BR102015003237A2 - método para melhorar a digestibilidade na alimentação de animais bovinos - Google Patents

Abstract

método para melhorar a digestibilidade na alimentação de animais bovinos a invenção refere-se ao uso de pelo menos uma amilase bacteriana em combinação com uma mistura de pelo menos dois óleos essenciais selecionados do grupo que consiste em timol, eugenol, meta-cresol, vanilina e guajacol na alimentação para animais ruminantes da subfamília bovinae para a melhora do ganho de peso, rendimento de leite e/ou taxa de conversão alimentar (tca). exemplos de animais bovinos são gado de corte e vacas leiteiras.

Description

MÉTODO PARA MELHORAR A DIGESTIBILIDADE NA ALIMENTAÇÃO DE

ANIMAIS BOVINOS

Campo da Invenção [001] Vacas de alto rendimento em sistemas agrícolas modernos vivem em condições que são caracterizadas por uma produção muito elevada de leite (vacas leiteiras) ou taxa de crescimento (gado de corte) , o qual é seguido por uma exigência de energia igualmente elevada. A utilização do alimento diminui acentuadamente quando a ingestão é aumentada para além dos níveis de manutenção. Em parte, para justificar isso, mais e mais alimentos facilmente degradáveis são incluídos na alimentação de ruminantes, por exemplo, matérias-primas contendo amido tais como concentrados à base de cereais e silagens de cereais integrais. O material de amido é frequentemente recuperado nas fezes o que significa que a utilização de tais ingredientes do alimento poderia ser reforçada.

[002] O conteúdo energético de alimentos para bovinos pode ser medido usando uma técnica de fermentação In vitro desenvolvida no Instituto de Nutrição Animal, Universidade de Hohenheim pelo Prof. Menke e seus colegas em 1979. O teste de valor alimentício de Hohenheim (HFT) envolve a medição do volume de gás produzido durante a incubação por 24 horas do alimento para animais em líquido ruminal. A quantidade de gás produzido durante a incubação correlaciona-se diretamente com a digestibilidade dos alimentos e, por conseguinte, com o conteúdo de energia. Desde a primeira publicação deste método tem havido inúmeras melhorias e adaptações feitas como descrito por Steingass e Menke, 1986.

[003] Modificações na HFT permitem que as alterações na taxa de produção de gás sejam observadas. A alteração de certos aspectos do teste, tais como o tipo de substrato, preparação de substrato e/ou tempo de incubação leva a diferenças na energia disponível do substrato (Alimento) para a mistura de fluido do rúmen. A adição de determinadas substâncias para a fermentação HFT pode aumentar ou diminuir a digestibilidade do substrato. Há, portanto, uma necessidade de coerência de procedimentos, tais como os equipamentos e soluções que são usados, a tomada de medidas e a preparação do substrato.

[004] Nos alimentos para animais, o trigo/milho ou silagem de trigo/milho está se tornando mais comum e importante, em especial na alimentação dos ruminantes, devido ao seu crescimento eficiente e por suas propriedades energéticas densas.

[005] Como consequência disso, melhorias na digestibilidade do milho e/ou amido em alimento para ruminantes precisam ser feitas para permitir a plena utilização do potencial de energia e todos os nutrientes disponíveis.

[006] Uma parte das vacas de alta produção, que se caracterizam por uma alta taxa de crescimento (gado de corte), está recebendo dietas com altos niveis de concentrado de milho. Essas dietas são amplamente utilizadas para bovinos confinados, pois eles podem melhorar o desempenho do animal, suas características de carcaça e, consequentemente, aumentar a lucratividade. Essas dietas geralmente são suplementadas com monensina, um ionóforo carboxilico originalmente desenvolvido como um cocciodiostático de ave doméstica. Sabe-se, que Monensina tem propriedades promotoras do crescimento benéficas quando alimentadas ao gado, pois melhora a eficiência do alimento e previne e controla infecções parasitárias no rebanho.

[007] A desvantagem de monensina é que ela é um antibiótico sintético. Assim, existe uma continua necessidade de se encontrar uma solução alternativa sustentável para o gado de corte capaz de reduzir o uso de antibióticos na criação de animais e agricultura e capaz de acompanhar o ritmo da crescente demanda global por produtos de carne livre de antibióticos.

Descrição da Arte Relacionada [008] WO 03/068256 Al descreve um suplemento alimentar de amilase para nutrição melhorada de ruminantes. A amilase utilizada é uma amilase fúngica produzida por Aspergillus oryzae. Tricarico et al., em Animal Science 2005, 81: 365-374, descreve os efeitos do extrato de Aspergillus oryzae contendo atividade alfa-amilase na fermentação ruminal e na produção de leite em vacas em lactação da raça Holstein.

[009] Rojo et al (Feed Science and Technology, 123-124 (2005), 655-665) estudaram a efeitos de amilases exógenas de Bacillus licheniformis e Aspergillus níger sobre a digestão do amido ruminal e o desempenho de cordeiros.

Sumário da Invenção [0010] É um objetivo da presente invenção proporcionar um conceito alternativo, de preferência melhorado, que pode aliviar os problemas acima descritos por melhorar a utilização dos alimentos em animais em confinamento, ou seja, melhorar a taxa de conversão alimentar e/ou o ganho de peso e melhorar o rendimento de leite em vacas produtoras de leite.

[0011] É um outro objetivo da presente invenção proporcionar um conceito alternativo de alimentação para animais em confinamento que diz respeito a um método sustentável para a produção de produto de carne de animal, substituindo todos ou parte dos antibióticos na dieta animal.

[0012] Foi descoberto agora, surpreendentemente, que a utilização combinada de uma carbohidrase com um mistura de pelo menos dois, de preferência pelo menos três compostos de óleos essenciais selecionados a partir do grupo que consiste em timol, eugenol, meta-cresol, vanilina e guajacol em alimentos para animais em confinamento da subfamilia Bovinae tem a vantagem de ser capaz de melhorar a digestibilidade de dietas compreendendo milho.

[0013] Em particular, os inventores da presente invenção descobriram que a suplementação de uma carbohidrase, tal como, por exemplo, uma amilase, em adição a uma mistura de compostos de óleos essenciais selecionados a partir do grupo consistindo do timol, eugenol, meta-cresol, vanilina e guajacol melhora o ganho de peso diário e eficiência alimentar em rebanhos confinados.

[0014] Confinamento ou pátio de alimentação é um tipo de operação de alimentação animal que é usado na agricultura animal intensiva para aperfeiçoamento de gado, notavelmente gado de corte, mas também de suínos, cavalos, ovelhas, perus, galinhas ou patos, antes do abate.

[0015] No presente contexto, um animal da subfamilia Bovinaee (também chamada de bovino ou bovinos), um animal do reino de Animalia, do filo Chordata, da classe de Mammalia, ordem Artiodactyla, e da família Bovidae. Para os presentes fins, gado doméstico é a espécie mais preferida. Para os presentes propósitos o termo inclui todas as raças de gado doméstico, e todos os tipos de produção de gado, em especial gado de corte e vacas leiteiras.

[0016] Foi ainda verificado que uma mistura de pelo menos dois, de preferência pelo menos três compostos de óleos essenciais selecionados a partir do grupo que consiste em timol, eugenol, metacresol, vanilina e guajacol em alimentos para animais da subfamília Bovinaee pode ser utilizada como um ingrediente alimentar alternativo que pode reduzir ou substituir a quantidade de antibióticos, como atualmente usado na alimentação de animais em confinamento, mantendo os benefícios importantes dos referidos antibióticos.

[0017] Portanto, numa modalidade, a invenção está relacionada com um método para melhorar a digestibilidade das dietas tal como utilizadas para os animais de confinamento. Mais especificamente, a invenção refere-se a métodos para melhorar o ganho de peso e/ou a razão de conversão alimentar (TCA) de gado de corte em gado de corte, que compreende proporcionar ao animal uma quantidade eficaz de pelo menos uma carbohidrase, em combinação com uma mistura de pelo menos dois, de preferência pelo menos três compostos de óleos essenciais selecionados a partir do grupo que consiste em timol, eugenol, metacresol, vanilina e guaj acol.

[0018] Numa outra modalidade, a invenção diz respeito a um método de produção sustentável de um produto de carne de um animal da subfamilia Bovinae, o referido método compreendendo a etapa de formular uma composição de alimentação que se destina a ser utilizada em confinamentos, substituindo todo ou parte do (s) antibiótico(s) na composição com uma mistura de pelo menos dois, de preferência pelo menos três compostos de óleos essenciais selecionados a partir do grupo que consiste em timol, eugenol, meta-cresol, vanilina e guajacol.

[0019] O termo reação ou composição de alimentação significa qualquer composto, preparação, mistura, ou composição adequada para, ou destinada à ingestão por um animal.

[0020] A presente invenção também se refere a uma nova composição aditiva alimentar para animais em confinamento, especialmente gado de corte, compreendendo como ingrediente ativo pelo menos uma carbohidrase em combinação com pelo menos dois compostos de óleos essenciais como definidos acima.

Descrição Detalhada da Invenção [0021] Os compostos de óleos essenciais de acordo com a invenção estão disponíveis comercialmente ou podem ser preparados por um técnico na arte utilizando processos e métodos bem conhecidos no estado da técnica.

[0022] Os compostos de óleos essenciais podem ser utilizados em formas altamente purificadas em misturas ou na forma de extratos de plantas naturalmente disponíveis ou mistura de extratos.

[0023] O termo "extrato" tal como aqui utilizado inclui composições obtidas por extração com solventes (que também são conhecidos como "óleos extraídos"), destilação a vapor (que também são conhecidos como "óleos essenciais") ou outros métodos conhecidos do técnico na arte. Os solventes de extração adequados incluem álcoois tais como etanol.

[0024] A expressão "natural" é, neste contexto, entendida como uma substância que consiste em compostos de ocorrem na natureza e obtida a partir de produtos naturais ou através de síntese. A substância natural pode conter de preferência pelo menos dois dos compostos tal como acima definido como ingrediente principal e, adicionalmente, outros compostos de óleos essenciais como, por exemplo, capsaicina, tanino ou carvacrol.

[0025] No que se refere ao gado de corte, é atualmente contemplado que os óleos essenciais são administrados em quantidades (faixas de dosagem de óleos essenciais totais) de 50 a 150 mg por kg de peso corporal por dia, preferencialmente de 70 mg a 120 mg por kg de peso corporal por dia.

[0026] Numa outra modalidade preferida da invenção, os óleos essenciais são adicionados ao alimento como uma composição aditiva única.

[0027] A composição aditiva alimentar que contém os óleos essenciais de acordo com a invenção pode opcionalmente conter, em quantidades menores de outros compostos químicos, por exemplo, pelo menos um composto encontrado em plantas, e selecionado a partir do seguinte grupo, como, por kg de alimento: até cerca de 1 mg de propilideno, butilideno, ftalidas, gingerol, óleo de lavanda; até cerca de 2 mg de deca-, undeca-, dodecalactonas, iononas, irona, eucaliptol, mentol, óleo de hortelã- pimenta, alfa-pineno; até cerca de 3 mg de limoneno, anetol, linalol, diidrojasmonato de metila; até cerca de 4 mg de carvacrol, propiônico, ácido acético ou butirico, óleo de alecrim, óleo de cravo, geraniol, terpineol, citronelol; até cerca de 5 mg de amila e/ou salicilato de benzila, cinamaldeido, um polifenol vegetal (tanino); e até cerca de 5 mg de um pó de cúrcuma ou de um extrato de cúrcuma.

[0028] Todos os óleos essenciais e os compostos adicionais podem ser utilizados em combinação com um tensoativo emulsionante.

[0029] O agente emulsionante pode ser selecionado vantajosamente a partir daqueles de uma natureza preferencialmente hidrofilica, por exemplo, dentre poliglicerol ésteres de ácidos graxos, tais como ácido ricinoleico esterificado ou ésteres de propileno glicol de ácidos graxos, sacaro-ésteres ou sacaro-glicerideos, polietileno-glicol, lecitinas etc.

[0030] Exemplos de dosagens particularmente preferidas dos compostos de óleos essenciais na composição aditiva alimentar final de acordo com a invenção são, independentemente de um dentre os seguintes intervalos: timol entre 80 e 120 g/kg, preferencialmente 101 g/kg; eugenol entre 20 e 60 g/kg, preferencialmente 30 g/kg; meta-cresol 80 e 110 g/kg, preferencialmente 90 g/kg; vanilina entre 30 e 70 g/kg, preferencialmente 50 g/kg; guajacol entre 20 e 50 g/kg, preferencialmente 35 g/kg; salicilato entre 10 e 30 g/kg, preferencialmente 25 g/kg; resorcina entre 5 e 20 g/kg, preferencialmente 15 g/kg [0031] Numa modalidade preferida de um conceito de alimento para gado de corte o alimento final inclui uma mistura de timol, meta-cresol e vanilina, em que estes três compostos são usados em quantidades suficientes para proporcionar uma dosagem diária de 50 mg a 150 mg de óleos essenciais totais por kg de peso corporal do indivíduo ao qual ela deverá ser administrada.

[0032] Para os propósitos da presente invenção, uma composição aditiva alimentar preferida, contendo a combinação reivindicada de óleos essenciais está disponível sob o nome comercial do produto Crina ©Ruminants (disponível a partir da DSM Nutritional Products AG, Kaiseraugst, Suiça). Crina ® 30 Ruminantes é uma mistura de compostos aromatizantes destinados à alimentação animal e tem concentração de 380 g/kg de óleos essenciais totais.

[0033] No presente contexto, uma carbohidrase é uma enzima que catalisa a divagem de carboidratos em açúcares simples.

[0034] Exemplos de carbohidrases úteis no presente contexto são glucanases, em particular beta-glucanases e xiloglucanases, xilanases, pectinases e amilases e suas misturas. Numa modalidade preferida da invenção, a carbohidrase é uma amilase.

[0035] A carbohidrase para utilização de acordo com a invenção é estável na presença de protease. A estabilidade de protease pode ser determinada por incubação de 0,5 mg de proteína da enzima carbohidrase purificado/ml num tampão a um pH desejado (por exemplo, pH 3, 4, ou 5), durante o tempo desejado (por exemplo, 30, 45, 60, 90, ou 120 minutos) na presença de protease (por exemplo, pepsina, 70 mg/1), e, em seguida, aumentando o pH para o pH desejado (por exemplo, pH 4, 5, 6, ou 7) e medindo a atividade residual. A atividade de carbohidrase residual é preferencialmente pelo menos 20%, preferencialmente pelo menos 30, 40, 50, 60, 70, 80, ou pelo menos 90% em relação ao controle (uma amostra tratada sem protease).

[0036] Numa modalidade particular, pelo menos uma carbohidrase é uma amilase ou uma mistura de enzimas compreendendo, pelo menos, duas enzimas selecionadas a partir do grupo que consiste em betaglucanases, xiloglucanases, xilanases, pectinases e amilases.

[0037] Para os propósitos da presente invenção, são carbohidrases preferidas são carbohidrases contidas nos seguintes produtos comerciais: Ro η o z yme©Rumi S t ar©, RonozymeiVP, RonozymeOWX e Roxazyme© (Disponível a partir da DSM Nutritional Products AG, Kaiseraugst, Suiça).

[0038] No presente contexto, uma amilase é uma enzima que catalisa a endo-hidrólise de amido e outros oligo- e polissacarideos lineares e ramificados. Em uma modalidade particular, a amilase para utilização de acordo com a invenção tem uma atividade de alfa-amilase, ou seja, catalisa a endohidrólise de ligações 1,4-alfa-glucosidicas em oligossacarideos e polissacarideos. As alfa-amilases agem, por exemplo, no amido, glicogênio e polissacarideos e oligossacarideos relacionados de uma maneira aleatória, liberando grupos redutores na configuração alfa.

[0039] Numa modalidade preferida, a amilase do invento é uma alfa-amilase {nome sistemático: 1, 4-alfa-D-glucano glucanohidrolase), preferencialmente uma amilase bacteriana. Em outras modalidades, a amilase da presente invenção pertence à ao grupo EC 3.2.1. de amilases, tais como EC 3.2.1.1 (alfa-amilase), EC 3.2.1.2 (beta-amilase), EC 3.2.1.3 (glucano 1,4-alfa-glucosidase, amiloglucosidase, ou glicoamilase), EC 3.2.1.20 (alfa-glicosidase), EC 3.2.1.60 (glucano 1, 4-alfamaltotetraohidrolase) , EC 3.2.1.68 (isoamilase), EC 3.2.1.98 (glucano 1,4-alfamaltohexosidase) ou EC 3.2.1.133 (glucano 1,4-alfa-maltohidrolase).

[0040] Numa modalidade preferida, a amilase para utilização de acordo com a invenção pode ser, ou é, classificada como pertencente ao grupo EC 3.2.1.1. Os números EC referem-se a Nomenclatura de Enzima 1992 da NC-IUBMB, Academic Press, San Diego, Califórnia, incluindo suplementos 1-5 publicados no Eur. J. Brochem. 1994, 223, 1-5; Eur. J. Biochem. 1995, 232, 1-6; Eur. J. Brochem. 1996, 237, 1-5; Eur. J. Brochem. 1997, 250, 1-6; e Eur. J. Biochem. 1999, 264, 610-650; respectivamente. A nomenclatura é regularmente completada e atualizada; ver, por exemplo rede internacional da internet, em http://www.chem.qmw.ac.uk/rubmb/enzyme/index.html.

[0041] Atividade de amilase pode ser determinada por qualquer ensaio adequado. Geralmente, o pH de ensaio e a temperatura de ensaio podem ser adaptados para a enzima em questão. Exemplos de valores de pH de Ensaio são pH 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12. Exemplos de temperaturas de ensaio são 30, 35, 37, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 80, 90, ou 95°C. Valores de pH e de temperaturas preferidos estão na faixa fisiológica, tal como valores de pH 3, 4, 5, 6, 7 ou 8, e temperaturas de 30, 35, 37 ou 40 °C. O ensaio de amilase a seguir pode ser usado. Substrato: comprimidos Phadebas (Pharmacia Diagnostics; polímero de amido reticulado, insolúvel, de coloração azul, que é misturado com albumina de soro bovino e uma substância tampão, e fabricado na forma de comprimidos). Temperatura de Ensaio: 37 °C. Ensaio de pH: 4,3 (ou 7,0, se desejado) . Tempo de reação: 20 min. Após a suspensão em água, o amido é hidrolisado pela alfa-amilase, gerando fragmentos solúveis azuis. A absorvância da solução azul resultante, medida a 620 nm, é uma função da atividade de alf a-amilase. Uma Unidade alfa-amilase fúngica (1 FAU) é a quantidade de enzima que diva 5,26 g de amido por hora nas condições de ensaio padrão. Um amido preferido é Merck, Amylum solubile Erg. B. 6, lote 9947275. Uma descrição mais detalhada do ensaio, APTSMYQI-3207, está disponível mediante pedido da Novozymes A/S, Krogshoejvej 36, DK-2880 Bagsvaerd, Dinamarca.

[0042] Para uma classificação taxonômica e identificação da bactéria é feita referência ao manual de Bergey de Bacteriologia Sistemática (1986), vol 2, ISBN0-683-0783. Na alternativa, a análise de sequência de 16SrRNA bem conhecida pode ser utilizada (ver, por exemplo, Johansen et al., Int. J. Syst. BacterioL de 1999, 49, 1231-1240, em particular a seção de Métodos na p. 1233, segunda coluna); ou especialistas em taxonomia podem ser consultados, por exemplo a partir de DSMZ ou outras instituições depositárias reconhecidas.

[0043] Tal como é aqui empregado, o termo bacteriano designa amilases bacterianas que são derivadas de bactérias. O termo "derivado de" inclui enzimas que podem ser obtidas, ou são obtidas, a partir cepas bacterianas do tipo selvagem, bem como de suas variantes . As variantes podem ter pelo menos uma substituição, inserção e/ou deleção de pelo menos um resíduo de aminoácido. O termo variante também inclui shufflants (embaralhadores), híbridos, enzimas quiméricas e enzimas de consenso. As variantes podem ter sido produzidas por qualquer método conhecido na arte, tal como mutagênese direcionada a sítio, mutagênese aleatória, processos de derivação consenso (EP 897.985), e embaralhamento de genes (WO 95/22625, WO 96/00343), etc. Para os presentes propósitos uma variante amilase se qualifica como bacteriana quando pelo menos uma amilase bacteriana tenha sido utilizada para a sua concepção, derivação ou preparação. O termo "bacteriano(a)" não faz referência a um hospedeiro de produção recombinante potencial, mas apenas à origem do gene que codifica a amilase que é hospedado por ele .

[0044] A amilase para utilização de acordo com a invenção é preferencialmente derivada de uma cepa de Bacillus, tais como cepas de Bacillus amyloliquefaclens, Bacillus circulans, Bacillus halmapalus, Bacillus licheni forrais, Bacillus megaterium, Bacillus sp. , Bacillus stearothermophilus e Bacillus subtilís; preferencialmente a partir de cepas de Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus halmapalus, Bacillus licheniformis, Bacillus sp. , Bacillus subtilisf e Bacillus stearothermophilus.

[0045] Exemplos não limitativos de amilases de tipo selvagem para utilização de acordo com a invenção são aquelas amilases derivadas de Bacillus licheniformis, tal como Swissprot com nome da entrada AMY_BACLI, número de adesão primário P06278; Bacillus amyloliquefaciens, tal como Swissprot com nome de entrada AMY_BACAM, número de adesão primário P00692; Bacillus megaterium, tal como Swissprot com nome de entrada AMY__BACME, número de adesão primário P20845; Bacillus círculans, tal como Swissprot com nome de entrada AMY_BACCI, número de adesão primário P08137; Bacillus stearothermophilus, tal como Swissprot com nome de entrada AMY_BACST, número de adesão primário P06279. Outro exemplo é amilase de Bacillus subtilis, tal como Swissprot com nome de entrada AMY_BACSU, número de adesão primário P00691.

[0046] Para os propósitos da presente invenção, amilases preferidas são as amilases contidas nos seguintes produtos comerciais: BAN, Stainzyme, Termamyl SC, Natalase, e Duramyl (todos da Novozymes), e nos produtos Validase BAA e Validase HT (Da Valley Research) . Outros exemplos particulares de amilases para utilização de acordo com a invenção são as amilases contidas nos seguintes produtos comerciais: clarase, DexLo, GC 262 SP, G-Zyme G990, G-Zyme G995, G-Zyme G997, G-Zyme G998, HTAA, Optimax 7525, Purastar OxAm, Purastar ST, Spezyme AA, Spezyme Alpha, Spezyme BBA, Spezyme Delta AA, Spezyme DBA, Spezyme Ethyl, Spezyme Fred (GC521), Spezyme HPA, e Ultraphlow (todos da Genencor); Validase HT340L, Valley Thin 340L {todos da Valley Research); Avizyme 1500, Dextro 300 L, Kleistase, Maltazyme, Maxamyl, Thermozyme, Thermatex, Starzyme HT 120 L, Starzyme Super Cone, e Ultraphlo.

[0047] Em uma modalidade particular, a amilase para utilização de acordo com a invenção é de peletização estável, e/ou termoestável. A temperatura de fusão (Tm) de uma enzima é uma medida da sua termoestabilidade. A amilase da invenção pode ter uma Tm de pelo menos 75 °C, 76 °C, 77 °C, 78 °C, 79 °C, 80 °C, 81 °C, 82 °C, 83 °C, 84 °C, 85 °C, 86 °C, 87 °C, 88 °C, 89 °C, 90 °C, 91 °C, 92 °C, 93 °C, 94 °C ou, pelo menos, 95 °C, conforme determinado por Calorimentria de varredura diferencial (DSC). A DSC é realizada em um tampão fosfato de sódio 10 mM, cloreto de sódio 50 mM, a pH 7,0. A velocidade de varredura é constante, por exemplo, 1,5 °C/min. O intervalo de varredura pode ser de 20 a 100 °C. Outro tampão pode ser selecionado para a varredura, por exemplo, um tampão de pH 5,0, 5,5, 6,0, ou pH 6,5. Em modalidades alternativas adicionais, uma maior ou menor velocidade de varredura pode ser usada, por exemplo, uma velocidade inferior de 1,4 °C/min, 1,3 °C/min, 1,2 °C/min, 1,1 °C/min, de 1,0 °C/min, ou, 0,9 °C/min.

[0048] Numa outra modalidade preferida, a amilase para utilização de acordo com a invenção tem uma atividade a pH 7,0 e 37 °C de pelo menos 35% em relação à atividade ao pH ótimo e 37 °C. Mais preferencialmente, a atividade a pH 7,0 e 37 °C é, pelo menos, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, ou, pelo menos, 75% da atividade em pH ótimo e 37 °C.

[0049] Numa outra modalidade preferida, a amilase da invenção tem uma atividade a pH 7,0 e 37 °C e na presença de sais biliares 5mM de pelo menos 25% em relação à atividade em o pH ótimo e 37 °C na ausência de sais biliares. Mais preferencialmente, o nivel de atividade a pH 7,0 e 37 °C e na presença de sais biliares 5 mM é, pelo menos, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, ou pelo menos 65% da atividade ao pH ótimo e 37 °C na ausência de sais biliares.

[0050] Uma amilase bacteriana para utilização de acordo com a presente invenção é a enzima ativa do produto comercial Ronozyme© RumiStar®.

[0051] Em uma modalidade particular, as amilases, na forma na qual são adicionadas ao alimento, ou quando estão sendo incluídas em um aditivo alimentar, são bem definidas. Meio bem definido, no qual a preparação de enzima é pelo menos 50% pura numa base de proteína. Em outras modalidades especiais a preparação de enzima é pelo menos 60, 70, 80, 85, 88, 90, 92, 94, ou pelo menos 95% puro. A pureza pode ser determinada por qualquer método conhecido na arte, por exemplo, por SDS-PAGE, ou por cromatografia de exclusão cd tamanho (ver Exemplo 12 do WO 01/58275).

[0052] Uma preparação de enzima bem definida é vantajosa. Por exemplo, é muito mais fácil dosar corretamente para o alimento uma enzima que é essencialmente livre de interferir ou contaminar outras enzimas. O termo dose refere-se corretamente, em particular, ao objetivo de se obter de resultados consistentes e constantes, e a capacidade de otimizar a dosagem baseada no efeito desejado.

[0053] Preparações de enzima com purezas desta ordem de grandeza são, em particular, obtidas utilizando-se métodos recombinantes de produção, ao passo que elas não são tão facilmente obtidas e estão também sujeitas a uma variação muito mais elevada de lote para lote, quando produzidas por métodos de fermentação tradicionais.

[0054] A amilase bacteriana para utilização de acordo com a invenção é incluida nas dietas de bovinos ou aditivos alimentares de bovinos em quantidades eficazes . É presentemente contemplado que uma quantidade eficaz está abaixo de 200 mg de proteína enzimática por kg de matéria seca da dieta, preferencialmente abaixo de 150, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 9, 8, ou abaixo de 7 mg de proteína enzimática por kg de matéria seca da dieta (ppm) . Por outro lado, uma quantidade eficaz pode estar acima de 0,01 mg de proteína enzimática por kg de matéria seca da dieta, preferencialmente acima de 0,05, 0,10, 0,15, 0,20, 0,25, 0,30, 0,35, 0,40, 0,45, 0,50, 0,75, 1, 2, 3, ou acima de 4 mg de proteína enzimática por kg de dieta seca matéria (ppm). Por conseguinte, exemplos não limitativos de faixas de doses preferidas são: 0,10-50 mg de proteína enzimática/kg, de preferência 0,50-10, 1-9, 2-8, 3-8, ou 4- 7 mg de proteína enzimática/kg.

[0055] Na utilização de acordo com a invenção, a mistura de óleos essenciais e da amilase pode ser alimentada ao animal antes, depois, ou simultaneamente com a dieta do animal. Sendo esta última preferida.

[0056] A taxa de conversão alimentar (TCA) é indicativa de como efetivamente o alimento é utilizado. A TCA pode ser determinada com base em um ensaio de crescimento animal, que compreende um primeiro de tratamento no qual uma mistura de pelo menos dois compostos de acordo com a invenção em combinação com uma amilase é adicionada ao alimento do animal numa concentração adequada por kg de alimento, e um segundo tratamento (controle) sem adição de composto(s) ao alimento animal.

[0057] Como é amplamente conhecido, uma melhor TCA é menor do que a TCA de controle. Em modalidades particulares, a TCA é melhorada (ou seja, reduzida) em comparação com o controle em, pelo menos 1,0%, preferencialmente pelo menos 1,5%, 1,6%, 1,7%, 1,8%, 1,9%, 2,0%, 2,1%, 2,2%, 2,3%, 2,4%, ou, pelo menos, 2,5%.

[0058] Um ganho de peso melhorado significa um ganho de peso diária, semanal, quinzenal ou mensal melhorado (em g ou kg pelo periodo de tempo relevante) , em relação a um controle sem adição de amilase e óleos essenciais.

[0059] No que se refere às composições de alimentos para bovinos, tais como gado de corte, a dieta dos bovinos é normalmente composta por uma fração facilmente degradável (denominada "concentrado") e uma fração menos facilmente degradável rica em fibra, de acordo com a presente invenção, compreende como parte majoritária o milho. A silagem é uma versão ensilada da fração rica em fibra, em que material com um elevado teor de água é tratado com um processo de fermentação anaeróbia controlada (naturalmente fermentado ou tratado com aditivo).

[0060] A composição aditiva alimentar da presente invenção compreende, além da amilase e dos óleos essenciais, como aqui descrito acima, pelo menos um ingrediente adicional selecionado dentre vitaminas e minerais. Por exemplo, o aditivo alimentar da invenção pode incluir (i) pelo menos uma vitamina, (ii) pelo menos um mineral, ou (iii) pelo menos uma vitamina e pelo menos um mineral.

[0061] A referida pelo menos uma vitamina pode ser solúvel em gordura ou solúvel em água. Dentre os exemplos de vitaminas solúveis em gordura estão vitamina A, vitamina D3, vitamina E, e vitamina K, por exemplo, a vitamina K3 . Dentre os exemplos de vitaminas solúveis em água estão vitamina B12, biotina e colina, vitamina Bl, vitamina B2, vitamina B6, niacina, ácido fólico e pantotenato, por exemplo, Ca-D-pantotenato.

[0062] O referido pelo menos um mineral pode ser um macro mineral e/ou um mineral de traço. Dentre os exemplos de minerais de traço estão manganês, zinco, ferro, cobre, iodo, selênio e cobalto. Dentre exemplos de macro minerais estão cálcio, fósforo e sódio.

[0063] A incorporação da composição de aditivos alimentares, como aqui exemplificados acima, à alimentação animal é, na prática, realizada utilizando-se um concentrado ou uma pré-mistura. Uma pré-mistura designa preferencialmente uma mistura uniforme de um ou mais micro-ingredientes com diluente e/ou carreador. As pré-misturas são utilizadas para facilitar a dispersão uniforme de micro-ingredientes em uma mistura maior. Uma pré-mistura de acordo com a invenção podem ser adicionada a ingredientes do alimento ou à água potável na forma de sólidos (por exemplo como um pó solúvel em água) ou líquidos.

[0064] Uma pré-mistura pode compreender de 0,5 a 10% em peso dos ingredientes ativos de acordo com a invenção e de 10 - 95% em peso de outros aditivos convencionais, tais como aromatizantes, vitaminas, sais minerais e qualquer adjuvante absorvente convencional. Esta pré-mistura é finalmente adicionada ao alimento.

[0065] A presente invenção é ainda descrita pelo seguinte exemplo que não deve ser interpretado como limitativo do escopo da invenção.

[0066] Exemplo: Efeitos da CrinaORuminants e Ron o z ymeORumi s t a r® para aperfeiçoamento de gado Nelore em confinamento Protocolo e Projeto [0067] O estudo foi realizado em instalações do Departamento de Zootecnia na ESALQ/USP (Universidade de São Paulo), Piracicaba-SP, Brasil.

[0068] Os tratamentos foram alocados em cinqüenta baias, com 6 animais por baia. A água foi fornecida para consumo ad libitum e o alimento uma vez por dia. O gado foi privado de alimento e água por 16 horas antes da avaliação de peso corporal (PC) no inicio e no fim do experimento. Após 28 e 56 dias o peso corporal (PC) foi avaliado para o monitoramento do ganho médio diário parcial.

Tratamentos, número de animais e repetições Dietas: dietas altamente concentradas Resultados [0069] Os resultados são mostrados nas tabelas 1 e 2 .

Tabela 1: Periodo de adaptação - 28 dias: Μ + C = monensina + Crina, C + R = Crina + Ronozyme Rumistar, PC = peso corporal, GMD = ganho médio diário, MSI= ingestão de matéria seca, EA = eficiência alimentar [0070] Resumo: CRINA RUMINANIS aumentou a média diária de ganho em 14,5% e a eficiência alimentar em 7,34% em comparação com MONENSINA. CRINA RUMINANTS mais RONOZYME RUMISTAR (amilase) aumentou a média de ganho diária em 23,3% e eficiência alimentar em 12,4% em comparação com MONENSINA.

Tabela 2: Após 59 dias M + C = monensina + Crina, C + R = Crina + Ronozyme Rumistar [0071] Resumo: CRINA RUMINANTS aumentou o ganho médio diário em 14,7% e a eficiência alimentar em 7,75% em comparação com MONENSINA. CRINA RUMINANTS mais RONOZYME RUMISTAR (amilase) aumentou o ganho médio diário em 20,8% e a eficiência alimentar em 10,9% em comparação com MONENSINA.

Claims (10)

1. Método de melhorar o ganho de peso, a produção de leite e/ou a taxa de conversão alimentar de animais da subfamilia Bovinae, caracterizado pelo fato de compreender a administração ao animal de pelo menos uma carbohidrase em combinação com uma mistura de pelo menos dois, preferencialmente pelo menos três compostos de óleos essenciais selecionados do grupo que consiste em timol, eugenol, meta-cresol, vanilina e guajacol.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que os óleos essenciais são administrados em doses (faixa de dosagem total de óleos essenciais) de 50 a 150 mg por kg de peso corporal por dia, preferencialmente de 70 mg a 120 mg por kg de peso corporal por dia.

3. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o animal é um gado doméstico, em particular, um gado de corte.

4. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o animal é uma vaca leiteira.

5. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3 ou 4, caracterizado pelo fato de que a referida pelo menos uma carbohidrase é uma amilase.

6. Uso de pelo menos uma carbohidrase, em combinação com uma mistura de pelo menos dois, preferencialmente pelo menos três compostos de óleos essenciais selecionados a partir do grupo que consiste em timol, eugenol, meta-cresol, vanilina e guajacol caracterizado pelo fato de que é na alimentação de animais da subfamília Bovinae para melhorar o ganho de peso, produção de leite e/ou conversão alimentar.

7. Uso, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que os olhos essenciais são administrados em doses (faixas de dose total de óleos essenciais) de 50 a 150 mg por kg de peso corporal por dia, preferencialmente de 70 mg a 120 mg por kg de peso corporal por dia.

8. Uso, de acordo com a reivindicação 6 ou 7, caracterizado pelo fato do animal ser um gado doméstico, em particular um gado de corte.

9. Uso, de acordo com a reivindicação 6 ou 6, caracterizado pelo fato do animal ser uma vaca leiteira.

10. Uso, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato da referida pelo menos uma carboidrase ser uma amilase.