L'invention se rapporte aux glycosides d'anthracycline, qui sont des dérivés de la daunorubicine et de la doxorubicine, à leurs sels d'addition acides pharmaceutiquement acceptables, aux anthracyclinones correspondantes, aux procédés de préparation desdits glycosides d'anthracycline, de leurs sels et des anthracyclinones correspondantes, et aux compositions pharmaceutiques contenant lesdits glycosides d'anthracycline ou leurs sels. Les glycosides d'anthracycline et leurs sels servent d'agents anti-tumeurs et les anthracyclones, d'intermédiaire dans leur préparation.
L'invention permet de préparer des glycosides d'an.thracycline de formule générale A :
<EMI ID=1.1>
où R1 et R3, pris chacun indépendamment, représente un atome
<EMI ID=2.1>
<EMI ID=3.1>
tanément des atomes d'hydrogène et les sels d'addition pharmaceutiquement acceptables de ces glycosides d'anthracycline.
<EMI ID=4.1>
R3 représentent tous deux des atomes d'hydrogène, le composé de formule générale A est la 6-0-méthyldaunorubicine, ciaprès désignée sous le nom de composé (I). Quand R, représente un groupe méthyle, R2 un groupe hyd.roxy et R3 un atome d'hydrogène, le composé de formule générale A est la 6-0-méthyldoxorubicine, ci-après désignée sous le nom de composé (II).
Quand R, et R3 représentent tous deux des groupes méthyle et <EMI ID=5.1>
nérale A est la 6,9-di-0-méthyldaunorubicine, ci-après désignée sous le nom de composé (III). Quand R. et R, représentent tous deux des groupes méthyle et R2 représente un groupe hydroxy, le composé de formule générale A est la 6,9-di-0méthyldoxorubicine, ci-après désignée sous le nom de composé
<EMI ID=6.1>
<EMI ID=7.1>
mule générale A est 9-0-méthyl-daunorubicine, ci-après désignée sous le nom de composé (V). Quand R, représente un atome
<EMI ID=8.1>
composé de formule générale A est la 9-0-méthyldoxorubicine, ci-après désignée sous le nom de composé (VI).
L'invention a encore pour objet un procédé de préparation des composés (I), (III) et (V), comprenant la condensation d'une anthracyclinone de formule générale B :
<EMI ID=9.1>
<EMI ID=10.1>
dessus, avec du chlorure de 2,3,6-trideoxy-3-trifluoroacPta-
<EMI ID=11.1>
solvant organique inerte en présence d'un sel d'argent soluble comme catalyseur et d'un tamis moléculaire comme agent déshydratant, l'élimination du groupe protecteur 0-trifluoroacétyle du condensat résultant par traitement avec du méthanol, et l'élimination du groupe protecteur N-trifluoroacétyle par hydrolise alcaline douce.
Le chlorure de 2, 3, 6-trideoxy-3-trifluoroacéta-
<EMI ID=12.1>
dans la condensation peut être préparé comme le décrit le bre-
<EMI ID=13.1>
la Demanderesse.
Le chloroforme ou le bichlorure de méthylène est approprié comme solvant organique inerte et le sel d'argent soluble est de préférence du trifluorométhanesulfonate d'argent.
Les conditions de réaction préférées sont décrites plus complètement dans le brevet américain n[deg.] 4112076 appartenant à la Demanderesse. Le composé (I), (III) ou (V) peut être isolé en tant que tel ou sous la forme de son sel d'addition avec un acide pharmaceutiquement acceptable, en suivant les procédures de travail classique.
Le composé (I), (III) ou (V) peut être transformé en composé (II), (IV) ou (VI) respectivement par bromation en position 14 et hydrolyse du dérivé 14-bromo. Les conditions
de bromation et d'hydrolyse sont de préférence celles indiquées dans le brevet français n[deg.] 1217133 ou dans le brevet américain 3803124 appartenant à la Demanderesse. Cette transformation supplémentaire fait partie de l'invention.
L'invention concerne également des préparations
<EMI ID=14.1>
(II), (III), (IV) (V) ou (VI), ou leurs sels d'addition acides pharmaceutiquement acceptables en mélange avec un diluant ou un support inertes.
Les anthracyclinones de formule générale B sont
<EMI ID=15.1>
<EMI ID=16.1>
posé de formule générale B est la 6-0-méthyldaunomycinone,
<EMI ID=17.1>
<EMI ID=18.1>
formule générale B est la 6,9-di-0-méthyldaunomycinone, ci-
<EMI ID=19.1>
<EMI ID=20.1>
posé de la formule générale B est la 9-0-méthyldaunomycinone, ci-après désignée sous le nom de composé (IX).
Les composés (VII) et (VIII) peuvent être préparés à partir de la 6,11-di-O-acétyl -7,9-0-isopropylidène-dauno-
<EMI ID=21.1>
Chim. Ital., 100, 949-989, 1970). Le procédé, qui fait partie de l'invention, comprend le traitement de cette matière première avec une quantité catalytique d'acide sulfurique dans l'acétone aqueux, la méthylation de la 7,11-di-0-acétyldaunomycinone résultante avec de l'iodure de méthyle dans l' acétone sec en présence d'oxyde d'argent (I), la séparation de la 6-0-méthyl-7,11-di-0-acétyldaunomycinone et de la <EMI ID=22.1> de chacun de ces deux produits par hydrolyse.
Le traitement de l'acide sulfurique donne la 7,11-di-0-acétyl-daunomycinone par hydrolyse du groupe 0-isopropylidène accompagnée par un transfert d'un groupe acétyle de la position C-6-0 à la position C-7-0. La séparation des produits de la réaction de méthylation peut s' effectuer par chromatographie.
Le composé (IX) peut être préparé par un procédé suivant l'invention, qui comprend l'acétylation de la daunomycinone sous des conditions contrôlées avec de l'anhydride acétique dans la pyridine pour donner la 6,7,11-tri-
<EMI ID=23.1>
dans l'acétone sec en présence d'oxyde d'argent (I) et l'élimination par hydrolyse des groupes protecteurs acétyle de la 9-0-méthyl-6,7,11-tri-0-acétyldaunomycinone obtenue.
N
DONNEES RELATIVES A 1 'ACTIVITE BIOLOGIQUE
Activité anti-tumeur
<EMI ID=24.1>
centre des cellules HeLa et la leucémie P-388 ascitique chez les souris en comparaison avec la daunorubicine. Les résultats des tests in vitro au tableau 1, montrent que les nouveaux composés sont moins cytotoxiques que la daunorubicine.
Tableau 1
<EMI ID=25.1>
a) Les cellules HeLa ont été exposées aux médicaments pendant
24 heures, puis mises sur plaques. Le nombre de colonies
a été évalué 5 jours plus tard.
Les données "in vivo" reportées au tableau 2 indiquent que les composés I et III sont moins toxiques que la daunorubicine.
t
Tableau 2 : Activité anti-tumeur sur la leucémie ascitique
P-388 chez les souris
<EMI ID=26.1>
a) Les souris ont été traitées i.p. un jour après l'inoculation de cellules tumorales. b) Temps de survivance moyen des souris traitées/temps de survivance moyen des souris de test pour 100. c) Evaluées sur la base de résultats autoptiques macroscopiques. d) Données de deux expériences.
L'invention est illustrée par les exemples ci-après:
Exemple 1
<EMI ID=27.1>
lidène daunomycinone (1 g , 1,9 mmol) préparée comme décrit par Arcamone F. et al. dans Gazz. Chim. Ital. 100, 949, 1970, dans l'acétone (50 ml) et l'eau (5 ml) a été traitée avec de l'acide sulfurique concentré (2 ml) pendant 30 minutes à la température ambiante en agitant vigoureusement. La solution obtenue a été diluée avec de l'eau (150 ml) et extraite trois fois avec du chloroforme (portions de 150 ml); Les extraits combinés ont été lavés à l'eau, séchés sur du sulfate de soude anhydre et concentrés à faible volume à pression réduite. L'addition d'un excès éther de pétrole a donné 0,90 g (1,87 mmol) de 7,11-di-0-acétyldaunomycinone, sous la forme d'une poudre
<EMI ID=28.1>
Le spectre p.m.r. (CDC13) a montré une absorption à 2,09
<EMI ID=29.1>
<EMI ID=30.1>
Le spectre I.R. (KBr) a montré une absorption à 1765 (acétate phénolique), 1735 (acétate benzylique, 1710 (-CO-CH3), 1655,
1625, et 1585 cm -1 (bandes quinone). Le spectre U.V.-Visible
<EMI ID=31.1>
425 et 436 (sh.) nm.
Exemple 2 :
<EMI ID=32.1>
Une solution de 7,11-di-0-acétyldaunomycinone préparée comme décrit à l'exemple 1 (2,315 g , 4,8 mmol) dans l'acétone sec (160 ml) a été refluxée avec de l'iodure de méthyle (11 ml) en présence de 11 g d'oxyde d'argent (I) sous agitation vigoureuse. Après 3 heures, le mélange de réaction
a été filtré, le solide a été lavé jusqu'à épuisement avec du chloroforme et les filtrats combinés ont été évaporés jusqu'à l'état sec à pression réduite. La purification du résidu cru sur une colonne de gel de silice en utilisant un solvant gradient benzène : acétate d'éthyle, a permis d'obtenir la 6,9-di0-méthyl-7,11-di-0-acétyldaunomycinone (éluée avec benzène :
<EMI ID=33.1>
m/e 510 (M+). Le spectre p.m.r. (CDC1,) a montré des absorptions à 2,17 (s, C-7-OAc), 2,32 (s, CH3-CO-), 2,57 (s,C-ll0-Ac),3,23 (s, C-9-0-CH3),4,01 et 4,05 (deux s, C-4-0-CH3 , C-6-0-CH3) et 6,48 6 (signal large C-7-H). Le spectre I.R. (KBr) a montré des absorptions à 1765 (acétate phénolique), 1735 (acétate
<EMI ID=34.1>
none); aucune absorption OH présente. La purification a permis d'obtenir de la 6-0-méthyl-7,11-di-0-acétyledaunomycinone (éluée avec benzène : acétate d'éthyle 1 : 1) (1.227 g ,
2,48 mmol) . m.p. 114-116[deg.]C; m/e 496 (M+). Le spectre p.m.r.
(CDC13) a montré des absorptions à 2,11 (s, C-7-OAc), 2,36 (s, CH3-CO), 2,49 (s, C-11-OAc), 3,99 et 4,02 (deux s, 0-CH3aromatique) et 6,53.6 {large signal, C-7-H). Le spectre I.R.
(KBr) a montré des absorptions à 1770 (acétate aromatique)
<EMI ID=35.1>
(bandes quinone); absorption OH présente.
Un autre composant du mélange de réaction, isolé au cours de la purification (élue avec benzène : acétate d'éthyle 7 : 3) était la 6,7-di-0-méthyl-11-0-acétyldaunomycinone
(0,300 g , 0,64 mmol), m/e 468 (M+); le spectre p.m.r. (CDC13) a montré des absorptions à 2,40 (s, CH3-CO-), 2,47 (s, C-110-Ac),3,58 (s, C-7-0-CH3),4,02 et 4,04 (deux s, 0-CH3 aroma-
<EMI ID=36.1>
<EMI ID=37.1>
<EMI ID=38.1>
absorption OH présente.
Exemple 3
<EMI ID=39.1>
mycinone, préparée comme indiqué à l'exemple 2, (1 g , 2 mmol)
<EMI ID=40.1>
<EMI ID=41.1>
sous courant d'azote. Après une heure, la solution obtenue a été diluée avec de l'eau (50 ml) et réglée à un pH de 5 avec de l'acide chlorhydrique aqueux 0,05 M. L'extraction au chloroforme (3 aliquotes de 120 ml), le séchage de la phase organique sur du sulfate de soude anhydre, l'évaporation à faible volume et la précipitation avec un excès d'éther de pétrole a donné 0,867 g (1,91 mmol) de 6-0-méthyl-7-0-acétyldaunomycinone
sous la forme d'une poudre orange : m.p. 105-108[deg.]C avec dé-
<EMI ID=42.1>
des absorptions à 2,10 (s, C-7-0-Ac), 2,38 (s, CH3-CO), 4,03
<EMI ID=43.1>
<EMI ID=44.1>
à 1720 (bande large, acétate benzylique et CH3-CO) 1670, 1630
<EMI ID=45.1>
acétyldaunomycinone, préparée comme décrit ci-dessus (0,867 g , 1,91 mmol) dans l'hydroxyde de sodium aqueux 0,05 M (120 ml)
a été agitée à la température ambiante pendant 1 heure.
La solution obtenue a été diluée avec de l'eau (50 ml), réglée
à pH 5 avec de l'acide chlorydrique aqueux dilué et extraite au chloroforme (trois aliquotes de 100 ml). Les extraits combinés, séchés sur du sulfate de soude anhydre, ont été évaporés à l'état sec sous pression réduite sur une colonne de gel de silice, en utilisant un solvant gradient chloroforme : méthanol. L'élution au chloroforme : méthanol 98 : 2 et la précipitation par un éther de pétrole en excès a fourni 0,659 g (1,60 mmol) de 6-0-méthyldaunomycinone (VII), sous la forme d'une poudre jaune : m.p. 104 -
<EMI ID=46.1>
a montré des absorptions à 2,45(s, CH3-CO), 4,07 (s, deux 0-CH3 aromatiques, 5,27 (signal large, C-7-H) et 13,47 (s, C-ll-OH). Le spectre I.R. (KBr) a montré des absorptions à 1713 (-CO-CF13)
<EMI ID=47.1>
<EMI ID=48.1>
<EMI ID=49.1>
préparée comme décrit à l'exemple 2 (0,500 g , 0,98 mmol) dans l'acétone (50 ml) a été refroidie à 0[deg.] C et on a ajouté goutte à goutte, tout en agitant, de l'hydroxyde de sodium auqueux 0,05 M
(20 ml). Après une heure, la solution obtenue a été diluée avec de l'eau (25 ml) et ajustée à pH 5 avec de l'acide chlorhydrique aqueux dilué. L'extraction au chloroforme (trois aliquotes de
60 ml), séchage de la phase organique sur du sulfate de sodium anhydre, concentration a faible volume et précipitation avec
un excès d'éther de pétrole, ont permis l'obtention de 0,450 g
<EMI ID=50.1>
forme d'une poudre orange : m.p. 100 - 102[deg.]C avec décomposi-
<EMI ID=51.1>
sorptions à 2,10 (s, C-7-O-Ac), 2,33 (s, CH3 -CO), 3,18
(s,C-9-0-CH3),3,88 et 4,00 (deux s, 0-CH3 aromatique), 6,40
(signal large, C-7-H) et 13,28 6 (s, C-11-OH). Le spectre I.R.
(KBr) a montré des absorptions à 1740 (acétate benzylique) 1720
<EMI ID=52.1>
Une solution de 6,9-di-0-méthyl-7-0-acétyldaumyci- none, préparée comme décrit ci-dessus (0,300 g , 0,64 mmol) dans l'hydroxyde de sodium aqueux M (10 ml) a été agitée à la température ambiante; après 150 minutes, on a ajouté de l'hydroxyde <EMI ID=53.1>
obtenue a été diluée avec de l'eau (100 ml), ajustée à pH 5 avec de l'acide chlorhydrique aqueux 0,5 M et extraite avec
du chloroforme (trois aliquotes de 100 ml). Les phases organiques combinées ont été séchées sur du sulfate de soude anhy-
<EMI ID=54.1>
sur une colonne de gel de silice en utilisant un solvant gradient chloroforme : méthanol. L'élution avec le chloroforme
a permis d'obtenir 0,130 g (0,28 mmol) de matière première
(6,9-di-0-méthyl-7-0-acétyldaunomycinone), tandis que l'élution avec chloroforme : méthanol (99 : 1) a permis, après précipitation avec un excès d'éther de pétrole d'obtenir 0,1.21 g. (0,28 mmol) de 6,9-di-0-méthyldaunomycinone (VIII) :
m.p. 146 - 149[deg.]C, m/e 426 (M+). Le spectre p.m.r. (CDC13)
<EMI ID=55.1>
4,00 (s, deux 0-CH3 aromatiques), 5,21 (signal large, C-7-H) et 13,28 6(s, C-11-OH). Le spectre I.R. (KBr) a montré des
<EMI ID=56.1>
(absorption quinone).
Exemple 5
<EMI ID=57.1>
A une solution de 6-0-méthyldaunomycinone, préparée comme décrit à l'exemple 3 (0,500 g, 1,21 mmol) dans le bichlorure de méthylène sec (55 ml), on a ajouté du chlorure de
<EMI ID=58.1>
ranosyle (0,519 g , 1,45 mmol dans 9 ml de bichlorure de
o
méthylène) et un tamis moléculaire (4 A Merck, 1,6 g ).
"E. Merck" est une marque déposée. La solution a alors été traitée avec 0,400 g, (1,58 mmol) de trifluorométhanesulfonate d'argent dans l'éther diéthyle anhydre (10 ml), sous azote et avec agitation vigoureuse. Après 1 heure à 0[deg.] C, le mélange de réaction a été neutralisé avec une solution saturée de bicarbonate de soude aqueux et extrait avec du chloroforme, la phase organique a été séparée, séchée sur du sulfate de soude anhydre et concentrée à faible volume ( = 5 ml). La solution obtenue a été traitée pendant la nuit, avec 80 ml de méthanol à la température ambiante. La purification du résidu cru sur une colonne de gel de silice, en utilisant le chloroforme comme éluant, a donné, outre 0,125 g (0,3 mmol) <EMI ID=59.1>
tre p.m.r. (CDC1,) a montré des absorptions à 1,33 (d, CH- -C5'), 2,42 (s, CH3-CO), 3,95 et 4,02 (deux s, 0-CH3 aromatiques), 5,25 (signal large, C-7-H), 5,40 (signal large, C-l'-H) et
13,47(s, C-ll-OH).
A une solution de 6-0-méthyl-N-trifluoroacétyldaunorubicine (0,390 g 0,61 mmol) dans l'acétone (12 ml), refroidie à 0[deg.]C sous azote, on a ajouté goutte à goutte de l'hydroxyde de sodium aqueux 0,12 M (40 ml). Après 2 heures, le mélange
de réaction a été dilué avec de l'eau (40 ml) réglé à pH 3,5 avec de l'acide chlorhydrique aqueux 0,25 N et extrait avec du chloroforme pour éliminer les impuretés. La phase aqueuse a été amenée à un pH de 8,2 avec une solution de bicarbonate de sodium aqueux saturée et extraite avec du chloroforme (trois aliquotes 150 ml); la phase organique a été séparée, séchée sur
<EMI ID=60.1>
acidifiée à un pH de 4,5 avec du chlorure d'hydrogène méthanolique 0,5 N. L'addition d'un excès d'éther de pétrole a donné de la 6-0-méthyldaunorubicine sous forme de son chlorhy-
<EMI ID=61.1>
position. Spectre de masse (F.D.) 541 (M+). Le spectre I.R.
(KBr) a montré l'absorption à 1720 (CO-CH3), 1665, 1630 et
<EMI ID=62.1>
CH30H) a montré une absorption maximum à 230, 253, 282 (sh.)
<EMI ID=63.1>
1cm
Exemple 6
<EMI ID=64.1>
(III).
On a condensé de la 6,9-di-0-Méthyldaunomycinone, préparée comme décrit à l'exemple 4, (0,250 g , 0,59 mmol)
<EMI ID=65.1>
tyl-a-L-lyxo-hexopyranosyle 0,98 g, 2,73 mmol) en présence de tamis moléculaire (4A Merck, 1 g ) et de trifluorométhanesulfonate d'argent (0,860 g , 3,39 mmol), en suivant la procé-dure décrite à l'exemple 5, pour donner 0,376 g (0, 57 mmol)
<EMI ID=66.1>
4,02 (deux s, OCH3-aromatique), 5,10-5,35 (signal large,
<EMI ID=67.1>
ultérieure de la 6,9-di-0-méthyl-N-trifluoroacétyl-daunorubicine (0,2 g , 0,31 mmol), comme dans l'exemple 5,a donné de la 6,9-di-0-méthyldaunorubicine sous la forme de son chlorhydrate (III) (0,137 g , 0,23 mmol) : m.p. 171 - 175[deg.]C (avec décomposition); spectre de masse en désorption de champ 555
(M+). Le spectre I.R. (KBr) a montré des absorptions à 1710
(CO-CH3), 1665, 1625 et 1580 cm-1 (bandes quinone). Le spectre U.V.-Visible (CH30H) a montré une absorption maximum à :
<EMI ID=68.1>
lcm
Exemple 7
<EMI ID=69.1>
Une solution de daunomycinone (2 g , 5,02 mmol) dans la pyridine sèche (20 ml) et l'anhydride acétique (30 ml) a été maintenue sous agitation à 4[deg.]C. Après 16 heures, le mélange de réaction a été versé dans l'eau glacée (150 ml) et extrait deux fois avec du chloroforme (portions à 150 ml et
100 ml). La phase organique a été séparée, lavée trois fois avec de l'eau (portions de 150 ml), séchée sur du sulfate de soude anhydre et évaporée à l'état sec sous pression réduite. Le mélange cru, purifié sur une colonne de gel de silice, en utilisant du chloroforme et un solvant gradient chloroformeméthanol, a donné 1,35 (2,58 mmol) de 6,7,11-tri-0-acétyldaunomycinone (élué avec du chloroforme : méthanol 98 : 2) :
m.p. 121 - 123[deg.]C; m/e 524 (M+). Le spectre p.m.r.
(CDC13) a montré des absorptions à 2,13 (s, C-7-0-Ac), 2,38 (s, CH3-CO), 2,48 (s, C-ll-OAc) et 2,53 (s, C-6-OAc), 4,01 (s, C-4-OCH3)
<EMI ID=70.1>
une absorption à 1770 (acétates phénoliques), 1740 (C-7-OAc),
1710 (-COCH3), 1670 et 1580 cm-1 (bandes quinone); absorption OH (C-9-OH) également présente.
Exemple 8 ,'
<EMI ID=71.1>
de méthyle (30 ml) en présence d'oxyde d'argent (I) (5 g ) à
50[deg.]C, sous agitation vigoureuse. Après 4 heures, 10 ml d'iodure de méthyle.et 1 g d'oxyde d'argent (I) ont été ajoutés et le mélange de réaction a été maintenu à 50[deg.]C pendant 2 heures supplémentaires. Après une nouvelle addition de 10 ml d'acétone anhydre, le mélange de réaction a été laissé toute la nuit à . température ambiante. Le mélange de réaction a été filtré, le solide lavé trois fois avec du chloroforme (portions à 70 ml) et les filtrats combinés ont été évaporés à l'état sec sous pression réduite. Le mélange cru (0,705 g ), purifié sur une colonne de gel de silice en utilisant un solvant gradient chloroforme : méthanol, a donné 0,450 g (0,836 mmol) de 6,7,11-
<EMI ID=72.1>
méthanol 99 : 1) : m.p. 125 - 128[deg.]C , m/e 538 (M+). Le spec-
<EMI ID=73.1>
<EMI ID=74.1>
OAc), 3,17 (s, C-9-OCH3), 3,98 (C-4-0-CH3) et 6,306 (signal large, C-7-H). Le spectre I.R. (KBr) a montré des absorptions à 1775 (acétates phénoliques), 1740 (acétate benzylique, C-7-
<EMI ID=75.1>
aucune absorption pour OH libre n'est présente. La purification chromatographique a donné également 0,135 g (0,26 mmol) de matière première de départ éluée avec chloroforme : métha-
<EMI ID=76.1>
Exemple 9
<EMI ID=77.1>
mycinone, préparée comme décrit à l'exemple 8 (0,400 g , 0,743 mmol) dans 10 ml d'acétone : eau (1 : 1) a été traitée avec
15 ml d'hydroxyde de sodium aqueux 0,25 N additionnés goutte à goutte et sous agitation à 0[deg.]C. Après 45 minutes, le mélange
de réaction a été réglé à pH 5 avec de l'acide chlorhydrique
aqueux 1 N et extrait deux fois au chloroforme (portions de
i 100 ml). Les extraits organiques combinés ont été séchés sur du sulfate de soude anhydre et évaporés à l'état sec pour
produire 0,327 g (0,72 mmol) de 7-0-acétyl-9-0-méthyldaunomycinone, dont le spectre p.m.r. a montré des absorptions à
<EMI ID=78.1>
<EMI ID=79.1>
instabilité, n'était pas complètement caractérisé, mais directement soumis à une hydrolyse supplémentaire. Une solution de 7-0-acétyl-9-0-méthyldaunomycinone (0,327 g ; 0,72 mmol) dans l'acétone (15 ml) a été traitée avec 15 ml d'hydroxyde de sodium aqueux 1 M, goutte à goutte, tout en agitant à 0[deg.]C . Après une heure, le mélange de réaction a été réglé à
un pH 5 avec de l'acide chlorhydrique aqueux 1 M et extrait trois fois avec du chloroforme (portions de 75 ml). Les extraits combinés, séchés sur du sulfate de soude anhydre, évaporés à l'état sec sous pression réduite et purifiés sur une colonne de gel de silice, en utilisant du chloroforme comme éluant, ont donné 0,169 g (0,41 mmol de 9-0-méthyldauno-
<EMI ID=80.1>
(CDC13) a montré des absorptions à 2,38 (s, CH3-CO), 3,28 (s, C-9-OCH3), 4,09 (s, C-4-OCH3), 5,1-5,3 (signal large, C-7-H),
13,53 (s, C-ll-OH) et 14,17 6 (s, C-6-OH).
Exemple 10
<EMI ID=81.1>
La 9-0-Méthyldaunomycinone, préparée comme décrit à l'exemple 9, (0,180 g , 0,44 mmol) a été condensée avec du
<EMI ID=82.1>
lyxo-hexopyranosyle (0,704 g , 1,97 mmol), en présence de
"
<EMI ID=83.1>
fonate d'argent (0,620 g , 2,45 mmol), suivant le procédé décrit à l'exemple 5, pour donner 0,250 g (0,39 mmol) de 9-0-méthyl-N-trifluoroacétyldaunorubicine,m.p. 133-136[deg.]C;
<EMI ID=84.1>
p.m.r. (CDC13)a montré des absorptions à 1,32 (d, CH3-C-5'). 2,29 (s, CH3-CO), 3,29 (s, C-9-OCH3), 4,06 (s, C-4-OCH3), 5,0-5,2 (signal large, C-7-H), 5,46 (signal large, C-l'-H),
<EMI ID=85.1>
<EMI ID=86.1> cine (0,200 g , 0,31 mmol)comme dans l'exemple 5, a produit la 9-0-méthyldaunorubicine sous la forme de son chlorhydrate
(V) (0,065 g , 0,12 mmol); m.p. 165 - 16y[deg.]C (avec décomposition); de spectre de masse en désorption de champ, 541 (M+). Le spectre I.R. (KBr) a montré des absorptions à 1715 (COCH3,
<EMI ID=87.1>
(CH30H) a montré l'absorption maximum à : 234, 253, 290, 480, <EMI ID=88.1>
1cm
The invention relates to anthracycline glycosides, which are derivatives of daunorubicin and doxorubicin, to their pharmaceutically acceptable acid addition salts, to the corresponding anthracyclinones, to the processes for preparing said anthracycline glycosides, to their salts and corresponding anthracyclinones, and to pharmaceutical compositions containing said anthracycline glycosides or their salts. The anthracycline glycosides and their salts serve as anti-tumor agents and the anthracyclones, as intermediates in their preparation.
The invention makes it possible to prepare an.thracycline glycosides of general formula A:
<EMI ID = 1.1>
where R1 and R3, each taken independently, represents an atom
<EMI ID = 2.1>
<EMI ID = 3.1>
hydrogen atoms and the pharmaceutically acceptable addition salts of these anthracycline glycosides.
<EMI ID = 4.1>
R3 both represent hydrogen atoms, the compound of general formula A is 6-0-methyldaunorubicin, hereinafter referred to as compound (I). When R 1 represents a methyl group, R 2 a hydroxy group and R 3 a hydrogen atom, the compound of general formula A is 6-0-methyldoxorubicin, hereinafter referred to as compound (II).
When R, and R3 both represent methyl groups and <EMI ID = 5.1>
Neral A is 6,9-di-0-methyldaunorubicin, hereinafter referred to as compound (III). When R. and R both represent methyl groups and R2 represents a hydroxy group, the compound of general formula A is 6,9-di-0-methyldoxorubicin, hereinafter referred to as the compound
<EMI ID = 6.1>
<EMI ID = 7.1>
General mule A is 9-0-methyl-daunorubicin, hereinafter referred to as compound (V). When R, represents an atom
<EMI ID = 8.1>
compound of general formula A is 9-0-methyldoxorubicin, hereinafter referred to as compound (VI).
The subject of the invention is also a process for the preparation of compounds (I), (III) and (V), comprising the condensation of an anthracyclinone of general formula B:
<EMI ID = 9.1>
<EMI ID = 10.1>
above, with 2,3,6-trideoxy-3-trifluoroacPta- chloride
<EMI ID = 11.1>
inert organic solvent in the presence of a soluble silver salt as a catalyst and a molecular sieve as a dehydrating agent, removal of the O-trifluoroacetyl protecting group from the resulting condensate by treatment with methanol, and removal of the protecting group N-trifluoroacetyl by mild alkaline hydrolise.
2,3,6-trideoxy-3-trifluoroaceta- chloride
<EMI ID = 12.1>
in condensation can be prepared as described in the brief
<EMI ID = 13.1>
the Applicant.
Chloroform or methylene dichloride is suitable as an inert organic solvent and the soluble silver salt is preferably silver trifluoromethanesulfonate.
The preferred reaction conditions are described more fully in American patent n [deg.] 4112076 belonging to the Applicant. Compound (I), (III) or (V) can be isolated as such or in the form of its addition salt with a pharmaceutically acceptable acid, following standard working procedures.
Compound (I), (III) or (V) can be transformed into compound (II), (IV) or (VI) respectively by bromination in position 14 and hydrolysis of the 14-bromo derivative. Conditions
bromination and hydrolysis are preferably those indicated in French patent n [deg.] 1217133 or in American patent 3803124 belonging to the Applicant. This additional transformation is part of the invention.
The invention also relates to preparations
<EMI ID = 14.1>
(II), (III), (IV) (V) or (VI), or their pharmaceutically acceptable acid addition salts in admixture with an inert diluent or carrier.
The anthracyclinones of general formula B are
<EMI ID = 15.1>
<EMI ID = 16.1>
posed of general formula B is 6-0-methyldaunomycinone,
<EMI ID = 17.1>
<EMI ID = 18.1>
general formula B is 6,9-di-0-methyldaunomycinone, ci-
<EMI ID = 19.1>
<EMI ID = 20.1>
posed of the general formula B is 9-0-methyldaunomycinone, hereinafter referred to as compound (IX).
Compounds (VII) and (VIII) can be prepared from 6,11-di-O-acetyl -7,9-0-isopropylidene-dauno-
<EMI ID = 21.1>
Chim. Ital., 100, 949-989, 1970). The process, which is part of the invention, includes treating this raw material with a catalytic amount of sulfuric acid in aqueous acetone, methylating the resulting 7,11-di-0-acetyldaunomycinone with methyl iodide in dry acetone in the presence of silver oxide (I), the separation of 6-0-methyl-7,11-di-0-acetyldaunomycinone and <EMI ID = 22.1> from each of these two products by hydrolysis.
Treatment of sulfuric acid gives 7,11-di-0-acetyl-daunomycinone by hydrolysis of the 0-isopropylidene group accompanied by a transfer of an acetyl group from position C-6-0 to position C-7 -0. The separation of the products of the methylation reaction can be carried out by chromatography.
Compound (IX) can be prepared by a method according to the invention, which comprises the acetylation of daunomycinone under controlled conditions with acetic anhydride in pyridine to give 6,7,11-tri-
<EMI ID = 23.1>
in dry acetone in the presence of silver oxide (I) and the elimination by hydrolysis of the acetyl protecting groups of the 9-0-methyl-6,7,11-tri-0-acetyldaunomycinone obtained.
NOT
BIOLOGICAL ACTIVITY DATA
Anti-tumor activity
<EMI ID = 24.1>
HeLa cell center and ascitic P-388 leukemia in mice in comparison with daunorubicin. The results of the in vitro tests in Table 1 show that the new compounds are less cytotoxic than daunorubicin.
Table 1
<EMI ID = 25.1>
a) HeLa cells were exposed to the drugs for
24 hours, then put on plates. The number of colonies
was evaluated 5 days later.
The "in vivo" data reported in Table 2 indicate that compounds I and III are less toxic than daunorubicin.
t
Table 2: Anti-tumor activity on ascites leukemia
P-388 in mice
<EMI ID = 26.1>
a) The mice were treated i.p. one day after inoculation of tumor cells. b) Average survival time of the treated mice / average survival time of the test mice per 100. c) Evaluated on the basis of macroscopic autoptic results. d) Data from two experiments.
The invention is illustrated by the following examples:
Example 1
<EMI ID = 27.1>
lidene daunomycinone (1 g, 1.9 mmol) prepared as described by Arcamone F. et al. in Gazz. Chim. Ital. 100, 949, 1970, in acetone (50 ml) and the water (5 ml) was treated with concentrated sulfuric acid (2 ml) for 30 minutes at room temperature with vigorous stirring. The solution obtained was diluted with water (150 ml) and extracted three times with chloroform (portions of 150 ml); The combined extracts were washed with water, dried over anhydrous sodium hydroxide and concentrated to low volume at reduced pressure. Addition of excess petroleum ether gave 0.90 g (1.87 mmol) of 7,11-di-0-acetyldaunomycinone, in powder form
<EMI ID = 28.1>
The p.m.r. (CDC13) showed absorption at 2.09
<EMI ID = 29.1>
<EMI ID = 30.1>
The I.R. spectrum (KBr) showed an absorption at 1765 (phenolic acetate), 1735 (benzyl acetate, 1710 (-CO-CH3), 1655,
1625, and 1585 cm -1 (quinone bands). The visible UV spectrum
<EMI ID = 31.1>
425 and 436 (sh.) Nm.
Example 2:
<EMI ID = 32.1>
A solution of 7,11-di-0-acetyldaunomycinone prepared as described in Example 1 (2.315 g, 4.8 mmol) in dry acetone (160 ml) was refluxed with methyl iodide (11 ml) in the presence of 11 g of silver oxide (I) with vigorous stirring. After 3 hours, the reaction mixture
was filtered, the solid was washed until exhaustion with chloroform and the combined filtrates were evaporated to dryness at reduced pressure. Purification of the green residue on a column of silica gel using a benzene: ethyl acetate gradient solvent made it possible to obtain 6,9-di0-methyl-7,11-di-0-acetyldaunomycinone (eluted with benzene:
<EMI ID = 33.1>
m / e 510 (M +). The p.m.r. (CDC1,) showed absorptions at 2.17 (s, C-7-OAc), 2.32 (s, CH3-CO-), 2.57 (s, C-110-Ac), 3.23 (s, C-9-0-CH3), 4.01 and 4.05 (two s, C-4-0-CH3, C-6-0-CH3) and 6.48 6 (wide signal C-7 -H). The I.R. spectrum (KBr) showed absorptions at 1765 (phenolic acetate), 1735 (acetate
<EMI ID = 34.1>
none); no OH absorption present. The purification made it possible to obtain 6-0-methyl-7,11-di-0-acetyledaunomycinone (eluted with benzene: ethyl acetate 1: 1) (1.227 g,
2.48 mmol). m.p. 114-116 [deg.] C; m / e 496 (M +). The p.m.r.
(CDC13) showed absorptions at 2.11 (s, C-7-OAc), 2.36 (s, CH3-CO), 2.49 (s, C-11-OAc), 3.99 and 4 , 02 (two s, 0-CH3aromatic) and 6,53.6 (large signal, C-7-H). The I.R.
(KBr) showed absorptions at 1770 (aromatic acetate)
<EMI ID = 35.1>
(quinone bands); OH absorption present.
Another component of the reaction mixture, isolated during purification (eluted with benzene: ethyl acetate 7: 3) was 6,7-di-0-methyl-11-0-acetyldaunomycinone
(0.300 g, 0.64 mmol), m / e 468 (M +); the spectrum p.m.r. (CDC13) showed absorptions at 2.40 (s, CH3-CO-), 2.47 (s, C-110-Ac), 3.58 (s, C-7-0-CH3), 4, 02 and 4.04 (two s, 0-CH3 aroma-
<EMI ID = 36.1>
<EMI ID = 37.1>
<EMI ID = 38.1>
OH absorption present.
Example 3
<EMI ID = 39.1>
mycinone, prepared as indicated in example 2, (1 g, 2 mmol)
<EMI ID = 40.1>
<EMI ID = 41.1>
under a stream of nitrogen. After one hour, the solution obtained was diluted with water (50 ml) and adjusted to a pH of 5 with 0.05 M aqueous hydrochloric acid. Extraction with chloroform (3 aliquots of 120 ml) , drying the organic phase over anhydrous sodium hydroxide, low volume evaporation and precipitation with excess petroleum ether gave 0.867 g (1.91 mmol) of 6-0-methyl-7- 0-acetyldaunomycinone
in the form of an orange powder: m.p. 105-108 [deg.] C with de-
<EMI ID = 42.1>
absorptions at 2.10 (s, C-7-0-Ac), 2.38 (s, CH3-CO), 4.03
<EMI ID = 43.1>
<EMI ID = 44.1>
to 1720 (wide band, benzyl acetate and CH3-CO) 1670, 1630
<EMI ID = 45.1>
acetyldaunomycinone, prepared as described above (0.867 g, 1.91 mmol) in 0.05 M aqueous sodium hydroxide (120 ml)
was stirred at room temperature for 1 hour.
The solution obtained was diluted with water (50 ml), adjusted
at pH 5 with dilute aqueous hydrochloric acid and extracted with chloroform (three aliquots of 100 ml). The combined extracts, dried over anhydrous sodium sulfate, were evaporated to dryness under reduced pressure on a column of silica gel, using a gradient chloroform: methanol solvent. Elution with chloroform: methanol 98: 2 and precipitation with excess petroleum ether provided 0.659 g (1.60 mmol) of 6-0-methyldaunomycinone (VII), in the form of a yellow powder: m.p. 104 -
<EMI ID = 46.1>
showed absorptions at 2.45 (s, CH3-CO), 4.07 (s, two aromatic 0-CH3, 5.27 (broad signal, C-7-H) and 13.47 (s, C- ll-OH). The IR spectrum (KBr) showed absorptions at 1713 (-CO-CF13)
<EMI ID = 47.1>
<EMI ID = 48.1>
<EMI ID = 49.1>
prepared as described in Example 2 (0.500 g, 0.98 mmol) in acetone (50 ml) was cooled to 0 [deg.] C and was added dropwise while stirring. 0.05 M sodium hydroxide
(20 ml). After one hour, the solution obtained was diluted with water (25 ml) and adjusted to pH 5 with dilute aqueous hydrochloric acid. Chloroform extraction (three aliquots of
60 ml), drying the organic phase over anhydrous sodium sulfate, concentration at low volume and precipitation with
an excess of petroleum ether, made it possible to obtain 0.450 g
<EMI ID = 50.1>
form of an orange powder: m.p. 100 - 102 [deg.] C with decomposition
<EMI ID = 51.1>
sorptions at 2.10 (s, C-7-O-Ac), 2.33 (s, CH3 -CO), 3.18
(s, C-9-0-CH3), 3.88 and 4.00 (two s, 0-CH3 aromatic), 6.40
(broad signal, C-7-H) and 13.28 6 (s, C-11-OH). The I.R.
(KBr) showed absorptions at 1740 (benzyl acetate) 1720
<EMI ID = 52.1>
A solution of 6,9-di-0-methyl-7-0-acetyldaumycinone, prepared as described above (0.300 g, 0.64 mmol) in aqueous sodium hydroxide M (10 ml) was stirred at room temperature; after 150 minutes, hydroxide was added <EMI ID = 53.1>
obtained was diluted with water (100 ml), adjusted to pH 5 with 0.5 M aqueous hydrochloric acid and extracted with
chloroform (three 100 ml aliquots). The combined organic phases were dried over anhy- sodium hydroxide.
<EMI ID = 54.1>
on a silica gel column using a chloroform: methanol gradient solvent. Elution with chloroform
yielded 0.130 g (0.28 mmol) of raw material
(6,9-di-0-methyl-7-0-acetyldaunomycinone), while elution with chloroform: methanol (99: 1) made it possible, after precipitation with an excess of petroleum ether, to obtain 0, 1.21 g. (0.28 mmol) of 6,9-di-0-methyldaunomycinone (VIII):
m.p. 146 - 149 [deg.] C, m / e 426 (M +). The p.m.r. (CDC13)
<EMI ID = 55.1>
4.00 (s, two aromatic 0-CH3), 5.21 (broad signal, C-7-H) and 13.28 6 (s, C-11-OH). The I.R. spectrum (KBr) showed
<EMI ID = 56.1>
(quinone absorption).
Example 5
<EMI ID = 57.1>
To a solution of 6-0-methyldaunomycinone, prepared as described in Example 3 (0.500 g, 1.21 mmol) in dry methylene dichloride (55 ml), was added chloride of
<EMI ID = 58.1>
ranosyle (0.519 g, 1.45 mmol in 9 ml of bichloride
o
methylene) and a molecular sieve (4 A Merck, 1.6 g).
"E. Merck" is a registered trademark. The solution was then treated with 0.400 g, (1.58 mmol) of silver trifluoromethanesulfonate in anhydrous diethyl ether (10 ml), under nitrogen and with vigorous stirring. After 1 hour at 0 [deg.] C, the reaction mixture was neutralized with a saturated solution of aqueous sodium bicarbonate and extracted with chloroform, the organic phase was separated, dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated to low volume (= 5 ml). The solution obtained was treated overnight with 80 ml of methanol at room temperature. Purification of the raw residue on a silica gel column, using chloroform as eluent, gave, in addition to 0.125 g (0.3 mmol) <EMI ID = 59.1>
tre p.m.r. (CDC1,) showed absorptions at 1.33 (d, CH- -C5 '), 2.42 (s, CH3-CO), 3.95 and 4.02 (two s, 0-CH3 aromatic), 5.25 (wide signal, C-7-H), 5.40 (wide signal, C-l'-H) and
13.47 (s, C-11-OH).
To a solution of 6-0-methyl-N-trifluoroacetyldaunorubicin (0.390 g 0.61 mmol) in acetone (12 ml), cooled to 0 [deg.] C under nitrogen, was added dropwise 0.12 M aqueous sodium hydroxide (40 ml). After 2 hours, the mixture
The reaction mixture was diluted with water (40 ml) adjusted to pH 3.5 with 0.25 N aqueous hydrochloric acid and extracted with chloroform to remove impurities. The aqueous phase was brought to a pH of 8.2 with a saturated aqueous sodium bicarbonate solution and extracted with chloroform (three 150 ml aliquots); the organic phase was separated, dried over
<EMI ID = 60.1>
acidified to pH 4.5 with 0.5N methanolic hydrogen chloride. Addition of excess petroleum ether gave 6-0-methyldaunorubicin as its chlorhy-
<EMI ID = 61.1>
position. Mass spectrum (F.D.) 541 (M +). The I.R.
(KBr) showed absorption at 1720 (CO-CH3), 1665, 1630 and
<EMI ID = 62.1>
CH30H) showed maximum absorption at 230, 253, 282 (sh.)
<EMI ID = 63.1>
1cm
Example 6
<EMI ID = 64.1>
(III).
Condensed 6,9-di-0-Methyldaunomycinone, prepared as described in Example 4, (0.250 g, 0.59 mmol)
<EMI ID = 65.1>
tyl-aL-lyxo-hexopyranosyl 0.98 g, 2.73 mmol) in the presence of molecular sieve (4A Merck, 1 g) and silver trifluoromethanesulfonate (0.860 g, 3.39 mmol), following the procedure hard described in Example 5, to give 0.376 g (0.57 mmol)
<EMI ID = 66.1>
4.02 (two s, OCH3-aromatic), 5.10-5.35 (wide signal,
<EMI ID = 67.1>
further 6.9-di-0-methyl-N-trifluoroacetyl-daunorubicin (0.2 g, 0.31 mmol), as in Example 5, gave 6.9-di-0-methyldaunorubicin in the form of its hydrochloride (III) (0.137 g, 0.23 mmol): mp 171 - 175 [deg.] C (with decomposition); field desorption mass spectrum 555
(M +). The I.R. spectrum (KBr) showed absorptions at 1710
(CO-CH3), 1665, 1625 and 1580 cm-1 (quinone bands). The UV-Visible spectrum (CH30H) showed maximum absorption at:
<EMI ID = 68.1>
lcm
Example 7
<EMI ID = 69.1>
A solution of daunomycinone (2 g, 5.02 mmol) in dry pyridine (20 ml) and acetic anhydride (30 ml) was kept stirring at 4 [deg.] C. After 16 hours, the reaction mixture was poured into ice water (150 ml) and extracted twice with chloroform (portions at 150 ml and
100 ml). The organic phase was separated, washed three times with water (150 ml portions), dried over anhydrous sodium hydroxide and evaporated to dryness under reduced pressure. The raw mixture, purified on a silica gel column, using chloroform and a chloroformmethanol gradient solvent, gave 1.35 (2.58 mmol) of 6,7,11-tri-0-acetyldaunomycinone (eluted with chloroform: methanol 98: 2):
m.p. 121 - 123 [deg.] C; m / e 524 (M +). The p.m.r.
(CDC13) showed absorptions at 2.13 (s, C-7-0-Ac), 2.38 (s, CH3-CO), 2.48 (s, C-ll-OAc) and 2.53 (s, C-6-OAc), 4.01 (s, C-4-OCH3)
<EMI ID = 70.1>
absorption at 1770 (phenolic acetates), 1740 (C-7-OAc),
1710 (-COCH3), 1670 and 1580 cm-1 (quinone bands); OH absorption (C-9-OH) also present.
Example 8, '
<EMI ID = 71.1>
methyl (30 ml) in the presence of silver oxide (I) (5 g) to
50 [deg.] C, with vigorous stirring. After 4 hours, 10 ml of methyl iodide and 1 g of silver oxide (I) were added and the reaction mixture was kept at 50 ° C. for an additional 2 hours. After a further addition of 10 ml of anhydrous acetone, the reaction mixture was left overnight. ambient temperature. The reaction mixture was filtered, the solid washed three times with chloroform (portions to 70 ml) and the combined filtrates were evaporated to dryness under reduced pressure. The raw mixture (0.705 g), purified on a column of silica gel using a chloroform: methanol gradient solvent, gave 0.450 g (0.836 mmol) of 6.7.11-
<EMI ID = 72.1>
methanol 99: 1): m.p. 125 - 128 [deg.] C, m / e 538 (M +). The spec-
<EMI ID = 73.1>
<EMI ID = 74.1>
OAc), 3.17 (s, C-9-OCH3), 3.98 (C-4-0-CH3) and 6.306 (wide signal, C-7-H). The I.R. spectrum (KBr) showed absorptions at 1775 (phenolic acetates), 1740 (benzyl acetate, C-7-
<EMI ID = 75.1>
no absorption for free OH is present. Chromatographic purification also gave 0.135 g (0.26 mmol) of starting raw material eluted with chloroform: metha-
<EMI ID = 76.1>
Example 9
<EMI ID = 77.1>
mycinone, prepared as described in Example 8 (0.400 g, 0.743 mmol) in 10 ml of acetone: water (1: 1) was treated with
15 ml of 0.25 N aqueous sodium hydroxide added dropwise and with stirring at 0 [deg.] C. After 45 minutes, the mixture
was adjusted to pH 5 with hydrochloric acid
aqueous 1 N and extracted twice with chloroform (portions of
i 100 ml). The combined organic extracts were dried over anhydrous sodium hydroxide and evaporated to dryness to
produce 0.327 g (0.72 mmol) of 7-0-acetyl-9-0-methyldaunomycinone, whose spectrum p.m.r. showed absorptions to
<EMI ID = 78.1>
<EMI ID = 79.1>
instability, was not completely characterized, but directly subjected to additional hydrolysis. A solution of 7-0-acetyl-9-0-methyldaunomycinone (0.327 g; 0.72 mmol) in acetone (15 ml) was treated with 15 ml of 1 M aqueous sodium hydroxide, dropwise, while stirring at 0 [deg.] C. After one hour, the reaction mixture was set to
pH 5 with 1 M aqueous hydrochloric acid and extracted three times with chloroform (75 ml portions). The combined extracts, dried over anhydrous sodium sulfate, evaporated to dryness under reduced pressure and purified on a column of silica gel, using chloroform as eluent, gave 0.169 g (0.41 mmol of 9- 0-methyldauno-
<EMI ID = 80.1>
(CDC13) showed absorptions at 2.38 (s, CH3-CO), 3.28 (s, C-9-OCH3), 4.09 (s, C-4-OCH3), 5.1-5 , 3 (wide signal, C-7-H),
13.53 (s, C-11-OH) and 14.17 6 (s, C-6-OH).
Example 10
<EMI ID = 81.1>
9-0-Methyldaunomycinone, prepared as described in Example 9, (0.180 g, 0.44 mmol) was condensed with
<EMI ID = 82.1>
lyxo-hexopyranosyl (0.704 g, 1.97 mmol), in the presence of
"
<EMI ID = 83.1>
silver fonate (0.620 g, 2.45 mmol), according to the method described in Example 5, to give 0.250 g (0.39 mmol) of 9-0-methyl-N-trifluoroacetyldaunorubicin, m.p. 133-136 [deg.] C;
<EMI ID = 84.1>
p.m.r. (CDC13) showed absorptions at 1.32 (d, CH3-C-5 '). 2.29 (s, CH3-CO), 3.29 (s, C-9-OCH3), 4.06 (s, C-4-OCH3), 5.0-5.2 (wide signal, C- 7-H), 5.46 (wide signal, C-l'-H),
<EMI ID = 85.1>
<EMI ID = 86.1> cine (0.200 g, 0.31 mmol) as in Example 5, produced 9-0-methyldaunorubicin in the form of its hydrochloride
(V) (0.065 g, 0.12 mmol); m.p. 165 - 16y [deg.] C (with decomposition); mass spectrum in field desorption, 541 (M +). The I.R. spectrum (KBr) showed absorptions at 1715 (COCH3,
<EMI ID = 87.1>
(CH30H) showed the maximum absorption at: 234, 253, 290, 480, <EMI ID = 88.1>
1cm