BE1030650A1 - Composition de decrochage et de prelevement de microorganismes - Google Patents
Composition de decrochage et de prelevement de microorganismes Download PDFInfo
- Publication number
- BE1030650A1 BE1030650A1 BE20225481A BE202205481A BE1030650A1 BE 1030650 A1 BE1030650 A1 BE 1030650A1 BE 20225481 A BE20225481 A BE 20225481A BE 202205481 A BE202205481 A BE 202205481A BE 1030650 A1 BE1030650 A1 BE 1030650A1
- Authority
- BE
- Belgium
- Prior art keywords
- sampling
- composition
- microorganisms
- composition according
- weight
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 151
- 238000005070 sampling Methods 0.000 title claims abstract description 85
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims description 104
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 35
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 35
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 23
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims abstract description 22
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims abstract description 22
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims abstract description 18
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 claims abstract description 9
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 claims abstract description 9
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 claims abstract description 9
- 102100032487 Beta-mannosidase Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 108010055059 beta-Mannosidase Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 108010029541 Laccase Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims abstract description 4
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims abstract description 4
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims abstract 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 43
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 23
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 22
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerol group Chemical group OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 241000186781 Listeria Species 0.000 claims description 17
- QCDWFXQBSFUVSP-UHFFFAOYSA-N 2-phenoxyethanol Chemical compound OCCOC1=CC=CC=C1 QCDWFXQBSFUVSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 229960005323 phenoxyethanol Drugs 0.000 claims description 16
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 14
- 239000003352 sequestering agent Substances 0.000 claims description 14
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 12
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 claims description 12
- 108010056079 Subtilisins Proteins 0.000 claims description 11
- 102000005158 Subtilisins Human genes 0.000 claims description 11
- 239000003761 preservation solution Substances 0.000 claims description 10
- -1 alkyl ether sulfate Chemical class 0.000 claims description 9
- 238000011109 contamination Methods 0.000 claims description 9
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 claims description 9
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 claims description 8
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 8
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 claims description 7
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 claims description 7
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 claims description 7
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims description 6
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 claims description 6
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 claims description 6
- 229920001202 Inulin Polymers 0.000 claims description 5
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 claims description 5
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 claims description 5
- 150000002327 glycerophospholipids Chemical class 0.000 claims description 5
- 229940029339 inulin Drugs 0.000 claims description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 5
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 4
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 4
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 4
- 241000186779 Listeria monocytogenes Species 0.000 claims description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- SFNALCNOMXIBKG-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol monododecyl ether Chemical compound CCCCCCCCCCCCOCCO SFNALCNOMXIBKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 claims description 3
- AEQDJSLRWYMAQI-UHFFFAOYSA-N 2,3,9,10-tetramethoxy-6,8,13,13a-tetrahydro-5H-isoquinolino[2,1-b]isoquinoline Chemical compound C1CN2CC(C(=C(OC)C=C3)OC)=C3CC2C2=C1C=C(OC)C(OC)=C2 AEQDJSLRWYMAQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 claims description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 claims description 2
- PHOQVHQSTUBQQK-SQOUGZDYSA-N D-glucono-1,5-lactone Chemical compound OC[C@H]1OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O PHOQVHQSTUBQQK-SQOUGZDYSA-N 0.000 claims description 2
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 claims description 2
- HLCFGWHYROZGBI-JJKGCWMISA-M Potassium gluconate Chemical compound [K+].OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O HLCFGWHYROZGBI-JJKGCWMISA-M 0.000 claims description 2
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 claims description 2
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 claims description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 claims description 2
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 238000010876 biochemical test Methods 0.000 claims description 2
- 239000004227 calcium gluconate Substances 0.000 claims description 2
- 235000013927 calcium gluconate Nutrition 0.000 claims description 2
- 229960004494 calcium gluconate Drugs 0.000 claims description 2
- NEEHYRZPVYRGPP-UHFFFAOYSA-L calcium;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanoate Chemical compound [Ca+2].OCC(O)C(O)C(O)C(O)C([O-])=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C([O-])=O NEEHYRZPVYRGPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 229960004106 citric acid Drugs 0.000 claims description 2
- 235000015165 citric acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000000151 deposition Methods 0.000 claims description 2
- 235000012209 glucono delta-lactone Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000000182 glucono-delta-lactone Substances 0.000 claims description 2
- 229960003681 gluconolactone Drugs 0.000 claims description 2
- 229960004838 phosphoric acid Drugs 0.000 claims description 2
- 235000011007 phosphoric acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000004224 potassium gluconate Substances 0.000 claims description 2
- 235000013926 potassium gluconate Nutrition 0.000 claims description 2
- 229960003189 potassium gluconate Drugs 0.000 claims description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims description 2
- 229960004249 sodium acetate Drugs 0.000 claims description 2
- 239000000176 sodium gluconate Substances 0.000 claims description 2
- 235000012207 sodium gluconate Nutrition 0.000 claims description 2
- 229940005574 sodium gluconate Drugs 0.000 claims description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 claims description 2
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 claims description 2
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 claims description 2
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 229960001367 tartaric acid Drugs 0.000 claims description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims 2
- 241000533331 Salmonella bongori Species 0.000 claims 1
- 241001138501 Salmonella enterica Species 0.000 claims 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 claims 1
- 150000008051 alkyl sulfates Chemical class 0.000 claims 1
- 238000010894 electron beam technology Methods 0.000 claims 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims 1
- 230000005251 gamma ray Effects 0.000 claims 1
- 239000003348 petrochemical agent Substances 0.000 claims 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 claims 1
- 239000000344 soap Substances 0.000 claims 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 claims 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims 1
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 230000014670 detection of bacterium Effects 0.000 abstract 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 33
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 22
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 21
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 20
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 19
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 15
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 14
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 14
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 108090000787 Subtilisin Proteins 0.000 description 11
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 11
- 238000012009 microbiological test Methods 0.000 description 8
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 7
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 6
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 6
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 6
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 6
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 6
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 5
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000003139 biocide Substances 0.000 description 4
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 description 4
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 4
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 4
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000607149 Salmonella sp. Species 0.000 description 3
- MGSKVZWGBWPBTF-UHFFFAOYSA-N aebsf Chemical compound NCCC1=CC=C(S(F)(=O)=O)C=C1 MGSKVZWGBWPBTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 3
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 3
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 3
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 3
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 3
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical class OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 2
- CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 2,4-Hexadienoic acid, potassium salt (1:1), (2E,4E)- Chemical compound [K+].CC=CC=CC([O-])=O CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 2
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 2
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 2
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 2
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 241001084338 Listeria sp. Species 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- XYFCBTPGUUZFHI-UHFFFAOYSA-N Phosphine Chemical compound P XYFCBTPGUUZFHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N Phosphorous acid Chemical compound OP(O)=O ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 2
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 2
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 2
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 2
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 2
- LPNBBFKOUUSUDB-UHFFFAOYSA-N p-toluic acid Chemical compound CC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 LPNBBFKOUUSUDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- ACVYVLVWPXVTIT-UHFFFAOYSA-M phosphinate Chemical compound [O-][PH2]=O ACVYVLVWPXVTIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-M phosphonate Chemical compound [O-]P(=O)=O UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 2
- 239000004302 potassium sorbate Substances 0.000 description 2
- 235000010241 potassium sorbate Nutrition 0.000 description 2
- 229940069338 potassium sorbate Drugs 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000003001 serine protease inhibitor Substances 0.000 description 2
- 229940023144 sodium glycolate Drugs 0.000 description 2
- 229940057950 sodium laureth sulfate Drugs 0.000 description 2
- SXHLENDCVBIJFO-UHFFFAOYSA-M sodium;2-[2-(2-dodecoxyethoxy)ethoxy]ethyl sulfate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOCCOCCOCCOS([O-])(=O)=O SXHLENDCVBIJFO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- JEJAMASKDTUEBZ-UHFFFAOYSA-N tris(1,1,3-tribromo-2,2-dimethylpropyl) phosphate Chemical compound BrCC(C)(C)C(Br)(Br)OP(=O)(OC(Br)(Br)C(C)(C)CBr)OC(Br)(Br)C(C)(C)CBr JEJAMASKDTUEBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- IBLKWZIFZMJLFL-UHFFFAOYSA-N 1-phenoxypropan-2-ol Chemical compound CC(O)COC1=CC=CC=C1 IBLKWZIFZMJLFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PORQOHRXAJJKGK-UHFFFAOYSA-N 4,5-dichloro-2-n-octyl-3(2H)-isothiazolone Chemical compound CCCCCCCCN1SC(Cl)=C(Cl)C1=O PORQOHRXAJJKGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940090248 4-hydroxybenzoic acid Drugs 0.000 description 1
- 241000588625 Acinetobacter sp. Species 0.000 description 1
- 241000862484 Alicyclobacillus sp. Species 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 208000005223 Alkalosis Diseases 0.000 description 1
- 241000228197 Aspergillus flavus Species 0.000 description 1
- 241000193755 Bacillus cereus Species 0.000 description 1
- 241000194110 Bacillus sp. (in: Bacteria) Species 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- LVDKZNITIUWNER-UHFFFAOYSA-N Bronopol Chemical compound OCC(Br)(CO)[N+]([O-])=O LVDKZNITIUWNER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 description 1
- 241000589513 Burkholderia cepacia Species 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000589875 Campylobacter jejuni Species 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 1
- GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N Chlorhexidine Chemical compound C=1C=C(Cl)C=CC=1NC(N)=NC(N)=NCCCCCCN=C(N)N=C(N)NC1=CC=C(Cl)C=C1 GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000193468 Clostridium perfringens Species 0.000 description 1
- 239000004287 Dehydroacetic acid Substances 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-M Glycolate Chemical compound OCC([O-])=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010000540 Hexosaminidases Proteins 0.000 description 1
- 102000002268 Hexosaminidases Human genes 0.000 description 1
- 101001111742 Homo sapiens Rhombotin-2 Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- XPJVKCRENWUEJH-UHFFFAOYSA-N Isobutylparaben Chemical compound CC(C)COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 XPJVKCRENWUEJH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588754 Klebsiella sp. Species 0.000 description 1
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 1
- 241000186612 Lactobacillus sakei Species 0.000 description 1
- 241000194035 Lactococcus lactis Species 0.000 description 1
- 241000194039 Lactococcus piscium Species 0.000 description 1
- 241000192003 Leuconostoc carnosum Species 0.000 description 1
- 241000192131 Leuconostoc gelidum Species 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 102000004317 Lyases Human genes 0.000 description 1
- 108090000856 Lyases Proteins 0.000 description 1
- 241000231286 Neottia Species 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000179039 Paenibacillus Species 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 241000232299 Ralstonia Species 0.000 description 1
- 102100023876 Rhombotin-2 Human genes 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 1
- 241000607714 Serratia sp. Species 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241001147693 Staphylococcus sp. Species 0.000 description 1
- 241000191973 Staphylococcus xylosus Species 0.000 description 1
- 241000983364 Stenotrophomonas sp. Species 0.000 description 1
- 235000014897 Streptococcus lactis Nutrition 0.000 description 1
- 241000194020 Streptococcus thermophilus Species 0.000 description 1
- 101710136739 Teichoic acid poly(glycerol phosphate) polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- XEFQLINVKFYRCS-UHFFFAOYSA-N Triclosan Chemical compound OC1=CC(Cl)=CC=C1OC1=CC=C(Cl)C=C1Cl XEFQLINVKFYRCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000235017 Zygosaccharomyces Species 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- DMSMPAJRVJJAGA-UHFFFAOYSA-N benzo[d]isothiazol-3-one Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NSC2=C1 DMSMPAJRVJJAGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960004365 benzoic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 1
- 238000012742 biochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- LLEMOWNGBBNAJR-UHFFFAOYSA-N biphenyl-2-ol Chemical group OC1=CC=CC=C1C1=CC=CC=C1 LLEMOWNGBBNAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003168 bronopol Drugs 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 229960003260 chlorhexidine Drugs 0.000 description 1
- MXOAEAUPQDYUQM-UHFFFAOYSA-N chlorphenesin Chemical compound OCC(O)COC1=CC=C(Cl)C=C1 MXOAEAUPQDYUQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 150000001945 cysteines Chemical class 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 235000019258 dehydroacetic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940061632 dehydroacetic acid Drugs 0.000 description 1
- JEQRBTDTEKWZBW-UHFFFAOYSA-N dehydroacetic acid Chemical compound CC(=O)C1=C(O)OC(C)=CC1=O JEQRBTDTEKWZBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PGRHXDWITVMQBC-UHFFFAOYSA-N dehydroacetic acid Natural products CC(=O)C1C(=O)OC(C)=CC1=O PGRHXDWITVMQBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001617 ethyl hydroxybenzoate Drugs 0.000 description 1
- 239000004403 ethyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010228 ethyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- NUVBSKCKDOMJSU-UHFFFAOYSA-N ethylparaben Chemical compound CCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 NUVBSKCKDOMJSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 150000002191 fatty alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000010408 film Substances 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000005470 impregnation Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N inulin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)OC[C@]1(OC[C@]2(OC[C@]3(OC[C@]4(OC[C@]5(OC[C@]6(OC[C@]7(OC[C@]8(OC[C@]9(OC[C@]%10(OC[C@]%11(OC[C@]%12(OC[C@]%13(OC[C@]%14(OC[C@]%15(OC[C@]%16(OC[C@]%17(OC[C@]%18(OC[C@]%19(OC[C@]%20(OC[C@]%21(OC[C@]%22(OC[C@]%23(OC[C@]%24(OC[C@]%25(OC[C@]%26(OC[C@]%27(OC[C@]%28(OC[C@]%29(OC[C@]%30(OC[C@]%31(OC[C@]%32(OC[C@]%33(OC[C@]%34(OC[C@]%35(OC[C@]%36(O[C@@H]%37[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O%37)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%36)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%35)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%34)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%33)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%32)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%31)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%30)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%29)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%28)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%27)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%26)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%25)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%24)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%23)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%22)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%21)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%20)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%19)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%18)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%17)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%16)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%15)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%14)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%13)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%12)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%11)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%10)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O9)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O8)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N 0.000 description 1
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000010813 municipal solid waste Substances 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000000505 pernicious effect Effects 0.000 description 1
- GJLNWLVPAHNBQN-UHFFFAOYSA-N phenyl 4-hydroxybenzoate Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C(=O)OC1=CC=CC=C1 GJLNWLVPAHNBQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical group CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- XRBCRPZXSCBRTK-UHFFFAOYSA-N phosphonous acid Chemical compound OPO XRBCRPZXSCBRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004437 phosphorous atom Chemical group 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000073 phosphorus hydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001392 phosphorus oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 239000011241 protective layer Substances 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000008261 resistance mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000009666 routine test Methods 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940045990 sodium laureth-2 sulfate Drugs 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- GUQPDKHHVFLXHS-UHFFFAOYSA-M sodium;2-(2-dodecoxyethoxy)ethyl sulfate Chemical group [Na+].CCCCCCCCCCCCOCCOCCOS([O-])(=O)=O GUQPDKHHVFLXHS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ASEFUFIKYOCPIJ-UHFFFAOYSA-M sodium;2-dodecoxyethyl sulfate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOCCOS([O-])(=O)=O ASEFUFIKYOCPIJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- MDDUHVRJJAFRAU-YZNNVMRBSA-N tert-butyl-[(1r,3s,5z)-3-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-5-(2-diphenylphosphorylethylidene)-4-methylidenecyclohexyl]oxy-dimethylsilane Chemical compound C1[C@@H](O[Si](C)(C)C(C)(C)C)C[C@H](O[Si](C)(C)C(C)(C)C)C(=C)\C1=C/CP(=O)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 MDDUHVRJJAFRAU-YZNNVMRBSA-N 0.000 description 1
- VSAISIQCTGDGPU-UHFFFAOYSA-N tetraphosphorus hexaoxide Chemical compound O1P(O2)OP3OP1OP2O3 VSAISIQCTGDGPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 1
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 229960003500 triclosan Drugs 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/22—Testing for sterility conditions
Abstract
Composition stérile d'échantillonnage comprenant un tensioactif, une ou plusieurs enzymes choisies dans le groupe constitué d'une protéase, une polysaccharidase, une laccase, une lipase, une cellulose et une mannanase, , kit d'échantillonnage comprenant cette composition, procédé d'échantillonnage basé sur cette composition ou ce kit et utilisation de cette composition ou ce kit pour la détection de bactéries sur une surface.
Description
COMPOSITION DE DECROCHAGE ET DE PRELEVEMENT DE MICROORGANISMES
Domaine technique
La présente invention se rapporte à une composition de décrochage et de prélèvement de microorganismes, à un kit de décrochage, de prélèvement et de conservation de microorganismes comprenant ladite composition et à un procédé de décrochage, de prélèvement et de conservation de microorganismes.
L'art antérieur
Dans de nombreux domaines d'activités comme les secteurs agroalimentaires, les collectivités, les secteurs médicaux et vétérinaires, des contaminations problématiques dues à la présence de microorganismes sont observées très fréquemment.
Classiquement, dans les hôpitaux et dans les cabinets médicaux ou vétérinaires, la présence de microorganismes est responsable de maladies nosocomiales tandis qu'en agroalimentaire et en collectivité, ces microorganismes sont responsables de la dégradation de denrées périssables mais aussi du transfert de contaminants vers les consommateurs des produits issus par exemple d'une chaîne de production de viande, de fruits, de légumes ou autres.
Or, de nos jours, des normes strictes en matière d'hygiène sont imposées et il convient donc de s'assurer que le nombre de microorganismes responsables de telles contaminations soit maintenu sous une valeur seuil acceptable, cette valeur seuil acceptable étant propre à chaque domaine d'activité.
Les bactéries planctoniques sont un premier exemple de microorganismes contaminants, ces bactéries sont libres au niveau d'un substrat liquide ou solide et posent un problème en soi car elles sont à même de contaminer directement tout type de surface comme les denrées alimentaires, les outils médicaux, les bandes transporteuses, les réservoirs de stockage ou encore les patients humains ou les animaux eux- mêmes.
Toutefois, aujourd'hui, il est largement reconnu que les problématiques liés à la contamination par des microorganismes sont d'autant plus importants que ces derniers forment des biofilms.
En effet, dans tout type d'industrie et plus particulièrement dans le domaine de l'industrie agroalimentaire, les biofilms se forment de manière inévitable, cela au vu de la richesse du milieu environnant.
Les biofims sont définis comme un consortium de
Microorganismes enchâssés dans une matrice de substances polymériques extracellulaires. Autrement dit, les biofilms sont des pellicules visqueuses qui se développent sur toutes les surfaces, suite à l'adhésion de microorganismes sur ces surfaces et à la sécrétion par ceux-ci de polymères les recouvrant, facilitant leur adhésion à la surface et formant ainsi Ia matrice extracellulaire. Les biofilms constituent ainsi une couche de protection autour des microorganismes très résistante aux agressions chimiques et thermiques ce qui rend ainsi leur élimination très difficile au moyen des biocides conventionnels et représentent de plus une source récurrente et important de contamination du milieu environnant.
Cette résistance est expliquée d'une part par la matrice de substances polymériques extracellulaires qui forme une barrière physique à la diffusion des molécules biocides dans le biofilm et, d'autre part, à l'état sessile des microorganismes et à leur capacité à s'échanger entre eux très rapidement des gènes responsables de certains mécanismes de résistance aux biocides.
Dès lors, on comprend aisément que les biofilms sont des structures très résistantes et extrêmement variées, par exemple des souches différentes d'une même bactérie peuvent former des biofilms différents, ces biofilms étant encore plus variés qu'ils sont composés de plusieurs bactéries différentes. De plus, les bactéries s'échangeant entre elles des gènes de résistance et l'environnement influe également sur le biofilm, accentuant encore leur complexité et leur résistance.
En outre, la matrice extracellulaire des biofims peut être identifiée lorsqu'elle est fortement développée mais dans la majorité des cas, le biofiim se développe insidieusement dans les installations et sa présence sera détectée que lors de l'analyse de Ia qualité du produit fini.
Concernant la croissance du biofilm, celle-ci a leu de manière cyclique en comprenant une phase de croissance durant laquelle se produit l'accumulation des microorganismes et une phase de détachement durant laquelle des morceaux entiers de biofilms et des microorganismes se détachent par érosion et sous l'effet de leur poids pour contaminer les surfaces, les denrées alimentaires, les outils médicaux, les bandes transporteuses, les réservoirs de stockage ou encore les patients humains, consommateurs ou les animaux eux-mêmes.
Cela devant entraîner pour l'industriel, l'arrêt de sa chaîne de production, effectuer un cycle de nettoyage pour éliminer le biofilm, représentant de nombreuses heures de travail, ressources déployées et de perte de rendement.
De tout ceci, il ressort que les microorganismes contaminants et/ou les biofilms constituent une reelle problématique, tout particulièrement dans le domaine des soins de santé (hôpitaux, cabinets dentaires ou médicaux), des soins vétérinaires et de l'agroalimentaire.
Cette problématique est d'autant plus critique que les microorganismes et/ou les biofilms peuvent impliquer des bactéries responsables d'infections potentiellement mortelles chez les individus, que ces bactéries soient présentes dans les hôpitaux, les cabinets vétérinaires ou encore dans l'industrie agroalimentaire et se retrouvent au final sur les produits alimentaires destinés à la consommation.
Comme cela a été indiqué plus haut, la problématique des microorganismes et plus particulièrement des biofilms est double. D'une part, les désinfectants et biocides classiques sont très souvent inefficaces car ils ne parviennent pas à atteindre les microorganismes protégés par la matrice extracellulaire du biofilm, cette matrice étant de structure et de composition complexe et très variable. D'autre part, un biofilm est généralement mixte, c'est-à-dire qu'il contient une multitude de bactéries différentes ou de mêmes bactéries mais qui sont de souches différentes, ce qui favorise la propagation des gènes de résistance entre les bactéries du biofilm et rend ainsi leur traitement très difficile voire inefficace.
Par conséquent, d'un environnement à l'autre ou d'un secteur d'activité à l'autre, il est plutôt fréquent que les biofilms détectés soient totalement différents. Afin de détecter les biofilms, il existe des kits de détection de la présence de biofilms sur des surfaces ou dans des installation plus spécifiques (circuits d'eau, etc…), ces kits (tel que celui divulgué dans le document EP2537601) permettent de réaliser une coloration sélective des biofilms. II est donc actuellement possible de déterminer des zones où sont présents des biofilms afin de procéder à une élimination de ces derniers sans toutefois connaître la nature précise des microorganismes (bactéries) à l'origine du biofilm ciblé. en résulte que des compositions d'élimination des biofilms comprenant plusieurs enzymes sont employées sans toutefois savoir si les enzymes utilisées et éventuellement formulées dans une base détergente (voir par exemple le document EP2243821) sont réellement adéquates pour agir sur un biofilm donné. Pour cette raison, les traitements actuels sont plutôt aléatoires et non spécifiques, ce qui est économiquement non rentable et peut entraîner une perte de temps et un arrêt considérable des installations. 5 Par aileurs, des techniques de prélèvement de microorganismes au départ de surfaces ont été développées afin de caractériser et/ou de quantifier les populations de microorganismes présentes sur des surfaces et responsables de contaminations. Ces méthodes de prélèvement permettent donc de déterminer, sur une surface, les différents types (de souches) de bactéries et de microorganismes présents.
Parmi les méthodes de prélèvement de microorganismes présents sur une surface, l'une des références en la matière est la Norme
ISO 18593 :2004(F) qui prévoit et définit des méthodes horizontales pour des techniques de prélèvement sur des surfaces (plus spécifiquement sur des surfaces se rencontrant dans l'environnement des industries agroalimentaire). La méthode à «l'étoffe/éponge » est un exemple de techniques de prélèvement cité dans cette Norme, cette méthode permettant de rechercher et/ou de dénombrer des microorganismes présents sur une surface. Brièvement, selon cette méthode de prélèvement, il s'agit de mouiller l'étoffe/éponge avec une quantité de diluant qui est du sérum physiologique stérile, d'échantillonner la surface dans deux directions perpendiculaires avant d'introduire l'étoffe/éponge dans un récipient stérile avec le diluant. Par la suite, après un éventuel stockage du prélèvement, ce dernier est analysé quantitativement et/ou qualitativement.
Malheureusement, si une telle méthode permet d'assurer un prélèvement de microorganismes libres à la surface d'un substrat, c'est- d-dire un prélèvement de microorganismes planctoniques, elle se relève être inefficace lorsque la surface est contaminée por des microorganismes ayant formé un biofilm. En effet, comme expliqué plus haut, les microorganismes protégés par la matrice extracellulaire du biofilm, cette matrice étant de structure et de composition complexe et très variable et les biofilms étant mixtes, ils sont encore plus variés et complexes qu'ils sont composés de plusieurs bactéries différentes ou de souches différentes.
De plus, il s'avère que les techniques de prélèvement reposant sur un support imprégné d'eau peuvent avoir un effet bénéfique sur le développement des microorganismes, même lors de la réalisation d'un prélèvement au départ d'une surface. En effet, il est reconnu que certaines bactéries présentent une croissance accrue en présence d'eau, le support imbibé d'eau favorisant donc cette croissance pendant le prélèvement mais également après celui-ci puisqu'une fine pellicule d'eau subsiste sur le support traité où a eu lieu le prélèvement. Ceci peut donc favoriser le développement de certains microorganismes non prélevés, en particulier lorsqu'ils sont protégés par Un biofilm.
Afin de palier aux inconvénients des supports de prélèvement imprégnés d'eau, on connait de l'état de la technique le document DE10304331 qui divulgue une préparation enzymatique qui peut être utilisée pour éliminer les biofilms des surfaces en l'absence de biocides. Cette préparation enzymatique comprend une ou plusieurs enzymes du groupe des polysacchoridases et/ou protéases et éventuellement des nucléases.
Malheureusement, même si les compositions selon le document DE10304331 présentent une certaine efficacité en terme de prélèvement des microorganismes, il apparaît qu'elles sont insuffisantes compte tenu de la diversité et de la complexité des microorganismes et des biofilms qui peuvent être présents sur une surface d'une installation et qu'elles ne permettent pas un prélèvement représentatif des populations bactériennes y étant pourtant bien présentes, c'est-à-dire qu'elles ne permettent qu'un faible recouvrement des microorganismes.
En effet, les biofilms et/ou les microorganismes présents sur une surface d'une installation sont d'une part composés d'une population de microorganismes variée et complexe, c'est-à-dire différents microorganismes mais également ces différents microorganismes pouvant encore être de souches différents, cela entraînant des résistances différentes mais également la formation de matrices extracellulaires de biofilms variées, complexes et différentes, parfois au sein d'une même surface d'une installation.
Il existe donc un réel besoin de fournir une composition qui a pour but de palier les inconvénients de l'état de la technique en permettant un prélèvement efficace, représentatif et de manière adéquate des populations de microorganismes, qu'ils soient libres mais également sous la forme d'un biofilm de structure complexe qui peut varier considérablement d'un prélèvement à un autre. En outre, il existe un besoin de fournir une composition permettant le prélèvement des microorganismes sur différents types de surfaces, dans différents environnements, stable dans le temps et qui soit facile à utiliser par les
Utilisateurs ou encore compatible avec la chaîne de production, par exemple les aliments dans une industrie agroalimentaire.
A ce titre, la demande de brevet WO 2018/002013 décrit une solution aqueuse visqueuse comprenant une ou plusieurs enzymes et 8,4% de surfactants pour une application sur une surface horizontale ou même verticale, en vue d'une imprégnation prolongée d'un tissu placé sur cette surface, de manière à récupérer un Maximum des micro-organismes éventuellement présents, y compris sous forme de biofilm, tout en préservant leur viabilité et de quantifier leur présence.
Bref résumé de l'invention
La présente invention a trait à une composition (stérile) d'échantilonnage de microorganismes présents sur une surface, l'échantilonage étant compatible avec les tests microbiologiques en aval, comprenant : un ou plusieurs tensioactif(s), présent{s) à une teneur d'au moins 0,01% en poids et au plus de 1,5% en poids par rapport au poids de ladite composition (somme des poids en tensioactifs : poids de la composition), ce ou ces tensioactif(s) comprenant (ou consistant essentiellement en) un tensioactif anionique ; au moins deux enzymes choisies dans le groupe constitué d'une (sérine) protéase, une polysaccharidase, une laccase, une lipase, une cellulase et une mannanase ; au moins un agent stabilisant présent à une teneur d'au moins 15% par rapport au poids de ladite composition, ledit stabilisant étant choisi dans le groupe des polyols (de préférence le glycérol) et, de préférence au moins un agent séquestrant.
La présente invention a également trait à l'utilisation de cette composition pour le prélèvement en vue de la détection de microorganismes, avantageusement Salmonella sp. et/ou Listeria sp.
Description détaillée d'une réalisation de l'invention
Les techniques pour l'évaluation de la présence de microorganismes comprennent la culture, la biochimie (la mesure de la production d'ATP ou de NADH, la Mesure d'une activité enzymatique, par exemple la catalase, voire même la mesure de protéines dans un milieu), les méthodes génétiques de « Polymerase Chain Reaction » (PCR) et de séquençage (ex. ARN riposomial 165) et des méthodes immunologiques.
En d'autres termes, de nombreuses enzymes sont utilisées pour une analyse biochimique ou pour les analyses de biologie moléculaire, de cytométrie de flux ou les tests immunologiques (immunoassays), telles que la phosphatase alcaline, la Tag polymérase, la luciférase, etc.
Cependant, les inventeurs ont remarqué que l'activité protéolytique résiduelle interférait avec ces tests. De plus les protéases interférèrent avec les complexes antigène-anticorps lors de réactions de type immunologique, également largement utilsés pour la détection de microorganismes. Souvent plusieurs méthodes sont combinées, en particulier la détection de microorganismes pathogènes potentiellement présents à faible intensité comprend une étape de culture, suivie du marquage immunologique et/ou génétique. Ceci implique que le prélèvement des microorganismes doit assurer une récupération suffisante, une viabilité suffisante, mais également que les produits utilisés n'interfèrent pas avec les tests à réaliser en aval. Il y a donc un égquiliore très délicat à respecter.
Pour résoudre ce problème, il est prévu suivant l'invention une composition stérile d'échantilonnage, de décrochage et/ou de prélèvement, de microorganismes potentiellement présents sur une surface comprenant : - Qu moins un tensioactif anionique, le ou les tensioactifs représentant ensemble au moins 0,01% (de préférence au moins 0,02%) en poids par rapport au poids de ladite composition (poids des tensioactifs :poids de la solution), et au plus 1,5%, de préférence au plus 1%, voire 0,5%, voire même 0,1% ; - Qu moins un polyol (glycérol) en tant qu'agent stabilisant et/ou agent viscosant représentant au moins 15%, de préférence au moins 18%, préférentiellement environ 20% en poids par rapport au poids de ladite composition, et/ou de préférence moins de 30%, voire moins de 25%, en poids par rapport au poids de ladite composition,
- avantageusement, au moins un agent séquestrant (les cations di- ou multi-valents), de préférence en une teneur pondérale d'au moins 0,2%, de préférence au moins 0,3%, voire au moins 0,4% ; - au moins deux enzymes (en concentration apte à dégrader les éventuels biofilms bactériens ou les souillures et en concentration non interférente avec les tests microbiologiques en aval), lesdites au moins deux enzymes étant choisies dans le groupe constitué d'une (sérine) protéase, une polysaccharidase, une laccase, une lipase, une cellulose et une mannanase. - De préférence, le ou les tensioactifs présent(s) dans la composition de prélèvement (ex. à une teneur comprise entre 0,02% et 1,5%, ou maximum 1%, maximum 0,5% maximum 0,1%) consiste(nt) (essentiellement) en un ou plusieurs tensioactif(s) anioniques.
Cette composition présente de préférence (i) un pH compris entre 5 et 11, de préférence entre 6 et 10, de manière encore plus préférée, entre 7 et 9, ou entre 7,5 et 8 et/ou (ii) une viscosité dynamique (20°C) comprise entre 1, de préférence 2, 5, 10, 20, 30, 40, 50 mPa.s et 150, de préférence 100, 90, 80, voire 70 mPass.
Dans le contexte de la présente invention, le mot « surface » est entendu de manière large et signifie de préférence une surface d'objets ou de locaux de particuliers, de l'industrie, voire de l'espace public (y compris les transports en commun ou les sanitaires publics) potentiellement contaminée par des microorganismes, y compris des bactéries ou microorganismes pathogènes. Par exemple de nombreuses surfaces de l'industrie agro-alimentaire risquent d'être contaminées par des microorganismes potentiellement délétères (toxiques ou altérants), ce qui est intolérable et force, le cas échéant, à supprimer les lots infectés.
Parmi ces surfaces, l'on peut retrouver des tables, des ustensiles, des poignées. Les pharmacies, les industries pharmaceutiques, les hôpitaux, les cabinets médicaux ont également de nombreuses surfaces potentiellement contaminées par des microorganismes potentiellement nocifs, qu'il convient d'identifier avec rapidité et précision, ce que permet la présente invention.
Parmi les microorganismes dont l'identification rapide et/ou précise représente un intérêt, l'on retrouve, pour l'industrie alimentaire, les microorganismes pathogènes (par exemple, Escherichia Coli, Salmonella sp. Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus, Bacillus cereus,
Pseudomonas aeruginosa, Campylobacter jejuni, Clostridium perfringens,
Aspergillus flavus), des microorganismes altérants (par exemple, Brochotrix thermosphacta, Lactaobcillus rahmnosus, Lactococcus piscium,
Leuconostoc carnosum/gelidum, Paenibacillus sp, Zygosaccharomyces baili/rouxi, Candida sp), ou les ferments (Lactobacillus cosei,
Lactococcus lactis, Lactobacillus sakei, Streptococcus thermophilus,
Pédiococcus acidilactici, Staphylococcus xylosus, Saccharomyces cerevisiae). Plus généralement, les microorganismes potentiellement présents sur des surfaces (non alimentaires) et intéressants à identifier de manière rapide et/ou précise se retrouvent par exemple parmi
Escherichia coli, Salmonella sp., Pseudomonns sp (ex. P. aeruginosa),
Staphylococcus sp. (ex. S. aureus), Candida albicans, Alicyclobacillus sp.…
Stenotrophomonas sp. Acinetobacter sp., Klebsiella sp., Serratia Sp.
Bacillus sp., Ralstonia picketi et Burkholderia Cepacia.
Contrairement aux solutions de nettoyage ou de prélèvement classiques, les détergents de la présente invention sont avantageusement choisis pour ne pas affecter la viabilité des bactéries à prélever: tant leur teneur que leur structure chimique sont importants.
Ainsi, leur concentration est inférieure à 1,5% (poids de l'ensemble des détergents :poids de l'ensemble de la composition). Cependant, une teneur minimale, par exemple au moins 0,01 ou au moins 0,02 voire 0,03% est nécessaire.
Parmi les détergents préférés, se retrouvent le laureth sulfate (ou d'autres détergents anioniques « doux», idéalement une chaine hydro corbonée de 12 à 14 atomes de carbone, un segment de poly(oxyéthane-1,2-diyl) et une tête anionique, par exemple un sulfate de sodium).
L'homme de l'art connait d'autres détergents anioniques qui soient «doux», voire est en mesure de tester d'autres détergents anioniques qui sont considérés comme « doux », par exemple au moyen d'un test in vitro sur culture de microorganismes (cfr. ci-dessous).
De préférence, l'indice HLB de l'ensemble des émulsifiants de
Ia composition est compris entre 10 et 16.
Dans le contexte de la présente invention, la terminologie indice HLB (pour « Hydrophilic-lipophilic balance ») porte sur le caractère hydrophile ou lipophile des agents tensioactifs ajoutés.
Avantageusement, la composition a été stérilsée par des moyens physiques, par exemple par irradiation, tel que aux rayons gamma.
De préférence, cette composition ne comporte pas d'agent conservateur. Alternativement, un éventuel agent conservateur qui serait malgré tout présent doit être le plus dilué possible, ou neutralisé rapidement (avant application de la composition sur une surface ou juste après), de manière à ne pas interférer avec le métabolisme des microorganismes prélevés. Ainsi, les inventeurs ont remarqué que des compositions, où les agents conservateurs habituels, en ce compris le phénoxyéthanol, étaient présent à moins de 50 ppm, étaient acceptables. Les compositions préférées ont, avantageusement, une concentration en conservateurs moindre, par exemple moins de 20 ppm, moins de 10 ppm, moins de 5 ppm (partie pour million : poids de la somme des conservateurs (ex. le phénoxyéthanol) : poids total de la composition), voire une concentration qui est en-dessous de la limite de détection et/ou de 0,1 ppm.
Ainsi, le choix des constituants (ex. les enzymes) formant Ia composition est basé en partie sur leur teneur en agents conservateurs, Ia plus faible possible et/ou des agents conservateurs non-interférant. Ainsi, une teneur résiduelle faible en 2-phénoxyéthanol est acceptable, même si elle gagne à être maintenue aussi basse que possible.
Cette composition d'échantillonnage est de préférence pour une application sur une surface, telle qu'une surface utilisée dans les industries alimentaires. La composition peut avantageusement être appliquée à d'autres surfaces industrielles comme par exemple l'industrie pharmaceutique, le milieu des soins de santé voire même la pétrochimie.
Les caractéristiques de la composition selon la présente invention présentent l'avantage de fournir une composition de prélèvement de microorganismes, qu'ils soient sous forme planctoniques ou bien sous forme de biofilms complexes et variés. Cette composition permet un échantillonnage précis des microorganismes.
La composition selon la présente invention, en comprenant au moins deux enzymes choisies dans le groupe comprenant une protéase, une polysaccharidase, une laccase, une lipase, une cellulase et une mannanase, permet avantageusement de dégrader et de déstructurer efficacement la matrice extracellulaire des biofilms et notamment d'une population variée et complexe de biofilms ayant des matrices extracellulaires différentes permettant ainsi de libérer les bactéries afin de les prélever. Toutefois, les inventeurs ont remarqué que l'utilisation d'enzymes était particulièrement délicate lorsque les microorganismes à prélever sont sensibles et en faible quantité.
Ainsi la viabilité de certaines bactéries, en particulier Gram positif, est affectée par de nombreux composés : les tests en aval qui impliquent la culture ou le métabolisme d'une telle bactérie donneraient des résultats faussement négatifs, ce qui est inacceptable (un «faux positif» est moins grave qu'un « faux négatif », ce dernier pouvant être mortel). En effet, Listeria est un contaminant redouté, et les inventeurs ont remarqué que de nombreux composants utilisés empêchaient sa détection en aval, ce qui est d'autant plus pernicieux que ceci s'accompagne d'une bonne récupération d'autres microorganismes, ce qui laisse penser que le procédé aurait bien fonctionné. Au-delà de
Listeria, les inventeurs ont remarqué que d'autres bactéries Gram positif étaient très sensibles aux différents composants des solutions de prélèvement habituellement utilisées.
De préférence, la composition comprend au moins une protéase, telle qu'une sérine protéase (ex. une subtilisine), l'au moins autre enzyme étant choisie parmi une polysaccharidase, une laccase, une lipase, une cellulose et une mannanase.
L'utilisation d’une protéase augmente fortement la capacité de prélèvement de la composition mais, comme écrit ci-dessus, les inventeurs ont remarqué que cette enzyme interfère avec les tests en aval et même, dans certains cas, avec les autres composants de la composition de prélèvement elle-même.
Certes, une activité protéase peut facilement être inhibée, au moins dans des conditions de laboratoire. Cependant, les inventeurs ontremarqué que, en pratique (sur site, hors laboratoire), les inhibiteurs de protéases disponibles étaient soit d'un usage compliqué, soit inefficaces, soit interféraient eux-mêmes avec les tests microbiologiques en aval. Ainsi, après de nombreux tests infructueux, les inventeurs privilégient l'incorporation d'une activité protéase à faible intensité. Dans le cas de l'Alcalase (ex. Alcalase 2,5 DX), il s'agit de préférence d'environ 0,5 à 5
Unité Anson par kg de la composition (0,2 g à 2g de l'alcalase 2,5 DX/Kg de composition), par exemple environ 1 Unité Anson par kilo de la composition. D'autres protéases, y compris d'autres lots commerciaux de l'alcalase peuvent être utilisées, par exemple des sérine protéases.
L'activité à incorporer, soit correspond à celle mentionnée ci-dessus pour l'alcalase (2,5 DX), soit est déterminée à la lumière des exemples de la présente invention : la concentration la plus élevée qui n'interfère pas avec les tests microbiologiques en aval.
L'homme de l'art connait très bien la manière de tester une activité protéolytique, par exemple en utilisant un substrat dont la coloration (ou les propriétés de fluorescence) change après clivage protéolytique. Ainsi, le fait de déterminer une activité équivalente à celle d'une certaine quantité d'alcalose 25 DX est à sa portée.
Alternativement, ou en addition, de préférence, le substrat utilisé est le N- succinyl-alanyl-alanyl-propyl-phénylalanyl-p-nitroanilide (CAS 70967-97- 4), qui est dissous dans un tampon phosphate à pH 7, 25 mM à une concentration de 1 mM. 1 ml de ce substrat porté à 20°C est mis en présence de 100 ul de la solution à tester (également à 20°C), par exemple à pH 7, ou à un pH optimal pour l'activité enzymatique et l'absorbance est mesurée en fonction du temps. L'activité enzymatique est alors facilement déterminée en aval, par exemple par la loi de
Lambert-Beer. En d'autres termes, à la lumière de ce qui précède, le fait de déterminer une activité équivalente, représente une activité de routine. Par exemple, une activité équivalente à 0,2; 0,3:0,4:0,5:0,6 ; 0, 7: 08: 0,9; 1: 15 ou 2 g/Kg de l'alcalase 25 DX signifie avantageusement, dans le contexte de la présente invention, que la protéase considérée (ex. une sérine protéase, voire même une autre subtilisine) a la même activité dans les conditions décrites ci-dessus (substrat CAS 70967-97-4).
A la lumière de la présente invention, un test de routine peut être développé, soit comme une alternative, soit en association, en mélangeant plusieurs dilutions d'une culture de Listeria avec la faible quantité d'alcalase ci-dessus, ou avec une solution saline ou avec une autre protéase considérée (à plusieurs concentrations), suivie de la mesure par un test spécifique de détection de Listeria : Ia composition saline et l'alcalase (appliquée à faible dose) représentant deux contrôles positifs.
Dans le cas, non préféré, OÙ un inhibiteur de protéase est ajouté après le prélèvement, les concentrations en protéases peuvent être revues à la hausse. Cependant, la nature et la concentration de l'inhibiteur de protéase doit, de manière particulièrement préférée, être déterminée de manière à ne pas interférer avec les tests microbiologiques enaval.
En outre, l'agent séquestrant ainsi que le pH compris entre 5 et 11 (entre 7 et 8,5) de la composition selon la présente invention permet avantageusement de former des complexes avec des ions minéraux qui vont être fixés sous une forme empêchant leur précipitation par les reactions habituelles et ainsi de stabiliser dans le temps la composition selon la présente invention, notamment au vu des enzymes présentes dans de telles proportions.
Dans le contexte de la présente invention, l'agent séquestrant est de préférence une substance chimique ayant la capacité à former des complexes avec des ions minéraux qu'il fixe sous une forme empêchant leur précipitation par les réactions habituelles. A titre d'exemple, l'agent séquestrant peut être le glucono-delta-lactone, le gluconate de sodium, le gluconate de potassium, le gluconate de calcium, l'acide citrique, l'acide phosphorique, l'acide tartrique, l'acétate de sodium, le sorbitol, un composé comportant un atome de phosphore, voire la corboxymethyl inuline (le sel sodique). Les agents séquestrants dits « doux » sont préférés : les inventeurs ont remarqué que ces séquestrants « doux» permettaient une meilleure activité enzymatique au niveau du prélèvement et/ou pour les tests microbiologiques en aval impliquant des enzymes (ex. les inventeurs ont noté des interférences avec les tests PCR en aval lorsque trop d'agent séquestrants et/ou des agents séquestrants trop puissants étaient présents). Alternativement, l'agent séquestrant peut être un oxyde de phosphore tel qu'un phosphonate, un phosphinate ou un phosphate ou leur mélange, ou un sel de celui-ci, une amine ou un oxyde d'amine portant au moins, dans sa structure, un groupement fonctionnel phosphine, oxyde de phosphine, phophinite, phosphonite, phosphite, phosphonate, phosphinate ou phosphate, seul ou en combinaison, ou un sel de ceux-ci. La carboxyméthyl inuline est avantageuse et les inventeurs ont montré que ce composé n'interfère pas avec les tests microbiologiques en aval. De même des mélanges de carboxyméthyl inuline avec un glycolate (ex. en ratio massique compris entre 0,5:1 et 2:1; carboxyméthyl inuline : glycolate de sodium) sont préférés. Les inventeurs ont également obtenu des bons résultats avec les phosphonates.
Dans le cadre de la présente invention, il a été déterminé que la composition suivant l'invention en comprenant au moins Un tensioactif anionique (comprenant un ou plusieurs tensioactif, ledit ou lesdits tensioactifs étant (essentiellement) un ou des tensioactifs anioniques) qui représente au moins 0,01% en poids par rapport au poids de cette composition (de préférence au moins 0,02%, et moins de 1,5%, de préférence moins de 1%, voire moins de 0,5%, voire même de moins de 0,1%), permet de manière particulièrement avantageuse de décrocher et de prélever une proportion représentative et complète d'une population de microorganismes présents sur une surface, qu'ils soient planctoniques ou bien sous la forme de biofilms puisque les enzymes de la composition selon l'invention permettent leur libération. Il s'agit donc d'un équilibre délicat entre la nature des détergents, leur faible concentration, la nature des enzymes et une faible activité (protéase).
Avantageusement, ce tensioactif anionique consiste en un tensioactif moussant ou un tensioactif moussant est incorporé au(x) tensioactif(s) anionique(s), cela présentant l'avantage d'une part de décrocher et prélever les microorganismes et d'autre part d'emprisonner les microorganismes prélevés dans la composition selon l'invention afin de réaliser un prélèvement efficace et représentatif de la population de contaminants d'une surface.
En outre, la composition selon la présente invention en comprenant au moins un tensioactif anionique et au moins un polyol ou le propylène glycol en tant qu'agent stabilisant et/ou agent viscosant à au moins 15% en poids, est stable dans le temps.
Par ailleurs, il a été déterminé que la composition selon la présente invention, en n'étant pas trop visqueuse permet de réduire significativement le temps de contact nécessaire avec les microorganismes et/ou les biofilms présents sur une surface de sorte à les déstructurer suffisamment pour en libérer les bactéries et ainsi pouvoir les échantillonner et/ou identifier ces derniers en vue du traitement ultérieur spécifique et approprié des surfaces. En d'autres termes, la composition selon la présente invention permet donc d'entourer totalement les microorganismes ou les biofilms et de déstructurer ces derniers plus rapidement et plus efficacement, apportant ainsi une composition de prélèvement adéquate et optimale, et permettant également de piéger les microorganismes et contaminants prélevés au départ d'une surface sans que la problématique de l'évaporation rapide des compositions liquides de prélèvement ne soit rencontrée.
en résulte que la composition selon la présente invention, au contraire des compositions actuelles, permet d'obtenir Un prélèvement réellement représentatif et suffisamment complet des contaminants présents sur une surface, pour différents types de surfaces et pour différents environnements. Cela est particulièrement avantageux car en ayant un prélèvement représentatif et complet des microorganismes, ceux-ci pourront par la suite être identifiés et un traitement d'élimination ciblé et efficace, en utilisant les composés adéquats et non plus un cocktail de composés bien souvent inefficace, pourra être appliqué sur la surface. Ceci représente bien entendu un avantage économique et de temps considérable.
L'intérêt de la composition selon la présente invention est donc double en ce sens qu'elle permet d'une part de prélever et d'échantillonner l'ensemble des contaminants d'une surface qu'ils soient planctoniques ou sous forme de biofilms en vue de leur analyse et qu'elle permet ensuite de déterminer précisément quel traitement d'élimination de ces contaminants sera à appliquer.
De préférence, comme décrit ci-dessus, l'au moins un tensioactif anionique de la composition selon l'invention est choisi dans le groupe comprenant le laureth sulfate de sodium. Cette molécule a le numéro CAS 9004-82-4. Il s'agit, de préférence du laureth-2 sulfate de sodium et/ou du laureth-3 sulfate de sodium
De préférence, l'au moins un polyol ou alcool gras en tant qu'agent stabilisant et/ou agent viscosant est le glycérol. Les inventeurs ont remarqué que le glycérol (ou d'autres polyols), lorsqu'il est présent en grande quantité (par exemple plus de 15% en poids), augmente la stabilité de la composition dans le temps.
De préférence, la composition selon l'invention comprend en outre un agent régulateur de pH.
De préférence, la composition selon l'invention présente un pH compris entre 6 et 10, de préférence entre 7 et 9, préférentiellement entre 8 et 9, de manière particulièrement avantageuse entre 8,2 et 8,6.
De préférence, la composition selon l'invention est sous forme liquide, de préférence sous forme liquide pulvérisable.
De préférence, la composition selon l'invention comprend en outre au moins une enzyme additionnelle choisie dans le groupe constitué des oxydo-réductases, des lyases, des transférases, des lipases, des estérases, des glucosaminidases.
Comme expliqué ci-avant, l'intérêt de la composition selon la présente invention est double en ce sens qu'elle permet d'une part de prélever et d'échantillonner l'ensemble des contaminants d'une surface qu’ils soient planctoniques ou sous forme de biofilms et qu'elle permet ensuite de déterminer précisément la nature de ces contaminants, ce qui permet de savoir quel traitement d'élimination de ces contaminants sera à appliquer.
Par conséquent, il est important que la composition selon l'invention, qui contient les contaminants, microorganismes et biofilms suite au prélèvement, puisse permettre une analyse fiable, correcte et représentative de la population prélevée sans que ladite composition après prélèvement n'interfère avec les analyses ultérieures.
L'invention se rapporte donc également à un kit d'échantilonnage, de décrochage, de prélèvement et de conservation, de microorganismes (à l'état vivant ou revivifiable) en vue d'analyses de laboratoire ultérieures.
Ce kit comprend la composition décrite ci-dessus, et un moyen d'application contrôlée de celle-ci. Par exemple Un pulvérisateur calibré de manière à projeter Ia même quantité de composition, avec la même dispersion et en gouttelettes de volume identiques.
En d'autres termes, il est prévu par la présente invention un kit d'échantilonnage, de décrochage (d'une surface), de prélèvement et de conservation de microorganismes à l'état vivant ou revivifiable en vue d'analyses de laboratoire ultérieures comprenant : - Une composition d'échantilonnage (de décrochage et de prélèvement) de microorganismes selon la présente invention, - Qu moins un dispositif d'application contrôlée de cette composition d'échantilonnage (de décrochage et de prélèvement) sur lo surface ; - de préférence au moins un moyen de récolte stérile de ces microorganismes, - de préférence au moins un récipient stérile, par exemple un sachet stérile, comprenant une solution de conservation de microorganismes en vue d'analyses de laboratoire ultérieures.
De préférence, l'au moins un moyen de récolte stérile des microorganismes du kit selon Ia présente invention est un tissu, une lingette ou une éponge.
La solution de conservation, dans le contexte de la présente invention, comprend, de préférence, du polyoxyéthylène sorbitane et/ou un dérivé de phosphoglycéride (ex. de la lécithine) ; cette composition a, de préférence, comme fonction de neutraliser une quelconque potentielle activité biocide qui serait présente dans la composition d’échantilonnage, par exemple causée par la présence de conservateurs qui seraient toujours présents ou d'agents désinfectants accidentellement présents.
De préférence, la composition de conservation comprend un tampon phosphate (ex. pH 7, 25 MM) qui peut avantageusement comprendre en outre des sels, tels que le chlorure de magnésium et/ou le chlorure de calcium.
Cette solution de conservation peut avantageusement comprendre en outre un hydrolysat de protéine (ex. peptone) ou un composé riche en protéines, de manière à fournir des nutriments aux microorganismes prélevés et/ou à contrecarrer les effets délétères associés à une activité protéase résiduelle, si présente.
Cette solution de conservation comprend avantageusement des groupements thiols réducteurs, par exemples via des cystéines (sous forme réduite) et/ou du glutathion. Des thiols qui ne sont pas de cette nature sont également possibles, pour autant qu'ils restent compatibles avec le métabolisme des microorganismes. Lorsque le groupement thiol est la cystéine, il peut être présent via l'hydrolysat de protéines, par exemple un hydrolysat de protéines riche en cystéine et/ou où le potentiel réducteur a été assuré.
De préférence le dérivé de polyoxyéthylène sorbitane de ce kit est le monooléate de polyoxyéthylène sorbitane et/ou le dérivé de phosphoglycéride est Ia phosphatidylcholine.
Avantageusement, le dérivé de polyoxyéthylène sorbitane, lorsqu'il est présent, est présent à une teneur d'au moins 4 g/L, de préférence à une teneur d'au moins 4,3 g/L, préférentiellement à une teneur d'au moins 4,6 g/L, avantageusement à une teneur d'au moins 4,9 g/L. De même, le dérivé de phosphoglycéride , lorsqu'il est présent, est présent à une teneur comprise entre 0,5 et 3 g/L, de préférence à une teneur comprise entre 0,5 et 2,5 g/L, préférentiellement entre 0,5 et 2 g/L, avantageusement entre 0,5 et 1,5 g/L
De préférence, l'hydrolysat de protéines (peptone) est présent à une teneur d'au moins 10 g/L, de manière préférée au moins 11 g/L, de préférence au moins 12 g/L, préférentiellement au moins 13 g/L, avantageusement au moins 14 g/L de manière particulièrement avantageuse au moins 15 g/L.
L'invention se rapporte en outre à un procédé d'échantilonnage, de décrochage, de prélèvement et de conservation de microorganismes à l'état vivant ou revivifiable en vue d'analyses de laboratoire ultérieures comprenant les étapes suivantes : a) au moins une application contrôlée d'une composition d'échantilonnage, de décrochage et de prélèvement de microorganismes selon la présente invention, b) laisser agir cette composition d'échantilonnage (de décrochage) sur cette surface à prélever, c) déposer au moins un moyen de récolte de ces microorganismes sur cette surface à prélever, d) laisser imbiber ce moyen de récolte par cette composition d’échantilonnage (de décrochage), e) prélever stérilement ce moyen de récolte des microorganismes imbibé et le déposer dans au moins un récipient stérile, par exemple un sachet stérile comprenant une solution de conservation de microorganismes à l'état vivant ou revivifiable en vue d'analyses de laboratoire ultérieures.
Avantageusement, l'étape b} du procédé selon l'invention a lieu pendant une durée d'au moins 10 secondes, au moins 20 secondes, au moins 30 secondes, au moins 1 mn, de préférence d'au moins 2mn, préférentiellement d'au moins 3 mn, avantageusement d'au moins 4mn, de manière particulièrement avantageuse d'au moins 5 mn et, de préférence, de moins de 30 minutes, de préférence de moins de 15 ou 10 minutes.
De préférence, le procédé selon l'invention comprend en outre au moins une étape préliminaire de préchauffage de cette composition d'échantilonnage (de décrochage), de préférence à une température comprise entre 20 et 60 °C, préférentiellement entre 30 et 50 °C, avantageusement entre 40 et 50 °C.
De préférence, le procédé selon l'invention comprend en outre au moins une étape de stockage de ce récipient stérile contenant ce moyen de récolte imbibé, à une température inférieure à 15 °C, de préférence inférieure à 10°C, avantageusement inférieure à 5°C, telle que de 4 à 8°C. Alternativement, le stockage peut être réalisé à moins de O°C, pour autant que l'activité microbiologique puisse être restaurée ultérieurement.
De préférence l'application contrôlée d'un volume de lo composition d'échantilonnage est une application d'une teneur comprise entre 0,5 et 2 gramme(s) de composition (par 100 cm’), de préférence d'une teneur comprise entre 0,7 et 18 gramme de composition par application, préférentiellement entre 0,9 et 1,6 gramme decomposition (par 100 cm’), avantageusement entre 1,1 et 1,4 gramme de composition (par 100 cm’).
De préférence, le moyen de récolte stérile est Un tissu, une lingette, un swap, un racloir, un écouvillon ou une éponge.
Avantageusement, les analyses ultérieures en laboratoire de l'étape e) décrite ci-dessus comprend un ou plusieurs des tests suivants : un test impliquant une étape de culture des microorganismes ;
un test biochimique (par exemple l'ATP-métrie, la détection de NADH, la mesure de l'activité catalase) ; un test comprenant une étape de reconnaissance immunologique, et un test de biologie moléculaire (une étape de test impliquant des marqueurs et/ou des sondes et/ou des amorces génétiques et une combinaison de ces étapes, séquençage).
Comme ce sera décrit ci-dessous, ces tests sont faussés par les solutions de prélèvement de l'art antérieur, mais sont à présent possibles lorsque les solutions de prélèvement de la présente invention sont utilisées, même pour les microorganismes les plus délicats, tels que
Listeria sp., ou les microorganismes présents en faible quantité (CFU).
D'autres caractéristiques, détails et avantages de l'invention ressortiront de la description donnée ci-après, à titre non limitatif et en faisant référence aux exemples.
Exemples.
Les premiers obstacles que les inventeurs ont dus surmonter portent sur le manque de représentativité des biofilms générés au laboratoire, par rapport à la situation sur site. Ceci complique en particulier les choix des activités enzymatiques (nature des enzymes, leurs abondances, présence de composés potentiellement délétères). Sur base de ces tests préliminaires, les inventeurs ont donc décidé que toutes les compositions qui seraient formulées au laboratoire devraient être testées en conditions réelles : de nombreuses formulations prometteuses àléchele du laboratoire sont inutilisables, en pratique, et les inventeurs n'ont pas trouvé de directives publiées, même à l'aide de leur expertise, qui aurait pu les aider à identifier les compositions fonctionnelles.
Cependant, une fois qu'une formulation complexe a été identifiée, telles celles décrites ci-dessous, certains composés de cette formulation peuvent être remplacés par d'autres, ce qui est facilement testable au laboratoire (efficacité, absence de toxicité pour les microorganismes), puis sur site, ou directement sur site. Ainsi, dans une certaine mesure, une protéase est substituable par une autre, en particulier lorsque celles-ci sont des sérine-protéases (subtilisines). Cependant, lorsque des compositions enzymatiques commerciales sont utilisées, les inventeurs ont remarqué que, selon les fournisseurs, et même les marques, différents additifs risquent d'interférer avec les analyses de microbiologie, ainsi les variations de la composition de la présente invention sont possibles, grâce à l'enseignement de la présente invention, mais nécessitent de suivre les règles de prudence décrites dans la présente invention.
Example 1
Une société de transformation de viande située en Belgique a été sélectionnée pour cette étude. Toutes les installations ont été préalablement nettoyées et désinfectées avant de réaliser les prélèvements.
Le protocole de décrochage est appliqué avec une limitation des actions mécaniques pouvant introduire une erreur de reproductibilité ; il comporte les étapes suivantes :
Parcourir rapidement (screener) les zones à prélever avec la lampe UV et kit de détection BDK (Realco) ;
Préchauffer la solution de prélèvement à 45°C ;
Déposer deux gabarits sur les surfaces à prélever (afin de délimiter une surface de 10cm sur 10 cm): eau physiologue vs composition de prélèvement (14 sprays pour couvrir Ia zone ;1,2 g /spray) ;
Laisser agir 5 minutes Ia solution de prélèvement ;
Déposer la lingette stérile sur les deux zones de prélèvement et laisser imbiber ;
Prélever stérilement à l'aide de pince et déposé dans un sachet stérile de transport ;
Stocker les échantillons dans des bacs frigos à 4°C ;
Évaluer après les deux zones avec la lampe et le BDK.
Au total 6 zones de prélèvements ont été incluses dans cette étude : Zone 1 table ronde ; Zone 2 couvercle pour table poubelle ; Zone 3 bac inox; Zone 4 table scie; Zone 5 surface plastique ; Zone 6 découenneuse.
Dans ces 6 zones, la composition de prélèvement comprenant des enzymes (dont une subtilisine, activité équivalente à 10
Unités Anson/kg) et des détergents (environ 10% en poids) permet une bien meilleure récupération des microorganismes, tant en microbiologie classique que par mesure ATP (2G) ou par culture. Réciproquement, il ne resta plus de microorganismes sur les surfaces où la solution de prélèvement a été placée, contrairement à la surface traitée par l'eau physiologique. La différence est surtout marquée au niveau de la microbiologie classique, par rapport à l'ATP 2G ou par test impliquent une étape de culture (peu de différence remarquées).
Les inventeurs ont reproduit l'exemple, pour y inclure des analyses métagénomiques, tout en variant le temps de contact de la composition de prélèvement sur la surface (30 secondes et 5 minutes). A nouveau, la composition enzymatique permet un bien meilleur prélèvement (ex. 100 fois mieux en microbiologie classique et 14 fois mieux en OPCR). Les bactéries retrouvées montrent une proportion accrue en
Pseudomonas.
Exemple 2 - addition d'une solution de conservation ;
Salmonella
Les inventeurs, suspectant des effets délétères associés à la composition de prélèvement, ont cherché à déterminer dans quelle mesure une solution adjuvante pouvait contrecarrer ceux-ci, dans le cadre de tests visant à déterminer la présence de Salmonella et/ou de
Listeria, soit par PCR ou OPCR, soit en utilisant des kits de détection commerciaux, par exemple ceux de BioMérieux. Pour ce faire, une solution dite ‘de conservation’ a été testée (en g/l) : Protéines (extrait de viande de boeuf ; 5) ; Peptone, 10 ; Polysorbate 80 (Tween 80 ; 5) ; Lecithin 0,7 ; NaCl, 5. En outre, divers inhibiteurs de sérine protéase ont été utilisés, dons le but de neutraliser l'activité de la subtilisine de la solution de prélèvement.
La première série de tests a été réalisée en laboratoire, où des quantités connues des bactéries (0,1 ml de 107 UFC/mI de Salmonella} ont été incubées soit dans une solution physiologique (100 ml), soit dans la composition de prélèvement de l'exemple 1 (6m! + 94 ml eau physiologique), soit dans la composition de l'exemple 1, avant que lo solution de conservation ne soit ajoutée (6 ml composition de prélèvement, 90 ml eau, 4 ml de la solution de conservation).
Lorsque 107 UFC/ml de Salmonella sont analysés (donc 104
UFC/ml dans le mélange final), les différentes situations sont compatibles avec l'identification du microorganisme au moyen d'analyses PCR ou du test Vidas® Salmonella. Cependant, une mise en évidence par le test
Vidas SLM® (bouillon culture, puis mesure spécifique par test antigénique et fluorescence ; ce test renseigne quant à l'absence ou à la présence de Salmonella) échoue lorsque la composition de prélèvement est présente, alors qu'il fonctionne lorsque les bactéries sont diluées dans l'eau physiologique ou lorsque la solution de conservation a été ajoutée.
En outre, dans cet exemple, les inventeurs considèrent que les concentrations en Salmonella sont élevées, ce qui ne représente pas nécessairement, voire rarement, la situation sur le terrain, où même 1 CFU doit être détecté.
Exemple 3 - addition d'une solution de conservation ; Listeria
Dans ce cas, les inventeurs ont remarqué que la solution enzymatique cause des problèmes au niveau de la détection (dénombrement et qPCR) ; ces problèmes sont réduits grâce à la solution de conservation, cependant le kit commercial Vidos® (LMX) ne fonctionne toujours pas.
En outre, lorsque la quantité de Listera ensemencée est réduite, le microorganisme n'est généralement plus détecté suite au mélange (Vidas LMX®, jamais ; Vidas LMO2®, pas à chaque fois) avec la composition de prélèvement, alors que la détection reste robuste lorsque le mélange a été effectué uniquement dans l'eau physiologique. Dans ce cas (volontairement extrême), Ia composition de conservation n'a pas amélioré la détection. Par prudence, les tests ont été reproduits et trois souches de Listeria ont été testée avec toujours les mêmes résultats ; il s'agit des souches ATCC 19114, NCTC 11994 et ATCC 13932.
En comparant tous les résultats, les inventeurs concluent que la composition de prélèvement ralentit Ia croissance de microorganismes (Listeria), problème qui est partiellement résolu par Ia composition de conservation. Par contre, la composition de prélèvement interfère avec certains tests microbiologiques en aval. Vu que la nature et l'abondance des microorganismes sur une surface à tester est inconnue à l'avance, les inventeurs concluent donc que les compositions des exemples 1 à 3 sont utiles, mais gagneraient à être encore améliorées.
Exemple 4 - Identifications des composés délétères
Les inventeurs ont recherché dans les différentes enzymes commerciales si certains composés interféraient avec les tests microbiologiques en aval. Les inventeurs ont remarqué que la présence de composés tels que le phénoxyéthanol, le sorbate de potassium ou des dérivés de thiazolinone est assez répandue. Ainsi, les inventeurs ont sélectionné des compositions enzymatiques qui sont dépourvues de tels composés, ou les plus pauvres possibles, même si les inventeurs ont retrouvé des concentrations importantes de 2-phénoxyéthanol dans de nombreuses compositions enzymatiques commerciales. Parmi les composés recherchés se retrouvent le Bronopol, le triclosan, l'idocarb, le chlorhexidine, le DCOIT, le BIT, le OIT, le CIT, le MIT, l'éthyl-parabène, le méthylparabène, le butythylparabène, le phénylparabène, l'isoproylparabène, l'isobutylparabène, le propylparabène, l'acide salisyllique, l'acide 4-hydroxybenzoïque, l'acide 4-méthylbenzoïque, l'acide benzoïque, l'acide sorbique, l'acide déhydroacétique, le 1- phénoxypropane-2-ol, le 1,2dioromo-2,4-dicyonobutane, le 2-
hydroxybiphényle, le 2-phénoxyéthanol (le plus abondamment retrouvé, parfois jusqu'à 0,4% en poids), l'alcool bensylique et le chlorophenesin.
Exemple comparatif 1
Suspectant une interférence entre les protéases de lo composition de prélèvement et les enzymes ou les anticorps des tests en aval, les inventeurs ont testé l'effet de l'addition d'inhibiteurs de protéases dans la solution de conservation (cfr exemple 3), tout en évitant au maximum les compositions enzymatiques commerciales comprenant des composés identifiés comme délétères (cfr. exemple 4).
Différentes manières d'appliquer l'inhibiteur de protéase ont été testées. La protéase choisie étant une subtilisine ou la trypsine, deux inhibiteurs de serine-protéase ont été testés : le PMSF et l'AEBSF.
Le PMSF a permis une bonne inhibition des activités protéolytiques des sérine-protéases testées. Par contre, l'AEBSF n'a inhibé que la trypsine. Des tests de mesure où Listeria (les 3 souches ci-dessus ont été testées) est mise en contact avec une composition comprenant une subtilisine, puis l'AEBSF en concentration suffisante pour causer l'inhibition complète de la subtilisine ont montré que différents tests microbiologiques donnaient des valeurs plus basses, voire même ne détectaient pas Listeria dans les conditions du test, au contraire du contrôle sans les enzymes ou lorsque le PMSF est ajouté.
Ainsi, les inventeurs ont choisi d'incorporer le PMSF dans la solution de conservation à tester, malgré les inconvénients de cette molécule.
Malheureusement, même dans ces conditions, le test Vidas®
LMX ne permet pas de mettre en évidence la présence de Listeria monocytogenes.
Exemple 5 - Optimisation de la composition de prélèvement
Les inventeurs ont alors décidé de tester l'efficacité d'une composition de prélèvement fortement diluée et évitant autant que possible les composés identifiés comme délétères. En outre, les activités enzymatiques sont réduites, tout comme la teneur en détergent. Les détergents sont choisis après des tests au laboratoire pour leur compatibilité avec la vie des microorganismes, y compris de Listeria, qui a été identifiée comme plus sensible.
Tout d'abord, avec des concentrations en détergent de 10% en poids, même en présence d'activité enzymatique faible, en présence de teneur minimales en agents conservateurs (ex. non-détectables pour la quasi-totalité ; phénoxyéthanol inférieur à 4 ppm) et en absence de
PMSF, les tests de détection de Listeria, de type Vidas®, ne fonctionnent pas bien (sous-quantification massive), ou pas de manière reproductible.
Même des tests moins spécifiques ne fonctionnent pas lorsqu'une culture de Listeria est soumise à ces différents traitements.
Ainsi, tous les paramètres de la composition doivent être vérifiés, avec le problème qu'une trop forte dilution des activités enzymatiques risque de ne plus permettre le décrochage des microorganismes, alors qu'une trop forte dilution des détergents risque de ne plus permettre une application homogène de la composition ou un bon contact avec le biofilm. Ainsi, les inventeurs ont remarqué que, outre la quantité des composants, leur nature devait être reconsidérée.
Une formulation diluée a été testée comprenant environ 20% en poids de glycérol, environ 0,03% en poids d'un détergent anionique de type laureth sulfate (de sodium), 0,4% en poids de séquestrant (carboxyméthylinuline) ; 0,4% en poids de glycolate de sodium; 0,04 % en poids d'une subtilisine (activité 1 Unité Anson], ainsi qu'une lipase ; une amylase, une cellulase et une mannanase. Les inventeurs ont sélectionné des enzymes, ici des enzymes commerciales, dépourvues d'agents conservateurs tels que le sorbate de potassium, le MIT, l'OIT, le BIT et le CIT.
Lorsque c'était possible, les inventeurs ont utilisé des enzymes commerciales dépourvues de phénoxyéthanol (cellulase et mannanase), ou à faible teneur en cette molécule (subtilisine ; 4 g/kg de la formulation enzymatique, lipase ; 0,249 g/kg et amylase ; 0,233 g/kg). Les enzymes autres que la subtilisine ont été ajoutées dans des teneurs pondérales comprises entre 0,1 et 0,5% (poids de la composition enzymatique :poids total) et la quantité d'enzyme est typiquement de 1 à 10% en poids par rapport à la formulation commerciale.
Suite à l'utilisation de cette composition, la présence de
Listeria est détectée, et le test Vidas® LMX pour Listeria est, enfin, positif et reproductible. Les inventeurs ont remarqué en outre que, dans ces conditions diluées, l'ajout de l'inhibiteur de protéase PMSF n'est pas nécessaire, et même réduit Ia propagation de Listeria.
Les inventeurs considèrent que la concentration des enzymes autres que les protéases (ici, une subtilisine) peuvent encore être quelque peu réduites, ex. la concentration la plus faible qui permet le détachement, tout comme celles de l'agent séquestrant. A la lumière de la présente invention, ceci peut se tester au laboratoire sur les 3 souches de Listerig ou dans d'autres modèles, y compris, de préférence, plus complexes.
Les inventeurs ont ensuite testé une éventuelle synergie avec la solution de conservation (cfr. exemples 2 et 3) : vu que les résultats sont déjà très bons, l'amélioration associée à l'ajout de la solution de conservation est marginale, mais elle a été cependant intéressante dans le cas d'un test qui comprend une propagation suivie d'une détection par PCR.
Il est bien entendu que la présente invention n'est en aucune façon limitée aux formes de réalisations décrites ci-dessus et que bien des modifications peuvent y être apportées sans sortir du cadre des revendications annexées.
Claims (18)
1. Une composition sterile d’echantilonnage de microorganismes potentiellement présents sur une surface comprenant : - Un ou plusieurs tensioactifs, present(s) à une teneur d'au moins 0,02% en poids et au plus de 1,5% en poids par rapport au poids de ladite composition (somme des poids en tensioactifs : poids de la composition), ledit ou lesdits plusieurs tensioactifs comprenant un tensioactif anionique ; - QU moins deux enzymes choisies dans le groupe constitué d'une (sérine) protéase, une polysaccharidase, une laccase, une lipase, une cellulose et une mannanase ; - QU moins un agent stabilisant, de préférence présent à une teneur d'au moins 15% par rapport au poids de ladite composition, ledit stabilisant étant choisi dans le groupe des polyols, - Au moins un agent séquestrant.
2. Composition d'échantillonnage selon la revendication 1, comprenant au moins un tensioactif anionique choisi dans le groupe constitué des alkyle éther sulfate, de préférence un sel de laureth sulfate, alkyle sulfate, alkyloenzène sulfonate et les savons.
3. Composition d'échantillonnage selon la revendication 1 oularevendication 2, dans laquelle l'agent séquestrant est choisi parmi le glucono-delta-lactone, le gluconate de sodium, le gluconate de potassium, le gluconate de calcium, l'acide citrique, l'acide phosphorique, l'acide tartrique, l'acétate de sodium, le sorbitol, la carboxyméthyl inuline et les mélanges de ceux-ci.
4. Composition d'échantillonnage selon une quelconque des revendications précédentes 1 à 3 comprenant au moins 50% (en poids) en eau, de préférence au moins 60% (en poids) en eau.
5. Composition d'échantilonnage selon l'une quelconque des revendications précédentes 1 à 4, dans laquelle l'agent stabilisant est le glycérol.
6. Composition d'échantilonnage selon l'une quelconque des revendications précédentes 1 à 5 comprenant au moins une protéase, de préférence une sérine-protéase, avantageusement en concentration équivalente à 0,5 à 5 Unité Anson de l'Alcalase 2,5 DX par kg de ladite composition, de manière plus préférée en concentration équivalente à environ 1 Unité Anson de l'Alcalase 2,5 DX par kg de ladite composition.
7. Composition d'échantilonnage selon l'une quelconque des revendications précédentes 1 à 6, ayant été stérilisée par une méthode physique, de préférence choisie parmi l'iradiation aux rayons gamma, l'iradiation pas faisceau d'électrons et la filtration stérilisante.
8. Composition d'échantilonnage selon l'une quelconque des revendications précédentes 1 à 7, étant sous forme de liquide pulvérisable.
9. Composition d’échantilonnage selon l’une quelconque des revendications précédentes 1 à 8 comprenant moins de 100 ppm de 2-phénoxyéthanol (partie pour million: poids du 2- phénoxyéthanol :poids de la composition), de préférence moins de 50 ppm de 2-phénoxyéthanol, de préférence moins de 20 ppm de 2- phénoxyéthanol, de préférence moins de 10 ppm de 2-phénoxyéthanol, de préférence moins de 5 ppm de 2-phénoxyéthanol, moins de 4 ppm de 2-phénoxyéthanol, voire moins de 3 ppm de 2-phénoxyéthanol.
10, Composition d'échantilonnage selon l'une quelconque des revendications précédentes | à 9 comprenant de 0,02 à 0,5% de tensioactif(s), de préférence ledit ou lesdits tensioactif(s) consistant essentiellement en un ou plusieurs tensioactif(s) anioniques.
11. Kit d'échantilonnage de microorganismes potentiellement présents sur des surfaces, à l'état vivant ou revivifiable, pour la détection et l'analyse en laboratoire ultérieures comprenant : - une composition d'échantilonnage de microorganismes de surface, de préférence une surface industrielle telle qu'une surface alimentaire, une surface industrielle comme par exemple l'industrie pharmaceutique, le milieu des soins de santé ou la pétrochimie, selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, - Qu moins un dispositif d'application contrôlée de ladite composition d'échantilonnage sur ladite surface.
12. Kit d'échantilonnage selon la revendication 11 comprenant en outre au moins Un récipient stérile, par exemple un sachet stérile.
13. Kit d'échantillonnage selon la revendication 11 ou 12 dans lequel la composition d'échantilonnage comprend une sérine protéase et ledit kit comprenant en outre une solution de conservation d'un échantillon prélevé, ladite solution de conservation comprenant un hydrolysat de protéines (de la peptone)} et/ou un inhibiteur de conservateur choisi parmi le polyoxyéthylène sorbitane et/ou un dérivé de phosphoglycéride.
14. Kit d'échantilonnage selon une quelconque des revendications précédentes 11 à 13, comprenant en outre un moyen de récolte stérile des microorganismes, de préférence un tissu, une lingette ou une éponge.
15. Procédé d'échantilonnage de microorganismes sur des surfaces, à l'état vivant ou revivifiable, pour la détection et l'analyse en laboratoire ultérieures comprenant les étapes suivantes : a) au moins une application contrôlée, de préférence une pulvérisation d'un volume contrôlé, de la composition d'échantilonnage de microorganismes selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, sur Une surface à prélever, b) laisser agir ladite composition sur ladite surface à prélever pendant une durée contrôlée, c) mettre en contact au moins un moyen de récolte stérile desdits microorganismes sur ladite surface à prélever, d) laisser imbiber de manière contrôlée ledit au moins un moyen de récolte stérile par ladite composition, e) prélever stérilement ledit au moins un moyen de récolte des microorganismes imbibé et le déposer dans au moins un récipient stérile, par exemple un sachet stérile comprenant une solution de conservation de l'échantillon prélevé comprenant un hydrolysat de protéines, un inhibiteur de protéase et/ou un inhibiteur de conservateur étant le polyoxyéthylène sorbitane et/ou un dérivé de phosphoglycéride , f) effectuer au moins un test de détection de microorganismes, ledit au moins un test de détection parmi un test impliquant une étape de culture des microorganismes, un test biochimique, un test comprenant une étape de reconnaissance immunologique, et un test de biologie moléculaire.
16. Utilisation de la composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 10 ou du kit selon l'une quelconque des revendications 11 à 14 pour la détection d'une contamination du genre Salmonella sur des surfaces, de préférence du genre Salmonella enterica et/ou Salmonella bongori.
17. Utilisation de la composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 10 ou du kit selon l'une quelconque des revendications 11 à 14 pour la détection d'une contamination du genre Listeria sur des surfaces, de préférence du genre Listeria monocytogenes.
18. Utilisation de la composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 10 ou du kit selon l'une quelconque des revendications 11 à 14 pour la détection d'une contamination du genre Pseudomonas sur des surfaces, de préférence du genre Pseudomonas aeruginosa.
19, Utilisation de la composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 10 ou du kit selon l'une quelconque des revendications 11 à 14 pour la détection d'une contamination du genre Staphylococcus sur des surfaces, de préférence du genre
Staphylococcus aureus.
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
BE20225481A BE1030650B1 (fr) | 2022-06-20 | 2022-06-20 | Composition de decrochage et de prelevement de microorganismes |
PCT/EP2023/066578 WO2023247502A1 (fr) | 2022-06-20 | 2023-06-20 | Composition de decrochage et de prelevement de microorganismes |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
BE20225481A BE1030650B1 (fr) | 2022-06-20 | 2022-06-20 | Composition de decrochage et de prelevement de microorganismes |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
BE1030650A1 true BE1030650A1 (fr) | 2024-01-22 |
BE1030650B1 BE1030650B1 (fr) | 2024-01-29 |
Family
ID=82404361
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
BE20225481A BE1030650B1 (fr) | 2022-06-20 | 2022-06-20 | Composition de decrochage et de prelevement de microorganismes |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
BE (1) | BE1030650B1 (fr) |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE10304331A1 (de) | 2003-02-04 | 2004-08-12 | Henkel Kgaa | Enzymatische Entfernung von Biofilmen auf Haushaltsoberflächen |
EP2243821A1 (fr) | 2009-04-20 | 2010-10-27 | Realco SA | Produit et procédé d'élimination des biofilms |
EP2537601A1 (fr) | 2011-06-24 | 2012-12-26 | Realco | Trousse et procédé de détection de biofilms |
WO2018002013A1 (fr) | 2016-06-29 | 2018-01-04 | Realco | Support imprégné d'au moins une composition pour le prélèvement de microorganismes présents sur une surface |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE4110764A1 (de) * | 1991-04-03 | 1992-10-08 | Weigert Chem Fab | Verfahren zum entfernen von staerkehaltigen verunreinigungen von geschirr und hierfuer geeignete tensidkonzentrate |
JP3686434B2 (ja) * | 1993-10-01 | 2005-08-24 | 千寿製薬株式会社 | コンタクトレンズ用剤の安定化方法 |
US20080248558A1 (en) * | 2004-09-10 | 2008-10-09 | Novozymes A/S | Methods For Preventing, Removing, Reducing, or Disrupting Biofilm |
JP5466782B1 (ja) * | 2013-07-09 | 2014-04-09 | アムテック株式会社 | 洗浄剤組成物 |
-
2022
- 2022-06-20 BE BE20225481A patent/BE1030650B1/fr active IP Right Grant
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE10304331A1 (de) | 2003-02-04 | 2004-08-12 | Henkel Kgaa | Enzymatische Entfernung von Biofilmen auf Haushaltsoberflächen |
EP2243821A1 (fr) | 2009-04-20 | 2010-10-27 | Realco SA | Produit et procédé d'élimination des biofilms |
EP2537601A1 (fr) | 2011-06-24 | 2012-12-26 | Realco | Trousse et procédé de détection de biofilms |
WO2018002013A1 (fr) | 2016-06-29 | 2018-01-04 | Realco | Support imprégné d'au moins une composition pour le prélèvement de microorganismes présents sur une surface |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
CAS , no. 70967-97-4 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
BE1030650B1 (fr) | 2024-01-29 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP3341461B1 (fr) | Support imprégné d'au moins une composition pour le prélèvement de microorganismes présents sur une surface | |
Macarisin et al. | Survival of outbreak, food, and environmental strains of Listeria monocytogenes on whole apples as affected by cultivar and wax coating | |
EP2789692B1 (fr) | Méthode de mesure de cellules et réactif pour la mesure des cellules | |
FR2732037A1 (fr) | Procede de detection de microorganismes par separation et culture sur un systeme gelifie, systeme gelifie et necessaire de dosage pour mettre en oeuvre ce procede, utilisation en microbiologie | |
BE1023894B1 (fr) | Composition comprenant au moins un composant détergent et au moins un composant enzymatique pour l'élimination de biofilms | |
BE1030645B1 (fr) | Methode de detection de microorganismes | |
US20100279388A1 (en) | Agent for treating mildew and method for treating mildew | |
BE1030650A1 (fr) | Composition de decrochage et de prelevement de microorganismes | |
WO2023247502A1 (fr) | Composition de decrochage et de prelevement de microorganismes | |
BE1030647B1 (fr) | Procede d'echantillonnage de microorganismes sur des surfaces industrielles agro-alimentaires | |
BE1030646A1 (fr) | Kit de prélèvement comprenant une solution de conservation pour la collecte de microorganismes | |
EP3476406B1 (fr) | Kit de détection des contaminations résiduelles sur des dispositifs médicaux | |
EP2348867B1 (fr) | Composition et procede pour le traitement de la cercosporiose du bananier | |
Wirtanen et al. | Sanitation in dairies | |
Ogodo et al. | Principles of applied microbiology and biotechnology: Technique for the screening of antimicrobial herbs | |
CA3134894A1 (fr) | Billes de verre fonctionnalisees, leur utilisation pour capter des micro-organismes et les dispositifs correspondants | |
EP2789682A1 (fr) | Procédé d'élimination de biofilms pour le nettoyage d'instruments médicaux, en particulier pour lutter contre les maladies nosocomiales | |
CA2807247A1 (fr) | Composition desinfectante | |
Mendez Sosa | Development of Listeria monocytogenes biofilms in a CDC biofilm reactor and investigation of effective strategies for biofilm control in food processing environments | |
Karaca et al. | Evaluation of Clean-in-Place Agents on the Removal of Thermophilic Biofilms Formed under Partially Simulated Conditions Associated with the Dairy Industry. | |
FR2677373A1 (fr) | Detection de pesticides de la famille des organophosphores et/ou des carbamates, en milieu aqueux. | |
De Jesus et al. | Reduction of Bacillus cereus Biofilms on Stainless Steel Surfaces by Pestalotiopsis sp. Culture Crude Extract | |
Forauer | Biofilm Sanitizer Tolerance of Vermont Dairy Listeria monocytogenes | |
WO2023021119A1 (fr) | Methode de controle d'un procede de decontamination | |
Madheswaran et al. | Research Article Biofilm Formation and its Susceptibility Testing of Myroides odoratimimus SKS05-GRD Using MBECTM High-throughput Assay |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
FG | Patent granted |
Effective date: 20240129 |