Substance antivirale.
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rales, un procédé pour leur préparation et les compositions pharmaceutiques les' renfermant.
On sait maintenant d'une façon générale que les acides ribonucléiques à double chaîne sont des inducteurs puissants d'interférons et qu'ils doivent ainsi présenter un intérêt dans; la prophylaxie à larqe spectre des infections virales, et à un ,
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ribonucléiques à double chaîne, à la fois d'origine naturelle et synthétique, possèdent comme cela a été mis en évidence une. activité inductrice d'interférons et antivirale dans les cultures de tissus et chez les animaux vivants. Parmi les sources spécifiques d'acide ribonucléique à double chaîne inducteur
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ches de Pénicillium chrysogenum, P. Funiculosum, P. stoloniferum, Aspergillus niger et A. Foetidus ; le virus ce polyédrose cytoplasmique ; le virion du réovirus 3 et la forme réplique du
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Toutefois, certains phénomènes suggèrent que l'acide ribonucléique à double chaîne d'origine naturelle peut présen-
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plication médicale et vétérinaire peut être limitée. Il existe ainsi un besoin d'agent antiviral qui soit rr.oins toxique que l'acide ribonucléique à double chaîne seul et qui présente une activité antivirale comparable ou meilleure.
Cette invention est fondée sur cette constatation que
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Pour définir correctement l'invention, il est: nécessaire d'examiner d'une façon assez développée la technique antérieure.
On sait bien entendu que les acides nucléiques forment
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complexes de polybases avec des acides nucléiques sont, comme on le sait, plus stables à la dégradation par la nucléase et à la dénaturation thermique que les acides nucléiques initiaux.
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des polybases aboutirait à une stabilisation vis-à-vis d'une
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virale améliorée ou prolongée. Les résultats publies à l'appui ce cette théorie n'ont pas été particulièrement encourageants.
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ont indiqué que la stimulation du mécanisme des interférons
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jusqu' à 100 fois par l'addition de substances polybasiques
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colistine, ces substances ayant été indiquées précédemment comme étant capables d'inhiber l'action de la ribonucléase ou d'augmenter la fixation cellulaire de Ces chercheurs spéculaient sur le fait qu' "On pouvait concevoir que certaines
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précisaient cette affirmation en ajoutant eu' "il a été cons-
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par la néomycine ou la protamine".
On a montré que la poly-D-lysine ce poids moléculaire
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renforçait l'induction d'interférons par Poly I:r-oly C chez la souris, et on a indiqué qu'elle était à cet égard supérieure au
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naison de Poly I:Poly C et de poly-D-lysine n'ont pas montré de signes immédiats de toxicité, bien que la dose ce substance soit nettement inférieure à celle pour laquelle les effets toxiques de Poly I:?oly C lui-même seraient apparus.
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que antérieure indiquait à cet égard qu'il existait de bonnes raisons de supposer que des complexes de certaines polybases
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augmentés et (ou) prolongés in vitro et in vivo. Toutefois, comme on le sait, les taux d'interférons ne sont pas strictement parallèles à l'activité antivirale. Un compose qui est
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bon agent antiviral, et vice versa. outre, selon la techni-
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type de polybase qui est nécessaire pour fournir des taux ac-
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d'ARN d.c. sont, selon certains chercheurs, moins satisfaisan-
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sont, de l'avis de la Société Demanderesse, la confirmation du ! fait qu'il n'existe pas de loi ou tendance générale confirmée par la technique antérieure. Il n'est donc pas possible de dire
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d'interférons (beaucoup moins au point de vue activité antivi-
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L'utilisé d'un agent antiviral dépend principalement de deux facteurs, à savoir la durée de la protection conférée
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ces deux facteurs peut être lié ou non à sa capacité d'induire ! la production d'interférons, et ainsi selon la technique anté-
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base, tandis que le second de ces facteurs, à savoir la toxici- té, est un fait à propos duquel la technique antérieure est complètement silencieuse.
L'invention est matérialisée dans une substance anti- virale constituée par un complexe principalement; ionique dans lequel le constituant cationique est un polycation d'une mole- :
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tandis que le constituant anionique est (a) un polyanion d'aci-! .de ribonucléique à double chaîne, cet acide ribonucléique à <EMI ID=46.1> <EMI ID=47.1>
chaîne d'origine naturelle.
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l'acide ribonucléique se rapporte le la caractéristique selon la-
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que molécule. Les acides ribonucléiques peuvent présenter des degrés variables de "caractère à double chaîne".
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rigine naturelle" désigne n'importe quel acide ribonucléique à double chaîne qui peut être isolé à partir d'une source d'or;-
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?oly C.
L'expression "dérivé à double chaîne d'un acide ribo- nucléique à double chaîne d'origine naturelle" désigne n'impor- te quel acide ribonucléique à double chaîne d'origine naturelle ;
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dans le brevet français n[deg.] 71-14303, ou les acides ribonucléi- ques à double chaîne modifiés par un alcalin tels que décrits dans le brevet français n[deg.] 72-00892), à condition que les dé-
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des bases entre les chaînes complémentaires.
Le caractère à double chaîne d'un acide ribonucléique à double chaîne ou d'un dérivé d'acide ribonucléique à double chaîne peut être mesuré par deux paramètres qui sont dénommés hyperchromicité et Tm. Ces paramètres son= obtenus en enregis-
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tout en élevant progressivement la température de cette matière.! Le coefficient d'absorption des ultra-violets d'une matière à
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jusqu' à ce qu'une valeur constante soit atteinte, qui corres- j pond 'à l'absorption de l'acide ribonucléique thermiquement dé- naturé (c'est-à-dire à simple chaîne). La différence entre les
<EMI ID=60.1> .ption de la matière à double chaîne, est dénommée "hyperchromi- cité" de cette matière.
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Le constituant cationique présent dans le complexe
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molécule de polyarginine, qu'il n'existe sensiblement pas ce
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nine dans la molécule de polyarginine.
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arginine est une poly-L-arginine. 1
Les polyanions présents dans le complexe suivant l'in- j
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chaîne, cet acide ribonucléique à double chaîne étant d'origine !
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Les sources préférées d'acide ribonucléique a double chaîne comprennent les particules du type des virus que l'on trouve
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capable d'induire la production d'interférons chez les mammi- fères vivants. (Ceci peut être confirmé par la méthode ce Lamp-
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-complexe est caractérisé'par une interaction électrostatique puissante entre la fraction molaire cationique de polyarginine <EMI ID=77.1>
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ayant sensiblement un même nombre de centres cationiques que
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faible toxicité.
Les complexes suivant l'invention peuvent être prépa-
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de la polyarginine ou un sel ce celle-ci avec (a) ces polyanions
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chaîne d'origine naturelle.
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tion de chlorhydrate de polyarginine dans une solution aqueuse . d'un sel minéral, par exemple de NaCl. Cn peut préparer une solution analogue de constituant formé par l'acide ribonucléi-
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ré va précipiter directement. S'il n'est pas précipité, on peut; diluer la solution pour réduire la molarité, et ceci va généra-) lement précipiter le complexe désiré.
Suivant une variante, on peut ajouter un mélange physique de polyarginine neutre et de l'acide ribonucléique ou du dérivé d'acide ribonucléique à une solution ce sel, et si nécessaire on peut diluer la solution résultante pour précipiter le complexe désiré.
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ce polyarginine en contact avec le polyanion d'acide polynuclé-
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la base du nombre des centres amino basiques capables de réagir avec les centres acide phosphorique du polyanion d'acide ribonucléique).
Les complexes suivant l'invention ont une activité �ntivirale, avec un large spectre d'activité vis-à-vis d'une
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lement à l'induction d'interférons chez les cellules hôtes, en conférant ainsi une protection vis-à-vis d'une attaque par le virus.
Une propriété surprenante de ces complexes réside dans'
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Ainsi, selon un autre de ses aspects, l'invention con- ; cerne une composition pharmaceutique ou vétérinaire renfermant un complexe suivant l'invention et un véhicule pharmaceutique ou vétérinaire.
Le choix du véhicule pharmaceutique est déterminé par le. mode d'administration préféré et par la pratique pharmaceu-
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injection, par exemple sous-cutanée ou intramusculaire, auquel cas le véhicule va être un liquide injectable dans lequel le complexe peut être dissous ou mis en suspension sous forme d'une suspension fine. Dans le cas d'une application localisée, le véhicule peut être un liquide destiné à une application locale sur la muqueuse du nez ou de la gorge.
Les exemples donnés ci-après à titre non limitatif :
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d.c. correspond à un acide ribonucléique à double chaîne.
<EMI ID=101.1> .(200 ml), à la température ambiante, une solution ce poly-L-ar- <EMI ID=102.1>
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lange réactionnel pendant 15 heures à la température ambiante, puis on centrifuge. La mesure du spectre u.v. ce la liqueur qui surnage indique qu'elle ne contient pas d'acide nucléique. On
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forme d'une suspension en vue d'un titrage biologique.
La toxicité et l'activité biologique de ce produit sort:
indiquées dans les tableaux ci-après.
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A. Toxicité chez la souris
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d.c. et celle des complexes préparés dans l'exemple 1 ont été
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animaux ont été observés ensuite pendant 10 jours,
Complexe ARN d.c.-Dolvarainine : Toxicité ;
i
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nombre d'animaux du groupe
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On a administre par injection intrapéritonéale composé testé à des souris de �6-20 g de la souche CD1. 24 heures
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pendant 12 jours et on a comparé le taux de mortalité ces sou ris traitées avec celui des souris témoins non -traitées*
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Cn ajoute à une solution sous agitation du sel de so-
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centrifuge ensuite le précipité. Une mesure du spectre u.v. de la solution qui surnage indique quelle ne renferme pas d'acide nucléique. On remet le précipité en suspension dans du chlorure ce sodium O,15M (50 ml), on centrifuge CI% nouveau et on remet encore le précipité en suspension dans du chlorure de sodium
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est insoluble dans NaCl 3M et il est utilisé scus forme d'une suspension pour un titrage biologique.
Durée de l'activité
La durée de la protection assurée par le complexe vis-
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pendant une durée allant jusqu' à 5 semaines. On a administré une!
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de la souche CD1. Aux jours -35, -21, -7 ou -1 relativement au jour 0, on a testé ces souris avec l'une ce deux dilutions du
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intrapéritonéale. On a observé les animaux pendant 12 jours et
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complexe avec celui de souris témoins auxquelles une dose équi-
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tanée ou intrapéritonéale (i.p.) et testées de la même manière. Les intervalles de temps, les doses et les voies sont indiqués
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grosse des souris à la fin de la période de prétraitement, un
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appropriés ont pu être ainsi choisis :-
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testés.
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TABLEAU 3
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TABLEAU 4
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1
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ou <EMI ID=141.1> <EMI ID=142.1>