AR094349A1 - Suspensión y aglomerado de células pluripotentes humanas para la diferenciación en células endocrinas pancreáticas - Google Patents

Abstract

Reivindicación 1: Un método para producir un aglomerado de células tridimensional; el método comprende las etapas de: a) cultivar las células madre pluripotentes en un cultivo adherente plano, b) expandir las células madre pluripotentes a aglomerados de células agregados, c) transferir los aglomerados de células madre pluripotentes de un cultivo adherente plano a un cultivo dinámico en suspensión mediante el uso de una enzima o agente quelante, en donde se forma un aglomerado de células tridimensional. Reivindicación 10: Un método para expandir y diferenciar células madre pluripotentes en un sistema de cultivo en suspensión agitado dinámicamente que comprende: a) cultivar las células madre pluripotentes en un cultivo adherente plano, b) expandir las células madre pluripotentes a aglomerados de células agregadas, c) transferir los aglomerados de células madre pluripotentes del cultivo adherente plano a un cultivo dinámico en suspensión mediante el uso de una enzima o un agente quelante, d) mantener los aglomerados de células en un sistema de cultivo en suspensión agitado dinámicamente en donde los aglomerados de células madre expresan CD9, SSEA4, TRA-1-60, y TRA-1-81, y carecen de la expresión de CXCR4, e) diferenciar los aglomerados de células pluripotentes en un sistema dinámico de cultivo en suspensión agitado para generar una población de células precursoras pancreáticas, una población de células precursoras neurales o una población precursora de cardiomiocitos.