BR112012007555B1 - Métodos in vitro para prever a sensibilidade e resposta de doenças mediadas por proteína quinase ck2 a inibidores de ck2 - Google Patents

Métodos in vitro para prever a sensibilidade e resposta de doenças mediadas por proteína quinase ck2 a inibidores de ck2 Download PDF

Info

Publication number
BR112012007555B1
BR112012007555B1 BR112012007555-1A BR112012007555A BR112012007555B1 BR 112012007555 B1 BR112012007555 B1 BR 112012007555B1 BR 112012007555 A BR112012007555 A BR 112012007555A BR 112012007555 B1 BR112012007555 B1 BR 112012007555B1
Authority
BR
Brazil
Prior art keywords
level
polypeptide
inhibitor
treatment
akt
Prior art date
Application number
BR112012007555-1A
Other languages
English (en)
Other versions
BR112012007555A2 (pt
Inventor
Denis Drygin
Sean O´Brien
Kenna Anderes
Daniel D. Vonhoff
John K.C. Lim
Claire S. Padgett
Joshua R. Bliesath
Caroline B. Ho
William G. Rice
Adam Siddiqui-Jain
Original Assignee
Cylene Pharmaceuticals, Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Cylene Pharmaceuticals, Inc filed Critical Cylene Pharmaceuticals, Inc
Publication of BR112012007555A2 publication Critical patent/BR112012007555A2/pt
Publication of BR112012007555B1 publication Critical patent/BR112012007555B1/pt

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57415—Specifically defined cancers of breast
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57434—Specifically defined cancers of prostate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/106—Pharmacogenomics, i.e. genetic variability in individual responses to drugs and drug metabolism
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/136—Screening for pharmacological compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/91—Transferases (2.)
    • G01N2333/912—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
    • G01N2333/91205—Phosphotransferases in general
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2440/00—Post-translational modifications [PTMs] in chemical analysis of biological material
    • G01N2440/14—Post-translational modifications [PTMs] in chemical analysis of biological material phosphorylation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

biomarcadores para prever a sensibilidade e resposta de doenças mediadas por proteína quinase ck2 a inibidores de ck2. são divulgados biomarcadores para determinação da sensibilidade de doenças mediadas pela proteína quinase ck2, tais como distúrbios inflamatórios e/ou proliferativos, ao tratamento com inibidores de ck2. esses biomarcadores podem ser usados para prever ou selecionar indivíduos que provavelmente são responsivos ao tratamento com um inibidor de ck2 e tratar ou monitorar indivíduos que estão sofrendo tratamento com inibidor de ck2.

Description

Referência Cruzada a Pedidos Relacionados
[0001] O presente pedido reivindica prioridade ao Pedido Provisório U.S. No. de Série 61/248.270, depositado em 2 de Outubro de 2009, Pedido Provisório U.S. No. de Série 61/255.805, depositado em 28 de Outubro de 2009, Pedido Provisório U.S. No. de Série 61/323.771, depositado em 13 de Abril de 2010 e Pedido Provisório U.S. No. de Série 61/380.685, depositado em 7 de Setembro de 2010, cada um dos quais é aqui incorporado por referência na íntegra para todas as finalidades.
Campo Técnico
[0002] A presente invenção refere-se a biomarcadores para determinação da sensibilidade de doenças mediadas pela proteína quinase CK2, tais como distúrbios proliferativos e/ou inflamatórios, ao tratamento com inibidores de CK2. Tais biomarcadores podem ser usados para prever ou selecionar indivíduos que provavelmente são responsivos ao tratamento com inibidores de CK2 e tratar ou monitorar indivíduos que estão sofrendo tratamento com inibidores de CK2.
Antecedentes da Invenção
[0003] A proteína quinase CK2 (formalmente denominada caseína quinase II, referida aqui como "CK2") é uma serina /treonina quinase de proteína abundante e altamente conservada. A holoenzima é, tipicamente, encontrada em complexos tetraméricos consistindo em duas subunidades catalíticas (alfa e/ou alfa') e duas subunidades regulatórias (beta). CK2 tem uma série de alvos fisiológicos e participa em uma série complexa de funções celulares, incluindo a manutenção de viabilidade celular. O nível de CK2 em células normais é rigorosamente regulado e há muito foi considerada como exercendo um papel em crescimento e proliferação celular. Inibidores de CK2 que são úteis para tratamento de determinados tipos de cânceres são descritos nos documentos PCT/US2007/077464, PCT/US2008/074820 e PCT/US2009/035609, os conteúdos de cada um dos quais são aqui incorporados por referência.
[0004] A prevalência e a importância da CK2 sugerem que a mesma é uma enzima ancestral na escala evolucionária, conforme uma análise evolucionária de sua sequência; sua longevidade pode explicar porque ela se tornou importante em tantos processos bioquímicos e porque a CK2 de hospedeiros tem sido cooptada por patógenos infecciosos (por exemplo, vírus, protozoários) como uma parte integral de seus sistemas bioquímicos de ciclo de vida e sobrevivência. Essas mesmas características explicam porque acredita-se que inibidores de CK2 sejam úteis em uma variedade de tratamentos médicos, conforme discutido aqui. Em virtude do fato de ela ser central para muitos processos biológicos, conforme resumido por Guerra & Issinger, Curr. Med. Chem., 2008, 15: 1870-1886, inibidores de CK2, incluindo os compostos descritos aqui, seriam úteis no tratamento de uma variedade de doenças e distúrbios.
[0005] Células cancerígenas mostram uma elevação de CK2 e evidência recente sugere que a CK2 exerce supressão potente de apoptose em células cancerígenas ao proteger proteínas regulatórias de degradação mediada por caspase. A função anti-apoptótica de CK2 pode contribuir para sua capacidade de participar em transformação e tumorigênese. Em particular, foi mostrado que a CK2 está associada à leucemia mielogênea aguda e crônica, leucemia linfoblástica aguda, leucemia linfocítica crônica, linfoma e mieloma múltiplo. Além disso, atividade intensificada de CK2 foi observada em tumores sólidos do cólon, reto e mama, carcinomas de células escamosas do pulmão e da cabeça e pescoço (SCCHN) e adenocarcinomas do pulmão, cólon, reto, rim, mama e próstata. Inibição de CK2 por uma pequena molécula é reportada como induzindo à apoptose de células de câncer pancreático, células de carcinoma hepatocelular (HegG2, Hep3) e células de câncer cervical (HeLa); e inibidores de CK2 sensibilizaram dramaticamente tumores RMS (Rhabdomiosarcoma) à apoptose induzida por TRAIL. Assim, um inibidor de CK2 isoladamente ou em combinação com TRAIL ou um ligante para o receptor TRAIL pode ser útil para tratar RMS, o sarcoma de tecido mole mais comum em crianças. Além disso, descobriu-se que CK2 elevada está altamente correlacionada com a agressividade de neoplasias e tratamento com inibidores de CK2 potentes, assim, reduziria a tendência de lesões benignas de avançar para aquelas malignas ou de que aquelas malignas venham a metastatizar.
[0006] Descobriu-se que a CK2 promove vias de sinalização (por exemplo, PI3K/Akt, NF-kB e Wnt) e progressão de ciclo celular via fosforilação de p21 e p27. CK2 também é reportada como conferindo supressão de tumor (por exemplo, PML, PTEN, p53) e promovendo biogênese de rRNA e tRNA para acionar a síntese de proteína. A CK2 ativa a maquinaria de chaperona Hsp90, a qual pode funcionar para proteger onco-quinases. Essas ações da CK2 podem promover a sobrevivência de células cancerígenas.
[0007] Diferente de outras quinases e vias de sinalização, onde mutações são frequentemente associadas com alterações estruturais que causam perda de controle regulatório, nível de atividade aumentado de CK2 parece ser, em geral, causado por super-regulação ou superexpressão da proteína ativa ao invés de por alterações que afetam os níveis de ativação. Guerra e Issinger postulam que isso pode ser em virtude de regulação por agregação, uma vez que os níveis de atividade não se correlacionam bem com os níveis de mRNA. Atividade excessiva de CK2 foi mostrada em muitos cânceres, incluindo tumores SCCHN, tumores de pulmão, tumores de mama e outros. Id.
[0008] Foi mostrado que atividade elevada de CK2 em carcinomas cólon-retais se correlaciona com malignidade aumentada. Foi reportado que expressão e atividade anormais de CK2 promovem níveis nucleares aumentados de NF-KB em células de câncer de mama e mieloma. Atividade de CK2 é acentuadamente aumentada em pacientes com AML e CML durante crise de blasto, indicando que um inibidor de CK2 seria particularmente eficaz nessas condições. Foi mostrado que a sobrevivência de células de mieloma múltiplo (Multiple Myeloma - MM) conta com alta atividade de CK2 e inibidores de CK2 eram citotóxicos para células de MM. Similarmente, um inibidor de CK2 inibiu o crescimento de células de linfoma p190 de murino. Foi reportado que sua interação com Bcr/Abl exerce um papel importante em proliferação de células expressando Bcr/Abl, indicando que inibidores de CK2 podem ser úteis no tratamento de leucemias Bcr/Abl-positivas. Foi mostrado que inibidores de CK2 inibem a progressão de papilomas da pele, xenoenxertos de câncer de próstata e mama em camundongos e prolongam a sobrevivência de camundongos transgênicos que expressam oncogenes que promovem o câncer de próstata. Id.
[0009] O papel de CK2 em vários processos doentios que não câncer foi recentemente revisto. Vide Guerra & Issinger, Curr. Med. Chem., 2008, 15: 1870-1886. Evidência crescente indica que CK2 está envolvida em doenças críticas do sistema nervoso central incluindo, por exemplo, mal de Alzheimer, mal de Parkinson e distúrbios neurodegenerativos raros, tais como demência de Guam-Parkinson, síndrome de deleção de cromossomo 18, paralisia supranuclear progressiva, doença de Kuf ou doença de Pick. É sugerido que fosforilação CK2-mediada seletiva de proteínas tau pode estar envolvida em neurodegeneração progressiva em Alzheimer. Além disso, estudos recentes sugerem que a CK2 exerce um papel em dano à memória e isquemia cerebral, o último efeito aparentemente sendo mediado pelo efeito regulatório de CK2 sobre as vias de sobrevivência PI3K.
[00010] Também foi mostrado que a CK2 está envolvida na modulação de distúrbios inflamatórios, por exemplo, dor inflamatória aguda ou crônica, glomerulonefrite e doenças autoimunes incluindo, por exemplo, esclerose múltipla (Multiple Sclerosis - MS), lupus eritematoso sistêmico, artrite reumatoide e artrite juvenil. Ela regula positivamente a função do canal receptor de serotonina 5-HT3, ativa heme oxigenase do tipo 2 e intensifica a atividade de sintase de óxido nítrico neuronal. Foi reportado que um inibidor seletivo de CK2 reduz fortemente a resposta dolorosa de camundongos quando administrado ao tecido da coluna espinhal antes de testagem de dor. Ele fosforila fosfolipase A2 secretória do tipo IIA do fluido sinovial de pacientes com RA e modula a secreção de DEK (uma proteína de ligação a DNA nuclear), a qual é uma molécula pró-inflamatória encontrada em fluido sinovial de pacientes com artrite juvenil. Assim, espera-se que inibição de CK2 controle a progressão de patologias inflamatórias, tais como aquelas descritas aqui e foi mostrado que os inibidores divulgados aqui tratam eficazmente dor em modelos animais.
[00011] Também foi mostrado que a proteína quinase CK2 exerce um papel em distúrbios do sistema vascular tais como, por exemplo, aterosclerose, tensão de cisalhamento laminar e hipoxia. Também foi mostrado que a CK2 exerce um papel em distúrbios do músculo esquelético e tecido ósseo, tais como hipertrofia de cardiomiócitos, sinalização deficiência à insulina e mineralização de tecido ósseo. Em um estudo, inibidores de CK2 foram eficazes ao diminuir a angiogênese induzida por fator de crescimento em células cultivadas. A CK2 promove a angiogênese e foi reportado que ativa HIF-1a sob hipoxia e sustenta a neo-vascularização.
[00012] Além disso, em um modelo de retinopatia, um inibidor de CK2, combinado com octreotídeo (um análogo de somatostatina), reduziu tufos neovasculares; assim, os inibidores de CK2 descritos aqui podem ser eficazes em combinação com um análogo de somatostatina para tratar retinopatia.
[00013] Foi mostrado também que a CK2 fosforila GSK, troponina e cadeia leve de miosina; assim, ela é importante em fisiologia do músculo esquelético e óssea e está relacionada À doenças que afetam o tecido muscular.
[00014] Evidência sugere que CK2 também está envolvida no desenvolvimento e regulação do ciclo de vida de parasitas protozoários tais como, por exemplo, Theileria parva, Trypanosoma cruzi, Leishmania donovani, Herpetomonas muscarum muscarum, Plasmodium falciparum, Trypanosoma brucei, Toxoplasma gondii e Schistosoma mansoni.Numerosos estudos confirmaram o papel de CK2 em regulação de motilidade celular de parasitas protozoários, essencial para invasão de células hospedeiras. Foi mostrado que ativação de CK2 ou atividade excessiva de CK2 ocorre em hospedeiros infectados com Leishmania donovani, Herpetomonas muscarum muscarum, Plasmodium falciparum, Trypanosoma brucei, Toxoplasma gondii e Schistosoma mansoni. Na verdade, foi mostrado que inibição de CK2 bloqueia a infecção por T cruzi.
[00015] Foi mostrado também que CK2 interage com e/ou fosforila proteínas virais associadas ao vírus da imunodeficiência humana do tipo 1 (Human Immunodeficiency Virus type 1 - HIV-1), papiloma virus humano e virus do herpes simplex, além de outros tipos de virus (por exemplo, citomegalovírus humano, virus de hepatite C e B, virus da doença de Borna, adenovirus, coxsackievirus, coronavirus, influenza e vírus da varicela zoster). CK2 fosforila e ativa a transcriptase reversa e proteases de HIV-1 in vitro e in vivo e promove a patogenicidade do vírus da imunodeficiência humana-símio (Simian-Human Immunodeficiency Virus - SHIV), um modelo para HIV. Inibidores de CK2 são, assim, capazes de reduzir os efeitos patogênicos de um modelo de infecção por HIV. CK2 também fosforila numerosas proteínas em vírus do herpes simplex e numerosos outros vírus e algumas evidências sugerem que os vírus têm adotado a CK2 como uma enzima de fosforilação para suas proteínas essenciais do ciclo de vida. Espera- se que inibição de CK2, assim, detenha a infecção e progressão de infecções virais, as quais contam com a CK2 do hospedeiro para seus próprios ciclos de vida.
[00016] CK2 é incomum na diversidade de processos biológicos que ela afeta e difere da maioria das quinases de outras formas também: ela é constitutivamente ativa, pode usar ATP ou GTP e está elevada na maioria dos tumores e tecidos em proliferação rápida. Ela também tem características estruturais incomuns que podem distingui-la da maioria das quinases também, permitindo que seus inibidores sejam altamente específicos para a CK2, enquanto que muitos inibidores de quinase afetam múltiplas quinases, aumentando a probabilidade de efeitos que não são sobre o alvo ou variabilidade entre indivíduos. Por todas essas razões, a CK2 é um alvo particularmente interessante para desenvolvimento de fármaco e a invenção proporciona inibidores altamente eficazes de CK2 que são úteis no tratamento de uma variedade de diferentes doenças e distúrbios mediados por ou associados a níveis excessivos, anormais ou indesejados de atividade de CK2.
[00017] Foi postulado que superexpressão de CK2 é um marcador prognóstico negativo para câncer (Ahmad et al., 2005; Duncan & Litchfeld 2008). Além disso, embora a fosforilação de Akt em Serina 129 pela CK2 tenha sido descrita na literatura (Di Maira etal., 2005; Di Maira et al., 2009), a forma pela qual um inibidor de CK2 potencial afetaria a fosforilação de Akt é desconhecida e ainda não previsível.
[00018] IL-6 e IL-8 são mediadores de resposta inflamatória bem descritos. IL-6 é uma citocina pró-inflamatória conhecida por exercer um papel em doenças inflamatórias e câncer. A IL-6 serve como fatores de crescimento autócrinos e parácrinos para vários cânceres e altos níveis de IL-6 se correlacionam com um pobre prognóstico e produção aumentada de fatores angiogênicos. IL-8 é uma quimiocina produzida por macrófagos, células epiteliais e outros tipos de célula e é um principal mediador da resposta inflamatória. IL-8 funciona como um quimioatrativo e é também um fator angiogênico potente.
[00019] Foi reportado que a CK2 fosforila e, desse modo, modula a atividade de fatores de transcrição envolvidos em regulação da resposta inflamatória incluindo, por exemplo, fator-kappa B nuclear (NF-KB), transdutor de sinal e ativador de transcrição (Signal Transducer And Activator Of Transcription - STAT) 1, monofosfato de adenosina cíclico (Cyclic Adenosine Monophosphate - cAMP), proteína de ligação a elemento de resposta (Response Element Binding Protein - CREB), proteina moduladora de elemento de resposta a cAMP (cAMP Response Element Modulator Protein - CREM), PU.1, proteina-1 de especificidade (Specificity Protein-1 - Sp1), proteínas de ligação a intensificador-CCAAT (CCAAT-Enhancer Binding Proteins - C/EBP), receptores de hormônio esteroidal e os protooncogenes c-Jun, c-Fos, c- Myc e Max. Vide Singh & Ramji, J. Mol. Med. 2008, 86(8): 887-97.
[00020] Câncer de mama inflamatório (Inflammatory Breast Cancer - IBC) exibe angiogênese e linfangiogênese aumentadas e tem um maior potencial metastático do que o câncer de mama não inflamatório. Embora o papel de CK2 em câncer de mama em geral tenha sido investigado, não há literatura descrevendo o papel de CK2 em IBC.
[00021] CK2 regula a transcrição de NF-KB via fosforilação de IKB e NF-KB. IL-6 e IL-8 são genes alvo de NF-KB. Embora se saiba que a CK2 está envolvida em regulação de NF-KB, um dos fatores transcricionais responsáveis pela expressão de IL-6, o elo entre CK2 e IL-6 não é bem estabelecido. A regulação potencial de IL-8 através de NF-kB no intestino foi reportada (Parhar et al., 2007).
[00022] O agrupamento de diferenciação 19 (Cluster of Differentiation 19 - CD19) é expresso sobre células dendríticas foliculares e células B. CD19 está presente sobre células B das células de linhagem B mais precocemente reconhecíveis durante desenvolvimento de blastos de células B, mas falta quando de maturação em células plasmáticas. Após ativação, a cauda citoplásmica de CD19 se torna fosforilada, o que leva à ligação por quinases da família Src e recrutamento de quinase PI-3. Mutações que causam defeitos no desenvolvimento de células B podem dar origem a cânceres, tais como linfomas e leucemias. Foi mostrado que CD19 é um regulador principal de atividade de AKT (Otero, Omori &Rickert, 2001) e ativação constitutiva de Akt contribui para a patogênese e sobrevivência de múltiplas doenças derivadas de células B, incluindo linfoma de células do manto (Radelius, Pittaluga, Nishizuka et al., 2006).
[00023] Conforme descrito acima, descobriu-se que inibidores de CK2 possuem propriedades antiproliferativas potentes, as quais os tornam úteis para quimioterapia de câncer. Contudo, há uma necessidade por uso mais objetivado de inibidores de CK2, o qual requer a identificação de indivíduos que provavelmente responderão ao tratamento com tais agentes. A identificação de biomarcadores úteis para prever a responsividade de uma célula, tecido, tumor ou indivíduo ao tratamento com inibidores de CK2 é extremamente valiosa no desenvolvimento de abordagens objetivadas para o tratamento de distúrbios mediados por CK2 incluindo, mas não limitado a, distúrbios proliferativos, tais como cânceres. Tais biomarcadores podem ser usados como critérios para identificar e/ou selecionar pacientes que provavelmente receberão um benefício terapêutico a partir da administração de um inibidor de CK2. Além disso, esses e outros biomarcadores podem também ser úteis para monitoramento da resposta de um indivíduo ao tratamento e para determinar se modificar o regime de dosagem ou substituir ou aumentar o agente terapêutico.
[00024] Consequentemente, há uma necessidade de identificar biomarcadores os quais são capazes de prever a sensibilidade e/ou monitorar a resposta de uma doença mediada por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, ao tratamento com um inibidor de CK2.
Sumário da Invenção
[00025] A presente invenção refere-se a biomarcadores para prever, determinar e/ou monitorar a sensibilidade de uma doença mediada por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, ao tratamento com um agente terapêutico, em particular um inibidor de CK2.
[00026] Em um primeiro aspecto, a presente invenção proporciona biomarcadores que são úteis para prever a sensibilidade e/ou responsividade de um indivíduo ou sistema ao tratamento com um inibidor de CK2. Os biomarcadores e métodos associados de medição dos referidos biomarcadores podem ser usados para selecionar um indivíduo ou uma população de indivíduos para tratamento com um inibidor de CK2 em particular. A invenção refere-se também ao uso desses biomarcadores para monitorar ou prever os resultados de tratamento em indivíduos aos quais está sendo administrado um inibidor de CK2.
[00027] Conforme descrito aqui, biomarcadores úteis para prever a sensibilidade e/ou monitorar a responsividade de uma doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2 incluem os níveis de expressão de mRNA e/ou polipeptídeo (isto é, a expressão de proteína) de IL-6, IL-8, HIF-1α, VEGF, subunidades CK2αDe/ou CK2a', CK2β e o nível de Akt fosforilada em serina 129 (p-Akt S129), isoladamente ou com relação ao polipeptideo de Akt total (isto é, o nível normalizado de p-Akt S129). Biomarcadores adicionais incluem o nível de Akt fosforilada em serina 473 (p-Akt S473), isoladamente ou com relação ao polipeptideo de Akt total (isto é, o nível normalizado de p-Akt S473), o nível de p21 fosforilado em treonina 145 (p-p21 T145), isoladamente ou com relação ao polipeptideo de p21 total (isto é, o nível normalizado de p-p21 T145), o nível de fator-KB nuclear fosforilado (NF-KB) em serina 529 (P-NF-KB S529), isoladamente ou com relação ao polipeptideo de NF-KB total (isto é, o nível normalizado de P-NF-KB S529), o nível de STAT3 fosforilado em tirosina 705 (p-STAT3 Y705), isoladamente ou com relação ao polipeptideo de STAT3 total (isto é, o nível normalizado de p-STAT3 Y705) ou o nível de JAK2 fosforilada em tirosina 1007/1008 (p-JAK2 Y1007/1008), isoladamente ou com relação ao polipeptideo de JAK2 total (isto é, o nível normalizado de p-JAK2 Y1007/1008).
[00028] Consequentemente, em um segundo aspecto, a invenção proporciona métodos para prever a sensibilidade e/ou monitorar a responsividade de uma doença mediada por CK2, tal como um distúrbio proliferative e/ou um distúrbio inflamatório, em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo determinação dos níveis de expressão de mRNA e/ou polipeptideo de um ou mais biomarcadores selecionados de IL-6, IL-8, HIF-1α, VEGF, CK2a e CK2α', CK2β e/ou o nível de fosforilação para p-Akt S129, p-Akt S473, p-p21 T145, P-NF-KB S529, p-STAT3 Y705, p-JAK2 Y1007/1008, isoladamente ou com relação ao nível total de proteína não fosforilada (isto é, o nível normalizado) em uma amostra biológica derivada do indivíduo, conforme ainda descrito aqui.
[00029] Em uma de tais modalidades, o método compreende determinação do nível de expressão de mRNA de IL-6 e/ou polipeptideo de IL-6 em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível de expressão de mRNA de IL-6 e/ou polipeptídeo de IL-6 com relação ao controle é prognóstico da sensibilidade da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00030] Em outra de tais modalidades, o método compreende determinação do nível de expressão de mRNA de IL-6 e/ou polipeptídeo de IL-6 em uma primeira amostra biológica derivada do indivíduo antes de administração com um inibidor de CK2, em que uma diminuição no nível de expressão de mRNA de IL-6 e/ou polipeptídeo de IL-6 com relação a uma segunda amostra biológica derivada do indivíduo após administração do inibidor de CK2 é indicativa de uma resposta positiva ao tratamento da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00031] Em outra de tais modalidades, o método compreende determinação do nível de expressão de mRNA de IL-8 e/ou polipeptídeo de IL-8 em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível de expressão de mRNA de IL-8 e/ou polipeptídeo de IL-8 com relação ao controle é prognóstico da sensibilidade da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00032] Em outra de tais modalidades, o método compreende determinação do nível de expressão de mRNA de IL-8 e/ou polipeptídeo de IL-8 em uma primeira amostra biológica derivada do indivíduo antes de administração com um inibidor de CK2, em que uma diminuição no nível de expressão de mRNA de IL-8 e/ou polipeptídeo de IL-8 com relação a uma segunda amostra biológica derivada do indivíduo após administração do inibidor de CK2 é indicativa de uma resposta positiva ao tratamento da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00033] Em outra de tais modalidades, o método compreende determinação do nível de expressão de mRNA de CK2a e/ou polipeptideo de CK2α em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível de expressão de mRNA de CK2α e/ou polipeptideo de CK2a com relação ao controle é prognóstico da sensibilidade da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00034] Em outra de tais modalidades, o método compreende determinação do nível de expressão de mRNA de CK2a e/ou polipeptideo de CK2aQ em uma primeira amostra biológica derivada do indivíduo antes de administração com um inibidor de CK2, em que uma diminuição no nível de expressão de mRNA de CK2a e/ou polipeptideo de CK2α com relação a uma segunda amostra biológica derivada do indivíduo após administração do inibidor de CK2 é indicativa de uma resposta positiva ao tratamento da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00035] Em outra de tais modalidades, o método compreende determinação do nível de expressão de mRNA de CK2a' e/ou polipeptideo de CK2a' em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível de expressão de mRNA de CK2a' e/ou polipeptideo de CK2α'com relação ao controle é prognóstico da sensibilidade da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00036] Em outra de tais modalidades, o método compreende determinação do nível de expressão de mRNA de CK2a' e/ou polipeptideo de CK2α'π em uma primeira amostra biológica derivada do indivíduo antes de administração com um inibidor de CK2, em que uma diminuição no nível de expressão de mRNA de CK2α'π e/ou polipeptideo de CK2a' com relação a uma segunda amostra biológica derivada do indivíduo após administração do inibidor de CK2 é indicativa de uma resposta positiva ao tratamento da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00037] Em outra de tais modalidades, o método compreende determinação do nível de expressão de mRNA de VEGF e/ou polipeptídeo de VEGF em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível de expressão de mRNA de VEGF e/ou polipeptídeo de VEGF com relação ao controle é prognóstico da sensibilidade da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00038] Em outra de tais modalidades, o método compreende determinação do nível de expressão de mRNA de VEGF e/ou polipeptídeo de VEGF em uma primeira amostra biológica derivada do indivíduo antes de administração com um inibidor de CK2, em que uma diminuição no nível de expressão de mRNA de VEGF e/ou polipeptídeo de VEGF com relação a uma segunda amostra biológica derivada do indivíduo após administração do inibidor de CK2 é indicativa de uma resposta positiva ao tratamento da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00039] Em outra de tais modalidades, o método compreende determinação do nível de expressão de mRNA de CK2a e/ou polipeptídeo de CK2a em uma amostra biológica derivada do indivíduo; e determinação do nível de polipeptídeo de Akt fosforilada S129 (p-Akt S129) em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que uma correlação positiva entre o nível de expressão de mRNA de CK2a e/ou polipeptídeo de CK2a e o nível de polipeptídeo de p-Akt S129 é prognóstico de sensibilidade da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00040] Em uma outra modalidade, o método compreende determinação do nível de expressão de mRNA de CK2a' e/ou polipeptídeo de CK2a' em uma amostra biológica derivada do indivíduo; e determinação do nível de polipeptídeo de Akt fosforilada S129 (p-Akt S129) com relação ao nível de polipeptídeo de Akt total em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que uma correlação positiva entre o nível de expressão de mRNA de CK2o' e/ou polipeptídeo de CK2o' e o nível normalizado de polipeptídeo de p-Akt S129 é prognóstico de sensibilidade da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00041] Em outra modalidade, o método compreende determinação do nível de polipeptídeo de Akt fosforilada S129 (p-Akt S129) em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível de polipeptídeo de p-Akt S129 com relação ao controle é prognóstico da sensibilidade da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00042] Em outra modalidade, o método compreende determinação do nível de polipeptídeo de Akt fosforilada S129 (p-Akt S129) em uma primeira amostra biológica derivada do indivíduo antes de administração com um inibidor de CK2, em que uma diminuição no nível de polipeptídeo de Akt fosforilada S129 (p-Akt S129) com relação a uma segunda amostra biológica derivada do indivíduo após administração do inibidor de CK2 é indicativa de uma resposta positiva ao tratamento da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00043] Em ainda outra modalidade, o método compreende determinação do nível de polipeptídeo de Akt fosforilada S129 (p-Akt S129) com relação ao nível de polipeptídeo de Akt total em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível normalizado de polipeptídeo de p-Akt S129 com relação ao controle correspondente é prognóstico da sensibilidade da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00044] Em ainda outra modalidade, o método compreende determinação do nível de polipeptídeo de Akt fosforilada S129 (p-Akt S129) com relação ao nível de polipeptídeo de Akt total em uma primeira amostra biológica derivada do indivíduo antes de administração com um inibidor de CK2, em que uma diminuição no nível de polipeptideo de Akt fosforilada S129 (p-Akt S129) com relação ao nível de polipeptideo de Akt total quando comparado com uma segunda amostra biológica derivada do indivíduo após administração do inibidor de CK2 é indicativa de uma resposta positiva ao tratamento da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00045] Em outra modalidade, o método compreende determinação do nível de polipeptideo de Akt fosforilada S473 (p-Akt S473) em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível de polipeptideo de p-Akt S473 com relação ao controle é prognóstico da sensibilidade da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00046] Em outra modalidade, o método compreende determinação do nível de polipeptideo de Akt fosforilada S473 (p-Akt S473) em uma primeira amostra biológica derivada do indivíduo antes de administração com um inibidor de CK2, em que uma diminuição no nível de polipeptideo de Akt fosforilada S473 (p-Akt S473) com relação a uma segunda amostra biológica derivada do indivíduo após administração do inibidor de CK2 é indicativa de uma resposta positiva ao tratamento da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00047] Em ainda outra modalidade, o método compreende determinação do nível de polipeptideo de Akt fosforilada S473 (p-Akt S473) com relação ao nível de polipeptideo de Akt total em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível normalizado de polipeptideo de p-Akt S473 com relação ao controle correspondente é prognóstico da sensibilidade da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00048] Em ainda outra modalidade, o método compreende determinação do nível de polipeptideo de Akt fosforilada S473 (p-Akt S473) com relação ao nível de polipeptideo de Akt total em uma primeira amostra biológica derivada do indivíduo antes de administração com um inibidor de CK2, em que uma diminuição no nível de polipeptideo de Akt fosforilada S473 (p-Akt S473) com relação ao nível de polipeptideo de Akt total quando comparado com uma segunda amostra biológica derivada do indivíduo após administração do inibidor de CK2 é indicativa de uma resposta positiva ao tratamento da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00049] Em outra modalidade, o método compreende determinação do nível de polipeptideo de p21 fosforilado T145 (fosfo-p21 T145 ou p- p21 T145) em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível de polipeptideo de p-p21T145 com relação ao controle é prognóstico da sensibilidade da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00050] Em outra modalidade, o método compreende determinação do nível de polipeptideo de p21 fosforilado T145 (fosfo-p21 T145 ou p- p21 T145) em uma primeira amostra biológica derivada do indivíduo antes de administração com um inibidor de CK2, em que uma diminuição no nível de polipeptideo de p21 fosforilado T145 (fosfo-p21 T145 ou p-p21 T145) com relação a uma segunda amostra biológica derivada do indivíduo após administração do inibidor de CK2 é indicativa de uma resposta positiva ao tratamento da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00051] Em ainda outra modalidade, o método compreende determinação do nível de polipeptideo de p21 fosforilado T145 (fosfo- p21 T145 ou p-p21 T145) com relação ao nível de polipeptideo de p21 total em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível normalizado de polipeptideo de p21 com relação ao controle correspondente é prognóstico da sensibilidade da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00052] Em ainda outra modalidade, o método compreende determinação do nível de polipeptídeo de p21 fosforilado T145 (fosfo- p21 T145 ou p-p21 T145) com relação ao nível de polipeptídeo de p21 total em uma primeira amostra biológica derivada do indivíduo antes de administração com um inibidor de CK2, em que uma diminuição no nível de polipeptídeo de p21 fosforilado T145 (fosfo-p21 T145 ou p-p21 T145) com relação ao nível de polipeptídeo de p21 total quando comparado com uma segunda amostra biológica derivada do indivíduo após administração do inibidor de CK2 é indicativa de uma resposta positiva ao tratamento da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00053] Em outra modalidade, o método compreende determinação do nível de polipeptídeo de fator-KB nuclear fosforilado (NF-KB) em serina 529 (p-NF-KB S529) em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível de polipeptídeo de p-NF-KB S529 com relação ao controle é prognóstico da sensibilidade da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00054] Em outra modalidade, o método compreende determinação do nível de polipeptídeo de fator-KB nuclear fosforilado (NF-KB) em serina 529 (p-NF-KB S529) em uma primeira amostra biológica derivada do indivíduo antes de administração com um inibidor de CK2, em que uma diminuição no nível de polipeptídeo de NF-KB S529 fosforilado (p- NF-KB S529) com relação a uma segunda amostra biológica derivada do indivíduo após administração do inibidor de CK2 é indicativa de uma resposta positiva ao tratamento da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00055] Em ainda outra modalidade, o método compreende determinação do nível de polipeptídeo de fator-KB nuclear fosforilado (NF-KB) em serina 529 (p-NF-KB S529) com relação ao nível de polipeptídeo de NF-KB total em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível normalizado de polipeptídeo de P-NF-KB S529 com relação ao controle correspondente é prognóstico da sensibilidade da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00056] Em ainda outra modalidade, o método compreende determinação do nível de polipeptideo de fator-KB nuclear fosforilado (NF-KB) em serina 529 (p-NF-KB S529) com relação ao nível de polipeptideo de NF-KB total em uma primeira amostra biológica derivada do indivíduo antes de administração com um inibidor de CK2, em que uma diminuição no nível de polipeptideo de NF-KB S529 (p-NF-KB S529) fosforilado com relação ao nível de polipeptideo de NF-KB total quando comparado com uma segunda amostra biológica derivada do indivíduo após administração do inibidor de CK2 é indicativa de uma resposta positiva ao tratamento da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00057] Em outra modalidade, o método compreende determinação do nível de polipeptideo de STAT3 fosforilado em tirosina 705 (p-STAT3 Y705) em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível de polipeptideo de p-STAT3 Y705 com relação ao controle é prognóstico da sensibilidade da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00058] Em outra modalidade, o método compreende determinação do nível de polipeptideo de STAT3 fosforilado em tirosina 705 (p-STAT3 Y705) em uma primeira amostra biológica derivada do indivíduo antes de administração com um inibidor de CK2, em que uma diminuição no nível de polipeptideo de STAT3 fosforilado em tirosina 705 (p-STAT3 Y705) com relação a uma segunda amostra biológica derivada do indivíduo após administração do inibidor de CK2 é indicativa de uma resposta positiva ao tratamento da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00059] Em ainda outra modalidade, o método compreende determinação do nível de polipeptideo de STAT3 fosforilado em tirosina 705 (p-STAT3 Y705) com relação ao nível de polipeptideo de STAT3 total em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível normalizado de polipeptideo de p-STAT3 Y705 com relação ao controle correspondente é prognóstico da sensibilidade da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00060] Em ainda outra modalidade, o método compreende determinação do nível de polipeptideo de STAT3 fosforilado em tirosina 705 (p-STAT3 Y705) com relação ao nível de polipeptideo de STAT3 total em uma primeira amostra biológica derivada do indivíduo antes de administração com um inibidor de CK2, em que uma diminuição no nível de polipeptideo de STAT3 fosforilado em tirosina 705 (p-STAT3 Y705) com relação ao nível de polipeptideo de STAT3 total quando comparado com uma segunda amostra biológica derivada do indivíduo após administração do inibidor de CK2 é indicativa de uma resposta positiva ao tratamento da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00061] Em outra modalidade, o método compreende determinação do nível de polipeptideo de JAK2 fosforilada em tirosina 1007/1008 (p- JAK2 Y1007/1008) em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível de polipeptideo de p-JAK2 Y1007/1008 com relação ao controle é prognóstico da sensibilidade da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00062] Em outra modalidade, o método compreende determinação do nível de polipeptideo de JAK2 fosforilada em tirosina 1007/1008 (p- JAK2 Y1007/1008) em uma primeira amostra biológica derivada do indivíduo antes de administração com um inibidor de CK2, em que uma diminuição no nível de polipeptideo de JAK2 fosforilada em tirosina 1007/1008 (p-JAK2 Y1007/1008) com relação a uma segunda amostra biológica derivada do indivíduo após administração do inibidor de CK2 é indicativa de uma resposta positiva ao tratamento da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00063] Em ainda outra modalidade, o método compreende determinação do nível de polipeptídeo de JAK2 fosforilada em tirosina 1007/1008 (p-JAK2 Y1007/1008) com relação ao nível de polipeptídeo de JAK2 total em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível normalizado de polipeptídeo de p-JAK2 Y1007/1008 com relação ao controle correspondente é prognóstico da sensibilidade da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00064] Em ainda outra modalidade, o método compreende determinação do nível de polipeptídeo de JAK2 fosforilada em tirosina 1007/1008 (p-JAK2 Y1007/1008) com relação ao nível de polipeptídeo de JAK2 total em uma primeira amostra biológica derivada do indivíduo antes de administração com um inibidor de CK2, em que uma diminuição no nível de polipeptídeo de JAK2 fosforilada em tirosina 1007/1008 (p-JAK2 Y1007/1008) com relação ao nível de polipeptídeo de JAK2 total quando comparado com uma segunda amostra biológica derivada do indivíduo após administração do inibidor de CK2 é indicativa de uma resposta positiva ao tratamento da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00065] Em várias modalidades descritas aqui, a amostra biológica pode ser selecionada de uma célula, um tecido, uma cultura tecidual, um tumor ou um fluido biológico derivado do referido indivíduo. Em uma modalidade, o fluido biológico pode ser selecionado de plasma, soro ou células mononucleares de sangue periférico (Peripheral Blood Mononuclear Cells - PBMCs).
[00066] Em várias modalidades descritas aqui, o distúrbio proliferativo é um câncer ou malignidade. Em uma modalidade, o câncer ou malignidade pode ser câncer de cabeça e pescoço, carcinoma de pulmão de células não-pequenas (Non-Small Cell Lung Carcinoma - NSCLC), câncer de mama, incluindo inflammatory breast cancer (IBC), câncer de próstata, câncer pancreático, linfomas, incluindo linfoma não- Hodgkins (Non-Hodgkins Lymphoma - NHL) e Linfoma de células do manto (Mantle Cell Lymphoma - MCL), glioblastoma, carcinoma de células escamosas (Squamous Cell Carcinoma - SCC) do pulmão, câncer ovariano, mieloma múltiplo, leucemia mieloide aguda, câncer cólon-retal e câncer da tiroide.
[00067] Em modalidades frequentes, a doença mediada por CK2 é um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório e os métodos são usados para determinar a sensibilidade de tais distúrbios ao tratamento com um inibidor de CK2. Em modalidades específicas, o inibidor de CK2 é CX-4945 ou um análogo do mesmo incluindo, mas não limitado a, Composto 1 e Composto 2.
[00068] Em algumas modalidades, o método compreende determinação dos níveis de expressão de mRNA e/ou polipeptideo usando dois ou mais dos biomarcadores mencionados acima.
[00069] A invenção refere-se também ao uso dos métodos descritos acima para selecionar indivíduos que estão sofrendo de uma doença mediada por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, para tratamento com um inibidor de CK2 e a métodos de tratamento de indivíduos selecionados usando esses métodos.
[00070] Assim, em outro aspecto, a invenção proporciona um método para seleção de indivíduos que estão sofrendo de uma doença mediada por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, para tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo prognóstico da sensibilidade do distúrbio mediado por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2 em cada indivíduo determinando-se os níveis de um ou mais biomarcadores, conforme descrito aqui e selecionando aqueles indivíduos que mostram a resposta indicada como prognóstica de sensibilidade para tratamento com um inibidor de CK2.
[00071] Em algumas modalidades, os métodos fornecidos aqui podem ser usados para identificar ou selecionar um paciente ou população de pacientes que provavelmente se beneficiarão de tratamento com um inibidor de CK2. Em outras modalidades, os métodos podem ser úteis para identificar pacientes que provavelmente não se beneficiarão de tratamento com um inibidor de CK2. Tais métodos podem também ser usados para selecionar uma população de pacientes para inclusão (ou exclusão) em um ensaio clínico para avaliar a eficácia de tratamento com um inibidor de CK2. Os métodos descritos aqui podem também ser usados para avaliar a resposta de pacientes que estão sofrendo tratamento com um inibidor de CK2 e, assim, podem ser úteis para monitorar ou prever os resultados de tratamento com um inibidor de CK2.
[00072] Em um outro aspecto, a invenção proporciona um método para tratamento de uma doença mediada por CK2, tal como um distúrbio proliferative e/ou um distúrbio inflamatório, em um indivíduo que precisa do mesmo compreendendo determinação dos níveis de um ou mais biomarcadores em uma amostra biológica derivada do indivíduo, conforme descrito aqui e tratamento do indivíduo com um inibidor de CK2 se o nível do biomarcador na amostra do indivíduo caracteriza a resposta indicada como sendo prognóstica de sensibilidade ou responsividade ao tratamento com um inibidor de CK2.
[00073] Essas e outras modalidades da invenção são descritas aqui.
Breve Descrição dos Desenhos
[00074] A Figura 1 ilustra o efeito de IL-6 em células de mieloma múltiplo. IL-6 induz à secreção de VEGF (Vascular Endothelial Growth Factor - Fator de Crescimento Endotelial Vascular), o qual promove a angiogênese, estimula o crescimento e migração de células de mieloma múltiplo, aumenta adicionalmente a secreção de IL-6 e impede a apresentação de antigeno por células dendríticas.
[00075] A Figura 2 mostra a atividade inibitória do inibidor de CK2, CX-4945, em comparação com vários análogos de CX-4945.
[00076] A Figura 3 mostra a sensibilidade diferencial de CX-4945 entre células cancerígenas e células normais. O eixo Y mostra as vezes de indução de atividade de Caspase 3/7, um marcador de apoptose celular. O eixo X ilustra o tipo de célula. BT-474: células de câncer de mama; Mia PaCa 2 e BxPC3-3: células de câncer pancreático; SK-OV- 3 e A2780: células de câncer ovariano; A375: células de melanoma; CCD18Co: células de fibroblasto de cólon normal; CCD1058 e CCD1068: células de fibroblasto de pele normal; e Mrc5 e IMR90: células de fibroblasto de pulmão normal.
[00077] A Figura 4 ilustra a inibição de crescimento de tumor após tratamento com CX-4945 (25 mg/kg bid ou 75 mg/kg bid) durante 0 curso de 35 dias.
[00078] A Figura 5A ilustra a inibição de crescimento de tumor em câncer de mama na linhagem de células de câncer de mama BT-474 após tratamento com CX-4945 (25 mg/kg bid ou 75 mg/kg bid) durante 0 curso de 35 dias.
[00079] A Figura 5B ilustra a inibição de crescimento de tumor em câncer ovariano na linhagem de células de câncer ovariano SK-OV-3 após tratamento com CX-4945 (25 mg/kg bid ou 75 mg/kg bid) durante 0 curso de 35 dias.
[00080] A Figura 6 ilustra a inibição de crescimento de tumor em câncer pancreático em xenoenxertos de câncer pancreático BxPC3 após tratamento com CX-4945 (12,5 mg/kg bid, 25 mg/kg bid, 50 mg/kg bid ou 75 mg/kg bid) durante 0 curso de 35 dias. O fármaco foi bem tolerado e as concentrações plasmáticas de CX-4945 estavam intimamente correlacionadas com 0 regime de dosagem.
[00081] A Figura 7 mostra os níveis de IL-6 e IL-8 no plasma no dia 21 com relação ao dia 1 após tratamento com CX-4945 (CX-4945).
[00082] A Figura 8 mostra a alteração percentual nos níveis de IL-6 e IL-8 após 21 dias de tratamento com CX-4945 (CX-4945) em pacientes com Tumores NSCLC, de próstata, tiroide/papilare células de Leydig.
[00083] A Figura 9A mostra a alteração percentual nos níveis séricos de IL-6 após 21 dias de tratamento com CX-4945 nos Grupos 1-3 do Exemplo 1.
[00084] A Figura 9B mostra os níveis de IL-6 nos pacientes ID NOs: 1-24 após 1 e 21 dias de tratamento com CX-4945.
[00085] A Figura 10 mostra os níveis de IL-8 nos pacientes ID NOs: 1-24 após 1 e 21 dias de tratamento com CX-4945.
[00086] A Figura 11 mostra a alteração percentual em Akt S473/Akt 8 horas pós-dose no dia 1 e dia 21 em CD19 PBMCs após tratamento com CX-4945 nos Grupos 1-3 do Exemplo 1.
[00087] A Figura 12 mostra a alteração percentual em p21 T145/p21 4 horas pós-dose no dia 1 e dia 21 em PBMCs CD45 após tratamento com CX-4945 nos Grupos 1-3 do Exemplo 1.
[00088] A Figura 13 mostra a alteração em p-Akt S129 (A), p-Akt S473 (B) e p-p21 T145 (C) entre pontos de tempo pré-dose (tempo = 0) e em estado constante (tempo = 8 dias ou 21 dias) como uma função da AUC cumulativa.
[00089] A Figura 14 mostra a alteração em p-Akt S129 em células tumorais em circulação (Circulating Tumor Cells - CTCs) entre pontos de tempo pré-dose (tempo = 0) e 6 horas pós-dose no dia 8 para pacientes sob o esquema QID.
[00090] A Figura 15 mostra a secreção de IL-6 por células de câncer de mama inflamatório (Inflammatory Breast Cancer - IBC) SUM-149PT tratadas durante seis horas com concentrações de CX-4945 de 0,0□ LIM até 5D iiM (A). A viabilidade celular das células SUM-149PT foi determinada após 96 horas (B).
[00091] A Figura 16 mostra o efeito de CX-4945 sobre a secreção de IL-6 por xenoenxertos SUM-149PT agressivos. O efeito sobre o peso do tumor é mostrado no painel (A). Descobriu-se que tumores agressivos (menores do que 1g) têm uma maior taxa de secreção de IL-6 do que tumores menores (B). Descobriu-se que CX-4945 reduz a secreção de IL-6 em todos os tumores (C) e reduz significativamente a secreção de IL-6 por tumores agressivos (D).
[00092] A Figura 17 mostra os efeitos de tratamento em camundongos trazendo xenoenxertos SUM-149PT, deixados não tratados (Left UnTreated - UTC) ou tratados PO uma vez (uma vez) ou BID durante 8 dias (xD8) com 75 mg/kg de CX-4945.
[00093] A Figura 18 mostra a expressão de Akt S129 em células não tratadas (UnTreated Cells - UTC) e células tratadas com CX-4945 e agentes quimioterapêuticos adicionais, incluindo 5-fluorouracila (5-FU), BEZ 235, AZD 6244, erlotinib, lapatinib, sorafenib e sunitinib (Sutent).
[00094] A Figura 19 mostra o estado de fosforilação de p21 em T145 e Akt em S129 após tratamento com 10 pM de CX-4945 a 4 horas e 8 horas, comparado com condições de eliminação reversível.
[00095] A Figura 20 mostra a relação entre os níveis de mRNA de CK2a (RU) e Composto IC50 (pM) em células de câncer de mama para CX-4945 (A), Composto 1 (B) e Composto 2 (C).
[00096] A Figura 21 mostra a correlação entre 0 nível de subunidade CK2a' e o estado de fosforilação de Akt em S129 em linhagens de células de câncer de mama que são sensíveis e resistentes ao CX-4945 e Composto 2 (A) e os níveis para CK2α'e p-Akt em S129 em várias linhagens de células de câncer de mama (B).
[00097] A Figura 22 mostra os níveis de fosfoproteína em PBMCs a 4 horas pós-dose no dia 21 versus pré-tratamento com CX-4945 para os biomarcadores (A) Akt em S129, (B) Akt S473 e (C) p21 T145.
[00098] A Figura 23 mostra os valores de IC50 previstos versus calculados para CX-4945 usando os marcadores CK2α e pAkt em S129 normalizados (A) e níveis de polipeptideo de CK2α e p-Akt em S129 (B).
[00099] A Figura 24 mostra 0 efeito de concentrações crescentes de CX-4945 sobre a sinalização PIK3/Akt e progressão de ciclo celular , conforme avaliado em células de câncer de mama BT-474 e células de câncer pancreático BxPC-3.
[000100] A Figura 25 ilustra a capacidade de CX-4945 de modular 0 ciclo celular em células de câncer de mama BT-474 e células de câncer pancreático BxPC-3.
[000101] A Figura 26 ilustra os efeitos de concentrações crescentes de CX-4945 sobre a formação e migração de tubo em células BxPC-3.
[000102] A Figura 27 mostra 0 efeito de CX-4945 sobre as concentrações de aldolase, pVHL e p53.
[000103] A Figura 28 ilustra um ensaio repórter de luciferase usado para medir a expressão de HIF-1a após exposição à concentrações crescentes de CX-4945.
[000104] A Figura 29 mostra a expressão de mRNA de CK2 (A) e proteína CK2 (B) em um painel de linhagens de células de mieloma múltiplo humano.
[000105] A Figura 30 mostra um ensaio de quinase in vitro 0 qual demonstra 0 efeito de CX-4945 sobre a atividade de CK2 em várias linhagens de células de mieloma múltiplo.
[000106] A Figura 31 ilustra como CX-4945 modula várias proteínas chave em células de mieloma múltiplo humano, incluindo Akt1 (A), NF- KB (B), JAK2/STAT3 (C) e divagem de PARP (D).
[000107] A Figura 32 mostra 0 efeito de tratamento com CX-4945 a 10 pM sobre a expressão de VEGF em linhagens de células de mieloma múltiplo.
[000108] A Figura 33 mostra 0 efeito de tratamento com CX-4945 a 10 pM sobre HIF-1α em linhagens de células de mieloma múltiplo.
[000109] A Figura 34 ilustra os efeitos de concentrações crescentes de CX-4945 sobre a secreção de IL-6 em células de mieloma múltiplo U266.
[000110] A Figura 35 é um diagrama que ilustra a capacidade de CK2 de fosforilar múltiplos substratos na via PIK3/Akt.
[000111] A Figura 36 compares a capacidade de CX-4945 e várias concentrações de estaurosporina (STS) de inibir a fosforilação de Akt-S129.
[000112] A Figura 37 mostra o efeito de 75 mg/kg bid de CX-4945 sobre a fosforilação de Akt-S129, Akt-S473 e p21-T145 em PBMCs de camundongo.
[000113] A Figura 38 mostra os resultados de um ensaio Comet que demonstra o efeito de CX-4945 sobre o dano a DNA induzido por gemcitabina em células de câncer ovariano A2780.
[000114] A Figura 39A mostra a atividade sinergística de gemcitabina e CX-4945 quando administrados a 60 mg/kg e 100 mg/kg, respectivamente em xenoenxertos de câncer ovariano A2780.
[000115] A Figura 39B mostra a atividade sinergística de gemcitabina e CX-4945 sobre a apoptose de células cancerígenas, conforme demonstrado pelo aumento em PARP clivado (painel superior). O painel inferior mostra a atividade sinergística de gemcitabina e CX-4945 em termos de inibição percentual de crescimento de tumor (Tumor Growth Inhibition - TGI) e o número médio de dias para atingir o endpoint (TTE).
[000116] A Figura 40 é um diagrama ilustrando a relação entre a sinalização de EGFR e CK2.
[000117] A Figura 41 mostra o efeito de CX-4945 sobre a atividade de CK2 estimulada por fator de crescimento epidérmico (Epidermal Growth Factor - EGF) em A431 (carcinoma epidermoide) e NCI-H2170 (células de câncer de pulmão).
[000118] A Figura 42 mostra o efeito de CX-4945 a 10 pM em combinação com erlotinib a 50 pM sobre a fosforilação de Akt e rpS6 em células NCI-H1650 e NCI-H1975.
[000119] A Figura 43 ilustra a atividade anti-tumor sinergistica de CX- 4945 e erlotinib em células de carcinoma epidermoide A431.
Descrição Detalhada
[000120] A presente invenção refere-se a biomarcadores para prever a sensibilidade e/ou monitorar a responsividade de doenças mediadas por CK2, incluindo distúrbios proliferativos e/ou distúrbios inflamatórios, ao tratamento com inibidores de CK2.
[000121] Conforme descrito aqui, CK2 foi implicada em muitos tipos de células cancerígenas (Tabela 1) e evidência recente sugere que CK2 exerce supressão potente de apoptose em células cancerígenas ao proteger proteínas regulatórias de degradação mediada por caspase. Tabela 1. Relação de CK2 com Múltiplos Cânceres
Figure img0001
[000122] Conforme descrito aqui, os presentes inventores demonstram que os níveis de expressão de mRNA e/ou polipeptídeo de CK2α, CK2α', IL-6, IL-8, VEGF e HIF-1a e os níveis de fosforilação de Akt, p21, NF-KB, STAT3 ou JAK2, quer isoladamente ou com relação a Akt, p21, NF-KB, STAT3 ou JAK2 total, respectivamente, podem ser usados como biomarcadores para avaliar ou prever a sensibilidade ou falta de sensibilidade e/ou monitorar a responsividade de um indivíduo ou sistema ao tratamento com um inibidor de CK2.
lnterleucina-6
[000123] Conforme mostrado nos Exemplos 1-3, o uso de um inibidor de CK2, CX-4945, reduz significativamente a concentração de IL-6 em pacientes com câncer de mama inflamatório (Inflammatory Breast Cancer - IBC) e câncer de próstata. Além disso, o Exemplo 11 mostra que tratamento com CX-4945 em células de mieloma múltiplo U266 reduz a produção de IL-6. O presente pedido também demonstra que inibidores de CK2 podem inibir a secreção de IL-6 por células SUM-149 PT de IBC em cultura de células (IC50 ~ 2.5 piM) e in vivo. Em um modelo de xenoenxerto, administração de CX-4945 causou uma redução de 40- 60% (dependendo do tamanho do tumor) nos níveis plasmáticos de IL- 6 humana após uma dosagem de 50 mg/kg BID PO x 3d, 75 mg/kg PO diariamente ou BID x 8d. Descobriu-se também que xenoenxertos SUM- 149PT agressivos (isto é, peso > 1 g) produziam níveis significativamente maiores de IL-6 por g de massa tumoral do que os tumores não agressivos (isto é, peso < 1 g).
[000124] IL-6 é uma citocina importante em biologia de câncer e está relacionada à atividade de CK2 em uma variedade de cânceres, incluindo câncer de cabeça e pescoço, câncer de mama inflamatório, mieloma múltiplo e câncer da tiroide (Tabela 1). Em mieloma múltiplo, a IL-6 é predominantemente produzida de um modo parácrino por células de mieloma múltiplo e células estromais da medula óssea (Bone Marrow Stromal Cells - BMSCs). Sob circunstâncias normais, a IL-6 causa diferenciação de células B mas, em mieloma múltiplo, ela causa proliferação e inibe a apoptose de células de mieloma. As interações entre células de mieloma múltiplo e BMSCs aumentam sua secreção através de vias dependentes de fator-KB nuclear (NF-KB).
[000125] IL-6 tem efeitos a jusante adicionais sobre células de mieloma múltiplo. Primeiro, ela promove a proliferação e sobrevivência celular através da via RAS-MAPK e via JAK-STAT, respectivamente. Além disso, a IL-6 impede apoptose induzida por dexametasona através da via PI3K- AKT e bloqueia a diferenciação de monócitos em células dendríticas, assim, prejudicando as funções imunes do hospedeiro. Além disso, a IL- 6 induz à secreção de VEGF (Vascular Endothelial Growth Factor - Fator de Crescimento Endotelial Vascular), o qual promove a angiogênese, estimula o crescimento e migração de células de mieloma múltiplo, aumenta adicionalmente a secreção de IL-6 e impede a apresentação de antígeno por células dendríticas. Vide Figura 1.
[000126] O presente pedido apresenta dados que demonstram que tratamento com um inibidor de CK2 reduz os níveis de IL-6 e que secreção e atividade de IL-6 é uma característica proeminente de doenças mediadas por CK2. Consequentemente, em uma modalidade, a invenção proporciona um método para prever a sensibilidade de uma doença mediada por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo determinação do nível de expressão de mRNA de IL-6 e/ou polipeptideo de IL-6 em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível de expressão de mRNA de IL-6 e/ou polipeptideo de IL-6 com relação ao controle é prognóstico da sensibilidade do distúrbio proliferativo e/ou inflamatório ao tratamento com um inibidor de CK2.
[000127] Conforme usado aqui, a frase o "nível de um polipeptideo"é usado permutavelmente com "níveis de expressão de proteína" para referir-se ao processo pelo qual uma sequência de ácido nucleico sofre transcrição e tradução com sucesso, de modo que níveis detectáveis da sequência de aminoácido ou proteína sejam expressos e quantificados.
[000128] Em outro aspecto, a invenção proporciona um método para seleção de indivíduos que estão sofrendo de uma doença mediada por CK2, tal como um distúrbio proliferative e/ou um distúrbio inflamatório, para tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo prognóstico da sensibilidade de o distúrbio proliferative e/ou distúrbio inflamatório ao tratamento com um inibidor de CK2 em cada indivíduo por meio do método precedente e seleção daqueles indivíduos que mostram um nível aumentado de expressão de mRNA de IL-6 e/ou polipeptideo de IL-6 com relação ao controle para tratamento com um inibidor de CK2.
[000129] Em outro aspecto, a invenção proporciona um método para tratamento de uma doença mediada por CK2, tal como um distúrbio proliferative e/ou um distúrbio inflamatório, em um indivíduo que precisa do mesmo compreendendo determinação do nível de expressão de mRNA de IL-6 e/ou polipeptideo de IL-6 em uma amostra biológica derivada do indivíduo por meio do método descrito acima e tratamento do indivíduo com um inibidor de CK2 se o nível de expressão de mRNA de IL-6 e/ou polipeptideo de IL-6 está elevado.
[000130] Em algumas modalidades, os métodos descritos acima compreendem determinação do nível de expressão de mRNA de IL-6 com relação ao controle. Em outras modalidades, os métodos compreendem determinação do nível de polipeptideo de IL-6 com relação ao controle. Em outras modalidades, os métodos compreendem determinação do nível de expressão de mRNA de IL-6 e do nível de polipeptideo de IL-6 com relação ao controle.
[000131] Em um outro aspecto, a invenção proporciona um método para monitoramento da responsividade de uma doença mediada por CK2 em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2, compreendendo: (a) determinação do nível de expressão de mRNA de IL-6 e/ou polipeptídeo de IL-6 em uma primeira amostra biológica derivada do indivíduo antes de tratamento com um inibidor de CK2; (b) determinação do nível de expressão de mRNA de IL-6 e/ou polipeptídeo de IL-6 em pelo menos uma segunda amostra biológica derivada do indivíduo subsequentemente ao tratamento com um inibidor de CK2; e (c) comparação do nível de expressão de mRNA de IL-6 e/ou polipeptídeo de IL-6 na segunda amostra biológica com o nível de expressão de mRNA de IL-6 e/ou polipeptídeo de IL-6 na primeira amostra biológica; em que uma diminuição no nível de expressão de mRNA de IL-6 e/ou polipeptídeo de IL-6 na segunda amostra biológica comparado com a primeira amostra biológica é indicativa de uma resposta positiva ao tratamento da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[000132] Em algumas de tais modalidades, o nível de IL-6 após tratamento é diminuído, indicando que o tratamento com um inibidor de CK2 é eficaz para tratar a doença mediada por CK2. Em outras modalidades, a taxa de aumento na IL-6 após tratamento é reduzida com relação a um controle não tratado, indicando que o tratamento com um inibidor de CK2 é eficaz para tratar a doença mediada por CK2. Em outras modalidades, o nível e/ou a taxa de aumento na IL-6 está aumentada com relação ao controle, indicando que o tratamento é ineficaz.
[000133] Em um outro aspecto, a invenção proporciona um método para identificação de um composto útil para o tratamento de um distúrbio proliferativo e/ou distúrbio inflamatório mediado por CK2, compreendendo: (a) análise do nível de expressão de mRNA de IL-6 e/ou polipeptídeo de IL-6 em um indivíduo antes de tratamento com o composto; e (b) análise do nível de expressão de mRNA de IL-6 e/ou polipeptideo de IL-6 em um indivíduo subsequentemente ao tratamento com o composto; em que uma diminuição no nível de expressão de mRNA de IL-6 e/ou polipeptideo de IL-6 é indicativa de eficiência do fármaco.
[000134] Em modalidades frequentes relacionadas aos níveis de polipeptideo e/ou mRNA de IL-6, o distúrbio proliferativo compreende câncer ou malignidade. Em uma modalidade exemplificativa, o câncer ou malignidade é selecionada de câncer de mama, câncer de mama inflamatório (Inflammatory Breast Cancer - IBC), câncer pancreático, câncer de próstata e mieloma múltiplo.
lnterleucina-8
[000135] O presente pedido apresenta dados que demonstram que tratamento com um inibidor de CK2 reduz os níveis de IL-8 e que atividade e secreção de IL-8 é uma característica proeminente de doenças mediadas por CK2. Consequentemente, em outro aspecto, a invenção proporciona um método para prever a sensibilidade de uma doença mediada por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo determinação do nível de expressão de mRNA de IL-8 e/ou polipeptideo de IL-8 em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível de expressão de mRNA de IL-8 e/ou polipeptideo de IL-8 com relação ao controle é prognóstico da sensibilidade do distúrbio proliferativo e/ou inflamatório ao tratamento com um inibidor de CK2.
[000136] Em outro aspecto, a invenção proporciona um método para seleção de indivíduos que estão sofrendo de uma doença mediada por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, para tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo prognóstico da sensibilidade de o distúrbio proliferativo e/ou distúrbio inflamatório ao tratamento com um inibidor de CK2 em cada indivíduo por meio do método precedente e seleção daqueles indivíduos que mostram um nível aumentado de expressão de mRNA de IL-8 e/ou polipeptideo de IL-8 com relação ao controle para tratamento com um inibidor de CK2.
[000137] Em outro aspecto, a invenção proporciona um método para tratamento de uma doença mediada por CK2, tal como um distúrbio proliferative e/ou um distúrbio inflamatório, em um indivíduo que precisa do mesmo compreendendo determinação do nível de expressão de mRNA de IL-8 e/ou polipeptideo de IL-8 em uma amostra biológica derivada do indivíduo por meio do método descrito acima e tratamento do indivíduo com um inibidor de CK2 se o nível de expressão de mRNA de IL-8 e/ou polipeptideo de IL-8 está elevado.
[000138] Em algumas modalidades, os métodos descritos acima compreendem determinação do nível de expressão de mRNA de IL-8 com relação ao controle. Em outras modalidades, os métodos compreendem determinação do nível de polipeptideo de IL-8 com relação ao controle. Em outras modalidades, os métodos compreendem determinação do nível de expressão de mRNA de IL-8 e o nível de polipeptideo de IL-8 com relação ao controle.
[000139] Em um outro aspecto, a invenção proporciona um método para monitoramento da responsividade de uma doença mediada por CK2 em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2, compreendendo: (a) determinação do nível de expressão de mRNA de IL-8 e/ou polipeptideo de IL-8 em uma primeira amostra biológica derivada do indivíduo antes de tratamento com um inibidor de CK2; (b) determinação do nível de expressão de mRNA de IL-8 e/ou polipeptideo de IL-8 em pelo menos uma segunda amostra biológica derivada do indivíduo subsequentemente ao tratamento com um inibidor de CK2; e (c) comparação do nível de expressão de mRNA de IL-8 e/ou polipeptideo de IL-8 na segunda amostra biológica com o nível de expressão de mRNA de IL-8 e/ou polipeptideo de IL-8 na primeira amostra biológica; em que uma diminuição no nível de expressão de mRNA de IL-8 e/ou polipeptídeo de IL-8 na segunda amostra biológica comparado com a primeira amostra biológica é indicativa de uma resposta positiva ao tratamento da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[000140] Em algumas de tais modalidades, o nível de IL-8 após tratamento é diminuído, indicando que o tratamento com um inibidor de CK2 é eficaz para tratar a doença mediada por CK2. Em outras modalidades, a taxa de aumento em IL-8 após tratamento é reduzida com relação a um controle não tratado, indicando que o tratamento com um inibidor de CK2 é eficaz para tratar a doença mediada por CK2. Em outras modalidades, o nível e/ou a taxa de aumento em IL-8 está aumentada com relação ao controle, indicando que o tratamento é ineficaz.
[000141] Em outro aspecto, a invenção proporciona um método para identificação de um composto útil para o tratamento de um distúrbio proliferativo e/ou distúrbio inflamatório mediado por CK2, compreendendo: (a) análise do nível de expressão de mRNA de IL-8 e/ou polipeptídeo de IL-8 em um indivíduo antes de tratamento com o composto; e (b) análise do nível de expressão de mRNA de IL-8 e/ou polipeptídeo de IL-8 em um indivíduo subsequentemente ao tratamento com o composto; em que uma diminuição no nível de expressão de mRNA de IL-8 e/ou polipeptídeo de IL-8 é indicativa de eficiência do fármaco.
[000142] Em modalidades frequentes relacionadas aos níveis de mRNA e/ou polipeptídeo de IL-8, o distúrbio proliferativo compreende câncer ou malignidade. Em uma modalidade exemplificativa, o câncer ou malignidade é selecionada de câncer de mama, câncer de mama inflamatório (Inflammatory Breast Cancer - IBC), câncer pancreático, câncer de próstata e mieloma múltiplo.
CK2α e CK2a'
[000143] O presente pedido apresenta dados que demonstram que expressão elevada de CK2α e/ou CK2a' é uma característica proeminente de doenças mediadas por CK2 (vide, por exemplo, Exemplos 6 e 9, que mostram níveis aumentados de expressão de subunidade CK2a em câncer de mama e mieloma múltiplo, respectivamente). Consequentemente, em algumas modalidades, o biomarcador compreende o nível de expressão de mRNA e/ou níveis de polipeptideo da subunidade CK2α e/ou CK2a' ou ambos.
[000144] Assim, em um aspecto, a invenção proporciona um método para prever a sensibilidade de uma doença mediada por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2, compreendendo: (i) determinação do nível de expressão de mRNA de CK2a e/ou polipeptideo de CK2a em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível de expressão de mRNA de CK2α e/ou polipeptideo de CK2α com relação ao controle é prognóstico da sensibilidade da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2; e/ou (ii) determinação do nível de expressão de mRNA de CK2a' e/ou polipeptideo de CK2a' em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível de expressão de mRNA de CK2α'e/ou polipeptideo de CK2α'com relação ao controle é prognóstico da sensibilidade da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[000145] Em modalidades frequentes, a doença mediada por CK2 é um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório. Em uma modalidade específica, a doença mediada por CK2 é selecionada de câncer de mama, câncer de mama inflamatório (Inflammatory Breast Cancer - IBC) e mieloma múltiplo.
[000146] Em algumas modalidades, os métodos descritos acima compreendem determinação do nível de expressão de mRNA de CK2a com relação ao controle. Em outras modalidades, os métodos compreendem determinação do nível de polipeptideo de CK2α com relação ao controle. Em outras modalidades, os métodos compreendem determinação do nível de expressão de mRNA de CK2a e o nível de polipeptideo de CK2α com relação ao controle.
[000147] Em algumas modalidades, os métodos descritos acima compreendem determinação do nível de expressão de mRNA de CK2a' com relação ao controle. Em outras modalidades, os métodos compreendem determinação do nível de polipeptideo de CK2α'com relação ao controle. Em outras modalidades, os métodos compreendem determinação do nível de expressão de mRNA de CK2a' e o nível de polipeptideo de CK2α'com relação ao controle.
[000148] Em outro aspecto, a invenção proporciona um método para seleção de indivíduos que estão sofrendo de uma doença mediada por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, para tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo prognóstico da sensibilidade de o distúrbio proliferativo e/ou distúrbio inflamatório ao tratamento com um inibidor de CK2 em cada indivíduo por meio do método acima e selecionando aqueles indivíduos que mostram um nível aumentado de expressão de mRNA de CK2α e/ou polipeptideo de CK2o para tratamento com um inibidor de CK2.
[000149] Em um outro aspecto, a invenção proporciona um método para seleção de indivíduos que estão sofrendo de uma doença mediada por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, para tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo prognóstico da sensibilidade de o distúrbio proliferativo e/ou distúrbio inflamatório ao tratamento com um inibidor de CK2 em cada indivíduo por meio do método acima e selecionando aqueles indivíduos que mostram um nível aumentado de expressão de mRNA de CK2a' e/ou polipeptídeo de CK2a' para tratamento com um inibidor de CK2.
[000150] Em modalidades frequentes, a doença mediada por CK2 é um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório. Em uma modalidade específica, a doença mediada por CK2 é selecionada de câncer de mama, câncer de mama inflamatório (Inflammatory Breast Cancer - IBC) e mieloma múltiplo.
[000151] Em um outro aspecto, a invenção proporciona um método para tratamento de uma doença mediada por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, em um indivíduo que precisa do mesmo, compreendendo: (i) determinação do nível de expressão de mRNA de CK2a e/ou polipeptídeo de CK2a em uma amostra biológica derivada do indivíduo por meio do método de acordo com a reivindicação 1 e tratamento do indivíduo com um inibidor de CK2 se o nível de expressão de mRNA de CK2a e/ou polipeptídeo de CK2a está elevado; e/ou (ii) determinação do nível de expressão de mRNA de CK2a' e/ou polipeptídeo de CK2a' em uma amostra biológica derivada do indivíduo por meio do método acima e tratamento do indivíduo com um inibidor de CK2 se o nível de expressão de mRNA de CK2a' e/ou polipeptídeo de CK2a' está elevado.
[000152] A invenção também proporciona um método para prever a sensibilidade de um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2, compreendendo: (i) determinação do nível de expressão de mRNA de CK2a e/ou polipeptídeo de CK2a em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível de expressão de mRNA de CK2a e/ou polipeptídeo de CK2α com relação ao controle é prognóstico da sensibilidade do indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2; e/ou (ii) determinação do nível de expressão de mRNA de CK2α' e/ou polipeptideo de CK2a' em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível de expressão de mRNA de CK2α'e/ou polipeptideo de CK2α'com relação ao controle é prognóstico da sensibilidade do indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2.
[000153] Em outro aspecto, a invenção proporciona um método to prever a resposta de um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo determinação do nível de expressão de mRNA de CK2α e/ou polipeptideo de CK2a em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um nível aumentado de expressão de mRNA de CK2α e/ou polipeptideo de CK2α com relação ao controle é prognóstico de responsividade to um inibidor de CK2.
[000154] Em um outro aspecto, a invenção proporciona um método to prever a resposta de um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo determinação do nível de expressão de mRNA de CK2α'e/ou polipeptideo de CK2a' em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um nível aumentado de expressão de mRNA de CK2α'e/ou polipeptideo de CK2α'com relação ao controle é prognóstico de responsividade to um inibidor de CK2.
[000155] Em um outro aspecto, a invenção proporciona um método para monitoramento da responsividade de uma doença mediada por CK2 em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2, compreendendo: (a) determinação do nível de expressão de mRNA de CK2α e/ou polipeptideo de CK2a em uma primeira amostra biológica derivada do indivíduo antes de tratamento com um inibidor de CK2; (b) determinação do nível de expressão de mRNA de CK2a e/ou polipeptideo de CK2a em pelo menos uma segunda amostra biológica derivada do indivíduo subsequentemente ao tratamento com um inibidor de CK2; e (c) comparação do nível de expressão de mRNA de CK2a e/ou polipeptideo de CK2a na segunda amostra biológica com o nível de expressão de mRNA de CK2α e/ou polipeptideo de CK2a na primeira amostra biológica; em que uma diminuição no nível de expressão de mRNA de CK2α e/ou polipeptideo de CK2a na segunda amostra biológica comparado com a primeira amostra biológica é indicativa de uma resposta positiva ao tratamento da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[000156] Em um outro aspecto, a invenção proporciona um método para monitoramento da responsividade de uma doença mediada por CK2 em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2, compreendendo: (a) determinação do nível de expressão de mRNA de CK2α'e/ou polipeptideo de CK2a' em uma primeira amostra biológica derivada do indivíduo antes de tratamento com um inibidor de CK2; (b) determinação do nível de expressão de mRNA de CK2a' e/ou polipeptideo de CK2a' em pelo menos uma segunda amostra biológica derivada do indivíduo subsequentemente ao tratamento com um inibidor de CK2; e (c) comparação do nível de expressão de mRNA de CK2a' e/ou polipeptideo de CK2a' na segunda amostra biológica com o nível de expressão de mRNA de CK2a' e/ou polipeptideo de CK2a' na primeira amostra biológica; em que uma diminuição no nível de expressão de mRNA de CK2a' e/ou polipeptideo de CK2a' na segunda amostra biológica comparado com a primeira amostra biológica é indicativa de uma resposta positiva ao tratamento da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[000157] Em modalidades frequentes relacionadas aos níveis de mRNA e/ou polipeptideo de CK2a e CK2a', o distúrbio proliferativo compreende câncer ou malignidade. Em uma modalidade exemplificativa, o câncer ou malignidade é selecionada de câncer de mama, câncer de mama inflamatório (Inflammatory Breast Cancer - IBC), câncer pancreático, câncer de próstata e mieloma múltiplo.
Fosforilação de Akt-S129
[000158] Conforme mostrado nos Exemplos 1, 5-8, 11-12 e 14, tratamento com um inibidor de CK2 reduziu a fosforilação de Akt em S129 em várias linhagens de células, incluindo câncer de mama, câncer pancreático e mieloma múltiplo. Conforme descrito aqui, Akt-S129 é um biomarcador CK2 específico, uma vez que a CK2 fosforila e super- regula Akt/PKB. Assim, em determinados aspectos da invenção, os métodos requerem avaliação do estado de fosforilação de Akt em Serina 129 em uma amostra biológica, sistema ou indivíduo. Nos métodos descritos aqui, o estado de fosforilação de Akt pode ser determinado avaliando o nível de polipeptídeo de p-Akt em S129 isoladamente (isto é, o valor absoluto). Em algumas de tais modalidades, o nível de polipeptídeo de p-Akt em S129 pode ser determinado com relação a um controle adequado, tal como uma amostra correspondente de um indivíduo normal. Em outras modalidades, o nível normalizado de p-Akt em S129 pode ser determinado avaliando o nível de polipeptídeo de p- Akt em S129 com relação à Akt total, em que os níveis relativos podem, algumas vezes, ser expressos como um percentual ou proporção de p- Akt em S129 para Akt total. Em algumas de tais modalidades, o controle correspondente será o nível normalizado de polipeptídeo de p-Akt em S129 para Akt total em um controle normal.
[000159] Em determinados aspectos da invenção, os métodos requerem avaliação da relação entre os níveis de mRNA e/ou de polipeptídeo de CK2α e/ou CK2a' e o estado de fosforilação de p-Akt em S129.
[000160] Em um de tais aspectos, a invenção proporciona um método para prever a sensibilidade de uma doença mediada por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2, compreendendo: (a) determinação do nível de expressão de mRNA de CK2a' e/ou polipeptídeo de CK2a' em uma amostra biológica derivada do indivíduo; e (b) determinação do nível de polipeptideo de Akt fosforilada em S129 (p-Akt em S129) em uma amostra biológica derivada do indivíduo; em que uma correlação positiva entre o nível de expressão de mRNA de CK2α'e/ou polipeptideo de CK2a' e o nível de polipeptideo de p-Akt em S129 é prognóstico de sensibilidade da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[000161] Em outro de tais aspectos, a invenção proporciona um método para seleção de indivíduos que estão sofrendo de uma doença mediada por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, para tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo prognóstico da sensibilidade da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2 em cada indivíduo por meio do método acima e selecionando aqueles indivíduos que mostram uma correlação positiva entre o nível de expressão de mRNA de CK2a' e/ou polipeptideo de CK2o' e o nível de polipeptideo de p-Akt em S129.
[000162] Em um outro de tais aspectos, a invenção proporciona um método para tratamento de uma doença mediada por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, em um indivíduo que precisa do mesmo compreendendo determinação do nível de expressão de mRNA de CK2α'e/ou polipeptideo de CK2a' em uma amostra biológica derivada do indivíduo e determinação do nível de polipeptideo de p-Akt em S129 em uma amostra biológica derivada do indivíduo por meio do método de acima e tratamento do indivíduo com um inibidor de CK2 se há uma correlação positiva entre o nível de expressão de mRNA de CK2α'e/ou polipeptideo de CK2a' e o nível de polipeptideo de p-Akt em S129.
[000163] Em outro aspecto, a invenção proporciona um método para prever a sensibilidade de uma doença mediada por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2, compreendendo: (a) determinação do nível de expressão de mRNA de CK2α e/ou polipeptídeo de CK2a em uma amostra biológica derivada do indivíduo; e (b) determinação do nível de polipeptídeo de Akt fosforilada em S129 (p-Akt em S129) em uma amostra biológica derivada do indivíduo; em que uma correlação positiva entre o nível de expressão de mRNA de CK2a e/ou polipeptídeo de CK2a e o nível de polipeptídeo de p-Akt em S129 é prognóstico de sensibilidade da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[000164] Em outro de tais aspectos, a invenção proporciona um método para seleção de indivíduos que estão sofrendo de uma doença mediada por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, para tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo prognóstico da sensibilidade de o distúrbio proliferativo e/ou distúrbio inflamatório ao tratamento com um inibidor de CK2 em cada indivíduo por meio do método acima e selecionando aqueles indivíduos que mostram uma correlação positiva entre o nível de expressão de mRNA de CK2a e/ou polipeptídeo de CK2a e o nível de polipeptídeo de p-Akt em S129.
[000165] Em um outro de tais aspectos, a invenção proporciona um método para tratamento de uma doença mediada por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, em um indivíduo que precisa do mesmo compreendendo determinação do nível de expressão de mRNA de CK2a e/ou polipeptídeo de CK2a em uma amostra biológica derivada do indivíduo e determinação do nível de polipeptídeo de p-Akt em S129 em uma amostra biológica derivada do indivíduo por meio do método de acima e tratamento do indivíduo com um inibidor de CK2 se há uma correlação positiva entre o nível de expressão de mRNA de CK2a e/ou polipeptídeo de CK2a e o nível de polipeptídeo de p-Akt em S129.
[000166] Em outro aspecto, a invenção proporciona um método para prever a sensibilidade de uma doença mediada por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2, compreendendo: (a) determinação do nível de expressão de mRNA de CK2α'e/ou polipeptideo de CK2a' em uma amostra biológica derivada do indivíduo; e (b) determinação do nível de polipeptideo de Akt fosforilada em S129 (p-Akt em S129) com relação ao nível de polipeptideo de Akt total em uma amostra biológica derivada do indivíduo; em que uma correlação positiva entre o nível de expressão de mRNA de CK2a' e/ou polipeptideo de CK2a' e o nível normalizado de polipeptideo de p-Akt em S129 é prognóstico de sensibilidade da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[000167] Em outro de tais aspectos, a invenção proporciona um método para seleção de indivíduos que estão sofrendo de uma doença mediada por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, para tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo prognóstico da sensibilidade da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2 em cada indivíduo por meio do método acima e selecionando aqueles indivíduos que mostram uma correlação positiva entre o nível de expressão de mRNA de CK2a' e/ou polipeptideo de CK2a' e o nível normalizado de polipeptideo de p-Akt em S129.
[000168] Em um outro de tais aspectos, a invenção proporciona um método para tratamento de uma doença mediada por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, em um indivíduo que precisa do mesmo compreendendo determinação do nível de expressão de mRNA de CK2α'e/ou polipeptideo de CK2a' em uma amostra biológica derivada do indivíduo e determinação do nível de polipeptideo de p-Akt em S129 com relação ao nível de polipeptideo de Akt total em uma amostra biológica derivada do indivíduo por meio do método de acima e tratamento do indivíduo com um inibidor de CK2 se há uma correlação positiva entre o nível de expressão de mRNA de CK2α'e/ou polipeptideo de CK2a' e o nível normalizado de polipeptideo de p-Akt em S129.
[000169] Em outros aspectos da invenção, os métodos requerem determinação do nível de polipeptideo de p-Akt em S129 em a sistema ou indivíduo. Em algumas modalidades, o nível de polipeptideo de p-Akt em S129 é determinado com relação ao polipeptideo de Akt total, para proporcionar um nível normalizado de polipeptideo de p-Akt em S129. Em outras modalidades, o nível de polipeptideo de p-Akt em S129 isoladamente é determinado. Tanto o nível absoluto quanto o nível normalizado de polipeptideo de p-Akt em S129 podem ser comparados com os controles absoluto ou normalizado correspondentes derivados de um sistema ou indivíduo normal.
[000170] Assim, em um aspecto, a invenção proporciona um método para prever a sensibilidade de um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo determinação do nível de polipeptideo de p-Akt em S129 em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível de polipeptideo de p-Akt em S129 com relação ao controle é prognóstico da sensibilidade do distúrbio proliferativo e/ou inflamatório ao tratamento com um inibidor de CK2.
[000171] Em outro aspecto, a invenção proporciona um método para seleção de indivíduos que estão sofrendo de um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório para tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo prognóstico da sensibilidade de o distúrbio proliferativo e/ou distúrbio inflamatório ao tratamento com um inibidor de CK2 em cada indivíduo por meio do método acima e selecionando aqueles indivíduos que mostram um nível aumentado de polipeptideo de p-Akt em S129 para tratamento com um inibidor de CK2.
[000172] Em um outro aspecto, a invenção proporciona um método para tratamento de um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório em um indivíduo que precisa do mesmo compreendendo determinação do nível de polipeptídeo de p-Akt em S129 em uma amostra biológica derivada do indivíduo por meio do método acima e tratamento do indivíduo com um inibidor de CK2 se o nível de polipeptídeo de p-Akt em S129 está elevado.
[000173] Em outro aspecto, proporciona um método para monitoramento da responsividade de uma doença mediada por CK2 em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2, compreendendo: (a) determinação do nível de polipeptídeo de p-Akt em S129 em uma primeira amostra biológica derivada do indivíduo antes de tratamento com um inibidor de CK2; (b) determinação do nível de polipeptídeo de p-Akt em S129 em pelo menos uma segunda amostra biológica derivada do indivíduo subsequentemente ao tratamento com um inibidor de CK2; e (c) comparação do nível de polipeptídeo de p-Akt em S129 na segunda amostra biológica com o nível de polipeptídeo de p-Akt em S129 na primeira amostra biológica; em que uma diminuição no nível de polipeptídeo de p-Akt em S129 na segunda amostra biológica comparado com a primeira amostra biológica é indicativa de uma resposta positiva ao tratamento com o inibidor de CK2.
[000174] Em outro aspecto, a invenção proporciona um método to prever a resposta de um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo determinação do nível de polipeptídeo de p-Akt em S129 em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um nível aumentado de polipeptídeo de p-Akt em S129 com relação ao controle é prognóstico de responsividade to um inibidor de CK2.
[000175] Em outras modalidades, o nível normalizado de polipeptídeo de p-Akt em S129 é usado como um biomarcador. O nível normalizado de polipeptídeo de p-Akt em S129 pode ser determinado avaliando o nível de polipeptideo de p-Akt em S129 com relação ao polipeptideo de Akt total em uma amostra ou indivíduo.
[000176] Em um de tais aspectos, a invenção proporciona um método para prever a sensibilidade de um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo determinação do nível de polipeptideo de p-Akt em S129 com relação ao nível de polipeptideo de Akt total em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível normalizado de polipeptideo de p-Akt em S129 com relação ao controle correspondente é prognóstico da sensibilidade do distúrbio proliferativo e/ou inflamatório ao tratamento com um inibidor de CK2.
[000177] Em outro de tais aspectos, a invenção proporciona um método para seleção de indivíduos que estão sofrendo de um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório para tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo prognóstico da sensibilidade de o distúrbio proliferativo e/ou distúrbio inflamatório ao tratamento com um inibidor de CK2 em cada indivíduo por meio do método precedente e seleção daqueles indivíduos que mostram um nível aumentado de polipeptideo de p-Akt em S129 com relação ao nível de polipeptideo de Akt total para tratamento com um inibidor de CK2.
[000178] Em outro de tais aspectos, a invenção proporciona um método para tratamento de um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório em um indivíduo que precisa do mesmo compreendendo determinação do nível de polipeptideo de p-Akt em S129 com relação ao nível de polipeptideo de Akt total em uma amostra biológica derivada do indivíduo por meio do método precedente e tratamento do indivíduo com um inibidor de CK2 se o nível de polipeptideo de p-Akt em S129 com relação ao nível de polipeptideo de Akt total está elevado.
[000179] Em um outro aspecto, a invenção proporciona um método para monitoramento da responsividade de uma doença mediada por CK2 em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2, compreendendo: (a) determinação do nível de polipeptideo de p-Akt em S129 com relação ao nível de polipeptideo de Akt total em uma primeira amostra biológica derivada do indivíduo antes de tratamento com um inibidor de CK2; (b) determinação do nível de polipeptideo de p-Akt em S129 com relação ao nível de polipeptideo de Akt total em pelo menos uma segunda amostra biológica derivada do indivíduo subsequentemente ao tratamento com um inibidor de CK2; e (c) comparação do nível normalizado de polipeptideo de p-Akt em S129 na segunda amostra biológica com o nível normalizado de polipeptideo de p-Akt em S129 na primeira amostra biológica; em que uma diminuição no nível normalizado de polipeptideo de p-Akt em S129 na segunda amostra biológica comparado com a primeira amostra biológica é indicativa de uma resposta positiva ao tratamento com o inibidor de CK2.
[000180] Em outro aspecto, a invenção proporciona um método para identificação de um composto útil para o tratamento de um distúrbio proliferativo e/ou distúrbio inflamatório mediado por CK2, compreendendo: (a) análise do nível de polipeptideo de p-Akt em S129 em um indivíduo antes de tratamento com o composto; e (b) análise do nível de polipeptideo de p-Akt em S129 em um indivíduo subsequentemente ao tratamento com o composto; em que uma diminuição no nível de polipeptideo de p-Akt em S129 é indicativa de eficiência do fármaco.
[000181] Em outro aspecto, a invenção proporciona um método para identificação de um composto útil para o tratamento de um distúrbio proliferativo e/ou distúrbio inflamatório mediado por CK2, compreendendo: (a) análise do nível de polipeptideo de p-Akt em S129 com relação ao nível total de polipeptideo de Akt em um indivíduo antes de tratamento com o composto; e (b) análise do nível de polipeptideo de p-Akt em S129 com relação ao nível total de polipeptídeo de Akt em um indivíduo subsequentemente ao tratamento com o composto; em que uma diminuição no nível normalizado de polipeptídeo de p-Akt em S129 é indicativa de eficiência do fármaco.
[000182] Em modalidades frequentes relacionadas aos níveis de polipeptídeo de p-Akt em S129, o distúrbio proliferativo compreende câncer ou malignidade. Em uma modalidade exemplificativa, o câncer ou malignidade é selecionada de câncer de mama, câncer de mama inflamatório (Inflammatory Breast Cancer - IBC), câncer pancreático, câncer de próstata e mieloma múltiplo.
Fosforilação de Akt-S473
[000183] Conforme mostrado nos Exemplos 1, 8, 11-12 e 14, tratamento com um inibidor de CK2 reduziu a fosforilação de Akt S473 em várias linhagens de células, incluindo câncer de mama, câncer pancreático e mieloma múltiplo. Consequentemente, em determinados aspectos da invenção, os métodos requerem avaliação do estado de fosforilação de Akt em Serina 473 em uma amostra biológica, sistema ou indivíduo. Nos métodos descritos aqui, o estado de fosforilação de Akt pode ser determinado avaliando o nível de polipeptídeo de p-Akt S473 isoladamente (isto é, o valor absoluto). Em algumas de tais modalidades, o nível de polipeptídeo de p-Akt S473 pode ser determinado com relação a um controle adequado, tal como uma amostra correspondente de um indivíduo normal. Em outras modalidades, o nível normalizado de p-Akt S473 pode ser determinado avaliando o nível de polipeptídeo de p-Akt S473 com relação à Akt total, em que os níveis relativos podem, algumas vezes, ser expressos como um percentual ou proporção de p-Akt S473 para Akt total. Em algumas de tais modalidades, o controle correspondente será o nível normalizado de polipeptídeo de p-Akt S473 para Akt total em um controle normal.
[000184] Em um de tais aspectos, a invenção proporciona um método para monitoramento da responsividade de uma doença mediada por CK2 em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2, compreendendo: (a) determinação do nível de polipeptideo de p-Akt S473 em uma primeira amostra biológica derivada do indivíduo antes de tratamento com um inibidor de CK2; (b) determinação do nível de polipeptideo de p-Akt S473 em pelo menos uma segunda amostra biológica derivada do indivíduo subsequentemente ao tratamento com um inibidor de CK2; e (c) comparação do nível de polipeptideo de p-Akt S473 na segunda amostra biológica com o nível de polipeptideo de p- Akt S473 na primeira amostra biológica; em que uma diminuição no nível de polipeptideo de p-Akt S473 na segunda amostra biológica comparado com a primeira amostra biológica é indicativa de uma resposta positiva ao tratamento com o inibidor de CK2.
[000185] Em outro de tais aspectos, a invenção proporciona um método para monitoramento da responsividade de uma doença mediada por CK2 em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2, compreendendo: (a) determinação do nível de polipeptideo de p- Akt S473 com relação ao nível de polipeptideo de Akt total em uma primeira amostra biológica derivada do indivíduo antes de tratamento com um inibidor de CK2; (b) determinação do nível de polipeptideo de p-Akt S473 com relação ao nível de polipeptideo de Akt total em pelo menos uma segunda amostra biológica derivada do indivíduo subsequentemente ao tratamento com um inibidor de CK2; e (c) comparação do nível normalizado de polipeptideo de p-Akt S473 na segunda amostra biológica com o nível normalizado de polipeptideo de p-Akt S473 na primeira amostra biológica; em que uma diminuição no nível normalizado de polipeptideo de p-Akt S473 na segunda amostra biológica comparado com a primeira amostra biológica é indicativa de uma resposta positiva ao tratamento com o inibidor de CK2.
[000186] Em outro aspecto, a invenção proporciona um método para prever a sensibilidade de um distúrbio mediado por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo determinação do nível de polipeptideo de p-Akt S473 em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível de polipeptideo de p-Akt S473 com relação ao controle é prognóstico da sensibilidade do distúrbio proliferativo e/ou inflamatório ao tratamento com um inibidor de CK2.
[000187] Em ainda outro aspecto, a invenção proporciona um método para prever a sensibilidade de um distúrbio mediado por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo determinação do nível de polipeptideo de p-Akt S473 com relação ao nível de polipeptideo de Akt total em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível normalizado de polipeptideo de p-Akt S473 com relação ao controle correspondente é prognóstico da sensibilidade do distúrbio mediado por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[000188] Em outro de tais aspectos, a invenção proporciona um método para seleção de indivíduos que estão sofrendo de um distúrbio mediado por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, para tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo prognóstico da sensibilidade do distúrbio mediado por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2 em cada indivíduo através de um dos métodos precedentes e seleção daqueles indivíduos que mostram um nível aumentado de polipeptideo de p-Akt S473 ou um aumento no nível normalizado de polipeptideo de p-Akt S473 para tratamento com um inibidor de CK2.
[000189] Em outro aspecto, a invenção proporciona um método para tratamento de um distúrbio mediado por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou distúrbio inflamatório, em um indivíduo que precisa do mesmo compreendendo determinação do nível de polipeptídeo de p-Akt S473 em uma amostra biológica derivada do indivíduo através de um dos métodos precedentes e tratamento do indivíduo com um inibidor de CK2 se o nível de polipeptídeo de p-Akt S473 está elevado.
[000190] Em outro aspecto, a invenção proporciona um método to prever a resposta de um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo determinação do nível de polipeptídeo de p-Akt S473 isoladamente ou com relação a o nível de polipeptídeo de Akt total em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível absoluto ou normalizado de polipeptídeo de p-Akt S473 com relação a um controle correspondente é prognóstico de responsividade a um inibidor de CK2.
[000191] Em um outro aspecto, a invenção proporciona um método para identificação de um composto útil para o tratamento de um distúrbio mediado por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou distúrbio inflamatório, compreendendo: (a) análise do nível de polipeptídeo de p- Akt S473 em um indivíduo antes de tratamento com o composto; e (b) análise do nível de polipeptídeo de p-Akt S473 em um indivíduo subsequentemente ao tratamento com o composto; em que uma diminuição no nível de polipeptídeo de p-Akt S473 é indicativa de eficiência do fármaco.
[000192] Em ainda outro aspecto, a invenção proporciona um método para identificação de um composto útil para o tratamento de um distúrbio mediado por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou distúrbio inflamatório, compreendendo: (a) análise do nível de polipeptídeo de p- Akt S473 com relação ao polipeptídeo de Akt total em um indivíduo antes de tratamento com o composto; e (b) análise do nível de polipeptídeo de p-Akt S473 com relação ao polipeptídeo de Akt total em um indivíduo subsequentemente ao tratamento com o composto; em que uma diminuição no nível normalizado de polipeptideo de p-Akt S473 é indicativa de eficiência do fármaco.
[000193] Em modalidades frequentes relacionadas aos níveis de polipeptideo de p-Akt S473, o distúrbio proliferativo compreende câncer ou malignidade. Em uma modalidade exemplificativa, o câncer ou malignidade é selecionada de câncer de mama, câncer de mama inflamatório (Inflammatory Breast Cancer - IBC), câncer pancreático, câncer de próstata e mieloma múltiplo.
Fosforilação de P21-T145
[000194] Conforme mostrado nos Exemplos 1 e 8, 11-12 e 14, tratamento com um inibidor de CK2 reduziu a fosforilação de p21 em T145 em várias linhagens de células, incluindo linhagens de células de câncer de mama e pancreático. Consequentemente, em outros aspectos da invenção, os métodos requerem avaliação do estado de fosforilação de p21 em treonina 145 (p-p21 em T145) em uma amostra biológica, sistema ou indivíduo. Nos métodos descritos aqui, o estado de fosforilação de p21 pode ser determinado avaliando o nível de polipeptideo de p-p21 em T145 isoladamente (isto é, o valor absoluto). Em algumas de tais modalidades, o nível de polipeptideo de p-p21 em T145 pode ser determinado com relação a um controle adequado, tal como uma amostra correspondente de um indivíduo normal. Em outras modalidades, o nível normalizado de p-p21 em T145 pode ser determinado avaliando o nível de polipeptideo de p-p21 em T145 com relação ao p21 total, em que os níveis relativos podem, algumas vezes, ser expressos como um percentual ou proporção de p-p21 em T145 para p21 total. Em algumas de tais modalidades, o controle correspondente será o nível normalizado de polipeptideo de p-p21 em T145 para p21 total em um controle normal.
[000195] Em um de tais aspectos, a invenção proporciona um método para monitoramento da responsividade de uma doença mediada por CK2 em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2, compreendendo: (a) determinação do nível de polipeptideo de p-p21 em T145 em uma primeira amostra biológica derivada do indivíduo antes de tratamento com um inibidor de CK2; (b) determinação do nível de polipeptideo de p-p21 em T145 em pelo menos uma segunda amostra biológica derivada do indivíduo subsequentemente ao tratamento com um inibidor de CK2; e (c) comparação do nível de polipeptideo de p-p21 em T145 na segunda amostra biológica com o nível de polipeptideo de p-p21 em T145 na primeira amostra biológica; em que uma diminuição no nível de polipeptideo de p-p21 em T145 na segunda amostra biológica comparado com a primeira amostra biológica é indicativa de uma resposta positiva ao tratamento com o inibidor de CK2.
[000196] Em outro de tais aspectos, a invenção proporciona um método para monitoramento da responsividade de uma doença mediada por CK2 em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2, compreendendo: (a) determinação do nível de polipeptideo de p- p21 em T145 com relação ao nível de polipeptideo de p21 total em uma primeira amostra biológica derivada do indivíduo antes de tratamento com um inibidor de CK2; (b) determinação do nível de polipeptideo de p-p21 em T145 com relação ao nível de polipeptideo de p21 total em pelo menos uma segunda amostra biológica derivada do indivíduo subsequentemente ao tratamento com um inibidor de CK2; e (c) comparação do nível normalizado de polipeptideo de p-p21 em T145 na segunda amostra biológica com o nível normalizado de polipeptideo de p-p21 em T145 na primeira amostra biológica; em que uma diminuição no nível normalizado de polipeptideo de p-p21 em T145 na segunda amostra biológica comparado com a primeira amostra biológica é indicativa de uma resposta positiva ao tratamento com o inibidor de CK2.
[000197] Em um outro aspecto, a invenção proporciona um método para prever a sensibilidade de um distúrbio mediado por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo determinação do nível de polipeptídeo de p-p21 em T145 em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível de polipeptídeo de p-p21 em T145 com relação ao controle é prognóstico da sensibilidade do distúrbio mediado por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[000198] Em outro aspecto, a invenção proporciona um método para prever a sensibilidade de um distúrbio mediado por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo determinação do nível de polipeptídeo de p-p21 em T145 com relação ao nível de polipeptídeo de p21 total em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível normalizado de polipeptídeo de p-p21 em T145 com relação ao controle correspondente é prognóstico da sensibilidade do distúrbio mediado por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[000199] Em ainda outro aspecto, a invenção proporciona um método para seleção de indivíduos que estão sofrendo de um distúrbio mediado por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, para tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo prognóstico da sensibilidade do distúrbio mediado por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2 em cada indivíduo através de um dos métodos precedentes e seleção daqueles indivíduos que mostram um nível aumentado de polipeptídeo de p-p21 em T145 para tratamento com um inibidor de CK2.
[000200] Em ainda outro aspecto, a invenção proporciona um método para seleção de indivíduos que estão sofrendo de um distúrbio mediado por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório para tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo prognóstico da sensibilidade do distúrbio mediado por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2 e selecionando aqueles indivíduos que mostram um aumento no nível normalizado de polipeptideo de p- p21 em T145 para tratamento com um inibidor de CK2.
[000201] Em um outro aspecto, a invenção proporciona um método to prever a resposta de um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo determinação do nível de polipeptideo de p-p21 em T145 em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um nível aumentado de polipeptideo de p-p21 em T145 com relação ao controle é prognóstico de responsividade a um inibidor de CK2.
[000202] Em outro aspecto, a invenção proporciona um método para tratamento de um distúrbio mediado por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, em um indivíduo que precisa do mesmo compreendendo determinação do nível de polipeptideo de p- p21 em T145 em uma amostra biológica derivada do indivíduo através de um dos métodos precedentes e tratamento do indivíduo com um inibidor de CK2 se o nível de polipeptideo de p-p21 em T145 está elevado.
[000203] Em outro aspecto, a invenção proporciona um método to prever a resposta de um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo determinação do nível de polipeptideo de p-p21 em T145 com relação ao nível de polipeptideo de p21 total em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um nível normalizado aumentado de polipeptideo de p-p21 em T145 com relação a um controle correspondente é prognóstico de responsividade a um inibidor de CK2.
[000204] Em outro aspecto, a invenção proporciona um método para identificação de um composto útil para o tratamento de um distúrbio proliferativo e/ou distúrbio inflamatório mediado por CK2, compreendendo: (a) análise do nível de polipeptideo de p-p21 em T145 com relação ao polipeptideo de p21 total em um indivíduo antes de tratamento com o composto; e (b) análise do nível de polipeptideo de p- p21 em T145 com relação ao polipeptideo de p21 total em um indivíduo subsequentemente ao tratamento com o composto; em que uma diminuição no nível normalizado de polipeptideo de p-p21 em T145 é indicativa de eficiência do fármaco.
[000205] Em modalidades frequentes relacionadas ao p-p21 em T145 níveis de polipeptideo, o distúrbio proliferativo compreende câncer ou malignidade. Em uma modalidade exemplificativa, o câncer ou malignidade é selecionada de câncer de mama, câncer de mama inflamatório (Inflammatory Breast Cancer - IBC), câncer pancreático e mieloma múltiplo.
Fosforilação de NF-KB S529
[000206] Conforme mostrado em Exemplo 11, tratamento com um inibidor de CK2 reduziu a fosforilação de NF-KB em S529 em várias linhagens de células de mieloma múltiplo. Consequentemente, em determinados aspectos da invenção, os métodos requerem avaliação do estado de fosforilação de NF-KBat Em serina 529 em uma amostra biológica, sistema ou indivíduo. Nos métodos descritos aqui, o estado de fosforilação de NF-KB pode ser determinado avaliando o nível de polipeptideo de p-NF-KB em S529 isoladamente (isto é, o valor absoluto). Em algumas de tais modalidades, o nível de polipeptideo de P-NF-KB em S529 pode ser determinado com relação a um controle adequado, tal como uma amostra correspondente de um indivíduo normal. Em outras modalidades, o nível normalizado de p-NF-KB em S529 pode ser determinado avaliando o nível de polipeptideo de p-NF- KB em S529 com relação ao NF-KB total, em que os níveis relativos podem, algumas vezes, ser expressos como um percentual ou proporção de p-NF-KB em S529 para NF-KB total. Em algumas de tais modalidades, o controle correspondente será o nível normalizado de polipeptídeo de p-NF-KB em S529 para NF-KB total em um controle normal.
[000207] Em um de tais aspectos, a invenção proporciona um método para monitoramento da responsividade de uma doença mediada por CK2 em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2, compreendendo: (a) determinação do nível de polipeptídeo de p-NF-KB em S529 em uma primeira amostra biológica derivada do indivíduo antes de tratamento com um inibidor de CK2; (b) determinação do nível de polipeptídeo de p-NF-KB em S529 em pelo menos uma segunda amostra biológica derivada do indivíduo subsequentemente ao tratamento com um inibidor de CK2; e (c) comparação do nível de polipeptídeo de p-NF-KB em S529 na segunda amostra biológica com o nível de polipeptídeo de p-NF-KB em S529 na primeira amostra biológica; em que uma diminuição no nível de polipeptídeo de p-NF-KB em S529 na segunda amostra biológica comparado com a primeira amostra biológica é indicativa de uma resposta positiva ao tratamento com o inibidor de CK2.
[000208] Em outro de tais aspectos, a invenção proporciona um método para monitoramento da responsividade de uma doença mediada por CK2 em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2, compreendendo: (a) determinação do nível de polipeptídeo de p- NF-KB em S529 com relação ao nível de polipeptídeo de NF-KB total em uma primeira amostra biológica derivada do indivíduo antes de tratamento com um inibidor de CK2; (b) determinação do nível de polipeptídeo de p-NF-KB em S529 com relação ao nível de polipeptídeo de NF-KB total em pelo menos uma segunda amostra biológica derivada do indivíduo subsequentemente ao tratamento com um inibidor de CK2; e (c) comparação do nível normalizado de polipeptídeo de p-NF-KB em S529 na segunda amostra biológica com o nível normalizado de polipeptídeo de p-NF-KB em S529 na primeira amostra biológica; em que uma diminuição no nível normalizado de polipeptideo de p-NF-KB em S529 na segunda amostra biológica comparado com a primeira amostra biológica é indicativa de uma resposta positiva ao tratamento com o inibidor de CK2.
[000209] Em outro aspecto, a invenção proporciona um método para prever a sensibilidade de um distúrbio mediado por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo determinação do nível de polipeptideo de p-NF-KB em S529 em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível de polipeptideo de P-NF-KB em S529 com relação ao controle é prognóstico da sensibilidade do distúrbio proliferativo e/ou inflamatório ao tratamento com um inibidor de CK2.
[000210] Em ainda outro aspecto, a invenção proporciona um método para prever a sensibilidade de um distúrbio mediado por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo determinação do nível de polipeptideo de p-NF-KB em S529 com relação ao nível de polipeptideo de NF-KB total em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível normalizado de polipeptideo de P-NF-KB em S529 com relação ao controle correspondente é prognóstico da sensibilidade do distúrbio mediado por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[000211] Em outro de tais aspectos, a invenção proporciona um método para seleção de indivíduos que estão sofrendo de um distúrbio mediado por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, para tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo prognóstico da sensibilidade do distúrbio mediado por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2 em cada indivíduo através de um dos métodos precedentes e seleção daqueles indivíduos que mostram um nível aumentado de polipeptideo de p-NF-KB em S529 ou um aumento no nível normalizado de polipeptideo de p-NF-KB em S529 para tratamento com um inibidor de CK2.
[000212] Em outro aspecto, a invenção proporciona um método para tratamento de um distúrbio mediado por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou distúrbio inflamatório, em um indivíduo que precisa do mesmo compreendendo determinação do nível de polipeptideo de p- NF-KB em S529 em uma amostra biológica derivada do indivíduo através de um dos métodos precedentes e tratamento do indivíduo com um inibidor de CK2 se o nível de polipeptideo de p-NF-KB em S529 está elevado.
[000213] Em outro aspecto, a invenção proporciona um método to prever a resposta de um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo determinação do nível de polipeptideo de p-NF- KB em S529 isoladamente ou com relação a o nível de polipeptideo de NF-KB total em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível absoluto ou normalizado de polipeptideo de p-NF- KB em S529 com relação a um controle correspondente é prognóstico de responsividade a um inibidor de CK2.
[000214] Em um outro aspecto, a invenção proporciona um método para identificação de um composto útil para o tratamento de um distúrbio mediado por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou distúrbio inflamatório, compreendendo: (a) análise do nível de polipeptideo de p- NF-KB em S529 em um indivíduo antes de tratamento com o composto; e (b) análise do nível de polipeptideo de p-NF-KB em S529 em um indivíduo subsequentemente ao tratamento com o composto; em que uma diminuição no nível de polipeptideo de p-NF-KB em S529 é indicativa de eficiência do fármaco.
[000215] Em ainda outro aspecto, a invenção proporciona um método para identificação de um composto útil para o tratamento de um distúrbio mediado por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou distúrbio inflamatório, compreendendo: (a) análise do nível de polipeptídeo de p- NF-KB em S529 com relação ao polipeptídeo de NF-KB total em um indivíduo antes de tratamento com o composto; e (b) análise do nível de polipeptídeo de p-NF-KB em S529 com relação ao polipeptídeo de NF- KB total em um indivíduo subsequentemente ao tratamento com o composto; em que uma diminuição no nível normalizado de polipeptídeo de p-NF-KB em S529 é indicativa de eficiência do fármaco.
[000216] Em modalidades frequentes relacionadas aos níveis de polipeptídeo de p-NF-KB em S529, o distúrbio proliferativo compreende câncer ou malignidade. Em uma modalidade exemplificativa, o câncer ou malignidade é mieloma múltiplo.
Fosforilação de STAT3-Y705
[000217] Conforme mostrado em Exemplo 11, tratamento com um inibidor de CK2 reduziu a fosforilação de STAT3 em Y705 em várias linhagens de células de mieloma múltiplo. Consequentemente, em determinados aspectos da invenção, os métodos requerem avaliação do estado de fosforilação de STAT3 at tyrosine 705 em uma amostra biológica, sistema ou indivíduo. Nos métodos descritos aqui, o estado de fosforilação de STAT3 pode ser determinado avaliando o nível de polipeptídeo de p-STAT3 em Y705 isoladamente (isto é, o valor absoluto). Em algumas de tais modalidades, o nível de polipeptídeo de P-STAT3 em Y705 pode ser determinado com relação a um controle adequado, tal como uma amostra correspondente de um indivíduo normal. Em outras modalidades, o nível normalizado de p-STAT3 em Y705 pode ser determinado avaliando o nível de polipeptídeo de p- STAT3 em Y705 com relação ao STAT3 total, em que os níveis relativos podem, algumas vezes, ser expressos como um percentual ou proporção de p-STAT3 em Y705 para STAT3 total. Em algumas de tais modalidades, o controle correspondente será o nível normalizado de polipeptideo de p-STAT3 em Y705 para STAT3 total em um controle normal.
[000218] Em um de tais aspectos, a invenção proporciona um método para monitoramento da responsividade de uma doença mediada por CK2 em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2, compreendendo: (a) determinação do nível de polipeptideo de p-STAT3 em Y705 em uma primeira amostra biológica derivada do indivíduo antes de tratamento com um inibidor de CK2; (b) determinação do nível de polipeptideo de p-STAT3 em Y705 em pelo menos uma segunda amostra biológica derivada do indivíduo subsequentemente ao tratamento com um inibidor de CK2; e (c) comparação do nível de polipeptideo de p-STAT3 em Y705 na segunda amostra biológica com o nível de polipeptideo de p-STAT3 em Y705 na primeira amostra biológica; em que uma diminuição no nível de polipeptideo de p-STAT3 em Y705 na segunda amostra biológica comparado com a primeira amostra biológica é indicativa de uma resposta positiva ao tratamento com o inibidor de CK2.
[000219] Em outro de tais aspectos, a invenção proporciona um método para monitoramento da responsividade de uma doença mediada por CK2 em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2, compreendendo: (a) determinação do nível de polipeptideo de p- STAT3 em Y705 com relação ao nível de polipeptideo de STAT3 total em uma primeira amostra biológica derivada do indivíduo antes de tratamento com um inibidor de CK2; (b) determinação do nível de polipeptideo de p-STAT3 em Y705 com relação ao nível de polipeptideo de STAT3 total em pelo menos uma segunda amostra biológica derivada do indivíduo subsequentemente ao tratamento com um inibidor de CK2; e (c) comparação do nível normalizado de polipeptideo de p- STAT3 em Y705 na segunda amostra biológica com o nível normalizado de polipeptideo de p-STAT3 em Y705 na primeira amostra biológica; em que uma diminuição no nível normalizado de polipeptideo de p-STAT3 em Y705 na segunda amostra biológica comparado com a primeira amostra biológica é indicativa de uma resposta positiva ao tratamento com o inibidor de CK2.
[000220] Em outro aspecto, a invenção proporciona um método para prever a sensibilidade de um distúrbio mediado por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo determinação do nível de polipeptideo de p-STAT3 em Y705 em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível de polipeptideo de P-STAT3 em Y705 com relação ao controle é prognóstico da sensibilidade do distúrbio proliferativo e/ou inflamatório ao tratamento com um inibidor de CK2.
[000221] Em ainda outro aspecto, a invenção proporciona um método para prever a sensibilidade de um distúrbio mediado por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo determinação do nível de polipeptideo de p-STAT3 em Y705 com relação ao nível de polipeptideo de STAT3 total em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível normalizado de polipeptideo de P-STAT3 em Y705 com relação ao controle correspondente é prognóstico da sensibilidade do distúrbio mediado por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[000222] Em outro de tais aspectos, a invenção proporciona um método para seleção de indivíduos que estão sofrendo de um distúrbio mediado por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, para tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo prognóstico da sensibilidade do distúrbio mediado por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2 em cada indivíduo através de um dos métodos precedentes e seleção daqueles indivíduos que mostram um nível aumentado de polipeptídeo de p-STAT3 em Y705 ou um aumento no nível normalizado de polipeptídeo de p-STAT3 em Y705 para tratamento com um inibidor de CK2.
[000223] Em outro aspecto, a invenção proporciona um método para tratamento de um distúrbio mediado por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou distúrbio inflamatório, em um indivíduo que precisa do mesmo compreendendo determinação do nível de polipeptídeo de p- STAT3 em Y705 em uma amostra biológica derivada do indivíduo através de um dos métodos precedentes e tratamento do indivíduo com um inibidor de CK2 se o nível de polipeptídeo de p-STAT3 em Y705 está elevado.
[000224] Em outro aspecto, a invenção proporciona um método to prever a resposta de um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo determinação do nível de polipeptídeo de p- STAT3 em Y705 isoladamente ou com relação a o nível de polipeptídeo de STAT3 total em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível absoluto ou normalizado de polipeptídeo de P-STAT3 em Y705 com relação a um controle correspondente é prognóstico de responsividade a um inibidor de CK2.
[000225] Em um outro aspecto, a invenção proporciona um método para identificação de um composto útil para o tratamento de um distúrbio mediado por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou distúrbio inflamatório, compreendendo: (a) análise do nível de polipeptídeo de p- STAT3 em Y705 em um indivíduo antes de tratamento com o composto; e (b) análise do nível de polipeptídeo de p-STAT3 em Y705 em um indivíduo subsequentemente ao tratamento com o composto; em que uma diminuição no nível de polipeptídeo de p-STAT3 em Y705 é indicativa de eficiência do fármaco.
[000226] Em ainda outro aspecto, a invenção proporciona um método para identificação de um composto útil para o tratamento de um distúrbio mediado por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou distúrbio inflamatório, compreendendo: (a) análise do nível de polipeptideo de p- STAT3 em Y705 com relação ao polipeptideo de STAT3 total em um indivíduo antes de tratamento com o composto; e (b) análise do nível de polipeptideo de p-STAT3 em Y705 com relação ao polipeptideo de STAT3 total em um indivíduo subsequentemente ao tratamento com o composto; em que uma diminuição no nível normalizado de polipeptideo de p-STAT3 em Y705 é indicativa de eficiência do fármaco.
[000227] Em modalidades frequentes relacionadas aos níveis de polipeptideo de p-STAT3 em Y705, o distúrbio proliferativo compreende câncer ou malignidade. Em uma modalidade exemplificativa, o câncer ou malignidade é mieloma múltiplo.
Fosforilação de JAK2-Y1007/1008
[000228] Conforme mostrado em Exemplo 11, tratamento com um inibidor de CK2 reduziu a fosforilação de JAK2 Y1007/1008 em várias linhagens de células de mieloma múltiplo. Consequentemente, em determinados aspectos da invenção, os métodos requerem avaliação do estado de fosforilação de JAK2 em resíduos de tirosina 1007 e 1008 em uma amostra biológica, sistema ou indivíduo. Nos métodos descritos aqui, o estado de fosforilação de STAT3 pode ser determinado avaliando o nível de polipeptideo de p-JAK2 Y1007/1008 isoladamente (isto é, o valor absoluto). Em algumas de tais modalidades, o nível de polipeptideo de p-JAK2 Y1007/1008 pode ser determinado com relação a um controle adequado, tal como uma amostra correspondente de um indivíduo normal. Em outras modalidades, o nível normalizado de p- JAK2 Y1007/1008 pode ser determinado avaliando o nível de polipeptideo de p-JAK2 Y1007/1008 com relação a JAK2 total, em que os níveis relativos podem, algumas vezes, ser expressos como um percentual ou proporção de p-JAK2 Y1007/1008 para JAK2 total. Em algumas de tais modalidades, o controle correspondente será o nível normalizado de polipeptideo de p-JAK2 Y1007/1008 para JAK2 total em um controle normal
[000229] Em um de tais aspectos, a invenção proporciona um método para monitoramento da responsividade de uma doença mediada por CK2 em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2, compreendendo: (a) determinação do nível de polipeptideo de p-JAK2 Y1007/1008 em uma primeira amostra biológica derivada do indivíduo antes de tratamento com um inibidor de CK2; (b) determinação do nível de polipeptideo de p-JAK2 Y1007/1008 em pelo menos uma segunda amostra biológica derivada do indivíduo subsequentemente ao tratamento com um inibidor de CK2; e (c) comparação do nível de polipeptideo de p-JAK2 Y1007/1008 na segunda amostra biológica com o nível de polipeptideo de p-JAK2 Y1007/1008 na primeira amostra biológica; em que uma diminuição no nível de polipeptideo de p-JAK2 Y1007/1008 na segunda amostra biológica comparado com a primeira amostra biológica é indicativa de uma resposta positiva ao tratamento com o inibidor de CK2.
[000230] Em outro de tais aspectos, a invenção proporciona um método para monitoramento da responsividade de uma doença mediada por CK2 em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2, compreendendo: (a) determinação do nível de polipeptideo de p- JAK2 Y1007/1008 com relação ao nível de polipeptideo de JAK2 total em uma primeira amostra biológica derivada do indivíduo antes de tratamento com um inibidor de CK2; (b) determinação do nível de polipeptideo de p-JAK2 Y1007/1008 com relação ao nível de polipeptideo de JAK2 total em pelo menos uma segunda amostra biológica derivada do indivíduo subsequentemente ao tratamento com um inibidor de CK2; e (c) comparação do nível normalizado de polipeptideo de p-JAK2 Y1007/1008 na segunda amostra biológica com o nível normalizado de polipeptideo de p-JAK2 Y1007/1008 na primeira amostra biológica; em que uma diminuição no nível normalizado de polipeptídeo de p-JAK2 Y1007/1008 na segunda amostra biológica comparado com a primeira amostra biológica é indicativa de uma resposta positiva ao tratamento com o inibidor de CK2.
[000231] Em outro aspecto, a invenção proporciona um método para prever a sensibilidade de um distúrbio mediado por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo determinação do nível de polipeptídeo de p-JAK2 Y1007/1008 em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível de polipeptídeo de p-JAK2 Y1007/1008 com relação ao controle é prognóstico da sensibilidade do distúrbio proliferativo e/ou inflamatório ao tratamento com um inibidor de CK2.
[000232] Em ainda outro aspecto, a invenção proporciona um método para prever a sensibilidade de um distúrbio mediado por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo determinação do nível de polipeptídeo de p-JAK2 Y1007/1008 com relação ao nível de polipeptídeo de JAK2 total em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível normalizado de polipeptídeo de p-JAK2 Y1007/1008 com relação ao controle correspondente é prognóstico da sensibilidade do distúrbio mediado por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[000233] Em outro de tais aspectos, a invenção proporciona um método para seleção de indivíduos que estão sofrendo de um distúrbio mediado por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, para tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo prognóstico da sensibilidade do distúrbio mediado por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2 em cada indivíduo através de um dos métodos precedentes e seleção daqueles indivíduos que mostram um nível aumentado de polipeptideo de p-JAK2 Y1007/1008 ou um aumento no nível normalizado de polipeptideo de p-JAK2 Y1007/1008 para tratamento com um inibidor de CK2.
[000234] Em outro aspecto, a invenção proporciona um método para tratamento de um distúrbio mediado por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou distúrbio inflamatório, em um indivíduo que precisa do mesmo compreendendo determinação do nível de polipeptideo de p- JAK2 Y1007/1008 em uma amostra biológica derivada do indivíduo através de um dos métodos precedentes e tratamento do indivíduo com um inibidor de CK2 se o nível de polipeptideo de p-JAK2 Y1007/1008 está elevado.
[000235] Em outro aspecto, a invenção proporciona um método to prever a resposta de um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo determinação do nível de polipeptideo de p-JAK2 Y1007/1008 isoladamente ou com relação a o nível de polipeptideo de JAK2 total em uma amostra biológica derivada do indivíduo, em que um aumento no nível absoluto ou normalizado de polipeptideo de p-JAK2 Y1007/1008 com relação a um controle correspondente é prognóstico de responsividade a um inibidor de CK2.
[000236] Em um outro aspecto, a invenção proporciona um método para identificação de um composto útil para o tratamento de um distúrbio mediado por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou distúrbio inflamatório, compreendendo: (a) análise do nível de polipeptideo de p- JAK2-Y1007/1008 em um indivíduo antes de tratamento com o composto; e (b) análise do nível de polipeptideo de p-JAK2-Y1007/1008 em um indivíduo subsequentemente ao tratamento com o composto; em que uma diminuição no nível de polipeptideo de p-JAK2-Y1007/1008 é indicativa de eficiência do fármaco.
[000237] Em ainda outro aspecto, a invenção proporciona um método para identificação de um composto útil para o tratamento de um distúrbio mediado por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou distúrbio inflamatório, compreendendo: (a) análise do nível de polipeptideo de p- JAK2-Y1007/1008 com relação ao polipeptideo de JAK2 total em um indivíduo antes de tratamento com o composto; e (b) análise do nível de polipeptideo de p-JAK2-Y1007/1008 com relação ao polipeptideo de JAK2 total em um indivíduo subsequentemente ao tratamento com o composto; em que uma diminuição no nível normalizado de polipeptideo de p-JAK2-Y1007/1008 é indicativa de eficiência do fármaco.
[000238] Em modalidades frequentes relacionadas aos níveis de polipeptideo de p-JAK2 Y1007/1008, o distúrbio proliferativo compreende câncer ou malignidade. Em uma modalidade exemplificativa, o câncer ou malignidade é mieloma múltiplo.
Uso de Um ou Mais Biomarcadores para a Criação de Perfis de Amostra
[000239] Em ainda outro aspecto, a invenção proporciona um método para distinguir respondedores de não respondedores para tratamento de uma doença mediada por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, com um inibidor de CK2, compreendendo: (a) determinação do nível de expressão de mRNA e/ou nível de polipeptideo de um ou mais biomarcadores selecionados de CK2α, CK2α'e IL-6, IL-8, VEGF, HIF-1α e/ou o nível de polipeptideo de p-Akt em S129, p-Akt S473, p-p21 em T145, p-NF-KB S529, p-STAT3 em Y705 ou p-JAK2 Y1007/1008 em uma amostra derivada de um indivíduo, em que a amostra não é exposta ao inibidor de CK2 para proporcionar um perfil de amostra; e (b) comparação do perfil de amostra com um perfil de referência; em que o perfil de referência é indicativo de responsividade ao inibidor de CK2 e/ou não responsividade ao inibidor de CK2.
[000240] Em ainda outro aspecto, a invenção proporciona um método para distinguir respondedores de não respondedores para tratamento de uma doença mediada por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, com um inibidor de CK2, compreendendo:(a) determinação do nível de expressão de mRNA e/ou nível de polipeptídeo de um ou mais biomarcadores selecionados de CK2α, CK2a' e IL-6, IL-8, VEGF, HIF-1o e/ou o nível de polipeptídeo de p-Akt em S129, p-Akt S473, p-p21 em T145, p-NF-KB S529, p-STAT3 em Y705 ou p-JAK2 Y1007/1008 em uma amostra derivada de um indivíduo, em que a amostra não é exposta ao inibidor de CK2 para proporcionar um perfil de amostra; e (b) comparação do perfil de amostra com um perfil de referência; em que o perfil de referência é indicativo de responsividade ao inibidor de CK2 e/ou não responsividade ao inibidor de CK2.
[000241] Em algumas de tais modalidades, a etapa (a) compreende determinação do nível de expressão de mRNA de IL-6 e/ou polipeptídeo de IL-6 na amostra derivada do indivíduo. Em algumas modalidades, a etapa (a) compreende determinação do nível de expressão de mRNA de IL-8 e/ou polipeptídeo de IL-8 na amostra derivada do indivíduo. Em outras modalidades, a etapa (a) compreende determinação do nível de expressão de mRNA de CK2a e/ou polipeptídeo de CK2a' na amostra derivada do indivíduo. Em outras modalidades, a etapa (a) compreende determinação do nível de polipeptídeo de p-Akt em S129 na amostra derivada do indivíduo. Em algumas de tais modalidades, o nível normalizado de polipeptídeo de p-Akt em S129 é usado determinando- se o nível de p-Akt em S129 com relação ao polipeptídeo de Akt total. Em outras modalidades, a etapa (a) compreende determinação do nível de polipeptídeo de p-Akt S473 na amostra derivada do indivíduo. Em algumas de tais modalidades, o nível normalizado de polipeptídeo de p- Akt S473 é usado determinando-se o nível de p-Akt S473 com relação ao polipeptídeo de Akt total. Em outras modalidades, a etapa (a) compreende determinação do nível de polipeptídeo de p-p21 em T145 na amostra derivada do indivíduo. Em algumas de tais modalidades, o nível normalizado de polipeptideo de p-p21 em T145 é usado determinando-se o nível de p-p21 em T145 com relação ao polipeptideo de p21 total. Em outras modalidades, a etapa (a) compreende determinação do nível de polipeptideo de P-NF-KB em S529 na amostra derivada do indivíduo. Em algumas de tais modalidades, o nível normalizado de polipeptideo de p-NF-KB em S529 é usado determinando-se o nível de p-NF-KB em S529 com relação ao polipeptideo de NF-KB total. Em outras modalidades, a etapa (a) compreende determinação do nível de polipeptideo de p-STAT3 em Y705 na amostra derivada do indivíduo. Em algumas de tais modalidades, o nível normalizado de polipeptideo de p-STAT3 em Y705 é usado determinando-se o nível de p-STAT3 em Y705 com relação ao polipeptideo de STAT3 total. Em outras modalidades, a etapa (a) compreende determinação do nível de polipeptideo de p-JAK2 Y1007/1008 na amostra derivada do indivíduo. Em algumas de tais modalidades, o nível normalizado de polipeptideo de p-JAK2 Y1007/1008 é usado determinando-se o nível de p-JAK2 Y1007/1008 com relação ao polipeptideo de JAK2 total.
[000242] Em algumas modalidades, a similaridade entre o perfil de amostra e o perfil de referência prevê se o paciente é um respondedor ou não respondedor ao fármaco para tratamento de uma doença mediada por CK2. Em algumas modalidades, o perfil de referência indicativo de responsividade ao fármaco é obtido a partir de um ou mais pacientes que são responsivos ao fármaco. Em outras modalidades, o perfil de referência indicativo de não responsividade ao fármaco é obtido a partir de um ou mais pacientes que não são responsivos ao fármaco. Em modalidades frequentes, o fármaco é um inibidor de CK2.
[000243] Os métodos fornecidos aqui podem também ser usados para identificar ou prever indivíduos para os quais provavelmente tratamento com um inibidor de CK2 é eficaz e, assim, selecionar um indivíduo ou um grupo ou população de indivíduos que provavelmente se beneficiarão de tal tratamento. Uma vez rotulados, tais indivíduos podem, então, ser selecionados para tratamento e/ou tratados com um inibidor de CK2. Inversamente, indivíduos que são determinados como provavelmente não se beneficiarão de tratamento com um inibidor de CK2 podem ser rotulados e excluídos de tratamento com um inibidor de CK2 ou um tratamento alternativo apropriado fornecido. Em várias modalidades descritas aqui, o indivíduo pode ser um ser humano ou outro mamífero. Em modalidades exemplificativas, o indivíduo é um ser humano.
Comparação de Biomarcadores Com Populações de Referência Para Monitoramento de Responsividade
[000244] Em um aspecto adicional, a invenção proporciona um método para monitoramento da responsividade de uma doença mediada por CK2 em um indivíduo ao tratamento com um inibidor de CK2, compreendendo: (a) determinação do nível de um ou mais biomarcadores em uma amostra biológica derivada do indivíduo após tratamento com um inibidor de CK2 e (b) comparação do nível de um ou mais biomarcadores na amostra biológica com os níveis de um ou mais biomarcadores obtidos a partir de uma população de indivíduos de referência que estão sofrendo da referida doença mediada por CK-2, em que uma diminuição no nível de um ou mais biomarcadores na amostra biológica é indicativa de uma resposta ao tratamento da doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[000245] Para correlacionar a amostra biológica de um indivíduo com uma população de referência padrão, é necessário obter dados sobre as respostas clínicas exibidas por uma população de indivíduos que recebeu o tratamento, isto é, uma população clínica, antes e/ou após tratamento com o inibidor de CK2. Esses dados clínicos podem ser obtidos por meio de análise retrospectiva dos resultados de (um) ensaio(s) clínico(s). Alternativamente, os dados clínicos podem ser obtidos projetando e realizando um ou mais novos ensaios clínicos. A análise de dados da população clínica é útil para definir uma população de referência padrão a qual, por sua vez, é útil para classificar indivíduos para seleção de tratamento terapêutico e/ou classificar indivíduos como exibindo uma resposta positiva ao tratamento com um inibidor de CK2. Em uma modalidade preferida, os indivíduos incluídos na população clínica foram classificados quanto à existência da condição médica de interesse, por exemplo, uma doença mediada por CK2. A classificação de indivíduos potenciais pode incluir, por exemplo, uma exame físico padrão ou um ou mais testes de laboratório. Alternativamente, a classificação de indivíduos pode incluir uso de um padrão de expressão gênica, um padrão de expressão de proteína ou um padrão de fosforilação. Por exemplo, o padrão de expressão gênica é útil como um critério de classificação onde há uma forte correlação entre o padrão de expressão gênica e suscetibilidade ou gravidade de uma doença. Tal população de referência padrão compreende indivíduos que compartilham característica(s) padrões de perfil de expressão gênica. Por exemplo, característica(s) de expressão gênica de biomarcador é(são) útil(eis) nos métodos da presente invenção para comparação com o nível medido de um ou mais produtos de expressão gênica em um determinado indivíduo. Esse(s) produto(s) de expressão gênica útil(eis) nos métodos da presente invenção inclui(em), mas não está(ão) limitados a, por exemplo, mRNA característico associado a esse grupo de genótipo em particular ou o produto de expressão gênica do polipeptídeo desse grupo de genótipo. Em uma modalidade, um indivíduo é classificado ou atribuído a um grupo de genótipo ou classe em particular com base na similaridade entre os níveis medidos de um ou mais biomarcadores no indivíduo e o nível do um ou mais biomarcadores observados em uma população de referência padrão.
[000246] Em uma modalidade exemplificativa, o biomarcador é selecionado do nível de expressão de mRNA e/ou de polipeptideo de CK2α, CK2α', IL-6, IL-8, VEGF ou HIF-1a ou do nível de polipeptideo de p-Akt em S129, p-Akt S473, p-p21 em T145, p-NF-KB S529, p-STAT3 em Y705 ou p-JAK2 Y1007/1008. Em outra modalidade, combinações de dois ou mais biomarcadores são usadas e selecionadas do nível de expressão de mRNA e/ou de polipeptideo de CK2α, CK2a', IL-6, IL-8, VEGF ou HIF-1a ou do nível de polipeptideo de p-Akt em S129, p-Akt S473, p-p21 em T145, p-NF-KB S529, p-STAT3 em Y705 ou p-JAK2 Y1007/1008.
[000247] Deve ser entendido que, nos métodos descritos aqui referentes aos níveis de p-Akt em S129, p-Akt S473, p-p21 em T145, p- NF-KB S529, p-STAT3 em Y705 ou p-JAK2 Y1007/1008, o nível absoluto ou o nível normalizado de polipeptideo de p-Akt em S129, p- Akt S473, p-p21 em T145, p-NF-KB S529, p-STAT3 em Y705 ou p-JAK2 Y1007/1008, respectivamente, pode ser usado.
Combinações de Biomarcadores Para Prever a Sensibilidade e/ou Monitoramento de Responsividade
[000248] Em várias modalidades descritas aqui, os métodos da presente invenção podem utilizar uma ou mais combinações de biomarcadores rotulados aqui para prever a sensibilidade e/ou monitorar a responsividade de uma doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
[000249] Assim, em uma modalidade, a presente invenção proporciona uma combinação de testes úteis para prever ou determinar a eficácia de tratamento de um inibidor de CK2 compreendendo um primeiro teste para detecção do nível de um primeiro biomarcador de uma amostra biológica de um indivíduo e um segundo teste para detecção do nível de um segundo biomarcador da referida amostra biológica, em que o primeiro marcador é diferente do segundo marcador. Em uma modalidade, o primeiro biomarcador é selecionado do nível de expressão de mRNA e/ou de polipeptideo de CK2α, CK2a', IL-6, IL-8, VEGF ou HIF-1o ou do nível de polipeptideo de p-Akt em S129, p-Akt S473, p-p21 em T145, p-NF-KB S529, p-STAT3 em Y705 ou p-JAK2 Y1007/1008. Em uma outra modalidade, o segundo biomarcador é selecionado do nível de expressão de mRNA e/ou de polipeptideo de CK2α, CK2a', IL-6, IL-8, VEGF ou HIF-1a ou do nível de polipeptideo de p-Akt em S129, p-Akt S473, p-p21 em T145, p-NF-KB S529, p-STAT3 em Y705 ou p-JAK2 Y1007/1008.
[000250] Em outra modalidade, a presente invenção proporciona uma combinação de biomarcadores (isto é, um painel de biomarcadores) útil para prever ou determinar a eficácia de tratamento de um inibidor de CK2. Em uma modalidade, o painel de biomarcadores inclui um ou mais biomarcadores selecionados do nível de expressão de mRNA e/ou de polipeptideo de CK2α, CK2a', IL-6, IL-8, VEGF ou HIF-1a ou do nível de polipeptideo de p-Akt em S129, p-Akt S473, p-p21 em T145, p-NF-KB S529, p-STAT3 em Y705 ou p-JAK2 Y1007/1008. Em outra modalidade, o painel de biomarcadores inclui dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez ou mais biomarcadores selecionados do nível de expressão de mRNA e/ou de polipeptideo de CK2α, CK2a', IL-6, IL-8, VEGF ou HIF-1a ou do nível de polipeptideo de p-Akt em S129, p-Akt S473, p- p21 em T145, p-NF-KB S529, p-STAT3 em Y705 ou p-JAK2 Y1007/1008. Em uma modalidade exemplificativa, o painel de biomarcadores inclui todos os biomarcadores selecionados do nível de expressão de mRNA e/ou de polipeptideo de CK2α, CK2a', IL-6, IL-8, VEGF ou HIF-1a ou do nível de polipeptideo de p-Akt em S129, p-Akt S473, p-p21 em T145, p-NF-KB S529, p-STAT3 em Y705 ou p-JAK2 Y1007/1008.
[000251] Em outra modalidade, a presente invenção proporciona um método para fornecer informação útil para prever ou determinar a eficácia de tratamento de um inibidor de CK2 compreendendo determinação do nível de um ou mais biomarcadores a partir de uma amostra biológica de um indivíduo e fornecimento do nível de um ou mais biomarcadores a uma entidade que fornece uma previsão ou determinação da eficácia terapêutica com base em um aumento ou diminuição no nível de um ou mais biomarcadores em um indivíduo tratado com um inibidor de CK2. Em uma modalidade, o biomarcador é selecionado do nível de expressão de mRNA e/ou de polipeptídeo de CK2α, CK2a', IL-6, IL-8, VEGF ou HIF-1a ou do nível de polipeptídeo de p-Akt em S129, p-Akt S473, p-p21 em T145, p-NF-KB S529, p-STAT3 em Y705 ou p-JAK2 Y1007/1008.
Métodos de Triagem de Indivíduos para Prever a Responsividade
[000252] A presente invenção, assim, proporciona um método de triagem de indivíduos que estão sofrendo de um distúrbio proliferativo de forma a prever sua responsividade ao tratamento com um inibidor de CK2 compreendendo determinação do nível de expressão de mRNA e/ou níveis de polipeptídeo das subunidades catalíticas de CK2 (CK2α/CK2α'), IL-6, IL-8, VEGF, HIF-1a e/ou o estado de fosforilação de p-Akt em S129, p-Akt S473, p-p21 emT145, p-NF-KB S529, p-STAT3 em Y705 e p-JAK2-Y1007/1008 através de um método conforme definido acima.
[000253] Em um outro aspecto, a presente invenção proporciona um método de tratamento de um distúrbio proliferativo e/ou inflamatório em um indivíduo que precisa do mesmo compreendendo determinação do nível de expressão das subunidades catalíticas de CK2 (CK2α/CK2α'), IL-6, IL-8, VEGF, HIF-1a e/ou o estado de fosforilação de Akt, de preferência Akt em S129 ou Akt S473 ou p21, de preferência T145 ou NF-KB, de preferência S529, STAT3, de preferência Y705 ou JAK2, de preferência Y1007 ou Y1008, em uma amostra derivada do indivíduo, através dos métodos descritos aqui e tratamento do indivíduo com um inibidor de CK2 se o nível de expressão de subunidades catalíticas de CK2, IL-6, IL-8, VEGF, HIF-1a e/ou Akt fosforilada, p21, NF-KB, STAT3 ou JAK2 está elevado.
[000254] O nível determinado para um biomarcador ou biomarcadores em particular em uma amostra biológica, tal como uma célula ou tecido, um sistema ou indivíduo pode ser comparado com uma amostra de controle apropriada. Por exemplo, uma amostra de controle pode compreender uma amostra biológica derivada de um indivíduo que não está sofrendo da doença ou uma amostra de tecido normal (isto é, tecido não tumoral) do mesmo indivíduo.
[000255] Descobriu-se que níveis elevados de expressão de mRNA e/ou níveis de polipeptideo para CK2α, CK2a' e/ou IL-6, IL-8, VEGF, HIF-1a e/ou um nível elevado de Akt, p21, NF-KB, STAT3 ou JAK2 fosforilada, quer isoladamente ou com relação à Akt, p21, NF-KB, STAT3 ou JAK2 total, respectivamente são prognósticos de um efeito terapêutico benéfico de um inibidor de CK2. O nível elevado no qual uso terapêutico de um inibidor de CK2 está indicado pode ser determinado por aqueles versados no campo. Em determinadas modalidades, tratamento com inibidor de CK2 pode ser indicado onde o nível elevado na amostra está detectavelmente acima do nível de controle ou onde o nível é pelo menos 50%, 75%, 100%, 300%, 500% ou 1000% maior do que o controle.
[000256] Em algumas modalidades, o controle apropriado será uma amostra de controle obtida de um indivíduo normal ou um grupo de indivíduos que são não afetados com o distúrbio proliferativo e/ou o distúrbio inflamatório. Algumas vezes, o controle apropriado pode ser uma amostra de controle de uma célula ou tecido normal do indivíduo afetado pelo distúrbio proliferativo e/ou o distúrbio inflamatório. Por exemplo, em um indivíduo afetado por câncer, a amostra biológica de teste pode ser derivada de um tumor no tecido afetado por câncer e a amostra de controle pode ser obtida a partir de um tecido que não está afetado pelo câncer. Amostras de controle podem ser ensaiadas com relação ao nível de expressão de mRNA e/ou o nível de polipeptideo do(s) biomarcador(es) de interesse ou o estado de fosforilação do biomarcador e comparado com os níveis correspondentes para o(s) biomarcador(es) de interesse na amostra biológica de teste.
[000257] Quando os métodos referem-se à prevenção de sensibilidade ou responsividade a um inibidor de CK2, o indivíduo é, tipicamente, um indivíduo que foi rotulado ou diagnosticado como tendo uma doença mediada por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório e que não sofreu tratamento com um inibidor de CK2. Assim, os métodos podem ser usados para prever quais indivíduos provavelmente são responsivos ao tratamento com um inibidor de CK2 antes de início de tratamento. Em outras modalidades, foi administrado ao indivíduo um inibidor de CK2 e o indivíduo está sendo avaliado para monitor a eficácia de tratamento.
Métodos de Seleção de Dosagens Usando os Biomarcadores Rotulados
[000258] Os métodos da presente invenção podem também ser usados para selecionar uma dose apropriada de um inibidor de CK2 para otimizar individualmente a terapia para cada indivíduo. Fatores a serem considerados na seleção da dose apropriada incluem o indivíduo e condição que está sendo tratada em particular, a condição clínica do paciente individual, o local de distribuição do composto ativo, o tipo particular do composto ativo, o método de administração, o esquema de administração, a gravidade da condição e outros fatores conhecidos por praticantes de medicina. A quantidade terapeuticamente eficaz de um composto ativo a ser administrado será orientada portais considerações e é a quantidade mínima necessária para prevenir, aliviar ou tratar a doença. Tal quantidade está, de preferência, abaixo da quantidade que é tóxica para o hospedeiro ou a qual torna o hospedeiro significativamente mais suscetível à infecções.
Amostra Biológica
[000259] Conforme descrito aqui, os métodos referem-se à determinação dos níveis de biomarcador em um sistema. O sistema pode ser in vitroou in vivo. Assim, os métodos podem ser realizados in vitroou in vivo, por exemplo, sobre uma amostra biológica derivada de um indivíduo, incluindo mas não limitado a, um mamífero, tal como um ser humano. Em uma modalidade, a amostra biológica é um material biológico derivado do indivíduo tal como, por exemplo, uma célula (por exemplo, uma célula tumoral em circulação), linhagem de célula, tecido (por exemplo, um tecido de biópsia), cultura tecidual, lisato de célula ou tecidual, tumor ou um fluido biológico ou uma fração dos mesmos, tal como plasma, soro, sangue, urina, saliva ou células mononucleares de sangue periférico (Peripheral Sangue Mononuclear Cells - PBMCs), por exemplo, PBMCs de linfócito ou monócito. Em algumas modalidades, as PBMCs são separadas em fenótipos, tais como PBMCs CD19 positive (CD19+) ou CD45 positive (CD45+). PBMCs podem ser isoladas ou extraídas de sangue usando métodos conhecidos por aqueles versados no campo, por exemplo, mediante o uso de Ficoll ou através de lise hipotônica.
Medição de Biomarcador
[000260] Os níveis de expressão e/ou fosforilação para os biomarcadores descritos aqui são ensaiados na amostra biológica através de qualquer meio técnico com base em expressão de RNA usando, por exemplo, a técnica de RT-PCR e microarranjo de DNA ou com base em expressão de proteína (isto é, para medir os níveis de polipeptídeo) usando, por exemplo, a técnica de Western blotting, imunohistoquímica ou ELISA, incluindo imunoensaios, imunoprecipitação e ensaios eletroforéticos.
[000261] Anticorpos específicos para as subunidades catalíticas de CK2 (CK2α/CK2α'), IL-6, IL-8, VEGF, HIF-1a, Akt, p-Akt em S129, p-Akt S473, p21, p-p21 em T145, NF-KB, p-NF-KB S529, STAT3, p-STAT3 em Y705, JAK2 e p-JAK2-Y1007/1008 podem ser usados em um formato de imunoensaio padrão para medir os níveis de expressão. Por exemplo, ensaios do tipo ELISA (ensaio imunoabsorvente enzima ligado), ensaios do tipo imunoprecipitação, ensaios Western blotting convencionais, ensaios de imunofluorescência e ensaios de imunohistoquímica usando anticorpos monoclonais e policlonais podem também ser utilizados para determinar os níveis das subunidades catalíticas de CK2 (CK2α/CK2α'), IL-6, IL-8, VEGF, HIF-1a, Akt, p-Akt em S129, p-Akt S473, p21, p-p21 em T145, NF-KB, p-NF-KB S529, STAT3, p-STAT3 em Y705, JAK2 e p-JAK2-Y1007/1008 como proteínas biomarcadoras. Anticorpos policlonais e monoclonais específicos para esses biomarcadores podem ser produzidos de acordo com métodos conhecidos.
[000262] Os níveis de biomarcadores podem também ser medidos usando eletroforese em gel bidimensional (2-D) e, então, analisados, por exemplo, através de análise imunoblot usando anticorpos, usando métodos conhecidos na técnica.
Doenças mediadas por CK-2
[000263] Em modalidades frequentes da presente invenção, a doença mediada por CK2 é um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório. Em algumas modalidades, o distúrbio proliferativo compreende câncer. O câncer pode ser câncer da mama, próstata, cólon, reto, pâncreas, fígado, cérebro, cabeça e pescoço, pulmão (SCLC ou NSCLC) ou pele (por exemplo, melanoma). Em modalidades específicas, o câncer é câncer de próstata ou câncer de mama. Em determinadas modalidades, o câncer é câncer de mama inflamatório. Em outras modalidades, o distúrbio é leucemia mielogênea aguda ou crônica, leucemia linfocítica crônica, leucemia linfoblástica aguda, leucemia Bcr/Abl-positiva, linfoma ou mieloma múltiplo. Em outras modalidades, o distúrbio é um tumor sólido, incluindo um tumor sólido avançado. Em outras modalidades, o distúrbio é doença de Castleman.
[000264] Em outras modalidades, o distúrbio descrito aqui é um distúrbio inflamatório. Algumas vezes, o distúrbio inflamatório é glomerulonefrite, esclerose múltipla, lupus eritematoso sistêmico, artrite reumatoide ou artrite juvenil. Em algumas modalidades, os compostos são usados para aliviar a dor inflamatória, uma vez que modelos com murino demonstram que CK2 modula a transmissão de sinal nociceptivo e reduz a resposta dolorosa em camundongos quando de infusão na coluna espinhal.
[000265] Em modalidades alternativas, o distúrbio mediado por CK2 é selecionado do grupo consistindo em um distúrbio neurodegenerativo, dor, um distúrbio do sistema vascular, um distúrbio patofisiológico do músculo esquelético ou tecido ósseo, parasitose por protozoário ou uma doença virai.
[000266] Em determinadas modalidades, o distúrbio mediado por CK2 é um distúrbio neurodegenerativo. Em algumas de tais modalidades, o distúrbio neurodegenerativo é mal de Alzheimer, mal de Parkinson, dano à memória, isquemia cerebral, demência de Guam-Parkinson, síndrome de deleção do cromossomo 18, paralisia supranuclear progressiva, doença de Kuf ou doença de Pick.
[000267] Em outras modalidades, o distúrbio mediado por CK2 é um distúrbio do sistema vascular. Em algumas de tais modalidades, o distúrbio do sistema vascular é aterosclerose, tensão de cisalhamento laminar ou hipóxia.
[000268] Em outras modalidades, o distúrbio mediado por CK2 é um distúrbio patofisiológico do músculo esquelético ou tecido ósseo. Essas condições incluem aterosclerose, tensão de cisalhamento laminar e hipoxia e condições associadas. Em algumas de tais modalidades, o distúrbio é hipertrofia de cardiomiócitos, sinalização deficiente à insulina ou mineralização do tecido ósseo.
[000269] Em ainda outras modalidades, o distúrbio é uma parasitose por protozoário. Foi mostrado que infecções por protozoários levam a aumentos quase imediatos nos níveis de IL-8 no hospedeiro infectado.
[000270] Além do envolvimento de inibidores de CK2 no ciclo de vida de tais patógenos, o qual é discutido acima, a supressão de expressão de IL-8 pode ser útil ao aliviar dano localizado associado a patógenos parasíticos. Os compostos da invenção são, assim, úteis para tratamento de parasitose em virtude de Theileria parva; Toxoplasma gondii, Trypanosoma cruzi (doença de Chagas), Leishmania donovani, Herpetomonas muscarum muscarum, Plasmodium falciparum, Traypanosoma brucei e Schistosoma mansoni, dentre outras.
[000271] Em outras modalidades, o distúrbio é uma doença virai. Em algumas de tais modalidades, a doença virai é vírus da imunodeficiência humana do tipo 1 (HIV-1), papiloma vírus humano, vírus de Epstein-Barr ou vírus do herpes simplex. Em outras modalidades, o distúrbio virai é papiloma vírus, citomegalovírus humano, hepatite C ou B, vírus da doença de Borna, adenovirus, vírus coxsackie, coronavirus ou vírus da varicela zoster.
Inibidores de CK2
[000272] CK2 é uma proteína com um sítio ativo único que pode ser inibido por uma variedade de produtos terapêuticos conhecidos, incluindo estaurosporina, um produto natural originalmente isolado em 1977 de Streptomyces staurosporeus(Omura et al., 1977, J. Antibiot. 30: 275-82), o qual inibe proteínas quinases ao impedir a ligação de ATP à quinase. Além de estaurosporina, muitos inibidores de CK2 ATP- competitivos foram reportados na literatura, incluindo 5,6-dicloro-1-β-D- ribofuranosil benzimidazola (DRB), 6-metil-1,3,8-trihidróxi antraquinona (emodina), 2-dimetilamino-4,5,6,7-tetrabromo-1 /-/-benzimidazola (DMAT), 4,5,6,7-tetrabromobenzotriazola (TBB), resorufina, 2,6,2',6'- dilactona de ácido 4,4',5,5',6,6'-Hexahidróxidifênico (ácido elágico), ácido [5-oxo-5,6-di-hidroindolo-(1,2-a)quinazolin-7-il]acético (IQA) e 2- (3,4-di-hidróxifenil)-3,5,7- trihidróxi-4H-cromen-4-ona (quercetina). Vide, por exemplo, Zhu et al., 2009, Mol. Cell. Biochem. 333: 159-67; Lopez-Ramos et al., 2010, Faseb J. 24: 3171-85; e Cozza et al., 2010, Med. Res. Rev. 30: 419-62.
[000273] Inibidores de CK2 exercem atividades biológicas que incluem, mas não estão limitados a, inibição de proliferação celular e modulação de atividade de proteína quinase. Inibidores de CK2 podem modular a atividade de proteína quinase CK2 e, sem estar limitado pela teoria, acredita-se que sua inibição de CK2 confere a capacidade de tratar vários distúrbios descritos aqui, os quais estão associados a níveis anormais, excessivos ou indesejados de atividade de CK2. Tais compostos podem, portanto, ser utilizados em múltiplas aplicações por aqueles versados no campo. Por exemplo, inibidores de CK2 podem encontrar usos que incluem, mas não estão limitados a, (i) modulação de atividade de proteína quinase (por exemplo, atividade de CK2), (ii) modulação de proliferação celular, (iii) modulação de apoptose, (iv) tratamento de distúrbios relacionados à proliferação celular, tais como leucemia, linfoma, mieloma múltiplo e tumores sólidos (por exemplo, tumores da mama ou próstata) e (v) tratamento de distúrbios neurodegenerativos, distúrbio inflamatórios, distúrbios do sistema vascular, distúrbios do músculo esquelético ou tecido ósseo, parasitoses por protozoários, doenças virais e dor.
[000274] Um inibidor de CK2 pode ser formulado como uma composição farmacêutica. Tal composição farmacêutica pode, então, ser administrada através de qualquer via de administração adequada, por exemplo, oralmente, parenteralmente, através de um spray de inalação, retal ou topicamente em formulações de unidade de dosagem contendo veículos, adjuvantes e carreadores farmaceuticamente aceitáveis não tóxicos convencionais, conforme desejado. A formulação de fármacos é discutida, por exemplo, em Hoover, John E., REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, Mack Publishing Co., Easton, Pa.; 1975. Outros exemplos de formulações de fármaco podem ser encontrados em Liberman, H. A. e Lachman, L., Eds., PHARMACEUTICAL DOSAGE FORMS, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980. Composições farmacêuticas adequadas para uso na presente invenção incluem composições em que os ingredientes ativos estão contidos em uma quantidade eficaz para obter a finalidade pretendida. Determinação das quantidades eficazes e regimes de dosagem apropriados está dentro da capacidade daqueles versados no campo.
[000275] Um inibidor de CK2 pode estar em uma quantidade eficaz em uma componente farmacêutica, formulação ou medicamento, a qual é uma quantidade que pode levar a um efeito biológico adequado, levando a alívio, melhora ou remoção dos sintomas de uma doença ou condição. Os termos também podem referir-se à redução ou diminuição da taxa de proliferação celular (por exemplo, diminuição ou interrupção de crescimento de tumor) ou redução do número de células cancerígenas em proliferação (por exemplo, remoção de parte ou todo um tumor).
[000276] Inibidores de CK2 conforme descrito aqui incluem, mas não estão limitados a, os compostos de qualquer uma das fórmulas descritas nos Pedidos de Patente Internacionais Nos. PCT/US2007/077464, PCT/US2008/074820 e PCT/US2009/035609 e Pedidos Provisórios U.S. Nos. de Série 61/170.468 (depositado em 17 de Abril de 2009), 61/242.227 (depositado em 14 de Setembro de 2009), 61/180.090 (depositado em 20 de Maio de 2009), 61/218.318 (depositado em 18 de Junho de 2009), 61/179.996 (depositado em 20 de Maio de 2009), 61/218.214 (depositado em 14 de Junho de 2009), 61/41.806 (depositado em 11 de Setembro de 2009), 61/180.099 (depositado em 20 de Maio de 2009), 61/218.347 (depositado em 18 de Junho de 2009), 61/237.227 (depositado em 26 de Agosto de 2009), 61/243.107 (depositado em 16 de Setembro de 2009) e 61/243.104 (depositado em 16 de Setembro de 2009), os conteúdos de cada um dos quais são aqui incorporados por referência na íntegra. Inibidores de CK2 podem ser sintetizados através de métodos conhecidos na técnica, incluindo métodos divulgados nos Pedidos de Patente Internacionais Nos. PCT/US2007/077464, PCT/US2008/074820 e PCT/US2009/035609.
[000277] Em uma modalidade da presente invenção, o inibidor de CK2 é um composto tendo a Fórmula Estrutural (A):
Figure img0002
ou um sal, solvato e/ou profármaco do mesmo;
[000278] em que o grupo rotulado α representa um anel aromático ou heteroaromático de 5 ou 6 elementos fundido sobre o anel contendo Q1, em que α é um anel de arila com 6 elementos opcionalmente contendo um ou mais átomos de nitrogênio como elementos do anel ou um anel de arila com 5 elementos selecionado de tiofeno e tiazola;
[000279] Q1 é C=X, Q2 é NR5e a ligação entre Q1 e Q2 é uma ligação simples; ou Q1 é C-X-R5, Q2 é N e a ligação entre Q1 e Q2 é uma ligação dupla; e
[000280] em que X representa O, S ou NR4;
[000281] cada Z1, Z2, Z3 e Z4 é N ou CR3 e um ou mais de Z1, Z2, Z3 e Z4 é CR3;
[000282] cada R3 é independentemente H ou um grupo C1-C8 alquila, C2-C8 heteroalquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, C1-C8 acila, C2-C8 heteroacila, C6- C10 arila, C5-C12 heteroarila, C7-C12 arilalquila ou C6-C12 heteroarilalquila opcionalmente substituído,
[000283] ou cada R3 é halo, OR, NR2, NROR, NRNR2, SR, SOR, SO2R, SO2NR2, NRSO2R, NRCONR2, NRCOOR, NRCOR, CN, COOR, CONR2, OOCR, COR OU NO2I
[000284] em que cada R é independentemente H ou C1-C8 alquila, C2-C8 heteroalquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, C1-C8 acila, C2-C8 heteroacila, C6- C10 arila, C5-C10 heteroarila, C7-C12 arilalquila ou C6-C12 heteroarilalquila,
[000285] e em que dois R sobre o mesmo átomo ou sobre átomos adjacentes podem ser ligados para formar um anel de 3-8 elementos, opcionalmente contendo um ou mais N, O ou S;
[000286] e cada grupo R e cada anel formado pela ligação de dois grupos R juntos é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes selecionados de halo, =0, =N-CN, =N-OR', =NR', OR', NR'2, SR', SO2R', SO2NR'2, NR'SO2R', NR'CONR'2, NR'COOR', NR'COR', CN, COOR', CONR'2, OOCR', COR' e NO2,
[000287] em que cada R' é independentemente H, C1-C6 alquila, C2- C6 heteroalquila, C1-C6 acila, C2-C6 heteroacila, C6-C10 arila, C5-C10 heteroarila, C7-12 arilalquila ou C6-12 heteroarilalquila, cada de o qual é opcionalmente substituída por um ou mais grupos selecionada de halo, C1-C4 alquila, C1-C4 heteroalquila, C1-C6 acila, C1-C6 heteroacila, hidróxi, amino e =0;
[000288] e em que dois R' podem ser ligados para formar um anel de 3-7 elementos opcionalmente contendo até três heteroátomos selecionados de N, O e S,
[000289] R4 é H ou elemento opcionalmente substituído selecionado do grupo consistindo em Ci-Ce alquila, C2-C6 heteroalquila e C1-C6 acila;
[000290] cada R5 é independentemente H ou um elemento opcionalmente substituído selecionado do grupo consistindo em C1-10 alquila, C2-10 alquenila, C2-10 heteroalquila, C3-8 anel carbocíclico e C3-8 anel heterocíclico opcionalmente fundido a um carbociclo ou heterociclo opcionalmente substituído; ou R5 é uma C1-10 alquila, C2-10 alquenila ou C2-10 heteroalquila substituída por um C3-8 anel carbocíclico ou C3-8 anel heterocíclico opcionalmente substituído; e
[000291] em cada -NR4R5, R4 e R5, junto com N, podem formar um anel de 3-8 elementos opcionalmente substituído, 0 qual pode conter opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado de N, O e S como um elemento do anel;
[000292] contanto que, quando Q1 na Fórmula (A) é C-NHψ, onde $ é fenila opcionalmente substituída:
[000293] se 0 anel rotulado α é um anel de seis elementos contendo pelo menos um N como um elemento do anel, pelo menos um R3 presente deve ser um substituinte polar ou se cada R3 é H, então, <t> deve ser substituído; e
[000294] se 0 anel rotulado α é fenila e três de Z1-Z4 representam CH, então, Z2 não pode ser C-OR" e Z3 não pode ser NH2, NO2, NHC(=O)R" ou NHC(=O)-OR", onde R" é C1-C4 alquila.
[000295] Em uma modalidade da Fórmula (A), 0 composto é representado pela Fórmula Estrutural I, II, III ou IV:
Figure img0003
Figure img0004
ou um sal, solvato e/ou profármaco dos mesmos;
[000296] em que:
[000297] cada Z 1 , Z2 , Z3 e Z4 é N ou CR3 ;
[000298] cada de Z5 , Z6 , Z7 e Z8 é N ou CR6 ;
[000299] nenhum, um ou dois de Z1 -Z 4 são N e nenhum, um ou dois de Z5 -Z 8 são N;
[000300] cada R3 e cada R6 são, independentemente, H ou um grupo C1-C8 alquila, C2-C8 heteroalquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, C1-C8 acila, C2-C8 heteroacila, C6-C10 arila, C5-C12 heteroarila, C7-C12 arilalquila ou C6-C12 heteroarilalquila opcionalmente substituído,
[000301] ou cada R3 e cada R6 é independentemente halo, OR, NR2, NROR, NRNR2, SR, SOR, SO2R, SO2NR2, NRSO2R, NRCONR2, NRCOOR, NRCOR, CN, COOR, CONR2, OOCR, COR, substituinte polar, bioisóstero de carbóxi, COOH ou NO2,
[000302] em que cada R é independentemente H ou C1-C8 alquila, C2-C8 heteroalquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, C1-C8 acila, C2-C8 heteroacila, C6- C10 arila, C5-C10 heteroarila, C7-C12 arilalquila ou C6-C12 heteroarilalquila,
[000303] e em que dois R sobre o mesmo átomo ou sobre átomos adjacentes podem ser ligados para formar um anel de 3-8 elementos, opcionalmente contendo um ou mais N, O ou S;
[000304] e cada grupo R e cada anel formado pela ligação de dois grupos R juntos é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes selecionados de halo, =0, =N-CN, =N-OR', =NR', OR', NR'2, SR', SO2R', SO2NR'2, NR'SO2R', NR'CONR'2, NR'COOR', NR'COR', CN, COOR', CONR'2, OOCR', COR' e N02,
[000305] em que cada R'é independentemente H, C1-C6 alquila, C2- C6 heteroalquila, C1-C6 acila, C2-C6 heteroacila, C6-C10 arila, C5-C10 heteroarila, C7-12 arilalquila ou C6-12 heteroarilalquila, cada de 0 qual é opcionalmente substituída por um ou mais grupos selecionada de halo, C1-C4 alquila, C1-C4 heteroalquila, C1-C6 acila, C1-C6 heteroacila, hidróxi, amino e =0;
[000306] e em que dois R' podem ser ligados para formar um anel de 3-7 elementos opcionalmente contendo até três heteroátomos selecionada de N, O e S;
[000307] R4 é H ou um elemento opcionalmente substituído selecionado do grupo consistindo em C1-C6 alquila, C2-C6 heteroalquila e C1-C6 acila;
[000308] cada R5 é independentemente H ou um elemento opcionalmente substituído selecionado do grupo consistindo em C1-10 alquila, C2-10 alquenila, C2-10 heteroalquila, C3-8 anel carbocíclico e C3-8 anel heterocíclico opcionalmente fundido a um anel carbocíclico ou heterocíclico opcionalmente substituído adicional; ou R5 é a C1-10 alquila, C2-10 alquenila ou C2-10 heteroalquila substituída por um C3-8 anel carbocíclico ou C3-8 anel heterocíclico opcionalmente substituído; e
[000309] em cada -NR4R5, R4 e R5, junto com N, podem formar um anel de 3-8 elementos opcionalmente substituído, 0 qual pode conter opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado de N, O e S como um elemento do anel;
[000310] contanto que, quando -NR4R5 na Fórmula (I) é -NHψ, onde ψ é fenila opcionalmente substituída:
[000311] se todos de Z5-Z8 são CH ou um de Z5-Z8 é N, pelo menos um de Z1-Z4 é CR3 e pelo menos um R3 deve ser um substituinte não hidrogênio; ou
[000312] se cada R3 é H, então, $ deve ser substituído; ou
[000313] se todos de Z5-Z8 são CH ou um de Z5-Z8 é N, então, Z2 não é C-OR" e Z3 não é NH2, NO2, NHC(=O)R" ou NHC(=O)-OR", onde R" é C1-C4 alquila.
[000314] Em uma modalidade de Formula I, 0 composto é representado pelas Fórmulas Estruturais la, lb, lc ou Id:
Figure img0005
ou um sal, solvato e/ou profármaco do mesmo; em que:
[000315] Z5 é N ou CR6A;
[000316] cada R6A, R6B, R6C e R8 independentemente é H ou um grupo C1-C8 alquila, C2-C8 heteroalquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, C1-C8 acila, C2-C8 heteroacila, C6-C10 arila, C5-C12 heteroarila, C7-C12 arilalquila ou C6-C12 heteroarilalquila opcionalmente substituído,
[000317] ou cada R6A, R6B, R6C e R8 independentemente é halo, CF3, CFN, OR, NR2, NROR, NRNR2, SR, SOR, SO2R, SO2NR2, NRSO2R, NRCONR2, NRCOOR, NRCOR, CN, COOR, bioisóstero de carbóxi, CONR2, OOCR, COR OU NO2,
[000318] R9é independentemente um grupo C1-C8 alquila, C2-C8 heteroalquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, C1-C8 acila, C2-C8 heteroacila, C6-C10 arila, C5-C12 heteroarila, C7-C12 arilalquila ou C6-C12 heteroarilalquila opcionalmente substituído ou
[000319] R9é independentemente halo, OR, NR2, NROR, NRNR2, SR, SOR, SO2R, SO2NR2, NRSO2R, NRCONR2, NRCOOR, NRCOR, CN, COOR, CONR2, OOCR, COR ou NO2,
[000320] em que cada R é independentemente H ou C1-C8 alquila, C2-C8 heteroalquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, C1-C8 acila, C2-C8 heteroacila, C6- C10 arila, C5-C10 heteroarila, C7-C12 arilalquila ou C6-C12 heteroarilalquila,
[000321] e em que dois R sobre 0 mesmo átomo ou sobre átomos adjacentes podem ser ligados para formar um anel de 3-8 elementos, opcionalmente contendo um ou mais N, O ou S;
[000322] e cada grupo R e cada anel formado pela ligação de dois grupos R juntos é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes selecionados de halo, =0, =N-CN, =N-OR', =NR', OR', NR'2, SR', SO2R', SO2NR'2J NR'SO2R', NR'CONR'2, NR'COOR', NR'COR', CN, COOR', CONR'2, OOCR', COR' e NO2,
[000323] em que cada R' é independentemente H, C1-C6 alquila, C2- C6 heteroalquila, C1-C6 acila, C2-C6 heteroacila, C6-C10 arila, C5-C10 heteroarila, C7-12 arilalquila ou C6-12 heteroarilalquila, cada de 0 qual é opcionalmente substituída por um ou mais grupos selecionados de halo, C1-C4 alquila, C1-C4 heteroalquila, C1-C6 acila, C1-C6 heteroacila, hidróxi, amino e =0;
[000324] e em que dois R' podem ser ligados para formar um anel de 3-7 elementos opcionalmente contendo até três heteroátomos selecionada de N, O e S; n é 0 a 4; e p é 0 a 4.
[000325] Em determinadas modalidades da Fórmula I, o composto é selecionado do grupo consistindo em:
Figure img0006
Figure img0007
Figure img0008
[000326] Em modalidades específicas dos métodos descritos aqui, o inibidor de CK2 é o Composto K (CX-4945):
Figure img0009
ou um sal ou éster farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[000327] Conforme usado aqui, o termo "Composto K" é usado permutavelmente com CX-4945 e refere-se a um inibidor AT- competitivo de primeira classe potente, seletivo e oralmente disponível de CK2 com propriedades favoráveis do fármaco. CX-4945 está sendo investigado atualmente para o tratamento de diversos tipos de câncer, incluindo tumores sólidos avançados, doença de Castleman e mieloma múltiplo. Vide, por exemplo, "CX-4945, an Orally Bioavailable Selective Inhibitor of Protein Kinase CK2, Inhibits Survival and Angiogenic Signaling and Exhibits Antitumor Efficacy", Siddiqui-Jain, A. et al., Cancer Research,enviado para publicação; e "Discovery and Structure Activity Relationship of CX-4945, a First-In-Class Potent, Selective and Orally Available Inhibitor of Protein Kinase CK2 for the Treatment of Cancer", Pierre, F. et al., J. Med. Chem.,a ser enviado. CX-4945 é urn inibidor extremamente potente de CK2, com uma IC50 para CK2 de 0,001 pM. Vide Figura 2, a qual mostra a atividade inibitória de CK2y do  CX-4945 em comparação com vários análogos de CX-4945. Conforme mostrado na Tabela 2, CX-4945 tem alta especificidade pelas subunidades CK2o e CK2o'. Tabela 2. CX-4945 é um inibidor de CK2 altamente seletivo
Figure img0010
[000328] Um estudo clínico em andamento em Fase I de CX-4945 em pacientes com tumores que expressam CK2 é descrito no Exemplo 1. Foi observado que CX-4945 inibe a proliferação celular em várias linhagens de células cancerígenas e é eficaz em múltiplos modelos de xenoenxerto de câncer. Além disso, CX-4945 está oralmente disponível através das espécies (%F 20-48), não tem inibição significativa in vitro de isoformas 5 CYP e o canal de hERG e não é mutagênico.
[000329] Conforme mostrado na Figura 3, CX-4945 mostra sensibilidade diferencial entre células cancerígenas e normais. Notavelmente, CX-4945 induz a níveis significativos de apoptose em células cancerígenas, enquanto que células normais permanecem não afetadas. In vivo, CX-4945 inibe o crescimento de tumor e marcadores farmacocinéticos em múltiplos modelos, incluindo modelos de câncer de mama e ovariano. Vide Figuras 4, 5A (Câncer de Mama) e 5B (Câncer Ovariano). Além disso, exposição de plasma total ao CX-4945 se correlaciona com reduções no volume de tumor em xenoenxertos BxPC- 3 (câncer pancreático). Vide Figura 6.
[000330] Em outras modalidades específicas, o inibidor de CK2 é um composto (Composto 1 ou Composto 2) tendo a fórmula:
Figure img0011
ou um sal ou farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
[000331] O Composto 1 exibiu uma IC50 de 6 nM para inibição de CK2; Composto 2 exibiu uma IC50 de cerca de 9 nM (quando comparado com CX-4945, 0 qual exibiu uma IC50 de 1 nM para inibição de CK2, vide Figura 1 e Tabela 2).
[000332] Em outras modalidades específicas, 0 inibidor de CK2 é selecionado de DRB, emodina, DMAT, TBB, resorufina, ácido elágico, IQA e quercetina.
[000333] Os compostos da invenção, conforme descrito acima, podem ser sintetizados usando métodos, técnicas e materiais conhecidos por aqueles versados no campo, tal como descrito, por exemplo, em March, ADVANCED ORGANIC CHEMISTR, 4aEd., (Wiley 1992); Carey e Sundberg, ADVANCED ORGANIC CHEMISTY 3aEd., Vols. A e B (Plenum 1992) e Green e Wuts, PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC SYNTHESIS, 2aEd. (Wiley 1991). Materiais de iniciação úteis para o preparo dos compostos da invenção e intermediários dos mesmos estão comercialmente disponíveis de fontes tais como Aldrich Chemical Co. (Milwaukee, Wis.), Sigma Chemical Co. (St. Louis, Mo.), Maybridge (Cornwall, Inglaterra), Asinex (Winston-Salem, NC), ChemBridge (San Diego, CA), ChemDiv (San Diego, CA), SPECS (Delft, Países Baixos), Timtec (Newark, DE) ou, alternativamente, podem ser preparados através de métodos sintéticos bem conhecidos (vide, por exemplo, Harrison et al.,"Compendium of Synthetic Organic Methods", Vols. 1-8 (John Wiley and Sons, 1971-1996); "Beilstein Handbook of Organic Chemistry", Beilstein Institute of Organic Chemistry, Frankfurt, Alemanha; Feiser et al.,"Reagents for Organic Synthesis", Volumes 1- 21, Wiley Interscience; Trost etal.,"Comprehensive Organic Synthesis", Pergamon Press, 1991; "Theilheimer's Synthetic Methods of Organic Chemistry", Volumes 1-45, Karger, 1991; March, "Advanced Organic Chemistry", Wiley Interscience, 1991; Larock "Comprehensive Organic Transformations", VCH Publishers, 1989; Paquette, "Enciclopédia of Reagents for Organic Synthesis", 3a Edição, John Wiley & Sons, 1995). Outros métodos para a síntese dos presentes compostos e/ou materiais de iniciação dos mesmos são descritos na técnica ou serão prontamente evidentes para aqueles versados no campo. Alternativas aos reagentes e/ou grupos de proteção podem ser encontradas nas referências fornecidas acima e em outros compêndios bem conhecidos por aqueles versados no campo.
[000334] O preparo dos presentes compostos pode incluir uma ou mais etapas de proteção e desproteção (por exemplo, a formação e remoção de grupos acetal). Orientação quanto à seleção de grupos de proteção adequados pode ser encontrada, por exemplo, em Greene &Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis," Wiley Interscience, 1999. Além disso, o preparo pode também incluir várias purificações, tais como cromatografia em coluna, cromatografia rápida, cromatografia em camada fina (Thin-Layer Chromatography - TLC), recristalização, destilação, cromatografia de líquido em alta pressão (High-Pressure Liquid Chromatography - HPLC) e semelhantes. Também, vários métodos bem conhecidos na técnica química para a identificação e quantificação de produtos de reação química, tais como ressonância magnética nuclear de prótons e carbono-13 (1H e 13C NMR), espectroscopia de infravermelho e ultravioleta (IR e UV), cristalografia de raios X, análise elemental (Elemental Analysis - EA), HPLC e espectroscopia de massa (Mass Spectroscopy - MS), podem ser usados também. O preparo pode também envolver quaisquer métodos de proteção e desproteção, purificação e identificação e quantificação que são bem conhecidos na técnica química.
[000335] Descrições adicionais relacionadas ao preparo dos presentes inibidores de CK2 podem ser encontradas no Pedido de Utilidade U.S. No. 11/849.230, o qual foi depositado em 31 de Agosto de 2007 e publicado como US 2009/0105233 A1 em 23 de Abril de 2009. Os conteúdos do pedido são aqui incorporados por referência na íntegra para todas as finalidades.
[000336] Os termos "composto(s) da invenção", "esses compostos", "tal(is) composto(s)", "o(s) composto(s)" e "o(s) presente(s) composto(s)"referem-se a compostos abrangidos pelas Fórmulas Estruturais divulgadas aqui, por exemplo, Fórmulas (A), (I), (II), (III), (IV), (la), (lb), (lc) e (Id), incluindo quaisquer compostos específicos dentro dessas fórmulas estruturais divulgadas aqui. Os compostos podem ser rotulados por sua estrutura química e/ou nome químico. Quando a estrutura química e o nome químico entram em conflito, a estrutura química é determinante da identidade do composto. Além disso, os presentes compostos podem inibir a atividade biológica da proteína CK2 e, desse modo, são também referidos aqui como "(um) inibidor(es)" ou "inibidor(es) de CK2". Compostos de Fórmulas (A), (I), (II), (III), (IV), (la), (lb), (lc) e (Id), incluindo quaisquer compostos específicos descritos aqui, são "inibidores" exemplificativos.
[000337] Os presentes compostos podem conter um ou mais centros quirais e/ou ligações duplas e, portanto, podem existir como estereoisômeros, tais como isômeros com ligação dupla (isto é, isômeros geométricos, tais como E e Z), enantiômeros ou diastereômeros. A invenção inclui cada uma das formas estereoisoméricas isoladas, bem como misturas de estereoisômeros em graus variados de pureza quiral, incluindo misturas racêmicas e misturas de diastereômeros. Consequentemente, as estruturas químicas representadas aqui abrangem todos os possíveis enantiômeros e estereoisômeros das misturas enantioméricas e estereoisoméricas. Misturas enantioméricas e estereoisoméricas podem ser decompostas em seus enantiômeros ou estereoisômeros componentes usando técnicas de separação ou técnicas de síntese quiral bem conhecidas por aqueles versados no campo. A invenção inclui cada uma das formas estereoisoméricas isoladas, bem como misturas de estereoisômeros em graus variados de pureza quiral, incluindo misturas racêmicas. Ela também abrange os vários diastereômeros. Outras estruturas podem aparecer para representar um isômero específico, mas isso é meramente por conveniência e não se destina a limitar a invenção ao isômero de olefina representado.
[000338] Os presentes compostos podem também existir em várias formas tautoméricas e a representação aqui de um tautômero e por conveniência apenas e também deve ser entendida como abrangendo outros tautômeros da forma mostrada. Consequentemente, as  estruturas químicas representadas aqui abrangem todas as possíveis formas tautoméricas dos compostos ilustrados. O termo "tautômero", conforme usado aqui, refere-se a isómeros que mudam para um outro com grande facilidade, de modo que eles podem existir juntos em equilíbrio. Por exemplo, cetona e enol são duas formas tautoméricas de um composto. Em outro exemplo, um derivado de 1,2,4-triazola substituído pode existir em pelo menos três formas tautoméricas, conforme mostrado abaixo:
Figure img0012
RT1é H ou alquila opcionalmente substituída, RT2 é uma arila opcionalmente substituída.
[000339] Os compostos da invenção frequentemente têm grupos ionizáveis de modo a serem capazes de preparar sais. Nesse caso, sempre que referência é feita ao composto, será entendido na técnica que um sal farmaceuticamente aceitável pode também ser usado. Esses sais podem ser sais de adição de ácido envolvendo ácidos inorgânicos ou orgânicos ou os sais podem, no caso de formas ácidas dos compostos da invenção, ser preparados a partir de bases inorgânicas ou orgânicas. Frequentemente, os compostos são preparados ou usados como sais farmaceuticamente aceitáveis preparados como produtos da adição de ácidos ou bases farmaceuticamente aceitáveis. Ácidos e bases farmaceuticamente aceitáveis adequados são bem conhecidos na técnica, tais como ácido clorídrico, sulfúrico, hidrobrômico, acético, láctico, cítrico ou tartárico para formação de sais de adição de ácido e hidróxido de potássio, hidróxido de sódio, hidróxido de amónio, cafeína, várias aminas e semelhantes para formação de sais básicos. Métodos para preparo dos sais apropriados são bem estabelecidos na técnica. Em alguns casos, os compostos podem conter um grupo funcional ácido e um básico, caso no qual eles podem ter dois grupos ionizáveis e ainda não tem carga líquida. Métodos padrões para o preparo de sais farmaceuticamente aceitáveis e suas formulações são bem conhecidos na técnica e são divulgados em várias referências incluindo, por exemplo, "Remington: The Science and Practice of Pharmacy", A. Gennaro, ed., 20a edição, Lippincott, Williams & Wilkins, Filadélfia, PA.
[000340] "Solvato", conforme usado aqui, significa um composto formado através de solvatação (a combinação de moléculas de solvente com moléculas ou ions do soluto) ou um agregado que consiste de um íon ou molécula de soluto, isto é, um composto da invenção, com uma ou mais moléculas de solvente. Quando água é o solvente, o solvato correspondente é "hidrato". Exemplos de hidrato incluem, mas não estão limitados a, hemi-hidrato, mono-hidrato, di-hidrato, tri-hidrato, hexa-hidrato, etc. Será entendido por aqueles versados no campo que o sal e/ou profármaco farmaceuticamente aceitável do presente composto podem também existir em uma forma de solvato. O solvato é, tipicamente, formado via hidratação, a qual é parte do preparo do presente composto ou através de absorção natural de umidade pelo composto anidro da presente invenção.
[000341] O termo "éster" significa qualquer éster do presente composto no qual qualquer uma das funções -COOH da molécula é substituída por uma função -COOR, no qual a porção R do éster é qualquer grupo contendo carbono o qual forma uma porção éster estável incluindo, mas não limitado a, alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, cicloalquilalquila, arila, arilalquila, heterociclila, heterociclilalquila e derivados substituídos dos mesmos. Os ésteres hidrolisáveis dos presentes compostos são os compostos de carboxila que estão presentes na forma de grupos éster hidrolisáveis éster. Isto é, esses ésteres são farmaceuticamente aceitáveis e podem ser hidrolisados ao ácido carboxílico correspondente in vivo. Esses ésteres podem ser aqueles convencionais, incluindo alcanoilóxialquil ésteres inferiores, por exemplo, pivaloiloximetil e 1-pivaloilóxietil ésteres; alcóxicarbonilalquil ésteres inferiores, por exemplo, metóxicarboniloximetil, 1-etóxicarbonilóxietil e 1-isopropilcarbonilóxietil ésteres; alcoximetil ésteres inferiores, por exemplo, metoximetil ésteres, lactonil ésteres, benzofurano ceto ésteres, tiobenzofurano ceto ésteres; alcanoilaminometil ésteres inferiores, por exemplo, acetilaminometil ésteres. Outros ésteres podem também ser usados, tais como benzil ésteres e ciano metil ésteres. Outros exemplos desses ésteres incluem: (2,2-dimetil-1 -óxipropilóxi)metil ésteres; (1RS)-1-acetóxietil ésteres, 2- [(2-metilpropilóxi)carbonil]-2-pentenil ésteres, 1-[[(1-metiletóxi)carbonil]- óxi]etil ésteres; isopropilóxicarbonilóxietil ésteres, (5-metil-2-oxo-1,3- dioxola-4-il)metil ésteres, 1-[[(ciclohexilóxi)carbonil]óxi]etil ésteres; 3,3- dimetil-2-oxobutil ésteres. É óbvio para aqueles versados no campo que ésteres hidrolisáveis dos compostos da presente invenção podem ser formados nas carboxilas livres dos referidos compostos usando métodos convencionais. Ésteres representativos incluem pivaloiloximetil ésteres, isopropilóxicarbonilóxietil ésteres e (5-metil-2-oxo-1,3-dioxola- 4-il)metil ésteres.
[000342] O termo "profármaco" refere-se a um precursor de um composto farmaceuticamente ativo no qual o precursor em si pode ou não ser farmaceuticamente ativo mas, quando de administração, será convertido, quer metabolicamente ou de outro modo, no composto farmaceuticamente ativo ou fármaco de interesse. Por exemplo, um profármaco pode ser uma forma de éster, éter ou amida de um composto farmaceuticamente ativo. Vários tipos de profármaco foram preparados e divulgados para uma variedade de produtos farmacêuticos. Vide, por exemplo, Bundgaard, H. e Moss, J., J. Pharm. Sei. 78: 122-126 (1989). Assim, aqueles versados no campo sabem como preparar esses profármacos com técnicas comumente empregadas de síntese orgânica.
[000343] "Grupos de proteção" referem-se a um agrupamento de átomos que, quando preso a um grupo funcional reativo em uma molécula, disfarça, reduz ou impede a reatividade do grupo funcional. Exemplos de grupos de proteção podem ser encontrados Green et al., "Protective Groups in Organic Chemistry", (Wiley, 2aed. 1991) e Harrison et al.,"Compendium of Synthetic Organic Methods", Vols. 1-8 (John Wiley and Sons, 1971-1996). Grupos de amino proteção representativos incluem, mas não estão limitados a, grupos formila, acetila, trifluoroacetila, benzila, benzilóxicarbonila ("CBZ"), terc- butóxicarbonila ("Boc"), trimetil-silila ("TMS"), 2-trimetil-silil-etano- sulfonila ("SES"), tritila e tritila substituída, alilóxicarbonila, 9- fluorenilmetilóxicarbonila ("FMOC"), nitro-veratrilóxicarbonila ("NVOC") e semelhantes. Grupos de hidróxi proteção representativos incluem, mas não estão limitados a, aqueles onde o grupo hidróxi é acilado ou alquilado, tal como benzil e tritil éteres, bem como alquil éteres, tetra- hidropiranoil éteres, trialquil-silil éteres e alil éteres.
[000344] Conforme usado aqui, o termos "alquila", "alquenila" e "alquinila" incluem radicais hidrocarbila monovalentes de cadeia reta, de cadeia ramificada e cíclicos e combinações desses, os quais contêm apenas C e H quando eles são não substituídos. Exemplos incluem metila, etila, isobutila, ciclohexila, ciclopentiletila, 2-propenila, 3-butinila e semelhantes. O número total de átomos de carbono em cada um de tais grupos é algumas vezes descritos aqui, por exemplo, quando o grupo pode conter até dez átomos de carbono, ele pode ser representado como 1-10C ou como C1-C10 ou C1-10. Quando é permitido que heteroátomos (N, O e S tipicamente) substituam átomos de carbono, conforme em grupos heteroalquila, por exemplo, os números que descrevem o grupo, embora ainda escritos, por exemplo, como C1-C6, representam a soma dos números de átomos de carbono no grupo mais o número de tais heteroátomos que são incluídos como substituintes para átomos de carbono na parte principal do anel ou cadeia que está sendo descrita.
[000345] Tipicamente, os substituintes alquila, alquenila e alquinila da invenção contêm 1-10C (alquila) ou 2-10C (alquenila ou alquinila). De preferência, eles contêm 1-8C (alquila) ou 2-8C (alquenila ou alquinila). Algumas vezes, eles contêm 1-4C (alquila) ou 2-4C (alquenila ou alquinila). Um único grupo pode incluir mais de um tipo de ligação múltipla ou mais de uma ligação múltipla; tais grupos são incluídos dentro da definição do termo "alquenila" quando eles contêm pelo menos uma ligação dupla carbono-carbono e estão incluídos dentro do termo "alquinila" quando eles contêm pelo menos uma ligação tripla carbono-carbono.
[000346] Grupos alquila, alquenila e alquinila são frequentemente opcionalmente substituídos até o ponto em que tal substituição faz sentido quimicamente. Substituintes típicos incluem, mas não estão limitados a, halo, =0, =N-CN, =N-OR, =NR, OR, NR2, SR, SO2R, SO2NR2, NRSO2R, NRCONR2, NRCSNR2, NRC(=NR)NR2, NRCOOR, NRCOR, CN, C=CR, COOR, CONR2, OOCR, COR e NO2, em que cada R é independentemente H, C1-C8 alquila, C2-C8 heteroalquila, C1-C8 acila, C2-C8 heteroacila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2- C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, C6-C10 arila ou C5-C10 heteroarila e cada R é opcionalmente substituída por halo, =0, =N-CN, =N-OR', =NR', OR', NR'2I SR', SO2R', SO2NR'2, NR'SO2R', NR'CONR'2, NR'CSNR'2, NR'C(=NR')NR'2, NR'COOR', NR'COR', CN, C^CR', COOR', CONR'2, OOCR', COR' e NO2, em que cada R' é independentemente H, C1-C8 alquila, C2-C8 heteroalquila, C1-C8 acila, C2-C8 heteroacila, C6-C10 arila ou C5-C10 heteroarila. Grupos alquila, alquenila e alquinila podem também ser substituídos por C1-C8 acila, C2-C8 heteroacila, C6-C10 arila ou C5-C10 heteroarila, cada um dos quais pode ser substituído pelos substituintes que são apropriados para o grupo em particular. Onde dois R ou R' estão presentes sobre o mesmo átomo (por exemplo, NR2) ou sobre átomos adjacentes que são ligados juntos (por exemplo, -NR-C(O)R), os dois grupos R ou R' podem ser tomados junto com os átomos aos quais eles estão conectados para formar um anel de 5-8 elementos, 0 qual pode ser substituído por C1- C4 alquila, C1-C4 acila, halo, C1-C4 alcóxi e semelhantes podem conter um heteroátomo adicional selecionado de N, O e S como um elemento do anel.
[000347] "Opcionalmente substituído", conforme usado aqui, indica que 0 grupo ou grupos em particular que estão descritos podem não ter substituintes hidrogênio ou 0 grupo ou grupos podem ter um ou mais substituintes não hidrogênio. Se não de outro modo especificado, 0 número total de tais substituintes que podem estar presentes é igual ao número de átomos de H presentes sobre a forma não substituída do grupo que está sendo descrito. Onde um substituinte opcional é preso via uma ligação dupla, tal como um oxigênio de carbonila (=0), 0 grupo ocupa duas valências disponíveis, de modo que o número total de substituintes que pode ser incluído é reduzido de acordo com 0 número de valências disponíveis.
[000348] "Substituído," quando usado para modificar um grupo ou radical especificado, significa que um ou mais átomos de hidrogênio do grupo ou radical especificado são cada um, independentemente uns dos outros, substituídos pelo(s) mesmo(s) ou diferente(s) substituinte(s).
[000349] Grupos substituintes úteis para substituição de átomos de carbono saturados no grupo ou radical especificado incluem, mas não estão limitados a -Ra, halo, -O‘, =0, -ORb, -SRb, -S-, =S, -NRCRC, =NRb, =N-ORb, trihalometila, -CF3, -CN, -OCN, -SCN, -NO, -NO2, =N2, -N3, - S(O)2Rb, -S(O)2NRb, -S(O)2O-, -S(O)2ORb, -OS(O)2Rb, -OS(O)2O-, - OS(O)2ORb, -P(O)(O-)2, -P(O)(ORb)(O'), -P(O)(ORb)(ORb), -C(O)Rb, - C(S)Rb, -C(NRb)Rb, -C(O)O’, -C(O)ORb, -C(S)ORb, -C(O)NRCRC, - C(NRb)NRcRc, -OC(O)Rb, -OC(S)Rb, -00(0)0; -0C(0)0Rb, - 0C(S)0Rb, -NRbC(0)Rb, -NRbC(S)Rb, -NRbC(0)0-, -NRbC(0)0Rb, - NRbC(S)0Rb, -NRbC(0)NRcRc, -NRbC(NRb)Rb e -NRbC(NRb)NRcRc, onde Raé selecionado do grupo consistindo em alquila, cicloalquila, heteroalquila, cicloheteroalquila, arila, arilalquila, heteroarila e heteroarilalquila; cada Rbé independentemente hidrogênio ou Ra; e cada Rcé independentemente Rb ou, alternativamente, os dois Rcs podem ser tornados juntos com o átomo de nitrogênio ao qual eles estão ligados para formar uma cicloheteroalquila de 4, 5, 6 ou 7 elementos a qual pode opcionalmente incluir de 1 a 4 dos mesmos ou diferentes heteroátomos adicionais selecionados do grupo consistindo em O, N e S. Como exemplos específicos, -NRCRC se destina a incluir -NH2, -NH- alquila, N-pirrolidinila e N-morfolinila. Como outro exemplo específico, uma alquila substituída se destina a incluir -alquileno-O-alquila, - alquileno-heteroarila, -alquileno-cicloheteroalquila, -alquileno-C(O)ORb, -alquileno-C(O)NRbRb e -CH2-CH2-C(O)-CH3. O um ou mais grupos substituintes, tomados junto com os átomos aos quais eles estão ligados, podem formar um anel cíclico incluindo cicloalquila e cicloheteroalquila.
[000350] Similarmente, grupos substituintes úteis para substituição de átomos de carbono insaturados no grupo ou radical especificado incluem, mas não estão limitados a, -Ra, halo, -O; -ORb, -SRb, -S; - NRCRC, trihalometila, -CF3, -CN, -OCN, -SCN, -NO, -NO2, -N3, -S(O)2Rb, -S(O)2O-, -S(O)2ORb, -OS(O)2Rb, -OS(O)2O’, -OS(O)2ORb, -P(O)(Q-)2, - P(O)(ORb)(O-), -P(O)(ORb)(ORb), -C(O)Rb, -C(S)Rb, -C(NRb)Rb, -C(O)O’ , -C(O)ORb, -C(S)ORb, -C(O)NRCRC, -C(NRb)NRcRc, -OC(O)Rb, - OC(S)Rb, -OC(O)O; -OC(O)ORb, -OC(S)ORb, -NRbC(O)Rb, - NRbC(S)Rb, -NRbC(O)O-, -NRbC(O)ORb, -NRbC(S)ORb, NRbC(O)NRcRc, -NRbC(NRb)Rb e -NRbC(NRb)NRcRc, onde Ra, Rb e Rc são conforme previamente definido.
[000351] Grupos substituintes úteis para substituição de átomos de nitrogênio em grupos heteroalquila e cicloheteroalquila incluem, mas não estão limitados a, -Ra, -O; -ORb, -SRb, -S', -NRCRC, trihalometila, - CF3, -CN, -NO, -NO2, -S(O)2Rb, -S(O)2O’, -S(O)2ORb, -OS(O)2Rb, - OS(O)2O-, -OS(O)2ORb, -P(O)(O-)2, -P(O)(ORb)(O'), -P(O)(ORb)(ORb), - C(O)Rb, -C(S)Rb, -C(NRb)Rb, -C(O)ORb, -C(S)ORb, -C(O)NRCRC, - C(NRb)NRcRc, -OC(O)Rb, -OC(S)Rb, -OC(O)ORb, -OC(S)ORb, - NRbC(O)Rb, -NRbC(S)Rb, -NRbC(O)ORb, -NRbC(S)ORb, NRbC(O)NRcRc, -NRbC(NRb)Rb e -NRbC(NRb)NRcRc, onde Ra, Rb e Rc são conforme previamente definido.
[000352] Substituintes "acetileno"são grupos 2-10C alquinila que são opcionalmente substituídos e são da fórmula -C=C-Ra, em que Ra é H ou C1-C8 alquila, C2-C8 heteroalquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, C1-C8 acila, C2-C8 heteroacila, C6-C10 arila, C5-C10 heteroarila, C7-C12 arilalquila ou C6-C12 heteroarilalquila, e cada grupo R é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes selecionados de halo, =0, =N- CN, =N-OR', =NR', OR', NR'2, SR', SO2R', SO2NR'2, NR'SO2R', NR'CONR'2, NR'CSNR'2, NR'C(=NR')NR'2, NR'COOR', NR'COR', CN, COOR', CONR'2, OOCR', COR' e NO2, em que cada R' é independentemente H, C1-C6 alquila, C2-C6 heteroalquila, C1-C6 acila, C2-C6 heteroacila, C6-C10 arila, C5-C10 heteroarila, C7-12 arilalquila ou C6-12 heteroarilalquila, cada dos quais é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halo, C1-C4 alquila, C1-C4 heteroalquila, C1-C6 acila, C1-C6 heteroacila, hidróxi, amino e =0; e em que dois R' podem ser ligados para formar um anel de 3-7 elementos opcionalmente contendo até três heteroátomos selecionados de N, O e S. Em algumas modalidades, Ra de -C=C-Ra é H ou Me. Onde dois R ou R'estão presentes sobre o mesmo átomo (por exemplo, NR2) ou sobre átomos adjacentes que são ligados juntos (por exemplo, -NR- C(O)R), os dois grupos R ou R pode ser tomados juntos com os átomos aos quais eles estão conectados para formar um anel de 5-8 elementos, 0 qual pode ser substituído por C1-C4 alquila, C1-C4 acila, halo, C1-C4 alcóxi e semelhantes e pode conter um heteroátomo adicional selecionado de N, O e S como um elemento do anel.
[000353] "Heteroalquila", "heteroalquenila" e "heteroalquinila" e semelhantes são definidos similarmente aos grupos hidrocarbila (alquila, alquenila e alquinila) correspondentes, mas os termos 'hetero'referem-se a grupos que contêm 1-3 heteroátomos O, S ou N ou combinações dos mesmos dentro do resíduo da parte principal; assim, pelo menos um átomo de carbono de um grupo alquila, alquenila ou alquinila correspondente é substituído por um dos heteroátomos especificados para formar um grupo heteroalquila, heteroalquenila ou heteroalquinila. Os tamanhos típicos preferidos para heteroformas de grupos alquila, alquenila e alquinila são, em geral, os mesmos conforme para os grupos hidrocarbila correspondentes e os substituintes quem podem estar presentes sobre as heteroformas são os mesmos conforme aqueles descritos acima para os grupos hidrocarbila. Por razões de estabilidade química, também deve ser entendido que, a menos que de outro modo especificado, tais grupos não incluem mais de dois heteroátomos contíguos, exceto onde um grupo oxo está presente sobre N ou S, conforme em um grupo nitro ou sulfonila.
[000354] Embora "alquila", conforme usado aqui, inclua grupos cicloalquila e cicloalquilalquila, 0 termo "cicloalquila" pode ser usado aqui para descrever um grupo carbocíclico não aromático que está conectado à molécula via um átomo de carbono e "cicloalquilalquila" pode ser usado para descrever um grupo carbocíclico não aromático que está conectado à molécula através de um ligante de alquila. Similarmente, "heterociclila" pode ser usado para descrever um grupo cíclico não aromático que contém pelo menos um heteroátomo como um elemento do anel e que está conectado à molécula via um átomo do anel, o qual pode ser C ou N; e "heterociclilalquila" pode ser usado para descrever tal grupo que está conectado à outra molécula através de um ligante. Os tamanhos e substituintes que são adequados para os grupos cicloalquila, cicloalquilalquila, heterociclila e heterociclilalquila são os mesmos conforme aqueles descritos acima para grupos alquila. Conforme usado aqui, esses termos também incluem anéis que contêm uma ligação dupla ou duas, contanto que o anel não seja aromático.
[000355] Conforme usado aqui, "acila" abrange grupos compreendendo um radical alquila, alquenila, alquinila, arila ou arilalquila preso em uma das duas posições de valência disponíveis de um átomo de carbono da carbonila e heteroacila refere-se aos grupos correspondentes em que pelo menos um outro carbono que não o carbono da carbonila foi substituído por um heteroátomo escolhido de N, O e S. Assim, heteroacila inclui, por exemplo, -C(=O)OR e - C(=O)NR2, bem como -C(=O)-heteroarila.
[000356] Grupos acila e heteroacila são ligados a qualquer grupo ou molécula à qual eles estão presos através da valência aberta do átomo de carbono na carbonila. Tipicamente, eles são grupos C1-C8 acila, os quais incluem grupos formila, acetila, pivaloíla e benzoíla e C2-C8 heteroacila, os quais incluem metóxiacetila, etóxicarbonila e 4- piridinoíla. Os grupos hidrocarbila, grupos arila e heteroformas de tais grupos que compreendem um grupo acila ou heteroacila podem ser substituídos pelos substituintes descritos aqui, como substituintes geralmente adequados para cada um dos componentes correspondentes do grupo acila ou heteroacila.
[000357] Porção "aromática" ou porção "arila" refere-se a uma porção monocíclica ou bicíclica fundida tendo as características bem conhecidas de aromaticidade; exemplos incluem fenila e naftila. Similarmente, "heteroaromático" e "heteroarila"referem-se a tais sistemas de anel monocíclico ou bicíclico fundido os quais contêm, como elementos do anel, um ou mais heteroátomos selecionados de O, S e N. A inclusão de um heteroátomo permite aromaticidade em anéis com 5 elementos, bem como anéis com 6 elementos. Sistemas heteroaromáticos típicos incluem grupos C5-C6 aromáticos monocíclicos, tais como piridila, pirimidila, pirazinila, tienila, furanila, pirrolila, pirazolila, tiazolila, oxazolila e imidazolila e as porções bicíclicas fundidas formadas fundindo um desses grupos monocíclicos com um anel de fenila ou com qualquer um dos grupos heteroaromáticos monocíclicos para formar um grupo C8-C10 bicíclico, tal como indolila, benzimidazolila, indazolila, benzotriazolila, isoquinolila, quinolila, benzotiazolila, benzofuranila, pirazolopiridila, quinazolinila, quinoxalinila, cinolinila e semelhantes. Qualquer sistema de anel monocíclico ou bicíclico fundido o qual tem as características de aromaticidade em termos de distribuição de elétrons por todo o anel sistema está incluído nessa definição. Ela também inclui grupos bicíclicos onde pelo menos o anel o qual está diretamente preso ao restante da molécula tem as características de aromaticidade. Tipicamente, os sistema de anel contêm 5-12 átomos como elementos no anel. De preferência, as heteroarilas monocíclicas contêm 5-6 elementos no anel e as heteroarilas bicíclicas contêm 8-10 elementos no anel.
[000358] Porções arila e heteroarila podem ser substituídas por uma variedade de substituintes, incluindo C1-C8 alquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 alquinila, C5-C12 arila, C1-C8 acila e heteroformas desses, cada uma das quais pode, em si, ser ainda substituída; outros substituintes para porções arila e heteroarila incluem halo, OR, NR2, SR, SO2R, SO2NR2, NRSO2R, NRCONR2, NRCSNR2, NRC(=NR)NR2, NRCOOR, NRCOR, CN, C=CR, COOR, CONR2, OOCR, COR e NO2, em que cada R é independentemente H, C1-C8 alquila, C2-C8 heteroalquila, C2-C8 alquenila, C2-C8 heteroalquenila, C2-C8 alquinila, C2-C8 heteroalquinila, C6-C10 arila, C5-C10 heteroarila, C7-C12 arilalquila ou C6-C12 heteroarilalquila e cada R é opcionalmente substituído conforme descrito acima para grupos alquila. Onde dois R ou R' são presentes sobre 0 mesmo átomo (por exemplo, NR2) ou sobre átomos adjacentes que são ligados juntos (por exemplo, -NR-C(O)R), os dois grupos R ou R podem ser tomados junto com os átomos aos quais eles estão conectados para formar um anel de 5-8 elementos, 0 qual pode ser substituído por C1-C4 alquila, C1-C4 acila, halo, C1-C4 alcóxi e semelhantes e pode conter um heteroátomo adicional selecionado de N, O e S como um elemento do anel.
[000359] Os grupos substituintes sobre um grupo arila ou heteroarila podem, naturalmente, ser ainda substituídos pelos grupos descritos aqui, conforme adequado para cada tipos de tais substituintes ou para cada componente do substituinte. Assim, por exemplo, um substituinte arilalquila pode ser substituído sobre a porção arila por substituintes descritos aqui conforme típico para grupos arila e pode ser ainda substituído sobre a porção alquila por substituintes descritos aqui, conforme típico ou adequado para grupos alquila.
[000360] Similarmente, "arilalquila" e "heteroarilalquila"referem-se a sistemas de anel aromático e heteroaromático os quais são ligados, em seu ponto de fixação, através de um grupo de ligação, tal como um alquileno, incluindo ligantes substituídos ou não substituídos, saturados ou insaturados, cíclicos ou acíclicos. Tipicamente, 0 ligante é C1-C8 alquila ou uma heteroforma da mesma. Esses ligantes podem também incluir um grupo carbonila, assim, tornando os mesmos capazes de proporcionar substituintes como uma porção acila ou heteroacila. Um anel de arila ou heteroarila em um grupo arilalquila ou heteroarilalquila pode ser substituído pelos mesmos substituintes descritos acima para grupos arila. De preferência, um grupo arilalquila inclui um anel de fenila opcionalmente substituído pelos grupos definidos acima para grupos arila e um C1-C4 alquileno que é não substituído ou é substituído por um ou dois grupos C1-C4 alquila ou grupos heteroalquila, onde os grupos alquila ou heteroalquila podem opcionalmente ciclizar para formar um anel, tal como ciclopropano, dioxolano ou oxaciclopentano. Similarmente, um grupo heteroarilalquila inclui, de preferência, um grupo C5-C6 heteroarila monocíclico que é opcionalmente substituído pelos grupos descritos acima como substituintes típicos sobre grupos arila e um C1-C4 alquileno que é não substituído ou é substituído por um ou dois grupos C1-C4 grupos alquila ou heteroalquila ou inclui um anel de fenila opcionalmente substituído ou C5-C6 heteroarila monocíclica e um C1-C4 heteroalquileno que é não substituído ou é substituído por um ou dois grupos C1-C4 alquila ou heteroalquila, onde os grupos alquila ou heteroalquila podem opcionalmente ciclizar para formar um anel, tal como ciclopropano, dioxolano ou oxaciclopentano.
[000361] Onde um grupo arilalquila ou heteroarilalquila é descrito como opcionalmente substituído, os substituintes podem estar sobre a porção alquila ou heteroalquila ou sobre a porção arila ou heteroarila do grupo. Os substituintes opcionalmente presentes sobre a porção alquila ou heteroalquila são os mesmos conforme aqueles descritos acima para grupos alquila em geral; os substituintes opcionalmente presentes sobre a porção arila ou heteroarila são as mesmas conforme aquelas descritas acima para grupos arila em geral.
[000362] Grupos "arilalquila", conforme usado aqui, são grupos hidrocarbila se eles são não substituídos e são descritos pelo número total de átomos de carbono no anel e alquileno ou ligante similar. Assim, um grupo benzila é um grupo C7-arilalquila e feniletila é uma C8- arilalquila.
[000363] "Heteroarilalquila", conforme descrito acima, refere-se a uma porção compreendendo um grupo arila que é preso através de um grupo de ligação e difere de "arilalquila" em que pelo menos um átomo no anel da porção arila ou um átomo no grupo de ligação é um heteroátomo selecionado de N, O e S. Os grupos heteroarilalquila são descritos aqui de acordo com o número total de átomos no anel e ligante combinados e eles incluem grupos arila ligados através de um ligante heteroalquila; grupos heteroarila ligados através de um ligante de hidrocarbila, tal como um alquileno; e grupos heteroarila ligados através de um ligante de heteroalquila. Assim, por exemplo, C7-heteroarilalquila incluiria piridilmetila, fenóxi e N-pirrolilmetóxi.
[000364] "Alquileno", conforme usado aqui, refere-se a um grupo hidrocarbila divalente; em virtude do fato dele ser divalente, ele pode ligar dois outros grupos juntos. Tipicamente, ele refere-se a -(CHsjn- onde n é 1-8 e, de preferência, n é 1-4 embora, onde especificado, um alquileno pode também ser substituído por outros grupos e pode ser de outros comprimentos e as valências abertas não precisam estar em extremidades opostas de uma cadeia. Assim, -CH(Me)- e -C(Me)2- pode também ser referido como alquilenos, assim como um grupo cíclico, tal como ciclopropan-1,1 -diíla. Onde um grupo alquileno é substituído, os substituintes incluem aqueles tipicamente presentes sobre grupos alquila, conforme descrito aqui.
[000365] Em geral, qualquer grupo alquila, alquenila, alquinila, acila ou arila ou arilalquila ou qualquer heteroforma de um desses grupos que está contida em um substituinte pode, em si, ser opcionalmente substituído por substituintes adicionais. A natureza desses substituintes é similar àquela mencionada com relação aos substituintes primários em si se os substituintes não são de outro modo descritos. Assim, onde em uma modalidade, por exemplo, R7 é alquila, essa alquila pode ser opcionalmente substituída pelos substituintes restantes listados como modalidades para R7 onde isso faz sentido químico e onde isso não ultrapassa o limite de tamanho estabelecido para a alquila per se; por exemplo, alquila substituída por alquila ou por alquenila simplesmente estenderia o limite máximo de átomos de carbono para essas modalidades e não está incluída. Contudo, alquila substituída por arila, amino, alcóxi, =0 e semelhantes também seria incluída dentro do escopo da invenção e os átomos desses grupos substituintes não são contados no número usado para descrever o grupo alquila, alquenila, etc. que está sendo descrito. Onde nenhum número de substituintes é especificado, cada um de tais grupos alquila, alquenila, alquinila, acila ou arila pode ser substituído por uma série de substituintes de acordo com suas valências disponíveis; em particular, qualquer desses grupos pode ser substituído por átomos de flúor em qualquer uma ou todas de suas valências disponíveis, por exemplo.
[000366] "Heteroforma", conforme usado aqui, refere-se a um derivado de um grupo tal como uma alquila, arila ou acila, em que pelo menos um átomo de carbono do grupo carbocíclico designado foi substituído por um heteroátomo selecionada de N, O e S. Assim, as heteroformas de alquila, alquenila, alquinila, acila, arila e arilalquila são heteroalquila, heteroalquenila, heteroalquinila, heteroacila, heteroarila e heteroarilalquila, respectivamente. Deve ser entendido que não mais do que dois átomos de N, O ou S são comumente conectados em sequência, exceto onde um grupo oxo está preso ao N ou S para formar um grupo nitro ou sulfonila.
[000367] "Halo", conforme usado aqui, inclui flúor, cloro, bromo e iodo. Flúor e cloro são frequentemente preferidos.
[000368] "Amino", conforme usado aqui, refere-se a NH2 mas, onde um amino é descrito como "substituído" ou "opcionalmente substituído", 0 termo inclui NR'R" em que cada R' e R" é independentemente H ou é um grupo alquila, alquenila, alquinila, acila, arila ou arilalquila ou uma heteroforma de um desses grupos e cada um dos grupos alquila, alquenila, alquinila, acila, arila ou arilalquila ou heteroformas de um desses grupos é opcionalmente substituída pelos substituintes descritos aqui conforme adequado para o grupo correspondente. O termo também inclui formas em que R' e R" são ligados juntos para formar um anel de 3-8 elementos o qual pode ser saturado, insaturado ou aromático e o qual contém 1-3 heteroátomos independentemente selecionados de N, O e S como elementos do anel e o qual é opcionalmente substituído pelos substituintes descritos, conforme adequado para grupos alquila ou, se NR'R" é um grupo aromático, ele é opcionalmente substituído pelos substituintes descritos, conforme típico para grupos heteroarila.
[000369] Conforme usado aqui, o termo "carbociclo"refere-se a um composto cíclico contendo apenas átomos de carbono no anel, enquanto que a "heterociclo"refere-se a um composto cíclico compreendendo um heteroátomo. As estruturas carbocíclica e heterocíclica abrangem compostos tendo sistemas de anel monocíclico, bicíclico ou múltiplo. Conforme usado aqui, esses termos também incluem anéis que contêm uma ligação dupla ou duas, contanto que o anel não seja aromático.
[000370] Conforme usado aqui, o termo "heteroátomo"refere-se a qualquer átomo que não é carbono ou hidrogênio, tal como nitrogênio, oxigênio ou enxofre.
[000371] Exemplos ilustrativos de heterociclos incluem, mas não estão limitados a, tetra-hidrofurano, 1,3-dioxolano, 2,3-di-hidrofurano, pirano, tetra-hidropirano, benzofurano, isobenzofurano, 1,3-di-hidro- isobenzofurano, isoxazola, 4,5-di-hidroisoxazola, piperidina, pirrolidina, pirrolidin-2-ona, pirrola, piridina, pirimidina, octahidro-pirrolo[3,4 b]piridina, piperazina, pirazina, morfolina, tiomorfolina, imidazola, imidazolidina 2,4-diona, 1,3-di-hidrobenzimidazol-2-ona, indola, tiazola, benzotiazola, tiadiazola, tiofeno, tetra-hidrotiofeno 1,1-dióxido, diazepina, triazola, guanidina, diazabiciclo[2.2.1]heptano, 2,5- diazabiciclo[2.2.1 Jheptano, 2,3,4,4a,9,9a-hexahidro-1 H-β-carbolina, oxirano, oxetano, tetra-hidropirano, dioxano, lactonas, aziridina, azetidina, piperidina, lactames e podem também abranger heteroarilas. Outros exemplos ilustrativos de heteroarilas incluem, mas não estão limitados a, furano, pirrola, piridina, pirimidina, imidazola, benzimidazola e triazola.
[000372] Conforme usado aqui, o termo "substituinte inorgânico" refere-se a substituintes que não contêm carbono ou contêm carbono ligado a outros elementos que não hidrogênio (por exemplo, carbono elemental, monóxido de carbono, dióxido de carbono e carbonato). Exemplos de substituinte inorgânicos incluem, mas não estão limitados a, nitro, halogênio, azido, ciano, sulfonilas, sulfinilas, sulfonatos, fosfatos, etc.
[000373] O termo "substituinte polar", conforme usado aqui, refere-se a qualquer substituinte tendo um dipolo elétrico e opcionalmente um momento dipolo (por exemplo, um substituinte polar assimétrico tem um momento dipolo e um substituinte polar simétrico não tem um momento dipolo). Substituintes polares incluem substituintes que aceitam ou doam uma ligação de hidrogênio e grupos que trazem pelo menos uma carga parcial positiva ou negativa em solução aquosa em níveis de pH fisiológico. Em determinadas modalidades, um substituinte polar é um que pode aceitar ou doar elétrons em uma ligação de hidrogênio não covalente com outra porção química.
[000374] Em determinadas modalidades, um substituinte polar é selecionado de um carbóxi, um bioisóstero de carbóxi ou outra porção derivada de ácido que existe predominantemente como um ânion em pH de cerca de 7 a 8 ou maior. Outros substituintes polares incluem, mas não estão limitados a, grupos contendo um OH ou NH, um oxigênio de éter, um nitrogênio de amina, um enxofre ou nitrogênio oxidado, uma carbonila, um nitrilo e anel heterocíclico contendo nitrogênio ou contendo oxigênio quer aromático ou não aromático. Em algumas modalidades, o substituinte polar (representado por X) é um carboxilato ou um bioisóstero de carboxilato.
[000375] "Bioisóstero de carboxilato" ou "bioisóstero de carbóxi", conforme usado aqui, refere-se a uma porção que se espera ser negativamente carregada em um grau substancial em pH fisiológico. Em determinadas modalidades, o bioisóstero de carboxilato é uma porção selecionada do grupo consistindo em:
Figure img0013
e sais dos precedentes, em que cada R7 é independentemente H ou um elemento opcionalmente substituído selecionado do grupo consistindo em C1-10 alquila, C2-10 alquenila, C2-10 heteroalquila, C3-8 anel carbocíclico e C3-8 anel heterocíclico opcionalmente fundido a um anel carbocíclico ou heterocíclico opcionalmente substituído adicional; ou R7 é uma C1-10 alquila, C2-10 alquenila ou C2-10 heteroalquila substituída por um C3-8 anel carbocíclico ou C3-8 anel heterocíclico opcionalmente substituído.
[000376] Em determinadas modalidades, 0 substituinte polar é selecionado do grupo consistindo em ácido carboxílico, éster carboxílico, carboxamida, tetrazola, triazola, oxadiazola, oxotiadiazola, tiazola, aminotiazola, hidróxitiazola e carbóximetano-sulfonamida,. Em algumas modalidades dos compostos descritos aqui, pelo menos um substituinte polar presente é um ácido carboxílico ou um sal ou éster ou um bioisóstero do mesmo. Em determinadas modalidades, pelo menos um substituinte polar presente é um substituinte contendo ácido carboxílico ou um sal, éster ou bioisóstero do mesmo. Nas últimas modalidades, o substituinte polar pode ser uma C1-C10 alquila ou CICIO alquenila ligada a um ácido carboxílico (ou sal, éster ou bioisóstero do mesmo), por exemplo.
[000377] O termo 'solgrupo' ou 'grupo de intensificação de solubilidade', conforme usado aqui, refere-se a um fragmento molecular selecionado por sua capacidade de intensificar a solubilidade fisiológica de um composto que, de outro modo, tem solubilidade relativamente baixa. Qualquer substituinte que pode facilitar a dissolução de qualquer molécula em particular em água ou qualquer meio biológico pode servir como um grupo de intensificação de solubilidade. Exemplos de grupos de solubilização são, mas não estão limitados a: qualquer substituinte contendo um grupo passível de ser ionizado em água em uma faixa de pH de 0 a 14; qualquer grupo ionizável passível de formar um sal; ou qualquer substituinte altamente polar, com um alto momento dipolar e capaz de formação de uma interação forte com moléculas de água. Exemplos de grupos de solubilização são, mas não estão limitados a: alquil aminas substituídas, álcoois alquílicos substituídos, alquil éteres, aril aminas, piridinas, fenóis, ácidos carboxílicos, tetrazolas, sulfonamidas, amidas, sulfonilamidas, ácidos sulfônicos, ácidos sulfínicos, fosfatos, sulfoniluréias.
[000378] Grupos adequados para essa finalidade incluem, por exemplo, grupos da fórmula -A-(CH2)o-4-G, onde A está ausente, O ou NR, onde R é H ou Me; e G pode ser um grupo carbóxi, um bioisóstero de carbóxi, hidróxi, fosfonato, sulfonato ou um grupo da fórmula -NRy2 ou P(O)(ORy)2, onde cada Ry é independentemente H ou uma C1-C4 alquila que pode ser substituída por um ou mais (tipicamente até três) desses grupos: NH2, OH, NHMe, NMe2, OMe, halo ou =0 (oxigênio de carbonila); e dois Ry em um de tais grupos podem ser ligados juntos para formar um anel de 5-7 elementos, opcionalmente contendo um heteroátomo adicional (N, O ou S) como um elemento do anel e opcionalmente substituído por uma C1-C4 alquila a qual pode, em si, ser substituída por um ou mais (tipicamente até três) desses grupos: NH2, OH, NHMe, NMe2, OMe, halo ou =0 (oxigênio de carbonila).
Prevenção de Sensibilidade e/ou Monitoramento de Responsividade de Doenças Mediadas por CK-2 ao Tratamento com Combinações Terapêuticas Compreendendo Inibidores de CK2
[000379] Além das modalidades descritas acima, a presente invenção também proporciona biomarcadores para prever a sensibilidade e/ou monitorar a resposta de uma doença mediada por CK2, tal como um distúrbio proliferativo e/ou um distúrbio inflamatório, com inibidores de CK2 quando usado em combinação com agentes terapêuticos adicionais.
[000380] Em um aspecto, a presente invenção proporciona biomarcadores que são úteis para prever a sensibilidade e/ou responsividade de um indivíduo ou sistema ao tratamento com um inibidor de CK2 quando usado em combinação com agentes terapêuticos adicionais, tais como agentes anticâncer, anti- inflamatórios, anti-infectivos, bem como produtos terapêuticos para 0 tratamento de dor (por exemplo, analgésicos) e distúrbios autoimunes. Assim, em uma modalidade, os biomarcadores e métodos associados de medição dos referidos biomarcadores podem ser usados para selecionar um indivíduo ou uma população de indivíduos para tratamento com uma combinação terapêutica em particular compreendendo um inibidor de CK2. A invenção refere-se também ao uso desses biomarcadores para monitorar ou prever os resultados de tratamento em indivíduos aos quais está sendo administrada uma combinação terapêutica compreendendo um inibidor de CK2.
[000381] Conforme descrito aqui, biomarcadores úteis para prever a sensibilidade e/ou monitorar a responsividade de uma doença mediada por CK2 ao tratamento com uma combinação terapêutica compreendendo um inibidor de CK2 incluem os níveis de expressão de mRNA e/ou polipeptideo (isto é, a expressão de proteína) de IL-6, IL-8, HIF-1α, VEGF, subunidades CK2α e/ou CK2a's, CK2β e o nível de Akt fosforilada em serina 129 (p-Akt em S129), isoladamente ou com relação ao polipeptideo de Akt total (isto é, o nível normalizado de p-Akt em S129). Biomarcadores adicionais incluem o nível de Akt fosforilada em serina 473 (p-Akt S473), isoladamente ou com relação ao polipeptideo de Akt total (isto é, o nível normalizado de p-Akt S473), o nível de p21 fosforilado em treonina 145 (p-p21 em T145), isoladamente ou com relação ao polipeptideo de p21 total (isto é, o nível normalizado de p-p21 em T145), o nível de fator-KB nuclear fosforilado (NF-KB) em serina 529 (p-NF-KB S529), isoladamente ou com relação ao polipeptideo de NF-KB total (isto é, o nível normalizado de p-NF-KB S529), o nível de STAT3 fosforilado em tirosina 705 (p-STAT3 em Y705), isoladamente ou com relação ao polipeptideo de STAT3 total (isto é, o nível normalizado de p-STAT3 em Y705) ou o nível de JAK2 fosforilada em tirosina 1007/1008 (p-JAK2 Y1007/1008), isoladamente ou com relação ao polipeptideo de JAK2 total (isto é, o nível normalizado de p-JAK2 Y1007/1008).
[000382] Em uma modalidade, a combinação terapêutica compreende um inibidor de CK2 e um agente terapêutico adicional. Em modalidades alternativas, a composição terapêutica compreende um inibidor de CK2 e dois, três, quatro, cinco ou mais agentes terapêuticos adicionais.
[000383] Em uma modalidade, o agente terapêutico adicional é um agente anticâncer. Agentes anticâncer usados em combinação com os inibidores de CK2 do presente pedido podem incluir agentes selecionados de qualquer uma das classes conhecidas por aqueles versados no campo incluindo, por exemplo, agentes de alquilação, antimetabólitos, alcaloides e terpenoides vegetais (por exemplo, taxanos), inibidores de topoisomerase, antibióticos anti-tumor, terapias hormonais, agentes de objetivação molecular e semelhantes. Em geral, tal agente anticâncer é um agente de alquilação, um antimetabólito, um vinca alcaloide, um taxano, um inibidor de topoisomerase, um antibiótico anti-tumor, um inibidor de tirosina quinase, um macrolídeo imunossupressivo, um inibidor de Akt, um inibidor de HDAC, um inibidor de Hsp90, um inibidor de mTOR, um inibidor de PI3K/mTOR ou um inibidor de PI3K. Comumente, um agente anticâncer é selecionado do grupo consistindo em um inibidor de Akt, um inibidor de HDAC, um inibidor de Hsp90, um inibidor de mTOR, um inibidor de PI3K/mTOR, um inibidor de PI3K e um anticorpo monoclonal de objetivação de antígeno de tumor/câncer; altemativamente, um agente anticâncer é selecionado do grupo consistindo em um inibidor de Akt, um inibidor de HDAC, um inibidor de Hsp90, um inibidor de mTOR, um inibidor de PI3K/mTOR e um inibidor de PI3K.
[000384] Agentes de alquilação incluem (a) agentes quimioterapêuticos baseados em platina semelhante à alquilação, tais como cisplatina, carboplatina, nedaplatina, oxaliplatina, satraplatina e (SP-4-3)-(cis)-aminadicloro-[2-metilpiridina]platina (II); (b) alquil sulfonatos, tal como busulfan; (c) derivados de etilenoimina e metilmelamina, tais como altretamina e tiotepa; (d) mostardas de nitrogênio, tais como clorambucila, ciclofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, trofosamida, prednimustina, melphalan e uramustina; (e) nitrosouréias, tais como carmustina, lomustina, fotemustina, nimustina, ranimustina e estreptozocina; (f) triazenos e imidazotetrazinas, tais como dacarbazina, procarbazina, temozolamida e temozolomida.
[000385] Antimetabólitos incluem (a) análogos de purina, tais como fludarabina, cladribina, clorodeoxiadenosina, clofarabina, mercaptopurina, pentostatina e tioguanina; (b) análogos de pirimidina, tais como fluorouracila, gemcitabina, capecitabina, citarabina, azacitidina, edatrexato, floxuridina e troxacitabina; (c) anti-folatos, tais como metotrexato, pemetrexed, raltitrexed e trimetrexato. Antimetabólitos também incluem inibidores de sintase de timidilato, tais como fluorouracila, raltitrexed, capecitabina, floxuridina e pemetrexed; e inibidores de reductase de ribonucleotídeo, tais como claribina, clofarabina e fludarabina.
[000386] Agentes derivados de alcaloides e terpenoides vegetais incluem inibidores mitóticos, tais como os vinca alcaloides vinblastina, vincristina, vindesina e vinorelbina; e estabilizantes do polímero de microtúbulo, tais como os taxanos incluindo, mas não limitado a, paclitaxel, docetaxel, larotaxel, ortataxel e tesetaxel.
[000387] Inibidores de topoisomerase incluem inibidores de topoisomerase I, tais como camptotecina, topotecan, irinotecan, rubitecan e belotecan; e inibidores de topoisomerase II, tais como etoposídeo, teniposídeo e amsacrina.
[000388] Antibióticos anti-tumor incluem (a) antraciclinas, tais como daunorubicina (incluindo daunorubicina lipossômica), doxorubicina (incluindo doxorubicina lipossômica), epirubicina, idarubicina e valrubicina; (b) agentes relacionados a Streptomyces, tais como bleomicina, actinomicina, mitramicina, mitomicina, porfiromicina; e (c) antracenodionas, tais como mitoxantrona e pixantrona. Antraciclinas têm três mecanismos de ação: intercalação entre pares de base da fita de DNA/RNA; inibição da enzima topoisomerase II; e criação de radicais livres de oxigênio ferro-mediada que danificam o DNA e membranas celulares. Antraciclinas são, em geral, caracterizadas como inibidores de topoisomerase II.
[000389] Terapias hormonais incluem (a) androgênios, tais como fluoximesterona e testolactona; (b) anti-androgênios, tais como bicalutamida, ciproterona, flutamida e nilutamida; (c) inibidores de aromatase, tais como aminoglutetimida, anastrozola, exemestano, formestano e letrozola; (d) corticosteroides, tais como dexametasona e prednisona; (e) estrogênios, tal como dietilestilbestrol; (f) anti- estrogênios, tais como fulvestrant, raloxifeno, tamoxifeno e toremifina; (g) agonistas e antagonistas de LHRH, tais como buserelina, goserelina, leuprolida e triptorelina; (h) progestinas, tais como acetato de medroxiprogesterona e acetato de megestrol; e (i) hormônios da tiroide, tais como levotiroxina e liotironina.
[000390] Agentes moleculares alvo incluem (a) inibidores da tirosina quinase de receptor (receptor tyrosine kinase - 'RTK'), tais como inibidores de EGFR, incluindo erlotinib, gefitinib e neratinib; inibidores de VEGFR, incluindo vandetanib, semaxinib e cediranib; e inibidores de PDGFR; ainda incluídos são inibidores de RTK que atuam em múltiplos sítios receptores, tal como lapatinib, o qual inibe EGFR e HER2, bem como aqueles inibidores que atuam em cada um de C-kit, PDGFR e VEGFR incluindo, mas não limitado a, axitinib, sunitinib, sorafenib e toceranib; também incluídos são inibidores de BCR-ABL, c-kit e PDGFR, tal como imatinib; (b) agentes de ligação a FKBP, tal como um antibiótico macrolídeo imunossupressivo, incluindo bafilomicina, rapamicina (sirolimus) e everolimus; (c) agentes de terapia gênica, agentes de terapia anti-senso e moduladores de expressão gênica, tais como os retinoides e rexinoides, por exemplo, adapaleno, bexaroteno, ácido trans-retinóico, ácido 9-cis-retinóico e N-(4-hidróxifenil)retinamida; (d) agentes de terapia fenótipo-dirigida, incluindo anticorpos monoclonais, tais como alemtuzumab, bevacizumab, cetuximab, ibritumomab tiuxetano, rituximab e trastuzumab; (e) imunotoxinas, tal como gemtuzumab ozogamicina; (f) radioimunoconjugados, tal como 131 l-tositumomab; e (g) vacinas contra o câncer.
[000391] Anticorpos monoclonais incluem, mas não estão limitados a, anticorpos monoclonais de murino, quiméricos ou parcial ou totalmente humanizados. Tais anticorpos terapêuticos incluem, mas não estão limitados a, anticorpos dirigidos a antígenos de tumor ou câncer sobre a superfície celular ou dentro da célula. Tais anticorpos terapêuticos também incluem, mas não estão limitados a, anticorpos dirigidos a alvos ou vias direta ou indiretamente associadas à CK2. Anticorpos terapêuticos podem ainda incluir, mas não estão limitados a, anticorpos dirigidos a alvos ou vias que interagem diretamente com os compostos da presente invenção. Em uma variação, anticorpos terapêuticos incluem, mas não estão limitados a, agentes anticâncer, tais como Abagovomab, Adecatumumab, Afutuzumab, Alacizumab pegol, Alemtuzumab, Altumomab pentetato, Anatumomab mafenatox, Apolizumab, Bavituximab, Belimumab, Bevacizumab, Bivatuzumab mertansina, Blinatumomab, Brentuximab vedotina, Cantuzumab mertansina, Catumaxomab, Cetuximab, Citatuzumab bogatox, Cixutumumab, Clivatuzumab tetraxetano, Conatumumab, Dacetuzumab, Detumomab, Ecromeximab, Edrecolomab, Elotuzumab, Epratuzumab, Ertumaxomab, Etaracizumab, Farletuzumab, Figitumumab, Fresolimumab, Galiximab, Glembatumumab vedotina, Ibritumomab tiuxetano, Intetumumab, Inotuzumab ozogamicina, Ipilimumab, Iratumumab, Labetuzumab, Lexatumumab, Lintuzumab, Lucatumumab, Lumiliximab, Mapatumumab, Matuzumab, Milatuzumab, Mitumomab, Nacolomab tafenatox, Naptumomab estafenatox, Necitumumab, Nimotuzumab, Ofatumumab, Olaratumab, Oportuzumab monatox, Oregovomab, Panitumumab, Pemtumomab, Pertuzumab, Pintumomab, Pritumumab, Ramucirumab, Rilotumumab, Rituximab, Robatumumab, Sibrotuzumab, Tacatuzumab tetraxetano, Taplitumomab paptox, Tenatumomab, Ticilimumab, Tigatuzumab, Tositumomab, Trastuzumab, Tremelimumab, Tucotuzumab celmoleucina, Veltuzumab, Volociximab, Votumumab, Zalutumumab e Zanolimumab. Em algumas modalidades, tais anticorpos terapêuticos incluem alemtuzumab, bevacizumab, cetuximab, daclizumab, gemtuzumab, ibritumomab tiuxetano, panitumumab, rituximab, tositumomab e trastuzumab; em outras modalidades, tais anticorpos monoclonais incluem alemtuzumab, bevacizumab, cetuximab, ibritumomab tiuxetano, rituximab e trastuzumab; altemativamente, tais anticorpos incluem daclizumab, gemtuzumab e panitumumab. Em ainda outra modalidade, anticorpos terapêuticos úteis no tratamento de infecções incluem, mas não estão limitados a, Afelimomab, Efungumab, Exbivirumab, Felvizumab, Foravirumab, Ibalizumab, Libivirumab, Motavizumab, Nebacumab, Pagibaximab, Palivizumab, Panobacumab, Rafivirumab, Raxibacumab, Regavirumab, Sevirumab, Tefibazumab, Tuvirumab e Urtoxazumab. Em uma outra modalidade, agentes terapêuticos podem ser úteis no tratamento de inflamação e/ou distúrbios autoimunes incluindo, mas não estão limitados a, Adalimumab, Atlizumab, Atorolimumab, Aselizumab, Bapineuzumab, Basiliximab, Benralizumab, Bertilimumab, Besilesomab, Briakinumab, Canakinumab, Cedelizumab, Certolizumab pegol, Clenoliximab, Daclizumab, Denosumab, Eculizumab, Edobacomab, Efalizumab, Erlizumab, Fezakinumab, Fontolizumab, Fresolimumab, Gantenerumab, Gavilimomab, Golimumab, Gomiliximab, Infliximab, Inolimomab, Keliximab, Lebrikizumab, Lerdelimumab, Mepolizumab, Metelimumab, Muromonab-CD3, Natalizumab, Ocrelizumab, Odulimomab, Omalizumab, Otelixizumab, Pascolizumab, Priliximab, Reslizumab, Rituximab, Rontalizumab, Rovelizumab, Ruplizumab, Sifalimumab, Siplizumab, Solanezumab, Stamulumab, Talizumab, Tanezumab, Teplizumab, Tocilizumab, Toralizumab, Ustekinumab, Vedolizumab, Vepalimomab, Visilizumab, Zanolimumab e Zolimomab aritox. Em ainda outra modalidade, tais anticorpos terapêuticos incluem, mas não estão limitados a, adalimumab, basiliximab, certolizumab pegol, eculizumab, efalizumab, infliximab, muromonab-CD3, natalizumab e omalizumab. Alternativamente, o anticorpo terapêutico pode incluir abciximab ou ranibizumab. Em geral, um anticorpo terapêutico não é conjugado ou é conjugado com um radionuclídeo, citocina, toxina, enzima de ativação de fármaco ou um lipossoma cheio de fármaco.
[000392] Inibidores de Akt incluem 1L6-Hidroximetil-quiro-inositol-2- (R)-2-O-metil-3-O-octadecil-sn-glicerocarbonato, SH-5 (Calbiochem Cat. No. 124008), SH-6 (Calbiochem Cat. No. Cat. No. 124009), Calbiochem Cat. No. 124011, Triciribina (NSC 154020, Calbiochem Cat. No. 124012), 10-(4'-(N-dietilamino)butil)-2-clorofenoxazina, Cu(ll)Cl2(3- Formilcromona tio-semicarbazona), 1,3-di-hidro-1 -(1 -((4-(6-feniI-1H- imidazo[4,5-g]quinoxalin-7-il)fenil)metil)-4-piperidinil)-2H-benzimidazol- 2-ona, GSK690693 (4-(2-(4-amino-1,2,5-oxadiazol-3-il)-1-etil-7-{[(3S)- 3-piperidinilmetil]óxi}-1 H-imidazo[4,5-c]piridin-4-il)-2-metil-3-butin-2-ol), SR13668 ((2,10-dicarbetóxi-6-metóxi-5,7-di-hidro-indolo[2,3- b]carbazola), GSK2141795, Perifosina, GSK21110183, XL418, XL147, PF-04691502, BEZ-235 [2-Metil-2-[4-(3-metil-2-oxo-8-quinolin-3-il-2,3- di-hidro-imidazo[4,5-c]quinolin-1 -il)-fenil]-propionitrilo], PX-866 (((1S- ,4E, 10R, 11R, 13S, 14R)-[4-dialilaminometileno-6-hidróxi-1 -metoximetil- 10,13-d imeti I-3,7,17-trioxo-1,3,4,7,10,11,12,13,14,15,16,17-dodecah- idro-2-oxa-ciclopenta[a]fenantren-11-il éster de ácido acético)), D- 106669, CAL-101, GDC0941 (2-(1 H-indazol-4-il)-6-(4-metano-sulfonil- piperazin-1 -ilmetil)-4-morfolin-4-il-tieno[3,2-d]pirimidina), SF1126, SF1188, SF2523, TG100-115 [3-[2,4-diamino-6-(3-hidróxifenil)pteridin- 7-il]fenol], Uma série desses inibidores tais como, por exemplo, BEZ- 235, PX-866, D 106669, CAL-101, GDC0941, SF1126, SF2523, são também rotulados na técnica como inibidores de PI3K/mTOR; exemplos adicionais, tal como PI-103 (hidrocloreto de [3-[4-(4- morfolinilpirido[3',2':4,5]furo[3,2-d]pirimidin-2-il]fenol), são bem conhecidos por aqueles versados no campo. Inibidores de PI3K adicionais bem conhecidos incluem LY294002 [2-(4-morfolinil)-8-fenil- 4H-1-benzopirano-4-ona] e wortmanina. Inibidores de mTOR conhecidos por aqueles versados no campo incluem temsirolimus, deforolimus, sirolimus, everolimus, zotarolimus e biolimus A9. Um subconjunto representativo de tais inibidores inclui temsirolimus, deforolimus, zotarolimus e biolimus A9.
[000393] Inibidores de HDAC incluem (i) ácidos hidroxâmicos, tais como Tricostatina A, vorinostat (ácido suberoilanilida hidroxâmico - SAHA), panobinostat (LBH589) e belinostat (PXD101); (ii) peptídeos cíclicos, tal como trapoxina B e depsipeptídeos, tal como romidepsina (NSC 630176); (iii) benzamidas, tais como MS-275 (3-piridilmetil-N-{4- [(2-aminofenil)-carbamoil]-benzil}-carbamato), CI994 (4-acetilamino-N- (2aminofenil)-benzamida) e MGCD0103 (N-(2-aminofenil)-4-((4-(piridin- 3-il)pirimidin-2-ilamino)metil)benzamida); (iv) cetonas eletrofílicas; (v) os compostos de ácido alifático, tais como fenilbutirato e ácido valpróico.
[000394] Inibidores de Hsp90 incluem ansamicinas de benzoquinona, tal como geldanamicina, 17-DMAG (17-Dimetilamino-etilamino-17- demetóxigeldanamicina), tanespimicina (17-AAG, 17-alilamino-17- demetóxigeldanamicina), EC5, retaspimicina (IPI-504, 18,21-didehidro- 17-demetóxi-18,21-dideoxo-18,21 -d i-hidróxi-17-(2-propenilamino)- geldanamicina) e herbimicina; pirazolas, tal como CCT 018159 (4-[4- (2,3-d i-hidro-1,4-benzodioxin-6-il)-5-metil-1 H-pirazol-3-il]-6-eti I-1,3- benzenodiol); macrolídeos, tal como radicocol; bem como BIIB021 (CNF2024), SNX-5422, STA-9090 e AUY922.
[000395] Agentes diversos incluem altretamina, trióxido arsênico, nitrato de gálio, hidróxiuréia, levamisola, mitotano, octreotídeo, procarbazina, suramin, talidomida, lenalidomida, compostos fotodinâmicos, tais como methoxsalen e porfímero sódico e inibidores de proteassomo, tal como bortezomib.
[000396] Agentes de terapia biológica incluem interferons, tais como interferon-α2a e interferon-a2b e interleucinas, tais como aldesleucina, denileucina diftitox e oprelvecina.
[000397] Além dos agentes anticâncer destinados a atuar contra células cancerígenas, terapias combinadas incluindo o uso de agentes protetores ou adjuntos incluem agentes citoprotetores, tais como armifostina, dexrazonxano e mesna, fosfonatos tais como parmidronato e ácido zoledrônico e fatores de estimulação, tais como epoetina, darbeopetina, filgrastim, PEG-filgrastim e sargramostim, são também considerados.
[000398] Em outra modalidade, o agente terapêutico adicional é um agente anti-inflamatório. Agentes anti-inflamatórios usados em combinação com os inibidores de CK2 do presente pedido podem incluir agentes selecionados de glucocorticoides, NSAIDs, coxibs, corticosteroides, analgésicos, inibidores de 5-lipoxigenase, inibidores de proteína de ativação de 5-lipoxigenase e antagonistas do receptor de leucotrieno. Exemplos de agentes anti-inflamatórios não esteroidais incluem, mas não estão limitados a, cetoprofeno, flurbiprofeno, ibuprofeno, naproxeno, fenoprofeno, benoxaprofeno, indoprofeno, pirprofeno, carprofeno, oxaprozina, pranoprofeno, suprofeno, alminoprofeno, butibufeno, diclofenac, cetorolac, aspirina, bextra, celebrex, vioxx e acetominofeno. Em uma modalidade, agentes anti- inflamatórios são anticorpos monoclonais. Em outra modalidade, agentes anti-inflamatórios são anticorpos monoclonais que objetivam receptores ou antígenos direta ou indiretamente associados à inflamação. Em outra modalidade, agentes anti-inflamatórios são anticorpos monoclonais que objetivam a quinase CK2 ou vias reguladas por CK2. Em ainda outra modalidade, agentes anti-inflamatórios incluem, mas não estão limitados a, Adalimumab, Atlizumab, Atorolimumab, Aselizumab, Bapineuzumab, Basiliximab, Benralizumab, Bertilimumab, Besilesomab, Briakinumab, Canakinumab, Cedelizumab, Certolizumab pegol, Clenoliximab, Daclizumab, Denosumab, Eculizumab, Edobacomab, Efalizumab, Erlizumab, Fezakinumab, Fontolizumab, Fresolimumab, Gantenerumab, Gavilimomab, Golimumab, Gomiliximab, Infliximab, Inolimomab, Keliximab, Lebrikizumab, Lerdelimumab, Mepolizumab, Metelimumab, Muromonab-CD3, Natalizumab, Ocrelizumab, Odulimomab, Omalizumab, Otelixizumab, Pascolizumab, Priliximab, Reslizumab, Rituximab, Rontalizumab, Rovelizumab, Ruplizumab, Sifalimumab, Siplizumab, Solanezumab, Stamulumab, Talizumab, Tanezumab, Teplizumab, Tocilizumab, Toralizumab, Ustekinumab, Vedolizumab, Vepalimomab, Visilizumab, Zanolimumab e Zolimomab aritox.
[000399] Em outra modalidade, o agente terapêutico adicional é um agente anti-infectivo. Agentes anti-infectivos usados em combinação com os inibidores de CK2 do presente pedido incluem aqueles agentes conhecidos na técnica para tratar infecções virais, fúngicas, parasíticas ou bacterianas. O termo "antibiótico" conforme usado aqui, refere-se a uma substância química que inibe o crescimento ou mata microorganismos. Abrangidos por esse termo são antibióticos produzidos por um microorganismo, bem como antibióticos sintéticos conhecidos na técnica. Antibióticos incluem, mas não estão limitados a, claritromicina, ciprofloxacina e metronidazola. Em uma modalidade, agentes anti-infectivos são anticorpos monoclonais dirigidos a antígenos associados a agentes infecciosos ou microorganismos. Exemplos não limitativos de anticorpos eficazes no tratamento de infecções incluem Afelimomab, Efungumab, Exbivirumab, Felvizumab, Foravirumab, Ibalizumab, Libivirumab, Motavizumab, Nebacumab, Pagibaximab, Palivizumab, Panobacumab, Rafivirumab, Raxibacumab, Regavirumab, Sevirumab, Tefibazumab, Tuvirumab e Urtoxazumab.
[000400] Em outra modalidade, o agente terapêutico é um agente imunoterapêutico útil para o tratamento de dor, inflamação, infecção e/ou distúrbios autoimunes. Tais agentes usados em combinação com os inibidores de CK2 do presente pedido incluem, mas não estão limitados a, microorganismos ou componentes bacterianos (por exemplo, derivado de dipeptídeo de muramila, Picibanil), polissacarídeos tendo atividade de potencialização de imunidade (por exemplo, lentinan, esquizofilana, crestina), citocinas obtidas por meio de técnicas de engenharia genética (por exemplo, interferon, interleucina (IL)), fatores de estimulação de colônia (por exemplo, G- CSF (Filgrastim/Pegfilgrastim, Lenograstim), GM-CSF (Molgramostim, Sargramostim), SCF (Ancestim) e eritropoietina) e semelhantes. Anticorpos monoclonais que têm tais efeitos terapêuticos incluem, mas não estão limitados a, Adalimumab, Atlizumab, Atorolimumab, Aselizumab, Bapineuzumab, Basiliximab, Benralizumab, Bertilimumab, Besilesomab, Briakinumab, Canakinumab, Cedelizumab, Certolizumab pegol, Clenoliximab, Daclizumab, Denosumab, Eculizumab, Edobacomab, Efalizumab, Erlizumab, Fezakinumab, Fontolizumab, Fresolimumab, Gantenerumab, Gavilimomab, Golimumab, Gomiliximab, Infliximab, Inolimomab, Keliximab, Lebrikizumab, Lerdelimumab, Mepolizumab, Metelimumab, Muromonab-CD3, Natalizumab, Ocrelizumab, Odulimomab, Omalizumab, Otelixizumab, Pascolizumab, Priliximab, Reslizumab, Rituximab, Rontalizumab, Rovelizumab, Ruplizumab, Sifalimumab, Siplizumab, Solanezumab, Stamulumab, Talizumab, Tanezumab, Teplizumab, Tocilizumab, Toralizumab, Ustekinumab, Vedolizumab, Vepalimomab, Visilizumab, Zanolimumab e Zolimomab aritox.
Exemplos:
[000401] Os exemplos a seguir ilustram, mas não limitam a invenção. Exemplo 1 Estudo Clínico com CX-4945 em Fase I
Figure img0014
[000402] CX-4945 demonstrou potência como um agente único em supressão de crescimento de xenoenxerto de tumor com uma ampla janela terapêutica pré-clinicamente. Um estudo em Fase I foi empreendido para determinar a dose máxima tolerada (Maximum Tolerated Dose - MTD) e toxicidades dose-limitativas (Dose Limiting Toxicities - DLTs), para caracterizar a farmacocinética (PKs) e estudar os efeitos farmacodinâmicos de CX-4945.
Procedimento
[000403] Pacientes elegíveis com tumores sólidos avançados, doença de Castleman ou mieloma múltiplo com doença progressiva ou para os quais não há terapia padrão disponível, recebem CX-4945 em grupos de dose sucessivos a: 90, 160, 300, 460, 700 e 1000 mg por dose. Doses orais são administradas duas vezes ao dia durante vinte e um dias consecutivos de um ciclo de quatro semanas. A terapia é continuada em pacientes que consentem até que sinais de intolerância ao CX-4945 sejam observados ou haja evidência de doença em avanço. A resposta pelo RECIST é determinada após cada 2 ciclos. Amostras seriais de sangue e plasma são coletadas nos primeiro e oitavo dias de dosagem do Ciclo 1 (isto é, Dia 1 e Dia 21) para análise farmacocinética e para avaliações farmacodinâmicas de biomarcador (especificamente, formas total e fosforilada de p21 e Akt).
[000404] Um conjunto adicional de pacientes, com os mesmos critérios de elegibilidade, recebem CX-4945 em grupos de dose sucessiva em: 300, 500, 600 e 800 mg por dose. Doses orais são administradas quatro vezes ao dia durante vinte e um dias consecutivos de um ciclo de quatro semanas. Terapia é continuada nos pacientes que consentem até que sinais de intolerância ao CX-4945 sejam observados ou haja evidência de doença em avanço. A resposta pelo RECIST é determinada após cada 2 ciclos. Amostras seriais de sangue e plasma são coletadas nos primeiro e oitavo dias de dosagem do Ciclo 1 (isto é, Dia 1 e Dia 8) para análise farmacocinética e para avaliações farmacodinâmicas de biomarcador (especificamente, formas total e fosforilada de p21 e Akt).
[000405] Um método de citometria por varredura a laser foi desenvolvido e validado para quantificar a fosforilação de p21 e Akt em células e caracterizar esses substratos em células sanguíneas em circulação e células tumorais em circulação (Circulating Tumor Cells - CTC) coletadas de pacientes que estão sofrendo tratamento com inibidores de CK2, tal como CX-4945.
Sumário dos Resultados
[000406] Trinta e seis pacientes com tumores sólidos avançados (3-4 pacientes por Grupo, a partir de seis Grupos de dose distintos) receberam doses orais de CX-4945 e todos os pacientes no estudo participaram na coleta de PBMCs. Começando em pacientes no Grupo 3, biomarcadores demonstraram alterações em seu perfil, concorrentemente com inibição de CK2.
Via e Esquema de Administração
[000407] Pacientes nos Grupos 1-6 foram dosados duas vezes diariamente (BID) com cápsulas orais. O Grupo 1 recebeu 90 mg de CX- 4945 BID. O Grupo 2 recebeu 160 mg de CX-4945 BID. O Grupo 3 recebeu 300 mg de CX-4945 BID. O Grupo 4 recebeu 460 mg de CX- 4945 BID. O Grupo 5 recebeu 700 mg de CX-4945 BID. O Grupo 6 recebeu 1000 mg de CX-4945 BID.
[000408] Pacientes nos Grupos 7-9 foram dosados quatro vezes diariamente (QID) com cápsulas orais. O Grupo 7 recebeu 300 mg de CX-4945 QID. O Grupo 8 recebeu 500 mg de CX-4945 QID. O Grupo 9 recebeu 600 mg de CX-4945 QID.
Análise de Biomarcador
[000409] Para identificar biomarcadores úteis para medição de inibição de CK2, amostras de sangue foram coletadas no pré- tratamento, 4 horas e 8 horas após a primeira dose de CX-4945 no dia 1 e Dia 21. Amostras de plasma foram também coletadas nesses pontos de tempo para quantificação de IL-6 e IL-8 e alterações nos níveis séricos de IL-6 e IL-8 após 21 dias de tratamento com CX-4945 foram determinadas.
[000410] Conforme observado na Figura 7, os níveis de IL-6 foram significativamente reduzidos em três pacientes (#9, #10, #20) e os níveis de IL-8 foram significativamente reduzidos em três pacientes (#9, #13, #20). A alteração percentual em IL-6 e IL-8 em pacientes que estão sofrendo tratamento com Composto K (CX-4945) foi determinada para pacientes tendo tumores NSCLC (#6), próstata (#9), tiroide/papilar (#13, #20) e de células de Leydig (#16). Os níveis de IL-6 foram significativamente reduzidos em dois pacientes (#9, #20, com uma menor redução em #13) e os níveis de IL-8 foram significativamente reduzidos em três pacientes (#9, #13, #20). Uma redução nos níveis de IL-6 e IL-8 após 21 dias de tratamento foi associada ao aparecimento de doença estável, conforme evidenciado a partir do tempo aumentado sob tratamento (Figura 8). Conforme mostrado nas Figuras 9A e B, uma redução acentuada nos níveis séricos de IL-6 em pacientes com câncer de mama inflamatório (Inflammatory Breast Cancer - IBC) e câncer de próstata foi observada após 21 dias de dosagem. Conforme mostrado na Figura 10, os níveis de IL-8 foram significativamente reduzidos em pacientes com tumores de próstata, tiroide/papilar e células de Leydig.
[000411] Além disso, PBMCs foram isoladas para analisar p21 Total, p21-T145, Akt Total, Akt-T129 e Akt-S473 no tempo 0, 4 e 8 horas pós- dose no dia 1 e Dia 21. PBMCs foram analisadas e também separadas em fenótipos (CD19, CD45). Para cada ponto de tempo, a proporção de p21-T145/Total p21, Akt-S129/Akt total e Akt-S473/Akt total foi calculada.
[000412] A alteração na proporção de p-Akt S473 para Akt total a 8 horas pós-dose no dia 1 e dia 21 em PBMCs CD19 para os Grupos 1-3 é mostrada na Figura 11. A alteração na proporção de p-p21 em T145 para p21 total a 4 horas pós-dose no dia 1 e dia 21 em PBMCs CD45 é mostrada na Figura 12.
[000413] Além disso, PBMCs foram isoladas para analisar p-p21- T145, p-Akt-S129 e p-Akt-S473 no tempo 0, 4 e 8 horas pós-dose no dia 1 e Dia 21 para o esquema de dosagem BID e no tempo 0, 2,4 e 6 horas pós-dose no dia 1 e Dia 8 para o esquema de dosagem QID. PBMCs foram analisadas e também separadas em fenótipos (CD19, CD45).
[000414] A alteração percentual em p-Akt em S129 foi comparada a partir da pré-dose (tempo = 0), a 4 horas, entre o Dia 1 e Dia 21 (ou Dia 1 e Dia 8) e como uma função da AUC cumulativa de CX-4945, conforme mostrado na Figura 13A.
[000415] A alteração percentual em p-Akt S473 foi comparada a partir da pré-dose (tempo = 0), a 4 horas, entre o Dia 1 e Dia 21 (ou Dia 1 e Dia 8) e como uma função da AUC cumulativa de CX-4945, conforme mostrado na Figura 13B.
[000416] A alteração percentual em p-p21 em T145 foi comparada a partir da pré-dose (tempo = 0), a 4 horas, entre o Dia 1 e Dia 21 (ou Dia 1 e Dia 8) e como uma função de a AUC cumulativa de CX-4945, conforme mostrado na Figura 13C.
[000417] Conforme mostrado nas Figuras 13A-C, a fosforilação dos biomarcadores Akt-S 129, Akt-S473 e p21-T145 diminui de uma maneira relacionada à exposição (AUC) clara. Além disso, esses dados demonstram que CX-4945 afeta o biomarcador Akt-S 129 CK2- específico em PBMCs e indica que CX-4945 tem um impacto significativo sobre sua molécula alvo, CK2.
[000418] Além disso, células tumorais em circulação (Circulating Tumor Cells - CTCs) foram isoladas para analisar p-Akt-S129 na pré- dose (tempo = 0) no dia 1 e 6 horas pós-dose no dia 8 para pacientes sob o esquema QID. A alteração percentual no número de CTC e a medição de p-Akt-S129 nas CTCs foi comparado a partir da pré-dose (tempo = 0), no dia 1 e 6 horas no dia 8, conforme mostrado na Figura 14.
Exemplo 2 Efeito do Inibidor de CK2 sobre a Secreção de IL-6 por Células de Câncer de Mama Inflamatório
[000419] A secreção de IL-6 por células de câncer de mama inflamatório (Inflammatory Breast Cancer - IBC) SUM-149PT foi avaliada como uma função da concentração de inibidor de CK2. Os níveis de IL-6 como um percentual do controle não tratado foram determinados a 6 horas com CX-4945 em uma concentração de 0,05 pM até 50 pM. A viabilidade celular das células SUM-149PT foi determinada após 96 horas. Os resultados são mostrados na Figura 15.
Exemplo 3 Efeito do Inibidor de CK2 sobre a Secreção de IL-6 por Xenoenxertos de Câncer de Mama Inflamatório Agressivo
[000420] O efeito de inibidores de CK2 sobre a secreção de IL-6 por xenoenxertos SUM-149PT agressivos foi também estudado. Descobriu- se que tumores agressivos (menores do que 1 g) têm uma maior taxa de secreção de IL-6 do que tumores menores (Figura 16B).
[000421] Descobriu-se que CX-4945 reduz significativamente a secreção de IL-6 por tumores agressivos (Figura 16D).
Exemplo 4 Estudo in vivo em Camundongos trazendo Xenoenxertos SUM-149PT
[000422] Camundongos trazendo xenoenxertos SUM-149PT foram deixados não tratados (Left UnTreated - UTC) ou foram tratados PO uma vez (uma vez) ou BID x 8 dias (xD8) com 75 mg/kg de CX-4945.
[000423] Plasma foi isolado, os tumores foram extraídos e pesados. Os níveis de IL-6 humana no plasma foram determinados por meio de ELISA e os valores resultantes foram normalizados para o peso do tumor.
[000424] Tratamentos com uma única dose e BID x 8d resultaram em redução dramática dos níveis de IL-6 humana no plasma dos animais (46 e 58% respectivamente), conforme mostrado na Figura 17.
Exemplo 5 Q Estado de Fosforilação de Akt em S129 é um Biomarcador CK2 Específico
[000425] Descobriu-se que o sítio S129 de Akt1 é único à CK2 usando o software Scansite 2.0. Vide Obenauer et al.,"Scansite 2.0: Proteome- Wide Prevention of Cell Signaling Interactions Using Short Sequence Motifs", 2003, Nucl Acids Res 31: 3635-41.
[000426] Para avaliar o efeito de CX-4945 sobre o estado de fosforilação de Akt em S129, expressão de Akt em S129 foi medida em células não tratadas (UnTreated Cells - UTC) e comparada com células tratadas com CX-4945 e uma série de outros agentes quimioterapêuticos, incluindo 5-fluorouracila (5-FU), BEZ 235, um inibidor duplo de PIK3/mTOR, AZD 6244, um inibidor de MEK, erlotinib, um inibidor de tirosina quinase de EGFR, lapatinib, um inibidor duplo de EGFR e Her2, sorafenib, uma RKT multi-objetivada (Raf, PDGF, VEGF, C-Kit) e sunitinib (Sutent), uma RTK multi-objetivada. Conforme mostrado na Figura 18, o marcador p-Akt em S129 responde precocemente ao tratamento com CX-4945. Esses resultados foram validados em cultura de células, em PBMCs de camundongo e em tecido tumoral (IHC).
[000427] Além disso, descobriu-se que inibição de fosforilação de Akt em S129 por CX-4945 era reversível. Vide Figura 19. Esses dados sugerem que o estado de fosforilação de Akt em S129 pode ser usado para monitorar a resposta de uma célula cancerígena a um inibidor de CK2.
Exemplo 6 Expressão de Subunidade de CK2 e Sensibilidade a Inibidores de CK2
[000428] Os níveis de mRNA de CK2a foram determinados em células de câncer de mama usando métodos padrões. Descobriu-se que células de câncer de mama com maiores níveis de mRNA de CK2a são mais sensíveis a inibidores de CK2, conforme mostrado na Figura 20, para células de câncer de mama tratadas com CX-4945 (A), Composto 1 (B) e Composto 2 (C).
[000429] A correlação entre CK2 subunit expressão, o estado de fosforilação de Akt em S129 e sensibilidade to CX-4945 e Composto 2 foi analisados.
[000430] Uma correlação direta foi identificada entre os níveis de expressão de mRNA de CK2a e a atividade de vários inibidores de CK2 em células cancerígenas. Descobriu-se que células de câncer de mama com maiores níveis de mRNA de CK2a são mais sensíveis ao Composto K (CX-4945) e outros inibidores de CK2 (por exemplo, Composto 1 e Composto 2) do que células com menores níveis de expressão de CK2a (vide Figura 20).
[000431] Em linhagens de células de câncer de mama sensíveis ao CX-4945 e Composto 2, o estado de fosforilação de Akt em S129 era diretamente proporcional à expressão de CK2a'. Em linhagens de células de câncer de mama resistentes ao CX-4945 e Composto 2, o estado de fosforilação de Akt em S129 era um inversamente proporcional multiplicativo à expressão de CK2a'. Os resultados são mostrados na Figura 21.
[000432] Níveis de fosforilação diminuídos com exposição crescente ao inibidor de CK2s, conforme medido pela AUC cumulativa, demonstram a inibição de atividade intracelular de CK2.
[000433] Consequentemente, análise da relação entre expressão da subunidade catalítica de CK2 e o estado de fosforilação de Akt em S129 pode, portanto, ser usada para prever a sensibilidade de células cancerígenas a inibidores de CK2, tal como CX-4945.
[000434] Além disso, foi mostrado que a fosforilação dos biomarcadores Akt em S129, Akt em S473 e p21 em T145 na via PI3 diminui de uma maneira relacionada à exposição (AUC) (Figuras 22A- C), indicando que o estado de fosforilação de Akt em S129, Akt em S473 e p21 em T145 pode ser usado para monitorar a resposta de uma doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2.
Exemplo 7 Análise para Determinar Marcadores que Influenciam a Sensibilidade a Inibidores de CK2
[000435] Os níveis de expressão da subunidade CK2a, p-Akt em S129 e Akt1 total foram determinados usando técnicas padrões. A utilidade desses marcadores para prever os valores de IC50 para inibidores de CK2 em células cancerígenas foi avaliada.
[000436] A IC50 de CX-4945 foi melhor prevista examinando a expressão relativa de CK2a e 0 estado de fosforilação de Akt em S129 normalizado para expressão total de Akt, de acordo com a expressão: IC50 = 5,58 - 0,14 (CK2a) + 4,5(pAktS129norm). Vide Figura 23.
Exemplo 8 CX-4945 Modula a Sinalização à PI3K/Akt e Progressão de Ciclo Celular
[000437] O efeito de concentrações crescentes de CX-4945 sobre a sinalização à PIK3/Akt e progressão de ciclo celular foi avaliado em células de câncer de mama BT-474 e células de câncer pancreático BxPC-3. Conforme mostrado na Figura 24, CX-4945 reduziu os níveis de p-Akt em S129 e p-Akt S473, bem como p-p21 em T145 em ambos os tipos de célula.
[000438] Conforme observado na Figura 25, CX-4945 modula o ciclo celular em células de câncer BT-474 e BxPC-3. Com relação à angiogênese e hipóxia, foi observado que concentrações crescentes de CX-4945 não têm efeitos significativos sobre a formação e migração de tubo em células BxPC-3. Vide Figura 26. As concentrações de aldolase estavam reduzidas após tratamento com CX-4945, enquanto que os níveis de pVHL e p53 estavam aumentados. Vide Figura 27. Usando um ensaio repórter de luciferase para medir a expressão de fator-1 induzível por hipóxia (Hypoxia-lnducible Factor-1a - HIF-1a), diminuição de atividade de HIF-1a foi observada após exposição a concentrações crescentes de CX-4945 (Figura 28).
Exemplo 9 CK2 é Superexpressa em um Painel de Linhagens de Células de Mieloma Múltiplo Humano
[000439] Os níveis de mRNA e proteína de CK2 foram avaliados em HMCL (Human Myelomuma Cell Line) e células plasmáticas normais CD138+. Os níveis de CK2α, CK2α'e CK2β foram medidos e normalizados com transcritos de actina. Conforme mostrado na Figura 29, os níveis de mRNA e proteína de CK2α, CK2α'e CK2β estavam elevadas nas linhagens de células de mieloma múltiplo quando comparado com células plasmáticas normais.
Exemplo 10 CX-4945 Reduz a Atividade de Quinase CK2 em Linhagens de Células de Mieloma Múltiplo
[000440] Um ensaio de quinase in vitrofoi realizado para medir a atividade de quinase CK2 em linhagens de células de mieloma múltiplo após tratamento com CX-4945 a 10 ^M. Conforme mostrado na Figura 30, CX-4945 reduziu significativamente a atividade de quinase CK2 em linhagens de células de mieloma múltiplo U266, RPMI, OCI-MY1 e KMS11 quando comparado com células não tratadas (UnTreated Cells - UTC).
Exemplo 11 CX-4945 Modula a Sinalização à CK2 em Células de Mieloma Múltiplo Humano
[000441] Esse exemplo demonstra que CX-4945 exibe várias atividades de mediação, incluindo células de mieloma múltiplo, incluindo a redução de fosforilação de Akt-S129, p21-T145, NF-KB e JAK/STAT, a redução dos níveis de IL-6 e indução de apoptose celular. Além disso, CX-4945 inibe a hipóxia induzida por HIF-1a e suprime o VEGF. Respostas avaliadas nesse estudo incluem determinação dos níveis dos seguintes marcadores: p-p21, p-Akt, IL-6, IL-8, Ki67, Caspase, CTC e FDG-PET.
[000442] O efeito de CX-4945 sobre a sinalização à CK2 foi medido em células de mieloma múltiplo humano. Especificamente, o efeito de CX-4945 sobre a fosforilação de Akt1 e NF-KB, modulação de JAK/STAT e divagem de PARP foi avaliado. Vide Figuras 31A-D. CX- 4945 reduziu a fosforilação de p-Akt em S129 e S473 (Figura 31 A), bem como a fosforilação de p-NF-KB em S529 (Figura 31B). Além disso, foi mostrado que CX-4945 reduz a fosforilação de p-STAT3 em Y705 e p- JAK2 em Y1007/1008 (Figura 31C) e foi observado um aumento na divagem de PARP (Figura 31 D), um marcador para apoptose celular.
[000443] Além disso, o efeito de CX-4945 sobre a secreção de VEGF foi examinado. Conforme mostrado na Figura 32, tratamento com CX- 4945 a 10 nM reduziu a secreção de VEGF em linhagens de células de mieloma múltiplo. Além disso, foi observado que CX-4945 modula a expressão de HIF-1a em um painel de linhagens de células de mieloma múltiplo. Vide Figura 33.
[000444] Por fim, foi mostrado que tratamento com CX-4945 em células de mieloma múltiplo U266 reduz a produção de IL-6, um fator de crescimento e sobrevivência chave para células de mieloma, bem como um fator de morbidade principal para pacientes com mieloma múltiplo. Vide Figura 34.
[000445] Em virtude de a CX-4945 reduzir a atividade de CK2 em células de mieloma múltiplo, ela tem o efeito de modular a atividade de várias proteínas chave nessa doença. Especificamente, a CK2 fosforila múltiplos substratos na via PI3K/Akt, incluindo Akt-S129, a qual é exclusivamente fosforilada por CK2. Além disso, a CK2 modula JAK/STAT e fosforila NF-KB, incluindo NF-KB em S529. Além disso, a CK2 suprime a apoptose celular e está elevada sob hipóxia.
Exemplo 12 Investigação Adicional de Atividade de CX-4945 na Via PI3K/Akt
[000446] Conforme descrito acima, CK2 fosforila múltiplos substratos na via PI3K/Akt. Vide Figura 35. Os presentes inventores mostraram que Akt-S129 é exclusivamente fosforilada por CK2.
[000447] Nesse exemplo, a capacidade do inibidor de CK2, CX-4945, de inibir a fosforilação de Akt-129 foi comparada com aquela da estaurosporina (STS), outro inibidor de quinase. De modo interessante, CX-4945 inibiu a fosforilação de Akt-S129, enquanto que exposição à STS não afeta a fosforilação de Akt-S 129. Vide Figura 36.
[000448] Para investigar adicionalmente a capacidade de CX-4945 de reduzir a fosforilação de vários alvos da via PIK3/Akt, o composto foi administrado oralmente a camundongos (75 mg/kg bid) e a fosforilação de Akt-S129, Akt-S473 e p21-T145 foi avaliada em PBMCs de camundongo. Conforme mostrado na Figura 37, a fosforilação de Akt- S129, Akt-S473 e p21-T145foi reduzida em camundongos tratados com CX-4945.
Exemplo 13 Combinações de CX-4945 com Agentes Quimioterapêuticos que Danificam o DNA
[000449] Usando um ensaio Comet, foi observado que CX-4945 aumenta o dano a DNA induzido por gemcitabina em células de câncer ovariano A2780. Vide Figura 38. Além disso, gemcitabina e CX-4945 exibiram atividade anti-tumor sinergística em xenoenxertos A780. Vide Figuras 39A e 39B.
Exemplo 14 Combinações de CX-4945 com Agentes de Objetivação de EGFR
[000450] Conforme mostrado na Figura 40, há "cross-talk"entre a sinalização de EGFR e CK2. Especificamente, a CK2 controla múltiplas proteínas quinases através de fosforilação de uma chaperona molecular de objetivação de quinase, Cdc37, a qual exerce efeitos sobre o EGFR diretamente, bem como Src a qual, subsequentemente, interage com EGFR. Além disso, a exportação nuclear de S6K1 II é regulada pela fosforilação de CK2 em Ser-17, enquanto que ativação de ERK induzida por EGF promove a dissociação CK2-mediada de alfa-catenina a partir de beta-catenina e transativação de beta-catenina. Por fim, a C2K é um componente do complexo de base KSR1 que contribui para a ativação de quinase Raf.
[000451] Para examinar o efeito de CX-4945 sobre a atividade de CK2 estimulada por fator de crescimento epidérmico (Epidermal Growth Factor - EGF), A431 (carcinoma epidermoide) e NCI-H2170 (células de câncer de pulmão) foram tratados com 100 ng/ml de EGF e/ou CX-4945 a 10 pM e os níveis de p-Akt em S129 e p-Akt em S473 foram medidos. Em ambos os tipos de células, foi observado que CX-4945 inibe significativamente a atividade de CK2 estimulada por EGF. Vide Figura 41.
[000452] Conforme mostrado nas Figuras 42A e 42B, a combinação de CX-4945 com erlotinib reduz a fosforilação de Akt e rpS6. Erlotinib objetiva o receptor de fator de crescimento epidérmico (Epidermal Growth Factor Receptor - EGFR) e é usado para tratar NSCLC e câncer pancreático, dentre outros tipos de câncer. Em xenoenxertos A431, erlotinib e CX-4945 exibiram atividade anti-tumor sinergística. Vide Figura 43. Embora o erlotinib e CX-4945 mostrassem inibição significativa de crescimento de tumor quando usados isoladamente, a combinação foi ainda mais potente, mostrando atividade sinergística a qual prolongou o tempo até endpoint.
[000453] A totalidade de cada patente, pedido de patente, publicação e documento mencionado aqui é incorporado por referência. Citação das patentes, pedidos de patente, publicações e documentos acima não é uma admissão de que qualquer um dos precedentes é a técnica anterior precedente, nem constitui qualquer admissão quanto aos conteúdos ou dados dessas publicações ou documentos.
[000454] Os exemplos precedentes são fornecidos para ilustrar a invenção e não limitar ou definir seu escopo. Modificações podem ser feitas no precedente sem se desviar dos aspectos básicos da invenção. Embora a invenção tenha sido descrita em detalhes substanciais com referência a uma ou mais modalidades específicas, aqueles versados no campo reconhecerão que alterações podem ser feitas nas modalidades especificamente divulgadas no presente pedido e, ainda, essas modificações e aprimoramentos estão dentro do escopo e espírito da invenção. A invenção ilustrativamente descrita aqui pode ser adequadamente praticada na ausência de qualquer (quaisquer) elemento(s) não especificamente divulgado(s) aqui. Assim, por exemplo, em cada caso aqui, qualquer um dos termos "compreendendo", "consistindo essencialmente em" e "consistindo em" pode ser substituído pelos outros dois termos. Assim, os termos e expressões os quais foram empregados são usados como termos de descrição e não de limitação, equivalentes das características mostradas e descritas ou porções das mesmas não são excluídas e é reconhecido que várias modificações são possíveis dentro do escopo da invenção. Modalidades da invenção são apresentadas nas reivindicações a seguir.

Claims (26)

1. Método in vitropara monitoramento da resposta de um indivíduo que está sendo tratado com um inibidor de CK2, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) determinação do nível de um biomarcador em uma amostra biológica derivada do indivíduo em um ponto de tempo durante ou após administração do inibidor de CK2, em que o biomarcador é selecionado do nível de Akt S473 fosforilado, da proporção de Akt S 473 fosforilado para Akt total, , do nível de NF-KB S529 fosforilado, da proporção de NF-KB S529 fosforilado para NF-KB total, do nível de STAT3 T705 fosforilado, da proporção de STAT3 T705 fosforilado para STAT3 total, do nível de JAK2 Y1007/1008 fosforilado e da proporção de JAK2 Y1007/1008 fosforilado para JAK2 total; e (b) comparação do nível do biomarcador na amostra biológica com um nível de referência do biomarcador; em que uma diminuição no nível do biomarcador na amostra biológica, comparado com o nível de referência do biomarcador, é indicativa de uma resposta positiva ao tratamento com o referido inibidor de CK2.
2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o nível de referência do biomarcador é selecionado do grupo consistindo em (1) o nível do referido biomarcador do indivíduo antes de administração do inibidor de CK2; (2) o nível do referido biomarcador a partir de uma população de referência; (3) um nível pré- atribuído para o referido biomarcador; e (4) o nível do referido biomarcador do indivíduo em um segundo ponto de tempo antes do primeiro ponto de tempo.
3. Método, de acordo a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a referida amostra biológica é selecionada de uma célula, um tecido, uma cultura tecidual, um tumor ou um fluido biológico derivado do referido indivíduo.
4. Método, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o referido fluido biológico é selecionado de plasma, soro ou PBMCs.
5. Método, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que a referida célula é uma célula tumoral em circulação (Circulating Tumor Cell - CTC).
6. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o referido indivíduo sofre de um câncer ou malignidade.
7. Método, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que o referido câncer ou malignidade é selecionado de câncer de mama, câncer de mama inflamatório (Inflammatory Breast Cancer - IBC), câncer pancreático, câncer de próstata, câncer de pulmão, câncer de cólon, melanoma, mieloma múltiplo, câncer de pele, câncer do sistema nervoso central ou câncer de fígado.
8. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o referido indivíduo sofre de um distúrbio autoimune, inflamatório ou infeccioso mediado por CK-2.
9. Método, de acordo a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o referido inibidor de CK2 é CX-4945.
10. Método in vitropara monitoramento da resposta de um indivíduo que está sendo tratado com um inibidor de CK2, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) determinação do nível de mRNA e/ou expressão de proteína de um biomarcador em uma amostra biológica derivada do indivíduo em um ponto de tempo durante ou após administração do inibidor de CK2, em que o biomarcador é selecionado de IL-6, IL-8, CK2α, CK2a', CK2β, VEGF e HIF-1 a; e (b) comparação do nível do biomarcador na amostra biológica com um nível de referência do biomarcador; em que uma diminuição no nível do biomarcador na amostra biológica, comparado com o nível de referência do biomarcador, é indicativa de uma resposta positiva ao tratamento com o referido inibidor de CK2.
11. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o nível de referência do biomarcador é selecionado do grupo consistindo em (1) o nível do referido biomarcador do indivíduo antes de administração do inibidor de CK2; (2) o nível do referido biomarcador a partir de uma população de referência.
12. Método, de acordo a reivindicação 10 ou 11, caracterizado pelo fato de que a referida amostra biológica é selecionada de uma célula, um tecido, uma cultura tecidual, um tumor ou um fluido biológico derivado do referido indivíduo.
13. Método, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o referido fluido biológico é selecionado de plasma, soro ou PBMCs.
14. Método, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que a referida célula é uma célula tumoral em circulação (Circulating Tumor Cell - CTC).
15. Método, de acordo com a reivindicação 10 ou 11, caracterizado pelo fato de que o referido indivíduo sofre de um câncer ou malignidade.
16. Método, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o referido câncer ou malignidade é selecionado de câncer de mama, câncer de mama inflamatório (Inflammatory Breast Cancer - IBC), câncer pancreático, câncer de próstata, câncer de pulmão, câncer de cólon, melanoma, mieloma múltiplo, câncer de pele, câncer do sistema nervoso central ou câncer de fígado.
17. Método, de acordo com a reivindicação 10 ou 11, caracterizado pelo fato de que o referido indivíduo sofre de um distúrbio autoimune, inflamatório ou infeccioso mediado por CK-2.
18. Método, de acordo com a reivindicação 10 ou 11, caracterizado pelo fato de que o referido inibidor de CK2 é CX-4945.
19. Método in vitropara prever a resposta clínica de uma doença mediada por CK2 ao tratamento com um inibidor de CK2 em um indivíduo, caracterizado pelo fato de que compreende determinação do nível de um biomarcador em uma amostra biológica derivada do indivíduo em um ponto de tempo durante ou após administração do inibidor de CK2, em que o biomarcador é selecionado do nível de Akt S473 fosforilado, da proporção de Akt S 473 fosforilado para Akt total, do nível de NF-KB S529 fosforilado, da proporção de NF-KB S529 fosforilado para NF-KB total, do nível de STAT3 T705 fosforilado, da proporção de STAT3 T705 fosforilado para STAT3 total, do nível de JAK2 Y1007/1008 fosforilado e da proporção de JAK2 Y1007/1008 fosforilado para JAK2 total, o nível de expressão de IL-6, o nível de expressão de IL-8, o nível de expressão de CK2o, o nível de expressão de CK2a', o nível de expressão de CK2β, o nível de expressão de VEGF e o nível de expressão de HIF-1a.
20. Método, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que a referida amostra biológica é selecionada de uma célula, um tecido, uma cultura tecidual, um tumor ou um fluido biológico derivado do referido indivíduo.
21. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que o referido fluido biológico é selecionado de plasma, soro ou PBMCs.
22. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que a referida célula é uma célula tumoral em circulação (Circulating Tumor Cell - CTC).
23. Método, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que o referido indivíduo sofre de um câncer ou malignidade.
24. Método, de acordo com a reivindicação 23, caracterizado pelo fato de que o referido câncer ou malignidade é selecionado de câncer de mama, câncer de mama inflamatório (Inflammatory Breast Cancer - I BC), câncer pancreático, câncer de próstata, câncer de pulmão, câncer de cólon, melanoma, mieloma múltiplo, câncer de pele, câncer do sistema nervoso central ou câncer de fígado.
25. Método, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que o referido indivíduo sofre de um distúrbio autoimune, inflamatório ou infeccioso mediado por CK-2.
26. Método, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que o referido inibidor de CK2 é CX-4945.
BR112012007555-1A 2009-10-02 2010-10-04 Métodos in vitro para prever a sensibilidade e resposta de doenças mediadas por proteína quinase ck2 a inibidores de ck2 BR112012007555B1 (pt)

Applications Claiming Priority (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US24827009P 2009-10-02 2009-10-02
US61/248,270 2009-10-02
US25580509P 2009-10-28 2009-10-28
US61/255,805 2009-10-28
US32377110P 2010-04-13 2010-04-13
US61/323,771 2010-04-13
US38068510P 2010-09-07 2010-09-07
US61/380,685 2010-09-07
PCT/US2010/051341 WO2011041785A1 (en) 2009-10-02 2010-10-04 Biomarkers for predicting the sensitivity and response of protein kinase ck2-mediated diseases to ck2 inhibitors

Publications (2)

Publication Number Publication Date
BR112012007555A2 BR112012007555A2 (pt) 2016-10-25
BR112012007555B1 true BR112012007555B1 (pt) 2020-09-29

Family

ID=43128291

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BR112012007555-1A BR112012007555B1 (pt) 2009-10-02 2010-10-04 Métodos in vitro para prever a sensibilidade e resposta de doenças mediadas por proteína quinase ck2 a inibidores de ck2

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20110212845A1 (pt)
EP (1) EP2483686A1 (pt)
JP (1) JP2013506836A (pt)
KR (1) KR20120104196A (pt)
AU (1) AU2010300307A1 (pt)
BR (1) BR112012007555B1 (pt)
CA (1) CA2776278A1 (pt)
IL (1) IL218935A0 (pt)
IN (1) IN2012DN03817A (pt)
MX (1) MX2012003997A (pt)
WO (1) WO2011041785A1 (pt)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB201212773D0 (en) * 2012-07-18 2012-08-29 Ucl Business Plc Vascular remodelling
US9146545B2 (en) 2012-11-27 2015-09-29 Honeywell International Inc. Multivariable control system for setpoint design
TWI582239B (zh) * 2013-03-11 2017-05-11 諾華公司 與ｗｎｔ抑制劑相關之標記
KR101593595B1 (ko) * 2013-10-08 2016-02-12 한국생명공학연구원 Ｃｘ－４９４５를 유효성분으로 함유하는 스플라이싱 조절제
WO2015053452A1 (ko) * 2013-10-08 2015-04-16 한국생명공학연구원 Ｃｘ－４９４５를 유효성분으로 함유하는 스플라이싱 조절제
US20170051062A1 (en) * 2014-02-18 2017-02-23 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Methods and Pharmaceutical Compositions for the Treatment of Diseases Mediated by the NRP-1/OBR Complex Signaling Pathway
EA035674B1 (ru) * 2014-07-18 2020-07-24 Санофи Способ определения того, является ли пациент, предположительно страдающий от рака, кандидатом для терапии афлиберцептом
WO2016133860A1 (en) * 2015-02-16 2016-08-25 Board Of Regents Of The University Of Nebraska Cancer biomarkers and methods of use thereof
GB202102895D0 (en) * 2021-03-01 2021-04-14 Cambridge Entpr Ltd Novel compounds, compositions and therapeutic uses thereof
WO2023190820A1 (ja) * 2022-03-30 2023-10-05 公立大学法人福島県立医科大学 抗ＣＫ２α抗体又はその断片
CN115160341B (zh) * 2022-07-18 2023-07-18 中国医学科学院医学实验动物研究所 苯并噁嗪类化合物及其药物用途

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW200715636A (en) 2005-10-04 2007-04-16 Antig Tech Co Ltd Method of controlling fuel concentration used in direct liquid fuel cell
CA2974246C (en) 2006-09-01 2020-02-25 Senhwa Biosciences, Inc. Tricyclic heteroaryl compounds and their use as protein modulators
US8488289B2 (en) 2006-09-27 2013-07-16 International Rectifier Corporation Current protection circuit for intelligent power switch
US20090035609A1 (en) 2007-07-31 2009-02-05 Apple Inc. Intelligent universal rechargeable batteries for battery charging system for mobile and accessory devices

Also Published As

Publication number Publication date
JP2013506836A (ja) 2013-02-28
EP2483686A1 (en) 2012-08-08
IN2012DN03817A (pt) 2015-08-28
BR112012007555A2 (pt) 2016-10-25
IL218935A0 (en) 2012-07-31
KR20120104196A (ko) 2012-09-20
WO2011041785A1 (en) 2011-04-07
MX2012003997A (es) 2012-07-25
US20110212845A1 (en) 2011-09-01
CA2776278A1 (en) 2011-04-07
AU2010300307A1 (en) 2012-05-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
BR112012007555B1 (pt) Métodos in vitro para prever a sensibilidade e resposta de doenças mediadas por proteína quinase ck2 a inibidores de ck2
US20200338083A1 (en) Combination therapies
RU2715236C2 (ru) Комбинации
US8853235B2 (en) Polymorphs and salts of a kinase inhibitor
US20120129849A1 (en) Deuterated serine-threonine protein kinase modulators
JP6126069B2 (ja) 癌の分類および使用法
US20110065712A1 (en) Tricyclic compounds and pharmaceutical uses thereof
TWI772753B (zh) Mdm2抑制劑的治療方法和生物標記物
KR20120104180A (ko) 신규한 트리시클릭 단백질 키나제 조절제
WO2011011199A1 (en) Combination therapies with ck2 modulators
WO2012170827A2 (en) Pyrazolopyrimidines and related heterocycles as ck2 inhibitors
TWI711452B (zh) 癌症的倂用治療法
KR20140040594A (ko) 돌연변이체 c-kit의 억제 방법
CA3150354A1 (en) METHOD FOR IDENTIFYING RESPONDERS TO SMARCA2/4 DEGRADATION AGENTS
JP2022511282A (ja) Ｐｌｋ１標的のリン酸化状態及びｐｌｋ１阻害剤を用いた癌の治療
TW202214248A (zh) 使用ｍｄｍ２拮抗劑的癌症療法之生物標記
US20150099754A1 (en) Treatment of cancer characterized by gene mutations
WO2024111504A1 (ja) スプライシング機能を調節するがん治療薬の被験者に対する奏功を予測する方法

Legal Events

Date Code Title Description
B08F Application dismissed because of non-payment of annual fees [chapter 8.6 patent gazette]
B08G Application fees: restoration [chapter 8.7 patent gazette]
B11A Dismissal acc. art.33 of ipl - examination not requested within 36 months of filing
B04C Request for examination: application reinstated [chapter 4.3 patent gazette]
B08F Application dismissed because of non-payment of annual fees [chapter 8.6 patent gazette]
B08G Application fees: restoration [chapter 8.7 patent gazette]
B06F Objections, documents and/or translations needed after an examination request according [chapter 6.6 patent gazette]
B06U Preliminary requirement: requests with searches performed by other patent offices: procedure suspended [chapter 6.21 patent gazette]
B06A Patent application procedure suspended [chapter 6.1 patent gazette]
B09A Decision: intention to grant [chapter 9.1 patent gazette]
B16A Patent or certificate of addition of invention granted [chapter 16.1 patent gazette]

Free format text: PRAZO DE VALIDADE: 20 (VINTE) ANOS CONTADOS A PARTIR DE 04/10/2010, OBSERVADAS AS CONDICOES LEGAIS.