BR112017016106B1 - Composição compreendendo octanoato de cobre e um potencializador, método de tratamento de uma planta ou semente de uma planta infectada ou em risco de infecção por um patógeno fúngico, fungicida e método para tratar a infecção por um patógeno fúngico que é resistente a uma classe de cobre ou a um fungicida triazol - Google Patents

Composição compreendendo octanoato de cobre e um potencializador, método de tratamento de uma planta ou semente de uma planta infectada ou em risco de infecção por um patógeno fúngico, fungicida e método para tratar a infecção por um patógeno fúngico que é resistente a uma classe de cobre ou a um fungicida triazol Download PDF

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Abstract

potencializadores fungicidas eficazes para o tratamento de plantas infectadas com patógenos fúngicos. a presente invenção inclui composições e métodos para o tratamento de plantas infectadas com patógenos fúngicos através do contato de uma planta ou planta infectada com risco de infecção com uma composição fungicida compreendendo um fungicida selecionado de um composto de cobre tal como octanoato de cobre ou hidróxido de cobre ou um fungicida triazol tal como miclobutanil, propiconazol, tebuconazol ou epoxiconazol, um potencializador selecionado a partir de inibidores de apirase, por exemplo, n-(m-tolil)-[1,1'-bifenil]-4-sulfonamida, s-heptil-2-oxo-2h-cromeno-3-carbotioato, 3- (n-(4-bromofenil) sulfamoil)-n-(3-nitrofenil) benzamida ou (e)-3-metil-n'-(1-(naftalen-2-il) etilideno) benzo-hidrazida e, opcionalmente, um veículo inerte fitologicamente aceitável.

Description

CAMPO TÉCNICO
[001] A presente invenção refere-se em geral ao campo de fungi cidas, e mais particularmente, à eficácia realçada de fungicidas para o tratamento de plantas infectadas com patógenos fúngicos.
TÉCNICA ANTECEDENTE
[002] Sem limitar o escopo da invenção, este antecedente é des crito em conexão com composições fungicidas úteis para tratar plantas infectadas com patógenos fúngicos.
[003] Os patógenos fúngicos causam perdas devastadoras de safras e frutas pós-colheita em todo o mundo (Chen et al., 2008). Muitos fungicidas químicos foram usados em doses elevadas e intervalos frequentes para impedir estas perdas matando diferentes espécies fúngicas. O Mercado global para fungicidas foi estimado em mais de 7,4 bilhões em 2005 (Morton and Staub, 2008) e espera-se aumentar para mais de $20 bilhões em 2017 (Israel, 2013). Para reduzir o risco de doença de safra e realçar a segurança de alimentos e proteger o ambiente, novos fungicidas ou estratégias eficazes para aumentar a potência de fungicidas atuais devem ser desenvolvidos.
[004] Uma limitação à potência de fungicidas é a capacidade de fungos de desintoxicá-los rapidamente sequestrando-os ou exportando-os através da membrana plasmática. Os fungos usam diversos mecanismos para remoção de xenobióticos, e é claro que qualquer inibi- ção destes processos aumentaria a potência de fungicidas. Plantas também desintoxicam exportando-os. Um relato anterior documentou que a superexpressão de um homólogo de ABCB1 (AtPgp1) ou uma enzima apirase (NTPDase) (AtAPY1) conferiu resistência multi- herbicida às plantas A. thaliana (Windsor et al., 2003). Além disso, inibidores de atividade de enzima apirase suprimiram a capacidade da planta exportar herbicidas e, desse modo, aumentaram sua sensibilidade a estas toxinas (Windsor et al., 2003). Uma função chave de certas apirases é auxiliar manter um estado estável baixo de ATP extra- celular (eATP) (Knowles, 2011; Lim et al., 2014), que é um regulador de diversas respostas em plantas e animais (Clark et al., 2014). Considerados juntos, os dados de Windsor et al. (2003) suportaram o duplo papel quanto aos transportadores de ABC e apirases na resistência ao herbicida, e indicaram que a ruptura da atividade de apirase ou adição exógena de ATP inibiria a atividade de transporte de ABC e, desse modo, bloquearia o efluxo contínuo de compostos tóxicos.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[005] Os inibidores de apirase AI.1 {N-(m-tolil)-[1,1’-bifenil]-4-sul- fonamida}, AI.10 { 2-oxo-2H-cromeno-3-carbotioato de S-heptila}, AI.13 {3-(N-(4-bromofenil)sulfamoil)-N-(3-nitrofenil)benzamida}, e AI.15 {(E)-3- metil-N’-(1-(naftalen-2-il)etilideno) benzo-hidrazida} diferencialmente realçam o efeito de fungicidas de cobre e triazol contra fungos patogênicos de planta. Fungicidas preferidos que são suscetíveis ao realce são octanoato de cobre, hidróxido de cobre, miclobutanila, propiconazol, tebuconazol, epoxiconazol, difenoconazol, triticonazol, e protioconazol. A combinação do fungicida e potencializador selecionados fornece atividade fungicida sinérgica contra fungos patogênicos de planta.
[006] Em uma modalidade, a presente invenção inclui composi ções e métodos de tratamento de plantas ou sementes de planta infectadas com ou em risco de serem infectadas com um patógeno fúngico. As composições desta presente invenção compreendem uma formulação de um fungicida e um potencializador e um veículo inerte fitologi- camente aceitável. Os fungicidas são selecionados de um fungicida de composto de cobre ou fungicida de triazol, tal como octanoato de cobre, hidróxido de cobre, miclobutanila, propiconazol, tebuconazol, epo- xiconazol, difenoconazol, triticonazol, ou protioconazol. Exemplos do inibidor de apirase usados como potencializadores incluem: AI.1: N-(m-tolil)-[1,1’-bifenil]-4-sulfonamida, AI.10: 2-oxo-2H-cromeno-3-carbotioato de S-heptila, AI.13: 3-(N-(4-bromofenil) sulfamoil)-N-(3-nitrofenil) ben- zamida, ou AI.15: (E)-3-metil-N’-(1-(naftalen-2-il) etilideno) benzo- hidrazida.
[007] Na composição desta invenção, a relação de peso do fun gicida para potencializador em que o efeito fungicida é sinérgico situa- se na faixa dentre cerca de 500:1 e 5000:1.
[008] Outra modalidade da invenção está direcionada ao trata mento de plantas ou sementes de planta infectadas com ou em risco com infecção por fungos patogênicos de planta. O tratamento envolve contatar a planta com uma formulação do fungicida e potencializador, em que o fungicida é octanoato de cobre, hidróxido de cobre, miclobu- tanila, propiconazol, tebuconazol, epoxiconazol, difenoconazol, tritico- nazol, ou protioconazol e o potencializador é AI.1, AI.10, AI.13 ou AI.15. As formulações da presente invenção são particularmente eficazes contra os patógenos fúngicos de planta Botrytis cinerea, Colleto- trichum graminicola, Fusarium oxysporum, Sclerotiana sclerotiorum, Verticillium dahlia, Micospharella gramincola e Sphacelotheca reliana.
[009] Em outra modalidade, a presente invenção inclui um fungi cida compreendendo: um fungicida de cobre ou triazol; e um inibidor de apirase em quantidades suficientes para tratar um fungo. Em um aspecto, o inibidor de apirase é selecionado de pelo menos um de N- (m-tolil)-[1,1’-bifenil]-4-sulfonamida; 2-oxo-2H-cromeno-3-carbotioato de S-heptila; 3-(N-(4-bromofenil)sulfamoil)-N-(3-nitrofenil)benzamida; 3- (N-(4-bromofenil) sulfamoil)-N-(3-nitrofenil) benzamida; ou (E)-3-metil- N’-(1-(naftalen-2-il) etilideno) benzo-hidrazida. Em outro aspecto, o fungicida é adicionado aos meios de crescimento para o cultivo de células. Em outro aspecto, as células são selecionadas de pelo menos uma célula bacteriana, fúngica, de planta, animal, mamífera, levedura, anfíbia, aviária, nematodo ou inseto. Em outro aspecto, a composição é sinérgica e a relação de pelo do fungicida para o inibidor de apirase está entre cerca de 500:1 e 5000:1.
[0010] Ainda outra modalidade, a presente invenção inclui um mé todo de tratamento de infecção por um patógeno fúngico que é resistente a uma classe de cobre ou fungicida de triazol, o método compreendendo: contatar o patógeno fúngico com uma composição compreendendo uma classe de cobre ou triazol em combinação com um inibidor de apirase fúngica, em que o inibidor de apirase fúngica impede o fungo de pelo menos desintoxicar o fungicida ou exportar o fungicida. Em um aspecto, o fungicida é selecionado de pelo menos um de octa- noato de cobre, propiconazol, tebuconazol, ou epoxiconazol. Em outro aspecto, o patógeno fúngico é um patógeno de planta selecionado de pelo menos um de Botrytis cinerea, Colletotrichum graminicola, Fusarium oxysporum, Sclerotiana sclerotiorum, Verticillium dahlia, Micos- pharella gramincola, ou Sphacelotheca reliana. Em outro aspecto, o patógeno fúngico é um patógeno de planta e uma planta e uma planta tratada é uma planta frutífera, planta de cultura de vegetal, planta de cultura de noz ou planta de grão. Em outro aspecto, o patógeno fúngico é um patógeno de planta e uma planta tratada é morango, banana, milho, soja, tabaco, trigo ou algodão. Em outro aspecto, a composição é sinérgica e a relação de peso do fungicida para o inibidor de apirase está entre cerca de 500:1 e 5000:1.
DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[0011] Para um entendimento mais completo das características e vantagens da presente invenção, a referência é agora feita à descrição detalhada da invenção junto com as figuras acompanhantes e em que:
[0012] A figura 1 é um adendrograma mostrando a relação filoge- nética entre a apirase caracterizada de diferentes plantas e espécies de fungos. A árvore foi construída com base nas sequências de ami- noácido deduzidas de sequências de gene de apirase reportadas de diferentes plantas e fungos: Arabidopsis thaliana apirase 1 (Acesso n° NP_187058), Arabidopsis thaliana apyrase 2 (Acesso n° NP_001154717), Pisum sativum (Acesso n° BAA75506), Botrytis cinerea (Acesso n° XP_001558134), Colletotrichum graminicola (Acesso n° EFQ33146), Fusarium oxysporum (Acesso n° ENH75262), Sclerotiana sclerotiorum (Acesso n° XP_001590729) e Verticillium dahliae (Acesso n° EGY20804).
[0013] As figuras 2A a 2C são gráficos que mostram que os inibi dores de Apirase diferencialmente realçam a potência de três diferentes fungicidas. 2A. Octanoato de cobre, 2B. Propiconazol, e 2C. Miclo- butanil contra os fungos patogênicos Botrytis cinerea. A linhagem de fungos patogênicos de planta (Botrytis cinerea) foi desenvolvida em placa de Petri de meio YPD na presença de 65 μM de inibidores de apirase (AI # 1, 10, 13 e 15) a 30°C durante 12 dias. O volume equivalente de dimetilsulfóxido (DMSO) foi adicionado como um controle. Os estudos foram repetidos duas vezes com resultados similares. Barras de erro indicam desvios padrão (n=5). Os significados da potência de fungicidas são indicados: *** (teste t de Studen, P < 0, 001); **(teste t de Student, P < 0,01) ou *(teste t de Student, P < 0,05).
[0014] As figuras 3A a 3C são gráficos que mostram que os inibi dores de Apirase diferencialmente realçam a potência de realçam a potência de três fungicidas diferentes 3A. Octanoato de cobre, 3B. Propiconazol, e 3C. Miclobutanil contra os fungos patogênicos Colleto- trichum graminicola. linhagem de fungos patogênicos de planta (Colle- totrichum graminicola) foi cultivada em placa de Petri de meio YPD na presença de 65 μM de inibidores de apirase (AI # 1, 10, 13 e 15) a 30°C durante 7 dias. O volume equivalente de dimetilsulfóxido (DMSO) foi adicionado como um controle. Como um controle. Barras de erro indicam desvios padrão (n=5). Os significados da potência de fungicidas são indicados: *** (teste t de Student, P < 0. 001); **(teste t de Student, P < 0.01) or *(teste t de Student, P < 0.05).
[0015] Figuras 4A a 4C são gráficos que mostram que os inibido res de Apirase diferencialmente realçam a potência de três fungicidas diferentes 4A. Octanoato de cobre, 4B. Propiconazol, and 4C. Miclobu- tanil contra os fungos patogênicos Fusarium oxysporum. Linhagem de fungos patogênicos de planta (Fusarium oxysporum) foi cultivada em placa de Petri de meio YPD na presença de 65 μM de inibidores de apirase (AI # 1, 10, 13 and 15) at 30°C durante 12 dias. O volume equivalente de dimetilsulfóxido (DMSO) foi adicionado como um controle. Os resultados foram repetidos duas vezes com resultados similares. Barras de erro indicam desvios padrão (n=5). Os significados da potência de fungicidas são indicados: *** (teste t de Student, P < 0,001); **(teste t de Student, P < 0,01) ou *(teste t de Student, P < 0,05).
[0016] Figuras 5A a 5C são gráficos que mostram que os inibido res de Apirase diferencialmente realçam a potência de três fungicidas diferentes 5A. Octanoato de cobre, 5B. Propiconazol, e 5C. Miclobuta- nil contra os fungos patogênicos Sclerotiana sclerotiorum. A linhagem de fungos patogênicos de planta (Sclerotiana sclerotiorum) foi cultivada em placa de Petri de meio YPD na presença de 65 μM de inibidores de apirase (AI # 1, 10, 13 e 15) a 30°C durante 7 dias. O volume equi valente de dimetilsulfóxido (DMSO) foi adicionado como um controle. Os resultados foram repetidos duas vezes com resultados similares. Barras de erro indicam desvios padrão (n=5). Os significados da potência de fungicidas são indicados: *** (teste t de Student, P < 0,001); **(teste t de Student, P < 0,01) ou *(teste t de Student, P < 0.05).
[0017] As figuras 6A a 6C são gráficos que mostram que os inibi dores de Apirase diferencialmente realçam a potência de três fungicidas diferentes 6A. Octanoato de cobre, 6B. Propiconazol, e 6C. Miclo- butanil contra os fungos patogênicos Verticillium dahliae. Linhagem de fungos patogênicos de planta (Verticillium dahliae) foi cultivada em placa de Petri de meio YPD na presença de 65 μM de inibidores de apirase (AI # 1, 10, 13 e 15) a 30°C durante 12 dias. O volume equivalente de dimetilsulfóxido (DMSO) foi adicionado como um controle. Os resultados foram repetidos duas vezes com resultados similares. Barras de erro indicam desvios padrão (n=5). Os significados da potência de fungicidas são indicados: *** (teste t de Student, P < 0,001); **(teste t de Student, P < 0,01) ou *(teste t de Student, P < 0,05).
[0018] A figura 7 mostra estruturas químicas exemplares e nomes sistemáticos dos inibidores de apirase estudados (AI).
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[0019] Enquanto a preparação e uso de várias modalidades da presente invenção são discutidas em detalhes abaixo, deve-se apreciar que a presente invenção fornece muitos conceitos inventivos aplicáveis que podem ser incorporados em uma ampla variedade de contextos específicos. As modalidades específicas descritas aqui são meramente ilustrativas de meio específicos para preparer e usar a invenção e não delimiter o escopo da invenção.
[0020] Como usado aqui, o termo "potencializador", "potenciador", refere-se a um composto ou compostos que inibem a atividade de api- rase enzimática (um "inibidor de apirase", "AI" ou "ai"), que induz ao realce, acentuação ou potenciação de um fungicida. Por exemplo, quando o potencializador ou potenciador é usado em conjunção com um fungicida, a combinação do potenciador e do fungicida realça o efeito fungicida do fungicida e/ou torna um fungo que tornou-se resistente ao fungicida suscetível ao fungicida como um resultado da atividade do potenciador. Mais frequentemente, estes potencializadores ou potenciadores não têm nenhuma atividade desfavorável sobre o próprio fungo ou um organismo vivo que é (ou seria) infectado com um fungo. Os potenciadores da presente invenção são inibidores de apira- se que alvejam a resistência fúngica aos fungicidas. Exemplos não li- mitantes de potenciadores da presente invenção incluem: N-(m-tolil)- [1,1’-bifenil]-4-sulfonamida (Inibidor de Apirase 1 ou (AI.1)); 2-oxo-2H- cromeno-3-carbotioato de S-heptila; 3-(N-(4-bromofenil) sulfamoil)-N- (3-nitrofenil)benzamida (AI.10); 3-(N-(4-bromofenil)sulfamoil)-N-(3-nitro- fenil)benzamida (AI.13); e/ou (E)-3-metil-N’-(1-(naftalen-2-il)etilideno) benzo-hidrazida (AI.15). A figura 7 mostra estruturas químicas exemplares e nomes sistemáticos dos inibidores de apirase estudados (AI). Em certas modalidades, o potencializador ou potenciador de fungicida faz com que uma quantidade subideal do fungicida torne-se ideal para o tratamento do fungo, desse modo reduzindo a quantidade de fungicida necessária para tratar o fungo. Dada à resistência aumentada dos fungos aos agentes fungicidas devido ao uso excessivo de fungicidas, a presente invenção não apenas torna os fungos resistentes, de outro modo também suscetíveis, isto é acreditados também reduzir a oportunidade dos fungos tornarem-se resistentes a fungicidas como um resultado de uso de um regime de dose menor.
[0021] Apirases são enzimas cuja característica unificadora é sua capacidade de hidrolisar o gama fosfato de ATP e, em um grau menor, o beta fosfato de ADP. A maioria das apirases é expressa como proteínas associadas à membrana plasmática com sua atividade hidrolítica voltada dentro da matriz extracelular. Apirases extracelulares são fre-quentemente referidos como ecto-apirases. As ecto-apirases frequentemente hidrolisam a ATP extracelular.
[0022] Resistência fúngica a fungicidas é frequentemente causada pelo fungo que desenvolve a capacidade de desintoxicar rapidamente os fungicidas, por exemplo, sequestrando o fungicida ou exportando o fungicida através da membrana plasmática. Os fungos usam diversos mecanismos para remover estes xenobióticos, como tal, enfrentar este efeito tem sido difícil. A inibição de resistência fúngica à desintoxicação xenobiótica aumentaria a potência de fungicidas e/ou tornar os fungos que se tornaram resistente a fungicidas suscetíveis novamente.
[0023] Os compostos desta invenção podem ser aplicados na for ma de uma composição compreendendo um fungicida, o inibidor de apirase da presente invenção com, por exemplo, um veículo ou diluen- te fitologicamente aceitável ótico. Estas composições frequentemente serão formulações concentradas que podem ser diluídas em água, ou outro líquido, para aplicação. Em certas modalidades, as composições podem também ser formulados em partículas ou formulações granulares que são vaporizadas ou aplicadas sem outro tratamento.
[0024] Como usado aqui, o termo "fitologicamente aceitável" refe re-se às composições, dieluentes, excipientes, e/ou veículos que são geralmente aplicáveis para uso com qualquer parte de uma planta durante qualquer parte de seu ciclo de vida, incluindo, porém não limitada às sementes, mudas, células de planta, plantas, ou flores. As composições podem ser preparadas de acordo com os procedimentos, métodos e fórmulas que são convencionais nas técnicas agrícolas. Seguindo os ensinamentos da presente invenção, o técnico versado nas técnicas agrícolas e/ou químicas pode facilmente preparar uma composição desejada. Mais comumente, os compostos da presente invenção podem ser formulados para serem armazenados, e/ou apli- cados, como suspensões ou emulsões aquosas ou não aquosas preparadas puras ou de formulações concentradas das composições. Formulações solúveis em água, suspensíveis em água ou emulsificá- veis podem também ser convetidas em ou formuladas como sólidos (por exemplo, pós umectáveis), que podem ser diluídos em umaa formulação final. Em certas formulações, as composições da presente invenção podem também ser fornecidas em meio de crescimento, por exemplo, meios in vitro para o cultivo de planta ou outros tipos de células, em meios de crescimento de planta de laboratório, em solo, ou para vaporizar sobre as sementes, mudas, raizes, caules, talos, folhas, flores ou a planta inteira.
[0025] Os presentes inventores reconheceram que a capacidade de inibidores de apirase de suprimir a exportação de herbicidas de células planta inibindo-se a atividade de transporte de ABCB aumentou a possibilidade que de eles suprimiriam a exportação de fungicidas de fungos patogênicos e desse modo realçariam a potência de fungicidas. Transportadores de ABC desempenham um papel chave em auxiliar a resistência de fungos patogênicos a fungicidas exportando os fungicidas (Kretschmer et al., 2009). Não foi possível prever que os inibidores de apirase de planta seriam eficazes contra os transportadores de ABC fúngico (visto que eles são contra transportadores de ABCD de planta) ou que eles realçariam a potência fungíca de fungicidas, assim como eles realçariam a potência herbicida de herbicidas.
[0026] As apirases são bem estudadas em células de animais e células de planta, porém são bem menos caracterizadas em fungos patogênicos de planta (Knowles et al., 2011; Clark et al., 2014). Ecto- fosfatases fúngicas são melhor caracterizadas e podem também hidro- lisar ATP e ADP apesar de seu Km para estes substratos ser muito maior do que aquele de apirases. As ectofosfatases mostraram desempenhar papéis importantes em processos de nutrição, proliferação, diferenciação, adesão, virulência e infecção, assim eles afetariam a resistência fúngica a fungicida de outros modos. A adesão às células hospedeiras é a primeira etapa no estabelecimento de uma infecção fúngico e as ectofosfatases podem ser uma das primeiras proteínas parasitas que entram em contato com as células hospedeiras. Diversos resultados indicam que as atividades de ectofosfatase aumentam a potência dos fungos aderir-se às células hospedeiras (Freitas- Mesquita AL et al., 2014).
[0027] A presente invenção demonstra pela primeira vez que os inibidores de apirase específicos realçam a potência dos fungicidas comumente disponíveis para restringir mais eficazmente o crescimento de diversas espécies fúngicas patogênicas de planta. Em certas modalidades, não limitantes, os inibidores de apirase podem ser fornecidos em: 0,01, 0,05, 0,1, 0,5, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2,0, 2,5, 3,0, 4,0, 5,0, 7,5, e 10% de peso para peso em uma composição final. Quando fornecidos em forma líquida, os inibidores de apirase podem ser fornecidos em: 0,01, 0,05, 0,1, 0,5, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2,0, 2,5, 3,0, 4,0, 5,0, 7,5, e 10% de volume para volume em uma composição diluída final. O técnico versado reconhecerá que a formulação do fungicida e do inibidor de apirase pode ser fornecida em um concentrado que pode ser diluído antes do uso, ou pode ser fornecida em uma forma diluída pronta para o tratamento.
[0028] Para os propósitos de teste, os vários fungicidas e inibido res usados com a presente invenção foram usados em certas concentrações. O técnico versado reconhecerá que as várias composições são usadas comercialmente em concentrações e formulações variáveis. Por exemplo, é comum os fungicidas serem aplicados comercialmente em concentrações de 14 a 30% devido às, por exemplo, regulações ambientais. A presente invenção encontrou usos particulares com vários fungicidas conhecidos por terem se tornado menos efica- zes como um resultado de resistência fúngico aumentada, por exemplo, fungicidas de cobre e triazol.
[0029] Por exemplo, Propiconazol é um membro da classe de triazol de fungicidas, o maior grupo de fungicidas por participação de mercado. Propiconazol é usado em frutas, vegetais, culturas em linha e gramíneas para controlar uma variedade de doenças fúngicas. Mi- clobutanil é também um membro da classe de triazol de fungicidas. Miclobutanil é usado em frutas, vegetais, culturas em linha e gramí- neas para controlar uma variedade de doenças fúngicas.
[0030] Octanoato de cobre é um membro da classe de compostos de cobre de fungicidas, que é a segunda maior classe de fungicidas nos Estados Unidos por participação de mercado. Octanoato de cobre é usado primeiramente em frutas e vegetais para controlar uma variedade de doenças fúngicas.
[0031] A presente invenção visa fornecer formulações fungicidas particulares eficazes contra os patógenos fúngicos de planta, por exemplo, Botrytis cinerea, Colletotrichum graminicola, Fusarium oxys- porum, Sclerotiana sclerotiorum, Verticillium dahlia, Micospharella gramincola and Sphacelotheca reliana.
[0032] Botrytis cinerea é um patógeno de planta aerotransportado com um estilo de vida necrotrófico que ataca mais de 200 hospedeiros de cultura no mundo todo. Ele ataca principalmente espécies de planta dicotiledôneas, incluindo proteína importante, óleo, culturas hortículas e de fibra, uvas e morangos. Muitas classes de fungicides falharam em controlar a Botrytis cinerea devido a sua plasticidade genética (Williamson et al., 2007). Botrytis também causa putrefação branda secundária de frutas e vegetais durante armazenagem, trânsito e no mercado (González et al., 2006).
[0033] O gênero Colletotrichum compreende ~600 espécies que atacam mais de 3.200 espécies de plantas monocotiledôneas e dicoti- ledôneas. Colletotrichum graminicola primeiramente infecta o milho (Zea mays), causando perdas anuais de aproximadamente 1 bilhão de dólares apenas nos Estados Unidos (Connell et al., 2012).
[0034] Murcha de Fusarium da bananeira, causada pelo fungo ori ginado do solo, Fusarium oxysporum f.sp. cubense, foi primeiro reportada na Austrália em 1874. Murcha de Fusarium da bananeira é uma grande ameaça à produção de banana no mundo todo. Nenhum fungicida está atualmente disponível para eficazmente controlar a doença, uma vez que as plantas são infectadas (Peng J et al., 2014).
[0035] O fungo do mofo branco, Sclerotinia sclerotiorum, é conhe cido atacar mais do que 400 espécies hospedeiras e é considerado um dos patógenos de planta mais abrangentes. A maioria destas espécies é dicotiledônea, junto com diversas plantas monocotiledôneas agrico- lamente significantes (Bolton et al., 2006). Algumas culturas importantes afetadas por S. sclerotiorum incluem legumes (soja), a maioria dos vegetais, drupas e tabacos.
[0036] O ascomiceto, Verticillium dahliae, é um patógno de planta fúngico transmitido pelo solo que causa doenças de murchamento vascular em uma ampla faixa de espécies hospedeiras dicotiledôneas (Klosterman et al., 2009). V. dahliae pode causar diversas perdas de- produção e qualidade em culturas de algodão e outras culturas importantes tais como vegetais, fibras, fruta, árvores de frutos de casca rija, árvores de floresta e plantas ornamentais (Bhat and Subbarao, 1999; Pegg and Brady, 2002).
[0037] O fungo de ascomiceto, Micospharella gramincola, (ana- morfo: Septoria tritici) é uma da doenças foliares mais importantes das folhas de trigo, ocorrendo quer que o trigo seja cultivado. As perdas de produção atribuídas a esta doença varia de 25% a 50%, e são especialmente elevadas na Europa, a região Mediterrânea e África Oriental. Infecção por M. gramincola é iniciada por ascoporos areotransportados produzidos em resíduos da colheita da última temporada. A infecção primária geralmente ocorre após as mudas emergirem na primavera ou outono. A doença Madura é caracterizada por lesões necróticas nas folhas e caules de plantas infectadas.
[0038] O fungo basidiomiceto, Sphacelotheca reliana, infecta o mi lho (Zea mays) sistemicamente, causando Head Smut. A perda de produção atribuída à doença é variável, e é diretamente dependente da incidência da doença. Invernos como teliósporos diploide em resíduos de cultura ou solo. As estruturas florais são convertidas em sori contendo massas de teliósporos em pó que se assemelham às galhas maduras de fuligem comum.
[0039] As linhagens fúngicas patogênicas de planta Botrytis cine- rea, Colletotrichum graminicola, Fusarium oxysporum, Sclerotiana sclerotiorum e Verticillium dahliae foram obtidas do Institute for Plant Genomics & Biotechnology, Texas A & M University, USA. Ágar Dextrose batata (PDA, Sigma-Aldrich) foi rotineiramente usado para o cultivo de diferentes linhagens fúngicas patogênicas de planta.
[0040] Os inibidores de ectofosfatase NGXT191 (AI. 1), AI.10, NGXT1913 (AI. 13), e AI. 15 foram usados neste estudo. Os fungicidas octanoato de cobre (C16H30CuO4), miclobutanil (C15H17ClN4) e propico- nazol (C15H17Cl2N3O2) foram usados. As concentrações destes compostos usadas foram de octanoato de cobre (285 mM), miclobutanil (53.6 mM) and propiconazol (418 mM).
Teste de crescimento fúngico:
[0041] Testes de disco de suscetibilidade antifúngica padrão foram realizados para determinar qualquer efeito de potenciação de inibidores de ectofosfatase sobre o crescimento de fungo patogênico. As linhagens do tipo selvagem de fungo patogênico foram semeadas em meio de PDA com discos de papel contendo fungicidas no centro da placa. As placas contendo os inibidores de ectofosfatase (65 DM) ou uma concentração igual de solvente de DMSO (serviu como um controle), que, quando aplicados sozinhos, não afetaram o crescimento de fungos patogênicos. As placas foram incubadas a 30oC durante 7 dias (C. graminicola e S. sclerotiorum) ou 12 dias (B. cinerea, F. oxysporum e V. dahliae), dependendo da taxa de crescimento dos fungos. As placas foram fotografadas, e a zona de inibição de crescimento fúngico foi medida usando o software IMAGE JTM (NIH, USA). Todos os testes foram realizados com 5 replicações. Os estudos foram realizados duas vezes. Os resultados foram analisados quanto à significância usando testes t de Student.
[0042] Análise filogenética e sequência de apirase:
[0043] A comparação da sequência de aminoácido deduzida de api- rase (trifosfato de nucleosídeo-difosfo-hidrolases) de diferentes plantas e fungos patogênicos, Arabidopsis thaliana apirase 1 (Acesso n° NP_187058), Arabidopsis thaliana apirase 2 (Acesso n° NP_001154717), Pisum sativum (Acesso n° BAA75506), Botrytis cinerea (Acesso n° XP_001558134), Colletotrichum graminicola (Acesso n° EFQ33146), Fusarium oxysporum (Acesso n° ENH75262), Sclerotiana sclerotiorum (Acesso n° XP_001590729) e Verticillium dahliae (Acesso n° EGY20804) foi feita. Um alinhamento múltiplo das sequências de ami- noácido deduzidas revelou que a estrutura primária das apirases de diferentes fungos patogênicos difere no tamanho de suas extremidades C de outras apirases de planta conhecidas, porém mantém os domínios de superfamília GDA1/CD39 (nucleosídeo fosfatase) funcionalmente importantes conservados. Dos cinco fungos estudados, B. cinerea não tem nenhuma região de ligação de nucleotídeo do domínio da superfamília açúcar cinase/HSP70/actina, porém esta região está presente em C. graminicola, F. oxysporum, S. sclerotiorum e V. dahliae. A árvore filogenética mostra que C. graminicola e V. dahliae são próximos um do outro e se situam na mesma ramificação, enquan- to B. cinerea, F. oxysporum e S. sclerotiorum situam-se em diferentes ramificações (Fig. 1).
[0044] Inibidores de apirase inibem o crescimento de patógeno fúngico de planta:
[0045] Os seguintes exemplos de inibidores de ectofosfatase (api- rase) foram usados neste estudo: Fórmula: C19H17NO2S NOME - N-(m-tolil)-[1,1’-bifenil]-4-sulfonamida AI.1: N-(m-tolil)-[1, 1’-bifenil]-4-sulfonamida. Fórmula: C17H20O3S NOME - 2-oxo-2H-cromeno-3-carbotioato de S-heptila AI.10: 2-oxo-2H-cromeno-3-carbotioato de S-heptila. Fórmula: C19H14N3O5SBr NOME - 2-(N-4-bromofenil)sulfamil)-N-(3-nitrofenil)benzamida AI.13: 3-(N-(4-bromofenil) sulfamoil)-N-(3-nitrofenil) benzamida. Fórmula: C20H18N2O NOME - (E)-metil-N’-(1-naftaleno-2-il)etilideno)benzo-hidrazida AI.15: (E)-3-metil-N’-(1-(naftalen-2-il) etilideno) benzo-hidrazida.
[0046] Estes inibidores de apirase diferencialmente realçaram o efei to de composto de cobre e fungicidas de triazol (octanoato de cobre, mi- clobutanila, propiconazol, tebuconazol ou epoxiconazol) contra os fungos patogênicos de planta, como julgado pelos ensaios de placa usados (Wang et al., 2012) e descritos em detalhes nas seguintes seções.
[0047] Quando cada um dos compostos, abreviados para conveni ência como: AI.1, AI.10, AI.13 e AI.15 (acima), respectivamente, foram testados sozinhos em ensaios de placa fúngica, nenhuma atividade fungicida foi detectada. Os inibidores de apirase testados não mostraram nenhum efeito sobre o crescimento fúngico.
Exemplo 1: Botrytis cinerea
[0048] O fungo patogênico B. cinereal foi cultivado na presença de fungicidas (Octanoato de cobre, Miclobutanil e Propiconazol) suplementados com inibidores de apirase AI.1, AI.10, AI.13 e AI. 15. Octa- noato de cobre combinado com o inbidor AI.1 teve um efeito inibitório significantemente maior sobre o crescimento de B. cinerea (22%) em comparação com octanoato de cobre sozinho (Fig. 2A). Além disso, miclobutanil combinado com os inibidores AI.1, AI.13 e AI.15, teve um efeito inibitório significantemente maior sobre o crescimento de B. ci- nerea em comparação com aquele de miclobutanil sozinho (Fig. 2B). O fungicida propiconazol combinado com os inibidores AI.1, AI.10 e AI.15 teve um grande efeito inibitório sobre o crescimento de B. cinerea em comparação com o propiconazol sozinho (Fig. 2C).
Exemplo 2: Colletotrichum graminicola
[0049] O fungo patogênico C. graminicola foi cultivado na presen ça de fungicidas (octanoato de cobre, miclobutanil e propiconazol) su-plementados com inibidores de apirase AI.1, AI.10, AI.13 e AI.15. Oc- tanoato de cobre combinado com os inibidores AI.1 e AI.13 teve um efeito inibitório significantemente maior sobre o crescimento de C. graminicola em comparação com aquele de octanoato de cobre sozinho (Fig. 3A). Na presença dos inibidores AI.1, AI.10, AI.13 and AI.15, o fungicida miclobutanil teve um efeito inibitório significantemente maior sobre o crescimento de C. graminicola em comparação com aquele de miclobutanil sozinho (Fig. 3B). Nenhum dos quatro inibidores junto com propiconazol foi capaz de inibir o crescimento de fungo mais sig- nificantemente do que o propiconazol usado sozinho (Fig. 3C).
Exemplo 3: Fusarium oxysporum f. sp cubense
[0050] O fungo patogênico F. oxysporum foi cultivado na presença de fungicidas (octanoato de cobre, miclobutanil e propiconazol) suple-mentados com inibidores de apirase AI.1, AI.10, AI.13 e AI.15. Octa- noato de cobre combinado com os inibidores AI.1 e AI.13 teve um efeito inibitório significantemente maior sobre o crescimento de F. oxyspo- rum do que octanoato de cobre sozinho (Fig. 4A). O fungicida miclobu- tanil na presença do inibidor AI.10 teve um efeito inibitório significan- temente maior sobre o crescimento de F. oxysporum do que o miclo- butanil sozinho (Fig. 4B). Na presença de AI.10, o fungicida propicona- zol teve um efeito inibitório significantemente maior sobre o crescimento de F. oxysporum do que o propiconazol sozinho (Fig. 4C).
Exemplo 4: Sclerotiana sclerotiorum
[0051] O fungo patogênico Sclerotiana sclerotiorum foi cultivado na presença de fungicidas (octanoato de cobre, miclobutanil e propiconazol) suplementados com inibidores de apirase AI.1, AI.10, AI.13 e AI.15. Oc- tanoato de cobre combinado com os inibidores AI.1, AI.10, AI.13 e AI.15 teve um efeito inibitório significantemente maior sobre o crescimento de Sclerotiana sclerotiorum do que o octanoato de cobre sozinho (Fig. 5A). Miclobutanil na presença dos inibidores AI.1, AI.10, AI.13 e AI.15 teve um efeito inibitório significantemente maior sobre o crescimento de Sclerotia- na sclerotiorum do que o miclobutanil (Fig. 5B) sozinho. O fungicida pro- piconazol combinado com os inibidores AI.1, AI.10, AI.13 e AI.15 teve um efeito inibitório significantemente maior sobre o crescimento de Sclerotia- na sclerotiorum do que o propiconazol sozinho (Fig. 5C).
Exemplo 5: Verticillium dahliae
[0052] O fungo patogênico V. dahliae foi cultivado na presença de fungicidas (octanoato de cobre, miclobutanil e propiconazol) suplementados com inibidores de apirase AI.1, AI.10, AI.13 eAI.15. Octanoato de cobre combinado com os inibidores AI.1, AI.10, AI.13 e AI.15 teve um efeito inibitório significantemente maior sobre o crescimento de fungus V. dahliae do que o octanoato de cobre sozinho (Fig. 6A). Mi- clobutanil combinado com o inbidor AI.15 teve um efeito inibitório signi- ficantemente maior sobre o crescimento de V. dahliae do que miclobu- tanil sozinho (Fig. 6B). Propiconazol na presença dos inibidores AI.10 e AI.15 teve um efeito inibitório significantemente maior sobre o crescimento de V. dahliae do que o propiconazol sozinho (Fig. 6C).
Exemplo 6: Tebuconazol e AI
[0053] Os compostos foram testados quanto à eficácia da doença em combinação com o fungicida RAXIL® (tebuconazol), junto com uma baixa taxa de metalaxila sobre a semente de trigo. As taxas de tebuco- nazol, 0,15 e 0,25 gm de ai/100 kg, testados em combinação com o po- tencializador AI.1 foram de 7,5 e 10 vezes abaixo da taxa de aplicação comercial de 1,5 gm ai/100 kg. As análises da doença foam pré- realizadas com as taxas reduzidas de tebuconazol e metalaxila para garantir a falta de eficácia nstas taxas menores. O triazol na taxa padrão de 1,5 gm de ai/100 kg foi incluído no estudo como um controle. Os produtos foram aplicados tanto como um tratamento excessivo sobre a semente pré-tratada com a combinação de tebuconazol + metalaxila quanto uma suspensão aquosa simples com dois fungicidas. Duas taxas, 2,5 e 10 gm de ai/100kg, de Potencializador AI.1 foram avaliadas.
[0054] Bioensaios gerados por semente. Os bioensaios gerados por semente são realizados em caixas fechadas estéreis que permitem que os patógenos fúngicos transmitidos por semente sejam detectados. Caixas de sapatos plásticas são de superfície esterilizada e papéis de sacola estéreis são colocados no fundo de cada recipiente. As avaliações de monocotiledôneas diferem das avaliações de dicotiledô- neas com base nos métodos usados para matar as sementes. As mo- nocotiledôneas são colocadas em garrafas umedecidas com água estéril e deixados incubar a 25°C durante 1 dia seguido pela colocação em 0°C durante 24 horas para matar os embriões de semente. As sementes dicotiledôneas são colocadas em garrafas embebidas com uma solução branda de herbicida 2,4-D para matar os embriões. As caixas de bioensaio são em seguida colocadas a 25°C durante 7 dias. O crescimento fúngico é observado e notado através de avaliação por microscópio de cada semente. Duas replicações de 50 sementes cada são normalmente feitas. Os resultados são fornecidos na tabela 1. Tabela 1. A eficácia de doença transmitida por semente de tratamento de semente com o fungicida RAXIL® (tebuconazol) e Potencializador AI.1. • Populações fúngicas foram contagens combinadas quanto às populações de Alternaria, Aspergillus, Fusarium, Penicillium, e Cladosporium
[0055] Teste NSL+. Uma análise de argila arenosa natural (NSL) é composta de uma mistura 1:1 de areia para argila, em que a argila é naturalmente infestada com Pythium spp. E outros micróbios endêmicos ao solo. O teste NSL+ mantém a mesma mistura de solo e um componente adicional de Fusarium graminearum. Um isolado apropriado de F. graminearum foi inoculado na zona de semente. As sementes plantadas são colocadas em uma atmosfera de 10°C para permitir um ambiente ideal para pressão Pythium. Após 10 dias sob as condições descritas acima; as sementes foram movidas para a estufa (27°C) para emergência de muda e avaliação de sobrevivência. O teste NSL+ permite a avaliação de um composto tanto para a atividade de Pythium quanto Fusarium no mesmo ensaio, similar às condições de campo típicas. Todos os tratamentos foram replicados cinco vezes e a colocação na estufa foi randomizada. A emergência e sobrevivência de mudas foi avaliada. Um controle estéril foi incluindo em todas as análises. O controle estéril foi composto de sementes não tratadas sendo colocadas em uma mistura de NSL. Os resultados são fornecidos nas tabelas 2 e 3. Tabela 2. Tabela 3: Experimento de teste mostra o realce de Raxil (tebuconazol) contra Head Smut (Sphacelotheca reiliana) em milho.
Exemplo 7: Comparação de diferentes Inibidores de Apirase na Atividade de Epoxiconazol
[0056] Os isolados foram cultivados em ágar de Dextrose Batata de levedura. O teste de sensibilidade ao fungicida com base em medições de OD foi realizado em placas de 96 cavidades usando aproximadamente 10.000 esporos por cavidade (contagens de esporo por microscópio). As concentrações de teste de potencializadores foram de 0, 0,003, 0,016, 0,08, 0,4, 2, 10 e 50 Dg ml-1. As concentrações de fungicida testadas foram de 0, 0,00128, 0,0064, 0,016, 0,032, 0,08, 0,16, 0,8, 4, 10, 20 e 50 ng ml-1. Os resultados são fornecidos nas tabelas 4 e 5. Tabela 4. Efeito de diferentes inibidores de apirase sobre a suscetibilidade de epoxiconazol de isolado de Micosphaerella graminicola FLU4- 02.
[0057] O potencializador A.I.1 é N-(m-tolil)-[1, 1’-bifenil]-4- sulfonamida.
[0058] O potencializador A.I. 2 é 3-hexil-2,3-di-hidro-N,4- difeniltiazol-2-amoniobrometo.
[0059] O potencializador A.I. 10 é 2-oxo-2H-cromeno-3-carbotioato de S-heptila.
[0060] O potencializador A.I. 12 é 2-[(N-ciclo-hexilglicil) amino]- 4,5,6,7-tetra-hidro-1-benzotiofeno-3-carboxilato de etila.
[0061] O potencializador A.I. 14 é (E)-N’-(2-hidróxi-5-nitobenzili- deno)hexano-hidrazida.
[0062] O potencializador A.I. 16 é 2-(4-chlorofenilcarbamoil) ben- zoato de prop-2-inila. Tabela 5. Efeito de Potencializador A.I.1 sobre a suscetibilidade de diferentes fungicidas de isolado de Septoria tritici G3-03.
[0063] As composições desta invenção são aplicadas às plantas na forma de dispersões, soluções, suspensões, aerossóis, e pó, que compreendem o fungicida e potencializador desta invenção e um veículo inerte fitologicamente aceitável. O veículo mais amplamente usa- do é água. As composições são formulações concentradas que são dispersas em água para aplicação, ou são formulações em pó ou granulares que são aplicadas sem outro tratamento. As composições são preparadas de acordo com os procedimentos e fórmulas que são convencionais na técnica química agrícola, porém que são novos e importantes devido à presença nelas dos compostos desta invenção.
[0064] A quantidade real da composição a ser aplicada à planta não é crítica e pode facilmente ser determinada por aqueles versados na técnica. Em geral, espera-se que as concentrações de 10 ppm a 5000 ppm por peso de composto ativo forneça bom controle. Com a maioria dos compostos, concentrações de 100 a 1500 ppm serão suficientes.
[0065] Doenças fúngicas de planta podem ser controladas apli cando quantidades eficazes da composição inventive aos patógenos de planta ou um lugar onde os patógenos de planta habitam ou um lugar (planta, solo) onde os patógenos de planta podem habitar. Doenças de planta podem ser controladas aplicando-se quantidades eficazes das composições a uma planta ou um lugar onde uma planta é deixada crescer. Especificamente, a aplicação é feita ao caule e folhas da planta, semente da planta, bulbos da planta incluindo o bulbo, cor- mo, rizoma, tubérbulo-caule, tubérculo-raiz, e rizóforo.
[0066] Como o tratamento do solo no método de controle da pre sente invenção, por exemplo, pulverização no solo, mistura com o solo, perfusão de um agente líquido no solo (irrigação de uma agente líquido, injeção no sólido, gotejamento de um agente líquido) podem ser incluídas. O tratamento pode ser realizado antes da disseminação, no momento da disseminação, imediatamente após a disseminação, durante o aumento do período de mudas, antes do plantio estabelecido, no momento do plantio estabelecido e tempo de crescimento após o plantio estabelecido.
[0067] Contempla-se que qualquer modalidade descrita neste rela- tório descritivo pode ser implementada com respeito a qualquer método, kit, reagente, ou composição da invenção, e vice versa. Além disso, as composições da invenção podem ser usadas para obter os métodos da invenção.
[0068] Será entendido que as modalidades particulares descritas aqui são mostradas por meio de ilustração e não como limitações da invenção. As principais características desta invenção podem ser em-pregadas em várias modalidades sem afastar-se do escopo da invenção. Aqueles versados na técnica reconhecerão, ou serão capazes de verificar usando não mais do que a experimentação de rotina, numerosos equivalentes aos procedimentos específicos descritos aqui. Tais equivalentes são considerados estar no escopo desta invenção e são abrangidos pelas reivindicações.
[0069] Todas as publicações e pedidos de patente mencionados no relatório descritivo são indicativos do nível de versalidade daqueles versados na técnica à qual esta invenção pertence. Todas as publicações e pedidos de patente são incorporados aqui por referência no mesmo nível como se cada publicação ou pedido de patente fosse específico e individualmente indicado ser incorporado por referência.
[0070] O uso da palavra "um, uma (a)" ou "um, uma (an)" quando usada em conjunção com o termo "compreendendo" nas reivindicações e/ou o relatório descritivo pode significar "um", porém é também consistente com o significado de "um ou mais," "pelo menos um," e "um ou mais do que um." O uso do termo "ou" nas reivindicações é usado para significar "e/ou" a menos que explicitamente indicado para referir-se às alternativas apenas ou as alternativas são mutualmente exclusivas, embora a invenção suporte uma definição que se refere apenas às alternativas e "e/ou". Por todo ste pedido, o termo "cerca de" é usado para indicar que um valor inclui a variação inerente de erro quanto ao dispositivo, o método sendo empregado para determinar o valor ou a variação que existe entre os objetos de estudo.
[0071] Como usado neste relatório descritivo e reivindicação(s), as palavras "compreendendo" (e qualquer forma de compreender, tal como "compreendem" e "compreende"), "tendo" (e qualquer forma de ter, tal como "têm" e "tem"), "incluindo" (e qualquer forma de incluir, tal como "inclui" e "incluem") ou "contendo" (e qualquer forma de conter, tal como "contém" e "contêm") são inclusivas ou não limitadas e não excluem elementos ou etapas de método adicionais, não relacionados.
[0072] O termo "ou combinações dos mesmos" como usado aqui refere-se a todas as permutações e combinações dos itens listados precedendo o termo. Por exemplo, "A, B, C, ou combinações dos mesmos" é destinado a incluir pelo menos um de: A, B, C, AB, AC, BC, ou ABC, e se a ordem for importante em um contexto particular, também BA, CA, CB, CBA, BCA, ACB, BAC, ou CAB. Continuando com este exemplo, expressamente incluídas estão as combinações que contém repetições de um ou mais itens ou termos, tais como BB, AAA, AB, BBC, AAABCCCC, CBBAAA, CABABB, e assim por diante. O técnico versado entenderá que tipicamente não existe sobre o número de itens ou termos em qualquer combinação, a menos que de outro modo evidente a partir do contexto.
[0073] Todas as composições e/ou métodos descritos e reivindicados aqui podem ser feitos e executados sem experimentação indevida à luz da presente invenção. Embora as composições e métodos desta invenção te-nham sido descritos em termos de modalidades preferidas, será evidente para aqueles versados na técnica que variações podem ser aplicadas às composições e métodos e nas etapas ou na sequência de etapas do método descrito aqui sem afastar-se do conceito, espírito e escopo da invenção. Todos os tais substitutos e modificações similares aparentes para aqueles versados na técnica são considerados estar dentro do espírito, escopo e conceito da invenção, como definido pelas reivindicações anexas.

Claims (21)

1. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende: octanoato de cobre e um potencializador selecionado de N- (m-tolil)-[1,1'-bifenil]-4-sulfonamida, S-heptil-2-oxo-2H-cromeno-3- carbotioato, 3-(N-(4-bromofenil)sulfamoil)-N-(3-nitrofenil)benzamida, ou (E)-3-metil-N'-(1-(naftalen-2-il)etilideno)benzohidrazida.
2. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a composição compreende ainda um veículo inerte fitologicamente aceitável.
3. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o potencializador é fornecido a 0,005, 0,01, 0,05, 0,1, 0,5, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2,0, 2,5, 3,0, 4,0, 5,0, 7,5, ou 10% em peso do potencializador para o fungicida.
4. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o potencializador é fornecido a 0,005, 0,01, 0,05, 0,1, 0,5, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2,0, 2,5, 3,0, 4,0, 5,0, 7,5 ou 10% em volume do potencializador para o fungicida.
5. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a composição é sinérgica e a proporção em peso do fungicida para o potencializador está entre 500:1 e 5000:1.
6. Método de tratamento de uma planta ou semente de uma planta infectada ou em risco de infecção por um patógeno fúngico de planta, caracterizado pelo fato de que compreende: colocar a planta ou semente de uma planta em contato com uma composição que compreende: octanoato de cobre e um potencializador selecionado de N- (m-tolil)-[1,1'-bifenil]-4-sulfonamida, S-heptil 2-oxo-2H-cromeno-3- carbotioato, 3-(N-(4-bromofenil)sulfamoil)-N-(3-nitrofenil)benzamida ou (E)-3-metil-N'-(1-(naftalen-2-il)etilideno)benzohidrazida.
7. Método de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que o patógeno fúngico de planta é Botrytis cinerea, Colletotrichum graminicola, Fusarium oxysporum, Sclerotiana sclerotiorum, Verticillium dahlia, Mycospharella gramincola ou Sphacelotheca reliana.
8. Método de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que a planta é uma planta carregada de frutos, planta carregada de vegetais, planta carregada de noz ou planta de grãos.
9. Método de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que a planta é morango, banana, milho, soja, tabaco, trigo ou algodão.
10. Método de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que a composição compreende ainda um diluente.
11. Método de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que o potencializador é fornecido a 0,01, 0,05, 0,1, 0,5, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2,0, 2,5, 3,0, 4,0, 5,0, 7,5 ou 10% em peso do potencializador para o fungicida.
12. Método de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que o potencializador é fornecido a 0,01, 0,05, 0,1, 0,5, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2,0, 2,5, 3,0, 4,0, 5,0, 7,5 ou 10% em volume do potencializador para o fungicida.
13. Método de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que a composição é sinérgica e a relação em peso do fungicida para o intensificador está entre 500:1 e 5000:1.
14. Fungicida, caracterizado pelo fato de que compreende: octanoato de cobre e um inibidor de apirase selecionado de N-(m-tolil)-[1,1'-bifenil]-4-sulfonamida, S-heptil 2-oxo-2H-cromeno-3- carbotioato, 3-(N-(4-bromofenil)sulfamoil)-N-(3-nitrofenil)benzamida ou (E)-3-metil-N'-(1-(naftalen-2-il)etilideno)benzohidrazida, em quantidades suficientes para tratar um fungo.
15. Fungicida de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o fungicida é adicionado a um meio de crescimento para células em crescimento.
16. Fungicida de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que as células são selecionadas de pelo menos uma das células bacterianas, fúngicas, vegetais, animais, mamíferos, leveduras, anfíbios, aviários, nematódeos ou insetos.
17. Fungicida de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a composição é sinérgica e a relação em peso do fungicida para o inibidor de apirase está entre 500: 1 e 5000: 1.
18. Método para tratar a infecção por um patógeno fúngico que é resistente a uma classe de cobre ou a um fungicida triazol, caracterizado pelo fato de que compreende: colocar o patógeno fúngico em contato com uma composição que compreende octanoato de cobre em combinação com um inibidor de apirase fúngica, selecionado de N-(m-tolil)-[1,1'-bifenil]-4- sulfonamida, S-heptil 2-oxo-2H-cromeno-3-carbotioato, 3-(N-(4- bromofenil)sulfamoílo)-N-(3-nitrofenil)benzamida ou (E)-3-metil-N'-(1- (naftalen-2-il) etilideno) benzohidrazida, em que o inibidor de apirase fúngica impede o fungo de pelo menos um de desintoxicar o fungicida ou exportar o fungicida, e em que o local de aplicação do composto e da composição exclui o corpo humano ou animal.
19. Método de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o patógeno fúngico é um patógeno de planta selecionado de pelo menos um de Botrytis cinerea, Colletotrichum graminicola, Fusarium oxysporum, Sclerotiana sclerotiorum, Verticillium dahlia, Mycospharella gramincola ou Sphacelotheca reliana.
20. Método de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o patógeno fúngico é um patógeno de planta e a planta tratada é planta carregada de frutos, planta carregada de vegetais, planta carregada de noz ou planta de grãos.
21. Método de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o patógeno fúngico é um patógeno de planta e a planta tratada é morango, banana, milho, soja, tabaco, trigo ou algodão.
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