BR112015026193A2 - composição farmacêutica, método para formular uma composição farmacêutica, método para tratar um ferimento em um indivíduo, método para inibir a formação de biofilme em uma superfície, artigo fabricado para curativo, e, método para aumentar a eficácia antibacteriana de gentamicina - Google Patents

Abstract

1 / 1 resumo “composiã‡ãƒo farmacãšutica, mã‰todo para formular uma composiã‡ãƒo farmacãšutica, mã‰todo para tratar um ferimento em um indivãduo, mã‰todo para inibir a formaã‡ãƒo de biofilme em uma superfãcie, artigo fabricado para curativo, e, mã‰todo para aumentar a eficãcia antibacteriana de gentamicina” composiã§ãµes farmacãªuticas que compreendem um antibiã³tico aminoglicosã­dico e pelo menos um agente quelante de zinco em uma concentraã§ã£o especificada e mã©todos de inibir a colonizaã§ã£o bacteriana, formaã§ã£o de biofilme e tratamento de infecã§ãµes bacterianas que utilizam as composiã§ãµes sã£o fornecidas. as formulaã§ãµes tã³picas adequadas para cuidado com o ferimento e formulaã§ãµes aplicã¡veis na superfã­cie adequadas para necessidades de desinfecã§ã£o mã©dica, industrial e domã©stica tambã©m sã£o descritas.

Description

“COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, MÉTODO PARA FORMULAR UMA COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, USO DA COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, MÉTODO PARA INIBIR A FORMAÇÃO DE BIOFILME EM UMA SUPERFÍCIE, ARTIGO FABRICADO PARA CURATIVO, E, MÉTODO PARA AUMENTAR A EFICÁCIA ANTIBACTERIANA DE GENTAMICINA” REIVINDICAÇÃO DE PRIORIDADE

[001] Este pedido reivindica a prioridade sob 35 U.S.C. $119 do Pedido Condicional U.S. Ser. Nº 61/812,701 depositado em 16 de abril de 2013, cujo pedido é incorporado por referência em sua totalidade.

CAMPO TÉCNICO

[002] O assunto da descrição se refere a composições farmacêuticas eficazes contra colônias bacterianas resistentes, em particular, contra Staphylococcus e na inibição da formação de biofilmes que compreendem células bacterianas de Staphylococcus. A descrição ainda se refere a formulações de composição tópica, métodos para tratar e inibir infecções por Staphylococcus que utilizam as composições e a artigos de fabricação incluindo curativos, bandagens e, especialmente, roupas tendo as composições bacterianas inventivas introduzidas no tecido.

FUNDAMENTOS

[003] A incidência de infecções de ferimento, especialmente associadas com Staphylococcus aureus e Staphylococcus epidermidis, é uma preocupação principal para prestadores de cuidados com a saúde. S. aureus é um dos agentes patogênicos mais comuns encontrados em ferimentos crônicos e S. epidermidis é o agente patogênico mais comum associado com as infecções relacionadas com dispositivo. Além disso, S. pseudintermedius é um agente patogênico comum associado com infecções veterinárias recorrentes. S. aureus, S. epidermidis, e S. pseudintermedius são conhecidos por formar facilmente, que são comunidades bacterianas aderentes na superfície que tornam as bactérias resistentes à antibióticos comuns ou a respostas imunes de hospedeiro e aumentam grandemente os custos de tratamento de cuidado com a saúde.

[004] Um fator principal na patogênese de ferimentos crônicos é a infecção bacteriana. Os ferimentos colonizadores de bactérias podem evocar uma resposta inflamatória persistente que é nociva ao processo de cura. Células semelhantes a neutrófilos e macrófagos superregulam citocinas pró- inflamatórias como IL-1 e TNF-a, que, por sua vez levam a níveis elevados de metaloproteinases de matriz (MMPs), expressão de fator de crescimento diminuído e última aberração do processo de cura. Uma das espécies mais comuns cultivadas a partir de ferimentos crônicos é Staphylococcus aureus, que junto com certas outras espécies bacterianas, têm a capacidade de revestir por si só em uma matriz de polissacarídeo extracelular (EPS) denominada um glycocalyx. Uma vez que a população adota este fenótipo séssil, este é substancialmente mais resistente aos mecanismos de defesa bem como antimicrobianos exógenos. A superação das características protetoras destes “biofilmes” tem se mostrado muito difícil e novos métodos eficazes de prevenção e tratamento são, portanto, muito desejáveis.

[005] Trabalho prévio pelos presentes investigadores indicou que é requerido para a formação inicial de biofilmes estafilocócicas (ver, por exemplo, Conrady D et al. “A zinc-dependent adhesion module is responsible for intercellular adhesion in staphylococcal biofilms” PNAS 2008, 105(49):1945661 e Pedido U.S. Série Nº 12/994921, cujas descrições totais são incorporadas aqui por esta referência.). Foi mostrado que o ácido dietilenotriamino pentaacético (DTPA), um quelante de zinco exemplar, pode inibir a formação de biofilme por S. aureus e S. epidermidis. Uma caracterização biofísica de uma região de repetição contendo o domínio G5 a partir de Aap foi descrita, revelando que este é um módulo de adesão dependente de zinco (Znº**) (“módulo de adesão de zinco”) responsável pela interação celular em biofilmes estafilocócicos. Este módulo de adesão de zinco foi identificado em uma variedade de bactérias, incluindo bactérias gram positivas em geral e fornece um alvo específico para a quelação de zinco e inibição de biofilme em biofilmes compreendidos de bactérias tendo um domínio G5. A quelação de zinco foi mostrada inibir a formação tanto de S. epidermidis quanto de biofilmes de S. aureus resistentes a meticilina e a suplementação com zinco adicional na faixa fisiológica foi mostrada reverter o efeito. A observação do efeito reversível fornece um meio para identificar as bactérias que possuem um módulo de adesão de zinco, que pode formar um contato intermolecular adesivo referido como um “zíper de zinco” e sublinha a criticidade do zinco em adesão intercelular fornecendo um alvo específico para a quelação e inibição de biofilme. Além disso, foi observado que a adição de um fragmento de Aap solúvel contendo um módulo de adesão de zinco intacto simples inibe a formação de biofilme de uma maneira dependente de dose, indicado que a região de repetição de B contendo o domínio G5 é, de fato, um elemento requerido para a adesão intercelular em biofilmes estafilocócicos.

[006] As composições que compreendem tanto um antibiótico, quanto um quelante de metal iônico, são conhecidas na técnica. O Pedido U.S. Nº 13/095262 concedido a Raad et al., junto com um portfólio de técnica relacionada fora do mesmo laboratório, descreve composições que compreendem antibióticos particulares com EDTA, um quelante de ferro/cálcio bem conhecido. Raad restringe exemplos e modalidades de trabalho às composições que compreendem EDTA e explica a necessidade de álcool nas composições; explicando expressamente que as combinações de antibiótico e EDTA sem álcool requerem tempos de exposição inaceitavelmente longos para a eficácia desejada. Raad falha em descrever expressamente as composições que compreendem quelantes de zinco e falha em estimar as bases mecânicas para as sinergias que podem ser atingidas especificamente em combinação com quelantes de zinco.

[007] O uso de quelantes de zinco em combinação com composições antibióticas também é conhecido. O pedido de Patente U.S. Série Nº 12/391357 concedido a Zhang et al. descreve composições de antibióticos de aminoglicosídeo e quelantes iônicos, em geral; entretanto Zhang explica a adição do quelante iônico em quantidades extremamente pequenas, refletindo o papel mecânico considerado do quelante de acordo com Zhang. Em particular Zhang explica que uma combinação de antibióticos de B-lactam com antibióticos aminoglicosídicos fornece uma sinergia antibacteriana, mas que se dissolvido na mesma solução, um sal precipita-se devido a uma reação ácido-base ou o grupo amino do antibiótico de aminoglicosídeo reage com o grupo de B-lactam dos antibióticos de B-lactam, reduz drasticamente a eficácia destes tipos de antibióticos e apresentam perigos potenciais aos indivíduos se os antibióticos forem administrados como soluções IV. A adição de um quelante de acordo com Zhang evita a formação destas partículas de agregado residuais. Zhang não estima ou descreve qualquer sinergia com respeito à eficácia de antibiótico de um antibiótico na adição de um quelante ou com respeito à eficácia do antibiótico de um quelante na adição de um antibiótico e não descreve composições de antibióticos que compreendem quantidades de quelantes suficientes para fornecer esta sinergia inesperada.

[008] Em consequência, permanece uma necessidade na técnica quanto a composições antimicrobianas eficazes contra biofilmes em ambientes hospitalares e industriais e para composições formuladas para fornecer eficácia de antibiótico intensificada no tratamento de ferimento.

SUMÁRIO

[009] Consequentemente, a presente descrição fornece composições de um antibiótico e um quelante de zinco que apresenta eficácia inesperada contra biofilmes e formação de biofilme e eficácia antibiótica intensificada no cuidado com ferimento. Em composições particulares de antimicrobianos e

DTPA apresenta-se eficácia antibiótica sinergética surpreendente na inibição da formação de biofilme e na dispersão de biofilmes que compreendem células bacterianas gram positivas e, em particular, células de Staphylococcus, por exemplo S. aureus e S. epidermidis. Pela introdução de DTPA no ambiente de S. aureus, S. Epidermidis e S. pseudintermedius, o quelante liga o zinco, sequestrando-o das bactérias e, desse modo, inibindo a formação de biofilme. S. aureus, S. Epidermidis ou S. pseudintermedius preservado no estado planctônico, então sendo mais facilmente alvejados e erradicados por antimicrobianos tópicos tradicionais. Em estudos que usam um modelo de ferimento —porcino, os presentes investigadores observaram que as composições que compreendem tanto DTPA quanto gentamicina formulada para o contato tópico sustentado com um ferimento apresentou eficácia inesperada contra a colonização bacteriana, com eficácia inesperada ocorrendo em concentrações muito específicas de DTPA.

[0010] Uma modalidade da descrição é direcionada a composições farmacêuticas que compreendem pelo menos um antibiótico aminoglicosídico e pelo menos um agente quelante de íon metálico, em que uma concentração de agente quelante de íon metálico é de pelo menos cerca de 1 mg/ml. Em modalidades específicas, o quelante é um quelante de zinco e, em formas de realização específicas, o quelante é DTPA em concentrações de pelo menos cerca de 15 mg/ml. Um antibiótico aminoglicosídico específico compreende gentamicina ou canamicina e em modalidades muito específicas os antibióticos compreendem gentamicina.

[0011] Outras modalidades fornecem composições especialmente formuladas para a aplicação tópica à pele. Tais composições compreende de cerca de 0,05 a cerca de 1% de gentamicina em peso, 2,5 a 15 mg/ml de DTPA e uma base de emulsão óleo em base projetada para manter um ferimento úmido para a cura intensificada. Os métodos para formular composições eficazes para a aplicação tópica também são fornecidos.

Métodos para tratar ferimentos que utilizam as composições farmacêuticas também são descritos, incluindo modalidades específicas direcionadas à aplicação de formulações tópicas aos ferimentos.

[0012] Uma outra modalidade refere-se a métodos de inibir a formação de biofilme em superfícies duras, por exemplo, em dispositivos médicos, superfícies de quarto hospitalar, grades de leito, pisos e outros. As modalidades para o consumidor doméstico formuladas como formulações de pulverização ou lenço também são consideradas para o uso do consumidor geral, por exemplo, para a aplicação a brinquedos, superfícies de berçário, superfícies de banheiro e outras superfícies domésticas comumente contaminadas. As aplicações industriais, por exemplo, tubulação de drenagem, esgoto e tratamento de água, vasos de contenção ou transporte também podem ser tratados de acordo com certas modalidades, em particular, para inibir a formação de biofilmes que compreendem um ou mais células de S. aureus, S. Epidermidis e S. pseudintermedius.

[0013] De acordo com modalidades adicionais, têxteis ou outros materiais tecidos podem ser submetidos à infusão ou impregnação com as composições inventivas para fornecer a aplicação imediata a um ferimento sob condições de tratamento comuns ou extremas. Em uma modalidade particular, roupas especialmente projetadas para pessoal militar ou de reforço podem ser fabricadas a partir de tecido tendo pelo menos uma porção impregnada com as modalidades das composições inventivas pela aplicação in situ a ferimentos sustentados no campo. Outras modalidades incluem curativos e bandagens com combinações ativas de acordo com a descrição.

[0014] Uma modalidade adicional é direcionada a métodos para aumentar a eficácia antibacteriana de gentamicina, em geral, onde a gentamicina estabeleceu eficácia ou onde a gentamicina tem resistência conhecida. No caso de biofilmes de Staphylococcus com resistência conhecida a gentamicina, as composições de acordo com as modalidades da invenção fornecem eficácia antibacteriana intensificada surpreendente.

[0015] Estas e outras características e aspectos da descrição ainda serão elaborados e esclarecidos por referência às Figuras e Descrição Detalhada como apresentado aqui.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0016] Fig. 1: Representação pictórica do projeto experimental do modelo de ferimento porcino; 44 ferimentos de espessura parcial profundos foram feitos nas áreas peravertebrais e torácicas de cada um dos dois suínos e quatro ferimentos foram aleatoriamente determinados a cada um dos 11 grupos de tratamento.

[0017] Fig. 2: Gráfico de barra que mostra contagens bacterianas de Staphylococcus aureus planctônicas e de biofilme (em unidades de formação de colônia log por milímetro) como uma função da concentração de DTPA apenas, em comparação com três tratamentos controle: veículo, 0,1% de Gentamicina e não tratado.

[0018] Fig. 3: Gráfico de barra que mostra contagens bacterianas de Staphylococcus aureus planctônicas e de biofilme (em unidades de formação de colônia log por milímetro) como uma função da concentração de DTPA apenas em constante de 0,1% de Gentamicina.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[0019] A presente invenção fornece composições eficazes para inibir a colonização bacteriana e a formação de biofilmes e tendo eficácia antibiótica intensificada. As formulações adequadas para superfície dura e aplicações de tratamento tópico na pele e formulações adequadas para aplicações de cuidado pessoal, bem como artigos impregnados ou revestidos com as composições inventivas e métodos que utilizam as composições e artigos também são descritos. As modalidades da invenção são suportadas pela descoberta surpreendente que a adição de certas concentrações específicas de agentes quelantes de zinco a uma composição antimicrobiana fornece um efeito sinergético com respeito à inibição da colonização bacteriana e formação de biofilme e redução da carga bacteriana. As seguintes definições aplicam-se para construir o escopo dos termos apresentados aqui. Se uma definição não for expressamente fornecida, o escopo de um termo será construído de acordo com seu significado comum na técnica relevante.

[0020] O termo “biofilme” refere-se a acréscimos microbianos fechados na matriz a superfícies biológicas ou não biológicas. A formação de biofilme representa um modo protegido de crescimento que permite que as células sobrevivam em ambientes hostis.

[0021] O termo “formação de biofilme” é pretendido incluir a formação, desenvolvimento e modificação das colônias bacterianas contidas com as estruturas de biofilme, bem como a síntese e manutenção de uma matriz de polissacarídeo das estruturas de biofilme. Também dentro do escopo deste termo está a formação de biofilmes com base em proteína que não secretam polissacarídeo na matriz, mas que compreende proteínas semelhantes a Aap que permitem que as bactérias formem uma arquitetura de biofilme.

[0022] O termo “módulo de adesão de zinco” refere-se a uma dobra de polipeptídeo encontrada em proteínas de superfície celular bacteriana que incluem, mas não se limitam à proteína associada com o Acúmulo (Aap) do Staphylococcus epidermidis. O módulo de adesão de zinco compreende uma sequência de polipeptídeo que inclui pelo menos um domínio G5 e, opcionalmente, sequência de aminoácido adicional.

[0023] Os termos “quelante” ou “quelante de íon metálico” referem- se a qualquer substância que seja capaz de remover um íon metálico de um sistema de solução pela formação de um novo íon complexo tendo propriedades mecânicas diferentes do que aquelas do íon metálico original. O termo ainda é pretendido abranger substâncias que são capazes de quelar os íons metálicos, especificamente metais bivalentes.

[0024] O termo “íons metálicos” é pretendido incluir qualquer fon metálico que esteja disponível, isto é, qualquer íon metálico envolvido em uma reação ou caminho bioquímicos ou qualquer íon metálico que esteja disponível no fluido, tecido ou osso de um indivíduo.

[0025] O termo “quelante de zinco” refere-se a qualquer substância que é capaz de quelar um íon de zinco (Zn?”) e, desta maneira esgota o zinco dos ambientes aquosos.

[0026] O termo “bactérias gram positivas” refere-se a bactérias tendo paredes celulares com quantidades altas de peptidoglicano. As bactérias gram positivas são identificadas por sua tendência em reter mancha violeta cristalina e azul escura ou violeta no protocolo de tingimento Gram.

[0027] O termo “bactérias gram negativas” refere-se a bactérias tendo camadas de peptidoglicano mais finas que não retêm a mancha violeta cristal no protocolo de tingimento Gram e em vez disso retém a contraestaina, tipicamente safranina. Bactérias gram negativas mancha vermelha ou cor-de- rosa no protocolo de tingimento Gram.

[0028] O termo “mamífero” refere-se aos organismos dentro daquela classe taxonômica que pode sofrer de estados associados com o biofilme. O termo inclui seres humanos, por exemplo, bem como animais selvagens e domesticados e animais de criação, que incluem, mas não se limitam a cavalos, chimpanzés, macacos, porcos, ovelhas, cabras, hamsters, porquinhos da índia, símios, ursos, cães, gatos, camundongos coelhos, gado, esquilos e ratos. O termo “composição farmacêutica” inclui preparações adequadamente seguras para a administração a mamíferos, por exemplo, seres humanos.

[0029] O termo “formulação tópica” refere-se a composições farmacêuticas adequadas para a administração dérmica a um mamífero. As composições farmacêuticas tópicas adequadas incluem, mas não são limitados a géis, cremes, loções, unguentos, tinturas, pulverizações e sólidos. Em uma modalidade, uma composição farmacêutica tópica da presente invenção é aplicada na superfície externa da pele ou na vizinhança de cortes, abrasões, danos por queimadura em gramado, lacerações, queimaduras ou ferimentos por perfurações a fim de tratar, prevenir ou inibir a formação de biofilmes bacterianas.

[0030] O termo “agente antimicrobiano” refere-se a qualquer substância que mata ou evita o desenvolvimento das bactérias ou outros micróbios.

[0031] O termo “antibiótico” refere-se a uma substância que é antagonista ao desenvolvimento de microorganismos. Os antibióticos adequados podem ser de ocorrência natural, quimicamente modificados ou sinteticamente produzidos.

[0032] O termo “enxágue cirúrgico” refere-se a uma solução usada durante a cirurgia para irrigar o local de um dispositivo médico implantado, com a intenção de evitar a formação inicial de biofilmes na vizinhança do dispositivo médico.

[0033] O termo “enxágue dental” refere-se a uma solução contendo um ou mais quelantes de zinco usados como uma lavagem ou enxágue bucal para evitar o estabelecimento de biofilmes orais que levam a cáries dentais.

[0034] O termo “composição de limpeza pessoal” refere-se a uma composição que é usada para higiene pessoal. As composições de limpeza pessoal incluem, mas não são limitadas a géis, cremes, suspensões, coloides, sabões, lavagens corporais, xampus e outros. Em uma modalidade, as composições de limpeza pessoal da presente invenção inibem as infecções relacionadas com biofilme incluindo, mas não limitado a infecção por S. aureus resistente a meticilina adquirida na comunidade (CA-MRSA).

[0035] O termo “superfície dura” refere-se a superfícies duras que incluem, mas não se limitam a, instrumentos cirúrgicos e dispositivos médicos, tanques de armazenamento, tubulações, bandejas, contentores, paredes, pisos, bancadas, pisos de vestiários, bancos, armários, chuveiros,

banheiros, toaletes, unidades de filtração de água, superfícies domésticas, itens de berçário, por exemplo, componentes de bomba mamária e superfícies de berço, brinquedos e outros itens domésticos e outros.

[0036] Os termos “inibe”, “inibição” e “inibido” como usado aqui com respeito à formação de biofilme, refere-se ao efeito de um quelante de zinco no rompimento, dispersão ou limpeza de um biofilme, bem como evitando a formação de um biofilme.

[0037] O termo “quantidade eficaz”, como usado aqui com respeito à inibição da formação de biofilme, refere-se a uma quantidade de um quelante de zinco em combinação com um antibiótico suficiente para atingir o resultado inibidor desejado.

[0038] O termo “quantidade segura e eficaz” refere-se a uma quantidade de um quelante de zinco em combinação com um antibiótico que é eficaz para inibir a formação de biofilme sem efeitos colaterais adversos, tais como toxicidade, irritação ou resposta alérgica, proporcionado com uma razão risco/benefício razoável quando usado da maneira da invenção.

[0039] O termo “quantidade terapeuticamente eficaz” refere-se a uma quantidade suficiente de um ingrediente para tratar os distúrbios, em uma razão risco/benefício razoável aplicável a qualquer tratamento médico. Será entendido, entretanto, que o uso diário total das composições da presente invenção será decidido pelo médico atendente dentro do escopo do julgamento médico perfeito. O nível de dose terapeuticamente eficaz específico para qualquer indivíduo particular dependerá de uma variedade de fatores que incluem o distúrbio sendo tratado e a gravidade do distúrbio; atividade do quelante específico utilizado; a composição específica utilizada; a idade, o peso corporal, saúde geral, sexo e dieta do indivíduo; o tempo de administração, via de administração e taxa de excreção do composto específico utilizado; a duração do tratamento; medicamentos usados em combinação ou coincidente com o composto específico utilizado e outros fatores, bem conhecido nas técnicas médicas. Por exemplo, está bem dentro da habilidade da técnica iniciar com doses de composto em níveis menores do que os requeridos para atingir o efeito terapêutico desejado e aumentar gradualmente a dosagem até o efeito desejado ser atingido.

[0040] O acrônimo CFU significa unidade formadora de colônia, que é uma estimativa de números bacterianos ou fúngicos viáveis. Em contraste, uma contagem microscópica inclui todas as células, mortas e vivas. CFU é uma estimativa de célula viável. A aparência de uma colônia visível requer desenvolvimento significante de células iniciais colocadas e, em geral, isto não é possível no período de contagem das colônias para determinar se a colônia atingiu de uma célula a 1.000 células. Portanto, os resultados são dados como CFU/mL (unidades formadoras de colônia por mililitro) para líquidos e CFU/g (unidades formadoras de colônia por grama) para os sólidos refletirem esta incerteza (em vez de célula/mL ou células/g como em uma contagem direta).

[0041] As modalidades da invenção fornecem novas composições farmacêuticas tendo eficácia intensificada na inibição da formação de biofilme e eficácia antibacteriana intensificada em excesso que pode ser predito com base na eficácia inibidora e antibacteriana dos componentes individualmente. As composições compreendem pelo menos um antibiótico aminoglicosídico e pelo menos um agente quelante de íon de zinco, em que uma concentração de agente quelante de íon de zinco é de pelo menos cerca de 1 mg/ml. Em algumas modalidades, o álcool é expressamente excluído como um componente da composição.

[0042] De acordo com as modalidades específicas, o antibiótico aminoglicosídico é etimicina, gentamicina, tobramicina, amicacina, netilmicina, dibecacina, canamicina, arbecacina, sagamicina, isopamicina, sisomiícina, —neomicina, paromoicina, estreptomicina, spectinomicina, micronomicina, astromicina, ribostamicina, sais ou hidratos farmaceuticamente aceitáveis de qualquer um dos precedentes ou combinações destes. Em modalidades muito específicas, o antibiótico aminoglicosídico é gentamicina ou canamicina e em modalidades mais específicas, o antibiótico aminoglicosídico é gentamicina. Em certas modalidades, a concentração de antibiótico, incluindo gentamicina, varia de cerca de 0,01% a cerca de 5%, de cerca de 0,01% a cerca de 1%, de cerca de 0,01% a cerca de 0,5%, de cerca de 0,05% a cerca de 0,5%, de cerca de 0,05% a cerca de 0,1%, de cerca de 0,06% a cerca de 0,1%, de cerca de 0,07% a cerca de 0,1%, de cerca de 0,08% a cerca de 0,1%, de cerca de 0,09% a cerca de 0,1% e semelhante. Em uma modalidade muito específica, a concentração de gentamicina é de cerca de 0,1% em peso.

[0043] O agente de quelação de zinco pode ser um ou mais do ácido dietilenotriamino pentaacético (DTPA), N,N,N' -tetraquis(2-piridinilmetil)- 1,2-etanodiamina (TPEN), 1,10-fenantrolina, ácido tetraacético de etileno glicol (EGTA), dietilditiocarbamato (DEDTC), ácido etilenodiamino-N,N'*- diacético (EDDA) e sais ou seus hidratos. Nas modalidades específicas o agente quelante de íon de zinco é DTPA ou qualquer quelante de íon que quela o zinco a uma extensão substancialmente similar em um ambiente aquoso como DTPA. O quelante de zinco pode ser adicionado às composições em uma forma de sal ou hidrato e nas modalidades específicas podem ser adicionadas como Na;sDTPA ou Na;CaDTPA, enquanto nas modalidades muito específicas DTPA podem ser adicionadas como Na;CaDTPA. Em algumas modalidades DTPA podem estar presentes na composição na forma ácida e naquelas modalidades pode ser desejável para adicionar um agente solubilizador tal como ácido clorídrico (HCI). Outros agentes de solubilização são bem conhecidos na técnica.

[0044] Descobriu-se surpreendentemente que uma quantidade de quelante de zinco presente na composição influencia a eficácia antibacteriana resultante de uma maneira imprevisível. Como ilustrado na Figura 3, nas concentrações muito baixas do agente de quelação de zinco, a eficácia antibacteriana de gentamicina é de fato reduzida. No aumento das concentrações, entretanto, a eficácia antibacteriana é intensificada na gentamicina sozinha e ainda nas concentrações mais altas é intensificada em excesso de um efeito aditivo que demonstra a sinergia positiva verdadeira nas concentrações particulares. Nas modalidades específicas a concentração de agente de quelação de zinco estão entre cerca de 5 mg/ml e 15 mg/ml. Nas formulações de 1% em peso de gentamicina, a eficácia aparece maximizada (nenhuma carga bacteriana medida) a cerca de 15 mg/ml DTPA; entretanto a concentração de DTPA pode ser ajustada mais altas sob as outras condições, nas outras concentrações de antibiótico e em combinação com outros antibióticos. Em certas modalidades a concentração de quelante de zinco pode ser tão maior quanto 50 mg/ml.

[0045] Nas modalidades específicas, a concentração das faixas quelantes de cerca de 0,5 mg/ml a cerca de 50 mg/ml, ou de 1 mg/ml a cerca de 45 mg/ml, ou de cerca de 1,5 mg/ml a cerca de 30 mg/ml. Em uma modalidade mais específica, a concentração das faixas quelantes de cerca de 2,5 mg/ml a cerca de 15 mg/ml, de cerca de 5 mg/ml a cerca de 15 mg/ml, de cerca de 7,5 mg/ml a cerca de 15 mg/ml, de cerca de 10 mg/ml a cerca de 15 mg/ml, de cerca de 12,5 mg/ml a cerca de 15 mg/ml e outros. Em uma modalidade mais específica, o quelante é DTPA e a concentração da composição é cerca de 30 mM, equivalente a cerca de 15 mg/ml.

[0046] O desenvolvimento bacteriano e colonização são inibidos pelas composições de acordo com a invenção. As bactérias são selecionadas do grupo que consistem de Acidothermus cellulyticusó, Actinomyces odontolyticus, —Alkaliphilus —metalliredigens, —Alkaliphilus —oremlandii, Arthrobacter aurescens, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus clausii, Bacillus halodurans, Bacillus licheniformis, Bacillus pumilus, Bacillus subtilis, Bifidobacterium adolescentis, Bifidiobacterium longum, Caldicellulosiruptor saccharolyticus, — Carboxydothermus — hydrogenoformans, — Clostridium acetobutylicum, Clostridium beijerinckii, Clostridium botulinum, Clostridium cellulolyticum, Clostridium difficile, Clostridium kKluyveri, Clostridium leptum, Clostridium novyi, Clostridium perfringens, Clostridium tetani, Clostridium thermocellum, Corynebacterium diphtheriae, Corynebacterium efficiens, — Corynebacterium — glutamicum, Corynebacterium jeikeium, Corynebacterium urealyticum, Desulfitobacterium hafniense, Desulfotomaculum reducens, Eubacterium ventriosum, Exiguobacterium sibiricum, Finegoldia magna, Geobacillus kaustophilus, Geobacillus thermodenitrificans, Janibacter sp., Kineococcus radiotolerans, Lactobacillus Jermentum, Listeria monocytogenes, Listeria innocua, Listeria welshimeri, Moorella thermoacetica, Mycobacterium avium, Mycobacterium bovis, Mycobacterium — gilvum, — Mycobacterium leprae.

Mycobacterium paratuberculosis, Mycobacterium smegmatis, Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium ulcerans, Mycobacterium vanbaalenii, Nocardioides sp., Nocardia Jarcinica, Oceanobacillus iheyensis, Pelotomaculum thermopropionicum, “Rhodococcus sp.

Saccharopolyspora erythraea, coagulase-negative Staphylococcus — species, Staphylococcus — aureus, resistente à meticilina Staphylococcus aureus (MRSA), Staphylococcus epidermidis, resistente à meticilina Staphylococcus epidermidis, (MRSE), Staphylococcus pseudintermedius, Staphylococcus intermedius, Staphylococcus delphini, Streptococcus agalactiae, Streptococcus gordonii, Streptococcus mitis, Streptococcus oralis, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sanguinis, Streptococcus suis, Streptomyces avermililis, Streptomyces coelicolor, Thermoanaerobacter ethanolicus, Thermoanaerobacter tengcongensis e combinações destes.

De acordo com as modalidades mais específicas, as bactérias são selecionadas do grupo que consiste de Corynebacterium urealyticum, Finegoldia magna, Staphylococcus aureus, Staphylococcus aureus resistente à meticiliha (MRSA),

Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus epidermidis resistente à meticilina (MRSE), Streptococcus gordonii, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sanguinis, Streptococcus suis e combinações destes e ainda nas modalidades mais específicas as bactérias são selecionadas do grupo que consiste de Staphylococcus aureus, Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA), Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus epidermidis resistente à meticilina (MRSE) e combinações destes.

[0047] De acordo com algumas modalidades da invenção, a composição pode ser fornecida como uma composição aderente (uma composição que compreende componentes pretendidos para aumentar o tempo de contato dos ativos com uma superfície alvo), uma composição de enxague, um banho ou formulada como um revestimento. Nas modalidades específicas a composição é formulada pela inibição da formação de biofilme em uma superfície. Os exemplos não limitantes das superfícies duras incluem os instrumentos cirúrgicos e dispositivos médicos, tanques de armazenagem, tubulação, bandejas, contentores, paredes, pisos, contrapisos, pisos de vestiário, assentos, armários, chuveiros, banheiros, toaletes, unidades de filtração de água, superfícies domésticas, itens de berçário, por exemplo, componentes de bombas mamárias e superfícies de berço, brinquedos e outros itens domésticos. Outras superfícies incluem superfícies têxteis, incluindo sem limitação de roupa, sapatilhas/sapatos, lenços, desgaste utilitário para pessoal médico e outros expostos aos riscos elevados da contaminação bacteriana, fraldas e outros. Uma superfície também pode ser uma superfície corporal, tal como pele ou outras estruturas corporais contendo queratina tal como unhas, cabelo, pele e cascos. Nas modalidades específicas a superfície é contatada com uma composição que compreende pelo menos um antibiótico aminoglicosídico e pelo menos um agente quelante de íon de zinco, em que uma concentração de agente quelante de íon de zinco é de pelo menos cerca de 1 mg/ml e em outras modalidades específicas está entre de cerca de 1 mg/ml a cerca de 15 mg/ml. Estes métodos são particularmente efetivos contra as biofilmes que compreendem um ou mais das células bacterianas S. aureus, S. epidermidis e S. pseudintermedius. Nas modalidades muito específicas, o biofilme compreende as células S. aureus.

[0048] O contato pode ser atingido pela pulverização, deposição ou limpeza em alguns aspectos um lenço pronto para o uso impregnado com as composições de acordo com a invenção é fornecido. Em outros aspectos, as garrafas de pulverização que compreendem as composições de pulverização no local são consideradas. Ainda, os sistemas de dispensa e retenção/dispensador são bem conhecidos na técnica.

[0049] Em um aspecto da modalidade, um instrumento cirúrgico ou dispositivo médico é banhado ou revestido em uma composição que compreende um antibiótico e uma quantidade efetiva de pelo menos um quelante de zinco. Por exemplo, o dispositivo pode ser mergulhado na composição e opcionalmente deixado secar. Em outro aspecto da modalidade, um dispositivo pode ser pulverizado com uma composição que compreende um antibiótico e uma quantidade efetiva de pelo menos um quelante de zinco e opcionalmente deixado secar. Em um ambiente cirúrgico, o presente método deve ser usado, por exemplo, para banhar um dispositivo médico antes ou após implantação antes do fechamento. Alternativamente, um dispositivo médico deve ser revestido com uma composição que compreende um antibiótico e uma quantidade efetiva de pelo menos um quelante de zinco antes da implantação.

[0050] Os exemplos não limitantes dos dispositivos médicos implantáveis incluem marca-passos, válvulas cardíacas, juntas de substituição, cateteres, portas de acesso do cateter, tubo de diálise, bandas gástricas, desvios, placas com parafuso, substituições do disco espinhal artificial, desfibriladores — implantáveis — internos, dispositivos de terapia de ressincronização cardíaca, monitores cardíacos implantáveis, dispositivos de reparo do anel da válvula mitral, dispositivos de assistência ventricular esquerda (LVADSs), corações artificiais, bombas de infusão implantáveis, bombas de insulina implantáveis, stents, neuroestimuladores implantáveis, pinos/hastes/grampos cirúrgicos, dispositivos de substituição de junta rabo de andorinha, implantes maxilofacial e implantes dentais.

[0051] A composição que compreende um antibiótico e pelo menos um quelante de zinco pode ser em qualquer forma que permite a aplicação da solução ao dispositivo particular. Em uma modalidade específica, a composição é formulada como um gel. Em outra modalidade específica, a composição é formulada como uma espuma e em outras modalidades específicas a composição pode ser formulada como um revestimento de polímero. Opcionalmente, a composição pode ser formulada tal que uma quantidade efetiva de antibiótico e quelante de zinco é liberada gradualmente, fornecendo para inibição da formação de biofilme em um período de tempo.

[0052] As composições de acordo com a invenção também podem ser fornecidas como um aspecto de formulações de cuidado pessoal, por exemplo, como xampus, esmalte para unha ou outros produtos de cuidado com as unhas, lavagem corporal, sabão, roupas cirúrgicas, enxágue/condicionadores, loções, unguentos, produtos de cuidado dentário tal como enxaguantes bucais ou pasta de dente, ou creme dental, bases de maquiagem ou contidas dentro dos produtos cosméticos associados com um risco conhecido da contaminação bacteriana tal como máscara/delineador e outros. A chave da eficácia para qualquer tal formulação é uma concentração do agente de quelação de zinco relativa ao antibiótico. Nas formulações muito específicas o agente de quelação de zinco é DTPA, o agente antimicrobiano é gentamicina e a concentração de DTPA é pelo menos 1 mg/ml e de cerca de 0,05 a cerca de 1% de gentamicina em peso.

[0053] De acordo com outras modalidades, a composição farmacêutica que compreende um antibiótico e uma quantidade efetiva de pelo menos um agente de quelação de zinco é formulada especificamente para a aplicação tópica a um indivíduo. Nas modalidades específicas a composição compreende pelo menos 1 mg/ml de DTPA. Nas modalidades mais específicas a composição compreende de cerca de 0,05 a cerca de 1% de gentamicina em peso, 2,5 a 15 mg/ml de DTPA e é formulada em uma base de emulsão óleo em água. As composições podem ser formuladas como unguentos, cremes ou loções. Os unguentos e cremes podem, por exemplo, ser formulados com uma base aquosa ou oleosa com a adição de agentes formados de gel e/ou espessantes adequados. Em certas modalidades, as composições tópicas podem compreender uma emulsão de óleo em água como a base. As loções podem ser formuladas com uma base de emulsão aquosa ou oleosa e também podem conter um ou mais agentes de emulsificação, agentes de estabilização, agentes de dispersão, agentes de suspensão, agentes espessantes ou agentes de coloração. Em uma modalidade mais específica, a composição é uma composição farmacêutica tópica que compreende cerca de 30 mM (-15 mg/ml) Na;CaDTPA, cerca de 0,1% de gentamicina e uma base de emulsão de óleo em água.

[0054] Uma formulação ilustrativa é apresentada no Exemplo 3, abaixo. Em um exemplo específico descrito geralmente, o método compreende o fornecimento de um vaso base da base de emulsão óleo em água adequado mantendo a cerca de 60ºC; preparando uma solução de alíquota em um primeiro vaso pela adição de uma quantidade de DTPA a uma quantidade de água estéril e misturando até uniformizar-se; transferindo um volume especificado da alíquota a um segundo vaso e adicionando o sulfato de gentamicina enquanto misturando até o sulfato de gentamicina ser substancialmente dissolvido totalmente; aquecimento da base no vaso de base a cerca de 90ºC enquanto agitação; filtrando e transferindo os conteúdos inteiros do segundo vaso ao vaso base; misturando até uniformizar-se; esfriamento de cerca de 55ºC; transferindo a um vaso de esterilização e esterilização.

[0055] As composições formuladas para aplicação tópica são particularmente úteis para o tratamento dos ferimentos e incisões cirúrgicas. O “tratamento” não é construído para incluir a inibição do desenvolvimento da bactéria, inibição da formação das colônias de bactéria e biofilmes, bem como eficácia antibacteriana. Deve ser notado que um agente de quelação de zinco sozinho não é considerado bactericida; entretanto este atua para evitar a colonização das células bacterianas e formação dos biofilmes. Em combinação com um antibiótico, por exemplo gentamicina, tanto a colonização bacteriana quanto a contagem bacteriana parecem ser reduzidas indicando a inibição intensificada da colonização/formação de biofilme bem como atividade bactericida intensificada da composição como um total. Nas modalidades específicas, as formulações tópicas são úteis para evitar a infecção nos ferimentos e incisões recentes.

[0056] Outras modalidades fornecem os artigos de fabricação, tais como curativos e bandagens que compreendem pelo menos uma porção impregnada ou revestida com uma composição farmacêutica que compreende pelo menos um antibiótico aminoglicosídico e pelo menos um agente quelante de íon de zinco, em que uma concentração de agente quelante de íon de zinco está entre de cerca de 1 mg/ml a cerca de 15 mg/ml. Em um aspecto o artigo é um item de roupa usada por um indivíduo engajado em atividade de risco de morte alto, tais como atividades de aplicação militar ou policial. No caso de um ferimento, a roupa impregnada com uma composição pode ser pressionada na abertura do ferimento para inibir ou evitar a infecção.

[0057] Em algumas modalidades entre cerca de 5 e 15 mg/ml do agente de quelação de zinco pode ser adicionado a uma composição de um antibiótico, por exemplo, gentamicina, para aumentar a atividade antibiótica da gentamicina. Nos exemplos específicos o agente de quelação de zinco compreende DTPA.

[0058] Os seguintes Exemplos são apresentados para ilustrar as modalidades específicas e aspectos da invenção e não devem ser construídos como limitantes ao escopo total da invenção como definido pelas reivindicações.

EXEMPLOS Exemplo 1

[0059] Este exemplo ilustra a eficácia antibacteriana inesperada das composições de acordo com a invenção. Em uma modalidade exemplar mais específica, os presentes investigadores descobrem a sinergia positiva inesperada nos efeitos de uma nova formulação de antibiótico-quelante de zinco e em particular formulações de gentamicina-DTPA nos ferimentos infectados com S. aureus. Resumidamente, quarenta e quatro ferimentos de espessura parcial profundos foram criados na área paravertebral em dois porcos. Quatro ferimentos cada foram aleatoriamente indicados a onze grupos de tratamento e inoculados com S. aureus ATCC 6538. Os ferimentos foram tratados com aproximadamente 200 mg de cada tratamento. No dia 2, os ferimentos foram indicados usando uma técnica de pulverizar e esfregar para recuperar a contagem bacteriana associada com o biofilme e planctônica, respectivamente. Todos os grupos de tratamento nas concentrações diferentes de DTPA sozinhos reduzem as contagens bacterianas (planctônica e biofilme) em comparação com os ferimentos de controle não tratados. A concentração mais alta de DTPA (30000 uM) sozinha mostrou a redução mais ampla tanto das contagens planctônicas quanto bacterianas de biofilme como comparadas a outras concentrações de DTPA. As concentrações de DTPA a 5000, 10000 e 30000 uM quando combinadas com gentamicina mostraram uma redução de 99,99% da contagem bacteriana planctônica S. aureus como comparado aos ferimentos não tratados. A concentração maior de DTPA (30000 uM) combinada com gentamicina também mostrou a porcentagem mais alta da redução (99,99%) nas contagens da bactéria de biofilme S. aureus comparadas aos ferimentos não tratados. Este exemplo demonstra que DTPA, nas concentrações de 2500 a 30000 uM, em combinação com Gentamicina mostrou uma redução tanto planctônica quanto biofilme associada a S. aureus em comparação com a Gentamicina sozinha, indicando um efeito sinergético forte deste composto com este antibiótico nas concentrações específicas de DTPA. Isto é particularmente surpreendente e não predito em vista dos dados que indicam uma sinergia negativa nas concentrações muito baixas de DTPA. A. Materiais e Métodos

[0060] Os suínos (2 animais) foram usados como o animal experimental devido as similaridades morfológicas, fisiológicas e bioquímicas entre a pele suína e a pele humana. Ferimento do animal: * 44 ferimentos de espessura parcial profundos medindo 10 mm x 7 mm x 0,5 mm foram feitos nas áreas peravertebrais e torácicas de cada animal * 4 ferimentos foram aleatoriamente indicados em cada um dos 11 grupos de tratamento Inoculação: * 25 ul do inóculo de 10º CFU/ml foram inoculados em cada ferimento e esfregados levemente usando-se uma espátula de Teflon estéril. Projeto Experimental: Porco 1: Grupos de tratamento A. 30 uM de DTPA B. 100 uM de DTPA C. 300 uM de DTPA D. 1000 uM de DTPA E. 30 uM de DTPA + Gentamicina 0,1% F. 100 uM de DTPA + Gentamicina 0,1% G. 300 uM D TPA + Gentamicina 0,1%

H. 1000 uM de DTPA + Gentamicina 0,1%

1. Veículo J. Gentamicina 0,1% K. Não tratado Porco 2: Grupos de tratamento A. 2500 uM de DTPA B .5000 uM de DTPA C. 10000 uM de DTPA D. 30000 uM de DTPA E. 2500 uM de DTPA + Gentamicina 0,1% F. 5000 uM de DTPA + Gentamicina 0,1% G. 10000 uM D TPA + Gentamicina 0,1% H. 30000 uM de DTPA + Gentamicina 0,1%

1. Veículo J. Gentamicina 0,1% K. Não tratado

[0061] A Figura 1 ilustra o projeto experimental e descreve um diagrama esquemático dos grupos de tratamento e ferimento do animal Aplicação do tratamento: * Dentro de 20 minutos de inoculação cada ferimento foi tratado com o tratamento apropriado. Cada ferimento foi tratado com = 200 mg do tratamento apropriado (dias O e 1).

* Todos os ferimentos foram revestidos com revestimentos de película de poliuretano Recuperação do ferimento: * Um cilindro de aço cirúrgico estéril (22 mm de diâmetro interno) foi colocado na área do ferimento e 1 ml de solução neutralizadora para todos os propósitos foi pipetado para dentro.

* O local foi levemente pulverizado por pipetação dentro e fora três vezes para remover as bactérias frouxamente fixadas (a), esta alíquota representa as bactérias planctônicas.

* O mesmo ferimento foi então cercado usando-se um outro cilindro estéril e 1 ml de solução neutralizadora para todos os propósitos foi novamente pipetado no cilindro e desta vez esfregado com espátula de Teflon estéril por 30 segundos 30 para remover as bactérias firmemente fixadas (b), esta alíquota foi aspirada e representa as bactérias de biofilme.

Quantificação Bacteriana: * Diluições seriais (c) foram feitas e quantificadas usando o sistema de distribuidores em espiral (d) (que deposita uma quantidade definida (50 ul de suspensão em uma superfície de uma placa de ágar de rotação).

* Staphylococcus aureus foi desenvolvido no Ágar de Sal de Manitol médio diferencial e seletivo (e) a 37+2'C por 24 horas.

B. Resultados * Os ferimentos tratados com DTPA apenas: * Os ferimentos tratados com 30000 uM de DTPA continham as contagens inferiores de S. aureus comparado a todas as outras concentrações de DTPA.

* O tratamento com esta concentração resultou em uma redução de 99,96% comparado ao grupo não tratado.

* O aumento na concentração de DTPA foi diretamente proporcional aos aumentos na porcentagem tanto da redução planctônica quanto bacteriana de biofilme.

* Todos os ferimentos, com a exceção daqueles tratados com uM de DTPA, contidos mais do que S. aureus em um fenótipo de biofilme do que em um estado planctônico.

* 0,1% do controle positivo de Gentamicina produzido substancialmente mais redução na carga microbiana do ferimento do que qualquer uma das concentrações de DTPA apenas.

[0062] A Figura 2 fornece um resumo do gráfico de barra para facilitar a comparação que mostra os ferimentos tratados com DTPA apenas no aumento das concentrações e o efeito tanto das contagens plactônicas quanto bacterianas de biofilme de S. aureus ATCC6538. Ferimentos tratados com combinação de DTPA/Gentamicina: * As contagens de S. aureus planctônicas inferiores foram vistas nos ferimentos tratados com 5000, 10000 e 30000 uM de DTPA + Gentamicina 0,1% comparados aos ferimentos não tratados, todas as três concentrações de carga microbiana reduzida por 99,99% aos níveis abaixo do limite de quantificação.

* 30000 uM de DTPA + Gentamicina 0,1% resultou na quantidade inferior de bactéria em um fenótipo de biofilme, reduzindo as contagens abaixo do limite de quantificação.

* As reduções da bactéria de biofilme e planctônica foram diretamente proporcionais às concentrações de DTPA usadas.

* Todos os ferimentos, coma exceção daqueles tratados com 1000 uM de DTPA + Gentamicina 0,1% ou 30000 uM de DTPA + Gentamicina 0,1%, continham mais S. aureus em um fenótipo de biofilme do que no estado planctônico. As exceções tiveram níveis igualmente menores (não detectados) tanto no estado de biofilme quanto planctônico.

* Os tratamentos de 2500 uM, 5000 uM, 10000 uM e 30000 uM de DTPA + Gentamicina 0,1% todos resultaram tanto nas contagens de biofilmes quanto planctônicas menores do que nos ferimentos tratados com Gentamicina 0,1% apenas.

* Notavelmente, parece que a adição das concentrações muito baixas de DTPA à Gentamicina atualmente resultam em uma diminuição na eficácia de antibiótico total da composição, isto é, predizendo uma sinergia negativa, que contraria inesperadamente uma sinergia positiva no aumento das concentrações de DTPA relativas à Gentamicina.

[0063] A Figura 3 apresenta um resumo do gráfico de barra dos ferimentos tratados com uma combinação de DTPA/Gentamicina no aumento concentrações de DTPA e o efeito nas contagens bacterianas de biofilmes e planctônicas de S. aureus ATCC6538

[0064] Como já é evidente a partir dos dados, a redução aumentada de S. aureus dentro dos ferimentos foi diretamente proporcional à concentração aumentada de DTPA (com e sem Gentamicina 0,1%). A concentração de 30000 uM (= 15 mg/ml) de DTPA usada sozinha produziu uma contagem bacteriana planctônica de 5,19+0,29 Log de CFU/ml e uma contagem de biofilme de 6,09+012 Log de CFU/ml, considerando 30000 uM de DTPA usada em conjunção com Gentamicina 0,1% resultada nos ferimentos contendo cargas bacterianas de biofilme e planctônica abaixo do nível de quantificação (1,30 Log de CFU/ml). Estas foram diferenças de Log de mais de 3,89+0,29 e 4,79-01,2 em unidades formadoras de colônia por mililitro, respectivamente. Os tratamentos de 2500 uM, 5000 uM, 10000 uM e 30000 uM de DTPA (equivalente a 1,25, 2,5, 5 e 15 mg/ml respectivamente) + Gentamicina 0,1% produziram reduções mais amplas nas contagens bacterianas de biofilmes e planctônicas de S. aureus do que a Gentamicina 0,1% apenas. Estes dados indicam que o quelante de zinco, DTPA, tem um efeito antimicrobiano que é sinergético quando usado em combinação com Gentamicina. Exemplo 2

[0065] Este exemplo ilustra uma formulação de pulverização exemplar das modalidades das composições inventivas. Os componentes essenciais compreendem de cerca de 15 mg/ml a cerca de 50 mg/ml (30 a 100 mM) DTPA, 0,1% de gentamicina, agente de tamponamento (para manter o PH) e opcionalmente um ou mais excipientes tais como modificadores de viscosidade e/ou conservantes. Os excipientes apropriados e concentrações adequadas devem estar facilmente evidentes a uma pessoa com habilidade comum nas técnicas de formulação da composição. A formulação básica pode ser ajustada para fornecer as composições de pulverização aquosas que varia as concentrações de DTPA. Os métodos para a preparação das composições acima podem ser classificados usando-se os métodos comumente usados conhecidos nas técnicas farmacêuticas. Exemplo 3

[0066] Este exemplo ilustra uma formulação de creme tópico exemplar. Formulação tópica:

1. Fornece um creme emoliente de óleo em água / veículo que carregará e dispersará os componentes farmacêuticos ativos de DTPA e Gentamicina, junto com os componentes farmacêuticos adicionais que podem ser incluídos nas modalidades alternativas;

2. Fornece um emulsificador que manterá os componentes farmacêuticos ativos uniformemente dispersados;

3. Fornece um creme emoliente que atua como carreador (agente de dispersão), umidificador e umectante (mantém a pele macia), evitando a perda de água e o bloqueio da umidade enquanto mantém a umidade da área específica ao local, deste fornecendo um ambiente úmido para cicatrização do ferimento natural intensificada;

4. Fornece um creme emoliente, tópico que no contato com um ferimento de mamífero ou incisão cirúrgica, dispersará uniformemente e rapidamente os ingredientes farmacêuticos ativos na aplicação específica ao local, enquanto estão sendo rapidamente absorvidos naquele local específico;

[0067] A seleção dos componentes GRAS (geralmente reconhecida como seguro) foi incorporada e farmaceuticamente compostas dentro dos parâmetros de ajuste, tal como adições de ingrediente oportunas, temperatura, esfriamento e assim por diante, tal incorporação estando bem dentro da habilidade de um médico comum.

[0068] Seleção de ingredientes GRAS e suas funções respectivas:

1. Estearato de glicerila /PEG-100: emulsificador

2. Álcool lanolínico: emulsificador, emoliente e intensificador de viscosidade

3. Álcool cetílico: emulsificador, emoliente, agente espessante e umidificador

4. Óleo mineral: emoliente

5. Solução de Sorbitol 70%: umectante e condicionador de pele

6. Água purificada: atua como um carreador e agente de dispersão

[0069] Os emulsificadores geralmente favorecem a suspensão de um líquido em outro, enquanto os emolientes atuam como umidificadores para manter a maciez da pele (ferimento), enquanto o aumento da capacidade da pele de manter a água e bloqueio na umidade, enquanto lubrifica a pele (ferimento). Fornecendo a capacidade de manter o ferimento úmido cria um ambiente de cicatrização ideal de ferimento.

[0070] Os seguintes ingredientes tabelados ilustram a modalidade mais específica de uma composição adequada como uma base cremosa para a formulação tópica presente. Tabela 1: Base cremosa Jess E TOO

[0071] Instruções de formulação:

1. Em um béquer de vidro adequadamente dimensionado, adaptado com uma barra agitadora magnética, adicionar a água e o sorbitol e misturar até uniformizar.

2. Transferir a solução da etapa 1 através de um filtro de 0,22 mícrons em um frasco de vidro apropriadamente dimensionado.

3. Em um béquer de vidro separado adicionar os seguintes ingredientes e iniciar o aquecimento a 70ºC, estearato de glicerol/álcool PEG- 100, álcool lanolínico, álcool cetílico e óleo mineral.

4. Pegar a solução da etapa 3, colocar em um frasco, tampar, vedar e esterilizar com calor seco durante a noite a 121ºC.

5. No conjunto asséptico, utilizar a tampa asséptica, colocar a solução da etapa 4 em um béquer adaptado com uma barra agitadora magnética e aquecer a aproximadamente 90ºC.

6. Aquecer a solução da etapa 2 a aproximadamente 90ºC e transferir na solução da etapa 5, iniciar a mistura.

7. Aquecer a mistura, na etapa 6, a 90ºC, descontinuar o aquecimento e deixar esfriar até 60ºC.

8. Manter a solução a 60ºC até quando necessitar.

Tabela 2: Agente quelante — 10 mg/ml de solução [Teens O e Instruções de formulação:

1. Em um béquer de vidro adequadamente dimensionado adaptado com uma barra agitadora magnética adicionar Na;CaDTPA.

2. QS cm água estéril para injeção, iniciar a mistura, misturar até dissolver.

Tabela 3: Composição Tópica — 1000 uM de quelante/0,1% de creme de gentamicina

[0072] Instruções de formulação:

1. Utilizar um béquer de vidro adequadamente dimensionado, preparar uma solução de alíquota secundária pela adição da quantidade especificada de solução de agente quelante à quantidade especificada de água estéril.

2. Colocar a barra agitadora magnética na solução e misturar até uniformizar.

3. Utilizar uma seringa dimensionada adequadamente, retirar 5 ml da solução da etapa 2.

4. Descartar os conteúdos em um béquer de vidro adequadamente dimensionado adaptado com um agitador magnético.

5. Iniciar a mistura em velocidade baixa e adicionar o sulfato de gentamicina e misturar até dissolver.

6. Recarregar a seringa com o material na etapa 5, de uma maneira a assegurar a transferência total.

7. Em um béquer de vidro adequadamente dimensionado separado, adicionar a base cremosa que foi mantida a 60ºC e aquecer a 90ºC.

8. Adicionar uma barra agitadora à base cremosa e iniciar a mistura em velocidade baixa.

9. Fixar um filtro de 0,22 mícrons à serina mantendo a alíquota de 5 ml da etapa 6 e transferir a alíquota à base cremosa na etapa 8.

10. Continuar a mistura até uniformizar e deixar o creme esfriar a aproximadamente 55ºC e transferir as quantidades requeridas em contentor apropriado.

11. Esterilizar.

[0073] A formulação acima pode ser facilmente ajustada para fornecer composições tópicas de concentrações variantes de DTPA incluindo, por exemplo, as composições que compreendem de cerca de 30 uM a cerca de mM de DTPA. Opcionalmente, o antibiótico pode ser omitido. Os métodos para preparar as composições acima podem ser classificados usando-se métodos comumente conhecidos nas técnicas farmacêuticas.

[0074] Aqueles habilitados na técnica reconhecerão ou serão capazes de determinar usando-se não mais do que experimentação de rotina, muitos equivalentes às modalidades específicas da invenção descritas aqui. O escopo da presente invenção não é pretendido ser limitado aos exemplos específicos descritos na Descrição acima, mas em vez disso é como apresentado nas reivindicações anexas. De acordo com as reivindicações, os artigos, tais como "um", "uma" e "o" podem significar um ou mais do que um a não ser que indicado ao contrário ou de outra maneira evidente a partir do contexto. As reivindicações ou descrições que incluem "ou" entre um ou mais membros de um grupo são considerados satisfeitos se um, mais do que um ou todos os membros do grupo estiverem presentes em utilizados em ou, de outra maneira, relevantes a um dado produto ou processo a não ser que indicado ao contrário ou de outra maneira evidente a partir do contexto. A invenção inclui modalidades em que exatamente um membro do grupo está presente em utilizado em, ou de outra maneira relevante a um dado produto ou processo. Deve ser entendido que a invenção abrange todas as variações, combinações e permutas em qualquer uma ou mais limitações, elementos, cláusulas, termos descritivos, etc., a partir de uma ou mais das reivindicações listadas devem ser introduzidos em outra reivindicação. Por exemplo, qualquer reivindicação que é dependente de uma outra reivindicação pode ser modificada para incluir um ou mais elementos, limitações, cláusulas ou termos descritivos, encontrados em qualquer outra reivindicação que é dependente da mesma reivindicação de base. Além disso, quando as reivindicações citam um produto (por exemplo, um artigo de fabricação ou dispositivo), deve ser entendido que os métodos que usam o produto de acordo com qualquer um dos métodos descritos aqui e métodos de fabricar o produto, estão incluídos dentro do escopo da invenção, a não ser que indicado de outra maneira ou a não ser que deva estar evidente a uma pessoa de habilidade comum na técnica que uma contradição ou inconsistência deve surgir. Os métodos de tratar um indivíduo podem incluir uma etapa de fornecer a um indivíduo em necessidade de tal tratamento (por exemplo, um indivíduo que tem um ferimento ou outra necessidade médica para o tratamento antimicrobiano, incluindo uma necessidade profilática), uma etapa de diagnosticar um indivíduo como tendo tal doença ou distúrbio, uma etapa de selecionar um indivíduo para o tratamento e/ou uma etapa de sugerir um artigo, composição ou kit da invenção a um indivíduo ou prescrever um artigo, composição ou kit da invenção para um indivíduo u fornecer instruções com respeito ao uso do artigo, composição ou kit, por exemplo, instruções para usar o artigo, composição ou kit para um ou mais propósitos.

[0075] Quando os elementos são apresentados como listas, deve ser entendido que cada subgrupo dos elementos também é descrito e quaisquer elementos podem ser removidos do grupo. A invenção fornece todas as tais modalidades. Também deve ser entendido que, em geral, quando a invenção ou aspectos da invenção é/são referidos como compreendendo elementos, características particulares, etc., certas modalidades da invenção ou aspectos da invenção consistem ou consistem essencialmente de tais elementos, características, etc.

[0076] Os termos "aproximadamente" ou "cerca de" em referência a um número geralmente inclui números que estão dentro de +10%, em algumas modalidades +5%, em algumas modalidades +1%, em algumas modalidades +0,5% do número, a não ser que de outra maneira estabelecido ou de outra maneira evidente a partir do contexto (exceto quando tal número deve, de maneira não permissível, exceder 100% de um valor possível). Quando as faixas são dadas, os pontos finais são incluídos.

Além disso, deve ser entendido que a não ser que indicado de outra maneira ou de outra maneira evidente a partir do contexto e entendimento de uma pessoa habilitada na técnica, os valores que são expressados como faixas podem assumir qualquer valor específico ou subfaixa dentro das faixas estabelecidas em modalidades diferentes da invenção, ao décimo da unidade do limite inferior da faixa, a não ser que o contexto dite claramente de outra maneira.

Além disso, qualquer modalidade particular, aspecto, elemento, característica, etc., da presente invenção pode ser explicitamente excluída de qualquer uma ou mais das reivindicações.

Claims (23)

REIVINDICAÇÕES

1. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende pelo menos um antibiótico aminoglicosídico e pelo menos um agente quelante de fon de zinco, em que uma concentração de agente quelante de fon de zinco é de pelo menos cerca de 1 mg/ml.

2. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o antibiótico aminoglicosídico é etimicina, gentamicina, tobramicina, amicacina, netilmicina, dibecacina, canamicina, arbecacina, sagamicina, isopamicina, sisomicina, neomicina, paromoicina, estreptomicina, espectinomicina, micronomicina, astromicina, ribostamicina, sais ou hidratos farmaceuticamente aceitáveis e combinações destes.

3. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o antibiótico aminoglicosídico é gentamicina.

4. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que uma quantidade de antibiótico aminoglicosídico presente na composição está entre cerca de 0,01 e 5% de concentração em peso.

5. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pelo fato de que a quantidade de antibiótico aminoglicosídico está presente na composição entre cerca de 0,05 e 0,1% em peso.

6. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o agente quelante de fon de zinco é selecionado do grupo que consiste de ácido dietilenotriamino pentaacético (DTPA), N,N,N -tetraquis(2-piridinilmetil)-1,2-etanodiamina (TPEN), 1,10- fenantrolina, ácido tetraacético de etileno glicol (EGTA), dietilditiocarbamato (DEDTC), ácido etilenodiamino-N,N'-diacético (EDDA) e sais ou hidratos dos mesmos.

7. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 6,

caracterizada pelo fato de que o agente quelante de fon metálico DTPA.

8. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato de que o DTPA é adicionado à composição como NasDTPA ou Na;CaDTPA.

9. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que o DTPA é adicionado à composição como Na;CaDTPA.

10. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 8, em que o DTPA está presente na forma ácida, a composição caracterizada pelo fato de que ainda compreende um agente solubilizador.

11. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo fato de que o agente solubilizador é ácido clorídrico.

12. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a concentração de agente quelante de fon metálico está entre cerca de 5 mg/ml e 15 mg/ml.

13. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, formulado para a aplicação tópica a um indivíduo; caracterizada pelo fato de que a composição compreende de cerca de 0,05 a cerca de 1% de gentamicina em peso, 2,5 a 15 mg/ml DTPA e uma base de emulsão óleo em base.

14. Método para formular uma composição farmacêutica como definido na reivindicação 13 como uma formulação tópica, o método caracterizado pelo fato de que compreende: fornecer um vaso de base de base de emulsão de óleo em água adequada mantida em torno de 60ºC; preparar uma solução de alíquota em um primeiro vaso pela adição de uma quantidade de DTPA a uma quantidade de água estéril e misturar até uniformizar; transferir um volume especificado de uma alíquota a um segundo vaso e adicionar sulfato de gentamicina enquanto a mistura até o sulfato de gentamicina é totalmente dissolvido de maneira substancial; aquecer a base no vaso de base a cerca de 90ºC enquanto agita-se; filtrar e transferir os conteúdos totais do segundo vaso ao vaso de base; misturar até uniformizar; esfriar a cerca de 55ºC; transferência a um vaso de esterilização e esterilizar.

15. Uso da composição farmacêutica como definida na reivindicação 13, caracterizado pelo fato de ser para manufatura de um medicamento para tratar um ferimento em um indivíduo.

16. Método para inibir a formação de biofilme em uma superfície, o método caracterizado pelo fato de que compreende contatar a superfície com uma composição que compreende pelo menos um antibiótico aminoglicosídico e pelo menos um agente quelante de fon de zinco, em que uma concentração de agente quelante de fon de zinco está entre cerca de 1 mg/ml a cerca de 15 mg/ml, em que a superfície pode ser uma superfície dura, uma superfície têxtil, uma superfície da pele ou qualquer superfície de estrutura de corpo contendo queratina.

17. Método de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que o biofilme compreende um ou mais de células bacterianas S. aureus, S. Epidermidis e S. pseudintermedius.

18. Método de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o biofilme compreende células bacterianas S. aureus.

19. Método de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que a composição é aplicada à superfície como uma formulação de pulverização ou por intermédio de um lenço pronto para o uso.

20. Artigo fabricado para curativo, caracterizado pelo fato de que compreende pelo menos uma porção impregnada ou revestida com uma composição farmacêutica que compreende pelo menos um antibiótico aminoglicosídico e pelo menos um agente quelante de fon de zinco à superfície, em que uma concentração de agente quelante de fon de zinco está entre de cerca de 1 mg/ml a cerca de 15 mg/ml.

21. Artigo de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que o artigo é um item de roupa usado por um indivíduo engajado em atividade de alto risco de morte, tal que a roupa possa ser comprimida em um ferimento aberto tão logo o indivíduo experimente um dano que compreende um ferimento aberto, contendo, desse modo, o ferimento com a composição.

22. Artigo de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que é fabricado como uma bandagem.

23. Método para aumentar a eficácia antibacteriana de gentamicina, caracterizado pelo fato de que compreende formular a composição de gentamicina que compreende entre cerca de 5 e 15 mg/ml de agente quelante de zinco.