BE1028063A1 - HYALURONIC ACID PURIFICATION METHOD - Google Patents
HYALURONIC ACID PURIFICATION METHOD Download PDFInfo
- Publication number
- BE1028063A1 BE1028063A1 BE20205100A BE202005100A BE1028063A1 BE 1028063 A1 BE1028063 A1 BE 1028063A1 BE 20205100 A BE20205100 A BE 20205100A BE 202005100 A BE202005100 A BE 202005100A BE 1028063 A1 BE1028063 A1 BE 1028063A1
- Authority
- BE
- Belgium
- Prior art keywords
- hyaluronic acid
- buffer solution
- dialysis
- tank
- compound
- Prior art date
Links
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 title claims abstract description 94
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 39
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 title claims description 34
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 title claims description 34
- 238000000746 purification Methods 0.000 title description 32
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims abstract description 109
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 89
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 51
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 37
- 230000008030 elimination Effects 0.000 claims description 29
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 claims description 29
- SHKUUQIDMUMQQK-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(oxiran-2-ylmethoxy)butoxymethyl]oxirane Chemical compound C1OC1COCCCCOCC1CO1 SHKUUQIDMUMQQK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 10
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 5
- AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N divinyl sulfone Chemical compound C=CS(=O)(=O)C=C AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 claims description 5
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 5
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 4
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 claims description 4
- -1 polypropylene Polymers 0.000 description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 5
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 4
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 4
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 3
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 3
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 3
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 3
- 229920010126 Linear Low Density Polyethylene (LLDPE) Polymers 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 2
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 2
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011169 microbiological contamination Methods 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Chemical group CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical group CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N alpha-D-glucuronic acid Chemical group O[C@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 238000007348 radical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 1
- 210000004127 vitreous body Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0072—Hyaluronic acid, i.e. HA or hyaluronan; Derivatives thereof, e.g. crosslinked hyaluronic acid (hylan) or hyaluronates
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D61/00—Processes of separation using semi-permeable membranes, e.g. dialysis, osmosis or ultrafiltration; Apparatus, accessories or auxiliary operations specially adapted therefor
- B01D61/24—Dialysis ; Membrane extraction
- B01D61/243—Dialysis
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Water Supply & Treatment (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
L’invention concerne une méthode de purification d’acide hyaluronique modifié, comprenant : la mise en contact d’un gel d’acide hyaluronique modifié comprenant au moins un composé à éliminer avec une solution tampon, au travers d’une membrane de dialyse, dans un réservoir de dialyse ; l’alimentation de manière continue du réservoir de dialyse avec une quantité de solution tampon fraiche ; le soutirage de manière continue d’une quantité de solution tampon usagée du réservoir de dialyse, la solution tampon usagée comprenant le au moins un composé à éliminer, et les étapes d’alimentation et de soutirage étant effectuées simultanément ; l’obtention d’un gel d’acide hyaluronique modifié purifié. L’invention concerne également un dispositif pour la mise en œuvre de ladite méthode.The invention relates to a method for purifying modified hyaluronic acid, comprising: contacting a modified hyaluronic acid gel comprising at least one compound to be eliminated with a buffer solution, through a dialysis membrane, in a dialysis tank; continuously supplying the dialysis tank with a quantity of fresh buffer solution; continuously withdrawing a quantity of used buffer solution from the dialysis tank, the used buffer solution comprising the at least one compound to be removed, and the feeding and withdrawing steps being carried out simultaneously; obtaining a gel of purified modified hyaluronic acid. The invention also relates to a device for implementing said method.
Description
METHODE DE PURIFICATION D’ACIDE HYALURONIQUE DOMAINE DE L'INVENTION La présente invention concerne une méthode de purification d'acide hyaluronique ainsi qu’un dispositif pour la mise en œuvre de ladite méthode. ARRIERE-PLAN TECHNIQUE L'acide hyaluronigue est un polysaccharide mucoïde d'origine biologique, largement distribué dans la nature. Par exemple, il est connu que l'acide hyaluronique est présent dans divers tissus animaux tels que le cordon ombilical, le liquide synovial, l'humeur vitrée, la crête de coq et divers tissus conjonctifs tels que la peau et le cartilage.FIELD OF THE INVENTION The present invention relates to a method for purifying hyaluronic acid and to a device for carrying out said method. TECHNICAL BACKGROUND Hyaluronic acid is a mucoid polysaccharide of biological origin, widely distributed in nature. For example, it is known that hyaluronic acid is present in various animal tissues such as umbilical cord, synovial fluid, vitreous humor, rooster crest, and various connective tissues such as skin and cartilage.
Chimiquement, l'acide hyaluonigue est un membre des glycosaminoglycanes et il est constitué d’unités alternées et répétées d'acide D-glucuronique et de N-acétyl-D-glucosamine.Chemically, hyaluonic acid is a member of glycosaminoglycans and is made up of alternating and repeating units of D-glucuronic acid and N-acetyl-D-glucosamine.
Grace à sa capacité à retenir l’eau, l’acide hyaluronique joue un rôle primordial pour l’'hydratation de la peau. Plus particulièrement, il joue un rôle important dans l'hydratation et l'élasticité de la peau. Toutefois, l'acide hyaluronique diminue en quantité et en qualité avec l'âge, entraînant un dessèchement et un amincissement de la peau qui se ride. Ainsi, de nombreuses méthodes permettent l’application, notamment par injection, d'acide hyaluronique dans la peau afin de la réparer et de l’'hydrater.Thanks to its ability to retain water, hyaluronic acid plays an essential role in the hydration of the skin. More specifically, it plays an important role in the hydration and elasticity of the skin. However, hyaluronic acid decreases in quantity and quality with age, causing dryness and thinning of the wrinkled skin. Thus, many methods allow the application, especially by injection, of hyaluronic acid into the skin in order to repair and moisturize it.
Cependant, l’acide hyaluronique a tendance à se dégrader de manière rapide dans l'organisme par réaction enzymatique et radicalaire, ce qui diminue significativement sa demi-vie. Une solution mise en œuvre pour limiter, voire éviter, cet inconvénient, est la modification, notamment la réticulation de l’acide hyaluronique afin d'augmenter la persistance du produit à l’intérieur du derme et ainsi augmenter sa durée d’action. Un problème qui peut résulter de cette transformation concerne la purification du produit. Plus particulièrement, afin d'éliminer les composés restants utilisés pour la modification de l’acide hyaluronique ainsi que les composés résultant de la modification incomplète de l’acide hyaluronique (qui peuvent s’avérer toxiques pour l’organisme), une méthode de dialyse est effectuée après l'étape de modification.However, hyaluronic acid tends to degrade rapidly in the body by enzymatic and radical reaction, which significantly decreases its half-life. One solution implemented to limit, or even avoid, this drawback is the modification, in particular the crosslinking of hyaluronic acid in order to increase the persistence of the product inside the dermis and thus increase its duration of action. One problem which can result from this transformation concerns the purification of the product. More particularly, in order to eliminate the remaining compounds used for the modification of hyaluronic acid as well as the compounds resulting from the incomplete modification of hyaluronic acid (which may prove to be toxic to the organism), a method of dialysis is performed after the edit step.
De manière générale, la dialyse est une technique qui repose sur la diffusion sélective des molécules à travers une membrane semi-perméable et qui permet la séparation des molécules basée sur leur taille.Generally speaking, dialysis is a technique which relies on the selective diffusion of molecules through a semi-permeable membrane and which allows the separation of molecules based on their size.
Ainsi, un échantillon comprenant de l’acide hyaluronique modifié et des impuretés est mis en contact avec une solution tampon via une membrane qui permet la diffusion des molécules de petite taille (impuretés) de l'échantillon comprenant de l'acide hyaluronique à la solution tampon.Thus, a sample comprising modified hyaluronic acid and impurities is contacted with a buffer solution via a membrane which allows the diffusion of small molecules (impurities) from the sample comprising hyaluronic acid to the solution. buffer.
Toutefois, la solution tampon peut vite devenir saturée en impuretés ce qui conduit à une diminution de l'efficacité de la purification.However, the buffer solution can quickly become saturated with impurities, which leads to a decrease in the efficiency of the purification.
Ainsi, il devient important de remplacer la solution tampon saturée de sorte à garder un bon taux de purification.Thus, it becomes important to replace the saturated buffer solution so as to maintain a good purification rate.
Diverses manipulations afin de remplacer la solution tampon saturée à différents intervalles sont exigées, ce qui provoque une augmentation du volume de la solution tampon usagée, une augmentation du coût du procédé et aussi un risque de contamination microbiologique en raison des interventions externes.Various manipulations in order to replace the saturated buffer solution at different intervals are required, which causes an increase in the volume of the used buffer solution, an increase in the cost of the process and also a risk of microbiological contamination due to external interventions.
Il existe donc un réel besoin de fournir une méthode qui permet de purifier de manière efficace de l’acide hyaluronique modifié sans risque de contamination du produit purifié et sans augmenter le coût du procédé de purification.There is therefore a real need to provide a method which makes it possible to efficiently purify modified hyaluronic acid without risk of contamination of the purified product and without increasing the cost of the purification process.
RESUME DE L'INVENTION L’invention concerne en premier lieu une méthode de purification d'acide hyaluronique modifié, comprenant :SUMMARY OF THE INVENTION The invention relates firstly to a method for purifying modified hyaluronic acid, comprising:
— la mise en contact d’un gel d'acide hyaluronique modifié comprenant au moins un composé à éliminer avec une solution tampon, au travers d'au moins une membrane de dialyse, dans un réservoir de dialyse ;- Contacting a modified hyaluronic acid gel comprising at least one compound to be removed with a buffer solution, through at least one dialysis membrane, in a dialysis tank;
— l’alimentation de manière continue du réservoir de dialyse avec une quantité de solution tampon fraiche ;- continuously feeding the dialysis tank with a quantity of fresh buffer solution;
— le soutirage de manière continue d’une quantité de solution tampon usagée du réservoir de dialyse, la solution tampon usagée comprenant le au moins un composé à éliminer, et les étapes d’alimentation et de soutirage étant effectuées simultanément ; — l’obtention d’un gel d’acide hyaluronique modifié purifié.- Continuously withdrawing a quantity of used buffer solution from the dialysis tank, the used buffer solution comprising the at least one compound to be removed, and the feed and withdrawal steps being carried out simultaneously; - obtaining a gel of purified modified hyaluronic acid.
Selon certains modes de réalisation, l’acide hyaluronique modifié est de l’acide hyaluronique réticulé.In some embodiments, the modified hyaluronic acid is crosslinked hyaluronic acid.
Selon certains modes de réalisation, la solution tampon est une solution tampon phosphate.According to some embodiments, the buffer solution is a phosphate buffer solution.
Selon certains modes de réalisation, le au moins un composé à éliminer peut être choisi parmi le 1,4-butanediol diglycidyl éther, le divinyl sulfone, le polyéthylène glycol, le glutaraldehyde et leurs combinaisons.According to certain embodiments, the at least one compound to be eliminated can be chosen from 1,4-butanediol diglycidyl ether, divinyl sulfone, polyethylene glycol, glutaraldehyde and their combinations.
Selon certains modes de réalisation, le au moins un composé à éliminer présente un poids moléculaire moyen de 150 à 5 000 Da.According to some embodiments, the at least one compound to be removed has an average molecular weight of 150 to 5,000 Da.
Selon certains modes de réalisation, l’acide hyaluronique modifié est obtenu à partir d'acide hyaluronique qui présente un poids moléculaire moyen de 0,8 à 10 MDa.According to some embodiments, the modified hyaluronic acid is obtained from hyaluronic acid which has an average molecular weight of 0.8 to 10 MDa.
Selon certains modes de réalisation, la méthode comprend une étape qui consiste à placer le gel d’acide hyaluronique modifié comprenant le au moins un composé à éliminer dans une poche formée par la membrane de dialyse avant de mettre en contact le gel d'acide hyaluronique modifié comprenant le au moins un composé à éliminer avec la solution tampon.According to certain embodiments, the method comprises a step which consists in placing the modified hyaluronic acid gel comprising the at least one compound to be eliminated in a pocket formed by the dialysis membrane before contacting the hyaluronic acid gel. modified comprising the at least one compound to be removed with the buffer solution.
Selon certains modes de réalisation, le rapport massique de gel d'acide hyaluronique modifié comprenant le au moins un composé à éliminer et de solution tampon dans le réservoir de dialyse est de 1:3 à 1:15, et de préférence de 1:5 et de 1:10.According to certain embodiments, the mass ratio of modified hyaluronic acid gel comprising the at least one compound to be removed and of buffer solution in the dialysis tank is from 1: 3 to 1:15, and preferably from 1: 5 and 1:10.
Selon certains modes de réalisation, le gel d’acide hyaluronique modifié comprenant le au moins un composé à éliminer consiste essentiellement, ou consiste, en l’acide hyaluronique modifié, une solution aqueuse et le au Moins un composé à éliminer.According to some embodiments, the modified hyaluronic acid gel comprising the at least one compound to be removed consists essentially of, or consists, of the modified hyaluronic acid, an aqueous solution and the at least one compound to be removed.
L’invention concerne également un dispositif de purification d'acide hyaluronique modifié, comprenant :The invention also relates to a device for purifying modified hyaluronic acid, comprising:
— un réservoir de dialyse configuré pour recevoir une solution tampon et un gel d’acide hyaluronique modifié comprenant au moins un composé à éliminer ; — au moins une membrane de dialyse configurée pour être placée dans le réservoir de dialyse ; — un réservoir d’alimentation en connexion fluidique avec le réservoir de dialyse ; — un réservoir d’élimination en connexion fluidique avec le réservoir de dialyse.- a dialysis tank configured to receive a buffer solution and a modified hyaluronic acid gel comprising at least one compound to be eliminated; - at least one dialysis membrane configured to be placed in the dialysis tank; - a supply tank in fluid connection with the dialysis tank; - an elimination tank in fluid connection with the dialysis tank.
Selon certains modes de réalisation, la membrane de dialyse est configurée pour recevoir le gel d’acide hyaluronique modifié comprenant au moins un composé à éliminer.In some embodiments, the dialysis membrane is configured to receive the modified hyaluronic acid gel comprising at least one compound to be removed.
Selon certains modes de réalisation, la membrane de dialyse a un poids moléculaire de coupure nominal de 1 500 à 100 000 Da, et de préférence de 1 500 à 15 000 Da.In some embodiments, the dialysis membrane has a nominal cut-off molecular weight of 1,500 to 100,000 Da, and preferably 1,500 to 15,000 Da.
Selon certains modes de réalisation, le dispositif comprend un tube d'alimentation permettant la connexion fluidique entre le réservoir de dialyse et le réservoir d’alimentation.According to some embodiments, the device comprises a supply tube allowing the fluidic connection between the dialysis reservoir and the supply reservoir.
Selon certains modes de réalisation, le tube d’alimentation a un diamètre interne de 1 à 10 mm, et de préférence de 3 à 5 mm.In some embodiments, the feed tube has an internal diameter of 1-10mm, and preferably 3-5mm.
Selon certains modes de réalisation, le dispositif comprend un tube d'élimination permettant la connexion fluidique entre le réservoir de dialyse et le réservoir d’élimination.In some embodiments, the device includes a removal tube for fluid connection between the dialysis reservoir and the removal reservoir.
Selon certains modes de réalisation, le tube d'élimination a un diamètre interne de 1 à 10 mm, et de préférence de 3 à 5 mm.In some embodiments, the removal tube has an internal diameter of 1-10mm, and preferably 3-5mm.
Selon certains modes de réalisation, le diamètre du tube d'alimentation est inférieur au diamètre du tube d'élimination de 1 à 9 mm, et de préférence de 1 à 2 mm.According to some embodiments, the diameter of the feed tube is smaller than the diameter of the removal tube by 1 to 9 mm, and preferably 1 to 2 mm.
Selon certains modes de réalisation, le dispositif comprend au moins une pompe, de préférence une pompe péristaltique.According to certain embodiments, the device comprises at least one pump, preferably a peristaltic pump.
La présente invention permet de répondre au besoin exprimé ci- dessus. Elle fournit plus particulièrement une méthode qui permet de purifier de manière efficace de l'acide hyaluronique modifié sans risque de contamination du produit purifié et sans augmenter le coût du procédé de purification. Cela est accompli grâce à une purification de l’acide hyaluronique modifié de manière continue de sorte à éliminer des composants n’ayant pas 5 réagi avec l’acide hyaluronique libre. Plus particulièrement, la méthode selon l'invention permet l'alimentation de manière continue du réservoir de dialyse avec une quantité de solution tampon fraiche et en même temps le soutirage de manière continue d’une quantité de solution tampon usagée (comprenant le au moins un composé à éliminer, c'est-à-dire les impuretés) du réservoir de dialyse. Cela permet non seulement de réduire la quantité de solution tampon usagée mais aussi de réduire les coûts liés aux diverses manipulations nécessaires pour le changement de cette solution. De plus, cette méthode qui peut être automatisée permet de diminuer tout risque de contamination microbiologique liée également aux interventions externes pour le changement de la solution tampon.The present invention makes it possible to meet the need expressed above. It more particularly provides a method which makes it possible to efficiently purify modified hyaluronic acid without risk of contamination of the purified product and without increasing the cost of the purification process. This is accomplished by purification of the modified hyaluronic acid continuously so as to remove unreacted components with the free hyaluronic acid. More particularly, the method according to the invention allows the continuous supply of the dialysis tank with a quantity of fresh buffer solution and at the same time the continuous withdrawal of a quantity of used buffer solution (comprising the at least one compound to be removed, i.e. impurities) from the dialysis tank. This not only makes it possible to reduce the quantity of used buffer solution but also to reduce the costs associated with the various manipulations necessary for the change of this solution. In addition, this method, which can be automated, reduces any risk of microbiological contamination also linked to external interventions for changing the buffer solution.
BREVE DESCRIPTION DES FIGURES La figure 1 illustre de manière schématique le dispositif selon l'invention.BRIEF DESCRIPTION OF THE FIGURES FIG. 1 schematically illustrates the device according to the invention.
DESCRIPTION DE MODES DE REALISATION DE L'INVENTION L’invention est maintenant décrite plus en détail et de façon non limitative dans la description qui suit. Dispositif de purification Le dispositif de l'invention sera décrit en faisant référence à la figureDESCRIPTION OF EMBODIMENTS OF THE INVENTION The invention is now described in more detail and without limitation in the description which follows. Purification device The device of the invention will be described with reference to FIG.
1. L'invention concerne ainsi un dispositif 1 pour la purification d'acide hyaluronigue modifié. Par « acide hyaluronique modifié » on entend de l’acide hyaluronique modifié chimiquement sous forme d’esters, d'amides, ou sous forme de dérivés possédant des ponts intra et/ou interchaînes (réticulé). De préférence, il s'agit d’acide hyaluronique réticulé. Les composés utilisés pour la réticulation de l’acide hyaluronique (agents réticulants) peuvent être choisis parmi le 1,4-butanediol diglycidyl éther, le divinyl sulfone, le polyéthylène glycol, le glutaraldéhyde. Ainsi, la réaction de ces composés avec l'acide hyaluronique libre permet d'obtenir de l'acide hyaluronique réticulé.1. The invention thus relates to a device 1 for the purification of modified hyaluronic acid. By "modified hyaluronic acid" is meant chemically modified hyaluronic acid in the form of esters, amides, or in the form of derivatives having intra and / or interchain (crosslinked) bridges. Preferably, it is crosslinked hyaluronic acid. The compounds used for the crosslinking of hyaluronic acid (crosslinking agents) can be chosen from 1,4-butanediol diglycidyl ether, divinyl sulfone, polyethylene glycol, glutaraldehyde. Thus, the reaction of these compounds with free hyaluronic acid makes it possible to obtain crosslinked hyaluronic acid.
Le dispositif 1 selon l'invention permet ainsi de purifier de l’acide hyaluronique modifié afin d’éliminer des composants n’ayant pas réagi (tels que le 1,4-butanediol diglycidyl éther, le divinyl sulfone, le polyéthylène glycol).The device 1 according to the invention thus makes it possible to purify modified hyaluronic acid in order to remove unreacted components (such as 1,4-butanediol diglycidyl ether, divinyl sulfone, polyethylene glycol).
Le dispositif 1 selon l'invention comprend un réservoir de dialyse 2 configuré pour recevoir une solution tampon et un gel d’acide hyaluronique modifié comprenant au moins un composé à éliminer.The device 1 according to the invention comprises a dialysis tank 2 configured to receive a buffer solution and a modified hyaluronic acid gel comprising at least one compound to be eliminated.
Le gel d’acide hyaluronique modifié comprenant au moins un composé à éliminer peut ainsi comprendre de l’acide hyaluronique modifié, de préférence réticulé, ainsi qu’au moins un composé choisi parmi le 1,4- butanediol diglycidyl éther, le divinyl sulfone, le polyéthylène glycol, le glutaraldéhyde et leurs combinaisons. De préférence, le au moins un composé à éliminer comprend ou est le 1,4-butanediol diglycidyl éther.The modified hyaluronic acid gel comprising at least one compound to be removed can thus comprise modified hyaluronic acid, preferably crosslinked, as well as at least one compound chosen from 1,4-butanediol diglycidyl ether, divinyl sulfone, polyethylene glycol, glutaraldehyde and their combinations. Preferably, the at least one compound to be removed comprises or is 1,4-butanediol diglycidyl ether.
Le gel d’acide hyaluronique modifié peut avoir une concentration en acide hyaluronique de 10 à 35 mg/g, et de préférence de 15 à 30 mg/g par rapport à la masse totale du gel. Par exemple, cette concentration en acide hyaluronique peut être de 10 à 15 mg/g ; ou de 15 à 20 mg/g ; ou de 20 à 25 mg/g ; ou de 25 à 30 mg/g ; ou de 30 à 35 mg/g par rapport à la masse totale du gel.The modified hyaluronic acid gel may have a hyaluronic acid concentration of 10 to 35 mg / g, and preferably 15 to 30 mg / g, based on the total mass of the gel. For example, this concentration of hyaluronic acid can be 10 to 15 mg / g; or from 15 to 20 mg / g; or from 20 to 25 mg / g; or from 25 to 30 mg / g; or from 30 to 35 mg / g relative to the total mass of the gel.
Le gel d'acide hyaluronique modifié peut avoir une viscosité de 30 à 210 Pa.s et de préférence de 40 à 100 Pa.s. Par exemple la viscosité du gel d'acide hyaluronique modifié peut être de 30 à 40 Pa.s ; ou de 40 à 50 Pa.s ; ou de 50 à 60 Pa.s ; ou de 60 à 70 Pa.s ; ou de 70 à 80 Pa.s ; ou de 80 à 90 Pa.s ; ou de 90 à 100 Pa.s ; ou de 100 à 120 Pa.s ; ou de 120 à 140 Pa.s ; ou de 140 à 160 Pa.s ; ou de 160 à 180 Pa.s ; ou de 180 à 210 Pa.s. La viscosité du produit peut être mesurée avec un rhéomètre HAAKE RheoStress 6000 à 25°C.The modified hyaluronic acid gel can have a viscosity of 30 to 210 Pa.s and preferably 40 to 100 Pa.s. For example, the viscosity of the modified hyaluronic acid gel can be 30 to 40 Pa.s; or from 40 to 50 Pa.s; or from 50 to 60 Pa.s; or from 60 to 70 Pa.s; or from 70 to 80 Pa.s; or from 80 to 90 Pa.s; or from 90 to 100 Pa.s; or from 100 to 120 Pa.s; or from 120 to 140 Pa.s; or from 140 to 160 Pa.s; or from 160 to 180 Pa.s; or from 180 to 210 Pa.s. The viscosity of the product can be measured with a HAAKE RheoStress 6000 rheometer at 25 ° C.
Selon certains modes de réalisation, l’acide hyaluronique modifié peut être obtenu à partir d’acide hyaluronique (libre) de poids moléculaire moyen de 0,8 MDa à 10 MDa.In some embodiments, the modified hyaluronic acid can be obtained from (free) hyaluronic acid with an average molecular weight of 0.8 MDa to 10 MDa.
Selon certains modes de réalisation, le au moins un composé à éliminer peut présenter un poids moléculaire moyen de 150 à 5 000 Da.According to some embodiments, the at least one compound to be removed can have an average molecular weight of 150 to 5000 Da.
Ce gel peut également comprendre un solvant, de préférence une solution aqueuse isotonique adaptée aux produits injectables.This gel can also comprise a solvent, preferably an isotonic aqueous solution suitable for injectable products.
Le pH de la solution tampon peut par exemple être de 6,0 à 8,0, de préférence de 7,0 à 7,6.The pH of the buffer solution may for example be 6.0 to 8.0, preferably 7.0 to 7.6.
La solution tampon peut être une solution tampon phosphate, en d'autres termes une solution comprenant des ions phosphate. La concentration des ions phosphates dans la solution tampon peut être de 1,0 à 7,0 mmol.The buffer solution can be a phosphate buffer solution, in other words a solution comprising phosphate ions. The concentration of phosphate ions in the buffer solution can be 1.0-7.0 mmol.
Le réservoir de dialyse 2 peut avoir par exemple un volume de 5 à 100 L.The dialysis tank 2 may for example have a volume of 5 to 100 L.
Le réservoir de dialyse 2 peut être fabriqué à partir d’un matériau choisi parmi le polypropylène, le polyéthylène, le polychlorure de vinyle (PVC), le verre et l’acier inox et plus généralement tout matériau compatible avec le contact de produits injectables.The dialysis tank 2 can be made from a material chosen from polypropylene, polyethylene, polyvinyl chloride (PVC), glass and stainless steel and more generally any material compatible with contact with injectables.
Le réservoir de dialyse peut être ouvert ou fermé.The dialysis reservoir can be opened or closed.
Le réservoir de dialyse 2 peut avoir une partie inférieure fermée 2a (elle comprend ainsi une paroi inférieure) et une partie supérieure 2b qui peut être fermée (dans ce cas elle comprend une paroi supérieure) ou ouverte sur une partie ou sur toute la partie supérieure 2b.The dialysis tank 2 can have a closed lower part 2a (it thus comprises a lower wall) and an upper part 2b which can be closed (in this case it comprises an upper wall) or open over part or all of the upper part. 2b.
Le dispositif selon l'invention 1, et plus particulièrement le réservoir de dialyse 2 comprend au moins une membrane de dialyse 3. Cette membrane 3 peut avoir un poids moléculaire de coupure nominal de 1 500 à 100 000 Da, et de préférence de 1 500 à 15 000 Da. Par exemple, la membrane de dialyse 3 peut avoir un poids moléculaire de coupure nominal de 1 500 à 6 000 Da ; ou de 6 000 à 8 000 Da ; ou de 8 000 à 10 000 Da ; ou de 10 000 à 12 000 Da ; ou de 12 000 à 14 000 Da ; ou de 14 000 à 16 000 Da ; ou de 16 000 à 20 000 Da ; ou de 20 000 à 40 000 Da ; ou de 40 000 à 60 000 Da ; ou de 60000 à 80000 Da; ou de 80000 à 100000 Da. Le « poids moléculaire de coupure nominal » fait référence à la molécule de poids moléculaire le plus bas (en daltons) pour lequel au moins 90 % de la molécule est retenue par la membrane.The device according to the invention 1, and more particularly the dialysis reservoir 2 comprises at least one dialysis membrane 3. This membrane 3 can have a nominal cut-off molecular weight of 1,500 to 100,000 Da, and preferably 1,500. at 15,000 Da. For example, dialysis membrane 3 can have a nominal cut-off molecular weight of 1500-6000 Da; or from 6000 to 8000 Da; or from 8,000 to 10,000 Da; or from 10,000 to 12,000 Da; or from 12,000 to 14,000 Da; or from 14,000 to 16,000 Da; or from 16,000 to 20,000 Da; or from 20,000 to 40,000 Da; or from 40,000 to 60,000 Da; or from 60,000 to 80,000 Da; or from 80,000 to 100,000 Da. The "nominal cut-off molecular weight" refers to the lowest molecular weight molecule (in daltons) for which at least 90% of the molecule is retained by the membrane.
Selon certains modes de réalisation (non-illustrés sur la figure), la membrane de dialyse 3 est positionnée de telle manière dans le réservoir de dialyse 2 de sorte à créer deux compartiments (par exemple un compartiment pouvant accueillir le gel d’acide hyaluronique modifié comprenant le au moins un composé à éliminer et l’autre compartiment pouvant accueillir la solution tampon. Cette séparation peut être effectuée par exemple en positionnant la membrane de dialyse 3 de manière perpendiculaire à la paroi inférieure (le fond) du réservoir de dialyse 2.According to certain embodiments (not shown in the figure), the dialysis membrane 3 is positioned in such a way in the dialysis reservoir 2 so as to create two compartments (for example a compartment which can accommodate the modified hyaluronic acid gel. comprising the at least one compound to be removed and the other compartment capable of accommodating the buffer solution This separation can be carried out for example by positioning the dialysis membrane 3 perpendicular to the lower wall (the bottom) of the dialysis tank 2.
Alternativement, et préférentiellement, la membrane de dialyse 3 est configurée de sorte à former une poche pouvant accueillir le gel d’acide hyaluronique modifié comprenant le au moins un composé à éliminer. Cette disposition est illustrée sur la figure 1. Plus particulièrement, une poche formée par la membrane de dialyse 3 peut recevoir le gel d’acide hyaluronique modifié comprenant le au moins un composé à éliminer, cette poche est ensuite fermée et placée dans le réservoir de dialyse 2 de sorte qu'elle soit immergée dans la solution tampon.Alternatively, and preferably, the dialysis membrane 3 is configured so as to form a pocket capable of accommodating the modified hyaluronic acid gel comprising the at least one compound to be eliminated. This arrangement is illustrated in FIG. 1. More particularly, a pocket formed by the dialysis membrane 3 can receive the modified hyaluronic acid gel comprising the at least one compound to be eliminated, this pocket is then closed and placed in the reservoir of dialysis 2 so that it is submerged in the buffer solution.
Selon certains modes de réalisation, le gel d'acide hyaluronique est positionné dans une seule poche (formée par une seule membrane de dialyse 3) qui est ensuite positionnée dans le réservoir de dialyse 2.According to some embodiments, the hyaluronic acid gel is positioned in a single pocket (formed by a single dialysis membrane 3) which is then positioned in the dialysis reservoir 2.
Selon d'autres modes de réalisation, le gel d'acide hyaluronique est positionné dans plusieurs poches (formées par plusieurs membranes de dialyse 3 respectives) qui sont ensuite positionnées dans le réservoir de dialyse 2.According to other embodiments, the hyaluronic acid gel is positioned in several pockets (formed by several respective dialysis membranes 3) which are then positioned in the dialysis reservoir 2.
De préférence, le réservoir de dialyse 2 est muni d’un ou plusieurs agitateurs, mais tout autre moyen approprié d’agitation connu de l'homme de l’art peut être utilisé, afin d'obtenir une solution tampon homogène.Preferably, the dialysis tank 2 is provided with one or more stirrers, but any other suitable means of stirring known to those skilled in the art can be used, in order to obtain a homogeneous buffer solution.
Le dispositif de purification 1 selon l'invention comprend également un réservoir d’alimentation 4 configuré pour accueillir la solution tampon.The purification device 1 according to the invention also comprises a feed tank 4 configured to accommodate the buffer solution.
Le réservoir d’alimentation 4 peut avoir une partie inférieure fermée 4a (elle comprend ainsi une paroi inférieure) et une partie supérieure 4b qui peut être fermée (dans ce cas elle comprend une paroi supérieure) ou ouverte sur une partie ou sur toute la partie supérieure 4b.The supply tank 4 can have a closed lower part 4a (it thus comprises a lower wall) and an upper part 4b which can be closed (in this case it comprises an upper wall) or open over part or all of the part. upper 4b.
Ce réservoir d'alimentation 4 est en connexion fluidique avec le réservoir de dialyse 2, c'est-à-dire qu'une quantité de solution tampon peut être directement transférée du réservoir d'alimentation 4 au réservoir de dialyse 2. Cette connexion fluidique peut être effectuée avec un tube d'alimentation 5 allant du réservoir d’alimentation 4) au réservoir de dialyseThis supply tank 4 is in fluid connection with the dialysis tank 2, that is to say that a quantity of buffer solution can be directly transferred from the supply tank 4 to the dialysis tank 2. This fluid connection can be carried out with a feed tube 5 going from the feed tank 4) to the dialysis tank
2. Ainsi, le tube d’alimentation 5 peut avoir une entrée qui se trouve dans le réservoir d’alimentation 4 et une sortie qui se trouve dans le réservoir de dialyse 2. De préférence, l’entrée du tube d’alimentation 5 est à proximité de la partie inférieure 4a du réservoir d’alimentation 4. Par exemple, l'entrée du tube d'alimentation 5 se trouve à une distance inférieure ou égale à 5 cm, et de préférence inférieure ou égale à 2 cm du fond du réservoir d’alimentation2. Thus, the feed tube 5 may have an inlet which is in the feed tank 4 and an outlet which is in the dialysis tank 2. Preferably, the inlet of the feed tube 5 is. near the lower part 4a of the supply tank 4. For example, the inlet of the supply tube 5 is located at a distance less than or equal to 5 cm, and preferably less than or equal to 2 cm from the bottom of the feed tank
4. De préférence encore, la sortie du tube d’alimentation 5 se trouve à proximité de la partie inférieure 2a du réservoir de dialyse 2 (comme illustré sur la figure 1). Par exemple, la sortie du tube d’alimentation 5 se trouve à une distance inférieure ou égale à 5 cm, et de préférence inférieure ou égale à 2 cm du fond du réservoir de dialyse 2.4. More preferably, the outlet of the feed tube 5 is located near the lower part 2a of the dialysis tank 2 (as illustrated in Figure 1). For example, the outlet of the feed tube 5 is located at a distance less than or equal to 5 cm, and preferably less than or equal to 2 cm from the bottom of the dialysis tank 2.
Selon certains modes de réalisation préférés, le dispositif 1 comprend un seul tube d'alimentation 5.According to some preferred embodiments, the device 1 comprises a single feed tube 5.
Selon d'autres modes de réalisation, le dispositif 1 comprend plusieurs tubes d'alimentation 5, par exemple deux ou trois ou quatre tubes d'alimentation 5.According to other embodiments, the device 1 comprises several supply tubes 5, for example two or three or four supply tubes 5.
Dans le cas où le réservoir de dialyse 2 comprend plus d’un compartiment, en d’autres termes si le réservoir de dialyse 2 comprend un premier compartiment pour la solution tampon et un deuxième compartiment pour la solution d'acide hyaluronique modifié comprenant le au moins un composé à éliminer, la sortie du tube d'alimentation 5 se trouve dans le compartiment comprenant la solution tampon.In the case where the dialysis tank 2 comprises more than one compartment, in other words if the dialysis tank 2 comprises a first compartment for the buffer solution and a second compartment for the modified hyaluronic acid solution comprising the at minus one compound to be removed, the outlet of the feed tube 5 is in the compartment comprising the buffer solution.
Selon certains modes de réalisation, le tube d’alimentation 5 peut avoir un diamètre interne de 1 à 10 mm, et de préférence de 3 à 5 mm. Par « diamètre » on entend la dimension maximale dans un plan orthogonal à l'axe longitudinal du tube d'alimentation 5.According to some embodiments, the feed tube 5 may have an internal diameter of 1-10mm, and preferably 3-5mm. By “diameter” is meant the maximum dimension in a plane orthogonal to the longitudinal axis of the feed tube 5.
Le tube d'alimentation 5 peut être fabriqué à partir d'un matériau choisi parmi le polypropylène, le polyéthylène linéaire de basse densité (LLDPE) et le silicone. Il est préférable d'utiliser un tube d’alimentation 5 compatible avec l’utilisation d'une pompe, de préférence une pompe péristaltique.The feed tube 5 can be made from a material selected from polypropylene, linear low density polyethylene (LLDPE) and silicone. It is preferable to use a feed tube 5 compatible with the use of a pump, preferably a peristaltic pump.
Le réservoir d’alimentation 4 peut avoir par exemple un volume de 5 à 240 L.The feed tank 4 may for example have a volume of 5 to 240 L.
Le réservoir d'alimentation 4 peut être fabriqué à partir d'un matériau choisi parmi le polypropylène, le polyéthylène, le polychlorure de vinyle (PVC), le verre et l’acier inox et plus généralement tout matériau compatible avec le contact de produits injectables.The supply tank 4 can be made from a material chosen from among polypropylene, polyethylene, polyvinyl chloride (PVC), glass and stainless steel and more generally any material compatible with contact with injectable products. .
Le réservoir d’alimentation 4 peut être ouvert ou fermé.The feed tank 4 can be opened or closed.
Le dispositif de purification 1 selon l'invention comprend également un réservoir d’élimination 6 configuré pour accueillir la solution tampon usagée sortant du réservoir de dialyse 2.The purification device 1 according to the invention also comprises an elimination tank 6 configured to receive the used buffer solution leaving the dialysis tank 2.
Le réservoir d'élimination 6 peut avoir une partie inférieure fermée 6a (elle comprend ainsi une paroi inférieure) et une partie supérieure 6b qui peut être fermée (dans ce cas elle comprend une paroi supérieure) ou ouverte sur une partie ou sur toute la partie supérieure 6b.The disposal tank 6 can have a closed lower part 6a (it thus comprises a lower wall) and an upper part 6b which can be closed (in this case it comprises an upper wall) or open over part or all of the part. upper 6b.
Ce réservoir d’élimination 6 est en connexion fluidique avec le réservoir de dialyse 2, c'est-à-dire une quantité de solution tampon peut être directement soutirée (éliminée) du réservoir de dialyse 2 au réservoir d'élimination 6. Cette connexion fluidique peut être effectuée avec un tube d'élimination 7 qui permet le transfert de la solution tampon du réservoir de dialyse 2 au réservoir d’élimination 6. Ainsi, le tube d'élimination 7 peut avoir une entrée qui se trouve dans le réservoir de dialyse 2 et une sortie qui se trouve dans le réservoir d’élimination 6. De préférence, l'entrée du tube d'élimination 7 se trouve proche de la partie supérieure 2b du réservoir de dialyse 2. Par exemple, l'entrée du tube d'élimination 7 se trouve à une distance inférieure ou égale à 30 cm, et de préférence inférieure ou égale à 20 cm de la partie supérieure du réservoir de dialyse 2.This elimination tank 6 is in fluid connection with the dialysis tank 2, that is to say a quantity of buffer solution can be directly withdrawn (eliminated) from the dialysis tank 2 to the elimination tank 6. This connection Fluidic can be carried out with a disposal tube 7 which allows the transfer of the buffer solution from the dialysis tank 2 to the elimination tank 6. Thus, the elimination tube 7 can have an inlet which is in the dialysis tank. dialysis 2 and an outlet which is in the elimination tank 6. Preferably, the inlet of the elimination tube 7 is located near the upper part 2b of the dialysis tank 2. For example, the inlet of the tube elimination 7 is located at a distance less than or equal to 30 cm, and preferably less than or equal to 20 cm from the upper part of the dialysis tank 2.
Selon certains modes de réalisation préférés, le dispositif 1 comprend un seul tube d’élimination 7.According to some preferred embodiments, the device 1 comprises a single elimination tube 7.
Selon d'autres modes de réalisation, le dispositif 1 comprend plusieurs tubes d'élimination 7, par exemple deux ou trois ou quatre tubes d'éliminationAccording to other embodiments, the device 1 comprises several elimination tubes 7, for example two or three or four elimination tubes.
7.7.
Dans le cas où le réservoir de dialyse 2 comprend plus d’un compartiment, en d’autres termes si le réservoir de dialyse 2 comprend un premier compartiment pour la solution tampon et un deuxième compartiment pour le gel d'acide hyaluronique modifié comprenant le au moins un composé à éliminer, l'entrée du tube d’élimination 7 se trouve dans le compartiment comprenant la solution tampon.In the case where the dialysis tank 2 comprises more than one compartment, in other words if the dialysis tank 2 comprises a first compartment for the buffer solution and a second compartment for the modified hyaluronic acid gel comprising the au minus one compound to be removed, the inlet of the elimination tube 7 is located in the compartment comprising the buffer solution.
Selon certains modes de réalisation, le tube d'élimination (7) peut avoir un diamètre interne de 1 à 10 mm, et de préférence de 3 à 5 mm. Par « diamètre » on entend la dimension maximale dans un plan orthogonal à l'axe longitudinal du tube d’élimination 7.According to some embodiments, the elimination tube (7) may have an internal diameter of 1 to 10 mm, and preferably 3 to 5 mm. By "diameter" is meant the maximum dimension in a plane orthogonal to the longitudinal axis of the elimination tube 7.
De préférence, le diamètre interne du tube d'alimentation 5 est inférieur au diamètre interne du tube d’élimination 7. Par exemple, le diamètre interne du tube d’alimentation 5 peut être inférieur au diamètre interne du tube d’élimination 7 de 1 à 9 mm, et de préférence de 1 à 2 mm.Preferably, the internal diameter of the supply tube 5 is less than the internal diameter of the elimination tube 7. For example, the internal diameter of the supply tube 5 may be less than the internal diameter of the elimination tube 7 by 1. to 9 mm, and preferably from 1 to 2 mm.
Cette différence de diamètre, de préférence en combinaison avec le positionnement des tubes d'alimentation 5 et d’élimination 7 dans les réservoirs d’alimentation 4 et d'élimination 6 respectivement, permet de maintenir un débit de solution tampon entrant et sortant de du réservoir de dialyse 2 ainsi qu’un niveau constant de solution tampon dans le réservoir de dialyse 2.This difference in diameter, preferably in combination with the positioning of the feed 5 and elimination 7 tubes in the feed 4 and elimination 6 reservoirs, respectively, makes it possible to maintain a flow rate of buffer solution entering and leaving the tank. dialysis tank 2 and a constant level of buffer solution in dialysis tank 2.
Le tube d’élimination 7 peut être fabriqué à partir d'un matériau choisi parmi le polypropylène, le polyéthylène linéaire de basse densité (LLDPE) et le silicone.Disposal tube 7 can be made from a material selected from polypropylene, linear low density polyethylene (LLDPE) and silicone.
Il est préférable, dans le cadre de l’invention, d'utiliser un tube d'élimination 7 compatible avec l’utilisation d’une pompe, de préférence une pompe péristaltique.It is preferable, within the framework of the invention, to use an elimination tube 7 compatible with the use of a pump, preferably a peristaltic pump.
Le réservoir d’élimination 6 peut avoir par exemple un volume de 5 à 240 L. Il est préférable, dans le cadre de l'invention, d'utiliser un réservoir d'élimination 6 ayant un volume suffisant qui permet d'éviter la vidange du réservoir avant la fin de la méthode selon l'invention.The elimination tank 6 can have for example a volume of 5 to 240 L. It is preferable, within the framework of the invention, to use an elimination tank 6 having a sufficient volume which makes it possible to avoid emptying. of the reservoir before the end of the method according to the invention.
Le réservoir d’élimination 6 peut être fabriqué à partir d’un matériau choisi parmi le polypropylène, le polyéthylène, le polychlorure de vinyle (PVC), le verre et l’acier inox.Disposal tank 6 can be made from a material selected from polypropylene, polyethylene, polyvinyl chloride (PVC), glass and stainless steel.
Le réservoir d’élimination 7 peut être ouvert ou fermé.The elimination tank 7 can be open or closed.
Le dispositif 1 selon l'invention peut en outre comprendre une pompe (non-illustrée sur la figure). De préférence, il s'agit d’une pompe péristaltique. La pompe permet de maintenir un débit constant de solution tampon entrant et sortant du réservoir de dialyse 2. De préférence, le dispositif 1 selon l'invention comprend une seule pompe qui permet d'accueillir le tube d'alimentation 5 et le tube d'élimination 7.The device 1 according to the invention can further comprise a pump (not shown in the figure). Preferably, it is a peristaltic pump. The pump makes it possible to maintain a constant flow of buffer solution entering and leaving the dialysis tank 2. Preferably, the device 1 according to the invention comprises a single pump which allows the supply tube 5 and the tube to be accommodated. disposal 7.
Méthode de purification L’invention concerne une méthode pour la purification d’acide hyaluronique modifié. De préférence, cette méthode est mise en œuvre dans le dispositif 1 décrit ci-dessus.Purification Method The invention relates to a method for the purification of modified hyaluronic acid. Preferably, this method is implemented in the device 1 described above.
La méthode selon l'invention comprend dans un premier temps la mise en contact d’un gel d'acide hyaluronique modifié comprenant au moins un composé à éliminer avec une solution tampon. Le gel d'acide hyaluronique modifié comprenant le au moins un composé à éliminer, ainsi que la solution tampon sont telles que décrites ci-dessus. Cette mise en contact est effectuée dans un réservoir de dialyse 2, tel que décrit ci-dessus. De plus, cette mise en contact est effectuée à travers une membrane de dialyse 3, telle que décrite ci-dessus.The method according to the invention firstly comprises bringing a modified hyaluronic acid gel comprising at least one compound to be removed with a buffer solution into contact. The modified hyaluronic acid gel comprising the at least one compound to be removed, as well as the buffer solution are as described above. This contacting is carried out in a dialysis tank 2, as described above. In addition, this contacting is carried out through a dialysis membrane 3, as described above.
Selon certains modes de réalisation, comme détaillé ci-dessus, la membrane de dialyse 3 peut être placée de telle manière afin de former deux compartiments. Ainsi, le gel d'acide hyaluronique modifié comprenant au moins un composé à éliminer peut être placé dans un premier compartiment et la solution tampon peut être placée dans le deuxième compartiment.According to certain embodiments, as detailed above, the dialysis membrane 3 can be placed in such a way so as to form two compartments. Thus, the modified hyaluronic acid gel comprising at least one compound to be removed can be placed in a first compartment and the buffer solution can be placed in the second compartment.
Alternativement, la méthode selon l'invention peut comprendre une étape selon laquelle le gel d’acide hyaluronique modifié comprenant le au moins un composé à éliminer est, dans un premier temps, placé dans une ou plusieurs poches formées par une ou plusieurs membranes de dialyse 3, et après fermeture de ces poches, la ou les membranes 3 comprenant le gel d'acide hyaluronique sont placées dans le réservoir de dialyse 2.Alternatively, the method according to the invention can comprise a step according to which the modified hyaluronic acid gel comprising the at least one compound to be eliminated is, first of all, placed in one or more pockets formed by one or more dialysis membranes. 3, and after closing these pockets, the membrane or membranes 3 comprising the hyaluronic acid gel are placed in the dialysis tank 2.
Lorsque le gel d’acide hyaluronique modifié comprenant le au moins un composé à éliminer est mis en contact avec la solution tampon à travers la membrane de dialyse 3, le au moins un composé à éliminer peut traverser la membrane 3 pour se retrouver dans la solution tampon. Cela est possible grâce au diamètre des pores de la membrane 3 (comme détaillé ci-dessus) qui permet le passage des molécules de petite taille telles que les composés à éliminer et qui retient les molécules de grande taille, c’est-à-dire les molécules d'acide hyaluronique modifié.When the modified hyaluronic acid gel comprising the at least one compound to be removed is brought into contact with the buffer solution through the dialysis membrane 3, the at least one compound to be removed can pass through the membrane 3 to end up in the solution. buffer. This is possible thanks to the diameter of the pores of the membrane 3 (as detailed above) which allows the passage of small molecules such as the compounds to be eliminated and which retains the large molecules, i.e. modified hyaluronic acid molecules.
La méthode selon l'invention comprend également une étape d'alimentation de manière continue du réservoir de dialyse 2 avec une quantité de solution tampon fraiche. En d'autres termes, de la solution tampon fraiche (c'est-à-dire inutilisée) se trouvant par exemple dans un réservoir d'alimentation 4 comme décrit ci-dessus est alimenté de manière continue dans le réservoir de dialyse 2. La solution tampon fraiche est de préférence la même que celle utilisée dans le réservoir de dialyse 2. Le but de cette étape est d'alimenter le réservoir de dialyse 2 avec de la solution tampon fraiche afin d’éviter la saturation de la solution tampon qui se trouve dans le réservoir de dialyse 2 à cause de la concentration élevée en composé à éliminer.The method according to the invention also comprises a step of continuously feeding the dialysis tank 2 with a quantity of fresh buffer solution. In other words, fresh (that is to say unused) buffer solution, for example in a supply tank 4 as described above, is continuously fed into the dialysis tank 2. The Fresh buffer solution is preferably the same as that used in dialysis tank 2. The aim of this step is to supply dialysis tank 2 with fresh buffer solution in order to avoid saturation of the buffer solution which builds up. found in dialysis tank 2 because of the high concentration of compound to be removed.
La solution tampon fraîche peut être alimentée dans le réservoir de dialyse 2 avec un débit par exemple de 0,1 à 5,5 L/h.The fresh buffer solution can be fed into the dialysis tank 2 with a flow rate for example of 0.1 to 5.5 L / h.
La méthode selon l'invention comprend également une étape de soutirage de manière continue d’une quantité de solution tampon usagée du réservoir de dialyse. En d’autres termes, de la solution tampon comprenant le ou les composés à éliminer est transférée du réservoir de dialyse 2 dans un réservoir d’élimination 6 par exemple. Cette étape est effectuée afin de garder un niveau constant de solution tampon dans le réservoir de dialyse 2. Les étapes d'alimentation et de soutirage sont effectuées simultanément ce qui permet de garder un débit constant ainsi qu’un volume constant de solution tampon dans le réservoir de dialyse 2 à tout moment.The method according to the invention also comprises a step of continuously withdrawing a quantity of used buffer solution from the dialysis tank. In other words, the buffer solution comprising the compound (s) to be eliminated is transferred from the dialysis tank 2 to a elimination tank 6, for example. This step is carried out in order to keep a constant level of buffer solution in the dialysis tank 2. The feed and draw-off stages are carried out simultaneously which makes it possible to keep a constant flow rate as well as a constant volume of buffer solution in the dialysis tank. dialysis tank 2 at any time.
La solution tampon usagée peut être soutirée du réservoir de dialyse 2 avec un débit de 0,1 à 5,5 L/h.The used buffer solution can be withdrawn from the dialysis tank 2 at a flow rate of 0.1 to 5.5 L / h.
Ainsi, toutes les manipulations liées au remplacement de la solution tampon saturée dans le réservoir de dialyse 2 sont évitées, et la méthode de l'invention permet de purifier efficacement de l’acide hyaluronique modifié en mettant en œuvre un procédé peu coûteux et en évitant le risque de contamination.Thus, all the manipulations linked to the replacement of the saturated buffer solution in the dialysis tank 2 are avoided, and the method of the invention makes it possible to efficiently purify modified hyaluronic acid by implementing an inexpensive process and by avoiding the risk of contamination.
Selon certains modes de réalisation, le rapport massique de gel d'acide hyaluronique modifié comprenant le au moins un composé à éliminer et de solution tampon dans le réservoir de dialyse 2 peut être de 1:3 à 1:15, et de préférence de 1:5 et de 1:10.According to certain embodiments, the mass ratio of modified hyaluronic acid gel comprising the at least one compound to be removed and of buffer solution in the dialysis tank 2 can be from 1: 3 to 1:15, and preferably from 1. : 5 and 1:10.
Ainsi, la méthode selon l'invention permet de diminuer le volume de solution tampon utilisé et la taille des équipements pour une même quantité d'acide hyaluronique modifié à traiter, tout en maintenant l’efficacité de purification d’acide hyaluronique modifié.Thus, the method according to the invention makes it possible to reduce the volume of buffer solution used and the size of the equipment for the same quantity of modified hyaluronic acid to be treated, while maintaining the efficiency of purification of modified hyaluronic acid.
A la fin de la purification un gel d’acide hyaluronique modifié purifié est obtenu dans le réservoir de dialyse 2.At the end of the purification, a gel of purified modified hyaluronic acid is obtained in the dialysis tank 2.
La durée de la purification peut être de 30 min à 72 h, et de préférence de 40 à 45 h. Ainsi pendant toute cette durée, le renouvellement de la solution tampon se fait de manière continue et de préférence automatique sans que des manipulations externes ne soient nécessaires.The duration of the purification can be from 30 min to 72 h, and preferably from 40 to 45 h. Thus, throughout this period, the renewal of the buffer solution is carried out continuously and preferably automatically without any external manipulations being necessary.
De plus, à la fin de la purification, la quantité de composé(s) à éliminer dans le gel d'acide hyaluronique purifié peut être inférieure ou égale à 10 ppm en poids, de préférence inférieure ou égale à 5 ppm en poids, et encore de préférence inférieure ou égale à 2 ppm en poids. La quantification du composé à éliminer peut être basée sur la technique de GC/MS (chromatographie en phase gazeuse / spectrométrie de masse).In addition, at the end of the purification, the amount of compound (s) to be eliminated in the purified hyaluronic acid gel may be less than or equal to 10 ppm by weight, preferably less than or equal to 5 ppm by weight, and more preferably less than or equal to 2 ppm by weight. The quantification of the compound to be removed can be based on the technique of GC / MS (gas chromatography / mass spectrometry).
EXEMPLE L'exemple suivant illustre l'invention sans la limiter.EXAMPLE The following example illustrates the invention without limiting it.
Afin d'illustrer l’efficacité de la méthode de purification selon l'invention, trois purifications ont été effectuées. Dans les trois cas, le gel à purifier consiste en de l’acide hyaluronique réticulé dans une solution aqueuse en présence de 1,4-butanediol diglycidyl éther. La concentration en acide hyaluronique du gel à purifier est de 25 mg/g. La solution tampon utilisée est une solution tampon phosphate ayant un pH entre 7,0 et 7,6.In order to illustrate the effectiveness of the purification method according to the invention, three purifications were carried out. In all three cases, the gel to be purified consists of crosslinked hyaluronic acid in an aqueous solution in the presence of 1,4-butanediol diglycidyl ether. The hyaluronic acid concentration of the gel to be purified is 25 mg / g. The buffer solution used is a phosphate buffer solution having a pH between 7.0 and 7.6.
La purification P1 (comparative) est effectuée avec un rapport de gel à purifier et de solution tampon de 1:10. et selon une méthode de dialyse conventionnelle, c’est-à-dire avec des changements fréquents de la solution tampon à des moments déterminés. Plus précisément, la membrane de dialyse formant une poche contenant 0,5 kg de gel est plongée dans 4,5 kg de solution tampon et des changements fréquents de la solution tampon sont effectués à temps déterminés. Le volume de solution tampon des bains supplémentaires est de 13,5 L (total 18 L: 45 L initiaux + 135 L supplémentaires).The P1 purification (comparative) is carried out with a ratio of gel to be purified and of buffer solution of 1:10. and according to a conventional dialysis method, that is to say with frequent changes of the buffer solution at specific times. More precisely, the dialysis membrane forming a pocket containing 0.5 kg of gel is immersed in 4.5 kg of buffer solution and frequent changes of the buffer solution are carried out at set times. The volume of buffer solution for the additional baths is 13.5 L (total 18 L: initial 45 L + additional 135 L).
La purification P2 (selon l'invention) est effectuée avec un rapport de gel à purifier et de solution tampon de 1:10. Le système est conçu pour avoir un rapport de gel à purifier par rapport à la solution tampon constant de 1:10 dans le réservoir de dialyse et plus précisément, la membrane de dialyse formant une poche contenant 0,5 kg de gel est plongée dans 4,5 kg de solution tampon. Un volume total de 18 L est utilisé pour la purification : 4,5 L initaux dans le réservoir de dialyse et 13,5 L de solution tampon dans le réservoir d’alimentation.P2 purification (according to the invention) is carried out with a ratio of gel to be purified and of buffer solution of 1:10. The system is designed to have a ratio of gel to be purified with respect to the constant buffer solution of 1:10 in the dialysis tank and more precisely, the dialysis membrane forming a pocket containing 0.5 kg of gel is immersed in 4 , 5 kg of buffer solution. A total volume of 18 L is used for purification: initial 4.5 L in the dialysis tank and 13.5 L of buffer solution in the feed tank.
La purification P3 (selon l'invention) est effectuée avec un rapport de gel à purifier et de solution tampon de 1:5 et selon la méthode de l'invention. Plus précisément la membrane de dialyse formant une poche contenant 0,5 kg de gel est plongée dans 2,0 kg de solution tampon. Un volume total de 12 L est utilisé pour la purification : 2,0 L initiaux de dialyse et 10L de tampon dans le réservoir d’alimentation.The P3 purification (according to the invention) is carried out with a ratio of gel to be purified and of buffer solution of 1: 5 and according to the method of the invention. More precisely, the dialysis membrane forming a pocket containing 0.5 kg of gel is immersed in 2.0 kg of buffer solution. A total volume of 12 L is used for purification: initial 2.0 L of dialysis and 10 L of buffer in the feed tank.
Pour chaque purification, 10 membranes de dialyse ont été remplies avec le gel à purifier. Les membranes utilisées ont une taille de pores deFor each purification, 10 dialysis membranes were filled with the gel to be purified. The membranes used have a pore size of
12.000 Da-14.000 Da.12,000 Da-14,000 Da.
De plus, pour chaque purification, des échantillons de gel à purifier ont été prélevés à des moments déterminés : TO : avant la purification ; T7 : Après 7 h de purification. Pour P1, ce moment correspond au premier changement de solution tampon ; T24 : Après 24 h de purification. Pour P1, ce moment correspond au deuxième changement de solution tampon ; T30 : Après 30 h de purification. Pour P1, ce moment correspond au troisième changement de solution tampon ;In addition, for each purification, gel samples to be purified were taken at determined times: TO: before purification; T7: After 7 h of purification. For P1, this moment corresponds to the first change of buffer solution; T24: After 24 h of purification. For P1, this moment corresponds to the second change of buffer solution; T30: After 30 h of purification. For P1, this moment corresponds to the third change of buffer solution;
T48 : Après 48 h de purification. Fin de la purification.T48: After 48 h of purification. End of purification.
La quantité (en ppm) en 1,4-butanediol diglycidyl éther dans les échantillons prélevés a été analysée et est illustrée dans le tableau ci- dessous. La quantité (en ppm) en 1,4-butanediol diglycidyl éther est déterminée par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse (Colonne GC : HP Innovax). La limite de quantification est fixée à 1,3 ppm et la limite de détection est fixée à 0,4 ppm.The amount (in ppm) of 1,4-butanediol diglycidyl ether in the samples taken was analyzed and is shown in the table below. The quantity (in ppm) of 1,4-butanediol diglycidyl ether is determined by gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC column: HP Innovax). The limit of quantification is set at 1.3 ppm and the limit of detection is set at 0.4 ppm.
| 9 | VW | Pa | T8 | V8 - Concernant P1 et P2, 0,5 kg de gel à purifier ont été utilisés avec 18 L de solution tampon ce qui permet de calculer que 0,028 kg d'acide hyaluronique a été purifié par litre de solution tampon.| 9 | VW | Pa | T8 | V8 - Concerning P1 and P2, 0.5 kg of gel to be purified were used with 18 L of buffer solution, which makes it possible to calculate that 0.028 kg of hyaluronic acid was purified per liter of buffer solution.
Concernant P3, 0,5 kg de gel à purifier ont été utilisés avec 12 L de solution tampon ce qui permet de calculer que 0,042 kg d'acide hyaluronique a été purifié par litre de solution tampon, ainsi 50 % supplémentaire d’acide hyaluronique a été purifié en comparaison avec P1 et P2.Regarding P3, 0.5 kg of gel to be purified were used with 12 L of buffer solution which allows to calculate that 0.042 kg of hyaluronic acid was purified per liter of buffer solution, thus 50% additional hyaluronic acid was was purified in comparison with P1 and P2.
De plus, en calculant la quantité de 1,4-butanediol diglycidyl éther éliminée par litre de solution tampon on constate que pour P1 et P2 cette quantité est de 0,054 ppm de 1,4-butanediol diglycidyl éther par litre de solution tampon. Pour P3 cette quantité est de 0,077 ppm de 1,4-butanediol diglycidyl éther par litre de solution tampon. On constate ainsi que P3 permet d'éliminer 42,6 % plus de 1,4-butanediol diglycidyl éther en comparaison avec P1 et P2.In addition, by calculating the amount of 1,4-butanediol diglycidyl ether removed per liter of buffer solution, it can be seen that for P1 and P2 this amount is 0.054 ppm of 1,4-butanediol diglycidyl ether per liter of buffer solution. For P3, this amount is 0.077 ppm of 1,4-butanediol diglycidyl ether per liter of buffer solution. It is thus observed that P3 makes it possible to remove 42.6% more of 1,4-butanediol diglycidyl ether in comparison with P1 and P2.
Claims (18)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| BE20205100A BE1028063B1 (en) | 2020-02-17 | 2020-02-17 | HYALURONIC ACID PURIFICATION METHOD |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| BE20205100A BE1028063B1 (en) | 2020-02-17 | 2020-02-17 | HYALURONIC ACID PURIFICATION METHOD |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| BE1028063A1 true BE1028063A1 (en) | 2021-09-08 |
| BE1028063B1 BE1028063B1 (en) | 2021-09-14 |
Family
ID=69701023
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| BE20205100A BE1028063B1 (en) | 2020-02-17 | 2020-02-17 | HYALURONIC ACID PURIFICATION METHOD |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| BE (1) | BE1028063B1 (en) |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN203017990U (en) * | 2012-11-19 | 2013-06-26 | 上海其胜生物制剂有限公司 | Dialysis device of high-molecular solution or gel |
| CN103706253A (en) * | 2013-12-16 | 2014-04-09 | 南昌大学 | Large-size efficient and dynamic dialysis method and device thereof |
| EP3320028A1 (en) * | 2015-09-01 | 2018-05-16 | Merz Pharma GmbH & Co. KGaA | Method of making a cross-linked polymer gel and device for performing the method |
| CN110627921A (en) * | 2019-10-24 | 2019-12-31 | 海雅美生物技术(珠海)有限公司 | Cross-linked hyaluronic acid dialysis device |
-
2020
- 2020-02-17 BE BE20205100A patent/BE1028063B1/en active IP Right Grant
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| BE1028063B1 (en) | 2021-09-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP1562867B1 (en) | Water treatment method using an inorganic powder reagent with high specific surface area including a step of recycling said reagent | |
| EP1527022B1 (en) | Method and facility for treatment of sludge derived from biological water purification facilities | |
| CN101132990B (en) | Wastewater treatment equipment and method of wastewater treatment | |
| EP0437393B1 (en) | Process for the production and the extraction of antioxidants from a culture of microorganisms and a photobioreactor for performing the process | |
| JP5172082B2 (en) | Treatment method of treated water | |
| EP3040312B1 (en) | Water treatment method comprising a step of adsorption on ion-exchange resin and a step of coagulation/ballasted flocculation and separation, and corresponding installation | |
| FR2942220A1 (en) | METHOD AND DEVICE FOR PURIFYING LIQUID EFFLUENTS | |
| CN102153230B (en) | Method and device for treating salt-containing wastewater produced during producing epoxy chloropropane by using glycerol as raw material | |
| CN103359875A (en) | Waste water treatment method and waste water treatment system | |
| BE1028063B1 (en) | HYALURONIC ACID PURIFICATION METHOD | |
| EP2307318B1 (en) | Process for treating a liquid by flotation induced by floating particles | |
| CN106986510A (en) | A kind of water paint production wastewater treatment equipment and its handling process | |
| FR2668765A1 (en) | Activated sludge process for treating residual waters - using three tanks aerated by air contg. ozone | |
| JP2006255580A (en) | Ammonia concentration reduction apparatus and method of fermented solution | |
| CA2981862A1 (en) | Method and device for treating water by contact with an adsorbent material | |
| EP1284932A1 (en) | Method for treating an effluent containing in particular nitrogen and/or phosphorus and/or organic matter and/or heavy metals | |
| CA2447092C (en) | Method for the enzymatic production of a curing agent in its fluid state | |
| RU2010107250A (en) | METHOD FOR CLEANING MEMBRANE FILTERS | |
| CN104787988A (en) | Intelligent domestic sewage treatment device and sewage treatment method | |
| CN103466779B (en) | Sewage decoloration method | |
| EP4001223B1 (en) | Method for biological treatment of ammonium perchlorate with sharing of microfiltration | |
| BE886082R (en) | PROCESS FOR REMOVING NITROGEN IMPURITIES FROM A MIXTURE OF HYDROCARBONS | |
| FR2585023A1 (en) | METHOD FOR THE SEPARATION OF PROTEINS AND FATTY ACIDS USEFUL IN A PROCESS FOR THE INDUSTRIAL FRACTIONATION OF THESE PROTEINS | |
| UA13852U (en) | A method for obtaining and transformation of phenols | |
| CN113648836A (en) | Method for controlling leakage of membrane source disinfection by-product precursor |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG | Patent granted |
Effective date: 20210914 |