<Desc/Clms Page number 1>
Titel : Farmaceutische preparaten met aktiviteit op het centrale zenuw- stelsel.
De onderhavige uitvinding heeft betrekking op farmaceutische preparaten die als aktieve ingredient cytidine-difosfo-dimethylethanolamine, ook wel bekend als CDP-deanol met formule 1 bevatten, alsmede op een werkwijze voor het bereiden daarvan.
CDP-deanol is een bekende verbinding die een rol speelt in de cholinebiosynthese in de zenuwcellen.
Het is bekend dat CNS choline vereist, zowel voor de biosynthese van acetylcholine als voor die van fosfatidylcholine (lecithine). in veel aspecten van geriatrische pathologie, neemt de cholinebehoefte van de zenuwcellen toe en is het derhalve belangrijk dat die mechanismen worden geaktiveerd welke een hogere produktie daarvan mogelijk maken.
Momenteel zijn drie metabolische routen op neuronaal niveau bekend, die tot de fosfatidylcholinebiosynthese leiden (J. K. BLUSZTAJN et al.
Brain Research 179, 319-327, (1979) ; N. CHIDA en T. ARAKAWA Tohoky J.
Exp. Med. 104,359, (1971), en K. DROSS en H. KEWITZ NAUNYN- Schmiedeberg's Arch. Pharmacol. 274,91, (1972)) ; het is bekend dat fosfatidylcholine de gemakkelijkst toegankelijke bewaarvorm van choline is (J. K. 8LUSZTAIN en R. J. WURTMAN Science, 221,614-620, (1983)).
Het fosfatidylcholine kan in feite gemakkelijk tot vrij choline worden gehydroliseerd met behulp van een basisch fosfatase (G. B. ANSELL en SPANIER Biochem. J. 110,201 (1968), en G. B. ANSELL en SPANNER Cholinergic Mechanism e Psychopharmacology (Plenum, New York, 1978)).
Twee van de genoemde metabolische routen, waarvan de ene bekend
EMI1.1
staat als de"CDP-choline de andere die van de ling" leiden niet tot een werkelijke cholinesynthese omdat ze alleen reeds bestaande cholinemoleculen herverdelen.
Alleen de in de laatste paar jaren door BLUSZTAIN ontdekte "Transmethyleringsroute" maakt een biosynthese van nieuwe fosfatidylcholinemoleculen mogelijk uitgaande van ethanolamine, met behulp van een enzymatisch systeem dat de verschillende methyleringsstappen katalyseert onder toepassing van S-adenosylmethionine als methyldonor.
<Desc/Clms Page number 2>
Het enzymatisch systeem dat aan deze transformatie gewijd is, staat bekend als fosfatidylethanolamine N-methyltransferase (PEMT). De PEMT aktiviteit is hoofdzakelijk aangetroffen in de membraanfractie van ratten en runderhersenen en vertoont zijn maximumwaarden op het niveau
EMI2.1
van de neuronuiteinden (synaptosomen) (J. et al, Brain Research 179, 319-327 (1979) en F. AXELROD J. Neurochem. 34, 1494, (1980)).
Voor de PEMT aktiviteit op neuronaal niveau spelen de aktiviteit van tenminste twee verschillende methyltransferaseenzymen een rol.
Het eerste methyltransferase katalyseert de omzetting van fosfatidylethanolamine in fosfatidyl-N-monomethylethanolamine (PME), terwijl het tweede methyltransferase de omzetting van PME in fosfatidyl
EMI2.2
N, in fosfatidylcholine katalyseert (F. AXELROD J. Neurochem. 34, 1494, (1980) en N-dimethylethanolamine (PDE) en van PDEA. K. PERCY - J. F. MOORE - C. J. WAECHTER J. Neurochem. 30,1404, (1982)).
Het CDP-deanol geeft door een reaktie met een diacylglycerol PPE en fosfatidyl-deanol dat de"transmethyleringsroute"binnentreedt en zelfs voorbijstreeft, zoals in het op het formuleblad weergegeven schema is weergegeven.
Het therapeutisch gebruik van deanol is reeds bekend : indien toegediend als vrije base, wordt het niet direkt door de zenuwcellen gebruikt maar eerst geaktiveerd, dat wil zeggen veresterd met het citidylcoenzym, waarbij met name CDP-deanol wordt gevormd.
Dit molecuul heeft een hoog energetische binding die de synthese van fosfatidyl-deanol mogelijk maakt, een metaboliet die door methylering wordt omgezet in fosfatidylcholine dat op zijn beurt in staat is om choline te vormen voor de acetylcholinesynthese.
Het CDP-deanol, dat een direktere metabolische voorloper van fos- fatidylcholine is dan deanol, speelt derhalve een rol van direkte voorloper voor de synthese van het laatste sleutelmetaboliet.
Overigens dient de gelding van de uitvinding op geen enkele wijze gekoppeld te worden aan de bovenstaand vermelde biochemische veronderstellingen, die bovendien geen absolute verklaring geven voor deverrassende therapeutische werking die voor de farmaceutische preparaten volgens de uitvinding is gevonden.
<Desc/Clms Page number 3>
Het CDP-deanol blijkt in feite, vergeleken met dimethylaminoethanol (deanol) hemisuccinaat, opmerkelijk minder toxisch te zijn zoals gebleken is uit acute toxiciteitsproeven met toediening langs intraperitoneale en orale route in BALB/c muizen met een gewicht van 17 - 22 g.
De intraperitoneale LD50 van CDP-deanol bleek hoger dan 45 g/kg t zijn, terwijl het deanol hemisuccinaat een bijna dubbele toxiciteit vertoonde
EMI3.1
met een LD50 van g/kg.
CDP-deanol bleek ook significant aktiever en effectiever te zijn dan deanol (als hemisuccinaat) in de symptomatische behandeling van de seniele hersenaftakeling zoals is aangetoond door de hieronder samenge vatte clinische proef.
12 Oudere patienten met hersenaftakeling (7 mannen, 5 vrouwen, gemiddelde leeftijd 76,5 aren), verdeeld in twee groepen van 6personen, zijn behandeld met CDP-deanol per os (2 x 250 mg tabletten tweemaal per dag) respectievelijk per i. m. (twee keer per dag flesjes van 500 mg).
De aktiviteit parameters van het geneesmiddel zijn geevalueerd met behulp van de Birren test (gemodificeerd), de Toulousa Pieron test en de semikwantitatieve schalen op Kellner-Sheffield, terwijl de verdraagzaamheidsparameters geevalueerd werden door biochemische en clinische onderzoeken.
De evaluatietijdstippen zijn vastgesteld op het tijdstip 0 en na 30 dagen behandeling. De statistische analyse vertoonde een significante verbetering in geheugenproblemen, in het bijzonder in de i. m. behandelde'personen. De basale biochemische parameters veranderdenniet wezenlijk en ongewenste effecten bleken niet of nagenoeg niet op te treden.
Het CDP-deanol bewees algemeen effectief te zijn indasbehandeling van hersenfunctieproblemen met een vasculair-organischeentraumatische oorsprong, in verschijnselen van seniele aftakeling, in problemen met intellectueel vermogen en in alle gevallen van psychische stress.
Voor het bereiken van de gewenste therapeutische effecten kan CDP-deanol aan patienten worden toegediend langs verschillende wegen in zuivere vorm of in de vorm van farmaceutische preparaten.
De samenstelling van geschikte farmaceutische preparaten kan worden uitgevoerd volgens de gebruikelijke technieken zoals beschreven zijn in"Remington's Pharmaceutical Sciences Handbook", Hack Pub. Co. USA.
<Desc/Clms Page number 4>
De hoeveelheid CDP-deanol, die langs orale weg wordt toegediend, kan varieren van 5 mg/kg/dag tot 30 mg/kg/dag. De hoeveelheid aktieve component die door parenterale weg wordt toegediend, kan varieren van 1 mg/kg/dag tot 50 mg/kg/dag tot 50 mg/kg/dag, bij voorkeur van 5 mg/kg/dag tot 30 mg/kg/dag.
Een eenheidsdosis voor orale toediening kan bijvoorbeeld 100 tot 1000 mg aktieve ingrediënt omvatten.
De preparaten volgens de uitvinding wordt in het algemeen een of twee keer per dag toegediend, maar frequentere toedieningenkunnengepast zijn, tenminste in sommige gevallen, en kunnen al naar gelang de condities van de patient en de toedieningsweg worden gevarieerd.
Voor orale toediening kan de verbinding worden gepresenteerd in de vorm van vaste of vloeibare preparaten zoals capsules, pillen, tabletten, poeders, oplossingen, suspensies of emulsies, eventueel vormen met langzame afgifte zoals cronoiden enz.
De vaste eenheidsdosis kan een zachte of harde gelatinecapsule zijn, die smeermiddelen en inerte excipientia zoals lactose, saccharose of zetmeel bevat.
De verbindingen volgens de uitvinding kunnen ook worden gepresenteerd in de vorm van tabletten, waarbij conventionele excipientia worden gebruikt, zoals lactose, saccharose, zetmeel, gelatine, alginezuur, stearinezuur, magnesiumstearaat, enz.
Voor parenterale toediening kunnen de verbindingen worden toegediend in de vorm van injecteerbare preparaten, opgelost of gesuspendeerd in fysiologisch aanvaardbare verdunningsmiddelen, samen met een drager die een steriele vloeistof, bijvoorbeeld water, of een olie, zonder de toevoeging van andere excipientia kan zijn. Oliën die gebruikt kunnen worden zijn plantaardige, dierlijke, minerale of synthetische olien, zoals pindaolie, sojabonenolie en minerale olie.
In het algemeen kunnen water, waterige oplossingen van minerale zouten, waterige oplossingen van dextrose of andere suikers, ethanol, glycolen zoals propyleen-of polyethyleenglycol als drager voor injecteerbare oplossingen worden gebruikt.
Bovendien kunnen de preparaten volgens de uitvinding desgewenst naast het bovengenoemde excipient en CDP-deanol, ook andere aktieve
<Desc/Clms Page number 5>
ingrediënten met complementaire of op andere wijze nuttige aktiviteiten bevatten.
Een ander aspect van de uitvinding bestaat uit een werkwijze voor het bereiden van cytidine-difosfo-dimethylaminoethanol.
De werkwijze bestaat uit het laten reageren van een cytidin-5'- monofosforzuurtrialkylammoniumzout met een fosforyl-dimethylaminoethanolzout, in tegenwoordigheid van een carbodiimide, in een geschikt oplosmiddel.
Bij voorkeur laat men 1 mol cytidine-5'-monofosforzuur (CMP) trialkylammoniumzout reageren met een hoeveelheid, equivalent met 2 - 8 mol, van een fosforyl-dimethylaminoethanolzout, in een formamide-pyri- dineoplossing bij eentsiperatuur tussen 15 en 400C gedurende een periode van 5 tot 25 uur.
Dicyclohexylcarbodiimide wordt gebruikt als het carbodiimide, en natrium, kalium, ammonium, calcium, magnesium, triethylammoniumzouten en dergelijke kunnen worden gebruikt als de fosforyl-dimethylaminoethanolzouten.
De uitvinding wordt aan de hand van de hiernavolgende nietbeperkende voorbeelden nader toegelicht.
VOORBEELD 1 Bereiding van CDP-deanol
Een oplossing van 30 g dicyclohexylcarbodiimide in 100mlpyridine werd langzaam toegevoegd aan een oplossing van 21 g tributylammoniumcytidine-S'-monofosfaat (gehalte in cytidine-5'-monofosforzuur : 13, 4 g) en 35, 6 g fosforyl-dimethylaminoethanolnatriumzout in 200' formamide.
Het mengsel liet men onder roeren gedurende 15 uur bij 350C reageren ; het neergeslagen dicyclohexylureum werd daarna afgefiltreerd en weggeworpen, en de filtraten werden geconcentreerd met behulp van een omgekeerde osmoseproces, tot een droog residu van ongeveer 30 - 35%.
Langzaam werd 1 liter aceton aan het verkregen visceuze residu toegevoegd, onder roeren, waarbij zieh een neerslag vormde dat door centrifugeren werd gewonnen.
De bovenstaande acetonoplossingen werden weggegooid en het neerslag werd twee keer met 250 ml watervrij aceton gewassen.
<Desc/Clms Page number 6>
Na drogen werd 30 g ruw cytidine-difosfodeanolnatriumzout verkregen. Het verkregen ruwe produkt (30 g) werd verdund in 3 1 water, de pH werd op 7, 2 ingesteld en het produkt werd geabsorbeerd op een Dowex 1-X2 harskolom in formiaatvorm. De hars werd met water gewassen e daarna gesalueerd met een 0, 005 M mierezuuroplossing.
De eluaatfractie die de gewenste verbinding bevatte werd geneutraliseerd met NaOH, geconcentreerd tot een siroop door een omgekeerde osmoseproces, daarna in geringe mate verdund met water en aan een ultra filtratieproces onderworpen.
Aan de oplossing die het gesynthetiseerde molecuul bevatte met ee zuiverheidsgraad van meer dan 99%, werd 5 volumehoeveelheden van een 3 : 2 (v/v) methanol : aceton mengsel (koud) toegevoegd totdat de kristallisatie volledig was. Daarna werden de kristallen verzameld en gedroogd onder hoogvacuum waarbij 19, 3 g cytidine-difosfo-dimethylamino- ethanoltrihydraatnatriumzout werd verkregen.
De opbrengst was 87%.
EMI6.1
Het smeltpunt 231-235 C Elementanalyse
EMI6.2
<tb>
<tb> (opzwelling).C <SEP> H <SEP> N
<tb> gevonden <SEP> 30, <SEP> 19 <SEP> 4, <SEP> 80 <SEP> 10, <SEP> 84 <SEP>
<tb> berekend <SEP> (hydraatvorm) <SEP> 30, <SEP> 36 <SEP> 4, <SEP> 90 <SEP> 10, <SEP> 89 <SEP>
<tb> U <SEP> V <SEP> in <SEP> HO <SEP> oplossing <SEP> = <SEP> max <SEP> 270 <SEP> nm, <SEP> log <SEP> : <SEP> : <SEP> 3, <SEP> 942 <SEP>
<tb> 224 <SEP> nm
<tb> in <SEP> 0, <SEP> 1 <SEP> N <SEP> HCl <SEP> oplossing <SEP> = <SEP> max <SEP> 278 <SEP> nm, <SEP> log <SEP> = <SEP> 4, <SEP> 089 <SEP>
<tb> HCl <SEP> 1 <SEP> N <SEP> = <SEP> max <SEP> 278 <SEP> nm, <SEP> log <SEP> = <SEP> 4, <SEP> 090 <SEP>
<tb> IR <SEP> cm <SEP> = <SEP> 2479,2670 <SEP> cm <SEP> -1 <SEP>
<tb> R. <SEP> M. <SEP> N. <SEP> (6 <SEP> ; <SEP> DO <SEP> ; <SEP> CH3CN <SEP> als <SEP> standaard) <SEP> : <SEP> 2, <SEP> 88 <SEP> ;
<SEP> 3, <SEP> 36 <SEP> ; <SEP> 4, <SEP> 23 <SEP> ; <SEP> 4, <SEP> 65 <SEP> ; <SEP> 5, <SEP> 94 <SEP> en
<tb> 7, <SEP> 82. <SEP>
<tb>
<Desc/Clms Page number 7>
VOORBEELD II Injecteerbare farmaceutische preparaten Injecteerbaar langs intramusculaire of intraveneuze weg. a) Waterige oplossing (pH 7 ! 0, 5)
EMI7.1
<tb>
<tb> een <SEP> flesje <SEP> bevat <SEP> : <SEP> ml <SEP> 2 <SEP> ml <SEP> 4 <SEP> ml <SEP> 4
<tb> Cytidinedifosfodeanol <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 250 <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 500 <SEP> g <SEP> 1, <SEP> 000 <SEP>
<tb> Natriummerthiolaat <SEP> mg <SEP> 0, <SEP> 080 <SEP> mg <SEP> 0, <SEP> 160 <SEP> mg <SEP> 0, <SEP> 160 <SEP>
<tb> Water <SEP> voor <SEP> injectiepreparaten <SEP> q. <SEP> s. <SEP> tot <SEP> ml <SEP> 2 <SEP> ml <SEP> 4 <SEP> ml <SEP> 4
<tb> b) <SEP> Gevriesdroogd
<tb> één <SEP> gevriesdroogd <SEP> fies <SEP> je <SEP> bevat <SEP> :
<SEP>
<tb> Cytidinedifosfodeanol <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 250 <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 500 <SEP> g <SEP> 1, <SEP> 000 <SEP>
<tb> Glycocoll <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 150 <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 300 <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 300 <SEP>
<tb> Mannitol <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 100 <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 200 <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 200 <SEP>
<tb> Natriummerthiolaat <SEP> mg <SEP> 0, <SEP> 050 <SEP> mg <SEP> 0, <SEP> 100 <SEP> mg <SEP> 0, <SEP> 100 <SEP>
<tb>
VOORBEELD III Orale farmaceutische preparaten a) Tabletten
EMI7.2
<tb>
<tb> - <SEP> één <SEP> tablet <SEP> bevat <SEP> : <SEP> #/g <SEP> 0,45 <SEP> #/g <SEP> 0,685
<tb> Cytidinedifosfodeanol <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 250 <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 500 <SEP>
<tb> - <SEP> Excipientiavan <SEP> de <SEP> kern <SEP> :
<SEP>
<tb> mals-zetmeel <SEP> mg <SEP> 70, <SEP> 0 <SEP> mg <SEP> 0, <SEP> 70 <SEP>
<tb> microgranulaire <SEP> cellulose <SEP> mg <SEP> 86, <SEP> 0 <SEP> mg <SEP> 0, <SEP> 56 <SEP>
<tb> geprecipiteerde <SEP> silica <SEP> mg <SEP> 5, <SEP> 0 <SEP> mg <SEP> 6
<tb> natrium <SEP> carboxymethylamylopectine <SEP> mg <SEP> 20, <SEP> 0 <SEP> mg <SEP> 30
<tb> talk <SEP> mg <SEP> 6, <SEP> 0 <SEP> mg <SEP> 8
<tb> magnesiumstearaat <SEP> mg <SEP> 3, <SEP> 0 <SEP> mg <SEP> 4
<tb> - <SEP> Excipientia <SEP> van <SEP> de <SEP> coating <SEP> :
<SEP>
<tb> polymethylmethacrylaat <SEP> mg <SEP> 1, <SEP> 454 <SEP> mg <SEP> 1, <SEP> 650 <SEP>
<tb> lactose <SEP> mg <SEP> 2, <SEP> 643 <SEP> mg <SEP> 3, <SEP> 040 <SEP>
<tb> polyethyleenglycol <SEP> 6000 <SEP> mg <SEP> 0, <SEP> 902 <SEP> mg <SEP> 1, <SEP> 037 <SEP>
<tb> talk <SEP> mg <SEP> 1, <SEP> 189 <SEP> mg <SEP> 1, <SEP> 367 <SEP>
<tb> kaolien <SEP> mg <SEP> 2, <SEP> 114 <SEP> mg <SEP> 2, <SEP> 431 <SEP>
<tb>
<Desc/Clms Page number 8>
EMI8.1
<tb>
<tb> titaniumdioxide <SEP> mg <SEP> 1, <SEP> 586 <SEP> mg <SEP> 1, <SEP> 824 <SEP>
<tb> polysorbaat <SEP> 80 <SEP> mg <SEP> 0, <SEP> 079 <SEP> mg <SEP> 0, <SEP> 090 <SEP>
<tb> natriumcitraatbihydraat <SEP> mg <SEP> 0, <SEP> 053 <SEP> mg <SEP> 0, <SEP> 060 <SEP>
<tb> b) <SEP> Capsules
<tb> - <SEP> één <SEP> capsule <SEP> bevat <SEP> :
<SEP> g <SEP> 0, <SEP> 277 <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 553 <SEP>
<tb> Cytidinedifosfodeanol <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 250 <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 500 <SEP>
<tb> microkristallijne <SEP> cellulose <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 020 <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 040 <SEP>
<tb> geprecipiteerde <SEP> silica <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 003 <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 005 <SEP>
<tb> talk <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 003 <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 006 <SEP>
<tb> magnesiumstearaat <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 001 <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 002 <SEP>
<tb> c) <SEP> Fialoids <SEP> per <SEP> os
<tb> - <SEP> een <SEP> 10 <SEP> ml <SEP> fialoid <SEP> bevat <SEP> :
<SEP>
<tb> Cytidinedifosfodeanol <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 500 <SEP> g <SEP> 1, <SEP> 000 <SEP>
<tb> sorbitol <SEP> 70% <SEP> oplossing <SEP> g <SEP> 2, <SEP> 000 <SEP> g <SEP> 2, <SEP> 000 <SEP>
<tb> glycerine <SEP> g <SEP> 1, <SEP> 600 <SEP> g <SEP> 1, <SEP> 600 <SEP>
<tb> saccharine <SEP> g0, <SEP> 010 <SEP> g0, <SEP> 015 <SEP>
<tb> methyl-p-hydroxybenzoaat <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 012 <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 012 <SEP>
<tb> propyl <SEP> p-hydroxybenzoaat <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 004 <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 004 <SEP>
<tb> smaakstof <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 030 <SEP> 9 <SEP> 0, <SEP> 040 <SEP>
<tb> gedestilleerd <SEP> water <SEP> q. <SEP> s. <SEP> tot <SEP> ml <SEP> 10 <SEP> ml <SEP> 10
<tb>
<Desc / Clms Page number 1>
Title: Pharmaceutical preparations with activity on the central nervous system.
The present invention relates to pharmaceutical preparations containing as active ingredient cytidine-diphospho-dimethylethanolamine, also known as CDP-deanol of formula 1, and to a process for its preparation.
CDP-deanol is a known compound that plays a role in the choline biosynthesis in the nerve cells.
CNS is known to require choline, both for the biosynthesis of acetylcholine and that of phosphatidylcholine (lecithin). in many aspects of geriatric pathology, the choline requirement of the nerve cells is increasing and it is therefore important that those mechanisms are activated which allow a higher production thereof.
Currently, three neuronal-level metabolic pathways leading to phosphatidylcholine biosynthesis are known (J. K. BLUSZTAJN et al.
Brain Research 179, 319-327 (1979); N. CHIDA and T. ARAKAWA Tohoky J.
Exp. Med. 104,359, (1971), and K. DROSS and H. KEWITZ NAUNYN-Schmiedeberg's Arch. Pharmacol. 274.91, (1972)); phosphatidylcholine is known to be the most readily accessible storage form of choline (J.K. 8LUSZTAIN and R.J. WURTMAN Science, 221,614-620, (1983)).
In fact, the phosphatidylcholine can be easily hydrolyzed to free choline using a basic phosphatase (G. B. ANSELL and SPANIER Biochem. J. 110,201 (1968), and G. B. ANSELL and SPANNER Cholinergic Mechanism Psychopharmacology (Plenum, New York, 1978)).
Two of the mentioned metabolic pathways, one of which is known
EMI1.1
state as the "CDP-choline the other ones from the ling" do not lead to actual choline synthesis because they only redistribute pre-existing choline molecules.
Only the "Transmethylation Route" discovered in the last few years by BLUSZTAIN allows biosynthesis of new phosphatidylcholine molecules from ethanolamine, using an enzymatic system that catalyzes the different methylation steps using S-adenosylmethionine as methyl donor.
<Desc / Clms Page number 2>
The enzymatic system devoted to this transformation is known as phosphatidylethanolamine N-methyl transferase (PEMT). The PEMT activity is mainly found in the membrane fraction of rats and bovine brains and shows its maximum values at the level
EMI2.1
of the neuron ends (synaptosomes) (J. et al, Brain Research 179, 319-327 (1979) and F. AXELROD J. Neurochem. 34, 1494, (1980)).
For the PEMT activity at neuronal level, the activity of at least two different methyl transferase enzymes play a role.
The first methyl transferase catalyzes the conversion of phosphatidylethanolamine to phosphatidyl-N-monomethylethanolamine (PME), while the second methyl transferase converts PME to phosphatidyl
EMI2.2
N, catalyzes in phosphatidylcholine (F. AXELROD J. Neurochem. 34, 1494, (1980) and N-dimethylethanolamine (PDE) and of PDEA. K. PERCY - JF MOORE - CJ WAECHTER J. Neurochem., 30,1404, (1982) )).
The CDP-deanol reacts with a diacylglycerol PPE and phosphatidyl-deanol to enter and even surpass the "transmethylation pathway" as shown in the scheme shown on the formula sheet.
The therapeutic use of deanol is already known: when administered as a free base, it is not used directly by the nerve cells but first activated, that is to say esterified with the citidylcoenzyme, in particular forming CDP-deanol.
This molecule has a high energy bond that allows the synthesis of phosphatidyldeanol, a metabolite that is converted by methylation into phosphatidylcholine which in turn is able to form choline for acetylcholine synthesis.
The CDP-deanol, which is a more direct metabolic precursor of phosphatidylcholine than deanol, therefore plays a direct precursor role in the synthesis of the last key metabolite.
Incidentally, the validity of the invention should in no way be linked to the above-mentioned biochemical assumptions, which moreover do not provide an absolute explanation for the surprising therapeutic effect found for the pharmaceutical preparations according to the invention.
<Desc / Clms Page number 3>
In fact, the CDP-deanol, compared to dimethylaminoethanol (deanol) hemisuccinate, appears to be remarkably less toxic as demonstrated by acute toxicity tests with intraperitoneal and oral route administration in BALB / c mice weighing 17-22 g.
The intraperitoneal LD50 of CDP-deanol was found to be higher than 45 g / kg t, while the deanol hemisuccinate showed almost double toxicity
EMI3.1
with an LD50 of g / kg.
CDP-deanol was also found to be significantly more active and effective than deanol (as hemisuccinate) in the symptomatic treatment of the senile brain degeneration as demonstrated by the clinical trial summarized below.
12 Elderly patients with brain degeneration (7 men, 5 women, mean age 76.5 ares), divided into two groups of 6 persons, were treated with CDP-deanol per os (2 x 250 mg tablets twice a day) per i. m. (500 mg bottles twice a day).
The drug's activity parameters were evaluated using the Birren test (modified), the Toulousa Pieron test and the semi-quantitative scales at Kellner-Sheffield, while the tolerability parameters were evaluated by biochemical and clinical studies.
The evaluation times are set at time 0 and after 30 days of treatment. The statistical analysis showed a significant improvement in memory problems, especially in the i. m. treated persons. The basic biochemical parameters did not change significantly and undesirable effects were found to be virtually non-existent.
The CDP-deanol proved to be generally effective in the treatment of brain function problems with a vascular-organic and traumatic origin, in symptoms of senile deterioration, in problems with intellectual ability and in all cases of psychological stress.
To achieve the desired therapeutic effects, CDP-deanol can be administered to patients by various routes in pure form or in the form of pharmaceutical preparations.
The composition of suitable pharmaceutical preparations can be performed according to the usual techniques as described in "Remington's Pharmaceutical Sciences Handbook", Hack Pub. Co. USA.
<Desc / Clms Page number 4>
The amount of CDP-deanol administered orally can range from 5 mg / kg / day to 30 mg / kg / day. The amount of active ingredient administered by parenteral route can range from 1 mg / kg / day to 50 mg / kg / day to 50 mg / kg / day, preferably from 5 mg / kg / day to 30 mg / kg / day.
For example, a unit dose for oral administration may comprise 100 to 1000 mg of the active ingredient.
The compositions of the invention are generally administered once or twice a day, but more frequent administrations may be appropriate, at least in some cases, and may be varied according to the patient's conditions and the route of administration.
For oral administration, the compound can be presented in the form of solid or liquid preparations such as capsules, pills, tablets, powders, solutions, suspensions or emulsions, optionally slow release forms such as cronoids, etc.
The solid unit dose may be a soft or hard gelatin capsule containing lubricants and inert excipients such as lactose, sucrose or starch.
The compounds of the invention may also be presented in the form of tablets using conventional excipients such as lactose, sucrose, starch, gelatin, alginic acid, stearic acid, magnesium stearate, etc.
For parenteral administration, the compounds can be administered in the form of injectable preparations, dissolved or suspended in physiologically acceptable diluents, together with a carrier which can be a sterile liquid, for example water, or an oil, without the addition of other excipients. Oils that can be used are vegetable, animal, mineral or synthetic oils, such as peanut oil, soybean oil and mineral oil.
Generally, water, aqueous solutions of mineral salts, aqueous solutions of dextrose or other sugars, ethanol, glycols such as propylene or polyethylene glycol can be used as vehicles for injectable solutions.
In addition, if desired, the preparations according to the invention may, in addition to the above-mentioned excipient and CDP-deanol, also contain other active
<Desc / Clms Page number 5>
contain ingredients with complementary or otherwise useful activities.
Another aspect of the invention consists of a method of preparing cytidine-diphospho-dimethylaminoethanol.
The method consists in reacting a cytidin-5'-monophosphoric trialkylammonium salt with a phosphoryl-dimethylaminoethanol salt, in the presence of a carbodiimide, in a suitable solvent.
Preferably, 1 mole of cytidine-5'-monophosphoric acid (CMP) trialkylammonium salt is reacted with an amount, equivalent to 2 - 8 moles, of a phosphoryl-dimethylaminoethanol salt, in a formamide pyridine solution at 15 ° C to 400 ° C for a period of time. from 5 to 25 hours.
Dicyclohexylcarbodiimide is used as the carbodiimide, and sodium, potassium, ammonium, calcium, magnesium, triethylammonium salts and the like can be used as the phosphoryl-dimethylaminoethanol salts.
The invention is further elucidated by means of the following non-limiting examples.
EXAMPLE 1 Preparation of CDP-deanol
A solution of 30 g of dicyclohexylcarbodiimide in 100ml of pyridine was slowly added to a solution of 21 g of tributylammoniumcytidine-S'-monophosphate (content in cytidine-5'-monophosphoric acid: 13.4 g) and 35.6 g of phosphoryl-dimethylaminoethanol sodium salt in 200'-formamide .
The mixture was allowed to react at 350C for 15 hours with stirring; the precipitated dicyclohexylurea was then filtered off and discarded, and the filtrates were concentrated using a reverse osmosis process, to a dry residue of about 30-35%.
Slowly, 1 liter of acetone was added to the resulting viscous residue, with stirring, forming a precipitate which was recovered by centrifugation.
The above acetone solutions were discarded and the precipitate was washed twice with 250 ml of anhydrous acetone.
<Desc / Clms Page number 6>
After drying, 30 g of crude cytidine diphosphodeanol sodium salt was obtained. The crude product obtained (30 g) was diluted in 3 L of water, the pH was adjusted to 7.2 and the product was absorbed on a Dowex 1-X2 resin column in formate form. The resin was washed with water and then evaluated with a 0.005 M formic acid solution.
The eluate fraction containing the desired compound was neutralized with NaOH, concentrated to a syrup by a reverse osmosis process, then slightly diluted with water and subjected to an ultra filtration process.
To the solution containing the synthesized molecule with a purity greater than 99%, 5 volumes of a 3: 2 (v / v) methanol: acetone mixture (cold) was added until crystallization was complete. Then, the crystals were collected and dried under high vacuum to obtain 19.3 g of cytidine-diphospho-dimethylaminoethanol trihydrate sodium salt.
The yield was 87%.
EMI6.1
Melting point 231-235 C Elemental analysis
EMI6.2
<tb>
<tb> (bloating). C <SEP> H <SEP> N
<tb> found <SEP> 30, <SEP> 19 <SEP> 4, <SEP> 80 <SEP> 10, <SEP> 84 <SEP>
<tb> calculated <SEP> (hydrate form) <SEP> 30, <SEP> 36 <SEP> 4, <SEP> 90 <SEP> 10, <SEP> 89 <SEP>
<tb> U <SEP> V <SEP> in <SEP> HO <SEP> solution <SEP> = <SEP> max <SEP> 270 <SEP> nm, <SEP> log <SEP>: <SEP>: < SEP> 3, <SEP> 942 <SEP>
<tb> 224 <SEP> nm
<tb> in <SEP> 0, <SEP> 1 <SEP> N <SEP> HCl <SEP> solution <SEP> = <SEP> max <SEP> 278 <SEP> nm, <SEP> log <SEP> = <SEP> 4, <SEP> 089 <SEP>
<tb> HCl <SEP> 1 <SEP> N <SEP> = <SEP> max <SEP> 278 <SEP> nm, <SEP> log <SEP> = <SEP> 4, <SEP> 090 <SEP>
<tb> IR <SEP> cm <SEP> = <SEP> 2479.2670 <SEP> cm <SEP> -1 <SEP>
<tb> R. <SEP> M. <SEP> N. <SEP> (6 <SEP>; <SEP> DO <SEP>; <SEP> CH3CN <SEP> as <SEP> default) <SEP>: < SEP> 2, <SEP> 88 <SEP>;
<SEP> 3, <SEP> 36 <SEP>; <SEP> 4, <SEP> 23 <SEP>; <SEP> 4, <SEP> 65 <SEP>; <SEP> 5, <SEP> 94 <SEP> and
<tb> 7, <SEP> 82. <SEP>
<tb>
<Desc / Clms Page number 7>
EXAMPLE II Injectable Pharmaceutical Preparations Injectable by intramuscular or intravenous route. a) Aqueous solution (pH 7! 0.5)
EMI7.1
<tb>
<tb> a <SEP> bottle <SEP> contains <SEP>: <SEP> ml <SEP> 2 <SEP> ml <SEP> 4 <SEP> ml <SEP> 4
<tb> Cytidine diphosphodeanol <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 250 <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 500 <SEP> g <SEP> 1, <SEP> 000 <SEP>
<tb> Sodium nthiolate <SEP> mg <SEP> 0, <SEP> 080 <SEP> mg <SEP> 0, <SEP> 160 <SEP> mg <SEP> 0, <SEP> 160 <SEP>
<tb> Water <SEP> for <SEP> injection preparations <SEP> q. <SEP> s. <SEP> to <SEP> ml <SEP> 2 <SEP> ml <SEP> 4 <SEP> ml <SEP> 4
<tb> b) <SEP> Freeze-dried
<tb> one <SEP> freeze-dried <SEP> fies <SEP> your <SEP> contains <SEP>:
<SEP>
<tb> Cytidine diphosphodeanol <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 250 <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 500 <SEP> g <SEP> 1, <SEP> 000 <SEP>
<tb> Glycocoll <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 150 <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 300 <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 300 <SEP>
<tb> Mannitol <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 100 <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 200 <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 200 <SEP>
<tb> Sodium nthiolate <SEP> mg <SEP> 0, <SEP> 050 <SEP> mg <SEP> 0, <SEP> 100 <SEP> mg <SEP> 0, <SEP> 100 <SEP>
<tb>
EXAMPLE III Oral pharmaceutical preparations a) Tablets
EMI 7.2
<tb>
<tb> - <SEP> one <SEP> tablet <SEP> contains <SEP>: <SEP> # / g <SEP> 0.45 <SEP> # / g <SEP> 0.685
<tb> Cytidine diphosphodeanol <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 250 <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 500 <SEP>
<tb> - <SEP> Excipientiavan <SEP> the <SEP> core <SEP>:
<SEP>
<tb> tender starch <SEP> mg <SEP> 70, <SEP> 0 <SEP> mg <SEP> 0, <SEP> 70 <SEP>
<tb> microgranular <SEP> cellulose <SEP> mg <SEP> 86, <SEP> 0 <SEP> mg <SEP> 0, <SEP> 56 <SEP>
<tb> precipitated <SEP> silica <SEP> mg <SEP> 5, <SEP> 0 <SEP> mg <SEP> 6
<tb> sodium <SEP> carboxymethylamylopectin <SEP> mg <SEP> 20, <SEP> 0 <SEP> mg <SEP> 30
<tb> talc <SEP> mg <SEP> 6, <SEP> 0 <SEP> mg <SEP> 8
<tb> magnesium stearate <SEP> mg <SEP> 3, <SEP> 0 <SEP> mg <SEP> 4
<tb> - <SEP> Excipients <SEP> of <SEP> the <SEP> coating <SEP>:
<SEP>
<tb> polymethyl methacrylate <SEP> mg <SEP> 1, <SEP> 454 <SEP> mg <SEP> 1, <SEP> 650 <SEP>
<tb> lactose <SEP> mg <SEP> 2, <SEP> 643 <SEP> mg <SEP> 3, <SEP> 040 <SEP>
<tb> Polyethylene Glycol <SEP> 6000 <SEP> mg <SEP> 0, <SEP> 902 <SEP> mg <SEP> 1, <SEP> 037 <SEP>
<tb> talc <SEP> mg <SEP> 1, <SEP> 189 <SEP> mg <SEP> 1, <SEP> 367 <SEP>
<tb> Kaolin <SEP> mg <SEP> 2, <SEP> 114 <SEP> mg <SEP> 2, <SEP> 431 <SEP>
<tb>
<Desc / Clms Page number 8>
EMI8.1
<tb>
<tb> titanium dioxide <SEP> mg <SEP> 1, <SEP> 586 <SEP> mg <SEP> 1, <SEP> 824 <SEP>
<tb> polysorbate <SEP> 80 <SEP> mg <SEP> 0, <SEP> 079 <SEP> mg <SEP> 0, <SEP> 090 <SEP>
<tb> sodium citrate bihydrate <SEP> mg <SEP> 0, <SEP> 053 <SEP> mg <SEP> 0, <SEP> 060 <SEP>
<tb> b) <SEP> Capsules
<tb> - <SEP> one <SEP> capsule <SEP> contains <SEP>:
<SEP> g <SEP> 0, <SEP> 277 <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 553 <SEP>
<tb> Cytidine diphosphodeanol <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 250 <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 500 <SEP>
<tb> microcrystalline <SEP> cellulose <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 020 <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 040 <SEP>
<tb> precipitated <SEP> silica <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 003 <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 005 <SEP>
<tb> talk <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 003 <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 006 <SEP>
<tb> magnesium stearate <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 001 <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 002 <SEP>
<tb> c) <SEP> Fialoids <SEP> per <SEP> os
<tb> - <SEP> a <SEP> 10 <SEP> ml <SEP> fialoid <SEP> contains <SEP>:
<SEP>
<tb> Cytidine diphosphodeanol <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 500 <SEP> g <SEP> 1, <SEP> 000 <SEP>
<tb> sorbitol <SEP> 70% <SEP> solution <SEP> g <SEP> 2, <SEP> 000 <SEP> g <SEP> 2, <SEP> 000 <SEP>
<tb> glycerine <SEP> g <SEP> 1, <SEP> 600 <SEP> g <SEP> 1, <SEP> 600 <SEP>
<tb> saccharin <SEP> g0, <SEP> 010 <SEP> g0, <SEP> 015 <SEP>
<tb> methyl p-hydroxybenzoate <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 012 <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 012 <SEP>
<tb> propyl <SEP> p-hydroxybenzoate <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 004 <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 004 <SEP>
<tb> flavor <SEP> g <SEP> 0, <SEP> 030 <SEP> 9 <SEP> 0, <SEP> 040 <SEP>
<tb> distilled <SEP> water <SEP> q. <SEP> s. <SEP> to <SEP> ml <SEP> 10 <SEP> ml <SEP> 10
<tb>