] indica um aumento do risco de um doente com câncer não ser um respondedor ao tratamento com o anticorpo e / ou um aumento risco de um paciente com câncer não experimentando sobrevida livre de progressão.

[0031] Em uma concretização, a presença do genótipo homozigótico MUCl rs4072037 [AA] indica um risco reduzido de um paciente com câncer não ser um respondedor para o tratamento com o anticorpo e / ou um risco reduzido de um paciente com câncer que não experimenta livre de progressão sobrevivência.

[0032] Em uma concretização, a presença do genótipo homozigótico MUC1 rs4072037 [GG] indica um aumento do risco de um doente com câncer não ser um respondedor ao tratamento com o anticorpo e / ou um aumento do risco de um doente com câncer não tendo uma sobrevida livre de progressão.

[0033] Em uma concretização, a presença do genótipo homozigótico IL-10 rs 1800896 [GG] indica um risco reduzido de um paciente com câncer não ser um respondedor para o tratamento com o anticorpo e / ou um risco reduzido de um paciente com câncer que não experimenta sobrevida livre de progressão.

[0034] Em uma concretização, a presença do genótipo heterozigótico DNMT3A rs1550117 [GA] indica um risco reduzido de um paciente com câncer não ser um respondedor para o tratamento com o anticorpo e / ou um risco reduzido de um paciente com câncer que não experimenta sobrevida livre de progressão.

[0035] Em uma concretização, a presença do genótipo heterozigótico SMAD4 rs12456284 [GA] indica um risco reduzido de um paciente com câncer não ser um respondedor para o tratamento com o anticorpo e / ou um risco reduzido de um paciente com câncer que não experimenta progressão - sobrevivência livre.

[0036] Em uma concretização, a presença do genótipo homozigótico EGF rs4444903 [AA] indica um risco reduzido de um doente com câncer não ser um respondedor ao tratamento com o anticorpo e / ou uma redução do risco de um doente com câncer não tendo uma sobrevida livre de progressão.

[0037] Em uma concretização, a presença do genótipo homozigótico CDH1 rs16260 [AA] indica um risco reduzido de um paciente com câncer não ser respondedor para o tratamento com o anticorpo e / ou um risco reduzido de um paciente com câncer que não experimenta sobrevida livre de progressão.

[0038] Em uma concretização, a presença do genótipo homozigótico ERCC1 rs11615 [TT] indica um risco reduzido ou um paciente com câncer não sendo um respondedor para o tratamento com o anticorpo e / ou um risco reduzido de um paciente com câncer sem experiênciar sobrevida livre de progressão.

[0039] Em uma concretização, a presença do genótipo heterozigótico FCGR3A rs396991 [TG] e / ou do genótipo homozigótico FCGR3A rs396991 [TT] indica um risco reduzido de um doente com câncer não ser um respondedor ao tratamento com o anticorpo e / ou uma redução do risco de um paciente com câncer não experimentando sobrevida livre de progressão.

[0040] Em uma concretização, a presença do genótipo homozigótico FCGR3A rs396991 [GG] indica um aumento do risco de um doente com câncer não ser um respondedor ao tratamento com o anticorpo e / ou um aumento do risco de um doente com câncer não tendo uma sobrevida livre de progressão.

[0041] Em uma concretização de todos os aspectos da invenção, o anticorpo atua através do recrutamento de sistema imune do paciente para destruir as células tumorais. Em uma concretização, o anticorpo atua através dependente de anticorpo de citotoxicidade mediada por células (ADCC) e / ou citotoxicidade dependente do complemento (CDC). Em uma concretização, o anticorpo é um anticorpo monoclonal. Em uma concretização de todos os aspectos da invenção, o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 17 ou 51 ou um seu fragmento, e uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 24 ou um seu fragmento.

[0042] In one embodiment of all aspects of the invention, non-responsiveness to treatment with the antibody comprises a relative reduction in one or more of survival, progression-free survival, recurrence-free survival, distant recurrence-free survival, and stable disease.

[0043] Em um aspecto, a invenção refere-se a um método de tratamento de um doente de câncer, compreendendo o referido método k. avaliar se o paciente de câncer é um respondedor ao tratamento com um anticorpo através do método da invenção e l. tratar o paciente com câncer com um anticorpo se o paciente tiver um risco reduzido por não ser um respondente ao tratamento com o anticorpo ou (ii) não tratar o paciente com câncer com um anticorpo e / ou tratar o paciente com câncer com um regime de tratamento que compreende um tratamento que é diferente de um tratamento com um anticorpo se o paciente tiver um risco aumentado por não ser um respondente ao tratamento com o anticorpo.

[0044] Em uma concretização, o regime de tratamento compreende um tratamento por não ser dependente do sistema imunológico do paciente. Em uma concretização, o regime de tratamento não inclui um tratamento com um anticorpo por intermédio recrutando o sistema imune do paciente para destruir as células tumorais. Em uma concretização, o regime de tratamento compreende a cirurgia, quimioterapia e / ou radiação. Em uma concretização, o regime de tratamento compreende um tratamento com um inibidor de molécula pequena do antígeno tumoral e / ou um conjugado anticorpo-fármaco em que o anticorpo é dirigido contra o antígeno tumoral. Em uma concretização, o conjugado anticorpo-fármaco é um anticorpo acoplado a um marcador radioactivo, quimioterapêutico ou porção de toxina. Em uma concretização, o conjugado anticorpo-fármaco é um anticorpo acoplado a um composto citostático ou citotóxico.

[0045] Em um aspecto, a invenção refere-se a um método de avaliação do resultado clínico de um paciente de câncer, compreendendo o referido método a determinação do genótipo de um ou mais polimorfismos de um único nucleotídeo seleccionados a partir do grupo consistindo de FCGR2A rs1801274, MUC1 rs4072037, IL-10 rs1800896, DNMT3A rs1550117, SMAD4 rs12456284, EGF rs4444903, CDH1 rs16260, ERCC1 rs11615, e FCGR3A rs396991 em uma amostra obtida a partir do paciente.

[0046] Em uma concretização, a presença do genótipo heterozigótico FCGR2A rs1801274 [CT] indica um risco reduzido de prognóstico clínico.

[0047] Em uma concretização, a presença do genótipo homozigótico FCGR2A rs1801274 [TT] e / ou do genótipo homozigótico FCGR2A rs1801274 [CC] indica um risco aumentado de prognóstico clínico.

[0048] Em uma concretização, a presença do genótipo homozigótico MUC1 rs4072037 [AA] indica um risco reduzido de prognóstico clínico.

[0049] Em uma concretização, a presença do genótipo homozigótico MUC1 rs4072037 [GG] indica um risco aumentado de prognóstico clínico.

[0050] Em uma concretização, a presença do genótipo homozigótico IL-10 rsl 800896 [GG] indica um risco reduzido de prognóstico clínico deficiente.

[0051] Em uma concretização, a presença do genótipo heterozigótico ODMT3A rs 1550117 [GA] indica um risco reduzido de prognóstico clínico deficiente.

[0052] Em uma concretização, a presença do genótipo heterozigótico SMAD4 rsl 2456284 [GA] indica um risco reduzido de prognóstico clínico deficiente.

[0053] Em uma concretização, a presença do genótipo homozigótico EGF rs4444903 [AA] indica um risco reduzido de prognóstico clínico.

[0054] Em uma concretização, a presença do genótipo homozigótico CDH1 rs16260 [AA] indica um risco reduzido de prognóstico clínico ruim.

[0055] Em uma concretização, a presença do genótipo homozigótico ERCC1 rs11615 [TT] indica um risco reduzido de prognóstico clínico.

[0056] Em uma concretização, a presença do genótipo heterozigótico FCGR3A rs396991 [TG] e / ou o genótipo homozigótico FCGR3A rs396991 [TT] indica um risco reduzido de prognóstico clínico.

[0057] Em uma concretização, a presença do genótipo homozigótico FCGR3A rs396991 [GG] indica um risco aumentado de prognóstico clínico.

[0058] Em uma concretização, a avaliação do resultado clínico de um paciente com câncer compreende prever a probabilidade de um ou mais de sobrevida, sobrevida livre de progressão, sobrevida livre de recorrência, sobrevida livre recorrência - distante e doença estável. Em uma concretização, o resultado clínico deficiente compreende uma redução relativa em um ou mais de sobrevida, sobrevida livre de progressão, sobrevida livre de recorrência, sobrevida livre de recorrência distante e doença estável.

[0059] Em uma concretização, o paciente tem um tumor antígeno-positivo de tumor e recebe um tratamento com um anticorpo contra o antígeno tumoral.

[0060] Em uma concretização de todos os aspectos da invenção, a amostra é uma amostra que compreende DNA. Em uma concretização, o DNA foi extraído a partir de uma amostra corporal do paciente. Em uma concretização, o DNA foi extraído a partir de sangue.

[0061] Em uma concretização de todos os aspectos da invenção, o tumor é um tumor sólido. Em uma concretização, o tumor é um tumor gastroesofágico. Em uma concretização, o tumor é um adenocarcinoma avançada do estômago ou do esôfago inferior. Em uma concretização, o câncer é câncer gastro- esofágico. Em uma concretização, o câncer é um adenocarcinoma avançada do estômago ou do esôfago inferior.

[0062] Em um aspecto adicional, a presente invenção refere-se a um kit que compreende meios para determinar o genótipo para um ou mais polimorfismos de um único nucleotídeo selecionados do grupo que consiste em FCGR2A rs1801274, MUC1 rs4072037, IL-10 rs1800896, DNMT3A rs1550117, SMAD4 rs12456284, EGF rs4444903, CDH1 rs16260, ERCC1 rs11615, and FCGR3A rs396991 em uma amostra obtida do paciente. Em uma concretização, o referido kit é útil para conduzir os métodos de todos os aspectos da presente invenção. Em uma concretização, o referido kit compreende ainda um suporte de dados. Em uma concretização preferida, o referido suporte de dados é um transportador de dados eletrónico ou não eletrónico. Em uma concretização, o referido suporte de dados compreende instruções sobre como realizar os métodos de todos os aspectos da invenção.

[0063] Outros objectos, vantagens e características da presente invenção se tornam evidentes a partir da descrição detalhada que se segue quando considerada em conjunto com as figuras que a acompanham.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0064] A Figura 1 mostra polimorfismos de nucleotídeos individuais com uma mudança estatisticamente significante de frequência de genótipo entre o paciente e população de controle (x2 -teste, p <0,05).

[0065] Atribuição de genótipos específicos SNP para barrar seções é indicado. Pat. - População de pacientes, Co. - População de controle.

[0066] A Figura 2 mostra a frequência relativa de genótipos homozigóticas de risco por doente em relação ao número de fatores de risco SNP investigados por paciente. Os pacientes são classificados segundo a frequência cada vez maior de fatores de risco homozigóticos acumulados.

[0067] A Figura 3 mostra a sobrevida livre de progressão de pacientes PP diferenciadas por genótipo rs1801274 (FCGR2A) (Kaplan-Meier)

[0068] A Figura 4 mostra a sobrevida livre de progressão de pacientes com SAF diferenciados por genótipo rsl801274(FCGR2A) (Kaplan-Meier)

[0069] A Figura 5 mostra a Sobrevida livre de progressão de pacientes com PP diferenciada pelo genótipo rs 1800896 (IL-10) (curva de Kaplan-Meier)

[0070] A Figura 6 mostra a Sobrevida sem progressão de pacientes com FAS diferenciada pelo genótipo rs 1800896 (IL-10) (curva de Kaplan-Meier)

[0071] A Figura 7 mostra a sobrevida livre de progressão de pacientes com SAF diferenciadas por genótipo rsl550117 (DNMT3A) (Kaplan-Meier)

[0072] A Figura 8 mostra a sobrevida livre de progressão dos pacientes PP diferenciadas por genótipo rs 12456284 (SMAD4) (Kaplan-Meier)

[0073] A Figura 9 mostra a sobrevida livre de progressão dos pacientes PP diferenciadas por genótipo rs4072037 (MUC1) (Kaplan-Meier)

[0074] A Figura 10 mostra a sobrevida livre de progressão de pacientes com SAF diferenciadas por genótipo rs4072037 (MUC1) (Kaplan-Meier)

[0075] A Figura 11: sobrevida livre de progressão de pacientes com SAF diferenciadas por rs4444903 (EGF) genótipo (Kaplan-Meier)

[0076] A Figura 12 mostra a Sobrevida sem progressão de pacientes com FAS diferenciada pelo genótipo rsl6260 (CD HI) (curva de Kaplan-Meier)

[0077] Figura 13 mostra a sobrevida livre de progressão dos pacientes PP diferenciadas por genótipo rsl l615 (ERCC1) (Kaplan-Meier)

[0078] A Figura 14 mostra a sobrevida livre de progressão dos pacientes PP diferenciadas por genótipo rs396991 (FCGR3A) (Kaplan-Meier)

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0079] Embora a presente invenção seja descrita em detalhe abaixo, é para ser entendido que esta invenção não está limitada a metodologias, protocolos e reagentes particulares descritos aqui, uma vez que estes podem variar. É também para ser compreendido que a terminologia aqui utilizada é para o propósito de descrever apenas concretizações particulares, e não se destina a limitar o escopo da presente invenção que será limitado apenas pelas reivindicações anexas. A menos que definido de outro modo, todos os termos técnicos e científicos aqui utilizados têm os mesmos significados que comumente entendido por um técnico versado no assunto.

[0080] No que se segue, será descrito os elementos da presente invenção. Estes elementos são listados com concretizações específicas, no entanto, deve ser entendido que eles podem ser combinados em qualquer forma e em qualquer número de criar concretizações adicionais. As concretizações diversamente exemplificativas descritas e preferidas não devem ser interpretadas de forma a limitar a presente invenção apenas ao descrito explicitamente concretizações. Esta descrição deve ser entendida para suportar e abrangem concretizações que se combinam as concretizações explicitamente descritas com qualquer número dos elementos descritos e / ou preferidos. Além disso, quaisquer permutações e combinações de todos os elementos descritos neste pedido deve ser considerado divulgada pela descrição do presente pedido, a menos que o contexto indique o contrário.

[0081] De preferência, os termos aqui utilizados são definidos como descrito em "A multilingual glossary of biotechnological terms: (IUPAC Recommendations)", H.G.W. Leuenberger, B. Nagel, and H. Kolbl, Eds., Helvetica Chimica Acta, CH-4010 Basel, Switzerland, (1995).

[0082] A prática da presente invenção irá empregar, salvo indicação em contrário, métodos convencionais de química, bioquímica, biologia celular, imunologia, e técnicas de DNA recombinantes, que são explicadas na literatura no campo (cf, por exemplo, Molecular Cloning: A Labocamundongory Manual, 2 nd Edition, J. Sambrook et al., eds., Cold Spring Harbor Labocamundongory Press, Cold Spring Harbor 1989).

[0083] Ao longo deste relatório descritivo e das reivindicações que se seguem, a menos que o contexto exija de outra forma, a palavra "compreender", e variações tais como "compreende" e "compreendendo", será entendida como implicando a inclusão de um elemento declarado, inteiro ou passo ou grupo de membros, inteiros ou passos mas não a exclusão de qualquer outro elemento, inteiro ou passo ou grupo de membros, inteiros ou passos, embora em algumas concretizações, tais outro membro, inteiro ou passo ou grupo de membros, inteiros ou passos pode ser excluído, ou seja o objecto consiste na inclusão OA indicado membro, inteiro ou passo ou grupo de membros, inteiros ou passos. Os termos "um" e "uma" e "o" e de referência semelhante ao utilizado no contexto da descrio da invenção (especialmente no contexto das reivindicaes) devem ser entendidos para cobrir ambos o singular e o plural, a menos que aqui indicado em contrário ou claramente contradito pelo contexto. Recitação de gamas de valores aqui destina-se apenas a servir como um método abreviado de referir individualmente cada valor separado que cai dentro da gama. A menos que de outro modo aqui indicado, cada valor individual é incorporado na especificação como se fosse aqui individualmente recitados. Todos os modos aqui descritos podem ser realizados em qualquer ordem adequada, a menos que aqui indicado de outro modo ou de outro modo claramente contrariado pelo contexto. O uso de qualquer e todos os exemplos, ou linguagem exemplificativa (por exemplo, "tal como"), aqui fornecido destina-se apenas a ilustrar melhor a invenção e não constitui uma limitação do âmbito da invenção reivindicado de outro modo. Nenhuma linguagem na especificao deve ser entendida como indicando qualquer elemento não reivindicado essencial para a prática da invenção.

[0084] Vários documentos são citados ao longo do texto deste relatório descritivo. Cada um dos documentos aqui citados, incluindo (todas as patentes, pedidos de patente, publicações científicas, especificações do fabricante, instruções, etc.), quer supra ou infra, são aqui incorporados por referência na sua totalidade. Nada aqui deve ser interpretado como uma admissão de que a invenção não tem direito a anteceder tal divulgação em virtude de invenção anterior.

[0085] Os presentes inventores proporcionam testes para medir a elegibilidade de pacientes para certos tratamentos do câncer, em particular, a terapia de anticorpos, e para tirar conclusões sobre o prognóstico de um doente com câncer. Os resultados obtidos usando estes testes permite que o médico decida sobre um tratamento apropriado para um doente de câncer, e, em particular, para decidir se a terapia de anticorpo deve ser administrada a um paciente com câncer em particular.

[0086] O termo "Polimorfismo de único nucleotídeo" ou "SNP" refere-se a uma variação da sequência de DNA que ocorre geralmente dentro de uma população, em que um único nucleotídeo no genoma (ou outra sequência compartilhada) difere entre os membros de uma espécie biológica ou cromossomas emparelhados. SNPs podem ocorrer em sequências de codificação de genes, regiões não codificantes de genes, ou em regiões intergénicas (regiões entre genes). SNPs dentro de uma sequência de codificação pode, mas não necessariamente alterar a sequência de aminoácidos da proteína que é produzida, devido à degenerescência do código genético. Assim, os SNPs na região codificadora são de dois tipos, SNPs sínimos e não-sínimos. SNPs sínimos não afetam a sequência de proteína, enquanto SNPs não-sínimos alteram a sequência de aminoácidos da proteína. Os SNPs não-sínimos são de dois tipos: missense e não-senso. SNPs que não estão em regiões de codificação de proteína pode ainda afetar o splicing do gene, o fator de transcrição de ligação, a degradação do RNA mensageiro, ou a sequência de RNA não-codificante. A expressão do gene afetada por este tipo de SNP é referida como um eSNP (expressão de SNP) e podem estar a montante ou a jusante do gene.

[0087] Vários métodos conhecidos no estado da técnica podem ser utilizados para determinar o genótipo de SNPs. Métodos analíticos para descobrir novos SNPs e detectar SNPs conhecidos incluem, por exemplo, sequenciamento de DNA, electroforese capilar, espectrometria de massa, polimorfismo de conformação de cadeia simples (SSCP), análise eletroquímica, HPLC desnaturante e eletroforese em gel, polimorfismo de comprimento de fragmentos de restrição e análise de hibridização.

[0088] O processo de determinar quais nucleotídeos estão presente em uma posição SNP particular aqui descrito, para um ou ambos os alelos, podem ser referidos pelas frases tais como "a determinação do genótipo de um SNP" ou "geno tipagem de SNP". Assim, essas frases podem referir-se à detecção de um único alelo (nucleotídeos) a uma posição de SNP ou pode abranger a detecção de ambos os alelos (nucleotídeos) a uma posição de SNP (tal como, para determinar o estado homozigótico ou heterozigótico de uma posição de SNP). Além disso, essas frases podem também referir-se a detecção de um resíduo de aminoácido codificado por um SNP (tal como resuos de aminoácidos alternativos que são codificados por codões diferentes criadas pelos nucleotídeos alternativos em uma posição SNP).

[0089] Um reagente que detecta especificamente uma posição de SNP de alvo específico aqui revelada, e que é de preferência específico para um nucleotídeo particular (alelo) da posição de SNP alvo (isto é, o reagente, de preferência, pode diferenciar entre diferentes nucleotídeos alternativos numa posição SNP de alvo , permitindo assim que a identidade do nucleotídeo presente na posição SNP alvo seja determinada) pode ser usado para detecção de SNP. Tipicamente, tal reagente de detecção se hibridiza com uma molécula de ácido nucleico SNP-alvo resultante por combinação de bases complementares de uma maneira específica de sequência e discrimina a sequência variante alvo de outras sequências de ácido nucleico tais como uma forma conhecida em uma amostra de teste. Um exemplo de um reagente de detecção é um iniciador ou sonda de ácido nucleico que não ocorre naturalmente que se hibridiza com um ácido nucleico alvo contendo um SNP aqui revelado. Numa concretização preferida, tal iniciador ou sonda pode diferenciar entre os ácidos nucleicos que possuem um nucleotídeo particular (alelo) na posição alvo SNP de outros ácidos nucleicos que possuem um nucleotídeo diferente na mesma posição alvo SNP. Além disso, um reagente de deteco pode hibridar com uma região específica 5' e / ou 3' para a posição de SNP. Será evidente para um técnico versado no assunto que tais reagentes de detecções, tais como iniciadores e sondas são diretamente úteis como reagentes para a genotipagem de um ou mais dos SNPs aqui descritos, e pode ser incorporado em qualquer formato de kit.

[0090] Para analisar SNPs, pode ser apropriado usar oligonucleotídeos específicos para alelos SNP alternativos. Tais oligonucleotídeos que detectam variações únicas de nucleotídeos nas sequências alvo podem ser referidos por termos como "oligonucleotídeos específicos do alelo", "sondas específicas do alelo" ou "iniciadores específicos do alelo".

[0091] Um reagente de detecção SNP pode ser marcado com um repórter, tal como um corante repórter fluorogênico que emite um sinal detectável. Enquanto o corante repórter preferido é um corante fluorescente, qualquer corante repórter que pode ser ligado a um reagente de detecção, tal como uma sonda de oligonucleido ou iniciador é adequado de acordo com a invenção. Em ainda outra concretização, o reagente de detecção pode ser ainda marcado com um corante extintor, especialmente quando o reagente é usado como uma sonda auto-quenching tal como uma sonda TaqMan. Os reagentes de detecção SNP aqui revelados podem tamb conter outras etiquetas, incluindo, mas não limitados a, biotina para a estreptavidina, hapteno para ligação do anticorpo, e o oligonucleotídeo de ligação a outro oligonucleotídeo complementar.

[0092] De acordo com a presente invenção, também são contemplados os reagentes que não contêm (ou que não são complementares a) um nucleotídeo SNP a ser identificada e que são utilizados para ensaiar uma ou mais SNPs aqui divulgados. Por exemplo, os iniciadores que flanqueiam, mas não hibridizam diretamente a uma posição alvo SNP são úteis em reacções de extensão de iniciadores, em que os iniciadores hibridam com uma região adjacente à posição de SNP alvo (isto é, dentro de um ou mais nucleotídeos a partir do local SNP alvo). Durante a reacção de extensão do iniciador, um iniciador é tipicamente não é capaz de se estender para além de um local alvo SNP se um determinado nucleotídeo (alelo) se encontra presente naquele sítio alvo SNP, e do produto da extensão do iniciador pode ser detectado de modo a determinar qual SNP alelo está presente no local alvo SNP. Por exemplo, em particular os ddNTPs são normalmente utilizados na reacção de extensão do iniciador para terminar a extensão do iniciador uma vez que um ddNTP é incorporado no produto de extensão. Assim, os reagentes que se ligam a uma molécula de ácido nucleico em uma região adjacente a um local de SNP e que são usados para o ensaio do local SNP, embora as sequências ligadas não incluem necessariamente sítio de PNS si só, também são contemplados de acordo com a invenção.

[0093] O termo "FCGR2A" refere-se ao gene FCGR2A humano. Este gene codifica o receptor Il-a (CD32) da região Fc da gama imunoglobulina de baixa afinidade e é um membro de uma família de genes do receptor Fc da imunoglobulina. A proteína codificada por este gene é um receptor de superfície celular encontrado em células fagocíticas, como macrófagos e neutrófilos, e está envolvido no processo de fagocitose e limpeza de complexos imunes. O splicing alternativo resulta em múltiplas variantes de transcrição.

[0094] De um modo preferido, o termo "FCGR2A" refere- se a que compreende um ácido nucleico, de um modo preferido que consiste na sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 61 da listagem de sequências ou uma variante da referida sequência de ácido nucleico e a uma proteína codificada por este ácido nucleico, de preferência, para uma proteína que compreende, de um modo preferido que consiste na sequência de aminoácidos de SEQ ID nO: 62 da listagem de sequências ou uma variante da referida sequência de aminoácidos.

[0095] RSL 801274 é um SNP no gene FCGR2A, rs 1801274 (C) codifica o alelo arginina (R), com o (t) alelo que codifica a histidina variante (H). Este SNP é uma substituição de transição intragénica com a seguinte alteração codão: CAT, CGT, e resulta em uma mutação de sentido errado. O SNP é conhecido na literatura por vários nomes, incluindo A519C e R131 H. A sequência contexto é como se segue: TGGGATGGAGAAGGTGGGATCCAAA[C/T]GGGAGAATTTCTGGGATTTTCCATT

[0096] O termo "MUC1" refere-se ao gene MUC1 humano. Este gene codifica Mucina I, associada à superfície celular (MUC1) ou mucina epitelial polimórfica (PEM) que é um membro da família da mucina e é uma fosfoproteína glicosilada ligada à membrana. A proteína está ancorada na superfície apical de muitos epitélios por um domínio transmembranar. Além do domínio transmembranar é um domínio SEA que contém um site de clivagem para liberação do grande domínio extracelular. A proteína serve uma função protetora, ligando-se a agentes patogênicos e também funciona em uma capacidade de sinalização celular.

[0097] De preferência, o termo "MUC1" refere-se a um ácido nucleico compreendendo, de preferência, constituído pela sequência de ácido nucleico o SEQ ID NO: 63 da listagem de sequências ou uma variante da referida sequência de ácido nucleico e a uma proteína codificada por este nucleico ácido, de preferência a uma proteína que compreende, de um modo preferido que consiste na sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 64 da listagem de sequências ou uma variante da referida sequência de aminoácidos.

[0098] rs4072037 é um SNP no gene MlJCl. Este SNP é uma substituição de transição intragenica com a seguinte mudança de codão: ACA, ACG e resulta em uma mutação silenciosa. A sequência de contexto é a seguinte: CCCCTAAACCCGCAACAGTTGTTAC[A/G]GGTTCTGGTCATGCAAGCTCTACCC

[0099] O termo "IL-10" refere-se ao gene IL-10 humano. Este gene codifica intcrleukin-10 (IL-10), também conhecido como fator inibidor de síntese de citocinas humanas (CSIF), que é uma citocina antiinflamatória.

[00100] De preferência, o termo "IL-10" refere-se a um ácido nucleico compreendendo, de preferência constituído pela sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 65 da listagem de sequências ou uma variante da referida sequência de ácido nucleico e a uma proteína codificada por este ácido nucleico, de preferência a uma proteína compreendendo, de preferência consistindo na sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 66 da listagem de sequências ou uma variante da referida sequência de aminoácidos.

[00101] Rs 1800896 é um SNP no gene IL-10. Este SNP é uma substituição de transição intragenica intergenica / desconhecida. A sequência de contexto é a seguinte: CAACACTACTAAGGCTTCTTTGGGA[A/G]GGGGAAGTAGGGATAGGTAAGAGGA

[00102] O termo "DNMT3A" refere-se ao gene de DMT3A humano. Este gene codifica DNA (citosina-5)-metiltransferase 3A. A proteína codificada por este gene é uma enzima que catalisa a transferência de grupos metilo para estruturas CpG específicas do DNA.

[00103] De um modo preferido, o termo "DNMT3A" refere- se a que compreende um ácido nucleico, de um modo preferido que consiste na sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 67 da listagem de sequências ou uma variante da referida sequência de ácido nucleico e a uma proteína codificada por este ácido nucleico, de preferência para uma proteína que compreende, de preferência, consistindo na sequência de aminoácidos de SEQ ID nO: 68 da listagem de sequências ou uma variante da referida sequência de aminoácidos.

[00104] RS 1550117 é um SNP no gene DNMT3A. Este SNP é uma substituição de transição intragénica na região promotora DNMT3A. A sequência de contexto é como se segue: AATTCCACCAGCACAGCCACTCACT[A/G]TGTGCTCATCTCACTCCTCCAGCAG

[00105] O termo "SMAD4" refere-se ao gene SMAD4 humano. Este gene codifica mães contra homólogo decapentaplégico 4. A proteína codificada por este gene está envolvida na sinalização celular e pertence à família de proteínas Darfwin que modulam membros da superfamília proteína TOPβ. Liga-se SMADs ated regul-receptor, tais como Smad1 e SMAD2, e forma um comple que se liga ao DNA e serve como um fator de transcrição. É o coSMAD de mamífero conhecida apenas.

[00106] De preferência, o termo "SMAD4" refere-se a um ácido nucleico compreendendo, de preferência constituído pela sequência de ácido nucleico SEQ ID NO: 69 da listagem de sequências ou uma variante da referida sequência de ácido nucleico e a uma proteína codificada por este nucleico ácido, de preferência a uma proteína que compreende, de preferência constituída pela sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 70 da listagem de sequências ou uma valente da referida sequência de aminoácidos.

[00107] rs 12456284 é um SNP no gene SMAD4. Este SNP é uma substituição de transição intragénica na 3'-UTR. A sequência de contexto é como se segue: AGGTCCAGAGCCAGTGTTCTTGTTC[A/G]ACCTGAAAGTAATGGCTCTGGGTTG

[00108] O termo "EGF" relaciona-se com o gene de EGF humano. Este gene codifica para o fator de crescimento epidérmico. EGF é um fator de crescimento que estimula o crescimento celular, a proliferação, a diferenciação e através da ligação ao seu receptor EGFR.

[00109] De um modo preferido, o termo "EGF" refere-se a que compreende um ácido nucleico, de um modo preferido que consiste na sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 71 da listagem de sequências ou uma variante da referida sequência de ácido nucleico e a uma proteína codificada por este ácido nucleico, de preferência para uma proteína que compreende, de um modo preferido que consiste na sequência de aminoácidos de SEQ ID nO: 72 da listagem de sequências ou uma variante da referida sequência de aminoácidos.

[00110] rs4444903 é um SNP no gene EGF. Este SNP é uma substituição de transição intragenica na 5'-UTR. A sequência de contexto é a seguinte: CTTTCAGCCCCAATCCAAGGGTTGT[A/G]GCTGGAACTTTCCATCAGTTCTTCC

[00111] O termo "CDH 1" se refere ao gene CDH1 humano. Este gene codifica a caderina-1 também conhecida como CAM 120/80 ou caderina epitelial (E-caderina) ou uvomorulina. A proteína é um membro clássico da superfamília da caderina. É uma glicoproteína de adesão célula-célula dependente de cálcio composta por cinco repetições extracelulares de caderina, uma região transmembranar e uma cauda citoplasmática altamente conservada. Pensa-se que a perda de função contribui para a progressão no câncer, aumentando a proliferação, invasão e / ou metástase.

[00112] De preferência, o termo "CDH1" refere-se a um ácido nucleico compreendendo, de preferência consistindo na sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 73 da listagem de sequências ou uma variante da referida sequência de ácido nucleico e a uma proteína codificada por esta ácido nucleico, de preferência a uma proteína que compreende, constituindo de preferência a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 74 da lista de sequências ou uma variante da referida sequência de aminoácidos.

[00113] rs 16260 é um SNP no gene CDH1. Este SNP é uma substituição transversão intragénica localizado na região promotora do gene CDHL. A sequência de contexto é como se segue: CTAGCAACTCCAGGCTAGAGGGTCA[A/C]CGCGTCTATGCGAGGCCGGGTGGGC

[00114] O termo "ERCCl" refere-se ao gene ERCCl humano. Este gene codifica DNA excisão da proteína de reparação ERCC-1. A função da proteína ERCCl é predominantemente na reparação de excisão de nucleotídeos de DNA danificado.

[00115] De um modo preferido, o termo "ERCCl" refere- se a que compreende um ácido nucleico, de um modo preferido que consiste na sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 75 da listagem de sequências ou uma variante da referida sequência de ácido nucleico e a uma proteína codificada por este ácido nucleico, de preferência para uma proteína que compreende, de um modo preferido que consiste na sequência de aminoácidos de SEQ ID nO: 76 da listagem de sequências ou uma variante da referida sequência de aminoácidos.

[00116] RSL 1615 é um SNP no gene ERCC 1. Este SNP é uma substituição silenciosa transição intragénica. A sequência de contexto é como se segue: ATCCCGTACTGAAGTTCGTGCGCAA[C/T]GTGCCCTGGGAATTTGGCGACGTAA

[00117] O termo "FCGR3A" refere-se ao gene FCGR3A humano. Este gene codifica para baixo imunoglobulina gama afinidade pelo receptor Fc região III-A. A proteína codificada por este gene é parte do conjunto de moléculas da superfície das células de diferenciação.

[00118] De um modo preferido, o termo "FCGR3A" refere- se a que compreende um ácido nucleico, de um modo preferido que consiste na sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 77 da listagem de sequências ou uma variante da referida sequência de ácido nucleico e a uma proteína codificada por este ácido nucleico, de preferência para uma proteína que compreende, de um modo preferido que consiste na sequência de aminoácidos de SEQ ID nO: 78 da listagem de sequências ou uma variante da referida sequência de aminoácidos.

[00119] rs396991 é um SNP no gene FCGR3A. Este SNP é uma substituição de transversão intragenica com a seguinte mudança de codão: GTT, TTT e resulta em uma mutação missense. Rs396991 (T) codifica o alelo de fenilalanina (F), com o alelo (G) que codifica a variante valina (V). A sequência de contexto é a seguinte: CGGCTCCTACTTCTGCAGGGGGCTT[G/T]TTGGGAGTAAAAATGTGTCTTCAGA

[00120] Claudinas são uma família de proteínas que são os componentes mais importantes de junções apertadas, onde estabelecem a barreira paracelular que controla o fluxo de moléculas no espaço intercelular entre células de um epitélio. Claudinas são proteínas transmembranares que abrangem a membrana 4 vezes com o N-terminal e a extremidade C-terminal ambas localizadas no citoplasma. O primeiro loop ou domínio extracelular consiste na média de 53 aminoácidos e o segundo loop ou domínio extracelular consiste em cerca de 24 aminoácidos. As proteínas de superfície celular da família Claudina, como a CLDN18.2, são expressas em rumores de várias origens e são particularmente adequadas como estruturas alvo em conexão com imunoterapia de câncer mediada por anticorpos devido à sua expressão seletiva (sem expressão em um tecido normal relevante de toxicidade) e localização para a membrana plasmática.

[00121] O termo "CLDN", tal como aqui utilizado, significa e inclui Claudina CLDN18.2. De um modo preferido, um Claudina é um Claudina humano.

[00122] O termo "CLDN 18" refere-se a Claudina 18 e inclui quaisquer variantes, incluindo 18 Claudina variante de splicing 1 (Claudina 18,1 (CLDN 18,1)) e Claudina 18 variante de exciso 2 (Claudina 18,2 (CLDN18.2)).

[00123] O termo "CLDN18.2" refere-se preferencialmente a CLDN18.2 humano, e, em particular, para que compreende uma proteína, de um modo preferido que consiste na sequência de amino ácido de acordo com a SEQ ID NO: 1 da listagem de sequências ou uma variante da dita sequência de aminoácidos. O primeiro laço extracelular ou um domínio de CLDN18.2 compreende, de preferência os aminoácidos 27 a 81, mais preferivelmente ácidos aminados 29 a 78 da sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 1. A segunda ansa extracelular ou domínio de CLDN18.2 compreende preferivelmente aminoácidos 140 a 180 da sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID nO: 1. a referida primeira e segunda ansas extracelulares ou domínios formar preferencialmente a porção extracelular de CLDN18.2.

[00124] CLDN18.2 é expressa seletivamente em tecidos normais em células epiteliais diferenciadas da mucosa gástrica. CLDN18.2 é expressa em câncers de diversas origens, tais como o carcinoma pancreático, carcinoma esofágico, carcinoma gástrico, carcinoma bronquial, carcinoma da mama, tumores e otorrinolaringológicas. CLDN18.2 é um alvo valioso para a prevenção and'or tratamento de tumores primários, tais como o câncer gástrico, câncer do esôfago, câncer do pâncreas, o câncer do pulmão tais como câncer do pulmão de células não pequenas (NSCLC), câncer do ovário, câncer do cólon, câncer hepático, câncer da cabeça-pescoço, e os câncers da vesícula biliar, e suas metástases, em particular mettases do câncer gástrico, tais como tumores, metástases Krukenberg peritoneal, e metástases linfáticas.

[00125] O termo "CLDN18.1" refere-se a um modo preferido CLDN 18,1 humana, e, em particular, para uma proteína que compreende, de um modo preferido que consiste na sequência de aminoácidos de acordo com SEQ ID NO: 2 da listagem de sequências ou uma variante da referida sequência de aminoácidos.

[00126] "Prognóstico", como aqui utilizado refere-se a uma previsão de resultados alcançados e, em particular, a probabilidade de sobrevida livre de progressão (PES) ou sobrevida livre de doença (DFS). A sobrevida é normalmente calculada como o número médio de meses ou anos) (que 50% dos pacientes sobrevivem, ou a percentagem de pacientes que estão vivos após 1, 5, 15, e 20 anos. O prognóstico é importante para as decisões de tratamento porque os pacientes com um bom progntico são normalmente oferecidos tratamentos menos invasivos, enquanto que os pacientes com mau prognóstico são normalmente oferecidos tratamentos mais agressivos, tais como drogas quimioterápicas mais extenso.

[00127] "Predisposição" como aqui utilizado refere-se ao fornecimento de informação sobre a eventual resposta de uma doença para um tratamento terapêutico distinto.

[00128] A frase "indicam um risco" refere-se à indicação de um certo grau de probabilidade ou. A frase "indicam um risco reduzido" refere-se a um baixo grau de probabilidade ou. A frase "indicam um risco aumentado" refere-se a uma determinada, superior ou elevado grau de probabilidade ou.

[00129] Se um evento "indica um risco reduzido de um doente com câncer não ser um respondedor ao tratamento com um anticorpo" referido evento é indicativa para um paciente com câncer ser um respondedor ao tratamento com o anticorpo, isto é, é provável que o paciente é um respondedor ao tratamento com o anticorpo e, opcionalmente, é mais provável que o paciente é um respondedor ao tratamento com o anticorpo do que o paciente não ser um respondedor ao tratamento com o anticorpo.

[00130] Se um evento "indica um aumento do risco de um doente com câncer não ser um respondedor ao tratamento com um anticorpo" referido evento é indicativa para um doente com câncer não ser um respondedor ao tratamento com o anticorpo, isto é, é provável que o paciente não é um respondedor ao tratamento com o anticorpo e, opcionalmente, o mais provável é que o paciente não é um respondedor ao tratamento com o anticorpo do que o doente ser um respondedor ao tratamento com o anticorpo.

[00131] Se um evento "indica um risco reduzido de prognóstico clínico" referido evento é indicativo de um bom resultado clico, isto é, é provável que haja um bom resultado clínico e, opcionalmente, o mais provável é que haverá um bom resultado clínico de não sendo um mau resultado clínico.

[00132] Se um evento "indica um risco aumentado de prognóstico clínico" referido evento é indicativo de um resultado clínico pobre, isto é, é provável que haja um mau resultado clínico e, opcionalmente, o mais provável é que haverá um resultado clínico pobre do que a existência de uma boa evolução clínica.

[00133] Se um evento "indica um risco reduzido de um doente com câncer não tendo uma sobrevida livre de progressão" referido evento é indicativo para um paciente de câncer tendo uma sobrevida livre de progressão, isto é, é provável que o paciente experimenta sobrevida livre de progressão e opcionalmente é mais provável que o paciente experimenta a sobrevida livre de progressão do que o paciente não experimenta sobrevivência ree progressão.

[00134] Se um evento "indica um aumento do risco de um paciente com câncer não experimentando sobrevida livre de progressão", o dito evento é indicativo para um paciente com câncer não experimentando sobrevida livre de progressão, ou seja, é provável que o paciente não experimenta sobrevida livre de progressão e, opcionalmente, é mais provável que o paciente não experimenta a sobrevivência sem progressão do que o paciente experimentando a sobrevivência sem progressão.

[00135] O termo "amostra", tal como aqui utilizado, refere-se a qualquer material que é obtida de um sujeito e que pode ser utilizado para fins analíticos, em particular para a determinação do genótipo de um ou mais polimorfismos de nucleotídeos simples. Em certas concretizações, as amostras aqui descritas pode ser ou pode ser derivada de quaisquer tecidos, células e / ou culas em fluidos biológicos a partir de, por exemplo, um mamero ou ser humano a ser testado. Uma amostra pode ser isolada a partir de um paciente, por exemplo, a partir do corpo humano. Uma amostra pode ser uma amostra fraccionada e / ou purificada. Por exemplo, amostras englobadas pela presente invenção pode provir ou pode ser derivada a partir de tecido (por exemplo, secção ou explante) amostras, as amostras de células únicas, as amostras de colónias de células, as amostras de cultura de células, sangue (por exemplo sangue total ou fracção do sangue, tais como fracção de célula de sangue, soro ou plasma) de amostras, as amostras de urina, ou amostras de outras fontes periféricas. Em uma concretização particularmente preferida, a amostra é uma amostra de tecido (por exemplo, uma biopsia de um sujeito com ou suspeitos de terem tecido canceroso). Por exemplo, a amostra pode ser de uma biópsia de um tumor. A amostra pode ser obtida de um doente antes do início de um tratamento terapêutico, durante o tratamento terapêutico, e / ou após o tratamento terapêutico, por exemplo, antes, durante ou após a administração da terapia do câncer.

[00136] Os materiais de amostra podem ser utilizados para produzir extractos de ácido nucleico (incluindo DNA e / ou RNA), proteínas ou extractos de membrana de quaisquer fluidos corporais (tais como sangue, soro, plasma, urina, saliva, fleuma, sucos gástricos, sémen, lágrimas, suor, etc.), pele, cabelo, células (especialmente células nucleadas), biópsias, cotonete bucal ou espécimes de tecido ou tumor.

[00137] A presente invenção diz ainda respeito a um kit que compreende meios, tais como reagentes para a determinação do genótipo de um ou mais polimorfismos de nucleotídeos simples, tal como aqui descrito. No contexto da presente invenção, o termo "kit de partes (em resumo: kit)" entende-se qualquer combinação de pelo menos alguns dos componentes aqui identificados, os quais são combinados, coexistindo espacialmente, para uma unidade funcional, e que pode conter outros componentes. Por exemplo, o kit pode compreender iniciadores ou sondas específicas para sequências de ácidos nucleicos pré-seleccionada compreendendo um ou mais polimorfismos de um único nucleotídeo do genótipo dos quais é para ser determinada. O estojo também pode compreender enzimas adequadas para a amplificação de ácidos nucleicos (por exemplo, polimerases, como a polimerase Taq), e desoxinucleotídeos e tampões necessários para a mistura de reacção durante a amplificação. O kit tamb pode compreender sondas específicas para um ou mais polimorfismos de nucleotídeos simples. Em certas concretizações, os referidos meios são detectavelmente marcado.

[00138] Um kit da invenção pode compreender (i) um recipiente, e / ou (ii) um suporte de dados. O referido recipiente pode ser preenchido com uma ou mais dos meios ou reagentes acima mencionados. O referido suporte de dados pode ser um suporte de dados não-eletrônico, por exemplo, um transportador de dados gráficos, tais como um folheto informativo, uma folha de informação, um código de barras ou um código de acesso, ou um suporte de dados eletrônico, tais como uma disquete, um disco compacto (CD), um disco versátil Digital (DVD), um circuito integrado ou de um outro suporte de dados eletrônico baseada em semicondutores. O código de acesso pode permitir o acesso a um banco de dados, por exemplo, um banco de dados de internet, um sistema centralizado, um banco de dados ou descentralizada. O referido suporte de dados pode compreender instruções para permitir a análise dos resultados obtidos com o referido conjunto e, em particular, para a utilização do kit nos métodos da invenção.

[00139] Adicionalmente ou em alternativa, o referido kit pode compreender materiais desejáveis de um ponto de vista comercial e do utilizador incluindo tamp (s), reagente (s) e / ou diluente (s).

[00140] Com base nos resultados obtidos (isto é, sobre a base do genótipo de um ou mais polimorfismos de nucleotídeo único), o médico pode escolher uma terapia de câncer para o qual o paciente é previsto como sendo sensível, em particular, a terapia com anticorpos. De um modo preferido, uma terapia de câncer para o qual o paciente é previsto como sendo não-sensível não é administrado ao paciente.

[00141] Com base no resultado, o paciente é predisposto como não responsivo à terapia de anticorpos, em particular, terapia de anticorpos agindo através do recrutamento do sistema imunitário do paciente para destruir células tumorais, o médico pode optar por administrar terapia contra o câncer, que é diferente de terapia de anticorpos, em particular terapia de anticorpos agindo através do recrutamento do sistema imunológico do paciente para destruir células tumorais. Em particular, o médico pode optar por administrar quimioterapia.

[00142] Com base no resultado de que o paciente é predisposto como sendo responsivos ao anticorpo terapia, em particular terapia com anticorpos agindo através do recrutamento de sistema imune do paciente para destruir células de tumor, o médico pode escolher administrar a terapia de anticorpos, em particular, a terapia de anticorpos agindo através do recrutamento da o sistema imune do paciente para destruir células de tumor, opcionalmente em combinação com quimioterapia.

[00143] O termo "tratamento (terapêutico)", em particular, em ligação com o tratamento de câncer tal como é aqui utilizado, refere-se a qualquer tratamento que tem por objectivo melhorar o estado de saúde e / ou prolongamento (aumentar) o tempo de vida de um paciente. O referido tratamento pode eliminar o câncer, reduzir o tamanho ou o número de tumores em um paciente, deter ou retardar o desenvolvimento de câncer num paciente, inibir ou retardar o desenvolvimento de novo de câncer num paciente, diminuir a frequência ou a severidade dos sintomas num paciente, e / ou recorrências diminuição do um paciente que tem atualmente ou que já teve câncer. Um tratamento (teraptico) de câncer pode ser seleccionado a partir do grupo que consiste em cirurgia, quimioterapia, terapia de radiação e terapia-alvo. Um tratamento particularmente preferido de acordo com a invenção é o tratamento de câncer envolvendo anticorpos monoclonais terapêuticos contra antígenos tumorais tais como CLDN18.2 expresso nas células alvo.

[00144] A terapia adjuvante é um tratamento que é dado em adição ao tratamento primário, principal ou inicial. As cirurgias e regimes de tratamento complexos utilizados na terapia do câncer têm levado a termo para ser utilizado principalmente para descrever tratamentos contra o câncer coadjuvantes. Um exemplo de terapia adjuvante é o tratamento adicional geralmente dada após a cirurgia, onde toda a doença detectável foi removida, mas em que continua a existir um risco de recidiva estatística devido a doença oculta.

[00145] Termos tais como "sensível", ou "resposta" refere-se, num cenário terapêutico, para o facto de que um paciente tem um benefício terapêutico a partir de um determinado modo de tratamento e, em particular, para a observação de um alívio, a prevenção ou eliminação de uma doença incluindo encurtando a duração de uma doença, parando ou retardando a progressão ou agravamento de uma doen, inibir ou retardar o desenvolvimento de uma nova doença e / ou recorrências, prevenir ou retardar o aparecimento de uma doença ou os seus sintomas, diminuição da frequência ou a gravidade dos sintomas em um paciente que tem atualmente ou que já teve uma doença e / ou prolongar o tempo de vida do paciente. Em particular, eles referem-se à observação de uma redução da massa tumoral ou de um aumento no tempo livre de tumor, tempo livre de recorrência ou tempo de sobrevivência global.

[00146] Termos tais como "não-responsivo" ou "não- respondedor" referem-se, em um ambiente terapêutico, para o facto de que um paciente não tem nenhum benefício terapêutico a partir de um determinado modo de tratamento e, em particular, a não observação de um alívio, a prevenção ou eliminação de uma doença, isto é, o paciente é resistente ao tratamento.

[00147] A resposta completa é definida como a ausência de qualquer doença residual, tais como o câncer, e é geralmente avaliada por análise patológica de amostras de tecido adquiridas. Neste contexto, o termo "resposta patológica completa" (PCR) é usada frequentemente. Em particular, a PCR é definida como a ausência de quaisquer células de tumor invasivas residuais no leito do tumor inicial. No entanto, a definição de PCR pode variar entre diferentes sistemas de classificação. A resposta patológica completa tem mostrado ser um fator prognóstico para geral melhor sobrevivência, mas também para a sobrevida livre de doença e sobrevida livre de recorrência.

[00148] A sobrevida livre de recorrência é definida como o tempo desde a randomização até à primeira de qualquer recorrência ou recaída, o segundo câncer, ou morte.

[00149] A sobrevida livre de progressão (PFS) é um tipo de taxa de sobrevivência que mede o período de tempo durante e depois da medicação ou tratamento durante o qual a doença a ser tratada (geralmente o câncer) não piorar. Às vezes é usado como métrica para estudar a saúde de uma pessoa com uma doença para tentar determinar o quão bem um novo tratamento está funcionando e é frequentemente utilizado como um endpoint clínico em ensaios clínicos randomizados para terapias contra o câncer.

[00150] De acordo com a invenção, o termo "paciente de câncer tendo uma sobrevida livre de progressão" refere-se a um paciente com câncer com um período de tempo prolongado, sem progressão da doença, em especial quando em comparação com a média das pacientes e / ou, quando em comparação com pacientes que sejam não-respondedores a um dado modo de tratamento. Preferencialmente, o referido período de tempo prolongado é de pelo menos 4, preferencialmente pelo menos 5, mais preferencialmente pelo menos 6 meses, tal como pelo menos 7 meses ou pelo menos 8 meses, o referido período de tempo de partida por exemplo, a partir do momento de uma primeira administração de um tratamento.

[00151] O termo "resultado clínico" é definido como o resultado clínico de uma doença, por exemplo, redução ou melhoria de sintomas, em particular na sequência de um tratamento.

[00152] O termo "recorrência" no que diz respeito ao câncer inclui ocorrência de células de tumor, no mesmo local e órgão da doença origem, metástase distante, que pode aparecer mesmo muitos anos depois do diagnóstico inicial e terapia de câncer, ou a eventos locais, tais como a infiltração de células tumorais para os nódulos linfáticos regionais.

[00153] Os termos "indivíduo" e "sujeito" são aqui utilizados indiferentemente. Eles se referem a seres humanos, primatas não-humanos ou outros mamíferos (por exemplo, camundongo, camundongos, coelhos, cães, gatos, bovinos, suínos, ovelhas, cavalos ou primatas) que podem ser atingidas com ou são suscetíveis a uma doença ou distúrbio (por exemplo, câncer), mas podem ou não ter a doença ou desordem. Em muitas concretizações, o indivíduo é um ser humano. Salvo disposição em contrário, os termos "indivíduo" e "assunto" não denotam uma determinada idade e, assim, abranger adultos, idosos, crianças e recém-nascidos. Em concretizações preferidas da presente invenção, o "indivíduo" ou "sujeito" é um "paciente". O termo "paciente" significa de acordo com a invenção, um sujeito para o tratamento, em especial de um sujeito doente.

[00154] Em uma concretização particularmente preferida, um método da invenção é realizado em um paciente que já está diagnosticado como tendo câncer.

[00155] "Célula alvo" significa qualquer célula indesejável tal como uma célula cancerosa. Em concretizações preferidas, a célula alvo expressa CLDN18.2.

[00156] No contexto da presente invenção, os termos tais como "proteger", "prevenção" ou "profilática" referem-se à prevenção da ocorrência e / ou a propagação de uma doença num sujeito e, em particular, para minimizar a possibilidade de que um assunto irá desenvolver uma doença ou retardar o desenvolvimento de uma doença. Por exemplo, um sujeito em risco de câncer seria um candidato para a terapia para prevenir o câncer.

[00157] Por "em risco" entende-se um objecto que é identificado como tendo um mais elevado do que a normal probabilidade de desenvolver uma doença, em particular câncer, em comparação com a população em geral. Além disso, um assunto que tenha tido, ou que tem atualmente, uma doença, em particular câncer, é um assunto que tem um risco aumentado para o desenvolvimento de uma doença, como tal, um objecto pode continuar a desenvolver uma doença. Os indivíduos que têm atualmente, ou que tiveram, um câncer também tem um risco aumentado de metástases cancerosas.

[00158] Tal como aqui é usado, o termo "combinação", no contexto da administração de uma terapia refere-se ao uso de mais do que uma terapia ou agente terapêutico. O uso do termo "em combinação" não restringe a ordem em que as terapias ou agentes terapêuticos são administrados a um sujeito. Uma terapia ou agente terapêutico pode ser administrado antes, concomitantemente com, ou subsequente à administração de um segundo agente terapêutico ou terapia a um sujeito.

[00159] De preferência, as terapias ou agentes terapêuticos são administrados a um sujeito com uma sequência, quantidade e / ou dentro de um intervalo de tempo tal que as terapias ou agentes terapêuticos podem agir em conjunto. Em uma concretização particular, as terapias ou agentes terapêuticos são administrados a um sujeito com uma sequência, quantidade e / ou dentro de um intervalo de tempo de tal modo que eles proporcionam um benefício maior do que se fossem administrados de outra forma, em particular, independentemente um do outro. De um modo preferido, o aumento do benefício é um efeito sinérgico.

[00160] O termo "doença" refere-se a uma condição anormal que afecta o corpo de um indivíduo. Uma doença está muitas vezes entendida como um estado clínico associado com sintomas e sinais específicos. A doença pode ser causada por fatores originalmente a partir de uma fonte externa, tal como a doença infecciosa, ou pode ser causada por disfunções internas, tais como as doenças auto-imunes. Em humanos, a "doença" é muitas vezes usada de forma mais ampla para se referir a qualquer condição que causa dor, disfunção, angústia, problemas sociais ou morte para o indivíduo aflito, ou problemas semelhantes para aqueles em contato com o indivíduo. Neste sentido mais amplo, que às vezes inclui lesões, incapacidades, doenças, síndromes, infecções, sintomas isolados, comportamentos desviantes e variações atípicas de estrutura e função, enquanto que em outros contextos e para outros fins estas podem ser consideradas categorias distintas. Doenças geralmente afetam os indivíduos não só fisicamente, mas também emocionalmente, como contratação e viver com muitas doenças podem alterar a perspectiva sobre a vida, e uma personalidade. De acordo com a invenção, o termo "doença" inclui câncer, em particular as formas de câncer aqui descrito. Qualquer referência no presente documento a câncer ou de formas particulares de câncer também inclui a metástase do câncer da mesma. Em uma concretização preferida, uma doen a ser tratada de acordo com o presente pedido de patente envolve células que expressam um antígeno de tumor, tais como CLDN18.2.

[00161] "Doença envolvendo células que expressam um antígeno de tumor" significa, de acordo com a invenção que um antígeno de tumor, tais como CLDN18.2 é expressa em células de um tecido ou órgão doente. Em uma concretização, a express de um antígeno tumoral em células de um tecido ou órgão doente é aumentada em comparação com o estado de um tecido ou órgão saudável. Um aumento refere-se a um aumento de pelo menos 10%, em particular pelo menos 20%, pelo menos 50%, pelo menos 100%, pelo menos 200%, pelo menos 500%, pelo menos 1,000%, pelo menos, 10000% ou mesmo Mais. Em uma concretização, a expressão é encontrada apenas em um tecido doente, enquanto que a expressão num tecido saudável correspondente é reprimida. De acordo com a invenção, doenças que envolvem células que expressam um antígeno de tumor incluem doenças cancerosas. Além disso, de acordo com a invenção, doenças cancerosas são de preferência aqueles em que as células cancerosas expressam um antígeno de tumor.

[00162] Os termos "doença do câncer" ou "câncer" referem-se ou descrevem à condição fisiológica em um indivíduo que é tipicamente caracterizada por crescimento celular desregulado. Exemplos de câncers incluem, mas não estão limitados a, carcinoma, linfoma, blastoma, sarcoma e leucemia. Mais particularmente, os exemplos de tais câncers incluem câncer do osso, câncer do sangue, câncer do pulmão, câncer do fígado, câncer pancreático, câncer da pele, câncer da cabeça ou pescoço, melanoma cutâneo ou intraocular, câncer uterino, câncer do ovário, câncer rectal, câncer da região anal, câncer do estômago, câncer do cólon, câncer da mama, câncer da próstata, câncer uterino, carcinoma dos órgãos sexuais e reprodutivas, a doença de Hodgkin, câncer do esôfago, câncer do intestino delgado, câncer do sistema endócrino, câncer da tiróide glândula, câncer da glândula paratiróide, câncer da glândula supra-renal, sarcoma de tecido mole, câncer da bexiga, câncer do rim, carcinoma de células renais, carcinoma da pélvis renal, neoplasmas do sistema nervoso central (SNC), neuroectodérmico câncer, tumores do eixo espinal, glioma, meningioma, e adenoma pituitário. O termo "câncer" de acordo com a invenção também compreende as metástases cancerosas. De um modo preferido, uma "doença do câncer" é caracterizado por células que expressam um antígeno de tumor, tais como CLDN18.2 e uma célula cancerosa expressa como antígeno tumoral. Uma célula que expressa um antígeno de tumor, tais como CLDN18.2 é de preferência uma célula de câncer, preferencialmente de câncers aqui descrito.

[00163] De acordo com a invenção, o termo "tumor" ou "doença tumoral" refere-se a um crescimento anormal de células (chamadas células neoplásicas, células tumorígenas ou células tumorais) formando de preferência um inchaço ou lesão. Por "célula tumoral" entende-se uma célula anormal que cresce por uma proliferação celular rápida e descontrolada e continua a crescer após o estímulo que iniciou o novo cessão do crescimento. Os tumores mostram falta parcial ou completa de organização estrutural e coordenação funcional com o tecido normal e geralmente formam uma massa distinta de tecido, que pode ser benigna, pré-maligna ou maligna.

[00164] Em uma concretização, um câncer de acordo com a invenção envolve células cancerosas que expressam um antígeno de tumor, tais como CLDN18.2. Em uma concretização, o câncer é o antígeno tumoral positiva tal como CLDN18.2 positivo. Em uma concretização, a expressão do antígeno do tumor tal como CLDN18.2 está à superfície das células. Em uma concretização, pelo menos 50%, preferencialmente 60%, 70%, 80% ou 90% das células de câncer são o antígeno de tumor positivo, tal como CLDN18.2 positiva e / ou, pelo menos, 40%, de preferência, pelo menos 50% do câncer as células são positivas para a expressão de superfície do antígeno de tumor, tais como CLDN18.2. Em uma concretização, pelo menos 95% ou pelo menos 98% das células de câncer são o antígeno de tumor positivo tal como CLDN18.2 positivo. Em uma concretização, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80% ou pelo menos 90% das células de câncer são positivas para a expressão de superfície do antígeno de tumor, tais como CLDN18.2.

[00165] Em uma concretização, um câncer que envolve células cancerosas que expressam CLDN18.2 ou um câncer CLDN18.2 positivo é seleccionado do grupo que consiste em câncer gástrico, câncer esofágico, câncer do pâncreas, câncer do pulmão tal como câncer do pulmão de células não pequenas (NSCLC) , câncer de ovário, câncer de cólon, câncer hepático, câncer de cabeça e câncer da vesícula biliar e suas metástases, em particular metástases de câncer gástrico, como tumores de Krukenberg, metástases peritoneais e metástases linfonodais. Numa concretização, o câncer é um adenocarcinoma, em particular um adenocarcinoma avançado. As doenças de câncer particularmente preferidas são os adenocarcinomas do estômago, o esôfago, o ducto pancreático, os canais biliares, o pulmão e o ovário. Numa concretização, o câncer é seleccionado do grupo que consiste em câncer do estômago, câncer do esôfago, em particular o esôfago inferior, câncer da junção eso-gástrica e câncer gastroesofágico. Numa concretização particularmente preferida, o câncer é um câncer gastroesofágico, tal como um câncer gastroesofágico avançado metastático, refractário ou recorrente. Numa concretização, um tumor positivo CLDN18.2 é um tumor dos tipos de câncer acima.

[00166] Concretizações envolvendo uma CLD 18.2 células tumorais ou cancerosas positivas que expressam CLDN18.2 envolvem de preferência a utilização de um anticorpo que tem a capacidade de se ligar a CLDN18.2. Em uma concretização, um anticorpo que tem a capacidade de se ligar a CLDN18.2 é um anticorpo monoclonal, um anticorpo quimérico ou humanizado, ou um fragmento de um anticorpo.

[00167] De acordo com a invenção, um "carcinoma" é um tumor maligno derivada a partir de células epiteliais. Este grupo representa os câncers mais comuns, incluindo as formas mais comuns de câncer da mama, da próstata, do pulmão e do câncer do cólon.

[00168] "Adenocarcinoma" é um câncer que se origina no tecido glandular. Este tecido também é parte de uma categoria de tecido maior conhecida como tecido epitelial. O tecido epitelial inclui a pele, glândulas e uma variedade de outros tecidos que alinham as cavidades e órgãos do corpo. O epitélio é derivado do embrião logicamente do ectodermo, endoderma e mesoderma. Para ser classificado como adenocarcinoma, as células não precisam necessariamente ser parte de uma glândula, desde que tenham propriedades secretoras. Esta forma de carcinoma pode ocorrer em alguns mamíferos superiores, incluindo humanos. Os adenocarcinomas bem diferenciados tendem a se parecer com o tecido glandular que são derivados de, ao mesmo tempo pouco diferenciado não pode. Por coloração das células a partir de uma biópsia, um patologista irá determinar se o tumor é um adenocarcinoma ou algum outro tipo de câncer. Adenocarcinomas pode surgir em muitos tecidos do corpo, devido à natureza ubíqua das glândulas dentro do corpo. Enquanto cada glândula não pode ser segregando a mesma substância, enquanto há uma função exócrina para a célula, que é considerado glandular e sua forma maligna é, por conseguinte, com o nome de adenocarcinoma. Os adenocarcinomas maligno invadir outros tecidos e muitas vezes metástase dado tempo suficiente para fazê-lo. Os adenocarcinoma do ovário é o tipo mais comum de carcinoma do ovário. Ele inclui os adenocarcinomas serosa e mucinoso, o adenocarcinoma de células claras eo adenocarcinoma endometrioid.

[00169] Por "metástase" se entende a propagação das células cancerosas do seu local original para outra parte do corpo. A formação de metástases é um processo muito complexo e depende de descolamento de células malignas do tumor primário, invasão da matriz extracelular, a penetração das membranas endoteliais do porão para entrar na cavidade do corpo e vasos, e em seguida, depois de ser transportado pelo sangue, a infiltração de órgãos alvo. Finalmente, o crescimento de um novo tumor no local de destino depende de angiogênese. Metástase de tumor muitas vezes ocorre mesmo após a remoção do tumor primário porque as células tumorais ou componentes podem permanecer e desenvolver o potencial metastático. Em uma concretização, o termo "metástases" de acordo com a invenção refere-se a "metástase" refere-se a que uma metástase remota que é a partir do tumor primário e o sistema de linfonodo regional. Em uma concretização, o termo "metástases" de acordo com o no venção refere-se a linfa metástase. Uma forma particular de metástases que é tratável utilizando a terapia da invenção é originário de metástase do câncer gástrico como o local primário. Em concretizações preferidas, tais metástase do câncer gástrico é tumor de Krukenberg, metástase peritoneal e / ou metástase do nódulo linfático.

[00170] Um câncer refratário é um tumor maligno para a qual um determinado tratamento é ineficaz, o que é tanto inicialmente não respondem ao tratamento, ou que se torna insensível ao longo do tempo. Os termos "refractária", "que não responde" ou "resistentes" são aqui utilizados indiferentemente.

[00171] Tumor de Krukenberg é um tumor metastático incomum da contabilidade do ovário por 1% a 2% de todos os tumores do ovário. Prognóstico de tumor Krukenberg ainda é muito baixa e não há nenhum tratamento estabelecido para tumores Krukenberg. O Tumor de Krukenberg é uma célula de adenocarcinoma do anel de sinete metastático do ovário. Estômago é o principal local na maioria dos casos de tumor Krukenberg (70%). Carcinomas do cólon, apêndice, e da mama (carcinoma lobular invasivo principalmente) são os seguintes sítios primários mais comuns. Os casos raros de tumor de Krukenberg proveniente de carcinomas da vesícula biliar, do tracto biliar, pâncreas, o intestino delgado, ampola de Vater, colo do útero e da bexiga urinária / urachus têm sido relatados.

[00172] O termo "cirurgia", tal como aqui utilizado, inclui a remoção de tumores em uma operação. É um tratamento comum para o câncer. Um cirurgião pode remover os tumores utilizando excisão local.

[00173] O termo "quimioterapia", tal como aqui utilizado, refere-se à utilização de agentes quimioterapêuticos ou combinações de agentes chemothcrapeutic, de preferência parar o crescimento de células cancerosas, ou matando as células ou impedindo-os de se dividir. Quando a quimioterapia é administrada por via oral ou injetada em uma veia ou músculo, os fármacos entram na corrente sanguínea e pode atingir células de câncer em todo o corpo (quimioterapia sistémica). Quando a quimioterapia é colocada directamente no fluido cerebrospinal, um órgão ou uma cavidade corporal, tal como o abdómen, as drogas afecta principalmente células tumorais naquelas áreas (quimioterapia regionais).

[00174] Os agentes quimioterapêutico, de acordo com a invenção incluem compostos citostáticos e compostos citotóxicos. Os agentes quimioterápicos tradicionais agem matando as células que se dividem rapidamente, uma das principais propriedades da maioria das células cancerosas. Isto significa que a quimioterapia também prejudica as células que se dividem rapidamente, em circunstâncias normais, tais como as células da medula óssea, do tracto digestivo, e folículos pilosos. Isto resulta em efeitos colaterais mais comuns da quimioterapia. De acordo com a invenção, o termo "quimioterapia" de preferência não inclui anticorpos que têm como alvo proteínas que são anormalmente expressos em células cancerosas (antígenos tumorais) e agem através do recrutamento de sistema imune do paciente para destruir as células tumorais. Os anticorpos que têm como alvo proteínas que são anormalmente expressos em células cancerosas (antígenos tumorais) e atuam através de uma porção terapêutica ou agente conjugado com o anticorpo, no entanto, pode ser visto como uma forma de quimioterapia. No entanto, no sentido mais estrito, o termo "quimioterapia" de acordo com a invenção não incluem a terapia-alvo.

[00175] De acordo com a invenção, o termo "agente quimioterapêutico" inclui taxanos, compostos de platina, os análogos de nucleósidos, análogos de camptotecina, antraciclinas, etoposido, bleomicina, vinorelbina, ciclofosfamida, e suas combinações. De acordo com a invenção, uma referência a um agente quimioterapêutico é para incluir qualquer pró-fármaco, tais como éster, sal ou derivado, tal como o referido agente conjugado. Exemplos são os conjugados do referido agente com a substância transportadora, o proteína ligada a paclitaxel, por exemplo, tal como o paclitaxel ligado a albumina. De um modo preferido, sais do referido agente sejam farmaceuticamente aceitável.

[00176] Os taxanos constituem uma classe de compostos de diterpeno, que foram derivadas primeira partir de fontes naturais tais como plantas do género Taxus, mas alguns foram sintetizados artificialmente. O principal mecanismo de acção da classe dos taxanos de drogas é a ruptura da função de microtúbulos, inibindo desse modo o processo de divisão celular. Os taxanos incluem o docetaxel (Taxotere) e paclitaxel (Taxol).

[00177] De acordo com a invenção, o termo "docetaxel" refere-se a um composto tendo a seguinte fórmula:

[00178] Em particular, o termo "o docetaxel" refere-se ao composto l, 7p, 10p-tri-hidroxi-9-oxo-5P, 20- epoxytax- 1 l-eno-2-A, tri-il-4,13a 4-etilo 2-benzoato 13- {(2R, 3S) -3 - [(terc-butoxicarbonil) - amino] -2-hidroxi-3- fenilpropanoato}.

[00179] De acordo com a invenção, o termo "paclitaxel" refere-se a um composto tendo a seguinte fórmula:

[00180] Em particular, o termo "paclitaxel" refere-se ao composto (2α, 4α, 5β, 7β, 10β, 13α) -4, 10-bis- (acetiloxi) -13 - {[(2R, 3S) -3- (benzoilamino ) -2-hidroxi- 3-fenilpropanoil] oxi} -l, 7-di-hidroxi-9-oxo-5,20-l-epoxytax 1 -en-2-ilo.

[00181] De acordo com a invenção, o termo "composto de platina" refere-se a compostos contendo platina na sua estrutura, tais como complexos de platina, e inclui compostos tais como cisplatina, carboplatina e oxaliplatina.

[00182] O termo "cisplatina" ou "cisplatina" refere-se ao composto cis-diaminodicloroplatina (II) (CDDP) com a seguinte fórmula:

[00183] O termo "carboplatina" refere-se ao composto cis-diamina (l, l-ciclobutanedicarboxilato) platina (II) com a seguinte fórmula:

[00184] O termo "oxaliplatina" refere-se a um composto que é um composto de platina que é complexado com um ligando transportador de diaminociclo- hexano a fórmula seguinte:

[00185] Em particular, o termo "oxaliplatino" refere- se ao composto [(1R, 2R) -ciclohexano-1, 2- diamina] (etanodioato-0,0 ') platina (lI). O oxaliplatino para injeção também é comercializado sob o nome comercial Eloxatine.

[00186] O termo "análogo de nucleosídeo" refere-se a um análogo estrutural de um nucleosídeo, uma categoria que inclui ambos os análogos de purina e análogos de pirimidina.

[00187] O termo "gemcitabina" é um composto que é um um análogo de nucleosido da seguinte fórmula:

[00188] Em particular, o termo refere-se ao composto 4-amino- 1 -(2-deoxi-2,2-difluor-P-D-eritro- pentofuranosil)pirimidin-2(lH)-ona ou 4-amino- l-[(2R,4R,5R)- 3,3-difluor-4-hidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2-il]- 1,2- dihidropirimidin-2-ona.

[00189] O termo "análogo de nucleósido" inclui derivados de tluoropirimidina tais como fluorouracilo e seus pró-fármacos. O termo "fluorouracil" ou "5-fluorouracil" (5- FU ou f5U) (vendido sob as marcas Adrucil, Carac, Efudix,Efudex e Fluoroplex) é um composto que é um análogo de pirimidina da seguinte fórmula:

[00190] Em particular, o termo refere-se ao composto 5-fluoro-1H-pirimidina-2,4-diona.

[00191] O termo "capecitabina" (Xeloda, Roche) refere- se a um agente quimioterapêutico que é um pró-fármaco que é convertido em 5-FU nos tecidos. A capecitabina que pode ser administrada por via oral tem a seguinte fórmula:

[00192] Em particular, o termo refere-se ao composto pentil [1 - (3,4-di-hidroxi-5-metiltetraliydrofuran-2-il) -5- tluoro-2-oxo-lH-pirimidin-4-il] carbamato.

[00193] O termo "ácido folínico" ou "leucovorina" refere-se a um composto útil em combinação sinérgica com o agente de quimioterapia 5-fluorouracilo. Assim, se é aqui feita referência à administração de 5-fluorouracilo ou um prfmaco do mesmo, a referida administração em uma concretização pode compreender uma administração em conjunto com ácido folínico. O ácido folínico tem a seguinte fórmula:

[00194] Em particular, o termo refere-se ao composto (2S) -2 - {[4 - [(2-amino-5-formil-4-oxo-5,6,7,8-tetra-hidro- 1 H-pteridin-6- il) metilamino] -benzoil] amin} pentanodico.

[00195] According to the invention, the term "camptothecin analog" refers to derivatives of the compound camptothecin (CPT; (S)-4-ethyl-4-hydroxy-lH- pyrano[3',4':6,7]indolizino[l,2-b] quinoline-3, 14-(4H, 12H)- dione). De preferência, o termo "análogo de camptotecina" refere-se a compostos que compreendem a seguinte estrutura:

[00196] De acordo com a invenção, os análogos de camptotecina preferidos são inibidores da enzima enzimática topoisomerase I (topo I). Os análogos de camptotecina preferidos de acordo com a invenção são irinotecan e topotecan.

[00197] Irinotecano é uma droga impedindo DNA de desenrolamento por inibição da topoisomerase I. Em termos químicos, é um análogo semi-sintético da camptotecina alcalóide natural tendo a seguinte fórmula:

[00198] em particular, o termo "irinotecano" refere-se ao composto (S) -4, um 1-dietil-3,4, 12, 14-tetra-hidro-4- hidroxi-3,14 -dioxo-1 H-pirano [3' , 4' : 6,7] -indolizino [1, 2-b] quinolin-9-il- [1, 4'-bipiperidina] -l '-carboxilato de etilo.

[00199] O topotecano é um inibidor da topoisomerase de fórmula:

[00200] Em particular, o termo "topotecan" refere-se ao composto (S) -10 - [(dimetilamino) metil] -4- etil-4,9-di- hidroxi-l H-pirano [3, 4' : 6,7] indolizino [ l, 2-b] quinolina-3,14 (4H, 12H) -diona.

[00201] As antraciclinas são uma classe de fármacos comumente utilizados na quimioterapia do câncer, que também são antibióticos. Estruturalmente, todas as antraciclinas compartilhar um de anéis de quatro 7,8,9, 10- tetrahydrotetracene-5, a estrutura comum de 12 quinona e normalmente requerem glicosilação em locais específicos.

[00202] As antraciclinas preferencialmente trazem cerca de um ou mais dos seguintes mecanismos de acção: 1. Inibir a síntese de DNA e RNA intercalando entre pares de bases da cadeia DNA / RNA, impedindo assim a replicação de células de câncer de crescimento rápido. 2. Inibir a enzima topoisomerase II, impedindo o relaxamento do DNA super- enrolado e bloqueando assim a transcrição e a replicação. 3. A criação de radicais de oxigénio livres mediados por ferro que danificam o DNA e membranas celulares.

[00203] De acordo com a invenção, o termo "antraciclina" refere-se preferencialmente a um agente, preferencialmente, um agente anti-câncer para induzir a apoptose, de um modo preferido inibindo a religação do DNA em topoisomerase II.

[00204] Os exemplos de antraciclinas e análogos de antraciclina incluem, mas não estão limitados a, daunorubicina (daunomicina), doxorrubicina (adriamicina), epirubicina, idarubicina, rodomicina, pyrarubicin, valrubicina, N-trifl uoro-acetil doxorrubicina 14- valecamundongo, aclacinomycin, morpholinodoxorubicin (morfolino-DOX), cianomorfolino-doxorrubicina (cianomorfolino-DOX), 2-pirrol cin ino-doxorubi (2-PDOX), 5- iminodaunomycin, mitoxantrona e aclacinomycin A (aclarubicina). A mitoxantrona é um membro da classe anihracendione de compostos, que são análogos de antraciclina que não possuem a porção de açúcar das antraciclinas, mas retêm a estrutura de anel aromático policíclico planar que permite a intercalação no DNA.

[00205] Especificamente contempladas como antraciclina no contexto da presente invenção é a epirubicina. A epirrubicina é um medicamento de antraciclina que tem a seguinte fórmula: e é comercializado sob o nome comercial Ellence nos EUA e farmorrubicina ou epirrubicina Ebewe noutro local. Em particular, o termo "epirubicina" refere-se ao composto (8R, 10S) -10- [(2S, 4S, 5R, 6S) Oxan-2-il -4-amino-5-hidroxi-6- metil] oxi -6, 1 1 -di-hidroxi-8- (2- hidroxiacetil) - 1- metoxi-8-metil-9, 10-di-hidro-7H-tetracen-5, 12-diona. A epirrubicina é favorecida em relação a doxorrubicina, a antraciclina mais popular, em alguns regimes de quimioterapia, uma vez que parece provocar menos efeitos colaterais.

[00206] O termo "etoposido" refere-se a um derivado semi-sintético da podofilotoxina que exibe actividade antitumoral. Etoposido inibe a síntese de DNA através da formação de um complexo com a topoisomerase de DNA e IE. Este complexo induz quebras no DNA de cadeia dupla e impede reparação por topoisomerase II de ligação. As quebras de DNA acumulados em impedir a entrada na fase mitica de divisão celular, e conduzir à morte celular. Etoposido tem a seguinte fórmula:

[00207] Em particular, o termo refere-se ao composto 4'-demetil-epipodofilotoxina 9- [4,6-0- (R) etilideno-beta-D- glucopiranósido], 4' - (di-hidrogenofosfato).

[00208] O termo "bleomicina" refere-se a um antibiótico glicopeptídeo produzido pela bactéria Streptomyces verticillus. Quando usado como agente anticancerígeno, ele funciona causando rupturas no DNA. A bleomicina preferencialmente compreende um composto com a seguinte fórmula:

[00209] O termo "vinorelbina" refere-se a um fármaco de quimioterapia anti-mitótico que é um alcalóide de vinca semi-sintético e é administrado como um tratamento para alguns tipos de câncer, incluindo câncer da mama e câncer do pulmão de células não pequenas. A vinorelbina compreende de preferência um composto com a seguinte fórmula:

[00210] A ciclofosfamida é um agente de alquilação de mostarda de nitrogênio do grupo oxazoporinas. O principal uso da ciclophosfamida é com outros agentes de quimioterapia no tratamento de algumas formas de câncer. A Ciclofosfamida compreende de preferência um composto com a seguinte fórmula:

[00211] No contexto da presente invenção, o termo "terapia de radiação" refere-se ao uso de raios X de alta energia ou outros tipos de radiação para matar células cancerosas ou mantê-los a partir de crescente. Existem dois tipos de terapia de radiação. A radioterapia externa utiliza uma máquina de exterior do corpo para enviar radiação para o câncer. A radioterapia interna usa uma substância radioactiva selada em agulhas, sementes, fios, ou cateteres que são colocados directamente em ou perto do câncer. A forma como a terapia de radiação é administrada depende do tipo e do estádio do câncer a ser tratado.

[00212] De acordo com a invenção, o termo "terapia orientada" refere-se a qualquer terapia que possa ser utilizada para atingir células preferencialmente pacientes, tais como células de câncer, enquanto as células não pacientes não são alvo ou dirigidas em menor grau. A segmentação de células pacientes, de preferência, resulta em matar e / ou prejudicar a proliferação ou viabilidade de células pacientes. Tal terapia inclui i) anticorpos, fragmentos de anticorpos e proteínas que estão desnudas ou conjugadas com uma fração terapêutica que visam certos alvos de superfície celular em células pacientes, tais como antígenos tumorais, por exemplo, CLDN18.2 (por exemplo, anticorpos ou conjugados de anticorpos contra CLDN18.2, tal como aqui descrito) ou ii) moléculas de pequenas dimensões, que prejudicam a proliferação ou viabilidade das células pacientes. Em uma concretização específica, o agente se liga a um antígeno que é expresso a um nível mais elevado do que em pacientes em células estaminais normais. Em uma concretização específica, o agente se liga especificamente a um antígeno tumoral. A quimioterapia tradicional ou radioterapia não é considerada uma "terapia-alvo" apesar de ser frequentemente dirigidos aos tumores. Além disso, o termo "terapia de anticorpo" de acordo com a invenção de preferência não inclui a terapia com anticorpos, fragmentos ou seus derivados que são conjugados com uma unidade teraptica, mas meramente refere-se a terapia com anticorpos, fragmentos ou seus derivados que atuam através do recrutamento do sistema imune do paciente para destruir as células tumorais.

[00213] O termo "antígeno" refere-se a um agente que compreende um epítopo contra o qual uma resposta imunitária é a serem gerados e / ou é dirigido. O termo "antígeno" inclui, em particular, proteínas, peptídeos, polissacáridos, ácidos nucleicos, especialmente RNA e DNA, e nucleotídeos. O termo "antígeno" inclui também agentes, os quais se tornam antigénico - e sensibilizando - única através de transformação (por exemplo, intermediariamente na molécula ou por preenchimento com proteína corporal). Um antígeno ou um produto de processamento da mesma é de preferência, reconhecível por um receptor de células T ou B, ou por uma molécula de imunoglobulina, tal como um anticorpo. Em uma concretização preferida, o antígeno é um antígeno associado di-Sease, tal como um antígeno tumoral, tal como CLDN18.2.

[00214] No contexto da presente invenção, o termo "antígeno tumoral" ou "antígeno associado a tumor" refere-se a um antígeno que está presente em células tumorais. De preferência, o antígeno está presente nas células tumorais, tal como na superfície das células tumorais. De preferência, o "antígeno tumoral" é expresso pelas células tumorais. Numa concretização, o termo "antígeno tumoral" refere-se a proteínas que são aberrantemente expressas em células tumorais quando comparadas às células normais, isto é, não tumorosas. Por exemplo, a expressão só pode ser encontrada em células tumorais, mas não nas células normais, isto é, não tumorosas, ou o nível de expressão pode ser maior nas células tumorais em comparação com as células normais, isto é, não tumorosas. Numa concretização, o termo "antígeno tumoral" refere-se a proteínas que estão em condições normais especificamente expressas num número limitado de tecidos e / ou órgãos ou em estádios de desenvolvimento específicos e são expressas ou expressas aberrantemente em um ou mais tecidos tumorais ou cancerígenos. No contexto da presente invenção, um antígeno tumoral é de preferência associado com a superfície celular de uma célula cancerosa e, de preferência, não é, apenas raramente ou a um nível mais baixo, expresso em tecidos e células normais. De preferência, de acordo com a invenção, um antígeno tumoral não é expresso numa célula se o nível de expressão estiver abaixo do limite de detecção e / ou se o nível de expressão for muito baixo para permitir a ligação por anticorpos específicos do antígeno tumoral adicionados às células . Um antígeno tumoral particularmente preferido de acordo com a invenção é CLDN18.2.

[00215] De acordo com a invenção, o termo "câncer positivo do antígeno tumoral" ou "tumor positivo para o antígeno tumoral" ou termos semelhantes significa um câncer ou tumor envolvendo câncer ou células tumorais que expressam um antígeno tumoral, de preferência na superfície do referido câncer células ou células tumorais. Um antígeno tumoral é expresso na superfície dos ceils se estiver localizado na superfície das referidas células e for acessível à ligação por anticorpos específicos do antígeno do tumor adicionados às células.

[00216] Em uma concretização preferida da invenção, um "tumor antígeno-positivo câncer" ou "antígeno-positivas de tumor do tumor" é um "CLDN câncer 18,2-positivo" ou "CLDN tumor 18,2-positivo". De acordo com a invenção, o termo "CLDN18.2 câncer positivo" ou "CLDN tumor 18,2-positiva" significa um câncer ou tumor que envolve as células de câncer ou tumor que expressam CLDN18.2, de preferência, sobre a superfície das referidas células de câncer ou células tumorais.

[00217] "Superfície celular" é usado de acordo com o seu significado normal na arte, e assim, inclui o lado de fora da célula que está acessível para ligação de proteínas e outras moléculas.

[00218] O termo "porção extracelular", no contexto da presente invenção refere-se a uma parte de uma molécula tal como uma proteína que está de frente para o espaço extracelular de uma célula e de preferência é acessível a partir do exterior da referida célula, por exemplo, por de ligação ao antígeno moléculas, tais como anticorpos localizados no exterior da célula. Preferencialmente, o termo refere-se a um ou mais ansas extracelulares ou domínios ou um seu fragmento.

[00219] De acordo com a invenção, CLDN18.2 não é substancialmente expressa em uma célula, se o nível de expressão é comparado inferior a expressão em células do estômago ou do tecido do estômago. De preferência, o nível de expressão é menos do que 10%, de preferência, menos do que 5%, 3%, 2%, a 1%, 0,5%, 0,1% ou 0,05% da expressão em células do estômago ou tecido do estômago ou mesmo inferior. De um modo preferido, CLDN18.2 não é substancialmente expressa em uma célula, se o nível de expressão superior ao nível de expressão em tecido não canceroso excepto estômago por não mais de 2 vezes, de preferência 1, 5 vezes, e, de preferência, não exceda o nível de expressão em que o referido tecido não canceroso. De um modo preferido, CLDN18.2 não é substancialmente expressa em uma célula, se o nível de expressão é abaixo do limite de detecção e / ou se o nível de expressão é muito baixa para permitir a ligação de anticorpos específicos de CLDN18.2 adicionados às células.

[00220] De acordo com a invenção, CLDN18.2 é expresso em uma célula, se o nível de expressão superior ao nível de expressão em tecido não canceroso diferente de estômago de preferência por mais do que duas vezes, de preferência de 10 vezes, 100 vezes, 1000 vezes, ou 10000 vezes. De um modo preferido, CLDN18.2 é expresso em uma célula, se o nível de expressão é superior ao limite de detecção e / ou se o nível de expressão é suficientemente alto para permitir a ligação de anticorpos específicos de CLDN18.2 adicionados às células. De um modo preferido, CLDN18.2 expresso em uma célula é expressa ou exposta na superfície da referida célula.

[00221] O termo "epítopo" refere-se a um determinante antigénico em uma molécula, isto é, para a parte de uma molécula que é reconhecida pelo sistema imune, por exemplo, que é reconhecido por um anticorpo. Por exemplo, os epítopos são os, locais tridimensionais discretas sobre um antígeno, que são reconhecidos pelo sistema imune. Os epítopos consistem normalmente em agrupamentos de superfície quimicamente activos de moléculas tais como aminoácidos ou cadeias laterais de açúcares, e geralmente possuem características estruturais tridimensionais específicas, bem como características de carga específicas. Os epítopos conformacionais e n conformacionais distinguem-se pelo facto da ligação para o primeiro, mas não o último é perdido na presen de solventes desnaturantes. Um epítopo de uma proteína compreende preferivelmente uma porção contínua ou descontínua da referida proteína e é de preferência entre 5 e 100, de preferência entre 5 e 50, mais preferencialmente entre 8 e 30, mais preferencialmente entre 10 e 25 aminoácidos de comprimento, por exemplo, o epítopo pode ser, de preferência 8, 9, 10, 1 1, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, ou 25 aminoácidos de comprimento.

[00222] O termo "anticorpo" inclui uma glicoproteína que compreende, pelo menos, duas cadeias pesadas (H) e duas (L) cadeias leves inter-ligadas por ligaes dissulfureto, bem como qualquer molécula compreendendo uma porção de ligação ao antígeno de tais glicoproteína. O termo "anticorpo" inclui anticorpos monoclonais, anticorpos recombinantes, anticorpos humanos, anticorpos humanizados, anticorpos quiméricos, fragmentos ou derivados de anticorpos, incluindo, sem limitação, anticorpos de cadeia simples, por exemplo, scFv e fragmentos de anticorpos de ligação ao antígeno, tais como Fab e Fab 'fragmentos e também inclui todas as formas recombinantes de anticorpos, por exemplo, anticorpos expressos em procariotas, anticorpos glicosilados un, e quaisquer fragmentos de anticorpo de ligação ao antígeno e derivados como aqui descrito. Cada cadeia pesada é compreendida por uma região variável de cadeia pesada (abreviado aqui como VH] e uma região constante de cadeia pesada. Cada cadeia leve é composta por uma região variável de cadeia leve (abreviada aqui como VL) e uma região constante de cadeia leve. As regiões VH e VL podem ser subdivididas em regiões de hipervariabilidade, denominadas regiões determinantes de complementaridade (CDR), intercaladas com regiões mais conservadas, denominadas regiões estruturais (FR). Cada VH e VL é composto de três CDRs e quatro FRs, dispostos a partir de ammo-terminal a carboxi-terminal na seguinte ordem: FRl, CDRl, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. As regiões variáveis das cadeias pesada e leve contêm um domínio de ligação que interage com um antígeno. As regiões constantes dos anticorpos podem mediar a ligação da imunoglobulina para hospedar tecidos ou fatores, incluindo várias células do sistema imune (por exemplo, células efetoras) e o primeiro componente (Clq) do sistema de complemento clássico.

[00223] O termo "anticorpo monoclonal", tal como aqui utilizado, refere-se a uma preparação de moléculas de anticorpo de composição molecular única. Um anticorpo monoclonal exibe uma única especificidade e afinidade de ligação. Numa concretização, os anticorpos monoclonais são produzidos por um hibridoma que inclui uma célula B obtida de um animal não humano, por exemplo, um camundongo fundido a uma célula imortalizada.

[00224] O termo "anticorpo recombinante", como aqui utilizado, inclui todos os anticorpos que são preparados, expressos, criados ou isolados por meios recombinantes, tais como (a) anticorpos isolados de um animal (por exemplo, um camundongo) que é transgénico ou transcromossómico com respeito para os genes de imunoglobulina ou um hibridoma preparado a partir dele, (b) anticorpos isolados a partir de uma célula hospedeira transformada para expressar o anticorpo, por exemplo, a partir de um transfectoma, (c) anticorpos isolados a partir de um recombinante, a biblioteca combinatia de anticorpos, e anticorpos (d) preparado , expressos, criados ou isolados por quaisquer outros meios que envolvem splicing das sequências de genes de imunoglobulina para outras sequências de DNA.

[00225] O termo "anticorpo humano", tal como aqui utilizado, pretende incluir anticorpos com regiões variáveis e constantes derivadas de sequências de imunoglobulina da linha germinativa humana. Anticorpos humanos podem incluir resíduos de aminoácidos não codificados pelas sequências de imunoglobulinas da linha germinal humana (por exemplo, mutaes introduzidas por mutagese aleatia ou especica do local in vitro ou por mutao somica in vivo).

[00226] O termo "anticorpo humanizado" refere-se a uma molécula que possui um local de ligação ao antígeno que está substancialmente derivadas de uma imunoglobulina de uma espécie não-humana, em que a estrutura da imunoglobulina restantes da molécula está com base na estrutura e / ou sequência de uma imunoglobulina humana. O local de ligação ao antígeno pode incluir quer domios varieis completos fundidos para os domínios constantes ou apenas as regiões determinantes de complementaridade (CDR) enxertadas em regis estruturais apropriadas nos domios varieis. Os locais de ligação de antígenos podem ser de tipo selvagem ou modificados por uma ou mais substituições de aminoácidos, por exemplo, modificada para se assemelhar mais de perto imunoglobulinas humanas. Algumas formas de anticorpos humanizados preservar todas as sequências de CDR (por exemplo, um anticorpo de camundongo humanizado que cont todas as seis CDR a partir do anticorpo de murganho). Outras formas têm uma ou mais CDRs que s alteradas em relao ao anticorpo original.

[00227] O termo "anticorpo quimérico" refere-se a esses anticorpos, em que uma porção de cada uma das sequências de aminoácidos das cadeias leves e pesadas é homólogo às sequências correspondedores em anticorpos derivados de uma espécie particular ou pertencentes a uma determinada classe correspondente, enquanto que o restante segmento da cadeia é homólogo às sequências correspondedores em um outro correspondente. Tipicamente, a região variável de ambas as cadeias leve e pesada imita as regiões variáveis de anticorpos derivados de uma espécie de mamíferos, enquanto que as porções constantes são homólogas de sequências de anticorpos derivados de uma outra. Uma vantagem clara de tais formas quiméricas é que a região variável pode convenientemente ser derivadas de fontes presentemente conhecidas usando células B ou hibridomas prontamente disponíveis a partir de organismos hospedeiros não humanos em combinação com regiões constantes derivadas de, por exemplo, preparações de células humanas. Enquanto a região variável tem a vantagem de facilidade de preparação e a especificidade não é afectado pela fonte, a região constante sendo humana, é menos provável que provoquem uma resposta imunitária de um indivíduo humano quando os anticorpos são injetados do que a região constante a partir de uma fonte não humana. No entanto, a definição não se limita a este exemplo particular.

[00228] Os anticorpos podem ser derivados de espécies diferentes, incluindo, mas não limitado a camundongo, camundongo, coelho, cobaia e humano.

[00229] Anticorpos descritos aqui incluem anticorpos IgA tais como IgA 1 ou IgA2, IgGl, IgG2, lgG3, lgG4, IgE, IgM e IgD. Em várias concretizações, o anticorpo é um anticorpo IgGl, mais particularmente um isotipo IgGl, kappa ou IgGl, lambda (por exemplo, IgGl, K, À), um anticorpo IgG2a (por exemplo,é, IgG2a, K, À), um anticorpo IgG2b (por exemplo, IgG2b, k, à), um anticorpo IgG3 (por exemplo, IgG3, k, à) ou anticorpo na IgG4 (por exemplo, lgG4, k, à).

[00230] Tal como aqui utilizado, um "anticorpo heterólogo" é definido em relação a um organismo transgénico que produz um anticorpo tal. Este termo refere-se a um anticorpo possuindo uma sequência de aminoácidos ou uma sequência de ácido nucleico de codificação correspondendo ao encontrado num organismo que não seja constituída o organismo transgénico, e sendo geralmente derivadas a partir de outras espécies do que o organismo transgênico.

[00231] Tal como aqui utilizado, um "anticorpo hetero- híbrido" refere-se a um anticorpo possuindo cadeias leves e pesadas ou origens organométicas diferentes. Por exemplo, um anticorpo possuindo uma cadeia pesada humana associada a uma cadeia leve murina é um anticorpo hetero-híbrido.

[00232] Os anticorpos aqui descritos são, de preferência isolado. Um "anticorpo isolado", como aqui utilizado, pretende referir-se a um anticorpo que é substancialmente livre de outros anticorpos tendo diferentes especificidades antigicas (por exemplo, um anticorpo isolado que se liga especificamente a um antígeno tumoral é substancialmente isento de anticorpos que se ligam especificamente a outros antígenos do que o antígeno de tumor). Um anticorpo isolado que se liga especificamente a um epítopo, isoforma ou variante de um antígeno de tumor humano pode, no entanto, ter reactividade cruzada com outros antígenos relacionados, por exemplo, a partir de outras espécies (por exemplo, espécies de antígenos de tumor homogos). Além disso, um anticorpo isolado pode ser substancialmente isento de outro material celular e / ou produtos químicos. Em uma concretização da invenção, uma combinação de anticorpos monoclonais "isolado" refere-se a anticorpos que possuem diferentes especificidades e sendo combinadas em uma composição ou mistura bem definida.

[00233] Os termos de um anticorpo (ou simplesmente "porção de ligação") ou "fragmento de ligação ao antígeno" de um anticorpo (ou simplesmente "fragmento de ligação") ou termos semelhantes "porção de ligação ao antígeno" refere-se a um ou mais fragmentos de um anticorpo que reter a capacidade para se ligarem especificamente a um antígeno. Tem sido demonstrado que a função de ligação ao antígeno de um anticorpo pode ser executada por fragmentos de um anticorpo de comprimento completo. Exemplos de fragmentos de ligação englobados dentro do termo de um anticorpo "porção de ligação ao antígeno" incluem (i) os fragmentos Fab, fragmentos monovalentes que consiste nos domínios VL, VH, CL e CH; (ii) F(ab')2, fragmentos bivalentes que compreende dois fragmentos Fab ligados por uma ponte dissulfureto na regi chRNAeira; (iii) fc, fragmentos consistindo dos domínios VH e CH; (iv) fragmentos Fv que consiste nos domínios VL e VH de um único braço de um anticorpo, (v) Fragmentos de dAb (Ward et al., (1989) Nature 341: 544-546), que consistem em um domínio VH; (vi) regiões determinantes de complementaridade isoladas (CDR), e (vii) combinações de duas ou mais CDRs isoladas que podem opcionalmente ser juntadas por um ligante sintético. Além disso, embora os dois domínios do fragmento Fv, VL e VH, sejam codificados por genes separados, eles podem ser unidos, usando métodos recombinantes, por um vinculador sintético que lhes permite ser feito como uma única cadeia proteica na qual o VL e as regiões VH par para formar moléculas monovalentes (conhecidas como Fv de cadeia simples (scFv), ver, por exemplo, Bird et al. (1988) Science 242: 423-426 e Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci USA 85: 5879-5883). Tais anticorpos de cadeia simples também se destinam a ser abrangidos dentro do termo "fragmento de ligação ao antígeno" de um anticorpo. Um outro exemplo são as proteínas de fusão de imunoglobulina de domínio de ligação compreendendo (i) um polipeptídeo de domínio de ligação que é fundido com um polipeptídeo de região de dobradiça de imunoglobulina, (ii) uma região constante de CH2 de cadeia pesada de imunoglobulina fundida com a região de dobradiça e (iii) uma imunoglobulina região constante de CH3 de cadeia pesada fundida com a região constante de CH2. O polipeptídeo de domínio de ligação pode ser uma região variável de cadeia pesada ou uma região variável de cadeia leve. As proteínas de fusão de imunoglobulina de domínio de ligação são ainda descritas nos US 2003/0118592 e US 2003/0133939. Estes fragmentos de anticorpo são obtidos utilizando técnicas convencionais conhecidas pelos especialistas com a técnica, e os fragmentos são rastreados quanto à utilidade da mesma maneira que os anticorpos intactos.

[00234] O termo "domínio de ligação" caracteriza em ligação com a presente invenção uma estrutura, e. de um anticorpo, que se liga a / interage com uma determinada estrutura alvo / epítopo de antígeno. Assim, o domínio de ligação de acordo com a invenção designa um "sítio de interação de antígeno”.

[00235] Todos os anticorpos e derivados de anticorpos, tais como fragmentos de anticorpo, como aqui descritos para os fins da presente invenção são englobados pelo termo "anticorpo". O termo "derivados de anticorpos" refere-se a qualquer forma modificada de um anticorpo, por exemplo, um conjugado do anticorpo e outro agente ou anticorpo, ou um fragmento de anticorpo.

[00236] Anticorpos de ocorrência natural são geralmente monoespecifico, ou seja, elas ligam-se a um único antígeno. A presente invenção compreende anticorpos de ligação a uma célula alvo (por envolver um antígeno de tumor) e uma segunda entidade, tal como uma célula citotóxica (por exemplo, acoplando o receptor CD3). Os anticorpos da presente invenção podem ser biespecíficos ou triespecíficos multiespecífico, tais como, tetraespecílico e, assim, por diante.

[00237] O termo "molécula biespecífica" pretende incluir um agente que tenha duas especificidades de ligação diferentes. Por exemplo, a molécula pode se ligar ou interagir com (a) um antígeno de superfície celular e (b) um receptor tal como um receptor Fc na superfície de uma célula efetora. O termo "molécula multiespecífica" pretende incluir um agente que tenha mais de duas especificidades de ligação diferentes. Por exemplo, a molécula pode ligar ou interagir com (a) um antígeno de superfície celular, (b) um receptor tal como um receptor Fc na superfície de uma célula efetora, e (c) pelo menos um outro componente. Por conseguinte, o termo "anticorpo contra um antígeno tumoral" inclui, mas não está limitado a, moléculas mulpecetísticas, biespecíficas, específicas, tetraspecíficas e outras que são dirigidas para um antígeno tumoral e para outros alvos, tais como receptores Fc em células efectoras . O termo "anticorpos biespecíficos" também inclui diacorpos. Os diacorpos são anticorpos biespecíficos biespecíficos nos quais os domínios VH e VL são expressos numa única cadeia polipeptídica, mas usando um linker que é muito curto para permitir o emparelhamento entre os dois domínios na mesma cadeia, forçando assim os domínios a emparelhar-se com complemento domínios de outra cadeia e criando dois locais de ligação ao antígeno (ver, por exemplo, Holliger, P., et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448; Poljak, RJ, et al. (1994) Estrutura 2: 1121-1123).

[00238] De acordo com a invenção, um anticorpo pode exercer o seu efeito terapêutico através do recrutamento de sistema imune do paciente para destruir células tumorais e / ou através de uma porção terapêutica ou agente acoplado ao anticorpo. Para o propósito da presente invenção, tais conjugados de anticorpo podem ser considerados sendo abrangidos pelo termo "agente quimioterapêutico" enquanto que os anticorpos que exerce o seu efeito terapêutico através do recrutamento de sistema imune do paciente a destruir as células tumorais não são.

[00239] No contexto da presente invenção, um anticorpo de preferência é capaz de atuar através do recrutamento de sistema imune do paciente para destruir células de tumor, isto é, o anticorpo, em particular quando ligados ao seu alvo, tal como um antígeno de tumor em uma célula doente, provoca efector imune funciona como aqui descrito. Preferencialmente, as referidas funções efetoras imunes são dirigidas contra as células, tais como células cancerosas que transportam um antígeno de tumor, tais como CLDN18.2 na sua superfície.

[00240] O termo "funções efetoras imunes" no contexto da presente invenção inclui quaisquer funções mediadas por componentes do sistema imune que resultam por exemplo, na inibição do crescimento e / ou a inibição do desenvolvimento do tumor, incluindo a inibição da disseminação de tumores e metástases de tumores. Preferencialmente, as funções efectoras imunes resultar na morte de células cancerosas. Tais funções compreendem citotoxicidade dependente do complemento (CDC), citotoxicidade mediada por anticorpo por células dependente de anticorpos (ADCC), fagocitose mediada por células dependente de anticorpos (ADCP), a indução de apoptose nas células que transportam o antígeno tumoral, citólise das células que transportam o antígeno tumoral, e / ou a inibição da proliferação das células transportando o antígeno tumoral. Os agentes de ligação podem também exercer um efeito simplesmente pela ligação de antígenos tumorais na superfície de uma célula cancerosa. Por exemplo, os anticorpos podem bloquear a função do antígeno do tumor ou induzir apoptose apenas pela ligação ao antígeno de tumor na superfície de uma célula cancerosa.

Citotoxicidade mediada por células dependente de anticorpos

[00241] ADCC descreve a capacidade de morte celular das células efectoras, em linfitos particulares, o que requer de um modo preferido a célula alvo a ser marcado por um anticorpo.

[00242] ADCC ocorre, preferencialmente, quando os anticorpos se ligam a antígenos em células tumorais e os domínios de Fe de anticorpos envolver receptores de Fc (FcR) na superfície de células efectoras imunes. Várias famílias de receptores de Fc foram identificadas, e as populações de células específicas caracteristicamente expressa definido receptores Fc. ADCC pode ser visto como um mecanismo para induzir directamente um grau variável de destruição do tumor imediato que conduz ao antígeno apresentação e a indução de respostas de células T dirigida ao tumor. De preferência, a indução de ADCC in vivo irá conduzir a tumor-respostas de células T dirigidas e as respostas de anticorpos derivados do hospedeiro.

Citotoxicidade dependente do complemento

[00243] CDC é outro método de morte celular que pode ser dirigido por anticorpos. IgM é o isotipo mais eficaz para a ativação do complemento. IgGl e IgG3 também são muito eficazes na direção do CDC através da via clássica de ativação do complemento. De preferência, nesta formação em cascata, a formação de complexos antígeno-anticorpo resulta na desobstrução de múltiplos locais de ligação de Clq em estreita proximidade nos domínios CH2 de moléculas de anticorpo participantes tais como moléculas de IgG (Clq é um dos três subcomponentes do complemento C1). De preferência, estes locais de ligação Clq não fechados convertem a interacção Clq-IgG de baixa afinidade para uma de alta avidez, o que desencadeia uma cascata de eventos envolvendo uma série de outras proteínas do complemento e conduz à liberação proteolítica dos agentes quimiotácticos / ativadores de células efectoras C3a e C5a. De preferência, a cascata do complemento termina na formação de um complexo de ataque de membrana, que cria poros na membrana celular que facilitam a passagem livre de água e solutos para dentro e para fora da célula.

[00244] Para inibir o crescimento do tumor e / ou desenvolvimento de tumor, de acordo com a invenção, um anticorpo pode ser conjugado com uma unidade ou agente terapêutico, tal como uma citotoxina, um fármaco (por exemplo, um imunossupressor) ou um radioisótopo. Uma citotoxina ou agente citotóxico inclui qualquer agente prejudicial e, em particular, mata células. Os exemplos incluem taxol, citocalasina B, gramicidina D, brometo de etidio, emetina, mitomicina, etoposido, tenoposição, vincristina, vinblastina, colchicina, doxorrubicina, daunorrubicina, dihidroxi antracina diona, mitoxantrona, mitimamicina, actinomicina D, amanitina, 1 - dehidrotestosterona, glucocorticóides, procaína, tetracaína, lidocaína, propranolol e puromicina e seus análogos ou homólogos. Os agentes terapêuticos adequados para a formação de conjugados de anticorpos incluem, mas não estão limitados a, antimetabolitos (por exemplo, metotrexato, 6- mercaptopurina, 6-tioguanina, citarabina, fludarabina, 5- fluorouracilo decarbazina), agentes alquilantes (por exemplo, mectlorometamina, tioepa clorambucil, melfalano , carmustina (BSNU) e lomustina (CCNU), ciclophosfamida, busulfan, dibromomannitol, estreptozotcina, mitomicina C e cis- diclorodiamina platina (II) (DDP) cisplatina), antraciclinas (por exemplo, daunorubicina (anteriormente daunomicina) e doxorrubicina), antibióticos (por exemplo, dactinomicina (anteriormente actinomicina), bleomicina, mitramicina e antracicina (AMC), e agentes anti-mitóticos (por exemplo, vincristina e vinblastina), numa forma de realização preferida, o agente terapêutico é um agente citotóxico ou um agente radiotóxico. outra forma de realização, o agente terapêutico é um imunossupressor. Ainda noutra concretização, o agente terapêutico é GM-CSF. Numa concretização preferida, o agente terapêutico é doxorrubicina, cisplatina, bleomicina, sulfato, carmustina, clorambucil, ciclophosfamida ou ricina A.

[00245] Os anticorpos também podem ser conjugados com um radioisótopo, por exemplo, iodo-131, ítrio-90 ou dio- 1 1 1, para gerar radiofármacos citotóxicos.

[00246] Os conjugados de anticorpos da invenção podem ser usados para modificar uma dada resposta biológica, e a porção de fármaco não é para ser interpretado como limitado a agentes terapêuticos químicos clássicos. Por exemplo, a poro do fmaco pode ser uma protea ou poliptido possuindo uma actividade biolica desejada. Tais proteas podem incluir, por exemplo, uma toxina enzimaticamente activa, ou seu fragmento activo, tais como abrina, ricina A, exotoxina de pseudomonas, ou toxina da difteria; uma proteína tal como fator de necrose tumoral ou interfer-y; ou, modificadores da resposta biológica tais como, por exemplo, linfocinas, interleucina-1 ("IL-1"), interleucina-2 ("IL-2"), interleucina-6 ("IL-6"), fator estimulante de colônias de macrófagos granulócitos ("GM-CSF"), fator estimulador de colônias de granulócitos ("G-CSF") ou outros fatores de crescimento.

[00247] As técnicas para conjugar tal unidade terapêutica a anticorpos são bem conhecidas, ver, por exemplo, RNAon et al., "Anticorpos Monoclonais para Imunotransferência de Medicamentos em Terapia de Câncer", em Anticorpos Monoclonais e Terapia de Câncer, Reisfeld et al. (eds.), pp. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985); Heilstrom et al., "Anticorpos para entrega de medicamentos", em Controle de entrega de medicamentos (2a Ed.), Robinson et al. (eds.), pp. 623-53 (Marcel Dekker, Inc., 1987); Thorpe, "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents in Cancer Therapy: A Review", in Monoclonal Antibodies '84: Aplicações Biológicas e Clínicas, Pincheraet al. (eds.), pp. 475-506 (1985); "Análise, Resultados e Prospectiva Futura do Uso Terapêutico de Anticorpo Radiomarcado em Terapia de Câncer", em Anticorpos Monoclonais para Detecção e Terapia de Câncer, Baldwin et al. (eds.), pp. 303-16 (Academic Press 1985) e Thorpe et al., "Preparação e propriedades citotóxicas de conjugados de anticorpo-toxina", Immunol. Rev. 62: 119-58 (1982).

[00248] O termo "anticorpo contra um antígeno tumoral" ou termos semelhantes refere-se a um anticorpo dirigido ou tendo a capacidade de ligação ao antígeno tumoral. O termo "ligação", de acordo com a invenção se refere, de preferência, a uma ligação específica.

[00249] De acordo com a presente invenção, um anticorpo é capaz de se ligar a um alvo pré-determinado, se ele tem uma afinidade significativa para o referido alvo pré- determinado e se liga à referida predeterminada alvo em ensaios convencionais. "Afinidade" ou "afinidade de ligação" é geralmente medida pelo equilíbrio de dissociação constante (D). De um modo preferido, o termo "afinidade significativa" refere-se à ligação a um alvo pré-determinado, com uma constante de dissociação (KD) de 10-5 M ou inferior, 10-6 M ou inferior, 10-7 M ou inferior, 10-8 M ou inferior, 10-9 M ou inferior, 10-10 M ou inferior, 10-11 M ou inferior, ou l0-12 M ou inferior.

[00250] Um anticorpo não é (substancialmente) capaz de se ligar a um alvo, se ela não tem afinidade significativa para o referido alvo e não se liga de forma significativa, em particular, não se liga de forma detectável, ao referido alvo em ensaios convencionais. De preferência, o anticorpo não se liga de forma detectável para o referido alvo se estiver presente em uma concentração de até 2, de preferência 10, mais preferencialmente, 20, em particular, 50 ou 100 μg/ml ou superior. De um modo preferido, um anticorpo não tem qualquer afinidade significativa para um alvo caso se ligue ao referido alvo com um KD que é pelo menos 10 vezes, 100 vezes, 103 vezes de, 104 vezes de, 105 vezes de, ou 106 vezes maior do que a KD para a ligação ao alvo predeterminado para o qual o anticorpo é capaz de se ligar. Por exemplo, se a KD para a ligação de um anticorpo para o alvo para que o anticorpo capaz de se ligar é de 10-7 M, a KD para a ligação a um alvo para o qual o anticorpo não tem qualquer afinidade significativa seria é pelo menos 10-6 M, 10-5 M, 10-4 M, 10-3 M, 10-2 M ou 10-1 M.

[00251] Um anticorpo é específico para um alvo pré- determinado, se for capaz de se ligar ao referido alvo pré- determinado, enquanto que não é capaz de se ligar a outros alvos, ou seja, não tem qualquer afinidade significativa para outros objectivos e não se liga de forma significativa a outros alvos em ensaios convencionais. De acordo com a invenção, um anticorpo é específico para um antígeno de tumor que seja capaz de se ligar ao antígeno de tumor, mas não é (substancialmente) capaz de se ligar a outros alvos. De um modo preferido, um anticorpo é específico para um antígeno de tumor, se a afinidade para e a ligação de tais outros alvos não exceda significativamente a afinidade para ou de ligação a proteínas de antígeno-independentes de tumor, tais como albumina de soro bovino (BSA), caseína, albumina do soro humano (HSA) ou proteínas transmembranares antígeno que não de tumor, tais como as moléculas de MHC ou receptor de transferrina ou qualquer outro poliptido especificada. De um modo preferido, um anticorpo é específico para um alvo pré- determinado, se liga ao referido alvo com um K D que é pelo menos 10 vezes, 100- vezes, uma Superar aposta, 104 vezes de, 105 vezes de, ou 106 vezes de mais baixa do que a KD para a ligação a um alvo para o qual não é específica. Por exemplo, se a KD para a ligação de um anticorpo para o alvo para o qual é específico é de 10-7 M, a KD para a ligação a um alvo para os quais ele não é específico seria, pelo menos, 10-6 M, 10-5 M, 10-4 M, 10-3 M, 10-2 M, ou 10-1 M.

[00252] A ligação de um anticorpo a um alvo pode ser determinada experimentalmente utilizando qualquer método adequado; veja, por exemplo, Berzofsky et al., "Interações Antibody-Antigen" em Imunologia Fundamental, Paul, W. E., Ed., Raven Press New York, N Y (1984), Kuby, Janis Immunology, W. II. Freeman and Company New York, N Y (1992) e os métodos aqui descritos. As afinidades podem ser prontamente determinadas usando técnicas convencionais, como por diálise de equilíbrio; utilizando o instrumento BIAcore 2000, utilizando procedimentos gerais delineados pelo fabricante; por radioimunoensaio utilizando antígeno alvo radiomarcado; ou por outro método conhecido pelo especialista em artesanato. Os dados de afinidade podem ser analisados, por exemplo, pelo método de Scatchard et al., Ann N.Y. Acad. ScL, 51: 660 (1949). A afinidade medida de uma interacção particular anticorpo-antígeno pode variar se for medida sob diferentes condições, por exemplo, concentração de sal, pH. Assim, as medições de afinidade e outros parâmetros de ligação ao antígeno, por exemplo, KD, ICSO, são de preferência feitas com soluções padronizadas de anticorpo e antígeno e um tampão padronizado.

[00253] Tal como aqui utilizado, "isotipo" refere-se à classe de anticorpo (por exemplo, IgM ou IgGl) que é codificada por genes das regiões constantes da cadeia pesada.

[00254] Tal como aqui utilizado, "isotipo de comutação" refere-se o fenômeno pelo qual a classe, ou isotipo, de um anticorpo muda de uma classe Ig para uma das outras classes Ig.

[00255] O termo "de ocorrência natural" tal como aqui utilizado aplicado a um objecto refere-se ao facto de um objecto poder ser encontrado na natureza. Por exemplo, um polipeptídeo ou sequência polinucleotídica que está presente num organismo (incluindo vírus) que pode ser isolado a partir de uma fonte na natureza e que não foi intencionalmente modificado pelo homem no laboratório é de ocorrência natural.

[00256] O termo "rearranjado", tal como aqui utilizado, refere-se a uma configuração de um locus de imunoglobulina de cadeia pesada ou cadeia leve em que um segmento V é posicionado imediatamente adjacente a um segmento DJ ou J numa conformação que codifica essencialmente um domínio VH ou VL completo, respectivamente. Um locus do gene da imunoglobulina (anticorpo) rearranjado pode ser identificado por comparação com o DNA da linha germinal: um locus rearranjado terá pelo menos um elemento de homologia heptamer / nonamer recombinado.

[00257] O termo "configuração não rearranjada" ou "linha germinal", tal como aqui utilizado na referência a um segmento V, refere-se à configuração em que o segmento V não é recombinado de modo a ser imediatamente adjacente a um segmento D ou J.

[00258] De preferência, a ligação de um anticorpo contra um antígeno tumoral a células que expressam o antígeno tumoral induz ou medeia a morte de células que expressam o antígeno tumoral. As células que expressam um antígeno tumoral são de preferência células cancerosas e são, em particular, células das doenças cancerígenas aqui descritas. De preferência, o anticorpo induz ou medeia a matança de células induzindo uma ou mais lise mediada por citotoxicidade dependente do complemento (CDC), lise mediada por citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC), apoptose e inibição da proliferação de células que expressam um antígeno tumoral. De preferência, a lise mediada por ADCC de células ocorre na presença de células efectoras, que em concretizações particulares são selecionadas do grupo que consiste em monócitos, células mononucleares, células NK e PMNs. A inibição da proliferação de células pode ser medida in vitro determinando a proliferação de células num ensaio utilizando bromodeoxiuridina (5-bromo-2'-desoxiuridina, BrdU). BrdU é um nucleósido sintético que é um análogo da timidina e pode ser incorporado no DNA recentemente sintetizado de células replicantes (durante a fase S do ciclo celular), substituindo por timidina durante a replicação do DNA. Detectando a química incorporada utilizando, por exemplo, anticorpos específicos para BrdU indica as células que foram ativamente replicantes seu DNA.

[00259] Em concretizações preferidas, os anticorpos aqui descritos podem ser caracterizados por uma ou mais das seguintes propriedades: a) especificidade para um antígeno tumoral; b) uma afinidade de ligação para um antígeno de tumor de cerca de 100 nM ou menos, de um modo preferido, cerca de 5-10 nM ou menos e, mais preferivelmente, cerca de 1-3 nM ou menos, c) a capacidade de induzir ou mediar CDC em células positivas para o antígeno tumoral; d) a capacidade para induzir ou mediar ADCC em células positivas de antígeno do tumor; e) a capacidade para inibir o crescimento de células positivas de antígeno do tumor; f) a capacidade de induzir apoptose de células positivas de antígeno de tumor.

[00260] Numa concretização, um anticorpo contra um antígeno tumoral tem a capacidade de se ligar a um epítopo presente no antígeno tumoral, de preferência um epítopo localizado nos domínios extracelulares do antígeno tumoral. De preferência, um anticorpo contra um antígeno tumoral é específico para o antígeno tumoral. De preferência, um anticorpo contra um antígeno tumoral se liga ao antígeno tumoral expresso na superfície celular. Em concretizações particularmente preferidas, um anticorpo contra um antígeno tumoral se liga a epítopos nativos do antígeno tumoral presentes na superfície de células vivas.

[00261] De acordo com a invenção um anticorpo que tem a capacidade de se ligar a CLDN18.2 ou um anticorpo contra CLDN18.2 é um anticorpo capaz de se ligar a um epítopo presente em CLDN18.2, de preferência um epítopo localizado dentro dos domínios extracelulares de CLDN18.2, em particular o primeiro domínio extracelular, de preferência o ácido amino posições 29-78 da CLDN18.2. Em concretizações particulares, um anticorpo que tem a capacidade de se ligar a CLDN18.2 é um anticorpo capaz de se ligar a (i) um epítopo no CLDN18.2 que não está presente no CLDN 18,1, de preferência a SEQ ID NO: 3, 4, e 5 , (ii) um epítopo localizado no CLDN18.2-loopl, de preferência a SEQ ID nO: 8, (iii) um epítopo localizado no loop2 CLDN18.2-, de preferência a SEQ ID nO: 10, (iv) um epítopo localizado sobre a CLDN18.2-loopD3, de preferência, a SEQ ID nO: 11, (v) um epítopo, que englobam CLDN18.2-loopl e CLDN18.2-loopD3, ou (vi) um epítopo não-glicosilado localizada na CLDN18.2-loopD3, de preferência a SEQ ID NO: 9.

[00262] De acordo com a invenção um anticorpo que tem a capacidade de se ligar a CLDN18.2 de preferência é um anticorpo que tem a capacidade de se ligar a CLDN18.2, mas não para CLDN18.2. De um modo preferido, um anticorpo que tem a capacidade de se ligar a CLD 18.2 é específico para CLDN 18,2. De um modo preferido, um anticorpo que tem a capacidade de se ligar a CLDN18.2 é um anticorpo que tem a capacidade de ligação a f CLDN18.2 expressa na superfície da célula. Em particular, as concretizações preferidas, um anticorpo que tem a capacidade de se ligar a CLDN18.2 se liga a epítopos nativos de CLDN18.2 presentes na superfície de células vivas. De um modo preferido, um anticorpo que tem a capacidade de se ligar a CLDN18.2 se liga a um ou mais peptídeos seleccionados a partir do grupo que consiste em SEQ ID MOs: 1, 3-1 1, 44, 46, e 48-50. De um modo preferido, um anticorpo que tem a capacidade de se ligar a CLDN18.2 é específico para as proteínas acima mencionadas, ou fragmentos de peptídeos imunogénicos ou seus derivados. Um anticorpo que tem a capacidade de se ligar a CLDN18.2 pode ser obtido por um método compreendendo o passo de imunização de um animal com uma proteína ou peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos seleccionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 1, 3-11, 44, 46, e 48-50, ou uma célula ácido nucleico ou hospedeira expressar o referido peptídeo ou proteína. De um modo preferido, o anticorpo liga-se a células de câncer, em partícula, células de tipos de câncer mencionados acima e, preferivelmente, não se ligam substancialmente às células não-cancerosas.

[00263] De um modo preferido, a ligação de um anticorpo possuindo a capacidade de se ligarem a CLDN18.2 para as culas que expressam CLDN18.2 induz ou medeia matar células que expressam de CLDN18.2. As células que expressam CLD 18.2 são de preferência células de câncer e são, em particular, seleccionado a partir do grupo que consiste em gástrico tumorigénico, do esôfago, pâncreas, pulmão, ovário, cólon, hepáticos, cabeça-pescoço e células de câncer vesícula biliar. De um modo preferido, os anticorpos ou induz medeia a morte de células através da indução de uma ou mais da citotoxicidade dependente do complemento (CDC) de lise mediada por anticorpo dependente da citotoxicidade celular (ADCC) mediada por lise, a apoptose, e a inibição da proliferação de células que expressam CLDN18.2. De preferência, a ADCC mediada por lise das células ocorre na presença de células efectoras, que em concretizações particulares são seleccionados a partir do grupo que consiste de monócitos, células mononucleares, células NK e PMN.

[00264] Em concretizações preferidas, um anticorpo que tem a capacidade de se ligar a CLDN18.2 pode ser caracterizada por uma ou mais das seguintes propriedades: g) especificidade para CLDN18.2; h) uma afinidade de ligação para CLDN18.2 de cerca de 100 nM ou menos, de um modo preferido, cerca de 5-10 nM ou menos e, mais preferivelmente, cerca de 1-3 nM ou menos. i) A capacidade de induzir ou mediar CDC em CLDNl8.2 células positivas; j) a capacidade para induzir ou mediar ADCC na CLDNl8,2 células positivas; k) a capacidade para inibir o crescimento de células de CLDNl8,2 positivos; l) a capacidade de induzir apoptose de células positivas CLDNl8.2.

[00265] Numa concretização particularmente preferida, um anticorpo possuindo a capacidade de ligação ao CLDN l 8.2 é produzido por um hibridoma depositado no DSMZ (Mascheroder Weg lb, 31824 Braunschweig, Alemanha; novo endereço: Inhoffenstr. 7B, 31824 Braunschweig, Alemanha) e com a seguinte designação e número de:

[00266] a. 182-dl 106-055, no. de acesso. DSM ACC2737, depositada em 19 de outubro de 2005

[00267] b. 1 2-Dl 106-056, no. de acesso. DSM ACC2738, depositada em 19 de outubro de 2005

[00268] c. 182-dl 106-057, no. de acesso. DSM ACC2739, depositada em 19 de outubro, 2005

[00269] d. 182-dl 106-058, no. de acesso. DSM ACC2740, depositada em 19 de outubro de 2005

[00270] e. 182-dl 106-059, no. de acesso. DSM ACC2741, depositada em 19 de outubro de 2005,

[00271] f. 182-dl 106-062, no. de acesso. DSM ACC2742, depositada em 19 de outubro de 2005,

[00272] g. 182-dl 106-067, no. de acesso. DSM ACC2743, depositada em 19 de outubro de 2005,

[00273] h. 182-D758-035, no. de acesso. DSM ACC2745, depositada em 17 de novembro de 2005,

[00274] Eu. 182-D758-036, no. de acesso. DSM ACC2746, depositada em 17 de novembro de 2005,

[00275] j. 182-D758-040, no. de acesso. DSM ACC2747, depositada em 17 de novembro de 2005,

[00276] k. 182 D 1106-061, a adesão não. DSM ACC2748, depositada em 17 de novembro de 2005,

[00277] 1.-182 Dl 106-279, no. de acesso. DSM ACC2808, depositada em 26 de outubro de 2006,

[00278] m. 182-dl 106-294, no. de acesso. DSM ACC2809, depositada em 26 de outubro de 2006,

[00279] n. l 106-362 182-D, a adesão não. DSM ACC2810, depositada em 26 de outubro de 2006.

[00280] Os anticorpos preferidos de acordo com a invenção são aqueles produzidos por, e obtido a partir dos hibridomas acima descritos; ou seja, i.e. 37G11 no caso de 182-D1106-055, 37H8 no caso de 182-D1106-056, 38G5 no caso de 182-D1106-057, 38H3 no caso de 182-D1106-058, 39F11 no caso de 182-D1106-059, 43A11 no caso de 182-D1106-062, 61C2 no caso de 182-D1106-067, 26B5 no caso de 182-D758-035, 26D12 no caso de 182-D758-036, 28D10 no caso de 182-D758-040, 42E12 no caso de 182-D1106-061, 125E1 no caso de 182-D1106-279, 163E12 no caso de 182-D1106-294, and 175D10 no caso de 182-D1106- 362; e as formas quiméricas e humanizadas destes.

[00281] Em uma concretização, um anticorpo que tem a capacidade de se ligar a CLDN18.2 é um anticorpo seleccionado a partir do grupo que consiste de (i) um anticorpo produzido por e / ou obtenível a partir de um clone depositado sob a adesão não. DSM ACC2737, DSM ACC2738, DSM ACC2739, DSM ACC2740, DSM ACC2741, DSM ACC2742, DSM ACC2743, DSM ACC2745, DSM ACC2746, DSM ACC2747, DSM ACC2748, DSM ACC2808, DSM ACC2809, ou DSM ACC2810, (ii) um anticorpo que é uma forma quimerizado ou humanizado do anticorpo em (i), (iii) um anticorpo possuindo a especificidade do anticorpo em (i), e (iv) de um anticorpo compreendendo a porção ou local de ligação de antígeno de ligação de antígeno, em particular da região variável , do anticorpo sob (i) e de preferência possuindo a especificidade do anticorpo sob (i).

[00282] Os anticorpos quiméricos preferidos e as suas sequências estão apresentados na tabela a seguir:

[00283] Em concretizações preferidas, os anticorpos, em particular formas quimerizado de anticorpos de acordo com a invenção incluem anticorpos compreendendo uma região constante de cadeia pesada (CH) que compreende uma sequência de aminoácidos derivada de uma região constante de cadeia pesada humana, tais como a sequência de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 13 ou um seu fragmento. Em outras concretizações preferidas, os anticorpos, em particular formas quimerizado de anticorpos de acordo com a invenção incluem anticorpos compreendendo uma região constante de cadeia leve (CL), que compreende uma sequência de aminoácidos derivada de uma região constante de cadeia leve humana, tais como a sequência de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 12 ou um seu fragmento. Em uma concretização particularmente preferida, os anticorpos, em particular formas quimerizado de anticorpos de acordo com a invenção incluem anticorpos que compreendem um CH compreendendo uma sequência de aminoácidos derivada a partir de um CH humano, tais como a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 13 ou um fragmento do mesmo e que compreendem uma CL, compreendendo uma sequência de aminoácidos derivada a partir de uma CL humana tal como a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID nO: 12 ou um seu fragmento.

[00284] Em uma concretização, um anticorpo que tem a capacidade de se ligar a CLDN18.2 é um anticorpo quimérico de camundongo / humano IgGl monoclonal compreendendo capa, cadeia leve variável de murino, humana kapa de cadeia leve da região constante alotipo m (3), cadeia da região variável pesada de murino, humana IgGI região constante, alotipo Glm (3) .

[00285] Em certas concretizações preferidas, as formas quimerizadas de anticorpos incluem anticorpos compreendendo uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 14, 15, 16, 17, 18, 19, 51 e um fragmento do mesmo e / ou que compreende uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo constituído por SEQ ID NO: 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28 e um seu fragmento.

[00286] Em certas concretizações preferidas, quimerizado formas de anticorpos incluem anticorpos compreendendo uma combinação de cadeias pesadas e cadeias leves seleccionadas entre as seguintes possibilidades: (i) a (ix): (i) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 14 ou um seu fragmento e a cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 21 ou um seu fragmento, (ii) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 15 ou um seu fragmento e a cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 20 ou um seu fragmento, (iii) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 16 ou um seu fragmento e a cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 22 ou um seu fragmento, (iv) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 18 ou um seu fragmento e a cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 25 ou um seu fragmento, (v) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 17 ou um seu fragmento e a cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 24 ou um seu fragmento, (vi) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 19 ou um seu fragmento e a cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 23 ou um seu fragmento, (Vii) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 19 ou um seu fragmento e a cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 26 ou um seu fragmento, (viii) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 19 ou um seu fragmento e a cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 27 ou um seu fragmento, (ix) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 19 ou um seu fragmento e a cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 28 ou um seu fragmento, e (x) a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 51 ou um seu fragmento e a cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 24 ou um seu fragmento.

[00287] O anticorpo de acordo com (v) ou (x) é particularmente preferido.

[00288] "Fragmento" ou "fragmento de uma sequência de amino ácido" como utilizado acima, refere-se a uma parte de uma sequência de anticorpo, isto é, uma sequência que representa a sequência de anticorpo encurtado no terminal N e / ou C-terminal, que quando se substitui o referido anticorpo sequência de um anticorpo retém a ligação do referido anticorpo para CLDN18.2 e de preferência funções do referido anticorpo, tal como aqui descrito, por exemplo, CDC ou ADCC mediada lise mediada lise. De preferência, um fragmento de uma sequência de aminoácidos compreende pelo menos 80%, de um modo preferido, pelo menos, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% dos resíduos de aminoácidos a partir da referida sequência de amino-ácido. Um fragmento de uma sequência de aminoácido selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 14, 15, 16, 17, 18, 19, 51, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27 e 28 refere- se, de preferência, a referid sequência em que 17, 18, 19, 20, 21, 22 ou 23 aminoácidos no terminal-N são removidos.

[00289] Em uma concretização preferida, um anticorpo possuindo a capacidade de ligação ao CLD 18.2 compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 29, 30, 31, 32, 33, 34, e um seu fragmento. Em uma forma de realização preferida, um anticorpo possuindo a capacidade de se ligar a CLDN18.2 compreende uma região variável de cadeia leve (VL) compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo constituído por SEQ ID NO: 35, 36, 37, 38 39, 40, 41, 42, 43 e um seu fragmento. Em certas concretizações preferidas, um anticorpo possuindo a capacidade de ligação a CLDN18.2 compreende uma combinação de região variável de cadeia pesada (VH) e região variável de cadeia leve (VL) seleccionada a partir das seguintes possibilidades (i) a (ix) : (i) a VH compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 29 ou um seu fragmento e a VL compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 36 ou um seu fragmento, (ii) o VH compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 30 ou um seu fragmento e a VL compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 35 ou um seu fragmento, (iii) o VH compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 31 ou um seu fragmento e a VL compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 37 ou um seu fragmento, (iv) a VH compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 33 ou um seu fragmento e a VL compreende uma sequência de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 40 ou um seu fragmento, (v) o VH compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 32 ou um seu fragmento e a VL compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 39 ou um seu fragmento, (vi) a VH compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 34 ou um seu fragmento e a VL compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 38 ou um seu fragmento, (vii) a VH compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 34 ou um seu fragmento e a VL compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 41 ou um seu fragmento, (viii) a VH compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 34 ou um seu fragmento e a VL compreende uma sequência de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 42 ou um seu fragmento, (xi) o VH compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 34 ou um seu fragmento e a VL compreende uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 43 ou um seu fragmento.

[00290] O anticorpo de acordo com (v) é particularmente preferido.

[00291] De acordo com a invenção, o termo "fragmento" refere-se, em particular, para uma ou mais das regiões determinantes da complementaridade (CDR), de um modo preferido, pelo menos a região variável da CDR3 da região de cadeia pesada variável (VH) e / ou de região da cadeia leve variável (VL). Em uma concretização, os ditos um ou mais das regiões determinantes da complementaridade (CDRs) são seleccionados a partir de um conjunto de regiões determinantes de complementaridade CDRL, CDR2 e CDR3. Em uma concretização particularmente preferida, o termo "fragmento" refere-se às regiões determinantes de complementaridade CDRL, CDR2 e CDR3 da região variável de cadeia pesada (VH) e / ou da região variável de cadeia leve (VL).

[00292] Numa concretização preferida, um anticorpo possuindo a capacidade de ligação a CLDN18.2 compreende um VH compreendendo um conjunto de regiões de determinação de complementaridade CDRl, CDR2 e CDR3 selecionadas das seguintes concretizações (i) a (vi): (i) CDR1: posições 45-52 de SEQ ID NO: 14, CDR2: posições 70-77 de SEQ ID NO: 14, CDR3: posições 116-125 de SEQ ID NO: 14,

[00293] (1i) CDR1: posições 45-52 de SEQ ID NO: 15, CDR2: posições 70-77 de SEQ ID NO: 15, CDR3: posições 116-126 de SEQ ID NO: 15,

[00294] (Iii) CDR1: posições 45-52 de SEQ ID NO: 16, CDR2: posições 70-77 de SEQ ID NO: 16, CDR3: posições 116-124 de SEQ ID NO: 16,

[00295] (Iv) CDR1: posições 45-52 de SEQ ID NO: 17, CDR2: posições 70-77 de SEQ ID NO: 17, CDR3: posições 116-126 da SEQ ID NO: 17,

[00296] (v) CDRl: posições 44-51 da SEQ ID NO: 18, CDR2: posições 69-76 da SEQ ID NO: 18, CDR3: posições 115-125 da SEQ ID NO: 18, and

[00297] (vi) CDRl: posições 45-53 da SEQ ID NO: 19, CDR2: posições 71-78 da SEQ ID NO: 19, CDR3: posições 117-128 da SEQ ID NO: 19.

[00298] Em uma concretização preferida, um anticorpo que tem a capacidade de se ligar a CLDN18.2 compreende uma VL que compreende um conjunto de regiões determinantes de complementaridade CDR1, CDR2 e CDR3 selecionados a partir das seguintes concretizações (i) a (ix): (ii) CDR1: posições 47-58 de SEQ ID NO: 20, CDR2: posições 76-78 de SEQ ID NO: 20, CDR3: posições 115-123 de SEQ ID NO: 20, (iii) CDR1: posições 49-53 de SEQ ID NO: 21, CDR2: posições 71-73 de SEQ ID NO: 21, CDR3: posições de 110-118 de SEQ ID NO: 21, (iv) ) CDR1: posições 47-52 de SEQ ID NO: 22, CDR2: posições 70-72 de SEQ ID NO: 22, CDR3: posições 109-117 de SEQ ID NO: 22, (v) ) CDR1: posições 47-58 de SEQ ID NO: 23, CDR2: posições 76-78 de SEQ ID NO: 23, CDR3: posições 115-123 de SEQ ID NO: 23, (vi) CDRl: posições 47-58 da SEQ ID NO: 24, CDR2: posições 76-78 da SEQ ID NO: 24, CDR3: posições 115-123 da SEQ ID NO: 24, (vii) CDRl: posições 47-58 da SEQ ID NO: 25, CDR2: posições 76-78 da SEQ ID NO: 25, CDR3: posições 115-122 da SEQ ID NO: 25, (vii): CDRL posições 47-58 de SEQ ID NO: 26, CDR2: posições 76-78 de SEQ ID NO: 26, CDR3: 1 posições 15-123 da SEQ ID NO: 26, (Viii) CDR1: posições 47-58 de SEQ ID NO: 27, CDR2: posições 76-78 de SEQ ID NO: 27, CDR3: posições 115-123 de SEQ ID NO: 27, e (ix) CDR1: posições 47-52 de SEQ ID NO: 28, CDR2: posições 70-72 de SEQ ID NO: 28, CDR3: posições 109-117 de SEQ ID NO: 28.

[00299] Em uma concretização preferida, um anticorpo possuindo a capacidade de ligação a CLDN18.2 compreende uma combinação de VH e VL cada uma compreendendo um conjunto de regiões determinantes de complementaridade CDRl, CDR2 e CDR3 selecionadas das seguintes concretizações (i) a (ix): (i) VH: CDRl: posições 45-52 da SEQ ID NO: 14, CDR2: posições 70-77 da SEQ ID NO: 14, CDR3: posições 116-125 de SEQ ID NO: 14, VL: CDR1: posições 49-53 de SEQ ID NO: 21, CDR2: posições 71-73 de SEQ ID NO: 21, CDR3: 110-1 posições 18 da SEQ ID NO: 21, (ii) VH: CDRl: posições 45-52 da SEQ ID NO: 15, CDR2: posições 70-77 da SEQ ID NO:15, CDR3: posições 116-126 da SEQ ID NO: 15, VL: CDRl: posições 47-58 da SEQ ID NO: 20, CDR2: posições 76-78 da SEQ ID NO: 20, CDR3: posições 115-123 da SEQ ID NO: 20, (iii) VH: CDRL: posições 45-52 da SEQ ID NO: 16, CDR2: posições 70-77 da SEQ ID NO:16, CDR3: posições 116-124 de SEQ ID NO: 16, VL: CDR1: posições 47-52 de SEQ ID NO: 22, CDR2: posições 70-72 de SEQ ID NO: 22, CDR3: posições 109-117 da SEQ ID NO: 22, (iv) VH: CDRL: posições 44-51 da SEQ ID NO: 18, CDR2: posições 69-76 da SEQ ID NO: 18, CDR3: posições 115-125 de SEQ ID NO: 18, VL: CDR1: posições 47-58 de SEQ ID NO: 25, CDR2: posições 76-78 de SEQ ID NO: 25, CDR3: posições 115-122 da SEQ ID NO: 25, (v) VH: CDRl: posições 45-52 da SEQ ID NO: 17, CDR2: posições 70-77 da SEQ ID NO:17, CDR3: posições 116-126 de SEQ ID NO: 17, VL: CDR1: posições 47-58 de SEQ ID NO: 24, CDR2: posições 76-78 de SEQ ID NO: 24, CDR3: posições 115- 123 da SEQ ID NO: 24, (vi) VH: CDRl: posições 45-53 da SEQ ID NO: 19, CDR2: posições 71-78 da SEQ ID NO: 19, CDR3: posições 117-128 da SEQ ID NO: 19, VL: CDR1: posições 47-58 de SEQ ID NO: 23, CDR2: posições 76-78 de SEQ ID NO: 23, CDR3: posições 115-123 de SEQ ID NO: 23, (vii) VH: CDRl: posições 45-53 da SEQ ID NO: 19, CDR2: posições 71 -78 da SEQ ID NO: 19, CDR3: posições 117-128 da SEQ ID NO: 19, VL: CDRl: posições 47-58 da SEQ ID NO: 26, CDR2: posições 76-78 de SEQ ID NO: 26, CDR3: posições 115123 de SEQ ID NO: 26, (viii) VH: CDRl: posições 45-53 da SEQ ID NO: 19, CDR2: posições 71-78 da SEQ ID NO: 19, CDR3: posições 117-128 da SEQ ID NO: 19, VL: CDRl: posições 47-58 da SEQ ID NO: 27, CDR2: posições 76-78 de SEQ ID NO: 27, CDR3: posições 115-123 de SEQ ID NO: 27, e (ix) VH: CDRl: posições 45-53 da SEQ ID NO: 19, CDR2: posições 71-78 da SEQ ID NO: 19, CDR3: posições 117-128 da SEQ ID NO: 19, VL: CDRl: posições 47-52 da SEQ ID NO: 28, CDR2: posições 70-72 de SEQ ID NO: 28, CDR3: posições 109-117 de SEQ ID NO: 28.

[00300] De acordo com outras concretizações preferidas, um anticorpo que tem a capacidade de se ligar a CLDN18.2 compreende de preferência uma ou mais das regiões determinantes da complementaridade (CDR), de um modo preferido, pelo menos a região variável da CDR3 da região variável de cadeia pesada (VH) e / ou da região variável da cadeia leve (V L) de um anticorpo monoclonal contra CLDN18.2, de preferência de um anticorpo monoclonal contra CLDN18.2 aqui descrito, e de preferência, compreende uma ou mais das regiões determinantes da complementaridade (CDR), de um modo preferido, pelo menos, o CDR3 da região variável, as regiões de cadeia pesada variável (VH) e / ou as regiões variáveis de cadeia leve (VL) aqui descrito. Em uma concretização, o referido um ou mais das regiões determinantes da complementaridade (CDRs) são seleccionados a partir de um conjunto de regiões determinantes complementarity- CDRL, CDR2 e CDR3 aqui descritos. Em uma concretização particularmente preferida, um anticorpo que tem a capacidade de se ligar a CLDN18.2 preferencialmente compreende as regiões determinantes de complementaridade CDRL, RDC2 e RDC3 de região variável de cadeia pesada (VH) e / ou da região variável da cadeia leve (VL) de um anticorpo monoclonal contra CLDN18.2, de preferência, de um anticorpo monoclonal contra CLDN18.2 aqui descrito, e de preferência compreende as regiões determinantes de complementaridade CDRL, CDR2 e CDR3 das regiões variáveis da cadeia pesada (VH) e / ou as regiões variáveis da cadeia leve (VL) aqui descrito.

[00301] Em uma concretização um anticorpo compreendendo uma ou mais CDR, um conjunto de CDRs ou uma combinação de conjuntos de CDR como aqui descritos compreende a referida CDR, juntamente com as suas regis estruturais intervenientes. De preferência, a porção também vai incluir, pelo menos, cerca de 50% de qualquer uma ou ambas as primeira e quarta regis de estrutura, a 50%, sendo o C-terminal de 50% da primeira região de estrutura e o N-terminal de 50% do quarto quadro região. Construção de anticorpos produzidos por técnicas de DNA recombinante pode resultar na introdução de resíduos N- ou C-terminais para as regiões variáveis codificadas por ligantes introduzidos para facilitar a clonagem ou outros passos de manipulação, incluindo a introdução de ligadores para unir-se as regiões variáveis da invenção outras sequências proteicas incluindo cadeias pesadas de imunoglobulina, outros domios varieis (por exemplo na produção de diacorpos) ou marcadores de proteína.

[00302] Em uma concretização um anticorpo compreendendo uma ou mais CDRs, um conjunto de CDRs ou uma combinação de conjuntos de CDR como descrito aqui compreende a referida CDR em uma estrutura de anticorpo humano.

[00303] A referência aqui a um anticorpo que compreende, em relação à sua cadeia pesada, uma cadeia particular, ou uma região ou sequência particular, de preferência relaciona-se com a situação em que todas as cadeias pesadas do referido anticorpo compreendem a referida cadeia, região ou sequência particular. Isto aplica-se correspondentemente à cadeia leve de um anticorpo.

[00304] Deve ser entendido que os anticorpos aqui descritos podem ser administrados a um paciente por administração de um ácido nucleico tal como RNA que codifica o anticorpo e / ou pela administração de uma célula hospedeira compreendendo um ácido nucleico tal como RNA que codifica o anticorpo. Assim, um ácido nucleico que codifica um anticorpo quando administrado a um paciente pode estar presente na forma nua ou num veículo de entrega adequado, tal como na forma de lipossomas ou partículas virais, ou dentro de uma célula hospedeira. O ácido nucleico fornecido pode produzir o anticorpo em períodos de tempo prolongados em uma forma sustentada mitigar a instabilidade, pelo menos, parcialmente observados para anticorpos terapêuticos. Os ácidos nucleicos a serem entregues a um paciente pode ser produzido por meios recombinantes. Se um ácido nucleico é administrado a um paciente sem estar presente dentro de uma célula hospedeira, que é, de preferência, tomado por células do paciente para a expressão do anticorpo codificado pelo ido nucleico. Se um ácido nucleico é administrado a um paciente ao mesmo tempo estar presente dentro de uma célula hospedeira, que é preferencialmente expressa pela célula hospedeira dentro do paciente, de modo a produzir o anticorpo codificado pelo ácido nucleico.

[00305] O termo "ácido nucleico", tal como aqui utilizado, pretende incluir DNA e RNA, tais como moléculas de DNA genómico, DNAc, RNAm, produzidas de forma recombinante e sintetizadas quimicamente. Um ácido nucleico pode ser de cadeia simples ou de cadeia dupla. O RNA inclui RNA transcrito in vitro (RNA IVT) ou RNA sintético. Os ácidos nucleicos podem estar compreendidos num vetor. O termo "vetor", tal como aqui utilizado, inclui quaisquer vetores conhecidos do especialista na matéria, incluindo vetores de plasmídeos, vetores de cosmídeos, vetores de fagos tais como fagos lambda, vetores virais, tais como vetores adenovirais ou baculovirais, ou vetores cromossômicos artificiais tais como cromossomas artificiais bacterianos (BAC), cromossomos artificiais de fermento (YAC) ou cromossomos artificiais PI (PAC). Os referidos vetores incluem expressão, bem como vetores de clonagem. Os vetores de expressão compreendem os plasmídeos bem como os vetores virais e geralmente contêm uma sequência de codificação desejada e sequências de DNA apropriadas necessárias para a expressão da sequência de codificação operativamente ligada num organismo hospedeiro particular (por exemplo, bactérias, leveduras, plantas, insectos ou mamíferos) ou em sistemas de expressão in vitro. Os vetores de clonagem são geralmente utilizados para engenharia e amplificação de um certo fragmento de DNA desejado e podem carecer de sequências funcionais necessárias para a expressão dos fragmentos de DNA desejados.

[00306] No contexto da presente invenção, o termo "RNA" refere-se a uma molécula que compreende resíduos de ribonucleotídeos e, de preferência, está inteiramente ou substancialmente composta por resíduos de ribonucleotídeos. "Ribonucleotide" refere-se a um nucleotídeo com um hidroxi! grupo na Imposição de um grupo β-D-ribofuranosilo. O termo inclui RNA de cadeia dupla, RNA de cadeia simples, RNA isolado tal como RNA parcialmente purificado, RNA essencialmente puro, RNA sintético, RNA produzido de forma recombinante, bem como RNA modificado que difere do RNA natural devido à adição, eliminação, substituição e / ou alteração de um ou mais nucleotídeos. Tais alterações podem incluir a adição de material não nucleotídico, tal como a (s) extremidade (ões) de um RNA ou internamente, por exemplo, a um ou mais nucleotídeos do RNA.

[00307] Os nucleotídeos em moléculas de RNA também podem compreender nucleotídeos não padronizados, tais como nucleotídeos que não ocorrem naturalmente ou nucleotídeos quimicamente sintetizados ou desoxinucleotídeos. Estes RNAs alterados podem ser referidos como análogos ou análogos de RNA de ocorrência natural.

[00308] De acordo com a presente invenção, o termo "ARN" inclui e de preferência refere-se a "RNAm" que significa "ARN mensageiro" e refere-se a uma "transcrição" que pode ser produzida utilizando DNA como molde e codifica um peptídeo ou proteína. O mRNA compreende tipicamente uma região 5 'não traduzida (S'-UTR), uma região de codificação de proteína ou peptídeo e uma região 3' não traduzida (3'- UTR). O mRNA tem um intervalo limitado nas células e in vitro. De preferência, o mRNA é produzido por transcrição in vitro usando um modelo de DNA. Numa forma de realização da invenção, o RNA é obtido por transcrição in vitro ou síntese química. A metodologia de transcrição in vitro é conhecida pelo técnico versado no assunto. Por exemplo, há uma variedade de kits de transcrição in vitro comercialmente disponíveis.

[00309] A fim de aumentar a expressão e / ou a estabilidade do RNA utilizado de acordo com a presente invenção, pode ser modificado, de preferência, sem alterar a sequência do peptídeo ou proteína expressos.

[00310] O termo "modificação" no contexto do ARN, tal como utilizado de acordo com a presente invenção, inclui qualquer modificação do ARN que não está naturalmente presente no referido ARN. Esse ARN modificado é abrangido aqui pelo termo "RNA".

[00311] Por exemplo, o RNA de acordo com a invenção pode ter modificado que ocorre naturalmente ou ribonucleotídeos sintéticos, a fim de aumentar a sua estabilidade e / ou diminuir a citotoxicidade. Por exemplo, em uma concretização, no RNA usado de acordo com a invenção, 5-metilcitidina é substituído parcial ou completamente, de preferência completamente, para citidina. Em alternativa ou adicionalmente, em uma concretização, no RNA usado de acordo com a invenção pseudouridina é substituído parcial ou completamente, de preferência completamente, para uridina.

[00312] Em uma concretização, o termo "modificação" refere-se ao fornecimento de um RNA com um análogo 5'-cap ou 5'-cap. O termo "cobrir" 5 refere-se a uma estrutura de tampão encontrada na extremidade 5 'de uma molécula de mRNA e geralmente consiste num nucleotídeo de guanosina ligado ao mRNA através de uma ligação de trifosfato de 5' a 5 não usual. Numa concretização, esta guanosina é metilada na posição 7. O termo "5' cap convencional" refere-se a uma capa de 5' de RNA que ocorre naturalmente, de preferência, à capa 7-metilguanosina (m7G). No contexto da presente invenção, o termo "5" -cap "inclui um análogo de cabeca de 5 'que se assemelha à estrutura de capa de RNA é modificado para possuir a capacidade de estabilizar o RNA e ser acoplado ao mesmo, de preferência, in vivo e / ou em uma célula. De preferência, o RNA é administrado, isto é, transfectado para uma célula, em particular, uma célula presente in vivo, expressa a proteína ou o peptídeo que codifica.

[00313] O termo "transfecção" refere-se à introdução de ácidos nucleicos, em particular, RNA, numa célula. Para os propósitos da presente invenção, o termo "transfecção" também inclui a introdução de um ácido nucleico c numa célula ou a absorção de um ácido nucleico por essa célula, em que a célula pode estar presente num indivíduo, por exemplo, um doente. Assim, de acordo com a presente invenção, uma célula para transfecção de um ácido nucleico aqui descrito pode estar presente in vitro ou in vivo, por exemplo, a célula pode formar parte de um órgão, um tecido e / ou um organismo de um paciente. De acordo com a invenção, a transfecção pode ser transitória ou estável. Para algumas aplicações de transfecção, é suficiente que o material genético transfectado seja expressado apenas de forma transitória. Como o ácido nucleico introduzido no processo de transfecção geralmente não está integrado no genoma nuclear, o ácido nucleico estranho será diluído através da mitose ou degradado. As células que permitem a amplificação episomal de ácidos nucleicos reduzem muito a taxa de diluição. Se for desejado que o ácido nucleico transfectado permaneça no genoma da célula e suas células filhas, deve ocorrer uma transfecção estável. O RNA pode ser transfectado para células para expressar transitoriamente sua proteína codificada.

[00314] O termo "estabilidade" de RNA refere-se a "meia-vida" de RNA. "Meia-vida de" refere-se ao período de tempo que é necessário para eliminar metade da actividade, a quantidade ou número das moléculas. No contexto da presente invenção, a meia-vida de um RNA é indicativa para a estabilidade do referido RNA. A meia-vida de RNA pode influenciar a "duração da expressão" do RNA. Pode-se esperar que o RNA que tem uma meia-vida longa será expressa por um período de tempo prolongado.

[00315] No contexto da presente invenção, o termo "transcrição" refere-se a um processo, em que o código genético numa sequência de DNA é transcrito em RNA. Posteriormente, o RNA pode ser traduzido em proteína. De acordo com a presente invenção, o termo "transcrição" compreende "transcrição in vitro", em que o termo "transcrição in vitro" refere-se a um processo em que o RNA, em particular, o mRNA, é sintetizado in vitro num sistema isento de células, de preferência utilizando extcamundongos celulares apropriados. De preferência, os pesquisadores de clonagem são aplicados para a geração de transcrições. Estes pesquisadores de clonagem são geralmente designados como pesquisadores de transcrição e são de acordo com a presente invenção abrangida pelo termo "vetor".

[00316] O termo "tradução" de acordo com a invenção refere-se ao processo nos ribossomas de uma célula pelo qual uma cadeia de ARN mensageiro dirige a montagem de uma sequência de aminoácidos para formar um péptido ou proteína.

[00317] O termo "expressão" é utilizado de acordo com a invenção no seu significado mais geral e compreende a produção de RNA e / ou peptídeos ou proteínas, por exemplo, por transcrição e / ou tradução. Com relação ao RNA, o termo "expressão" ou "tradução" refere-se, em particular, à produção de pépeptídeos ou proteínas. Também compreende expressão parcial de ácidos nucleicos. Além disso, a expressão pode ser transitória ou estável. De acordo com a invenção, o termo expressão também inclui uma "expressão aberrante" ou "expressão anormal".

[00318] "Expressão aberrante" ou "expressão anormal" significa de acordo com a invenção que a expressão é alterada, de preferência, aumentada, em comparação com uma referência, e. um estado num sujeito que não possui uma doença associada a uma expressão anormal ou anormal de uma determinada proteína, por exemplo, um antígeno tumoral. Um aumento na expressão refere-se a um aumento de pelo menos 10%, em particular pelo menos 20%, pelo menos 50% ou pelo menos 100%, ou mais. Numa concretização, a expressão só é encontrada num tecido doente, enquanto a expressão num tecido saudável é reprimida.

[00319] O termo "especificamente expresso" significa que uma proteína é essencialmente expressa somente em um tecido ou órgão específico. Por exemplo, um antígeno tumoral expresso especificamente na mucosa gástrica significa que a referida proteína é expressa principalmente na mucosa gástrica e não é expressa em outros tecidos ou não é expressa em grande parte em outros tipos de tecido ou órgãos. Assim, uma proteína que é expressa exclusivamente em células da mucosa gástrica e em uma extensão significativamente menor em qualquer outro tecido, como o testículo, é especificamente expressa em células da mucosa gástrica. Em algumas concretizações, um antígeno tumoral também pode ser expressamente expresso em condições normais em mais de um tipo ou órgão de tecido, tal como em 2 ou 3 tipos de tecido ou órgãos, mas, de preferência, em não mais do que 3 diferentes tipos de tecido ou órgão. Neste caso, o antígeno tumoral é então expressamente expresso nesses órgãos. Por exemplo, se um antígeno tumoral é expresso em condições normais de preferência em uma extensão aproximadamente igual em pulmão e estômago, o referido antígeno tumoral é expresso especificamente no pulmão e no estômago.

[00320] De acordo com a invenção, o termo "codificação de RNA" significa que o RNA, se presente no ambiente apropriado, de preferência dentro de uma célula, pode ser expresso para produzir uma proteína ou péptido que codifica. Alguns aspectos da invenção dependem da transferência adotiva de células hospedeiras que são transfectadas in vitro com um ácido nucleico, tal como RNA que codifica um anticorpo aqui descrito e transferido para receptores tais como pacientes, de preferência após expansão ex vivo a partir de freqüências precursoras baixas para números de células clinicamente relevantes. As células hospedeiras usadas para tratamento de acordo com a invenção podem ser autólogas, alogênicas ou singênicas para um receptor tratado.

[00321] O termo "autólogo" é usado para descrever qualquer coisa que é derivado do mesmo assunto. Por exemplo, "transplante autólogo" refere-se a um transplante de tecido ou órgãos derivados do mesmo sujeito. Tais procedimentos são vantajosos porque eles superam a barreira imunológica que caso contrário resulta em rejeição.

[00322] O termo "alogênico" é usado para descrever qualquer coisa que for derivado de diferentes indivíduos da mesma espécie. Dois ou mais indivíduos estão a ser dito alogénica um ao outro quando os genes em um ou mais loci não sejam idênticos.

[00323] O termo "singênico" é utilizado para descrever qualquer coisa que é derivado a partir de indivíduos ou tecidos tendo genótipos idênticos, isto é, gémeos idênticos ou animais da mesma estirpe consanguínea, ou os seus tecidos.

[00324] O termo "heterólogo" é usado para descrever algo constituído por vários elementos diferentes. Como um exemplo, a transferência de medula óssea de um indivíduo em um indivíduo diferente, constitui um transplante heterólogo. Um gene heterólogo é um gene derivado de uma fonte diferente do sujeito.

[00325] O termo "peptídeo", de acordo com a invenção compreende oligo- e polipeptídeos e refere-se a substâncias que compreendem dois ou mais, de preferência, três ou mais, preferencialmente, 4 ou mais, preferencialmente, 6 ou mais, preferencialmente, de 8 ou mais, preferencialmente, de 9 ou mais, de preferência 10 ou mais, de preferência, 13 ou mais, de preferência 16 mais, de um modo preferido, 21 ou mais e de preferência até 8, 10, 20, 30, 40 ou 50, em particular, 100 aminoácidos ligados de forma covalente através de ligações peptídicas. O termo "proteína" refere-se a peptídeos grandes, de um modo preferido para os peptídeos com mais de 100 resíduos de aminoácidos, mas, em geral, os termos "peptídeos" e "proteínas" são sinônimos e são usados aqui de forma intermutel.

[00326] O ensaio aqui dado com respeito a sequências de aminoácidos específicas, por exemplo, aqueles que são mostrados na listagem de sequências, devem ser interpretados de modo a também se relacionarem com variantes das referidas sequências específicas resultando em sequências que são funcionalmente equivalentes às referidas sequências específicas, por exemplo, sequências de aminoácidos que exibem propriedades idênticas ou semelhantes às das sequências específicas de aminoácidos.

[00327] Uma propriedade importante é a de reter a ligação de um anticorpo ao seu alvo ou para manter as funções efectoras de um anticorpo. De um modo preferido, uma sequência que é uma variante com respeito a uma sequência específica, quando se substitui a sequência específica de um anticorpo retém a ligação do referido anticorpo ao seu alvo e de preferência funções do referido anticorpo, tal como aqui descrito, por exemplo, CDC lise mediada ou ADCC mediada lise.

[00328] Será apreciado pelos técnicos versados no assunto que, em particular, as sequências das CDR, regiões hipervariáveis e variáveis podem ser modificadas sem perder a capacidade de um anticorpo para se ligar ao seu alvo. Por exemplo, regiões CDR será idêntica ou altamente homóloga às regiões de anticorpos aqui especificados. Por "altamente homólogos" considera-se que a partir de 1 a 5, de preferência, 1 - 4, tal como 1 a 3 ou 1 ou 2 substituies podem ser feitas nas CDRs. Além disso, as regiões hipervariáveis e variáveis pode ser modificado de modo que eles apresentam uma homologia substancial com as regiões de anticorpos especificamente aqui descritos.

[00329] O termo "variante" de acordo com a invenção refere-se, em particular, para os mutantes, variantes de splicing, isoformas, conformações, variantes alicas, variantes de espie e homólogos de espécies, em particular aqueles que estão naturalmente presentes. Uma variante alélica refere-se a uma alteração da sequência normal de um gene, o significado dos quais é frequentemente pouco claro. O sequenciamento do gene completo muitas vezes identifica numerosas variantes alicas de um dado gene. Uma espécie homóloga é uma sequência de ácido nucleico ou de aminoácidos com uma espécie diferente de origem a partir do que uma dada sequência de ácido nucleico ou de aminoácidos. O termo "variante" deve abranger as variantes após a tradução modificados e variantes de conformação.

[00330] Para os fins da presente invenção, "variantes" de uma sequência de aminoácidos compreendem variantes de inserção de aminoácidos, variantes de adição de aminoácidos, variantes de deleção de aminoácidos e / ou variantes de substituição de aminoácido. As variantes de deleção de aminoácidos que compreendem a deleção no N-terminal e / ou a extremidade C-terminal da proteína são também chamados N- terminal e / ou variantes de truncagem C-terminal.

[00331] As variantes de inserção dee aminoácido compreendem inserções de único ou dois ou mais aminoácidos em uma sequência de aminoácidos particular. No caso de variantes de sequência de aminoácidos possuindo uma inserção, um ou mais resíduos de aminoácidos são introduzidos num sítio particular em uma sequência de aminoácidos, embora a insero aleatia com rastreio apropriado do produto resultante também é possível.

[00332] As variantes de adição de aminoácido compreendem fusões amino e / ou earboxy-terminais de um ou mais aminoácidos, tais como 1, 2, 3, a 5, 10, 20, 30, 50 ou mais aminoácidos.

[00333] As variantes de deleção de aminoácidos são caracterizadas pela remoção de um ou mais aminoácidos da sequência, tais como por remoção de 1, 2, 3, 5, 10, 20, 30, 50, ou mais aminoácidos. As deleções podem estar em qualquer posição da proteína.

[00334] As variantes de substituição de aminoácidos são caracterizadas por pelo menos um resíduo na sequência a ser removido e outro resíduo a ser inserido no seu lugar. É dada preferência às modificações estar em posições na sequência de aminoácidos que não são conservadas entre proteínas homólogas ou peptídeos e / ou a substituição de aminoácidos com outros os que possuam propriedades semelhantes. De um modo preferido, as alteraes de aminoácidos nas variantes proteicas são as alterações de aminoácidos conservativas, isto é, substituições de aminoácidos semelhante carregadas ou não carregadas. Uma alterao de aminoácidos conservativa envolve a substituio de um de uma família de aminoácidos que estão relacionados nas suas cadeias laterais. Os aminoácidos que ocorrem naturalmente são geralmente divididos em quatro famílias: ácido (aspartato, glutamato), básicos (lisina, arginina, histidina), n polares (alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina, triptofano), e não carregados polar (glicina, asparagina, glutamina, cisteína, serina, treonina, tirosina) aminoácidos. Fenilalanina, triptofano, e tirosina são por vezes classificados conjuntamente como aminoácidos aromáticos.

[00335] De preferência, o grau de similaridade, preferencialmente identidade entre uma dada sequência de aminoácidos e uma sequência de aminoácidos que é uma variante da referida dada sequência de aminoácidos será de pelo menos cerca de 60%, 65%, 70%, 80%, 81%, 82 %, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99%. O grau de semelhança ou de identidade é dada preferência para uma região de aminoácidos que é pelo menos cerca de 10%, pelo menos cerca de 20%, pelo menos cerca de 30%, pelo menos cerca de 40%, pelo menos cerca de 50%, pelo menos cerca de 60 %, pelo menos cerca de 70%, pelo menos cerca de 80%, pelo menos cerca de 90% ou cerca de 100% de todo o comprimento da sequência de aminoácidos de referência. Por exemplo, se a sequência de aminoácidos de referência é constituído por 200 aminoácidos, o grau de similaridade ou de identidade é dada de preferência durante pelo menos cerca de 20, pelo menos aproximadamente 40, pelo menos cerca de 60, pelo menos, cerca de 80, pelo menos cerca de 100, pelo menos cerca de 120, pelo menos cerca de 140, pelo menos cerca de 160, pelo menos cerca de 180, ou cerca de 200 aminoácidos, de preferência os aminoácidos contínuos. Em concretizações preferidas, o grau de similaridade ou de identidade é determinado para todo o comprimento da sequência de aminoácidos de referência. O alinhamento para determinar a similaridade de sequência, de preferência de identidade de sequência pode ser feito com as ferramentas da arte conhecida, utilizando de preferência o melhor alinhamento de sequências, por exemplo, utilizando Align, usando as configurações padrão, de preferência EMBOSS :: agulha, Matriz: Blosum62, Gap Abrir 10,0, Gap estender 0,5.

[00336] "Similaridade de sequência" indica a percentagem de aminoácidos que ou são idênticos ou que representa substituições de aminoácidos conservadoras. "Identidade de sequência" sequências entre dois aminoácidos indica a percentagem de aminoácidos que são idênticos entre as sequências.

[00337] O termo "percentagem de identidade" destina-se a denotar uma percentagem de resíduos de aminoácidos que são idênticos entre as duas sequências a serem comparadas, obtido após o melhor alinhamento, sendo puramente estatística esta percentagem e as diferenças entre as duas sequências a serem distribuídos aleatoriamente e ao longo toda a sua extensão. As comparações de sequências entre duas sequências de aminoácidos são convencionalmente realizadas por comparação destas sequências, depois de ter alinhado-los de forma óptima, referida comparação ser efetuada pelo segmento ou pelo "janela de comparação" para identificar e comparar regiões locais de similaridade de sequência. O alinhamento óptimo das sequências para comparação pode ser produzido, além manualmente, por meio do algoritmo de homologia local de Smith e Waterman, 1981, App anúncios. Matemática. 2, 482, por meio do algoritmo de homologia local de Neddleman e Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48, 443, por meio do método de busca de similaridade de Pearson e Lipman, 1988, Proc. Natl. Acad. Sei. EUA 85, 2444, ou por meio de programas de computador que usam esses algoritmos (GAP, BESTFIT, FA ST A, BLAST P, BLAST N e TFASTA no Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Drive, Madison, Wisconsin).

[00338] A percentagem de identidade é calculada determinando o número de posições idênticas entre as duas sequências a serem comparadas, dividindo este valor pelo número de posições comparadas e multiplicando o resultado obtido por 100 de modo a obter a percentagem de identidade entre estas duas sequências.

[00339] O termo "célula" ou "célula hospedeira" refere-se, de preferência, a uma célula intacta, isto é, uma célula com uma membrana intacta que não liberou os seus componentes intracelulares normais tais como enzimas, organelas ou material genético. Uma célula intacta de preferência é uma célula viável, isto é, uma célula viva capaz de desempenhar as suas funções metabólicas normais. Preferivelmente, o referido termo refere-se de acordo com a invenção a qualquer célula que possa ser transfectada com um ácido nucleico exógeno. De preferência, a célula quando transfectada com um ácido nucleico exógeno e transferida para um receptor pode expressar o ácido nucleico no recipiente. O termo "célula" inclui células bacterianas; outras células úteis são células de levedura, células de fungos ou células de mamíferos. As células bacterianas adequadas incluem células de cepas bacterianas gram-negativas, tais como cepas de Escherichia coli., Proteus e Pseudomonas e cepas bacterianas gram-positivas, tais como cepas de Bacillus, Streptomyces, Staphylococcus e Lactococcus. As células fúngicas adequadas incluem células de espécies de Trichoderma, Neurospora e Aspergillus. As células de levedura adequadas incluem células de espécies de Saccharomyces (por exemplo, Saccharomyces cerevisiae), Schizosaccharomyces (por exemplo, Schizosaccharomyces pombe), Pichia (por exemplo, Pichia pastoris e Pichia metanolicd) e Hansenula. As células de mamífero adequadas incluem, por exemplo, células CHO, células BHK, células HeLa, células COS, 293 HEK e semelhantes. No entanto, também podem ser utilizadas células anfíbias, células de insectos, células de plantas e quaisquer outras células utilizadas na técnica para a expressão de proteínas heterólogas. As células de mamífero são particularmente preferidas para a transferência adotiva, tais como células de seres humanos, camundongos, hamsters, porcos, cabras e primatas. As células podem ser derivadas de um grande número de tipos de tecido e incluem células primárias e linhas celulares tais como células do sistema imunológico, em particular células apresentadoras de antigénio tais como células dendríticas e células T, células estaminais tais como células estaminais hematopoiéticas e células mesenquimais células-tronco e outros tipos de células. Uma célula apresentadora de antígeno é uma célula que exibe antígeno no contexto do principal complexo de histocompatibilidade em sua superfície. As células T podem reconhecer este complexo usando seu receptor de células T (TCR).

[00340] O termo "animal transgênico" refere-se a um animal com um genoma que compreende um ou mais transgenes, de preferência pesadas e / ou leves transgenes de cadeia, ou transcromossomas (quer integrados ou não integrados no DNA genómico natural do animal) e que é de preferência capaz de expressando os transgenes. Por exemplo, um camundongo transgênico pode ter um transgene de cadeia leve humana e qualquer um transgene humano de cadeia pesada ou transcromossoma humano de cadeia pesada, de tal modo que o camundongo produz anticorpos antígeno anti-tumorais humanos quando imunizados com um antígeno do tumor e / ou células que expressam um tumor antígeno. A cadeia transgene pesada humana pode ser integrado no DNA cromossómico do camundongo, como é o caso de camundongos transgénicos, por exemplo, camundongos HuMAb, tais como HCo7 ou camundongos HCol2, ou o transgene de cadeia pesada humana pode ser mantido extracromossomicamente, como é o caso para transcromossómico (por exemplo, KM) camundongos, tal como descrito em WO 02/43478. Tais camundongos transgénicos e transcromossómico pode ser capaz de produzir vários isotipos de anticorpos monoclonais humanos para um antígeno de tumor (por exemplo, IgG, IgA e / ou IgE) por recombinao VDJ submetido e troca de isotipo.

[00341] "Redução", "diminuição" ou "inibição", tal como aqui utilizado, significa uma diminuição global ou a capacidade para causar uma diminuição global, de preferência de 5% ou superior, 10% ou mais, 20% ou superior, mais preferivelmente de 50% ou maior, e mais preferencialmente de 75% ou maior, do nível, por exemplo, do nível de expressão ou no nível de proliferação de células.

[00342] Os termos, tais como "aumentar" ou "melhorar", referem-se de preferência a um aumento ou aumento em cerca de pelo menos 10%, de preferência pelo menos 20%, de preferência pelo menos 30%, mais preferencialmente pelo menos 40%, mais preferencialmente pelo menos 50%, ainda mais preferencialmente pelo menos 80% e mais preferencialmente pelo menos 100%, pelo menos 200%, pelo menos 500%, pelo menos 1000%, pelo menos 10000% ou mesmo mais.

[00343] Os anticorpos aqui descritos podem ser produzidos por uma variedade de técnicas, incluindo a metodologia de anticorpo monoclonal convencional, por exemplo, a técnica de hibridização de células somáticas padrão de Kohler e Milstein, Nature 256: 495 (1975). Embora os procedimentos de hibridação de células somáticas sejam preferidos, em princípio, podem ser utilizadas outras técnicas para a produção de anticorpos monoclonais, por exemplo, transformação viral ou oncogênica de linfócitos B ou técnicas de exibição de fagos utilizando bibliotecas de genes de anticorpos.

[00344] O sistema animal preferido para a preparação de hibridomas que segregam anticorpos monoclonais é o sistema murino. A produção de hibridoma no camundongo é um procedimento muito bem estabelecido. Os protocolos de imunização e técnicas para o isolamento de esplenócitos imunizados para fusão conhecidos na arte. Os parceiros de fusão (por exemplo, células de mieloma de mureo) e processos de fus tamb s conhecidos.

[00345] Outros sistemas animais preferidos para a preparação de hibridomas que secretam anticorpos monoclonais são o sistema de ratos e coelhos (por exemplo, descrito em Spieker-Polet et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92: 9348 (1995), ver também Rossi et al., Am. J. Clin. Pathol. 124: 295 (2005)).

[00346] Em ainda outra concretização preferida, os anticorpos monoclonais humanos podem ser gerados usando camundongos transgênicos ou transcromossomal que transportam partes do sistema imune humano, em vez do sistema de do camundongo. Estes camundongos transgênicos e transcromossomal incluem camundongos, conhecidos como camundongos HuMAb e camundongos KM, respectivamente, e são aqui referidos coletivamente como "camundongos transgênicos." A produção de anticorpos humanos em tais camundongos transgênicos pode ser realizada como descrito em detalhes para CD20 no documento WO 2004 035607.

[00347] Ainda outra estratégia para gerar anticorpos monoclonais é isolar diretamente genes que codificam anticorpos de linfócitos produzindo anticorpos de especificidade definida, e. ver Babcock et al., 1996; Uma nova estratégia para gerar anticorpos monoclonais a partir de linfócitos isolados isolados que produzem anticorpos de especificidades definidas. Para detalhes de engenharia de anticorpos recombinantes, veja também Welschof e Kraus, anticorpos recombinantes para terapia de câncer ISBN-0-89603-918-8 e Benny K.C. Engenharia de antiestrólitos ISBN 1 - 58829-092-1.

[00348] Para gerar anticorpos, os camundongos podem ser imunizados com peptídeos transportadores conjugado derivados da sequência do antígeno, ou seja, a sequência contra a qual os anticorpos são para ser dirigido, uma preparação enriquecida de antígeno ou seus fragmentos e / ou células expressas de forma recombinante que expressa o antígeno, quanto descrito. Alternativamente, os camundongos podem ser imunizados com DNA que codifica o antígeno ou os seus fragmentos. No caso de imunizaes, usando uma preparao purificada ou enriquecida do antígeno de não resultar em anticorpos, os camundongos podem ser imunizados com culas que expressam o antígeno, por exemplo, uma linhagem celular para promover respostas imunes.

[00349] A resposta imune pode ser monitorada ao longo do curso do protocolo de imunização com amostras de plasma e de soro a ser obtido pela veia da cauda ou hemorragias retro- orbital. Os camundongos com tulos suficientes de imunoglobulina podem ser utilizados para as fusões. Os camundongos podem ser impulsionados por via intraperitoneal ou por via intravenosa com células que expressam o antígeno de 3 dias antes do sacrifício e remoção do baço para aumentar a taxa de hibridomas secretores de anticorpos específicos.

[00350] Para gerar hibridomas que produzem anticorpos monoclonais, os esplenócitos e de células dos nódulos linfáticos a partir de murganhos imunizados podem ser isolados e fundidos com uma linha celular imortalizada apropriada, tal como uma linha celular de mieloma de camundongo. Os hibridomas resultantes podem então ser rastreados para a produção de anticorpos específicos para o antígeno. Os poços individuais podem então ser rastreados por ELISA para hibridomas secretoras de anticorpos. Através de análise de imunofluorescência e FACS utilizando células que expressam o antígeno, anticorpos com especificidade para o antígeno pode ser identificado. O anticorpo que segregam hibridomas pode ser novamente semeadas, peneirados novamente, e se ainda positivo para os anticorpos monoclonais podem ser subclonados através de diluição limitante. Os subclones estáveis podem então ser cultivadas in vitro para gerar o anticorpo em meio de cultura de tecidos para caracterização.

[00351] Os anticorpos também podem ser produzidos em um transfectoma célula hospedeira utilizando, por exemplo, uma combinação de técnicas de DNA recombinante e o gene de trans métodos lection como são bem conhecidos no estado da técnica (Morrison, S. (1985) Science 229: 1202).

[00352] Por exemplo, numa concretização, o gene (s) de interesse, eg, genes de anticorpo, pode ser ligado a um vector de expressão tal como um plasmídeo de expressão eucariótica, tal como usado pelo sistema de expressão do gene GS descrito em WO 87 / 04462, WO 89/01036 e EP 338 841 ou outros sistemas de expressão bem conhecidos no estado da técnica. O plasmídeo purificado com os genes de anticorpos clonados pode ser introduzido em células hospedeiras eucarióticas tais como células CHO, células NS / 0, células HEK293T ou células HEK293 ou, alternativamente, outras células eucarióticas, tais como células derivadas de plantas, células de fungos ou de leveduras. O método utilizado para introduzir estes genes pode ser métodos descritos na técnica tais como electroporação, lipofectina, lipofectamina ou outros. Após a introdução destes genes de anticorpos nas células hospedeiras, as células que expressam o anticorpo podem ser identificadas e seleccionadas. Estas células representam os transfectomas que podem então ser amplificados para o seu nível de expressão e ampliados para produzir anticorpos. Os anticorpos recombinantes podem ser isolados e purificados a partir destes sobrenadantes e / ou cultura de células.

[00353] Alternativamente, os genes de anticorpos clonados podem ser expressos em outros sistemas de expressão, incluindo células procarióticas, tais como microorganismos, por exemplo, E. coli. Além disso, os anticorpos podem ser produzidos em animais transgênicos não humanos, tais como em leite de ovelha e coelhos ou em ovos de galinhas, ou em plantas transgicas; ver por exemplo, Verma, R., et al. (1998) J. Immunol. Meth. 216: 165-181; Pollock et al. (1999) J. Immunol. Meth. 23 1: 147-157; e Fischer, R., et al. (1999) Biol. Chem. 380: 825-839.

Quimerização

[00354] Os anticorpos de murino são altamente imunogénicos no homem quando aplicado repetitivamente levando à redução do efeito terapêutico. A imunogenicidade principal é mediada pelas regiões constantes de cadeia pesada. A imunogenicidade de anticorpos de murídeo em seres humanos pode ser reduzida ou completamente evitada se os anticorpos respectivos são quimerizado ou humanizado. Os anticorpos quiméricos são anticorpos, as diferentes partes de que são derivadas de espécies animais diferentes, tais como aquelas que possuem uma região variável derivada de um anticorpo murino e uma região constante de imunoglobulina humana. Chimerisation de anticorpos é conseguido pela união das regiões variáveis da cadeia pesada e leve do anticorpo de murino com a região constante de cadeia pesada e leve humana (por exemplo, tal como descrito por Kraus et al., Em Methods in série Molecular Biology, anticorpos recombinantes para câncer terapia ISBN-0-89603-918-8). Em anticorpos quimicos de concretizações preferenciais são geradas pela junção humano cadeia kappa-luz região constante a região variável de murideo da cadeia leve. Em uma concretização tamb anticorpos quimicos preferidos podem ser gerados por se juntar humano cadeia lambda-leve da região constante a região variável de murideo da cadeia leve. As regiões constantes da cadeia pesada preferida para geração de anticorpos quiméricos são IgGl, IgG3 e IgG4. Outras regiões constantes da cadeia pesada preferida para geração de anticorpos quiméricos são IgG2, IgA, IgD e IgM.

Humanização

[00355] Os anticorpos interagem com antígenos alvo predominantemente atrav de resuos de aminoácidos que se situam nas seis regis determinantes de cadeia pesada e leve de complementaridade (CDRs). Por esta razão, as sequências de aminoácidos dentro de CDRs são mais diversas entre anticorpos individuais do que as sequências fora das CDR. Uma vez que as sequências de CDR são responsáveis pela maioria das interaces anticorpo-antígeno, possel expressar anticorpos recombinantes que imitem as propriedades de anticorpos que ocorrem naturalmente específicos através da construção de vetores de express que incluem sequências CDR do anticorpo de ocorrcia natural específico enxertadas em sequências estruturais de um anticorpo diferente com propriedades diferentes (ver, por exemplo, Riechmann, L. et al (1998) Nature 332: 323-327; Jones, P. et al (1986) Nature 321: 522-525; and queen, C. et al. (1989) Proc Natl Acad Sci EUA 86: 10029-10033). Tais sequências estruturais podem ser obtidas a partir de bancos de dados de DNA públicas que incluem sequências de genes de anticorpos da linha germinativa. Estas sequências da linhagem germinativa irão variar a partir de sequências de genes de anticorpos maduros porque eles não irão incluir genes variaeis completamente montados, que s formados por V (D) J aderir durante a maturação de células B. As sequências de genes de linha germinal também serão diferentes a partir das sequências de um anticorpo reportório secundário de alta afinidade no indivíduo uniformemente em toda a região variável.

[00356] A capacidade dos anticorpos para se ligarem um antígeno pode ser determinada utilizando ensaios de ligação padrão (por exemplo, ELISA, Western Blot, imunofluorescência e análise de citometria de fluxo).

[00357] Para purificar anticorpos, os hibridomas seleccionados podem ser cultivados em dois litros frascos giratórios de purificação de anticorpo monoclonal. Alternativamente, os anticorpos podem ser produzidos com base em biorreactores de diálise. Os sobrenadantes podem ser filtrados e, se necessário, concentrados antes da cromatografia de afinidade com proteína G-Sepharose ou proteína A-Sepharose. A IgG eluída pode ser verificado por electroforese em gel e cromatografia líquida de alto desempenho para assegurar a pureza. A solução tampão pode ser mudada para PBS, e a concentração pode ser determinada por OD280 utilizando coeficiente de extino de 1,43. Os anticorpos monoclonais podem ser fracionados e armazenados a -80 ° C.

[00358] Para determinar se os anticorpos monoclonais seleccionados se ligam a epítopos únicos, mutagénese sítio- dirigida ou multi-sítio dirigida pode ser utilizada.

[00359] Para determinar o isotipo de anticorpos, podem ser realizados ELISA de isotipo com vários kits comerciais (por exemplo, Zymed, Roche Diagnostics). Os poços de placas miertoter podem ser revestidos com Ig anti-ratinho. Após o bloqueio, as placas são feitas reagir com anticorpos monoclonais ou controles de isotipo purificados, à temperatura ambiente durante duas horas. Os poços podem então ser feitos reagir com IgGl IgGl, IgG2a, IgG2b ou IgG3, IgA ou sondas conjugadas com peroxidase específicas de IgM de rato. Após a lavagem, as placas podem ser desenvolvidas com substrato ABTS (1 mg / ml) e analisadas a DO de 405-650. Alternativamente, o Kit de isotipo de anticorpos monoclonais de mouse IsoStrip (Roche, Cat. No. 1493027) pode ser usado conforme descrito pelo fabricante.

[00360] A fim de demonstrar a presença de anticorpos no soro de camundongos imunizados ou de ligação de anticorpos monoclonais a células que expressam antígeno de estar, a citometria de fluxo pode ser usada. As linhagens celulares que expressam naturalmente ou após antígeno transfecção e controles negativo a que falta a expressão do antígeno (cultivadas sob condies de crescimento convencionais) pode ser misturado com várias concentrações de anticorpos monoclonais em sobrenadantes de hibridoma ou em PBS contendo 1% de FBS, e pode ser incubado a 4° C durante 30 minutos. Após a lavagem, o anticorpo IgG anti-Alexa647 ou APC- marcada se pode ligar ao anticorpo monoclonal ligado ao antígeno, sob as mesmas condições que a coloração de anticorpo primário. As amostras podem ser analisadas por citometria de fluxo com um instrumento FACS utilizando luz e propriedades de dispersão lateral a porta em células individuais, que vivem. De modo a distinguir os anticorpos monoclonais específicos para o antígeno de ligantes não específicos em uma única medição, o método de co-transfecção pode ser empregue. As culas transientemente transfectadas com plasmídeos que codificam o antígeno e um marcador fluorescente podem ser coradas, como descrito acima. As células transfectadas pode ser detectada num canal de fluorescência diferente do que as células marcadas com o anticorpo. Como a maioria dos ceils transfectadas expressam ambos os transgenes, os anticorpos monoclonais específicos para o antígeno ligam-se preferencialmente ao marcador de fluorescência de células que expressam, enquanto que os anticorpos não específicos se ligam em uma proporção comparável de células não transfectadas. Um ensaio alternativo utilizando microscopia de fluorescência pode ser utilizado em adição a ou em vez da citometria de fluxo de ensaio. As culas podem ser coradas exactamente como descrito acima e examinadas por microscopia de fluorescência.

[00361] A fim de demonstrar a presença de anticorpos no soro de camundongos imunizados ou de ligação de anticorpos monoclonais a culas vivas que expressam o antígeno, a análise de microscopia de imunofluoresccia pode ser utilizado. Por exemplo, as linhagens celulares que expressam quer espontaneamente ou após antígeno transfecção e controles negativos sem expressão de antígeno são crescidas em lâminas de câmara sob condições de crescimento padrão em meio DMEM / F12, suplementado com 10% de soro fetal de vitelo (FCS), 2 mM de L-glutamina, 100 IU / mL de penicilina e 100 g / ml de estreptomicina. As células podem ser então fixadas com metanol ou paraformaldeído ou deixadas sem tratamento. As células podem então ser feitos reagir com os anticorpos monoclonais contra o antígeno, durante 30 min. a 25 ° C. Após a lavagem, as células podem ser feitas reagir com um anticorpo marcado com Alexa555-anti-IgG de camundongo secundário (Molecular Probes) sob as mesmas condições. As células podem então ser examinadas por microscopia de fluorescência.

[00362] Os extratos celulares de células que expressam os antígenos e os controles negativos adequados, podem ser preparados e submetidos a dodecilsulf ato de sódio (SDS) electroforese em gel de poliacrilamida. Após a electroforese, os antígenos separados vão ser transferido para membranas de nitrocelulose, bloqueados, e sondados com os anticorpos monoclonais a serem testados. IgG de ligação pode ser detectada utilizando IgG anti-camundongo de peroxidase e reveladas com substcamundongo ECL.

[00363] Os anticorpos podem ser ainda testados para a reactividade com antígeno por imunohistoquímica de uma maneira bem conhecida para o técnico versado no assunto, por exemplo, usando paraformaldeído ou acetona fixo criossecções ou cortes de tecido embebidos em parafina fixados com paraformaldeído a partir das amostras de tecido de câncer ou tecido de câncer obtidos a partir de pacientes durante os procedimentos cirúrgicos de rotina ou a partir de camundongos portadores de tumores xenoenxertados inoculados com linhagens de células que expressam espontaneamente ou após transfecção antígeno. Para a imunocoloração, anticorpos reactivos ao antígeno podem ser incubadas seguido por peroxidase de rábano de cabra conjugado com anti-camundongo ou anticorpos anti-coelho de cabra (DAKO), de acordo com as instruções do fornecedor.

[00364] Os anticorpos podem ser testados quanto à sua capacidade para mediar a fagocitose e morte de células que expressam um antígeno de tumor. O teste de atividade de anticorpo monoclonal in vitro irão proporcionar uma triagem inicial antes do ensaio em modelos in vivo.

Citotoxicidade mediada por células dependente de anticorpos (ADCC)

[00365] Resumidamente, as células polimorfonucleares (PMN), células NK, monócitos, células mononucleares ou outras células efectoras, a partir de dadores saudáveis podem ser purificadas por centrifugação de densidade de Ficoll Hypaque, seguido de lise de eritrócitos contaminantes. Células efectoras lavadas podem ser suspensas em RPML suplementado com 10% de soro fetal de vitelo inactivado pelo calor ou, em alternativa, com 5% de soro humano inactivado pelo calor e misturado com 51 Cr marcado células alvo que expressam um antígeno de tumor, em várias proporções de células efectoras para alvo células. Alternativamente, as culas alvo podem ser marcados com um ligando de reforçar a fluorescência (BATDA). Um quelato de európio altamente fluorescente com o ligando de reforço que é libertado a partir de células mortas pode ser medida por um fluoretro. Outra técnica alternativa pode utilizar a transfecção de células alvo com a luciferase. Amarelo lucifer adicionada pode então ser oxidado por apenas as células viáveis. Antígeno anti-tumoral purificada IgG pode então ser adicionado a várias concentrações. IgG humana irrelevante pode ser usado como controle negativo. Os ensaios podem ser realizados durante 4 a 20 horas a 37 ° C, dependendo do tipo de célula efectora utilizado. As amostras podem ser ensaiadas para a citólise por medição 51 Cr libertação ou a presença do quelato EuTDA no sobrenadante da cultura. Alternativamente, a luminescência resultante a partir da oxidação de amarelo lucifer pode ser uma medida de células viáveis.

[00366] Os anticorpos monoclonais anti-tumor antígeno também podem ser testados em várias combinações, para determinar se a citólise é reforçada com anticorpos monoclonais múltiplos.

Citotoxidade dependente do complemento (CDC)

[00367] Os anticorpos antígenos anti-tumorais monoclonais podem ser testados quanto à sua capacidade de mediar CDC utilizando uma variedade de técnicas conhecidas. Por exemplo, o soro para o complemento pode ser obtido a partir do sangue de uma maneira conhecida pelo especialista na matéria. Para determinar a atividade CDC de mAbs, diferentes métodos podem ser utilizados. 51Cr pode liberar, por exemplo, ser medido ou a permeabilidade da membrana elevado pode ser avaliada utilizando um ensaio de exclusão iodeto de propídio (PI). Resumidamente, as células alvo podem ser lavadas e 5 x 105 / ml pode ser incubado com várias concentrações de mAb para 10-30 min. à temperatura ambiente ou a 37 ° C. O soro ou plasma pode ser, em seguida, adicionado a uma concentração final de 20% (v / v) e as células incubadas a 37 ° C durante 20-30 min. Todas as células a partir de cada amostra pode ser adicionada à solução de PI num tubo de FACS. A mistura pode então ser analisada imediatamente por análise de citometria de fluxo utilizando FACSArray.

[00368] Num ensaio alternativo, a indução de CDC pode ser determinada em células aderentes. Numa concretização deste ensaio, as células são semeadas 24 h antes do ensaio com uma densidade de 3 x 104 / poço em placas de microtitulação de fundo plano de cultura de tecido. O meio de crescimento do dia seguinte é removido e as células são incubadas em triplicado com anticorpos. As células de controlo são incubadas com meio de crescimento ou meio de crescimento contendo 0,2% de saponina para a determinação de lise de fundo e lise máxima, respectivamente. Após a incubação durante 20 min. à temperatura ambiente, o sobrenadante é removido e 20% (v / v) de plasma humano ou soro em DMEM (pré-aquecido a 37 ° C) é adicionado às células e incubado durante mais 20 min. a 37 ° C. Todas as células de cada amostra são adicionadas à solução de iodeto de propídio (10 μ A nú). Em seguida, os sobrenadantes são substituídos por PBS contendo 2,5 ug / ml de brometo de etidio e a emissão de fluorescência após excitação a 520 nm é medida a 600 nm utilizando um Tecan Satire. A percentagem de lise específica é calculada da seguinte forma:% lise específica = (fluorescência amostra-fundo de fluorescência) / (fluorescência de fundo de lise-fluorescência máxima) x 100.

Indução de apoptose e inibição da proliferação de células por anticorpos monoclonais

[00369] Para testar a capacidade de iniciar a apoptose, os anticorpos antígeno anti-tumor monoclonais podem, por exemplo, ser incubados com as células tumorais positivas de antígeno de tumor ou células de tumor transfectadas antígeno tumoral a 37 ° C durante cerca de 20 horas. As células podem ser colhidas, lavadas em tampão de anexina-V (BD Biosciences) de ligação, e incubou-se com anexina V conjugada com F1TC ou APC (BD Biosciences) durante 15 min. no escuro. Todas as células a partir de cada amostra podem ser adicionadas à solução de PI (10 ug / ml em PBS) num tubo de FACS e avaliados imediatamente por citometria de fluxo (como acima). Alternativamente, uma inibição geral da proliferação celular por anticorpos monoclonais pode ser detectada com kits disponíveis comercialmente. O Kit de Proliferação Celular DELFIA (Perkin-Elmer, Cat. N ° AD0200) é um imunoensaio não isotópico com base na medição de 5- bromo- 2'-desoxiuridina (BrdU) a incorporação durante a síntese de DNA das células em proliferação em microplacas. BrdU incorporado é detectado utilizando o anticorpo monoclonal marcado com európio. Para permitir a detecção de anticorpos, as células são fixadas e o DNA desnaturado usando solução de correcção. O anticorpo não ligado é removido por lavagem e DELFIA indutor é adicionado para dissociar iões európio do anticorpo marcado em solução, onde formam quelatos altamente fluorescentes com componentes do Indutor DELFIA. A fluorescência medida - utilizando fluorometria resolvida no tempo na detecção - é proporcional à síntese do DNA na célula de cada poço.

Estudos pré-clínicos

[00370] Os anticorpos aqui descritos também podem ser testados num modelo in vivo (por exemplo, em camundongos imunes deficientes que transportam tumores xenoinxertados inoculados com linhagens celulares que expressam um antígeno tumoral para determinar a sua eficácia no controle do crescimento de células tumorais que expressam antígeno tumoral.

[00371] Em estudos in vivo, após antígeno de tumor xenoinxertado que expressam as células de tumor em camundongos imunocomprometidos ou em outros animais pode ser realizada utilizando os anticorpos aqui descritos. Os anticorpos podem ser administrados a camundongos isentos de tumor, seguida por injeção de células tumorais para medir os efeitos dos anticorpos para evitar a formação de tumores ou sintomas relacionados com o tumor. Os anticorpos podem ser administrados a camundongos portadores de tumor para determinar a eficácia terapêutica dos anticorpos respectivos para reduzir o crescimento de tumores, metástases de tumores ou sintomas relacionados. A aplicação de anticorpo pode ser combinada com a aplicação de outras substâncias como fármacos citostáticos, inibidores do fator de crescimento, bloqueadores do ciclo celular, inibidores da angiogênese ou outros anticorpos para determinar a eficácia sinérgica e a toxicidade potencial de combinações. Para analisar os efeitos secundários tóxicos mediados por anticorpos animais podem ser inoculados com anticorpos ou reagentes de controle e exaustivamente investigados quanto a sintomas, possivelmente relacionados com terapia de anticorpo antígeno tumoral. Os efeitos secundários possíveis da aplicação in vivo de anticorpos de antígenos de tumor incluem, particularmente, toxicidade no antígeno tumoral expressando tecidos. Os anticorpos que reconhecem um antígeno tumoral em humanos e em outras espécies, por exemplo, camundongos, são particularmente úteis para prever os efeitos colaterais potenciais mediados por aplicação do antígeno-anticorpos monoclonais de tumores em seres humanos.

[00372] Mapeamento de epítopos reconhecidos por anticorpos pode ser efetuada, tal como descrito em detalhe em "Epitope Mapping Protocols (Methods in Molecular Biology) por Glenn E. Morris ISBN- 089603-375-9 e em "Epitope Mapping: A Practical Approach" Practical Approach Series, 248 por Olwyn MR Westwood, Frank C. Hay.

[00373] Os compostos e agentes aqui descritos podem ser administrados na forma de qualquer composição farmacêutica adequada.

[00374] As composições farmacêuticas são de preferência estéreis e contém uma quantidade eficaz dos anticorpos aqui descritos e, opcionalmente, de outros agentes, como aqui discutido para produzir a reacção desejada ou o efeito desejado.

[00375] As composições farmacêuticas são normalmente fornecidas numa forma de dosagem uniforme e podem ser preparadas de uma maneira conhecida per se. Uma composição farmacêutica pode, por exemplo, estar na forma de uma solução ou suspensão.

[00376] Uma composição farmacêutica pode compreender sais, substâncias tampão, conservantes, veículos, diluentes e / ou excipientes, todos os quais são de preferência farmaceuticamente aceitáveis. O termo "farmacêuticamente aceitável" refere-se à não toxicidade de um material que não interage com a acção do componente activo da composição farmacêutica.

[00377] Os sais que não são farmaceuticamente aceitáveis podem ser utilizados para a preparação de sais farmaceuticamente aceitáveis e estão incluídos na invenção. Os sais farmaceuticamente aceitáveis deste tipo compreendem, de forma não limitativa os preparados a partir dos seguintes ácidos: bromídrico, sulfúrico, fosfórico, nítrico, maleico, acético, salicílico, cítrico, fórmico, malónico, clorídrico, succínico, e outros semelhantes. Os sais farmaceuticamente aceitáveis também podem ser preparados como sais de metais alcalinos ou sais de metais alcalino-terrosos, tais como sais de sódio, sais de potássio ou sais de cálcio.

[00378] As substâncias tampão adequadas para utilização em uma composição farmacêutica incluem ácido acético num sal, ácido cítrico num sal, ácido bórico num sal e ácido fosfórico num sal.

[00379] Os conservantes adequados para utilização em uma composição farmacêutica incluem cloreto de benzalconio, clorobutanol, parabenos e timerosal.

[00380] Uma formulação injetável pode compreender um excipiente farmaceuticamente aceitável, tal como lactato de Ringer.

[00381] O termo "transportador" refere-se a um componente orgânico ou inorgânico, de natureza natural ou sintética, em que o componente activo é combinado para facilitar, estimular ou activar a aplicação. De acordo com a invenção, o termo "transportador" também inclui um ou mais enchimentos compatíveis sólidos ou líquidos, diluentes ou substâncias de encapsulamento, os quais são adequados para administração a um paciente.

[00382] As substâncias veiculares possíveis para administração parentérica são, por exemplo água estéril, Ringer, lactato de Ringer, solução estéril de cloreto de sódio, polialquilenoglicóis, naftalenos hidrogenados e, em particular, polímeros de lactido biocompativeis, copolímeros de lactídeo / glicolídeo ou copolímeros de propileno polioxi/ polioxietileno.

[00383] O termo "excipiente", quando aqui utilizado destina-se a indicar todas as substâncias que podem estar presentes em uma composição farmacêutica e que não são ingredientes activos, tais como, por exemplo, transportadores, ligantes, lubrificantes, espessantes, agentes tensioactivos, conservantes, emulsionantes, tampões, agentes aromatizantes ou corantes.

[00384] Os agentes e composições aqui descritos podem ser administrados por qualquer via convencional, tal como através de administração parentérica, incluindo por injecção ou infusão. A administração é preferivelmente parentérica, por exemplo intravenosamente, intra-arterialmente, subcutaneamente, intradermicamente ou intramuscularmente.

[00385] As composições adequadas para administração parentérica compreendem, normalmente, uma preparação aquosa ou não aquosa estéril do composto activo, que é preferencialmente isotónica com o sangue do receptor. Exemplos de transportadores e de solventes compatíveis são solução de Ringer e solução de cloreto de sódio isotônica. Além disso, óleos normalmente fixos, estéreis são utilizados como solução ou meio de suspensão.

[00386] Os agentes e composições aqui descritos são administrados em quantidades eficazes. Uma "quantidade eficaz" refere-se à quantidade que consegue uma reacção desejado ou um efeito desejado sozinho ou em conjunto com outras doses, no caso de tratamento de uma determinada doença ou de uma condição particular, a reacção desejada refere-se preferencialmente a inibição do curso da doença. Este compreende a abrandar o progresso da doença e, em particular, interromper ou reverter o progresso da doença. A reacção desejada num tratamento de uma doença ou de uma condição pode também ser atraso do aparecimento ou uma prevenção do aparecimento da referida doen ou o referido estado. Em particular, o termo "quantidade eficaz" refere-se quantidade de uma terapia que é suficiente para resultar na prevenção do desenvolvimento, recorrência ou aparecimento de câncer e um ou mais dos seus sintomas, reduzir a gravidade, a duração de câncer, melhorar um ou mais sintomas de câncer, impedir o avanço de câncer, causa de regressão de câncer, e / ou prevenção de metástases cancerosas. Em uma concretização da invenção, a quantidade de uma terapia seja eficaz para conseguir uma estabilização, redução ou eliminação da população de células tronco cancerígenas e / ou erradicação, remoção, ou o controle de câncer primário, câncer metastático e / ou câncer recorrente.

[00387] Uma quantidade eficaz de um agente ou composio aqui descrito dependerá do estado a ser tratado, a severidade da doença, os parâmetros individuais do paciente, incluindo a idade, condição fisiológica, tamanho e peso, a duração do tratamento, do tipo de uma terapia de acompanhamento (se presente), a via de administração específica e fatores semelhantes. Consequentemente, as doses administradas dos agentes aqui descritos podem depender de vários de tais parâmetros. No caso em que uma reacção em um paciente é insuficiente com uma dose inicial, doses mais elevadas (ou doses mais elevadas eficazmente alcançadas por uma via diferente, mais localizada de administração) pode ser utilizado.

[00388] Os agentes e composições aqui proporcionados podem ser utilizados sozinhos ou em combinação com os regimes terapêuticos convencionais, tais como cirurgia, irradiao, quimioterapia e / ou transplante de medula óssea (autólogo, singeneico, alogeneico ou não relacionada).

[00389] O tratamento do câncer representa um campo onde as estratégias de combinação são especialmente desejáveis uma vez que frequentemente a acção combinada de duas, três, quatro ou mesmo mais drogas cancerosas / terapias gera efeitos sinérgicos que são consideravelmente mais forte do que o impacto de uma abordagem monoterapêutica. Assim, em uma outra concretização da presente invenção, um tratamento de câncer pode ser eficazmente combinado com vários outros arrasta. Entre os que são, por exemplo combinados com terapias tumorais convencionais, estratégias multi- epitópicos, imunoterapia suplementar, e as abordagens de tratamento de segmentação angiogénese ou apoptose (para revisão ver por exemplo, Andersen et al 2008: O tratamento do câncer: a combinação de vacinação com outras terapias do câncer Imunologia imunoterapia, 57 (11): 1735-1743) a administração sequencial de diferentes agentes podem inibir o crescimento de células de câncer em diferentes pontos de verificação, ao passo que outros agentes podem por exemplo, inibir a neo-angiogênese, a sobrevivência de células malignas ou metástases, câncer potencialmente converter em uma doença crônica.

[00390] A presente invenção é ainda ilustrada pelos exemplos seguintes que não devem ser interpretados como limitativos do escopo da invenção.

EXEMPLOS Exemplo 1: Análise Descritiva de polimorfismos imunes genéticos

[00391] O padrão individual de polimorfismos de um único nucleotídeo (SNP) no genoma do paciente pode ser preditivo para a taxa de resposta do anticorpo terapêutico 1MAB362. A fim de investigar tais padrões de SNP, todos os pacientes foram genotipados para um número de SNPs com papel conhecido ou presumido na resposta imune e susceptibilidade a câncer gástrico.

[00392] Em detalhe, as seguintes questões foram abordadas: a. Os genótipos de SNP de cada paciente no que se refere a polimorfismos estudados. b. A frequência de genótipos SNP na população de pacientes. c. Identificação de pacientes com polimorfismos que podem interferir diretamente com mode de ação do IMAB362 (o receptor Fc e polimorfismos do sistema complementar). d. A acumulação de genótipos SNP por paciente descritos como fatores de risco para o câncer gástrico susceptibilidade, progressão do câncer ou tratamento do câncer. e. Correlação de genótipos SNP com o resultado clínico. f. Correlação de genótipos SNP com Sobrevida livre de progressão (PFS).

[00393] Todos os pacientes do grupo 1, 2, e 3 foram analisados quanto a polimorfismos genéticos. As amostras de sangue foram recolhidas de pacientes no dia 1 (V2a, pré- infusão).

[00394] Amostras de sangue total (9 ml, EDTA- Monovette) foram recolhidas a partir de todas as pacientes. sangue com EDTA foi armazenado em alíquotas de 1 ml imediatamente após a recolha da amostra no centro de estudo a -20 ° C. As amostras de sangue com EDTA foram enviadas em gelo seco (-70 ° C) e armazenadas a -20 ° C. Após a chegada, as amostras de sangue foram imediatamente armazenados a -20 ° C, até o isolamento do DNA.

[00395] SNPs de interesse foram selecionadas por uma pesquisa da literatura focando SNPs que são conhecidos para afectar o funcionamento do sistema imunológico e, especialmente, os SNPs que foram descritos para afectar o modo de acção dos anticorpos terapêuticos como o receptor Fc e complementar polimorfismos do sistema. SNPs tendo sido descritos para afectar a sobrevivência de pacientes com câncer gástrico, susceptibilidade (gástrica) ou câncer da progressão do câncer gástrico foram selecionados e estudados como bem.

[00396] Os polimorfismos genéticos foram analisados por SNP Genotyping TaqMan ™ ensaios (46 padrão, 5 feito-; Life Technologies) no Fluidigm Biomark ™ tempo real plataforma análise de PCR. o isolamento do DNA foi feita de acordo com protocolos convencionais para o isolamento de DNA genómico a partir de sangue total. A plataforme de análise de PCR em tempo real Fluidigm Biomark™ permite a genotipagem de até 96 amostras de pacientes com 96 SNPs em uma medição, como amostras de pacientes e iniciadores SNP específicos são aplicados a um chip de laboratório com 96 canais de amostras de DNA de pacientes e 96 canais ortogonais para o Os ensaios de SNPs. DNA genómico paciente é pré-amplificado por amplificação alvo específicos (STA). DNA pré-amplificado é submetido a TaqMan ™ tempo real A análise de PCR sob condições padrão na ™ tempo real plataforma análise de PCR Fluidigm Biomark. A determinação alélica dos SNPs foi feito para cada paciente e para cada ensaio, utilizando o software Fluidigm Biomark e o software de análise estatística "R". Um subconjunto de SNPs foi confirmada por sequenciamento de Sanger clássica como resultados Fluidigm foram ambíguas.

[00397] Os polimorfismos genéticos de 51 polimorfismos de um único nucleotídeo (SNP) foram determinados para 53 pacientes. A amostra de sangue de um paciente não permitir a extracção de DNA em quantidades suficientes para analisar os SNPs. 6 genótipos SNP foram determinadas para um subconjunto de apenas 20 pacientes. O genótipo para rs2279744 MDM2 SNP não foi determinado em 9 pacientes devido a problemas técnicos. O resultado rs20417 genotipagem PTGS2 para um paciente era ambígua e não foi adicionalmente investigada.

[00398] Determinação da matriz de genótipos SNP para pacientes testados permite o teste estatístico da população de pacientes para deslocamentos de frequência de genótipos comparado com frequência genótipo em populações de controle caucasiana. as frequências dos genótipos SNP na população de controle caucasiana baseiam-se em dados recolhidos pelos projectos internacionais SNP genotipagem (HapMap-CEU, PGA- EUROPEIA-painel, CAUC1, painel piloto _l _CEU_low_coverage, CEIJ GENO painel, PDR-90) depositadas no banco de dados público dbSNP (National Center for Biotechnology Information, Bethesda (MD, EUA). O número de pacientes por genótipo de um determinado SNP foi comparado com o número de pacientes por genótipo em populações de controle caucasianos. O número de pacientes por genótipo para populações de controle foi calculada multiplicando a frequência do genótipo fornecida relativo SNP na população com o número indicado de amostras estudadas. Isto permitiu um teste de qui quadrado directa para identificar diferenças estatisticamente significativas entre a população de pacientes e a população de controle correspondente.

[00399] O teste de Qui quadrado foi realizado para 48 dos 51 SNPs estudados. Nenhum dado para frequências de genótipos SNP foi depositado em bancos de dados públicos ainda para SNPs C1QA (rs 1044378), FCGR2C (Q57X (C-> T)) e MDM2 (rs2279744). SNPs com uma mudança estatisticamente significativa na freqüência de genótipos entre paciente e população de controle (5 de 48 SNPs, p <0,05) são mostrados na Figura 1.

[00400] 4 destes 5 SNPs foram mostrados para desempenhar um papel no câncer / susceptibilidade a câncer gástrico. Todos os quatro cânceres / câncer gástrico com susceptibilidade SNPs mostram, na verdade uma super- representação do respectivo câncer associado ao genótipo na população paciente, como esperado para pacientes de câncer gástrico (Tabela 1).

[00401] Um desses 5 SNPs até agora não foi demonstrado ser um fatores de risco / susceptibilidade em câncer ou câncer gástrico, rs 12146727 (CIS). Este SNP tem até agora só foi descrita como um fator de risco putativo para doença cardiovascular uma vez.Tabela 1: Cnacer gpastrico com susceptibilidade associada a SNPs com diferenças estatisticamente significativas na frequência de genótipo entre paciente e população de controle.

[00402] 49 de 51 SNPs estudados na população de pacientes mostram um padrão variante alelo na população de pacientes estudados. Isto permite testar para deslocamentos de alelos SNP entre subpopulaes de pacientes, que, idealmente, pode ajudar na identificação de uma população que responde, putativo de frequência. Somente dois SNPs, CI QA (rsl 044378) e FCGR2C (AH 1ME8) mostram um genótipo SNP invariável em todos os pacientes, evitando qualquer tipo de análise diferencial. Para 5 SNPs, uma mudança estatisticamente significante frequência alélica pode ser determinada neste estudo em comparação com populações de controle, fornecendo prova de princípio de que a frequência do alelo de SNP é dependente da composição de uma determinada população. A selecção SNP testado é, portanto, bem adequado para a futura identificação de SNPs candidatos biomarcador.

[00403] O receptor de Fc e polimorfismos do sistema complemento podem interferir diretamente com 1MAB362 modo de acção. Os pacientes foram genotipados para alelos de SNP em genes que podem afetar a eficácia de terapias baseadas em anticorpos, como FCGR3A (F176V [T »G], rs396991), FCGR2A (H131R [T-C], rs 1801274), e C1 QA ([276A-» L], rsl 72378) (Tabela 2).

[00404] Os pacientes foram ainda genotipados para os alelos SNP publicados do gene FCGR2C (Q57X [C-T], sem número rs) e dos fator CI do sistema complemento (R119H [G-> A], rsl 2146727) e C1QA ( rs292001, rsl 044378). Esses SNPs ainda não demonstraram afetar a terapia com anticorpos, mas foram incluídos como SNPs interessantes. Tabela 2: Pacientes com polimorfismos de receptores Fc e do sistema complemento. Os genótipos de SNP de pacientes com receptor Fc bem documentado e polimorfismos do sistema complemento são enumeradas. FCGR3A Val / Val polimorfismos com um impacto positivo putativo em terapia de anticorpos estão representados em negrito e sublinhados. Polimorfismos em FCGR2A (Arg / Arg) e CI GQ [G / L] com um impacto negativo putativo sobre a terapia com anticorpos estão sombreadas a cinzento e destacadas em negrito.

[00405] Um total d e 23 pacientes apresentam, pelo menos, um do receptor Fc bem -documented e complementar polimorfismos do sistema. 4 pacientes (100411, 101120, 200336, e 400109) eram homozigóticos para o alelo FCGR3A (F176V [T- L]), o que tem sido relatado para aumentar as taxas de resposta e sobrevida livre de progressão na terapia com anticorpos. 12 pacientes são homozigóticos para o alelo FCGR2A (H 131R [T- »C]), mais 10 pacientes são homozigóticos para o alelo CI QA ([276A- A L]). Ambos estes SNPs foram demonstradas para impactar negativamente a terapia com anticorpos. No total, 21 pacientes são homozigóticos para o alelo quer FCGR2A (H131R [T- »C]) ou o alelo C1QA ([276A-» L] (Paciente 10051 1 é homozigótica para ambos os alelos SNP).

[00406] Uma correlação dos resultados acima com a progressão da doença do paciente pode produzir uma visão sobre o papel do receptor Fc e complementar polimorfismos do sistema para tratamento IMAB362 o.

[00407] A progressão da doença e da eficácia do tratamento com anticorpo em pacientes poderiam ser afectados pela acumulação de SNPs descritos como fatores de risco para o câncer gástrico susceptibilidade, progressão do câncer ou tratamento do câncer. Entre os investigados 51 SNPs, até 43 SNPs permitir categorização dos respectivos genótipos SNP como 'risco' contra genótipos 'não-risco'. O número de homozigóticos genótipos do fator de risco de SNP por paciente foi contado como estes são descritos, em geral, como os alelos de risco mais relevantes. A frequência relativa do número de genótipos de risco por doente homozigóticas em relação ao número de investigados os fatores de risco de SNP por paciente está representado na Figura 2.

[00408] Uma acumulação de 14 a 46% dos genótipos investigados de risco por doente é observado. Esta ampla distribuição permite investigar se a acumulação de genótipos de risco de SNP por paciente se correlaciona com o resultado clínico do paciente.

[00409] Em resumo, 53 de 54 pacientes foram genotipados com sucesso por 51 SNPs. 49 de 51 SNPs apresentam um padrão variante alelo SNP, permitindo a análise de sub- populações de pacientes para uma mudança significativa no SNP frequência genótipo. Os polimorfismos do receptor e do sistema complemento Fc homozigóticos descritos como moduladores da terapia de anticorpo são descobertos em 23 de 53 pacientes. Uma acumulação de 14 a 46% dos genótipos investigados de risco por doente é observado.

Exemplo 2: Correlação da genotipagem de SNP com resultados clínicos

[00410] Objetivo da correlação do resultado clínico com genótipos de polimorfismos genéticos é a identificação de candidatos putativos de biomarcadores SNP prevendo resultado clínico dos pacientes. Os candidatos biomarcadores putativos identificados nesta análise serão verificados na posterior lib fase e estudos de Fase III. Verificação de candidatos de biomarcadores putativos na Fase lib vai permitir a diferenciação entre os candidatos putativos prognósticos e preditivos SNP.

[00411] A análise de correlação para cada SNP com o resultado clínico foi feita de forma independente por dois Ila populações ensaio clínico de pacientes de fase definida: O 'conjunto de análise completo' da população (FAS) com 40 pacientes e a população por conjunto protocolo' com 21 pacientes.

[00412] As frequências absolutas de genótipos do respectivo SNP para cada grupo de resultados clínicos ('respondedor', 'não respondedor') da população de pacientes foram quantificadas pelo SAS Enterprise Guide 6.1. As frequências absolutas de genótipos foram organizadas em tabelas de contingência (3x2 ou 2x2) estruturadas pelo resultado clínico e pelo genótipo SNP. O teste estatístico padrão empregado foi o teste do qui quadrado de Pearson. O teste exato de Fisher foi aplicado em alguns casos para tabelas de contingência 2x2 se a estrutura numérica do conjunto de dados proibisse o uso do teste de qui-placex de Pearson. O nível de significância estatística aplicado foi p <0,05. A análise de correlação foi realizada com o software de análise estatística SAS Enterprise Guide 6.1.

[00413] Para investigar o efeito dos genótipos de SNP na sobrevida livre de progressão, as curvas de Kaplan-Meier foram calculadas para cada grupo e depois formalmente comparadas empregando o teste estatístico Logrank. O nível de significância estatística aplicado foi p <0,05. As estatísticas Logrank foram realizadas com o software de análise estatística SAS Enterprise Guide 6.1.

[00414] Correlação dos resultados clínicos com SNP genotipagem é realizada para identificar putativos candidatos SNP biomarcadores preditivos ou prognósticos. A correlação foi estudada em duas populações de pacientes, a população FAS e a população PP.

[00415] A população FAS compreende 40 pacientes, 12 pacientes definidos como 'respondedor' (resultado clínico 'remissão parcial' ou 'doença estável') e 28 pacientes como 'não-respondedor' (resultado clínico 'progressão da doença). Uma amostra do doente (100801, não-respondedor) da população FAS não estava disponível para a análise de SNP tal como descrito acima, o número máximo de pacientes FAS analisados para correlações foi, por conseguinte, reduzido para 39. A população PP compreende 21 pacientes com 10 e 11 pacientes com resposta pacientes que não responderam.

[00416] O número de pacientes investigados por SNP diferem entre 20 e 39 (na população FAS) e 20 a 21 (na população PP).

[00417] A análise de correlação foi feita como descrito acima. No total, os 51 de SNPs estudados, 2 mostram uma correlação estatisticamente significativa com o resultado clínico em FAS assim como na população de PP.

[00418] Os 2 SNPs que mostram correlação estatística entre resultado clínico e respectivo genótipo SNP em ambas as populações são FCGR2A rs 1801274 (p = 0,0004 [PP]; p = 0,008 [FAS]) e IL-10 rs 1800896 (p = 0,042 [ PP], p = 0,022 [FAS]) (Tabela 3). O número de pacientes testados estatisticamente por SNP foi 21 (PP) e 39 (FAS) para cada um desses 2 SNPs. Tabela 3: SNPs mostrando correlação estatística entre os resultados clínicos e SNP genótipo em PP, bem como na população FAS.

[00419] 5 SNPs mo stram uma correlação com o resultado clínico em uma população de pacientes (FAS ou PP), como pode ser mostrado para DNMT3A rsl 5501 l7 [PP, p = 0,035], SMAD4 rs 12456284 [FAS, p = 0,02], MUCl rs4072037 (FAS , p = 0,03), EGF rs44449 () 3 [FAS , p = 0,049] e CDH l rs 16260 [FAS p = 0,049])(Tabela 4). Tabela 4: SNPs que mostram correlação estatística entre os resultados clínicos e SNP genótipo em população PP ou FAS. (teste qui quadrado, estatisticamente significante: p<0.05)

[00420] Inspecção de super- ou sub-representação de genótipos de SNP em pacientes respondedor / não-respondedor pode permitir a proporcionar explicação científica para diferenças de frequência estatisticamente significativas.

[00421] Os genótipos de dois SNPs, l615 rsl (ERCCl) e rs396991 (FCGR3A), está correlacionada com a sobrevida livre de progressão prolongada (PFS) na população PP (Tabela 5). Tabela 5: SNPs mostrando correlação estatística entre PFS prolongada e SNP genótipo na população PP.

[00422] Número de pacientes testados estatisticamente por SNP estavam 21 (PP) e 39 (FAS) para cada um dos SNPs 9 listados.

[00423] FCGR2A rs 1801274 [C / T]: Em PP, todos os pacientes que abrigam o genótipo rsl 801274 [CT] heterocigótico são realmente respondedores (8), o que se reflete no valor p altamente significativo (0,0004) do teste estatístico. Todos os pacientes de RP (4 de 4) exibem esse genótipo. A maioria dos não respondedores (73%, 8 de 11) mostra o genótipo homozigótico [TT] (Tabela 6). Este padrão de distribuição de genótipos também pode ser encontrado na população do FAS, embora não tão distinto quanto na população de PP (Tabela 7). Uma série de pacientes não respondedores na população FAS também abrigam o genótipo [CT] (30%), o que leva a um p-valor menos pronunciado, mas ainda estatisticamente altamente significativo. Tabela 6: Listagem de genótipos rs 1801274 (FCGR2A) em pacientes PP e respectivas frequências em resposta (PR e SD) e pacientes que não responderam (DP).

[00424] Tabela 7: Lista de genótipos rsl801274 (FCGR2A) em pacientes SAF e respectivas frequências em respondedores (PR e SD) e pacientes que não responderam (PD). RESP: Respondedor, NONRESP: não-respondedor, PFS: sobrevida livre de progressão, abs freq.: frequência absoluta, rel freq.: frequência relativa.

[00425] Análise de Sobrevivência FCGR2A rsl801274 [C / T]: super-representação altamente significativa do genótipo rs1801274 [CT] é esperado na população que responde, para ser refletido em correlação com o tempo de sobrevivência prolongado livre de progressão (SLP), também. De facto, em ambas as populações, PP (fig. 3) e o FAS (Figura 4), a [CT] genótipo está correlacionada com o PFS prolongada (p = 0,00 PP () 7, FAS p = 0,03) altamente significativo como bem. É de interesse, no entanto, que durante os primeiros 60 dias de tratamento de pacientes com o genótipo FAS [TT] mostram uma tendência para uma taxa de PFS maior do que os pacientes com [CC] ou [CT] genótipo. A análise de sobrevida confirma assim rs 1801274 (2A FCG) como um muito interessante candidato biomarcador putativo de natureza preditiva ou prognóstico.

[00426] IL-10 rs 1800896 [A / G]: Em PP, nenhum dos pacientes não respondedores possui o genótipo homozigótico rs 1800896 [GG] (Tabela 8). Este genótipo é encontrado em frequência elevada (40%) em pacientes respondedores (4 em 10). Apenas 1 respondedor de 10 (10%) mostrou o genótipo [AA], os respondedores restantes mostram o genótipo heterozigótico [GA]. No FAS, uma distribuição de frequência de genótipos comparável pode ser observada (Tabela 9), embora o genótipo [GG] possa ser observado nos pacientes que não respondem nesta população em baixa freqüência (1 1%, 3 de 27).Tabela 8: Listagem de genótipos rs 1800896 (IL-10) em pacientes com PP e respectivas frequências em pacientes respondedores (PR e SD) e não respondedores (PD).

[00427] RESP: Respondedor, NONRESP: Não-respondedor, PFS: sobrevida livre de progressão, abs freq.: frequência absoluta, rel freq.: frequência relativa Tabela 9: Listagem de genótipos rs 1800896 (IL-10) em pacientes com FAS e respectivas frequências em pacientes respondedores (PR e SD) e não-respondedores (PD). RESP: Respondedor, NONRESP: Não-respondedor, PFS: sobrevida livre de progressão, abs freq.: frequência absoluta, rel freq.: frequência relativa

[00428] Análise de sobrevivência rsl800896 (IL-10) [A / G]: O genótipo rs 1800896 [GG] está significativamente super-representado nos pacientes respondedores. A correlação estatística do genótipo [GG] com PFS mostra que, na população PP e FAS, o genótipo [GG] não está significativamente correlacionado com PFS (PP p = 0,27 (Fig. 5); FAS p = 0. () 8, ( Fig. 6)). No entanto, o valor de p para a correlação de sobrevivência do FAS limita o significado, o que pode ser uma indicação de que, em populações maiores com significado de ruído estatístico reduzido, pode ser alcançado. No geral, rs 1800896 (IL-10) é um interessante candidato de biomarcador putativo.

[00429] D MT3A rsl550117 [G / A]: Em PP, 4 respondedores (40%) mostram o genótipo [GA] enquanto que todos os não- respondedores mostram o genótipo [GG] (p = 0,03, Tabela 10).

[00429] Tabela 10: Listagem de rsl550117 (DNMT3A) genótipos em pacientes PP e respectivas frequências em resposta (PR e SD) e pacientes não-respondedores (DP). RESP: Respondedor, NONRESP: Não-respondedor, PFS: sobrevida livre de progressão, abs freq.: frequência absoluta, rel freq.: frequência relativa

[00430] Análise de sobrevivência rsl550117 (DNMT3A) [G / A]: O genótipo rs 1550117 [GA] está significativamente representado em excesso nos pacientes respondentes da população de PP, na população FAS, a diferença em PFS entre [GA] e [GG] portadores é de significância limítrofe (FAS p = 0,058) (Figura 7).

[00431] Na população de FAS, apenas um paciente é um portador do genótipo [AA].

[00432] SMAD4 rs 12456284 [G / A]: No FAS, uma representação exagerada estatisticamente significativa do genótipo [GA] (7 de 12 pacientes, 58%) em relação ao genótipo [AA] e [GG] pode ser encontrada no respondedor população (p = 0,023, Tabela 1 1). Na população não-respondente do FAS, a freqüência do genótipo [GA] pode ser encontrada em uma freqüência de 19% (5 dos 27 não respondedores). Na população de PP, esta associação é indicada pela significância da tendência (p = 0,081, dados não apresentados) Tabela 11: Listagem de genótipos rs 12456284 (SMAD4) em pacientes com SAF e respectivas frequências em resposta (FR e SD) e pacientes que não responderam (PD).

[00433] Análise de sobrevivência rsl2456284 (SMAD4) [G/A]: O genótipo rsl 2456284 [GA] está significativamente representado em excesso nos pacientes respondentes com FAS e mostra a mesma tendência nos respondedores de PP. A correlação estatística dos genótipos rsl 2456284 com PFS mostra que, na população PP, o genótipo [GA] está significativamente correlacionado com PFS (PP p = 0,048) usando o teste Gehan-Brelow-Wilcoxon (Figura 8), enquanto que o uso do teste logrank é p = 0,35. O teste Gehan-Brelow- Wilcoxon dá mais peso aos eventos PFS em pontos iniciais do que o teste logrank e, de fato, a diferença entre os portadores [GA] e [AA] é mais pronunciada durante os primeiros 100 dias deste teste clínico de fase Ila. Na população FAS, o genótipo [GA] não está significativamente correlacionado com PFS (p = 0,20 (logrank), p = 0,23 (Gehan- Brelow-Wilcoxon)), embora a inspeção visual sugira uma tendência de portadores de [GA] para PFS prolongado.

[00434] MUCL rs4072037 [A/G]: No FAS, o genótipo rs4072037 encontrado com a maior freqüência de 67% na população respondente é [AA] (8 de 12), enquanto que os não respondedores exibem esse genótipo em apenas 26% de pacientes (7 de 27). Nenhum dos pacientes respondentes mostra o genótipo homozigoto [GG] (Tabela 12), enquanto o não respondedor mostra o genótipo [GG] a uma taxa de 22% (6 de 27). Essa distribuição diferencial do genótipo em pacientes com FAS respondentes e não respondentes é estatisticamente significante (p = 0,03). Um padrão de distribuição de genótipo comparável é encontrado na população de PP (dados não apresentados), onde os respondedores mostram quase a mesma freqüência de genotipo relativo [AA] de 70% (7 de 10) como na população de FAS (significância da tendência p = 0,11). Tabela 12: Listagem de genótipos de rs4072037 (MUCl) em pacientes com FAS e frequências em pacientes respondentes (PR e SD) e não-respondedores (PD). RESP: Respondendor, NONRESP: Não-respondedor, PFS: sobrevida livre de progressão, abs freq.: frequência absoluta, rel freq.: frequência relativa

[00435] Análise de sobrevivência rs4072037 (MUC1) [A / G |: A super-representação significativa do genótipo rs4072037 [AA], em pacientes com resposta e pode indicar correlação desta com o genótipo PFS. O teste estatístico revela que em PP e FAS população, o [AA] genótipo é significativamente correlacionada com PFS (PP p = 0,001, (Figura 9); FAS p = 0,02, (Figura 10).). Esta análise de sobrevivência confirma rs4072037 (MUCL) como um muito interessante putativo candidato biomarcador preditivo ou prognóstico.

[00436] EGF «4444903 [L / A]: Em FAS, o genótipo rs4444903 [AA] é significativamente super-representado (p = 0.Q49) na população que responde, (5 de 12; 42%) em comparação com a população não-respondedor (3 de 27; 11%) (Tabela 13). Na população PP esta distribuição assimétrica não é estatisticamente significativa (p = 0,32, dados não apresentados).Tabela 13: Listagem de genótipos rs4444903 (EGF) em pacientes FAZ e respectivas frequências em pacientes respondedores (PR and SD) e não-respondedores (PD). RESP: Respondedor, NONRESP: Não-respondedor, PFS: sobrevida livre de progressão, abs freq.: frequência absoluta, rel freq.: frequência relativa

[00437] Análise de sobrevivência rs4444903 (EGF) [L / A]: A correlação do genótipo rs4444903 [AA] com PFS na população PP ou FAS não é estatisticamente significativa (p FAS = 0,1; p = 0,16 PP). No entanto, uma tendência para a PFS prolongados pode ser observada tanto em PP e população FAS (Figura 1 1).

[00438] CDH1 rs16260 [C / A]: Em FAS, o genótipo RS 16260 [AA] é encontrado com uma frequência significativamente mais elevada no respondedor (5 de 12; 42%) do que a população não-respondedor (3 de 27; 1 1%) (p = 0,049, Tabela 14). Em PP, esta distribuição assimétrica entre ambos os grupos de pacientes não é significativa (p = 0,72, dados não apresentados). Tabela 14: Listagem de RS 16260 (CDHL) genótipos em pacientes FAS e respectivas frequências em resposta (PR e SD) e pacientes que não responderam (PD). RESP: Respondedor, NONRESP: Não-respondedor, PFS: sobrevida livre de progressão, abs freq.: frequência absoluta, rel freq.: frequência relativa

[00439] Análise de sobrevivência rs 16260 (CDHl) [C / A]: A correlação do genótipo rs 16260 (CDHl) [AA] com as limitações PFS na significância estatística na população FAS (teste Logrank p = 0,065, teste Gehan-Brelow-Wilcoxon p = 0,032) (Figura 12).

[00440] ERCCl rsl 1615 [C / T]: em PP, uma tendência para uma maior frequência do rsl 1615 genótipo [TT] na população respondedor (3 dos 10; 30%) encontra-se (p = 0,068; população não-respondedor (0%)). Inversamente, o genótipo homozigótico [CC] é apenas encontrado na população não- respondedor (2 pacientes) (Tabela 15). Tabela 15: Listagem de genótipos rsl 1615 (ERCCl) em pacientes com PP e respectivas freqüências em pacientes respondentes (PR e SD) e nou respondedores (PD). RESP: Respondedor, NONRESP: Não-respondedor, PFS: sobrevida livre de progressão, abs freq.: frequência absoluta, rel freq.: frequência relativa

[00441] Analise de Sobrevivência rsl l615 (ERCCl) [C/T] O genótipo rsl 1615 [TT] é encontrado exclusivamente na população que responde, a população em PP. correlação estatística de rsl 1615 genótipos com PFS mostra que o genótipo rsl 1615 em PP é altamente significativamente correlacionada com o PFS, com [CT] e [TT] transportadoras que mostra a sobrevivência prolongada em comparação com transportadores [CC] (PP p = 0,0001) (Figura 13). Apesar deste valor importância notável, deve notar-se que existem apenas dois pacientes com o genótipo [CC] e 3 pacientes com o genótipo [TT] em PP. No entanto, na população FAS o mesmo efeito pode ser observado como uma tendência (FAS p = 0,13, dados não apresentados), sugerindo que o efeito também é válido em maiores populações de pacientes.

[00442] Análise de sobrevivência FCGR3A rs396991 [T / G]: Nem em PP ou FAS, o genótipo de SNP rs396991 está correlacionada com o resultado clínico (FAS p = 0,49; p = 0,29 PP, dados não mostrados). No entanto, a análise de sobrevivência na população PP indica com elevada significância estatística que os pacientes com o genótipo [TG] e [TT] mostrar melhorada em comparação com o PFS [GG] (p = 0,00 () 7, Figura 14). Este efeito também pode ser observado na população FAS (p = 0,25; dados não mostrados). Apesar do valor de significância recebeu para a população PP, deve notar-se que apenas 3 pacientes PP são [GG] operadoras.

Exemplo 3: Exame de acompanhamento análises imunes de polimorfismo

[00443] O objetivo primário deste estudo clínico fase IIa foi a avaliação da segurança e da eficácia do anti- CLDN18.2 O anticorpo IMAB362 mononuclear terapêutico em pacientes com adenocarcinomas gastroesofágico. Além disso, acompanham análises de polimorfismos genéticos da resposta imune foram realizados para avaliar os parâmetros que podem servir como potenciais biomarcadores preditivos ou de prognóstico em correlação com a terapia IMAB362.

Discussão de análise de polimorfismo imunológico descritivo

[00444] Os polimorfismos genéticos no genoma do paciente têm sido demonstrado que alterar a taxa de resposta de anticorpos teraputicos. A fim de investigar o impacto da variação genética na taxa de resposta do indivíduo, os genótipos de 51 polimorfismos nucleotídicos singulares (SNPs) com função conhecida ou presumida em resposta imune e susceptibilidade a câncer gástrico ou progresso foram determinadas em pacientes.

[00445] Neste estudo, 51 SNPs foram genotipados com sucesso para 53 dos 54 pacientes estudados. Um desvio estatisticamente significativo de frequência do genótipo na população de pacientes em comparação com populações de controle poderia ser detectado por 5 SNPs. 4 desses SNPs foram mostrados antes de ser associada com o câncer / susceptibilidade a câncer gástrico. O respectivo / câncer gástrico câncer genótipos associados desses SNPs 4 estão sobre-representados na população em estudo, como seria de esperar em uma população de pacientes com GC avançada. Sobre- representação do respectivo genótipo homozigótico pode indicar um modo recessivo de acção que implica uma função comprometida do gene, em oposição a actividade do gene aumentado. Isto é realçado pelos dados publicados, por exemplo, o câncer associado genótipo AA gástrica de RS 16260 SNP em CDH1 foi avaliado para causar uma regulação para baixo da expressão CDH1, devido à sua posição no promotor de HDC 1 a -160.

[00446] Os polimorfismos nos genes que estão envolvidos na sinalização imune foram investigados mesmo que esses polimorfismos não tenham sido descritos anteriormente como fator de risco de câncer gástrico. Polimorfismos genéticos em genes que codificam para fator de sinalização imune demonstraram modular o risco de desenvolver câncer gástrico significativamente. A taxa de resposta de uma terapia de câncer baseada em anticorpos também pode ser afetada por esses SNPs.

[00447] O genótipo GG IL-2 super-representado (rs2069762 SNP) na população paciente está associada a um risco aumentado de atrofia gástrica induzida por infecção H. pylori e pode predispor ao câncer gástrico. Os genótipos rs231775 CTLA4 SNP e genótipos rs2274223 (PLCEl) têm sido descritos como fatores de risco GC susceptibilidade. Conforme estudos publicados sobre rs231775 são contraditórios sobre a sequência do genótipo, no entanto, nenhuma conclusão vai ser desenhada aqui. Os polimorfismos Fcy-receptor e do sistema complemento foram investigados neste estudo. A codificação possivelmente benéfica do genótipo FCGR3A para Val / Val [GG] é detectado em 4 pacientes APT, o genótipo FCGR2A com um impacto potencialmente negativo (Arg / Arg) [CC] pode ser detectada em 12 pacientes APT.

[00448] O CDC como um segundo mecanismo efetor demonstrou ser também afetado por polimorfismos de SNP: portadores de um alelo de um polimorfismo no componente do complemento ClqA ([276A-> G], rsl 72378) mostram resposta prolongada após a terapia com Rituximab de linfoma folicular. O polimorfismo do sistema do complemento em C1QA com genótipo 'GG' é detectado em 10 pacientes, possivelmente afetando a resposta negativamente. O polimorfismo SNP rsl 2146727 no componente de componente CI S, no entanto, até agora foi descrito apenas em uma tela não relacionada a terapias de anticorpos ou câncer.

[00449] A identificação de mudanças significativas de frequência entre o genótipo do paciente e de controle de populações demonstra que SNP deslocamentos de frequência genótipo podem servir como marcadores de prognóstico e preditivos em estudos clínicos.

[00450] Acumulação de alelos de risco SNP pode ter um impacto sobre o resultado clínico de um paciente também. A fim de permitir que a referida análise, o número de genótipos homozigóticos risco SNP foi contado por paciente. A correlação destes números com resposta terapêutica pode dar uma visão sobre o papel de SNP acumulação de fatores de risco.

Discussão de correlação de de genotipagem SNP com o resultado clínico FCGR2A rsl801274:

[00451] Inspecção dos genótipos FCGR2A super- ou baixo-representados revela que na população PP todos os pacientes com o genótipo heterozigótico rsl 801274 [CT] são pacientes respondedores e que os pacientes com resposta parcial (PR) abrigam exclusivamente esse genótipo. O genótipo homozigótico representados na população não-respondedor é [TT]. A mera observação destas distribuições de frequência não permite concluir se a [CT] genótipo é benéfico ou se o [TT] é desvantajoso. Na maioria dos estudos que investigam o efeito de genótipos SNP, os respectivos genótipos homozigóticos demonstram os maiores efeitos biológicos, muitas vezes, indicando um modo de acção recessiva que reflecte a função do gene comprometida de ambos os alelos, em oposição a actividade do gene aumentado. No caso de alelos de SNP levar a um aumento da actividade genética, um efeito gradual do efeito biológico pode muitas vezes ser observada: Um alelo (isto é, heterozigótica) aumenta a atividade do gene, dois alelos (isto é, homozigóticos) aumentam a atividade do gene, mesmo mais. Em ambos os casos, o ganho de função ou perda de função, os mais fortes efeitos biológicos / clínicas são geralmente observados em pacientes com genótipos homozigóticos. Sob este pressuposto super- representação do genótipo homozigótico [TT] na população não- respondedora na população PP e FAS causaria um efeito desvantajoso.

[00452] Contudo, isso é inesperado, uma vez que o genótipo rsl 801274 FCGR2A [TT] foi descrito em vários estudos clínicos como um fator com um efeito prolongado sobre PFS. Em nosso ensaio clínico de fase lla, uma inspeção mais próxima da associação entre genótipo e PFS em pacientes não respondedores FAS indica que os pacientes com FAS PD com o genótipo [TT] mostram durante os primeiros 60 dias de terapia, de fato, uma tendência para maiores tempos de PFS em oposição para pacientes com FAS PD com o genótipo [CT] (compare a Tabela 7 e a Figura 4). Uma interpretação para colocar essa observação em linha com a sub-representação de [TT] em respondedores com PFS prolongada poderia ser uma sobreposição de dois mecanismos moleculares diferentes: Primeiro, o genótipo rsl 801274 [CT] poderia ser um marcador para pacientes respondentes. Esta é uma nova observação não descrita na literatura até agora e pode sugerir que este genótipo é um marcador preditivo para o tratamento com rMAB362. O mecanismo molecular subjacente a esta nova observação ainda não foi resolvido.

[00453] A segunda observação, já descrita na literatura para outros anticorpos terapêuticos anti-câncer, seria o PFS prolongados de pacientes portadores do genótipo FCGR2A [TT]. Em nosso estudo Ila fase este efeito é devido à sobreposição do primeiro mecanismo postulado única observável como uma tendência em pacientes que não responderam. Mecanisticamente, a segunda observação pode ser explicada por um aumento da afinidade de ligação do anticorpo IgGl para o FCGR2A 131 His / Sua alelo do receptor (codificado por [TT] genótipo), em oposição à fraca afinidade de ligação para o FCGR2A 131 alelo homozigico receptor Arg / Arg ( codificado por [CC] genótipo): Em estudos que investigam o impacto de polimorfismos dos receptores Fcy sistematicamente, foi recentemente mostrado que os anticorpos do isotipo IgGl, de facto ligar-se com afinidades diferentes para as duas formas alélicas de receptor Fey 11 a, HI 31 com uma afinidade maior do que o R 131. A afinidade diferencial de anticorpos IgG para os alelos de receptor FCGR2A é geralmente aceite que afectam a taxa de disparo de mecanismos efectores e PFS consequentemente prolongados em pacientes que albergam o alelo receptor de elevada afinidade. Os dados que suportam esta hipótese foi fornecida por relatórios que demonstram que os polimorfismos dos receptores Fcy FCGR2A H131 R e FCGR3A F176V (Phe> Val, rs396991) pode ter um impacto sobre a eficia clica da terapia de anticorpo IgGl baseado no Trastuzumab em pacientes com câncer da mama metastático. Os pacientes com os genótipos FCGR3A 176 Val / Val e FCGR2A 131 Sua / Seu mostrou significativamente melhor taxa de resposta e sobrevida livre de progressão. As mesmas também polimorfismos foram associados com a taxa de resposta de rituximab (IgGl) - treated pacientes com linfomas de células-B. Noutro estudo, o PFS prolongados após terapia Cetuximab (IgGl) poderia ser associado com a FCGR3A 176 Val / Val genótipo. Controversa, há estudos recentes bem alimentados relatando qualquer associação entre polimorfismos Fcy-receptor e sobrevivência, taxa de resposta, ou de sobrevida livre de progressão para os anticorpos discutidos. No estudo do câncer da mama Grupo Internacional de Investigação (BCIRG) a BCIRG-006 1218 pacientes foram tratados num estudo aleatorizado com dois Trastuzumab- contendo braços e um grupo de controle não- Trastuzumab. As associações relatadas acima entre polimorfismos-receptor Fey e eficácia Trastuzumab não pôde ser confirmada. Um estudo de longo prazo com 460 pacientes que empregam rituximab combinadas com quimioterapia no linfoma folicular não relataram associação de polimorfismos dos receptores Fcy com sobrevida livre de progressão. No ensaio ALCANCE com 419 pacientes, em que os pacientes receberam fludarabina e ciclofosfamida (FC) ou rituximab mais FC, FCGR2A e FCGR3A polimorfismos não influenciou significativamente os resultados. Os ensaios de cetuximab recentes também produziram resultados inconsistentes, não recomendando polimorfismos-receptor Fey biomarcadores como úteis. Isto pode reflectir diferenças na população fatores intrínsecos ou regimes de quimioterapia simultâneas. MUC1 rs4072037:

[00454] MUCl é uma glicoproteína transmembranar da família das mucinas. Mucins são proteínas de alto peso molecular que são O-glicosiladas no domínio extracelular N- terminal extensivamente com oligossacarídeos e cadeias de n- glicano. As mucosas são expressas na superfície apical do revestimento epitelial de caminhos respiratórios e gastrointestinais respiratórios e ductos no fígado, pâncreas e rins. As mucinas transmembranares abrangem a membrana com uma hélice a-a e fornecem com suas correntes de açúcar um revestimento protetor para o espaço extracelular. As mucosas segregadas no espaço extracelular acumulam uma camada de gel mucoso que serve como proteção física adicional para o epitélio. O MUCl transmembranlar e as mucinas secretadas MUC5C e MUC6 são as principais mucinas expressas no estômago. O MUCl é traduzido como uma única cadeia de polipéptido que está sujeita a autoclavagem. O domínio extracelular N- terminal (MUC1-N) permanece inicialmente não covalentemente ligado ao domínio transmembranar / intracitoplasmático (MUC 1 -C). Este domínio intracitoplasmático serve como um domínio de sinalização que pode entrar no núcleo e associar-se a uma série de fator de transcrição para ativar a expressão gênica diretamente. O estresse celular pode levar à clivagem proteolítica do domínio MUCl-N e MUCl-C através de um segundo local proteolítico. Isso pode ser observado em células cancerosas, também, onde MUCl não é mais expressa de forma ordenada na membrana apical da célula, mas pode ser encontrada sobre-expressa e localizada em toda a célula. O derramamento do domínio extracelular (também conhecido como CA15-3) no espaço extracelular e a localização intracelular de MUCl -C é a conseqüência. O domínio de sinalização intracitoplasmática atua como um oncogene, e. por ativação da sinalização Wnt / p-catenina e bloqueio de rotas apoptóticas.

[00455] O domínio extracelular de MUC1, no entanto, não é apenas um componente estrutural estático, mas desempenha um papel importante durante eventos de sinalização na membrana celular. A glicosilação e expressão estado do domínio extracelular MUCL foi demonstrada para regular as interacções das moléculas de sinalização de membrana e a matriz extracelular. MUC1-N pouco-glicosilasado em células tumorais tem sido relatado para aumentar a sinalização entre as moléculas de membrana de ICAM-1 ou E-selectina e o MUC1 coreprotein. Além disso, a expressão de mucina e glicosilação estado parece mascarar moléculas associadas à membrana. Em culas de câncer, mascarando

[00456] HER2 de proteínas por expressão de mucina foi descrita como um possível mecanismo de resistência à terapia de trastuzumab.

[00457] O polimosrfimo do alelo “A” rs4072037 MUC1 tem sido descrito como um fator de risco de susceptibilidade a câncer gástrico. Este polimorfismo é uma G-> A troca no exão 2, resultando em processamento alternativo de MUCL exactamente no local de clivagem previsto sinal de peptídeo de MUC 1. Deficiência de clivagem do peptídeo sinal poderia levar a localizao aberrante MUCL proteína ou padrão de glicosilação e consequentemente deficiente a função da proteína.

[00458] Neste ensaio clínico de fase Ila, o genótipo rs4072037 [AA] foi encontrado para ser estatisticamente associado com a população respondente. Pode-se especular que a forma alleica de MUCl subjugada ou subexpressa [AA] permite um melhor acesso de IMAB362 à molécula alvo de membrana CLD 18.2 expressa em células cancerosas, promovendo conseqüentemente a eficácia do tratamento. Isso tornaria rs4072037 um biomarcador preditivo. IL-10 rsl800896

[00459] IL-10 é um regulador chave do sistema imunológico com funções pleiotrópicas. A IL-10 é conhecida por atuar como uma citocina anti-inflamatória, imunossupressora por inibição da proliferação de células T específicas de antígenos dependentes de macrófagos e produção dependente de macrófagos de citoquinas por células T. No entanto, a IL-10 foi descrita também como uma citocina de iunounostimul, aumentando a diferenciação e crescimento de células B, granulócitos e mastócitos, bem como a ativação de células T de células N e CD8 +. O potencial pleiotrópico da IL-10 também é refletido pela expressão generalizada de IL-10 em muitos tipos de células imunes, incluindo células Th2, células Treg, células Th3, células T NK, células B, macrófagos e células dendríticas. Este duplo papel da IL-10 reflecte-se no potencial de inibição de tumores, também promovendo tumores: IL-10 secretada por células tumorais ou células imunitárias infiltradas por tumores, uma vez que os macrófagos permitem que células tumorais escapem da vigilância imune através de mecanismos que foram esclarecidos apenas em parte. Um mecanismo descrito envolve células Treg que contribuem para a indução de tolerância periférica através da expressão de citocinas imunorreguladoras como a IL-10. Outro mecanismo relatado é a inibição da apresentação cruzada de antígenos associados a tumores por células dendríticas e, portanto, prevenção de células T de iniciar uma resposta imune efetiva contra células tumorais. Por outro lado, a exposição das células tumorais malignas à IL-10 conduz a uma regulação descendente das proteínas HLA de classe I, resultando em maior sensibilidade à citotoxicidade das células NK.

[00460] O polimorfismo do promotor de IL-10 rs 1800896 na posição (-1082) é de interesse como o alelo 'G' foi relatado como fator de risco de câncer gástrico e fator de risco de câncer renal. O alelo 'G' deste polimorfismo foi associado in vitro com diminuição da expressão de IL-10 em comparação com o alelo 'A'. Nos pacientes respondentes deste ensaio clínico de fase Ila, o genótipo [GG] de rs 1800896 está sobre representado, possivelmente indicando um menor nível de expressão relativa de IL-10. Pode-se especular que os pacientes que abrigam o genótipo [GG] têm uma expressão inferior de IL-10, que por sua vez pode tornar mais difícil para as células tumorais escapar da vigilância imunológica por um dos mecanismos descritos acima. Na verdade, nenhum dos 12 pacientes respondentes com FAS mostra níveis elevados de soro de IL-10, em oposição a 22% dos pacientes não respondedores do FAS (6 dos 27 medidos). No entanto, outros autores afirmam que o alelo 'A' está associado à diminuição da expressão de IL-10.

[00461] Deve também ser notado, que sinais IL-10 através do mediador intracelular Stat3 e que a ativação é dependente de Stat3 MUCL-C. Por conseguinte, a interação funcional da proteína MUC1 e IL-10 podia ser a razão pela qual estas moléculas tanto provou ser candidatos biomarcadores estatisticamente significativos nesta fase I la ensaio clínico. Finalmente, FCGR2A é expressa em macrófagos, que são muitas vezes uma fonte principal de IL-10 no mieroenvironment tumor. Se estes candidatos biomarcadores putativos prevalecer em estudos em curso e futuras, uma investigação da interação funcional desses fatores pode ser de considerável interesse. rs1550117 (DNMT3A):

[00462] rsl550117 é um SNP no gene DNMT3A que codifica a DNA enzimática (citosina-5) -metiltransferase 3A catalisando a transferência de grupos metil para estruturas específicas de CpG em indução de DNA modificação genética epi. Demonstrou-se que o genótipo [AA] confere um risco aumentado de câncer gástrico em comparação com [GG] ou [GA]. Neste estudo [AA] pode ser encontrado em apenas um paciente na população do FAS e nenhum paciente da população de PP. Isso pode indicar que [AA] também confere um risco de sobrevivência, também, impedindo o tratamento de terceira e quarta linha de portadores de AA neste teste clínico de fase Ila. A descoberta de que [GA] está significativamente correlacionada com o desfecho clínico em PP sugere que este marcador possui potencial como biomarcador preditivo para o tratamento IMAB362. rs12456284 (SMAD4):

[00463] rs l2456284 é um SNP no gene que codifica para os SMAD4 "Mães contra homólogo decapentaplégico 4" intracelular co-transdutor TGFp / BMP de sinalização. Foi publicado que a [GG] genótipo diminuíram significativamente o risco para o câncer gástrico. A sobre-representação estatisticamente significativa do genótipo heterozigótico [GA] ao longo do genótipo [AA] na população que responde, FAS sugere que este genótipo pode servir como biomarcador preditivo. PFS prolongados de pacientes da população PP transportando [GA] é um fato de apoio. rs4444903 (EGF):

[00464] O polimorfismo funcional rs4444903 na região promotora do gene EGF foi observada para modular os níveis de proteína de EGF, quantidades mais elevadas de fator de EGF foram detectados no soro de portadores [GG]. O alelo G e [GG] genótipo desse polimorfismo mostrou correlações significativas com o aumento do risco de câncer gastrointestinal em uma meta-análise.

[00465] Nesta fase, o estudo clínico do genótipo [AA] está significativamente representado excessivamente nos respondedores da FAS e os pacientes com esse genótipo mostram uma tendência para PFS prolongado na população de FAS e PP. Isso poderia indicar que o genótipo rs4444903 [AA] é um biomarcador preditivo ou prognóstico. rs16260 (CDHl):

[00466] A proteína de adesão celular Cadherinl (E- cadherin) é um membro da superfamília de caderina dependente de cálcio. A função de perda foi desenvolvida na progressão do câncer. O alelo rsl 6260 [A] no promotor CDHl foi demonstrado para reduzir a eficiência transcricional do caderina. Além disso, o alelo -160A de CDHl foi descrito como um fator de susceptibilidade para o desenvolvimento de câncer gástrico.

[00467] Neste estudo, portadores do genótipo rsl 6260 [AA] estão estatisticamente representados em respondedores FAS. Isto pode sugerir que o genótipo [AA] seja um biomarcador putativo preditivo. rs11615 (ERCC1) e rs396991 (FCGR3A):

[00468] Os dois SNPs rsl1615 (ERCCl, proteína de reparação de DNA "reparação por excisão por grupo complementação 1-cruzado") e rs36991 (FCGR3A, baixo afinidade a imunoglobulina para a região do receptor Fc gama III-A), ambos mostram uma correlação de genótipos (ERCCl [TT], FCGR3A [TG] e [TT]) com PFS prolongada. Isto pode sugerir que esses SNPs sejam biomarcadores preditivos ou prognósticos.

Claims (9)

1. Método de avaliação (i) se um paciente com câncer com um tumor antígeno- positivo é um respondendor ao tratamento com um anticorpo contra o antígeno tumoral, e / ou (j) ) se um paciente com câncer com um tumor antígeno- positivo tumoral, irá experimentar sobrevivência livre de evolução, em que o antígeno tumoral é a proteína CLDN18.2 caracterizado pelo fato de que o referido método compreende a determinação do genótipo de um ou mais polimorfismos de um único nucleotídeo selecionados a partir do grupo consistindo em MUC1 rs4072037, IL-10 rs1800896, DNMT3A rs1550117, SMAD4 rs12456284, EGF rs4444903, CDH1 rs16260 e ERCC1 rs11615 numa amostra obtida a partir do paciente, em que (k) a presença do genótipo homozigoto MUC1 rs4072037 [AA] indica um risco reduzido de um paciente com câncer não ser um respondedor ao tratamento com o anticorpo e / ou um risco reduzido de um paciente com câncer não experimentar sobrevida livre de evolução; (l) a presença do genótipo homozigoto MUC1 rs4072037 [GG] indica um aumento do risco de um paciente com câncer não ser um respondedor ao tratamento com o anticorpo e / ou um aumento do risco de um paciente com câncer não experimentar sobrevivência livre de evolução; (m) a presença do genótipo homozigoto IL-10 rs1800896 [GG] indica um risco reduzido de um paciente com câncer não ser um respondedor ao tratamento com o anticorpo e / ou uma redução do risco de um paciente com câncer não tendo uma sobrevivência livre de evolução; (n) a presença do genótipo heterozigótico DNMT3A rs1550117 [GA] indica um risco reduzido de um paciente com câncer não ser um respondedor ao tratamento com o anticorpo e / ou uma redução do risco de um paciente com câncer não experimentar sobrevivência livre de evolução; (o) a presença do genpotipo heterozigótico SMAD4 rs12456284 [GA] indica um risco reduzido de um paciente com câncer não ser um respondedor ao tratamento com o anticorpo e / ou uma redução do risco de um paciente com câncer não experimentar sobrevivência livre de evolução; (p) a presença de genótipos homozigotos EGF rs4444903 [AA] indica um risco reduzido de um paciente com câncer não ser um respondedor ao tratamento com o anticorpo e / ou uma redução do risco de um paciente com câncer não experimentar sobrevivência livre de evolução; (q) a presença do genótipo homozigótico CDH1 rs16260 [AA] indica um risco reduzido de um paciente com câncer não ser um respondedor ao tratamento com o anticorpo e / ou uma redução do risco de um paciente com câncer não experimentar sobrevivência livre de evolução; e (r) a presença do genótipo homozigoto ERCC1 rs11615 [TT] indica um risco reduzido de um paciente com câncer não ser um respondedor ao tratamento com o anticorpo e / ou uma redução do risco de um paciente com câncer não experimentar sobrevida livre de evolução.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o anticorpo atua através do recrutamento do sistema imune do paciente para destruir célula tumorais, preferencialmente através de citotoxicidade mediada por células dependentes de anticorpos (ADCC) e/ou citotoxicidade dependente de complemento (CDC).

3. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 17 ou 51 ou um seu fragmento e uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID. NO: 24 ou um seu fragmento.

4. Uso de um anticorpo que se liga a CLDN18.2 caracterizado pelo fato de que é para a preparação de um medicamento para utilização no tratamento de um paciente com câncer possuindo um tumor o qual é positivo para CLDN18.2, em que o paciente configura-se por ter um risco reduzido de não ser um respondedor ao tratamento com o anticorpo, em que o risco reduzido é avaliado através da determinação do genótipo para um ou mais polimorfismos de um único nucleotídeo selecionados a partir do grupo que consiste em MUC1 rs4072037, IL-10 rs1800896, DNMT3A rs 1550117, SMAD4 rs 12456284, EGF rs4444903, CDH1 rs16260 e ERCC1 rs11 obtido de uma amostra do paciente, em que o risco reduzido é indicado em uma amostra de tumor obtida do paciente pela (a) a presença do genótipo homozigótico rs4072037 [AA] de MUC1; (b) a presença do genótipo IL-10 rs1800896 [GG] homozigótico; (c) a presença do genótipo heterozigótico DNMT3A rs1550117 [GA]; (d) a presença do genótipo heterozigótico SMAD4 rs12456284 [GA]; (e) a presença do genótipo rs4444903 [AA] homozigótico de EGF; (f) a presença do genótipo CDH1 rs16260 [AA] homozigótico; e (g) a presença do genótipo homozigótico ERCC1 rs11615 [TT.

5. Uso, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que o referido método compreende avaliar se o paciente com câncer é um respondedor ao tratamento com um anticorpo pelo método conforme definido por qualquer uma das reivindicações 1 a 3 e tratar o paciente com câncer com o anticorpo se o paciente tiver um risco reduzido, por não ser um respondedor ao tratamento com o anticorpo.

6. Uso, de acordo com a reivindicação 4 ou 5, caracterizado pelo fato de que o regime de tratamento compreende um tratamento com um conjugado anticorpo-fármaco e em que o anticorpo é dirigido contra o antígeno tumoral, o conjugado anticorpo-fármaco é preferencialmente um anticorpo acoplado a uma porção radioativa, quimioterápica ou toxina ou em que o conjugado anticorpo-fármaco é um anticorpo acoplado a um composto citostático ou citotóxico.

7. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3 ou o uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 6, caracterizado pelo fato de que o tumor é um tumor sólido.

8. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3 e 7 ou uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 7, caracterizado pelo fato de que o tumor é um tumor gastroesofágico.

9. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, 7 e 8 ou o uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 8, caracterizado pelo fato de que o tumor é um adenocarcinoma avançado do estômago ou do esôfago inferior.