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L'invention concerne un procédé d'obtention de phospholipides natu- rels à partir de phosphatides végétaux bruts, en particulier à partir de ceux qu'on prépare de façon connue en partant de fèves de soja. Les esters diglycéri- ques de l'acide cholinephosphorique et de l'acide colaminephosphorique sont con- nus comme représentants de phosphatides-esters très répandus dans le règne ani- mal et végétal. Voir par exemple, Paul Karrer, Lehrbuch der organischen Chemie, 1950, p.247. Ces esters sont toujours associés, particulièrement dans les phos- phatides bruts d'origine végétale. Ce mélange de substances est désigné dans le commerce et dans l'industrie sous le nom'de lécithine.
Suivant la nomenclatu- re chimique, on ne désigne cependant sous les noms de lécithine ou lécithines, que les représentants de la classe de corps des phosphatides, qui contiennent la choline comme groupe basique. Quand la colamine représente la partie basique, le chimiste parle de céphaline; voir Karrer, même ouvrage, p. 2470 Les phospha- tides-esters possèdent la formule de structure suivante:
EMI1.1
Lécithine: ester diglycérique d'acide chlolinephosphorique.
EMI1.2
Céphaline: ester diglycérique d'acide colaminephosphoriqueo Comme les radicaux d'acides gras varient, il n'existe plusieurs lécithines, res- pectivement plusieurs oéphalines.
On a découvert à présent que, dans certaines conditions, on peut ob- tenir, à partir de phosphatides bruts d'origine végétale, en particulier égale- ment à partir de phosphatide brut de fèves de soja, des phospholipides natu- rels dans lesquels les esters diglycériques d'acide choline-phosphorique domi- nent, ou qui sont constitués exclusivement d'esters diglycériques d'acide cho- line-phosphorique, et qui possèdent en outre une teneur élevée en acides gras essentiels qui, de leur côté, jouent un rôle essentiel dans l'activité médico- thérapeutique de cette importante classe de corps biologiqueso
On a également découvert que les esters diglycériques d'acide choli- ne-phosphorique obtenus suivant le procédé de la présente invention, peuvent 'être dissociés par voie enzymatique si on les traite par du venin de serpent;
du fait que le venin de serpent attaque et sépare les acides gras fixés en posi- tion alpha, de manière à former des esters de chloline de l'acide monoglycéro- phosphorique, dénommés lysoléoithines, qui, de façon surprenante, portent enco- re en position bêta des acides gras essentiels à non-saturation multiple, ce qui joue un rôle important aux points de vue physiologique et médical,.
Dans le language médical, on entend aujourd'hui par acides gras es- sentiels, de façon générale les acides gras nécessaires à la vie, que le corps humain ne peut créer de lui-même. Il s'agit d'acides gras à non-saturation multiple, de configuration bien déterminée-, parmi lesquels l'acide linoléique occupe l'organisme humain, une position clé, parce que, à partir de cet acide, il se forme dans le corps, comme acide essentiel, par exemple l'acide arachido- nique très actif, qui est un acide tétraénique à 20 atomes de carbone.
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En ce qui concerne le rôle que les acides essentiels jouent dans l'organisme humain, on citera parmi la littérature copieuse, par exemple les pu- blications suivantes:
Rieckehoff et ses collaborateurs (Archiv Biochem. 25, 1-12, 1950), ont découvert par des essais effectués sur des animaux qu'en cas de diète par manque de graisse, une petite quantité d'acide linoléique suffit déjà pour syn- thétiser l'acide arachidonique dans le corps.
Schulz (Medizin. 29/30, VII, 1007, 1954) démontre qu'en cas de ma- ladies aiguës du parenchyme du foie, la durée de la maladie est écourtée par des administrations d'acides gras à non-saturation multiple. On obtient éga- lement un effet net dans des cas d'hépatopathies chroniques.
EMI2.1
Allegri (Croh.Sc.med.Torino, 97, 6, 1954) montre, par des essais effectués sur des animaux, que, comparativement à des animaux témoins, des rats atteints d'hépateotomie partielle, alimentés d'acides gras non saturés, accusent une régénération plus rapide du restant de leur foie - en poids et sous forme d'image histologique - (forte activité karyocinétique) et un accroissement no- table des diamètres des noyaux.
EMI2.2
Knipping (l6ineh,medowsehr. 97,$, VI, 901 1955) montre que les aci- des gras à non-saturation multiple sont aptes à écourter les hépatopathies lé- gères et de gravité moyenne, et surtout la phase si difficile à traiter, com- prise entre l'hépatopathie et la reconstitution. Dans des essais sur animaux, l'engraissement des petites lèvres reprend, et la concentration de glycogène dans le foie s'accroît. En outre, la sécrétion de bile est activée et le miroir d'acide pyrocatéchique s'affaiblit. D'après Schettler, des acides gras essen- tiels à non-saturation multiple, ne possèdent pas seulement une action lipotro- pique, mais exercent également une action favorable sur la synthèse de glyco- gène.
En ce qui concerne le rôle qui revient aux phospholipides à base de choline en général, et aux acides gras essentiels, en particulier en médecine, la Demanderesse s'est donné pour but l'obtention, à partir de phosphatides bruts d'origine végétale, de préférence à partir de phosphatides bruts de fèves de soja, principalement ou exclusivement d'esters de choline de l'acide diglyoéro- phosphorique, ayant une teneur aussi élevée que possible en acides gras essentiels, L'invention a donc-pour but principal de réaliser le traitement de phosphatides végétaux, en particulier des phosphatides bruts de fèves de soja, de manière.
à conserver d'une part les acides gras essentiels contenus dans les phosphatides esters, c'est-à-dire de les amener ainsi à une teneur désirée élevée, mais d'au- tre part également de séparer en même temps une quantité aussi grande que pos- sible des corps d'accompagnement, et parmi eux également tous les phosphatides- esters qui ne contiennent pas de choline comme composant basique. L'invention concerne donc un procédé de préparation de phospholipides naturels ayant une teneur élevée en acides gras essentiels et en choline, et le produit obtenu par ce procédé.
L'invention a en outre pour but la préparation d'un phospholipide neutre, à teneur élevée en acides gras essentiels, constitué pratiquement exclu- sivement d'esters de choline de l'acide diglycérophosphorique, et pouvant être considéré comme chimiquement pur, parce que des phospholipides qui contiennent certains constituants incompatibles avec le plasma, en particulier l'ester di- glycérique de l'acide colamine phosphorique, c'est-à-dire la céphaline, ne con- viennent pas pour l'administration intraveineuse.
A ce sujet, on trouve dans la littérature, les données suivantes: O'Brien publie dans Lanoet, 271, 232 (1956), des essais relatifs à des substances activant la coagulation du sang. Il recherche une interdépen- dance entre l'apparition accrue de thromboses coronariennes-et l'alimentation riche en graisse modifiée des cinquante dernières années. L'auteur réussit à
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montrer que non seulement les graisses, mais également et dans une mesure beau- coup plus grande, certains phospholipoïdes, notamment la phosphatidyl-éthanolami- ne (céphaline), accélérée. les phénomènes de coagulation.
Au cours d'essais d'a- limentation par des catégories de graisses déterminées et de la céphaline, il montre que c'est avec la céphaline que la coagulation se modifie le plus.
Summer et Summer (Joof Biol.Chem. 154, 531, 1940) décrivent un fer- ment existant dans les fèves de soja (peroxydase), apte à oxyder des acides gras non saturés en présence de peroxyde d'hydrogène. Suivant Michlin et Pschenno- va, (Biochimija 11, 437, 1946) ce ferment possède des liaisons non saturées sur lesquelles l'oxygène peut être fixé de façon labile. Les essais de Kamaljan (Biochimija 16, 396, 1951) ont montré que l'addition de colamine abaisse la fixation d'oxygène du ferment, et ralentit également la décoloration des caro- tinoides par des peroxydeso L'oléate de colamine ralentit également l'activité du peroxydase.
De même, en septembre 1956, dans sa conférence donnée à Londres au Symposium sur la biologie de la vieillesse, Sinclair montre que la facilité accrue de coagulation du sang peut être causée par une concentration accrue en phosphatide d'éthanolamine.
L'invention a finalement pour but de séparer des esters diglycériques d'acide cholinephosphorique, les acides gras fixés en position alpha. Les es- ters de choline d'acide monoglycérophosphorique obtenus, possèdent une activité biologique élevée grâce à leur tensio-activité extraordinairement grande. Ils possèdent une action d'activité d'échange de matières et peuvent par exemple être utilisés comme energeticum cardiaque. Les esters de choline de l'acide monoglycérophosphorique sont, contrairement aux esters d'acide diglycérophospho- rique, remarquablement solubles dans l'eau, et sont par contre insolubles dans l'éther et l'acétone.
Il est connu de préparer des esters de l'acide diglycérophosphorique à partir de phosphatides bruts, en particulier également à partir de phosphati- des bruts de fèves de soja, par extraction préalable du phosphatide brut au moyen d'acétone, suivie du traitement par l'alcool du mélange d'esters obtenu par cet- te. extraction.
Suivant la présente invention, on effectue la préparation à partir de phosphatides bruts, en particulier à partir de phosphatide brut de fèves de soja, par extraction jusqu'à épuisement du phosphatide brut pas l'acétone à une température ne dépassant pas 35 , et.traitement du mélange ainsi obtenu pour en séparer dans une large mesure l'ester diglycérique de l'acide cholinephosphori- que et l'ester diglyoérique de l'acide colaminephosphorique, également par extrac- tion à une température ne dépassant pas 35 , et en présence d'un gaz inerte, par de l'alcool, et de préférence à l'abri de la lumière.
On obtient de cette manière, avec un rendement satisfaisant, des phospholipides, contenant comme constituant basique principalement de la choline et possédant par rapport aux acides gras totaux, une teneur de 60% en acides gras essentiels.
Suivant une nouvelle phase du procédé, pour séparer complètement l'ester diglyoérique de l'acide colaminephosphorique, on introduit la solution alcoolique à une température ne dépassant pas 35 et à l'abri.de la lumière, de l'air ou d'oxygène,en présence d'un gaz inerte, au-dessus d'une colonne con- tenant une suspension alcoolique d'un carbonate ou d'un oxyde d'un ou de plu- sieurs éléments du second et du troisième groupe du système périodique des élé- ments, de préférence de l'aluminium et/ou du magnésium. Aux fins de l'inven- tion, l'oxyde d'aluminium s'est montré particulièrement indiqué.
Par évapora- tion dans le vide de la solution alcooloque quittant la colonne, en présence d'un gaz inerte, on obtient des esters dé choline de l'acide diglycérophospho- rique chimiquement purs, qui conviennent par conséquent à une administration intraveineuse, et qui possèdent une teneur extraordinairement élevée en acides gras essentiels.
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Pour augmenter le rendement en esters diglycériques d'acide choline- phosphorique, il faut séparer par élutriation par de l'alcool, les composés d'addition formés dans la colonne d'une part à partir de l'oxyde ou du carbonate et d'autre part à partir des esters diglycériques des acides choline- ou colami- nephosphoriqueso On réunit à la première solution, la solution obtenue par élu- triation par l'alcool qui s'écoule de la colonne et on concentre les deux so- lutions dans le vide, en présence d'un gaz inerte.
L'ester de choline de l'acide diglyoérophosphorique obtenu conformé- ment à l'invention, est une substance incolore de consistance pâteuse, qui se dissout aisément dans l'éther et le chloroforme, également dans l'alcool, l'é- ther de pétrole et d'autres solvants organiques. Il est complètement insoluble dans l'acétone. Le teneur en azote total atteint théoriquement 2,05%. L'in- dice d'azote sous forme de choline, déterminé analytiquement d'après Kjeldahl, est de 2,04%; par conséquent, plus de 99,5%, c'est-à-dire pratiquement 100% de l'azote total, existent sous forme de choline.
Les acides gras de l'ester ob- tenu suivant l'invention sont de l'ordre de 17,7% d'acides saturés et 82,3% d'a- cides non saturés, calculés par rapport aux acides gras totaux. Les chiffres ab- solus des acides gras non saturés seuls sont les suivants:
pour une teneur to- tale de 82,3%, l'acide oléique intervient à raison de 17,2%, l'acide linoléique à raison de 52%, l'acide linoléique à raison de 13,1%.,.Si on transforme ces chif- fres absolus en chiffres relatifs par rapport aux acides gras non saturés, on obtient 20% d'acide oléique, 64% d'acide linoléique et 16% d'acide linoléique, c'est-à-dire qu'au point de vue des acides essentiels seuls, la proportion d'a- cide linoléique atteint 80%, et la proportion d'acide linoléique 20%, grâce au mode opératoire particulier du procédé conforme à l'invention.
EXEMPLE. -
On sépare les constituants huileux de 8 kg de phosphatide brut de fèves de soja en les traitant en plusieurs fois par environ 150 litres d'acé- tone à une température ne dépassant pas 35 . On sépare l'acétone du résidu in- soluble dans le vide et en présence d'un gaz inerte, puis on le soumet à une extraction répétée par de l'éthanol, de nouveau à une température maximum de 35 et à l'abri de la lumière, de l'air ou de l'oxygène, en faisant passer un gaz inerte à travers l'appareil d'extraction. On purifie les solutions alcooli- ques par repos pendant plusieurs jours, pour en séparer les matières en sus- pension ou à l'état de solution colloïdale.
Par concentration des solutions dans le vide, en faisant passer en même temps un gaz inerte tel que l'azote ou l'anhydride carbonique, on obtient, avec un rendement d'environ 25 à 30%, une fraction de phospholipide qui contient, par rapport aux acides gras totaux, 60% d'acides gras essentiels, ce qui correspond à une teneur d'environ 45% des consti- tuants importants dans la molécule totale.
On introduit 1 litre de la solution ainsi obtenue, à une concentra- tion d'environ 2-3%, en 10 heures, à l'abri de la lumière, de l'air ou de l'oxy- gène, au-dessus d'une colonne d'absorption, ayant par exemple un diamètre de 4 cm, contenant une suspension de, par exemple 10% d'oxyde de magnésium et d'o- xyde d'aluminium dans l'éthanol. Après le passage de la solution alcoolique à travers la colonne, on élutrie au moyen de' 3 litres d'éthanol. On concentre les solutions alcooliques dans le vide en présence d'un gaz inerte. On obtient ainsi, suivant la concentration de la solution de l'aster de choline, 10 à 14 g d'ester de oholine -de l'acide diglycérophosphorique chimiquement pur, c'est-à- dire exempt de céphaline.
On dissout 5,7 g de l'ester de oholine de l'acide diglycérophosphori- que dans 570 cm3 d'éther exempt de peroxydes, on la fait réagir avec 6 cm3 d'une solution aqueuse de 18 mg de venin de serpent (Crotalus adamanteus), puis on laisse au repos pendant 24 heures à la température ordinaire, après des agita- tions répétées. On distille ensuite le solvant dans le vide sans tenir compte de la formation de dépôt. On obtient 2,9 g d'ester de choline de l'acide mono-
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glycéophosphorique, contenant, par rapport aux acides gras totaux, 28% d'aci- des gras essentiels à non-saturation multiplet
REVENDICATIONS.
1.- Procédé d'obtention de phospholipides naturels à partir de phos- phatides bruts végétaux, en particulier de lécithine de fèves de soja, par ex- traction par l'acétone et l'alcool- caractérisé en ce qu'on extrait à une tem- pérature ne dépassant pas 35 et à l'abri de l'air ou de l'oxygène, en présence d'un gaz inerte, tout d'abord la lécithine brute par l'acétone, puis le mélan- ge d'esters résultant de cette extraction par de l'alcool, et finalement on concentre la solution alcoolique dans le vide en faisant passer en même temps un courant de gaz inerte.
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The invention relates to a process for obtaining natural phospholipids from crude plant phosphatides, in particular from those which are prepared in known manner from soya beans. The diglyceric esters of cholinephosphoric acid and colaminephosphoric acid are known to be representatives of phosphatide-esters which are very widespread in the animal and plant kingdoms. See, for example, Paul Karrer, Lehrbuch der organischen Chemie, 1950, p.247. These esters are always associated, particularly in crude phosphatides of plant origin. This mixture of substances is referred to in commerce and industry as lecithin.
According to the chemical nomenclature, however, under the names of lecithin or lecithins, only the representatives of the body class of phosphatides, which contain choline as a basic group, are designated. When the colamine represents the basic part, the chemist speaks of cephalin; see Karrer, same work, p. 2470 Phosphatide esters have the following structural formula:
EMI1.1
Lecithin: diglycerol ester of chlolinephosphoric acid.
EMI1.2
Cephalin: diglycerol ester of colaminephosphoric acido As fatty acid radicals vary, there are several lecithins, respectively several oephalins.
It has now been discovered that, under certain conditions, it is possible to obtain from crude phosphatides of plant origin, in particular also from crude phosphatide of soya beans, natural phospholipids in which the diglycerol esters of choline-phosphoric acid dominate, or which consist exclusively of diglycerol esters of choline-phosphoric acid, and which also have a high content of essential fatty acids which, in turn, play an important role. essential role in the medico-therapeutic activity of this important class of biological bodies
It has also been found that the diglycerol esters of choline-phosphoric acid obtained by the process of the present invention can be enzymatically dissociated if treated with snake venom;
due to the fact that snake venom attacks and separates fatty acids fixed in the alpha position, so as to form chloline esters of monoglycerophosphoric acid, called lysoleoithins, which, surprisingly, still carry in the beta position of multiple unsaturated essential fatty acids, which plays an important role from a physiological and medical point of view.
In medical language today, essential fatty acids are understood to mean, in general, the fatty acids necessary for life, which the human body cannot create on its own. These are fatty acids with multiple unsaturation, of well-defined configuration, among which linoleic acid occupies the human organism, a key position, because, from this acid, it is formed in the body, as an essential acid, for example very active arachidinic acid, which is a 20 carbon tetraenic acid.
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With regard to the role that essential acids play in the human organism, the copious literature can be cited, for example the following publications:
Rieckehoff and his colleagues (Archiv Biochem. 25, 1-12, 1950), have discovered by tests carried out on animals that in the case of a diet for lack of fat, a small amount of linoleic acid is already sufficient to synthesize arachidonic acid in the body.
Schulz (Medizin. 29/30, VII, 1007, 1954) shows that in acute diseases of the liver parenchyma the duration of the disease is shortened by administrations of multiple unsaturated fatty acids. A clear effect is also obtained in cases of chronic liver disease.
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Allegri (Croh.Sc.med.Torino, 97, 6, 1954) shows, by tests carried out on animals, that, compared to control animals, rats suffering from partial hepatotomy, fed with unsaturated fatty acids, show faster regeneration of the rest of their liver - in weight and in histological image form - (strong karyokinetic activity) and a noticeable increase in the diameters of the nuclei.
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Knipping (16ineh, medowsehr. 97, $, VI, 901 1955) shows that multiple unsaturated fatty acids are able to shorten mild and moderate liver disease, and especially the phase so difficult to treat, understanding between hepatopathy and reconstitution. In animal tests, fattening of the labia minora resumes, and the concentration of glycogen in the liver increases. In addition, the secretion of bile is activated, and the mirror of pyrocatechic acid weakens. According to Schettler, essential multi-unsaturated fatty acids not only possess lipotropic action, but also exert a favorable action on glycogen synthesis.
With regard to the role which falls to choline-based phospholipids in general, and to essential fatty acids, in particular in medicine, the Applicant has set itself the goal of obtaining, from crude phosphatides of plant origin, preferably from crude soybean phosphatides, mainly or exclusively from choline esters of diglyoerophosphoric acid, having as high a content as possible of essential fatty acids. The main aim of the invention is therefore to carry out the treatment of plant phosphatides, in particular crude soybean phosphatides, so.
to conserve on the one hand the essential fatty acids contained in the phosphatide esters, that is to say to bring them thus to a high desired content, but on the other hand also to separate at the same time such a large quantity as possible of the accompanying bodies, and among them also all the phosphatide esters which do not contain choline as a basic component. The invention therefore relates to a method for preparing natural phospholipids having a high content of essential fatty acids and choline, and the product obtained by this method.
A further object of the invention is the preparation of a neutral phospholipid, with a high content of essential fatty acids, consisting practically exclusively of choline esters of diglycerophosphoric acid, and which can be regarded as chemically pure, because phospholipids which contain certain constituents incompatible with plasma, in particular the diglycerol ester of colamine phosphoric acid, ie, cephalin, are not suitable for intravenous administration.
On this subject, we find in the literature, the following data: O'Brien publishes in Lanoet, 271, 232 (1956), tests relating to substances which activate blood coagulation. He is looking for an interdependence between the increased occurrence of coronary thrombosis and the modified high-fat diet of the last fifty years. The author succeeds in
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show that not only fats, but also and to a much greater extent, certain phospholipoids, notably phosphatidyl-ethanolamine (cephalin), accelerated. coagulation phenomena.
During feeding trials with specific categories of fat and cephalin, it shows that it is with cephalin that coagulation changes the most.
Summer and Summer (Joof Biol. Chem. 154, 531, 1940) describe a ferment existing in soya beans (peroxidase) capable of oxidizing unsaturated fatty acids in the presence of hydrogen peroxide. According to Michlin and Pschennova, (Biochimija 11, 437, 1946) this ferment has unsaturated bonds on which oxygen can be fixed in a labile manner. Kamaljan's tests (Biochimija 16, 396, 1951) have shown that the addition of colamine lowers the oxygen uptake of the ferment, and also slows the discoloration of carotinoids by peroxides. Colamine oleate also slows down the oxygen uptake of the ferment. peroxidase activity.
Likewise, in September 1956, in his lecture given in London at the Symposium on the Biology of Aging, Sinclair showed that the increased ease of blood clotting can be caused by an increased concentration of ethanolamine phosphatide.
The final object of the invention is to separate the diglycerol esters of cholinephosphoric acid, the fatty acids fixed in the alpha position. The monoglycerophosphoric acid choline esters obtained have a high biological activity owing to their extraordinarily high surface activity. They have a material exchange activity action and can for example be used as cardiac energeticum. The choline esters of monoglycerophosphoric acid are, unlike esters of diglycerophosphoric acid, remarkably soluble in water, and on the other hand are insoluble in ether and acetone.
It is known to prepare esters of diglycerophosphoric acid from crude phosphatides, in particular also from crude phosphatides of soybeans, by preliminary extraction of the crude phosphatide by means of acetone, followed by treatment with l. alcohol of the ester mixture obtained by this. extraction.
According to the present invention, the preparation is carried out from crude phosphatides, in particular from crude phosphatide of soybeans, by extraction until exhaustion of the crude phosphatide not acetone at a temperature not exceeding 35, and. treatment of the mixture thus obtained to separate to a large extent the diglycerol ester of cholinephosphoric acid and the diglyomeric ester of colaminephosphoric acid, also by extraction at a temperature not exceeding 35, and in the presence an inert gas, with alcohol, and preferably protected from light.
In this way, with a satisfactory yield, phospholipids are obtained, containing mainly choline as basic constituent and having, relative to the total fatty acids, a content of 60% of essential fatty acids.
According to a new phase of the process, to completely separate the diglyomeric ester from colaminephosphoric acid, the alcoholic solution is introduced at a temperature not exceeding 35 and protected from light, air or oxygen. , in the presence of an inert gas, above a column containing an alcoholic suspension of a carbonate or an oxide of one or more elements of the second and third groups of the periodic system of elements, preferably aluminum and / or magnesium. For the purposes of the invention, aluminum oxide has been shown to be particularly suitable.
By vacuum evaporation of the alcoholic solution leaving the column in the presence of an inert gas, chemically pure choline esters of diglycerophosphoric acid are obtained, which are therefore suitable for intravenous administration, and which have an extraordinarily high content of essential fatty acids.
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To increase the yield of diglycerol esters of choline-phosphoric acid, it is necessary to separate by elutriation with alcohol, the addition compounds formed in the column on the one hand from the oxide or carbonate and on the other hand from the diglycerol esters of choline- or colaminephosphoric acids o The solution obtained by elution by the alcohol which flows from the column is combined with the first solution and the two solutions are concentrated in the empty, in the presence of an inert gas.
The choline ester of diglyoerophosphoric acid obtained according to the invention is a colorless substance of pasty consistency, which readily dissolves in ether and chloroform, also in alcohol, ether. petroleum and other organic solvents. It is completely insoluble in acetone. The total nitrogen content theoretically reaches 2.05%. The nitrogen index in the form of choline, determined analytically according to Kjeldahl, is 2.04%; therefore, more than 99.5%, i.e. almost 100% of total nitrogen, exists as choline.
The fatty acids of the ester obtained according to the invention are of the order of 17.7% saturated acids and 82.3% unsaturated acids, calculated relative to the total fatty acids. The absolute figures for unsaturated fatty acids alone are as follows:
for a total content of 82.3%, oleic acid is used at a rate of 17.2%, linoleic acid at a rate of 52%, linoleic acid at a rate of 13.1%.,. these absolute figures are converted into figures relative to the unsaturated fatty acids, we obtain 20% oleic acid, 64% linoleic acid and 16% linoleic acid, that is to say that from the point of view of essential acids alone, the proportion of linoleic acid reaches 80%, and the proportion of linoleic acid 20%, by virtue of the particular procedure of the process according to the invention.
EXAMPLE. -
The oily constituents of 8 kg of crude soybean phosphatide are separated by treating them several times with about 150 liters of acetone at a temperature not exceeding 35. The acetone is separated from the insoluble residue in vacuo and in the presence of an inert gas, then subjected to repeated extraction with ethanol, again at a maximum temperature of 35 and in the absence of heat. light, air or oxygen, by passing an inert gas through the extraction apparatus. Alcoholic solutions are purified by standing for several days to separate suspended or colloidal solids.
By concentrating the solutions in a vacuum, while passing an inert gas such as nitrogen or carbon dioxide at the same time, a phospholipid fraction is obtained with a yield of about 25 to 30% which contains, by in relation to the total fatty acids, 60% of essential fatty acids, which corresponds to a content of about 45% of the important constituents in the total molecule.
1 liter of the solution thus obtained is introduced at a concentration of about 2-3% in 10 hours, protected from light, air or oxygen, above. an absorption column, for example having a diameter of 4 cm, containing a suspension of, for example 10% of magnesium oxide and aluminum oxide in ethanol. After the alcoholic solution has passed through the column, it is eluted with 3 liters of ethanol. The alcoholic solutions are concentrated in vacuo in the presence of an inert gas. There is thus obtained, depending on the concentration of the solution of the choline aster, 10 to 14 g of oholin ester of chemically pure diglycerophosphoric acid, that is to say free of cephalin.
5.7 g of the oholin ester of diglycerophosphoric acid is dissolved in 570 cm3 of peroxide-free ether, reacted with 6 cm3 of an aqueous solution of 18 mg of snake venom (Crotalus adamanteus), then left to stand for 24 hours at room temperature, after repeated stirring. The solvent is then distilled off in vacuo without taking into account deposit formation. 2.9 g of mono- acid choline ester are obtained.
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glyceophosphoric acid containing, based on the total fatty acids, 28% of multiplet unsaturated essential fatty acids
CLAIMS.
1.- Process for obtaining natural phospholipids from crude plant phosphatides, in particular from soybean lecithin, by extraction with acetone and alcohol- characterized in that one extracts at a temperature not exceeding 35 and protected from air or oxygen, in the presence of an inert gas, first the crude lecithin with acetone, then the mixture of esters resulting from this extraction with alcohol, and finally the alcoholic solution is concentrated in vacuo while at the same time passing a stream of inert gas.