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La présente invention a pour objet un traitement de différentes matières, et nomment de laitances froides de poissons pour l'obtention d'acide nucléique pur et de ses sels.
On connaît des procédés de traitement de différentes matières animales en vue de l'obtention d'acide nucléique, notamment par traitement des matières animales, par une lessive de soude et précipitation du nucléinate obtenu par l'alcool. Ces procédés aboutissent à des aoides nucléiques souillés. Si l'on veut obtenir un acide nucléique pur, on foit faire subir un traitement préalable à la matière pre- mière pour la débarrasser de ses impuretés organiques et minérales, et ne pratiquer l'extraction et la précipitation
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de l'acide nucléique que sur un produit notablement purifié.
La présente invention concerne un procédé pour l'extraction d'acide nucléique à partir de différentes ma-' tières premières, et notamment de laitances fraîches de pois- son, dans lequel on traite des laitances fraîches de poisson, dilacérées au préalable, par une lessive alcaline, et on précipite le nucléate alcalin formé par l'alcool, procédé caractérisé par ce qu'on purifie le nucléinate alcalin par un traitement à chaud à l'aide de sulfate de calcium et on précipite, à partir de la solution purifiée de nucléate alca- lin, l'acide nucléique pratiquement pur.
L'invention concerne encore un procédé de prépa- ration des sels de l'acide nucléique, caractérisé par ce qu'on mélange une suspension alcoolique d'acide nucléique à une solution alcoolique d'un sel du métal considéré, ce. qui donne le nucléinate métallique correspondant par double décomposition.
Pour l'application du procédé de la présente in- vention, on dilacère des laitances fraîches de poisson pour former une bouillie liquide. Cette bouillie est traitée par une lessive alcaline concentrée chaude. Le mélange se liqué- fie peu à peu et l'hydrolyse est arrêtée lorsque le tout est transformé en un liquide coloré.
On refroidit à environ 40 et précipite le nuclé- inate alcalin brut par l'alcool, lave par décantation et sé- pare le nucléinate par un moyen physique connu, par exemple par centrifugation ou filtration sous press@@@.
Le précipité non séché est purifie par action à chaud du sulfate de calcium en présence d'eau Une première
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filtration à chaud pour éviter le colmatage facile des fil- tres, sera suivie d'une deuxième filtration à froid du jus obtenu pour éliminer la totalité des protéines retenues par le nucléinate alcalin. On obtient une solution limpide, fai- blement colorée, contenant du nucléinate alcalin pratique- ment pur.
1 acide nucléique est précipité de cette solu- tion purifiée par une méthode connue, par exemple par l'al- cool chlorhydrique. On le sépare par essorage ou centrifuga- tion, le lave à l'alcool et à l'acétone. On obtient un acide thymonucléique ou désoxyribosenucléique pratiquement pur.
Pour la fabrication des sels de l'acide nucléique or ajoute à une suspension d'acide nucléique dans l'alcool une solution alcoolique de sodium ou d'un sel du métal dont On désire former le nucléinate. Le nucléinate métallique se forré par double décomposition et peut être séparé par un procédé quelconque.
EXEMPLES -
500 KG de laitances fraîches de poisson sont dilacérées JUSQU'à obtention d'une bouillie liquide. On trai- te cette bouillie par 85 litres de lessive de soude à 36 Bé, pendant 1 heure, à 80 0. On agite pendant ce chauffage, le magna formé initialement par l'incorporation de la soude se liquéfie peu à peu pour donner à la fin d'une heure un liquide brunâtre qu'on refroidit à 40 c.
On verse alors le liquide d'hydrolyse dans 650 litres d'alcool à 80 G-.L. Un nucléinate de sodium impur pré- cipite et se dépose rapidement. On décante le liquide surna- geant et après trois lavages successifs du précipité à l'al- cool @ G.L., le précipité est recueilli après un essorage
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aussi poussé que possible.
Le précipite essoré mais non séché est mélangé à une pâte formée de 97 litres d'eau et de 5,250 kg de sul- fate de calcium pour 75 kg de précipité. On mélange énergi- queent et chauffe à 80 G. Le mélange est filtré à chaud, le filtrat est refroidi et filtré de nouveau. On obtient alors un jus clair, jaune d'or.
8 volumes de ce jus sont versés dans un mélange tiède de 16 volumes d'alcool à 75/80 G.L. et 1,8 volumes d'acide chlorhydrique. Après agitât énergique, l'acide nu- cléique se:dépose sous forme d'un précipité blanc. Celui-ci est recueilli, lavé à l'alcool par décantation, essoré ou centrifugé et lavé de nouveau trois fois à l'alcool, et une fois à l'acétone.
On obtient une poudre blanche, légère, très fine, d'acide thymo-nucléique, contenant environ
EMI4.1
<tb> - <SEP> azote <SEP> 15 <SEP> %
<tb>
<tb> - <SEP> phosphore <SEP> 9 <SEP> , <SEP> 5 <SEP> %
<tb>
<tb> - <SEP> humidité <SEP> 7 <SEP> %
<tb>
Cet acide donne avec l'acétate de sodium une solu- tion stable qui ne révèle pas la présence de matières organi- ques ou minérales.
II. - Une partie d'acide thyno-nucléique obtenu dans l'exemple 1 est délayée dans de l'alcool à 85 G.L. On y ajoute une solution alcoolique de sodium, ou de sulfates de manganèse, de cuivre, de fer, de chlorure de calcium, de magnésium ou de cobalt ( sans que cette liste puisse avoir un caractère limitatif) etc... pour obtenir les thymo-nuclé- inates correspondants de sodium, manganèse, cuivre, fer,, cal- cium, magnésium, cobalt etc... qui se forment par double
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décomposition.
REVENDICATIONS,
1 ) Procédé pour l'extraction d'acide nucléique à partir de différentes matières premières et notamment de laitances fraîches de poisson, dans lequel on traite la matière première par exemple des laitances fraîches de pois- son, dilacérées au préalable, par une lessive alcaline, et on précipite le nucléinate alcalin par l'alcool, procédé ca- ractérisé par ce qu'on purifie le nucléinate alcalin préci- pité par un traitement à chaud à l'aide de sulfate de cal- cium. et on précipite, à partir de la solution de nucléinate @ alcalin purifiée, l'acide nucléique pratiquement pur par un 'alcool et d'acide chlorhydrique, ce . qui permet d'obtenir à partir de matières premières brutes de l'acide nucléique pur.
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The present invention relates to a treatment of different materials, and name cold raits of fish to obtain pure nucleic acid and its salts.
There are known methods of treating various animal materials with a view to obtaining nucleic acid, in particular by treatment of animal materials, with a sodium hydroxide solution and precipitation of the nucleinate obtained by alcohol. These methods result in contaminated nucleic acids. If one wants to obtain a pure nucleic acid, one makes undergo a preliminary treatment with the raw material to rid it of its organic and mineral impurities, and not to practice the extraction and the precipitation.
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nucleic acid than in a significantly purified product.
The present invention relates to a process for the extraction of nucleic acid from various raw materials, and in particular from fresh fish milt, in which fresh fish milt, previously shredded, is treated with a alkaline lye, and precipitating the alkaline nucleate formed by alcohol, a process characterized in that the alkaline nucleinate is purified by a heat treatment with calcium sulfate and precipitated from the purified solution of alkaline nucleate, the substantially pure nucleic acid.
The invention also relates to a process for the preparation of salts of the nucleic acid, characterized in that an alcoholic suspension of nucleic acid is mixed with an alcoholic solution of a salt of the metal in question, this. which gives the corresponding metal nucleinate by double decomposition.
For the application of the process of the present invention, fresh fish milt is broken up to form a liquid slurry. This slurry is treated with hot concentrated alkaline lye. The mixture gradually liquefies and the hydrolysis is stopped when the whole is transformed into a colored liquid.
The mixture is cooled to about 40 and the crude alkaline nucleinate is precipitated by alcohol, washed by decantation and the nucleinate separated by known physical means, for example by centrifugation or filtration under pressure.
The non-dried precipitate is purified by hot action of calcium sulphate in the presence of water.
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hot filtration to prevent easy clogging of the filters, will be followed by a second cold filtration of the juice obtained to remove all of the proteins retained by the alkali nucleinate. A clear, weakly colored solution is obtained containing substantially pure alkali nucleinate.
The nucleic acid is precipitated from this purified solution by a known method, for example by hydrochloric alcohol. It is separated by suction or centrifugation, washed with alcohol and acetone. Substantially pure thymonucleic or deoxyribosucleic acid is obtained.
For the manufacture of the salts of the nucleic acid, gold adds to a suspension of nucleic acid in alcohol an alcoholic solution of sodium or of a salt of the metal of which it is desired to form the nucleinate. Metal nucleinate is formed by double decomposition and can be separated by any method.
EXAMPLES -
500 KG of fresh fish milt are shredded UNTIL a liquid porridge is obtained. This slurry is treated with 85 liters of sodium hydroxide solution at 36 Bé, for 1 hour, at 80 ° C. Stirred during this heating, the magna formed initially by the incorporation of the sodium hydroxide gradually liquefies to give at the end of an hour a brownish liquid which is cooled to 40 c.
The hydrolysis liquid is then poured into 650 liters of 80 G-.L alcohol. Impure sodium nucleinate precipitates and settles rapidly. The supernatant liquid is decanted and after three successive washings of the precipitate with alcohol @ G.L., the precipitate is collected after filtering.
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as pushed as possible.
The drained but not dried precipitate is mixed with a paste formed from 97 liters of water and 5.250 kg of calcium sulphate per 75 kg of precipitate. The mixture is vigorously mixed and heated to 80 G. The mixture is filtered while hot, the filtrate is cooled and filtered again. This gives a clear, golden yellow juice.
8 volumes of this juice are poured into a lukewarm mixture of 16 volumes of 75/80 G.L. alcohol and 1.8 volumes of hydrochloric acid. After vigorous stirring, the nucleic acid settles in the form of a white precipitate. This is collected, washed with alcohol by decantation, drained or centrifuged and washed again three times with alcohol, and once with acetone.
A white, light, very fine powder of thymonucleic acid is obtained, containing approximately
EMI4.1
<tb> - <SEP> nitrogen <SEP> 15 <SEP>%
<tb>
<tb> - <SEP> phosphorus <SEP> 9 <SEP>, <SEP> 5 <SEP>%
<tb>
<tb> - <SEP> humidity <SEP> 7 <SEP>%
<tb>
This acid gives with sodium acetate a stable solution which does not reveal the presence of organic or inorganic matter.
II. - A part of thyno-nucleic acid obtained in Example 1 is diluted in alcohol at 85 GL. An alcoholic solution of sodium, or of sulphates of manganese, copper, iron or calcium chloride is added to it. , magnesium or cobalt (without this list being limiting) etc ... to obtain the corresponding thymonucleinates of sodium, manganese, copper, iron, calcium, magnesium, cobalt, etc. . which are formed by double
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decomposition.
CLAIMS,
1) Process for the extraction of nucleic acid from different raw materials and in particular from fresh fish milt, in which the raw material is treated, for example fresh fish milt, previously dilacerated, with an alkaline lye , and the alkali nucleinate is precipitated with alcohol, a process characterized by purifying the precipitated alkali nucleinate by heat treatment with calcium sulfate. and substantially pure nucleic acid is precipitated from the purified alkali nucleinate solution with alcohol and hydrochloric acid. which makes it possible to obtain pure nucleic acid from raw materials.