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Verfahren zur Gewinnung der neuen Verbindungen
Psilocybin und Psilocin
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Gewinnung der bisher unbekannten, psychotrop wirksamen Verbindungen Psilocybin und Psilocin aus Pilzarten.
Es war schon bekannt (R. Heim, C. r. hebd. Séances Acad. Sei. 242 [1956], S. 965), dass eine Reihe von natürlich vorkommenden Pilzarten in Mexiko, Ostsibirien, Kamtschatka und in andern Gegenden
Asiens und Amerikas von den Eingeborenen zu rituellen Zwecken oder als Genuss-oder Rauschmittel verwendet werden, da. ihre Einnahme eigenartige Wirkungen auf den Körper und vor allem auf die Psyche des Menschen hervorruft. Bei diesen sogenannten halluzinogenen Pilzen handelt es sich um folgende Gattungen : Psilocybe, Stropharia, Panaeolus, Conocybe, Amanita, Russula.
Es war aber bisher nicht gelungen, aus Pilzmaterial natürlicher Herkunft oder aus künstlich gezüchtetem Pilzmaterial psychotrop wirksame Verbindungen zu isolieren.
Es wurde nun ein Verfahren zur Gewinnung der bisher unbekannten Wirkstoffe Psilocybin und Psilocin gefunden, welches dadurch gekennzeichnet ist, dass man Pilzmaterial natürlicher Herkunft der Gattungen Psilocybe, Stropharia, Panaeolus, Conocybe, Amanita oder Russula oder künstlich gezüchtete Pilzmaterial, erhalten aus Kulturen dieser Pilze oder ihrer biologischen Varianten oder Mutanten, trocknet, vermahlt und mit Wasser, einem niederen aliphatischen Alkohol oder einem Gemisch von Wasser und einem mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel extrahiert, aus der wässerigen Lösung des Extraktionsrückstandes, gegebenenfalls nach Entfettung mit Petroläther, durch fraktionierte Fällung mit einem mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel, z.
B. absolutem Äthanol oder Aceton, inaktive Begleitstoffe abtrennt und die im Filtrat enthaltenen Wirkstoffe durch Adsorption an Cellulosepulver und Elution mit wassergesättigtem Butanol oder einem andern mit Wasser nicht mischbaren Alkohol voneinander trennt und gegebenenfalls von Halogen befreit.
Das Verfahren wird vorzugsweise folgendermassen ausgeführt :
Das aktive Pilzmaterial (Fruchtkörper, Sklerotien oder Mycel) wird im Luftstrom oder im Vakuum bei 20 - 400C vorsichtig getrocknet, feinst vermahlen und Wasser, einem niederen aliphatischen Alkohol oder einem Gemisch von Wasser und einem mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel bei Raumtemperatur erschöpfend extrahiert. Die Extrakte werden im Vakuum bei tiefer Temperatur eingedampft, und der Rückstand mit Petroläther entfettet und zur Entfernung inaktiver Begleitstoffe mit Aceton oder Chloroform-Alkohol extrahiert. Weitere Ballaststoffe werden durch Auflösen des Rückstandes in möglichst wenig Wasser und wiederholtes Fällen mit absolutem Äthanol oder Aceton abgetrennt ; das Filtrat wird im Vakuum bei tiefer Temperatur eingedampft.
Die weitere Reinigung erfolgt durch Chromatographie an Cellulose-Pulver nach dem Durchlaufverfahren; die Elution erfolgt mit wassergesättigtem Butanol oder einem andern mit Wasser nicht mischbaren Alkohol. Die aufgefangenen Fraktionen werden mit dem Keller-Reagens (eisenchloridhaltiger Eisessig und konz. Schwefelsäure) auf Wirkstoffgehalt geprüft. Die Fraktionen mit positiver Farbreaktion werden vereinigt und nötigenfalls nochmals einer chromatographischen Aufteilung an einer Säule aus CellulosePulver unterworfen.
Aus dem Durchlauf-Chromatogramm wird eine rascher wandernde Zone eluiert, welche einen durch eine rein blaue Keller-Farbreaktion gekennzeichneten,"Psilocin"genannten Wirkstoff liefert, während aus einer langsamer wandernden Zone ein zweiter, mengenmässig vorherrschender Wirkstoff mit violetter Farbreaktion, das "Psilocybin", erhalten wird.
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Die aus der Säule schon in ziemlich reiner Form erhaltenen Wirkstoffe sind halogenhaltig und kristallisieren als solche nicht : Erst eine chemische Behandlung kann das Halogen entfernen, worauf man kristallisierte Verbindungen erhält. Zu diesem Zweck wird eine wässerige Lösung der Wirkstoffe mit Silbercarbonat behandelt, das Filtrat von den überschüssigen Silber-Ionen mit Schwefelwasserstoff befreit und im Vakuum bei tiefer Temperatur eingeengt, wobei die Substanzen aus der konzentrierten Lösung kristallisieren.
Für die Analyse wird das Psilocybin nochmals aus Methanol oder Wasser umkristallisiert. Aus Wasser werden feine, schneeweisse Nadeln, aus Methanol farblose, methanolhaltige sechseckige Platten oder Prismen erhalten, die bei. 195 - 2000C unter Zersetzung schmelzen. Die Verbindung löst sich in 120 Teilen siedendem Methanol oder in 20 Teilen siedendem Wasser ; in höheren Alkonolen oder andern organischen Lösungsmitteln ist sie sehr schwer löslich oder unlöslich.
Zur Analyse wird im Hochvakuum bei 1000C getrocknet, wobei eine Gewichtsabnahme von 10, 4%
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H 0 N P (M.-G. 284, 2).dünnten wässerigen Mineralsäuren und in verdünnten wässerigen Alkalien. Die Lösung von Psilocybin in 80%igem wässerigem Äthanol reagiert schwach sauer (PH 5, 2). Das UV-Spektrum in methanolischer Lö- sung zeigt Maxima bei 222, 267 und 290 mu.
Für die Analyse wird Psilocin durch erneutes Chromatographieren an einer Cellulosepulversäule mit wassergesättigtem Butanol oder durch Behandeln mit Nitriumbicarbonat in wässeriger Lösung und Aus- schütteln mit Äther oder einem organischen Lösungsmittel gereinigt. Die Resultate der Elementaranalyse stimmen auf die Bruttoformel C H NO. Psilocin kristallisiert aus Methanol oder Aceton ; es ist in Wasser mässig, in verdünnter Säure leicht löslich. Smp. 173-176 C (Zers. ).
Das Psilocin ist charakterisiert durch das UV-Spektrum (in methanolischer Lösung) mit den Maxima bei 222,260, 267,283 und 293 mJ1 einerseits und durch die Keller-Farbreaktion, bei welcher-im Ge- gensatz zu Psilocybin - eine rein blaue Farbe entsteht.
Bei s. c. Injektion oder peroraler Verabreichung von 2 bis 8 mg ruft das Psilocybin beim Menschen eine ausgesprochen euphorische Stimmungslage hervor, die von Antriebslosigkeit und einem Gefühl der Gleichgültigkeit begleitet ist. In höheren Dosen treten neben vegetativen Erscheinungen gewisse Wahr- nehmensveränderungen auf. Die Verbindungen sollen zur Erforschung von Geisteskrankheiten und Psychosen verschiedenster Genese verwendet werden und können bei psychisch Kranken als nützliche Hilfe bei psychotherapeutischer Behandlung verwendet werden.
Beispiel l : Psilocybin und Psilocin aus Psilocybe mexicana Heim natürlicher Provenienz.
Die reifen Fruchtkörper von Psilocybe mexicana Heim werden im Luftstrom bei 300C vorsichtig getrocknet. 54 g der getrockneten Pilze werden feinst gemahlen und einmal mit 600 cms und dreimal mit 300 cms Methanol je 1/2 Stunde geschüttelt. Die Extrakte werden vereinigt und im Vakuum zur Trockne eingedampft. Rückstand 12 g.
Der Methanol-Rückstand wird zur Entfettung viermal mit 250 cms Petroläther und anschliessend noch dreimal mit 100 cm* Chloroform + 10% Alkohol verrieben. Der noch ungelöst verbleibende Rest von zirka 10 g wird in 10 cms Wasser gelöst und langsam mit 100 cms abs. Alkohol versetzt, wobei in der Lösung die Wirksubstanz angereichert wird. Diese Operation wird noch zwei-bis dreimal wiederholt. Die dekantierten Lösungen werden im Vakuum zur Trockne eingedampft, mit Methanol wieder gelöst und mit 20 g Cellulose-Pulver + 5% Wasser versetzt. Das Methanol wird im Vakuum wieder abgedampft, und das mit der Wirksubstanz behaftete Cellulosepulver auf eine Säule von 100 g Cellulose-Pulver + 5%. Wasser gegeben (die Säule wird vorher mit wassergesättigtem Butanol rein gewaschen).
Man eluiert mit wassergesättigtem Butanol und fängt Fraktionen von 20 cms auf. Der Eindampfrückstand der einzelnen Fraktionen wird mit Hilfe der Keller'schen Farbreaktion auf Wirkstoffgehalt geprüft. Dazu werden Proben von 0, 25 mg Eindampfrückstand mit 2 cms Keller-Reagéns angesetzt.
Die Fraktionen mit positiver Farbreaktion werden vereinigt. Man löst das amorphe Pulver in 20 cms Wasser und schüttelt mit 0,5 g Silbercarbonat. Nach der Filtration wird die Lösung mit Schwefelwasserstoff entsilbert und hierauf schonend eingeengt. Aus der konzentrierten Lösung kristallisiert das Psilocybin in farblosen feinen Nadeln (Ausbeute 200 mg).
Psilocin wird aus den Fruchtkörpern nur in Spuren erhalten.
Psilocybin wird durch nochmaliges Umkristallisieren aus Methanol oder Wasser analysenrein erhalten. Es löst sich in 120 Teilen kochendem Methanol oder 20 Teilen Wasser bei Siedehitze. Aus Methanol werden farblose Prismen erhalten, die bei 195 - 2200C unter Zersetzung schmelzen. Für die Analyse wurde im Hochvakuum bei 1000C getrocknet, wobei eine Gewichtsabnahme von 10, 4% eintrat.
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Die Analyse entspricht einerBruttoformel C.JHCtN P. Das UV-Spektrum, aufgenommen in Me- thanol, zeigt folgende Maxima : 222mIL, 267 mg und 290 mu.
Der neue Wirkstoff besitzt amphoteren Charakter. Er löst sich unter Salzbildung sowohl in verdünnten wässerigen Alkalien als auch in wässerigen Säuren. Die Lösung des Psilocybins in 80% gem wässerigem
Alkohol reagiert sauer (PH 5, 2).
Beispiel 2 : Gewinnung von Psilocybin und Psilocin aus Stropharia cubensis Earle natürlicher Pro- venienz.
Die in Mexiko gesammelten Fruchtkörper von Stropharia cubensis Earle werden an der Luft bei Raum- temperatur im Schatten vorsichtig getrocknet. 24, 2 g getrocknete Fruchtkörper werden feinst gemahlen und bei Zimmertemperatur einmal mit 300 cm* und dreimal mit je 150 cm* Methanol je /2 Stunde ausgeschüttelt. Die Extrakte werden vereinigt und im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand (6. g) wird zur Entfettung viermal mit je 125 cms Petroläther und noch dreimal mit je 50 cms Chloroform verrieben, das 10% Äthanol enthält.
Der noch ungelöste Rest von zirka 5 g wird in 5 cms Wasser gelöst, und aus dieser Lösung werden durch langsames Versetzen mit 50 cm* abs. Äthanol weitere Begleitstoffe ausgefällt, wobei die Wirkstoffe in der Lösung angereichert werden. Die Reinigung wird in gleicher Weise noch zwei-bis dreimal wiederholt. Die dekantieren Lösungen werden vereinigt und im Vakuum zur
Trockne eingedampft. Der Rückstand wird in Methanol aufgenommen und mit 10 g Cellulose-Pulver, dem 5% Wasser zugefügt wurden, versetzt. Das Methanol wird im Vakuum abgedampft, und das mit der
Wirksubstanz behaftete Cellulose-Pulver auf eine Säule von 50 g Cellulose-Pulver gegeben, das 5% Was- ser enthält vorher wird die Säule mit wassergesättigtem Butanol rein gewaschen.
Man eluiert mit wasser- gesättigtem Butanol und fängt Fraktionen von 10 cm* auf. Die einzelnen Fraktionen werden im Hochvakuum bei höchstens 50C Badtemperatur eingedampft und mit eisenchloridhaltigem Eisessig und konz.
Schwefelsäure auf Wirkstoffgehalt geprüft. Dazu werden Proben von 0, 25 mg Rückstand mit 2 cm'Keller-
Reagens angesetzt. Die wirksamen Fraktionen sind durch eine violette (Psilocybin) oder rein blaue (Psilocin) Keller-Reaktion gekennzeichnet.
Die Fraktionen mit positiver Farbreaktion der gleichen Nuance werden vereinigt. Man löst das amorphe Pulver der obigen Eindampfrückstände in 2 cm* Wasser und schüttelt mit 0,25 g Silbercarbonat.
Nach der Filtration werden die überschüssigen Silber-Ionen mit Schwefelwasserstoff entfernt. Aus der schonend eingeengten Lösung kristallisiert das Psilocybin in farblosen feinen Nadeln. Man erhält 58 mg kristallisiertes Psilocybin, entsprechend einer Ausbeute von 0, 24% - bezogen auf die getrockneten Frucht- körper-und eine Spur Psilocin.
Beispiel S: Gewinnung von Psilocybin und Psilocin aus Reinkulturen vonPsilocybesemperviva Heim et Cailleux. a) Isolierung des Pilzmaterials : Die reife Kultur von Psilocybe semperviva Heim et Cailleux wird durch ein Gazetuch filtriert, das Pilzmaterial ausgepresst und im Vakuum bei 300C getrocknet. Aus einem Ansatz mit 100 Penicillinkolben, enthaltend 100 l Nährlösung, werden bei der Ernte nach 35 bis 70 Tagen 2540 g Trockenmaterial erhalten, d. h. 25,4 g pro 1 angesetzter Nährlösung.
Das Kulturfiltrat, das auch gewisse Mengen Wirkstoffe enthält, wird nach dem gleichen Verfahren aufgearbeitet, wie im folgenden Abschnitt für das Pilzmaterial beschrieben wird.' b) Gewinnung der Wirkstoffe : 306 g getrocknetes Pilzmaterial werden feinst pulverisiert, dreimal mit je 500 cm Chloroform und noch dreimal mit je 500 cm* Chloroform, das 10% Äthanol enthält, ausgeschüttelt. Dabei gehen 2, 8 g inaktive Begleitstoffe in Lösung. Das vorextrahierte Pilzmaterial wird einmal mit 3 l und dreimal mit je l, 5 l Methanol erschöpfend ausgezogen. Die vereinigten Auszilge werden unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft, wobei ein hellbrauner Rückstand von 17. 5 g verbleibt.
Zur Entfernung fettartiger Verunreinigungen wird dieser Rückstand in 17, 5 cm Wasser aufgenommen und die Suspension einmal mit 500 cm* und zweimal mit je 250 cm* Petroläther ausgeschüttelt. Die Petrolätherlösung enthält 0,75 g inaktive Begleitstoffe. Die zurückbleibende wässerige Lösung wird im Vakuum auf zirka 25 cm* eingeengt und unter kräftigem Rühren langsam mit 250 cm* abs. Äthanol versetzt. Von der dabei entstehenden klebrigen Fällung wird die wirkstoffhaltige Lösung durch Dekantieren abgetrennt. Die Fällung wird nochmals in wenig Wasser gelöst und mit der zehnfachen Menge abs. Äthanol behandelt. Diese Reinigung durch Fällung wird mit dem Rückstand noch zweimal wiederholt. Die Lösungen werden vereinigt und im Vakuum zur Trockne eingedampft.
Es verbleibt ein fester Rückstand von 11, 7 g, der die gesamte Menge der Wirkstoffe enthält.
Für die Chromatographie an der Cellulose-Säule wird der Rückstand in möglichst wenig 50%gem Methanol gelöst, die Lösung mit 40 g Cellulosepulver gut vermischt und das Material im Vakuum getrocknet. Das auf diese Weise mit Substanz beladene Cellulosepulver wird auf eine Cellulose-Säule ge-
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geben, die durch Aufschlämmen von 350 g Cellulosepulver mit wassergesättigtem Butanol hergestellt wird. Man entwickelt im Durchlaufverfahren mit wassergesättigtem Butanol, wobei Fraktionen von je 100 cm'abgetrennt und im Hochvakuum bei einer 500C nicht übersteigenden Badtemperatur eingedampft werden.
Die mittleren Fraktionen (3, 35 g) geben eine positive Keller'sche Farbreaktion und werden zur weiteren Reinigung nochmals nach dem gleichen Verfahren auf Cellulosepulver chromatographiert.
Bei der Entwicklung mit wassergesättigtem Butanol werden Fraktionen von je 50 cms abgetrennt und nach Eindampfen im Hochvakuum bei höchstens 500C Badtemperatur mit der Keller'schen Farbreaktion geprüft. Dabei wird folgende Verteilung erhalten :
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<tb>
<tb> Fraktion <SEP> Nr. <SEP> Rückstand <SEP> Keller'sche
<tb> mg <SEP> Farbreaktion
<tb> 1- <SEP> - <SEP> 7 <SEP> 1270 <SEP> negativ
<tb> 8 <SEP> - <SEP> 16 <SEP> 87 <SEP> rein <SEP> blau
<tb> 17 <SEP> - <SEP> 20 <SEP> 79 <SEP> negativ
<tb> 21 <SEP> - <SEP> 30 <SEP> 10. <SEP> 53 <SEP> violett
<tb> 31 <SEP> - <SEP> 43 <SEP> 758 <SEP> negativ
<tb>
Der Rückstand der Fraktionen 8 - 16 (87 mg) liefert nach der Behandlung mit Silbercarbonat, wie im Beispiel 2 beschrieben, 45 mg reines Psilocin.
Die Fraktionen 21-30 (1053 mg) liefern nach der Behandlung mit Silbercarbonat 765 mg reines Psilocybin.
Aus dem Kulturfiltrat werden die Wirkstoffe nach dem gleichen Verfahren gewonnen. Zu diesem Zweck wird das Filtrat im Vakuum auf zirka 1/10 seines Volumens konzentriert. Man fällt mit dem zehnfachen Volumen Methanol, filtriert von den ausgefällten Begleitstoffen ab, dampft die Lösung im Vakuum zur Trockne ein und extrahiert den Rückstand dreimal mit der zehnfachen Menge Methanol. Der Eindampfrückstand der Methanolextrakte wird wie oben weiter verarbeitet. Aus 12 1 Kulturfiltrat werden 80 mg Psilocybin und 6 mg. Psilocin erhalten. Gesamtausbeute : 845 mg Psilocybin und 51 mg Psilocin,
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Zur Gewinnung der Wirkstoffe werden z. B. 612 g getrocknete Sklerotien und Mycelmaterial feinst pulverisiert, dreimal mit je 11 Chloroform und anschliessend noch dreimal mit je 11 Chloroform + 10% Äthanol vorextrahiert.
Dabei gehen in den Vorextrakt 5,6 g inaktive Begleitstoffe. Das vorextrahierte Pilzmaterial wird nun einmal mit 6 l und anschliessend noch dreimal mit je 31Methanol erschöpfend ausgezogen. Die vereinigten Methanolextrakte dampft man unter vermindertem Druck zur Trockne ein und erhält dabei 35 g eines hellbraunen Rückstandes. Dieser wird zur Entfernung fettartiger Verunreinigungen in 35 cm* Wasser aufgeschwemmt und einmal mit 11 und zweimal mit je 0, 5 1 Petroläther ausgeschüttelt. Der Petroläther enthält I, 5 g inaktive Begleitstoffe. Die zurückbleibende wässerige Lösung wird vorerst im Vakuum auf zirka 50 cams eingeengt und hierauf unter kräftigem Rühren mit 500 cms abs.
Äthanol versetzt. Von der dabei entstehenden klebrigen Fällung wird die wirkstoffhaltige Lösung durch Dekantieren abgetrennt. Die Fällung wird wieder in wenig Wasser gelöst und erneut mit der zehnfachen Menge abs. Alkohol behandelt. Diese Fällungsoperation wird mit dem Rückstand noch zweimal wiederholt. Die Lösungen werden vereinigt und im Vakuum zur Trockne gebracht. Es verbleibt ein fester Rückstand von 23,4 g, welcher die gesamte Menge der Wirkstoffe enthält.
Für die Chromatographie an der Cellulose-Säule wird der Rückstand in möglichst wenig 50% igem Methanol gelöst, die Lösung mit 80 g Cellulosepulver gut vermischt und das Material im Vakuum getrocknet. Das auf diese Weise mit Substanz beladene Cellulosepulver wird auf eine Cellulose-Säule gegeben, welche durch Aufschlämmen von 700 g Cellulosepulver in mit Wasser gesättigtem Butanol hergestellt wurde. Man entwickelt mit wassergesättigtem Butanol im Durchlaufverfahren, wobei Fraktionen von je 200'cm* abgetrennt und im Hochvakuum bei einer 500C nicht überschreitenden Badtemperatur eingedampft werden.
Dabei wird folgende Aufteilung erhalten :
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Tabelle 1
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<tb>
<tb> Fraktion <SEP> Nr. <SEP> Rückstand <SEP> Keller'sche
<tb> g <SEP> Farbreaktion
<tb> 1-14 <SEP> 2, <SEP> 170 <SEP> negativ
<tb> 15-34 <SEP> 6, <SEP> 660 <SEP> positiv
<tb> 35-40 <SEP> 3, <SEP> 540 <SEP> negativ
<tb> 12, <SEP> 370 <SEP>
<tb>
Der Rest von zirka 11 g bleibt in der Säule haften.
Die Fraktionen 15 - 34, die einen Rückstand von insgesamt 6, 660 g liefern, enthalten die gesamte Menge der Wirkstoffe. Sie werden zur weiteren Reinigung erneut, wie nachstehend beschrieben, chromatographiert. Man löst den Rückstand von 6, 66 g in möglichst wenig Methanol und imprägniert damit 20 g Cellulosepulver. Nach dem Trocknen wird dieses auf eine Säule von 600 g wie oben vorbehandelten Cellulosepulvers gegeben. Bei der Entwicklung mit wassergesättigtem Butanol werden Fraktionen von je 100 cms abgetrennt und nach Eindampfen im Hochvakuum mit der Farbreaktion geprüft.
Dabei wird folgende Verteilung erhalten :
Tabelle 2
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<tb>
<tb> Fraktion <SEP> Nr. <SEP> Rückstand <SEP> Keller'sehe
<tb> mg <SEP> Farbreaktion
<tb> 1 <SEP> - <SEP> 8 <SEP> 2950 <SEP> negativ
<tb> 9 <SEP> - <SEP> 17 <SEP> 180 <SEP> rein <SEP> blau
<tb> 18 <SEP> - <SEP> 21 <SEP> 155 <SEP> negativ
<tb> 22 <SEP> - <SEP> 31 <SEP> 912 <SEP> violett
<tb> 32-45 <SEP> 1510 <SEP> negativ
<tb>
Der Rückstand der Fraktionen 9 - 17 (180 mg) liefert nach der Behandlung mit Silbercarbonat, wie im Beispiel 1 beschrieben, 90 mg reines Psilocin.
Die Fraktionen 22 - 31 (Tabelle 2) liefern nach der in Beispiel 1 beschriebenen Behandlung mit Silbercarbonat 619 mg reines Psilocybin mit den in Beispiel 1 beschriebenen Eigenschaften. Aus dem Kulturfiltrat werden die Wirkstoffe nach dem gleichen Verfahren, wie vorstehend für die Sklerotien beschrieben, gewonnen. Zu diesem Zweck wird das Kulturfiltrat im Vakuum auf zirka 1/10 seines Volumens konzentriert. Man fällt mit dem zehnfachen Volumen Methanol, filtriert und extrahiert den Rückstand dreimal mit der zehnfachen Menge Methanol. Der Eindampfrückstand der Methanolextrakte wird, wie oben beschrieben, weiter verarbeitet. Aus 10 l Kulturfiltrat werden z. B. 220 mg Psilobycin und 12 mg Psilocin erhalten.
Be is pie I 5 : Gewinnung von Psilocybin und Psilocin aus Reinkulturen von Stropharia cubensis Earle.
Die Gewinnung der Wirkstoffe aus 452 g getrocknetem Pilzmaterial erfolgt nach dem im Beispiel 3 beschriebenen Verfahren. Ausbeute : 1083 mg reines kristallisiertes Psilocybin und 45 mg Psilocin, entsprechend einer Ausbeute von 0,24% bzw. 0, 010%, bezogen auf das getrocknete Pilzmaterial.
Beispiel 6 : Psilocybin und Psilocin aus Psilocybe semperviva Heim et Cailleux natürlicher Provenienz.
Die durch künstliche Züchtung auf natürlichen Nährböden (Kompost) gewonnenen reifen Fruchtkörper von Psilocybe semperviva Heim et Cailleux werden im Luftstrom bei 300C vorsichtig getrocknet.
32 g getrocknete Fruchtkörper werden feinst gemahlen und bei Zimmertemperatur einmal mit 300 cms und dreimal mit je 150 ems Methanol je 1/2 Stunde ausgeschüttelt. Die vereinigten Extrakte werden im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand (8, 3 g) wird zur Entfettung viermal mit je 125 cms Petroläther und dreimal mit je 50 cms Chloroform verrieben, das 10% Äthanol enthält. Es verbleibt ein Rest von 6, 5 g. Dieser Rückstand wird in 6 cm Wasser gelöst und die Lösung langsam mit 60 cm* abs. Äthanol zur Ausfällung weiterer Begleitstoffe versetzt, wobei die Wirkstoffe in der Lösung angereichert
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werden. Die Reinigung wird in gleicher Weise noch zweimal wiederholt. Die Lösungen werden dekantiert, vereinigt und im Vakuum zur Trockne eingedampft.
Der Rückstand wird in Methanol aufgenommen und wie in Beispiel 2 beschrieben auf Cellulosepulver chromatographiert. Den so erhaltenen Wirkstoffen wird durch Behandlung mit Silbercarbonat das Halogen entzogen. Nach Umkristallisieren erhält man 160 mg kristallisiertes Psilocybin und 32 mg Psilocin, entsprechend einem Gehalt von 0, 5% bzw.
0, 1% bezogen auf das getrocknete Pilzmaterial.
Beispiel 7 : Psilocybin aus Psilocybe caerulescens Murill var. Mazatecorum Heim natürlicher Provenienz.
Die durch künstliche Züchtung auf natürlichen Nährboden (Kompost) gewonnenen reifen Fruchtkörper von Psilocybe caerulescens Murril var. Mazatecorum Heim werden vorsichtig getrocknet, worauf das getrocknete Pilzmaterial (7,3 g) feinst gemahlen und mit Methanol erschöpfend extrahiert wird, wie im Beispiel 2 beschrieben. Die Extrakte werden vereinigt und im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird, wie im Beispiel 2 angegeben, auf die Wirkstoffe weiter verarbeitet. Man erhält 14, 6 mg reines Psilocybin entsprechend einem Gehalt von 0, 2% Psilocybin (bezogen auf das getrocknete Pilzmaterial). Aus dem aufgearbeiteten Pilzmuster wurde kein Psilocin erhalten.
Beispiel 8 : Psilocybin aus Reinkulturen von Psilocybe caerulescens Murril var. Mazatecorum Heim.
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Beispiel 3 angegeben. Ausbeute aus einem Ansatz von 10 l Nährlösung : 449 mg Psilocybin, entsprechend einem Gehalt von 0, 22%, bezogen auf das getrocknete Pilzmaterial. Es wurde in diesem Ansatz kein Psilocin gefunden.
Beispiel 9 : Psilocybin aus Psilocybe Zapotecorum Heim natürlicher Provenienz.
Die im "pays chatino", Mexiko, gesammelten und ausgelesenen reifen Fruchtkörper von Psilocybe
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getrocknet (Rückstandausgeschüttelt, wie im Beispiel 2 angegeben. Die vereinigten Methanol-Extrakte werden im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird, wie im Beispiel 2 angegeben, weiter aufgearbeitet. Man erhält 212 mg reines Psilocybin entsprechend einem Gehalt von 0, 5%. Aus dem aufgearbeiteten Pilzmaterial wurde kein Psilocin erhalten.
Be is pie 1 10 : Psilocybin aus Reinkulturen von Psilocybe Zapotecorum Heim.
Die Gewinnung der Wirkstoffe aus 430 g getrocknetem Pilzmaterial, d. h. 17, 2 g pro 1, erfolgt wie im Beispiel 3 beschriebenen Verfahren. Ausbeute 903 mg reines Psilocybin, entsprechend einem Gehalt von 0, 21ufo, bezogen auf das getrocknete Pilzmaterial. Kein Psilocin.
Beispiel 11 : Psilocybin und Psilocin aus Psilocybe Aztecorum Heim natürlicher Provenienz.
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reifen Fruchtkörper von Psilocybe Aztecorum Heim werden schonend getrocknet, feinst gemahlen und mit Methanol erschöpfend extrahiert, wie im Beispiel 2 beschrieben. Die Extrakte werden vereinigt und im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird, wie im Beispiel 2 angegeben, auf die Wirkstoffe verarbeitet. Man erhält 570 mg reines Psilocybin und 47 mg Psilocin, entsprechend einem Gehalt von 0, 2% bzw. 0, 017%, bezogen auf das getrocknete Pilzmaterial (285 g).
Beispiel 12 : Psilocybin und Psilocin aus Reinkulturen von Psilocybe Aztekorum Heim.
86, 5 g feinst gemahlenes Mycel werden 1/2 Stunde mit 1 1 igem wässerigem Äthanol bei Raumtemperatur ausgeschüttelt. Nach dem Abfiltrieren des Rückstandes wird dieser noch dreimal auf die gleiche Weise extrahiert. Der Eindampfrückstand der vereinigten Extrakte (8, 9 g) wird zur Entfernung von fettartigen Begleitstoffen und inaktiven Ballaststoffen nacheinander zweimal mit 100 cms Petroläther, zweimal mit 80 cms Chloroform und zweimal mit 50 cms Aceton ausgezogen. Es verbleiben 5,6 g eines wasserlöslichen Pulvers, das in 6 cms Wasser gelöst wird.
Unter gutem Rühren versetzt man die Lösung langsam mit 60 cm* Aceton, trennt die entstandene Fällung ab, löst sie wieder in wenig Wasser und fällt nochmals mit der zehnfachen Menge Aceton. Diese Reinigung durch Fällung wird mit dem in Aceton unlöslichen Anteil noch zweimal wiederholt, wonach die gesamte Menge der Wirkstoffe in die wässerigacetonischen Extrakte übergegangen ist. Die Extrakte werden im Vakuum eingedampft, und der Rückstand (2,8 g), wie im Beispiel 3 beschrieben, durch Chromatographie an einer Säule aus Cellulosepulver weiter gereinigt und aufgeteilt.
Nach iweimaligerChromatographie erhält man 225 mg kristallisiertes Psilocybin und 15mg Psilocin, entsprechend einer Ausbeute von 0, 260/0 bzw. 0, 017ufo, bezogen auf das getrocknete Pilzmaterial.
Beispiel 13 : Psilocybin und Psilocin aus Trockenmycel von Psilocybe mexicana.
430 g getrocknetes, feinst gemahlenes Mycel werden 1/2 Stunde mit 4, 5 1 800/oigem wässerigem
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zur Entfernung von Ballaststoffen ausgezogen. Es verbleiben 25 g eines wasserlöslichen Pulvers, das in 25 cm'Wasser gelöst wird. Unter gutem Rühren versetzt man langsam mit 250 cm* Aceton, trennt hier- auf Flüssigkeit und Fällung und löst diese wieder in wenig Wasser und fällt erneut mit der zehnfachen
Menge Aceton. Diese Operation wird mit dem in Aceton unlöslichen Teil noch zweimal wiederholt, wonach die gesamten Wirkstoffe in die wässerig-acetonischen Auszüge übergegangen sind. Diese werden unter gutem Rühren eingedampft, und der Rückstand (9, 8 g), wie in Beispiel 4 beschrieben, durch
Chromatographie an einer Cellulose-Säule weiter aufgeteilt.
Nach zweimaliger Chromatographie erhält man 32 mg krist. Psilocin und 225 mg Psilocybin ent- sprechend einer Ausbeute von 0,007 bzw. 0,05calo bezogen auf das Trockenmycel.
PATENTANSPRÜCHE :
1. Verfahren zur Gewinnung der neuen Verbindungen Psilocybin und Psilocin in reinem Zustand aus Pilzarten, dadurch gekennzeichnet, dass man Pilzmaterial natürlicher Herkunft der Gattungen Psilocybe, Stropharia, Panaeolus, Conocybe, Amanita oder Russula oder künstlich gezüchtete Pilzmaterial, erhalten aus Kulturen dieser Pilze oder ihren biologischen Varianten oder Mutanten, trocknet, vermahlt und mit Wasser, einem niederen aliphatischen Alkohol oder einem Gemisch von Wasser und einem mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel extrahiert, aus der wässerigen Lösung des Extraktionsrückstandes, gegebenenfalls nach Entfettung mit Petroläther, durch fraktionierte Fällung mit einem mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel, z.
B. abs. Äthanol oder Aceton, inaktive Begleitstoffe abtrennt und die im Filtrat enthaltenen Wirkstoffe durch Adsorption an Cellulosepulver und Elution mit wassergesättigtem Butanol oder einem andern mit Wasser nicht mischbaren Alkohol voneinander trennt und gegebenenfalls von Halogen befreit.
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Process for obtaining the new compounds
Psilocybin and psilocin
The present invention relates to a method for obtaining the hitherto unknown, psychotropically active compounds psilocybin and psilocin from fungal species.
It was already known (R. Heim, C. r. Hebd. Séances Acad. Sci. 242 [1956], p. 965) that a number of naturally occurring mushroom species in Mexico, Eastern Siberia, Kamchatka and other areas
Asia and America are used by the natives for ritual purposes or as stimulants or intoxicants since. their ingestion has peculiar effects on the body and above all on the psyche of humans. These so-called hallucinogenic mushrooms are of the following genera: Psilocybe, Stropharia, Panaeolus, Conocybe, Amanita, Russula.
So far, however, it has not been possible to isolate psychotropically active compounds from mushroom material of natural origin or from artificially grown mushroom material.
A process has now been found for obtaining the hitherto unknown active ingredients psilocybin and psilocin, which is characterized in that mushroom material of natural origin of the genera Psilocybe, Stropharia, Panaeolus, Conocybe, Amanita or Russula or artificially grown mushroom material obtained from cultures of these mushrooms or their biological variants or mutants, dried, ground and extracted with water, a lower aliphatic alcohol or a mixture of water and a water-miscible organic solvent, from the aqueous solution of the extraction residue, optionally after degreasing with petroleum ether, by fractional precipitation with a Water-miscible organic solvents, e.g.
B. absolute ethanol or acetone, separates inactive accompanying substances and separates the active ingredients contained in the filtrate by adsorption on cellulose powder and elution with water-saturated butanol or another water-immiscible alcohol and optionally freed from halogen.
The method is preferably carried out as follows:
The active fungal material (fruiting bodies, sclerotia or mycelium) is carefully dried in a stream of air or in a vacuum at 20-400C, finely ground and water, a lower aliphatic alcohol or a mixture of water and a water-miscible organic solvent is extracted exhaustively at room temperature. The extracts are evaporated in vacuo at low temperature, and the residue is degreased with petroleum ether and extracted with acetone or chloroform-alcohol to remove inactive accompanying substances. Further dietary fiber is separated by dissolving the residue in as little water as possible and repeatedly precipitating it with absolute ethanol or acetone; the filtrate is evaporated in vacuo at low temperature.
Further purification is carried out by chromatography on cellulose powder using the continuous flow process; the elution takes place with water-saturated butanol or another alcohol which is immiscible with water. The collected fractions are checked for active substance content with the Keller reagent (glacial acetic acid containing iron chloride and concentrated sulfuric acid). The fractions with a positive color reaction are combined and, if necessary, subjected to another chromatographic division on a column made of cellulose powder.
A more rapidly migrating zone is eluted from the flow-through chromatogram, which supplies an active ingredient called "psilocin" characterized by a pure blue cellar color reaction, while a second, predominantly quantitative active ingredient with a purple color reaction, the "psilocybin", is produced from a slower moving zone. , is obtained.
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The active ingredients already obtained from the column in fairly pure form contain halogen and do not crystallize as such: only chemical treatment can remove the halogen, which results in crystallized compounds. For this purpose, an aqueous solution of the active ingredients is treated with silver carbonate, the excess silver ions are removed from the filtrate with hydrogen sulfide and concentrated in vacuo at low temperature, the substances crystallizing from the concentrated solution.
For the analysis, the psilocybin is recrystallized again from methanol or water. Fine, snow-white needles are obtained from water, and colorless, methanol-containing hexagonal plates or prisms are obtained from methanol. 195 - 2000C melt with decomposition. The compound dissolves in 120 parts of boiling methanol or in 20 parts of boiling water; it is very sparingly soluble or insoluble in higher alcohols or other organic solvents.
For analysis, drying is carried out in a high vacuum at 1000C, with a weight decrease of 10.4%
EMI2.1
H 0 N P (M.-G. 284, 2). In dilute aqueous mineral acids and in dilute aqueous alkalis. The solution of psilocybin in 80% aqueous ethanol reacts slightly acidic (PH 5, 2). The UV spectrum in methanolic solution shows maxima at 222, 267 and 290 μm.
For the analysis, psilocin is purified by renewed chromatography on a cellulose powder column with water-saturated butanol or by treatment with nitrium bicarbonate in an aqueous solution and shaking with ether or an organic solvent. The results of the elemental analysis agree with the gross formula CH NO. Psilocin crystallizes from methanol or acetone; it is moderately soluble in water and easily soluble in dilute acid. M.p. 173-176 C (dec.).
Psilocin is characterized by the UV spectrum (in methanolic solution) with the maxima at 222.260, 267.283 and 293 mJ1 on the one hand and by the basement color reaction, which - in contrast to psilocybin - produces a pure blue color.
By S. c. Injection or oral administration of 2 to 8 mg, psilocybin induces a decidedly euphoric mood in humans, which is accompanied by listlessness and a feeling of indifference. In addition to vegetative symptoms, certain changes in perception occur at higher doses. The compounds are intended to be used to research mental illnesses and psychoses of various origins and can be used as a useful aid in psychotherapeutic treatment in the mentally ill.
Example 1: Psilocybin and psilocin from Psilocybe mexicana of natural origin.
The ripe fruit bodies of Psilocybe mexicana Heim are carefully dried in an air stream at 300C. 54 g of the dried mushrooms are finely ground and shaken once with 600 cms and three times with 300 cms of methanol for 1/2 hour each time. The extracts are combined and evaporated to dryness in vacuo. Residue 12 g.
The methanol residue is triturated four times with 250 cms of petroleum ether and then three times with 100 cm * chloroform + 10% alcohol. The remaining undissolved residue of about 10 g is dissolved in 10 cms of water and slowly with 100 cms abs. Alcohol is added, the active substance being enriched in the solution. This operation is repeated two or three more times. The decanted solutions are evaporated to dryness in vacuo, redissolved with methanol and mixed with 20 g of cellulose powder + 5% water. The methanol is evaporated off again in vacuo, and the cellulose powder with the active substance on a column of 100 g cellulose powder + 5%. Added water (the column is washed clean beforehand with water-saturated butanol).
It is eluted with water-saturated butanol and fractions of 20 cms are collected. The evaporation residue of the individual fractions is checked for active ingredient content with the aid of Keller's color reaction. For this purpose, samples of 0.25 mg of evaporation residue are prepared with 2 cms of Keller reagents.
The fractions with a positive color reaction are combined. The amorphous powder is dissolved in 20 cms of water and shaken with 0.5 g of silver carbonate. After filtration, the solution is desilvered with hydrogen sulfide and then gently concentrated. The psilocybin crystallizes from the concentrated solution in colorless, fine needles (yield 200 mg).
Psilocin is only obtained in traces from the fruiting bodies.
Psilocybin is obtained in analytically pure form by repeated recrystallization from methanol or water. It dissolves in 120 parts of boiling methanol or 20 parts of boiling water. Colorless prisms are obtained from methanol, which melt at 195-220 ° C. with decomposition. For the analysis, drying was carried out in a high vacuum at 1000 ° C., a weight decrease of 10.4% occurring.
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The analysis corresponds to a gross formula C.JHCtN P. The UV spectrum, recorded in methanol, shows the following maxima: 222mIL, 267 mg and 290 mu.
The new active ingredient is amphoteric in character. It dissolves with salt formation in both dilute aqueous alkalis and aqueous acids. The solution of psilocybin in 80% according to aqueous
Alcohol is acidic (PH 5, 2).
Example 2: Obtaining psilocybin and psilocin from Stropharia cubensis Earle of natural origin.
The fruit bodies of Stropharia cubensis Earle collected in Mexico are carefully dried in the air at room temperature in the shade. 24.2 g of dried fruit bodies are finely ground and shaken at room temperature once with 300 cm * and three times with 150 cm * of methanol each / 2 hours. The extracts are combined and evaporated to dryness in vacuo. The residue (6 g) is triturated four times with 125 cms of petroleum ether each time and a further three times with 50 cms of chloroform, which contains 10% ethanol.
The still undissolved residue of about 5 g is dissolved in 5 cms of water, and from this solution, by slowly adding 50 cm * abs. Ethanol precipitated further accompanying substances, whereby the active substances are enriched in the solution. The cleaning is repeated two or three times in the same way. The decanted solutions are combined and in vacuo to
Evaporated to dryness. The residue is taken up in methanol and mixed with 10 g of cellulose powder to which 5% water has been added. The methanol is evaporated off in vacuo, and that with the
Cellulose powder contaminated with the active substance is placed on a column of 50 g cellulose powder which contains 5% water. The column is first washed with water-saturated butanol.
It is eluted with water-saturated butanol and fractions of 10 cm * are collected. The individual fractions are evaporated in a high vacuum at a maximum bath temperature of 50C and glacial acetic acid containing iron chloride and conc.
Sulfuric acid tested for active ingredient content. For this purpose, samples of 0.25 mg residue with 2 cm 'cellar
Reagent prepared. The effective fractions are identified by a purple (psilocybin) or pure blue (psilocin) Keller reaction.
The fractions with a positive color reaction of the same shade are combined. The amorphous powder of the above evaporation residues is dissolved in 2 cm * water and shaken with 0.25 g of silver carbonate.
After the filtration, the excess silver ions are removed with hydrogen sulfide. From the carefully concentrated solution, the psilocybin crystallizes in fine, colorless needles. 58 mg of crystallized psilocybin are obtained, corresponding to a yield of 0.24% - based on the dried fruit bodies - and a trace of psilocin.
Example S: Obtaining psilocybin and psilocin from pure cultures of Psilocybesemperviva Heim et Cailleux. a) Isolation of the mushroom material: The mature culture of Psilocybe semperviva Heim et Cailleux is filtered through a gauze cloth, the mushroom material is squeezed out and dried in vacuo at 300C. From a batch with 100 penicillin flasks containing 100 l of nutrient solution, 2540 g of dry material are obtained during the harvest after 35 to 70 days, ie. H. 25.4 g per 1 prepared nutrient solution.
The culture filtrate, which also contains certain amounts of active ingredients, is processed using the same procedure as described in the following section for the mushroom material. b) Obtaining the active ingredients: 306 g of dried mushroom material are finely pulverized, shaken out three times with 500 cm of chloroform each and three times with 500 cm * of chloroform, which contains 10% ethanol. In the process, 2.8 g of inactive accompanying substances go into solution. The pre-extracted mushroom material is exhaustively extracted once with 3 l and three times with 1.5 l of methanol each time. The combined extracts are evaporated to dryness under reduced pressure, a light brown residue of 17.5 g remaining.
To remove fatty impurities, this residue is taken up in 17.5 cm of water and the suspension is extracted once with 500 cm * and twice with 250 cm * petroleum ether each time. The petroleum ether solution contains 0.75 g of inactive accompanying substances. The remaining aqueous solution is concentrated in vacuo to about 25 cm * and slowly increased with 250 cm * abs with vigorous stirring. Ethanol added. The solution containing the active ingredient is separated from the sticky precipitate that results by decanting. The precipitate is dissolved again in a little water and with ten times the amount of abs. Ethanol treated. This purification by precipitation is repeated twice with the residue. The solutions are combined and evaporated to dryness in vacuo.
A solid residue of 11.7 g remains, which contains the entire amount of the active ingredients.
For the chromatography on the cellulose column, the residue is dissolved in as little as possible 50% of methanol, the solution is mixed well with 40 g of cellulose powder and the material is dried in vacuo. The cellulose powder loaded with substance in this way is placed on a cellulose column
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which is made by slurrying 350 g of cellulose powder with water-saturated butanol. It is developed in a continuous process with water-saturated butanol, fractions of 100 cm 'each being separated off and evaporated in a high vacuum at a bath temperature not exceeding 500 ° C.
The middle fractions (3.35 g) give a positive Keller color reaction and are chromatographed again on cellulose powder using the same method for further purification.
When developing with water-saturated butanol, fractions of 50 cms each are separated off and, after evaporation in a high vacuum at a bath temperature of not more than 500C, tested with the Keller's color reaction. The following distribution is obtained:
EMI4.1
<tb>
<tb> Fraction <SEP> No. <SEP> residue <SEP> Keller'sche
<tb> mg <SEP> color reaction
<tb> 1- <SEP> - <SEP> 7 <SEP> 1270 <SEP> negative
<tb> 8 <SEP> - <SEP> 16 <SEP> 87 <SEP> pure <SEP> blue
<tb> 17 <SEP> - <SEP> 20 <SEP> 79 <SEP> negative
<tb> 21 <SEP> - <SEP> 30 <SEP> 10. <SEP> 53 <SEP> violet
<tb> 31 <SEP> - <SEP> 43 <SEP> 758 <SEP> negative
<tb>
The residue of fractions 8-16 (87 mg) gives 45 mg of pure psilocin after treatment with silver carbonate, as described in Example 2.
Fractions 21-30 (1053 mg) provide 765 mg of pure psilocybin after treatment with silver carbonate.
The active ingredients are obtained from the culture filtrate using the same method. For this purpose the filtrate is concentrated in vacuo to about 1/10 of its volume. It is precipitated with ten times the volume of methanol, the precipitated accompanying substances are filtered off, the solution is evaporated to dryness in vacuo and the residue is extracted three times with ten times the amount of methanol. The residue from evaporation of the methanol extracts is processed further as above. From 12 liters of culture filtrate, 80 mg psilocybin and 6 mg become. Get psilocin. Total yield: 845 mg psilocybin and 51 mg psilocin,
EMI4.2
To obtain the active ingredients z. B. 612 g of dried sclerotia and mycelium material finely powdered, pre-extracted three times with 11 chloroform each and then three times with 11 chloroform + 10% ethanol each time.
In the process, 5.6 g of inactive accompanying substances go into the pre-extract. The pre-extracted mushroom material is then exhaustively extracted once with 6 l and then three times with 31Methanol each time. The combined methanol extracts are evaporated to dryness under reduced pressure and 35 g of a light brown residue are obtained. This is suspended in 35 cm * of water to remove grease-like impurities and extracted once with 11 and twice with 0.5 l petroleum ether each time. Petroleum ether contains 1.5 g inactive accompanying substances. The remaining aqueous solution is first concentrated in vacuo to about 50 cams and then with vigorous stirring with 500 cms abs.
Ethanol added. The solution containing the active ingredient is separated from the sticky precipitate that results by decanting. The precipitation is dissolved again in a little water and again with ten times the amount of abs. Alcohol treats. This precipitation operation is repeated twice more with the residue. The solutions are combined and brought to dryness in vacuo. A solid residue of 23.4 g remains, which contains the entire amount of the active ingredients.
For the chromatography on the cellulose column, the residue is dissolved in as little 50% methanol as possible, the solution is mixed thoroughly with 80 g of cellulose powder and the material is dried in vacuo. The cellulose powder loaded with substance in this way is placed on a cellulose column which was produced by slurrying 700 g of cellulose powder in butanol saturated with water. It is developed with water-saturated butanol in a continuous process, with fractions of 200 cm * each being separated off and evaporated in a high vacuum at a bath temperature not exceeding 500 ° C.
The following breakdown is obtained:
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Table 1
EMI5.1
<tb>
<tb> Fraction <SEP> No. <SEP> residue <SEP> Keller'sche
<tb> g <SEP> color reaction
<tb> 1-14 <SEP> 2, <SEP> 170 <SEP> negative
<tb> 15-34 <SEP> 6, <SEP> 660 <SEP> positive
<tb> 35-40 <SEP> 3, <SEP> 540 <SEP> negative
<tb> 12, <SEP> 370 <SEP>
<tb>
The remainder of about 11 g remains in the column.
Fractions 15-34, which give a total residue of 6.660 g, contain the entire amount of active ingredients. For further purification, they are chromatographed again as described below. The residue of 6.66 g is dissolved in as little methanol as possible and 20 g of cellulose powder are impregnated with it. After drying, this is placed on a column of 600 g of cellulose powder pretreated as above. When developing with water-saturated butanol, fractions of 100 cms each are separated off and, after evaporation, checked in a high vacuum with the color reaction.
The following distribution is obtained:
Table 2
EMI5.2
<tb>
<tb> Fraction <SEP> No. <SEP> backlog <SEP> Keller'sehe
<tb> mg <SEP> color reaction
<tb> 1 <SEP> - <SEP> 8 <SEP> 2950 <SEP> negative
<tb> 9 <SEP> - <SEP> 17 <SEP> 180 <SEP> pure <SEP> blue
<tb> 18 <SEP> - <SEP> 21 <SEP> 155 <SEP> negative
<tb> 22 <SEP> - <SEP> 31 <SEP> 912 <SEP> violet
<tb> 32-45 <SEP> 1510 <SEP> negative
<tb>
The residue from fractions 9-17 (180 mg) gives, after treatment with silver carbonate, as described in Example 1, 90 mg of pure psilocin.
Fractions 22-31 (Table 2) provide 619 mg of pure psilocybin with the properties described in Example 1 after the treatment with silver carbonate described in Example 1. The active ingredients are obtained from the culture filtrate by the same method as described above for the sclerotia. For this purpose, the culture filtrate is concentrated to about 1/10 of its volume in vacuo. It is precipitated with ten times the volume of methanol, filtered and the residue is extracted three times with ten times the amount of methanol. The residue from evaporation of the methanol extracts is processed further as described above. From 10 l of culture filtrate z. B. Obtain 220 mg psilobycin and 12 mg psilocin.
Be is pie I 5: Obtaining psilocybin and psilocin from pure cultures of Stropharia cubensis Earle.
The active ingredients are obtained from 452 g of dried mushroom material using the method described in Example 3. Yield: 1083 mg of pure crystallized psilocybin and 45 mg of psilocin, corresponding to a yield of 0.24% or 0.010%, based on the dried mushroom material.
Example 6: Psilocybin and psilocin from Psilocybe semperviva Heim et Cailleux of natural provenance.
The ripe fruit bodies of Psilocybe semperviva Heim et Cailleux obtained by artificial breeding on natural nutrient media (compost) are carefully dried in a stream of air at 300C.
32 g of dried fruit bodies are finely ground and shaken out at room temperature once with 300 cms and three times with 150 ems of methanol each time for 1/2 hour. The combined extracts are evaporated to dryness in vacuo. The residue (8.3 g) is triturated four times with 125 cms of petroleum ether and three times with 50 cms of chloroform, which contains 10% ethanol. A remainder of 6.5 g remains. This residue is dissolved in 6 cm of water and the solution slowly with 60 cm * abs. Ethanol added to the precipitation of further accompanying substances, whereby the active substances are enriched in the solution
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will. The cleaning is repeated twice in the same way. The solutions are decanted, combined and evaporated to dryness in vacuo.
The residue is taken up in methanol and chromatographed on cellulose powder as described in Example 2. The halogen is removed from the active ingredients obtained in this way by treatment with silver carbonate. After recrystallization, 160 mg of crystallized psilocybin and 32 mg of psilocin are obtained, corresponding to a content of 0.5% and
0.1% based on the dried mushroom material.
Example 7: Psilocybin from Psilocybe caerulescens Murill var. Mazatecorum home of natural provenance.
The ripe fruiting bodies of Psilocybe caerulescens Murril var. Mazatecorum Heim obtained by artificial cultivation on natural nutrient soil (compost) are carefully dried, after which the dried mushroom material (7.3 g) is finely ground and exhaustively extracted with methanol, as described in Example 2. The extracts are combined and evaporated to dryness in vacuo. As indicated in Example 2, the residue is processed further for the active ingredients. 14.6 mg of pure psilocybin are obtained, corresponding to a content of 0.2% psilocybin (based on the dried mushroom material). No psilocin was obtained from the reclaimed mushroom specimen.
Example 8: Psilocybin from pure cultures of Psilocybe caerulescens Murril var. Mazatecorum Heim.
EMI6.1
Example 3 given. Yield from a batch of 10 l nutrient solution: 449 mg psilocybin, corresponding to a content of 0.22%, based on the dried mushroom material. No psilocin was found in this batch.
Example 9: Psilocybin from Psilocybe Zapotecorum Heim of natural provenance.
The ripe fruit bodies of Psilocybe collected and selected in "pays chatino", Mexico
EMI6.2
dried (residue extracted, as indicated in example 2. The combined methanol extracts are evaporated to dryness in vacuo. The residue is further worked up as indicated in example 2. 212 mg of pure psilocybin corresponding to a content of 0.5% are obtained. No psilocin was obtained from the processed mushroom material.
Be is pie 1 10: Psilocybin from pure cultures of Psilocybe Zapotecorum Heim.
The extraction of the active ingredients from 430 g of dried mushroom material, i. H. 17, 2 g per 1, is carried out as described in Example 3 procedure. Yield 903 mg of pure psilocybin, corresponding to a content of 0.21ufo, based on the dried mushroom material. No psilocin.
Example 11: Psilocybin and psilocin from Psilocybe Aztecorum Heim of natural provenance.
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ripe fruit bodies of Psilocybe Aztecorum Heim are gently dried, finely ground and exhaustively extracted with methanol, as described in Example 2. The extracts are combined and evaporated to dryness in vacuo. The residue is, as indicated in Example 2, processed into the active ingredients. 570 mg of pure psilocybin and 47 mg of psilocin are obtained, corresponding to a content of 0.2% and 0.017%, based on the dried mushroom material (285 g).
Example 12: Psilocybin and psilocin from pure cultures of Psilocybe Aztekorum Heim.
86.5 g of finely ground mycelium are shaken out for 1/2 hour with 1 liter aqueous ethanol at room temperature. After the residue has been filtered off, it is extracted three more times in the same way. The evaporation residue of the combined extracts (8.9 g) is extracted successively twice with 100 cms of petroleum ether, twice with 80 cms of chloroform and twice with 50 cms of acetone to remove fatty accompanying substances and inactive roughage. 5.6 g of a water-soluble powder remain, which is dissolved in 6 cms of water.
While stirring well, the solution is slowly mixed with 60 cm * acetone, the precipitate formed is separated off, dissolved again in a little water and again ten times the amount of acetone. This purification by precipitation is repeated twice more with the portion insoluble in acetone, after which the entire amount of the active ingredients has passed into the aqueous acetone extracts. The extracts are evaporated in vacuo, and the residue (2.8 g), as described in Example 3, is further purified and divided by chromatography on a column of cellulose powder.
After two chromatography, 225 mg of crystallized psilocybin and 15 mg of psilocin are obtained, corresponding to a yield of 0.260/0 or 0.017ufo, based on the dried mushroom material.
Example 13: Psilocybin and psilocin from dry mycelium from Psilocybe mexicana.
430 g of dried, finely ground mycelium are treated for 1/2 hour with 4.5,1,800% aqueous
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Stripped to remove fiber. 25 g of a water-soluble powder remain, which is dissolved in 25 cm of water. 250 cm * of acetone are slowly added with thorough stirring, the liquid and precipitate are then separated and these are dissolved again in a little water and again falls tenfold
Amount of acetone. This operation is repeated twice more with the part that is insoluble in acetone, after which all the active ingredients have passed into the aqueous-acetone extracts. These are evaporated with thorough stirring, and the residue (9.8 g), as described in Example 4, through
Chromatography on a cellulose column further divided.
After two chromatography, 32 mg of crystalline are obtained. Psilocin and 225 mg psilocybin correspond to a yield of 0.007 or 0.05calo based on the dry mycelium.
PATENT CLAIMS:
1. A process for obtaining the new compounds psilocybin and psilocin in the pure state from mushroom species, characterized in that mushroom material of natural origin of the genera Psilocybe, Stropharia, Panaeolus, Conocybe, Amanita or Russula or artificially grown mushroom material obtained from cultures of these mushrooms or theirs biological variants or mutants, dried, ground and extracted with water, a lower aliphatic alcohol or a mixture of water and a water-miscible organic solvent, from the aqueous solution of the extraction residue, optionally after degreasing with petroleum ether, by fractional precipitation with a water miscible organic solvents, e.g.
B. abs. Ethanol or acetone, inactive accompanying substances are separated off and the active substances contained in the filtrate are separated from one another by adsorption on cellulose powder and elution with water-saturated butanol or another water-immiscible alcohol and optionally freed from halogen.