BE1029278B1 - Device for detecting the presence of at least one target DNA and/or at least one target RNA in a sample, in particular in a liquid sample - Google Patents
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Abstract
La présente invention porte sur un dispositif et sur un procédé pour détecter la présence d’au moins un ADN cible et/ou d’au moins un ARN cible dans un échantillon, en particulier dans un échantillon liquide.The present invention relates to a device and a method for detecting the presence of at least one target DNA and/or at least one target RNA in a sample, in particular in a liquid sample.
Description
+ BE2021/5267 Dispositif pour detecter la presence d’au moins un ADN cible et/ou d’au moins un ARN cible dans un échantillon, en particulier dans un échantillon liquide La présente invention porte sur un dispositif et sur un procédé pour détecter la présence d’au moins un ADN cible et/ou d'au moins un ARN cible dans un échantillon, en particulier dans un échantillon liquide. Plus particulièrement, la présente invention porte sur un dispositif pour détecter la présence d'au moins un ADN cible et/ou d’au moins un ARN cible dans un échantillon biologique, en particulier dans un échantillon biologique liquide.+ BE2021/5267 Device for detecting the presence of at least one target DNA and/or at least one target RNA in a sample, in particular in a liquid sample The present invention relates to a device and to a method for detecting the presence of at least one target DNA and/or at least one target RNA in a sample, in particular in a liquid sample. More particularly, the present invention relates to a device for detecting the presence of at least one target DNA and/or at least one target RNA in a biological sample, in particular in a liquid biological sample.
En d’autres termes, la présente invention porte sur un dispositif et sur un procédé pour détecter la présence d’au moins un acide nucléique cible dans un échantillon, en particulier dans un échantillon liquide.In other words, the present invention relates to a device and a method for detecting the presence of at least one target nucleic acid in a sample, in particular in a liquid sample.
Dans le cadre de la présente invention, les termes « acide nucléique » incluent l'acide désoxyribonucléique (ADN) et l'acide ribonucléique cible (ARN). Les différentes formes d’ADN et d’ARN sont également couvertes par les termes « acide nucléique ».As used herein, the terms "nucleic acid" include deoxyribonucleic acid (DNA) and target ribonucleic acid (RNA). The different forms of DNA and RNA are also covered by the term “nucleic acid”.
Un dispositif selon l'invention trouve de nombreuses applications dans les domaines de la santé, notamment pour détecter, chez un individu au départ duquel est simplement prélevé un échantillon, la présence d’au moins un ADN cible et/ou d'au moins un ARN cible indiquant que l'individu souffre d’une ou de plusieurs pathologies ou d’une ou de plusieurs maladies données. Il peut par exemple s'agir d’une pathologie ou d’une maladie virale (hépatites virales, ...) ou d’une pathologie ou d’une maladie bactérienne (méningite, …) ou encore d'une pathologie ou d’une maladie parasitaire (paludisme, …).A device according to the invention finds numerous applications in the fields of health, in particular for detecting, in an individual from whom a sample is simply taken, the presence of at least one target DNA and/or of at least one Target RNA indicating that the individual suffers from one or more pathologies or from one or more given diseases. It may for example be a pathology or a viral disease (viral hepatitis, etc.) or a pathology or a bacterial disease (meningitis, etc.) or even a pathology or a parasitic disease (malaria, etc.).
Des dispositifs de détection d’ADN cible ou d’ARN cible sont connus dont certains permettent la réalisation d’une amplification d’ADN cible ou d’ARN cible pour obtenir des amplicons de l'ADN cible ou de l'ARN cible (par exemple par amplification isothermique à médiation par boucles [LAMP] ou par amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse [RT-LAMP]), en présence d’un agent présentant des propriétés oxydo-réductrices et étant apte à se lier aux amplicons d’ADN cible ou d’ARN cible : on parle alors de mesures électrochimiques utilisant un indicateur redox. Un tel dispositif connu de l’état de la technique peut être constitué d’un réceptacle destiné à contenir un échantillon prétraité et étant associé à des électrodes permettant la réalisation de mesures de type électrochimique au sein de l’échantillon prétraité afin d’y détecter la présence d’ADN cible ou d’ARN cible.Devices for detecting target DNA or target RNA are known, some of which allow amplification of target DNA or target RNA to obtain amplicons of the target DNA or of the target RNA (for example by isothermal amplification mediated by loops [LAMP] or by isothermal amplification mediated by reverse transcription loop [RT-LAMP]), in the presence of an agent having redox properties and being capable of binding to amplicons of Target DNA or target RNA: this is referred to as electrochemical measurements using a redox indicator. Such a device known from the state of the art can consist of a receptacle intended to contain a pretreated sample and being associated with electrodes allowing the realization of measurements of the electrochemical type within the pretreated sample in order to detect therein the presence of target DNA or target RNA.
Typiquement, avec les dispositifs actuels de détection d’ADN cible ou d’ARN cible, avant de placer un échantillon prélevé chez un individu dans un tel réceptacle et donc de pouvoir procéder à une mesure de type électrochimique, l'échantillon doit être prétraité, c'est-à-dire qu’il doit être mis en solution en présence de réactifs permettant de réaliser une amplification dudit ADN cible ou dudit ARN cible et en présence d’un agent présentant des propriétés oxydo- réductrices et étant apte à se lier aux amplicons d’ADN cible ou d’ARN cible. En pratique, l’agent présentant des propriétés oxydo-réductrices et étant apte à se lier aux amplicons d’ADN cible ou d’ARN cible interagit à la fois avec les amplicons obtenus et avec les électrodes pour permettre d’effectuer une mesure électrochimique et de déterminer si l’échantillon prélevé chez l'individu contient ou non PADN cible ou PARN cible et donc de déterminer si l'individu souffre d’une pathologie ou d’une maladie donnée (ciblée). Concrètement, en présence d’amplicons obtenus si de l'ADN cible et/ou de l'ARN cible est/sont présent(s) dans l’échantillon, une certaine quantité d'agent présentant des propriétés oxydo- réductrices se lie aux amplicons d’ADN cible ou d’ARN cible et interagit donc moins / n’interagit plus avec les électrodes, ce qui se traduit par une modification, en particulier par une réduction, du signal mesuré au niveau des électrodes.Typically, with current devices for detecting target DNA or target RNA, before placing a sample taken from an individual in such a receptacle and therefore being able to carry out an electrochemical type measurement, the sample must be pretreated, that is to say that it must be placed in solution in the presence of reagents making it possible to carry out an amplification of said target DNA or of said target RNA and in the presence of an agent having oxido-reducing properties and being able to bind to target DNA or target RNA amplicons. In practice, the agent having redox properties and being capable of binding to the target DNA or target RNA amplicons interacts both with the amplicons obtained and with the electrodes to make it possible to carry out an electrochemical measurement and to determine whether or not the sample taken from the individual contains target DNA or target PARN and therefore to determine whether the individual suffers from a given (targeted) pathology or disease. Concretely, in the presence of amplicons obtained if target DNA and/or target RNA is/are present in the sample, a certain quantity of agent exhibiting redox properties binds to the amplicons. of target DNA or target RNA and therefore interacts less / no longer interacts with the electrodes, which results in a modification, in particular a reduction, of the signal measured at the level of the electrodes.
Malheureusement, si de tels dispositifs sont adaptés à des analyses réalisées en laboratoire, ils sont peu adéquats voire totalement inadaptés pour une détection d’ADN cible et/ou d’ARN cible devant être effectuée sur le terrain. En effet, puisque le prétraitement/la préparation d’un échantillon prélevé chez un individu requiert toujours la mise en œuvre de nombreux réactifs, l'opérateur doit non seulement disposer de matériel (réactifs, solvants, pipettes, dispositif de chauffage, ...) mais aussi réaliser de nombreuses manipulations délicates comme par exemple des dilutions qui se doivent d’être précises. Il est évident que ceci est particulièrement contraignant sur le terrain et qu’il est même parfois tout simplement impossible d’assurer une préparation correcte de l’échantillon prélevé, ce qui peut mener à des mesures électrochimiques erronées (faux négatifs et/ou présence de contaminants par exemple). Par ailleurs, les réactifs mis en œuvre sont généralement sensibles aux conditions environnementales (températures élevées, humidité, …) et/ou dangereux à manipuler, ce qui rend d'autant plus contraignantes les détections d’ADN cible et/ou d’ARN cible effectuées sur le terrain.Unfortunately, if such devices are suitable for analyzes carried out in the laboratory, they are not very suitable or even totally unsuitable for detecting target DNA and/or target RNA to be carried out in the field. Indeed, since the pretreatment/preparation of a sample taken from an individual always requires the implementation of numerous reagents, the operator must not only have equipment (reagents, solvents, pipettes, heating device, etc.) ) but also perform many delicate manipulations such as dilutions which must be precise. It is obvious that this is particularly restrictive in the field and that it is even sometimes quite simply impossible to ensure correct preparation of the sample taken, which can lead to erroneous electrochemical measurements (false negatives and/or presence of contaminants, for example). Furthermore, the reagents used are generally sensitive to environmental conditions (high temperatures, humidity, etc.) and/or dangerous to handle, which makes detection of target DNA and/or target RNA all the more restrictive. carried out in the field.
Il existe donc actuellement un réel besoin de procurer un dispositif pour détecter la présence d’ADN cible et/ou d’ARN cible dans un échantillon, en particulier dans un échantillon liquide, qui permette de s'affranchir au moins partiellement de ces problématiques lorsqu’une détection d’un ou de plusieurs ADN cibles et/ou d’un ou de plusieurs ARN cibles nécessite d’être effectuée, en particulier lorsqu'elle nécessite d’être effectuée sur le terrain.There is therefore currently a real need to provide a device for detecting the presence of target DNA and/or target RNA in a sample, in particular in a liquid sample, which makes it possible to at least partially overcome these problems when detection of one or more target DNAs and/or of one or more target RNAs needs to be carried out, in particular when it needs to be carried out in the field.
Pour résoudre ces problèmes, il est prévu, suivant l'invention, un dispositif pour détecter la présence d’au moins un ADN cible et/ou d’au moins un ARN cible dans un échantillon, en particulier dans un échantillon liquide, ledit dispositif comprenant : - des réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP) dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible ; - une molécule non intercalante ou un composé non intercalant, en particulier une molécule non intercalante ou un composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible ; et - des électrodes agencées pour être en contact avec ledit échantillon pendant que ce dernier est en contact ou après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par bouclesTo solve these problems, provision is made, according to the invention, for a device for detecting the presence of at least one target DNA and/or at least one target RNA in a sample, in particular in a liquid sample, said device comprising: - reagents making it possible to carry out an amplification of said at least one target DNA and/or of said at least one target RNA to obtain amplicons of said at least one target DNA and/or of said at least one target RNA, for example performing loop-mediated isothermal amplification (LAMP) or performing reverse-transcription loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP) of said at least one target DNA and/or said at least one target RNA, to obtain amplicons of said at least one target DNA and/or of said at least one target RNA; - a non-intercalating molecule or a non-intercalating compound, in particular a non-intercalating molecule or a non-intercalating compound having redox properties, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA; and - electrodes arranged to be in contact with said sample while the latter is in contact or after the latter has been in contact with said reagents allowing the amplification of said at least one target DNA and/or of said at least a target RNA to obtain amplicons of said at least one target DNA and/or of said at least one target RNA, for example performing loop-mediated isothermal amplification
(LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP), et avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible, ledit dispositif comprenant intrinsèquement lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible et comprenant intrinsèquement ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible.(LAMP) or carrying out isothermal amplification mediated by reverse transcription loop (RT-LAMP), and with said non-intercalating molecule or with said non-intercalating compound capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA, said device intrinsically comprising said reagents allowing amplification of said at least one target DNA and/or said at least one target RNA and intrinsically comprising said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound, in particular said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound exhibiting oxidation-reduction properties, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA.
En d'autres termes, il est prévu, suivant l'invention, un dispositif pour détecter la présence d’au moins un acide nucléique cible dans un échantillon, en particulier dans un échantillon liquide, ledit dispositif comprenant : - des réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un acide nucléique cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un acide nucléique cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP) dudit au moins un acide nucléique cible, pour obtenir des amplicons dudit au moins un acide nucléique cible ; - une molécule non intercalante ou un composé non intercalant, en particulier une molécule non intercalante ou un composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible ; et - des électrodes agencées pour être en contact avec ledit échantillon pendant que ce dernier est en contact ou après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit au moins un acide nucléique cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un acide nucléique cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP), et avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant, en particulier avec laditeIn other words, there is provided, according to the invention, a device for detecting the presence of at least one target nucleic acid in a sample, in particular in a liquid sample, said device comprising: - reagents allowing the production an amplification of said at least one target nucleic acid to obtain amplicons of said at least one target nucleic acid, for example performing loop-mediated isothermal amplification (LAMP) or performing loop-mediated isothermal amplification reverse transcription (RT-LAMP) of said at least one target nucleic acid, to obtain amplicons of said at least one target nucleic acid; - a non-intercalating molecule or a non-intercalating compound, in particular a non-intercalating molecule or a non-intercalating compound having redox properties, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA; and - electrodes arranged to be in contact with said sample while the latter is in contact or after the latter has been in contact with said reagents allowing the realization of the amplification of said at least one target nucleic acid to obtain amplicons of said at least one target nucleic acid, for example performing loop-mediated isothermal amplification (LAMP) or performing reverse-transcription loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP), and with said non-intercalating molecule or with said non-intercalating compound, in particular with said
> BE2021/5267 molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, ledit dispositif comprenant intrinsèquement lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un acide nucléique cible et comprenant intrinsèquement ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices.> BE2021/5267 non-intercalating molecule or with said non-intercalating compound exhibiting oxido-reducing properties, said device intrinsically comprising said reagents allowing amplification of said at least one target nucleic acid and intrinsically comprising said non-intercalating molecule or said compound non-intercalating, in particular said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound having oxidation-reduction properties.
Selon un mode de réalisation, il est prévu, suivant l'invention, un dispositif pour détecter la présence d’au moins un ADN cible et/ou d’au moins un ARN cible dans un échantillon, en particulier dans un échantillon liquide, ledit dispositif comprenant : - des réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP) dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible ; - une molécule non intercalante ou un composé non intercalant, en particulier une molécule non intercalante ou un composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible ; - un élément chauffant électrique agencé pour chauffer ledit échantillon pendant que ce dernier est en contact ou après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP); et - des électrodes agencées pour être en contact avec ledit échantillon pendant que ce dernier est en contact ou après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de l’amplification duditAccording to one embodiment, there is provided, according to the invention, a device for detecting the presence of at least one target DNA and/or at least one target RNA in a sample, in particular in a liquid sample, said device comprising: - reagents making it possible to carry out an amplification of said at least one target DNA and/or of said at least one target RNA to obtain amplicons of said at least one target DNA and/or of said at least one target RNA, for example performing loop-mediated isothermal amplification (LAMP) or performing reverse-transcription loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP) of said at least one target DNA and/or said at least one target RNA, for obtaining amplicons of said at least one target DNA and/or of said at least one target RNA; - a non-intercalating molecule or a non-intercalating compound, in particular a non-intercalating molecule or a non-intercalating compound having redox properties, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA; - an electric heating element arranged to heat said sample while the latter is in contact or after the latter has been in contact with said reagents allowing the amplification of said at least one target DNA and/or said at least one RNA to be carried out target to obtain amplicons of said at least one target DNA and/or said at least one target RNA, for example performing loop-mediated isothermal amplification (LAMP) or performing transcription loop-mediated isothermal amplification reverse (RT-LAMP); and - electrodes arranged to be in contact with said sample while the latter is in contact or after the latter has been in contact with said reagents allowing the realization of the amplification of said
© BE2021/5267 au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP), et avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant, en particulier avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, ledit dispositif comprenant intrinsèquement lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un acide nucléique cible et comprenant intrinsèquement ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices.© BE2021/5267 at least one target DNA and/or said at least one target RNA to obtain amplicons of said at least one target DNA and/or said at least one target RNA, for example carrying out isothermal amplification mediated by loops (LAMP) or carrying out reverse transcription loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP), and with said non-intercalating molecule or with said non-intercalating compound, in particular with said non-intercalating molecule or with said non-intercalating compound having redox properties, said device intrinsically comprising said reagents enabling amplification of said at least one target nucleic acid and intrinsically comprising said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound, in particular said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound intercalating agent with oxidation-reduction properties.
Par définition, le terme « intrinsèquement » signifie « qui est inhérent à quelque chose, qui lui appartient en propre ». Dans le cadre de la présente invention, le terme « intrinsèquement » appliqué au dispositif selon l'invention signifie donc que le dispositif comprend, avant même son utilisation et donc avant introduction d’un échantillon, de façon inhérente et en propre, au moins des réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible et/ou au moins une molécule non intercalante ou un composé non intercalant, en particulier une molécule non intercalante ou un composé non intercalant présentant des propriétés oxydo- réductrices, voire des réactifs pour lyser ledit échantillon.By definition, the term “intrinsically” means “which is inherent in something, which belongs to it in its own right”. In the context of the present invention, the term "intrinsically" applied to the device according to the invention therefore means that the device comprises, even before its use and therefore before introduction of a sample, inherently and inherently, at least reagents allowing the realization of an amplification of said at least one target DNA and/or of said at least one target RNA and/or at least one non-intercalating molecule or a non-intercalating compound, in particular a non-intercalating molecule or a non-intercalating compound having redox properties, or even reagents to lyse said sample.
Par les termes « ADN cible », il est entendu, au sens de la présente invention, tout type d'ADN, par exemple l'ADN ribosomique et l'ADN mitochondrial.By the terms “target DNA”, it is understood, within the meaning of the present invention, any type of DNA, for example ribosomal DNA and mitochondrial DNA.
Par les termes « ARN cible », il est entendu, au sens de la présente invention, tout type d’ARN, par exemple l'ARN messager (ARNm), l'ARN ribosomique (ARNr) et l'ARN de transfert (ARN).By the terms “target RNA”, it is understood, within the meaning of the present invention, any type of RNA, for example messenger RNA (mRNA), ribosomal RNA (rRNA) and transfer RNA (RNA ).
Par les termes « amplicons d'ADN cible », il est entendu, au sens de la présente invention, les produits d’une amplification dudit ADN cible, par exemple les produits d’une amplification dudit ADN cible par la technique de l'amplification en chaîne par polymérase (PCR) ou par la technique de l’amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP).By the terms “target DNA amplicons”, it is understood, within the meaning of the present invention, the products of an amplification of said target DNA, for example the products of an amplification of said target DNA by the technique of amplification in the polymerase chain (PCR) or by the technique of isothermal loop-mediated amplification (LAMP).
Par les termes « amplicons d'ARN cible », il est entendu, au sens de la présente invention, les produits d’une amplification dudit ARN cible, en particulier les produits d’une amplification dudit ARN cible après transcription inverse par mise en œuvre d’une transcriptase inverse, par exemple les produits d'une amplification dudit ARN cible par la technique de réaction de polymérase en chaine par transcriptase inverse (RT-PCR) ou par la technique d'amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP).By the terms "target RNA amplicons", it is understood, within the meaning of the present invention, the products of an amplification of said target RNA, in particular the products of an amplification of said target RNA after reverse transcription by implementation of a reverse transcriptase, for example the products of an amplification of said target RNA by the technique of polymerase chain reaction by reverse transcriptase (RT-PCR) or by the technique of isothermal amplification mediated by reverse transcription loop (RT -LAMP).
Par les termes « amplicons d'acide nucléique cible », il est entendu, au sens de la présente invention, les produits d’une amplification dudit acide nucléique cible, par exemple les produits d’une amplification dudit acide nucléique cible par la technique de l'amplification en chaîne par polymérase (PCR), par la technique de l’amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP), par la technique de réaction de polymérase en chaine par transcriptase inverse (RT-PCR) ou par la technique d'amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP).By the terms "target nucleic acid amplicons", it is understood, within the meaning of the present invention, the products of an amplification of said target nucleic acid, for example the products of an amplification of said target nucleic acid by the technique of polymerase chain reaction (PCR), by the loop-mediated isothermal amplification (LAMP) technique, by the reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) technique or by the reverse transcription loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP).
A titre d'exemple et à titre non exhaustif, peuvent être mis en œuvre en tant que réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, une transcriptase inverse ou rétrotranscriptase, une polymérase, une ADN polymérase, des primers, des dNTPs, et/ou des tampons (buffers).By way of example and non-exhaustively, can be implemented as reagents allowing the realization of an amplification of said at least one target DNA and / or said at least one target RNA to obtain amplicons of said at least one Target DNA and/or said at least one target RNA, a reverse transcriptase or retrotranscriptase, a polymerase, a DNA polymerase, primers, dNTPs, and/or buffers.
Par les termes « une molécule non intercalante ou un composé non intercalant », il est entendu, au sens de la présente invention, une molécule ou un composé ne s’intercalant pas entre des molécules d’ADN ou d’ARN, en particulier une molécule ou un composé ne s'intercalant pas entre deux paires de base d'ADN.By the terms "a non-intercalating molecule or a non-intercalating compound", it is understood, within the meaning of the present invention, a molecule or a compound that does not intercalate between DNA or RNA molecules, in particular a molecule or compound that does not fit between two DNA base pairs.
Avec un tel dispositif de détection d'ADN cible et/ou d’ARN cible selon invention, l'échantillon prélevé chez un individu ne nécessite pas de prétraitement/de préparation, seule une lyse de l’échantillon étant parfois mais non indispensablement nécessaire selon certains modes de réalisation suivant l'invention, le dispositif selon l'invention comprenant intrinsèquement les réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de l'ADN cible et/ou de l’ARN cible, la molécule non intercalante ou le composé non intercalant, en particulier la molécule non intercalante ou le composé non intercalant présentant des propriétés oxydo- réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible, éventuellement un élément chauffant électrique et éventuellement des réactifs pour lyser ledit échantillon ou une solution pour lyser ledit échantillon.With such a target DNA and/or target RNA detection device according to the invention, the sample taken from an individual does not require pretreatment/preparation, only lysis of the sample being sometimes but not necessarily necessary according to certain embodiments according to the invention, the device according to the invention intrinsically comprising the reagents making it possible to carry out an amplification of said target DNA and/or of said target RNA to obtain amplicons of the target DNA and/or of the target RNA, the non-intercalating molecule or the non-intercalating compound, in particular the non-intercalating molecule or the non-intercalating compound having redox properties, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least least one target RNA, optionally an electric heating element and optionally reagents to lyse said sample or a solution to lyse said sample.
Le dispositif selon l'invention permet ainsi à l’opérateur de se dispenser d’une quantité importante de matériel et de réactifs mais aussi de réduire considérablement les manipulations à effectuer sur le terrain pour détecter un ADN cible et/ou un ARN cible au départ d’un échantillon prélevé chez un individu. Il en résulte notamment que les erreurs de manipulation et les contaminations sont significativement réduites que les mesures électrochimiques réalisées sont d’autant plus fiables et que le temps requis pour réaliser une détection sur le terrain est significativement réduit. En outre, un dispositif de détection d’un ADN cible et/ou d’un ARN cible selon l'invention est peu coûteux et peu encombrant puisqu'il ne nécessite pas d’appareillages imposants tels que ceux utilisés en laboratoire.The device according to the invention thus allows the operator to dispense with a large quantity of equipment and reagents but also to considerably reduce the manipulations to be carried out in the field to detect a target DNA and/or a target RNA at the start of a sample taken from an individual. The result in particular is that handling errors and contamination are significantly reduced as the electrochemical measurements carried out are all the more reliable and the time required to carry out detection in the field is significantly reduced. In addition, a device for detecting a target DNA and/or a target RNA according to the invention is inexpensive and compact since it does not require large equipment such as those used in the laboratory.
Les techniques d'amplification de l'ADN et/ou de l'ARN sont bien connues de l’homme de métier. En particulier et à titre d'exemple, les techniques d'amplification PCR, RT-PCR, LAMP et RT-LAMP sont des techniques bien connues de l’homme de métier qui est dès lors a même de déterminer, pour un ADN cible donné et/ou pour un ARN cible donné, quels réactifs et quelles quantités de réactifs doivent être compris intrinsèquement dans le dispositif selon l'invention (par exemple : tampons, dNTPs, polymérase, ADN polymérase, primers, transcriptase inverse, …).DNA and/or RNA amplification techniques are well known to those skilled in the art. In particular and by way of example, the PCR, RT-PCR, LAMP and RT-LAMP amplification techniques are techniques well known to those skilled in the art who are therefore able to determine, for a given target DNA and/or for a given target RNA, which reagents and which quantities of reagents must be included intrinsically in the device according to the invention (for example: buffers, dNTPs, polymerase, DNA polymerase, primers, reverse transcriptase, etc.).
A titre exemplatif, pour réaliser la détection de la présence d’ARN cible dans un échantillon, en particulier la détection de la présence d’ARNm cible dans un échantillon, les réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit ARN cible pour obtenir des amplicons dudit ARN cible comprennent une transcriptase inverse ou rétrotranscriptase et/ou une ADN polymérase. La transcriptase inverse ou rétrotranscriptase est une enzyme utilisée pour réaliser la transcription en sens inverse de la direction standard (transcription inverse ou rétrotranscription) pour obtenir de l'ADN à partir d'ARN. La transcriptase inverseBy way of example, to carry out the detection of the presence of target RNA in a sample, in particular the detection of the presence of target mRNA in a sample, the reagents allowing the realization of an amplification of said target RNA to obtain amplicons of said target RNA comprise a reverse transcriptase or retrotranscriptase and/or a DNA polymerase. Reverse transcriptase or retrotranscriptase is an enzyme used to perform transcription in the reverse of the standard direction (reverse transcription or retrotranscription) to obtain DNA from RNA. reverse transcriptase
? BE2021/5267 permet donc, au départ d’ARN, d'utiliser des techniques d’amplification telles que l'amplification en chaîne par polymérase (PCR) ou l’amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) se réalisant classiquement grâce à des brins d'ADN. En d'autres termes, à l'aide de la transcriptase inverse, l'ARN peut être transcrit en ADN, rendant l'analyse des ARN réalisable en recourant à des techniques d'amplification classiques d’ADN. Lorsque la transcriptase inverse ou rétrotranscriptase est associée à la technique d’amplification PCR, on parle alors de réaction de polymérase en chaine par transcriptase inverse (RT-PCR). Lorsque la transcriptase inverse ou rétrotranscriptase est associée à la technique d’amplification LAMP, on parle alors d'amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP).? BE2021/5267 therefore makes it possible, starting from RNA, to use amplification techniques such as polymerase chain reaction (PCR) or loop-mediated isothermal amplification (LAMP) conventionally carried out using DNA strands. In other words, using reverse transcriptase, RNA can be transcribed into DNA, making RNA analysis feasible using conventional DNA amplification techniques. When reverse transcriptase or reverse transcriptase is combined with the PCR amplification technique, it is called reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR). When reverse transcriptase or reverse transcriptase is combined with the LAMP amplification technique, it is called reverse transcription loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP).
Notons que la transcriptase inverse permet de créer de l'ADN complémentaire (ADNc) à partir d'ARNm. L'ADNc est un simple brin synthétisé à partir d'un ARNm, représentant ainsi la partie codante de la région du génome ayant été transcrit en cet ARNm. L'ADNc est obtenu après une réaction de transcription inverse d'un ARNm et équivaut donc à la copie ADN de l'ARNm. De VADNc double brin peut résulter de la copie d’un premier brin par une ADN polymérase.Note that reverse transcriptase makes it possible to create complementary DNA (cDNA) from mRNA. cDNA is a single strand synthesized from an mRNA, thus representing the coding part of the region of the genome that has been transcribed into this mRNA. cDNA is obtained after a reverse transcription reaction of an mRNA and hence is equivalent to the DNA copy of mRNA. Double-stranded cDNA can result from the copying of a first strand by a DNA polymerase.
Avantageusement, selon l'invention, lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible sont sous forme anhydre ou lyophilisée.Advantageously, according to the invention, said reagents allowing the realization of an amplification of said at least one target DNA and/or of said at least one target RNA are in anhydrous or lyophilized form.
Préférentiellement, selon l'invention, lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible sont présents sur un support comportant des charges positives et/ou des groupements chargés positivement et/ou des polymères chargés positivement, par exemple sur un support cellulosique comportant des charges positives et/ou des groupements chargés positivement et/ou des polymères chargés positivement.Preferably, according to the invention, said reagents making it possible to carry out an amplification of said at least one target DNA and/or of said at least one target RNA are present on a support comprising positive charges and/or positively charged groups and/or positively charged polymers, for example on a cellulosic support comprising positive charges and/or positively charged groups and/or positively charged polymers.
Avantageusement, selon l'invention, ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo- réductrices, est sous forme anhydre ou lyophilisée.Advantageously, according to the invention, said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound, in particular said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound having redox properties, is in anhydrous or lyophilized form.
LO BE2021/5267 Préférentiellement, selon l'invention, ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo- réductrices, est présent(e) sur un support comportant des charges positives et/ou des groupements chargés positivement et/ou des polymères chargés positivement, par exemple sur un support cellulosique comportant des charges positives et/ou des groupements chargés positivement et/ou des polymères chargés positivement.Preferably, according to the invention, said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound, in particular said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound having redox properties, is present on a support comprising fillers positive charges and/or positively charged groups and/or positively charged polymers, for example on a cellulosic support comprising positive charges and/or positively charged groups and/or positively charged polymers.
De préférence, le dispositif selon l'invention comprend en outre un élément chauffant électrique agencé pour chauffer ledit échantillon pendant que ce dernier est en contact ou après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP).Preferably, the device according to the invention further comprises an electric heating element arranged to heat said sample while the latter is in contact or after the latter has been in contact with said reagents allowing the amplification of said at least a target DNA and/or said at least one target RNA to obtain amplicons of said at least one target DNA and/or said at least one target RNA, for example carrying out loop-mediated isothermal amplification (LAMP) or performing reverse transcription loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP).
Avantageusement, le dispositif selon l'invention comprend en outre un réactif pour lyser ledit échantillon ou une solution pour lyser ledit échantillon.Advantageously, the device according to the invention further comprises a reagent for lysing said sample or a solution for lysing said sample.
De préférence, selon l'invention, ledit réactif pour lyser ledit échantillon est sous forme anhydre ou lyophilisée.Preferably, according to the invention, said reagent for lysing said sample is in anhydrous or freeze-dried form.
Préférentiellement, le dispositif selon l'invention se présente sous la forme d’une cartouche ou d’un dispositif microfluidique, par exemple sous forme d’une cellule ou d’une puce microfluidique ou d’un dispositif microfluidique à base de papier.Preferably, the device according to the invention is in the form of a cartridge or a microfluidic device, for example in the form of a cell or a microfluidic chip or a paper-based microfluidic device.
Selon l'invention, le dispositif comprend ou non un élément chauffant électrique, en particulier comprend ou non intrinsèquement un élément chauffant électrique. Lorsqu’il ne comprend pas d’élément chauffant électrique, le chauffage du dispositif peut être par exemple assurer en mettant le dispositif en contact avec une plaque chauffante ou avec tout autre dispositif permettant d'assurer un chauffage de l'échantillon pendant que ce dernier est en contact ou après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible et/ou avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé nonAccording to the invention, the device may or may not include an electric heating element, in particular may or may not intrinsically comprise an electric heating element. When it does not include an electric heating element, the heating of the device can be ensured, for example, by bringing the device into contact with a heating plate or with any other device making it possible to ensure heating of the sample while the latter is in contact or after the latter has been in contact with said reagents making it possible to carry out the amplification of said at least one target DNA and/or of said at least one target RNA and/or with said non-intercalating molecule or with said non-intercalating compound
H BE2021/5267 intercalant, en particulier avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible.H BE2021/5267 intercalating, in particular with said non-intercalating molecule or with said non-intercalating compound having redox properties, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA.
Selon l’invention, de préférence, lesdites électrodes sont en outre agencées pour être accessibles électriquement depuis l’extérieur dudit dispositif. Selon l’invention, ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible est choisi(e) dans le groupe constitué de Os(bpy)s* ; Ru(NHs)e** ; FcCH2N*Me3 ; FcB(OH)2 et leurs mélanges. Cette liste est non exhaustive et toute autre molécule non intercalante ou tout autre composé non intercalant, en particulier toute autre molécule non intercalante ou tout autre composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons d’au moins un ADN cible et/ou aux amplicons d’au moins un ARN cible tombe sous le couvert de la présente invention. De préférence, le dispositif selon l'invention présente : - une première partie ou zone comprenant lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP) ; et - une deuxième partie ou zone, en particulier une deuxième partie ou zone séparée de ladite première partie ou zone, comprenant ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo- réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible. Une distinction entre ces deux parties ou zones permet de séquencer les étapes d’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de l'ADN cible et/ou de l'ARN cible (par exemple par amplification isothermique à médiation par boucles [LAMP] ou par amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse [RT-LAMP]) et de liaison de ladite molécule non intercalante ou dudit composé non intercalant aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible, ce qui permet au dispositif selon l'invention d’être optimal, des amplicons étant d’abord obtenus avant qu’ils n’entrent en contact avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible .According to the invention, preferably, said electrodes are also arranged to be electrically accessible from the outside of said device. According to the invention, said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound, in particular said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound having redox properties, capable of binding to the amplicons of the said at least one target DNA and/or to the amplicons said at least one target RNA is selected from the group consisting of Os(bpy)s*; Ru(NHs)e**; FcCH2N*Me3; FcB(OH)2 and mixtures thereof. This list is non-exhaustive and any other non-intercalating molecule or any other non-intercalating compound, in particular any other non-intercalating molecule or any other non-intercalating compound having redox properties, capable of binding to the amplicons of at least one DNA target and/or to the amplicons of at least one target RNA falls within the scope of the present invention. Preferably, the device according to the invention has: - a first part or zone comprising said reagents allowing the performance of an amplification of said at least one target DNA and/or of said at least one target RNA to obtain amplicons of said at least one target DNA and/or said at least one target RNA, for example performing loop-mediated isothermal amplification (LAMP) or performing reverse-transcription loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP); and - a second part or zone, in particular a second part or zone separated from said first part or zone, comprising said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound, in particular said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound having oxido- reducing agents, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA. A distinction between these two parts or zones makes it possible to sequence the stages of amplification of said target DNA and/or of said target RNA to obtain amplicons of the target DNA and/or of the target RNA (for example by isothermal amplification mediated by loops [LAMP] or by isothermal amplification mediated by reverse transcription loop [RT-LAMP]) and binding of said non-intercalating molecule or of said non-intercalating compound to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least a target RNA, which allows the device according to the invention to be optimal, amplicons being first obtained before they come into contact with said non-intercalating molecule or with said non-intercalating compound capable of binding to amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA.
A titre d'exemple, notamment si le dispositif selon l'invention se présente sous la forme d’une puce ou d’une cellule microfluidique, les deux parties ou zones peuvent être des chambres distinctes reliées fluidiquement (comme illustré aux figures 7C et 7D) ou peuvent être des emplacements distincts situés dans un même (micro-)canal d’une puce ou d’une cellule microfluidique (comme illustré à la figure 7F).By way of example, in particular if the device according to the invention is in the form of a chip or a microfluidic cell, the two parts or zones can be distinct chambers fluidically connected (as illustrated in FIGS. 7C and 7D ) or can be separate locations within a single (micro-)channel of a microfluidic chip or cell (as shown in Figure 7F).
Selon un mode de réalisation, le dispositif suivant l'invention pour détecter la présence d’au moins un ADN cible et/ou d'au moins un ARN cible dans un échantillon, en particulier dans un échantillon liquide, comprend : - une première partie ou zone comprenant des réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP) dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible ; - une deuxième partie ou zone, en particulier une deuxième partie ou zone séparée de ladite première partie ou zone, comprenant ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible ; etAccording to one embodiment, the device according to the invention for detecting the presence of at least one target DNA and/or at least one target RNA in a sample, in particular in a liquid sample, comprises: - a first part or zone comprising reagents allowing amplification of said at least one target DNA and/or said at least one target RNA to obtain amplicons of said at least one target DNA and/or said at least one target RNA, for example performing loop-mediated isothermal amplification (LAMP) or performing reverse-transcription loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP) of said at least one target DNA and/or said at least one target RNA, to obtain amplicons of said at least one target DNA and/or of said at least one target RNA; - a second part or zone, in particular a second part or zone separated from said first part or zone, comprising said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound, in particular said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound having redox properties , capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA; and
- des électrodes agencées pour être en contact avec ledit échantillon pendant que ce dernier est en contact ou après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP), et avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible, ledit dispositif comprenant intrinsèquement lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible et comprenant intrinsèquement ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible.- electrodes arranged to be in contact with said sample while the latter is in contact or after the latter has been in contact with said reagents allowing the realization of the amplification of said at least one target DNA and/or of said at least one target RNA to obtain amplicons of said at least one target DNA and/or of said at least one target RNA, for example performing loop-mediated isothermal amplification (LAMP) or performing loop-mediated isothermal amplification of reverse transcription (RT-LAMP), and with said non-intercalating molecule or with said non-intercalating compound, in particular said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound exhibiting oxidation-reduction properties, capable of binding to the amplicons of said at least one DNA target and/or to the amplicons of said at least one target RNA, said device intrinsically comprising said reagents making it possible to carry out an amplification of said at least one target DNA and/or said at least one target RNA and intrinsically comprising said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound, in particular said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound exhibiting oxido-reducing properties, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA.
Selon un autre mode de réalisation, le dispositif suivant l'invention pour détecter la présence d’au moins un ADN cible et/ou d’au moins un ARN cible dans un échantillon, en particulier dans un échantillon liquide, comprend :According to another embodiment, the device according to the invention for detecting the presence of at least one target DNA and/or at least one target RNA in a sample, in particular in a liquid sample, comprises:
- une première partie ou zone comprenant des réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP) dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, lesdits réactifs étant sous une forme anhydre ou lyophilisée; - une molécule non intercalante ou un composé non intercalant, en particulier une molécule non intercalante ou un composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible, ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant étant sous une forme anhydre ou lyophilisée et étant compris (contenu) dans ladite première partie ou zone ou dans une deuxième partie ou zone, en particulier dans une deuxième partie ou zone séparée de ladite première partie ou zone ; et - des électrodes agencées pour être en contact avec ledit échantillon pendant que ce dernier est en contact ou après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP), et avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant, en particulier avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible, ledit dispositif comprenant intrinsèquement lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible et comprenant intrinsèquement intrinsèquement ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible.- a first part or zone comprising reagents allowing the realization of an amplification of said at least one target DNA and/or of said at least one target RNA to obtain amplicons of said at least one target DNA and/or of said at least one target RNA , for example performing loop-mediated isothermal amplification (LAMP) or performing reverse-transcription loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP) of said at least one target DNA and/or said at least one RNA target, to obtain amplicons of said at least one target DNA and/or of said at least one target RNA, said reagents being in an anhydrous or lyophilized form; - a non-intercalating molecule or a non-intercalating compound, in particular a non-intercalating molecule or a non-intercalating compound having redox properties, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA, said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound being in an anhydrous or lyophilized form and being comprised (contained) in said first part or zone or in a second part or zone, in particular in a second part or zone separated from said first part or zone; and - electrodes arranged to be in contact with said sample while the latter is in contact or after the latter has been in contact with said reagents allowing the amplification of said at least one target DNA and/or of said at least a target RNA to obtain amplicons of said at least one target DNA and/or of said at least one target RNA, for example performing loop-mediated isothermal amplification (LAMP) or performing loop-mediated isothermal amplification reverse transcription (RT-LAMP), and with said non-intercalating molecule or with said non-intercalating compound, in particular with said non-intercalating molecule or with said non-intercalating compound exhibiting oxidation-reduction properties, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA, said device intrinsically comprising said reagents making it possible to carry out an amplification of said at least one target DNA and/or said at least one target RNA and intrinsically comprising said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound, in particular said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound having oxidation-reduction properties, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA.
Avantageusement, le dispositif selon l'invention comprend une vanne située entre ladite première partie ou zone et ladite deuxième partie ou zone. La présence d’une vanne permet de commander le passage de l'échantillon lysé ou non depuis la première partie ou zone vers la deuxième partie ou zone après une durée déterminée de séjour de l'échantillon dans la première partie ou zone de telle sorte que l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de PADN cible et/ou de l'ARN cible (par exemple par amplification isothermique à médiation par boucles [LAMP] ou par amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse [RT- LAMP]) est optimisée.Advantageously, the device according to the invention comprises a valve situated between said first part or zone and said second part or zone. The presence of a valve makes it possible to control the passage of the sample, lysed or not, from the first part or zone to the second part or zone after a determined residence time of the sample in the first part or zone so that amplifying said target DNA and/or said target RNA to obtain amplicons of target DNA and/or target RNA (e.g. by loop-mediated isothermal amplification [LAMP] or reverse transcription loop-mediated isothermal amplification [RT-LAMP]) is optimized.
Préférentiellement, le dispositif selon l'invention comprend en outre des réactifs pour lyser ledit échantillon ou une solution pour lyser ledit échantillon.Preferably, the device according to the invention further comprises reagents for lysing said sample or a solution for lysing said sample.
En particulier, le dispositif selon l'invention comprend en outre intrinsèquement des réactifs pour lyser ledit échantillon ou une solution pour lyser ledit échantillon.In particular, the device according to the invention also intrinsically comprises reagents for lysing said sample or a solution for lysing said sample.
Avantageusement, le dispositif selon l'invention présente une partie ou zone additionnelle comprenant lesdits réactifs pour lyser ledit échantillon ou ladite solution pour lyser ledit échantillon, ladite partie ou zone additionnelle étant située en amont de ladite première partie et de ladite deuxième partie dans un sens d’écoulement/de déplacement de l’échantillon.Advantageously, the device according to the invention has an additional part or zone comprising said reagents for lysing said sample or said solution for lysing said sample, said additional part or zone being located upstream of said first part and of said second part in a direction sample flow/displacement.
Selon le type d’échantillon prélevé au départ d’un individu, il peut s’avérer être utile de procéder à une lyse de l'échantillon. Afin d'éviter que l’opérateur n’ait à effectuer une lyse sur le terrain avec du matériel spécifique et encombrant (pipette, solution de lyse, ...), le dispositif selon l'invention peut avantageusement comprendre une chambre de lyse (partie ou zone additionnelle) dans laquelle l'échantillon est lysé avant de gagner les autres parties ou zones du dispositif.Depending on the type of sample taken from an individual, it may be useful to lyse the sample. In order to avoid the operator having to carry out a lysis in the field with specific and cumbersome equipment (pipette, lysis solution, etc.), the device according to the invention can advantageously comprise a lysis chamber ( part or additional zone) in which the sample is lysed before reaching the other parts or zones of the device.
De préférence, le dispositif selon l'invention comprend une vanne située entre ladite partie ou zone additionnelle et ladite première partie ou zone et/ou ladite deuxième partie ou zone. La présence d’une telle vanne permet de commander le passage depuis la partie ou zone additionnelle où a lieu la lyse de l'échantillon vers la première et/ou la deuxième partie après une durée déterminée de séjour de l'échantillon dans cette partie ou zone additionnelle de telle sorte que la lyse de l’échantillon est optimisée.Preferably, the device according to the invention comprises a valve situated between said additional part or zone and said first part or zone and/or said second part or zone. The presence of such a valve makes it possible to control the passage from the part or additional zone where the lysis of the sample takes place towards the first and/or the second part after a determined period of residence of the sample in this part or additional area such that sample lysis is optimized.
Selon un mode de réalisation préféré du dispositif suivant l'invention, lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons de l’ADN cible et/ou de l’ARN cible (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse) et/ou ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible et/ou les réactifs pour lyser ledit échantillon sont sous forme non liquide. Une forme non liquide peut être par exemple un gel, un hydrogel ou encore une cire mais aussi être une forme sèche non aqueuse comme par exemple une poudre.According to a preferred embodiment of the device according to the invention, said reagents making it possible to carry out an amplification of said at least one target DNA and/or of said at least one target RNA to obtain amplicons of the target DNA and/or of the target RNA (e.g. performing loop-mediated isothermal amplification or performing reverse transcription loop-mediated isothermal amplification) and/or said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound, in particular said molecule non-intercalating or said non-intercalating compound exhibiting oxidation-reduction properties, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA and/or the reagents for lysing said sample are in non-intercalating form liquid. A non-liquid form can be, for example, a gel, a hydrogel or even a wax, but also can be a non-aqueous dry form such as, for example, a powder.
Selon un mode de réalisation préféré du dispositif suivant l'invention, lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons de l’ADN cible et/ou de l’ARN cible (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse) et/ou ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible et/ou les réactifs pour lyser ledit échantillon sont sous une forme anhydre ou lyophilisée.According to a preferred embodiment of the device according to the invention, said reagents making it possible to carry out an amplification of said at least one target DNA and/or of said at least one target RNA to obtain amplicons of the target DNA and/or of the target RNA (e.g. performing loop-mediated isothermal amplification or performing reverse transcription loop-mediated isothermal amplification) and/or said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound, in particular said molecule non-intercalating or said non-intercalating compound exhibiting oxidation-reduction properties, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA and/or the reagents for lysing said sample are in a form anhydrous or freeze-dried.
En particulier, selon un mode de réalisation avantageux du dispositif suivant l'invention, lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification et ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, sont sous une forme anhydre ou lyophilisée.In particular, according to an advantageous embodiment of the device according to the invention, said reagents making it possible to carry out an amplification and said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound, in particular said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound exhibiting redox, are in an anhydrous or freeze-dried form.
En particulier, selon un autre mode de réalisation avantageux du dispositif suivant l'invention, lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification et ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, et lesdits réactifs pour lyser ledit échantillon sont sous une forme anhydre ou lyophilisée.In particular, according to another advantageous embodiment of the device according to the invention, said reagents making it possible to carry out an amplification and said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound, in particular said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound having oxidation-reduction properties, and said reagents for lysing said sample are in an anhydrous or freeze-dried form.
Au contraire de solutions liquides comprenant les réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible et/ou ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, et/ou les réactifs pour lyser ledit échantillon, une forme anhydre ou lyophilisée de ces derniers permet de disposer d’un dispositif qui peut être conservé plusieurs mois voire plusieurs années sans dégradations des réactifs permettant la réalisation d’une amplification et/ou de ladite molécule non intercalante ou dudit composé non intercalant, en particulier de ladite molécule non intercalante ou dudit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, et/ou des réactifs pour lyser ledit échantillon, lesquels conservent leurs propriétés au cours du temps, ce qui contribue à une reproductibilité des résultats.Unlike liquid solutions comprising the reagents allowing amplification of said target DNA and/or said target RNA and/or said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound, in particular said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound having oxidation-reduction properties, and/or the reagents for lysing said sample, an anhydrous or freeze-dried form of the latter makes it possible to have a device which can be kept for several months or even several years without degradation of the reagents allowing amplification to be carried out and/or said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound, in particular said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound exhibiting oxido-reducing properties, and/or reagents for lysing said sample, which retain their properties during the time, which contributes to the reproducibility of the results.
Les dispositifs actuels, recourent systématiquement à une forme liquide des réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible et/ou à une forme liquide de ladite molécule non intercalante ou dudit composé non intercalant, en particulier à une forme liquide des réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible et/ou à une forme liquide de ladite molécule non intercalante ou dudit composé non intercalant introduites au sein du dispositif après introduction dans ce dernier d’un échantillon (les réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible et la molécule non intercalante ou le composé non intercalant ne sont donc pas intrinsèquement présent dans le dispositif). Avec les dispositifs actuels, cette forme liquide des réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible et/ou cette forme liquide de la molécule non intercalante ou du composé non intercalant est systématiquement utilisée et préconisée pour assurer la disponibilité de ces composés. En particulier, les réactifs doivent pouvoir interagir avec l'ADN cible et/ou VARN cible et la molécule non intercalante ou le composé non intercalant doit pouvoir interagir à la fois avec l'ADN cible et/ou l’ARN cible et avec les électrodes (en particulier avec l’électrode de travail) pour que des mesures électrochimiques correctes et fiables puissent être effectuées.Current devices systematically make use of a liquid form of the reagents allowing amplification of said target DNA and/or said target RNA and/or a liquid form of said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound, in particular at a liquid form of reagents allowing amplification of said target DNA and/or said target RNA and/or a liquid form of said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound introduced into the device after introduction into the latter of a sample (the reagents making it possible to carry out an amplification of said target DNA and/or of said target RNA and the non-intercalating molecule or the non-intercalating compound are therefore not intrinsically present in the device). With current devices, this liquid form of the reagents allowing the realization of an amplification of said target DNA and/or of said target RNA and/or this liquid form of the non-intercalating molecule or of the non-intercalating compound is systematically used and recommended to ensure the availability of these compounds. In particular, the reagents must be able to interact with the target DNA and/or the target VRNA and the non-intercalating molecule or the non-intercalating compound must be able to interact both with the target DNA and/or the target RNA and with the electrodes (especially with the working electrode) so that correct and reliable electrochemical measurements can be made.
Au contraire des dispositifs actuels, ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible est présent(e) dans un dispositif selon l'invention sous une forme non liquide, en particulier sous une forme anhydre ou lyophilisée, et il a été montré, dans le cadre de la présente invention et à l'encontre de ce qui est préconisé et rencontré avec les dispositifs disponibles aujourd’hui, que cette forme non liquide, en particulier que cette forme anhydre ou lyophilisée, de ladite molécule non intercalante ou dudit composé non intercalant, en particulier de ladite molécule non intercalante ou dudit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, permet bien de réaliser des mesures précises et fiables pour déterminer si une liaison est / a été établie entre ledit au moins un ADN cible et/ou ledit au moins un ARN cible et ladite molécule non intercalante ouledit composé non intercalant, en particulier entre ledit au moins un ADN cible et/ou ledit au moins un ARN cible et ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, afin de déduire que ledit au moins un ADN cible et/ou ledit au moins un ARN cible est présent ou non dans ledit échantillon et d’assurer une détection dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible avec un dispositif suivant l'invention.Unlike current devices, said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound, in particular said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound having oxidation-reduction properties, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to amplicons of said at least one target RNA is present in a device according to the invention in a non-liquid form, in particular in an anhydrous or lyophilized form, and it has been shown, in the context of the present invention and at the contrary to what is recommended and encountered with the devices available today, that this non-liquid form, in particular this anhydrous or freeze-dried form, of said non-intercalating molecule or of said non-intercalating compound, in particular of said non-intercalating molecule or of said non-intercalating compound having redox properties, makes it possible to carry out precise and reliable measurements to determine whether a bond is t / has been established between said at least one target DNA and/or said at least one target RNA and said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound, in particular between said at least one target DNA and/or said at least one target RNA and said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound exhibiting oxidation-reduction properties, in order to deduce that said at least one target DNA and/or said at least one target RNA is present or not in said sample and to ensure detection of said at least one at least one target DNA and/or said at least one target RNA with a device according to the invention.
En d’autres termes, contre toute attente, il a été mis en évidence dans le cadre de la présente invention qu’une forme non liquide de ladite molécule non intercalante ou dudit composé non intercalant, en particulier qu’une forme anhydre ou lyophilisée de ladite molécule non intercalante ou dudit composé non intercalant, présent intrinsèquement dans un dispositif selon l'invention, permet bien de réaliser des mesures précises et fiables pour déterminer si une liaison est / a été établie entre ledit au moins un ADN cible et/ou ledit au moins un ARN cible et ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier entre ledit au moins un ADN cible et/ou ledit au moins un ARN cible et ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, afin de déduire, via une mesure électrochimique, que ledit au moins un ADN cible et/ou ledit au moins un ARN cible est présent ou non dans ledit échantillon et d'assurer une détection dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible avec un dispositif suivant l'invention.In other words, against all expectation, it has been demonstrated in the context of the present invention that a non-liquid form of said non-intercalating molecule or of said non-intercalating compound, in particular an anhydrous or freeze-dried form of said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound, intrinsically present in a device according to the invention, indeed makes it possible to carry out precise and reliable measurements to determine whether a bond is/has been established between said at least one target DNA and/or said at least one target RNA and said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound, in particular between said at least one target DNA and/or said at least one target RNA and said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound exhibiting oxidation-reduction properties , in order to deduce, via an electrochemical measurement, that said at least one target DNA and/or said at least one target RNA is present or not in said sample and to ensure a detection of said at least one target DNA and/or of said at least one target RNA with a device according to the invention.
Selon un mode de réalisation suivant l'invention, le dispositif pour détecter la présence d’au moins un ADN cible et/ou d'au moins un ARN cible dans un échantillon, en particulier dans un échantillon liquide, comprend : - des réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP) dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, lesdits réactifs étant sous une forme anhydre ou lyophilisée ; - une molécule non intercalante ou un composé non intercalant, en particulier une molécule non intercalante ou un composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible, ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant étant sous une forme anhydre ou lyophilisée ; et - des électrodes agencées pour être en contact avec ledit échantillon pendant que ce dernier est en contact ou après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP), et avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant, en particulier avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible, ledit dispositif comprenant intrinsèquement lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible et comprenant intrnsèquement ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible .According to an embodiment according to the invention, the device for detecting the presence of at least one target DNA and/or of at least one target RNA in a sample, in particular in a liquid sample, comprises: - reagents allowing carrying out an amplification of said at least one target DNA and/or of said at least one target RNA to obtain amplicons of said at least one target DNA and/or of said at least one target RNA, for example carrying out an isothermal amplification mediated by loops (LAMP) or carrying out isothermal amplification mediated by reverse transcription loop (RT-LAMP) of said at least one target DNA and/or of said at least one target RNA, in order to obtain amplicons of said at least one target DNA and/or said at least one target RNA, said reagents being in an anhydrous or lyophilized form; - a non-intercalating molecule or a non-intercalating compound, in particular a non-intercalating molecule or a non-intercalating compound having redox properties, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA, said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound being in an anhydrous or lyophilized form; and - electrodes arranged to be in contact with said sample while the latter is in contact or after the latter has been in contact with said reagents allowing the amplification of said at least one target DNA and/or of said at least a target RNA to obtain amplicons of said at least one target DNA and/or of said at least one target RNA, for example performing loop-mediated isothermal amplification (LAMP) or performing loop-mediated isothermal amplification reverse transcription (RT-LAMP), and with said non-intercalating molecule or with said non-intercalating compound, in particular with said non-intercalating molecule or with said non-intercalating compound exhibiting oxidation-reduction properties, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA, said device intrinsically comprising said reagents making it possible to carry out an amplification of said at least one target DNA and/or said at least one target RNA and intrinsically comprising said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound, in particular said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound exhibiting oxidation-reduction properties, capable of binding to amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA.
Selon un autre mode de réalisation, le dispositif suivant l'invention pour détecter la présence d’au moins un ADN cible et/ou d’au moins un ARN cible dans un échantillon, en particulier dans un échantillon liquide, comprend : - une première partie ou zone comprenant des réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP) dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, lesdits réactifs étant sous une forme anhydre ou lyophilisée; - une molécule non intercalante ou un composé non intercalant, en particulier une molécule non intercalante ou un composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible, ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant étant sous une forme anhydre ou lyophilisée et étant compris (contenu) dans ladite première partie ou zone ou dans une deuxième partie ou zone ; et - des électrodes agencées pour être en contact avec ledit échantillon pendant que ce dernier est en contact ou après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP), et avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant, en particulier avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible, ledit dispositif comprenant intrinsèquement lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible et comprenant intrinsèquement ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible.According to another embodiment, the device according to the invention for detecting the presence of at least one target DNA and/or at least one target RNA in a sample, in particular in a liquid sample, comprises: - a first part or zone comprising reagents allowing amplification of said at least one target DNA and/or said at least one target RNA to obtain amplicons of said at least one target DNA and/or said at least one target RNA, for example performing loop-mediated isothermal amplification (LAMP) or performing reverse-transcription loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP) of said at least one target DNA and/or said at least one target RNA, for obtaining amplicons of said at least one target DNA and/or of said at least one target RNA, said reagents being in an anhydrous or lyophilized form; - a non-intercalating molecule or a non-intercalating compound, in particular a non-intercalating molecule or a non-intercalating compound having redox properties, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA, said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound being in an anhydrous or lyophilized form and being comprised (contained) in said first part or zone or in a second part or zone; and - electrodes arranged to be in contact with said sample while the latter is in contact or after the latter has been in contact with said reagents allowing the amplification of said at least one target DNA and/or of said at least a target RNA to obtain amplicons of said at least one target DNA and/or of said at least one target RNA, for example performing loop-mediated isothermal amplification (LAMP) or performing loop-mediated isothermal amplification reverse transcription (RT-LAMP), and with said non-intercalating molecule or with said non-intercalating compound, in particular with said non-intercalating molecule or with said non-intercalating compound exhibiting oxidation-reduction properties, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA, said device intrinsically comprising said reagents making it possible to carry out an amplification of said at least one target DNA and/or said at least one target RNA and intrinsically comprising said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound, in particular said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound exhibiting oxidation-reduction properties, capable of binding to amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA.
De façon préférentielle selon l'invention, lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons de l'ADN cible et/ou de l'ARN cible et/ou ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible, et/ou lesdits réactifs pour lyser ledit échantillon se présentent sous une forme anhydre ou lyophilisée dans le dispositif suivant l'invention.Preferably according to the invention, said reagents making it possible to carry out an amplification of said at least one target DNA and/or of said at least one target RNA to obtain amplicons of the target DNA and/or of the target RNA and /or said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound, in particular said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound having redox properties, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least a target RNA, and/or said reagents for lysing said sample are in an anhydrous or lyophilized form in the device according to the invention.
De façon préférentielle selon l'invention, lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons de l'ADN cible et/ou de l'ARN cible et/ou ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible, et/ou lesdits réactifs pour lyser ledit échantillon se présentent sous la forme d’un lyophilisat dans le dispositif suivant l'invention.Preferably according to the invention, said reagents making it possible to carry out an amplification of said at least one target DNA and/or of said at least one target RNA to obtain amplicons of the target DNA and/or of the target RNA and /or said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound, in particular said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound having redox properties, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least a target RNA, and/or said reagents for lysing said sample are in the form of a lyophilisate in the device according to the invention.
Selon un mode de réalisation avantageux du dispositif suivant l'invention, ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible et/ou lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de l'ADN cible et/ou de l'ARN cible, par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP), sont présents sur un support comportant des charges positives et/ou des groupements chargés positivement et/ou des polymères chargés positivement, par exemple sur un support cellulosique comportant des charges positives et/ou des groupements chargés positivement et/ou des polymères chargés positivement.According to an advantageous embodiment of the device according to the invention, said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound, in particular said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound having oxidation-reducing properties, capable of binding to the amplicons of said at least a target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA and/or said reagents making it possible to carry out an amplification of said target DNA and/or of said target RNA to obtain amplicons of the target DNA and/or of the Target RNAs, for example performing loop-mediated isothermal amplification (LAMP) or performing reverse-transcription loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP), are present on a support having positive charges and/or or positively charged groups and/or positively charged polymers, for example on a cellulosic support comprising positive charges and/or positively charged groups and/or positively charged polymers.
Par exemple, des groupements chargés positivement sont associés à un support, en particulier à un support cellulosique, par greffage covalent ou autre.For example, positively charged groups are associated with a support, in particular with a cellulosic support, by covalent or other grafting.
Alternativement ou complémentairement, des polymères chargés positivement sont associés à un support, en particulier à un support cellulosique, par adsorption.Alternatively or additionally, positively charged polymers are associated with a support, in particular with a cellulosic support, by adsorption.
Alternativement ou complémentairement, des espèces chimiques prédéterminées sont polymérisées en surface d’un support, en particulier en surface d’un support cellulosique, pour que des polymères chargés positivement soient associés à ce support.Alternatively or additionally, predetermined chemical species are polymerized on the surface of a support, in particular on the surface of a cellulosic support, so that positively charged polymers are associated with this support.
Dans le cadre de la présente invention, il a été mis en avant, en particulier pour ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier pour ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible, qu’un tel support chargé positivement permet d’en garantir une disponibilité adéquate, en ce sens qu'il ne reste pas accroché au support afin d'assurer une mesure électrochimique adéquate.In the context of the present invention, it has been put forward, in particular for said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound, in particular for said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound having oxido-reducing properties, capable of bind to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA, that such a positively charged support makes it possible to guarantee adequate availability thereof, in the sense that it does not remain attached to the support in order ensure adequate electrochemical measurement.
Avantageusement, selon l'invention ledit échantillon est choisi parmi un échantillon sanguin, un échantillon salivaire, un échantillon urinaire.Advantageously, according to the invention, said sample is chosen from a blood sample, a saliva sample, a urine sample.
L’échantillon peut se présenter sous forme liquide ou semi-liquide mais aussi sous forme solide ou semi-solide.The sample can be in liquid or semi-liquid form but also in solid or semi-solid form.
De préférence, selon l'invention, ledit élément chauffant électrique comprend une résistance électrique, laquelle est alimentée par une source d'énergie électrique.Preferably, according to the invention, said electrical heating element comprises an electrical resistor, which is powered by a source of electrical energy.
Préférentiellement, selon l'invention, lesdites électrodes sont au nombre de trois.Preferably, according to the invention, said electrodes are three in number.
De préférence, le dispositif selon l'invention se présente sous la forme d’une cartouche ou d’un dispositif microfluidique, par exemple sous forme d’une cellule ou d’une puce microfluidique ou d’un dispositif microfluidique à base de papier.Preferably, the device according to the invention is in the form of a cartridge or a microfluidic device, for example in the form of a cell or a microfluidic chip or a paper-based microfluidic device.
Avantageusement, le dispositif selon l'invention se présente sous la forme d’une cartouche au travers de laquelle peut s’écouler une solution ou d’un dispositif microfluidique, par exemple sous forme d’une cellule ou d'une puce microfluidique. Le dispositif selon l'invention peut également se présenter sous forme d’un dispositif microfluidique à base de papier (« paper-based microfluidics ») consistant par exemple en une série de fibres de cellulose ou de nitrocellulose hydrophiles qui guident un liquide d'une entrée à une zone souhaitée par imbibition et/ou par capillarité. Eventuellement, le dispositif microfluidique à base de papier selon l'invention se présente sous la forme d’un origami (« paper-origami based »), c'est-à-dire sous la forme d’un papier microfluidique dont des parties sont prévues pour être pliées l’une sur l’autre ou les unes sur les autres pour être mises en contact. Au sens de la présente invention, le dispositif peut préférentiellement encore se présenter sous la forme d'un « paper-based point-of-care NAATs (Nucleic acid amplification-based tests) ».Advantageously, the device according to the invention is in the form of a cartridge through which a solution or a microfluidic device can flow, for example in the form of a cell or a microfluidic chip. The device according to the invention can also take the form of a paper-based microfluidic device (“paper-based microfluidics”) consisting for example of a series of hydrophilic cellulose or nitrocellulose fibers which guide a liquid from one entry to a desired area by imbibition and/or capillary action. Optionally, the paper-based microfluidic device according to the invention is in the form of an origami ("paper-origami based"), that is to say in the form of a microfluidic paper of which parts are intended to be folded one on the other or on each other to be brought into contact. Within the meaning of the present invention, the device may also preferentially take the form of a “paper-based point-of-care NAATs (Nucleic acid amplification-based tests)”.
La présente invention porte également sur un ensemble comprenant : - un dispositif selon l'invention ; et - un appareil ou un appareillage pouvant être relié électriquement aux électrodes pour effectuer des mesures électrochimiques, de préférence des mesures électrochimiques voltampérométriques, plus préférentiellement des mesures électrochimiques voltampérométriques cycliques ou à ondes carrées.The present invention also relates to an assembly comprising: - a device according to the invention; and - an apparatus or apparatus that can be electrically connected to the electrodes to perform electrochemical measurements, preferably electrochemical voltammetric measurements, more preferably cyclic electrochemical voltammetric measurements or square waves.
Typiquement, pour réaliser des mesures électrochimiques, de préférence des mesures électrochimigues voltampérométriques, plus préférentiellement des mesures électrochimiques voltampérométriques cycliques ou à ondes carrées, l’appareillage comprend un potentiostat pour appliquer une différence de potentiel entre les électrodes et/ou une unité de traitement de signaux émis par le potentiostat ou reçus par le potentiostat.Typically, to carry out electrochemical measurements, preferably electrochemical voltammetric measurements, more preferably cyclic or square wave electrochemical voltammetric measurements, the apparatus comprises a potentiostat for applying a potential difference between the electrodes and/or a processing unit of signals emitted by the potentiostat or received by the potentiostat.
La présente invention porte également sur un procédé de détection de la présence d’au moins un ADN cible et/ou d’au moins un ARN cible dans un échantillon, en particulier dans un échantillon liquide, ledit procédé comprenant les étapes suivantes : - une étape d'introduction dudit échantillon dans un dispositif selon l'invention ou dans un dispositif d'un ensemble selon l'invention ; - une première étape de mise en contact, au sein dudit dispositif, dudit échantillon avec des réactifs intrnsèquement présents dans ledit dispositif pour réaliser une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible ; - une deuxième étape de mise en contact, au sein dudit dispositif, pendant ou après ladite première mise en contact, dudit échantillon avec une molécule non intercalante ou avec un composé non intercalant intrinsèquement présent(e) dans ledit dispositif, en particulier avec une molécule non intercalante ou avec un composé non intercalant intrinsèquement présent(e) dans ledit dispositif présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible ; - une troisième étape de mise en contact, au sein dudit dispositif, pendant ou après ladite première mise en contact et/ou pendant ou après ladite deuxième mise en contact, dudit échantillon avec des électrodes reliées électriquement à un appareil ou à un appareillage pour réaliser au moins une mesure électrochimique, pour déterminer si une liaison est / a été établie entre ledit au moins un ADN cible et/ou ledit au moins un ARN cible et ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier entre ledit au moins un ADN cible et/ou ledit au moins un ARN cible et ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo- réductrices, afin de déduire que ledit au moins un ADN cible et/ou ledit au moins un ARN cible est présent ou non dans ledit échantillon et d’assurer une détection dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible.The present invention also relates to a method for detecting the presence of at least one target DNA and/or at least one target RNA in a sample, in particular in a liquid sample, said method comprising the following steps: - a step of introducing said sample into a device according to the invention or into a device of an assembly according to the invention; - a first step of bringing said sample into contact, within said device, with reagents intrinsically present in said device to carry out an amplification of said at least one target DNA and/or of said at least one target RNA to obtain amplicons of said at least a target DNA and/or said at least one target RNA; - a second step of bringing into contact, within said device, during or after said first bringing into contact, said sample with a non-intercalating molecule or with a non-intercalating compound intrinsically present in said device, in particular with a molecule non-intercalating or with a non-intercalating compound intrinsically present in said device having redox properties, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA; - a third step of bringing into contact, within said device, during or after said first bringing into contact and/or during or after said second bringing into contact, said sample with electrodes electrically connected to a device or to an apparatus for carrying out at least one electrochemical measurement, to determine whether a bond is/has been established between said at least one target DNA and/or said at least one target RNA and said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound, in particular between said at least one target DNA and/or said at least one target RNA and said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound having redox properties, in order to deduce that said at least one target DNA and/or said at least one target RNA is present or not in said sample and to ensure detection of said at least one target DNA and/or of said at least one target RNA.
De préférence, le procédé selon l'invention comprend un chauffage dudit échantillon pendant que ce dernier est en contact ou après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible.Preferably, the method according to the invention comprises heating said sample while the latter is in contact or after the latter has been in contact with said reagents allowing the amplification of said at least one target DNA and/or of said at least one target RNA to obtain amplicons of said at least one target DNA and/or of said at least one target RNA.
Avantageusement, selon l'invention, ladite première étape de mise en contact et/ou ladite deuxième étape de mise en contact consiste en une mise en solution par ledit échantillon desdits réactifs intrinsèquement présents dans ledit dispositif pour réaliser une amplification dudit au moins un ADN cible et/ou dudit au moins un ARN cible pour obtenir des amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou des amplicons dudit au moins un ARN cible, et/ou en une mise en solution par ledit échantillon de ladite molécule non intercalante ou dudit composé non intercalant intrinsèquement présent(e) dans ledit dispositif, en particulier en une mise en solution de ladite molécule non intercalante ou dudit composé non intercalant intrinsèquement présent(e) dans ledit dispositif et présentant des propriétés oxydo-réductrices, pour permettre l’établissement d’une liaison entre lesdits amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou lesdits amplicons dudit au moins un ARN cible et ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier pour permettre l’établissement d’une liaison entre lesdits amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou lesdits amplicons dudit au moins un ARN cible et ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices.Advantageously, according to the invention, said first step of bringing into contact and/or said second step of bringing into contact consists of dissolving by said sample said reagents intrinsically present in said device to carry out an amplification of said at least one target DNA and/or of said at least one target RNA to obtain amplicons of said at least one target DNA and/or amplicons of said at least one target RNA, and/or in solution by said sample of said non-intercalating molecule or of said compound non-intercalating intrinsically present in said device, in particular by dissolving said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound intrinsically present in said device and having oxido-reducing properties, to allow the establishment of a bond between said amplicons of said at least one target DNA and/or said amplicons of said at least one target RNA and said non-intercalating molecule e or said non-intercalating compound, in particular to allow the establishment of a bond between said amplicons of said at least one target DNA and/or said amplicons of said at least one target RNA and said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound exhibiting redox properties.
De préférence, le procédé selon l'invention comprend une étape de lyse dudit échantillon, de préférence une étape de lyse dudit échantillon réalisée en amont de ladite première et/ou de ladite deuxième étape de mise en contact.Preferably, the method according to the invention comprises a step of lysis of said sample, preferably a step of lysis of said sample carried out upstream of said first and/or of said second contacting step.
La présente invention porte encore sur l’utilisation d’un dispositif selon l'invention ou d’un ensemble selon l’invention pour détecter la présence d’au moins un ADN cible et/ou d’au moins un ARN cible dans un échantillon.The present invention also relates to the use of a device according to the invention or of an assembly according to the invention for detecting the presence of at least one target DNA and/or at least one target RNA in a sample. .
D'autres caractéristiques, détails et avantages de l'invention ressortiront des exemples donnés ci-après, à titre non limitatif et en faisant référence aux figures annexées. Généralement, sur les figures, les éléments similaires portent la même référence.Other characteristics, details and advantages of the invention will emerge from the examples given below, on a non-limiting basis and with reference to the appended figures. Generally, in the figures, similar elements bear the same reference.
La figure 1 illustre un premier exemple d’un mode de réalisation d’un dispositif selon l'invention.Figure 1 illustrates a first example of an embodiment of a device according to the invention.
La figure 2 illustre un second exemple d’un mode de réalisation d’un dispositif selon l'invention.Figure 2 illustrates a second example of an embodiment of a device according to the invention.
La figure 3 illustre un troisième exemple d’un mode de réalisation d’un dispositif selon l'invention.Figure 3 illustrates a third example of an embodiment of a device according to the invention.
La figure 4 illustre un quatrième exemple d’un mode de réalisation d’un dispositif selon l'invention.Figure 4 illustrates a fourth example of an embodiment of a device according to the invention.
Les figures 5A, 5B et 5C sont des vues éclatées d'exemples de modes de réalisation de dispositifs selon l'invention et illustrent les composants de différents modes de réalisation d’un dispositif selon l'invention.Figures 5A, 5B and 5C are exploded views of exemplary embodiments of devices according to the invention and illustrate the components of different embodiments of a device according to the invention.
Les figures 6A, 6B, 6C, 6D et 6E sont des vues éclatées d'exemples de modes de réalisation de dispositifs selon l'invention et illustrent également les composants de différents modes de réalisation d’un dispositif selon l'invention.Figures 6A, 6B, 6C, 6D and 6E are exploded views of exemplary embodiments of devices according to the invention and also illustrate the components of different embodiments of a device according to the invention.
Les figures 7A, 7B, 7C, 7D, 7E et 7F illustrent encore des exemples de modes de réalisation de dispositifs selon l'invention.FIGS. 7A, 7B, 7C, 7D, 7E and 7F further illustrate examples of embodiments of devices according to the invention.
Exemples La figure 1 illustre un premier mode de réalisation d’un dispositif selon l'invention qui, comme illustré comprend une première partie ou zone 1, une deuxième partie ou zone 2, des électrodes 3 et un élément chauffant électrique 4. Optionnellement, comme illustré par les pointillés, ce mode de réalisation d’un dispositif selon l’invention peut comprendre une partie ou zone additionnelle 5 comprenant des réactifs pour lyser l’échantillon ou une solution pour lyser un échantillon prélevé au départ d’un individu. La figure 1 illustre un exemple d’un dispositif selon l'invention qui pourrait se présenter sous la forme d’une cartouche ou d’un dispositif microfluidique, par exemple sous la forme d’un dispositif microfluidique à base de papier (« paper-based microfluidics » ou « paper-origami based » ou « paper-based point-of-care NAATS »).Examples FIG. 1 illustrates a first embodiment of a device according to the invention which, as illustrated, comprises a first part or zone 1, a second part or zone 2, electrodes 3 and an electric heating element 4. Optionally, as illustrated by the dotted lines, this embodiment of a device according to the invention can comprise an additional part or zone 5 comprising reagents for lysing the sample or a solution for lysing a sample taken from an individual. FIG. 1 illustrates an example of a device according to the invention which could be in the form of a cartridge or of a microfluidic device, for example in the form of a microfluidic device based on paper (“paper- based microfluidics” or “paper-origami based” or “paper-based point-of-care NAATS”).
Le dispositif selon l’invention comprend intrinsèquement dans une première partie ou zone 1, des réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de l'ADN cible et/ou de l'ARN cible potentiellement contenu dans l’échantillon (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse). Le dispositif comprend également intrinsèquement dans une deuxième partie ou zone 2 une molécule non intercalante ou un composé non intercalant, en particulier une molécule non intercalante ou un composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible. Avec un tel dispositif selon l'invention, l’échantillon prélevé au départ d’un individu est de préférence lysé, c’est-à-dire mis en solution dans une solution de lyse, avant d’être introduit dans le dispositif comme indiqué par la flèche. Lorsque, par exemple sous l’effet de la gravité, l'échantillon lysé gagne la première partie ou zone 1, il entre en contact avec les réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de VADN cible et/ou de l'ARN cible (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse), dans la première partie ou zone 1 sous l'effet d’un chauffage à une température prédéterminée par l'élément chauffant électrique 4. Des amplicons de l’ADN cible et/ou de l'ARN cible sont ainsi obtenus à condition que cet ADN cible et/ou que cet ARN cible soit présent dans l’échantillon prélevé au départ de l'individu. Les amplicons obtenus gagnent alors, par exemple sous l’effet de la gravité, la deuxième partie ou zone 2 comprenant une molécule non intercalante ou un composé non intercalant, en particulier une molécule non intercalante ou un composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible.The device according to the invention intrinsically comprises in a first part or zone 1, reagents allowing the realization of an amplification of said target DNA and/or of said target RNA to obtain amplicons of the target DNA and/or of the RNA target potentially contained in the sample (e.g. performing loop-mediated isothermal amplification or performing reverse transcription loop-mediated isothermal amplification). The device also intrinsically comprises in a second part or zone 2 a non-intercalating molecule or a non-intercalating compound, in particular a non-intercalating molecule or a non-intercalating compound having oxidation-reducing properties, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA. With such a device according to the invention, the sample taken from an individual is preferably lysed, that is to say dissolved in a lysis solution, before being introduced into the device as indicated by the arrow. When, for example under the effect of gravity, the lysed sample reaches the first part or zone 1, it comes into contact with the reagents making it possible to carry out an amplification of said target DNA and/or of said target RNA to obtain amplicons of target DNA and/or target RNA (e.g. performing loop-mediated isothermal amplification or performing reverse transcription loop-mediated isothermal amplification), in the first part or zone 1 under the effect of heating to a predetermined temperature by the electric heating element 4. Amplicons of the target DNA and/or of the target RNA are thus obtained provided that this target DNA and/or that this target RNA is present in the sample taken at the departure of the individual. The amplicons obtained then gain, for example under the effect of gravity, the second part or zone 2 comprising a non-intercalating molecule or a non-intercalating compound, in particular a non-intercalating molecule or a non-intercalating compound having redox properties , capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA.
Selon le mode de réalisation illustré, les électrodes 3 (électrode de travail, contre-électrode ou électrode auxiliaire et électrode de référence) sont en contact avec l’échantillon après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de l'ADN cible et/ou de l'ARN cible (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse), et avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant, en particulier avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible. Les électrodes 3 sont également accessibles électriquement depuis l’extérieur du dispositif selon l'invention de telle sorte qu’elles peuvent être reliées électriquement à un appareillage (non illustré) permettant de réaliser des mesures électrochimiques (de préférence des mesures électrochimiques voltampérométriques, plus préférentiellement des mesures électrochimiques voltampérométriques cycliques ou à ondes carrées) utilisant un indicateur redox (Molécule non intercalante ou composé non intercalant), le principe et la mise en œuvre d’une telle mesure électrochimique étant bien connus de l'homme de métier.According to the illustrated embodiment, the electrodes 3 (working electrode, counter-electrode or auxiliary electrode and reference electrode) are in contact with the sample after the latter has been in contact with said reagents allowing the realization of the amplifying said target DNA and/or said target RNA to obtain target DNA and/or target RNA amplicons (for example performing isothermal loop-mediated amplification or performing isothermal mediated amplification by reverse transcription loop), and with said non-intercalating molecule or with said non-intercalating compound, in particular with said non-intercalating molecule or with said non-intercalating compound exhibiting oxido-reducing properties, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA. The electrodes 3 are also electrically accessible from the outside of the device according to the invention so that they can be electrically connected to an apparatus (not shown) making it possible to carry out electrochemical measurements (preferably electrochemical voltammetric measurements, more preferably cyclic or square wave voltammetric electrochemical measurements) using a redox indicator (non-intercalating molecule or non-intercalating compound), the principle and implementation of such an electrochemical measurement being well known to those skilled in the art.
Lorsque le mode de réalisation illustré à la figure 1 comprend également une partie ou zone additionnelle 5 comprenant une solution ou des réactifs pour lyser un échantillon prélevé au départ d’un individu, l’échantillon peut être directement introduit dans le dispositif au niveau de la partie ou zone additionnelle 5 dans laquelle l’échantillon est lysé avant de gagner, par exemple sous l’effet de la gravité, la première partie ou zone 1 puis la deuxième partie ou zone2.When the embodiment illustrated in FIG. 1 also comprises an additional part or zone 5 comprising a solution or reagents for lysing a sample taken from an individual, the sample can be introduced directly into the device at the level of the additional part or zone 5 in which the sample is lysed before reaching, for example under the effect of gravity, the first part or zone 1 then the second part or zone2.
La figure 2 illustre un second mode de réalisation d’un dispositif selon l'invention. La figure 2 illustre un exemple d’un dispositif selon l'invention qui pourrait se présenter sous la forme d’une cartouche ou d’un dispositif microfluidique, par exemple sous la forme d’un dispositif microfluidique à base de papier (« paper-based microfluidics » ou «paper-origami based » ou « paper-based point-of-care NAATs »). Les mêmes éléments que ceux illustrés à la figure 1 sont repris. Toutefois, selon le mode de réalisation tel qu'illustré à la figure 2, la première partie ou zone 1 et la deuxième partie ou zone 2 sont situées à un même niveau, c’est-à-dire dans une même zone ou un même compartiment. Par exemple, la molécule non intercalante ou le composé non intercalant, en particulier la molécule non intercalante ou le composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins unFigure 2 illustrates a second embodiment of a device according to the invention. FIG. 2 illustrates an example of a device according to the invention which could be in the form of a cartridge or of a microfluidic device, for example in the form of a paper-based microfluidic device (“paper- based microfluidics” or “paper-origami based” or “paper-based point-of-care NAATs”). The same elements as those illustrated in FIG. 1 are repeated. However, according to the embodiment as illustrated in FIG. 2, the first part or zone 1 and the second part or zone 2 are located at the same level, that is to say in the same zone or the same compartment. For example, the non-intercalating molecule or the non-intercalating compound, in particular the non-intercalating molecule or the non-intercalating compound having redox properties, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least minus one
ARN cible, situé(e) dans la deuxième partie ou zone 2, peut revêtir les parois latérales d’une zone ou d’un compartiment du dispositif en entourant ainsi la première partie ou zone 1 comprenant les réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de ADN cible et/ou de l'ARN cible potentiellement contenu dans l’échantillon (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse). Il n’est pas exclu, selon l'invention, que les réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible et que ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant, en particulier ladite molécule non intercalante ou ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible, soient présents en mélange dans une même zone ou dans un même compartiment, lequel comprendrait alors ladite première et ladite deuxième partie ou zone.Target RNA, located in the second part or zone 2, can coat the side walls of a zone or a compartment of the device, thus surrounding the first part or zone 1 comprising the reagents allowing the amplification to be carried out of said target DNA and/or said target RNA to obtain amplicons of target DNA and/or target RNA potentially contained in the sample (for example performing loop-mediated isothermal amplification or performing isothermal amplification mediated by reverse transcription loop). It is not excluded, according to the invention, that the reagents allowing the amplification of said target DNA and/or said target RNA and that said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound, in particular said non-intercalating molecule or said non-intercalating compound having oxidation-reduction properties, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA, are present as a mixture in the same zone or in the same compartment, which would then comprise said first and said second part or zone.
La figure 3 illustre un troisième mode de réalisation d’un dispositif selon l'invention. La figure 3 illustre un exemple d’un dispositif selon l'invention qui pourrait se présenter sous la forme d’une cartouche ou d’un dispositif microfluidique, par exemple sous la forme d’un dispositif microfluidique à base de papier (« paper-based microfluidics » ou « paper-origami based » ou « paper-based point-of-care NAATS »). A la différence du mode de réalisation illustré à la figure 1, celui illustré à la figure 3 comprend une partie ou zone 7 supplémentaire située en amont et en contact avec les électrodes 3 dans un sens d'écoulement de l'échantillon.Figure 3 illustrates a third embodiment of a device according to the invention. FIG. 3 illustrates an example of a device according to the invention which could be in the form of a cartridge or of a microfluidic device, for example in the form of a microfluidic device based on paper (“paper- based microfluidics” or “paper-origami based” or “paper-based point-of-care NAATS”). Unlike the embodiment illustrated in FIG. 1, that illustrated in FIG. 3 comprises an additional part or zone 7 located upstream and in contact with the electrodes 3 in a flow direction of the sample.
Le mode de réalisation illustré à la figure 4 est identique à celui de la figure 3 hormis le fait que le chauffage assuré par l’élément chauffant électrique 4 s'effectue au niveau de la partie ou zone 7 supplémentaire située en amont et en contact avec les électrodes 3 dans un sens d'écoulement de l’échantillon plutôt qu’au niveau de la première partie ou zone 1. La figure 4 illustre un exemple d’un dispositif selon l’invention qui pourrait se présenter sous la forme d’une cartouche ou d’un dispositif microfluidique, par exemple sous la forme d’un dispositif microfluidique à base de papier (« paper-based microfluidics » ou « paper-origami based » ou « paper-based point-of-care NAATS »).The embodiment illustrated in FIG. 4 is identical to that of FIG. 3 except for the fact that the heating provided by the electric heating element 4 takes place at the level of the additional part or zone 7 located upstream and in contact with the electrodes 3 in a flow direction of the sample rather than at the level of the first part or zone 1. FIG. 4 illustrates an example of a device according to the invention which could be in the form of a cartridge or a microfluidic device, for example in the form of a paper-based microfluidic device (“paper-based microfluidics” or “paper-origami based” or “paper-based point-of-care NAATS”).
Les figures 5A, 5B et 5C illustrent les composants de différents modes de réalisation d’un dispositif selon l'invention.Figures 5A, 5B and 5C illustrate the components of different embodiments of a device according to the invention.
Plus particulièrement, les figures 5A, 5B et 5C illustrent les composants d’un dispositif A selon l'invention qui se présente sous la forme d’un cylindre constituant par exemple une cartouche.More particularly, FIGS. 5A, 5B and 5C illustrate the components of a device A according to the invention which is in the form of a cylinder constituting for example a cartridge.
A la figure 5A, le dispositif A selon l'invention comprend une première partie constituée par exemple d’un disque perméable 1+2, par exemple d’un disque perméable en matière cellulosique, comprenant à la fois les réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de l’ADN cible et/ou de l'ARN cible (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse), et la molécule non intercalante ou le composé non intercalant, en particulier la molécule non intercalante ou le composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible.In FIG. 5A, the device A according to the invention comprises a first part consisting for example of a 1+2 permeable disc, for example of a permeable disc made of cellulosic material, comprising both the reagents allowing the production of the amplifying said target DNA and/or said target RNA to obtain amplicons of the target DNA and/or target RNA (for example performing loop-mediated isothermal amplification or performing isothermal amplification mediated by reverse transcription loop), and the non-intercalating molecule or the non-intercalating compound, in particular the non-intercalating molecule or the non-intercalating compound having oxidoreductive properties, capable of binding to the amplicons of the said at least one target DNA and / or to the amplicons of said at least one target RNA.
Un élément chauffant électrique (non illustré) assure un chauffage du disque perméable 1+2 à une température prédéterminée pour assurer l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de l'ADN cible et/ou l'ARN cible (par exemple une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse). Selon le mode de réalisation de la figure 5A, des électrodes 3 au nombre de trois sont en contact avec l’échantillon pendant que ce dernier est en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de l'ADN cible et/ou de VADN cible (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse), et avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant, en particulier avec ladite molécule non intercalante ou avec ledit composé non intercalant présentant des propriétés oxydo- réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible.An electrical heating element (not shown) provides heating of the 1+2 permeable disc to a predetermined temperature to ensure the amplification of said target DNA and/or said target RNA to obtain amplicons of the target DNA and/or the RNA target (e.g. loop-mediated isothermal amplification or performing reverse transcription loop-mediated isothermal amplification). According to the embodiment of FIG. 5A, three electrodes 3 are in contact with the sample while the latter is in contact with said reagents enabling the amplification of said target DNA and/or said target RNA to be carried out. to obtain amplicons of target DNA and/or target DNA (e.g. performing loop-mediated isothermal amplification or performing reverse transcription loop-mediated isothermal amplification), and with said molecule not intercalating compound or with said non-intercalating compound, in particular with said non-intercalating molecule or with said non-intercalating compound having redox properties, capable of binding to amplicons of said at least one target DNA and/or to amplicons of said at least one RNA target.
En outre, les électrodes 3 sont également accessibles électriquement depuis l’extérieur du dispositif selon l'invention de telle sorte qu’elles peuvent être reliées électriquement à un appareillage (non illustré) permettant de réaliser des mesures électrochimiques (de préférence des mesures électrochimiques voltampérométriques, plus préférentiellement des mesures électrochimiques voltampérométriques cycliques ou à ondes carrées) utilisant un indicateur redox (molécule non intercalante ou composé non intercalant), le principe et la mise en œuvre d’une telle mesure électrochimique étant bien connus de l'homme de métier. Comme illustré à la figure 5A, les électrodes 3 du dispositif A selon l'invention peuvent être reliées électriquement à un appareillage (non illustré) par l'intermédiaire d’une base B ou d'un socle muni de connecteurs. Par exemple, le dispositif A selon l'invention peut être visé ou clipsé sur le socle ou la base B pour assurer un contact adéquat entre les connecteurs et les électrodes 3.In addition, the electrodes 3 are also electrically accessible from outside the device according to the invention so that they can be electrically connected to an apparatus (not shown) making it possible to carry out electrochemical measurements (preferably electrochemical voltammetric measurements , more preferably cyclic or square-wave voltammetric electrochemical measurements) using a redox indicator (non-intercalating molecule or non-intercalating compound), the principle and implementation of such an electrochemical measurement being well known to those skilled in the art. As illustrated in FIG. 5A, the electrodes 3 of the device A according to the invention can be electrically connected to an apparatus (not illustrated) via a base B or a base provided with connectors. For example, the device A according to the invention can be screwed or clipped onto the base or the base B to ensure adequate contact between the connectors and the electrodes 3.
La figure 5B est identique à la figure 5A mais le dispositif A illustré comprend en plus une partie ou zone additionnelle 5 comprenant des réactifs ou une solution pour lyser un échantillon prélevé au départ d’un individu. De la sorte, l'échantillon peut être directement introduit dans le dispositif au niveau de la partie ou zone additionnelle 5 dans laquelle l’échantillon est lysé avant de gagner, par exemple sous l’effet de la gravité, la partie constituée par exemple d’un disque perméable 1+2 comprenant à la fois les réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de VADN cible et/ou de l'ARN cible (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse), et la molécule non intercalante ou le composé non intercalant, en particulier la molécule non intercalante ou le composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible.FIG. 5B is identical to FIG. 5A but the device A illustrated also comprises an additional part or zone 5 comprising reagents or a solution for lysing a sample taken from an individual. In this way, the sample can be introduced directly into the device at the level of the additional part or zone 5 in which the sample is lysed before reaching, for example under the effect of gravity, the part consisting for example of a 1+2 permeable disk comprising both the reagents allowing the amplification of said target DNA and/or said target RNA to obtain amplicons of target DNA and/or target RNA (for example the production of loop-mediated isothermal amplification or performing reverse transcription loop-mediated isothermal amplification), and the non-intercalating molecule or the non-intercalating compound, in particular the non-intercalating molecule or the non-intercalating compound having oxidative properties -reductive, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA.
La figure 5C est identique à la figure 5B mais le dispositif A illustré comprend en plus une vanne 6, par exemple une vanne à tiroir rotative, permettant de commander le passage de l'échantillon depuis la partie ou zone additionnelle 5 où il est lysé vers la partie constituée par exemple d’un disque perméable 1+2 comprenant à la fois les réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de l'ADN cible et/ou de l’ARN cible (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse), et la molécule non intercalante ou le composé non intercalant, en particulier la molécule non intercalante ou le composé non intercalant présentant des propriétés oxydo- réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible.FIG. 5C is identical to FIG. 5B but the device A illustrated additionally comprises a valve 6, for example a rotary slide valve, making it possible to control the passage of the sample from the part or additional zone 5 where it is lysed towards the part consisting for example of a 1+2 permeable disk comprising both the reagents allowing the amplification of said target DNA and/or said target RNA to obtain amplicons of the target DNA and/or of the target RNA (e.g. performing loop-mediated isothermal amplification or performing reverse transcription loop-mediated isothermal amplification), and the non-intercalating molecule or the non-intercalating compound, in particular the non-intercalating molecule or the non-intercalating compound exhibiting redox properties, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA.
Les dispositifs illustrés aux figures 5A, 5B et 5C comprennent intrinsèquement les réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible et la molécule non intercalante ou le composé non intercalant, en particulier la molécule non intercalante ou le composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible et, éventuellement des réactifs ou une solution pour lyser un échantillon prélevé au départ d’un individu.The devices illustrated in FIGS. 5A, 5B and 5C intrinsically comprise the reagents making it possible to carry out the amplification of said target DNA and/or of said target RNA and the non-intercalating molecule or the non-intercalating compound, in particular the non-intercalating molecule or the compound non-intercalating having oxidation-reduction properties, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA and, optionally reagents or a solution for lysing a sample taken from a individual.
Les figures 6A, GB, 6C, 6D et 6E illustrent également les composants de différents modes de réalisation d’un dispositif selon Pinvention. Plus particulièrement, les figures 6A, 6B, 6C, 6D et GE illustrent les composants d’un dispositif A selon l'invention qui se présente sous la forme d’un cylindre constituant par exemple une cartouche. A la figure GA, le dispositif A selon l'invention comprend : - une première partie 1 constituée par exemple d’un disque perméable, par exemple d’un disque perméable en matière cellulosique, comprenant les réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de l’ADN cible et/ou de l'ARN cible (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse) ; et - une deuxième partie 2 constituée par exemple d’un disque perméable, par exemple d’un disque perméable en matière cellulosique, comprenant la molécule non intercalante ou le composé non intercalant, en particulier la molécule non intercalante ou le composé non intercalant présentant des propriétés oxydo- réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible.Figures 6A, GB, 6C, 6D and 6E also illustrate the components of different embodiments of a device according to the invention. More particularly, FIGS. 6A, 6B, 6C, 6D and GE illustrate the components of a device A according to the invention which is in the form of a cylinder constituting for example a cartridge. In figure GA, the device A according to the invention comprises: - a first part 1 consisting for example of a permeable disc, for example of a permeable disc made of cellulosic material, comprising the reagents allowing the realization of the amplification of said target DNA and/or said target RNA to obtain amplicons of target DNA and/or target RNA (e.g. performing loop-mediated isothermal amplification or performing loop-mediated isothermal amplification reverse transcription); and - a second part 2 consisting for example of a permeable disk, for example a permeable disk of cellulosic material, comprising the non-intercalating molecule or the non-intercalating compound, in particular the non-intercalating molecule or the non-intercalating compound having redox properties, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA.
Un élément chauffant électrique (non illustré) assure un chauffage d’au moins le disque perméable 1 à une température prédéterminée pour assurer l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de l’ADN cible et/ou de ARN cible (par exemple pour assurer une amplification isothermique à médiation par boucles ou pour assurer une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse). Selon le mode de réalisation de la figure GA, des électrodes 3 au nombre de trois sont en contact avec l'échantillon après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de l'ADN cible et/ou de l'ARN cible (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse), et avec la molécule non intercalante ou avec le composé non intercalant, en particulier avec la molécule non intercalante ou avec le composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible. En outre, les électrodes 3 sont également accessibles électriquement depuis l’extérieur du dispositif selon l'invention de telle sorte qu’elles peuvent être reliées électriquement à un appareillage (non illustré) permettant de réaliser des mesures électrochimiques (de préférence des mesures électrochimiques voltampérométriques, plus préférentiellement des mesures électrochimiques voltampérométriques cycliques ou à ondes carrées) utilisant un indicateur redox (Molécule non intercalante ou composé non intercalant), le principe et la mise en œuvre d’une telle mesure électrochimique étant bien connus de l'homme de métier. Comme illustré à la figure GA, les électrodes 3 du dispositif A selon l'invention peuvent être reliées électriquement à un appareillage (non illustré) par l'intermédiaire d’une base B ou d’un socle muni de connecteurs. Par exemple, le dispositif A selon l'invention peut être visé ou clipsé sur le socle ou la base B pour assurer un contact adéquat entre les connecteurs et les électrodes 3.An electric heating element (not shown) heats at least the permeable disc 1 to a predetermined temperature to ensure the amplification of said target DNA and/or said target RNA to obtain amplicons of the target DNA and/or target RNA (e.g. to provide loop-mediated isothermal amplification or to provide reverse transcription loop-mediated isothermal amplification). According to the embodiment of FIG. GA, three electrodes 3 are in contact with the sample after the latter has been in contact with said reagents allowing amplification of said target DNA and/or said RNA to be carried out. target to obtain amplicons of the target DNA and/or target RNA (e.g., performing loop-mediated isothermal amplification or performing reverse transcription loop-mediated isothermal amplification), and with the non-intercalating molecule or with the non-intercalating compound, in particular with the non-intercalating molecule or with the non-intercalating compound exhibiting oxidation-reduction properties, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least least one target RNA. In addition, the electrodes 3 are also electrically accessible from outside the device according to the invention so that they can be electrically connected to an apparatus (not shown) making it possible to carry out electrochemical measurements (preferably electrochemical voltammetric measurements , more preferably cyclic or square wave voltammetric electrochemical measurements) using a redox indicator (non-intercalating molecule or non-intercalating compound), the principle and implementation of such an electrochemical measurement being well known to those skilled in the art. As illustrated in figure GA, the electrodes 3 of the device A according to the invention can be electrically connected to an apparatus (not illustrated) via a base B or a base provided with connectors. For example, the device A according to the invention can be screwed or clipped onto the base or the base B to ensure adequate contact between the connectors and the electrodes 3.
La figure 6B est identique à la figure 6A mais une vanne 6, par exemple une vanne à tiroir rotative, sépare la première partie 1 de la deuxième partie 2 et permet de commander le passage de l’échantillon depuis la première partie 1 comprenant les réactifs permettant la réalisation de l’amplification duditFIG. 6B is identical to FIG. 6A but a valve 6, for example a rotary slide valve, separates the first part 1 from the second part 2 and makes it possible to control the passage of the sample from the first part 1 comprising the reagents allowing the realization of the amplification of said
ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de l'ADN cible et/ou de l'ARN cible (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse), vers la deuxième partie 2 comprenant la molécule non intercalante ou le composé non intercalant, en particulier la molécule non intercalante ou le composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible.target DNA and/or said target RNA to obtain amplicons of target DNA and/or target RNA (e.g. performing loop-mediated isothermal amplification or performing loop-mediated isothermal amplification reverse transcription), to the second part 2 comprising the non-intercalating molecule or the non-intercalating compound, in particular the non-intercalating molecule or the non-intercalating compound having oxidoreductive properties, capable of binding to the amplicons of the said at least one DNA target and/or to the amplicons of said at least one target RNA.
La figure 6C est identique à la figure 6A mais le dispositif A illustré comprend en plus une partie ou zone additionnelle 5 comprenant des réactifs ou une solution pour lyser un échantillon prélevé au départ d’un individu. De la sorte, l'échantillon peut être directement introduit dans le dispositif au niveau de la partie ou zone additionnelle 5 dans laquelle l’échantillon est lysé avant de gagner, par exemple sous l’effet de la gravité, la première partie 1 constituée par exemple d'un disque perméable comprenant les réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de l’ADN cible et/ou de l’ARN cible (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse), puis vers la deuxième partie 2 comprenant la molécule non intercalante ou le composé non intercalant, en particulier la molécule non intercalante ou le composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible. La figure 6D est identique à la figure 6C mais le dispositif A illustré comprend en plus une vanne 6’, par exemple une vanne à tiroir rotative, permettant de commander le passage de l'échantillon depuis la partie ou zone additionnelle 5 où il est lysé vers la première partie 1 constituée par exemple d’un disque perméable comprenant les réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de ADN cible et/ou de ARN cible (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse) puis vers la deuxième partie 2 comprenant la molécule non intercalante ou le composé non intercalant,FIG. 6C is identical to FIG. 6A but the device A illustrated also comprises an additional part or zone 5 comprising reagents or a solution for lysing a sample taken from an individual. In this way, the sample can be introduced directly into the device at the level of the additional part or zone 5 in which the sample is lysed before reaching, for example under the effect of gravity, the first part 1 constituted by example of a permeable disk comprising the reagents allowing the amplification of said target DNA and/or said target RNA to obtain amplicons of the target DNA and/or of the target RNA (for example the production of a loop-mediated isothermal amplification or performing reverse transcription loop-mediated isothermal amplification), then to the second part 2 comprising the non-intercalating molecule or the non-intercalating compound, in particular the non-intercalating molecule or the non-intercalating compound having redox properties, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA. FIG. 6D is identical to FIG. 6C but the device A illustrated additionally comprises a valve 6′, for example a rotary slide valve, making it possible to control the passage of the sample from the part or additional zone 5 where it is lysed. to the first part 1 consisting for example of a permeable disk comprising the reagents allowing the realization of the amplification of said target DNA and/or of said target RNA to obtain amplicons of target DNA and/or of target RNA (for example the realization of an isothermal amplification mediated by loops or the production of an isothermal amplification mediated by a reverse transcription loop) then to the second part 2 comprising the non-intercalating molecule or the non-intercalating compound,
en particulier la molécule non intercalante ou le composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible.in particular the non-intercalating molecule or the non-intercalating compound exhibiting oxidation-reduction properties, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA.
La figure 6E est identique à la figure 6D mais le dispositif A illustré comprend en plus une vanne 6, par exemple une vanne à tiroir rotative, permettant de commander le passage de l’échantillon depuis la première partie 1 constituée par exemple d’un disque perméable comprenant les réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de l’ADN cible et/ou de l'ARN cible (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse), vers la deuxième partie 2 comprenant la molécule non intercalante ou le composé non intercalant, en particulier la molécule non intercalante ou le composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible.FIG. 6E is identical to FIG. 6D but the device A illustrated additionally comprises a valve 6, for example a rotary slide valve, making it possible to control the passage of the sample from the first part 1 consisting for example of a disc permeable cell comprising the reagents allowing the realization of the amplification of said target DNA and/or of said target RNA to obtain amplicons of the target DNA and/or of the target RNA (for example the realization of an isothermal amplification mediated by loops or carrying out isothermal amplification mediated by reverse transcription loop), to the second part 2 comprising the non-intercalating molecule or the non-intercalating compound, in particular the non-intercalating molecule or the non-intercalating compound having redox properties , capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA.
Les dispositifs illustrés aux figures GA, 6B, 6C, 6D et 6E comprennent intrinsèquement les réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible et la molécule non intercalante ou le composé non intercalant, en particulier la molécule non intercalante ou le composé non intercalant présentant des propriétés oxydo- réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible et, éventuellement des réactifs ou une solution pour lyser un échantillon prélevé au départ d’un individu.The devices illustrated in FIGS. GA, 6B, 6C, 6D and 6E intrinsically comprise the reagents allowing the amplification of said target DNA and/or said target RNA and the non-intercalating molecule or the non-intercalating compound, in particular the non-intercalating molecule, to be carried out. intercalating compound or the non-intercalating compound exhibiting redox properties, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA and, optionally reagents or a solution for lysing a sample taken from the departure of an individual.
Les figures 7A, 7B, 7C, 7D, 7E et 7F illustrent des exemples de modes de réalisation de dispositifs selon l'invention sous forme de dispositifs microfluidiques (cellules ou puces microfluidiques) présentant une entrée E via laquelle un échantillon peut être introduit. Des éléments identiques à ceux illustrés aux figures précédentes sont repris.FIGS. 7A, 7B, 7C, 7D, 7E and 7F illustrate examples of embodiments of devices according to the invention in the form of microfluidic devices (cells or microfluidic chips) having an inlet E via which a sample can be introduced. Elements identical to those illustrated in the preceding figures are repeated.
En particulier, la figure 7E illustre un dispositif selon l'invention tel qu'illustré aux figures 7A à 7D à la différence près que les électrodes sont en contact direct avec une zone comprenant à la fois les réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de VADN cible et/ou de l'ARN cible (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse), et la molécule non intercalante ou le composé non intercalant, en particulier la molécule non intercalante ou le composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible.In particular, FIG. 7E illustrates a device according to the invention as illustrated in FIGS. 7A to 7D with the difference that the electrodes are in direct contact with an area comprising both the reagents allowing the amplification of said target DNA and/or said target RNA to obtain amplicons of target DNA and/or target RNA (e.g. performing loop-mediated isothermal amplification or performing transcription loop-mediated isothermal amplification inverse), and the non-intercalating molecule or the non-intercalating compound, in particular the non-intercalating molecule or the non-intercalating compound having redox properties, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA.
Selon le mode de réalisation d’un dispositif suivant l'invention illustré à la figure 7F, le (micro-)canal C d’une cellule ou puce microfluidique constitue une première zone ou partie du dispositif, cette première zone ou partie comprenant une première sous-zone (délimitée par les pointillés) où se trouvent les réactifs 1 permettant la réalisation de l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible pour obtenir des amplicons de PADN cible et/ou de l'ARN cible (par exemple la réalisation d’une amplification isothermique à médiation par boucles ou la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse) et une deuxième sous-zone (délimitée par les autres pointillés) où se trouve la molécule non intercalante ou le composé non intercalant, en particulier la molécule non intercalante ou le composé non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible, chacune de ces deux sous-zones étant situées dans ladite première zone ou partie du dispositif constituée par ledit (micro-)canal d’un dispositif microfluidique et étant donc en communication fluidique. Les dispositifs illustrés aux figures 7A, 7B, 7C, 7D, 7E et 7F comprennent intrinsèquement les réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ADN cible et/ou dudit ARN cible et la molécule non intercalante ou le composé non intercalant, en particulier la molécule non intercalante ou le composé non intercalant présentant des propriétés oxydo- réductrices, apte à se lier aux amplicons dudit au moins un ADN cible et/ou aux amplicons dudit au moins un ARN cible et, éventuellement des réactifs ou une solution pour lyser un échantillon prélevé au départ d’un individu. La présente invention a été décrite en relation avec des modes de réalisations spécifiques, qui ont une valeur purement illustrative et ne doivent pas être considérés comme limitatifs. D’une manière générale, il apparaîtra évident pour l’homme du métier que la présente invention n’est pas limitée aux exemples illustrés et/ou décrits ci-dessus.According to the embodiment of a device according to the invention illustrated in FIG. 7F, the (micro-)channel C of a microfluidic cell or chip constitutes a first zone or part of the device, this first zone or part comprising a first sub-zone (delimited by the dotted lines) where the reagents 1 are found, allowing the amplification of said target DNA and/or said target RNA to obtain amplicons of the target DNA and/or of the target RNA (for example the performing loop-mediated isothermal amplification or performing reverse transcription loop-mediated isothermal amplification) and a second subzone (delimited by the other dotted lines) where the non-intercalating molecule or the non-intercalating compound is located , in particular the non-intercalating molecule or the non-intercalating compound having redox properties, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one RNA target, each of these two sub-zones being located in said first zone or part of the device consisting of said (micro-)channel of a microfluidic device and therefore being in fluid communication. The devices illustrated in FIGS. 7A, 7B, 7C, 7D, 7E and 7F intrinsically comprise the reagents enabling the amplification of said target DNA and/or said target RNA and the non-intercalating molecule or the non-intercalating compound, in particular the non-intercalating molecule or the non-intercalating compound having redox properties, capable of binding to the amplicons of said at least one target DNA and/or to the amplicons of said at least one target RNA and, optionally reagents or a solution for lysing a sample taken from an individual. The present invention has been described in relation to specific embodiments, which are purely illustrative and should not be construed as limiting. In general, it will appear obvious to those skilled in the art that the present invention is not limited to the examples illustrated and/or described above.
L’usage des verbes « comprendre », « inclure », « comporter », ou toute autre variante, ainsi que leurs conjugaisons, ne peut en aucune façon exclure la présence d’éléments autres que ceux mentionnés. L’usage de l’article indéfini « un », «une », ou de l’article défini «le», «la» ou « l’ », pour introduire un élément n’exclut pas la présence d’une pluralité de ces éléments.The use of the verbs "understand", "include", "compose", or any other variant, as well as their conjugations, can in no way exclude the presence of elements other than those mentioned. The use of the indefinite article "un", "une", or of the definite article "le", "la" or "l'", to introduce an element does not exclude the presence of a plurality of these elements.
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Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2017014828A2 (en) * | 2015-05-20 | 2017-01-26 | President And Fellows Of Harvard College | Device and method for electrochemical detection |
WO2017117666A1 (en) * | 2016-01-08 | 2017-07-13 | Advanced Theranostics Inc. | Fully integrated, stand-alone, point-of-care device to detect target nucleic acids |
KR102062980B1 (en) * | 2018-04-11 | 2020-02-11 | 부산대학교 산학협력단 | Amplified double-stranded DNA detection method and apparatus using the same |
-
2021
- 2021-04-07 BE BE20215267A patent/BE1029278B1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2017014828A2 (en) * | 2015-05-20 | 2017-01-26 | President And Fellows Of Harvard College | Device and method for electrochemical detection |
WO2017117666A1 (en) * | 2016-01-08 | 2017-07-13 | Advanced Theranostics Inc. | Fully integrated, stand-alone, point-of-care device to detect target nucleic acids |
KR102062980B1 (en) * | 2018-04-11 | 2020-02-11 | 부산대학교 산학협력단 | Amplified double-stranded DNA detection method and apparatus using the same |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
BRIAN S. FERGUSON ET AL: "Integrated Microfluidic Electrochemical DNA Sensor", ANALYTICAL CHEMISTRY, vol. 81, no. 15, 1 August 2009 (2009-08-01), US, pages 6503 - 6508, XP055470046, ISSN: 0003-2700, DOI: 10.1021/ac900923e * |
KUANGWEN HSIEH ET AL: "Integrated Electrochemical Microsystems for Genetic Detection of Pathogens at the Point of Care", ACCOUNTS OF CHEMICAL RESEARCH, vol. 48, no. 4, 18 March 2015 (2015-03-18), US, pages 911 - 920, XP055687909, ISSN: 0001-4842, DOI: 10.1021/ar500456w * |
KUANGWEN HSIEH ET AL: "Rapid, Sensitive, and Quantitative Detection of Pathogenic DNA at the Point of Care through Microfluidic Electrochemical Quantitative Loop-Mediated Isothermal Amplification", ANGEWANDTE CHEMIE, vol. 124, no. 20, 4 April 2012 (2012-04-04), DE, pages 4980 - 4984, XP055463539, ISSN: 0044-8249, DOI: 10.1002/ange.201109115 * |
MARTIN ALEXANDRA ET AL: "Real-time electrochemical LAMP: a rational comparative study of different DNA intercalating and non-intercalating redox probes", ANALYST, vol. 141, no. 13, 1 January 2016 (2016-01-01), UK, pages 4196 - 4203, XP055876943, ISSN: 0003-2654, DOI: 10.1039/C6AN00867D * |
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