BR102018011804A2

BR102018011804A2 - implante, e, métodos para preparar um implante e para tratar um defeito ósseo.

Info

Publication number: BR102018011804A2
Application number: BR102018011804-8A
Authority: BR
Inventors: Benjamin T. Reves; Roger E. Harrington; Jebrena C. Jacobs; David S. Scher; Daniel A. Shimko
Original assignee: Warsaw Orthopedic, Inc.
Priority date: 2017-06-12
Filing date: 2018-06-11
Publication date: 2018-12-26
Also published as: WO2018231636A1; US20180353654A1; EP3939627A1; AU2018203249A1; CN109010916A; US11464888B2; EP3415174A1; JP2019022650A; MX2018006803A; EP3415174B1; CN109010916B

Abstract

é fornecido um implante configurado para se encaixar em, ou próximo de, um defeito ósseo para promover o crescimento ósseo. o implante compreende um oxiesterol uniformemente disposto em uma matriz de tecido acelular (atm). a matriz do tecido acelular pode ser de colágeno de porcino, que em alguns casos é reticulado. o implante pode conter um colágeno reticulado de porcino acelular em uma quantidade de cerca de 5% em peso a cerca de 25% em peso do implante e um oxiesterol em uma quantidade de cerca de 5% em peso a cerca de 90% em peso do implante. o oxiesterol pode ser mono-hidrato de oxi133 ou um polimorfo de oxi133. métodos de preparação e uso do implante são fornecidos.

Description

“IMPLANTE, E, MÉTODOS PARA PREPARAR UM IMPLANTE E PARA TRATAR UM DEFEITO ÓSSEO”

ANTECEDENTES [001] Os produtos biológicos são comumente empregados para promover o crescimento ósseo em aplicações médicas, incluindo a cicatrização de fraturas e o controle cirúrgico de distúrbios da coluna vertebral. A fusão da coluna é frequentemente realizada por cirurgiões ortopédicos e neurocirurgiões para tratar doenças degenerativas do disco e artrite que afetam a coluna lombar e cervical, para corrigir deformidades causadas pela escoliose e para reparar a instabilidade devido à espondilolistese. Além disso, as técnicas de fusão da coluna podem ser aplicadas para tratar dores nos braços ou nas pernas causadas por nervos da coluna comprimidos. Historicamente, o enxerto ósseo autógeno, geralmente retirado da crista ilíaca do paciente, tem sido usado para aumentar a fusão entre os níveis vertebrais.

[002] Uma proteína que é osteogênica e comumente usada para promover a fusão da coluna é a proteína óssea humana recombinante tipo 2 (rhBMP-2). As moléculas pequenas também têm sido usadas para induzir o crescimento do osso. Os oxiesteróis formam uma grande família de derivados oxigenados do colesterol que estão presentes na circulação e nos tecidos humanos e animais. Verificou-se que os oxiesteróis estão presentes nas lesões ateroescleróticas e desempenham um papel importante em vários processos fisiológicos, tais como diferenciação celular, inflamação, apoptose e produção de esteroides. Alguns oxiesteróis de ocorrência natural possuem propriedades osteogênicas robustas e podem ser usados para o crescimento ósseo. O oxiesterol de ocorrência natural osteogênico mais potente, o 20(S)hidroxicloresterol, é tanto osteogênico quanto antiadipogênico quando aplicado a células mesenquimais multipotentes capazes de se diferenciar em osteoblastos e adipócitos.

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 10/129

2/108 [003] Um tal oxiesterol é o Oxil33 ou (3S,5S,6S,8R,9S,10R, 13S,

14S,17S) 17-((S)-2-hidroxioctan-2-il)-10, 13 -dimetilhexadecahidro-1Hciclopenta[a]fenantreno-3,6-diol, que exibe a seguinte estrutura:

[004] Uma variedade de materiais tem sido sugerida para o tratamento de defeitos ósseos. Além do enxerto ósseo tradicional, vários substitutos sintéticos do enxerto ósseo têm sido usados ou explorados, incluindo vários materiais de matriz.

[005] Nos últimos anos, muita atenção tem sido dada ao fornecimento de materiais à base de colágeno, de origem humana ou animal. Em particular, uma atenção considerável tem sido direcionada ao desenvolvimento de preparações e materiais baseados em tecidos animais que são tratados para fornecer compatibilidade, a fim de evitar a rejeição dos tecidos quando usados em humanos. A principal função do colágeno na matriz extracelular dérmica é atuar como um suporte no tecido conjuntivo. Predominantemente, o colágeno está presente na forma de colágeno tipo I (80-85%) e colágeno tipo ΙΠ (8-11%), sendo ambos fibrogênios ou colágenos em forma de bastonete. A resistência à tração da pele é devida, em grande parte, a essas moléculas de colágeno que se formam em fibrilas, com moléculas adjacentes reticulando para aumentar ainda mais a resistência à tração. O colágeno também pode ser usado como um material de estrutura para promover o crescimento ósseo. O colágeno tem sido frequentemente usado como transportador para composições de implantes injetáveis ou préformados. A dificuldade com composições de implantes injetáveis contendo colágeno, elastina e/ou outro material biocompatível é que existe uma tendência para migração e reabsorção e isto pode significar que o implante é

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 11/129

3/108 eficaz apenas por um tempo limitado. Os implantes pré-formados prestam-se apenas a procedimentos específicos.

[006] Portanto, existe uma necessidade para implantes maleáveis melhorados, que podem ser usados para fornecer agentes promotores do crescimento ósseo. Há também a necessidade de uma estrutura de colágeno cuja colagenase não pode quebrar facilmente e pode oferecer estabilidade dimensional. Adicionalmente, existe uma necessidade de fornecer implantes maleáveis que possam incorporar um agente osteogênico, tal como um oxiesterol e fornecer convenientemente e rapidamente o oxiesterol a um defeito ósseo. Além disso, existe também a necessidade de um implante maleável com propriedades adesivas para se ligar a outros implantes médicos, tais como parafusos, hastes, placas e dispositivos intercorporais compreendendo osso, aloenxerto, autoenxerto e/ou materiais sintéticos.

SUMÁRIO [007] Os implantes contendo oxiesterol uniformemente dispostos em uma matriz de tecido acelular (ΑΊΜ) e métodos para produzir e usar esses implantes são fornecidos. Os implantes são configurados para se encaixarem em um defeito ósseo ou próximo a um defeito ósseo, para promover o crescimento ósseo. Em algumas modalidades, o implante é um gel, pasta ou massa moldável, que em alguns casos, pode ser fornecido colocando-o em uma seringa. Em outras modalidades, o implante é liofilizado e, em alguns casos, colocado em uma seringa para fornecimento a um defeito ósseo. Após a reidratação, o implante é hidratado e, opcionalmente, colocado em uma seringa para uma aplicação fácil a um sítio cirúrgico. Em algumas modalidades, os implantes liofilizados têm uma matriz de colágeno de porcino acelular, que pode ou não ser reticulada, material ósseo e um agente osteogênico, por exemplo, um oxiesterol incorporado neles. Adicionalmente, são fornecidos implantes moldáveis que, além disso, podem também incluir um material de fase expansível ou ligante, por exemplo carboximatilcelulose,

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 12/129

4/108 alginato, pectina ou quitosana. Em um aspecto, o presente pedido é dirigido a um material médico osteogênico implantável compreendendo um implante liofilizado moldável que inclui uma combinação de uma matriz de colágeno de porcino acelular, material ósseo e um agente ativo compreendendo um oxiesterol.

[008] Em algumas modalidades, é fornecido um implante moldável tendo um agente ativo que compreende a estrutura:

ou um sal, hidrato ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que Ri compreende um substituinte alifático ou cíclico tendo pelo menos um átomo de carbono. Em algumas modalidades, o agente ativo é um esterol compreendendo Oxil33.

[009] Em certas modalidades, a matriz de tecido acelular (ATM) do implante compreende partículas sólidas ou semissólidas de material colagenoso que são derivadas de um material de tecido natural, em que o material colagenoso conserva a arquitetura de fibra original e ultraestrutura molecular do material de tecido natural do qual é derivado, em que o material colagenoso é substancialmente livre de proteínas de tecido não fibroso, glicoproteínas, elementos celulares, lipídeos ou resíduos lipídicos, em que o material colagenoso não é citotóxico, em que a composição de implante é pode ser usada como componente de uma pasta, gel ou uma solução injetável, e em que as partículas de material colagenoso têm um tamanho de partícula na faixa de aproximadamente 50 mícrons a aproximadamente 500 mícrons.

[0010] Em outras modalidades, a matriz de tecido acelular é uma preparação de tecido fibroso colágeno substancialmente não antigênico, não ressorvível, de origem em tecido humano ou animal, que é adequada para homo- ou heterotransplante como um reparo permanente de defeitos dos

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 13/129

5/108 ossos, cuja preparação retém a estrutura natural e a arquitetura original do tecido humano ou animal, é substancialmente livre de proteínas de tecido não fibroso e glicoproteínas, é substancialmente livre de elementos celulares, é substancialmente livre de lipídeos e resíduos lipídicos e não é citotóxica, em que a preparação é capaz, quando implantada, de ser recolonizada pelas células do hospedeiro (por exemplo, osteoclastos, osteoblastos, etc.).

[0011] Em vários aspectos, a matriz do tecido acelular é obtida de uma fonte humana, suína, caprina, bovina, ovina ou equina. Em outros aspectos, a matriz do tecido acelular é o colágeno de porcino, que, em alguns casos, é colágeno de porcino reticulado.

[0012] Em algumas modalidades, a matriz de tecido acelular do implante compreende de cerca de 5% em peso a cerca de 25% em peso de colágeno de porcino acelular e de cerca de 0,01% em peso a cerca de 90% em peso de oxiesterol. Em outras modalidades, além do oxiesterol e de uma matriz de tecido acelular, o implante compreende um fluido de cerca de 25% em peso a cerca de 50% em peso e material ósseo em uma quantidade de cerca de 25% em peso a cerca de 75% em peso.

[0013] Em certas modalidades, o material ósseo do implante inclui matriz óssea desmineralizada (DBM), matriz óssea mineralizada, fibras ósseas desmineralizadas, aparas ósseas desmineralizadas. Em outras modalidades, o material ósseo pode ser de cerâmica inorgânica compreendendo fosfato tricálcico, hidroxiapatita, fosfato de cálcio bifásico, cerâmica de fosfato de cálcio porosa, fosfato tricálcico, hidroxiapatita ou uma combinação dos mesmos. Em alguns aspectos, o fosfato tricálcico e a hidroxiapatita estão em uma razão de cerca de 70:30 a cerca de 90:10 ou em uma razão de cerca de 85:15. Em várias modalidades, o tamanho de partícula do material ósseo é de cerca de 125 pm a cerca de 750 pm.

[0014] Fluidos úteis para o implante desta divulgação incluem, sem limitação, água, solução de cloreto de sódio, dextrose, solução de Ringer com

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 14/129

6/108

Lactato, sangue, aspirado de medula óssea, frações de medula óssea, solução salina tamponada com fosfato, DMSO, ácido acético, acetona, DME, DMF, MTBE, acetonitrila, butanol, butanona, álcool t-butílico, etanol, polietileno glicol, metanol, clorobenzeno, clorofórmio, tolueno, propanol, pentano, heptano, etanol, Capriol-90 ™, éter dietílico ou uma combinação dos mesmos. O implante moldável pode também incluir excipientes, diluentes, polímeros biodegradáveis, agentes intumescentes, fatores de crescimento, antibióticos, solubilizantes, estabilizantes, agentes espessantes, antioxidantes ou ligantes. Ligantes ou agentes intumescentes úteis incluem carboximatilcelulose, alginato, quitosana, hidroxipropil celulose, hidroxipropil metilcelulose, hidroxietil metilcelulose, hidroxietilcelulose, Carbopol, propileno glicol, álcoois polivinílicos, gelatina ou uma combinação dos mesmos.

[0015] Em algumas modalidades, é fornecido um implante liofilizado configurado para encaixar em, ou próximo de, um sítio de defeito do osso para promover o crescimento ósseo, o implante compreendendo um colágeno de porcino acelular reticulado em uma quantidade de cerca de 0,1% em peso a cerca de 15% em peso do implante e um oxiesterol em uma quantidade de cerca de 0,01% em peso a cerca de 90% em peso do implante, o oxiesterol tendo uma concentração de cerca de 100 mg/cc a cerca de 1,0 g/cc.

[0016] Em algumas modalidades, existe um método para preparar um implante, o método compreendendo misturar um fluido com um oxiesterol, o oxiesterol em uma quantidade de cerca de 0,01% em peso a cerca de 90% em peso com base no peso total do implante e em uma matriz de tecido acelular em uma quantidade de cerca de 0,1% em peso a cerca de 20% em peso com base no peso total do implante. Em outras modalidades, o método compreende ainda sujeitar o implante misturado com o fluido para liofilização para formar um implante liofilizado, em que, em alguns casos, a matriz de tecido acelular é de colágeno de porcino acelular ou um colágeno reticulado de porcino acelular.

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 15/129

7/108 [0017] Em certas modalidades, o fluido usado neste método é água, solução de cloreto de sódio, dextrose, solução de Ringer com Lactato, solução salina tamponada com fosfato (PBS), sangue, aspirado de medula óssea, frações de medula óssea ou uma combinação dos mesmos em uma quantidade de cerca de 3/4 mL a cerca de 10 mL. Em outras modalidades, o método compreende ainda a adição de um material de fase expansível ou ligante em uma quantidade de cerca de 2% em peso a cerca de 4% em peso com base no peso total do implante. Em alguns aspectos, o material de fase expansível ou ligante é carboximatilcelulose, pectina, quitosana ou uma combinação dos mesmos.

[0018] Em algumas modalidades, o método para preparar um implante compreende ainda a colocação do implante em um molde antes da liofilização. Este molde pode conferir características que aumentam a reidratação do implante liofilizado, tais como reentrâncias ou orifícios de formas aleatórias ou definidas. Em outros aspectos, o implante pode ser colocado em uma seringa, que em alguns aspectos, pode ser colocada em uma bolsa selada a vácuo. Em outros aspectos, o implante liofilizado pode ser colocado em uma bolsa selada a vácuo.

[0019] Em algumas modalidades, existe um método para tratar um defeito ósseo em um paciente com necessidade do mesmo, o método compreendendo implantar em, ou próximo de, um defeito ósseo um implante compreendendo um oxiesterol uniformemente disperso em uma matriz de tecido acelular. Em alguns aspectos, o implante usado no método de tratamento compreende ainda um material de fase expansível ou ligante em uma quantidade de cerca de 2% em peso a cerca de 4% em peso com base no peso total do implante.

[0020] Características e vantagens adicionais de várias modalidades serão apresentadas em parte na descrição que segue, e em parte serão evidentes a partir da descrição, ou podem ser aprendidas pela prática de várias

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 16/129

8/108 modalidades. Os objetivos e outras vantagens de várias modalidades serão realizados e atingidos por meio dos elementos e combinações particularmente indicados na descrição e nas reivindicações anexas.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS [0021] Em parte, outros aspectos, características, benefícios e vantagens das modalidades serão evidentes em relação à descrição, reivindicações anexas e desenhos anexos a seguir, em que

A FIG. 1 ilustra uma radiografia de raios-X tirada de um rato imediatamente após a cirurgia, após ter sido submetido a uma fusão da coluna lombar póstero-lateral de dois níveis onde o implante era uma pasta maleável contendo Permacol®, mono-hidrato de Oxil33, cerâmica e carboximatilcelulose;

a FIG. 2 ilustra uma radiografia de raios-X feita do mesmo rato 4 semanas no pós-operatório depois de submetido a uma fusão da coluna lombar póstero-lateral de dois níveis, onde o implante era uma pasta maleável contendo Permacol®, mono-hidrato de Oxil33, cerâmica e carboximatilcelulose;

a FIG. 3 ilustra uma radiografia de raios-X feita do mesmo rato 8 semanas no pós-operatório depois de submetido a uma fusão de coluna lombar póstero-lateral de dois níveis em que o implante era uma pasta maleável contendo Permacol®, mono-hidrato de Oxil33, cerâmica e carboximatilcelulose;

a FIG. 4 ilustra uma lâmina de histologia de um rato do grupo de controle que foi implantado com um material de implante que não continha qualquer oxiesterol incluindo mono-hidrato de Oxil33;

a FIG. 5 ilustra uma lâmina de histologia (por exemplo, coloração H&E) do mesmo rato que foi submetido à fusão da coluna lombar póstero-lateral de dois níveis 8 semanas após o procedimento onde o implante

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 17/129

9/108 era uma pasta maleável contendo Permacol®, mono-hidrato de Oxil33, cerâmica e carboximatilcelulose; e a FIG. 6 ilustra uma lâmina de histologia (por exemplo, coloração H&E) do mesmo rato que foi submetido à fusão da coluna lombar póstero-lateral de dois níveis 8 semanas após o procedimento onde o implante era uma pasta maleável contendo Permacol®, mono-hidrato de Oxil33, cerâmica e carboximatilcelulose.

[0022] Será entendido que os números podem não estar em escala.

Além disso, a relação entre objetos em uma figura pode não estar em escala, e pode, de fato, ter uma relação inversa ao tamanho. As figuras pretendem trazer compreensão e clareza à estrutura de cada objeto mostrado, e assim, algumas características podem ser exageradas para ilustrar uma característica específica de uma estrutura.

DESCRIÇÃO DETALHADA [0023] Para efeitos do presente relatório descritivo e das reivindicações anexas, salvo indicação em contrário, todos os números expressando quantidades de ingredientes, porcentagens ou proporções de materiais, condições de reações e outros valores numéricos usados no relatório descritivo e reivindicações, devem ser entendidos como sendo modificados em todos exemplos, pelo termo “cerca de”. Consequentemente, a menos que indicado em contrário, os parâmetros numéricos apresentados no seguinte relatório descritivo e reivindicações anexas são aproximações que podem variar dependendo das propriedades desejadas que se pretende obter através do presente pedido. No mínimo, e não como uma tentativa de limitar a aplicação da doutrina dos equivalentes ao escopo das reivindicações, cada parâmetro numérico deve, pelo menos, ser interpretado à luz do número de dígitos significativos relatados e pela aplicação de técnicas comuns de arredondamento.

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 18/129

10/108 [0024] Não obstante as faixas e parâmetros numéricos que estabelecem o escopo amplo do presente pedido sejam aproximações, os valores numéricos estabelecidos nos exemplos específicos são relatados com a maior precisão possível. Qualquer valor numérico, no entanto, inerentemente contém certos erros necessariamente resultantes do desvio padrão encontrado em suas respectivas medições de teste. Além disso, todas as faixas aqui divulgadas devem ser entendidas como abrangendo quaisquer e todas as subfaixas aí incluídas. Por exemplo, uma faixa de “1 a 10” inclui quaisquer e todas as subfaixas entre (e incluindo) o valor mínimo de 1 e o valor máximo de 10, ou seja, todas e quaisquer subfaixas com um valor mínimo igual ou maior que 1 e um valor máximo menor ou igual a 10, por exemplo, 5,5 a 10.

Definições [0025] Nota-se que, tal como usado no presente relatório descritivo e nas reivindicações anexas, as formas singulares “um”, “uma” e “o, a” incluem referentes plurais a menos que expressamente e inequivocamente limitados a um referente. Assim, por exemplo, a referência a “um implante” inclui um, dois, três ou mais implantes.

[0026] O termo “agente bioativo” como usado aqui é geralmente usado para se referir a qualquer substância que altera a fisiologia de um paciente. O termo “agente bioativo” pode ser usado indiferentemente aqui com os termos “agente terapêutico”, “quantidade terapeuticamente eficaz” e “ingrediente farmacêutico ativo”, “API” ou “fármaco”.

[0027] O termo “biodegradável” inclui compostos ou componentes que se degradarão com o tempo pela ação de enzimas, pela ação hidrolítica e/ou por outros mecanismos semelhantes no corpo humano. Em várias modalidades, “biodegradável” inclui componentes que podem quebrar ou degradar dentro do corpo para componentes não tóxicos à medida que as células (por exemplo, células ósseas) infiltram os componentes e permitem o

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 19/129

11/108 reparo do defeito. Por “bioerodível” entende-se que os compostos ou componentes irão erodir ou degradar ao longo do tempo devido, pelo menos em parte, quando entram em contato com substâncias encontradas nos fluidos circundantes do tecido, ou por ação celular. Por “bioabsorvível” entende-se que os compostos ou componentes serão decompostos e absorvidos no corpo humano, por exemplo, por uma célula ou tecido. “Biocompatível” significa que os compostos ou componentes não causará irritação ou necrose tecidual substancial no local do tecido-alvo e/ou não será carcinogênico.

[0028] O termo “alquila” como usado aqui, se refere a um radical hidrocarboneto monovalente saturado ou insaturado, ramificado, de cadeia linear ou cíclica, derivado da remoção de um átomo de hidrogênio de um único átomo de carbono de um alcano, alqueno ou alquino de origem. Grupos alquila típicos incluem, mas não estão limitados a, metila; etila como etanila, etenila, etinila; propilas como propan-l-ila, propan-2-ila, ciclopropan-l-ila, prop-l-en-l-ila, prop-l-en-2-ila, prop-2-en-l-ila, cicloprop-l-en-l-ila; cicloprop-2-en-l-ila, prop-l-in-l-ila, prop-2-in-l-ila, etc.; butilas como butan-

1-ila, butan-2-ila, 2-metila-propan-l-ila, 2-metila-propan-2-ila, ciclobutan-1ila, but-l-en-l-ila, but-l-en-2-ila, 2-metila-prop-l-en-l-ila, but-2-en-l-ila, but-2-en-2-ila, buta-l,3-dien-l-ila, buta-l,3-dien-2-ila, ciclobut-l-en-l-ila, ciclobut-l-en-3-ila, ciclobuta-l,3-dien-l-ila, but-l-in-l-ila, but-l-in-3-ila, but3-in-l-ila, etc.; e semelhantes. Quando os níveis específicos de saturação são pretendidos, a nomenclatura “alquenila” e/ou “alquinila” é usada, como definida abaixo. Em algumas modalidades, os grupos alquila são (C1-C40) alquila. Em algumas modalidades, os grupos alquila são (C1-C6) alquila.

[0029] O termo “alcanila”, como usado aqui, se refere a um radical alquila de cadeia linear, ramificada ou cíclica, saturada, derivado da remoção de um átomo de hidrogênio de um único átomo de carbono de um alcano de origem. Grupos alcanila típicos incluem, mas não estão limitados a, metanila; etilinila; propanilas tais como propan-l-ila, propan-2-ila (isopropila),

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 20/129

12/108 ciclopropan-l-ila, etc.; butanilas tais como butan-l-ila, butan-2-ila (secbutila), 2-metil-propan-l-ila (isobutila), 2-metil-propan-2-ila (t-butila), ciclobutan-l-ila, etc.; e semelhantes. Em algumas modalidades, os grupos alcanila são (C1-C40) alcanila. Em algumas modalidades, os grupos alcanila são (C1-C6) alcanila.

[0030] O termo “alquenila”, como usado aqui, se refere a um radical alquila de cadeia linear, ramificada ou cíclica, insaturada tendo pelo menos uma ligação dupla de carbono-carbono derivada da remoção de um átomo de hidrogênio de um único átomo de carbono de um alqueno de origem. O radical pode estar na conformação eis ou trans em tomo da(s) ligação(ões) dupla(s). Grupos alquenila típicos incluem, mas não estão limitados a etenila; propenilas tais como prop-l-en-l-ila, prop-l-en-2-ila, prop-2-en-l-ila, prop-2en-2-ila, cicloprop-l-en-l-ila; cicloprop-2-en-l-ila; butenilas como but-l-en-

1-ila, but-l-en-2-ila, 2-metil-prop-l-en-l-ila, but-2-en-l-ila, but-2-en-l-ila, but-2-en-2-ila, buta-l,3-dien-l-ila, buta-l,3-dien-2-ila, ciclobut-l-en-l-ila, ciclobut-l-en-3-ila, ciclobuta-l,3-dien-l-ila, etc.; e semelhantes. Em algumas modalidades, o grupo alquenila é (C2-C40) alquenila. Em algumas modalidades, o grupo alquenila é (C2-C6) alquenila.

[0031] O termo “alquinila” como usado aqui se refere a um radical alquila de cadeia linear ramificada ou cíclica insaturada tendo pelo menos uma ligação tripla de carbono-carbono derivado pela remoção de um átomo de hidrogênio de um único átomo de carbono de um alquino de origem. Grupos alquinila típicos incluem, mas não estão limitados a, etinila; propinilas, tais como prop-l-in-l-ila, prop-2-in-l-ila, etc.; butinilas tais como but-l-in-l-ila, but-3-in-l-ila, etc.; e semelhantes. Em algumas modalidades, o grupo alquinila é (C2-C40) alquinila. Em algumas modalidades, o grupo alquinila é (C2-C6) alquinila.

[0032] O termo “alquildi-ila” como usado aqui se refere a um radical hidrocarboneto divalente saturado ou insaturado, de cadeia linear, ramificada,

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 21/129

13/108 ou cíclica derivado da remoção de um átomo de hidrogênio de cada um dos dois átomos de carbono diferentes de um alcano, alqueno ou alquino de origem, ou pela remoção de dois átomos de hidrogênio de um único átomo de carbono de um alcano, alqueno ou alquino de origem. Os dois centros de radicais monovalentes ou cada valência do centro de radical divalente podem formar ligações com os mesmos átomos ou diferentes átomos. As alquildi-ilas típicas incluem, mas não estão limitadas a, metandi-ilas; etildi-ilas como etan-

1.1- di-ila, etan-l,2-di-ila, eten-l,l-di-ila, eten-l,2-di-ila; propildi-ilas como propan-l,l-di-ila, propan-l,2-di-ila, propan-2,2-di-ila, propan-l,3-di-ila, ciclopropan-l,l-di-ila, ciclopropan-l,2-di-ila, prop-l-en-l,l-di-ila, prop-l-en-

1.2- di-ila, prop-2-en-l,2-di-ila, prop-l-en-l,3-di-il cicloprop-l-en-l,2-di-ila, cicloprop-2-en-l,2-di-ila, cicloprop-2-en-l,l-di-ila, prop-l-in-l,3-di-ila, etc.; butildi-ilas como, butan-l,l-di-ila, butan-l,2-di-ila, butan-l,3-di-ila, butan-

1,4-di-ila, butan-2,2-di-ila, 2-metil-propan-l,l-di-ila, 2-metil-propan-l,2-diila, ciclobutan-l,l-di-ila; ciclobutan-l,2-di-ila, ciclobutan-l,3-di-ila, but-l-en-

1,1-di-ila, but-l-en-l,2-di-ila, but-l-en-l,3-di-ila, but-l-en-l,4-di-ila, 2-metilprop-1 -en-1,1 -di-ila, 2-metanilideno-propan-1,1 -di-ila, buta-1,3-dien-1,1 -diila, buta-l,3-dien-l,3-di-ila, ciclobut-l-en-l,2-di-ila, ciclobut-l-en-l,3-di-ila, ciclobut-2-en-1,2-di-ila, ciclobuta-1,3-dien-1,2-di-ila, ciclobuta-1,3-dien-1,3di-ila, but-l-in-l,3-di-ila, but-l-in-l,4-di-ila, buta-l,3-di-in-l,4-di-ila, etc.; e semelhantes. Quando se pretendem níveis específicos de saturação, é usada a nomenclatura alcanildi-ila, alquenildi-ila e/ou alquinildi-ila. Em algumas modalidades, o grupo alquildi-ila é (C1-C40) alquildi-ila. Em algumas modalidades, o grupo alquildi-ila é (C1-C6) alquildi-ila. Também são contemplados radicais alcanildi-ila acíclicos saturados nos quais os centros de radicais estão nos carbonos terminais, por exemplo, metandi-il (metano); etan-l,2-di-il(etano); propan-l,3-di-il(propano); butan-l,4-di-il(butano); e semelhantes (também referidos como alquilenos, definidos infra).

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 22/129

14/108 [0033] O termo “alquileno” como usado aqui se refere a um radical alquildi-ila de cadeia linear com dois centros de radicais monovalentes terminais derivados da remoção de um átomo de hidrogênio de cada um dos dois átomos de carbono terminais de alcano, alqueno ou alquino de origem de cadeia linear. Grupos alquileno típicos incluem, mas não estão limitados a metano; etilenos como etano, eteno, etino; propilenos como propano, prop[l]eno, propa[l, 2]dieno, prop[l]ino, etc.; butilenos como butano, but[l]eno, but[2]eno, buta[l, 3]dieno, but[l]ino, but[2]ino, but[l, 3]diíno, etc.; e semelhantes. Quando se pretendem níveis específicos de saturação, é usada a nomenclatura alcano, alqueno e/ou alquino. Em algumas modalidades, o grupo alquileno é (C1-C40) alquileno. Em algumas modalidades, o grupo alquileno é (C1-C6) alquileno.

[0034] Os termos “heteroalquila”, “heteroalcanila”, “heteroalquenila”, “heteroalquinila”, “heteroalquildi-ila” e “heteroalquileno”, como usados aqui, se referem a radicais alquila, alcanila, alquenila, alquinila, alquildi-ila e alquileno, respectivamente, em que um ou mais dos átomos de carbono são cada um independentemente substituídos com os mesmos ou diferentes grupos heteroatômicos. Grupos heteroatômicos típicos que podem ser incluídos nesses radicais incluem, mas não estão limitados a, —O—, —S—, —O—O—, —S—S—, —O—S—, NR', =N—N=, —N=N—, —N(O)N— , _N=N—NR—, —PH—, —P(O)2—, —O—P(O)2—, —SH2—, — S(O)2—, —SnH2— ou semelhantes, onde cada R’ é independentemente hidrogênio, alquila, alcanila, alquenila, alquinila, arila, arilarila, arilalquila, heteroarila, heteroarilalquila ou heteroaril-heteroarila tal como aqui definidos.

[0035] O termo “arila” como usado aqui se refere a um radical hidrocarboneto aromático monovalente derivado pela remoção de um átomo de hidrogênio de um único átomo de carbono de um sistema de anel aromático de origem. Grupos arila típicos incluem, mas não estão limitados a, radicais derivados de aceantrileno, acenaftileno, acefenaneleno, antraceno,

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 23/129

15/108 azuleno, benzeno, criseno, coroneno, fluoranteno, fluoreno, hexaceno, hexafeno, hexileno, as-indaceno, s-indaceno, indano, indeno, naftaleno, octaceno, octafeno, octaleno, ovaleno, penta-2,4-dieno, pentaceno, pentaleno, pentafeno, perileno, fenaleno, fenantreno, piceno, pleiadeno, pireno, pirantreno, rubiceno, trifenileno, trinaftaleno e semelhantes. Em algumas modalidades, o grupo arila é (C5-C14) arila ou um grupo (C5-C10) arila. Algumas arilas são fenila e naftila.

[0036] O termo “arildi-ila” como usado aqui se refere a um radical hidrocarboneto aromático divalente derivado pela remoção de um átomo de hidrogênio de cada um dos dois diferentes átomos de carbono de um sistema de anel aromático de origem ou pela remoção de dois átomos de hidrogênio de um único átomo de carbono de um sistema de anel aromático de origem. Os dois centros de radicais monovalentes ou cada valência do centro divalente podem formar ligações com o(s) mesmo(s) ou diferente(s) átomo(s). Grupos arildi-ila típicos incluem, mas não se limitam a, radicais divalentes derivados de aceantrileno, acenaftileno, acefenantrileno, antraceno, azuleno, benzeno, criseno, coroneno, fluoranteno, flúor, hexaceno, hexafeno, hexileno, asindaceno, s-indaceno, indano, indeno, naftaleno, octaceno, octafeno, octaleno, ovaleno, penta-2,4-dieno, pentaceno, pentaleno, pentafeno, perileno, fenaleno, fenantreno, piceno, pleiadeno, pireno, pirantreno, rubiceno, trifenileno, trinaftileno e semelhantes. Em algumas modalidades, o grupo arildi-ila é (C5C14) arildi-ila ou (C5-C10) arildi-ila. Por exemplo, alguns grupos arildi-ila são radicais divalentes derivados de benzeno e naftaleno, especialmente, fena-

1,4-di-ila, nafta-2,6-di-ila e nafta-2,7-di-ila.

[0037] O termo “arileno”, como usado aqui, se refere a um radical em ponte divalente tendo dois centros de radicais monovalentes adjacentes derivados da remoção de um átomo de hidrogênio de cada um dos dois átomos de carbono adjacentes de um sistema de anel aromático de origem. A fixação de um radical em ponte de arileno, por exemplo, benzeno, a um

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 24/129

16/ 108 sistema de anel aromático de origem, por exemplo, benzeno, resulta em um sistema de anel aromático fundido, por exemplo, naftaleno. Presume-se que a ponte tenha o número máximo de ligações duplas não cumulativas consistentes com sua ligação ao sistema de anéis fundidos resultante. A fim de evitar a contagem dupla de átomos de carbono, quando um substituinte arileno é formado tomando em conjunto dois substituintes adjacentes em uma estrutura que inclui substituintes alternativos, os átomos de carbono da ponte de arileno substituem os átomos de carbono em ponte da estrutura. Como exemplo, considere a seguinte estrutura:

R² em que R¹, quando tomado sozinho é hidrogênio, ou quando tomado em conjunto com R² é (C5-C14) arileno; e R², quando tomado sozinho é hidrogênio, ou quando tomado em conjunto com R¹ é (C5-C14) arileno.

[0038] Quando R¹ e R² são cada um hidrogênio, o composto resultante é benzeno. Quando R¹ tomado em conjunto com R² é C6 arileno (benzeno), o composto resultante é naftaleno. Quando R¹ tomado em conjunto com R² é CIO arileno (naftaleno), o composto resultante é antraceno ou fenantreno. Grupos típicos de arileno incluem, mas não se limitam a, aceantrileno, acenaftileno, acefenantileno, antraceno, azuleno, benzeno (benzo), criseno, coroneno, fluoranteno, fluoreno, hexaceno, hexafeno, hexileno, as-indaceno, s-indaceno, indeno, naftaleno (nafto), octaceno, octafeno, octaleno, ovaleno, penta-2,4-dieno, pentaceno, pentaleno, pentafeno, perileno, fenaleno, fenantreno, piceno, pleiadeno, pireno, pirantreno, rubiceno, trifenileno, trinaftaleno ou semelhantes. Quando uma conectividade específica é pretendida, os átomos de carbono em ponte envolvidos (da ponte do arileno) são denotados entre parênteses, por exemplo, [1, 2]benzeno ([1, 2]benzo), [1, 2]naftaleno, [2, 3]naftaleno, etc. Assim, no

Petição 870180049765, de 11/06/2018. pág. 25/129

17/108 exemplo acima, quando R¹ tomado junto com R² é [2, 3] naftaleno, o composto resultante é o antraceno. Quando R¹ tomado junto com R₂ é [1, 2] naftaleno, o composto resultante é fenantreno. Em uma modalidade, o grupo arileno é (C5-C14) ou (C5-C10).

[0039] O termo “arilarila”, como usado aqui, se refere a um radical hidrocarboneto monovalente derivado da remoção de um átomo de hidrogênio de um único átomo de carbono de um sistema de anel em que dois ou mais sistemas de anel aromáticos idênticos ou não idênticos são unidos diretamente em conjunto por uma ligação simples, em que o número dessas junções de anel diretas é de um a menos que o número de sistemas de anel aromático de origem envolvidos. Grupos arilarila típicos incluem, mas não estão limitados a, bifenila, trifenila, fenil-naftila, binaftila, bifenil-naftila e semelhantes. Quando o número de átomos de carbono compreendendo um grupo arilarila é especificado, os números se referem aos átomos de carbono compreendendo cada anel aromático de origem. Por exemplo, (C1-C14) arilarila é um grupo arilarila em que cada anel aromático compreende de 5 a 14 carbonos, por exemplo, bifenila, trifenila, binaftila, fenilnaftila, etc. Em alguns casos, cada sistema de anel aromático de origem de um grupo arilarila é independentemente um (C5-C14) aromático ou (C1-C10) aromático. Alguns são grupos arilarila em que todos os sistemas de anéis aromáticos de origens são idênticos, por exemplo, bifenila, trifenila, binaftila, trinaftila, etc.

[0040] O termo “biarila”, como usado aqui, se refere a um radical arilarila com dois sistemas aromáticos de origem idênticos unidos diretamente em conjunto por uma ligação simples. Grupos biarila típicos incluem, mas não estão limitados a, bifenila, binaftila, biantracila e semelhantes. Em alguns casos, os sistemas de anéis aromáticos são anéis (C5-C14) aromáticos ou anéis (C5-C10) aromáticos. Em uma modalidade, o grupo biarila é bifenila.

[0041] O termo “arilalquila”, como usado aqui, se refere a um radical alquila acíclico, no qual um dos átomos de hidrogênio ligados a um átomo de

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 26/129

18/108 carbono, tipicamente um átomo de carbono terminal ou spa, é substituído por um radical arila. Grupos arilalquila típicos incluem, mas não estão limitados a, benzila, 2-feniletan-l-ila, 2-fenileten-l-ila, naftilmetila, 2-naftiletan-l-ila,

2-naftileten-l-ila, naftobenzila, 2-naftofeniletan-l-ila e semelhantes. Quando são pretendidas frações de alquila específicas, a nomenclatura arilalcanila, arilalquenila e/ou arilalquinila é usada. Em algumas modalidades, o grupo arilalquila é (C6-C40) arilalquila, por exemplo, a fração alcanila, alquenila ou alquinila do grupo (C1-C26) arilalquila e a fração arila é (C5-C14). Em algumas modalidades, o grupo arilalquila é (C6-C13), por exemplo, a fração alcanila, alquenila ou alquinila do grupo arilalquila é (C1-C3) e a fração arila é (C5-C10).

[0042] O termo “heteroarila” como usado aqui se refere a um radical monovalente heteroaromático derivado pela remoção de um átomo de hidrogênio a partir de um único átomo de um sistema de anel heteroaromático de origem. Grupos heteroarila típicos incluem, mas não estão limitados a, radicais derivados de acridina, arsindol, carbazol, β-carbolina, cromano, cromeno, cinolina, furano, imidazol, indazol, indol, indolina, indolizina, isobenzofurano, isocromeno, isoindol, isoindolina, isoquinolina, isotiazol, isoxazol, naftiridina, oxadiazol, oxazol, perimidina, fenantridina, fenantrolina, fenazina, ftalazina, pteridina, purina, pirano, pirazina, pirazol, piridazina, piridina, pirimidina, pirrol, pirrolizina, quinazolina, quinolina, quinolizina, quinoxalina, tetrazol, tiadiazol, tiazol, tiofeno, triazol, xanteno e semelhantes. Em algumas modalidades, o grupo heteroarila é uma heteroarila de 5-14 membros, com heteroarila de 5-10 membros. Alguns radicais heteroarila são aqueles derivados de sistemas de anéis heteroaromáticos de origem nos quais quaisquer heteroátomos no anel são nitrogênios, tais como imidazol, indol, indazol, isoindol, naftiridina, pteridina, isoquinolina, ftalazina, purina, pirazol, pirazina, piridazina, piridina, pirrol, quinazolina, quinolina, etc.

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 27/129

19/108 [0043] O termo “heteroarildi-ila” se refere a um radical heteroaromático divalente derivado pela remoção de um átomo de hidrogênio de cada um de dois átomos diferentes de um sistema de anel heteroaromático de origem ou pela remoção de dois átomos de hidrogênio de um único átomo de um sistema de anel heteroaromático. Os dois centros de radicais monovalentes ou cada valência do centro divalente único podem formar ligações com o(s) mesmo(s) ou diferente(s) átomo(s). Grupos heteroarildi-ila típicos incluem, mas não estão limitados a, radicais divalentes derivados de acridina, arsindol, carbazol, β-carbolina, cromano, cromeno, cinolina, furano, imidazol, indazol, indol, indolina, indolizina, isobenzofurano, isocromo, isoindol, isoindolina. isoquinolina, isotiazol, isoxazol, naftiridina, oxadiazol, oxazol, perimidina, fenantridina, fenantrolina, fenazina, ftalazina, pteridina, purina, pirano, pirazina, pirazina, piridazina, piridina, pirimidina, pirrol, pirrolizina, quinazolina, quinolina, quinolizina, quinoxalina tetrazol, tiadiazol, tiazol, tiofeno, triazol, xanteno e semelhantes. Em algumas modalidades, o grupo heteroarildi-ila é heteroarildi-ila de 5-14 membros ou uma heteroarildiila de 5-10 membros. Alguns grupos heteroariladi-ila são radicais divalentes derivados de sistemas de anel heteroaromáticos de origem nos quais quaisquer heteroátomos do anel são nitrogênios, tais como imidazol, indol, indazol, isoindol, naftiridina, pteridina, isoquinolina, ftalazina, purina, pirazol, pirazina, piridazina, piridina, pirrol, quinazolina, quinolina, etc.

[0044] O termo “heteroarileno” como usado aqui se refere a um radical em ponte divalente tendo dois centros de radicais monovalentes adjacentes derivados pela remoção de um átomo de hidrogênio de cada um de dois átomos adjacentes de um sistema de anel heteroaromático de origem. A fixação de um radical em ponte de heteroarileno, por exemplo, piridino, a um sistema de anel aromático de origem, por exemplo, benzeno, resulta em um sistema de anel heteroaromático fundido, por exemplo, quinolina. Presume-se que a ponte tenha o número máximo de ligações duplas não cumulativas

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 28/129

20/ 108 consistentes com sua ligação ao sistema de anéis fundidos resultante. De modo a evitar átomos de anel de contagem dupla, quando um substituinte heteroarileno é formado tomando em conjunto dois substituintes adjacentes em uma estrutura que inclui substituintes alternativos, os átomos de anel em ponte do heteroarileno substituem os átomos de anel em ponte da estrutura. Como exemplo, considere a seguinte estrutura:

R² em que R¹, quando tomado sozinho é hidrogênio, ou quando tomado em conjunto com R² é heteroarileno de 5-14 membros; e R², quando tomado sozinho é hidrogênio, ou quando tomado em conjunto com R¹ é heteroarileno de 5-14 membros;

[0045] Quando R¹ e R² são, cada um, hidrogênio, o composto resultante é benzeno. Quando R¹ tomado em conjunto com R² é um heteroarileno piridino de 6 membros, o composto resultante é isoquinolina, quinolina ou quinolizina. Quando R¹ tomado em conjunto com R² é um heteroarileno de 10 membros (por exemplo, isoquinolina), o composto resultante é, por exemplo, acridina ou fenantridina. Grupos heteroarileno típicos incluem, mas não estão limitados a, acridino, carbazolo, β-carbolino, cromeno, cinolino, furano, imidazolo, indazolno, indoleno, indolizino, isobenzofurano, isocromeno, isoindoleno, isoquinolino, isotiazolno, isoxazolno, naftiridino, oxadiazolno, oxazolno, perimidino, fenantridino, fenantrolino, fenazino, ftalazino, pteridino, purino, pirano, pirazino, pirazolino, piridazino, piridino, pirimidino, pirroleno, pirrolizino, quinazolino, quinolino, quinolizino, quinoxalino, tetrazolno, tiadiazolno, tiazolno, tiofeno, triazolno, xanteno, ou semelhantes. Quando uma conectividade específica é pretendida, os átomos em ponte envolvidos (da ponte de heteroarileno) são indicados entre parênteses, por exemplo, [l,2]piridino, [2,3]piridino, [3,4]piridino, etc.. Assim, no exemplo acima, quando R¹ tomado em conjunto

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 29/129 / 108 com R² é [1,2] piridino, o composto resultante é quinolizina. Quando R¹tomado em conjunto com R² é [2,3] piridino, o composto resultante é quinolina. Quando R¹ tomado em conjunto com R² é piridino [3,4], o composto resultante é isoquinolina. Em algumas modalidades, o grupo heteroarileno é heteroarileno de 5-14 membros ou heteroarileno de 5-10 membros. Alguns radicais heteroarileno são aqueles derivados de sistemas de anéis heteroaromáticos de origem nos quais quaisquer heteroátomos no anel são nitrogênios, tais como imidazolo, indolo, indazolo, isoindolo, naftiridino, pteridino, isoquinolino, ftalazino, purino, pirazolo, pirazino, piridazino, pimdolo, pirrolo, quinazolino, quinolino, etc.

[0046] O termo “heteroaril-heteroarila” como usado aqui se refere a um radical monovalente heteroaromático derivado pela remoção de um átomo de hidrogênio a partir de um único átomo de um sistema em anel no qual dois ou mais sistemas de anéis heteroaromáticos de origem idênticos ou não idênticos são unidos diretamente em conjunto por uma ligação simples, em que o número de tais junções de anel diretas é de um a menos que o número de sistemas de anéis heteroaromáticos envolvidos. Grupos heteroarilheteroarila típicos incluem, mas não estão limitados a, bipiridila, tripiridila, piridilpurinila, bipurinila, etc. Quando o número de átomos do anel é especificado, os números se referem ao número de átomos compreendendo cada sistemas de anéis heteroaromáticos de origem. Por exemplo, heteroarilheteroarila de 5-14 membros é um grupo heteroaril-heteroarila em que cada sistema de anel heteroaromático de origem compreende de 5 a 14 átomos, por exemplo, bipiridila, tripiridila, etc. Em algumas modalidades, cada sistema de anel heteroaromático de origem é independentemente um heteroaromático de 5-14 membros, em outras modalidades, um heteroaromático de 5-10 membros. Também existem grupos heteroaril-heteroarila nos quais todos os sistemas de anéis heteroaromáticos de origem são idênticos. Alguns radicais heteroaril-heteroarila são aqueles em que cada grupo heteroarila é derivado de

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 30/129 / 108 sistemas de anéis heteroaromáticos de origem nos quais quaisquer heteroátomos no anel são nitrogênios, tais como imidazol, indol, indazol, isoindol, naftiridina, pteridina, isoquinolina, ftalazina, purina, pirazol, pirazina, piridina, piridina, pirrol, quinazolina, quinolina, etc.

[0047] O termo “bi-heteroarila”, como usado aqui, se refere a um radical heteroaril-heteroarila tendo dois sistemas de anéis heteroaromáticos, idênticos, unidos diretamente em conjunto por uma ligação simples. Grupos bi-heteroarila típicos incluem, mas não se limitam a, bipiridila, bipurinila, biquinolinila e semelhantes. Em algumas modalidades, os sistemas de anéis heteroaromáticos são anéis heteroaromáticos de 5-14 membros ou anéis heteroaromáticos de 5-10 membros. Alguns radicais de bi-heteroarila são aqueles em que os grupos heteroarila são derivados de um sistema de anel heteroaromático de origem no qual quaisquer heteroátomos do anel são nitrogênios, como bi-imidazolila, bi-indolila, bi-indazolila, bi-isoindolila, binafatiridinila, biperidinila, bi-isoquinolinila, bifiralazinila, bipurinila, bipirazolila, bipirazinila, bipiridazinila, bipiridinila, bipirrolila, biquinazolinila, biquinolinila, etc.

[0048] O termo “heteroarilalquila” como usado aqui se refere a um radical alquila acíclico no qual um dos átomos de hidrogênio ligados a um átomo de carbono, tipicamente um átomo de carbono terminal ou sp2, é substituído com um radical heteroarila. Quando frações alquila específicas são pretendidas, é usada a nomenclatura heteroarilalcanila, heteroarilalquenila e/ou heteroalquinila. Em algumas modalidades, o grupo heteroarilalquila é uma heteroarilalquila de 6-20 membros, por exemplo, a fração alcanila, alquenila ou alquinila da heteroarilalquila tem 1-6 membros e a fração heteroarila é uma heteroarila de 5-14 membros. Em algumas modalidades, a heteroarilalquila é uma heteroarilalquila de 6-13 membros, por exemplo, a fração alcanila, alquenila ou alquinila tem 1-3 membros e a fração heteroarila é uma heteroarila de 5-10 membros.

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 31/129 /108 [0049] O termo “substituído” como usado aqui se refere a um radical em que um ou mais átomos de hidrogênio são, cada um, independentemente, substituídos com o(s) mesmo(s) ou diferente(s) substituinte(s). Os substituintes típicos incluem, mas não estão limitados a, —X, —R, —O-, =0, —OR, —O—OR, —SR, —S-, =S, —NRR, =NR, perhalo (C1-C6) alquila, —CX3, —CF3, —CN, —OCN, —SCN, —NCO, —NCS, —NO, — NO2, =N2, —N3, —S(O)2O-, —S(O)2OH, —S(O)2R, —C(O)R, —C(O)X, —C(S)R, —C(S)X, —C(O)OR, —C(O)O-, —C(S)OR, —C(O)SR, — C(S)SR, —C(O)NRR, —C(S)NRR e —C(NR)NRR, onde cada X é independentemente um halogênio (por exemplo, —F ou -Cl) e cada R é independentemente hidrogênio, alquila, alcanila, alquenila, alcanila, arila, arilalquila, arilarila, heteroarila, heteroarilalquila ou heteroaril-heteroarila, como aqui definido. O substituinte real que substitui qualquer grupo particular dependerá da identidade do grupo que está sendo substituído.

[0050] O termo “solvato”, como usado aqui, se refere a um agregado que compreende uma ou mais moléculas de um composto da divulgação com uma ou mais moléculas de solvente. O solvente pode ser água, caso em que o solvato pode ser um hidrato. Altemativamente, o solvente pode ser um solvente orgânico. Assim, os compostos da presente divulgação podem existir como um hidrato, incluindo um mono-hidrato, di-hidrato, hemi-hidrato, sesqui-hidrato, tri-hidrato, tetra-hidrato ou uma combinação dos mesmos, bem como as formas solvatadas correspondentes. Os compostos da divulgação podem ser solvatos verdadeiros, enquanto em outros casos, os compostos da divulgação podem apenas reter água acidental ou ser uma mistura de água mais algum solvente adventício.

[0051] O termo “oxiesterol” como usado aqui pretende englobar uma ou mais formas de colesterol oxidado. Os oxiesteróis aqui descritos são quer de forma independente quer coletivamente ativos para o crescimento ósseo

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 32/129 / 108 em um paciente, como descrito no documento WO 2013169399 Al, que é aqui incorporado por referência na sua totalidade.

[0052] O oxiesterol pode estar na forma de um sal farmaceuticamente aceitável. Alguns exemplos de sais potencialmente farmaceuticamente aceitáveis incluem os ácidos e bases formadores de sais que não aumentam substancialmente a toxicidade de um composto, tais como sais de metais alcalinos tais como magnésio, potássio e amônio, sais de ácidos minerais tais como cloridrato, ácido iodídrico, bromídrico, fosfórico, metafosfórico, nítrico e sulfurico, bem como sais de ácidos orgânicos tais como ácidos tartárico, acético, cítrico, málico, benzoico, glicólico, glucônico, gulônico, succínico, arilsulfônico, por exemplo, os ácidos p-toluenossulfônico, ou semelhantes.

[0053] Os sais farmaceuticamente aceitáveis de oxiesterol incluem sais preparados a partir de bases ou ácidos não tóxicos farmaceuticamente aceitáveis incluindo bases inorgânicas ou orgânicas, ácidos inorgânicos ou orgânicos e ácidos graxos. Sais derivados de bases inorgânicas incluem sais de alumínio, amônio, cálcio, cobre, férrico, ferroso, lítio, magnésio, mangânico, manganoso, potássio, sódio, zinco e semelhantes. Os sais derivados de bases orgânicas não tóxicas farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de aminas primárias, secundárias e terciárias, aminas substituídas incluindo aminas substituídas de ocorrência natural, aminas cíclicas e resinas de troca iônica básicas, tais como arginina, betaína, cafeína, colina, N,N'dibenziletilenodiamina, dietilamina, 2-dietilaminoetanol, 2dimetilaminoetanol, etanolamina, etilenodiamina, N-etil-morfolina, Netilpiperidina, glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperidina, resinas de poliamina, procaína, purinas, teobromina, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina, trometamina e semelhantes. Quando o composto do presente pedido de patente é básico, os sais podem ser preparados a partir de ácidos não tóxicos farmaceuticamente aceitáveis,

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 33/129 /108 incluindo ácidos inorgânicos e orgânicos. Tais ácidos incluem ácido acético, benzenossulfônico, benzoico, canforsulfônico, cítrico, etanossulfônico, fórmico, fumárico, glucônico, glutâmico, bromídrico, clorídrico, isetiônico, láctico, maleico, málico, mandélico, metanossulfônico, malônico, mucínico, nítrico, pamoico, pantotênico, fosfórico, propiônico, succínico, sulfurico, tartárico, p-toluenossulfônico, ácido trifluoroacético e semelhantes. Sais de ácidos graxos podem também ser usados, por exemplo, sais de ácidos graxos que contenham mais de 2 átomos de carbono, mais de 8 átomos de carbono ou mais de 16 átomos de carbono, tais como butírico, caproico, caprílico, cáprico, láurico, místico, palmítico, esteárico, araquínico ou semelhantes.

[0054] Em algumas modalidades, a fim de reduzir a solubilidade do oxiesterol para auxiliar na obtenção de um efeito de depósito de liberação controlada, o oxiesterol usado como base livre ou usado em um sal que possui uma solubilidade relativamente mais baixa. Por exemplo, o presente pedido de patente pode usar um sal insolúvel, tal como um sal de ácido graxo. Sais de ácidos graxos representativos incluem sais de ácido oleico, ácido linoleico ou sais de ácido graxo com uma solubilidade entre 8 a 20 carbonos, tal como, por exemplo, palmeato ou estearato.

[0055] Os termos composição “bioativa” ou composição “farmacêutica” como usados aqui, pode ser usado de forma intercambiável. Ambos os termos se referem a composições que podem ser administradas a um indivíduo. As composições bioativas ou farmacêuticas são por vezes aqui chamadas de “composições farmacêuticas” ou “composições bioativas” da divulgação. Por vezes, a frase “administração de Oxil33” é aqui usado no contexto da administração deste composto a um indivíduo (por exemplo, contatar o indivíduo com o composto, injetar o composto, administrar o composto em um implante, etc). Deve ser entendido que o composto para tal uso pode geralmente estar na forma de uma composição farmacêutica ou composição bioativa compreendendo o oxiesterol (por exemplo, Oxil33).

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 34/129 /108 [0056] Uma “quantidade terapeuticamente eficaz” ou “quantidade eficaz” é tal que, quando administrada, o oxiesterol (por exemplo, Oxil33) resulta na alteração da atividade biológica, tal como, por exemplo, intensificação do crescimento ósseo, etc. A dosagem administrada a um paciente pode ser como doses simples ou múltiplas dependendo de uma variedade de fatores, incluindo as propriedades farmacocinéticas administradas do fármaco, a via de administração, condições e características do paciente (sexo, idade, peso corporal, saúde, tamanho, etc.) e extensão dos sintomas, tratamentos concomitantes, frequência de tratamento e o efeito desejado. Em algumas modalidades, a formulação é projetada para liberação imediata. Em outras modalidades, a formulação é projetada para liberação sustentada. Em outras modalidades, a formulação compreende uma ou mais superfícies de liberação imediata e uma ou mais superfícies de liberação sustentada.

[0057] Um “depósito” inclui, mas não está limitado a, cápsulas, microesferas, micropartículas, microcápsulas, partículas de microfibra, nanoesferas, nanoparticulas, revestimentos, matrizes, wafers, pílulas, pastilhas, emulsões, lipossomas, micelas, géis ou outras composições farmacêuticas ou uma combinação das mesmas. Materiais adequados para o depósito são materiais idealmente biodegradáveis e/ou bioabsorvíveis farmaceuticamente aceitáveis que são aprovados pela FDA ou materiais GRAS. Estes materiais podem ser poliméricos ou não poliméricos, bem como sintéticos ou de ocorrência natural, ou uma combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, a matriz pode ser um depósito biodegradável.

[0058] O termo “implantável”, como usado aqui, se refere a um dispositivo biocompatível (por exemplo, implante) que retém o potencial para uma colocação com sucesso em um mamífero. A expressão “dispositivo implantável” e as expressões de importação semelhantes, tais como aqui usadas, se referem a um objeto implantável através de cirurgia, injeção ou

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 35/129 / 108 outros meios adequados cuja função principal é conseguida através da sua presença física ou propriedades mecânicas.

[0059] A aplicação “localizada” inclui a aplicação onde um ou mais fármacos são depositados dentro de um tecido, por exemplo, uma cavidade óssea, ou nas proximidades (com cerca de 0,1 cm, ou em muitos casos, cerca de 10 cm, por exemplo) do mesmo. Por exemplo, o oxiesterol administrado localmente a partir do implante pode ser, por exemplo, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 99,9% ou 99,999% menos que a dose oral ou dose injetável.

[0060] O termo “mamífero” se refere a organismos da classe taxonômica “mamalia”, incluindo, mas não se limitando a seres humanos, outros primatas tais como macacos, chimpanzés, símios, orangotangos, ratos, camundongos, coelhos, gatos, cachorros, porcos, vacas, cavalos, etc.

[0061] O termo “partícula” se refere a pedaços de uma substância de todas as formas, tamanhos, espessuras e configurações, tais como fibras, fios, tiras estreitas, folhas finas, clipes, fragmentos, etc., que possuem geometrias regulares, irregulares ou aleatórias. Deve ser entendido que alguma variação na dimensão ocorrerá na produção das partículas e partículas demonstrando tal variabilidade nas dimensões estão dentro do escopo do presente pedido. Por exemplo, as partículas minerais (por exemplo, cerâmica) podem ser de cerca de 0,5 mm a cerca de 1,5 mm. Em algumas modalidades, as partículas minerais podem ser de cerca de 0,2 mm a cerca de 0,5 mm.

[0062] Em algumas modalidades, o dispositivo médico compreende uma matriz. A “matriz” do presente pedido é usada como um suporte para reparação, regeneração e/ou aumento de osso e/ou cartilagem. Normalmente, a matriz fornece uma matriz 3-D de poros de interconexão, que atuam como um suporte para a migração de células. A morfologia da matriz orienta a migração celular e as células são capazes de migrar para dentro ou sobre a matriz, respectivamente. As células, então, são capazes de proliferar e

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 36/129 /108 sintetizar novos tecidos e formar ossos e/ou cartilagens. Em algumas modalidades, a matriz é reabsorvível e compreende partículas de colágeno e cerâmica e um oxiesterol uniformemente distribuído por toda a matriz.

[0063] Em algumas modalidades, a matriz pode ser maleável, coesa, fluível e/ou pode ser moldada em qualquer forma. O termo “maleável” inclui o fato de que a matriz é capaz de ser convertida a partir de uma primeira forma para uma segunda forma pela aplicação de pressão.

[0064] O termo “coesiva”, como usado aqui, significa que a matriz tende a permanecer uma massa singular conectada mediante o movimento, incluindo a exibição da capacidade de alongar-se substancialmente sem se romper com o alongamento. Um exemplo de uma matriz coesiva inclui, por exemplo, uma massa.

[0065] O termo “moldável” inclui que a matriz pode ser moldada à mão ou à máquina ou injetada no sítio do tecido alvo (por exemplo, defeito, fratura ou vazio ósseo) em uma ampla variedade de configurações. Em algumas modalidades, a matriz pode ser formada em folhas, blocos, anéis, escoras, placas, discos, cones, pinos, parafusos, tubos, dentes, ossos, porção do osso, cunhas, cilindros, cilindros roscados ou semelhantes, como bem como configurações geométricas mais complexas.

[0066] O oxiesterol pode ser “osteogênico”, onde ele pode intensificar ou acelerar o crescimento de novo tecido ósseo.

[0067] O termo “matriz de tecido acelular” (“ATM”) se refere a uma estrutura derivada de tecido que é feita a partir de qualquer uma de uma ampla faixa de tecidos contendo colágeno, removendo todas, ou substancialmente todas, as células viáveis e, em muitos casos, todas as células mortas detectáveis, componentes subcelulares e/ou detritos gerados por células mortas ou moribundas. Como usado aqui, uma “matriz acelular” é uma matriz que: (a) é feita de qualquer uma de uma ampla faixa de tecidos baseados em

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 37/129 /108 colágeno; (b) é acelular; e (c) retém as funções biológicas e estruturais possuídas pelo tecido ou órgão nativo do qual foi feito.

[0068] O termo “descelularizar” se refere a um processo que elimina ou reduz suficientemente as células nativas e o material celular em um tecido de tal modo que, quando este tecido é implantado, ele não invoca uma resposta imune adversa. O termo “acelular” pretende se referir ao tecido que é suficientemente reduzido em células e material celular de modo a não invocar uma resposta imune adversa.

[0069] Como usado aqui “secagem por congelação” ou “liofilização” envolve a secagem de um material em um estado congelado a muito baixa pressão (por exemplo, em um alto vácuo), de modo que o gelo, ou outro solvente congelado, sublima-se rapidamente sem fundir. Métodos e aparelhos para liofilização são bem conhecidos na técnica (ver, por exemplo, “FreezeDrying/Lyophilization Of Pharmaceutical and Biological Productsf Terceira Edição, Louis Rey and Joan C. May, Informa Healthcare, 2010). A etapa de liofilização pode ser realizada por qualquer modo adequado e com o uso de qualquer aparelho adequado.

[0070] Os cabeçalhos das seções abaixo não devem ser restringidos e podem ser intercambiados com outros cabeçalhos da seção.

Oxiesteróis [0071] Os implantes contendo oxiesterol e métodos para produzir e usar esses implantes são fornecidos. Mediante reidratação, os implantes podem ser formados para se encaixarem facilmente dentro de um defeito ósseo. Em algumas modalidades, os implantes têm um colágeno de porcino acelular que pode ou não ser reticulado, um material ósseo e um agente osteogênico, por exemplo, um oxiesterol incorporado dentro deles. Adicionalmente, são fornecidos implantes moldáveis que, além disso, podem também incluir um material de fase expansível ou ligante, por exemplo, carboximatilcelulose, alginato, pectina ou quitosana. Em um aspecto, o

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 38/129

30/108 presente pedido é dirigido a um material médico osteogênico implantável compreendendo um implante moldável que inclui uma combinação de um colágeno de porcino acelular, material ósseo e um agente ativo que compreende um oxiesterol.

[0072] Em algumas modalidades, o implante maleável pode ser um implante robusto que contém materiais de aloenxerto ou minerais que ainda podem se ligar e ser coesivos. Em algumas modalidades, existe um implante maleável configurado para se encaixar a, ou a se aproximar de, um defeito ósseo para promover o crescimento ósseo, o implante maleável compreendendo um colágeno de porcino acelular em uma quantidade de cerca de 0,1% em peso a cerca de 20% em peso do implante, material ósseo em uma quantidade de cerca de 0,1% em peso a cerca de 95% em peso do implante, e um oxiesterol, o implante configurado para se tomar moldável ao ser umedecido com um fluido.

[0073] Os oxiesteróis são uma família de moléculas que consistem em derivados oxigenados do colesterol. Os oxiesteróis estão envolvidos em muitos processos biológicos, e descobriu-se que possuem propriedades osteogênicas. Por exemplo, um oxiesterol de ocorrência natural, o 20(S)hidroxicolesterol, tem propriedades osteogênicas e antiadipogênicas. Tais oxiesteróis podem ser úteis na cura de fraturas ósseas, procedimentos de fusão do osso longo, procedimentos de fusão da coluna, procedimentos de fusão da coluna intercorporal, procedimentos de fusão da coluna póstero-lateral, e procedimentos de discectomia cervical e de fusão, procedimentos odontológicos e procedimentos craniais/maxilofaciais.

[0074] Os oxiesteróis também desempenham um papel em vários processos fisiológicos, tais como a diferenciação celular, a inflamação, a apoptose, e a produção de esteroides. Os oxiesteróis são produtos da oxidação do colesterol e são formados in vivo por uma variedade de tipos de células, incluindo osteoblastos (Schroepfer. Phyiol Rev 80:361-554, 2000; Bjorkhem

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 39/129

31/108 and Dicsfalusy. Arterioscler Tromb Vase Biol 22:734-742, 2002). Certos oxiesteróis, como o 20(S)-hidroxicolesterol, assim como o 22(S)- ou o 22(R)hidroxicolesterol, induzem a diferenciação osteogênica em multipotens de células mesenquimais, como as células do estroma da medula óssea M2-10B4 (M2), e fibroblastos embrionários C3H10T1/2 (Kha et al. J Bone Miner Res 19:830-840, 2004). Os oxiesteróis podem induzir osteogênese e inibir a diferenciação adipogênica das células-tronco mesenquimais, através da ativação da via de sinalização de hedgehog, que por sua vez, regula os comutadores principais que controlam a diferenciação osteogênica e adipogênica, nomeadamente Runx2 e PPARy, respectivamente (Richardson et al. J Cell Biochem 100:1131-1145, 2007; Dwyer et al. J Biol Chem 282: 8959-8968, 2007; Kim et al., J Bone Miner Res 22:1711-1719, 2007). Alguns oxiesteróis também fornecem usos terapêuticos para o tratamento de defeitos ósseos ou distúrbios como a osteoporose.

[0075] Os implantes descritos neste documento podem ser úteis na criação de novos implantes e matrizes terapêuticos que incluem um oxiesterol para indução da formação óssea local e tratamento de defeitos ósseos. O oxiesterol é retido na ATM e liberado ao longo do tempo, enquanto a ATM permite que o influxo de células ósseas cresça e preencha o defeito. Em algumas modalidades, essas aplicações são baseadas na capacidade destes compostos de oxiesterol para induzir a via de sinalização de hedgehog. Em algumas modalidades, o implante faz com que as células-tronco mesenquimais mostrem a expressão induzida de marcadores de diferenciação de osteoblasto. Os implantes e as matrizes aqui descritos podem ser usados para uma variedade de usos terapêuticos incluindo, mas não limitados a, indução de formação de osso local e tratamento de defeitos ósseos. Em algumas modalidades, os implantes contendo oxiesterol como aqui descritos induzem uma resposta biológica quando o implante contata uma célula humana ou animal. Em algumas modalidades, a célula pode ser uma célula

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 40/129

32/108 tronco mesenquimal ou uma célula estromal da medula óssea. Em algumas modalidades, a resposta biológica compreende estimular a diferenciação osteoblástica, inibir a diferenciação de adipócitos ou estimular a formação de cicatriz. Em algumas modalidades, o implante é configurado como um implante para liberar o oxiesterol para induzir uma resposta biológica em, ou próxima de, um sítio cirúrgico ou de um sítio de defeito ósseo.

[0076] Os oxiesteróis podem ser usados para induzir a formação óssea sistêmica para o tratamento de defeitos do osso, tais como osteoporose, para induzir a formação de osso no local para o tratamento de condições tais como fraturas sem união, ou outros distúrbios ósseos, tais como defeitos ósseos da mandíbula em aplicações/implantes dentárias e para induzir a fusão da coluna. Em algumas modalidades, o implante pode incluir um oxiesterol sozinho ou em combinação com uma ou mais proteínas morfogenéticas ósseas ou agentes osteogênicos. Em algumas modalidades, mais de um oxiesterol está presente no implante. Em algumas modalidades, os implantes incluem Oxil33 e/ou Oxil53.

[0077] Em algumas modalidades, o implante ou a ATM incluem oxiesteróis que ajudam na osteogênese. Em algumas modalidades, o implante ou a ATM incluem Oxi34, Oxi49 e/ou Oxil33. Em algumas modalidades, o implante ou a ATM inclui um oxiesterol compreendendo a estrutura:

ou um sal, hidrato ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R¹ compreende um substituinte alifático ou cíclico tendo pelo menos um átomo de carbono.

[0078] Em algumas modalidades, Ri compreende uma alquila, heteroalquila, uma alcanila, uma heteroalcanila, uma alquenila, uma heteroalquenila, uma alquinila, uma heteroalquinila, uma alquildi-ila, a

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 41/129 /108 heteroalquildi-ila, um alquileno, um heteroalquileno, uma arila, uma arildi-ila, um arideno, uma arilarila, uma biarila, uma arilalquila, uma heteroarila, uma heteroarildi-ila, um heteroarileno, uma heteroaril-heteroarila, uma biheteroarila, uma heteroarilalquila ou combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, o substituinte Ri compreende uma (C1-C20) alquila ou heteroalquila, uma (C2-C20) arila ou heteroarila, uma (C6-C26) arilalquila ou heteroaril-heteroalquila e uma (C5-C20) arilalquila ou heteroaril-heteroalquila, uma (C4-C10) alquildi-ila ou heteroalquildi-ila, ou um (C4-C10) alquileno ou heteroalquileno. O substituinte Ri pode ser de cadeia cíclica ou acíclica, ramificada ou não ramificada, substituída ou não substituída, aromática, saturada ou insaturada, ou combinações das mesmas. Em algumas modalidades, o substituinte Ri é um grupo alifático. Em algumas modalidades, o substituinte Ri é um grupo cíclico. Em algumas modalidades, o substituinte Ri é um grupo hexila.

[0079] A presente divulgação inclui um implante, incluindo um oxiesterol osteogênico (por exemplo, Oxil33) uniformemente disposto (por exemplo, disperso) em uma ATM, e o oxiesterol tem a capacidade de promover a diferenciação osteogênica in vitro. O Oxil33 é um agente osteogênico particularmente eficaz. Em várias aplicações, o Oxil33 é útil no tratamento de condições que se beneficiariam da estimulação localizada da formação óssea, como, por exemplo, fusão da coluna, reparo de fraturas, aplicações de tecido/regeneração óssea, aumento da densidade óssea na mandíbula para implantes dentários, osteoporose ou semelhantes. Uma vantagem particular do Oxil33 é que ele fornece maior facilidade de síntese e melhor tempo de fusão quando comparado a outros oxiesteróis osteogênicos. O Oxil33 é uma molécula pequena que pode servir como um agente terapêutico anabólico para o crescimento ósseo, bem como um agente útil para o tratamento de uma variedade de outras condições.

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 42/129 /108 [0080] As composições e métodos para a preparação de Oxil33 foram descritas no Pedido Internacional PCT/2015/064526, depositado em 8 de dezembro de 2015, cujo conteúdo é incorporado aqui por referência em sua totalidade.

[0081] Um aspecto da divulgação do pedido de patente é um implante ou uma ATM incluindo Oxil33, tendo a fórmula:

ou um sal, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável dos mesmos. O Oxil33 pode ser usado como uma composição farmacêutica ou bioativa compreendendo Oxil33 ou um sal, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável dos mesmos e um veículo farmaceuticamente aceitável. Oxil33 tem a designação IUPAC (35,55,65,8/?,95,10/?, 135,145,175)- 17-((5)-2-hidroxioctan-2-il)-10,13dimetil-hexadecahidro-1 H-ciclopcnta[a ]fenantreno-3,6-diol.

[0082] Outro aspecto da divulgação é um método para a indução (estimulação, intensificação) de uma resposta mediada pela via de hedgehog (Hh), em uma célula ou tecido, compreendendo contatar a célula ou tecido com uma quantidade terapeuticamente eficaz de Oxil33. A célula ou tecido pode ser in vitro ou em um indivíduo, tal como um mamífero. A resposta mediada pela via de hedgehog (Hh) envolve a estimulação da diferenciação osteoblástica, osteomorfogênese e/ou osteoproliferação; a estimulação do crescimento capilar e/ou formação de cartilagem; a estimulação da neovasculogênese, por exemplo, angiogênese, intensificando assim o fornecimento de sangue aos tecidos isquêmicos; ou é a inibição da diferenciação de adipócitos, morfogênese de adipócitos e/ou proliferação de adipócitos; ou a estimulação de células progenitoras para sofrerem

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 43/129 /108 neurogênese. A resposta mediada por Hh pode compreender a regeneração de qualquer uma de uma variedade de tipos de tecidos, para uso em medicina regenerativa. Outro aspecto da divulgação é um método para o tratamento de um indivíduo com um distúrbio ósseo, osteopenia, osteoporose ou uma fratura óssea, compreendendo a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de uma composição bioativa ou composição farmacêutica compreendendo Oxil33. O indivíduo pode administrar a composição bioativa ou a composição farmacêutica a uma dose terapeuticamente eficaz, em uma forma de dosagem eficaz em um intervalo selecionado para, por exemplo, aumentar a massa óssea, melhorar os sintomas de osteoporose, reduzir, eliminar, prevenir ou tratar lesões ateroscleróticas, ou semelhantes. O indivíduo pode administrar a composição bioativa ou a composição farmacêutica em uma dose terapeuticamente eficaz, em uma forma de dosagem eficaz a um intervalo selecionado para melhorar os sintomas da osteoporose. Em algumas modalidades, uma composição compreendendo Oxil33 pode incluir célulastronco mesenquimais para induzir a diferenciação osteoblástica das células em uma área cirúrgica específica.

[0083] Em vários aspectos, o Oxil33 pode ser administrado a uma célula, tecido ou órgão por administração local. Por exemplo, o Oxil33 pode ser aplicado localmente com um creme ou similar, ou pode ser injetado ou introduzido diretamente em uma célula, tecido ou órgão, ou pode ser introduzido com um dispositivo médico adequado, como um implante como discutido aqui.

[0084] Em algumas modalidades, a dosagem de Oxil33 é de aproximadamente 10 pg/dia a cerca de 80 g/dia. Em algumas modalidades, a dosagem de Oxil33 é de cerca de 1,0 g/dia, 1,5, 2,0, 2,5, 3,0, 3,5, 4,0, 4,5, 5,0, 5,5, 6,0, 6,5, 7,0, 7,5, 8,0, 8,5, 9,0, 9,5, 10,0, 10,5, 11,0, 11,5, 12,0, 12,5 13,0, 13,5, 14,0, 14,5, 15,0, 15,5, 16,0, 16,5, 17,0, 17,5, 18,0, 18,5, 19,0, 19,5, 20,0, 20,5, 21,0, 21,5, 22,0, 22,5, 23,0, 23,5, 24,0, 24,5, 25,0 25,5 26,0 26,5

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 44/129 /108

27,0 27,5 28,0, 28,5, 29,0, 29,5, 30,0, 30,5, 31,0, 31,5, 32,0, 32,5, 33,0, 33,5, 34,0, 34,5, 35,0, 35,5, 36,0, 36,5, 37,0, 37,5, 38,0, 38,5, 39,0, 39,5, 40,0, 40,5, 41,0, 41,5, 42,0, 42,5, 43,0, 43,5, 44,0, 44,5, 45,0, 45,5, 46,0, 46,5, 47,0, 47,5, 48,0, 48,5, 49,0, 49,5 50,0, 50,5, 51,0, 51,5, 52,0, 52,5, 53,0, 53,5, 54,0, 54,5, 55,0, 55,5, 56,0, 56,5, 57,0, 57,5, 58,0, 58,5, 59,0, 59,5 a cerca de 60,0 gramas/dia. Dosagens adicionais de Oxil33 incluem de aproximadamente 2,4 ng/dia a aproximadamente 50 mg/dia; aproximadamente 50 ng/dia a

aproximadamente	2,5	mg/dia;	aproximadamente	250	ng/dia	a
aproximadamente	250	mcg/dia;	aproximadamente	250	ng/dia	a
aproximadamente	50	mcg/dia;	aproximadamente	250	ng/dia	a
aproximadamente	25	mcg/dia;	aproximadamente	250	ng/dia	a
aproximadamente	1	mcg/dia;	aproximadamente	300	ng/dia	a

aproximadamente 750 ng/dia ou aproximadamente 0,50 mcg/dia a 500 ng/dia. Em várias modalidades, a dose pode ser de cerca de 0,01 a aproximadamente 10 mcg/dia ou aproximadamente 1 ng/dia a cerca de 120 mcg/dia. Em algumas modalidades, a dosagem de Oxil33 é em maiores quantidades. Por exemplo, em algumas modalidades, a dosagem de Oxil33 é de 0,01 mg/dia a 5 g/dia.

[0085] Uma matriz de tecido acelular (ATM) pode compreender o oxiesterol (por exemplo, Oxil33) disposto de forma homogênea em toda região ou em regiões discretas ou camadas discretas da ATM. O oxiesterol pode ser carregado na ATM e pode compreender de cerca de 0,01, 0,02, 0,03, 0,04, 0,05, 0,06, 0,07, 0,08, 0,09, 0,1, 0,15, 0,2, 0,25, 0,3, 0,35, 0,4, 0,45, 0,5,

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 45/129 /108

40.5, 41,0, 41,5, 42,0, 42,5, 43,0, 43,5, 44,0, 44,5, 45,0, 45,5, 46,0, 46,5, 47,0,

47.5, 48,0, 48,5, 49,0, 49,5, 50,0, 50,5, 51,0, 51,5, 52,0, 52,5, 53,0, 53,5, 54,0,

54.5, 55,0, 55,5, 56,0, 56,5, 57,0, 57,5, 58,0, 58,5, 59,0, 59,5 a cerca de 60% p/v, p/p e/ou v/v do peso total da ATM.

[0086] Em algumas modalidades, uma alta concentração do oxiesterol pode ser carregada na ATM e compreende de cerca de 20% em peso a cerca de 99% em peso da ATM. Em algumas modalidades, o oxiesterol pode ser carregado na ATM em uma quantidade de cerca de 20% em peso a cerca de 90% em peso, 35% em peso a cerca de 80% em peso ou cerca de 50% em peso a cerca de 90% em peso da ATM. Em algumas modalidades, o oxiesterol pode ser carregado na ATM em uma quantidade de cerca de 20% em peso a cerca de 30% em peso, cerca de 30% em peso a cerca de 40% em peso, cerca de 40% em peso a cerca de 50% em peso, cerca de 50% em peso a cerca de 60% em peso, cerca de 60% em peso a cerca de 70% em peso, cerca de 70% em peso a cerca de 80% em peso, cerca de 80% em peso a cerca de 90% em peso ou cerca de 90% em peso a cerca de 99% em peso. Em algumas modalidades, o oxiesterol pode ser carregado na ATM em uma quantidade de cerca de 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, a cerca de 99% em peso da ATM.

[0087] O oxiesterol pode ser carregado na ATM e pode compreender de cerca de 0,01, 0,1, 0,15, 0,2, 0,25, 0,3, 0,35, 0,4, 0,45, 0,5, 0,55, 0,6, 0,65, 0,7, 0,75, 0,8, 0,85, 0,9, 0,95, 1,0, 1,5, 2,0, 2,5, 3,0, 3,5, 4,0, 4,5, 5,0, 5,5, 6,0,

6.5, 7,0, 7,5, 8,0, 8,5, 9,0, 9,5, 10,0, 10,5, 11,0, 11,5, 12,0, 12,5, 13,0, 13,5, 14,0, 14,5, 15,0, 15,5, 16,0, 16,5, 17,0, 17,5, 18,0, 18,5, 19,0, 19,5, 20,0, 20,5, 21,0, 21,5, 22,0, 22,5, 23,0, 23,5, 24,0, 24,5, 25,0, 25,5, 26,0, 26,5, 27,0, 27,5, 28,0, 28,5, 29,0, 29,5, 30,0, 30,5, 31,0, 31,5, 32,0, 32,5, 33,0, 33,5, 34,0, 34,5, 35,0, 35,5, 36,0, 36,5, 37,0, 37,5, 38,0, 38,5, 39,0, 39,5, 40,0, 40,5, 41,0, 41,5, 42,0, 42,5, 43,0, 43,5, 44,0, 44,5, 45,0, 45,5, 46,0, 46,5, 47,0, 47,5, 48,0, 48,5, 49,0, 49,5, 50,0, 50,5, 51,0, 51,5, 52,0, 52,5, 53,0, 53,5, 54,0, 54,5, 55,0, 55,5,

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 46/129

38/108

56,0, 56,5, 57,0, 57,5, 58,0, 58,5, 59,0, 59,5 e cerca de 60 mg/cc da ATM. Em algumas modalidades, o oxiesterol pode ser carregado na ATM em uma quantidade de cerca de 400 mg/cc. Em algumas modalidades, o oxiesterol pode ser carregado na ATM em uma quantidade de cerca de 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, a cerca de 500 mg/cc. Em algumas modalidades, 400 mg/cc podem ser carregados na ATM.

[0088] Em algumas modalidades, o oxiesterol pode ser carregado na

ATM em quantidades altamente concentradas. Por exemplo, em algumas modalidades, o oxiesterol é carregado na ATM em uma quantidade de pelo menos 500 mg/cc. Em algumas modalidades, o oxiesterol é adicionado na ATM em uma quantidade de cerca de 1 mg/cc a cerca de 1 g/cc, de cerca de 100 mg/cc a cerca de 1 g/cc, de cerca de 500 mg/cc a cerca de 900 mg/cc, ou de cerca de 600 mg/cc a cerca de 800 mg/cc. Em outras modalidades, o oxiesterol é adicionado na ATM em uma quantidade de cerca de 500 mg/cc a cerca de 600 mg/cc, de cerca de 600 mg/cc a cerca de 700 mg/cc, de cerca de 700 mg/cc a cerca de 800 mg/cc, de cerca de 800 mg/cc a cerca de 900 mg/cc ou de cerca de 900 mg/cc a cerca de 1 g/cc.

[0089] Em adição ao composto Oxil33, outras modalidades da divulgação englobam quaisquer e todos os estereoisômeros individuais em qualquer um dos estereocentros presentes no Oxil33, incluindo diastereoisômeros, racematos, enantiômeros, e outros isômeros do composto. Nas modalidades da divulgação, o Oxil33 pode incluir todos os polimorfos, solvatos ou hidratos do composto, tais como hidratos e os formados com solventes orgânicos. Em várias modalidades, o Oxil33 inclui polimorfo de Forma A, polimorfo de Forma B, polimorfo de Forma C, polimorfo de Forma D, polimorfo de Forma E, polimorfo de Forma F, polimorfo de Forma G, polimorfo de Forma H, polimorfo de Forma I ou uma mistura das mesmas

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 47/129 /108 como descrito em US 15/082.695 e 15/374.610 aqui incorporados por referência como se fossem apresentados na íntegra.

[0090] Em algumas modalidades, o oxiesterol que pode ser distribuído uniformemente na matriz de tecido acelular pode ser um polimorfo de Oxil33 que compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em polimorfo de Forma A, e/ou polimorfo de Forma B. Em algumas modalidades, o polimorfo de Oxil33 compreende, consiste essencialmente em, ou consiste na Forma A que produz um padrão de difração de raios-X de pó compreendendo uma ou mais das seguintes reflexões: 16,4, 17,91 e 20,94 ± 0,2 graus 2Θ. Em algumas modalidades, o polimorfo de Oxil33 compreende, consiste essencialmente em, ou consiste na Forma A que produz um padrão de difração de raios-X de pó compreendendo uma ou mais das seguintes reflexões: 6,1, 12,3 e 18,6 ± 0,2 graus 2Θ em vez de ou além do padrão de difração de raios-X dos acima referidos para a Forma A.

[0091] Em algumas modalidades, polimorfo de Oxil33 que pode ser distribuído uniformemente na matriz do tecido acelular compreende, consiste essencialmente em, ou consiste na Forma B que produz um padrão de difração de raios-X de pó que compreende uma ou mais das seguintes reflexões: 13,3, 16,1 e 18,82 ± 0,2 graus 2Θ. Em algumas modalidades, o polimorfo de Oxil33 compreende, consiste essencialmente em, ou consiste na Forma B que produz um padrão de difração de raios-X de pó compreendendo uma ou mais das seguintes reflexões: 5,9, 11,9 e 17,96 0,2 graus 2Θ no lugar de ou além do padrão de difração de raios-X de pó daqueles acima para a Forma B.

[0092] A capacidade para preparar sais depende da acidez ou basicidade de um composto. Sais adequados do composto incluem, mas não estão limitados a, sais de adição de ácido, tais como aqueles feitos com ácido clorídrico, bromídrico, iodídrico, perclórico, sulfurico, nítrico, fosfórico, acético, propiônico, glicólico, láctico, pirúvico, malônico, succínico, maleico,

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 48/129 /108 fumárico, málico, tartárico, cítrico, benzoico, carbônico, cinâmico, mandélico, metanossulfônico, etanossulfônico, hidroxietanossulfônico, benzenossulfônico, p-toluenossulfônico, ciclo-hexanossulfâmico, salicíclico, p-aminossalicilico, 2-fenoxibenzoico e 2-acetoxibenzoico; sais feitos com sacarina; sais de metais alcalinos, tais como sais de sódio e potássio; sais de metais alcalino-terrosos, tais como sais de cálcio e magnésio; e sais formados com ligantes orgânicos ou inorgânicos, tais como sais de amônio quaternário. Sais adequados adicionais incluem, mas não estão limitados a, acetato, benzenossulfonato, benzoato, bicarbonato, bissulfato, bitartarato, borato, brometo, edetato de cálcio, cansilato, carbonato, cloreto, clavulanato, citrato, dicloridrato, edetato, edisilato, estolato, esilato, fumarato, gluceptato, gluconato, glutamato, glicolilanarsanilato, hexil resorcinato, hidrabamina, bromidrato, cloridrato, hidroxinaftoato, iodeto, isotioato, lactato, lactobionato, laurato, malato, maleato, mandelato, mesilato, metil brometo, metil nitrato, metil sulfato, mucato, napsilato, nitrato, sal de amônio de N-metil glucamina, oleato, pamoato (embonato), palmitato, pantotenato, fosfato sais de difosfato, poligalacturonato, salicilato, estearato, sulfato, subacetato, succinato, tanato, tartarato, teoclato, tosilato, trietiodeto e valerato dos compostos.

[0093] Em várias modalidades, o Oxil33 inclui uma ou mais funções biológicas. Ou seja, o Oxil33 pode induzir uma resposta biológica quando contatado com uma célula-tronco mesenquimal ou uma célula estromal de medula óssea. Por exemplo, o Oxil33 pode estimular a diferenciação osteoblástica. Em algumas modalidades, uma composição bioativa incluindo Oxil33 pode incluir uma ou mais funções biológicas quando administrada a uma célula de mamífero, por exemplo, uma célula in vitro ou uma célula em um humano ou em um animal. Por exemplo, tal composição bioativa pode estimular a diferenciação osteoblástica. Em algumas modalidades, tal função biológica pode surgir da estimulação da via de hedgehog.

Purificação de Oxil33

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 49/129 / 108 [0094] Em algumas modalidades, o oxiesterol, por exemplo, o

Oxil33, é altamente purificado. Em algumas modalidades, o Oxil33 pode ser cristalizado ou recristalizado. Em algumas modalidades, o Oxil33 purificado é formado recristalizando o Oxil33 em uma mistura de 3:1 de acetona/água, como mostrado abaixo:

Esquema 1

mw 420,67 g/m

θ27^Η4β°3 ^H2° mw 438,69 g/m [0095] Como mostrado acima, após a cristalização, o Oxil33 purificado forma um hidrato. No entanto, em algumas modalidades, o Oxil33 está na forma anidra. Em algumas modalidades, a porcentagem de cristalinidade de qualquer uma das formas cristalinas de Oxil33 aqui descritas pode variar em relação à quantidade total de Oxil33.

[0096] Em certas modalidades, o Oxil33 pode ter uma cristalinidade percentual de um sal, hidrato, solvato ou forma cristalina de Oxil33 para ser de cerca de pelo menos 10%, pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos, 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, ou de pelo menos 99%. Em algumas modalidades, a cristalinidade percentual pode ser substancialmente 100%, em que substancialmente 100% indica que a quantidade total de Oxil33 parece ser cristalina da melhor forma que pode ser determinada utilizando métodos conhecidos na técnica. Consequentemente, as quantidades terapeuticamente eficazes de Oxil33 podem incluir quantidades que variam na cristalinidade. Estas incluem exemplos em que uma quantidade de Oxil33 cristalizado em uma forma sólida é subsequentemente dissolvida, parcialmente dissolvida, ou suspensa ou dispersa em um líquido.

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 50/129 / 108 [0097] Em uma modalidade, o Oxil33 purificado é cristalizado como um mono-hidrato. Contudo, em outras modalidades, o Oxil33 purificado pode ser cristalizado em outras formas hidratadas, tais como, por exemplo, um di-hidrato, um hemi-hidrato, um sesqui-hidrato, um tri-hidrato, um tetrahidrato ou combinações dos mesmos, bem como as formas solvatadas correspondentes. Em algumas modalidades, o Oxil33 é cristalizado em uma forma amorfa. Em outras modalidades, o Oxil33 purificado é cristalizado como um co-cristal ou um sal farmaceuticamente aceitável.

[0098] Em algumas modalidades, o oxiesterol (por exemplo, Oxil33) que pode ser usado e pode estar na forma amorfa e tem uma dissolução e liberação mais rápida da ATM, tal como, por exemplo, uma liberação por ruptura da ATM de cerca de 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 45%, a cerca de 50% do oxiesterol durante 24 ou 48 horas.

[0099] Em algumas modalidades, o Oxil33 não purificado pode ser solidificado por mistura com heptanos. O produto pode ser subsequentemente filtrado e suspenso em cloreto de metileno. Em algumas modalidades, o Oxil33 não purificado pode ser filtrado da suspensão e cristalizado com o uso de acetona e água ou outros solventes orgânicos ou inorgânicos (por exemplo, éter dietílico, diclorometano, acetato de etila, acetona, n,n-dimetilformamida, acetonitrila, dimetilsulfóxido, amônia, t-butanol, n-propanol, etanol, metanol, ácido acético ou uma combinação dos mesmos).

[00100] Em várias modalidades, o Oxil33 não purificado pode ser isolado e purificado por qualquer outro meio tradicional. Ou seja, o Oxil33 não purificado pode ser isolado e purificado até a pureza desejada, por exemplo, de cerca de 95% a cerca de 99,9% por filtração, centrifugação, destilação para separar líquidos voláteis com base nas suas volatilidades relativas, cristalização, recristalização, evaporação para remover líquidos voláteis de solutos não voláteis, extração por solventes para remover

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 51/129 /108 impurezas, dissolução da composição em um solvente em que outros componentes são solúveis ou outros métodos de purificação.

[00101] Em algumas modalidades, o Oxil33 purificado é formado em forma cristalina por cristalização, a qual separa o Oxil33 a partir da corrente de alimentação de líquido por resfriamento da corrente de alimentação de líquido ou adição de precipitantes que reduzem a solubilidade de subprodutos e reagentes não usados na mistura de reação assim que o Oxil33 forma cristais. Em algumas modalidades, os cristais sólidos são então separados do líquido restante por filtração ou centrifugação. Os cristais podem ser ressolubilizados em um solvente e então recristalizados e os cristais são então separados do líquido remanescente por filtração ou centrifugação para obter uma amostra altamente pura de Oxil33. Em algumas modalidades, os cristais podem então ser granulados para o tamanho de partícula desejado. Em algumas modalidades, as partículas minerais (por exemplo, cerâmica) podem ser usadas na ATM e podem ter um tamanho de partícula de cerca de 0,5 mm a cerca de 1,5 mm. Em algumas modalidades, as partículas minerais podem ter de cerca de 0,2 mm a cerca de 0,5 mm.

[00102] Em algumas modalidades, o Oxil33 não purificado pode ser purificado quando o Oxil33 purificado é formado na forma cristalizada no seio de um solvente e, em seguida, removido do solvente para formar um elevado grau de pureza de Oxil33 tendo uma pureza de cerca de 98% a cerca de 99,99%. Em algumas modalidades, o Oxil33 pode ser recuperado por filtração ou filtração a vácuo antes ou depois da purificação.

Implantes [00103] Em algumas modalidades, o implante compreende uma ATM que fornece uma estrutura de tecido acelular para as células para orientar o processo de formação de tecido in vivo em três dimensões além do oxiesterol (por exemplo, Oxil33). Em algumas modalidades, o implante fornece uma estrutura porosa para promover o crescimento interno do ósseo. A morfologia

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 52/129 / 108 da ATM orienta a migração de células e as células são capazes de migrar para dentro ou sobre a ATM. As células então são capazes de proliferar e sintetizar novos tecidos e formar ossos e/ou cartilagens. Em algumas modalidades, uma ou mais matrizes de tecido acelular são empilhadas umas sobre as outras. [00104] Em algumas modalidades, o implante compreende um oxiesterol uniformemente dispostos em uma massa coesiva de uma ATM. Em certas modalidades, a ATM é obtida a partir de uma fonte humana, porcina, de cabra, bovina, ovina ou equina. Em outros aspectos, a ATM é o colágeno de porcino, enquanto que em outros aspectos, a ATM é o colágeno de porcino reticulado. Em vários aspectos, o implante é um gel, pasta ou massa moldável e pode ser colocado em uma seringa. Em certos aspectos, o implante pode ser liofilizado e hidratado e então colocado em um sítio de defeito ósseo por um cirurgião ou outro profissional responsável. Em outros aspectos, o implante liofilizado é hidratado e colocado em uma seringa para aplicação em um sítio de defeito ósseo.

[00105] Em algumas modalidades, o implante compreende material ósseo em adição à ATM e ao oxiesterol. A ATM pode ser obtida de uma fonte humana ou animal e, em alguns casos, pode ser não reticulada, em outros casos, a ATM pode ser reticulada. Em vários casos, a ATM compreende colágeno de porcino acelular, que, em alguns casos, pode ser reticulada. Cada um dentre o colágeno, material ósseo e oxiesterol de porcino acelular compreende partículas que são misturadas homogeneamente entre si. Em várias modalidades, o material ósseo compreende ATM de osso desmineralizada (DBM), ATM de osso mineralizada, fibras ósseas desmineralizadas, aparas ósseas desmineralizadas; e cerâmica inorgânica compreendendo fosfato tricálcico, hidroxiapatita, fosfato de cálcio bifásico, cerâmica de fosfato de cálcio porosa ou fosfato tricálcico, hidroxiapatita ou uma combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, o implante também

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 53/129 /108 compreende uma fase expansível ou ligante ou agente de intumescimento, por exemplo, carboximatilcelulose ou outros derivados de celulose.

[00106] O implante moldável, em algumas modalidades, compreende um corpo poroso que inclui um material mineral particulado com um diâmetro médio de partícula de cerca de 0,4 mm a cerca de 5,0 mm homogeneamente misturadas com uma ATM. Em algumas modalidades, as partículas minerais têm um tamanho médio de partícula de cerca de 0,5 mm a cerca de 1,5 mm. Em algumas modalidades, as partículas minerais têm um tamanho médio de partícula de cerca de 125 micrômetros a cerca de 750 micrômetros.

[00107]

Em algumas modalidades, os minerais particulados (por exemplo, TCP:HA) podem ser homogeneamente dispostos em toda a ATM com um tamanho de partícula de cerca de 0,10, 0,11, 0,12, 0,13, 0,14, 0,15, 0,16, 0,17, 0,18, 0,19, 0,22, 0,22, 0,22, 0,23, 0,24, 0,25, 0,26, 0,27, 0,28, 0,29,

0,30, 0,31, 0,32, 0,38, 0,39, 0,30, 0,31, 0,32, 0,33, 0,34, 0,35, 0,36, 0,37, 0,38,

0,39, 0,40, 0,41, 0,42, 0,43, 0,44, 0,45, 0,46, 0,47, 0,48, 0,49, 0,5 0, 0,51,

0,52, 0,53, 0,54, 0,55, 0,56, 0,57, 0,58, 0,59, 0,60, 0,61, 0,62, 0,63, 0,64, 0,65,

0,66, 0,67, 0,68, 0,69, 0,70, 0,71, 0,72, 0,73, 0,74, 0,75, 0,76, 0,77, 0,78, 0,79,

0,80, 0,81, 0,82, 0,83, 0,84, 0,85, 0,86, 0,87, 0,88, 0,89, 0,90, 0,91, 0,92, 0,93,

0,94, 0,95, 0,96, 0,97, 0,98, 0,99, 1,0, 1,25, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2,0,

2,25 a cerca de 2,5 mm. Estas partículas podem estar na forma de grânulos, aparas, fibras ou uma combinação dos mesmos.

[00108] Em várias modalidades, a distribuição de tamanho de partícula da ATM pode ser de cerca de 10 micrômetros, 13 micrômetros, 85 micrômetros, 100 micrômetros, 151 micrômetros, 200 micrômetros e todas as subfaixas entre elas. Em algumas modalidades, pelo menos 75% das partículas têm um tamanho de cerca de 10 micrômetros a cerca de 200 micrômetros. Em algumas modalidades, pelo menos 85% das partículas têm um tamanho de cerca de 10 micrômetros a cerca de 200 micrômetros. Em

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 54/129 /108 algumas modalidades, pelo menos 95% das partículas têm um tamanho de cerca de 10 micrômetros a cerca de 200 micrômetros. Em algumas modalidades, todas as partículas têm um tamanho de cerca de 10 micrômetros a cerca de 200 micrômetros. Em algumas modalidades, pelo menos 75% das partículas têm um tamanho de cerca de 20 micrômetros a cerca de 180 micrômetros. Em algumas modalidades, pelo menos 85% das partículas têm um tamanho de cerca de 20 micrômetros a cerca de 180 micrômetros. Em algumas modalidades, pelo menos 95% das partículas têm um tamanho de cerca de 20 micrômetros a cerca de 180 micrômetros. Em algumas modalidades, todas as partículas têm um tamanho de cerca de 20 micrômetros a cerca de 180 micrômetros.

[00109] Em algumas modalidades, o um ou mais oxiesteróis pode, por exemplo, ter um tamanho médio de partícula de cerca de 2,2 a cerca de 10 mícrons. Em algumas modalidades, as partículas de oxiesterol têm um tamanho médio de partícula mínimo de cerca de 2,2 mícrons, ou cerca de 2,5 mícrons, ou cerca de 3 mícrons, ou cerca de 4 mícrons. As partículas também podem ter um tamanho médio de partícula máximo de cerca de 10 mícrons, ou cerca de 8 mícrons, ou cerca de 7 mícrons, ou cerca de 5 mícrons. Em algumas modalidades, o oxiesterol tem um tamanho de partícula de cerca de 5 a 30 micrômetros, ou cerca de 2 micrômetros a cerca de 20 micrômetros, ou de 30 micrômetros a 100 micrômetros, no entanto, em várias modalidades, variações de cerca de 1 micrômetro a 250 micrômetros podem ser usadas. Em algumas modalidades, o oxiesterol tem um tamanho de partícula de cerca de 0,1 nm a cerca de 1 mícron para fornecer uma dissolução melhorada e uma liberação mais rápida do implante. Em algumas modalidades, o oxiesterol (por exemplo, Oxil33) está na forma de nanopartículas e de cerca de 10,0, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340,

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 55/129 / 108

350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, a cerca de 500 nm de diâmetro.

[00110] Em algumas modalidades, o oxiesterol inclui um tamanho de partícula de cerca de 0,1 mm a cerca de 5 mm para alongar a duração de liberação do implante por redução da taxa de dissolução de Oxil33 que pode modular a formação óssea. Além disso, as partículas de oxiesterol podem ter uma distribuição monofásica. Adicionalmente, em algumas modalidades, pode ser útil ter um oxiesterol solúvel em água de modo a produzir um efeito anti-inflamatório/analgésico agudo que o implante não esteja fornecendo.

[00111] Em várias modalidades, o oxiesterol está na forma de um polimorfo, solvato, hidrato ou um sal farmaceuticamente aceitável. O oxiesterol pode altemativamente ser cristalizado em uma forma amorfa. Em algumas modalidades, o oxiesterol está na forma de um mono-hidrato. Em algumas modalidades, o oxiesterol (por exemplo, Oxil33) pode estar em forma amorfa. Em várias modalidades, o implante compreende Oxil33 e uma ATM em forma amorfa, cristalina ou semicristalina; onde a forma cristalina pode incluir polimorfos, solvatos ou hidratos. O Oxil33 inclui polimorfo de Forma A, polimorfo de Forma B, polimorfo de Forma C, polimorfo de Forma D, polimorfo de Forma E, polimorfo de Forma F, polimorfo de Forma G, polimorfo de Forma H, polimorfo de Forma I ou uma mistura das mesmas como descrito em US 15/082.695 e 15/374.610 aqui incorporados por referência como se fossem apresentados na íntegra.

[00112] Em algumas modalidades, uma ATM do presente pedido de patente inclui um oxiesterol em uma quantidade de cerca de 0,01 mg/cc a cerca de 500 mg/cc. A ATM pode incluir o oxiesterol em uma quantidade de cerca de 10 mg/cc, 20 mg/cc, 25 mg/cc, 30 mg/cc, 40 mg/cc, 50 mg/cc, 60 mg/cc, 70 mg/cc, 80 mg/cc, 90 mg/cc, 100 mg/cc, 110 mg/cc, 120 mg/cc, 130 mg/cc, 140 mg/cc, 150 mg/cc, 160 mg/cc, 170 mg/cc, 180 mg/cc, 190 mg/cc, 200 mg/cc, 210 mg/cc, 220 mg/cc, 230 mg/cc, 240 mg/cc, 250 mg/cc, 260

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 56/129 /108 mg/cc, 270 mg/cc, 280 mg/cc, 290 mg/cc, 300 mg/cc, 310 mg/cc, 320 mg/cc, 330 mg/cc, 340 mg/cc, 350 mg/cc, 360 mg/cc, 370 mg/cc, 380 mg/cc, 390 mg/cc, 400 mg/cc, 410 mg/cc, 420 mg/cc, 430 mg/cc, 440 mg/cc, 450 mg/cc, 460 mg/cc, 470 mg/cc, 480 mg/cc, 490 mg/cc a cerca de 500 mg/cc ou qualquer quantidade entre os mesmos. Em algumas modalidades, a ATM libera de cerca de 40 ng a cerca de 5 mg do oxiesterol a cada hora.

[00113] Em algumas modalidades, o oxiesterol pode ser carregado na ATM em quantidades altamente concentradas. Por exemplo, em algumas modalidades, o oxiesterol é carregado na ATM em uma quantidade de pelo menos 500 mg/cc. Em algumas modalidades, o oxiesterol é adicionado à ATM em uma quantidade de cerca de 1 mg/cc a cerca de 1 g/cc, de cerca de 100 mg/cc a cerca de 1 g/cc, de cerca de 500 mg/cc a cerca de 900 mg/cc, ou de cerca de 600 mg/cc a cerca de 800 mg/cc. Em outras modalidades, o oxiesterol é adicionado à ATM em uma quantidade de cerca de 500 mg/cc a cerca de 600 mg/cc, cerca de 600 mg/cc a cerca de 700 mg/cc, cerca de 700 mg/cc a cerca de 800 mg/cc, cerca de 800 mg/cc a cerca de 900 mg/cc, ou cerca de 900 mg/cc a cerca de 1 g/cc. Em algumas modalidades, o oxiesterol é carregado na ATM em uma quantidade de cerca de 134 mg/cc.

[00114] Em algumas modalidades, o oxiesterol compreende uma faixa de cerca de 0,01% em peso a cerca de 45% em peso com base no peso total da ATM ou do implante antes ou depois de ser umedecido. Em algumas modalidades, o implante compreende pelo menos um material biodegradável em uma% em peso de cerca de 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43% ou aproximadamente 44% com base no peso total da ATM ou do implante.

[00115] Em algumas modalidades, a ATM contendo o oxiesterol pode ter uma superfície de liberação por ruptura que libera de cerca de 10%, 15%,

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 57/129 /108

20%, 25%, 30%, 35%, 45%, a cerca de 50% do oxiesterol por mais de 24 ou horas.

[00116] Em algumas modalidades, uma alta concentração do oxiesterol pode ser carregada na ATM e compreende de cerca de 0,01% em peso a cerca de 90% em peso da ATM. Em algumas modalidades, o oxiesterol pode ser carregado na ATM em uma quantidade de cerca de 0,1% em peso a cerca de 90% em peso ou de cerca de 1,0% em peso a cerca de 90% em peso da ATM. Em algumas modalidades, o oxiesterol pode ser carregado na ATM em uma quantidade de cerca de 20% em peso a cerca de 30% em peso, cerca de 30% em peso a cerca de 40% em peso, cerca de 40% em peso a cerca de 50% em peso, cerca de 50% em peso a cerca de 60% em peso, cerca de 60% em peso a cerca de 70% em peso, cerca de 70% em peso a cerca de 80% em peso, cerca de 80% em peso a cerca de 90% em peso ou cerca de 90% em peso a cerca de 99% em peso da ATM. Em algumas modalidades, o oxiesterol pode ser carregado na ATM em uma quantidade de cerca de 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90 ou cerca de 95% em peso da ATM.

[00117] Em algumas modalidades, a ATM libera o oxiesterol durante um período de 1-90 dias, 1-10 dias, 1-3 dias, 3-7 dias, 3-12 dias, 3-14 dias, Ί10 dias 7-14 dias, 7-21 dias, 7-30 dias, 7-50 dias, 7-90 dias, 7-140 dias, 14140 dias, 3 dias a 135 dias, 3 dias a 180 dias, ou 3 dias a 6 meses. Em algumas modalidades, o crescimento ósseo será observado durante um período de pelo menos 14 dias, por exemplo, 14-90 dias, 14-30 dias, 14-60 dias, 21-90 dias, 21-180 dias; 14-210 dias, ou 14 dias a 6 meses.

[00118] Em algumas modalidades, a ATM (em alguns casos, colágeno de porcino acelular) compreende de cerca de 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7,

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 58/129 /108

30,0, 30,5, 31,0, 31,5, 32,0, 32,5, 33,0, 33,5, 34,0, 34,5, 35,0, 35,5, 36,0, 36,5, 37,0, 37,5, 38,0, 38,5, 39,0, 39,5, 40,0, 40,5, 41,0, 41,5, 42,0, 42,5, 43,0, 43,5, 44,0, 44,5, 45,0, 45,5, 46,0, 46,5, 47,0, 47,5, 48,0, 48,5, 49,0, 49,5 ou a cerca de 50,0% p/p, p/v ou v/v do implante. Em certas modalidades, a ATM é colágeno de porcino acelular, que pode estar presente em uma quantidade de cerca de 0,1% em peso a cerca de 25% em peso do implante. Em algumas modalidades, a ATM está presente em uma quantidade entre cerca de 0,01% em peso a cerca de 50% em peso, cerca de 0,1% em peso a cerca de 20% em peso ou cerca de 0,1% em peso a cerca de 25% em peso do implante. Em algumas modalidades, a ATM é de colágeno de porcino reticulado acelular, que pode estar presente em uma quantidade de cerca de 0,1% em peso a cerca de 25% em peso, cerca de 1,0% em peso a cerca de 20% em peso, cerca de 20% em peso a cerca de 30% em peso, cerca de 30% em peso a cerca de 40% em peso ou cerca de 40% em peso a cerca de 50% em peso.

[00119] Em algumas modalidades, o implante compreende ainda um fluido de cerca de 25% em peso a cerca de 50% em peso que é adicionado para melhorar a maleabilidade do implante moldável. O implante maleável está configurado para ser moldável a qualquer forma desejada para se encaixar em um sítio de defeito ósseo. Em algumas modalidades, o implante maleável pode ser moldado para encaixar em um sítio cirúrgico, tal como um sítio de defeito ósseo. A forma da ATM pode ser adaptada para o sítio em que deve ser situada. Por exemplo, pode ter a forma de um pedaço, um tampão, um alfinete, um pino, um cilindro, um bloco, uma cunha, uma folha, uma tira, etc. O termo “forma” se refere a uma forma ou configuração determinada ou regular em contraste com uma forma ou configuração indeterminada ou vaga (como no caso de um caroço ou outra massa sólida sem forma especial) e é característica de tais materiais como folhas, tiras, placas, discos, núcleos, tubos, cunhas, cilindros ou semelhantes. Isso inclui formas que variam de formas geométricas regulares a formas irregulares, angulares ou não

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 59/129 /108 geométricas ou combinações de recursos com qualquer uma dessas características. Em algumas modalidades, o implante é maleável antes de ser implantado em um sítio cirúrgico. Em tais modalidades, um profissional médico pode moldar o implante na forma desejada e permitir que o implante cure ou seque antes do implante. Em tais modalidades, um médico pode moldar o implante diretamente em um sítio de defeito ósseo. O implante é maleável e configurado para ser pressionado em um sítio de defeito ósseo para preencher as fendas em um sítio de defeito ósseo. Em algumas modalidades, o implante é maleável quando umedecido e é configurado para permanecer maleável enquanto em contato com um sítio de defeito ósseo. Em certas modalidades, o implante moldável é colocado em uma seringa para aplicação a um sítio de defeito ósseo. A seringa contendo o implante também pode ser colocada em uma bolsa selada a vácuo.

[00120] Em algumas modalidades, a ATM maleável pode ser formada para se encaixar no espaço vazio de uma gaiola intercorporal ou em tomo do lado de fora da gaiola no espaço intervertebral.

[00121] O implante pode ser umedecido ou hidratado com uma variedade de fluidos de modo a formar um implante maleável e moldável ou uma pasta aquosa que pode ser subsequentemente liofilizada. Em algumas modalidades, a ATM é umedecida com água estéril, solução salina fisiológica, cloreto de sódio, dextrose, Solução de Ringer com lactato, solução salina tamponada com fosfato (PBS), sangue, aspirado de medula óssea, frações de medula óssea ou uma combinação dos mesmos. A quantidade de fluido com que a ATM pode ser umedecida inclui de cerca de 0,25, 0,5, 0,75,

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 60/129 /108

38,0, 38,5, 39,0, 39,5, 40,0, 40,5, 41,0, 41,5, 42,0, 42,5, 43,0, 43,5, 44,0, 44,5, 45,0, 45,5,46,0, 46,5,47,0, 47,5, 48,0,48,5, 49,0,49,5 a cerca de 50,0 ml.

[00122] Em algumas modalidades, o implante é hidratado com ácido hialurônico, éteres de celulose (tais como carboximatilcelulose), colágeno, gelatina, pó de osso autoclavado, transportadores osteocondutores, sangue completo, frações de sangue, aspirado de medula óssea, aspirado de medula óssea concentrada e misturas dos mesmos. Exemplos não limitantes de frações do sangue incluem soro, plasma, plasma rico em plaquetas (PRP), plasma rico em plaquetas concentrado, plasma pobre em plaquetas e plasma pobre em plaquetas concentrado. Após a hidratação, o implante se toma um gel, uma massa ou uma pasta que pode ser moldada em uma forma predeterminada em cerca de 30 segundos ou administrada a um defeito ósseo e manipulada para se conformar ao defeito ósseo de tal maneira que promova a cura.

[00123] Em algumas modalidades, o implante compreende uma ATM porosa configurada para permitir o influxo de pelo menos células de osso e/ou de cartilagem. Em algumas modalidades, a ATM também é configurada para liberar um agente ativo, como um oxiesterol. Por “porosa”, entende-se que a ATM tem uma pluralidade de poros. Os poros da ATM são de um tamanho grande o suficiente para permitir o influxo de sangue, de outro fluido corporal e de células progenitoras e/ou ósseas e/ou de cartilagem no interior para orientar o processo de formação de tecido in vivo em três dimensões.

[00124] Em algumas modalidades, a ATM compreende uma pluralidade de poros. Em algumas modalidades, pelo menos 10% dos poros estão entre cerca de 50 micrômetros e cerca de 500 micrômetros nos seus pontos mais largos. Em algumas modalidades, pelo menos 20% dos poros estão entre cerca de 50 micrômetros e cerca de 250 micrômetros nos seus pontos mais largos. Em algumas modalidades, pelo menos 30% dos poros estão entre cerca de 50 micrômetros e cerca de 150 micrômetros nos seus

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 61/129 /108 pontos mais largos. Em algumas modalidades, pelo menos 50% dos poros estão entre cerca de 10 micrômetros e cerca de 500 micrômetros nos seus pontos mais largos. Em algumas modalidades, pelo menos 90% dos poros estão entre cerca de 50 micrômetros e cerca de 250 micrômetros nos seus pontos mais largos. Em algumas modalidades, pelo menos 95% dos poros estão entre cerca de 50 micrômetros e cerca de 150 micrômetros nos seus pontos mais largos. Em algumas modalidades, 100% dos poros estão entre cerca de 10 micrômetros e cerca de 500 micrômetros nos seus pontos mais largos.

[00125] Em algumas modalidades, a ATM tem uma porosidade de pelo menos cerca de 30%, pelo menos cerca de 50%, pelo menos cerca de 60%, pelo menos cerca de 70%, pelo menos cerca de 90%, pelo menos cerca de 95%, ou pelo menos cerca de 99%. Os poros podem suportar o crescimento de células, formação ou remodelação do osso, cartilagem e/ou tecido vascular. [00126] Em algumas modalidades, o oxiesterol é administrado em um implante que está em forma sólida ou semissólida. Em vários aspectos, o oxiesterol é (3S, 5S, 6S, 8R, 9S, 10R, 13S, 14S, 17S) 17-((S)-2-hidroxioctan-

2-il) -10, 13 -dimetil-hexadecahidro-1 H-ciclopenta[a]fenantreno-3,6-diol (Oxil33), Oxil49, Oxil53, Oxil54, Oxil55 ou hidratos, solvatos, formas amorfas, polimorfos ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis. Em outros aspectos, o oxiesterol inclui polimorfo de Forma A, polimorfo de Forma B, polimorfo de Forma C, polimorfo de Forma D, polimorfo de Forma E, polimorfo de Forma F, polimorfo de Forma G, polimorfo de Forma H, polimorfo de Forma I de Oxil33 ou uma mistura das mesmas como descrito nos documentos US n°s. de série 15/082.695 e 15/374.610 aqui incorporados por referência como se fossem apresentados na íntegra.

[00127] A forma moldável do implante pode ter uma viscosidade prédoseada na faixa de cerca de 1 a cerca de 2000 centipoise (cps), 1 a cerca de 200 cps, ou 1 a cerca de 100 cps. Em várias modalidades, o implante

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 62/129 /108 semissólido ou sólido pode compreender um colágeno de porcino acelular com um peso molecular (MW), como mostrado pela viscosidade inerente (IV) de cerca de 0,10 dL/g a cerca de 1,2 dL/g ou de cerca de 0,20 dL/g a cerca de 0,50 dL/g. Outras faixas de IV incluem, mas não estão limitadas a cerca de 0,05 a cerca de 0,15 dL/g, cerca de 0,10 a cerca de 0,20 dL/g, cerca de 0,15 a cerca de 0,25 dL/g, cerca de 0,20 a cerca de 0,30 dL/g, cerca de 0,25 a cerca de 0,35 dL/g, cerca de 0,30 a cerca de 0,35 dL/g, cerca de 0,35 a cerca de 0,45 dL/g, cerca de 0,40 a cerca de 0,45 dL/g, cerca de 0,45 a cerca de 0,55 dL/g, cerca de 0,50 a cerca de 0,70 dL/g 0,55 a cerca de 0,6 dL/g, cerca de 0,60 a cerca de 0,80 dL/g, cerca de 0,70 a cerca de 0,90 dL/g, cerca de 0,80 a cerca de 1,00 dL/g, cerca de 0,90 a cerca de 1,10 dL/g, cerca de 1,0 a cerca de 1,2 dL/g, cerca de 1,1 a cerca de 1,3 dL/g, cerca de 1,2 a cerca de 1,4 dL/g, cerca de 1,3 a cerca de 1,5 dL/g, cerca de 1,4 a cerca de 1,6 dL/g, cerca de 1,5 a cerca de 1,7 dL/g, cerca de 1,6 a cerca de 1,8 dL/g, cerca de 1,7 a cerca de 1,9 dL/g, ou cerca de 1,8 a cerca de 2,1 dL/g.

[00128] Em algumas modalidades, a ATM tem um módulo de elasticidade na faixa de cerca de lxlO² a cerca de 6x10⁵ dinas/cm², ou 2x10⁴ a cerca de 5xl0⁵ dinas/cm², ou 5xl0⁴ a cerca de 5xl0⁵ dinas/cm². Em algumas modalidades, a ATM está na forma liofilizada.

[00129] Em algumas modalidades, a ATM tem uma densidade entre cerca de 1,6 g/cm³, e cerca de 0,05 g/cm³. Em algumas modalidades, a ATM tem uma densidade de entre cerca de 1,1 g/cm³, e cerca de 0,07 g/cm³. Por exemplo, a densidade pode ser menor que 1 g/cm³, menor que cerca de 0,7 g/cm³, menor que cerca de 0,6 g/cm³, menor que cerca de 0,5 g/cm³, menor que cerca de 0,4 g/cm³, menor que cerca de 0,3 g/cm³, menor que cerca de 0,2 g/cm³, ou menor que cerca de 0,1 g/cm³.

[00130] Em algumas modalidades, o diâmetro ou diagonal da ATM pode variar de 1 mm a 50 mm. Em algumas modalidades, o diâmetro ou diagonal da ATM pode variar de 1 mm a 30 mm, ou 5 mm a 10 mm, que é

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 63/129 /108 pequeno o suficiente para se encaixar através de uma cânula endoscópica, mas grande o suficiente para minimizar o número de matrizes necessárias para preencher um defeito ósseo grande (por exemplo, defeito osteocondral). Em algumas modalidades, no momento da cirurgia, a ATM pode ser moldada pelo cirurgião na forma desejada para se encaixar ao tecido ou ao defeito ósseo.

[00131] Em algumas modalidades, o interior poroso pode conter o oxiesterol dentro da ATM e porque o interior é poroso, o oxiesterol é distribuído uniformemente em toda a ATM quando o oxiesterol é incorporado na ATM, como discutido aqui.

[00132] Em algumas modalidades, o oxiesterol será mantido no interior da ATM e liberado para o ambiente em tomo da ATM (por exemplo, defeito ósseo, defeito osteocondral, etc.) à medida que a ATM se degrada ao longo do tempo.

[00133] Em algumas modalidades, a ATM pode ser semeada com células ósseas e/ou tecido ósseo colhidos, tais como, por exemplo, osso cortical, osso autógeno, ossos halogênicos e/ou osso xenogênico. Em algumas modalidades, a ATM pode ser semeada com células de cartilagem e/ou tecido de cartilagem colhidos (por exemplo, tecido de cartilagem autógeno, halogênico e/ou xenogênico). Por exemplo, antes da inserção no local do tecido alvo, a ATM pode ser umedecida com o tecido/células ósseas do enxerto, geralmente, com células/tecido de osso aspiradas do paciente, em uma razão de cerca de 3:1, 2:1, 1:1, 1:3 ou 1:2 em volume. As células/o tecido de osso podem penetrar na ATM fornecida, e a ATM pode ser amassada manualmente ou com máquina, obtendo assim uma consistência flexível e coesiva que pode ser subsequentemente empacotada no defeito ósseo. Em algumas modalidades, a ATM fornece um transportador maleável, não solúvel em água, que permite a colocação e a retenção precisas no local de implantação. Em algumas modalidades, as células de osso e/ou cartilagem

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 64/129 /108 coletadas podem ser misturadas com o oxiesterol e semeadas no interior da ATM.

Matriz de Tecido Acelular (ATM) [00134] Como usado aqui, uma “matriz de tecido acelular” (ATM) é uma estrutura derivada de tecido que é feita a partir de qualquer uma de uma ampla faixa de tecidos contendo colágeno removendo todas, ou substancialmente todas, as células viáveis e também todas células mortas detectáveis, componentes subcelulares e/ou detritos gerados por células mortas ou moribundas. Em vários aspectos, uma “matriz de tecido acelular” é uma matriz que: (a) é feita de qualquer uma de uma ampla variedade de tecido à base de colágeno; (b) é acelular; e (c) retém as funções biológicas e estruturais possuídas pelo tecido ou órgão nativo do qual foi feito. Como usado aqui, uma ATM sem “substancialmente todas as células viáveis” é uma ATM em que a concentração de células viáveis é menor que 1% (por exemplo, menor que: 0,1%; 0,01%; 0,001%; 0,0001%; 0,00001%; ou 0,000,001%) do que no tecido ou órgão a partir do qual o material ósseo foi feito. Uma ATM “substancialmente sem células mortas e/ou restos celulares” é aquela que contém menos de 10% (por exemplo, menos de: 8%; 5%; 1%; 0,1%; 0,001%; 0,0001%; ou menos) das células mortas e/ou restos celulares presentes no material ósseo após um processo de remoção de células.

[00135] As funções biológicas retidas pela ATM incluem o reconhecimento celular e a ligação celular, bem como a capacidade de apoiar a disseminação celular, a proliferação celular e a diferenciação celular. Essas funções são fornecidas por proteínas colágenas não desnaturadas (por exemplo, colágeno Tipo I) e por uma variedade de moléculas não colágenas (por exemplo, proteínas que servem como ligantes para moléculas como as de integrinas, moléculas com alta densidade de carga, como glicosaminoglicanos). por exemplo, o hialuronano) ou proteoglicanos, ou outras adesões). As funções estruturais retidas por matrizes acelulares úteis

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 65/129 /108 incluem a manutenção da arquitetura histológica, a manutenção da matriz tridimensional dos componentes do tecido e características físicas tais como resistência, elasticidade e durabilidade, porosidade definida e retenção de macromoléculas. A eficiência das funções biológicas de uma ATM pode ser medida, por exemplo, pela sua capacidade de apoiar a proliferação celular e é de pelo menos 50% (por exemplo, pelo menos: 50%; 60%; 70%; 80%; 90%; 95%; 98%; 99%; 99,5%; 100%, ou mais de 100%) do tecido ou órgão nativo do qual a ATM é fabricada. Além disso, a integridade da membrana basal na ATM, medida por microscopia eletrônica e/ou imuno-histoquímica, é pelo menos 70% da membrana do tecido ou órgão nativo do qual é feita a ATM.

[00136] Embora as propriedades acima descritas sejam retidas pela ATM, o material ósseo pode ser produzido a partir de qualquer tecido à base de colágeno de mamífero (por exemplo, derme, fáscia, cordões umbilicais, placentas, válvulas cardíacas, ligamentos, tendões, tecido vascular (artérias e veias, como veias safenas, tecido conjuntivo neural ou ureteres). Em alguns aspectos, os tecidos nos quais esses aloenxertos podem ser colocados incluem essencialmente qualquer tecido que possa ser remodelado pela invasão ou infiltração de células. Os tecidos relevantes incluem os tecidos esqueléticos tais como, cartilagem, ligamentos, fáscia e tendão. Outros tecidos em que qualquer matriz de tecido acelular acima pode ser colocada incluem, sem limitação, pele, gengiva, dura-máter, miocárdio, tecido vascular, tecido neural, músculo estriado, músculo liso, parede da bexiga, tecido do ureter, intestino e tecido da uretra.

[00137] Em várias modalidades, o material de matriz de tecido acelular pode compreender qualquer tecido contendo colágeno e o material de origem mamífero, humano ou animal. O material da matriz do tecido acelular pode ser um tecido compreendendo predominantemente o colágeno tipo I. Em outros aspectos, os materiais de partida incluem derme e tendões. Em algumas modalidades, os materiais de tecido de porcino são processados para fornecer

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 66/129 /108 o material colagenoso, embora seja entendido que outras fontes de mamífero podem altemativamente ser empregues, tais como, por exemplo, primatas, vacas, ovelhas, cabras ou cavalos. Um exemplo de uma matriz de tecido de porcino acelular útil para o implante deste pedido é Permacol®. O Permacol® é derivado da derme de porcino que sofreu a remoção de componentes celulares e material genético. A matriz de tecido acelular (ATM) extracelular restante, principalmente colágeno é então reticulada para formar uma ATM que contém 20% de colágeno em solução salina a 80%. Verificou-se que Permacol® induz a rejeição mínima de corpo estranho e é resistente à biodegradação por colagenases nativas.

[00138] Dependendo do material de partida, as partículas de colágeno podem conter uma proporção de elastina. Assim, as partículas e os materiais colagenosos coerentes formados a partir do mesmo consistem essencialmente em colágeno opcionalmente com pequenas proporções de elastina.

[00139] As partículas de colágeno acelular podem ser formadas usando qualquer processo adequado. A arquitetura da fibra de colágeno original e a ultraestrutura molecular do tecido natural devem ser retidas nas partículas. O tecido colagenoso não é solubilizado nem desnaturado no processo, de modo que a sua estrutura de fibras naturais é mantida. Tudo o que é necessário é que as etapas usadas em sua produção resultem em matrizes com as propriedades biológicas e estruturais descritas acima. Os métodos de produção úteis incluem os descritos nas Patentes US 5.397.353 e 6.936.271, pedidos de patente US publicados 2013/0045923 e 2013/0267465, e EP1112096, todos os quais são aqui incorporados por referência na sua totalidade.

[00140] Assim, material de tecido natural recém-cortado pode ser tratado para remover a partir do mesmo substancialmente todos os lipídeos e resíduos de lipídeos e depois são tratados para remover as proteínas de tecidos não fibrosos e elementos celulares. A extração de lipídeos pode ser conseguida por extração com solvente utilizando um solvente orgânico, tal

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 67/129 /108 como acetona. Outros exemplos não limitativos de solventes adequados incluem solventes não aquosos tais como etanol e éter.

[00141] As proteínas de tecido não fibroso incluem glicoproteínas, proteoglicanos, proteínas globulares e semelhantes, tais como componentes de ATM extracelular. Os elementos celulares incluem proteínas antigênicas e enzimas e outros restos celulares que surgem das condições de processamento. Estas porções do material de tecido natural podem ser removidas por tratamento com uma enzima proteolítica, tal como tripsina. Foi verificado anteriormente que acima de 20°C o tratamento com tripsina pode, em alguns casos, resultar em uma alteração da estrutura da fibra de colágeno que leva a uma menor resistência física. Além disso, baixas temperaturas desfavorecem o crescimento de microrganismos na preparação. Portanto, é útil realizar o tratamento com tripsina a uma temperatura abaixo de 20°C. Além disso, a tripsina é mais estável abaixo de 20°C e quantidades menores podem ser necessárias. Qualquer concentração de tripsina adequada pode ser usada, por exemplo, uma concentração dentro da faixa de cerca de 0,01 g/1 a 25 g/1. Verificou-se que bons resultados podem ser obtidos utilizando cerca de

2,5 g/1 de tripsina. Podem ser realizados opcionalmente tratamentos adicionais, tais como o tratamento com uma ou mais enzimas adicionais, por exemplo, uma enzima de divisão de carboidratos.

[00142] O material colagenoso resultante é então reduzido a partículas, sendo tomado cuidado para assegurar que a redução de tamanho não está associada com uma degradação da arquitetura de fibra de colágeno original e ultraestrutura molecular do material de partida. As partículas podem ser produzidas por trituração ou moagem usando, por exemplo, um moinho de esferas ou de martelo, que pode ser resfriado a uma temperatura apropriada. O material da folha pode ser cortado em pequenos pedaços antes da moagem. A moagem pode ser realizada em forma seca (teor de umidade menor que 10%) ou em forma hidratada congelada (teor de umidade de 20 a 80%).

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 68/129 /108 [00143] As partículas de colágeno acelular podem ser de qualquer tamanho adequado. Em algumas modalidades, as partículas de colágeno acelular têm um diâmetro médio dentro da faixa de cerca de 5 pm a cerca de 1000 pm e, em outras modalidades, de cerca de 50 pm a cerca de 500 pm. Bons resultados foram obtidos usando partículas de colágeno acelular com um diâmetro médio de aproximadamente 150 pm.

[00144] Em resumo, as etapas envolvidas na produção de uma ATM incluem a coleta do tecido de um doador (por exemplo, um cadáver humano ou qualquer um dos mamíferos acima listados, incluindo derme de porcino), o tratamento químico de modo a estabilizar o tecido e evitar a degradação bioquímica e estrutural em conjunto com, ou seguida por, remoção de células em condições que, de modo semelhante, conservam a função biológica e estrutural. O material ósseo pode opcionalmente ser tratado com um agente de crioconservação e crioconservado e, opcionalmente, liofilizado, novamente sob condições necessárias para manter as propriedades biológicas e estruturais descritas da ATM. Após congelamento ou liofilização, o tecido pode ser fragmentado, por exemplo, pulverizado ou micronizado para produzir uma ATM particulada sob condições similares de conservação de função. Todas as etapas são geralmente realizadas sob condições estéreis assépticas.

[00145] Um método exemplificador de produção de ATM, que é descrito em maior detalhe na Patente US 5.397.353, contém as seguintes etapas: (a) a derme recém-cortada é extraída com acetona com uma ou mais alterações; (b) a derme é colocada em tampão ou solução salina para remover a acetona; (c) a derme é então submetida à digestão com tripsinas em solução de pH 7,0 a 9, para remover proteínas antigênicas e elementos celulares tais como folículos pilosos e glândulas sudoríparas; (d) opcionalmente, o tecido pode ser tratado com uma enzima de divisão de carboidratos, tais como amilase, hialuronidase ou neuramidase para remover polissacarídeos antigênicos e mucopolissacarídeos; (e) o tecido purificado é estabilizado por

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 69/129 /108 tratamento com um di-isocianato, por exemplo, di-isocianato de hexano como uma solução a 0,1% em acetona; (f) mais duas lavagens com acetona; (g) enxague com tampão ou solução salina; (h) armazenagem na presença de um bactericida ou esterilização com irradiação gama; e (i) empacotamento em condições estéreis. De acordo com este procedimento, uma preparação de tecido fibroso colagenoso substancialmente não antigênico e não ressorvível de origem humano ou animal é fornecida, a qual é adequada para homo ou heterotransplante como uma reparação permanente para danos ósseos, cuja preparação retém a estrutura natural e a arquitetura original do tecido humano ou animal, é substancialmente livre de proteínas e glicoproteínas de tecido não fibroso, é substancialmente livre de elementos celulares, é substancialmente livre de lipídeos e resíduos lipídicos e não é citotóxica, em que a preparação, quando implantada, é capaz de ser recolonizada pelas células hospedeiras (por exemplo, osteoblastos, osteoclastos, etc.) e revascularizada. Além disso, uma preparação de tecido fibroso colagenoso substancialmente não antigênico e não ressorvível também é substancialmente livre de polissacarídeos e mucopolissacarídeos antigênicos.

[00146] De acordo com um aspecto adicional do presente pedido, é fornecido um processo para a fabricação de um material colagenoso acelular a partir de um material de tecido natural, em que o processo compreende as etapas de: (i) tratar o material de tecido natural com um solvente orgânico; (ii) tratar o material de tecido natural com uma enzima proteolítica, de modo a fornecer um material tratado que seja substancialmente livre de proteínas de tecido não fibroso, elementos celulares e lipídeos ou resíduos lipídicos e exiba arquitetura de fibra de colágeno original e ultraestrutura molecular do material de tecido do qual é derivada; (iii) reduzir o material tratado a uma pluralidade de partículas de colágeno compreendendo fragmentos de fibras de colágeno; e (iv) liofilizar as partículas de colágeno em suspensão em um meio de

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 70/129 /108 suspensão de liofilização, em que o processo, em alguns aspectos, exclui o intumescimento das partículas de colágeno com ácido e/ou alcali.

[00147] De acordo com outro aspecto do presente pedido, é fornecido um processo para a fabricação de um material colagenoso acelular a partir de uma pluralidade de partículas de colágeno, as partículas de colágeno compreendem fragmentos de fibras de colágeno e sendo derivadas de um material tratado, o material tratado tendo sido produzido a partir de um material de tecido natural por tratamento com um solvente orgânico e com uma enzima proteolítica de modo a fornecer um material que esteja substancialmente livre de proteínas de tecido não fibroso, elementos celulares e lipídeos ou resíduos lipídicos e exiba ultraestrutura molecular e arquitetura fibra de colágeno original do material de tecido natural, em que o processo compreende a etapa de liofilização das partículas de colágeno em suspensão em um meio de suspensão liofilizado e em que o processo exclui o intumescimento das partículas de colágeno com ácido e/ou álcali.

[00148] Em algumas modalidades, o tecido irá infiltrar o material ósseo a um grau de cerca de pelo menos 50 por cento dentro de cerca de 1 mês a cerca de 6 meses após a implantação da ATM. Em outras modalidades, cerca de 75 por cento do material ósseo será infiltrado por tecido dentro de cerca de 2-3 meses após a implantação da ATM. Em alguns casos, a ATM será substancialmente cerca de 90 por cento ou mais, submergido ou envolvido por tecido dentro de cerca de 6 meses após a implantação da ATM. Em outros casos, a ATM será completamente submersa ou envolvida por tecido dentro de cerca de 9-12 meses após a implantação.

[00149] Em alguns aspectos, o implante do presente pedido pode incluir um oxiesterol uniformemente disposto em uma ATM, em que a ATM compreende colágeno acelular de outras fontes, por exemplo, primatas, bovinos, ovinos ou písceo, em alguns casos, reticuladas, enquanto em outros não reticuladas. Este tipo de ATM pode ser colocado em uma seringa para

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 71/129 /108 aplicação em um sítio cirúrgico ou pode ser liofilizado para reidratação em um sítio cirúrgico. As matrizes de tecido acelular úteis preparadas a partir de fontes diferentes de colágeno de porcino, como descrito acima, podem também ser usadas para formar um implante em que um oxiesterol está disposto uniformemente (por exemplo, disperso). Os implantes preparados a partir destas ATMs podem também incluir outro material ósseo incluindo partículas inorgânicas com ou sem materiais de ligação ou intumescimento. Tal como acontece com as ATMs contendo colágeno de porcino, nestas ATMs, o colágeno pode ser reticulado ou não reticulado. Os implantes, incluindo as ATMs preparadas a partir de colágeno acelular de não porcino, podem ser administrados da mesma forma que as ATM contendo colágeno de porcino acelular, nomeadamente através de uma seringa ou podem ser liofilizados e depois re-hidratados para aplicação em um sítio cirúrgico.

[00150] Em algumas modalidades, o implante preparado a partir de uma folha de preparação de tecido fibroso colagenoso substancialmente não antigênico descrito acima pode ser derivado a partir de derme de porcino. Em algumas modalidades, a folha de tecido colagenoso acelular de fibras de tecido derivadas da derme de porcino pode ser reticulado por meio de um poli-isocianato, o que em alguns casos, é o di-isocianato de hexametileno (HMDI). Um produto útil para o implante descrito neste pedido é Permacol®, um material biológico preparado a partir da derme de porcino e disponível como uma pasta. A derme de porcino é uma boa fonte de colágeno acelular, pois suporta a infiltração e revascularização da célula hospedeira. Como o Permacol® requer reidratação mínima, um implante contendo Permacol® e um oxiesterol pode ser preparado em apenas 30 segundos. Permacol® é tipicamente reticulado com di-isocianato, o que o toma bastante resistente à degradação enzimática.

[00151] Em outras modalidades, é fornecido um implante que compreende um transportador biocompatível tendo dispersas no mesmo

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 72/129 /108 partículas sólidas ou semissólidas de material colagenoso acelular derivado de um material de tecido natural, incluindo derme de porcino, em que o material colagenoso acelular conserva a arquitetura de fibra original e ultraestrutura molecular do material de tecido natural do qual deriva, em que o material colagenoso acelular é substancialmente livre de proteínas de tecido não fibroso, glicoproteínas, elementos celulares, lipídeos ou resíduos lipídicos, em que o material colagenoso acelular não é citotóxico, em que a composição do implante é capaz de ser usada como um componente de uma pasta, gel ou uma solução injetável, e em que as partículas de material colagenoso acelular têm um tamanho de partícula dentro da faixa de aproximadamente 50 mícrons a aproximadamente 500 mícrons.

[00152] Em outras modalidades, as partículas de material colagenoso acelular têm uma distribuição de tamanho de partícula em que os tamanhos de partículas de pelo menos 50 por cento das partículas estão dentro de 35 por cento do tamanho médio de partícula, pode estar livre de polissacarídeos antigênicos e mucopolissacarídeos, e pode estar substancialmente livre de polissacarídeos e mucopolissacarídeos antigênicos. Em várias modalidades, o material colagenoso acelular contém uma proporção de elastina. Em outros aspectos, o material colagenoso acelular é reticulado. Em certas implementações, o transportador biocompatível é pelo menos um de solução salina, glicerol, uma solução de dextrano, um polissacarídeo viscoso antigênico não tóxico ou uma combinação dos mesmos. Em certos aspectos, o material colagenoso acelular compreende aproximadamente 10 por cento em peso a aproximadamente 90 por cento em peso da composição do implante.

[00153] Em algumas modalidades, a ATM compreende biomateriais contendo colágeno acelulares que, quando colocados em um defeito ósseo, fornecem estruturas em tomo das quais novo osso e/ou cartilagem do paciente vai crescer, substituindo gradualmente o transportador de ATM à medida que o sítio alvo cura. Exemplos de matrizes transportadoras adequadas podem

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 73/129 /108 incluir, mas não estão limitadas a, a ATM MasterGraft® produzida por Medtronic Sofamor Danek, Inc., Memphis, Tenn.; Massa MasterGraft® produzida por Medtronic Sofamor Danek, Inc., Memphis, Tennessee; Esponja de Colágeno Absorvível (“ACS”) produzida por Integra LifeSciences Corporation, Plainsboro, N.J.; fibras de colágeno da pele bovina revestidas com hidroxiapatita, por exemplo, Healos® comercializado pela Johnson & Johnson, EUA; esponjas de colágeno, por exemplo, Hemostagene® comercializadas por Coletica SA, França, ou por exemplo, Helisat® comercializado por Integra Life Sciences Inc., EUA; e ATM de enxerto ósseo Collagraft® produzida por Zimmer Holdings, Inc., Warsaw, Ind.

[00154] Em algumas modalidades, o colágeno acelular contém tanto fibras de colágeno acelular solúvel como de colágeno acelular insolúvel. As fibras de colágeno acelular solúvel e de colágeno acelular insolúvel podem primeiro ser preparadas separadamente e depois combinadas. Tanto as fibras de colágeno acelular solúvel como de colágeno acelular insolúvel podem ser derivadas de uma variedade de fontes, incluindo fontes de seres humanos, bovinos, ovinos, písceos, ou de porcino.

[00155] Em certas modalidades, a ATM de colágeno acelular inclui composições moldáveis que incluem as fibras de colágeno acelular insolúvel a um nível de 0,04 g/cc a 0,1 g/cc da ATM, e colágeno solúvel a um nível de 0,01 g/cc a 0,08 g/cc da ATM. Em outras modalidades, tais composições incluem fibras de colágeno acelular insolúvel a um nível de cerca de 0,05 a 0,08 g/cc da ATM e colágeno acelular solúvel a um nível de cerca de 0,02 a cerca de 0,05 g/cc da ATM. Em geral, a ATM incluirá fibras de colágeno acelular insolúvel em uma quantidade (porcentagem em peso) que é pelo menos maior ou igual a quantidade de colágeno acelular solúvel, para contribuir beneficamente com as propriedades desejadas de manuseio e implante do material de ATM. Em algumas modalidades, a ATM colagenosa acelular incluirá fibras de colágeno acelular insolúvel e de colágeno acelular

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 74/129 /108 solúvel presentes em uma razão em peso de 4:1 a 1:1, em alguns casos, de cerca de 75:25 a cerca de 60:40. Em outras modalidades, a ATM de colágeno acelular pode incluir fibras de colágeno acelular insolúvel e de colágeno acelular solúvel em uma razão em peso de cerca de 75:25 a cerca de 65:35, e em uma modalidade cerca de 70:30.

[00156] Em algumas modalidades, a ATM de colágeno acelular compreende colágeno de porcino acelular e/ou um material não polimérico. Em algumas modalidades, a ATM de colágeno acelular pode incluir um biopolímero biodegradável que pode fornecer liberação imediata ou liberação prolongada do oxiesterol. Por exemplo, a ATM de colágeno de porcino acelular pode compreender poliéter éter cetona (PEEK). Em algumas modalidades, a ATM de colágeno acelular pode compreender um ou mais dentre poli(alfa-hidróxi ácidos), poliglicolídeo (PG), polietileno glicol (PEG), conjugados de poli(alfa-hidróxi ácidos), poliortoésteres (POE), poliaspirinas, polifosfagênios, colágeno, colágeno hidrolisado, gelatina, gelatina hidrolisada, frações de gelatina hidrolisada, elastina, amido, amido prégelatinizado, ácido hialurônico, quitosana, alginato, albumina, fibrina, análogos da vitamina E, tais como acetato de alfa-tocoferila, succinato de dalfa-tocoferila, D,L-lactida ou L-lactida, caprolactona, dextranos, vinilpirrolidona, álcool polivinílico (PVA), PVA-g-PLGA, copolímero de PEGT-PBT (poliativo), metacrilatos, copolímeros de PEO-PPO-PAA, PLGAPEO-PLGA, PEG-PLG, PLA-PLGA, poloxâmero 407, copolímeros de tribloco PEG-PLGA-PEG, POE, SAIB (acetato isobutirato de sacarose), polidioxanona, metilmetacrilato (MM A), MM A e N-vinilpirrolidona, poliamida, oxicelulose, copolímero de ácido glicólico e carbonato de trimetileno, politeramidas, poliéter éter cetona, polimetilmetacrilato, silicone, ácido hialurônico, quitosana ou combinações dos mesmos.

[00157] Em algumas modalidades, o implante pode não ser completamente biodegradável. Por exemplo, o dispositivo pode compreender

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 75/129 /108 poliuretano, poliureia, poliéter(amida), PEBA, olefina elastomérica termoplástica, copoliéster e elastômero termoplástico estirênico, aço, alumínio, aço inoxidável, titânio, ligas metálicas com alto teor de metais não ferrosos e uma baixa proporção relativa de ferro, dispositivo de carbono, dispositivo de vidro, plástico, cerâmicas, metacrilatos, poli(Nisopropilacrilamida), PEO-PPO-PEO (plurônicos) ou combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, estes tipos de matrizes podem precisar ser removidos após um determinado período de tempo.

[00158] Em algumas modalidades, o implante compreende pelo menos um colágeno de porcino acelular compreendendo um ou mais dentre poli(lactídeo-co-glicolídeo) (PLGA), polilactídeo (PLA), poliglicolídeo (PGA), D-lactida, D,L-lactida, L-lactida, D,L-lactida-co-8-caprolactona, Llactida-co-8-caprolactona, D,L-lactida-co-glicolídeo-co-8-caprolactona, poli(D,L-lactida-co-caprolactona), poli(L-lactida-co-caprolactona), poli(Dlactida-co-caprolactona), poli(D,L-lactida), poli(D-lactida), poli(L-lactida), poli(esteramida) ou uma combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, o oxiesterol é encapsulado em um colágeno de porcino acelular.

[00159] Em algumas modalidades, a ATM compreende um ou mais polímeros (por exemplo, PLA, PLGA) com um PM de cerca de 15.000 a cerca de 150.000 Da ou de cerca de 25.000 a cerca de 100.000 Da.

[00160] Em algumas modalidades, o implante compreende pelo menos um material biodegradável em uma % em peso de cerca de 99,5%, 99%, 98%,

97%, 96%, 95%, 94%, 93%, 92%, 91%, 90%, 89%, 88%, 87%, 86%, 85%,

84%, 83%, 82%, 81%, 80%, 79%, 78%, 76%, 75%, 74%, 73%, 72%, 71%,

70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 35%, 25%, 20%, 15%, 10%, ou cerca de

5% com base no peso total da ATM ou do implante. Em algumas modalidades, o colágeno de porcino acelular compreende uma faixa de cerca de 0,1% a cerca de 20% com base no peso total da ATM ou do implante. Em algumas modalidades, o colágeno de porcino acelular compreende uma faixa

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 76/129 /108 de cerca de 0,1% a cerca de 15% com base no peso total da ATM ou do implante. Em algumas modalidades, o colágeno de porcino acelular compreende de cerca de 14%, 13%, 12%, 11%, 9%, 8%, 7%, 6% ou cerca de 5% com base no peso total da ATM ou do implante.

[00161] Em algumas modalidades, o colágeno de porcino acelular está presente na ATM em uma quantidade de cerca de 0,01% em peso a cerca de 50% em peso ou de cerca de 8,0% em peso a cerca de 50% em peso da ATM. Em algumas modalidades, o colágeno de porcino acelular está presente em uma quantidade de cerca de 0,1% em peso a cerca de 10% em peso, de cerca de 10% em peso a cerca de 20% em peso, de cerca de 20% em peso a cerca de 30% em peso, de cerca de 30% em peso a cerca de 40% em peso, ou de cerca de 40% em peso a cerca de 50% em peso.

[00162] O manitol, a trealose, o dextrano, o mPEG e/ou o PEG podem ser usados como um plastificante para o polímero. Em algumas modalidades, o polímero e/ou plastificante pode também ser revestido no implante para fornecer o perfil de liberação desejado. Em algumas modalidades, a espessura do revestimento pode ser fina, por exemplo, de cerca de 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 ou 50 mícrons para revestimentos mais espessos de 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100 mícrons para atrasar a liberação do oxiesterol do implante. Em algumas modalidades, a faixa do revestimento no implante varia de cerca de 5 mícrons a cerca de 250 mícrons ou de 5 mícrons a cerca de 200 mícrons para atrasar a liberação do implante.

[00163] A resistência à compressão pode ser desejável para muitas aplicações de engenharia de tecidos, tais como fraturas do platô tibial, deficiência acetabular, fraturas cominutivas de ossos longos, defeitos maxilofaciais orais, fusões da coluna, e defeitos subcondrais da cartilagem. As matrizes de colágeno resistentes à compressão ajudarão a favorecer volumes adequados de osso recém-formado.

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 77/129 /108 [00164] Em algumas modalidades, a ATM é resistente à compressão, onde a ATM resiste à redução no tamanho ou um aumento na densidade quando uma força é aplicada em comparação com matrizes de colágeno sem o material ósseo disposto no mesmo. Em várias modalidades, a ATM de colágeno acelular resiste à compressão em 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou mais em uma ou todas as direções quando uma força é aplicada à ATM.

Material Ósseo [00165] Em algumas modalidades, o implante pode conter material ósseo desmineralizado disposto no mesmo. O material ósseo desmineralizado pode compreender pó de osso desmineralizado, aparas, prismas triangulares, esferas, cubos, cilindros, fragmentos, fibras ou outras formas com geometrias irregulares ou aleatórias. Estes podem incluir, por exemplo, osso cortical e esponjoso “substancialmente desmineralizado”, “parcialmente desmineralizado” ou “completamente desmineralizado”. Estes incluem também a desmineralização da superfície, em que a superfície do construto ósseo é substancialmente desmineralizada, parcialmente desmineralizada ou completamente desmineralizada, mas o corpo do construto ósseo é completamente mineralizado. Em algumas modalidades, a matriz de tecido acelular pode compreender algum material ósseo completamente mineralizado. A configuração do material ósseo pode ser obtida por moagem, recorte, corte ou usinagem do osso inteiro como descrito, por exemplo, na Patente US 5.899.939. Toda a divulgação é aqui incorporada por referência na presente divulgação.

[00166] Em algumas modalidades, o material ósseo pode compreender fibras ósseas desmineralizadas alongadas com uma razão de comprimento médio para espessura média ou razão de aspecto das fibras de cerca de 50:1 a cerca de 1.000:1. Na aparência geral, as fibras ósseas desmineralizadas alongadas podem ser redondas, esféricas, granulares, alongadas, pós, aparas,

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 78/129 /108 fibras, cilindros, fios, tiras estreitas, folhas finas ou uma combinação dos mesmos. As fibras ósseas desmineralizadas alongadas podem ter uma aparência substancialmente linear ou podem ser enroladas para se assemelharem a molas. Em algumas modalidades, as fibras ósseas desmineralizadas alongadas são de formas irregulares incluindo, por exemplo, formas lineares, de serpentinas ou curvas. As fibras ósseas alongadas podem ser desmineralizadas, no entanto, parte do conteúdo mineral original pode ser retido quando desejável para uma modalidade particular. Em algumas modalidades, o material ósseo compreende fibras e aparas ósseas desmineralizadas alongadas. Em algumas modalidades, o material ósseo compreende fibras completamente desmineralizadas e aparas desmineralizadas de superfície. Em algumas modalidades, a razão de fibras para aparas ou pós é de cerca de 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 ou 45 fibras a cerca de 30, 35, 40,45, 50, 55, 60, 65 ou 70 aparas.

[00167] Em algumas modalidades, o material ósseo compreende fibras de ATM (DBM) de osso desmineralizada e aparas de ATM desmineralizada em uma razão de 30:60. Em algumas modalidades, o material ósseo compreende fibras de ATM de osso desmineralizadas e aparas de ATM de osso desmineralizadas em uma razão de 25:75 a cerca de 75:25 de fibras para aparas.

[00168] Em algumas modalidades, a ATM de osso desmineralizada pode ser semeada com células ósseas coletadas e/ou tecido ósseo, tais como, por exemplo, osso cortical, osso autógeno, ossos halogênicos e/ou osso xenogênico. Em algumas modalidades, a ATM de DBM pode ser semeada com células de cartilagem coletadas e/ou tecido de cartilagem (por exemplo, tecido de cartilagem autógeno, halogênico e/ou xenogênico). Por exemplo, antes da inserção no local do tecido alvo, a ATM de DBM pode ser umedecida com células/tecidos de osso de enxerto, geralmente com células/tecido de osso aspiradas a partir do paciente, em uma razão de cerca

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 79/129 / 108 de 3:1, 2:1, 1:1, 1:3 ou 1:2 em volume. As células/tecido de osso podem penetrar na ATM de DBM fornecida, e a ATM pode ser amassado à mão ou à máquina, obtendo assim uma consistência flexível e coesiva que pode subsequentemente ser empacotada no defeito ósseo. Em algumas modalidades, a ATM de DBM fornece um transportador maleável, não solúvel em água, que permite a colocação e retenção precisas no local de implante. Em algumas modalidades, as células de osso e/ou cartilagem coletadas podem ser misturadas com o Oxil33 e semeadas no interior da ATM.

[00169] Em algumas modalidades, o material ósseo compreende ainda partículas minerais, tais como, por exemplo, cerâmicas. Em algumas modalidades, as partículas no implante compreendem uma cerâmica reabsorvível, osso, polímero degradável sintético, ácido hialurônico, quitosana ou combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, as partículas compreendem tecido ósseo cortical, esponjoso e/ou córticoesponjoso, halogênico, xenogênico ou transgênico. Em algumas modalidades, as partículas minerais compreendem, consistem essencialmente em ou consistem em pó de osso, pó de osso desmineralizado, cerâmica de fosfato de cálcio porosa, hidroxiapatita, fosfato tricálcico, vidro bioativo ou combinações dos mesmos.

[00170] Em algumas modalidades, o material ósseo pode compreender um policarbonato derivado de tirosina (carboneto de DTE-co-DT) de cerâmica reabsorvível (por exemplo, hidroxiapatita, fosfato tricálcico, biovidro, sulfato de cálcio), no qual o grupo pendente através da tirosina - um aminoácido - é um éster etílico (DTE) ou carboxilato livre (DT) ou combinações dos mesmos.

[00171] Em algumas modalidades, o material ósseo pode conter um material inorgânico, tal como uma cerâmica inorgânica e/ou material substituto de osso. Materiais inorgânicos ou materiais substitutos de osso

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 80/129 / 108 exemplificadores incluem mas não estão limitados a aragonita, dahlita, calcita, brushita, carbonato de cálcio amorfo, vaterita, weddellita, whelellita, estruvita, urato, ferri-hidrato, francolita, mono-hidrocalcita, magnetita, goetita, dentina, carbonato de cálcio, sulfato de cálcio, fosfossilicato de cálcio, fosfato de sódio, aluminato de cálcio, fosfato de cálcio, hidroxiapatita, fosfato alfa-tricálcico, fosfato dicálcico, fosfato β-tricálcico, fosfato tetracálcico, fosfato de cálcio amorfo, fosfato octacálcico, fluoroapatita BIOGLASS™, clorapatita, fosfato tricálcico substituído com magnésio, hidroxiapatita de carbonato, formas substituídas de hidroxiapatita (por exemplo, hidroxiapatita derivada de osso podem ser substituídas por outros íons tais como fhioreto, cloreto, magnésio, sódio, potássio, etc.), ou combinações ou derivados dos mesmos.

[00172] Em algumas modalidades, a incluir cerâmicas inorgânicas, tais como, por exemplo, fosfato de cálcio no implante, estas irão agir como uma fonte local de cálcio e fosfato para as células que tentam depositar novo osso. A cerâmica inorgânica também fornece resistência à compressão e características de suporte de carga ao implante.

[00173] Em algumas modalidades, as partículas minerais no implante compreendem fosfato tricálcico e hidroxiapatita em uma razão de cerca de 80:20 a cerca de 90:10. Em algumas modalidades, as partículas minerais no implante compreendem fosfato tricálcico e hidroxiapatita em uma razão de cerca de 70:30 a cerca de 95:5. Em algumas modalidades, as partículas minerais no implante compreendem fosfato tricálcico e hidroxiapatita em uma razão de cerca de 85:15.

[00174] Em algumas modalidades, o material ósseo compreende partículas minerais que oferecem resistência à compressão. Em algumas modalidades, as partículas minerais (por exemplo, cerâmica) compreendem pelo menos cerca de 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, ou cerca de 95% em peso da

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 81/129 /108

ATM. Em algumas modalidades, as partículas são predominantemente de qualquer forma (por exemplo, redonda, esférica, alongada, pós, aparas, fibras, cilindros, etc.). Em algumas modalidades, o material ósseo compreende partículas minerais em uma quantidade de cerca de 0,1% em peso a cerca de 95% em peso da ATM. Em algumas modalidades, o material ósseo compreende partículas minerais em uma quantidade de cerca de 50% em peso a cerca de 80% em peso da ATM. Em algumas modalidades, a ATM compreende de cerca de 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%., 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, ou a cerca de 79% em peso da ATM.

[00175] Em algumas modalidades, as partículas minerais estão presentes em uma quantidade de cerca de 0,1% em peso a cerca de 30% em peso do material ósseo. Em algumas modalidades, as partículas minerais estão presentes em uma quantidade entre cerca de 0,01% em peso a cerca de 50% em peso da ATM. Em algumas modalidades, as partículas minerais estão presentes em uma quantidade entre cerca de 7,0% em peso a cerca de 50% em peso da ATM. Em algumas modalidades, as partículas minerais estão presentes em uma quantidade de cerca de 0,1% em peso a cerca de 10% em peso, cerca de 10% em peso a cerca de 20% em peso, cerca de 20% em peso a cerca de 30% em peso, cerca de 30% em peso a cerca de 40% em peso ou cerca de 40% em peso a cerca de 50% em peso.

[00176] Em algumas modalidades, a porosidade das partículas compreende de 0 a 50%, em algumas modalidades, a porosidade das partículas compreende de 5% a 25%. Em algumas modalidades, as partículas não estão emaranhadas entre si, mas entram em contato umas com as outras e as porções de cada partícula se sobrepõem no material ósseo para fornecer resistência à compressão. Em algumas modalidades, pelo menos 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, ou mais das partículas se sobrepõem umas às outras na ATM.

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 82/129 / 108 [00177] Em algumas modalidades, as partículas são distribuídas aleatoriamente através da ATM. Em outras modalidades, as partículas são uniformemente ou igualmente distribuídas ao longo da ATM. Em algumas modalidades, as partículas podem ser dispersas na ATM utilizando um agente dispersante. Em outras modalidades, as partículas podem ser agitadas no polímero e a agitação mecânica distribuirá as partículas na ATM até que a distribuição desejada seja atingida (por exemplo, aleatória ou uniforme).

[00178] Em algumas modalidades, o material ósseo pode ser misturado com um ou mais agentes terapêuticos, por exemplo, um agente antiinflamatório, um agente analgésico, um fator de crescimento osteoindutivo, um agente antimicrobiano ou uma combinação dos mesmos. Os agentes osteoindutivos incluem um ou mais membros da família das Proteínas Morfogenéticas Ósseas (“BMPs”). As BMPs são uma classe de proteínas que, se acredita, têm atividades osteoindutoras ou promotoras de crescimento no tecido ósseo endógeno, ou funcionam como precursores pró-colágeno. Os membros conhecidos da família de BMP incluem, mas não estão limitados a BMP-1, BMP-2, BMP-3, BMP-4, BMP-5, BMP-6, BMP-7, BMP-8, BMP-9, BMP-10, BMP-11, BMP-12, BMP-13, BMP-14 (GDF-5), BMP-15, BMP-16, BMP-17, BMP-18 bem como polinucleotídeos ou polipeptídeos das mesmas, bem como polipeptídeos ou polinucleotídeos maduros que codificam as mesmas.

[00179] As BMPs usadas como agentes osteoindutores compreendem uma ou mais dentre BMP-1; BMP-2; BMP-3; BMP-4; BMP-5; BMP-6; BMP-7; BMP-8; BMP-9; BMP-10; BMP-11; BMP-12; BMP-13; BMP-15; BMP-16; BMP-17; ou BMP-18; bem como qualquer combinação de uma ou mais destas BMPs, incluindo as BMPs inteiras ou fragmentos das mesmas, ou combinações das mesmas, como polipeptídeos ou polinucleotídeos que codificam os fragmentos polipeptídicos de todas as BMPs citadas. Os agentes

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 83/129 /108 osteoindutores de BMP isolados podem ser administrados como polinucleotídeos, polipeptídeos, proteína inteira ou combinações dos mesmos. [00180] Com efeito, os fatores osteoindutores são as proteínas morfogenéticas de osso humano recombinantes (rhBMPs) porque estão disponíveis em quantidade ilimitada e não transmitem doenças infecciosas. Em algumas modalidades, a proteína morfogenética do osso é rhBMP-2, rhBMP-4, rhBMP-7 ou heterodímeros das mesmas.

[00181] A BMP-2 recombinante pode ser usada em uma concentração de cerca de 0,4 mg/mL a cerca de 10,0 mg/mL, em alguns casos cerca de 1,5 mg/mL. No entanto, qualquer proteína morfogenética óssea é contemplada incluindo proteínas morfogenéticas ósseas designadas como BMP-1 a BMP18. As BMPs estão disponíveis em Wyeth, Cambridge, Mass. e as BMPs e os genes que os codificam podem também ser preparadas por um versado na técnica, como descrito na Patente US 5.187.076 para Wozney et al.; Patente US 5.366.875 de Wozney et al.; Patente US 4 877 864 de Wang et al.; Patente US 5.108.922 de Wang et al.; Patente US 5.116.738 de Wang et al.; Patente US 5.013.649 de Wang et al.; Patente US 5.106.748 de Wozney et al.; Patentes PCT W093/00432 para Wozney et al.; WO94/26893 para Celeste et al.; e WO94/26892 para Celeste et al. Todos os fatores osteoindutivos são contemplados se obtidos como acima ou isolados do osso. Métodos para isolar as proteínas ósseas morfogenéticas do osso são descritos, por exemplo, na Patente US 4.294.753 de Urist e Urist et al., 81 PNAS 371, 1984.

[00182] O material ósseo pode incluir ou ser misturado com um ou mais membros da superfamília de TGF-β. Por exemplo, a ATM pode incluir AMH, ARTN, GDF1, GDF10, GDF11, GDF15, GDF2, GDF3, GDF3A, GDF5, GDF6, GDF7, GDF8, GDF9, GDNF, INHA, INHBA, INHBB, INHBC, INHBE, LEFTY1, LEFTY2, MSTN, NODAL, NRTN, PSPN, TGFB1, TGFB2, TGFB3, FGF, FGF básico, VEGF, fator de crescimento

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 84/129 /108 semelhante à insulina, EGF, PDGF, fator de crescimento nervoso ou combinações dos mesmos.

[00183] O material ósseo pode incluir ou ser misturado com um agente terapêutico incluindo, mas não se limitando a, inibidores de IL-1, tal como Kineret® (anakinra), que é uma forma recombinante não glicosilada do antagonista do receptor de interleucina-1 humana (IL-lRa), ou AMG 108, que é um anticorpo monoclonal que bloqueia a ação da IL-1. O material ósseo pode incluir ou ser misturado com agentes terapêuticos incluindo aminoácidos excitatórios tais como glutamato e aspartato, antagonistas ou inibidores da ligação do glutamato a receptores de NMDA, receptores de AMPA e/ou receptores de cainato. O material ósseo pode incluir ou ser misturado com agentes terapêuticos para reduzir a inflamação, incluindo mas não se limitando a, antagonistas do receptor da interleucina-1, talidomida (um inibidor da liberação de TNF-α), análogos da talidomida (que reduzem a produção de TNF-α por macrófagos), quinapril (um inibidor da angiotensina II, que sobrerregulam o TNF-α), interferons como a IL-11 (que modula a expressão do receptor de TNF-α), ou o ácido aurin-tricarboxílico (que inibe o TNF-a).

[00184] O material ósseo pode incluir ou ser misturado com um agente terapêutico incluindo, mas não se limitando a, um agente analgésico. Exemplos de agentes analgésicos incluem, mas não estão limitados a, acetaminofeno, tramadol, lidocaína, bupivacaína, ropivacaína, analgésicos opioides tais como buprenorfina, butorfanol, dextromoramida, dezocina, dextropropoxifeno, diamorfina, fentanila, alfentanila, sufentanila, hidrocodona, hidromorfona, cetobemidona, levometadila, levorfanol, meperidina, metadona, morfina, nalbufina, ópio, oxicodona, papaveretum, pentazocina, petidina, fenoperidina, piritramida, dextropropoxifeno, remifentanila, sufentanila, tilidina, tramadol, codeína, dihidrocodeína, meptazinol, dezocina, eptazocina, flupirtina ou uma combinação dos mesmos.

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 85/129 / 108 [00185] O material ósseo pode incluir ou ser misturado com um agente terapêutico incluindo, mas não se limitando a, um agente anti-inflamatório. Um exemplo de um agente anti-inflamatório inclui, mas não se limita a, clonidina, sulindac, sulfassalazina, naroxina, diclofenaco, indometacina, ibuprofeno, flurbiprofeno, cetoprofeno, aclofenaco, aloxiprina, aproxen, aspirina, diflunisal, fenoprofeno, ácido mefenâmico, naproxeno, fenilbutazona, piroxicam, meloxicam, salicilamida, ácido salicílico, esoxisulindaco, tenoxicam, cetorolaco, clonidina, flufenisal, salsalato, salicilato de trietanolamina, aminopirina, antipirina, oxifenbutazona, apazona, cintazona, ácido flufenâmico, clonixerila, clonixina, ácido meclofenâmico, flunixina, colchicina, demecolcina, alopurinol, oxipurinol, cloridrato de benzidamina, dimefadano, indoxol, intrazol, cloridrato de mimbano, cloridrato de paranileno, tetridamina, cloridrato de benzindopirina, fluprofeno, ibufenaco, naproxol, fenbufeno, cinchofeno, diflumidona sódica, fenamol, flutiazina, metazamida, cloridrato de letimida, cloridrato de nexeridina, octazamida, molinazol, neocinchofeno, nimazol, citrato de proxazol, tesicam tolmetina, triflumidato, fenamatos (ácido mefênico, ácido meclofênico), nabumetona, celecoxib, etodolaco, nimesulida, apazona, ouro, tepoxalina; ditiocarbamato, ou uma combinação dos mesmos.

[00186] Os agentes anti-inflamatórios também incluem esteroides, como por exemplo, 21-acetoxipregnenolona, alclometasona, algestona, amcinonida, beclometasona, betametasona, budesonida, cloroprednisona, clobetasol, clobetasona, clocortolona, cloprednol, corticosterona, cortisona, cortivazol, deflazacort, desonida, desoximatasona, dexametasona, 21-acetato de dexametasona, sal de di-Na de 21-fosfato de dexametasona, diflorasona, diflucortolona, difluprednato, enoxolona, fluazacort, flucloronida, flumetasona, flunisolida, acetonido de fluocinolona, fluocinonida, fluocortin butila, fluocortolona, fluorometolona, acetato dee fluperolona, acetato de fluprednidena, fluprednisolona, flurandrenolida, propionato de fluticasona,

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 86/129 /108 formocortal, halquinonida, propionato de halobetasol, halometasona, acetato de halopredona, hidrocortamato, hidrocortisona, etabonato de loteprednol, mazipredona, medrisona, meprednisona, metilprednisolona, furoato de mometasona, parametasona, prednicarbato, prednisolona, 25dietilaminoacetato de prednisolona, fosfato sódico de prednisolona, prednisona, prednival, prednilideno, rimexolona, tixocortol, triancinolona, acetonido de triancinolona, benetonido de triancinolona, hexacetonido de triancinolona ou uma combinação dos mesmos.

[00187] O material ósseo pode incluir ou ser misturado com um agente terapêutico incluindo, mas não se limitando a uma estatina. Exemplos de uma estatina útil incluem, mas não estão limitados a, atorvastatina, sinvastatina, pravastatina, cerivastatina, mevastatina (ver Patente US n°. 3.883.140, cuja descrição completa é aqui incorporada por referência), velostatina (também chamada sinvinolina; ver Patente US 4.448.784 e 4.450.171 cujas divulgações inteiras são aqui incorporadas por referência), fluvastatina, lovastatina, rosuvastatina e fluindostatina (Sandoz XU-62-320), dalvastain (Publicação de Pedido EP 738510 A2, cuja descrição completa é aqui incorporada por referência), eptastatina, pitavastatina ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos ou uma combinação dos mesmos. Em várias modalidades, a estatina pode compreender misturas dos enantiômeros (+)R e (-)S da estatina. Em várias modalidades, a estatina pode compreender uma mistura racêmica de 1:1 da estatina.

[00188] Em algumas modalidades, o material ósseo pode incluir um agente antimicrobiano. Em algumas modalidades, o agente antimicrobiano pode incluir um ou mais dentre triclosan, também conhecido como éter de 2,4,4'-tricloro-2'-hidroxidifenílico, clorexidina e seus sais, incluindo acetato de cloro-hexidina, gluconato de cloro-hexidina, cloridrato de cloro-hexidina e sulfato de cloro-hexidina, prata e os seus sais, incluindo acetato de prata, benzoato de prata, carbonato de prata, citrato de prata, iodato de prata, iodeto

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 87/129 /108 de prata, lactato de prata, laurato de prata, nitrato de prata, óxido de prata, palmitato de prata, proteína de prata e sulfadiazina de prata, polimixina, tetraciclina, aminoglicosídeos, tais como tobramicina e gentamicina, rifampicina, bacitracina, neomicina, cloranfenicol, miconazol, quinolonas como o ácido oxolínico, norfloxacina, ácido nalidíxico, pefloxacina, enoxacina e ciprofloxacina, penicilinas como oxacilina e pipracila, nonoxinol 9, ácido fusídico, cefalosporinas,ou combinações dos mesmos.

[00189] Exemplos de agentes antimicrobianos incluem, a título ilustrativo e não se limitando a, acedapsona; acetosulfona sódica; alamecina; alexidina; amdinocilina; amdinocilina pivoxil; amiciclina; amifloxacina; mesilato de amifloxacina; amicacina; sulfato de amicacina; ácido aminossalicílico; aminossalicilato de sódio; amoxicilina; anfomicina; ampicilina; ampicilina sódica; apalcilina sódica; apramicina; aspartocina; sulfato de astromicina; avilamicina; avoparcina; azitromicina; azlocilina; azlocilina sódica; cloridrato de bacampicilina; bacitracina; desalicilato de metileno de bacitracina; bacitracina de zinco; bambermicinas; benzoilpas de cálcio; beritromicina; sulfato de betamicina; biapenem; biniramicina; cloridrato de bifenamina; bispiritiona magsulfex; buticacina; sulfato de butirosina; sulfato de capreomicina; carbadox; carbenicilina dissódica; carbenicilina indanil sódica; carbenicilina fenil sódica; carbenicilina potássica; carumonam sódico; cefaclor; cefadroxila; cefamandol; nafato de cefamandol; cefamandol sódico; cefaparol; cefatrizina; cefazaflur sódico; cefazolina; cefazolina sódica; cefbuperazona; cefdinir; cefepima; cloridrato de cefepima; cefetecol; cefixima; cloridrato de cefmenoxima; cefmetazol; cefmetazol sódico; cefonicida monossódico; cefonicida sódica; cefoperazona sódica; ceforanida; cefotaxima sódica; cefotetan; cefotetan dissódico; cloridrato de cefotiam; cefoxitin; cefoxitin sódico; ccfpimizol; ccfpimizol sódico; cefpiramida; ccfpiramida sódica; sulfato de ccfpiromc; cefpodoxima proxetil; ccfprozil; cefroxadina; cefsulodin sódico; ceftazidima; ceftibuten;

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 88/129 /108 ceftizoxima sódica; ceftriaxona sódica; cefuroxima; cefuroxima axetil; cefuroxima pivoxetil; cefuroxima sódica; cefacetril sódico; cefalexina; cloridrato de cefalexina; cefaloglicina; cefaloridina; cefalotin sódico; cefapirin sódico; cefradina; cloridrato de cetociclina; cetofenicol; cloranfenicol; palmitato de cloranfenicol; complexo de pantotenato de cloranfenicol; succinato de cloranfenicol sódico; fosfanilato de clorexidina; cloroxilenol; bisulfato de clortetraciclina; cloridrato de clortetraciclina; cinoxacina; ciprofloxacina; cloridrato de ciprofloxacina; cirolemicina; claritromicina; cloridrato de clinafloxacina; clindamicina; cloridrato de clindamicina; palmitato cloridrato de clindamicina; fosfato de clindamicina; clofazimina; cloxacilina benzatina; cloxacilina sódica; clorexidina, cloxiquina; colistimetato sódico; sulfato de colistina; coumermicina; coumermicina sódico; ciclacilina; cicloserina; dalfopristina; dapsona; daptomicina; demeclociclina; cloridrato de demeclociclina; demeciclina; denofungina; diaveridina; dicloxacilina; dicloxacilina sódica; sulfato de dihidroestreptomicina; dipiritiona; diritromicina; doxiciclina; doxiciclina cálcica; doxiciclina fosfatex; hiclato de doxiciclina; droxacina sódica; enoxacina; epicilina; cloridrato de epitetraciclina; eritromicina; acistrato de eritromicina; estolato de eritromicina; etilsuccinato de eritromicina; gluceptato de eritromicina; lactobionato de eritromicina; propionato de eritromicina; estearato de eritromicina; cloridrato de etambutol; etionamida; fleroxacina; floxacilina; fludalanina; flumequina; fosfomicina; fosfomicina trometamina; fumoxicilina; cloreto de furazólio; tartrato de furazólio; fusidato sódico; ácido fusídico; ganciclovir e ganciclovir sódico; sulfato de gentamicina; gloximonam; gramicidina; haloprogina; hetacilina; hetacilina potássica; hexedina; ibafloxacina; imipenem; isoconazol; isepamicina; isoniazid; josamicina; sulfato de canamicina; quitasamicina; levofuraltadona; levopropilcilina potássica; lexitromicina; lincomicina; cloridrato de lincomicina; lomefloxacina; cloridrato de lomefloxacina; mesilato de

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 89/129 /108 lomefloxacina; loracarbef; mafenida; meclociclina; sulfosalicilato de meclociclina; fosfato de megalomicina potássica; mequidox; meropenem; metaciclina; cloridrato de metaciclina; metenamina; hipurato de metenamina; mandelato de metenamina; meticilina sódica; metioprima; cloridrato de metronidazol; fosfato de metronidazol; mezlocilina; mezlocilina sódica; minociclina; cloridrato de minociclina; cloridrato de mirincamicina; monensina; monensina sódico; nafcilina sódica; nalidixato sódico; ácido nalidíxico; natainicina; nebramicina; palmitato de neomicina; sulfato de neomicina; undecilenato de neomicina; sulfato de netilmicina; neutramicina; nifuiradeno; nifuraldezona; nifuratel; nifuratrona; nifurdazil; nifurimida; nifiupirinol; nifurquinazol; nifurtiazol; nitrociclina; nitrofurantoína; nitromida; norfloxacina; novobiocin sódico; ofloxacina; onetoprima; oxacilina e oxacilina sódica; oximonam; oximonam sódico; ácido oxolínico; oxitetraciclina; oxitetraciclina cálcica; cloridrato de oxitetraciclina; paldimicina; paraclorofenol; paulomicina; pefloxacina; mesilato de pefloxacina; penamecilina; penicilinas como penicilina g benzatina, penicilina g potássica, penicilina g procaína, penicilina g sódica, penicilina v, penicilina v benzatina, penicilina v hidrabamina, e penicilina v potássica; pentizidona sódica; aminosalicilato de fenila; piperacilina sódica; pirbenicilina sódica; piridicilina sódica; cloridrato de pirlimicina; cloridrato de pivampicilina; pamoato de pivampicilina; probenato de pivampicilina; sulfato de polimixina b; porfiromicina; propicacina; pirazinamida; piritiona de zinco; acetato de quindecamina; quinupristina; racefenicol; ramoplanina; ranimicina; relomicina; repromicina; rifabutina; rifametano; rifamexil; rifamida; rifampina; rifapentina; rifaximina; rolitetraciclina; nitrato de rolitetraciclina; rosaramicina; butirato de rosaramicina; propionato de rosaramicina fosfato de; rosaramicina sódica; estearato de rosaramicina; rosoxacina; roxarsona; roxitromicina; sanciclina; sanfetrinem sódico; sarmoxicilina; sarpicilina; escopafungina; sisomicina; sulfato de sisomicina; esparfloxacina; cloridrato

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 90/129 /108 de espectinomicina; espiramicina; cloridrato de estalimicina; estefimicina; sulfato de estreptomicina; estreptonicozid; sulfabenz; sulfabenzamida; sulfacetamida; sulfacetamida sódica; sulfacitina; sulfadiazina; sulfadiazina sódica; sulfadoxina; sulfaleno; sulfamerazina; sulfameter; sulfametazina; sulfametizol; sulfametoxazol; sulfamonometoxina; sulfamoxol; sulfanilato de zinco; sulfanitran; sulfasalazina; sulfasomizol; sulfatiazol; sulfazamet; sulfisoxazol; sulfisoxazol acetil; sulfisboxazol diolamina; sulfomixina; sulopenem; sultamricilina; suncilina sódica; cloridrato de talampicilina; teicoplanina; cloridrato de temafloxacina; temocilina; tetraciclina; cloridrato de tetraciclina; complexo de tetraciclina fosfato; tetroxoprima; tiamfenicol; tifencilina potássica; ticarcilina cresil sódica; ticarcilina dissódica; ticarcilina monossódica; ticlatona; cloreto de tiodônio; tobramicina; sulfato de tobramicina; tosufloxacina; trimetoprima; sulfato de trimetoprima; trisulfapirimidinas; troleandomicina; sulfato de troespectomicina; tirotricina; vancomicina; cloridrato de vancomicina; virginiamicina; ou combinações dos mesmos.

[00190] O agente antimicrobiano no material ósseo pode ser um agente antiviral que pode ser misturado com o material ósseo. Os agentes antivirais podem incluir, mas não estão limitados a vidarabina, aciclovir, famciclovir, valaciclovir, ganciclovir, valganciclovir, inibidores da transcriptase reversa análoga de nucleosídeos (como o AZT (zidovudina), ddl (didanosina), ddC (zalcitabina), d4T (estavudina), e 3TC (lamivudina)), nevirapina, delavirdina, inibidores da proteínase (como saquinavir, ritonavir, indinavir e nelfinavir), ribavirina, amantadina, rimantadina, inibidores da neuraminidase (como zanamivir e oseltamivir), pleconarila, cidofovir, foscamet e/ou interferons.

Fase Expansível [00191] Em algumas modalidades, o implante pode compreender um material, tal como, por exemplo, um ligante ou fase expansível, para facilitar o intumescimento do implante. A fase expansível compreende polímeros que

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 91/129 /108 intumescem em contato com o fluido (por exemplo, salina, água, fluido corporal), e, assim, aumentam o volume do implante e que mantém ainda mais o implante na posição ao longo do tempo.

[00192] Em algumas modalidades, o ligante ou fase expansível compreende uma faixa de cerca de 0,1% a cerca de 20% com base no peso total do implante. Em algumas modalidades, o ligante ou fase expansível compreende uma faixa de cerca de 0,1% a cerca de 10% com base no peso total do implante. Em algumas modalidades, o ligante ou fase expansível compreende de cerca de 0,1%, 0,25%, 0,5%, 0,75%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9% ou de cerca de 10% com base no peso total do implante.

[00193] Em algumas modalidades, o ligante ou fase expansível compreende polímeros, monômeros, amidos, gomas, poli(aminoácidos), ou uma combinação dos mesmos, que intumescem após contato com fluido (água, solução salina, fluidos corporais). Em várias modalidades, a quantidade de intumescimento pode variar de cerca de 5 a cerca de 100 por cento, de cerca de 5 a cerca de 40 por cento, ou de cerca de 5 a cerca de 20 por cento. O tempo para atingir o máximo de intumescimento pode variar dependendo da localização e da propriedade desejada do implante. Na prática, o tempo para atingir o máximo intumescimento pode ocorrer dentro de um período de 5 dias, 3 dias, 2 dias ou dentro de um período de 24 horas.

[00194] O material intumescível adequado pode incluir, sem limitações, hidroxipropil celulose, hidroxipropil metilcelulose, hidroxietil metilcelulose, carboximatilcelulose, hidroxietilcelulose e sais dos mesmos, Carbopol, poli(hidroxietilmetacrilato), poli(metoxietilmetacrilato), gelatina, poli(metoxietoxietilmetacrilato), polimetilmetacrilato (PMMA), metilmetacrilato (MMA), metilmetacrilato (MMA), álcoois polivinílicos, propileno glicol, PEG 200, PEG 300, PEG 400, PEG 500, PEG 550, PEG 600, PEG 700, PEG 800, PEG 900, PEG 1000, PEG 1450, PEG 3350, PEG 4500, PEG 8000 ou combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, o

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 92/129 /108 ligante ou a fase expansível inclui polímeros gelificantes incluindo, mas não se limitando a, polímeros celulósicos, polímeros vinílicos, tais como polivinilpirrolidona; polímeros e copolímeros acrílicos, tais como polímero de ácido acrílico, copolímeros de ácido metacrílico, copolímeros de acrilato de etila-metacrilato de metila ou semelhantes; ou misturas dos mesmos.

[00195] Em várias implementações, o implante descrito no presente pedido compreende ainda excipientes, diluentes, polímeros biodegradáveis, agentes intumescentes, fatores de crescimento, antibióticos, solubilizantes, estabilizantes, agentes de volume, antioxidantes ou ligantes [00196] Uma lista não limitante de materiais intumescíveis que o ligante ou fase expansível pode compreender inclui álcool polivinílico (PVA), PVA modificado com comonômeros hidrofílicos, por exemplo, AMPS, o PVA modificado com grupos de reticulação rápida, por exemplo, NAAADA, PVA modificado com polivinilpirrolina (PVP), carboximatilcelulose, polietileno glicol (PEG), poli(éter vinílico), copolímeros de PVA e PEG, polipropileno glicol (PPG), copolímeros de PEG e PPG, copolímeros de PVA ou PPG, poliacrilonitrila, hidrocoloides, por exemplo, ágar, alginatos, colágeno, elastina, quitina, quitosana, gelatina, açúcar, manitol ou semelhantes. Em várias modalidades, o material intumescível inclui, por exemplo, poli(ácido N-isopropilacrilamida-co-acrílico)-poli(ácido L-láctico) (NAL); poli(N-isopropilacrilamida) (PNIPAM) enxertado em outros polímeros, tais como copolímeros ou polímeros de carboximatilcelulose (CMC), incluindo copolímeros em bloco e polímeros, compósitos ou copolímeros com funcionalidade final, contendo poli(éter 2-etoxietil vinílico) termossensível e/ou poli(éter hidroxietilvinílico) e/ou (EOVE200-HOVE400), cuja temperatura de transição sol-gel é de 20,5°C. O material intumescente, em várias modalidades, pode ser usado para controlar a liberação do oxiesterol no tecido e/ou no espaço sinovial.

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 93/129 /108 [00197] Em algumas modalidades, o ligante ou fase expansível inclui ácido hialurônico. Em algumas modalidades, o ligante ou fase expansível inclui glicosamino glicanos. Exemplos não limitativos de glicosamino glicanos incluem sulfato de condroitina, sulfato de dermatano, sulfato de queratina, heparina, sulfato de heparina e hialuronano. Em algumas modalidades, o ligante ou fase expansível inclui manitol, PEG, alginato de magnésio ou glicerol.

[00198] Os polímeros podem ser polímeros hidrofílicos reticulados ou levemente reticulados. Embora estes polímeros possam ser não iônicos, catiônicos, zwiteriônicos ou aniônicos, em várias modalidades, os polímeros intumescíveis são catiônicos ou aniônicos. Em várias modalidades, o polímero intumescível pode conter uma multiplicidade de grupos funcionais ácidos, tais como grupos de ácido carboxílico, ou sais dos mesmos. Exemplos de tais polímeros adequados para uso aqui incluem aqueles que são preparados a partir de monômeros contendo ácido polimerizáveis, ou monômeros contendo grupos funcionais que podem ser convertidos em grupos ácidos após polimerização. Exemplos de tais polímeros também incluem polímeros à base de polissacarídeos tais como polímeros de carboximetil amido e celulose e poli(aminoácidos) tais como poli(ácido aspártico). Alguns monômeros não ácidos podem também ser incluídos, usualmente em quantidades menores, na preparação dos polímeros absorventes. Tais monômeros não ácidos incluem, por exemplo, monômeros contendo os seguintes tipos de grupos funcionais: ésteres de sulfonato ou carboxilato, grupos hidroxila, grupos amida, grupos amino, grupos nitrila, grupos de sal de amônio quaternário e grupos arila (por exemplo, grupos fenila, tais como os derivados do monômero de estireno). Outros monômeros não ácidos potenciais incluem hidrocarbonetos insaturados tais como etileno, propileno, 1-buteno, butadieno ou isopreno.

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 94/129 /108 [00199] Em algumas modalidades, o ligante ou fase expansível compreende substâncias que são capazes de se tomar livremente permeáveis após hidratação em fluidos aquosos. Tais substâncias incluem polissacarídeos, tais como gelatina, sacarose, sorbitol, mananas, ácido jalurônico, poliaminoácidos, poliálcoois, poliglicóis ou semelhantes. Além do precedente, o polímero intumescível pode também incluir excipientes adicionais, tais como lubrificantes, agentes promotores de fluxo, plastificantes e agentes antiaderentes. Por exemplo, o ligante ou fase expansel pode ainda incluir polietileno glicol, polivinilpirrolidona, talco, estearato de magnésio, beenato de glicerila, ácido esteárico ou dióxido de titânio.

[00200] Em várias modalidades, a distribuição do tamanho de partículas do material de fase expansível ou ligante pode ser cerca de 10 micrômetros, 13 micrômetros, 85 micrômetros, 100 micrômetros, 151 micrômetros, 200 micrômetros e todas as subfaixas entre estas. Em algumas modalidades, pelo menos 75% das partículas têm um tamanho de cerca de 10 micrômetros a cerca de 200 micrômetros. Em algumas modalidades, pelo menos 85% das partículas têm um tamanho de cerca de 10 micrômetros a cerca de 200 micrômetros. Em algumas modalidades, pelo menos 95% das partículas têm um tamanho de cerca de 10 micrômetros a cerca de 200 micrômetros. Em algumas modalidades, todas as partículas têm um tamanho de cerca de 10 micrômetros a cerca de 200 micrômetros. Em algumas modalidades, pelo menos 75% das partículas têm um tamanho de cerca de 20 micrômetros a cerca de 180 micrômetros. Em algumas modalidades, pelo menos 85% das partículas têm um tamanho de cerca de 20 micrômetros a cerca de 180 micrômetros. Em algumas modalidades, pelo menos 95% das partículas têm um tamanho de cerca de 20 micrômetros a cerca de 180 micrômetros. Em algumas modalidades, todas as partículas têm um tamanho de cerca de 20 micrômetros a cerca de 180 micrômetros.

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 95/129 /108

Crioconservação e Liofilização [00201] Após descelularização, o tecido pode ser congelado (por exemplo, crioconservado) e em outros casos, liofilizado ou seco por congelação. Antes de congelar, o tecido pode ser incubado em uma solução de crioconservação. Esta solução geralmente contém um ou mais crioprotetores para minimizar o dano do cristal de gelo à ATM estrutural que podería ocorrer durante o congelamento. Exemplos de crioprotetores úteis incluem, sem limitação, dimetilssulfóxido (DMSO), dextrano, sacarose, 1,2propanodiol, glicerol, sorbitol, frutose, trealose, rafinose, propileno glicol, 2,3 butanodiol, hidroxietil amido, polivinilpirrolidona (PVP), prolina (ou outros estabilizadores proteicos), albumina sérica humana ou combinações dos mesmos. Se o tecido for liofilizado, a solução geralmente também conterá um ou mais componentes protetores secos, para minimizar os danos estruturais durante a secagem e pode incluir uma combinação de um solvente orgânico e água que não sofre expansão ou contração durante o congelamento. Os agentes crioprotetores e protetores secos podem ser os mesmos, ou uma ou mais substâncias. Se o tecido não for liofilizado, ele pode ser congelado colocando-o (em um recipiente esterilizado) em um freezer a cerca de -80°C, ou mergulhando-o em nitrogênio líquido estéril e, em seguida, armazenando-o a uma temperatura abaixo de -160°C até o uso.

[00202] Qualquer meio de suspensão de secagem por congelação adequado pode ser usado. Por exemplo, o meio de suspensão de secagem por congelação pode compreender água ou um meio aquoso, tal como solução salina. Em algumas modalidades, pode ser incluído o uso de meios de suspensão de liofilização contendo níveis de ácidos ou álcalis de intumescimento de colágeno. Em outras modalidades, o uso de meios de suspensão de secagem por congelação contendo níveis de intumescimento de colágeno de ácidos ou álcalis, pode ser excluído para evitar danos na arquitetura da fibra e ultraestrutura molecular das partículas de colágeno. A

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 96/129 /108 título de exemplo, meios de suspensão de secagem por congelação com um pH na faixa de cerca de 5 a 12 podem ser usados para suspender partículas de colágeno acelulares reticulares, enquanto que para partículas de colágeno acelulares não reticuladas o meio de suspensão por secagem por congelação pode ter um pH dentro da faixa de cerca de 6 a 8.

[00203] As partículas de colágeno acelular podem ser suspensas no meio de suspensão de secagem por congelação em uma faixa de diferentes concentrações. Em várias modalidades, a concentração de partículas de colágeno acelular suspensas no meio de suspensão de secagem por congelação está na faixa de 10 a 80% (p/v), embora possam ser usadas outras concentrações. Na extremidade mais alta desta faixa, a quantidade de partículas de colágeno acelular no meio de secagem por congelação tem uma consistência pastosa relativamente espessa.

[00204] O processo pode incluir opcionalmente uma etapa de mistura da suspensão de partículas de colágeno acelular no meio de suspensão de secagem por congelação. Isto assegura uma distribuição uniforme das partículas de colágeno acelular no meio de suspensão de secagem por congelação. Tratamentos de mistura mecânica severa, como homogeneização ou blendagem, devem ser evitados, no entanto, a fim de minimizar o dano do colágeno acelular.

[00205] A suspensão de partículas de colágeno acelular pode, por exemplo, ser moldada, formada ou fundida na forma desejada, antes da liofilização. Em muitas implementações, o meio de suspensão de liofilização e as partículas de colágeno acelular suspensas são mantidos em um molde adequado durante a etapa de secagem por congelação. O processo pode, portanto, ser usado para a fabricação de materiais colagenosos acelulares de formas predeterminadas, que podem ser facilmente variados utilizando moldes diferentes. Exemplos de formas adequadas incluem folhas, tampões, blocos, cunhas, contas, cordas ou variações dos mesmos.

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 97/129 /108 [00206] Se a ATM for congelada e liofilizada, a seguir à incubação na solução de crioconservação, o tecido pode ser empacotado dentro de um recipiente estéril que é permeável ao vapor de água, mas impermeável às bactérias, por exemplo, uma bolsa permeável ao vapor de água ou frasco de vidro. Um lado de uma bolsa útil consiste em uma membrana porosa de TYVEK® de grau médico, um produto com marca registrada da DuPont Company de Wilmington, Dei. Essa membrana é porosa a vapor de água e impermeável a bactérias e poeira. A membrana TYVEK® é selada termicamente a uma folha impermeável de laminado de polietileno, deixando um lado aberto, formando assim uma bolsa de dois lados. A bolsa aberta é esterilizada por irradiação (por exemplo, irradiação γ) antes do uso. O tecido é colocado assepticamente (através do lado aberto) na bolsa estéril. O lado aberto é selado por calor assepticamente para fechar a bolsa. O tecido empacotado é a seguir protegido da contaminação microbiana através das etapas subsequentes do processamento.

[00207] Em várias modalidades, a reticulação pode ser realizada para transmitir a resistência física adicional ao material colagenoso acelular, e um aumento da resistência às enzimas digestivas que podem estar presentes em um ambiente de cicatrização de feridas. Surpreendentemente, verificou-se que o material colagenoso acelular liofilizado formado a partir de partículas de colágeno acelular reticulado tinha uma flexibilidade melhorada em comparação com o material colagenoso acelular correspondente formado a partir de partículas de colágeno acelular não reticuladas. Isso é benéfico para o uso do material colagenoso acelular no tratamento de feridas. Assim, em várias modalidades, as partículas de colágeno acelular são reticuladas.

[00208] Em várias modalidades, os agentes de reticulação incluem poli-isocianatos, em alguns casos, di-isocianatos. Os isocianatos polifuncionais reagem com grupos amino ou hidroxila de diferentes cadeias proteicas formando um material que possui uma estrutura estável, enquanto

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 98/129 /108 retém a arquitetura original do colágeno acelular e que é resistente ao ataque enzimático. Sabe-se que a antigenicidade está associada aos grupos amino das cadeias proteicas do colágeno acelular e a reação dos grupos amino com o isocianato elimina qualquer antigenicidade associada a esses grupos. Em certos aspectos, os di-isocianatos incluem di-isocianatos alifáticos, aromáticos e alicíclicos como exemplificado pelo di-isocianato de 1,6-hexametileno, diisocianato de tolueno, di-isocianato de 4,4'-difenilmetano e di-isocianato de 4,4'-diciclo-hexilmetano, respectivamente. Em outros aspectos, um diisocianato útil é o di-isocianato de hexametileno (HMDI). Podem também ser usados agentes de reticulação de carbodi-imida, tais como cloridrato de 1-etil-

3-[3-dimetilaminopropil] carbodi-imida (EDC).

[00209] A extensão da reticulação das partículas de colágeno acelular pode ser variada. Usualmente, isso fornece um mecanismo para controlar a taxa na qual o material colagenoso acelular é reabsorvido ou degradado durante o uso. A resistência à degradação tende a aumentar à medida que a extensão da reticulação é aumentada.

[00210] A título de exemplo, a reticulação das partículas de colágeno acelular pode ser realizada usando HMDI. Em certas modalidades, o HMDI pode ser usado a uma concentração de cerca de 0,01 g a 0,5 g por 50 g de colágeno acelular. Se a concentração for muito alta, isso pode resultar em reações de excesso de reticulação e corpos estranhos. A reticulação pode ser realizada em uma faixa de diferentes períodos de tempo. A título de exemplo, o colágeno acelular pode ser exposto ao agente de reticulação durante cerca de 1 hora a cerca de 3 dias. Tipicamente, a reticulação é realizada por pelo menos 12 horas, em alguns casos, pelo menos 20 horas. Será apreciado que as condições de reticulação podem rotineiramente variar para ajustar a extensão da reticulação.

[00211] Em algumas modalidades, um implante liofilizado compreende um esterol, por exemplo, uma quantidade eficaz de Oxil33. Uma suspensão

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 99/129 /108 contendo um colágeno de porcino acelular, material ósseo e o oxiesterol é liofilizada ou seca por congelação. Qualquer líquido adequado pode ser usado na pasta aquosa para misturar o colágeno de porcino acelular, o material ósseo e um oxiesterol para formar a pasta aquosa. Líquidos adequados incluem, por exemplo, preparações aquosas tais como água, solução salina (por exemplo solução salina fisiológica), soluções de açúcar ou combinações dos mesmos.

[00212] Mais particularmente, as formulações de implante liofilizadas são tipicamente primeiro preparadas como suspensões, em seguida, colocadas em tabuleiros, congeladas e liofilizadas. O volume total de líquido necessário para a pré-liofilização pode ser maior ou igual a quantidade de líquido necessária para pós liofilização.

[00213] O processo de liofilização inclui, tipicamente, a sublimação de água a partir de uma formulação de implante congelada sob condições controladas. A liofilização pode ser realizada utilizando equipamento padrão como usado para liofilização ou secagem a vácuo. O ciclo pode variar dependendo do equipamento e das instalações usadas para o preenchimento e acabamento.

[00214] Inicialmente, em algumas modalidades, uma pasta aquosa contendo os componentes do implante, incluindo Oxil33 é colocada em moldes de formas desejadas em uma câmara de liofilização sob uma faixa de temperaturas e, em seguida, é submetida a temperaturas bem abaixo do ponto de congelação da pasta aquosa, geralmente por várias horas. Em muitos casos, a temperatura pode ser menor ou igual a -40°C durante pelo menos 2 horas. Após a conclusão da congelação, a câmara de liofilização e o condensador são evacuados através de bombas de vácuo, tendo a superfície do condensador sido previamente refrigerada por refrigerante circulante. O condensador teria sido resfriado abaixo do ponto de congelação da suspensão a cerca de -40°C, em alguns casos a cerca de -50°C ou menos, em outros casos, a cerca de -60°C ou menos. Adicionalmente, a evacuação da câmara deve continuar até uma

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 100/129 /108 pressão de cerca de 50 mTorr a cerca de 600 mTorr, em alguns casos, cerca de 50 a cerca de 150 mTorr é obtida.

[00215] O implante liofilizado é então aquecido sob vácuo na câmara e no condensador. Isto usualmente seria realizado aquecendo as prateleiras dentro do liofilizador no qual os moldes contendo o implante liofilizado descansam durante o processo de liofilização a uma pressão variando de cerca de 50 mTorr a cerca de 600 mTorr. O processo de aquecimento ocorrería otimamente de forma muito gradual, ao longo de várias horas. Por exemplo, a temperatura deve inicialmente ser aumentada de cerca de -30°C a cerca de 10°C e mantida por cerca de 10-70 horas. Além disso, o implante liofilizado pode ser aumentado da temperatura de congelação a cerca de 25°C a -40°C durante um período de 30-192 horas. A secagem completa pode ser realizada por estabilização do vácuo, temperatura do condensador e temperatura liofilizada da prateleira do implante. Após a secagem inicial, a temperatura do implante liofilizado pode ser aumentada a cerca de 25°C a -40°C e mantida por cerca de 5-40 horas. Uma vez que o ciclo de secagem esteja completo, a pressão na câmara pode ser lentamente liberada à pressão atmosférica (ou ligeiramente abaixo) com gás nitrogênio seco estéril (ou gás equivalente).

[00216] Em algumas modalidades, após a liofilização, o implante é de cerca de 95 a cerca de 99,5% livre de umidade. Em várias modalidades, o implante é cerca de 95, 95,5, 96, 96,5, 97, 97,5, 98, 98,5, 99 ou cerca de 99,5% livre de umidade. Em algumas modalidades, o implante tem cerca de 0,5% a cerca de 5% de teor de umidade após a liofilização. Em várias modalidades, o implante tem cerca de 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5 ou 5% de teor de umidade após a liofilização. Os implantes liofilizados são estáveis e podem ser armazenados em uma ampla faixa de temperaturas. Os implantes liofilizados podem ser armazenados a uma temperatura menor ou igual a 30°C, por exemplo, refrigerados a 4°C ou à temperatura ambiente (por exemplo, aproximadamente 25°C).

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 101/129 /108 [00217] O implante é um implante liofilizado estável que é uma forma conveniente para preparar um implante moldável após reconstituição e implantá-lo no ou próximo de um defeito ósseo. Os implantes liofilizados de Oxil33 são tipicamente reconstituídos para uso por adição de uma solução aquosa para re-hidratar o implante liofilizado. Uma ampla variedade de soluções aquosas pode ser usada para reconstituir um implante liofilizado, por exemplo, água fisiologicamente aceitável, soro fisiológico, cloreto de sódio, dextrose, solução de Ringer com Lactato, solução salina tamponada com fosfato (PBS), sangue, aspirado de medula óssea, frações de medula óssea ou uma combinação dos mesmos.

Método de Preparação [00218] Em algumas modalidades, o implante é feito pela adição de um oxiesterol em uma quantidade de cerca de 20% em peso a cerca de 90% em peso para a ATM ou um colágeno de porcino acelular, estando o colágeno de porcino acelular em uma quantidade de cerca de 0,1% em peso a cerca de 20% em peso com base no peso total do implante para formar uma mistura. Em outras modalidades, partículas de cerâmicas porosas são adicionadas à mistura para formar o implante, sendo as partículas cerâmicas porosas em uma quantidade de cerca de 30% em peso a cerca de 99,5% em peso com base no peso total do implante. Em algumas modalidades, a mistura forma uma pasta aquosa, uma massa ou pasta, que pode ser liofilizada.

[00219] Em algumas modalidades, na fabricação do implante, uma mistura do material de ATM (por exemplo, colágeno acelular e oxiesterol) é combinada com o material ósseo e um líquido para umedecer o material para formar uma pasta aquosa, uma massa ou pasta em cerca de 30 segundos. Qualquer líquido adequado pode ser usado incluindo, por exemplo, preparações aquosas tais como água, solução salina (por exemplo solução salina fisiológica), soluções de açúcar, solventes orgânicos próticos ou compostos poli-hidróxi líquidos tais como glicerol e ésteres de glicerol, ou

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 102/129 /108 misturas dos mesmos. O líquido pode, por exemplo, constituir em cerca de 5 a cerca de 70 por cento em peso da composição misturada antes da liofilização. Uma vez umedecido, o implante se toma moldável ou fluível na forma de suspensão e, em alguns casos, pode ser liofilizado.

[00220] Em uma modalidade da fabricação, uma mistura de colágeno acelular pode ser combinada com pasta de Permacol®, um oxiesterol (por exemplo, Oxil33) e um líquido, desejavelmente com uma preparação aquosa, para formar uma massa coesiva moldável. O líquido em excesso pode ser removido por quaisquer meios adequados, incluindo, por exemplo, aplicando a massa coesiva a um molde ou forma permeável a líquidos e drenando o excesso de líquido.

[00221] Em algumas modalidades, o implante é formado pela mistura da pasta de Permacol®, colágeno acelular e do oxiesterol até formar uma massa coerente. Em outros aspectos, os materiais ósseos, pasta de Permacol® e o oxiesterol são umedecidos e misturados em uma seringa de mistura ou dispositivo semelhante.

[00222] Em algumas modalidades, a mistura de ATM, material ósseo e/ou oxiesterol são moldados para tomar a forma do implante. Antes, durante ou após a moldagem, incluindo em alguns casos a aplicação de força de compressão à ATM, o colágeno de porcino acelular pode ser submetido a uma ou mais operações adicionais tais como aquecimento, liofilização e/ou reticulação.

[00223] A reticulação pode ser usada para melhorar a resistência da ATM formada. Altemativamente, a superfície da ATM pode ser reticulada para reduzir o tamanho dos poros do interior poroso e, desse modo, formar o exterior da ATM que é menos permeável e/ou menos poroso que um interior poroso. A reticulação pode ser conseguida, por exemplo, por reação química, pela aplicação de energia, como energia radiante (por exemplo, luz UV ou

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 103/129 /108 energia de micro-ondas), secagem e/ou aquecimento e foto-oxidação mediada por corante, tratamento de-hidrotermal, tratamento enzimático ou outros.

[00224] Em algumas modalidades, um agente de reticulação química é usado. Exemplos de agentes de reticulação adequados incluem aqueles que contêm grupos reativos bifuncionais ou multifuncionais e que reagem com a ATM. A reticulação química pode ser introduzida expondo o material de ATM a um agente de reticulação química, quer colocando-o em contato com uma solução do agente de reticulação química, quer por exposição aos vapores do agente de reticulação química. Este contato ou exposição pode ocorrer antes, durante ou depois de uma operação de moldagem. Em qualquer caso, o material resultante pode então ser lavado para remover substancialmente todas as quantidades remanescentes do reticulador químico, se necessário ou desejado, para o desempenho ou aceitação da ATM final implantável.

[00225] Os agentes de reticulação química adequados incluem mono- e dialdeídos, incluindo glutaraldeído e formaldeído; compostos de poliepóxi tais como éteres poliglicidílicos de glicerol, éteres diglicidílicos de polietileno glicol e outros éteres de poliepóxi e glicidílicos de diepóxi; agentes tanantes incluindo óxidos metálicos polivalentes tais como dióxido de titânio, dióxido de cromo, dióxido de alumínio, sal de zircônio, bem como taninos orgânicos e outros óxidos fenólicos derivados de plantas; produtos químicos para esterificação ou grupos carboxila seguidos por reação com hidrazida para formar funcionalidades de acilazida ativadas no colágeno; diciclohexilcarbodi-imida e seus derivados, bem como outros agentes de reticulação heterobifuncionais; di-isocianato de hexametileno (HMID); e/ou açúcares, incluindo glicose, também reticularão o material de ATM.

[00226] Em algumas modalidades, as matrizes são formadas por mistura do oxiesterol com uma pasta aquosa de polímero, como o colágeno acelular e derramamento da mistura em um molde de formato. A mistura de

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 104/129 /108 compósito é seca por congelação e eventualmente quimicamente reticulada e cortada com a forma final desejada, em alguns casos, em tiras.

[00227] Em algumas modalidades, o oxiesterol é solubilizado e misturado com o colágeno de porcino acelular presente na pasta de Permacol®. Em algumas modalidades, o oxiesterol é solubilizado em um solvente orgânico (por exemplo, etanol) ou opcionalmente com um cossolvente (por exemplo, PEG). Exemplos adequados de solventes orgânicos incluem tetra-hidrofurano, éter dietílico, diclorometano, acetato de etila, acetona, η,η-dimetilformamida, acetonitrila, dimetilssulfóxido, amônia, tbutanol, n-propanol, etanol, metanol, ácido acético ou combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, o oxiesterol pode ser misturado em uma razão de 25:75 a 75:25 com o solvente. Em algumas modalidades, o oxiesterol é misturado em uma razão de 50:50 com o solvente para formar uma solução ou suspensão de oxiesterol, que pode então ser adicionado à pasta de Permacol® e/ou materiais ósseos.

[00228] Por exemplo, se o oxiesterol é Oxil33, ele é tipicamente apenas ligeiramente solúvel ou insolúvel em água. O Oxil33 pode ser solubilizado em um solvente não aquoso, tal como, por exemplo, etanol e misturado em uma solução ou suspensão. Em algumas modalidades, o Oxil33 pode ser filtrado passando o Oxil33 e o solvente através de um filtro (por exemplo, de 0,22 mícrons). Isso removerá as bactérias e outras partículas de tamanho maior da composição. O Oxil33 usado na composição pode ser micronizado antes de ser misturado com solventes e outros excipientes. Em várias modalidades, o tamanho de partícula do Oxil33 pode variar de cerca de 1 mícron a 250 mícrons. Em algumas modalidades, o Oxil33 pode ter um tamanho de partícula de cerca de 5 mícrons a cerca de 100 mícrons ou de cerca de 20 a 50 mícrons. O Oxil33 na solução ou suspensão pode ser adicionado a uma pasta aquosa de colágeno de porcino acelular e/ou partículas de cerâmica, misturado, e, em seguida, seco.

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 105/129 /108 [00229] O implante pode ser usado para reparar o osso e/ou cartilagem em um sítio de tecido alvo, por exemplo, um resultante de lesão, defeito provocado durante o da cirurgia, infecção, malignidade ou malformação do desenvolvimento. O implante pode ser usado em uma ampla variedade de procedimentos cirúrgicos ortopédicos, periodontais, neurocirúrgicos, orais e maxilofaciais, como o reparo de fraturas simples e/ou compostas e/ou não uniões; fixações externas e/ou internas; reconstruções articulares, como artrodese; artroplastia geral; artroplastia de copo do quadril; reposição da cabeça femoral e umeral; substituição da superfície da cabeça femoral e/ou substituição total da articulação; reparos da coluna vertebral, incluindo fusão da coluna e fixação interna; cirurgia tumoral, por exemplo, preenchimento deficiente; discectomia; laminactomia; excisão de tumores da medula espinhal; operações cervicais e torácicas anteriores; reparos de lesões na coluna; escoliose, lordose e cifose; fixação intermaxilar de fraturas; mentoplastia; substituição da articulação temporomandibular; aumento e reconstrução da crista alveolar; matrizes implantáveis embutidas; colocação e revisão de implantes; lifts do seio; e/ou procedimentos estéticos. Ossos específicos que podem ser reparados ou substituídos pela ATM implantável incluem o osso etmoidal, frontal, nasal, occipital, parietal, temporal, mandíbula, maxila, zigomático, vértebra cervical, vértebra torácica, vértebra lombar, sacro, costela, estemo, clavícula, escápula, úmero, rádio, ulna, ossos carpais, ossos metacarpais, falanges, ílio, ísquio, púbis, fêmur, tíbia, fíbula, patela, calcâneo, ossos do tarso e/ou metatarsais.

Aplicação de Oxiesterol à ATM [00230] Em algumas modalidades, um agente terapêutico (por exemplo, oxiesterol, com ou sem um ou mais fatores de crescimento) pode ser colocado no implante ou manualmente, misturando, pulverizando, impregnando, injetando, escovando e/ou despejando para infundir o implante.

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 106/129 /108 [00231] A aplicação do oxiesterol ao implante pode ocorrer no momento da cirurgia, pelo fabricante ou de qualquer outra maneira adequada. Por exemplo, o oxiesterol uniformemente disperso no interior da pasta de Permacol® pode ser colocado em uma seringa para aplicação a um local da cirurgia. Em outros aspectos, uma mistura liofilizada de Permacol® e o oxiesterol pode ser reconstituída a partir de uma seringa e a seringa pode ser colocada em um interior do implante através da inserção de uma agulha ou cânula (perfurando a ATM) e injetando o oxiesterol de modo que ele seja uniformemente distribuído por todo o interior poroso da ATM.

[00232] Em algumas modalidades, o oxiesterol pode ser aplicado à ATM antes de combinar os materiais e formando-o na forma final do implante. De fato, o oxiesterol pode ser misturado no polímero natural ou sintético (por exemplo, colágeno acelular, em alguns aspectos, reticulado) e vertido em moldes da forma final do implante. Altemativamente, o oxiesterol, tal como o Oxil33, pode ser aplicado sobre e/ou na ATM carregada porosa depois de formar o mesmo na forma final por mistura, imersão, injeção, pulverização ou uma combinação dos mesmos.

[00233] Os fatores de crescimento e o oxiesterol do presente pedido podem ser eliminados na ATM ou com outros agentes terapêuticos. Por exemplo, o fator de crescimento pode ser disposto sobre ou no transportador por eletrospray, pulverização ou impregnação por ionização, dispersão vibratória (incluindo sonicação), pulverização de bocal, pulverização assistida por ar comprimido, escovagem e/ou derramamento.

[00234] Em algumas modalidades, o interior do implante é carregado com oxiesterol que funciona como um fator osteoindutivo. Em outros aspectos, o oxiesterol pode ser disposto em um frasco e, em seguida, um cirurgião pode misturar um fluido com o oxiesterol, que pode ser usado para carregar a pasta de Permacol® antes da aplicação a um sítio de defeito ósseo.

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 107/129 /108 [00235] A quantidade de oxiesterol pode ser suficiente para causar o crescimento de ossos e/ou cartilagens. Em algumas modalidades, o oxiesterol é Oxil33 e está contido em uma ou mais ATMs em uma quantidade de 1 a 2 mg por centímetro cúbico da ATM.

[00236] Em algumas modalidades, o oxiesterol é fornecido em um transportador líquido (por exemplo, uma solução tamponada aquosa ou solvente orgânico). As soluções aquosas tamponadas exemplificadoras incluem, mas não estão limitadas a, TE, HEPES (ácido 2-[4-(2-hidroxietil)-lpiperazinil]etanossulfônico), MES (ácido 2-morfolinoetanossulfônico), tampão de acetato de sódio, tampão de citrato de sódio, tampão de fosfato de sódio, um tampão Tris (por exemplo, Tris-HCl), solução salina tamponada com fosfato (PBS), fosfato de sódio, fosfato de potássio, cloreto de sódio, cloreto de potássio, glicerol, cloreto de cálcio ou uma combinação dos mesmos. Em várias modalidades, a concentração de tampão pode ser de cerca de 1 mM a 100 mM. Em algumas modalidades, o oxiesterol é fornecido em um transportador (incluindo um tampão) contendo sacarose, glicina, ácido Lglutâmico, cloreto de sódio e/ou pollssorbato 80. Os solventes orgânicos exemplificadores ou solventes não aquosos incluem DMSO, ácido acético, acetona, DME, DMF, MTBE, acetonitrila, butanol, butanona, álcool tbutílico, etanol, polietileno glicol, metanol, clorobenzeno, clorofórmio, tolueno, propanol, pentano, heptano, etanol, éter dietílico ou semelhantes.

[00237] Em algumas modalidades, o oxiesterol disposto na matriz de tecido acelular é OXI133 e compreende a Forma polimórfica A que produz um padrão de difração de raios-X de pó compreendendo uma ou mais das seguintes reflexões: 6,1, 12,3, 16,4, 17,91, 18,6 e 20,94 ± 0,2 graus 2Θ antes de ser colocado na matriz; ou Forma B que produz um padrão de difração de raios-X de pó compreendendo uma ou mais das seguintes reflexões: 5,9, 11,9, 13,3, 16,1, 17,96 e 18,82 ± 0,2 graus 2Θ antes de ser colocado na matriz; ou uma mistura dos mesmos.

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 108/129

100 /108

Método de Tratamento [00238] Em algumas modalidades, o implante compreende um colágeno de porcino acelular, em alguns casos, um colágeno de porcino acelular reticulado e um oxiesterol, tal como, por exemplo, mono-hidrato de Oxil33, para promover a osteogênese. Em outras modalidades, o implante também pode incluir material ósseo e um fluido. Em uso, o Oxil33 fornece tratamento terapêutico para condições ósseas. O Oxil33 facilita a formação óssea, diferenciação osteoblástica, osteomorfogênese e/ou osteoproliferação. O implante pode ser administrado para tratar fraturas expostas e fraturas com alto risco de não união e em indivíduos com distúrbios da coluna vertebral. Ou seja, o Oxil33 pode induzir a fusão da coluna e pode ajudar a tratar doenças degenerativas do disco ou artrite que afetam as vértebras lombares ou cervicais.

[00239] Em algumas modalidades, o implante, depois de ser liofilizado, é administrado por umedecimento do mesmo para conferir propriedades de maleabilidade e moldabilidade ao implante. O implante pode ser moldado em diferentes tamanhos, formas e configurações. Em várias modalidades, o implante moldável que compreende uma ATM e um oxiesterol, pode ser colocado dentro de uma seringa de modo que um cirurgião pode aplica-lo a um local de cirurgia, e/ou a seringa contendo o implante é ainda colocada em uma bolsa de vácuo para conservação adicional antes de usar. Em outros casos, o implante é liofilizado e colocado em uma bolsa selada a vácuo para conservação antes da hidratação e uso por um cirurgião para tratar um defeito ósseo. Quer em uma seringa ou empacotados a vácuo, estes implantes podem ser armazenados a cerca de 40°C e 75% de umidade ambiente.

[00240] Existem vários fatores que podem ser levados em consideração na determinação do tamanho, forma e configuração do implante. Por exemplo, tanto o tamanho como a forma podem permitir a facilidade de

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 109/129

101 /108 posicionamento do implante no local do tecido alvo que é selecionado. Além disso, a forma e o tamanho do implante devem ser selecionados de forma a minimizar ou impedir que o implante se mova após o implante. Em várias modalidades, o implante pode ter a forma de uma haste ou de uma superfície plana, tal como um filme ou folha (por exemplo, tipo fita) ou semelhante. A flexibilidade pode ser uma consideração para facilitar a colocação do dispositivo.

[00241] As células-tronco mesenquimais tratadas com Oxil33 aumentaram a diferenciação dos osteoblastos. Assim, em algumas modalidades, uma ATM compreendendo Oxil33 pode ser implantada em um local da coluna com células-tronco mesenquimais para induzir o crescimento ósseo através da diferenciação de osteoblastos. O periósteo é um tipo de tecido que está envolvido precocemente durante um processo normal de reparo de fraturas ósseas e pode recrutar vários tipos de células (por exemplo, células-tronco mesenquimais) e fatores de crescimento ósseos necessários para o reparo de fraturas ósseas. Assim, em algumas modalidades, o tecido periósteo é usado como fonte de células-tronco mesenquimais e/ou fatores de crescimento em uma composição óssea desmineralizada.

[00242] Em algumas modalidades, um implante compreendendo Oxil33 pode ser implantado ou injetado diretamente em um sítio cirúrgico em um paciente. Em algumas modalidades, o implante é configurado para liberar Oxil33 na forma de um depósito. Em algumas modalidades, uma pluralidade de matrizes é fornecida (por exemplo, em um kit) e administrada a um sítio cirúrgico que triangula e/ou circunda o local que necessita de crescimento ósseo. Em várias modalidades, uma pluralidade de matrizes compreende cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 matrizes. Em algumas modalidades, um plastificante é usado para reduzir a temperatura de transição vítrea, a fim de afetar estabilidade do implante.

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 110/129

102 /108 [00243] Os marcadores radiográficos podem ser incluídos no implante para permitir ao usuário posicioná-lo com precisão no sítio alvo do paciente. Esses marcadores radiográficos também permitirão ao usuário rastrear o movimento e a degradação do implante no sítio ao longo do tempo. Nesta modalidade, o usuário pode posicionar com precisão o implante no local utilizando qualquer um dos numerosos procedimentos de diagnóstico por imagem. Tais procedimentos de diagnóstico por imagem incluem, por exemplo, imageamento de raios-X ou fluoroscopia. Exemplos de tais marcadores radiográficos incluem, mas não estão limitados a, cerâmicas, bário, fosfato, bismuto, iodo, tântalo, tungstênio e/ou esferas ou partículas de metal. Em várias modalidades, o marcador radiográfico pode ter uma forma esférica ou um anel ao redor do implante. A cerâmica na composição também pode ser usada como um marcador radiográfico.

[00244] Em algumas modalidades, o implante compreendendo o oxiesterol uniformemente disposto em uma ATM pode ser administrado ao sítio alvo, sendo moldado de acordo com as necessidades de um procedimento médico e passado por uma “cânula” ou “agulha” que pode ser um parte de um dispositivo de aplicação, por exemplo, uma seringa, um dispositivo de aplicação de pistola, ou qualquer dispositivo médico adequado para aplicação do implante a um órgão alvo ou região anatômica. A cânula ou agulha do dispositivo é projetada para causar um trauma físico e psicológico mínimo ao paciente.

Esterilização [00245] O colágeno de porcino acelular, material ósseo, oxiesterol e dispositivos para administrar o implante podem ser esterilizados. Em várias modalidades, um ou mais componentes da ATM, e/ou o dispositivo médico usados para administrar a matriz podem ser esterilizados por radiação, em uma etapa de esterilização terminal no empacotamento final. A esterilização terminal de um produto fornece maior garantia de esterilidade do que de

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 111/129

103 /108 processos como um processo asséptico, que exige que os componentes individuais do produto sejam esterilizados separadamente e que a embalagem final seja montada em um ambiente estéril.

[00246] Tipicamente, em várias modalidades, a radiação gama é usada na etapa de esterilização terminal, a qual envolve o uso de energia de ionização a partir de raios gama que penetra profundamente no dispositivo. Os raios gama são altamente eficazes na eliminação de microrganismos, não deixam resíduos nem têm energia suficiente para transmitir radioatividade ao dispositivo. Os raios gama podem ser empregados quando o dispositivo está no pacote e a esterilização gama não requer pressões altas ou condições de vácuo, portanto, as vedações do pacote e outros componentes não são estressadas. Além disso, a radiação gama elimina a necessidade de materiais de empacotamento permeáveis.

[00247] Em algumas modalidades, o implante pode ser empacotado em um pacote resistente à umidade e depois esterilizado terminalmente por irradiação gama. Em uso, o cirurgião remove um ou todos os componentes do pacote estéril para uso.

[00248] Em várias modalidades, a radiação de feixe de elétrons (ebeam) pode ser usada para esterilizar um ou mais componentes da ATM. A radiação do feixe de elétrons compreende uma forma de energia ionizante, que é geralmente caracterizada por baixa penetração e altas taxas de dose. A irradiação com feixes de elétrons é semelhante ao processamento gama, pois altera várias ligações químicas e moleculares no contato, incluindo as células reprodutivas de microrganismos. Os feixes produzidos para a esterilização por feixes de elétrons são fluxos de elétrons concentrados e altamente carregados, gerados pela aceleração e conversão de eletricidade.

[00249] Outros métodos também podem ser usados para esterilizar a ATM implantável e/ou um ou mais componentes da ATM, incluindo, mas não

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 112/129

104 /108 se limitando a, esterilização de gás, como, por exemplo, com óxido de etileno ou esterilização a vapor.

Kits [00250] Em várias modalidades, é fornecido um kit compreendendo o oxiesterol (por exemplo, Oxil33), ATM (por exemplo, pasta de Permacol®), material ósseo, e/ou diluentes. O kit pode incluir peças adicionais junto com a ATM implantável combinadas em conjunto para serem usadas para implantar a ATM (por exemplo, lenços, agulhas, seringas, seringa de mistura ou outro dispositivo de mistura). Em alguns casos, o oxiesterol já foi incorporado na ATM presente no kit. O kit pode incluir a ATM com ou sem um oxiesterol em um primeiro compartimento. O segundo compartimento pode incluir um frasco, mantendo o diluente e quaisquer outros instrumentos necessários para a aplicação localizada. Um terceiro compartimento pode incluir luvas, coberturas, curativos e outros materiais curativos para manter a esterilidade do processo de implantação, bem como um manual de instruções, que pode incluir um gráfico que mostra como implantar a ATM após a hidratação. Um quarto compartimento pode incluir agulhas e/ou suturas adicionais. Cada ferramenta pode ser empacotada separadamente em uma bolsa de plástico que é esterilizada por radiação. Um quinto compartimento pode incluir um agente para imageamento radiográfico. Uma capa do kit pode incluir ilustrações do procedimento de implantação e uma cobertura plástica transparente pode ser colocada sobre os compartimentos para manter a esterilidade.

[00251] Estes e outros aspectos do presente pedido serão ainda apreciados após consideração dos seguintes Exemplos, que se destinam a ilustrar certas modalidades particulares do pedido, mas não se destinam a limitar o seu escopo, tal como definido pelas reivindicações.

EXEMPLOS [00252] A pasta de Permacol®, uma pasta de colágeno acelular derivada da derme de porcino contém 20% de colágeno acelular reticulado e

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 113/129

105 /108 solução salina a 80%. O componente de colágeno é a derme de porcino descelularizada que é criogenicamente moída e depois reticulada usando diisocianato de hexametileno (HMDI). As formulações de implante moldáveis contendo Oxil33 misturado com pasta de Permacol® foram preparadas e usadas em estudos de fusão vertebral realizados em coelhos e ratos. Estas composições não foram liofilizadas nem carregadas em uma seringa. Estas composições foram aplicadas por implante das mesmas sobre processos transversais decorticados dos coelhos e ratos estudados.

Exemplo 1 [00253] Neste exemplo, a pasta de Permacol® foi misturada com mono-hidrato de Oxil33 em várias quantidades como listado na Tabela 1, abaixo. As formulações moldáveis da pasta de Permacol® e mono-hidrato de Oxil33 foram aplicadas em várias quantidades a fusões da coluna lombar póstero-lateral de nível único em coelhos. As formulações moldáveis de colágeno bovino reticuladas foram também aplicadas nas mesmas quantidades a coelhos em fusões da coluna lombar póstero-lateral de nível único. As taxas de fusão foram determinadas por palpação manual dos segmentos da coluna operados. Os resultados estão resumidos na Tabela 1 abaixo.

Tabela 1 - Estudo da Fusão Póstero-lateral de Nível Único em Coelho

Dose de Oxi (mg Oxil33/cc de implante)	Taxa de fusão de Pasta de Permacol® da Formulação Moldável (%)	Taxa de fusão de Colágeno Bovino Reticulado da Formulação Moldável (%)
10	50	20
40	66,7	50
80	100	33,3
160	75	33,3
240	66,6	33,3

A partir das taxas de fusão listadas na Tabela 1, acima, é evidente que a formulação moldável de Pasta de Permacol® e de 80 mg/cc de mono-hidrato de Oxil33 forneceram a taxa de fusão mais alta de 100% quando implantadas em coelhos submetidos a uma fusão da coluna lombar póstero-lateral de nível único, que foi um resultado inesperado. As taxas de fusão obtidas pela

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 114/129

106 /108 aplicação de implantes baseados em colágeno bovino reticulados a coelhos em procedimentos idênticos foram significativamente menores.

Exemplo 2 [00254] Neste exemplo, a pasta de Permacol® foi misturada com mono-hidratado de Oxil33 em várias quantidades, conforme listado na Tabela 2, abaixo. As formulações moldáveis de Pasta de Permacol® e mono-hidrato de Oxil33 foram aplicadas em diversas quantidades para ratos durante fusões da coluna lombar póstero-lateral de dois níveis. As formulações moldáveis com colágeno bovino reticulado foram também aplicadas nas mesmas quantidades que a de ratos durante fusões da coluna lombar póstero-lateral de dois níveis. As taxas de fusão foram determinadas por palpação manual dos segmentos operados da coluna. Os resultados estão resumidos na Tabela 2.

Tabela 2 - Estudo de Fusão Póstero-lateral de 2 Níveis de Rato

Dose de Oxi (mg Oxil33/cc do implante)	Taxa de fusão de Pasta de Permacol da Formulação Moldável (%)	Taxa de fusão de Colágeno Bovino Reticulado da Formulação Moldável (%)
0	0	0
5	0	10
10	60	80
20	90	90
40	100	90
80	100	90

A partir das taxas de fusão listadas na Tabela 2, acima, é evidente que as formulações moldáveis de Pasta de Permacol® e ambos dentre 40 mg/cm e 80 mg/cc de mono-hidrato de Oxil33, respectivamente, forneceram a taxa de fusão mais alta de 100% quando injetadas em ratos durante fusões da coluna lombar póstero-lateral de dois níveis (PLF). As taxas de fusão obtidas por implantes contendo colágeno bovino reticulado para os mesmos procedimentos de fusão são significativamente menores. Estes inesperados resultados foram confirmados por radiografias de raios-X tomadas de um rato imediatamente passar por um procedimento pós-operatório para uma fusão da coluna lombar póstero-lateral de dois níveis tal como ilustrado na FIG. 1 e no pós-operatório a intervalos de 4 semanas e 8 semanas como ilustrado nas FIGS. 2 e 3, respectivamente. As FIGS. 1, 2 e 3 representam resultados de um

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 115/129

107 /108 procedimento de fusão póstero-lateral de dois níveis realizada em um rato que recebeu um implante bilateral de 0,5 cc de uma pasta moldável de Permacol® misturada com 40 mg/1 cc de mono-hidrato de Oxil33, grânulos cerâmicos e carboximatilcelulose sódica (CMC) abrangendo os processos transversos L3 a L5 do rato. Em particular, a composição do implante de pasta moldável usada neste procedimento está resumida na Tabela 3, abaixo.

Tabela 3 - Composição do Implante Moldável

Descrição	Pasta de Permacol® (mg)	Cerâmica (mg)	CMC (mg)	Oxil33 (mg)
40 mg/cc Oxil33	750	750	20	40

[00255] Em comparação com a radiografia de raios-X pós-operatória imediata da FIG. 1, as FIGS. 2 e 3 ilustram a formação de novo osso ao longo das margens laterais e ossos trabeculares no interior dos implantes. A remoção do material do implante ficou evidente nas FIGS. 2 e 3 em comparação com a FIG. 1, a radiografia no pós-operatório. A presença de ossos em ponte entre o processo transverso L3-L5 evidência que o rato foi determinado como sendo radiograficamente fundido.

[00256] As FIGS. 4, 5 e 6 são lâminas histológicas de ratos submetidos a fusões póstero-laterais em dois níveis. A lâmina histológica da FIG. 4 é a imagem de um grupo de controle de ratos que era apenas um transportador do material de implante sem Oxil33. Nesta imagem, não há nova formação óssea e o tecido fibroso é visto entre os grânulos cerâmicos residuais. As FIGS. 5 e 6 são lâminas histológicas dos ratos que sofreram fusão póstero-lateral de dois níveis contendo uma formulação de implante moldável como na Tabela 3 acima e das quais as radiografias de raios-X após 4 e 8 semanas, respectivamente foram tomadas como ilustrado nas FIGS. 2 e 3. As FIGS. 5 e 6 mostram claramente o desaparecimento de grânulos cerâmicos e uma crescente presença de tecido adiposo, ambos indicativos de formação óssea e confirmando os resultados das FIGS. 2 e 3.

[00257] Todas as publicações de patente e não patente citadas nesta divulgação são aqui incorporadas na medida como se cada uma dessas

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 116/129

108 /108 publicações, patente e não patente, fosse aqui incorporada por referência na sua totalidade. Além disso, mesmo que a divulgação aqui tenha sido descrita com referência a exemplos e modalidades particulares, deve ser entendido que estes exemplos e modalidades são meramente ilustrativos dos princípios e aplicações da presente divulgação. Portanto, deve ser entendido que podem ser feitas numerosas modificações nas modalidades ilustrativas e que outras configurações podem ser concebidas sem se distanciar do espírito e escopo da presente divulgação como definido pelas reivindicações seguintes.

[00258] Será evidente para os versados na técnica que várias modificações e variações podem ser feitas de várias modalidades aqui descritas sem se distanciar do espírito ou escopo dos ensinamentos aqui apresentados. Assim, pretende-se que várias modalidades abranjam outras modificações e variações de várias modalidades dentro do escopo dos presentes ensinamentos.

Claims

1. Implante configurado para encaixar em, ou próximo de, um defeito ósseo para promover o crescimento ósseo, o implante caracterizado pelo fato de que compreende um oxiesterol disposto uniformemente em uma matriz de tecido acelular.

2. Implante de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que (i) o implante é um gel, pasta ou massa moldável; (ii) o implante é liofilizado; (iii) o implante é liofilizado e colocado em uma seringa; ou (iv) o implante é hidratado e colocado em uma seringa.

3. Implante de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que (i) o oxiesterol compreende (3S, 5S, 6S, 8R, 9S, 10R, 13S, 14S, 17S) 17-((S)-2-hidroxioctan-2-il)-10, 13-dimetil-hexadeca-hidro-lHciclopenta[a]fenantreno-3,6-diol (Oxil33), Oxil49, Oxil53, Oxil54, Oxil55 ou hidratos, solvatos, formas amorfas ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos; (ii) a matriz de tecido acelular é obtida de uma fonte humana, porcina, caprina, bovina, ovina ou equina; (iii) a matriz de tecido acelular é de colágeno de porcino; ou (iv) a matriz de tecido acelular é de colágeno de porcino reticulado.

4. Implante de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a matriz de tecido acelular compreende de cerca de 5% em peso a cerca de 25% em peso de colágeno de porcino acelular e de cerca de 0,01% em peso a cerca de 90% em peso de oxiesterol.

5. Implante de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o implante compreende adicionalmente um fluido de cerca de 25% em peso a cerca de 50% em peso e material ósseo em uma quantidade de cerca de 25% em peso a cerca de 75% em peso.

6. Implante de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a matriz de tecido acelular compreende colágeno de porcino

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 118/129

2/5 que é particulado e tem um tamanho de partícula de cerca de 50 pm a cerca de 500 pm.

7. Implante de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o material ósseo compreende (i) matriz óssea desmineralizada, osso mineralizado, fibras ósseas desmineralizadas, aparas ósseas desmineralizadas; (ii) cerâmica inorgânica compreendendo fosfato tricálcico, hidroxiapatita, fosfato de cálcio bifásico, cerâmica de fosfato de cálcio porosa, hidroxiapatita ou uma combinação dos mesmos; (iii) um tamanho de partícula de cerca de 125 pm a cerca de 750 pm; (iv) fosfato tricálcico e hidroxiapatita em uma razão de cerca de 70:30 a cerca de 90:10; ou (v) fosfato tricálcico e hidroxiapatita em uma razão de cerca de 85:15.

8. Implante de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o fluido compreende água, solução salina, DMSO, ácido acético, acetona, DME, DMF, MTBE, acetonitrila, butanol, butanona, álcool t-butílico, etanol, polietileno glicol, metanol, clorobenzeno, clorofórmio, tolueno, propanol, pentano, heptano, etanol, Capriol-90™, éter dietílico ou uma combinação dos mesmos.

9. Implante de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a matriz de tecido acelular é de partículas sólidas ou semissólidas de material colagenoso que são derivadas de um material de tecido natural e o material colagenoso conserva a arquitetura de fibra original e a estrutura molecular do material de tecido natural do qual é derivado, e o material colagenoso é substancialmente livre de proteínas de tecido não fibroso, glicoproteínas, elementos celulares, lipídeos ou resíduos lipídicos, e o material colagenoso não é citotóxico, e o implante é capaz de ser usado como componente de uma pasta, gel ou uma solução injetável, e as partículas de material colagenoso têm um tamanho de partícula dentro da faixa de aproximadamente 50 mícrons a aproximadamente 500 mícrons.

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 119/129

3/5

10. Implante de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a matriz de tecido acelular é uma preparação de tecido fibroso colagenoso substancialmente não ressorvível, não antigênico, de origem em tecido humano ou animal, que é adequada para homo ou heterotransplante como reparação permanente de lesões de tecidos, cuja preparação conserva a estrutura natural e a arquitetura original do tecido humano ou animal, é substancialmente livre de proteínas e glicoproteínas de tecido não fibroso, é substancialmente livre de elementos celulares, é substancialmente livre de lipídeos e resíduos lipídicos e não é citotóxica, em que a preparação é capaz, quando implantada, de ser recolonizada pelas células hospedeiras.

11. Implante de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o implante está configurado para ser liofilizado e, em seguida, reidratado antes da implantação em, ou próximo de, um defeito ósseo.

12. Método para preparar um implante, o método caracterizado pelo fato de que compreende a mistura de um fluido com um oxiesterol em uma quantidade de cerca de 0,01% em peso a cerca de 90% em peso com base em um peso total do implante e uma matriz de tecido acelular em uma quantidade de cerca de 0,1% em peso a cerca de 20% em peso com base no peso total do implante.

13. Método para preparar um implante de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente (i) submeter o implante misturado ao fluido para liofilização para formar um implante liofilizado; ou (ii) em que a matriz de tecido acelular é de colágeno de porcino acelular ou de colágeno reticulado de porcino acelular.

14. Método para preparar um implante de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o fluido é água, solução de cloreto de sódio, dextrose, solução de Ringer com Lactato, solução salina

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 120/129

4/5 tamponada com fosfato, sangue, aspirado de medula óssea, plasma rico em plaquetas, frações de medula óssea ou uma combinação dos mesmos em uma quantidade de cerca de 3/4 mL a cerca de 10 mL.

15. Método para preparar um implante de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o implante compreende adicionalmente um ligante ou um material de fase expansível em uma quantidade de cerca de 2% em peso a cerca de 4% em peso com base no peso total do implante.

16. Método para preparar um implante de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o ligante ou o material de fase expansível é carboximatilcelulose, pectina, quitosana ou uma combinação dos mesmos.

17. Método para preparar um implante de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente (i) colocar o implante em um molde antes da liofilização; (ii) colocar o implante em uma seringa; (iii) colocar o implante liofilizado em uma bolsa selada a vácuo; ou (iv) colocar a seringa contendo o implante em uma bolsa selada a vácuo.

18. Método para preparar um implante de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que o volume do fluido adicionado ao implante liofilizado compreende de cerca de 3/4 mL a cerca de 10 mL.

19. Método para tratar um defeito ósseo em um paciente com necessidade do mesmo, o método caracterizado pelo fato de que compreende implantar em, ou próximo de, um defeito ósseo um implante compreendendo um oxiesterol uniformemente disperso em uma matriz de tecido acelular.

20. Método para tratar um defeito ósseo de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que o implante compreende adicionalmente um ligante ou um material de fase expansível em uma

Petição 870180049765, de 11/06/2018, pág. 121/129

5/5 quantidade de cerca de 2% em peso a cerca de 4% em peso com base no peso total do implante.