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Procédé en vue de provoquer la régression de la leucémie et l'inhibition de la croissance des tumeurs chez les mammifères.
Sommaire de l'invention
La présente invention concerne les nouveaux 5-pyrimidine-carboxamides substitués par un groupe N-phényle et répondant à la formule :
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dans laquelle R. représente un atome d'hydrogène ou un radical carbohydrate comme décrit ci-dessus ; ainsi que les sels d'addition pharmacologiquement acceptables de ces composés.
L'invention concerne, en outre, des mélanges des composes 1,2, 3, 4-tétrahydro indiqués (ou de leurs sels) avec les composés 3, 4-dihydro correspondants répondant à la formule (II) :
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dans laquelle R1 a la signification définie ci-dessus, ou leurs sels d'addition pharmacologiquement acceptables, en proportions telles que le melange exerce une activité contre la leucémie et contre les tumeurs.
On a trouvé que les composés tétrahydro de formule (I) et les mélanges contenant au moins 5% molaires des composés tétrahydro en mélange avec les composés dihydro correspondants de formule (II) exerçaient une activité in vivo contre la leucémie L1210 implantée par voie intrapéritonéale dans le protocole d'essai 3LE31 du "National Cancer Institute" (NCI), comme décrit plus en détail ci-après.
Les composés tétrahydro de la présente invention ne forment pas de sels d'addition. Toutefois, les composés dihydro (que l'on peut y mélanger) forment assurément des sels d'addition avec différents réactifs formateurs de sels organiques et inorganiques pharmacologiquement acceptables. Les sels d'addition sont en général des solides cristallins qui sont relativement insolubles ä la fois dans les solvants polaires tels que l'eau, le méthanol et l'ethanol, et dans les solvants organiques non polaires tels que l'ether diéthylique, le benzene, le toluène et analogues. Ils sont quelque peu solubles dans des solvants aprotiques tels que le diméthylformamide et le diméthylsu1foxyde.
D'autre part, lorsque R1 représente un radical carbohydrate, il peut être un groupe furanosyle (par exemp1e, ribofuranosyle), un groupe pyranosyle (par exemple, arabinopyranosyle, glucopyranosyle ou galactopyranosyle), leurs derives déoxy ou leurs analogues aliphatiques (par exemple, des groupes hydroxyalcoxyalkyle ou polyhydroxyalkyle contenant 2 à 12 atomes de carbone dans chacune de leurs fractions alkyle et alcoxy, notamment le groupe
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2-hydroxyéthoxyméthy1e ou le groupe 2, 3-dihydroxy- propyle).
Telle qu'elle est utilisée dans la présente spécification, l'expression"radical carbohydrate" désigne des groupes cycliques et acycliques qui forment des pyrimidine-nucléosides ou les pseudonucléosides, par exemple, des matières comprenant à la fois les groupes cycliques et acycliques spécifiés ci-dessus.
Les N-phenyl-5-pyrimidine-carboxamides de l'invention peuvent se présenter sous la forme illustrée dans la formule (I) ci-dessus ou sous l'une quelconque de ses formes tautomères. Pour faciliter la compréhension, les composés de l'invention seront uniquement représentés dans la presente spécification sous la forme indiquée dans la formule ci-dessus, mais il est entendu qu'ils engloblent leurs tautomères ou leurs mélanges tautomères.
On peut préparer les N-phenyl-5-pyrimidine-
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carboxamides à partir des N-phényl-2-thioxo-S-pyri- midine-carboxamides correspondants préparés comme décrit dans la demande de brevet des Etats-Unis d'Amérique n 699. 776 du'8 février 1985 (5933 KON 1A), par réduction avec du nickel de Raney.
Les nouveaux composés de l'invention sont des agents cytotoxiques utiles pour provoquer la régression des affections malignes du sang telles que la leucémie, ainsi que pour inhiber la croissance de tumeurs solides et non solides. On peut les utiliser seuls ou en combinaison avec d'autres agents chimiothérapeutiques actifs ä cet effet. Telles qu'elles sont utilisées dans la présente spécification, les expressions"régression"et"inhibition" englobent l'arrêt ou le ralentissement du développement de l'affection maligne ou d'une autre manifestation de lamaladiecomparativementàl'évolutiondecettemaladie
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en absence de traitement.
On a trouvé que l'administration des nouveaux N-phényl-5-pyrimidine-carboxamides à des souris, en quantités comprises entre environ 12 et 200 mg/kg, de préférence, entre environ 25 et 100 mg/kg du poids du corps, était efficace pour provoquera régression de la leucémie. La relation mutuelle des posologies pour les mammifères d'autres tailles et d'autres espèces est décrite par Freireich, E. J. et al. "Quantitative comparison of Toxicity of anti-cancer agents in mouse, rat, hamster, dog, monkey and man" (= Comparaison quantitative de la toxicité des agents contre le cancer chez la souris, le rat, le hamster, le chien, le singe et l'homme), "Cancer Chemotherapy", Reg. 50, n 4. 219- 244, mai 1966.
On peut évidemment régler le niveau posologique pour obtenir la réponse thérapeutique optimale.
Par exemple, on peut administrer quotidiennement plusieurs doses fractionnées ou on peut réduire proportionnellement la dose suivant les exigences indiquées par la situation thérapeutique.
On peut judicieusement administrer les composés actifs par voie parentérale, intrapérito- néale, intraveineuse ou orale. On peut préparer des solutions ou des dispersions des composés actifs dans l'eau, judicieusement en mélange avec un agent tensio-actif tel que l'hydroxypropylcellulose. On peut également préparer des dispersions dans du glycérol, des polyéthylène-glycols liquides et leurs mélanges, ainsi que dans des huiles. Dans des
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conditions habituelles de conservation et d'utilisation, ces preparations contiennent un agent de conser- vation en vue d'empêcher la croissance de microorganismes.
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Les formes pharmaceutiques appropriées en vue d'être injectées englobent les dispersions ou les solutions aqueuses stériles, ainsi que les poudres stériles en vue de la préparation extemporanée de dispersions ou de solutions injectables stériles.
Pour ces utilisations, la forme pharmaceutique doit être stérile et elle doit avoir une fluidité suffisante pour permettre une injection aisée au moyen d'une seringue. Elle doit être stable dans les conditions de fabrication et de conservation et elle doit etre préservée contre la contamination par des micro-organismes tels que les bactéries et leschampignons.
Le support peut etre un solvant ou un milieu dispersant contenant, par exemple, de l'eau, de l'ethanol, un polyol (par exemple, le glycérol, le propylène-glycol, le polyéthylène-glycol liquide ou analogues), leurs mélanges appropriés, ainsi que des huiles végétales. On peut assurer la fluidité appropriée, par exemple, en utilisant un enrobage tel que la lécithine, en maintenant la granularité désirée des particules dans le cas d'une dispersion et en utilisant des agents tensio-actifs. On peut prévenir l'action des micro-organismes grâce ä différents agents antibactériens et antifongiques, par exemple, le paraben, le chlorobutanol, le phénol, l'acide sorbique, le thimérosal ou analogues.
Dans bon nombre de cas, iipeut etre preferable d'incorporer des agents isotoniques, par exemple, le sucre ou le chlorure de sodium, dans la conformation posologique.
On peut assurer l'absorption prolongée des formulations injectables en y incorporant des agents retardant l'absorption, par exemple, le monostéarate d'aluminium et la gélatine.
On prépare des solutions injectables stériles en incorporant le composé actif dans le
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solvant approprié, en mélange avec différents autres ingrédients énumérés ci-dessus, au besoin, en procédant ensuite ä une stérilisation filtrée. En général, on prépare les dispersions en incorporant l'ingredient actif stérilisé dans un véhicule stérile qui contient le milieu dispersant et n'importe quels autres ingrédients requis. Lorsque, d'autre part, on utilise des poudres stériles en vue de préparer des solutions injectables stérilets, il est préférable de soumettre une solution filtrée stérile des ingrédients désirés à un séchage sous vide ou ä une lyophilisation, pour obtenir une poudre de l'ingredient actif plus n'importe quels autres ingrédients désirés supplémentaires.
Telle qu'elle est utilisée dans la presente spécification, l'expression "excipient ou support pratiquement non toxique pharmaceutiquement acceptable" englobe les solvants, les milieux dispersants, les enrobages, les agents antibactériens et antifongiques, les agents isotoniques et retardant l'absorption et analogues. L'utilisation de ces milieux et agents en tant que supports ou excipients pour les substances pharmaceutiquement actives est bien connue dans la technique. Excepté dans la mesure où l'un ou l'autre agent ou milieu conventionnel est incompatible avec l'ingredient actif ou est toxique, on envisage son utilisation dans les formulations thérapeutiques de l'invention. On peut également incorporer des ingrédients actifs supplémentaires dans les compositions thérapeutiques.
11 peut être avantageux de formuler les compositions de l'invention en conformations posologiques unitaires en vue de faciliter l'administration et d'assurer l'uniformité de la posologie. L'expres- sion"conformation posologique unitaire" telle qu'elle
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est utilisée dans la présente spécification, désigne une unité physiquement discrète appropriée pour être utilisée sous forme d'une unité posologique pour les mammifères ä traiter ; chaque unité contient une quantité prédéterminée de la matière active calculée pour produire l'effet thérapeutique désiré, en association avec le support pharmaceutiquement acceptable requis.
Les spécifications des conformations posologiques unitaires sont dictées par et dépendent directement de (a) les caracteristiques uniques de la matière active et l'effet thérapeutique particulier si obtenir et (b) les limitations inhérentes à la technique de combinaison de cette matière active pour le traitement de la maladie chez des sujets vivants souffrant d'un état pathologique, sans qu'il se produise des effets secondaires cytotoxiques excessifs.
On peut assurer la régression de la leucémie ou l'Inhibition de la croissance des tumeurs avec les 5-pyrimidine-carboxamides de la présente invention, par exemple, en adoptant une administration quotidienne du médicament pendant une période pouvant atteindre 5 ou 10 jours, ou davantage. On peut également procéder à une administration multiple du médicament ou ä une administration basée sur n'importe quelle période désirée. Dès lors, on administre l'ingrédient thgrapeutiquement actif en quantités suffisantes pour favoriser l'inhibition du développement ultérieur ou la régression de la leucémie ou des tumeurs en absence d'effets secondaires néfastes excessifs d'une nature cytotoxique.
Brève description des dessins.
Pour faciliter davantage la description de l'invention, on se référera aux dessins annexés, dans lesquels :
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la figure 1 représente un spectre de résonance magnétique nucléaire du mélange de composés obtenu comme décrit ä l'exemple 1 ci-après; la figure 2 représente un spectre de masse du mélange de composés préparé comme décrit ä l'exemple 1 ci-après et la figure 3 représente un spectre de résonance magnétique nucleaire du composé 3, 4-dihydro purifié de l'exemple témoin A ci-après.
Meilleur mode de mise en oeuvre de l'invention-
Sont préférés parmi les 5-pyrimidine-carboxa- mides de l'invention, le N-phényl-1,2,3,4-tétrahydro- 6-hydroxy-4-oxo-5-pyrimidine-carboxamide et des mélanges contenant le composé précité conjointement avec sa contre-partie 3, 4-dihydro. L'invention sera décrite d'une manière plus détaillée en se référant aux exemples spécifiques ci-après illustrant la préparation et la mise ä l'épreuve de ces composés.
Exemple 1 Préparation de N-phényl-1, 2, 3, 4-tétrahydro-6-hydroxy- 4-oxo-5-pyrimidine-carboxamide en melange avec le N-phényl-3,4-dihydro-6-hydroxy-4-oxo-5-pyrimidinecarboxamide
A un melange de 400 ml d'ammoniaque aqueuse concentrée et de 400 ml d'eau, on a ajouté 13, 2 9 de la matière de départ N-phényl-1,2,3,4-tétrahydro- 6-hydroxy-4-oxo-2-thioxo-5-pyrimidine-carboxamide (préparé de la même manière que le composé analogue dont la préparation est décrite dans l'exemple 1 de la demande de brevet u. s. précitée nC 699. 776).
A la solution obtenue, on a ajouté une bouillie de nickel de Raney dans de l'eau (50 g). On a chauffé modérément la suspension ä reflux tout en agitant pendant quatre heures. Ensuite, on l'a refroidie et on a traité les solides (qui étaient constitués du
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produit et de matières inorganiques) avec de l'acide chlorhydrique dilué. On a filtre le mélange, on a extrait les solides avec une solution d'hydroxyde de sodium 2N, puis on a filtré. On a ensuite acidifie le filtrat avec de l'acide chlorhydrique dilué ; on a dissous une nouvelle fois le précipité obtenu dans de l'hydroxyde d'ammonium aqueux, on l'a purifié avec du charbon actif et de la célite et on l'a reprecipite avec de l'acide dilué.
On a recueilli le solide, on
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l'a avec de l'eau et on l'a Cette préparation a donné 5, de produit ayant un point de fusion de 200-208 C. Le produit laveprésentait le spectre de résonance magnétique nucléaire représenté dans la figure 1 des dessins. Son spectre de masse présentait des pics majeurs à 231 m/e et 233 m/e, indiquant ainsi la présence d'un mélange des composés tétrahydro et dihydro. On a trouvé que le produit contenait 39% en poids de N-phényl-1, 2, 3, 4-
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tétrahydro-6-hydroxy-4-oxo-5-pyrimidine-carboxamide et 61% en poids de N-phényl-3,
4-dihydro-6-hydroxy-4-oxo-5-pyrimidine-carboxamide.
Jusqu'à présent, le composé 1,2, 3, 4-tétra- hydro n'a pas été obtenu sous forme pure et il n'existe que sous forme de mélanges du compose ci-dessus et de produits réactionnels similaires, conjointement avec sa contre-partie 3, 4-dihydro.
TEMOIN A Préparation de N-phenyl-3, 4-dihydro-6-hydroxy-4-oxo- 5-pyrimidine-carboxamide.
On a préparé le N-phényl-3, 4-dihydro-6- hydroxy-4-oxo-S-pyrimidine-carboxamide purifié par
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oxydation contrôlés du composé 1, contenu dans le melange de l'exemple 1, de la manière suivante : On a mis 2, 8 g du mélange en suspension dans
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25 ml d'acide acétique glacial et on a ajouté 10 ml d'aeide peracétique à 40% dans de l'acide acétique. On a chauffé modérément la suspension pendant 10 minutes.
Lorsque la majeure partie des solides ont été dissous, on a filtré le mélange réactionnel encore chaud et on a refroidi la solution claire pendant une nuit. Un solide jaune a cristallisé. On a recueilli les cristaux, on les a lavés successivement avec un peu d'acide acétique et de l'ethanol et on les a séchés (point de fusion : 248 C, avec décomposition; rendement : 1, 4 g, 51%). Le spectre de résonance magnétique nucléaire (diméthylsulfoxyde) nla montre aucune trace du pic 4, 48 6 ; et les rapports des pics à 8, 35 S au multiplet aromatique étaient de 1 : 5, indiquant l'absence du composé tétrahydro.
Activité contre la leucémie des composés de l'exemple 1 dans la régression de la leucémie lymphoïde L1210 implantée par voie intraperitoneale.
On a soumis des échantillons des composés d'essai de l'exemple 1 ä des essais in vivo conformément au protocole d'essai 3LE31 NCI (protocole 1100 NCI,"Cancer Chemotherapy Reports' partie 3, volume 3, n 2, septembre 1972) pour determiner les effets exercés par les composés sur la leucémie L1210 implantée par voie intrapéritonéale (J. Nat'l. Cancer Inst.
13 (5) : 1328, 1953). Chaque essai consistait ä implanter des cellules de leucémie à six souris DBA/2, ä raison d'un sexe par essai, les souris mäles pesant au minimum 18 g et les souris femelles, au minimum 17 g, tandis que le poids de tous les animaux d'essai se situait dans un intervalle de 3 g. On a administré les composes d'essai sous forme d'injections par voie intrapéritonéale, en doses de 0, 1 ml de liquide ascitique dilué (105 cellules par dose), en commençant un jour après l'implantation de la tumeur et en
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continuant les injections quotidiennement pendant neuf jours.
On a pesé les animaux d'essai et on a enregistré le nombre de survivants sur une base régulière au cours d'une période d'essai de trente jours. Le rapport de la durée de survie pour les animaux traités et les animaux non traités (T/C) a été déterminé sous forme d'un pourcentage.
On a effectué les essais ä différents niveaux posologiques. On a déterminé statistiquement dans le système d'essai 3LE31 qu'une valeur T/C initiale au moins égale à 125% était nécessaire pour démontrer l'activité, tandis qu'une valeur T/C reproductible égale ou supérieure ä 125% justifiait une étude complémentaire. On considère qu'une valeur T/C reproductible de 150% ou plus représente une activité significative.
Les résultats des essais sont résumés dans le tableau suivant. Dans le système d'essai 3LE31, les composés de l'exemple 1 ont exercé une activité contre la leucémie (T/C % > 125%) ä une posologie aussi faible que50 mg/kg (exemple 1).
Tableau Activité contre la leucémie L1210 implantée par voie intrapéritonéale
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<tb>
<tb> Dose <SEP> T/C% <SEP> T/C%
<tb> (mg/kg) <SEP> (répétition)
<tb> 200 <SEP> 110 <SEP> 116
<tb> 100 <SEP> 186 <SEP> 185
<tb> 50 <SEP> 122 <SEP> 131
<tb> 25 <SEP> 116 <SEP> 107
<tb>
D'aprescequi precede, on constatera que, suivant la présente invention, on prévoit une classe de nouveaux 5-pyrimidine-carboxamides dont les membres exercent une activité cytotoxique importante et
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provoquent la régression et/ou inhibent le développement de la leucémie et des tumeurs chez les mammifères. 11 apparaitra clairement que différentes modifications peuvent être apportées dans le procédé de préparation et l'utilisation, ainsi que dans la substitution par- ticulière des composés thérapeutiquement actifs de l'invention.
En conséquence, la description qui précède, doit être considérée comme donnée uniquement ä titre d'illustration et le cadre de l'invention doit être interprété en fonction des revendications annexées.
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Method for causing regression of leukemia and inhibition of tumor growth in mammals.
Summary of the invention
The present invention relates to new 5-pyrimidine-carboxamides substituted by an N-phenyl group and corresponding to the formula:
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in which R. represents a hydrogen atom or a carbohydrate radical as described above; as well as the pharmacologically acceptable addition salts of these compounds.
The invention also relates to mixtures of the indicated 1,2, 3, 4-tetrahydro compounds (or their salts) with the corresponding 3, 4-dihydro compounds corresponding to formula (II):
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wherein R1 has the meaning defined above, or their pharmacologically acceptable addition salts, in such proportions that the mixture exerts activity against leukemia and against tumors.
It has been found that the tetrahydro compounds of formula (I) and the mixtures containing at least 5 mol% of the tetrahydro compounds in mixture with the corresponding dihydro compounds of formula (II) exert an activity in vivo against L1210 leukemia implanted intraperitoneally in the National Cancer Institute (NCI) test protocol 3LE31, as described in more detail below.
The tetrahydro compounds of the present invention do not form addition salts. However, the dihydro compounds (which can be mixed therein) certainly form addition salts with various reagents forming pharmacologically acceptable organic and inorganic salts. Addition salts are generally crystalline solids which are relatively insoluble both in polar solvents such as water, methanol and ethanol, and in non-polar organic solvents such as diethyl ether, benzene, toluene and the like. They are somewhat soluble in aprotic solvents such as dimethylformamide and dimethyl sulfoxide.
On the other hand, when R1 represents a carbohydrate radical, it may be a furanosyl group (for example, ribofuranosyl), a pyranosyl group (for example, arabinopyranosyl, glucopyranosyl or galactopyranosyl), their deoxy derivatives or their aliphatic analogs (for example, hydroxyalkoxyalkyl or polyhydroxyalkyl groups containing 2 to 12 carbon atoms in each of their alkyl and alkoxy fractions, in particular the group
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2-hydroxyethoxymethyl or the group 2, 3-dihydroxypropyl).
As used in this specification, the term "carbohydrate radical" refers to cyclic and acyclic groups which form pyrimidine nucleosides or pseudonucleosides, for example, materials comprising both the cyclic and acyclic groups specified herein -above.
The N-phenyl-5-pyrimidine-carboxamides of the invention can be in the form illustrated in formula (I) above or in any of its tautomeric forms. To facilitate understanding, the compounds of the invention will only be represented in the present specification in the form indicated in the formula above, but it is understood that they encompass their tautomers or their tautomeric mixtures.
We can prepare N-phenyl-5-pyrimidine-
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carboxamides from the corresponding N-phenyl-2-thioxo-S-pyridinine-carboxamides prepared as described in United States patent application no. 699. 776 of February 8, 1985 (5933 KON 1A), by reduction with Raney nickel.
The novel compounds of the invention are cytotoxic agents useful for causing the regression of malignant blood conditions such as leukemia, as well as for inhibiting the growth of solid and non-solid tumors. They can be used alone or in combination with other chemotherapeutic agents active for this purpose. As used in this specification, the terms "regression" and "inhibition" include arresting or slowing the development of the malignant disease or of another manifestation of the disease in comparison to the course of this disease.
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in the absence of treatment.
It has been found that administration of the new N-phenyl-5-pyrimidine carboxamide to mice in amounts of between about 12 and 200 mg / kg, preferably between about 25 and 100 mg / kg of body weight, was effective in causing regression of leukemia. The mutual relationship of dosages for mammals of other sizes and other species is described by Freireich, E. J. et al. "Quantitative comparison of Toxicity of anti-cancer agents in mouse, rat, hamster, dog, monkey and man" (= Quantitative comparison of the toxicity of agents against cancer in mice, rats, hamsters, dogs, monkeys and man), "Cancer Chemotherapy", Reg. 50, no. 4 219-244, May 1966.
The dosage level can obviously be adjusted to obtain the optimal therapeutic response.
For example, several divided doses may be administered daily or the dose may be reduced proportionally according to the requirements indicated by the therapeutic situation.
The active compounds can judiciously be administered by parenteral, intraperitoneal, intravenous or oral route. Solutions or dispersions of the active compounds can be prepared in water, suitably in admixture with a surfactant such as hydroxypropylcellulose. It is also possible to prepare dispersions in glycerol, liquid polyethylene glycols and their mixtures, as well as in oils. In
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under normal conditions of storage and use, these preparations contain a preservative to prevent the growth of microorganisms.
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Pharmaceutical forms suitable for injection include sterile aqueous dispersions or solutions, as well as sterile powders for the extemporaneous preparation of sterile dispersions or injectable solutions.
For these uses, the pharmaceutical form must be sterile and must have sufficient fluidity to allow easy injection using a syringe. It must be stable under the conditions of manufacture and conservation and it must be preserved against contamination by microorganisms such as bacteria and mushrooms.
The support can be a solvent or a dispersing medium containing, for example, water, ethanol, a polyol (for example, glycerol, propylene glycol, liquid polyethylene glycol or the like), their mixtures suitable, as well as vegetable oils. Appropriate fluidity can be ensured, for example, by using a coating such as lecithin, by maintaining the desired granularity of the particles in the case of a dispersion and by using surfactants. The action of microorganisms can be prevented by various antibacterial and antifungal agents, for example, paraben, chlorobutanol, phenol, sorbic acid, thimerosal or the like.
In many cases, it may be preferable to incorporate isotonic agents, for example, sugar or sodium chloride, in the dosage form.
Prolonged absorption of injectable formulations can be ensured by incorporating agents delaying absorption, for example, aluminum monostearate and gelatin.
Sterile injectable solutions are prepared by incorporating the active compound into the
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suitable solvent, mixed with various other ingredients listed above, if necessary, followed by filtered sterilization. In general, dispersions are prepared by incorporating the sterilized active ingredient in a sterile vehicle which contains the dispersing medium and any other required ingredients. When, on the other hand, sterile powders are used for the preparation of sterile injectable solutions, it is preferable to subject a sterile filtered solution of the desired ingredients to vacuum drying or lyophilization, to obtain a powder of the active ingredient plus any other additional desired ingredients.
As used in this specification, the term "pharmaceutically acceptable excipient or substantially non-toxic carrier" includes solvents, dispersing media, coatings, antibacterial and antifungal agents, isotonic agents and agents delaying absorption and analogues. The use of these media and agents as carriers or excipients for pharmaceutically active substances is well known in the art. Except to the extent that either conventional agent or medium is incompatible with the active ingredient or is toxic, consideration is given to its use in the therapeutic formulations of the invention. Additional active ingredients can also be incorporated into the therapeutic compositions.
It may be advantageous to formulate the compositions of the invention in unit dosage conformations in order to facilitate administration and to ensure uniformity of the dosage. The expression "unitary dosage conformation" as it
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is used in this specification, denotes a physically discrete unit suitable for use as a dosage unit for mammals to be treated; each unit contains a predetermined amount of the active ingredient calculated to produce the desired therapeutic effect, in association with the required pharmaceutically acceptable carrier.
The specifications of the unit dosage conformations are dictated by and directly depend on (a) the unique characteristics of the active ingredient and the particular therapeutic effect if obtaining and (b) the limitations inherent in the technique of combining this active ingredient for treatment disease in living subjects with a medical condition, without excessive cytotoxic side effects.
Leukemia regression or tumor growth inhibition can be achieved with the 5-pyrimidine carboxamide of the present invention, for example, by adopting daily administration of the drug for up to 5 or 10 days, or more. Multiple administration of the drug or administration based on any desired period can also be carried out. Therefore, the therapeutically active ingredient is administered in sufficient amounts to promote inhibition of further development or regression of leukemia or tumors in the absence of excessive harmful side effects of a cytotoxic nature.
Brief description of the drawings.
To further facilitate the description of the invention, reference is made to the appended drawings, in which:
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FIG. 1 represents a nuclear magnetic resonance spectrum of the mixture of compounds obtained as described in Example 1 below; FIG. 2 represents a mass spectrum of the mixture of compounds prepared as described in example 1 below and FIG. 3 represents a nuclear magnetic resonance spectrum of the purified 3,4-dihydro compound of control example A below. after.
Best mode for implementing the invention-
Preferred among the 5-pyrimidine-carboxamides of the invention, N-phenyl-1,2,3,4-tetrahydro-6-hydroxy-4-oxo-5-pyrimidine-carboxamide and mixtures containing the compound cited above together with its counterpart 3, 4-dihydro. The invention will be described in more detail with reference to the specific examples below illustrating the preparation and testing of these compounds.
Example 1 Preparation of N-phenyl-1, 2, 3, 4-tetrahydro-6-hydroxy-4-oxo-5-pyrimidine-carboxamide in mixture with N-phenyl-3,4-dihydro-6-hydroxy-4 -oxo-5-pyrimidinecarboxamide
To a mixture of 400 ml of concentrated aqueous ammonia and 400 ml of water, 13.29 of the starting material N-phenyl-1,2,3,4-tetrahydro-6-hydroxy-4 were added. -oxo-2-thioxo-5-pyrimidine-carboxamide (prepared in the same way as the analogous compound, the preparation of which is described in Example 1 of the aforementioned US patent application No.C 699,776).
To the solution obtained, a slurry of Raney nickel in water (50 g) was added. The suspension was heated moderately to reflux while stirring for four hours. Then it was cooled and the solids (which consisted of
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product and inorganic matter) with dilute hydrochloric acid. The mixture was filtered, the solids were extracted with 2N sodium hydroxide solution, then filtered. The filtrate was then acidified with dilute hydrochloric acid; the resulting precipitate was dissolved again in aqueous ammonium hydroxide, purified with activated carbon and celite and reprecipitated with dilute acid.
We collected the solid, we
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a with water and there was This preparation gave 5, of product having a melting point of 200-208 C. The washed product had the nuclear magnetic resonance spectrum shown in Figure 1 of the drawings. Its mass spectrum had major peaks at 231 m / e and 233 m / e, thus indicating the presence of a mixture of the tetrahydro and dihydro compounds. The product was found to contain 39% by weight of N-phenyl-1,2,3,4
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tetrahydro-6-hydroxy-4-oxo-5-pyrimidine-carboxamide and 61% by weight of N-phenyl-3,
4-dihydro-6-hydroxy-4-oxo-5-pyrimidine-carboxamide.
So far, the compound 1,2, 3, 4-tetrahydro has not been obtained in pure form and it exists only in the form of mixtures of the above compound and similar reaction products, together with its counterpart 3, 4-dihydro.
WITNESS A Preparation of N-phenyl-3, 4-dihydro-6-hydroxy-4-oxo-5-pyrimidine-carboxamide.
Prepared N-phenyl-3,4-dihydro-6-hydroxy-4-oxo-S-pyrimidine-carboxamide purified by
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controlled oxidation of compound 1, contained in the mixture of Example 1, in the following manner: 2.8 g of the mixture were placed in suspension in
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25 ml of glacial acetic acid and 10 ml of 40% peracetic aid in acetic acid was added. The suspension was warmed moderately for 10 minutes.
When most of the solids had dissolved, the still warm reaction mixture was filtered and the clear solution was cooled overnight. A yellow solid crystallized. The crystals were collected, washed successively with a little acetic acid and ethanol and dried (melting point: 248 C, with decomposition; yield: 1.4 g, 51%). The nuclear magnetic resonance spectrum (dimethyl sulfoxide) shows no trace of the peak 4, 48 6; and the ratios of the peaks at 8.35 S to the aromatic multiplet were 1: 5, indicating the absence of the tetrahydro compound.
Activity against leukemia of the compounds of Example 1 in the regression of L1210 lymphoid leukemia implanted intraperitoneally.
Samples of the test compounds of Example 1 were subjected to in vivo tests according to the test protocol 3LE31 NCI (protocol 1100 NCI, "Cancer Chemotherapy Reports' part 3, volume 3, no 2, September 1972) to determine the effects exerted by the compounds on L1210 leukemia implanted intraperitoneally (J. Nat'l. Cancer Inst.
13 (5): 1328, 1953). Each trial consisted of implanting leukemia cells into six DBA / 2 mice, one sex per trial, male mice weighing at least 18 g and female mice at least 17 g, while the weight of all test animals fell within 3 g. The test compounds were administered as injections intraperitoneally, in doses of 0.1 ml of diluted ascites fluid (105 cells per dose), starting one day after implantation of the tumor and
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continuing the injections daily for nine days.
The test animals were weighed and the number of survivors recorded on a regular basis during a thirty day test period. The survival time ratio for treated animals and untreated animals (T / C) was determined as a percentage.
The tests were performed at different dosage levels. It was statistically determined in the 3LE31 test system that an initial T / C value of at least 125% was necessary to demonstrate the activity, while a reproducible T / C value of 125% or greater warranted an additional study. A reproducible T / C value of 150% or more is considered to represent significant activity.
The results of the tests are summarized in the following table. In the 3LE31 test system, the compounds of Example 1 exerted activity against leukemia (T / C%> 125%) at a dosage as low as 50 mg / kg (Example 1).
Table Activity against L1210 leukemia implanted intraperitoneally
EMI11.1
<tb>
<tb> Dose <SEP> T / C% <SEP> T / C%
<tb> (mg / kg) <SEP> (repetition)
<tb> 200 <SEP> 110 <SEP> 116
<tb> 100 <SEP> 186 <SEP> 185
<tb> 50 <SEP> 122 <SEP> 131
<tb> 25 <SEP> 116 <SEP> 107
<tb>
From the foregoing, it will be seen that, according to the present invention, a class of novel 5-pyrimidine-carboxamides is provided, the members of which exert significant cytotoxic activity and
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cause regression and / or inhibit the development of leukemia and tumors in mammals. It will be clear that various modifications can be made in the method of preparation and use, as well as in the particular substitution of the therapeutically active compounds of the invention.
Consequently, the foregoing description should be considered as given by way of illustration only and the scope of the invention should be interpreted in accordance with the appended claims.