BE1024317B1 - Natuurdesem samenstelling - Google Patents

Natuurdesem samenstelling Download PDF

Info

Publication number
BE1024317B1
BE1024317B1 BE20165530A BE201605530A BE1024317B1 BE 1024317 B1 BE1024317 B1 BE 1024317B1 BE 20165530 A BE20165530 A BE 20165530A BE 201605530 A BE201605530 A BE 201605530A BE 1024317 B1 BE1024317 B1 BE 1024317B1
Authority
BE
Belgium
Prior art keywords
natural
dough
sourdough
composition
flour
Prior art date
Application number
BE20165530A
Other languages
English (en)
Other versions
BE1024317B9 (nl
BE1024317A9 (nl
BE1024317A1 (nl
Inventor
Hendrik Durnez
Original Assignee
Bio Bakkerij De Trog Bvba
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bio Bakkerij De Trog Bvba filed Critical Bio Bakkerij De Trog Bvba
Priority to BE20165530A priority Critical patent/BE1024317B9/nl
Publication of BE1024317A1 publication Critical patent/BE1024317A1/nl
Application granted granted Critical
Publication of BE1024317B1 publication Critical patent/BE1024317B1/nl
Publication of BE1024317A9 publication Critical patent/BE1024317A9/nl
Publication of BE1024317B9 publication Critical patent/BE1024317B9/nl

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A21BAKING; EDIBLE DOUGHS
    • A21DTREATMENT, e.g. PRESERVATION, OF FLOUR OR DOUGH, e.g. BY ADDITION OF MATERIALS; BAKING; BAKERY PRODUCTS; PRESERVATION THEREOF
    • A21D8/00Methods for preparing or baking dough
    • A21D8/02Methods for preparing dough; Treating dough prior to baking
    • A21D8/04Methods for preparing dough; Treating dough prior to baking treating dough with microorganisms or enzymes
    • A21D8/045Methods for preparing dough; Treating dough prior to baking treating dough with microorganisms or enzymes with a leaven or a composition containing acidifying bacteria
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A21BAKING; EDIBLE DOUGHS
    • A21DTREATMENT, e.g. PRESERVATION, OF FLOUR OR DOUGH, e.g. BY ADDITION OF MATERIALS; BAKING; BAKERY PRODUCTS; PRESERVATION THEREOF
    • A21D8/00Methods for preparing or baking dough
    • A21D8/02Methods for preparing dough; Treating dough prior to baking
    • A21D8/04Methods for preparing dough; Treating dough prior to baking treating dough with microorganisms or enzymes
    • A21D8/047Methods for preparing dough; Treating dough prior to baking treating dough with microorganisms or enzymes with yeasts
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/16Yeasts; Culture media therefor
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205Bacterial isolates
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11Lactobacillus
    • A23V2400/183Sanfranciscenis
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225Lactobacillus

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Bakery Products And Manufacturing Methods Therefor (AREA)

Abstract

De uitvinding betreft een unieke samenstelling van een kwalitatieve natuurdesem starter voor de bereiding van meestal biologische bakkerijproducten op basis van natuurdesemdeeg zonder de toevoeging van meerdere verbeteraars. De huidige uitvinding betreft in het bijzonder een unieke type I natuurdesemcompositie met een uniforme kwaliteit dankzij een zeer stabiel en specifiek microbioom, een specifieke tarwe- over roggebloem gewichtsverhouding en een gedefinieerde hoeveelheid water.

Description

BE2016/5530
NATUURDESEM SAMENSTELLING
TECHNISCH DOMEIN
De uitvinding heeft betrekking tot de voedselindustrie en omvat een samenstelling van een kwalitatieve natuurdesem geschikt voor de ambachtelijke bereiding van meestal biologische natuurdesem bakkerijproducten op industriële schaal.
STAND DER TECHNIEK
Natuurdesem is een deeg dat gefermenteerd wordt middels in de natuur voorkomende melkzuurbacteriën en gisten en bij het bakken van bijvoorbeeld brood gebruikt wordt als alternatief voor traditionele gist. Natuurdesembrood heeft een iets zuurdere smaak dan traditioneel brood en behoudt doorgaans ook langer zijn versheid.
Het bereiden van bakkerijproducten op basis van natuurdesem gebeurt in de huidige stand der techniek in drie fasen. In een eerste fase wordt een starterdeeg - ook moederdeeg genoemd - bereid uit het toevoegen van bloem en water die men gedurende een bepaalde tijd spontaan laat fermenteren. Het toevoegen van water en bloem wordt een aantal keer herhaald. In een tweede fase wordt een deel van deze starter vermengd met verse bloem en water dat men nog enkele uren laat rijzen vooraleer deze als basis wordt gebruikt voor de derde fase: de bereiding van een brooddeeg. Hierbij wordt een deel van het brooddeeg bewaard en aangevuld met bloem en water. Op deze wijze wordt een desem voor een volgend brooddeeg voorzien.
Doordat de bereiding van natuurdesembrood op de hierboven beschreven wijze veel meer tijd, kennis en kunde dan de bereiding van gewoon brood vergt, kiezen veel bakkerijen ervoor om een type II of type III natuurdesem te gebruiken in plaats van de bovenvermelde traditionele methode, berustend op een type I natuurdesem. Type II en type III natuurdesems worden toegevoegd aan de gebruikelijke ingrediënten om brood te bereiden - waaronder bloem, water en gist - om zo de smaak van de natuurdesem te verkrijgen. Hierdoor bezitten type II en type III zuurdesems wel de smaak van zuurdesem, maar nog niet de additionele voordelen - waaronder houdbaarheid en een verbeterde voedingswaarde - zoals wel het geval is bij type I zuurdesems.
Daarom worden vaak Stabilisators en/of andere hulpstoffen - al dan niet van natuurlijke afkomst - toegevoegd. Echter, wanneer men een kwaliteitsvol brood op
BE2016/5530 industriële wijze en met biologisch label wenst te produceren, zijn deze hulpstoffen te mijden.
De huidige uitvinding betreft een kwalitatieve samenstelling van een biologische natuurdesem zonder de nood aan toevoeging van hulpstoffen en waarbij de natuurdesem voor, tijdens en na het gebruik en propageren steeds kwalitatief gecontroleerd wordt om op deze manier een hoge en constante kwaliteit van de natuurdesem - en dus de producten op basis van desbetreffend desem - te garanderen.
SAMENVATTING VAN DE UITVINDING
In een eerste aspect betreft onderhavige uitvinding een natuurdesem samenstelling volgens conclusie 1. De uitvinding betreft een unieke samenstelling van een kwalitatieve natuurdesem voor de bereiding van meestal biologisch bakkerijproducten, die toelaat om de toevoeging van hulpstoffen te elimineren of te beperken. De huidige uitvinding betreft in het bijzonder een unieke type I natuurdesemcompositie met een hoge en constante kwaliteit dankzij een zeer stabiel en specifiek microbioom, specifieke bloem- en meel-gewichtsverhoudingen en een gedefinieerde hoeveelheid water aan een bepaalde temperatuur. De samenstelling resulteert bijgevolg in kwaliteitsvolle bakkerijproducten met unieke smaak.
GEDETAILLEERDE BESCHRIJVING
Tenzij anders gedefinieerd hebben aile termen die gebruikt worden in de beschrijving van de uitvinding, ook technische en wetenschappelijke termen, de betekenis zoals ze algemeen begrepen worden door de vakman in het technisch veld van de uitvinding.
Een, de en het refereren in dit document naar zowel het enkelvoud als het meervoud tenzij de context duidelijk anders veronderstelt. Bijvoorbeeld, een segment betekent een of meer dan een segment.
Wanneer ongeveer of rond in dit document gebruikt wordt bij een meetbare grootheid, een parameter, een tijdsduur of moment, en dergelijke, dan worden variaties bedoeld van +/-20% of minder, bij voorkeur +/-10% of minder, meer bij voorkeur +/-5% of minder, nog meer bij voorkeur +/-1% of minder, en zelfs nog meer bij voorkeur +/-0.1% of minder dan en van de geciteerde waarde, voor zoverre zulke variaties van toepassing zijn in de beschreven uitvinding.
De termen omvatten, omvattende, bestaan uit, bestaande uit, voorzien van, bevatten, bevattende, beheizen, beheizende, inhouden, inhoudende zijn
BE2016/5530 synoniemen en zijn inclusieve of open termen die de aanwezigheid van wat volgt aanduiden, en die de aanwezigheid niet uitsluiten of beletten van andere componenten, kenmerken, elementen, leden, stappen, gekend uit of beschreven in de stand der techniek.
Het eiteren van numerieke Intervallen door de eindpunten omvat alle gehele getallen, breuken en/of reële getallen tussen de eindpunten, deze eindpunten inbegrepen.
De natuurdesemcompositie beschreven door de huidige uitvinding omvat melkzuurbacteriën die uitsluitend behoren tot het species Lactobacillus sanfranciscensis en die zieh bovendien in een concentratie van 8 tot 11 efu per gram natuurdesemcompositie bevinden.
De uitvinders van onderhavige uitvinding hebben aangetoond dat het gebruik van een zuivere melkzuurbacteriële cultuur - bestaande uit Lactobacillus sanfranciscensis leidt tot een hogere en meer constante kwaliteit van de natuurdesem en bijgevolg dus de bakkerijproducten op basis daarvan. Zonder limiterend te willen zijn, is dit vermoedelijk te wijten aan het feit dat er gelijke fermentatieproducten gevormd en vrijgesteld worden in de natuurdesems. Op deze manier zorgt de uniformiteit van een zuivere melkzuurbacteriële cultuur in een eerste aspect voor een uniforme en karakteristieke smaak van de natuurdesems, en dus de bakkerijproducten gebaseerd op desbetreffende natuurdesems.
De zuiverheid van de melkzuurbacteriële cultuur kan worden nagegaan door moléculaire analyse.
In een voorkeursvorm volgens onderhavige uitvinding is Lactobacillus sanfranciscensis identificeerbaar door amplificatie van de V3 regio van 16S rRNA amplicons middels primers met de volgende sequentie: forward primer (5'CGCCCGCCGCGCGCGGCGGGCGGGGCGGGGGCACGGGGGGCCTACGGGAGGCAGCAG-3') en een reverse primer (5'-ATTACCGCGGCTGCTGG-3') waarbij een fragment van 250 baseparen wordt bekomen.
De huidige uitvinding definieert een concentratiebereik waarin voorgenoemde melkzuurbacteriën zieh bevinden in de beschreven natuurdesemcompositie. Hierdoor wordt de hoeveelheid fermentatie in een natuurdesemcompositie volgens de huidige uitvinding gedurende een bepaalde tijd constant gehouden tussen verschillende natuurdesems bereid volgens de huidige uitvinding. Een uniforme hoeveelheid fermentatie zorgt voor een gelijkaardige rijzing - en dus textuur - van de natuurdesems en daaruit resulterende bakkerijproducten.
BE2016/5530
In de huidige uitvinding wordt een concentratiebereik aan melkzuurbacteriën van 8 tot 11 cfu per gram natuurdesem gedefinieerd. Concentraties behorend tot dit bereik garanderen een luchtige natuurdesemstructuur met een karakteristieke en complexe smaakontwikkeling in de natuurdesem.
Het aantal kolonievormende units van melkzuurbacteriën kan worden bepaald door uitplating en cultiveren van de compositie of een verdunning ervan op een geschikte, eventueel selectieve, voedingsbodem, waarna het aantal kolonies wordt geteld.
De pH - en meerbepaald de zuurtegraad - van natuurdesem is een belangrijke eigenschap van de huidige uitvinding. Lactobacillus sanfranciscenis bezit enige zuurtolerantie maar kan niet overleven bij zeer läge pH-waarden. De gisten aanwezig in een natuurdesem zijn vaak zeer gevoelig voor een (te) läge pH. Bovendien heeft de pH een grote invloed op de fermentatie-efficiëntie van Lactobacillus sanfranciscensis. Zoals hieronder beschreven, is het belangrijk dat het evenwicht tussen de melkzuurbacteriën en de aanwezige gistcellen - en daarbij de symbiotische balans behouden blijft in de natuurdesem. De pH speelt een belangrijke roi in het behoud van de symbiotische balans. In een tweede aspect heeft de pH een invloed op de glutenstructuur, de smaak en de kwaliteit van de natuurdesem en het natuurdesemdeeg.
De huidige uitvinding definieert een relatief nauw pH-bereik tussen 3.5 en 4, en meer bij voorkeur tussen 3.8 en 4. Een natuurdesem met een pH gelegen in dit bereik garandeert een hoge fermentatie-efficiëntie en een stabiele symbiose van Lactobacillus sanfranciscensis en de aanwezige gisten. Eveneens zorgt deze nauwgedefinieerde pH mee voor een uniforme smaak en kwaliteit van de natuurdesem. Een afwijking van het pH-bereik van de huidige uitvinding kan een shift in de symbiotische balans induceren en de kwaliteit, smaak en textuur van de natuurdesem rechtstreeks of onrechtstreeks sterk beïnvloeden.
Natuurdesems beschreven door de huidige uitvinding kunnen worden geproduceerd op basis van zowel tarwe-, rogge- en speltbloem als tarwe-, rogge- en speltmeel afhankelijk van het gewenste eindproduct. Tarwebloem heeft een neutrale smaak en wordt standaard gebruikt in de productie van bakkerijproducten. Roggebloem echter heeft een iets zuurdere smaak en toevoeging hiervan - zoals in de huidige uitvinding geeft natuurdesems een onderscheidbare en uitgesproken smaak. Dit smaakverschil is hoogstwaarschijnlijk te wijten aan de activiteit van amylases in rogge die een hogere vrijstelling van suikers induceren.
BE2016/5530
Het gebruik van een type I natuurdesem volgens de huidige uitvinding in een brooddeeg, levert een karakteristieke smaak aan het brooddeeg, en leidt tot een product met traag verteerbaar zetmeel en bijgevolg een läge glycemische index, bovendien zorgt de typische structuur van een zuurdesem volgens de beschreven uitvinding voor een snellere opname van minerale bestanddelen door het lichaam.
Een natuurdesemcompositie volgens de huidige uitvinding omvat een groot aandeel aan water wat zorgt voor een zeer vochtige natuurdesemstructuur.
In een voorkeurdragende uitvoeringsvorm omvat de natuurdesem een water-overbloem gewichtsverhouding gelegen tussen 0.6 en 1.
Zoals eerder vermeld, wordt in de huidige uitvinding een zuivere Lactobacillus sanfranciscensis cultuur gecombineerd met natuurlijke gisten - waaronder Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces exiguous, Candida milleri en Candida humilis - om een symbiotisch consortium in stand te houden. Deze symbiose wordt gekarakteriseerd door metabolische interacties tussen de maltose-negatieve gisten en de maltose-positieve Lactobacillus sanfranciscensis waarbij uitwisseling van aminozuren en glucose optreedt. In een eerste aspect wordt de groei van - en dus fermentatie door - Lactobacillus sanfranciscensis gestimuleerd door de verhoogde beschikbaarheid van aminozuren door gist-excretie van dezen. Daartegenover stelt Lactobacillus sanfranciscensis glucose vrij die de groei van de aanwezige gisten stimuleert. Lactobacillus sanfranciscensis zet met behulp van maltose fosforylase maltose om in glucose-l-fosfaat dat verder gemetaboliseerd wordt tot glucose. Zolang er voldoende maltose beschikbaar is, verkiest Lactobacillus sanfranciscensis maltose boven glucose en wordt er glucose vrijgesteld. Bovendien dient het vermeld te worden dat het hierboven vermelde pH-bereik van de huidige uitvinding de activiteit van de maltose-H+ symporter van Lactobacillus sanfranciscensis doet toenemen. Hierdoor wordt de opname van maltose door Lactobacillus sanfranciscensis in natuurdesemdeeg verhoogd. Deze symbiotische balans kan - zoals vermeld - sterk verstoord worden door de pH van de natuurdesem, en dus is het belangrijk dat de pH van de natuurdesem binnen het bereik van de huidige uitvinding behouden blijft.
Wanneer geen maltose beschikbaar is, metaboliseert Lactobacillus sanfranciscensis het glucose zelf en wordt dit niet meer vrijgesteld waardoor de symbiose stilvalt. Aangezien er een deel van het natuurdesemdeeg gebruikt wordt voor het opstarten van een volgende natuurdesem starter, is het dus belangrijk om voldoende maltose te voorzien in de natuurdesemcultuur en de symbiose in stand te houden. Bloem is een rijke bron aan maltose en dus volstaat het om bloem en water toe te voegen aan het
BE2016/5530 deel van de natuurdesem dat als basis fungeert voor het heropstarten van een volgende natuurdesemcultuur. Dit procès wordt propagatie van de natuurdesem genoemd.
In de huidige uitvinding wordt de natuurdesem elke 24 uur gepropageerd. Het dient te worden benadrukt dat een natuurdesem volgens huidige uitvinding moet voldoen aan het bovenvermelde pH-bereik voor gebruik in de bereiding van een deeg. Daarom wordt de pH van de natuurdesem continu gemonitord en wordt het gebruik ervan beperkt tot het tijdsinterval - binnen bovenvermelde 24 uur - waarbinnen de pH van de zuurdesem optimaal is. Om de groei van - en dus fermentatie en bijgevolg verlaging van de pH van de zuurdesem door - de aanwezige melkzuurbacteriën te stimuleren, omvat de huidige uitvinding een bewaartijd van 4 uur bij 30 tot 35°C na de bereiding ervan.
De huidige uitvinding betreft een specifieke samenstelling en bereiding van een type I natuurdesem voor het gebruik in de ambachtelijke productie van bakkerijproducten op industriële schaal. Betreffende natuurdesemcompositie onderscheidt zieh van de traditionele type I natuurdesems door het hoge aandeel aan water, de hoge en constante kwaliteit en de aanwezigheid van een natuurdesem consortium bestaande uit een zeer stabiele en zuivere Lactobacillus sanfranciscensis cultuur in combinatie met symbiotische gisten. Het dient te worden benadrukt dat enkel Lactobacillus sanfranciscensis stammen de bacteriële component van het vernoemde stabiele consortium definiëren.
In een voorkeursuitvoering kan een natuurdesemcompositie volgens de huidige uitvinding gekarakteriseerd worden aan de hand van zijn Totale Titreerbare Zuurheid (TTA). In de huidige uitvinding verwijst de TTA naar het volume - in ml - 0.1N NaOH nodig om de pH-waarde van een mengsei van 10 gram natuurdesem in 100 ml water tot 8.5 te brengen. De TTA is een term die gekend is door de vakman in het technisch veld van de uitvinding en is in de huidige uitvinding gelijk aan ten minste 9.
In een voorkeurdragende uitvoeringsvorm wordt de natuurdesem als rijsmiddel toegevoegd aan een deeg voor een bakkerijproduct.
VOORBEELDEN
Bepalinq van het aantal kolonievormende eenheden in een natuurdesem
BE2016/5530
Bij wijze van niet limiterend voorbeeld werd 5 gram natuurdesem gehomogeniseerd in 45 ml zoutoplossing waarna een verdunningsreeks van het betreffend mengsei werd opgemaakt. 100 pi van deze verdunningen werden in triplicaat op een Man-RogosaSharpe-5 (MRS-5) medium met 0,1 gram cycloheximide per liter uitgeplaat. Na 48 uur incubatie bij 30°C werd het gemiddelde celgetal per verdunning op de platen bepaald. De concentratie aan melkzuurbacteriën per gram natuurdesem werd vervolgens berekend worden aan de hand van de toegepaste verdunningsfactor en volume zoutoplossing. De gemiddelde celtelling was 9.7 x 107 cfu/g.
Cultuurafhankelijke microbiële analyse
Voor de cultuur-afhankelijke microbiologische analyse werd een (GTG)s-PCR fingerprinting analyse uitgevoerd. Hiervoor werden verdunningen van mengsels omvattende 5 gram van de natuurdesem gehomogeniseerd in 45 ml zoutoplossing uitgeplaat op een Man-Rogosa-Sharpe-5 (MRS-5) medium met 0.1 gram cycloheximide per liter. Na 48 uur incubatie bij 30°C werden 48 willekeurige kolonies getransfereerd naar testbuisjes met MRS-5 agar en 24 uur bij 30°C geïncubeerd ter propagatie. Vervolgens werd het DNA uit de gepropageerde cellen geëxtraheerd met behulp van de Nucleospin 96 Tissue kit van Macherey-Nagel volgens bijgeleverde instructies van de producent en gekwantificeerd met een spectrofotometer (NanoDrop2000} volgens een methode gekend door een vakman. Het DNA van de stalen werd op basis van de resultaten van de spectrofotometer - verdund tot 50 ng/μΙ. De verdunde DNA-stalen werden aan een rep-PCR analyse met (GTG)s (5'GTGGTGGTGGTGGTG-3') als oligonucleotide primer onderworpen. Betreffende PCRcondities zijn terug te vinden in tabel 1. De verkregen PCR-producten - (GTG)sfingerprintclusters - werden gezuiverd met behulp van The Wizard® SV Gel en PCR clean-up system protocol van Promega volgens bijhorende instructies en onderworpen aan een 1,5% (m/v%) agarose gelelektroforese met 1 x TAE buffer bij 55 V voor 16 uur. Het DNA werd gevisualiseerd met behulp van ethidium bromide in 1 x TAE buffer en UV-licht. De verkregen (GTG)s-PCR fingerprints werden geanalyseerd met behulp van BioNumerics Version 5.10 software (Applied Maths, Sint-Martens-Latem, Belgium). De uitgevoerde clusteranalyse toonde aan dat alle gepropageerde kolonies tot hetzelfde species behoren.
Sequenering van 16S rRNA fragmenten van vier willekeurige van bovenvermelde kolonies toonde aan dat Lactobacillus sanfranciscensis het desbetreffende species is.
BE2016/5530
Tabel 1 - Toegepaste condities gedurende (GTG)s-PCR fingerprinting analyse
PCR fase Fasetemperatuur Faseduur
Initiële denaturatie 95°C 5'
Denaturatie 94°C 1'
Hybridisatie 40°C 1'
Elongatie 65°C 8'
Finale elongatie 65°C 16'
Terminatie 4°C 00
Waarbij het PCR-reactiemengsel een totaal volume van 25 μΙ omvat waarvan: 5 μΙ 5 x Gitschier buffer, 0.4 μΙ 10 mg/ml BSA, 2.5 μΙ dimethylsulfoxide, 1 mM dNTPs, 2 U Taq polymerase, 1 μΙ DNA template (50 ng) en 1 μΙ primer (0.3 mg/ml).
Cultuuronafhankeliike microbiële analyse
De resultaten van de (GTG)s-PCR fingerprinting analyse werden bevestigd door een cultuur-onafhankelijke analyse gebaseerd op een denaturating gradient gel electrophoresis (DGGE) van de V3-regio van 16S rRNA PCR amplicons. Hiervoor werd DNA geëxtraheerd uit natuurdesemstalen als volgt: 10 gram natuurdesem werd gehomogeniseerd met een 90 ml fysiologische pepton-oplossing [0.1% (m/V) bacteriologische pepton en 0.85% (m/V) NaCI]. 50 ml van resulterend mengsei werd tweemaal gecentrifugeerd om in een eerste aspect de vaste partikels te verwijderen en in een tweede aspect om de microbiële cellen te pelleteren. Vervolgens werd 1 ml TES-buffer aan gepelleteerde microbiële cellen toegevoegd en resulterend mengsel werd gecentrifugeerd waarna het supernatans verwijderd werd. De celwanden van de bacteriële cellen werden gelyseerd door toevoeging van 90 μΙ lysozyme en 90 μΙ mutanolysine in 300 μΙ STET-buffer en 60 minuten incubatie bij 37°C. Het resulterende mengsel werd voorzien van 40 μΙ 20% SDS in TE buffer en enkele glazen pareltjes, en werd vervolgens gevortexed. Na denaturatie van de aanwezige enzymen - door incubatie bij 65°C - werd het DNA gezuiverd met behulp van 100 μΙ TE en 515 μΙ van een fenol/chloroform/isoamylalcohol-oplossing (49:49:1), gevolgd door centrifugatie en transfer van het supernatans - bevattende het DNA - naar een nieuwe eppendorf-tube. Het DNA werd geprecipiteerd met 70 μΙ 5 M NaCI en 1 ml koude propanol (-20°C), gepelleteerd door centrifugatie en gedroogd in vaccuum. Tot slot werd het DNA geresuspendeerd in 30 μΙ TE-buffer en bewaard voor 24 uur bij 4°C om het DNA op te lossen.
Vervolgens werd een PCR met een forward primer (5'CGCCCGCCGCGCGCGGCGGGCGGGGCGGGGGCACGGGGGGCCTACGGGAGGCAGCAG-3') en een reverse primer (5'-ATTACCGCGGCTGCTGG-3') uitgevoerd ter amplificatie van
BE2016/5530 de bacteriële V3 regio van het 16S rRNA gen. De specifieke PCR-condities zijn terug te vinden in tabel 2, hieronder. Na amplificatie werden de resulterende amplicons geanalyseerd en vergeleken ten opzichte van amplicons van de vier geïdentificeerde stalen uit de cultuurafhankelijke microbioligische analyse met behulp van een DGGE. De DGGE-gel omvat 8% (V/V) polyacrylamide in 1 x TAE buffer met een denaturatiegradiënt van 35% tot 60% [100% denaturerend polyacrylamide-oplossing: 7 M urea en 40% (V/V formamide]. De DGGE werd uitgevoerd in 1 x TAE-buffer bij 70 V en 60°C voor 960 minuten. De gel werd gekleurd met behulp van ethidium bromide en gevisualiseerd door belichting met UV.
Er werd geen verschil aangetoond tussen de vier gesequeneerde - Lactobacillus sanfranciscensis - stalen en de ongekende natuurdesemstalen. De resultaten uit de cultuur-afhankelijke microbiologische méthode - dat de melkzuurbacteriële cultuur in de natuurdesemcompositie van de huidige uitvinding uitsluitend bestaat uit Lactobacillus sanfranciscensis - werden bevestigd.
Tabel 2 - Toegepaste condities gedurende (GTG)s-PCR fingerprinting analyse
PCR fase Fasetemperatuur Faseduur
Initiële denaturatie 95°C 5'
Denaturatie 94°C 20
Hybridisatie 55°C 45
Elongatie 72°C 1'
Finale elongatie 72°C 7'
Terminatie 4°C 00
Waarbij het PCR-reactiemengsel een totaal volume van 50 pl omvat waarvan: 6 pl lOx PCR-buffer [15 mM MgCb], 2,5pl BSA, 2.5 pl dNTPs (2 nM voor elk dNTP), 2 pl van elke primer, 0.25 pl Taq polymerase (5 U/pl), 32.75 pl ultrazuiver water en 1 pl DNAtemplate (50 ng/pl). Als forward primer werd de sequentie 5'CGCCCGCCGCGCGCGGCGGGCGGGGCGGGGGCACGGGGGGCCTACGGGAGGCAGCAG-3' en als reverse primer werd de sequentie 5'-ATTACCGCGGCTGCTGG-3' gebruikt.
Het is verondersteld dat de huidige uitvinding niet beperkt is tot de uitvoeringsvormen die hierboven beschreven zijn en dat enkele aanpassingen of veranderingen aan de beschreven voorbeelden kunnen toegevoegd worden zonder de toegevoegde conclusies te herwaarderen.
BE2016/5530
SEQUENCE LISTING <110> Bio Bakkerij De Trog bvba <120> Natuurdesem samenstelling <130> TROG-002-BE <160> 3 <170> Patentln version 3.5 <210> 1 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220>
<223> (GTG)5 primer for rep-PCR <400> 1 gtggtggtgg tggtg 15 <210> 2 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220>
<223> Targets V3 region of 16S rRNA <400> 2 cgcccgccgc gcgcggcggg cggggcgggg gcacgggggg cctacgggag gcagcag
2016/5530 11 BE2016/5530 <210> 3 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220>
<223> Targets V3 region of 16S rRNA <400> 3 attaccgcgg ctgctgg 17
BE2016/5530

Claims (12)

  1. CONCLUSIES
    1. Een natuurdesemcompositie voor gebruik bij de productie van bakkerijproducten waarbij de compositie symbiotische gisten en melkzuurbacteriën omvat, met het kenmerk, dat de melkzuurbacteriën uitsluitend behoren tot Lactobacillus sanfranciscensis en zieh aan een concentratie tussen 8 en 11 cfu per gram compositie bevinden.
  2. 2. Natuurdesemcompositie volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat de melkzuurbacteriën in de compositie identificeerbaar zijn middels PCR, door gebruik te maken van een primerpaar met sequenties 5'CGCCCGCCGCGCGCGGCGGGCGGGGCGGGGGCACGGGGGGCCTACGGGAGGCAG CAG-3' en 5'-ATTACCGCGGCTGCTGG-3'.
  3. 3. Een natuurdesemcompositie volgens conclusie 1 met het kenmerk dat de pH van de natuurdesem tussen 3.5 en 4, en meer bij voorkeur tussen 3.8 en 4 ligt.
  4. 4. Een natuurdesemcompositie volgens conclusie 1 of 3, omvattende tarwebloem, roggebloem, speltbloem, tarwemeel, roggemeel en/of speltmeel.
  5. 5. Een natuurdesemcompositie volgens één der voorgaande conclusies met het kenmerk dat de water-over-bloem gewichtsverhouding tussen 0.60 en 1 ligt.
  6. 6. Een natuurdesemcompositie volgens één der voorgaande conclusies met het kenmerk dat één of meer gisten in de natuurdesem gekozen worden uit Saccharomyces exiguous, Saccharomyces cerevisiae, Candida milleri, of Candida humilis.
  7. 7. Een natuurdesemdeeg volgens één der voorgaande conclusies met het kenmerk dat het natuurdesemdeeg een type I natuurdesem is.
  8. 8. Een natuurdesemcompositie volgens één der voorgaande conclusies met het kenmerk dat de totaal titreerbare zuurheid (TTA) minstens 9 is.
  9. 9. Een natuurdesem volgens één der voorgaande conclusies met het kenmerk dat het natuurdesem een propagatietijd bezit van 24 uur.
  10. 10. Een werkwijze voor het bereiden van een bakkerijproduct, omvattende het gebruik van een natuurdesem volgens één der conclusies 1 tot 9 als rijsmiddel.
  11. 11. Een deeg omvattende een natuurdesem volgens één der voorgaande conclusies.
  12. 12. Een bakkerijproduct op basis van een natuurdesem of deeg volgens één der voorgaande conclusies.
    2016/5530
    BE2016/5530
    NATUURDESEM SAMENSTELLING
BE20165530A 2016-06-30 2016-06-30 Natuurdesem samenstelling BE1024317B9 (nl)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
BE20165530A BE1024317B9 (nl) 2016-06-30 2016-06-30 Natuurdesem samenstelling

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
BE20165530A BE1024317B9 (nl) 2016-06-30 2016-06-30 Natuurdesem samenstelling

Publications (4)

Publication Number Publication Date
BE1024317A1 BE1024317A1 (nl) 2018-01-25
BE1024317B1 true BE1024317B1 (nl) 2018-01-30
BE1024317A9 BE1024317A9 (nl) 2018-03-06
BE1024317B9 BE1024317B9 (nl) 2018-03-12

Family

ID=56550659

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BE20165530A BE1024317B9 (nl) 2016-06-30 2016-06-30 Natuurdesem samenstelling

Country Status (1)

Country Link
BE (1) BE1024317B9 (nl)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3734743A (en) * 1971-02-26 1973-05-22 Us Agriculture Sour dough french bread
CN102703600A (zh) * 2012-07-10 2012-10-03 光明乳业股份有限公司 一种植物乳杆菌肠道定殖性的定性、定量测定方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3734743A (en) * 1971-02-26 1973-05-22 Us Agriculture Sour dough french bread
CN102703600A (zh) * 2012-07-10 2012-10-03 光明乳业股份有限公司 一种植物乳杆菌肠道定殖性的定性、定量测定方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MARKUS J. BRANDT ET AL: "Effects of process parameters on growth and metabolism of Lactobacillus sanfranciscensis and Candida humilis during rye sourdough fermentation", EUROPEAN FOOD RESEARCH AND TECHNOLOGY, vol. 218, no. 4, 6 February 2004 (2004-02-06), Berlin/Heidelberg, pages 333 - 338, XP055335846, ISSN: 1438-2377, DOI: 10.1007/s00217-003-0867-0 *
S. SIEUWERTS ET AL: "Unraveling Microbial Interactions in Food Fermentations: from Classical to Genomics Approaches", APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY, vol. 74, no. 16, 20 June 2008 (2008-06-20), US, pages 4997 - 5007, XP055282735, ISSN: 0099-2240, DOI: 10.1128/AEM.00113-08 *
STEPHANIE A VOGELMANN ET AL: "Impact of ecological factors on the stability of microbial associations in sourdough fermentation", FOOD MICROBIOLOGY, ACADEMIC PRESS LTD, LONDON, GB, vol. 28, no. 3, 12 November 2010 (2010-11-12), pages 583 - 589, XP028366438, ISSN: 0740-0020, [retrieved on 20101126], DOI: 10.1016/J.FM.2010.11.010 *

Also Published As

Publication number Publication date
BE1024317B9 (nl) 2018-03-12
BE1024317A9 (nl) 2018-03-06
BE1024317A1 (nl) 2018-01-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Gänzle et al. Lifestyles of sourdough lactobacilli–Do they matter for microbial ecology and bread quality?
Stolz et al. Utilisation of maltose and glucose by lactobacilli isolated from sourdough
Iacumin et al. Description of the microflora of sourdoughs by culture-dependent and culture-independent methods
JP5014513B2 (ja) 単一段階の焼成製品の製造
Ramos et al. Microbiological and chemical characteristics of tarubá, an indigenous beverage produced from solid cassava fermentation
Penido et al. Selection of starter cultures for the production of sour cassava starch in a pilot-scale fermentation process
Rogalski et al. Role of Kazachstania humilis and Saccharomyces cerevisiae in the strain-specific assertiveness of Fructilactobacillus sanfranciscensis strains in rye sourdough
Şimşek et al. Comparison of lactic acid bacteria diversity during the fermentation of Tarhana produced at home and on a commercial scale
EP0953288B1 (fr) Levain panaire longue conservation prêt à l&#39;emploi
Zinno et al. Impact of NaCl reduction on lactic acid bacteria during fermentation of Nocellara del Belice table olives
Fujimoto et al. Microbial behavior and changes in food constituents during fermentation of Japanese sourdoughs with different rye and wheat starting materials
Oshiro et al. Dense tracking of the dynamics of the microbial community and chemicals constituents in spontaneous wheat sourdough during two months of backslopping
EP1603399B1 (fr) Levain panaire, son utilisation et produits de boulangerie cuits susceptibles d&#39;être obtenus
Maloney et al. Yeast fermentations
BE1024317B1 (nl) Natuurdesem samenstelling
EP3194565B1 (en) Strain of the yeast species saccharomyces cerevisiae, strains essentially derived from it and use thereof
Amr et al. Sourdough use in bread production
Vilanova et al. Microbiota distribution in sourdough: Influence of high sucrose resistant strains
WO2019068700A1 (fr) Ameliorant de panification comprenant des microorganismes
Champagne et al. Interaction between pH, autolysis promoters and bacterial contamination on the production of yeast extracts
JPWO2010119874A1 (ja) ラクトバチルス属菌株および防黴性を有する食品
Ignatova-Ivanova et al. Biodiversity of lactic acid bacteria in Bulgarian wheat and rye flour.
Torres-Maravilla et al. Evaluation of pulque sediment (xaxtle) as a starter culture in order to obtain a low glycemic index baked product
Aouine et al. Isolation and Characterization of Potential Starter Yeasts from Traditional Moroccan Sourdoughs
Semumu et al. Evolutionary engineering of Wickerhamomyces subpelliculosus and Kazachstania gamospora for baking

Legal Events

Date Code Title Description
FG Patent granted

Effective date: 20180130