AT402151B - Verfahren zur herstellung eines virussicheren biologischen präparates - Google Patents
Verfahren zur herstellung eines virussicheren biologischen präparates Download PDFInfo
- Publication number
- AT402151B AT402151B AT154793A AT154793A AT402151B AT 402151 B AT402151 B AT 402151B AT 154793 A AT154793 A AT 154793A AT 154793 A AT154793 A AT 154793A AT 402151 B AT402151 B AT 402151B
- Authority
- AT
- Austria
- Prior art keywords
- preparation
- surfactant
- virus
- weight
- heating
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract description 5
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims abstract description 56
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 40
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims abstract description 37
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims abstract description 13
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 13
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 8
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 40
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 29
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 16
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 13
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims description 8
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 3
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 claims description 2
- 102000000429 Factor XII Human genes 0.000 claims 1
- 108010080865 Factor XII Proteins 0.000 claims 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 22
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 16
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 16
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 16
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 14
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 14
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 11
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 8
- 108010071289 Factor XIII Proteins 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 7
- 108010018823 anti-inhibitor coagulant complex Proteins 0.000 description 6
- 229940105776 factor viii inhibitor bypassing activity Drugs 0.000 description 6
- 229940012444 factor xiii Drugs 0.000 description 6
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 6
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 5
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 4
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 4
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 3
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 3
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 3
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 3
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 3
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 3
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 2
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 2
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 2
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 2
- 229920001030 Polyethylene Glycol 4000 Polymers 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 2
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 2
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 2
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 239000010836 blood and blood product Substances 0.000 description 2
- 229940125691 blood product Drugs 0.000 description 2
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 2
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- HEGSGKPQLMEBJL-RKQHYHRCSA-N octyl beta-D-glucopyranoside Chemical compound CCCCCCCCO[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HEGSGKPQLMEBJL-RKQHYHRCSA-N 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 2
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 2
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 2
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 102100023804 Coagulation factor VII Human genes 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 108010062466 Enzyme Precursors Proteins 0.000 description 1
- 102000010911 Enzyme Precursors Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 108010023321 Factor VII Proteins 0.000 description 1
- 208000031220 Hemophilia Diseases 0.000 description 1
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 description 1
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 102100038124 Plasminogen Human genes 0.000 description 1
- 108010051456 Plasminogen Proteins 0.000 description 1
- 208000000474 Poliomyelitis Diseases 0.000 description 1
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N Propylene oxide Chemical compound CC1CO1 GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000710960 Sindbis virus Species 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KXHPPCXNWTUNSB-UHFFFAOYSA-M benzyl(trimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 KXHPPCXNWTUNSB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- NUPDFKWZQURWCC-UHFFFAOYSA-M benzyl-(2-hydroxyethyl)-dimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].OCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 NUPDFKWZQURWCC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000009640 blood culture Methods 0.000 description 1
- 229960000182 blood factors Drugs 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 239000003093 cationic surfactant Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 239000002532 enzyme inhibitor Substances 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 229940012413 factor vii Drugs 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N heavy water Substances [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 1
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 238000002414 normal-phase solid-phase extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- -1 polyoxyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M sodium deoxycholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 210000000605 viral structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000003253 viricidal effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 239000002888 zwitterionic surfactant Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
AT 402 151 B
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung eines virussicheren biologischen Präparates durch Erhitzen in Lösung. Durch das erfindungsgemäße Verfahren kann die Virussicherheit des Präparates unter Erhaltung der biologischen Aktivität erhöht werden.
Unter biologischen Präparaten versteht man Präparate biologischen Ursprungs, die beispielsweise aus Körperflüssigkeiten, wie Blut, oder Zellkulturen gewonnen werden können. Durch den Kontakt mit potentiell infektiösem Material besteht bei derartigen Produkten die Gefahr der Kontamination durch infektiöse Agentien.
Das Risiko der Übertragung von Viren durch Blutprodukte ist bekannt. Unter Blutprodukten werden Produkte aus menschlichem oder tierischem Blut, Plasma oder Serum verstanden, die zur therapeutischen, prophylaktischen oder diagnostischen Anwendung bestimmt sind. Solche Produkte können Enzyme, Proenzyme einschließlich Gerinnungsfaktoren, Enzyminhibitoren, Immunglobuline, Albumine, Plasminogen, Fibrinogen, Fibronectin oder Plasma enthalten. Wässerige Proteinlösungen werden gemäß dem Verfahren der EP-0 278 487 mit bis zu 2 g/100 ml eines nichtionischen Detergens versetzt und anschließend bei niedriger Temperatur, beispielsweise 4’C, solange inkubiert, bis ein virusinaktivierender Effekt erzielt wurde.
Gemäß der EP-0 050 061 wird gleichfalls ein pharmazeutisches Produkt mit Amphiphilen bei einer Temperatur zwischen 4 und 37 *C behandelt.
Diese Behandlung mit Detergentien hat jedoch den Nachteil, daß sie lediglich auf membranumhüllte Viren abzielt: Wenn ein Tensid in einer Konzentration über der mizellbildenden Konzentration (CMC) vorliegt, werden lipidhaltige Membranen solubilisiert und das Virus inaktiviert. Demgegenüber werden Viren, die an sich keine lipidhaltige Membran aufweisen, wie z.B. Hepatitis A-Virus, die aber in Lipidvesikeln eingeschlossen sein können, durch eine Tensidbehandlung freigesetzt und damit aktiviert anstelle von inaktiviert (siehe dazu Manucci PM et al. (1992), The Lancet 339, 819 "Outbreak of hepatitis A among Italian patients with haemophilia").
Oberflächenaktive Mittel werden gemäß der EP-B1-0 124 044 in einer Menge von 0,01 bis 0,5 Gew.% gemeinsam mit einem Polyol und einem chelatbildenden Mittel zu einer fibronectinhaltigen Lösung zugesetzt, die bei einer Temperatur von 50 bis 70 *C wärmebehandelt wird. Die geringen Mengen an oberflächenaktivem Mittel schützen Finbronectin während der mechanischen Behandlung vor Denaturierung.
Ebenso werden Detergentien als Lösungsvermittler gemeinsam mit virusinaktivierenden Mitteln zu Blutplasma zugesetzt, welches bei einer Temperatur bis zu 60'C gehalten wird (US-PS 5 186 945). Um eine gewünschte oberflächenaktive Wirkung zu erzielen, werden sehr geringe Mengen an nichtionischen Detergentien eingesetzt, etwa in einer Konzentration von 0,001 bis 5 Gew.%. Der Vorteil der Verwendung dieser geringen Detergensmengen liegt darin, daß diese nicht entfernt werden müssen.
Es ist weiters in der EP-0 131 740 beschrieben, daß ein Verfahren zur Inaktivierung von Viren in einer Lösung mit organischen Lösungsmitteln bei einer Temperatur von 0 bis 70 "C durchgeführt werden kann. Als Benetzungsmittel kommen dabei 0,001 bis 10 Gew.% Detergentien zum Einsatz. Jedoch ist es erforderlich, die labilen Proteine bei Erhitzen der Lösung zu stabilisieren. Damit werden aber nicht nur das labile Protein stabilisiert, sondern auch die Viruskomponenten.
Ein Verfahren zur Inaktivierung von Viren in einem Produkt, das an eine feste Phase adsorbiert ist, ist auch in der EP-0 197 554 beschrieben. Das adsorbierte Produkt wird mit einem virusinaktivierenden Mittel in Kontakt gebracht, worauf die feste Phase abgetrennt und gewaschen wird. Zuletzt wird das Produkt wieder desorbiert. Als virusinaktivierendes Mittel ist unter anderem eine amphiphile Substanz beschrieben, die anionisch, kationisch, ampholytisch und nichtionisch sein kann. Die Behandlung kann jedoch nur bei einer Temperatur von 0 bis 50 *C vorgenommen werden.
Die Erfindung stellt sich zur Aufgabe, ein Verfahren zur Verfügung zu stellen, welches die Herstellung eines virussicheren Präparates enthaltend ein labiles Protein durch Erhitzen unter weitgehender Erhaltung der biologischen Aktivität ermöglicht.
Die Aufgabe wird erfindungsgemäß dadurch gelöst, daß dem in wässeriger Lösung vorliegenden Präparat vor dem Erhitzen ein Tensid in einer hohen Konzentration mit mindestens 1 Gew.%, vorzugsweise mehr als 10 Gew.%, bis zu 98 Gew.% eines Tensids zugesetzt und das Tensid nach dem Erhitzen entfernt wird. Die erfindungsgemäß geeigneten Tenside können aus der Gruppe der nichtionischen, anionischen, kationischen oder zwitterionischen Tenside ausgewählt werden und sind vorzugsweise biologisch verträglich. Beispielsweise kann ein Tween®-(Polyoxyethylenderivate der Sorbinatester) oder Triton®-(z.B. Ethox-ylate des 4-(l,1,3,3-Tetramethyl(butyl)phenols oder Benzyltrimethyl(ammoniumhydroxid)) Tensid, Pluronic®-(Polyalkylenglykole auf der Basis von Blockpolymeren aus Ethylen- und Propylenoxid), N-Octylglucosid, Natriumdesoxycholat, Benzyltrimethylammoniumchlorid, Benzyldimethyl-2-hydroxyäthyleammoniumchlorid oder Sulfobetain®SBl2 (N-Dodecyl-N'N-dimethylammonio-3-propansulfat) verwendet werden. Das erhaltene 2
AT 402 151 B
Präparat zeichnet sich durch seinen geringen Anteil an Denaturierungsprodukten aus, da trotz Erhitzen mindestens 50 %, vorzugsweise mindestens 80 % der biologischen Aktivität des Präparates erhalten bleibt. Dabei konnte beobachtet werden, daß die nach dem Erhitzen von hochkonzentrierten Proteinlösungen auftretenden Trübungen der Lösung ausbleiben. Die Extinktion Esoo der erhitzten Lösung mit mindestens 5 Gew.% Proteingehalt beträgt weniger als 0,1 (bei einer Schichtdicke von 1 cm, Referenz: Wasser). Als Ergebnis wird also ein optisch klares Produkt, weitgehend frei von Denaturierungsprodukten erhalten.
Es hat sich herausgestellt, daß der Zusatz eines Lösungsvermittlers vor dem Erhitzen der Lösung vorteilhaft ist. Einer Faktor XIII haltigen Lösung kann beispielsweise Arginin zugesetzt werden, um den Effekt der Tensidwirkung auf die Reduktion der Trübungsbildung zu verstärken.
Die Hitzebehandlung wird bei einer Temperatur von 55 bis 65 "C, vorzugsweise bei etwa 60 ”C, und während einer Zeitdauer, die ausreicht, eventuell vorhandene Viren zu inaktivieren, durchgeführt, vorzugsweise während 2 min bis 100 Stunden. Am meisten bevorzugt wird eine Behandlungsdauer von 30 min bis 10 Stunden. Die benötigte Zeitdauer des erfindungsgemäßen Verfahrens kann mit Hilfe von Modellviren, wie HIV, Sindbis-, Polio-, FSME- und Vaccinia-Virus, in einem Vorversuch bestimmt werden. Ein vor dem Erhitzen zugesetztes Virus darf nach dem Erhitzen in der Lösung nicht mehr nachweisbar sein.
Obwohl eine Virus-Inaktivierungsmethode mittels Tensiden im Stand der Technik lediglich als wirksam gegen membranumhüllte Viren beschrieben wird, kann der gewünschte Effekt auch gegen nichtmembranumhüllte Viren erzielt werden, wenn das erfindungsgemäße Verfahren durchgeführt wird.
Eine wesentliche Denaturierung der Proteine im erfindungsgemäß erhitzten Produkt kann nicht festgestellt werden. Es war überraschend, daß hitzelabile Proteine durch die Anwesenheit von Tensiden sogar stabilisiert werden. Es ist daher möglich, labile Proteine erfindungsgemäß zu erhitzen und deren spezifische Aktivität aufrechtzuerhalten. Die Erhaltung der biologischen Aktivität während einer Hitzebehandlung ist vor allem bei hitzelabilen Proteinen von Bedeutung. Eine Behandlung von hitzestabilen Präparationen, beispielsweise einer Albumin-Präparation, ist jedoch weniger kritisch. Die Erfindung betrifft daher vor allem ein Verfahren zur Herstellung eines Präparates, das hitzelabile Proteine, ausgenommen Albumin, enthält.
Auf einen Zusatz üblicher Stabilisatoren, wie z.B. Polyole und/oder Aminosäuren oder deren Derivate, kann dabei verzichtet werden. Dies hat den Vorteil, daß die Virusinaktivierung rascher erfolgt und die Effektivität der Hitzebehandlung wesentlich besser ist. Die Entfernung der üblichen Stabilisatoren ist überdies aufwendig und kann somit vermieden werden.
So kann beispielsweise eine wässerige Lösung, enthaltend Blutgerinnungsfaktor XIII, erfindungsgemäß ohne Verwendung der üblichen Stabilisatoren erhitzt werden.
Gemäß einem weiteren Aspekt der Erfindung wird die virusinaktivierende Wärmebehandlung an einem an einen festen Träger adsorbierten Präparat vorgenommen, wobei das adsorbierte Präparat beim Erhitzen in einer Lösung eines Tensids suspendiert ist. Nach dem Erhitzen kann das virusinaktivierte Präparat in bekannter Weise vom Träger getrennt werden. Blutfaktoren, wie Faktoren des Prothrombinkomplexes, werden beispielsweise an einem Ionenaustauscher oder an eine Affinitätsmatrix adsorbiert und in einer wässerigen Lösung in Anwesenheit hoher Tensidkonzentrationen suspendiert und erhitzt.
Die Erfindung umfaßt gleichermaßen ein Verfahren zum Erhöhen der Virussicherheit eines biologischen Präparates unter Erhaltung von mindestens 50 %, vorzugsweise 80 % der biologischen Aktivität, insbesondere der Virussicherheit gegenüber membranumhüllten und nicht-membranumhüllten Viren, wobei das Präparat in wässeriger Lösung bzw. in Suspension - gebunden an einen festen Träger - in Gegenwart eines gelösten Tensids in einer Konzentration von mindestens 1 Gew.%, vorzugsweise mehr als 10 Gew.%, bis zu 98 Gew.% erhitzt wird.
Das erfindungsgemäße Verfahren eignet sich überraschenderweise auch zum Stabilisieren eines biologischen Präparats während einer Hitzebehandlung.
Das erfindungsgemäße Verfahren erfolgt ausschließlich in wässeriger Lösung oder Suspension, die je nach Tensidkonzentration auch mehrphasig sein kann. Durch die hervorragende viruzide Wirkung der hochkonzentrierten Tenside kann auf die Verwendung organischer Lösungsmittel verzichtet werden. Das erfindungsgemäß behandelte Präparat enthält daher keine toxischen Spuren an organischen Lösungsmitteln.
Die Entfernung des erfindungsgemäß zugesetzten Tensids erfolgt mit an sich üblichen Methoden. Beispielsweise kann das behandelte Präparat an einem festen Träger adsorbiert und tensidfrei gewaschen werden. Die Präzipitation der zu präparierenden Proteine mit Fällungsmitteln, wie Ethanol, Ammoniumsulfat oder Polyethylenglykol, die Flüssigphasenextraktion oder die Phasentrennung durch Zusatz von bestimmten Substanzen, wie Mischungen von Salz und Polyethylenglykol oder löslichem Dextran, sowie die Festphasenextraktion von Tensid an Cl8-Material ("reversed phase chromatography") sind gleichermaßen geeignete Methoden zur Abtrennung zumindest des Großteils an Tensid vom Präparat. Durch die geeigneten Maßnahmen zur Entfernung des Tensids wird die Tensidkonzentration im Präparat vorzugsweise auf 3
AT 402 151 B weniger als 0,01 Gew.% reduziert.
Die Erfindung wird durch die nachfolgenden Beispiele noch näher erläutert.
Beispiel 1: Hitzebehandlung von an Ionenaustauscher gebundenem aktiviertem Prothrombinkomplex (FEI-BA) in Gegenwart von Tween-80 (Inaktivierung von Vaccinia-Virus) 15 mg DEAE-Sephadex A-50 (Fa. Pharmacia) wurden 15 min bei Raumtemperatur mit 1 ml einer Lösung von 30 g/l NaCI in Wasser zur Quellung inkubiert. Danach wurde das Gel durch Zentrifugation vom Quellüberstand abgetrennt. Anschließend folgten fünf Waschungen des Gels mit je 1 ml Puffer (9 g/l Na2HP0*.2H20, 7 g/l NaCI, pH 7,0) und weitere zwei Waschungen mit einem Puffer (7 g/l Na3Citrat.2H20, 7 g/l NaCI), wobei ebenfalls resuspendiert und zentrifugiert wurde. 30 ml frisch gefrorenes menschliches Citratplasma wurden bei 0 bis +4’C aufgetaut und das anfallende Kryopräzipitat durch Zentrifugation bei + 2 * C abgetrennt. Der daraus resultierende "Kryoüber-stand" wurde mit dem gewaschen DEAE-Sephadex inkubiert, wobei FEIBA generiert und zusammen mit den Faktoren des Prothrombinkomplexes und inertem Protein an das Gel adsorbiert wurde. Danach wurde coadsorbiertes Inertprotein vom DEAE-Gel durch Waschen mit einem Puffer (9 g/l Na2HP0*.2H20, 7 g/l NaCI) entfernt.
Der pufferfeuchte Gel-Proteinkomplex wurde nun mit 1 ml Tween-80 10 min bei 60'C suspendiert, wobei zuvor 0,1 ml einer Vacciniavirussuspension zugesetzt wurden. Der Virustiter wurde nach 2, 4, 6, 8 und 10 min bestimmt. Die Suspension des Gel-Proteinkomplexes in Tween-80 wurde dann mit einer Lösung von 30 g/l NaCI in Wasser 1:10 verdünnt. Dabei wurde der Wirkstoff vom Gel eluiert. Das Tensid wurde aus dieser Lösung in bekannter Weise durch Adsorption mit einer Affinitätsmatrix für die Extraktion unerwünschter Tenside aus Protein-Lösungen (Extracti-Gel® D Detergent Removing Gel der Firma Pierce) entfernt. Die Lösung wurde nun gegen destilliertes Wasser dialysiert, eingefroren und lyophilisiert. Nach Rekonstitution des Lyophilisats wurde die FEIB-Aktivität gemäß der AT-350726 bestimmt.
Als Kontrolle dienten eine ebenso hergestellte Präparation von FEIBA, versetzt mit Virus, jedoch ohne Behandlung mit heißem Tensid, sowie eine Präparation ohne Tensid- und Hitzebehandlung.
Die Analysenergebnisse sind Tabelle 1 zu entnehmen. 4
AT 402 151 B TABELLE 1 c 2 u 4> o es s ·*» es 2
lO
Hitzebehandlung von an Ionenaustauscher gebundenem aktiviertem Prothrombinkomplex (FEIBA) in Gegenwart von Tween-80 (Vaccinia)
in.
© VI
q rr O O 00
:CC
co - *5E o 00S 3 o>
-CO e & 6- φ s
ΐ- > S o 00 0> t C Λ ω -» ® S ω o N 3hS^E·^ :C0 n.b.....nicht bestimmt 5
AT 402 151 B
Beispiel 2: Hitzbehandlung von an Ionenaustauscher gebundenem aktivierten Prothrombinkomplex (FEIBA) in Gegenwart von Tween-80 (Inaktivierung von FSME-Viren) FEIBA wurde analog zu Beispiel 1 hergestellt. Zur Behandlung des pufferfeuchten Gel-Proteinkomplexes mit Tween-80 wurden jedoch 0,1 ml einer FSME-Virussuspension zugesetzt. Der Virustiter wurde nach 0,5, 1, 1,5, 2, 3, 4, 7 und 10 min bestimmt. Die FEIB-Aktivität im Eluat wurde, wie in Beispiel 1 beschrieben, bestimmt.
Als Kontrolle dienten wieder eine ebenso hergestellte Präparation von FEIBA, versetzt mit Virus, jedoch ohne Behandlung mit Tensid, sowie eine ebensolche Präparation ohne Tween-80- und ohne Hitzebehandlung.
Die Analysenergebnisse sind Tabelle 2 zu entnehmen. 6 10 75 ε o 20 25 Φ Ό = < «· Hr jo CQ Ä ® Μ hoH 2 « ''CD j; x t υ ο w 5 ao Ξ e00 5 | i 2 je ® 2 ’S « S-S * 30 35 es O L © > H hc §= t 40 45 50 «oΞ u Φ
α o >> J u α c ca
AT 402 151 B TABELLE 2 ja c
TT CM O -S -Ä *"“· c c
o V CM o o o o o -q c C ω _q c -O c Ä +* .5 O Ä .fi N t- 2 CO o <*· JD JD J2 .a s "3 v c 1«· C C c o ca > u Φ o o u T3 o o **ΐ jS cö b* oa c c e c Ϊ dJ V V s α φ Q o bO iO o -Q _o -O O O V c r* c c c ** — o G o a ,-r-i -O --1 c ‘0 c c C - V G m o λ JD -£5 JD ©' c C c c C V O 00 s 3 J3 Ä o 00
«I α> ·*« ϊ E-0) c _£ O :«β ^ ---— s-g||Γ«8
O ® 0) S Λ bt h « ϊ S £ξ ü | x- s eSl-S? 3 -3 3 O
:CS n.b.....nicht bestimmt 7 55
AT 402 151 B
Beispiel 3 : Hitzebehandlung von an Ionenaustauscher gebundenem Prothrombinkomplex in Gegenwart von Tween-80 (Inaktivierung von Vaccinia-Viren) 30 ml frisch gefrorenes menschliches Citratplasma wurden bei 0 bis +4”C aufgetaut und das dabei anfallende Kryopräzipitat durch Zentrifugation bei +2”C abgetrennt. Der daraus resultierende "Kryoüber-stand" wurde mit 2 IE Heparin/ml versetzt. Danach wurden die Proteine des Prothrombinkomplexes mit DEAE-Sephadex A-50 (Fa. Pharmacia) in einer Konzentration von 0,5 mg/ml adsorbiert. Der Gel-Proteinkomplex wurde von der Lösung abgetrennt und jeweils mit einem Puffer 1 (4 g/l Na3Citrat.2H2 0, 7 g/l NaCI, 9 g/l Na2HP0*.2H20, 500 IE Heparin/I, pH 7,5) und anschließend mit Puffer 2 (4 g/l Na3Citrat.2H2 0/1,7 g/l NaCI, 500 IE Heparin/I, pH 7,5) gewaschen.
Das gewaschene Gel wurde nun zur Virusinaktivierung mit 1 ml Tween-80 10 min bei 60 *C suspendiert. Der Tensidlösung wurden 0,1 ml einer Vacciniavirussuspension zugesetzt. Der Virustiter wurde nach 2, 4, 6, 8 und 10 min bestimmt. Die Suspension des Gel-Proteinkompiexes in Tween-80 wurde anschließend mit einer Lösung von 1 g/l Na3Citrat.2H20, 30 g/l NaCI, 1000 IE Heparin/I, pH 7,0, 1:10 verdünnt. Dabei wurde der Prothrombinkomplex eluiert. Das Tensid aus dieser Lösung wurde in bekannter Weise durch Adsorption mit einer Affinitätsmatrix für die Extraktion unerwünschter Tenside aus Protein-Lösungen (Extracti-Gel® D Detergent Removing Gel der Firma Pierce) entfernt. Die Prothrombinkomplex enthaltende Lösung wurde gegen einen Puffer, enthaltend 4 g/l Na3Citrat.2H20 und 8 g/l NaCI, pH 7,0, umgepuffert und lyophilisiert.
Im rekonstituierten, lyophilisierten Prothrombinkomplex wurde der Proteingehalt, sowie die Gerinnungsfaktoren II, VII, IX und X bestimmt.
Als Kontrolle dienten ein wie oben beschrieben hergestellter Prothrombinkomplex, jedoch ohne Tensidbehandlung, sowie eine Präparation ohne Tensid- und Hitzebehandlung.
Die Resultate sind Tabelle 3 zu entnehmen. 8 5 70 75
Hitzebehandlung von an Ionenaustauscher gebundenem Prothrombinkomplex in Gegenwart von Twcen-80 (Vaccinia) 45 50
AT 402 151 B TABELLE 3 «0 s ΤΓ CO »o £ ^ (Λ o' Ü X iO t- α »-» o >» u j o o' . _ w »—» s2> e C 0,3 n.b. 0,3 η I) 0,3 w g a oq Ci cs s
ur OJ o VI
O QO c
o QO :« C O 00 0) 05 r* 0) > <*-> c τα ® ;? • H o» & V X bc « C ^ \3 P V -ΓΗ **3 o V N 3 CO S w m4 44 Ofl ? 4-J _ Γ2 ’S 3 to H 2 < &ud Γ" a c > bi £ 4) *C λ 9) 5! fl ^ N 0) o> ε « fl "O fl C -β 03 3 H
:C0 C r* 4) > *-> O
Cl, bn £ s 4) &© n.b.....nicht bestimmt 9 55
AT 402 151 B
Beispiel 4: Hitzebehandlung von an Ionenaustauscher gebundenem Prothrombinkomplex in Gegenwart von Tween-80 (Inaktivierung von FSME-Viren)
Prothrombinkomplex wurde analog zu Beispiel 3 hergestellt. Zur Behandlung des pufferfeuchten Gelproteinkomplexes mit Tween-80 wurden jedoch 0,1 ml einer FSME-Virussuspension zugesetzt. Der Virustiter wurde nach 0,5, 1, 1,5, 2, 3, 4, 7 und 10 min bestimmt. Im rekonstituierten lyophilisierten Prothrombinkomplex wurden der Proteingehalt sowie die Gerinnungsfaktoren II, VII, IX und X bestimmt.
Als Kontrolle dienten ein wie oben beschrieben hergestellter Prothrombinkomplex, jedoch ohne Tensidbehandlung, sowie eine Präparation ohne Tensid- und Hitzebehandlung.
Die Resultate sind Tabelle 4 zu entnehmen. io
AT 402 151 B TABELLE 4 5 60 ^ : 1,4 0,6 ; iß ^4 3 u 0) 3 x : CO ; 0.7 j 2,1 10 nach LyopI Faktor VII n.b. 0,3 n.b. OO o n.b 0,3 15 w β 3 i—i Ä Ξ : 00 ; rH 1.9 05 20 (3 S on tu -w' O 00 25 30 ε Vs•a c 3S e hc 0) T~ «S * Λ H o c =5 5 CD U fl *S E § a o «~ o5 s
O c~
M C "Ό β
Tj* 35 f» “ I 3 O Ji _C M ε o Ό S «3
<u 03 u « Ό u « 3 β Q
CO 03 *o 40 V ja 0) = N T3 o 32 u ^ Cu
iß O 45
o oo c 4> « Ϊ H 50 JO c JO c JO c o o V o o V o o o o o o •ti > o CN» JD o .d cd .d C V c o c o -d o -d -d C V c c c o J2 o -O -d —! C V c c -D J3 -d ^5 c c C c *“ o O -O J2 -d c V c C c -d ja -d .d c S e c tq 00 -d -d c O c c c _o _d -d -d -d c c c c +·» :flj C O 00 :CQ /*v c o 00 Φ 4-J J—S :C8 C 4-» · .-4 * *N fll > z» sJj -w > *55 •w c .fl bt ^ « «> fl .g •P ·Η > +* r*5 P * V3 ί 2 ^ ZS 1=3 o Dh Ö N 3 « ϊ·-5 s HBfiE /-“N 5 - 2 bo n s <υ -C S> 8*4 o> ε «T3 *i> C c -C ^ »i g <u -c Q. ££ co O ** o Q. CO e .s 3 o s-e n.b.....nicht bestimmt 11 55
AT 402 151 B
Beispiel 5 : Stabilität des Faktor XIII beim Erhitzen in Lösung (ohne Stabilisatoren) in Gegenwart eines Tensids
Eine Plasmafraktion (Cohn I Niederschlag) wurde mit der 10-fachen Menge einer citrathaltigen Pufferlösung, pH 7,0 (13,4 g/l Na3Citrat.2H2O, 29 g/l NaCI, 20 000 KIE Aprotinin/I) gelöst. Nach Zusatz von Ammoniumsulfat bis zur 16 %igen Sättigung (bei Raumtemperatur) wurde auf 4" C abgekühlt und das Gemisch noch 2 h gerührt. Der entstände Niederschlag wurde mit der Pufferlösung gelöst und die Fällung mit Ammoniumsulfat einmal wiederholt.
Der Niederschlag wurde in einer citrathaltigen Pufferlösung, pH 7,0 (5,4 g/l Na3Citrat.2H2 0, 7 g/l NaCI, 0,1 KIE Aprotinin/I) gelöst und 10 min auf 56’C erhitzt. Der entstandene Niederschlag aus denaturiertem Fibrinogen wurde abzentrifugiert. Der Hitzefällungsüberstand wurde durch Fällung mit 3,5 Gew./Vol.% PEG 4000 bei 4*C von Begleitproteinen befreit. Anschließend wurde der Faktor XIII durch Zugabe von PEG 4000 bis zu einer Konzentration von 10 Gew./Vol.% bei 4*C ausgefällt, durch Zentrifugieren abgetrennt und in 1/25 des ursprünglichen Volumens eines 0,1 Gew.%igen Natriumcitratpuffers (pH 7,0) gelöst.
Die spezifische Aktivität betrug 21 E Faktor Xlll/mg Protein. Die Lösung wurde geteilt und ein Teil mit 1 Gew.% Tween 80 versetzt. Beide Lösungen wurden 6 h lang auf 60 *C erhitzt. Die Faktor Xlll-Restaktivitä-ten nach 6 h Erhitzen betrugen 82 % ohne Tensidzusatz und 84 % mit Tensidzusatz.
Beispiel 6: Beispiel 5 wurde mit verschiedenen Tensiden in unterschiedlichen Konzentrationen wiederholt (Erhitzen: 4 h, 60' C). TABELLE 5
Erhitzen einer Faktor Xlll-haltigen Lösung in Anwesenheit von Tensid Tensid Konzentration Gew.% FXIII-Restaktivität % Tween 80 15 97 Triton X-100 15 91 Pluronic P 85 10 96
Die Beispiele 5 und 6 zeigen, daß eine Hitzebehandlung von Faktor XIII in Gegenwart von Tensiden durchgeführt werden kann, ohne größere Verluste an Faktor Xlll-Aktivität in Kauf nehmen zu müssen.
Das folgende Beispiel 7 illustriert die überraschend verbesserte Inaktivierungskinetik eines Modeilvirus durch eine Hitzebehandlung in Gegenwart eines Tensids im Vergleich zur Hitzebehandlung ohne Tensidzusatz:
Beispiel 7: Inaktivierung eines Modellvirus (Sindbis) in einer Faktor Xlll-haltigen Lösung in Anwesenheit bzw. Abwesenheit eines Tensids
Eine Faktor Xlll-haltige Lösung entsprechend Beispiel 5 wurde geteilt und ein Teil mit 0,3 Gew./Vol.% N-Octylglukosid versetzt.
Beide Lösungen wurden auf 60 °C erhitzt, mit 10 Vol.% einer Sindbis-Virus-Suspension versetzt (Start der Virusinaktivierungsreaktion) und bei 60 * C weiter inkubiert. In bestimmten Zeitabständen wurden Proben gezogen und der Virustiter bestimmt.
Die Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle 6 zusammengestellt. 12
Claims (7)
- AT 402 151 B TABELLE 6 Virusinaktivierung in einer Faktor Xlll-haltigen Lösung mit und ohne Tensid bei 60 °C Virustiter (log 10) Dauer des Erhitzens auf 60 ° C (Minuten) ohne Tensid mit Tensid 0 8,1 8,1 0,5 5,75 1,88 1 5,0 £ 1,5 1,5 4,25 £ 1,5 2 3,88 < 1,5 2,5 3,75 £ 1,5 3 3,25 £ 1,5 3,5 2,75 £ 1,5 4 2,63 £ 1,5 4,5 2,5 £ 1,5 5 2,38 £ 1,5 6 1,88 £ 1,5 7 2,1 £ 1,5 8,10,15,20,30 £ 1,5 £ 1,5 Durch den Zusatz von Tensid wird eine noch schnellere und weitgehendere Virusinaktivierung erhalten, ohne größere Verluste an Faktor Xlll-Aktivität in Kauf nehmen zu müssen (vergleiche Beispiel 6). Patentansprüche 1. Verfahren zur Herstellung eines virussicheren biologischen Präparates unter Anwendung eines Tensids und durch Erhitzen, wobei mindestens 50 % der biologischen Aktivität erhalten werden, dadurch gekennzeichnet, daß dem in wässeriger Lösung vorliegenden Präparat vor dem Erhitzen mindestens 1 Gew.%, vorzugsweise mehr als 10 Gew.%, bis zu 98 Gew.% des biologisch verträglichen Tensids zugesetzt werden und das Tensid nach dem Erhitzen entfernt wird.
- 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Erhitzen bei einer Temperatur im Bereich von 55 bis 65 · C während einer Zeitdauer durchgeführt wird, die ausreicht, um infektiöse Agentien zu inaktivieren, vorzugsweise während 2 Minuten bis 100 Stunden.
- 3. Verfahren zur Herstellung eines virussicheren biologischen, an einen festen Träger adsorbierten Präparates durch Erhitzen unter Erhaltung von mindestens 50 % der biologischen Aktivität des Präparates, dadurch gekennzeichnet, daß das an dem festen Träger adsorbierte Präparat in einer Lösung eines biologisch verträglichen Tensids suspendiert, die Suspension erhitzt und gegebenenfalls das virusinaktivierte Präparat vom Träger getrennt wird.
- 4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß der Lösung oder der Suspension ein Lösungsvermittler für Proteine zugesetzt wird.
- 5. Verfahren zum Erhöhen der Virussicherheit eines biologischen Präparates unter Erhaltung von mindestens 50 %, vorzugsweise 80 % der biologischen Aktivität, insbesondere der Virussicherheit gegenüber membranumhüllten und nicht-membranumhüllten Viren, dadurch gekennzeichnet, daß das Präparat in wässeriger Lösung bzw. in Suspension - gebunden an einen festen Träger - in Gegenwart eines gelösten Tensids in einer Konzentration von mindestens 1 Gew.%, vorzugsweise mehr als 10 Gew.%, 13 AT 402 151 B bis zu 98 Gew.% erhitzt wird.
- 6. Verfahren zum Stabilisieren eines biologischen Präparates während einer Hitzebehandlung, dadurch gekennzeichnet, daß das Präparat in wässeriger Lösung bzw. in Suspension - gebunden an einen festen Träger - in Gegenwart eines gelösten, biologisch verträglichen Tensids in einer Konzentration von mindestens 1 Gew.%, vorzugsweise mehr als 10 Gew.%, bis zu 98 Gew.% erhitzt wird.
- 7. Virussichere biologische Präparation, erhältlich nach einem der Ansprüche 1 bis 4, die optisch klar ist. 14
Priority Applications (9)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT154793A AT402151B (de) | 1993-08-03 | 1993-08-03 | Verfahren zur herstellung eines virussicheren biologischen präparates |
| AU66530/94A AU6653094A (en) | 1992-12-16 | 1993-12-10 | Process for preparing a virus-safe biological composition |
| JP06513548A JP3133338B2 (ja) | 1992-12-16 | 1993-12-10 | ウイルス的に安全な生物学的組成物の調製方法 |
| PCT/AT1993/000191 WO1994013329A1 (de) | 1992-12-16 | 1993-12-10 | Verfahren zur herstellung eines virussicheren biologischen präparates |
| EP94901684A EP0674531A1 (de) | 1992-12-16 | 1993-12-10 | Verfahren zur herstellung eines virussicheren biologischen präparates |
| US08/165,906 US5639730A (en) | 1992-12-16 | 1993-12-14 | Method of producing a virus-safe biological preparation |
| HR931496A HRP931496B1 (en) | 1992-12-16 | 1993-12-15 | Process for the preparation of biological preparations not containing (active) viruses |
| SI9300659A SI9300659A (en) | 1992-12-16 | 1993-12-16 | Process for the preparation of virus safe biological composition |
| US08/678,594 US5733885A (en) | 1992-12-16 | 1996-07-15 | Method of producing a virus-safe biological preparation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT154793A AT402151B (de) | 1993-08-03 | 1993-08-03 | Verfahren zur herstellung eines virussicheren biologischen präparates |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ATA154793A ATA154793A (de) | 1996-07-15 |
| AT402151B true AT402151B (de) | 1997-02-25 |
Family
ID=3515764
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| AT154793A AT402151B (de) | 1992-12-16 | 1993-08-03 | Verfahren zur herstellung eines virussicheren biologischen präparates |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| AT (1) | AT402151B (de) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5891843A (en) * | 1995-08-28 | 1999-04-06 | Immuno Aktiengesllschaft | Pharmaceutical composition for the treatment of blood coagulation diseases, methods for the production thereof and its use |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0278487A2 (de) * | 1987-02-13 | 1988-08-17 | BEHRINGWERKE Aktiengesellschaft | Verfahren zur Inaktivierung hüllhaltiger Viren in mittels einer Zelle in vitro hergestellten Protein-Präparationen |
| EP0345246A2 (de) * | 1988-05-31 | 1989-12-06 | IMMUNO Aktiengesellschaft | Gewebeklebstoff |
| US5186945A (en) * | 1988-11-23 | 1993-02-16 | Edward Shanbrom | Blood plasma antiviral process and composition |
-
1993
- 1993-08-03 AT AT154793A patent/AT402151B/de not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0278487A2 (de) * | 1987-02-13 | 1988-08-17 | BEHRINGWERKE Aktiengesellschaft | Verfahren zur Inaktivierung hüllhaltiger Viren in mittels einer Zelle in vitro hergestellten Protein-Präparationen |
| EP0345246A2 (de) * | 1988-05-31 | 1989-12-06 | IMMUNO Aktiengesellschaft | Gewebeklebstoff |
| US5186945A (en) * | 1988-11-23 | 1993-02-16 | Edward Shanbrom | Blood plasma antiviral process and composition |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5891843A (en) * | 1995-08-28 | 1999-04-06 | Immuno Aktiengesllschaft | Pharmaceutical composition for the treatment of blood coagulation diseases, methods for the production thereof and its use |
| US6013620A (en) * | 1995-08-28 | 2000-01-11 | Baxter Aktiengesellschaft | Pharmaceutical composition for the treatment of blood coagulation diseases, methods for the production thereof and its use |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ATA154793A (de) | 1996-07-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0674531A1 (de) | Verfahren zur herstellung eines virussicheren biologischen präparates | |
| US4446134A (en) | Process for heat treatment of aqueous solution containing human blood coagulation factor VIII | |
| AT398079B (de) | Präparation mit thrombinaktivität sowie verfahren zu ihrer herstellung | |
| DE3880292T2 (de) | Ausscheidung von prozesschemikalien aus biologischen gemischen mit halogenierten kohlenwasserstoffen. | |
| DE69011136T3 (de) | Verfahren zur Herstellung einer Protein enthaltenden Zusammensetzung. | |
| DE19531637A1 (de) | Pharmazeutische Zusammensetzung zur Behandlung von Blutgerinnungsstörugnen, Verfahren zur Herstellung derselben und deren Verwendung | |
| EP0268973A2 (de) | Verfahren zur Herstellung eines virussicheren, lagerstabilen und intravenös verträglichen Immunglobulin-G-Präparates | |
| EP0973544B1 (de) | Immuntolerante prothrombinkomplex-präparation | |
| EP0722344B1 (de) | Verfahren zur virusinaktivierung in gegenwart eines polyethers und eines agens | |
| EP0567448B2 (de) | Verfahren zur Herstellung von Faktor VIII | |
| DE3888571T2 (de) | Stabilisierung von biologischen und pharmazeutischen Produkten während der Inaktivierung von viralen und bakteriellen Keimen. | |
| AT402151B (de) | Verfahren zur herstellung eines virussicheren biologischen präparates | |
| DE4434538C2 (de) | Verfahren zur Virusinaktivierung in Gegenwart eines Polyethers und eines chaotropen Agens | |
| EP0841954B1 (de) | Verfahren zur herstellung eines virussicheren, therapeutischen, biologischen präparates | |
| EP0237981A2 (de) | Verfahren zur Herstellung eines den Blutgerinnungsfaktor VIII enthaltenden, sterilen Präparates | |
| EP0973543B1 (de) | Verfahren zur inaktivierung von pathogenen, insbesondere von viren, in einem biologischen material | |
| DE19623293C2 (de) | Nicht-immunogene Faktor VIII-enthaltende Zusammensetzung und ein Verfahren zu ihrer Herstellung | |
| AT406824B (de) | Immuntolerante prothrombinkomplex-präparation | |
| AT402892B (de) | Verfahren zur herstellung eines virussicheren biologischen präparates | |
| WO1997049801A1 (de) | Verfahren zur herstellung von prothrombin als antidotausgangssubstanz für natürliche und synthetische thrombininhibitoren |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| RER | Ceased as to paragraph 5 lit. 3 law introducing patent treaties | ||
| MK07 | Expiry |
Effective date: 20130803 |