BR112016028022B1 - Compostos de sulfonamida inibidores de stat5 - Google Patents

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Abstract

COMPOSTO E SEU USO. A presente divulgação se refere a compostos com a Fórmula (Fórmula (I)) que são inibidores de STAT5.

Description

CAMPO DA DIVULGAÇÃO
[0001] A presente divulgação refere-se a compostos que são inibidores da proteína de STAT5, incluindo compostos da Fórmula (I).
INTRODUÇÃO
[0002] Numerosos inibidores foram desenvolvidos para atingir a via de sinalização JAK-STAT, uma importante força motriz em malignidades hematopoiéticas. Embora a ênfase tenha-se centrado na identificação de inibidores de quinase a montante eficazes para suprimir a atividade de STAT, inibidores têm sofrido com a baixa seletividade de quinase[1], toxicidade cardiovascular[2,3], em alguns casos clínicos, a resistência adquirida.[4] Vários inibidores da quinase têm sido utilizados em combinação para tentar combater a resistência.[5,6] Uma estratégia alternativa para reduzir a toxicidade fora do alvo é alvejar proteínas imediatamente a jusante das quinases, tais como proteínas Transdutor de Sinal e Ativador da Transcrição (STAT) 5.
[0003] Nas células normais, a ativação de proteínas STAT5 são firmemente reguladas por citocinas (IL-2, IL-5, IL-7, GM-CSF, eritropoietina (EPO), trombopoietina, e prolactina) e fatores de crescimento.[7] A ligação destes ligandos extracelulares aos seus receptores alvo induz a ativação de quinases JAK associadas ao receptor que fosforilam a tirosina chave dentro do receptor, proporcionando locais de ancoragem para os domínios de homologia 2 de SRC (SH2) dos monômeros inativos STAT5 citoplasmáticos. STAT5 é então fosforilado em resíduos de tirosina específicos, quer Y694 (STAT5A) ou Y699 (STAT5b) do C-terminal. Monômeros de STAT5 fosforilados formam homo ou hetero [8,9] STAT5X- STATX dímeros através de interações de fosfotirosina-SH2 recíprocas. Dímeros de STAT5 ativados translocam-se para o núcleo, onde se ligam a elementos de resposta de DNA de STAT5 que induzem a transcrição de genes envolvidos na proliferação (Bcl-XL, c-myc, p M-1), diferenciação celular (p21), a sobrevivência das células (MCL-1), inflamação (OSM) e apoptose (JAB).[10] Em contraste, as mutações dentro de quinases citosólicas (TEL-JAK2, Bcr-Abl, FLT-3), bem como receptor superativo associado a tirosina quinases (SRC, EGFR), induzem fosforilação constitutiva de proteínas STAT5, o que aumenta a produção de genes anti- apoptóticos que podem contribuir para dirigir o fenótipo do câncer. [11]
[0004] Abordagens que visam alvejar diretamente STAT5 foram limitadas a um inibidor de acil hidrazina derivado de cromona, identificado através de uma tela de alto rendimento de polarização de fluorescência (FP). Embora este agente tenha exibido uma promissora interrupção in vitro da interação fosfopeptídica de STAT5:EPOR, concentrações mais elevadas foram necessárias para inibir STAT5 em células.[12]
RESUMO
[0005] Numa modalidade, a presente invenção refere-se a compostos da fórmula (I) que são inibidores da proteína de STAT5. Numa modalidade, o composto da Fórmula (I) possui a seguinte estrutura:
Figure img0001
em que Ri é -(CH2)n-(C6-Cio)-arii ou -C(=O)-(CH2)n-(C6-Cio)-aril, em que os grupos aril são opcionalmente substituídos com um a cinco substituintes seiecionados dentre haio, OH (Ci-C6)-aiquii, (Ci-C6)-aicóxi, haio- substituído-( Ci-C4)-aiquii, -(ciciopropii)-CF3, - NO2, CN, -SO3R' e -COOR', em que R' é H ou (Ci-C4)-aiquii; R2 é - (CH2)n- (C6-Cio) -arii, em que os grupos ariio são opcionaimente substituídos com um a cinco substituintes seiecionados de entre halo, OH, (C1-C6) -alquilo, (C1-C6) -alcoxi, Halo-substituído- (C1-C4) - alquilo, - (Ciclopropil) -CF3, -NO2, CN, -SO3R 'e - COOR', em que R 'é H ou (C1-C4) -alquilo; R3 é - (CH2)n- (C6-C10)-arilo em que os grupos arilo estão opcionalmente substituídos com um a cinco substituintes selecionados de entre halo, OH, (C1-C6) -alquilo, (C1-C6), Halo-substituído- (C1-C4) -alquilo- alcoxi, - (ciclopropil) -CF3, -NO2, CN, -SO3R 'e - COOR', em que R 'é H ou (C1-C4) -alquilo; X é -COOR", -P (O) (OR")2, tetrazole, -C (= O) NR "-OH, ou -CF2OH, em que R "é H ou (C1-C4) -alquilo; R4 e R5 são H, ou tomados em conjuntos R4 e R5 são -C(=O); R é H, OH, halo, (C1-C6) -alquil ou (C1-C6) -alcóxi; n é 0, 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; e m é 1, 2, 3 ou 4; ou um seu sal, solvato, pró-fármaco e/ou um seu estereoisômero farmaceuticamente aceitável.
[0006] A presente divulgação também inclui composições farmacêuticas que compreendem compostos da divulgação e excipientes, veículos e/ou aditivos farmaceuticamente aceitáveis.
[0007] Numa modalidade, os compostos da divulgação são inibidores da proteína STAT5. Em um aspecto da divulgação, os compostos da Fórmula (I) são úteis para o tratamento ou prevenção de condições de uma condição ou doença mediada pela proteína STAT5. Noutra modalidade, a condição ou doença é malignidades hematopoiéticas, doenças da pele, câncer da pele não-melanoma, câncer da próstata ou inflamação.
[0008] Outras características e vantagens do presente pedido serão evidentes a partir da seguinte descrição detalhada. Deve-se compreender, entretanto, que a descrição detalhada e os exemplos específicos, ao indicar as modalidades preferidas do pedido atual, estão apresentando-as apenas como ilustrações, uma vez que várias mudanças e modificações dentro do princípio e do escopo do pedido atual se tornarão aparentes àquelas pessoas versadas na técnica desta descrição detalhada.
FIGURAS
[0009] A divulgação irá agora ser descrita em maior detalhe com referência aos seguintes desenhos, nos quais:
[0010] A Figura 1 é um dendrograma Treespot que demonstra que um composto da divulgação não inibe as quinases testadas (um acerto é definido como a inibição >35%);
[0011] A Figura 2 mostra as curvas de Ressonância de Plasmon de superfície (SPR) que exibe as afinidades de ligação dos compostos da divulgação contra as proteínas STAT3 e STAT5;
[0012] A Figura 3 são curvas de calibração para a proteína STAT3 e STAT5b de tipo selvagem utilizando fosfopéptidos fluoresceínados (5-FAM- pYLPQTC e 5-FAM-GpYLVLDKW para STAT3 e STAT5b, respectivamente);
[0013] Figura 4 são curvas de Polarização de Fluorescência (FP) normalizadas que indicam a ligação competitiva de inibidores de STAT5 de controle (pimozida e cromona) à proteína STAT5b de tipo selvagem.
[0014] A Figura 5 são curvas normalizadas de FP que exibem a ligação competitiva dos compostos 13a-d da divulgação contra STAT5b de tipo selvagem e proteínas STAT3.
[0015] A Figura 6 são gráficos que mostram o potencial citotóxico de compostos 13a-d da divulgação em ensaios de viabilidade celular K562;
[0016] A Figura 7 são gráficos que mostram o potencial citotóxico de compostos 13a-d da divulgação em ensaios de viabilidade celular de MV411;
[0017] A Figura 8 é um gráfico que mostra A) Inibição de pSTAT5 com um composto da divulgação em células K562; B) Iniciação de apoptose depois de 24 horas e knockdown de MCL-1; C) o composto não apresenta efeito sobre pSTAT3 em MDA-MB-231 até 20 μM; e D) knockdown de alvo a jusante de c-Myc depois de 5 horas;
[0018] A Figura 9 mostra uma série de espectros de LC-MS que mostram a estabilidade metabólica em hepatócitos de rato de um composto da divulgação em vários pontos de tempo: A) 0 min; B) 120 min; e C) 240 min;
[0019] A Figura 10 mostra um espectro de massa em tandem de um primeiro pico dos espectros de LC-MS da Figura 9;
[0020] A Figura 11 mostra um espectro de massa em tandem de um segundo pico dos espectros de LC-MS da Figura 9;
[0021] A Figura 12 mostra um espectro de massa em tandem de um terceiro pico dos espectros de LC-MS da Figura 9;
[0022] A Figura 13 mostra um espectro de massa em tandem de um quarto pico dos espectros de LC-MS da Figura 9; e
[0023] A Figura 14 mostra os efeitos de um composto da divulgação em células CD34+ e MV4-11 AML.
[0024] A Figura 15 mostra A) uma curva FP normalizada que exibe a ligação competitiva de um composto da divulgação à proteína STAT1 de tipo selvagem; B) Efeito de um composto da divulgação sobre os níveis de fosforilação de STAT1 em K562 e MDA-MB-231; C) os níveis de fosforilação de STAT5 em células MDA-MB-231. D) A viabilidade celular de um composto da divulgação em células MDA-MB-231.
[0025] A Figura 16 mostra A) Inibição de pSTAT5 com um composto da divulgação (10 μM, setas amarelas) em células MV-4:11 em 5 e 24h; B) Após 24 horas, a apoptose foi iniciada pela PARP-1 clivada detectável; C) um composto da divulgação induziu knockdown completa do gene-alvo a jusante, MCL-1 a 10 μM.
[0026] A Figura 17 mostra a estabilidade metabólica de um composto da divulgação em HLS9 e MMLS9 com NADPH a 60 min.
[0027] A Figura 18 mostra A) a estabilidade metabólica de um composto da divulgação e controle positivo (verapamil) em hepatócitos humanos e de camundongo aos 120 min. B) Percentagens restantes do composto e controle positivo (verapamil) em hepatócitos humanos e de camundongo fervidos aos 120 minutos, como controle negativo.
[0028] A Figura 19 mostra um ajuste de fase única de decaimento para os pontos de dados analíticos de HPLC de um composto da divulgação na presença de excesso de glutationa tripéptido (10 mM).
DESCRIÇÃO DE DIVERSAS MODALIDADES DEFINIÇÕES
[0029] O termo "(C1-Cp).alquilo ", tal como utilizado neste documento, significa cadeia linear e/ou ramificada, radicais alquilo saturados contendo de um a "p" átomos de carbono e inclui (dependendo da identidade de p) metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, s -butilo, isobutilo, t-butilo, 2,2- dimetilbutilo, n-pentilo, 2-metilpentilo, 3-metilpentilo, 4-metilpentilo, n-hexilo e semelhantes, em que a variável p é um número inteiro que representa o maior número de átomos de carbono no radical alquilo.
[0030] O termo "(C1-Cp).alcóxi" significa um grupo alquilo, como definido acima, que possui um átomo de oxigênio a ele ligado. Tal como utilizado neste documento, o termo significa cadeia linear e/ou ramificada, radicais alquilo saturados com um átomo de oxigênio a eles ligado e que contém de um a "p" átomos de carbono e inclui (dependendo da identidade da p) metóxi, etóxi, propóxi, isopropóxi , n-butóxi, s-butóxi, isobutóxi, t- butóxi, 2,2-dimetilbutóxi, n-pentóxi, 2-metilpentóxi, 3-metilpentóxi, 4- metilpentóxi, n-hexóxi e outros semelhantes, em que a variável p é um o número inteiro que representa o maior número de átomos de carbono no radical alcóxi.
[0031] O termo "substituído por halo (C1-Cp) alquilo ", tal como utilizado neste documento, significa cadeia linear e/ou ramificada, radicais alquilo saturados, contendo de um a "p" átomos de carbono, em que, pelo menos um, e até e incluindo todos os átomos de hidrogênio foram substituídos por átomos de halógenos e inclui (dependendo da identidade de p) fluorometilo, difluorometilo, trifluorometilo, clorometilo, diclorometilo, triclorometilo, 1-fluoroetilo, 1, 1-difluoroetilo e semelhantes, em que a variável p é um número inteiro que representa o maior número de átomos de carbono no radical alquilo.
[0032] O termo "arilo" como utilizado neste documento refere-se a grupos cíclicos que contêm pelo menos um anel aromático, por exemplo um anel único (por exemplo, fenilo) ou múltiplos anéis condensados (por exemplo naftilo). Em uma modalidade da presente descrição, o grupo arilo contém 6, 9 ou 10 átomos, tais como fenilo, naftilo, indanilo, antracenilo, 1, 2-di-hidronaftilo, 1, 2,3,4-tetra-hidronaftilo, fluorenilo, indanilo, indenilo e semelhantes.
[0033] O termo "halo", como utilizado neste documento refere-se a um átomo de halógeno e inclui flúor (F), cloro (Cl), bromo (Br) e iodo (I).
[0034] O termo "sal farmaceuticamente aceitável" refere-se, por exemplo, a um sal que retém a atividade biológica desejada de um composto da presente invenção e não confere efeitos toxicológicos indesejáveis ao mesmo; e pode referir-se a um sal de adição de ácido ou um sal de adição de base.
[0035] O termo "solvato", como utilizado neste documento significa um composto ou o seu sal farmaceuticamente aceitável, em que as moléculas de um solvente adequado estão incorporadas na rede cristalina. Um solvente adequado é fisiologicamentetolerável na dosagem administrada. Exemplos de solventes adequados são o etanol, água e semelhantes. Quando a água é o solvente, refere-se á molécula como um hidrato. A formação de solvatos pode variar dependendo do composto e do solvato. Em geral, os solvatos são formados por dissolução do composto no solvente apropriado e isolar o solvato por arrefecimento ou utilizando um anti-solvente. O solvato é tipicamente seco ou submetido a azeotropia sob condições ambientes.
[0036] Em modalidades da presente divulgação, os compostos podem ter um centro assimétrico. Estes compostos existem como enantiômeros. Quando os compostos possuem mais do que um centro assimétrico, eles podem existir como diastereômeros. Deve ser entendido que todos esses isômeros e suas misturas em qualquer proporção estão englobadas dentro do âmbito da presente divulgação. Deve ser ainda entendido que, embora a estereoquímica dos compostos possa ser como mostrado em qualquer composto dado listados neste documento, tais compostos também podem conter determinadas quantidades (por exemplo, menos do que 20%, adequadamente menos do que 10%, mais adequadamente inferior a 5%) dos compostos da divulgação que possuem estereoquímica alternativa. Por exemplo, os compostos da divulgação que são mostrados sem quaisquer designações estereoquímicas são entendidos como misturas racêmicas (isto é, contêm uma quantidade igual de cada enantiômero ou diastereômero possível). No entanto, deve ser entendido que todos os enantiômeros e diastereômeros estão incluídos no âmbito da presente divulgação, incluindo as suas misturas em qualquer proporção.
[0037] O termo "quantidade eficaz" ou "quantidade terapeuticamente eficaz" ou "quantidade farmaceuticamente eficaz", tal como utilizado neste documento, significa uma quantidade eficaz, em dosagens e por períodos de tempo necessários para atingir o resultado desejado. Por exemplo, no contexto de tratamento de um sujeito com uma doença mediada por STAT5, uma quantidade eficaz é uma quantidade que, por exemplo, inibe a proteína STAT5 no sujeito. As quantidades eficazes podem variar de acordo com factores tais como o estado de doença, idade, sexo e/ou o peso do sujeito. A quantidade de um determinado composto que vai corresponder a uma tal quantidade vai variar dependendo de vários fatores, tais como o fármaco dado ou composto, a formulação farmacêutica, a via de administração, o tipo de condição, doença ou desordem, a identidade do indivíduo a ser tratado e semelhantes, mas pode, no entanto, ser rotineiramente determinada por aqueles versados na técnica.
[0038] Tal como utilizado neste documento, o termo "pró-fármaco" refere-se a uma substância que é preparada numa forma inativa que é convertida numa forma ativa (isto é, medicamento) no interior do corpo ou células do mesmo pela ação de, por exemplo, enzimas endógenas ou outros produtos químicos e/ou condições. Derivados de pró-fármacos dos compostos da divulgação ou dos sais farmaceuticamente aceitáveis ou solvatos, podem ser preparados por métodos conhecidos por aqueles versados na técnica e incluem ésteres de quaisquer radicais hidroxilo ou carboxilo livres dos compostos.
[0039] Tal como utilizado neste documento, um "sujeito" refere-se a todos os membros do reino animal, incluindo mamíferos, e adequadamente refere-se a seres humanos. Um membro do reino animal inclui, sem limitação, um mamífero (tal como um humano, primata, suínos, ovinos, vaca, equino, cavalo, camelo, canino, felino, gato, tigre, leopardo, civeta, vison, fuinha, doninha, animal de estimação, animais de rebanho, coelho, camundongo, rato, porquinho da índia ou roedor, foca, baleia e similares), peixe, anfíbio, réptil e aves (tais como aves aquáticas, aves migratórias, codorniz, pato, ganso, ave de capoeira ou frango). Numa modalidade da presente divulgação, o sujeito está em necessidade de um composto ou composição da divulgação.
COMPOSTOS DA DIVULGAÇÃO
[0040] Numa modalidade, a presente invenção refere-se a compostos da Fórmula (A) que são inibidores de STAT5. Numa modalidade, o composto da Fórmula (A) possui a seguinte estrutura:
Figure img0002
em que Ri é -(CH2)n-(C6-Cio)-aril ou -C(=O)-(CH2)n-(C6-Cio)-aril em que os grupos aris groupssão opcionalmente substituídos com um a cinco substituintes selecionados dentre halo, OH, (Ci-C6)-alquil, (Ci-C6)-alcóxi, halo-substituído-(Ci-C4)-alquil, -(ciclopropil)-CF3, - NO2, CN, -SO3R' e - COOR',em que R' é H ou (Ci-C4)-alquil; R2 é -(CH2)n-(C6-Cio)-arilo, em que os grupos arilo estão opcionalmente substituídos com um a cinco substituintes selecionados de entre halo, OH, (Ci-C6)-alquil, (Ci-C6)-alcóxi, halo-substituído-(Ci-C4)-alquil, -(ciclopropil)-CF3, -NO2, CN, -SO3R' e - COOR', em que R' é H ou (Ci-C4)- alquil; R3 é -(CH2)n-(C6-Cio)-arilo, em que os grupos arilo estão opcionalmente substituídos com um a cinco substituintes selecionados de entre halo, OH, (Ci-C6)-alquil, (Ci-C6)-alcóxi, halo-substituído-(Ci-C4)-alquil, -(ciclopropil)-CF3, -NO2, CN, -SO3R' e - COOR', em que R' é H ou (Ci-C4)- alquil; X é -COOR ", -P (O) (OR")2, tetrazola, -C (= O) NR"-OH, ou -CF2OH, em que R" é H ou (Ci- C4) -alquilo ou - (CH2)n- (C6-Cio) -arilo R4 e R5 são independentemente ou simultaneamente H ou CF3, em que pelo menos um de R4 ou R5 é H, ou em conjunto, R4 e R5 são C(=O) ou -C(=S); R é H, OH, halo, (Ci-C6) -alquil ou (Ci-C6) -alcóxi; cada n é independentemente ou simultaneamente o, i , 2, 3, 4, 5 ou 6; e m é i, 2, 3 ou 4; ou um sal, solvato, pró-fármaco e/ou um estereoisômero farmaceuticamente aceitável deste.
[0041] Numa modalidade, o composto de Fórmula (A) é um composto da Fórmula (I) que são inibidores de STAT5. Numa modalidade, o composto da Fórmula (I) possui a seguinte estrutura:
Figure img0003
em que R1 é -(CH2)n-(C6-C10)-aril ou -C(=O)-(CH2)n-(C6-C10)-aril, em que os grupos aril são opcionalmente substituídos com um a cinco substituintes selecionados entre halo, OH, (C1-C6)-alquilo, (C1-C6)-alcóxi, halo- substituído-(C1-C4)-alquil, -(ciclopropil)-CF3, - NO2, CN, -SO3R' e -COOR', em que R' é H ou (C1- C4)-alquil; R2 é -(CH2)n-(C6-C10)-arilo, em que os grupos arilo estão opcionalmente substituídos com um a cinco substituintes selecionados de entre halo, OH, (C1-C6)-alquil, (C1-C6)-alcóxi, halo-substituído-(C1-C4)-alquil, -(ciclopropil)-CF3, -NO2, CN, -SO3R' e - COOR', em que R' é H ou (C1-C4)- alquil; R3 é -(CH2)n-(C6-C10)-arilo, em que os grupos arilo estão opcionalmente substituídos com um a cinco substituintes selecionados de entre halo, OH, (C1-C6)-alquil, (C1-C6)-alcóxi, halo-substituído-(C1-C4)-alquil, -(ciclopropil)-CF3, -NO2, CN, -SO3R' e - COOR', em que R' é H ou (C1-C4)- alquil; X é -COOR ", -P (O) (OR")2, tetrazole, -C (= O) NR "-OH, ou -CF2OH, em que R "é H ou (C1-C4 ) -alquilo; R4 e R5 são H ou tomados em conjuntos R4 e R5 são -C(=O); R é H, OH, halo, (C1 -C6)-alquil ou (C1 -C6)-alcóxi; cada n é independentemente ou simultaneamente 0, 1 , 2, 3, 4, 5 ou 6; e m é 1, 2, 3 ou 4; ou um seu sal, solvato, pró-fármaco e/ou um seu estereoisômero farmaceuticamente aceitável.
[0042] Numa modalidade da divulgação, R1 é -(C6-C10)-aril, -(CH2)-( C6-C10)-aril ou -C(=O)-( C6-C10)-aril. Numa outra modalidade, R1 é fenilo, naftilo, -CH2-fenil,-CH2-naftil, -C(=O)-fenil ou -C(=O)-naftil.
[0043] Noutra modalidade da divulgação, os substituintes opcionais no grupo arilo são selecionados de R1 de um a cinco de halo, CN, (C1-C6)- alquil, halo-substituído-( C1-C4)-alquil e (C1-C6)-alcóxi. Em outra modalidade da divulgação, os substituintes opcionais no grupo arilo são selecionados de um a cinco de halo, (C1-C6)-alquilo e (C1-C6) -alcóxi. Noutra modalidade, os substituintes opcionais no grupo arilo de R1 são selecionados de um a cinco de flúor, cloro, bromo, (C1-C4)-alquil ou (C1-C4)-alcóxi. Numa outra modalidade, os substituintes opcionais no grupo arilo de R1 são selecionados a partir de um a três substituintes selecionados a partir de fluoro, metilo e t-butilo. Numa modalidade, os substituintes opcionais no grupo arilo de R1 são selecionados de entre um a três substituintes selecionados de entreCN, -CF3, -CH3) F, isopropilo e t-butilo.
[0044] Numa modalidade da divulgação, a fração R1 é
Figure img0004
[0045] Numa outra modalidade da divulgação, a fração R1 é
Figure img0005
[0046] Numa outra modalidade da divulgação, a fração R1 é
Figure img0006
[0047] Numa modalidade da divulgação, R2 é -(C6-C10)-aril ou -(CH2)- (C6- C10)-aril. Em outra modalidade, R2 é fenil ou -CH2-fenil.
[0048] Numa outra modalidade, os substituintes opcionais no grupo arilo de R2 são selecionados de um a cinco de halo, halo-substituído- (C1- C4)-alquilo, -(ciclopropil)-CF3, -NO2, CN, -SO3R' e -COOR', em que R 'é H ou (C1-C4)-alquil. Noutra modalidade, os substituintes opcionais no grupo arilo de R2 são selecionados de entre um até três de halo, halo-substituído (C1-C4)-alquilo e - (ciclopropil)-CF3. Noutra modalidade, os substituintes opcionais no grupo arilo de R2 são um a três grupos cloro, CF3 ou - (ciclopropil) -CF3.
[0049] Numa outra modalidade, a fração R2 é
Figure img0007
[0050] Numa modalidade da divulgação, R3 é -(C6-C10)-aril ou -(CH2)-( C6-C10)-aril. Em outra modalidade, R3 é fenil ou -CH2-fenil.
[0051] Numa modalidade, os substituintes opcionais no grupo aril de R3 são selecionados de um a cinco de halo, OH, (C1-C6)-alquil e (C1-C6)- alcóxi. Noutra modalidade, os substituintes opcionais no grupo arilo de R3 são selecionados de um a cinco de flúor, cloro, bromo, OH, (C1-C3)-alquil e (C1-C3)-alcóxi. Noutra modalidade, os substituintes opcionais no grupo arilo de R3 são seleccionados de um a cinco de flúor, cloro, bromo e (C1-C3)- aquil
[0052] Numa modalidade, a fração de R3 é
Figure img0008
[0053] Numa outra modalidade, a fração R3 é
Figure img0009
[0054] Numa outra modalidade da divulgação, R é H, OH, fluoro, cloro, bromo, ou (C1-C4)-alquilo. Numa outra modalidade, H, F ou OH.
[0055] Noutra modalidade da divulgação, X é COOR ", -P (O) (OR") 2 ou tetrazole, em que R "é H, ou (C1-C4) Alquilo (tal como t-butil). Numa modalidade, X é -COOR ", em que R" é H ou (C1-C4)-alquilo. Numa modalidade, X é -COOH. Numa forma de realização, X é -COO-benzilo.
[0056] Noutra modalidade da divulgação, o composto da Fórmula (I) tem a seguinte estrutura
Figure img0010
[0057] Numa outra modalidade, o composto da Fórmula (I) tem a seguinte estrutura
Figure img0011
[0058] Noutra modalidade da divulgação, o composto da Fórmula (I) é um composto da Fórmula (I .A)
Figure img0012
em que R 6, R7 e Rs são independentemente ou simultaneamente selecionados a partir de H, halo, OH, (C1-C6) -alquilo, (C1-C6) -alcoxi, Halo- substituído- (C1-C4) -alquilo, - (Ciclopropil) -CF3, -NO2, CN, -SO3R 'e - COOR', em que R 'é H ou (C1-C4) -alquilo; R9 e R10 são, de forma independente ou simultaneamente, selecionados de um a cinco de halo, OH, (C1-C6) -alquilo, (C1-C6) -alcóxi, halo-substituído- (C1-C4) -alquilo, - {ciclopropil) -CF3, -NO2, CN, -SO3R 'e - COOR', em que R 'é H ou (C1-C4) -alquil; X é -COOR", -P(O)(OR")2, tetrazol, -C(=O)NR"-OH, ou -CF2OH, em que R" é H, (C1-C4)-alquil ou -CH2-(C6-C10)aril; ou um seu sal, solvato, pró-fármaco e/ou um seu estereoisômero farmaceuticamente aceitável.
[0059] Noutra modalidade da divulgação, R6, R7 e R8 são, independentemente ou simultaneamente, selecionados a partir de H, halo, CN, (C1-C6) -alquilo, halo-substituído- (C1-C4) -alquilo e (C1-C6) -alcóxi. Noutra modalidade da divulgação, R6, R7 e R8 são, independentemente ou simultaneamente, selecionado a partir de H, halo, CN, CF3, (C1-C6) -alquilo e (C1-C6) -alcóxi. Em outra modalidade, R6, R7 e R8 são, independentemente ou simultaneamente, selecionados de entre H, fluoro, cloro, bromo, CN, CF3, (C1-C4) -alquilo ou (C1-C4) -alcóxi. Numa modalidade, R6, R7 e R8 são, independentemente ou simultaneamente, selecionado a partir de H, CN, -CF3, -CH3, F, isopropilo e t-butilo. Numa outra modalidade, R6 e R8 são, independentemente ou simultaneamente, selecionados a partir de H, CN, -CF3,(C1-C4) alquilo (tal como -CH3, Isopropilo ou t-butilo). Numa modalidade, e R6 e R8 são t-butilo e R7 é H.
[0060] Numa modalidade, R9 e R10 são, de forma independente ou simultaneamente, selecionados de um a cinco de halo, OH, (C1-C6) -alquilo, (C1-C6) alcóxi ou halo-substituído- (C1-C4)-alquilo. Numa modalidade, R9 e R10 são, independentemente ou simultaneamente, selecionados a partir de um a cinco dos Cl, F, Br, OH ou (C1-C6) -alquilo. Numa modalidade, Rg é Cl na para-posição. Numa outra modalidade, R10 é cinco átomos de flúor. Numa outra modalidade, R10 é quatro átomos de flúor na orto- e meta- posições. Numa outra modalidade, R10 é três grupos metilo na orto-posição e para-posição.
[0061] Numa modalidade, X é -COOR ", em que R" é H, (C1-C4) - alquilo ou -CH2- (C6-C10)aril. Numa modalidade, X é -COOH, -COO (t-butilo) ou -COO-benzilo. Em outra modalidade, X é -COOH.
COMPOSIÇÕES
[0062] A presente divulgação também inclui composições farmacêuticas que compreendem um composto da Fórmula (A), (I) e (I.A), tal como definido acima (os compostos da divulgação), ou seus sais, solvatos e pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis e um tranportador ou diluente farmaceuticamente aceitável. Os compostos são adequadamente formulados em composições farmacêuticas para a administração a indivíduos, de preferência seres humanos numa forma biologicamente compatível, adequada para administração in vivo.
[0063] As composições que contêm os compostos da divulgação podem ser preparadas através de métodos conhecidos para a preparação de composições farmaceuticamente aceitáveis que podem ser administradas a indivíduos, de tal modo que uma quantidade eficaz da substância ativa é combinada numa mistura com um veículo farmaceuticamente aceitável. Os veículos adequados são descritos, por exemplo, em Pharmaceutical Sciences de Remington (2003 - 20a Edição) e em The United States Pharmacopeia: The National Formulary (USP 24 NF19), publicado em 1999. Nesta base, as composições incluem, embora não exclusivamente, as soluções das substâncias em associação com um ou mais veículos ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis e contido em soluções tamponadas com um pH adequado e iso-osmótico com os fluidos fisiológicos.
[0064] Os compostos da divulgação podem ser utilizados farmaceuticamente, na forma da base livre, sob a forma de sais, solvatos e como hidratos. Todas as formas estão dentro do âmbito da divulgação. Sais de adição básicos e ácidos podem ser formados com os compostos da divulgação para uso como fontes da forma de base livre mesmo se o sal particular per se for desejado apenas como um produto intermediário como, por exemplo, quando o sal é formado apenas para fins de purificação e identificação. Todos os sais que podem ser formados com os compostos da divulgação estão, por conseguinte, dentro do âmbito da presente revelação.
MÉTODOS DE TRATAMENTOS MÉDICOS E USOS
[0065] Os compostos da presente divulgação, incluindo compostos da Fórmula (A), (I) e (I.A) são inibidores da proteína STAT5. Numa modalidade, os compostos da divulgação são inibidores seletivos de STAT5 em relação à sua atividade contra STAT5 e STAT3. Numa modalidade, os compostos da divulgação têm valores de KD de menos de 200nM, opcionalmente menos que 150 nM, opcionalmente menos de 100 nM ou, opcionalmente, menos do que 50 nM.
[0066] Consequentemente, em uma modalidade da divulgação, está incluído um método de tratamento ou prevenção de uma doença ou condição mediada por transdutor de sinal e ativador de transcrição de proteína 5 (STAT5), que compreende a administração de uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um composto da divulgação a um sujeito em necessidade do mesmo. Numa modalidade, a doença ou condição mediada por STAT5 é uma doença ou condição em que a inibição da proteína STAT5 seria benéfica. Numa modalidade, a doença ou condição é uma doença maligna hematopoiética, condição da pele, câncer de pele não- melanoma, câncer da próstata ou inflamação, compreendendo a administração de uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um composto da divulgação a um sujeito em necessidade do mesmo. Numa modalidade, a malignidade hematopoiética é a leucemia. Numa outra modalidade, a leucemia é leucemia aguda, leucemia crônica, leucemia linfocítica ou leucemia mielóide. Noutra modalidade, a condição da pele é a psoríase ou dermatite.
[0067] Numa outra modalidade, os compostos da divulgação são úteis para inibir o transdutor de sinal e ativador de transcrição de proteína 5 (STAT5). Numa outra modalidade, os compostos da divulgação são úteis para a preparação de um medicamento para inibir o transdutor de sinal e ativador da transcrição de proteína 5 (STAT5). Em um aspecto da divulgação, os compostos da divulgação são úteis para o tratamento ou prevenção de doenças malignas hematopoiéticas, doenças da pele, câncer de pele não-melanoma, câncer da próstata ou inflamação. Numa modalidade, a malignidade hematopoiética é a leucemia. Numa outra modalidade, a leucemia é leucemia aguda, leucemia crônica, leucemia linfocítica ou leucemia mielóide. Noutra modalidade, a condição da pele é a psoríase ou dermatite.
[0068] Numa outra modalidade, os compostos da divulgação são úteis como sondas para investigar a função de STAT5 em várias células doentes. Numa modalidade, os compostos da invenção inibem especificamente STAT5 e, por conseguinte, os compostos são usados como sondas para determinar se STAT5 está envolvida numa doença ou condição.
[0069] Embora a descrição seja descrita em conjunção com modalidades específicas da mesma, é evidente que muitas alternativas, modificações e variações serão evidentes aos versados na técnica. Por conseguinte, pretende-se abranger todas essas alternativas, modificações e variações que se enquadrem no amplo espírito e escopo das reivindicações anexas. Além disso, a citação ou identificação de qualquer referência no presente peido não deverá ser interpretada como uma admissão de que essa referência está disponível como estado da técncia à presente divulgação.
[0070] A operação da divulgação é ilustrada pelos seguintes exemplos representativos. Como é evidente para aqueles versados na técnica, muitos dos pormenores dos exemplos podem ser alterados e ainda assim praticar-se a divulgação descrita neste documento.
EXEMPLOS
[0071] Protocolos Experimentais
[0072] Exemplo 1. Métodos Químicos
[0073] Metanol solvente de anidro, DMSO, CH2CI2, THF e DMF foram adquiridos a partir de Sigma Aldrich e usados diretamente a partir das garrafas Sure-Seal. As peneiras moleculares foram ativadas por aquecimento a 300°C sob vácuo durante a noite. Todas as reações foram realizadas sob uma atmosfera de nitrogênio seco em material de vidro seco no forno e foram monitoradas para a integralidade por cromatografia em camada fina (TLC) utilizando gel de sílica (visualizado por luz UV, ou desenvolvidos por tratamento com mancha de KMnO4 ). Os espectros de NMR foram registrados no espectrômetro Bruker Avance III a 23°C que funcionam a 400 MHz para 1H NMR e a 100 MHz 13C espectroscopia de NMR em CDCI3, CD3OD ou d6-DMSO. Os desvios químicos (d) são relatados em partes por milhão (ppm), após a calibração para solvente isotópico residual. As constantes de acoplamento (J) são relatadas em Hz. A espectrometria de massa foi realizada com um espectrômetro de massa de AB/Sciex QStar com uma fonte de ESI, MS/MS e capacidades de massa precisas, associado a um sistema Agilent 1100 capillary LC. Antes do ensaio biológico, a pureza do inibidor foi avaliada por HPLC de fase inversa (rpHPLC). Análise por rpHPLC foi realizada utilizando uma colunaPhenomenex Luna 5u C18 150 mm x 4.6 mm operada a 1,2 mL/min e utilizando misturas de gradiente. O gradiente linear consistiu de uma composição de solvente mutável de (I) 15% de MeCN e 85% H2O com 0,1% de TFA (v/v) a 100% de MeCN durante 30 minutos, e (II) 15% de MeCN e 85% H2O com 0,1% de TFA (v / v) a 100% de MeCN durante 60 minutos, detecção de UV a 250 nm. Para relatar dados de HPLC, percentagem de pureza é dada entre parênteses após o tempo de retenção para cada condição. Todos os compostos biologicamente avaliados são > 95% de pureza química, como medido por HPLC. Os rastreamentos de HPLC para todos os compostos testados são proporcionados na informação de apoio.
[0074] Os compostos da divulgação foram sintetizados da seguinte forma geral, como mostrado no Esquema 1.
Figure img0013
Esquema 1 : a) i) KtOBu, BnBr, DMF, 0°C>RT., 1h; então KtOBu, BnBr, DMF, 0°C> RT, 16h, 47%; b) 1 ) Aldeído, AcOH, 3Â Peneiras moleculares, CH3OH, 45°C, 2h; 2) NaCNBH3, 45°C, 16h, 36-96 %; c) Aldeído, Peneiras moleculares 3Â, CH2CI2, NaOAc, Na(OAc)3BH, RT, 16h, 88%; d) (CH3)3CSO2CI ou C5F5SO2CI, K2CO3, CH3CN, 16h, 0°C>RT, 6077%; e) 1 ) p-CI(C6H6)BnBr, Cs2CO3, DMF, R.T., N2, 2h, 70%; f) CH2CI2:TFA 1 :1 , RT, h, 90%; g) PPh3CI2, CHCI3, 30 min, 100°C aquecimento auxiliado por micro-ondas, 20-98%; h) H2, Pd/C, 1 :1 THF/CH3OH, 3-1 Oh, RT, 35-95%. DMF = N,N -dimetilformamida, TFA = ácido trifluoroacético
[0075] Procedimento Geral a (Dibenzilação de ácido salicílico). A uma solução agitada de 4-amino-ácido salicílico (1,0 eq) em DMF (0,1 M) a 0 °C foi adicionado KOtBu (1,2 eq). Após 15 min, brometo de benzil (1,2 eq) foi adicionado gota a gota. A suspensão foi deixada a agitar à temperatura ambiente durante mais 4 h antes que o recipiente de reação fosse novamente arrefecido a 0 ° C. Mais uma vez, KOtBu (1,2 eq) foi adicionado anterior à adição gota a gota de brometo de benzil (1,2 eq). A reação foi deixada a agitar durante a noite antes de ser desativada com H2O. A solução foi então extraída várias vezes com acetato de etil e as fases orgânicas combinadas. Os orgânicos foram então lavados com H2O e salmoura e depois concentrados, secos em Na2SO4 e concentrados in vácuo. O resíduo resultante foi purificado utilizando o cromatógrafo em coluna automatizada Biotage Isolera com uma mistura gradiente de 4:1 Hexano/EtOAc sob pressão reduzida.
[0076] Procedimento Geral b (aminação reduzia utilizando cianoborohidreto de sódio). A uma solução de 4-amino ácido salicílico 5 protegida por benzil (1,0 eq) e ácido acético (1,5 eq) agitada em CH3OH (0,1 M) anidro com 3 Â peneira mol. foi adicionado o aldeído (1,0 eq). A solução foi aquecida a 45 ° C durante 3 hr e, em seguida, deixada arrefecer até a temperatura ambiente. Em seguida, NaCNBH3 (1,3 equiv) foiadicionado em porções e a reação foi deixada a agitar à temperatura ambiente durante a noite. A reação foi diluída com CH2CI2, filtrada e concentrada in vácuo. O concentrado foi purificado utilizando o cromatógrafo em coluna automatizada Biotage Isolera utilizando um gradiente de hexanos/EtOAc.
[0077] Procedimento Geral c (aminação redutora utilizando triacetoxiborohidreto de sódio). A uma solução de 4-amino ácido salicílico 5 protegida por benzil (1,2 eq) e ácido acético (1,2 eq) agitada em dicloroetano de anidro (0,1 M) com 3 Â de peneiras mol. foi adicionado o aldeído (1,0 eq). A solução foi então agitada à temperatura ambiente durante 5 min, após a qual o Na(OAc)3BH (1,5 eq) foi adicionado e deixado a agitar à temperatura ambiente durante a noite. A reação foi diluída com CH2CI2, filtrada e concentrada in vácuo. O concentrado foi purificado utilizando o cromatógrafo em coluna automatizada Biotage Isolera utilizando um gradiente de hexanos/EtOAc.
[0078] Procedimento Geral d (sulfonilação de glicina e éster t-butílico sarcosina). Uma solução de éster de t-butil de amino ácido (1 eq) e K2CO3 (1,1 eq) foram dissolvidos em acetonitril anidro e arrefecidos até 0 °C antes de cloreto de sulfonil (1 eq) ser adicionado.A solução resultante foi deixada a agitar durante a noite à temperatura ambiente. A reação foi concentrada in vácuo e o resíduo foi dissolvido em CH2CI2. Os orgânicos foram combinados e, em seguida, lavados sequencialmente com 0,1 M de HCl, NaHCO3 saturado e salmoura. Os orgânicos foram então secos em Na2SO4 e concentrados in vácuo para resultar em derivados 7 & 8 sem purificação adicional.
[0079] Procedimento Geral e (alquilação de sulfonamida). Uma solução de 8 (1 eq) e CS2CO3 (1,3 eq) foi dissolvida em DMF anidro, seguido de adição de p-CIBnBr (1 eq). A solução resultante foi deixada a agitar durante 2 h à temperatura ambiente, a reação foi extinta com H 2 O e, em seguida, extraída repetidamente com acetato de etil. As fases orgânicas foram combinadas e lavadas com H2O, salmoura, secas em Na2SO4 e concentradas in vácuo. O resíduo resultante foi purificado utilizando o cromatógrafo em coluna automatizada Biotage Isolera com uma mistura gradiente de 2:1 Hexano/EtOAc sob pressão reduzida.
[0080] Procedimento Geral f (desproteção de t-butil éster). Uma solução de éster de t-butil de amino ácido (1 eq) foi dissolvida em TFA e diluída com CH2Cl2 em uma mistura de 1: 1 (0,1 M) de solução. A solução resultante foi deixada a agitar durante 1 h e, em seguida, co-evaporada com CH3OH (3x) e CHCI3 (3x). O resíduo resultante foi levado adiante sem purificação.
[0081] Procedimento Geral g (acoplamento peptídico de PPh3Cl2). A uma solução agitada de ácido carboxílico 10 (1,1 eq) em CHCI3 (0,1 M) adicionou-se PPh3CI2 (2,5 eq). A reação foi deixada a agitar durante 5 minutos à temperatura ambiente ou até dissolução completa, seguida pela adição gota a gota da anilina secundária 6 (1,0 eq). A mistura de reação foi depois aquecida em um microondas a 100 °C durante 30 min. A mistura de reação foi deixada arrefecer até à temperatura ambiente., seguida por lavagem sequencial com NaHCO3 saturado e salmoura. As camadas orgânicas foram depois secas em Na2SO4 e concentradas in vácuo. O concentrado foi absorvido diretamente em sílica para purificação de cromatografia em coluna utilizando um gradiente de hexanos e EtOAc.
[0082] Procedimento Geral h (hidrogenólise do éster de benzil e éter benzílico). O ácido salicílico protegido por benzil, 11 (1 eq) foi dissolvido em uma solução agitada de CH3OH/THF (1: 2, 0,1 M). A solução foi exaustivamente desgaseificada antes da adição cuidadosa de 10% de Pd /C (10 mg / mmol). O gás H2 foi borbulhado através do solvente durante 5 minutos antes que a solução fosse colocada sob uma atmosfera de gás H2 e agitada continuamente durante 2-5h, monitorando a conclusão da reação através de TLC. O gás H2 foi evacuado e a reação foi filtrada através de celite para remover o catalisador de Pd e concentrado in vácuo. O resíduo resultante foi adsorvido em sílica e colocado numa coluna utilizando uma coluna Biotage Isolera em um gradiente de CH2CI2, CH3OH e 1% de ácido acético.
[0083] Dados de Caracterização Intermediários
Figure img0014
[0084] Benzil 4-amino-2-(benziloxi) -benzoato de metilo (3). O composto 3 foi sintetizado de acordo com o processo geral a, obtendo-se o produto final como laranja solid (47%): δH (400 MHz, d-CDCI3) 5.07 (s, 2H, CH2), 5.21 (s, 2H, CH2), 5.99 (br s, 2H, NH2), 6.18 (dd, J = 8.6 e 1.8 Hz, 1 H, CH)), 6.32 (d, J = 1.7 Hz, 1 H, CH), 7.28-7.38 (8H, m, CH), 7.47 (d, J = 7.2 Hz, 2H, CH), 7.60 (d, J = 8.6 Hz, 1 H, CH); δC(400 MHz, CDCI3) 65.8, 70.2, 99.1 , 106.7, 109.0, 126.8, 127.5, 127.7, 127.9, 128.3, 128.4, 134.3, 136.6, 136.7, 152.2, 160.7, 165.7; LRMS (ES+) calculado para [C21H9NO3 + H] 333,18, encontrou-se 334,2.
Figure img0015
[0085] Benzil 2- (benziloxi) -4 - ((furan-2-ilmetil) amino) benzoato de metilo. Derivado 4 sintetizado através de furano-2-carbaldeído em 1.5Escala de mmol utilizando procedimento geral b (74%): δH (400 MHz, d- CDCI3) 4.36 (d, J = 5.4 Hz, 2H, CH2), 4.54 (br s, 1 H, NH), 5.12 (s, 2H, CH2), 5.31 (s, 2H, CH2), 6.19 (d, J = 3.4 Hz, 1 H, CH), 6.21 (d, J = 2.0 Hz, 1 H, CH), 6.24 (dd, J = 8.6 e 2.0 Hz, 1 H, CH), 6.31 (q, J = 3.0, 1 .8, e 4.6 Hz, 1 H, CH) 7.26 - 7.50 (m, 1 1 H, 1 1 CH), 7.84 (d, J = 8.6 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3) 40.6, 65.7, 70.4, 97.5, 104.9, 107.2, 108.9, 1 10.3, 126.8, 127.5, 127.6, 127.9, 128.2, 128.4, 134.2, 136.6, 136.7, 142.0, 151.4, 152.2, 160.7, 165.5 LRMS (ES+) Calculado para [C26H23NO4 + H] 413,16 encontrou-se 414,2.
Figure img0016
[0086] Benzil 2- (benzilóxi)-4-((tiofen-2-ilmetil) amino) benzoato.Derivado de 4 sintetizados através de tiofeno-2-carbaldeído numa escala 1,5 mmol utilizando o Procedimento Geral b (73%): δH (400 MHz, d- CDCI3) 4.50 (s, 2H, CH2), 4.54 (br s, 1 H, NH), 5.10 (s, 2H, CH2), 5.31 (s, 2H, CH2), 6.20 (d, J = 2.0 Hz, 1 H, CH), 6.25 (dd, J = 8.6 e 2.0 Hz, 1 H, CH), 6.97 (br, 2H, CH), 7.23 (dd, J = 1.3, 4.8 Hz, 1 H, CH), 7.27 - 7.58 (m, 10H, 10 CH), 7.84 (d, J = 8.6 Hz, 1 H, CH); δC(100 MHz, d-CDCI3) 51.6, 65.4, 70.6, 96.5, 104.9, 109.5, 125.6, 126.2, 127.0, 127.1 , 127.6, 128.8, 136.5, 140.3, 152.5, 161.3, 168.8 LRMS (ES+) Calculado para [C26H23NO3S + H] 429,14 encontrada 430,2.
Figure img0017
[0087] Benzil-2- (benziloxi)-(((1-metil-H-imidazol-2-il) metil) amino) benzoato. Derivado 4 sintetizados através de 1-metil-1H-imidazol-2- carbaldeído numa escala 1,5 mmol utilizando o Procedimento Geral b (43%): δH (400 MHz, d-CDCI3) 3.53 (s, 3H, CH3), 4.27(d, J = 5.4 Hz, 2H, CH2), 5.08 (s, 2H, CH2), 5.21 (br, 1 H, NH), 5.31 (s, 2H, CH2), 6.24 (dd, J = 8.6, 2.0 Hz, 1 H, CH), 6.30(d, J = 2.0 Hz, 1 H, CH), 6.81 (s, 1 H, CH), 6.96 (s, 1 H, CH), 7.23 - 7.51 (m, 10H, 10 CH), 7.84 (d, J = 8.6 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, cf-CDCI3)14.1 , 20.9, 29.6, 32.4, 40.1 , 60.2, 65.7, 70.3, 97.6, 104.7, 108.6, 121.6, 126.9, 127.1 , 127.5,127.9, 128.2, 134.2, 136.7, 144.0, 152.5, 160.7, 165.7 LRMS (ES+) Calculado para [C26H25N3O3 +H] 427,19 encontrado 428,21.
Figure img0018
[0088] Benzil 2-(benziloxi)-4 - ((ciclopropilmetil) amino) benzoato.Derivado de 4 sintetizados através ciclopropanecarbaldeído numa escala 1,5 mmol utilizando o Procedimento Geral b (66%): δH (400 MHz, d- CDCI3) 0.25 (dd, J = 5.3 e 10.0 Hz, 2H, CH2), 0.56 (dd, J = 5.7, 13.0 Hz, 2H, CH2), 1.05 (br, 1 H, CH), 2.97 (s, 2H, CH2), 4.40 (br, 1 H, NH), 5.13 (s, 2H, CH2), 5.33 (s, 2H, CH2), 6.15 (d, J = 2.0 Hz, 1 H, CH), 6.19 (dd, J = 8.6, 2.0 Hz, 1 H, CH), 7.27 - 7.58 (m, 10H, 10 CH), 7.84 (d, J = 8.6 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3) 3.4, 10.4, 14.1 , 48.2, 60.3, 65.7, 70.3, 96.9, 104.6, 107.9, 126.8, 127.4, 127.6, 127.9, 128.2, 128.3, 134.3, 136.7, 136.8, 153.1 , 160.9, 165.7 LRMS (ES+) Calculado para [C25H25NO3 + H] 387,18 encontrado 388,20.
Figure img0019
[0089] Benzil-2- (benziloxi)-4-((biciclo [2.2.1] hept-5-en-2-ilmetil) amino) benzoato. Derivado 4 sintetizados através biciclo [2.2.1] hept-5-eno- 2-carbaldeído numa escala de 1,5 mmol via Procedimento Geral b (36%): δH (400 MHz, d-CDCI3) 0.58-0.73 (m, 1 H, CH2), 1.25-1.46 (m, 2H, CH2) 1.47-1.60 (m, 1 H, CH2), 1.85-2.03 (m, 1 H, CH), 2.31 (br, 1 H, CH), 2.79 (br, 1 H, CH), 2.84-2.98 (m, 2H, CH2) 4.38 (br, 1 H, NH), 5.14 (s, 2H, CH2), 5.35 (s, 2H, CH2), 5.94-6.00 (m, 1 H, CH), 6.20-6.27 (m, 1 H, CH), 6.15 (d, J = 2.0 Hz, 1 H, CH), 6.19 (dd, J = 8.6, 2.0 Hz, 1 H, CH), 7.27 - 7.50 (m, 1011, 10 CH), 7.84 (d, J = 8.6 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, cf-CDCI3) 30.2, 38.4, 42.3, 44.2, 47.4, 49.5, 65.7, 70.3, 96.9, 104.6, 107.6, 126.9, 127.5, 127.6, 127.9, 128.3, 128.4, 131.8, 134.2, 136.1 , 136.7, 136.8, 137.8, 153.2, 160.9, 165.8 LRMS (ES+) calculada para [C29H29NO3+ H] 439,21 encontrado 440,21.
Figure img0020
[0090] Benzil 2- (benziloxi) -4- (4-terc-butilbenzil) amino) benzoato. Derivado 4 sintetizados através de 4-terc-butilbenzaldeído numa escala 0,9 mmol utilizando o modo geral procedure b (96%): δH (400 MHz, d-CDCI3) 1.19 (s, 9H, 3 CH3), 4.13 (s, 2H, CH2), 4.40 (br s, 1 H, NH), 4.92 (s, 2H, CH2), 5.17 (s, 2H, CH2), 6.02 (d, J = 2.0 Hz, 1 H, CH), 6.06 (dd, J = 8.6, 2.0 Hz, 1 H, CH), 7.08 - 7.32 (m, 14H, 14 CH), 7.71 (d, J = 8.6 Hz, 1 H, CH); δc (100 MHz, d-CDCI3) 31.0, 34.2, 47.0, 65.5, 70.1 , 96.9, 104.6, 107.9, 125.3, 126.7, 126.9, 127.3, 127.4, 127.7, 128.1 , 128.2, 134.1 , 134.9, 136.5, 136.6, 150.2, 152.8, 160.6, 165.5; LRMS (ES+) Calculado para [C32H33NO3 + H] 480,25 encontrado 481,26.
Figure img0021
[0091] Benzil 2- (benziloxi) -4- (naftalen-2-ilmetilamino) benzoato. Derivado 4 sintetizado via 2-naftaldeído numa escala 0,9 mmol utilizando o Procedimento Geral c (88 %): δH (400 MHz, d-CDCI3) 4.35 (s, 2H, NH2CH2), 4.52 (br s, 1 H, NH), 4.92 (s, 2H, CH2), 5.19 (s, 2H, CH2), 6.70 (d, J = 2.0 Hz, 1 H, CH), 6.12 (dd, J = 8.6, 2.0 Hz, 1 H, CH), 7.11 -7.22 (m, 6H, CH), 7.25 - 7.30 (m, 4H, 4 CH), 7.34 - 7.39 (m, 2H, 2 CH), 7.61 - 7.75 (m, 5H, 5 CH); δC (100 MHz, d-CDCI3) 47.1 , 65.2, 69.7, 96.7, 104.4, 107.9, 124.7, 125.2, 125.3, 125.7, 126.2, 126.9, 127.0, 127.1 , 127.3, 127.7, 127.8, 127.9, 132.1 , 132.7, 133.7, 135.1 , 136.1 , 152.3, 160.3, 165.1 ; LRMS (ES+) Calculado para [C32H27NO3 + H] 474,21, encontrou-se 475,21.
Figure img0022
[0092] Benzil 2- (benzilóxi) -4- (3,5-di-ierf-butilbenzil) amino) benzoato. Derivado de 4 sintetizados através de 3,5-di-terc-butilbenzaldeído numa escala de 0,9 mmol, utilizando o processo geral b (60%): δH (400 MHz, d-CDCI3) 1.34 (s, 18H, 6 CH3), 4.30 (s, 2H, CH2), 4.40 (br s, 1 H, NH), 5.11 (s, 2H, CH2), 5.32 (s, 2H, CH2), 6.22 (d, J = 2.0 Hz, 1 H, CH), 6.26 (dd, J = 8.6 e 2.0 Hz, 1 H, CH), 7.15 - 7.53 (m, 13H, 13 CH), 7.87 (d, J = 8.6 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3) 31.0, 34.2, 47.0, 65.5, 70.1 , 96.9, 104.6, 107.9, 121.8, 122.4, 125.3, 126.7, 126.9, 127.3, 127.4, 127.7, 128.1 , 128.2, 134.1 , 134.9, 136.5, 136.6, 150.2, 152.8, 160.6, 165.5; LRMS (ES+) Calculada para [C36H41 NO3 + H] 535,31 encontrado 536,30.
Figure img0023
[0093] Benzil 2- (benziloxi) -4 - ((4-fluorobenzil) amino) benzoato. Derivado 4 sintetizados através de 4-fluorobenzaldeído numa escala de 0,4 mmol, utilizando o processo geral b (45%): δH (400 MHz, d-CDCI3) 4.30 (s, 2H, CH2), 4.50 (br s, 1 H, NH), 5.07 (s, 2H, CH2), 5.30 (s, 2H, CH2), 6.14 (d, J = 2.0 Hz, 1 H, CH), 6.20 (dd, J = 8.6 e 2.0 Hz, 1 H, CH), 6.96-7.08 (m, 2H, CH), 7.22 - 7.40 (m, 10H, 10 CH), 7.40-7.45 (m, 2H, CH), 7.87 (d, J = 8.6 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3) 46.9, 65.7, 70.3, 97.3, 104.8, 1 15.3, 1 15.6, 126.7, 127.5, 127.6, 127.8, 128.2, 128.3, 128.7, 128.8, 133.7, 134.2, 136.6, 152.4, 160.7, 160.8, 165.5; LRMS (ES+) Calculado para [C28H24FNO3 + H] 441,17 encontrado 442,20.
Figure img0024
[0094] Benzil 2- (benziloxi) -4 - (((perfluorfenil) metil) amino) benzoato. Derivado 4 sintetizados através de 2,3,4,5,6-pentafluorobenzaldeído numa escala de 0,4 mmol, utilizando o processo geral b (36%): δH (400 MHz, d-CDCI3) 4.45 (s, 2H, CH2), 4.75 (br s, 1 H, NH), 5.09 (s, 2H, CH2), 5.27 (s, 2H, CH2), 6.21 (d, J = 2.0 Hz, 1 H, CH), 6.22 (dd, J = 8.6, 2.0 Hz, 1 H, CH), 7.21-7.50 (m, 10H, 10 CH), 7.80 (d, J - 8.6 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, tf-CDCI3) 13.9, 20.8, 35.0, 60.2, 65.8, 70.1 , 97.0, 104.7, 109.4, 126.7, 127.5, 127.6, 127.8, 128.2, 128.3, 134.3, 136.4, 136.5, 151.3, 160.7, 165.4, 171.0; LRMS (ES+) Calculado para [C28H20F5NO3 + H] 513,14 encontrado 514,20.
Figure img0025
[0095] Benzil 4- (benzilamino) -2- (benziloxi) -benzoato. Derivado 4 sintetizados através de benzaldeído numa escala de 1,2 mmol via Procedimento Geral A (210 mg, 40%): δH (400 MHz, d-CDCI3) 4.21 (s, 2H, CH2), 4.95 (s, 2H, CH2), 5.20 (s, 2H, CH2), 6.03 (d, J - 2.0 Hz, 1 H, CH), 6.09 (dd, J = 8.6, 2.1 Hz, 1 H, CH), 7.15 - 7.34 (m, 15H, CH), 7.73 (d, J = 8.6 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3) 47.5, 66.7, 70.3, 97.2, 104.8, 108.3, 126.8, 127.2, 127.4, 127.5, 127.6, 127.9, 128.2, 128.3, 128.6, 134.2, 136.6, 136.7, 138.1 , 152.8, 160.8, 165.6; LRMS (ES+) calculado para [C28H25NO3 + H] 424,19 encontrado 425,22.
Figure img0026
[0096] Terc-butil 2- (N, 2, 4, 6-tetrametilfenilsulfonamido) acetato. Derivado 5 sintetizado utilizando o Procedimento Geral d (77 %): δH (400 MHz, CDCI3) 1.37 (s, 9H, CH3) 2.30 (s, 3H, CH3), 2.61 (s, 6H, CH3) 2.82 (s, 3H, CH3), 3.99 (s, 2H, CH2), 6.95 (s, 2H, CH); δC (400 MHz, CDCI3) 21.0, 22.9, 27.5, 35.1, 51.6, 130.6, 137.4, 141.3, 145.5, 70.2; LRMS (ES+) calculado para [C16H25NO4S + H] 285,10, encontrado 286,22.
Figure img0027
[0097] 2-(N,2,4,6-tetrametillfenilsulfonamido)ácido acético. Derivado 6 foi sintetizado através do procedimento geral f (95%): δH (400 MHz, CDCI3) 2.32 (s, 3H, CH3), 2.61 (s, 6H, CH3), 2.82 (s, 3H, CH3), 3.99 (s, 2H, CH2), 6.95 (s, 2H, CH); δC (400 MHz, CDCI3) 21.0, 22.9, 35.1, 51.6, 130.6, 137.4, 141.3, 145.5, 170.2; LRMS (ES+) calculado para [C12H17NO04S H] 271,09, encontrou-se 272,28.
Figure img0028
[0098] Terc-butil 2-(2,3,4,5,6-pentafluoro-N- metilfenilsulfonamido)acetato. Derivado 5 foi sintetizado utilizando o processo geral d (90%): δH (400 MHz, CDCI3) 1.37 (s, 9H, CH3) 3.03 (s, 3H, CH3), 4.10 (S, 2H, CH2); δc (400 MHz, CDCI3) 27.5, 35.1, 51.6, 82.8, 1 15.6, 136.5, 144.8, 145.9, 167.0; LRMS (ES+) calculado para [C13H14F5NO4S + H] 376,06, encontrado 377,09.
Figure img0029
[0099] 2- (2,3,4,5,6-pentafluoro-N-metilfenilsulfonamido)ácido acético. Derivado 6 foi sintetizado utilizando o processo geral f (97%): δH (400 MHz, CDCI3) 2.86 (s, 3H, CH3), 4.10 (s, 2H, CH2); δC (400 MHz, CDCI3) 35.5, 51.6, 115.6, 136.5, 144.8, 145.9, 167.0; LRMS (ES+) calculado para [C9H6F5NO4S + H] 320,00, encontrou-se 321,05.
Figure img0030
[00100] Benzil-2- (benzilóxi) -4- (N - ((1-metil-1H-imidazol-2-il) metil) - 2 - (N, 2,4,6-tetrametillfenilsulfonamido)acetamido)benzoato . Anilina secundária 4 foi acoplado a um derivado de mesitil de 6 numa escala de 0,16 mmol através de processo geral g (60%): δH (400 MHz, d-CDCI3) 2.32 (s, 3H, CH3), 2.62, (s, 6H, 2CH3), 2.90 (s, 3H, CH3), 3.39 (d, J = 3.1 Hz, 3H, CH3) 3.44- 3.59 (m, 2H, CH2), 3.92, (s, 2H, CH2), 5.18 (s, 2H, CH2), 5.33 (s, 2H, CH2), 6.93 (dd, J = 8.6 e 2.1 Hz, 1 H, CH), 7.00 (s, 2H, CH), 7.27 -7.55 (m, 11 H, CH), 7.68 (d, J = 2.0 Hz, 1 H, CH), 7.89 (d, J = 8.6 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3) 21.6, 22.5, 33.4, 35.6, 48.1 , 49.3, 65.6, 70.7, 104.5, 113.8, 116.2, 120.2, 126.8, 127.1 , 127.6, 128.8, 130.4, 131.1 , 136.3,136.7, 137.2, 141.3, 145.2, 147.0, 152.3, 161.3, 166.5, 168.3; LRMS (ES+) Calculado para [C38H40N4O6S + H] 680,27 encontrou-se 681,28.
Figure img0031
[00101] Benzil-2- (benziloxi) -4- (N- (furan-2-ilmetil) -2- (A, 2,4,6 tetrametilfenilsulfonamido) acetamido) benzoato. Anilina secundária 4 foi acoplada a um derivado de mesitil 6 numa escala de 1,0 mmol via Procedimento Geral g (30%): δH (400 MHz, d-CDCI3) 2.27 (s, 3H, CH3), 2.54, (s, 6H, 2CH3), 2.77 (s, 3H, CH3), 3.67 (s, 2H,CH2), 4.77 (s, 2H, CH2), 5.06 (s, 2H, CH2), 5.36 (s, 2H, CH2), 6.08 (d, J = 2.0 Hz, 1 H, CH), 6.25 (dd, J = 8.6 e 2.1 Hz, 1 H, CH), 6.60 (m, 2H, CH), 6.92 (s, 2H, CH), 7.27 -7.49 (m, 1 1 H, CH), 7.84 (d, J = 8.6 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3) 20.8, 22.7, 34.6, 66.9, 70.7, 109.4, 110.4, 1 13.6, 1 19.8, 126.9, 128.0, 128.1 ,128.1 , 128.4, 128.5, 131 .7, 133.1 , 135.6, 135.7, 140.4, 142.1 , 142.4,149.7, 158.8, 165.2, 166.7; LRMS (ES+) Calculado para [C38H38N2O7S + H] 666,24, encontrou-se 667,24.
Figure img0032
[00102] Benzil 2-(benzilóxi)-4-(2-(N-2,4,6-tetrametilfenilsulfonamido)- N-(tiofen-2-ilmetil) acetamido) benzoato. Anilina secundária 4 foi acoplada a um derivado de v 6 numa escala de 0,9 mmol via Procedimento geral G (24%): δH (400 MHz, d-CDCI3) 2.28 (s, 3H, CH3), 2.56, (s, 6H, 2CH3), 2.78 (s, 3H, CH3), 3.67 (s, 2H, CH2), 4.90 (s, 2H, CH2), 5.03 (s, 2H, CH2), 5.36 (s, 2H, CH2), 6.50-6.63 (m, 2H, 2CH), 6.72 (d, J = 3.1 Hz, 1 H, CH), 6.86 (m, 1 H, CH), 6.91 (s, 2H, CH), 7.21(d, 1 H, CH), 7.29 - 7.43 (m, 10H, CH), 7.84 (d, J = 8.6 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3) 20.8, 22.7, 29.6, 34.6, 47.5, 49.4, 66.9, 70.7, 113.7, 119.8, 121.0, 125.0, 126.4, 126.9, 127.7, 128.1 , 128.4, 128.6, 131.8, 133.2, 135.6, 138.6, 140.5, 142.4, 144.5, 158.8, 165.2, 166.6; LRMS (ES+) Calculado para {C38H38N2O6S2 + H] 682,22, encontrou- se 683,18.
Figure img0033
[00103] Benzil-2- (benziloxi) -4- (N-(ciclopropilmetil) -2-N(2,4,6- tetrametilfenilsulfonamido) acetamido) benzoato. Anilina secundária 4 foi acoplada a derivado de mesitil 6 numa escala de 0,8 mmol via Procedimento Geral g (34%): δH (400 MHz, d-CDCI3): 0,035 (dd, J = 5,1 e 10,0 Hz, 2H, CH2), 0,33 (dd, J = 5,3 e 12.9 Hz, 2H, CH2), 1.05 (br, 1H, CH), (2.27 (s, 1H, CH3), 2.56 (s, 6H, CH3), 2.77 (s, 3H, CH3), 3.47 (d, J = 8.3 Hz, 2H,CH2), 3.67 (s, 2H, CH2), 5.18 (s, 2H, CH2), 5.38 (s, 2H, CH2), 6.77 (dd, J= 1.6 e 8.0 Hz, 1H, CH), 6.81 (d, J= 1.6 Hz, 1H, CH), 6.92 (s, 2H, CH), 7.25 - 7.46 (m, 10H), 7.89 (d, J = 8.0 Hz, 1H, CH); δC(100 MHz, d-CDCI3) 3.6, 9.6, 14.1, 22.7, 34.6, 53.5, 60.2, 66.9, 70.7, 114.1, 120.1, 120.7, 126.9, 127.9, 128.1, 128.1, 128.4, 128.5, 131.7, 133.1, 135.7, 140.5, 142.2, 145.4,158.8, 165.2, 166.4 LRMS (ES+) calculada para [C37H40N2O6S] 640,26,encontrado 641,24.
Figure img0034
[00104] Benzil-2-(benziloxi)-4-(N-(biciclo [2.2.1] hept-5-en-2-ilmetil) -2- (N, 2,4,6-tetrametilfenilsulfonamido) acetamido) benzoato. Anilina secundária 4 foi acoplado a mesitil derivado 6 numa escala de 0,4 mmol via Procedimento geral G (25%): δH(400 MHz, d-CDCI3)0.40 (d, J= 2.7Hz, 1H, CH), 0.78-0.94 (m, 1H, CH), 1.05-1.13 (m, 1H, CH2), 1.22- 1.44 (m, 4H, CH) 11.56 - 1.64 (m, 1H, CH), 2.05- 2.13 (m, 1H, CH), 2.27 (s, 3H, CH3), 2.57 (s, 6H, CH3), 2.78 (s, 3H, CH3), 3.68 (s, 2H, CH2), 5.19 (d, J = 11.2 Hz, 2H, CH), 5.38 (d, J = 4.3 Hz, 2H, CH), 5.69 (dd, J = 2.5 e 5.4 Hz, 1H, CH), 6.07 (dd, J = 3.2, 5.7 Hz, 1H, CH), 6.68-6.78 (m, 2H, CH), 6.92 (s, 2H, CH), 7.257.45 (m, 10H, CH), 7.90 (d, J = 8.1 Hz, CH); ); δC(100 MHz, d-CDC I3) 30.3, 31.0, 38.4, 38.7, 41.6, 42.3, 44.1, 44.3, 45.1, 47.4, 48.7, 49.5, 65.7, 70.3, 96.9, 104.6, 104.6, 107.6, 126.9, 127.5, 127.6, 127.9, 128.3, 128.4, 131.8, 134.2, 134.3, 136.2, 136.8, 136.9, 137.8, 153.3, 160.9, 165.8. LRMS (ES+) Calculado para [C41H44N2O6S] 692,29, encontrado 693,30.
Figure img0035
[00105] Benzil -4-(N-benzil-2-(N,2,4,6-tetrametilfenilsulfonamido) acetamido) -2- (benziloxi) -benzoato. Anilina secundária 4 foi acoplada a derivado de mesitil 6 numa escala de 0,39 mmol via Procedimento Geral g (20%): δH (400 MHz, d-CDCI3): 2.28 (s, 3H, CH3), 2.55 (s, 6H, 2 CH3), 2.79 (s, 3H, CH3), 3.68 (s, 2H, CH2), 4.79 (s, 2H, CH2), 4.95 (s, 2H CH2), 5.34 (s, 2H, CH2), 6.47 (s, 1 H, CH), 6.51 (d, J = 8.0 Hz, 1 H, CH), 6.92 (s, 2H, CH), 7.04 - 7.09 (m, 2H, CH), 7.23 - 7.27 (m, 4H, CH), 7.29 - 7.36 (m, 8H, CH), 7.37-7.42 (m, 2H, CH), 7.79 (d, J = 8.1 Hz, 1H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3) 20.8, 22.7, 34.7, 49.5, 52.9, 66.9, 70.6, 126.9, 127.6, 127.9, 128.1 , 128.1 , 128.4, 128.5, 128.7, 131.8, 133.1 , 135.6, 136.5, 140.5, 142.4, 158.7, 165.2, 166.8. LRMS (ES+) Calculado para [C40H40N2O6S] 676,26, encontrado 677,28.
Figure img0036
[00106] Benzil-2- (benziloxi) -4 - (N- (naftalen-1-ilmetil) -2 - (N, 2,4,6- tetrametilfenilsulfonamido) acetamido) benzoato de metilo. Anilina secundária 4 foi acoplado a derivado de mesitil 6 numa escala de 0,39 mmol através de processo geral G (20%): δH (400 MHz, d-CDCI3): 2.28 (s, 3H, CH3), 2.55 (s, 6H, 2 CH3), 2.79 (s, 3H, CH3), 3.68 (s, 2H, CH2), 4.79 (s, 2H, CH2), 4.95 (s, 2H CH2), 5.34 (s, 2H, CH2), 6.47 (s, 1 H, CH), 6.51 (d, J = 8.0 Hz, 1 H, CH), 6.92 (s, 2H, CH), 7.04-7.09 (m, 2H, CH), 7.23 - 7.27 (m, 4H, CH), 7.29 - 7.36 (m, 8H, CH), 7.37 -7.42 (m, 2H, CH), 7.79 (d, J = 8.1 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3) 20.8, 22.7, 34.7, 49.5, 52.9, 66.9, 70.6, 126.9, 127.6, 127.9, 128.1 , 128.1 , 128.4, 128.5, 128.7, 131.8, 133.1 , 135.6, 136.5, 140.5, 142.4, 158.7, 165.2, 166.8. LRMS (ES+) Calculado para [C40H40N2O6S] 726,28, encontrado 727,28.
Figure img0037
[00107] Benzil-2- (benziloxi) -4- (N- (4-fluorobenzil) -2 - (N, 2,4,6- tetrametilfenilsulfonamido) acetamido) benzoato. Anilina secundária 4 foi acoplada a derivado de mesitil 6 numa escala de 0,39 mmol através de processo geral g (39%): 2.27 (s, 1 H, CH3), 2.54 (s, 6H, CH3), 2.77 (s, 3H, CH3), 3.68 (s, 2H, CH2), 3.73 (s, 2H, CH2), 5.01 (s, 2H, CH2), 5.35 (s, 2H, CH2), 6.37 - 6.64 (m, 2H, CH), 6.87-6.99 (m, 4H, CH), 6.98-7.10 (m, 2H, CH), 7.27 - 7.46 (m, 10H, CH), 7.82 (d, J = 8.0 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3) 20.8, 22.6, 34.7, 49.5, 52.1 , 66.9, 70.6, 1 13.7, 1 15.1 , 115.3, 119.8, 126.8, 127.9, 128.1 , 128.4, 128.5, 130.5, 131.7, 132.3, 133.1 , 135.5, 140.4, 142.4, 144.6, 158.7, 165.1 , 166.8; LRMS (ES+) Calculadopara [C40H39FN 2O6S] 694,25, encontrado 695,25.
Figure img0038
[00108] Benzil-2- (benziloxi) -4 - (N - ((perfluorofenil) metil) -2- (N, 2,4,6-tetrametilfenilsulfonamido) acetamido) benzoato. Anilina secundária 4 foi acoplada a um derivado de mesitil 6 numa escala de 0,27 mmol via Procedimento Geral g (58%): 2.28 (s, 1 H, CH3), 2.53 (s, 6H, CH3), 2.77 (s, 3H, CH3), 3.66 (s, 2H, CH2), 4.97 (s, 2H, CH2), 5.12 (s, 2H, CH2), 5.36 (s, 2H, CH2), 6.57 (dd, J = 8.6 e 2.1 Hz, 1 H, CH), 6.67 (d, J = 2.0 Hz, 1 H, CH), 6.92 (s, 2H, CH), 7.27-7.46 (m, 10H, CH), 7.83 (d, J = 8.6 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3) 14.0, 20.7, 22.6, 34.7, 39.9, 49.3, 67.0, 70.8, 113.3, 119.4, 121.4, 126.7, 128.0, 128.1, 128.4, 128.5, 131.7, 133.3, 135.4, 135.5, 140.4,142.5, 143.5, 158.9, 164.9, 166.7; LRMS (ES+) Calculado para [C40H35F5N2O6S] 766,21, encontrado 767,25.
Figure img0039
[00109] Benzil-2- (benzilóxi) -4- (N- (4-metilbenzil) -2- (N, 2,4,6-tetrametilfenilsulfonamido) acetamido) benzoato. Anilina secundária 4 foi acoplada a mesitil derivado 6 numa escala de 0,39 mmol através de processo geral G (28%): δH (400 MHz, d-CDCI3 ): 2.28 (s, 3H, CH3), 2.31 (s, 3H, CH3) 2.55 (s, 6H, 2 CH3), 2.79 (s, 3H, CH3), 3.66 (s, 2H, CH2), 4.73 (s, 2H, CH2), 4.96 (s, 2H CH2), 5.34 (s, 2H, CH2), 6.38 - 6.57 (m, 2H, 2CH), 6.89 - 6.98 (m, 4H, CH), 7.04 (s, 2H, CH), 7.29 - 7.43 (m, 10H, 10 CH), 7.78 (d, J = 8.1 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3) 20.8, 20.9, 22.6, 34.6, 49.5, 52.5, 66.8, 70.6, 126.8, 127.9, 128.0, 128.1 , 128.4, 128.5, 128.7, 129.0, 131.7, 133.0, 133.5, 135.6, 137.2, 140.4, 142.3, 158.6, 165.1 , 166.6. LRMS (ES+) Calculado para [C41H42N2O6S] 690,28, encontrado 691,28.
Figure img0040
[00110] Benzil-2- (benziloxi) -4- (N-(4- (ferf-butil) benzil) -2- (N, 2,4,6- tetrametilfenilsulfonamido) acetamido) benzoato de metilo. Anilina secundária 4 foi acoplada a mesitil derivado 6 numa escala de 0,39 mmol via geral procedure g (37%): δH (400 MHz, d-CDCI3): 1.28 (s, 9H, C(CH3)), 2.28 (s, 3H, CH3), 2.55 (s, 6H, 2 CH3), 2.78 (s, 3H, CH3), 3.67 (s, 2H, CH2), 4.75 (s, 2H, CH2), 4.91 (s, 2H CH2), 5.34 (s, 2H, CH2), 6.44 (d, J = 2.0 Hz, 1 H, CH), 6.55 (dd, J = 2.0 e 8.6 Hz, 1 H, CH), 6.92 (s, 2H, CH), 7.01 (d, J = 8.4 Hz, 2H, CH) 7.27 (d, J = 8.3 Hz, 2H, CH), 7.29-7.48 (m, 10H, 10 CH), 7.80 (d, J = 8.3 Hz, 2H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3) 20.8, 22.6, 31.1 , 34.3, 34.6, 49.5, 52.5, 66.8, 70.5, 125.2, 126.9, 127.9, 128.0, 128.1 , 128.4, 128.5, 131.7, 133.0, 133.5, 135.6, 140.5, 142.3, 150.6, 158.6, 165.2, 166.6; LRMS (ES+) Calculado para [C44H48N2O6S] 732,32, encontrado 733,36.
Figure img0041
[00111] Benzil-2-(benziloxi)-4-(N-(3,5-(-di-terc-butil)benzil)-2-(N,2,4,6- tetrametilfenilsulfonamido)acetamido)benzoato. Anilina secundária 4 foi acoplado a mesitil derivado 6 numa escala 0,20 mmol via Procedimento Geral g (38%): δH (400 MHz, d-CDCI3): 1.24 (s, 18H, 6CH3), 2.04 (s, 3H, CH3), 2.56 (s, 6H, 2 CH3), 2.76 (s, 3H, CH3), 3.70 (s, 2H, CH2), 4.80 (s, 2H, CH2), 4.85 (s, 2H CH2), 5.34 (s, 2H, CH2), 6.42 (d, J = 2.0 Hz, 1 H, CH), 6.56 (dd, J - 2.0, 8.6 Hz, 1 H, CH), 6.88 - 6.99 (m, 4H, CH)& 2CH), 7.277.44 (m, 11 H, CH), 7.80 (d, J = 8.31 Hz, 2H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3) 20.7, 22.6, 31.2, 34.4, 34.6, 49.5, 53.3, 66.8, 70.5, 121.2, 123.0, 126.8, 127.9, 128.0, 128.3, 128.4, 131.7, 132.9, 135.5, 135.6, 140.5, 142.3, 150.9, 158.6, 165,1, 166,4; LRMS (ES+) calculada para [C48H56N2O6S] 788,39, encontrado 789,41.
Figure img0042
[00112] Benzil-2- (benziloxi) -4- (N- (furan-2-ilmetil) -2- (2,3,4,5,6- pentafluoro- fenilsulfonamido- N-metil) -acetamido) -benzoato. Anilina secundária 4 foi acoplado a derivado de pentafluoro 6 numa escala de 0,4 mmol via Procedimento geral g (31 %): δH (400 MHz, d-CDC I3) 3.05 (s, 3H, CH3), 3.84 (s, 2H, CH2), 4.68 (s, 2H, CH2), 5.08 (s, 2H, CH2), 5.36 (s, 2H, CH2), 6.02 (d, J = 3.2 Hz, 1 H, CH), 6.25 (m, 1 H, CH), 6.58 (d, J = 2.0 Hz, 1 H, CH), 6.67 (dd, J = 8.6, 2.1 Hz, 1 H, CH), 7.26 - 7.53 (m, 11 H, CH), 7.85 (d, J = 8.6 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3) 35.9, 51.6, 66.9, 70.6, 109.5, 1 10.3, 1 13.5, 1 19.6, 126.9, 128.0, 128.1 , 128.4, 128.5, 133.2,135.5, 142.4, 149.0, 158.7, 165.1 ; LRMS (ES+) Calculado para [C35H27F5 N2O7S + H] 714,15, encontrado 715,16.
Figure img0043
[00113] Benzil-2- (benziloxi) -4- (2- (N-2,3,4,5,6-pentafluoro- N- metilfenilsulfonamido) - N- (tiofen-2-ilmetil) acetamido) benzoato.Anilina secundária 4 foi acoplada a derivado de pentafluoro 6 numa escala de 0,3 mmol via Procedimento geral G (68%): δH (400 MHz, d- CDCI3); 3.06 (s, 3H, CH3), 3.87 (s, 2H, CH2), 4.86 (s, 2H, CH2), 5.07 (s, 2H, CH2), 5.37 (s, 2H, CH2), 6.60 (d, J = 2.0 Hz, 1 H, CH), 6.68 (d, J=2.1 Hz, 1 H, CH), 6.70 (dd, J = 8.6, 2.1 Hz, 1 H, CH), 6.88 (m, 1 H, CH), 7.25 (d, J=2.6 Hz, 1 H, CH), 7.29 - 7.46 (m, 10H, CH), 7.88 (d, J = 8.6 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3) 14.0, 20.8, 24.5, 35.8, 36.4, 47.4, 51.6, 60.2, 66.9, 70.6, 1 13.6, 119.7, 121.3, 126.1 , 126.4, 126.9, 127.7, 128.0, 128.1 , 128.4, 128.5, 133.2, 135.5, 137.9, 143.7, 158.7, 165.1 , 165.7; LRMS (ES+) Calculado para {C35H27F5N2O6S + H] 730,12, encontrado 731,12.
Figure img0044
[00114] Benzil-2- (benzilóxi) -4- (N- (ciclopropilmetil) -2- (2,3,4,5,6- pentafluoro- N-metilfenilsulfonamido) acetamido) benzoato. Anilina secundária 4 foi acoplada a derivado de pentafluoro 6 numa escala de 0,5 mmol via Procedimento geral G (93%): δH (400 MHz, d-CDCI3); 0.01 (dd, J = 5.1 e 10.0 Hz, 2H, CH2), 0.36 (dd, J =5.3 e 12.9 Hz, 2H, CH2), 0.73 (br, 1 H, CH), 3.04 (s, 3H, CH3), 3.38 (d, J = 7.19 Hz,2H, CH2), 3.86 (s, 2H, CH2), 5.22 (s, 2H, CH2), 5.38 (s, 2H, CH2), 6.84 (d, J = 1.6 Hz,1 H, CH), 6.85 (dd, J = 1.6 e 8.0 Hz, 1 H, CH), 7.28 - 7.47 (m, 10H, CH), 7.91 (d, J =8.0 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3) 3.4, 9.3, 14.0, 35.9, 51.7, 53.6, 66.9, 70.7, 113.9, 119.9, 126.9, 127.9, 128.1 , 128.4, 128.5, 133.2, 135.5, 135.6, 144.7, 158.7, 165.1 , 165.6; LRMS (ES+) Calculado para [C34H29F5N2O6S] 688,17, encontrado 689,19.
Figure img0045
[00115] Benzil-2- (benziloxi)-4- (N- (biciclo [2.2.1] hept-5-en-2-ilmetil) -2- (2,3,4,5,6-pentafluoro- N metilfenilsulfonamido) acetamido) benzoato de metilo.Anilina secundária 4 foi acoplada a pentafluoro derivado 6 numa escala de 0,3 mmol via Procedimento geral G (84%): δH (400 MHz, d- CDCI3) 0.40 (d, J = 2.7 Hz, 1 H, CH2), 0.78 -0.94 (m, 1 H, CH), 1.05 - 1.13 (m, 1 H, CH2) 1.22 - 1.44 (m, 4H, CH) 1 1.56 - 1.64 (m, 1 H, CH), 2.05 - 2.13 (m, 1 H, CH), 2.78 (s, 3H, CH3), 3.68 (s, 2H, CH2), 5.19 (s, 2H, CH), 5.38 (s, 2H, CH), 5.69 (dd, J = 2.5 e 5.4 Hz, 1 H, CH), 6.07 (J = 3.2, 5.7 Hz, 1 H, CH), 6.68 - 6.78 (m, 2H, CH), 6.92 (s, 2H, CH), 7.25 - 7.45 (m, 10H, CH), 7.90 (d, J = 8.1 Hz, CH); ); δC (100 MHz, d-CDCI3) 29.8, 35.9, 37.0, 41.7, 42.0, 44.2, 45.0, 49.3, 51.9, 53.4, 66.9, 70.7, 1 13.6, 1 19.4, 126.8, 126.9, 128.0, 128.1 , 128.4, 128.6, 131.8, 133.2, 135.6, 137.4, 144.8, 158.7, 165.1 , 165.6; LRMS (ES+) Calculado para [C38H33F5N2O6S] 740,20, encontrado 741,21.
Figure img0046
[00116] Benzil-4 - (N-benzil-2- (2,3,4,5,6-pentaf luoro-N-metilfenilsulfonamido) acetamido) -2- (benziloxi) -benzoato Anilina secundária 4 foi acoplada a pentafluoro derivado 6 numa escala de 0,5 mmol via Procedimento geral G (64%): δH (400 MHz, d-CDCI3): 3.05 (s, 3H, CH3), 3.87 (s, 2H, CH2), 4.71 (s, 2H, CH2),4.99 (s, 2H CH2), 5.35 (s, 2H, CH2), 6.49 (s, 1 H, CH), 6.63 (d, J = 8.0 Hz, 1 H, CH), 7.03(m, 2H, CH), 7.19-7.44 (m, 12H, CH) 7.83(d, J = 8.1 Hz, 1 H, CH); δC ( 100 MHz, d- CDCI3) 35.8, 51 .8, 52.9, 66.9, 70.6, 1 13.8, 1 19.8, 121 .2, 126.9, 127.8, 128.0, 128.1 , 128.3, 128.4, 128.5, 128.6, 133.2, 135.5, 135.9, 144.0, 158.6,165.1 , 165.8; LRMS (ES+) Calculado para [C37H29F5N2O6S] 724,17, encontrado 725,17.
Figure img0047
[00117] Benzil-2- (benzilóxi)-4- (N-(naftalen-1-ilmetil) -2- (2,3,4,5,6- pentafluoro-N-metilfenilsulfonamido) acetamido) benzoato. Anilina secundária 4 foi acoplada a derivado de pentafluoro 6 numa escala de 0,5 mmol via Procedimento geral G (83 %): δH (400 MHz, d-CDCI3): 3.06 (s, 3H, CH3), 3.90 (s, 2H, CH2), 4.87 (s, 2H, CH2), 4.88(s, 2H CH2), 5.33 (s, 2H, CH2), 6.48 (s, 1 H, CH), 6.63 (d, J = 8.0 Hz, 1 H, CH), 7.14 -7.53 (m, 14H, CH) 7.67 - 7.88 (m, 3H, CH) δC (100 MHz, d-CDCI3) 35.8, 51 .9, 53.0, 66.9, 70.6, 1 13.8, 1 19.8, 126.1 , 126.2, 126.8, 127.5, 127.6, 127.8, 127.9, 128.1 , 128.4, 132.7, 132.9, 133.2, 133.3, 135.4, 135.5, 158.7, 165.0, 166.0;LRMS (ES+) Calculado para [C41H31F5N2O6S] 774,18, encontrado 775,19
Figure img0048
[00118] Benzil-2- (benziloxi) -4- (N- (4-fluorobenzil) -2- (2,3,4,5,6- penta- fluoro-N-fenilsulfonamido) acetamido) benzoato. Anilina secundária 4 foi acoplado a pentafluoro derivado 6 numa escala de 0,2 mmol via Procedimento geral G (73%): 3.05 (s, 3H, CH3), 3.88 (s, 2H, CH2), 4.67 (s, 2H, CH2), 5.05(s, 2H, CH2), 5.36 (s, 2H, CH2), 6.53 (s, 2H, CH), 6.61 (dd, J = 2.05, 8.63Hz, 2H, CH), 6.87-7.04 (m, 4H, CH), 7.28 - 7.48 (m, 10H, CH), 7.84 (d, J = 8.0 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3) 35.8, 50.8, 51.8, 52.2, 67.0, 70.6, 113.7, 115.2, 115.4, 119.8, 121.3, 126.8, 128.0, 128.1 , 128.4, 128.5, 130.3, 130.4, 131.7, 133.2, 135.4, 135.5, 143.8, 158.7, 161.0, 163.4,165.0, 165.9; LRMS (ES ) calculada para [C37H29F6N2O6S] 742,16, encontrou-se 743,16.
Figure img0049
[00119] Benzil-2- (benzilóxi)-4-(2- (2,3,4,5,6-penta- fluoro-N-metilfenilsulfonamido) -N - ((perfluorofenil) metil) -acetamido) -benzoato de metilo.Anilina secundária 4 foi acoplada a derivado de pentafluoro 6 numa escala de 0,1 mmol via Procedimento geral G (74 %): 3.04 (s, 3H, CH3), 3.85 (s, 2H, CH2), 4.88 (s, 2H, CH2), 5.15 (s, 2H, CH2), 5.36 (s, 2H, CH2), 6.65 (d, J= 2.0 Hz, 1 H, CH), 6.69 (dd, J = 8.6, 2.1 Hz, 1 H, CH), 7.28-7.50 (m, 10H, CH), 7.87 (d, J = 8.6 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3) 35.3, 35.6, 48.3, 65.6, 70.9, 104.6, 112.2, 113.9, 115.4, 116.7, 127.1 , 128.9,131.3, 136.1 , 136.2, 137.8, 141.4, 144.7, 147.3, 161.2, 166.8, 168.4; LRMS (ES+) Calculado para [C37H24F10N2O6S] 814,12, encontrado 815,14.
Figure img0050
[00120] benzil-2- (benziloxi) -4 - (N - ((1-metil-1H-imidazol-2-il) metil) - 2- (2,3,4,5,6-penta- fluoro-N -metilfenilsulfonamido) acetamido) benzoato.Anilina secundária 4 foi acoplada a um derivado de pentafluoro 6 numa escala de 0,2 mmol via Procedimento Geral g (72%): δH (400 MHz, d- CDCI3) 2.28 (s, 3H, CH3), 3.80 (d, J = 3.1 Hz, 3H, CH3), 3.20 (s, 2H, CH2), 4.22 (s, 2H, CH2), 4.51 (s, 2H, CH2), 4.76 (s, 2H, CH2), 6.26 (dd, J = 8.6, 2.1 Hz, 1 H, CH), 6.29 (s, 2H, CH), 6.78 - 6.99 (m, 10H, CH), 6.35 (s, 1 H, CH), 6.41 (s, 1 H, CH), 7.68 (d, J = 2.0 Hz, 1 H, CH), 7.44 (d, J= 8.6 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3) 33.4, 35.6, 48.1 , 49.3, 65.6, 70.7, 104.5, 1 12.3, 113.8, 1 16.2, 120.2, 126.8, 127.1 , 127.6, 128.8, 130.4, 131.1 , 136.3,136.7, 137.2, 144.9, 147.0,152.3, 161.3, 166.5, 168.3; LRMS (ES+)Calculado para [C35H29F5N4O6S + H] 728,17 encontrado 729,18.
Figure img0051
[00121] Benzil-2- (benziloxi) -4- (N- (4- (terc-butil) benzil) -2- (2,3,4,5,6-pentafluro-N-metilfenilsulfonamido) acetamido) benzoato. Anilina secundária 4 foi acoplado a derivado de pentafluoro 6 numa escala de 0,4 mmol via Procedimento geral g (98%): δH (400 MHz, d-CDCI3): 1.29 (s, 9H, C(CH3)), 3.04 (s, 3H, CH3), 3.85 (s, 2H, CH2), 4.67 (s, 2H, CH2), 4.94 (s, 2H CH2), 5.34 (s, 2H, CH2), 6.46 (d, J = 2.0 Hz, 1 H, CH), 6.65 (dd, J = 2.0, 8.6 Hz, 1 H, CH), 6.96 (d, J = 8.7 Hz, 2H, CH), 7.27-7.42 (m, 12H, CH), 7.83 (d, J = 8.3 Hz, 2H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3) 31.1 , 34.3, 35.8, 51.8, 52.6, 66.9, 70.6, 1 13.8, 1 19.8, 125.3, 126.9, 128.0, 128.1 , 128.4, 128.5, 132.9, 133.2, 135.4, 135.5, 150.8, 158.6, 165.1 ; LRMS (ES+) Calculado para[C41H37F5N2O6S] 780,23, encontrado 781,23.
[00122] Síntese dos Inibidores Tetrapodal (13a-d)
Figure img0052
[00123] Feri-butil (mesitilsulfonil) glicinato. Derivado 9 sintetizado usando o procedimento geral d (71 %): δH (400 MHz, CDCI3) 1.36 (s, 9H, (CH3)3), 2.29 (s, 3H, CH3), 2.65 (s, 6H, CH3), 3.60 (d, J = 5.4 Hz, 2H, CH2), 5.08 (t, J = 5.13 Hz, 2H, CH); δC (400 MHz, CDCI3) 20.8, 23.0, 27.7, 46.5, 81.9, 130.0, 137.4, 140.1 , 145.0, 167.5; LRMS (ES+) calculado para [C15H23NO4S + H] 313,13, encontrado 314,11.
Figure img0053
[00124] terc-butil-N- (4-clorobenzil) -N- (mesitilsulfonil) glicinato. O derivado 10 sintetizado utilizando o processo geral E (77%): δH (400 MHz, CDCI3) 1.34 (s, 9H, (CH3)3), 2.29 (s, 3H, CH3), 2.63 (s, 6H, CH3), 3.70 (s, 2H, CH2), 4.49 (s, 2H, CH2) 6.95 (s, 2H, CH), 7.08 (d, J = 8.1 Hz, 2H, CH), 7.25 (d, J = 8.1 Hz, 2H, CH); δC(400 MHz, CDCI3) 20.8, 23.0, 27.7, 46.5, 51.8, 81.9, 128.6, 130.0, 132.3, 134.6, 137.4, 140.1 , 145.0, 167.5; LRMS (ES+) calculado para [C22H28CINO4S + H] 437,14, encontrado 438,10.
Figure img0054
[00125] N- (4-clorobenzil) -N- (mesitilsulfonil) glicina. Derivado 11 sintetizado utilizando o processo geral F (90%): δH (400 MHz, CDCI3) 2.29 (s, 3H, CH3), 2.63 (s, 6H, CH3), 3.70 (s, 2H, CH2), 4.49 (s, 2H, CH2) 6.95 (s, 2H, CH), 7.08 (d, J = 8.0 Hz, 2H, CH), 7.25 (d, J = 8.0 Hz, 2H, CH); δC (400 MHz, CDCI3) 20.8, 23.0, 46.5, 51.8, 128.6, 130.0, 132.3, 134.6, 137.4, 140.1, 145.0, 167.5; LRMS (ES+) calculado para [C18H20CINO4S + H] 381,08, encontrado 382,07.
Figure img0055
[00126] terc-butil ((perfluorofenil)sulfonil)glicinato. Derivado 9 sintetizado usando procedimento geral d (71%): δH (400 MHz, CDCl3) 1.40 (s, 9H, COO(CH3)3), 3.93 (s, 2H, CH2), 5.54 (s, 1H, NH); δC (400 MHz, CDCl3) 27.5, 45.1, 82.8, 115.6, 136.5, 144.8, 145.9, 167.0; LRMS (ES+) calculado para [C12H12F5NO4S + H] 361.04, encontrado 362.09
Figure img0056
[00127] terc-butil N-(4-clorobenzil)-N-((perfluorofenil)sulfonil)glicinato. Derivado 10 sintetizado usando procedimento geral e (71%): δH (400 MHz, CDCl3) 1.37 (s, 9H, (CH3)3), 3.93 (s, 2H, CH2), 4.57 (s, 2H, CH2), 7.24 (d, J = 8.5 Hz, 2H, CH), 7.33 (d, J = 8.5 Hz, 2H, CH); δC (400 MHz, CDCl3) 27.5, 52.5, 53.0, 81.8, 112.6, 126.5, 130.1, 132.4, 134.3, 136.5, 144.8, 145.9, 167.0; LRMS (ES+) calculado para [C19H17F5ClNO4S + H] 485.05, encontrado 486.10.
Figure img0057
[00128] N-(4-clorobenzil)-N-((perfluorofenil)sulfonil)glicina. Derivado 11 sintetizado usando procedimento geral f (92%): δH (400 MHz, CDCl3) 4.13 (s, 2H, CH2), 4.58 (s, 2H, CH2), 7.25 (d, J = 8.2 Hz, 2H, CH), 7.35 (d, J = 8.2 Hz, 2H, CH); δC (400 MHz, CDCl3) 52.8, 54.2, 112.6, 126.5, 130.1, 132.4, 134.3, 136.5, 144.8, 145.9, 172.0; LRMS (ES+) calculado para [C15H9F5ClNO4S + H] 428.99, encontrou-se 429.99.
Figure img0058
[0129] Benzil-2- (benziloxi) -4- (2 - ((N- (4-clorobenzil) -2,4,6-trimetilfenilsulfonamido) -N- (3,5-di-terc-butilbenzil) acetamido) benzoato. 12 derivado sintetizado utilizando o processo g geral (55%); δH (400 MHz,CDCI3) 1.26 (s, 18H, (CH3)3), 2.31 (s, 3H, CH3), 2.60 (s, 6H, CH3), 3.58 (s, 2H, CH2), 4.56 (s, 2H, CH2), 4.75 (s, 4H, CH2), 5.32 (s, 2H, CH2), 6.24 (br s, 2H, CH), 6.93 (s, 2H, CH), 6.96 (s, 2H, CH), 7.03 (d, J = 8.1 Hz, 2H, CH), 7.14 (d, J = 8.1 Hz, 2H, CH), 6.93 (s, 2H, CH), 7.29-7.38 (m, 10H, CH), 7.70 (d, J = 8.1 Hz, 1 H, CH); δC (400 MHz, CDCI3) 20.8, 22.8, 31.4, 34.6, 45.7, 49.5, 53.3, 66.9, 70.5, 113.5, 120.0, 121.3, 123.4, 127.0, 127.9, 128.0,128.3, 128.4, 128.5, 130.3, 131.9, 132.6, 133.7, 135.4, 135.5, 140.3, 142.5, 150.9, 158.5, 165.2, 166.2; LRMS (ES+) calculado para [C54H59CIN2O6S+H] 898,38, resultou em 899,39.
Figure img0059
[0130] Benzil 2- (benziloxi) -4- (2 - ((N- (4-clorobenzil) -2,4,6-trimetilfenilsulfonamido) -N- (naftalen-2 -ilmetil) acetamido) benzoato. 12 derivado utilizando o processo g geral (72%): δH (400 MHz, CDCI3) 2.27 (s, 3H, CH3), 2.59 (s, 6H, CH3), 3.58 (s, 2H, CH2), 4.62 (s, 2H, CH2), 4.71 (s, 2H, CH2), 4.86 (s, 2H, CH2), 5.30 (s, 2H, CH2), 6.21 (d, J = 7.9 Hz, 1 H, CH), 6.27 (s, 1 H, CH), 6.94 (s, 2H, CH), 7.07 (d, J = 8.5 Hz, 2H, CH), 7.16 (d, J = 8.5 Hz, 2H, CH), 7.19 (d, J = 8.1 Hz, 2H, CH), 7.22-7.27 (m, 2H, CH), 7.287.38 (m, 5H, CH), 7.42-7.53 (m, 4H, CH), 7.62-7.78 (m, 4H, CH), 7.82 (d, J = 8.5 Hz, 1 H, CH); δC(400 MHz, CDCI3) 20.8, 22.8, 45.6, 49.9, 52.9, 66.9, 70.5, 126.0, 126.2, 126.8, 127.5, 127.6, 127.8, 128.0, 128.1 , 128.2, 128.3, 128.4, 128.6, 130.1 , 131.8, 132.5, 132.6, 132.9, 133.6, 133.8, 135,3, 135,5, 140,3, 142,5, 158,6, 165,1, 166,6; LRMS (ES+) calculada para [C50H45CIN2O6S + H] 836,27, resultou em 837,28.
Figure img0060
[0131] Benzil 2-(benziloxi) -4- (2 - ((N- (4-clorobenzil) -2,3,4,5,6-pentafluorofenil)sulfonamido) -N- (naftalen-2-ilmetil)acetamido) benzoato. 12 derivado sintetizado utilizando o processo g geral (61%): δH (400 MHz, CDCI3) 3.77 (s, 2H, CH2), 4.67 (s, 2H, CH2), 4.73 (s, 2H, CH2), 4.83 (s, 2H, CH2), 5.29 (s, 2H, CH2), 6.31 (d, 1 H, CH), 6.39 (d, J = 8.3 Hz, 1 H, CH), 7.13-7.23 (m, 5H, CH), 7.23-7.29 (m, 5H, CH), 7.29-7.36 (m, 5H, CH), 7.41 (s, 1 H, CH), 7.45-7.54 (m, 2H, CH), 7.64-7.75 (m, 2H, CH), 7.78 (d, J = 8.4 Hz, 1 H, CH), 7.81-7.89 (m, 1H, CH); δC (400 MHz, CDCI3) 47.5, 50.5, 53.0, 66.9, 70.6, 113.2, 1 19.5, 121.3, 126.1, 126.3, 126.9, 127.5, 127.9, 128.1 , 128.3, 128.4, 128.9, 129.9, 132.7, 132.9, 133.1 , 133.2, 134.3, 135.2, 135.4,143.7, 158.7, 165.0, 165.8; LRMS (ES+) calculado para “ 11 ! ' ' +H] 884,17, resultou em 885,19.
Figure img0061
[0132] Benzil-2- (benziloxi) -4- (2 - ((N- (4-clorobenzil) -2,3,4,5,6-pentafluorofenil) sulfonamido) -N- (3,5-di- terc-butilbenzil) acetamido) benzoato.Sintetizado 12 derivado utilizando o processo g geral (61 %): δH (400 MHz, CDCI3) 1.25 (s, 18H, (CH3)3), 3.75 (s, 2H, CH2), 4.63 (s, 2H, CH2), 4.70 (s, 2H, CH2), 4.76 (s, 2H, CH2), 5.30 (s, 2H, CH2), 6.25 (s, 1 H, CH), 6.33 (d, J = 8.1 Hz, 1 H, CH), 6.85 (s, 2H, CH), 7.17 (d, J = 8.5 Hz, 2H, CH), 7.25 (d, J = 8.5 Hz, 2H, CH), 7.28-7.37 (m, 12H, CH), 7.78 (d, J = 8.1 Hz, 1 H, CH); δC (400 MHz, CDCI3) 31.1 34.5, 47.6, 50.3, 53.3, 11 1 .3, 1 16.2, 117.2, 1 18.9, 121.6, 123.0, 128.9, 129.9, 132.0, 132.5, 134.3, 134.4, 136.4, 138.9, 143.5, 145.0, 145.9, 146.8, 151.0, 162.7, 165.3, 172.2; LRMS (ES+) calculado para [C51H48CIF5N2O6S + H] 946,28, resultou em 947,30.
Figure img0062
[0133] 4-(2-((N- (4-clorobenzil) -2,3,4,5,6-pentafluorofenil) sulfonamido)-N-(3,5-di-terc-butilbenzil)acetamido)-2 ácido hidroxibenzóico. 13a derivado sintetizado utilizando procedimento geral h (76%): δH (400 MHz, CDCI3) 1.25 (s, 18H, (CH3)3), 3.80 (s, 2H, CH2), 4.61 (s, 2H, CH2), 4.73 (s, 2H, CH2), 6.25 (s, 1 H, CH), 6.36 (s, 1 H, CH), 6.88 (s, 2H, CH), 7.15 (d, J = 8.5 Hz, 2H, CH), 7.24 (d, J = 8.5 Hz, 2H, CH), 7.31 (s, 1 H, CH), 7.75 (d, J = 8.5 Hz, 1 H, CH); δC (400 MHz, CDCI3) 31.1 , 34.5, 47.6, 50.3, 121.6, 128.7, 128.9, 129.9, 132.5, 134.4, 151.0, 162.7, 172.4; LRMS (ES+) calculado para 1 ' ' + H] 766,19, resultou em 765,18; HPLC (I), (II),tR = 48,22 min (95,25%).
Figure img0063
[0134] 4-(2-((N- (4-clorobenzil) -2,4,6-trimetilfenil) sulfonamido)-N- (3,5-di-terc-butilbenzil)acetamido)-2-ácido hidroxibenzóico. Sintetizado 13b derivado utilizando procedimento geral h (59%): δH (400 MHz, CDCI3) 1.25 (s, 18H, (CH3)3), 2.29 (s, 3H, CH3), 2.60 (s, 6H, CH3) 3.59 (s, 2H, CH2), 4.60 (s, 2H, CH2), 4.72 (s, 2H, CH2), 6.1 1 (s, 1 H, CH), 6.25 (s, 1 H, CH), 6.92 (s, 2H, CH), 6.96 (s, 2H, CH), 7.05 (d, J = 8.3 Hz, 2H, CH), 7.14 (d, J = 8.3 Hz, 2H, CH), 7.31 (s, 1 H, CH), 7.73 (d, J = 8.3 Hz, 1 H, CH); δC (400 MHz, CDCI3) 20.6, 20.8, 22.7, 31.2, 34.5, 45.6, 49.6, 53.3, 1 17.1 , 1 18.9, 121.4, 123.2, 128.6, 130.2, 131.9, 132.4, 133.6, 133.7, 134.8, 140.3, 142.6,147.3, 150.8, 162,6, 166,1, 173,1, 177,4; LRMS (ES+) calculado para [C40H47ClN2O6S + H] 718,28, resultou em717,3; HPLC (I) tR = 32,08 min (97,63%), (II), tR = 49,69 min (97,12%).
Figure img0064
[0135] 4-(2-((N-(4-clorobenzil) -2,4,6-trimetilfenil) sulfonamido) -N- (naftaleno-2-ilmetil) acetamido) -2-ácido hidroxibenzóico. 13 c derivado sintetizado utilizando procedimento geral h (72%): δH (400 MHz, CDCI3) 2.34 (s, 3H, CH3) 2.63 (s, 6H, CH3) 3.88 (s, 2H, CH2), 4.40 (s, 2H, CH2), 4.90 (s, 2H, CH2), 6.31 (s, 1 H, CH), 6.51 (s, 1 H, CH), 7.03 (s, 2H, CH), 7.08 (d, J = 8.3 Hz, 2H, CH) 7.20 (d, J = 8.3 Hz, 2H, CH), 7.44-7.49 (m, 2H, CH), 7.67-7.93 (m, 5H, CH); δC (400 MHz, CDCI3) 21.0, 23.0, 47.5, 50.5, 53.0, 107.0, 107.2, 110.7, 125.1 , 126.0, 127.6, 1270, 127.3, 128.6, 130.1 , 131.7, 132.5, 133.7, 134.2, 135.2, 137.7, 141.1 , 143.8, 145.1 , 148.3, 163.1 , 166.9, 173.2 LRMS (ES+) calculado para [C36H33CIN2O6S + H] 656,17, resultou em 655,20; HPLC (I), tR = # min (#%), (II), tR = # min (#%). Preencher os espaços em branco.
Figure img0065
[0136] 4-(2-((N- (4-clorobenzil)-2,3,4,5,6-pentafluorofenil)sulfonamido) -N-(-naftaleno-2-ilmetil) acetamido)-2-ácido hidroxibenzóico. 13d derivado sintetizado utilizando procedimento geral h (61 %): δH (400 MHz, CDCI3) 3.88 (s, 2H, CH2), 4.66 (s, 2H, CH2), 4.90 (s, 2H, CH2), 6.31 (s, 1 H, CH), 6.51 (s, 1 H, CH), 7.15-7.36 (m, 4H, CH), 7.417.57 (m, 3H, CH), 7.67-7.93 (m, 5H, CH); δC (400 MHz, CDCI3) 47.5, 50.5,53.1 , 66.9, 70.6, 1 13.2, 1 19.6, 121.2, 126.2, 126.3, 126.9, 127.5, 127.6, 127.8, 127.9, 128.1 , 128.4, 128.6, 128.9, 129.9, 132.7, 132.9, 133.1, 133.2, 134.3, 135.2, 135.4, 143.7, 158.7, 165.0, 165.8; LRMS (ES+) calculado para [C33H22CIF5N2O6S+ H] 704,08, resultou em 703,09; HPLC (l) tR = 26,58 min (94,41%), (II), tR = 41,17 min (84,06%).
Figure img0066
[0137] 2-(hidroxi)-4- (N- (tetra-hidrofuran-2-il)metil)-2-(N, 2,4,6 tetrametilfenilsulfonamido)acetamido) ácido benzóico. 8a derivado hidrogenado em uma escala de 0,3 mmol via procedimento geral h (95%): δH (400 MHz, d-CDCI3) 1.79-2.04 (m, 4H, 2CH2), 2.29 (s, 3H, CH3(Ph)), 2.57 (s, 6H, 2CH3(Ph)), 2.82 (s, 3H, CH3NSO2), 3.61-3.79 (m, 2H, COCH2), 3.803.89 (m, 4H, NHCH2 THF, 0-CH2), 4.02-4.17 (m, 1 H, CH), 6.72 (d, J = 8.3 Hz, 1 H, CH (Ph)), 6.79 (s, 1 H, CH (Ph)), 6.93 (s, 2H, CH), 7.83 (d, J = 8.3 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3) 21.1 , 22.9, 25.4, 29.3, 29.8, 34.9, 49.9, 53.3, 68.1 , 1 17.1 , 1 19.1 , 131.7, 132.1 , 132.3, 140.8, 142.9, 148.0, 163.1 ; HRMS (ES+) calculado para [C24H30N2O7S+H] 490,18, resultou em 491,20; HPLC (l) tR = 16,45 min (96,95%), (II), tR = 24,99 min (96,49%).
Figure img0067
[0138] 2- (hidroxi) -4- (2-((N, 2,4,6 tetrametilfenilsulfonamido)-N-(tiofen-2-ilmetil) acetamido) ácido benzóico. 8b derivado hidrogenado em uma escala de 0,2 mmol via procedimento geral h (82%); δH (400 MHz, d- CDCI3) 2.28 (s, 3H, CH3(Ph)), 2.57 (s, 6H, 2CH3), 2.85 (s, 3H, CH3NSO2), 3.79 (s, 2H, COCH2), 4.94 (s, 2H, CH2Ar), 6.48 (d, 1 H, J = 8.3 Hz, CH), 6.58 (s, 1 H, CH), 6.77 (d, 1 H, J = 3.1 Hz, CH), 6.85-6.87 (m, 1 H, CH), 6.93 (s, 2H, CH), 7.21 (d, 1 H, J = 5.3 Hz, CH), 7.88 (d, 1 H, J = 8.4 Hz, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3): 20.8, 22.6, 29.5, 34.6, 47.6, 49.5, 1 18.8,125.9, 126.4, 127.5, 131.4, 131.8, 132.4, 138.3, 140.6, 142.6, 165.2; HRMS (ES+) calculado para [C24H26N2O6S2+H] 502,12, resultou em 503,1; HPLC (l) t R = 18,77 min (87,95%), (II), tR = 29,19 min (87,95%).
Figure img0068
[0139] 4- (N-(ciclopropilmetil)-2-((N,2,4,6 tetrametilfenil) sulfonamido) -acetamido) -2-ácido benzóico. 8d derivado hidrogenado em uma escala de 0,3 mmol via procedimento geral H (90%); δH (400 MHz, d- CDCI3) 0.05-0.18 (m, 2H, CH2), 0.37-0.49 (m, 2H, CH2), 0.77-0.97 (m, 1 H, CH), 2.28 (s, 3H, CH3), 2.57 (s, 6H, CH3), 2.83 (s, 3H, CH3), 3.53 (d, J = 71.2 Hz, 2H), 3.79 (s, 2H, CH2), 6.71 (d, J = 8.4 Hz, 1 H CH), 6.77 (d, J = 1.4 Hz, 1 H, CH), 6.94 (s, 2H, CH), 7.94 (d, J = 8.4 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3): 3.6, 9.6, 20.6, 20.8, 22.6, 29.5, 34.7, 49.5, 53.6, 111.9, 117.2, 1 19.2, 131.5, 131.8, 132.3, 140.6, 142.6, 147.9, 162.9, 166.7, 172.7, 177.3; HRMS (ES+) Calculado para [C23H26N2O6S + H] 460,17, resultou em 461,2; HPLC (l) tR = 18,10 min (93,12%), (II), tR = 27,83 min (93,25%).
Figure img0069
[0140] 2-hidroxi-4-(N((1-metil-1H-imidazol-2-il)metil)-2- (N,2,4,6tetrametilfenil)sulfonamido)-acetamido)ácido benzóico. 8c derivado hidrogenado em uma escala de 0,15 mmol via procedimento geral h (40%); δH (400 MHz, d-CDCI3) 2.28 (s, 3H, CH3), 2.50 (s, 6H, CH3), 2.81 (s, 3H, CH3), 3.78 (s, 2H, CH2), 4.06 (s, 2H, CH2), 6.40 (d, J = 8.4 Hz, 1 H, CH), 6.46 (s, 1H, CH), 6.91 (s, 2H, CH), 7.00 (s, 1H, CH), 7.25 (s, 1H, CH), 7.65 (d, J =8.2 Hz, 1H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3): 20.8, 22.6, 33.1, 34.6, 47.8, 49.5, 106.0, 113.2, 120.5, 127.1 , 131.4, 131.9, 138.2, 140.6, 142.9, 147.3, 152.4, 164.8, 166,9, 171,8; HRMS (ES+) calculado para [C24H28N4O6S + H] 500,17, resultou em 501,20; HPLC (l) tR = 10,65 min (98,04%), (II), tR = 15,79 min (83,06%).
Figure img0070
[0141] 4-(N-(biciclo [2.2.1]heptan-2-ilmetil)-2-((N,2,4,6 tetrametilfenil) sulfonamido) -acetamido) -2-ácido hidroxibenzóico. 8e derivado hidrogenado em uma escala 0,14 mmol via procedimento geral h (35%); δH (400 MHz, d-CDCI3) 0.78-1 .06 (m, 2H, CH2), 1.07-1.22 (m, 2H, CH2), 1 .29-1.60 (m, 3H, CH2, CH), 1.82-2.04 (m, 2H, CH), 2.22 (s, 3H, CH3), 2.47 (s, 6H, CH3), 2.70 (s, 3H, CH3), 3.45 (s, 2H, CH2), 3.63 (s, 2H, CH2), 3.81 (s, 2H, CH2), 6.51 (d, J = 8.0 Hz, 1H, CH), 6.64 (s, 1H, CH), 6.86 (s, 2H, CH), 7.85 (d, J = 8.0 Hz, 1H, CH); δC(100 MHz, d-CDCI3): 20.8, 22.5, 22.6, 29.7, 34.3, 34.4, 36.7, 38.7, 39.6, 51.3, 131.5, 131.8, 137.2, 140.4, 142.5, 148.3, 164.4, 166.2, 171.3; HRMS (ES+) Calculado para[C27H34N2O6S+H] 514,21, resultou em 515,20; HPLC (l) tR = 22,48 min (99,40%), (II), tR = 35,27 min (96,56%).
Figure img0071
[0142] 4- (N-benzil-2 - ((N, 2,4,6 tetrametilfenil) sulfonamido) -acetamido) -2-ácido hidroxibenzóico. 8g derivado hidrogenado em uma escala de 0,07 mmol via procedimento geral h (75%); δH (400 MHz, d- CDCI3) 2.29 (s, 3H, CH3), 2.57 (s, 6H, CH3), 2.87 (s, 3H, CH3), 3.81 (s, 2H, CH2), 4.82 (s, 2H, CH2), 6.41 (d, J = 8.1 Hz, 1 H, CH), 6.54 (s, 1 H, CH), 6.94 (s, 2H, CH), 7.06-7.16 (m, 2H, CH), 7.18-7.25 (m, 3H, CH), 7.84 (d, J = 8.5 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3): 20.8, 22.6, 34.6, 49.6, 52.9, 118.8, 127.6, 128.4, 131.6, 131.8, 136.2, 140.5, 142.5, 166.8; HRMS (ES+) calculado para [C26H28N2O6S+H] 496,17, resultou em 497,17; HPLC (l) tR = 19,17 min (98,29%), (II), tR = 29,81 min (97,35%).
Figure img0072
[0143] 2-hidroxi-4-(N- (4-metilbenzil)-2-((N, 2,4,6-tetrametilfenil) sulfonamido)-acetamido) ácido benzóico. 8f derivado hidrogenado em uma escala 0,04 mmol via procedimento geral h (85%); δH (400 MHz, d-CDCI3) 2.30 (s, 3H, CH3), 2.57 (s, 6H, CH3), 2.87 (s, 3H, CH3), 3.79 (s, 2H, CH2), 4.77 (s, 2H, CH2), 6.41 (d, J = 8.5 Hz, 1 H, CH), 6.52 (s, 1 H, CH), 6.93 (s, 2H, CH), 6.98 (d, J = 8.3, 2H, CH), 7.04 (d, J = 8.3 Hz, 2H, CH), 7.82 (d, J = 8.3 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3): 20.8, 20.9, 22.6, 31.7, 34.6, 36.8, 49.5, 52.6, 116.7,1 18.7, 128.3, 129.0, 131.5, 131.7, 132.0, 133.2, 137.2, 140.5, 142.5, 147.1 , 162.7, 163.3, 166.7, 171.8; HRMS (ES+) calculado para [C26H28N2O6S+H] 510,18, resultou em 511,20; HPLC (l) tR = 20,32 min (95,53%), (II), tR = 31,81 min (93,81%).
Figure img0073
[0144] 4-(N-(4-fluorobenzil) -2 - ((N,2,4,6-tetrametilfenil) sulfonamido) -acetamido) -2-ácido hidroxibenzóico. 8H derivado hidrogenado em uma escala de 0,1 mmol via procedimento geral h (89%); δH (400 MHz, d-CDCI3): 2.29 (s, 3H, CH3), 2.57 (s, 6H, CH3), 2.86 (s, 3H, CH3), 3.82 (s, 2H, CH2), 4.79 (s, 2H, CH2), 6.43 (d, J = 8.3 Hz, 1 H, CH), 6.55 (s, 1 H, CH), 6.84-7.01 (m, 4H, CH), 7.02-7.17 (m, 2H, CH), 7.85 (d, J = 8.3 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3): 20.8, 22.6, 29.5, 34.8, 49.6, 52.2, 1 11.7, 1 15.2, 1 15.4, 1 16.9, 1 18.9, 130.2, 130.3, 131.4, 131.8,132.0, 132.3, 140.5, 142.6, 147.2, 160.9, 162.8, 163.4, 166.8, 171.8; HRMS (ES+) Calculado para [C26H27FN2O6S+H] 514,16, resultou em 515,20; HPLC (l) tR = 19,48 min (96,92%), (II), tR = 30,84 min (92,79%).
Figure img0074
[0145] 2-hidroxi-4-(N-((perfluorofenil)metil) -2- ((N, 2,4,6-tetrametilfenil) sulfonamido)-acetamido) ácido benzóico. 8i derivado hidrogenado em uma escala de 0,16 mmol via procedimento geral h (90%); δH (400 MHz, d-DMSO): 2.24 (s, 3H, CH3), 2.40 (s, 6H, CH3), 2.73 (s, 3H, CH3), 3.71 (s, 2H, CH2), 4.93 (s, 2H, CH2), 6.60 (d, J = 8.5 Hz, 1 H, CH), 6.79 (s, 1 H, CH), 6.97 (s, 2H, CH), 7.76 (d, J = 8.4 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, d-DMSO): 20.8, 22.6, 34.6, 36.8, 49.5, 1 15.4, 131.6, 136.4, 141.3, 145.3, 162.9, 166.7, 172.7; HRMS (ES+) Calculado para [C26H23F5N2O6S +H] 586,12, resultou em 587,10; HPLC (l) tR = 20,63 min (99,83%), (II), tR = 32,50 min (98,56%).
Figure img0075
[0146] 4- (N- (4- (terc-butil) benzil) -2 - ((N, 2,4,6-tetrametilfenil) sulfonamido) -acetamido) -2-ácido hidroxibenzóico. 8k derivado hidrogenado em uma escala de 0,08 mmol via procedimento geral h (40%); δH (400 MHz, d-CDCI3): 1.29 (s, 9H, CH3), 2.29 (s, 3H, CH3), 2.57 (s, 6H, CH3), 2.86 (s, 3H, CH3), 3.81 (s, 2H, CH2), 4.79 (s, 2H, CH2), 6.47 (d, J = 8.5 Hz, 1 H, CH), 6.57 (s, 1 H, CH), 6.94 (s, 2H, CH), 7.03 (d, J = 8.2 Hz, 2H, CH), 7.27 (d, J = 8.2 Hz, 2H, CH), 7.84 (d, J = 8.4 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3): 20.5, 20.8, 22.6, 31.1 , 34.3, 34.6, 49.5, 52.7, 1 16.8, 1 18.9, 125.3, 127.9, 131.5, 131.7, 132.2, 133.1 , 140.5, 142.5, 150.5, 162.7, 166.7, 173.0, 177.0; HRMS (ES+) calculado para [C30H36F5N2O6S+H] 552,23, resultou em 553,20; HPLC (l) t R = 23,33 min (98,57%), (II), tR = 37,15 min (98,89%).
Figure img0076
[0147] 4- (N- (3,5-di-terc-butilbenzil) -2 - ((N, 2)4,6-tetrametilfenil) sulfonamido) -acetamido) -2-ácido hidroxibenzóico. 8I derivado hidrogenado em uma escala de 0,07 mmol via procedimento geral h (65%); δH (400 MHz, d-CDCI3): 1.24 (s, 18H, CH3), 2.28 (s, 3H, CH3), 2.58 (s, 6H, CH3), 2.81 (s, 3H, CH3), 3.83 (s, 2H, CH2), 4.83 (s, 2H, CH2), 6.46 (d, J = 8.4 Hz, 1 H, CH), 6.55 (s, 1 H, CH), 6.93 (s, 2H, CH), 6.95 (s, 2H, CH), 7.28 (s, 1 H, CH), 7.83 (d, J = 8.4 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3): 20.5, 20.8, 22.6, 31.2, 34.4, 34.5, 49.5, 53.4, 121.3, 122.9, 131.4, 131.7, 132.0, 135.0, 140,5, 142,5, 150,8, 162,7, 177,1; HRMS (ES+) Calculado para [C34H44N2O6S+H] 608,29, resultou em 609,30; HPLC (l) tR = 26,49 min (99,72%), (II), tR = 42,87 min (98,62%).
Figure img0077
[0148] 2-hidroxi-4- (N- (naftalen-2-ilmetil) -2 - ((N, 2,4,6-tetrametilfenil) sulfonamido) -acetamido) ácido benzóico. 8j derivado hidrogenado em uma escala de 0,09 mmol via procedimento geral h (40%); δH (400 MHz, d-CDCI3): 2.24 (s, 3H, CH3), 2.57 (s, 6H, CH3), 2.89 (s, 3H, CH3), 3.84 (s, 2H, CH2), 4.99 (s, 2H, CH2), 6.42 (d, J = 8.2 Hz, 1 H, CH), 6.58 (s, 1 H, CH), 6.91 (s, 2H, CH), 7.27 (s, 1 H, CH), 7.38-7.50 (m, 2H, CH), 7.54 (s, 1 H, CH), 7.68-7.88 (m, 4H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3): 20.5, 20.7, 22.6, 34.7, 49.6, 53.1 , 11 1 .8, 1 16.8, 1 18.9, 125.9, 126.1 , 127.5, 127.6, 128.3, 131.4, 131.8, 132.2, 132.6, 133.0, 133.6, 140.5, 142.5 147.4, 162.8, 167.0, 172.5, 177.0; HRMS (ES+) calculado para [C30H30N2O6S+H] 546,18, resultou em 547,20; HPLC (I), tR = 21.21 min (97,90%), (II), tR = 33,46 min (95,26%).
Figure img0078
[0149] 2-hidroxi-4- (2-((2,3,4,5,6-penta- fluoro-N-metilfenil) sulfonamido) -N - ((tetra-hidrofuran-2-il) metil) acetamido) ácido benzoico. 8m derivado hidrogenado em uma escala de 0,1 mmol via procedimento geral h (70%); δH (400 MHz, d-CDCI3): 1.41 -1.60 (m, 1 H, CH), 1.79-2.01 (m, 3H, CH2, CH), 3.07 (s, 3H, CH3), 3.67 (d, J = 6.5 Hz, 2H, CH2), 3.71 - 3.89 (m, 2H, CH2), 3.93-4.21 (m, 2H, CH2), 6.80 (d, J = 8.2 Hz, 1 H, CH), 6.89 (s, 1 H, CH), 7.95 (d, J = 8.3 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3): 20.5, 25.2, 28.8, 31.7, 35.7, 36.8, 52.0, 52.9, 67.7, 116.7, 118.6, 132.3, 146.9, 162.9, 163.3, 171.9, 176.1 ; HRMS (ES+) calculado para I ’ ’+H] 538,08, resultou em 539,10; HPLC (l) tR = 24,63 min (97,67%), (II), tR = 26,45 min (95,84%).
Figure img0079
[0150] 2-hidroxi-4-(2-((2,3,4,5,6-pentafluoro- N-metilfenil) sulfonamida) -N- (tiofen-2-ilmetil) acetamido) ácido benzóico. 8n derivado hidrogenado em uma escala de 0,1 mmol via procedimento geral h (95%): δH (400 MHz, d-CDCI3) 3.03 (s, 3H, CH3), 3.97 (s, 2H, CH2), 4.83 (s, 2H, CH2), 6.52 (d, J= 8.3 Hz, 1H, CH), 6.65 (s, 1H, CH), 6.68 (s, 1H, CH), 6.786.85 (m, 1 H, CH), 7.17 (d, J=5.4 Hz, 1H, CH), 7.87 (d, J = 8.4 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3) 20.5, 22.6, 29.3, 29.6, 31.6, 32.3, 34.2, 35.9, 47.8, 52.0, 52.2, 1 12.1 , 117.1 , 1 19.0, 126.3, 126.6, 127.6, 132.7, 137.8, 146.8, 147.1 , 163.1 , 163.2, 165.7, 172.5, 176.5; HRMS (ES+) calculado para [C21H15F5N2O6S2 +H] 550,03, resultou em 551,0.; HPLC (l) tR = 26,91 min (64,94%), (II), tR = 30,17 min (92,72%).
Figure img0080
[0151] 2-hidroxi-4-(N-((1-metil-1H-imidazol-2-il) metil) -2 -((2,3,4,5,6-penta- fluoro-N-metilfenil) sulfonamido)acetamido) ácido benzóico. 8o derivado hidrogenado em uma escala 0,16 mmol via procedimento geral h (54%): δH (400 MHz, d-DMSO) 2.94 (s, 3H, CH3), 3.60 (s, 3H, CH3), 3.61 (s, 2H, CH2), 4.99 (s, 2H, CH2), 6.64 (s, 1 H, CH), 6.78 (s, 1 H, CH), 7.18 (s, 1 H, CH), 7.37 (s, 1 H, CH), 7.72 (s, 1 H, CH); δC (100 MHz, d-DMSO); 33.1 , 34.6, 47.8, 49.5, 106.0, 1 13.2, 120.5, 127.1 , 131.4, 131.9, 138.2, 140.6, 142,9, 147,3, 152,4, 164,8, 166,9, 171,8; HRMS (ES+) calculada para [C21H17F5N4O6S2+H] 548,08, resultou em 549,10; HPLC (l) tR = 17,52 min (74,54%), (II), tR = 15,87 min (79,92%).
Figure img0081
[0152] 4-(N- (ciclopropilmetil) -2 - ((2,3,4,5,6-pentafluoro- N-metilfenil) sulfonamido) acetamido) -2-ácido hidroxibenzóico. 8p derivado hidrogenado em uma escala de 0,4 mmol via procedimento geral h (87%): δH (400 MHz, d-CDCI3) 0.04-0.18 (m, 2H, CH2), 0.40-0.59 (m, 2H, CH2), 0.78-1.00 (m, 1H, CH), 3.07 (s, 3H, CH3), 3.49 (d, J = 7.2 Hz, 2H, CH2), 4.04 (s, 2H, CH2), 6.83 (s, 1 H, CH), 6.90 (s, 1 H, CH), 8.00 (d, J = 8.3 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3): 3.5, 9.4, 20.5, 35.8, 52.0, 53.8, 1 11.9,117.2, 1 19.1 , 132.6, 147,4, 163,0, 165,7, 172,9; HRMS (ES+) calculada para [C20H17F5N2O6S2 +H] 508,07, resultou em 509,10; HPLC (l) tR = 26,33 min (97,61%), (II), tR = 29,31 min (96,90%).
Figure img0082
[0153] 4- (N- (biciclo [2.2.1] heptan-2-ilmetil) -2 - ((2,3,4,5,6- pentafluoro-N-metilfenil) sulfonamido) acetamido) -2- ácido hidroxibenzóico.8q derivado hidrogenado em uma escala de 0,3 mmol via procedimento geral h h (66%): δH (400 MHz, d-CDCI3) 0.40-0.61(m, 1 H, CH), 0.85-1.07 (m, 2H, CH2), 1.08-1.27 (m, 3H, CH2, CH), 1.28-1.45 (m, 2H, CH2), 1.721.90 (m, 1 H, CH), 1.99 (s, 1 H, CH2), 2.07 (s, 1 H, CH2), 2.94 (s, 3H, CH3), 3.48-3.70 (m, 2H, CH2), 4.00 (s, 2H, CH2), 6.83 (d, J = 8.4 Hz, 1 H, CH), 6.91 (s, 1 H, CH), 7.86 (d, J = 8.2 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3): 28.2, 29.4, 34.3, 34.4, 37.7, 38.7, 39.6, 42.6, 48.9, 1 13.2, 131.5, 131.8, 137.2, 140.4, 142.5, 148.3, 164.4, 166.2, 171.3; HRMS (ES+) calculado para [C24H23F5N2O6S+H] 562,12, resultou em 563,10; HPLC (l) tR = 30,77 min (98,73%), (II), tR = 36,21 min (99,12%).
Figure img0083
[0154] 4- (N- (benzil-2-((2,3,4,5,6-pentafluoro-N-metilfenil) sulfonamido) -acetamido)-2-ácido hidroxibenzóico. 8s derivado hidrogenado em uma escala de 0,3 mmol via procedimento geral h (87%): δH (400 MHz, d-CDCI3) 3.10 (s, 3H, CH3), 4.06 (s, 2H, CH2), 4.78 (s, 2H, CH2), 6.55 (d, J = 8.6 Hz, 1 H, CH), 6.69 (s, 1 H, CH), 7.04-7.16 (m, 2H, CH), 7.26-7.32 (m, 3H, CH), 7.89 (d, J = 8.4 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3): 29.6, 30.3, 35.9, 50.8, 52.2, 53.2, 1 1 1.9, 1 15.8, 117.1, 1 19.1 , 128.0, 128.4, 128.6, 132.2, 132.6, 135.7, 139.1 , 143.5, 146.1 , 147.1, 163.1 , 166.0, 172.3; HRMS (ES+) calculado para [C23H17F5N2O6S+H] 544,07, resultou em 545,10; HPLC (l) tR = 19,74 min (97,50%), (II), tR = 30,90 min (96,37
Figure img0084
[0155] 4-(N- (4-terc-butil) benzil)-2-((2,3,4,5,6-pentafluoro-N-metilfenil) sulfonamido)acetamido) -2-ácido hidroxibenzóico. 8w derivado hidrogenado em uma escala de 0,4 mmol via procedimento geral h (92%): δH (400 MHz, d-CDCI3) 1.29 (s, 9H, CH3), 3.10 (s, 3H, CH3), 4.08 (s, 2H, CH2), 4.76 (s, 2H, CH2), 6.59 (d, J = 8.4 Hz, 1H, CH), 6.72 (s, 1H, CH), 7.01 (d, J = 8.1 Hz, 2H, CH), 7.29 (d, J = 8.15 Hz, 2H, CH), 7.90 (d, J = 8.4 Hz, 1H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3): 31 .1 , 32.0, 34.3, 35.8, 37.1 , 52.1 , 52.9, 116.9, 118.8, 125.4, 127.9, 132.50, 150.8, 162.92, 165.9, 172.4; HRMS (ES+) calculado para [C27H25F5N2O6S+H] 600,14, resultou em 601,10; HPLC (l) tR = 23,68 min (98,12%), (II), tR = 37,81 min (98,08%).
Figure img0085
[0156] 2-hidroxi-4- (N- (naftaleno-2-ilmetil) -2-((2,3,4,5,6-penta- fluoro-N-metilfenil) sulfonamida) acetamido) ácido benzóico. 8v derivado hidrogenado em uma escala de 0,4 mmol via procedimento geral h (73%): δH (400 MHz, d-CDCI3) 3.10 (s, 3H, CH3), 4.09 (s, 2H, CH2), 4.95 (s, 2H, CH2), 6.54 (d, J = 8.4 Hz, 1 H, CH), 6.72 (s, 1 H, CH), 7.23 (s, 1 H, CH), 7.40-7.56 (m, 3H, CH), 7.67-7.94 (m, 4H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3): 20.6, 35.7, 52.1 , 53.1 , 1 18.9, 125.8, 126.0, 126.1 , 127.5, 127.6, 128.5, 132.5, 132.7, 133.0, 133.1, 162.8, 166.1, 177.5; HRMS (ES+) calculado para [C27H19F5N2O6S+H] 594,09, resultou em 595,10; HPLC (l) tR = 21,64 min (90,45%), (II), tR = 34,27 min (88,02%).
Figure img0086
[0157] 4- (N- (4-fluorobenzil) -2 - ((2,3,4,5,6-penta- fluoro-N-metilfenil) sulfonamida) acetamido) -2-ácido hidroxibenzóico. 8t derivado hidrogenado em uma escala de 0,15 mmol via procedimento geral h (63%): δH (400 MHz, d-CDCI3) 3.09 (s, 3H, CH3), 4.05 (s, 2H, CH2), 4.75 (s, 2H, CH2), 6.54 (d, J = 8.53 Hz, 1 H, CH), 6.68 (s, 1 H, CH), 6.90-7.03 (m, 2H, CH), 7.03-7.12 (m, 2H, CH), 7.92 (d, J = 8.50 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, d- CDCI3): 20.5, 29.6, 35.9, 52.0, 52.2, 52.4, 1 12.1 , 1 15.5, 1 15.7, 1 17.1 , 1 17.6, 119.1 , 120.4, 129.6, 130.3, 130.4, 131.7, 132.7, 146.9, 147.0, 161.2, 163.1 , 163.6, 165,9, 172,7, 176,5; HRMS (ES+) calculada para [C23H16F6N2O6S+H] 562,06, resultou em 563,10; HPLC (l) tR = 19,99 min (98,87%), (II), tR = 31,40 min (97,59%).
Figure img0087
[0158] 2-hidroxi-4- (2 - ((2,3,4,5,6-pentafluoro-N-metilfenil) sulfonamida) -N-((perflurofenil) metil) acetamido)ácido benzóico. 8U derivado hidrogenado em uma escala de 0,07 mmol via procedimento geral h (89%): δH (400 MHz, d-CDCI3) 3.06 (s, 3H, CH3), 4.01 (s, 2H, CH2), 4.94 (s, 2H, CH2), 6.62 (d, J = 8.34 Hz, 1 H, CH), 6.73 (s, 1 H, CH), 7.95 (d, J = 8.52 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3): 29.6, 30.8, 31.3, 35.8, 40.0, 52.0, 58.3, 61.4, 109.0, 112.9, 1 15.6, 1 16.8, 118.4, 125.9, 133.0, 136.1 , 136.3, 136.5, 138.5, 138.6, 138.9, 142.5, 143.5, 144.0, 145.0, 146.0, 146.5, 163.1 , 165.9, 171,5, 173,4; HRMS (ES+) calculada para [C23H12F10N2O6S+H] 634,03, encontrada 635,0; HPLC (l) tR = 20,88 min (98,71%), (II), tR = 33,06 min (98,39%).
Figure img0088
4-(N-(3,5-di-terc-butilbenzil)-2-((2,3,4,5,6-penta- fluoro-N-metilfenil) sulfonamida) acetamido) -2-ácido hidroxibenzóico. 8x derivado hidrogenado em uma escala de 0,07 mmol via procedimento geral h (89%): δH (400 MHz, d-CDCI3) 3.06 (s, 3H, CH3), 4.01 (s, 2H, CH2), 4.94 (s, 2H, CH2), 6.62 (d, J = 8.34 Hz, 1H, CH), 6.73 (s, 1H, CH), 7.95 (d, J = 8.52 Hz, 1 H, CH); δC (100 MHz, d-CDCI3): 29.6, 30.8, 31.3, 35.8, 40.0, 52.0, 58.3, 61.4, 109.0, 1 12.9, 1 15.6, 1 16.8, 1 18.4, 125.9, 133.0, 136.1 , 136.3, 136.5, 138.5, 138.6, 138.9, 142.5, 143.5, 144.0, 145.0, 146.0, 146.5, 163.1 , 165.9, 171.5, 173.4; HRMS (ES+) calculado para [C23H12F10N2O6S+H] 634,03, resultou em 635,0; HPLC (l) tR = 26,48 min (99,42%), (II), tR = 43,39 min (98,62%).Outros compostos da divulgação foram sintetizados de acordo com o Esquema 2:
Figure img0089
Esquema 2: (A) a) i) KtOBu, BnBr, DMF, 0 °C ^ RT., 1 h; em seguida, KtOBu, BnBr, DMF, 0 °C ^ RA, 16 h, 60%; b) SOCI2, t-butanol, DCM, 0 °C ^ RT, 83%; c) 1) aldeído, AcOH, 3Â Mol. crivos, CH3OH, 45 °C, 2h; 2) NaCNBH3, 45 °C, 16 h, 56-96%; d) Aldeído, 3Â Mol. crivos, CH2CI2, NaOAc, Na (OAc)3BH, RT, 16 h, 82%; (E) d) C5F5SO2Cl, K2CO3, CH3NC, 16 h, 0 °C ^ RT, 60-77%; f) 1) p-CI (C6H6) BnBr, Cs2CO3, DMF, R.T., N2, 2h, 70%; g) CH2CI2: TFA 1: 1, à RT, 1 h, 90%; h) PPh3CI2, CHCI3, 30 min, 100 ° C, aquecimento assistido por microondas, 20-98%; i) H2, Pd / C, 1: 1 de THF / CH3OH, 3-10h, RT, 35-95%. IA) 1: 1 de TFA / DCM, 30 min,temperatura ambiente DMF = N,N -dimetilformamida, TFA = ácido trifluoroacético.
[0159] Procedimento Geral a (Dibenzilação de ácido salicílico).A uma solução agitada de 4-amino-ácido salicílico (1,0 eq) em DMF (0,1 M) a 0 °C foi adicionado KOtBu (1,2 eq). Após 15 min, brometo de benzil (1,2 eq) foi adicionado gota a gota. A suspensão foi deixada a agitar à temperatura ambiente durante mais 4 h antes que o recipiente de reação fosse novamente arrefecido a 0 ° C. Mais uma vez, KOtBu (1,2 eq) foi adicionado anterior à adição gota a gota de brometo de benzil (1,2 eq). A reação foi deixada a agitar durante a noite antes de ser desativada com H2O. A solução foi então extraída várias vezes com acetato de etil e as fases orgânicas combinadas. Os orgânicos foram então lavados com H2O e salmoura e depois concentrados, secos em Na2SO4 e concentrados in vácuo. O resíduo resultante foi purificado utilizando o cromatógrafo em coluna automatizada Biotage Isolera com uma mistura gradiente de 4:1 Hexano/EtOAc sob pressão reduzida.
[0160] Procedimento Geral b (proteção de t-butil de ácido salicílico). O ácido 4-aminobenzóico foi suspenso em SOCI2 (2,0 eq.) a 25 °C. A suspensão foi submetida a refluxo durante 2 h. SOCI2 foi removido sob pressão reduzida, os últimos vestígios por azeótropo com CHCI3 (x3). O cloreto de ácido resultante foi dissolvido em CH2CI2 e uma solução de t- butanol em CH2CI2 foi adicionada à solução agitada que foi arrefecida a 0 ° C. Um precipitado de sólido branco foi formado - o sal hidrocloridrato foi resfriado com 1,0 M KOH e extraído com EtOAc (4x).
[0161] Procedimento Geral c (aminação reduzia utilizando cianoborohidreto de sódio). A uma solução de 4-amino ácido salicílico protegidos 1 / 1a (1,0 eq) e ácido acético (1,5 eq) agitada em CH3OH (0,1 M) anidro com 3 Â mol. crivos foi adicionado o aldeído (1,0 eq). A solução foi aquecida a 45 ° C durante 3 hr e, em seguida, deixada arrefecer até a temperatura ambiente. Em seguida, NaCNBH3 (1,3 equiv) foi adicionado em porções e a reação foi deixada a agitar à temperatura ambiente durante a noite. A reação foi diluída com CH2CI2, filtrada e concentrada in vácuo. O concentrado foi purificado utilizando o cromatógrafo em coluna automatizada Biotage Isolera utilizando um gradiente de hexanos/EtOAc para fornecer anilinas secundárias 2.
[0162] Procedimento Geral d (aminação redutora utilizando triacetoxiborohidreto de sódio). A uma solução de 4-amino ácido salicílico protegido 1/1a (1,2 eq) e ácido acético (1,2 eq) foi agitada em dicloroetano anidro (0,1 M) com 3 Â mol. crivos foi adicionado o aldeído (1,0 eq). A solução foi então agitada à temperatura ambiente durante 5 min, após que Na(OAc)3BH (1,5 eq) foi adicionado e deixado a agitar à temperatura ambiente durante a noite. A reação foi diluída com CH2CI2, filtrada e concentrada in vácuo. O concentrado foi purificado utilizando o cromatógrafo em coluna automatizada Isolera Biotage utilizando um gradiente de hexanos / EtOAc para fornecer derivados da anilina secundária 2.
[0163] Procedimento Geral E (sulfonilação do éster t-butílico de glicina e sarcosina). Uma solução de éster de t-butil de amino ácido (1 eq) e K2CO3 (1,1 eq) foram dissolvidos em acetonitril anidro e arrefecidos até 0 °C antes de cloreto de sulfonil (1 eq) ser adicionado. A solução resultante foi deixada a agitar durante a noite à temperatura ambiente. A reação foi concentrada in vácuo e o resíduo foi dissolvido em CH2CI2. Os orgânicos foram combinados e, em seguida, lavados sequencialmente com 0,1 M de HCl, NaHCO3 saturado e salmoura. Os orgânicos foram então secos em Na2SO4 e concentrados in vacuo para resultar em derivados 3 sem purificação adicional.
[0164] Procedimento Geral f (alquilação de sulfonamida). Uma solução de 3 (1 eq) e CS2CO3 (1,3 eq) foram dissolvidos em DMF anidro, seguidos de adição de p-CIBnBr (1 eq). A solução resultante foi deixada a agitar durante 2 h à temperatura ambiente, a reação foi extinta com H 2 O e, em seguida, extraída repetidamente com acetato de etil. As fases orgânicas foram combinadas e lavadas com H2O, salmoura, secas em Na2SO4 e concentradas in vácuo. O resíduo resultante foi purificado utilizando o cromatógrafo em coluna automatizada Biotage Isolera com uma mistura gradiente de 2: 1 Hexano / EtOAc sob pressão reduzida para fornecer o composto 4.
[0165] Procedimento geral g (desproteção do éster t-butil). Uma solução de éster de t-butil de amino ácido (1 eq) foi dissolvida em TFA e diluída com CH2Cl2 em uma mistura de 1: 1 (0,1 M) de solução. A solução resultante foi deixada a agitar durante 1 h e, em seguida, co-evaporada com CH3OH (3x) e CHCI3 (3x). O resíduo resultante foi levado adiante sem purificação, para se obter os compostos 5.
[0166] Procedimento Geral h (PPh3CI2 acoplamento peptídico).A uma solução agitada do ácido carboxílico (5) (1,1 eq) em CHCI3 (0,1 M) adicionou-se PPh3CI2 (2,5 eq). A reação foi deixada a agitar durante 5 minutos à temperatura ambiente ou até dissolução completa, seguida pela adição gota a gota da anilina secundária 2 (1,0 eq). A mistura de reação foi depois aquecida em um microondas a 100 °C durante 30 min. A mistura de reação foi deixada arrefecer até à temperatura ambiente, seguida por lavagem sequencial com NaHCO3 saturado e salmoura. As camadas orgânicas foram depois secas em Na2SO4 e concentradas in vácuo. O concentrado foi absorvido diretamente em sílica para purificação de cromatografia em coluna utilizando um gradiente de hexanos e EtOAc para fornecer derivados 6.
[0167] Procedimento Geral i (hidrogenólise do éster de benzil e éter benzílico). O ácido salicílico de benzil protegido, 6 (1 eq) foi dissolvido em uma solução agitada de CH3OH/THF (1: 2, 0,1 M). A solução foi exaustivamente desgaseificada antes da adição cuidadosa de 10% de Pd /C (10 mg / mmol). O gás H2 foi borbulhado através do solvente durante 5 minutos antes que a solução fosse colocada sob uma atmosfera de gás H2 e agitada continuamente durante 2-5h, monitorando a conclusão da reação através de TLC. o gás H2 foi evacuado e a reação foi filtrada através de celite para remover o catalisador de Pd e concentrado in vácuo. O resíduo resultante foi adsorvido em sílica e colocado em uma coluna utilizando uma coluna Biotage Isolera em um gradiente de CH2CI2, CH3OH e 1% de ácido acético para fornecer série de molécula final 7.
[0168] Procedimento geral i (desproteção de ácido de grupos funcionais de t-butil). O ácido salicílico protegido de t-butil foi dissolvido com razão de 1: 1 de TFA / DCM e agitado durante 30 min. A solução bruta foi concentrada in vacuo. O resíduo resultante foi adsorvido em sílica e colocado em uma coluna utilizando uma coluna Biotage Isolera em um gradiente de CH2CI2, CH3OH e 1% de ácido acético para fornecer série de molécula final 7.
[0169] Dados de caracterização intermediaries
Figure img0090
[0170] Benzil 4-amino-2- (benziloxi) -benzoato (Esquema 2 - 1).O composto 1 foi sintetizado de acordo com o procedimento geral a, obtendo-se o produto final como um sólido cor de laranja (47%): δH (400 MHz, d- CDCI3) 5.07 (s, 2H, CH2), 5.21 (s, 2H, CH2), 5.99 (br s, 2H, NH2), 6.18 (dd, J = 8.6 e 1.8 Hz, 1 H, CH)), 6.32 (d, J = 1.7 Hz, 1 H, CH), 7.287.38 (8H, m, CH), 7.47 (d, J = 7.2 Hz, 2H, CH), 7.60 (d, J = 8.6 Hz, 1 H, CH);; δC (400 MHz, CDCI3) 65.8, 70.2, 99.1 , 106.7, 109.0, 126.8, 127.5, 127.7, 127.9, 128.3,128.4, 134.3, 136.6, 136.7, 152.2, 160.7, 165.7; LRMS (ESI+) calculado para C21H19NO3 [M+H]+ 333,2, resultou em 333,2.
[0171]
Figure img0091
[0172] Terc-butil-4-aminobenzoato (1a). 1a derivado sintetizado de acordo com o procedimento geral b em (83%): 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1.06 - 1 .19 (m, 7H), 1.39 (s, 1 H). 1.46 (s, 16H), 1.52 (d, J = 3.6 Hz, 3H), 1.88 (s, 1 H), 1.96 (s, 6H), 4.00 (q, J = 7.1 Hz, 4H), 5.82 (d, J = 15.3 Hz, 4H), 6.47 - 6.55 (m, 4H), 7.50 - 7.59 (m, 4H), 7.79 -7.98 (m, 2H). 13C NMR (101 MHz, DMSO-d6) δ 28.16, 28.30, 79.14, 1 12.80, 117.95, 119.36, 1 19.66, 129.89, 131.18, 153.37, 165.58. LRMS (ESI+) calculado para C11H16NO2 [M+H]+ 194,11, resultou em 194,15.
Figure img0092
[0173] Terc-butilo 4- (benzilamino) benzoato (2a). 2a derivado sintetizado de acordo com o procedimento geral c em (67%):1H NMR (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 1.62 (s, 9H), 4.37 (d, J = 5.3 Hz, 2H), 4.76 (t, J = 5.7 Hz, 1 H), 6.54 - 6.63 (m, 2H), 7.26 - 7.41 (m, 5H), 7.84 - 7.94 (m, 2H). 13C NMR (101 MHz, Clorofórmio-d) δ 28.27, 47.41, 79.74, 111.50, 120.25, 127.19, 127.26, 128.61, 131.25, 138.56, 151.50, 166.14. LRMS (ESI+) calculado para C18H22NO2 [M+H]+ 284,15, resultou em 284,16.
Figure img0093
[0174] Benzil 4 - ((4-metilbenzil) amino) benzoato (2b). 2b derivado sintetizado de acordo com o procedimento geral c em (80%): 1H NMR (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 1.50 - 1.57 (m, 1 H), 2.36 (s, 3H), 4.33 (d, J = 4.7 Hz, 2H), 4.57 (d, J = 5.4 Hz, 1 H), 5.30 (d, J = 14.9 Hz, 6H), 6.55 - 6.63 (m, 2H), 7.17 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.24 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.29 - 7.43 (m, 3H), 7.45 (dt, J = 6.1 , 1.6 Hz, 2H), 7.88 - 7.97 (m, 2H). 13C NMR (101 MHz, Clorofórmio-d) δ 20.97, 47.24, 53.36, 65.83, 111.51, 118.22, 127.26, 127.84, 128.37, 129.31, 131.58, 135.17, 136.58, 137.06, 151.83, 166.50. LRMS (ESI+) calculado para C22H22NO2 [M+H]+ 332,15, resultou em 332,17.
Figure img0094
[0175] Benzil 4-((4-isopropilbenzil) amino) benzoato (2c). 2c derivado sintetizado de acordo com o procedimento geral c em (76%): 1H NMR (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 1.26 (d, J = 7.0 Hz, 6H), 2.91 (hept, J = 6.9 Hz, 1 H), 4.34 (s, 2H), 4.53 (s, 1H), 5.32 (s, 2H), 6.59 (dd, J = 8.5, 1.2 Hz, 2H), 7.22 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.24 - 7.40 (m, 4H), 7.44 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.88 - 7.95 (m, 2H). 13C NMR (101 MHz, Cloroformado) δ 23.87, 33.68, 47.31, 65.82, 111.48, 118.30, 126.69, 127.39, 127.81, 127.84, 128.35, 131.59, 135.47, 136.56, 148.18, 151.76. LRMS (ESI+) calculado para C24H26NO2 [M+H]+ 360,18, resultou em 360,18.
Figure img0095
[0176] benzil 4-((4-(ert-butil)benzil)amino) benzoato (2d). 2d derivado sintetizado de acordo com o procedimento geral c: 1H NMR (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 1.34 (s, 9H), 4.35 (s, 2H), 5.33 (s, 2H), 6.56 - 6.63 (m, 2H), 7.23 - 7.48 (m, 9H), 7.89 - 7.96 (m, 2H). 13C NMR (101 MHz, Clorofórmio-d) δ 31.23, 34.41, 47.21, 65.82, 111.49, 118.29, 125.56,127.13, 127.82, 127.85, 128.36, 131.60, 135.13, 151.79, 166.46. LRMS (ESI+) calculado para C25H28NO2 [M+H]+ 374,20, resultou em 374,22.
Figure img0096
[0177] terc-butil 4 - ((4- (terc-butil) benzil) amino) benzoato (2d). 2d derivado sintetizado de acordo com o procedimento geral C em (71 %): 1H NMR (400 MHz, Methanol-d4) δ 1.29 (s, 5H), 1.54 (s, 5H), 4.32 (s, 1 H), 6.56 (d, J = 8.7 Hz, 1 H), 7.26 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 7.35 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 7.62 - 7.70 (m, 1H). LRMS (ESI+) calculado para C25H28NO2 [M+H]+ 331,22, resultou em 331,24.
Figure img0097
[0178] Benzil 4-((4- (trifluorometil)benzil)amino) benzoato (2e). 2e derivado sintetizado de acordo com o procedimento geral C no (71%):LRMS (ESI+) calculada para C22H19F3NO2 [M+H]+ 386,13, resultou em 386,15.
Figure img0098
[0179] Benzil 4-((4-cianobenzil)amino)benzoato de (2f). Derivado 2f sintetizado de acordo com o procedimento geral d sobre (60%): 1H NMR (400 MHz, Clorofórmio-d) 6 1.24 (t, J = 7.2 Hz, 1 H), 2.02 (s, 1 H), 4.10 (q, J = 7.1 Hz, 1 H), 4.41 (d, J = 4.4 Hz, 2H), 4.72 (s, 1 H), 5.12 (t, J = 6.0 Hz, 1 H), 5.27 (s, 2H), 6.52 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.23 - 7.46 (m, 8H), 7.54 (dd, J = 8.1 , 5.6 Hz, 3H), 7.85 (d, J = 8.4 Hz, 2H). 13C NMR (101 MHz, clorofórmio-d) δ 14,07, 46,77, 63,75, 65,90, 1 10,75, 11 1,65, 118,61 (d, J = 19,5 Hz), 126,87, 127,50, 127,85 (d, J = 15,2 Hz), 128,41, 131,58, 132,02, 132,33, 136,38, 144,38, 151.46, 166,51. LRMS (ESI+) calculado para C22H19N2O2 [M+H]+ 343,13, resultou em 343,14.
Figure img0099
[0180] Benzil 4-((3,5-di-terc-butilbenzil)amino)benzoato (2 g). 2g derivado sintetizado de acordo com o procedimento geral d em (60%): 1H NMR (400 MHz, clorofórmio-d) δ 1.26 (d, J = 7.0 Hz, 6H), 2.91 (hept, J = 6.9 Hz, 1 H), 4.34 (s, 2H), 5.32 (s, 2H), 6.59 (dd, J = 8.5, 1.2 Hz, 2H), 7.22 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.24 - 7.40 (m, 4H), 7.44 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.88 - 7.95 (m, 2H). 13C NMR (101 MHz, clorofórmio-d) δ 23.87, 33.68, 47.31, 65.82, 1 1 1,48, 1 18,30, 126,69, 127,39, 127,81, 127,84, 128,35, 131,59, 135,47, 136,56, 148,18, 151,76. LRMS (ESI+) calculado para C29H36NO2 [M+H]+ 430,26, resultou em 430,28.
Figure img0100
[0181] terc-butil 4 - ((3,5-di-terc-butilbenzil) amino) benzoate (2g). 2g derivado sintetizado de acordo com o procedimento geral d em (85%): 1H NMR (400 MHz, clorofórmio-d) δ 1.47 (s, 18H), 1 .68 (s, 9H), 4.43 (d, J = 5.1 Hz, 2H), 4.67 (t, J = 5.3 Hz, 1 H), 6.66 - 6.73 (m, 2H), 7.32 (d, J = 1.8 Hz, 2H), 7.50 (t, J = 1.8 Hz, 1 H), 7.93 - 8.00 (m, 2H). 13C NMR (101 MHz, Clorofórmio-d) δ 28.34, 31.49, 34.82, 48.43, 79.64, 111.45, 120.27, 121.47, 121.90, 131.32, 137.58, 151.18, 151 .74, 166.15. LRMS (ESI+) calculado para C26H38NO2 [M+H]+ 396,28, resultou em 396,30.
Figure img0101
[0182] Benzil 4-((3,5-bis (trifluorometil)benzil)amino)benzoate (2h). 2h derivado sintetizado de acordo com o procedimento geral c no (41%): 1H NMR (400 MHz, clorofórmio-d) δ 4.53 (d, J = 5.8 Hz, 2H), 4.71 (t, J = 5.9 Hz, 1 H), 5.31 (s, 2H), 6.52 - 6.61 (m, 2H), 7.27 - 7.39 (m, 3H), 7.39 - 7.46 (m, 2H), 7.80 (s, 3H), 7.87 - 7.96 (m, 2H). 13C NMR (101 MHz,Clorofórmio-d) δ 46.80, 65.99, 111.75, 119.52, 121.39, 127.01, 127.86, 127.89, 128.37, 131,66, 132,13, 136,35, 141.29, 150,87, 166,27. LRMS (ESI+) calculada para C23H18F6NO2 [M+H]+454,12, resultou em 454,15.
Figure img0102
[0183] Benzil 4-((3-cianobenzil)amino)benzoato (2i). 2i derivado sintetizado de acordo com o procedimento geral d em (83%): 1H MNR (400 MHz, clorofórmio-d) δ 1.24 (q, J = 7.6, 7.1 Hz, 1 H), 3.49 (d, J = 7.9 Hz, 1 H), 4.38 (d, J = 5.7 Hz, 3H), 4.67 (d, J = 2.9 Hz, 3H), 5.14 (d, J = 4.9 Hz, 2H), 5.26 (s, 3H), 6.49 - 6.57 (m, 3H), 7.23 - 7.39 (m, 5H), 7.34 - 7.43 (m, 5H), 7.44 - 7.63 (m, 11 H), 7.80 - 7.88 (m, 3H). 13C NMR (101 MHz,Clorofórmio-d) δ 46.40, 63.43, 65.96, 111.68, 111.95, 112.33, 118.40, 127.78, 127.94, 128.42, 129.06 , 129.42 , 129.96 , 130.36 , 130.76 , 130.89 , 130.99 , 131.49 , 131.60 , 136.33 , 140.30 , 142.65 , 151.50 , 166.67 . LRMS (ESI+) calculado para C22H19N2O2 [M+H]+ 343,13, resultou em 343,16.
Figure img0103
[0184] terc-butil ((perfluorofenil)sulfonil)glicinato (3). 3 derivado sintetizado utilizando o procedimento geral e (71%): δH (400 MHz, CDCI3) 1.40 (s, 9H, COO(CH3)3), 3.93 (s, 2H, CH2), 5.54 (s, 1 H, NH); δC (400 MHz, CDCI3) 27.5, 45.1 , 82.8, 115.6, 136.5, 144.8, 145.9, 167.0; LRMS (ESI+) calculado para C12H12F5NO4S [M+H]+ 361,0, resultou em 362,1.
Figure img0104
[0185] terc-butil N-(4-clorobenzil) -N- ((perfluorofenil) sulfonil) glicinato (4). 4 derivado sintetizado utilizando o procedimento geral f (71 %): δH (400 MHz, CDCI3) 1.37 (s, 9H, (CH3)3), 3.93 (s, 2H, CH2), 4.57 (s, 2H, CH2), 7.24 (d, J = 8.5 Hz, 2H, CH), 7.33 (d, J = 8.5 Hz, 2H, CH); δC (400 MHz, CDCI3) 27.5, 52.5, 53.0, 81.8, 1 12.6, 126.5, 130.1, 132.4, 134.3, 136.5, 144.8, 145.9, 167.0; LRMS (ESI+) calculado para C19H17F5CINO4S [M+H]+ 485,0, resultou em 486,1.
Figure img0105
[0186] N-(4-clorobenzil) -N- ((perfluorofenil)sulfonil)glicina (5). 5 derivado sintetizado utilizando o Procedimento Geral g (92%): δH (400 MHz, CDCI3) 4.13 (s, 2H, CH2), 4.58 (s, 2H, CH2), 7.25 (d, J = 8.2 Hz, 2H, CH), 7.35 (d, J = 8.2 Hz, 2H, CH); δC (400 MHz, CDCI3) 52.8, 54.2, 1 12.6, 126.5, 130.1, 132.4, 134.3, 136.5, 144.8, 145.9, 172.0; LRMS (ESI+) calculado para C15H9F5CINO4S [M+H]+ 428,9, resultou em 429,9.
Figure img0106
[0187] terc-butil4-(N-benzil-2((N-(4-clorobenzil)-2,3,4,5,6- pentafluorfenil)sulfonamindo)acetamido)benzoato (6a). 6a derivado sintetizado utilizando o procedimento geral h (61%): 1H NMR (400 MHz, clorofórmio-d) δ 1 .25 (s, 3H), 1 .56 (s, 27H), 2.04 (s, 1 H), 3.72 (s, 3H), 4.65 (s, 4H), 4.72 (s, 6H), 6.79 (d, J = 8.0 Hz, 6H), 7.02 (dd, J = 6.5, 2.9 Hz, 6H), 7.18 (d, J = 8.4 Hz, 6H), 7.23 - 7.31 (m, 16H), 7.88 (d, J = 8.1 Hz, 6H). 13C NMR (101 MHz, Clorofórmio-d) δ 27.93, 47.57 , 50.51 , 53.13 , 81.66 ,127.67 , 127.85 , 128.45 , 128.57 , 128.93 , 129.89 , 131.07 , 132.72 , 135.74 , 143.14 , 164.22 , 165.62 . LRMS (ESI+) calculado para C33H29F5CIN2O5S [M+H]+ 695,14, resultou em 695,16.
Figure img0107
[0188] Benzil4-(2-((N-(4-clorobenzil)-2,3,5,6-pentafluorfenil)sulfonamido)-N-(4-metilbenzil)acetamido)benzoato. 6b derivado sintetizado utilizando o procedimento geral h (68%): 1H NMR (400 MHz, clorofórmio-d) δ 1.27 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 2.05 (s, 1 H), 2.33 (s, 5H), 3.73 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 4.13 (q, J = 7.1 Hz, 1 H), 4.68 (d, J = 12.0 Hz, 5H), 5.34 (s, 3H), 6.83 (d, J = 8.1 Hz, 3H), 6.91 (d, J = 7.8 Hz, 3H), 7.08 (d, J = 7.8 Hz, 3H), 7.16 - 7.23 (m, 3H), 7.23 - 7.47 (m, 1 1 H), 7.98 (d, J = 8.2 Hz, 3H). 13C NMR (101 MHz, Clorofórmio-d) δ 20.98, 47.62, 50.54, 52.87, 66.97 , 127.97 , 128.16 , 128.31 , 128.51 , 128.55 , 128.94 , 129.14 , 129.91 ,130.46 , 131.34 , 132.66 , 132.76 , 134.25 , 135.46 , 137.66 , 143.77 , 164.96 , 165.49. LRMS (ESI+) calculado para C37H29CIF5N2O5S [M+H]+ 743,13, resultou em 743,15.
Figure img0108
[0189] Benzil-4- (2 - ((N-(4-clorobenzil) -2,3,4,5,6-pentafluorofenil) sulfonamido) -N - (4-isopropilbenzil) acetamido) benzoato (6c). 6c derivado sintetizado utilizando o procedimento geral h (55%): 1H NMR (400 MHz, clorofórmio-d) δ 0.88 (dt, J = 11.6, 7.3 Hz, 1H), 1.25 (d, J = 6.9 Hz, 12H), 2.90 (p, J = 6.9 Hz, 2H), 3.73 (s, 2H), 4.68 (d, J = 13.2 Hz, 6H), 5.35 (s, 4H), 6.82 (d, J = 8.1 Hz, 3H), 6.95 (d, J = 7.9 Hz, 3H), 7.1 1 - 7.21 (m, 7H), 7.26 (d, J = 3.1 Hz, 4H), 7.29 - 7.47 (m, 9H), 7.98 (d, J = 8.1 Hz, 3H). 13C NMR (101 MHz, Clorofórmio-d) δ 23.78, 33.65, 47.61, 50.50 , 52.93 , 66.99 , 126.51 , 127.95 , 128.17 , 128.32 , 128.52 , 128.56 , 128.94 , 129.93 , 130.46 , 131 .34 , 132.69 , 132.97 , 135.45 , 143.87 , 148.66 , 164.99 , 165.47 . LRMS (ESI+) calculado para C39H33CIF5N2O5S [M+H]+ 771,16, resultou em 771,17.
Figure img0109
[0190] benzil-4-(N- (4-(terc-butil) benzil) -2 - ((N- (4-clorobenzil) -2,3,4,5,6-pentafluorofenil) sulfonamido)acetamido) benzoato (6d). 6d derivado sintetizado utilizando o procedimento geral h (71%): 1H NMR (400 MHz, clorofórmio-d) δ 1.31 (d, J = 1.3 Hz, 10H), 3.72 (s, 1 H), 4.67 (d, J = 13.0 Hz, 4H), 5.34 (s, 2H), 6.82 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.95 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.18 (d, J = 8.0 Hz, 3H), 7.24 - 7.37 (m, 7H), 7.37 - 7.42 (m, 4H), 7.44 (d, J = 1 .9 Hz, 1 H), 7.98 (d, J = 8.1 Hz, 2H). 13C NMR (101 MHz, δ cloroformizado 31.14, 34.41, 47.59, 50.48, 52.85, 67.00, 125.35, 127.93, 128.17, 128.24, 128.33, 128.52, 128.94, 129.93, 131.35, 132.57, 132.66, 134.27, 135.42, 143.90, 165.00, 165.45. LRMS (ESI+) calculado para C40H35CIF5N2O5S [M+H]+ 785,18 resultou em 785,21.
Figure img0110
[0191] terc-butil-4- (2 - ((N- (4-clorobenzil) -2,3,4,5,6-pentafluorofenil) sulfonamido) -N- (4- (trifluorometil)benzil)acetamido) benzoato (6e). 6e derivado sintetizado utilizando o procedimento geral h (77%): 1 H NMR (400 MHz, clorofórmio-d) δ 1.57 (s, 5H), 3.75 (s, 1 H), 4.63 (s, 1 H), 4.77 (s, 1 H), 6.83 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 7.18 (dd, J = 8.2, 4.0 Hz, 2H), 7.27 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.55 (d, J = 8.0 Hz, 1 H), 7.92 (d, J = 8.2 Hz, 1 H). 13C NMR (101 MHz, clorofórmio-d) δ 27.92, 47.60, 50.51, 52.76 , 77.06 , 81.81 , 125.44 , 125.48 , 127.50 , 128.78 , 128.97 , 129.84 , 131.31 , 132.59 , 132.68 , 134.36 , 139.71 , 142.91 , 166.03 . LRMS (ESI+) calculado para C34H28CIF8N2O5S [M+H]+ 763,12 resultou em 763,15.
Figure img0111
[0192] Benzil-4- (2 - ((N- (4-clorobenzil) -2,3,4,5,6- pentafluorofenil) sulfonamido) -N- (4-cianobenzil) acetamido) benzoato (6f). 6f derivado sintetizado utilizando o procedimento geral H (60%): 1 H NMR (400 MHz, clorofórmio-d) δ 1.25 (t, J = 7.1 Hz, 1 H), 2.04 (s, 1 H), 3.77 (s, 1 H), 4.62 (s, 2H), 4.78 (s, 2H), 5.34 (s, 2H), 6.86 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.17 (dd, J = 8.4, 2.6 Hz, 4H), 7.24 - 7.30 (m, 2H), 7.30 - 7.45 (m, 5H), 7.55 - 7.62 (m, 2H), 7.97 - 8.05 (m, 2H). 13C NMR (101 MHz, Clorofórmio-d) δ 47.67, 50.55, 52.85, 67.10 , 127.65 , 128.19 , 128.37 , 128.53 , 128.99 ,129.09 , 129.82 , 130,92, 131,67, 132,33, 132,51, 134,40, 135,32, 140,93, 143,34, 164,71, 166,16. LRMS (ESI+) calculada para C37H26CIF5N3O5S [M+H]+ 754,11 resultou em 754,15.
Figure img0112
[0193] Benzil-4-(2-((N-(4-clorobenzil)-2,3,4,5,6- pentafluorfenil)sulfonamido)-N-(3,5-di-terc-butilbenzil)acetamido benzoato(6g). 6g derivado sintetizado utilizando o procedimento geral h (84%): 1 H NMR (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 0.82 - 0.93 (m, 1 H), 1 .24 - 1.37 (m, 25H), 3.71 (s, 2H), 4.62 (s, 2H), 4.74 (s, 3H), 5.35 (s, 3H), 6.75 (d, J = 8.0 Hz, 3H), 6.85 (s, 3H), 7.15 (d, J = 8.1 Hz, 3H), 7.24 (d, J = 8.1 Hz, 4H), 7.29 - 7.46 (m, 10H), 7.94 (d, J = 8.0 Hz, 3H). 13C NMR (101 MHz, Clorofórmio-d) δ 31 .18, 34.56, 47.70 , 50.27 , 53.34 , 66.94 , 121 .51 , 123.13 , 128.05 , 128.09 , 128.28 , 128.51 , 128.92 , 129.97 , 131 .1 1 , 132.59 , 134.31 , 134.47 , 135.47 , 150.98 , 165.27. LRMS (ESI+) calculado para C44H43CIF5N2O5S [M+H]+ 841,24 resultou em 841,27.
Figure img0113
[0194] terc-butil-4- (2 - ((N- (4-clorobenzil) -2,3,4,5,6-pentafluorofenil) sulfonamido) -N- (3,5-di-terc- butilbenzil)acetamido)benzoato (6g). 1 H NMR (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 1 H NMR (400 MHz, clorofórmio-d) δ 1 .24 (s, 18H), 1 .56 (s, 9H), 3.52 - 3.87 (m, 2H), 4.61 (s, 2H), 4.74 (d, J = 12.3 Hz, 2H), 6.71 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.81 - 6.87 (m, 2H), 7.14 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.20 - 7.34 (m, 3H), 7.84 (d, J = 8.0 Hz, 2H). 13C NMR (101 MHz, Clorofórmio-d) δ 27.94, 31 .16, 34.55, 47.68, 50.26, 53.34, 81 .60, 121 .45, 123.10, 127.83, 128.91, 129.97,130.81, 132.22, 132.62, 134.28, 134.55, 150.92, 164.26, 165.33. LRMS(ESI+) calculado para C41H45CIF5N2O5S [M+H]+ 807,26 resultou em 807,29.
Figure img0114
[0195] Benzil-4- (N- (3,5-bis (trifluorometil) benzil) -2 - ((N- (4-clorobenzil) -2,3,4,5,6-pentafluorofenil)sulfonamido)acetamido) benzoato (6h). 6h derivado sintetizado utilizando o procedimento geral h (89%): 1H NMR (400 MHz, clorofórmio-d) δ 0.81 - 0.94 (m, 1 H), 1.21 - 1.32 (m, 3H), 2.04 (s, 1 H), 3.46 (s, 1 H), 3.79 (s, 3H), 4.13 (dt, J = 14.3, 7.6 Hz, 1 H), 4.55 (d, J = 17.3 Hz, 2H), 4.62 (s, 4H), 4.87 (s, 5H), 5.32 (d, J = 18.0 Hz, 6H), 6.86 (d, J = 8.1 Hz, 5H), 7.17 (d, J = 8.3 Hz, 6H), 7.23 - 7.33 (m, 7H), 7.33 -7.46 (m, 15H), 7.57 (s, 5H), 7.81 (d, J = 9.5 Hz, 4H), 7.90 (d, J = 8.6 Hz, 1 H), 8.02 (d, J = 8.2 Hz, 5H). 13C NMR (101 MHz, Clorofórmio-d) δ 46.75, 47.54 , 50.35 , 52.41 , 65.94 , 67.11 , 11 1.72 , 119.44 , 121.50 ,121.87 , 124.21 , 127.04 , 127.51 , 127.84 , 128.14 , 128.35 , 128.39 ,128.42 , 128.52 , 129.03 , 129.82 , 131.07 , 131.45 , 131.62 , 131.79 ,132.12 , 132.40 , 134.48 , 135.32 , 138.44 , 143.28 , 164.65 , 166.42 .LRMS (ESI+) calculado para C38H25CIF11N2O5S [M+H]+ 865,09 resultou em 865,12.
Figure img0115
[0196] benzil-4- (2 - ((N-(4-clorobenzil)-2,3,4,5(6-pentafluorofenil) sulfonamido) - N- (3-cianobenzil)acetamido) benzoato (6i). 6i derivado sintetizado utilizando o procedimento geral h (63%): 1H NMR (400 MHz, clorofórmio-d) δ 1,20-1,29 (m, 2H), 2,03 (s, 2H), 3,77 (s, 2H), 4,1 (q, J = 7,1 Hz, 1 H), 4,62 (s, 2H), 4,76 (s, 3H), 5,34 (s, 3H), 6,85 (d, J = 8,1 Hz, 3H), 7,18 (d, J = 8,2 Hz , 3H), 7,28 (d, J = 8,3 Hz, 3H), 7,30-7,46 (m, 12H), 7,58 (dq, J = 7,8, 1,2 Hz, 2H), 8,00 (d, J = 8,2 Hz, 3H) . 13C NMR (101 MHz, clorofórmio-d) δ 47,66, 50,48, 52,47, 67,08, 1 12,71, 127,66, 128,16, 128,34, 128,52, 129,00, 129,46, 129,83, 130,90, 131,62, 131,67, 131,83, 132,51, 132,81, 134,37, 135,35, 136,39, 137,35, 143,34, 164,71, 166,15. LRMS (ESI+) calculado para C37H26CIF5N3O5S [M+H]+ 754,11 resultou em 754,14.
Figure img0116
[0197] 4- (N-benzil-2-((N-(4-clorobenzil)-2,3,4,5,6- pentafluorofenil) sulfonamido)-acetamido)ácido benzóico (7a): 7a derivado sintetizado utilizando procedimento geral i (45%): 1H NMR (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 3.75 (s, 2H), 4.65 (s, 2H), 4.74 (s, 2H), 6.68 - 6.90 (m, 2H), 6.90 - 7.14 (m, 2H), 7.19 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.26 - 7.41 (m, 5H), 7.98 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 1 1.25 (s, 1 H). 13C NMR (101 MHz, Clorofórmio-d) δ 20.66, 47.64, 50.50, 53.22, 127.86, 127.96, 128.04, 128.47, 128.52, 128.64, 128.80, 128.96, 129.93, 131.83, 131.99, 132.61, 134.33, 135.52, 143.38, 143.46, 144.33, 165.69, 170.43.
Figure img0117
[0198] 4- (2-((N- (4-clorobenzil)-2,3,4,5)6-pentafluorofenil) sulfonamido) -N- (4-metilbenzil)acetamido) ácido benzóico (7b). 7b derivado sintetizado utilizando o procedimento geral I (53%): 1H NMR (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 2.1 1 (s, 6H), 2.33 (s, 3H), 3.74 (s, 1 H), 4.70 (s, 4H), 6.77 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 6.80 - 6.95 (m, 3H), 7.08 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 7.16 - 7.35 (m, 5H), 7.96 (dd, J = 22.4, 8.1 Hz, 2H). 13C NMR (101 MHz, Clorofórmio-d) δ 20.64, 20.97, 47.62 , 50.51 , 51.04 , 52.87 , 128.03 , 128.34 , 128.51 , 128.67 , 128.78 , 128.95 , 129.14 , 129.92 , 131 .66 , 131 .79 , 132.57 , 133.98 , 137.64 , 144.46 , 165.70 , 170.35 , 177.40 . HRMS (ESI-) calculado para [C30H21CIF5N2O6S]- 651,0785, resultou em 651,0791;
Figure img0118
[0199] 4-(2-((N-(4-clorobenzil)-2,3,4,5,6- pentafluorfenil)sulfonamido)-N-(4-isopropilbenzil)acetamido)ácido benzóico (7c). 7c derivado sintetizado utilizando o procedimento i geral (69%): 1H NMR (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 1.24 (dd, J = 1 1.6, 7.0 Hz, 7H), 2.06 (d, J = 18.9 Hz, 2H), 2.80 - 2.94 (m, 1 H), 3.47 (s, 6H), 3.72 (s, 1 H), 4.1 1 (q, J = 7.1 Hz, 1 H), 4.63 (s, 2H), 4.68 (s, 2H), 6.81 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 6.94 (dd, J = 7.9, 4.0 Hz, 2H), 7.15 (dd, J = 19.3, 8.0 Hz, 3H), 7.23 - 7.33 (m, 2H), 7.88 - 8.00 (m, 2H). 13C NMR (101 MHz, clorofórmio-d) δ 14.00, 20.59, 20.87 , 23.74 , 33.63 , 47.62 , 50.48 , 50.50 , 52.97 , 53.26 , 60.33 , 77.08 , 116.1 1 , 1 16.26 , 126.49 , 127.93 , 128.53 , 128.66 , 128.75 , 128.93 , 129.94 , 130.22 , 131.55 , 131.67 , 132.63 , 132.88 , 134.29 , 136.40 , 138.94 , 142.39 , 143.43 , 144.13 , 144.99 , 146.04 , 148.68 , 165.54 , 169.00 , 171.22 , 176.02 . HRMS (ESI-) calculado para [C32H25CIF5N2O5S]-679.1098, encontrada 679,1105.
Figure img0119
[0200] 4 - (N- (4- (terc-butil) benzil) -2 - ((N- (4-clorobenzil) - 2,3,4,5,6-pentafluorofenil)sulfonamido)acetamido)ácido benzóico (7d). 7d derivado sintetizado utilizando procedimento geral i (63%): 1H NMR (400 MHz, Clorofórmio- d) δ 1 .30 (s, 9H), 3.65 - 3.82 (s, 2H), 4.65 (s, 2H), 4.69 (s, 2H), 6.84 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 6.95 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.17 (s, 2H), 7.27 (dd, J = 13.5, 7.9 Hz, 5H), 7.97 (s, 1 H), 10.22 (s, 1 H). 13C NMR (101 MHz, Clorofórmio-d) δ 31.12, 34.39, 47.63, 50.48, 52.95, 1 16.12, 125.35, 127.95, 128.22, 128.93, 129.96, 131.79, 132.49, 132.65, 134.27, 143.50, 144.24, 165.61. HRMS (ESI-) calculado para [C33H27CIF5N2O5S] - 693,1255, resultou em 693,1270.
Figure img0120
4- (2 - ((N - (4-clorobenzil) -2,3,4,5,6-pentafluorofenil)sulfonamido) -N- (4-(trifluorometil) benzil)acetamido) ácido benzóico (7e). 7e derivado sintetizado utilizando procedimento geral i (95%): 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ 3.87 (s, 2H), 4.61 (s, 2H), 4.86 (s, 2H) 7.02 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.21 - 7.35 (m, 7H), 7.58 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.95 (dd, J = 8.4, 1.5 Hz, 2H). 13C NMR (101 MHz, MeOD) δ 47.91, 50.61, 52.16, 124.91 , 124.95, 127.68, 128.45, 128.68, 129.83, 130.94, 131.03, 131.09, 131.18, 131 .50, 133.29, 133.78, 140.61 , 166.49, 166.83.HRMS (ESI-) calculado para [C30H18CIF8N2O5S] - 705.0503, resultou em 705,0513.
Figure img0121
[0201] 4- (2- ((N- (4-clorobenzil) -2,3,4,5,6-pentafluorofenil) sulfonamido) -N- (4-cianobenzil)acetamido) ácido benzóico (7f). 7f derivado sintetizado utilizando o procedimento geral i (54%):1H NMR (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 0.86 (t, J = 10.5 Hz, 4H), 1.25 (s,10H), 1.42 (s, 2H), 2.10 (s, 7H), 3.78 (s, 3H), 4.59 - 4.67 (m, 4H), 4.78 (s, 4H), 6.80 (d,J = 8.0 Hz, 2H), 6.89 (d, J = 7.9 Hz, 3H), 7.18 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 7H), 7.29 (dd, J =18.1 , 10.1 Hz, 12H), 7.59 (d, J = 7.9 Hz, 6H), 7.77 (s, 1 H), 7.99 (dd, J = 22.5, 7.9 Hz, 6H). 13C NMR (101 MHz, Clorofórmio-d) δ 20.72 , 22.53 , 29.54 , 47.66 , 50.54 , 51.04 , 52.90 , 77.07 , 1 12.00 , 116.09 , 1 18.14 ,127.68 , 128.48 , 128.61 , 128.83 , 129.00 , 129.05 , 129.85 , 131.97 ,132.10 , 132.33 , 132.36 , 132.45 , 133.78 , 134.46 , 136.37 , 138.95 ,140.85 , 140.97 , 143.44 , 143.83 , 145.95 , 166.22 , 166.32 , 169.86 ,177.13 . HRMS (ESI-) calculado para [C30H18CIF5N3O5S] - 662,0581, resultou em 662,0590.
Figure img0122
[0202] 4-(2-((N- (4-clorobenzil)-2,3,4,5,6-pentafluorofenil) sulfonamido) -N- (3,5-di-terc-butilbenzil)acetamido)ácido benzóico (7g). 7g derivado sintetizado utilizando o procedimento geral i (78%): 1H NMR (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 1.24 (d, J = 1.1 Hz, 10H), 4.62 (s, 1 H), 4.75 (s, 1 H), 6.77 (d, J = 8.0 Hz, 1 H), 6.85 (s, 1 H), 7.15 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 7.18 - 7.28 (m, 2H), 7.28 - 7.34 (m, 1 H), 7.96 (d, J = 8.0 Hz, 1 H). 13C NMR (101 MHz, Clorofórmio-d) δ 31.32, 34.72, 47.87, 50.42, 53.54, 77.21, 121.73, 123.33, 128.41, 129.09, 130.15, 131.74, 132.69, 134.51, 146.24, 151.19, 165.39, 169.84. HRMS (ESI-) calculado para [C37H35CIF5N2O5S]- 749,1881, resultou em 749,1902.
Figure img0123
[0203] 4- (N - (3,5-bis(trifluorometil)benzil)-2-((N- (4-clorobenzil) -2,3,4,5,6-pentafluorofenil)sulfonamido)acetamido) ácido benzóico (7h). 7h derivado sintetizado utilizando procedimento geral i (86%): 1H NMR (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 2.12 (s, 6H), 3.81 (s, 4H), 4.64 (d, J = 10.9 Hz, 5H), 4.88 (d, J = 2.9 Hz, 6H), 6.78 (d, J = 8.1 Hz, 3H), 6.89 (d, J = 8.1 Hz, 3H), 7.14 - 7.25 (m, 6H), 7.25 - 7.35 (m, 8H), 7.56 (d, J = 1.6 Hz, 6H), 7.82 (d, J = 6.8 Hz, 4H), 8.01 (dd, J = 26.3, 8.2 Hz, 6H). 13C NMR (101 MHz, Clorofórmio-d) δ 20.61, 47.54 , 50.36 , 50.88 , 52.40 , 52.46 , 11 1.76 , 121 .48 , 121.90 , 124.19 , 127.66 , 128.43 , 128.53 , 128.61 , 128.88 , 129.04 , 129.85 , 130.07 , 131.83 , 132.12 , 132.26 , 132.33 , 133.66 , 138.28 , 138.35 , 143.90 , 144.00 , 166.47 , 166.56 , 170.12 , 177.61 . HRMS (ESI-) calculado para [C31H17CIF11N2O5S]- 773,0377, resultou em 773,0387.
Figure img0124
[0204] 4-(2- ((N-(4-clorobenzil) -2,3,4,5,6-pentafluorofenil) sulfonamido)-N-(3-cianobenzil) acetamido) ácido benzóico (7i). 7i derivado sintetizado utilizando o procedimento geral i (67%): 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.96 (s, 2H), 4.55 (s, 2H), 4.84 (s, 2H), 7.25 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 7.35 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.39 - 7.51 (m, 2H), 7.58 (s, 1 H), 7.69 (dt, J = 7.4, 1.6 Hz, 1 H), 7.88 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 13.10 (s, 1 H). 13C NMR (101 MHz, DMSO-d6) δ 28.27, 49.34, 51.31 , 51.79, 1 1 1.72, 1 18.86, 128.32, 128.78, 128.29 129.88, 130.35, 131.01 , 131.08, 131 .1 1 , 131.09, 131 .57, 132.90, 133.09, 134.44, 138.51 , 166.58, 166.69. HRMS (ESI-) calculado para [C30H18CIF5N3O5S]- 662,0581, resultou em 662,0581.
[0205] Exemplo 2: Triagem de Quinase de DiscoverX
[0206] A perfilação de quinase KINOMEscan foi realizada como anteriormente descrito (Fabian et al., 2005;. Karaman et al., 2008). Para a maioria dos ensaios, as linhagens de fago T7 de marcação de quinase foram cultivadas em paralelo em blocos de 24 poços em um hospedeiro de E. coli derivado da linhagem BL21. As E. coli foram cultivadas até à fase de registro e infectadas com o fago T7 a partir de um lote congelado (multiplicidade de infecção = 0,4) e incubadas com agitação a 32 °C até a lise (90-150 minutos). Os lisados foram centrifugados (6000 x g) e filtrados (0.2μm) para remover os detritos celulares. As quinases restantes foram produzidas em células HEK-293 e subsequentemente marcadas com DNA para a detecção de qPCR como previamente descrito (Wodicka et al., 2010). Os grânulos magnéticos revestidos com estreptavidina foram tratados com pequenos ligandos de molécula biotinilados durante 30 minutos à temperatura ambiente para gerar resinas de afinidades para ensaios de quinase. Os grânulos com ligandos foram bloqueados com excesso de biotina e lavados com tampão de bloqueio (SeaBlock (Pierce), 1% de BSA, 0,05% Tween 20, 1 mM DTT) para remover ligandos não ligados e reduzir ligação de fago não específica. As reações de ligação foram estruturadas através da combinação de quinases, grânulos de afinidade com ligandos e compostos de teste em 1x tampão de ligação (20% SeaBlock, 0,17x PBS, 0,05% de Tween 20, DTT de 6 mM). 13a foi preparado como estoques de 40x em 100% de DMSO e diluído diretamente no ensaio. Todas as reações foram realizadas em placas de 384 poços de polipropileno em um volume final de 0,04 ml. As placas de ensaio foram incubadas à temperatura ambiente com agitação durante 1 hora e os grânulos de afinidade foram lavados com tampão de lavagem (1x PBS, 0,05% de Tween 20). Os grânulos foram, em seguida, re-suspensos em tampão de eluição (1x PBS, 0,05% de Tween 20, ligando de afinidade de não biotinilado de 0,5 μM) e incubados à temperatura ambiente com agitação durante 30 minutos. A concentração de quinase nos eluídos foi medida por qPCR e os dados apresentados como %Ctrl (Figura 1). Dados para 13a também estão representados em um dendograma de TreeSpot para simplicidade (Figura 1).
[0207] Discussão
[0208] Para determinar a seletividade da 13a para STAT5, a atividade de quinase não direcionada foi triada como um alvo alternativo possível para um efetor de fosforilação de STAT5. 13a foi avaliado contra 120 quinases representativas que revestem a diversidade das famílias quinase (DiscoveRx). PCR quantitativo ultrassensível (qPCR) foi utilizado para medir os níveis de quinases imobilizadas após tratamento com 13a em 5 μM. 13a mostraram efeitos insignificantes contra o banco de quinases e, especificamente, contra quinases ativadoras de STAT5 a montante, JAK 1/2, ABL e FLT-3. Estes dados indicam que a inibição da fosforilação de STAT5 é causada pela interação com o domínio SH2 de STAT5 e não através da inibição de quinases a montante.
[0209] Exemplo 3: Estudos de Ressonância de Plasmon de Superfície (SPR).
[0210] As interações de STAT3 e STAT5 com marcação de His com pequenas moléculas foram investigadas utilizando a espectroscopia de SPR. Os experimentos de ligação foram realizados em um biossensor ProteOn XPR36 (Bio-Rad) a 25 °C utilizando o chip de sensor de HTE (Bio-Rad, Ontário, Canadá). As células de fluxo do chip de sensor foram carregadas com uma solução de níquel em 30 μL/min para 120 s para saturar a superfície de Tris-NTA com iões de Ni(ll). STAT3 e STAT5 com marcação de His purificados (SignalChem, British Columbia, Canadá) em tampão de PBST (PBS com 0,005% (v/v) de Tween-20 e 0,001% de DMSO de pH 7,4) foram injetados no primeiro e segundo canais do chip respectivamente, na direção vertical a uma taxa de fluxo de 25 μg/μL para 300 s, que atingiu, em média, -8000 de unidade de ressonância (RU). Após uma lavagem com tampão de PBST, os compostos (13a-d) de ligação para as proteínas imobilizadas foram monitorizados por injeção de uma gama de concentrações, juntamente com uma peça em bruto a um caudal de 100 μL/min para 200 s para cada um destes compostos. Quando a injeção dos compostos foi concluída, o tampão em execução foi deixado fluir sobre os substratos imobilizados para os inibidores não-especificamente ligados a dissociar-se para 600 s. Após dissociação dos compostos, a superfície do chip foi regenerada com uma injeção de 1 M de NaCl a um caudal de 100 μL/min durante 18 s foi utilizada como referência do canal de Interspot para correções de ligação não específicas e o canal em branco utilizado com cada injeção de analito serviu como uma dupla referência para corrigir o possível desvio da linha de base. Os dados foram analisados utilizando o Proteon Manager Software versão 3.1. O modelo de ligação de Langmuir 1:1 foi utilizado para determinar os valores de KD. Os experimentos de controle já foram reportados, o que valida esse protocolo. Os experimentos de ligação foram realizados em várias concentrações, 13b, d (5, 1,67, 0,56,0.19μM, a linha superior sendo 5) e 13c (10, 3.3, 1.1, 0.37μM, a linha superior sendo 10) na Figura 2.
[0211] Discussão
[0212] Os experimentos de ligação SPR foram realizados para medir a associação cinética e dissociação utilizando um Proteon XPR36 (Biorad) com STAT5 e STAT3 (SignalChem) de comprimento completo com marcação de His imobilizados em um chip de biossensor. Os inibidores exibiram afinidades de ligação nanomolares para STAT5 e seletividade para o STAT5 ao invés da proteína de STAT3. O composto 13a exibiu o KD mais potente (Koff/ kon) de 41,9 ± 4 nm com seletividade de 7 vezes para STAT5 vs. STAT3, KD = 287 ± 29 nM. ,
[0213] Exemplo 4: Ensaio de Polarização de Fluorescência
[0214] A ligação de compostos da presente divulgação para o domínio STAT5b SH2 foi avaliada utilizando ensaios de polarização de fluorescência similares aos descritos anteriormente.15 ensaios análogos foram também realizados com a proteína STAT3 para determinar a especificidade dos compostos (13a-d). Os ensaios de fluorescência foram realizados em placas planas pretas de 384 poços (Corning) e medições de polarização de fluorescência foram tomadas com a máquina Infinite M1000 (Tecan, Crailsheim, Alemanha). As condições de tampão para todos os ensaios foram 20 mM de HEPES, 50 mM de NaCl, 1 mM de EDTA, 2mM de diotreitol, pH 7,5 e a concentração final de DMSO nos poços foi mantida constante a 10%.
[0215] As curvas de calibração para as proteínas STAT3 e STAT5b de tipo selvagem foram obtidos por incubação de uma concentração final de 10 nM de fosfopeptídeo fluorescente (5-FAM- pYLPQTC (SEQ ID NO: 1) e 5-FAM-GpYLVLDKW (SEQ ID NO: 2) para STAT3 e STAT5b, respectivamente), as quais são conhecidas por se ligarem os domínios de SH2, com concentrações de proteína crescente (como mostrado na Figura 3). O ponto em que 80% do fosfopeptídeo fluorescente foi ligado foi utilizado como a concentração de proteína ótima necessária para os ensaios de polarização fluorescente competitivos.
[0216] Para os ensaios de polarização de fluorescência de STAT5b, o peptídeo 5-FAM-GpYLVLDKW (SEQ ID NO: 2) e a proteína STAT5b foram primeiro incubados durante 30 minutos à temperatura ambiente. Os compostos foram titulados em concentrações que variam a partir de 1 -> 60.000 nM e incubados durante mais 15 minutos ao ponto em que as medições de polarização de fluorescência foram tomadas de modo triplicado. As concentrações finais de poço de fosfopeptídeo fluorescente e STAT5B foram 10 nM e 250 nM, respectivamente. O mesmo protocolo foi utilizado para os ensaios de STAT3 FP análoga, exceto que o peptídeo 5- FAM-pYLPQTC (SEQ ID NO: 1) foi utilizado como uma sonda e a concentração de STAT3 final foi de 150 nM em cada poço.
[0217] As medidas de polarização de fluorescência resultants foram normalizadas e plotadas contra a concentração do composto em uma escala logarítmica. Os dados em bruto foram equipados com uma curva de inibição de dose-resposta normalizada padrão utilizando o software GraphPad Prism 6. Os valores de IC50 foram convertidos em valores Ki utilizando a Equação1, que corrige a concentração de proteína e é uma determinação mais precisa de constantes inibidoras em um ensaio de polarização de fluorescência do que a equação de Cheng-Pruskoff.15 Todas as constantes de inibição e valores R calculados estão resumidos na Tabela 1.
Figure img0125
[0218] Equação 1: Equação de Cheng-Pruskoff modificada contendo um fator de correção para a concentração de proteína. Para os ensaios de STAT5b, [Peptídeo] = 10 nM, [proteína] = 250 nM, e Kd = 170 nM. Para os ensaios de STAT3, [Péptido] = 10 nM, [Proteína] = 160 nM, e Kd = 105 nM.
[0219] Conforme mostrado nas Figuras 4 e 5, os compostos da divulgação foram avaliados utilizando FP, 13a em que foi resultou em para interromper de forma potente as interações fosfopeptídeo-STAT5b, Ki = 145 nM. Além disso, 13a foi 1000 vezes mais seletivo para STAT5B do que para STAT3, com uma STAT3 de Ki = 143 μM.
[0220] Exemplo 5: Linhas celulares e técnicas de cultura
[0221] Eritroleucemia humana K562 e células MV-4-11 foram cultivadas meio de Dulbecco modificado por Iscove (Gibco) suplementado com FBS de 10% (Sigma). As linhas de carcinoma da mama MDA-MB-231 e MDA-MB-468 foram cultivadas em meio de Eagles modificado por Dulbecco (DMEM) suplementado com FBS de 10% (Sigma). Para a regulação negativa da atividade de STAT5, as células foram tratadas com 5, 10, 15, 20 μM de compostos de 13a-d STAT5 para os pontos de tempo 3h e 5h. Como um controle, as células foram tratadas apenas com DMSO.
[0222] Conforme mostrado nas Figuras 6 e 7, 13-A foi avaliado quanto à potência de célula total contra linhas celulares de STAT5 transformadas com CML e AML, K562 (Bcr-Abl) e MV-4; 1 1 (FLT3-ITD), respectivamente. A viabilidade das células foi avaliada após tratamento em várias concentrações de inibidor (0,78-50 μM) utilizando um ensaio de viabilidade celular CellTiter-Blue (72 horas). Em comparação com os inibidores de STAT5 (8j, 8l, 8v, 8x), os valores de IC50 para 13a-d foram 2-3 vezes maiores em potência, com atividades que vão desde 3-20 μM (de suporte). 13a apresentou a actividade mais potente em FLT3-ITD impulsionada por MV4; 11 células, IC50 = 3,5 μM.
[0223] Exemplo 6: Amostragem Ocidental
[0224] As células 1x106 foram cultivadas em frascos de cultura de células de 25 cm (Cellstar) e tratadas com inibidor de 13a. As proteínas foram extraídas utilizando tampão RIPA e inibidores de protease com fosfatos e uma determinação cuidadosa de proteína foram pré-formados (kit de ensaio de proteína BCA, Pierce). Em cada ensaio, 30 μg de extrato de célula total clarificado foram resolvidos em um gel de poliacrilamida-SDS a 10% e transferidos para uma membrana de nitrocelulose (Bio-Rad). As membranas foram bloqueadas com leite magro a 5% durante pelo menos 1 h, seguida por uma incubação de um dia para o outro em anticorpo primário.
[0225] A imunodetecção foi realizada utilizando anticorpos contra a STAT5 total de (Cell Signaling # 9363), STAT5 fosforilada (Tyr 694) (Cell Signaling, Cat. # 9359), STAT3 total (Cell Signaling # 4904) e STAT3 fosforilada (Tyr 705) (Cell Signaling # 9661), caspase-3 clivada (Asp175) (Cell Signaling # 9661), clivado-PARP-1 (ab72805) anti-ciclina D1 (ab16663 través), anti-ciclina D2 (través ab94685), anti- c-Myc (través ab32072) e β-actina (Cell Signaling # 3700) como um controle de carga, seguido de anticorpos secundários fluorescentes de cabra conjugado com Alexa Fluor 488 (Cell Signaling # 4408) e Alexa Fluor 647.
[0226] Conforme mostrado na Figura 8, 13a mediou a inibição de níveis de fosforilação de STAT5. As células de leucemia K652 foram tratadas com 13a durante 5 horas, as células foram recolhidas e foram determinados os níveis de STAT5 fosforilado (Y694) (A). 13a diminuiu pSTAT5 de uma forma dependente da dose e pSTAT5 ablado acima de μM 10, sem qualquer alteração na concentração ou STAT5 total de PARP-1 clivável. No entanto, foram encontradas células K562 a sofrer morte celular (PARP clivado-1, Caspase-3) às 24 horas a 15 μM indicando que 13a induz a apoptose como um resultado de inativação de STAT5 (B). Para investigar seletividade, as células MDA-MB-231 cancerígenas da mama, que abrigam alta atividade de pSTAT3 e baixa atividade de pSTAT5, foram avaliadas para a inibição pSTAT diferencial por 13a. A pSTAT3 não foi inibida a doses correspondentes à inibição de STAT5 dentro da linha de células leucêmicas (C). A Jusante do STAT5, a modulação dos alvos de transcrição de STAT5, MCL-1, CYCLIND1 / D2 e MYC foi avaliada. Foi fundamentado que 13a deve diminuir a expressão do gene e induzir a apoptose em 24 horas. As células K562 foram doseadas com 13a nas mesmas concentrações observadas para a inibição seletiva de STAT5. Em 5 horas, as diminuições dependentes de dose em MYC e desarme completo de MCL-1 foram observados às 24 horas (D).
[0227] Exemplo 7 - Propriedades de ADME
[0228] A estabilidade metabólica do composto 13a foi avaliada através de uma triagem de perfil de ADME em hepatócitos de rato, como se mostra nas Figuras 9-13. Espectros de LC-MS e MS/MS em tandem, que ilustra que a presença de metabolitos de 13a é mínima e que a maior parte de 13a intacto é recuperado após 240 min.
[0229] Conforme mostrado na Figura 9, o composto 13a foi avaliado quanto à sua estabilidade metabólica em hepatócitos de rato e de LC-MS Os espectros foram obtidos em vários pontos de tempo. Pico 1: 13a conjugado com glutationa+desidratação (MW = 1054,2 g / mol). Pico 2: 13a conjugado com glutationa+acetilação+desidratação (MW = 1096,3 g/mol). O pico 3: Oxidação do composto 13a (MW = 783,2 g/mol). Pico 4: Composto intacto 13a (MW = 767). As áreas relativas dos picos para o pico 1: (<1%), pico 2: (<1%), pico 3 (1-10%), Pico 4: (> 10%).
[0230] A Figura 10 mostra um espectro de massa em tandem (MS / MS) para o Pico 1, que ilustra a fragmentação para efeitos de elucidação da estrutura do composto 13a desidratado e conjugado com glutationa. A Figura 11 mostra um espectro de massa em tandem (MS/MS) para o Pico 2 ilustrando a fragmentação para efeitos de elucidação da estrutura do composto 13a desidratado, acetilado e conjugado com glutationa. A Figura 12 mostra um espectro de massa em tandem (MS / MS) para o pico 3 que ilustra a fragmentação para efeitos de elucidação da estrutura da oxidação do composto 13a. A Figura 13 mostra um espectro de massa em tandem (MS/MS) para o Pico 4 ilustra a fragmentação para o composto de origem 13a.
[0231] Exemplo 8 - Efeito sobre as Células CD34+ e Células MV4-11 AML
[0232] O composto 13a foi avaliado em células de cordão umbilical CD34+ humanas para determinar os efeitos não direcionados e a janela terapêutica. Existia uma ordem aproximada de diferença de magnitude na sensibilidade, com pouca redução na viabilidade celular em 10 μM de 13a, enquanto MV-4; 11 células foram eliminadas, nas mesmas concentrações.
[0233] Conforme mostrado na Figura 14, o composto 13a mostrou pouco efeito em células CD34+ humanas saudáveis de células de cordão umbilical a 10 μM com efeito limitado sobre a viabilidade celular em comparação com MV4; 11 células.
[0234] Exemplo 9 - Efeito em Células CML e AML
[0235] Para investigar a seletividade, células MDA-MB-231 cancerígenas da mama, que abrigam alta atividade de pSTAT3 e atividade insignificante de pSTAT5, Figura 8c e Figura 15c, foram avaliadas para a inibição de pSTAT diferencial pela 13a. A pSTAT3 não foi inibida a doses correspondentes à inibição de pSTAT5 dentro da linha de células leucêmicas e nem os níveis totais de proteína STAT3 ou STAT5 foram afetados. Além disso, não houve níveis detectáveis de pSTATI em ambas células K562 e MDA-MB-231. Correspondentemente, 13a não interrrompe o complexo de fosfopéptido-STAT1 com valores IC50 de >150 μM, Figura 15a. Mostrou-se também que a 13a foi 3 vezes menos citotóxica em MDA MB- 231 (IC50 = 10 μM) do que na linha de células leucêmicas de alta pSTAT5, Figura 15d.
[0236] Os relatórios anteriores indicam que o desarme de pSTAT5 em células de leucemia anula a expressão de MCL-1 a jusante, tanto o nível de proteína e mRNA e é suficiente para induzir apoptose. Além disso, a expressão de MCL-1 é altamente dependente de vias de sinalização de STAT5, sugerindo que os inibidores de STAT5 possam ser importantes para desencadear apoptose em células de leucemia. Com seletividade estabelecida a montante do fator de transcrição, assim como dentro da família STAT, os efeitos a jusante do desarme de pSTAT5 foram investigados, especialmente a modulação dos alvos transcricionais de STAT5. Para confirmar os efeitos inibidores de 13a, os experimentos foram conduzidos de modo a medir as alterações em nível de expressão de genes regulados por STAT5 conhecidos, MCL-1, CYCLIN D1/D2 e MYC em células K562.
[0237] As células K562 foram doseadas com 13a nas mesmas concentrações observadas para a inibição de pSTAT5 seletiva. Após 5 h, diminuições dependentes de dose na expressão de c-MYC foram observadas e o desarme de MCL-1 completo observado a 24 h a 15μM, que são ambos consistentes com suas respectivas taxas de rotatividade celular, Figura 8d.
[0238] Do mesmo modo, a análise de amostragem occidental para níveis de proteína de pSTAT5 e expressão do gene alvo a jusante também foram investigados dentro da linha de células AML, MV-4; 11. Consistente com a linha de células CML K562, 13a em concentrações semelhantes mostrou a diminuição da dose-dependente de pSTAT5 às 5h com ablação completa da fosforilação após 24 h às 10 μM, Figura 16a. Além disso, em 24 horas, observou-se o início da apoptose, a Figura 16b, bem como o desarme completo de MCL-1 alvo a jusante a 10 μM, Figura 16c. Em geral, 13a tinha uma potência mais pronunciada dentro das células AML do que de células CML. Estes dados, em conjugação com a análise de amostragem ocidental de pSTAT5, a interrupção potente in vitro de complexação de STAT5/fosfopéptido (Tabela 1), SPR (Figura 2) e triagem KINOME (Figura 1), e os resultados de células inteiras (Figura 6 e 7), indicam que os agentes de ligação de STAT5 inibem a função transcricional de STAT5.
[0239] Exemplo 9 - Estudos Metabólicos
[0240] Os hepatócitos primários são populares para a biotransformação de drogas devido à sua forte semelhança com o fígado humano in vivo. Os hepatócitos intactos contêm enzimas oxidativas de fase I, bem como enzimas de fase II como sulfo- e glucuronosiltransferases. Os hepatócitos podem ser gerados a partir de diversas espécies de animais, com o método que requer todo o fígado, o que pode não estar disponível no caso do fígado humano. Em vez disso, o fígado humano é obtido a partir de pacientes que se submetem a ressecção parcial do fígado devido a metástases hepáticas. Uma vez isolados, os hepatócitos são criopreservados para manter a atividade catalítica das enzimas metabólicas. Portanto, para compreender as propriedades físico-químicas e perfil metabólico de 13a, triagens de absorção, distribuição, metabolismo e excreção (ADME) em ambas as frações S9 e hepatócitos intactos foram investigados.
[0241] A estabilidade metabólica da 13a foi avaliada em ambas as frações S9 de fígado humano e rato agrupados e hepatócitos humanos e de rato. As concentrações do fármaco primário foram 13a avaliadas por LC- MS/MS para estimar a sua estabilidade em ambos os sistemas de reação.
[0242] Relativamente às frações reunidas S9, a solução da fração S9 juntamente com NADPH foi adicionada a cada poço. O controle negativo não tem NADPH, o qual foi utilizado para excluir o fator de instabilidade do próprio fármaco. O controle positivo utilizado no ensaio foi o Verapamil, um fármaco conhecido por ser metabolizado por enzimas do fígado. A reacção foi iniciada pela adição de 13a e realizada em duplicada. Foram recolhidas amostras a partir da solução de reação a 0 min e 60 min. A reação foi parada pela adição de metanol frio. As amostras foram então analisadas através de LC-MS/MS para determinar o perfil metabólico. Como a Figura 17 ilustra, após 60 min, 13a foi recuperado em 59,82% em frações S9 de fígado humano (HLS9) com apenas 6,96% recuperados nas frações S9 de fígado de rato (MMLS9). A recuperação inferior da 13a em MMLS9 vs. HLS9 é devido a 1,5 vezes de maior concentração de CPY450 e enzimas de conjugação de fase II.
[0243] 13a foi então avaliado dentro de hepatócitos humanos e de rato intactos. Como as frações S9, Verapamil foi utilizado como um controle positivo no ensaio. Os hepatócitos criopreservados foram descongelados e plaqueados a uma densidade de células de trabalho de 0,5x106 de células viáveis/ml. Uma parcela dos hepatócitos a 0,5 x 106 células viáveis/mL foi fervida durante 5 min antes da adição à placa como um controle negativo para eliminar a atividade enzimática de modo que a rotação de pouco ou nenhum substrato deve ser observada e para excluir a possibilidade da instabilidade do próprio 13a. Ambos 13a e Verapamil foram adicionados e os pontos de tempo de 0 min e 120 min foram tomados pela adição de metanol frio para parar a reação e as percentagens restantes de 13a foram analisadas por meio de LC-MS/MS. Como mostra a Figura 18, 13a é recuperado em uma porção significativa de 68,56% em hepatócitos humanos em comparação com 53,37% em hepatócitos de rato. Como esperado, o controle negativo tinha taxas mais elevadas recuperáveis de 13a em ~ 85% em ambos os sistemas hepáticos.
[0244] No geral, é evidente que 13a é estável entre frações de s9 de humano e de rato reunidas bem como hepatócitos. Dentro destes estudos, foram identificados uma série de metabolitos de fases I e II dentro de hepatócitos de rato. Como a Figura 9 ilustra, 13a é recuperável a >85% após 4h com metabolitos mensuráveis de fase I e II. Cada pico do espectro de massa inicial é executado novamente através de uma especificação de massa em tandem para identificar o pico principal, juntamente com os padrões de fracionamento correspondentes desse metabolito. Em primeiro lugar, analisamos o espectro de massa em tandem de pico 4, que confirmou que o fármaco primário 13a foi recuperado. Presente entre 110% após 4 horas, um pico principal 1, com um m/z de 1054,2, corresponde a uma fase II, glutationa conjugado de metabolito 13-A, Figura 10. O pico 2, por outro lado, é uma combinação de ambos os metabolismos de fase I e fase II. Com um maior pico de massa em m/z 1096,3, isto corresponde a uma 13a de conjugação de glutationa (m/z 1054,2), que foi posteriormente acetilado. Muito provavelmente, deduzimos a acetilação ocorre na posição do ácido da parte de ácido salicílico, a Figura 11.
[0245] Uma vez que o metabolito principal recuperado entre 10 20%, o pico 3 é um produto do metabolismo de fase I em que 13a (m/z 767,1) foi oxidado para produzir o pico principal com m/z de 783,1. Com base no padrão de fragmentação, o local mais provável de oxidação pode residir no núcleo de glicina ou o anel de benzil do ácido salicílico, Figura 12.
[0246] Dois dos picos principais correspondem a um derivado de glutationa do fármaco primário 13a, que em conjunto representam 10% dos metabolitos recuperados. A estabilidade de 13a sob condições mais severas, com um excesso de tripeptídeo de glutationa foi investigada. Considerando a estrutura 13a, o pentafluorobenzeno é a unidade funcional que é provavelmente mais suscetível a ataque nucleofílico da enzima GST. Especificamente, a posição para é de alta absorção de elétrons favoráveis à substituição aromática nucleofílica a acontecer. As experiências de HPLC de 13a com 1000x da concentração do tripeptídeo de glutationa (10 mM) em relação a 13a (100 μM) foram realizadas em um tampão de fosfato (HEPES), que foi escolhido com base na solubilidade da 13a dentro deste sistema tampão. Os pontos de dados obtidos com os ensaios de HPLC analíticos foram ajustados utilizando software ORIGIN, utilizando uma equação de decaimento exponencial. Estes modelos de equações para processos biológicos/químicos em que uma taxa em que algo acontece é proporcional à quantidade deixada. Cada molécula de fármaco tem uma certa probabilidade de ser metabolizada em um intervalo de tempo pequeno. Assim, como uma concentração de fármaco vai para baixo, a taxa do seu metabolismo desce também. Como a Figura 19 ilustra, 13a (linha decrescente) era estável à conjugação de glutationa (linha crescente) ao longo de um período de tempo de 20 h. Tabela 1. O resumo de valores de IC50e constantes de inibição (Ki) derivadas a partir de ensaios de ligação de FP com compostos (13a-d), e os inibidores de STAT5 de controle (pimozida e cromona).
Figure img0126
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Claims (18)

1. Composto de fórmula:
Figure img0127
caracterizado pelo fato de que: R1 é -(CH2)n-(C6-C10)-aril ou -C(=O)-(CH2)n-(C6-C10)-aril, em que os grupos aril são opcionalmente substituídos com um a cinco substituintes selecionados dentre halo, OH, -(C1-C6)-alquil, -(C1-C6)-alcóxi, -(C1-C4)-alquil halo substituído, -(ciclopropil)-CF3, -NO2, CN, -SO3R' e -COOR', em que R' é H ou -(C1-C4)-alquil; R2 é -(CH2)n-(C6-C10)-aril, em que os grupos aril são substituídos com um a cinco substituintes selecionados dentre halo, OH, -(C1-C6)-alquil, -(C1- C6)-alcóxi, -(C1-C4)-alquil halo substituído, -(ciclopropil)-CF3, -NO2, CN, - SO3R' e -COOR', em que R' é H ou -(C1-C4)-alquil; R3 é -(CH2)n-(C6-C10)-aril, em que os grupos aril são substituídos com um a cinco substituintes halo; X é -COOR", -P(O)(OR")2, tetrazol, -C(=O)NR"-OH ou -CF2OH, em que R" é H ou -(C1-C4)-alquil ou -CH2-(C6-C10)benzil; R4 e R5 são, independentemente ou simultaneamente, H ou CF3, em que um de R4 ou R5 é H ou, em conjunto, R4 e R5 são -C(=O) ou -C(=S); R é H, OH, halo, -(C1-C6)-alquil ou (C1-C6)-alcóxi; n é, independentemente ou simultaneamente, 0, 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; e m é 1, 2, 3 ou 4, ou um farmaceuticamente aceitável do mesmo.
2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R1 é -(C6-C10)-aril, -(CH2)-(C6-C10)-aril ou -C(=O)-(C6-C10)-aril.
3. Composto, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que R1 é fenil, naftil, -CH2-fenil, -CH2-naftil, -C(=O)-fenil ou -C(=O)- naftil.
4. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que os substituintes opcionais no grupo aril de R1 são selecionados dentre um a cinco de halo, -(C1-C6)-alquil e -(C1-C6)-alcóxi.
5. Composto, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que os substituintes opcionais no grupo aril de R1 são selecionados dentre um a três substituintes selecionados dentre fluoro, metil ou t-butil.
6. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que R1 é:
Figure img0128
7. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que R2 é -(C6-C10)-aril ou -(CH2)-(C6-C10)-aril.
8. Composto, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que R2 é fenil ou -CH2-fenil.
9. Composto, de acordo com a reivindicação 7 ou 8, caracterizado pelo fato de que os substituintes um a cinco no grupo aril de R2 são selecionados dentre halo, -(C1-C4)-alquil halo substituído, -(ciclopropil)-CF3, -NO2, CN, -SO3R' e -COOR', em que R' é H ou -(C1-C4)-alquil.
10. Composto, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que os substituintes no grupo aril de R2 são um a três grupos cloro.
11. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que R3 é -(C6-C10)-aril ou -(CH2)-(C6-C10)-aril.
12. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que os substituintes um a cinco no grupo aril de R3 são selecionados dentre fluoro, cloro e bromo.
13. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pelo fato de que R é H, OH, fluoro, cloro, bromo ou -(C1-C4)- alquil.
14. Composto, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que R é H, F ou OH.
15. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que X é -COOR", em que R" é H ou -(C1-C4)- alquil.
16. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizado pelo fato de que tem a seguinte estrutura:
Figure img0129
17. Composto, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que tem a seguinte estrutura:
Figure img0130
18. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, caracterizado pelo fato de que é para uso na inibição da proteína transdutora de sinal e ativadora da transcrição 5 (STAT5) no tratamento ou prevenção de doenças, tais como: a) maglinidades hematopoiéticas, tais como leucemias, tal como leucemia aguda, leucemia crônica, leucemia linfocitica ou leucemia mielóide; b) condições da pele, tais como psoríase ou dermatite; c) câncer de pele não-melanoma; d) câncer da próstata; ou e) inflamação.
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