BR112015007365B1 - Processo para a preparação de um hidrogel, pró-droga ligada a umsuporte e composição farmacêutica - Google Patents

Processo para a preparação de um hidrogel, pró-droga ligada a umsuporte e composição farmacêutica Download PDF

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Nicola Bisek
Thomas Knappe
Tobias Voigt
Burkhardt Laufer
Franziska Hahn
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Abstract

"PROMEDICAMENTOS SOB A FORMA DE HIDROGEL". A presente invenção refere-se a um processo para a preparação de um hidrogel e a um hidrogel que pode ser obtido pelo referido processo. A presente invenção adicionalmente se refere a um processo para a preparação de um conjugado de hidrogel-espaçador, a um conjugado de hidrogel-espaçador que pode ser obtido pelo referido processo, a um processo para a preparação de uma pró-droga ligada a um suporte e a pró-drogas ligadas a um suporte que podem ser obtidas pelo referido processo, em particular a pró-drogas ligadas a um suporte que proporcionam uma liberação controlada ou prolongada de um fármaco a partir de um suporte. Além disso, a invenção se refere à utilização do hidrogel para a preparação de uma pró-droga ligada a um suporte.

Description

Campo da Invenção
[001] A presente invenção refere-se a um processo para a preparação de um hidrogel e a um hidrogel que pode ser obtido pelo referido processo. A presente invenção adicionalmente se refere a um processo para a preparação de um conjugado de hidrogel-espaçador, a um conjugado de hidrogel-espaçador que pode ser obtido pelo referido processo, a um processo para a preparação de uma pró-droga ligada a um suporte e a pró-drogas ligadas a um suporte que podem ser obtidas pelo referido processo, em particular a pró-drogas ligadas a um suporte que proporcionam uma liberação controlada e/ou prolongada de um fármaco a partir de um suporte. Além disso, a invenção se refere à utilização do hidrogel para a preparação de uma pró-droga ligada a um suporte.
Antecedentes da Invenção
[002] Hidrogéis convencionais são redes poliméricas tridimensionais, hidrofílicas ou anfifílicas capazes de absorver grandes quantidades de água. Estas redes podem ser compostas de vários polímeros e são insolúveis devido à presença de reticulações covalentes químicas e/ou físicas, tais como interações ou emaranhamentos iônicos, hidrofóbicos.
[003] Muitos hidrogéis convencionais são severamente limitados em sua aplicação. Alguns hidrogéis são usados para aplicações farmacêuticas tais como fechamento de ferimento, engenharia de tecido ou liberação de fármacos. Hidrogéis para vedação de tecido são revelados, por exemplo, na Publicação do Requerimento de Patente Internacional No. WO 2008/125655 AI.
[004] Além disso, a Publicação do Requerimento de Patente Internacional No. WO 99/014259 AI revela hidrogéis de PEG reticulados nos quais moléculas de fármacos são aprisionadas.
[005] A liberação de moléculas de fármacos aprisionadas a partir de semelhantes hidrogéis convencionais depende da degradação do hidrogel e pode levar a uma liberação de explosão, causando temporariamente níveis de fármaco elevados demais e também levar a dificuldade para prever a liberação de fármaco. É desejável controlar e/ou sustentar a liberação do fármaco a partir de um hidrogel. A Publicação dos Requerimentos de Patente Internacional No. WO 06/003014 A2 e No. WO 2011/012715 A1 descrevem hidrogéis como suportes em pró-drogas ligadas a um suporte, em que as porções biologicamente ativas são ligadas de modo covalente ao hidrogel através de encadeadores de pró-droga reversíveis. As pró-drogas ligadas ao hidrogel liberam o fármaco controlado e com uma meia-vida específica.
[006] No entanto, os hidrogéis revelados na Publicação do Requerimento de Patente Internacional No. WO 2011/012715 A1 são preferencialmente usados para a liberação controlada e prolongada de moléculas de fármacos menores e podem não proporcionar acesso suficiente para moléculas de fármacos maiores, tais como fármacos de proteína, deste modo resultando em uma baixa carga de fármaco de semelhantes hidrogéis.
Descrição Detalhada da Invenção Processo para a preparação de um Hidrogel e Hidrogel
[007] Por conseguinte, existe a necessidade de hidrogéis que possam ser usados como suportes para pró-drogas ligadas a um suporte, os quais sejam adequados para a liberação controlada e prolongada de moléculas de fármacos maiores.
[008] Portanto é um objetivo da presente invenção superar no mínimo algumas das deficiências acima mencionadas e proporcionar um hidrogel, o qual pode ser usado como um suporte para pró-drogas ligadas a um suporte aos quais são adequadas para a liberação controlada e/ou prolongada de moléculas de fármacos maiores.
[009] Em um aspecto, a presente invenção se refere a um processo para a preparação de um hidrogel compreendendo as etapas de: (a) proporcionar uma mistura compreendendo (a-i) no mínimo um reagente da cadeia principal, em que pelo menos um reagente da cadeia principal tem um peso molecular variando de 1 a 100 kDa, e compreende no mínimo três aminas (-NH2 e/ou -NH-); (a-ii) no mínimo um reagente reticulador, em que pelo menos um reagente reticulador tem um peso molecular variando de 6 a 40 kDa, pelo menos um reagente reticulador compreendendo (i) no mínimo dois grupamentos carbonilóxi (-(C=O)-O- ou - O-(C=O)-), e adicionalmente (ii) no mínimo dois grupamentos finais funcionais ativados selecionados entre o grupo consistindo de grupamentos éster ativados, grupamentos carbamato ativados, grupamentos carbonato ativados e grupamentos tiocarbonato ativados, e sendo à base de PEG compreendendo pelo menos 70% de PEG; e (a-iii) um primeiro solvente e no mínimo um segundo solvente, cujo segundo solvente é imiscível no primeiro solvente, em uma proporção em peso dpelo menos um reagente da cadeia principal para pelo menos um reagente reticulador variando de 1:99 a 99:1; e (b) polimerizar a mistura da etapa (a) em uma polimerização de suspensão para um hidrogel.
[010] De modo geral, sabe-se que o design do reticulador influencia o tamanho do poro de um hidrogel, mas a expectativa foi de que quanto mais longos os reticuladores fossem, maior a probabilidade deles formarem estruturas secundárias as quais iriam obstruir o acesso ao espaço interno do hidrogel. As obstruções referidas iriam evitar que fármacos de proteína maiores penetrassem no espaço interno do hidrogel e a anexação de semelhantes moléculas de fármacos seria restrita essencialmente à superfície e às áreas proximas à superfície do hidrogel. Agora foi descoberto surpreendentemente que, apesar destas limitações esperadas, fármacos grandes, tais como proteínas, são capazes de penetrar nos hidrogéis da presente invenção em quantidades que tornam estes hidrogéis suportes adequados para pró-drogas.
[011] Dentro da presente invenção, os termos são usados com o significado que se segue.
[012] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "hidrogel” significa uma rede polimérica hidrofílica ou anfifílica composta de homopolímeros ou copolímeros, a qual é insolúvel devido à presença de reticulações químicas covalentes. As reticulações proporcionam a estrutura de rede e integridade física. Os hidrogéis apresentam uma compatibilidade termodinâmica com água a qual permite que eles dilatem em meio aquoso.
[013] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "reagente” significa um composto químico o qual compreende no mínimo um grupamento funcional para reação com o grupamento funcional de outro reagente ou porção.
[014] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "reagente da cadeia principal” significa um reagente, o qual é adequado como uma matéria prima para formar hidrogéis. Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, um reagente da cadeia principal preferencialmente não compreende ligações biodegradáveis. Um reagente da cadeia principal pode compreender um "núcleo de ramificação" o qual se refere a um átomo ou uma porção ao qual mais de uma outra porção é anexada.
[015] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "reagente reticulador” significa um reagente linear ou ramificado, o qual é adequado como uma matéria prima para reticulação de reagentes da cadeia principal. Preferencialmente, o reagente reticulador é um composto químico linear. Um reagente reticulador compreende no mínimo duas ligações biodegradáveis.
[016] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "porção” significa uma parte de uma molécula, a qual carece de um ou mais átomos comparada com o reagente correspondente. Se, por exemplo, um reagente da fórmula "H-X-H" reage com outro reagente e se torna parte do produto da reação, a porção correspondente do produto da reação tem a estrutura "H-X-" ou "-X-" , ao passo que cada "-" indica anexação a outra porção. Por conseguinte, uma porção biologicamente ativa é liberada a partir de uma pró-droga como um fármaco.
[017] Por conseguinte, a expressão "em forma ligada" é usada para se referir à porção correspondente de um reagente, isto é, "lisina em forma ligada" se refere a uma porção lisina a qual carece de um ou mais átomos do reagente lisina e é parte de uma molécula.
[018] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "grupamento funcional” significa um grupo de átomos o qual pode reagir com outros grupamentos funcionais. Grupamentos funcionais incluem, mas não estão limitados aos seguintes grupamentos: ácido carboxílico (-(C=O)OH), amina primária ou secundária (-NH2, -NH-), maleimida, tiol (-SH), ácido sulfônico (- (O=S=O)OH), carbonato, carbamato (-O(C=O)N<), hidróxi (-OH), aldeído (-(C=O)H), cetona (-(C=O)-), hidrazina (>N-N<), isocianato, isotiocianato, ácido fosfórico (-O(P=O)OHOH), ácido fosfônico (- O(P=O)OHH), haloacetil, halogeneto de alquila, acriloíla, fluoreto de arila, hidroxilamina, dissulfeto, vinil sulfona, vinil cetona, diazoalcano, oxirano, e aziridina.
[019] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "grupamento funcional ativado” significa um grupamento funcional, o qual é conectado a um grupamento de ativação, isto é, um grupamento funcional foi reagido com um reagente de ativação. Grupamentos funcionais ativados preferenciais incluem, mas não estão limitados a grupamentos éster ativados, grupamentos carbamato ativados, grupamentos carbonato ativados e grupamentos tiocarbonato ativados. Grupamentos de ativação preferenciais são selecionados entre as fórmulas ((f-i) a (f-vi): em que
Figure img0001
[020] as linhas tracejadas indicam anexação ao resto da molécula;
[021] b é 1, 2, 3 ou 4; e
[022] XH é Cl, Br, I, ou F.
[023] Por conseguinte, um éster ativado preferencial tem a fórmula
[024] -(C=O)-XF, em que
[025] XF é selecionado entre as fórmulas (f-i), (f-ii), (f-iii), (f-iv), (f- v) e (f-vi).
[026] Por conseguinte, um carbamato ativado preferencial tem a fórmula
[027] -N-(C=O)-XF, em que
[028] XF é selecionado entre as fórmulas (f-i), (f-ii), (f-iii), (f-iv), (f- v) e (f-vi).
[029] Por conseguinte, um carbonato ativado preferencial tem a fórmula
[030] -O-(C=O)-XF, em que
[031] XF é selecionado entre as fórmulas (f-i), (f-ii), (f-iii), (f-iv), (f- v) e (f-vi).
[032] Por conseguinte, um tioéster ativado preferencial tem a fórmula
[033] -S-(C=O)-XF, em que
[034] XF é selecionado entre as fórmulas (f-i), (f-ii), (f-iii), (f-iv), (f- v) e (f-vi).
[035] Por conseguinte, um "grupamento funcional de extremidade ativado" é um grupamento funcional ativado o qual está localizado na extremidade de uma porção ou molécula, isto é, é um grupamento funcional ativado terminal.
[036] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "grupamento de capeamento” significa uma porção a qual é conectada de modo irreversível, isto é, de modo permanente, a um grupamento funcional de modo a torná-lo incapaz de reagir com grupamentos funcionais de outros reagentes ou porções.
[037] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "grupamento de proteção” significa uma porção a qual é conectada de modo reversível a um grupamento funcional de modo a torná-lo incapaz de reagir com, por exemplo, outro grupamento funcional. Grupamentos de proteção de alcoóis (-OH) adequados são, por exemplo, acetil, benzoíla, benzil, éter β-metoxietoximetilico, dimetoxitritil, éter metoximetílico, metoxitritil, éter p-metoxibenzílico, éter metiltiometílico, pivaloíla, tetra-hidropiranil, tritil, trimetilsilil, terc- butildimetilsilil, tri-iso-propilsililoximetil, éter tri-isopropilsilílico, éter metílico, e éter etoxietílicos. Grupamentos de proteção de amina adequados são, por exemplo, carbobenzilóxi, p-metoxibenzil carbonil, terc-butiloxicarbonil, 9-fluorenilmetiloxiarbonil, acetil, benzoil, benzil, carbamato, 7-metoxibenzil, 3,4-dimetoxibenzil, 7-metoxifenil, e tosil. Suitable carbonil grupamentos de proteção são, por exemplo, acetals e ketals, acilals e ditianes. Grupamentos de proteção de ácido carboxílico adequados são, por exemplo, ésteres metílicos, ésteres benzílicos, ésteres terc-butílicos, 2,6-dimetilphenol, 2,6-di- isopropilphenol, 2,6.-di-terc-butilphenol, ésteres silílicos, ortoésteres, e oxazoline. Grupamentos de proteção de fosfato adequados são, por exemplo, 2-cianoetil e metil.
[038] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, os termos "elaborar" e "elaboração" se referem à série de manipulações necessárias para isolar e purificar o um ou mais produtos de uma reação química, em particular de uma polimerização.
[039] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "polímero” significa uma molécula compreendendo unidades estruturais de repetição, isto é, os monômeros, conectadas por ligações químicas em um modo linear, circular, ramificado, reticulado ou dendrimérico ou uma combinação das mesmas, as quais podem ser de origem sintética ou biológica ou uma combinação de ambas. Entende-se que um polímero também pode compreender, por exemplo, grupamentos funcionais ou porções de capeamento. Preferencialmente, um polímero tem um peso molecular de no mínimo 0,5 kDa, por exemplo, um peso molecular de no mínimo 1 kDa, um peso molecular de no mínimo 2 kDa, um peso molecular de no mínimo 3 kDa ou um peso molecular de no mínimo 5 kDa.
[040] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "polimérico” significa um reagente ou uma porção compreendendo um ou mais polímeros.
[041] Uma pessoa versada na arte entende que os produtos de polimerização obtidos a partir de uma reação de polimerização não têm todos o mesmo peso molecular, mas ao invés apresentam uma distribuição de peso molecular. Consequentemente, as faixas de peso molecular, os pesos moleculares, as faixas de números de monômeros em um polímero e os números de monômeros em um polímero conforme usado aqui, neste requerimento de patente, se referem ao número médio de peso molecular e ao número médio de monômeros. Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "número médio de peso molecular” significa a média aritmética ordinária dos pesos moleculares dos polímeros individuais.
[042] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "polimerização" ou "polimerizar” significa o processo de reagir reagentes de monômeros ou macromonômeros em uma reação química para formar cadeias de polímeros ou redes incluindo, mas não limitadas a, hidrogéis.
[043] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "macromonômero” significa uma molécula que foi obtida a partir da polimerização de reagentes de monômeros.
[044] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "polimerização de condensação" ou "reação de condensação” significa uma reação química, na qual os grupamentos funcionais de dois reagentes reagem para formar uma única molécula, isto é, o produto da reação, e uma molécula de baixo peso molecular, por exemplo água, é liberada.
[045] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "polimerização de suspensão” significa uma reação de polimerização heterogênea e/ou bifásica, em que os reagentes de monômeros são dissolvidos em um primeiro solvente, formando a fase dispersa a qual é emulsificada em um segundo solvente, formando a fase contínua. Na presente invenção, os reagentes de monômeros são pelo menos um reagente da cadeia principal e pelo menos um reagente reticulador. Tanto o primeiro solvente quanto os reagentes de monômeros não são solúveis no segundo solvente. A emulsão referida é formada por agitação, sacudindo, exposição a ultrassom ou emulsificação Microsieve™, mais preferencialmente por agitação ou emulsificação Microsieve™ e mais preferencialmente por agitação. Esta emulsão é estabilizada por um emulsificador apropriado. A polimerização é iniciada por adição de uma base como iniciador o qual é solúvel no primeiro solvente. Uma base adequada comumente conhecida adequada como iniciador pode ser uma base terciária, tal como tetrametiletilenodiamina (TMEDA).
[046] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "imiscível” significa a propriedade onde duas substâncias capazes de combinar para formar uma mistura homogênea.
[047] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "poliamina” significa um reagente ou porção compreendendo mais de uma amina (-NH- e/ou -NH2), por exemplo, a partir de 2 a 64 aminas, a partir de 4 a 48 aminas, a partir de 6 a 32 aminas, a partir de 8 a 24 aminas, ou a partir de 10 a 16 aminas. Poliaminas particularmente preferenciais compreendem, a partir de 2 a 32 aminas.
[048] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "à base de PEG compreendendo pelo menos X% de PEG" em relação a uma porção ou a um reagente significa que a referida porção ou o referido reagente compreende no mínimo X% (em peso/peso) de unidades de etileno glicol (-CH2CH2O-), em que as unidades de etileno glicol podem ser arranjadas em bloco, alternadamente ou podem ser distribuídas aleatoriamente dentro da porção ou do reagente e preferencialmente todas as unidades de etileno glicol da referida porção ou do referido reagente estão presentes em um bloco; a percentagem em peso remanescente da porção ou do reagente à base de PEG são outras porções especialmente selecionadas entre os seguintes substituintes e ligações: • Ci-50 alquil, C2-50 alquenil, C2-50 alquinil, C3-10 cicloalquil, heterociclil de 4 a 7 membros, heterobiciclil de 8 a 11 membros, fenil; naftil; indenil; indanil; e tetralinil; e • ligações selecionadas entre o grupo compreendendo
Figure img0002
em que linhas tracejadas indicam anexação ao restante da porção ou do reagente, e R1 e R1a são de modo independente um do outro selecionados entre H e C1-6 alquil.
[049] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "C1-4 alquil" isolado ou em combinação significa um grupamento alquil de cadeia reta ou ramificado tendo 1 a 4 átomos de carbono. Caso presente na extremidade de uma molécula, exemplos de grupamentos C1-4 alquila de cadeia reta e ramificado são metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, isobutila, sec-butila e terc-butila. Quando duas porções de uma molécula são ligadas pelo grupamento C1-4 alquila, então exemplos para semelhantes grupamentos C1-4 alquila são -CH2-, -CH2-CH2-, -CH(CH3)-, -CH2-CH2-CH2-, -CH(C2H5)-, - C(CH3)2-, -CH2-CH2-CH2-CH2-, e -CH2-CH2-CH2(CH3)-. Cada átomo de hidrogênio de um grupamento C1-4 alquila pode ser substituído por um substituinte conforme definido abaixo.
[050] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "C1-6 alquil" isolado ou em combinação significa um grupamento alquila de cadeia reta ou ramificado tendo 1 a 6 átomos de carbono. Caso presente na extremidade de uma molécula, exemplos de grupamentos C1-6 alquila de cadeia reta e ramificado são metilaa, etila, n-propila, isopropila, n-butila, isobutila, sec-butila, terc-butila, n-pentila, 2-metilbutila, 2,2-dimetilpropila, n-hexila, 2-metilpentila, 3-metilpentila, 2,2-dimetilbutila, 2,3-dimetilbutila e 3,3-dimetilpropila. Quando duas porções de uma molécula são ligadas pelo grupamento C1-6 alquila, então exemplos para semelhantes grupamentos C1-6 alquila são -CH2-, -CH2-CH2-, -CH(CH3)-, -CH2-CH2-CH2-, -CH(C2H5)- e -C(CH3)2-. Cada átomo de hidrogênio de um grupamento C1-6 alquila pode ser substituído por um substituinte conforme definido abaixo.
[051] Por conseguinte, conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "C1-20 alquila" isolado ou em combinação significa um grupamento alquila de cadeia reta ou ramificado tendo 1 a 20 átomos de carbono. O termo "C8-18 alquila" isolado ou em combinação significa um grupamento alquila de cadeia reta ou ramificadoa tendo 8 a 18 átomos de carbono. Por conseguinte, conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "C1-50 alquila" isolado ou em combinação significa um grupamento alquila de cadeia reta ou ramificado tendo 1 a 50 átomos de carbono. Cada átomo de hidrogênio de um grupamento C1-20 alquila, um grupamento C8-18 alquila e grupamento C1-50 alquila pode ser substituído por um substituinte. Em cada caso o grupamento alquila pode estar presente na extremidade de uma molécula ou duas porções de uma molécula podem ser ligadas pelo grupamento alquila.
[052] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "C2-6 alquenila" isolado ou em combinação significa uma porção hidrocarboneto de cadeia reta ou ramificada compreendendo pelo menos uma ligação dupla carbono-carbono tendo 2 a 6 átomos de carbono. Caso presente na extremidade de uma molécula, exemplos são -CH=CH2, -CH=CH-CH3, -CH2-CH=CH2, -CH=CHCH2-CH3 e - CH=CH-CH=CH2. Quando duas porções de uma molécula são ligadas pelo grupamento C2-6 alquenila, então um exemplo para semelhante C2-6 alquenila é -CH=CH-. Cada átomo de hidrogênio de um grupamento C2-6 alquenil pode ser substituído por um substituinte conforme definido abaixo. Opcionalmente, podem ocorrer uma ou mais ligações triplas.
[053] Por conseguinte, conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "C2-20 alquenila" isolado ou em combinação significa um resíduo hidrocarboneto de cadeia reta ou ramificado compreendendo pelo menos uma ligação dupla carbono-carbono tendo 2 a 20 átomos de carbono. O termo "C2-50 alquenila" isolado ou em combinação significa um resíduo hidrocarboneto de cadeia reta ou ramificado compreendendo pelo menos uma ligação dupla carbono- carbono tendo 2 a 50 átomos de carbono. Caso presente na extremidade de uma molécula, exemplos são -CH=CH2, -CH=CH-CH3, -CH2-CH=CH2, -CH=CHCH2-CH3 e -CH=CH-CH=CH2. Quando duas porções de uma molécula são ligadas pelo grupamento alquenil, então um exemplo é por exemplo, -CH=CH-. Cada átomo de hidrogênio de um grupamento C2-20 alquenila ou C2-50 alquenila pode ser substituído por um substituinte conforme definido abaixo. Opcionalmente, podem ocorrer uma ou mais ligações triplas.
[054] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "C2-6 alquinila" isolado ou em combinação significa resíduo hidrocarboneto de cadeia reta ou ramificado compreendendo pelo menos uma ligação tripla carbono-carbono tendo 2 a 6 átomos de carbono. Caso presente na extremidade de uma molécula, exemplos são -CHCH, -CH2-C=CH, CH2-CH2-C=CH e CH2-CHC-CH3. Quando duas porções de uma molécula são ligadas pelo grupamento alquinil, então um exemplo é: -C=C-. Cada átomo de hidrogênio de um grupamento C2-6 alquinil pode ser substituído por um substituinte conforme definido abaixo. Opcionalmente, podem ocorrer uma ou mais ligações duplas.
[055] Por conseguinte, conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "C2-20 alquinil" isolado ou em combinação significa um resíduo hidrocarboneto de cadeia reta ou ramificado compreendendo pelo menos uma ligação tripla carbono-carbono tendo 2 a 20 átomos de carbono e "C2-50 alquinila" isolado ou em combinação significa um resíduo hidrocarboneto de cadeia reta ou ramificado compreendendo pelo menos uma ligação tripla carbono-carbono tendo 2 a 50 átomos de carbono. Caso presente na extremidade de uma molécula, exemplos são -C^CH, -CH2-C=CH, CH2-CH2-CHCH e CH2- C=C-CH3. Quando duas porções de uma molécula são ligadas pelo grupamento alquinil, então um exemplo é -C^C-. Cada átomo de hidrogênio de um grupamento C2-20 alquinila ou C2-50 alquinila pode ser substituído por um substituinte conforme definido abaixo. Opcionalmente, podem ocorrer uma ou mais ligações duplas.
[056] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, os termos "C3-8 cicloalquila" ou "anel C3-8 cicloalquila” significa uma cadeia alquil cíclica tendo 3 a 8 átomos de carbono, a qual pode ser saturada ou insaturada, por exemplo, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclohexila, ciclohexenila, cicloheptila, ciclooctila. Cada átomo de hidrogênio de um carbono do cicloalquil pode ser substituído por um substituinte conforme definido abaixo. O termo "C3-8 cicloalquila" ou "anel C3-8 cicloalquila" também inclui biciclos formando ponte como norbonano ou norboneno. Por conseguinte, "C3-5 cicloalquila” significa um cicloalquil tendo 3 a 5 átomos de carbono e "C3-10 cicloalquila” significa um cicloalquil tendo 3 a 10 átomos de carbono.
[057] Por conseguinte, conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "C3-10 cicloalquila” significa um sistema de anel carbocíclico tendo 3 a 10 átomos de carbono, o qual pode ser saturado ou insaturado, por exemplo, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclohexila, ciclohexenila, cicloheptila, ciclooctila, ciclononila, ciclodecila. O termo "C3-10 cicloalquila" também inclui carbomono- e - biciclos no mínimo parcialmente saturados.
[058] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "halogênio” significa fluoro, cloro, bromo ou iodo. Particularmente preferencial é fluoro ou cloro.
[059] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "heterociclila de 4 a 7 membros" ou "heterociclo de 4 a 7 membros” significa um anel com 4, 5, 6 ou 7 átomos de anel que podem conter até o número máximo de ligações duplas (anel aromático ou não aromático o qual é totalmente, parcialmente ou in- saturado) em que no mínimo um átomo do anel até 4 átomos do anel são substituídos por um heteroátomo selecionado entre o grupo consistindo de enxofre (incluindo -S(O)-, -S(O)2-), oxigênio e nitrogênio (incluindo =N(O)-) e em que o anel é ligado ao resto da molécula através de um átomo de carbono ou nitrogênio. Exemplos para heterociclos de 4 a 7 membros incluem, mas não estão limitados a azetidina, oxetano, tietano, furano, tiofeno, pirrol, pirrolina, imidazol, imidazolina, pirazol, pirazolina, oxazol, oxazolina, isoxazol, isoxazolina, tiazol, tiazolina, isotiazol, isotiazolina, tiadiazol, tiadiazolina, tetra- hidrofurano, tetra-hidrotiofeno, pirrolidina, imidazolidina, pirazolidina, oxazolidina, isoxazolidina, tiazolidina, isotiazolidina, tiadiazolidina, sulfolano, pirano, di-hidropirano, tetra-hidropirano, imidazolidina, piridina, piridazina, pirazina, pirimidina, piperazina, piperidina, morfolina, tetrazol, triazol, triazolidina, tetrazolidina, diazepano, azepina e homopiperazina. Cada átomo de hidrogênio de um heterociclil de 4 a 7 membros ou de um grupamento heterocíclico de 4 a 7 membros pode ser substituído por um substituinte conforme definido abaixo.
[060] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "heterobiciclil de 8 a 11 membros" ou "heterobiciclo de 8 a 11 membros” significa um sistema heterocíclico de dois anéis com 8 a 11 átomos do anel, onde no mínimo um átomo do anel é compartilhado por ambos os anéis e que pode conter até o número máximo de ligações duplas (anel aromático ou não aromático o qual é totalmente, parcialmente ou in-saturado) em que no mínimo um átomo do anel até 6 átomos do anel serem substituídos por um heteroátomo selecionado entre o grupo consistindo de enxofre (incluindo -S(O)-, -S(O)2-), oxigênio e nitrogênio (incluindo =N(O)-) e em que o anel é ligado ao resto da molécula através de um átomo de carbono ou de nitrogênio. Exemplos para um heterobiciclo de 8 a 11 membros são indol, indolina, benzo furano, benzotiofeno, benzoxazol, benzisoxazol, benzotiazol, benzisotiazol, benzimidazol, benzimidazolina, quinolina, quinazolina, di-hidroquinazolina, quinolina, di-hidroquinolina, tetra- hidroquinolina, deca-hidroquinolina, isoquinolina, deca- hidroisoquinolina, tetra-hidroisoquinolina, di-hidroisoquinolina, benzazepina, purina e pteridina. O termo heterobiciclo de 8 a 11 membros também inclui estruturas spiro de dois anéis como 1,4-dioxa- 8-azaspiro[4.5]decano ou heterociclos ligados como 8-aza- biciclo[3.2.1]octano. Cada átomo de hidrogênio de um grupamento heterobiciclila de 8 a 11 membros ou heterobiciclo de 8 a 11 membros pode ser substituído por um substituinte conforme definido abaixo.
[061] O termo "substituído” significa que um ou mais átomos de - H de uma molécula ou porção são substituídos por um átomo diferente ou um grupo de átomos, os quais são referidos como "substituinte". Substituintes adequados são selecionados entre o grupo consistindo de halogênio; CN; COOR9; OR9; C(O)R9; C(O)N(R9R9a); S(O)2N 9 9a 9 9a 9 9 9 9a 9b 9 (R R ); S(O)N(R R ); S(O)2R ; S(O)R ; N(R )S(O)2N(R R ); SR ; N(R9R9a); N02; OC(O)R9; N(R9)C(O)R9a; N(R9)S(O)2R9a; N(R9)S(O)R9a; N(R9)C(O)OR9a; N(R9)C(O)N(R9aR9b); OC(O)N(R9R9a); T; C1-50 alquila; C2-50 alquenila; ou C2-50 alquinila, em que T; C1-50 alquila; C2-50 alquenila; e C2-50 alquinila são opcionalmente substituídos com um ou mais R10, os quais são os mesmos ou diferentes e em que C1-50 alquila; C2-50 alquenila; e C2-50 alquinila são opcionalmente interrompidos por um ou mais grupamentos selecionados entre o grupo consistindo de T, -C(O)O-; -O-; -C(O)-; -C(O)N(R11)-; - S(O)2N(R11)-; -S(O)N(R11)-; -S(O)2-; -S(O)-; -N(R11)S(O)2N(R11a)-; -S-; - N(R11)-; -OC(O)R11; -N(R11)C(O)-; -N(R11)S(O)2-; -N(R11)S(O)-; - N(R11)C(O)O-; -N(R11)C(O)N(R11a)-; e -OC(O)N(R11R11a); em que
[062] R9, R9a, R9b são selecionados de modo independente entre o grupo consistindo de H; T; e C1-50 alquila; C2-50 alquenila; ou C2-50 alquinila, em que T; C1-50 alquila; C2-50 alquenila; e C2-50 alquinila são opcionalmente substituídos com um ou mais R10, os quais são os mesmos ou diferentes e em que C1-50 alquila; C2-50 alquenila; e C2-50 alquinila são opcionalmente interrompidos por um ou mais grupamentos selecionados entre o grupo consistindo de T, -C(O)O-; - O-; -C(O)-; -C(O)N(R11)- ; -S(O)2N(R11)-; -S(O)N(R11)-; -S(O)2-; -S(O)-; -N(R11)S(O)2N(R11a)-; -S-; -N(R11)-; -OC(O)R11; -N(R11)C(O)- ; - N(R11)S(O)2-; -N(R11)S(O)-; -N(R11)C(O)O-; -N(R11)C(O)N(R11a)-; e - OC(O)N(R11R11a);
[063] T é selecionado entre o grupo consistindo de fenila; naftila; indenila; indanila; tetralinila; C3-10 cicloalquila; heterociclila de 4 a 7 membros; ou heterobiciclila de 8 a 11 membros, em que T é opcionalmente substituído com um ou mais R10, os quais são os mesmos ou diferentes;
[064] R10 é halogênio; CN; oxo (=O); COOR12; OR12; C(O)R12; 12 12a 12 12a 12 12a 12 12 C(O)N(R R ); S(O)2N(R R ); S(O)N(R R ); S(O)2R ; S(O)R ; N(R12)S(O)2N(R12aR12b); SR12; N(R12R12a); NO2; OC(O)R12; N(R12)C(O) R12a; N(R12)S(O)2R12a; N(R12)S(O)R12a; N(R12)C(O)OR12a; N(R12)C(O)N (R12aR12b); OC(O)N(R12R12a); ou C1-6 alquila, em que C1-6 alquil é opcionalmente substituído com um ou mais halogênios, os quais são os mesmos ou diferentes;
[065] R11, R11a, R12, R12a, R12b são selecionados de modo independente entre o grupo consistindo de H; ou C1-6 alquila, em que C1-6 alquila é opcionalmente substituído com um ou mais halogênio, os quais são os mesmos ou diferentes.
[066] Em uma modalidade R9, R9a, R9b podem ser de modo independente uns dos outros H.
[067] Em uma modalidade R10 é C1-6 alquila.
[068] Em uma modalidade T é fenila.
[069] Preferencialmente, um máximo de 6 átomos de -H de uma molécula são de modo independente substituídos por um substituinte, por exemplo, 5 átomos de -H são de modo independente substituídos por um substituinte, 4 átomos de -H são de modo independente substituídos por um substituinte, 3 átomos de -H são de modo independente substituídos por um substituinte, 2 átomos de -H são de modo independente substituídos por um substituinte, ou 1 átomo de -H é substituído por um substituinte.
[070] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "interrompido” significa que entre dois átomos de carbono ou na extremidade de uma cadeia de carbono entre o átomo de carbono respectivo e o átomo de hidrogênio um ou mais átomos são inseridos.
[071] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "pró-droga” significa um composto que sofre biotransformação antes de apresentar seus efeitos farmacológicos. Pró-drogas, portanto, podem ser visualizadas como porções biologicamente ativas conectadas a grupamentos de proteção não tóxicos especializados usados em uma maneira transitória para alterar ou eliminar propriedades indesejáveis na molécula de origem. Isto também inclui o reforço de propriedades desejáveis no fármaco e a supressão de propriedades indesejáveis.
[072] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "pró-droga ligada a um suporte” significa uma pró-droga que contém uma ligação temporária de uma porção biologicamente ativa com um grupamento de suporte transitório que produz propriedades fisicoquímicas ou farmacocinéticas aprimoradas e que pode ser facilmente removido in vivo, geralmente por uma clivagem hidrolítica.
[073] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "porção de encadeador de pró-droga reversível” significa uma porção a qual sobre sua uma extremidade é anexada a uma porção biologicamente ativa D através de uma ligação reversível e sobre outra extremidade é anexada através de uma ligação permanente, a qual na presente invenção é formada pela reação de um grupamento funcional amina de uma porção de cadeia principal ou Ax2 com Ayl, deste modo ligando a porção biologicamente ativa ao suporte de hidrogel nas pró- drogas ligadas a um suporte da presente invenção. Uma "ligação reversível" é uma ligação que é não enzimaticamente hidroliticamente degradável, isto é, clivável, sob condições fisiológicas (tampão aquoso em pH 7,4, 37°C) com uma meia-vida variando de uma hora a doze meses.
[074] Em contraste, uma "ligação permanente" é não enzimaticamente hidroliticamente degradável sob condições fisiológicas (tampão aquoso em pH 7,4, 37°C) com meias-vidas de mais de doze meses.
[075] Uma "ligação biodegradável" é uma ligação que é enzimaticamente e/ou não enzimaticamente hidroliticamente degradável, isto é, clivável, sob condições fisiológicas (tampão aquoso em pH 7,4, 37°C) com uma meia-vida variando a partir de uma hora até doze meses. Preferencialmente, além disso, uma ligação biodegradável é não enzimaticamente hidroliticamente degradável sob condições fisiológicas.
[076] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "encadeador de pró-droga traceless” significa um encadeador de pró-droga reversível o qual depois de clivagem libera o fármaco em sua forma livre. Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "forma livre" de um fármaco significa o fármaco em sua forma farmacologicamente ativa, não modificada.
[077] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "peptídeo” significa um polímero curto de monômeros de aminoácido ligados por ligações peptídicas. O termo "polipeptídeo” significa um peptídeo compreendendo até e inclusive 50 monômeros de aminoácido. O termo "proteína” significa um peptídeo de mais de 50 monômeros de aminoácido.
[078] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "oligonucleotídeo” significa um polímero de ácido nucléico curto de até 100 bases.
[079] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "composição farmacêutica” significa um ou mais ingredientes ativos, e um ou mais ingredientes inertes, bem como qualquer produto o qual resulta, diretamente ou indiretamente, de combinação, complexação ou agregação de quaisquer dois ou mais dos ingredientes, ou de dissociação de um ou mais dos ingredientes, ou de outros tipos de reações ou interações de um ou mais dos ingredientes. Por conseguinte, as composições farmacêuticas da presente invenção englobam qualquer composição produzida mistyurando a pró-droga ligada a um suporte da presente invenção e um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis.
[080] Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "excipiente" se refere a um diluente, um adjuvante, ou um veículo com o qual o fármaco é administrado. O excipiente farmacêutico pode ser líquidos estéreis, tais como água e óleos, incluindo os óleos de petróleo, de origem animal, vegetal ou sintética, incluindo, mas não limitados a óleo de amendoim, óleo de soja, óleo mineral, óleo de gergelim e semelhantes. A água é um excipiente preferencial quando a composição farmacêutica é administrada por via oral. Salina e dextrose aquosa são excipientes preferenciais quando a composição farmacêutica é administrada por via intravenosa. Soluções salinas e soluções aquosas de dextrose e glicerol são preferencialmente empregadas como excipientes líquidos para soluções injetáveis. Excipientes farmacêuticos adequados incluem amido, glucose, lactose, sacarose, manitol, trealose, gelatina, malte, arroz, farinha, giz, sílica-gel, estearato de sódio, monoestearato de glicerol, talco, cloreto de sódio, leite em pó desnatado, glicerol, propileno, glicol, água, etanol e semelhantes. A composição farmacêutica, caso desejado, também pode conter quantidades menores de agentes umectantes ou emulsificantes, agentes de tamponamento de pH, como, por exemplo, acetato, succinato, tris, carbonato, fosfato, HEPES (ácido 4-(2-hidroxietil)-1- piperazinaetanossulfônico), MES (ácido 2-(N- morfolino)etanossulfônico), ou pode conter detergentes, como Tween, poloxâmeros, poloxaminas, CHAPS, Igepal, ou aminoácidos como, por exemplo, glicina, lisina, ou histidina. Estas composições farmacêuticas podem tomar a forma de soluções, suspensões, emulsões, comprimidos, pílulas, cápsulas, pós, formulações de liberação prolongada e semelhantes. A composição farmacêutica pode ser formulada como um supositório, com ligantes e excipientes tradicionais tais como triglicerídeos. Formulação oral pode incluir excipientes de rotina tais como graus farmacêuticos de manitol, lactose, amido, estearato de magnésio, sacarina de sódio, celulose, carbonato de magnésio, etc.. Exemplos de excipientes farmacêuticos adequados são descritos em "Remington's Pharmaceutical Sciences" por E.W. Martin. As composições referidas vão conter uma quantidade terapeuticamente eficaz do fármaco ou da porção biologicamente ativa, junto com uma quantidade adequada de excipiente de modo a proporcionar a forma para administração adequada ao paciente. A formulação deve ser adequada ao modo de administração.
[081] Em geral o termo "compreendem" ou "compreendendo" também engloba “consistem de” ou “consistindo de”.
[082] Alguns dos reagentes da cadeia principal e de reticulador, os quais podem ser usados como matéria prima na etapa (a) do processo estão disponíveis comercialmente. Além disso, os reagentes da cadeia principal e de reticulador podem ser preparados de acordo com um método descrito na seção de Exemplos. Um método para a síntese de um reagente da cadeia principal adequado é descrito no exemplo 1 da Publicação do Requerimento de Patente Internacional No. WO2011/012715A1, a qual é incorporada por meio de referência aqui, a este requerimento de patente. O Exemplo 2 da Publicação do Requerimento de Patente Internacional No. WO2011/012715A1 proporciona adicionalmente métodos para a síntese de reagentes de reticulador de um peso molecular menor cujos métodos podem ser alterados usando conhecimento de química de rotina para obter reagentes de reticulador adequados para a presente invenção. Com base nestes métodos, uma pessoa versada na arte é capaz de aplicar conhecimento de química de rotina para obter os reagentes da cadeia principal e de reticulador usados na presente invenção.
[083] A mistura da etapa (a) compreende um primeiro solvente e no mínimo um segundo solvente. O primeiro solvente referido é preferencialmente selecionado entre o grupo compreendendo diclorometano, clorofórmio, tetra-hidrofurano, acetato de etila, dimetilformamida, acetonitrilo, dimetil sulfóxido, carbonato de propileno, N-metilpirrolidona, metanol, etanol, isopropanol e água e misturas dos mesmos.
[084] Pelo menos um reagente da cadeia principal e pelo menos um reagente reticulador são dissolvidos no primeiro solvente, isto é, a fase dispersa da polimerização de suspensão. Em uma modalidade o reagente da cadeia principal e o reagente reticulador são dissolvidos separadamente, isto é, em diferentes recipientes, usando ou o mesmo solvente ou solvente diferente e preferencialmente usando o mesmo solvente para ambos os reagentes. Em outra modalidade, o reagente da cadeia principal e o reagente reticulador são dissolvidos juntos, isto é, no mesmo recipiente e usando o mesmo solvente.
[085] Um solvente adequado para o reagente da cadeia principal é um solvente orgânico. Preferencialmente, o solvente é selecionado entre o grupo consistindo de diclorometano, clorofórmio, tetra-hidro- furano, acetato de etila, dimetilformamida, acetonitrilo, dimetil sulfóxido, propileno carbonato, N-metilpirrolidona, metanol, etanol, isopropanol e água e misturas dos mesmos. Mais preferencialmente, o reagente da cadeia principal é dissolvido em um solvente selecionado entre o grupo compreendendo acetonitrilo, dimetil sulfóxido, metanol ou misturas dos mesmos. O mais preferencialmente, o reagente da cadeia principal é dissolvido em dimetilsulfóxido.
[086] Em uma modalidade o reagente da cadeia principal é dissolvido no solvente em uma concentração variando a partir de 1 a 300 mg/ml, mais preferencialmente a partir de 5 a 60 mg/ml e o mais preferencialmente a partir de 10 a 40 mg/ml.
[087] Um solvente adequado para o reagente reticulador é um solvente orgânico. Preferencialmente, o solvente é selecionado entre o grupo compreendendo diclorometano, clorofórmio, tetra-hidrofurano, acetato de etila, dimetilformamida, acetonitrilo, dimetil sulfóxido, propileno carbonato, N-metilpirrolidona, metanol, etanol, isopropanol, água ou misturas dos mesmos. Mais preferencialmente, o reagente reticulador é dissolvido em um solvente selecionado entre o grupo compreendendo dimetilformamida, acetonitrilo, dimetil sulfóxido, metanol ou misturas dos mesmos. O mais preferencialmente, o reagente reticulador é dissolvido em dimetilsulfóxido.
[088] Em uma modalidade o reagente reticulador é dissolvido no solvente em uma concentração variando a partir de 5 a 500 mg/ml, mais preferencialmente a partir de 25 a 300 mg/ml e o mais preferencialmente a partir de 50 a 200 mg/ml.
[089] Pelo menos um reagente da cadeia principal e pelo menos um reagente reticulador são misturados em uma proporção em peso variando a partir de 1:99 a 99:1, por exemplo, em uma proporção em peso variando a partir de 2:98 a 90:10, em uma proporção em peso variando a partir de 3:97 a 88:12, em uma proporção em peso variando a partir de 3:96 a 85:15, em uma proporção em peso variando a partir de 2:98 a 90:10 e em uma proporção em peso variando a partir de 5:95 a 80:20; particularmente preferencial em uma proporção em peso a partir de 5:95 a 80:20, em que o primeiro número se refere ao reagente da cadeia principal e o segundo número ao reagente de reticulador.
[090] Preferencialmente, as proporções são selecionadas de tal modo que a mistura da etapa (a) compreende um excesso molar de grupamentos amina do reagente da cadeia principal comparado com os grupamentos finais funcionais ativados do reagente de reticulador. Consequentemente, o hidrogel resultante do processo da presente invenção tem grupamentos amina livres os quais podem ser usados para ligar outras porções ao hidrogel, tais como espaçadores, ligantes de afinidade, queladores e/ou porções de encadeador de pró-droga reversível.
[091] Pelo menos um segundo solvente, isto é, a fase contínua da polimerização de suspensão, é preferencialmente um solvente orgânico, mais preferencialmente um solvente orgânico selecionado entre o grupo compreendendo C5-30 alcanos lineares, ramificados ou cíclicos; C5-30 alquenos lineares, ramificados ou cíclicos; C5-30 alquinos lineares, ramificados ou cíclicos; poli(dimetilsiloxanos) lineares ou cíclicos; C6-20 hidrocarbonetos aromáticos; e misturas dos mesmos. Ainda mais preferencialmente, pelo menos segundo solvente é selecionado entre o grupo compreendendo C5-16 alcanos lineares, ramificados ou cíclicos; tolueno; xileno; mesitileno; hexametildissiloxano; ou misturas dos mesmos. O mais preferencialmente, pelo menos segundo solvente selecionado entre o grupo compreendendo C7-11 alcanos lineares, tais como heptano, octano, nonano, decano e undecano.
[092] Preferencialmente, a mistura da etapa (a) adicionalmente compreende um detergente. Detergentes preferenciais são Cithrol DPHS, Hypermer 70A, Hypermer B246, Hypermer 1599A, Hypermer 2296, ou Hypermer 1083. O mais preferencial é Cithrol DPHS.
[093] Preferencialmente, o detergente tem uma concentração de 0,1 g a 100 g por 1 L da mistura total, isto é, fase dispersa e fase contínua juntas. Mais preferencialmente, o detergente tem uma concentração de 0,5 g a 10 g por 1 L da mistura total, e o mais preferencialmente, o detergente tem uma concentração de 0,5 g a 5 g por 1 L da mistura total.
[094] Preferencialmente, a mistura da etapa (a) é uma emulsão.
[095] A polimerização na etapa (b) é iniciada adicionando uma base. Preferencialmente, a base é uma base não nucleofílica solúvel em alcanos, mais preferencialmente a base é selecionada entre N,N,N',N'-tetrametiletileno diamina (TMEDA), 1,4-dimetilpiperazina, 4- metilmorfolina, 4-etilmorfolina, 1,4-diazabiciclo[2.2.2]octano, 1,1,4,7,10, 10-hexametiltrietilenotetramina, 1,4,7-trimetil-1,4,7-triazaciclononano, tris[2-(dimetilamino)etil] amina, trietilamina, di-isopropiletilamina (DIPEA), trimetilamina, N,N-dimetiletilamina, N,N,N',N'-tetrametil-1,6- hexanodiamina, N,N,N',N",N"-pentametildietilenotriamina, 1,8-diaza- biciclo[5.4.0]undec-7-eno, 1,5-diazabiciclo[4.3.0]non-5-eno, e hexametilenotetramina. Ainda mais preferencialmente, a base é selecionada entre TMEDA, 1,4-dimetilpiperazina, 4-metilmorfolina, 4- etilmorfolina, 1,4-diazabiciclo[2.2.2]octano, 1,1,4,7,10, 10- hexametiltrietilenotetramina, 1,4,7-trimetil-1,4,7-triazaciclononano, tris[2-(dimetilamino)etil] amina, 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno, 1,5- diazabiciclo[4.3.0]non-5-eno, e hexametilenotetramina. O mais preferencialmente, a base é TMEDA.
[096] A base é adicionada à mistura da etapa (a) em uma quantidade de 1 a 500 equivalentes por grupamento final funcional ativado na mistura, preferencialmente em uma quantidade de 5 a 50 equivalentes, mais preferencialmente em uma quantidade de 5 a 25 equivalentes e o mais preferencialmente em uma quantidade de 10 equivalentes.
[097] Na etapa (b) do processo, a polimerização do hidrogel da presente invenção é uma reação de condensação, a qual preferencialmente ocorre sob agitação contínua da mistura da etapa (a). Preferencialmente, a velocidade da ponta (velocidade da ponta = π x velocidade rotacional do stirrer x diâmetro do stirrer) varia de 0,2 a 10 metros por segundo (m/s), mais preferencialmente de 0,5 a 4 m/s e o mais preferencialmente de 1 a 2 m/s.
[098] Em uma modalidade preferencial da etapa (b), a reação de polimerização é realizada em um vaso cilíndrico equipado com bafles. A proporção do diâmetro para a altura do vaso pode variar de 4:1 a 1:2, mais preferencialmente a proporção do diâmetro para a altura do vaso varia de 2:1 a 1:1.
[099] Preferencialmente, o vaso da reação é equipado com um stirrer de fluxo axial selecionado entre o grupo compreendendo stirrer de pitched blade, propulsor do tipo marinho, ou Lightnin A-310. Mais preferencialmente, o stirrer é um stirrer de lâmina aguda.
[0100] A etapa (b) pode ser realizada em uma ampla faixa de temperatura, preferencialmente em uma temperatura a partir de -10°C até 100 C°, mais preferencialmente em uma temperatura de 0°C a 80°C, ainda mais preferencialmente em uma temperatura de 10°C a 50 °C e o mais preferencialmente em temperatura ambiente. "Temperatura ambiente" se refere à temperatura presente em um ambiente laboratorial típico e preferencialmente significa uma temperatura variando a partir de 17 a 25°C.
[0101] Preferencialmente, o hidrogel obtido a partir da polimerização é um artigo modelado, tal como um revestimento, uma malha, um stent, uma nanopartícula ou uma micropartícula. Mais preferencialmente, o hidrogel está sob a forma de contas microparticulares tendo um diâmetro a partir de 1 a 500 micrômetros, mais preferencialmente com um diâmetro a partir de 10 a 300 micrômetros, ainda mais preferencialmente com um diâmetro a partir de 20 e 150 micrômetros e o mais preferencialmente com um diâmetro a partir de 30 a 130 micrômetros. Os diâmetros mencionados acima são medidos quando as micropartículas de hidrogel são totalmente hidratadas em água.
[0102] Em uma modalidade, o processo para a preparação de um hidrogel da presente invenção adicionalmente compreende a etapa de: (c) elaboração do hidrogel.
[0103] A etapa (c) compreende uma ou mais das seguintes etapas: (c1) remoção do excesso de líquido da reação de polimerização, (c2) lavagem do hidrogel para remover solventes usados durante a polimerização, (c3) transferência do hidrogel para dentro de uma solução tampão, (c4) fracionamento de tamanho/peneiramento do hidrogel, (c5) transferência do hidrogel para dentro de um recipiente, (c6) secagem do hidrogel, (c7) transferência do hidrogel para dentro de um solvente específico adequado para esterilização, e (c8) esterilização do hidrogel, preferencialmente por radiação gama.
[0104] Preferencialmente, a etapa (c) compreende todas as seguintes etapas: (c1) remoção do excesso de líquido da reação de polimerização, (c2) lavagem do hidrogel para remover solventes usados durante a polimerização, (c3) transferência do hidrogel para dentro de uma solução tampão, (c4) fracionamento de tamanho/peneiramento do hidrogel, (c5) transferência do hidrogel para dentro de um recipiente, (c7) transferência do hidrogel para dentro de um solvente específico adequado para esterilização, e (c8) esterilização do hidrogel, preferencialmente por radiação gama. O reagente da cadeia principal
[0105] Pelo menos um reagente da cadeia principal tem um peso molecular variando a partir de 1 a 100 kDa, preferencialmente a partir de 2 a 50 kDa, mais preferencialmente a partir de 5 a 30 kDa, ainda mais preferencialmente a partir de 5 a 25 kDa e o mais preferencialmente a partir de 5 a 15 kDa.
[0106] Preferencialmente, o reagente da cadeia principal é à base de PEG compreendendo pelo menos 10% de PEG, mais preferencialmente compreendendo pelo menos 20% de PEG, ainda mais preferencialmente compreendendo pelo menos 30% de PEG e o mais preferencialmente compreendendo pelo menos 40% de PEG.
[0107] Em uma modalidade, o reagente da cadeia principal está presente sob a forma de seu sal acidífero, preferencialmente sob a forma de um sal de adição de ácido. Sais de adição de ácido adeqauados são formados a partir de ácidos os quais formam sais não tóxicos. Exemplos incluem, mas não estão limitados ao acetato, aspartato, benzoato, besilato, bicarbonato, carbonato, bissulfato, sulfato, borato, cansilato, citrato, edisilato, esilato, formato, fumarato, gluceptato, gliconato, glicuronato, hexafluorofosfato, hibenxato, hidrocloreto, hidrobrometo, hidroiodeto, isetionato, lactato, malato, maleato, malonato, mesilato, metilsulfato, naftilato, nicotinato, nitrato, orotato, oxalato, palmitato, pamoato, fosfato, fosfato de hidrogênio, di- hidrogênio fosfato, sacarato, estearato, succinato, tartarato e tosilato. De modo particularmente preferencial, o reagente da cadeia principal está presente sob a forma de seu sal de hidrocloreto.
[0108] Em uma modalidade, pelo menos um reagente da cadeia principal é selecionado entre o grupo consistindo de um composto de fórmula (I)
[0109] B(- (A0)x1 - (SP)x2 - A1- P - A2 - Hyp1)x (I), em que
[0110] B é um núcleo de ramificação,
[0111] SP é uma porção de espaçador selecionada entre o grupo consistindo de C1-6 alquila, C2-6 alquenila e C2-6 alquinila,
[0112] P é uma cadeia polimérica à base de PEG compreendendo pelo menos 80% de PEG, preferencialmente no mínimo 85% de PEG, mais preferencialmente no mínimo 90% de PEG e o mais preferencialmente no mínimo 95% de PEG,
[0113] Hyp1 é uma porção compreendendo uma amina (-NH2 e/ou -NH-) ou uma poliamina compreendendo pelo menos duas aminas (- NH2 e/ou -NH-),
[0114] X é um inteiro de 3 a 16,
[0115] x1, x2 são de modo independente um do outro 0 ou 1, com a condição de que x1 é 0, se x2 for 0,
[0116] A0, A1, A2 são de modo independentemente selecionados uns do outros entre o grupo consistindo de
Figure img0003
em que R1 e R1a são de modo independente um do outro selecionados entre H e C1-6 alquila; um composto de fórmula (II)
[0117] Hyp2 - A3 - P - A4 - Hyp3 (II), em que
[0118] P é definido como acima no composto de fórmula (I),
[0119] Hyp2, Hyp3 são de modo independente um do outro uma poliamina compreendendopelo menos duas aminas (-NH2 e/ou -NH), e
[0120] A3 e A4 são selecionados de modo independente entre o grupo consistindo de
Figure img0004
Figure img0005
em que R1 e R1a são de modo independente um do outro selecionados entre H e C1-6 alquila; um composto de fórmula (III)
[0121] P1 - A5 - Hyp4 (III), em que
[0122] P1 é uma cadeia polimérica à base de PEG compreendendo pelo menos 80% de PEG, preferencialmente no mínimo 85% de PEG, mais preferencialmente no mínimo 90% de PEG e mais preferencialmente pelo menos 95% de PEG,
[0123] Hyp4 é uma poliamina compreendendo pelo menos três em que R1 e R1a são de modo independente um do outro selecionados entre H e C1-6 alquila; e um composto de fórmula (IV),
[0124] A5 é selecionado entre o grupo consistindo de
Figure img0006
em que R1 e R1a são de modo independente um do outro selecionados entre H e C1-6 alquila; e um composto de fórmula (IV),
[0125] T1 - A6 - Hyp5 (IV), em que
[0126] Hyp5 é uma poliamina compreendendo pelo menos três aminas (-NH2 e/ou -NH), e
[0127] A6 é selecionado entre o grupo consistindo de
Figure img0007
em que R1 e R1a são de modo independente um do outro selecionados entre H e C1-6 alquila; e T1 é selecionado entre o grupo consistindo de C1-50 alquila, C250 alquenila ou C2-50 alquinila, cujo fragmento é opcionalmente interrompido por um ou mais grupamento(s) selecionado(s) entre -NH-, -N(C1-4 alquil)-, -O-, -S-, -C(O)-, -C(O)NH-, - C(O)N(C1-4 alquil)-, -O- C(O)-, -S(O)-, -S(O)2-, heterociclila de 4 a 7 membros, fenila ou naftila.
[0128] Nas seções que se seguem o termo "Hypx" se refere a Hyp1, Hyp2, Hyp3, Hyp4 e Hyp5 coletivamente.
[0129] Preferencialmente, o reagente da cadeia principal é um composto de fórmula (I), (II) ou (III), mais preferencialmente o reagente da cadeia principal é um composto de fórmula (I) ou (III), e o mais preferencialmente o reagente da cadeia principal é um composto de fórmula (I).
[0130] Em uma modalidade preferencial, em um composto de fórmula (I), x é 4, 6 ou 8. Preferencialmente, em um composto de fórmula (I), x é 4 ou 8, o mais preferencialmente, x é 4.
[0131] Em uma modalidade preferencial nos compostos de fórmula (I) a (IV), A0, A1, A2, A3, A4, A5 e A6 são selecionados entre o grupo compreendendo
Figure img0008
[0132]Preferencialmente, em um composto de fórmula (I), A1 é
Figure img0009
[0133]Preferencialmente, em um composto de fórmula (I), A2 é
Figure img0010
e A4 é
[0134]Preferencialmente, em um composto de fórmula (III), A5 é
Figure img0011
[0135] Preferencialmente, em um composto de fórmula (II), A3 é
Figure img0012
[0136] Preferencialmente, em um composto de fórmula (III), A5 é
Figure img0013
[0137]Preferencialmente, em um composto de fórmula (IV), A6 é
Figure img0014
[0138]Preferencialmente, em um composto de fórmula (IV), T1 é selecionado entre H e C1-6 alquila.
[0139] Em uma modalidade, em um composto de fórmula (I), o núcleo de ramificação B é selecionado entre as seguintes estruturas:
Figure img0015
Figure img0016
[0140] linhas tracejadas indicam anexação a A0 ou, se x1 e x2 forem ambos 0, a A1,
[0141] t é 1 ou 2; preferencialmente t é 1,
[0142] v é 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14; preferencialmente, v é 2, 3, 4, 5, 6; mais preferencialmente, v é 2, 4 ou 6; o mais preferencialmente, v é 2.
[0143] Em uma modalidade preferencial, B tem uma estrutura de fórmula (a-i), (a-ii), (a-iii), (a-iv), (a-v), (a-vi), (a-vii), (a-viii), (a-ix), (a-x), (a-xiv), (a-xv) ou (a-xvi). Mais preferencialmente, B tem uma estrutura de fórmula (a-iii), (a-iv), (a-v), (a-vi), (a-vii), (a-viii), (a-ix), (a-x) ou (a-iv). O mais preferencialmente, B tem uma estrutura de fórmula (a-xiv).
[0144] Uma modalidade preferencial é uma combinação de B e A0, ou, se x1 e x2 são ambos 0 uma combinação preferencial de B e A1, a qual é selecionada entre as seguintes estruturas:
Figure img0017
em que linhas tracejadas indicam anexação a SP ou, se x1 e x2 forem ambos 0, a P.
[0145] Mais preferencialmente, a combinação de B e A0 ou, se x1 e x2 são ambos 0, a combinação de B e A1, tem uma estrutura de fórmula de fórmula (b-i), (b-iv), (b-vi) ou (b-viii) e o mais preferencialmente tem uma estrutura de fórmula de fórmula (b-i).
[0146] Em uma modalidade, x1 e x2 de fórmula (I) são 0.
[0147] Em uma modalidade, a cadeia polimérica à base de PEG P tem um peso molecular a partir de 0,3 kDa a 40 kDa; por exemplo, a partir de 0,4 a 35 kDa, a partir de 0,6 a 38 kDa, a partir de 0,8 a 30 kDa, a partir de 1 a 25 kDa, a partir de 1 a 15 kDa ou a partir de 1 a 10 kDa. O mais preferencialmente P tem um peso molecular a partir de 1 a 10 kDa.
[0148] Em uma modalidade, a cadeia polimérica à base de PEG P1 tem um peso molecular a partir de 0,3 kDa a 40 kDa; por exemplo, a partir de 0,4 a 35 kDa, a partir de 0,6 a 38 kDA, a partir de 0,8 a 30 kDa, a partir de 1 a 25 kDa, a partir de 1 a 15 kDa ou a partir de 1 a 10 kDa. O mais preferencialmente P1 tem um peso molecular a partir de 1 a 10 kDa.
[0149] Em uma modalidade, nos compostos de fórmulas (I) ou (II), P tem uma estrutura de fórmula (c-i):
Figure img0018
em que n varia de 6 a 900, mais preferencialmente n varia de 20 a 700 e o mais preferencialmente n varia de 20 a 250.
[0150] Em uma modalidade, nos compostos de fórmulas (III), P1 tem uma estrutura de fórmula (c-ii):
Figure img0019
em que
[0151] n varia de 6 a 900, mais preferencialmente n varia de 20 a 700 e o mais preferencialmente n varia de 20 a 250;
[0152] T0 é selecionado entre o grupo compreendendo C1-6 alquila, C2-6 alquenila e C2-6 alquinila, o qual é opcionalmente interrompido por um ou mais grupamento(s) selecionado(s) entre -NH-, - N(C1-4 alquil)-, -O-, -S-, -C(O)-, -C(O)NH-, -C(O)N(C1-4 alquil)-, -O-C(O)-, - S(O)- ou - S(O)2-.
[0153] Em uma modalidade, nos compostos de fórmulas (I) a (IV), a porção Hypx é uma poliamina e preferencialmente compreende em forma ligada e, onde aplicável, em configuração R- e/ou S- uma porção das fórmulas (d-i), (d-ii), (d-iii) e/ou (d-iv):
Figure img0020
em que
[0154] z1, z2, z3, z4, z5, z6 são de modo independente um do outro 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8.
[0155] Mais preferencialmente, Hypx compreende em forma ligada e em configuração R- e/ou S- lisina, ornitina, ácido diaminopropiônico e/ou ácido diaminobutírico. Mais preferencialmente, Hypx compreende em forma ligada e em configuração R- e/ou S- lisina.
[0156] Hypx tem um peso molecular a partir de 40 kDa a 30 kDa, preferencialmente de 0,3 kDa a 25 kDa, mais preferencialmente de 0,5 kDa a 20 kDa, ainda mais preferencialmente de 1 kDa a 20 kDa e o mais preferencialmente de 2 kDa a 15 kDa.
[0157] Hypx é preferencialmente selecionado entre o grupo consistindo de uma porção de fórmula (e-i)
Figure img0021
em que
[0158] p1 é um inteiro de 1 a 5, preferencialmente p1 é 4, e a linha tracejada indica anexação a A2 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (I) e a A3 ou A4 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (II);
[0159] uma porção de fórmula (e-ii)
Figure img0022
em que
[0160] p2, p3 e p4 são idênticos ou diferentes e cada um é de modo independente dos outros um inteiro de 1 a 5, preferencialmente p2, p3 e p4 são 4, e a linha tracejada indica anexação a A2 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (I), a A3 ou A4 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (II), a A5 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (III) e a A6 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (IV);
[0161] uma porção de fórmula (e-iii)
Figure img0023
em que
[0162] p5 a p11 são idênticos ou diferentes e cada um é de modo independente do outro um inteiro de 1 a 5, preferencialmente p5 a p11 são 4, e
[0163] a linha tracejada indica anexação a A2 se o reagente da cadeia principal for de fórmula (I), a A3 ou A4 se o reagente da cadeia principal for de fórmula (II), a A5 se o reagente da cadeia principal for de fórmula (III) e a A6 se o reagente da cadeia principal for de fórmula (IV);
[0164] uma porção de fórmula (e-iv)
Figure img0024
em que
[0165] p12 a p26 são idênticos ou diferentes e cada um é de modo independente do outro um inteiro de 1 a 5, preferencialmente p12 a p26 são 4, e
[0166] a linha tracejada indica anexação a A2 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (I), a A3 ou A4 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (II), a A5 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (III) e a A6 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (IV);
[0167] uma porção de fórmula (e-v)
Figure img0025
em que
[0168] p27 e p28 são idênticos ou diferentes e cada um é de modo independente do outro um inteiro de 1 a 5, preferencialmente p27 e p28 são 4,
[0169] q é um inteiro de 1 a 8, preferencialmente q é 2 ou 6 e o mais preferencialmente q é 6, e
[0170] a linha tracejada indica anexação a A2 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (I), a A3 ou A4 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (II), a A5 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (III) e a A6 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (IV);
[0171] uma porção de fórmula (e-vi)
Figure img0026
em que
[0172] p29 e p30 são idênticos ou diferentes e cada um é de modo independente do outro um inteiro de 2 a 5, preferencialmente p29 e p30 são 3, e
[0173] a linha tracejada indica anexação a A2 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (I), a A3 ou A4 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (II), a A5 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (III) e a reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (IV);
[0174] em que
Figure img0027
[0175] independente do outro um inteiro de 2 a 5, preferencialmente p31 a p36 são 3, e a linha tracejada indica anexação a A2 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (I), a A3 ou A4 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (II), a A5 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (III) e a A6 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (IV);
[0176] uma porção de fórmula (e-viii)
Figure img0028
em que
[0177] p37 a p50 são idênticos ou diferentes e cada um é de modo independente do outro um inteiro de 2 a 5, preferencialmente p37 a p50 são 3, e
[0178] a linha tracejada indica anexação a A2 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (I), a A3 ou A4 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (II), a A5 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (III) e a A6 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (IV); e
[0179] uma porção de fórmula (e-ix):
Figure img0029
em que
[0180] p51 a p80 são idênticos ou diferentes e cada um é de modo independente do outro um inteiro de 2 a 5, preferencialmente p51 a p80 são 3, e
[0181] a linha tracejada indica anexação a A2 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (I), a A" ou A4 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (II), a A5 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (III) e a A6 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (IV); e
[0182] em que as porções (e-i) a (e-v) podem em cada centro quiral estar ou em configuração R- ou S-, preferencialmente, todos os centros quirais de uma porção (e-i) a (e-v) estão na mesma configuração.
[0183] Preferencialmente, Hypx é tem uma estrutura de fórmulas (e-i), (e-ii), (e-iii), (e-iv), (e-vi), (e-vii), (e-viii) ou (e-ix). Mais preferencialmente, Hypx tem uma estrutura de fórmulas (e-ii), (e-iii), (e- iv), (e-vii), (e-viii) ou (e-ix), ainda mais preferencialmente Hypx tem uma estrutura de fórmulas (e-ii), (e-iii), (e-vii) ou (e-viii) e o mais preferencialmente Hypx tem uma estrutura de fórmula (e-iii).
[0184] Se Hypx compreender em forma ligada lisina, é preferencial que compreenda D-lisina, porque se descobriu surpreendentemente que hidrogéis compreendendo porções de cadeia principal compreendendo D-lisina - ao contrário daqueles compreendendo L- lisina - são mais estáveis quando administrados a um paciente.
[0185] Se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (I), uma porção preferencial - A2 - Hyp1 é uma porção da fórmula
Figure img0030
em que a linha tracejada indica anexação a P; e
[0186] E1 é selecionado entre as fórmulas (e-i) a (e-ix).
[0187] Se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (II) uma porção preferencial Hyp2 - A3 - é uma porção da fórmula
Figure img0031
em que
[0188] a linha tracejada indica anexação a P; e
[0189] E1 é selecionado entre as fórmulas (e-i) a (e-ix); e uma porção preferencial - A4 - Hyp3 é uma porção da fórmula
Figure img0032
em que
[0190] a linha tracejada indica anexação a P; e
[0191] E1 é selecionado entre as fórmulas (e-i) a (e-ix).
[0192] Se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (III), uma porção preferencial - A5 - Hyp4 é uma porção da fórmula
Figure img0033
em que
[0193] a linha tracejada indica anexação a P1; e
[0194] E1 é selecionado entre as fórmulas (e-i) a (e-ix).
[0195] Mais preferencialmente, o reagente da cadeia principal tem uma estrutura de fórmula (I) e B tem uma estrutura de fórmula (a-xiv).
[0196] Ainda mais preferencialmente, o reagente da cadeia principal tem uma estrutura de fórmula (I), B tem uma estrutura de fórmula (a-xiv), x1 e x2 são 0, e A1 é -O-.
[0197] Ainda mais preferencialmente, o reagente da cadeia principal tem uma estrutura de fórmula (I), B tem uma estrutura de fórmula (a-xiv), A1 é -O-, e P tem uma estrutura de fórmula (c-i).
[0198] Ainda mais preferencialmente, o reagente da cadeia principal é de fórmula (I), B é de fórmula (a-xiv), x1 e x2 são 0, A1 é -O- e P é de fórmula (c-i).
[0199] Ainda mais preferencialmente, o reagente da cadeia principal é de fórmula (I), B é de fórmula (a-xiv), x1 e x2 são 0, A1 é -O, P é de fórmula (c-i), A2 é -NH-(C=O)- e Hyp1 é de fórmula (e-iii).
[0200] O mais preferencialmente, o reagente da cadeia principal tem a seguinte fórmula:
Figure img0034
em que
[0201] n varia de 10 a 40, preferencialmente de 10 a 30, mais preferencialmente de 10 a 20.
[0202] Igualmente de modo preferencial, n varia de 20 a 30 kDa e o mais preferencialmente n é 28.
[0203] SP de fórmula (I) é uma porção de espaçador selecionada entre o grupo compreendendo C1-6 alquila, C2-6 alquenila e C2-6 alquinila, preferencialmente SP é -CH2-, -CH2-CH2-, -CH(CH3)-, -CH2- CH2-CH2-, -CH(C2H5)-, -C(CH3)2-, -CH=CH- ou -CH=CH-, o mais preferencialmente SP é -CH2-, -CH2-CH2- ou -CH=CH-. O Reagente Reticulador
[0204] Pelo menos um reagente reticulador compreende pelo menos dois grupamentos carbonilóxi (-(C=O)-O- ou -O-(C=O)-), os quais são ligações biodegradáveis. Estas ligações biodegradáveis são necessárias para tornar o hidrogel biodegradável. Adicionalmente, pelo menos um reagente reticulador compreende no mínimo dois grupamentos finais funcionais ativados os quais durante a polimerização da etapa (b) reagem com as aminas de pelo menos um reagente da cadeia principal.
[0205] O reagente reticulador tem um peso molecular variando a partir de 6 a 40 kDa, mais preferencialmente variando a partir de 6 até 30 kDa, ainda mais preferencialmente variando a partir de 6 a 20 kDa, ainda mais preferencialmente variando a partir de 6 a 15 kDa e o mais preferencialmente variando a partir de 6 a 10 kDa.
[0206] O reagente reticulador compreende no mínimo dois grupamentos finais funcionais ativados selecionados entre o grupo compreendendo grupamentos éster ativados, grupamentos carbamato ativados, grupamentos carbonato ativados e grupamentos tiocarbonato ativados, os quais durante polimerização reagem com os grupamentos amina dos reagentes da cadeia principal, formando ligações de amida, isto é, uma porção de cadeia principal e uma porção de reticulador são preferencialmente conectadas através de uma ligação de amida.
[0207] Em uma modalidade preferencial, o reagente reticulador é um composto de fórmula (V-I):
Figure img0035
em que cada D1, D2 D3 e D4 são idênticos ou diferentes e cada um é de modo independente dos outros selecionado entre o grupo compreendendo - O-, -NR5-, -S- e -CR6R6a-;
[0208] cada R1, R1a, R2, R2a, R3, R3a, R4, R4a, R6 e R6a são idênticos ou diferentes e cada um é de modo independente dos outros selecionado entre o grupo compreendendo -H, -OR7, -NR7R7a, -SR7 e C1-6 alquila; opcionalmente, cada um do(s) par(es) R1/R2, R3/R4, R1a/R2a, e R3a/R4a podem formar de modo independente uma ligação química e/ou cada um dos pares R1/R2/R2a, R3/R3a, R4/R4a, R6/R6a, R1/R2, R3/R4, R1a/R2a, e R3a/R4a são de modo independente um do outro unidos juntos com o átomo ao qual eles são anexados para formar um C3-8 cicloalquil ou para formar um anel A ou são unidos juntos com o átomo ao qual eles são anexados para formar um heterociclila de 4 a 7 membros ou heterobiciclila de 8 a 11 membros ou adamantila;
[0209] cada R5 é selecionado de modo independente entre -H e C1-6 alquila; opcionalmente, cada um do(s) par(es) R1/R5, R2/R5, R3/R5, R4/R5 e R5/R6 podem formar de modo independente uma ligação química e/ou são unidos juntos com o átomo ao qual eles são anexados para formar um heterociclila de 4 a 7 membros ou heterobiciclil de 8 a 11 membros;
[0210] cada R7, R7a é selecionado de modo independente entre H e C1-6 alquila;
[0211] A é selecionado entre o grupo consistindo de indenila, indanila e tetralinila; P2 é
Figure img0036
m varia de 120 a 920, preferencialmente de 120 a 460 e mais preferencialmente de 120 a 230;
[0212] r1, r2, r7, r8 são de modo independente 0 ou 1;
[0213] r3, r6 são de modo independente 0, 1, 2, 3, ou 4;
[0214] r4, r5 são de modo independente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10;
[0215] s1, s2 são de modo independente 1, 2, 3, 4, 5 ou 6;
[0216] Y1, Y2 são idênticos ou diferentes e cada um é de modo independente do outro selecionado entre as fórmulas (f-i) a (f-vi):
Figure img0037
em que
[0217] as linhas tracejadas indicam anexação ao resto da molécula,
[0218] b é 1, 2, 3 ou 4
[0219] XH é Cl, Br, I, ou F.
[0220] Preferencialmente, o reagente reticulador é um composto de fórmula (V-II):
Figure img0038
si L -IS2 (V-II). em que
[0221] D1, D2, D3 e D4 são idênticos ou diferentes e cada um é de modo independente dos outros selecionado entre o grupo compreendendo -O-, -NR5-, -S- e -CR5R5a-;
[0222] R1, R1a, R2, R2a, R3, R3a, R4, R4a, R5 e R5a são idênticos ou diferentes e cada um é de modo independente dos outros selecionado entre o grupo compreendendo H e C1-6 alquil; opcionalmente, um ou mais dos par(es) R1/R1a, R2/R2a, R3/R3a, R4/R4a, R1/R2, R3/R4, R1a/R2a, e R3a/R4a formam uma ligação química ou são unidos juntos com o átomo ao qual eles são anexados para formar um C3-8 cicloalquila ou para formar um anel A ou são unidos juntos com o átomo ao qual eles são anexados para formar um heterociclila de 4 a 7 membros ou heterobiciclila de 8 a 11 membros ou adamantila;
[0223] A é selecionado entre o grupo consistindo de fenila, naftila, indenila, indanila e tetralinila;
[0224] P2 é
Figure img0039
m varia de 120 a 920, preferencialmente de 120 a 460 e mais preferencialmente de 120 a 230;
[0225] r1, r2, r7, r8 são de modo independente 0 ou 1;
[0226] r3, r6 são de modo independente 0, 1, 2, 3, ou 4;
[0227] r4, r5 são de modo independente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10;
[0228] s1, s2 são de modo independente 1, 2, 3, 4, 5 ou 6;
[0229] Y1, Y2 são idênticos ou diferentes e cada um é de modo independente do outro selecionado entre as fórmulas (f-i) a (f-vi):
Figure img0040
em que as linhas tracejadas indicam anexação ao resto da molécula,
[0230] b é 1, 2, 3 ou 4
[0231] XH é Cl, Br, I, ou F.
[0232] Entende-se que as porções
Figure img0041
representam pelo menos dois grupamentos finais funcionais ativados.
[0233] Preferencialmente, Y1 e Y2 de fórmula (V-I) e (V-II) têm uma estrutura de fórmula (f-i), (f-ii) ou (f-v). Mais preferencialmente, Y1 e Y2 têm uma estrutura de fórmula (f-i) ou (f-ii) e o mais preferencialmente, Y1 e Y2 têm uma estrutura de fórmula (f-i).
[0234] Preferencialmente, ambas as porções Y1 e Y2 de fórmula (V-I) e (V-II) têm a mesma estrutura. Mais preferencialmente, ambas as porções Y1 e Y2 têm a estrutura de fórmula (f-i).
[0235] Preferencialmente, r1 de fórmula (V-I) e (V-II) é 0.
[0236] Preferencialmente, r1 e s1 de fórmula (V-I) e (V-II) são ambos 0.
[0237] Preferencialmente, um ou mais dos pares R1/R1a, R2/R2a, R3/R3a, R4/R4a, R1/R2, R3/R4, R1a/R2a, e R3a/R4a de fórmula (V-I) e (V-II) formam uma ligação química ou são unidos juntos com o átomo ao qual eles são anexados para formar um C3-8 cicloalquila ou formar um anel A.
[0238] Preferencialmente, um ou mais dos par R1/R2, R1a/R2a, R3/R4, R3a/R4a de fórmula (V-I) e (V-II) são unidos juntos com o átomo ao qual eles são anexados para formar um heterociclila de 4 a 7 membros ou heterobiciclila de 8 a 11 membros.
[0239] Preferencialmente, o reagente reticulador de fórmula (V-I) e (V-II) é simétrico, isto é, a porção
Figure img0042
tem a mesma estrutura que a porção
Figure img0043
[0240] Em uma modalidade preferencial s1, s2, r1 e r8 de fórmula (V-I) e (V-II) são 0.
[0241] Em outra modalidade preferencial s1, s2, r1 e r8 de fórmula (V-I) e (V-II) são 0 e r4 de fórmula (V-I) e (V-II) e r5 são 1.
[0242] Reagentes reticuladores preferenciais são de fórmula (V-1) a (V-54):
Figure img0044
Figure img0045
Figure img0046
Figure img0047
Figure img0048
Figure img0049
Figure img0050
cada reagente reticulador pode estar sob a forma de sua mistura racêmica, onde aplicável; e
[0243] m, Y1 e Y2 são definidos conforme acima.
[0244] Reagentes reticuladores ainda mais preferenciais são de fórmula (Va-1) a (Va-54):
Figure img0051
Figure img0052
Figure img0053
Figure img0054
Figure img0055
Figure img0056
Figure img0057
Figure img0058
em que cada reagente reticulador pode estar sob a forma de sua mistura racêmica, onde aplicável; e
[0245] m, Y1 e Y2 são definidos conforme acima.
[0246] Foi descoberto surpreendentemente que a utilização de reagentes reticuladores com ramificações, isto é, resíduos diferentes de H, no carbono alfa do grupamento carbonilóxi leva à formação de hidrogéis os quais são mais resistentes contra degradação enzimática, talo como degradação através de esterases.
[0247] De modo similar, foi descoberto surpreendentemente que quanto menos átomos houver entre o (C=O) de um grupamento carbonilóxi e o (C=O) do éster ativado adjacente, do carbamato ativado, do carbonato ativado ou do tiocarbamato ativado, mais resistentes contra degradação são os hidrogéis resultantes, tal como mais resistentes contra degradação através de esterases.
[0248] Por conseguinte, os reagentes reticuladores V-11 a V-54, V-1, V-2, Va-11 a Va-54, Va-1 e Va-2 são reagentes reticuladores preferenciais. Os reagentes reticuladores Va-11 a Va-54, Va-1 e Va-2 são os reagentes reticuladores mais preferenciais. O mais preferencial é o reagente reticulador Va-14.
[0249] Em outra modalidade, os reagentes reticuladores V-1, V-2, V-5, V-6, V-7, V-8, V-9, V-10, V-11l, V-12, V-13, V-14, V-15, V-16, V17, V-18, V-19, V-20, V-21, V-22, V-23, V-24, V-25, V-26, V-27, V-28, V-29, V-30, V-31, V-32, V-33, V-34, V-35, V-36, V-37, V-38, V-39, V40, V-41, V-42, V-43, V-44, V-45, V-46, V-47, V-48, V-49, V-50, V-51, V-52, V-53 an V-54 são reagentes reticuladores preferenciais. Mais preferencialmente, pelo menos um reagente reticulador é de fórmula V-5, V-6, V-7, V-8, V-9, V-10, V-14, V-22, V-23, V-43, V-44, V-45 ou V46, e o mais preferencialmente, pelo menos um reagente reticulador é de fórmula V-5, V-6, V-9 ou V-14.
[0250] Em outra modalidade, os reagentes reticuladores Va-1, Va- 2, Va-5, Va-6, Va-7, Va-8, Va-9, Va-10, Va-11, Va-12, Va-13, Va-14, Va-15, Va-16, Va-17, Va-18, Va-19, Va-20, Va-21, Va-22, Va-23, Va- 24, Va-25, Va-26, Va-27, Va-28, Va-29, Va-30, Va-31, Va-32, Va-33, Va-34, Va-35, Va-36, Va-37, Va-38, Va-39, Va-40, Va-41, Va-42, Va- 43, Va-44, Va-45, Va-46, Va-47, Va-48, Va-49, Va-50, Va-51, Va-52, Va-53 an Va-54 são reagentes reticuladores ainda mais preferenciais. Mais preferencialmente, pelo menos um reagente reticulador é de fórmula Va-5, Va-6, Va-7, Va-8, Va-9, Va-10, Va-14, Va-22, Va-23, Va- 43, Va-44, Va-45 ou Va-46, e o mais preferencialmente, pelo menos um reagente reticulador é de fórmula Va-5, Va-6, Va-9 ou Va-14.
[0251] As modalidades preferenciais do composto de fórmula (V-I) e (V-II) conforme mencionado acima se aplicam, por conseguinte, aos compostos preferenciais de fórmulas (V-1) a (V-54) e aos compostos mais preferenciais de fórmulas (Va-1) a (Va-54).
[0252] Em outro aspecto, a presente invenção se refere a um hidrogel que pode ser obtido por um processo de a presente invenção conforme definido acima.
[0253] O hidrogel contém a partir de 0,01 a 1 mmol/g de grupamentos de amina primária (-NH2), mais preferencialmente, a partir de 0,02 a 0,5 mmol/g de grupamentos de amina primária e o mais preferencialmente de 0,05 a 0,3 mmol/g de grupamentos de amina primária. O termo "X mmol/g de grupamentos de amina primária” significa que 1 g de hidrogel seco compreende X mmol de grupamentos amina primária. A medição do teor de amina do hidrogel é realizada de acordo com Gude et al. (Letters in Peptide Science, 2002, 9(4): 203-206, o qual é incorporado por meio de referência em sua totalidade) e também é descrita em detalhes na seção de Exemplos.
[0254] Preferencialmente, o termo "seco" conforme usado aqui, neste requerimento de patente, segnifica tendo um teor de água residual de um máximo de 10%, preferencialmente menos de 5% e mais preferencialmente menos de 2% (determinado de acordo com Karl Fischer). O método preferencial de secagem é liofilização. Processo para a preparação de um conjugado de hidrogel-espaçador
[0255] Em outro aspecto, a presente invenção se refere a um processo para a preparação de um conjugado de hidrogel-espaçador compreendendo a etapa de: (d) reagir o hidrogel da etapa (b) ou (c) com um reagente espaçador de fórmula (VI)
[0256] Ax1-S0-Ax2 (VI), em que
[0257] S0 é selecionado entre o grupo compreendendo C1-50 alquila, C2-50 alquenil e C2-50 alquinila, cujo fragmento é opcionalmente interrompido por um ou mais grupamento(s) selecionado(s) entre -NH-, -N (C1-4 alquil)-, -O-, -S, -C(O)-, -C(O)NH, -C(O)N(C1-4 alquil)-, -O-C(O)- , -S(O)-, -S(O)2-, heterociclila de 4 a 7 membros, fenila e naftila;
[0258] Ax1 é um grupamento funcional para reação com um grupamento amina do hidrogel; e
[0259] Ax2 é um grupamento funcional;
[0260] na presença de um solvente para obter um conjugado de hidrogel-espaçador.
[0261] Preferencialmente, Ax1 é selecionado entre o grupo compreendendo ácido carboxílico ativado; Cl-(C=O)-; NHS-(C=O)-, em que NHS é N-hidroxissuccinimida; ClSO2-; R1(C=O)-; I-; Br-; Cl-; SCN-; e CN-, em que
[0262] R1 é selecionado entre o grupo compreendendo H, C1-6 alquila, alquenil, C2-6 alquinila, C3-8 cicloalquila, heterociclila de 4 a 7 membros, heterobiciclila de 8 a 11 membros, fenila, naftila, indenila, indanila, e tetralinila.
[0263] O mais preferencialmente, Ax1 é um ácido carboxílico ativado.
[0264] Reagentes de ativação adequados para obter o ácido carboxílico ativado são por exemplo N,N'-diciclohexil-carbodiimida (DCC), 1-etil-3-carbodiimida (EDC), hexafluorofosfato de benzotriazol- 1-il-oxitripirrolidinofosfônio (PyBOP), hexafluorofosfato de bromotripirrolidinofosfônio (PyBrOP), hexafluorofosfato de 1-ciano-2- etoxi-2-oxoetilidenaminooxi)dimetilamino-morfolino-carbênio (COMU), 1-hidroxibenzotriazol (HOBT), 1-hidroxi-7-azabenzotriazol (HOAT), hexafluorofosfato de O-(6-clorobenzotriazol-1-il)-N,N,N’,N’- tetrametilurônio (HCTU), 1-H-benzotriazólio (HBTU), hexafluorofosfato de (O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N’-tetrametilurônio (HATU), e tetrafluoroborato de O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametilurônio (TBTU). Estes reagentes estão disponíveis comercialmente e são de conhecimento geral do especialista.
[0265] Preferencialmente, Ax2 é selecionado entre o grupo compreendendo -maleimida, -SH, -NH2, -SeH, -N3, -C^CH, - CR1=CR1aR1b, -OH, -(CH=X0)-R1, -(C=O)-S-R1, -(C=O)-H, -NH-NH2, - O-NH2, -Ar-X0, -Ar-Sn(R1)(R1a)(R1b), -Ar-B(OH)(OH),
Figure img0059
e com grupamentos de proteção opcionais; em que
[0266] X0 é -OH, -NR1R1a, -SH, e -SeH,
[0267] Ar é selecionado entre fenil, naftil, indenil, indanil, e tetralinil, e
[0268] R1, R1a, R1b são de modo independente uns dos outros selecionados entre o grupo compreendendo H, C1-6 alquila, C2-6 alquenila, C2-6 alquinila, C3-8 cicloalquila, heterociclila de 4 a 7 membros, heterobiciclila de 8 a 11 membros, fenila, naftila, indenila, indanila, e tetralinila.
[0269] Mais preferencialmente, Ax2 é selecionado entre -NH2, maleimida e tiol e o mais preferencialmente Ax2 é maleimida. Igualmente preferencial é tiol (-SH).
[0270] Condições de reação adequadas são descritas nas seções de Exemplos e são conhecidas por uma pessoa versada na arte.
[0271] A etapa (d) do processo pode ser realizada na presença de uma base. Bases adequadas incluem bases inorgânicas ou orgânicas costumeiras. Estas preferencialmente incluem hidretos, hidróxidos, amidas, alcóxidos, acetatos, carbonatos ou bicarbonatos de metais de álcali ou de metais terrosos alcalinos tais como, por exemplo, hidreto de sódio, amida de sódio, metóxido de sódio, etóxido de sódio, terc- butóxido de potássio, hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, hidróxido de amônio, acetato de sódio, acetato de potássio, acetato de cálcio, acetato de amônio, carbonato de sódio, carbonato de potássio, bicarbonato de potássio, bicarbonato de sódio ou carbonato de amônio, e aminas terciárias tais como trimetilamina, trietilamina, tributilamine, N,N-dimetilaniline, N,N-dimetilbenzilamina, piridina, N- metilpiperidina, N-metilmorfolina, N,N-dimetilaminopiridina, diazabiciclooctano (DABCO), diazabiciclononeno (DBN), N,N-di- isopropiletilamina (DIPEA), diazabicicloundeceno (DBU) ou colidina.
[0272] A etapa (d) do processo pode ser realizada na presença de um solvente. Solventes adequados para realizar a etapa (d) do processo da invenção incluem solventes orgânicos. Estes preferencialmente incluem água e hidrocarbonetos alifáticos, alicíclicos ou aromáticos tais como, por exemplo, éter de petróleo, hexano, heptano, ciclohexano, metilciclohexano, benzeno, tolueno, xileno ou decalina; hidrocarbonetos halogenados tais como, por exemplo, clorobenzeno, diclorobenzeno, diclorometano, clorofórmio, tetracloreto de carbono, dicloroetano ou tricloroetano; alcoóis tais como metanol, etanol, n- ou i-propanol, n-, i-, sec- ou terc-butanol, etanodiol, propano- 1,2-diol, etoxietanol, metoxi etanol, éter mono metílico de dietileno glicol, éter dimetílico, dietileno glicol; acetonitrilo, N-metil-2-pirrolidona (NMP), dimetilformamida (DMF), dimetil sulfóxido (DMSO), N,N- dimetilacetamida, nitrometano, nitrobenzeno, hexametilfosforamida (HMPT), 1,3-dimetil-2-imidazolidinona (DMI), a,3-dimetil-3,4,5,6-tetra- hidro-2(lH)-pirimidinona (DMPU), acetato de etila, acetona, butanona; éteres tais como éter dietílico, éter di-isopropílico, éter metil t-butílico, éter metil t-amílico, dioxana, tetra-hidrofurano, 1,2-dimetoxietano, 1,2- dietoxietano ou anisol; ou misturas dos mesmos. Preferencialmente, o solvente é selecionado entre água, acetonitrilo ou N-metil-2- pirrolidona.
[0273] Em outro aspecto, a presente invenção se refere a um conjugado de hidrogel-espaçador que pode ser obtido por meio do processo acima descrito. Processo para a preparação de uma pró-droga ligada a um suporte
[0274] Em outro aspecto, a presente invenção se refere a um processo para a preparação de uma pró-droga ligada compreendendo a etapa de: (e) reagir o hidrogel da etapa (b) ou (c) ou o conjugado de hidrogel- espaçador da etapa (d) com um reagente de encadeador de pró-droga e porção biologicamente ativa de fórmula (VII)
[0275] Ay1-L-D (VII), em que
[0276] Ay1 é um grupamento funcional para reação com uma amina do hidrogel da etapa (b) ou (c) ou para reação com o grupamento funcional Ax2 do conjugado de hidrogel-espaçador da etapa (d),
[0277] L é um encadeador de pró-droga;
[0278] D é uma porção biologicamente ativa; na presença de um solvente, para obter uma pró-droga ligada a um suporte.
[0279] A etapa (e) do processo pode ser realizada na presença de um solvente. Solventes adequados para realizar a etapa (e) do processo da invenção incluem solventes orgânicos. Estes preferencialmente incluem água e hidrocarbonetos alifáticos, alicíclicos ou aromáticos tais como, por exemplo, éter de petróleo, hexano, heptano, ciclohexano, metilciclohexano, benzeno, tolueno, xileno ou decalina; hidrocarbonetos halogenados tais como, por exemplo, clorobenzeno, diclorobenzeno, diclorometano, clorofórmio, tetracloreto de carbono, dicloroetano ou tricloroetano; alcoóis tais como metanol, etanol, n- ou i-propanol, n-, i-, sec- ou terc-butanol, etanodiol, propano- 1,2-diol, etoxietanol, metóxi etanol, éter mono metílico de dietileno glicol, éter dimetílico, dietileno glicol; acetonitrilo, N-metil-2-pirrolidona (NMP), dimetilformamida (DMF), dimetil sulfóxido (DMSO), N,N- dimetilacetamida, nitrometano, nitrobenzeno, hexametilfosforamida (HMPT), 1,3-dimetil-2-imidazolidinona (DMI), 1,3-dimetil-3,4,5,6-tetra- hidro-2(lH)-pyrimidinone (DMPU), acetato de etila, acetona, butanona; éteres tais como éter dietílico, éter di-isopropílico, éter metil t-butílico, éter metil t-amílico, dioxana, tetra-hidrofurano, 1,2-dimetoxietano, 1,2- dietoxietano ou anisol; ou misturas dos mesmos. Preferencialmente, o solvente é selecionado entre água, acetonitrilo ou N-metil-2- pirrolidona.
[0280] Se o reagente de encadeador de pró-droga e porção biologicamente ativa de fórmula (VII) reagir com uma amina do hidrogel da etapa (b) ou (c), então Ay1 é maleimida ou OH-, preferencialmente maleimida.
[0281] Se o reagente de encadeador de pró-droga e porção biologicamente ativa de fórmula (VII) reagir com Ax2 do conjugado de hidrogel-espaçador da etapa (d), a estrutura de Ay1 depende da estrutura de Ax2 com a qual Ay1 reage. Pares preferenciais de Ax2/Ay1 são selecionados entre os seguintes:
Figure img0060
Figure img0061
Figure img0062
em que
[0282] X0 é -OH, -NR1R1a, -SH, e -SeH;
[0283] R1, R1a, R1b são de modo independente uns dos outros selecionados entre o grupo compreendendo H, C1-6 alquila, C2-6 alquenila, C2-6 alquinila, C3-8 cicloalquila, heterociclila de 4 a 7 membros, heterobiciclila de 8 a 11 membros, fenila, naftila, indenila, indanila, e tetralinila; e
[0284] Ar é selecionado entre fenila, naftila, indenila, indanila, e tetralinila.
[0285] Mais preferencialmente, Ay1 é selecionado entre -SH ou - maleimida e o mais preferencialmente Ay1 é -SH e, por conseguinte, um Ax2 preferencial é -maleimida ou -SH e um Ax2 mais preferencial é - maleimida.
[0286] Em uma modalidade particularmente preferencial Ax2 é um tiol e Ay1 de fórmula (VII) é de fórmula (VIIa)
[0287] T- PG0 - S- (VIIa), em que
[0288] T é H ou uma porção de etiqueta;
[0289] PG0 é uma porção de ativação de enxofre; e
[0290] S é enxofre.
[0291] Em uma modalidade PG0 de fórmula (VIIa) é selecionado entre o grupo consistindo de
Figure img0063
em que as linhas tracejadas marcadas com um asterisco indicam anexação a T de fórmula (VIIa) e as linhas não marcadas indicam anexação ao enxofre de fórmula (VIIa);
[0292] Ar é uma porção aromática a qual é opcionalmente adicionalmente substituída;
[0293] R01, R03, R04 são de modo independente uns dos outros uma ligação química ou é C1-50 alquila; C2-50 alquenila; ou C2-50 alquinila, em que C1-50 alquila; C2-50 alquenila; e C2-50 alquinila são opcionalmente substituídos com um ou mais R3, os quais são os mesmos ou diferentes e em que C1-50 alquila; C2-50 alquenila; e C2-50 alquinila são opcionalmente interrompidos por um ou mais grupamentos selecionados entre o grupo consistindo de -Q-, -C(O)O-; -O-; -C(O)-; -C(O)N (R4)-; -S(O)2N(R4)-; -S(O)N(R4)-; -S(O)2-; -S(O)-; - N(R4)S(O)2N(R4a)-; -S-; -N(R4)-; -OC(O)R4; -N(R4)C(O)-; -N(R4)S(O)2-; - N(R4)S(O)-; -N(R4)C (O)O-; -N(R4)C(O)N(R4a)-; e -OC(O)N(R4R4a);
[0294] R02 é -H; C1-50 alquila; C2-50 alquenila; ou C2-50 alquinila, em que C1-50 alquila; C2-50 alquenila; e C2-50 alquinila são opcionalmente substituídos com um ou mais R3, os quais são os mesmos ou diferentes e em que C1-50 alquila; C2-50 alquenila; e C2-50 alquinila são opcionalmente interrompidos por um ou mais grupamentos selecionados entre o grupo consistindo de -Q-, -C(O)O-; -O-; -C(O)-; -C(O)N(R4)-; -S (O)2N(R4)-; -S(O)N(R4)-; -S(O)2-; -S(O)-; -N(R4)S(O)2N(R4a)-; -S-; -N (R4)-; -OC (O)R4; -N(R4)C(O)-; -N(R4)S(O)2-; -N(R4)S(O)-; -N(R4)C(O)O-; -N(R4)C (O)N(R4a)-; e -OC(O)N(R4R4a);
[0295] Q é selecionado entre o grupo consistindo de fenila; naftila; indenila; indanila; tetralinila; C3-10 cicloalquila; heterociclila de 4 a 7 membros; e heterobiciclila de 8 a 11 membros, em que T é opcionalmente substituído com um ou mais R3, os quais são os mesmos ou diferentes;
[0296] R3 é halogênio; -CN; oxo (=O); -COOR5; -OR5; -C(O)R5; - C(O)N(R5R5a); -S(O)2N(R5R5a); -S(O)N(R5R5a); -S(O)2R5; -S(O)R5; - N(R5)S(O)2N(R5aR5b); -SR5; -N(R5R5a); -NO2; -OC(O)R5; -N(R5)C(O)R5a; -N(R5)S(O)2R5a; -N(R5)S(O)R5a; -N(R5)C(O)OR5a; -N(R5)C(O)N(R5aR5b); -OC(O)N(R5R5a); ou C1-6 alquila, em que C1-6 alquila é opcionalmente substituído com um ou mais halogênio, os quais são os mesmos ou diferentes; e
[0297] R4, R4a, R5, R5a, R5b são selecionados de modo independente entre o grupo consistindo de -H; ou C1-6 alquila, em que C1-6 alquila é opcionalmente substituído com um ou mais halogênio, os quais são os mesmos ou diferentes.
[0298] Preferencialmente, R01 é C1-6 alquila. Ainda mais preferencialmente, R01 é selecionado entre -CH2-, -CH2-CH2-e -CH2- CH2-CH2-.
[0299] Preferencialmente, R02 é selecionado entre H e C1-6 alquila.
[0300] Preferencialmente, R03 é C1-6 alquila.
[0301] Preferencialmente, R04 é C1-6 alquila.
[0302] Preferencialmente, Ar é selecionado entre o grupo
Figure img0064
e em que linhas tracejadas marcadas com um asterisco indicam anexação a T de fórmula (VIIa) e as linhas tracejadas não marcadas indicam anexação ao resto de PG0 de fórmula (VIIa);
[0303] W é de modo independente um do outro O, S, ou N;
[0304] W’ é N; e em que Ar é opcionalmente substituído com um ou mais substituintesselecionados de modo independente entre o grupo consistindo de NO2, CI e F.
[0305] Mais preferencialmente, PG0 selecionado entre o grupo consistindo de
Figure img0065
em que as linhas tracejadas marcadas com um asterisco indicam anexação a T de fórmula (VIIa) e as linhas não marcadas indicam anexação ao enxofre de fórmula (VIIa); e Ar, R01, R02, R03 e R04 são usados conforme acima.
[0306] Mais preferencialmente, PG0 de fórmula (VIIa) é
Figure img0066
em que a linha tracejada marcada com um asterisco indica anexação a T de fórmula (VIIa) e a linha tracejada não marcada indica anexação ao enxofre de fórmula (VIIa).
[0307] O mais preferencialmente, PG0 de fórmula (VIIa) é em que a linha tracejada marcada com um asterisco indica anexação a T de fórmula (VIIa) e a linha tracejada não marcada indica anexação ao enxofre de fórmula (VIIa).
Figure img0067
[0308] Em uma modalidade preferencial T de fórmula (VIIa) é H.
[0309] Em outra modalidade, T de fórmula (VIIa) compreende uma porção polimérica. Preferencialmente, T de fórmula (VIIa) compreende um polímero selecionado entre o grupo consistindo de 2-metacriloil- oxietil fosfoil colinas, poli(acrílicos ácidos), poli(acrilatos), poli(acrilamidas), poli(alquilóxi) polímeros, poli(amidas), poli(amidoamines), poli(aminoácidos), poli(anidridos), poli(aspartamidas), poli(butíricos ácidos), poli(glicólicos ácidos), tereftalatos de polibutileno, poli(caprolactonas), poli(carbonatos), poli(cianoacrilatos), poli(dimetilacrilamidas), poli(ésteres), poli(etilenos), poli(alquileno glicóis), poli(etileno óxidos), poli(etil fosfatos), poli(etiloxazolinas), poli(glicólicos ácidos), poli(hidroxietil acrilatos), poli(hidroxietil-oxazolinas), poli(hidroximetacrilatos), poli(hidroxipropilmetacrilamidas), poli(hidroxipropil metacrilatos), poli(hidroxipropiloxazolinas), poli(imino carbonatos), poli(lácticos ácidos), poli(lácticos-co-glicólicos ácidos), poli(metacrilamidas), poli(metacrilatos), poli(metiloxazolinas), poli(organofosfazenos), poli(orto ésteres), poli(oxazolinas), poli(propileno glicóis), poli(siloxanos), poli(uretanos), poli(vinil alcoóis), poli(vinil aminas), poli(vinilmetil éteres), polivinilpirrolidonas), silicones, celuloses, carbometil celuloses, hidroxipropil metilcelluloses, quitinas, quitosanas, dextranos, dextrinas, gelatinas, ácidos hialurônicos e derivados, ácidos hialurônicos funcionalizados, mananas, pectinas, ramnogalacturonanos, amidos, hidroxialquil amidos, hidroxietil amidos e outros polímeros à base de carboidratos, xilanos, e copolímeros dos mesmos.
[0310] Se T de fórmula (VIIa) for uma porção polimérica, é preferencial que T tenha um peso molecular de no mínimo 1 kDa, preferencialmente de no mínimo 3 kDa e o mais preferencialmente de no mínimo 5 kDa. Se T de fórmula (VIIa) for uma porção polimérica, é preferencial que tenha um peso molecular de no máximo 1000 kDa, por exemplo, no máximo 800 kDa, no máximo 500 kDa, no máximo 250 kDa, no máximo 200 kDa, ou no máximo 100 kDa.
[0311] Em outra modalidade, T de fórmula (VIIa) compreende um ligante de afinidade. Preferencialmente, T de fórmula (VIIa) compreende, mais preferencialmente T é uma porção ligante de afinidade selecionada entre o grupo consistindo de 4- aminobenzamidina, 3-(2'-aminobenzidriloxi)tropano, ε-aminocaproil-p- clorobenzilamida, ácido 1-amino-4-[3-(4,6-diclorotriazin-2-ilamino)-4- sulfofenilamino]antraquinona-2-sulfônico, di-hidrocloreto de 2-(2'- amino-4'-metilfeniltio)-N,N-dimetilbenzilamina, angiopoietina-1, aptâmeros, ácido arotinóide, avidina, biotina, calmodulina, cocaetileno, citosporona B, N,N-dihexil-2-(4-fluorofenil)indol-3-acetamida, N,N- dipropil-2-(4-clorofenil)-6,8-dicloro-imidazo[l,2-a]piridina-3-acetamida, 5-fluoro-2'-deoxiuridina 5'-(p-aminofenil) monofosfato, S-hexil-L- glutationa, (S,S)-4-fenil-α-(4-feniloxazolidin-2-ilideno)-2-oxazolina-2- acetonitrilo, Pro-Leu-Gli hidroxamato, ácido 2-(4-(2- (trifluorometil)fenil)piperidina-1-carboxamido)benzóico, cloreto de trimetil(m-aminofenil)amônio, urocortina III, cofatores como trifosfato de adenosina, s-adenosil metionina, ácido ascórbico, cobalamina, coenzima A, coenzima B, coenzima M, coenzima Q, coenzima F420, trifosfato de citidina, mononucleotídeo flavina, dinucleotídeo flavina adenina, glutation, heme, lipoamida, menaquinona, metanofurano, metilcobalamina, molibdopterina, NAD+, NADP+, açúcares de nucleotídeo, 3'-fosfoadenosina-5'-fosfossulfato, fosfato de piridoxal, polihistidinas, pirroloquinolina quinona, riboflavina, estreptavidina, tetra-hidrobiopterina, tetra-hidrometanopterina, ácido tetra-hidro fólico, proteína de veículo de biotina carboxil (BCCP), proteína de ligação de quitina, proteínas de ligação FK506, etiqueta FLAG, proteína fluorescente verde, glutation-S-transferase, hemaglutinina, proteína de ligação de maltose, etiqueta myc, NusA, epítope de proteína C, etiqueta S-tag, etiqueta strep-tag, tiorredoxinas, triazinas e fragmentos de anticorpos.
[0312] Se T de fórmula (VIIa) compreender um ligante de afinidade, é preferencial que o ligante de afinidade seja uma polihistidina.
[0313] Em outra modalidade, T de fórmula (VIIa) compreende uma porção carregada. Preferencialmente, T de fórmula (VIIa) compreende no mínimo uma carga positiva e/ou negativa. Entende-se que o número de cargas positivas e negativas de T é desigual para assegurar que T seja uma molécula carregada.
[0314] Preferencialmente, T de fórmula (VIIa) compreende no mínimo uma carga positiva ou negativa, por exemplo, no mínimo duas cargas positivas ou negativas, no mínimo três cargas positivas ou negativas, no mínimo quatro cargas positivas ou negativas, no mínimo cinco cargas positivas ou negativas, no mínimo seis cargas positivas ou negativas, no mínimo sete cargas positivas ou negativas, no mínimo oito cargas positivas ou negativas, no mínimo nove cargas positivas ou negativas, no mínimo dez cargas positivas ou negativas, no mínimo onze cargas positivas ou negativas, no mínimo doze cargas positivas ou negativas, no mínimo treze cargas positivas ou negativas, no mínimo quatorze cargas positivas ou negativas ou no mínimo quinze cargas positivas ou negativas.
[0315] Mais preferencialmente, T de fórmula (VIIa) compreende no mínimo uma carga positiva, tal como uma carga positiva, duas cargas positivas, três cargas positivas, quatro cargas positivas, cinco cargas positivas, seis cargas positivas, sete cargas positivas, oito cargas positivas, nove cargas positivas, dez cargas positivas, onze cargas positivas, doze cargas positivas, treze cargas positivas, quatorze cargas positivas ou quinze cargas positivas. Mais preferencialmente, T de fórmula (VIIa) compreende uma carga positiva, duas cargas positivas, três cargas positivas, quatro cargas positivas, cinco cargas positivas, seis cargas positivas, sete cargas positivas ou oito cargas positivas. Mais preferencialmente, T de fórmula (VIIa) compreende duas cargas positivas, três cargas positivas, quatro cargas positivas, cinco cargas positivas ou seis cargas positivas.
[0316] Preferencialmente, a no mínimo uma carga positiva de T de fórmula (VIIa) é proporcionada por um amônio ou fosfônio.
[0317] Preferencialmente, T de fórmula (VIIa) compreende uma poliamida contendo pelo menos um resíduo amônio quaternário e/ou no mínimo um compreendendo Preferencialmente, são grupamentos funcionais amina. Preferencialmente, T de fórmula (VIIa) compreende no mínimo um resíduo amônio quaternário e/ou no mínimo um resíduo amônio protonado. Ainda mais preferencialmente, T de fórmula (VIIa) compreende quatro resíduos amônio quaternário e/ou quatro resíduos amônio protonado.
[0318] Preferencialmente, T de fórmula (VIIa) compreende em forma ligada uma poliamina. Mais preferencialmente, T de fórmula (VIIa) compreende em forma ligada uma poliamina selecionada entre o etileno diamina, 1,3-diaminopropano, cadaverina, putrescina, espermina, T de fórmula (VIIa)
[0319] Ainda mais preferencialmente, T de fórmula (VIIa) compreende uma porção de fórmula (a):
Figure img0068
em que a linha tracejada indica anexação a PG0;
[0320] R1, R1a, R1b, R2, R2a, R2b, R3, R3a, R3b, R4, R4a, R4b são de modo independente uns dos outros H ou metila;
[0321] cada m é de modo independente um do outro 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, ou 8;
[0322] cada n é de modo independente um do outro 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, ou 8;
[0323] cada x é de modo independente um do outro 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8:
[0324] cada y é de modo independente um do outro 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8; e
[0325] SP é uma porção de espaçador.
[0326] Preferencialmente, a porção de fórmula (a) é simétrica, isto é, a porção
Figure img0069
é a mesma que a porção
Figure img0070
[0327] Em uma modalidade R1, R1a, R1b de fórmula (a) são todos metila.
[0328] Em outra modalidade R1 de fórmula (a) é H e R1a e R1b de fórmula (a) são ambos metila.
[0329] Em uma modalidade R2, R2a, R2b de fórmula (a) são todos metila.
[0330] Em outra modalidade R2 de fórmula (a) é H e R2a e R2b de fórmula (a) são ambos metila.
[0331] Em uma modalidade R3, R3a, R3b de fórmula (a) são todos metila.
[0332] Em outra modalidade R3 de fórmula (a) é H e R3a e R3b de fórmula (a) são ambos metila.
[0333] Em uma modalidade R4, R4a, R4b de fórmula (a) são todos metila.
[0334] Em outra modalidade R4 de fórmula (a) é H e R4a e R4b de fórmula (a) são ambos metila.
[0335] Preferencialmente, m de fórmula (a) é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6. Mais preferencialmente, m de fórmula (a) é 2, 3, 4, ou 5, ainda mais preferencialmente, m de fórmula (a) é 3, 4 ou 5 e o mais preferencialmente, m de fórmula (a) é 4.
[0336] Preferencialmente, n de fórmula (a) é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6. Mais preferencialmente, n de fórmula (a) é 2, 3, 4, ou 5, ainda mais preferencialmente, n de fórmula (a) é 2, 3 ou 4 e o mais preferencialmente, n de fórmula (a) é 3.
[0337] Preferencialmente, x de fórmula (a) é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6. Mais preferencialmente, n de fórmula (a) é 1, 2, 3, ou 4, ainda mais preferencialmente, x de fórmula (a) é 1, 2, ou 3 e o mais preferencialmente, x de fórmula (a) é 1.
[0338] Preferencialmente, y de fórmula (a) é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6. Mais preferencialmente, y de fórmula (a) é 1, 2, 3, ou 4, ainda mais preferencialmente, y de fórmula (a) é 1, 2, ou 3 e o mais preferencialmente, y de fórmula (a) é 1.
[0339] Em uma modalidade preferencial, R1, R1a, R1b, R2, R2a, R2b, R3, R3a, R3b, R4, R4a, R4b são metil; m é 4; n é 3; y é 1 e x é 1.
[0340] Em outra modalidade preferencial, R1, R2, R3, R4 são H; R1a, R1b, R2a, R2b, R3a, R3b, R4a, R4b são metil, m é 4; n é 3; y é 1 e x é 1.
[0341] Contra-íons preferenciais para T de fórmula (I) são Cl-, TFA- e S04-.
[0342] Se Ay1 for de fórmula (VIIa) e T for uma porção de etiqueta, então T pode ser usado para purificar reagentes encadeadores de pró- droga-porção biologicamente ativa de fórmula (VII) os quais têm um número definido de porções Ay1-L por porção D de uma mistura de reagentes encadeadores de pró-droga e porção biologicamente ativa de fórmula (VII) na qual cada D é conectado a x porções Ay1-L e em que x é um inteiro positivo, tal como 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10. T portanto pode ser usado para isolar monoconjugados do reagente encadeador de pró-droga e porção biologicamente ativa de fórmula (VII).
[0343] O método de isolamento de alguns monoconjugados do encadeador de pró-droga-porção biologicamente ativa depende da porção de etiqueta T de fórmula (VIIa).
[0344] Se T de fórmula (VIIa) for uma porção polimérica com um peso molecular de no mínimo 10 % (em peso/peso) de D de fórmula (VII), a etapa de isolamento é preferencialmente cromatografia por exclusão de tamanho.
[0345] Se T de fórmula (VIIa) compreender um ligante de afinidade, a etapa de isolamento é preferencialmente cromatografia por afinidade.
[0346] Se T de fórmula (VIIa) compreender uma porção carregada, a etapa de isolamento é preferencialmente cromatografia de permuta iônica.
[0347] Em uma modalidade preferencial T de fórmula (VIIa) é uma porção carregada e a etapa de isolamento é preferencialmente cromatografia de permuta iônica.
[0348] Preferencialmente, a etapa (e) do processo compreende a etapa de reagir um conjugado de hidrogel-espaçador da etapa (d) com um reagente de pró-droga-porção biologicamente ativa de fórmula (VII).
[0349] Condições de reação adequadas são descritas nas seções de Exemplos e são conhecidas por uma pessoa versada na arte.
[0350] Consequentemente, o processo para a preparação de uma pró-droga ligada a um suporte preferencialmente compreende as etapas de: (d) reagir o hidrogel da etapa (b) ou (c) com um reagente espaçador de fórmula (VI)
[0351] Ax1-S0-Ax2 (VI), em que
[0352] S0 é selecionado entre o grupo compreendendo C1-50 alquila, C2-50 alquenila e C2-50 alquinila, cujo fragmento é opcionalmente interrompido por um ou mais grupamento(s) selecionado(s) entre -NH-, -N(C1-4 alquil)-, -O-, -S, -C(O)-, -C(O)NH, - C(O)N(C1-4 alquil)-, -O-C(O)-, -S(O)-, -S(O)2-, heterociclila de 4 a 7 membros, fenila e naftila;
[0353] Ax1 é um grupamento funcional para reação com um grupamento amina do hidrogel; e
[0354] Ax2 é um grupamento funcional;
[0355] na presença de um solvente para obter um conjugado de hidrogel-espaçador; e (e) reagir o conjugado de hidrogel-espaçador da etapa (d) com um reagente encadeador de pró-droga-porção biologicamente ativa de fórmula (VII)
[0356] Ay1-L-D (VII), em que
[0357] Ay1 é um grupamento funcional para reação com o grupamento funcional Ax2 do conjugado de hidrogel-espaçador da etapa (d),
[0358] L é um encadeador de pró-droga;
[0359] D é uma porção biologicamente ativa; na presença de um solvente, para obter uma pró-droga ligada a um suporte.
[0360] Combinações preferenciais de Ax2 e Ay1 são conforme revelado acima.
[0361] O reagente encadeador de pró-droga ou a porção de encadeador de pró-droga como parte do reagente encadeador de pró- droga e porção biologicamente ativa pode ter a estrutura de qualquer porção de encadeador de pró-droga conhecida na arte.
[0362] Preferencialmente, o reagente encadeador de pró-droga ou a porção de encadeador de pró-droga como parte do reagente encadeador de pró-droga e porção biologicamente ativa é um reagente ou porção encadeador de pró-droga traceless.
[0363] Um encadeador de pró-droga preferencial é revelado e pode ser obtido conforme descrito na Publicação do Requerimento de Patente Internacional No. WO 2005/099768 A2. Por conseguinte, um reagente encadeador de pró-droga e porção biologicamente ativa preferencial Ay1-L-D tem uma estrutura de fórmula h-i) ou (h-ii):
Figure img0071
em que
[0364] Ay1 é um grupamento funcional conforme definido na etapa (e),
[0365] D é uma porção biologicamente ativa a qual é conectada a L através de um grupamento amina do fármaco correspondente;
[0366] X é uma porção de espaçador tal como R5-Y6,
[0367] Y1, Y2 são de modo independente O, S ou NR6,
[0368] Y3, Y5 são de modo independente O ou S,
[0369] Y4 é O, NR6 ou C(R7)(R8)-,
[0370] Y6 é O, S, NR6, succinimida, maleimida, ligações carbono- carbono insaturadas ou qualquer heteroátomo contendo um par de elétrons livres ou está ausente,
[0371] R2, R3 são de modo independente um dos outro selecionados entre hidrogel, alquila linear, ramificado ou cíclico substituído ou não substituído ou heteroalquila, arilos, arilos substituídos, heteroarila substituída ou não substituída, ciano, nitro, halogênio, carbóxi, carboxilalquila, alquilcarbonila ou carboxamidoalquila;
[0372] R4 é selecionado entre hidrogênio, alquila linear, ramificado ou cíclico substituído ou não substituído ou heteroalquila, arila, arilasubstituída, heteroarila substituída ou não substituída, alcóxi linear, ramificado ou cíclico substituído ou não substituído, heteroalquilóxi linear, ramificado ou cíclico substituído ou não substituído, arilóxi ou heteroarilóxi, ciano, halogênio,
[0373] R5 é selecionado entre alquil linear, ramificado ou cíclico substituído ou não substituído ou heteroalquila, arilos, arilos substituídos, heteroarilos substituídos ou não substituídos,
[0374] R6 é selecionado entre hidrogel, alquil linear, ramificado ou cíclico substituído ou não substituído ou heteroalquila, arilos, heteroarilos substituídos ou não substituídos,
[0375] R7, R8 são selecionados de modo independente entre hidrogênio, alquila linear, ramificado ou cíclico substituído ou não substituído ou heteroalquila, arilos, arilos substituídos, heteroarilos substituídos ou não substituídos, carboxialquila, alquilcarbonila, carboxamidoalquila, ciano ou halogênio,
[0376] W é selecionado entre alquila linear, ramificado ou cíclico substituído ou não substituído, arilos, arilos substituídos, heteroalquila linear, ramificado ou cíclico substituído ou não substituído, heteroarilos substituídos ou não substituídos,
[0377] Nu é a nucleófilo,
[0378] n é zero ou um inteiro positivo, e
[0379] Ar é um hidrocarboneto aromático multi-substituído ou um heterociclo aromático multi-substituído.
[0380] Entende-se que nas fórmulas (h-i) e (h-ii) L corresponde à porção ligando Ay1 e D.
[0381] Preferencialmente, R2, R3, R4, R5, R6, R7 e R8 de fórmula (h i) e (h-ii) são selecionados de modo independente entre H, C1-6 alquila, C2-6 alquenila e C2-6 alquinila.
[0382] Preferencialmente, Y6 de fórmula (h-i) e (h-ii) é C1-20 alquila, C2-20 alquenila ou C2-20 alquinila.
[0383] Preferencialmente, Nu de fórmula (h-i) e (h-ii) é selecionado entre o grupo de nucleófilos consistindo de grupamentos amino primário, secundário e terciário, tiol, ácido carboxílico, hidroxilamina, hidrazina e heteroarila contendo nitrogênio.
[0384] Preferencialmente, W de fórmula (h-i) e (h-ii) é -(CR9R10)b-, em que R9 e R10 são selecionados de modo independente entre H, C1-6 alquila, C2-6 alquenila e C2-6 alquinila e em que b é 1 , 2, 3, 4 ou 5.
[0385] Preferencialmente, n de fórmula (h-i) e (h-ii) é 0, 1 ou 2, mais preferencialmente, n é 0 ou 1 e o mais preferencialmente n é 0.
[0386] Preferencialmente, Ar de fórmula (h-i) e (h-ii) é selecionado entre
Figure img0072
[0387] Outros encadeadores de pró-droga preferenciais são revelados e podem ser obtidos conforme descrito na Publicação do Requerimento de Patente Internacional No. WO 2006/136586 A2. Por conseguinte, um reagente encadeador de pró-droga e porção biologicamente ativa preferencial Ay1-L-D tem uma estrutura de fórmula (h-iii), (h-iv) ou (h-v):
Figure img0073
em que
[0388] Ay1 é um grupamento funcional conforme definido na etapa (e);
[0389] D é uma porção biologicamente ativa a qual é conectada a L através de um grupamento amina do fármaco correspondente formando uma ligação de amida;
[0390] X é uma porção de espaçador tal como R13-Y1;
[0391] Y1 é O, S, NR6, succinimida, maleimida, ligações de carbono-carbono insaturadas ou qualquer heteroátomo-contendo um par de elétrons livre ou está ausente;
[0392] R13 é selecionado entre alquila linear, ramificado ou cíclico substituído ou não substituído ou heteroalquila, arilos, arilos substituídos, heteroarilos substituídos ou não substituídos;
[0393] R2 e R3 são selecionados de modo independente entre hidrogênio, grupamentos acila, ou grupamentos de proteção para grupamentos hidroxila;
[0394] R4 a R12 são selecionados de modo independente entre hidrogênio, alquila linear, ramificado ou cíclico substituído ou não substituído ou heteroalquila, arilos, arilos substituídos, heteroarilos substituídos ou não substituídos, ciano, nitro, halogênio, carbóxi, carboxamida.
[0395] Entende-se que nas fórmulas (h-iii), (h-iv) e (h-v) L corresponde à porção ligando Ay1 e D.
[0396] Preferencialmente, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11 e R12 de fórmula (h-iii), (h-iv) e (h-v) são selecionados de modo independente entre H, C1-6 alquila, C2-6 alquenila e C2-6 alquinila.
[0397] Preferencialmente, nas fórmulas (h-iii), (h-iv) e (h-v) Yl é C1 20 alquila, C2-20 alquenila ou C2-20 alquinila.
[0398] Outro encadeador de pró-droga preferencial é revelado e pode ser obtido conforme descrito na Publicação do Requerimento de Patente Internacional No. WO 2009/095479 A2. Por conseguinte, um reagente de encadeador de pró-droga e porção biologicamente ativa preferencial Ay1-L-D tem uma estrutura de fórmula (h-vi):
Figure img0074
em que
[0399] Ay1 é um grupamento funcional conforme definido na etapa (e);
[0400] D é uma porção biologicamente ativa a qual é conectada ao resto da molécula através de uma amina aromática do fármaco correspondente formando uma ligação de amida;
[0401] C(R4R4A); C(R4R4A);
[0402]X1 é C; ou S(O);
[0403] X2 é C(R7, R7A); ou C(R7, R7a)-C(R8, R8A);
[0404]R1, R1a, R2, R2A, R3, R3A, R4, R4A, R5, R5A, R6, R7, R7A, R8, R8A são selecionados de modo independente entre o grupo consistindo de H; e C1-4 alquila;
[0405] opcionalmente, um ou mais dos pares R1a/R4A, R1a/R5A, R4A/R5A, R4A/R5A, R7A/R8A formam uma ligação química;
[0406] opcionalmente, um ou mais dos pares R1/R1a R2/R2A, R4/R4A, R5/R5A, R7/R7A, R8/R8A são unidos juntos com o átomo ao qual eles são anexados para formar um C3-8 cicloalquila; ou heterociclila de 4 a 7 membros;
[0407] opcionalmente, um ou mais dos pares R1/R4, R1/R5, R1/R6, R4/R5, R7/R8, R2/R3 são unidos juntos com os átomos aos quais eles são anexados para formar um anel A; opcionalmente, R3/R3A são unidos juntos com o átomo de nitrogênio ao qual eles são anexados para formar um heterociclo de 4 a 7 membros;
[0408] A é selecionado entre o grupo consistindo de fenila; naftila; indenila; indanila; tetralinila; C3-10 cicloalquila; heterociclila de 4 a 7 membros; e heterobiciclil de 8 a 11 membros;
[0409] contanto que um hidrogênio de R1, R1a, R2, R2A, R3, R3A, R4, R4A, R5, R5A, R6, R7, R7A, R8 ou R8A seja substituído por Ay1.
[0410] Entende-se que na fórmula (h-vi) L corresponde à porção ligando Ay1 e D.
[0411] Outro encadeador de pró-droga preferencial é revelado e pode ser obtido conforme descrito na Publicação dos Requerimentos de Patente Internacional Nos. WO 2011/012721 A1 e WO 2011/012722 A1. Por conseguinte, um reagente de encadeador de pró-droga-porção biologicamente ativa preferencial Ay1-L-D tem uma estrutura de fórmula (h-vii):
Figure img0075
[0412] em que
[0413] D é uma porção biologicamente ativa a qual é conectada ao resto da molécula através de uma amina aromática do fármaco correspondente formando uma ligação de amida;
[0414] Ay1 é um grupamento funcional conforme definido na etapa (e);
[0415] X1 é C(R1Rla) ou um fragmento cíclico selecionado entre C3 8 cicloalquila, heterociclila de 4 a 7 membros, fenila, naftila, indenila, indanila, tetralinila, ou heterobiciclila de 8 a 11 membros, em que
[0416] no caso de X1 ser um fragmento cíclico, o fragmento cíclico referido é incorporado em L1 através de dois átomos do anel adjacente e o átomo do anel de X1, o qual está adjacente ao átomo de carbono da ligação de amida, também é um átomo de carbono;
[0417] X2 é uma ligação química ou é selecionado entre C(R3R3a), N(R3), O, C(R3R3a)-C(R4R4a), C(R3R3a)-N(R4), N(R3)-C(R4R4a), C(R3R3a) -O, ou O-C(R3R3a), em que
[0418] no caso de X1 ser um fragmento cíclico, X2 é uma ligação química, C(R3R3a), N(R3) ou O;
[0419] opcionalmente, no caso de X1 ser um fragmento cíclico e X2 ser C(R3R3a), a ordem do fragmento X1 e do fragmento X2 dentro de L1 pode ser alterada e o fragmento cíclico é incorporado em L1 através de dois átomos do anel adjacente.
[0420] R1, R3 e R4 são selecionados de modo independente entre o grupo consistindo de H, C1-4 alquila e -N(R5R5a);
[0421] R1a, R2, R3a, R4a e R5a são selecionados de modo independente entre o grupo consistindo de H, e C1-4 alquila;
[0422] R5 é C(O)R6;
[0423] R6 é C1-4 alquila;
[0424] opcionalmente, um dos pares R1a/R4a, R3a/R4a ou R1a/R3a formam uma ligação química;
[0425] contanto que um hidrogênio de R1, R1a, R2, R2a, R3, R3a, R4, R4a, R5, R5a ou R6 seja substituído por Ay1 .
[0426] Entende-se que na fórmula (h-vii) L corresponde à porção ligando Ay1 e D.
[0427] Outro encadeador de pró-droga preferencial é revelado e pode ser obtido conforme descrito na Publicação do Requerimento de Patente Internacional No. WO 2011/089214 A1. Por conseguinte, um reagente de encadeador de pró-droga e porção biologicamente ativa preferencial Ay1-L-D tem uma estrutura de fórmula (h-viii):
Figure img0076
[0428] Ay1 é um grupamento funcional conforme definido na etapa (e);
[0429] D é uma porção biologicamente ativa a qual é conectada ao resto da molécula através de uma hidroxila aromática (-OH) do fármaco correspondente formando uma ligação de carbamato;
[0430] R1 é selecionado entre o grupo consistindo de C1-4 alquila; heteroalquila; C3-8 cicloalquila; e
Figure img0077
[0431] R2, R2a, R3 e R3a são selecionados de modo independente entre hidrogênio, C1-4 alquila linear, ramificado ou cíclico substituído ou não substituído ou heteroalquila;
[0432] cada d é de modo independente 2, 3 ou 4;
[0433] contanto que um hidrogênio de R1, R2, R2a, R3, ou R3a seja substituído por Ay1.
[0434] Entende-se que na fórmula (h-viii) L corresponde à porção ligando Ay1 e D.
[0435] Outro encadeador de pró-droga preferencial é revelado e pode ser obtido conforme descrito na Publicação do Requerimento de Patente Internacional No. WO 2011/089216 A1. Por conseguinte, um reagente de encadeador de pró-droga e porção biologicamente ativa preferencial Ay1-L-D tem uma estrutura de fórmula (h-ix):
Figure img0078
em que
[0436] Ay1 é um grupamento funcional conforme definido na etapa (e);
[0437] D é uma porção biologicamente ativa a qual é conectada ao resto da molécula através de uma amina alifática do fármaco correspondente formando uma ligação de amida;
[0438] X1 é selecionado entre O, S ou CH-R1a;
[0439] R1 e R1a são selecionados de modo independente from H, OH, CH3;
[0440] R2, R2a, R4 e R4a são selecionados de modo independente entre H e C1-4 alquila,
[0441] R3 e R3a são selecionados de modo independente entre H, C1-4 alquila, e R5;
[0442] R5 é selecionado entre
Figure img0079
em que linhas tracejadas indicam anexação ao resto de a porção, contanto que um hidrogênio de R1, R1a, R2, R2a, R3, R3a, R4, R4a e R5 seja substituído por Ay1.
[0443] Entende-se que na fórmula (h-ix) L corresponde à porção ligando Ay1 e D.
[0444] Preferencialmente, R3 de fórmula (h-ix) é H e R3a de fórmula (h-ix) é R5.
[0445] Preferencialmente, um de R4/R4a de fórmula (h-ix) é H.
[0446] Opcionalmente, um ou mais dos pares R3/R3a, R4/R4a, R3/R4 de fórmula (h-ix) pode formar de modo independente um ou mais fragmentos cíclicos selecionados entre C3-8 cicloalquila, heterociclila de 4 a 7 membros, ou heterobiciclila de 8 a 11 membros.
[0447] Opcionalmente, R3, R3a, R4 e R4a de fórmula (h-ix) são adicionalmente substituídos com C1-6 alquila, C2-6 alquenila, C2-6 alquinila, fenila, heterociclo de 4 a 7 membros ou halogênio.
[0448] Outro encadeador de pró-droga preferencial é revelado e pode ser obtido conforme descrito na Publicação do Requerimento de Patente Internacional No. WO 2011/089215 A1. Por conseguinte, um reagente de encadeador de pró-droga e porção biologicamente ativa preferencial Ay1-L-D tem uma estrutura de fórmula (h-x):
Figure img0080
em que
[0449] Ay1 é um grupamento funcional conforme definido na etapa (e);
[0450] D é uma porção biologicamente ativa a qual é conectada ao resto da molécula através de uma amina aromática do fármaco correspondente formando uma ligação de amida;
[0451] R1, R1a, R2, R3, R3a, R4 e R4a são selecionados de modo independente entre H e C1-4 alquila;
[0452] opcionalmente, quaisquer dois de R1, R1a, R2, R3, R3a, R4 e R4a podem formar de modo independente um ou mais fragmentos cíclicos selecionados entre C3-8 cicloalquila, heterociclila de 4 a 7 membros, fenila, naftila, indenila, indanila, tetralinila, ou heterobiciclila de 8 a 11 membros;
[0453] opcionalmente, R1, R1a, R2, R3, R3a, R4 e R4a são adicionalmente substituídos com um substituinte selecionado entre o grupo compreendendo C1-6 alquila, C2-6 alquenila, C2-6 alquinila, C3-8 cicloalquila, heterociclila de 4 a 7 membros, fenila, naftila, indenila, indanila, tetralinila, ou heterobiciclila de 8 a 11 membros;
[0454] contanto que um hidrogênio de R1, R1a, R2, R3, R3a, R4 e R4a seja substituído por Ay1.
[0455] Entende-se que na fórmula (h-x) L corresponde à porção ligando Ay1 e D.
[0456] Outro encadeador de pró-droga preferencial é revelado e pode ser obtido conforme descrito na Publicação de Patente No. PCT/EP2012/065748. Por conseguinte, um reagente de encadeador de pró-droga-porção biologicamente ativa preferencial Ay1-L-D tem uma estrutura de fórmula (h-xi):
Figure img0081
em que
[0457] Ay1 é um grupamento funcional conforme definido na etapa (e);
[0458] D é uma porção biologicamente ativa a qual é conectada ao resto da molécula através de um grupamento ácido carboxílico (- (C=O)-OH) do fármaco correspondente formando uma ligação de éster carboxílico;
[0459] R1 é selecionado entre o grupo de alquila não substituída; alquila substituída; fenila não substituída; fenila substituída; naftila não substituída; naftila substituída; indenila não substituída; indenila substituída; indanila não substituída; indanila substituída; tetralinila não substituída; tetralinila substituída; C3-10 cicloalquila não substituída; C310 cicloalquila substituída; heterociclila de 4 a 7 membros não substituída; heterociclila de 4 a 7 membros substituída; heterobiciclila de 8 a 11 membros não substituída; e heterobiciclila de 8 a 11 membros substituída;
[0460] R2 é selecionado entre H, alquila não substituída, e alquila substituída;
[0461] R3 e R4 são selecionados de modo independente entre o grupo consistindo de H, alquila não substituída, e alquila substituída;
[0462] e é 0 ou 1 ;
[0463] opcionalmente, R1 e R3 são unidos juntos com os átomos aos quais eles são anexados para formar um anel A;
[0464] A é selecionado entre o grupo consistindo de C3-10 cicloalquila; heterociclila alifática de 4 a 7 membros; e heterobiciclila alifática de 8 a 11 membros, em que A é não substituído ou substituído;
[0465] Q é selecionado entre o grupo compreendendo C1-50 alquila, C2-50 alquenila ou C2-50 alquinila, cujo fragmento é opcionalmente interrompido por um ou mais grupamento(s) selecionado(s) entre -NH-, -N(C1-4 alquil)-, -O-, -S-, -C(O)-, -C(O)NH-, - C(O)N(C1-4 alquil)-, -O-C (O)-, -S(O)-, -S(O)2-, heterociclila de 4 a 7 membros, fenil ou naftil.
[0466] Entende-se que na fórmula (h-xi) L corresponde à porção ligando Ay1 e D.
[0467] Outro encadeador de pró-droga preferencial é revelado e pode ser obtido conforme descrito na Publicação de Patente Européia No. EP12165516. Por conseguinte, um reagente de encadeador de pró-droga e porção biologicamente ativa preferencial Ay1-L-D tem a estrutura de fórmula (h-xii):
Figure img0082
em que
[0468] Ay1 é um grupamento funcional conforme definido na etapa (e);
[0469] D é uma porção biologicamente ativa a qual é conectada ao resto da molécula através de um grupamento hidroxila do fármaco correspondente formando uma ligação éster ou carbamato
[0470] Y é -C(R1)(R1a)-; ou -N(R1)-;
[0471] X é -C(R4)(R4a)-; -N(R4)-; -O-; -C(R4)(R4a)-C(R5)(R5a)-; - C(R4)(R4a)-N(R6)-; -N(R6)-C(R4)(R4a)-; -C(R4)(R4a)-O-; -O-C(R4)(R4a)-; - C(O)-N(R6)-; ou -N(R6)-C(O)-;
[0472] X1 é ou -
[0473] X2 é -C(R7)(R7A)-; ou -C(R7)(R7a)-C(R8)(R8A)-;
[0474] X3 é =O; =S; ou =N-CN;
[0475] R1 R1a R2 R2A R3 R3A R4 R4A R5 R5A R6 R7 R7A R8 R8A são selecionados de modo independente entre o grupo consistindo de H; C1-6 alquila, C2-6 alquenila, C2-6 alquinila, C1-20 heteroalquila e Y1- T; e de modo independente nenhum, um ou mais dos pares R1a/R4A, R1a/R5A, R4A/R5A, R7A/R8A estão ausentes e os átomos de carbono correspondentes aos quais eles são anexados formam uma ligação dupla cis;
[0476] Y1 é uma ligação química ou C1-6 alquila, C2-6 alquenila, C2-6 alquinila;
[0477] T é selecionado entre o grupo consistindo de fenila; naftila; indenila; indanila; tetralinila; C3-10 cicloalquila; heterociclila de 4 a 7 membros; ou heterobiciclila de 8 a 11 membros, em que T é opcionalmente substituído com um ou mais R9, os quais são os mesmos ou diferentes;
[0478] R9 é halogênio; -CN; oxo (=O); -C(O)OH; -OH; -S(O)2NH2; - S(O)NH2; -S(O)2OH; -S(O)OH; -SH; -NH2; -N02; C1-6 alquila, ou C1-10 heteroalquila;
[0479] opcionalmente, um ou mais dos pares R1/R1a, R1/R4, R1/R6, R1/R5, R2/R2A, R2/R3, R4/R4A, R4/R5, R5/R5A, R7/R7A, R7/R8, R8/R8A são unidos juntos com o átomo ao qual eles são anexados para formar um anel T;
[0480] opcionalmente, R3/R3A são unidos juntos com o átomo de nitrogênio ao qual eles são anexados para formar um heterociclo de 4 a 7 membros;
[0481] contanto que um hidrogênio de R1 , R1a, R2, R2A, R3, R3A, R4, R4A, R5, R5A, R6, R7, R7A, R8 ou R8A seja substituído por Ay1.
[0482] Entende-se que na fórmula (h-xii) L corresponde a uma porção ligando Ay1 e D.
[0483] Em uma modalidade preferencial, o reagente encadeador de pró-droga-porção biologicamente ativa Ay1-L-D é de fórmula (h-i) ou (h-ii).
[0484] Em outra modalidade preferencial, o reagente encadeador de pró-droga-porção biologicamente ativa Ay1-L-D é de fórmula (h-vi).
[0485] Qualquer fármaco que compreende no mínimo um grupamento funcional pode ser conjugado a um encadeador de pró- droga reagente para obter um reagente encadeador de pró-droga- porção biologicamente ativa Ay1-L-D. O fármaco referido é selecionado entre o grupo compreendendo polipeptídeos, proteínas, e oligonucleotídeos. Preferencialmente, o fármaco é uma proteína.
[0486] Preferencialmente, D tem um peso molecular variando entre 2 e 500 kDa, mais preferencialmente entre 5 e 250 kDa, mais preferencialmente entre 5 e 100 kDa e o mais preferencialmente entre 10 e 60 kDa.
[0487] Em uma modalidade o fármaco é um fármaco de proteína. Preferencialmente, o fármaco é um fármaco de proteína que modula a atividade de um ou mais dos alvos biológicos selecionados entre fatores de crescimento de fibroblasto básicos (bFGF), fatores de crescimento de fibroblasto acidíferos (aFGF), fatores de crescimento transformantes alfa (TGFa), fatores de crescimento transformantes beta (TGFβ), fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF), angiogenina, fator de crescimento de células endoteliais derivado de plaquetas (PD-ECGF), interleucina- 1 (IL-1) interleucina-8 (IL-8), interleucina- 12, fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), angiopoietina-I, Del-I, folistatina, fator estimulante de colônia de granulócitos (G-CSF), fator de crescimento de hepatócitos (HGF), leptina, midquina, fator de crescimento placentário, pleiotrofina (PTN), progranulina, proliferina, fator de necrose tumoral -alfa (TNF-alfa), angioarrestina, angio estatina (fragmento de plasminogênio), anti- trombina antiangiogênica III, inibidor derivado de cartilagem (CDI), fragmento do complemento CDS9, endostatina (fragmento de colágeno XVIII), fragmento de fibronectina, gro-beta, heparinases, fragmento de hexassacarídeo de heparina, gonadotropina coriônica humana (hCG), interferon alfa/beta/gama, proteína indutível de interferon (IP-IO), kringle S (fragmento do plasminogênio), inibidores da metaloproteinase (TIMPs), 2-metoxiestradiol, inibidor da ribonuclease placentária, inibidor de ativador do plasminogênio, fator plaquetário 4 (PF4), fragmento de 16 kD da prolactina, proteína relacionada com a proliferina (PRP), retinóides, tetra-hidrocortisol-S, trombospondina-I (TSP-I), vasculo estatina, e vasostatina (fragmento da calreticulina), prostaglandina, hormônio do crescimento, fator de crescimento semelhante à insulina -I (IGF-I), esfingosina-1-fosfato, fator D, TP801, inibidores do complemento, incluindo CI, C3 e C5, agonista α2 adrenérgico, mTOR, fator neurotrófico ciliar (CNTF), fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF), fator neurotrófico derivado de células gliais (GDNF), fator de crescimento derivado do epitélio da lente (LEDGF), fator de viabilidade do cone derivado da haste (RdCVF), fator derivado do epitélio pigmentar (PEDF).
[0488] Se o fármaco for uma proteína, é preferencialmente selecionado entre o grupo consistindo de ACTH, adenosina desaminase, agalsidase, albumina, alfa-1 antitripsina (AAT), inibidor da alfa-1 proteinase (API), alglucosidase, alteplase, anistreplase, ancrod serina protease, anticorpos (monoclonais ou policlonais e fragmentos ou fusões), antitrombina III, antitripsinas, aprotinina, asparaginases, bifalina, proteínas morfogênicas ósseas, calcitonina (salmão), colagenase, DNase, endorfinas, enfuvirtide, encefalinas, eritropoietinas, fator VIla, fator VIII, fator VIlla, fator IX, fibrinolisina, proteínas de fusão, hormônios folículo-estimulantes, fator estimulante de colônias de granulócitos (G-CSF), galactosidase, glucagon, peptídeos semelhantes ao glucagon como GLP-1, glucocerebrosidase, fator estimulante de colônias de macrófagos granulócitos (GM-CSF), gonadotropina coriônica (hCG), hemoglobinas, vacinas da hepatite B, hirudina, hialuronidases, idunonidase, imunoglobulinas, vacinas da gripe, interleucinas (1 alfa, 1 beta, 2, 3, 4, 6, 10, 11, 12), antagonista de IL-1 receptor (rhlL-1ra), insulinas, interferons (alfa 2a, alfa 2b, alfa 2c, beta 1a, beta 1b, gama 1a, gama 1b), fator de crescimento de queratinócitos (KGF), lactase, leuprolida, levo tiroxina, hormônio luteinizante, vacina de lyme, peptídeo natriurético, pancrelipase, papaína, hormônio paratiroidiano, PDGF, pepsina, proteína de ativação da fosfolipase (PLAP), fator de ativação plaquetária alcetilhidrolase (PAF-AH), prolactina, proteína C, octreotida, secretina, sermorelina, superóxido dismutase (SOD), somatropinas (hormônio do crescimento), somatostatina, estreptoquinase, sucrase, fragmento da toxina tetânica, tilactase, trombinas, timosina, hormônio estimulante da tiróide, tirotropina, fatores de crescimento transformante, fator de necrose tumoral (TNF), receptor do TNF-IgG Fc, ativador do plasminogênio tecidual (tPA), transferrina, TSH, urato oxidase e uroquinase.
[0489] Se o fármaco for um anticorpo, pode ser um anticorpo monoclonal ou policlonal ou um fragmento ou fusão do mesmo. Fragmentos de anticorpos preferenciais são selecionados entre o grupo compreendendo Fab (fragmento, ligação antigênica), fragmentos F(ab)2 , Fc (fragmento, cristalizável), fragmento pFc', Fv (fragmento, variável), scFv (fragmento variável de cadeia única), di- scFv/diabodies, engager de células T bi-específicos, CDRs (regiões determinantes de complementaridade), anticorpos de domínio único (sdABs/Nanobodies), cadeias pesadas (α, δ, ε, Y, μ) ou fragmentos de cadeia pesada, cadeias leves (À, K) ou fragmentos de cadeia leve, fragmentos VH (região variável da cadeia pesada), fragmentos VL (região variável da cadeia leve), fragmentos VHH e fragmentos VNAR.
[0490] Se o fármaco for uma proteína de scaffold de afinidade, é preferencialmente selecionado entre o grupo compreendendo proteínas de scaffold de afinidade derivadas de tubarão, proteínas de scaffold de afinidade derivadas de domínio Kunitz, proteínas de scaffold de afinidade derivadas de centirina, proteínas de scaffold de afinidade derivadas de ubiquitina, proteínas de scaffold de afinidade derivadas de lipocalina, proteínas de scaffold de afinidade derivadas de anquirina, versabodies (proteínas de scaffold de afinidade ricas em dissulfeto), proteínas de scaffold de afinidade derivadas de fibronectina, proteínas de scaffold de afinidade e fragmentos de anticorpos derivados de camelóides, proteínas de scaffold de afinidade e fragmentos de anticorpos derivados de lhama, proteínas de scaffold de afinidade derivadas de transferrina, e inibidores de protease do tipo de abóbora com proteínas de scaffold de afinidade derivadas de scaffold de nó de cisteína.
[0491] Em outro aspecto, a presente invenção se refere a uma pró-droga ligada a um suporte que pode ser obtido por um processo para a preparação de uma pró-droga ligada a um suporte da presente invenção.
[0492] A referida pró-droga ligada a um suporte libera moléculas de fármacos com uma meia-vida variando a partir de 1 hora até doze meses, por exemplo, a partir de 6 horas até doze meses, a partir de doze horas até onze meses, a partir de um dia até dez meses, a partir de três dias até nove meses, a partir de seis dias até nove meses, a partir de uma semana até nove meses, a partir de duas semanas até sete meses, a partir de três semanas até oito meses, a partir de quatro semanas até oito meses, a partir de seis semanas até sete meses, a partir de oito semanas até sete meses, a partir de dez semanas até seis meses, a partir de doze semanas até seis meses ou a partir de dezesseis semanas até cinco meses.
[0493] Outro aspecto da presente invenção é uma composição farmacêutica compreendendo as pró-drogas ligadas a um suporte da presente invenção ou um sal farmacêutico da mesma junto com um excipiente farmaceuticamente aceitável.
[0494] Ainda outro aspecto da presente invenção é uma pró-droga ligada a um suporte da presente invenção ou uma composição farmacêutica compreendendo a pró-droga ligada a um suporte da presente invenção para utilização como um medicamento.
[0495] Ainda outro aspecto da presente invenção é um método de tratar, controlar, retardar ou prevenir em uma paciente mamífero, preferencialmente em um ser humano, que necessite de tratamento de uma ou mais condições compreendendo administrar ao referido paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz da pró-droga ligada a um suporte da presente invenção ou da composição farmacêutica compreendendo a pró-droga ligada a um suporte da presente invenção ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma. Exemplos Materiais e Métodos Materiais:
[0496] Amino 4-arm PEG5000 foi obtido da JenKem Technology, Pequim, República Popular da China. Cithrol™ DPHS foi obtido da Croda International Pic, Cowick Hall, Reino Unido. Ácido cis-1,4- ciclohexanodicaboxílico foi obtido da TCI EUROPE N.V., Boerenveldseweg 6 - Haven 1063, 2070 Zwijndrecht, Bélgica.
[0497] Ácido isopropilmalônico foi obtido da ABCR GmbH & Co. KG, 76187 Karlsruhe, Alemanha.
[0498] Éster monobenzílico de ácido glutárico foi obtido da IRIS Biotec GmbH, 95615 Marktredwitz, Alemanha.
[0499] Éster pentafluorofenílico de ácido N-(3-maleimidopropil)-21- amino-4,7, 10,13,16,19-hexaoxa-heneicosanóico (maleimida-NH- PEG6-PFE) e éster pentafluorofenílico de ácido N-(3-maleimidopropil)- 39-amino-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37-dodecaoxa- nonatriacontanóico (maleimida-NH-PEG12-PFE) foi obtido da Biomatrik Inc., Jiaxing, República Popular da China.
[0500] Oxyma pure e Fmoc-Z-Asp(OtBu)-OH foram adquiridos da Merck Biosciences GmbH, Schwalbach/Ts, Alemanha.
[0501] (5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)-metil-4-nitrofenil carbonato foi adquirido da Chemzon Scientific Inc., Lachine, QC, Canadá.
[0502] Todos os outros produtos químicos foram da Sigma- ALDRICH Chemie GmbH, Taufkirchen, Alemanha. Métodos:
[0503] RP-HPLC foi realizada em uma coluna de 100x20 mm ou 100x40 mm C18 ReproSil-Pur 300 ODS-3 5μ (Dr. Maisch, Ammerbuch, Alemanha) conectada a um detector Waters 600 ou 2535 HPLC System e Waters 2487 ou 2489 Absorbance, respectivamente. Foram usados gradientes lineares da solução A (0,1% de TFA em H2O) e da solução B (0,1% de TFA em acetonitrilo). Frações de HPLC contendo produto foram combinadas e liofilizadas.
[0504] Purificações por cromatografia por cintilação foram realizadas em um sistema Isolera One da Biotage AB, Suécia, usando cartuchos de sílica Biotage KP-Sil e n-heptano, acetato de etila, e metanol como eluentes. Os produtos foram detectados a 254 nm. Para produtos não apresentando absorbância acima de 240 nm as frações foram triadas por LC/MS.
[0505] LC de ultra-performance analítica (UPLC) foi realizada em um sistema Waters Acquity equipado com uma coluna Waters BEH300 C18 (2,1 x 50 mm, 1,7 μm de tamanho de partícula) acoplada a um espectrômetro de massa LTQ Orbitrap Discovery da Thermo Scientific.
[0506] HPLC- Ionização por eletrospray -Espectrometria de massa (HPLC-ESI-MS) foi realizada em um Waters Acquity UPLC com um detector Acquity PDA acoplado a um espectrômetro de massa de alta resolução/alta precisão Thermo LTQ Orbitrap Discovery equipado com uma coluna Waters ACQUITY UPLC BEH300 C18 RP (2,1 x 50 mm, 300 A, 1,7 μm, fluxo: 0,25 mL/min; solvente A: UP-H2O + 0,04% de TFA, solvente B: UP-Acetonitrilo + 0,05% de TFA.
[0507] Os espectros de MS de produtos de PEG apresentaram uma série de porções (CH2CH2O)n devido à polidispersidade das matérias primas de PEG. Para interpretação mais fácil, somente um único sinal m/z representativo é proporcionado nos exemplos. Exemplo 1 Síntese do reagente da cadeia principal 1a, 1g, e 1h:
Figure img0083
Figure img0084
[0508] O reagente da cadeia principal 1a foi sintetizado conforme descrito no exemplo 1 da Publicação do Requerimento de Patente Internacional No. WO 2011/012715 Al com a exceção da utilização de Boc-DLys(Boc)-OH ao invés de Boc-LLys(Boc)-OH. MS: m/z 888,50 = [M+10H+]10+ (calculada = 888,54)
Figure img0085
Figure img0086
[0509] O reagente da cadeia principal 1g foi sintetizado a partir de amino 4-arm PEG5000 1b de acordo com o seguinte esquema:
Figure img0087
[0510] Para a síntese do composto 1b, amino 4-arm PEG5000 (peso molecular de cerca de 5350 g/mol, 10,7 g, 2,00 mmol, sal de HCl) e bis(pentafluorofenil)carbonato (4,73 g, 12,0 mmol) foram dissolvidos em 43 mL de DCM (anídrico) e DIPEA (3,10 g, 24,0 mmol, 4,18 mL) foi acrescentado em temperatura ambiente. Depois de 10 min, 1,9-bis-boc-1,5,9-triazanonano (5,30 g, 16,0 mmol) foi acrescentado e a mistura foi agitada por 15 min. Em seguida 1,9-bis- boc-1,5,9-triazanonano adicional (0,33 g, 1,0 mmol) foi acrescentado. Depois de completa dissolução, a mistura da reação foi filtrada e o solvente foi evaporado em temperatura ambiente.
[0511] O resíduo foi dissolvido em 40 mL de iPrOH e diluído com 320 mL de MTBE. O produto foi precipitado de um dia para o outro a - 20 °C. O precipitado foi coletado por filtração através de um filtro de vidro Por. 3, e lavado com 200 mL de MTBE arrefecido (0 °C). O produto foi secado a vácuo de um dia para o outro. Rendimento de 11,1 g (83%) de sólido branco 1b. MS: m/z 1112,86 = [M+6H]6+ (calculada =1 113,04).
[0512] Para a síntese do composto 1c, o composto boc-protegido 1b (11,1 g, 1,66 mmol) foi dissolvido em 40 mL de 3 M de HCl em MeOH e agitado por 20 min a 45 °C, e em seguida por 10 min a 55 °C. Para precipitação, 10 mL de MeOH e 200 mL de MTBE foram acrescentados e a mistura foi armazenada por 16 h a -20 °C. O precipitado foi coletado por filtração através de um filtro de vidro Por. 3 e lavado com 200 mL de MTBE arrefecido (0 °C). O produto foi secado a vácuo de um dia para o outro. Rendimento de 9,14 g (89%) de pó branco 1c (sal de HCl). MS: m/z 979,45 = [M+6H]6+ (calculada = 979,55).
[0513] Para a síntese do composto 1d, o composto 1c (9,06 g, 1,47 mmol, sal de HCl) e bis(pentafluorofenil)carbonato (6,95 g, 17,6 mmol) foram dissolvidos em 50 mL de DCM (anídrico) e DIPEA (4,56 g, 35,3 mmol, 6,15 mL) foi acrescentado em temperatura ambiente. Depois de 10 min, 1,9-bis-boc-1,5,9-triazanonano (7,80 g, 23,5 mmol) foi acrescentado e a mistura foi agitada por 15 min. Em seguida 1,9- bis-boc-1,5,9-triazanonano adicional (0,49 g, 1,5 mmol) foi acrescentado. Depois de completa dissolução, o solvente foi evaporado em temperatura ambiente.
[0514] O resíduo foi dissolvido em 35 mL de iPrOH a 40 °C e diluído com 200 mL de MTBE. O produto foi precipitado de um dia para o outro a -20 °C. O precipitado foi coletado por filtração através de um filtro de vidro Por. 3, e lavado com 200 mL de MTBE arrefecido (0 °C). O produto foi secado a vácuo de um dia para o outro para proporcionar 1d como um sólido branco. Rendimento de 11,6 g (90%) de sólido branco 1d. MS: m/z 1248,08 = [M+7H]7+ (calculada = 1248,27).
[0515] Para a síntese do composto 1e, o composto boc-protegido 1d (11,4 g, 1,31 mmol) foi dissolvido em 40 mL de 3 M de HCl em MeOH e agitado por 20 min a 45 °C, e em seguida por 10 min a 55 °C. Para precipitação, 10 mL de MeOH e 200 mL de MTBE foram acrescentados e a mistura foi armazenada por 16 h a -20 °C. O precipitado foi coletado por filtração através de um filtro de vidro Por. 3 e lavado com 200 mL de MTBE arrefecido (0 °C). O produto foi secado a vácuo de um dia para o outro para proporcionar o pó branco 1e. Rendimento de 7,60 g (75%) de pó branco 1e (sal de HCl). MS: m/z 891,96 = [M+8H]8+ (calculada = 892,13).
[0516] Para a síntese do composto 1f, o composto 1e (7,56 g, 0,980 mmol, sal de HCl) e bis(pentafluorofenil)carbonato (9,27 g, 23,0 mmol) foram dissolvidos em 250 mL de DCM (anídrico) e DIPEA (6,08 g, 47,0 mmol, 8,19 mL) foi acrescentado a 35 °C. Depois de 10 min, 1,9-bis-boc-1,5,9-triazanonano (5,30 g, 16,0 mmol) foi acrescentado e a mistura foi agitada por 15 min. Em seguida 1,9-bis-boc-1,5,9-triaza- nonano adicional (0,33 g, 1,0 mmol) foi acrescentado. Depois de completa disssolução, o solvente foi evaporado em temperatura ambiente.
[0517] O resíduo foi dissolvido em 250 mL de iPrOH a 60 °C e diluído com 1350 mL de MTBE. O produto foi precipitado de um dia para o outro a -20 °C. O precipitado foi coletado por filtração através de um filtro de vidro Por. 3, e lavado com 400 mL de MTBE arrefecido (0 °C). O produto foi secado a vácuo de um dia para o outro para proporcionar 1f como um sólido vítreo. Rendimento de 11,1 g (83%) de sólido vítreo 1f. MS: m/z 1312,01 =[M+10H]10+ (calculada = 1312,21).
[0518] Para a síntese do reagente da cadeia principal 1g, o composto boc-protegido 1f (7,84 g, 0,610 mmol) foi dissolvido em 16 mL de MeOH a 37 °C e 55 mL de uma solução pré-resfriada de 4 M de HCl (4 °C) em dioxana foi acrescentada em temperatura ambiente. A mistura foi agitada sem resfriamento por 20 min. Depois de 20 min, 110 mL de 3 M de HCl em MeOH foi acrescentado. A solução foi particionada em 24 tubos Falcon (50 mL) e precipitada com acréscimo de 40 mL de MTBE a frio (-20°C) a cada tubo Falcon. Depois de centrifugação a 3214 rcf por 1 min, o sobrenadante foi decantado e o sólido vítreo foi dissolvido em 5 mL de MeOH por tubo Falcon e precipitado adicionando 40 mL de MTBE a frio (-20°C) a cada tubo Falcon novamente. O sobrenadante foi descartado e o sólido remanescente foi secado a vácuo de um dia para o outro. Rendimento de 5,74 g (87%) de sólido vítreo branco 1g (sal de HCl). MS: m/z 965,46 = [M+10H]10+ (calculada = 965,45).
Figure img0088
[0519] O reagente da cadeia principal 1h foi sintetizado conforme descrito para o composto 1e no exemplo 1 da Publicação do Requerimento de Patente Internacional No. WO 2011/012715 A1 com a exceção da utilização de Boc-DLys(Boc)-OH ao invés de Boc- LLys(Boc)-OH. MS: m/z 848,52 = [M+8H+]8+ (calculada = 848,57) Exemplo 2 Síntese dos reagentes de reticulador 2d, 2g, rac-2k, rac-2o, 2s, 2v, rac-2y, 2ac, 2ag, e 2ak
[0520] O reagente de reticulador 2e foi preparado a partir de éster monobenzílico de ácido azeláico e PEG 10000 de acordo com o seguinte esquema:
Figure img0089
[0521] Para a síntese de éster monobenzílico de ácido azeláico 2a, uma mistura de ácido azeláico (37,6 g, 200 mmol), álcool benzílico (21,6 g, 200 mmol), ácido p-toluenossulfônico (0,80 g, 4,2 mmol), e 240 mL de tolueno foi refluxada por 7 h em um equipamento Dean- Stark. Depois de arrefecimento, o solvente foi evaporado e 300 mL de solução aquosa sat. de NaHCO3 foram acrescentados. Esta mistura foi extraída com 3 x 200 mL de MTBE. As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre Na2SO4 e o solvente foi evaporado. O produto foi purificado sobre 2 x 340 g de sílica usando acetato de etila/heptano (10:90 ^ 25:75) como eluente. O eluente foi evaporado e o resíduo foi secado a vácuo de um dia para o outro. Rendimento de 25,8 g (46%) de óleo incolor 2a. MS: m/z 279,16 = [M+H]+ (calculada = 279,16).
[0522] Para a síntese do composto 2b, éster monobenzílico de ácido azeláico 2a (3,90 g, 14,0 mmol) e PEG 10000 (40,0 g, 4,00 mmol) foram dissolvidos em 64 mL de diclorometano e arrefecidos com um banho de gelo. Uma solução de DCC (2,89 g, 14,0 mmol) e DMAP (0,024 g, 0,020 mmol) em 32 mL de diclorometano foi acrescentada. O banho de gelo foi removido e mistura foi agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro. A suspensão resultante foi arrefecida até 0 °C e o sólido foi filtrado. O solvente foi evaporado a vácuo.
[0523] O resíduo foi dissolvido em 65 mL de diclorometano e diluído com 308 mL de MTBE em temperatura ambiente. A mistura foi armazenada de um dia para o outro a -20 °C. O precipitado foi coletado por filtração através de um filtro de vidro Por. 3, e lavado com 250 mL de MTBE arrefecido (-20 °C). O produto foi secado a vácuo de um dia para o outro. Rendimento de 40,8 g (97%) de pó branco 2b. MS: m/z 835,50 = [M+14H]14+ (calculada = 835,56).
[0524] Para a síntese do composto 2c, o composto 2b (40,6 g, 3,86 mmol) foi dissolvido em acetato de metila (250 mL) e 203 mg de paládio sobre carvão vegetal foi acrescentado. Sob uma atmosfera de hidrogênio em pressão ambiente, a mistura foi agitada de um dia para o outro em temperatura ambiente. A mistura da reação foi filtrada através de um bloco de celite e o filtrado foi evaporado e secado a vácuo de um dia para o outro. Rendimento de 37,2 g (93%) de sólido vítreo 2c. MS: m/z 882,53 = [M+13H]13+ (calculada = 882,51).
[0525] Para a síntese do composto 2d, o composto 2c (32,0 g, 3,10 mmol) e TSTU (3,73 g, 12,4 mmol) foram dissolvidos em 150 mL de diclorometano em temperatura ambiente. Em seguida DIPEA (1,60 g, 12,4 mmol) foi acrescentado e a mistura foi agitada por 1 h. A suspensão resultante foi filtrada e o filtrado foi diluído com 170 mL de diclorometano, lavado com 140 mL de uma solução de 750 g de água/197 g de NaCl/3 g de NaOH. A fase orgânica foi secada sobre MgS04 e o solvente foi evaporado a vácuo.
[0526] O resíduo foi dissolvido em 200 mL de tolueno, diluído com 180 mL de MTBE em temperatura ambiente e armazenado de um dia para o outro a -20 °C. O precipitado foi coletado por filtração através de um filtro de vidro Por. 3, e lavado com 100 mL de MTBE arrefecido (-20 °C). O produto foi secado a vácuo de um dia para o outro. Rendimento de 28,8 g (88%) de pó branco 2d. MS: m/z 795,47 = [M+15H]15+ (calculada = 795,54).
[0527] O reagente de reticulador 2g foi preparado a partir de éster monobenzílico de ácido azeláico e PEG6000 de acordo com o seguinte esquema:
Figure img0090
[0528] Para a síntese do composto 2e, éster monobenzílico de ácido azeláico 2a (6,50 g, 23,3 mmol) e PEG 6000 (40,0 g, 6,67 mmol) foram dissolvidos em 140 mL de diclorometano e arrefecidos com um banho de gelo. Uma solução de DCC (4,81 g, 23,3 mmol) e DMAP (0,040 g, 0,33 mmol) em 40 mL de diclorometano foi acrescentada. O banho de gelo foi removido e mistura foi agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro. A suspensão resultante foi arrefecida até 0 °C e o sólido foi filtrado. O solvente foi evaporado a vácuo. O resíduo foi dissolvido em 70 mL de diclorometano e diluído com 300 mL de MTBE em temperatura ambiente. A mistura foi armazenada de um dia para o outro a -20 °C. O precipitado foi coletado por filtração através de um filtro de vidro Por. 3, e lavado com 500 mL de MTBE arrefecido (-20 °C). O produto foi secado a vácuo de um dia para o outro. Rendimento de 41,2 g (95%) de pó branco 2e. MS: m/z 833,75 = [M+8H]8+ (calculada = 833,74).
[0529] Para a síntese do composto 2f, o composto 2e (41,2 g, 6,32 mmol) foi dissolvido em acetato de metila (238 mL) e etanol (40 mL), em seguida 400 mg de paládio sobre carvão vegetal foi acrescentado. Sob uma atmosfera de hidrogênio em pressão ambiente, a mistura foi agitada de um dia para o outro em temperatura ambiente. A mistura da reação foi filtrada através de um bloco de celite e o filtrado foi evaporado e secado a vácuo de um dia para o outro. Rendimento de 38,4 g (96%) de sólido vítreo 2f. MS: m/z 750,46 = [M+9H]9+ (calculada = 750,56).
[0530] Para a síntese do composto 2g, o composto 2f (38,2 g, 6,02 mmol) e TSTU (7,25 g, mmol) foram dissolvidos em 130 mL de diclorometano em temperatura ambiente. Em seguida DIPEA (3,11 g, 24,1 mmol) foi acrescentado e a mistura foi agitada por 1 h. A suspensão resultante foi filtrada, o filtrado foi diluído com 100 mL de diclorometano e lavado com 200 mL de uma solução de 750 g de água/197 g de NaCl/3 g de NaOH. A fase orgânica foi secada sobre MgSO4 e o solvente foi evaporado a vácuo.
[0531] O resíduo foi dissolvido em 210 mL de tolueno, diluído com 430 mL de MTBE em temperatura ambiente e armazenado de um dia para o outro a -20 °C. O precipitado foi coletado por filtração através de um filtro de vidro Por. 3, e lavado com 450 mL de MTBE arrefecido (-20 °C). O produto foi secado a vácuo de um dia para o outro. Rendimento de 35,8 g (91%) de pó branco 2g. MS: m/z 857,51 = [M+8H]8+ (calculada = 857,51).
[0532] O reagente de reticulador 2k foi preparado a partir de éster monobenzílico de ácido isopropilmalônico e PEG 10000 de acordo com o seguinte esquema:
Figure img0091
[0533] Para a síntese de éster monobenzílico de ácido isopropilmalônico rac-2h, ácido isopropilmalônico (35,0 g, 239 mmol), álcool benzílico (23,3 g, 216 mmol) e DMAP (1,46 g, 12,0 mmol) foram dissolvidos em 100 mL de acetonitrilo. A mistura foi arrefecida até 0 °C com um banho de gelo. Uma solução de DCC (49,4 g, 239 mmol) em 150 mL de acetonitrilo foi acrescentada dentro de 15 min a 0 °C. O banho de gelo foi removido e a mistura da reação foi agitada de um dia para o outro em temperatura ambiente, em seguida o sólido foi filtrado. O filtrado foi evaporado a 40 °C a vácuo e o resíduo foi dissolvido em 300 mL de MTBE. Esta solução foi extraída com 2 x 300 mL de solução aquosa sat. de NaHCO3, em seguida as fases aquosas combinadas foram acidificadas até pH = 1 a 3 usando 6 N de ácido clorídrico. A emulsão resultante foi extraída com 2 x 300 mL de MTBE e o solvente foi evaporado. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com 200 mL de solução aquosa sat. de NaCl e secadas sobre MgSO4. O produto foi purificado sobre 340 g de sílica usando acetato de etila/heptano (10:90 ^ 20:80) como eluente. O eluente foi evaporado e o resíduo foi secado a vácuo de um dia para o outro. Rendimento de 9,62 g (17%) de óleo incolor rac-2h. MS: m/z 237,11 = [M+H]+ (calculada = 237,11).
[0534] Para a síntese do composto rac-2i, éster monobenzílico de ácido isopropilmalônico rac-2h (945 mg, 4,00 mmol) e PEG 10000 (10,0 g, 4,00 mmol) foram dissolvidos em 20 mL de diclorometano e arrefecidos com um banho de gelo. Uma solução de DCC (825 mg, 4,00 mmol) e DMAP (6 mg, 0,05 mmol) em 10 mL de diclorometano foi acrescentada. O banho de gelo foi removido e mistura foi agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro. A suspensão resultante foi arrefecida até 0 °C e o sólido foi filtrado. O solvente foi evaporado a vácuo.
[0535] O resíduo foi dissolvido em 20 mL de diclorometano e diluído com 150 mL de MTBE em temperatura ambiente. A mistura foi armazenada de um dia para o outro a -20 °C. O precipitado foi coletado por filtração através de um filtro de vidro Por. 3, e lavado com 500 mL de MTBE arrefecido (-20 °C). O produto foi secado a vácuo de um dia para o outro. Rendimento de 9,63 g (92%) de pó branco rac-2i. MS: m/z 742,50 =[M+16H]16+ (calculada = 742,51).
[0536] Para a síntese do composto rac-2j, o composto rac-2i (3,38 g, 0,323 mmol) foi dissolvido em acetato de metila (100 mL) e 105 mg de paládio sobre carvão vegetal foi acrescentado. Sob uma atmosfera de hidrogênio em pressão ambiente, a mistura foi agitada de um dia para o outro em temperatura ambiente. A mistura da reação foi filtrada através de um bloco de celite e o filtrado foi evaporado e secado a vácuo de um dia para o outro. Rendimento de 3,25 g (98%) de sólido vítreo rac-2j. MS: m z 731,25 =[M+16H]16+ (calculada = 731,25).
[0537] Para a síntese do composto rac-2k, o composto rac-2j (3,10 g, 0,302 mmol) e TSTU (0,364 g, 1,21 mmol) foram dissolvidos em 15 mL de diclorometano em temperatura ambiente. Em seguida DIPEA (0,156 g, 1,21 mmol) foi acrescentado e a mistura foi agitada por 45 min. A suspensão resultante foi filtrada e o filtrado foi lavado com 2 x 10 mL de um tampão de fosfato a 0,5 M, pH = 6,5. A fase orgânica foi secada sobre MgSO4 e o solvente foi evaporado a vácuo. O resíduo foi dissolvido em 20 mL de tolueno, diluído com 10 mL de MTBE em temperatura ambiente e armazenado de um dia para o outro a -20 °C. O precipitado foi coletado por filtração através de um filtro de vidro Por. 3, e lavado com 250 mL de MTBE arrefecido (-20 °C). O produto foi secado a vácuo de um dia para o outro. Rendimento de 2,66 g (84%) de pó branco rac-2k. MS: m/z 743,37 =[M+16H]16+ (calculada = 743,38).
[0538] O reagente de reticulador rac-2o foi preparado a partir de ácido cis-1,4-ciclohexanodicarboxílico e PEG 10000 de acordo com o seguinte esquema:
Figure img0092
Figure img0093
[0539] Para a síntese de éster monobenzílico de ácido cis-1,4- ciclohexanodicarboxílico rac-2l, ácido cis-1,4-ciclohexanodicarboxílico (20,0 g, 116 mmol), álcool benzílico (11,3 g, 105 mmol) e DMAP (710 mg, 5,81 mmol) foram dissolvidos em 200 mL de THF. A mistura foi arrefecida até 0 °C com um banho de gelo. Uma solução de DCC (49,4 g, 239 mmol) em 100 mL de THF foi acrescentada dentro de 15 min a 0 °C. O banho de gelo foi removido e a mistura da reação foi agitada de um dia para o outro em temperatura ambiente, em seguida o sólido foi filtrado. O filtrado foi evaporado a 40 °C e o resíduo foi dissolvido em 300 mL de MTBE. Esta solução foi extraída com 2 x 300 mL de solução aquosa sat. de NaHCO3 , em seguida as fases aquosas combinadas foram acidificadas para pH = 1 a 3 usando 6 N de ácido clorídrico. A resultante emulsão foi extraída com 2 x 300 mL de MTBE e o solvente foi evaporado. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com 200 mL de solução aquosa sat. de NaCl e secadas sobre MgS04. O produto foi purificado sobre 340 g de sílica usando acetato de etila/heptano (10:90 ^ 20:80) como eluente. O eluente foi evaporado e o resíduo oleoso incolor cristalizou durante secagem a vácuo de um dia para o outro. Rendimento de 4,82 g (16%) de cristais incolores rac-2l. MS: m/z 263,13 =[M+H]+ (calculada = 263,13).
[0540] Para a síntese do composto rac-2m, éster monobenzílico de ácido cis-1,4-ciclohexanodicarboxílico rac-21 (2,10 g, 8,00 mmol) e PEG 10000 (20,0 g, 10,0 mmol) foram dissolvidos em 50 mL de diclorometano e arrefecidos com um banho de gelo. Uma solução de DCC (1,65 g, 8,00 mmol) e DMAP (0,012 g, 0,10 mmol) em 25 mL de diclorometano foi acrescentada. O banho de gelo foi removido e mistura foi agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro. A suspensão resultante foi arrefecida até 0 °C e o sólido foi filtrado. O solvente foi evaporado a vácuo.
[0541] O resíduo foi dissolvido em 55 mL de diclorometano e diluído com 300 mL de MTBE em temperatura ambiente. A mistura foi armazenada de um dia para o outro a -20 °C. O precipitado foi coletado por filtração através de um filtro de vidro Por. 3, e lavado com 250 mL de MTBE arrefecido (-20 °C). O produto foi secado a vácuo de um dia para o outro. Rendimento de 18,2 g (87%) de pó branco rac-2m. MS: m/z 745,76 =[M+16H]16+ (calculada = 745,77).
[0542] Para a síntese do composto rac-2n, o composto rac-2m (9,00 g, 0,857 mmol) foi dissolvido em acetato de metila (100 mL) e 157 mg de paládio sobre carvão vegetal foi acrescentado. Sob uma atmosfera de hidrogênio em pressão ambiente, a mistura foi agitada de um dia para o outro em temperatura ambiente. A mistura da reação foi filtrada através de um bloco de celite e o filtrado foi evaporado e secado a vácuo de um dia para o outro. Rendimento de 8,83g (100%) de sólido vítreo rac-2n. MS: m z 734,50 =[M+16H]16+ (calculada =734,50).
[0543] Para a síntese do composto rac-2o, o composto rac-2n (8,92 g, 0,864 mmol) e TSTU (1,04 g, 3,64 mmol) foram dissolvidos em 35 mL de diclorometano em temperatura ambiente. Em seguida DIPEA (0,447 g, 3,46 mmol) foi acrescentado e a mistura foi agitada por 45 min. A suspensão resultante foi filtrada e o filtrado foi lavado com 2 x 10 mL de um tampão de fosfato a 0,5 M, pH = 6,5. A fase orgânica foi secada sobre MgSO4 e o solvente foi evaporado a vácuo.
[0544] O resíduo foi dissolvido em 50 mL de tolueno, diluído com 25 mL de MTBE em temperatura ambiente e armazenado de um dia para o outro a -20 °C. O precipitado foi coletado por filtração através de um filtro de vidro Por. 3, e lavado com 400 mL de MTBE arrefecido (-20 °C). O produto foi secado a vácuo de um dia para o outro. Rendimento de 7,62 g (84%) de pó branco rac-2o. MS: m/z 702,60 = [M+16H]16+ (calculada = 702,59).
[0545] O reagente de reticulador 2s foi preparado a partir de éster monobenzílico de ácido subérico e PEG 10000 de acordo com o seguinte esquema:
Figure img0094
Figure img0095
[0546] Éster monobenzílico de ácido subérico 2p foi sintetizado a partir de ácido subérico e álcool benzílico, por conseguinte para éster monobenzílico de ácido azeláico 2a.
[0547] O composto 2q foi sintetizado, por conseguinte para o derivado de PEG 2b a partrir de éster monobenzílico de ácido subérico 2p e PEG 10000.
[0548] O composto 2r foi sintetizado, por conseguinte para o derivado de PEG 2c a partrir do composto 2q.
[0549] Para a síntese do composto 2s, o composto 2r (18,0 g, 1,74 mmol) e p-nitrofenil carbonato (2,12 g, 6,76 mmol) foram dissolvidos em 70 mL de acetonitrilo em temperatura ambiente. Em seguida DIPEA (0,90 g, 6,76 mmol) em 1,0 mL de diclorometano foi acrescentado e a mistura foi agitada por 17 h. A mistura foi diluída com 270 mL de MTBE em temperatura ambiente e armazenado de um dia para o outro a -20 °C. O precipitado foi coletado por filtração através de um filtro de vidro Por. 3, e lavado com 200 mL de MTBE arrefecido (-20 °C). O produto foi secado a vácuo de um dia para o outro. Rendimento de 17,6 g (96%) de pó amarelo claro 2s. MS: m/z 822,20 = [M+14H]14+ (calculada = 822,25).
[0550] O reagente de reticulador 2v foi preparado a partir de éster monobenzílico de ácido subérico 2p e PEG6000 de acordo com o seguinte esquema:
Figure img0096
[0551]O composto 2t foi sintetizado por conseguinte para o derivado de PEG 2b a partir de éster monobenzílico de ácido subérico 2p e PEG6000.
[0552] O composto 2u foi sintetizado por conseguinte para o derivado de PEG 2c a partir do composto 2t.
[0553] Para 0,38 mmol) e dissolvidos em seguida DIPEA (0,20 g, 1,52 mmol) em 0,14 mL de diclorometano foi acrescentado e a mistura foi agitada por 1 h. A mistura foi diluída com 26 mL de MTBE em temperatura ambiente e armazenado de um dia para o outro a -20 °C. O precipitado foi coletado por filtração através de um filtro de vidro Por. 3, e lavado com 100 mL de MTBE arrefecido (-20 °C). O produto foi secado a vácuo de um dia para o outro. Rendimento de 2,37 g (95%) de pó amarelo claro 2v. MS: m/z 774,34 = [M+9H]9+ (calculada = 77)
[0554] O reagente de reticulador 2y foi preparado a partir de éster monobenzílico de ácido isopropilmalônico e PEG8000 de acordo com o seguinte esquema:
Figure img0097
[0555] Para a síntese do composto rac-2w, éster monobenzílico de ácido isopropilmalônico rac-2h (2,25 g, 9,50 mmol) e PEG 8000 (19,0 g, 2,38 mmol) foram dissolvidos em 100 mL de diclorometano e arrefecidos com um banho de gelo. Uma solução de DCC (1,96 g, 9,50 mmol) e DMAP (14 mg, 0,12 mmol) em 10 mL de diclorometano foi acrescentada. O banho de gelo foi removido e mistura foi agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro. A suspensão resultante foi arrefecida até 0 °C e o sólido foi filtrado. O solvente foi evaporado a vácuo.
[0556] O resíduo foi dissolvido em 40 mL de diclorometano e diluído com 270 mL de MTBE em temperatura ambiente. A mistura foi armazenada de um dia para o outro a -20 °C. O precipitado foi coletado por filtração através de um filtro de vidro Por. 3, e lavado com 500 mL de MTBE arrefecido (-20 °C).
[0557] O produto foi secado a vácuo de um dia para o outro. Rendimento de 18,5 g (92%) de pó branco rac-2w. MS: m/z 737,43 =[M+13H]13+ (calculada = 737,42).
[0558] Para a síntese do composto rac-2x, o composto rac-2w (18,4 g, 2,18 mmol) foi dissolvido em acetato de metila (160 mL) e 254 mg de paládio sobre carvão vegetal foi acrescentado. Sob uma atmosfera de hidrogênio em pressão ambiente, a mistura foi agitada de um dia para o outro em temperatura ambiente. A mistura da reação foi filtrada através de um bloco de celite e o filtrado foi evaporado e secado a vácuo de um dia para o outro. Rendimento de 17,7 g (98%) de sólido vítreo rac-2x. MS: m/z 723,51 =[M+13H]13+ (calculada = 723,55).
[0559] Para a síntese do composto rac-2y, o composto rac-2x (13,6 g, 1,65 mmol) e TSTU (1,96 g, 6,60 mmol) foram dissolvidos em 60 mL de diclorometano em temperatura ambiente. Em seguida DIPEA (852 mg, 6,60 mmol) foi acrescentado e a mistura foi agitada por 45 min. A suspensão resultante foi filtrada, o filtrado foi diluído com 70 mL de acetato de etila e lavado com 70 mL de um tampão de fosfato a 0,5 M, pH = 6,5. A fase orgânica foi secada sobre MgS04 e o solvente foi evaporado a vácuo. O resíduo foi dissolvido em 80 mL de tolueno, o sólido remanescente foi filtrado e lavado com 20 mL de tolueno. As frações de tolueno combinadas foram diluídas com 35 mL de MTBE em temperatura ambiente e armazenados de um dia para o outro a -20 °C. O precipitado foi coletado por filtração através de um filtro de vidro Por. 3, e lavado com 600 mL de MTBE arrefecido (-20 °C). O produto foi secado a vácuo de um dia para o outro. Rendimento de 12,1 g (87%) de pó branco rac-2y. MS: m z 738,51 =[M+13H]13+ (calculada = 738,49).
[0560] O reagente de reticulador 2ac foi preparado a partir de éster monobenzílico de ácido sebácico e PEG 10000 de acordo com o seguinte esquema:
Figure img0098
[0561] Para a síntese de éster monobenzílico de ácido sebácico 2z, uma mistura de sebácico ácido (20,2 g, 100 mmol), álcool benzílico (10,8 g, 100 mmol), ácido p-toluenossulfônico (0,40 g, 2,1 mmol), e 120 mL de tolueno foi refluxada por 19 h em um equipamento Dean- Stark. Depois de arrefecimento, o solvente foi evaporado e 150 mL de solução aquosa sat. de NaHCO3 foram acrescentados. Esta mistura foi extraída com 3 x 100 mL de MTBE. As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre Na2SO4 e o solvente foi evaporado. O produto foi purificado sobre 340 g de sílica usando acetato de etila/heptano (10:90 ^ 25:75) como eluente. O eluente foi evaporado e o resíduo foi secado a vácuo de um dia para o outro. Rendimento de 13,4 g (46%) de óleo incolor 2z. MS: m/z 293,16 = [M+H]+ (calculada = 293,16).
[0562] Para a síntese do composto 2aa, éster monobenzílico de ácido sebácico 2z (1,02 g, 3,50 mmol) e PEG 10000 (10,0 g, 1,00 mmol) foram dissolvidos em 40 mL de diclorometano e arrefecidos com um banho de gelo. Uma solução de DCC (722 mg, 3,5 mmol) e DMAP (6,1 mg, 0,05 mmol) em 12 mL de diclorometano foi acrescentada. O banho de gelo foi removido e mistura foi agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro. A suspensão resultante foi arrefecida até 0 °C e o sólido foi filtrado. O solvente foi evaporado a vácuo.
[0563] O resíduo foi dissolvido em 12 mL de diclorometano e diluído com 45 mL de MTBE em temperatura ambiente. A mistura foi armazenada de um dia para o outro a -20 °C. O precipitado foi coletado por filtração através de um filtro de vidro Por. 3, e lavado com 250 mL de MTBE arrefecido (-20 °C). O produto foi secado a vácuo de um dia para o outro. Rendimento de 9,92 g (94%) de pó branco 2aa. MS: m/z 793,48 = [M+15H]15+ (calculada = 793,56).
[0564] Para a síntese do composto 2ab, o composto 2aa (9,83 g, 0,93 mmol) foi dissolvido em acetato de metila (100 mL) e 123 mg de paládio sobre carvão vegetal foi acrescentado. Sob uma atmosfera de hidrogênio em pressão ambiente, a mistura foi agitada de um dia para o outro em temperatura ambiente. A mistura da reação foi filtrada através de um bloco de celite e o filtrado foi evaporado e secado a vácuo de um dia para o outro. Rendimento de 9,14 g (95%) de sólido vítreo 2ab. MS: m/z 840,51 = [M+14H]14+ (calculada = 840,44).
[0565] Para a síntese do composto 2ac, o composto 2ab (9,00 g, 0,87 mmol) e TSTU (1,05 g, 3,47 mmol) foram dissolvidos em 30 mL de diclorometano em temperatura ambiente. Em seguida DIPEA (449 mg, 3,47 mmol) foi acrescentado e a mistura foi agitada por 1 h. A suspensão resultante foi filtrada e o filtrado foi diluído com 30 mL de diclorometano, lavado com 60 mL de uma solução de 750 g de água/197 g de NaCl/3 g de NaOH. A fase orgânica foi secada sobre MgSO4 e o solvente foi evaporado a vácuo.
[0566] O resíduo foi dissolvido em 45 mL de tolueno, diluído com 35 mL de MTBE em temperatura ambiente e armazenado de um dia para o outro a -20 °C. O precipitado foi coletado por filtração através de um filtro de vidro Por. 3, e lavado com 350 mL de MTBE arrefecido (-20 °C). O produto foi secado a vácuo de um dia para o outro. Rendimento de 8,29 g (90%) de pó branco 2ac. MS: m z 794,47 = [M+15H]15+ (calculada = 794,48).
[0567] O reagente de reticulador 2ag foi preparado a partir de éster monobenzílico de ácido undecanodióico e PEG 10000 de acordo com o seguinte esquema:
Figure img0099
[0568] Para a síntese de éster monobenzílico de ácido undecanodióico 2ad, uma mistura de ácido undecanodióico (21,6 g, 100 mmol), álcool benzílico (10,8 g, 100 mmol), ácido p- toluenossulfônico (0,40 g, 2,1 mmol), e 120 mL de tolueno foi refluxada por 19 h em um equipamento Dean-Stark. Depois de arrefecimento, o solvente foi evaporado e 150 mL de solução aquosa sat. de NaHCO3 foram acrescentados. Esta mistura foi extraída com 3 x 100 mL de MTBE. As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre Na2SO4 e o solvente foi evaporado. O produto foi purificado sobre 340 g de sílica usando acetato de etila/heptano (10:90 ^ 25 :75) como eluente. O eluente foi evaporado e o resíduo foi secado a vácuo de um dia para o outro. Rendimento de 14,8 g (48%) de óleo incolor 2ad. MS: m/z 307,19 = [M+H]+ (calculada = 307,19).
[0569] Para a síntese do composto 2ae, éster monobenzílico de ácido undecanodióico 2ad (1,07 g, 3,50 mmol) e PEG 10000 (10,0 g, 1,00 mmol) foram dissolvidos em 40 mL de diclorometano e arrefecidos com um banho de gelo. Uma solução de DCC (722 mg, 3,5 mmol) e DMAP (6,1 mg, 0,05 mmol) em 12 mL de diclorometano foi acrescentada. O banho de gelo foi removido e mistura foi agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro. A suspensão resultante foi arrefecida até 0 °C e o sólido foi filtrado. O solvente foi evaporado a vácuo.
[0570] O resíduo foi dissolvido em 13 mL de diclorometano e diluído com 43 mL de MTBE em temperatura ambiente. A mistura foi armazenada de um dia para o outro a -20 °C. O precipitado foi coletado por filtração através de um filtro de vidro Por. 3, e lavado com 250 mL de MTBE arrefecido (-20 °C). O produto foi secado a vácuo de um dia para o outro. Rendimento de 10,0 g (95%) de pó branco 2ae. MS: m/z 792,48 = [M+15H]15+ (calculada = 792,49).
[0571] Para a síntese do composto 2af, o composto 2ae (9,83 g, 0,93 mmol) foi dissolvido em acetato de metila (100 mL) e 103 mg de paládio sobre carvão vegetal foi acrescentado. Sob uma atmosfera de hidrogênio em pressão ambiente, a mistura foi agitada de um dia para o outro em temperatura ambiente. A mistura da reação foi filtrada através de um bloco de celite e o filtrado foi evaporado e secado a vácuo de um dia para o outro. Rendimento de 8,90 g (92%) de sólido vítreo 2af. MS: m/z 780,47 = [M+15H]15+ (calculada = 780,47).
[0572] Para a síntese do composto 2ag, o composto 2af (8,75 g, 0,84 mmol) e TSTU (1,01 g, 3,37 mmol) foram dissolvidos em 30 mL de diclorometano em temperatura ambiente. Em seguida DIPEA (435 mg, 3,37 mmol) foi acrescentado e a mistura foi agitada por 1 h. A suspensão resultante foi filtrada e o filtrado foi diluído com 30 mL de diclorometano, lavado com 60 mL de uma solução de 750 g de água/197 g de NaCl/3 g de NaOH. A fase orgânica foi secada sobre MgS04 e o solvente foi evaporado a vácuo.
[0573] O resíduo foi dissolvido em 38 mL de tolueno, diluído com 30 mL de MTBE em temperatura ambiente e armazenado de um dia para o outro a -20 °C. O precipitado foi coletado por filtração através de um filtro de vidro Por. 3, e lavado com 350 mL de MTBE arrefecido (-20 °C). O produto foi secado a vácuo de um dia para o outro. Rendimento de 7,51 g (84%) de pó branco 2ag. MS: m z 793,48 = [M+14H]14+ (calculada = 793,38).
[0574] O reagente de reticulador foi preparado a partir de éster monobenzílico de ácido glutárico e PEG 10000 de acordo com o seguinte esquema:
Figure img0100
[0575] Para a síntese do composto 2ai, éster monobenzílico de ácido glutárico 2ah (1,95 g, 8,78 mmol) e PEG 10000 (25,1 g, 2,51 mmol) foram dissolvidos em 70 mL de diclorometano e arrefecidos com um banho de gelo. Uma solução de DCC (1,81 g, 8,78 mmol) e DMAP (15,3 mg, 0,13 mmol) em 18 mL de diclorometano foi acrescentada. O banho de gelo foi removido e mistura foi agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro. A suspensão resultante foi arrefecida até 0 °C e o sólido foi filtrado. O solvente foi evaporado a vácuo.
[0576] O resíduo foi dissolvido em 70 mL de diclorometano e diluído com 360 mL de MTBE em temperatura ambiente. A mistura foi armazenada de um dia para o outro a -20 °C. O precipitado foi coletado por filtração através de um filtro de vidro Por. 3, e lavado com 500 mL de MTBE arrefecido (-20 °C).
[0577] O produto foi secado a vácuo de um dia para o outro.
[0578] Rendimento de 24,9 g (95%) de pó branco 2ai. MS: m/z 740,76 = [M+16H]16+ (calculada = 740,76).
[0579] Para a síntese do composto 2aj, o composto 2ai (24,9 g, 2,39 mmol) foi dissolvido em acetato de metila (220 mL) e 302 mg de paládio sobre carvão vegetal foi acrescentado. Sob uma atmosfera de hidrogênio em pressão ambiente, a mistura foi agitada de um dia para o outro em temperatura ambiente. A mistura da reação foi filtrada através de um bloco de celite e o filtrado foi evaporado e secado a vácuo de um dia para o outro. Rendimento de 24,3 g (99%) de sólido vítreo 2aj. MS: m/z 729,50 = [M+16H]16+ (calculada = 729,49).
[0580] Para a síntese do composto 2ak, o composto 2aj (23,9 g, 2,33 mmol) e TSTU (2,81 g, 9,33 mmol) foram dissolvidos em 100 mL de diclorometano em temperatura ambiente. Em seguida DIPEA (1,21 g, 9,33 mmol) foi acrescentado e a mistura foi agitada por 1 h. A suspensão resultante foi filtrada e o filtrado foi diluído com 20 mL de diclorometano, lavado com 120 mL de uma solução de 750 g de água/197 g de NaCl/3 g de NaOH. A fase orgânica foi secada sobre MgSC4 e o solvente foi evaporado a vácuo.
[0581] O resíduo foi dissolvido em 125 mL de tolueno, diluído com 100 mL de MTBE em temperatura ambiente e armazenado de um dia para o outro a -20 °C. O precipitado foi coletado por filtração através de um filtro de vidro Por. 3, e lavado com 650 mL de MTBE arrefecido (-20 °C). O produto foi secado a vácuo de um dia para o outro. Rendimento de 22,5 g (92%) de pó branco 2ak. MS: m/z 741,63 = [M+16H]16+ (calculada = 741,63). Exemplo 3 Preparação de contas de hidrogel 3a, 3b, 3c, e 3d contendo grupamentos amino livres.
[0582] Em um reator cilíndrico de 250 mL com saída no fundo, diâmetro de 60 mm, equipado com bafles, uma emulsão de 218 mg de Cithrol™ DPHS em 100 mL de undecano foi agitada com um isojet stirrer, diâmetro de 50 mm a 580 rpm, em temperatura ambiente. Uma solução de 250 mg de 1a e 2205 mg de 2d em 22,1 g de DMSO foi acrescentada e agitada por 10 min em temperatura ambiente para formar uma suspensão. 1,1 mL de TMEDA foram acrescentados para realizar polimerização. A mistura foi agitada por 16 h. 1,7 mL de ácido acético foram acrescentados e em seguida depois de 10 min, 100 mL de uma solução a 15% em peso de cloreto de sódio em água foram acrescentados. Depois de 10 min, o stirrer foi interrompido e as fases foram deixadas para separar. Depois de 2 h, a fase aquosa contendo o hidrogel foi drenada.
[0583] Para fracionamento do tamanho das contas, a suspensão de água-hidrogel foi diluída com 40 mL de etanol e peneirada a úmido sobre peneiras de aço de 125, 100, 75, 63, 50, 40, e 32 μm usando uma máquina de peneiração de controle Retsch AS200 por 15 min. A amplitude da peneiração foi de 1,5 mm, o fluxo da água foi de 300 mL/min. As frações de contas que foram retidas sobre as peneiras de 63 e 75 μm foram reunidas e lavadas 3 vezes com 0,1% de AcOH, 10 vezes com etanol e secadas por 16 h a 0,1 mbar para proporcionar 670 mg de 3a como um pó branco.
[0584] O conteúdo de grupamentos amino do hidrogel foi determinado como sendo de 0,145 mmol/g por conjugação de um fmoc-aminoácido aos grupamentos amino livres sobre o hidrogel e subsequente determinação fmoc.
[0585] 3b foi preparado conforme descrito para 3a com a exceção da aplicação de uma velocidade de stirrer de 560 rpm, a utilização de 350 mg de 1a, 2548 mg de 2g, 26,1 g de DMSO, 257 mg de Cithrol™ DPHS, 1,5 mL de TMEDA, e 2,4 mL de ácido acético, produzindo 550 mg de 3b como um pó branco, grupamentos amino livres a 0,120 mmol/g.
[0586] 3c foi preparado conforme descrito para 3a com a exceção da aplicação de uma velocidade de stirrer de 560 rpm, a utilização de 250 mg de 1a, 3019 mg de rac-2k, 32,7 g de DMSO, 290 mg de Cithrol™ DPHS, 1,1 mL de TMEDA, e 1,7 mL de ácido acético, produzindo 770 mg de 3c como um pó branco, grupamentos amino livres a 0,126 mmol/g.
[0587] 3d foi preparado conforme descrito para 3a com a exceção da utilização de 250 mg de 1a, 2258 mg de rac-2o, 22,6 g de DMSO, 222 mg de Cithrol™ DPHS, 1,1 mL de TMEDA, e 1,7 mL de ácido acético, produzindo 186 mg de 3d como um pó branco, grupamentos amino livres a 0,153 mmol/g.
[0588] 3e foi preparado conforme descrito para 3a com a exceção da utilização de 250 mg de 1a, 2168 mg de rac-2y, 21,8 g de DMSO, 215 mg de Cithrol™ DPHS, 1,1 mL de TMEDA, 1,7 mL de ácido acético, produzindo 710 mg de 3e como um pó branco, grupamentos amino livres a 0,154 mmol/g.
[0589] 3f foi preparado conforme descrito para 3a com a exceção da aplicação de uma velocidade de stirrer de 400 rpm, a utilização de 290 mg do reagente da cadeia principal que foi descrito no exemplo 1 da Publicação do Requerimento de Patente Internacional No. WO 2011/012715 A1 como 1g, 2281 mg de 2v, 15,8 g de DMSO, 290 mg de Cithrol™ DPHS, 2,2 mL de TMEDA, 3,3 mL de ácido acético, peneiração sobre peneiras de aço de 250, 180, 125, 90, e 63 μm, o produto foi coletado sobre a peneira de 180 μm. A elaboração foi produzindo 820 mg de 3f como um pó amarelo claro, grupamentos amino livres a 0,108 mmol/g.
[0590] 3g foi preparado conforme descrito para 3a com a exceção da aplicação de uma velocidade de stirrer de 500 rpm, a utilização de 300 mg do reagente da cadeia principal que foi descrito no exemplo 1 da Publicação do Requerimento de Patente Internacional No. WO 2011/012715 A1 como 1g, 2520 mg de 2s, 32,4 g de DMSO, 300 mg de Cithrol™ DPHS, 2,2 mL de TMEDA, 3,4 mL de ácido acético, produzindo 770 mg de 3g como um pó amarelo claro, grupamentos amino livres a 0,175 mmol/g.
[0591] 3h foi preparado conforme descrito para 3a com a exceção da utilização de 200 mg de 1a, 1995 mg de 2ac, 19,8 g de DMSO, 195 mg de Cithrol™ DPHS, 0,9 mL de TMEDA, 1,4 mL de ácido acético, produzindo 650 mg de 3h como um pó branco, grupamentos amino livres a 0,131 mmol/g.
[0592] 3i foi preparado conforme descrito para 3a com a exceção da utilização de 150 mg de 1a, 1591 mg de 2ag, 15,7 g de DMSO, 154 mg de Cithrol™ DPHS, 0,7 mL de TMEDA, 1,0 mL de ácido acético, produzindo 300 mg de 3i como um pó branco, grupamentos amino livres a 0,123 mmol/g.
[0593] 3j foi preparado conforme descrito para 3a com a exceção da aplicação de uma velocidade de stirrer de 570 rpm, a utilização de 360 mg de 1h, 2567 mg de 2ak, 26,3 g de DMSO, 257 mg de Cithrol™ DPHS, 2,2 mL de TMEDA, 3,4 mL de ácido acético, produzindo 744 mg de 3j como um pó branco, grupamentos amino livres a 0,097 mmol/g.
Exemplo 4 Síntese de reagente de encadeador 4c
[0594] O reagente de encadeador 4c foi sintetizado de acordo com o seguinte esquema:
Figure img0101
Síntese de 4a:
[0595] Fmoc-L-Asp(OtBu)-OH (1,00 g, 2,43 mmol) foi dissolvido com DCC (0,70 g, 3,33 mmol) em DCM (25 mL). Oxyma pure (0,51 g, 3,58 mmol) e collidine (0,50 mL, 3,58 mmol) foram acrescentados em uma porção e uma solução de N-Boc-etilenodiamina (0,41 g, 2,56 mmol) em DCM (15 mL) foi acrescentada lentamente. Depois de agitar a mistura por 90 min em temperatura ambiente, o precipitado formado foi filtrado e o filtrado foi lavado com HCl aquoso (0,1 M, 50 mL). A camada aquosa foi extraída com DCM (2 x 20 mL) e as frações orgânicas combinadas foram lavadas com NaHCO3 sat. aquoso (3 x 25 mL) e salmoura (1 x 50 mL), secadas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas a vácuo. O sólido bruto foi purificado por cromatografia por cintilação. O intermediário N-boc-N’-(N-fmoc-4-terc.-butil-L- aspartoil)-etilenodiamina foi obtido com sólido branco (0,98 g, 1,77 mmol, 73%). MS: m/z 554,29 = [M+H]+, (calculada = 554,29). N-boc-N’-(N-fmoc-4-terc.-butil-L-aspartoil)-etilenodiamina (0,98 g, 1,77 mmol) foi dissolvida em THF (15 mL), DBU (0,31 mL) foi acrescentado e a solução foi agitada por 12 min em temperatura ambiente. A reação foi extinta com AcOH (0,5 ml), concentrada a vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia por cintilação para proporcionar 4a (0,61 g, 1,77 mmol, 73 % durante 2 etapas) como sólido branco. MS: m/z 332,38 = [M+H]+, (calculada = 332,22).
Síntese de 4b:
[0596] Ácido 6-acetiltiohexanóico (0,37 g, 1,95 mmol) foi dissolvido em DCM (19,5 mL) e Oxyma pure (0,35 g, 2,48 mmol) e DCC (0,40 g, 1,95 mmol) adicionado em uma porção. A solução foi agitada por 30 min em temperatura ambiente, filtrada, e o filtrado foi adicionado a uma solução de 4a (0,61 g, 1,77 mmol) em DCM (10,5 mL). DIPEA (0,46 mL, 2,66 mmol) foi acrescentado à solução e a reação foi agitada por 2 h em temperatura ambiente. A solução foi lavada com H2SO4 aquoso (0,1 M, 2 x 30 mL), NaHCO3 sat. aquoso (2 x 20 mL) e salmoura (1 x 20 mL). A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4, filtrada e concentrada a vácuo. O material bruto foi purificdo por cromatografia por cintilação para proporcionar N-boc-N'-(N-6- acetiltiohexil-4-terc.-butil-L-aspartoil)-etilenodiamina (0,65 g, 1,30 mmol, 73% durante 2 etapas) como sólido branco. MS: m z 504,27 = [M+H]+, (calculada = 504,28). N-boc-N'-(N-6-Acetiltiohexil-4-tert.-butil-L-aspartoil)-etilenodiamina (0,60 g, 1,18 mmol) foi dissolvido em TFA (5 mL) e TES (0,13 mL) e água (0,13 ml) foram acrescentados. A mistura foi agitada por 30 min em temperatura ambiente. TFA foi removido em uma corrente de N2, e 4b bruto dissolvido em H2O/ACN a 1 :1 e purificado por RP-HPLC. Rendimento de: 0,39 g, 0,85 mmol (sal de TFA), 72%. MS: m/z 348,25 = [M+H]+, (calculada = 348,16). Síntese de 4c:
[0597] 4b (sal de TFA, 0,38 g, 0,80 mmol) foi dissolvido em DMF (5 mL) e 4-nitrofenil carbonato de (5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)-metila (0,26 g, 0,88 mmol) e DIPEA (0,28 mL, 1,6 mmol) foram acrescentados. A suspensão resultante foi diluída com DCM (5 mL) e agitada por 3 h em temperatura ambiente. Mais DIPEA (0,28 mL 1,6 mmol) foi acrescentado e a agitação continuou por 2 h. DCM foi concentrado a vácuo, o resíduo foi diluído com H2O/ACN a 3: 1 e purificado por RP-HPLC para proporcionar N-(5-metil-2-oxo-1,3-dioxol- 4-il)-metil-oxocarbonil-N'-(N-6-acetiltiohexil-L-aspartil)-etilenodiamina (0,31 g, 0,62 mmol, 77%) como óleo incolor. MS: m/z 504,16 = [M+H]+, (calculada = 504,17).
[0598] N-(5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)-metil oxocarbonil-N'-(N-6- acetiltiohexil-L-aspartil)-etileno-diamina (150 mg, 0,30 mmol) foi dissolvida em DCM (17,5 mL) e NHS (41 mg, 0,36 mmol), DCC (74 mg, 0,36 mmol) e DMAP (4 mg, 0,03 mmol) foram acrescentados em uma porção. A reação foi agitada por 1 h em temperatura ambiente e a suspensão resultante foi filtrada. O precipitado foi lavado com uma pequena quantidade de DCM e os filtrados combinados foram concentrados a vácuo. 4c foi purificado por RP-HPLC para proporcionar um óleo incolor (144 mg, 0,24 mmol, 80%). MS: m/z 601,18 = [M+H]+, (calculada = 601,18).
Exemplo 5 Preparação de contas de hidrogel funcionalizadas com maleimida 5a
[0599] 259,3 mg de contas de hidrogel a seco 3a foi incubado por 15 min em 10 mL de 1% de n-propilamina em NMP e em seguida foram lavadas duas vezes com 1% de n-propilamina em NMP e duas vezes com 2% de DIPEA em NMP. 171 mg de maleimida-NH-PEG12- PFE foi dissolvido em 1 mL de NMP e acrescentado às contas de hidrogel lavadas 3a. A suspensão de hidrogel foi incubada por 2 h em temperatura ambiente. As contas de hidrogel funcionalizadas com maleimida resultantes 5a foram lavadas cinco vezes cada com NMP, 20 mM de succinato, 1 mM de Na2EDTA, 0,01% de Tween20, pH 3,0, água, e com 0,1 % de ácido acético, 0,01% de Tween20. Preparação de contas de hidrogel funcionalizadas com maleimida 5b
[0600] 117,7 mg de contas de hidrogel a seco 3a foram dilatadas em 5 mL de NMP e lavadas cinco vezes com NMP e cinco vezes com 2% de DIPEA em NMP. 5 eq (56 mg) de maleimida-NH-PEG6-PFE (com base no teor de amina das contas de hidrogel) foram dissolvidos em 0,5 mL de NMP e acrescentados às contas de hidrogel lavadas 5b. A suspensão de hidrogel foi incubada por 2,5 h em temperatura ambiente. As contas de hidrogel funcionalizadas com maleimida resultantes foram lavadas cinco vezes cada com NMP e depois disso com 0,1% de ácido acético, 0,01% de Tween20.
Exemplo 6 Síntese de pró-droga Lucentis-encadeador-hidrogel 6c transitória
[0601] 4,6 mg de Lucentis (representado no esquema abaixo como Lucentis-NH2) (460 μL de 10 mg/mL de Lucentis em 10 mM de histidina, 10% em peso de α,α-trehalose, 0,01% de Tween20, pH 5,5) foi permutado com tampão para 10 mM de fosfato de sódio, 2,7 mM de cloreto de potássio, 140 mM de cloreto de sódio, pH 7,4 e a concentração de Lucentis foi ajustada para 16,4 mg/mL. 6 mg de reagente Linker 4c foi dissolvido em 100 μL de DMSO para produzir uma concentração de 100 mM. 1 equivalente molar de reagente de encadeador 4c relativo à quantidade de Lucentis foi acrescentado à solução de Lucentis. A mistura da reação foi misturada cuidadosamente e incubada por 5 min em temperatura ambiente. Em seguida, 2 equivalentes molares adicionais de reagente de encadeador 4c foram acrescentados à solução de Lucentis em etapas de 1 equivalente molar e depois da adição de cada equivalente a mistura da reação foi incubada por 5 min em temperatura ambiente produzindo uma mistura de Lucentis não modificado e o monoconjugado protegido Lucentis- encadeador 6a.
[0602] O pH da mistura da reação foi ajustado para pH 6,5 por adição de 1 M de citrato de sódio, pH 5,0 e Na2EDTA foi acrescentado até uma concentração final de 5 mM. De modo a remover os grupamentos de proteção de 6a, 0,5 M de NH2OH (dissolvido em 10 mM de citrato de sódio, 140 mM de cloreto de sódio, 5 mM de Na2EDTA, pH 6,5) foi acrescentado até uma concentração final de 45 mM e a reação de desproteção foi incubada em temperatura ambiente por 4 h produzindo o monoconjugado de Lucentis-encadeador 6b. A mistura de Lucentis e monoconjugado de Lucentis-encadeador 6b teve o tampão trocado para 10 mM de fosfato de sódio, 2,7 mM de cloreto de potássio, 140 mM de cloreto de sódio, 5 mM de Na2EDTA, 0,01% de Tween 20, pH 6,5 e a concentração total das duas espécies de Lucentis foi ajustada para 11,8 mg/mL. O conteúdo de monoconjugado de Lucentis-encadeador 6b na mistura foi de 20% conforme determinado por ESI-MS.
[0603] 4 mg da mistura de Lucentis/monoconjugado de Lucentis- encadeador 6b em 10 mM de fosfato de sódio, 2,7 mM de cloreto de potássio, 140 mM de cloreto de sódio, 5 mM de Na2EDTA, 0,01% de Tween 20, pH 6,5 foram adicionados a 1 mg de contas de hidrogel funcionalizadas com maleimida 5a e incubados de um dia para o outro em temperatura ambiente produzindo a pró-droga Lucentis-encade- ador-hidrogel 6c transitória.
Figure img0102
Exemplo 7 Cinética de liberação in vitro - determinação da meia-vida in vitro
[0604] Pró-droga 6c Lucentis-encadeador-hidrogel (contendo aproximadamente 1 mg de Lucentis) foi lavada cinco vezes com 60 mM de fosfato de sódio, 3 mM de Na2EDTA, 0,01% de Tween20, pH 7,4 e finalmente suspendida em 1 mL do tampão supracitado. A suspensão foi incubada a 37 °C. O tampão da suspensão foi trocado depois de diferentes intervalos de tempo e analisado por HPLC-SEC a 220 nm. Os picos correspondentes a Lucentis liberado foram integrados e o total de Lucentis liberado foi plotado contra o tempo de incubação total. Foi aplicado software de ajuste de curva para determinar as taxas de clivagem de primeira ordem.
Exemplo 8 Preparação de contas de hidrogel 8a e 8b contendo grupamentos amino livres
[0605] 8a foi preparado conforme descrito para 3a com a exceção da utilização de 400 mg de [PEG1250-LLys-LLys2-LLys4(NH2)8]4, 5082 mg de 2s, 33,5 g de DMSO, 400 mg de Cithrol™ DPHS, 2,3 mL de TMEDA, e 4,8 mL de ácido acético, produzindo 1460 mg de 8a como um pó branco, grupamentos amino livres a 0,057 mmol/g.
[0606] 8b foi preparado conforme descrito para 3a com a exceção da utilização de 290 mg de [PEG1250-LLys-LLys2-LLys4(NH2)8]4, 2281 mg de 2v, 26,1 g de DMSO, 257 mg de Cithrol™ DPHS, 1,7 mL de TMEDA, e 3,5 mL de ácido acético, produzindo 820 mg de 8b como um pó branco, grupamentos amino livres a 0,108 mmol/g.
[0607] 8c foi preparado conforme descrito para 3a com a exceção da utilização de 250 mg de [PEG1250-LLys-LLys2-LLys4(NH2)8]4, 2168 mg de rac-2y, 21,8 g de DMSO, 215 mg de Cithrol™ DPHS, 1,1 mL de TMEDA, e 1,7 mL de ácido acético, produzindo 810 mg de 8c como um pó branco, grupamentos amino livres a 0,154 mmol/g.
Exemplo 9 Preparação de hidrogel conjugado a biotina 9a e 9b
[0608] 11 mg de 8a foram transferidos para uma seringa equipada com uma frita de filtro. As contas de hidrogel 8a foram lavadas três vezes cada com NMP e com H2O/ACN/TFA (1/1/0,002; em vol/vol/vol), respectivamente. 1,14 mg de éster de N-hidroxissuccinimida de ácido biotinamidohexanóico (2.5 μmol) foram dissolvidos em 250 μl de H2O/ACN/TFA (1/1/0,002; em v/v/v), adicionados às contas de hidrogel lavadas 8a e incubados por 5 min em temperatura ambiente sob agitação (15 rpm). 50 μl de fosfato de sódio a 0,5 M, pH 7,4 foram adicionados e a mistura da reação foi incubada por 60 min em temperatura ambiente sob agitação (15 rpm). O hidrogel conjugado a biotina resultante 9a foi lavado cinco vezes cada com H2O/ACN/TFA (1/1/0,002; em v/v/v) e com fosfato de sódio a 10 mM, cloreto de potássio a 2,7 mM, cloreto de sódio a 140 mM, 10% de ACN, pH 7,4, respectivamente.
[0609] 9b foi preparado de acordo com 9a com a exceção de que foram usados 11,3 mg de contas de hidrogel 8b e 2,2 mg de éster de N-hidroxissuccinimida de ácido biotinamidohexanóico (4,8 μmol).
Exemplo 10 Preparação de hidrogel de estreptavidina-biotina 10a e 10b
[0610] 6 mg de estreptavidina foi dissolvido em 10 mM de fosfato de sódio, 2,7 mM de cloreto de potássio, 140 mM de cloreto de sódio, 10% de ACN, pH 7,4, adicionado ao hidrogel conjugado a biotina 9a (preparado a partir de 11 mg de 8a) e incubado por 60 min em temperatura ambiente sob agitação (15 rpm) produzindo o hidrogel de estreptavidina-biotina 10a. 10a foi lavado duas vezes com 850 μl de fosfato de sódio a 10 mM, cloreto de potássio a 2,7 mM, cloreto de sódio a 140 mM, 10% de ACN, pH 7,4 e as frações de lavagens foram combinadas. A quantidade de estreptavidina ligada ao hidrogel conjugado a biotina foi quantificada indiretamente por determinação fotométrica a 280 nm da concentração de estreptavidina nas frações de lavagens combinadas e foi considerada de 2,6 mg.
[0611] 10b foi preparado de acordo com 10a com a exceção de foram usados hidrogel conjugado a biotina 9b (preparado a partir de 11,3 mg de 8b) e 8,1 mg de estreptavidina. A quantidade de estreptavidina ligada ao hidrogel conjugado a biotina 9b foi considerada de 0,5 mg.
Exemplo 11 Contas de hidrogel bloqueadas 11
[0612] Contas de hidrogel foram sintetizadas de acordo com o procedimento descrito no exemplo 3c e funcionalizadas com grupamentos de maleimida de acordo com o procedimento descrito no exemplo 5b. Depois disso, 4 mL da suspensão de hidrogel a 10 mg/mL foram transferidos para dentro de uma seringa de 20 mL equipada com uma frita. O solvente foi expelido e o hidrogel foi lavado 10 vezes com 5 mL de histidina a 10 mM/10 % em peso de α,α-trehalose/0,01% de Tween 20/pH 5,5. O solvente foi expelido e 5 mL de β- mercaptoetanol a 1 mM em histidina a 10 mM /10 % em peso de α,α- trehalose/ 0,01% de Tween 20/pH 5,5 foram extraídos para dentro da seringa. A suspensão resultante foi deixada para incubar em temperatura ambiente sob suave agitação por 5 min. O solvente foi descartado e o hidrogel foi tratado 9 vezes adicionais com 5 mL de β- mercaptoetanol a 1 mM em histidina a 10 mM /10 % em peso de α,α- trehalose/0,01% de Tween 20/pH 5,5. O solvente foi descartado a cada vez. As contas de hidrogel foram em seguida lavadas 10 vezes com a cada vez 5 mL de histidina a 10 mM /10 % em peso de α,α- trehalose/0,01% de Tween 20/pH 5,5, o solvente foi descartado a cada vez. As contas de hidrogel foram em seguida lavadas dez vezes com a cada vez 5 mL de PBS-T/pH 7,4, o solvente foi descartado a cada vez. Finalmente, PBS-T fresco /pH 7,4 foi extraído para dentro da seringa e a suspensão foi transferida para dentro de um tubo Falcon para proporcionar 11.
Figure img0103
Figure img0104

Claims (34)

1. Processo para a preparação de um hidrogel, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de: (a) proporcionar uma mistura compreendendo (a-i) no mínimo um reagente da cadeia principal, em que pelo menos um reagente da cadeia principal tem um peso molecular variando de 1 a 100 kDa, e compreende no mínimo três aminas (-NH2 e/ou -NH-); (a-ii) no mínimo um reagente reticulador, em que pelo menos um reagente reticulador tem um peso molecular variando de 6 a 40 kDa, pelo menos um reagente reticulador compreendendo (i) no mínimo dois grupamentos carbonilóxi (-(C=O)-O- ou -O-(C=O)-), e adicionalmente (ii) no mínimo dois grupamentos finais funcionais ativados selecionados entre o grupo consistindo de grupamentos éster ativados, grupamentos carbamato ativados, grupamentos carbonato ativados e grupamentos tiocarbonato ativados, e sendo à base de PEG compreendendo pelo menos 70% de PEG; e (a-iii) um primeiro solvente e no mínimo um segundo solvente, cujo segundo solvente é imiscível no primeiro solvente, em uma proporção em peso de pelo menos um reagente da cadeia principal para pelo menos um reagente reticulador variando de 1:99 a 99:1; e (b) polimerizar a mistura da etapa (a) em uma polimerização de suspensão para um hidrogel; em que pelo menos um reagente da cadeia principal é selecionado entre o grupo consistindo de um composto de fórmula (I): B(- (A0)x1 - (SP)x2 - A1- P - A2 - Hyp1)x (I), em que B é um núcleo de ramificação, SP é uma porção de espaçador selecionada entre o grupo consistindo de C1-6 alquila, C2-6 alquenila e C2-6 alquinila, P é uma cadeia polimérica à base de PEG compreendendo pelo menos 80% de PEG, preferencialmente no mínimo 85% de PEG, mais preferencialmente no mínimo 90% de PEG e mais preferencialmente pelo menos 95% de PEG, Hyp1 é uma porção compreendendo uma amina (-NH2 e/ou -NH-) ou uma poliamina compreendendo pelo menos duas aminas (- NH2 e/ou -NH-), x é um inteiro de 3 a 16, x1, x2 são de modo independente um do outro 0 ou 1, com a condição de que x1 é 0, se x2 for 0, A0, A1, A2 são de modo independente uns dos outros selecionados entre o grupo consistindo de:
Figure img0105
e em que R1 e R1a são de modo independente um do outro selecionados entre H e C1-6 alquil; um composto de fórmula (II)
Figure img0106
em que P é definido como acima no composto de fórmula (I), Hyp2, Hyp3 são de modo independente um do outro uma poliamina compreendendo pelo menos duas aminas (-NH2 e/ou -NH-), A3 e A4 são selecionados de modo independente entre o grupo consistindo de:
Figure img0107
em que R1 e R1a são de modo independente um do outro selecionados entre H e C1-6 alquil; um composto de fórmula (III)
Figure img0108
em que P1 é uma cadeia polimérica à base de PEG compreendendo pelo menos 80% de PEG, preferencialmente no mínimo 85% de PEG, mais preferencialmente no mínimo 90% de PEG e mais preferencialmente pelo menos 95% de PEG, Hyp4 é uma poliamina compreendendo pelo menos três aminas (-NH2 e/ou -NH), e A5 é selecionado entre o grupo consistindo de 
Figure img0109
em que R1 e R1a são de modo independente um do outro selecionados entre H e C1-6 alquil.
2. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a mistura da etapa (a) ainda compreende um detergente.
3. Processo de acordo a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a polimerização na etapa (b) é iniciada adicionando uma base.
4. Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que a base é selecionada entre N,N,N',N'-tetrametiletileno diamina , 1,4-dimetilpiperazina, 4-metilmorfolina, 4-etilmorfolina, 1,4- diazabiciclo[2.2.2]octano, 1,1,4,7,10,10-hexametiltrietilenotetramina, 1,4,7-trimetil-1,4,7-triazaciclononano, tris[2-(dimetilamino) etil]amina, trietilamina, di-isopropiletilamina , trimetilamina, N,N-dimetiletilamina, N,N,N',N'-tetrametil-1,6-hexanodiamina, N,N,N', N",N"- pentametildietilenotriamina, 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno, 1,5- diazabiciclo[4.3.0]non-5-eno, e hexametilenotetramina.
5. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que a mistura da etapa (a) é uma emulsão.
6. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a etapa de: (c) elaboração do hidrogel.
7. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que Hyp1, Hyp2, Hyp3e Hyp4 são selecionados entre o grupo consistindo de uma porção de fórmula (e-i) NH2
Figure img0110
em que p1 é um inteiro de 1 a 5, preferencialmente p1 é 4, e a linha tracejada indica anexação a A2 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (I) e a A3 ou A4 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (II); uma porção de fórmula (e-ii)
Figure img0111
em que p2, p3 e p4 são idênticos ou diferentes e cada um é de modo independente dos outros um inteiro de 1 a 5, preferencialmente p2, p3 e p4 são 4, e a linha tracejada indica anexação a A2 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (I), a A3 ou A4 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (II), e a A5 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (III); uma porção de fórmula (e-iii) 
Figure img0112
em que p5 a p11 são idênticos ou diferentes e cada um é de modo independente do outro um inteiro de 1 a 5, preferencialmente p5 a p11 são 4, e a linha tracejada indica anexação a A2 se o reagente da cadeia principal for de fórmula (I), a A3 ou A4 se o reagente da cadeia principal for de fórmula (II), e a A5 se o reagente da cadeia principal for de fórmula (III); uma porção de fórmula (e-iv)
Figure img0113
em que p12 a p26 são idênticos ou diferentes e cada um é de modo independente do outro um inteiro de 1 a 5, preferencialmente p12 a p26 são 4, e a linha tracejada indica anexação a A2 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (I), a A3 ou A4 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (II), e a A5 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (III); uma porção de fórmula (e-v)
Figure img0114
em que p27 e p28 são idênticos ou diferentes e cada um é de modo independente do outro um inteiro de 1 a 5, preferencialmente p27 e p28 são 4, q é um inteiro de 1 a 8, preferencialmente q é 2 ou 6 e o mais preferencialmente q é 6, e a linha tracejada indica anexação a A2 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (I), a A3 ou A4 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (II), e a A5 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (III); uma porção de fórmula (e-vi)
Figure img0115
em que p29 e p30 são idênticos ou diferentes e cada um é de modo independente do outro um inteiro de 2 a 5, preferencialmente p29 e p30 são 3, e a linha tracejada indica anexação a A2 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (I), a A3 ou A4 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (II), e a A5 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (III); uma porção de fórmula (e-vii)
Figure img0116
em que p31 a p36 são idênticos ou diferentes e cada um é de modo independente do outro um inteiro de 2 a 5, preferencialmente p31 a p36 são 3, e a linha tracejada indica anexação a A2 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (I), a A3 ou A4 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (II), e a A5 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (III); uma porção de fórmula (e-viii) 
Figure img0117
em que p37 a p50 são idênticos ou diferentes e cada um é de modo independente do outro um inteiro de 2 a 5, preferencialmente p37 a p50 são 3, e a linha tracejada indica anexação a A2 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (I), a A3 ou A4 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (II), e a A5 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (III); e uma porção de fórmula (e-ix): 
Figure img0118
em que p51 a p80 são idênticos ou diferentes e cada um é de modo independente do outro um inteiro de 2 a 5, preferencialmente p51 a p80 são 3, e a linha tracejada indica anexação a A2 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (I), a A3 ou A4 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (II), e a A5 se o reagente da cadeia principal tiver uma estrutura de fórmula (III); e em que as porções (e-i) a (e-v) podem em cada centro quiral estar ou na configuração R- ou na S-, preferencialmente, todos os centros quirais de uma porção (e-i) a (e-v) estão na mesma configuração.
8. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que o reagente da cadeia principal é um composto de fórmula (I).
9. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que o núcleo de ramificação B é selecionado entre as seguintes estruturas:
Figure img0119
Figure img0120
em que linhas tracejadas indicam anexação a A0 ou, se x1 e x2 forem ambos 0, a A1, t é 1 ou 2; preferencialmente t é 1, v é 1, 2, 3, 4, 5, 6 ,7 ,8 , 9, 10, 1 1, 12, 13 ou 14; preferencialmente, v é 2, 3, 4, 5, 6 mais preferencialmente, v é 2, 4 ou 6; o mais preferencialmente, v é 2.
10. Processo de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que B é de fórmula (a-xiv).
11. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que A0 é
Figure img0121
12. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que x1 e x2 são 0.
13. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pelo fato de que P apresenta uma estrutura de fórmula (c-i) em que n varia de 6 a 900, mais preferencialmente n varia de 20 a 700 e o mais preferencialmente n varia de 20 a 250.
Figure img0122
14. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que a porção - A2 - Hyp1 é uma porção da fórmula
Figure img0123
em que a linha tracejada indica anexação a P; e E1 é selecionado entre as fórmulas (e-i) a (e-ix).
15. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que o reagente da cadeia principal tem a seguinte fórmula:
Figure img0124
em que n varia de 10 a 40, preferencialmente de 10 a 30, mais preferencialmente de 10 a 20.
16. Processo de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que n varia de 20 a 30 e o mais preferencialmente n é 28.
17. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo fato de que o reagente da cadeia principal está presente sob a forma de seu sal acídico.
18. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, caracterizado pelo fato de que o reagente reticulador é um composto de fórmula (V-II):
Figure img0125
em que D1, D2, D3 e D4 são idênticos ou diferentes e cada um é de modo independente dos outros selecionado entre o grupo compreendendo O, NR5, S e CR5R5a; R1, R1a, R2, R2a, R3, R3a, R4, R4a, R5 e R5a são idênticos ou diferentes e cada um é de modo independente dos outros selecionados entre o grupo compreendendo H e C1-6 alquil; opcionalmente, um ou mais dos pares R1/R1a, R2/R2a, R3/R3a, R4/R4a, R1/R2, R3/R4, R1a/R2a, e R3a/R4a formam uma ligação química ou são unidos juntos com o átomo ao qual eles são anexados para formar um C3-8 cicloalquila ou para formar um anel A ou são unidos juntos com o átomo ao qual eles são anexados para formar um heterociclila de 4 a 7 membros ou heterobiciclila de 8 a 11 membros ou adamantila; A é selecionado entre o grupo consistindo de fenila, naftila, indenila, indanila e tetralinila; P2 é
Figure img0126
m varia de 120 a 920, preferencialmente de 120 a 460 e mais preferencialmente de 120 a 230; r1, r2, r7, r8 são de modo independente 0 ou 1; r3, r6 são de modo independente 0, 1, 2, 3, ou 4; r4, r5 são de modo independente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10; s1, s2 são de modo independente 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; Y1, Y2 são idênticos ou diferentes e cada um é de modo independente do outro selecionado entre as fórmulas (f-i) a (f-vi):
Figure img0127
em que as linhas tracejadas indicam anexação ao resto da molécula, b é 1, 2, 3 ou 4 XH é Cl, Br, I, ou F.
19. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 18, caracterizado pelo fato de que o reagente reticulador é de fórmula (V-l) a (V-54):
Figure img0128
em que cada reagente reticulador pode estar sob a forma de sua mistura racêmica, onde aplicável; e m varia de 120 a 920, preferencialmente de 120 a 460 e mais preferencialmente de 120 a 230; Y1, Y2 são idênticos ou diferentes e cada um é de modo independente do outro selecionado entre as fórmulas (f-i) a (f-vi):
Figure img0129
Figure img0130
Figure img0131
Figure img0132
Figure img0133
Figure img0134
Figure img0135
ou em que as linhas tracejadas indicam anexação ao resto da molécula, b é 1, 2, 3 ou 4 XH é Cl, Br, I, ou F.
20. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 19, caracterizado pelo fato de que o hidrogel obtido a partir da polimerização é um artigo moldado.
21. Processo de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que o hidrogel está sob a forma de contas microparticulares tendo um diâmetro de 1 a 500 micrômetros.
22. Hidrogel, caracterizado pelo fato de que pode ser obtido por um processo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 21.
23. Processo para a preparação de um conjugado de hidrogel-espaçador, caracterizado pelo fato de que compreende a etapa de: (d) reagir o hidrogel como definido na reivindicação 22 com um reagente espaçador da fórmula (VI) Ax1-S0-Ax2 (VI), em que S0 é selecionado entre o grupo compreendendo C1-50 alquila, C2-50 alquenil e C2-50 alquinila, cujo fragmento é opcionalmente interrompido por um ou mais grupamento(s) selecionado(s) entre -NH-, -N(C1-4 alquil)-, -O-, -S, -C(O)-, -C(O)NH-, - C(O)N(C1-4 alquil)-, -O-C(O)-, -S(O)-, -S(O)2-, heterociclila de 4 a 7 membros, fenila e naftila; Ax1 é um grupamento funcional para reação com um grupamento amina do hidrogel; e Ax2 é um grupamento funcional; na presença de um solvente para obter um conjugado de hidrogel-espaçador.
24. Processo de acordo com a reivindicação 23, caracterizado pelo fato de que Ax1 é selecionado entre o grupo compreendendo ácido carboxílico ativado; Cl-(C=O)-; NHS-(C=O)-, em que NHS é N-hidroxissuccinimida; CISO2-; R1(C=O)-; I-; Br-; Cl-; SCN-; e CN-, em que R1 é selecionado entre o grupo compreendendo H, C1-6 alquila, C2-6 alquenila, C2-6 alquinila, C3-8 cicloalquila, heterociclila de 4 a 7 membros, heterobiciclila de 8 a 11 membros, fenila, naftila, indenila, indanila, e tetralinila.
25. Processo de acordo com a reivindicação 23 ou 24, caracterizado pelo fato de que Ax2 é selecionado entre o grupo compreendendo -maleimida, -SH, -NH2, -SeH, -N3, -C^CH, - CR1=CR1aR1b, -OH, -(C=O)-S-R1, -(C=O)-H, -NH-NH2, -O-NH2, -Ar-X0, - Ar-Sn(R1)(R1a)(R1b), -Ar- B(OH)(OH),
Figure img0136
proteção opcionais; em que X0 é -OH, -NR1R1a, -SH, ou -SeH, Ar é selecionado entre fenila, naftila, indenila, indanila, e tetralinila, e R1, R1a, R1b são de modo independente uns dos outros selecionados entre o grupo compreendendo H, C1-6 alquila, C2-6 alquenila, C2-6 alquinila, C3-8 cicloalquila, heterociclila de 4 a 7 membros, heterobiciclila de 8 a 11 membros, fenila, naftila, indenila, indanila, e tetralinila.
26. Conjugado de hidrogel-espaçador, caracterizado pelo fato de que pode ser obtido pelo processo como definido na reivindicação 24 ou 25.
27. Processo para a preparação de uma pró-droga ligada a um suporte, caracterizado pelo fato de que compreende a etapa de: (e) reagir um hidrogel como definido na reivindicação 22 ou um conjugado de hidrogel-espaçador como definido na reivindicação 27 com um reagente de encadeador de pró-droga e porção biologicamente ativa de fórmula (VII) Ay1-L-D (VII), em que Ay1 é um grupamento funcional para reação com uma amina do hidrogel da etapa (b) ou (c) ou para reação com o grupamento funcional Ax2 do conjugado de hidrogel-espaçador da etapa (d), L é um encadeador de pró-droga; D é uma porção biologicamente ativa; na presença de um solvente, para obter uma pró-droga ligada a um suporte.
28. Processo de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pelo fato de que Ax2/Ay1 são selecionados entre os seguintes:
Figure img0137
Figure img0138
Figure img0139
em que X0 é -OH, -NR1R1a, -SH, ou -SeH; R1, R1a, R1b são de modo independente uns dos outros selecionados entre o grupo compreendendo H, C1-6 alquil, C2-6 alquenil, C2-6 alquinila, C3-8 cicloalquila, heterociclila de 4 a 7 membros, heterobiciclila de 8 a 11 membros, fenila, naftila, indenila, indanila, e tetralinila; e Ar é selecionado entre fenil, naftila, indenila, indanila, e tetralinila.
29. Processo de acordo com a reivindicação 27 ou 28, caracterizado pelo fato de que Ax2 é um tiol e Ay1 é de fórmula (VIIa) T- PG0 - S- (VIIa), em que T é H ou uma porção de etiqueta; PG0 é uma porção de ativação de enxofre; e S é enxofre.
30. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 27 a 29, caracterizado pelo fato de que D tem um peso molecular variando entre 2 e 500 kDa, mais preferencialmente entre 5 e 250 kDa, mais preferencialmente entre 5 e 100 kDa e o mais preferencialmente entre 10 e 60 kDa.
31. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 27 a 30, caracterizado pelo fato de que D é um anticorpo monoclonal ou policlonal ou um fragmento ou fusão do mesmo.
32. Pró-droga ligada a um suporte, caracterizada pelo fato de que pode ser obtida por um processo para a preparação de uma pró-droga ligada a um suporte como definido em qualquer uma das reivindicações 28 a 31.
33. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende a pró-droga ligada a um suporte como definida na reivindicação 32, ou um sal farmacêutico da mesma junto com um excipiente farmaceuticamente aceitável.
34. Pró-droga ligada a um suporte de acordo com a reivindicação 32 ou composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 33, caracterizada pelo fato de ser para utilização como um medicamento.
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