BR112016015044B1 - Anticorpos específicos para rsv e partes funcionais dos mesmos - Google Patents
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Abstract
ANTICORPOS ESPECÍFICOS PARA RSV E PARTES FUNCIONAIS DOS MESMOS. Este pedido proporciona anticorpos e equivalentes funcionais dos mesmos que são capazes de se ligar especificamente ao RSV, bem como meios e métodos para a sua produção.
Description
[001] Este pedido reivindica o benefício do Pedido Provisório U.S.N° de Série 61/927.819, depositado em 15 de janeiro, 2014, que é incorporado aqui a título de referência.
[002] Este pedido refere-se ao domínio da biotecnologia e medicina.
[003] O Vírus Sincicial Respiratório (RSV) é um vírus do resfriado comum pertencente à família dos paramixovírus. O RSV é virulento, facilmente transmissível e é a causa mais comum de doença do trato respiratório inferior em crianças com menos de 2 anos de idade. Até 98 % das crianças que frequentam jardins de infância serão infectadas em uma única estação por RSV. Entre 0,5 % e 3,2 % das crianças com infecção por RSV requerem hospitalização. Aproximadamente 90 000 admissões hospitalares e 4 500 mortes por ano foram relatadas nos Estados Unidos. Os principais fatores de risco para hospitalização devido ao RSV são nascimento prematuro, doença pulmonar crônica, doença cardíaca congênita, imunidade comprometida, e idade inferior a 6 semanas em crianças que de outro modo seriam saudáveis. É necessário um tratamento adicional para bronquiolite positiva para o RSV para além de tratamento complementar na forma de nutrição adequada e terapia com oxigênio. Terapias antivirais, tais como Ribavirin, não demonstraram ser eficazes em infecção por RSV. Um anticorpo monoclonal, Palivizumab (também denominado Synagis®), está registrado para profilaxia contra infecção pelo RSV. O Palivizumab é um anticor- po monoclonal geneticamente manipulado (humanizado) para a pro-teína de fusão do RSV. Não obstante o Palivizumab ter sido um agente profilático muito eficaz, anticorpos e terapias alternativos proporcionando cobertura adicional contra o RSV serão vantajosos.
[004] Um objetivo é proporcionar meios e métodos para contrariar e/ou prevenir uma infecção pelo RSV. Um objetivo adicional é proporcionar anticorpos alternativos e/ou aperfeiçoados contra o RSV, ou equivalentes funcionais de tais anticorpos, e proporcionar células estáveis capazes de produzir anticorpos ou seus equivalentes funcionais contra o RSV.
[005] De acordo com a descrição, um anticorpo sintético, recombinante, ou isolado ou uma sua parte funcional capaz de se ligar especificamente ao Vírus Sincicial Respiratório compreende:
[006] a. uma sequência CDR1 de região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência que é pelo menos 70 % idêntica à sequência NYIIN (SEQ ID NO: 1) ou DYIIN (SEQ ID NO: 9), e
[007] b. uma sequência CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência que é pelo menos 75 % idêntica à sequência GIIPVLGTVHYAPKFQG (SEQ ID NO: 2) ou GIIPVLGTVHYGPKFQG (SEQ ID NO: 10), e
[008] c. uma sequência CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência que é pelo menos 70 % idêntica à sequência ETALVVSTTYLPHYFDN (SEQ ID NO: 3) ou ETALVVSTTYRPHYFDN (SEQ ID NO: 11), e
[009] d. uma sequência CDR1 de região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência que é pelo menos 85 % idêntica à sequência QASQDIVNYLN (SEQ ID NO: 4), e
[0010] e. uma sequência CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência que é pelo menos 70 % idêntica à sequência VASNLET (SEQ ID NO: 5), e
[0011] f. uma sequência CDR3 de região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência que é pelo menos 70 % idêntica à sequência QQYDNLP (SEQ ID NO: 6).
[0012] e em que pelo menos um aminoácido da cadeia pesada difere da SEQ ID NO: 7 e o referido pelo menos um aminoácido é escolhido de:
[0013] Em outra modalidade, o anticorpo ou parte funciona compreende:
[0014] a. uma sequência CDR1 de região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência que difere em um aminoácido de NYIIN (SEQ ID NO: 1) ou DYIIN (SEQ ID NO: 9),
[0015] b. uma sequência CDR2 de região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência que difere em um ou dois aminoácidos de GIIPVLGTVHYAPKFQG (SEQ ID NO: 2) ou GIIPVLGTVHYGPKFQG (SEQ ID NO: 10),
[0016] c. uma sequência CDR3 de região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência que difere em um ou dois aminoácidos de ETALVVSTTYLPHYFDN (SEQ ID NO: 3) ou ETALVVSTTYRPHYFDN (SEQ ID NO: 11),
[0017] d. uma sequência CDR1 de região variável de cadeia leve que compreende uma sequência que difere em um aminoácido de QASQDIVNYLN (SEQ ID NO: 4),
[0018] e. uma sequência CDR2 de região variável de cadeia leve que compreende uma sequência que difere em um aminoácido de VASNLET (SEQ ID NO: 5), e/ou
[0019] f. uma sequência CDR3 de região variável de cadeia leve que compreende uma sequência que difere em um aminoácido de QQYDNLP (SEQ ID NO: 6).
[0020] Em outra modalidade, o anticorpo ou parte functional compreende
[0021] a. uma sequência CDR1 de região variável de cadeia pesada que compreende NYIIN (SEQ ID NO: 1) ou DYIIN (SEQ ID NO: 9),
[0022] b. uma sequência CDR2 de região variável de cadeia pesada que compreende GIIPVLGTVHYAPKFQG (SEQ ID NO: 2) ou GIIPVLGTVHYGPKFQG (SEQ ID NO: 10),
[0023] c. uma sequência CDR3 de região variável de cadeia pesada que compreende ETALVVSTTYLPHYFDN (SEQ ID NO: 3) ou ETALVVSTTYRPHYFDN (SEQ ID NO: 11),
[0024] d. uma sequência CDR1 de região variável de cadeia leve que compreende QASQDIVNYLN (SEQ ID NO: 4),
[0025] e. uma sequência CDR2 de região variável de cadeia leve que compreende VASNLET (SEQ ID NO: 5), e
[0026] f. uma sequência CDR3 de região variável de cadeia leve que compreende QQYDNLP (SEQ ID NO: 6).
[0027] Em outra modalidade, o anticorpo ou parte functional compreende pelo menos os seguintes aminoácidos na região variável de cadeia pesada que diferem da SEQ ID NO: 7:
[0028] Em uma modalidade adicional, pelo menos os seguintes aminoácidos na região variável de cadeia pesada que diferem da SEQ ID NO: 7:
[0029] Em outra modalidade, o anticorpo ou parte functional compreende pelo menos os seguintes aminoácidos na região variável de cadeia pesada que diferem da SEQ ID NO: 7:
[0030] Em uma modalidade adicional, o anticorpo ou parte funcional compreende pelo menos os seguintes aminoácidos na região va-riável de cadeia pesada que diferem da SEQ ID NO: 7:
[0031] Em outra modalidade, o anticorpo ou parte functional compreende pelo menos os seguintes aminoácidos na região variável de cadeia pesada que diferem da SEQ ID NO: 7:
[0032] Em uma modalidade adicional, o anticorpo ou parte funcional compreende os seguintes aminoácidos na região variável de cadeia pesada que diferem da SEQ ID NO: 7:
[0033] Em uma modalidade adicional, o anticorpo ou parte funcional compreende pelo menos os seguintes aminoácidos na região va-riável de cadeia pesada que diferem da SEQ ID NO: 7:
[0034] Em uma modalidade adicional, o anticorpo ou parte funcional compreende pelo menos os seguintes aminoácidos na região va-riável de cadeia pesada que diferem da SEQ ID NO: 7:
[0035] Em outra modalidade, o anticorpo ou parte functional compreende pelo menos os seguintes aminoácidos na região variável de cadeia pesada que diferem da SEQ ID NO: 7:
[0036] Em uma modalidade adicional, o anticorpo ou parte funcional compreende pelo menos os seguintes aminoácidos na região va-riável de cadeia pesada que diferem da SEQ ID NO: 7:
[0037] Em outra modalidade, a sequência CDR1 de região variável de cadeia pesada compreende uma sequência que difere em um aminoácido de uma de NYIIN (SEQ ID NO: 1) ou DYIIN (SEQ ID NO: 9), a sequência CDR2 de região variável de cadeia pesada compreende uma sequência que difere em um ou dois aminoácidos de GIIPVLGTVHYAPKFQG (SEQ ID NO: 2) ou GIIPVLGTVHYGPKFQG (SEQ ID NO: 10), e/ou a sequência CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência que difere em um ou dois aminoácidos de ETALVVSTTYLPHYFDN (SEQ ID NO: 3) ou ETALVVSTTYRPHYFDN (SEQ ID NO: 11).
[0038] Em outra modalidade, a sequência CDR1 de região variável de cadeia leve compreende uma sequência que difere em um aminoácido de QASQDIVNYLN (SEQ ID NO: 4), a sequência CDR2 de região variável de cadeia leve compreende uma sequência que difere em um aminoácido de VASNLET (SEQ ID NO: 5), e/ou a CDR3 de região variável de cadeia leve compreende uma sequência que difere em um aminoácido de QQYDNLP (SEQ ID NO: 6).
[0039] Em outra modalidade, a sequência CDR1 de região variável de cadeia pesada compreende NYIIN (SEQ ID NO: 1) ou DYIIN (SEQ ID NO: 9), a sequência CDR2 de região variável de cadeia pesada compreende GIIPVLGTVHYAPKFQG (SEQ ID NO: 2) ou GIIPVLGTVHYGPKFQG (SEQ ID NO: 10), e/ou a sequência CDR3 de região variável de cadeia pesada compreende ETALVVSTTYLPHYFDN (SEQ ID NO: 3) ou ETALVVSTTYRPHYFDN (SEQ ID NO: 11).
[0040] Em uma modalidade adicional, a sequência CDR1 de região variável de cadeia leve compreende QASQDIVNYLN (SEQ ID NO: 4), a sequência CDR2 de região variável de cadeia leve compreende VASNLET (SEQ ID NO: 5), e/ou a CDR3 de região variável de cadeia leve compreende QQYDNLP (SEQ ID NO: 6).
[0041] Em uma modalidade, um anticorpo sintético, recombinante,ou isolado ou sua parte funcional capaz de se ligar especificamente a um antígeno do RSV F compreende
[0042] a. uma sequência CDR1 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos DYIIN (SEQ ID NO: 9), e
[0043] b. uma sequência CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos GIIPVLGTVHYGPKFQG (SEQ ID NO: 10), e
[0044] c. uma sequência CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos ETALVVSTTYRPHYFDN (SEQ ID NO: 11), e
[0045] d. uma sequência CDR1 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos QASQDIVNYLN (SEQ ID NO: 4), e
[0046] e. uma sequência CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos VASNLET (SEQ ID NO: 5), e
[0047] f. uma CDR3 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos QQYDNLP (SEQ ID NO: 6).
[0048] Em outra modalidade, um anticorpo sintético, recombinante, ou isolado ou uma sua parte funcional capaz de se ligar especificamente a um antígeno do RSV F compreende:
[0049] a. uma sequência CDR1 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos DYIIN (SEQ ID NO: 9), e
[0050] b. uma sequência CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos GIIPVLGTVHYGPKFQG (SEQ ID NO: 10), e
[0051] c. uma sequência CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos ETALVVSTTYLPHYFDN (SEQ ID NO: 3), e
[0052] d. uma sequência CDR1 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos QASQDIVNYLN (SEQ ID NO: 4), e
[0053] e. uma sequência CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos VASNLET (SEQ ID NO: 5), e
[0054] f. uma CDR3 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos QQYDNLP (SEQ ID NO: 6).
[0055] Em outra modalidade, o anticorpo ou parte funcional tem uma região Fc tendo Y na posição 252Y, T na posição 254T, e E na posição 256, em que a numeração corresponde ao índice EU em Kabat.
[0056] Ainda em outra modalidade, um método de inibição de infecção por RSV em um indivíduo compreende administrar ao indivíduo o anticorpo ou parte funcional descrito aqui.
[0057] Ainda em outra modalidade, uma sequência de ácido nucleico sintética, recombinante, ou isolada codifica o anticorpo ou parte funcional descrito aqui.
[0058] Objetivos e vantagens adicionais serão apresentados em parte na descrição seguinte, e em parte serão óbvios da descrição, ou podem ser aprendidos através da prática. Os objetivos e vantagens serão percebidos e alcançados através dos elementos e combinações particularmente indicados nas reivindicações adjuntas.
[0059] Deve ser entendido que a descrição geral anterior e a descrição detalhada seguinte são somente exemplares e explicativos e não restringem as reivindicações.
[0060] As figuras adjuntas, que são incorporadas e constituem parte desta especificação, ilustram uma (várias) modalidade(s) e em conjunto com a descrição, servem para explicar os princípios descritos aqui.
[0061] As Figuras 1A e B são uma representação da sequência para a cadeia pesada de D25 e diversas variantes da cadeia pesada (J, L, e LA).
[0062] A Figura 2 é uma representação da sequência para a cadeia pesada de diversas variantes otimizadas (1G7, 1F5, 2D10).
[0063] As Figuras 3A e B são uma representação da sequência para a cadeia pesada de quatro variantes adicionais da variante otimizada 1G7. As variantes (1G7-GLM, B12-1, E3-5, e E9-2) foram preparadas para alterar o pI por incorporação de resíduos da linha germinal.
[0064] As Figuras 4A e B mostram atividade in vitro de D25 e diversas variantes em um ensaio de microneutralização.
[0065] As Figuras 5A e B mostram que D25 e diversas variants oferecem proteção contra provocação pelos subtipos RSV A2 e RSV B.
[0066] A Figura 6 mostra os resultados de uma provocação com RSV A2 em rato do algodão em animais tratados com 1G7, 1F5, D25 (designados na figura como D25wt), ou nenhum anticorpo.
[0067] As Figuras 7A e B mostram que 1G7 protege contra RSV A2 e RSV B9320. Os títulos no pulmão de RSV são representados graficamente como função da concentração no soro de IgG humana no momento da recolha.
[0068] As Figuras 8A e B mostram a neutralização de RSV A2 e RSV B9320 por vários anticorpos.
[0069] As Figuras 9A e B mostram o epitopo para a ligação de 1G7 definido por mutantes resistentes ao anticorpo monoclonal.
[0070] A Figura 10 mostra os resultados de um ensaio de neutralização contra isolados clínicos de RSV.
[0071] A Tabela 1 proporciona uma listagem de certas sequências referidas nas presentes modalidades.
[0072] São proporcionados anticorpos específicos para o RSV melhorados ou suas partes funcionais tendo propriedades melhoradas em comparação com outros anticorpos. Anticorpos ou partes funcionais, por exemplo, anticorpos ou seus fragmentos de ligação a antígenos, variantes, ou seus derivados incluem, mas não se limitam a, anticorpos policlonais, monoclonais, humanos, humanizados ou quiméricos, anticorpos de cadeia simples, fragmentos de ligação a epitopos, por exemplo, Fab, Fab' e F(ab')2, Fd, Fvs, Fvs de cadeia simples (scFv), anticorpos de cadeia simples, Fvs ligados por dissulfeto (sdFv), fragmentos que compreendem um domínio VL ou VH, fragmentos produzidos por uma biblioteca de expressão de Fab. Moléculas scFv são conhecidas na área e são descritas, por exemplo, na patente US 5,892,019. Moléculas de imunoglobulinas ou anticorpos abrangidas por esta divulgação podem ser de qualquer tipo (por exemplo, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA, e IgY), classe (por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2) ou subclasse de moléculas de imunoglobulinas.
[0073] Por exemplo, os inventores conseguiram gerar anticorpos específicos para o RSV com propriedades melhoradas relativamente a anticorpos anteriores específicos para o RSV, incluindo proteção melhorada contra subtipos RSV A e subtipos RSV B, neutralização melhorada, e menores valores de IC50. Tais anticorpos têm uma afinidade particular elevada ou forte para o RSV e, em consequência, são particularmente adequados para contrariar e/ou pelo menos em parte prevenir uma infecção pelo RSV e/ou efeitos adversos de uma infecção pelo RSV. Anticorpos e suas partes funcionais são sinônimos de moléculas ligantes específicas para o RSV e incluem quaisquer anticorpos completos ou partes de anticorpos capazes de se ligarem especificamente ao RSV.
[0074] Em uma modalidade, pelo menos um resíduo não da linha germinal da região variável de cadeia pesada de D25 (SEQ ID NO: 7) é alterado em um resíduo da linha germinal. Em outra modalidade, pelo menos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, ou 12 resíduos não da linha germinal da região variável de cadeia pesada de resíduos de D25 são alterados de novo em um resíduo da linha germinal. Em outra modalidade, pelo menos um resíduo não da linha germinal pode ser alterado em um resíduo da linha germinal e pelo menos uma posição de CDR pode ser modificada relativamente à SEQ ID NO: 7.
[0075] Uma modalidade inclui um anticorpo isolado, sintético, ou recombinante ou uma sua parte funcional capaz de se ligar especificamente ao Vírus Sincicial Respiratório e compreendendo:
[0076] a) uma sequência CDR1 de cadeia pesada compreendendo uma sequência que é pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, ou 94 % idêntica à sequência NYIIN (SEQ ID NO: 1) ou DYIIN (SEQ ID NO: 9),
[0077] b) uma sequência CDR2 de cadeia pesada compreendendo uma sequência que é pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, ou 94 % idêntica à sequência GIIPVLGTVHYAPKFQG (SEQ ID NO: 2) ou GIIPVLGTVHYGPKFQG (SEQ ID NO: 10),
[0078] c) uma sequência CDR3 de cadeia pesada compreendendo uma sequência que é pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, ou 94 % idêntica à sequência ETALVVSTTYLPHYFDN (SEQ ID NO: 3) ou ETALVVSTTYRPHYFDN (SEQ ID NO: 11),
[0079] d) uma sequência CDR1 de cadeia leve compreendendo uma sequência que é pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, ou 94 % idêntica à sequência QASQDIVNYLN (SEQ ID NO: 4),
[0080] e) uma sequência CDR2 de cadeia leve compreendendo uma sequência que é pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, ou 94 % idêntica à sequência VASNLET (SEQ ID NO: 5), e
[0081] f) uma sequência CDR3 de cadeia leve compreendendo uma sequência que é pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, ou 94 % idêntica à sequência QQYDNLP (SEQ ID NO: 6).
[0082] e em que pelo menos um aminoácido da cadeia pesada difere da SEQ ID NO: 7 e o referido pelo menos um aminoácido é escolhido de:
[0083] "Pelo menos um aminoácido na região variável de cadeia pesada difere da SEQ ID NO: 7" significa que o anticorpo ou parte funcional deve compreender pelo menos uma diferença de aminoácidos relativamente à SEQ ID NO: 7, apesar de, em algumas modalidades, poder compreender mais do que uma diferença relativamente à SEQ ID NO: 7. Em algumas modalidades, inclui substituições apresentadas na Tabela 2, deleções ou aminoácidos alternativos em posições listadas na Tabela 2, ou diferenças (incluindo deleções, substituições, ou adições) em posições não listadas na Tabela 2. Os números de posições na Tabela 2 são proporcionados relativamente à SEQ ID NO: 7 e o número da posição pode acabar por não ser igual ao número da posição baseado na numeração consecutiva de aminoácidos no anticorpo ou parte funcional de interesse. Ao invés, os números das posições são atribuídos com base no alinhamento com a SEQ ID NO: 7.
[0084] Em uma modalidade, o anticorpo ou parte funcional inclui uma cadeia pesada e/ou uma cadeia leve, em que a região variável de cadeia pesada é pelo menos 90 % idêntica à SEQ ID NO: 7 ou SEQ ID NO: 15 e em que a região variável de cadeia leve é pelo menos 90 % idêntica à SEQ ID NO: 8. Em outra modalidade, a região variável de cadeia pesada é pelo menos 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, ou 99 % idêntica à SEQ ID NO: 7 ou SEQ ID NO: 15. Em outra modalidade, a região variável de cadeia leve é pelo menos 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, ou 99 % idêntica à SEQ ID NO: 8.
[0085] Em uma modalidade, o anticorpo ou parte functional compreende uma sequência CDR1 de região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência que difere em um aminoácido de uma de NYIIN (SEQ ID NO: 1) ou DYIIN (SEQ ID NO: 9).
[0086] Em uma modalidade, o anticorpo ou parte functional compreende uma sequência CDR2 de região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência que difere em um ou dois aminoácidos de GIIPVLGTVHYAPKFQG (SEQ ID NO: 2) ou GIIPVLGTVHYGPKFQG (SEQ ID NO: 10).
[0087] Em uma modalidade, o anticorpo ou parte functional compreende uma sequência CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência que difere em um ou dois aminoácidos de ETALVVSTTYLPHYFDN (SEQ ID NO: 3) ou ETALVVSTTYRPHYFDN (SEQ ID NO: 11).
[0088] Em uma modalidade, o anticorpo ou parte functional compreende uma sequência CDR1 de região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência que difere em um aminoácido de QASQDIVNYLN (SEQ ID NO: 4).
[0089] Em uma modalidade, o anticorpo ou parte functional compreende uma sequência CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência que difere em um aminoácido de VASNLET (SEQ ID NO: 5).
[0090] Em uma modalidade, o anticorpo ou parte functional compreende uma CDR3 de região variável de cadeia leve que compreende uma sequência que difere em um aminoácido de QQYDNLP (SEQ ID NO: 6).
[0091] Em outra modalidade, o anticorpo ou parte functional compreende uma sequência CDR1 de região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência que difere em um aminoácido de NYIIN (SEQ ID NO: 1) ou DYIIN (SEQ ID NO: 9), uma sequência CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência que difere em um ou dois aminoácidos de GIIPVLGTVHYAPKFQG (SEQ ID NO: 2) ou GIIPVLGTVHYGPKFQG (SEQ ID NO: 10), uma sequência CDR3 de re-gião variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência que difere em um ou dois aminoácidos de ETALVVSTTYLPHYFDN (SEQ ID NO: 3) ou ETALVVSTTYRPHYFDN (SEQ ID NO: 11), uma sequência CDR1 de região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência que difere em um aminoácido de QASQDIVNYLN (SEQ ID NO: 4), uma sequência CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência que difere em um aminoácido de VASNLET (SEQ ID NO: 5), e/ou uma sequência CDR3 de região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência que difere em um aminoácido de QQYDNLP (SEQ ID NO: 6).
[0092] Em algumas modalidades, o anticorpo ou parte functional compreende pelo menos uma ou até todas as CDRs idênticas à SEQ ID NO: 7 (cadeia pesada) e/ou SEQ ID NO: 8 (cadeia leve).
[0093] Em uma modalidade, o anticorpo ou parte functional compreende uma sequência CDR1 de região variável de cadeia pesada compreendendo NYIIN (SEQ ID NO: 1) ou DYIIN (SEQ ID NO: 9).
[0094] Em uma modalidade, o anticorpo ou parte functional compreende uma sequência CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo GIIPVLGTVHYAPKFQG (SEQ ID NO: 2) ou GIIPVLGTVHYGPKFQG (SEQ ID NO: 10).
[0095] Em uma modalidade, o anticorpo ou parte functional compreende uma sequência CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo ETALVVSTTYLPHYFDN (SEQ ID NO: 3) ou ETALVVSTTYRPHYFDN (SEQ ID NO: 11).
[0096] Em uma modalidade, o anticorpo de parte functional compreende uma sequência CDR1 de região variável de cadeia pesada compreendendo NYIIN (SEQ ID NO: 1) ou DYIIN (SEQ ID NO: 9), uma sequência CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo GIIPVLGTVHYAPKFQG (SEQ ID NO: 2) ou GIIPVLGTVHYGPKFQG (SEQ ID NO: 10), e/ou uma sequência CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo ETALVVSTTYLPHYFDN (SEQ ID NO: 3) ou ETALVVSTTYRPHYFDN (SEQ ID NO: 11).
[0097] Em uma modalidade, o anticorpo ou parte functional compreende uma sequência CDR1 de região variável de cadeia leve que compreende QASQDIVNYLN (SEQ ID NO: 4).
[0098] Em uma modalidade, o anticorpo ou parte functional compreende uma sequência CDR2 de região variável de cadeia leve que compreende VASNLET (SEQ ID NO: 5).
[0099] Em uma modalidade, o anticorpo ou parte functional compreende uma CDR3 de região variável de cadeia leve que compreende QQYDNLP (SEQ ID NO: 6).
[00100] Em uma modalidade, o anticorpo de parte funcional compreende uma sequência CDR1 de região variável de cadeia leve que compreende QASQDIVNYLN (SEQ ID NO: 4), uma sequência CDR2 de região variável de cadeia leve que compreende VASNLET (SEQ ID NO: 5), e/ou uma CDR3 de região variável de cadeia leve que compreende QQYDNLP (SEQ ID NO: 6).
[00101] Em outra modalidade, o anticorpo ou parte funcional compreende uma sequência CDR1 de região variável de cadeia pesada compreendendo NYIIN (SEQ ID NO: 1) ou DYIIN (SEQ ID NO: 9), uma sequência CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo GIIPVLGTVHYAPKFQG (SEQ ID NO: 2) ou GIIPVLGTVHYGPKFQG (SEQ ID NO: 10), uma sequência CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo ETALVVSTTYLPHYFDN (SEQ ID NO: 3) ou ETALVVSTTYRPHYFDN (SEQ ID NO: 11), uma sequência CDR1 de região variável de cadeia leve compreendendo QASQDIVNYLN (SEQ ID NO: 4), uma sequência CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo VASNLET (SEQ ID NO: 5), e/ou uma sequência CDR3 de região variável de cadeia leve compreendendo QQYDNLP (SEQ ID NO: 6).
[00102] Em uma modalidade, o anticorpo ou parte funcional compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência que é 95 % idêntica nas regiões de estrutura a uma sequência escolhida das SEQ ID NO: 12-21.
[00103] Em uma modalidade, o anticorpo ou parte funcional compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência que é idêntica nas regiões de estrutura a uma sequência escolhida das SEQ ID NO: 12-21.
[00104] Em uma modalidade, o anticorpo ou parte funcional compreende pelo menos os seguintes aminoácidos na região variável de cadeia pesada que diferem da SEQ ID NO: 7:
[00105] Em outra modalidade, as diferenças apresentadas na Tabela 3 são as únicas diferenças de SEQ ID NO: 7. Em uma modalidade, as diferenças apresentadas na Tabela 3 não são as únicas diferenças de SEQ ID NO: 7. Em outra modalidade, a região variável de cadeia leve compreende a SEQ ID NO: 8.
[00106] Em uma modalidade, o anticorpo ou parte funcional compreende pelo menos os seguintes aminoácidos na região variável de cadeia pesada que diferem de SEQ ID NO: 7:
[00107] Em outra modalidade, as diferenças apresentadas na Tabela 4 são as únicas diferenças de SEQ ID NO: 7. Em uma modalidade, as diferenças apresentadas na Tabela 4 não são as únicas diferenças de SEQ ID NO: 7. Em outra modalidade, a região variável de cadeia leve compreende a SEQ ID NO: 8.
[00108] Em uma modalidade, o anticorpo ou parte funcional compreende pelo menos os seguintes aminoácidos na região variável de cadeia pesada que diferem de SEQ ID NO: 7:
[00109] Em outra modalidade, as diferenças apresentadas na Tabela 5 são as únicas diferenças de SEQ ID NO: 7. Em uma modalidade, as diferenças apresentadas na Tabela 5 não são as únicas diferenças de SEQ ID NO: 7. Em outra modalidade, a região variável de cadeia leve compreende a SEQ ID NO: 8.
[00110] Em uma modalidade, o anticorpo ou parte funcional compreende pelo menos os seguintes aminoácidos na região variável de cadeia pesada que diferem de SEQ ID NO: 7:
[00111] Em outra modalidade, as diferenças apresentadas na Tabela 6 são as únicas diferenças de SEQ ID NO: 7. Em uma modalidade, as diferenças apresentadas na Tabela 6 não são as únicas diferenças de SEQ ID NO: 7. Em outra modalidade, a região variável de cadeia leve compreende a SEQ ID NO: 8.
[00112] Em uma modalidade, o anticorpo ou parte funcional compreende pelo menos os seguintes aminoácidos na região variável de cadeia pesada que diferem de SEQ ID NO: 7:
[00113] Em outra modalidade, as diferenças apresentadas na Tabela 7 são as únicas diferenças de SEQ ID NO: 7. Em uma modalidade, as diferenças apresentadas na Tabela 7 não são as únicas diferenças de SEQ ID NO: 7. Em outra modalidade, a região variável de cadeia leve compreende a SEQ ID NO: 8.
[00114] Em uma modalidade, o anticorpo ou parte funcional compreende pelo menos os seguintes aminoácidos na região variável de cadeia pesada que diferem de SEQ ID NO: 7:
[00115] Em outra modalidade, as diferenças apresentadas na Tabela 8 são as únicas diferenças de SEQ ID NO: 7. Em uma modalidade, as diferenças apresentadas na Tabela 8 não são as únicas diferenças de SEQ ID NO: 7. Em outra modalidade, a região variável de cadeia leve compreende a SEQ ID NO: 8.
[00116] Em uma modalidade, o anticorpo ou parte funcional compreende pelo menos os seguintes aminoácidos na região variável de cadeia pesada que diferem de SEQ ID NO: 7.
[00117] Em outra modalidade, as diferenças apresentadas na Tabela 9 são as únicas diferenças de SEQ ID NO: 7. Em uma modalidade, as diferenças apresentadas na Tabela 9 não são as únicas diferenças de SEQ ID NO: 7. Em outra modalidade, a região variável de cadeia leve compreende a SEQ ID NO: 8.
[00118] Em uma modalidade, o anticorpo ou parte funcional compreende pelo menos os seguintes aminoácidos na região variável de cadeia pesada que diferem de SEQ ID NO: 7:
[00119] Em outra modalidade, as diferenças apresentadas na Tabela 10 são as únicas diferenças de SEQ ID NO: 7. Em uma modalidade, as diferenças apresentadas na Tabela 10 não são as únicas diferenças de SEQ ID NO: 7. Em outra modalidade, a região variável de cadeia leve compreende a SEQ ID NO: 8.
[00120] Em uma modalidade, o anticorpo ou parte funcional compreende pelo menos os seguintes aminoácidos na região variável de cadeia pesada que diferem de SEQ ID NO: 7:
[00121] Em outra modalidade, as diferenças apresentadas na Tabela 11 são as únicas diferenças de SEQ ID NO: 7. Em uma modalidade, as diferenças apresentadas na Tabela 11 não são as únicas diferenças de SEQ ID NO: 7. Em outra modalidade, a região variável de cadeia leve compreende a SEQ ID NO: 8.
[00122] Em uma modalidade, o anticorpo ou parte funcional compreende pelo menos os seguintes aminoácidos na região variável de cadeia pesada que diferem de SEQ ID NO: 7:
[00123] Em outra modalidade, as diferenças apresentadas na Tabela 12 são as únicas diferenças de SEQ ID NO: 7. Em uma modalidade, as diferenças apresentadas na Tabela 12 não são as únicas diferenças de SEQ ID NO: 7. Em outra modalidade, a região variável de cadeia leve compreende a SEQ ID NO: 8.
[00124] Em uma modalidade, o anticorpo ou parte funcional compreende uma sequência de região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência que é pelo menos 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, ou 100 % idêntica à sequência de SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, ou SEQ ID NO: 21. Em outra modalidade, o anticorpo ou parte funcional compreende uma sequência de região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência que é pelo menos 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, ou 100 % idêntica à sequência de estrutura (isto é, não CDR) de SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, ou SEQ ID NO: 21.
[00125] Em outra modalidade, o anticorpo ou parte funcional compreende uma sequência de região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência que é pelo menos 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, ou 100 % idêntica à sequência DIQMTQSPSSLSAAVGDRVTITCQASQDIVNYLNWYQQKPGKAPKLLI YVASNLETGVPSRFSGSGSGTDFSLTISSLQPEDVATYYCQQYDNLP LTFGGGTKVEIKRTV (SEQ ID NO: 8).
[00126] Em outras modalidades, é aplicada substituição conservativa de aminoácidos. Substituição conservativa de aminoácidos envolve a substituição de um aminoácido por outro geralmente com propriedades similares (tamanho, hidrofobicidade, etc.) de modo a ser provável que o funcionamento global não seja seriamente afetado.
[00127] Em uma modalidade, o anticorpo ou parte funcional pode compreender pelo menos uma mutação em CDR relativamente às CDRs presentes na SEQ ID NO: 7. Em uma modalidade, o anticorpo ou parte funcional pode compreender pelo menos uma das alterações da Tabela 13. Em outra modalidade, o anticorpo ou parte funcional pode compreender uma, duas, ou as três alterações da Tabela 13.
[00128] Outra modalidade inclui um anticorpo isolado, sintético, ou recombinante ou uma sua parte funcional capaz de se ligar especificamente a um antígeno do RSV F e compreendendo uma sequência CDR1 de região variável de cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos DYIIN (SEQ ID NO: 9), uma sequência CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos GIIPVLGTVHYAPKFQG (SEQ ID NO: 2), uma sequência CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos ETALVVSTTYLPHYFDN (SEQ ID NO: 3), uma sequência CDR1 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos QASQDIVNYLN (SEQ ID NO: 4), uma sequência CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos VASNLET (SEQ ID NO: 5), e uma CDR3 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos QQYDNLP (SEQ ID NO: 6).
[00129] Outra modalidade inclui um anticorpo isolado, sintético, ou recombinante ou uma sua parte funcional capaz de se ligar especificamente a um antígeno do RSV F e compreendendo uma sequência CDR1 de região variável de cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos NYIIN (SEQ ID NO: 1), uma sequência CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos GIIPVLGTVHYGPKFQG (SEQ ID NO: 10), uma sequência CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos ETALVVSTTYLPHYFDN (SEQ ID NO: 3), uma sequência CDR1 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos QASQDIVNYLN (SEQ ID NO: 4), uma sequência CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos VASNLET (SEQ ID NO: 5), e uma CDR3 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos QQYDNLP (SEQ ID NO: 6).
[00130] Outra modalidade inclui um anticorpo isolado, sintético, ou recombinante ou uma sua parte funcional capaz de se ligar especificamente a um antígeno do RSV F e compreendendo uma sequência CDR1 de região variável de cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos NYIIN (SEQ ID NO: 1), uma sequência CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos GIIPVLGTVHYAPKFQG (SEQ ID NO: 2), uma sequência CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos ETALVVSTTYRPHYFDN (SEQ ID NO: 11), uma sequência CDR1 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos QASQDIVNYLN (SEQ ID NO: 4), uma sequência CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos VASNLET (SEQ ID NO: 5), e uma CDR3 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos QQYDNLP (SEQ ID NO: 6).
[00131] Em outra modalidade, um anticorpo isolado, sintético, ou recombinante ou sua parte funcional compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo CDR1, CDR2, e CDR3 de cadeia pesada e uma cadeia leve compreendendo CDR1, CDR2, e CDR3 de cadeia leve, em que pelo menos uma, duas, ou as três CDRs de cadeia pesada são escolhidas da coluna A, as restantes CDRs de cadeia pesada (se existirem) são escolhidas da coluna B, e as CDRs de cadeia leve compreendem a coluna C da Tabela 14. Assim, em uma modalidade, as CDRs de cadeia leve são apresentadas na Tabela 14 coluna C e as CDRs de cadeia pesada podem ser misturadas-e-emparelhadas das colunas A e B desde que a cadeia pesada tenha uma de cada de CDR1, CDR2, e CDR3.
[00132] Não é necessário que as várias modalidades de CDRs alternativas contenham quaisquer das mutações não de linha germinal em linha germinal discutidas acima na seção I.A, mas quaisquer ou todas dessas podem estar opcionalmente presentes.
[00133] Em uma modalidade, o anticorpo ou parte funcional pode compreender pelo menos uma das CDRs de cadeia pesada alternativas da Tabela 14 e pode ter pelo menos outra modificação de CDR. Especificamente, ainda em outra modalidade, o anticorpo ou parte funcional pode compreender uma sequência CDR1 de cadeia pesada compreendendo uma sequência que difere em um aminoácido de NYIIN (SEQ ID NO: 1), uma sequência CDR2 de cadeia pesada compreendendo uma sequência que difere em um ou dois aminoácidos de GIIPVLGTVHYAPKFQG (SEQ ID NO: 2), uma sequência CDR3 de cadeia pesada compreendendo uma sequência que difere em um ou dois aminoácidos de ETALVVSTTYLPHYFDN (SEQ ID NO: 3), uma sequência CDR1 de cadeia leve compreendendo uma sequência que difere em um aminoácido de QASQDIVNYLN (SEQ ID NO: 4), uma sequência CDR2 de cadeia leve compreendendo uma sequência que difere em um aminoácido de VASNLET (SEQ ID NO: 5), e/ou uma sequência CDR3 de cadeia leve compreendendo uma sequência que difere em um aminoácido de QQYDNLP (SEQ ID NO: 6), em que pelo menos uma CDR1 de cadeia pesada é DYIIN SEQ ID NO: 9), CDR2 de cadeia pesada é GIIPVLGTVHYGPKFQG (SEQ ID NO: 10), ou CDR3 de cadeia pesada éETALVVSTTYRPHYFDN (SEQ ID NO: 11).
[00134] Em uma modalidade, modificações adicionais podem ser efetuadas em anticorpos ou partes funcionais descritos aqui para melhorar a sua semivida. Em uma modalidade, mutações tais como mutações por deleção, adição, ou substituição podem ser efetuadas nos anticorpos ou partes funcionais para melhorar a sua semivida. Em uma modalidade, a região Fc pode ser mutada de modo a incluir uma, duas, ou as três seguintes substituições M252Y, S254T, e T256E, em que a numeração corresponde ao índice EU em Kabat. Em uma modalidade, a região Fc pode ser mutada de modo a incluir todas as seguintes substituições M252Y, S254T, e T256E, em que a numeração corresponde ao índice EU em Kabat. Dall’Acqua et al., Properties of Human IgG1s Engineered for Enhanced Binding to the Neonatal Fc Receptor (FcRn), J Biol Chem 281(33):23514-23524 (2006). A modalidade com as três substituições é designada variante YTE. Expresso de modo diferente, em uma modalidade, o anticorpo ou parte funcional tem uma região Fc tendo Y na posição 252Y, T na posição 254T, e E na posição 256, em que a numeração corresponde ao índice EU em Kabat.
[00135] Em certa modalidade, o anticorpo ou parte funcional tem um valor de IC50 menor do que 10 ng/mL em um ensaio de neutralização in vitro em que células HEp-2 são infectadas com RSV e o anticorpo ou parte funcional. Em outra modalidade, o IC50 é 9 ng/mL, 8ng/mL, 7 ng/mL, 6 ng/mL, 5 ng/mL, 4 ng/mL, 3 ng/mL, ou 2 ng/mL ou menos para RSV subtipo A e/ou RSV subtipo B. Em uma modalidade, o IC50 é medido no ensaio de neutralização in vitro descrito nos exemplos, opcionalmente para RSV A2 e/ou RSV B9320.
[00136] Em uma modalidade, os anticorpos e suas partes funcionais são eficazes a neutralizar estirpes do RSV subtipo A. Em uma modalidade, os anticorpos e suas partes funcionais são eficazes a neutralizar estirpes do RSV subtipo B. Em outra modalidade, os anticorpos e suas partes funcionais são eficazes a neutralizar estirpes do RSV subtipos A e B.
[00137] Como usado aqui, o termo anticorpo ou sua parte funcional é usado no sentido mais lato. Pode ser preparado artificial, como anticorpos monoclonais (mAbs) produzidos por tecnologia de hibridoma convencional, tecnologia recombinante e/ou um seu fragmento funcional. Pode incluir moléculas de imunoglobulinas intatas, por exemplo, um anticorpo policlonal, um anticorpo monoclonal (mAb), um anticorpo monoespecífico, um anticorpo biespecífico, um anticorpo poliespecífico, um anticorpo humano, um anticorpo humanizado, um anticorpo de animal (por exemplo, anticorpo de camelídeo), anticorpos quiméricos, bem como porções, fragmentos, regiões, peptídeos e seus derivativos (proporcionados por qualquer técnica conhecida, tal como, mas não se limitando a, clivagem enzimática, síntese peptídica, ou técnicas recombinantes), tais como, por exemplo, imunoglobulina desprovida de cadeias leves, Fab, Fab', F (ab')2, Fv, scFv, fragmento de anticorpo, diacorpo, Fd, regiões CDR, ou qualquer porção ou sequência peptídica do anticorpo que seja capaz de se ligar a um antígeno ou epitopo. Em uma modalidade, a parte funcional é um anticorpo de cadeia simples, um fragmento variável de cadeia simples (scFv), um fragmento Fab, ou um fragmento F(ab')2.
[00138] É dito que um anticorpo ou parte funcional é "capaz de se ligar a" uma molécula se for capaz de reagir especificamente com a molécula para desse modo ligar a molécula ao anticorpo. Fragmentos ou porções de um anticorpo podem estar desprovidos do fragmento Fc do anticorpo intato, ser eliminados mais rapidamente da circulação, e podem ter menos ligação tecidual inespecífica do que um anticorpo intato. Exemplos de anticorpos podem ser produzidos a partir de anticorpos intatos usando métodos bem conhecidos na técnica, por exemplo, por clivagem proteolítica com enzimas tais como papaína (para produzir fragmentos Fab) ou pepsina (para produzir fragmentos F(ab')2). Porções de anticorpos podem ser preparadas por quaisquer dos métodos acima, ou podem ser preparadas por expressão de uma porção da molécula recombinante. Por exemplo, as região(ões) CDR de um anticorpo recombinante pode(m) ser isolada(s) e subclonada(s) em um vetor de expressão apropriado.
[00139] Em uma modalidade, um anticorpo ou parte funcional é um anticorpo humano. O uso de anticorpos humanos para terapia humana pode diminuir a possibilidade de efeitos secundários devido a uma reação imunológica em um indivíduo humano contra sequências não humanas. Em outra modalidade, o anticorpo ou parte funcional é humanizado. Em outra modalidade, um anticorpo ou parte funcional é um anticorpo quimérico. Deste modo, sequências de interesse, tais como, por exemplo, um local de ligação de interesse, podem ser incluídas em um anticorpo ou parte funcional.
[00140] Em uma modalidade, o anticorpo pode ter um isotipo IgG, IgA, IgM, ou IgE. Em uma modalidade, o anticorpo é um IgG.
[00141] As presentes modalidades também proporcionam uma sequência de ácido nucleico isolada, sintética, ou recombinante codificando quaisquer dos anticorpos ou partes funcionais descritos na seção I.A ou I.B acima. Tal ácido nucleico é, por exemplo, isolado de uma célula B que é capaz de produzir um anticorpo ou parte funcional. Tais ácidos nucleicos codificam as sequências de cadeia pesada e leve apresentadas aqui. Em alternativa, tais ácidos nucleicos codificam sequências de cadeia pesada e leve compreendendo as CDRs de cadeia pesada e leve, respectivamente, apresentadas aqui. Em algumas modalidades, os ácidos nucleicos codificarão partes funcionais dos anticorpos descritos aqui. Devido à degenerescência do código de ácidos nucleicos, múltiplos ácidos nucleicos codificarão o mesmo aminoácido e todos estão abrangidos aqui.
[00142] Em uma modalidade, um anticorpo ou parte funcional pode ser usado em um método de tratamento ou como um medicamento. O método pode ser usado para contrariar ou pelo menos em parte prevenir uma infecção pelo RSV ou para contrariar ou pelo menos em parte prevenir efeitos adversos de uma infecção pelo RSV. O método também compreende administrar a um indivíduo necessitado uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo ou parte funcional como descrito aqui. Em uma modalidade, o indivíduo necessitado é um paciente humano.
[00143] Em uma modalidade, para contrariar o RSV, um anticorpo ou parte funcional pode ser administrado a um indivíduo antes da ocorrência de uma infecção pelo RSV, por outras palavras, como um agente profilático. Em alternativa, um anticorpo ou parte funcional pode ser administrado quando um indivíduo já está infectado pelo RSV. O referido anticorpo ou parte funcional pode ser administrado a indivíduos com um risco acrescido de infecção pelo RSV, tais como, por exemplo, crianças com nascimento prematuro, indivíduos com doença pulmonar crônica, doença cardíaca congênita e/ou imunidade comprometida, crianças com uma idade inferior a 6 semanas. Crianças com nascimento prematuro incluem lactentes em seu primeiro ano de vida, bem como crianças em seu segundo ano de vida e crianças mais velhas que continuam em risco de contrair infecção pelo RSV. Também pessoas idosas têm um risco acrescido de contrair infecção pelo RSV e assim podem ser um alvo para a administração com base no risco. Os anticorpos ou partes funcionais também podem ser administrados a indivíduos que sofreram uma infecção prévia pelo RSV.
[00144] Para aplicação terapêutica, anticorpos ou partes funcionais são tipicamente combinados com um transportador, adjuvante, diluente e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável. Em uma modalidade, os anticorpos ou partes funcionais são combinados com água para injeção, Em outra modalidade, são preparados em uma solução líquida estéril, sem conservantes com histidina, glicina, e cloreto. Em outra modalidade, exemplos de transportadores adequados compreendem, por exemplo, hemocianina de lapa californiana (KLH), albumina do soro (por exemplo, BSA ou RSA) e ovalbumina. Em outra modalidade, o referido transportador adequado compreende uma solução tal como, por exemplo, solução salina. Em outras modalidades, os anticorpos ou partes funcionais são proporcionados em uma forma liofilizada e misturados com água para injeção antes da administração.
[00145] Ainda em outra modalidade, um ácido nucleico codificando um anticorpo ou parte funcional pode ser administrado. Por administração de tal ácido nucleico, anticorpos ou partes funcionais são produzidos pela maquinaria do hospedeiro. Anticorpos ou partes funcionais produzidos são capazes de prevenir e/ou contrariar infecção pelo RSV e/ou os efeitos adversos de uma infecção pelo RSV.
[00146] Um ácido nucleico codificando uma parte funcional de um anticorpo refere-se a um ácido nucleico com pelo menos 30 pares de bases de comprimento, pelo menos 50 pares de bases de comprimento, ou pelo menos 100 pares de bases de comprimento, compreendendo pelo menos uma característica de expressão (no tipo, não necessariamente na quantidade) de um ácido nucleico codificando um anticorpo. Em uma modalidade, um ácido nucleico codificando uma parte funcional de um anticorpo codifica pelo menos uma sequência de aminoácidos compreendendo duas ou opcionalmente três CDRs dos anticorpos descritos aqui.
[00147] Também é proporcionada uma célula produtora de um anticorpo isolado capaz de produzir um anticorpo ou parte funcional. Os anticorpos ou partes funcionais descritos aqui podem ser fabricados a partir de um hibridoma que segrega o anticorpo ou a partir de uma célula produzida de modo recombinante que foi transformada ou transfectada com um gene ou genes codificando o anticorpo ou parte fun-cional.
[00148] Uma modalidade inclui um método de produção do anticorpo ou parte funcional por cultura de células hospedeiras em condições em que um ácido nucleico é expresso para produzir o anticorpo, seguido de recuperação do anticorpo. Pode ser usada uma variedade de linhagens de células para expressar o anticorpo ou parte funcional, incluindo, mas não se limitando a, linhagens de células de mamífero. Em uma modalidade, as linhagens de células podem ser humanas. Em outra modalidade, podem ser usadas linhagens de células bacterianas ou de insetos. Em uma modalidade, as linhagens de células incluem células de ovário de hamster chinês (CHO), variantes de células CHO (por exemplo DG44), células 293 e células NSO. Em outra modalidade, linhagens de células incluem células VERY, BHK, Hela, COS, MDCK, 293F, 293T, 3T3, W138, BT483,Hs578T, HTB2, BT2O e T47D, CRL7O3O e HsS78Bst.
[00149] A expressão recombinante emprega construção de um vetor de expressão contendo um polinucleotídeo que codifica o anticorpo ou parte funcional. Depois de ser obtido um polinucleotídeo, pode ser preparado um vetor para a produção do anticorpo por tecnologia de DNA recombinante bem conhecida na área. Vetores de expressão podem incluir sinais apropriados de controle da transcrição e tradução. Tal pode ser alcançado usando técnicas in vitro de DNA recombinante, técnicas sintéticas, e recombinação genética in vivo. Em uma modalidade, um vetor replicável compreende uma sequência de ácido nucleico codificando um anticorpo ou parte funcional operavelmente ligado a um promotor heterólogo.
[00150] Pode ser usada uma variedade de sistemas hospedeiro- vetor de expressão para expressar anticorpos ou partes funcionais, como descrito na Pat. U.S. No. 5.807.715. Por exemplo, células de mamífero, como células de ovário de hamster chinês (CHO), em conjunção com um vetor como o elemento promotor genético principal intermédio-inicial do citomegalovírus humano, são um sistema de expressão eficaz para anticorpos (Foecking et al., Gene 45:101 (1986); and Cockett et al., Bio/Technology 8:2 (1990)). Adicionalmente, pode ser escolhida uma estirpe de células hospedeiras que module a expressão de sequências inseridas, ou modifique e processe o produto genético do modo específico desejado. Tais modificações (por exemplo, glicosilação) e processamento (por exemplo, clivagem) de produtos proteicos podem ser importantes para a função da proteína. Diferentes células hospedeiras têm mecanismos característicos e específicos para o processamento pós-tradução e modificação de proteínas e produtos genéticos. Linhagens de células ou sistemas hospedeiros apropriados podem ser escolhidos para assegurar a modificação e processamento corretos da proteína da invenção. Para essa finalidade podem ser usadas células hospedeiras eucarióticas que possuem a maquinaria celular para o processamento apropriado do transcrito primário, glicosilação, e fosforilação do produto genético.
[00151] Em sistemas bacterianos, alguns vetores de expressão podem ser selecionados, dependendo da utilização pretendida para o anticorpo ou parte funcional a ser expresso. Por exemplo, quando for pretendido produzir uma grande quantidade de tal anticorpo ou parte funcional, para a geração de composições farmacêuticas compreendendo um anticorpo ou parte funcional, podem ser desejáveis vetores que dirijam a expressão de níveis altos de produtos proteicos de fusão que sejam facilmente purificados. Tais vetores incluem mas não estão limitados ao vetor de expressão de E. coli pUR278 (Ruther et al., EMBO J. 12:1791 (1983)), em que a sequência codificadora pode ser ligada individualmente no vetor na estrutura com a região codificadora de lac Z, de modo que é produzida uma proteína de fusão; vetores pIN (Inouye & Inouye, 1985, Nucleic Acids Res. 13:3101-3109 (1985); Van Heeke & Schuster, 1989, J. Biol. Chem., 24:5503-5509 (1989)); e similares. Vetores pGEX também podem ser usados para expressar polipeptídeos estranhos como proteínas de fusão com glutationa S-transferase (GST). Em geral, tais proteínas de fusão são solúveis e podem ser facilmente purificadas a partir de células submetidas a lise mediante adsorção e ligação a matriz de afinidade de glutationa-agarose seguido de eluição na presença de glutationa livre. Os vetores pGEX são planejados para introduzirem locais de clivagem de trombina e/ou fator Xa protease no polipeptídeo expresso, de modo que o produto genético alvo clonado possa ser liberado da fração GST.
[00152] Em um sistema de inseto, vírus de poliedrose nuclear de Autographa californica (AcNPV) é usado como um vetor para expressar genes estranhos. O vírus cresce em células de Spodoptera frugiperda. A sequência codificadora da proteína pode ser individualmente clonada em regiões não essenciais (por exemplo, o gene da poliedrina) do vírus e colocada sob o controle de um promotor de AcNPV (por exemplo, o promotor da poliedrina).
[00153] Em células hospedeiras de mamífero, podem ser usados alguns sistemas de expressão à base de vírus. Em casos em que um adenovírus é usado como um vetor de expressão, a sequência codificante de interesse pode ser ligada a um complexo de controle de transcrição/tradução de adenovírus, por exemplo, o promotor tardio e sequência líder tripartida. Este gene quimérico pode então ser inserido no genoma do adenovírus por recombinação in vitro ou in vivo. A inserção em uma região não essencial do genoma viral (por exemplo, região E1 ou E3) dará origem a um vírus recombinante que é viável e capaz de expressar o anticorpo ou parte funcional em hospedeiros infectados (por exemplo, ver, Logan & Shenk, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:355-359 (1984)). Sinais de iniciação específicos também podem ser requeridos para a tradução eficiente de sequências codificantes inseridas do anticorpo ou parte funcional. Estes sinais incluem o códon de iniciação ATG e sequências adjacentes. Adicionalmente, o códon de iniciação deve estar geralmente na estrutura com a fase de leitura da sequência codificante desejada para assegurar tradução do inserto completo. Estes sinais de controle da tradução exógenos e códons de iniciação podem ter uma variedade de origens, naturais e sintéticas. A eficiência da expressão pode ser aumentada pela inclusão de elementos intensificadores da transcrição, terminadores da transcrição apropriados, etc. (ver, por exemplo, Bittner et al., Methods in Enzymol., 153:51-544(1987)).
[00154] A expressão estável pode ser usada para a produção de longo prazo, de alto rendimento de proteínas recombinantes. Por exemplo, linhagens de células que expressam de modo estável a molécula proteica podem ser geradas. Células hospedeiras podem ser transformadas com um vector apropriadamente desenhado compreendendo elementos de controle da expressão (por exemplo, promotor, intensificador, terminadores de transcrição, locais de poliadenilação, etc.), e um gene marcador selecionável. Após a introdução do DNA estranho, as células podem permanecer em cultura durante 1-2 dias em um meio enriquecido, e depois são transferidas para um meio seletivo. O marcador selecionável no plasmídeo recombinante confere resistência à seleção e permite que as células que integraram de modo estável o plasmídeo em seus cromossomos cresçam e formem focos que por sua vez podem ser clonados e expandidos em linhagens celulares. Plasmídeos que codificam um anticorpo ou parte funcional podem ser usados para introduzir o gene/cDNA em qualquer linhagem de células adequada para produção em cultura.
[00155] Podem ser usados alguns sistemas de seleção, incluindo, mas não se limitando aos genes de timidina quinase do vírus herpes simplex (Wigler et al., Cell, 11:223 (1977)), hipoxantinaguaninafosforribosiltransferase (Szybalska & Szybalski, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 48:202 (1992)), e adenina fosforribosiltransferase (Lowy et al., Cell, 22:8-17 (1980)) que podem ser empregues em células tk-, hgprt- ou aprT-, respectivamente. Além disso, resistência a antimetabólitos pode ser usada como base de seleção para os seguintes genes: dhfr, que confere resistência ao metotrexato (Wigler et al., Natl. Acad. Sci. USA, 77:357 (1980); O'Hare et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 78:1527 (1981)); gpt, que confere resistência ao ácido micofenólico (Mulligan & Berg, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 78:2072 (1981)); neo, que confere resistência ao aminoglicosídeo G-418 (Wu e Wu, Biotherapy 3:87-95 (1991); Tolstoshev, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 32:573-596 (1993); Mulligan, Science 260:926-932 (1993); e Morgan e Anderson, Ann. Rev. Biochem. 62:191-217 (1993); May, TIB TECH 11(5):155-2 15 (1993)); e hygro, que confere resistência à higromicina (Santerre et al., Gene, 30:147 (1984)). Métodos habitualmente conhecidos na área da tecnologia de DNA recombinante podem ser rotineiramente aplicados para selecionar o clone recombinante desejado, e tais métodos são descritos, por exemplo, em Ausubel et al. (editores), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (1993); Kriegler, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990); e nos Capítulos 12 e 13, Dracopoli et al. (editores), Current Protocols in Human Genetics, John Wiley & Sons, NY (1994); Colberre-Garapin et al., 1981, J. Mol. Biol., 150:1.
[00156] Depois de um anticorpo ou parte funcional ter sido produzido por expressão recombinante, pode ser purificado por qualquer método conhecido na área para a purificação de uma molécula de imunoglobulina, por exemplo, por cromatografia (por exemplo, de troca iônica, de afinidade, particularmente por afinidade para os antígenos específicos de Proteína A ou Proteína G, e cromatografia em coluna de exclusão por tamanho), centrifugação, solubilidade diferencial, ou por qualquer outra técnica padrão para a purificação de proteínas. Adicionalmente, as proteínas da presente invenção ou seus fragmentos podem ser fundidos a sequências polipeptídicas heterólogas descritas aqui ou conhecidas na técnica para facilitar a purificação.
[00157] Em algumas modalidades, são geradas células produtoras de anticorpos específicos para o RSV que são estáveis durante pelo menos seis meses. Em outra modalidade, uma célula produtora de anticorpos específicos para o RSV é estável durante pelo menos nove semanas, pelo menos três meses, ou pelo menos seis meses. Em outra modalidade, métodos alternativos de produção de anticorpos e partes funcionais são bem conhecidos na técnica e estão descritos pelo menos na Pat. US No. 8.562.996.
[00158] Serão agora referidas em detalhe as presentes modalidades exemplares, cujos exemplos estão ilustrados nas figuras adjuntas. Sempre que for possível, os mesmos números de referência serão usados ao longo das figuras para referir partes iguais ou similares. Outras modalidades serão claras para os peritos na técnica considerando a especificação e prática reveladas aqui. As modalidades são adicionalmente explicadas nos seguintes exemplos. Estes exemplos não limitam o escopo das reivindicações, servindo meramente para clarificar certas modalidades. É pretendido que a especificação e exemplos sejam considerados meramente exemplares, com os verdadeiros escopo e espírito sendo indicados pelas seguintes reivindicações.
[00159] Os fragmentos de DNA da cadeia leve variável (VL) e cadeia pesada variável (VH) da imunoglobulina 1G7, cada um contendo mutações desejadas que melhoram a potência do anticorpo, foram inseridos em um vetor de expressão de IgG1 humano contendo a região constante leve capa e a região constante pesada de IgG1 CH1- dobradiça-CH2-CH3. Para expressar o anticorpo 1G7, células 293-F de rim embrionário humano foram transfectadas de modo transitório com o vetor contendo 1G7 usando reagente 293FectinTM (Invitrogen, Carlsbad, CA). As células foram cultivadas a 37 °C, 120 rpm com 5 % de CO2 e 80 % de umidade. O meio de cultura foi introduzido no segundo dia por adição de meio em volume igual e recolhido aos 10 dias após a transfecção. O sobrenadante foi filtrado de modo estéril para remover células e detritos. A IgG foi purificada usando coluna de proteína A (coluna de proteína A Hi-Trap, Sigma) e a proteína que eluiu foi dialisada contra PBS por uma noite a 4 °C. A concentração de IgG foi determinada por quantificação de proteína em NanoDrop (Thermo Scientific).
[00160] Seguiu-se a mesma abordagem para produzir os outros anticorpos.
[00161] Ensaios de microneutralização foram realizados do modo seguinte: Em resumo, diluições em série de 2 vezes de MAb foram introduzidas em placas de microtitulação de 384 poços em meio de cultura de células HEp-2 a um volume de 15 μL/poço. Subsequentemente, 15 μL de vírus RSV A2 ou RSV B 9320 com diluição em meio de cultura de células HEp-2 para uma concentração variando desde 80 até 150 pfu/poço foram adicionados a cada poço incluindo poços de controle contendo somente meio de cultura de células HEp-2, e as placas foram incubadas durante 1,5 horas a 37 °C com 5 % de CO2. Adicionaram-se a cada poço células HEp-2 a 2,5 x 105 células/mL em 30μL e as placas foram incubadas a 37 °C com 5 % de CO2. Passados 3 dias para o RSV A2 ou 4 dias para o RSV B9320, o meio foi removido e adicionaram-se 30 μL de acetona 80 %/PBS 20 % gelado para fixar as células.
[00162] A replicação viral foi medida por ensaio imunoabsorvente ligado a enzima (ELISA) usando um MAb anti-RSV F conjugado a peroxidase de rábano picante dirigido ao local C de RSV F (1331H) (Beeler e van Wyke Coelingh, J Virol. 63(7):2941-2950 (1989). O MAb 1331H foi diluído 1:6 000 em PBS e 30 μL foram adicionados a cada poço. Após duas horas de incubação a 37 °C, as placas foram lavadas três vezes com PBS-T. Adicionaram-se a cada poço 30 μL de TMB peroxidase e as placas foram incubadas à temperatura ambiente no escuro durante 15 minutos. A reação foi terminada pela adição de 15μL de H2SO4 2 N a cada poço. A conversão do substrato foi medida monitorando a absorvância a 450 nm usando um leitor de microplacas. Os valores de IC50 foram calculados usando um algoritmo de ajustamento não linear em Graphpad Prism usando o log (inibidor) vs. resposta com ajustamento da curva de inclinação variável e representam a concentração de MAb requerida para uma redução de 50 % da absorvância medida a 450 nm.
[00163] Os resultados são apresentados na Figura 4, que mostra que cada um de 1G7, 1F5, 2D10, e D25 inibiu a replicação de RSV A2 e RSV B9320 na microneutralização. O 1G7 foi o mais eficaz, seguido de 1F5, 2D10, e então D25.
[00164] Os animais foram doseados com 0,1 mL de anticorpo por injeção intramuscular aos vários níveis de dosagem indicados na figura. Vinte e quatro horas mais tarde, os animais foram anestesiados usando uma câmara de isoflurano e foram infectados por instilação intranasal de 1*106 pfu/animal da estirpe RSV A2. Quatro dias depois, os animais foram sacrificados por asfixia com dióxido de carbono; seus pulmões foram removidos cirurgicamente, bissetados e congelados em nitrogênio líquido ou imediatamente processados. Amostras de sangue foram obtidas por punção cardíaca no momento do sacrifício.
[00165] Para avaliar o efeito da administração de MAb na replicação do RSV nos pulmões de ratos do algodão, o título viral de RSV em homogenatos pulmonares de rato do algodão foi determinado para cada grupo de dose. Para esse propósito, pulmões recolhidos foram individualmente homogeneizados em 10 partes (peso/volume) de Solução Salina Equilibrada de Hanks mais fosfato de sucrose usando um homogeneizador de tecidos Fast Prep 24 durante 20 segundos com tubos TeenALysing Matrix à temperatura ambiente. As suspensões resultantes foram centrifugadas a 930 *g durante 10 min a 4 °C, e os sobrenadantes foram recolhidos e armazenados a -80 °C até à análise. Amostras de homogenatos pulmonares foram diluídas 1:10 e 1:100 em meio de cultura, e 50 μL de amostras de homogenato pulmonar não diluído ou homogenato pulmonar diluído foram adicionados a poços em duplicado de células HEp-2 que haviam sido semeadas a uma densidade celular de 2,5 * 105 células/poço em placas de 24 poços, 24 horas antes da inoculação. Após 1 hora de incubação a 37 oC com 5 % de CO2, o inóculo foi substituído por meio de cultura contendo metilcelulose 0,8 % e as células foram incubadas a 37 °C com 5 % de CO2. Cinco dias mais tarde a cobertura foi removida, e as células foram fixadas e imunocoradas com um anticorpo policlonal anti-RSV de cabra seguido de um anticorpo secundário HRP anti-cabra. As placas foram visualizadas por reação com reagente AEC. As placas foram quantificadas ao microscópio usando uma objetiva 10*. O limite de detecção para este ensaio é 200 pfu/g de tecido. Amostras com um título viral inferior ao limite de detecção (< 200 pfu/g) foram designadas a 100 pfu/g (metade do limite de detecção inferior) para propósitos de análise estatística. Os resultados estão apresentados na Figura 5, demonstrando que todas as variantes J, L, e LA são mais eficazes do que D25 na proteção contra provocação pelo RSV A, mas que as variantes L e LA foram menos eficazes na proteção contra os subtipos RSV B (com L tendo melhor desempenho contra uma estirpe B do que outra). Com base nestes dados, J foi escolhido como ponto de partida para otimização adicional.
[00166] O modelo discutido acima na parte (A) deste exemplo foi usado para comparar a capacidade de 1G7, 1F5, e D25 para protegerem contra provocação pelo RSV. Os animais foram doseados a 2mg/kg, 1 mg/kg, 0,5 mg/kg, e 0,25 mg/kg. Os resultados estão apresentados na Figura 6. Os dados mostram que 1G7 teve melhor desempenho do que 1F5 na proteção contra provocação pelo RSV, apesar de ambos terem sido capazes de reduzir o título do vírus para o limite de detecção. Tanto 1G7 como 1F5 tiveram melhor desempenho do que D25.
[00167] O mesmo modelo de rato do algodão foi usado como descrito na seção (A) acima. Cada animal recebeu 0,1 mL de anticorpo, com concentrações variáveis de anticorpo presente, como relatado na Figura 7. 1G7 demonstra uma relação de resposta à dose com o título pulmonar do RSV para RSV A2 e RSV B9320.
[00168] O mesmo modelo de rato do algodão foi usado como descrito na seção (A) acima.
[00169] As concentrações de IgG humana em amostras de soro de rato do algodão no dia da recolha pulmonar foram determinadas usando um método ELISA. Neste ensaio, os anticorpos humanos foram capturados por um anticorpo de cabra anti-humano ligado a placas de microtitulação. O anticorpo IgG (H + L) de cabra anti- humano (0,5μg/mL em 1x PBS) foi revestido em placas de microtitulação Nunc Maxisorp de 384 poços por uma noite a 4 °C em um volume de 30 μL. As placas foram lavadas e depois bloqueadas com 60 μL de uma solução de PBS + soro de cabra inativado pelo calor 3 % por 1 hora à temperatura ambiente. O tampão de bloqueio foi removido e as amostras foram aplicadas do modo seguinte: Uma diluição em série de duas vezes do anticorpo humano padrão diluído em tampão de ensaio foi usada para a curva padrão com uma gama de concentrações de 500ng/mL até 0,488 ng/mL. As curvas padrão foram ajustadas usando um ajustamento de curvas de 4 parâmetros.
[00170] Os resultados são apresentados na Figura 8, mostrando que as variantes descritas aqui têm menores IC50s do que D25 na neutralização de RSV A2 e RSV B9320. Tal também demonstra que não ocorreu perda de atividade contra o vírus A2 ou B9320, tendo sido observada atividade aumentada com E9-2 e B12-1 e somente uma perda nominal de atividade contra o vírus B9320 com 1G7 GLM e E3-5.
[00171] Mutantes do vírus RSV A e RSV B foram isoladas por passagem três vezes na presença de 250 ng/mL de 1G7-YTE. 1G7- YTE é o anticorpo 1G7 com a mutação YTE descrita acima na seção I.C acima. Após a última passagem, a sequência da proteína RSV F foi determinada. As mutações correspondem a regiões que foram previamente definidas na estrutura cocristalina do RSV F com o anticorpo D25 paterno. Todos os mutantes resistentes continham alterações na região da proteína RSV F na região F1 entre os aminoácidos 200-213. Não se verificou que mutações secundárias na posição 294 aumentassem a resistência e não foram mais resistentes do que aquelas com uma única mutação na região 200-213. Mutações secundárias na re-gião F2 da base da mutação N208S originaram resistência acrescida. Os resultados são proporcionados na Figura 9.
[00172] Foi realizado um ensaio de neutralização por pré-incubação dos vírus isolados clínicos expandidos com uma série de diluição dos anticorpos antes da infecção de células HEp2. A infecção de células foi medida como função da expressão da proteína F na superfície das células. Os valores de IC50 foram calculados por ajustamento não linear de curvas de neutralização. A replicação viral foi medida tal como no Exemplo 2 (Ensaio de Microneutralização In Vitro).
[00173] Os resultados são proporcionados na Figura 10. Os valores de IC50 para 1G7 e 1F5 são ambos menores do que para D25 para a neutralização de isolados A ou isolados B de RSV em células HEp2.
[00174] Todas as referências citadas aqui, incluindo patentes, pedidos de patentes, artigos, manuais, e similares, e as referências aí citadas, tanto quanto ainda não o estão, são deste modo incorporadas aqui a título de referência na sua totalidade para todos os propósitos.
[00175] A especificação descrita anteriormente é considerada suficiente para permitir ao perito na técnica praticar as modalidades. A descrição e Exemplos anteriores detalham certas modalidades e descrevem o melhor modo contemplado pelos inventores. No entanto, será apreciado que, independentemente de quão detalhado o texto anterior possa estar apresentado, as modalidades podem ser praticadas de muitos modos e as reivindicações incluem quaisquer seus equivalentes
Claims (4)
1. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga especificamente a proteína Vírus Sincicial Respiratório (RSV) e é eficaz na neutralização de ambas estirpes do RSV subtipo A e B e compreende:uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos que difere em um aminoácido da SEQ ID NO: 15 e uma região variável de cadeia leve que é idêntica à SEQ ID NO: 8, em que a diferença em um aminoácido da SEQ ID NO: 15 está na sequência CDR3 de região variável de cadeia pesada: ETALVVSTTYLPHYFDN (SEQ ID NO: 3).
2. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, compreende um isótopo IgG1 humano e compreende uma região Fc tendo Y na posição 252Y, T na posição 254T, e E na posição 256, em que a numeração corresponde ao índice EU em Kabat.
3. Fragmento de ligação ao antígeno, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é um anticorpo de cadeia simples, um fragmento variável de cadeia simples (scFv), um fragmento Fab, ou um fragmento F(ab')2.
4. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de ser para uso em um método de prevenção ou tratamento de infecção por RSV.
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