KR20240037305A - 진균 방제용 조성물 및 관련 방법 - Google Patents

진균 방제용 조성물 및 관련 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20240037305A
KR20240037305A KR1020247005757A KR20247005757A KR20240037305A KR 20240037305 A KR20240037305 A KR 20240037305A KR 1020247005757 A KR1020247005757 A KR 1020247005757A KR 20247005757 A KR20247005757 A KR 20247005757A KR 20240037305 A KR20240037305 A KR 20240037305A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
seq
cgi
factor
fungal
plant
Prior art date
Application number
KR1020247005757A
Other languages
English (en)
Inventor
호프 샤오-왕 다니슨
데이비드 바리 콜레스키
신두 마누바이 크리슈난쿠티
안토니오 디에고 마르티네스
야지에 니우
미치카 가브리엘 샤프
Original Assignee
플래그쉽 파이어니어링 이노베이션스 Vii, 엘엘씨
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 플래그쉽 파이어니어링 이노베이션스 Vii, 엘엘씨 filed Critical 플래그쉽 파이어니어링 이노베이션스 Vii, 엘엘씨
Publication of KR20240037305A publication Critical patent/KR20240037305A/ko

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/60—Isolated nucleic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01P—BIOCIDAL, PEST REPELLANT, PEST ATTRACTANT OR PLANT GROWTH REGULATORY ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR PREPARATIONS
    • A01P3/00—Fungicides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/37—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/37—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi
    • C07K14/39—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi from yeasts
    • C07K14/395—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi from yeasts from Saccharomyces

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

본 발명은 분생포자 발아 억제(CGI) 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 및 CGI 인자 모티프와, CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 및 CGI 인자 모티프를 포함하는 조성물을 제공한다. 또한 본 발명은 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 및 CGI 인자 모티프를 코딩하는 재조합 DNA 구축물 및 벡터와, CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 및 CGI 인자 모티프를 코딩하는 재조합 DNA 구축물 또는 벡터를 포함하는 트랜스제닉 유기체를 제공한다. 또한, 본 발명은 진균 성장 및 감염을 방제 또는 억제하는 방법과, CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 및 CGI 인자 모티프를 사용하여 진균성 질병을 치료하는 방법을 제공한다.

Description

진균 방제용 조성물 및 관련 방법
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2021년 7월 23일자로 출원된 미국 가출원 제63/225,356호의 이익을 청구하며, 이는 그 전체가 본원에 참고로 포함된다.
전자 서열 목록에 대한 언급
전자 서열 목록(237212000140SEQLIST.xml; 크기: 5,682,035 바이트; 및 생성일: 2022년 7월 15일)의 내용은 그 전체가 본원에 참고로 포함된다.
본 발명은 항진균제 또는 살진균제, 항진균제 또는 살진균제를 포함하는 조성물 및 유기체, 및 항진균제 또는 살진균제를 사용하여 진균 병원체와 같은 진균을 억제 또는 방제하는 방법에 관한 것이다.
진균계는 다양한 유기체 군을 포함하며, 그 중 일부는 다양한 숙주에 대한 병원체로 작용할 수 있다. 병원성 진균은 직접적인 감염에 의해 분비된 독소로부터의 간접적인 영향에 의해 인간 및 동물 둘 모두의 건강에 해로운 영향을 미칠 수 있다. 식물 또는 식물 제품의 비방제 진균 병원체로 인한 식품 부패 및 작물 손실은 또한 상당한 농업적 손실 및 경제적 손실을 초래할 수 있다. 따라서, 진균 병원체의 성장을 방제하거나 억제할 수 있는 제제와, 진균 성장을 방제하거나 억제하고 생물학적 시스템의 진균 감염을 치료하는 데 사용될 수 있는 제제를 포함하는 조성물에 대한 필요성이 존재한다.
본 발명의 일 양태에서, 진균의 성장 또는 번식을 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 상기 방법은 진균에게 유효량의 하나 이상의 분생포자 발아 억제(conidial germination-inhibiting; CGI) 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프(여기서, CGI 인자는 서열 번호 961~1920, 서열 번호 1957~2189, 서열 번호 2194~2210, 서열 번호 2215~2243, 서열 번호 2457~3361, 및 서열 번호 5707~5731로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열과의 서열 동일성이 80% 이상인 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 CGI 인자 모티프는 서열 번호 1921~1956 중 적어도 하나를 포함하며, CGI 인자의 아미노산 서열은 진균에 의해 천연적으로 발현되는 알파 페로몬의 아미노산 서열이 아니거나, 또는 상기 적어도 하나의 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 진균 게놈에 존재하지 않음); 및 선택적으로, 농업상 또는 제약상 허용가능한 담체를 포함하는 항진균 조성물을 제공하고; 이에 의해 진균의 성장 또는 번식을 항진균 조성물이 제공되지 않은 대조 진균에 비해 감소시키는 단계를 포함한다.
본 발명의 또 다른 양태에서, 분생포자 발아 억제(CGI) 인자, CGI 인자 전구체, 또는 CGI 인자 단편을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자에 이종 프로모터가 작동가능하게 연결된 것을 포함하는 재조합 DNA 구축물이 본원에 제공되며, 여기서, 뉴클레오티드 서열은 (a) 서열 번호 961~1920, 서열 번호 1957~2189, 서열 번호 2194~2210, 서열 번호 2215~2243, 서열 번호 2457~3361, 또는 서열 번호 5707~5731 중 적어도 하나와의 서열 동일성이 80% 이상인 아미노산 서열을 포함하는 적어도 하나의 CGI 인자, 적어도 하나의 CGI 인자 전구체, 또는 적어도 하나의 CGI 인자 단편을 코딩하거나, 또는 (b) 서열 번호 1921~1956 중 적어도 하나를 포함하는 적어도 하나의 CGI 인자 모티프를 코딩하고; 뉴클레오티드 서열은 선택적으로 이종 발현을 위해 최적화된 코돈을 갖는다. 관련 실시 형태는 이러한 재조합 DNA 구축물이 이종적으로 발현되는 세포 또는 유기체, 예를 들어 트랜스제닉 식물 또는 식물 부분(예를 들어, 근경 또는 접가지)을 포함한다.
본 발명의 또 다른 양태에서, 식물의 진균 병원체에 의해 야기되는 질병을 예방하거나 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 상기 방법은 식물에게 유효량의 하나 이상의 분생포자 발아 억제(conidial germination-inhibiting; CGI) 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프(여기서, CGI 인자는 서열 번호 961~1920, 서열 번호 1957~2189, 서열 번호 2194~2210, 서열 번호 2215~2243, 서열 번호 2457~3361, 및 서열 번호 5707~5731로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열과의 서열 동일성이 80% 이상인 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 CGI 인자 모티프는 서열 번호 1921~1956 중 적어도 하나를 포함하며, CGI 인자의 아미노산 서열은 진균 병원체에 의해 천연적으로 발현되는 알파 페로몬의 아미노산 서열이 아니거나, 또는 상기 적어도 하나의 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 진균 게놈에 존재하지 않음); 및 선택적으로, 농업상 허용가능한 담체를 포함하는 항진균 조성물을 제공하고; 이에 의해 식물에서 진균 병원체에 의해 야기되는 질병을 항진균 조성물이 제공되지 않은 대조 식물에 비해 예방하거나 감소시키는 단계를 포함한다.
본 발명의 다른 양태는 유기체, 예컨대 식물 및 동물, 예컨대 비인간 동물에서 진균성 질병을 예방 또는 치료하는 방법; 농업에서 또는 치료제로서 사용하기 위한 것으로 제형화된 항진균 조성물; 무생물 표면을 포함한 표면 상에서의 진균 감염 또는 성장을 예방하거나 처리하는 방법; 및 항진균 특성, 예를 들어 진균 오염 또는 성장에 대한 저항성을 갖는 기재 또는 매트릭스와 같은 구성물에 관한 것이다.
도 1a~도 1b는 분생포자 발아 억제 분석을 위한 실험 셋업을 도시한다. 도 1a는 40x(상단 열) 및 400x(하단 열) 배율의, 분생포자 발아에 대한 대조군 처리의 효과를 보여주는 명시야 이미지를 도시한다. 비처리 분생포자(좌측 패널)와 50%(w/v) 에탄올로 처리된 분생포자(우측 패널)를 음성 대조 조건으로 사용하고, 100 μM 펜피클로닐(중간 패널)을 양성 대조 조건으로 사용하였다. 400x 이미지에서 별표는 발아 중인 분생포자를 강조한다. 도 1b는 분생포자 발아 억제 분석을 위한 예시적인 96웰 플레이트 레이아웃을 보여준다. 다음과 같이 예시되는 바와 같다(좌측에서 우측으로): Un, 비처리; eth, 50% 에탄올; fen, 펜피클로실; 6, 펩티드106; 7, 펩티드107; 12, 펩티드112; 13, 펩티드113; 14, 펩티드114; 및 15, 펩티드115.
도 2a~도 2e는 후보 CGI 인자에 의한 푸사리움(Fusarium) 및 보트리티스(Botrytis) 분생포자 발아 억제를 테스트한 실험의 결과를 보여준다. 도 2a는 인큐베이션된 푸사리움 분생포자(상부 패널) 또는 보트리티스 분생포자(하부 패널)에 대한 레사주린 형광을 후보 CGI 인자 또는 대조군(좌측에 표시됨)의 농도 구배와 함께 도시한다. 도 2b는 10 μM, 100 μM, 375 μM 및 1 mM 후보 CGI 인자 또는 대조군(x축에 표시됨)과 함께 인큐베이션된 푸사리움 분생포자에 대한 레사주린 형광 정량화를 보여준다. 도 2c는 10 μM, 100 μM, 375 μM 및 1 mM 후보 CGI 인자 또는 대조군(x축에 표시됨)과 함께 인큐베이션된 보트리티스 분생포자에 대한 레사주린 형광을 보여준다. 도 2d는 100 μM 또는 375 μM 후보 CGI 인자 또는 대조군(x축에 표시됨)과 함께 인큐베이션된 푸사리움 분생포자에 대한 레사주린 형광을 보여준다. 도 2e는 100 μM 또는 375 μM 후보 CGI 인자 또는 대조군(x축에 표시됨)과 함께 인큐베이션된 보트리티스 분생포자에 대한 레사주린 형광을 보여준다. 375 μM 비처리 및 50% 에탄올 조건의 프로세싱 동안 발생한 피펫팅 오류가 도 2c 및 도 2e에 예시되어 있다. 도 2a~도 2e에서, Pep106, 펩티드106; Pep107, 펩티드107; Pep112, 펩티드112; Pep113, 펩티드113; Pep114, 펩티드114; 비처리된 것 및 50% EtOH 처리된 것을 음성 대조 조건으로 사용; 및 펜피클로닐을 양성 대조 조건으로 사용.
도 3은 100 μM의 선택된 후보 CGI 인자 및 대조군과 함께 인큐베이션된 푸사리움 및 보트리티스 분생포자의 레사주린 형광 정량화를 보여준다. 각 진균 종의 3개의 복제물을 각 조건에 대해 평가하였다. 다음과 같이 예시된 바와 같다: Fus, 푸사리움; Bo, 보트리티스; D 및 E, 엠티(empty) 웰; 및 Fenp, 펜피클로닐. 도 3에서, Pep106, 펩티드106; Pep107, 펩티드107; Pep112, 펩티드112; Pep113, 펩티드113; Pep114, 펩티드114; 및 Pep115, 펩티드115; 비처리된 것 및 50% EtOH 처리된 것을 음성 대조 조건으로 사용; 및 100 μM 펜피클로닐을 양성 대조 조건으로 사용.
도 4는 100 μM의 선택된 후보 CGI 인자와 함께 인큐베이션된 푸사리움 및 보트리티스 분생포자의 레사주린 형광 정량화를 보여준다. 각 진균 종의 4개의 복제물을 각 조건에 대해 평가하였다. 다음과 같이 예시된 바와 같다: Fus, 푸사리움; Bo, 보트리티스; D 및 E, 엠티 웰; 및 Fenp, 펜피클로닐. 도 4에서, Pep106, 펩티드106; Pep107, 펩티드107; Pep112, 펩티드112; Pep113, 펩티드113; Pep114, 펩티드114; 및 Pep115, 펩티드115; 비처리된 것 및 50% EtOH 처리된 것을 음성 대조 조건으로 사용; 및 100 μM 펜피클로닐을 양성 대조 조건으로 사용.
도 5는 CGI 인자 아미노산 모티프(서열 번호 1921)를 보여준다. 모티프에서 문자의 높이는 보존 정도를 나타내며, 문자가 클수록 더 많이 보존된 것이다. Y축은 위치의 상대 엔트로피를 표현하는 스택 높이이고; 문자의 높이는 추정된 보존 확률 또는 정도를 나타내며, 문자가 클수록 더 많이 보존된 것이다. 이 모티프에 있어서, 주어진 아미노산이 열거된 특정 위치에서 나타날 것으로 예상되는 확률은 다음과 같다. 위치 1, W:1.000. 위치 2, T:0.011, E:0.014, K:0.025, Q:0.027, S:0.040, R:0.043, G:0.098, 및 H:0.742. 위치 3, W:1.000. 위치 4, G:0.047, I:0.087, V:0.103, 및 L:0.763. 위치 5, A:0.022, T:0.040, K:0.066, E:0.067, N:0.071, S:0.128, R:0.283, 및 Q:0.323. 위치 6, I:0.051, F:0.171, 및 L:0.778. 위치 7, E:0.013, A:0.015, Y:0.016, Q:0.020, M:0.036, F:0.041, S:0.043, G:0.068, D:0.107, R:0.301, 및 K:0.328. 위치 8, N:0.010, T:0.015, L:0.020, A:0.021, Y:0.025, I:0.025, W:0.031, V:0.039, M:0.045, K:0.089, R:0.110, 및 P:0.556. 위치 9, G:1.000. 위치 10, A:0.034, E:0.182, 및 Q:0.784. 위치 11, P:1.000. 위치 12, F:0.028, L:0.093, I:0.182, 및 M:0.697. 위치 13, Y:1.000. 상단 X축은 서열에서 아미노산의 위치 k를 나타낸다. 하단 X축, 첫 번째 행은 삽입 확률, 즉 위치 k에 상응하는 문자와 위치 (k+1)에 상응하는 문자 사이에 삽입된 하나 이상의 문자를 관찰할 확률이다. 하단 X축, 두 번째 행은 삽입 길이, 즉 위치 k 다음에 있는 삽입(존재하는 경우)의 예상 길이이다. 하단 X축, 세 번째 행은 점유도, occ(k), 즉 위치 k에서 문자를 관찰할 확률이고; 상기 모델과 관련하여 갭 캐릭터 또는 결실을 관찰할 확률은 [1-occ(k)]이다. 이 모티프는 단지 마지막 3개 아미노산 잔기(위치 11, 12 및/또는 13)에서 불안정성을 갖는 것을 특징으로 하며, 예를 들어, CGI 인자 폴리펩티드에는 위치 13 Y 잔기가 결여되어 있다.
도 6a~도 6c는 3가지 실험으로부터의 푸사리움 생존성 비색 분석(레사주린 사용) 결과를 보여준다. 도 6a는 다음으로부터의 천연 알파 페로몬: 푸사리움 spp.(Fusarium ph., WCTWKGQPCW(서열 번호 2182)), 보트리티스 spp.(Botrytis Ph., WCGRPGQPC(서열 번호 2183)), 및 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae)(Yeast Ph., WHWLQLKPGQPMY(서열 번호 2184)), 및 합성 펩티드(Scr. Yeast 1, WKMGQYHQLPPLW(서열 번호 2185))와, C-말단 글리신 캡을 포함하는 변형 사카로마이세스 세레비지애 알파 페로몬(Yeast Pep-Gly, WHWLQLKPGQPMYG(서열 번호 2186))을 375 μM의 농도에서 테스트한 첫 번째 실험의 결과를 보여준다. 도 6b는 다음으로부터의 천연 알파 페로몬: 푸사리움 spp.(Fusarium ph., WCTWKGQPCW(서열 번호 2182)), 보트리티스 spp.(Botrytis Ph., WCGRPGQPC(서열 번호 2183)), 및 사카로마이세스 세레비지애(Yeast Ph., WHWLQLKPGQPMY(서열 번호 2184)), 및 합성 펩티드(Scr. Yeast 1, WKMGQYHQLPPLW(서열 번호 2185))와, C-말단 글리신 캡을 포함하는 변형 사카로마이세스 세레비지애 알파 페로몬(Yeast Pep-Gly,WHWLQLKPGQPMYG(서열 번호 2186))을 375 μM의 농도에서 테스트하고 레사주린의 첨가 후 51시간에 생존성을 측정한 두 번째 실험의 결과를 보여준다. 도 6c는 다음으로부터의 천연 알파 페로몬: 푸사리움 spp.(HH1, WCTWKGQPCW(서열 번호 2182)), 보트리티스 spp.(HH2, WCGRPGQPC(서열 번호 2183)), 및 사카로마이세스 세레비지애 (HH3, WHWLQLKPGQPMY(서열 번호 2184)), 및 합성 펩티드(HH31, WKMGQYHQLPPLW(서열 번호 2185)), C-말단 글리신 캡을 포함하는 변형 사카로마이세스 세레비지애 알파 페로몬(HH35, WHWLQLKPGQPMYG (서열 번호 2186)), N-말단 글리신 캡을 포함하는 변형 사카로마이세스 세레비지애 알파 페로몬(HH36, GWHWLQLKPGQPMY(서열 번호 2187)), 사카로마이세스 세레비지애 알파 페로몬의 연속 탠덤(tandem) 카피의 서열을 갖는 펩티드(HH37, WHWLQLKPGQPMYWHWLQLKPGQPMY(서열 번호 2188)), 및 4-글리신 연결 세그먼트에 의해 분리된 사카로마이세스 세레비지애 알파 페로몬의 탠덤 카피의 서열을 갖는 펩티드(HH38, WHWLQLKPGQPMYGGGGSWHWLQLKPGQPMY(서열 번호 2189))를 175 μM 및 375 μM의 농도에서 테스트한 세 번째 실험의 결과를 보여준다. 도 6a~도 6c에서, 사용된 대조군은 다음과 같았다: 비처리, 50% 에탄올(음성 대조군) 및 살진균제 펜피클로닐(양성 대조군).
도 7은 보트리티스 시네레아(Botrytis cinerea) 분생포자 현탁액, 이어서 5 mM MES 완충액("MES") 또는 275 마이크로몰 CGI 인자 "HH38"(9서열 번호 2189)(5 mM MES 완충액 중(또는 "비처리" 대조군으로서 첨가 없음))로 처리한 후 니코티아나 벤타미아나(Nicotiana benthamiana) 잎 상의 진균 병변 크기를 테스트하기 위한 실험의 결과를 보여준다.
달리 정의되지 않는 한, 사용된 모든 기술 용어 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자가 통상적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 당업계에 제공되고 실시예 및 다양한 일반 참고문헌에서 입증된 것과 같은 본원에 기술된 절차에는 통상적인 방법이 사용된다. 달리 명시되지 않는 한, 본원에 기술된 핵산 서열은 좌측에서 우측으로 읽을 때 5'에서 3' 방향으로 제공된다. 핵산 서열은 명시된 바와 같이 DNA 또는 RNA로 제공될 수 있으며; 당업자에게 공지된 바와 같이, 하나의 공개는 필연적으로 다른 하나를 정의한다. 더욱이, 공지된 코돈 축퇴성으로 인해, 상이한 핵산 서열들이 동일한 폴리펩티드 서열을 코딩할 수 있으며, (예를 들어, 주어진 종에 대한 코돈 최적화의 목적을 위한) 이러한 변형된 핵산 서열들은 본 발명의 범위 내에 있다.
"포함하다"라는 용어는 "함유하다"를 의미하고자 한다. 용어가 단수형으로 제공되는 경우, 이것은 해당 용어의 복수형으로 설명되는 본 발명의 양태도 고려한다. 본원에서 사용되는 용어 "및/또는"은 다른 것의 유무와 상관없이 다수의 명시된 특징 또는 구성요소 각각의 특정 개시로서 취해져야 한다. 따라서, 본원에서 "A 및/또는 B"와 같은 문구에 사용되는 바와 같은 용어 "및/또는"은 "A 및 B," "A 또는 B," "A"(단독) 및 "B"(단독)을 포함하는 것으로 의도된다. 마찬가지로, "A, B 및/또는 C"와 같은 어구에 사용된 용어 "및/또는"은 다음의 실시 형태 각각을 포함하는 것으로 의도된다: A, B, 및 C; A, B, 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A 및 C; A 및 B; B 및 C; A(단독); B(단독); 및 C(단독).
하기 설명은 예시적인 방법, 파라미터 등을 설명한다. 그러나 이러한 설명은 본 발명의 범위를 제한하려는 것이 아니라 예시적인 실시 형태의 설명으로 제공됨을 인식해야 한다.
항진균 또는 살진균 펩티드
본 발명의 일 양태는 진균 방제를 위한 분생포자 발아 억제(CGI) 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프를 제공하며, 여기서, 진균 방제는 분생포자 발아, 진균 성장, 또는 진균 번식의 억제 또는 감소를 포함하거나, 또는 살진균성이다(진균을 사멸시킬 수 있다). "CGI 인자 단편"은 CGI 인자의 기능을 유지하면서 CGI 인자에 비해 1개의 아미노산 또는 2개의 아미노산이 감소된 아미노산 서열을 지칭한다. "CGI 인자 전구체"는 CGI 인자의 적어도 하나의 카피(실시 형태들에서, CGI 인자의 2개 이상의 카피 또는 다수의 상이한 CGI 인자들)를 포함하고 예를 들어 단백질 분해 절단을 통해 성숙 CGI 인자(들)로 프로세싱되는 폴리펩티드이다. CGI 인자 전구체는 하나 이상의 진균 게놈에 고유하게 코딩된 서열을 갖는 전구체뿐만 아니라 합성 서열을 갖는 전구체도 포함한다. "활성" CGI 인자, CGI 인자 전구체, 또는 CGI 인자 단편은 진균 분생포자 발아 활성 억제(분생포자 발아 억제성), 진균 성장, 또는 진균 번식의 억제가 가능한 CGI 인자, CGI 인자 전구체, 또는 CGI 인자 단편을 지칭한다. "독성" CGI 인자, CGI 인자 전구체, 또는 CGI 인자 단편은 진균을 사멸시킬 수 있거나 또는 진균 세포 집단에서 생존 세포 수를 감소시키는(즉, 살진균성인) CGI 인자, CGI 인자 전구체, 또는 CGI 인자 단편을 지칭한다. CGI 인자, CGI 인자 전구체, 또는 CGI 인자 단편은 독성 없이 활성일 수 있거나, 또는 활성 없이 독성일 수 있거나, 또는 활성이면서 독성일 수 있다. 활성 및/또는 독성 CGI 인자, CGI 인자 전구체, 또는 CGI 인자 단편은 모두 본 발명의 CGI 인자, CGI 인자 전구체, 또는 CGI 인자 단편이다.
CGI 인자 모티프는 서열 WX1WX2X3X4X5X6GX7PX8Y(서열 번호 1921)를 포함한다. 이 서열에서, X1은 T, E, K, Q, S, R, G 및 H의 군으로부터 선택되고; X2는 G, I, V 및 L의 군으로부터 선택되고; X3은 A, T, K, E, N, S, R 및 Q의 군으로부터 선택되고; X4는 I, F 및 L의 군으로부터 선택되고; X5는 E, A, Y, Q, M, F, S, G, D, R 및 K의 군으로부터 선택되고; X6은 N, T, L, A, Y, I, W, V, M, K, R 및 P의 군으로부터 선택되고; X7은 A, E, 및 Q의 군으로부터 선택되고; X8은 F, L, I, 및 M의 군으로부터 선택된다. CGI 인자 모티프는 서열 번호 1922, 서열 번호 1923, 서열 번호 1924, 서열 번호 1925, 서열 번호 1926, 서열 번호 1927, 서열 번호 1928, 서열 번호 1929, 서열 번호 1930, 서열 번호 1931, 서열 번호 1932, 서열 번호 1933, 서열 번호 1934, 서열 번호 1935, 서열 번호 1936, 서열 번호 1937, 서열 번호 1938, 서열 번호 1939, 서열 번호 1940, 서열 번호 1941, 서열 번호 1942, 서열 번호 1943, 서열 번호 1944, 서열 번호 1945, 서열 번호 1946, 서열 번호 1947, 서열 번호 1948, 서열 번호 1949, 서열 번호 1950, 서열 번호 1951, 서열 번호 1952, 서열 번호 1953, 서열 번호 1954, 서열 번호 1955, 또는 서열 번호 1956일 수 있으며, 이들 각각은 서열 WX1WX2X3X4X5X6GX7PX8Y(서열 번호 1921)의 모티프 하위세트를 나타낸다.
일부 실시 형태에서, CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프는 식물, 식물 부분, 식물의 수확된 부분, 종자 또는 식재할 지역에 적용되어 임의의 진균 식물 병원체 변종을 방제한다. 식물 및 식물 세포는 쌍자엽 식물과 단자엽 식물을 포함하여 임의의 관심 종의 것이다. 관심 식물은 줄뿌림 작물(row crop plant), 과실 생산 식물 및 나무, 야채, 나무, 및 관상용 꽃, 관목, 나무, 지피식물 및 터프그래스(turf grass)를 포함한 관상용 식물을 포함한다. 상업적으로 중요한 재배 작물, 나무 및 식물의 예는 다음을 포함한다: 알팔파(메디카고 사티바(Medicago sativa)), 아몬드(프루누스 둘시스(Prunus dulcis)), 사과(말루스 엑스 도메스티카(Malus x Domestica)), 살구(프루누스 아르메니아카(Prunus armeniaca), 피. 브리간티네(P. brigantine), 피. 만드슈리카(P. mandshurica), 피. 무메(P. mume), 피. 시비리카(P. sibirica)), 아티초크(시나라 카르둔쿨루스(Cynara cardunculus) var. 스콜리무스(scolymus)), 아스파라거스(아스파라거스 오피시날리스(Asparagus officinalis)), 아보카도(페르세아 아메리카나(Persea americana)), 바나나(무사(Musa) spp.), 보리(호르데움 불가레(Hordeum vulgare)), 콩(파세올루스(Phaseolus) spp.), 블루베리와 크랜베리(박시니움(Vaccinium) spp.), 브라질 너트(베르톨레티아 엑셀사(Bertholletia excelsa)), 카카오(테오브로마 카카오(Theobroma cacao)), 칼라만시(시트러스 엑스 미크로카르파(Citrus x microcarpa)), 캐놀라와 유채 또는 서양 평지, (브라시카 나푸스(Brassica napus)), 폴란드 캐놀라(브라시카 라파(Brassica rapa)), 및 브로콜리, 케일, 양배추, 및 순무를 포함한 관련 십자화과 야채(브라시카 카리나타(Brassica carinata), 비. 준세아(B. juncea), 비. 올레라세아(B. oleracea), 비. 나푸스(B. napus), 비. 니그라(B. nigra), 및 비. 라파(B. rapa), 및 이들의 잡종), 카네이션(디안투스 카리오필루스(Dianthus caryophyllus)), 당근(다우쿠스 카로타 사티부스(Daucus carota sativus)), 캐슈(아나카르디움 옥시덴탈레(Anacardium occidentale)), 카사바(마니호트 에스쿨렌툼(Manihot esculentum)), 셀러리(아피움 그라베올렌스(Apium graveolens)), 체리(프루누스 아비움(Prunus avium)), 밤나무(카스타네아(Castanea) spp.), 병아리콩 또는 가르반조(시세르 아리에티눔(Cicer arietinum)), 치커리(키코리움 인티부스(Cichorium intybus)), 칠리 페퍼와 기타 캅시쿰 페퍼(캅시쿰 안누움(Capsicum annuum), 씨. 프루테센스(C. frutescens), 씨. 치넨세(C. chinense), 씨. 푸베센스(C. pubescens), 씨. 바카툼(C. baccatum)), 국화(크리산테뭄(Chrysanthemum) spp.), 시트론(시트러스 메디카(Citrus medica)), 코코넛(코코스 누시페라(Cocos nucifera)), 커피(야생 및 재배 코페아(Coffea) spp.(코페아 아라비카(Coffea arabica), 코페아 카네포라(Coffea canephora), 및 코페아 리베리카(Coffea liberica) 포함)), 목화(고시피움 히르수툼 엘.(Gossypium hirsutum L.)), 동부콩(비그나 운구이쿨라타(Vigna unguiculata) 및 기타 비그나 spp.), 파바빈(비시아 파바(Vicia faba)), 오이(쿠쿠미스 사티부스(Cucumis sativus)), 커런트와 구즈베리(리베스(Ribes) spp.), 대추야자(페닉스 닥틸리페라(Phoenix dactylifera)), 좀개구리밥(개구리밥아과(family Lemnoideae)), 가지 또는 오베르진(aubergine)(솔라눔 멜론게나(Solanum melongena)), 엘더베리(삼부쿠스(Sambucus) spp.), 유칼립투스(유칼립투스(Eucalyptus) spp.), 아마(리눔 우시타티수뭄 엘.(Linum usitatissumum L.)), 제라늄(펠라르고늄(Pelargonium) spp.), 생강(진기베르 오피시날레(Zingiber officinale)), 인삼(파낙스(Panax) spp.), 그레이프프루트(시트러스 엑스 파라디시(Citrus x paradisi)), 포도(비티스(Vitis) spp.)(와인 포도(비티스 비니페라(Vitis vinifera) 및 이의 잡종) 포함), 구아바(시듐 구아자바(Psidium guajava)), 개암(코릴루스 아벨라나(Corylus avellana), 코릴루스 spp.), 삼과 대마(칸나비스 사티바(Cannabis sativa) 및 칸나비스 spp.), 홉(후물루스 루풀루스(Humulus lupulus)), 서양고추냉이(아르모라시아 루스티카나(Armoracia rusticana)), 붓꽃(이리스(Iris) spp.), 잭프루트(아르토카르푸스 헤테로필루스(Artocarpus heterophyllus)), 키위프루트(악티니디아(Actinidia) spp.), 금귤(시트러스 자포니카(Citrus japonica)), 레몬(시트러스 리몬(Citrus limon)), 렌틸(렌즈 쿨리나리스(Lens culinaris)), 상추(락투카 사티바(Lactuca sativa)), 라임(시트러스(Citrus) spp.), 리치(리치 치넨시스(Litchi chinensis)), 마카다미아(마카다미아(Macadamia) spp.), 마이즈 또는 옥수수(제아 마이스 엘.(Zea mays L.)), 만다린(시트러스 레티쿨라타(Citrus reticulata)), 망고(만기페라 인디카(Mangifera indica)), 망고스틴(가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)), 멜론(쿠쿠미스 멜로(Cucumis melo)), 기장(세타리아(Setaria) spp., 에키노클로아(Echinochloa) spp., 엘레우시네(Eleusine) spp., 파니쿰(Panicum) spp., 페니세툼(Pennisetum) spp.), 귀리(아베나 사티바(Avena sativa)), 기름 야자(엘리스 퀴네엔시스(Ellis quineensis)), 오크라(아벨모스쿠스 에스쿨렌투스(Abelmoschus esculentus)), 올리브(올레아 유로파에아(Olea europaea)), 양파(알리움 세파(Alium cepa))와 기타 파속 식물(allium)(알리움 spp.), 오렌지(시트러스 시넨시스(Citrus sinensis)), 파파야(카리카 파파야(Carica papaya)), 파스닙(파스티나카 사티바(Pastinaca sativa)), 패션프루트(파시플로라 에둘리스(Passiflora edulis)), 피칸(카리아 일리노이넨시스(Carya illinoinensis)), 복숭아와 천도복숭아(프루누스 페르시카(Prunus persica)), 배(피루스(Pyrus) spp.), 완두콩(피숨 사티붐(Pisum sativum)), 땅콩(아라키스 하이포가에아(Arachis hypogaea)), 모란(파에오니아(Paeonia) spp.), 감(디오스피로스 카키(Diospyros kaki), 디오스피로스 spp.), 페튜니아(페튜니아(Petunia) spp.), 파인애플(아나나스 코모수스(Ananas comosus)), 피스타치오(피스타시아 베라(Pistacia vera)), 플랜테인(무사 spp.), 자두(프루누스 도메스티카(Prunus Domestica)), 포인세티아(유포르비아 풀체리마(Euphorbia pulcherrima)), 포멜로(시트러스 막시마(Citrus maxima)), 포플러(포풀루스(Populus) spp.), 감자(솔라눔 투베로숨(Solanum tuberosum)), 호박과 스쿼시(쿠쿠르비타 페포(Cucurbita pepo), 씨. 막시마(C. maxima), 씨. 모샤타(C. moschata)), 퀸스(시도니아 오블롱가(Cydonia oblonga)), 라즈베리(루부스 이다에우스(Rubus idaeus), 루부스 옥시덴탈리스(Rubus occidentalis), 루부스 spp.), 대황(레움(Rheum) spp.), 벼(오리자 사티바 엘.(Oryza sativa L.)), 장미(로사(Rosa) spp.), 고무(헤베아 브라질리엔시스(Hevea brasiliensis)), 호밀(세칼레 세레알레(Secale cereale)), 홍화(카르타무스 틴크토리우스 엘(Carthamus tinctorius L)), 사츠마(시트러스 운시우(Citrus unshiu)), 참깨(세사메 인디움(Sesame indium)), 수수(소르굼 비콜로르(Sorghum bicolor)), 사워 오렌지(시트러스 엑스 아우란티움(Citrus x aurantium)), 가시여지(안노나 무리카타(Annona muricata)), 대두(글리신 맥스 엘.(Glycine max L.)), 딸기(프라가리아(Fragaria) spp., 프라가리아 엑스 아나나사(Fragaria x ananassa)), 사탕무(베타 불가리스(Beta vulgaris)), 사탕수수(사카룸(Saccharum) spp.), 해바라기(헬리안투스 안누우스(Helianthus annuus)), 고구마(이포모에아 바타타스(Ipomoea batatas)), 타마린드(타마린두스 인디카(Tamarindus indica)), 귤(시트러스 탄제리나(Citrus tangerina)), 차(카멜리아 시넨시스(Camellia sinensis)), 담배(니코티아나 타바쿰 엘.(Nicotiana tabacum L.)), 토마틸로(피살리스 필라델피카(Physalis philadelphica)), 토마토(솔라눔 리코페르시쿰(Solanum lycopersicum) 또는 리코페르시콘 에스쿨렌툼(Lycopersicon esculentum)), 튤립(툴리파(Tulipa) spp.), 호두(주글란스 spp. 엘(Juglans spp. L.)), 수박(시트룰루스 라나투스(Citrulus lanatus)), 밀(트리티쿰 아에스티붐(Triticum aestivum)), 및 얌(디스코레아(Discorea) spp.). 재배 식물의 야생 친척도 관심 대상이다.
치료될 수 있는 예시적인 질병(원인 병원체는 괄호 안에 예시됨)은 알테르나리아(Alternaria) 잎 및 과실 점무늬병(알테르나리아 알테르나타(Alternaria alternata)), 탄저병(콜레토트리쿰 아쿠타툼(Colletotrichum acutatum)), 잎마름병(세이마토스포리움 리체니콜라(Seimatosporium lichenicola)), 잎 녹병(트란즈스켈리아 디스콜로르(Tranzschelia discolor)), 더뎅이병(클라도스포리움 카르포필룸(Cladosporium carpophilum)), 구멍병(윌소노마이세스 카르포필루스(Wilsonomyces carpophilus)), 갈색 꽃썩음병(Brown Rot Blossom Blight)(모닐리니아 락사(Monilinia laxa), 엠. 프룩티콜라(M. fructicola)), 블랙 시가토카(Black Sigatoka)(마이코스파에렐라 피지엔시스(Mycosphaerella fijiensis)), 옐로 시가토카(Yellow Sigatoka)(마이코스파에렐라 무시콜라(Mycosphaerella musicola)), 알테르나리아 과실 썩음병(알테르나리아 spp.), 과실 탄저 썩음병(콜레토트리쿰 글로에오스포로이데스(Colletotrichum gloeosporoides)), 보트리오스파에리아 동고병(Botryosphaeria Canker)(보트리오스파에리아 spp.), 잎무늬병(Leaf Spot and Blotch)(마이코스파에렐라 spp., 셉토리아(Septoria) spp.), 머미베리(모닐리니아 박시니이-코림보시(Monilinia vaccinii-corymbosi)), 포몹시스(Phomopsis) 잎반점병, 잔가지 마름병 및 줄기 동고병(포몹시스 박시니이(Phomopsis vaccinii)), 흰가루병(스파에로테카(Sphaerotheca) spp.), 셉토리아(Septoria) 마름병(셉토리아 spp.), 단과지 마름병(Spur Blight)(디디멜라(Didymella) spp., 포마(Phoma) spp.), 탄저병(스파셀로마 네카토르(Spaceloma necator), 엘시노에 베네타( veneta)), 보트리오스파에리아 동고병(보트리오스파에리아 도티데아(Botryosphaeria dothidea)), 콜레토트리쿰 썩음병(콜레토트리쿰 글로에오스포리오이데스(Colletotrichum gloeosporioides)), 잎무늬병(마이코스파에렐라 spp., 셉토리아 루비(Septoria rubi), 스파에룰리나 루비(Sphaerulina rubi)), 흰가루병(스파에로테카 마쿨라리스(Sphaerotheca macularis), 미크로파에라(Microphaera) spp., 오이디움(Oidium) spp.), 블랙베리의 로제트(Rosette) 또는 더블 블로섬(Double Blossom)(세르코스포렐라 루비(Cercosporella rubi)), 단과지 마름병(디디멜라 아플라나타(Didymella applanata)), 블랙베리 녹병(프라그미디움(Phragmidium) spp.), 탄저병(콜레토트리쿰 프라가리애(Colletotrichum fragariae)), 딸기역병(Leather Rot)(피토프토라 칵토룸(Phytophthora cactorum)), 흰가루병(스파에로테카 마쿨라리스), 엽면 상의 보트리티스 잿빛 곰팡이(보트리티스 시네레아), 모종 뿌리썩음병, 줄기기부썩음병(리족토니아 솔라니(Rhizoctonia solani)), 코튼볼(Cottonball)(모닐리니아 옥시콕사이(Monilinia oxycocci)), 과실 썩음병(피살로스포라 박시니아(Physalospora vaccinia), 글로메렐라 신굴라타(Glomerella cingulata), 콜레오포마 엠페트리(Coleophoma empetri)), 로포데르미움(Lophodermium) 잔가지 마름병 (로포데르미움 spp.), 균륜 서프레션(Fairy Ring Suppression)(실로시베(Psilocybe) spp.), 백화현상(알테르나리아 알테르나타 pv 시트리(citri)), 알테르나리아 잎 및 과실 반점(알테르나리아 시트리), 탄저병(콜레토트리쿰 아쿠타툼, 씨. 글로에오스포리오이데스), 세르코스포라(Cercospora) 잎반점병(세르코스포라 spp.), 디플로디아(Diplodia) 꼭지썩음병(Stem-End Rot)(디플로디아 나탈렌시스(Diplodia natalensis)), 누른무늬병(마이코스파에렐라 시트리(Mycosphaerella citri)), 감귤수지병(디아포르테 시트리(Diaporthe citri)), 페니실리움 부패병(Penicillium Decay), 녹색곰팡이병, 위스커곰팡이병(Whisker Mold), 청색곰팡이병(페니실리움 spp.), 포몹시스 꼭지썩음병(포몹시스 시트리이(Phomopsis citrii)), 개화 후 낙과(Post Bloom Fruit Drop; PFD)(콜레토트리쿰 아쿠타툼), 흰가루병(에리시페(Erysiphe) spp.), 더뎅이병(엘시노에 파우세티이(Elsinoe fawcettii)), 스위트 오렌지 더뎅이병(엘시노에 오스트랄리스(Elsinoe australis)), 검은무늬병(귀그나르디아 시트리카르파(Guignardia citricarpa)), 검은썩음병(귀그나르디아 비드웰리이(Guignardia bidwellii)), 노균병(플라스모파라 비티콜라(Plasmopara viticola)), 포몹시스 케인(Cane) 및 잎 반점병(포몹시스 비티콜라(Phomopsis viticola)), 흰가루병(운시눌라 네카토르(Uncinula necator)), 보트리티스 다발썩음병(보트리티스 시네레아), 아스페르길루스(Aspergillus) 근두썩음병(아스페르길루스 니게르(Aspergillus niger)), 피티움(Pythium) 잘록병(피티움 spp.), 줄기썩음병/흰곰팡이병(스클레로티움 롤프시이(Sclerotium rolfsii)), 리족토니아(Rhizoctonia) 페그(Peg) 및 꼬투리 썩음병(리족토니아 솔라니), 줄기썩음병/흰곰팡이병(스클레로티움 롤프시이), 실린드로클라디움(Cylindrocladium) 검은썩음병(실린도클라디움 크로탈라리애(Cylindocladium crotalariae)), 피티움 꼬투리썩음병 (피티움 미리오틸룸(Pythium myriotylum)), 알테르나리아 늦은 마름병(Late Blight)(알테르나리아 알테르나타), 보트리오스파에리아 이삭 및 가지 마름병(Panicle and Shoot Blight)(보트리오스파에리아 도티데아), 셉토리아 잎반점병(셉토리아 피스타시아룸(Septoria pistaciarum)), 더뎅이병(클라도스포리움 카르포필룸), 알테르나리아 반점병 및 과실 썩음병(알테르나리아 알테르나타), 탄저병(콜레토트리쿰 프루니콜라(Colletotrichum prunicola), 씨. 글로에오스포리오이데스(C. gloeosporioides), 잎 녹병(트란즈스켈리아 디스콜로르), 흰가루병(스파에로테카 판노사(Sphaerotheca pannosa), 포도스파에라 클란데스티나(Podosphaera clandestina)), 구멍병(윌소노마이세스 카르포필루스), 알테르나리아 잎반점병(알테르나리아 spp., 에이. 알테르나타), 아스코치타(Ascochyta) 잎반점병(아스코치타 시나래(Ascochyta cynarae)), 필로스티카(Phyllostica) 잎반점병(필로스티카 spp.), 녹병(우로마이세스 베태(Uromyces betae), 푸치니아 헬리안티(Puccinia helianthi)), 흰녹병(알부고 트라고포고니스(Albugo tragopogonis)), 탄저병(콜레토트리쿰 아쿠타툼, 글로메렐라 신굴라타), 이스턴 필버트 블라이트(Eastern Filbert Blight)(아니소그람마 아노말레(Anisogramma anomale)), 늦은 마름병(알테르나리아 알테르나타), 더뎅이병(클라도스포리움 카르포필룸), 셉토리아 잎반점병(셉토리아 피스타시아룸), 구멍병(윌소노마이세스 카르포필루스), 꽃마름병(모닐리니아 락사, 엠. 프룩티콜라), 흰가루병(에리시페 spp.), 녹병(푸치니아 spp.), 알테르나리아 검은무늬병(알테르나리아 브라시캐(Alternaria brassicae)), 검은뿌리썩음병/포마(Phoma)(렙토스파에리아 마쿨란스(Leptosphaeria maculans)), 세르코스포라 잎반점병(씨. 브라시시콜라(C. brassicicola)), 두상화썩음병(Head rot)(리족토니아 솔라니), 잎반점병 및 꼬투리썩음병(알테르나리아 알테르나타), 흰가루병(에리시페 폴리고니(Erysiphe polygoni)), 흰비단병(Southern blight)(스클레로티움 롤프시이), 탄저병 잎마름병(콜레토트리쿰 그라미니콜라(Colletotrichum graminicola)), 잿빛 잎반점병(세르코스포라 소르기(Cercospora sorghi)), 북부 옥수수 잎마름병(세토스파에리아 투르시카(Setosphaeria turcica)), 북부 옥수수 잎반점병(코클리오볼루스 카르보눔(Cochliobolus carbonum)), 일반 녹병(푸치니아 소르기(Puccinia sorghi)), 남부 녹병(피. 폴리소라(P. polysora)), 남부 옥수수 잎마름병(코클리오볼루스 헤테로스트로푸스(Cochliobolus heterostrophus)), 눈무늬병(아우레오바시디움 제애(Aureobasidium zeae)), 피소데르마(Physoderma) 갈색 반점병(피. 마이디스(P. maydis)), 황색 잎마름병(필로스틱타 마이디스(Phyllosticta maydis)), 아스코키타(Ascochyta) 마름병(에이. 고시피이(A. gossypii)), 녹병(푸치니아 스케돈나르디(Puccinia schedonnardi), 피. 카카바타(P. cacabata), 리족토니아 잎 및 줄기 질병(알. 솔라니), 갈색무늬병(Target spot)(코리네스포라 카시이콜라(Corynespora cassiicola)), 흰비단병(스클레로티움 롤프시이), 리족토니아 큰가지 썩음병(알. 솔라니), 실린드로클라디움 검은썩음병(씨. 크로탈라리아(C. crotalaria), 흰곰팡이병(스클레로티니아 미노르(Sclerotinia minor)), 이른 잎반점병(세르코스포라 아라키디콜라(Cercospora arachidicola)), 늦은 잎반점병(세르코스포리디움 페르소나툼(Cercosporidium personatum)), 그물무늬병(포마 아라키디콜라(Phoma arachidicola)), 녹병(푸치니아 아라키디스(Puccinia arachidis)), 깨씨무늬증(Pepper Spot)(렙토스페룰리나 크라시아스카(Leptospherulina crassiasca)), 남부 줄기썩음병(스클레로티움 롤프시이), 리족토니아 큰가지 썩음병(알. 솔라니), 실린드로클라디움 검은썩음병(씨. 크로탈라리아), 흰곰팡이병(스클레로티니아 미노르), 탄저병(콜레토트리쿰 린데무티아눔(Colletotrichum lindemuthianum)), 아스코키타 마름병(에이. 파세올로룸(A. phaseolorum)), 세르코스포라 잎부스럼병 (씨. 크루엔타(C. cruenta)), 노균병(피토프토라 니코티아나에(Phytophthora nicotianae)), 녹병(우로마이세스 아펜디쿨라투스(Uromyces appendiculatus)), 탄저병(과숙썩음병)(씨. 글로에오스포로이데스), 머미 베리(엠. 박시니이코림보시), 녹병(푸치니아스트룸 박시니이(Pucciniastrum vaccinii)), 셉토리아 잎반점병(셉토리아 알보푼크타타(Septoria albopunctata)), 노균병(페로노스포라 파라시티카(Peronospora parasitica)), 알테르나리아 잎마름병(에이. 다우시(A. dauci)), 세르코스포라 잎반점병(씨. 카로태(C. carotae)), 스토크 기부 썩음병(Basal stalk rot)(리족토니아 솔라니), 이른 마름병(세르코스포라 아피이(Cercospora apii)), 늦은 마름병(셉토리아 아피콜라(Septoria apicola)), 베르티실리움 갈색 반점병 및 드라이 버블(dry bubble), 핑크썩음병(Pink rot)(스클레로티니아 스클레로티오룸(Sclerotinia sclerotiorum)), 로포데르미움 잎/잔가지 마름병(엘. 하이포필룸(L. hypophyllum)), 업라이트 다이백(Upright dieback)(포몹시스 박시니이), 탄저병(콜레토트리쿰 spp.), 노균병(슈도페로노스포라 쿠벤시스(Pseudoperonospora cubensis)), 갈색무늬병(코리네스포라 카시이콜라), 알테르나리아 잎마름병(에이. 쿠쿠메리나(A. cucumerina)), 알테르나리아 잎반점병(에이. 알테르나타), 세르코스포라 잎반점병(씨. 시트룰리나(C. citrullina)), 덩굴마름병(Gummy stem blight)/덩굴쇠약병(vine decline)(디디멜라 브리오니애(Didymella bryoniae)), 흰가루병(스파에로테카 단독), 더뎅이병(클라도스포리움 쿠쿠메리눔(Cladosporium cucumerinum)), 탄저병(콜레토트리쿰 spp.), 보트리티스 잎곰팡이병(보트리티스 시네레아), 세르코스포라 잎반점병(세르코스포라 spp.), 흰가루병(레베일룰라 타우리카(Leveillula taurica)), 자주무늬병(알테르나리아 포리(Alternaria porri)), 보트리티스 목썩음병, 노균병(페로노스포라 데스트룩토르(Peronospora destructor)), 이른 잎반점병(세르코스포라 아라키디콜라), 늦은 잎반점병(세르코스포리디움 페르소나툼), 깨씨무늬증(렙토스파에룰리나 크라시아스카(Leptosphaerulina crassiasca)), 흑점병(콜레토트리쿰 코코데스(Colletotrichum coccodes)), 보트리티스 덩굴썩음병(비. 시네레아(B. cinerea)), 이른 마름병(알테르나리아 솔라니(Alternaria solani)), 늦은 마름병(피토프토라 인페스탄스(Phytophthora infestans)), 탄저병(콜레토트리쿰 트룬카툼(Colletotrichum truncatum)), 세르코스포라 잎마름병(씨. 키쿠치이(C. kikuchii)), 디아포르테(Diaporthe) 꼬투리 및 줄기썩음병 (디. 파세올로룸(D. phaseolorum)), 콩점무늬병(Frogeye leaf spot)(세르코스포라 소지나(Cercospora sojina)), 자반병(Purple seed stain)(씨. 키쿠치이), 셉토리아 갈색 반점병(에스. 글리시네스(S. glycines)), 녹병(파코프소라 파키리지(Phakopsora pachyrhizi)), 줄기 동고병(디아포르테 파세올로룸(Diaporthe phaseolorum)), 이른 마름병(알테르나리아 솔라니), 잿빛 잎곰팡이병(플루비아 플루바(Fluvia fluva); 클라도스포리움(Cladosporium)), 잿빛 잎반점병(스템필리움 보트리오숨(Stemphyllium botryosum)), 늦은 마름병(피토프토라 인페스탄스), 셉토리아 잎반점병(에스. 리코페르시시(S. lycopersici)), 갈색무늬병(코리네스포라 카시이콜라), 알테르나리아 과실 썩음병(검은곰팡이병)(에이. 알테르나타), 탄저병(콜레토트리쿰 spp.), 보트리티스 잿빛곰팡이병(비. 시네레아), 늦은 마름병 과실 썩음병(피. 인페스탄스), 리족토니아 과실 썩음병(알. 솔라니), 탄저병(콜레토트리쿰 글로에오스포리오이데스), 탄저병(콜레토트리쿰 아쿠타툼), 꽃마름병/갈색썩음병(모닐리니아 spp.), 더뎅이병(벤투리아 카르포필라(Venturia carpophila)), 구멍병(윌소노마이세스 카르포필루스), 잎오갈병(타프리나 데포르만스(Taphrina deformans)), 검은옹이병(체리, 자두)(아피오스포리나 모르보사(Apiosporina morbosa)), 체리 잎반점병(블루메리엘라 자아피이(Blumeriella jaapii), 더뎅이병(클라도스포리움 카르포필룸), 인테리어 니들 블라이트(Interior needle blight)(마이코스파에렐라 spp. 및 파에오크립토푸스 누두스(Phaeocryptopus nudus)), 스위스 니들캐스트(Swiss needlecast)(파에오크립토푸스 가에우만니이(Phaeocryptopus gaeumannii)), 인테리어 니들 블라이트(마이코스파에렐라 spp. 및 파에오크립토푸스 누두스), 스클레로데리스(Scleroderris) 동고병(그레메니엘라 아비에티나(Gremmeniella abietina)), 잎 녹병(테코프소라 미니마(Thekopsora minima), 흰가루병(에리시페 네카토르(Erysiphe necator)), 알테르나리아 썩음병(에이. 알테르나타), 모무늬병(Angular leaf spot)(마이코스페아렐라 안굴라타(Mycosphearella angulata)), 탄저병(엘시노에 암펠리나(Elsinoe ampelina)), 검은썩음병(귀그나르디아 비드웰리이), 잎마름병(슈도세르코스포라 비티스(Pseudocercospora vitis)), 포몹시스 케인 및 잎 반점병(피. 비티콜라), 적화병(Rotbrenner)(슈도페지쿨라 트라케이필라(Pseudopezicula tracheiphila)), 셉토리아 잎반점병(에스. 암펠리나(S. ampelina)), 사과 더뎅이병(벤투리아 이나에쿠알리스(Venturia inaequalis)), 배 더뎅이병(브이. 피리스(V. piris)), 알테르나리아 점무늬낙엽병, 알테르나리아 썩음병(알테르나리아 spp.), 붉은별무늬병(Cedar apple rust)(김노스포란기움 주니페르-비르기니아내(Gymnosporangium juniper-virginianae)), 흰가루병(포도스파에라 류코트리차(Podosphaera leucotricha)), 퀸스(Quince) 녹병(김노스포란기움 spp.), 그을음점무늬병 및 그을음병, 사과나무 탄저병(Bitter rot)(글로메렐라 신굴라타), 검은썩음병(보트리오스파에리아 옵투사(Botryosphaeria obtusa)), 브룩스(Brooks) 과실 반점병(마이코스파에렐라 포미(Mycosphaerella pomi)), 겹무늬썩음병(White rot)(보트리오스파에리아 도티데아), 알테르나리아 썩음병 및 표면 곰팡이병, 사과나무 탄저병 푸른곰팡이병, 반점썩음병(Bull's-eye rot), 잿빛곰팡이병, 파시디오피크니스(Phacidiopycnis) 썩음병, 리조푸스(Rhizopus) 썩음병, 스펙(Speck) 썩음병, 스파에롭시스(Sphaeropsis) 썩음병, 겹무늬썩음병, 잘록병(피티움 spp.), 뿌리썩음병(피토프토라 spp.), 딸기역병(피. 칵토룸), 근부역병(Red stele)(피. 프라가리애(P. fragariae), 도관 붕괴(피. 칵토룸), 줄기기부썩음병(피토프토라 spp.), 근두썩음병(피토프토라 캅시시(Phytophthora capsici)), 노균병(페로노스포라 에푸사(Peronospora effusa); 피. 파리노사(P. farinosa)), 흰녹병(알부고 옥시덴탈리스(Albugo occidentalis)), 핑크썩음병(피토프토라 에리트로셉티카(Phytophthora erythroseptica)), 피티움 리크(leak), 피티움 묘목병(피티움 spp.), 피토프토라 뿌리 및 줄기 썩음병(피토프토라 메가스페르마(Phytophthora megasperma)), 피티움 잘록병(피티움 spp.), 경령썩음병, 근두썩음병, 뿌리썩음병(피토프토라 spp.), 근두썩음병, 순썩음병(Spear rot)(피토프토라 spp.), 뿌리썩음병(피토프토라 신나모미(Phytophthora cinnamomi)), 노균병(페로노스포라 파라시티카(Peronospora parasitica)), 잿빛무늬병(Brown rot), 감귤류 그루썩음병, 수지병, 뿌리썩음병, 수간 동고병(피토프토라 spp.), 또는 노균병(브레미아 락투캐(Bremia lactucae))을 포함한다. 농업 또는 원예학적 관점에서, 그리고 본 출원의 목적상, 위에 열거된 병원체 및 질병 중 일부는 "진균"으로 간주되지만 원인 병원체는 기술적으로 난균류(난균문)이며, 이는 피티온(Pythion) spp., 피토프토라 spp., 페로노스포라 spp., 플라스모파라 spp., 알부고 spp. 및 브레미아 spp.를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
수확된 식물 부분에 적용하는 경우(본원에서 수확 후로도 지칭됨), 적용은 다양한 처리 방법, 예를 들어 침지, 점적, 관주, 분무, 또는 연무에 의한 것일 수 있다. 대안적인 실시 형태에서, 수확된 식물 부분에는 CGI 인자, CGI 인자 전구체, 또는 CGI 인자 단편을 함유하는 필름 또는 막과 같은 조성물이 적용되거나, 수확된 식물 부분은 CGI 인자, CGI 인자 전구체, 또는 CGI 인자 단편을 포함하는 용기에 패키징된다. 추가로 이러한 처리제, 조성물, 및 용기는 식료품(예를 들어, 베이커리 상품 또는 가공 과일 또는 야채와 같은 가공 식품)을 진균 성장 및 변질로부터 보호하는 데 유용하다. 위에서 설명한 임의의 식물 또는 식물 부분은 수확 후 처리될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 수확 후 처리되는 식물은 알팔파, 아몬드, 사과, 살구, 아티초크, 아스파라거스, 아보카도, 바나나, 보리, 콩, 블루베리와 크랜베리, 브라질 너트, 카카오, 칼라만시, 캐놀라와 유채 또는 서양 평지, 폴란드 캐놀라, 및 관련 십자화과 야채(브로콜리, 케일, 양배추, 및 순무 포함), 카네이션, 당근, 캐슈, 카사바, 셀러리, 체리, 밤나무, 병아리콩 또는 가르반조, 치커리, 칠리 페퍼와 기타 캅시쿰 페퍼, 국화, 시트론, 코코넛, 커피, 목화, 동부콩, 파바빈, 오이, 커런트와 구즈베리, 대추야자, 좀개구리밥, 가지 또는 오베르진, 엘더베리, 유칼립투스, 아마, 제라늄, 생강, 인삼, 그레이프프루트, 포도(와인 포도 포함), 구아바, 개암, 삼과 대마, 홉, 서양고추냉이, 붓꽃, 잭프루트, 키위프루트, 금귤, 레몬, 렌틸, 상추, 라임, 리치, 마카다미아, 마이즈 또는 옥수수, 만다린, 망고, 망고스틴, 멜론, 기장, 귀리, 기름 야자, 오크라, 올리브, 양파와 기타 파속 식물, 오렌지, 파파야, 파스닙, 패션프루트, 피칸, 복숭아와 천도복숭아, 배, 완두콩, 땅콩, 모란, 감, 페튜니아, 파인애플, 피스타치오, 플랜테인, 자두, 포인세티아, 포멜로, 포플러, 감자, 호박과 스쿼시, 퀸스, 라즈베리, 대황, 벼, 장미, 고무, 호밀, 홍화, 사츠마, 참깨, 수수, 사워 오렌지, 가시여지, 대두, 딸기, 사탕무, 사탕수수, 해바라기, 고구마, 타마린드, 귤, 차, 담배, 토마틸로, 토마토, 튤립, 호두, 수박, 밀, 및 얌을 포함한다.
일부 실시 형태에서, CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프는 구조적 요소 진균 병원체(예를 들어, 인간이 건축한 구조물, 예컨대 건물 또는 기타 인간이 만든 인공물, 또는 이의 구성 요소를 감염시키거나 손상시키는 진균 병원체)에 대해 활성 및/또는 독성을 갖는다. 일부 실시 형태에서, CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프는 인간이 건축한 구조물 또는 인공물에 유용한 목재 또는 기타 재료를 손상시키는 진균의 성장 또는 번식을 억제하거나 또는 상기 진균에 대해 독성을 가지며; 예는 갈색썩음병, 겹무늬썩음병, 또는 무름병을 야기하는 목재 부패 진균, 또는 인간이 건축한 구조물 또는 건물에서 마른썩음병을 야기하는 진균을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 구조적 요소 진균 병원체로는 마른썩음병 진균(세르풀라 라크리만스(Serpula lacrymans)), 칼라 썩음병 진균(코니포라 푸테아나(Coniphora puteana)), 습식(wet rot) 진균(안트로디아 바일란티이(Antrodia vaillantii), 에이. 잔타(A. xantha), 아스테로스트로마(Asterostroma) spp., 돈키오포리아 엑스판사(Donkioporia expansa), 팍실루스 파누오이데스(Paxillus panuoides), 펠리누스 콘티그누우스(Phellinus contignuus), 타이로마이세스 플라센투스(Tyromyces placentus)), 또는 물에 의해 손상된 구조 재료에 서식하는 진균, 예를 들어, 페니실리움 크리소게눔(Penicillium chrysogenum), 아스페르길루스 베르시콜로르(Aspergillus versicolor), 카에토미움(Chaetomium) spp., 아크레모니움(Acremonium) spp., 울로클라디움(Ulocladium) spp., 스타키보트리스(Stachybotrys) spp., 아르트리니움 파에오스페르뭄(Arthrinium phaeospermum), 아우레오바시디움 풀룰란스(Aureobasidium pullulans), 클라도스포리움 헤르바룸(Cladosporium herbarum), 트리코데르마(Trichoderma) spp., 아스페르길루스 푸미가투스(Aspergillus fumigatus), 아스페르길루스 멜레우스(Aspergillus melleus), 아스페르길루스 니게르, 아스페르길루스 오크라세우스(Aspergillus ochraceus), 무코르 라세모수스(Mucor racemosus), 또는 무코르 스피노수스가 있다.
재조합 DNA 구축물 및 벡터
본 발명의 양태는 다음을 포함하는 재조합 DNA 구축물을 포함한다: 분생포자 발아 억제(CGI) 인자, CGI 인자 전구체, 또는 CGI 인자 단편을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자에 이종 프로모터가 작동가능하게 연결된 것(여기서, 뉴클레오티드 서열은 (a) 서열 번호 961, 서열 번호 962, 서열 번호 963, 서열 번호 964, 서열 번호 965, 서열 번호 966, 서열 번호 967, 서열 번호 968, 서열 번호 969, 서열 번호 970, 서열 번호 971, 서열 번호 972, 서열 번호 973, 서열 번호 974, 서열 번호 975, 서열 번호 976, 서열 번호 977, 서열 번호 978, 서열 번호 979, 서열 번호 980, 서열 번호 981, 서열 번호 982, 서열 번호 983, 서열 번호 984, 서열 번호 985, 서열 번호 986, 서열 번호 987, 서열 번호 988, 서열 번호 989, 서열 번호 990, 서열 번호 991, 서열 번호 992, 서열 번호 993, 서열 번호 994, 서열 번호 995, 서열 번호 996, 서열 번호 997, 서열 번호 998, 서열 번호 999, 서열 번호 1000, 서열 번호 1001, 서열 번호 1002, 서열 번호 1003, 서열 번호 1004, 서열 번호 1005, 서열 번호 1006, 서열 번호 1007, 서열 번호 1008, 서열 번호 1009, 서열 번호 1010, 서열 번호 1011, 서열 번호 1012, 서열 번호 1013, 서열 번호 1014, 서열 번호 1015, 서열 번호 1016, 서열 번호 1017, 서열 번호 1018, 서열 번호 1019, 서열 번호 1020, 서열 번호 1021, 서열 번호 1022, 서열 번호 1023, 서열 번호 1024, 서열 번호 1025, 서열 번호 1026, 서열 번호 1027, 서열 번호 1028, 서열 번호 1029, 서열 번호 1030, 서열 번호 1031, 서열 번호 1032, 서열 번호 1033, 서열 번호 1034, 서열 번호 1035, 서열 번호 1036, 서열 번호 1037, 서열 번호 1038, 서열 번호 1039, 서열 번호 1040, 서열 번호 1041, 서열 번호 1042, 서열 번호 1043, 서열 번호 1044, 서열 번호 1045, 서열 번호 1046, 서열 번호 1047, 서열 번호 1048, 서열 번호 1049, 서열 번호 1050, 서열 번호 1051, 서열 번호 1052, 서열 번호 1053, 서열 번호 1054, 서열 번호 1055, 서열 번호 1056, 서열 번호 1057, 서열 번호 1058, 서열 번호 1059, 서열 번호 1060, 서열 번호 1061, 서열 번호 1062, 서열 번호 1063, 서열 번호 1064, 서열 번호 1065, 서열 번호 1066, 서열 번호 1067, 서열 번호 1068, 서열 번호 1069, 서열 번호 1070, 서열 번호 1071, 서열 번호 1072, 서열 번호 1073, 서열 번호 1074, 서열 번호 1075, 서열 번호 1076, 서열 번호 1077, 서열 번호 1078, 서열 번호 1079, 서열 번호 1080, 서열 번호 1081, 서열 번호 1082, 서열 번호 1083, 서열 번호 1084, 서열 번호 1085, 서열 번호 1086, 서열 번호 1087, 서열 번호 1088, 서열 번호 1089, 서열 번호 1090, 서열 번호 1091, 서열 번호 1092, 서열 번호 1093, 서열 번호 1094, 서열 번호 1095, 서열 번호 1096, 서열 번호 1097, 서열 번호 1098, 서열 번호 1099, 서열 번호 1100, 서열 번호 1101, 서열 번호 1102, 서열 번호 1103, 서열 번호 1104, 서열 번호 1105, 서열 번호 1106, 서열 번호 1107, 서열 번호 1108, 서열 번호 1109, 서열 번호 1110, 서열 번호 1111, 서열 번호 1112, 서열 번호 1113, 서열 번호 1114, 서열 번호 1115, 서열 번호 1116, 서열 번호 1117, 서열 번호 1118, 서열 번호 1119, 서열 번호 1120, 서열 번호 1121, 서열 번호 1122, 서열 번호 1123, 서열 번호 1124, 서열 번호 1125, 서열 번호 1126, 서열 번호 1127, 서열 번호 1128, 서열 번호 1129, 서열 번호 1130, 서열 번호 1131, 서열 번호 1132, 서열 번호 1133, 서열 번호 1134, 서열 번호 1135, 서열 번호 1136, 서열 번호 1137, 서열 번호 1138, 서열 번호 1139, 서열 번호 1140, 서열 번호 1141, 서열 번호 1142, 서열 번호 1143, 서열 번호 1144, 서열 번호 1145, 서열 번호 1146, 서열 번호 1147, 서열 번호 1148, 서열 번호 1149, 서열 번호 1150, 서열 번호 1151, 서열 번호 1152, 서열 번호 1153, 서열 번호 1154, 서열 번호 1155, 서열 번호 1156, 서열 번호 1157, 서열 번호 1158, 서열 번호 1159, 서열 번호 1160, 서열 번호 1161, 서열 번호 1162, 서열 번호 1163, 서열 번호 1164, 서열 번호 1165, 서열 번호 1166, 서열 번호 1167, 서열 번호 1168, 서열 번호 1169, 서열 번호 1170, 서열 번호 1171, 서열 번호 1172, 서열 번호 1173, 서열 번호 1174, 서열 번호 1175, 서열 번호 1176, 서열 번호 1177, 서열 번호 1178, 서열 번호 1179, 서열 번호 1180, 서열 번호 1181, 서열 번호 1182, 서열 번호 1183, 서열 번호 1184, 서열 번호 1185, 서열 번호 1186, 서열 번호 1187, 서열 번호 1188, 서열 번호 1189, 서열 번호 1190, 서열 번호 1191, 서열 번호 1192, 서열 번호 1193, 서열 번호 1194, 서열 번호 1195, 서열 번호 1196, 서열 번호 1197, 서열 번호 1198, 서열 번호 1199, 서열 번호 1200, 서열 번호 1201, 서열 번호 1202, 서열 번호 1203, 서열 번호 1204, 서열 번호 1205, 서열 번호 1206, 서열 번호 1207, 서열 번호 1208, 서열 번호 1209, 서열 번호 1210, 서열 번호 1211, 서열 번호 1212, 서열 번호 1213, 서열 번호 1214, 서열 번호 1215, 서열 번호 1216, 서열 번호 1217, 서열 번호 1218, 서열 번호 1219, 서열 번호 1220, 서열 번호 1221, 서열 번호 1222, 서열 번호 1223, 서열 번호 1224, 서열 번호 1225, 서열 번호 1226, 서열 번호 1227, 서열 번호 1228, 서열 번호 1229, 서열 번호 1230, 서열 번호 1231, 서열 번호 1232, 서열 번호 1233, 서열 번호 1234, 서열 번호 1235, 서열 번호 1236, 서열 번호 1237, 서열 번호 1238, 서열 번호 1239, 서열 번호 1240, 서열 번호 1241, 서열 번호 1242, 서열 번호 1243, 서열 번호 1244, 서열 번호 1245, 서열 번호 1246, 서열 번호 1247, 서열 번호 1248, 서열 번호 1249, 서열 번호 1250, 서열 번호 1251, 서열 번호 1252, 서열 번호 1253, 서열 번호 1254, 서열 번호 1255, 서열 번호 1256, 서열 번호 1257, 서열 번호 1258, 서열 번호 1259, 서열 번호 1260, 서열 번호 1261, 서열 번호 1262, 서열 번호 1263, 서열 번호 1264, 서열 번호 1265, 서열 번호 1266, 서열 번호 1267, 서열 번호 1268, 서열 번호 1269, 서열 번호 1270, 서열 번호 1271, 서열 번호 1272, 서열 번호 1273, 서열 번호 1274, 서열 번호 1275, 서열 번호 1276, 서열 번호 1277, 서열 번호 1278, 서열 번호 1279, 서열 번호 1280, 서열 번호 1281, 서열 번호 1282, 서열 번호 1283, 서열 번호 1284, 서열 번호 1285, 서열 번호 1286, 서열 번호 1287, 서열 번호 1288, 서열 번호 1289, 서열 번호 1290, 서열 번호 1291, 서열 번호 1292, 서열 번호 1293, 서열 번호 1294, 서열 번호 1295, 서열 번호 1296, 서열 번호 1297, 서열 번호 1298, 서열 번호 1299, 서열 번호 1300, 서열 번호 1301, 서열 번호 1302, 서열 번호 1303, 서열 번호 1304, 서열 번호 1305, 서열 번호 1306, 서열 번호 1307, 서열 번호 1308, 서열 번호 1309, 서열 번호 1310, 서열 번호 1311, 서열 번호 1312, 서열 번호 1313, 서열 번호 1314, 서열 번호 1315, 서열 번호 1316, 서열 번호 1317, 서열 번호 1318, 서열 번호 1319, 서열 번호 1320, 서열 번호 1321, 서열 번호 1322, 서열 번호 1323, 서열 번호 1324, 서열 번호 1325, 서열 번호 1326, 서열 번호 1327, 서열 번호 1328, 서열 번호 1329, 서열 번호 1330, 서열 번호 1331, 서열 번호 1332, 서열 번호 1333, 서열 번호 1334, 서열 번호 1335, 서열 번호 1336, 서열 번호 1337, 서열 번호 1338, 서열 번호 1339, 서열 번호 1340, 서열 번호 1341, 서열 번호 1342, 서열 번호 1343, 서열 번호 1344, 서열 번호 1345, 서열 번호 1346, 서열 번호 1347, 서열 번호 1348, 서열 번호 1349, 서열 번호 1350, 서열 번호 1351, 서열 번호 1352, 서열 번호 1353, 서열 번호 1354, 서열 번호 1355, 서열 번호 1356, 서열 번호 1357, 서열 번호 1358, 서열 번호 1359, 서열 번호 1360, 서열 번호 1361, 서열 번호 1362, 서열 번호 1363, 서열 번호 1364, 서열 번호 1365, 서열 번호 1366, 서열 번호 1367, 서열 번호 1368, 서열 번호 1369, 서열 번호 1370, 서열 번호 1371, 서열 번호 1372, 서열 번호 1373, 서열 번호 1374, 서열 번호 1375, 서열 번호 1376, 서열 번호 1377, 서열 번호 1378, 서열 번호 1379, 서열 번호 1380, 서열 번호 1381, 서열 번호 1382, 서열 번호 1383, 서열 번호 1384, 서열 번호 1385, 서열 번호 1386, 서열 번호 1387, 서열 번호 1388, 서열 번호 1389, 서열 번호 1390, 서열 번호 1391, 서열 번호 1392, 서열 번호 1393, 서열 번호 1394, 서열 번호 1395, 서열 번호 1396, 서열 번호 1397, 서열 번호 1398, 서열 번호 1399, 서열 번호 1400, 서열 번호 1401, 서열 번호 1402, 서열 번호 1403, 서열 번호 1404, 서열 번호 1405, 서열 번호 1406, 서열 번호 1407, 서열 번호 1408, 서열 번호 1409, 서열 번호 1410, 서열 번호 1411, 서열 번호 1412, 서열 번호 1413, 서열 번호 1414, 서열 번호 1415, 서열 번호 1416, 서열 번호 1417, 서열 번호 1418, 서열 번호 1419, 서열 번호 1420, 서열 번호 1421, 서열 번호 1422, 서열 번호 1423, 서열 번호 1424, 서열 번호 1425, 서열 번호 1426, 서열 번호 1427, 서열 번호 1428, 서열 번호 1429, 서열 번호 1430, 서열 번호 1431, 서열 번호 1432, 서열 번호 1433, 서열 번호 1434, 서열 번호 1435, 서열 번호 1436, 서열 번호 1437, 서열 번호 1438, 서열 번호 1439, 서열 번호 1440, 서열 번호 1441, 서열 번호 1442, 서열 번호 1443, 서열 번호 1444, 서열 번호 1445, 서열 번호 1446, 서열 번호 1447, 서열 번호 1448, 서열 번호 1449, 서열 번호 1450, 서열 번호 1451, 서열 번호 1452, 서열 번호 1453, 서열 번호 1454, 서열 번호 1455, 서열 번호 1456, 서열 번호 1457, 서열 번호 1458, 서열 번호 1459, 서열 번호 1460, 서열 번호 1461, 서열 번호 1462, 서열 번호 1463, 서열 번호 1464, 서열 번호 1465, 서열 번호 1466, 서열 번호 1467, 서열 번호 1468, 서열 번호 1469, 서열 번호 1470, 서열 번호 1471, 서열 번호 1472, 서열 번호 1473, 서열 번호 1474, 서열 번호 1475, 서열 번호 1476, 서열 번호 1477, 서열 번호 1478, 서열 번호 1479, 서열 번호 1480, 서열 번호 1481, 서열 번호 1482, 서열 번호 1483, 서열 번호 1484, 서열 번호 1485, 서열 번호 1486, 서열 번호 1487, 서열 번호 1488, 서열 번호 1489, 서열 번호 1490, 서열 번호 1491, 서열 번호 1492, 서열 번호 1493, 서열 번호 1494, 서열 번호 1495, 서열 번호 1496, 서열 번호 1497, 서열 번호 1498, 서열 번호 1499, 서열 번호 1500, 서열 번호 1501, 서열 번호 1502, 서열 번호 1503, 서열 번호 1504, 서열 번호 1505, 서열 번호 1506, 서열 번호 1507, 서열 번호 1508, 서열 번호 1509, 서열 번호 1510, 서열 번호 1511, 서열 번호 1512, 서열 번호 1513, 서열 번호 1514, 서열 번호 1515, 서열 번호 1516, 서열 번호 1517, 서열 번호 1518, 서열 번호 1519, 서열 번호 1520, 서열 번호 1521, 서열 번호 1522, 서열 번호 1523, 서열 번호 1524, 서열 번호 1525, 서열 번호 1526, 서열 번호 1527, 서열 번호 1528, 서열 번호 1529, 서열 번호 1530, 서열 번호 1531, 서열 번호 1532, 서열 번호 1533, 서열 번호 1534, 서열 번호 1535, 서열 번호 1536, 서열 번호 1537, 서열 번호 1538, 서열 번호 1539, 서열 번호 1540, 서열 번호 1541, 서열 번호 1542, 서열 번호 1543, 서열 번호 1544, 서열 번호 1545, 서열 번호 1546, 서열 번호 1547, 서열 번호 1548, 서열 번호 1549, 서열 번호 1550, 서열 번호 1551, 서열 번호 1552, 서열 번호 1553, 서열 번호 1554, 서열 번호 1555, 서열 번호 1556, 서열 번호 1557, 서열 번호 1558, 서열 번호 1559, 서열 번호 1560, 서열 번호 1561, 서열 번호 1562, 서열 번호 1563, 서열 번호 1564, 서열 번호 1565, 서열 번호 1566, 서열 번호 1567, 서열 번호 1568, 서열 번호 1569, 서열 번호 1570, 서열 번호 1571, 서열 번호 1572, 서열 번호 1573, 서열 번호 1574, 서열 번호 1575, 서열 번호 1576, 서열 번호 1577, 서열 번호 1578, 서열 번호 1579, 서열 번호 1580, 서열 번호 1581, 서열 번호 1582, 서열 번호 1583, 서열 번호 1584, 서열 번호 1585, 서열 번호 1586, 서열 번호 1587, 서열 번호 1588, 서열 번호 1589, 서열 번호 1590, 서열 번호 1591, 서열 번호 1592, 서열 번호 1593, 서열 번호 1594, 서열 번호 1595, 서열 번호 1596, 서열 번호 1597, 서열 번호 1598, 서열 번호 1599, 서열 번호 1600, 서열 번호 1601, 서열 번호 1602, 서열 번호 1603, 서열 번호 1604, 서열 번호 1605, 서열 번호 1606, 서열 번호 1607, 서열 번호 1608, 서열 번호 1609, 서열 번호 1610, 서열 번호 1611, 서열 번호 1612, 서열 번호 1613, 서열 번호 1614, 서열 번호 1615, 서열 번호 1616, 서열 번호 1617, 서열 번호 1618, 서열 번호 1619, 서열 번호 1620, 서열 번호 1621, 서열 번호 1622, 서열 번호 1623, 서열 번호 1624, 서열 번호 1625, 서열 번호 1626, 서열 번호 1627, 서열 번호 1628, 서열 번호 1629, 서열 번호 1630, 서열 번호 1631, 서열 번호 1632, 서열 번호 1633, 서열 번호 1634, 서열 번호 1635, 서열 번호 1636, 서열 번호 1637, 서열 번호 1638, 서열 번호 1639, 서열 번호 1640, 서열 번호 1641, 서열 번호 1642, 서열 번호 1643, 서열 번호 1644, 서열 번호 1645, 서열 번호 1646, 서열 번호 1647, 서열 번호 1648, 서열 번호 1649, 서열 번호 1650, 서열 번호 1651, 서열 번호 1652, 서열 번호 1653, 서열 번호 1654, 서열 번호 1655, 서열 번호 1656, 서열 번호 1657, 서열 번호 1658, 서열 번호 1659, 서열 번호 1660, 서열 번호 1661, 서열 번호 1662, 서열 번호 1663, 서열 번호 1664, 서열 번호 1665, 서열 번호 1666, 서열 번호 1667, 서열 번호 1668, 서열 번호 1669, 서열 번호 1670, 서열 번호 1671, 서열 번호 1672, 서열 번호 1673, 서열 번호 1674, 서열 번호 1675, 서열 번호 1676, 서열 번호 1677, 서열 번호 1678, 서열 번호 1679, 서열 번호 1680, 서열 번호 1681, 서열 번호 1682, 서열 번호 1683, 서열 번호 1684, 서열 번호 1685, 서열 번호 1686, 서열 번호 1687, 서열 번호 1688, 서열 번호 1689, 서열 번호 1690, 서열 번호 1691, 서열 번호 1692, 서열 번호 1693, 서열 번호 1694, 서열 번호 1695, 서열 번호 1696, 서열 번호 1697, 서열 번호 1698, 서열 번호 1699, 서열 번호 1700, 서열 번호 1701, 서열 번호 1702, 서열 번호 1703, 서열 번호 1704, 서열 번호 1705, 서열 번호 1706, 서열 번호 1707, 서열 번호 1708, 서열 번호 1709, 서열 번호 1710, 서열 번호 1711, 서열 번호 1712, 서열 번호 1713, 서열 번호 1714, 서열 번호 1715, 서열 번호 1716, 서열 번호 1717, 서열 번호 1718, 서열 번호 1719, 서열 번호 1720, 서열 번호 1721, 서열 번호 1722, 서열 번호 1723, 서열 번호 1724, 서열 번호 1725, 서열 번호 1726, 서열 번호 1727, 서열 번호 1728, 서열 번호 1729, 서열 번호 1730, 서열 번호 1731, 서열 번호 1732, 서열 번호 1733, 서열 번호 1734, 서열 번호 1735, 서열 번호 1736, 서열 번호 1737, 서열 번호 1738, 서열 번호 1739, 서열 번호 1740, 서열 번호 1741, 서열 번호 1742, 서열 번호 1743, 서열 번호 1744, 서열 번호 1745, 서열 번호 1746, 서열 번호 1747, 서열 번호 1748, 서열 번호 1749, 서열 번호 1750, 서열 번호 1751, 서열 번호 1752, 서열 번호 1753, 서열 번호 1754, 서열 번호 1755, 서열 번호 1756, 서열 번호 1757, 서열 번호 1758, 서열 번호 1759, 서열 번호 1760, 서열 번호 1761, 서열 번호 1762, 서열 번호 1763, 서열 번호 1764, 서열 번호 1765, 서열 번호 1766, 서열 번호 1767, 서열 번호 1768, 서열 번호 1769, 서열 번호 1770, 서열 번호 1771, 서열 번호 1772, 서열 번호 1773, 서열 번호 1774, 서열 번호 1775, 서열 번호 1776, 서열 번호 1777, 서열 번호 1778, 서열 번호 1779, 서열 번호 1780, 서열 번호 1781, 서열 번호 1782, 서열 번호 1783, 서열 번호 1784, 서열 번호 1785, 서열 번호 1786, 서열 번호 1787, 서열 번호 1788, 서열 번호 1789, 서열 번호 1790, 서열 번호 1791, 서열 번호 1792, 서열 번호 1793, 서열 번호 1794, 서열 번호 1795, 서열 번호 1796, 서열 번호 1797, 서열 번호 1798, 서열 번호 1799, 서열 번호 1800, 서열 번호 1801, 서열 번호 1802, 서열 번호 1803, 서열 번호 1804, 서열 번호 1805, 서열 번호 1806, 서열 번호 1807, 서열 번호 1808, 서열 번호 1809, 서열 번호 1810, 서열 번호 1811, 서열 번호 1812, 서열 번호 1813, 서열 번호 1814, 서열 번호 1815, 서열 번호 1816, 서열 번호 1817, 서열 번호 1818, 서열 번호 1819, 서열 번호 1820, 서열 번호 1821, 서열 번호 1822, 서열 번호 1823, 서열 번호 1824, 서열 번호 1825, 서열 번호 1826, 서열 번호 1827, 서열 번호 1828, 서열 번호 1829, 서열 번호 1830, 서열 번호 1831, 서열 번호 1832, 서열 번호 1833, 서열 번호 1834, 서열 번호 1835, 서열 번호 1836, 서열 번호 1837, 서열 번호 1838, 서열 번호 1839, 서열 번호 1840, 서열 번호 1841, 서열 번호 1842, 서열 번호 1843, 서열 번호 1844, 서열 번호 1845, 서열 번호 1846, 서열 번호 1847, 서열 번호 1848, 서열 번호 1849, 서열 번호 1850, 서열 번호 1851, 서열 번호 1852, 서열 번호 1853, 서열 번호 1854, 서열 번호 1855, 서열 번호 1856, 서열 번호 1857, 서열 번호 1858, 서열 번호 1859, 서열 번호 1860, 서열 번호 1861, 서열 번호 1862, 서열 번호 1863, 서열 번호 1864, 서열 번호 1865, 서열 번호 1866, 서열 번호 1867, 서열 번호 1868, 서열 번호 1869, 서열 번호 1870, 서열 번호 1871, 서열 번호 1872, 서열 번호 1873, 서열 번호 1874, 서열 번호 1875, 서열 번호 1876, 서열 번호 1877, 서열 번호 1878, 서열 번호 1879, 서열 번호 1880, 서열 번호 1881, 서열 번호 1882, 서열 번호 1883, 서열 번호 1884, 서열 번호 1885, 서열 번호 1886, 서열 번호 1887, 서열 번호 1888, 서열 번호 1889, 서열 번호 1890, 서열 번호 1891, 서열 번호 1892, 서열 번호 1893, 서열 번호 1894, 서열 번호 1895, 서열 번호 1896, 서열 번호 1897, 서열 번호 1898, 서열 번호 1899, 서열 번호 1900, 서열 번호 1901, 서열 번호 1902, 서열 번호 1903, 서열 번호 1904, 서열 번호 1905, 서열 번호 1906, 서열 번호 1907, 서열 번호 1908, 서열 번호 1909, 서열 번호 1910, 서열 번호 1911, 서열 번호 1912, 서열 번호 1913, 서열 번호 1914, 서열 번호 1915, 서열 번호 1916, 서열 번호 1917, 서열 번호 1918, 서열 번호 1919, 서열 번호 1920, 서열 번호 1957, 서열 번호 1958, 서열 번호 1959, 서열 번호 1960, 서열 번호 1961, 서열 번호 1962, 서열 번호 1963, 서열 번호 1964, 서열 번호 1965, 서열 번호 1966, 서열 번호 1967, 서열 번호 1968, 서열 번호 1969, 서열 번호 1970, 서열 번호 1971, 서열 번호 1972, 서열 번호 1973, 서열 번호 1974, 서열 번호 1975, 서열 번호 1976, 서열 번호 1977, 서열 번호 1978, 서열 번호 1979, 서열 번호 1980, 서열 번호 1981, 서열 번호 1982, 서열 번호 1983, 서열 번호 1984, 서열 번호 1985, 서열 번호 1986, 서열 번호 1987, 서열 번호 1988, 서열 번호 1989, 서열 번호 1990, 서열 번호 1991, 서열 번호 1992, 서열 번호 1993, 서열 번호 1994, 서열 번호 1995, 서열 번호 1996, 서열 번호 1997, 서열 번호 1998, 서열 번호 1999, 서열 번호 2000, 서열 번호 2001, 서열 번호 2002, 서열 번호 2003, 서열 번호 2004, 서열 번호 2005, 서열 번호 2006, 서열 번호 2007, 서열 번호 2008, 서열 번호 2009, 서열 번호 2010, 서열 번호 2011, 서열 번호 2012, 서열 번호 2013, 서열 번호 2014, 서열 번호 2015, 서열 번호 2016, 서열 번호 2017, 서열 번호 2018, 서열 번호 2019, 서열 번호 2020, 서열 번호 2021, 서열 번호 2022, 서열 번호 2023, 서열 번호 2024, 서열 번호 2025, 서열 번호 2026, 서열 번호 2027, 서열 번호 2028, 서열 번호 2029, 서열 번호 2030, 서열 번호 2031, 서열 번호 2032, 서열 번호 2033, 서열 번호 2034, 서열 번호 2035, 서열 번호 2036, 서열 번호 2037, 서열 번호 2038, 서열 번호 2039, 서열 번호 2040, 서열 번호 2041, 서열 번호 2042, 서열 번호 2043, 서열 번호 2044, 서열 번호 2045, 서열 번호 2046, 서열 번호 2047, 서열 번호 2048, 서열 번호 2049, 서열 번호 2050, 서열 번호 2051, 서열 번호 2052, 서열 번호 2053, 서열 번호 2054, 서열 번호 2055, 서열 번호 2056, 서열 번호 2057, 서열 번호 2058, 서열 번호 2059, 서열 번호 2060, 서열 번호 2061, 서열 번호 2062, 서열 번호 2063, 서열 번호 2064, 서열 번호 2065, 서열 번호 2066, 서열 번호 2067, 서열 번호 2068, 서열 번호 2069, 서열 번호 2070, 서열 번호 2071, 서열 번호 2072, 서열 번호 2073, 서열 번호 2074, 서열 번호 2075, 서열 번호 2076, 서열 번호 2077, 서열 번호 2078, 서열 번호 2079, 서열 번호 2080, 서열 번호 2081, 서열 번호 2082, 서열 번호 2083, 서열 번호 2084, 서열 번호 2085, 서열 번호 2086, 서열 번호 2087, 서열 번호 2088, 서열 번호 2089, 서열 번호 2090, 서열 번호 2091, 서열 번호 2092, 서열 번호 2093, 서열 번호 2094, 서열 번호 2095, 서열 번호 2096, 서열 번호 2097, 서열 번호 2098, 서열 번호 2099, 서열 번호 2100, 서열 번호 2101, 서열 번호 2102, 서열 번호 2103, 서열 번호 2104, 서열 번호 2105, 서열 번호 2106, 서열 번호 2107, 서열 번호 2108, 서열 번호 2109, 서열 번호 2110, 서열 번호 2111, 서열 번호 2112, 서열 번호 2113, 서열 번호 2114, 서열 번호 2115, 서열 번호 2116, 서열 번호 2117, 서열 번호 2118, 서열 번호 2119, 서열 번호 2120, 서열 번호 2121, 서열 번호 2122, 서열 번호 2123, 서열 번호 2124, 서열 번호 2125, 서열 번호 2126, 서열 번호 2127, 서열 번호 2128, 서열 번호 2129, 서열 번호 2130, 서열 번호 2131, 서열 번호 2132, 서열 번호 2133, 서열 번호 2134, 서열 번호 2135, 서열 번호 2136, 서열 번호 2137, 서열 번호 2138, 서열 번호 2139, 서열 번호 2140, 서열 번호 2141, 서열 번호 2142, 서열 번호 2143, 서열 번호 2144, 서열 번호 2145, 서열 번호 2146, 서열 번호 2147, 서열 번호 2148, 서열 번호 2149, 서열 번호 2150, 서열 번호 2151, 서열 번호 2152, 서열 번호 2153, 서열 번호 2154, 서열 번호 2155, 서열 번호 2156, 서열 번호 2157, 서열 번호 2158, 서열 번호 2159, 서열 번호 2160, 서열 번호 2161, 서열 번호 2162, 서열 번호 2163, 서열 번호 2164, 서열 번호 2165, 서열 번호 2166, 서열 번호 2167, 서열 번호 2168, 서열 번호 2169, 서열 번호 2170, 서열 번호 2171, 서열 번호 2172, 서열 번호 2173, 서열 번호 2174, 서열 번호 2175, 서열 번호 2176, 서열 번호 2177, 서열 번호 2178, 서열 번호 2179, 서열 번호 2180, 또는 서열 번호 2181 중 적어도 하나와의 서열 동일성이 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%인 아미노산 서열을 포함하는 적어도 하나의 CGI 인자, 적어도 하나의 CGI 인자 전구체, 또는 적어도 하나의 CGI 인자 단편을 코딩하거나, 또는 (b) 이종 발현을 위해 최적화된 코돈을 갖는 (a)의 합성 서열이거나; 또는 (c) 적어도 하나의 CGI 인자 모티프를 코딩함). 전술한 실시 형태의 상기 적어도 하나의 CGI 인자를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 서열 번호 9, 서열 번호 10, 서열 번호 11, 서열 번호 12, 서열 번호 13, 서열 번호 14, 서열 번호 15, 서열 번호 16, 서열 번호 17, 서열 번호 18, 서열 번호 19, 서열 번호 20, 서열 번호 21, 서열 번호 22, 서열 번호 23, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 26, 서열 번호 27, 서열 번호 28, 서열 번호 29, 서열 번호 30, 서열 번호 31, 서열 번호 32, 서열 번호 33, 서열 번호 34, 서열 번호 35, 서열 번호 36, 서열 번호 37, 서열 번호 38, 서열 번호 39, 서열 번호 40, 서열 번호 41, 서열 번호 42, 서열 번호 43, 서열 번호 44, 서열 번호 45, 서열 번호 46, 서열 번호 47, 서열 번호 48, 서열 번호 49, 서열 번호 50, 서열 번호 51, 서열 번호 52, 서열 번호 53, 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 56, 서열 번호 57, 서열 번호 58, 서열 번호 59, 서열 번호 60, 서열 번호 61, 서열 번호 62, 서열 번호 63, 서열 번호 64, 서열 번호 65, 서열 번호 66, 서열 번호 67, 서열 번호 68, 서열 번호 69, 서열 번호 70, 서열 번호 71, 서열 번호 72, 서열 번호 73, 서열 번호 74, 서열 번호 75, 서열 번호 76, 서열 번호 77, 서열 번호 78, 서열 번호 79, 서열 번호 80, 서열 번호 81, 서열 번호 82, 서열 번호 83, 서열 번호 84, 서열 번호 85, 서열 번호 86, 서열 번호 87, 서열 번호 88, 서열 번호 89, 서열 번호 90, 서열 번호 91, 서열 번호 92, 서열 번호 93, 서열 번호 94, 서열 번호 95, 서열 번호 96, 서열 번호 97, 서열 번호 98, 서열 번호 99, 서열 번호 100, 서열 번호 101, 서열 번호 102, 서열 번호 103, 서열 번호 104, 서열 번호 105, 서열 번호 106, 서열 번호 107, 서열 번호 108, 서열 번호 109, 서열 번호 110, 서열 번호 111, 서열 번호 112, 서열 번호 113, 서열 번호 114, 서열 번호 115, 서열 번호 116, 서열 번호 117, 서열 번호 118, 서열 번호 119, 서열 번호 120, 서열 번호 121, 서열 번호 122, 서열 번호 123, 서열 번호 124, 서열 번호 125, 서열 번호 126, 서열 번호 127, 서열 번호 128, 서열 번호 129, 서열 번호 130, 서열 번호 131, 서열 번호 132, 서열 번호 133, 서열 번호 134, 서열 번호 135, 서열 번호 136, 서열 번호 137, 서열 번호 138, 서열 번호 139, 서열 번호 140, 서열 번호 141, 서열 번호 142, 서열 번호 143, 서열 번호 144, 서열 번호 145, 서열 번호 146, 서열 번호 147, 서열 번호 148, 서열 번호 149, 서열 번호 150, 서열 번호 151, 서열 번호 152, 서열 번호 153, 서열 번호 154, 서열 번호 155, 서열 번호 156, 서열 번호 157, 서열 번호 158, 서열 번호 159, 서열 번호 160, 서열 번호 161, 서열 번호 162, 서열 번호 163, 서열 번호 164, 서열 번호 165, 서열 번호 166, 서열 번호 167, 서열 번호 168, 서열 번호 169, 서열 번호 170, 서열 번호 171, 서열 번호 172, 서열 번호 173, 서열 번호 174, 서열 번호 175, 서열 번호 176, 서열 번호 177, 서열 번호 178, 서열 번호 179, 서열 번호 180, 서열 번호 181, 서열 번호 182, 서열 번호 183, 서열 번호 184, 서열 번호 185, 서열 번호 186, 서열 번호 187, 서열 번호 188, 서열 번호 189, 서열 번호 190, 서열 번호 191, 서열 번호 192, 서열 번호 193, 서열 번호 194, 서열 번호 195, 서열 번호 196, 서열 번호 197, 서열 번호 198, 서열 번호 199, 서열 번호 200, 서열 번호 201, 서열 번호 202, 서열 번호 203, 서열 번호 204, 서열 번호 205, 서열 번호 206, 서열 번호 207, 서열 번호 208, 서열 번호 209, 서열 번호 210, 서열 번호 211, 서열 번호 212, 서열 번호 213, 서열 번호 214, 서열 번호 215, 서열 번호 216, 서열 번호 217, 서열 번호 218, 서열 번호 219, 서열 번호 220, 서열 번호 221, 서열 번호 222, 서열 번호 223, 서열 번호 224, 서열 번호 225, 서열 번호 226, 서열 번호 227, 서열 번호 228, 서열 번호 229, 서열 번호 230, 서열 번호 231, 서열 번호 232, 서열 번호 233, 서열 번호 234, 서열 번호 235, 서열 번호 236, 서열 번호 237, 서열 번호 238, 서열 번호 239, 서열 번호 240, 서열 번호 241, 서열 번호 242, 서열 번호 243, 서열 번호 244, 서열 번호 245, 서열 번호 246, 서열 번호 247, 서열 번호 248, 서열 번호 249, 서열 번호 250, 서열 번호 251, 서열 번호 252, 서열 번호 253, 서열 번호 254, 서열 번호 255, 서열 번호 256, 서열 번호 257, 서열 번호 258, 서열 번호 259, 서열 번호 260, 서열 번호 261, 서열 번호 262, 서열 번호 263, 서열 번호 264, 서열 번호 265, 서열 번호 266, 서열 번호 267, 서열 번호 268, 서열 번호 269, 서열 번호 270, 서열 번호 271, 서열 번호 272, 서열 번호 273, 서열 번호 274, 서열 번호 275, 서열 번호 276, 서열 번호 277, 서열 번호 278, 서열 번호 279, 서열 번호 280, 서열 번호 281, 서열 번호 282, 서열 번호 283, 서열 번호 284, 서열 번호 285, 서열 번호 286, 서열 번호 287, 서열 번호 288, 서열 번호 289, 서열 번호 290, 서열 번호 291, 서열 번호 292, 서열 번호 293, 서열 번호 294, 서열 번호 295, 서열 번호 296, 서열 번호 297, 서열 번호 298, 서열 번호 299, 서열 번호 300, 서열 번호 301, 서열 번호 302, 서열 번호 303, 서열 번호 304, 서열 번호 305, 서열 번호 306, 서열 번호 307, 서열 번호 308, 서열 번호 309, 서열 번호 310, 서열 번호 311, 서열 번호 312, 서열 번호 313, 서열 번호 314, 서열 번호 315, 서열 번호 316, 서열 번호 317, 서열 번호 318, 서열 번호 319, 서열 번호 320, 서열 번호 321, 서열 번호 322, 서열 번호 323, 서열 번호 324, 서열 번호 325, 서열 번호 326, 서열 번호 327, 서열 번호 328, 서열 번호 329, 서열 번호 330, 서열 번호 331, 서열 번호 332, 서열 번호 333, 서열 번호 334, 서열 번호 335, 서열 번호 336, 서열 번호 337, 서열 번호 338, 서열 번호 339, 서열 번호 340, 서열 번호 341, 서열 번호 342, 서열 번호 343, 서열 번호 344, 서열 번호 345, 서열 번호 346, 서열 번호 347, 서열 번호 348, 서열 번호 349, 서열 번호 350, 서열 번호 351, 서열 번호 352, 서열 번호 353, 서열 번호 354, 서열 번호 355, 서열 번호 356, 서열 번호 357, 서열 번호 358, 서열 번호 359, 서열 번호 360, 서열 번호 361, 서열 번호 362, 서열 번호 363, 서열 번호 364, 서열 번호 365, 서열 번호 366, 서열 번호 367, 서열 번호 368, 서열 번호 369, 서열 번호 370, 서열 번호 371, 서열 번호 372, 서열 번호 373, 서열 번호 374, 서열 번호 375, 서열 번호 376, 서열 번호 377, 서열 번호 378, 서열 번호 379, 서열 번호 380, 서열 번호 381, 서열 번호 382, 서열 번호 383, 서열 번호 384, 서열 번호 385, 서열 번호 386, 서열 번호 387, 서열 번호 388, 서열 번호 389, 서열 번호 390, 서열 번호 391, 서열 번호 392, 서열 번호 393, 서열 번호 394, 서열 번호 395, 서열 번호 396, 서열 번호 397, 서열 번호 398, 서열 번호 399, 서열 번호 400, 서열 번호 401, 서열 번호 402, 서열 번호 403, 서열 번호 404, 서열 번호 405, 서열 번호 406, 서열 번호 407, 서열 번호 408, 서열 번호 409, 서열 번호 410, 서열 번호 411, 서열 번호 412, 서열 번호 413, 서열 번호 414, 서열 번호 415, 서열 번호 416, 서열 번호 417, 서열 번호 418, 서열 번호 419, 서열 번호 420, 서열 번호 421, 서열 번호 422, 서열 번호 423, 서열 번호 424, 서열 번호 425, 서열 번호 426, 서열 번호 427, 서열 번호 428, 서열 번호 429, 서열 번호 430, 서열 번호 431, 서열 번호 432, 서열 번호 433, 서열 번호 434, 서열 번호 435, 서열 번호 436, 서열 번호 437, 서열 번호 438, 서열 번호 439, 서열 번호 440, 서열 번호 441, 서열 번호 442, 서열 번호 443, 서열 번호 444, 서열 번호 445, 서열 번호 446, 서열 번호 447, 서열 번호 448, 서열 번호 449, 서열 번호 450, 서열 번호 451, 서열 번호 452, 서열 번호 453, 서열 번호 454, 서열 번호 455, 서열 번호 456, 서열 번호 457, 서열 번호 458, 서열 번호 459, 서열 번호 460, 서열 번호 461, 서열 번호 462, 서열 번호 463, 서열 번호 464, 서열 번호 465, 서열 번호 466, 서열 번호 467, 서열 번호 468, 서열 번호 469, 서열 번호 470, 서열 번호 471, 서열 번호 472, 서열 번호 473, 서열 번호 474, 서열 번호 475, 서열 번호 476, 서열 번호 477, 서열 번호 478, 서열 번호 479, 서열 번호 480, 서열 번호 481, 서열 번호 482, 서열 번호 483, 서열 번호 484, 서열 번호 485, 서열 번호 486, 서열 번호 487, 서열 번호 488, 서열 번호 489, 서열 번호 490, 서열 번호 491, 서열 번호 492, 서열 번호 493, 서열 번호 494, 서열 번호 495, 서열 번호 496, 서열 번호 497, 서열 번호 498, 서열 번호 499, 서열 번호 500, 서열 번호 501, 서열 번호 502, 서열 번호 503, 서열 번호 504, 서열 번호 505, 서열 번호 506, 서열 번호 507, 서열 번호 508, 서열 번호 509, 서열 번호 510, 서열 번호 511, 서열 번호 512, 서열 번호 513, 서열 번호 514, 서열 번호 515, 서열 번호 516, 서열 번호 517, 서열 번호 518, 서열 번호 519, 서열 번호 520, 서열 번호 521, 서열 번호 522, 서열 번호 523, 서열 번호 524, 서열 번호 525, 서열 번호 526, 서열 번호 527, 서열 번호 528, 서열 번호 529, 서열 번호 530, 서열 번호 531, 서열 번호 532, 서열 번호 533, 서열 번호 534, 서열 번호 535, 서열 번호 536, 서열 번호 537, 서열 번호 538, 서열 번호 539, 서열 번호 540, 서열 번호 541, 서열 번호 542, 서열 번호 543, 서열 번호 544, 서열 번호 545, 서열 번호 546, 서열 번호 547, 서열 번호 548, 서열 번호 549, 서열 번호 550, 서열 번호 551, 서열 번호 552, 서열 번호 553, 서열 번호 554, 서열 번호 555, 서열 번호 556, 서열 번호 557, 서열 번호 558, 서열 번호 559, 서열 번호 560, 서열 번호 561, 서열 번호 562, 서열 번호 563, 서열 번호 564, 서열 번호 565, 서열 번호 566, 서열 번호 567, 서열 번호 568, 서열 번호 569, 서열 번호 570, 서열 번호 571, 서열 번호 572, 서열 번호 573, 서열 번호 574, 서열 번호 575, 서열 번호 576, 서열 번호 577, 서열 번호 578, 서열 번호 579, 서열 번호 580, 서열 번호 581, 서열 번호 582, 서열 번호 583, 서열 번호 584, 서열 번호 585, 서열 번호 586, 서열 번호 587, 서열 번호 588, 서열 번호 589, 서열 번호 590, 서열 번호 591, 서열 번호 592, 서열 번호 593, 서열 번호 594, 서열 번호 595, 서열 번호 596, 서열 번호 597, 서열 번호 598, 서열 번호 599, 서열 번호 600, 서열 번호 601, 서열 번호 602, 서열 번호 603, 서열 번호 604, 서열 번호 605, 서열 번호 606, 서열 번호 607, 서열 번호 608, 서열 번호 609, 서열 번호 610, 서열 번호 611, 서열 번호 612, 서열 번호 613, 서열 번호 614, 서열 번호 615, 서열 번호 616, 서열 번호 617, 서열 번호 618, 서열 번호 619, 서열 번호 620, 서열 번호 621, 서열 번호 622, 서열 번호 623, 서열 번호 624, 서열 번호 625, 서열 번호 626, 서열 번호 627, 서열 번호 628, 서열 번호 629, 서열 번호 630, 서열 번호 631, 서열 번호 632, 서열 번호 633, 서열 번호 634, 서열 번호 635, 서열 번호 636, 서열 번호 637, 서열 번호 638, 서열 번호 639, 서열 번호 640, 서열 번호 641, 서열 번호 642, 서열 번호 643, 서열 번호 644, 서열 번호 645, 서열 번호 646, 서열 번호 647, 서열 번호 648, 서열 번호 649, 서열 번호 650, 서열 번호 651, 서열 번호 652, 서열 번호 653, 서열 번호 654, 서열 번호 655, 서열 번호 656, 서열 번호 657, 서열 번호 658, 서열 번호 659, 서열 번호 660, 서열 번호 661, 서열 번호 662, 서열 번호 663, 서열 번호 664, 서열 번호 665, 서열 번호 666, 서열 번호 667, 서열 번호 668, 서열 번호 669, 서열 번호 670, 서열 번호 671, 서열 번호 672, 서열 번호 673, 서열 번호 674, 서열 번호 675, 서열 번호 676, 서열 번호 677, 서열 번호 678, 서열 번호 679, 서열 번호 680, 서열 번호 681, 서열 번호 682, 서열 번호 683, 서열 번호 684, 서열 번호 685, 서열 번호 686, 서열 번호 687, 서열 번호 688, 서열 번호 689, 서열 번호 690, 서열 번호 691, 서열 번호 692, 서열 번호 693, 서열 번호 694, 서열 번호 695, 서열 번호 696, 서열 번호 697, 서열 번호 698, 서열 번호 699, 서열 번호 700, 서열 번호 701, 서열 번호 702, 서열 번호 703, 서열 번호 704, 서열 번호 705, 서열 번호 706, 서열 번호 707, 서열 번호 708, 서열 번호 709, 서열 번호 710, 서열 번호 711, 서열 번호 712, 서열 번호 713, 서열 번호 714, 서열 번호 715, 서열 번호 716, 서열 번호 717, 서열 번호 718, 서열 번호 719, 서열 번호 720, 서열 번호 721, 서열 번호 722, 서열 번호 723, 서열 번호 724, 서열 번호 725, 서열 번호 726, 서열 번호 727, 서열 번호 728, 서열 번호 729, 서열 번호 730, 서열 번호 731, 서열 번호 732, 서열 번호 733, 서열 번호 734, 서열 번호 735, 서열 번호 736, 서열 번호 737, 서열 번호 738, 서열 번호 739, 서열 번호 740, 서열 번호 741, 서열 번호 742, 서열 번호 743, 서열 번호 744, 서열 번호 745, 서열 번호 746, 서열 번호 747, 서열 번호 748, 서열 번호 749, 서열 번호 750, 서열 번호 751, 서열 번호 752, 서열 번호 753, 서열 번호 754, 서열 번호 755, 서열 번호 756, 서열 번호 757, 서열 번호 758, 서열 번호 759, 서열 번호 760, 서열 번호 761, 서열 번호 762, 서열 번호 763, 서열 번호 764, 서열 번호 765, 서열 번호 766, 서열 번호 767, 서열 번호 768, 서열 번호 769, 서열 번호 770, 서열 번호 771, 서열 번호 772, 서열 번호 773, 서열 번호 774, 서열 번호 775, 서열 번호 776, 서열 번호 777, 서열 번호 778, 서열 번호 779, 서열 번호 780, 서열 번호 781, 서열 번호 782, 서열 번호 783, 서열 번호 784, 서열 번호 785, 서열 번호 786, 서열 번호 787, 서열 번호 788, 서열 번호 789, 서열 번호 790, 서열 번호 791, 서열 번호 792, 서열 번호 793, 서열 번호 794, 서열 번호 795, 서열 번호 796, 서열 번호 797, 서열 번호 798, 서열 번호 799, 서열 번호 800, 서열 번호 801, 서열 번호 802, 서열 번호 803, 서열 번호 804, 서열 번호 805, 서열 번호 806, 서열 번호 807, 서열 번호 808, 서열 번호 809, 서열 번호 810, 서열 번호 811, 서열 번호 812, 서열 번호 813, 서열 번호 814, 서열 번호 815, 서열 번호 816, 서열 번호 817, 서열 번호 818, 서열 번호 819, 서열 번호 820, 서열 번호 821, 서열 번호 822, 서열 번호 823, 서열 번호 824, 서열 번호 825, 서열 번호 826, 서열 번호 827, 서열 번호 828, 서열 번호 829, 서열 번호 830, 서열 번호 831, 서열 번호 832, 서열 번호 833, 서열 번호 834, 서열 번호 835, 서열 번호 836, 서열 번호 837, 서열 번호 838, 서열 번호 839, 서열 번호 840, 서열 번호 841, 서열 번호 842, 서열 번호 843, 서열 번호 844, 서열 번호 845, 서열 번호 846, 서열 번호 847, 서열 번호 848, 서열 번호 849, 서열 번호 850, 서열 번호 851, 서열 번호 852, 서열 번호 853, 서열 번호 854, 서열 번호 855, 서열 번호 856, 서열 번호 857, 서열 번호 858, 서열 번호 859, 서열 번호 860, 서열 번호 861, 서열 번호 862, 서열 번호 863, 서열 번호 864, 서열 번호 865, 서열 번호 866, 서열 번호 867, 서열 번호 868, 서열 번호 869, 서열 번호 870, 서열 번호 871, 서열 번호 872, 서열 번호 873, 서열 번호 874, 서열 번호 875, 서열 번호 876, 서열 번호 877, 서열 번호 878, 서열 번호 879, 서열 번호 880, 서열 번호 881, 서열 번호 882, 서열 번호 883, 서열 번호 884, 서열 번호 885, 서열 번호 886, 서열 번호 887, 서열 번호 888, 서열 번호 889, 서열 번호 890, 서열 번호 891, 서열 번호 892, 서열 번호 893, 서열 번호 894, 서열 번호 895, 서열 번호 896, 서열 번호 897, 서열 번호 898, 서열 번호 899, 서열 번호 900, 서열 번호 901, 서열 번호 902, 서열 번호 903, 서열 번호 904, 서열 번호 905, 서열 번호 906, 서열 번호 907, 서열 번호 908, 서열 번호 909, 서열 번호 910, 서열 번호 911, 서열 번호 912, 서열 번호 913, 서열 번호 914, 서열 번호 915, 서열 번호 916, 서열 번호 917, 서열 번호 918, 서열 번호 919, 서열 번호 920, 서열 번호 921, 서열 번호 922, 서열 번호 923, 서열 번호 924, 서열 번호 925, 서열 번호 926, 서열 번호 927, 서열 번호 928, 서열 번호 929, 서열 번호 930, 서열 번호 931, 서열 번호 932, 서열 번호 933, 서열 번호 934, 서열 번호 935, 서열 번호 936, 서열 번호 937, 서열 번호 938, 서열 번호 939, 서열 번호 940, 서열 번호 941, 서열 번호 942, 서열 번호 943, 서열 번호 944, 서열 번호 945, 서열 번호 946, 서열 번호 947, 서열 번호 948, 서열 번호 949, 서열 번호 950, 서열 번호 951, 서열 번호 952, 서열 번호 953, 서열 번호 954, 서열 번호 955, 서열 번호 956, 서열 번호 957, 서열 번호 958, 서열 번호 959, 서열 번호 960, 또는 서열 번호 3362~5698을 포함할 수 있다. 이 양태의 추가 실시 형태에서, CGI 인자는 서열 번호 2182, 서열 번호 2183, 서열 번호 2184, 서열 번호 2185, 서열 번호 2186, 서열 번호 2187, 서열 번호 2188, 서열 번호 2189, 서열 번호 2194, 서열 번호 2195, 서열 번호 2196, 서열 번호 2197, 서열 번호 2198, 서열 번호 2199, 서열 번호 2200, 서열 번호 2201, 서열 번호 2202, 서열 번호 2203, 서열 번호 2204, 서열 번호 2205, 서열 번호 2206, 서열 번호 2207, 서열 번호 2208, 서열 번호 2209, 서열 번호 2210, 서열 번호 2215, 서열 번호 2216, 서열 번호 2217, 서열 번호 2218, 서열 번호 2219, 서열 번호 2220, 서열 번호 2221, 서열 번호 2222, 서열 번호 2223, 서열 번호 2224, 서열 번호 2225, 서열 번호 2226, 서열 번호 2227, 서열 번호 2228, 서열 번호 2229, 서열 번호 2230, 서열 번호 2231, 서열 번호 2232, 서열 번호 2233, 서열 번호 2234, 서열 번호 2235, 서열 번호 2236, 서열 번호 2237, 서열 번호 2238, 서열 번호 2239, 서열 번호 2240, 서열 번호 2241, 서열 번호 2242, 또는 서열 번호 2243을 포함할 수 있다. 이 양태의 일부 실시 형태에서, CGI 인자 모티프는 서열 번호 1921, 서열 번호 1922, 서열 번호 1923, 서열 번호 1924, 서열 번호 1925, 서열 번호 1926, 서열 번호 1927, 서열 번호 1928, 서열 번호 1929, 서열 번호 1930, 서열 번호 1931, 서열 번호 1932, 서열 번호 1933, 서열 번호 1934, 서열 번호 1935, 서열 번호 1936, 서열 번호 1937, 서열 번호 1938, 서열 번호 1939, 서열 번호 1940, 서열 번호 1941, 서열 번호 1942, 서열 번호 1943, 서열 번호 1944, 서열 번호 1945, 서열 번호 1946, 서열 번호 1947, 서열 번호 1948, 서열 번호 1949, 서열 번호 1950, 서열 번호 1951, 서열 번호 1952, 서열 번호 1953, 서열 번호 1954, 서열 번호 1955, 또는 서열 번호 1956 중 적어도 하나를 포함한다. 이 양태의 다른 추가 실시 형태에서, CGI 인자는 서열 번호 2457, 서열 번호 2458, 서열 번호 2459, 서열 번호 2460, 서열 번호 2461, 서열 번호 2462, 서열 번호 2463, 서열 번호 2464, 서열 번호 2465, 서열 번호 2466, 서열 번호 2467, 서열 번호 2468, 서열 번호 2469, 서열 번호 2470, 서열 번호 2471, 서열 번호 2472, 서열 번호 2473, 서열 번호 2474, 서열 번호 2475, 서열 번호 2476, 서열 번호 2477, 서열 번호 2478, 서열 번호 2479, 서열 번호 2480, 서열 번호 2481, 서열 번호 2482, 서열 번호 2483, 서열 번호 2484, 서열 번호 2485, 서열 번호 2486, 서열 번호 2487, 서열 번호 2488, 서열 번호 2489, 서열 번호 2490, 서열 번호 2491, 서열 번호 2492, 서열 번호 2493, 서열 번호 2494, 서열 번호 2495, 서열 번호 2496, 서열 번호 2497, 서열 번호 2498, 서열 번호 2499, 서열 번호 2500, 서열 번호 2501, 서열 번호 2502, 서열 번호 2503, 서열 번호 2504, 서열 번호 2505, 서열 번호 2506, 서열 번호 2507, 서열 번호 2508, 서열 번호 2509, 서열 번호 2510, 서열 번호 2511, 서열 번호 2512, 서열 번호 2513, 서열 번호 2514, 서열 번호 2515, 서열 번호 2516, 서열 번호 2517, 서열 번호 2518, 서열 번호 2519, 서열 번호 2520, 서열 번호 2521, 서열 번호 2522, 서열 번호 2523, 서열 번호 2524, 서열 번호 2525, 서열 번호 2526, 서열 번호 2527, 서열 번호 2528, 서열 번호 2529, 서열 번호 2530, 서열 번호 2531, 서열 번호 2532, 서열 번호 2533, 서열 번호 2534, 서열 번호 2535, 서열 번호 2536, 서열 번호 2537, 서열 번호 2538, 서열 번호 2539, 서열 번호 2540, 서열 번호 2541, 서열 번호 2542, 서열 번호 2543, 서열 번호 2544, 서열 번호 2545, 서열 번호 2546, 서열 번호 2547, 서열 번호 2548, 서열 번호 2549, 서열 번호 2550, 서열 번호 2551, 서열 번호 2552, 서열 번호 2553, 서열 번호 2554, 서열 번호 2555, 서열 번호 2556, 서열 번호 2557, 서열 번호 2558, 서열 번호 2559, 서열 번호 2560, 서열 번호 2561, 서열 번호 2562, 서열 번호 2563, 서열 번호 2564, 서열 번호 2565, 서열 번호 2566, 서열 번호 2567, 서열 번호 2568, 서열 번호 2569, 서열 번호 2570, 서열 번호 2571, 서열 번호 2572, 서열 번호 2573, 서열 번호 2574, 서열 번호 2575, 서열 번호 2576, 서열 번호 2577, 서열 번호 2578, 서열 번호 2579, 서열 번호 2580, 서열 번호 2581, 서열 번호 2582, 서열 번호 2583, 서열 번호 2584, 서열 번호 2585, 서열 번호 2586, 서열 번호 2587, 서열 번호 2588, 서열 번호 2589, 서열 번호 2590, 서열 번호 2591, 서열 번호 2592, 서열 번호 2593, 서열 번호 2594, 서열 번호 2595, 서열 번호 2596, 서열 번호 2597, 서열 번호 2598, 서열 번호 2599, 서열 번호 2600, 서열 번호 2601, 서열 번호 2602, 서열 번호 2603, 서열 번호 2604, 서열 번호 2605, 서열 번호 2606, 서열 번호 2607, 서열 번호 2608, 서열 번호 2609, 서열 번호 2610, 서열 번호 2611, 서열 번호 2612, 서열 번호 2613, 서열 번호 2614, 서열 번호 2615, 서열 번호 2616, 서열 번호 2617, 서열 번호 2618, 서열 번호 2619, 서열 번호 2620, 서열 번호 2621, 서열 번호 2622, 서열 번호 2623, 서열 번호 2624, 서열 번호 2625, 서열 번호 2626, 서열 번호 2627, 서열 번호 2628, 서열 번호 2629, 서열 번호 2630, 서열 번호 2631, 서열 번호 2632, 서열 번호 2633, 서열 번호 2634, 서열 번호 2635, 서열 번호 2636, 서열 번호 2637, 서열 번호 2638, 서열 번호 2639, 서열 번호 2640, 서열 번호 2641, 서열 번호 2642, 서열 번호 2643, 서열 번호 2644, 서열 번호 2645, 서열 번호 2646, 서열 번호 2647, 서열 번호 2648, 서열 번호 2649, 서열 번호 2650, 서열 번호 2651, 서열 번호 2652, 서열 번호 2653, 서열 번호 2654, 서열 번호 2655, 서열 번호 2656, 서열 번호 2657, 서열 번호 2658, 서열 번호 2659, 서열 번호 2660, 서열 번호 2661, 서열 번호 2662, 서열 번호 2663, 서열 번호 2664, 서열 번호 2665, 서열 번호 2666, 서열 번호 2667, 서열 번호 2668, 서열 번호 2669, 서열 번호 2670, 서열 번호 2671, 서열 번호 2672, 서열 번호 2673, 서열 번호 2674, 서열 번호 2675, 서열 번호 2676, 서열 번호 2677, 서열 번호 2678, 서열 번호 2679, 서열 번호 2680, 서열 번호 2681, 서열 번호 2682, 서열 번호 2683, 서열 번호 2684, 서열 번호 2685, 서열 번호 2686, 서열 번호 2687, 서열 번호 2688, 서열 번호 2689, 서열 번호 2690, 서열 번호 2691, 서열 번호 2692, 서열 번호 2693, 서열 번호 2694, 서열 번호 2695, 서열 번호 2696, 서열 번호 2697, 서열 번호 2698, 서열 번호 2699, 서열 번호 2700, 서열 번호 2701, 서열 번호 2702, 서열 번호 2703, 서열 번호 2704, 서열 번호 2705, 서열 번호 2706, 서열 번호 2707, 서열 번호 2708, 서열 번호 2709, 서열 번호 2710, 서열 번호 2711, 서열 번호 2712, 서열 번호 2713, 서열 번호 2714, 서열 번호 2715, 서열 번호 2716, 서열 번호 2717, 서열 번호 2718, 서열 번호 2719, 서열 번호 2720, 서열 번호 2721, 서열 번호 2722, 서열 번호 2723, 서열 번호 2724, 서열 번호 2725, 서열 번호 2726, 서열 번호 2727, 서열 번호 2728, 서열 번호 2729, 서열 번호 2730, 서열 번호 2731, 서열 번호 2732, 서열 번호 2733, 서열 번호 2734, 서열 번호 2735, 서열 번호 2736, 서열 번호 2737, 서열 번호 2738, 서열 번호 2739, 서열 번호 2740, 서열 번호 2741, 서열 번호 2742, 서열 번호 2743, 서열 번호 2744, 서열 번호 2745, 서열 번호 2746, 서열 번호 2747, 서열 번호 2748, 서열 번호 2749, 서열 번호 2750, 서열 번호 2751, 서열 번호 2752, 서열 번호 2753, 서열 번호 2754, 서열 번호 2755, 서열 번호 2756, 서열 번호 2757, 서열 번호 2758, 서열 번호 2759, 서열 번호 2760, 서열 번호 2761, 서열 번호 2762, 서열 번호 2763, 서열 번호 2764, 서열 번호 2765, 서열 번호 2766, 서열 번호 2767, 서열 번호 2768, 서열 번호 2769, 서열 번호 2770, 서열 번호 2771, 서열 번호 2772, 서열 번호 2773, 서열 번호 2774, 서열 번호 2775, 서열 번호 2776, 서열 번호 2777, 서열 번호 2778, 서열 번호 2779, 서열 번호 2780, 서열 번호 2781, 서열 번호 2782, 서열 번호 2783, 서열 번호 2784, 서열 번호 2785, 서열 번호 2786, 서열 번호 2787, 서열 번호 2788, 서열 번호 2789, 서열 번호 2790, 서열 번호 2791, 서열 번호 2792, 서열 번호 2793, 서열 번호 2794, 서열 번호 2795, 서열 번호 2796, 서열 번호 2797, 서열 번호 2798, 서열 번호 2799, 서열 번호 2800, 서열 번호 2801, 서열 번호 2802, 서열 번호 2803, 서열 번호 2804, 서열 번호 2805, 서열 번호 2806, 서열 번호 2807, 서열 번호 2808, 서열 번호 2809, 서열 번호 2810, 서열 번호 2811, 서열 번호 2812, 서열 번호 2813, 서열 번호 2814, 서열 번호 2815, 서열 번호 2816, 서열 번호 2817, 서열 번호 2818, 서열 번호 2819, 서열 번호 2820, 서열 번호 2821, 서열 번호 2822, 서열 번호 2823, 서열 번호 2824, 서열 번호 2825, 서열 번호 2826, 서열 번호 2827, 서열 번호 2828, 서열 번호 2829, 서열 번호 2830, 서열 번호 2831, 서열 번호 2832, 서열 번호 2833, 서열 번호 2834, 서열 번호 2835, 서열 번호 2836, 서열 번호 2837, 서열 번호 2838, 서열 번호 2839, 서열 번호 2840, 서열 번호 2841, 서열 번호 2842, 서열 번호 2843, 서열 번호 2844, 서열 번호 2845, 서열 번호 2846, 서열 번호 2847, 서열 번호 2848, 서열 번호 2849, 서열 번호 2850, 서열 번호 2851, 서열 번호 2852, 서열 번호 2853, 서열 번호 2854, 서열 번호 2855, 서열 번호 2856, 서열 번호 2857, 서열 번호 2858, 서열 번호 2859, 서열 번호 2860, 서열 번호 2861, 서열 번호 2862, 서열 번호 2863, 서열 번호 2864, 서열 번호 2865, 서열 번호 2866, 서열 번호 2867, 서열 번호 2868, 서열 번호 2869, 서열 번호 2870, 서열 번호 2871, 서열 번호 2872, 서열 번호 2873, 서열 번호 2874, 서열 번호 2875, 서열 번호 2876, 서열 번호 2877, 서열 번호 2878, 서열 번호 2879, 서열 번호 2880, 서열 번호 2881, 서열 번호 2882, 서열 번호 2883, 서열 번호 2884, 서열 번호 2885, 서열 번호 2886, 서열 번호 2887, 서열 번호 2888, 서열 번호 2889, 서열 번호 2890, 서열 번호 2891, 서열 번호 2892, 서열 번호 2893, 서열 번호 2894, 서열 번호 2895, 서열 번호 2896, 서열 번호 2897, 서열 번호 2898, 서열 번호 2899, 서열 번호 2900, 서열 번호 2901, 서열 번호 2902, 서열 번호 2903, 서열 번호 2904, 서열 번호 2905, 서열 번호 2906, 서열 번호 2907, 서열 번호 2908, 서열 번호 2909, 서열 번호 2910, 서열 번호 2911, 서열 번호 2912, 서열 번호 2913, 서열 번호 2914, 서열 번호 2915, 서열 번호 2916, 서열 번호 2917, 서열 번호 2918, 서열 번호 2919, 서열 번호 2920, 서열 번호 2921, 서열 번호 2922, 서열 번호 2923, 서열 번호 2924, 서열 번호 2925, 서열 번호 2926, 서열 번호 2927, 서열 번호 2928, 서열 번호 2929, 서열 번호 2930, 서열 번호 2931, 서열 번호 2932, 서열 번호 2933, 서열 번호 2934, 서열 번호 2935, 서열 번호 2936, 서열 번호 2937, 서열 번호 2938, 서열 번호 2939, 서열 번호 2940, 서열 번호 2941, 서열 번호 2942, 서열 번호 2943, 서열 번호 2944, 서열 번호 2945, 서열 번호 2946, 서열 번호 2947, 서열 번호 2948, 서열 번호 2949, 서열 번호 2950, 서열 번호 2951, 서열 번호 2952, 서열 번호 2953, 서열 번호 2954, 서열 번호 2955, 서열 번호 2956, 서열 번호 2957, 서열 번호 2958, 서열 번호 2959, 서열 번호 2960, 서열 번호 2961, 서열 번호 2962, 서열 번호 2963, 서열 번호 2964, 서열 번호 2965, 서열 번호 2966, 서열 번호 2967, 서열 번호 2968, 서열 번호 2969, 서열 번호 2970, 서열 번호 2971, 서열 번호 2972, 서열 번호 2973, 서열 번호 2974, 서열 번호 2975, 서열 번호 2976, 서열 번호 2977, 서열 번호 2978, 서열 번호 2979, 서열 번호 2980, 서열 번호 2981, 서열 번호 2982, 서열 번호 2983, 서열 번호 2984, 서열 번호 2985, 서열 번호 2986, 서열 번호 2987, 서열 번호 2988, 서열 번호 2989, 서열 번호 2990, 서열 번호 2991, 서열 번호 2992, 서열 번호 2993, 서열 번호 2994, 서열 번호 2995, 서열 번호 2996, 서열 번호 2997, 서열 번호 2998, 서열 번호 2999, 서열 번호 3000, 서열 번호 3001, 서열 번호 3002, 서열 번호 3003, 서열 번호 3004, 서열 번호 3005, 서열 번호 3006, 서열 번호 3007, 서열 번호 3008, 서열 번호 3009, 서열 번호 3010, 서열 번호 3011, 서열 번호 3012, 서열 번호 3013, 서열 번호 3014, 서열 번호 3015, 서열 번호 3016, 서열 번호 3017, 서열 번호 3018, 서열 번호 3019, 서열 번호 3020, 서열 번호 3021, 서열 번호 3022, 서열 번호 3023, 서열 번호 3024, 서열 번호 3025, 서열 번호 3026, 서열 번호 3027, 서열 번호 3028, 서열 번호 3029, 서열 번호 3030, 서열 번호 3031, 서열 번호 3032, 서열 번호 3033, 서열 번호 3034, 서열 번호 3035, 서열 번호 3036, 서열 번호 3037, 서열 번호 3038, 서열 번호 3039, 서열 번호 3040, 서열 번호 3041, 서열 번호 3042, 서열 번호 3043, 서열 번호 3044, 서열 번호 3045, 서열 번호 3046, 서열 번호 3047, 서열 번호 3048, 서열 번호 3049, 서열 번호 3050, 서열 번호 3051, 서열 번호 3052, 서열 번호 3053, 서열 번호 3054, 서열 번호 3055, 서열 번호 3056, 서열 번호 3057, 서열 번호 3058, 서열 번호 3059, 서열 번호 3060, 서열 번호 3061, 서열 번호 3062, 서열 번호 3063, 서열 번호 3064, 서열 번호 3065, 서열 번호 3066, 서열 번호 3067, 서열 번호 3068, 서열 번호 3069, 서열 번호 3070, 서열 번호 3071, 서열 번호 3072, 서열 번호 3073, 서열 번호 3074, 서열 번호 3075, 서열 번호 3076, 서열 번호 3077, 서열 번호 3078, 서열 번호 3079, 서열 번호 3080, 서열 번호 3081, 서열 번호 3082, 서열 번호 3083, 서열 번호 3084, 서열 번호 3085, 서열 번호 3086, 서열 번호 3087, 서열 번호 3088, 서열 번호 3089, 서열 번호 3090, 서열 번호 3091, 서열 번호 3092, 서열 번호 3093, 서열 번호 3094, 서열 번호 3095, 서열 번호 3096, 서열 번호 3097, 서열 번호 3098, 서열 번호 3099, 서열 번호 3100, 서열 번호 3101, 서열 번호 3102, 서열 번호 3103, 서열 번호 3104, 서열 번호 3105, 서열 번호 3106, 서열 번호 3107, 서열 번호 3108, 서열 번호 3109, 서열 번호 3110, 서열 번호 3111, 서열 번호 3112, 서열 번호 3113, 서열 번호 3114, 서열 번호 3115, 서열 번호 3116, 서열 번호 3117, 서열 번호 3118, 서열 번호 3119, 서열 번호 3120, 서열 번호 3121, 서열 번호 3122, 서열 번호 3123, 서열 번호 3124, 서열 번호 3125, 서열 번호 3126, 서열 번호 3127, 서열 번호 3128, 서열 번호 3129, 서열 번호 3130, 서열 번호 3131, 서열 번호 3132, 서열 번호 3133, 서열 번호 3134, 서열 번호 3135, 서열 번호 3136, 서열 번호 3137, 서열 번호 3138, 서열 번호 3139, 서열 번호 3140, 서열 번호 3141, 서열 번호 3142, 서열 번호 3143, 서열 번호 3144, 서열 번호 3145, 서열 번호 3146, 서열 번호 3147, 서열 번호 3148, 서열 번호 3149, 서열 번호 3150, 서열 번호 3151, 서열 번호 3152, 서열 번호 3153, 서열 번호 3154, 서열 번호 3155, 서열 번호 3156, 서열 번호 3157, 서열 번호 3158, 서열 번호 3159, 서열 번호 3160, 서열 번호 3161, 서열 번호 3162, 서열 번호 3163, 서열 번호 3164, 서열 번호 3165, 서열 번호 3166, 서열 번호 3167, 서열 번호 3168, 서열 번호 3169, 서열 번호 3170, 서열 번호 3171, 서열 번호 3172, 서열 번호 3173, 서열 번호 3174, 서열 번호 3175, 서열 번호 3176, 서열 번호 3177, 서열 번호 3178, 서열 번호 3179, 서열 번호 3180, 서열 번호 3181, 서열 번호 3182, 서열 번호 3183, 서열 번호 3184, 서열 번호 3185, 서열 번호 3186, 서열 번호 3187, 서열 번호 3188, 서열 번호 3189, 서열 번호 3190, 서열 번호 3191, 서열 번호 3192, 서열 번호 3193, 서열 번호 3194, 서열 번호 3195, 서열 번호 3196, 서열 번호 3197, 서열 번호 3198, 서열 번호 3199, 서열 번호 3200, 서열 번호 3201, 서열 번호 3202, 서열 번호 3203, 서열 번호 3204, 서열 번호 3205, 서열 번호 3206, 서열 번호 3207, 서열 번호 3208, 서열 번호 3209, 서열 번호 3210, 서열 번호 3211, 서열 번호 3212, 서열 번호 3213, 서열 번호 3214, 서열 번호 3215, 서열 번호 3216, 서열 번호 3217, 서열 번호 3218, 서열 번호 3219, 서열 번호 3220, 서열 번호 3221, 서열 번호 3222, 서열 번호 3223, 서열 번호 3224, 서열 번호 3225, 서열 번호 3226, 서열 번호 3227, 서열 번호 3228, 서열 번호 3229, 서열 번호 3230, 서열 번호 3231, 서열 번호 3232, 서열 번호 3233, 서열 번호 3234, 서열 번호 3235, 서열 번호 3236, 서열 번호 3237, 서열 번호 3238, 서열 번호 3239, 서열 번호 3240, 서열 번호 3241, 서열 번호 3242, 서열 번호 3243, 서열 번호 3244, 서열 번호 3245, 서열 번호 3246, 서열 번호 3247, 서열 번호 3248, 서열 번호 3249, 서열 번호 3250, 서열 번호 3251, 서열 번호 3252, 서열 번호 3253, 서열 번호 3254, 서열 번호 3255, 서열 번호 3256, 서열 번호 3257, 서열 번호 3258, 서열 번호 3259, 서열 번호 3260, 서열 번호 3261, 서열 번호 3262, 서열 번호 3263, 서열 번호 3264, 서열 번호 3265, 서열 번호 3266, 서열 번호 3267, 서열 번호 3268, 서열 번호 3269, 서열 번호 3270, 서열 번호 3271, 서열 번호 3272, 서열 번호 3273, 서열 번호 3274, 서열 번호 3275, 서열 번호 3276, 서열 번호 3277, 서열 번호 3278, 서열 번호 3279, 서열 번호 3280, 서열 번호 3281, 서열 번호 3282, 서열 번호 3283, 서열 번호 3284, 서열 번호 3285, 서열 번호 3286, 서열 번호 3287, 서열 번호 3288, 서열 번호 3289, 서열 번호 3290, 서열 번호 3291, 서열 번호 3292, 서열 번호 3293, 서열 번호 3294, 서열 번호 3295, 서열 번호 3296, 서열 번호 3297, 서열 번호 3298, 서열 번호 3299, 서열 번호 3300, 서열 번호 3301, 서열 번호 3302, 서열 번호 3303, 서열 번호 3304, 서열 번호 3305, 서열 번호 3306, 서열 번호 3307, 서열 번호 3308, 서열 번호 3309, 서열 번호 3310, 서열 번호 3311, 서열 번호 3312, 서열 번호 3313, 서열 번호 3314, 서열 번호 3315, 서열 번호 3316, 서열 번호 3317, 서열 번호 3318, 서열 번호 3319, 서열 번호 3320, 서열 번호 3321, 서열 번호 3322, 서열 번호 3323, 서열 번호 3324, 서열 번호 3325, 서열 번호 3326, 서열 번호 3327, 서열 번호 3328, 서열 번호 3329, 서열 번호 3330, 서열 번호 3331, 서열 번호 3332, 서열 번호 3333, 서열 번호 3334, 서열 번호 3335, 서열 번호 3336, 서열 번호 3337, 서열 번호 3338, 서열 번호 3339, 서열 번호 3340, 서열 번호 3341, 서열 번호 3342, 서열 번호 3343, 서열 번호 3344, 서열 번호 3345, 서열 번호 3346, 서열 번호 3347, 서열 번호 3348, 서열 번호 3349, 서열 번호 3350, 서열 번호 3351, 서열 번호 3352, 서열 번호 3353, 서열 번호 3354, 서열 번호 3355, 서열 번호 3356, 서열 번호 3357, 서열 번호 3358, 서열 번호 3359, 서열 번호 3360, 또는 서열 번호 3361을 포함할 수 있다. 이 양태의 다른 추가 실시 형태에서, CGI 인자는 서열 번호 5707, 서열 번호 5708, 서열 번호 5709, 서열 번호 5710, 서열 번호 5711, 서열 번호 5712, 서열 번호 5713, 서열 번호 5714, 서열 번호 5715, 서열 번호 5716, 서열 번호 5717, 서열 번호 5718, 서열 번호 5719, 서열 번호 5720, 서열 번호 5721, 서열 번호 5722, 서열 번호 5723, 서열 번호 5724, 서열 번호 5725, 서열 번호 5726, 서열 번호 5727, 서열 번호 5728, 서열 번호 5729, 서열 번호 5730, 또는 서열 번호 5731을 포함할 수 있다. 임의의 전술한 실시 형태와 조합될 수 있는 이 양태의 추가 실시 형태에서, CGI 인자, CGI 인자 전구체, 또는 CGI 인자 단편은 활성 및/또는 독성을 갖는다. 임의의 전술한 실시 형태와 조합될 수 있는 이 양태의 추가 실시 형태에서, 재조합 DNA 구축물은 (a) CGI 인자의 적어도 하나의 카피, (b) 2개 이상의 CGI 인자 각각의 적어도 하나의 카피, (c) 적어도 하나의 CGI 인자 전구체, (d) 적어도 하나의 CGI 인자 단편, (e) 적어도 하나의 CGI 인자 모티프, 또는 (f) (a) 내지 (e)의 임의의 조합을 포함한다. 임의의 전술한 실시 형태와 조합될 수 있는 이 양태의 추가 실시 형태에서, 이종 프로모터는 박테리아 프로모터, 진균 프로모터, 조류(algal) 프로모터, 동물 프로모터, 또는 식물 프로모터이다. 임의의 전술한 실시 형태와 조합될 수 있는 이 양태의 추가 실시 형태에서, 이종 프로모터는 식물 발현성 프로모터, 즉 식물 세포에서 발현을 유도하는 기능을 하는 프로모터이다. 이러한 양태의 일부 실시 형태에서, 식물 발현성 프로모터는 유비퀴틴 프로모터, 세스트룸(cestrum) 황색 바이러스 프로모터, 옥수수 TrpA 프로모터, OsMADS 6 프로모터, 마이즈 H3 히스톤 프로모터, 옥수수 수크로스 신테타아제 1 프로모터, 옥수수 알코올 데히드로게나아제 1 프로모터, 옥수수 열 충격 단백질 프로모터, 마이즈 mtl 프로모터, 완두콩 소형 서브유닛 RuBP 카르복실라아제 프로모터, 벼 액틴 프로모터, 벼 시클로필린 프로모터, Ti 플라스미드 만노핀 신타아제 프로모터, Ti 플라스미드 노팔린 신타아제 프로모터, 페튜니아 칼콘 이소머라아제 프로모터, 콩 글리신 풍부 단백질 1 프로모터, 감자 파타틴 프로모터, 렉틴 프로모터, CaMV 35S 프로모터, 또는 S-E9 소형 서브유닛 RuBP 카르복실라아제 프로모터의 프로모터 군으로부터 선택된다. 일부 실시 형태에서, 이종 프로모터는 유도성 프로모터, 조직 특이성 프로모터, 일시적 특이성 프로모터, 또는 발생적 특이성 프로모터이다. 조직 특이성 프로모터는 재조합 DNA 구축물 및 코딩된 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프의 발현을 식물의 특정 조직(예를 들어, 뿌리, 잎, 괴경, 과실 또는 종자)으로 제한하는 데 유용하다. 일부 실시 형태에서, 이종 프로모터는 유도성, 조직 특이성, 일시적 특이성 또는 발생적 특이성일 수 있는 식물 miRNA 프로모터이고; 예를 들어, 미국 특허 제8,334,430호에 개시된 조직-특이성 프로모터 및 미국 특허 제8,314,290호에 개시된 일시적 특이성 프로모터를 참조한다. 일부 실시 형태에서, 재조합 DNA 구축물은 발현 강화 요소, 전사체 안정화 서열, 리보스위치, 또는 miRNA 또는 siRNA에 대한 인식 부위와 같은 발현 제어에 유용한 추가 요소를 포함한다. 예를 들어, 식물의 특정 조직에서 자연적으로 발현되는 miRNA에 대한 인식 부위가 포함되면 해당 특정 조직에서 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프의 발현이 감소되거나 제거될 것으로 예상된다. 이 양태의 추가 실시 형태에서, 재조합 DNA 구축물은 세포에서 기능적인 적어도 하나의 분비 신호 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 추가로 포함한다. 본 발명의 또 다른 양태는 전술한 실시 형태 중 어느 하나의 재조합 DNA 구축물을 포함하는 재조합 벡터에 관한 것이다. 이러한 양태의 일부 실시 형태에서, 벡터는 재조합 DNA 구축물 측면에 있는 좌측 T-DNA 경계 및 우측 T-DNA 경계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 벡터는 재조합 DNA 구축물 측면에 있는 추가 서열을 추가로 포함한다. 상기 추가 서열은 선발가능 마커, 트랜스포존 말단, 상동성 아암(arm), 제한효소 부위, 또는 벡터의 하류 사용에 적합한 기타 서열에 상응할 수 있다. 이 양태의 추가 실시 형태에서, 벡터는 박테리아, 바이러스 또는 바이로이드 벡터이다.
본 발명의 추가 양태는 전술한 실시 형태 중 어느 하나의 재조합 DNA 구축물의 전사로부터 생성된 RNA 전사체(예를 들어, 메신저 RNA)에 관한 것이다.
본 발명의 추가 양태는 전술한 실시 형태 중 어느 하나의 재조합 DNA 구축물에 의해 코딩되는 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프에 관한 것이다.
트랜스제닉 세포 및 유기체
본 발명의 또 다른 양태는 전술한 청구항 중 어느 한 항의 재조합 벡터를 포함하는 트랜스제닉 세포에 관한 것이다. 이 양태의 추가 실시 형태에서, 세포는 박테리아 세포, 진균 세포, 조류 세포, 동물 세포 또는 식물 세포로부터 선택된다. 이 양태의 추가 실시 형태에서, 트랜스제닉 세포는 식물 세포이다. 이러한 양태의 일부 실시 형태에서, 식물 세포는 쌍자엽 식물 세포이다. 이 양태의 추가 실시 형태에서, 쌍자엽 식물 세포는 대두 세포, 해바라기 세포, 토마토 세포, 감자 세포, 브라시카 spp. 세포, 목화 세포, 사탕무 세포, 또는 담배 세포의 군으로부터 선택된다. 이 양태의 추가 실시 형태에서, 식물 세포는 단자엽 식물 세포이다. 이 양태의 추가 실시 형태에서, 단자엽 식물 세포는 보리 세포, 마이즈 세포, 귀리 세포, 벼 세포, 수수 세포, 사탕수수 세포 또는 밀 세포의 군으로부터 선택된다. 트랜스제닉 세포를 갖는 임의의 전술한 실시 형태와 조합될 수 있는 이 양태의 또 다른 실시 형태에서, CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프는 (a) 일시적으로 발현되거나, 또는 (b) 안정적으로 발현된다.
본 발명의 추가 양태는 임의의 전술한 실시 형태의 트랜스제닉 식물 세포를 포함하는 트랜스제닉 식물에 관한 것이다. 일부 실시 형태에서, 트랜스제닉 식물은 트랜스제닉인 일부 세포(예를 들어, 본원에 개시된 바와 같은 재조합 DNA 구축물을 발현함) 및 트랜스제닉이 아닌 일부 세포를 갖는 키메라 식물이다. 관련 실시 형태는 근경이 트랜스제닉이고(예를 들어, 본원에 개시된 바와 같은 재조합 DNA 구축물을 발현함) 접목된 접가지가 트랜스제닉이 아닌 접목된 식물; 또는 근경이 트랜스제닉이 아니고 접가지가 트랜스제닉인 접목된 식물을 포함한다. 실시 형태들에서, 변형된 게놈은 식물의 핵 게놈이고; 다른 실시 형태에서, 변형된 게놈은 식물의 엽록체 또는 미토콘드리아의 게놈이다. 이러한 양태의 일부 실시 형태에서, 트랜스제닉 식물은 쌍자엽 식물이다. 이 양태의 추가 실시 형태에서, 쌍자엽 식물은 대두 식물, 해바라기 식물, 토마토 식물, 브라시카 spp. 식물, 목화 식물, 사탕무 식물 또는 담배 식물의 군으로부터 선택된다. 이 양태의 추가 실시 형태에서, 트랜스제닉 식물은 단자엽 식물이다. 이 양태의 추가 실시 형태에서, 단자엽 식물은 보리 식물, 마이즈 식물, 귀리 식물, 벼 식물, 수수 식물, 사탕수수 식물 또는 밀 식물의 군으로부터 선택된다. 이러한 양태의 또 다른 실시 형태에서, 식물은 트랜스제닉 식물 세포를 포함하지 않는 대조 식물과 비교하여 진균 병원체에 대해 향상된 저항성을 갖는다. 이 양태의 또 다른 실시 형태에서, 진균 병원체는 아스페르길루스 종; 마그나포르테 오리재(Magnaporthe oryzae); 보트리티스 시네레아; 푸치니아 종; 푸사리움 그라미네아룸(Fusarium graminearum); 푸사리움 옥시스포룸(Fusarium oxysporum); 블루메리아 그라미니스(Blumeria graminis); 마이코스파에렐라 그라미니콜라(Mycosphaerella graminicola); 콜레토트리쿰 종; 우스틸라고 마이디스(Ustilago maydis); 멜람프소라 리니(Melampsora lini), 파코프소라 파키리지, 또는 리족토니아 솔라니 중 하나이다. 임의의 전술한 실시 형태와 조합될 수 있는 이 양태의 또 다른 실시 형태에서, CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 진균 병원체의 게놈에서 나타나지 않는다.
식물 및 식물 세포는 쌍자엽 식물과 단자엽 식물을 포함하여 임의의 관심 종의 것이다. 관심 식물은 줄뿌림 작물, 과실 생산 식물 및 나무, 야채, 나무, 및 관상용 꽃, 관목, 나무, 지피식물 및 터프그래스를 포함한 관상용 식물을 포함한다. 상업적으로 중요한 재배 작물, 나무 및 식물의 예는 다음을 포함한다: 알팔파(메디카고 사티바), 아몬드(프루누스 둘시스), 사과(말루스 엑스 도메스티카), 살구(프루누스 아르메니아카, 피. 브리간티네, 피. 만드슈리카, 피. 무메, 피. 시비리카), 아티초크(시나라 카르둔쿨루스 var. 스콜리무스), 아스파라거스(아스파라거스 오피시날리스), 아보카도(페르세아 아메리카나), 바나나(무사 spp.), 보리(호르데움 불가레), 콩(파세올루스 spp.), 블루베리와 크랜베리(박시니움 spp.), 브라질 너트(베르톨레티아 엑셀사), 카카오(테오브로마 카카오), 칼라만시(시트러스 엑스 미크로카르파), 캐놀라와 유채 또는 서양 평지, (브라시카 나푸스), 폴란드 캐놀라(브라시카 라파), 및 브로콜리, 케일, 양배추, 및 순무를 포함한 관련 십자화과 야채(브라시카 카리나타, 비. 준세아, 비. 올레라세아, 비. 나푸스, 비. 니그라, 및 비. 라파, 및 이들의 잡종), 카네이션(디안투스 카리오필루스), 당근(다우쿠스 카로타 사티부스), 캐슈(아나카르디움 옥시덴탈레), 카사바(마니호트 에스쿨렌툼), 셀러리(아피움 그라베올렌스), 체리(프루누스 아비움), 밤나무(카스타네아 spp.), 병아리콩 또는 가르반조(시세르 아리에티눔), 치커리(키코리움 인티부스), 칠리 페퍼와 기타 캅시쿰 페퍼(캅시쿰 안누움, 씨. 프루테센스, 씨. 치넨세, 씨. 푸베센스, 씨. 바카툼), 국화(크리산테뭄 spp.), 시트론(시트러스 메디카), 코코넛(코코스 누시페라), 커피(야생 및 재배 코페아 spp.(코페아 아라비카, 코페아 카네포라, 및 코페아 리베리카 포함)), 목화(고시피움 히르수툼 엘.), 동부콩(비그나 운구이쿨라타 및 기타 비그나 spp.), 파바빈(비시아 파바), 오이(쿠쿠미스 사티부스), 커런트와 구즈베리(리베스 spp.), 대추야자(페닉스 닥틸리페라), 좀개구리밥(개구리밥아과), 가지 또는 오베르진(솔라눔 멜론게나), 엘더베리(삼부쿠스 spp.), 유칼립투스(유칼립투스 spp.), 아마(리눔 우시타티수뭄 엘.), 제라늄(펠라르고늄 spp.), 생강(진기베르 오피시날레), 인삼(파낙스 spp.), 그레이프프루트(시트러스 엑스 파라디시), 포도(비티스 spp.)(와인 포도(비티스 비니페라 및 이의 잡종) 포함), 구아바(시듐 구아자바), 개암(코릴루스 아벨라나, 코릴루스 spp.), 삼과 대마(칸나비스 사티바 및 칸나비스 spp.), 홉(후물루스 루풀루스), 서양고추냉이(아르모라시아 루스티카나), 붓꽃(이리스 spp.), 잭프루트(아르토카르푸스 헤테로필루스), 키위프루트(악티니디아 spp.), 금귤(시트러스 자포니카), 레몬(시트러스 리몬), 렌틸(렌즈 쿨리나리스), 상추(락투카 사티바), 라임(시트러스 spp.), 리치(리치 치넨시스), 마카다미아(마카다미아 spp.), 마이즈 또는 옥수수(제아 마이스 엘.), 만다린(시트러스 레티쿨라타), 망고(만기페라 인디카), 망고스틴(가르시니아 망고스타나), 멜론(쿠쿠미스 멜로), 기장(세타리아 spp., 에키노클로아 spp., 엘레우시네 spp., 파니쿰 spp., 페니세툼 spp.), 귀리(아베나 사티바), 기름 야자(엘리스 퀴네엔시스), 오크라(아벨모스쿠스 에스쿨렌투스), 올리브(올레아 유로파에아), 양파(알리움 세파)와 기타 파속 식물(알리움 spp.), 오렌지(시트러스 시넨시스), 파파야(카리카 파파야), 파스닙(파스티나카 사티바), 패션프루트(파시플로라 에둘리스), 피칸(카리아 일리노이넨시스), 복숭아와 천도복숭아(프루누스 페르시카), 배(피루스 spp.), 완두콩(피숨 사티붐), 땅콩(아라키스 하이포가에아), 모란(파에오니아 spp.), 감(디오스피로스 카키, 디오스피로스 spp.), 페튜니아(페튜니아 spp.), 파인애플(아나나스 코모수스), 피스타치오(피스타시아 베라), 플랜테인(무사 spp.), 자두(프루누스 도메스티카), 포인세티아(유포르비아 풀체리마), 포멜로(시트러스 막시마), 포플러(포풀루스 spp.), 감자(솔라눔 투베로숨), 호박과 스쿼시(쿠쿠르비타 페포, 씨. 막시마, 씨. 모샤타), 퀸스(시도니아 오블롱가), 라즈베리(루부스 이다에우스, 루부스 옥시덴탈리스, 루부스 spp.), 대황(레움 spp.), 벼(오리자 사티바 엘.), 장미(로사 spp.), 고무(헤베아 브라질리엔시스), 호밀(세칼레 세레알레), 홍화(카르타무스 틴크토리우스 엘), 사츠마(시트러스 운시우), 참깨(세사메 인디움), 수수(소르굼 비콜로르), 사워 오렌지(시트러스 엑스 아우란티움), 가시여지(안노나 무리카타), 대두(글리신 맥스 엘.), 딸기(프라가리아 spp., 프라가리아 엑스 아나나사), 사탕무(베타 불가리스), 사탕수수(사카룸 spp.), 해바라기(헬리안투스 안누우스), 고구마(이포모에아 바타타스), 타마린드(타마린두스 인디카), 귤(시트러스 탄제리나), 차(카멜리아 시넨시스), 담배(니코티아나 타바쿰 엘.), 토마틸로(피살리스 필라델피카), 토마토(솔라눔 리코페르시쿰 또는 리코페르시콘 에스쿨렌툼), 튤립(툴리파 spp.), 호두(주글란스 spp. 엘), 수박(시트룰루스 라나투스), 밀(트리티쿰 아에스티붐), 및 얌(디스코레아 spp.). 재배 식물의 야생 친척도 관심 대상이다.
본 발명의 추가 양태는 임의의 전술한 실시 형태의 트랜스제닉 식물의 트랜스제닉 종자에 관한 것이며, 여기서, 상기 종자는 재조합 DNA 구축물을 포함한다.
본 발명의 추가 양태는 적어도 하나의 모(parent)로서 임의의 전술한 실시 형태의 트랜스제닉 식물을 갖는 F1 자손 식물에 관한 것이며, 여기서, F1 자손 식물은 전술한 실시 형태의 재조합 DNA 구축물 중 임의의 것을 포함한다.
본 발명의 또 다른 양태는 임의의 전술한 실시 형태의 트랜스제닉 식물로부터 생산된 수확 생성물에 관한 것이며, 여기서, 수확 생성물은 재조합 DNA 구축물을 포함한다. 이 양태의 일부 실시 형태에서, 수확 생성물은 과실, 잎, 줄기, 꽃, 뿌리, 괴경 또는 종자이다.
본 발명의 추가 양태는 적어도 하나의 분생포자 발아 억제(CGI) 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프를 포함하는 폴리펩티드(적어도 하나의 식물 분비 신호 펩티드에 선택적으로 융합됨)를 코딩하는 이종 DNA 서열을 발현하도록 변형된 게놈을 갖는 식물에 관한 것이며, 여기서, CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프는 식물의 진균 병원체의 분생포자 발아, 성장, 또는 번식을 억제하고, CGI 인자는 서열 번호 961~1920, 서열 번호 1957~2189, 서열 번호 2194~2210, 서열 번호 2215~2243, 서열 번호 2457~3361, 또는 서열 번호 5707~5731의 군으로부터 선택되는 서열과의 서열 동일성이 80% 이상인 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 CGI 인자 모티프는 서열 번호 1921~1956 중 적어도 하나를 포함하고, 식물은 이종 DNA 서열을 발현하지 않는 대조 식물과 비교하여 진균 병원체에 대해 향상된 저항성을 갖는다. 상기 적어도 하나의 CGI 인자를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 서열 번호 1~960 또는 3362~5698을 포함할 수 있다. 이 양태의 추가 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프의 뉴클레오티드 서열은 진균 병원체의 게놈에서 나타나지 않는다. 임의의 전술한 실시 형태와 조합될 수 있는 이 양태의 추가 실시 형태에서, 진균 병원체는 아스페르길루스 종; 마그나포르테 오리재; 보트리티스 시네레아; 푸치니아 종; 푸사리움 그라미네아룸; 푸사리움 옥시스포룸; 블루메리아 그라미니스; 마이코스파에렐라 그라미니콜라; 콜레토트리쿰 종; 우스틸라고 마이디스; 멜람프소라 리니, 파코프소라 파키리지, 또는 리족토니아 솔라니 중 하나이다.
본 발명의 또 다른 양태는 다음을 포함하고 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프를 발현하기 위한 재조합 DNA 구축물을 함유하는 세포를 포함하는 식물에 관한 것이다: 세포에서 기능적이며 (a) 적어도 하나의 분생포자 발아 억제(CGI) 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프를 코딩하는 뉴클레오티드 서열, 및 (b) 세포에서 기능적인 적어도 하나의 분비 신호 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자에 작동가능하게 연결된 이종 프로모터(여기서, CGI 인자는 서열 번호 961~1920, 서열 번호 1957~2189, 서열 번호 2194~2210, 서열 번호 2215~2243, 서열 번호 2457~3361, 또는 서열 번호 5707~5731의 군으로부터 선택되는 서열과의 서열 동일성이 80% 이상인 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 CGI 인자 모티프는 서열 번호 1921~1956 중 적어도 하나를 포함하고; 상기 적어도 하나의 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 세포에서의 발현을 위해 최적화된 적어도 하나의 코돈을 선택적으로 포함함). 상기 적어도 하나의 CGI 인자를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 서열 번호 1~960 또는 3362~5698을 포함할 수 있다. 이러한 양태의 일부 실시 형태에서, CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프는 활성 및/또는 독성을 갖는다. 임의의 전술한 실시 형태와 조합될 수 있는 이 양태의 추가 실시 형태에서, 세포는 식물 세포이다. 식물 세포가 아닌 세포를 갖는 임의의 전술한 실시 형태와 조합될 수 있는 이 양태의 추가 실시 형태에서, 세포는 식물 내부 또는 식물 상의 박테리아 또는 진균 세포이다. 임의의 전술한 실시 형태와 조합될 수 있는 이 양태의 일부 실시 형태에서, 식물은 상기 세포를 포함하지 않는 대조 식물과 비교하여 진균성 병원체에 대해 향상된 저항성을 갖는다. 이 양태의 또 다른 실시 형태에서, 진균 병원체는 아스페르길루스 종; 마그나포르테 오리재; 보트리티스 시네레아; 푸치니아 종; 푸사리움 그라미네아룸; 푸사리움 옥시스포룸; 블루메리아 그라미니스; 마이코스파에렐라 그라미니콜라; 콜레토트리쿰 종; 우스틸라고 마이디스; 멜람프소라 리니, 파코프소라 파키리지, 또는 리족토니아 솔라니 중 하나이다. 임의의 전술한 실시 형태와 조합될 수 있는 이 양태의 또 다른 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 진균 병원체의 게놈에서 나타나지 않는다.
조성물
본 발명의 또 다른 양태는 전술한 실시 형태 중 어느 하나의 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프 및 농업상 허용가능한 담체를 포함하는 항진균 또는 살진균 조성물에 관한 것이다. 이 양태의 일부 실시 형태에서, 조성물은 종자 처리제, 엽면 분무 처리제, 엽면 관주 처리제, 즉시 사용 가능(RTU) 제형, 생산물 코팅, 현탁 농축물, 탱크-믹스, 에어로졸, 뿌리 침지제, 관주제, 연무제, 토양 처리제, 관개 제형, 또는 스프링클러 제형 중 하나로 제형화된다. 이 양태의 추가 실시 형태에서, 농업상 허용가능한 담체는 고체 담체, 액체 담체, 겔 담체, 현탁액 또는 에멀젼을 포함한다. 이 양태의 추가 실시 형태에서, 농업상 허용가능한 담체는 보조제, 불활성 성분, 분산제, 계면활성제, 점착성 부여제, 결합제, 또는 안정화제 중 하나 이상을 포함한다. 농업용 제형에 유용한 보조제 및 기타 성분은 예를 들어 Compedium of Herbicidal Adjuvants, 13th edition, 2016(siu-weeds[dot]com/adjuvants/index-adj[dot]html에서 입수가능)에 기술되어 있다. 이 양태의 일부 실시 형태에서, 이러한 농업용 제형은 하나 이상의 추가 성분, 예컨대 제초제, 살곤충제, 살선충제, 살진균제(본원에 개시된 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프 이외의 것), 유인제 또는 미끼를 추가로 포함한다. 이 양태의 일부 실시 형태에서, 조성물은 인간이 건축한 구조물(예를 들어, 건물, 울타리, 벽) 또는 인공물(예를 들어, 가구, 의류, 직물)에의 적용용, 또는 인간이 건축한 구조물 또는 인공물을 만드는 데 유용한 재료에의 혼입용으로 제형화된다. 이 양태의 일부 실시 형태에서, 조성물은 식품 또는 사료, 예를 들어 식물로부터 가공된 제품에의 첨가물로서 혼입된다. 이 양태의 추가 실시 형태에서, 조성물은 서방형 또는 제어 방출형 제형으로 제형화된다.
본 발명의 추가 양태는 유효량의 하나 이상의 분생포자 발아 억제(CGI) 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프(이는 (a) 서열 번호 961~1920, 서열 번호 1957~2189, 서열 번호 2194~2210, 서열 번호 2215~2243, 서열 번호 2457~3361, 또는 서열 번호 5707~5731의 군으로부터 선택되는 서열과의 서열 동일성이 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%인 CGI 인자의 아미노산 서열; 또는 (b) CGI 인자 모티프의 아미노산 서열을 포함함); 및 담체를 포함하는 항진균 조성물에 관한 것이다. 이 양태의 일부 실시 형태에서, CGI 인자 모티프는 서열 번호 1921~1956 중 적어도 하나를 포함한다. 임의의 전술한 실시 형태와 조합될 수 있는 이 양태의 추가 실시 형태에서, CGI 인자, CGI 인자 전구체, 또는 CGI 인자 단편은 활성 및/또는 독성을 갖는다. 임의의 전술한 실시 형태와 조합될 수 있는 이 양태의 추가 실시 형태에서, 담체는 농업상 허용가능한 담체 또는 제약상 허용가능한 담체로부터 선택된다. 임의의 전술한 실시 형태와 조합될 수 있는 이 양태의 추가 실시 형태에서, 조성물은 액체, 겔, 에멀젼, 현탁액, 캡슐화제, 고체, 분말, 코팅, 스프레이, 토양 관주제, 과립, 종자 코팅제 또는 미끼로 제형화된다. 이 양태의 일부 실시 형태에서, 이러한 농업용 제형은 하나 이상의 추가 성분, 예컨대 제초제, 살곤충제, 살선충제, 살진균제(본원에 개시된 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프 이외의 것), 유인제 또는 미끼를 추가로 포함한다. 이 양태의 일부 실시 형태에서, 조성물은 인간이 건축한 구조물(예를 들어, 건물, 울타리, 벽) 또는 인공물(예를 들어, 가구, 의류, 직물)에의 적용용, 또는 인간이 건축한 구조물 또는 인공물을 만드는 데 유용한 재료에의 혼입용으로 제형화된다. 이 양태의 일부 실시 형태에서, 조성물은 식품 또는 사료, 예를 들어 식물로부터 가공된 제품에의 첨가물로서 혼입된다. 이 양태의 추가 실시 형태에서, 조성물은 서방형 또는 제어 방출형 제형으로 제형화된다.
본 발명의 또 다른 양태는 활성 및/또는 독성을 갖는 적어도 하나의 분생포자 발아 억제(CGI) 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프와 복합체를 형성하는 기재(substrate) 또는 매트릭스를 포함하는, 항진균 특성을 갖는 조성물에 관한 것이며, 여기서, CGI 인자는 서열 번호 961~1920, 서열 번호 1957~2189, 서열 번호 2194~2210, 서열 번호 2215~2243, 서열 번호 2457~3361, 또는 서열 번호 5707~5731의 군으로부터 선택되는 서열과의 서열 동일성이 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%인 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 CGI 인자 모티프는 서열 번호 1921~1956 중 적어도 하나를 포함한다. 이러한 양태의 일부 실시 형태에서, CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프는 활성 및/또는 독성을 갖는다. 임의의 전술한 실시 형태와 조합될 수 있는 이 양태의 추가 실시 형태에서, 기재 또는 매트릭스와 상기 적어도 하나의 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프 사이의 복합체 형성은 다음을 통한 것이다: (a) 공유 결합, (b) 비공유 결합, 또는 (c) (a)와 (b)의 조합. 이 양태의 일부 실시 형태에서, 기재 또는 매트릭스는 폴리펩티드를 포함한다. 기재 또는 매트릭스를 갖는 임의의 전술한 실시 형태와 조합될 수 있는 이 양태의 추가 실시 형태에서, 기재 또는 매트릭스는 자가 조립 펩티드를 포함한다.
당업자에게 공지된 임의의 적합한 기재 또는 매트릭스가 본 발명에 적용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 기재 또는 매트릭스는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드는 자가 조립 펩티드이다. 일부 실시 형태에서, 자가 조립 펩티드는 (M)(YEYK)nYEY(서열 번호 2194)이며, 여기서, n은 3이거나 또는 n은 3~10이고, 메티오닌은 말단의 선택적 아미노산으로서, 하나 이상의 CGI 펩티드에 공유적으로 또는 비공유적으로 연결된다. 자가 조립 펩티드는 Miki et al. (2021) Nature Communications, 21:3412, DOI: 10.1038/s41467-021-23794-6에 의해 입증된 바와 같이 당업자에게 공지되어 있으며, 이는 이것이 교시하는 모든 것에 대해 구체적으로 그리고 전체적으로 본원에 참고로 포함된다. 일부 실시 형태에서, 기재 또는 매트릭스와 적어도 하나의 CGI 펩티드 사이의 복합체 형성은 공유 결합을 통한 것이다. 일부 실시 형태에서, 기재 또는 매트릭스와 적어도 하나의 CGI 펩티드 사이의 복합체 형성은 비공유 결합을 통한 것이다. 일부 실시 형태에서, 기재 또는 매트릭스와 적어도 하나의 CGI 펩티드 사이의 복합체 형성은 공유 결합과 비공유 결합의 조합을 통한 것이다.
진균 저항성을 제공하는 방법
본 발명의 추가 양태는 유기체의 진균 병원체에 대한 저항성을 갖는 유기체를 제공하는 방법에 관한 것으로서, 이는 전술한 실시 형태 중 어느 하나의 재조합 DNA 구축물을 유기체의 세포에서 발현시키는 단계를 포함하고, 여기서, 이종 프로모터는 유기체에서 기능적이다. 이러한 양태의 추가 실시 형태에서, CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 진균 병원체의 게놈에서 나타나지 않는다. 이러한 양태의 추가 실시 형태에서, 재조합 DNA 구축물은 (a) 형질감염에 의해; (b) 모 세포로부터의 유전에 의해; 또는 (c) 재조합 DNA 구축물을 포함하는 도너 세포와의 융합에 의해 유기체의 세포 내로 도입된다. 이 양태의 또 다른 실시 형태에서, 유기체는 식물이고, 재조합 DNA 구축물은 (a) 형질전환에 의해, 또는 (b) 재조합 DNA 구축물을 함유하는 적어도 하나의 모 식물로부터의 유전에 의해 식물에 제공된다. 형질전환은 안정적이거나 일시적일 수 있다. 이러한 양태의 또 다른 실시 형태에서, 식물은 마이즈 식물, 대두 식물, 밀 식물, 벼 식물, 목화 식물, 감자 식물, 토마토 식물, 브라시카 spp. 식물, 또는 사탕무 식물의 군으로부터 선택된다.
본 발명의 추가 양태는 유기체의 진균 병원체에 대한 저항성을 갖는 유기체를 제공하는 방법에 관한 것으로서, 이는 유기체를 임의의 전술한 실시 형태의 벡터와 접촉시키는 단계를 포함한다. 이러한 양태의 추가 실시 형태에서, CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 진균 병원체의 게놈에서 나타나지 않는다.
본 발명의 또 다른 양태는 유기체의 진균 병원체에 대한 저항성을 갖는 유기체를 제공하는 방법에 관한 것으로서, 이는 유기체를 임의의 전술한 실시 형태의 세포와 접촉시키는 단계를 포함한다. 이러한 양태의 일부 실시 형태에서, CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 진균 병원체의 게놈에서 나타나지 않는다.
본 발명의 또 다른 양태는 질병 저항성 식물을 생산하는 방법에 관한 것으로서, 이는 하기 단계를 포함한다: 전술한 실시 형태 중 어느 하나의 재조합 DNA 구축물을 식물에 도입하는 단계(여기서, CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프가 식물에서 발현됨); 서열 번호 961~1920, 서열 번호 1957~2189, 서열 번호 2194~2210, 서열 번호 2215~2243, 서열 번호 2457~3361, 또는 서열 번호 5707~5731 중 적어도 하나와의 서열 동일성이 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%인 아미노산 서열을 포함하는 CGI 인자를 발현하도록 식물을 에디팅(editing)하거나; 또는 CGI 인자 모티프를 발현하도록 식물을 에디팅함으로써, 질병 저항성 트랜스제닉 식물을 생산하는 단계. 이 양태의 일부 실시 형태에서, CGI 인자 모티프는 서열 번호 1921~1956 중 적어도 하나를 포함한다. 상기 적어도 하나의 CGI 인자를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 서열 번호 1~960 또는 3362~5698을 포함할 수 있다. 임의의 전술한 실시 형태와 조합될 수 있는 이 양태의 추가 실시 형태에서, CGI 인자, CGI 인자 전구체, 또는 CGI 인자 단편은 활성 및/또는 독성을 갖는다. 임의의 전술한 실시 형태와 조합될 수 있는 이 양태의 추가 실시 형태에서, 식물 에디팅은 징크 핑거 뉴클레아제(ZFN), 전사 활성인자 유사 이펙터 뉴클레아제(TALEN), 올리고뉴클레오티드 지정 돌연변이 유발(ODM) 또는 클러스터된 규칙적으로 이격된 짧은 팔린드롬 반복체(CRISPR) 뉴클레아제(예를 들어, Cas9, Cas12)를 사용하여 수행되거나, 또는 유전자 기록에 의해 수행된다(예를 들어, PCT 특허 출원 공개 WO2020/047124 참조). 임의의 전술한 실시 형태와 조합될 수 있는 이 양태의 또 다른 실시 형태에서, 도입 단계는 (a) 식물을 형질전환시키는 것에 의해; 또는 (b) 재조합 DNA 구축물을 포함하는 제1 식물을 제2 식물과 교배시키는 것에 의해 성취된다. 임의의 전술한 실시 형태와 조합될 수 있는 이 양태의 또 다른 실시 형태에서, 도입 단계는 식물을 형질전환시키는 것을 포함하고, 식물을 형질전환시키는 것은 박테리아 매개 형질전환, 미세발사체 매개 형질전환, 초음파 처리, 전기천공, 나노입자 매개 형질전환, 또는 리포솜 매개 또는 스페로플라스트 매개 벡터 전달을 포함한다. 임의의 전술한 실시 형태와 조합될 수 있는 이 양태의 추가 실시 형태는 식물이 마이즈 식물, 대두 식물, 밀 식물, 벼 식물, 목화 식물, 감자 식물, 토마토 식물, 브라시카 spp. 식물, 또는 사탕무 식물인 것을 포함한다.
본 발명의 일부 양태는 유기체의 진균 병원체에 대한 저항성을 갖는 유기체를 제공하는 방법에 관한 것으로서, 이는 유기체를 전술한 실시 형태 중 어느 하나의 항진균 조성물과 접촉시키는 단계를 포함한다. 이러한 양태의 추가 실시 형태에서, CGI 인자의 아미노산 서열은 진균 병원체에 의해 천연적으로 발현되는 알파 페로몬의 서열이 아니거나, 또는 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 진균 병원체의 게놈에서 나타나지 않는다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법은 아스페르길루스, 칸디다(Candida), 콕시디오이데스(Coccidioides), 히스토플라스마(Histoplasma) 또는 블라스토마이세스(Blastomyces) 진균으로 이루어진 군으로부터 선택되는 진균 병원체에 대한 저항성을 제공한다. 일부 실시 형태에서, 진균 병원체는 무코로마이코티나(Mucoromycotina) 진균, 칸디다 종(예를 들어, 씨. 알비칸스(C. albicans), 씨. 트로피칼리스(C. tropicalis), 씨. 크루세이(C. krusei), 씨. 글라브라타(C. glabrata) 및 씨. 슈도트로피칼리스(C. pseudotropicalis)), 아스페르길루스 종(예를 들어, 에이. 푸미가투스, 에이. 플라부스(A. flavus) 및 에이. 니게르), 마그나포르테 오리재, 보트리티스 시네레아, 푸치니아 spp., 푸사리움 그라미네아룸, 푸사리움 옥시스포룸, 블루메리아 그라미니스, 마이코스파에렐라 그라미니콜라, 콜레토트리쿰 spp., 우스틸라고 마이디스, 멜람프소라 리니, 파코프소라 파키리지, 또는 리족토니아 솔라니이다. 일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법은 식물의 진균 병원체에 대한 저항성을 제공한다. 일부 실시 형태에서, 식물의 진균 병원체는 마그나포르테 오리재; 보트리티스 시네레아; 푸치니아 spp.; 푸사리움 그라미네아룸; 푸사리움 옥시스포룸; 블루메리아 그라미니스; 마이코스파에렐라 그라미니콜라; 콜레토트리쿰 spp.; 우스틸라고 마이디스; 멜람프소라 리니; 파코프소라 파키리지; 또는 리족토니아 솔라니이다.
진균 성장을 방제하거나 예방하는 방법
본 발명의 추가 양태는 진균 병원체를 방제하는 방법에 관한 것으로서, 이는 전술한 실시 형태 중 어느 하나의 유효량의 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프를 포함하는 조성물을 진균 병원체 또는 이의 환경에 전달하는 단계를 포함한다.
본 발명의 추가 양태는 진균 병원체를 방제하는 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 다음 단계를 포함한다: 진균 병원체 또는 진균 병원체 함유 장소에 분생포자 발아 억제(CGI) 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프(상기 진균 병원체, 상기 진균 병원체와 동일한 속의 진균, 상기 진균 병원체와는 다른 속의 진균, 또는 이들의 혼합물 중 적어도 하나로부터 유래)를 포함하는 조성물을 적용하는 단계. 이 양태의 일부 실시 형태에서, CGI 인자는 서열 번호 961~1920, 서열 번호 1957~2189, 서열 번호 2194~2210, 서열 번호 2215~2243, 서열 번호 2457~3361, 또는 서열 번호 5707~5731의 군으로부터 선택되는 아미노산 서열, 또는 이에 대한 서열 동일성이 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%인 아미노산 서열을 갖거나; 또는 CGI 인자 모티프는 서열 번호 1921~1956 중 적어도 하나를 포함한다. 상기 적어도 하나의 CGI 인자를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 서열 번호 1~960 또는 3362~5698을 포함할 수 있다. 임의의 전술한 실시 형태와 조합될 수 있는 이 양태의 추가 실시 형태에서, CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프는 활성 및/또는 독성을 갖는다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 진균 병원체"로부터 유래된" CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프는 진균 병원체로부터 직접적으로 수득된(예를 들어, 추출된) CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프, 또는 간접적으로 수득된 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프(예를 들어, 하나 이상의 진균 병원체 CGI 인자 서열을 기반으로 하는 서열을 갖는 합성 CGI 인자 또는 이의 전구체)를 지칭한다. 일부 실시 형태에서, 진균 병원체"로부터 유래된" CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프의 아미노산 서열은 자연 발생 진균 알파 페로몬 펩티드의 아미노산 서열에 상응하며, 예를 들어, 진균 병원체의 게놈 코딩된 발현 또는 추정 알파 페로몬 펩티드 서열과 동일하거나 거의 동일한(예를 들어, 90% 초과의 서열 동일성) 아미노산 서열을 갖는다. 실시 형태들에서, 진균 병원체"로부터 유래된" CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프의 아미노산 서열은 하나 초과의 자연 발생 진균 알파 페로몬 펩티드들의 조합, 예를 들어 단일 진균 알파 페로몬 펩티드의 동종이량체 또는 2개의 상이한 알파 페로몬 펩티드들의 이종이량체, 또는 하나 이상의 알파 페로몬 펩티드의 다량체(추가 아미노산(예를 들어, 알파 페로몬 단량체들에 인접하거나 그 사이에 있는 측면 아미노산 또는 연결 아미노산)을 포함하거나 포함하지 않음)를 포함한다. 다른 실시 형태에서, 진균 병원체"로부터 유래된" CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프의 서열은 그 진균 병원체의 해당 서열에 비해 더 짧거나 더 길다. 예를 들어, 합성 CGI 인자 또는 CGI 인자 전구체는 자연 발생 진균 알파 페로몬(또는 알파 페로몬 전구체) 서열의 서열에 삽입된 추가 아미노산을 포함할 수 있으며; 실시 형태들에서, 상기 추가 아미노산은 상기 추가 아미노산이 결여된 폴리펩티드에 비해 다음과 같은, 그러나 이에 한정되지 않는 원하는 특성 또는 기능을 제공한다: 증가된 용해도, 변형된 전하, 개선된 검출성 또는 선발성(예를 들어, 검출가능하거나 선발가능한 서열, 예컨대 리포터 또는 에피토프를 사용), 증가된 안정성, 증가된 세포 침투, 또는 변형된 세포 또는 조직 위치(예를 들어, 세포 소기관 또는 특정 조직으로의 국소화). 일부 실시 형태에서, 합성 CGI 인자 또는 CGI 인자 전구체는 하나 이상의 진균 병원체로부터 확인된 다수의 자연 발생 CGI 인자로부터 유래된 서열을 포함한다(예를 들어, 단위 서열들이, 단위 서열들을 연결하는 링커 아미노산을 선택적으로 갖고 상이한 진균 종들로부터 확인된 CGI 인자 서열인, 이종이량체 또는 다른 다량체인 합성 CGI 인자). 추가로, 진균 병원체"로부터 유래된" CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프에는 추가 아미노산 잔기, 예를 들어 링커 서열, 신호 펩티드 서열 또는 이와 유사한 것이 부가될 수 있다.
본 발명의 추가 양태는 진균의 성장 또는 번식을 방제하는 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 유효량의 하나 이상의 분생포자 발아 억제(CGI) 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프를 포함하는 조성물을 진균에 제공하는 단계를 포함하며, CGI 인자는 서열 번호 961~1920, 서열 번호 1957~2189, 서열 번호 2194~2210, 서열 번호 2215~2243, 서열 번호 2457~3361, 또는 서열 번호 5707~5731의 군으로부터 선택되는 서열과의 서열 동일성이 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%인 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 CGI 인자 모티프는 서열 번호 1921~1956 중 적어도 하나를 포함하고, CGI 인자의 아미노산 서열은 진균에 의해 천연적으로 발현되는 알파 페로몬의 아미노산 서열이 아니거나, 또는 상기 적어도 하나의 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프의 뉴클레오티드 서열은 진균의 게놈에서 나타나지 않는다. 상기 적어도 하나의 CGI 인자를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 서열 번호 1~960 또는 3362~5698을 포함할 수 있다. 이러한 양태의 일부 실시 형태에서, CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프는 활성 및/또는 독성을 갖는다. 임의의 전술한 실시 형태와 조합될 수 있는 이 양태의 추가 실시 형태에서, 조성물은 진균을 조성물과 직접적으로 접촉시키거나, 또는 조성물을 진균의 환경에 전달함으로써 진균에 제공된다.
본 발명의 또 다른 양태는 표면 상에서의 진균의 성장을 예방하는 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 유효량의 하나 이상의 분생포자 발아 억제(CGI) 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프를 포함하는 조성물로 표면을 처리하는 단계를 포함하며, CGI 인자는 서열 번호 961~1920, 서열 번호 1957~2189, 서열 번호 2194~2210, 서열 번호 2215~2243, 서열 번호 2457~3361, 또는 서열 번호 5707~5731의 군으로부터 선택되는 서열과의 서열 동일성이 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%인 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 CGI 인자 모티프는 서열 번호 1921~1956 중 적어도 하나를 포함한다. 상기 적어도 하나의 CGI 인자를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 서열 번호 1~960 또는 3362~5698을 포함할 수 있다. 이러한 양태의 일부 실시 형태에서, CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프는 활성 및/또는 독성을 갖는다. 임의의 전술한 실시 형태와 조합될 수 있는 이 양태의 추가 실시 형태에서, 표면은 무생물 표면이거나 또는 살아있는 유기체의 표면이다. 임의의 전술한 실시 형태와 조합될 수 있는 이 양태의 추가 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프의 뉴클레오티드 서열은 진균의 게놈에서 나타나지 않는다.
표면 상에서 또는 구조물(예를 들어, 인간이 건축한 구조물 또는 인공물) 내부에서 진균의 성장을 예방하는 방법이 또한 본원에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 본 방법은 진균의 성장 또는 번식을 억제하는 유효량의 하나 이상의 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프를 포함하는 조성물(예를 들어, 페인트, 코팅, 스프레이, 또는 딥(dip))로 표면 또는 구조물을 처리하는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, CGI 인자는 다음으로부터 선택되는 서열과의 서열 동일성이 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%인 아미노산 서열을 포함한다: 서열 번호 961~1920으로 이루어진 군, 또는 서열 번호 1957~2189로 이루어진 군, 또는 서열 번호 2194~2210으로 이루어진 군, 서열 번호 2215~2243으로 이루어진 군, 또는 서열 번호 2457~3361로 이루어진 군, 또는 서열 번호 5707~5731로 이루어진 군. 실시 형태들에서, 상기 적어도 하나의 CGI 인자를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 서열 번호 1~960 또는 3362~5698로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프의 DNA 서열은 진균의 게놈에서 나타나지 않는다.
일부 실시 형태에서, 표면은 무생물 표면이다. 일부 실시 형태에서, 표면은 살아있는 유기체의 표면이다. 실시 형태들에서, 구조물은 인간이 건축한 구조물 또는 인공물, 예컨대 건물, 울타리, 벽, 가구, 직물, 또는 이들의 구성요소이다.
진균성 질병을 치료하는 방법
본 발명의 추가 양태는 진균성 질병을 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것으로서, 이는 대상체에게 임의의 전술한 실시 형태의 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프 및 제약상 허용가능한 담체를 포함하는 항진균 또는 살진균 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 이 양태의 일부 실시 형태에서, 대상체는 포유동물이고; 다른 실시 형태에서 대상체는 조류, 파충류, 어류, 또는 양서류와 같은 척추동물이거나 또는 곤충류와 같은 무척추동물이다. 이 양태의 추가 실시 형태에서, 포유동물은 인간이다. 이 양태의 추가 실시 형태에서, 포유동물은 길들여진 동물 또는 가축이다. 임의의 전술한 실시 형태와 조합될 수 있는 이 양태의 다른 추가 실시 형태에서, 진균성 질병은 아스페르길루스, 칸디다, 콕시디오이데스, 히스토플라스마, 크립토코커스(Cryptococcus), 뉴모시스티스(Pneumocystis) 또는 블라스토마이세스 진균의 군으로부터 선택되는 진균 병원체에 의해 야기된다. 일부 실시 형태에서, 진균성 질병은 무코로마이코티나 진균, 칸디다 종(예를 들어, 씨. 알비칸스, 씨. 아우리스(C. auris), 씨. 트로피칼리스, 씨. 크루세이, 씨. 글라브라타, 씨. 파라프실로시스(C. parapsilosis), 및 씨. 슈도트로피칼리스), 콕시디오이데스 종(예를 들어, 씨. 이미티스(C. immitis) 또는 씨. 포사다시이(C. posadasii)), 아스페르길루스 종(예를 들어, 에이. 푸미가투스, 에이. 플라부스 및 에이. 니게르), 무코르 종, 리조무코르(Rhizomucor) 종, 말라세지아(Malassezia) 종(예를 들어, 엠. 푸르푸르(M. furfur), 엠. 글로보세(M. globose), 및 엠. 레스트릭타(M. restricta)), 마그나포르테 오리재, 보트리티스 시네레아, 푸치니아 spp., 푸사리움 그라미네아룸; 푸사리움 옥시스포룸, 블루메리아 그라미니스, 마이코스파에렐라 그라미니콜라, 콜레토트리쿰 spp., 우스틸라고 마이디스; 멜람프소라 리니, 파코프소라 파키리지, 또는 리족토니아 솔라니의 감염이다. 임의의 전술한 실시 형태와 조합될 수 있는 이 양태의 또 다른 실시 형태에서, 진균성 질병은 아스페르길루스증, 블라스토마이세스증, 칸디다증, 콕시디오이데스진균증, 히스토플라스마증, 털곰팡이증, 진균종, 링웜, 스포로트릭스증, 파라콕시디오이데스진균증, 탈라로마이코시스, 색소모세포진균증 푸사리움증, 이머고마이코시스, 스케도스포리오시스, 또는 진균성 수막염이다. 임의의 전술한 실시 형태와 조합될 수 있는 이 양태의 추가 실시 형태에서, 항진균 또는 살진균 조성물은 정맥내, 근육내, 피하, 국소, 경구, 경피, 복강내, 안와내로 투여되거나, 이식에 의해, 흡입에 의해 투여되거나, 척수강내, 뇌실내 또는 비강내로 투여된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "대상체"는 동물, 식물 또는 미생물과 같은 유기체를 지칭한다. 일부 실시 형태에서, 대상체는 포유동물이다. 일부 실시 형태에서, 포유동물은 인간이다. 다른 실시 형태에서, 대상체는 길들여진 동물 또는 가축이다. 일부 실시 형태에서, 대상체는 비포유동물이다. 일부 실시 형태에서, 비포유동물은 파충류, 곤충류, 양서류, 조류 또는 어류이다. 실시 형태들에서, 대상체는 척추동물(예를 들어, 포유동물, 조류, 연골어류 또는 경골어류, 파충류 또는 양서류)이다. 실시 형태들에서, 대상체는 인간이고; 이는 성인 및 비성인(유아 및 소아)을 포함한다. 실시 형태들에서, 대상체는 비인간 포유동물, 예컨대 비인간 영장류(예를 들어, 원숭이, 유인원), 유제류(예를 들어, 소, 버팔로, 들소, 양, 염소, 돼지, 낙타, 라마, 알파카, 사슴, 말, 당나귀), 육식동물(예를 들어, 개, 고양이), 설치류(예를 들어, 래트, 마우스), 또는 토끼목 포유동물(예를 들어, 토끼)이다. 실시 형태들에서, 대상체는 조류, 예컨대 다음의 조류 분류군의 구성원이다: 닭목(예를 들어, 닭, 칠면조, 꿩, 메추라기), 기러기목(예를 들어, 오리, 거위), 고악하목(예를 들어, 타조, 에뮤), 비둘기목(예를 들어, 비둘기, 도브) 또는 앵무목(예를 들어, 앵무새). 실시 형태들에서, 대상체는 무척추동물, 예컨대 절지동물(예를 들어, 곤충류, 거미류, 갑각류), 선충류, 환형동물, 연충류 또는 연체동물이다. 실시 형태들에서, 대상체는 동물 또는 식물의 마이크로바이옴의 일부와 같이 공생의 일부인 유기체이다. 실시 형태들에서, 대상체는 식물, 예컨대 속씨 식물(쌍자엽 식물 또는 단자엽 식물일 수 있음) 또는 겉씨 식물(예를 들어, 침엽수, 소철, 마황문, 은행나무), 양치류, 속새류, 클럽모스, 또는 선태류이다. 실시 형태들에서, 대상체는 진핵 조류(단세포 또는 다세포)이다. 실시 형태들에서, 대상체는 농업 또는 원예에 중요한 식물, 예컨대 줄뿌림 작물, 과실 생산 식물 및 나무, 야채, 나무, 및 관상용 꽃, 관목, 나무, 지피식물 및 터프그래스를 포함한 관상용 식물이다. 식물 및 식물 세포는 쌍자엽 식물과 단자엽 식물을 포함하여 임의의 관심 종의 것이다. 관심 식물은 줄뿌림 작물, 과실 생산 식물 및 나무, 야채, 나무, 및 관상용 꽃, 관목, 나무, 지피식물 및 터프그래스를 포함한 관상용 식물을 포함한다.
열거된 실시 형태:
1. 재조합 DNA 구축물로서, 상기 구축물은
분생포자 발아 억제(CGI) 인자, CGI 인자 전구체, 또는 CGI 인자 단편을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자에 이종 프로모터가 작동가능하게 연결된 것을 포함하며,
상기 뉴클레오티드 서열은
(a) 서열 번호 961~1920, 서열 번호 1957~2189, 서열 번호 2194~2210, 서열 번호 2215~2243, 서열 번호 2457~3361, 또는 서열 번호 5707~5731 중 적어도 하나와의 서열 동일성이 80% 이상인 아미노산 서열을 포함하는 적어도 하나의 CGI 인자, 적어도 하나의 CGI 인자 전구체, 또는 적어도 하나의 CGI 인자 단편을 코딩하거나,
(b) 이종 발현에 최적화된 코돈을 갖는 (a)의 합성 서열이거나; 또는
(c) 적어도 하나의 CGI 인자 모티프를 코딩하는, 재조합 DNA 구축물.
2. 실시 형태 2에 있어서, CGI 인자 모티프는 서열 번호 1921~1956 중 적어도 하나를 포함하는, 재조합 DNA 구축물.
3. 실시 형태 1 또는 실시 형태 2에 있어서, CGI 인자, CGI 인자 전구체, 또는 CGI 인자 단편은 활성 및/또는 독성을 갖는, 재조합 DNA 구축물.
4. 실시 형태 1 내지 3 중 어느 하나에 있어서, 재조합 DNA 구축물은 (a) CGI 인자의 적어도 하나의 카피, (b) 2개 이상의 CGI 인자 각각의 적어도 하나의 카피, (c) 적어도 하나의 CGI 인자 전구체, (d) 적어도 하나의 CGI 인자 단편, (e) 적어도 하나의 CGI 인자 모티프, 또는 (f) (a) 내지 (e)의 임의의 조합을 포함하는, 재조합 DNA 구축물.
5. 실시 형태 1~4 중 어느 하나에 있어서, 이종 프로모터는 박테리아 프로모터, 진균 프로모터, 조류 프로모터, 동물 프로모터, 또는 식물 프로모터인, 재조합 DNA 구축물.
6. 실시 형태 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 이종 프로모터는 식물 발현성 프로모터인, 재조합 DNA 구축물.
7. 실시 형태 6에 있어서, 식물 발현성 프로모터는 유비퀴틴 프로모터, 세스트룸 황색 바이러스 프로모터, 옥수수 TrpA 프로모터, OsMADS 6 프로모터, 마이즈 H3 히스톤 프로모터, 옥수수 수크로스 신테타아제 1 프로모터, 옥수수 알코올 데히드로게나아제 1 프로모터, 옥수수 열 충격 단백질 프로모터, 마이즈 mtl 프로모터, 완두콩 소형 서브유닛 RuBP 카르복실라아제 프로모터, 벼 액틴 프로모터, 벼 시클로필린 프로모터, Ti 플라스미드 만노핀 신타아제 프로모터, Ti 플라스미드 노팔린 신타아제 프로모터, 페튜니아 칼콘 이소머라아제 프로모터, 콩 글리신 풍부 단백질 1 프로모터, 감자 파타틴 프로모터, 렉틴 프로모터, CaMV 35S 프로모터, 및 S-E9 소형 서브유닛 RuBP 카르복실라아제 프로모터로 이루어진 프로모터 군으로부터 선택되는, 재조합 DNA 구축물.
8. 실시 형태 1 내지 7 중 어느 하나에 있어서, 재조합 DNA 구축물은 세포에서 기능적인 적어도 하나의 분비 신호 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 추가로 포함하는, 재조합 DNA 구축물.
9. 유기체의 진균 병원체에 대한 저항성을 갖는 유기체를 제공하는 방법으로서, 상기 방법은 실시 형태 1 내지 8 중 어느 하나의 재조합 DNA 구축물을 유기체의 세포에서 발현시키는 단계를 포함하고, 이종 프로모터는 유기체에서 기능적인, 방법.
10. 실시 형태 9에 있어서, CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 진균 병원체의 게놈에서 나타나지 않는, 방법.
11. 실시 형태 9에 있어서, 재조합 DNA 구축물은 (a) 형질감염에 의해; (b) 모 세포로부터의 유전에 의해; 또는 (c) 재조합 DNA 구축물을 포함하는 도너 세포와의 융합에 의해 유기체의 세포 내로 도입되는, 방법.
12. 실시 형태 9에 있어서, 유기체는 식물이고, 재조합 DNA 구축물은 (a) 형질전환에 의해, 또는 (b) 재조합 DNA 구축물을 함유하는 적어도 하나의 모 식물로부터의 유전에 의해 식물에 제공되는, 방법.
13. 실시 형태 12에 있어서, 식물은 마이즈 식물, 대두 식물, 밀 식물, 벼 식물, 목화 식물, 감자 식물, 토마토 식물, 브라시카 spp. 식물, 및 사탕무 식물로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
14. 실시 형태 1 내지 8 중 어느 하나의 재조합 DNA 구축물에 의해 코딩되는 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프.
15. 실시 형태 14의 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프 및 농업상 허용가능한 담체를 포함하는 항진균 또는 살진균 조성물.
16. 실시 형태 15에 있어서, 상기 조성물은 종자 처리제, 엽면 분무 처리제, 엽면 관주 처리제, 즉시 사용 가능(RTU) 제형, 생산물 코팅, 현탁 농축물, 탱크-믹스, 에어로졸, 뿌리 침지제, 관주제, 연무제, 토양 처리제, 관개 제형, 또는 스프링클러 제형 중 하나로 제형화되는, 항진균 또는 살진균 조성물.
17. 실시 형태 15에 있어서, 농업상 허용가능한 담체는 고체 담체, 액체 담체, 겔 담체, 현탁액 또는 에멀젼을 포함하는, 항진균 또는 살진균 조성물.
18. 실시 형태 15에 있어서, 농업상 허용가능한 담체는 보조제, 불활성 성분, 분산제, 계면활성제, 점착성 부여제, 결합제, 또는 안정화제 중 하나 이상을 포함하는, 항진균 또는 살진균 조성물.
19. 실시 형태 1 내지 8 중 어느 하나의 재조합 DNA 구축물을 포함하는 재조합 벡터.
20. 실시 형태 19에 있어서, 벡터는 재조합 DNA 구축물 측면에 있는 좌측 T-DNA 경계 및 우측 T-DNA 경계를 포함하는, 벡터.
21. 실시 형태 19에 있어서, 벡터는 바이러스 벡터인, 벡터.
22. 유기체의 진균 병원체에 대한 저항성을 갖는 유기체를 제공하는 방법으로서, 유기체를 실시 형태 19의 벡터와 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
23. 실시 형태 22에 있어서, CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 진균 병원체의 게놈에서 나타나지 않는, 방법.
24. 실시 형태 1 내지 8 중 어느 하나의 재조합 DNA 구축물의 전사로부터 생성된 RNA 전사체.
25. 실시 형태 19의 재조합 벡터를 포함하는 트랜스제닉 세포.
26. 실시 형태 25에 있어서, 세포는 박테리아 세포, 진균 세포, 조류 세포, 동물 세포 또는 식물 세포로부터 선택되는, 트랜스제닉 세포.
27. 실시 형태 26에 있어서, 트랜스제닉 세포는 식물 세포인, 트랜스제닉 세포.
28. 실시 형태 27에 있어서, 식물 세포는 쌍자엽 식물 세포인, 트랜스제닉 세포.
29. 실시 형태 28에 있어서, 쌍자엽 식물 세포는 대두 세포, 해바라기 세포, 토마토 세포, 브라시카 spp. 세포, 목화 세포, 사탕무 세포, 및 담배 세포로 이루어진 군으로부터 선택되는, 트랜스제닉 세포.
30. 실시 형태 27에 있어서, 식물 세포는 단자엽 식물 세포인, 트랜스제닉 세포.
31. 실시 형태 30에 있어서, 단자엽 식물 세포는 보리 세포, 마이즈 세포, 귀리 세포, 벼 세포, 수수 세포, 사탕수수 세포 및 밀 세포로 이루어진 군으로부터 선택되는, 트랜스제닉 세포.
32. 실시 형태 25 내지 31 중 어느 하나에 있어서, CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프는 (a) 일시적으로 발현되거나, 또는 (b) 안정적으로 발현되는, 트랜스제닉 세포.
33. 유기체의 진균 병원체에 대한 저항성을 갖는 유기체를 제공하는 방법으로서, 유기체를 실시 형태 25의 세포와 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
34. 실시 형태 33에 있어서, CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 진균 병원체의 게놈에서 나타나지 않는, 방법.
35. 실시 형태 27의 트랜스제닉 식물 세포를 포함하는 트랜스제닉 식물.
36. 실시 형태 35에 있어서, 트랜스제닉 식물은 쌍자엽 식물인, 트랜스제닉 식물.
37. 실시 형태 36에 있어서, 쌍자엽 식물은 대두 식물, 해바라기 식물, 토마토 식물, 브라시카 spp. 식물, 목화 식물, 사탕무 식물 및 담배 식물로 이루어진 군으로부터 선택되는, 트랜스제닉 식물.
38. 실시 형태 35에 있어서, 트랜스제닉 식물은 단자엽 식물인, 트랜스제닉 식물.
39. 실시 형태 38에 있어서, 단자엽 식물은 보리 식물, 마이즈 식물, 귀리 식물, 벼 식물, 수수 식물, 사탕수수 식물 및 밀 식물로 이루어진 군으로부터 선택되는, 트랜스제닉 식물.
40. 실시 형태 35에 있어서, 식물은 트랜스제닉 식물 세포를 포함하지 않는 대조 식물과 비교하여 진균 병원체에 대해 향상된 저항성을 갖는, 트랜스제닉 식물.
41. 실시 형태 39에 있어서, 진균 병원체는 아스페르길루스 종; 마그나포르테 오리재; 보트리티스 시네레아; 푸치니아 종; 푸사리움 그라미네아룸; 푸사리움 옥시스포룸; 블루메리아 그라미니스; 마이코스파에렐라 그라미니콜라; 콜레토트리쿰 종; 우스틸라고 마이디스; 멜람프소라 리니, 파코프소라 파키리지, 또는 리족토니아 솔라니 중 하나인, 트랜스제닉 식물.
42. 실시 형태 35 내지 41에 있어서, CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 진균 병원체의 게놈에서 나타나지 않는, 트랜스제닉 식물.
43. 실시 형태 35의 트랜스제닉 식물의 트랜스제닉 종자로서, 상기 종자는 재조합 DNA 구축물을 포함하는, 트랜스제닉 종자.
44. 실시 형태 35의 트랜스제닉 식물을 적어도 하나의 모로서 갖는 F1 자손 식물로서, F1 자손 식물은 재조합 DNA 구축물을 포함하는, F1 자손 식물.
45. 실시 형태 35의 트랜스제닉 식물로부터 생산된 수확 생성물로서, 수확 생성물은 재조합 DNA 구축물을 포함하는, 수확 생성물.
46. 실시 형태 45에 있어서, 수확 생성물은 과실, 잎, 줄기, 꽃, 뿌리, 괴경 또는 종자인, 수확 생성물.
47. 질병 저항성 식물을 생산하는 방법으로서,
실시 형태 1 내지 8 중 어느 하나의 재조합 DNA 구축물을 식물 내로 도입하는 단계(여기서, CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프가 식물에서 발현됨);
서열 번호 961~1920, 서열 번호 1957~2189, 서열 번호 2194~2210, 서열 번호 2215~2243, 서열 번호 2457~3361, 또는 서열 번호 5707~5731 중 적어도 하나와의 서열 동일성이 80% 이상인 아미노산 서열을 포함하는 CGI 인자, CGI 인자 전구체, 또는 CGI 인자 단편을 발현하도록 식물을 에디팅하거나; 또는
CGI 인자 모티프를 발현하도록 식물을 에디팅하고,
이에 의해 진균 또는 난균에 의해 야기되는 질병에 대해 저항성을 갖는 질병 저항성 트랜스제닉 식물을 생산하는 단계를 포함하는, 방법.
48. 실시 형태 47에 있어서, CGI 인자 모티프는 서열 번호 1921~1956 중 적어도 하나를 포함하는, 방법.
49. 실시 형태 47 또는 실시 형태 48에 있어서, CGI 인자, CGI 인자 전구체, 또는 CGI 인자 단편은 진균 또는 난균의 성장을 억제하고/하거나 독성을 갖는, 방법.
50. 실시 형태 47 내지 49 중 어느 하나에 있어서, 식물 에디팅은 징크 핑거 뉴클레아제(ZFN), 전사 활성인자 유사 이펙터 뉴클레아제(TALEN), 올리고뉴클레오티드 지정 돌연변이 유발(ODM) 또는 클러스터된 규칙적으로 이격된 짧은 팔린드롬 반복체(CRISPR)/Cas 뉴클레아제를 사용하여 수행되는, 방법.
51. 실시 형태 47 내지 49 중 어느 하나에 있어서, 도입 단계는 (a) 식물을 형질전환시키는 것에 의해; 또는 (b) 재조합 DNA 구축물을 포함하는 제1 식물을 제2 식물과 교배시키는 것에 의해 성취되는, 방법.
52. 실시 형태 47 내지 49 중 어느 하나에 있어서, 도입 단계는 식물을 형질전환시키는 것을 포함하고, 식물을 형질전환시키는 것은 박테리아 매개 형질전환, 미세발사체 매개 형질전환, 초음파 처리, 전기천공, 나노입자 매개 형질전환, 또는 리포솜 매개 또는 스페로플라스트 매개 벡터 전달을 포함하는, 방법.
53. 실시 형태 47 내지 52 중 어느 하나에 있어서, 식물은 마이즈 식물, 대두 식물, 밀 식물, 벼 식물, 목화 식물, 감자 식물, 토마토 식물, 브라시카 spp. 식물, 또는 사탕무 식물인, 방법.
54. 진균 병원체를 방제하는 방법으로서, 실시 형태 14의 유효량의 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프를 포함하는 조성물을 진균 병원체 또는 이의 환경에 전달하는 단계를 포함하는, 방법.
55. 다음을 포함하는 항진균 조성물:
(a) 유효량의 적어도 하나의 분생포자 발아 억제(CGI) 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프(이는
(i) 서열 번호 961~1920, 서열 번호 1957~2189, 서열 번호 2194~2210, 서열 번호 2215~2243, 서열 번호 2457~3361, 또는 서열 번호 5707~5731로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열과의 서열 동일성이 80% 이상인 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드; 또는
(ii) CGI 인자 모티프의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함함); 및
(b) 담체.
56. 실시 형태 53에 있어서, CGI 인자 모티프는 서열 번호 1921~1956 중 적어도 하나를 포함하는, 항진균 조성물.
57. 실시 형태 55 또는 실시 형태 56에 있어서, CGI 인자, CGI 인자 전구체, 또는 CGI 인자 단편은 진균 또는 난균의 성장을 억제하고/하거나 독성을 갖는, 항진균 조성물.
58. 실시 형태 55 내지 57 중 어느 하나에 있어서, 담체는 농업상 허용가능한 담체 또는 제약상 허용가능한 담체로부터 선택되는, 항진균 조성물.
59. 실시 형태 55 내지 58 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물은 액체, 겔, 에멀젼, 현탁액, 캡슐화제, 고체, 분말, 코팅, 스프레이, 토양 관주제, 과립, 종자 코팅제 또는 미끼로 제형화되는, 항진균 조성물.
60. 유기체의 진균 병원체에 대한 저항성을 갖는 유기체를 제공하는 방법으로서, 유기체를 실시 형태 55 내지 59 중 어느 하나의 항진균 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
61. 실시 형태 60에 있어서, CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 진균 병원체의 게놈에서 나타나지 않는, 방법.
62. 하기 단계를 포함하는, 진균 병원체를 방제하는 방법:
진균 병원체 또는 진균 병원체 함유 장소에 분생포자 발아 억제(CGI) 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프(상기 진균 병원체, 상기 진균 병원체와 동일한 속의 진균, 상기 진균 병원체와는 다른 속의 진균, 또는 이들의 혼합물 중 적어도 하나로부터 유래)를 포함하는 조성물을 적용하는 단계.
63. 실시 형태 62에 있어서, CGI 인자는 서열 번호 961~1920, 서열 번호 1957~2189, 서열 번호 2194~2210, 서열 번호 2215~2243, 서열 번호 2457~3361, 또는 서열 번호 5707~5731로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 또는 이에 대한 서열 동일성이 80% 이상인 아미노산 서열을 갖거나; 또는 CGI 인자 모티프는 서열 번호 1921~1956 중 적어도 하나를 포함하는, 방법.
64. 실시 형태 62 또는 실시 형태 63에 있어서, CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프는 활성 및/또는 독성을 갖는, 방법.
65. 적어도 하나의 분생포자 발아 억제(CGI) 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프를 포함하는 폴리펩티드(적어도 하나의 식물 분비 신호 펩티드에 선택적으로 융합됨)를 코딩하는 이종 DNA 서열을 발현하도록 변형된 게놈을 갖는 식물로서, CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프는 식물의 진균 병원체의 분생포자 발아, 성장, 또는 번식을 억제하고, CGI 인자는 서열 번호 961~1920, 서열 번호 1957~2189, 서열 번호 2194~2210, 서열 번호 2215~2243, 서열 번호 2457~3361, 또는 서열 번호 5707~5731로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열과의 서열 동일성이 80% 이상인 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 CGI 인자 모티프는 서열 번호 1921~1956 중 적어도 하나를 포함하고, 식물은 이종 DNA 서열을 발현하지 않는 대조 식물과 비교하여 진균 병원체에 대해 향상된 저항성을 갖는, 식물.
66. 실시 형태 65에 있어서, 상기 적어도 하나의 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프의 뉴클레오티드 서열은 진균 병원체의 게놈에서 나타나지 않는, 식물.
67. 실시 형태 65 또는 실시 형태 66에 있어서, 진균 병원체는 아스페르길루스 종; 마그나포르테 오리재; 보트리티스 시네레아; 푸치니아 종; 푸사리움 그라미네아룸; 푸사리움 옥시스포룸; 블루메리아 그라미니스; 마이코스파에렐라 그라미니콜라; 콜레토트리쿰 종; 우스틸라고 마이디스; 멜람프소라 리니, 파코프소라 파키리지, 또는 리족토니아 솔라니 중 하나인, 식물.
68. 다음을 포함하고 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프를 발현하기 위한 재조합 DNA 구축물을 함유하는 세포를 포함하는 식물:
세포에서 기능적이며 (a) 적어도 하나의 분생포자 발아 억제(CGI) 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프를 코딩하는 뉴클레오티드 서열, 및 (b) 세포에서 기능적인 적어도 하나의 분비 신호 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자에 작동가능하게 연결된 이종 프로모터
(여기서, CGI 인자는 서열 번호 961~1920, 서열 번호 1957~2189, 서열 번호 2194~2210, 서열 번호 2215~2243, 서열 번호 2457~3361, 또는 서열 번호 5707~5731로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열과의 서열 동일성이 80% 이상인 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 CGI 인자 모티프는 서열 번호 1921~1956 중 적어도 하나를 포함하고;
상기 적어도 하나의 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 세포에서의 발현을 위해 최적화된 적어도 하나의 코돈을 선택적으로 포함함).
69. 실시 형태 68에 있어서, CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프는 활성 및/또는 독성을 갖는, 식물.
70. 실시 형태 68 또는 실시 형태 69에 있어서, 세포는 식물의 세포인, 식물.
71. 실시 형태 68 또는 실시 형태 69에 있어서, 세포는 식물 내부 또는 식물 상의 박테리아 또는 진균 세포인, 식물.
72. 실시 형태 68 내지 71 중 어느 하나에 있어서, 식물은 세포를 포함하지 않는 대조 식물과 비교하여 진균 병원체에 대해 향상된 저항성을 갖는, 식물.
73. 실시 형태 72에 있어서, 진균 병원체는 아스페르길루스 종; 마그나포르테 오리재; 보트리티스 시네레아; 푸치니아 종; 푸사리움 그라미네아룸; 푸사리움 옥시스포룸; 블루메리아 그라미니스; 마이코스파에렐라 그라미니콜라; 콜레토트리쿰 종; 우스틸라고 마이디스; 멜람프소라 리니, 파코프소라 파키리지, 또는 리족토니아 솔라니 중 하나인, 식물.
74. 실시 형태 68 내지 73에 있어서, 상기 적어도 하나의 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 진균 병원체의 게놈에서 나타나지 않는, 식물.
75. 진균의 성장 또는 번식을 방제하는 방법으로서, 상기 방법은 적어도 하나의 분생포자 발아 억제(CGI) 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프의 유효량을 포함하는 조성물을 진균에 제공하는 단계를 포함하며, CGI 인자는 서열 번호 961~1920, 서열 번호 1957~2189, 서열 번호 2194~2210, 서열 번호 2215~2243, 서열 번호 2457~3361, 또는 서열 번호 5707~5731로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열과의 서열 동일성이 80% 이상인 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 CGI 인자 모티프는 서열 번호 1921~1956 중 적어도 하나를 포함하고, 상기 적어도 하나의 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프의 뉴클레오티드 서열은 진균 병원체의 게놈에서 나타나지 않는, 방법.
76. 실시 형태 75에 있어서, CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프는 활성 및/또는 독성을 갖는, 방법.
77. 실시 형태 75 또는 실시 형태 76에 있어서, 조성물은 진균을 조성물과 직접적으로 접촉시키거나, 또는 조성물을 진균의 환경에 전달함으로써 진균에 제공되는, 방법.
78. 표면 상의 진균의 성장을 예방하는 방법으로서, 상기 방법은 적어도 하나의 분생포자 발아 억제(CGI) 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프의 유효량을 포함하는 조성물로 표면을 처리하는 단계를 포함하며, CGI 인자는 서열 번호 961~1920, 서열 번호 1957~2189, 서열 번호 2194~2210, 서열 번호 2215~2243, 서열 번호 2457~3361, 또는 서열 번호 5707~5731로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열과의 서열 동일성이 80% 이상인 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 CGI 인자 모티프는 서열 번호 1921~1956 중 적어도 하나를 포함하는, 방법.
79. 실시 형태 78에 있어서, CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프는 활성 및/또는 독성을 갖는, 방법.
80. 78 또는 실시 형태 79에 있어서, 표면은 무생물 표면이거나 또는 살아있는 유기체의 표면인, 방법.
81. 실시 형태 78 내지 80에 있어서, 상기 적어도 하나의 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프의 뉴클레오티드 서열은 진균의 게놈에서 나타나지 않는, 방법.
82. 항진균 특성을 갖는 조성물로서, 상기 조성물은 활성 및/또는 독성을 갖는 적어도 하나의 분생포자 발아 억제(CGI) 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프와 복합체를 형성하는 기재 또는 매트릭스를 포함하며, CGI 인자는 서열 번호 961~1920, 서열 번호 1957~2189, 서열 번호 2194~2210, 서열 번호 2215~2243, 서열 번호 2457~3361, 또는 서열 번호 5707~5731로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열과의 서열 동일성이 80% 이상인 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 CGI 인자 모티프는 서열 번호 1921~1956 중 적어도 하나를 포함하는, 조성물.
83. 실시 형태 82에 있어서, CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프는 활성 및/또는 독성을 갖는, 조성물.
84. 실시 형태 82 또는 실시 형태 83에 있어서, 기재 또는 매트릭스와 상기 적어도 하나의 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프 사이의 복합체 형성은 다음을 통한 것인, 조성물: (a) 공유 결합, (b) 비공유 결합, 또는 (c) (a)와 (b)의 조합.
85. 실시 형태 84에 있어서, 기재 또는 매트릭스는 폴리펩티드를 포함하는, 조성물.
86. 실시 형태 84 또는 실시 형태 85에 있어서, 기재 또는 매트릭스는 자가 조립 펩티드를 포함하는, 조성물.
87. 진균성 질병을 갖는 대상체를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 대상체에게 실시 형태 13의 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프 및 제약상 허용가능한 담체를 포함하는 항진균 또는 살진균 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
88. 실시 형태 87에 있어서, 대상체는 포유동물인, 방법.
89. 실시 형태 88에 있어서, 포유동물은 인간인, 방법.
90. 실시 형태 88에 있어서, 포유동물은 길들여진 동물 또는 가축인, 방법.
91. 실시 형태 87 내지 90 중 어느 하나에 있어서, 진균성 질병은 아스페르길루스, 칸디다, 콕시디오이데스, 히스토플라스마, 크립토코커스, 뉴모시스티스 및 블라스토마이세스 진균으로 이루어진 군으로부터 선택되는 진균 병원체에 의해 야기되는, 방법.
92. 실시 형태 87 내지 91 중 어느 하나에 있어서, 진균성 질병은 아스페르길루스증, 블라스토마이세스증, 칸디다증, 콕시디오이데스진균증, 히스토플라스마증, 털곰팡이증, 진균종, 링웜, 스포로트릭스증, 파라콕시디오이데스진균증, 탈라로마이코시스, 색소모세포진균증 푸사리움증, 이머고마이코시스, 스케도스포리오시스, 또는 진균성 수막염인, 방법.
93. 실시 형태 87 내지 92 중 어느 하나에 있어서, 항진균 또는 살진균 조성물은 정맥내, 근육내, 피하, 국소, 경구, 경피, 복강내, 안와내로 투여되거나, 이식에 의해, 흡입에 의해 투여되거나, 척수강내, 뇌실내 또는 비강내로 투여되는, 방법.
실시예
현재 개시된 주제는 본 발명의 예시로서 제공되고 제한으로서 제공되는 것이 아닌 하기 실시예를 참조함으로써 더 잘 이해될 것이다.
실시예 1:
이 실시예는 분생포자 발아 억제(CGI) 인자의 설계를 설명한다.
재료 및 방법
CGI 펩티드 발현을 위해 pUC 플라스미드를 제조하였다. 상기 플라스미드는 하나 이상의 CGI 펩티드의 전사 및 번역을 구동하기 위한 T7 LacOperator 프로모터(서열 번호 2245)를 함유하였다. T7 프로모터는 CGI 펩티드의 전사 및 번역을 구동하기 위해 코돈 최적화하였다. 상기 플라스미드는 5'에서 3'으로 5' 펩티드 분비 서열, N-말단 His-태그 서열(서열 번호 2246), 프로테아제 절단 부위(서열 번호 2247), 및 CGI 펩티드 서열을 함유하는 선형 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다. 상기 플라스미드는 또한 전사 종결 서열(서열 번호 2244)을 함유하였다.
실시예 2:
이 실시예는 박테리아에서의 CGI 인자의 발현을 설명한다.
재료 및 방법
CGI 인자 구축물을 함유하는 pUC 플라스미드를 보유하는 이. 콜라이(E. coli)(BL21(DE3))를 실시예 1에서 이전에 설명한 바와 같이 배양하였다. 단일 박테리아 콜로니를 리소제니 브로써(LB) 배지에 접종하여 스타터 배양물을 생성하였다. 그 후 스타터 배양물을 600 nm(OD600)에서의 광학 밀도가 0.4~0.8에 도달할 때까지 37℃의 진탕기 내에 두었다. 그 후, 40~400 μM 이소프로필 β-d-1-티오갈락토피라노시드(IPTG)를 사용하여 37℃에서 하룻밤 플라스미드 프로모터의 발현을 유도하였다.
실시예 3:
이 실시예는 CGI 인자의 정제를 설명한다.
재료 및 방법
재조합 펩티드의 정제를 이전에 기술된 바와 같이 수행하였다(Nallamsetty, S., and Waugh, D.S. (2007) Biochem Biophys Res Commun. 364(3): 639-44)). 박테리아 세포 현탁액을 10,000~11,000 psi에서 균질화기를 사용하여 용해시켰다. 그 후 용해된 세포 현탁액을 15,000 x g에서 30분 동안 원심분리하였다. 크로마토그래피 전에 세포 파편을 0.45 mM 폴리에테르술폰 막을 사용하여 여과하였다. 그 후, 상청액을 50 mM 인산나트륨 완충액(pH 7.7), 150 mM 염화나트륨 및 25 mM 이미다졸로 평형화된 니켈-니트릴로트리아세트산(Ni-NTA) 수지 컬럼에 적용하였다. 안정적인 기준선에 도달할 때까지 컬럼을 평형 완충액으로 세척하였다. 그 후, 결합된 융합 단백질을 50 mM 인산나트륨 완충액(pH 7.7), 150 mM 염화나트륨 및 250 mM 이미다졸 내로 10 컬럼 부피에 걸친 선형 구배를 사용하여 용출시켰다. 단백질 분획을 풀링하고(pooled), 생성된 샘플을 약 10배 농축하였다. 임의의 추가의 세포 파편을 5,000 x g에서 10분 동안 원심분리하여 침전시켰다. 그 후 His6-TEV 프로테아제를 첨가하여 단백질 태그를 융합 단백질로부터 제거하고, 41℃에서 하룻밤 절단하였다. SDS-PAGE 겔 분석에 의해 효율적인 절단이 확인되었다.
실시예 4:
이 실시예는 진균 병원체의 펩티드 억제제의 설계 및 검증을 설명한다.
재료 및 방법
분생포자 발아 억제(CGI) 인자
병원성 진균을 사멸시키는 새로운 화합물 및 표적을 확인하기 위해, 진균 교배 페로몬을 기반으로 하여 일련의 짧은 펩티드를 설계하였다. 이 연구에 사용된 펩티드 105~119의 서열은 각각 서열 번호 2196~2210이다. 실시예 1~3에 기술된 바와 같이 펩티드를 발현시키고 정제하였다.
분생포자 발아 억제 비색 분석
푸사리움 또는 보트리티스 포자를 감자 덱스트로스 한천 플레이트에 접종한 후 접종된 플레이트를 밀봉된 플라스틱 상자에서 7일 동안 인큐베이션하여 바이오매스를 생성하였다. 인큐베이션 후, 피펫을 사용하여 균사체 위로 물을 흡인하고 분생포자가 현탁되도록 하면서 플레이트에 살균수 15 mL를 채웠다. 그 후, 분생포자 현탁액 15 mL를 팔콘 튜브로 옮기고 0.5%(w/v) D-글루코스로 수정하였다. 유리 혈구계산판(Weber Scientific, 카탈로그 번호 3048-11)을 사용하여 미세분생포자를 정량화하였다. 10 μL의 미세분생포자 현탁액을 커버슬립 아래 유리 혈구계산판 챔버로 옮겼다. 혈구계산판의 16개 코너 스퀘어의 각 세트 내의 분생포자의 수를 카운팅하고, 평균 카운트 수에 10^4를 곱하여 원래 현탁액 중 분생포자 수/mL를 구하였다.
미세분생포자 처리를 위해, 물 중 50%(w/v) 에탄올을 사용하여 2 mM 펜피클로닐(Millipore Sigma, 카탈로그 번호 36532) 용액 스톡 용액을 제조하였다. 펩티드 용액은 물 중 50%(w/v) 에탄올을 사용하여 제조하였다. 96웰 플레이트(VWR, 카탈로그 번호 734-2781)는 원하는 처리제 농도와 1x10^6개의 분생포자/mL(웰당 150 μL의 최종 부피)를 얻도록 각 웰에 처리 용액과 미세분생포자를 첨가함으로써 준비하였다. 감자 덱스트로스 브로쓰(PDB; Alpha Biosciences, 카탈로그 번호 P16-126)를 사용하여 부피를 조정하였다. 그 후 플레이트를 덮고 30℃에서 18시간 동안 200 rpm으로 인큐베이션하였다. 그 후, 각 웰에 Prestoblue 세포 생존성 시약(Thermofisher Scientific, 카탈로그 번호 A13262) 15 μL를 첨가하고, 플레이트를 7시간 동안 추가로 인큐베이션하였다. 그 후, 분광광도계(BioTek Synergy H1 Microplate Reader, Fischer Scientific, 카탈로그 번호 11-120-533)를 사용하여 560 nm에서 여기 후 590 nm 방출에서의 형광을 기록하였다.
결과
펩티드 105~119(각각 서열 번호 2196~2210)를 제조하고 진균 무성생식에 대한 그의 효과에 대해 평가하였다. 비처리 미세분생포자 및 물 중 50%(w/v) 에탄올로 처리된 미세분생포자를 분생포자 발아 억제 분석을 위한 음성 대조군으로 사용한 반면, 살진균제 화합물인 펜피클로닐을 양성 대조군으로 사용하였다(도 1a). 도 2a는 분생포자 발아 억제 분석에 사용한 96웰 플레이트의 예시적인 레이아웃을 보여주는 반면, 도 2b는 이 연구에 사용한 레사주린 기반 세포 생존성 시약의 검증을 보여준다.
푸사리움 또는 보트리티스 분생포자를 후보 CGI 인자로 처리하면 분생포자 발아가 억제되었다(도 2a). 이러한 억제는 농도 의존적이었다(도 2b~도 2c). 보트리티스 페로몬으로부터 유래된 펩티드106은 보트리티스 분생포자 발아를 감소시켰다(도 2d~도 2e). 사카로마이세스 세레비지애 페로몬으로부터 유래된 펩티드107은 보트리티스 및 푸사리움 분생포자 둘 모두의 발아를 억제하였으며(도 2d~도 2e), 375 μM 농도에서 가장 강력한 억제가 관찰되었다(도 3 및 도 4).
결론
진균 페로몬은 전형적으로 진균 성장을 촉진한다. 여기서, 진균 페로몬으로부터 유래된 펩티드가 보트리티스 및 푸사리움의 성장을 예기치 않게 억제함이 입증되었다. 진균 페로몬을 기반으로 한 신규한 CGI 인자를 적용하여 식물의 진균 감염을 방제할 수 있다.
실시예 5:
이 실시예는 종자에 적용되는 경우 탠덤 CGI 인자의 항진균 활성을 설명한다.
재료 및 방법
탠덤 CGI 인자의 발현 및 정제
탠덤 CGI 발현을 위해 플라스미드 벡터를 제조한다. 플라스미드 벡터는 다음을 포함한다(5'에서 3'으로): T7 LacOperator 프로모터(서열 번호 2245); Shine-Delgarno 서열(서열 번호 2251); 다음을 코딩하는 선형 폴리뉴클레오티드 서열: N-말단 His-태그 서열(서열 번호 2246); TEV 프로테아제 절단 태그(서열 번호 2247); 제1 CGI 펩티드 서열; P2A 절단 펩티드(박테리아에서 사용되지 않는 경우) 또는 번역 개시 영역(TIR; 박테리아에서 사용되는 경우)(서열 번호 2252); 제2 CGI 펩티드 서열; 및 T7 전사 종결 서열(서열 번호 2244).
탠덤 CGI 플라스미드를 보유하는 이. 콜라이(BL21(DE3))를 실시예 1에 기술된 바와 같이 준비하였으며, 탠덤 GCI 인자를 실시예 2~3에 기술된 바와 같이 발현시키고 정제하였다.
종자 처리 적용
제1 및 제2 펩티드는 정제 전과 정제 시 화학량론적 비 및 등몰 비로 생산된다. 옥수수 또는 토마토 종자를 50 mL 코니칼 튜브 내의 10 mL의 CGI 펩티드 용액에 침지시키고 진탕기에서 30분 동안 인큐베이션한다. 코팅된 종자를 흄후드에서 하룻밤 건조시킨다.
결과
탠덤 CGI를 실시예 4에 기술된 바와 같이 펩티드 105~119에 상응하는 GCI 인자로부터 제조한다. 이 연구에서 제조된 탠덤 CGI는 서열 번호 1957, 서열 번호 1958, 서열 번호 1959, 서열 번호 1960, 서열 번호 1961, 서열 번호 1962, 서열 번호 1963, 서열 번호 1964, 서열 번호 1965, 서열 번호 1966, 서열 번호 1967, 서열 번호 1968, 서열 번호 1969, 서열 번호 1970, 서열 번호 1971, 서열 번호 1972, 서열 번호 1973, 서열 번호 1974, 서열 번호 1975, 서열 번호 1976, 서열 번호 1977, 서열 번호 1978, 서열 번호 1979, 서열 번호 1980, 서열 번호 1981, 서열 번호 1982, 서열 번호 1983, 서열 번호 1984, 서열 번호 1985, 서열 번호 1986, 서열 번호 1987, 서열 번호 1988, 서열 번호 1989, 서열 번호 1990, 서열 번호 1991, 서열 번호 1992, 서열 번호 1993, 서열 번호 1994, 서열 번호 1995, 서열 번호 1996, 서열 번호 1997, 서열 번호 1998, 서열 번호 1999, 서열 번호 2000, 서열 번호 2001, 서열 번호 2002, 서열 번호 2003, 서열 번호 2004, 서열 번호 2005, 서열 번호 2006, 서열 번호 2007, 서열 번호 2008, 서열 번호 2009, 서열 번호 2010, 서열 번호 2011, 서열 번호 2012, 서열 번호 2013, 서열 번호 2014, 서열 번호 2015, 서열 번호 2016, 서열 번호 2017, 서열 번호 2018, 서열 번호 2019, 서열 번호 2020, 서열 번호 2021, 서열 번호 2022, 서열 번호 2023, 서열 번호 2024, 서열 번호 2025, 서열 번호 2026, 서열 번호 2027, 서열 번호 2028, 서열 번호 2029, 서열 번호 2030, 서열 번호 2031, 서열 번호 2032, 서열 번호 2033, 서열 번호 2034, 서열 번호 2035, 서열 번호 2036, 서열 번호 2037, 서열 번호 2038, 서열 번호 2039, 서열 번호 2040, 서열 번호 2041, 서열 번호 2042, 서열 번호 2043, 서열 번호 2044, 서열 번호 2045, 서열 번호 2046, 서열 번호 2047, 서열 번호 2048, 서열 번호 2049, 서열 번호 2050, 서열 번호 2051, 서열 번호 2052, 서열 번호 2053, 서열 번호 2054, 서열 번호 2055, 서열 번호 2056, 서열 번호 2057, 서열 번호 2058, 서열 번호 2059, 서열 번호 2060, 서열 번호 2061, 서열 번호 2062, 서열 번호 2063, 서열 번호 2064, 서열 번호 2065, 서열 번호 2066, 서열 번호 2067, 서열 번호 2068, 서열 번호 2069, 서열 번호 2070, 서열 번호 2071, 서열 번호 2072, 서열 번호 2073, 서열 번호 2074, 서열 번호 2075, 서열 번호 2076, 서열 번호 2077, 서열 번호 2078, 서열 번호 2079, 서열 번호 2080, 서열 번호 2081, 서열 번호 2082, 서열 번호 2083, 서열 번호 2084, 서열 번호 2085, 서열 번호 2086, 서열 번호 2087, 서열 번호 2088, 서열 번호 2089, 서열 번호 2090, 서열 번호 2091, 서열 번호 2092, 서열 번호 2093, 서열 번호 2094, 서열 번호 2095, 서열 번호 2096, 서열 번호 2097, 서열 번호 2098, 서열 번호 2099, 서열 번호 2100, 서열 번호 2101, 서열 번호 2102, 서열 번호 2103, 서열 번호 2104, 서열 번호 2105, 서열 번호 2106, 서열 번호 2107, 서열 번호 2108, 서열 번호 2109, 서열 번호 2110, 서열 번호 2111, 서열 번호 2112, 서열 번호 2113, 서열 번호 2114, 서열 번호 2115, 서열 번호 2116, 서열 번호 2117, 서열 번호 2118, 서열 번호 2119, 서열 번호 2120, 서열 번호 2121, 서열 번호 2122, 서열 번호 2123, 서열 번호 2124, 서열 번호 2125, 서열 번호 2126, 서열 번호 2127, 서열 번호 2128, 서열 번호 2129, 서열 번호 2130, 서열 번호 2131, 서열 번호 2132, 서열 번호 2133, 서열 번호 2134, 서열 번호 2135, 서열 번호 2136, 서열 번호 2137, 서열 번호 2138, 서열 번호 2139, 서열 번호 2140, 서열 번호 2141, 서열 번호 2142, 서열 번호 2143, 서열 번호 2144, 서열 번호 2145, 서열 번호 2146, 서열 번호 2147, 서열 번호 2148, 서열 번호 2149, 서열 번호 2150, 서열 번호 2151, 서열 번호 2152, 서열 번호 2153, 서열 번호 2154, 서열 번호 2155, 서열 번호 2156, 서열 번호 2157, 서열 번호 2158, 서열 번호 2159, 서열 번호 2160, 서열 번호 2161, 서열 번호 2162, 서열 번호 2163, 서열 번호 2164, 서열 번호 2165, 서열 번호 2166, 서열 번호 2167, 서열 번호 2168, 서열 번호 2169, 서열 번호 2170, 서열 번호 2171, 서열 번호 2172, 서열 번호 2173, 서열 번호 2174, 서열 번호 2175, 서열 번호 2176, 서열 번호 2177, 서열 번호 2178, 서열 번호 2179, 서열 번호 2180, 및/또는 서열 번호 2181이다.
실시예 6:
이 실시예는 종자에 적용되는 경우 단일 CGI 펩티드의 항진균 활성을 설명한다.
재료 및 방법
CGI 펩티드의 정제 및 발현
CGI 펩티드 플라스미드를 제조한다. 플라스미드는 다음을 포함한다(5'에서 3'으로): T7 LacOperator 프로모터(서열 번호 2245); Shine-Delgarno 서열(서열 번호 2251); 다음을 코딩하는 선형 폴리뉴클레오티드 서열: N-말단 His-태그 서열(서열 번호 2246), TEV 프로테아제 절단 태그(서열 번호 2247) 및 펩티드 서열; 및 T7 전사 종결 서열(서열 번호 2244).
CGI 펩티드 플라스미드를 보유하는 이. 콜라이(BL21(DE3))를 실시예 1에 기술된 바와 같이 준비하였으며, 탠덤 CGI 인자를 실시예 2~3에 기술된 바와 같이 발현시키고 정제하였다.
종자 처리 적용
옥수수 또는 토마토 종자를 50 mL 코니칼 튜브 내의 10 mL의 CGI 펩티드 용액에 침지시키고 진탕기에서 30분 동안 인큐베이션한다. 코팅된 종자를 흄후드에서 하룻밤 건조시킨다.
실시예 7:
이 실시예는 CGI 인자를 종자에 전달하는 것을 설명한다.
재료 및 방법
CGI 인자의 정제 및 발현
CGI 인자를 함유하는 pUC 플라스미드를 보유하는 이. 콜라이(BL21(DE3))를 실시예 1~3에 기술된 바와 같이 생산 및 정제한다. 그 후 CGI 인자를 종자 처리제 또는 식재성 조성물로 사용하기 위한 것으로 제형화한다. 살해충 미니세포에 더하여, 제형은 다른 살해충제, 계면활성제, 필름 형성 중합체, 담체, 동결방지제 및/또는 제형 첨가제를 포함할 수 있다. 이들 성분들은, 함께 사용되는 경우, 저장 안정성이 있고 슬러리 종자 처리기, 직접 처리기, 온-팜 호퍼 박스(on-farm hopper-box) 또는 플랜터-박스와 같은 일반 종자 처리 장비에 사용하기에 적합한 조성물을 제공한다.
종자 처리 제형의 경우, 3% EP/PO 블록 공중합체, 트리스티릴페놀, 0.5% 에톡실레이트, 5% 칼슘 염 + 피그먼트 레드, 0.2% 실리콘 오일 및 물 중 40%의 CGI 펩티드를 제조하고, 네거티브 흐름 실험실 후드 아래에서 하룻밤 벼 종자와 함께 인큐베이션하였다.
그 후, 비제형화 벼 종자 대비 제형화 벼 종자를 분석하여 진균 성장에 대한 커버리지 퍼센트를 결정한다.
실시예 8:
이 실시예는 수확 후 작물에 CGI 인자를 적용하는 것을 설명한다.
재료 및 방법
딸기를 얻고 크기에 따라 분류한다. 가장 작은 크기의 과실을 70% 에탄올에 1분간 함침시켜 표면을 살균한다. 그 후 과실을 물로 세 번 헹구고, CGI 인자를 적용하기 전에 여분의 수분을 제거한다.
CGI 인자 적용을 위해 처리 용액(CGI 및 대조군)을 제조한다. 각 처리 조건에 대해 6개의 딸기를 페트리 디쉬 상에 배열하고 흄후드 내에 둔다. 각 딸기에 처리 용액 2 mL를 분무하여 전체 과실(껍질 포함)을 커버한다. 대안적으로, 과실을 처리 용액에 하나씩 함침시킨다. 그 후, 처리된 과실을 흄후드에서 15분 동안 건조되도록 방치한다.
딸기 처리 후, 7일된 보트리티스 플레이트에 물 10 mL를 채워 분생포자 현탁액을 제조한다. 그 후 상기 용액을 튜브 내로 피펫팅하고 50 mg의 D-글루코스를 첨가한다. 처리된 딸기를 플라스틱 용기에 담긴 새로운 페트리 디쉬로 옮기고, 각 페트리 디쉬에 분생포자 현탁액 3 mL를 첨가하여 딸기를 가볍게 굴려 현탁액을 과실 표면 상에 펴 바른다. 그 후 플라스틱 용기를 덮고 실온에서 7일 동안 인큐베이션한다. 인큐베이션 기간의 종료 시에 딸기를 평가하여 비처리 대조 샘플과 비교하여 처리 용액의 효능을 결정한다.
결과
유기농 딸기는 수확 후 언제든지 진균 감염 위험이 있다. 배송 또는 포장 중에 상처가 생길 수 있으며, 이는 진균 병원체에 대한 과실의 감수성을 증가시킨다. 또한, 조밀하게 포장된 딸기는 일정한 부하를 받고 있으며, 들판, 식료품점, 및 소비자의 집 사이에서 수송되는 경우 다양한 온도를 경험한다. 이 과실의 고도 변질성 특성으로 인해 수확 후 유기농 딸기의 양 및 품질이 유의하게 손실된다.
이 문제를 해결하기 위해, 진균 감염을 예방하기 위해 포장 전에 건강한 딸기에 분무 또는 침지 처리를 함으로써 CGI 인자를 적용한다. CGI 인자는 소비자가 선택적으로 세척 제거할 때까지 과실 상에 여전히 존재하여 포자 발아를 억제한다.
실시예 9:
이 실시예는 진균 병원체의 펩티드 억제제의 설계 및 검증을 설명한다.
재료 및 방법
분생포자 발아 억제(CGI) 인자
병원성 진균을 사멸시키는 새로운 화합물 및 표적을 확인하기 위해, 서열 번호 2196, 서열 번호 2197, 서열 번호 2198, 서열 번호 2199, 서열 번호 2200, 서열 번호 2201, 서열 번호 2202, 서열 번호 2203, 서열 번호 2204, 서열 번호 2205, 서열 번호 2206, 서열 번호 2207, 서열 번호 2208, 서열 번호 2209, 서열 번호 2210, 서열 번호 2211, 서열 번호 2212, 서열 번호 2213, 및 서열 번호 2214를 포함하는 일련의 짧은 펩티드를 진균 교배 페로몬을 기반으로 하여 설계하였다(표 1) 펩티드는 N 말단 또는 C 말단에 글리신 잔기를 부가함으로써 변형된 펩티드를 포함하거나, 또는 하나 이상의 아미노산(예를 들어, 다중 글리신 잔기와 같은 링커 절편)에 의해 선택적으로 분리된 탠덤 카피인 펩티드를 포함하였다. 실시예 1~3에 기술된 바와 같이 펩티드를 발현시키고 정제하였다.
[표 1]
푸사리움 생존성 비색 분석
푸사리움 분생포자 현탁액을 실시예 4에 기술된 바와 같이, 감자 덱스트로스 한천에서 7일 동안 성장시킨 푸사리움 바이오매스의 7일 배양물로부터 제조하고 혈구계산판으로 정량화하였다. 펜피클로닐(Millipore Sigma, 카탈로그 번호 36532)의 용액 및 개별 펩티드의 용액을 물 중 50%(w/v) 에탄올에서 제조하고, 실시예 4에 기술된 바와 같이 PrestoBlue™(레사주린) 생존성 비색 분석을 사용하여 테스트하였다.
푸사리움 분생포자 현탁액, 펩티드 또는 대조 처리 용액 및 감자 덱스트로스 브로쓰(Alpha Biosciences, 카탈로그 번호 P16-126)를 96웰 플레이트의 각 웰에 첨가하여 원하는 처리 농도 및 1x10^6개의 분생포자/mL(웰당 150 마이크로리터의 최종 부피)를 얻었다. 플레이트를 덮고 30℃에서 18시간 동안 200 rpm으로 인큐베이션하였다. 15 마이크로리터의 PrestoBlue™ 세포 생존성 시약(Thermofisher Scientific, 카탈로그 번호 A13262)을 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 추가로 인큐베이션한 후 분광광도계(BioTek Synergy H1 Microplate Reader, Fischer Scientific, 카탈로그 번호 11-120-533)를 사용하여 590 nm 방출(560 nm에서 여기)에서 형광을 측정하였다.
보트리티스 생존성 비색 분석
보트리티스 분생포자 현탁액을 실시예 4에 기술된 바와 같이, 감자 덱스트로스 한천에서 7일 동안 성장시킨 보트리티스 시나레아(주 CBS 261.71) 바이오매스의 7일 배양물로부터 제조하고 혈구계산판으로 정량화하였다. 펜피클로닐(Millipore Sigma, 카탈로그 번호 36532)의 용액 및 개별 펩티드의 용액을 물 중 50%(w/v) 에탄올에서 제조하고, 실시예 4에 기술된 바와 같이 PrestoBlue™(레사주린) 생존성 비색 분석을 사용하여 테스트하였다.
보트리티스 분생포자 현탁액, 펩티드 또는 대조 처리 용액 및 감자 덱스트로스 브로쓰(Alpha Biosciences, 카탈로그 번호 P16-126)를 96웰 플레이트의 각 웰에 첨가하여 원하는 처리 농도 및 1x10^6개의 분생포자/mL(웰당 150 마이크로리터의 최종 부피)를 얻었다. 플레이트를 덮고 30℃에서 24시간 동안 200 rpm으로 인큐베이션하였다. 15 마이크로리터의 PrestoBlue™ 세포 생존성 시약(Thermofisher Scientific, 카탈로그 번호 A13262)을 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 추가 1시간 동안 추가로 인큐베이션한 후 분광광도계(BioTek Synergy H1 Microplate Reader, Fischer Scientific, 카탈로그 번호 11-120-533)를 사용하여 590 nm 방출(560 nm에서 여기)에서 형광을 측정하였다.
결과
푸사리움 생존성 비색 분석
다회의 별개의 푸사리움 생존성 실험을 실행하였다. 첫 번째 실험에서, 분생포자 발아를 억제하고/하거나 진균 세포 생존성을 감소시키는 능력에 대해 테스트된 펩티드는 푸사리움 sp.로부터의 천연 알파 페로몬(WCTWKGQPCW, 서열 번호 2182), 보트리티스 sp.로부터의 천연 알파 페로몬(WCGRPGQPC, 서열 번호 2183), 및 사카로마이세스 세레비지애로부터의 천연 알파 페로몬(WHWLQLKPGQPMY, 서열 번호 2184)과, 사카로마이세스 세레비지애 알파 페로몬의 아미노산 서열의 재배열을 기반으로 하는, 아미노산 서열 WKMGQYHQLPPLW(서열 번호 2185)를 갖는 합성 펩티드 및 아미노산 서열 WHWLQLKPGQPMYG(서열 번호 2186)를 갖는 C-말단 글리신 캡을 갖는 변형 사카로마이세스 세레비지애 알파 페로몬을 포함하였다. 결과는 도 6a에 예시되어 있다. 테스트된 모든 CGI 펩티드는, 비처리되거나 물 담체 용액 중 50%(w/v) 에탄올만으로 처리된 샘플과 비교하여, 375 마이크로몰 농도에서, 처리된 샘플에서 푸사리움 세포 생존성을 감소시키는 능력을 보여주었다. 특히, 이 실험에서, 사카로마이세스 세레비지애 알파 페로몬(서열 번호 2184)과, 합성 펩티드(서열 번호 2185) 및 C-말단 글리신 캡핑 사카로마이세스 세레비지애 알파 페로몬(서열 번호 2186)은 푸사리움 세포 생존성을 양성 대조군(펜피클로닐) 살진균 처리제와 거의 동일한 수준까지 크게 감소시켰다. 이러한 결과는 예기치 않게, 하나의 진균 속(사카로마이세스)의 게놈에 코딩된 알파 페로몬 및 그 유도체가 상이한 진균 속(푸사리움)의 세포 생존성을 감소시키는 데 효과적임을 입증하였다.
첫 번째 실험과 유사하게 수행된 두 번째 실험에서, 상기 펩티드들을 375 마이크로몰의 농도에서 다시 테스트하였으며; 생존성을 이후 시점(레사주린을 첨가한지 51시간 후)에 측정하였다. 결과는 도 6b에 예시되어 있다. 유사한 결과가 관찰되었으며, 이때 푸사리움 알파 페로몬(서열 번호 2182) 및 보트리티스 알파 페로몬(서열 번호 2183)은 비처리되거나 물 담체 용액 중 50%(w/v) 에탄올만으로 처리된 샘플과 비교하여 푸사리움 세포 생존성을 또한 감소시켰다. 특히, 사카로마이세스 세레비지애 알파 페로몬(서열 번호 2184) 및 합성 펩티드(서열 번호 2185)는 또한 푸사리움 세포 생존성을 양성 대조군(펜피클로닐) 살진균 처리제와 거의 동일한 수준까지 크게 감소시켰다. 이러한 결과는 예기치 않게, 하나의 진균 속(사카로마이세스)의 게놈에 코딩된 알파 페로몬 및 그 유도체가 상이한 진균 속(푸사리움)의 세포 생존성을 감소시키는 데 효과적임을 확인해 주었다.첫 번째 및 두 번째 실험과 유사하게 실행한 세 번째 실험에서, 8개의 추정 분생포자 발아 억제 펩티드를 175 마이크로몰 및 375 마이크로몰에서 테스트하였다. 테스트된 펩티드는 또한 푸사리움 sp.로부터의 천연 알파 페로몬(WCTWKGQPCW, 서열 번호 2182), 보트리티스 sp.로부터의 천연 알파 페로몬(WCGRPGQPC, 서열 번호 2183), 및 사카로마이세스 세레비지애로부터의 천연 알파 페로몬(WHWLQLKPGQPMY, 서열 번호 2184), 합성 펩티드(서열 번호 2185) 및 C-말단 글리신 캡핑 사카로마이세스 세레비지애 알파 페로몬(서열 번호 2186)과, 이전에 테스트되지 않은 다음의 3개의 펩티드를 포함하였다: N-말단 글리신 캡이 있는 변형된 사카로마이세스 세레비지애 알파 페로몬(GWHWLQLKPGQPMY, 서열 번호 2187), 사카로마이세스 세레비지애 알파 페로몬의 연속 탠덤 카피의 서열을 갖는 펩티드(WHWLQLKPGQPMYWHWLQLKPGQPMY, 서열 번호 2188), 및 4개-글리신 연결 절편에 의해 분리된 사카로마이세스 세레비지애 알파 페로몬의 탠덤 카피의 서열을 갖는 펩티드(WHWLQLKPGQPMYGGGGSWHWLQLKPGQPMY, 서열 번호 2189). 결과는 도 6c에 예시되어 있다. 관찰된 결과는 첫 번째 및 두 번째 실험에서 얻어진 결과와 유사하였다. 375 마이크로몰 농도에서, 푸사리움 알파 페로몬(서열 번호 2182) 및 보트리티스 알파 페로몬(서열 번호 2183)은 비처리되거나 물 담체 용액 중 50%(w/v) 에탄올만으로 처리된 샘플과 비교하여 푸사리움 세포 생존성을 또한 감소시켰으며; 175 마이크로몰의 더 낮은 농도에서는 이 효과가 덜 두드러졌다. 375 마이크로몰에서, 사카로마이세스 세레비지애 알파 페로몬(서열 번호 2184) 및 그 유도체(서열 번호 2188 및 2189)는 또한 푸사리움 세포 생존성을 양성 대조군(펜피클로닐) 살진균 처리제와 거의 동일한 수준까지 크게 감소시켰지만, 175 마이크로몰에서는 푸사리움 세포 생존성에 유의미한 효과를 나타내지 않았다. 특히, 더 긴 사카로마이세스 세레비지애 알파 페로몬 유래 탠덤 펩티드들(스페이서가 없는 탠덤 카피(서열 번호 2188) 및 스페이서가 있는 탠덤 카피(서열 번호 2189))는 175 마이크로몰 및 375 마이크로몰 둘 모두에서 푸사리움 세포 생존성을 양성 대조군(펜피클로닐) 살진균 처리제와 거의 동일한 수준까지 감소시키는 데 효과적이었다.
실험 4 및 5를 유사한 프로토콜에 따라 세 번째 실험과 동일한 CGI 펩티드를 사용하여 수행하였다. 이들 실험의 결과는 표 2에 평균 억제 퍼센트 및 평균(4회 반복)으로부터의 편차로 제공된다.
[표 2]
보트리티스 생존성 비색 분석
결과는 표 3에 평균 억제 퍼센트 및 평균(4회 반복)으로부터의 편차로 제공된다. 결과는 일반적으로 푸사리움 생존성 분석에서 관찰된 것과 유사하였다. 375 마이크로몰의 농도에서, 푸사리움 알파 페로몬(서열 번호 2182) 및 사카로마이세스 세레비지애 알파 페로몬(서열 번호 2184)은 비처리되거나 담체 용액 중 50%(w/v) 에탄올만으로 처리된 샘플과 비교하여 보트리티스 세포 생존성을 감소시켰다. 이 실험에서, 사카로마이세스 세레비지애 알파 페로몬(서열 번호 2184) 및 그 유도체(서열 번호 2188 및 2189)를 이용한 처리는 양성 대조군(펜피클로닐) 살진균 처리제를 사용하여 얻은 생존성 감소의 대략적으로 약 2/3만큼 푸사리움 세포 생존성을 감소시켰다. 푸사리움 생존성 실험에서 관찰된 바와 같이, 375 마이크로몰에서, 더 긴 사카로마이세스 세레비지애 알파 페로몬 유래 탠덤 펩티드들(스페이서가 없는 탠덤 카피(서열 번호 2188) 및 스페이서가 있는 탠덤 카피(서열 번호 2189))은 테스트된 가장 효과적인 펩티드였으며, 이는 펜피클로닐 처리와 마찬가지로 보트리티스 세포 생존성을 감소시켰다. 이러한 결과는 예기치 않게, 하나의 진균 속(사카로마이세스)의 게놈에 코딩된 알파 페로몬 및 그 유도체가 상이한 진균 속(보트리티스)의 세포 생존성을 감소시키는 데 효과적임을 확인해 주었다.
[표 3]
실시예 10:
이 실시예는 진균 성장 또는 생존성, 또는 분생포자 발아의 신규한 합성 펩티드 억제제를 설명한다. 더 구체적으로, 이 실시예는 진균의 분생포자 발아를 억제하고/하거나 세포 생존성을 감소시키도록 설계된 합성 펩티드의 예를 설명한다.
이들 합성 펩티드의 일 실시 형태는 적어도 2개의 상이한 CGI 펩티드들(예를 들어, 상이한 소스(source) 유기체로부터의 알파 페로몬 펩티드 또는 상이한 소스 게놈에 코딩된 알파 페로몬 펩티드, 또는 이들 알파 페로몬 펩티드의 유도체)의 서열을 포함하고 추가 아미노산, 예컨대 스페이서 또는 링커 서열을 형성하는 아미노산을 선택적으로 추가로 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 합성 펩티드이다.
이들 합성 펩티드의 또 다른 실시 형태는 합성 펩티드가 발현될 세포에서 기능적인 신호 펩티드에 융합된, 적어도 하나의 CGI 펩티드의 서열 또는 이로부터 유래된 서열을 포함하는 합성 펩티드이다. 많은 신호 펩티드 서열이 설명되었으며, 예를 들어 트윈-아르기닌 전좌(Twin-arginine translocation; Tat) 신호 서열은 전형적으로 컨센서스 SRRxFLK "트윈-아르기닌" 모티프를 포함하는 N-말단 펩티드 서열인데, 이는 상기 Tat 신호 펩티드를 포함하는 폴딩된 단백질이 지질 이중층을 가로질러 전좌되게 하는 역할을 한다. 또한, 예를 들어 www[dot]signalpeptide[dot]de에서 공개적으로 이용가능한 Signal Peptide Database를 참조한다. 예를 들어, 식물 세포에서 기능적인 박테리아 신호 펩티드에 융합된 CGI 펩티드 서열을 포함하는 합성 펩티드는 식물 세포 또는 식물에서 발현될 수 있다. 예를 들어, 서열 MVKVKCYVLFTALLSSLCAYG(서열 번호 2195)를 갖는 박테리아 신호 펩티드를 참조한다(Moeller (2019) J. Exp. Bot., 60:3337-3335; doi:10.1093/jxb/erp167). 신호 펩티드는 단백질을 특정 소기관으로 보내는 데에도 유용하며; 예를 들어, proline[dot]bic[dot]nus[dot]edu[dot]sg/spdb에서 공개적으로 이용가능한 Spdb 신호 펩티드 데이터베이스에 개시된 실험적으로 결정되고 컴퓨터로 예측된 신호 펩티드를 참조한다.
이들 합성 펩티드의 또 다른 실시 형태는 세포 투과 펩티드(CPP)에 융합된 적어도 하나의 CGI 펩티드의 서열을 포함하거나 이로부터 유래된 합성 펩티드이다. 수백 개의 CPP 서열이 기술되었으며; 예를 들어, crdd[dot]osdd[dot]net/raghava/cppsite/에서 공개적으로 이용가능한 세포 투과 펩티드 데이터베이스인 CPPsite를 참조한다. 일반적으로 사용되는 CPP 서열의 예로는 CGI 펩티드의 C-말단에 융합될 수 있는 폴리-아르기닌 서열, 예를 들어 옥토아르기닌 또는 노노아르기닌이 있다.
이들 합성 펩티드의 또 다른 실시형태는 자가 조립 펩티드에 융합되거나 이와 복합체를 형성하는 적어도 하나의 CGI 펩티드의 서열을 포함하거나 이로부터 유래된 합성 펩티드이다. 일부 실시 형태에서, 자가 조립 펩티드는 (M)(YEYK) n YEY(서열 번호 2194)이며, 여기서, n은 3이거나 또는 n은 3~10이고, 메티오닌은 말단의 선택적 아미노산이며, 자가 조립 펩티드는 하나 이상의 CGI 펩티드에 공유적으로 또는 비공유적으로 연결되고; 예를 들어 Miki et al. (2021) Nature Communications, 21:3412, DOI: 10.1038/s41467-021-23794-6을 참조한다. 실시 형태들에서, 자가 조립 펩티드는 CGI 펩티드의 N-말단 또는 내부 부위(예를 들어, 2개의 CGI 펩티드를 연결하는 링커 펩티드 서열에서)에 융합된다. 실시 형태들에서, 자가 조립 펩티드/CGI 융합체 또는 복합체는 항진균 특성을 갖는 입자 또는 구조(예를 들어, 겔 또는 시트 또는 섬유)를 형성하고, (예를 들어, 페인트, 코팅, 필름, 직물 등으로) 제형화되고 적용되어 살아있는 기재 또는 매트릭스 또는 무생물 기재 또는 매트릭스(예를 들어, 식물 조직 표면, 종자, 수확된 식물 부분, 식료품, 목재, 석고, 무기 건축 자재)를 진균 감염 또는 성장 또는 손상으로부터 보호한다.
상기 실시 형태들의 조합도 구상된다. 예를 들어, 진균 성장 또는 생존성의 합성 펩티드 억제제는 2개 이상의 상이한 CGI 펩티드들(예를 들어, 상이한 소스 유기체로부터의 알파 페로몬 펩티드 또는 상이한 소스 게놈에 코딩된 알파 페로몬 펩티드, 또는 이들 알파 페로몬 펩티드의 유도체)의 카피를 포함할 수 있으며, 여기서, CGI 펩티드들은 아미노산 연결 서열(예를 들어, 글리신 잔기)에 의해 연결되고, 폴리-아르기닌 CPP 서열은 합성 펩티드의 C-말단에 융합된다. 이들 합성 펩티드의 실시 형태는 추가 아미노산, 예컨대 스페이서 또는 링커 서열을 형성하는 아미노산, 또는 알파 페로몬 서열에 인접하게 위치하는 아미노산(예를 들어, 개별 알파 페로몬 서열의 또는 전체 펩티드 분자의 N-말단 또는 C-말단의 하나 이상의 아미노산의 "캡")을 선택적으로 추가로 포함한다.
이들 합성 펩티드의 비제한적 예가 표 4에 제공되어 있다.
[표 4]
실시예 11:
이 실시예는 하나 이상의 신호 펩티드 및 하나 이상의 CGI 펩티드를 포함하는 신규한 합성 융합 펩티드를 설명한다. 실시 형태들에서, 하나 이상의 아미노산 링커가 융합 펩티드에 포함되어, 예를 들어 신호 펩티드를 인접한 CGI 펩티드에 연결하거나, 또는 하나 초과의 CGI 펩티드를 함유하는 융합 펩티드에 포함되어, 하나의 CGI 펩티드를 또 다른 CGI 펩티드에 연결한다. 경제적인 측면에서 아미노산 링커는 상대적으로 짧다(예를 들어, 10개 이하의 아미노산). 실시 형태들에서, 신호 펩티드는 생체 내에서 CGI 펩티드로부터 절단된다. 이들 융합 펩티드 서열은 예를 들어 식물 세포와 같은 진핵 세포에서 융합 펩티드 또는 CGI 펩티드의 발현에 유용하다. 관련 실시 형태는 하나 이상의 CGI 펩티드 또는 CGI 펩티드 유도체, 예컨대 이들 합성 융합 펩티드를 일시적으로 또는 안정적으로 발현하는 진핵 세포 및 진핵 유기체(예를 들어, 식물 세포 또는 조직 또는 온전한 식물)를 포함한다. 이들 합성 융합 펩티드는 진균의 세포 생존성의 감소 및/또는 분생포자 발아 억제에 유용하다.
표 5는 하나 이상의 아미노산 링커를 선택적으로 포함하는 적어도 하나의 신호 펩티드 및 적어도 하나의 CGI 펩티드를 포함하는 합성 융합 펩티드의 비제한적인 예를 제공한다. 이들 융합 펩티드는 PR1 신호 서열 MGFVLFSQLPSFLLVSTLLLFLVISHSCRA(서열 번호 5699) 또는 GRP 신호 서열 MATTKHLALAILVLLSIGMTTSA(서열 번호 5700)과 적어도 하나의 CGI 펩티드의 다양한 조합을 포함하고, 선택적으로, 1 내지 9개의 아미노산(표 5에서 밑줄 친 텍스트로 예시됨)의 아미노산 링커를 추가로 포함한다.
[표 5]
실시예 12
이 실시예는 분생포자 발아 억제(CGI) 인자 서열의 확인을 설명한다.
추가의 분생포자 발아 억제(CGI) 인자 서열이 자낭균류로부터 확인되었고, 상기 CGI 인자 아미노산 서열은 본원에서 서열 번호 2457~3361로 제공된다. 또한, 각각의 CGI 인자에 대해 적어도 하나의 상응하는 게놈 DNA 서열이 확인되었으며, 이는 서열 번호 3362~5698로 제공된다. 자낭균류 게놈은 동물, 예를 들어, 무척추동물(예컨대 절지동물, 선충류, 환형동물, 연충류, 연체동물) 및 척추동물(예컨대 포유동물, 조류, 연골 또는 경골 어류, 파충류 또는 양서류)에 대해 병원성을 갖는 것으로 알려진 진균 종의 게놈을 포함하였다. 일부 실시 형태에서, 진균 게놈은 조류, 예를 들어 가축화된 가금류 및 물새에서 병원성인 진균 종의 것이다. 일부 실시 형태에서, 진균 게놈은 포유동물, 예를 들어 길들여진 포유동물(개, 고양이, 길들여진 유제류 및 토끼목 포유동물), 비인간 영장류 또는 인간에서 병원성인 진균 종의 것이다. 특정 실시 형태에서, 진균 게놈은 성인 및 비성인(유아 및 소아)을 포함한 인간에서 병원성인 진균 종의 것이다.
[표 6]
실시예 13
이 실시예는 식물 세포에서의 적어도 하나의 분생포자 발아 억제(CGI) 인자의 발현을 설명한다. 더 구체적으로, 이 실시예는 적어도 하나의 CGI 인자 펩티드를 코딩하는 다양한 DNA 구축물로 식물을 박테리아 매개 형질감염시켜 CGI 인자 펩티드를 일시적으로 발현시키는 것을 예시한다.
발현 카세트(구축물 "HD6")는, NOS 종결에 작동가능하게 연결된, 합성 CGI 인자 "HH38"(GGGG 링커를 포함하는 사카로마이세스 세레비지애 알파 페로몬의 이량체(서열 WHWLQLKPGQPMYGGGGSWHWLQLKPGQPMY, 서열 번호 2189를 가짐))을 코딩하는 DNA에 융합된 분비 신호 펩티드("GRP")를 코딩하는 코딩 서열에 작동가능하게 연결되고 이의 발현을 구동하는 제아 마이스 유비퀴틴 10 프로모터를 포함하도록 설계되었다. 이 발현 카세트의 변이체는 추가 요소를 포함하였다. 표 7을 참조한다. 구축물 "HD7"에는 면역원성 검출을 위한 FLAG 태그와 형광단 mCherry가 부가되었다. 구축물 "HD8"은 또한 FLAG 태그 및 mCherry 형광단을 포함하고, GRP 분비 신호 펩티드 대신 SV40 핵 국소화 신호("NLS")를 추가로 포함하였다. 마지막으로, 구축물 "HD9"는 HD8과 유사하지만 CGI 인자 HH38을 코딩하는 DNA가 결여된 대조 플라스미드였다. 플라스미드에 대한 설명은 표 7을 참조한다.
[표 7]
개별 발현 카세트를 T-DNA 우측 및 좌측 경계가 측면에 있는 Ti 플라스미드 pMP90에 삽입하여 각각 플라스미드 pHD6 ~ pHD9를 제공하였다. 적격 아그로박테리움 투메파시엔스(Agrobacterium tumefaciens) 주 GV3101을 사용하여, 생성된 플라스미드로 잎 침윤를 통해 담배인 니코티아나 벤타미아나(Nicotiana benthamiana)를 일시적으로 형질전환시켰다. 쿠마시 브릴리언트 블루(Coomassie Brilliant Blue) 염색 및 마우스 또는 토끼 항-FLAG 항체를 사용한 웨스턴 블롯을 사용한 단백질 추출 및 분석을 위해 침윤 2일 후에 일시적 형질전환 식물로부터의 잎 조직을 샘플링하였다. 쿠마시 염색은 HD6, HD7, HD8 및 HD9 구축물이 침윤된 잎으로부터 추출된 전체 단백질 중 올바른 분자량을 갖는 펩티드의 존재를 나타냈으며, 이는 이들 잎에서 단백질 발현이 가능함을 나타낸다. 단백질 밴드를 추가로 특성화하기 위해 항-FLAG 항체를 사용하여 웨스턴 블롯 분석을 수행하였으며, HD7, HD8 및 HD9 구축물이 침투된 잎으로부터 추출된 전체 단백질에 대해, 그리고 또한 HD7 구축물(GRP 분비 신호를 포함함) 또는 HD9 구축물(P2A 절단 서열을 포함함)이 침윤된 잎으로부터의 아포플라스틱 유체로부터 추출된 단백질에 대해 예상된 바와 같이 올바른 크기의 양성 밴드가 관찰되었다.
또한 Olympus 표면형광 현미경(RFP/Cy3 채널)을 사용하여 10x 배율로 형광 영상화하기 위해 일시적 형질전환 식물로부터의 잎 조직을 침윤 2일 후에 샘플링하였다. 상기 선택된 채널의 형광은 mCherry가 결여된 음성 대조 구축물인 HD6이 침윤된 잎으로부터의 조직에서 관찰되지 않았다. HD7 구축물이 침윤된 잎으로부터의 조직에서 확산형 mCherry 형광이 관찰되었으며, 이는 mCherry 표지된 HH38 CGI 펩티드가 분비되었음을 시사한다. mCherry의 핵 국소화를 나타내는 점 모양의 형광 신호가 mCherry 리포터에 융합된 핵 국소화 신호를 포함하는 HD9 구축물이 침윤된 잎으로부터의 조직에서 관찰되었다.
실시예 14
이 실시예는 진균 병원체를 방제하는 방법을 예시하며, 이는 진균 병원체를 함유하거나 또는 이에 노출되는 장소에 적어도 하나의 분생포자 발아 억제(CGI) 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프(상기 진균 병원체, 상기 진균 병원체와 동일한 속의 진균, 상기 진균 병원체와는 다른 속의 진균, 또는 이들의 혼합물 중 적어도 하나로부터 유래)를 포함하는 조성물을 적용하는 단계를 포함한다. 이 실시예는 유기체의 진균 병원체에 대한 저항성을 갖는 유기체를 제공하는 것을 추가로 설명하며, 이는 유기체를 유효량의 적어도 하나의 CGI 인자를 포함하는 항진균 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하고, 선택적으로, CGI 인자의 아미노산 서열은 진균 병원체에 의해 천연적으로 발현되는 알파 페로몬의 것이 아니거나, 또는 CGI 인자를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 진균 병원체의 게놈에서 나타나지 않는다. 더 구체적으로, 이 실시예는 항진균 CGI 인자 함유 조성물을 식물(니코티아나 벤타미아나)의 잎 상에 국소 적용하면 진균 병원체(보트리티스 시네레아)에 의한 감염 증상이 효과적으로 감소되거나 예방됨을 입증한다. 이 실시예에서, 항진균 CGI 인자 함유 조성물은 GGGG 링커가 부가된 천연 사카로마이세스 세레비지애 알파 페로몬 WHWLQLKPGQPMY(서열 번호 2184)의 동종이량체인, 아미노산 서열 WHWLQLKPGQPMYGGGGSWHWLQLKPGQPMY(서열 번호 2189)를 갖는 합성 CGI 인자 "HH38"(즉, 합성 CGI 인자 "HH38"은 진균 병원체(보트리티스 시네레아)에 의해 천연적으로 발현되는 알파 페로몬 WCGRPGQPC(서열 번호 2183)과는 상이한 아미노산 서열을 가짐)을 포함하였다.
한 실험에서, 비슷한 나이의 잎을 건강한 니코티아나 벤타미아나 식물로부터 절단하고 잎자루를 수성 한천이 담긴 플레이트 내에 넣었다.
잎을 시각적으로 사분면으로 나누었다. 각 사분면에 보트리티스 시네레아 분생포자 현탁액(물 중 10% 백포도 주스 중 3.2E+05개의 분생포자/mL)의 10 마이크로리터 소적 1개를 둔 다음, 100 마이크로리터의 주어진 처리 용액을 두었으며(또는 대조군으로서 무첨가); 다음의 처리 조건당 3개의 잎을 사용하였다: 5 mM 2-(N-모르폴리노)에탄술폰산(MES) 완충액; 5 mM MES 완충액 중 275 마이크로몰 CGI 인자 "HH38"(서열 번호 2189); 50% 에탄올 중 275 마이크로몰 펜피클로닐(4-(2,3-디클로로페닐)-1H-피롤-3-카르보니트릴, 페닐피롤 살진균제); 및 50% 에탄올. 플레이트를 덮고 가습된 2차 용기에 넣고 성장 챔버에서 14시간 광(20℃):10시간 암(18℃) 사이클로 인큐베이션하였다. 11일 후 잎 상의 진균 병변을 사진으로 촬영하고 자를 사용하여 수동으로 측정하였다. 그 후 잎을 48시간 동안 70% 에탄올에서 탈색시키고(24시간에 에탄올을 교환), 적어도 1시간 동안 물에 재수화시키고, 사진을 촬영하고, ImageJ 소프트웨어를 사용하여 진균 병변의 면적을 정량화하였다(imagej[dot]nih[dot]gov/ij/ 참조). 이러한 실험 조건 하에서, 펜피클로닐은 식물독성이 있는 것으로 관찰되었으며, 처리 부위에서 조직 괴사가 관찰되었으므로 이 처리 및 상응하는 에탄올 대조군은 분석에서 제외되었다. 대조군, MES 및 CGI 인자 펩티드 HH38에 대한 결과는 표 8 및 도 8에 제공된다. 10 마이크로리터의 보트리티스 시네레아 접종물을 접종한 대부분(10/12)의 잎 사분면에는 접종 부위에 작은(직경 약 1/3 cm) 진균 병변이 발생하였으며; 이 사분면에 적용된 소량의 액체가 아마도 병변 크기를 제한했을 것으로 추정되지만 이 조직은 일반적으로 비. 시네리아에 의한 감염에 취약함을 나타냈다. 비. 시네레아를 접종하고 100 마이크로리터의 처리 용액(MES 완충액 또는 MES 완충액 중 HH38)으로 처리한 잎 사분면은 액체로 습윤된 면적이 비교적 더 컸다. 5 mM MES 완충액으로 처리된 모든 잎 사분면에서는 회색-흑색 진균 성장을 특징으로 하는 큰(평균 1.72 cm의 폭) 진균 병변이 발생하였다. 이와는 대조적으로, 375 마이크로몰 CGI 인자 HH38로 처리된 12개 중 1개의 잎 사분면에서만 임의의 측정가능한 진균 병변이 발생하였다. 이들 데이터는 CGI 인자 HH38(서열 번호 2189)의 국소 적용이 니코티아나 벤타미아나 잎 상에서의 보트리티스 시네레아 성장을 효과적으로 억제했음을 나타낸다. 이들 결과는 CGI 인자를 포함하는 항진균 조성물이 유기체 상에서의 또는 유기체 내에서의 진균 병원체의 성장을 효과적으로 억제함을 입증하며, 여기서, CGI 인자의 아미노산 서열은 진균 병원체에 의해 천연적으로 발현되는 알파 페로몬의 것이 아니거나, 또는 CGI 인자를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 진균 병원체의 게놈에서 나타나지 않는다.
[표 8]
니코티아나 벤타미아나에서 보트리티스 시네레아에 의한 감염 증상을 감소 또는 예방하는 CGI 인자 "HH38"(서열 번호 2189)의 능력을 테스트하기 위한 두 번째 실험은, 비. 시네레아 접종물((물 중 10% 백포도 주스 중 3.2E+05개의 분생포자/mL)을 물 중 10% 희석 백포도 주스(비처리 대조군으로서), 5 mM MES 완충액, 5 mM MES 완충액 중 2% DMSO(v/v) 중 375 mM CGI 인자 HH38 및 물 중 2% DMSO(v/v)로부터 선택되는 동일한 부피의 처리 용액과 사전 혼합한 것을 제외하고는 유사한 방법을 사용하여 수행하였다. 주어진 처리 혼합물 20 마이크로리터를 잎 사분면 상에 피펫팅하였다(총 12개 사분면에 대해 처리당 3개의 반복 잎). 성장 챔버에서 7일간 인큐베이션한 후 잎을 사진 촬영하고, 70% 에탄올로 탈색하고, 다시 사진을 촬영하고, ImageJ 소프트웨어를 사용하여 진균 병변의 면적을 정량화하였다. 이 실험에서, CGI 인자 HH38 펩티드로 처리된 잎 사분면에서의 진균 병변은 비처리(희석 포도 주스) 대조군보다 44% 더 작았다(독립표본 t 검정을 사용하는 경우 통계적으로 유의한 차이). 또한 HH38 처리에서의 진균 병변은 2% DMSO 처리보다 39% 더 작고, 5 mM MES 처리보다 19% 더 작은 것으로 관찰되었지만, 이는 독립표본 t 검정을 사용하는 경우 통계적으로 유의한 것은 아니었다. 이들 데이터는 합성 CGI 인자 HH38(서열 번호 2189)의 국소 적용이 니코티아나 벤타미아나 잎 상에서의 보트리티스 시네레아 성장을 통계적으로 유의한 정도로 억제하였음을 나타낸다.
실시예 15
이 실시예는 자연 발생 CGI 인자 펩티드의 아미노산 서열로부터 유래된 아미노산 서열을 갖고 원하는 기능성을 제공하기 위한 추가 아미노산을 추가로 포함하는 합성 항진균 펩티드의 예를 예시한다. 더 구체적으로, 이 실시예는 C-말단에서 옥토아르기닌 세포 투과 펩티드(CPP) 서열, WHWLQLKPGQPMYRRRRRRRR(서열 번호 2240)에 융합된 사카로마이세스 세레비지애 알파 페로몬(WHWLQLKPGQPMY, 서열 번호 2184)의 아미노산 서열을 갖는 합성 CGI 인자 펩티드의 항진균 활성을 설명한다. 합성 항진균 펩티드의 다른 실시 형태는 C-말단에서 폴리아르기닌 CPP 서열, 폴리라이신 CPP 서열, Tat 베이직 도메인 서열(RKKRRQRRR, 서열 번호 5736), BP100 CPP 서열(KKLFKKILKYL, 서열 번호 5737), D-R9 CPP 서열(rrrrrrrrr(D 형태), 서열 번호 5738), KLA10 CPP 서열(KALKKLLAKWLAAAKALL, 서열 번호 5739), dhvar5 CPP 서열(LLLFLLKKRKKRKY, 서열 번호 5740), HPV33L2-445/467 CPP 서열(SYFILRRRRKRFPYFFTDVRVAA, 서열 번호 5741), Crot(27-29) 유도체(2) CPP 서열(KMDCRWRWKCCKK, 서열 번호 5742), CyLoP-1 CPP 서열(CRWRWKCCKK, 서열 번호 5743), M511 CPP 서열(FLGKKFKKYFLQLLK, 서열 번호 5744), E162 CPP 서열(KTVLLRKLLKLLVRKI, 서열 번호 5745), MG2d CPP 서열(GIGKFLHSAKKWGKAFVGQIMNC, 서열 번호 5746), 또는 또 다른 CPP 서열(예를 들어, CPPsite, crdd[dot]osdd[dot]net/raghava/cppsite/에 공개적으로 개시되거나 또는 Numata et al. (2018) Scientific Reports, 8:10966, DOI:10.1038/s41598-018-29298-6에 개시된 세포 침투 펩티드 서열)에 융합된, 적어도 하나의 CGI 펩티드의 아미노산 서열(예를 들어, 서열 번호 961~1920, 서열 번호 1957~2189, 서열 번호 2194~2210, 서열 번호 2215~2243, 서열 번호 2457~3361, 및 서열 번호 5707~5731로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열)을 갖는 펩티드를 포함한다.
여러 CGI 인자 펩티드를 합성하고 여러 진균 병원체의 패널에 대해 스크리닝하였다. 병원체를 25℃에서 변형 RPMI 배지에서 성장시켰다(Vicente et al. (2009) Mycol. Res., 113:754-757, DOI:10.1016/j.mycres.2009.02.011 참조). 인큐베이션 시간은 종에 따라 변하였다: 푸사리움 쿨모룸(Fusarium culmorum)의 경우 24시간, 푸사리움 그라미네아룸의 경우 22시간, 피토프토라 인페스탄스의 경우 7일, 자이모셉토리아 트리티시의 경우 5일. 펩티드를 DMSO에 용해시키고 변형 RPMI 배지로 희석하였으며; 펩티드를 진균 배양 배지에 용해시키려는 시도가 이루어졌을 때 다수의 펩티드에 대해 침전이 관찰되었으므로 이러한 실험은 제외하였다. 그럼에도 불구하고, 옥토아르기닌 CPP 서열(서열 번호 2240)을 함유하는 합성 CGI 인자 펩티드는 중요한 식물 병원체인 푸사리움 쿨모룸(곡류 작물을 포함한 다양한 쌍자엽 식물과 단자엽 식물의 여러 "마름병" 및 "썩음병"의 진균 원인 물질(causal agent); 24시간 인큐베이션), 푸사리움 그라미네아룸(지베렐라 제아에(Gibberella zeae)의 불완전세대로서, 밀 및 보리의 푸사리움 이삭마름병, 및 마이즈의 이삭 및 줄기 썩음병의 진균 원인 물질; 22시간 인큐베이션), 피토프토라 인페스탄스(토마토 늦은 마름병 및 감자 마름병의 난균 또는 "진균" 원인 물질; 7일 인큐베이션) 및 자이모셉토리아 트리티시(셉토리아 트리티시, 밀에서의 셉토리아 잎부스럼병의 진균 원인 물질; 5일 인큐베이션)를 강력하게 억제(대조군에 비해 50% 이상 억제)하는 것으로 관찰되었다. 따라서, 관련 실시 형태는 푸사리움 쿨모룸, 푸사리움 그라미네아룸, 피토프토라 인페스탄스, 및 자이모셉토리아 트리티시에 의해 야기되는 감염 또는 질병을 치료 또는 예방하는 방법을 포함하며, 상기 방법은 이러한 병원체 중 하나 이상에 감염되었거나 감염될 위험이 있는 식물에게 하나 이상의 CGI 인자 펩티드 서열 및 세포 침투 펩티드 서열을 포함하는 서열을 갖는 적어도 하나의 합성 펩티드 또는 적어도 하나의 CGI 펩티드를 제공하는 단계에 의한 것이고; 합성 폴리펩티드의 구체적인 실시 형태는 C-말단에서 폴리아르기닌 CPP 서열, 예컨대 옥토아르기닌 또는 노노아르기닌에 융합된, 서열 번호 961~1920, 서열 번호 1957~2189, 서열 번호 2194~2210, 서열 번호 2215~2243, 서열 번호 2457~3361, 및 서열 번호 5707~5731로부터 선택되는 CGI 인자 펩티드의 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
실시예 16
이 실시예는 진균 병원체의 성장을 감소시키거나 억제하는 방법을 예시하며, 상기 방법은 진균 병원체를 적어도 하나의 분생포자 발아 억제(CGI) 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프(상기 진균 병원체, 진균 병원체와 동일한 속의 진균, 상기 진균 병원체와 상이한 속의 진균, 또는 이들의 혼합물 중 적어도 하나로부터 유래)를 포함하는 조성물과 접촉시키는 단계에 의한 것이다.
진균 병원체의 성장을 억제하거나 이를 사멸시키는 CGI 인자의 능력을 테스트하기 위한 실험을 다음을 사용하여 수행하였다: 천연 보트리티스 시네레아알파 페로몬 WCGRPGQPC(서열 번호 2183), 천연 사카로마이세스 세레비지애 알파 페로몬 WHWLQLKPGQPMY(서열 번호 2184), 및 아미노산 서열 WHWLQLKPGQPMYGGGGSWHWLQLKPGQPMY(서열 번호 2189, 천연 사카로마이세스 세레비지애 알파 페로몬의 동종이량체(GGGG 링커가 부가됨))를 갖는 합성 CGI 인자 "HH38". CGI 인자 펩티드를 합성하여 동결건조 분말로 제공하고; 스크리닝을 위해 펩티드를 DMSO에 용해시키고 50% DMSO에 9375 마이크로몰 스톡으로 희석하였다.
테스트를 위해 선택된 진균 종 및 주는 표 9에 열거되어 있다. 이들은 균사체 형성 진균이거나 효모로 성장한다. 진균 스톡을 먼저 30℃의 적절한 부활 배지에서 성장시킨 후 37℃의 분석 배지 상에서 성장시켰다.
[표 9]
PDA" = 감자 덱스트로스 한천: 24.0 g의 감자 덱스트로스 브로쓰(Difco 254920), 15.0 g의 한천(Roth 5210)(1000 mL 탈이온수 중)(pH를 7.0으로 조정).
"TM186" = 효모용 범용 배지: 증류수 1000 mL 중 효모 추출물 3.0 g, 맥아 추출물 3.0 g, 대두 유래의 펩톤 5.0 g, 글루코스 10.0 g, 한천 15.0 g
" MLNA" = 변형 Leeming & Notman 한천: 1000 mL 탈이온수 중 5.0 g 펩톤(Bacto 211577), 5.0 g 트립톤(Bacto 211705), 10.0 g 글루코스(Roth HN06), 11.5 g 87% 글리세롤, 2.0 g 밀 추출물(Merck 103753), 8.0 g 황소 담즙(Fluka 70168), 0.5 g 글리세롤 모노스테아레이트(Alfa Aesar 43883), 5.0 mL Tween 60, 20.0 mL 올리브 오일, 15.0 g 한천(Roth 5210), pH를 6.0으로 조정
"AFT04": 50.0 mL RPMI 1640(10X, 글루코스 및 페놀 레드 함유, Sigma R1145), 0.15 g L-글루타민(Applichem A3734), 17.26 g MOPS(3-(N-모르폴리노)-프로판술폰산), 450 mL 탈이온수(pH를 7.0으로 조정하고 엽산 0.5 mg(필터 살균 스톡, Sigma F8758)을 첨가).
스크리닝 과정을 96웰 플레이트에서 마이크로 브로쓰 희석 분석으로 수행하였다. 이 절차는 Clinical and Laboratory Standards Institute(CLSI, clsi[dot]org)에 의해 제공되거나 (DIN, din[dot]de) 표준 방법에 제공된 지침을 수정한 것이었다. 테스트 플레이트의 접종 타이터는 진균 포자의 경우 0.5~5 x 10^4이고, 효모 세포의 경우 1~2.5 x 10^3이었다. 균사체 형성은 종종 웰 전체에 걸쳐 불균일하게 분포되는 것으로 관찰되었으므로 진균 성장을 현미경 검사에 의해 추가로 평가하였다.
상기 3가지 펩티드에 대한 예비 결과는 다음과 같았다. 아스페르길루스 푸미가투스, 아스페르길루스 플라부스, 푸사리움 옥시스포룸, 무코르 시르시넬로이데스 에프. 잔세니이, 또는 리조무코르 미에헤이의 성장 억제가 375 마이크로몰 또는 187.5 마이크로몰의 농도의 보트리티스 알파 페로몬(서열 번호 2183) 또는 사카로마이세스 알파 페로몬(서열 번호 2184)과 함께 3일간 인큐베이션한 후에는 관찰되지 않았지만, 합성 CGI 인자 "HH38"(서열 번호2189)은 때때로 성장 패턴의 변화를 유도하였다. 칸디다 알비칸스, 칸디다 파라프실로시스, 또는 칸디다 아우리스의 성장 억제는 375 또는 187.5 마이크로몰의 임의의 상기 3가지 펩티드와 함께 1일간 인큐베이션한 후 관찰되지 않았다. 375 마이크로몰의 농도의 보트리티스 알파 페로몬(서열 번호 2183) 및 사카로마이세스 알파 페로몬(서열 번호 2184) 둘 모두는 2일간의 인큐베이션 후 크립토코커스 네오포르만스의 성장을 감소시켰고, 375 마이크로몰의 합성 CGI 인자 "HH38"(서열 번호 2189)은 이 종의 성장 패턴을 변화시키는 것으로 관찰되었다. 이는 예비 결과이므로 다양한 인간 또는 동물 진균 병원체에 대한 CGI 펩티드 항진균 활성을 조사할 수 있도록 분석법을 더욱 개선하고 있다.
실시예 17
이 실시예는 진균 병원체의 성장을 감소시키거나 억제하는 방법을 예시하며, 상기 방법은 진균 병원체를 적어도 하나의 분생포자 발아 억제(CGI) 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프(상기 진균 병원체, 진균 병원체와 동일한 속의 진균, 상기 진균 병원체와 상이한 속의 진균, 또는 이들의 혼합물 중 적어도 하나로부터 유래)를 포함하는 조성물과 접촉시키는 단계에 의한 것이다. 더 구체적으로, 이 실시예는 추정 CGI 인자 펩티드의 효과를 조사하기 위해 생세포 이미징 시스템을 사용하는 것을 예시한다.
oCelloScopeTM(BioSense Solutions ApS, Farum, DK) 광학 검출 시스템을 사용하여 30% 희석 감자 덱스트로스 브로쓰에서 22시간 동안 성장시킨 푸사리움 프롤리페라툼(Fusarium proliferatum)의 분생포자를 포함하는 96웰 플레이트를 이미지화하였다. 진균 성장은 "표면적 분할 및 추출"("SESA") 알고리즘을 사용하여 결정하였으며; Fredborg et al. (2013) J. Clinical Microbiol., 51:2047 - 2053; DOI:10.1128/JCM.00440-13을 참조한다. 다음을 포함한, 3가지의 자연 발생 알파 페로몬 펩티드 및 하나 이상의 자연 발생 알파 페로몬 펩티드 서열로부터 유래된 아미노산 서열을 갖는 7가지의 합성 CGI 인자를 포함한 10가지의 CGI 인자 펩티드를 테스트하였다: (1) "HH1", 푸사리움 그라미네아룸 알파 페로몬(WCTWKGQPCW, 서열 번호 2182); (2) "HH2" 보트리티스 시네레아 알파 페로몬(WCGRPGQPC, 서열 번호 2183); (3) "HH3" 사카로마이세스 세레비지애 알파 페로몬(WHWLQLKPGQPMY, 서열 번호 2184); (4) "HH31" 재배열 사카로마이세스 세레비지애 알파 페로몬 서열(WKMGQYHQLPPLW, 서열 번호 2185); (5) "HH35" 사카로마이세스 세레비지애 알파 페로몬(C-말단 글리신을 포함함)(WHWLQLKPGQPMYG, 서열 번호 2186); (6) "HH36" 사카로마이세스 세레비지애 알파 페로몬(N-말단 글리신을 포함함)(GWHWLQLKPGQPMY, 서열 번호 2187); (7) "HH37" 사카로마이세스 세레비지에 알파 페로몬 동종이량체(링커가 없음)(WHWLQLKPGQPMYWHWLQLKPGQPMY, 서열 번호 2188); (8) "HH38" 사카로마이세스 세레비지에 알파 페로몬 동종이량체(글리신 링커를 포함함)(WHWLQLKPGQPMYGGGGSWHWLQLKPGQPMY, 서열 번호 2189); (9) "HH4" 사카로마이세스 세레비지에 알파 페로몬 및 푸사리움 그라미네아룸 알파 페로몬 이종이량체(링커가 없음)(WHWLQLKPGQPMYWCTWKGQPCW(서열 번호 2231); 및 (10) "HH42" 푸사리움 그라미네아룸 알파 페로몬 및 사카로마이세스 세레비지애 알파 페로몬 이종이량체(링커가 없음)(WCTWKGQPCWWHWLQLKPGQPMY(서열 번호 2233).
CGI 인자 펩티드를 30% 감자 덱스트로스 브로쓰에서 제조하였으며, 약간의 침전이 관찰됨에 따라 1 mL 시린지 필터(0.2 마이크론 Ultipor 나일론 막이 장착된 PALL Acrodisc 시린지 필터)를 통해 여과하였고; 따라서 표에 제공된 CGI 인자 펩티드 농도는 공칭(및 최소) 농도로 처리된다. 이 분석의 결과는 비처리 대조군에 대해 정규화된 SESA 값으로 표 10에 제공된다.
[표 10]
375 마이크로몰의 공칭 농도의 HH3, HH31, HH35 및 HH36 펩티드로 처리한 푸사리움 프롤리페라툼에 대한 정규화된 값은 비처리 대조군보다 유의하게 더 낮았으며; HH3, HH 35 및 HH36은 또한 250 마이크로몰의 공칭 농도에서 통계적으로 유의한 항진균 활성을 나타냈다. 합성 CGI 인자 펩티드 중 4가지(HH37, HH38, HH4 및 HH42)는 테스트된 최저 농도인 100 마이크로몰의 공칭 농도에서 통계적으로 유의한 항진균 활성을 나타냈으며; 특히, 이들 펩티드는 테스트된 자연 발생 알파 페로몬 펩티드보다 길며, 추가 연결 아미노산이 있거나 없는 동종이량체 또는 이종이량체인데, 이는 더 긴 CGI 펩티드를 선택하거나 CGI 펩티드 서열의 길이를 증가시킴으로써 항진균 활성이 향상될 수 있음을 나타낸다.
전술한 개시 내용은 본 발명의 양태 및 실시 형태를 예시 및 예로서 어느 정도 상세하게 설명하지만, 설명 및 예는 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 추가 실시 형태가 [청구범위] 내에 개시된다. 본 발명에서 인용된 모든 특허 및 과학 문헌의 개시내용은 그 전체가 본원에 참고로 명시적으로 포함된다.

Claims (21)

  1. 진균의 성장 또는 번식을 감소시키는 방법으로서,
    상기 방법은 하나 이상의 분생포자 발아 억제(CGI) 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프의 유효량(여기서, CGI 인자는 서열 번호 2189, 서열 번호 2240, 서열 번호 961~1920, 서열 번호 1957~2189, 서열 번호 2194~2210, 서열 번호 2215~2243, 서열 번호 2457~3361, 및 서열 번호 5707~5731로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열과의 서열 동일성이 80% 이상인 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 CGI 인자 모티프는 서열 번호 1921~1956 중 적어도 하나를 포함하고, 상기 하나 이상의 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 진균의 게놈에서 나타나지 않음); 및
    선택적으로, 농업상 또는 제약상 허용가능한 담체
    를 포함하는 항진균 조성물을 진균에 제공하고;
    이에 의해 항진균 조성물이 제공되지 않은 대조 진균에 비해 진균의 성장 또는 번식을 감소시키는 단계를 포함하는, 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 하나 이상의 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프는 (a) 분비 신호 펩티드, (b) 국소화 신호, (c) 검출가능한 마커 또는 면역원성 마커, (d) 절단 서열, (e) 측면 또는 연결 아미노산 서열, (f) 세포 침투 펩티드, 및 (g) 자가 조립 펩티드로 이루어진 군 중 하나 이상을 추가로 포함하는 폴리펩티드로 제공되는, 방법.
  3. 제1항에 있어서, 항진균 조성물은 진균의 분생포자 발아, 성장, 번식 또는 생존성을 감소시키는, 방법.
  4. 제1항에 있어서, 상기 진균은 식물 또는 동물의 병원체이며, 상기 방법은 진균에 의해 야기되는 질병을 예방하거나 감소시키는, 방법.
  5. 제1항에 있어서, 상기 진균은 보트리티스(Botrytis) sp., 푸사리움(Fusarium) sp., 피토프토라(Phytophthora) sp., 자이모셉토리아(Zymoseptoria) sp., 아스페르길루스(Aspergillus) sp., 마그나포르테(Magnaporthe) sp., 푸치니아(Puccinia) sp., 블루메리아(Blumeria) sp., 마이코스파에렐라(Mycosphaerella) sp., 콜레토트리쿰(Colletotrichum) sp., 우스틸라고(Ustilago) sp., 멜람프소라(Melampsora) sp., 파코프소라(Phakopsora) sp., 리족토니아(Rhizoctonia) sp. 아스페르길루스(Aspergillus) sp., 칸디다(Candida) sp., 콕시디오이데스(Coccidioides) sp., 히스토플라스마(Histoplasma) sp., 크립토코커스(Cryptococcus) sp., 뉴모시스티스(Pneumocystis) sp., 및 블라스토마이세스(Blastomyces) sp.로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인, 방법.
  6. 제1항에 있어서, 상기 진균은 보트리티스 sp., 푸사리움 sp., 피토프토라 sp. 및 자이모셉토리아 sp.로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상이며, 상기 CGI 인자는 진균 알파 페로몬의 다량체를 포함하는 폴리펩티드 또는 진균 알파 페로몬과 세포 침투 펩티드를 포함하는 폴리펩티드로서 제공되는, 방법.
  7. 제1항에 있어서, 상기 진균은 보트리티스 sp. 또는 푸사리움 sp.이며, 상기 CGI 인자는 서열 번호 2189의 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  8. 제1항에 있어서, 상기 진균은 푸사리움 sp., 피토프토라 sp., 및 자이모셉토리아 sp.이며, 상기 CGI 인자는 서열 번호 2240의 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  9. 제1항에 있어서, 상기 진균은 크립토코커스 sp.이며, 상기 CGI 인자는 서열 번호 2183, 서열 번호 2184, 또는 서열 번호 2189의 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  10. 제1항에 있어서, 상기 항진균 조성물은 미립자, 고체, 액체, 겔, 지질 나노입자, 현탁액, 또는 에멀젼으로 제형화되는, 방법.
  11. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 진균을 조성물과 직접적으로 접촉시키거나, 또는 조성물을 진균의 환경에 전달함으로써 진균에 제공되는, 방법.
  12. 제1항에 있어서, 상기 하나 이상의 분생포자 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프를 코딩하는 재조합 DNA 구축물을 진균의 환경에서 발현시킴으로써 상기 조성물을 진균에 제공하는, 방법.
  13. 재조합 DNA 구축물로서, 상기 구축물은
    분생포자 발아 억제(CGI) 인자, CGI 인자 전구체, 또는 CGI 인자 단편을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자에 이종 프로모터가 작동가능하게 연결된 것을 포함하며,
    상기 뉴클레오티드 서열은
    서열 번호 2189, 서열 번호 2240, 서열 번호 961~1920, 서열 번호 1957~2189, 서열 번호 2194~2210, 서열 번호 2215~2243, 서열 번호 2457~3361, 또는 서열 번호 5707~5731 중 적어도 하나와의 서열 동일성이 80% 이상인 아미노산 서열을 포함하는 하나 이상의 CGI 인자, 하나 이상의 CGI 인자 전구체, 또는 하나 이상의 CGI 인자 단편을 코딩하거나, 또는
    서열 번호 1921~1956 중 적어도 하나를 포함하는 하나 이상의 CGI 인자 모티프를 코딩하고;
    상기 뉴클레오티드 서열은 이종 발현을 위해 최적화된 코돈을 선택적으로 갖는, 재조합 DNA 구축물.
  14. 제13항에 있어서, 재조합 DNA 구축물은 (a) CGI 인자의 하나 이상의 카피, (b) 2개 이상의 CGI 인자 각각의 하나 이상의 카피, (c) 하나 이상의 CGI 인자 전구체, (d) 하나 이상의 CGI 인자 단편, (e) 하나 이상의 CGI 인자 모티프, 또는 (f) (a) 내지 (e)의 임의의 조합을 포함하는, 재조합 DNA 구축물.
  15. 제13항에 있어서, 이종 프로모터는 박테리아 프로모터, 진균 프로모터, 조류 프로모터, 동물 프로모터, 또는 식물 프로모터인, 재조합 DNA 구축물.
  16. 제13항에 있어서, (a) 분비 신호 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열, (b) 국소화 신호를 코딩하는 뉴클레오티드 서열, (c) 검출가능한 마커 또는 면역원성 마커를 코딩하는 뉴클레오티드 서열, (d) 절단 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열, (e) 측면 또는 연결 뉴클레오티드 서열, (f) T-DNA를 코딩하는 뉴클레오티드 서열, (g) 세포 침투 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열, 및 (h) 자가 조립 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 뉴클레오티드 서열을 추가로 포함하는, 재조합 DNA 구축물.
  17. 식물의 진균 병원체에 의해 야기되는 질병을 예방하거나 감소시키는 방법으로서,
    상기 방법은 하나 이상의 분생포자 발아 억제(CGI) 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프의 유효량(여기서, CGI 인자는 서열 번호 2189, 서열 번호 2240, 서열 번호 961~1920, 서열 번호 1957~2189, 서열 번호 2194~2210, 서열 번호 2215~2243, 서열 번호 2457~3361, 및 서열 번호 5707~5731로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열과의 서열 동일성이 80% 이상인 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 CGI 인자 모티프는 서열 번호 1921~1956 중 적어도 하나를 포함하고, 상기 하나 이상의 CGI 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 진균 병원체의 게놈에서 나타나지 않음); 및
    선택적으로, 농업상 허용가능한 담체
    를 포함하는 항진균 조성물을 식물에 제공하고;
    이에 의해 항진균 조성물이 제공되지 않은 대조 식물에 비해 식물에서 진균 병원체에 의해 야기되는 질병을 예방하거나 감소시키는, 방법.
  18. 제17항에 있어서, 상기 진균 병원체는 보트리티스 sp., 푸사리움 sp., 피토프토라 sp., 자이모셉토리아 sp., 아스페르길루스 sp., 마그나포르테 sp., 푸치니아 sp., 블루메리아 sp., 마이코스파에렐라 sp., 콜레토트리쿰 sp., 우스틸라고 sp., 멜람프소라 sp., 파코프소라 sp., 및 리족토니아 sp.로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인, 방법.
  19. 제17항에 있어서, 상기 하나 이상의 분생포자 발아 억제(CGI) 인자, CGI 인자 전구체, CGI 인자 단편, 또는 CGI 인자 모티프는 (a) 분비 신호 펩티드, (b) 국소화 신호, (c) 검출가능한 마커 또는 면역원성 마커, (d) 절단 서열, (e) 측면 또는 연결 아미노산 서열, (f) 세포 침투 펩티드, 및 (g) 자가 조립 펩티드로 이루어진 군 중 하나 이상을 추가로 포함하는 폴리펩티드로 제공되는, 방법.
  20. 제17항에 있어서, 상기 항진균 조성물은 농업상 허용가능한 담체를 추가로 포함하고, 상기 농업용 담체는 보조제, 불활성 성분, 분산제, 계면활성제, 점착성 부여제, 결합제, 또는 안정화제로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인, 방법.
  21. 제17항에 있어서, 상기 항진균 조성물은 종자 처리제, 엽면 분무 처리제, 엽면 관주 처리제, 즉시 사용 가능(RTU) 제형, 생산물 코팅, 현탁 농축물, 탱크-믹스, 에어로졸, 뿌리 침지제, 관주제, 연무제, 토양 처리제, 관개 제형, 또는 스프링클러 제형 중 하나로 제형화되는, 방법.
KR1020247005757A 2021-07-23 2022-07-22 진균 방제용 조성물 및 관련 방법 KR20240037305A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202163225356P 2021-07-23 2021-07-23
US63/225,356 2021-07-23
PCT/US2022/074082 WO2023004435A1 (en) 2021-07-23 2022-07-22 Compositions for fungal control and related methods

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20240037305A true KR20240037305A (ko) 2024-03-21

Family

ID=82932510

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020247005757A KR20240037305A (ko) 2021-07-23 2022-07-22 진균 방제용 조성물 및 관련 방법

Country Status (7)

Country Link
EP (1) EP4373840A1 (ko)
KR (1) KR20240037305A (ko)
AR (1) AR126549A1 (ko)
AU (1) AU2022315304A1 (ko)
CA (1) CA3226974A1 (ko)
TW (1) TW202332686A (ko)
WO (1) WO2023004435A1 (ko)

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU3570997A (en) * 1996-06-17 1998-01-07 The Texas A & M University System Pheromone compositions and methods of use in controlling fungal diseases in plants
WO2003080657A2 (en) * 2002-03-25 2003-10-02 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Yeast pheromones for the treatment of infectious diseases
US20050058689A1 (en) * 2003-07-03 2005-03-17 Reactive Surfaces, Ltd. Antifungal paints and coatings
US8314290B2 (en) 2004-12-21 2012-11-20 Monsanto Technology Llc Temporal regulation of gene expression by MicroRNAs
WO2007047016A2 (en) 2005-10-13 2007-04-26 Monsanto Technology, Llc Methods for producing hybrid seed
EP2956474B1 (en) * 2013-02-12 2018-08-22 Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. Polypeptides against plant pathogenic fungi
BR112021003380A2 (pt) 2018-08-28 2021-05-18 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc métodos e composições para modulação de um genoma

Also Published As

Publication number Publication date
EP4373840A1 (en) 2024-05-29
AU2022315304A1 (en) 2024-02-08
CA3226974A1 (en) 2023-01-26
AR126549A1 (es) 2023-10-18
WO2023004435A1 (en) 2023-01-26
TW202332686A (zh) 2023-08-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CA2801056C (en) Pseudozyma aphidis as a biocontrol agent against various plant pathogens
US9848603B2 (en) Methods for protecting plants with antifungal compositions
JP6457945B2 (ja) 抗病原体方法
Desmedt et al. Plant defense priming in the field: a review
KR20240037305A (ko) 진균 방제용 조성물 및 관련 방법
US20240067682A1 (en) Peptide having plant stem cell-inducing effect and plant pest resistance-inducing effect
KR20190141143A (ko) 선충구제제의 상승작용적 칼콘 함유 조성물
CN104271592B (zh) 用于植物的抗微生物环肽组合物
KR102601629B1 (ko) 선충구제제의 상승작용적 조성물
Nasution Management approaches for Ceratocystis wilt and canker disease in Acacia plantations
Piencek et al. The evaluation of infection caused by different fungi species of highbush blueberry plants grown on selected commercial plantations located in central Poland
Navarro-Acevedo Development and Testing of Harpin Based Products for the Control of Nematodes and Fungal Plant Pathogens
AU2016224979A1 (en) Novel compositions and methods for controlling soil borne pathogens of agricultural crops
Schroeder From Model System to Crops: Translational Approaches to Design New Crop Disease Protection Strategies Based on Findings in Arabidopsis thaliana
Dryburgh Effects of Virus Infection and Volatiles on Aphid Virus Vector Behavior on Sweetpotato
Aparicio del Moral Natural enemies for the conservation biological control of Myzus persicae in Mediterranean peach orchards
dos Santos et al. Aà § ã o herbicida na severidade de doenà § as em plantas cultivadas
dos Santos et al. Herbicide action in the severity of diseases in cultivated plants
KR20200003056A (ko) 칼콘을 포함하는 살선충제의 상승작용 조성물
SMITH et al. Biofumigation in Agriculture and Horticulture
Pujol et al. Natural enemies for the conservation biological control of Myzus persicae in Mediterranean peach orchards
Yao Bacillus subtilis und seine Stoffwechselprodukte als Agenzien zur Resistenzinduktion gegen Blattläuse auf Ackerbohne (Vicia faba) und Sommerweizen (Triticum aestivum)
Ogle et al. BIOCONTROL OF WEEDS USING PLANT PATHOGENS