AT17499U1

AT17499U1 - Kit zur Entnahme von Speichelproben

Info

Publication number: AT17499U1
Application number: ATGM50047/2021U
Authority: AT
Original assignee: Procomcure Biotech Gmbh
Priority date: 2020-09-18
Filing date: 2020-09-18
Publication date: 2022-06-15

Abstract

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf einen Kit zur Entnahme von Speichelproben zum Nachweis von SARS-CoV-2-Virus im Speichel, wobei der Kit umfasst: a) einen ersten Behälter zur Aufnahme der Speichelprobe, wobei innerhalb des Behälters eine Coronavirus-deaktivierende Zusammensetzung in fester Form, welche wenigstens ein chaotropes Mittel umfasst, vorhanden ist; b) einen zweiten Behälter, der eine Gurgelzusammensetzung umfasst; und c) gegebenenfalls eine Einfüllvorrichtung, vorzugsweise einen Trichter. Die Erfindung bezieht sich außerdem auf die Verwendung des Kits zur Entnahme von Speichel, insbesondere Speichel, der virale RNA umfasst, und ein Verfahren zum Nachweis viraler RNA von SARS-CoV-2-Virus in einer Speichelprobe.

Description

Beschreibung

KIT ZUR ENTNAHME VON SPEICHELPROBEN

[0001] Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf einen Kit zur Entnahme von Speichelproben zum Nachweis von SARS-CoV-2-Virus im Speichel, die Verwendung des Kits zur Entnahme von Speichel, insbesondere Speichel, der virale RNA von SARS-CoV-2-Virus umfasst, und ein Verfahren zum Nachweis viraler RNA von SARS-COV-2,

[0002] Pandemische Situationen sind kritisch und eine Herausforderung für die Gesundheitssysteme weltweit. Die Auswirkungen einer Pandemie können die Gesundheits- und Pflegesysteme auf der ganzen Welt schnell überfordern. Die Suche nach ausreichend Personal, die Verfügbarkeit von Medikamenten und Vorräten und alternativer Pflegemittel muss in detaillierte Pläne, die rechtzeitig getestet und geübt werden, eingebunden werden. Genaue Informationen über die Krankheit müssen dem Pflegepersonal und der Öffentlichkeit zugänglich gemacht werden, um Angste zu reduzieren. Das Sammeln von Informationen und das Testen von Menschen hat äuBerste Wichtigkeit erlangt, um die Pandemie in den Griff zu bekommen und die Wirtschaft sicher wieder zu Öffnen. Dies gilt insbesondere bei hochansteckenden Krankheiten, wie durch Coronavirus verursachten Krankheiten. Gemäß den Centers of Disease Control and Prevention ist die Coronavirus-Erkrankung 2019 oder "COVID-19" eine Atemwegserkrankung, die durch das SARS-Coronavirus 2 oder "SARS-CoV-2" (SARS = severe acute respiratory syndrome) verursacht wird. Diese Krankheit breitet sich über Tröpfchen aus, die entstehen, wenn ein infiziertes Individuum niest oder hustet. Zu den Symptomen gehören Fieber, Husten und Atemnot. Zu den schweren Komplikationen gehören Lungenentzündung, Multiorganversagen und in einigen Fällen der Tod.

[0003] Virustests, die aktive COVID-19-Infektionen nachweisen, sind die primäre Art des Testens, obwohl auch Antikörpertests verfügbar sind, die anhand der Anwesenheit von COVID-19Antikörpern vergangene Infektionen anzeigen.

[0004] Es gibt mehrere Gründe dafür, dass das Testen von Menschen auf aktive COVID-19Infektionen wichtig ist. SARS-CoV-2 ist besonders ansteckend, da dies das erste Mal ist, dass dieses spezielle Coronavirus unter Menschen übertragen wird. Ohne einen Impfstoff oder Herdenimmunität besteht der einzige Weg, eine Übertragung von COVID-19 zu verhindern, darin, Infizierte von Nichtinfizierten abzusondern. Menschen, die eine positive Diagnose erhalten, sollten sich selbst isolieren, um eine weitere Ausbreitung von COVID-19 zu verhindern. Wenn Menschen mit Sicherheit wissen, dass sie mit COVID-19 infiziert sind, treffen sie mit höherer Wahrscheinlichkeit geeignete Vorsorgemaßnahmen einschließlich Isolation, Abstandhalten und Maskentragen. Diese Informationen sind auch nützlich für die Umgebung der infizierten Individuen, da diese den Kontakt überhaupt vermeiden oder, wenn sie sich in der Nähe der infizierten Person befinden, mehr Vorsicht walten lassen können.

[0005] Dies ist besonders wichtig, da es Beweise dafür gibt, dass eine signifikante Anzahl der Menschen mit COVID-19 asymptomatisch sind, was bedeutet, dass sie nie irgendwelche der üblichen Anzeichen von Krankheit zeigen oder so milde Symptome aufweisen, dass COVID-19 für eine andere Krankheit, wie eine Erkältung, gehalten werden kann. Studien deuten darauf hin, dass ungefähr 40% bis 75% der Menschen mit COVID-19 asymptomatisch sind. Außerdem gilt: Je mehr Menschen es gibt, die wegen bestätigter Fälle von COVID-19 behandelt werden, desto mehr Daten stehen Arzten, Epidemiologen und Forschern zur Verfügung, um die Krankheit, ihre Wirkungen und ihre möglichen Behandlungen besser zu verstehen.

[0006] Zu verstehen, wer mit COVID-19 infiziert ist und wo Ausbrüche wahrscheinlich sind, ist ein entscheidender Faktor beim Umgang mit der Pandemie, von der Vorbereitung von Krankenhäusern auf potentielle Spitzen bis zur sicheren Wiederöffnung von Wirtschaft, Schulen, Kirchen und anderer Orte, wo Leute zusammenkommen. Wie bereits erwähnt, müssen die Menschen, weil das Virus so ansteckend ist, mit relativer Gewissheit wissen, ob sie derzeit mit der Krankheit infiziert sind, bevor sie auf der Arbeit, beim Treffen mit Freunden und Bekannten oder in anderen

öffentlichen Räumen Kontakt mit anderen haben. Andernfalls laufen sie Gefahr, die Krankheit überall in ihrer sozialen Umgebung zu verbreiten.

[0007] Während der ausgedehnten Lockdowns warnten Gesundheitsexperten, dass die Aufhebung von Ausgangssperren und die Rückkehr zu regelmäßiger Arbeit und sozialen Gewohnheiten ohne ausgedehntes Testen wahrscheinlich zu einem starken Anstieg der Infektionen führen würde. Diese Experten betonten, dass effektives ausgedehntes Testen zur Verhinderung von Ausbrüchen der entscheidende Faktor ist, um die Wirtschaft erfolgreich wieder hochzufahren. Es ist jedoch nicht so einfach, die COVID-19-Tests auf das empfohlene Niveau zu erhöhen. Das Testen ist aufgrund von fehlendem Nachschub und einem Rückstau bei den Labors, die den diagnostischen Test verarbeiten, zu einem Problem geworden. Weiterhin müssen Kliniken und Labors Fachpersonal bereitstellen, um geeignete Körperproben zu entnehmen. Im Vergleich zur klassischen Probenahme über einen Nasenabstrich ist das Entnehmen einer Speichelprobe leichter, nicht invasiv und nicht so unangenehm für die zu testende Person. Dank der anwenderfreundlichen Aspekte kann die Verwendung von Speichelproben ein Vorteil sein, zum Beispiel während eines SARS-CoV-2-Ausbruchs in einer Schule, wo Kinder getestet werden müssen. Es gibt auch ein geringeres Risiko für Pflegende, wenn sie eine Speichelprobe entnehmen, da die Patienten diese selbst entnehmen können und es eine geringere Gefahr des Hustens oder Niesens gibt, als wenn man eine Probe mit einem Wattestäbchen entnimmt.

[0008] Im Hinblick auf die mit den Testsystemen zusammenhängenden Probleme gibt es ein Bedürfnis nach einem Probenahmesystem, das das Entnehmen von Proben von zu testenden Personen zu Hause ermöglicht. Dies erfordert jedoch eine zuverlässige und sichere Handhabung des Entnahmevorgangs, was eine schwere Aufgabe ist. Weiterhin erfordert die Entnahme von Proben zu Hause weiterhin eine sichere und stabile Aufbewahrung der entnommenen Proben in einer solchen Weise, dass die Proben durch Postdienste sicher zu Labors, die die Probenanalyse durchführen, transportiert werden können. Insbesondere ist es wichtig, dass DNA und RNA, wie virale RNA, nicht zerstört oder beschädigt wird.

[0009] Die oben genannten Probleme werden mittels eines Kits zur Entnahme von Speichelproben zum Nachweis von SARS-CoV-2-Virus im Speichel, der erfindungsgemäß durch die Merkmale gemäß Anspruch 1 gekennzeichnet ist, gelöst, sowie von den Ausführungsformen, wie sie sich in der vorliegenden Erfindung widerspiegeln.

[0010] Ein Ziel der vorliegenden Erfindung besteht darin, einen Kit für die Entnahme von Speichelproben bereitzustellen, der eine sichere und stabile Aufbewahrung der entnommenen Proben ermöglicht und für eine ausreichende Sicherheit für die zu testende Person sorgt. Somit ist der Kit der vorliegenden Erfindung für die Selbstentnahme von Körperflüssigkeiten durch die Testperson selbst, z.B. zu Hause, geeignet.

[0011] Erfindungsgemäß umfasst der Kit einen ersten Behälter zur Aufnahme von Speichelproben, wobei innerhalb des ersten Behälters eine Coronavirusdeaktivierende Zusammensetzung in fester Form vorhanden ist.

[0012] Behälter für Körperflüssigkeiten wie Speichelproben im Sinne der vorliegenden Erfindung werden im Allgemeinen als in-vitro-diagnostische medizinische Vorrichtungen angesehen. Die Behälter sind insbesondere geeignet, Proben, die vom menschlichen Körper stammen, insbesondere Körperflüssigkeiten, zum Zwecke der in-vitro-diagnostischen Untersuchung, zu enthalten und zu konservieren. Vorzugsweise ist der erste Behälter der vorliegenden Erfindung ein Probenröhrchen oder eine Stechampulle. In einem Aspekt der Erfindung kann der erste Behälter eine Kapazität für Flüssigkeiten von 0,5 ml bis 1 I, vorzugsweise im Bereich von 1 ml bis 200 ml, insbesondere im Bereich von 1,5 ml bis 20 ml oder 2 ml bis 10 ml, aufweisen.

[0013] In einem weiteren Aspekt weist der erste Behälter eine dicht verschließbare Öffnung auf und ist vorzugsweise ein dicht verschließbares Probenröhrchen.

[0014] In einem weiteren Aspekt kann der erste Behälter vorteilhafterweise flüssigkeitsdicht verschlossen, besonders bevorzugt luftdicht verschlossen, werden. Das luftdichte Verschließen oder das flüssigkeitsdichte Verschließen ist für den Transport der Proben vorteilhaft, um Kontaminati-

onen zu vermeiden.

[0015] Geeignete Behälter, die vom Kunden oder allgemein von zu testenden Personen leicht und sicher verschlossen werden können, sind besonders bevorzugt.

[0016] Daher weist der erste Behälter des Kits gemäß der Erfindung in einem weiteren Aspekt der vorliegenden Erfindung einen Verschluss, vorzugsweise einen Schraubverschluss, auf.

[0017] Der erste Behälter des Kits gemäß der vorliegenden Erfindung kann im Allgemeinen aus jedem Material bestehen, das für den Kontakt mit Körperflüssigkeiten und/oder biologischem Material geeignet ist. Nichteinschränkende Beispiele sind Glas oder organische Polymere. Organische Polymere sind aufgrund der verbesserten Bruch- und Stoßfestigkeit, die zu testenden Personen eine sichere Handhabung ermöglicht, bevorzugt.

[0018] Besonders gute Ergebnisse konnten mit einem Behälter erreicht werden, der Polystyrol oder Polyolefine, vorzugsweise Polyolefine, wie Polypropylen und/oder Polyethylen, umfasst oder daraus besteht.

[0019] In einem bevorzugten Aspekt besteht der erste Behälter im Wesentlichen aus einem organischen Polymer mit einem Schmelzpunkt, der höher als 120°C, vorzugsweise höher als 140 °C, ist, und am meisten bevorzugt einem Schmelzpunkt, der höher als 150°C, zum Beispiel zwischen 150 und 200°C, liegt. Ein höherer Schmelzpunkt ist für den ersten Behälter der vorliegenden Erfindung vorteilhaft, da in einem bevorzugten Aspekt die Coronavirus-deaktivierende Zusammensetzung auf der Innenfläche des Behälters gefällt ist, indem Wasser aus einer Zusammensetzung, die die Coronavirus-deaktivierende Zusammensetzung umfasst, verdampft wird, vorzugsweise bei höheren Temperaturen, wie höher als 80°C oder höher als 90 °C.

[0020] In einem Aspekt der Erfindung besteht der erste Behälter im Wesentlichen aus Polyolefinen hoher Dichte. In einem weiteren Aspekt kann das Material des ersten Behälters von dem Material der Abdichtung, wie dem Verschluss, verschieden sein.

[0021] In einem Aspekt umfasst der erste Behälter des Kits gemäß der Erfindung Polypropylen oder besteht im Wesentlichen daraus, und der Verschluss umfasst Polyethylen oder besteht im Wesentlichen daraus.

[0022] Vorzugsweise liegt der erste Behälter in Form eines Sammelröhrchens vor.

[0023] Der erste Behälter des Kits gemäß der vorliegenden Erfindung weist eine Innenfläche auf, die geeignet ist, mit Körperflüssigkeiten in Kontakt gebracht zu werden, und die, wenn der Behälter verwendet und gefüllt wird, mit der aufgefangenen Körperflüssigkeit in Kontakt steht. Innerhalb des ersten Behälters des Kits gemäß der Erfindung befindet sich eine feste Coronavirus-deaktivierende Zusammensetzung. Die feste Coronavirus-deaktivierende Zusammensetzung ist bei 20°C wasserlöslich.

[0024] Gewöhnlich kann die Zusammensetzung in fester Form, vorzugsweise in Pulverform, in den ersten Behälter gegeben werden. In einem Aspekt ist die Innenfläche des ersten Behälters wenigstens teilweise mit der Coronavirus-deaktivierenden Zusammensetzung beschichtet. Vorteilhafterweise haftet die Zusammensetzung wenigstens teilweise, vorzugsweise vollständig, an der Innenfläche des ersten Behälters.

[0025] In einer besonders bevorzugten Ausführungsform der Erfindung ist die Coronavirus-deaktivierende Zusammensetzung durch Fällung auf der Innenfläche des ersten Behälters abgeschieden. Die Fällung erfolgt gemäß einem bevorzugten Aspekt durch Verdampfen des Lösungsmittels, vorzugsweise Wasser, aus einer Lösung oder Dispersion, die die Coronavirus-deaktivierende Zusammensetzung umfasst, in dem ersten Behälter des Kits gemäß der Erfindung.

[0026] Es hat sich gezeigt, dass ein Behälter, der eine feste Coronavirus-deaktivierende Zusammensetzung enthält, für zu testende Personen sicherer ist. Insbesondere wenn der erste Behälter in einem erfindungsgemäßen Kit zur Probenentnahme, der einen zweiten Behälter mit einer Gurgelzubereitung umfasst, verwendet wird, kann vermieden werden, dass der Anwender aus Versehen den ersten Behälter, der die Coronavirus-deaktivierende Zusammensetzung enthält, als

Gurgelzubereitung nimmt.

[0027] Die Deaktivierung von Coronaviren ist in der Literatur bekannt (Evaluation of Chemical Protocols for Inactivating SARS-CoV-2 Infectious Samples; Viruses 2020, 12, 624).

[0028] Es hat sich gezeigt, dass Coronaviren, insbesondere SARS-CoV-2, durch chaotrope Mittel deaktiviert werden können. Für eine im Wesentlichen stabile Aufbewahrung von Nucleinsäureund/oder Polypeptidmolekülen in einer biologischen Probe umfasst die Coronavirus-deaktivierende Zusammensetzung wenigstens ein chaotropes Mittel. Mehrere chaotrope Mittel sind in der Technik bekannt, die die Sekundär-, Tertiär- und/oder Quartärstruktur von biologischen Makromolekülen, wie Polypeptiden, Proteinen und Nucleinsäuren einschließlich DNA und RNA, zerstören. Nichteinschränkende Beispiele für solche chaotropen Mittel, wie sie für die Verwendung in bestimmten der vorliegend offenbarten Zusammensetzungen in Betracht gezogen werden, sind Guanidiniumsalze, Guanidiniumchlorid, Guanidiniumthiocyanat, Kaliumthiocyanat, Natriumthiocyanat und Harnstoff. Bestimmte Ausführungsformen ziehen einschließlich, aber ohne darauf beschränkt zu sein, die Mitverwendung eines chaotropen Mittels in einer Konzentration von etwa 0,05, 0,1, 0,5, 1,0, 1,2, 1,4, 1,6, 1,8, 2,0, 2,2, 2,4, 2,6, 2,8, 3,0, 3,2, 3,4, 3,4, 3,6, 3,8 oder 4,0 M in Betracht, wobei "etwa" so zu verstehen ist, dass es eine quantitative Variation repräsentiert, die um weniger als 50%, vorzugsweise weniger als 40%, besonders bevorzugt weniger als 30% und besonders bevorzugt weniger als 20%, 15%, 10% oder 5% größer oder kleiner als die genannte Menge sein kann.

[0029] In einer bevorzugten Ausführungsform kann das Guanidiniumsalz, insbesondere das Guanidiniumthiocyanat, in einer Konzentration von 1 M bis 6 M, vorzugsweise 2 M bis 5 M, wie 4 M, verwendet werden. Gewöhnlich werden die Lösungen in den Behälter gefüllt, und das Lösungsmittel wird verdampft. Die Körperflüssigkeiten (hierin Speichelproben), die in den ersten Behälter gefüllt werden, lösen dann die verfestigte Coronavirus-deaktivierende Zusammensetzung auf und führen wiederum zu ausreichenden Konzentrationen, um das Coronavirus zu deaktivieren.

[0030] Ein Hauptgrund für die Instabilität von Nucleinsäure in biologischen Proben ist die Anwesenheit von Desoxyribonucleasen und Ribonucleasen. Desoxyribonucleasen und Ribonucleasen sind Enzyme, die DNA bzw. RNA zerlegen. Ihre Hauptquelle im Verdauungstrakt sind Sekrete des Pankreas, obwohl diese Enzyme auch in Sekreten und Zellen der Speicheldrüse und Wangenschleimhaut vorhanden sein können. Außerdem können Mikroorganismen, die im Mund leben, oder solche aus kürzlich aufgenommenen Lebensmitteln Desoxyribonucleasen oder Ribonucleasen freisetzen. Es wäre zu erwarten, dass eine Nucleinsäure innerhalb einer biologischen Probe (z.B. Speichel), die in Wasser aufbewahrt wird, mit der Zeit zersetzt oder abgebaut wird.

[0031] Guanidiniumsalze, insbesondere Guanidiniumthiocyanat und/oder Guanidiniumchlorid, sind ebenfalls dafür bekannt, Desoxyribonucleasen und Ribonucleasen zu hemmen (Methods in Enzymology; Band 502, 2012, Seite 273-290).

[0032] Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform umfasst die Coronavirus-deaktivierende Zusammensetzung ein Guanidiniumsalz in fester Form oder besteht daraus.

[0033] In einem weiteren Aspekt der vorliegenden Erfindung kann die Coronavirus-deaktivierende Zusammensetzung einen verfestigten Puffer umfassen.

[0034] Nichteinschränkende Beispiele für geeignete Puffermittel sind Natriumcyclohexandiamintetraacetat (CDTA), N,N-Bis(2-hydroxyethyl)-2-aminoethansulfonsäure (BES), 4-(2-Hydroxyethyl)piperazin-1-ethansulfonsäure (HEPES), Essigsäure oder Acetat (z.B. Natriumacetat), Zitronensäure oder Citrat, Apfelsäure, Phthalsäure, Bernsteinsäure, Histidin, Diphosphorsäure, Maleinsäure, Kakodylsäure, BB'- Dimethylglutarsäure, -kohlensäure oder -carbonat, 5(4)-Hydroxymethylimidazol, Glycerol-2-phosphorsäure, Ethylendiamin, Imidazol, Arsensäure, Phosphorsäure oder Phosphat, Natriumacetat, 2:4:6-Collidin, 5(4)-Methylimidazol, N- Ethylmorpholin, Triethanolamin, Diethylbarbitursäure, Trischydroxymethyl)-aminomethan (Tris), 3-(N-Morpholino)propansulfonsäure; 4-Morpholinpropansulfonsäure (MOPS), 2-Morpholinoethansulfonsäure (MES), Piperazin-1,4-bis(2-ethansulfonsäure) (PIPES), N-[Trischydroxymethyl)methyl)-2-aminoethansulfon- säure (TES), 4-(2-Hydroxyethyl)piperazin- 1-propansulfonsäure (EPPS), N-(2- acetamido)-2-

aminoethansulfonsäure (ACES) oder Kombinationen davon. Andere Beispiele sind Phosphat, Carbonat, Ethylendiamin- oder Imidazolpuffer. Weitere nichteinschränkende Beispiele für ein geeignetes Puffermittel sind Puffermittel mit einem pKa bei 25°C von etwa 4,7 bis etwa 8,0.

[0035] Es hat sich als vorteilhaft herausgestellt und verbessert die Lagerstabilität der entnommenen Proben, wenn die Coronavirus-deaktivierende Zusammensetzung Trischydroxymethyl)aminomethan und/oder Ethylendiamintetraessigsäure umfasst.

[0036] In einer bevorzugten Ausführungsform umfasst die Coronavirus-deaktivierende Zusammensetzung Trischydroxymethyl)aminomethan und ein Guanidiniumsalz in einem Stoffmengenverhältnis im Bereich von 1:1000 bis 1:10, besonders bevorzugt 1:500 bis 1:20, am meisten bevorzugt 1:150 bis 1:50.

[0037] In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform umfasst die Coronavirus-deaktivierende Zusammensetzung Ethylendiamintetraessigsäure und ein Guanidiniumsalz in einem Stoffmengenverhältnis im Bereich von 1:1000 bis 1:20, vorzugsweise 1:600 bis 1:50, besonders bevorzugt 1:300 bis 1:100.

[0038] In einem weiteren bevorzugten Aspekt der vorliegenden Erfindung umfasst die Coronavirus-deaktivierende Zusammensetzung Trischydroxymethyl)aminomethan und Ethylendiamintetraessigsäure in einem Stoffmengenverhältnis im Bereich von 20:1 bis 0,5:1, vorzugsweise 10:1 bis 0,8:1 und am meisten bevorzugt 5:1 bis 1:1.

[0039] In einem weiteren Aspekt der vorliegenden Erfindung ist das Guanidiniumsalz aus der Gruppe ausgewählt, die aus Guanidiniumthiocyanat, Guanidiniumchlorid, Guanidiniumisothiocyanat und Gemischen davon besteht.

[0040] Am meisten bevorzugt handelt es sich bei dem Guanidiniumsalz um Guanidiniumthiocyanat und/oder Guanidiniumchlorid.

[0041] Der Kit der vorliegenden Erfindung ist für die Entnahme von Speichelproben geeignet.

[0042] Die Speichelprobe kann die verfestigte Coronavirus-deaktivierende Zusammensetzung im ersten Behälter der Erfindung auflösen. Das Volumen des ersten Behälters ist gewöhnlich so angepasst, dass man eine ausreichende Konzentration der Coronavirus-deaktivierenden Zusammensetzung erhält, wenn er vollständig mit der Speichelprobe gefüllt ist.

[0043] Der Ausdruck "Speichel", wie er hier verwendet wird, bezieht sich auf das Sekret oder eine Kombination von Sekreten aus einer der Speicheldrüsen einschließlich der Ohrspeicheldrüse, der Unterkieferdrüse und der Unterzungendrüse, gegebenenfalls gemischt mit den Sekreten aus den zahlreichen kleinen Lippen-, Wangen- und Gaumendrüsen, die den Mund auskleiden.

[0044] Vorteile für den Patienten, wenn er eine Speichelprobe oder eine nasale, vordere nasale und/oder nasopharyngeale Probe anstelle einer Blutprobe als Quelle für Ribonucleinsäure abgibt, bestehen darin, dass Patienten es typischerweise vorziehen, die mit einer Blutentnahme einhergehenden Unannehmlichkeiten, Schmerzen und Befürchtungen zu vermeiden. Außerdem ist die Verwendung eines Nadelstichs, um einen Tropfen Blut zu erhalten, zwar ausreichend, um eine verwendbare Menge DNA zu gewinnen, doch ist die erwartete Menge an RNA für die meisten Zwecke zu gering, um verwendbar zu sein. Speichel, Auswurf, nasale, vordere nasale und/oder nasopharyngeale Probe haben den weiteren Vorteil, dass die zur Entnahme kein Fachpersonal erfordern, wodurch dort, wo eine Massenprobeentnahme durchgeführt wird (z.B. während einer Epidemie/Pandemie), Kosten reduziert werden. Um Speichel von einem Patienten abzunehmen, wird der Mund vorzugsweise vor der Probenahme ausgespült. Nahrungsteilchen können FremdRNA einführen, und durch Küssen übertragener Speichel kann eine Quelle für fremde humane RNA oder virale RNA sein. Der Mund kann mit etwa 50 mi Wasser ausgespült werden, indem man kräftig durchspült oder mit einer Zahnbürste ohne Zahnpasta bürstet. Unstimulierter Speichel ist gewöhnlich vom mukösen Typ und wird langsam sezerniert. Stimulierter Speichel (Erwartung von leckerem Essen, süße oder saure Süßigkeiten) ist vom serösen (wässrigen) Typ und wird schneller sezerniert. Nach dem Ausspülen des Mundes und etwa 5 Minuten Warten, bis kein

Wasser mehr im Mund ist, kann der Patient ein Volumen (zum Beispiel etwa 1-2 ml) Speichel, vorzugsweise stimulierten Speichel, in den ersten Behälter des Kits der vorliegenden Erfindung spucken. Der Speichelfluss kann zweckmäßigerweise mit ein paar Körnern/einer Prise Speisezucker, den man auf der Zunge platziert, oder irgendeine andere solche speichelstimulierende Substanz, die die RNA-Stabilität oder anschließende Amplifikation nicht beeinträchtigt, stimuliert werden.

[0045] In Beispielen, die nicht Teil der Erfindung sind, kann Speichel auch von Patienten wie Säuglingen, kleinen Kindern und Menschen mit Behinderung und/oder Krankheit, die vielleicht nicht in der Lage sind, direkt in eine Sammelvorrichtung zu spucken, erhalten werden. In diesem Fall wird ein Utensil (z.B. ein Wattestäbchen usw.) verwendet, um Speichel abzunehmen. Speichel kann auch von nichthumanen Tieren, wie Vieh, Haustieren und dergleichen, die vielleicht nicht in der Lage oder willens sind, direkt in eine Sammelvorrichtung zu spucken, erhalten werden. In diesem Fall kann ein Utensil (z.B. ein Wattestäbchen usw.) verwendet werden, um Speichel abzunehmen. Um eine vordere nasale oder nasopharyngeale Probe von einem Patienten zu entnehmen, kann eine Vielzahl von Hilfsmitteln verwendet werden. Schleimhautzellen können mit Hilfe von harten oder flexiblen Bürsten, Wattestäbchen oder Kunststoff-/Holz-Schabern abgeschabt werden, und Zellen können aus der Nasenhöhle gespült werden, indem man eine Flüssigkeit (z.B. Kochsalzlösung) einführt und die Flüssigkeit zurückgewinnt. Zum Beispiel kann ein steifes Wattestäbchen/Bürste im Vorderteil der Nase und ein flexibles Wattestäbchen/Bürste im hinteren Nasen-Rachen-Raum platziert und verwendet werden, um Schleimhautsekrete zu entnehmen und Zellen vorsichtig von der Schleimhaut abzureiben. Proben, die mit der Flüssigkeit und/oder Hilfsmitteln entnommen wurden, können in den ersten Behälter gegeben werden.

[0046] Erfindungsgemäß wird der erste Behälter des Kits der vorliegenden Erfindung zur Entnahme von Speichel, der mit einer Gurgelzusammensetzung, z.B. Wasser, erhalten wird, verwendet.

[0047] Im Sinne der vorliegenden Erfindung umfasst der Ausdruck "Speichel" auch eine Gurgelzusammensetzung, die Speichel umfasst. Es hat sich gezeigt, dass mit einer Gurgelzusammensetzung erhaltener Speichel und somit ein Gemisch von Speichel und Gurgelzusammensetzung zu Proben mit einer höheren Viruslast führt, insbesondere bei Patienten, die mit Coronavirus, wie SARS-COoV-2-Virus, infiziert sind.

[0048] Es hat sich gezeigt, dass Infektionen durch das Coronavirus zu schweren akuten Atemwegssyndromen führen können und dass das Gurgeln eine ausreichende Viruslast für den Nachweis von viraler RNA, z.B. durch PCR-Techniken, liefert.

[0049] Der Kit gemäß der Erfindung ist geeignet, um eine menschliche Speichelprobe zu entnehmen und sie für den Transport zu stabilisieren. Das nachgeschaltete Verfahren ist die Extraktion von DNA und RNA und anschließende PCR-Analyse. Es hat sich gezeigt, dass der Kit der Erfindung für die Entnahme von Speichelproben ausgezeichnet gut geeignet ist und die Probe stabilisiert, damit sie bei Umgebungstemperaturen durch normale Post- oder Kurierdienste transportiert werden kann.

[0050] Der Kit der Erfindung kann zusätzlich eine oder mehrere der folgenden Komponenten umfassen oder daraus bestehen:

ein Behältnis für den Transport des Behälters der Erfindung, der mit der Körperflüssigkeitsprobe, z.B. der Speichelprobe, gefüllt ist; das Behältnis kann ein dicht verschließbarer Kunststoffbeutel sein;

ein Klebeetikett zum Etikettieren der Proben; und

saugfähiges Material.

[0051] Der Kit besteht aus dem ersten Behälter und vorzugsweise einem Trichter, um menschliche Gurgellösung aufzufangen. Dieser Kit ermöglicht die Entnahme von Zellen von der Rückseite des Rachens und von Speichel zu Hause. Die Probe wird stabilisiert, Protein wird denaturiert und für den Transport bei Umgebungstemperaturen vorbereitet. Die Sammelröhrchen gewährleisten, dass die Proben während des Transports nicht kontaminiert werden.

[0052] Die Proben können dann in speziell ausgerüsteten Einrichtungen verwendet werden, um die DNA oder RNA aus den stabilisierten Zellen oder dem Speichel zu extrahieren. Die nachgeschaltete Anwendung der Probe ist eine Analyse der DNA oder RNA. Der Zweck dieser Analyse kann medizinischer Natur für die Virologie sein oder seinen Ursprung in der nichtmedizinischen Lebensweise aufweisen und Ernährungszwecken dienen.

[0053] In einem bevorzugten Aspekt umfasst der Kit der Erfindung einen ersten Behälter in Form eines Probenröhrchens mit einer verschließbaren Öffnung, vorzugsweise einem Verschluss.

[0054] Der Anwender entfernt den Verschluss des Sammelröhrchens und steckt die Einfüllvorrichtung, vorzugsweise den Trichter, in die Öffnung des Röhrchens. Dann öffnet der Anwender den zweiten Behälter, der eine Gurgelzusammensetzung umfasst, und nimmt die Gurgelzusammensetzung, vorzugsweise Wasser, in den Mund. Die Gurgelzusammensetzung wird verwendet, um ausreichend lange, z.B. 10 Sekunden, an der Rückseite des Rachens zu gurgeln. Der Anwender überführt die Flüssigkeit mit Hilfe des Trichters in den ersten Behälter. Der Trichter wird verworfen, und das Röhrchen wird mit dem beiliegenden Verschluss geschlossen. Das Röhrchen wird zum Transport in den Kunststoffbeutel zurückgegeben. Der Anwender sendet dann die Proben an die Einrichtung zur Analyse.

[0055] Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform der vorliegenden Erfindung umfasst der Kit einen ersten Behälter für Körperflüssigkeiten, bei dem es sich um ein verschließbares Probenröhrchen handelt, das Polypropylen oder Polyethylen oder Polystyrol umfasst oder daraus besteht.

[0056] In einer weiteren Ausführungsform der vorliegenden Erfindung ist der zweite Behälter des Kits zur Entnahme von Speichel gemäß der vorliegenden Erfindung ein Probenröhrchen oder eine Ampulle, wobei der zweite Behälter vorzugsweise Polypropylen oder Polyethylen oder Polystyrol umfasst oder daraus besteht.

[0057] In einem Aspekt der vorliegenden Erfindung umfasst die Gurgelzusammensetzung, die im zweiten Behälter vorhanden ist, Wasser oder gepufferte Kochsalzlösung oder besteht daraus.

[0058] Eine weitere Ausführungsform der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung eines Kits der vorliegenden Erfindung zur Entnahme von Speichel, insbesondere Speichel, der virale RNA, insbesondere RNA von Coronavirus, wie RNA von SARS- CoV-2-Virus, umfasst.

[0059] Eine weitere Ausführungsform der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zum Nachweis von viraler RNA von SARS-CoV-2-Virus in einer Speichelprobe, das die folgenden Schritte umfasst:

i) Bereitstellen einer Probe von Speichel, die durch Gurgeln mit einer Gurgelzusammensetzung erhalten wird;

il) Einfüllen der Speichelprobe in einen Behälter, wobei innerhalb des Behälters eine Coronavirus-deaktivierende Zusammensetzung in fester Form vorhanden ist; und

il) Analysieren der Probe mit PCR-Techniken.

[0060] Erfindungsgemäß wird die Speichelprobe durch Gurgeln mit einer Gurgelzusammensetzung erhalten.

[0061] Verfahren der Erfindung werden zweckmäßigerweise praktisch umgesetzt, indem man die bei einem solchen Verfahren verwendeten Zusammensetzungen in Form eines Kits, z.B. des Kits der Erfindung, bereitstellt. Wenigstens eine Art positiver Kontrolle oder Standard kann bereitgestellt werden, bei der/dem es sich um eine Nucleinsäure(DNA- oder RNA-)matrize handeln kann, um die Eignung der Probe zum Nachweis eines Zielgens oder einer Zielnucleinsäuresequenz (z.B. eines Transkripts) zu beweisen. Wünschenswerterweise erleichtert der Behälter die Probenahme im Feld, ohne dass eine Klinik oder ein Krankenhaus erforderlich ist, und ist so groß, dass er per Post an eine Sammelstelle und/oder Analysestelle gesendet werden kann.

[0062] In einer weiter bevorzugten Ausführungsform bezieht sich die vorliegende Erfindung auf die Extraktion von viraler RNA von SARS-CoV-2-Virus.

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[0063] In einer besonders bevorzugten Ausführungsform des Verfahrens gemäß der vorliegenden Erfindung wird die Probe mit PCR-Techniken, wie Reverse-Transkription-Polymerase-Kettenreaktion (RT-PCR) oder RT-gqPCR oder RNA/DNA-Sequenzierung oder RNA/DNA-Hybridisierung, analysiert.

BEISPIELE:

[0064] Der Behälter der Erfindung wurde insofern vorbereitet, dass ein Probenröhrchen, das aus Polypropylen bestand, mit 1,5 ml einer wässrigen Zusammensetzung mit einer Konzentration von 4 M Guanidiniumthiocyanat, 55 mM Tris(hydroxymethyl)aminomethan (Tris) und Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA) gefüllt wurde. Die Lösung wurde 15 h lang bei 90°C inkubiert. Das Probenröhrchen mit der verfestigten Coronavirus-deaktivierenden Zusammensetzung wurde mit einem aus Polyethylen bestehenden Schraubverschluss ausgestattet.

[0065] Der Behälter ist für die Probenstabilisierung für nachgeschaltete genetische Analysen vorgesehen. Genetische Analysen können an DNA oder RNA durchgeführt werden. Da RNA als erheblich weniger stabil als DNA gilt, wurde die Stabilitätsvalidierung an RNA durchgeführt. Somit wird angenommen, dass, wenn RNA stabil ist, DNA noch stabiler sein wird. Außerdem gilt virale RNA als noch instabiler, und so erforscht diese Validierung zwei Aspekte der Stabilität:

* Stabilität humaner RNA über die Zeit, wobei RNAse-P-RNA in den Proben gemessen wird; * Virale (SARS-CoV-2) RNA mit der Zeit

PROBENVORBEREITUNG

[0066] Das Ziel dieses Experiments bestand darin, die Stabilität von humaner und viraler RNA über längere Zeiträume bei 0°C und bei 45°C zu bewerten. Die typische Zeit, in der eine Probe entnommen und zum Labor transportiert wird, beträgt weniger als 24 h, kann aber auch bis zu 72 h betragen. Um die Stabilität dieser Proben zu bewerten, wurde das folgende Experiment aufgebaut:

[0067] Speichelproben von 4 Individuen wurden mit dem Kit der Erfindung entnommen, der den oben genannten Behälter der Erfindung und einen zweiten Behälter, der aus einem 1 mi Wasser enthaltenden Probenröhrchen bestand, umfasste. Die Testindividuen verwendeten die Gurgellösung und gurgelten 10 Sekunden lang. Anschließend wurden die Gurgelproben gesammelt. Diese Individuen wurden zuvor auf die Anwesenheit einer SARS-CoV-2-Virusinfektion getestet und erwiesen sich als negativ. Die Proben wurden in 4 gleiche Aliquote aufgeteilt. Jedes Aliquot wurde mit echtem SARS-CoV-2-Virus aus einer klinischen Probe infundiert, die zuvor als positiv und eine hohe Viruslast tragend analysiert wurde. Der CT-Wert der positiven Probe betrug 24,27, was eine grobe virale Last von 250 000 Viruskopien pro Reaktion anzeigt. Da der Behälter der Erfindung in der Lage sein sollte, geringere Viruslasten zu konservieren, wurden die negativen Speichelproben mit dem positiven viralen Material in einer Verdünnung von 1:500 versetzt. Dies führt zu einer Probe, die um einen Faktor 500 weniger virales Material aufweist als ein stark infektiöses Individuum, ungefähr 500 Kopien pro Reaktion. (Die Nachweisgrenze von nur 2,5 Kopien wird in einem späteren Stadium dieser Anmeldung bestimmt).

1. PROBENSTABILITÄT VON HUMANER RNA

[0068] Die Anwesenheit von humaner RNA wurde zu allen Zeitpunkten als Vierfachbestimmung gemessen. Der Mittelwert der Vierfachbestimmung wurde genommen und für Berechnungen verwendet. Der CT-Wert wurde bestimmt.

Mittleres HEC-CT

Individuum 1 30,46 Durchschnitts-CT: Individuum 2 28,28 Oh bei 0°C, CT = 29,59 Individuum 3 31,98

Individuum 4 27,55 Pool positiver Proben 29,69

1:10 verdünnt

ERGEBNIS

[0069] Humane RNA war in allen Proben gleich ungefähr viel vorhanden (was zu erwarten war), da Verdünnungen bei negativen humanen Speichelproben vorgenommen wurden.

[0070] Die NTC, Probe ohne humanes Material, zeigte keine Amplifikation, was zu erwarten war.

2. PROBENSTABILITÄT VON HUMANER RNA

[0071] Die Anwesenheit von humaner RNA wurde zu allen Zeitpunkten als Vierfachbestimmung gemessen. Der Mittelwert der Vierfachbestimmung wurde genommen und für Berechnungen verwendet. Der CT-Wert wurde bestimmt.

Mittleres HEC-CT

Individuum 1 31,22

Individuum 2 28,20 Durchschnitts-CT: Individuum 3 28,92 Oh bei 0°C, CT = 29,59 Individuum 4 27,81 72 h bei 0 °C, CT= 29,22 Pool positiver Proben 29,92

1:10 verdünnt

ERGEBNIS

[0072] Humane RNA war auch für 72 Stunden bei 0°C stabil. Es gab keinen Anstieg des CTWerts, der ein Maß für den Abbau ist.

3. PROBENSTABILITÄT VON HUMANER RNA

[0073] Die Anwesenheit von humaner RNA wurde zu allen Zeitpunkten als Vierfachbestimmung gemessen. Der Mittelwert der Vierfachbestimmung wurde genommen und für Berechnungen verwendet. Der CT-Wert wurde bestimmt.

Mittleres HEC-CT

Individuum 1 51,45 Durchschnitts-CT: Individuum 2 28,81 .

— Oh bei 0°C, CT = 29,59 Individuum 3 29,02 . Individuum 4 27,54 /zh pe! 0°C, CT= 29,22 Pool positiver Proben 30,92 72 h bei 45 °C, CT = 29,55

1:10 verdünnt

ERGEBNIS

[0074] Humane RNA war auch bei 45°C stabil. Es gab keinen Anstieg des CT-Werts, der ein Maß für den Abbau ist.

4. PROBENSTABILITÄT VON HUMANER RNA

[0075] Die Anwesenheit von humaner RNA wurde zu allen Zeitpunkten als Vierfachbestimmung gemessen. Der Mittelwert der Vierfachbestimmung wurde genommen und für Berechnungen verwendet. Der CT-Wert wurde bestimmt. Die Kurven sind in Figur 1 wiedergegeben.

Humane Kontrolle Start 0#C 0#C 0#PC 45#C 45#C 45#C (Durchschnitts-CT) 24h [48h 72h |24h 48 h 72h Individuum 1 30,46 [28,89 [32,13 [31,22 [30,66 1[32,16 [31,45 Individuum 2 28,28 [28,38 [29,03 [28,20 [28,88 [29,14 [28,81 Individuum 3 31,98 129,05 [29,92 [28,92 |28,85 1[|29,88 29,02 Individuum 4 27,55 [|28,36 |27,99 [27,81 |27,70 1|27,96 [27,54 Durchschnitts-CT 29,57 28,67 |29,77 1|29,04 |29,02 1|29,78 129,20 ERGEBNISSE

[0076] Der CT-Wert war bei beiden Temperaturen stabil, was einen hohen Grad der Stabilität zeigt. Eine Temperatur von 45 °C simuliert ein gegenüber Raumtemperatur um den Faktor 4,5 beschleunigtes Altern. Dies bedeutet, dass ein Zeitraum von 72 h bei dieser Temperatur das Aquivalent von 72 x 4,5 = 324 h oder 13,5 Tagen ist. Somit ist humane RNA bei Raumtemperatur mindestens 2 Wochen lang stabil.

5. PROBENSTABILITÄT VON VIRALER RNA

[0077] Die Anwesenheit von viraler RNA wurde zu allen Zeitpunkten als Dreifachbestimmung gemessen. Der Mittelwert der Dreifachbestimmung wurde genommen und für Berechnungen verwendet. Der CT-Wert wurde bestimmt.

Mittleres SARS-CoV-2-CT

Individuum 1 29,28

Individuum 2 29,19

Individuum 3 30,92 Durchschnitts-CT: Individuum 4 28,36 Oh bei 0°C, CT = 29,44 Pool positiver Proben 24,27

1:10 verdünnt

6. PROBENSTABILITÄT VON VIRALER RNA

[0078] Die Anwesenheit von viraler RNA wurde zu allen Zeitpunkten als Dreifachbestimmung gemessen. Der Mittelwert der Dreifachbestimmung wurde genommen und für Berechnungen verwendet. Der CT-Wert wurde bestimmt.

Mittleres SARS-CoV-2-CT

Individuum 1 27,59

Individuum 2 26,82 Durchschnitts-CT: Individuum 3 27,40 Ohbei0 °C, CT = 29,44 Individuum 4 26,06 72 h bei 0 °C, CT= 26,97 Pool positiver Proben 23,26

1:10 verdünnt

ERGEBNIS [0079] Virale RNA war bei 0 °C sehr stabil, ohne beobachtbaren Abbau.

7. PROBENSTABILITÄT VON VIRALER RNA

[0080] Die Anwesenheit von viraler RNA wurde zu allen Zeitpunkten als Dreifachbestimmung gemessen. Der Mittelwert der Dreifachbestimmung wurde genommen und für Berechnungen verwendet. Der CT-Wert wurde bestimmt.

Mittleres SARS-CoV-2-CT

Individuum 1 52,64 Durchschnitts-CT: Individuum 2 31,16 .

— Oh bei 0°C, CT = 29,44 Individuum 3 31,15 . Individuum 4 32,00 72 h bei 0 °C, CT= 29,97 Pool positiver Proben 30,36 72 h bei 45 °C, CT = 31,74

1:10 verdünnt

ERGEBNIS

[0081] Virale RNA war auch bei 45 °C stabil. Es gab nur einen marginalen Anstieg des CT- Werts, der ein Maß für den Abbau ist.

8. PROBENSTABILITÄT VON VIRALER RNA

[0082] Die Anwesenheit von viraler RNA wurde zu allen Zeitpunkten als Dreifachbestimmung gemessen. Der Mittelwert der Dreifachbestimmung wurde genommen und für Berechnungen verwendet. Der CT-Wert wurde bestimmt. Die Kurven sind in Figur 2 wiedergegeben.

Virale RNA Start |0#C |0#C 0#C |45#C |45#C |45#C (Durchschnitts-CT) 24h 1|48h 72h |24h 48 h 72h Individuum 1 29,28 [30,92 |29,62 [27,59 |30,11 133,07 [32,64 Individuum 2 29,19 1|27,98 |28,63 |26,82 |30,40 130,89 [31,16 Individuum 3 30,92 28,71 [29,11 [27,40 [30,21 [31,78 131,15 Individuum 4 28,36 |28,06 |27,51 1|26,06 |30,09 1|32,43 [32,00 Durchschnitts-CT 29,44 [|28,92 |28,72 126,97 (30,20 1|32,04 [31,74 ERGEBNISSE

[0083] Der CT-Wert war bei beiden Temperaturen stabil, was einen hohen Grad der Stabilität zeigt. Eine Temperatur von 45 °C simuliert ein gegenüber Raumtemperatur um den Faktor 4,5

beschleunigtes Altern. Dies bedeutet, dass ein Zeitraum von 72 h bei dieser Temperatur das Aquivalent von 72 x 4,5 = 324 h oder 13,5 Tagen ist. Somit ist virale RNA bei Raumtemperatur mindestens 2 Wochen oder bei 45°C 3 Tage lang stabil.

9. MEHRERE GEFRIER-AUFTAU-ZYKLEN

[0084] Man geht davon aus, dass Gefrieren und Auftauen die Probenqualität beeinträchtigt und zu einem Abbau von DNA und RNA führt. Um zu bewerten, ob wiederholte Gefrier-Auftau-Zyklen die Probenqualität beeinträchtigen, wurde eine Probe insgesamt fünfmal bei -20 °C gefrieren gelassen, dann bei Raumtemperatur aufgetaut, gemessen und dann erneut gefrieren gelassen und wieder aufgetaut und gemessen. Die Kurven sind in Figur 3 wiedergegeben.

Mittelwert HEC-CT

ohne Auftauen 28,67 1x gefroren-aufgetaut 29,30 2x gefroren-aufgetaut 28,87 3x gefroren-aufgetaut 29,14 4x gefroren-aufgetaut 28,70 5x gefroren-aufgetaut 29,34 Mittelwert SARS-CoV-2-CT ohne Auftauen 30,62 1x gefroren-aufgetaut 31,30 2x gefroren-aufgetaut 30,84 3x gefroren-aufgetaut 30,81 4x gefroren-aufgetaut 30,63 5x gefroren-aufgetaut 31,55 ERGEBNIS

[0085] Selbst 5 Zyklen aus Gefrieren und Auftauen beeinträchtigen die Stabilität weder der viralen noch der humanen RNA.

10. PROBENSTABILITÄT VON VIRALER RNA

[0086] Eine Verdünnungsreihe von viralen Kopien wurde bei Proben von negativen Individuen angefertigt.

ERGEBNIS

[0087] Der Behälter der Erfindung ermöglicht einen genauen Nachweis von bis zu (Untergrenze) 2,5 Kopien von viraler RNA pro Reaktion.

Claims

Ansprüche

1. Kit zur Entnahme von Speichelproben zum Nachweis von SARS-CoV-2-Virus im Speichel, dadurch gekennzeichnet, dass das Kit umfasst:

a) einen ersten Behälter zur Aufnahme der Speichelprobe, wobei innerhalb des Behälters eine Coronavirus-deaktivierende Zusammensetzung in fester Form, welche wenigstens ein chaotropes Mittel umfasst, vorhanden ist;

b) einen zweiten Behälter, der eine Gurgelzusammensetzung umfasst; und

c) gegebenenfalls eine Einfüllvorrichtung, vorzugsweise einen Trichter.

2, Kit gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die feste Coronavirusdeaktivierenden Zusammensetzung wenigstens teilweise, vorzugsweise vollständig, an einer Innenfläche des ersten Behälters haftet oder die Innenfläche mit der festen Coronavirus-deaktivierenden Zusammensetzung wenigstens teilweise beschichtet ist.

3. Kit gemäß Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass die Coronavirus-deaktivierende Zusammensetzung bei 20 °C wasserlöslich ist.

4. Kit gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass der erste Behälter eine Kapazität für Flüssigkeiten von 1,5 ml bis 20 ml aufweist.

5. Kit gemäß einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass das Kit weiterhin die folgenden Komponenten umfasst: ij) ein Behältnis für den Transport des ersten Behälters; ii) ein Klebeetikett zum Etikettieren des ersten Behälters; il) saugfähiges Material.

6. Kit gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass das Kit eine Einfüllvorrichtung umfasst.

7. Kit gemäß einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, dass die Einfüllvorrichtung ein Trichter ist.

8. Kit gemäß einem der Ansprüche 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, dass der erste Behälter ein dicht verschließbares Probenröhrchen ist, das ein organisches Polymer, insbesondere Polypropylen oder Polyethylen oder Polystyrol umfasst oder daraus besteht, vorzugsweise mit einem Schmelzpunkt zwischen 150 und 200 °C.

9. Kit gemäß einem der Ansprüche 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, dass der zweite Behälter ein Probenröhrchen oder eine Ampulle ist, wobei der zweite Behälter vorzugsweise PoIypropylen oder Polyethylen oder Polystyrol umfasst oder daraus besteht.

10. Kit gemäß einem der Ansprüche 1 bis 9, dadurch gekennzeichnet, dass die Gurgelzusammensetzung Wasser oder gepufferte Kochsalzlösung umfasst oder daraus besteht.

11. Kit gemäß einem der Ansprüche 1 bis 10, dadurch gekennzeichnet, dass die Coronavirusdeaktivierende Zusammensetzung durch Fällung auf der Innenfläche des ersten Behälters abgeschieden ist.

12. Kit gemäß einem der Ansprüche 1 bis 11, dadurch gekennzeichnet, dass die Coronavirusdeaktivierende Zusammensetzung einen verfestigten Puffer umfasst.

13. Kit gemäß einem der Ansprüche 1 bis 12, dadurch gekennzeichnet, dass die Coronavirusdeaktivierende Zusammensetzung ein Guanidiniumsalz in fester Form umfasst oder daraus besteht.

14. Kit gemäß einem der Ansprüche 1 bis 13, dadurch gekennzeichnet, dass die Coronavirusdeaktivierende Zusammensetzung Trischydroxymethyl)aminomethan und/oder Ethylendiamintetraessigsäure umfasst.

15. Kit gemäß einem der Ansprüche 1 bis 14, dadurch gekennzeichnet, dass die Coronavirusdeaktivierende Zusammensetzung Trischydroxymethyl)}aminomethan und ein Guanidiniumsalz in einem Stoffmengenverhältnis im Bereich von 1:1000 bis 1:10, besonders bevorzugt 1:500 bis 1:20, am meisten bevorzugt 1:150 bis 1:50 umfasst.

16. Kit gemäß einem der Ansprüche 1 bis 14, dadurch gekennzeichnet, dass die Coronavirusdeaktivierende Zusammensetzung Ethylendiamintetraessigsäure und ein Guanidiniumsalz in einem Stoffmengenverhältnis im Bereich von 1:1000 bis 1:20, vorzugsweise 1:600 bis 1:50, besonders bevorzugt 1:300 bis 1:100 umfasst.

17. Kit gemäß einem der Ansprüche 1 bis 14, dadurch gekennzeichnet, dass die Coronavirusdeaktivierende Zusammensetzung Trischydroxymethyl)aminomethan und Ethylendiamintetraessigsäure in einem Stoffmengenverhältnis im Bereich von 20:1 bis 0,5:1, vorzugsweise 10:1 bis 0,8:1, am meisten bevorzugt 5:1 bis 1:1 umfasst.

18. Kit gemäß einem der Ansprüche 13 bis 17, dadurch gekennzeichnet, dass das Guanidiniumsalz aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Guanidiniumthiocyanat, Guanidiniumchlorid, Guanidiniumisothiocyanat und Gemischen davon besteht.

19. Kit gemäß einem der Ansprüche 13 bis 18, dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei dem Guanidiniumsalz um Guanidiniumthiocyanat und/oder Guanidiniumchlorid handelt.

20. Kit gemäß einem der Ansprüche 1 bis 19, dadurch gekennzeichnet, dass der erste Behälter einen Verschluss, vorzugsweise einen Schraubverschluss, aufweist.

21. Verwendung eines Kits gemäß einem der Ansprüche 1 bis 20 zur Entnahme von Speichel, insbesondere Speichel, der virale RNA, insbesondere RNA von Coronavirus, wie RNA von SARS-CoV-2-Virus, umfasst.

22. Verfahren zum Nachweis viraler RNA von SARS-CoV-2-Virus in einer Speichelprobe, dadurch gekennzeichnet, dass das Verfahren die folgenden Schritte umfasst:

ij) Bereitstellen einer Probe von Speichel, die durch Gurgeln mit einer Gurgelzusammensetzung erhalten wird;

il) Einfüllen der Speichelprobe in einen Behälter, wobei innerhalb des Behälters eine Coronavirus-deaktivierende Zusammensetzung in fester Form, welche wenigstens ein chaotropes Mittel umfasst, vorhanden ist; und

il) Analysieren der Probe mit PCR-Techniken.

23. Verfahren gemäß Anspruch 22, dadurch gekennzeichnet, dass die PCR- Technik ausgewählt ist aus Reverse-Transkription-Polymerase- Kettenreaktion (RT-PCR) oder RT-qPCR oder RNA/DNA-Sequenzierung oder RNA/DNA-Hybridisierung.

Hierzu 3 Blatt Zeichnungen