BR112017016991B1 - Partículas de n-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4- metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2h)-carboxamida, seu uso e seu processo de preparação, aglomerado, e composição farmacêutica - Google Patents

Abstract

PARTÍCULAS DE N-(5-CIANO-4-((2-METOXIETIL)AMINO)PIRIDIN-2-IL)-7-FORMIL-6- ((4-METIL-2-OXOPIPERAZIN-1-IL)METIL)-3,4-DI-HIDRO-1,8-NAFTIRIDINA-1(2H)-CARBOXAMIDA. A presente invenção refere-se a partículas de N-(5-ciano-4-((2-metoxietil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4- metil-2-oxopiperazin-1-il) metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida, a um processo de preparar as referidas partículas, a composições farmacêuticas compreendendo as referidas partículas e a método de tratar cânceres usando as referidas composições farmacêuticas.

Description

Campo da Invenção

[001] A presente invenção se refere a partículas de N-(5-ciano-4- ((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1- il) metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida, a um processo de preparar as referidas partículas e o uso das referidas partículas em composições farmacêuticas.

Antecedente da Invenção

[002] N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4- metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carbo- xamida é um inibidor de FGFR4 seletivo e potente que é descrito em pedido de patente PCT/IB2014/065585. É potencialmente útil no tratamento de doenças mediadas por FGFR4, tal como câncer, em particular tal como câncer de fígado.

[003] O PCT/IB2014/065585 descreve um método de preparar N- (5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2- oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma livre e na forma de sal farmaceuticamente aceitável.

[004] Há uma necessidade contínua durante desenvolvimento de fármaco para desenvolver novos processos apontados em melhorar as propriedades e/ou características de uma substância de fármaco. Por exemplo, a substância de fármaco deveria estar em uma forma que é fácil de controlar e processar em um produto de fármaco. Tais propriedades ideais de uma substância de fármaco deveriam ser obtidas por processos que são escaláveis e reproduzíveis.

Sumário da Invenção

[005] A invenção fornece partículas de N-(5-ciano-4-((2-metóxi- etil) amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4- di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida em forma de sal de ácido cítrico e um processo para preparar as referidas partículas. As partículas podem ser usadas na fabricação de composições farmacêuticas e usadas em métodos para tratar, prevenir ou melhorar cânceres. O processo descrito aqui permite preparar partículas de N- (5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2- oxopiperazin-1-il) metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida tendo propriedades benéficas em termos de facilidade de processabilidade. As partículas melhoraram propriedades de fluxo comparadas àquelas obtidas pelo processo descrito no PCT/IB2014/065585 como mostrado em mais detalhes na descrição detalhada, a seção experimental e as figuras fornecidas aqui.

[006] Várias modalidades da invenção são descritas aqui.

[007] Fornecido aqui é um processo para a preparação de partículas de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6- ((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)- carboxamida na forma de sal de ácido cítrico. O processo compreende as etapas de: a. Dissolver N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)- 7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridi- na-1(2H)-carboxamida em ácido propiônico; b. Adicionar ácido cítrico à solução obtida na etapa a) para obter uma suspensão compreendendo N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil) amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di- hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico; e c. Isolar as partículas de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil) amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di- hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico da suspensão obtida na etapa b.

[008] Em uma modalidade, a invenção fornece partículas de N- (5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopi- perazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico obtenível pelo processo descrito aqui.

[009] Fornecido aqui são da mesma forma partículas de N-(5- ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopipe- razin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico tendo um tamanho de partícula mediano (x50) dentre 200 e 300 mícrons.

[0010] Em outra modalidade, a invenção fornece partículas de N- (5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopi- perazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico tendo uma distribuição de tamanho de partícula x10 dentre 5 e 10 mícrons.

[0011] Em outra modalidade, a invenção fornece partículas de N- (5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopi- perazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico tendo uma distribuição de tamanho de partícula x90 dentre 400 e 500 mícrons.

[0012] Em outra modalidade, a invenção fornece partículas primárias de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6- ((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)- carboxamida na forma de sal de ácido cítrico tendo uma distribuição de tamanho de partícula x50 dentre 10 e 20 mícrons.

[0013] Em outra modalidade, a invenção fornece partículas primárias de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6- ((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)- carboxamida na forma de sal de ácido cítrico tendo uma distribuição de tamanho de partícula x10 dentre 1 e 5 mícrons.

[0014] Em outra modalidade, a invenção fornece partículas primárias de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6- ((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)- carboxamida na forma de sal de ácido cítrico tendo uma distribuição de tamanho de partícula x90 dentre 50 e 70 mícrons.

[0015] Em outra modalidade, a invenção fornece partículas primárias cristalinas de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)- 7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8- naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico tendo uma forma cristalina colunar.

[0016] Em outra modalidade, a invenção fornece um aglomerado compreendendo partículas primárias de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil) amino) piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di- hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico, o aglomerado tendo um tamanho mediano (x50) dentre 300 e 400 mícrons.

[0017] Em outra modalidade, a invenção se refere ao uso de partículas de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6- ((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)- carboxamida na forma de sal de ácido cítrico como descrito aqui na fabricação de uma composição farmacêutica compreendendo N-(5- ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2- oxopiperazin-1-il) metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico e opcionalmente um ou mais veículo(s) farmaceuticamente aceitável(is).

[0018] Em outra modalidade, a invenção se refere a uma composição farmacêutica compreendendo partículas de N-(5-ciano-4- ((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1- 11) metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico como descrito aqui e opcionalmente um ou mais veículo(s) farmaceuticamente aceitável(is).

[0019] Em outra modalidade, a composição farmacêutica descrita aqui é para uso como um medicamento. Em uma modalidade particular, é para uso no tratamento de câncer. Mais particularmente, é para uso no tratamento de uma indicação selecionada de câncer do fígado, câncer de mama, glioblastoma, câncer de próstata, rabdomiossarcoma, câncer gástrico, câncer ovariano, câncer de pulmão, câncer de cólon. Ainda mais particularmente, é para uso no tratamento de câncer do fígado.

[0020] Em uma modalidade, a invenção se refere a um método de tratar câncer compreendendo administrar a um indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz da composição farmacêutica como descrito aqui.

[0021] Em uma modalidade, a invenção se refere ao uso de uma composição farmacêutica como descrito aqui na fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer. Mais particularmente, é para o tratamento de uma indicação selecionada de câncer do fígado, câncer de mama, glioblastoma, câncer de próstata, rabdomiossarcoma, câncer gástrico, câncer ovariano, câncer de pulmão, câncer de cólon. Ainda mais particularmente, é para o tratamento de câncer do fígado.

Breve Descrição das figuras

[0022] Figura 1 é uma imagem de microscópio de elétron de varredura (SEM) das partículas obtidas usando um processo da invenção (escala 20 mícrons). A imagem foi tirada usando um aparato de SEM de Zeiss equipado com um microscópio Supra 40. Mostra uma partícula primária tendo uma forma cristalina colunar.

[0023] Figura 2 é um micrógrafo de elétron de varredura (SEM) das partículas obtidas usando o processo descrito em PCT/IB2014/065585 (escala 20 mícrons). A imagem foi tirada usando um aparato de SEM de Zeiss equipado com um microscópio Supra 40. Mostra aglomerações de partículas primárias em forma de agulha.

[0024] Figura 3 é um micrógrafo de elétron de varredura (SEM) das partículas obtidas usando um processo da invenção (escala 100 mícrons). A imagem foi tirada usando um aparato de SEM de Zeiss equipado com um microscópio Supra 40. A figura mostra um aglomerado de partículas primárias. No aglomerado, as partículas primárias tendo uma forma cristalina colunar são visíveis.

[0025] Figura 4 é um micrógrafo de elétron de varredura (SEM) das partículas obtidas usando um processo da invenção (escala 500 mícrons). A imagem foi tirada usando um aparato de SEM de Zeiss equipado com um microscópio Supra 40. A figura mostra aglomerados de partículas primárias.

[0026] Figura 5 mostra um revestimento do XRPD das partículas obtidas usando um processo da invenção e o XRPD das partículas obtido usando o processo descrito em PCT/IB2014/065585. O revestimento mostra a mesma assinatura para ambas as partículas da invenção e partículas obtidas usando o processo descrito em PCT/IB2014/065585.

[0027] Figura 6 mostra a distribuição de tamanho de partícula para partículas obtidas usando o processo da invenção. A figura mostra a densidade de distribuição e as curvas de distribuição cumulativas como uma função de tamanho de partícula. Mostra que as partículas contêm uma mistura de partículas primárias tendo uma faixa de tamanho de partícula de 0,5 a 150 mícrons e aglomerados tendo uma faixa de tamanho de partícula de 150 a 875 mícrons.

[0028] Figura 7 mostra a distribuição de tamanho de partícula para partículas obtidas usando o processo descrito em PCT/IB2014/065585. A figura mostra a densidade de distribuição e as curvas de distribuição cumulativa como uma função de tamanho de partícula. Mostra que as partículas têm uma faixa de tamanho de partícula de cerca de 0,5 a 30 mícrons.

[0029] Figura 8 é o SEM (200 mícrons) das partículas obtidas pelo processo da invenção etapa a) e b), isto é antes da etapa de isolamento. A imagem foi tirada com um microscópio Olympus BX51 (número de série SN8G30637) equipado com uma câmera DP25 (número de série SN8K08782). O software usado para imageamento é StreamStart. A imagem mostra partículas cristalinas tendo um hábito cristalino colunar.

[0030] Figura 9 mostra a energia de fluxo básico das partículas da invenção como descrito nos exemplos 1 e 1a e de partículas obtidas usando o processo descrito em PCT/IB2014/065585 (exemplo de referência 1). O gráfico mostra que as partículas da invenção requerem menos energia para fluir comparado aqueles obtidos pelo processo descrito em PCT/IB2014/065585 (exemplo de referência 1), indicando fluidez melhorada.

[0031] Figura 10 mostra a porcentagem de compressibilidade como uma função de tensão normal aplicada das partículas da invenção como descrito nos exemplos 1 e 1a e de partículas obtidas usando o processo descrito em PCT/IB2014/065585 (exemplo de referência 1). O gráfico mostra que as partículas da invenção têm uma porcentagem de compressibilidade mais alta, sugerindo que carga de fármaco mais alta no produto de fármaco final poderia ser obtida usando-se as partículas da invenção.

[0032] Figura 11 mostra os gráficos da tensão de cisalhamento como uma função da tensão normal aplicada das partículas da invenção como descrito nos exemplos 1 e 1a e de partículas obtidas usando o processo descrito em PCT/IB2014/065585 (exemplo de referência 1). Isto permite calcular um ângulo de fricção de parede. O gráfico mostra que as partículas da invenção têm um ângulo de fricção de parede mais baixo comparado aqueles obtidos usando o processo descrito em PCT/IB2014/065585 (exemplo de referência 1) indicando que as partículas da invenção exibem comportamento menos pegajoso a superfícies de metal e desse modo melhoraram processabilidade.

Descrição detalhada da invenção Definições

[0033] Ao definir a concentração de um composto em uma solução, o termo "%" se refere ao % em p/p, isto é o peso do composto sobre o peso da solução (isto é composto + solvente).

[0034] A menos que de outra maneira definido, o termo "partículas" no plural quando aqui usado se refere a um volume de partículas. A menos que de outra maneira definido, o termo "cristais" no plural quando aqui usado se refere a um volume de cristais.

[0035] O termo "partículas" é pretendido abranger partículas primárias e aglomerados.

[0036] Quando aqui usado, o termo "partícula primária" se refere a uma entidade singular. Partículas primárias da invenção podem ser vistas, por exemplo, na Figura 1 e 8.

[0037] Quando aqui usado, o termo "aglomerado" se refere a um agrupamento de partículas primárias. Quando aqui usado, o termo "aglomerado" não é pretendido ser limitante sobre a natureza das ligações entre as partículas primárias e pode ser usado alternadamente, por exemplo, com o termo "agregados."

[0038] Tamanho de partícula é determinado pela distribuição de tamanho de partícula cumulativa de tamanho inferior em volume como medido por difração de luz a laser. Por exemplo, o valor de tamanho de partícula mediano (x50 ou d50) indica o tamanho sob o qual 50% em peso das partículas na amostra existem. Como um exemplo, indica um valor de x50 de 10 mícrons que 50% em peso das partículas têm um tamanho abaixo de 10 mícrons.

[0039] Similarmente um tamanho de partícula de x10 ou d10 indica o tamanho sob o qual 10% em peso das partículas na amostra existem.

[0040] Similarmente um tamanho de partícula de x90 ou d90 indica o tamanho sob o qual 90% em peso das partículas na amostra existem.

[0041] É entendido que os tamanhos de partícula determinados aqui estão sujeitos a variações dependendo do aparato e método usados. Uma pessoa versada entenderia que estes valores não são valores absolutos e podem variar em cerca de +/- 10%.

[0042] Na presente descrição, os tamanhos de partícula são medidos por difração de luz a laser. O aparato usou para difração de luz a laser é um aparato de Sympatec Helos. Detalhes do aparato usado e medidas são determinados nos exemplos 3 e 4.

[0043] Quando aqui usado, a abreviação "mícrons"corresponde a mícrons.

[0044] Quando aqui usado, o termo "colunar" quando referindo-se à forma cristalina das partículas da invenção descreve uma forma cristalina como mostrada por exemplo na Fig.1. Uma forma cristalina "colunar"é um cristal de crescimento tridimensional lapidado. Uma forma cristalina colunar pode da mesma forma ser definida como uma ripa. É distinguível de uma forma cristalina de agulha (ou cristal acicular) onde o crescimento cristalino é unidirecional.

[0045] Quando aqui usado, o termo "veículo farmaceuticamente aceitável"inclui qualquer e todos os solventes, meios de dispersão, revestimentos, tensoativos, antioxidantes, preservativos (por exemplo, agentes antibacterianos, agentes antifúngicos), agentes isotônicos, agentes de atraso de absorção, sais, preservativos, estabilizadores de fármaco, aglutinantes, excipientes, agentes de desintegração, lubrificantes, agentes adoçantes, agentes flavorizantes, tinturas, e similar e combinações dos mesmos, como seria conhecido por aqueles versados na técnica (veja, por exemplo, Remington’s Pharmaceutical Sciences, 18aEd. Mack Printing Company, 1990, pp. 1289-1329). Exceto na medida em que qualquer veículo convencional é incompatível com o ingrediente ativo, seu uso nas composições terapêuticas ou farmacêuticas é contemplado.

[0046] O termo "uma quantidade terapeuticamente eficaz" de um composto da presente invenção se refere a uma quantidade do composto da presente invenção que extrairá a resposta biológica ou médica de um indivíduo, por exemplo, redução ou inibição de uma enzima ou uma atividade de proteína, ou melhorar sintomas, aliviar condições, retardar ou atrasar progressão de doença, ou prevenir uma doença, etc. Em uma modalidade não limitante, o termo "uma quantidade terapeuticamente eficaz" se refere à quantidade do composto da presente invenção que, quando administrado a um indivíduo, é eficaz para (1) pelo menos parcialmente aliviar, inibir, prevenir e/ou melhorar uma condição, ou um distúrbio ou uma doença (i) mediado por FGFR4, ou (ii) associado com atividade de FGFR4, ou (iii) caracterizado por atividade (normal ou anormal) de FGFR4, ou (2) reduzir ou inibir a atividade de FGFR4; ou (3) reduzir ou inibir a expressão de FGFR4. Em outra modalidade não limitante, o termo "uma quantidade terapeuticamente eficaz" se refere à quantidade do composto da presente invenção que, quando administrou a uma célula, ou um tecido, ou um material biológico não celular, ou um meio, é pelo menos parcialmente eficaz para reduzir ou inibir a atividade de FGFR4.

[0047] Quando aqui usado, o termo "indivíduo"se refere a um animal. Tipicamente o animal é um mamífero. Um indivíduo da mesma forma se refere, por exemplo, a primatas (por exemplo, humanos, macho ou fêmea), vacas, ovelha, cabras, cavalos, cachorros, gatos, coelhos, ratos, camundongos, peixe, pássaros e similar. Em certas modalidades, o indivíduo é um primata. Em ainda outras modalidades, o indivíduo é um humano.

[0048] Quando aqui usado, o termo "inibir", "inibição"ou "inibindo" se refere à redução ou supressão de uma determinada condição, sintoma, ou distúrbio, ou doença, ou uma diminuição significante na atividade de linha de base de uma atividade biológica ou processo.

[0049] Quando aqui usado, o termo "tratar", "tratando" ou "tratamento" de qualquer doença ou distúrbio se refere em uma modalidade, para melhorar a doença ou distúrbio (isto é, reduzindo ou interrompendo ou reduzindo o desenvolvimento da doença ou pelo menos um dos sintomas clínicos do mesmo). Em outra modalidade "tratar", "tratando" ou "tratamento" se refere a aliviar ou melhorar pelo menos um parâmetro físico que inclui aqueles que podem não ser discerníveis pelo paciente. Em ainda outra modalidade, "tratar", "tratando" ou "tratamento" se refere a modular a doença ou distúrbio, fisicamente, (por exemplo, estabilização de um sintoma discernível), fisiologicamente, (por exemplo, estabilização de um parâmetro físico), ou ambos. Em ainda outra modalidade, "tratar", "tratando" ou "tratamento" se refere a prevenir ou atrasar o início ou desenvolvimento ou progressão da doença ou distúrbio.

[0050] Quando aqui usado, um indivíduo está "em necessidade de" um tratamento se tal indivíduo beneficiasse biologicamente, medicalmente ou em qualidade de vida de tal tratamento.

[0051] Quando aqui usado, o termo "um,""uma,""o" e termos similares usados no contexto da presente invenção (especialmente no contexto das reivindicações) serão interpretados para abranger igualmente o singular e plural a menos que de outra maneira indicado aqui ou claramente contradito pelo contexto.

[0052] A invenção se refere a um processo para a preparação de partículas de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6- ((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)- carboxamida na forma de sal de ácido cítrico. N-(5-ciano-4-((2-metóxi- etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4- di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico tem a seguinte estrutura:

[0053] O processo compreende etapa a) dissolver N-(5-ciano-4- ((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1- il) metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma livre em ácido propiônico. N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7- formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina- 1(2H)-carboxamida na forma livre pode ser obtido por um processo descrito por exemplo no exemplo 1 (etapas 1 a 14). A concentração de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2- oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma livre em ácido propiônico pode estar entre 5-15% (em peso), preferivelmente 5-15%. Em uma modalidade, a concentração de N-(5- ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopipe- razin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma livre em ácido propiônico é cerca de 5-10% em peso. Em uma modalidade, a concentração de N-(5-ciano-4-((2-metóxi- etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4- di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma livre em ácido propiônico é cerca de 10-15% em peso. Em uma modalidade, é cerca de 12% em peso. Em uma modalidade, é cerca de 13% em peso. O ácido propiônico usado no processo presente é preferivelmente puro. Por "puro"é significado que o ácido propiônico é pelo menos 99% puro. Preferivelmente, ácido propiônico é pelo menos 99,5% puro. Tipicamente, a temperatura usada para dissolver N-(5-ciano-4-((2- metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1- il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma livre em ácido propiônico está entre 50°C e 80°C, preferivelmente cerca de 70°C. O tempo necessário para dissolução completa depende da temperatura usada. Tipicamente, a cerca de 70°C, o tempo necessário está entre 10-30 minutos, preferivelmente cerca de 20 minutos. Dissolução completa pode ser facilmente determinada por uma pessoa versada, por exemplo, por inspeção visual.

[0054] Na etapa b) do processo da invenção, ácido cítrico é adicionado à solução obtida na etapa a). Ácido cítrico pode ser adicionado como um sólido, como uma solução ou como uma suspensão. Quando adicionado como uma solução ou suspensão, a concentração pode variar de 1 a 50% em p/p. Tipicamente, é adicionado como uma solução ou suspensão. O solvente usado para a solução de ácido cítrico é tipicamente um solvente em que N-(5-ciano- 4-((2-metóxi-etil)amino) piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin- 1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico é pobremente solúvel. Tal solvente pode ser selecionado por exemplo, a partir de heptano, éter metil terc-butílico, n-hexano, acetato de etila, acetato de n-propila, acetona, acetonitrila, tolueno, água ou misturas dos mesmos. Em uma modalidade, o solvente usado para a solução/suspensão de ácido cítrico é acetona. Em uma modalidade, o solvente usado para solução/suspensão de ácido cítrico é acetato de etila. Em uma modalidade, ácido cítrico é adicionado à solução obtida na etapa a) como uma solução em acetona. Em uma modalidade, a concentração de ácido cítrico em acetona está entre 1-50%, preferivelmente entre 20-30%, mais preferivelmente cerca de 23%. Em outra modalidade, a concentração de ácido cítrico em acetona está entre 1-10%, preferivelmente entre 15%, mais preferivelmente cerca de 2,5%.

[0055] Em uma modalidade, ácido cítrico é adicionado à solução obtida na etapa a) como uma solução em acetato de etila. Em uma modalidade, a concentração de ácido cítrico em acetato de etila está entre 1-10%, preferivelmente 1-5%, mais preferivelmente cerca de 1,3%.

[0056] A quantidade de ácido cítrico adicionado durante o processo depende da esteiquiometria desejada do N-(5-ciano-4-((2- metóxi-etil) amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1- il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico. Em uma modalidade preferida, a esteiquiometria desejada de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6- ((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)- carboxamida na forma de sal de ácido cítrico é 1:1 (ácido cítrico: N-(5- ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2- oxopiperazin-1-il) metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)- carboxamida). Em outra modalidade, a esteiquiometria desejada de N- (5-ciano-4-((2-metóxi-etil) amino) piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2- oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico é 0,5:1 (ácido cítrico: N-(5-ciano-4-((2- metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1- il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida). Um técnico versado pode determinar a quantidade de ácido cítrico requerida para obter a esteiquiometria desejada. A quantidade de ácido cítrico requerida pode ser adicionada imediatamente ou em várias alíquotas. Em uma modalidade, ácido cítrico é adicionado imediatamente. Em outra modalidade, ácido cítrico é adicionado em várias alíquotas. Cada alíquota pode variar como a forma ou pode ser a mesma. Por exemplo, em uma alíquota, ácido cítrico pode ser adicionado na forma sólida. Em outra alíquota, ácido cítrico pode ser adicionado como uma solução. Em outra alíquota, ácido cítrico pode ser adicionado como uma suspensão. Cada alíquota de ácido cítrico pode ser da mesma concentração ou de concentração diferente. O solvente usado para cada alíquota de ácido cítrico quando adicionado como uma solução ou uma suspensão pode ser o mesmo ou diferente. As alíquotas podem ser adicionadas durante um certo tempo entre 1 segundo a 10 horas. A temperatura em que o ácido cítrico é adicionado pode variar de 20-80 °C. Preferivelmente, a temperatura em que o ácido cítrico é adicionado é cerca de 55 °C. Sob adição de ácido cítrico, uma suspensão compreendendo N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino) piridin- 2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8- naftiridina-1(2H)-carboxamida em forma de sal de ácido cítrico é formada.

[0057] Em uma modalidade, há uma etapa adicional de semear a suspensão obtida na etapa b) com uma suspensão de semente compreendendo N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil- 6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)- carboxamida na forma de sal de ácido cítrico. A suspensão de semente compreende partículas de N-(5-ciano-4-((2-metóxi- etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4- di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico obtida por um processo da invenção. Preferivelmente, as partículas de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6- ((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)- carboxamida na forma de sal de ácido cítrico usada na suspensão de semente tem uma esteiquiometria de 1:1 (ácido cítrico: N-(5-ciano-4- ((2-metóxi-etil) amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1- il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida). Para a suspensão de semente, as partículas de N-(5-ciano-4-((2-metóxi- etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4- di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico estão suspensas em um solvente tal como acetona. A suspensão de semente pode ser adicionada entre as adições de alíquotas de ácido cítrico ou depois que o total de ácido cítrico requerido foi adicionado à mistura de reação. A suspensão de semente tipicamente compreende cerca de 0,005-5%, preferivelmente 0,01-1% partículas de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil) amino)piridin-2-il)-7- formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina- 1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico obtida por um processo da invenção. Em uma modalidade, a suspensão de semente compreende 0,5% partículas de N-(5-ciano-4-((2-metóxi- etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il) metil)-3,4- di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico obtida por um processo da invenção. A temperatura da suspensão de semente é tipicamente cerca de 20 °C.

[0058] A suspensão obtida na etapa b) do processo da invenção é tipicamente agitada durante um período de tempo que permite N-(5- ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopipe- razin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico para cristalizar a solução. Tipicamente, a suspensão pode ser agitada durante 1 minuto a 20 horas. A temperatura da suspensão resultante pode ser permitida cair a cerca de 20 °C, se as etapas anteriores fossem realizadas sob temperaturas mais altas do que 20°C. Figura 8 mostra uma imagem de microscópio das partículas primárias de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2- il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8- naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico obtidas depois da etapa b). Na Figura 8, as partículas primárias de N-(5-ciano- 4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin- 1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico estão em suspensão no meio de reação.

[0059] Etapa c) no processo da invenção inclui isolar as partículas de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2- oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico da suspensão obtida na etapa anterior b). Isto é tipicamente feito por filtração, lavagem e secagem. Desse modo, em uma outra modalidade, etapa c) no processo da invenção inclui: etapa c1) filtrar a suspensão obtida na etapa b) para produzir partículas de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7- formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina- 1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico; etapa c2) lavar as partículas obtidas depois da etapa de filtração c1); e etapa c3) secar as partículas obtidas na etapa c2).

[0060] Filtração pode ser feita usando técnicas e aparatos padrões. Por exemplo, filtração pode ser feita usando um filtro de vidro/sintetizador. Filtração pode ser feita sob vácuo, por exemplo, sob 50 kPa (500mbar). Filtração pode ser feita em temperatura ambiente. Filtração pode ser feita sob uma atmosfera de nitrogênio.

[0061] Lavagem podem ser feita com um sistema de solvente ou com vários sistemas de solvente. Por exemplo, em uma modalidade, o sistema de solvente usado pode ser uma mistura de 1:1 de ácido propiônico e acetona em temperatura ambiente. Em outra modalidade, o sistema de solvente usado pode da mesma forma ser uma mistura de 1:1 de ácido propiônico e acetato de etila em temperatura ambiente. Em uma modalidade, o sistema de solvente usado pode da mesma forma ser acetona apenas em temperatura ambiente. Em uma modalidade, uma primeira etapa de lavagem é realizada com uma mistura de 1:1 de ácido propiônico e acetona em temperatura ambiente seguido por uma segunda etapa de lavagem com acetona apenas em temperatura ambiente. Em uma modalidade, uma primeira etapa de lavagem é realizada com uma mistura de 1:1 de ácido propiônico e acetato de etila em temperatura ambiente seguido por uma segunda etapa de lavagem com acetato de etila apenas em temperatura ambiente.

[0062] Tipicamente, secagem é realizada usando técnicas padrões. Por exemplo, as partículas resultantes podem ser secas em um forno, opcionalmente sob vácuo, por exemplo, sob cerca de 0,5 kPa (5mbar). Secagem pode ser realizada sob uma atmosfera de nitrogênio. Tipicamente, secagem é realizada a cerca de 40 °C.

[0063] A invenção abrange, em uma modalidade, as partículas obteníveis por um processo da invenção descrito aqui.

[0064] Os tamanhos de partícula das partículas da presente invenção são medidos usando difração de luz a laser como descrito no Exemplo 3 e estão portanto com base na distribuição de tamanho de partícula pesado em volume desse modo obtido. A distribuição de tamanho de partícula é representada por uma curva de distribuição cumulativa (de tamanho inferior) (Q3(x)%) e uma curva de distribuição de densidade (q3lg(x)) como é mostrado por exemplo na Figura 6.

[0065] Desse modo, em uma modalidade, a invenção se refere a partículas de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6- ((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)- carboxamida na forma de sal de ácido cítrico tendo uma distribuição de tamanho de partícula substancialmente igual aquela mostrada na Figura 6. Em uma modalidade, a invenção se refere a partículas de N- (5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2- oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico tendo uma curva de distribuição de tamanho inferior cumulativa substancialmente igual aquela mostrada na Figura 6. Em uma modalidade, a invenção se refere a partículas de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2- oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico tendo uma curva de distribuição de densidade substancialmente igual aquela mostrada na Figura 6.

[0066] Na presente invenção, os tamanhos de partícula incluindo valores de x10, x50 e x90 são preferivelmente medidos por difração de luz a laser.

[0067] Como pode ser visto no gráfico de distribuição de tamanho de partícula mostrado na Figura 6, as partículas obtidas usando o processo da invenção têm uma distribuição de tamanho de partícula cumulativa de tamanho inferior por volume tendo os seguintes valores característicos:

[0068] Desse modo, em uma modalidade, a invenção se refere a partículas de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6- ((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)- carboxamida na forma de sal de ácido cítrico tendo um valor de x10 dentre 5 e 10 mícrons. Preferivelmente, as partículas de N-(5-ciano-4- ((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1- il) metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico tem um valor de x10 de cerca de 7 mícrons. Em uma modalidade, o valor de x10 pode variar dentro +/- 10%. Desse modo, em uma modalidade, as partículas de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil) amino) piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di- hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico tem um valor de x10 dentre 4,5 e 11 mícrons. Como uma comparação, N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6- ((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)- carboxamida na forma de sal de ácido cítrico obtida pelo processo descrito em PCT/IB2014/065585 (exemplo de referência 1) tem um tamanho de partícula x10 ou d10 de cerca de 1 mícron (veja exemplo 4 e Figura 7).

[0069] Em uma modalidade, a invenção se refere a partículas de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2- oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico tendo um valor de x50 dentre 200 e 300 mícrons. Preferivelmente, as partículas de N-(5-ciano-4-((2- metóxi-etil) amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il) metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico tem um valor de x50 de cerca de 265 mícrons. Em uma modalidade, o valor de x50 pode variar dentro +/- 10%. Desse modo, em uma modalidade, as partículas de N-(5-ciano-4-((2-metóxi- etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4- di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico tem um valor de x50 dentre 180 e 330 mícrons. Como uma comparação, N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6- ((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)- carboxamida na forma de sal de ácido cítrico obtida pelo processo descrito em PCT/IB2014/065585 (exemplo de referência 1) tem um tamanho de partícula mediano (x50 ou d50) de cerca de 3 mícron (veja exemplo 4 e Figura 7).

[0070] Em uma modalidade, a invenção se refere a partículas de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2- oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico tendo um valor de x90 dentre 400 e 500 mícrons. Preferivelmente, as partículas de N-(5-ciano-4-((2- metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il) metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico tem um valor de x90 de cerca de 450 mícrons. Em uma modalidade, o valor de x10 pode variar dentro +/- 10%. Desse modo, em uma modalidade, as partículas de N-(5-ciano-4-((2-metóxi- etil)amino) piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4- di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico tem um valor de x90 dentre 360 e 550 mícrons. Como uma comparação, N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6- ((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)- carboxamida na forma de sal de ácido cítrico obtida pelo processo descrito em PCT/IB2014/065585 (exemplo de referência 1) tem um tamanho de partícula x90 ou d90 de cerca de 7 mícrons (veja exemplo 4 e Figura 7).

[0071] Da mesma forma, como pode ser visto a partir do gráfico mostrado na Figura 6, as partículas obtidas pelo processo da invenção podem ser diferenciadas em partículas primárias tendo uma faixa de tamanho de partícula de 0,5 a 150 mícrons e aglomerados tendo uma faixa de tamanho de partícula de 150 a 875 mícrons.

[0072] Desse modo, em uma modalidade, as partículas da invenção compreendem uma mistura de partículas primárias de N-(5- ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2- oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico e aglomerados de partículas primárias de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2- oxopiperazin-1-il) metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico.

[0073] As partículas primárias podem ser separadas a partir dos aglomerados por métodos conhecidos a uma pessoa de experiência na técnica tal como peneiração por exemplo.

[0074] Em uma modalidade, a invenção, portanto se refere a partículas primárias de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)- 7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8- naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico obtenível por um processo da invenção descrito aqui.

[0075] Em uma modalidade, a invenção se refere a partículas primárias de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6- ((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)- carboxamida na forma de sal de ácido cítrico tendo uma faixa de tamanho de partícula de 0,5 a 150 mícrons.

[0076] Em uma modalidade, a invenção se refere a partículas primárias de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6- ((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)- carboxamida na forma de sal de ácido cítrico tendo um tamanho de partícula mediano x50 dentre 10 e 20 mícrons, preferivelmente cerca de 15 mícrons (veja exemplo 3 e Figura 6). Em uma modalidade, o valor de x50 pode variar dentro +/- 10%. Desse modo, em uma modalidade, as partículas primárias de N-(5-ciano-4-((2-metóxi- etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4- di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico tem um tamanho de partícula mediano x50 dentre 9 e 22 mícrons.

[0077] Em uma modalidade, a invenção se refere a partículas primárias de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6- ((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)- carboxamida na forma de sal de ácido cítrico tendo um tamanho de partícula de x10 dentre 1 e 5 mícrons, preferivelmente cerca de 3 mícrons (veja exemplo 3 e Figura 6). Em uma modalidade, o valor de x10 pode variar dentro +/- 10%. Desse modo, em uma modalidade, as partículas de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6- ((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)- carboxamida na forma de sal de ácido cítrico tem um valor de x10 de 0,9 a 5,5 mícrons.

[0078] Em uma modalidade, a invenção se refere a partículas de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2- oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico tendo um tamanho de partícula x90 dentre 50 e 70 mícrons, preferivelmente cerca de 60 mícrons (veja exemplo 3 e Figura 6). Em uma modalidade, o valor de x90 pode variar dentro +/- 10%. Desse modo, em uma modalidade, as partículas de N- (5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2- oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico tem um tamanho de partícula x90 dentre 45 e 77 mícrons.

[0079] A diferença em tamanhos de partícula entre as partículas primárias da presente invenção e aquelas obtidas pelo processo descrito em PCT/IB2014/065585 pode da mesma forma ser vista nas imagens de microscopia de elétron de varredura mostradas na Figura 1 e Figura 2 respectivamente.

[0080] Em uma modalidade, as partículas primárias da presente invenção têm uma forma cristalina colunar. Isto pode ser visto na Figura 1 e Figura 8.

[0081] Em uma modalidade, a invenção se refere a uma partícula primária cristalina de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7- formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina- 1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico tendo uma forma cristalina colunar. Um forma cristalina colunar é descrita por exemplo na Figura 1. A forma cristalina das partículas primárias da presente invenção é diferente da forma cristalina das partículas obtidas usando o processo descrito em PCT/IB2014/065585 e mostrada na Figura 2.

[0082] Interessantemente, a forma polimórfica obtida usando o processo da invenção ou o processo descrito em PCT/IB2014/065585 para gerar N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4- metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)- carboxamida na forma de sal de ácido cítrico é idêntica, como pode ser visto na Figura 5.

[0083] A invenção da mesma forma se refere, em outro aspecto, a um aglomerado compreendendo partículas primárias de N-(5-ciano-4- ((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1- il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico como descrito aqui. Os aglomerados da invenção podem ser vistos nas Figuras 3 e 4.

[0084] Portanto, em uma modalidade, a invenção se refere a um aglomerado compreendendo partículas primárias de N-(5-ciano-4-((2- metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1- il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida em forma de sal de ácido cítrico, cujo aglomerado é obtenível por um processo da invenção descrito aqui.

[0085] Em outra modalidade, a invenção se refere a um aglomerado compreendendo partículas primárias de N-(5-ciano-4-((2- metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1- il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico, as partículas primárias tendo um tamanho de partícula mediano (x50 ou d50) de 10 a 20 mícrons, preferivelmente cerca de 15 mícrons. Em uma modalidade, o valor x50 das partículas primárias pode variar dentro +/- 10%. Desse modo, em uma modalidade, a invenção se refere a um aglomerado compreendendo partículas primárias de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6- ((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)- carboxamida na forma de sal de ácido cítrico tendo um tamanho de partícula mediano x50 dentre 9 e 22 mícrons. O próprio aglomerado tem um tamanho mediano (x50 ou d50) dentre 300 e 400 mícrons, preferivelmente cerca de 340 mícrons. Em uma modalidade, o valor x50 do aglomerado pode variar dentro +/- 10%. Desse modo, em uma modalidade, o aglomerado compreendendo partículas primárias de N- (5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2- oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico tem um tamanho mediano x50 dentre 270 e 440 mícrons.

[0086] Em outra modalidade, a invenção se refere a um aglomerado compreendendo partículas primárias de N-(5-ciano-4-((2- metóxi-etil) amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1- il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico, as partículas primárias tendo um tamanho de partícula (x10 ou d10) dentre 1 e 5 mícrons, preferivelmente cerca de 3 mícrons. Em uma modalidade, o valor x10 das partículas primárias pode variar dentro +/- 10%. Desse modo, em uma modalidade, a invenção se refere a um aglomerado compreendendo partículas primárias de N-(5- ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2- oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico tendo um valor de x10 de 0,9 a 5,5 mícrons. O próprio aglomerado tem um tamanho x10 ou d10 dentre 200 e 300 mícrons, preferivelmente cerca de 230 mícrons. Em uma modalidade, o valor x10 do aglomerado pode variar dentro +/- 10%. Desse modo, em uma modalidade, o aglomerado compreendendo partículas primárias de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)- 7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8- naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico tem um tamanho x10 dentre 180 e 330 mícrons.

[0087] Em outra modalidade, a invenção se refere a um aglomerado compreendendo partículas primárias de N-(5-ciano-4-((2- metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1- il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico tendo um tamanho de partícula x90 ou d90 dentre 50 e 70 mícrons, preferivelmente cerca de 60 mícrons. Em uma modalidade, o valor x90 das partículas primárias pode variar dentro +/10%. Desse modo, em uma modalidade, a invenção se refere a um aglomerado compreendendo partículas primárias de N-(5-ciano-4-((2- metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1- il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico tendo um tamanho de partícula x90 dentre 45 e 77 mícrons.

[0088] O próprio aglomerado tem um tamanho x90 ou d90 dentre 450 e 550 mícron, preferivelmente cerca de 490 mícrons. Em uma modalidade, o valor x90 do aglomerado pode variar dentro +/- 10%. Desse modo, em uma modalidade, o aglomerado compreendendo partículas primárias de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)- 7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8- naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico tem um tamanho x90 dentre 405 e 605 mícrons.

[0089] Sem desejar ser ligado por teoria, acredita-se que os aglomerados sejam formados sob secagem das partículas primárias obtidas na etapa b) do processo da invenção. A formação de aglomerado pode ser devido a solvente residual na superfície das partículas primárias que podem induzir a formação de aglomerado.

[0090] As partículas descritas aqui podem ser usadas na fabricação de uma composição farmacêutica. Portanto, a invenção se refere, em uma modalidade, a uma composição farmacêutica compreendendo partículas de N-(5-ciano-4-((2-metóxi- etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4- di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico como descrito aqui e opcionalmente um ou mais veículo(s) farmaceuticamente aceitável(is).

[0091] Em uma modalidade, a composição farmacêutica compreende partículas de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2- il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8- naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico e nenhum veículo(s) farmaceuticamente aceitável(is). Em uma modalidade, a composição farmacêutica compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de partículas de N-(5-ciano-4-((2-metóxi- etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4- di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico e um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis.

[0092] Em outro aspecto, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica compreendendo partículas de N-(5-ciano-4- ((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1- il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico e um veículo farmaceuticamente aceitável. Em uma outra modalidade, a composição compreende pelo menos dois veículos farmaceuticamente aceitáveis, tal como aqueles descritos aqui. Para propósitos da presente invenção, a menos que designado de outra maneira, solvatos e hidratos são geralmente considerados composições. Preferivelmente, veículos farmaceuticamente aceitáveis são estéreis. A composição farmacêutica pode ser formulada para rotinas particulares de administração tal como administração oral, administração parenteral, e administração retal, etc. Além disso, as composições farmacêuticas da presente invenção podem ser feitas em uma forma sólida (incluindo sem limitação cápsulas, comprimidos, pílulas, grânulos, pós ou supositórios), ou em uma forma líquida (incluindo sem limitação soluções, suspensões ou emulsões). As composições farmacêuticas podem ser submetidas a operações farmacêuticas convencionais tal como esterilização e/ou pode conter diluentes inertes convencionais, agentes lubrificantes, ou agentes de tamponamento, bem como adjuvantes, tal como preservativos, estabilizadores, agentes umectantes, emulsificadores e tampões, etc.

[0093] Tipicamente, as composições farmacêuticas são comprimidos ou cápsulas de gelatina compreendendo o ingrediente ativo juntamente com um ou mais de: a) diluentes, por exemplo, lactose, dextrose, sacarose, manitol, sorbitol, cellulose e/ou glicina; b) lubrificantes, por exemplo, sílica, talco, ácido esteárico, seu sal de magnésio ou cálcio e/ou polietilenoglicol; c) aglutinantes, por exemplo, silicato de alumínio de magnésio, pasta de amido, gelatina, tragacanto, metilcelulose, carboximetilcelulose sódica e/ou polivinilpirrolidona; d) disintegrantes, por exemplo, amidos, ágar, ácido algínico ou seu sal de sódio, ou misturas efervescentes; e e) absorventes, colorantes, sabores e adoçantes.

[0094] Em uma modalidade, a composição farmacêutica está na forma de uma cápsula compreendendo o ingrediente ativo. Em outra modalidade, a composição farmacêutica está na forma de uma cápsula compreendendo uma mistura do ingrediente ativo e excipientes. Comprimidos podem ser revestidos por película ou revestidos entéricos de acordo com métodos conhecidos na técnica.

[0095] Composições adequadas para administração oral incluem uma quantidade eficaz de um composto da invenção na forma de comprimidos, pastilhas, suspensões aquosas ou oleosas, pós dispersíveis ou grânulos, emulsão, cápsulas duras ou macias, ou xaropes ou elixires, soluções ou dispersão sólida. Composições pretendidas para uso oral são preparadas de acordo com qualquer método conhecido na técnica pela fabricação de composições farmacêuticas e tais composições podem conter um ou mais agentes selecionados a partir do grupo consistindo em agentes adoçantes, agentes flavorizantes, agentes colorantes e agentes preservantes para fornecer preparações farmaceuticamente elegantes e saborosas. Comprimidos podem conter o ingrediente ativo em mistura com excipientes farmaceuticamente aceitáveis não tóxicos que são adequados para a fabricação de comprimidos. Por exemplo, estes excipientes são diluentes inertes, tal como carbonato de cálcio, carbonato de sódio, lactose, fosfato de cálcio ou fosfato de sódio; agentes de granulação e desintegração, por exemplo, amido de milho, ou ácido algínico; agentes de ligação, por exemplo, amido, gelatina ou acácia; e agentes lubrificantes, por exemplo estearato de magnésio, ácido esteárico ou talco. Os comprimidos são não revestidos ou revestidos por técnicas conhecidas para atrasar a desintegração e absorção no trato gastrointestinal e desse modo fornecer uma ação contínua durante um período mais longo. Por exemplo, um material de atraso de tempo tal como monoestearato de glicerila ou diestearato de glicerila pode ser empregado. Formulações para uso oral podem ser apresentadas como cápsulas de gelatina duras em que o ingrediente ativo é misturado com um diluente sólido inerte, por exemplo, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio ou caulim, ou como cápsulas de gelatina macias em que o ingrediente ativo é misturado com água ou um médio de óleo, por exemplo, óleo de amendoim, óleo de parafina ou azeite de oliva.

[0096] As partículas da invenção oferecem propriedades benéficas em termos de facilidade de processabilidade. De fato, as propriedades de fluxo das partículas da invenção são melhoradas comparadas às propriedades de fluxo das partículas obtidas usando o processo descrito em PCT/IB2014/065585 (exemplo de referência 1).

[0097] Propriedades de fluxo podem ser quantificadas por reometria de pó. Reometria em pó permite medir vários parâmetros em substâncias de fármaco tal como energia de fluxo básica, porcentagem de compressibilidade, ângulo de fricção de parede. Como pode ser visto na Figura 9, as partículas da invenção diferem-se pelo menos significativamente na energia de fluxo básica comparada aquelas obtidas usando o processo descrito em PCT/IB2014/065585. Isto sugere que as partículas da invenção oferecem vantagens em termos de processabilidade. Da mesma forma, como pode ser visto na Figura 10, a porcentagem de compressibilidade é aumentada com as partículas da presente invenção comparadas àquelas obtidas pelo processo descrito em PCT/IB2014/065585. Isto sugere que carga de fármaco poderia ser melhorada na fabricação de produto de fármaco.

[0098] Além disso, como pode ser visto na Figura 11, o ângulo de fricção de parede difere-se entre as partículas da presente invenção e aquelas obtidas pelo processo descrito em PCT/IB2014/065585. Isto indica que as características de superfície das partículas são diferentes e sugerem que as partículas presentes exibem um comportamento menos pegajoso (menos interação com aço inoxidável). Isto fornece vantagens novamente em termos de processabilidade ao usar as partículas da presente invenção.

[0099] O uso das partículas presentes facilitam a fabricação de produto de fármaco, por exemplo carregamento de cápsula, produzindo rendimentos mais altos (comparados a usar as partículas obtidas pelo processo descrito em PCT/IB2014/065585). Além disso, usando as partículas presentes, pode ser possível reduzir a quantidade de excipientes necessária para a fabricação de produto de fármaco oferecendo vantagens em termos de custo, tempo e eficiência de processo. De fato, se uma substância de fármaco é pegajosa ou não flui facilmente, mais excipientes podem ser necessários para melhorar a manipulação da referida substância de fármaco.

[00100] A composição farmacêutica da presente invenção pode estar em dosagens unitárias de cerca de 1-1000 mg de ingrediente ativo para um indivíduo de cerca de 50-70 kg, ou cerca de 1-500 mg ou cerca de 1-250 mg ou cerca de 1-150 mg ou cerca de 0,5-100 mg, ou cerca de 1-50 mg de ingrediente ativo. Em uma modalidade, é cerca de 50mg de ingrediente ativo. Em outra modalidade, é cerca de 100mg de ingrediente ativo. Em outra modalidade, é cerca de 200mg de ingrediente ativo. Em outra modalidade, é cerca de 300mg de ingrediente ativo. A dosagem terapeuticamente eficaz da composição farmacêutica é dependente nas espécies do indivíduo, do peso corporal, idade e condição individual, do distúrbio ou doença ou da severidade dos mesmos sendo tratados. Um médico, clínico ou veterinário de experiência ordinária podem facilmente determinar a quantidade eficaz do ingrediente ativo necessário para prevenir, tratar ou inibir o progresso do distúrbio ou doença.

[00101] A atividade de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2- il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8- naftiridina-1(2H)-carboxamida é mostrada no exemplo 2.

[00102] Levando em conta a atividade de N-(5-ciano-4-((2-metóxi- etil) amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4- di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida como um inibidor de FGFR4, a composição farmacêutica da invenção pode ser útil no tratamento de condições que são mediadas pela atividade de proteínas de FGFR4, tal como câncer, e/ou que são responsivas (significando especialmente em uma maneira terapeuticamente benéfica) para inibição de FGFR4, mais especialmente uma doença ou distúrbio como mencionado aqui abaixo.

[00103] A composição farmacêutica da invenção pode ser útil no tratamento de câncer. Em particular, a composição farmacêutica da invenção pode ser útil no tratamento de uma indicação selecionada a partir de câncer do fígado, câncer de mama, glioblastoma, câncer de próstata, rabdomiossarcoma, câncer gástrico, câncer ovariano, câncer de pulmão, câncer de cólon.

[00104] Desse modo, como uma outra modalidade, a presente invenção fornece o uso de uma composição farmacêutica compreendendo partículas de N-(5-ciano-4-((2-metóxi- etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4- di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico como descrito aqui, em terapia. Em uma outra modalidade, a terapia é selecionada a partir de uma doença que pode ser tratada por inibição de FGFR4. Em outra modalidade, a doença é selecionada a partir da lista mencionada antes, adequadamente câncer do fígado.

[00105] Desse modo, como uma outra modalidade, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica compreendendo partículas de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6- ((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)- carboxamida na forma de sal de ácido cítrico como descrito aqui para uso em terapia. Em uma outra modalidade, a terapia é para uma doença que pode ser tratada por inibição de FGFR4. Em outra modalidade, a doença é selecionada a partir da lista mencionada antes, adequadamente câncer do fígado.

[00106] Em outra modalidade, a invenção fornece um método de tratar uma doença que é tratada por inibição de FGFR4 compreendendo administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica compreendendo partículas de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2- oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico como descrito aqui. Em uma outra modalidade, a doença é selecionada a partir da lista mencionada antes, adequadamente câncer do fígado.

[00107] Desse modo, como uma outra modalidade, a presente invenção fornece o uso de partículas de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil) amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di- hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico como descrito aqui, para a fabricação de um medicamento. Em uma outra modalidade, o medicamento é para tratamento de uma doença que pode ser tratada por inibição de FGFR4. Em outra modalidade, a doença é selecionada a partir da lista mencionada antes, adequadamente câncer do fígado.

[00108] A composição farmacêutica da invenção pode da mesma forma ser útil no tratamento de malignidades sólidas caracterizadas por expressão de FGFR4 positiva.

[00109] A composição farmacêutica da invenção pode da mesma forma ser útil no tratamento de malignidades sólidas caracterizadas por expressão de KLB positivo (beta-klotho).

[00110] A composição farmacêutica da invenção pode da mesma forma ser útil no tratamento de malignidades sólidas caracterizadas por expressão de FGF19 positivo.

[00111] A composição farmacêutica da invenção pode da mesma forma ser útil no tratamento de malignidades sólidas caracterizadas por FGFR4 positivo e expressão de KLB positivo.

[00112] A composição farmacêutica da invenção pode da mesma forma ser útil no tratamento de malignidades sólidas caracterizadas por FGFR4 positivo e expressão de FGF19 positivo.

[00113] A composição farmacêutica da invenção pode da mesma forma ser útil no tratamento de malignidades sólidas caracterizadas por FGFR4 positivo, KLB positivo e expressão de FGF19 positivo.

[00114] Qualquer expressão positiva em FGFR4, KLB e/ou FGF19 como descrito acima pode ser avaliada por métodos conhecidos à pessoa versada tal como por exemplo RT-qPCR, mancha do Oeste, ELISA, imunoistoquímica. Exemplos

[00115] Os seguintes exemplos são pretendidos ilustrar a invenção e não serão interpretados como sendo limitações a isso. Temperaturas são determinadas em graus Celsius. Se não mencionado de outra maneira, todas as evaporações são realizadas sob pressão reduzida, tipicamente entre cerca de 15 mm Hg e 100 mm Hg (= 20-133 mbar). A estrutura de produtos finais, intermediários e materiais de partida é confirmada pelos métodos analíticos padrões, por exemplo, microanálise e características espectroscópicas, por exemplo, MS, IR, RMN. Abreviações usadas são aquelas convencionais na técnica.

[00116] Todos os materiais de partida, blocos de construção, reagentes, ácidos, bases, agentes de desidratação, solventes, e catalisadores utilizados para sintetizar os compostos da presente invenção estão comercialmente disponíveis ou podem ser produzidos por métodos de síntese orgânica conhecidos a alguém de experiência ordinária na técnica. Além disso, os compostos da presente invenção podem ser produzidos por métodos de síntese orgânica conhecidos a alguém de experiência ordinária na técnica como mostrado nos seguintes exemplos. Abreviações Detalhes analíticos RMN: Medidas foram realizadas em um espectrômetro de Bruker UltrashieldTM 400 (400 MHz), Bruker UltrashieldTM 600 (600 MHz), 400 MHz DRX Bruker CryoProbe (400 MHz) ou um 500 MHz DRX Bruker CryoProbe (500 MHz) usando ou não trimetilsilano como um padrão interno. Trocas químicas (valores de d) são relatadas em ppm a jusante do tetrametilsilano, padrão intenso de espectros são designados como singleto (s), dupleto (d), tripleto (t), quarteto (q), multipleto, sinais não resolvidos ou mais sobreposição (m), sinal amplo (br). Solventes são determinados em parênteses. DSC: Medidas de DSC foram realizadas usando um DSC Q2000 (TA Instruments, New Castle, DE, USA) equipado com um DSC Refrigerated Cooling System (TA Instruments, New Castle, DE, USA). Dados foram tratados matematicamente usando o Software Analysis® Universal residente. Calibração para temperatura e calor de fusão foi realizada com índio como material de referência. As amostras foram analisadas em panelas de alumínio abertas e avaliadas sob uma purgação de nitrogênio com uma taxa de aquecimento de 10°C/min de 20 a 300 °C. UPLC-MS 3: Sistema: Waters Acquity UPLC com detector Waters SQ. Coluna: Acquity HSS T3 1,8 µm 2,1x50mm. Fluxo: 1,0 mL/min. Temperatura de coluna: 60 °C. Gradiente: de 5 a 98% B em 1,4 min, A = água + 0,05% de ácido fórmico + 3,75 mM de acetato de amônio, B = acetonitrila + 0,04% de ácido fórmico. UPLC-MS 6: Sistema: Waters Acquity Ultra Performance com detector de Waters SQ. Coluna: Acquity HSS T3 1,8 µm 2,1x50mm. Fluxo: 1,0 mL/min. Temperatura de coluna: 60 °C. Gradiente: de 5 a 98% B em 1,4 min, A = água + 0,05% de ácido fórmico + 3,75 mM de acetato de amônio, B = acetonitrila + 0,04% de ácido fórmico. ESI-MS: Water Acquity™ Ultra performance LC Exemplo 1 - N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-for- mil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridi- na-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico (1:1). Etapa 1: 2-(dimetoximetil)-1,8-naftiridina.

[00117] O procedimento descrito em J. Org. Chem., 2004, 69 (6), pp 1959-1966 foi usado. Em um frasco de base redonda de 4 gargalos de 20 L foi colocado 2-aminopiridina-3-carbaldeído (1000 g, 8,19 mol), 1,1-dimetoxipropan-2-ona (1257 g, 10,64 mols), etanol (10 L), e água (2 L). Isto foi seguido pela adição de uma solução de hidróxido de sódio (409,8 g, 10,24 mols) em água (1000 mL) gota a gota com agitação a 0-15 °C. A solução foi agitada durante 3 horas a 0-20 °C e em seguida concentrada sob vácuo. A solução resultante foi extraída com 3x1200 mL de acetato de etila e as camadas orgânicas foram combinadas. A mistura foi secada em sulfato de sódio e concentrada sob vácuo. O resíduo foi lavado com 3x300 mL de hexano e o sólido foi colecionado por filtração. Isto resultou no composto título como um sólido amarelo. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) d 9,11 (dd, 1H), 8,53 (d, 1H), 8,50 (dd, 1H), 7,73 (d, 1H), 7,67 (dd, 1H), 5,44 (s, 1H), 3,41 (s, 6H). Etapa 2: 7-(dimetoximetil)-1,2,3,4-tetra-hidro-1,8-naftiridina.

[00118] O procedimento descrito em J. Org. Chem., 2004, 69 (6), pp 1959-1966 foi usado. Em um reator de tanque de pressão de 5-L (5 atm) foi colocado 2-(dimetoximetil)-1,8-naftiridina (200 g, 979 mmols), etanol (3 L), PtO2 (12 g). O reator foi evacuado e estimulado três vezes com nitrogênio, seguido estimulando-se com hidrogênio. A mistura foi agitada durante a noite a 23°C sob uma atmosfera de hidrogênio. Esta reação foi repetida quatro vezes. Os sólidos foram filtrados e a mistura resultante foi concentrada sob vácuo para produzir o composto título como um sólido amarelo. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) d 7,14 (d, 1H), 6,51 (d, 1H), 6,47-6,41 (m, 1H), 4,98 (s, 1H), 3,28-3,19 (m, 2H), 3,23 (s, 6H), 2,64 (t, 2H), 1,73-1,79 (m, 2H). Etapa 3: 6-bromo-7-(dimetoximetil)-1,2,3,4-tetra-hidro-1,8-naftiridina.

[00119] Em um frasco de base redonda de 4 gargalos de 3 L foi colocado 7-(dimetoximetil)-1,2,3,4-tetra-hidro-1,8-naftiridina (114,6 g, 550,3 mmols) em acetonitrila (2 L). Isto foi seguido pela adição de NBS (103 g, 578 mols) em porções com agitação a 25 °C. A solução resultante foi agitada durante 30 minutos a 25 °C. A mistura resultante foi concentrada sob vácuo e o resíduo foi diluído com 1000 mL de éter dietílico. A mistura foi lavada com 3x100 mL de gelo/água. A fase aquosa foi extraída com 2x100 mL de éter dietílico e as camadas orgânicas foram combinadas. A mistura resultante foi lavada com 1x100 mL de salmoura, secadas em sulfato de sódio e concentradas sob vácuo para produzir o composto título como um sólido amarelo claro. LC-MS: (ES, m/z): 286,03 +. 1H-RMN: (300MHz, CDCI3) d 1,86 - 1,94 (2H, m), 2,70 - 2,74 (2H, m), 3,9 - 3,43 (2H, m), 3,47 (6H, s), 5,23 (1H, s), 5,58 (1H, s), 7,29 (1H, s). Etapa 4: 2-(dimetoximetil)-5,6,7,8-tetra-hidro-1,8-naftiridina-3-carbal- deído.

[00120] A uma solução de 6-bromo-7-(dimetoximetil)-1,2,3,4-tetra- hidro-1,8-naftiridina (15,0 g, 52,2 mmols) em THF (400 mL) a -78 °C sob argônio, foi adicionado MeLi (1,6 M em Et2O, 32,6 mL, 52,2 mmols), a solução foi agitada durante 5 minutos, em seguida n-BuLi (1,6 M em hexano, 35,9 mL, 57,5 mmols) foi adicionado lentamente e a solução foi agitada durante 20 minutos. THF (100 mL) foi adicionado à reação a -78°C. Subsequentemente, n-BuLi (1,6 M em hexano, 49,0 mL, 78 mmols) foi adicionado e a mistura reacional foi agitada durante 20 minutos, em seguida novamente n-BuLi (1,6 M em hexano, 6,53 mL, 10,45 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada durante 10 min a -78 °C. DMF (2,10 mL, 27,2 mmol) foi adicionada e a mistura reacional foi agitada a -78 °C durante 45 min, em seguida foi permitida aquecer em temperatura ambiente, derramada em NH4Cl aquoso saturado e extraída duas vezes com DCM. As fases orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4, filtradas e evaporadas para produzir o composto título como um óleo laranja. (UPLC-MS 3) tR 0,63 min; ESI-MS 237,2 +. Etapa 5: 2-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)etil)(metil)amino)acetato de etila.

[00121] Bromoacetato de etila (1,27 mL, 11,48 mmols) foi adicionado a uma mistura de (2-(metilamino)etil)carbamato de terc- butila (2,0 g, 11,48 mmols), trietilamina (4,81 mL) e THF (24 mL) a 0 °C. Depois de agitar 24 h em temperatura ambiente a mistura reacional foi dividida entre NaHCO3 aquoso saturado e DCM, extraída 2x com DCM, as camadas orgânicas secadas em Na2SO4 e evaporadas para produzir o composto título como um óleo amarelo pálido claro. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 5,20 (s, br, 1H), 4,18 (q, 2H), 3,24 (s, 2H), 3,223,16 (m, 2H), 2,65-2,61 (m, 2H), 2,38 (s, 3H), 1,42 (s, 9H), 1,24 (t, 3H). Etapa 6: Di-hidrocloreto de 2-((2-aminoetil)(metil)amino)acetato de etila.

[00122] Ácido clorídrico concentrado (10 mL) foi adicionado a uma solução de 2-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)etil)(metil)amino)acetato de etila (3,05 g, 11,13 mmols) em THF (20 mL) e EtOH (100 mL) em temperatura ambiente. Depois de agitar 1 h em temperatura ambiente a mistura reacional foi evaporada, etanol (20 mL) adicionado, evaporado, etanol adicional (50 mL) adicionado e em seguida agitada a 60 °C durante 70 min. A mistura reacional resfriada foi em seguida evaporada para produzir o composto título como um vidro amarelo pálido. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d 8,58 (s, br, 3H), 4,19 (q, 2H), 4,26-4,15 (m, 2H), 3,44 (s, br, 2H), 3,21 (s, br, 2H), 2,88 (s, 3H), 1,21 (t, 3H). Etapa 7: 1-((2-(dimetoximetil)-5,6,7,8-tetra-hidro-1,8-naftiridin-3-il) metil)-4-metilpiperazin-2-ona.

[00123] Triacetoxiboroidreto de sódio (3,10 g, 14,61 mmols) foi adicionado a uma mistura de 2-(dimetoximetil)-5,6,7,8-tetra-hidro-1,8- naftiridina-3-carbaldeído (obtida na etapa 4, 2,30 g, 9,74 mmol), di- hidrocloreto de 2-((2-aminoetil)(metil)amino)acetato de etila (obtido na etapa 6, 2,6 g, 14,61 mmols) e trietilamina (6,75 mL, 48,7 mmols) em 1,2-dicloroetano (20 mL) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada durante 21 h em temperatura ambiente e triacetoxiboroidreto de sódio adicional (2,6 g, 9,74 mmol) foi adicionado. Depois de outras 4 h de agitação em temperatura ambiente, novamente triacetoxiboroidreto de sódio adicional (1,3 g, 4,87 mmols) foi adicionado e a reação mantida a 4 °C durante 2,5 dias. A mistura reacional foi em seguida aquecida em temperatura ambiente, solução de NaHCO3 aquosa saturada adicionada, a mistura extraída com DCM (3x), as camadas orgânicas combinadas secadas em Na2SO4 e evaporadas. O resíduo foi aplicado a uma coluna de silica 120 g RediSep® como uma solução de DCM e purificado por cromatografia de fase normal, eluindo com um gradiente de DCM para 10% de MeOH em DCM. Produto contendo frações foi combinado e evaporado para produzir o composto título como uma espuma laranja. 1H RMN (400 MHz, CDCh) d 7,08 (s, 1H), 5,30 (s, br, 1H), 5,20 (s, 1H), 4,69 (s, 2H), 3,44-3,34 (m, 2H), 3,40 (s, 6H), 3,22-3,15 (m, 2H), 3,24 (s, 2H), 2,71-2,64 (m, 2H), 2,58-2,50 (m, 2H), 2,31 (s, 3H), 1,98-1,82 (m, 2H), (UPLC-MS 6) tR 0,33; ESI-MS 335,3 +. Etapa 8: 4-Fluoro-5-iodopiridin-2-amina.

[00124] Uma suspensão de 4-fluoropiridin-2-amina (336 g, 2,5 mol) e NIS (745 g, 2,75 mol) em MeCN (9 L) foi tratada com TFA (114 g, 1 mol). A mistura reacional foi em seguida agitada em temperatura ambiente durante 8 horas. A mistura reacional foi diluída com EtOAc (10 L), lavada com Na2S2O3 aquoso saturado (2 x 5 L), salmoura (4 x 5 L). As camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas para adquirir o produto cru. O produto cru foi purificado por recristallização de EtOAc/pentano (1/10) para proporcionar o composto título como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d 8,14 (d, 1H), 6,45 (s, 2H), 6,33 (d, 1H). Etapa 9: 6-amino-4-fluoronicotinonitrila.

[00125] 4-fluoro-5-iodopiridin-2-amina (obtido na etapa 8, 240 g, 1 mol), cianeto de zinco (125 g, 1,05 mol), zinco (13 g, 0,2 mol), Pd2(dba)3 (25 g, 25 mmols) e dppf (55 g, 0,1 mol) em DMA (800 mL) foram desgaseificados e carregados no frasco de base redonda sob nitrogênio. A mistura foi agitada a 100 °C durante 3 horas. A mistura reacional foi diluída com 5% de NaHCO3 (2 L), extraída com EtOAc (4 x 600 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 5% de NaOH (1 L), secadas em Na2SO4, concentradas a 700 mL. A fase orgânica resultante foi eluída por coluna de sílica gel com EtOAc (1,7 L). O filtrado orgânico combinado foi lavado com 2 M de HCl (3 x 800 mL). O pH da fase aquosa foi ajustado em 10 com NaHCO3 saturado. A fase aquosa foi extraída com DCM (3 x 500 mL). O DCM combinado foi secado em Na2SO4 e concentrado. O resíduo foi da mesma forma purificado por cromatografia de coluna (eluído com pentano: EtOAc 10:1 a 3:2) seguido por recristalização de pentano/EtOAc 3/1 para produzir o composto título como sólido branco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d 8,40 (d, 1H), 7,40 (s, 2H), 6,34 (d, 1H). Etapa 10: (4-cloro-5-cianopiridin-2-il)carbamato de terc-butila.

[00126] Uma mistura de 2,4-dicloro-5-cianopiridina (10 g, 57,8 mmols), carbamato de terc-butila (8,2 g, 70,5 mmols), Pd(OAc)2 (0,26 g, 1,1 mmol), Xantphos (1,34 g, 2,3 mmol) e K2CO3 (12 g, 87 mmols) em THF (150 mL) foram desgaseificados 3x com nitrogênio. A mistura foi em seguida aquecida a 70 °C durante 4-5 horas e monitorada por cromatografia até conversão completa. Seguindo conclusão da reação, THF adicional (100 mL) foi adicionado e aquecido a mistura a 70 °C durante 1 h adicional e em seguida resfriado em temperatura ambiente. A suspensão foi em seguida filtrada através de uma almofada de celite para remover o sólido. O filtrado foi em seguida concentrado e azotropicamente destilado com acetete de etila antes de filtrar para produzir o composto título. 1H RMN (DMSO-d6, 400 MHz): d 10,82 (s, 1H), 8,79 (s, 1H), 8,09 (s, 1H), 1,49 (s, 9H). Etapa 11: N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)carbamato de terc-butila.

[00127] Uma mistura de (4-cloro-5-cianopiridin-2-il)carbamato de terc-butila (obtida na etapa 10, 9,8 g, 38,6 mmols), 2-metóxi-etilamina (5,8 g, 77,3 mmols) e DIPEA (6 g, 46,4 mmols) em DMSO (80 mL) foi aquecida a 65-70 °C durante 24 h e monitorada por cromatografia até conversão completa. A solução foi em seguida resfriada em temperatura ambiente e um sólido branco precipitado gradualmente. Água (20 mL) foi em seguida adicionada lentamente dentro de 1 h. A suspensão foi agitada durante outra 1 h, filtrada e secada para produzir o composto título como um sólido branco. 1H RMN (DMSO-d6, 400 MHz): d 9,87 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 7,20 (s, 1H), 6,86 (s, 9H), 3,51 (t, 2H), 3,36 (t, 2H), 3,28 (s, 3H), 1,47 (s, 9H). Etapa 12: 6-amino-4-((2-metóxi-etil)amino)nicotinonitrila.

[00128] Uma solução de 6-amino-4-fluoronicotinonitrila (obtida na etapa 9, 1,10 g, 8,02 mmol) em DMA (20 mL) foi tratada com 2-metóxi- etilamina (2,07 mL, 24,1 mmols) e DIPEA (4,20 mL, 24,1 mmols), aquecida a 50 °C e agitada durante 15 horas. A mistura reacional foi resfriada em temperatura ambiente e concentrada. O material cru foi purificado por cromatografia de fase normal (24 g de cartucho de sílica gel, heptanos/EtOAc 100:0 a 0:100). O produto contendo frações foi concentrado e secado sob vácuo para produzir o composto título como um sólido quase branco.

[00129] Uma síntese alternativa de 6-amino-4-((2-metóxi-etil)amino) nicotinonitrila é esboçada abaixo:

[00130] A N-{5-ciano-4- [(2-metóxi-etil)amino]piridin-2-il}carbamato de terc-butila (obtido na etapa 11, 7g) foi adicionado 30-36% de HCl aquoso (40 mL), a mistura agitada em temperatura ambiente durante 30 minutos e monitorada por cromatografia até conversão completa. A solução foi em seguida basificada com 20-30% de solução de NaOH em pH=9-10 e filtrada para produzir um sólido branco. O sólido foi adicionado a acetato de etila (15 mL) e aquecido a 50-55 °C para formar uma solução clara. A solução foi em seguida resfriada a 3-6 °C, agitada durante 2-3 h e filtrada. A massa úmida foi em seguida secada para produzir o composto título como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d 7,92 (s, 1H), 6,39 (s, 2H), 6,15 (t, 1H), 5,61 (s, 1H), 3,46 (t, 2H), 3,27 (s, 3H), 3,24 (q, 2H), (UPLC-MS 3) tR 0,62; ESI-MS 193,1+. Etapa 13: N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-(dimetoxime til)-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2 H)-carboxamida.

[00131] Uma solução de 6-amino-4-((2-metóxi-etil)amino) nicotinonitrila (obtida na etapa 12, 481 mg, 2,50 mmols) em DMF anidroso (1,5 mL) foi adicionada gota a gota durante 10 minutos em uma mistura de di(1H-1,2,4-triazol-1-il)metanona (410 mg, 2,50 mmol) e DMF (1,5 mL) resfriada a 0 °C. Depois de agitar durante 45 minutos a 0 °C a mistura reacional foi permitida aquecer em temperatura ambiente e depois de outros 90 minutos em temperatura ambiente uma solução de 1-((2-(dimetoximetil)-5,6,7,8-tetra-hidro-1,8-naftiridin- 3-il)metil)-4-metilpiperazin-2-ona (obtida na etapa 7, 418 mg, 1,00 mmol) em DMF (2 mL) foi adicionada. A mistura reacional foi agitada durante 17,5 h em temperatura ambiente, extinguida pela adição de MeOH e evaporada. O resíduo foi aplicado a um 80 g de coluna de sílica RediSep® como uma solução de DCM e purificada por cromatografia de fase normal, eluindo com um gradiente de DCM para 2% de MeOH em DCM. Produto contendo frações foi combinado e evaporado para produzir o composto título como uma espuma laranja. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d 13,50 (s, 1H), 8,27 (s, 1H), 7,52 (s, 1H), 7,39 (s, 1H), 6,93 (t, 1H), 5,45 (s, 1H), 4,65 (s, 2H), 3,94-3,89 (m, 2H), 3,54-3,50 (m, 2H), 3,40-3,35 (m, 2H), 3,38 (s, 6H), 3,29 (s, 3H), 3,20-3,16 (m, 2H), 3,05 (s, 2H), 2,86-2,80 (m, 2H), 2,61-2,55 (m, 2H), 2,22 (s, 3H), 1,94-1,88 (m, 2H), (UPLC-MS 6) tR 0,72; ESI-MS 553,3 +. Etapa 14: N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4- metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)- carboxamida

[00132] Ácido clorídrico concentrado (0,40 mL) foi adicionado a uma solução de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-(dimetoxi- metil)-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina- 1(2H)-carboxamida (obtida na etapa 13, 470 mg, 0,808 mmol) em THF (3 mL) e água (1 mL) em temperatura ambiente. Depois de agitar durante 3 horas em temperatura ambiente NaHCO3 aquoso saturado foi adicionado, a mistura extraída com DCM (3x), as camadas orgânicas secadas em Na2SO4 e evaporadas. O resíduo foi sonicado com EtOAc (6 mL) e pentano (6 mL) e em seguida filtrado. O sólido branco obtido foi em seguida dissolvido em DCM (6 mL), EtOAc adicionado (3 mL), a solução aquecida, selada e permitida repousar em temperatura ambiente 2 horas. Filtração e secagem produziram N- (5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2- oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d 13,43 (s, 1H), 10,06 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,49 (s, 1H), 7,47 (s, 1H), 6,96 (t, br, 1H), 4,86 (s, 2H), 3,96-3,90 (m, 2H), 3,52 - 3,46 (m, 2H), 3,39-3,33 (m, 2H), 3,30-3,21 (m, 2H), 3,37 (s, 3H), 3,02 (s, 2H), 2,93-2,86 (m, 2H), 2,61-2,56 (m, 2H), 2,21 (s, 3H), 1,95-1,85 (m, 2H), (UPLC-MS 6) tR 0,70, ESI-MS 507,2, +. Etapa 15: N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4- metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carbo- xamida na forma de ácido cítrico (1:1).

[00133] N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4- metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carbo- xamida (obtida na etapa 14, 4g, 7,896 mmols) foi agitado em ácido propiônico (29,3 g, 29,60 mL) a 70 °C até que dissolução foi concluída (20 minutos). A solução foi resfriada a 55 °C e uma solução de ácido cítrico em acetona (23% w/w) foi adicionada a isto. Separadamente, uma suspensão de semente foi preparada adicionando acetona (0,2 g, 0,252 mL) para N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil- 6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)- carboxamida na forma de ácido cítrico (0,0185 g, 0,026 mmol). A suspensão de semente foi adicionada à solução a 50 °C e a suspensão resultante foi deixada agitar a 50°C durante 40 minutos. Uma outra solução de ácido cítrico em acetona (26,6 g, 2,51% w/w, 33,63 mL) foi adicionada à reação durante 380 minutos. A suspensão resultante foi agitada durante outros 120 minutos e resfriada a 20°C com agitação durante 4 horas. A suspensão foi agitada durante outras 12 horas antes de filtrar a suspensão sob vácuo e lavar o sólido resultante com um ácido propiônico: solução de acetona (1:1, 7g, 7,96 mL) em temperatura ambiente. O sólido foi também lavado com acetona (7g, 8,85 mL) em temperatura ambiente. O sólido resultante foi secado em um forno a 40°C e 0,5 kPa (5 mbar) para produzir o composto título como um sólido laranja claro (5,2 g, 7,443 mmol). (pm 698,70), mp (DSC) 168,8°C (início).

[00134] Análise de XRPD mostrou o mesmo padrão como com partículas obtidas por um processo descrito em PCT/IB2014/065585 (exemplo de referência 1 ) - veja Figura 5. Exemplo 1a Etapas 1 a 14 foram realizadas como descrito no exemplo 1. Etapa 15a: N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6- ((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)- carboxamida em forma de ácido cítrico (1:1)

[00135] N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4- metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carbo- xamida (obtida na etapa 14, 5 g, 9,930 mmols) foi agitado em ácido propiônico (33,5 g, 33,84 mL) a 60 °C. Uma vez que N-(5-ciano-4-((2- metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1- il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida foi dissolvido, pó de ácido cítrico anidroso (0,19 g, 0,9889 mmol) foi adicionado. A suspensão resultante foi aquecida a 70 °C e sonicada durante 5 minutos para garantir dissolução completa. A solução resultante foi resfriada a 50 °C e uma solução de ácido cítrico em acetato de etila (3,7 g, 1,3% de ácido cítrico em acetato de etila) foi adicionada durante 20 minutos. Sementes de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2- il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8- naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de ácido cítrico (0,02 g) foram adicionadas à solução e a suspensão foi envelhecida durante 15 atas. Outra alíquota de ácido cítrico em acetato de etila (128 g, 1,3% ácido cítrico em acetato de etila) foi adicionada à suspensão durante 11,85 horas. A suspensão foi deixada agitar durante mais de 4 horas. A suspensão foi em seguida filtrada sob vácuo (50 kPa (500 mbar)) e o sólido resultante foi lavado primeiramente com um ácido propiônico: solução de acetato de etila (1:1, 7g, 7,44 mL) em temperatura ambiente e em seguida com acetato de etila (12 g, 13,38 mL) em temperatura ambiente. O sólido resultante foi secado em um forno a 40 °C e 0,5 kPa (5 mbar) para produzir o composto título como um sólido laranja claro (6,3 g, 9,074 mmol).

[00136] Análise de XRPD mostrou o mesmo padrão como com partículas obtidas por um processo descrito em PCT/IB2014/065585 (exemplo de referência 1) - veja Figura 5. Exemplo de referência 1 (descrito em PCT/IB2014/065585) - N-(5- ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxo- piperazin-1 -il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1 (2H)-carboxamida em forma de ácido cítrico (1:1) Etapas 1 a 14 foram realizadas como descrito no exemplo 1. Etapa de Referência 15 - N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil) amino)piridin-2- il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8- naftiridina-1(2H)-carboxamida em forma de ácido cítrico (1:1)

[00137] Uma solução de ácido cítrico (96,9 mg) em acetona (5 mL) foi preparada em temperatura ambiente (0,1 M). Uma porção do 0,1 M de ácido cítrico em solução de acetona (2 mL) foi em seguida adicionada a uma suspensão de N-(5-ciano-4-((2-metóxi- etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4- di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida (100 mg) em acetona (4 mL) e a mistura sonicada durante 1 minuto em seguida aquecida a 55 °C com agitação durante 2 horas antes de lentamente resfriar em temperatura ambiente. O sólido branco foi em seguida coletado por filtração, lavando 2x com acetona (2 mL), e secado durante 18 horas a 40 °C sob vácuo para produzir o sal título.

[00138] Alternativamente, N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin- 2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8- naftiridina-1(2H)-carboxamida (6,5 g, 12,83 mmol) foi colocado em um reator de 4-frascos de 500ml. 49 mL de ácido acético glacial foi adicionado e a suspensão resultante foi agitada a 23 °C até que uma mistura clara fosse obtida. Em um frasco separado, ácido 2- hidroxipropano-1,2,3-tricarboxílico anidroso (2,59 g, 13,47 mmols, 1,05 equiv.) foi dissolvido em 49 mL de ácido acético glacial a 50 °C até que uma solução clara fosse obtida. Esta solução foi em seguida adicionada a 23°C à solução de N-(5-ciano-4-((2-metóxi- etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4- di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida previamente preparada. Esta mistura foi agitada durante 30 min a 23 °C e em seguida adicionada gota a gota em 1h a 192 mL de acetato de etila aquecido a 75 °C. A temperatura permaneceu constante sobre a adição. Ao término da adição, a temperatura da mistura foi resfriada lentamente a 23 °C e deixada 16h nesta temperatura sob agitação suave. A suspensão foi resfriada a 5-10 °C e filtrada. A massa foi lavada com 15 mL de acetato de etila e 15 mL de acetona. A massa úmida (aproximadamente 8,5 g) foi transferida em um frasco de 500 mL contendo 192 mL de acetona seca. A suspensão resultante foi refluxada durante 24 horas. A suspensão foi filtrada e a massa foi lavada com 2 vezes 15 mL de acetona seca em seguida secada a 50 °C sob vácuo durante várias horas para produzir o sal título.

Ex. 2 - Ensaios de cinase bioquímicos in-vitro para FGFR4

[00139] Todos os ensaios foram realizados em placas de microtítulo de 384 cavidades. Cada placa de ensaio conteve diluições seriais de 8 pontos para 40 compostos teste, bem como quatro diluições seriais de 8 pontos de estaurosporina como composto de referência, mais controles 16 altos e 16 baixos.

[00140] Manipulação líquida e etapas de incubação foram feitas em um Innovadyne Nanodrop Express equipado com um braço robótico (Thermo CatX, Caliper Twister II) e uma incubadora (Liconic STX40, Thermo Cytomat 2C450). As placas de ensaio foram preparadas por adição de 50 nl por cavidade de solução composta em 90% de DMSO. As reações de cinase foram iniciadas por adição etapa a etapa de 4,5µl por cavidade de peptídeo/solução de ATP (50mM de HEPES, pH 7,5, 1mM de DTT, 0,02% Tween20, 0,02% de BSA, 0,6% de DMSO, 10mM de beta-glicerofosfato, e 10 µM de ortovanadato de sódio, 16 mM de MgCh, 1122 µM de ATP, 4 µM de peptídeo (5-Fluo-Ahx- KKKKEEIYFFFG-NH2, Biosyntan GmbH) e 4,5 µl por cavidade de solução de enzima (50 mM de HEPES, pH 7,5, 1 mM de DTT, 0,02% de Tween20, 0,02% de BSA, 0,6% de DMSO, 10 mM de beta-glicero- fosfato, e 10 µM de ortovanadato de sódio, 16 mM de MgCl2, 6 NM de FGFR4 (GST-FGFR4(388-802), produzida em-casa por expressão em células de inseto e cromatografia de afinidade). Reações de cinase foram incubadas a 30 °C durante 60 minutos e subsequentemente terminadas por adição de 16 µl por cavidade de solução de parada (100 mM de HEPES pH 7,5, 5% de DMSO, 0,1% de reagente de revestimento Calibrador, 10 mM de EDTA, e 0,015% de Brij35). Placas com reações de cinase terminadas foram transferidos às estações de trabalho Caliper LC3000 para leitura. Peptídeos fosforilados e não fosforilados foram separados usando uma tecnologia de troca de mobilidade microfluídica Caliper. Brevemente, amostras de reações de cinase terminadas foram aplicadas ao fragmento. Analisados são transportados pelo fragmento por fluxo de tampão constante e a migração do peptídeo de substrato é monitorado pelo sinal de fluorescência de seu rótulo. Peptídeo fosforilado (produto) e peptídeo fosforilado (substrato) são separados em um campo elétrico por sua relação de carga/massa. Atividades de cinase foram calculadas a partir das quantidades de fosfo-peptídeo formadas. Valores de IC50 foram determinados a partir de valores de inibição percentuais em concentrações de composto diferentes por análise de regressão não linear.

Preparação de diluições de composto

[00141] Compostos teste foram dissolvidos em DMSO (10 mM) e transferidos em 1,4 mL de base plana ou tubos de em forma de V transportando uma matriz 2D única. As soluções de matéria prima foram armazenadas a +2 °C se não usadas imediatamente. Para o procedimento teste os frasconetes foram descongelados e identificados por um escâner pelo qual uma folha de processamento foi gerada que guiou as etapas de processamento subsequentes.

[00142] Diluições de composto foram feitas em placas de 96 cavidades. Este formato permitiu o ensaio de no máximo 40 compostos teste individuais em 8 concentrações (pontos simples) incluindo 4 compostos de referência. O protocolo de diluição incluiu a produção de "placas de pré-diluição", "placas mestre" e "placas de ensaio".

[00143] Placas de pré-diluição: Placas de polipropileno de 96 cavidades foram usadas como placas de pré-diluição. Um total de 4 placas de pré-diluição foram preparadas incluindo 10 compostos teste cada qual nas posições de placa A1-A10, um composto padrão a A11 e um controle de DMSO em A12. Todas as etapas de diluição foram feitas em um robô HamiltonSTAR.

[00144] Placas mestre: 30 µL de diluições de composto individuais incluindo composto padrão e controles das 4 "placas de pré-diluição" foram transferidos em uma 384 "placa mestre" incluindo as seguintes concentrações 1'810, 362, 72.5, 54.6, 14.5, 2.9, 0.58 e 0.12µM, respectivamente em 90% de DMSO.

[00145] Placas de ensaio: "Placas de ensaio" idênticas foram em seguida preparadas por pipetagem 50 nL cada de diluições de composto das "placas mestre" em "placas de ensaio" de 384 cavidades por meios de um dispensador de 384 canais HummingBird. Estas placas foram usadas diretamente para o ensaio que foi realizado em um volume total de 9,05 µL. Isto levou a uma concentração de composto final de 10, 2.0, 0.4, 0.08, 0.016, 0.0032, 0.00064 e 0.000128 µM e uma concentração de DMSO final de 0,5% no ensaio.

Ensaios de cinase celular in vitro para FGFR4

[00146] Como uma leitura para atividade de FGFR4 cinase celular, um ensaio que mede o teor de fosforilação de Tirosina em FGFR4 foi desenvolvido. Para isto, uma linhagem celular de BaF3-Tel-FGFR4 foi gerada: células de BaF3 foram estavelmente transduzidas com um retrovírus codificando uma proteína de fusão consistindo na porção de terminal amino de TEL (aa1-337) fundida ao domínio citoplásmico de FGFR4, incluindo o domínio de iuxtamembrana. A presença do domínio de TEL media ativação constitutiva da FGFR4 cinase fundida por oligomerização, e desse modo autofosforilação nos sítios de Tirosina.

[00147] Um MSD (Detecção de Meso Escala) com base em ELISA foi desenvolvido e usado como segue: - Tratamento de célula: 250000 células de BaF3-Tel- FGFR4 por cavidade foi semeado em placas de cultura de tecido de 96 cavidades (Corning Cat #3359) em 40uL de meio de crescimento (RPMI-1640 (Amimed Cat#1-41F01-I) suplementado com 10% de soro de bezerro fetal, 10mM de HEPES, 1mM de Piruvato De sódio, 2mM de Glutamina Estável e 1x Penicilina-Estreptomicina). Usando um dispositivo de manipulação líquido (Velocidade 11 Bravo, Agilent), diluições de 3 vezes seriais de compostos foram preparados em DMSO, pré-diluídas em meio de crescimento, seguido por transferência de 10 uL/cavidade aos placas de célula. Depois da incubação durante 1 hora a 37°C/5%CO2, 50uL de tampão de lise (150 mM de NaCl, 20 mM de Tris (pH 7,5), 1 mM de EDTA, 1 mM de EGTA, 1% de Triton X-100, 10 mM de NaF, complementado com inibidores de protease (Complete Mini, Roche Cat#11836153001) e inibidores de fhosfatase) (Phosphatase Inhib I, SIGMA Cat#P2850; Phosphatase Inhib II, SIGMA Cat#P5726 de acordo com instruções do fornecedor) foi adicionado e incubado durante 30 minutos em gelo com agitação a 300 rpm. Placas de amostra foram em seguida congeladas e armazenadas a - 70 °C. Seguindo descongelando em gelo, as placas de amostra foram centrifugadas durante 15 minutos a 1200rpm a 6°C. - Ensaio de ELISA: Placas de 96 cavidades de multi disposição (MSD, Cat#L15XB-3) foram revestidas durante 1 hora em temperatura ambiente com 25uL/cavidade de anticorpo anti-H-TEL de camundongo (Santa Cruz, Cat#sc-166835) diluído 1:400 em PBS/O. Seguindo adição de 150uL de 3% de Bloqueador de MSD A (Cat #R93BA-1) em TBS-T (50mM de Tris, 150 mM de NaCl, 0,02% de Tweeen-20), placas foram incubadas durante 1 hora em temperatura ambiente com agitação. Placas em seguida foram lavadas 3 vezes com 200uL/cavidade de TBS-T. 50uL do lisado de célula foram em seguida transferidos à placa revestida e incubada durante 15 horas a 4°C, seguido por 3 lavagens com 200µl de TBS-T/cavidade e adição de 25µl/cavidade de anticorpo MSD SULFOTAGGED PY20 (MSD Cat #R32AP-5), diluído 1:250 em TBS-T + 1% de Bloqueador de MSD A. Seguindo incubação durante 1 hora em temperatura ambiente com agitação, cavidades foram lavados 3 vezes com 200µl de TBS- T/cavidade. Seguindo ition de 150µl MSD Read Buffer (MSD, Cat#R92TC-2) solução de matéria prima diluiu 1:4 com nano água, geração de sinal electro-quimioluminescente foi imediatamente quantificada em um SectorImager 6000 (MSD). Cálculo de IC50: Para análise de dados, o ensaio antecedente foi determinado em cavidades contendo meio e tampão de lise, porém nenhuma célula, e o valor correspondente subtraído de todos os pontos de dados. O efeito de uma concentração de composto teste particular em fosforilação de FGFR4 é expressado como porcentagem da leitora de electro-quimio- luminescência corrigida antecedente obtida para células tratadas com veículo apenas (DMSO, 0.2% f.c.), que é fixa como 100. Concentrações de composto levando a inibição de sinal meio-máxima (IC50) foram determinadas por ajuste de curva paramétrica padrão quatro (XLfit 5,4, IDBS).

Ensaio de proliferação de célula

[00148] Ensaio de proliferação de manchamento azul de metileno (MBS): O efeito de compostos em proliferação de célula é garantido usando células de carcinoma hepatocelular HuH-7 obtidas da Japanese Collection de Research Bioresources Cell Bank (Cat#JCRB0403) e cultivado no meio indicado pelo vendedor (DMEM de glicose alta (Amimed Cat#1-26F01-I), 10% de soro de bezerro fetal (Invitrogen Cat#16140-071), 1 mM de piruvato de sódio (Amimed Cat#5-60F00-H), 1x Penicilina/Estreptomicina (Amimed Cat#4-01F00- H)) a 37°C em uma incubadora de CO2 a 5% umidificada. Especificamente, 5000 células/cavidade foram semeadas em placas de cultura de tecido de 96 cavidades (TPP Cat#92696) em um volume de meio total de 100 µl/cavidade e aumentando diluições de composto ou DMSO foram adicionados 24 horas depois disso em triplicata. 72 horas depois da adição de composto, células foram fixas adicionando 25 QL/cavidade de 20% de glutaraldeído (Sigma Aldrich Cat#G400-4) e incubado durante 10 minutos em temperatura ambiente. Células foram lavadas três vezes com H2O, 200 DL/cavidade e manchado com 100 QL/cavidade 0,05% de azul de metileno (ABCR GmbH Cat#AB117904) durante 10 minutos em temperatura ambiente. Células foram lavadas 3 vezes com H2O, 200 DL/cavidade e em seguida lisadas adicionando 200 QL/cavidade de 3% de HCl (Fluka Cat#84422) durante 30 minutos em temperatura ambiente com agitação. Densidade óptica foi medida a A650nm. A concentração de composto fornecendo 50% de inibição de proliferação com respeito a células tratadas por DMSO foi determinada (IC50) usando software XLFit.

[00149] Ensaio de CellTiter Glo (CTG): O efeito funcional de compostos em proliferação de célula usando células de carcinoma hepatocelular HuH-7 obtidas da Japanese Collection of Research Bioresources Cell Bank é avaliado (Cat#JCRB0403) e cultivado no meio indicado por vendedor (DMEM glicose alta (Amimed Cat#1- 26F01-I), 10% soro de bezerro fetal (Invitrogen Cat#16140-071), 1 mM de piruvato de sódio (Amimed Cat#5-60F00-H), 1x Penicilina/Estreptomicina (Amimed Cat#4-01F00-H)) a 37°C em uma incubadora de CO2 a 5% umedecida. Supressão mediada por composto de proliferação de célula/viabilidade é avaliada por quantificação de níveis de ATP celular usando o reagente de CellTiter- Glo (CTG) (Promega, Cat#G7573). Brevemente, células são semeadas em meio fresco de 3'000 células/cavidade/80 µl em placas de 86 cavidades tratadas por cultura de tecido (Costar Cat#3904), seguido por adição de 20 µl de meio contendo diluições de composto em 5 vezes sua concentração pretendida final. Efeitos de resposta de dose são avaliados por diluições seriais de 3 vezes do composto de teste, começando em 10 µM. Seguindo incubação das células durante 3 dias a 37 °C e 5% de CO2, o efeito de inibidores em viabilidade de célula é quantificado seguindo adição de 50 µl de CTG e medida de luminescência (tempo de integração: 500ms) como por manual de vendedor, usando uma leitora de placa de multi-modo correspondentemente (M200Pro, TECAN, Switzerland). Para análise de dados, o valor de fundo de ensaio determinado em meio contendo cavidade, porém nenhuma célula, é subtraído de todos os pontos de dados. Para permitir diferenciação de citotóxico de compostos citoestáticos, o número de células viáveis é avaliado relativo aquele observado na hora da adição de composto usando uma placa de célula separada (dia 0). O efeito de uma concentração de composto teste particular em proliferação celular/viabilidade é expressado como porcentagem do antecedente - e dia 0-leitora de luminescência corrigida obtida para células tratadas com veículo apenas (DMSO, 0.1% f.c.), que é fixo como 100%, visto que a leitora de luminescência para cavidades contendo meio, porém nenhuma célula, é fixo como - 100%. Concentrações de composto levando inibição de crescimento meio máxima (GI50) são determinadas usando ajuste de curva de parâmetro de padrão quatro (XLfit 5.2., IDBS, UK).

Dados Comparativos

[00150] Ensaios bioquímicos in vitro para FGFR1 (407-822), FGFR2 (406-821) e FGFR3 (411-806) foram administrados de uma maneira similar ao ensaio bioquímico in vitro para FGFR4 descrito acima, usando as porções indicadas dos domínios de cinase. Exemplo 1 produziu valores de IC50 > 10000 nM nos ensaios de FGFR1, FGFR2 e FGFR3 bioquímicos.

Exemplo 3 - Medida de difração a laser de partículas de N-(5- ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxo- piperazin-1 -il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1 (2H)-carboxamida obtidas no exemplo 1.

[00151] A distribuição de tamanho de partícula de N-(5-ciano-4-((2- metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il) metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida em forma de ácido cítrico (1:1) obtido no exemplo 1 foi analisado de acordo com o método descrito no capítulo de Pharmacopoeia européia 2.9.31 análise de tamanho de Partícula por difração de luz a laser.

[00152] Para a medida, um dispositivo de Sympatec HELOS com um comprimento focal de 500 mm de Sympatec GmbH, Germany, equipado com um dispositivo de dispersão úmido Cuvette de Sympatec GmbH, Germany foi usado. A substância de teste foi disperse em espírito branco, Brenntag Schweizerhall AG, Switzerland (catálogo número 12200-150) usando uma ajuda de dispersão (por exemplo, StatsafeTM6000, INNOSPEC Limited, aproximadamente 1% no espírito branco).

[00153] Procedimento: Gotas da ajuda de dispersão foram adicionadas sob mistura manual à amostra em pó de N-(5-ciano-4-((2- metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1- il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida em forma de ácido cítrico (1:1) obtido no exemplo 1. As partículas foram misturadas intensivamente, por exemplo, em um misturador de vórtice em ordem para umidificar a substância completamente e formar uma pasta lisa e homogênea. A pasta foi diluída com o espírito branco em um volume final de vários mililitros e a dispersão de matéria prima foi novamente misturada.

[00154] Medida: A dispersão de teste foi preparada diluindo-se da dispersão de matéria prima com espírito branco para uma concentração óptica apropriada e a distribuição de volume cumulativa foi determinada usando um instrumento de difração de luz a laser de acordo com o manual de instrução. Medidas foram feitas antes e depois de 10 segundos, 20 segundos, 30 segundo de sonicação. Os parâmetros foram fixos como segue: 30% de amplitude e 80% de tempo de ciclo ao dispositivo de ultrassonicação GM70 de Bandelin electronic GmbH & Co. KG, e uma duração de medida de cerca de 20 segundos.

[00155] Os tamanhos de partícula nos valores de tamanho inferior de 10%, 50% e 90% (x10, x50, x90) foram avaliados da distribuição de volume cumulativa sem sonicação. Sonicação não teve impacto significante nos tamanhos de partículas medidos.

[00156] A distribuição de tamanho de partícula resultante é mostrada na Figura 6.

Exemplo 4 - Medida de difração a laser de partículas de N-(5- ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxo- piperazin-1 -il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1 (2H)-carboxamida obtido no exemplo de referência 1 (descrito em PCT/IB2014/065585).

[00157] A distribuição de tamanho de partícula de N-(5-ciano-4-((2- metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il) metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida em forma de ácido cítrico (1:1) obtido no exemplo de referência 1 foi analisado de acordo com o método descrito no capítulo de European Pharmacopoeia 2.9.31 análise de tamanho de Partícula por difração de luz a laser.

[00158] Para a medida, um dispositivo de Sympatec HELOS com um comprimento focal de 100 mm de Sympatec GmbH, Germany, equipado com um dispositivo de dispersão úmido Cuvette de Sympatec GmbH, Germany foi usado. A substância de teste foi dispersa em espírito branco, Brenntag Schweizerhall AG, Switzerland (catálogo número 12200-150) usando uma ajuda de dispersão (por exemplo, StatsafeTM6000, INNOSPEC Limited, aproximadamente 1% no espírito branco).

[00159] Procedimento: Gotas da ajuda de dispersão foram adicionadas sob manual misturando à amostra em pó de N-(5-ciano-4- ((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1- il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico (1:1) obtido no exemplo 1. As partículas foram intensivamente misturadas, por exemplo, em um misturador de vórtice para umidificar a substância completamente e para formar uma pasta lisa e homogênea. A pasta foi diluída com o espírito branco em um volume final de vários mililitros e a dispersão de matéria prima foi novamente misturada.

[00160] Medida: A dispersão de teste foi preparada por diluição da dispersão de matéria prima com espírito branco para uma concentração óptica apropriada e a distribuição de volume cumulativa foi determinada usando um instrumento de difração de luz a laser de acordo com o manual de instrução. Medidas foram feitas antes da sonicação e depois da sonicação para até 600 segundos. Os parâmetros foram fixos como segue: 50% de amplitude ao dispositivo de ultrassonicação USGD-100 de Telsonic AG, e uma duração de medida de cerca de 20 segundos. A medida foi realizada duas vezes.

[00161] Os tamanhos de partícula nos valores de tamanho inferiores de 10%, 50% e 90% (x10, x50, x90) foram avaliados a partir da distribuição de volume cumulativa depois de 240 segundos de sonicação. Isto foi determinado ser representativo dos tamanhos de partícula primários.

[00162] A distribuição de tamanho de partícula resultante é mostrada na Figura 7.

Exemplo 5 - Medidas de energia de fluxo básico

[00163] Energia de fluxo básica (BFE) é a energia requerida para estabelecer um padrão de fluxo particular em um volume condicionado, preciso de pó. Este padrão de fluxo é um movimento para baixo no sentido horário da lâmina, gerando um modo de fluxo de tensão compressivo, relativamente alto no pó. A BFE é calculada a partir do trabalho feito movendo-se a lâmina pelo pó do topo do recipiente a base, isto é durante a travessia para baixo.

[00164] No presente exemplo, a energia de fluxo básica foi medida usando um reômetro de pó de FT4 de Freeman Technology sob as seguintes condições: tamanho de recipiente: 25mm; Nome de programa padrão: 25mm_1C_Split_1T; acessório de partida: 23,5 mm de lâmina; Recipiente: 25mm x 25 mL Split Vessel. Os resultados foram plotados na Figura 9.

[00165] A energia de fluxo básica medida para 2 amostras de partículas da invenção foi 39,17 mJ para partículas obtidas pelo processo descrito no exemplo 1a; e 65,07 mJ para partículas obtidas pelo processo descrito no exemplo 1.

[00166] A energia de fluxo básica medida para as amostras de partículas obtidas pelo processo descrito em PCT/IB2014/065585 foi 185,20 mJ.

[00167] Estes resultados sugerem que as partículas da invenção melhorassem propriedades de fluxo sobre essas partículas obtidas pelo processo descrito em PCT/IB2014/065585.

Exemplo 6 - Medidas de compressibilidade

[00168] Compressibilidade é uma medida de como densidade muda como uma função de tensão normal aplicada. Por definição, compressibilidade é a mudança percentual em volume depois da compressão (%). As medidas foram feitas usando um reômetro em pó de FT-4 de tecnologia de Freeman.

[00169] Partículas de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)- 7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridi- na-1(2H)-carboxamida obtidas pelo processo da presente invenção e partículas obtidas pelo processo descrito em PCT/IB2014/065585 foram colocadas em um recipiente e um pistão ventilado foi usado para comprimir as partículas. O pistão ventilado é designado tal que a face de compressão é construída a partir de uma malha de aço inoxidável tecida e permite o ar arrastado no pó para escapar uniformemente através da superfície do leito de pó. Uma tensão normal foi aplicada em 8 etapas de compressão sequencial, começando em 0,5 kPa e terminando em 15 kPa. Em cada etapa, a tensão normal foi sustentada constante durante 60 segundos e a compressibilidade foi automaticamente calculada como uma mudança de porcentagem em volume. Os resultados foram plotados na Figura 10.

[00170] A porcentagem de compressibilidade medida em 15 kPa foi 54,14% e 54,63% para partículas da presente invenção. Para as partículas obtidas pelo processo descrito em PCT/IB2014/065585, a porcentagem de compressibilidade medida a 15 kPa foi 49,93%.

[00171] Estes resultados sugerem que as partículas da invenção sejam mais compressíveis comparados àqueles obtidos pelo processo descrito em PCT/IB2014/065585, que ofereceria a vantagem que carga de fármaco mais alta no produto de fármaco final poderia ser obtido usando-se as partículas da invenção.

Exemplo 7 - Medida de ângulo de fricção de parede

[00172] Método de teste de fricção de parede foi desenvolvido para avaliar a interação entre a substância de fármaco e aço inoxidável. O aparato usado é um reômetro de pó de FT-4 de tecnologia de Freeman.

[00173] Partículas de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)- 7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridi- na-1(2H)-carboxamida obtidos pelo processo da presente invenção e partículas obtidas pelo processo descrito em PCT/IB2014/065585 foram colocadas em um recipiente contendo a amostra e uma cabeça de fricção de parede para induzir ambas tensões verticais e rotacionais. A amostra em pó é preparada condicionando-se e em seguida pré-consolidação usando a lâmina de FT4 padrão e pistão ventilado.

[00174] A cabeça de fricção de parede equipada com rugosidade media de 1,2 mícron 316 discos de Aço Inoxidável move-se para baixo à superfície da amostra e induz uma tensão normal quando o disco contata o topo da amostra. A cabeça continua a mover para baixo até que a tensão normal requerida é estabelecida. Rotação lenta da cabeça de fricção de parede em seguida começa, induzindo uma tensão de cisalhamento. Um plano de cisalhamento é estabelecido entre o disco e superfícies de amostra. Quando o leito em pó resiste à rotação da cabeça de fricção de parede, a torque aumenta até que a resistência seja eventualmente superada. Neste momento, um torque máximo é observado. A cabeça de fricção de parede continua girar em 18 graus/min durante 5 minutos. O torque requerido para manter esta rotação é medido que permite uma tensão de cisalhamento de "estado estacionário" ser calculada. A tensão normal é mantida constante na tensão aplicada alvo para cada etapa ao longo daquela etapa. Uma série de valores de tensão de cisalhamento é medida para uma faixa de tensões aplicadas alvo. Devido à natureza das amostras e o fato que um torque rotacional constante exata será improvavelmente obtido, o software determina um valor médio durante 10% do tempo de cisalhamento. O ângulo de fricção de parede é em seguida calculado desenhando-se uma linha mais bem ajustada através dos pontos de dados no gráfico, e medindo o ângulo subtendido entre esta linha mais bem ajustada e o horizontal. Os resultados foram plotados na Figura 11.

[00175] O ângulo de fricção de parede medido foi 34.58 ° e 35.85 ° para partículas da presente invenção. Para as partículas obtidas pelo processo descrito em PCT/IB2014/065585, o ângulo de fricção de parede foi 43.18 °.

[00176] Estes resultados sugerem que as partículas da invenção exibam comportamento menos pegajoso a superfícies de metal e desse modo melhoraram processabilidade comparado àqueles obtidos pelo processo descrito em PCT/IB2014/065585.

Claims (11)

1. Processo para preparação de partículas de N-(5-ciano-4- ((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1- il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de: (a) dissolver N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)- 7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiri- dina-1(2H)-carboxamida em ácido propiônico; (b) adicionar ácido cítrico à solução obtida na etapa a) para obter uma suspensão compreendendo N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil) amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di- hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico; e (c) isolar as partículas de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil) ami- no)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di- hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico da suspensão obtida na etapa b.

2. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende, depois da etapa (b), uma etapa de semear a solução obtida na etapa (b) com partículas de N-(5-ciano-4- ((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1- il) metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida, na forma de sal de ácido cítrico, para obter uma suspensão compreendendo N-(5- ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopipe- razin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico.

3. Processo, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o ácido cítrico adicionado na etapa (b) é adicionado em alíquotas.

4. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o ácido cítrico adicionado na etapa (b) é adicionado como uma solução e/ou na forma sólida.

5. Processo, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que o ácido cítrico é adicionado como uma solução de ácido cítrico em um solvente selecionado a partir de heptano, éter metil terc-butílico, n-hexano, acetato de etila, acetato de n-propila, acetona, acetonitrila, tolueno, e água, ou misturas dos mesmos.

6. Partículas de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2- il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8-naftiri- dina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico, caracterizadas pelo fato de que são obtidas pelo processo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 5, e que apresentam um tamanho de partícula mediano, medido por difração de luz laser, de: (i) x50 dentre 200 e 300 mícrons, ou (ii) x10 de partícula dentre 5 e 10 mícrons, ou (iii) x90 dentre 400 e 500 mícrons.

7. Partículas primárias de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil) amino)piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di- hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico, caracterizadas pelo fato de que são obtidas pelo processo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 5, e que apresentam um tamanho de partícula mediano x50, medido por difração de luz laser, dentre 10 e 20 mícrons, sendo que as ditas partículas primárias são opcionalmente partículas primárias cristalinas apresentando uma forma cristalina colunar.

8. Aglomerado, caracterizado pelo fato de que compreende partículas primárias de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)- 7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8- naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico, obtidas pelo processo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 5, sendo que as partículas primárias de N-(5-ciano-4-((2-metóxi- etil)amino) piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4- di-hidro-1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico são como definidas na reivindicação 7.

9. Aglomerado, caracterizado pelo fato de que compreende partículas primárias de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino)piridin-2-il)- 7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro-1,8- naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de sal de ácido cítrico, obtidas pelo processo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 5, e que apresentam um tamanho mediano x50, medido por difração de luz laser, dentre 300 e 400 mícrons.

10. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende partículas de N-(5-ciano-4-((2-metóxi-etil)amino) piridin-2-il)-7-formil-6-((4-metil-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3,4-di-hidro- 1,8-naftiridina-1(2H)-carboxamida na forma de ácido cítrico, como definidas na reivindicação 6 ou 7, e, opcionalmente, um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis.

11. Uso de partículas, como definidas na reivindicação 6 ou 7, caracterizado pelo fato de que é para preparação de uma composição farmacêutica, como definida na reivindicação 10, para tratamento de câncer, sendo que o câncer é câncer do fígado, câncer de mama, glioblastoma, câncer de próstata, rabdomiossarcoma, câncer gástrico, câncer ovariano, câncer de pulmão ou câncer de cólon.