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procédé en vue de provoquer la regression de la leucémie et l'Inhibition de la croissance des tumeurs chez les mammifères.
Sommaire de l'invention
La présente invention concerne de nouveaux 5-pyrimidine-carboxamides substitués par un groupe N-fluorophényle et répondant ä la formule :
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dans laquelle R. représente un atome d'hydrogène ou un radical carbohydrate du type décrit ci-dessus, tandis que l'un des radicaux R3 ou R4 représente un atome de fluor et l'autre, un atome d'hydrogène.
L'invention concerne, en outre, des mélanges des composés 1, 2, 3, 4-tétrahydro indiqués avec les
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composés 3, 4-dihydro correspondants répondant ä la formule :
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dans laquelle R., R.. et R4 ont les significations définies ci-dessus, en proportions telles que le mélange exerce une activité contre la leucémie et contre les tumeurs.
On a trouvé que les composés tétrahydro de formule I et les mélanges contenant au moins environ 5% molaires, de préférence, environ 25% molaires des composés tétrahydro en mélange avec les composés dihydro correspondants ou des sels d'addition pharmacologiquement acceptables des composes dihydro de formule (II) étaient dès lors actifs in vivo contre la leucémie L1210 implantée par voie intraperitoneale dans le protocole d'essai 3LE31 du "National Cancer Institute" (NCI), comme décrit plus en détail ci-après.
Les composés tétrahydro de la présente invention ne forment pas de sels d'addition. Toutefois, les composés dihydro (que l'on peut y mélanger) forment assurément des sels d'addition avec une variété de réactifs formateurs de sels organiques et inorganiques pharmacologiquement acceptables. En général, les sels d'addition sont des solides cristallins qui sont relativement insolubles à la fois dans des solvants polaires tels que l'eau, le méthanol et l'ethanol, ainsi que des solvants organiques non polaires tels que l'ether diéthylique, le benzène, le toluène et analogues. Ils sont quelque peu solubles dans des solvants aprotiques tels que le dimethylformamide et le diméthylsulfoxyde.
D'autre part, lorsque R1 représente un radical carbohydrate, il peut etre un groupe furanosyle (par exemple, ribofuranosyle), un groupe pyranosyle (par exemple, arabinopyranosyle, glucopyranosyle ou galactopyranosyle), leurs dérivés déoxy ou leurs analogues aliphatiques (par exemple, les groupes hydroxyalcoxyalkyle ou polyhydroxyalkyle contenant 2 ä 12
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atomes de carbone dans chacune de leurs fractions alcoxy et alkyle, notamment le groupe 2-hydroxy- éthoxyméthyle ou le groupe 2, 3-dihydroxypropyle).
Telle qu'elle est utilisée dans la présente spécification, l'expression "radical carbohydrate" désigne les groupes cycliques et acycliques qui forment des pyrimidine-nucléosides ou les pseudo-nucléosides, par exemple, des matières comportant ä la fois les groupes cycliques et acycliques spécifiés ci-dessus.
Les 5-pyrimidine-carboxamides substitués par un groupe fluorophényle selon l'invention peuvent exister sous la forme représentée dans la formule (I) ci-dessus ou sous la forme de l'une quelconque de ses formes tautomères. Pour faciliter la compréhen- sion, les composés de l'invention seront uniquement représentés dans la présente spécification sous la forme indiquée dans la formule ci-dessus, mais il est entendu qu'ils englobent leurs formes tautomères ou leurs mélanges tautomères.
On peut préparer les 5-pyrimidine-carboxamides substitués par un groupe fluorophényle à partir des 2-thioxo-5-pyrimidine-carboxamides substitués par un groupe N- (2-fluorophényle) et par un groupe N- (4- fluorophenyle) correspondants, prepares comme décrit dans la demande de brevet des Etats-Unis d'Amerique n 699. 776 du 8 Février 1985 (5933 KONlA)) par réduction avec du nickel de Raney.
Les nouveaux composés de l'invention sont des agents cytotoxiques utiles pour provoquer la régression des affections malignes du sang telles que la leucémie, ainsi que pour inhiber la croissance de tumeurs solides et non solides. On peut les utiliser seuls ou en combinaison avec d'autres agents chimiothérapeutiques actifs à cet effet. Telles qu'elles sont utilisées dans la présente spécification,
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les expressions"régression"et"inhibition"compren- nent l'arrêt ou le ralentissement du développement de l'affection maligne ou d'une autre manifestation de la maladie, comparativement à l'evolution de cette maladie en absence de traitement.
On a trouvé que l'administration des nouveau) 5-pyrimidine-carboxamides substitués par un groupe fluorophényle à des souris, en quantités comprises entre environ 12 et 200 mg/kg, de préférence, entre environ 25 et 100 mg/kg du poids du corps était efficace pour provoquer la régression de la leucémie.
La relation mutuelle des posologies pour les mammifères d'autres tailles et d'autres espèces est décrite par Freireich, E. J. et a1., "Quantitative Comparison of Toxicity of Anti-Cancer Agents in Mouse, Rat, Hamster, Dog, Monkey and Man" (Comparaison quantitative de la toxicité des agents contre le cancer chez la souris, le rat, le hamster, le chien, le singe et l'homme), "Cancer Chemotherapy", Reg. 50, n 4. 219-244, mai 1966.
Le niveau posologique peut évidemment être réglé pour assurer une réponse thérapeutique optimale.
Par exemple, on peut administrer quotidiennement plusieurs doses fractionnées ou la dose peut etre réduite proportionnellement, suivant les exigences indiquées par la situation thérapeutique.
On peut judicieusement administrer les composés actifs par voie parentérale, intraperitoneale, intraveineuse ou orale. On peut préparer les solutions ou les dispersions des composes actifs dans de lleau, en melange judicieux avec un agent tensio-actif tel que l'hydroxypropylcellulose. On peut légalement préparer des dispersions dans le glycérol, les polyethylene-glycols liquides et leurs mélanges, ainsi que dans des huiles. Dans les conditions habituelles
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de conservation et d'utilisation, ces préparations contiennent un agent de conservation pour empêcher la croissance des micro-organismes.
Les formes pharmaceutiques appropriées pour être injectées englobent les solutions ou les dispersions aqueuses stériles, ainsi que les poudres stériles en vue de la préparation extemporanée de dispersions ou de solutions injectables stériles.
Pour ces utilisations, la forme pharmaceutique doit être stérile et elle doit avoir une fluidité suffisante pour permettre une injection äisee au moyen d'une seringue. Elle doit être stable dans les conditions de fabrication et de conservation et elle doit être préservée contre la contamination par des microorganismes tels que les bactéries et les champignons.
Le support peut être un solvant ou un milieu dispersant contenant, par exemple, de l'eau, de l'étha- nol, un polyol (par exemple, le glycerol, le propylèneglycol, le polyethylene-glycol liquide, ou analogues), leurs mélanges appropriés, ainsi que des huiles végétales. On peut maintenirla fluidité appropriée, par exemple, en utilisant un enrobage tel que la lécithine, en conservant la granularité requise des particules dans le cas d'une dispersion et en utilisant des agents tensio-actifs. On peut assurer la prévention contre l'action des micro-organismes grâce ä différents agents antibactériens et antifongiques, par exemple, le paraben, le chlorobutanol, le phénol, l'acide sorbique le thimerosal ou analogues.
Dans de nombreux cas, il peut être préférable d'incorporer des agents isotoniques, par exemple, le sucre ou le chlorure de sodium, dans la forme posologique. On peut assurer l'absorption prolongée des formulations injectables en y incorporant des agents retardant l'absorption, par exemple, le monostéarate d'aluminium et la gelatine.
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On prépare les solutions injectables stériles en incorporant le composé actif dans le solvant approprié, en mélange avec différents autres ingrédients énumérés ci-dessus, au besoin, en procédant ensuite à une stérilisation filtrée. En généra1, on prépare les dispersions en incorporant l'ingredient actif stérilisé dans un véhicule stérile contenant le milieu dispersant et n'importe quels autres ingrédients requis Lorsque, d'autre part, on utilise des poudres steriles pour préparer des solutions injectables stériles, il est préférable de soumettre une solution filtrée stérile des ingrédients désirés à un séchage sous vide ou à une lyophilisation, ce qui donne une poudre de l'ingredient actif plus n'importe quels ingrédients supplémentaires désirés.
Telle qu'elle est utilisée dans la présente spécification, l'expression "excipient ou support pratiquement non toxique, pharmaceutiquement acceptable"englobe les solvants, les milieux dispersants, les enrobages, les agents antibactériens et antifongiques, les agents isotoniques et retardant l'absorption, et analogues. L'utilisation de ces milieux et agents comme supports ou excipients pour ces substances pharmaceutiquement actives est bien connue dans la technique. Excepté dans la mesure où l'un ou l'autre agent ou milieu conventionnel est incompatible avec l'ingredient actif ou est toxique, on envisage son utilisation dans les formulations thérapeutiques de l'invention. On peut également incorporer, dans les compositions thérapeutiques, des ingrédients actifs supplémentaires.
11 peut être avantageux de formuler les compositions de l'invention en conformations posologiques unitaires en vue de faciliter l'administration et d'assurer l'uniformité de la posologie. L'expressior
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"conformation posologique unitaire", telle qu'elle est utilisée dans la présente spécification, désigne une unité physiquement discrète appropriée pour être utilisée sous forme d'une unité posologique pour les mammifères ä traiter ; chaque unité contient une quantité prédéterminée de la matière active, calculée pour produire l'effet thérapeutique désiré, en association avec le support pharmaceutiquement acceptable requis.
Les spécifications des conformations posologiques unitaires sont dictées par et dépendent directement de (a) les caractéristiques uniques de la matière active et l'effet thérapeutique particulier à atteindre et (b) les limitations inhérentes à la technique de combinaison de cette matière active pour le traitement de la maladie chez les sujets vivants souffrant d'un état pathologique, sans qu'il se produise des effets secondaires cytotoxiques excessifs.
On peut obtenir la régression de la leucémie ou 1'inhibition de la croissance des tumeurs avec les 5-pyrimidine-carboxamides de la présente invention, par exemple, en administrant quotidiennement le médicament pendant une période pouvant aller jusqu'à 5 ou 10 jours ou davantage. On peut également adopter une administration multiple du médicament ou une administration s'étendant sur n'importe quelle période de base désirée. L'ingrédient thérapeutiquement actif est dès lors administre en quantités suffisantes pour favoriser la régression et l'inhibition d'un développement ultérieur ou la régression de la leucémie ou des tumeurs en absence d'effets secondaires néfastes excessifs d'une nature cytotoxique.
Brève description des dessins
Les dessins annexés sont donnés en vue de faciliter davantage la description de l'invention.
Dans ces dessins :
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la figure 1 représente un spectre de résonance magnétique nucléaire du mélange des composés
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préparé comme décrit à l'exemple 1 ci-après la figure 2 représente un spectre de masse du melange de l'exemple 1 la figure 3 représente un spectre de résonance magnétique nucléaire du compose 3', 4-dihydro purifié de l'exemple témoin A; la figure 4 représente un spectre de masse du compose 3, 4-dihydro purifié de l'exemple témoin A ; la figure 5 représente un spectre de résonance magnétique nucléaire du mélange de l'exemple 2 ci-après ; et la figure 6 représente un spectre de masse du mélange de l'exemple 2.
Meilleur mode de mise en oeuvre de l'invention.
Parmi les 5-pyrimidine-carboxamides substitués par un groupe fluorophényle de l'invention, sont préférés le N-(4-fluorophényl)-1,2,3,4-tétrahydro-6hydroxy-4-oxo-5-pyrimidine-carboxamide et le N- (2fluorophényl) -1,2,3,4-tétrahydro-6-hydroxy-4-oxo-5pyrimidine-carboxamide, ainsi que des melanges contenant les composés précités conjointement avec leurs contre-parties 3, 4-dihydro. L'invention sera décrite plus en détail en se référant aux exemples spécifiques ci-après illustrant la préparation et la mise à l'épreuve de ces composés.
Exemple 1 Préparation de N- (2-fluorophényl)-1, 2,3, 4-tétrahydro- 6-hydroxy-4-oxo-5-pyrimidine-carboxamide en mélange avec le N-(s-fluorophényl)-3,4-dihydro-6-hydroxy-4oxo-5-pyrimidine-carboxamide.
A un melange de 200 ml d'ammoniaque aqueuse concentrée et de 200 ml d'eau, on a ajouté 7, 2 g de la matière de départ, ä savoir le N- (2-fluorophényl)-
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1, 2, 3, 4-tétrahydro-6-hydroxy-4-oxo-2-thioxo-S- pyrimidine-carboxamide (préparé de la même manière que le composé analogue dont la préparation est décrite dans l'exemple 1 de la demande de brevet U. S. précitée n 699. 776 A ce mélange, on a ajoute 26 g de nickel de Raney. On a chauffe mode- riment la suspension à 80-90oC pendant six heures et on l'a refroidie.
On a ajouté de l'acide chlorhydrique fort jusqu'à ce que le melange réactionnel soit complètement acide et que le nickel de Raney commence à se dissoudre. Lorsqu'il ne s'est plus produit de dégagement d'hydrogène, on a recueilli les solides, on les a lavés sur le gäteau de filtre avec de
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l'eau et de l'éthanol, puis on les aremis en suspen- sion dans 50 ml d'éthanol. On a ensuite porté la suspension à une température voisine du point d'ébul- lition, on a recueilli les solides, on les a lavés avec un peu d'éthanol et d'éther éthylique et on les a séchés.
Cette préparation a donné 4, 2 g d'une poudre de couleur grise n'ayant pas de point de fusion précis et se décomposant à 240 C et plus.
Le produit possédait les spectres de résonance magnétique nucléaire et de masse repris dans les figures 1 et 2 des dessins. On a trouvé qu'il contenait
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environ 30% en poids de N- tétrahydro-6-hydroxy-4-oxo-5-pyrimidine-carboxamide et environ 70% en poids de N- (2-fluorophenyl)-1, 2, 3, 4-dihydro-6-hydroxy-4-oxo-5-pyrimidine-carboxamide.
Les structures attribuées ä ces composes sont basées sur l'interprétation des spectres de résonance magnétique nucléaire et de masse des figures 1 et 2. En se référant tout d'abord à la figure 1, le spectre de résonance magnétique nucleaire montre tous les pics de resonance d'hydrogène qui sont théoriquement
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présents en se basant sur la structure du N- (2-fluoro- phényl)-3, 4-dihydro-6-hydroxy-4-oxo-5-pyrimidine- carboxamide. Est significatif le pic du singulet distinct ä 8,32 5, ce qui indique la présence d'hydrogène en position 2 du noyau pyrimidine ; il en est de même du multiplet large à 4,5 S, qui indique la présence de 2 atomes d'hydrogène en position 2 du noyau pyrimidine.
La présence de deux groupes de ces
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pics au meme moment met positivement en évidence l'existence des deux composes, dire, les structures 3, 4-dihydro et 1, 2, 3, 4-tétrahydro.
La structure ä pics multiples à 6,95-7, 75 S est due ä la presence d'atomes d'hydrogène aromatiques sur le noyau carboxamide substitué. La forme spécifique de ce complexe de pics est révélatrice de la position du substituant fluor. En figure 1, le fluor occupe la position 2 du noyau. (Comparer à la figure 5 où le fluor occupe la position 4).
Le spectre de masse illustré en figure 2 confirme l'attribution structurale basée sur les données du spectre de résonance magnétique nucléaire.
Les caractéristiques principales sont les deux pics "apparentés" (M) des composés (249 et 251 m/e) et leurs M + 1 équivalents (250 et 252 m/e) dus à la fixation de protons. Dans le diagramme de rupture, le pic le plus fort est de 111 m/e dus ä la fixation de , protons, commune à la fois aux composants dihydro et tétrahydro, de la fraction 2-fluoroanilino. Les fragments pyrimidine-carbonyle à 139 et 141 m/e sont également présents.
Jusqu'à présent, le composé 1, 2, 3, 4-tétrahydro n'a pas été obtenu sous forme pure et il existe uniquement sous forme de mélanges du composé précité et de produits réactionnels similaires, conjointement avec sa contre-partie 3, 4-dihydro.
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TEMOIN A N- (2-fluorophényl)-3,4-dihydro-6-hydroxy-4-oxo-5pyrimidine-carboxamide
On a préparé le N- (2-f1uorophény1) -3, 4- dihydro-6-hydroxy-4-oxo-5-pyrimidine-carboxamide purifié par oxydation contrôlée du composé 1, 2, 3, 4tétrahydro contenu dans le mélange de l'exemple 1, de la manière suivante :
On a mis 10 9 du melange en suspension dans 25 ml d'acide acétique glacial et on a ajouté
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prudemment 9 ml d'acide peracgtique à 40% dans de l'acide acétique. On a chauffe modérément le mélange pendant une demi-heure. On a ajouté de l'acide acétique glacial supplémentaire à 1a solution chaude, tout en chauffant jusqu'à ce que les solides soient pratiquement dissous. On a filtré la solution encore chaude, puis on l'a refroidie pendant une heure et on a recueilli les solides qui sont apparus.
On a obtenu 6, 2 g d'un solide microcristallin de couleur chamois pale, qui ne présentait pas de point de fusion precis et se décomposait en fondant ä environ 230 C.
L'elimination du compose 1, 2, 3, 4-tétrahydro a été indiquée par la disparition du pic à 4, 55 S et d'autres pics mineurs dans le spectre de résonance magnétique nucléaire, comme représenté en figure 3, ainsi que par l'absence du pic à 251 m/e dans le spectre de masse, comme représenté en figure 4.
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Exemple 2 N- (4-fluorophényl) 2, 3, 4-tétrahydro-6-hydroxy-4-oxo- 5-pyrimidine-carboxamide en mélange avec le N- (4-fluorphenyl 4-dihydro-6-hydroxy-4-oxo-5-pyrimidine-carbo- xamide
A un mélange de 200 ml d'ammoniaque aqueuse concentres et de 200 ml d'eau, on a ajoute 7,2 g de
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la matière de depart, ä savoir le N- (4-fluorophenyl)- 1, 2, 3, 4-tétrahydro-6-hydroxy-4-oxo-2-thioxo-5- pyrimidine-carboxamide (préparé de la même manière que le compose analogue dont la préparation est décrite dans l'exemple 1 de la demande de brevet n 699. 776). On y a ajouté 26 g de nickel de Raney.
On a chauffé modérément la suspension a 80-900C pendant six heures et on l'a refroidie. On a ajouté de l'acide chlorhydrique fort jusqu'à ce que le mélange réactionnel soit tout ä fait acide et que le nickel de Raney commence ä se dissoudre. Lorsqu'il ne s'est plus produit de dégagement d'hydrogène, on a recueilli les solides, on les a lavés sur le gâteau de filtre avec de l'eau et de l'éthanol, puis on les a remis en suspension dans 50 ml d'éthanol. On a ensuite porté la suspension à une temperature voisine du point d'ébullition. On a recueilli les solides, on les a lavés avec un peu d'éthanol et de l'ether éthylique et on les a séchés.
On a obtenu 4, 2 g d'une poudre de couleur grise n'ayant pas de point de fusion précis et se décomposant à 240 C et plus. Les spectres de résonance magnétique nucléaire et de masse du produit sont représentés dans les figures 5 et 6 en annexe.
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Les spectres étaient compatibles avec un mélange de N- (4-fluorophényl) 2, 3, 4-tétrahydro-6-hydroxy- 4-oxo-5-pyrimidine-carboxamide et de N- 3, -1,Spécifiquement, le spectre de résonance magnétique nucleaire de la figure 5 présente des pics ä 8,32 # et à 4, 5 S, ce qui indique la présence d'un seul atome d'hydrogène en position 2 du noyau pyrimidine, tout comme dans le composé 3, 4-dihydro, ainsi que de deux atomes d'hydrogène en position 2 du noyau pyrimidine, tout comme dans le compose 1, 2, 3, 4-tétrahydro. Du fait que ces deux structures ne peuvent
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exister simultanément dans la meme molecule indique la présence d'un melange de ces composés.
Cette conclusion est étayée par les données du spectre de masse de la figure 6. Dans ce spectre, apparaissent clairement deux pics M apparentés, un pour le composé 3, 4-dihydro (249 m/e) et un pour le composé
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1, (251 m/e).
Comparaison des activités contre la leucémie des composés de l'exemple 1 et du témoin A, ainsi que de l'exemple 2 avec les 5-pyrimidine-carboxamides substitués analogues dans la régression de la leucémie lympholde L1210 implantée par voie intrapéritonéale.
On a soumis des échantillons des composes d'essai de l'exemple 1, du témoin A et de l'exemple 2, ainsi que d'autres 5-pyrimidine-carboxamides substitués de structures similaires à des essais in vivo conformement au protocole d'essai 3LE31 NCI (protocole NCI 1. 100,"Cancer Chemotherapy Reports", partie 3, volume 3, n 2, septembre 1972) en vue de déterminer les effets des composés sur la leucémie L1210 implan- tée par voie intraperitoneale ("J. Nat'l. Cancer Inst." 13 (5) : 1328, 1953).
Chaque essai consistait ä implanter des cellules de leucémie ä six souris DBA/2, à raison d'un sexe par essai, les souris mâles pesant au minimum 18 g et les souris femelles, au minimum, 17 g, tandis que le poids de tous ces animaux d'essai se situait dans un intervalle de 3 g. On a administré les composes d'essai par des injections par voie intraperitoneale, en doses de 0, 1 ml de liquide ascitique dilué (105 cellules par'dose) en commençant un jour après l'implantation de la tumeur et en poursuivant les injections quotidiennement pendant neuf jours.
On a pesé les animaux d'essai et on a enre-
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gistré le nombre de survivants sur une base régulière au cours d'une période d'essai de trente jours. On a déterminé le rapport du temps de survie pour les animaux traités et les animaux témoins (T/C) sous forme d'un pourcentage.
On a effectué les essais à des niveaux posologiques variables en fonction des résultats obtenus avec chaque composé d'essai. On a déterminé statistiquement dans le système d'essai 3LE31 qu'une valeur initiale T/C au moins égale à 125% était nécessaire pour démontrer l'activité, tandis qu'une valeur T/C reproductible égale ou supérieure ä 125% justifiait une étude complementaire. On considère qu'une valeur T/C reproductible de 150% ou plus représente une activité significative.
Les résultats des essais pour les composés de l'exemple 1 et du témoin A, de l'exemple 2, ainsi que des composés analogues substitués par un groupe
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2-chlorophényle, 3-fluorophényle ou 2,
4-difluorophény-le et préparés de la même manière (témoins B-D) sont résumés au Tableau I. Dans le système d'essai 3LE31, les composés de l'exemple 1 ont montré une activité contre la leucémie (T/C % > 125%) ä une posologie aussi faible que 50 mg/kg (exemple 1). D'autre part, aucun des composés témoins n'a exercé d'activité.
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TRBLEMJ 1 TABLEAU I ACl'IVIT. ES crMPARATIVES aNmE IA mx > > ITE L 1210 IMPIANI'EE PAR vom
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Ccmposesd'essai (Mélanges : contraire) R-. "-C---- "T-C-. t )-- H m e N , . OH R, H H
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1, 2, 3, 4-tétrahydro 3, 4-dihydro Cümpose (mg/kg) (ng/kg) repe- tition) tition) tition) CCMPOSES ACTIFS Exemple 1 H H F H 200 250 220 260 230 267 100 147 154 153 153 179 50117 139 139 128 120 25 106 127 127 119 105 Exemple 2 H F H H 400 --- 148 200 139 127
100 104 113
50102111
25 98 Termin A H H F H 400 -- 97
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(3, 4-dihydro, 200 106 115 1 T 11 purifié) 25 6J
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Outre l'essai 3LE31, le mélange de l'exemple 1 a subi l'épreuve conforme au protocole du "National
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Cancer Institute" par voie intrapéritonéale) et au protocole NCI 3MBG5 (xénogreffe MX-1 du carcinome mammaire humain dans la glande 3PS31 (leucémie p388 implantéesurrénale), de la manière suivante :
Activité contre la leucémie du composé de l'exemple 1 dans la regression de la leucémie P388 implantée par voie intrapéritonéale
On a soumis des échantillons du mélange d'essai de l'exemple 1 à un essai in vivo suivant le protocole d'essai 3PS31 NCI ("Cancer Chemotherapy Reports", partie 3, volume 3, n"2, septembre 1972) pour déterminer l'action du mélange sur la leucémie P388 implantée par voie intraperitoneale ("American Journal of Pathology", 33 : nO 3, page 603, 1957).
Chaque essai consistait à implanter des cellules de leucémie à six souris DBA/2, à raison d'un sexe par essai, les souris mâles pesant au minimum 18 g et les souris femelles, au minimum, 17 g, tandis que le poids de tous les animaux d'essai se situait dans un intervalle de 3 g. On a administré les composés d'essai par des injections par voie intraperitoneale, en doses de 0, 1 ml de liquide ascitique dilué (106 cellules par dose) en commençant un jour après l'implantation de la tumeur et en poursuivant quotidiennement pendant cinq jours l'administration de ces produits synthétiques.
On a pesé les animaux d'essai et on a enregistré chaque jour le nombre de survivants pendant une période d'essai de trente jours. Le rapport de la durée de survie pour les animaux traités et les animaux témoins (T/C) a été déterminé sous forme d'un pourcentage.
On a effectué les essais ä des niveaux
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posologiques variables. Dans le système d'essai 3PS31, on a déterminé qu'une valeur T/C initiale au moins égale à ou supérieure à 120% pour les produits synthétiques était nécessaire pour démontrer une activité modérée. On considère qu'une valeur T/C reproductible de 175% ou plus représente une activité significative.
Le mélange de l'exemple 1 a exerce l'activiste suivante
TABLEAU II Activité des composés de l'exemple 1 dans la régression de la leucémie P388 implantée par voie intraperitoneale Dose (mg/kg) T/C % T/C % (répétition) 400 200 188 171 100 158 144
50 124 134
25 128 127
Le mélange de l'exemple 1 a exercé une activité contre la leucémie (T/C % > 120%) ä une posologie aussi faible que 25 mg/kg.
Essai comparatif du mélange de l'exemple 1 dans la régression de la xénogreffe MX-1 du carcinome mammaire humain dans la glande surrénale
On a soumis des échantillons du mélange d'essai de l'exemple 1 ä des essais in vivo conformément au protocole d'essai 3MBG5 NCI ("Cancer Chemotherapy Reports", partie 3, volume 3, nO 2, septembre 1972) pour déterminer les effets du mélange sur des carcinomes mammaires humains dans la glande surrénale (explant chirurgical prélevé en 1974 à partir d'une tumeur mammaire primaire chez une femme agee de 29 ans n'ayant subi aucune chimiothérapie préalable).
Chaque essai a consisté à implanter un fragment de tumeur sous l'enveloppe membraneuse du rein de souris thymiques Swiss ou athymiques élevées au hasard.
Chaque groupe d'essai comprenait six souris et chaque
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groupe témoin, 12 souris, à raison d'un sexe par essai, les souris mâles pesant au minimum 18 g et les souris femelles, au minimum, 17 g, tandis que le poids de tous les animaux d'essai se situait dans un intervalle de 4 g. On a administré les composés d'essai par injection par voie intrapéritonéale, en commençant un jour après l'implantation de la tumeur'et on a répété l'injection tous les quatre jours pour arriver ä un total de trois injections.
On a pesé les animaux d'essai et on a enregistré quotidiennement le nombre de souris mortes au cours d'une période d'essai de 11 jours. On a déterminé sous forme d'un pourcentage le rapport du changement de poids moyen des tumeurs pour les animaux traités et les animaux témoins (T/C).
On a effectué les essais ä des niveaux posologiques variables. On a determine qu'une valeur initiale T/C inférieure ou égale à 20% était nécessaire pour démontrer une activité modérée. Une valeur T/C reproductible inférieure ou égale ä 10% est considérée comme une activité significative.
Le mélange de l'exemple 1 a exercé l'activiste suivante : Activité des cnposes de l'exemple 1 dans la régression de laxénogreffe MX-1 du carcinome mammaire humain dans la glande surrénale
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<tb>
<tb> Dose <SEP> (mg/kg) <SEP> T/C <SEP> % <SEP> T/C <SEP> % <SEP> (répétition)
<tb> 800----
<tb> 400---58
<tb> 200 <SEP> 33 <SEP> 51
<tb> 100 <SEP> 55 <SEP> 67
<tb>
On a trouvé que le mélange de l'exemple 1 était inefficace dans le système d'essai 3MBG5.
D'après ce qui précède, on peut constater que, suivant la présente invention, on prévoit une classe de nouveaux 5-pyrimidine-carboxamides dont
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les membres exercent une activité cytotoxique impor- tante et provoquent la régression et/ou inhibent le développement de la leucémie et des tumeurs chez les mammifères. 11 est clair que différents changements peuvent etre apportés dans le procédé de préparation et l'utilisation, ainsi que dans la substitution particulière des composés thérapeutiquement actifs de l'invention. En conséquence, la description qui précède, doit être considérée comme donnée uniquement ä titre d'illustration et le cadre de l'invention doit être interprété conformément aux revendications en annexe.
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a method for causing the regression of leukemia and the inhibition of tumor growth in mammals.
Summary of the invention
The present invention relates to new 5-pyrimidine-carboxamides substituted with an N-fluorophenyl group and corresponding to the formula:
EMI1.1
in which R. represents a hydrogen atom or a carbohydrate radical of the type described above, while one of the radicals R3 or R4 represents a fluorine atom and the other, a hydrogen atom.
The invention further relates to mixtures of the indicated compounds 1, 2, 3, 4-tetrahydro with
EMI1.2
corresponding 3,4-dihydro compounds corresponding to the formula:
EMI1.3
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in which R., R .. and R4 have the meanings defined above, in proportions such that the mixture exerts activity against leukemia and against tumors.
It has been found that the tetrahydro compounds of formula I and the mixtures containing at least about 5 mol%, preferably about 25 mol% of the tetrahydro compounds in admixture with the corresponding dihydro compounds or pharmacologically acceptable addition salts of the dihydro compounds of formula (II) were therefore active in vivo against leukemia L1210 implanted intraperitoneally in the test protocol 3LE31 of the "National Cancer Institute" (NCI), as described in more detail below.
The tetrahydro compounds of the present invention do not form addition salts. However, the dihydro compounds (which can be mixed therein) certainly form addition salts with a variety of pharmacologically acceptable organic and inorganic salt-forming reagents. In general, addition salts are crystalline solids which are relatively insoluble in both polar solvents such as water, methanol and ethanol, as well as non-polar organic solvents such as diethyl ether, benzene, toluene and the like. They are somewhat soluble in aprotic solvents such as dimethylformamide and dimethyl sulfoxide.
On the other hand, when R1 represents a carbohydrate radical, it may be a furanosyl group (for example, ribofuranosyl), a pyranosyl group (for example, arabinopyranosyl, glucopyranosyl or galactopyranosyl), their deoxy derivatives or their aliphatic analogs (for example, hydroxyalkoxyalkyl or polyhydroxyalkyl groups containing 2 to 12
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carbon atoms in each of their alkoxy and alkyl fractions, in particular the 2-hydroxyethoxymethyl group or the 2, 3-dihydroxypropyl group).
As used in this specification, the term "carbohydrate radical" refers to the cyclic and acyclic groups which form pyrimidine-nucleosides or pseudo-nucleosides, for example, materials having both cyclic and acyclic groups specified above.
The 5-pyrimidine-carboxamides substituted by a fluorophenyl group according to the invention can exist in the form represented in formula (I) above or in the form of any one of its tautomeric forms. For ease of understanding, the compounds of the invention will only be represented in the present specification in the form indicated in the above formula, but it is understood that they include their tautomeric forms or their tautomeric mixtures.
The 5-pyrimidine-carboxamides substituted by a fluorophenyl group can be prepared from the corresponding 2-thioxo-5-pyrimidine-carboxamides substituted by a N- (2-fluorophenyl) group and by a corresponding N- (4-fluorophenyl) group, prepared as described in the patent application of the United States of America No. 699. 776 of February 8, 1985 (5933 KONlA)) by reduction with Raney nickel.
The novel compounds of the invention are cytotoxic agents useful for causing the regression of malignant blood conditions such as leukemia, as well as for inhibiting the growth of solid and non-solid tumors. They can be used alone or in combination with other chemotherapeutic agents active for this purpose. As used in this specification,
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the terms "regression" and "inhibition" include arresting or slowing down the development of the malignant disease or of another manifestation of the disease, compared with the course of this disease in the absence of treatment.
It has been found that administration of the new fluorophenyl substituted 5-pyrimidine carboxamides to mice in amounts between about 12 and 200 mg / kg, preferably between about 25 and 100 mg / kg by weight body was effective in causing regression of leukemia.
The mutual relationship of dosages for mammals of other sizes and other species is described by Freireich, EJ et al., "Quantitative Comparison of Toxicity of Anti-Cancer Agents in Mouse, Rat, Hamster, Dog, Monkey and Man" (Quantitative comparison of the toxicity of agents against cancer in mice, rats, hamsters, dogs, monkeys and humans), "Cancer Chemotherapy", Reg. 50, no 4. 219-244, May 1966.
The dosage level can obviously be adjusted to ensure an optimal therapeutic response.
For example, several divided doses may be administered daily or the dose may be reduced proportionally, depending on the requirements indicated by the therapeutic situation.
The active compounds can judiciously be administered by parenteral, intraperitoneal, intravenous or oral route. The solutions or dispersions of the active compounds can be prepared in water, by judicious mixing with a surfactant such as hydroxypropylcellulose. Dispersions can be legally prepared in glycerol, liquid polyethylene glycols and mixtures thereof, as well as in oils. Under the usual conditions
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storage and use, these preparations contain a preservative to prevent the growth of microorganisms.
Pharmaceutical forms suitable for injection include sterile aqueous solutions or dispersions, as well as sterile powders for the extemporaneous preparation of sterile dispersions or solutions for injection.
For these uses, the pharmaceutical form must be sterile and must have sufficient fluidity to allow easy injection using a syringe. It must be stable under the conditions of manufacture and storage and it must be preserved against contamination by microorganisms such as bacteria and fungi.
The carrier can be a solvent or dispersing medium containing, for example, water, ethanol, polyol (for example, glycerol, propylene glycol, liquid polyethylene glycol, or the like), their suitable mixtures, as well as vegetable oils. Appropriate fluidity can be maintained, for example, by using a coating such as lecithin, by maintaining the required granularity of the particles in the case of dispersion and by using surfactants. Prevention against the action of microorganisms can be achieved by various antibacterial and antifungal agents, for example, paraben, chlorobutanol, phenol, sorbic acid, thimerosal or the like.
In many cases, it may be preferable to incorporate isotonic agents, for example, sugar or sodium chloride, in the dosage form. Prolonged absorption of injectable formulations can be ensured by incorporating agents delaying absorption, for example, aluminum monostearate and gelatin.
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The sterile injectable solutions are prepared by incorporating the active compound into the appropriate solvent, mixed with various other ingredients listed above, if necessary, then performing filtered sterilization. In general, dispersions are prepared by incorporating the sterilized active ingredient in a sterile vehicle containing the dispersing medium and any other required ingredients. When, on the other hand, sterile powders are used to prepare sterile injectable solutions, is preferable to subject a sterile filtered solution of the desired ingredients to vacuum drying or lyophilization, which gives a powder of the active ingredient plus any additional desired ingredients.
As used in this specification, the term "substantially non-toxic, pharmaceutically acceptable excipient or carrier" includes solvents, dispersing media, coatings, antibacterial and antifungal agents, isotonic agents and agents delaying absorption , and the like. The use of these media and agents as carriers or excipients for these pharmaceutically active substances is well known in the art. Except to the extent that either conventional agent or medium is incompatible with the active ingredient or is toxic, consideration is given to its use in the therapeutic formulations of the invention. It is also possible to incorporate, in the therapeutic compositions, additional active ingredients.
It may be advantageous to formulate the compositions of the invention in unit dosage conformations in order to facilitate administration and to ensure uniformity of the dosage. The expressior
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"unit dosage form", as used in this specification, means a physically discrete unit suitable for use as a dosage unit for mammals to be treated; each unit contains a predetermined amount of the active ingredient, calculated to produce the desired therapeutic effect, in association with the required pharmaceutically acceptable carrier.
The specifications of the unitary dosage conformations are dictated by and depend directly on (a) the unique characteristics of the active ingredient and the particular therapeutic effect to be achieved and (b) the limitations inherent in the technique of combining this active ingredient for treatment of disease in living subjects with a medical condition, without excessive cytotoxic side effects.
Leukemia regression or tumor growth inhibition can be achieved with the 5-pyrimidine carboxamide of the present invention, for example, by administering the drug daily for up to 5 or 10 days or more. Multiple administration of the drug or administration spanning any desired base period can also be adopted. The therapeutically active ingredient is therefore administered in sufficient amounts to promote regression and inhibition of further development or regression of leukemia or tumors in the absence of excessive harmful side effects of a cytotoxic nature.
Brief description of the drawings
The accompanying drawings are given to further facilitate the description of the invention.
In these drawings:
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FIG. 1 represents a nuclear magnetic resonance spectrum of the mixture of the compounds
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prepared as described in example 1 below FIG. 2 represents a mass spectrum of the mixture of example 1 FIG. 3 represents a nuclear magnetic resonance spectrum of the 3 ', 4-dihydro compound purified from the control example AT; FIG. 4 represents a mass spectrum of compound 3, 4-dihydro purified from control example A; FIG. 5 represents a nuclear magnetic resonance spectrum of the mixture of example 2 below; and FIG. 6 represents a mass spectrum of the mixture of example 2.
Best mode for implementing the invention.
Among the 5-pyrimidine-carboxamides substituted by a fluorophenyl group of the invention, preferred are N- (4-fluorophenyl) -1,2,3,4-tetrahydro-6hydroxy-4-oxo-5-pyrimidine-carboxamide and N- (2fluorophenyl) -1,2,3,4-tetrahydro-6-hydroxy-4-oxo-5pyrimidine-carboxamide, as well as mixtures containing the above-mentioned compounds together with their 3, 4-dihydro counterparts. The invention will be described in more detail with reference to the specific examples below illustrating the preparation and testing of these compounds.
Example 1 Preparation of N- (2-fluorophenyl) -1, 2,3, 4-tetrahydro- 6-hydroxy-4-oxo-5-pyrimidine-carboxamide in mixture with N- (s-fluorophenyl) -3.4 -dihydro-6-hydroxy-4oxo-5-pyrimidine-carboxamide.
To a mixture of 200 ml of concentrated aqueous ammonia and 200 ml of water was added 7.2 g of the starting material, namely N- (2-fluorophenyl) -
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1, 2, 3, 4-tetrahydro-6-hydroxy-4-oxo-2-thioxo-S-pyrimidine-carboxamide (prepared in the same way as the analogous compound whose preparation is described in Example 1 of the application to the above-mentioned US Patent No. 699. 776 To this mixture was added 26 g of Raney nickel, the suspension was warmed moderately to 80-90oC for six hours and cooled.
Strong hydrochloric acid was added until the reaction mixture was completely acidic and Raney nickel began to dissolve. When no more hydrogen was produced, the solids were collected and washed on the filter cake with
EMI9.1
water and ethanol, then sprinkled in suspension in 50 ml of ethanol. The suspension was then brought to a temperature close to the boiling point, the solids were collected, washed with a little ethanol and ethyl ether and dried.
This preparation gave 4.2 g of a gray powder having no precise melting point and decomposing at 240 C and above.
The product had the nuclear magnetic resonance and mass spectra shown in Figures 1 and 2 of the drawings. We found that it contained
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about 30% by weight of N-tetrahydro-6-hydroxy-4-oxo-5-pyrimidine-carboxamide and about 70% by weight of N- (2-fluorophenyl) -1, 2, 3, 4-dihydro-6- hydroxy-4-oxo-5-pyrimidine-carboxamide.
The structures assigned to these compounds are based on the interpretation of the nuclear magnetic resonance and mass spectra of Figures 1 and 2. Referring first to Figure 1, the nuclear magnetic resonance spectrum shows all of the peaks. hydrogen resonance which are theoretically
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present based on the structure of N- (2-fluorophenyl) -3,4-dihydro-6-hydroxy-4-oxo-5-pyrimidine-carboxamide. Significant is the peak of the distinct singlet at 8.32 5, which indicates the presence of hydrogen in position 2 of the pyrimidine ring; the same is true for the broad multiplet at 4.5 S, which indicates the presence of 2 hydrogen atoms in position 2 of the pyrimidine ring.
The presence of two groups of these
EMI10.1
peaks at the same time positively highlights the existence of the two compounds, say, the structures 3, 4-dihydro and 1, 2, 3, 4-tetrahydro.
The multiple peak structure at 6.95-7.75 S is due to the presence of aromatic hydrogen atoms on the substituted carboxamide ring. The specific shape of this peak complex is indicative of the position of the fluorine substituent. In Figure 1, fluorine occupies position 2 of the nucleus. (Compare to Figure 5 where the fluorine occupies position 4).
The mass spectrum illustrated in Figure 2 confirms the structural assignment based on the data of the nuclear magnetic resonance spectrum.
The main characteristics are the two "related" peaks (M) of the compounds (249 and 251 m / e) and their equivalent M + 1 (250 and 252 m / e) due to the fixation of protons. In the rupture diagram, the strongest peak is 111 m / e due to the fixation of, protons, common to both the dihydro and tetrahydro components, of the 2-fluoroanilino fraction. The pyrimidine-carbonyl fragments at 139 and 141 m / e are also present.
So far, the compound 1, 2, 3, 4-tetrahydro has not been obtained in pure form and it only exists in the form of mixtures of the aforementioned compound and similar reaction products, together with its counterpart 3, 4-dihydro.
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WITNESS A N- (2-fluorophenyl) -3,4-dihydro-6-hydroxy-4-oxo-5pyrimidine-carboxamide
The N- (2-fluoropheny1) -3,4-dihydro-6-hydroxy-4-oxo-5-pyrimidine-carboxamide was prepared purified by controlled oxidation of the compound 1, 2, 3, 4tetrahydro contained in the mixture of l example 1, as follows:
10% of the mixture was suspended in 25 ml of glacial acetic acid and added
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carefully 9 ml of 40% peracgtic acid in acetic acid. The mixture was warmed moderately for half an hour. Additional glacial acetic acid was added to the hot solution, while heating until the solids were substantially dissolved. The still hot solution was filtered, then cooled for one hour and the solids which appeared were collected.
6.2 g of a solid microcrystalline pale buff color were obtained, which did not have a precise melting point and decomposed when it melted at about 230 C.
Elimination of compound 1, 2, 3, 4-tetrahydro was indicated by the disappearance of the peak at 4.55 S and other minor peaks in the nuclear magnetic resonance spectrum, as shown in Figure 3, as well as by the absence of the peak at 251 m / e in the mass spectrum, as shown in FIG. 4.
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Example 2 N- (4-fluorophenyl) 2, 3, 4-tetrahydro-6-hydroxy-4-oxo 5-pyrimidine-carboxamide in mixture with N- (4-fluorphenyl 4-dihydro-6-hydroxy-4- oxo-5-pyrimidine-carboxamide
To a mixture of 200 ml of concentrated aqueous ammonia and 200 ml of water, 7.2 g of
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the starting material, namely N- (4-fluorophenyl) - 1, 2, 3, 4-tetrahydro-6-hydroxy-4-oxo-2-thioxo-5-pyrimidine-carboxamide (prepared in the same manner as the analogous compound whose preparation is described in Example 1 of patent application No. 699,776). 26 g of Raney nickel were added thereto.
The suspension was warmed moderately to 80-900C for six hours and cooled. Strong hydrochloric acid was added until the reaction mixture was completely acidic and Raney nickel began to dissolve. When no more hydrogen was produced, the solids were collected, washed on the filter cake with water and ethanol, and then resuspended in 50 ml of ethanol. The suspension was then brought to a temperature close to the boiling point. The solids were collected, washed with a little ethanol and ethyl ether and dried.
4.2 g of a gray powder were obtained, having no precise melting point and decomposing at 240 ° C. and above. The nuclear magnetic resonance and mass spectra of the product are shown in Figures 5 and 6 in the appendix.
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The spectra were compatible with a mixture of N- (4-fluorophenyl) 2, 3, 4-tetrahydro-6-hydroxy-4-oxo-5-pyrimidine-carboxamide and N- 3, -1, specifically, the spectrum of nuclear magnetic resonance in Figure 5 has peaks at 8.32 # and 4.5 S, indicating the presence of a single hydrogen atom in position 2 of the pyrimidine ring, as in compound 3, 4 -dihydro, as well as two hydrogen atoms in position 2 of the pyrimidine ring, just like in the compound 1, 2, 3, 4-tetrahydro. Because these two structures cannot
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to exist simultaneously in the same molecule indicates the presence of a mixture of these compounds.
This conclusion is supported by the data of the mass spectrum of FIG. 6. In this spectrum, clearly appear two related M peaks, one for the compound 3, 4-dihydro (249 m / e) and one for the compound
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1, (251 m / e).
Comparison of the activities against leukemia of the compounds of Example 1 and of control A, as well as of Example 2 with the 5-pyrimidine-substituted carboxamide analogues in the regression of the lymphoid leukemia L1210 implanted by the intraperitoneal route.
Samples of the test compounds of Example 1, of Control A and of Example 2, as well as of other substituted 5-pyrimidine-carboxamides of similar structures were subjected to in vivo tests according to the protocol of NCLE 3LE31 trial (NCI protocol 1.100, "Cancer Chemotherapy Reports", part 3, volume 3, no 2, September 1972) to determine the effects of the compounds on L1210 leukemia implanted intraperitoneally ("J. Nat'l. Cancer Inst. "13 (5): 1328, 1953).
Each trial consisted of implanting leukemia cells in six DBA / 2 mice, one sex per trial, male mice weighing at least 18 g and female mice at least 17 g, while the weight of all these test animals fell within a range of 3 g. The test compounds were administered by intraperitoneal injections, in doses of 0.1 ml of diluted ascites fluid (105 cells per dose) starting one day after implantation of the tumor and continuing the injections daily for nine days.
The test animals were weighed and recorded
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recorded the number of survivors on a regular basis during a 30-day trial period. The survival time ratio for treated animals and control animals (T / C) was determined as a percentage.
The tests were carried out at varying dosage levels depending on the results obtained with each test compound. It was statistically determined in the 3LE31 test system that an initial T / C value of at least 125% was necessary to demonstrate the activity, while a reproducible T / C value of 125% or greater warranted an additional study. A reproducible T / C value of 150% or more is considered to represent significant activity.
The results of the tests for the compounds of Example 1 and of control A, of Example 2, as well as analogous compounds substituted by a group
EMI14.1
2-chlorophenyl, 3-fluorophenyl or 2,
4-difluoropheny and prepared in the same way (BD controls) are summarized in Table I. In the 3LE31 test system, the compounds of Example 1 showed activity against leukemia (T / C%> 125 %) at a dosage as low as 50 mg / kg (Example 1). On the other hand, none of the control compounds exerted any activity.
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TRBLEMJ 1 TABLE I ACl'IVIT. ES MAIN FEATURES IA mx>> ITE L 1210 IMPIANI'EE BY vom
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Test conditions (Mixtures: opposite) R-. "-C ----" T-C-. t) - H m e N,. OH R, H H
EMI15.3
1, 2, 3, 4-tetrahydro 3, 4-dihydro Cümpose (mg / kg) (ng / kg) repetition) tition) tition) ACTIVE CCMPOSES Example 1 HHFH 200 250 220 260 230 267 100 147 154 153 153 179 50 117 139 139 128 120 25 106 127 127 119 105 Example 2 HFHH 400 --- 148 200 139 127
100 104 113
50102111
25 98 Termin A H H F H 400 - 97
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(3, 4-dihydro, 200 106 115 1 T 11 purified) 25 6J
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dp m n 9 "" "" "" "S.
'QQO = 3 - S I I I c e c
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In addition to test 3LE31, the mixture of Example 1 underwent the test in accordance with the protocol of the "National
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Cancer Institute "intraperitoneally) and to the NCI protocol 3MBG5 (xenograft MX-1 of human mammary carcinoma in the 3PS31 gland (leukemia p388 implanted adrenal), as follows:
Leukemia activity of the compound of Example 1 in the regression of P388 leukemia implanted intraperitoneally
Samples of the test mixture of Example 1 were subjected to an in vivo test according to the test protocol 3PS31 NCI ("Cancer Chemotherapy Reports", part 3, volume 3, no. 2, September 1972) to determine the action of the mixture on P388 leukemia implanted intraperitoneally ("American Journal of Pathology", 33: nO 3, page 603, 1957).
Each trial consisted of implanting leukemia cells in six DBA / 2 mice, at the rate of one sex per trial, the male mice weighing at least 18 g and the female mice, at least 17 g, while the weight of all the test animals fell within a range of 3 g. Test compounds were administered by intraperitoneal injections, in doses of 0.1 ml of diluted ascites fluid (106 cells per dose) starting one day after implantation of the tumor and continuing daily for five days administration of these synthetic products.
The test animals were weighed and the number of survivors recorded daily during a thirty day test period. The survival time ratio for treated animals and control animals (T / C) was determined as a percentage.
Tests were carried out at levels
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variable dosage. In the 3PS31 test system, it was determined that an initial T / C value at least equal to or greater than 120% for synthetic products was necessary to demonstrate moderate activity. A reproducible T / C value of 175% or more is considered to represent significant activity.
The mixture of Example 1a exercises the following activist
TABLE II Activity of the compounds of Example 1 in the regression of P388 leukemia implanted intraperitoneally Dose (mg / kg) T / C% T / C% (repetition) 400 200 188 171 100 158 144
50 124 134
25 128 127
The mixture of Example 1 exerted activity against leukemia (T / C%> 120%) at a dosage as low as 25 mg / kg.
Comparative test of the mixture of Example 1 in the regression of the MX-1 xenograft of human mammary carcinoma in the adrenal gland
Samples of the test mixture of Example 1 were subjected to in vivo tests according to the 3MBG5 NCI test protocol ("Cancer Chemotherapy Reports", part 3, volume 3, No. 2, September 1972) to determine the effects of the mixture on human mammary carcinomas in the adrenal gland (surgical explant taken in 1974 from a primary mammary tumor in a 29 year old woman who had not undergone any prior chemotherapy).
Each trial consisted of implanting a tumor fragment under the membranous envelope of the kidney of thymic Swiss or athymic mice bred at random.
Each test group included six mice and each
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control group, 12 mice, one sex per test, male mice weighing at least 18 g and female mice, minimum 17 g, while the weight of all test animals was within an interval 4 g. The test compounds were administered by injection intraperitoneally, starting one day after implantation of the tumor, and the injection was repeated every four days to arrive at a total of three injections.
Test animals were weighed and the number of dead mice recorded daily during an 11 day test period. The ratio of the average tumor weight change for the treated animals and the control animals (T / C) was determined as a percentage.
The tests were carried out at varying dosage levels. It was determined that an initial T / C value less than or equal to 20% was necessary to demonstrate moderate activity. A reproducible T / C value less than or equal to 10% is considered a significant activity.
The mixture of Example 1 exercised the following activist: Activity of the compounds of Example 1 in the regression of the MX-1 laenograft of human mammary carcinoma in the adrenal gland
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<tb>
<tb> Dose <SEP> (mg / kg) <SEP> T / C <SEP>% <SEP> T / C <SEP>% <SEP> (repeat)
<tb> 800 ----
<tb> 400 --- 58
<tb> 200 <SEP> 33 <SEP> 51
<tb> 100 <SEP> 55 <SEP> 67
<tb>
The mixture of Example 1 was found to be ineffective in the 3MBG5 test system.
From the above, it can be seen that, according to the present invention, a class of new 5-pyrimidine-carboxamides is provided,
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the limbs exert significant cytotoxic activity and cause regression and / or inhibit the development of leukemia and tumors in mammals. It is clear that different changes can be made in the method of preparation and use, as well as in the particular substitution of the therapeutically active compounds of the invention. Consequently, the foregoing description is to be taken as an illustration only and the scope of the invention is to be interpreted in accordance with the appended claims.