WO2004096275A1

WO2004096275A1 - サイトカイン誘導用具及びサイトカイン誘導方法

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Publication number: WO2004096275A1
Application number: PCT/JP2004/005986
Authority: WO
Inventors: Kazuo Shinmura; Shinichiro Kitahara; Yoshiko Abe; Kiyoshi Kuriyama
Original assignee: Sekisui Chemical Co., Ltd.
Priority date: 2003-04-28
Filing date: 2004-04-26
Publication date: 2004-11-11
Also published as: JPWO2004096275A1; US20060263430A1; EP1618892A1

Abstract

従来のサイトカイン誘導方法に比べてより効果的にサイトカインを誘導することを可能とするサイトカイン誘導用具及びサイトカイン誘導方法を提供する。サイトカイン誘導剤と、水に不溶性の多孔性の材料の担体とを含むサイトカイン誘導用具及び該サイトカイン誘導用具を用いたサイトカインを産生する細胞からサイトカインを誘導するサイトカイン誘導方法。

Description

明細書サイトカイン誘導用具及びサイトカイン誘導方法技術分野

本発明は、サイトカイン誘導療法等に用いられ、効果的にサイトカインを誘導し得るサイトカイン誘導用具及びサイトカイン誘導方法に関する。背景技術

サイト力インは、多種多様な細胞間情報伝達因子の総称である。サイトカインとしては、例えば、インターフェロン α、インターフェロン ]3、インターフェロン γ ( I F Ν - γ ) 、インターロイキン 1〜インター口ィキン 2 7、腫瘍壊死因子一 (T um o r N e c r o s i s F a c t o r— a、 TNF— o;) 、腫瘍壌死因子一 j3 (T um o r N e c r o s i s F a c t o r— ）、トランスフォーミング增殖因子一 α v T r a n s f o r m i n g G r o w t h a c t o r— α) > 卜ランスフォーミング增殖因子一 ]3 (T r a n s f o r m i n g G r o w t h F a c t o r — iS TGF— ; 3) 、及ぴ、各種細胞増殖因子等が挙げられる (臨床免疫第 2 7巻特別増刊号 1 9 9 5年「サイト力インのすベて」科学評論社、臨床免疫第 3 6卷、 3 9— 44、 20 0 1年、臨床免疫第 3 9卷、 1 8 9— 2 0 0、 2 0 0 3年）。

サイトカインは生体内で様々な活性を有し、様々な疾患に関与していることが知られている。このようサイトカインの活性を生体内で惹起して疾患の治療を行う、サイトカイン誘導療法が従来より行われている。サイトカイン誘導療法では、患者に、サイトカイン誘導剤を投与し、生体内においてサイトカインの誘導を引き起こす。このようなサイトカイン誘導療法に用いられるサイトカイン誘導物質として、様々な物質が知られている。例えば、微生物由来の OK— 43 2、 B CG、べスタチン、丸山ワクチン、又は、ロムリチド等が知られており、担子菌類由来のサイト力イン誘導物質として、クレスチン、レンチナン、又は、シゾフィラン等が知られている。

例えば、 OK— 43 2や B CG等は血液等からインターロイキン 1やインターフェロン γ等のサイトカインを誘導することが知られている (岐阜大医紀 43 : 1 6 6— 1 7 7、 1 9 9 5年、 Mo l e c u l a r me d i c i n e V o l . 36、臨時増刊号、 220— 229、 1 9 9 9年）。

上述したサイトカイン誘導療法では、生体内でサイトカインを誘導することはできる力 S、充分量のサイトカインを誘導することが困難であり、強い効力を発揮させ難いという問題があった。また、サイト力インを効果的に誘導するために、サイトカイン誘導剤の投与量が多くなり、副作用が大きくなり、治療を有効に行い得ないという問題もあった。

特開昭 6 1 - 2 7 7 6 28号公報には溶連菌の一種である OK— 43 2を不溶性担体共有結合で結合してなる癌治療用白血球刺激材が記載されているが、これは腫瘍障害性細胞を誘導するものであり、この先行技術文献ではサイトカイン誘導用具及びサイトカイン誘導方法については全く述べられていない。

一方、体外で体外循環システム等を用いて血液と不溶性材料等とを接触させる方法も検討されている。従来の体外循環システム等は血液中の有害物質の除去を目的とするものである。

また、輸血等に用いられている血液バッグなどは、血液または血液成分を貯蔵 ·保存のみを目的に用いられている。すなわち、積極的にサイトカインの産生を誘導するサイトカイン誘導用具及びサイトカイン誘導方法は全く知られていないのが現状であった。発明の開示

本発明は、上記現状に鑑み、従来のサイト力イン誘導療法に比べてより効果的にサイトカインを誘導し得る新規なサイトカイン誘導用具及びサイト力イン誘導方法を提供することを目的とする。

本発明は、サイトカイン誘導剤と、水に不溶性な多孔性の材料からなる担体とを含有するサイトカイン誘導用具及ぴサイトカイン誘導方法である。なお、上記担体としては、サイト力イン誘導剤のサイト力イン誘導作用を増強する誘導増強剤であることが好ましい。更に、サイトカイン誘導作用を増強する誘導増強剤は I F N— yの誘導を増強することが好ましい。

本願発明者らは、サイトカイン誘導剤とともに水に不溶性の多孔性材料からなる担体を含むサイト力イン誘導用具、又は、サイト力イン誘導剤が固定化された不溶性担体からなるサイトカイン誘導用具が、著しく高いサイトカイン誘導量を示すことを見いだし、本発明を完成した。以下に本発明を詳述する。

本発明のサイトカイン誘導用具は、サイトカイン誘導剤と水に不溶性の多孔性材料からなる担体とを含有する。

上記担体としては、水に不溶性な多孔性の材料からなるものであれば特に限定されず、例えば、金属、有機物又は無機物等により構成され、好ましくは有機物材料、より好ましくは高分子材料からなる。.

上記金属としては、例えば、金若しくは金合金、銀若しくは銀合金、チタン若しくはチタン合金、又は、ステンレス等が挙げられる。

上記無機物としては、例えば、活性炭、ガラス又はガラスの誘導体、シリカ系組成物、アルミナ、ヒドロキシアパタイト等が挙げられる。上記有機物材料又は高分子材料としては、例えば、セルロース系、ァガロース系、デキストラン系、ポリスチレン系、アクリルエステル系、ポリエチレンテレフタレ '一ト系、ナイ口ン系、ポリビュルァノレコール系、ポリスルホン系、ポリアミド系、ポリアタリロニトリル系、ポリエチレン系、ボリウレタン系、ポリプロピレン系、ポリエステル系等の材料が挙げられる。

上記ポリスチレン系の材料としては、例えば、ジビュルベンゼン一スチレン共重合体等が挙げられ、アクリルエステル系の材料としては、例えば、ポリメチルメタタリレート、ポリヒドロキシェチルメタクリレート等が挙げられる。

上記担体としては、なかでも、ポリスチレン系、アクリルエステル系高分子材料からなるものが好ましい。

上記担体は無極性であり、疎水性であってもよく、この場合、担体としては、ポリスチレン系高分子材料等を用いることができる。また、これらの担体には表面修飾や表面コーティング等により、表面に親水性を付与することもできる。

上記サイトカイン誘導剤の上記担体への固定化を物理吸着法によって行う場合には、上記担体としては、イオン交換性官能基や親水性官能基を有しない、疎水性の強い表面を有する材料からなることが好ましく、イオン交換性官能基や親水性官能基を有しない、スチレンからなる高分子材料からなることがより好ましく、スチレンにジビ.ニルべンゼン等の架橋剤を用いた高分子材料からなることが特に好ましい。

上記担体の形状としては特に限定されず、例えば、繊維状、不織布状、スポンジ状、粒子状、膜状、中空糸状等の公知の形状を用いることがでさる。上記担体の大きさとしては、粒子状では好ましい下限は 5 0 μ m、好ましい上限は 2 mmであり、繊維状では繊維径が 1 0 μ m以下であることが好ましく、 5 m以下であることがより好ましい。

上記担体が繊維状である場合は不織布からなることが好ましく、繊維径は 3 μ m以下であることが好ましい。

さらに、特開昭 6 1— 2 7 7 6 2 8号公報の癌治療用白血球刺激材では、白血球が吸着しない担体を用いることが好ましいと考えられるのに対して、本発明の上記担体は、白血球等を吸着する材料からなることが好ましく、白血球等を吸着する材料としては、例えば、ポリスチレン系、アクリルエステル系、ポリエステノレ系、ナイロン系、ポリビエルアルコール系、又は、酢酸セルロース等のセルロース系材料からなる高分子材料やガラス系の材料等が挙げられる。

上記担体としては、多孔性高分子材料からなるものが好ましい。

上記担体の形状としては、球状あるいは非球状の種々の形状のものを用いることができ、その形状は特に限定されない。なお、非球状としては、例えば、ペレット状、円柱状、円筒状、破砕状、繊維状、スポンジ状、中空糸状、シート状等が挙げられる。また、多孔性材料が容器内面や上記形状のものにコーティングなどによって付与されている材料でも良い。

上記多孔性高分子材料の表面積としては、 40 Om²/g以上であることが好ましく、細孔容積としては、 0. 5 mL/gであることが好ましく、平均細孔径としては、下限が 20A、上限が 800 Aであることが好ましい。

上記多孔性高分子材料を大別すると標準的なゲル構造をもつゲル型と、巨大網目構造 (M a e r o r e t i c u l a r s t r u c t u r e) をもつ MR型とに分けられる。また、単にスチレンとジビニルベンゼンのような架橋剤を用いて重合して得られた多孔性樹脂等は透明に近く、ゲル構造を呈するのでゲル型多孔性樹脂と呼ばれる。一方、特殊な重合法によると物理的に多孔性の樹脂等を製造することができ、このような樹脂は M R型又はポーラス型多孔性樹脂と呼ばれる。更に、懸濁重合の際において水に不溶でモノマーだけを溶かすことのできる特殊な有機溶剤を使用することにより、粒子の内部奥にまで大きな孔（マクロポア）をもった M R型又はポーラス型の粒子を作製することができる。

粒子状の多孔性高分子材料としては、例えば、強酸性陽イオン交換榭脂、弱酸性陽イオン交換樹脂、強塩基性陰イオン交換樹脂、弱塩基性陰イオン交換樹脂、合成吸着剤の他、キレート樹脂等からなるものが挙げられる。これらの多孔性粒子は公知の方法によって得ることができ、例えば、原料モノマーをゼラチン等の適当な懸濁安定剤を用いて水中で懸濁重合することにより球状の重合体として製造される。上記原料モノマ一としては、スチレン、ビエルトルエン、アクリル酸ェチル、メタタリル酸メチル、アタリ口エトリル等のエチレン性二重結合を有する化合物が用いられ、これにジビュルベンゼン、エチレンジメタタリレート等の多官能性モノマーである架橋剤を加え、多孔化剤の存在下過酸化べンゾィル、ァゾビスィソブチルニトリル等の重合開始剤を用いて架橋重合体を得る。上記多孔性粒子のうち市販されているものとしては、例えば、三菱化学社製ダイヤイオン（登録商標）、ロームアンドハース社製アンバーライト等、ダウケミカル製ダウエックス等が挙げられる。

例えば、架橋結合をもった球状樹脂はスチレンとジビュルベンゼン（架橋剤）のモノマーを水に懸濁し、重合して作ることができるが、この時にモノマーを溶解するような適当な溶媒を加えると、重合の過程で相分離が誘発されて、その結果、下記の細孔分布測定法によって測定できる範囲の多孔度を有する高分子材料が作製される。上記担体としては、巨大網目構造を有する多孔性高分子材料がより好ましい。上記巨大網目構造の細孔分布としては、下限が 2 A、上限が 2 0 0 0 Aであることが好ましく、より好ましい上限は 3 0 O Aである。また、細孔分布は、一般に用いられている方法によって規定することができ、例えば、細孔容積の 5〜 9 5 %を占める細孔径で示すことができる。

細孔分布は従来より用いられている一般的な試験方法にて測定することができる。このような試験方法としては、例えば、水銀圧入法とガス吸着法そしてバブルポイント法等が挙げられる。水銀圧入法では、一般的に水銀圧入式ポロシメーターといわれている測定装置が用いられる。この原理は試料を真空処理できる容器に入れ、微細な孔に入っている水分や様々なガスを取り除く前処理をした後に、試料を水銀で覆うようにする。そして水銀全体に圧力を掛けていくと、水銀は逃げ場が無くなり、試料の表面にあいている微細な孔に入り出すことにある。圧力を上げれば上げるだけ、水銀は小さな孔に入っていくので、（つまり圧力と孔の大きさは反比例しているので）掛けた圧力と水銀の変化量を調べると、孔の大きさ（横軸）と孔の容積（縦軸）の関係のグラフ（細孔分布曲線）を得ることができる。

また、ガス吸着法では、一般的には窒素 'ヘリウム 'クリプトンなどのガスを用いて、先のポロシメーター同様、試料を真空装置で脱気させた後一定圧又は一定量のガスを試料容器に加えると、ガスの分子は試料の表面に吸着していく。水銀圧入法の場合は、大きな孔から水銀が入つていく力 S、ガス吸着法の場合は、小さな孔にガスが吸着されていくことから始まる。数十回に分けて試料にガスを加えていくと、吸着の飽和をそれぞれに繰り返し、それ以上与えても全く吸着しない状態になる。そして比較的小さな細孔までの細孔分布を計ることができる。バブルボイント法は一般的には貫通した孔の細孔分布を計る方法で、フィルター'不織布などに適している。フロンで濡らした試料を固定し、窒素ガスを加圧していくと、ある圧力で大きな孔に着いていたフロン液が飛ばされ泡となって飛んでいく。すると突然ガスはその孔から上に流れ出す。更にガスを多く試料に当てると再び 1回目より高い圧力で、もう少し小さぃ孔ょりフロン液が泡となつて飛びそこからガスが流れ出す。この時のガスの圧力と流れたガスの量を測るとポロシメーターと同様の細孔分布測定ができる。

なお、細孔分布の測定法は上記の方法に限定されず、細孔の分布が測定できる他の方法であっても良い。

上記サイトカイン誘導剤としては、例えば、 B CG、 B CG— CWS、 P PD、 No c a r d i a _CWS、 OK—43 2、 Mu r amy l d i p e p t i d e等の細菌類やその成分； P S K：、レンチナン、シゾフィラン等の多糖類；ポリ I ： C、ポリ A： U等のポリマー； L e V am i s o l e、 DNCB、 A z i me x o n、 T i l o r o n e、 B e s t a t i n等の化学物質が挙げられる。また、上記のような生理活性物質に限らず、菌体、菌体成分、抗酸菌、溶連菌、放線菌、ペプチド類、核酸類、蛋白質、糖成分、脂質、プロスタグランジン類、ァラキドン酸代謝物類、 Keyhole Limpet Heraocyanin (KLH)等の蛋白質の様々な物質もサイトカイン誘導剤として用いられ得る。

これらサイトカイン誘導剤の中でも、菌体及び又はその菌体由来成分が好ましい。なかでも、抗酸菌と抗酸菌由来成分がより好ましく、結核菌ゃ結核菌由来成分が特に好ましい。牛型結核菌弱毒株である B C G とその由来成分も特に好ましい。

また、上記サイトカイン誘導剤としては、溶連菌及び Z又は溶連菌由来成分も好ましい。また、上記サイトカイン誘導剤のみではサイトカイン誘導能を充分に発揮し得ないものであっても、上記担体と組み合わせて用いることにより、サイトカイン誘導活性を発揮させることもできる。従って、本発明におけるサイトカイン誘導剤としては、従来より用いられているサイト力イン誘導物質の他、様々な物質を用いることができる。

上記サイトカイン誘導剤を上記担体の表面に固定化するには、物理吸着、共有結合、イオン結合等の公知の方法を用いることができる。また、共有結合等による場合には、必要に応じて、上記サイト力イン誘導剤と上記担体との結合部に任意の長さをもつスぺーサーを導入することが好ましい。

上記サイト力イン誘導剤が菌体等である場合は、必要に応じて、固定化する前に菌体の洗浄操作ゃ破碎操作、成分分画操作等のさまざまな前処理を施してもよい。また、上記サイト力イン誘導剤が生菌等である場合は、より安全性を高めるために、必要に応じて、固定化する前、固定化と同時、固定化の後のいずれの時点でも、加熱処理 '薬品処理 '放射線処理■ガス滅菌処理等のさまざまな方法により死菌化してもよい。上記加熱処理としては、例えば、オートクレープ処理が挙げられ、上記薬品処理としては、例えば、ダルタルアルデヒド処理、ホルマリン処理、又は、エタノール処理が挙げられ、上記放射線処理としては、例えば、 γ線処理が挙げられ、上記ガス滅菌処理としては、例えば、エチレンォキサイドガス処理等が挙げられる。

上記サイトカイン誘導剤としては、蛋白質変性剤で変性されているものが好適に用いられる。上記蛋白質変性剤としては、例えば、ダルタルアルデヒド、ホルマリン、エタノール等の各種溶剤や界面活性剤等が挙げられる。また、加熱処理等も蛋白質変性作用を発揮するので、水溶液中での加熱処理等も上記蛋白質変性剤に含まれる。なかでも、ホルマリンにより変性されたサイトカイン誘導剤がより好ましい。

上記サイトカイン誘導剤が B CGのような微生物である場合は、菌体表面外壁成分のァミノ酸や糖成分等を介して、上記担体のカルボキシル基、アミノ基及び/又はエポキシ基等の官能基に結合させることができる。この際、必要に応じてさまざまな鎖長や構造のスぺーサーを導入することもできる。

上記サイトカイン誘導剤が B CGのような菌体外層が脂質等により覆われている微生物である場合には、必要に応じて脂質を洗浄除去した後、上記担体の官能基に結合してもよい。

上記サイト力イン誘導剤を上記担体に固定化する方法としては、物理吸着法が好ましい。例えば、上記担体が疎水性表面を有し、上記サイト力イン誘導剤が B CGである場合、物理吸着作用によって固定化することができる。また、上記サイトカイン誘導剤が微生物やその成分であり、その表面が電荷を帯ぴている場合にも、その対極電荷を表面に有する担体に物理吸着作用によって固定化することができる。

上記担体の使用割合としては特に限定されないが、粒子状の担体として用いる場合には、血液容積に対する担体のかさ体積量として、下限は 0. 02 %、上限は 80%程度であり、好ましい下限は 0. 1 %、好ましい上限は 50%程度である。

上記サイトカイン誘導剤の使用割合としては特に限定されないが、例えば、 B CGである場合は、血液に添加される濃度として、乾燥重量で下限は 0. 00 1mg/mL、上限は 1 0 m g /m Lであることが好ましい。また、上記サイト力イン誘導剤が OK— 432である場合は、血液に添加される濃度として、下限は 0. 000 1 KE/mL、上限は 1 0 KE/mLであることが好ましい。

容器内に収納された本発明のサイトカイン誘導用具を有するサイトカイン誘導用具もまた、本発明の 1つである。

本発明のサイトカイン誘導用具では、上記担体とサイトカイン誘導剤とを含むサイトカイン誘導用具が、容器内にてサイトカインを産生する細胞と接触し、それによつてサイトカインが効果的に誘導される。この場合、接触温度を下限は 1 5 °C、上限は 4 2 °Cの範囲とすることが好ましく、それによつて、サイト力インの誘導をより効果的に引き起こすことができる。 ' なお、上記担体、及び、上記サイトカイン誘導剤は、予め混合されてサイトカインを産生する細胞と接触されてもよく、又は、個別にサイト力インを産生する細胞と接触されてもよい。

また、本発明のサイトカイン誘導用具では、容器の構造は特に限定されないが、図 1に模式的に示すように、血液等の導入部 1と、サイト力ィン誘導用具と接触した血液 4等を容器外に導く導出部 2とが備えられている容器 3が好ましい。

上記容器としては、カラム状の容器や血液バッグ状の容器等がより好ましく、血液バッグ状の容器等がさらに好ましい。

また、血液バッグ状の容器等では、上記担体及び/又はサイト力イン誘導剤が容器内にて血液又は血液成分等と接触する時間を任意に選択できるので、必要なサイト力インを誘導することができる。

本発明のサイト力イン誘導用具は、上記担体及び/又はサイト力イン誘導剤と接触させた血液等を容器外に導く場合に、担体及び/又はサイトカイン誘導剤が血液等に混入しないように流出防止機構が備えられていることがより好ましい。

図 1に模式的に示すように、担体及び/又はサイトカイン誘導剤流出防止機構 5としては、上記担体が容器 3内部に固定化されていることであっても良く、また、例えば、流出防止用の分離膜や分離フィルタ一等が設けられていても良い。

本発明のサイトカイン誘導用具の 1実施態様としては、例えば、導入部と導出部とを有する血液バッグに、粒子状、繊維状、不織布状等の担体に固定化されたサイトカイン誘導剤を充填し、ここに血液又は血液成分等を導入する。その後、所定温度で所定時間ィンキュベートをし、サィトカインを誘導した血液又は血液成分等を導出部から取り出し、点滴等によるサイトカイン誘導療法等に利用することができる。

本発明のサイトカイン誘導用具を用いて実施するサイトカイン誘導方法もまた、本発明の 1つである。

本発明のサイトカイン誘導用具又はサイトカイン誘導方法により誘導されるサイト力インとしては特に限定されないが、なかでも、インターフエロン _y ( I F N— γ ) 、ィンターロイキン 1 0 ( I L— 1 0 ) 、腫瘍壌死因子一 α ( T N F - α ) 、が好適に挙げられる。例えば、 I F N - はァレルギ一性疾患、癌等のさまざまな疾患において非常に重要な '役割を担っているサイト力インであり、 I F N— γを誘導することによりこれらの疾患に対する治療効果が期待できる。

本発明のサイトカイン誘導用具及びサイトカイン誘導方法におけるサィトカインを産生することのできる細胞とは、血液、血液成分おょぴサィトカインを産生することのできるさまざまな細胞が挙げられ、血液から分離された白血球や血小板などに限らず、骨髄系細胞、樹状細胞、表皮細胞、繊維芽細胞、肝細胞、骨芽細胞、血液幹細胞、胚性幹細胞等の組織から採取した細胞や培養細胞、株化細胞、サイトカインを産生する様々な細胞等を含有するものを指す。

本発明の本発明のサイトカイン誘導用具及びサイトカイン誘導方法における血液とは血液や血液を適当な希釈液、例えば生理食塩水や培地、緩衝液等で希釈しているものを指す。血液に抗凝固剤や添加物を加えて

2 いても良い。

本発明のサイトカイン誘導用具及びサイトカイン誘導方法における血液成分とは血液から分離された白血球や血小板などに限らず、骨髄系細胞、樹状細胞、血液幹細胞、血液細胞由来株化細胞等を含有するものを指す。これらは単独で使用することもできるし、別途取りだした白血球等を血液等に混ぜ合わせて使用しても良い。また、適当な希釈液、例えば生理食塩水や培地、緩衝液等でこれらの細胞を希釈して本発明に用いても良いが、好ましくは血液を用いる。

なお、本文中の説明においては、説明を分かり易くするために、サイトカインを産生する細胞として、血液または血液成分等を用いた例を取り上げて説明している。図面の簡単な説明

図 1は、本発明のサイトカイン誘導用具の一例を示す模式的断面図である。発明を実施するための最良の形態

以下に実施例を掲げて本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるものではない。

なお、ヒト血漿中の I FN— "Vの測定は、 R&D S y s t em s社製 E L I SAキット、 ENDOGE N社製 E L I SAキット、又は日本抗体研究所製 EL I SAキットにて行った。

(実施例 1 )

担体 1 (オルガノ社製、商品名：アンバーライト XAD4、多孔性ポリスチレン粒子、 MR型、細孔分布 2〜 1 50 A、表面積 70 Om g 以上、細孔容積 0. 5mL/g以上、平均細孔径約 1 2 OA) を精製水 (大塚製薬社製）にてデカンテーシヨンにより洗浄し、しかる後メタノール（和光純薬社製、 HPLC用）にてデカンテーシヨンすることにより洗浄した。次に、注射用生理食塩水（大塚製薬社製）にて担体 1をデカンテーシヨンにより洗浄し、粒子かさ体積で 50 β Lの担体 1を滅菌済みチューブ（ダイアヤトロン社製、エツペンドルフチューブ 1. 5 m L用）に充填した。

健常人から採血し、へパリン 1 5 I U/mL含有静脈血を得た。血液に l m gZmLの濃度となるように、 B CG (日本 BCG製造社製）を添加した。なお、 B CGは生理食塩水で調製した。この際、生理食塩水の体積が血液に対して 1. 25 °/₀となるようにした。

上記 B CGが添加された血液約 1. 45 mLを上記の担体 1を充填したチューブに添加した。

次に、チューブを転倒混和して血液を撹拌し、ロータリーミキサー（T A I TEC社製）に取り付け、 6 r p mで転倒混和させつつ、 3 7°Cにて 24時間恒温槽中でインキュベートした。インキュベート後の血液を 4°Cで 3 500 r pm (トミー精ェ社製、微量高速遠心機 MR X— 1 5 0) で 1 5分間遠心し、しかる後血漿を採取し、 _ 70°Cで該血漿を凍結保存した。次に、保存された血漿を、融解し、 Huma n I FN— y EL I SAキット（R&D S y s t e m社製又は E N D O G E N 社製）にて血漿中の I FN— γ誘導量を測定した。結果を表 1に示した。また、用いた健常人の血液の採血直後及び上記と同様に血液のみを培養した後において、血漿中の I FN— γの値は全て 1 0 p g/mL以下であった。

(比較例 1 )

担体 1を用いなかったことと、 8〇0を添加した血液1. 5mL'を用いたことを除いては、実施例 1と同様にして I FN— γ誘導量を測定した。結果を表 1に示した。

(比較例 2)

担体 1を用いなかったことと、〇0無添加の血液を1. 5mLを用いたことを除いては、実施例 1と同様にして I FN— 1/誘導量を測定した。結果を表 1に示した。

(比較例 3 )

B CGを血液に添加しなかったことを除いては、実施例 1と同様にして I F N— V誘導量を測定した。結果を表 1に示した。

(実施例 2 )

担体 1を担体 2 (オルガノ社製、商品名：アンバーライト XAD 1 6 HP、ポリスチレン多孔性粒子、 MR型、細孔分布 2〜300A、表面積 80 OmsZg以上、細孔容積 0. 5 8〜0. 6 5mL/g、平均細孔径約 1 5 O A) に変更したことを除いては実施例 1と同様にして I F N 一 y誘導量を測定した。結果を表 1に示した。

(比較例 4)

BCGを血液に添加しなかったことを除いては、実施例 2と同様にして I FN— _y誘導量を測定した。結果を表 1に示した。

(実施例 3 )

担体 1を担体 3 (オルガノ社製、商品名：アンバーライト XAD 20 00、ポリスチレン多孔性粒子、 MR型、細孔分布 2〜80A、表面積約 6 20 m g、細孔容積約 0. 7 m L / g、平均細孔径約 40〜 50 A) に変更したことを除いては実施例 1と同様にして I F N_ Y誘導量を測定した。結果を表 1に示した。

(比較例 5 )

B CGを血液に添加しなかったことを除いては、実施例 3と同様にして I F N— γ誘導量を測定した。結果を表 1に示した。 (実施例 4)

担体 1を担体 4 (オルガノ社製、商品名：アンバーライト XAD 7H P、アクリル酸系多孔性粒子、 MR型、細孔分布 2〜200 θΑ、表面積 400 m g以上、細孔容積 0. 5 m L / g以上、平均細孔径約 40 0〜 500 A) に変更したことを除いては実施例 1と同様にして I FN — y誘導量を測定した。結果を表 1に示した。

(比較例 6)

B CGを血液に添加しなかったことを除いては、実施例 4と同様にして I FN— γ誘導量を測定した。結果を表 1に示した。

(比較例 7)

担体として P o l y s c i e n c e s社製の商品名 P o 1 y b e a d s P o l y s t y r e n e M i c r o s p h e r e (粒十径 500 - 600 μ m, 非多孔性）を用いたことを除いては、実施例 1と同様にして I FN— γ誘導量を測定した。結果を表 1に示した。

(比較例 8 )

担体としてモリテックス社製球状ポリスチレン粒子（スチレンージビニルベンゼン共重合体、粒子径 2 50— 7 50 zm、非多孔性）を用いたことを除いては、実施例 1と同様にして I FN— γ誘導量を測定した。結果を表 1に示した。

(比較例 9 )

担体としてモリテックス社製球状ポリメチルメタクリレート粒子（粒子径 7 50_ 1 000 μπι、非多孔性）を用いたことを除いては、実施例 1と同様にして I FN— γ誘導量を測定した。結果を表 1に示した。

(比較例 1 0 )

ia体として P o l v s c i e n c e s社製の商品名 P o 1 y b e a d s P o l v s t y r e n e M i c r o s p h e r e (粒ナ径 500

6 — 600 μιη、非多孔性）を用いたことを除いては、比較例 3と同様にして I FN— γ誘導量を測定した。結果を表 1に示した。

(比較例 1 1 )

担体としてモリテックス社製球状ポリスチレン粒子（スチレン一ジビニルベンゼン共重合体、粒子径 25 0— 7 50 μπι、非多孔性) を用いたことを除いては、比較例 3と同様にして I FN— γ誘導量を測定した。結果を表 1に示した。

(比較例 1 2 )

担体としてモリテックス社製球状ポリメチルメタクリレート粒子（粒子径 7 50— 1 000 μ m、非多孔性）を用いたことを除いては、比較例 3と同様にして I FN— γ誘導量を測定した。結果を表 1に示した。

7 (実施例 5 )

B CGに替えて、ピシバール（中外製薬社製、 OK—43 2) を、 0. 1 KE/mLの濃度となるように各血液に添加した。なお、 OK— 43 2は、注射用生理食塩水（大塚製薬社製）で調製されたものであり、生理食塩水が血液に対して 1 %となるように調製した。 01^—43 2が添加された血液を、担体 1がかさ体積で 20 μ L充填された上記チューブに、チューブの目盛りが 1. 5mLとなるように添加した。すなわち、血液を約 1. 48 mL添加した。

その他は、実施例 1と同様にして、 I FN— γ誘導量を測定した。結果を表 2に示した。

また、用いた健常人の血液の採血直後及び上記と同様に血液のみを培養した後において、血漿中の I F Ν— Υの値は全て 10 p g/mL以下であった。

(比較例 1 3 )

担体 1を用いなかったことと、及び、 OK— 43 2添加血液を 1. 5 mL用いたことを除いては、実施例 5と同様にして I FN— γ誘導量を測定した。結果を表 2に示した。

(比較例 14)

担体 1を用いなかったこと、及ぴ、 ΟΚ— 43 2無添加の血液を 1. 5 mL用いたことを除いては、実施例 5と同様にして I FN— γ誘導量を測定した。結果を表 2に示した。

(比較例 1 5)

ΟΚ— 4 32を血液に添加しなかったことを除いては、実施例 5と同様にして I FN— γ誘導量を測定した。結果を表 2に示した。

(実施例 6)

担体 1を担体 2 (オルガノ社製、商品名：アンバーライト XAD 1 6

8 HP、ポリスチレン多孔性粒子、 MR型、細孔分布 2〜300 A、表面積 80 Om2Zg以上、細孔容積 0. 58〜0. 65mL/g、平均細孔径約 1 5 OA) に変更したことを除いては実施例 5と同様にして I FN 一 γ誘導量を測定した。結果を表 2に示した。

(比較例 1 6 )

ΟΚ— 43 2を血液に添加しなかったことを除いては、実施例 6と同様にして I FN—γ誘導量を測定した。結果を表 2に示した。

(実施例 7)

担体 1を担体 3 (オルガノ社製、商品名：アンバーライト XAD 20 00、ポリスチレン多孔性粒子、 MR型、細孔分布 2〜8 θΑ、表面積約 620 m2/ g、細孔容積約 0. 7 m L / g、平均細孔径約 40〜 50 A) に変更したことを除いては実施例 5と同様にして I FN—γ誘導量を測定した。結果を表 2に示した。

(比較例 1 7 )

OK— 43 2を血液に添加しなかったことを除いては、実施例 7と同様にして I FN— γ誘導量を測定した。結果を表 2に示した。

(実施例 8 )

担体 1を担体 4 (オルガノ社製、商品名：アンバーライト XAD 7H Ρ、アクリル酸系多孔性粒子、 MR型、細孔分布 2〜2000 A、表面積 40 OmS/Zg以上、細孔容積 0. 5 m L / g以上、平均細孔径約 40 0〜500 A) に変更したことを除いては実施例 5と同様にして I FN 一 γ誘導量を測定した。結果を表 2に示した。

(比較例 1 8 )

ΟΚ- 432を血液に添加しなかったことを除いては、実施例 8と同様にして I FN— γ誘導量を測定した。結果を表 2に示した。

(比較例 1 9)

9 担体として P o l y s c i e n c e s社製の商品名 P o 1 y b e a d s P o l y s t y r e n e M i c r o s p h e r e (粒子径 5 0 0 - 6 0 0 μ m 非多孔性）を用いたことを除いては、実施例 5と同様にして I F N— y誘導量を測定した。結果を表 2に示した。

(比較例 2 0)

担体としてモリテックス社製球状ポリチレン粒子（スチレンージビニルベンゼン共重合体、粒子径 2 5 0— 7 5 0 / m、非多孔性) を用いたことを除いては、実施例 5と同様にして I F N— y誘導量を測定した。結果を表 2に示した。

(比較例 2 1 )

担体としてモリテックス社製球状ポリメチルメタクリレー 1、粒子 (粒子径 7 5 0 - 1 0 0 0 /z m, 非多孔性）を用いたことを除いては、実施例 5と同様にして I F N— γ誘導量を測定した。結果を表 2に示した。

(比較例 2 2 )

担体として P o l y s c i e n c e s社製の商品名 P o 1 y b e a d s P o l y s t y r e n e M i c r o s p h e r e (粒子径 5 0 0 一 6 0 0 μ m、非多孔性）を用いたことを除いては、比較例 1 5と同様にして I F N— γ誘導量を測定した。結果を表 2に示した。

(比較例 2 3 )

担体としてモリテックス社製球状ポリスチレン粒子（スチレンージビニルベンゼン共重合体、粒子径 2 5 0— 7 5 0 μ πι、非多孔性）を用いたことを除いては、比較例 1 5と同様にして I F N— γ誘導量を測定した。結果を表 2に示した。

(比較例 2 4)

担体としてモリテックス社製球状ポリメチルメタクリレート粒子 (粒子径 7 5 0 - 1 0 0 0 / m, 非多孔性) を用いたことを除いては、比較例 1 5と同様にして I FN—y誘導量を測定した。結果を表 2に示した。

(実施例 9)

担体 1 (オルガノ社製、アンバーライト XAD— 4) かさ体積 l mL と B CG ( 1 Omg/mL) 1 m Lとを生理食塩中で 37 °Cにて 20時間混和し、 B CGを担体 1の粒子表面に物理吸着させた。混和後、担体 1を生理食塩水にて充分洗浄し、再ぴ生理食塩水に懸濁した。このようにして得られた、かさ体積 1 00 // L担体 1を滅菌済みチューブに充填した。以下、このチューブに血液を 1. 4mL添加したことを除いては実施例 1と同様な操作を行い、健常人の血液により I ^"ーの誘導量を測定した。結果を表 3に示した。

また、用いた健常人の血液の採血直後及び上記と同様に血液のみを培養した後において、血漿中の I FN— γの値は全て 1 0 p g/mL以下

2 であった。

(実施例 10)

担体 1を担体 2 (オルガノ社製、アンバーライト XAD 16 HP) に替えた以外は実施例 9と同様な操作を行い、健常人の血液により I FN 一 τ の誘導量を測定した。結果を表 3に示した。

(実施例 1 1 )

担体 1を担体 3 (オルガノ社製、アンバーライト XAD 2000 ) に替えた以外実施例 9と同様な操作を行い、健常人の血液により I FN— γの誘導量を測定した。結果を表 3に示した。

(実施例 1 2 )

担体 1を担体 4 (オルガノ社製、アンバーライト XAD 7 HP) に替えた以外は実施例 9と同様な操作を行い、健常人の血液により I FN— γの誘導量を測定した。結果を表 3に示した。

(比較例 25)

担体を用いなかったことと、 8〇0添加血液を1. 5 mLを用いたことを除いては実施例 9と同様にして I FN— γ誘導量を測定した。結果を表 3に示した。

(比較例 26)

B CGを物理吸着していない担体を用いたことを除いては、実施例 9 と同様にして I FN— γ誘導量を測定した。結果を表 3に示した。

(比較例 27)

B CGを物理吸着していない担体を用いたことを除いては、実施例 1 0と同様にして I FN— γ誘導量を測定した。結果を表 3に示した。

(比較例 28 )

BCGを物理吸着していない担体を用いたことを除いては、実施例 1 1と同様にして I FN— y誘導量を測定した。結果を表 3に示した。 (比較例 2 9 )

B CGを物理吸着していない担体を用いたことを除いては、実施例 1 2と同様にして I FN— γ誘導量を測定した。結果を表 3に示した。

(比較例 30 )

担体として P o l y s c i e n c e s社製商品名： P o 1 y b e a d s P o l y s t y r e n e M i c r o s p h e r e ( 子径 500 - 600 μ m 非多孔性) を用いたことを除いては実施例 9と同様にして I FN— γ誘導量を測定した。結果を表 3に示した。

(比較例 3 1 )

担体としてモリテックス社製球状ポリスチレン粒子（スチレン—ジビ -ルベンゼン共重合体、粒子径 2 5 0- 7 50 μηι, 非多孔性）を用いたことを除いては実施例 9と同様にして I FN— γ誘導量を測定した。結果を表 3に示した。

(比較例 3 2)

担体としてモリテックス社製球状ポリメチルメタタリレート粒子（粒子径 7 50 _ 1 000 μηι、非多孔性）を用いたことを除いては実施例 9と同様にして I FN— γ誘導量を測定した。結果を表 3に示した。

(比較例 3 3)

B CGを物理吸着していない担体を用いたことを除いては、比較例 3 0と同様にして I FN— γ誘導量を測定した。結果を表 3に示した。

(比較例 34 )

B CGを物理吸着していない担体を用いたことを除いては、比較例 3 1と同様にして I FN— γ誘導量を測定した。結果を表 3に示した。

(比較例 3 5 )

B CGを物理吸着していない担体を用いたことを除いては、比較例 3 2と同様にして I FN— γ誘導量を測定した。結果を表 3に示した。 3

Ifri- Ύ mix.

g/mL)

9 6L\

10 o

実施例

11 έ

12 1 Q

25 o

26 \l U

27 \1 u

28 \1 u

29 \1 U

比較例 30 R

31 22

32 19

33 く 10

34 く 10

35 く 10

. (実施例 1 3 )

担体 1かさ体積 I mLと B CG( 1 0 m g /m L)とを I mLの 1容積⁰ /₀ ホルマリン液（中性緩衝ホルマリン液、和光純薬工業社製）含有生理食塩中で 4 °Cにて 2 0時間混和し、 B CGを粒子表面に物理吸着させた。混和後、この粒子を生理食塩水にて充分洗浄した後、かさ体積で 1 0 0 を滅菌済みチューブ（ダイアヤトロン社製、 1. 5mL用）に充填した。

B CGのみの添加がないこと、及ぴ、血液を 1. 4mL添加したことを除いては実施例 1と同様な操作を行い、 I FN— γの誘導量を測定した。結果を表 1 1に示した。

また、用いた健常人の血液の採血直後及び上記と同様に血液のみを培養した後において、血漿中の I FN— yの値は全て 1 0 p gZmL以下であった。 (比較例 3 6 )

B CGを物理吸着しなかったことを除いては、実施例 1 3と同様にして I FN— yの誘導量を測定した。結果を表 4に示した。

(比較例 3 7)

担体 1を用いなかったことと、 B C G添加（ 1 m g /m L )血液を 1 - 5 mL用いたことを除いては、実施例 1 3と同様にして I FN— γの誘導量を測定した。

結果を表 4に示した。

(比較例 3 8 )

担'体として P o l y s c i e n c e s社製商品名： P o 1 y b e a d s P o l y s t y r e n e M i c r o s p h e r e (¾A子径 500 — 600 im、非多孔性）を用いたことを除いては実施例 1 3と同様にして I FN— γ誘導量を測定した。結果を表 4に示した。

(比較例 3 9)

担体としてモリテツタス社製球状ボリスチレン粒子 (スチレンージビ -ルベンゼン共重合体、粒子径 25 0— 7 50 μπι、非多孔性）を用いたことを除いては実施例 1 3と同様にして I FN— γ誘導量を測定した。結果を表 4に示した。

(比較例 40)

担体としてモリテックス社製球状ポリメチルメタクリレート粒子（粒子径 7 50— 1 000 /xm、非多孔性）を用いたことを除いては実施例 1 3と同様にして I FN— γ誘導量を測定した。結果を表 4に示した。表 4

(実施例 14 )

実施例 1 3と同様に作製した BCGを粒子表面に物理吸着させた担体 1をかさ体積で 4 m Lを血液バッグ（容量 50mL用）に充填した。健常人から採血して得たへパリン 1 5 I U/mL含の静脈血 50 m Lをこの血液バッグに導入した。この血液バッグを 3 7 °Cで 24時間、穏ゃかに攪拌しながらインキュベートした。この血液中の I FN— γ誘導量を実施例 1と同様に測定した。結果を表 5に示した。また、用いた健常人の血液の採血直後及び上記と同様に血液のみを培養した後において、血漿中の I FN— γの値は全て 1 0 p gZmL以下であった。

(比較例 4 1 )

B CGを物理吸着処理をしていない担体 1を使用したこと以外は実施例 1 4と同様にして I FN— γ誘導量を測定した。結果を表 5に示した。

(比較例 42)

担体 1を用いなかったこと、及び、 BCGの lmg/mL添加血液 5 OmLを用いたことを除いては、実施例 1 4と同様にして I FN— γ誘導量を測定した。結果を表 5に示した。

(比較例 43 )

担体として P o l y s c i e n c e s社製商品名： P o 1 y b e a d s P o l y s t y r e n e M i c r o s t h e r e (¾A子径 5 00 一 600 /xm、非多孔性）を用いたことを除いては実施例 14と同様にして I FN— γ誘導量を測定した。結果を表 5に示した。

(比較例 44)

担体としてモリテックス社製球状ポリスチレン粒子 (スチレン一ジビ -ルベンゼン共重合体、粒子径 250— 7 50 μηι、非多孔性) を用いたことを除いては実施例 14と同様にして I FN— γ誘導量を測定した。結果を表 5に示した。

(比較例 4 5 )

担体としてモリテックス社製球状ポリメチルメタクリレート粒子 (粒子径 7 5 0— 1 000 非多孔性）を用いたことを除いては実施例

14と同様にして I FN— γ誘導量を測定した。結果を表 5に示した。

(実施例 1 5 )

B CGを生理食塩水に懸濁して、リン酸緩衝液にて希釈し、 4000 r pmにて 1 5分間遠心操作を行った。上清を捨て、再びリン酸緩衝液にて懸濁し、 4000 r pmにて 1 5分間遠心操作を行った。これを 3 回行い、次に 50%エタノール含有リン酸緩衝液にて懸濁し、 4000 r pm (トミー精ェ社製、微量高速遠心機 MR X— 1 50 ) にて 1 5分間遠心操作を行った。次にエタノールにて懸濁し、 4000 r pmにて 1 5分間遠心操作を行った。これを 2回行い、再びリン酸緩衝液での洗浄を 3回行った。この処理済み B CG 2m gをカルボキシル基を導入した担体 1 (かさ体積 1 mL)にカルポジィミド法にて共有結合を行った。残った反応基をエタノールァミンにて反応させ、リン酸緩衝液にて洗浄後、リン酸緩衝液に懸濁した。このようにして得られた担体 100 μ L を滅菌済みチューブに充填した。

B CGのみの添加がないこと、及び、血液添加量を 1. 4mLにしたことを除いては実施例 1と同様な操作を行い、 I FN— yの誘導量を測定した。結果を表 6に示した。

また、用いた健常人の血液の採血直後及び上記と同様に血液のみを培養した後に

おいて、血漿中の I FN— γの値は全て 1 0 p g/mL以下であった。

(比較例 46)

B CGを共有結合しなかったことを除いては、実施例 1 5と同様な操作を行い、 I FN— γの誘導量を測定した。結果を表 6に示した。

(比較例 47)

担体 1を用いなかったこと、及び、 B CGの 1 m g/mL添加血液 1. 5 mLを用いたことを除いては、実施例 1 5と同様にして I FN— γ誘導量を測定した。

結果を表 6に示した。

(比較例 48)

担体として P o l y s c i e n c e s社製商品名： P o 1 y b e a d s P o l y s t y r e n e M i c r o s p h e r e (粒十径 500 - 600 / m_s 非多孔性) を用いたことを除いては実施例 1 5と同様にして I FN— γ誘導量を測定した。結果を表 6に示した。表 6

(実施例 1 6)

実施例 1 3と同様に作製した B CGを粒子表面に物理吸着させた担体 1をかさ体積で 0.8mLを血液バッグ（容量 5mL用）に充填した。健常人から採血して得たへパリン 1 5 I U/mL含有の静脈血 5mLをこの血液バッグに導入した。この血液バッグを 3 7 °Cで 24時間、穏やかに攪拌しながらインキュベートした。この血液中の TNF- α誘導量を、 ENDOGEN社製ヒト TNF-ひ測定キットを用いたこと以外実施例 1と同様に測定した。結果を表 7に示した。また、用いた健常人の血液の採血直後及び上記と同様に血液のみを培養した後において、血漿中の TNF- αの値は全て 1 6 p gZmL以下であった。

(比較例 4 9 )

B CGを物理吸着処理していない担体 1を使用したこと以外は実施例 1 6と同様にして TNF-ひ誘導量を測定した。結果を表 7に示した。表 7

(実施例 1 7)

実施例 1 3と同様に作製した B CGを粒子表面に物理吸着させた担体 1をかさ体積で 0.8mLを血液バッグ（容量 5mL用）に充填した。健常人から採血して得たへパリン 1 5 I U/mL含有の静脈血 5mLをこの血液バッグに導入した。この血液バッグを 3 7 °Cで 24時間、穏やかに攪拌しながらインキュベートした。この血液中の IL-1 0誘導量を、 ENDOGEN社製ヒト IL-1 0測定キットを用いたこと以外実施例 1と同様に測定した。結果を表 8に示した。また、用いた健常人の血液の採血直後及び上記と同様に血液のみを培養した後において、血漿中の IL-1 0の値は全て 1 5 p g/mL以下であった。

(比較例 50 )

B CGを物理吸着処理していない担体 1を使用したこと以外は実施例 1 7と同様にして IL-1 0誘導量を測定した。結果を表 8に示した。表 8

(実施例 1 8)

実施例 1 3と同様に作製した B CGを粒子表面に物理吸着させた担体 1をかさ体積で O.lmLを 24ゥエルのマルチプレート (コーユング社製）に添加した。 C 3 HZHeマウス（8週齢、雌、日本 S LCより購入）から脾臓細胞をできるだけ無菌的に採取し、 500000 細胞/ m の濃度になるよう RPM I培地（2%牛胎児血清含有）にて調製した。この脾臓細胞懸濁液 1.5mLをマルチプレートの各ゥルに添加し、 5% 炭酸ガス下で 3 7°Cで培養した。 48時間後、各ゥエルから培養上清を回収し、培養上清中の IFN- 0/濃度を、マウス IFN-γ測定キット（EN DOGEN社製）にて測定した。結果を表 9に示した。 (比較例 5 1 )

実施例 1 3と同様に作製した B C Gを粒子表面に物理吸着させた担体 1を使用しなかったこと以外は実施例 1 8と同様にして IFN- γ誘導量を測定した。結果を表 9に示した。表 9

産業上の利用可能性

本発明のサイトカイン誘導用具及びサイトカイン誘導方法は、サイト力イン誘導剤を用いて、水に不溶性の多孔性の材料からなる担体の共存下で実用レベル相当量のサイトカインを誘導できる画期的なものである _c サイトカイン誘導剤単剤よりもかなり高いレベルのサイトカイン量を誘導することができ、サイトカインが有効である種々の疾患の治療に好適に用いることができる。さらに、本発明のサイト力イン誘導用具及びサイトカイン誘導方法では、体外で血液及び血液成分等と接触させてサイト力インを誘導するものであり、必要に応じて、サイト力イン誘導後に副作用を発現する可能性のあるサイ 'トカイン誘導剤等を除去してから治療に用いることができる。

本発明により、サイト力イン誘導剤を投与する従来の方法よりも、副作用のほとんどない安全性の高い治療を達成することができる。このため、本発明のサイトカイン誘導用具及びサイトカイン誘導方法は、サイトカインの誘導が有効である様々な疾患の治療に好適に用いることができる。

3

Claims

請求の範囲 1 . サイトカイン誘導剤と、水に不溶性の多孔性の材料の担体とを含むことを特徴とするサイトカイン誘導用具。

2 . 前記多孔性の材料は、巨大網目構造を有する請求項 1に記載のサイトカイン誘導用具。

3 · 前記多孔性の材料は、細孔分布が 2〜 2 0 0 0 Aであることを特徴とする請求項 1または 2に記載のサイトカイン誘導用具。

4 . 前記多孔性の材料は、高分子材料からなる請求項 1〜3のいずれか 1項に記載のサイト力イン誘導用具。

5 . 前記高分子材料は、ポリスチレン系高分子材料及びアクリルェステル系高分子材料の少なくとも 1種の高分子材料からなることを特徴とする請求項 4に記載のサイトカイン誘導用具。

6 . サイトカイン誘導剤は、菌体及び Zまたは菌体由来成分である 'ことを特徴とする請求項 1〜 5のいずれか 1項に記載のサイトカイン誘導用具。

7 . サイトカイン誘導剤は、抗酸菌及び Zまたは抗酸菌由来成分であることを特徴とする請求項 6に記載のサイトカイン誘導用具。

8 . サイトカイン誘導剤は、溶連菌及ぴ /または溶連菌由来成分であることを特徴とする請求項 6に記載のサイトカイン誘導用具。

9 . 前記サイトカイン誘導剤及び前記多孔性の材料を収納している容器をさらに備える請求項 1〜8のいずれか 1項に記載のサイトカイン誘導用具。

1 0 . サイトカインを産生する細胞におけるサイトカインの産生を誘導するのに用いられる、請求項 1〜 9のいずれか 1項に記載のサイト力ィン誘導用具。

1 1. 前記サイト力インを産生する細胞が血液または血液成分由来の細胞である、請求項 1 0に記載のサイトカイン誘導用具。

1 2. 前記多孔性の材料がサイトカイン誘導増強作用を有する請求項 1〜 1 1のいずれか 1項に記載のサイトカイン誘導用具。

1 3. 請求項 1〜 1 2のいずれか 1項に記載のサイト力イン誘導用具を用いることを特徴とするサイトカイン誘導方法。