BR112015014459A2

BR112015014459A2 - Dry eye prevention / medical treatment agent

Info

Publication number: BR112015014459A2
Application number: BR112015014459A
Authority: BR
Inventors: Murai Hiromichi; Shimoda Hiroshi; Tanaka Junji; Tsubota Kazuo; Nakamura Shigeru; Kadekaru Takashi; Imada Toshihiro
Original assignee: Univ Keio; Oryza Oil & Fat Chemical Co Ltd
Priority date: 2012-12-18
Filing date: 2013-12-17
Publication date: 2019-12-31
Also published as: JPWO2014098092A1; CA2895353A1; US20150359812A1; HK1214144A1; EP2937091A1; CA2895353C; CN105007927A; JP6265500B2; US11033566B2; US20180036328A1; KR20150109354A; EP2937091B1; WO2014098092A1; IL239478B; ES2720205T3; EP2937091A4; KR102070479B1; IL239478A0

Abstract

resumo agente profilático e terapêutico para olho seco a presente invenção proporciona um agente profilático e terapêutico para o olho seco, tendo novos ingredientes para reduzir a deterioração da capacidade de secreção lacrimal e a inibição da geração de radical oxigênio no tecido da glândula lacrimal. o agente profilático e terapêutico para o olho seco desta invenção contém os extratos de maqui berry como a substância ativa da presente invenção, ou seja, contendo delfinidina - glicosídeo, extraída a partir de marri berry e, pelo menos, um ou mais das substâncias ativas delfinidina - 3 - sambubiosídeo - 5 - glucosídeo, delfinidina - 3,5 - diglucosídeo, delfinidina - 3 - sambubiosídeo e delfinidina - 3 - glucosídeo, de preferência delfinidina - 3,5 - diglucosídeo.abstract "prophylactic and therapeutic agent for dry eye" The present invention provides a prophylactic and therapeutic agent for dry eye, having novel ingredients to reduce the deterioration of tear secretion capacity and inhibition of oxygen radical generation in lacrimal gland tissue. the prophylactic and therapeutic agent for dry eye of this invention contains the maqui berry extracts as the active substance of the present invention, i.e. containing delphinidin - glycoside, extracted from marri berry and at least one or more of the active substances delphinidin - 3 - sambubioside - 5 - glucoside, delphinidin - 3,5 - diglucoside, delphinidin - 3 - sambubioside and delphinidin - 3 - glucoside, preferably delphinidin - 3,5 - diglucoside.

Description

“AGENTE PROFILÁTICO E TERAPÊUTICO PARA OLHO SECO”"PROPHYLACTIC AND THERAPEUTIC AGENT FOR A DRY EYE"

CAMPO TÉCNICO [0001] Esta invenção refere - se a composições que permitem o olho para aumentar a sua secreção lacrimal, especificamente para aumentar a quantidade de secreção lacrimal que tem sido diminuída por deterioração funcional devido a uma utilização excessiva dos olhos.TECHNICAL FIELD [0001] This invention relates to compositions that allow the eye to increase its tear secretion, specifically to increase the amount of tear secretion that has been diminished by functional deterioration due to excessive use of the eyes.

ESTADO DA TÉCNICA [0002] O fluido lacrimal é uma fina camada de líquido de aproximadamente 7pm de espessura que cobre a superfície exterior do globo ocular. O fluido lacrimal da superfície exterior é constituído por uma estrutura de três camadas de uma camada de óleo, uma camada de água e uma camada de mucina. Estas camadas influenciam - se mutuamente para se ajustar a estrutura do fluido lacrimal. Cada camada do fluido lacrimal contém vários ingredientes tais como proteínas, incluindo a lactoferrina, lisozima, IgA (imunoglobulina A), IgG (imunoglobulina G), albumina ou outros semelhantes, cera, colesterol, glucídios, mucina ou semelhantes. A função do fluido lacrimal, contendo estes ingredientes, é manter a superfície ocular úmida para prevenir a infecção por patógenos ou semelhantes que entram a partir do lado de fora, também para fornecer um número de substâncias fisiológicas ativas para fornecer oxigênio para o tecido não vascular como a córnea ou semelhantes.STATE OF THE TECHNIQUE [0002] Tear fluid is a thin layer of liquid approximately 7pm thick that covers the outer surface of the eyeball. The tear fluid on the outer surface consists of a three-layer structure of an oil layer, a water layer and a mucin layer. These layers influence each other to adjust the structure of the tear fluid. Each layer of tear fluid contains various ingredients such as proteins, including lactoferrin, lysozyme, IgA (immunoglobulin A), IgG (immunoglobulin G), albumin or the like, wax, cholesterol, glucides, mucin or the like. The function of the tear fluid, containing these ingredients, is to keep the eye surface moist to prevent infection by pathogens or the like that enter from the outside, also to provide a number of active physiological substances to supply oxygen to the non-vascular tissue such as the cornea or the like.

[0003] Como tal, o líquido lacrimal tem várias funções. No entanto, se há anormalidades na secreção lacrimal, resultando alterações na quantidade ou qualidade da secreção, assim resultando em um aumento na quantidade de evaporação do líquido lacrimal, ou semelhante, o líquido lacrimal que não funcionam bem. Essas anormalidades lacrimais aumentam os casos de olho seco, como as pessoas são estão agora. Diversas causas de olho seco têm sido relatadas recentemente. Uma das causas mais visíveis são os números excessivos de visualizações de terminais de exibição visual (VDT).[0003] As such, the tear fluid has several functions. However, if there are abnormalities in the tear secretion, resulting in changes in the quantity or quality of the secretion, thus resulting in an increase in the amount of evaporation of the tear fluid, or similar, the tear fluid that does not work well. These lacrimal abnormalities increase cases of dry eye, as people are now. Several causes of dry eye have been reported recently. One of the most visible causes is the excessive number of visual display terminal (VDT) views.

2/28 [0004] Recentes desenvolvimentos da tecnologia da informação e sua excelente infraestrutura aumentam drasticamente a oportunidade de usar os computadores na vida diária. De acordo com a estimativa da Intel Corporation, diz - se que há cerca de um trilhão de computadores ligados à Internet em todo o mundo. Hoje, a maioria dos trabalhadores de escritório vem o seu trabalho em um VDT. Como os computadores estão sendo usado com frequência, um número crescente de pessoas são a fadiga ocular queixando se e de sintomas de olho seco e de visão prejudicada, possivelmente causada por trabalho VDT, que é a partir de questão como um grave problema de saúde em países industriais avançados. Um dos principais fatores de causar sintomas de olho seco é pensado para ser aquela da visualização de VDTs diminuindo a frequência de piscar por quarto em comparação com a frequência normal, aumentando assim a quantidade de evaporação do líquido lacrimal. Os inventores da presente invenção também descobriram um novo fator causador de olho seco, ou seja, que a visão deteriora - se excessivamente com VDTs a função de fluido lacrimal, diminuindo assim a quantidade de secreção de líquido lacrimal. Suspeita - se que o uso excessivo dos olhos provoca estresse oxidante. Um relatório (Documento não patente 1) em 2007 por Nakamura et ai disse que o transtorno da córnea - epitélio causado por VDTs visualização é induzida por tal stress oxidante.2/28 [0004] Recent developments in information technology and its excellent infrastructure dramatically increase the opportunity to use computers in daily life. According to the Intel Corporation estimate, there are said to be about a trillion computers connected to the Internet worldwide. Today, most office workers see their work in a VDT. As computers are being used frequently, an increasing number of people are eye fatigue complaining of and symptoms of dry eye and impaired vision, possibly caused by VDT work, which is from issue as a serious health problem in advanced industrial countries. One of the main factors causing dry eye symptoms is thought to be that of viewing VDTs by decreasing the frequency of blinking per room compared to the normal frequency, thereby increasing the amount of tear fluid evaporation. The inventors of the present invention have also discovered a new causative factor for dry eye, that is, that vision deteriorates excessively with VDTs the function of tear fluid, thus decreasing the amount of tear fluid secretion. Overuse of the eyes is suspected to cause oxidative stress. A report (Non-Patent Document 1) in 2007 by Nakamura et al said that the disorder of the cornea - epithelium caused by VDTs visualization is induced by such oxidative stress.

[0005] Para aliviar o desconforto de fadiga ocular, olho seco ou semelhante hoje em dia, que é conhecido por ser eficaz para o líquido lacrimal deficiente colocando gotas de lágrimas artificiais para os olhos ou fechando a pontos lacrimais ou semelhantes. No entanto, cada uma dessas remediações é apenas um temporário, solidários e insuficientes. Portanto, em vez de esses remédios, uma forma de reduzir o olho seco, sensação de corpo estranho, desconforto ocular, fadiga ocular ou semelhante drasticamente é necessária, a substituição da secreção lacrimal perdido ou ter uma composição efetiva para as soluções acima.[0005] To relieve the discomfort of eye fatigue, dry eye or the like today, which is known to be effective for deficient tear fluid by placing artificial tear drops in the eyes or closing the tear points or the like. However, each of these remedies is only temporary, supportive and insufficient. Therefore, instead of these remedies, a way to reduce dry eye, foreign body sensation, eye discomfort, eye fatigue or the like drastically is necessary, replacing lost tear secretion or having an effective composition for the above solutions.

3/28 [0006] O olho seco é associado com radical oxigênio no tecido da glândula lacrimal. Assim, para prevenir e curar o olho seco é necessário suprimir o radical de oxigênio que é expressamente dentro do tecido da glândula lacrimal.3/28 [0006] The dry eye is associated with radical oxygen in the lacrimal gland tissue. Thus, to prevent and cure dry eye it is necessary to suppress the oxygen radical that is expressly within the tissue of the lacrimal gland.

DOCUMENTOS DO ESTADO DA TÉCNICA DOCUMENTOS DE NÃO - PATENTES [0007] O Documento Não patente 1: Investigative Ophthalmology & Visual Science, abril de 2007, Vol. 48, No. 4, p1552 - 1558, envolvimento do estresse oxidativo na córnea epitelial Alteração em uma supressão de Olho Seco.STATE OF THE TECHNICAL DOCUMENTS NON-PATENT DOCUMENTS [0007] Non-Patent Document 1: Investigative Ophthalmology & Visual Science, April 2007, Vol. 48, No. 4, p1552 - 1558, involvement of oxidative stress in the epithelial cornea a suppression of Dry Eye.

RESUMO DA INVENÇÃOSUMMARY OF THE INVENTION

PROBLEMAS A SEREM RESOLVIDOS PELA INVENÇÃO [0008] Em tal estado da técnica, inventores desta invenção aprenderam que o extrato da maqui berry reduz a deterioração da secreção lacrimal e a geração de radical de oxigênio no tecido da glândula lacrimal. Eles descobriram também que delfinidina - glicosídeo, que está contido tanto no extrato da maqui berry, assume um papel importante como uma substância fisiologicamente ativa, resultando assim na conclusão desta invenção. Em outras palavras, o objetivo desta invenção é fornecer um profilático e agente terapêutico para o olho seco, tendo novos ingredientes, através da qual o extrato de maqui berry ou delfinidina - glicosídeo, reduz a deterioração da capacidade de secreção lacrimal para suprimir a geração de radicais de oxigênio no tecido da glândula lacrimal.PROBLEMS TO BE SOLVED BY THE INVENTION [0008] In such a state of the art, inventors of this invention have learned that the maqui berry extract reduces the deterioration of the tear secretion and the generation of oxygen radical in the tear gland tissue. They also discovered that delfinidine - glycoside, which is contained in both maqui berry extract, plays an important role as a physiologically active substance, thus resulting in the conclusion of this invention. In other words, the objective of this invention is to provide a prophylactic and therapeutic agent for dry eye, having new ingredients, through which the extract of maqui berry or delfinidine - glycoside, reduces the deterioration of the capacity of lacrimal secretion to suppress the generation of oxygen radicals in the tear gland tissue.

MEIOS DE RESOLUÇÃO DOS PROBLEMAS [0009] As características da presente invenção para resolver os problemas acima mencionados são como se segue.PROBLEM SOLVING MEANS [0009] The characteristics of the present invention for solving the above mentioned problems are as follows.

1. Agente profilático e terapêutico para olho seco, contendo extrato de maqui berry como uma substância ativa.1. Prophylactic and therapeutic agent for dry eye, containing maqui berry extract as an active substance.

4/284/28

2. Agente profilático e terapêutico para o olho seco, contendo delfinidina - glicosídeo como uma substância ativa, extraído a partir de marri berry.2. Prophylactic and therapeutic agent for dry eye, containing delfinidine - glycoside as an active substance, extracted from marri berry.

3. Agente profilático e terapêutico para o olho seco, contendo quer delfinidina - 3 - sambubiosídeo - 5 - glicosídeo, delfinidina - 3,5 diglucosídeo, delfinidina - 3 - sambubiosídeo ou delfinidina - 3 - glucosídeo como uma substância ativa.3. Prophylactic and therapeutic agent for dry eye, containing either delfinidine - 3 - sambubioside - 5 - glycoside, delfinidine - 3,5 diglucoside, delfinidine - 3 - sambubioside or delfinidine - 3 - glucoside as an active substance.

4. Agente profilático e terapêutico para o olho seco, contendo delfinidina - 3, 5 - diglucosídeo como uma substância ativa.4. Prophylactic and therapeutic agent for dry eye, containing delfinidine - 3, 5 - diglucoside as an active substance.

5. Agente profilático e terapêutico para olho seco, contendo extrato de maqui berry incluindo delfinidina - 3,5 - diglucosídeo como uma substância ativa.5. Prophylactic and therapeutic agent for dry eye, containing maqui berry extract including delfinidine - 3,5 - diglucoside as an active substance.

6. Inibidor para a deterioração da capacidade de secreção lacrimal, contendo extrato de maqui berry como uma substância ativa.6. Inhibitor for the deterioration of the capacity of lacrimal secretion, containing maqui berry extract as an active substance.

7. Inibidor para a deterioração da capacidade de secreção lacrimal, contendo delfinidina - glicosídeo como uma substância ativa, extraído a partir de da maqui berry.7. Inhibitor for the deterioration of the capacity of lacrimal secretion, containing delfinidine - glycoside as an active substance, extracted from the maqui berry.

8. Inibidor para a deterioração da capacidade de secreção lacrimal, contendo quer delfinidina - 3 - sambubiosídeo - 5 - glicosídeo, delfinidina - 3,5 - diglucosídeo, delfinidina - 3 - sambubiosídeo ou delfinidina - 3 - glucosídeo como uma substância ativa.8. Inhibitor for the deterioration of the capacity of lacrimal secretion, containing either delfinidine - 3 - sambubioside - 5 - glycoside, delfinidine - 3,5 - diglucoside, delfinidine - 3 - sambubioside or delfinidine - 3 - glucoside as an active substance.

9. Inibidor para a deterioração da capacidade de secreção lacrimal, contendo o extrato de maqui berry, incluindo delfinidina - 3,5 diglucosídeo como uma substância ativa.9. Inhibitor for the deterioration of the capacity of lacrimal secretion, containing maqui berry extract, including delfinidine - 3.5 diglucoside as an active substance.

10. Inibidor para a geração de radical de oxigênio no tecido da glândula lacrimal, que contém o extrato da maqui berry como uma substância ativa.10. Inhibitor for the generation of radical oxygen in the tissue of the lacrimal gland, which contains the extract of maqui berry as an active substance.

11. Inibidor para a geração de radical de oxigênio no tecido da glândula lacrimal, contendo delfinidina - glicosídeo como uma substância ativa, extraído da maqui berry.11. Inhibitor for the generation of radical oxygen in the lacrimal gland tissue, containing delfinidine - glycoside as an active substance, extracted from maqui berry.

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12. Inibidor para a geração de radical de oxigênio no tecido da glândula lacrimal, contendo, pelo menos, um ou mais de delfinidina 3 - sambubiosídeo - 5 - glicosídeo, delfinidina - 3,5 - diglucosídeo, delfinidina - 3 - sambubiosídeo e delfinidina - 3 - glicosídeo desejado sob uma substância ativa.12. Inhibitor for the generation of oxygen radical in the lacrimal gland tissue, containing at least one or more of delfinidine 3 - sambubioside - 5 - glycoside, delfinidine - 3,5 - diglucoside, delfinidine - 3 - sambubioside and delfinidine - 3 - desired glycoside under an active substance.

13. Inibidor para a geração de radical de oxigênio no tecido da glândula lacrimal, contendo delfinidina - 3,5 - diglucosídeo como uma substância ativa.13. Inhibitor for the generation of radical oxygen in the tissue of the lacrimal gland, containing delfinidine - 3,5 - diglucoside as an active substance.

14. Inibidor para a geração de radical oxigênio no tecido da glândula lacrimal, contendo o extrato de maqui berry incluindo delfinidina - 3, 5 - diglucosídeo como uma substância ativa.14. Inhibitor for the generation of radical oxygen in the tissue of the lacrimal gland, containing maqui berry extract including delfinidine - 3, 5 - diglucoside as an active substance.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS [0010] A Fig. 1 é um gráfico que mostra as mudanças na capacidade de secreção lacrimal após quatro administrações consecutivas - dia de maqui berry para ratos que sofrem de estresse induzido por olho seco, (indicado pelo valor medido, média erro padrão mais - ou - menos, ** p < 0.01 para o valor padrão, #p < 0,05 ao veículo).BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS [0010] Fig. 1 is a graph showing changes in the capacity for tear secretion after four consecutive administrations - maqui berry day for rats suffering from stress induced by dry eye, (indicated by the measured value, average standard error plus - or - less, ** p <0.01 for the standard value, #p <0.05 to the vehicle).

[0011] A Fig. 2 é um gráfico que mostra alterações na capacidade de secreção lacrimal após quatro administrações consecutivas - dia de extrato de maqui berry para ratinhos que sofrem de estresse induzido olho seco, (indicado pelo valor da variável em comparação com o valor antes da administração, média ou mais ou minus de erro padrão, ** p < 0,01 para o valor padrão, #p <0,05 para o veículo).[0011] Fig. 2 is a graph showing changes in the capacity of tear secretion after four consecutive administrations - day of maqui berry extract for mice suffering from stress induced dry eye, (indicated by the value of the variable compared to the value before administration, mean or more or minus of standard error, ** p <0.01 for the standard value, #p <0.05 for the vehicle).

[0012] A Fig. 3 é um gráfico que mostra as mudanças na capacidade de secreção lacrimal após quatro administrações consecutivas - dia de extrato de maqui berry a ratos que sofrem de estresse induzido por olho seco.[0012] Fig. 3 is a graph showing changes in the capacity for tear secretion after four consecutive administrations - day of maqui berry extract to rats suffering from dry eye-induced stress.

[0013] A Fig. 4 é um gráfico que mostra o efeito do extrato de maqui berry na inibição da geração de espécies de radicais de oxigênio em células lacrimais.[0013] Fig. 4 is a graph that shows the effect of maqui berry extract in inhibiting the generation of oxygen radical species in tear cells.

6/28 [0014] A Fig. 5 é um gráfico comparando o efeito de extrato de maqui berry e outros extratos na inibição da geração de espécies de radicais de oxigênio em células lacrimais.6/28 [0014] Fig. 5 is a graph comparing the effect of maqui berry extract and other extracts in inhibiting the generation of oxygen radical species in tear cells.

[0015] A Fig. 6 é um gráfico que mostra o efeito de delfinidina - glicosídeo, isolado a partir de extrato de maqui berry, na inibição da geração de espécies de radicais de oxigênio.[0015] Fig. 6 is a graph showing the effect of delfinidine - glycoside, isolated from maqui berry extract, in inhibiting the generation of oxygen radical species.

[0016] A Fig. 7 é um gráfico de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) do extrato de maqui berry.[0016] Fig. 7 is a high performance liquid chromatography (HPLC) graph of the maqui berry extract.

[0017] A Fig. 8 é um gráfico de HPLC do extrato de maqui berry Fr. 1: delfinidina - 3 - sambubiosídeo - 5 - glicosídeo.[0017] Fig. 8 is an HPLC graph of the maqui berry extract Fr. 1: delfinidine - 3 - sambubioside - 5 - glycoside.

[0018] A Fig. 9 é um gráfico de HPLC do extrato de maqui berry Fr. 2: delfinidina - 3, 5 - glucosídeo.[0018] Fig. 9 is an HPLC graph of the maqui berry extract Fr. 2: delfinidine - 3, 5 - glucoside.

[0019] A Fig. 10 é um gráfico de HPLC do extrato de maqui berry Fr. 5: delfinidina - 3 - sambubiosídeo.[0019] Fig. 10 is an HPLC graph of the maqui berry extract Fr. 5: delfinidine - 3 - sambubioside.

[0020] A Fig. 11 é um gráfico de HPLC do extrato de maqui berry Fr. 6: delfinidina - 3 - glucosídeo.[0020] Fig. 11 is an HPLC graph of maqui berry extract Fr. 6: delfinidine - 3 - glucoside.

[0021] A Fig. 12 é um gráfico que mostra o efeito comparativo do Fr. 2: delfinidina - 3,5 - glicosídeo (Exemplo de Trabalho 3), Fr. 6: delfinidina - 3 - glucosídeo (Exemplo de Trabalho 5) e delfinidina 3 rutinoside na inibição da geração de espécies de radicais de oxigênio em células lacrimais.[0021] Fig. 12 is a graph showing the comparative effect of Fr. 2: delfinidine - 3,5 - glycoside (Working Example 3), Fr. 6: delfinidine - 3 - glucoside (Working Example 5) and delfinidine 3 rutinoside in inhibiting the generation of oxygen radical species in tear cells.

[0022] A Fig. 13 é um gráfico que mostra o efeito comparativo do Fr. 6: delfinidina - 3 - glucosídeo (Exemplo de Trabalho 5) e oteranhocianinas (isto é, petunidina - 3 - glucosídeo, peonidina - 3 - glucosídeo, movidina - 3 - glucosídeo, cianidína - 3 - glicosídeo) na inibição da geração de espécies de radicais de oxigênio na célula lacrimal.[0022] Fig. 13 is a graph showing the comparative effect of Fr. 6: delfinidine - 3 - glucoside (Working Example 5) and oteranhocyanines (ie, petunidine - 3 - glucoside, peonidine - 3 - glucoside, movidine - 3 - glucoside, cyanidin - 3 - glycoside) in inhibiting the generation of oxygen radical species in the tear cell.

[0023] A Fig. 14 é um gráfico que mostra a quantidade incorporada comparativa de antocianina (delfinidina - 3,5 - diglucosídeo; D3G5G, delfinidina - 3 - glucosídeo; D3G, delfinidina - 3 - rutinosideo; D3R) para as células lacrimais.[0023] Fig. 14 is a graph showing the comparative incorporated amount of anthocyanin (delfinidine - 3,5 - diglucoside; D3G5G, delfinidine - 3 - glucoside; D3G, delfinidine - 3 - rutinoside; D3R) for the tear cells.

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MODOS PARA REALIZAR A INVENÇÃO [0024] A seguir, a invenção é descrita em pormenor.MODES FOR CARRYING OUT THE INVENTION [0024] In the following, the invention is described in detail.

[0025] Em relação a este invento, o agente profilático e terapêutico para o olho seco, um inibidor para a deterioração da capacidade de secreção lacrimal ou um inibidor para a geração de radicais de oxigênio no tecido da glândula lacrimal, contendo uma substância ativa que é extrato de maqui berry ou de delfinidina - glicosídeo extraído a partir de maqui berry.[0025] In relation to this invention, the prophylactic and therapeutic agent for dry eye, an inhibitor for the deterioration of the capacity of lacrimal secretion or an inhibitor for the generation of oxygen radicals in the tissue of the lacrimal gland, containing an active substance that is an extract of maqui berry or delfinidine - glycoside extracted from maqui berry.

[0026] Além disso, o agente profilático e terapêutico para olho seco, um inibidor da geração de para o radical de oxigênio no tecido da glândula lacrimal, contém como uma substância ativa um ou mais de delfinidina - 3 - sambubiosídeo - 5 - glicosídeo, delfinidina - 3,5 - diglucosídeo, delfinidina 3 - sambubiosídeo e delfinidina - 3 - glucosídeo.[0026] In addition, the prophylactic and therapeutic agent for dry eye, an inhibitor of the generation of to the oxygen radical in the tissue of the lacrimal gland, contains as one active substance one or more of delfinidine - 3 - sambubioside - 5 - glycoside, delfinidine - 3,5 - diglucoside, delfinidine 3 - sambubioside and delfinidine - 3 - glucoside.

[0027] A delfinidina acima mencionada é um composto químico, como descrito na seguinte fórmula (1).[0027] The aforementioned delfinidine is a chemical compound, as described in the following formula (1).

Fórmula química (1)Chemical formula (1)

[0028] A delfinidina é um tipo de antocianidina e antioxidante que é conhecido como um dos principais pigmentos vegetais. Além disso, a antocianidina, como aglicona, está ligada a uma cadeia de açúcar ou de açúcar para formar cianina (glicosídeo).[0028] Delphinidin is a type of anthocyanidin and antioxidant that is known as one of the main plant pigments. In addition, anthocyanidin, like aglycone, is linked to a sugar or sugar chain to form cyanine (glycoside).

[0029] Embora o método para a obtenção de delfinidina seja ilimitado, é possível utilizar quer uma substância de origem vegetal ou um quimicamente sintetizado. É possível, naturalmente, usar uma substancia que está disponível comercialmente (isto é, síntese extra).[0029] Although the method for obtaining delfinidine is unlimited, it is possible to use either a substance of plant origin or a chemically synthesized one. It is, of course, possible to use a substance that is commercially available (ie extra synthesis).

8/28 [0030] A delfinidina - glicosídeo, tal como utilizado na presente invenção, é, por exemplo, descrito na seguinte fórmula química (2).8/28 [0030] Delphinidin - glycoside, as used in the present invention, is, for example, described in the following chemical formula (2).

Fórmula química (2)Chemical formula (2)

(R1 a R3 são substituídos por bihidroxil, açúcar (sacarídeo) monômero, ou dímero.).(R1 to R3 are replaced by bihydroxyl, sugar (saccharide) monomer, or dimer.).

[0031] Embora a delfinidina - glicosídeo acima referenciada não é limitada a essa substância específica, por exemplo, que é de preferência limitada a delfinidina - 3 - sambubiosídeo - 5 - glicosídeo, delfinidina - 3,5 - diglucosídeo, delfinidina - 3 - sambubiosídeo e delfinidina - 3 glicosídeo. Estes compostos químicos são aqueles em que as descrições estão substituídos por R1 a R3 dos compostos ilustrados na fórmula química acima 2. É possível também utilizar um ou mais de um.[0031] Although the delfinidine - glycoside referenced above is not limited to that specific substance, for example, it is preferably limited to delfinidine - 3 - sambubioside - 5 - glycoside, delfinidine - 3,5 - diglucoside, delfinidine - 3 - sambubioside and delfinidine - 3 glycoside. These chemical compounds are those in which the descriptions are replaced by R1 to R3 of the compounds illustrated in the chemical formula above 2. It is also possible to use one or more of one.

[0032] [Quadro 1][0032] [Table 1]

R1 R1 R2 R2 R3 R3 Delfinidina - 3 - O - sambubiosídeo - 5 - O glucosídeo Delfinidine - 3 - O - sambubioside - 5 - The glucoside OH OH Sam Sam Glu Glu Delfinidina 3,5 - O - glucosídeo Delfinidine 3.5 - O - glucoside OH OH Glu Glu Glu Glu Delfinidina - 3 - O - sambubiosídeo Delfinidine - 3 - O - sambubioside OH OH Sam Sam H H Delfinidina - 3 - O - glucosídeo Delfinidine - 3 - O - glucoside OH OH Glu Glu H H

Glu: Glicose, Sam: sambubiose [0033] O método para a obtenção de delfinidina glicosídeo não é especialmente limitado. É possível utilizar quer uma substância de origem vegetal ou um quimicamente sintetizada. No caso emGlu: Glucose, Sam: sambubiosis [0033] The method for obtaining delfinidine glycoside is not particularly limited. It is possible to use either a substance of plant origin or a chemically synthesized one. In the case

9/28 que a delfinidina - glicosídeo é extraído de uma planta para além da maqui berry, é possível utilizar o mirtilo, cassis, arando, Concord (uva), romã ou outro semelhante como ingrediente. No entanto, o extrato de maqui berry é preferido, uma vez que o maqui berry contém uma elevada concentração de delfinidina glicosídeo que é a substância ativa da presente invenção, e é facilmente extraída. É também possível usar um substânica que está disponível comercialmente.9/28 that delfinidine - glycoside is extracted from a plant in addition to maqui berry, it is possible to use blueberry, cassis, cranberry, Concord (grape), pomegranate or the like as an ingredient. However, maqui berry extract is preferred, since maqui berry contains a high concentration of delfinidine glycoside which is the active substance of the present invention, and is easily extracted. It is also possible to use a substance that is commercially available.

[0034] A maqui berry (também conhecida como Aristotelia Chilensis) é uma planta berry nativa da região sul do Chile na América do Sul. A sua ação antioxidante é conhecida por ser extremamente forte.[0034] The maqui berry (also known as Aristotelia Chilensis) is a berry plant native to the southern region of Chile in South America. Its antioxidant action is known to be extremely strong.

[0035] A maqui berry também é conhecida por conter delfinidina - glicosídeo ou delifinidina - 3 - sambubiosídeo - 5 - glicosídeo e delfinidina - 3,5 - O - diglucosídeo, substâncias que não estão contidas em outros frutos, como mirtilo e [0036] A investigação conduzida pelos inventores da presente invenção confirmaram que o maqui berry também contém delfinidina 3 - sambubiosídeo e delfinidina - 3 - glucosídeo, bem como a delfinidina - 3 sambubiosídeo - 5 - glicosídeo mencionado acima e glucosídeo delfinidina 3,5 - diglucosídeo de delfinidina . Delfinidina - 3,5 - diglucosídeo substância ativa especialmente excelentemente é uma e, portanto, funciona como um eficaz agente profilático e terapêutico para o olho seco, como um inibidor para a deterioração da capacidade de secreção lacrimal, ora um inibidor de geração de para o radical de oxigênio no tecido da glândula lacrimal.[0035] Maqui berry is also known to contain delfinidine - glycoside or delifinidine - 3 - sambubioside - 5 - glycoside and delfinidine - 3,5 - O - diglucoside, substances that are not contained in other fruits, such as blueberry and [0036] The research conducted by the inventors of the present invention confirmed that maqui berry also contains delfinidine 3 - sambubioside and delfinidine - 3 - glucoside, as well as the delfinidine - 3 sambubioside - 5 - glycoside mentioned above and delfinidine 3,5 - delfinidine diglycoside. Delfinidine - 3,5 - diglucoside active substance especially excellently is one and, therefore, works as an effective prophylactic and therapeutic agent for dry eye, as an inhibitor for the deterioration of the capacity of the lacrimal secretion, now an inhibitor of generation of for the oxygen radical in the tissue of the lacrimal gland.

[0037] O conteúdo de delfinidina - glicosídeo do extrato de maqui berry acima mencionado não é especialmente limitado. No entanto, é preferível que, quando o extrato de maqui berry é 100 % em peso, em seguida, 6-25 % em peso deve conter delfinidina - 3,5 - O - diglucosídeo, de preferência de 10-20 % em peso, e que 1 - 10 em peso % deve conter delfinidina - 3 - sambubiosídeo - 5 - glicosídeo, de preferência de 4 - 8 % em peso.[0037] The delphinidin - glycoside content of the aforementioned maqui berry extract is not particularly limited. However, it is preferable that when the maqui berry extract is 100% by weight, then 6-25% by weight should contain delfinidine - 3.5 - O - diglucoside, preferably 10-20% by weight, and that 1 - 10% by weight should contain delfinidine - 3 - sambubioside - 5 - glycoside, preferably 4 - 8% by weight.

10/28 [0038] Da presente invenção, nenhuma parte particular da planta maqui berry é limitada em extrair a delfinidina - glicosídeo como uma substância ativa. O fruto, as sementes, as flores, as folhas, caules ou semelhantes podem ser usados. No entanto, o fruto é preferível, uma vez que é possível para extrair uma elevada concentração da substância ativa de cima a partir do fruto.10/28 [0038] Of the present invention, no particular part of the maqui berry plant is limited to extracting delfinidine - glycoside as an active substance. Fruit, seeds, flowers, leaves, stems or the like can be used. However, the fruit is preferable, since it is possible to extract a high concentration of the active substance from above from the fruit.

[0039] Como um solvente de extração, é possível utilizar um solvente polar tal como água, metanol, etanol, álcool isopropílico, 1,3 butileno glicol, etileno glicol, propileno glicol, glicerina, acetato de etilo ou semelhantes. Também é possível misturar dois ou mais solventes, de entre os solventes acima mencionados. A água ou etanol a sua mistura, o etanol hidratado, é preferido como solvente de extração para extrair de forma eficiente a substância ativa.[0039] As an extraction solvent, it is possible to use a polar solvent such as water, methanol, ethanol, isopropyl alcohol, 1,3 butylene glycol, ethylene glycol, propylene glycol, glycerin, ethyl acetate or the like. It is also possible to mix two or more solvents, among the solvents mentioned above. Water or ethanol in its mixture, hydrated ethanol, is preferred as an extraction solvent to efficiently extract the active substance.

[0040] No caso em que a água é utilizada como um solvente de extração, o tipo de água não é limitado. A água da torneira, água destilada, água alcalina de íons, em águas profundas ou semelhantes podem ser utilizados.[0040] In the case where water is used as an extraction solvent, the type of water is not limited. Tap water, distilled water, alkaline ion water, in deep water or the like can be used.

[0041] A quantidade de concentração de etanol não é particularmente limitada, no caso de que o etanol hidratado é utilizado como um solvente de extração. No entanto, a concentração de etanol deveria ser de 10-90 % (p / p), de preferência 20 - 80 % (p / p). A razão pela qual a concentração de etanol é inferior a 90 % (p / p), tal como acima, é que uma concentração demasiada elevada de etanol faz com que o teor de óleo da maqui berry seja facilmente dissolve no etanol hidratado.[0041] The amount of ethanol concentration is not particularly limited, in the case that hydrated ethanol is used as an extraction solvent. However, the concentration of ethanol should be 10-90% (w / w), preferably 20 - 80% (w / w). The reason the ethanol concentration is less than 90% (w / w), as above, is that too high an ethanol concentration causes the oil content of the maqui berry to easily dissolve in the hydrated ethanol.

[0042] A temperatura de extração deve de 20 - 80 graus Celsius, de preferência 40 - 50 graus Celsius. Se a temperatura de extração é demasiado baixa, a substância ativa não é facilmente extraída. Se é alta, a substância ativa é degradada, assim, a atividade fisiológica (capacidade funcionamento da saúde) é menor.[0042] The extraction temperature should be 20 - 80 degrees Celsius, preferably 40 - 50 degrees Celsius. If the extraction temperature is too low, the active substance is not easily extracted. If it is high, the active substance is degraded, thus, the physiological activity (health functioning capacity) is less.

11/28 [0043] Os métodos de extração, por exemplo, incluem a extração contínua, extração de imersão, a extração em contracorrente, ou um que pode ser usado com qualquer equipamento opcional à temperatura ambiente ou por aquecimento sob refluxo.11/28 [0043] Extraction methods, for example, include continuous extraction, immersion extraction, countercurrent extraction, or one that can be used with any optional equipment at room temperature or by heating under reflux.

[0044] Tal como para o método específico de extração, colocar o ingrediente de extração (isto é, o fruto de maqui berry ou semelhante) para a cuba de processamento preenchida com um solvente de extração e agita - se até que a substância ativa do ingrediente de extração penetre no solvente. Se usando etanol hidratado, por exemplo, como o solvente de extração, a extração é realizada por o solvente sendo de aproximadamente dois a cem vezes tanto peso como o ingrediente de extração, de duração de 30 minutos a duas horas. Depois da substância ativa se infiltrada em solvente, em seguida, filtra o solvente e retira-se o resíduo para se obter o líquido extraído.[0044] As for the specific extraction method, place the extraction ingredient (ie the maqui berry fruit or the like) into the processing bowl filled with an extraction solvent and stir until the active substance in the extraction ingredient penetrates the solvent. If using hydrated ethanol, for example, as the extraction solvent, extraction is performed by the solvent being approximately two to one hundred times as much weight as the extraction ingredient, lasting from 30 minutes to two hours. After the active substance has infiltrated into a solvent, then filter the solvent and remove the residue to obtain the extracted liquid.

[0045] Depois, de acordo com o método comum, aplicar a diluição, concentração, método de secagem ou semelhante, ao líquido extraído para obter o agente profilático e terapêutico para a inibição do olho seco à deterioração da capacidade de secreção lacrimal.[0045] Then, according to the common method, apply the dilution, concentration, drying method or the like, to the liquid extracted to obtain the prophylactic and therapeutic agent for the inhibition of dry eye to the deterioration of the capacity of lacrimal secretion.

[0046] O método de refinação é conduzido através da absorção do líquido extraído que é filtrado através de absorção da resina sintética ou resina de filtração em gel ou outros semelhantes e em seguida eluindo o líquido extraído em metanol, etanol ou semelhante, para concentrá Io.[0046] The refining method is conducted by absorbing the extracted liquid which is filtered by absorbing the synthetic resin or gel filtration resin or the like and then eluting the extracted liquid in methanol, ethanol or the like, to concentrate it .

[0047] O agente profilático e terapêutico para a inibição do olho seco ou a deterioração da capacidade de secreção lacrimal da presente invenção pode ser utilizado como um ingrediente de quaisquer alimentos ou bebidas, tais como produtos de confeitaria (goma de mascar, bombons, caramelos, chocolates, bolachas, geleias, gomas, comprimido rebuçados de forma ou outro lanche), macarrão (macarrão de trigo sarraceno japonês chamados Soba, macarrão de trigo japonês chamada Udon, macarrão chinês chamado Ramen ou semelhantes), laticínios (leite, sorvete, iogurte, ou[0047] The prophylactic and therapeutic agent for the inhibition of dry eye or the deterioration of the tear secretion capacity of the present invention can be used as an ingredient in any food or beverage, such as confectionery products (chewing gum, chocolates, caramels) , chocolates, cookies, jellies, gums, lozenges or other snack), noodles (Japanese buckwheat noodles called Soba, Japanese wheat noodles called Udon, Chinese noodles called Ramen or similar), dairy products (milk, ice cream, yogurt , or

12/28 semelhante), temperos (feijão fermentado colar chamado Miso, molho de soja chamado Shoyu ou semelhantes), sopas, bebidas (suco, café, chá preto, chá verde, refrigerantes, bebidas de suplemento de esportes ou semelhantes) e alimentos em geral e alimentos saudáveis (tipo tablete tipo cápsula ou semelhantes), e suplementos nutricionais da bebida (suplemento nutritivo ou similares). O agente profilático e terapêutico para inibir a deterioração do olho seco da capacidade de secreção lacrimal da presente invenção pode ser aplicado para os alimentos e bebidas acima referidas.12/28 similar), seasonings (fermented bean paste called Miso, soy sauce called Shoyu or similar), soups, drinks (juice, coffee, black tea, green tea, soft drinks, sports supplement drinks or similar) and foods in general and healthy foods (tablet type capsule type or similar), and nutritional supplements of the drink (nutritional supplement or similar). The prophylactic and therapeutic agent to inhibit dry eye deterioration of the tear secretion capacity of the present invention can be applied to the above-mentioned foods and drinks.

[0048] De acordo com os tipos de comidas e bebidas acima referidas, podem ser adicionados os seguintes ingredientes: glicose, frutose, sacarose, maltose, sorbitol, esteviosido, xarope de milho, ácido lactose, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido málico, ácido sacinico, ácido láctico, L ácido ascórbico, DL - a - tocoferol, eritorbato de sódio, glicerina, propileno glicol, glicerina éster de ácido gordo, éster de ácido gordo de poliglicerol, éster de ácido gordo de sacarose, éster de sorbitano de ácido gordo, éster de ácido gordo de propileno glicol, goma arábica, carragenina, caseína, gelatina, pectina, agar - agar (de gelatina feita a partir de algas marinhas), séries de vitamina B, amida - ácido nicotínico, ácido pantotenato de cálcio, aminoácidos, sais de cálcio, pigmentos, produtos químicos do aroma, conservantes ou semelhantes.[0048] According to the types of foods and drinks mentioned above, the following ingredients can be added: glucose, fructose, sucrose, maltose, sorbitol, stevioside, corn syrup, lactose acid, citric acid, tartaric acid, malic acid, saccinic acid, lactic acid, L ascorbic acid, DL - a - tocopherol, sodium erythorbate, glycerin, propylene glycol, glycerin fatty acid ester, polyglycerol fatty acid ester, sucrose fatty acid ester, sorbitan acid ester fat, propylene glycol fatty acid ester, gum arabic, carrageenan, casein, gelatin, pectin, agar - agar (from gelatin made from seaweed), vitamin B series, amide - nicotinic acid, calcium pantothenate acid, amino acids, calcium salts, pigments, aroma chemicals, preservatives or the like.

[0049] O método específico de extração é aqui descrito. Em primeiro lugar, o agente profilático e terapêutico para o olho seco é seco por pulverização ou liofilizado com celulose em pó para fazer um pó, um granulado, um comprimido ou líquido para utilizar facilmente com diferentes tipos de alimentos e bebidas (prontos a comer as refeições ou semelhantes). Além disso, é possível dissolver o agente profilático e terapêutico para o olho seco, por exemplo, em um óleo e gordura, em etanol, glicerina ou uma mistura destas substâncias a usar como um alimento para fazer alimentos secos ou bebidas. Além disso, é possível fazer o extrato em um pó ou grânulos,[0049] The specific method of extraction is described here. First, the prophylactic and therapeutic agent for dry eye is spray dried or lyophilized with cellulose powder to make a powder, granulate, tablet or liquid for easy use with different types of foods and drinks (ready to eat). meals or similar). In addition, it is possible to dissolve the prophylactic and therapeutic agent for dry eye, for example, in an oil and fat, in ethanol, glycerin or a mixture of these substances to be used as a food to make dry foods or drinks. In addition, it is possible to make the extract into a powder or granules,

13/28 misturando - o com um ligante tal como goma arábica, dextrina ou semelhante para adicionar a secar alimentos ou bebidas.13/28 by mixing it with a binder such as gum arabic, dextrin or the like to add to dry food or drinks.

[0050] A quantidade total de substância ativa do agente profilático e terapêutico para o olho seco ou inibidor para a deterioração da capacidade de secreção lacrimal da presente invenção, que também podem ser adicionados a alimentos e bebidas, é de preferência de 1 a 20 % em peso ou menos, uma vez que o principal objetivo do presente invento é a manutenção da saúde.[0050] The total amount of active substance of the prophylactic and therapeutic agent for the dry eye or inhibitor for the deterioration of the tear secretion capacity of the present invention, which can also be added to food and drinks, is preferably from 1 to 20% in weight or less, since the main objective of the present invention is the maintenance of health.

[0051] O agente profilático e terapêutico inibição do olho seco e para a deterioração da capacidade de secreção lacrimal da presente invenção pode ser utilizado como a matéria - prima para fármacos (incluindo fármacos e quasi - drogas). Na fabricação de medicamentos, o agente terapêutico e profilático para o olho seco da presente invenção pode ser adequadamente misturado com matérias - primas, tais como, por exemplo, veículos (glicose, sacarose, açúcar branco macio, cloreto de sódio, amido, carbonato de cálcio, caulino, cristalino celulose, óleo de cacau, óleo vegetal hidrogenado, talco ou outros semelhantes), ligantes (água destilada, soro fisiológico, etanol, em água, solução etanólica, xarope simples, dextrose em água, solução de amido, solução de gelatina, carboximetil celulose, fosfato de potássio, pirrolidona de polivinilo ou semelhantes), agentes de desintegração (alginato de sódio, ágar - ágar, carbonato de hidrogênio de sódio, sulfato de laurilo e sódio, monoglicerido de ácido esteárico, amido, lactose, aracia em pó, gelatina, etanol ou semelhantes), agentes supressores de desintegração (branco açúcar macio, estearina, óleo de cacau, óleo hidrogenado ou semelhantes), por promotores de absorção (base de amónio quaternário, lauril sulfato de sódio ou os análogos), para absorventes (glicerina, amido, lactose, caulino, bentonita, ácido silícico ou semelhantes), ou agentes para lubrificante purificado (talco, estearato de polietileno glicol ou semelhante.[0051] The prophylactic and therapeutic agent inhibiting dry eye and for the deterioration of the tear secretion capacity of the present invention can be used as the raw material for drugs (including drugs and quasi - drugs). In the manufacture of medicines, the therapeutic and prophylactic agent for the dry eye of the present invention can be suitably mixed with raw materials, such as, for example, vehicles (glucose, sucrose, soft white sugar, sodium chloride, starch, carbonate of calcium, kaolin, crystalline cellulose, cocoa oil, hydrogenated vegetable oil, talc or similar), binders (distilled water, saline, ethanol, in water, ethanolic solution, simple syrup, water dextrose, starch solution, gelatin, carboxymethyl cellulose, potassium phosphate, polyvinyl pyrrolidone or the like), disintegrating agents (sodium alginate, agar - agar, sodium hydrogen carbonate, sodium lauryl sulfate, stearic acid monoglyceride, starch, lactose, aracia powder, gelatin, ethanol or similar), disintegrating suppressing agents (white soft sugar, stearin, cocoa oil, hydrogenated oil or similar), absorption promoters (quaternary ammonium base, sodium lauryl sulfate or the like), for absorbents (glycerin, starch, lactose, kaolin, bentonite, silicic acid or the like), or purified lubricant agents (talc, polyethylene glycol stearate or similar.

[0052] O agente profilático e terapêutico para o olho seco ou para a deterioração da inibição da capacidade de secreção lacrimal da[0052] The prophylactic and therapeutic agent for dry eye or for the deterioration of the inhibition of the capacity of tear secretion of

14/28 presente invenção pode ser administrado oralmente na forma de comprimidos, pílulas, cápsulas duras ou moles, grânulos subtis, pós, grânulos, líquidos ou semelhantes. No entanto, o agente terapêutico pode também ser administrado por via parentérica em diferentes formas de solução ou em conjunto com um dispersante, um agente de suspensão, um estabilizador ou semelhante por administração direta no local de injeção intradérmica por tecido, por injeção hipodérmica, intramuscular por injeção ou por injeção intravenosa ou semelhantes. O agente terapêutico pode também ser usado como uma gota ocular de supositório.The present invention can be administered orally in the form of tablets, pills, hard or soft capsules, subtle granules, powders, granules, liquids or the like. However, the therapeutic agent can also be administered parenterally in different forms of solution or together with a dispersant, suspending agent, stabilizer or the like by direct administration at the intradermal tissue injection site, by hypodermic, intramuscular injection. injection or intravenous injection or the like. The therapeutic agent can also be used as a suppository eye drop.

[0053] A dose aplicada pode ser ajustada de acordo com o método de administração ou para a condição da doença ou para a idade do paciente ou afim. Os adultos podem, normalmente, ser de cerca de 0,5 a 5000 mg da substância ativa por dia, enquanto que as crianças podem ter 0,5 a 3000 mg por dia. A proporção de composição do agente profilático e terapêutico para o olho seco ou para a deterioração do inibidor da capacidade de secreção lacrimal da presente invenção pode ser ajustada de acordo com o modo de administração. Quando a composição dietética é administrada por via oral ou por via mucosa, a dose aplicada de preferência é 0,3 a 15.0 % em peso. Quando a composição dietética é administrada por via parentérica, a dose é de preferência de 0,01 a 10 % em peso. A dose varia dependendo do estado do doente, de modo a que uma dose de menos do que a quantidade acima pode ser suficiente, ou uma quantidade maior, por vezes, podem ser necessários.[0053] The applied dose can be adjusted according to the method of administration or to the condition of the disease or to the age of the patient or the like. Adults can normally be about 0.5 to 5000 mg of the active substance per day, while children can have 0.5 to 3000 mg per day. The proportion of composition of the prophylactic and therapeutic agent to the dry eye or to the deterioration of the lacrimal secretion capacity inhibitor of the present invention can be adjusted according to the mode of administration. When the dietary composition is administered orally or mucosally, the dose applied is preferably 0.3 to 15.0% by weight. When the dietary composition is administered parenterally, the dose is preferably 0.01 to 10% by weight. The dose varies depending on the patient's condition, so that a dose of less than the above amount may be sufficient, or a larger amount may sometimes be necessary.

EXEMPLO DE TRABALHO [0054] Exemplos da presente invenção são aqui descritos, as ações que verificam os efeitos ou semelhantes do agente profilático e terapêutico para o olho seco, do inibidor da degradação da capacidade de secreção lacrimal, e do inibidor para a geração de radicais de oxigênio na lacrimal glândula tecido, que mostram que o âmbito da presente invenção não está limitado aos seus produtos e métodos de fabrico.WORKING EXAMPLE [0054] Examples of the present invention are described here, the actions that verify the effects or similar of the prophylactic and therapeutic agent for the dry eye, the inhibitor of the degradation of the capacity of lacrimal secretion, and the inhibitor for the generation of radicals of oxygen in the lacrimal tissue gland, which show that the scope of the present invention is not limited to its products and manufacturing methods.

15/28 [0055] (Exemplo de Trabalho 1: Preparação do extrato da maqui berry) [0056] Maqui berry (Aristotelia Chilensis) frutas em água destilada foi agitada a 50 graus Celsius para se obter o extrato líquido. Depois disso, o líquido foi filtrado e passado através de cromatografia em coluna com um absorvente sintético, e, em seguida, o extrato líquido de maqui berry que contém a substância ativa foi eluído em uma solução aquosa de etanol a 80 %. Então, o extrato líquido de maqui berry foi seco no extrato da maqui berry (Exemplo de Trabalho 1). Analisando o extrato da maqui berry do Exemplo de Trabalho 1 por HPLC, o extrato foi identificado por conter delfinidina 3,5 diglucosídeo de 12,26 % e delfinidina 3 - sambubiosídeo - 5 - glicosídeo de 7,76 %.15/28 [0055] (Work Example 1: Preparation of maqui berry extract) [0056] Maqui berry (Aristotelia Chilensis) fruits in distilled water was stirred at 50 degrees Celsius to obtain the liquid extract. After that, the liquid was filtered and passed through column chromatography with a synthetic absorbent, and then the liquid extract of maqui berry containing the active substance was eluted in an 80% aqueous ethanol solution. Then, the liquid maqui berry extract was dried on the maqui berry extract (Working Example 1). Analyzing the maqui berry extract from Work Example 1 by HPLC, the extract was identified as containing delfinidine 3.5 diglucoside of 12.26% and delfinidine 3 - sambubioside - 5 - glycoside of 7.76%.

[0057] (Exemplos de Trabalho 2 a 5: Isolando os ingredientes relacionados ao extrato da maqui berry) [0058] No passado, foi identificado que o extrato da maqui berry mostrou ação curativa em olho seco. Para encontrar a substância ativa do extrato, antocianina foi isolada da maqui berry e refinado.[0057] (Working Examples 2 to 5: Isolating the ingredients related to the maqui berry extract) [0058] In the past, it was identified that the maqui berry extract showed curative action on dry eye. To find the active substance in the extract, anthocyanin was isolated from the maqui berry and refined.

[0059] Quanto ao método de isolamento e de refinação, o extrato de maqui berry (0,25 g / 5 ml) obtido através da preparação descrita no Exemplo de Trabalho 1 foi filtrado através de um tampão de algodão e em seguida passado através de um Sep - Pak ODS (Waters Corporation). Em seguida, o extrato foi isolado por HPLC e refinado para amostragem. A condição é a seguinte:[0059] As for the isolation and refining method, the maqui berry extract (0.25 g / 5 ml) obtained through the preparation described in Working Example 1 was filtered through a cotton plug and then passed through a Sep - Pak ODS (Waters Corporation). Then, the extract was isolated by HPLC and refined for sampling. The condition is as follows:

Fase móvel: 25 % de MeOH 0,3% de TFAMobile phase: 25% MeOH 0.3% TFA

UV: 520nmUV: 520nm

Velocidade de fluxo: 9.0mL / minFlow speed: 9.0mL / min

Coluna: Inertsil PREP - ODS, 20 χ 250 milímetros [0060] Os seguintes fatos foram confirmados para isolar e refinar o extrato da maqui berry:Column: Inertsil PREP - ODS, 20 χ 250 mm [0060] The following facts have been confirmed to isolate and refine the maqui berry extract:

16/2816/28

Delfinidina - 3 sambubiosídeo - 5 - glicosídeo (Fr 1: Exemplo de Trabalho 2) 6,3 mg isoladoDelfinidine - 3 sambubioside - 5 - glycoside (Fr 1: Working Example 2) 6.3 mg isolated

Delfinidina - 3,5 - diglucosídeo (Fr 2: Exemplo de Trabalho 3) 6,3 mg isoladoDelfinidine - 3,5 - diglucoside (Fr 2: Working Example 3) 6.3 mg isolated

Delfinidina - 3 - sambubiosídeo (Fr.5: Exemplo de Trabalho 4) 2.5mg isoladoDelfinidine - 3 - sambubioside (Fr.5: Working Example 4) 2.5mg isolated

Delfinidina - 3 - glicosídeo (Fr. 6: Exemplo de Trabalho 5) 4,8 mg isolado [0061] Cada exemplo é 95 % puro ou mais.Delfinidine - 3 - glycoside (Fr. 6: Working Example 5) 4.8 mg isolated [0061] Each example is 95% pure or more.

[0062] Os resultados dos testes de HPLC são mostrados nas Figs 7-11.[0062] The results of the HPLC tests are shown in Figs 7-11.

[0063] [Exemplo de Teste 1: Avaliação da ação inibidora para a deterioração da capacidade de secreção lacrimal em murganhos que possuem sintomas de olho seco][0063] [Test Example 1: Evaluation of the inhibitory action for the deterioration of the capacity of lacrimal secretion in mice that have symptoms of dry eye]

CONDIÇÃO DE TESTE [0064] Em relação ao extrato de maqui berry (Exemplo de Trabalho 1), a avaliação sobre a ação inibitória à deterioração da capacidade de secreção lacrimal em ratos com sintomas de estresse induzido por olho seco foi feito de acordo com as seguintes etapas.TEST CONDITION [0064] Regarding maqui berry extract (Working Example 1), the assessment of the inhibitory action on the deterioration of the capacity of tear secretion in rats with symptoms of stress induced by dry eye was made according to the following phases.

[0065] Como um animal de teste, C57 / B ratinhos fêmea de 10 semanas de idade foram utilizados. Havia de 5 ~ 10 ratinhos por grupo.[0065] As a test animal, C57 / B 10 week old female mice were used. There were 5 ~ 10 mice per group.

[0066] O procedimento para a deterioração da capacidade de secreção lacrimal (teste de carga de estresse) foi feito de acordo com o documento: (Tracy L. Bale, Angelo Contarino, George W. Smith, Raymond Chan, Lisa H. Ouro, Paul E. Sawchenko: Camundongos deficientes do hormônio receptor - 2 exibição comportamento de ansiedade - como liberador de corticotropina e são hipersensíveis ao estresse Nature Genetics 24:.. 410 414, 2000.) Em outras palavras, os ratos foram mantidos em tubos de centrífuga de polipropileno - (capacidade de conteúdo: aprox. 60 mL) durante quatro horas por dia, e eles tiveram espaço para respirar. Durante o tempo em[0066] The procedure for the deterioration of the capacity of lacrimal secretion (stress load test) was done according to the document: (Tracy L. Bale, Angelo Contarino, George W. Smith, Raymond Chan, Lisa H. Ouro, Paul E. Sawchenko: Hormone receptor-deficient mice - 2 display anxiety behavior - as corticotropin releasers and are hypersensitive to stress. Nature Genetics 24: 410 414, 2000.) In other words, the rats were kept in centrifuge tubes polypropylene - (content capacity: approx. 60 mL) for four hours a day, and they had room to breathe. During the time

17/28 que os ratos foram contidos no tubo, o vento foi soprado para as faces da velocidade ata ratos de 0,5 a 1,0 m / s. Durante o período de fora de operação nos quatro horas, os ratinhos estavam livres para comer e beber água na gaiola. O procedimento acima descrito foi realizado várias vezes durante o período de administração do extrato de maqui berry.17/28 the rats were contained in the tube, the wind was blown to the faces of the velocity up to rats from 0.5 to 1.0 m / s. During the four-hour off-duty period, the mice were free to eat and drink water in the cage. The procedure described above was performed several times during the period of administration of the maqui berry extract.

[0067] O extrato de maqui berry (Exemplo de Trabalho 1), eluiu - se apropriadamente em água destilada, foi administrado aos murganhos por sonda oral sob as seguintes condições:[0067] The maqui berry extract (Working Example 1), eluted appropriately in distilled water, was administered to the mice by oral probe under the following conditions:

quantidade de conteúdo: 4mg / kg, 20 mg / kg solução de controle: água destilada (veículo) número de ensaios: uma vez por dia, durante quatro ou oito dias consecutivos [0068] A condição de restrição é a seguinte:amount of content: 4mg / kg, 20 mg / kg control solution: distilled water (vehicle) number of tests: once a day, for four or eight consecutive days [0068] The restriction condition is as follows:

temperatura: 23 ± 5 ^SC umidade: 70 ± 15 % horas de iluminação: 8:00 às 20:00. Horas de corte: 20:00 - 08:00 alimentos e água: Alimentos sólidos e água da torneira, taken discricionariamente [0069] A quantidade de secreção lacrimal foi medida da seguinte forma.temperature: 23 ± 5 ^S C humidity: 70 ± 15% lighting hours: 8:00 am to 8:00 pm. Cutting hours: 20:00 - 08:00 food and water: Solid food and tap water, taken discretionarily [0069] The amount of tear secretion was measured as follows.

[0070] Fio de algodão (ZONA - RÁPIDA pela Showa YakuhinKakou Co., Ltd.) foi inserido no canto do olho direito e esquerdo externos dos ratos durante 15 segundos. O comprimento de descoloração acastanhada no fio de algodão que foi penetrado pelo líquido lacrimal foi medida com uma exatidão de 0,5 mm. As medições foram feitas antes do período de estresse de carregamento (valor padrão) da administração, outra vez no dia seguinte durante o período de estresse de carga, e novamente antes do período de estresse - de carga. O valor médio de ambos os olhos dos ratos deve ser da quantidade da secreção lacrimal para cada rato.[0070] Cotton thread (ZONE - QUICK by Showa YakuhinKakou Co., Ltd.) was inserted into the outer right and left corner of the rats for 15 seconds. The length of brown discoloration in the cotton thread that was penetrated by the tear fluid was measured to an accuracy of 0.5 mm. The measurements were made before the administration stress period (default value), again the next day during the stress period, and again before the stress period - the load. The average value of both eyes of the rats should be the amount of tear secretion for each rat.

18/28 [0071] A análise estatística foi feita de acordo com o seguinte método.18/28 [0071] Statistical analysis was performed according to the following method.

[0072] Um teste t pareado foi feito para comparar o valor padrão para o valor no quarto dia de administração. Muitos testes t não pareados ou testes de Dunnett feito incorporando os grupos.[0072] A paired t test was done to compare the standard value to the value on the fourth day of administration. Many unpaired t-tests or Dunnett's tests done incorporating the groups.

[0073] O resultado e efeito do Exemplo de Teste 1:[0073] The result and effect of Test Example 1:

[0074] (A) O resultado da administração repetida de quatro dias (figura 1 ou figura 2) [0075] A Fig. 1 mostra o resultado de que as alterações (valor medido) da capacidade de secreção lacrimal após a administração do extrato de maqui berry para os ratinhos que têm sintomas de stress - induzido de olho seco. A quantidade de líquido lacrimal mostra uma tendência decrescente do grupo administrado com maqui berry - extrato e o grupo administrado com veículo. Especialmente o grupo administrado com veículo, os valores no primeiro dia de administração e no quarto dia diminuíram significativamente, em comparação com o valor padrão.[0074] (A) The result of repeated administration of four days (figure 1 or figure 2) [0075] Figure 1 shows the result that changes (measured value) in the capacity for tear secretion after administration of the extract maqui berry for mice that have symptoms of stress - induced dry eye. The amount of tear fluid shows a decreasing trend in the group administered with maqui berry - extract and the group administered with vehicle. Especially the vehicle-administered group, the values on the first day of administration and on the fourth day decreased significantly, compared to the standard value.

[0076] A Fig. 2 mostra a alteração da razão em comparação com o valor de pré - administração (valor padrão). Como mostrado na Fig.2, a alteração da razão do quarto dia de administração em comparação com o valor padrão mostra um significativamente pequena mudança na / kg de maqui berry - grupo administrado com 20 mg de extrato em comparação com o grupo administrado com veiculo. Portanto, verificou - se, que o extrato de maqui berry deste exemplo tem a ação para inibir capacidade de deterioração da secreção lacrimal, tornando, assim, eficaz como um agente profilático e terapêutico para o olho seco.[0076] Fig. 2 shows the ratio change compared to the pre - administration value (default value). As shown in Fig.2, the change in the ratio of the fourth day of administration compared to the standard value shows a significantly small change in the / kg maqui berry - group administered with 20 mg of extract compared to the group administered with vehicle. Therefore, it was verified that the maqui berry extract in this example has the action to inhibit the tear secretion 's deteriorating capacity, thus making it effective as a prophylactic and therapeutic agent for dry eye.

[0077] (B) O resultado da administração repetida de oito dias (Fig. 3) [0078] A Fig. 3 mostra o resultado de que as alterações (valor medido) da capacidade de secreção lacrimal após a administração do extrato de maqui berry para os ratinhos que têm sintomas de estresse[0077] (B) The result of repeated administration of eight days (Fig. 3) [0078] Fig. 3 shows the result that changes (measured value) in the capacity for tear secretion after administration of maqui berry extract for mice that have symptoms of stress

19/28 induzido de olho seco. Como mostrado na Fig. 3, a quantidade de secreção lacrimal de 20 mg / kg de grupo administrado com extrato de maqui berry foi significativamente maior do que a do grupo administrado com veículo.19/28 induced with dry eye. As shown in Fig. 3, the amount of tear secretion of 20 mg / kg in the group administered with maqui berry extract was significantly greater than that in the group administered with vehicle.

[0079] Portanto, verificou - se, que o extrato de maqui berry deste exemplo tem a ação de inibir a deterioração da capacidade de secreção lacrimal, tornando, assim, eficaz como um agente profilático e terapêutico para o olho seco.[0079] Therefore, it was found that the maqui berry extract in this example has the effect of inhibiting the deterioration of the capacity of lacrimal secretion, thus making it effective as a prophylactic and therapeutic agent for dry eye.

[0080] [Exemplo de Teste 2: Avaliação 1 sobre a ação inibitória do extrato de maqui berry de espécies de radicais de oxigênio, usando glândulas lacrimais isoladas de ratos] [0081] (2-1) Condições de ensaio [0082] A ação do extrato de maqui berry para espécies de radicais de oxigênio no tecido da glândula lacrimal foi avaliada utilizando ratinhos no modelo in vivo.[0080] [Test Example 2: Evaluation 1 on the inhibitory action of maqui berry extract from oxygen radical species, using lacrimal glands isolated from rats] [0081] (2-1) Test conditions [0082] The action of maqui berry extract for oxygen radical species in the lacrimal gland tissue was evaluated using mice in the in vivo model.

[0083] O extrato de maqui berry (Examplo de trabalho 1), eluiu - se apropriadamente em água destilada, foi administrado aos ratinhos por via oral sob as seguintes condições:[0083] The maqui berry extract (Example of work 1), eluted appropriately in distilled water, was administered to the mice orally under the following conditions:

animal: C57BL / 6, do sexo feminino, 10 semanas de idade quantidade de conteúdo: 4mg / kg, 20 mg / kg solução de controle: água destilada (veículo) número de ensaios: uma vez por dia, durante oito dias consecutivos número de amostras: 5 a 10 ratinhos por grupo [0084] As condições de retenção enquanto o teor dos ratos segue:animal: C57BL / 6, female, 10 weeks old quantity of content: 4mg / kg, 20 mg / kg control solution: distilled water (vehicle) number of tests: once a day, for eight consecutive days number of samples: 5 to 10 mice per group [0084] The retention conditions while the content of the mice follows:

temperatura: 23 ± 5 °C umidade: 70 ± 15% horas de iluminação: 8:00 às 20:00. Horas de corte: 20:00 - 08:00temperature: 23 ± 5 ° C humidity: 70 ± 15% lighting hours: 8:00 am to 8:00 pm. Cutting hours: 20:00 - 08:00

20/28 alimentos e água: Alimentos sólidos e água da torneira, tomados discricionariamente [0085] A avaliação da ação inibidora de espécies de oxigênio radicais foi feito da seguinte maneira.20/28 food and water: Solid food and tap water, taken at discretion [0085] The evaluation of the inhibitory action of radical oxygen species was carried out as follows.

[0086] Uma glândula lacrimal isolada foi colocada em um tubo de teste, e o tecido 25 mg / mL de soluto salino tamponado com fosfato frio (PBS) foi adicionado. Depois disso, as esferas de zircônia foram adicionadas à glândula lacrimal que é para ser esmagada por um moinho de esferas. Em seguida, 50 μΙ_ de cada suspensão de células foi dispensada. Em seguida, o extrato de maqui berry do Examplo de trabalho 1 (1,10 pg / ml) foi adicionado à suspensão celular, e em seguida solução de DCFH - DA, como a série radical oxigênio foi adicionado para tornar o último nível de concentração no 75μΜ. Em seguida, após 60 incubação ACTA a 37 graus Celsius, as células foram lavadas em PBS. O leitor de fluorescência de placas mediu a intensidade da fluorescência a (Λ485 / 528).[0086] An isolated tear gland was placed in a test tube, and tissue 25 mg / mL of cold phosphate buffered saline (PBS) was added. After that, the zirconia spheres were added to the tear gland which is to be crushed by a ball mill. Then, 50 μΙ_ of each cell suspension was dispensed. Then, maqui berry extract from Working Example 1 (1.10 pg / ml) was added to the cell suspension, and then DCFH - DA solution, as the radical oxygen series was added to make the last concentration level at 75μΜ. Then, after 60 ACTA incubation at 37 degrees Celsius, the cells were washed in PBS. The plate fluorescence reader measured the fluorescence intensity at (Λ485 / 528).

[0087] Como um exemplo comparativo, o mesmo teste foi feito em luteína 10 pg / ml (de comparação e de contraste). A Fig. 4 mostra os resultados.[0087] As a comparative example, the same test was done on 10 pg / ml lutein (for comparison and contrast). Fig. 4 shows the results.

[0088] Além disso, como um exemplo comparativo, os mesmos testes foram feitos no extrato de mirtilo (Indena) e sobre o extrato de groselha preta (Tama Biochemical Co., Ltd.). A Fig. 5 mostra os resultados.[0088] In addition, as a comparative example, the same tests were done on blueberry extract (Indena) and on blackcurrant extract (Tama Biochemical Co., Ltd.). Fig. 5 shows the results.

[0089] Além disso, os mesmos ensaios foram realizados a partir dos exemplos seguintes.[0089] In addition, the same tests were performed from the following examples.

[0090] Fr. 1: delfinidina - 3 - sambubiosídeo - 5 glicosídeo (Exemplo de Trabalho 2) [0091] Fr.2 delfinidina - 3, 5 - glucosídeo: (Exemplo de Trabalho 3) [0092] Fr. 5: delfinidina - 3 - sambubiosídeo (Exemplo de[0090] Fr. 1: delfinidine - 3 - sambubioside - 5 glycoside (Working Example 2) [0091] Fr.2 delfinidine - 3, 5 - glucoside: (Working Example 3) [0092] Fr. 5: delfinidine - 3 - sambubioside (Example of

Trabalho 4)Work 4)

21/28 [0093] Fr. 6: delfinidina - 3 - glucosídeo (Exemplo de Trabalho 5) [0094] A Fig. 6 mostra os resultados.21/28 [0093] Fr. 6: delfinidine - 3 - glucoside (Working Example 5) [0094] Fig. 6 shows the results.

[0095] (2 - 2) Resultado e efeitos de Exemplo de Teste 2 [0096] Como mostrado na Fig. 4, o extrato da maqui berry (10 pg / mL) inibiu significativamente a série de radical de oxigênio no tecido da glândula lacrimal. Verificou - se que, em comparação ao mesmo, a luteina que é conhecida por sua ação antioxidante em prevenção efetivamente, o extrato da maqui berry tem um excelente efeito na inibição de radical de oxigênio no tecido da glândula lacrimal.[0095] (2 - 2) Result and effects of Test Example 2 [0096] As shown in Fig. 4, the maqui berry extract (10 pg / mL) significantly inhibited the oxygen radical series in the lacrimal gland tissue . It was found that, in comparison to it, the lutein which is known for its antioxidant action in preventing effectively, the maqui berry extract has an excellent effect in the inhibition of oxygen radical in the lacrimal gland tissue.

[0097] Como mostrado na Fig. 5, em comparação com o extrato de mirtilo e extrato de cassis (groselha preta), o extrato da maqui berry inibiu significativamente o radical de oxigênio. Portanto, verificou - se que o extrato de maqui berry é eficaz como agente profilático e terapêutico para o olho seco e tem um excelente efeito como um agente profilático e terapêutico para o olho seco em comparação com outros ingredientes. Na Fig. 5, 1 e 3 e 10 mostra a quantidade de aditivo pg / mL de cada extrato botânico, e maqui berry é o extrato da maqui berry do Examplo de trabalho 1.[0097] As shown in Fig. 5, compared to blueberry extract and cassis extract (black currant), the maqui berry extract significantly inhibited the oxygen radical. Therefore, maqui berry extract has been found to be effective as a prophylactic and therapeutic agent for dry eye and has an excellent effect as a prophylactic and therapeutic agent for dry eye compared to other ingredients. In Fig. 5, 1 and 3 and 10 it shows the amount of additive pg / mL of each botanical extract, and maqui berry is the extract of maqui berry from Example 1.

[0098] Como mostrado na Fig. 6, o radical de oxigênio foi significativamente inibido em Fr. 1: delfinidina - 3 - sambubiosídeo - 5 glicosídeo (Exemplo de trabalho 2), Fr. 2: delfinidina - 3,5 - glicosídeo (Exemplo de Trabalho 3), Fr. 5: delfinidina - 3 - sambubiosídeo (Exemplo de Trabalho 4) e Fr. 6: delfinidina - 3 - glicosídeo (Exemplo de Trabalho 5). Assim, verificou - se que as substâncias acima contidas no extrato de maqui berry são efetivamente envolvido em prevenção e tratamento do olho seco.[0098] As shown in Fig. 6, the oxygen radical was significantly inhibited in Fr. 1: delfinidine - 3 - sambubioside - 5 glycoside (Working example 2), Fr. 2: delfinidine - 3,5 - glycoside (Example Work 3), Fr. 5: delfinidine - 3 - sambubioside (Work Example 4) and Fr. 6: delfinidine - 3 - glycoside (Work Example 5). Thus, it was found that the substances above contained in the maqui berry extract are effectively involved in the prevention and treatment of dry eye.

[0099] [Exemplo de Teste 3: Avaliação 2 da ação inibitória contra espécies de radicais de oxigênio do extrato de maqui berry usando glândulas lacrimais de ratos isoladas] [0100] (3-1) Condições de ensaio[0099] [Test Example 3: Evaluation 2 of the inhibitory action against oxygen radical species from maqui berry extract using isolated rat tear glands] [0100] (3-1) Test conditions

22/28 [0101] Em relação Fr. 2: delfinidina - 3,5 - diglucosideo (Exemplo de trabalho 3), Fr. 6: delfinidina - 3 - glucosídeo (Exemplo de trabalho 5) e delfinidina - 3 - rutinosideo (Exemplo Comparativo 1: A substância contida no cassis), a mesma avaliação como em Exemplo de Teste 2 foi realizado. A Fig. 12 mostra os resultados.22/28 [0101] Regarding Fr. 2: delfinidine - 3,5 - diglucoside (Working example 3), Fr. 6: delfinidine - 3 - glucoside (Working example 5) and delfinidine - 3 - rutinoside (Comparative example 1: The substance contained in the cassis), the same evaluation as in Test Example 2 was performed. Fig. 12 shows the results.

[0102] Em relação a Fr. 6 delfinidina - 3 - glucosídeo (WorkingExample 5) e a outra série de antocianina (petunidina - 3 - glucosídeo, peonidina - 3 - glucosídeo, malvidina - 3 - glucosideand cianidín - 3 - glicósido), a avaliação do Exemplo de Teste 2 foi realizado. A Fig. 13 mostra os resultados.[0102] In relation to Fr. 6 delfinidine - 3 - glucoside (WorkingExample 5) and the other anthocyanin series (petunidine - 3 - glucoside, peonidine - 3 - glucoside, malvidine - 3 - glucosideand cyanidin - 3 - glycoside), to evaluation of Test Example 2 was carried out. Fig. 13 shows the results.

[0103] (3 - 2) O resultado da análise e o efeito do Exemplo de Trabalho de Teste Exemplo 3.[0103] (3 - 2) The result of the analysis and the effect of the Test Work Example Example 3.

[0104] Como mostrado na Fig. 12, delfinidina - 3 rutinosideo (Exemplo Comparativo 1) não inibiu radical de oxigênio. Em vez disso, Fr. 2: delfinidina - 3,5 - diglucosideo (Exemplo de trabalho 3) e Fr. 6: delfinidina - 3 - glicosídeo (Exemplo de trabalho 5) inibida de radical de oxigênio, especialmente Fr. 2: delfinidina - 3,5 - diglucosideo (Exemplo de trabalho 3), que é a substância particular de maqui berry que mostra uma excelente ação inibidora contra espécies radicais de oxigênio.[0104] As shown in Fig. 12, delfinidine - 3 rutinoside (Comparative Example 1) did not inhibit oxygen radical. Instead, Fr. 2: delfinidine - 3,5 - diglucoside (Working example 3) and Fr. 6: delfinidine - 3 - glycoside (Working example 5) inhibited from the oxygen radical, especially Fr. 2: delfinidine - 3,5 - diglucoside (Working example 3), which is the particular substance of maqui berry that shows an excellent inhibitory action against radical oxygen species.

[0105] Assim, em comparação com outros delfinidina glicosídeos, verificou - se que P. 2: delfinidina - 3,5 - diglucosideo (Exemplo de trabalho 3), que é a substância particular da maqui berry, excelentemente efetivamente previne e trata olho seco.[0105] Thus, in comparison with other delfinidine glycosides, it was found that P. 2: delfinidine - 3,5 - diglucoside (Working example 3), which is the particular substance of maqui berry, excellently effectively prevents and treats dry eye .

[0106] Além disso, como mostrado na Fig. 13, em comparação com outras antocianinas, Fr. 2: delfinidina - 3,5 - diglucosideo (Exemplo de trabalho 3), que é a substância particular da maqui berry, mostrou especialmente excelente ação na inibição do radical de oxigênio em células lacrimais.[0106] In addition, as shown in Fig. 13, in comparison with other anthocyanins, Fr. 2: delfinidine - 3,5 - diglucoside (Working example 3), which is the particular substance of maqui berry, showed especially excellent action inhibiting the oxygen radical in tear cells.

[0107] [Exemplo de Teste 4: Teste de Absorção, relativa às células lacrimais, sobre a substância contida no extrato maqui berry][0107] [Test Example 4: Absorption Test, relative to the tear cells, on the substance contained in the maqui berry extract]

23/28 [0108] (4-1) Objetivo do ensaio [0109] Exemplo de Teste 1 identificou que o extrato da maqui berry inibe efetivamente o olho seco e a ação inibidora mais forte do que a de mirtilo e cassis. Além disso, em termos da substância, delfinidina - 3,5 diglucosídeo (Exemplo de Trabalho 3), que é a antocianina particular da maqui berry, mostraram uma ação inibidora mais forte do que a de outros, ou seja, antocianinas de delfinidina - 3 - glucosídeo (a principal antocianina contido no mirtilo) e de delfinidina - 3 - rutinoside (a principal antocianina contido em cassis: Exemplo Comparativo 1). Este teste foi realizado para comparar a quantidade do consumo de antocianina nas células lacrimais usando o HPLC para identificar o mecanismo de ações. Este teste foi realizado para comparar a quantidade de absorção de antocianina pelas células lacrimais, utilizando HPLC de identificar o mecanismo de ações.23/28 [0108] (4-1) Purpose of the test [0109] Test Example 1 identified that the maqui berry extract effectively inhibits dry eye and the stronger inhibitory action than blueberry and cassis. In addition, in terms of the substance, delfinidine - 3.5 diglucoside (Working Example 3), which is the particular anthocyanin of maqui berry, showed a stronger inhibitory action than that of others, that is, anthocyanins of delfinidine - 3 - glucoside (the main anthocyanin contained in blueberry) and delfinidine - 3 - rutinoside (the main anthocyanin contained in cassis: Comparative Example 1). This test was performed to compare the amount of anthocyanin consumption in the tear cells using HPLC to identify the mechanism of actions. This test was carried out to compare the amount of anthocyanin absorption by the tear cells, using HPLC to identify the mechanism of actions.

[0110] (4 - 2) Condições de ensaio [0111] O teste foi feito da seguinte maneira. Cada antocianina (de delfinidina - 3,5 - diglucosídeo, delfinidina - 3 - O - glucosídeo e delfinidina - 3 - Orutinoside) foi adicionado às células - lacrimais em suspensão de concentração final de 100 μΜ.[0110] (4 - 2) Test conditions [0111] The test was performed as follows. Each anthocyanin (from delfinidine - 3,5 - diglucoside, delfinidine - 3 - O - glucoside and delfinidine - 3 - Orutinoside) was added to the tear cells in 100 μΜ final concentration suspension.

[0112] Depois disso, a suspensão foi incubada durante 30 minutos a 37 graus Celsius. Em seguida, as células foram lavadas e novamente suspensas no tampão. Assim, a quantidade de antocianina foi analisada por HPLC. A análise é como se segue.[0112] After that, the suspension was incubated for 30 minutes at 37 degrees Celsius. Then, the cells were washed and resuspended in the buffer. Thus, the amount of anthocyanin was analyzed by HPLC. The analysis is as follows.

Análise de fluxo:Flow analysis:

pL de suspensão celular lpL of cell suspension l

Adicionar 50 pL (0,2% de TFA - 40% de MeOH) lAdd 50 pL (0.2% TFA - 40% MeOH) l

Filtrar por filtro de seringa lFilter by syringe filter l

A análise por HPLCHPLC analysis

24/28 [0113] A condição de HPLC é a seguinte:24/28 [0113] The HPLC condition is as follows:

Coluna: YMC Pro C18 UltraHT dia.2.0 x 100 mm Temperatura da coluna: 30 graus CelsiusColumn: YMC Pro C18 UltraHT dia.2.0 x 100 mm Column temperature: 30 degrees Celsius

Eluente: A = 0,3% de solução aquosa de TFA, B = acetonitriloEluent: A = 0.3% aqueous TFA solution, B = acetonitrile

Gradiente: 5 % B (0 minutos) - 5 % de B (0,60 min) - 13 % de B (0,61 min) - 15 % de B (3,00 min) - 26 % de B (6,00 min) - 90 % de B (6,20 min) - 90 % de B (7,20 min) - 5 % de B (7,40 min) - 5 % de B (9,50 min)Gradient: 5% B (0 minutes) - 5% B (0.60 min) - 13% B (0.61 min) - 15% B (3.00 min) - 26% B (6, 00 min) - 90% B (6.20 min) - 90% B (7.20 min) - 5% B (7.40 min) - 5% B (9.50 min)

Velocidade de Fluxo : 0,3 mL / min, o volume de injeção: 50 ϊί¹/₂ Flow Rate: 0.3 mL / min, injection volume: 50 ϊί ^_1/2

Limite quantitativo: 2 ng / ml (cianidína - 3 - Ο glucosídeo)Quantitative limit: 2 ng / ml (cyanidin - 3 - Ο glucoside)

Documentos de referência: Exp. Eye Res, 83, 348 (2006) ...............J Agric. Food Chem, 49 1546 (2001) [0114] (4 - 3) O resultado da análise e o efeito do Exemplo de Trabalho de Teste Exemplo 4.Reference documents: Exp. Eye Res, 83, 348 (2006) ............... J Agric. Food Chem, 49 1546 (2001) [0114] (4 - 3) The result of the analysis and the effect of the Test Work Example Example 4.

[0115] A Fig. 14 mostra o resultado do teste de absorção de células considerando a da substância ativa lacrimal contidas no extrato da maqui berry.[0115] Fig. 14 shows the result of the cell absorption test considering that of the lacrimal active substance contained in the maqui berry extract.

[0116] Como um resultado da comparação entre a quantidade de absorção de cada antocianina (Média ± EP, n = 6, delfinidina 3,5 - diglucosídeo; D3G5G, delfinidina - 3 - glucosídeo; D3G, delfinidina - 3 rutinoside; D3R) na lacrimal células, obviamente delfinidina - 3,5 - diglucosídeo (D3G5G) como especial mérito da maqui berry foi absorvida pelas células lacrimais mais do que delfinidina - 3 - glicosídeo (D3G; substância contida no mirtilo) e delfinidina - 3 - rutinosídeo (D3R: substância contida cassis), verificando - se que o extrato de maqui berry é facilmente absorvido pelas células lacrimais e armazenado ali, mostrando, assim, ser olho seco efetivo contra mais do que as outras substâncias de antocianinas.[0116] As a result of the comparison between the amount of absorption of each anthocyanin (Mean ± EP, n = 6, delfinidine 3,5 - diglucoside; D3G5G, delfinidine - 3 - glucoside; D3G, delfinidine - 3 rutinoside; D3R) in lacrimal cells, obviously delfinidine - 3,5 - diglucoside (D3G5G) as a special merit of maqui berry was absorbed by the lacrimal cells more than delfinidine - 3 - glycoside (D3G; substance contained in blueberry) and delfinidine - 3 - rutinoside (D3R: substance contained in cassis), verifying that the maqui berry extract is easily absorbed by the tear cells and stored there, thus showing to be effective dry eye against more than the other anthocyanin substances.

25/28 [0117] Os gráficos seguintes mostram exemplos dos compostos para o agente profilático e terapêutico para o olho seco desta invenção. No entanto, os compostos apresentados abaixo não se limitam a estes exemplos.25/28 [0117] The following graphs show examples of the compounds for the prophylactic and therapeutic agent for dry eye of this invention. However, the compounds shown below are not limited to these examples.

[0118] Exemplo de mistura 1: Gomas de mascar[0118] Mixing example 1: Chewing gum

Açúcar 53.0 % em pesoSugar 53.0% by weight

Base de goma20.0Gum base20.0

Glicose10.0Glucose10.0

Xarope de amido16.0Starch syrup16.0

Aroma Químico0.5Chemical Scent0.5

Agente profilático e terapêutico para o olho seco0.5Prophylactic and therapeutic agent for dry eye0.5

100.0 % em peso [0119] Exemplo de mistura 2: Gomas100.0% by weight [0119] Mixing example 2: Gums

Açúcar redução Sugar reduction 40.0 % em peso 40.0% by weight Açúcar granulado Granulated sugar 20.0 20.0 Glicose Glucose 20.0 20.0 Gelatina Gelatine 4.7 4.7 Água Water 9.68 9.68 Suco de yuzu (Citrus junos) Yuzu juice (Citrus junos) 4.0 4.0 sabor de Yuzu Yuzu flavor 0.6 0.6 Agente profilático e terapêutico para olho seco Prophylactic and therapeutic agent for dry eye 1.0 1.0 100.0 % em peso 100.0% by weight [0120] Exemplo de mistura 3: [0120] Mixing example 3: Doces Sweets Açúcar Sugar 50.0 % em peso 50.0% by weight Xarope de amido Starch syrup 33.0 33.0 Água Water 14.4 14.4 Ácido orgânico Organic acid 2.0 2.0 Aroma químico Chemical aroma 2.0 2.0 Agente profilático e terapêutico para olho seco Prophylactic and therapeutic agent for dry eye 0.4 0.4

26/2826/28

[0121] Exemplo de mistura [0121] Mixing example 100.0 % em peso 4: Iogurte (tipo forte/ tipo leve) 100.0% by weight 4: Yogurt (strong type / light type) Leite milk 41.5 % em peso 41.5% by weight Leite desnatado em pó Skimmed milk powder 5.8 5.8 Áçucar Sugar 8.0 8.0 Agar - agar Agar - agar 0.15 0.15 Gelatina Gelatine 0.1 0.1 Bactéria de ácido láctico Lactic acid bacteria 0.005 0.005 Agente profilático e terapêutico para olho seco Prophylactic and therapeutic agent for dry eye 0.4 0.4 Aroma químico Chemical aroma Quantidade minuto Min quantity Água Water Resto Rest 100.0 % em peso 100.0% by weight [0122] Exemplo mistura 5: I [0122] Mixing example 5: I Refrigerantes Soft drinks Solução de glicose frutose Glucose fructose solution 30.0 % em peso 30.0% by weight Agente emulsionante Emulsifying agent 0.5 0.5 Agente profilático e terapêutico para o olho seco Prophylactic and therapeutic agent for dry eye 0.3 0.3 Aroma química Chemical aroma Quantidade adequada Adequate quantity Água destilada Distilled water Resto Rest 100.0 % em peso 100.0% by weight [0123] Exemplo mistura 6:1 [0123] 6: 1 mixing example Doces em forma de Tablete Candy in the form of a tablet Açúcar Sugar 76.4 % em peso 76.4% by weight Glucose Glucose 19.0 19.0 Éster de ácido gordo de glicerina Glycerin fatty acid ester 0.2 0.2 Agente profilático e terapêutico para o olho seco Prophylactic and therapeutic agent for dry eye 0.5 0.5 Água destilada Distilled water 3.9 3.9

100.0 % em peso [0124] Exemplo mistura 7: cápsulas moles100.0% by weight [0124] Example mixture 7: soft capsules

Óleo de gérmen de arroz integral 47.0 % em pesoBrown rice germ oil 47.0% by weight

Yuzu (Citrus junos) óleo de semente 40.0Yuzu (Citrus junos) seed oil 40.0

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Agente de emulsão Agente profilático e terapêutico para o olho seco Emulsifying agent Prophylactic and therapeutic agent for dry eye 12.0 1.0 12.0 1.0 [0125] Misturando Exemplo 8: [0125] Mixing Example 8: 100.0 % em peso Tabletes 100.0% by weight Tablets Lactose Lactose 54.0 % em peso 54.0% by weight Celulose cristalina Crystalline cellulose 30.0 30.0 Produto divisão de amido Starch splitting product 10.0 10.0 Éster de ácido gordo de glicerina Glycerin fatty acid ester 5.0 5.0 Agente profilático e terapêutico para o olho seco Prophylactic and therapeutic agent for dry eye 1.0 1.0 [0126] Misturando Exemplo 9: [0126] Mixing Example 9: 100.0 % em peso Colírio 100.0% by weight Eye drops Cetotifenfumarato Ketotifenfumarate 0.7 % em peso 0.7% by weight Sulfonato de sódio Sodium sulphonate 0.2 0.2 Cromoglicato de sódio Sodium chromoglycate 9.8 9.8 L - aspartato de potássio L - potassium aspartate 8.5 8.5 Alantoína Allantoin 3.0 3.0 Cloridrato de tetrahidrozolina Tetrahydrozoline hydrochloride 0.5 0.5 Neostigmine metilsulfato Neostigmine methyl sulfate 0.05 0.05 Cloreto de benzalcônio Benzalkonium chloride 0.01 0.01 Glicerina Glycerin 25.0 25.0 Agente profilático e terapêutico para o olho seco Prophylactic and therapeutic agent for dry eye 1.0 1.0 pH ajustador pH adjuster Quantidade adequada Adequate quantity Água destilada Distilled water Resto Rest

100.0 % em peso100.0% by weight

APLICABILIDADE INDUSTRIAL [0127] Como descrito acima, a presente invenção torna possível fornecer um agente profilático e terapêutico para o olho seco, e um inibidor para a deterioração da capacidade de secreção lacrimal, e um inibidorINDUSTRIAL APPLICABILITY [0127] As described above, the present invention makes it possible to provide a prophylactic and therapeutic agent for dry eye, and an inhibitor for the deterioration of the capacity of tear secretion, and an inhibitor

28/28 para a geração de radical oxigênio no tecido da glândula lacrimal, que contém novos ingredientes derivados de marri berry, que é um alimento seguro.28/28 for the generation of radical oxygen in the tissue of the lacrimal gland, which contains new ingredients derived from marri berry, which is a safe food.

Claims

1. Prophylactic and therapeutic agent for dry eye, characterized by comprising delfinidine - 3, 5 - diglucoside as an active substance.

2. Prophylactic and therapeutic agent for dry eye that characterized by comprising, maqui berry extract containing delfinidine -

3,5 - diglucoside.

3. Inhibitor for the deterioration of the capacity of lacrimal secretion, characterized by comprising delfinidine - 3, 5 - diglucoside, as an active substance.

4. Inhibitor for the deterioration of the capacity of lacrimal secretion, characterized by comprising the extract of maqui berry, containing delfinidine - 3,5 - diglucoside.

5. Inhibitor for the generation of oxygen radicals in the lacrimal gland tissue, characterized by comprising delfinidine - 3.5 diglucoside as an active substance.

6. Inhibitor for the generation of oxygen radicals in the lacrimal gland tissue, characterized by comprising the maqui berry extract containing delfinidine - 3, 5 - diglucoside as an active substance.

7. Method for the manufacture of the prophylactic and therapeutic agent for dry eye, characterized by comprising the steps (a) to obtain the liquid from the maqui berry fruit extract (b), filter the liquid obtained in the above step ( a), and pass it through a synthetic absorbent chromatography column, (c) to obtain a liquid extracted by hydrated ethanol in the synthetic absorbent column chromatography used in step (b) above, and (d) prepare the prophylactic and therapeutic agent for dry eye from the maqui berry extract obtained by drying the liquid extracted from step (c) above.

8. Enhancer to increase the amount of anthocyanin absorbed by the tear cells to prevent and treat dry eye,

Petition 870160075949, of 12/15/2016, p. 5/6

2/2 characterized by delfinidine - 3,5 - diglucoside being contained as an active substance.

9. Method to increase the amount of anthocyanin absorbed by the tear cells to prevent and treat dry eye, characterized by delfinidine 3,5-diglucoside as an active substance is absorbed by the tear cells.

10. Use of a prophylactic and therapeutic agent for dry eye comprising delfinidine - 3, 5 - diglucoside characterized by being as an active substance.

11. Use of a prophylactic and therapeutic agent for dry eye comprising maqui berry extract containing delfinidine - 3.5 diglucoside for being an active substance.

12. Use of delfinidine - 3, 5 - diglucoside characterized by being an inhibitor of the deterioration of the capacity of lacrimal secretion.

13. Use of maqui berry extract containing delfinidine -

3,5 - diglucoside, characterized by being an inhibitor of the deterioration of the capacity of lacrimal secretion.

14. Use of delfinidine - 3, 5 - diglucoside characterized by being an inhibitor for the generation of oxygen radicals in the lacrimal gland tissue.

15. Use of maqui berry extract containing delfinidine -

3,5 - diglucoside, characterized by being an inhibitor for the generation of oxygen radicals in the lacrimal gland tissue