BR102022013090A2 - Método de avaliação de dano proteico em mechas de cabelo e seu respectivo uso - Google Patents

Abstract

método de avaliação de dano proteico em mechas de cabelo e seu respectivo uso. o presente pedido de patente de privilégio de invenção pertence aos métodos para tratamento capilar, e refere-se mais especificamente a um método, que notadamente, colorimétrica a avaliação do dano proteico; a solução verificou de forma comparativa a correlação entre o dano proteico provocado por diferentes tratamentos químicos, como outras características da fibra capilar, como: cor, brilho, penteabilidade, resistência da fibra e conseguiu ter resultados comprovados através de repetibilidade e reprodutibilidade, entregando uma resposta verdadeira do estado da haste capilar, que traduz a perda proteica em uma escala de cor, onde o verde representa o dano mais leve, os tons de cinza e violeta claro, danos moderados e os tons de roxo e roxo escuro, os danos capilares intensos; além de apresentar viabilidade de uso por profissionais especializados como tricologistas, médicos, esteticistas e cabeleireiros; o método mostra a vantagem de menor interferência aos ingredientes que, frequentemente estão presentes nos produtos cosméticos, os quais são interferentes em outros métodos presentes no mercado, como os tensoativos presentes em shampoos e condicionadores.

Description

CAMPO TÉCNICO DA INVENÇÃO

[001] O presente pedido de patente de privilégio de invenção pertence aos métodos para tratamento capilar, e refere-se mais especificamente a um método, que notadamente, colorimétrica a avaliação do dano proteico.

[002] O desenvolvimento de produtos capilares necessitava de estudos científicos que pudessem nortear e comprovar resultados de produtos e serviços. Com o crescimento do mercado de cabelos e a evolução dos produtos, saindo do básico uso de shampoo e condicionador, para máscaras, leave ins, sérums, a indústria lançou uma quantidade enorme de produtos nos últimos dez anos, e a grande maioria deles, somente segmentada por um cluster de hábitos e atitudes, e sem resultados científicos precisos que pudesse comprovar eficácia dos mesmos. Neste meio tempo, os consumidores também evoluíram suas percepções e avaliações e notaram claramente, que os resultados apresentados em fotos e vídeos são praticamente impossíveis de serem alcançados, ou seja, os consumidores também querem ver resultados comprovados antes da aquisição de produtos. Desta forma a busca por uma medição técnica de desgaste dos fios é algo almejado por todos os estudiosos do setor.

PROBLEMAS A SEREM RESOLVIDOS

[003] As técnicas de avaliação que existiam até o momento eram onerosas e praticadas somente dentro de grandes laboratórios, com equipamentos que não possibilitavam acesso e manuseio pelo público que realiza tratamentos capilares. O que o método traz como solução permite que estes profissionais avaliem corretamente os danos capilares e façam a indicação de uso correto dos tratamentos capilares. Este método analítico desenvolvido e validado também levou em consideração as práticas atuais das consumidoras, que realizam diariamente tratamentos químicos em seus cabelos. Portanto os testes comparativos foram realizados não somente mostrando melhora de brilho, cor, tração à ruptura (parâmetro associado a dano cortical) e penteabilidade, mas também tratamentos frente aos inúmeros tratamentos químicos, como: descoloração e coloração e alisamentos e relaxamentos. Tais ensaios visaram “validar” o resultado fornecido pelo método de reação e fornecer uma resposta do real estado da haste capilar. Através dos resultados obtidos, foi correlacionado visualmente o dano capilar da perda proteica refletido em uma escala com a cor verificada ao final da reação.

[004] Os produtos capilares têm a função de hidratar e tratar os fios, mas também de limpar. Para que todas as funções sejam realizadas alguns ingredientes são usados frequentemente nas fórmulas. Principalmente nos shampoos e condicionadores encontramos os tensoativos, que interferem em outros métodos de avaliação de perda proteica existentes no mercado, gerando resultados de falso positivo. Portanto esta é uma vantagem do método, além de apresentar boa reprodutibilidade e baixo custo. Além da execução prática e rápida, que permite uso em escala do mesmo.

[005] O cabelo tem uma estrutura anatômica distinta. As fibras capilares são divididas em três constituintes morfológicos principais, também componentes do folículo piloso: cutícula, córtex e medula. As fibras capilares contêm estruturas planas sobrepostas, semelhantes a escamas que circundam o núcleo central da fibra. Trata-se de uma camada protetora espessa, quimicamente resistente, denominada cutícula, com função de proteger o córtex de danos ambientais externos e da ação de agentes químicos dos tratamentos. Possui cerca de 6 a 10 camadas de espessura sobrepostas e consiste em proteína de queratina, lipídios estruturais e proteínas associadas à queratina de alto teor de enxofre. Cada camada possui 3 diferentes estruturas, conforme descrição a seguir: Epicutícula: composta por uma membrana proteolipídica, hidrofóbica e com 12% de cistina. Exocutícula: possui 15% cistina e constitui a maior área da cutícula, 55%. Endocutícula: possui baixa quantidade de cistina (~3%), sendo a camada mais interna e com a capacidade de absorção a água.

[006] As agressões térmicas, químicas e físicas, além de fatores ambientais, como poluição e radiação solar, interferem na qualidade da fibra capilar. Tratamento químico excessivo ou repetido como descoloração dos cabelos, hábitos de higiene e exposição ambiental produzem mudanças na textura do fio e pode resultar na quebra do fio. Essas mudanças podem ser vistas microscopicamente como “intemperismo” da haste do cabelo e contribuem para o emaranhamento e o frizz, ocorrendo a degeneração progressiva da raiz até a ponta do cabelo. O uso de cosméticos capilares pode reparar os danos na cutícula capilar e prevenir a quebra do cabelo, reduzindo o atrito e a absorção de água. Os tratamentos térmicos produzem a decomposição de resíduos de triptofano em produtos de oxidação do tipo quinurenina.

[007] Dada a composição da estrutura capilar, descrita acima, para que um produto possa tratar e atuar na resistência da fibra capilar, é necessário avaliar o nível de dano proteico na haste capilar. O processo de avaliação passa por detectar aminoácidos livres solúveis em um solvente, que realize a extração proteica. Em seguida correlacionar as proteínas, peptídeos e aminoácidos detectados, oriundos das cutículas e córtex capilar com a resistência da fibra capilar. E finalmente demonstrar em equivalência de alguma proteína, como queratina e albumina, o comparativo entre os tratamentos capilares.

ESTADO DA TÉCNICA

[008] Existem vários métodos para a determinação de proteínas totais, que foram desenvolvidos para diferentes amostras, tais como células bacterianas (Biureto), proteínas dissolvidas (Bradford), alimentos (Biureto, Lowry, Bradford), plasma sanguíneo (Biureto, Lowry, Bradford), plantas (Lowry), entre outras. Cada método apresenta um princípio diferente e precisa ser analisado separadamente. O método Biureto (Gornall et al, 1949) envolve a mistura de sulfato de cobre e hidróxido de sódio com tartarato de sódio, que estabiliza o cobre em solução. Segundo Zaia et al (1998), ocorre a formação de um complexo quadrado planar do cobre com a ligação peptídica da proteína, em meio alcalino. Geralmente, as concentrações de proteínas são superestimadas, uma vez que todos os compostos com grupos NH2 são medidos (Itzahki & Gill, 1964). O método descrito por Itzahki & Gill (1964) utiliza somente sulfato de cobre e hidróxido de sódio na formação do complexo. Apresenta limite de detecção de 1x10-3 mg.L-1 e leitura de absorbância em 310 nm (Wilson & Walker, 1995). Várias substâncias presentes no esgoto sanitário absorvem na região de 310 nm, podendo causar interferência nas leituras superestimando as concentrações de proteínas. O complexo formado no método do Biureto também pode ser lido a 540 nm, porém com menos sensibilidade. Stickland (1951) propôs um método para determinar proteínas totais em células bacterianas com os mesmos reagentes daquele proposto por Gornall et al (1949), porém com posterior centrifugação para eliminar material celular e hidróxido de cobre, ambos insolúveis. O método de Lowry apresenta limite de detecção de 0,7 mg.L-1 e leituras de absorbância em comprimento de onda 750 nm (Lowry et al, 1951). Neste método, ocorre redução dos constituintes ativos do reagente folin-fenol por meio das cadeias laterais de alguns aminoácidos que contribuem segundo Zaia et al (1998), com quatro elétrons ou pela retirada de dois elétrons de cada unidade tetrapeptídica dos peptídeos e proteínas, que é facilitada pela formação do quelato entre o cobre (II) e peptídeos/proteínas, tornando a reação biureto mais sensível. Segundo Wilson & Walker (1995), o limite de detecção deste método é de 1x10-5 mg.L-1. No método de Bradford, as leituras são feitas a 595 nm (Bradford, 1976) e o limite de detecção é de 2x10-5 mg.L-1 (Wilson & Walker, 1995). Ocorre ligação do corante azul de Coomassie BG-250 com grupos funcionais básicos ou aromáticos das proteínas. Para isto ocorrer, a proteína deve ter estrutura macromolecular, ou seja, de 8-9 ligações peptídicas no mínimo. A ligação ocorre em dois minutos e esta dura aproximadamente duas horas (Bradford, 1976). Segundo Zaia et al (1998), no pH de reação, a interação entre a proteína de alto peso molecular e o corante provoca o deslocamento do equilíbrio do corante para a forma aniônica, que absorve fortemente em 595 nm.

[009] Para Zaia et al (1998), vários fatores podem ser analisados antes da escolha da metodologia para determinação de proteína total, como sensibilidade, reprodutibilidade, simplicidade, poucas substâncias interferentes, disponibilidade de volume de amostra, rapidez, baixo custo, similaridade às concentrações ambientais e toxicidade do reagente.

[010] Além das referências não-patentárias acima referidas, os documentos de patentes encontrados no estado da técnica mostram outros métodos de avaliação do dano capilar que não são adequados as necessidades do consumidor e não trazem a eficácia pretendida.

[011] O documento BR112019019889 ensina um método para medir o atrito úmido dos cabelos, usando um sistema que compreende: (i) uma sonda de atrito, com uma superfície de contato, dita sonda equipada com um peso na faixa de 10 a 500 g; (ii) um meio para fixar a mecha de cabelo; e (iii) um banho-maria; em que a sonda de atrito está conectada a um analisador de textura, em que o referido método compreende as etapas de: (i) fornecer uma mecha de fibras capilares; (ii) alinhar as fibras capilares; (iii) fixar a mecha de fibras capilares; (iv) imergir a mecha de fibras capilares sob água no banho-maria; (v) colocar as fibras capilares em contato com a superfície de contato da sonda de atrito, a qual está equipada com o peso; (vi) mover a sonda ao longo das fibras capilares; e (vii) registrar o atrito gerado na etapa (vi); em que as etapas (v)- (vii) ocorrem sob água; e em que as etapas (vi)- (vii) são repetidas até que um valor constante seja obtido, sem levantar a sonda dos cabelos.

[012] Por sua vez, o documento BR 11 2019 019900 revela um sistema para a medição de fricção de um feixe de fibras capilares molhado, caracterizado pelo fato de compreender: i) uma sonda de fricção, que tem uma superfície de contato, a dita sonda equipada com um peso na faixa de 10 a 500 g; ii) um meio para prender o feixe de cabelo; e iii) um banho de água; em que a sonda de fricção é conectada a um analisador de textura; e em que os meios de fixação e a sonda de fricção são posicionados no banho de água abaixo da linha de preenchimento; e em que a superfície de contato da sonda de fricção compreende tensoativo; e um método de medição de fricção de cabelo molhado, com o uso do sistema.

[013] O documento Norte Americano US8752441 refere-se a um método para avaliar danos de fibras de queratina usando medições de cor e medições de área. Em um segundo aspecto, a presente invenção refere-se a um método para comparar os danos de diferentes fibras de queratina usando o método para avaliar os danos. A presente invenção refere-se a um método para avaliar danos de fibras de queratina compreendendo as etapas de: fornecer pelo menos uma amostra de fibra(s) de queratina; medir uma cor de uma porção selecionada da amostra e fornecer um valor de cor; medir uma área da porção selecionada da amostra e fornecer um valor de área; fornecendo um valor de dano dividindo o valor da cor pelo valor da área. A presente invenção também se refere a um método para avaliar e comparar danos de diferentes fibras de queratina compreendendo as etapas de: fornecer pelo menos duas amostras diferentes de fibra(s) de queratina; medir uma cor de uma porção selecionada de cada amostra e fornecer um valor de cor de cada amostra; medir uma área da porção selecionada de cada amostra e fornecer um valor de área de cada amostra; fornecer um valor de dano de cada amostra dividindo o valor da cor pelo valor da área; comparando o valor de dano das amostras. Os referidos métodos são úteis para avaliar quantitativa e/ou qualitativamente o grau de danos das fibras de queratina e também para comparar os danos de fibras de diferentes origens, diferentes porções de fibras e/ou fibras tratadas com diferentes tratamentos cosméticos, químicos e/ou mecânicos. O método compreende fornecer pelo menos uma amostra de fibra(s) de queratina; medir uma cor de uma porção selecionada da amostra e fornecer um valor de cor; medir uma área da porção selecionada da amostra e fornecer um valor de área; fornecer um valor de dano dividindo o valor da cor pelo valor da área; em que o método compreende ainda a etapa de tirar uma imagem da porção selecionada da amostra e em que a medição de cor e a medição de área são feitas com base na imagem; em que o valor de cor é a área integrada de pixels que tem um limite de brilho menor que o (escala de cinza) na porção selecionada e em que o valor de área é calculado integrando todas as áreas de pixel que escala de cinza maior que o padrão de escala de cinza.

[014] O documento Coreano KR100749692 revela um método para avaliar qualitativa e quantitativamente os danos ao cabelo usando meios não invasivos. Mais especificamente, é um objetivo da presente invenção fornecer um método para avaliar o grau de dano ao cabelo do alvo de avaliação com base na correlação entre os resultados da análise multivariada do espectro de absorção do infravermelho próximo do cabelo e o grau de cabelo dano. Aqui, o dano ao cabelo inclui preferencialmente dano qualitativo, ou mais preferencialmente inclui um dos danos causados por tratamento permanente ou tratamento de oxidação representado por um tratamento de clareamento ou um tratamento de tingimento de cabelo.

[015] O Documento Norte Americano US20080241854 refere-se a kits e métodos para análise de cabelo, particularmente para determinar a quantidade de dano ao cabelo, incluindo colocar o cabelo em uma solução contendo pelo menos um íon metálico de modo que uma quantidade do íon metálico seja fixada ao cabelo, removendo o cabelo da solução, determinar a quantidade de íon metálico ligado ao cabelo e determinar a quantidade de dano ao cabelo com base na quantidade de íon metálico ligado ao cabelo.

[016] Como mencionado acima, o método da presente invenção é um método para avaliar pelo menos um grau de dano ao cabelo causado por tratamento permanente e o grau de dano ao cabelo causado por tratamento de oxidação.

[017] O método da presente invenção é um método de avaliação do grau de dano ao cabelo a partir do espectro de absorção do infravermelho próximo do cabelo. O dano ao cabelo a ser avaliado inclui pelo menos um dos danos ao cabelo causados pelo tratamento permanente descrito acima e o dano ao cabelo causado pelo tratamento de oxidação.

[018] Esses métodos já revelados e conhecidos não têm a sensibilidade para diferenciar suficientemente o nível de dano do cabelo do indivíduo sem a necessidade de recorrer a aparelhos e equipamentos de alto custo. A presente invenção realiza a avaliação apenas com a utilização de um reagente, que realize a extração proteica, permitindo escolher os produtos cosméticos, mais efetivos para o determinado nível de dano diagnosticado.

[019] Assim, é fato que os documentos citados nos parágrafos acima, apesar de pertencerem ao mesmo campo de aplicação, não apresentam nenhuma das características do objeto ora aperfeiçoado garantindo, assim, que o mesmo atenda aos requisitos legais de patenteabilidade.

OBJETIVO DA INVENÇÃO

[020] Levando em conta todos os problemas que foram apresentados no estado da técnica, o inventor, que possui notório conhecimento sobre o setor, criou e desenvolveu o referido “MÉTODO DE AVALIAÇÃO DE DANO PROTEICO EM MECHAS DE CABELO E SEU RESPECTIVO USO”.

[021] O objetivo da presente invenção é apresentar um método no qual a degradação de proteínas em aminoácidos e peptídeos, medidas de força, brilho e cor foram utilizadas para avaliar a decomposição proteica nas fibras capilares como um todo submetidas aos procedimentos químicos. Foi possível correlacionar os níveis de danos proteicos aos demais testes pelo método, tendo em vista que as amostras que apresentaram maior perda proteica, ou dano severo, com cor intensa roxa, foram as mesmas que apresentaram, menor brilho e resistência à tração e maior força ao pentear. Assim, como as amostras que apresentaram dano leve, tiveram pequenas alterações quando comparadas as amostras controle. Foram realizadas pesquisas exaustivas dos interferentes comparado com os métodos existentes no mercado. Portanto o método entrega as condições ideais e atuais, uma vez que os níveis de danos apresentados são os mais frequentes encontrados nas usuárias de tratamentos capilares. Devemos considerar a possível presença de danos cumulativos nos cabelos, que podem intensificar a perda proteica. Também foi possível concluir que todos os procedimentos químicos analisados podem causar maior ou menor dano, o que reflete na necessidade do uso de produtos capilares com ingredientes ativos adicionados nas formulações que possam minimizar o problema e oferecer melhor condição ao cabelo, refletindo em melhores resultados nas avaliações realizadas e na percepção do consumidor. Desta forma, este método pode auxiliar, tanto no desenvolvimento de novos produtos, formulações e na escolha de ingredientes ativos mais eficientes e que diminuam os riscos de dano ao cabelo, assim como avaliar o nível de dano do cabelo do cliente e escolher os produtos cosméticos, mais efetivos para o determinado nível de dano diagnosticado.

[022] Os produtos capilares têm a função de hidratar e tratar os fios, mas também de limpar. Para que todas as funções sejam realizadas alguns ingredientes são usados frequentemente nas fórmulas. Principalmente nos shampoos e condicionadores encontramos os tensoativos, que interferem em outros métodos de avaliação de perda proteica existentes no mercado, gerando resultados de falso positivo. Portanto esta é uma vantagem do método, que também apresenta reprodutibilidade e baixo custo. Além da execução prática e rápida, que permite uso em escala do mesmo.

BREVE DESCRITIVO

[023] Para avaliar o dano da haste capilar, através da quantificação da perda de proteínas totais utilizou o reagente R1A contendo solução de 1%. Na2; 2% Na2CO3H2O; 0,16% Na2 tartarato; 0,4% NaOH e 0,95% NaHCO3 e reagente R2B com solução de 4% CuSO4.5H2O são misturados na proporção de até 420:1,55 (reagente R1A: R2B). Esta mistura reage com as proteínas presentes na amostra (queratina, peptídeos e aminoácidos) e promove alteração da cor do reagente. A partir da coloração obtida, distingue o dano desta haste capilar de menor a maior dano. Ex: Dano mínimo, dano leve, dano intermediário, dano moderado, dano grave, dano severo e dano intenso.

DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[024] A complementar a presente descrição de modo a obter uma melhor compreensão das características do presente invento e de acordo com uma preferencial realização prática do mesmo, acompanha a descrição, em anexo, um conjunto de desenhos, onde, de maneira exemplificada, embora não limitativa, se representou seu funcionamento:

[025] A Fig. 1 ilustra uma imagem da classificação de dano, correlacionando a cor; a partir da coloração obtida, distingue o dano desta haste capilar de menor a maior dano.

[026] Ex: Dano mínimo, dano leve, dano intermediário, dano moderado, dano grave, dano severo e dano intenso.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[027] Com referência aos desenhos ilustrados, a presente patente de invenção se refere à “MÉTODO DE AVALIAÇÃO DE DANO PROTEICO EM MECHAS DE CABELO E SEU RESPECTIVO USO”, mais precisamente concebe um método feito por intermédio da detecção colorimétrica e quantificação da proteína total em uma solução.

[028] Este método se fundamenta na redução do Cu+2 a Cu+1 ocorrendo a formação de um complexo colorido púrpura com absorbância máxima de 200nm a 800nm. A produção de Cu+1 varia em função da concentração de proteína e tempo de incubação.

[029] Para avaliar o dano da haste capilar, através da quantificação da perda de proteínas totais utilizou o reagente R1A contendo solução de 1%. Na2; 2% Na2CO3H2O; 0,16% Na2 tartarato; 0,4% NaOH e 0,95% NaHCO3 e reagente R2B com solução de 4% CuSO4.5H2O são misturados na proporção de até 420:1,55 (reagente R1A: R2B). Esta mistura reage com as proteínas presentes na amostra (queratina, peptídeos e aminoácidos) e promove alteração da cor do reagente. A partir da coloração obtida, distingue o dano desta haste capilar de menor a maior dano. Ex: Dano mínimo, dano leve, dano intermediário, dano moderado, dano grave, dano severo e dano intenso.

[030] Para realizar a extração de proteínas do cabelo, cerca de 1 a 300 mg de cada mecha de cabelo são cortados em fragmentos de ~0,5 a 5cm e dispersos em de 1 a 80 ml de cloreto de sódio e 1 a 80 ml de água destilada, utilizando-se embalagem de 5 a 100 mL. E após se submete ao banho de ultrassom por de 2 a 180 min de 30 a 70 °C.

[031] Uma alíquota de 0,1 a 30ml do sobrenadante contendo os peptídeos, aminoácidos e proteínas livres é transferido para outro tubo (triplicata) e adicionado de 1ml a 20ml da mistura na proporção de 420:0,5uL (reagente R1A:R2B), posteriormente, são resfriados à temperatura ambiente (por aproximadamente de 3 a 10 minutos) e realizada a leitura colorimétrica.

[032] Destaca-se que as características técnicas aqui descritas e combinadas interagem funcionalmente entre si e produzem um efeito técnico novo, ou, em outras palavras, o efeito técnico após a combinação é diferente que o somatório dos efeitos técnicos das características individuais, então tal combinação do método e do uso do “Kit” resulta em uma solução técnica para avaliação precisa de dano proteico, e, portanto, apresenta atividade inventiva.

[033] É certo que quando o presente invento for colocado em prática, poderão ser introduzidas modificações no que se refere a certos detalhes de construção e forma, sem que isso implique afastar-se dos princípios fundamentais que estão claramente substanciados no quadro reivindicatório, ficando assim entendido que a terminologia empregada não teve a finalidade de limitação.

Claims (5)

1. “MÉTODO DE AVALIAÇÃO DE DANO PROTEICO EM MECHAS DE CABELO”, concebe um método de avaliação do dano da haste capilar em cabelo; caracterizado por ser feito através da detecção colorimétrica e quantificação da proteína total em uma solução; se fundamentar na redução do Cu+2 a Cu+1 ocorrendo a formação de um complexo colorido púrpura com absorbância de 200nm a 800nm; a produção de Cu+1 variar em função da concentração de proteína e tempo de incubação, o método compreende avaliar o dano da haste capilar, devendo seguir o seguinte protocolo de realização: extrair da pessoa a ser analisada, através de pequeno corte de mechas dos cabelos, buscando sempre as partes mais danificadas dos fios, cerca de 1 a 300 mg de cada mecha de cabelo; sendo que as mesmas devem ser cortadas em fragmentos de ~0,5 a 5cm; após o corte as pequenas partes de cabelos devem ser dispersas em de 1 a 80 mL de cloreto de sódio e 1 a 80 mL de água destilada, utilizando-se embalagem de 5 a 100 mL; e em seguida devem ser submetidas ao aparelho ultrassom desenvolvido para atingir de 2 a 180 min de 30 a 70 °C. Após extração das proteínas, segue-se a combinação dos reagentes: que serão misturados na proporção de até 420 : 1,55; através da quantificação da perda de proteínas totais com reagente R1A 1% Na2; 2% Na2COo3H2O; 0,16% Na2 tartarato; 0,4% NaOH e 0,95% NaHCO3 e reagente R2B com 4% CUSO.5H2O.; para extrair as proteínas das mechas de cabelos; para finalizar uma alíquota de 0,1 a 30ml do sobrenadante contendo os peptídeos, aminoácidos e proteínas livres ser transferido para outro tubo e adicionado de 1mL a 20mL da combinação de reagentes na proporção de 420:0,5μL; e após de 05 a 10 minutos será realizada a leitura colorimétrica baseada na escala de danos segundo figura anexa, para que o profissional especializado possa realizar a avaliação e recomendar tratamento adequado à haste capilar.

2. Uso, de um método que compreende um Kit de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que os reagentes estão em uma solução.

3. Uso, do Kit de acordo com a reivindicação 2, caracterizado por os meios para determinar a escala do dano capilar compreendem reagentes R1A:R2B.

4. Uso, do Kit de acordo com a reivindicação 2 , caracterizado por os meios para determinar e interpretar visualmente a escala de danos, compreenderem a leitura colorimétrica baseada na imagem da classificação de dano, correlacionando a cor com os níveis: Sem dano, normal, dano mínimo, dano leve, dano intermediário, dano moderado, dano moderado-, dano moderado+, dano grave, dano severo, dano intenso, dano intenso- e dano intenso +.

5. Uso, do Kit de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que o kit compreende ainda pelo menos um tubo de ensaio.