BE1023877B1 - Procédés et compositions pour l’induction d’une immunité protectrice contre une maladie et/ou une infection à filovirus - Google Patents

Procédés et compositions pour l’induction d’une immunité protectrice contre une maladie et/ou une infection à filovirus Download PDF

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BE1023877B1 BE2016/5376A BE201605376A BE1023877B1 BE 1023877 B1 BE1023877 B1 BE 1023877B1 BE 2016/5376 A BE2016/5376 A BE 2016/5376A BE 201605376 A BE201605376 A BE 201605376A BE 1023877 B1 BE1023877 B1 BE 1023877B1
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Abstract

Compositions, vaccins et méthodes pour l’induction d’une immunité protectrice contre une maladie et/ou une infection à filovirus, en particulier une immunité protectrice contre une infection à Ebolavirus sont décrites. Le vaccin contient une première composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’au moins un vecteur adénoviral humain comprenant un premier acide nucléique codant une première protéine antigénique d’un filovirus, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; et une seconde composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur adénoviral simien comprenant un second acide nucléique codant une seconde protéine antigénique du filovirus, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; l’une des compositions étant une composition d’amorçage et l’autre composition étant une composition de rappel.

Description

TITRE DE L’INVENTION
PROCÉDÉS ET COMPOSITIONS POUR L’INDUCTION D’UNE IMMUNITÉ PROTECTRICE CONTRE UNE MALADIE ET/OU UNE INFECTION À FILOVIRUS
RENVOI À DES DEMANDES APPARENTÉES (001) La présente demande revendique la priorité de la demande de brevet provisoire U.S. n° 62/164 909 déposée le 21 mai 2015, dont la description est incorporée ici en son intégralité par référence.
REFERENCE AU LISTAGE DE SÉQUENCES SOUMIS PAR VOIE
ÉLECTRONIQUE (002) La présente demande contient un listage de séquences qui est soumis par voie électronique via EPS-Web sous forme d’un listage de séquences au format ASCII portant le nom de fichier « 688097-70WO Sequence Listing », date de création 20 mai 2016 et ayant une taille d’environ 15 kb. Le listage de séquences soumis via EFS-Web fait partie de la description et est incorporé ici en son intégralité par référence.
DOMAINE DE L’INVENTION (003) La présente invention concerne des compositions, des vaccins et des procédés pour l’induction d’une immunité protectrice contre une maladie et/ou une infection à filovirus, en particulier une immunité protectrice contre une infection à Ebolavirus.
ARRIÈRE-PLAN DE L’INVENTION (004) Les virus Marburg (MARV) et les vims Ebola (EBOV), tels que l’Ebolavirus Zaïre, sont liés à des flambées épidémiques de fièvre hémorragique Marburg (MHF) et de maladies à virus Ebola (EVD) particulièrement létales chez des êtres humains et des primates en Afrique, en Afrique du Nord et en Europe. Ces virus sont des filovirus qui sont connus pour infecter des êtres humains et des primates non humains, avec de sérieuses conséquences sur la santé, y compris des issues fatales. Des infections à filovirus ont eu pour résultat des taux de mortalité allant jusqu’à 90 % chez les êtres humains. Les infections à EBOV causent des EVD avec une issue fatale survenant souvent dans les 7 à 10 jours après l’infection. L’EVD se présente sous forme d’un syndrome fébrile aigu qui se manifeste par une fièvre soudaine, des nausées, vomissements, diarrhée, éruptions maculopapuleuses, malaise, prostration, des signes généralisés de perméabilité vasculaire accrue, des anomalies de la coagulation, et un dérèglement de la réponse immunitaire innée. Une bonne partie de la maladie s’avère être causée par un dérèglement des réponses immunitaires innées à l’infection et par la réplication du virus dans les cellules endothéliales vasculaires, ce qui entraîne la mort des cellules hôtes et la destruction de la barrière endothéliale. Les filovims peuvent être propagés par un aérosol de petites particules ou par le contact direct avec du sang infecté, des organes infectés et des liquides corporels infectés, d’origine humaine ou provenant de primates non humains. Π est rapporté que l’infection par un seul virion est suffisante pour causer une EVD chez des êtres humains. Il n’existe à l’heure actuelle aucun agent thérapeutique ou vaccin approuvé pour le traitement et la prévention de l’EVD, bien que deux vaccins candidats soient arrivés jusqu’à un essai clinique de phase 2/3 en cours au Libéria. Le traitement de soutien reste l’intervention médicale primaire pour les individus qui ont été infectés par des fîlovirus et/ou qui souffrent d’EVD. (005) Les individus restent infectieux pour la maladie à virus Ebola (EVD) tant que leur sang et leurs sécrétions contiennent le virus. Le grand pouvoir infectieux du sang et des sécrétions exposent le personnel de santé à un risque particulièrement élevé pendant les flambées épidémiques, et le contact direct avec les corps de victimes décédées peut également jouer un rôle dans la transmission du virus. La période d’incubation de l’EVD est de 2 à 21 jours (7 jours en moyenne selon la souche), suivie d’une maladie virale aiguë sévère, souvent caractérisée par l’apparition rapide de symptômes non spécifiques, tels que fièvre, fatigue extrême, pharyngite, troubles gastro-intestinaux, douleur abdominale, anorexie, céphalée, myalgie et/ou arthralgie. (006) Une réponse anticorps primaire (IgM) peut être détectée dans le sang de personnes infectées, 2 à 9 jours après l’infection, tandis que des anticorps IgG apparaissent approximativement 17 à 25 jours après l’infection. Cette réponse IgG coïncide avec la phase de rétablissement. Chez les survivants d’EVD, on détecte à la fois une immunité humorale et une immunité cellulaire, mais leur contribution relative à la protection est inconnue (Sullivan et al., Ebola virus pathogenesis: implications for vaccines and thérapies. J. Virol. 2003 ;77:9733-7). (007) En tant que la cause de maladie humaine sévère, les filoviras continuent à inquiéter à la fois comme source d’infections naturelles, et également comme agents possibles de bioterrorisme. Le réservoir des filoviras dans la nature n’a pas encore étant identifié de façon définitive. Quatre sous-types d’Ebolaviras ont été décrits comme causant l’EVD, à savoir ceux dans des épisodes au Zaïre, au Soudan, dans la région de Bundibugyo et en Côte d’ivoire (Sanchez, A. et al. 1996 PNAS USA 93:3602-3607). Ces sous-types d’Ebolavirus ont des organisations génétiques similaires, par exemple des viras à ARN à brin négatif contenant sept gènes en disposition linéaire. Les produits de gènes structuraux incluent, par exemple, la glycoprotéine d’enveloppe qui se trouve sous deux formes possibles, une glycoprotéine soluble sécrétée (ssGP) et une glycoprotéine transmembranaire (GP) engendrée par une modification d’ARN qui permet l’entrée virale (Sanchez, A. et al. 1996 PNAS USA 93:3602-3607). (008) Il a été suggéré que l’immunisation puisse être utile pour la protection contre l’infection à Ebola et/ou une maladie apparentée, car il semble qu’il existe moins de polymorphisme de nucléotides parmi les sous-types d’Ebola que parmi les autres viras à ARN (Sanchez, A. et al. 1996 PNAS USA 93:3602-3607). Jusqu’à récemment, les développements de vaccins préventifs contre les filoviras ont eu des résultats variables, en partie parce que les conditions requises pour les réponses immunitaires protectrices contre les infections à filoviras ne sont pas suffisamment élucidées. (009) À l’heure actuelle, il existe plusieurs plateformes vaccinales vectorielles d’antigènes, qui ont fait preuve de divers degrés de protection chez des primates non humains (PNH) exposés à de fortes doses infectieuses de filoviras. Les vaccins candidats en développement sont basés sur diverses techniques de plateformes, incluant des vecteurs compétents pour la réplication (par exemple, le viras de la stomatite vésiculaire, le viras de la rage, le viras parainfluenza) ; des virus incompétents pour la réplication (adénoviras, viras de la vaccine Ankara modifié) ; des sous-unités de protéines y compris des particules de type viral, exprimées dans des cellules bactériennes, des cellules d’insectes, des cellules mammaliennes, des cellules végétales ; des vaccins à ADN ; et/ou des filoviras atténués vivants ou tués (Friedrich et al., 2012). La glycoprotéine GP d’EBOV est un composant important d’un vaccin qui protège contre des expositions à la même espèce d’EBOV. Le développement de contre-mesures médicales pour ces viras est une grande priorité. (010) Des vecteurs adénoviraux déficients pour la réplication (rAd) sont de puissants inducteurs de réponses immunitaires cellulaires et sont par conséquent devenus d’utiles vecteurs pour des vaccins à base de gènes, notamment pour des lentivirus et des filovirus, ainsi que pour d’autres agents pathogènes non viraux (Shiver et al., (2002) Nature 415(6869): 331-5 ; (Hill et al., Hum Vaccin 6(1): 78-83.; Sullivan et al., (2000) Nature 408(6812): 605-9 ; Sullivan et al., (2003) Nature 424(6949): 681-4 ; Sullivan et al., (2006) PLoS Med 3(6): el77 ; Radosevic et al., (2007) ; Santra et al., (2009) Vaccine 27(42): 5837-45). Les vaccins à base d’adénovirus offrent plusieurs avantages en tant que vaccins humains, car ils peuvent être produits à des titres élevés dans des conditions de BPF et se sont avérés être sans danger et immunogènes chez les êtres humains (Asmuth et al, J Infect Dis 201(1): 132-41 ; Kibuuka et al., J Infect Dis 201(4): 600-7 ; Koup et al., PLoS One 5(2): e9015 ; Catanzaro et al., (2006) J Infect Dis 194(12): 1638-49 ; Harro et al., (2009) Clin Vaccine Immunol 16(9): 1285-92). Bien que la plupart des travaux initiaux sur des vaccins aient été effectués en utilisant rAd5, en raison de son net pouvoir de susciter des réponses anticorps à large spectre et des réponses de lymphocytes T CD8+, l’immunité préexistante contre rAd5 chez les êtres humains peut limiter l’efficacité (Catanzaro, (2006) ; Cheng et al., (2007) PLoS Pathog 3(2): e25. ; McCoy et al., (2007) J Virol 81(12):6594-604. ; Buchbinder et al., (2008) Lancet 372(9653): 1881-93). Cette propriété pourrait restreindre l’utilité de rAd5 dans les applications cliniques de nombreux vaccins qui sont actuellement en développement, y compris ceux contre Ebolavirus (EBOV). (011) Des vecteurs adénoviraux défectifs pour la réplication, rAd26 et rAd35, dérivés du sérotype 26 et du sérotype 35 d’adénovirus, respectivement, ont la capacité d’échapper à une immunité préexistante contre Ad5. rAd26 peut être cultivé jusqu’à des titres élevés dans des lignées cellulaires complémentant El d’Ad5, appropriées à la fabrication de ces vecteurs à une grande échelle et en qualité clinique (Abbink et al., 2007), et il a été montré que ce vecteur induisait des réponses immunitaires humorales et cellulaires dans des stratégies de vaccination amorce - rappel (Abbink et al., 2007 ; Liu et al., (2009) Nature 457(7225): 87-91). Les vecteurs rAd35 se développent jusqu’à des titres élevés sur des lignées cellulaires appropriées à la production de vaccins de qualité clinique (Havenga et al., (2006) J. Gen. Virol. 87(Pt 8): 2135-43), et ont été formulés pour injection ainsi que sous forme de poudre inhalable stable (Jin et al., Vaccine 28(27): 4369- 75). Ces vecteurs présentent une transduction efficace de cellules dendritiques humaines (de Gruijl et al., (2006) J. Immunol. 177(4): 2208- 15 ; Lore et al., (2007) J. Immunol. 179(3): 1721-9), et ont donc la capacité d’induire un apport et une présentation d’antigènes à un taux élevé. (012) La prévalence de l’immunité contre les adénovirus humains a également incité à prendre en considération des adénovirus simiens en tant que vecteurs. Les adénovirus simiens ne sont pas connus comme étant la cause de pathologie ou de maladie chez les êtres humains, et la prévalence d’anticorps contre des adénovirus originaires de chimpanzés est inférieure à 5 % chez des êtres humains résidant aux États-Unis (Tatsis N. et al. 2007 Mol. th.: the Journal ofthe American Society of Gene Therapy 15: 608-17). Ils présentent des structures en hexons analogues à celles des adénovirus humains (Bruna-Romero O. et al. 2001 Nat. Academy of Sciences ofthe USA 98: 11491-6). (013) Le sérotype 3 d’adénovims de chimpanzé recombinant (ChAd3 ou cAd3) est un adénovirus du sous-groupe C qui a des propriétés semblables à celles du sérotype 5 d’adénovirus humain (Ad5). L’adénovirus ChAd63 de chimpanzé est un autre vecteur simien qui est utilisé pour éviter les problèmes liés à une immunité préexistante contre AdHu5 chez des êtres humains. À la fois l’adénovirus ChAd3 et l’adénovirus cAd3 se sont avérés êtres sans danger et immunogènes dans des études sur des sujets humains, visant à évaluer des vaccins candidats contre le vims de l’hépatite C (HCV) (Barnes et al. Novel adenovims-based vaccines induce broad and sustained T cell responses to HCV in man. Science translational medicine 2012 ;4:115ral) et le paludisme (O’Hara et al. Clinical assessment of a recombinant simian adenovirus ChAd63: a potent new vaccine vector. The Journal ofinfectious diseases 2012 ;205:772-81), respectivement. (014) Il existe un besoin non satisfait en vaccins améliorés, suscitant des réponses immunitaires contre des filovims, en particulier une immunité protectrice contre les Ebolavirus les plus létaux, tels que l’EBOV.
BREF RÉSUMÉ DE L’INVENTION (015) On a découvert dans l’invention que diverses combinaisons amorce - rappel de vecteurs incompétents pour la réplication engendraient une réponse immunitaire efficace contre une infection et/ou une maladie à filovirus. Plus précisément, une combinaison pour immunisation amorce - rappel, d’une première composition comprenant au moins un vecteur adénoviral humain et d’une seconde composition comprenant un vecteur adénoviral simien engendre une protection immunitaire améliorée. (016) En conséquence, un aspect général de l’invention concerne une combinaison de vaccin comprenant : (i) une première composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’au moins un vecteur adénoviral humain comprenant un premier acide nucléique codant une première protéine antigénique d’un filovirus, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; et (ii) une seconde composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur adénoviral simien (par exemple de chimpanzé) comprenant un second acide nucléique codant une seconde protéine antigénique du filovirus, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; l’une des compositions étant une composition d’amorçage et l’autre composition étant une composition de rappel. (017) Dans une combinaison de vaccin selon un mode de réalisation, la première protéine antigénique et la seconde protéine antigénique peuvent être la même protéine ou des protéines différentes. (018) Un autre aspect général de l’invention concerne un procédé d’induction d’une réponse immunitaire contre un filovirus chez un sujet, comprenant : a. l’administration au sujet d’une première composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur adénoviral humain comprenant un premier acide nucléique codant une première protéine antigénique du filovirus ; et b. l’administration au sujet d’une seconde composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur adénoviral simien (par exemple de chimpanzé) comprenant un second acide nucléique codant une seconde protéine antigénique du filovirus. les étapes (a) et (b) étant effectuées dans cet ordre ou dans l’ordre inverse. (019) Dans un procédé selon un mode de réalisation de l’invention, la première protéine antigénique et la seconde protéine antigénique peuvent être la même protéine ou des protéines différentes. (020) Dans certains modes de réalisation, la première composition est utilisée pour l’amorçage de ladite réponse immunitaire et la seconde composition est utilisée pour le rappel de ladite réponse immunitaire. Dans d’autres modes de réalisation, la seconde composition est utilisée pour l’amorçage de ladite réponse immunitaire et la première composition est utilisée pour le rappel de ladite réponse immunitaire. (021) Dans un mode de réalisation, la composition de rappel est administrée 1-15 semaines après la composition d’amorçage. Dans un mode de réalisation préféré, la vaccination d’amorçage est effectuée à la semaine 0, suivie d’une vaccination de rappel à la semaine 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 15, 12, 13, 14, 15. Dans un autre mode de réalisation préféré, la vaccination d’amorçage est effectuée à la semaine 0, suivie d’une vaccination de rappel au 6e, 9e, 12e ou 24e mois. De façon plus particulièrement préférée, la vaccination d’amorçage est effectuée à la semaine 0, suivie d’une vaccination de rappel à la semaine 2, 4, 6, 8, 10 ou 12. (022) Les sous-types de filovirus selon l’invention peuvent être tout filovims. Dans des modes de réalisation préférés de l’invention, le filovims est un virus Ebola. Dans un mode de réalisation préféré, le vims Ebola appartient au sous-type Zaïre. (023) La protéine antigénique codée par les vecteurs adénoviraux compris dans les première et seconde compositions peut être toute protéine provenant d’un filovirus quelconque (par exemple Marburg ou Ebola). Dans un mode de réalisation, la protéine antigénique est une glycoprotéine (GP) ou une nucléoprotéine (NP) d’un filovims. Dans un mode de réalisation préféré, la première protéine antigénique comprend une GP comprenant la séquence d’acides aminés de SEQIDn0l ou une protéine essentiellement semblable à GP, telle qu’une GP comprenant la séquence d’acides aminés de SEQ K) n° 3. Dans un autre mode de réalisation, la seconde protéine antigénique comprend une GP comprenant la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1 ou une protéine essentiellement semblable à la GP, telle qu’une GP comprenant la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 3. Dans encore un autre mode de réalisation, chacune des première et seconde protéines antigéniques comprend une GP comprenant la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1 ou une protéine essentiellement semblable à la GP, telle qu’une GP comprenant la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 3. (024) Il est envisagé que les procédés, vaccins et compositions décrits ici puissent être réalisés en un nécessaire. Par exemple, dans un mode de réalisation, l’invention peut inclure un nécessaire comprenant : (i) une première composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’au moins un vecteur adénoviral humain comprenant un premier acide nucléique codant une première protéine antigénique d’un filovirus, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; et (ii) une seconde composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur adénoviral simien (par exemple de chimpanzé) comprenant un second acide nucléique codant une seconde protéine antigénique du filovirus, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; l’une des compositions étant une composition d’amorçage et l’autre composition étant une composition de rappel. (025) Dans ledit nécessaire, la première protéine antigénique et la seconde protéine antigénique peuvent être la même protéine ou des protéines différentes. (026) Dans un mode de réalisation préféré, le vecteur adénoviral humain compris dans la première composition de la combinaison de vaccin, le procédé ou le nécessaire est un vecteur rAd26 ou rAd35, de façon plus particulièrement préférée un vecteur rAd26. Dans un autre mode de réalisation préféré, le vecteur adénoviral simien dans la seconde composition de la combinaison de vaccin, le procédé ou le nécessaire est un vecteur adénoviral de chimpanzé, tel qu’un vecteur ChAd3. (027) En conséquence, dans un mode de réalisation, l’invention concerne un vaccin en combinaison, un nécessaire ou un procédé, dans lequel une première composition comprend une quantité immunologiquement efficace d’au moins un vecteur adénoviral humain, et dans lequel une seconde composition comprend une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur adénoviral simien, tel qu’un vecteur adénoviral de chimpanzé. La première composition comprend une quantité immunologiquement efficace d’au moins un vecteur adénoviral humain comprenant un acide nucléique codant une protéine antigénique d’un filovims, et la seconde composition comprend une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur adénoviral simien comprenant un acide nucléique codant une protéine antigénique d’un filovirus, qui peut être la même que ou différente de la protéine antigénique codée par ledit au moins un vecteur adénoviral humain dans la première composition.
BRÈVE DESCRIPTION DES DESSINS (028) La lecture du résumé qui précède, ainsi que de la description détaillée ci-après de l’invention sera mieux comprise en conjonction avec les dessins ci-annexés. Il doit être entendu que l’invention n’est pas limitée aux modes de réalisation précis présentés sur les dessins. (029) Sur ces dessins : (030) la FIG. 1 est un graphique montrant la réponse immunitaire humorale spécifique de GP-EPOV, évaluée par un dosage par immunoadsorption à enzyme liée (ELISA), exprimée en unités ELISA par ml, sur des échantillons d’essai prélevés sur des sujets de groupes G1 et G3, aux semaines 1 à 21 de l’essai : et (031) la FIG. 2 est un graphique représentant la réponse immunitaire humorale spécifique de GP-EPOV, évaluée par un dosage par immunoadsorption à enzyme liée (ELISA), exprimée en unités ELISA par ml, sur des échantillons d’essai prélevés sur des sujets de groupes G2 et G4, aux semaines 1 à 21 de l’essai.
DESCRIPTION DÉTAILLÉE DE L’INVENTION (032) Diverses publications, divers articles et divers brevets sont cité(e)s et décrit(e)s dans l’arrière-plan et toute la description ; chacune de ces références est incorporée en son intégralité ici par référence. L’examen de documents, actes, matériels, dispositifs, articles ou similaires qui a été inclus dans la description est dans le but de fournir le contexte pour l’invention. Π doit être entendu qu’un tel examen n’est pas une admission que tout ou partie de ces matières fasse partie de l’état de la technique eu égard à toutes inventions décrites ou revendiquées. (033) À moins d’indication contraire, tous les termes techniques et scientifiques utilisés ici ont la même signification que celle couramment entendue par l’homme de métier ordinaire dans la technique à laquelle appartient la présente invention. Sinon, certains termes utilisés ici ont les significations précisées dans la description. Tous les brevets, toutes les demandes de brevets publiées et publications cité(e)s ici sont incorporé(e)s par référence comme si entièrement indiqué(e)s ici. Π doit être entendu que telles qu’utilisées ici et dans les revendications ci-annexées, les formes au singulier « un », « une » et « le » ou « la » incluent la référence au pluriel, à moins d’indication expressément contraire par le contexte. (034) À moins d’indication contraire, le terme « au moins » précédant une série d’éléments doit être entendu comme se rapportant à chaque élément dans la série. L’homme de métier reconnaîtra, ou sera à même de déterminer, sans avoir à utiliser plus qu’une expérimentation courante, de nombreux équivalents des modes de réalisation particuliers de l’invention décrite ici. De tels équivalents doivent être entendus comme étant englobés par l’invention. (035) Dans toute la présente description et les revendications ci-annexées, à moins d’indication contraire par le contexte, le terme « comprennent », et ses variantes telles que « comprend » et « comprenant » doit être entendu comme impliquant l’inclusion d’un entier ou d’une étape énoncé(e) ou d’un groupe d’entiers ou d’étapes, mais non l’exclusion de tout autre entier ou de toute autre étape ou tout groupe d’entiers ou d’étapes. Lorsqu’il est utilisé ici, le terme « comprenant » peut être remplacé par le terme « contenant » ou « incluant » ou parfois lorsqu’il est utilisé ici, par le terme « ayant ». Lorsqu’il est utilisé ici, le terme « consistant en » exclut tout élément, toute étape ou tout composant non spécifié(e) dans l’élément revendiqué. Lorsqu’il est utilisé ici, le terme « consistant essentiellement en » n’exclut par des matériels ou étapes qui n’affectent pas matériellement les caractéristiques de base et nouvelles de la revendication. Dans chaque cas ici, l’un quelconque des termes « comprenant », consistant essentiellement en » et consistant en » peut être remplacé par l’un ou l’autre des deux autres termes. (036) Tel qu’utilisé ici, le terme conjonctif « et/ou » entre plusieurs éléments énoncés doit être entendu comme englobant à la fois les options individuelles et l’option combinée. Par exemple, lorsque deux éléments sont joints par « et/ou », une première option se rapporte à l’applicabilité du premier élément sans le second. Une deuxième option se rapporte à l’applicabilité du second élément sans le premier. Une troisième option se rapporte à l’application des premier et second éléments ensemble. L’une quelconque de ces options doit être entendue comme rentrant dans cette signification, et par conséquent comme satisfaisant à l’exigence du terme « et/ou » tel qu’utilisé ici. L’applicabilité concomitante de plus d’une des options doit également être entendue comme rentrant dans la signification, et par conséquent comme satisfaisant à l’exigence du terme « et/ou ». (037) Tel qu’utilisé ici, un « sujet » signifie tour animal, de préférence un mammifère, de façon tout particulièrement préférée un être humain, qui sera ou a été vacciné par un procédé selon un mode de réalisation de l’invention. Tel qu’utilisé ici, le terme « mammifère » englobe tout mammifère. Des exemples de mammifères incluent, mais sans se limiter à ceux-ci, les bovins, équins, ovins, porcins, chats, chiens, souris, rats, lapins, cobayes, singes, êtres humains, etc., de façon plus particulièrement préférée un être humain. (038) Telle qu’utilisée ici, l’expression « immunité protectrice » ou « réponse immunitaire protectrice » signifie que le sujet vacciné est capable de maîtriser une infection par l’agent pathogène contre lequel a été effectuée la vaccination. Habituellement, le sujet ayant développé une « réponse immunitaire protectrice » présente seulement des symptômes cliniques légers à modérés ou n’en présente pas du tout. Habituellement, un sujet présentant une « réponse immunitaire protectrice » ou « immunité protectrice » contre un agent déterminé ne mourra pas par suite de de l’infection par ledit agent. (039) Une « protéine capsidique » se rapporte à une protéine présente sur la capside d’un adénovirus (par exemple Ad26 ou Ad35) qui est impliquée dans la détermination du sérotype et/ou du tropisme d’un adénovirus particulier. Les protéines capsidiques incluent caractéristiquement les protéines fibreuses, à pentons et/ou à hexons. Telle qu’on l’utilise ici, une «protéine capsidique d’Ad26 » ou une «protéine capsidique d’Ad35 » peut être, par exemple, une protéine capsidique chimérique qui inclut au moins une partie d’une protéine capsidique d’Ad26 ou d’Ad35. Dans certains modes de réalisation, la protéine capsidique est une protéine capsidique entière d’Ad26 ou d’Ad35. Dans certains modes de réalisation, l’hexon, le penton ou la fibre sont d’Ad26 ou d’Ad35. (040) Le terme «adjuvant» est défini comme une ou plusieurs substances qui provoquent une stimulation du système immunitaire. Dans ce contexte, on utilise un adjuvant pour accroître la réponse immunitaire aux vecteurs adénoviraux de l’invention. (041) Le terme « identique » ou « identité » en pour cent, dans le contexte de deux ou plus de deux séquences d’acide nucléique ou de polypeptide (par exemple de glycoprotéines de filovirus et de polynucléotides qui les codent), se rapporte à deux ou plus de deux séquences ou sous-séquences qui sont identiques ou présentent un pourcentage spécifié de résidus acide aminé ou de nucléotides qui sont identiques, lorsqu’elles sont comparées et alignées pour une correspondance maximale, comme on le mesure en utilisant l’un des algorithmes de comparaison de séquences ci-après ou par examen visuel. (042) Pour la comparaison de séquences, normalement une séquence joue le rôle de séquence de référence, à laquelle on compare les séquences à tester. Lorsqu’on utilise un algorithme de comparaison de séquences, on entre dans un ordinateur les séquences de référence et à tester, on définit des coordonnées de séquences, si nécessaire, et on définit les paramètres du programme d’algorithme de séquences. L’algorithme de comparaison de séquences calcule ensuite l’identité de séquences en pourcentage pour la/les séquence(s) test, par rapport à la séquence de référence, sur la base des paramètres de programme définis. (043) Un alignement optimal de séquences pour la comparaison peut être effectué, par exemple, par l’algorithme d’homologie locale de Smith et Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482 (1981), par l’algorithme d’alignement d’homologie de Needleman et Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443 (1970), par la méthode de recherche de similarité de Pearson et Lipman, Proc. Nat’l. Acad. Sei. USA 85:2444 (1988), par exécution informatisée de ces algorithmes (GAP, BESFIT, FASTA et TFASTA dans l’ensemble de programmes Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI), ou par examen visuel (voir d’une façon générale Current Protocols in Molecular Biology, F.M Ausubel et al., rédacteurs en chef, Current Protocols, un partenariat entre Greene Publishing Associates, Inc. et John Wiley &amp; Sons, Inc., (Supplément 1995) (Ausubel)). (044) Des exemples d’algorithmes qui sont appropriés pour la détermination du pourcentage d’identité de séquences ou de similarité de séquences sont les algorithmes BLAST et BLAST 2.0, qui sont décrits dans Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215: 403-410 et Altschuel et al. (1977) Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402, respectivement. Le programme pour l’exécution d’analyses BLAST est accessible au public via le National Center for Biotechnology Information. Cet algorithme comprend d’abord l’identification de paires de séquences à score élevé (high scoring pairs, HSP) par identification de mots courts de longueur W dans la séquence en question, qui soit correspondent, soit satisfont à un certain score seuil T de valeur positive lorsqu’ils sont alignés avec un mot de la même longueur dans une séquence de base de données. T est considéré comme le seuil de score de mots voisins (Altschul et coll., réf. cit.). Ces ensembles réussis de mots voisins initiaux agissent comme des semences pour initialiser des recherches visant à trouver de plus longues HSP les contenant. Les ensembles réussis de mots sont ensuite étendus dans les deux directions le long de chaque séquence, aussi loin qu’il est possible d’accroître le score d’alignement cumulative. (045) On calcule les scores cumulatifs en utilisant, pour les séquences nucléotidiques, les paramètres M (score de récompense pour une paire de résidus correspondants ; toujours > 0) et N (score de pénalité pour les résidus qui ne correspondent pas ; toujours < 0). Pour les séquences d’acides aminés, on utilise une matrice de score pour calculer le score cumulatif. L’extension des ensembles réussis de mots dans chaque direction est interrompue lorsque : le score d’alignement cumulatif s’abaisse de la quantité X à partir de sa valeur maximale atteinte : le score cumulatif atteint zéro ou moins, en raison de l’accumulation d’un ou plusieurs alignements de résidus à score négatif ; ou la fin de l’une ou l’autre séquence est atteinte. Les paramètres de l’algorithme BLAST W, T et X déterminent la sensibilité et la vitesse de l’alignement. Le programme BLASTN (pour séquences de nucléotides) utilise comme valeurs par défaut une longueur de mot (W) de 11, une prévision (E) de 10, M = 5, N = 4, et une comparaison de deux brins. Pour les séquences d’acides aminés, le programme BLASTP utilise comme valeurs par défaut une longueur de mot (W) de 3, une prévision (E), de 10 et la matrice de score BLOSUM62 (voir Henikoff et Henikoff, Proc. Nat’IAcad. Sei. USA 89 :10915 (1989)]. (046) En plus du calcul de l’identité de séquences en pourcentage, l’algorithme BLAST exécute également une analyse statistique de la similarité entre deux séquences (voir par exemple Karlin et Altschul, Proc. Nat’l. Acad. Sei. USA 90:5873-5787 (1993)). Une mesure de la similarité fournie par l’algorithme BLAST est la plus faible probabilité de la somme (P(N)), qui donne une indication de la probabilité avec laquelle une correspondance entre deux séquences de nucléotides ou d’acides aminés se produise par hasard. Par exemple, un acide nucléique est considéré semblable à une séquence de référence si la plus faible probabilité de la somme dans une comparaison de l’acide nucléique test avec l’acide nucléique de référence est inférieure à environ 0,1, encore mieux inférieure à environ 0,01 et de façon particulièrement préférée, inférieure à environ 0,001. (047) Une autre indication que deux séquences d’acide nucléique ou de polypeptides sont essentiellement identiques est que le polypeptide codé par le premier acide nucléique réagisse immunologiquement en même temps avec le polypeptide codé par le second acide nucléique, comme décrit ci-dessous. Ainsi, un polypeptide est normalement essentiellement identique à un second polypeptide, par exemple, lorsque les deux peptides ne diffèrent que par des remplacements conservateurs. Une autre indication que deux séquences d’acide nucléique sont essentiellement identiques est que les deux molécules s’hybrident l’une avec l’autre dans des conditions stringentes, comme décrit ci-dessous. (048) L’expression « essentiellement semblable » dans le contexte des protéines antigéniques de filovirus de l’invention indique qu’un polypeptide comprend une séquence ayant un pourcentage d’identité de séquence d’au moins 90 %, de préférence d’au moins 95 %, avec la séquence de référence. On détermine le pourcentage d’identité de séquence en comparant deux séquences alignées de façon optimale dans une fenêtre de comparaison, la partie de la séquence de polynucléotide dans la fenêtre de comparaison pouvant comprendre des additions ou des délétions (c’est-à-dire des trous) par comparaison avec la séquence de référence (qui ne comprend ni additions ni délétions) pour l’alignement optimal des deux séquences. On calcule le pourcentage en déterminant le nombre de positions en lesquelles la base d’acide nucléique ou le résidu acide aminé apparaît dans les deux séquences pour obtenir le nombre de positions appariées, puis en divisant le nombre de positions appariées par le nombre total de positions dans la fenêtre de comparaison et en multipliant le résultat par 100 pour obtenir le pourcentage d’identité de séquences. (049) Π est découvert dans l’invention que diverses combinaisons d’amorce-rappel de vecteurs incompétents pour la réplication engendrent une réponse immunitaire efficace contre une infection et/ou une maladie à filovirus. Plus précisément, une combinaison d’amorce-rappel d’une première composition comprenant au moins un vecteur adénoviral humain et d’une seconde composition comprenant un vecteur adénoviral simien, tel qu’un vecteur adénoviral de chimpanzé, engendre une réponse immunitaire améliorée.
Protéines antigéniques de filovirus (050) Les vims Ebola sont des filovirus associés à des flambées épidémiques de fièvre hémorragique hautement létale chez des êtres humains et des primates en Amérique du Nord, Europe et Afrique (Peters, C J. et al. dans : Fields Virology, Fields, B.N. et al rédacteurs en chef. 1161-1176, Philadelphie, Lippincott-Raven, 1996 ; Peters, C.J. et al. 1994 Semin Virol 5:147-154). Bien que plusieurs sous-types aient été définis, l’organisation génétique de ces virus est similaire, chacun contenant sept gènes en disposition linéaire. Parmi les protéines virales, la glycoprotéine d’enveloppe se trouve sous deux formes différentes, une protéine sécrétée de 50-70 kilodaltons (kDa) (sGP) et une glycoprotéine transmembranaire de 130 kDa (GP), engendrée par modification d’ARN qui permet l’entrée virale (Peters, CJ. et al. dans: Virology, Fields, B.N. et al. rédacteurs en chef 1161-1176, Philadelphie, Lippincott-Raven, 1996 ; Sanchez, A. et al. 1996 PNAS USA 93:3602-3607). D’autres produits de gènes structuraux incluent la nucléoprotéine (NP), les protéines de matrice VP24 et VP40, les protéines non structurales présumées VP30 et VP35, et la polymérase virale (récapitulées dans l’article de synthèse par Peters, C J. et al. dans : Fields Virology, Fields, B.N. et al. rédacteurs en chef, 1161-1176, Philadelphie, Lippincott-Raven, 1996). (051) Les molécules d’acide nucléique comprises dans les vecteurs adénoviraux peuvent coder des produits de gènes structuraux de n’importe quelle espèce de filovirus (Marburg et/ou Ebola), telles que les sous-types Zaïre (espèce type, désignée également ici par EBOV), Soudan, Reston, Bundibugyo et Côte d’ivoire, incluant mais sans limitation celles décrites dans WO 2003/028632, dont le contenu est incorporé ici en son intégralité par référence. Les molécules d’acide nucléique comprises dans les vecteurs adénoviraux peuvent coder des produits de gènes structuraux d’espèces de filovirus impliquées dans une flambée épidémique particulière, telles que les espèces rapportées être liées à la flambée épidémique de 2014/2015 ou toute flambée épidémique future. (052) Les vecteurs adénoviraux de l’invention peuvent être utilisés pour exprimer des protéines antigéniques comprenant un déterminant antigénique d’une grande diversité d’antigènes de filovirus. Dans un mode de réalisation type et préféré, les vecteurs de l’invention comprennent un acide nucléique codant la forme transmembranaire de la glycoprotéine virale (GP). Dans d’autres modes de réalisation, les vecteurs de l’invention peuvent coder la forme sécrétée de la glycoprotéine virale (ssGP), ou la nucléoprotéine virale (NP). (053) Il sera clair à l’homme de métier que les molécules d’acide nucléique codant la protéine antigénique de filovirus peuvent être modifiées, par exemple, les molécules d’acide nucléique indiquées ici peuvent être mutées, tant que la protéine exprimée modifiée suscitera une réponse immunitaire contre un agent pathogène ou une maladie. Ainsi, tel qu’utilisée ici, l’expression « protéine antigénique » ou « protéine de filovirus » se rapporte à une protéine qui comprend au moins un déterminant antigénique d’une protéine de filovirus, telle que celles décrites plus haut. L’expression englobe des glycoprotéines de filovirus (à savoir les produits géniques du gène 4 ou du gène de GP d’un filovirus) ou une nucléoprotéine de filovirus ainsi que des protéines recombinantes qui comprennent un ou plusieurs déterminants de nucléoprotéines ou de glycoprotéines de filovirus. L’expression protéines antigéniques conglobe également des protéines antigéniques qui sont essentiellement semblables aux protéines de filovirus existant dans la nature. (054) Dans certains modes de réalisation, la protéine peut être mutée, de manière à être moins toxique pour les cellules (voir par exemple WO/2006/037038), dont le contenu est incorporé en son intégralité ici par référence, ou peut être exprimée à un degré accru ou diminué dans les cellules. Dans un mode de réalisation préféré, des molécules d’acide nucléique codant GP, ssGP et NP de la souche de vims Ebola Zaïre sont comprises dans les première et seconde compositions de la combinaison de vaccin. De préférence, le vecteur dans la première composition de la combinaison de vaccin code une GP ayant la séquence d’acides aminés de SEQIDn0 1, ou une protéine essentiellement semblable à SEQ ID n° 1, telle qu’une protéine comprenant la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 3, de préférence la protéine est capable d’induire une réponse immunitaire contre une GP ayant la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1. Dans un autre mode de réalisation préféré, le vecteur dans la seconde composition de la combinaison de vaccin code une GP ayant la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1, ou une séquence d’acides aminés essentiellement semblable à SEQIDn°l, telle qu’une protéine comprenant la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 3, de préférence la protéine est capable d’induire une réponse immunitaire contre une GP ayant la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1. Dans un mode de réalisation plus particulièrement préféré, le vecteur dans la première composition de la combinaison de vaccin code une GP ayant la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1 ou SEQ ID n° 3, et le vecteur dans la seconde composition de la combinaison de vaccin code une GP ayant la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1 ou SEQ ID n° 3.
Vecteurs adénoviraux humains (055) Un vecteur adénoviral selon l’invention est dérivé d’un adénovirus qui appartient à la famille des Adenoviridae et de préférence est un adénovirus qui appartient au genre Mastadenovirus. Dans un mode de réalisation préféré, le vecteur adénoviral de la première composition est dérivé d’un adénovirus humain (HAdV ou
AdHu ; dans la présente description on entend comme adénovims humain s’il se rapporte à Ad, sans indication d’espèce, par exemple, la dénomination abrégée « Ad5 » a la même signification que HAdV5, qui est le sérotype d’adénovims humain 5). (056) La plupart des études poussées ont été effectuées en utilisant des adénovirus humains. Dans certains modes de réalisation, l’adénovims recombinant est basé sur un sérotype d’adénovims humain 5, 11, 26, 34, 35, 48, 49 ou 50. Selon un mode de réalisation particulièrement préféré de l’invention, un vecteur adénoviral est dérivé d’un adénovims humain de l’un des sérotypes 26 et 35. Un avantage de ces sérotypes est une faible séroprévalence et/ou l’existence de faibles titres d’anticorps neutralisants préexistants dans la population humaine. La préparation de vecteurs rAd26 est décrite, par exemple, dans WO 2007/104792 et dans Abbink et al., (2007) Virol 81(9): 4654-63, dont les contenus sont incorporés en intégralité ici par référence. Des séquences génomiques prises somme exemples d’Ad26 se trouvent dans GenBank, n° d’enregistrement EF 153474 et dans SEQ ID n° 1 de WO 2007/104792, qui sont incorporés en leur intégralité ici par référence. La préparation de vecteurs rAd35 est décrite, par exemple, dans le brevet US n° 7 270 811, dans WO 00/70071 et dans Vogels et al., (2003) J Virol 77(15): 8263-71, qui sont tous incorporés en leurs intégralité ici par référence. Des séquences génomiques prises somme exemples d’Ad35 se trouvent dans GenBank, n° d’enregistrement AC_000019 et sur la Fig. 6 de WO 00/70071, qui sont incorporés en leur intégralité ici par référence. (057) Dans un mode de réalisation préféré, les vecteurs adénoviraux humains comprennent des protéines capsidiques provenant de deux sérotypes rares : Ad26 et Ad35. Dans un mode de réalisation, le vecteur est un virus rAd26 ou rAd35. (058) Les vecteurs qui peuvent être utilisés dans l’invention comprennent donc une protéine capsidique d’Ad26 ou Ad35 (par exemple une protéine fibreuse, à pentons ou hexons). L’homme de métier reconnaîtra que dans les vecteurs de l’invention il n’est pas nécessaire d’utiliser une protéine capsidique d’AD26 ou Ad35 complète. Ainsi, des protéines capsidiques chimériques qui incluent au moins une partie d’une protéine capsidique d’Ad26 ou d’Ad35 peuvent être utilisées dans les vecteurs de l’invention. Les vecteurs de l’invention peuvent également comprendre des protéines capsidiques dans lesquelles les protéines fibreuses, à pentons et hexons sont issues chacune d’un sérotype différent, dans la mesure ou au moins une protéine capsidique est issue d’Ad26 ou d’Ad35. Dans des modes de réalisation préférés, les protéines fibreuses, à pentons et hexons sont issues chacune d’Ad26 ou chacune d’Ad35. (059) Il sera clair à l’homme de métier ordinaire que des éléments issus de multiples sérotypes peuvent être combinés en un seul vecteur adénoviral recombinant, par exemple un adénovirus humain ou de chimpanzé. Il est donc possible de produite un vecteur adénoviral chimérique combinant des propriétés souhaitables de différents sérotypes. Ainsi, dans certains modes de réalisation, un vecteur adénoviral humain chimérique de l’invention pourrait combiner l’absence d’immunité préexistante des sérotypes Ad26 et Ad35 avec des caractéristiques telles que stabilité vis-à-vis de la température, assemblage, ancrage, rendement de production, infection redirigée ou améliorée, stabilité de l’ADN dans la cellule cible et similaires. (060) Dans certains modes de réalisation, le vecteur adénoviral humain recombinant utilisable dans l’invention est dérivé principalement ou entièrement d’Ad35 ou d’Ad26 (c’est-à-dire que le vecteur est rAd35 ou rAd26). Dans certains modes de réalisation, l’adénovirus humain est défectif pour la réplication, par exemple par ce qu’il contient une délétion dans la région El du génome. Pour les adénovirus humains pris comme exemples de l’invention, qui sont dérivés d’Ad26 ou d’Ad35, il est caractéristique de remplacer la séquence codant E4-orf6 de l’adénovirus par la séquence E4-orf6 d’un adénovirus de sous-groupe C humain tel qu’Ad5. Cela permet la propagation de tels adénovirus dans des lignées cellulaires complémentant bien connues qui expriment les gènes El d’Ad5, comme par exemple les cellules 293, les cellules PER.C6 et similaires (voir par exemple Havenga et al, 2006, J Gen Virol 87: 2135-43 ; WO 03/104467, qui sont incorporés en leur intégralité ici par référence). Dans certains modes de réalisation, l’adénovirus est un adénovirus humain de sérotype 35, comportant une délétion dans la région El dans laquelle a été cloné l’acide nucléique codant l’antigène, et comportant une région E4 orf6 d’Ad5. Dans certains modes de réalisation, l’adénovirus est un adénovirus humain de sérotype 26, comportant une délétion dans la région El dans laquelle a été cloné l’acide nucléique codant l’antigène, et comportant une région E4 orf6 d’Ad5. Pour l’adénovirus Ad35, il est caractéristique de conserver l’extrémité 3’ du cadre de lecture ouvert El B 55K dans l’adénovirus, par exemple les 166 pb directement en amont du cadre de lecture ouvert pIX ou un fragment les comprenant, tel qu’un fragment de 243 pb directement en amont du codon d’initiation de pIX, marqué à l’extrémité 5’ par un site de restriction Bsu361, étant donné que cela augmente la stabilité de l’adénovirus car le promoteur du gène pIX se trouve en partie dans cette région (voir par exemple. Havenga et al, 2006, ref. cit. ; WO 2004/001032). (061) On peut préparer un vecteur adénoviral humain en utilisant des méthodes connues dans la technique, au vu de la présente description. La préparation de vecteurs rAd26 est décrite, par exemple, dans WO 2007/104792 et dans Abbink et al., (2007) Virol 81(9): 4654-63. Des séquences génomiques prises comme exemples d’Ad26 se trouvent dans GenBank, n° d’enregistrement EF 153474, et dans SEQ ID NO:l de WO 2007/104792. La préparation de vecteurs rAd35 est décrite par exemple dans le brevet US n° 7 270 811 et dans Vogels et al, (2003) J Virol 77(15): 8263-71. Une séquence génomique prise comme exemple d’Ad35 de trouve dans GenBank, n° d’enregistrement AC_000019. (062) Dans un mode de réalisation, les vecteurs utilisables pour l’invention incluent ceux décrits dans WO 2012/082918, dont la description est incorporée en intégralité ici par référence.
Vecteurs adénoviraux simiens (063) Les vecteurs adénoviraux simiens selon la présente invention sont dérivés d’adénovirus originaires de simiens, qui, tels qu’utilisés ici, incluent les singes et les anthropoïdes, mais excluent les êtres humains. Des exemples de simiens incluent, mais sans se limiter à ceux-ci, le chimpanzé, le gorille, l’orang-outan, etc. Les adénovirus simiens ont en général une faible séroprévalence et/ou de faibles titres d’anticorps neutralisants préexistants dans la population humaine, et de nombreux de travaux qui ont fait appel à des vecteurs adénoviraux simiens, tels que les vecteurs adénoviraux de chimpanzé, ont été rapportés (par exemple US 6083716 ; WO 2005/071093 ; WO 2010/086189 ; WO 2010085984 ; Farina et al, 2001, J Virol 75: 11603-13 ; Cohen et al, 2002, J Gen Virol 83: 151-55 ; Kobinger et al, 2006, Virology 346: 394-401 ; Tatsis et al., 2007, Molecular Therapy 15: 608-17 ; voir également l’article de synthèse de Bangari et Mittal, 2006, Vaccine 24: 849- 62 ; ainsi que l’article de synthèse par Lasaro et Ertl, 2009, Mol Ther 17: 1333-39, qui sont tous incorporés en leur intégralité ici par référence). En conséquence, dans d’autres modes de réalisation préférés, le vecteur adénoviral recombinant selon l’invention est basé sur un adénovirus simien, par exemple un adénovirus de chimpanzé ou de bonobo. Dans certains modes de réalisation, l’adénovirus recombinant est basé sur un adénovirus de chimpanzé de type 1, 3, 7, 8, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27.1, 28.1, 29, 30, 31.1, 32, 33, 34, 35.1, 36, 37.2, 39, 40.1, 41.1, 42.1, 43, 44, 45, 46, 48, 49, 50 67 ou SA7P. (064) Dans des vecteurs adénoviraux simiens, tels que les vecteurs adénoviraux de chimpanzé, il est possible de supprimer le locus El afin de rendre les virus défectifs pour la réplication et de permettre une transcomplémentation sur une lignée cellulaire complémentant El AdHU5 (Farina SF, et al. 2001 J Virol 75: 11603-13). Une observation intéressante supplémentaire est que l’absence d’homologie de séquences entre AdHu5 et les adénovirus simiens au niveau de la séquence adjacente à El empêche une recombinaison homologue et la production de virus compétents pour la réplication (Tatsis N, et al. 2006 Gene Ther 13: 421-9). Dans certains modes de réalisation, le vecteur adénoviral recombinant est basé sur l’adénovirus de chimpanzé de type 3 ou 63. (065) Dans un mode de réalisation préféré, le vecteur adénoviral simien de la seconde composition est un vecteur adénoviral de chimpanzé (ChAdV ou AdCh). (066) Dans un mode de réalisation plus particulièrement préféré, le vecteur adénoviral de chimpanzé de la seconde composition est ChAdV3. L’adénovirus de chimpanzé recombinant de sérotype 3 (ChAd3 ou cAd3) est un adénovirus de sous-groupe C qui a des propriétés semblables à celles de l’adénovims humain de sérotype 5 (Ad5). Dans des études sur des sujets humains visant à évaluer des vaccins candidats contre le virus de l’hépatite C (HCV), il a été montré que ChAd3 étant sans danger et immunogène (Barnes E, et al. 2012 Science translational medicine 4: 115ral). Il a été rapporté que des vaccins à base de ChAd3 étaient capables d’induire une réponse immunitaire comparable à un vaccin à vecteur Ad5 humain. Voir par exemple
Perazzi D, et al. 2009 Vaccine 27: 1293-300 et Quinn KM, et al. 2013 J Immunol 190: 2720-35 ; WO 2005/071093 ; WO2011/0130627, etc. (067) Il est possible de produire un vecteur utilisable dans l’invention en utilisant un acide nucléique comprenant le génome adénoviral recombinant (par exemple, un vecteur de type plasmide, cosmide ou baculovims). L’invention fournit donc des molécules d’acide nucléique isolées qui codent les vecteurs adénoviraux de l’invention. Les molécules d’acide nucléique de l’invention peuvent être sous la forme d’ARN ou sous la forme d’ADN obtenu par clonage ou produit par synthèse. L’ADN peut être simple brin ou double brin. (068) Les vecteurs adénoviraux humains et simiens utilisables pour l’invention sont normalement défectifs pour la réplication. Dans ces modes de réalisation, le virus est rendu défectif pour la réplication par délétion ou inactivation de régions déterminantes pour la réplication du virus, telles que la région EL Les régions peuvent être essentiellement supprimées ou inactivées, par exemple, par insertion du gène d’intérêt (habituellement lié à un promoteur). Dans certains modes de réalisation, les vecteurs de l’invention peuvent contenir des délétions dans d’autres régions, telles que les régions E2, E3 ou E4, ou des insertions de gènes hétérologues liés à un promoteur. Pour les adénovirus mutés en E2 et/ou E4, en général on utilise des lignées cellulaires complémentant E2 et/ou E4, pour engendrer des adénovirus recombinants. Les mutations dans la région E3 de l’adénovirus n’ont pas besoin d’être complémentées par la lignée cellulaire, car E3 n’est pas requise pour la réplication. (069) Une lignée cellulaire d’encapsidation est normalement utilisée pour produire une quantité suffisante de vecteurs adénoviraux de l’invention. Une cellule d’encapsidation est une cellule qui comprend les gènes qui ont été supprimés ou inactivés dans un vecteur défectif pour la réplication, ce qui permet au virus de se répliquer dans la cellule. Des lignées cellulaires appropriées incluent, par exemple, les lignées Procell-92, PER.C6, 911, 293 et El A549. (070) Comme indiqué plus haut, une grande diversité de glycoprotéines de filovirus peuvent être exprimées dans des vecteurs. Si nécessaire, on peut optimiser en codons le gène hétérologue codant les glycoprotéines de filovirus, pour assurer une expression adéquate dans l’hôte (par exemple humain) traité. L’optimisation de codons est une technique largement appliquée dans le domaine. Normalement, le gène hétérologue est cloné dans la région El et/ou la région E3 du génome adénoviral humain. (071) Le gène hétérologue de filovirus peut être sous le contrôle d’un (c’est-à-dire liée de façon opérationnelle à un) promoteur issu d’adénovirus (par exemple, le Major
Late Promoter) ou peut être sous le contrôle d’un promoteur hétérologue. Des exemples de promoteurs hétérologues appropriés incluent, mais sans se limiter à ceux-ci, le promoteur de CMV, par exemple le promoteur de hCMV et le promoteur de RSV. De préférence, le promoteur est localisé en amont du gène hétérologue d’intérêt à l’intérieur d’une cassette d’expression. (072) Comme indiqué plus haut, les vecteurs adénoviraux humains et simiens utilisables pour l’invention peuvent comprendre une grande diversité de glycoprotéines de filovirus, connues de l’homme de métier. (073) Dans un mode de réalisation préféré de l’invention, le(s) vecteur(s) de rAd et ChAdV comprend/comprennent une ou plusieurs GP de virus Ebola Zaïre (EVOP) ou GP essentiellement semblables à celles-ci.
Combinaison immunogène (074) Une stratégie de vaccination pour réaliser une immunité protectrice chez la plupart des receveurs avec une seule vaccination serait souhaitable dans une situation de flambée épidémique. Des stratégies de vaccination permettant d’atteindre une immunité protectrice durable seraient souhaitables pour des populations dans des régions du monde où des flambées épidémiques apparaissent sporadiquement. De façon optimale une stratégie satisferait aux deux besoins, mais une stratégie différente peut être requise pour l’immunité rapide qui est nécessaire pour une immunité durable. (075) Un aspect général de l’invention concerne un vaccin ou une combinaison immunogène comprenant : (i) une première composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’au moins un vecteur adénoviral humain comprenant un premier acide nucléique codant une première protéine antigénique d’un filovirus, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; et (ii) une seconde composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur adénoviral simien comprenant un second acide nucléique codant une seconde protéine antigénique du filovims, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; l’une des compositions étant une composition d’amorçage et l’autre composition étant une composition de rappel. (076) Un autre aspect de l’invention concerne un vaccin ou une combinaison immunogène pour l’induction d’une immunité protectrice contre une maladie et/ou une infection à filovims, comprenant : (i) une première composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’au moins un vecteur adénoviral humain comprenant un premier acide nucléique codant une première protéine antigénique d’un filovirus, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; et (ii) une seconde composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur adénoviral simien comprenant un second acide nucléique codant une seconde protéine antigénique du filovims, le second acide nucléique étant le même que le premier acide nucléique ou différent du premier acide nucléique, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; l’une des compositions étant une composition d’amorçage et l’autre composition étant une composition de rappel. (077) Dans un mode de réalisation préféré de l’invention, une combinaison de vaccin comprend : (i) une première composition comprenant une quantité immunologiquement efficace de vecteur rAd26 ou rAd35 comprenant un premier acide nucléique codant une première protéine antigénique ayant la séquence d’acides aminés qui est identique à un degré d’au moins 90% à SEQIDn°l, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; et (ii) une seconde composition comprenant une quantité immunologiquement efficace de vecteur ChAd3 comprenant un second acide nucléique codant une seconde protéine antigénique ayant la séquence d’acides aminés qui est identique à un degré d’au moins 90 % à SEQID n° 1, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; l’une des compositions étant une composition d’amorçage et l’autre composition étant une composition de rappel. (078) Dans un mode de réalisation plus particulièrement préféré de l’invention, une combinaison de vaccin comprend : (i) une première composition comprenant une quantité immunologiquement efficace de vecteur rAd26 comprenant un premier acide nucléique codant une protéine antigénique ayant la séquence d’acides aminés de SEQIDn°l ou SEQID n° 3, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; et (ii) une seconde composition comprenant une quantité immunologiquement efficace de vecteur ChAd3 comprenant un second acide nucléique codant la protéine antigénique ayant la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1 ou SEQ ID n° 3, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; l’une des compositions étant une composition d’amorçage et l’autre composition étant une composition de rappel. (079) Dans un autre mode de réalisation plus particulièrement préféré de l’invention, une combinaison de vaccin comprend : (i) une première composition comprenant une quantité immunologiquement efficace de vecteur rAd26 comprenant un premier acide nucléique codant une protéine antigénique ayant la séquence d’acides aminés de SEQIDn0 1, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; et (ii) une seconde composition comprenant une quantité immunologiquement efficace de vecteur ChAd3 comprenant un second acide nucléique codant la protéine antigénique ayant la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 3, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; l’une des compositions étant une composition d’amorçage et l’autre composition étant une composition de rappel. (080) Dans un autre mode de réalisation préféré de l’invention, une combinaison de vaccin comprend : (i) une première composition comprenant une quantité immunologiquement efficace de vecteur rAd26 comprenant la séquence de nucléotides de SEQ ID n° 2, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; et (ii) une seconde composition comprenant une quantité immunologiquement efficace de vecteur ChAd3 comprenant la séquence de nucléotides de SEQ ID n° 2, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; l’une des compositions étant une composition d’amorçage et l’autre composition étant une composition de rappel. (081) Un autre aspect de l’invention concerne un nécessaire comprenant : (i) une première composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’au moins un vecteur adénoviral humain comprenant un premier acide nucléique codant une première protéine antigénique d’un filovirus, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; et (ii) une seconde composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur adénoviral simien comprenant un second acide nucléique codant une seconde protéine antigénique, le second acide nucléique étant le même que le premier acide nucléique ou différent du premier acide nucléique, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; l’une des compositions étant une composition d’amorçage et l’autre composition étant une composition de rappel.
Composition immunogène (082) Les compositions immunogènes sont des compositions qui comprennent une quantité immunologiquement efficace de vecteurs adénoviraux humains ou simiens (par exemple de chimpanzé) purifiés ou partiellement purifiés, pour utilisation dans l’invention. Lesdites compositions peuvent être formulées sous forme d’un vaccin (également désigné par « composition immunogène ») selon des procédés bien connus dans la technique. De telles compositions peuvent inclure des adjuvants pour accroître les réponses immunitaires. Les rapports optimaux de chaque composant dans la formulation peuvent être déterminés par des techniques bien connues de l’homme de métier, au vu de la présente description. (083) Les compositions immunogènes selon les modes de réalisation de la présente invention peuvent être préparées à l’aide de méthodes connues de l’homme de métier au vu de la présente description. Des compositions pharmaceutiques liquides en général incluent un véhicule liquide tel que l’eau, le pétrole, des huiles végétales ou animales, une huile minérale ou une huile synthétique. On peut également inclure une solution de sérum physiologique, une solution de glucose ou d’un autre saccharide, ou des glycols tels que l’éthylèneglycol, le propylèneglycol ou le polyéthylèneglycol. (084) Les compositions de l’invention peuvent comprendre d’autres antigènes de filovirus, ou les inoculations d’amorçage ou de rappel peuvent comprendre d’autres antigènes. Les autres antigènes utilisés en association avec les vecteurs adénoviraux de l’invention peuvent être, par exemple, des antigènes de filovirus et des acides nucléiques les exprimant. (085) Les compositions immunogènes utilisables dans l’invention peuvent comprendre des adjuvants. Des adjuvants appropriés pour co-administration selon l’invention devraient être des adjuvants qui sont potentiellement sans danger, bien tolérés et efficaces chez les personnes, incluant QS-21, Detox-PC, MPL-SE, MoGM-CSF, TiterMax-G, CRL- 1005, GERBU, TERamide, PSC97B, Adjumer, PG-026, GSK-I,AS01, AS03, AS04, AS15, GcMAF, la B-aléthine, MPC-026, Adjuvax, CpG ODN, la bétafectine, l’alun et MF59. (086) D’autres adjuvants qui peuvent être administrés incluent des lectines, des facteurs de croissance, des cytokines et des lymphokines telles que l’interféron alpha, l’interféron gamma, le facteur de croissance dérivé des plaquettes (PDGF), le facteur stimulant la formation de granulocytes (gCSF), le facteur stimulant la formation de colonies de granulocytes et de macrophages (gMCSF), le facteur de nécrose tumorale (TNF), le facteur de croissance de l’épiderme (EGF), IL-I, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10 et IL-12 ou les acides nucléiques qui les codent. (087) Les compositions de l’invention peuvent comprendre un excipient, véhicule, tampon, stabilisant, pharmaceutiquement acceptables, ou d’autres substances bien connues de l’homme de métier. Ces substances devraient être non toxiques et ne devraient pas interférer avec l’efficacité du composant actif. Les première et seconde compositions peuvent comporter le même véhicule pharmaceutiquement acceptable ou des véhicules pharmaceutiquement acceptables différents. La nature précise du véhicule ou de l’autre substance peut dépendre de la voie d’administration, par exemple les voies intramusculaire, sous-cutanée, oral, intraveineuse, cutanée, intra-muqueuse (intestin par exemple), intranasale ou intrapéritonéale.
Procédé pour l’induction d’une immunité protectrice contre une maladie et/ou une infection à filovirus (088) Un autre aspect général de l’invention concerne un procédé d’induction d’une réponse immunitaire contre un filovirus chez un sujet. Le procédé comprend : a. l’administration au sujet d’une première composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur adénoviral humain comprenant un premier acide nucléique codant une première protéine antigénique d’un filovirus ; et b. l’administration au sujet d’une seconde composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur adénoviral simien (par exemple de chimpanzé) comprenant un second acide nucléique codant une seconde protéine antigénique d’un filovirus, la seconde protéine antigénique étant la même que ou différente de la première protéine antigénique, les étapes (a) et (b) étant effectuées dans cet ordre ou dans l’ordre inverse. (089) Dans certains modes de réalisation, la première composition est utilisée pour l’amorçage de ladite réponse immunitaire et la seconde composition est utilisée pour le rappel de ladite réponse immunitaire. Dans d’autres modes de réalisation, la seconde composition est utilisée pour l’amorçage de ladite réponse immunitaire et la première composition est utilisée pour le rappel de ladite réponse immunitaire. (090) L’une quelconque des compositions immunogènes selon les modes de réalisation de l’invention incluant, mais sans limitation, celles décrites ici, peut être utilisée dans les procédés de l’invention. (091) Dans un mode de réalisation des procédés décrits, on utilise un vecteur adénoviral pour amorcer la réponse immunitaire et on utilise un autre vecteur adénoviral pour le rappel de la réponse immunitaire, environ 1-15 semaines après la vaccination d’amorçage, par exemple, la vaccination d’amorçage peut être administrée 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ou 15 semaines après la vaccination d’amorçage. Des compositions d’amorçage supplémentaires peuvent être administrées des semaines ou des mois après l’administration de rappel initiale, par exemple, environ 1, 2 ou 3 semaines ou 4 semaines, ou 8 semaines, ou 16 semaines, ou 20 semaines, ou 24 semaines, ou 28 semaines, ou 32 semaines, ou 36 semaines, ou un ou deux ans après le rappel initial. (092) Dans un mode de réalisation préféré, le vecteur adénoviral humain qui est utilisé selon la présente invention inclut un vecteur rAd26 ou rAd35 et le vecteur adénoviral simien inclut un vecteur adénoviral de chimpanzé, tel qu’un vecteur ChAd3. Dans un mode de réalisation pris comme exemple, on utilise un vecteur rAd26 ou rAd35 pour amorcer la réponse immunitaire, et un vecteur ChAd3 pour le rappel de la réponse immunitaire, ou vice versa. (093) Les antigènes dans les compositions d’amorçage et de rappel respectives ne doivent pas nécessairement être identiques, mais devraient de préférence avoir en commun des déterminants antigéniques similaires, ou être essentiellement semblables l’un à l’autre. (094) L’administration des compositions immunogènes comprenant les vecteurs s’effectue normalement par voie intramusculaire ou sous-cutanée. Cependant, d’autres modes d’administration, comme par voie intraveineuse, cutanée, intradermique ou nasale, peuvent également être envisagés. On peut effectuer l’administration intramusculaire des compositions immunogènes en utilisant une aiguille pour injecter une suspension du virus adénoviral. Une autre possibilité consiste à utiliser un dispositif d’injection sans aiguille pour administrer la composition (en utilisant, par exemple, Biojector ) ou une poudre lyophilisée contenant le vaccin. (095) Pour une injection intraveineuse, cutanée ou sous-cutanée, ou une injection au site d’affection, le vecteur sera sous la forme d’une solution aqueuse acceptable pour administration par voie parentérale, qui est apyrogène et a un pH, une isotonie et une stabilité convenables. L’homme de métier sera à même de préparer des solutions convenables en utilisant, par exemple, des véhicules isotoniques tels que Sodium Chloride Injection, Ringer’s Injection, Lactated Ringer’s Injection. Des conservateurs, stabilisants, tampons, antioxydants et/ou autres additifs peuvent être inclus selon les nécessités. On peut également utiliser une formulation à libération lente. (096) Normalement, l’administration aura un objectif prophylactique pour engendrer une réponse immunitaire contre un antigène de filovirus avant une infection ou l’apparition de symptômes. Les maladies et affections qui peuvent être traitées ou prévenues selon l’invention incluent celles dans lesquelles une réponse immunitaire peut jouer un rôle protecteur ou thérapeutique. Dans d’autres modes de réalisation, les vecteurs adénoviraux peuvent être administrées pour une prophylaxie post-exposition. (097) Les compositions immunogènes contenant les vecteurs adénoviraux humains ou simiens (par exemple de chimpanzé) sont administrées à un sujet, en donnant naissance à une réponse immunitaire anti-filovirus chez le sujet. Une quantité d’une composition qui est suffisante pour induire une réponse immunitaire détectable est définie comme étant une « dose immunologiquement efficace ». Comme il est montré ci-dessous, les compositions immunogènes de l’invention induisent une réponse immunitaire humorale ainsi qu’une réponse immunitaire cellulaire. Dans un mode de réalisation type, la réponse immunitaire est une réponse immunitaire protectrice. (098) La quantité effective administrée, et la vitesse et l’échelonnement dans le temps de l’administration dépendront de la nature et de la gravité de l’état qui est traité. La prescription de traitement, par exemple les décisions relatives au dosage, etc., sera sous la responsabilité des praticiens généralistes et d’autres docteurs en médecine, ou, dans un contexte vétérinaire, d’un médecin vétérinaire, et tiendra normalement compte de l’affection à traiter, de l’état du patient individuel, du site d’administration, du mode d’administration et d’autres facteurs connus des praticiens. Des exemples des techniques et protocoles mentionnés plus haut peuvent être trouvés dans Remington’s Pharmaceutical Sciences, 16e édition, Osol, A. rédacteur en chef, 1980. (099) Après la production de vecteurs adénoviraux et la formulation optionnelle de telles particules en des compositions, les vecteurs peuvent être administrés à un individu, en particulier un être humain ou un autre primate. L’administration peut être effectuée à des sujets humains, ou à un autre mammifère, par exemple une souris, un rat, un hamster, un cobaye, un lapin, un mouton, une chèvre, un porc, un cheval, un bovin, un âne, un singe, un chien ou un chat. L’administration à un mammifère non humain n’est pas nécessairement effectuée à une fin thérapeutique, mais peut être pour utilisation dans un contexte expérimental, par exemple, dans l’étude de mécanismes des réponses immunitaires aux vecteurs adénoviraux. (0100) Dans un schéma pris comme exemple, le vecteur adénoviral humain est administré (par exemple par voie intramusculaire) en un volume dans la plage comprise entre environ 100 μΐ et environ 10 ml, contenant des concentrations d’environ 10 à 10 particules virales/ml. De préférence, le vecteur adénoviral humain est administré en un volume dans la plage comprise entre 0,1 et 2,0 ml. Par exemple, le vecteur adénoviral humain peut être administré en un volume de 100 μΐ, 500 μΐ, 1 ml, 2 ml. De façon plus particulièrement préférée, le vecteur adénoviral humain est administré en un volume de 0,5 ml. En option, le vecteur adénoviral humain peut être administré à une concentration d’environ 10 pv/ml, 10 pv/ml, 10 pv/ml, 10 pv/ml, 5 x 1010 pv/ml, 1011 pv/ml ou 1012 pv/ml. (0101) Normalement, le vecteur adénoviral humain est administré en une quantité d’environ 10 à environ 10 particules virales (pv) à un sujet humain au cours d’une administration, plus couramment en une quantité d’environ 1010 à environ 1012 pv. La vaccination initiale est suivie d’un rappel comme indiqué plus haut. (0102) Dans un autre schéma pris comme exemple, le vecteur adénoviral simien (par exemple de chimpanzé) est administré (par exemple par voie intramusculaire) conjointement avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable. Le vecteur adénoviral simien (par exemple de chimpanzé) peut être administré, par exemple, avec une solution salée, dans la plage d’environ 100 μΐ à environ 10 ml de solution salée contenant des concentrations d’environ 10 à 10 particules virales/ml. Par exemple le vecteur adénoviral simien (par exemple de chimpanzé) peut être administré avec 100 μΐ, 500 μΐ, 1 ml, 2 ml, 3 ml, 4 ml, 5 ml, 6 ml, 7 ml, 8 ml, 9 ml ou 10 ml de solution salée. En option le vecteur adénoviral simien (par exemple de chimpanzé) peut être administré à une concentration d’environ 104 pv/ml, 105 pv/ml, 106 pv/ml, 107 pv/ml, O Q 1 Γ) 11 ΙΟ 10 pv/ml, 10 pv/ml, 10 pv/ml, 10 pv/ml ou 10 pv/ml. Caractéristiquement, le vecteur adénoviral simien (par exemple de chimpanzé) est administré à un sujet humain au cours d’une administration en une quantité d’environ 109 à environ 10 particules virales (pv), plus caractéristiquement, d’environ 10 à environ 10 pv. (0103) La vaccination initiale est suivie d’un rappel, comme indiqué plus haut ; la composition peut, si on le désire, être présente dans un nécessaire, emballage ou distributeur, qui peut contenir une ou plusieurs formes galéniques unitaires contenant le composant actif. Le nécessaire, par exemple, peut comprendre une feuille de métal ou de matière plastique, telle qu’un emballage thermoformé. Le nécessaire, l’emballage ou le distributeur peut être accompagné de directives pour l’administration. (0104) Les compositions de l’invention peuvent être administrées seules ou en association avec d’autres traitements, soit simultanément, soit successivement, en fonction de l’état à traiter. (0105) L’invention fournit également les modes de réalisation non limitatifs suivants : (0106) 1. Une combinaison de vaccin comprenant : (i) une première composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’au moins un vecteur adénoviral humain comprenant un premier acide nucléique codant une première protéine antigénique d’un filovirus, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; et (ii) une seconde composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur adénoviral simien comprenant un second acide nucléique codant une seconde protéine antigénique du filovirus, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; l’une des compositions étant une composition d’amorçage et l’autre composition étant une composition de rappel. (0107) 2. La combinaison de vaccin selon le mode de réalisation 1, dans laquelle la première protéine antigénique comprend une séquence d’acides aminés ayant une identité de séquence d’au moins 90 % avec la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1, de préférence est également capable d’induire une réponse immunitaire à la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1. (0108) 3. La combinaison de vaccin selon le mode de réalisation 1 ou 2, dans laquelle la première protéine antigénique comprend une séquence d’acides aminés ayant une identité de séquence d’au moins 95 % avec la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1, de préférence est également capable d’induire une réponse immunitaire à la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1. (0109) 4. La combinaison de vaccin selon l’un quelconque des modes de réalisation 1 à 3, dans laquelle la première protéine antigénique comprend la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1. (0110) 5. La combinaison de vaccin selon l’un quelconque des modes de réalisation 1 à 3, dans laquelle la première protéine antigénique comprend la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 3. (0111) 6. La combinaison de vaccin selon l’un quelconque des modes de réalisation 1 à 5, dans laquelle la seconde protéine antigénique comprend une séquence d’acides aminés ayant une identité de séquence d’au moins 90 % avec la séquence d’acides aminés de SEQIDn0 1, de préférence est également capable d’induire une réponse immunitaire à la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1. (0112) 7. La combinaison de vaccin selon l’un quelconque des modes de réalisation 1 à 6, dans laquelle la seconde protéine antigénique comprend une séquence d’acides aminés ayant une identité de séquence d’au moins 95 % avec la séquence d’acides aminés de SEQIDn0 1, de préférence est également capable d’induire une réponse immunitaire à la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1. (0113) 8. La combinaison de vaccin selon l’un quelconque des modes de réalisation 1 à 7, dans laquelle la seconde protéine antigénique comprend la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1. (0114) 9. La combinaison de vaccin selon l’un quelconque des modes de réalisation 1 à 7, dans laquelle la seconde protéine antigénique comprend la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 3. (0115) 10. La combinaison de vaccin selon l’un quelconque des modes de réalisation 1 à 9, dans laquelle le vecteur adénoviral humain est un vecteur rAd26. (0116) 11. La combinaison de vaccin selon l’un quelconque des modes de réalisation 1 à 10, dans laquelle le vecteur adénoviral simien est un vecteur adénoviral de chimpanzé. (0117) 12. La combinaison de vaccin selon le mode de réalisation 11, dans laquelle le vecteur adénoviral de chimpanzé est un vecteur ChAd3. (0118) 13. Une combinaison de vaccin comprenant : a. une première composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur rAd26 comprenant un acide nucléique codant une protéine antigénique comprenant la séquence d’acides aminés de SEQ K) n° 1, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; et b. une seconde composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur ChAd3 comprenant un acide nucléique codant une protéine antigénique comprenant la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1 ou SEQ ID n° 3, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; l’une des compositions étant une composition d’amorçage et l’autre composition étant une composition de rappel. (0119) 14. Une combinaison de vaccin comprenant : a. une première composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur rAd26 comprenant un acide nucléique codant une protéine antigénique comprenant la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 3, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; et b. une seconde composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur ChAd3 comprenant un acide nucléique codant une protéine antigénique comprenant la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1 ou SEQ ID n° 3, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; l’une des compositions étant une composition d’amorçage et l’autre composition étant une composition de rappel. (0120) 15. Une combinaison de vaccin comprenant : a. une première composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur rAd26 comprenant un acide nucléique codant une protéine antigénique comprenant la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; et b. une seconde composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur ChAd3 comprenant un acide nucléique codant une protéine antigénique comprenant la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 3, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; l’une des compositions étant une composition d’amorçage et l’autre composition étant une composition de rappel. (0121) 16. La combinaison de vaccin selon l’un quelconque des modes de réalisation 1 à 15, pour utilisation dans la génération d’une réponse immunitaire protectrice chez un sujet ayant besoin d’une telle réponse contre au moins un sous-type de filovirus, la première composition étant utilisée pour l’amorçage de ladite réponse immunitaire et la seconde composition étant utilisée pour le rappel de ladite réponse immunitaire. (0122) 17. La combinaison de vaccin selon l’un quelconque des modes de réalisation 1 à 15, pour utilisation dans la génération d’une réponse immunitaire protectrice chez un sujet ayant besoin d’une telle réponse contre au moins un sous-type de filovirus, la seconde composition étant utilisée pour l’amorçage de ladite réponse immunitaire et la première composition étant utilisée pour le rappel de ladite réponse immunitaire. (0123) 18. Un procédé d’induction d’une réponse immunitaire contre un filovirus chez un sujet ayant besoin d’une telle réponse, le procédé comprenant : a. l’administration au sujet d’une première composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur adénoviral humain comprenant un premier acide nucléique codant une première protéine antigénique du filovirus ; et b. l’administration au sujet d’une seconde composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur adénoviral simien comprenant un second acide nucléique codant une seconde protéine antigénique du filovirus, les étapes (a) et (b) étant effectuées dans cet ordre ou dans l’ordre inverse. (0124) 19. Le procédé selon le mode de réalisation 18, dans lequel la première protéine antigénique comprend une séquence d’acides aminés ayant une identité de séquence d’au moins 90% avec la séquence d’acides aminés de SEQIDn01, de préférence est également capable d’induire une réponse immunitaire à la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1. (0125) 20. Le procédé selon le mode de réalisation 18 ou 19, dans lequel la première protéine antigénique comprend une séquence d’acides aminés ayant une identité de séquence d’au moins 95 % avec la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1, de préférence est également capable d’induire une réponse immunitaire à la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1. (0126) 21. Le procédé selon l’un quelconque des modes de réalisation 18 à 20, dans lequel la première protéine antigénique comprend la séquence d’acides aminés de SEQIDn0 1. (0127) 22. Le procédé selon l’un quelconque des modes de réalisation 18 à 20, dans lequel la première protéine antigénique comprend la séquence d’acides aminés de SEQID n° 3. (0128) 23. Le procédé selon l’un quelconque des modes de réalisation 18 à 22, dans lequel la seconde protéine antigénique comprend une séquence d’acides aminés ayant une identité de séquence d’au moins 90 % avec la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1, de préférence est également capable d’induire une réponse immunitaire à la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1. (0129) 24. Le procédé selon l’un quelconque des modes de réalisation 18 à 23, dans lequel la seconde protéine antigénique comprend une séquence d’acides aminés ayant une identité de séquence d’au moins 95 % avec la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1, de préférence est également capable d’induire une réponse immunitaire à la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1. (0130) 25. Le procédé selon l’un quelconque des modes de réalisation 18 à 24, dans lequel la seconde protéine antigénique comprend la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1. (0131) 26. Le procédé selon l’un quelconque des modes de réalisation 18 à 24, dans lequel la seconde protéine antigénique comprend la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 3. (0132) 27. Le procédé selon l’un quelconque des modes de réalisation 18 à 26, dans lequel le vecteur adénoviral humain est un vecteur rAd26. (0133) 28. Le procédé selon l’un quelconque des modes de réalisation 18 à 27, dans lequel le vecteur adénoviral simien est un vecteur ChAd3. (0134) 29. Un procédé d’induction d’une réponse immunitaire contre un filovirus chez un sujet ayant besoin d’une telle réponse, le procédé comprenant : a. l’administration au sujet d’une première composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur rAd26 comprenant un acide nucléique codant une protéine antigénique comprenant la séquence d’acides aminés de SEQIDn°l, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; et b. l’administration au sujet d’une seconde composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur ChAd3 comprenant un acide nucléique codant une protéine antigénique comprenant la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1 ou SEQ ID n° 3, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable, les étapes (a) et (b) étant effectuées dans cet ordre ou dans l’ordre inverse. (0135) 30. Un procédé d’induction d’une réponse immunitaire contre un filovirus chez un sujet ayant besoin d’une telle réponse, le procédé comprenant : a. l’administration au sujet d’une première composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur rAd26 comprenant un acide nucléique codant une protéine antigénique comprenant la séquence d’acides aminés de SEQID n° 3, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; et b. l’administration au sujet d’une seconde composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur ChAd3 comprenant un acide nucléique codant une protéine antigénique comprenant la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1 ou SEQ ID n° 3, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable, les étapes (a) et (b) étant effectuées dans cet ordre ou dans l’ordre inverse. (0136) 31. Un procédé d’induction d’une réponse immunitaire contre un filovirus chez un sujet ayant besoin d’une telle réponse, le procédé comprenant : a. l’administration au sujet d’une première composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur rAd26 comprenant un acide nucléique codant une protéine antigénique comprenant la séquence d’acides aminés de SEQIDn°l, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; et b. l’administration au sujet d’une seconde composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur ChAd3 comprenant un acide nucléique codant une protéine antigénique comprenant la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 3, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable, les étapes (a) et (b) étant effectuées dans cet ordre ou dans l’ordre inverse. (0137) 32. Le procédé selon l’un quelconque des modes de réalisation 18 à 31, dans lequel l’étape (b) est effectuée 1-15 semaines, de préférence 1-12 semaines, après l’étape (a). (0138) 33. Le procédé selon l’un quelconque des modes de réalisation 18 à 31, dans lequel l’étape (b) est effectuée 1-15 semaines, de préférence 1-12 semaines, avant l’étape (a). (0139) 34. Un nécessaire comprenant : a. une première composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’au moins un vecteur adénoviral humain comprenant un premier acide nucléique codant une première protéine antigénique d’un filovirus, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; et b. une seconde composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur adénoviral simien comprenant un second acide nucléique codant une seconde protéine antigénique, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; l’une des compositions étant une composition d’amorçage et l’autre composition étant une composition de rappel. (0140) 35. Le nécessaire selon le mode de réalisation 34, dans lequel la première protéine antigénique comprend une séquence d’acides aminés ayant une identité de séquence d’au moins 90% avec la séquence d’acides aminés de SEQIDn0 1, de préférence est également capable d’induire une réponse immunitaire à la séquence d’acides aminés de SEQID n° 1. (0141) 36. Le nécessaire selon le mode de réalisation 34 ou 35, dans lequel la première protéine antigénique comprend une séquence d’acides aminés ayant une identité de séquence d’au moins 95 % avec la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1, de préférence est également capable d’induire une réponse immunitaire à la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1. (0142) 37. Le nécessaire selon l’un quelconque des modes de réalisation 34 à 36, dans lequel la première protéine antigénique comprend la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1. (0143) 38. Le nécessaire selon l’un quelconque des modes de réalisation 34 à 36, dans lequel la première protéine antigénique comprend la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 3. (0144) 39. Le nécessaire selon l’un quelconque des modes de réalisation 34 à 38, dans lequel la seconde protéine antigénique comprend une séquence d’acides aminés ayant une identité de séquence d’au moins 90 % avec la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1, de préférence est également capable d’induire une réponse immunitaire à la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1. (0145) 40. Le nécessaire selon l’un quelconque des modes de réalisation 34 à 39, dans lequel la seconde protéine antigénique comprend une séquence d’acides aminés ayant une identité de séquence d’au moins 95 % avec la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1, de préférence est également capable d’induire une réponse immunitaire à la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1. (0146) 41. Le nécessaire selon l’un quelconque des modes de réalisation 34 à 40, dans lequel la seconde protéine antigénique comprend la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1. (0147) 42. Le nécessaire selon l’un quelconque des modes de réalisation 34 à 40, dans lequel la seconde protéine antigénique comprend la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 3. (0148) 43. Le nécessaire selon l’un quelconque des modes de réalisation 34 à 42, dans lequel le vecteur adénoviral humain est un vecteur rAd26. (0149) 44. Le nécessaire selon l’un quelconque des modes de réalisation 34 à 43, dans lequel le vecteur adénoviral simien est un vecteur ChAd3. (0150) 45. Un nécessaire comprenant : a. une première composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur rAd26 comprenant un acide nucléique codant une protéine antigénique comprenant la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; et b. une seconde composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur ChAd3 comprenant un acide nucléique codant une protéine antigénique comprenant la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1 ou SEQ ID n° 3, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; l’une des compositions étant une composition d’amorçage et l’autre composition étant une composition de rappel. (0151) 46. Un nécessaire comprenant : a. une première composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur rAd26 comprenant un acide nucléique codant une protéine antigénique comprenant la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 3, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; et b. une seconde composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur ChAd3 comprenant un acide nucléique codant une protéine antigénique comprenant la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1 ou SEQ ID n° 3, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; l’une des compositions étant une composition d’amorçage et l’autre composition étant une composition de rappel. (0152) 47. Un nécessaire comprenant : a. une première composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur rAd26 comprenant un acide nucléique codant une protéine antigénique comprenant la séquence d’acides aminés de SEQID n° 1, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; et b. une seconde composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur ChAd3 comprenant un acide nucléique codant une protéine antigénique comprenant la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 3, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; l’une des compositions étant une composition d’amorçage et l’autre composition étant une composition de rappel. (0153) 48. Le nécessaire selon l’un quelconque des modes de réalisation 34 à 47, pour utilisation dans la génération d’une réponse immunitaire protectrice contre au moins un sous-type de filovims, dans lequel la première composition est utilisée pour l’amorçage de ladite réponse immunitaire et la seconde composition est utilisée pour le rappel de ladite réponse immunitaire. (0154) 49. Le nécessaire selon l’un quelconque des modes de réalisation 34 à 47, pour utilisation dans la génération d’une réponse immunitaire protectrice contre au moins un sous-type de filovirus, dans lequel la seconde composition est utilisée pour l’amorçage de ladite réponse immunitaire et la première composition est utilisée pour le rappel de ladite réponse immunitaire. (0155) 50. Le nécessaire selon l’un quelconque des modes de réalisation 34 à 49, dans lequel la composition d’amorçage est administrée à un sujet en ayant besoin 1-15 semaines, de préférence 1-12 semaines, avant l’administration de la composition de rappel au sujet.
EXEMPLES (0156) Les exemples qui suivent sont donnés à titre illustratif, mais non limitatif, de l’invention revendiquée.
Essai de phase I sur des sujets humains d’un schéma amorce-rappel combinant ChAd3-EBO-Z et Ad26.ZEBOV (0157) Une étude clinique de phase I sur des sujets humains a été conçue pour évaluer la sécurité du schéma hétérologue amorce-rappel combinant les vaccins candidats monovalents contre le virus Ebola Zaïre ChAd3-EBO-Z et Ad26.ZEBOV à intervalles de 4 ou 8 semaines. L’échantillon expérimental consistait en 32 sujets adultes sains âgés de 18 à 50 ans. (0158) ChAd3-EBO-Z est un vaccin vectorisé viral utilisant un adénovirus de chimpanzé comme vecteur codant une glycoprotéine de vims Ebola souche Zaïre. Il a été administré à une dose de 1 x 10 pv. Ad26.ZEBOV est un vaccin vectorisé viral utilisant un adénovims humain comme vecteur codant une glycoprotéine de virus Ebola souche Zaïre. . Il a été administré à une dose de 5 x 1010 pv. ChAd3-EBO-Z et Ad26.ZEBOV ont été administrés chacun par voie intramusculaire, conformément au dispositif expérimental présenté dans le tableau 1.
Tableau 1 : Dispositif expérimental pour l’essai de phase I sur des sujets humains d’un schéma amorce-rappel combinant ChAd3-EBO-Z et Ad26.ZEBOV
(0159) Les candidats du groupe 1 (Gl) ont reçu un vaccin d’amorçage de ChAd3-EBO-Z à la semaine 0 et un vaccin de rappel d’Ad26.ZEBOV à la semaine 4. Les candidats du groupe 2 (G2) ont reçu un vaccin d’amorçage d’Ad26.ZEBOV à la semaine 0 et un vaccin de rappel de ChAd3-EBO-Z à la semaine 4. Les candidats du groupe 3 (G3) ont reçu un vaccin d’amorçage de ChAd3-EBO-Z à la semaine 0 et un vaccin de rappel d’Ad26.ZEBOV à la semaine 8. Les candidats du groupe 4 (G4) ont reçu un vaccin d’amorçage d’Ad26.ZEBOV à la semaine 0 et un vaccin de rappel de ChAd3-EBO-Z à la semaine 8. La durée de suivi de l’étude était de 5 mois.
Matériels de vaccin (0160) L’utilisation du vecteur ChAd3 incompétent pour la réplication, recombinant, pour la construction du vaccin ChAd3-EBO-Z, était basée sur les propriétés d’induction aussi aisée de réponses immunitaires que rAd5, mais avec une immunité préexistante faible ou nulle contre ChAd3 dans les populations humaines. Le vaccin recombinant Ebola Zaïre vectorisé avec l’adénovirus de type 3 de chimpanzé (ChAd3-EBO-Z) est un vecteur adénoviral de sérotype 3 recombinant, déficient pour la réplication (ChAd3), exprimant une glycoprotéine ayant la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 3, qui est identique à la glycoprotéine Ebola de type sauvage (WT) (SEQ ID n° 1) issue de la souche Zaïre, hormis la présence d’une valine à la position 662 au lieu d’une isoleucine. On a mis au point le vaccin ChAd3-EBO-Z étudié en utilisant la technologie de la plateforme de vaccins à base d’adénovims. La substance pharmaceutique a été fabriquée et étiquetée dans des conditions de Bonne Pratique de Fabrication (BPF). ChAd3-EBO-Z a été fourni sous forme d’un liquide en parties aliquotes stériles dans des flacons en verre transparents de 1 ml, à une concentration de 11 11 1 x 10 pv par ml et en une partie aliquote de 2 ml à une concentration de 1 x 10 pv par ml. (0161) L’adénovirus humain Ad26.ZEBOV, qui code la GP Ebola WT (SEQ ID n° 1) a été fourni sous forme d’un liquide en parties aliquotes stériles à une concentration de 1 x 1010 pv par ml. Les vaccins ont été conservés dans un congélateur à -80 °C.
Vaccination et schéma expérimental (0162) Les vaccins ont été administrés par voie intramusculaire (IM) à tous les groupes dans le muscle deltoïde de l’un ou l’autre bras. Le jour de la vaccination, on a laissé les vaccins se décongeler à la température ambiante et on les a administrés en l’espace d’une heure. En fonction de la dose et de la concentration, en général, on peut utiliser un ou plusieurs flacons de vaccin. De même, en général, un flacon peut être utilisé pour plus d’un vaccin si l’administration est effectuée dans les limites de l’espace de temps post-décongélation imparti, soit 1 heure. (0163) Aux jours de vaccination, les sujets de l’étude ont été soumis à une évaluation clinique avant l’injection et des échantillons ont été prélevés pour les tests de laboratoire. (0164) L’immunogénicité spécifique d’Ebolavirus peut être évaluée par divers dosages immunologiques. En général, les mesurées des résultats de l’immunogénicité primaire sont des dosages ELISA et des dosages de neutralisation spécifiques d’antigènes pour les réponses anticorps et des dosages par coloration de cytokines intracellulaires (CCI) pour les réponses des lymphocytes T. Par exemple, on peut évaluer l’immunogénicité en utilisant les dosages immunologiques récapitulés dans les tableaux 3 et 4. L’ensemble des dosages exploratoires peut inclure, mais sans se limiter à ceux-ci, les dosages indiqués. Les mesures des résultats exploratoires incluent, mais sans se limiter à ceux-ci, l’ELISPOT ex vivo et la cytométrie en flux effectuée avec des échantillons de recherche recueillis à certains moments au cours de l’ensemble de l’étude, ainsi que d’autres dosages d’immunogénicité et l’évaluation de facteurs génétiques associés aux réponses immunitaires. Des profils d’expression d’ARNm induit par le vaccin, avant et après la vaccination, peuvent également être établis en tant qu’évaluation exploratoire. (0165) La réponse immunitaire humorale spécifique de glycoprotéines d’Ebola a été évaluée par ELISA.
Tableau 3 : Récapitulation des dosages immunologiques (sérologiques)
EBOV : virus Ebola ; ELISA dosage par immunoadsorption à enzyme liée ;
GP : glycoprotéine ; IgG : immunoglobuline G
Tableau 4 : Récapitulation des dosages immunologiques (cellulaires)
EBOV : virus Ebola ; ELISpot : dosage immunospot à enzyme liée ; CCI : coloration de cytokines intracellulaires : IFN : interféron : IL : interleukine ; CMSP : cellules mononucléaires de sang périphérique ; TNF : facteur de nécrose tumorale.
Dosage ELISA de la réponse IgG spécifique de glycoprotéine Ebola (0166) En bref, on a tapissé des plaques avec une forme trimère recombinante, soluble, purifiée par affinité, de la glycoprotéine de variant Makona Ebola. Les réponses anticorps ont été mesurées contre la glycoprotéine trimérisée d’Ebola souche Zaïre. Les échantillons ont été dosés en triple et on a utilisé un pool de référence de sérum ZEBOV-GP-positif pour construire une courbe d’étalonnage sur chaque plaque. On a calculé des unités ELISA arbitraires pour chaque échantillon en utilisant les valeurs de la DO de l’échantillon et les paramètres de la courbe d’étalonnage. On a déterminé un seuil de séropositivité de 166 unités ELISA à partir de la moyenne d’unités ELISA + 3 ET de 59 échantillons naïfs testés dans le dosage. (0167) On a mesuré les réponses immunitaires humorales pour tous les sujets volontaires jusqu’à 28 jours après administration du vaccin de rappel (B+28) et pour 17 des 32 sujets volontaires jusqu’à 90 jours après administration du vaccin de rappel (B+90) (G1 : n = 7. G2 : n = 5. G3 : n = 3, G4 : n = 2). Les échantillons B+90 restants ont été analysés une fois terminée la totalité des visites. (0168) Les FIG. 1 et 2 sont des graphiques montrant la cinétique de la réponse immunitaire humorale spécifique de GP EBOV. évaluée par ELISA. La FIG. 1 récapitule des données obtenues des groupes test G1 et G3. La FIG. 2 récapitule les données obtenues des groupes test G2 et G4. Les concentrations ELISA en moyenne géométrique sont exprimées en unités ELISA par ml, conjointement avec leur intervalle de confiance à 95%. Les candidats du groupe 1 (Gl) ont reçu une immunisation amorce avec ChAd3 exprimant la GP EBOV, suivie d’un rappel avec Ad26 exprimant la GP EBOV, 4 semaines après. Les candidats du groupe 2 (G2) ont reçu une immunisation amorce avec Ad26, suivie d’un rappel avec ChAd3, 4 semaines après. Les candidats du groupe 3 (G3) ont reçu une immunisation amorce avec ChAd3 suivie d’un rappel avec Ad26 8 semaines plus tard. Les candidats du groupe 4 (G4) ont reçu une immunisation amorce avec Ad26 suivie d’un rappel avec ChAd3 8 semaines plus tard. (0169) Comme il est montré sur les graphiques des FIG. 1 et 2, des réponses immunitaires ont été induites à la fois par les vecteurs adénoviraux issus de chimpanzé et les vecteurs adénoviraux d’origine humaine, exprimant la GP d’Ebola Zaïre. Π est important de noter que les réponses augmentaient sensiblement après le rappel avec le vecteur hétérologue. Au pic de la réponse immunitaire observée 2 semaines après le rappel, les titres d’anticorps spécifiques de GP EBOV augmentaient de 3,7 à 7,6 fois par rapport au taux pré-rapppel lorsque l’immunisation de rappel était administrée 4 semaines après l’immunisation amorce (Gl et G2) et de 8,6 à 12,4 fois lorsqu’elle était administrée 8 semaines après (G3 et G4). Globalement, on a constaté une réponse immunitaire légèrement supérieure lorsqu’un plus long intervalle entre amorce et rappel était utilisé. Π est intéressant de noter qu’à 90 jours post-immunisation de rappel (le dernier moment analysé), les réponses immunitaires humorales spécifiques de GP EBOV étaient maintenues à un taux excédant la réponse constatée après l’immunisation amorce. (0170) En conclusion, des schémas amorce-rappel hétérologues avec utilisation d’un vecteur de vaccin adénoviral issu de chimpanzé et d’un vecteur de vaccin adénoviral d’origine humaine sont capables d’induire une réponse immunitaire forte et de longue durée, indépendamment de l’ordre d’administration des vaccins en tant qu’immunisation amorce ou de rappel.
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<212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> wild-type (WT) Ebola glycoprotein (GP) <400> 1
Met Gly Val Thr Gly Ile Leu Gin Leu Pro Arg Asp Arg Phe Lys Arg 1 5 10 15
Thr Ser Phe Phe Leu Trp Val Ile Ile Leu Phe Gin Arg Thr Phe Ser 20 25 30
Ile Pro Leu Gly Val Ile His Asn Ser Thr Leu Gin Val Ser Asp Val 35 40 45
Asp Lys Leu Val Cys Arg Asp Lys Leu Ser Ser Thr Asn Gin Leu Arg 50 55 60
Ser Val Gly Leu Asn Leu Glu Gly Asn Gly Val Ala Thr Asp Val Pro 65 70 75 80
Ser Ala Thr Lys Arg Trp Gly Phe Arg Ser Gly Val Pro Pro Lys Val 85 90 95
Val Asn Tyr Glu Ala Gly Glu Trp Ala Glu Asn Cys Tyr Asn Leu Glu 100 105 110
Ile Lys Lys Pro Asp Gly Ser Glu Cys Leu Pro Ala Ala Pro Asp Gly 115 120 125
Ile Arg Gly Phe Pro Arg Cys Arg Tyr Val His Lys Val Ser Gly Thr 130 135 140
Gly Pro Cys Ala Gly Asp Phe Ala Phe His Lys Glu Gly Ala Phe Phe 145 150 155 igo
Leu Tyr Asp Arg Leu Ala Ser Thr Val Ile Tyr Arg Gly Thr Thr Phe 165 170 175
Ala Glu Gly Val Val Ala Phe Leu Ile Leu Pro Gin Ala Lys Lys Asp 180 185 190
Phe Phe Ser Ser His Pro Leu Arg Glu Pro Val Asn Ala Thr Glu Asp 195 200 205
Pro Ser Ser Gly Tyr Tyr Ser Thr Thr Ile Arg Tyr Gin Ala Thr Gly 210 215 220
Phe Gly Thr Asn Glu Thr Glu Tyr Leu Phe Glu Val Asp Asn Leu Thr 225 230 235 240
Tyr Val Gin Leu Glu Ser Arg Phe Thr Pro Gin Phe Leu Leu Gin Leu 245 250 255
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Leu Ile Trp Lys Val Asn Pro Glu Ile Asp Thr Thr Ile Gly Glu Trp 275 280 285
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Glu Leu Ser Phe Thr Val Val Ser Asn Gly Ala Lys Asn Ile Ser Gly 305 310 315 320
Gin Ser Pro Ala Arg Thr Ser Ser Asp Pro Gly Thr Asn Thr Thr Thr 325 330 335
Glu Asp His Lys Ile Met Ala Ser Glu Asn Ser Ser Ala Met Val Gin 340 345 350
Val His Ser Gin Gly Arg Glu Ala Ala Val Ser His Leu Thr Thr Leu 355 360 365
Ala Thr Ile Ser Thr Ser Pro Gin Ser Leu Thr Thr Lys Pro Gly Pro 370 375 380
Asp Asn Ser Thr His Asn Thr Pro Val Tyr Lys Leu Asp Ile Ser Glu 385 390 395 400
Ala Thr Gin Val Glu Gin His His Arg Arg Thr Asp Asn Asp Ser Thr 405 410 415
Ala Ser Asp Thr Pro Ser Ala Thr Thr Ala Ala Gly Pro Pro Lys Ala 420 425 430
Glu Asn Thr Asn Thr Ser Lys Ser Thr Asp Phe Leu Asp Pro Ala Thr 435 440 445
Thr Thr Ser Pro Gin Asn His Ser Glu Thr Ala Gly Asn Asn Asn Thr 450 455 460
His His Gin Asp Thr Gly Glu Glu Ser Ala Ser Ser Gly Lys Leu Gly 465 470 475 480
Leu Ile Thr Asn Thr Ile Ala Gly Val Ala Gly Leu Ile Thr Gly Gly 485 490 495
Arg Arg Thr Arg Arg Glu Ala Ile Val Asn Ala Gin Pro Lys Cys Asn 500 505 510
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Leu Ala Trp Ile Pro Tyr Phe Gly Pro Ala Ala Glu Gly Ile Tyr Ile 530 535 540
Glu Gly Leu Met His Asn Gin Asp Gly Leu Ile Cys Gly Leu Arg Gin 545 550 555 560
Leu Ala Asn Glu Thr Thr Gin Ala Leu Gin Leu Phe Leu Arg Ala Thr 565 570 575
Thr Glu Leu Arg Thr Phe Ser Ile Leu Asn Arg Lys Ala Ile Asp Phe 580 585 590
Leu Leu Gin Arg Trp Gly Gly Thr Cys His Ile Leu Gly Pro Asp Cys 595 600 605
Cys Ile Glu Pro His Asp Trp Thr Lys Asn Ile Thr Asp Lys Ile Asp 610 615 620
Gin Ile Ile His Asp Phe Val Asp Lys Thr Leu Pro Asp Gin Gly Asp 625 630 635 640
Asn Asp Asn Trp Trp Thr Gly Trp Arg Gin Trp Ile Pro Ala Gly Ile 645 650 655
Gly Val Thr Gly Val Ile Ile Ala Val Ile Ala Leu Phe Cys Ile Cys 660 665 670
Lys Phe Val Phe 675
<210> 2 <211> 2028 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DNA wild-type (WT) Ebola glycoprotein (GP) <400> 2 atgggcgtga ccggcatcct gcagctgccc agagaccggt tcaagcggac cagcttcttc 60 ctgtgggtga tcatcctgtt ccagcggacc ttcagcatcc ccctgggcgt gatccacaac 120 agcaccctgc aggtgtccga cgtggacaag ctggtgtgcc gggacaagct gagcagcacc 180 aaccagctgc ggagcgtggg cctgaacctg gaaggcaatg gcgtggccac cgacgtgccc 240 agcgccacaa agagatgggg cttcagatcc ggcgtgcccc ccaaggtggt gaactatgag 300 gccggcgagt gggccgagaa ctgctacaac ctggaaatca agaagcccga cggcagcgag 360 tgcctgcctg ccgctcctga tggcatcaga ggcttccccc ggtgcagata cgtgcacaag 420 gtgtccggca ccggcccctg tgccggcgat ttcgccttcc acaaagaggg cgcctttttc 480 ctgtacgacc ggctggccag caccgtgatc taccggggca ccaccttcgc cgaaggcgtg 540 gtggccttcc tgatcctgcc ccaggccaag aaggacttct tcagcagcca ccccctgcgc 600 gagcccgtga atgccaccga ggatcccagc agcggctact acagcaccac catcagatac 660 caggccaccg gcttcggcac caacgagaca gagtacctgt tcgaggtgga caacctgacc 720 tacgtgcagc tggaaagccg gttcaccccc cagtttctgc tgcagctgaa cgagacaatc 780 tacaccagcg gcaagcggag caacaccaca ggcaagctga tctggaaagt gaaccccgag 840 atcgacacca caatcggaga gtgggccttc tgggagacaa agaagaacct gacccggaag 900 atcagaagcg aggaactgag cttcaccgtg gtgtccaacg gcgccaagaa catcagcggc 960 cagagccctg ccagaacaag cagcgacccc ggcaccaaca ccaccaccga ggaccacaag 1020 atcatggcca gcgagaacag cagcgccatg gtgcaggtgc acagccaggg cagagaagcc 1080 gccgtgtccc acctgaccac cctggccacc atcagcacca gcccccagag cctgaccacc 1140 aagcctggcc ccgacaactc cacccacaac acccccgtgt acaagctgga catcagcgag 1200 gccacccagg tggaacagca ccacagacgg accgacaacg acagcaccgc cagcgatacc 1260 ccctccgcca caacagctgc cggacctccc aaggccgaga acaccaacac ctccaagagc 1320 accgactttc tggaccccgc caccaccaca agcccccaga accactccga gacagccggc 1380 aacaacaaca cccaccatca ggacaccggc gaggaaagcg ccagctctgg caagctgggc 1440 ctgatcacca acacaatcgc cggcgtggcc ggactgatca ccggcggcag aagaaccaga 1500 cgcgaggcca tcgtgaacgc ccagcccaag tgcaacccca acctgcacta ctggaccacc 1560 caggacgagg gcgctgccat tggcctggcc tggatccctt acttcggccc tgccgccgag 1620 ggcatctaca tcgagggcct gatgcacaac caggacggcc tgatctgcgg cctgcggcag 1680 ctggccaacg aaaccacaca ggccctgcag ctgttcctgc gggccaccac agagctgcgg 1740 accttctcca tcctgaacag aaaggccatc gactttctgc tgcagcgctg gggcggcaca 1800 tgtcacatcc tgggccccga ctgctgcatc gagccccacg actggaccaa gaatatcacc 1860 gacaagatcg accagatcat ccacgacttc gtggacaaga ccctgcccga ccagggcgac 1920 aacgataact ggtggacagg ctggagacag tggatccctg ccggcattgg cgtgacaggc 1980 gtgatcattg ccgtgatcgc cctgttctgc atctgcaagt tcgtgttc 2028 <210> 3 <211> 676
<212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ebola glycoprotein (GP) <400> 3
Met Gly Val Thr Gly Ile Leu Gin Leu Pro Arg Asp Arg Phe Lys Arg 1 5 10 15
Thr Ser Phe Phe Leu Trp Val Ile Ile Leu Phe Gin Arg Thr Phe Ser 20 25 30
Ile Pro Leu Gly Val Ile His Asn Ser Thr Leu Gin Val Ser Asp Val 35 40 45
Asp Lys Leu Val Cys Arg Asp Lys Leu Ser Ser Thr Asn Gin Leu Arg 50 55 60
Ser Val Gly Leu Asn Leu Glu Gly Asn Gly Val Ala Thr Asp Val Pro 65 70 75 80
Ser Ala Thr Lys Arg Trp Gly Phe Arg Ser Gly Val Pro Pro Lys Val 85 90 95
Val Asn Tyr Glu Ala Gly Glu Trp Ala Glu Asn Cys Tyr Asn Leu Glu 100 105 no
Ile Lys Lys Pro Asp Gly Ser Glu Cys Leu Pro Ala Ala Pro Asp Gly 115 120 125
Ile Arg Gly Phe Pro Arg Cys Arg Tyr Val His Lys Val Ser Gly Thr 130 135 140
Gly Pro Cys Ala Gly Asp Phe Ala Phe His Lys Glu Gly Ala Phe Phe 145 150 155 160
Leu Tyr Asp Arg Leu Ala Ser Thr Val Ile Tyr Arg Gly Thr Thr Phe 165 170 175
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Gly Val Thr Gly Val Val Ile Ala Val Ile Ala Leu Phe Cys Ile Cys 660 665 670
Lys Phe Val Phe 675

Claims (21)

  1. REVENDICATIONS
    1. Combinaison de vaccin comprenant : a. une première composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’au moins un vecteur adénoviral humain comprenant un premier acide nucléique codant une première protéine antigénique d’un filovirus, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; et b. une seconde composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur adénoviral simien comprenant un second acide nucléique codant une seconde protéine antigénique du filovirus, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; l’une des compositions étant une composition d’amorçage et l’autre composition étant une composition de rappel.
  2. 2. Combinaison de vaccin selon la revendication 1, dans laquelle la première protéine antigénique comprend la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1 ou SEQ ID n° 3.
  3. 3. Combinaison de vaccin selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle la seconde protéine antigénique comprend la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1 ou SEQ ID n° 3.
  4. 4. Combinaison de vaccin selon l’une quelconque des revendications 1 à 3, dans laquelle le vecteur adénoviral humain est un vecteur rAd26.
  5. 5. Combinaison de vaccin selon l’une quelconque des revendications 1 à 4, dans laquelle le vecteur adénoviral simien est un vecteur adénoviral de chimpanzé.
  6. 6. Combinaison de vaccin selon la revendication 5, dans laquelle le vecteur adénoviral de chimpanzé est un vecteur ChAd3.
  7. 7. Combinaison de vaccin selon l’une quelconque des revendications 1 à 6, pour utilisation dans la génération d’une réponse immunitaire protectrice contre au moins un sous-type de filovirus, dans laquelle la première composition est utilisée pour l’amorçage de ladite réponse immunitaire et la seconde composition est utilisée pour le rappel de ladite réponse immunitaire.
  8. 8. Combinaison de vaccin selon l’une quelconque des revendications 1 à 6, pour utilisation dans la génération d’une réponse immunitaire protectrice contre au moins un sous-type de filovirus, dans laquelle la seconde composition est utilisée pour l’amorçage de ladite réponse immunitaire et la première composition est utilisée pour le rappel de ladite réponse immunitaire.
  9. 9. Procédé d’induction d’une réponse immunitaire contre un filovirus chez un sujet, le procédé comprenant : a. l’administration au sujet d’une première composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur adénoviral humain comprenant un premier acide nucléique codant une première protéine antigénique du filovirus ; et b. l’administration au sujet d’une seconde composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur adénoviral simien comprenant un second acide nucléique codant une seconde protéine antigénique du filovirus, les étapes (a) et (b) étant effectuées dans cet ordre ou dans l’ordre inverse.
  10. 10. Procédé selon la revendication 9, dans lequel la première protéine antigénique comprend la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1 ou SEQ ID n° 3.
  11. 11. Procédé selon la revendication 9 ou 10, dans lequel la seconde protéine antigénique comprend la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1 ou SEQ ID n° 3.
  12. 12. Procédé selon l’une quelconque des revendications 9 à 11, dans lequel le vecteur adénoviral humain est un vecteur rAd26.
  13. 13. Procédé selon l’une quelconque des revendications 9 à 12, dans lequel le vecteur adénoviral simien est un vecteur ChAd3.
  14. 14. Procédé selon l’une quelconque des revendications 9 à 13, dans lequel l’étape (b) est effectuée 1-15 semaines après l’étape (a).
  15. 15. Nécessaire comprenant : a. une première composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’au moins un vecteur adénoviral humain comprenant un premier acide nucléique codant une première protéine antigénique d’un filovirus, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; et b. une seconde composition comprenant une quantité immunologiquement efficace d’un vecteur adénoviral simien comprenant un second acide nucléique codant une seconde protéine antigénique, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable ; l’une des compositions étant une composition d’amorçage et l’autre composition étant une composition de rappel.
  16. 16. Nécessaire selon la revendication 15, dans lequel la première protéine antigénique comprend la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1 ou SEQID n° 3.
  17. 17. Nécessaire selon la revendication 15 ou 16, dans lequel la seconde protéine antigénique comprend la séquence d’acides aminés de SEQ ID n° 1 ou SEQ ID n° 3.
  18. 18. Nécessaire selon l’une quelconque des revendications 15 à 17, dans lequel le vecteur adénoviral humain est un vecteur rAd26.
  19. 19. Nécessaire selon l’une quelconque des revendications 15 à 18, dans lequel le vecteur adénoviral simien est un vecteur ChAd3.
  20. 20. Nécessaire selon l’une quelconque des revendications 15 à 19, pour utilisation dans la génération d’une réponse immunitaire protectrice contre au moins un sous-type de filovirus, dans lequel la première composition est utilisée pour l’amorçage de ladite réponse immunitaire et la seconde composition est utilisée pour le rappel de ladite réponse immunitaire.
  21. 21. Nécessaire selon l’une quelconque des revendications 15 à 19, pour utilisation dans la génération d’une réponse immunitaire protectrice contre au moins un sous-type de filovirus, dans lequel la seconde composition est utilisée pour l’amorçage de ladite réponse immunitaire et la première composition est utilisée pour le rappel de ladite réponse immunitaire.
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