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"Procédé de préparation d'un produit hémostatique polyvalent".
On connaît déjà un procédé de préparation d'un produit hémostatique polyvalent, c'est-à-dire agissant sur tous les fac- teurs de coagulation; suivant ce procédé, de le cervelle ou autre tissu parenchymateux est mise en bouillie aqueuse et traitée par l'éther en vue d'extraire les corps gras, puis soumise à une macération en présence d'eau ; cours de cette macération, par l'action des ferments présents dans la cervelle, et qui dé- sintègrent l'albumine, le produit hémostatique est séparé de la combinaison complexe avec l'albumine; après la précipitation de l'albumine, on sépare la solution aqueuse de produit hémostati- que du résidu et on la concentre jusqu'à dessication.
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On a établi que, dans le produit préparé suivant ce procédé, aucune albumine ne peut plus être mise en évidence; cela signifie que le produit en est théoriquement dépourvu, mais que malgré tout des corps quelconques contenant de l'albumine doivent être présents ; de l'utilisation du produit dans le corps humain, ils peuvent déclencher un effet de choc.
Il est apparu que, d'après le procédé suivant la pré- sente invention, on peut préparer un produit duquel les compo- sants contenant de l'albumine qui déclenchent l'effet de choc sont totalement éliminés; par cela même, le procédé suivant l'in- vention s'accompagne d'un rendement plus élevé et d'une meilleu- re stabilité thermique. Le nouveau procédé peut, en outre, trou- ver son application à différents organes parenchymateux, par exemple le poumon, le foie, le rein.
Le procédé suivant l'invention pour la préparation d'un produit hémostatique polyvalent est caractérisé en ce qu'un tissu parenchymateux, après avoir été amené sous forme d'une bouillie homogène, est traité avec de l'acétone ou d'autres cétones à poids moléculaire inférieur, et de l'éther ou d'autres liaisons organiques dissolvant les graisses telles que des hydro- carbures aliphatiques saturés (éther de pétro.le, benzine), des hydrocarbures aliphatiques chlorés (chloroforme, tétrachlorure de carbone), des hydrocarbures aromatiques saturés et non sa tu- rés (benzène, cyclohexène), de l'acétone, des homologues infé- rieurs de l'éther diéthylique, etc.;
au cours de ce traitement, l'acétone supprime l'albumine, retire l'eau et les graisses neutres, et l'éther enlève les lipoïdes non hémostatiques; ensuite, la substance ainsi préparée est soumise à l'action d'éthanol ou d'alcool méthylique, propylique, ou butylique mélangé d'eau ; au cours de cette action, les lipoprotéines de la matière première se trouvent dédoublées, et la partie phos- phatide, étant libérée, est dissoute dans l'alcool; cette
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dissolution est alors concentrée dans le vide. liais on peut aussi procéder de telle sorte que l'on soumet d'abord à une macération la bouillie d'organes homogénéisée dans laquelle, au cours de l'homogénéisation, les ferments protéoly- tiques contenus dans les cellules sont mis en liberté ;
cours de cette macération, une partie au moins des lipoprotéides se trouvènt dédoublées ; ensuite, intervient le traitement avec de l'acétone, de l'éther et finalement avec l'éthanol aqueuse; dans ce dernier se dissout la partie constituée de phosphatides qui s'est trouvée libérée.
Exemple : Une cervelle de boeuf fraîche est libérée de ses méninges et rincée proprement dans l'eau. La cervelle débarras- sée du sang est travaillée dans un appareil d'homogénéisation, par exemple dans un appareil " Turmixe", jusqu'à ce qu'elle de- vienne une bouillie entièrement homogène. Cette bouillie est secouée à la machine pendant un quart d'heure avec une quantité environ quintuple d'acétone exempte d'eau et refroidie à 0 C.
Après l'enlèvement de l'acétone en surplus, on remet la même quan- tité d'acétone froide et exempte d'eau et on secoue de nouveau pendant un quart d'heure. La bouillie est alors débarrassée de l'acétone par essorage. Le traitement avec l'acétone a pour but d'enlever l'eau primitivement présente dans la bouillie, ainsi que la graisse neutre, et aussi de précipiter l'albumine. Après décantation de l'acétone, on peut encore lessiver plusieurs fois avec de l'acétone froide.
Si le résidu obtenu après l'enlèvement de l'acétone ne doit pas subir immédiatement la suite du traitement, on le répand en couche mince sur du papier-filtre et on obtient en quelques heures une poudre sèche qui reste stable si on la conserve dans une armoire frigorifique.
Si on poursuit immédiatement le traitement du résidu ce dernier n'est pas séché, mais incorporé à l'état encore humide avec une quantité environ décuple d'éther refroidi à 0 C. et
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secoué à la machine pendant une demi-heure. L'éther est alors enlevé par essorage et le résidu est étalé et séché à l'air pen- dant un court espace de temps, c'est-à-dire pendant une demi- heure. La poudre ainsi obtenue, elle aussi, est stable aussi longtemps si on la conserve au frais.
La poudre est secouée à la machine pendant une demi-heure avec un volume décuple d'éthanol à 60% qui est refroidi à 0 C.
Il se produit alors une scission des lipoprotéides en phosphati- de et albumine. Le phosphatide constitue la matière hémostatique efficace, qui se dissout dans l'éthanol, tandis que l'albumine reste insoluble. La solution alcoolique de phosphatide est sépa- rée du résidu et évaporée à sec à basse température dans un vide élevé.
La substance active ainsi obtenue est une poudre d'un blanc jaunâtre qui se dissout facilement dans l'eau. La solu- tion aqueuse est stable à la chaleur. Elle peut être chauffée à l'autoclave pendant quinze minutes à 115 sans qu'intervienne une perte d'activité.
Cependant, on peut procéder également comme suit : on fait macérer pendant 10 heures à 5 C., dans une armoire frigorifique, la bouillie homogène de cervelle préparée à partir de la cervelle fraîche comme décrit ci-dessus ; intervient le traitement déjà exposé avec l'acétone, l'éther et l'éthanol. Lors de la ma- cération, sous l'action des ferments protéolytiques présents dans la bouillie de cervelle, une partie au moins des lipoprotéides se trouve dédoublée en phosphatide et albumine. Par le traitement avec l'éthanol, ce dédoublement est complété, s'il y a lieu et la partie phosphatide est dissoute dans l'alcool.
Le procédé peut, en outre, être modifié de telle sorte que la solution alcoolique contenant la partie phosphatide n'est pas concentrée jusqu'à dessication, mais seulement concentrée dans le vide suffisamment pour que tout l'alcool soit éliminé.
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Le résidu qui contient encore de l'eau est étendu avec de l'eau jusqu'à la concentration finale désirée et, après élimination des parties insolubles par centrifugation, on obtient, prête à être utilisée, une solution de la substance hémostatique.
Au lieu de cervelle, on peut traiter également avec le même succès, conformément aux variantes de traitement décrites ci-des- sus, des poumons, des foies ou des reins de boeuf. Le poumon de boeuf est alors débarrassé du sang par l'effet d'un puissant .. , jet d'eau envoyé dans les artères pulmonaires, jusqu'à ce que le tissu apparaisse d'un blanc analogue à du fromage. Le poumon con- tient alors beaucoup d'eau. On le réduit et on l'essore à la main, et on le réduit dans l'appareil "Turmixe" en une bouillie homogène, dont on poursuit alors le traitement comme décrit, sans ou avec macération.
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"Process for the preparation of a polyvalent hemostatic product".
A process for the preparation of a polyvalent hemostatic product, that is to say one which acts on all the coagulation factors, is already known; according to this process, the brain or other parenchymal tissue is put into an aqueous slurry and treated with ether in order to extract the fatty substances, then subjected to maceration in the presence of water; during this maceration, by the action of the ferments present in the brain, and which break down albumin, the haemostatic product is separated from the complex combination with albumin; after precipitation of the albumin, the aqueous solution of hemostatic product is separated from the residue and concentrated to drying.
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It has been established that, in the product prepared according to this process, no albumin can no longer be detected; this means that the product is theoretically devoid of it, but that despite everything some bodies containing albumin must be present; from the use of the product in the human body, they can trigger a shock effect.
It has been found that, according to the process according to the present invention, a product can be prepared from which the components containing albumin which initiate the shock effect are completely eliminated; thereby, the process according to the invention is accompanied by a higher yield and a better thermal stability. The new method can furthermore find its application to various parenchymal organs, for example the lung, the liver, the kidney.
The process according to the invention for the preparation of a polyvalent hemostatic product is characterized in that a parenchymal tissue, after having been supplied in the form of a homogeneous slurry, is treated with acetone or other ketones to lower molecular weight, and ether or other organic fat dissolving bonds such as saturated aliphatic hydrocarbons (petroleum ether, benzine), chlorinated aliphatic hydrocarbons (chloroform, carbon tetrachloride), hydrocarbons saturated and unsalted aromatics (benzene, cyclohexene), acetone, lower homologues of diethyl ether, etc .;
during this treatment, acetone removes albumin, removes water and neutral fats, and ether removes non-hemostatic lipoids; then the substance thus prepared is subjected to the action of ethanol or methyl, propyl, or butyl alcohol mixed with water; during this action, the lipoproteins of the raw material are split, and the phosphide part, being released, is dissolved in alcohol; this
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dissolution is then concentrated in a vacuum. But it is also possible to proceed in such a way that the homogenized organ slurry is first subjected to maceration in which, during the homogenization, the proteolytic ferments contained in the cells are set free;
during this maceration, at least part of the lipoproteids are split; then, the treatment with acetone, ether and finally with aqueous ethanol takes place; in the latter dissolves the part consisting of phosphatides which has been released.
Example: A fresh beef brain is released from its meninges and rinsed cleanly in water. The brain freed from blood is worked in a homogenization apparatus, for example in a "Turmixe" apparatus, until it becomes a completely homogeneous slurry. This slurry is shaken in the machine for a quarter of an hour with about a quintuple quantity of acetone free of water and cooled to 0 C.
After removing the excess acetone, the same amount of cold, water-free acetone is returned and shaken again for a quarter of an hour. The slurry is then freed from acetone by draining. The purpose of the treatment with acetone is to remove the water originally present in the slurry, as well as the neutral fat, and also to precipitate the albumin. After decanting the acetone, it is possible to leach several times with cold acetone.
If the residue obtained after removing the acetone is not to undergo immediately further processing, it is spread in a thin layer on filter paper and a dry powder is obtained within a few hours which remains stable if stored in a refrigerated cabinet.
If the treatment of the residue is continued immediately, the latter is not dried, but incorporated in the still wet state with an approximately tenfold quantity of ether cooled to 0 ° C. and
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machine shaken for half an hour. The ether is then removed by suction and the residue is spread and air dried for a short time, ie for half an hour. The powder thus obtained is also stable for a long time if it is kept in a cool place.
The powder is machine shaken for half an hour with a tenfold volume of 60% ethanol which is cooled to 0 C.
The lipoproteids are then split into phosphatide and albumin. Phosphatide is the effective hemostatic material, which dissolves in ethanol, while albumin remains insoluble. The alcoholic phosphatide solution is separated from the residue and evaporated to dryness at low temperature in a high vacuum.
The active substance thus obtained is a yellowish-white powder which dissolves easily in water. The aqueous solution is heat stable. It can be autoclaved for fifteen minutes at 115 minutes without loss of activity.
However, one can also proceed as follows: one macerates for 10 hours at 5 C., in a refrigerated cabinet, the homogeneous porridge of brains prepared from the fresh brains as described above; the treatment already described with acetone, ether and ethanol takes place. During materation, under the action of the proteolytic ferments present in the brain slurry, at least part of the lipoproteids are split into phosphatide and albumin. By the treatment with ethanol, this doubling is completed, if necessary and the phosphatide part is dissolved in the alcohol.
The process can further be modified so that the alcoholic solution containing the phosphatide part is not concentrated to desiccation, but only concentrated in vacuum enough so that all the alcohol is removed.
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The residue which still contains water is diluted with water to the desired final concentration and, after removing the insoluble parts by centrifugation, a solution of the hemostatic substance is obtained, ready for use.
Instead of brains, it is also possible to treat with the same success, according to the treatment variants described above, beef lungs, livers or kidneys. The beef lung is then freed of blood by the effect of a powerful .., water jet sent into the pulmonary arteries, until the tissue appears white like cheese. The lung then contains a lot of water. It is reduced and wrung out by hand, and it is reduced in the "Turmixe" apparatus to a homogeneous slurry, the treatment of which is then continued as described, without or with maceration.