KR20190104528A - Car-t 세포들 투여를 결정하는 방법 - Google Patents

Car-t 세포들 투여를 결정하는 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20190104528A
KR20190104528A KR1020197019183A KR20197019183A KR20190104528A KR 20190104528 A KR20190104528 A KR 20190104528A KR 1020197019183 A KR1020197019183 A KR 1020197019183A KR 20197019183 A KR20197019183 A KR 20197019183A KR 20190104528 A KR20190104528 A KR 20190104528A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
cells
car
subject
genetically engineered
peak
Prior art date
Application number
KR1020197019183A
Other languages
English (en)
Inventor
히 리
티나 앨버슨
마크 디. 하이펠
클레어 엘. 서덜랜드
Original Assignee
주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 filed Critical 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드
Publication of KR20190104528A publication Critical patent/KR20190104528A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/57—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone
    • A61K31/573—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone substituted in position 21, e.g. cortisone, dexamethasone, prednisone or aldosterone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/44—Antibodies bound to carriers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
    • A61K39/4631—Chimeric Antigen Receptors [CAR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/464411—Immunoglobulin superfamily
    • A61K39/464412—CD19 or B4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70578—NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/71—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5011—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing antineoplastic activity
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6863—Cytokines, i.e. immune system proteins modifying a biological response such as cell growth proliferation or differentiation, e.g. TNF, CNF, GM-CSF, lymphotoxin, MIF or their receptors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/92—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving lipids, e.g. cholesterol, lipoproteins, or their receptors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5158—Antigen-pulsed cells, e.g. T-cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
    • A61K2239/48—Blood cells, e.g. leukemia or lymphoma
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)

Abstract

본 발명은 T 세포 수용체 (TCR) 또는 키메라 항원 수용체 (CAR)와 같은, 재조합 수용체로 조작된 세포들의 투여량을 결정하는 방법을 제공한다. 본 발명의 일부 구현예에서, 상기 방법은 투여될 때 독성을 나타내는 위험의 추정된 확률 및 조작된 세포들에 대한 반응의 추정된 확률에 의해 투여량을 위한 치료 범위를 결정하는 단계를 포함한다.

Description

CAR-T 세포들 투여를 결정하는 방법
관련 출원에 대한 상호 참조
이 출원은, 그 내용이 전체로 참조로서 포함되는, 2016년 12월 3일자로 출원된 "METHODS FOR DETERMINING DOSING IN CELL THERAPY"라는 표제의 미국 가출원 62/429,738, 2017년 6월 2일자로 출원된 "METHODS FOR DETERMINING DOSING IN CELL THERAPY"라는 표제의 미국 가출원 62/514,765, 2017년 6월 5일자로 출원된 "METHODS FOR DETERMINING DOSING IN CELL THERAPY"라는 표제의 미국 가출원 62/151,523으로부터 우선권을 주장한다.
참조에 의한 서열 목록의 포함
이 출원은 전자적 형식의 서열 목록과 함께 출원된다. 상기 서열 목록은 2017년 11월 29일에 작성된 735042009140SeqList.txt라는 표제의 파일로서 제공되며, 그 크기는 34 KB이다. 상기 서열 목록의 전자적 형식 내의 정보는 그 전체가 참조로서 포함된다.
분야
본 발명은 일부 측면에서 T 세포 수용체 (TCR) 또는 키메라 항원 수용체 (CAR)와 같은 재조합 수용체로 조작된 세포와 같은, 세포 치료제의 투약을 투여 및/또는 결정하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 일부 구현예에서, 상기 방법은 예를 들어, 세포 치료제 또는 조작된 세포의 투여 후에, 독성을 나타낼 위험의 추정된 확률 및 이의 징후 또는 증상, 또는 이의 정도 또는 지속성의 치료, 감소 또는 개선과 같은 치료 결과 또는 반응의 추정된 확률에 기초하여, 투약을 위한 치료 범위 및/또는 창(window)을 결정하는 단계를 포함한다.
면역요법, 예를 들어 CARs와 같은, 유전적으로 조작된 항원 수용체들을 발현하는 것들과 같은, T 세포를 투여하는 단계를 포함하는 입양 세포 치료 방법에 대하여 다양한 접근이 이용 가능하다. 본 발명의 일부 측면에서, 이용 가능한 방법들은 완전하게 만족스럽지 않을 수도 있다. 면역요법 및 입양 세포 치료법에 대한 추가적인 전략, 예를 들어 투여된 세포들 및 반응의 지속성, 활성 및/또는 증식을 향상시키는 전략과 T 세포 표현형을 조절하기 위한 전략에 대한 요구가 있다. 본 발명의 일부 구현예에서 이러한 요구를 충족시키는 방법, 세포, 조성물, 제조물품 및 시스템이 제공된다.
본 발명의 일부 측면에서, 키메라 항원 수용체 (CAR)로 조작된 것과 같은, 조작된 세포들의 투여량을 대상체에게 투여하는 단계 및/또는 평가하는 단계 및/또는 이러한 조작된 세포들이 투여된 대상체들에게 추가의 작용제(들)을 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에게 투여하거나 대상체를 치료하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 본 발명의 일부 구현예에서, 투여된 투여량은 치료 범위 및/또는 창(window) 이내이거나 및/또는 특정된 또는 결정된 치료 범위와 같은, 특정된 범위 이내, 선택적으로 투여 후의 일정 기간 이내 또는 특정 기간에 걸쳐서, 대상체의 혈액과 같은, 대상체의 샘플 또는 조직 또는 체액 내에 예를 들어, CAR+ 세포들인, 조작된 세포들의 전체적인 또는 피크 양 또는 수를 달성하기에 충분하다. 본 발명의 일부 측면에서, 치료 범위는 추정된 확률과 같은, 예를 들어 반응 확률 및/또는 신경 독성 (NT)과 같은, 예를 들어 3등급 이상 독성인, 중증 및/또는 3등급 이상 독성과 같은, 독성의 징후 또는 증상을 나타낼 확률 또는 위험인 확률에 기초하거나 확률과 관련하여 결정된다.
본 발명의 일부 구현예에서, 투여하는 단계는 본 발명의 일부 측면에서 치료 범위 및/또는 창(window) 이내이거나 이를 달성하거나 이내에서 발생하기에 불충분하거나 및/또는 특정된 또는 결정된 치료 범위와 같은, 특정된 범위 이내, 선택적으로 투여 후의 일정 기간 이내 또는 특정 기간에 걸쳐서, 대상체의 혈액과 같은, 대상체의 샘플 또는 조직 또는 체액 내에 예를 들어, CAR+ 세포들인, 조작된 세포들의 전체적인 또는 피크 양 또는 수를 달성하기에 불충분하다. 본 발명의 일부 측면에서, 이러한 구현예의 측면에서와 같이, 제공된 방법은 추가적으로 조작된 세포들 이외에 또는 추가로 대상체에게 화합물을 투여하는 단계를 수반한다. 본 발명의 일부 측면에서, 이러한 작용제는 CAR+ 세포들과 같은, 조작된 세포들에 대한 대상체의 확장, 지속성, 및/또는 노출의 가능성, 정도, 속도, 또는 레벨을 향상시키거나 증가시킬 수 있다고 공지되거나 의심되는 작용제일 수도 있다. 본 발명의 일부 측면에서, 작용제(들)은 생체 내에서 세포들의 확장을 증가 또는 촉진시키고 및/또는 CAR+ 세포들과 같은, 대상체 내에서 세포들의 확장, 피크 레벨, AUC, 또는 다른 측정의 레벨, 정도 또는 속도를 유발시킬 수 있고, 확장은 치료 범위 및/또는 창(window) 이내이다. 본 발명의 임의의 이러한 구현예의 일부에서, 치료 범위는 일부 측면에서 추정된 확률과 같은, 예를 들어 반응 확률 및/또는 신경 독성 (NT)과 같은, 예를 들어 3등급 이상인 독성인, 중증 및/또는 3등급 이상 독성과 같은, 독성의 징후 또는 증상이 나타날 확률 또는 위험인 확률에 기초하거나 확률과 관련하여 결정된다.
본 발명의 일부 구현예에서, 방법은 예를 들어, 투여 후에, 대상체에게 세포 치료 또는 조작된 세포들; 혈액 또는 혈액-유래 샘플들 (혈액 내에서 피크 CAR 세포들과 같은)과 같은 대상체의 샘플 내에서 조작된 또는 다른 세포들의 레벨을 모니터링하여 선택적으로 시간의 경과에 따른, 예를 들어, 세포들이 치료 범위 및/또는 창 이내 있는지 여부를 평가하는 단계를 수반한다. 본 발명의 일부 측면에서, 세포들이 치료 범위 또는 창 이내에 있는 경우, 본 명세서에서 제공된 방법은 생체 내에서 CAR+ 세포 확장을 향상시키기 위한 것과 같은, 조작된 세포들에 대한 확장 또는 노출을 향상시키기는 화합물을 투여하는 것과 같은, 예를 들어 피크 CAR+ 확장 및/또는 레벨 및/또는 노출 및/또는 AUC가 치료 또는 원하는 범위 내에 있도록, 대상체에게 투여를 수반한다.
본 발명의 임의의 이러한 구현예의 일부에서, 샘플 내에서 조작된, 예를 들어 CAR+, 세포들의 레벨은 샘플의 마이크로리터 당 세포들, 예를 들어 CAR+ 세포들의 수로 결정되고; 본 발명의 일부 구현예에서, 피크 레벨은 대상체에 대한 세포들의 투여 또는 세포 치료 후에, 선택적으로 특정 시간의 경과 후의 이러한 측정치 중에서 가장 높은 것이다.
본 발명의 임의의 이러한 구현예의 일부에서, 치료 범위는 중증 독성 및/또는 신경 독성 (NT) 또는 CRS와 같은, 독성 또는 독성 결과 또는 이의 징후 또는 증상의 추정된 확률이 20% 이하, 10% 이하 또는 5% 이하인 범위이다; 본 발명의 일부 측면에서, 확률은 확률 곡선에 기초하고, 예를 들어 세포 치료 및/또는 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 세포들로 치료되거나 투여된 대상체의 결과에 기초한다. 본 발명의 일부 구현예에서, 치료 반응, 효과, 개선 또는 치료의 추정된 확률은 20%, 25%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 그 이상이다.
본 발명의 임의의 이러한 구현예의 일부에서, 독성은 신경 독성이고 및/또는 중증 독성 및/또는 3-5등급 신경 독성이다.
본 발명의 일부 구현예에서, 반응 또는 반응의 지표는 대상체의 골수에서 측정된 골수 반응 또는 결과이다. 일부 경우에서, 골수 반응의 존재 또는 부존재는 유세포 분석 및/또는 IgH 시퀀싱이거나 이들에 의해 결정되고 및/또는 선택적으로 대상체의 림프절, 골수, 종양 부위, 혈액 또는 다른 샘플과 같은, 기관, 조직 또는 체액인 대상체의 샘플 내에서, 질병 또는 상태의 세포들의 감소 또는 제거이거나 이들을 나타낸다.
본 발명의 임의의 이러한 구현예의 일부에서, 질병 또는 상태는 암이다. 본 발명의 일부 측면에서, 암은 육종, 암종, 림프종, 비-호지킨 림프종 (NHLs), 이하성 거대 B세포 림프종 (DLBCL), 백혈병, CLL, ALL, AML 및 골수종으로 구성된 군에서 선택된다. 일부 경우에서, 암은 췌장암, 방광암, 대장암, 유방암, 전립선암, 신장암, 간세포암, 폐암, 난소암, 자궁 경부암, 췌장암, 직장암, 갑상선암, 자궁암, 위암, 식도암, 두경부암, 흑색종, 신경내분비암, CNS 암, 뇌종양, 골암, 또는 연조직 육종이다.
본 발명의 임의의 이러한 구현예의 일부에서, 키메라 항원 수용체 (CAR)는 항원에 특이적으로 결합하는 세포 외 항원-인식 도메인과 ITAM을 포함하는 세포 내 신호 전달 도메인을 함유한다. 본 발명의 일부 측면에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 CD3-제타(zeta) (CD3ζ) 사슬의 세포 내 도메인을 함유한다. 본 발명의 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체 (CAR)은 추가로 공자극(costimulatory) 신호 전달 영역을 함유한다. 일부 경우에서, 공자극 신호 전달 영역은 CD28 또는 4-1BB의 신호 전달 도메인을 함유한다. 일부 예에서, 공자극 도메인은 4-1BB의 도메인이다.
본 발명의 임의의 이러한 구현예의 일부에서, CAR은 B 세포들, ROR1, B 세포 성숙화 항원 (BCMA), tEGFR, Her2, Ll-CAM, CD19, CD20, CD22, 메소텔린(mesothelin), CEA, 및 B형 간염 표면 항원(hepatitis B surface antigen), 항-엽산 수용체, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, EGP-2, EGP-4, EPHa2, ErbB2, 3, 또는 4, erbB 이합체들(dimers), EGFR vIII, FBP, FCRL5, FCRH5, GPRC5D, 태아 아세틸콜린 e 수용체(fetal acethycholine e receptor), GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-알파, IL-13R-알파2, kdr, 카파 경쇄(kappa light chain), 루이스 Y(Lewis Y), L1-세포 부착 분자, (L1-CAM), 흑색종-관련 항원(Melanoma-associated antigen, MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 흑색종에서 우선적으로 발현되는 항원(Preferentially expressed antigen of melanoma, PRAME), 서바이빈(survivin), EGP2, EGP40, TAG72, B7-H6, IL-13 수용체 a2 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, 엽산 수용체-a, CD44v6, CD44v7/8, avb6 인테그린, 8H9, NCAM, VEGF 수용체들, 5T4, 태아(Foetal) AchR, NKG2D 리간드들, CD44v6, 이중 항원, 및 일반적인 태그(tag)와 관련된 항원, 암 정소 항원, 메소텔린(mesothelin), MUC1, MUC16, PSCA, NKG2D 리간드들, NY-ESO-1, MART-1, gp100, 종양 태아성 항원, ROR1, TAG72, VEGF-R2, 암배아성 항원(carcinoembryonic antigen, CEA), 전립선 특이 항원, PSMA, Her2/neu, 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, ephrinB2, CD123, c-Met, GD-2, O-아세틸화 GD2 (OGD2), CE7, 윌름스 종양(Wilms Tumor) 1 (WT-1), 사이클린, 사이클린 A2, CCL-1, CD138, 및 병원균-특이 항원에 의해 발현되는 항원들 중에서 선택되는 항원을 특이적으로 인식하거나 결합한다.
본 발명의 임의의 이러한 구현예의 일부에서, 세포들은 T 세포들이다. 일부 경우에서, T 세포들은 CD4+ 또는 CD8+이다.
본 명세서에서 세포들과 본 발명의 임의의 구현예의 방법 및 용도에 따르는 것과 같은 투여를 위한 지침을 포함하는 것들과 같은, 제조 물품 및 조성물이 제공된다.
본 명세서에서 질병 또는 상태를 갖는 대상체에게, 질병 또는 상태를 치료하기 위하여, 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포들을 포함하는 유전적으로 조작된 세포들의 투여량을 투여하는 단계, 유전적으로 조작된 세포들의 투여량을 투여하는 단계 후에, 세포들이 치료 범위 내에 있는지를 평가하기 위해 대상체의 혈액 내에서 CAR+ T 세포들을 모니터링하는 단계, 및 유전적으로 조작된 세포들이 치료 범위 내에 있지 않다면, 대상체에서 CAR+ T 세포 확장 또는 증식을 조절, 선택적으로 증가 또는 감소시킬 수 있는 작용제를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법을 제공하고, 여기서 치료 범위는 다음과 같다: (i) 약 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 이상의 추정된 반응 확률 및, 약 30% 이하의 추정된 독성 확률과 관련된 유전적으로 조작된 세포들로 이전에 치료된 하나 이상의 대상체들 중에서 혈액 내에, 피크 CD3+ CAR+ T 세포들, 또는 이의 CD8+ CAR+ T 세포 서브세트의 범위에 기초하여; 또는 (ii) 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 10개의 세포 내지 마이크로리터 당 500개의 세포 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포; 또는 (iii) 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후의 혈액 내의 마이크로리터 당 2개의 세포 내지 마이크로리터 당 200개의 세포 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포.
본 명세서에서 대상체의 혈액 내에서, 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포들을 포함하는 유전적으로 조작된 세포들의 존재를 모니터링하여, 세포들이 치료 범위 내에 있는지를 평가하는 단계로, 여기서 대상체는 이전에 질병 또는 상태를 치료하기 위하여 유전적으로 조작된 세포들의 투여량을 투여받았고; 유전적으로 조작된 세포들이 치료 범위 내에 있다면, 대상체에서 CAR+ T 세포 확장 또는 증식을 조절, 선택적으로 증가 또는 감소시킬 수 있는 작용제를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법을 제공하고, 여기서 치료 범위는 다음과 같다: (i) 약 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 이상의 추정된 반응 확률 및, 약 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% 이하의 추정된 독성 확률과 관련된 유전적으로 조작된 세포들로 이전에 치료된 하나 이상의 대상체들 중에서 혈액 내에, 피크 CD3+ CAR+ T 세포들, 또는 이의 CD8+ CAR+ T 세포 서브세트의 범위에 기초하여; 또는 (ii) 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 10개의 세포 내지 마이크로리터 당 500개의 세포 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포; 또는 (iii) 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후의 혈액 내의 마이크로리터 당 2개의 세포 내지 마이크로리터 당 200개의 세포 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포. 본 발명의 일부 구현예에서, 대상체의 혈액 내의 CAR+ T 세포들의 피크 수가 치료 범위 내에서 피크 CAR+ T 세포들의 가장 낮은 수 보다 작다면, CAR+ T 세포 확장 또는 증식을 증가시킬 수 있는 작용제가 대상체에 투여된다. 일부 경우에서, 작용제는 CAR-특이적 확장이 가능하다.
본 발명의 일부 구현예에서, 작용제는 항-이디오타입 항체 또는 CAR에 특이적인 이의 항원 결합 단편, 면역 체크포인트 억작용제, 대사 경로 조절제, 아데노신 수용체 길항제, 키나아제 억작용제, 항-TGFβ 항체 또는 항-TGFβR 항체 또는 사이토카인이다.
본 발명의 일부 구현예에서, 대상체의 혈액 내에서 CAR+ T 세포들의 피크 수는 치료 범위 내에 피크 CAR+ T 세포들 수의 가장 높은 수 보다 크다면, CAR+ T 세포 확장 또는 증식을 감소시킬 수 있는 작용제가 대상체에 투여된다. 본 발명의 일부 실시예에서, 작용제는 스테로이드이다. 본 발명의 일부 구현예에서, 스테로이드는 덱사메타손 또는 메틸프레드니솔론이다. 본 발명의 일부 구현예에서, 스테로이드는 각각 포괄적인, 약 1.0 mg 내지 약 40 mg, 약 1.0 mg 내지 약 20 mg, 약 2.0 mg 내지 약 20 mg, 약 5.0 mg 내지 약 25.0 mg, 약 10 mg 내지 약 20 mg, 또는 대략 그 정도의 덱사메타손 또는 이의 등량물의 양으로 투여된다.
본 발명의 임의의 이러한 구현예의 일부에서, 대상체는 유전적으로 조작된 세포들의 투여 개시의 적어도 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 또는 21일 후인 시점에 혈액 내의 CAR+ T 세포에 대하여 모니터링된다. 본 발명의 임의의 구현예의 일부에서, 대상체는 유전적으로 조작된 세포들의 투여 개시 후에, 각각 포괄적인, 11일 내지 22일, 12일 내지 18일, 14일 내지 16일, 또는 대략 그 정도의 시점에 혈액 내의 CAR+ T 세포에 대하여 모니터링된다.
본 발명의 일부 구현예에서, 작용제는 유전적으로 조작된 세포들의 투여 개시의 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 또는 21일 후 이상 또는 대략 그 이상의 시점에 투여된다. 본 발명의 구현예에서, 작용제는 유전적으로 조작된 세포들의 투여 개시 후에, 각각 포괄적인, 11일 내지 22일, 12일 내지 18일, 14일 내지 16일, 또는 대략 그 정도의 시점에 투여된다.
본 명세서에서 조작된 세포들의 활성을 조절하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 대상체의 샘플에서 종양 존재량(burden) 또는 염증 마커의 체적 측정치의 레벨, 양 또는 농도가 임계치 이상인 대상체를 선택하는 단계, 여기서 샘플은 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 유전적으로 조작된 T 세포를 함유하지 않고 및/또는 CAR을 발현하는 유전적으로 조작된 T 세포들 투여를 받기 전의 대상체들로부터 수득되고; 및 CAR을 발현하는 유전적으로 조작된 T 세포들의 확장 또는 증식을 감소시킬 수 있는 작용제를 선택된 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
본 명세서에서 조작된 세포들의 활성을 조절하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 대상체에서 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 유전적으로 조작된 T 세포의 확장 또는 증식을 감소시킬 수 있는 작용제를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 대상체는 대상체로부터 수득한 샘플에서 종양 존재량 또는 염증 마커의 체적 측정치의 레벨, 양 또는 농도가 임계치 이상인 것이다.
본 발명의 구현예에서, 상기 작용제는 키메라 항원 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전적으로 조작된 세포들의 투여량의 투여 개시 이전에 또는 동시에 투여된다. 일부 경우에, 상기 방법은 유전적으로 조작된 세포들의 투여량을 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
본 발명의 구현예에서, 대상체는 질병 또는 상태를 가지며, 유전적으로 조작된 세포들은 질병 또는 상태를 치료하기 위한 것이다.
본 발명의 일부 구현예에서, 작용제를 투여하기 이전에, 선택된 대상체는 유 전적으로 조작된 세포들의 투여 후에 독성을 나타낼 위험이 있다. 본 발명의 일부 구현예에서, 작용제의 투여가 대상체의 치료 범위 내에서, 또는 상기 방법에 의해 치료된 선택된 대상체들의 대다수 중에서 또는 상기 방법에 의해 치료된 선택된 대상체들의 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 이상 중에서 피크 CAR+ T 세포를 달성하기에 충분하다.
본 발명의 일부 측면에서, 치료 범위는 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 보다 큰 또는 대략 그보다 큰 반응의 추정된 확률 및 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% 보다 작은 또는 대략 그보다 작은 독성의 추정된 확률과 연관된 유전적으로 조작된 세포로 이전에 치료된 하나 이상의 대상체들의 혈액 내에서, 피크 CD3+ CAR+ T 세포 또는 그의 CD8+ CAR+ T 세포 서브 세트의 범위; 또는 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후의 혈액 내의 피크 CD3+ CAR+ T 세포, 즉 마이크로리터 당 10개의 세포 내지 마이크로리터 당 500개의 세포 또는 대략 그 정도; 또는 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후의 혈액 내의 피크 CD3+ CAR+ T 세포, 즉 마이크로리터 당 2개의 세포 내지 마이크로리터 당 200개의 세포 또는 대략 그 정도에 기초한다.
본 발명의 일부 구현예에서, 종양 존재량의 체적 측정치가 측정되고 체적 측정치는 직경의 결과물의 합 (SPD), 가장 긴 종양 직경 (LD), 가장 긴 종양 직경의 합 (SLD), 종양 체적, 괴사 체적, 괴사-종양 비 (NTR), 종양 주위의 부종 (PTE) 및 부종-종양 비 (ETR)이다. 일부 경우에서, 체적 측정치는 값은 직경의 결과물의 합 (SPD)이다. 본 발명의 일부 구현예에서, 체적 측정치는 대상체의 컴퓨터 단층 촬영 (CT), 양전자 방출 단층 촬영 (PET) 및/또는 자기 공명 영상 (MRI)을 사용하여 측정된다.
본 발명의 일부 구현예에서, 대상체로부터 수득한 샘플에서 염증 마커가 측정되고 염증 마커는 C-반응성 단백질 (CRP), 적혈구 침강 속도 (ESR), 알부민, 페리틴, β2 마이크로글로불린 (β2-M), 젖산 탈수소효소 (LDH), 사이토카인 또는 케모카인이다. 일부 경우에서, 염증 마커는 LDH이다. 본 발명의 일부 실시예에서, 염증 마커는 IL-7, IL15, MIP-1알파 또는 TNF-알파인 사이토카인 또는 케모카인이다. 본 발명의 일부 구현예에서, 사이토카인 또는 케모카인은 대식세포 또는 단핵구 활성화와 연관된다. 본 발명의 임의의 이러한 구현예의 일부에서, 샘플은 혈액 샘플, 혈장 샘플 또는 혈청 샘플이거나 이를 포함한다. 일부 경우에서, 염증 마커는 비색 분석법 또는 면역 분석법을 사용하여 평가된다. 일부 경우에서, 염증 마커는 면역 분석법을 사용하여 평가되고 면역 분석법은 효소 결합 면역 흡착 분석법 (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA), 효소 면역 분석법 (ELA), 방사 면역 분석법 (RIA), 표면 플라스몬 공명 (surface plasmon resonance, SPR), Western Blot, Lateral flow assay, 면역 조직 화학, 단백질 어레이 또는 면역-PCR (iPCR ) 중에서 선택된다.
본 발명의 일부 구현예에서, 임계값은 체적 측정치 또는 염증 마커의 평균 값을 넘는 값의 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내 또는 5% 이내 값이고 및/또는 복수의 대조군 대상체들에서 체적 측정치 또는 염증 마커의 평균 값을 넘는 값의 표준 편차 이내이며; 복수의 대조군 대상체들 중에서 적어도 하나의 대상체 내에서 측정된 체적 측정치 또는 염증 마커의 가장 높은 값을 넘는, 선택적으로 이러한 가장 높은 배수의 변화를 넘는 값의 50% 이내, 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내, 또는 5% 이내이고; 및/또는 복수의 대조군 대상체들의 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 98% 이상 중에서 측정된 바와 같은 체적 측정치 또는 염증 마커의 가장 높은 값을 넘는다.
본 발명의 일부 구현예에서, 복수의 대조군 대상체들은 유전적으로 조작된 세포들의 투여량을 투여하기 전의 대상체 그룹이며, 여기서 그룹의 대조군 대상체들 각각은 치료 범위 이내의 가장 높은 피크 CAR+ T 세포 보다 큰 혈액 내의 피크 CAR+ T 세포를 나타냈고; 그룹의 대조군 대상체들의 각각은 동일한 질병 또는 상태를 치료하기 위하여 조작된 세포들의 투여량을 받은 후에, 독성, 선택적으로 신경 독성 또는 사이토카인 방출 증후군(cytokine release syndrome, CRS)에서, 2등급 또는 3등급 이상의 신경 독성 또는 3등급 이상의 CRS 계속하여 나타냈으며; 그룹의 대조군 대상체들의 각각은 유전적으로 조작된 세포들의 투여량의 투여 후에, 반응, 선택적으로 완전한 반응 (CR) 또는 부분적인 반응 (PR)을 나타내지 않았고; 및/또는 그룹의 대조군 대상체들의 각각은 유전적으로 조작된 세포들의 투여량의 투여 후에, 선택적으로 3개월 이상 또는 6개월 이상 동안 지속적인 반응을 나타내지 않았다.
본 발명의 일부 구현예에서, 체적 측정치는 SPD이고 임계값은 ㎠ 당 30 또는 대략 그 정도, 리터 당 400 유닛이거나 대략 그 정도, 리터 당 500 유닛이거나 대략 그 정도, 또는, ㎠ 당 70 또는 대략 그 정도이다.
본 발명의 일부 구현예에서, 염증 마커는 LDH이고 임계값은 리터 당 300 유닛이거나 대략 그 정도, 리터 당 400 유닛이거나 대략 그 정도, 리터 당 500 유닛이거나 대략 그 정도, 또는, 리터 당 600 유닛이거나 대략 그 정도이다.
본 발명의 임의의 이러한 구현예의 일부에서, 작용제는 스테로이드이다. 일부 예시에서, 스테로이드는 코르티코스테로이드이다. 일부 예시에서 스테로이드는 덱사메타손 또는 메틸프레드니솔론이다. 본 발명의 임의의 이러한 구현예의 일부에서, 스테로이드는 각각 포괄적인, 약 1.0 mg 내지 약 40 mg, 약 1.0 mg 내지 약 20 mg, 약 2.0 mg 내지 약 20 mg, 약 5.0 mg 내지 약 25.0 mg, 약 10 mg 내지 약 20 mg, 또는 대략 그 정도의 덱사메타손 또는 이의 등량물의 양으로 투여된다. 본 발명의 일부 구현예에서, 체적 측정치 또는 염증 마커는 유전적으로 조작된 세포들의 투여의 개시 이전에 1일, 2일, 3일, 4일, 6일, 8일, 12일, 16일, 20일, 24일, 28일 또는 그 이상 이내에 대상체에서 측정된다.
본 발명의 임의의 이러한 구현예의 일부에서, 스테로이드는 각각 포괄적인, 약 1.0 mg 내지 약 40 mg, 약 1.0 mg 내지 약 20 mg, 약 2.0 mg 내지 약 20 mg, 약 5.0 mg 내지 약 25.0 mg, 약 10 mg 내지 약 20 mg, 또는 그 사이의 덱사메타손 또는 이의 등량물의 양으로 투여된다.
본 명세서에서 대상체에서 투여하는 방법이 제공되고, 상기 방법은 키메라 항원 수용체 (CAR)을 발현하는 T 세포를 포함하는 유전적으로 조작된 세포들의 투여량을, 질병 또는 상태를 갖는 대상체에게 투여하는 단계, 여기서 투여량은 대상체의 결정된 치료 범위 내에서 혈액 내의, 또는 상기 방법에 의해 치료된 선택된 대상체들의 대다수 중에서 또는 상기 방법에 의해 치료된 선택된 대상체들의 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 이상 중에서 피크 CAR+ T 세포를 달성하기에 충분한 다수의 유전적으로 조작된 세포들을 함유하고, 여기서 치료 범위는 (i) 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 보다 큰 또는 대략 그보다 큰 반응의 추정된 확률 및 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% 보다 작은 또는 대략 그보다 작은 독성의 추정된 확률과 연관된 유전적으로 조작된 세포로 이전에 치료된 하나 이상의 대상체들의 혈액 내에서, 피크 CD3+ CAR+ T 세포 또는 그의 CD8+ CAR+ T 세포 서브 세트의 범위; 또는 (ii) 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 10개의 세포 내지 마이크로리터 당 500개의 세포 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포; 또는 (iii) 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후의 혈액 내의 마이크로리터 당 2개의 세포 내지 마이크로리터 당 200개의 세포 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포에 기초한다.
본 발명의 임의의 이러한 구현예의 일부에서, 유전적으로 조작된 세포들의 투여량은 각각 포괄적인, 1 x 105 내지 5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 106 내지 2.5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 5 x 106 내지 1 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 107 내지 2.5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 5 x 107 내지 1 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도를 함유한다. 본 발명의 일부 구현예에서, 유전적으로 조작된 세포들의 투여량은 적어도 1 x 105개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 적어도 2.5 x 105개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 적어도 5 x 105개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 적어도 1 x 106개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 적어도 2.5 x 106개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 적어도 5 x 106개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 적어도 1 x 107개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 적어도 2.5 x 107개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 적어도 5 x 107개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 적어도 1 x 108개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 적어도 2.5 x 108개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 또는 적어도 5 x 108개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도를 함유한다.
본 명세서에서 대상체에서 투여하는 방법이 제공되고, 상기 방법은 키메라 항원 수용체 (CAR)로 조작된 T 세포를 포함하는 유전적으로 조작된 세포들의 차선의 (sub-optimal) 투여량을, 질병 또는 상태를 갖는 대상체에게 투여하는 단계, 여기서 투여량은 대상체의 결정된 치료 범위 내에서 혈액 내의, 또는 상기 방법에 의해 치료된 선택된 대상체들의 대다수 중에서 또는 상기 방법에 의해 치료된 선택된 대상체들의 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 이상 중에서 피크 CAR+ T 세포를 달성하기에 충분한 다수의 유전적으로 조작된 세포들을 함유하고; 유전적으로 조작된 세포들의 투여 단계 다음에, 치료 범위 내에서 혈액 내에 피크 CAR+ T 세포를 달성하기 위하여 대상체 내의 CAR+ 세포 확장 또는 증식을 향상시키는 작용제를 투여하는 단계, 여기서 치료 범위는 (i) 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 보다 큰 또는 대략 그보다 큰 반응의 추정된 확률 및 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% 보다 작은 또는 대략 그보다 작은 독성의 추정된 확률과 연관된 유전적으로 조작된 세포로 이전에 치료된 하나 이상의 대상체들의 혈액 내에서, 피크 CD3+ CAR+ T 세포 또는 그의 CD8+ CAR+ T 세포 서브 세트의 범위; 또는 (ii) 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 10개의 세포 내지 마이크로리터 당 500개의 세포 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포; 또는 (iii) 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후의 혈액 내의 마이크로리터 당 2개의 세포 내지 마이크로리터 당 200개의 세포 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포에 기초한다.
본 발명의 일부 구현예에서, 유전적으로 조작된 세포들의 투여량을 투여한 후, 상기 방법은 대상체의 혈액 내에 CAR+ T 세포를 모니터링하는 단계를 포함한다. 본 발명의 일부 구현예에서, 작용제의 투여 후에, 상기 방법은 작용제 없이 유전적으로 조작된 세포들의 동일한 투여량을 투여하는 단계를 포함하는 방법과 비교하여, 대상체에서 결정된 치료 범위 내에서 혈액 내의 피크 CAR+ 세포의 증가된 빈도; 또는 대상체의 결정된 치료 범위 내에서 혈액 내의, 또는 상기 방법에 의해 치료된 선택된 대상체들의 대다수 중에서 또는 상기 방법에 의해 치료된 선택된 대상체들의 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 이상 중에서 피크 CAR+ 세포를 달성한다.
본 발명의 일부 구현예에서, 유전적으로 조작된 세포들의 투여량은 1 x 107 이하의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 5 x 106 이하의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 2.5 x 106 이하의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 1 x 106 이하의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 2.5 x 105 이하의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도이다.
본 발명의 일부 구현예에서, 작용제는 CAR+ T 세포의 확장, 선택적으로 CAR-특이적 확장을 증가시킬 수 있다. 일부 경우에서, 작용제는 항-이디오타입 항체 또는 CAR에 특이적인 이의 항원 결합 단편, 면역 체크포인트 억작용제, 대사 경로 조절제, 아데노신 수용체 길항제, 키나아제 억작용제, 항-TGFβ 항체 또는 항-TGFβR 항체 또는 사이토카인이다.
본 발명의 임의의 이러한 구현예의 일부에서, 치료된 복수의 대상체들 중에서, 상기 방법은 선택적으로 작용제의 투여 단계를 포함하지 않는 방법과 비교하여, 3개월 이상 또는 6개월 이상 동안 지속되는, 지속적인 반응, 선택적으로 완전한 반응 (CR) 또는 객관적인 반응 (OR) 또는 부분적인 반응 (PR)을 달성한 대상체들의 백분율의 증가를 달성한다. 본 발명의 일부 실시예에서, 증가는 1.2배, 1.5배, 2배, 3배, 4배, 5배, 10배 또는 그 이상 또는 대략 그 정도이다. 본 발명의 일부 구현예에서, 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 50% 는 3개월 이상 또는 6개월 이상 동안 지속되는 완전한 반응 (CR)을 달성하고; 및/또는 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60% 또는 적어도 70%는 3개월 이상 또는 6개월 이상 동안 지속되는 객관적인 반응 (OR)을 달성한다.
본 발명의 일부 구현예에서, 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 50% 보다 큰, 60% 보다 큰, 70% 보다 큰, 또는 80% 보다 큰 또는 대략 그보다 큰 대상체들은 3등급 이상의 사이토카인 방출 증후군 (CRS)를 나타내고 및/또는 2등급 이상 또는 3등급 이상의 신경 독성을 나타내며; 또는 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 40% 보다 큰, 50% 보다 큰, 또는 55% 보다 큰 또는 대략 그보다 큰 대상체들은 임의의 신경 독성 또는 (CRS)를 나타내지 않았다.
본 발명의 임의의 이러한 구현예의 일부에서, 피크 CAR+ T 세포는 대상체의 혈액 내에서 마이크로리터 당 CAR+ T 세포의 수로 결정된다. 본 발명의 일부 구현예에서, 치료 범위는 독성의 추정된 확률이 20% 이하, 15% 이하, 10% 이하 또는 5% 이하이고 반응을 달성하는 추정된 확률은 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 그 이상 보다 큰 범위이다.
본 발명의 일부 구현예에서, 독성의 확률은 임의의 신경 독성 또는 사이토카인 방출 증후군 (CRS); 중증 독성 또는 3등급 이상의 독성; 중증 CRS 또는 3등급 이상의 CRS; 또는 중증 신경 독성, 2등급 이상의 신경 독성 또는 3등급 이상의 신경 독성 중에서 선택된 독성에 기초한다. 본 발명의 일부 구현예에서, 독성의 확률은 중등 독성 또는 3등급 이상의 독성에 기초한다. 본 발명의 일부 구현예에서, 중증 독성은 3-5 등급의 신경 독성이다.
본 발명의 일부 구현예에서, 반응 확률은 완전한 반응 (CR), 객관적인 반응 (OR) 또는 부분적인 반응 (PR)인 반응에 기초하고, 선택적으로 여기서 반응은 지속적이며, 선택적으로 3개월 이상 또는 6개월 이상 동안 지속된다. 본 발명의 일부 구현예에서, 반응은 대상체의 골수 내에서 악성 면역글로불린 중쇄 좌위 (IGH)의 존재 및/또는 지수 복제(index clone)의 평가에 기초하여 결정된 골수 반응이다. 일부 경우에서, 악성 IGH 및/또는 지수 복제는 유세포 분석기 또는 IgH 시퀀싱에 의해 평가된다.
본 명세서에서 지속적인 반응의 가능성을 평가하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 대상체로부터 수득한 생물학적 샘플에서, 하나 이상의 염증 마커의 피크 레벨 및/또는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전적으로 조작된 세포들의 피크 레벨을 검출하는 단계, 여기서 대상체는 질병 또는 상태를 치료하기 위하여 유전적으로 조작된 세포들의 투여량을 이전에 투여 받은 적이 있고; 개별적으로 임계값에 대하여 피크 레벨을 비교함으로써, 대상체가 유전적으로 조작된 세포들의 투여에 대하여 지속적인 반응을 달성할 가능성을 결정하는 단계를 포함한다.
본 발명의 일부 구현예에서, 대상체는 하나 이상의 염증 마커의 피크 레벨이 임계값 이하이면 지속적인 반응을 달성하기 쉽고 하나 이상의 염증 마커의 피크 레벨이 임계값을 이상하면 지속적인 반응을 달성하기 쉽지 않으며; 또는 대상체는 유전적으로 조작된 세포들의 피크 레벨이 하한 임계값과 상한 임계값 사이의 치료 범위 이내이면 지속적인 반응을 달성하기 쉽고 유전적으로 조작된 세포들의 피크 레벨이 하한 임계값 이하이거나 상한 임계값을 이상하면 지속적인 반응을 달성하기 쉽지 않다.
본 발명의 일부 구현예에서, 대상체가 지속적인 반응을 달성하기 쉽지 않다고 결정되면, 치료제로 또는 유전적으로 조작된 세포들 이외에 대체적인 치료학적 처리로 치료를 위한 대상체를 선택하는 단계를 추가로 포함한다. 본 발명의 일부 측면에서, 대상체가 지속적인 반응을 달성하기 쉽지 않다고 결정되면, 유전적으로 조작된 세포들 이외에 치료제 또는 대체적인 치료학적 처리를 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
본 명세서에서 대상체로부터 수득한 샘플에서 하나 이상의 염증 마커의 피크 레벨이 임계값 이상인; 및/또는 대상체로부터 수득한 샘플에서 키메라 항원 수용체 (CAR)를 포함하는 T 세포의 피크 레벨이 하한 임계값 이하이거나 상한 임계값 이상인, 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전적으로 조작된 세포들의 투여를 받은 대상체를 선택하는 단계; 및 대상체에게 유전적으로 조작된 세포들 이외에 치료제 또는 대체적인 치료학적 처리를 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법이 제공된다.
본 발명의 일부 구현예에서, 반응은 완전한 반응 (CR), 객관적인 반응 (OR) 또는 부분적인 반응 (PR)이다. 일부 경우에서, 반응은 3개월, 4개월, 5개월 또는 6 개월 이상 동안 지속된다.
본 발명의 일부 구현예에서, 피크 레벨은 평가되고 및/또는 샘플은 유전적으로 조작된 세포들의 투여 개시의 적어도 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일 또는 21일 후의 시점의 대상체로부터 수득된다. 본 발명의 일부 구현예에서, 피크 레벨은 평가되고 및/또는 샘플은 유전적으로 조작된 세포들의 투여 개시 후에, 각각 포괄적인, 11일 내지 22일 또는 12일 내지 18일 또는 14일 내지 16일 또는 대략 그 정도의 시점의 대상체로부터 수득된다.
본 발명의 일부 구현예에서, 피크 레벨은 하나 이상의 염증 마커의 피크 레벨이며 염증 마커는 C 반응성 단백질 (CRP), IL-2, IL-6, IL-10, IL-15, TNF-알파, MIP-1알파, MIP-1베타, MCP-1, CXCL10 또는 CCL13 중에서 선택된다. 본 발명의 일부 구현예에서, 하나 이상의 염증 마커의 피크 레벨이 평가되고, 임계값은 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내 또는 5% 이내이고 및/또는 유전적으로 조작된 세포들의 투여를 받은 대조군 대상체들의 그룹 중에서 결정된 바와 같이 염증 마커의 피크레벨의 중앙값 또는 평균의 표준 편차이내이며, 여기서 그룹의 대상체들의 각각은 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에 지속적인 반응, 선택적으로 CR 및/또는 PR, 선택적으로 3개월 또는 6개월 이상을 달성하지 않았다. 일부 예시에서, 대조군 대상체들은 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에 안정적인 질병 (SD) 또는 진행되는 질병 (PD)을, 선택적으로 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에 3개월 또는 6개월 동안 나타냈다.
본 발명의 일부 구현예에서, 피크 레벨은 CAR+ T 세포 또는 이의 CD8+ T 세포 서브세트의 피크 레벨이다. 본 발명의 일부 구현예에서, 하한 임계값 및 상한 임계값은 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 보다 큰 또는 대략 그보다 큰 반응의 추정된 확률 및 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% 보다 작은 또는 대략 그보다 작은 독성의 추정된 확률과 연관된 유전적으로 조작된 세포로 이전에 치료된 하나 이상의 대상체들의 혈액 내에서, 피크 CD3+ CAR+ T 세포, 또는 그의 CD8+ CAR+ T 세포 서브 세트 각각의 하한 및 상한이다.
본 발명의 일부 구현예에서, 치료 범위는 독성의 추정된 확률이 20% 이하, 15% 이하, 10% 이하 또는 5% 이하이고 반응을 달성하는 추정된 확률은 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 그 이상 보다 큰 범위이다. 일부 경우에서, 독성의 확률은 임의의 신경 독성 또는 사이토카인 방출 증후군 (CRS); 중증 독성 또는 3등급 이상의 독성; 중증 CRS 또는 3등급 이상의 CRS; 또는 중증 신경 독성, 2등급 이상의 신경 독성 또는 3등급 이상의 신경 독성 중에서 선택된 독성에 기초한다. 본 발명의 일부 구현예에서, 반응 확률은 완전한 반응 (CR), 객관적인 반응 (OR) 또는 부분적인 반응 (PR)인 반응에 기초하고, 선택적으로 여기서 반응은 지속적이며, 선택적으로 3개월 이상 또는 6개월 이상 동안 지속된다.
본 발명의 일부 구현예에서, 피크 CAR+ T 세포는 대상체의 혈액 내의 마이크로리터 당 CAR+ T 세포의 수로서 결정된다. 본 발명의 일부 구현예에서, 상한 임계 값은 마이크로리터 당 300개 세포들 내지 마이크로리터 당 1000개 세포들 또는 마이크로리터 당 400개 세포들 내지 마이크로리터 당 600개 세포들 또는 대략 그 정도이거나, 약 마이크로리터 당 300개 세포들, 마이크로리터 당 400개 세포들, 마이크로리터 당 500개 세포들, 마이크로리터 당 600개 세포들, 마이크로리터 당 700개 세포들, 마이크로리터 당 800개 세포들, 마이크로리터 당 900개 세포들 또는 마이크로리터 당 1000개 세포들이고; 하한 임계값은 마이크로리터 당 10개 세포들, 마이크로리터 당 9개 세포들, 마이크로리터 당 8개 세포들, 마이크로리터 당 7개 세포들, 마이크로리터 당 6개 세포들, 마이크로리터 당 5개 세포들, 마이크로리터 당 4개 세포들, 마이크로리터 당 3개 세포들, 마이크로리터 당 2개 세포들 또는 마이크로리터 당 1개 세포들 또는 대략 그 정도이다.
본 발명의 일부 구현예에서, 샘플은 혈액 샘플 또는 혈장 샘플이다. 본 발명의 일부 구현예에서, 상기 방법은 생체 외에서 수행된다.
본 발명의 일부 구현예에서, CAR+ T 세포의 피크 레벨은 하한 임계값 이하이고 치료제는 CAR+ T 세포의 확장과 증식을 감소시킬 수 있는 작용제이다. 일부 경우에는, 작용제가 스테로이드이다. 일부 경우에는, 스테로이드는 코르티코스테로이드이다. 본 발명의 일부 실시예에서, 스테로이드는 덱사메타손 또는 메틸프레드니솔론이다. 본 발명의 임의의 이러한 구현예의 일부에서, 스테로이드는 각각 포괄적인, 약 1.0 mg 내지 약 40 mg, 약 1.0 mg 내지 약 20 mg, 약 2.0 mg 내지 약 20 mg, 약 5.0 mg 내지 약 25.0 mg, 약 10 mg 내지 약 20 mg, 또는 그 사이의 덱사메타손 또는 이의 등량물의 양으로 투여된다.
본 발명의 일부 구현예에서, CAR+ T 세포의 피크 레벨은 상한 임계값을 이상하고, 치료제는 CAR+ T 세포의 확장, 선택적으로 CAR- 특이적 확장을 증가시킬 수 있는 작용제이다.
본 발명의 일부 구현예에서, 작용제는 항-이디오타입 항체 또는 CAR에 특이적인 이의 항원 결합 단편, 면역 체크포인트 억작용제, 대사 경로 조절제, 아데노신 수용체 길항제, 키나아제 억작용제, 항-TGFβ 항체 또는 항-TGFβR 항체 또는 사이토카인이다.
본 발명의 임의의 이러한 구현예의 일부에서, 질병 또는 상태는 암이다. 본 발명의 일부 측면에서, 암은 육종, 암종, 림프종, 비-호지킨 림프종 (NHLs), 이하성 거대 B세포 림프종 (DLBCL), 백혈병, CLL, ALL, AML 및 골수종으로 구성된 군에서 선택된다. 일부 경우에서, 암은 췌장암, 방광암, 대장암, 유방암, 전립선암, 신장암, 간세포암, 폐암, 난소암, 자궁 경부암, 췌장암, 직장암, 갑상선암, 자궁암, 위암, 식도암, 두경부암, 흑색종, 신경내분비암, CNS 암, 뇌종양, 골암, 또는 연조직 육종이다.
본 발명의 일부 구현예에서, 대상체는 인간이다.
본 발명의 일부 구현예에서, CAR은 질병 또는 상태와 연관된 항원에 특이적으로 결합하고 및/또는 질병 또는 상태와 연관된 세포에서 발현된다. 본 발명의 일부 실시예에서, 항원은 5T4, 8H9, avb6 인테그린, B7-H6, B 세포 성숙화 항원 (BCMA), CA9, 암성-고환 항원, 탄산 무수화 효소 9 (CAIX), CCL-1, CD19, CD20, CD22, CEA, B형 간염 표면 항원, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD138, CD171, 암배아성 항원 (CEA), CE7, 사이클린, 사이클린 A2, c-Met, 이중 항원, EGFR, 상피 당단백질 2 (epithelial glycoprotein 2, EPG-2), 상피 당단백질 40 (EPG-40), EPHa2, 에프린B2(ephrinB2), erb-B2, erb-B3, erb-B4, erbB 이합체들, EGFR vIII, 에스트로겐 수용체, 태아 AchR, 엽산 수용체 알파, 엽산 결합 단백질 (FBP), FCRL5, FCRH5, 태아 아세틸콜린 수용체, G250/CAIX, GD2, GD3, gp100, Her2/neu (수용체 티로신 키나아제 erbB2), HMW- MAA, IL-22R-알파, IL-13 수용체 알파 2 (IL-13Ra2), 키나아제 삽입 도메인 수용체 (kdr), 카파 경쇄, 루이스 Y, L1-세포 접착 분자 (L1-CAM), 흑색종-관련 항원 (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, MART-1, 메소텔린, 쥐-CMV, 뮤신 1(mucin 1, MUC1), MUC16, NCAM, NKG2D, NKG2D 리간드, NY-ESO-1, O-아세틸화 GD2 (OGD2), 종양 태아성 항원(oncofetal antigen), 흑색종에서 우선적으로 발현되는 항원 (PRAME), PSCA, 프로게스테론 수용체, 서바이빈, ROR1, TAG72, tEGFR, VEGF 수용체, VEGF-R2, 윌름스 종양 1 (WT-1), 병원균-특이적 항원 중에서 선택된다.
본 발명의 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체 (CAR)은 항원에 특이적으로 결합하는 세포 외 항원-인식 도메인과 ITAM을 함유하는 세포 내 신호 전달 도메인을 함유한다. 일부 경우에는, 세포 내 신호 전달 도메인은 CD3-제타 (CD3ζ) 사슬의 세포 내 도메인을 함유한다. 본 발명의 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체 (CAR)은 추가로 공자극 신호 전달 영역을 함유한다. 본 발명의 일부 측면에서, 공자극 신호 전달 영역은 CD28 또는 4-1BB의 신호 전달 도메인을 함유한다. 본 발명의 일부 구현예에서, 공자극 도메인은 4-1BB의 도메인이다.
본 발명의 일부 구현예에서, 세포는 T 세포이다. 일부 경우에는, T 세포는 CD4+ 또는 CD8+ 이다. 본 발명의 일부 실시예에서, T 세포는 대상체로부터 수득한 초기의(primary) T 세포이다. 본 발명의 임의의 이러한 구현예의 일부에서, 유전적으로 조작된 세포들의 세포는 세포를 대상체에 대하여 자가 조직(autologous)이다. 본 발명의 일부 구현예에서, 세포는 대상체에 대하여 동종 이계(allogeneic)이다.
본 명세서에서 또한 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유 전적으로 조작된 세포를 함유하는 조성물과 피크 CAR+ T 세포가 치료 범위 이내인지 여부를 평가한 후에 또는 평가한 결과에 기초하여 대상체에게 세포의 투여량을 투여하기 위한 설명서를 포함하는 키트가 제공되고, 여기서 치료 범위는: (i) 65% 보다 큰 또는 대략 그보다 큰 반응의 추정된 확률 및 30% 보다 작은 또는 대략 그보다 작은 독성의 추정된 확률과 연관된 유전적으로 조작된 세포로 이전에 치료된 하나 이상의 대상체들의 혈액 내에서, 피크 CD3+ CAR+ T 세포 또는 그의 CD8+ CAR+ T 세포 서브 세트의 범위에 기초하고; 또는 (ii) 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 10개의 세포들 내지 마이크로리터 당 500개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포; 또는 (iii) 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 2개의 세포들 내지 마이크로리터 당 200개의 세포 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포이다. 본 발명의 일부 구현예에서, 설명서는 유전적으로 조작된 세포들이 치료 범위 이내에 있는 경우에, 대상체에서 CAR+ T 세포 확장 또는 증식을 조절, 선택적으로 증가 또는 감소시킬 수 있는 작용제를 대상체에게 투여하는 것이라고 명시한다. 본 발명의 일부 구현예에서, 키트는 추가로 작용제를 함유한다.
본 명세서에서 대상체에서, CAR+ T 세포를 포함하는 유전적으로 조작된 세포들의 확장 또는 증식을 조절, 선택적으로 증가 또는 감소시킬 수 있는 작용제와, 피크 CAR+ T 세포가 치료 범위 이내에 있는지 여부를 평가한 결과에 기초하여, 대상체에게 작용제를 투여하기 위한 설명서를 함유하는 키트가 제공되고, 상기 대상체는 유전적으로 조작된 세포들을 투여 받은 적이 있으며, 여기서 치료 범위는 (i) 65% 보다 큰 또는 대략 그보다 큰 반응의 추정된 확률 및 30% 보다 작은 또는 대략 그보다 작은 독성의 추정된 확률과 연관된 유전적으로 조작된 세포로 이전에 치료된 하나 이상의 대상체들의 혈액 내에서, 피크 CD3+ CAR+ T 세포 또는 그의 CD8+ CAR+ T 세포 서브 세트의 범위에 기초하고; 또는 (ii) 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 10개의 세포들 내지 마이크로리터 당 500개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포; 또는 (iii) 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 2개의 세포들 내지 마이크로리터 당 200개의 세포 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포이다. 본 발명의 일부 구현예에서, 설명서는 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포의 피크 수가 치료 범위 내에 피크 CAR+ T 세포의 가장 낮은 수 보다 적은 경우에, CAR+ T 세포 확장 또는 증식을 증가시킬 수 있는 작용제가 대상체에게 투여된다고 명시한다. 본 발명의 일부 구현예에서, 작용제는 CAR-특이적 확장이 가능하다.
본 발명의 일부 구현예에서, 작용제는 항-이디오타입 항체 또는 CAR에 특이적인 이의 항원 결합 단편, 면역 체크포인트 억작용제, 대사 경로 조절제, 아데노신 수용체 길항제, 키나아제 억작용제, 항-TGFβ 항체 또는 항-TGFβR 항체 또는 사이토카인이다. 본 발명의 일부 구현예에서, 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포의 피크 수가 치료 범위 내에 피크 CAR+ T 세포의 가장 높은 수 보다 큰 경우에, CAR+ T 세포 확장 또는 증식을 감소시킬 수 있는 작용제가 대상체에게 투여된다
본 명세서에서 대상체 내의 CAR+ T 세포를 포함하는 유전적으로 조작된 세포들의 확장 또는 증식을 감소시킬 수 있는 작용제, 및 대상체를 대상체로부터 수득한 샘플에서 종양 존재량 또는 염증 마커의 체적 측정치의 레벨, 양 또는 농도로 평가하고 레벨, 양 또는 농도가 임계치 레벨 이상인 경우에 대상체에게 작용제를 투여하기 위한 설명서를 함유하는 키트가 제공되고, 여기서 샘플은 키메라 항원 수용체 (CAR)을 발현하는 유전적으로 조작된 T 세포를 함유하지 않고 및/또는 CAR을 발현하는 유전적으로 조작된 T 세포의 투여 전에 대상체로부터 수득된다. 본 발명의 일부 구현예에서, 체적 측정치는 직경의 결과물의 합 (SPD), 가장 긴 종양 직경 (LD), 가장 긴 종양 직경의 합 (SLD), 종양 체적, 괴사 체적, 괴사-종양 비 (NTR), 종양 주위의 부종 (PTE) 및 부종-종양 비 (ETR)이다. 일부 경우에서, 체적 측정치는 값은 직경의 결과물의 합 (SPD)이다.
본 발명의 일부 구현예에서, 염증 마커는 C-반응성 단백질 (CRP), 적혈구 침강 속도 (ESR), 알부민, 페리틴, β2 마이크로글로불린 (β2-M), 젖산 탈수소효소 (LDH), 사이토카인 또는 케모카인이다. 본 발명의 일부 실시예에서, 염증 마커는 LDH이다.
본 발명의 일부 구현예에서, 작용제는 스테로이드이다. 일부 경우에서, 스테로이드는 코르티코스테로이드이다. 본 발명의 일부 실시예에서, 스테로이드는 덱사메타손 또는 메틸프레드니솔론이다. 본 발명의 일부 구현예에서, 스테로이드는 각각 포괄적인, 약 1.0 mg 내지 약 40 mg, 약 1.0 mg 내지 약 20 mg, 약 2.0 mg 내지 약 20 mg, 약 5.0 mg 내지 약 25.0 mg, 약 10 mg 내지 약 20 mg, 또는 대략 그 정도의 덱사메타손 또는 이의 등량물의 양으로 투여하기 위하여 제형화된다.
본 발명의 일부 구현예에서, CAR은 질병 또는 상태와 연관된 항원에 특이적으로 결합하고 및/또는 질병 또는 상태와 연관된 세포 내에서 발현된다. 본 발명의 일부 구현예에서, 유전적으로 조작된 세포들은 T 세포, 선택적으로 CD4+ 또는 CD8+ T 세포를 포함한다.
본 명세서에서 또한 본 명세서에서 제공된 임의의 키트를 함유하는 제조물품이 제공된다.
도 1은 혈액 내의 CD4+/절단된 수용체+ 또는 CD8+/절단된 수용체+ CAR-T세포의 수에 기초하여 구축된 반응의 추정된 확률 곡선 및 3-5등급의 신경 독성을 나타낼 추정된 확률을 나타낸다.
도 2a는 전체적인 반응이 가장 우수한 것으로 그룹화된 대상체들에 대하여 주입 후 특정 시점에서 측정한 말초 혈액 중 CD3+/CAR+T 세포의 수를 나타낸다.
도 2b-2d는 3개월에 지속적인 반응한 것으로 그룹화된 반응을 달성한 대상체들에 대하여 주입 후 특정 시점에서 측정한 말초 혈액에서 CD3+/CAR+T 세포, CD4+/CAR+T 및 CD8+/CAR+T 세포 레벨을 나타낸다.
도 3은 대상체의 ≥20%에서 발생한 실험실 이상 및 치료-응급 부작용 사례 (TEAE)를 경험한 대상체의 백분율을 보여준다. *: 연구 치료와 무관하고 림프종의 진행으로 인한 다-기관 부전의 1급 5AE; †: 점진적 호흡 부전에 대한 기계 호흡을 거부하였지만 성장 인자 및 광범위한 항생제 및 항진균제에 대하여 호중구 감소적 (neutropenic)인 대상체에서 23일에 발생한, 조사자가 플루다라빈, 사이클로포스파마이드 및 CAR T 세포 치료제와 관련되었다고 평가한, 이하성 폐포 손상의 1급 5 AE.
도 4는 CRS 및 신경 독성의 발병까지 관측된 시간을 보여주는 카플란 마이어 곡선 (Kaplan meier curve)이다.
도 5a 및 도 5b는, 치료된 대상체의 하위 그룹 사이의 반응률을 도시한다.
도 6a 및 도 6b는, 전체 및 핵심 코호트에서의 반응 지속 기간 (CR/PR, CR 또는 PR) 및 전체 생존율을 나타낸다.
도 7a는 상이한 투여 레벨의 치료-후 다양한 시점에서 말초 혈액 중의 CAR+T 세포의 약물동력학을 보여준다.
도 7b는 반응체와 비반응체 간의 치료-후 다양한 시점에서 말초 혈액중의 CAR+ T 세포의 약물동력학을 보여준다.
도 7c는 임의의 신경 독성을 발병하거나 발병하지 않은 대상체에서 치료-후 다양한 시점에서 말초 혈액 중의 CAR+T 세포의 약물동력학을 보여준다.
도 8은 CAR+T 세포의 투여 전에 대상체의 혈청 내에서 측정된 분석물 레벨과 신경 독성 발병에 대한 상관관계를 보여준다.
도 9는, CAR-T-발현 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 함유하는 항-CD19 세포 치료제로 치료된 NHL 대상체들의 전체 코호트 및 핵심 코호트 내의 개별적인 대상체들에서, 무-진행 시간 (개월)을 플롯팅하고 전체적인 최고 반응 및 반응 지속성, 및 시간의 경과에 따라 관찰된 개별적인 임상 결과를 나타낸 그래프를 보여준다. a: 별도로 명시된 경우를 제외하고, 1개월에 BOR 획득한 환자들; b: 2명의 환자에서 관찰된 림프종에 의한 CNS 관여에 대한 완전한 해소; c: 질병 진행에 따라 생검 후 재-확장된 1명의 환자.
도 10a는 항-CD19 CAR-발현 세포를 투여받은 적이 있는 87명의 대상체로부터 수득한 샘플에서, 절단된 수용체에 특이적인 항체를 사용하여 유세포 분석법으로 평가한, CAR- 발현 CD + 세포/μL 혈액의 중앙값 (±4분위수) (CD3, 동그라미; N = 87); 또는 CAR을 인코딩하는 백터 내에 존재하는 마멋 간염 바이러스(woodchuck hepatitis virus) 전사-후 조절 요소 (WPRE)에 대하여 특이적인 프라이머를 사용하는 정량적인 중합효소 연쇄 반응 (qPCR)에 의해 평가한, 통합된 CAR 전이유전자(transgene)/μg 게놈 DNADML 복제 수의 중앙값 (±4분위수) (qPCR, 네모; N = 85)을 도시한다. 유세포 분석법에서 CAR+ 세포 검출을 위한 컷오프는 CAR+ 게이트에서 25건 이상으로 설정되었고, qPCR에 대한 검출 한계는 게놈 DNA ㎍ 당 CAR 전이유전자의 12.5 복제본 이상이었다.
도 10b는 11일 ± 3일에 항-CD19 CAR-발현 세포를 투여받은 적이 있는 67명의 대상체로부터 수득한 혈액 및 골수 샘플에서 CD4+ 및 CD8+ CAR-발현 세포/μL의 상대적인 수를 도시한다. 선은 단일 선을 나타내며 회귀 선이 아니다.
도 11a 및 도 11b는 DL1에서 CAR-발현 T 세포를 받은, 소포성 림프종으로부터 신생 또는 변형된 이하성 거대 B 세포 림프종 (DLBCL, NOS; N=27), 변형된 소포성 림프종 (tFL; N=10), 변연부 림프종 또는 만성 림프구 백혈병으로부터 변형된 DLBCL (tMZL/tCLL; N=4), 또는 맨틀 세포 림프종 (MCL; N-5)을 가지는 대상체 하위 그룹에서 CD4+ 및 CD8+ CAR+ 세포의 0 내지 28일 사이의 곡선 아래의 면적 중앙값 (AUC0-28; 도 11a) 및 최대 혈청 농도 (Cmax; CAR+ 세포/μL 혈액; 도 11b)를 도시한다.
도 12a 및 12b는 DL1 또는 DL2에서 CAR+ 세포를 받은 대상체에서 CD3+, CD4+ 및 CD8+ 세포의 0 내지 28일 사이의 곡선 아래의 면적 중앙값 (AUC0 -28; 도 12a) 및 최대 혈청 농도 (Cmax; CAR+ 세포/μL 혈액; 도 12b)를 도시한다.
도 13a-13d는 CRS가 발병하지 않은 (CRS 없음) 대상체들과 비교하여 사이토카인 방출 증후군 (임의의 CRS)가 발병한 대상체들에서 (CD4+: 도 13a; CD8+: 도 13b), 또는 NT가 발병하지 않은 (NT 없음) 대상체들과 비교하여 신경 독성 (임의의 NT)가 발병한 대상체들에서 (CD4+: 도 13c; CD8+: 도 13d), 시간의 경과에 따른 CAR-발현 CD4+ 및 CD8+ CAR+ 세포/μL 혈액의 중앙값 (±4분위수)를 도시한다.
도 14는 CR, PR 및 PDD의 최고의 전체적인 반응 (BOR)을을 갖는 대상체에 의해 그룹화된 대상체에서 CD3+ CAR+ 세포/μL (CD3+ Cmax)의 수를 도시한다.
도 15a는 높은 CAR+ 세포 확장 (CD3+ Cmax > 500)을 나타내는 대상체 및 낮은 CAR+ 세포 확장 (CD3+ Cmax < 500)을 나타내는 대상체로부터 수득한 혈청 샘플에서 전-림프구 고갈 혈액 분석물 레벨을 도시한다.
도 15b는 높은 CAR+ 세포 확장 (CD3+ Cmax > 500)을 나타내는 대상체 및 낮은 CAR+ 세포 확장 (CD3+ Cmax < 500)을 나타내는 대상체로부터 수득한 혈청 샘플에서 피크 혈액 분석물 레벨을 도시한다.
도 16은 CAR+ 세포의 DL1 또는 DL2를 투여받은 개별적인 대상체에 대한, CD3+ CAR+ 세포의 AUC0 - 28 (세포* 일/μL)에 대한 전-림프구 고갈 SPD (cm2)을 도시하는 도표를 도시한다.
도 17a 및 도 17b는 CRS가 발병하지 않은 (0등급의 CRS) 대상체들과 비교하여 사이토카인 방출 증후군이 발병된 (1-4 등급의 CRS) 대상체들 (도 17a)에서 또는 NT가 발병하지 않은 (0등급의 NT) 대상체들과 비교하여 신경 독성이 발병된 (1-4 등급의 NT) 대상체 (도 17b)로부터 수득한 혈청 샘플에서 전-림프구 고갈 혈액 분석물 레벨을 도시한다. 단위는 다음과 같다: 페리틴 및 D-이합체 (μg/L); CRP (mg/L) 및 사이토카인 (pg/mL).
도 18은 CRS가 발병하지 않은 (0등급의 CRS) 대상체들과 비교하여 사이토카인 방출 증후군이 발병된 (1-4 등급의 CRS) 대상체들에서 또는 NT가 발병하지 않은 (0등급의 NT) 대상체들과 비교하여 신경 독성이 발병된 (1-4 등급의 NT) 대상체들에서, 종양 존재량을 나타내는, 결과물 치수의 합 (SPD; cm2)과 젖산 탈수소효소 (LDH; U/L) 레벨인 전-림프구 고갈 환자 파라미터의 평가를 도시한다.
도 19a는 신경 독성 (1-4등급의 NT)가 발병한 대상체 또는 NT가 발병하지 않은 대상체 (0등급의 NT) (좌측 패널)에서, 및 CRS (1-4등급의 CRS)가 발병한 대상체 또는 CRS가 발병하지 않은 대상체 (0등급의 CRS) (우측 패널)에서 전-림프구 고갈 LDH (U/L) 레벨에 대하여 전 림프구 고갈 SPD (cm2)을 도시하는 도표이다. 도 19b는 95% 신뢰 구간 (CI)로 SPD (50 cm2 이상) 또는 NT (500 이상)의 레벨에 기초하여 CRS 또는 NT가 발병할 오즈비 추정치를 도시한다.
도 20은 3개월에 반응을 가지지 않는 대상체에 대하여 3개월에 지속적인 반응을 가지는 대상체에서 전-림프구 고갈 종양 존재량 파라미터 (SPD) 및 혈액 분석물 레벨을 도시한다. 단위는 다음과 같다: 페리틴 및 D-이합체 (μg/L); CRP 및 SAA-1 (mg/L) 및 사이토카인 (pg/mL).
도 21a 및 도 21b는 CRS가 발병하지 않은 (CRS 없음) 대상체들과 비교하여 사이토카인 방출 증후군 (임의의 CRS)가 발병한 대상체들에서 (도 21a), 또는 NT가 발병하지 않은 (NT 없음) 대상체들과 비교하여 신경 독성 (임의의 NT)가 발병한 대상체들 (도 21b)로부터 수득한 혈청 샘플에서 피크 혈액 분석물 레벨을 도시한다. 단위는 다음과 같다: CRP (mg/L); SAA-1 (mg/L) 및 사이토카인 (pg/mL).
도 22a는 안정한 질병 (SD) 또는 진행성 질병 (PD)을 갖는 대상체들 (N=17)과 비교하여 완전한 반응 (CR) 또는 부분적인 반응 (PR)의 최고의 전체적인 반응 (BOR)을 갖는 대상체들 (N=57)로부터 수득한 혈청 샘플에서 피크 혈액 분석물 레벨을 도시한다. 도 22b는 3-개월에 CR/PR을 나타내는 대상체들 (N=35)과 비교하여, SD/PD의 3-개월 반응을 갖는 대상체들 (N=31)로부터 수득한 혈청 샘플에서 피크 혈액 분석물 레벨을 도시한다. 단위는 다음과 같다: CRP (mg/L); SAA-1 (mg/L) 및 사이토카인 (pg/mL).
도 23a-23c는 CD3+ (도 23a), CD4+ (도 23b) 또는 CD8+ (도 23c) CAR-발현 세포의 최대 혈청 농도 (Cmax; 세포/μL 혈액)에 기초하여, 반응, 독성 및 지속적인 반응 결과에 대한 추정된 확률을 도시한다. 전체적인 반응률 (ORR; 완전한 반응 (CR) 및 부분적인 반응 (PR)을 가지는 대상체들을 포함)에 대한 추정된 확률 곡선, 3-개월 반응 (M3 반응; 투여 3개월 후에 CR 및 PR을 포함), 임의의 NT, 임의의 CRS, 3-4등급의 NT, 3-5등급의 NT 또는 2-5등급의 CRS.
발명의 상세한 설명
I. 치료학적 투여량 범위를 결정하는 방법
본 발명의 구현예 중에서 치료제의 세포에 의해 특이적으로 인식되는 것과 같은, 질병 또는 상태를 갖거나 갖는 것이라고 의심되는 대상체에게 조작된 세포들을 포함하는 것과 같은 세포 치료제의 투여를 수반하거나 관련된 방법, 용도, 조성물 및 제조물품이 제공된다. 일부 측면에서 제공된 구현예는 대상체에게 투약 일반적으로 대상체의 샘플, 체액, 조직, 기관 또는 위치에서 조작된 세포의 이상적인 레벨을 달성하거나 달성하기 쉬운 범위 및/또는 창인, 치료학적 투여량 범위 및/또는 창 이내이거나 이내인 것으로 의심되는 투여량을 투여하는 것과 같은, 예를 들어, 대상체에게 세포 치료체의 특정 투여량을 투여하는 단계와 관련된다.
입양 세포 치료 (키메라 항원 수용체들 (CARs) 및/또는 다른 재조합 항원 수용체와 같은, 관심있는 질병 또는 장애에 특이적인 키메라 수용체를 발현하는 세포의 투여를 수반하는 것들 및 다른 입양 면역 세포 및 입양 T 세포 치료제를 포함하는)은 암 및 다른 질병 및 장애의 치료에 효과적일 수 있다. 특정 상황에서, 입양 세포 치료에 사용 가능한 접근법은 항상 완전히 만족스럽지 않을 수도 있다. 일부 상황에서, 치료법에 대한 최적의 반응은 표적, 예를 들어 표적 항원을 인식하고 결합하는, 이동하는, 국소화하는 및 대상체, 종양 및 이의 환경 이내의 적절한 위치에 성공적으로 진입하는, 활성화되는, 확장하는, 세포 독성 사멸 및 사이토카인과 같은 다양한 인자의 분비를 포함하는, 다양한 효과기 기능을 발휘하는, 장기간을 포함하는, 지속하는, 특정 표현형 단계 (효과기, 장기간 메모리, 덜 분화된, 및 효과기 단계와 같은)로 재프로그래밍하는 변이 또는 착수(engage)하는, 항원 리간드 또는 항원에 대한 클리어런스 및 재-노출 후에 효과적이고 강력한 리콜 반응을 제공하고, 및 피로, 알레르기, 말단 분화 및/또는 억제 상태로의 분화를 회피하거나 감소시키는 투여된 세포의 능력에 의존한다.
일부 측면에서, 입양 세포 치료의 치료 효과는 그러한 세포가 투여되는 대상체에서의 독성의 발달, 일부 경우에 독성이 심각할 수 있는 특정 투여량 또는 투여 된 세포의 노출에 의해 제한될 수도 있다. 일부 경우에, 그러한 세포의 다량 투여는 예를 들어 확장 및/또는 지속성을 촉진시킴으로와 같은, 세포에 대한 노출을 증가시킴으로써 치료 효과를 증가시킬 수 있지만, 독성을 발현할 위험성을 더욱 높일 수도 있거나, 더 심각한 독성을 유발할 수도 있다. 또한, 어떤 경우에는 더 높은 질병 존재량을 지닌 대상체가 독성 또는 더 심각한 독성을 나타낼 위험이 더 클 수 있다. 대상체에게 세포 치료제를 투여할 수 있는 특정 방법은 항상 완전히 만족스럽지는 않을 수도 있다. 대상체에서 세포의 투여량을 증가시키거나 투여된 세포의 확장 또는 증식을 촉진하는 것은 높은 반응률과 관련될 수 있지만 또한 독성이 나타나는 것을 증가시킨다.
제공된 방법은 세포 치료제의 투여량을 결정할 때 사용 가능한 방법에 비해 장점을 제공한다. 제공된 방법은 일반적으로 대상체에서 조작된 세포의 이상적인 레벨을 달성하거나 달성하기 쉬운 범위 및/또는 창인, 치료학적 투여량 범위 및/또는 창 이내이거나 이내인 것으로 의심되는 투여량을 대상체에게 투여하는 것을 허용한다. 제공된 방법은 유리한 결과 또는 반응 및/또는 지속적인 반응 또는 결과와 같은 치료 결과의 높거나 특정 바람직한 가능성 정도와 관련되거나 달성될 수 있고 또한 세포 치료제의 대상체에게 투여한 후에 독성 결과 또는 독성을 나타낼 위험이 비교적 낮거나 최소화되거나 원하는 정도의 가능성과 연관된 세포의 투약을 허용한다. 제공된 방법은 또한 대상체가 반응 및/또는 지속적인 반응을 얻지 못할 것으로 판단되면 세포 치료제의 조절, 변형 및/또는 변경을 허용함으로써 이용 가능한 접근법 보다 이점을 제공함으로써 실질적으로 독성의 위험을 증가시키지 않으면서도 반응을 최적화한다. 일부 구현예에서, 약물동력학적 파라미터, 환자 속성, 종양 존재량 및/또는 염증 마커와 같은 바이오마커의 발현을 사용하여 반응의 가능성 및/또는 치료제를 조절, 변형 또는 변경하여 독성의 위험을 실질적으로 증가시키지 않으면서 보다 큰 반응 또는 보다 지속적인 반응을 달성하기 위한 필요를 결정할 수 있다.
일부 구현예에서, 치료학적 투여량 범위 및/또는 창은 조작된 세포, 예를 들어 CAR T 세포의 이상적인 레벨을 달성하거나 달성하기 쉬우며, 일부 측면에서 이상적인 레벨은 일반적으로 치료 후 또는 치료 후 일정 기간 이내의 관련된 샘플, 체액, 조직, 기관 또는 다른 위치에서 관찰된 또는 측정된 세포의 최대 수, 농도 또는 백분율을 의미한다. 일부 측면에서, 레벨은 주어진 시간 또는 일정 기간 동안의 수, 농도 또는 백분율 (무게 또는 부피 또는 면적 또는 총 세포 수 당 세포의 수와 같은), 또는 대상체 또는 조직 또는 장기 또는 체액 또는 위치의 세포에 대한 노출일 수도 있다. 일부 측면에서, 레벨은 세포의 치료 또는 투여 또는 이의 개시 후에 주어진 기간이 경과한, 조직 또는 샘플 또는 체액 또는 기관 또는 다른 위치에서 관련된 세포의 수 또는 백분율 또는 다른 판독 값의 도표와 관련하여 곡선 아래의 면적 (AUC)이다.
어떤 구현예에서, 레벨이 혈액에서 CAR+ 세포 농도 (예를 들어, 세포/μL), 일정 기간 동안 CAR+ 세포/부피 (예를 들어, CAR+ 세포/마이크로리터)의 곡선의 AUC, 치료 후 혈액 내의 최대 또는 피크 CAR+ 세포/부피 (예를 들어, CAR+ 세포/마이크로리터), 또는 치료-후 또는 이의 개시의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 21일 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12주 또는 그 이상이 지난 후의 CAR+ 세포/마이크로리터로 표현된다. 일부 구현예에서, 이상적인 레벨은 결정된 치료학적 범위 이내에 있거나 이내에 있는 레벨이다.
일부 구현예에서, 치료 범위는 또한 바람직한 결과 또는 반응 및/또는 지속적인 반응 또는 결과와 같은 치료 결과의 가능성이 높은 또는 지정된 원하는 정도와 관련된 치료 범위 및/또는 창인 예를 들어, 조작된 세포와 같은 세포 치료제의 대상체에게 투여한 후 독성 결과 또는 독성을 발현할 위험이 비교적 낮거나 최소화되거나 요구되는 가능성의 정도와 관련된다. 일부 측면에서, 독성 또는 독성 결과는 사이토카인 방출 증후군 (CRS) 또는 신경 독성 (NT)이다. 일부 측면에서 독성 또는 독성 결과는 CRS 또는 1등급 이상의 CRS 또는 모든 신경 독성 또는 1등급 이상의 신경 독성이다. 일부 측면에서, 독성 또는 독성 결과는 중증의 CRS 또는 3등급 이상의 CRS 또는 중증의 신경 독성 또는 3등급 이상의 신경 독성이다. 어떤 경우에는, 독성 위험이 질병 존재량, 세포 투여량, 세포 확장, 세포 노출 또는 피크 세포 농도와 같은 세포의 약물동력학 (PK)과 관련이 있다. 그러나, 동시에 반응을 극대화하기 위해 일부 경우에는 더 높거나 많은 양의 세포, 예를 들어 세포 노출 또는 피크 농도의 세포가 요구된다. 그러나, 일부 측면에서, 치료의 개시로부터 일정 기간 후에 지속되는 반응과 같은 지속적인 반응의 확률은 세포의 더 높거나 많은 투여량, 세포의 노출 또는 세포의 피크 농도에 따라 특정 투여량, 노출 또는 농도까지 증가할 수 있고; 그리고 나서 감소할 수 있다. CAR+ T 세포로 치료받은 대상체 집단으로부터 생성된 독성 (예를 들어, CRS 또는 신경 독성, 중증 CRS 또는 심각한 중증 신경 독성) 및 반응 (예를 들어, 골수 반응) 및/또는 지속적인 반응에 대한 확률 곡선에서 발견된다. 예상되는 반응 확률 또는 지속적인 반응을 최대화하고 독성의 추정된 위험을 최소화하기 위해 투여량을 결정할 수 있는 치료 범위 및/또는 창 예를 들어, 곡선 사이의 가장 넓은 범위가 있다. 일부 구현예에서, 그러한 확률 곡선은 대상체에게 투여할 세포의 투여량을 선택하거나 결정하는 방법에 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 그러한 확률 곡선은 예를 들어, 세포 확장, 활성 및/또는 기능에 영향을 미치는 작용제 및/또는 중재적 시술을 투여함으로써 세포의 투여량을 변형시키고 및/또는 세포의 확장 및/또는 활성을 조절하는 방법에서 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 제공된 방법은 키메라 항원 수용체 (CAR)로 조작된 세포의 투여량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 투여량은 결정된 치료 범위 내에서, 결정된 치료 범위 및/또는 노출 (예를 들어, AUC) 이내의 피크 CAR+ 세포/㎕를 달성하기에 충분하고, 치료 범위는 반응 결과 (예를 들어, 골수 반응)의 추정된 가능성 및/또는 지속적인 반응, 예를 들어 3개월에, 및 독성 결과의 추정된 가능성 (예를 들어, 3-5등급의 신경 독성)에 기초하여 결정된다.
일부 구현예에서, 추정된 확률은 적어도 10, 25, 50, 100, 150, 300, 400, 500 또는 그 이상의 대상체들과 같은, 대상체들의 집단으로부터 수득한 결과 또는 결과물에 기초하여 만들어진 확률 곡선으로부터 결정된다. 일부 구현예에서, 대상체 집단은 종양 또는 암과 같은 질병 또는 상태를 갖는 대상체와 같은, 병이 있는 대상체이다. 일부 구현예에서, 대상체의 집단은 질병 또는 상태를 치료하기 위해 유전적으로 조작된 세포, 예를 들어 CAR-T 세포로 치료받고 있거나 그럴 가능성이 높은 대상체 또는 후보자를 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체는 육종, 암종 또는 림프종, 선택적으로 비-호지킨 림프종 (NHL), 확산성 B 세포 림프종 (DLBCL), 백혈병, 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 급성 림프구성 백혈병 (ALL), 급성 골수성 백혈병(AML) 및 골수종을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 CLL을 갖는다. 일부 구현예에서, 독성 결과 (예를 들어, 3-5등급의 신경 독성과 같은 CRS 또는 신경 독성)의 위험에 대해 제1 확률 곡선이 생성되고 반응 결과 (예를 들어, 골수 반응)에 대해 제2 확률 곡선이 생성된다. 일부 구현예에서, 독성 결과 (예를 들어, 3-5등급의 신경 독성과 같은 CRS 또는 신경 독성)의 위험에 대해 제1 확률 곡선이 생성되고 지속적인 반응 결과에 대해 제2 확률 곡선이 생성된다. 일부 구현예에서, 확률 곡선은 S자형 곡선으로 변환되거나 제공된다.
일부 구현예에서, 독성 (예를 들어, 3-5등급의 신경 독성과 같은 CRS 또는 신경 독성)의 추정된 확률 및/또는 반응 (예를 들어, 골수 반응)의 추정된 확률은 혈액과 같은, 생물학적 샘플에서 피크 CAR+ 세포 농도 (세포/㎕)와 상관관계가 있다. 일부 구현예에서, CAR+ 세포는 T 세포이거나, 예를 들어 CD3+ T 세포이거나 T 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, T 세포는 CD4+ 또는 CD8+ T 세포이다. 일부 구현예에서, 투여된 조성물은 CD4+ 및 CD8+ CAR+ T 세포를 포함하고 확률 곡선은 CD4+ 세포 및 CD8+ 세포 및/또는 CD3+ 세포에 대해 개별적으로 생성된다.
일부 구현예에서, 제공된 방법은 항원 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체 (CAR)와 같은 재조합 수용체로 조작된 세포의 투여량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 대상체에게 투약하는 방법을 포함하며, 투여량은 결정된 치료 범위 이내에 있는 피크 CAR+ 세포/㎕를 달성하기에 충분하고, 치료 범위는 반응 (예를 들어, 골수 반응) 및/또는 지속적인 반응 (예를 들어, 3개월에 반응) 및 독성 결과 (예를 들어, 3-5등급의 신경 독성과 같은 CRS 또는 신경 독성)의 추정된 확률에 기초하여 결정된다. 일부 구현예에서, 독성을 야기할 추정된 확률은 독성 확률 곡선 상에서 35% 이하, 30% 이하, 25% 이하, 20% 이하, 15% 이하, 10% 이하, 또는 5% 이하이다. 일부 구현예에서, 반응을 달성할 추정된 확률은 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 그 이상이다. 일부 구현예에서, 독성은 1등급 이상의 CRS와 같은 임의의 CRS, 또는 1등급 이상의 신경 독성과 같은 임의의 신경 독성이다. 일부 구현예에서, 중증 독성은 중증 CRS 또는 3등급 이상의 CRS 또는 중증 신경 독성 또는 3등급 이상의 신경 독성이다. 일부 경우에는, 반응은 골수 반응이다. 일부 구현예에서, 반응은 IgH 딥 시퀀싱을 사용하여 평가된다. 일부 구현예에서, 독성 결과는 3-5등급의 신경 독성과 같은, 중증 신경 독성 또는 3등급 이상의 신경 독성이다.
본 명세서에서 질병 또는 상태 (예를 들어, 종양 또는 암)를 가지는 대상체에게 세포의 투여량을 투여 및 하나 이상의 다양한 시점과 같은, 예를 들어 세포 치료제의 주입 후에 3일, 7일, 14일, 28일, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 1년, 2년 또는 그 이상에서 또는 대략 그 정도 또는 보다 큰 시점에서 피크 CAR+ 세포/㎕에 대하여 주입-후 대상체를 모니터링함으로써 투약하는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 피크 CAR+ 세포/㎕가 치료 범위, 독성 확률 곡선 및/또는 반응 확률 곡선 및/또는 지속적인 반응 확률 곡선의 결정된 형태와 같은 치료 범위 내에 있는 확률을 결정하거나 평가하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 피크 CAR+ 세포/㎕ 또는 AUC가 치료 범위 내에 있지 않다면, 방법은 추가로 생체 내에서 피크 CAR+ 세포 확장이 제공된 방법에 의해여 결정된 것과 같은, 치료 범위 이내에 있도록 하기 위하여 CAR+ 세포 확장을 향상시키거나 증대시키는 및/또는 CAR+ 세포 활성 및/또는 확장을 감소, 억제, 예방 및/또는 늦추는 화합물 또는 작용제를 투여하는 단계를 포함한다.
본 명세서에서 세포의 차선의 투여량을 투여함으로써 질병 또는 상태 (예를 들어, 종양 또는 암)를 가지는 대상체에게 투약하는 방법이 제공되고 투여량은 대상체의 결정된 치료 범위 내에서 피크 CAR+ 세포/㎕를 달성하기에 불충분하다. 일부 구현예에서, 방법은 추가로 생체 내에서 CAR+ 세포 확장이 제공된 방법에 의해여 결정된 것과 같은, 치료 범위 이내에 있도록 하기 위하여 CAR+ 세포 확장을 향상시키거나 증대시키는 화합물 또는 작용제를 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 방법은 피크 CD3+, CD4+ 및/또는 CD8+ CAR+ T 세포 농도 (세포/㎕) 및/또는 AUC, 예를 들어 피크 CD8+ CAR+ T 세포 농도에 대한 반응 및 독성 확률 곡선에 기초하여 세포의 제2투여량을 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 피크 CD3+, CD4+ 및/또는 CD8+ CAR+ T 세포 농도 (세포/㎕) 및/또는 AUC, 예를 들어 피크 CD8+ CAR+ T 세포 농도에 대한 반응 및 독성 확률 곡선에 기초하여 종양 미세 환경 (TME) 표적제를 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 방법은 보다 지속적인 반응 및/또는 완화를 달성하는 투여 범위를 선택할 수 있도록 한다. 또한 대상체에서 투여된 세포의 최대 (피크) 혈장 농도 (Cmax) 및 곡선 아래의 면적 (즉, 치료제 CAR+ T 세포의 혈장 농도 대비 시간을 플롯팅하여 생성된 곡선 아래의 영역)과 같은 약물동력학적 파라미터를 평가, 측정 또는 모니터링하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 그러한 평가는 투여된 세포가 치료 범위 또는 창 내에 있는지를 결정하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 평가는 예를 들어, 투여된 CAR+ T 세포의 확장, 증식 및/또는 활성을 조절할 수 있는 작용제를 투여함으로써, 요법을 조절, 변형 및/또는 변경, 추가적인 및/또는 변형된 투여량을 투여, 및/또는 대체적인 요법을 투여하기 위한 지표로서 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 따라서 치료제를 투여하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 그러한 평가는 요법의 진행을 모니터링 및/또는 조절된 요법의 효과를 평가하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 측정은 반응의 가능성 또는 지속적인 반응을 평가하는데 사용될 수 있다.
본 명세서에서 다른 파라미터, 환자의 속성, 종양 존재량 및/또는 염증 마커와 같은 바이오마커의 발현을 평가, 측정 또는 모니터링하는 방법이 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 평가는 세포 치료제의 투여 또는 이의 개시 전에 대상체로부터 수득된 샘플을 사용하여 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 평가는 투여된 세포들이 치료 범위 또는 창 이내에 있을 가능성이 높은지 또는 이와 상관관계가 있을 가능성이 높은지 또는 이와 연관되어 있는지 여부를 결정하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 평가는 예를 들어, 투여된 CAR+ T 세포의 확장, 증식 및/또는 활성을 조절할 수 있는 작용제를 투여함으로써, 요법을 조절, 변형 및/또는 변경, 추가적인 및/또는 변형된 투여량을 투여, 및/또는 대체적인 요법을 투여하기 위한 지표로서 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 따라서 치료제를 투여하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 그러한 평가는 요법의 진행을 모니터링 및/또는 조절된 요법의 효과를 평가하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 측정은 반응의 가능성 또는 지속적인 반응을 평가하는데 사용될 수 있다.
II. 독성 및 반응 확률 곡선
일부 구현예에서, 기재된 바와 같이 대상체의 집단으로부터 확률 곡선이 생성되고 독성 결과 (예를 들어, CRS 또는 신경 독성, 예를 들어 3-5등급의 신경 독성) 또는 반응 (예를 들어, 골수 반응), 및/또는 반응의 지속성 (예를 들어 3개월 반응)과 상관관계에 있다. 일부 구현예에서, 상기 기재한한 바와 같은 독성 결과 및 반응 결과에 관한 정보는 환자의 피크 세포 레벨 및/또는 농도, 또는 노출 (예를 들어, AUC)에 관해 수집된 데이터와 결합 및/또는 상관관계에 있다. 일부 구현예에서, 독성 결과 및 반응 결과에 관한 정보는 각각 세포 레벨 데이터 (예를 들어, CAR+ T 세포의 피크 수 또는 농도)와 상관관계에 있고, 독립적으로 평가되는 대상체 집단으로부터 수집된다. 일부 구현예에서, 예를 들어 독성 결과 데이터가 수집되어 CAR+ 세포 수로 평가되어 독성 확률 곡선을 생성한다. 경우에 따라 지속적인 반응 결과에 대한 데이터를 포함하여 반응 결과 데이터를 수집하고 CAR+ 세포 수로 평가하여 반응 확률 곡선 및/또는 지속적인 반응 확률 곡선을 생성한다.
일부 구현예에서, 상기에서 얻어진 독성 반응 및/또는 지속적인 반응 확률 곡선은 대상체의 투약 결정 또는 입양 치료를 알려주기 위하여, 병렬로 또는 대략 동시에 또는 실질적으로 동시에 평가되는 것과 같이 공동으로 평가될 수 있다.
일부 구현예에서, 독성 결과 및 반응 결과는 혈액에서 CAR+ T 세포의 수, 농도 및/또는 노출에 기초하여 반응의 추정된 곡선 및 독성을 나타낼 추정된 확률을 구축하는데 사용될 수 있다. 경우에 따라 반응을 달성할 추정된 확률은 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 그 이상이다. 경우에 따라 예를 들어 3 또는 6개월 지속적인 반응과 같은 지속적인 반응을 달성할 확률은 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 그 이상이다. 독성 확률 곡선 상에서 경우에 따라 독성을 야기하거나 유발할 확률은 35% 이하, 30% 이하, 25% 이하, 20% 이하, 15% 이하, 10% 이하 또는 5% 이하이다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 결정된 표적 치료 범위 또는 창 내에 있는 대상체에서 피크 CAR+ 세포 농도를 달성하기에 충분한 수 또는 용량의 세포를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 상기 방법으로 치료된 대다수의 대상체에서 또는 75% 이상과 같은, 상기 방법으로 치료된 대상체의 약 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이상에서 피크 CAR+ 세포 농도를 달성하기에 충분한 수 또는 투여량을 투여하는 단계를 포함한다. 제공된 방법에서, 치료제의 독성 (독성 결과) 및 효능 (지속적인 반응 결과를 포함하는 반응 결과)과 관련된 하나 이상의 치료 결과 또는 사건과 관련된 하나 이상의 치료 결과 또는 증상이 평가되고 제공된 방법에 따라 투약 결정이 이루어진다. 일부 구현예에서, 독성 결과 및 반응 결과에 관한 정보는 대상체의 피크 세포 레벨, 농도 및/또는 노출에 관해 수집된 데이터와 결합 및/또는 상관관계에 있다. 일부 구현예에서, 독성 결과 및 반응 결과에 관한 정보는 각각 세포 레벨 데이터와 상관관계에 있고, 독립적으로 평가되는 대상체 집단으로부터 수집된다. 일부 구현예에서, 예를 들어 독성 결과 데이터를 수집 및 평가하여 독성 확률 곡선을 구성하고 반응 결과 데이터를 수집 및 평가하여 반응 확률 곡선을 구성한다. 일부 구현예에서, 지속적인 반응 결과 데이터 (예를 들어, 3개월, 6개월, 9개월 또는 12개월에서의 지속적인 반응)가 수집되어 지속적인 반응 확률 곡선을 구성하도록 평가된다 .
일부 구현예에서, 독성 및 반응 확률 곡선은 대상체의 투약 결정 또는 입양 치료를 알려주기 위하여, 병렬로 또는 대략 동시에 또는 실질적으로 동시에 평가되는 것과 같이 공동으로 평가될 수 있다.
일부 구현예에서, 독성 결과 및 반응의 결과는 독성의 결과 및 반응 결과가 존재하는 시간에 모니터일된다. 그러한 결과가 나타날 수 있는 특정 시간은 특정 치료제에 의존하며, 의사 또는 임상의와 같은 숙련된 기술자에게 알려져 있거나 결정할 숙련된 기술자의 수준 이내에 있다. 일부 구현예에서, 독성 결과 또는 반응 결과가 평가되는 시점은 독성 또는 효능의 증상이 대상체에서 검출 가능한 기간이거나 무-반응 또는 독성과 연관된 부작용이 대상체에서 검출될 수 없는 시점 이내에 또는 대략 그 쯤에서 평가된다. 일부 구현예에서, 독성 결과 및/또는 반응 결과가 대상체에서 정점에 이르렀을 때와 비슷거나 실질적으로 비슷하다. 일부 구현예에서, 기간은 반응의 지속성, 예를 들어 세포의 제1투여 후 3, 6, 9 또는 12개월 후에 지속적인 반응을 평가하기 위해 요구되는 시간을 포함한다.
일부 구현예에서, 독성 결과 또는 반응 결과는 대상체에게 치료제의 제1투여량의 개시 후 약 120일 이내, 치료제의 제1투여량의 개시 후 약 90일 이내, 치료제의 제1투여량의 개시 후 약 60일 이내, 치료제의 제1투여량의 개시 후 약 30일 이내에 평가될 수 있다. 일부 구현예에서, 독성 결과 또는 반응 결과는 대상체에게 제1투여량의 개시 후 약 6일, 12일, 16일, 20일, 24일, 28일, 32일, 36일, 40일, 44일, 48일, 52일, 56일, 60일, 64일, 68일, 72일, 76일, 80일, 84일, 88일, 92일, 96일 또는 100일 이내에 평가될 수 있다.
일부 구현예에서, 독성 결과 또는 반응 결과는 치료제의 단일 투여량이 투여되는 그러한 시간에 존재하거나 평가될 수있다. 입양 세포 치료와 관련하여, 주어진 "투여량"의 투여는 단일 조성물로서의 주어진 양 또는 개수의 세포의 투여 및/또는 단일 투여 또는 연속 주입과 같은 단일 중단되지 않은 투여를 포함하며, 또한 3 일 이하의 특정 기간 동안 여러 개의 개별 조성물 또는 주입에 제공되는 분할 투여량으로서의 주어진 양 또는 세포 수의 투여를 포함한다. 따라서, 일부 상황에서, 제1투여량은 단일 시점에서 주어지거나 개시되는 특정 세포 수의 단일 또는 연속 투여이다. 그러나 일부 상황에서는 제1투여량을 3일 동안 또는 2일 동안 하루에 한 번 또는 하루 동안 여러번 주입하는 것과 같이, 3일 이하의 기간에 걸쳐 여러번 주사 또는 주입으로 투여한다.
용어 "분할 투여량 (split dose)"은 분할되어 1일 이상 투여되는 양을 의미한다. 이러한 유형의 투여는 본 방법에 포함되며 단일 투여량으로 간주된다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 "제1투여량"은 어떤 경우에는 한 번의 투여량일 수 있거나 하나 이상의 반복 또는 추가적인 투여량의 후일 수있는 주어진 투여량의 타이밍을 기재하는데 사용된다. 이 용어는 반드시 대상체가 동일하거나 실질적으로 동일한 치료제의 투여량을 받지 않은 경우에도 대상체가 한 번도 치료제의 투여량을 받지 않았다는 것을 의미하지는 않는다.
일부 구현예에서, 독성 결과 또는 반응 결과는 치료제의 투여의 제1사이클 이후, 치료제의 투여의 제2사이클 이후, 치료제의 투여의 제3사이클 이후, 또는 치료제의 투여의 제4사이클 이후인 기간에 존재하고 및/또는 평가 또는 모니터링될 수 있다. 일부 구현예에서, 투여 사이클은 연속 투여에 걸쳐 반복되는 투여 일정의 반복된 일정일 수 있다. 일부 구현예에서, 투여 일정은 매일, 격일로, 또는 1주, 2주, 3주 또는 4주 (예를 들어, 28일)에 대하여 일주일에 한 번일 수 있다.
일부 구현예에서, 독성 결과 및 반응 결과는 독성 결과와 관련된 하나 이상의 증상 또는 사건 및 반응 결과와 관련된 하나 이상의 증상 또는 사건을 모니터링하여 평가될 수 있다. 일부 구현예에서, 질병 또는 상태는 종양 또는 암이다.
A. 독성 결과
일부 구현예에서, 치료제의 투여 대상체의 독성 결과 (예를 들어, CAR-T 세포)를 평가하거나 모니터링 할 수있다. 일부 구현예에서, 독성 결과는 사이토카인 방출 증후군 (CRS), 중증 CRS (sCRS), 대식세포 활성 증후군, 종양 용해 증후군, 3일 이상 동안 적어도 또는 약 38℃의 발열 및 적어도 또는 약 20 mg/dL의 C-반응성 단백질 (CRP)의 혈장 레벨과 같은 독성 사건, 신경 독성 및/또는 중증 신경 독성이거나 이와 관련된다. 일부 구현예에서, 독성 결과는 존재 또는 부재가 대상체의 특정 정도, 중증도 또는 독성 레벨을 나타낼 수 있는 징후, 증상, 특정 징후 및 증상 및/또는 양 또는 정도이다. 치료제 (예를 들어, CAR-T 세포)의 원하지 않는 독성 결과와 관련된 특정 징후, 증상 및/또는 양 또는 정도를 특정하거나 결정하는 것은 숙련된 기술자의 수준 이내에 있다.
일부 구현예에서, 독성 결과는 독성 사건과 관련된 지표이다. 일부 구현예에서, 독성 결과는 하나 이상의 바이오마커의 존재 또는 부재 또는 하나 이상의 바이오마커의 레벨의 부재의 존재이다. 일부 구현예에서, 바이오마커는 사이토카인- 방출 증후군 (CRS), 중증 CRS 또는 CRS-관련 결과를 나타내는 혈청 또는 다른 체액 또는 조직에 존재하는 분자이다. 일부 구현예에서, 바이오마커는 신경 독성 또는 중증의 신경 독성을 나타내는 혈청 또는 다른 체액 또는 조직에 존재하는 분자이다.
일부 구현예에서, 대상체는 독성 사건, CRS-관련 결과와 같은, 예를 들어 독성의 CRS 또는 다른 생화학적 지표의 혈청 레벨이 치료제의 제1투여량의 투여 직전에 지표의 혈청 레벨과 같은, 기준치 또는 전-처리 레벨의 약 10배 이상, 약 15배 이상, 약 20배 이상, 약 25배 이상, 약 50배 이상, 약 75배 이상, 약 100배 이상, 약 125배 이상, 약 150배 이상, 약 200배 이상, 또는 약 250배 이상인 경우에 독성 또는 독성 결과를 나타낸다.
일부 측면에서, 독성 결과는 사이토카인 방출 증후군 (CRS) 또는 중증 CRS (sCRS)이거나 이와 연관되거나 이를 나타낸다. CRS, 예를 들어 sCRS는 일부 경우에서 입양 T 세포 치료 및 다른 생물학적 제제의 대상체에 대한 투여 후에 발생할 수 있다. Davila et al., Sci Transl Med 6, 224ra25 (2014); Brentjens et al., Sci. Transl. Med. 5, 177ra38 (2013); Grupp et al., N. Engl. J. Med. 368, 1509-1518 (2013); 및 Kochenderfer et al., Blood 119, 2709-2720 (2012); Xu et al., Cancer Letters 343 (2014) 172-78를 참조한다.
전형적으로, CRS는, 예를 들어 T 세포, B 세포, NK 세포, 단핵세포 및/또는 대식세포에 의해 매개되는 과민 전신성 면역 반응에 의해 야기된다. 이러한 세포는 사이토카인 및 케모카인과 같은 많은 양의 염증성 매대 물질(mediator)을 방출할 수도 있다. 사이토카인은 급성 염증 반응을 일으키거나 미세 혈관 누출, 심부전 또는 사망을 유발할 수 있는 내피 기관 손상을 유도할 수도 있다. 중증의, 생명을 위협하는 CRS는 폐 침윤 및 폐 손상, 신부전 또는 파종성(disseminated) 혈관 내 응고를 유발할 수 있다. 다른 중증의 생명을 위협하는 독성에는 심장 독성, 호흡 곤란, 신경 독성 및/또는 간부전이 포함될 수 있다.
CAR-발현 세포를 투여하는 상황에서, CRS는 보통 CAR을 발현하는 세포의 주입 6-20일 후 발생한다. Xu et al., Cancer Letters 343 (2014) 172-78를 참조한다. 경우에 따라 CRS는 CAR T 세포 주입 6일 이하 또는 20일 이상 후에 발생한다. CRS 발병률 및 시기는 주입 당시의 기준치 사이토카인 레벨 또는 종양 존재량과 관련될 수도 있다. 일반적으로 CRS는 인터페론 (IFN)-γ, 종양 괴사 인자 (TNF)-α 및/또는 인터루킨 (IL)-2의 상승된 혈청 농도 상승를 포함한다. CRS에서 빠르게 유도될 수도 있는 다른 사이토카인은 IL-1β, IL-6, IL-8 및 IL-10이다.
CRS와 연관된 예시적인 징후 또는 증상은 열, 경직, 오한, 저혈압, 호흡 곤란, 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS), 아스파르테이트 아미노전달효소(aspartate transaminas, AST)/알라닌 아미노전달효소(alanine transaminase, ALT) 상승, 신장 장애, 심장 장애, 저산소증, 신경 장애 및 사망을 포함한다. 신경학적 합병증으로는 정신 착란, 발작 같은 활동, 혼란, 단어 찾기 어려움, 실어증, 및/또는 둔화되는 것을 포함한다. 다른 CRS 관련 징후 또는 결과는 피로, 메스꺼움, 두통, 발작, 빈맥, 근육통, 발진, 급성 혈관 누출 증후군, 간 기능 손상 및 신부전을 포함한다. 일부 측면에서, CRS는 혈청-페리틴, d-이합체, 아미노전이효소(aminotransferase), 젖산 탈수소효소, 트리글리세라이드와 같은 하나 이상의 요소의 증가 또는 저섬유소원혈증(hypofibrinogenemia) 또는 간비종대(hepatosplenomegaly)와 연관되어 있다.
일부 구현예에서, CRS와 관련된 징후 또는 증상은 다음 중에서 하나 이상을 포함한다: 2일 이상, 예를 들어 3일 이상, 예를 들어, 4일 이상 또는 적어도 3일 연속적인 일 동안의, 지속적인 발열, 예를 들어 특정된 온도, 예를 들어 약 38℃ 이상의 발열; 약 38℃ 이상의 발열; 사이토카인 (예를 들어, IFNγ 또는 IL-6)의 상승; 및/또는 고혈압 (예를 들어, 적어도 하나의 정맥 내 혈관 작용성 압력에 의해 측정된 것과 같은)과 같은, 적어도 하나의 독성의 임상 징후; 저산소증 (예를 들어, 약 90% 이하의 혈장 산소 (PO2) 레벨); 및/또는 하나 이상의 신경 장애 (정신 상태 변화, 혼란 및 발작 포함).
예시적인 CRS-관련 결과는 사이토카인 및 케모카인 및 CRS와 연관된 다른 요인을 포함하는, 하나 이상의 인자의 증가된 또는 높은 혈청 레벨을 포함한다. 예시적인 결과는 하나 이상의 그러한 인자의 합성 또는 분비의 증가를 추가로 포함한다. 그러한 합성 또는 분비는 T 세포 또는 타고난 면역 세포 또는 B 세포와 같은 T 세포와 상호 작용하는 세포에 의한 것일 수 있다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 염증 마커, 예를 들어, 사이토카인 또는 케모카인은 CAR 처리 전, 동안에 또는 후에 모니터링된다. 일부 측면에서, 하나 이상의 사이토카인 또는 케모카인은 IFN-γ, TNF-α, IL-2, IL-1β, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, sIL-2Rα, 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자 (GM-CSF) 또는 대식세포 염증 단백질 (MIP)을 포함한다. 일부 구현예에서, IFN-γ, TNF-α 및 IL-6이 모니터링된다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 바이오마커의 존재는 CRS 또는 신경 독성과 같은 독성 사건의 등급, 중증도 또는 정도를 나타낸다. 일부 구현예에서, 독성 결과는 CRS 또는 신경 독성의 특정 등급, 중증도 또는 정도와 같은 독성 사건의 특정 등급, 중증도 또는 정도이다. 일부 구현예에서, 특정 등급, 중증도 또는 범위에 관한 독성 사건의 존재는 투여량-제한 독성일 수 있다. 일부 구현예에서, 독성 사건의 부재 또는 특정 등급, 중증도 또는 범위 이하의 독성 사건의 존재는 투여량-제한 독성의 부재를 나타낼 수 있다.
어느 환자가 sCRS를 발병할 위험이 더 높을지를 예측하기 위해 CRS 발병과 관련이 있는 것처럼 보이는 CRS 기준이 개발되었다 (Davilla et al. Science translational medicine. 2014;6(224):224ra25를 참조한다). 요소로는 발열, 저산소증, 저혈압, 신경학적 변화, 염증성 사이토카인의 증가된 혈청 레벨을 포함하고, 치료-유도된 상승은 전처리 종양 존재량 및 sCRS 증상 모두와 높은 상관관계에 있다. CRS의 진단 및 관리에 관한 다른 가이드라인은 공지되어 있다 (예를 들어, Lee et al, Blood. 2014;124(2):188-95를 참조한다). 일부 구현예에서, CRS 등급을 반영하는 기준은 아래의 표 1에 상세하게 기재되어 있다.
Figure pct00001
일부 구현예에서, 독성 결과는 중증 CRS이다. 일부 구현예에서, 독성 결과는 중증 CRS의 부재 (예를 들어, 보통 또는 가벼운 CRS)이다. 일부 구현예에서, 중증 CRS는 표 1에 나와있는 바와 같이, 3등급 이상의 CRS를 포함한다. 일부 구현예에서, 중증 CRS는 2, 3, 4 또는 5등급의 CRS와 같은, 2등급 이상의 CRS를 포함한다.
일부 구현예에서, 독성 결과, 예를 들어 CRS-관련된 결과의 레벨, 예를 들어 CRS의 지표의 혈청 레벨은 ELISA로 측정된다. 일부 구현예에서, 발열 및/또는 C-반응성 단백질 (CRP)의 레벨은 측정될 수 있다. 일부 구현예에서, 발열 및 CRP ≥ 15 mg/dL를 가지는 대상체는 중증 CRS를 발병할 고-위험군으로 간주될 수도 있다. 일부 구현예에서, CRS-관련 혈청 요소 또는 CRS-관련 결과는 Flt-3L, 프렉탈카인(fracktalkine), 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자 (GM-CSF), 인터루킨-1 beta (IL-1β), IL-2, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, 인터페론 감마 (IFN-γ), 대식세포 염증성 단백질 (MIP)-1, MIP-1, sIL-2Rα, 또는 종양 괴사 인자 알파 (TNFα)를 포함하는, 염증성 사이토카인 및/또는 케모카인의 레벨 및/또는 농도에서의 증가를 포함한다. CRP의 초기 및 쉽게 측정할 수 있는 위험 요인이 되는 것 외에도, CRP는 세포 확장을 위한 마커이다. 일부 구현예에서, 15 mg/dL 이상과 같이, 높은 CRP 레벨을 갖는 것으로 측정된 대상체는 CRS를 갖는다. 일부 구현예에서, 높은 수준의 CRP를 갖는 것으로 측정된 대상체는 CRS를 갖지 않는다. 일부 구현예에서, CRS의 척도는 CRP의 척도 및 CRS를 나타내는 다른 척도를 포함한다.
일부 측면에서, 독성 결과는 신경 독성이거나 신경 독성과 관련된다. 일부 구현예에서, 신경 독성의 임상적인 위험과 관련된 징후 또는 증상은 혼란, 정신 착란, 표현 실어증, 망상, 근 위축, 혼수, 변경된 정신 상태, 경련, 발작과 같은 활동, 발작 (선택적으로 뇌파 검사 (EEG)에 의해 확인된), 베타 아밀로이드 (Aβ)의 증가된 레벨, 글루타메이트의 증가된 레벨 및 증가된 산소 라디칼 레벨을 포함한다. 일부 구현예에서, 신경 독성은 중증도에 기초하여 등급화된다 (예를 들어, 1-5등급 단위를 사용함 (Guido Cavaletti & Paola Marmiroli Nature Reviews Neurology 6, 657-666 (December 2010); National Cancer Institute―Common Toxicity Criteria version 4.03 (NCI-CTCAE v4.03)를 참조한다). 일부 구현예에서, 대상체는 만약, 투여 후에, 대상체는 다음 중에서 자기-관리를 제한하는 증상 (예를 들어, 목욕, 옷을 입고 벗는 것, 먹이 주는 것, 화장실을 사용하는 것, 약을 복용하는 것)을 나타낸다면 세포 치료제 또는 이의 세포의 투여량의 투여에 반응하여 또는 2차적인 "중증 신경 독성"을 발병할 것으로 간주된다: 1) 말초 운동 신경의 염증 또는 퇴화를 포함하는 말초 운동 신경병의 증상; 2) 말초 감각 신경의 염증 또는 변성을 포함하는 말초 감각 신경 병증의 증상, 감각 지각의 왜곡과 같은 감각 이상 및 불쾌감, 신경 또는 신경 그룹을 통한 강렬한 통증과 같은 신경통, 및/또는 자극이 없을 때 따끔거림, 마비, 압력, 냉기 및 온기의 비정상적인 피부 감각을 유발하는 감각 뉴런의 기능 장애. 일부 구현예에서, 중증 신경 독성은 표 2에 나와있는 바와 같이, 3등급 이상의 신경 독성을 포함한다. 일부 구현예에서, 중증 신경 독성은 2, 3, 4 또는 5등급의 신경 독성과 같은, 2등급 이상의 신경 독성을 포함한다.
Figure pct00002
일부 구현예에서, 독성 결과는 투여량-제한 독성이다. 일부 구현예에서, 독성 결과는 투여량-제한 독성이다. 일부 구현예에서, 투여량-제한 독성 (DLT)는 특정 독성을 평가하기 위하여 알려진 또는 게시된 National Cancer Institute (NCI) Common Terminology Criteria for Adverse Events (CTCAE) version 4.0를 포함하는 상기 기재된 임의의 것과 같은, 임의의 가이드라인에 의해 평가된 바와 같이 임의의 3등급 이상 독성으로 한정된다.
B. 반응 결과
일부 구현예에서, 치료제의 투여에 대한 대상체의 반응 결과는 모니터링되거나 평가될 수 있다. 일부 구현예에서, 반응 결과는 반응하지 않는다. 일부 구현예에서, 반응 결과는 부분적인 반응 (PR)이다. 일부 구현예에서, 반응 결과는 완전한 반응 (CR)이다. 일부 구현예에서, 반응 결과는 대상체에서 질병 존재량을 모니터링함으로써 평가된다. 일부 구현예에서, 무반응, 부분적인 반응 또는 임상적인 또는 완전한 반응의 존재는 평가될 수 있다.
일부 구현예에서, 부분 반응 (PR) 또는 완전 반응 (CR)은 치료제가 대상체의 질병 또는 상태의 확장이나 존재량을 감소 또는 방지한 것이다. 예를 들어, 질병 또는 상태가 종양인 경우, 감소된 질병 존재량은 종양 크기, 규모, 전이, 골수 또는 분자적으로 검출 가능한 암에서의 아세포(blast)의 백분율 및/또는 치료제 (예를 들어, CAR T 세포)로 치료 이전과 비교하여 예후 또는 생존 또는 종양 존재량과 관련된 다른 증상 개선을 나타내거나 존재한다.
일부 구현예에서, 투여는 다른 요법에 내성을 갖는 대상체에도 불구하고 대상체를 효과적으로 치료한다. 일부 구현예에서, 적어도 35%, 적어도 40% 또는 그 완전 반응 (CR)을 달성하는 방법에 있어서, 처리 대상의 적어도 50%; 및/또는 상기 방법에 따라 치료되는 피검자의 50% 이상, 60% 이상 또는 70% 이상이 객관적 반응률(ORR)을 달성할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따라 치료된, 대상체의 적어도 약 50%에서, 대상체의 적어도 약 60%에서, 대상체의 적어도 약 70%에서, 대상체의 적어도 약 80%에서 또는 대상체의 적어도 약 90%에서 CR을 달성 및/또는 객관적인 반응 (OR)을 달성한다. 일부 구현예에서, 효과적인 치료에 대한 평가 기준은 전체적인 반응 속도 또는 객관적인 반응 속도 (ORR), 완전 반응 (CR), 반응의 지속기간 (DOR), 무진행 생존율 (PFS), 및/또는 전체 생존율 (OS)를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 방법에 따라서 치료된 대상체의 적어도 40% 또는 적어도 50%는 완전한 반응 (CR)을 달성하고, 약 3개월, 6개월 또는 12개월 이상 또는 13개월 이상 또는 대략 15개월의 무진행 생존 (PFS) 및/또는 전체 생존 (OS)을 나타내고; 및/또는 대상체는 치료 후 적어도 6, 12, 18개월 이상 동안 PFS 또는 OS를 나타낸다.
일부 측면에서, NHL를 가지는 대상체와 같은, 대상체에서 반응률은 루가노 기준 (Lugano criteria)에 기초한다. (Cheson et al., (2014) JCO 32(27):3059-3067; Johnson et al., (2015) Radiology 2:323-338; Cheson, B.D. (2015) Chin Clin Oncol 4(1):5). 일부 측면에서, 반응 평가는 임의의 임상, 혈액, 및/또는 분자 방법을 활용한다. 루가노 기준을 사용하여 평가된 반응은 양전자 방출 단층 촬영 (PET)-컴퓨터 단층 촬영 (CT) 및/또는 CT를 영상 진단에 적절하게 사용하는 것을 포함한다. PET-CT 평가는 플루오로데옥시글루코스 (FDG)-친화(avid) 림프종에서 FDG 흡수를 평가하기 위해 FDG의 사용을 추가로 포함할 수 있다. PET-CT가 FDG-친화 조직학에서 반응을 평가하는데 사용될 수 있는 일부 측면에서, 5-점 척도가 사용될 수도 있다. 일부 측면에서 5-점 척도는 다음 기준으로 구성된다: 1, 배경 위에 흡수되지 않음. 2, 흡수 ≤ 종격; 3, 흡수 > 종격 ≤ 간; 4, 중등도의 흡수 > 간; 5, 간보다 현저하게 더 높은 흡수 및/또는 새로운 병변; X, 림프종과 관련이 있을것 같지 않은 흡수의 새로운 영역.
일부 측면에서, 루가노 기준을 사용하여 기술된 바와 같이, 치료 종료시의 완전한 반응은 다양한 측정 가능한 부위에서 완전한 대사 반응 및 완전한 방사선 반응을 포함한다. 일부 측면에서, 이들 부위에는 림프절 및 외흉부 부위가 포함되며, 여기서 CR은 PET-CT가 사용될 때 5-점 척도상의 잔류 질량을 갖거나 갖지 않는 1, 2 또는 3의 점수로 기술된다. 일부 측면에서, 생리학적 흡수가 높거나 비장 또는 골수 내에서 활성화된 (예를 들어, 화학 요법 또는 골수 콜로니-자극 인자를 갖는) 왈데이어 고리(Waldeyer's ring) 또는 엑스트라노달 부위에서, 흡수는 정상 종격 및/또는 간보다 클 수 있다. 이 상황에서, 조직이 높은 생리학적 흡수를 가진다 해도, 초기 관여 부위의 흡수가 주변의 정상 조직보다 크지 않다면 완전한 대사 반응이 추정될 수 있다. 어떤 측면에서는 CT를 사용하여 림프절에서 반응을 평가하는데 이 경우 CR은 림프절 외 병변 부위가 아닌 것으로 설명되고 표적 림프절/림프절 종괴는 병변의 최대 횡방향 직경(LDi) ≤ 1.5 cm로 퇴행하여야 한다. 또 다른 평가 부위에는 골수가 포함되는데 여기서 PET-CT에 기초한 평가는 골수에서 FDG-친화 질병의 증거가 부족하다는 것을 나타내야 하며, CT에 기초한 평가는 불확실한 경우 IHC 음성이어야하는 정상 형태를 나타내야 한다. 추가 부위는 정상으로 회귀해야 하는 장기 확대 평가를 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 측정되지 않은 병변 및 새로운 병변이 평가되며, CR의 경우 부재하여야 한다 (Cheson et al., (2014) JCO 32(27):3059-3067; Johnson et al., (2015) Radiology 2:323-338; Cheson, B.D. (2015) Chin Clin Oncol 4(1):5).
일부 측면에서, 루가노(Lugano) 기준을 사용하여 기술되는 부분 반응 (PR)은 다양한 측정 가능한 위치에서 부분적인 대사 반응 및/또는 방사선학적 반응을 포함한다. 일부 측면에서, 이들 위치는 림프절 및 림프 외 위치를 포함하며, 여기서 PR은 PET-CT가 사용되는 경우, 기준치 및 임의의 크기의 잔류 매스(들)와 비교하여 감소 된 흡수를 갖는 4 또는 5의 점수로 기재된다. 중반에, 그러한 발견은 질병에 반응하는 것을 나타낸다. 치료의 종결시, 그러한 결과는 질병 잔류를 나타낼 수 있다. 일부 측면에서, 반응은 CT를 사용하여 림프절에서 평가되며, 여기서 PR은 최대 6개의 표적 측정 가능 결절 및 결절외 위치의 SPD가 ≥ 50% 감소하는 것으로 기술된다. 병변이 너무 작아서 CT로 측정할 수 없으면 기본 값으로 5mm × 5mm가 할당되고; 병변이 더 이상 보이지 않으면 그 값은 0 mm x 0 mm이며; > 5mm × 5mm이지만 정상보다 작은 결절의 경우에는, 실측이 계산에 사용된다. 추가적인 평가 위치는 골수를 포함하는데, 여기서 PET-CT 기반 평가는 정상 골수에서의 흡수보다 높지만 기준치와 비교하여 감소된 잔류 흡수를 나타내야 한다 (화학요법으로부터의 반응 변화와 일치하는 확산 흡수는 허용됨). 일부 측면에서, 결절 반응의 맥락에서 골수에 지속적인 국소적 변화가 있다면, MRI 또는 생검, 또는 인터벌 스캔을 이용한 추가적인 평가가 고려되어야 한다. 일부 측면에서, 추가적인 위치는 비대 기관의 평가를 포함할 수 있는데, 여기서 비장은 길이에 있어서 > 50% 정상 이상으로 퇴행되어야 한다. 일부 측면에서, 비측정 병변 및 새로운 병변이 평가되는데, PR의 경우라면 이는 부재/정상, 퇴행되어야 하고, 증가는 없어야 한다. 무반응/안정적 질병 (SD) 또는 진행성 질병 (PD) 또한 PET-CT 및/또는 CT 기반 평가를 이용하여 측정될 수 있다. ([Cheson et al., (2014) JCO 32(27):3059-3067]; [Johnson et al., (2015) Radiology 2:323-338]; [Cheson, B.D. (2015) Chin Clin Oncol 4(1):5]).
일부 측면에서, 무-진행 생존 (PFS)은 질병, 예를 들어 암의 치료 중 또는 그 후에, 대상체가 그 질병을 앓고 있으나 더 악화되지는 않는 시간의 길이로서 설명된다. 일부 측면에서 객관적 반응 (OR)은 측정 가능한 반응으로 설명된다. 일부 측면에서 객관적 반응률 (ORR)은 CR 또는 PR을 달성한 환자의 분율로 설명된다. 일부 측면에서 총 생존율 (OS)은, 진단 날짜나 질병, 예를 들어 암에 대한 치료 개시 중 어느 하나로부터 상기 질병으로 진단된 대상체가 여전히 생존하는 시간의 길이로서 설명된다. 일부 측면에서, 무-사건 생존 (EFS)은 암 치료가 종료된 후, 대상체가, 상기 치료가 방해되거나 지체되려 하였던 사건 또는 특정 합병증 없이 남아있는 시간의 길이로서 설명된다. 이러한 사건은 암이 회귀하거나 특정한 증상이 개시되는 것을 포함할 수 있는데, 예를 들어 뼈까지 퍼진 암으로부터의 뼈 통증이나 사망이다.
반응 지속시간 (DOR)의 측정에는 종양 반응의 기록부터 질병 진행까지의 시간을 포함한다. 일부 구현예에서, 반응 평가를 위한 파라미터는 지속적인 반응, 예를 들어 요법 개시 다음에 그것이 관찰된 후, 또는 유전적으로 조작된 세포의 개시 다음에 부위 또는 병변의 치료 및/또는 파괴 후 일정 시간 이후 지속되는 반응을 포함한다. 일부 구현예에서, 지속적인 반응은 요법 개시 후 또는 상기 유전적으로 조작된 세포의 투여 개시 다음에 부위 또는 병변의 치료 및/또는 파괴 후 대략 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18 또는 24개월에 반응률로서 표시된다. 일부 구현예에서, 상기 반응은 3개월 이상 또는 6개월 이상 지속 가능하다. 일부 구현예에서, 지속적인 반응은 치료의 투여 3개월 후에 측정된 반응, 예를 들어, 3개월 반응이다. 일부 구현예에서, 지속적인 반응은 치료의 투여 6개월 후에 측정된 반응, 예를 들어, 6개월 반응이다.
일부 측면에서, RECIST 기준은 객관적 종양 반응을 결정하는데 사용되며; 일부 측면에서, 고형 종양에서의 반응 결정에 사용된다. (Eisenhauer et al., European Journal of Cancer 45 (2009) 228-247). 일부 측면에서, RECIST 기준은 표적 병변에 대한 객관적 종양 반응을 결정하는데 사용된다. 어떤 면에서는, RECIST 기준을 사용하여 결정된 완전한 반응은 모든 표적 병변의 소실로 설명되며 병리학적 림프절 (표적이든 비-표적이든)은 짧은 축에서 <10 mm로 감소해야 한다. 다른 측면에서, RECIST 기준을 사용하여 결정된 부분 반응은, 기준값 직경들의 합계를 레퍼런스로 하여, 표적 병변 직경들의 합계가 적어도 30% 감소하는 것으로 설명된다. 다른 측면에서, 진행성 질병 (PD)은 연구중인 최소 합계 (이는, 그것이 연구중인 가장 작은 것이라면 기준값 합계를 포함한다)를 레퍼런스로 하여, 표적 병변 직경들의 합계가 적어도 20% 증가하는 것으로 설명된다. 20%의 상대적 증가에 더하여, 그 합계는 적어도 5 mm의 절대적 증가를 입증해야 한다 (일부 측면에서, 하나 이상의 새로운 병변의 출현 또한 진행으로 간주된다). 다른 측면에서, 안정한 질병 (SD)은, 연구 중인 직경들의 가장 작은 합계를 레퍼런스로 하여, PR로 평가될 만큼 충분히 수축하지도, PD로 평가될 만큼 충분히 증가하지도 않은 것으로 설명된다.
일부 구현예에서, 질병 또는 상태는 종양이고 질병 존재량에서의 감소는 종양 크기의 감소이다. 일부 구현예에서, 질병 존재량 감소는 대상체의 질병 세포 또는 이의 체액 또는 기관 또는 조직의 양 또는 수, 종양의 질량 또는 부피, 또는 전이의 정도 또는 범위와 같은, 하나 이상의 요소의 감소에 의해 나타난다. 일부 구현예에서, 질병 존재량, 예를 들어 종양 존재량은 형태학적 질병 및/또는 최소 잔류 질병의 정도에 대하여 평가 또는 모니터링될 수 있다.
일부 구현예에서, 대상체에서 질병 또는 상태의 존재량은 검출, 평가 또는 측정된다. 일부 측면에서 질병 존재량이 대상체에서, 또는 기관, 조직 또는 혈액 또는 혈청과 같은, 대상체의 체액에서, 질병 또는 질병 관련 세포 예를 들어, 종양 세포의 수를 검출함으로써 검출될 수 있다. 일부 구현예에서, 질병 존재량, 종양 존재량은 고체 종양의 질량 및/또는 전이의 수 또는 정도를 측정함으로써 평가된다. 일부 측면에서, 대상체의 생촌율, 특정 기간 이내의 생존, 생존 범위, 무사건 또는 무증상 생존의 존재 또는 기간, 도는 무-재발 생존이 평가된다. 일부 구현예에서, 질병 또는 상태의 임의의 증상이 평가된다. 일부 구현예에서, 질병 또는 상태 존재량의 측정은 구체화된다.
일부 구현예에서, 질병 존재량은 대상체에서 또는 종양 또는 예를 들어 전이가 나타나는 다른 위치의 기관 또는 조직과 같은, 대상체의 기관, 조직 또는 체액에서 질병 세포의 총 수를 포함한다. 예를 들어, 종양 세포는 특정 혈액 악성 종양의 상황에서 혈액 또는 골수에서 검출 및/또는 정량화될 수 있다. 질병 존재량은 일부 구현예에서, 종양의 질량, 전이의 수 또는 정도 및/또는 골수에 존재하는 아세포의 백분율을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 대상체는 백혈병이 있다. 질병 존재량의 정도는 혈액 또는 골수의 잔류 백혈병을 평가하여 결정될 수 있다.
일부 측면에서, 예를 들어 CLL을 앓고 있는 대상체와 같은 대상체의 반응률은 만성 림프성 백혈병에 대한 국제 워크샵 (IWCLL) 반응 기준에 기초한다 (Hallek, et al., Blood 2008, Jun 15; 111 (12) : 5446-5456). 일부 측면에서, 이러한 기준은 다음과 같이 기술된다: 완전 관해 (CR), 이는 일부 측면에서 면역표현형 검사에 의한 말초 혈액 클론 림프구의 부재, 림프선염의 부재, 간 비대증 또는 비장 비대증의 부재, 구성적 증상의 부재 및 만족스러운 혈구 수를 요구하고; 불완전 골수 회복을 동반하는 완전 관해 (CRi), 이는 일부 측면에서 상기 CR과 같이 설명되지만 정상적인 혈구 수를 갖지 못하며; 부분 관해 (PR), 이는 일부 측면에서 말초 혈액 수에서의 개선과 함께, 림프구 수 ≥50% 저하, 림프선염 ≥ 50% 감소 또는 간이나 비장에서의 ≥ 50% 크기 감소로서 설명되고; 진행 질병 (PD), 이는 일부 측면에서 > 5 x109/L로 림프구 수 ≥ 50% 증가, 림프선염의 ≥ 50% 증가, 간 또는 비장 크기, 리히터 변이 또는 CLL에서 기인한 새로운 혈구감소증의 ≥ 50% 증가로서 설명되고; 안정 질병, 이는 일부 측면에서 CR, CRi, PR 또는 PD에 대한 기준을 충족시키지 못하는 것으로 설명된다.
일부 구현예에서, 세포 투여량의 투여 1개월 내에, 대상체의 림프절이 크기에 있어서 20 mm 이하 또는 10 mm 이하 또는 대략 그 정도이면, 상기 대상체는 CR 또는 OR을 나타낸다.
일부 구현예에서, CLL의 지수 복제는 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 골수에서 (또는 대상체들 중 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 이상 또는 그 이상의 골수에서) 검출되지 않는다. 일부 구현예에서, CLL의 지수 복제는 IgH 딥 시퀀싱에 의해 평가된다. 일부 구현예에서, 지수 복제는, 세포를 투여한 다음 (약) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12, 18 또는 24개월의 시점에 또는 적어도 (약) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12, 18 또는 24개월의 시점에 검출되지 않는다.
일부 구현예에서, 치료제 치료 이전의 골수에서 아세포의 백분율과 비교하여 골수에서 아세포의 백분율에 감소가 있는 경우 반응 결과가 나타난다. 일부 구현예에서, 치료제 치료 이전의 골수에서 아세포의 백분율과 비교하여 골수에서 아세포의 수 또는 백분율의 적어도 (약) 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 그 이상의 질병 또는 감소가 있는 경우에 질병 존재량의 감소가 나타난다.
일부 구현예에서, 대상체가 형태학적 질병을 나타내지 않거나 (비-형태학적 질병) 또는 실질적인 형태학적 질병을 나타내지 않는 경우에 대상체는 반응을 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체는, 예를 들어 광학 현미경에 의해 검출되는 바, 골수에 5% 이상의 아세포가 존재하는 경우 형태학적 질병을 나타낸다. 일부 구현예에 서, 골수에 5% 미만의 아세포가 존재한다면, 대상체는 완전한 또는 임상적 관해를 나타낸다.
일부 구현예에서, 대상체는 치료 이전에 형태학적 질병을 나타내는 경우에 감소된 또는 줄어든 질병 존재량을 나타내고 치료 후 분자 질병 (예를 들어, 유세포 분석기 또는 정량적인 PCR에 의해 검출 가능한 것과 같은, 분자적으로 검출 가능한 최소 잔류 질병 (MRD))을 갖거나 이를 갖지 않는 완전한 관해 (예를 들어, 골수에서 5% 이하의 아세포)를 나타낸다. 일부 구현예에서 대상체는 치료 이전에 분자 질병을 나타내고 치료 후 분자 질병을 나타내지 않는 경우에 감소된 또는 줄어든 질병 존재량을 나타낸다.
일부 구현예에서, 대상체는 완전한 관해를 나타낼 수 있지만, (광학 현미경 기법에 의하여) 형태학적으로 검출할 수 없는 적은 분률의 잔류 백혈병 세포가 존재한다. 대상체가 골수에서 5% 미만의 아세포를 나타내고 분자적으로 검출 가능한 암을 나타내는 경우 대상체는 최소 잔류 질병 (MRD)을 나타내는 것이라고 일컬어진다. 일부 구현예에서, 분자적으로 검출 가능한 암은 소수의 세포를 민감하게 검출하게 하는 다양한 분자적 기법 중 임의의 것을 사용하여 평가될 수 있다. 일부 측면에서, 그러한 기법은 독특한 Ig/T-세포 수용체 유전자 재배열 또는 염색체 전위에 의해 생성된 융합 된 전사체를 결정할 수 있는 PCR 분석을 포함한다. 일부 구현예에서, 유세포 분석법은 백혈병-특이적 면역 표현형에 기초하여 암 세포를 동정하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 암의 분자적 검출은 100,000개의 정상 세포 중에서 1개만큼 적은 백혈병 세포를 검출할 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는, 예를 들어 PCR이나 유세포 분석법에 의하여 100,000개 세포 중 적어도 1개 또는 그보다 많은 백혈병 세포가 검출된다면 분자적으로 검출 가능한 MRD를 나타낸다.
일부 구현예에서, 대상체의 질병 존재량은 분자적으로 검출할 수 없거나 MRD-인데, 그렇게, 일부 경우, 어떠한 백혈병 세포도 PCR 또는 유세포 분석법을 이용하여 대상체에서 검출될 수 없다.
일부 구현예에서, 대상체의 질병 존재량은 분자적으로 검출될 수 없거나 MRD이고, 일부 경우에는, 백혈병이 없는 세포가 PCR 또는 유세포 분석기를 사용하여 대상체에서 검출될 수 있다.
일부 구현예에서, 반응 결과는 대상체가 최소 잔류 질병 또는 분자 검출 가능한 질병 상태를 달성하거나 나타내는 CR의 부재 또는 완전한 반응의 존재이다. 일부 구현예에서, 반응 결과는 분자적으로 검출 가능한 질병을 갖는 CR의 존재 또는 분자적으로 검출 가능한 질병이 없는 CR의 존재이다. 일부 구현예에서, 대상체는 유세포 분석기 또는 qPCR에 의해 골수 또는 분자 질병에서 아세포를 평가하는 방법과 같은, 본 명세서에 기재된 방법을 사용하여 질병 존재량이 평가된다.
본 명세서에서 제공된 방법의 일부 구현예에서, 반응은 완전한 관해 또는 완전한 반응 (CR) 및/또는 객관적인 반응 (OR); 및/또는 대상체는 세포의 투여량의 투여의 1개월 이내에, 약 20 mm 이하 크기의 CR, OR, 림프절을 나타내고; 및/또는 선택적으로 세포 투여량의 투여 후 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12, 18, 또는 24개월 후 시점에, 선택적으로 IgH 딥 시퀀싱에 의해 평가된 바와 같이, CLL 또는 NHL과 같은, 질병 또는 상태의 지수 복제는 대상체의 골수 (또는 방법에 따라 치료된 대상체의 50% 이상의 골수)에서 검출되지 않는 것에 의해 결정된다.
C. 조작된 세포의 약물 동력학 (PK), 예를 들어 피크 세포 레벨의 결정
일부 구현예에서, 방법은 T 세포, 예를 들어 T 세포 기반 요법을 위해 투여된 T 세포의 노출, 수, 농도, 지속성 및 증식의 평가를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 방법에서, 세포의 노출, 또는 연장된 확장 및/또는 지속성, 및/또는 세포 표현형 또는 세포의 기능적 활성의 변화, 예를 들어, 면역 요법, 예를 들어 T 세포 요법을 위해 투여된 세포는 시험관 내 또는 생체 외에서 T 세포의 특성을 평가함으로써 측정될 수 있다. 일부 구현예에서, 그러한 분석법은 본 명세서에서 제공되는 세포 요법의 투여 전 또는 후에, 면역 요법, 예를 들어 T 세포 요법에 사용되는 T 세포의 기능을 결정하거나 확인하는데 사용될 수 있다.
일부 측면에서, 노출, 수, 농도, 지속성 및 증식은 약물동력학적 파라미터와 관련이 있다. 어떤 경우에는, 최대 (피크) 혈장 농도 (Cmax), 피크 시간 (즉, 최대 혈장 농도 (Cmax)가 발생할 때; Tmax), 최소 혈장 농도(치료제, 예를 들어 CAR+ T 세포의 투여량 사이에서 최소 혈장 농도; Cmin), 제거 반감기(T1/2) 및 곡선 아래의 면적 (즉, 치료제 CAR+ T 세포의 시간 대 혈장 농도를 플롯팅하여 생성된 곡선 아래의 면적; AUC)과 같은 이러한 파라미터들을 투여 후, 측정함으로써 평가할 수 있다. 투여 후 혈장 중의 특정 치료제, 예를 들어, CAR+ T 세포의 농도는 혈액 샘플에서 치료제, 예를 들어, CAR+ T 세포의 농도를 평가하기에 적합한 당업계에 공지 된 임의의 방법, 또는 본 명세서에 깆된 임의의 방법을 사용하여 측정될 수 있다. 예를 들어, 정량적 PCR (qPCR) 또는 유세포 분석법과 같은 핵산 기반 방법 또는 면역 분석법, ELISA 또는 크로마토그래피/질량 분광계 기반 분석과 같은 다른 분석법을 사용할 수 있다.
일부 구현예에서, 투여된 세포, 예를 들어, CAR+ T 세포 조성물의 약물동력학 (PK)은 투여된 세포의 이용 가능성, 예를 들어 생물학적 이용 가능성을 평가하기 위해 결정된다. 일부 구현예에서, 투여된 세포의 결정된 약물동력학적 파라미터는 CD3+ CAR+ 세포, CD4+ CAR+ 세포 및/또는 CD8+ CAR+ T 세포의 Cmax와 같은 최대 (피크) 혈장 농도 (Cmax); CD3+ CAR+ 세포, CD4+ CAR+ 세포 및/또는 CD8+ CAR+ T 세포의 Tmax와 같은 Cmax가 달성되는 시점 (Tmax) 및/또는 CD3+ CAR+ 세포, CD4+ CAR+ 세포 및/또는 CD8+ CAR+ T 세포의 AUC0 -28과 같은, 곡선 아래의 면적 (AUC)를 포함한다. 일부 구현예에서, 약물동력학적 파라미터는 피크 CD3+ CAR+ T 세포 농도 (Cmax CD3+ CAR+ T 세포), 또는 CD8+ CAR+ T 세포 농도 (Cmax CD8+ CAR+ T 세포)이다. 일부 구현예에서, 약물동력학적 파라미터는 CD3+ CAR+ T 세포의 AUC0 -28 (AUC0 -28 CD3+ CAR+ T 세포), CD8+ CAR+ T 세포의 AUC0-28 (AUC0-28 CD8+ CAR+ T 세포)이다.
일부 구현예에서, "노출"은 특정 기간 동안 치료제를 투여한 후 혈장 (혈액 또는 혈청)에서 치료제, 예를 들어 CAR+ T 세포의 신체 노출을 의미할 수 있다. 일부 구현예에서, 노출은 치료제, 예를 들어 CAR+ T 세포의 투여량을 투여한 후 약물 동력학적 분석에 의해 결정된 치료제 농도-시간 곡선 아래의 면적 (AUC)으로 기재될 수 있다. 일부 경우, AUC는 세포 요법에서 투여된 세포에 대하여 세포*일/μL, 또는 이에 상응하는 단위로 표현된다. 일부 구현예에서, AUC는 환자 집단에서 평균 AUC로서 측정된다. 일부 구현예에서, 전신 노출은 특정 기간, 예를 들어 0, 내지 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 21, 28일 또는 그 이상, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15주 또는 그 이상, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18, 24, 48개월 또는 그 이상 이내의 곡선 아래의 면적 (AUC)를 의미한다. 일부 구현예에서, AUC는 모든 측정 데이터 및 측정된 약물동력학적 (PK) 파라미터로부터 외삽된 데이터를 포함하는 치료제, 예를 들어, CAR+ T 세포의 투여 후 0일에서 28일까지의, 샘플 환자 집단과 같은, 환자 집단으로부터 평균 AUC와 같은, AUC (AUC0 - 28)로 측정된다. 일부 구현예에서, 시간 경과에 따른 노출, 예를 들어 AUC0 -28과 같은 특정 기간 동안의 AUC를 결정하기 위해, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 21 또는 28일 또는 그 이상마다 측정인 시간 경과에 따른, 다수의 파라미터, 예를 들어 세포 농도의 측정 또는 평가를 사용하여 치료제 농도-시간 곡선이 생성된다.
일부 구현예에서, T 세포의 투여 후 및 요법의 투여 전, 동안 및/또는 후에 대상체에서 재조합 수용체를 발현하는 세포의 존재 및/또는 양 (예를 들면, T 세포 기반 치료를 위하여 투여된 CAR 발현 세포)을 검출하였다. 일부 측면에서, 정량적 PCR (qPCR)과 같은 핵산 기반 방법은, 대상체의 혈액 또는 혈청 또는 기관 또는 조직 샘플 (예를 들어, 질병 부위, 예를 들어, 종양 샘플)에서 재조합 수용체를 발현하는 세포 (예를 들면, T 세포 기반 치료를 위하여 투여된 CAR 발현 세포)의 양을 평가하기 위해 사용된다. 일부 측면에서, 지속성은 DNA의 마이크로그램 당 수용체, 예를 들어 CAR을 인코딩하는 DNA 또는 플라스미드의 복제수 또는 샘플, 예를 들어 혈액 또는 혈청의 마이크로리터 당 수용체-발현 예를 들어, CAR-발현 세포의 수, 또는 샘플의 마이크로리터 당 말초 혈액 단핵 세포 (PBMCs) 또는 백혈구 또는 T 세포의 총 수 로서 정량화된다. 일부 구현예에서, qPCR 또는 핵산 기반 방법에 사용되는 프라이머 또는 프로브는 재조합 수용체를 인코딩하는 핵산, 조절 요소, 예를 들어 프로모터, 전자 및/또는 전사-후 조절 요소 또는 반응 요소를 포함하는 플라스미드 및/또는 벡터의 다른 구성성분 또는 요소, 또는 마커, 예를 들어 대리 마커에 결합, 인식 및/또는 증폭하는데에 특이적이다. 일부 구현예에서, 프라이머는 마멋 간염 바이러스(woodchuck hepatitis virus) 전사-후 조절 요소 (WPRE)와 같은, 조절 요소에 대하여 특이적일 수 있다.
일부 구현예에서, 세포는 T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포의 투여 후 4, 14, 15, 27, 또는 28일 이상 후에 대상체에서 검출된다. 일부 측면에서, 세포는 세포는 T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포의 투여 후 2, 4, 또는 6주 후, 또는 3, 6, 또는 12, 18 또는 24 또는 30 또는 36개월 후, 또는 1, 2, 3, 4, 5 또는 그 이상이 경과한 후에 검출된다.
일부 구현예에서, 피크 레벨 및/또는 AUC를 평가되고 및/또는 샘플은 대상체로부터 유전적으로 조작된 세포의 투여의 개시 후 최소 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일 또는 21일 후에 수득될 수 있다. 일부 구현예에서, 피크 레벨 및/또는 AUC를 평가되고 및/또는 샘플은 대상체로부터 유전적으로 조작된 세포의 투여의 개시 후 각각 포괄적인, 11 내지 22일, 12 내지 18일 또는 14 내지 16일 또는 대략 그 사이의 시점에 수득된다.
확장 및/또는 지속성을 나타내는, 노출, 예를 들어, 세포, 예를 들어, T 세포 요법을 위해 투여되는 T 세포의 수 또는 농도는 대상체가 노출되는 세포의 최대 수 또는 농도, 검출 가능한 세포 또는 특정 수 또는 백분율을 초과하는 세포의 지속 기간, 시간 경과에 따른 세포의 수 또는 농도에 대한 곡선 아래의 면적 (AUC), 및/또는 이들의 조합 및 이들의 지표의 관점에서 언급될 수도 있다. 이러한 결과는 종양 샘플과 같은, 특정한 샘플, 예를 들어 혈액, 혈청, 혈장 또는 조직 내의 핵산 또는 DNA의 총량과 비교하여 재조합 수용체를 코딩하는 핵산의 복제 수를 검출하기위한 qPCR 및/또는 수용체에 특이적인 항체를 일반적으로 사용하는 수용체를 발현하는 세포를 검출하는 유세포 분석법과 같은 공지된 방법을 사용하여 평가될 수 있다. 세포-기반 검정법은 또한 반응 또는 예를 들어, 세포 독성 반응에 결합 및/또는 중화 및/또는 유도할 수 있는 세포와 같은 기능 세포의 수 또는 백분율 또는 농도를 질병 또는 상태 또는 수용체에 의해 인식되는 항원을 발현하는 세포에 대해 검출하는데 사용될 수 있다.
일부 측면에서, 세포에 대한 대상체의 증가된 노출은 세포의 증가된 확장을 포함한다. 일부 구현예에서, 수용체 발현 세포, 예를 들면, CAR-발현 세포는 T-세포, 예를 들어, CAR-발현 T 세포의 투여 후에 대상체에서 확장한다.
일부 구현예에서, 수용체를 발현하는 세포는 대상체의 혈청, 혈장, 혈액 또는 조직, 예를 들어 종양 샘플에서, 예를 들어 qPCR 또는 유세포 분석법과 같은 특정 방법에 의해 T 세포, 예를 들어, CAR- 발현 T 세포의 투여 후 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 또는 60일 이상 또는 T 세포, 예를 들어, CAR- 발현 T 세포의 투여 후 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 23 또는 24주 이상 또는 대략 그 정도에 검출 가능하다.
일부 측면에서, 적어도 약 1 x 102, 적어도 약 1 x 103, 적어도 약 1 x 104, 적어도 약 1 x 105, 또는 적어도 약 1 x 106 또는 적어도 약 5 x 106 또는 적어도 약 1 x 107 또는 적어도 약 5 x 107 또는 적어도 약 1 x 108개의 재조합 수용체-발현, 예를 들어 CAR-발현 세포, 및/또는 마이크로리터, 적어도 10 마이크로 리터 당 10, 25, 50, 100, 200, 300, 400, 또는 500, 또는 1000개의 수용체-발현 세포가 대상체에서 또는 체액, 혈장, 혈청, 조식 또는 이의 부분, 혈액과 같은, 예를 들어 말초 혈액, 또는 질병 부위, 예를 들어 이의 종양에서 검출 가능하거나 존재한다. 일부 부현예에서, 이러한 세포의 수 또는 농도는 T 세포, 예를 들어, CAR-발현 T 세포의 투여 후, 적어도 약 20일, 적어도 약 40일, 또는 적어도 약 60일, 또는 적어도 약 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12개월, 또는 적어도 2 또는 3년 동안 대상체에서 검출 가능하다. 이러한 세포 수는 유세포 분석기-기반 또는 정량적인 PCR-기반 방법 및 공지된 방법을 사용하는 총 세포에 대한 외삽법에 의해 검출될 수도 있다. 예를 들어, [Brentjens et al., Sci Transl Med . 2013 5(177), Park et al, Molecular Therapy 15(4):825-833 (2007)], [Savoldo et al., JCI 121(5):1822-1826 (2011), Davila et al., (2013) PLoS ONE 8(4):e61338], [Davila et al., Oncoimmunology 1(9):1577-1583 (2012), Lamers, Blood 2011 117:72-82, Jensen et al., Biol Blood Marrow Transplant 2010 September; 16(9): 1245-1256], [Brentjens et al., Blood 2011 118(18):4817-4828]를 참조한다.
일부 측면에서, 면역 조직 화학법, PCR 및/또는 유세포 분석법으로 측정한 바와 같이, 예를 들어 말초 혈액 또는 골수 또는 기타 구획에서 100개의 세포 당 재조합 수용체를 인코딩하는 핵산의 복제 수, 예를 들어, 벡터 복제 수는, T 세포, 예를 들어, CAR-발현 T 세포의 투여 후, 적어도 0.01, 적어도 0.1, 적어도 1, 또는 적어도 10, 약 1주, 약 2주, 약 3주, 약 4주, 약 5주, 또는 적어도 약 6주, 또는 적어도 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8. 9, 10, 11, 또는 12개월 또는 적어도 2 또는 3년이다. 일부 구현예에서, 게놈 DNA 마이크로그램 당 수용체, 예를 들어 CAR을 발현하는 벡터의 복제 수는 T 세포, 예를 들어, CAR-발현 T 세포의 투여 후, 약 1주, 약 2주, 약 3주, 또는 적어도 약 4주 시점에 또는 이러한 투여 후 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12개월 또는 적어도 2 또는 3년 후에 적어도 100, 적어도 1000, 적어도 5000, 또는 적어도 10,000, 또는 적어도 15,000 또는 적어도 20,000이다.
일부 측면에서, 수용체, 예를 들어, 세포에 의해 발현되는 CAR은 세포의 투여 후, 예를 들어 T 세포 투여의 개시 후 적어도 약 3개월, 적어도 약 6개월, 적어도 약 12개월, 적어도 약 1년, 적어도 약 2년, 적어도 약 3년, 또는 3년 이상의 시점에, 대상체, 혈장, 혈청, 혈액, 조직 및/또는 이의 질병 부위 예를 들어, 종양 부위에서 정량적인 PCR (qPCR) 또는 유세포분석법에 의해 검출 가능하다. 일부 구현예에서, T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포의 투여 후 시간의 경과에 따른 대상체의 체액, 혈장, 혈청, 혈액, 조직 및/또는 이의 질병 부위 예를 들어, 종양 부위에서 수용체- (예를 들어, CAR-) 발현 세포의 농도에 대한 곡선 아래의 면적 (AUC)이 측정된다.
또한, 반응 또는 지속적인 반응의 가능성을 평가하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 대상체로부터 수득한 생물학적 샘플에서, 하나 이상의 염증 마커의 피크 레벨 및/또는 T 세포 발현 키메라 항원 수용체 (CAR)을 포함하는 유전적으로 조작된 세포의 피크 레벨을 검출하는 단계를 포함하고, 여기서 대상체는 질병 또는 상태를 치료하기 위하여 이전에 유전적으로 조작된 세포들의 투여량을 투여받은 적이 있다. 일부 구현예에서, 임계값과 피크 레벨을 각각 비교함으로써, 대상체가 유전적으로 조작된 세포들의 투여에 대한 지속적인 반응을 달성할 가능성을 결정하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 대상체는 상기 하나 이상의 염증 마커의 피크 레벨이 임계값 아래이면 지속적인 반응을 달성하기 쉽고 상기 대상체는 상기 하나 이상의 염증 마커의 피크 레벨이 임계값을 넘으면 지속적인 반응을 달성하기 쉽지 않다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 상기 유전적으로 조작된 세포들의 상기 피크 레벨이 하한 임계값과 상한 임계값 사이의 치료 범위 이내이면 지속적인 반응을 달성하기 쉽고 상기 대상체는 상기 유전적으로 조작된 세포들의 상기 피크 레벨이 하한 임계값 아래이거나 상한 임계값을 넘으면 지속적인 반응을 달성하기 쉽지 않다.
III. 치료 방법
본 발명의 일부 구현예에서, 치료 방법이 제공된다. 본 발명의 일부 구현예에서, 상기 방법은 면역 요법 및/또는 세포 치료제를 투여하는 것을 포함한다. 본 발명의 일부 구현예에서, 상기 방법은 유전적으로 조작된 세포, 예를 들어 키메라 항원 수용체 (CAR)와 같은 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 세포의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 세포의 투여량, 예를 들어 CAR+ 발현 세포를 목표 치료 범위 또는 창 내에 있도록 대상에게 투여하는 것을 포함한다. 본 발명의 일부 구현예에서, 환자의 세포가 목표 치료 범위 또는 창 내에 있는지 여부는 파라미터, 예를 들어 피크 세포 농도 (Cmax)와 같은 약물동력학적 파라미터를 모니터링함으로써 결정 또는 평가될 수있다. 본 발명의 일부 측면에서, 제공된 방법은 또한 파라미터, 피크 세포 농도 (Cmax), 환자 속성 및/또는 바이오마커와 같은 예를 들어 약물동력학적 파라미터의 평가에 기초하여, 대상체의 투여량을 결정하는 방법, 또는 대상체에게 투약하는 방법 또한 포함한다.
본 발명의 일부 구현예에서, 재조합 수용체를 발현하는 세포의 투여량은 질병, 상태 및 장애, 예를 들어 암을 치료하거나 예방하기 위하여 대상체에게 투여된다. 본 발명의 일부 구현예에서, 세포, 집단, 및 조성물은, 예를 들어 입양 T 세포 요*과 같은 입양 세포 치료제를 통해, 치료될 특정 질병 또는 상태을 가진 대상체 또는 환자에 투여된다. 본 발명의 일부 구현예에서, 배양 및/또는 다른 가공 방법 다음에, 세포 및 조성물, 예를 들어 조작된 조성물 및 최종 생산 조성물은, 대상체, 예를 들어 질병 또는 상태를 갖거나, 그러한 위험이 있는 대상체에 투여된다. 일부 측면에서, 따라서, 이 방법은, 예를 들어 조작된 T 세포에 의해 인식되는 항원을 발현하는 암에서 종양 존재량을 감소시킴으로써, 질병 또는 상태의 하나 이상의 증상을 치료, 예를 들어 개선한다.
입양 세포 치료제를 위한 세포의 투여 방법은 공지되어 있으며, 제공되는 방법 및 조성물과 관련하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 입양 T 세포 치료제 방법은, 예를 들어 Gruenberg 등의 미국 특허 출원 공개 2003/0170238; Rosenberg 등의 미국 특허 4,690,915; 문헌 [Rosenberg(2011) Nat Rev Clin Oncol. 8(10):577-85)]에 기재되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Themeli et al.(2013) Nat Biotechnol . 31(10): 928-933]; [Tsukahara et al.(2013) Biochem Biophys Res Commun 438(1): 84-9]; [Davila et al.(2013) PLoS ONE 8(4): e61338]을 참조한다.
치료되는 질병 또는 상태는, 항원의 발현이 질병, 상태 또는 장애의 병인학과 관련되고 및/또는 수반되는, 예를 들어, 이러한 질병, 상태 또는 장애의 원인이 되거나, 이를 악화시키거나 또는 달리 이와 관련된 임의의 것일 수 있다. 예시적인 질병 및 상태는, 세포의 악성 또는 형질 전환 (예를 들어, 암), 자가면역 또는 염증성 질병, 또는 예를 들어 박테리아, 바이러스 또는 기타 병원체에 의하여 야기되는 감염성 질병과 관련되는 질병 또는 상태를 포함할 수 있다. 치료될 수 있는 다양한 질병 및 상태와 관련된 항원을 포함하는, 예시적인 항원은 상기 기재되어 있다. 본 발명의 특정 구현예에서, 키메라 항원 수용체 또는 트렌스제닉 TCR은 상기 질병 또는 상태와 관련된 항원에 특이적으로 결합한다.
상기 질병, 상태 및 장애 중에는, 종양, 예를 들어 고형 종양, 혈액학적 악성종양, 및 흑색종이 있고, 국소화된 및 전이성 종양, 감염성 질병, 예를 들어 바이러스 또는 기타 병원체로의 감염, 예를 들어 HIV, HCV, HBV, CMV 감염, 및 기생충 질병, 및 자가면역 및 염증성 질병이 있다. 일부 구현예에서, 질병 또는 상태는 종양, 암, 악성종양, 신생물, 또는 다른 증식성 질병 또는 장애이다. 이러한 질병은 백혈병, 림프종, 예를 들어 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 급성 림프모구 백혈병 (ALL), 비-호지킨 림프종, 급성 골수성 백혈병, 다발성 골수종, 난치성 여포성 림프종, 맨틀 세포 림프종, 지연성 B 세포 림프종, B 세포 악성종양, 결장암, 폐암, 간암, 유방암, 전립선암, 난소암, 피부암, 흑색종, 골암 및 뇌암, 난소암, 상피암, 신장 세포 암종, 췌장 선암종, 호지킨 림프종, 자궁 경부암, 결장직장암, 교모세포종, 신경아세포종, 유잉 육종 (Ewing sarcoma), 수모세포종, 골육종, 활액 육종 및/또는 중피종을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 대상체는 급성 림프모구 백혈병 (ALL)을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 비-호지킨 림프종을 갖는다.
본 발명의 일부 구현예에서, 질병 또는 상태는 감염성 질병 또는 상태, 예를 들어, 바이러스, 레트로바이러스, 박테리아, 및 원충 감염, 면역결핍, 사이토메갈로바이러스 (CMV), 엡스타인-바르 바이러스 (Epstein-Barr virus)(EBV), 아데노바이러스, BK 폴리오마바이러스 (polyomavirus)이나, 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 질병 또는 상태는 자가면역 또는 염증성 질병 또는 상태, 예를 들어 관절염, 예를 들어 류머티즘성 관절염 (RA), I형 당뇨병, 전신 홍반성 낭창 (SLE), 염증성 장 질병, 건선, 경피증, 자가면역 갑상선 질병, 그레이브스병 (Grave's disease), 크론병 (Crohn's disease) 다발성 경화증, 천식, 및/또는 이식 관련 질병 또는 상태이다.
본 발명의 일부 구현예에서, 상기 질병 또는 장애와 관련된 항원은 αvβ6 인테그린 (avb6 인테그린), B 세포 성숙 항원 (BCMA), B7-H3, B7-H6, 탄산 탈수 효소 9 (CA9, 또한 CAIX 또는 G250으로도 알려짐), 암-고환 항원, 암/고환 항원 1B (CTAG, NY-ESO-1 및 LAGE-2로도 알려짐), 배암종 항원 (CEA), 사이클린, 사이클린 A2, C-C 모티프 케모카인 리간드 1 (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD138, CD171, 표피 성장 인자 단백질 (EGFR), 절단형 표피 성장 인자 단백질 (tEGFR), III 형 상피 성장 인자 수용체 돌연변이 (EGFR vIII), 상피 당단백 2 (EPG-2), 상피 당단백 40 (EPG-40), 에프린B2, 에프린 수용체 A2 (EPHa2), 에스트로겐 수용체, Fc 수용체 유사 5 (FCRL5, Fc 수용체 상동체 5 또는 FCRH5로도 알려짐), 태아 아세틸콜린 수용체 (태아 AchR), 엽산 결합 단백질 (FBP), 엽산 수용체 알파, 강글리오사이드 GD2, O-아세틸 화 GD2 (OGD2), 강글리오사이드 GD3, 당단백질 100 (gp100), G 단백질 결합 수용체 5D (GPCR5D), Her2/neu (수용체 타이로신 키나아제 erbB2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), erbB 이량체, 인간 고분자량-흑색종-관련 항원 (HMW-MAA), 헤파티티스 B 표면 항원, 인간 백혈구 항원 A1 (HLA-A1), 인간 백혈구 항원 A2 (HLA-A2), IL-22 수용체 알파 (IL-22Ra), IL-13 수용체 알파 2 (IL-13Ra2), 키나아제 삽입 도메인 수용체 (kdr), 카파 경쇄, L1 세포 부착 분자 (L1CAM), L1-CAM의 CE7 에피토프, 류신 리치 리피트 함유 8 패밀리 멤버 A (LRRC8A), 루이스 Y, 흑색종-관련 항원 (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 메소텔린, c-Met, 쥐과 사이토메갈로바이러스 (CMV), 뮤신 1 (MUC1), MUC16, 자연 킬러 그룹 2 멤버 D (NKG2D) 리간드, 멜란 A (MART-1), 신경 세포 접착 분자 (NCAM), 종측면아성 항원, 흑색종 우선 발현 항원 (PRAME), 프로게스테론 수용체, 전립선 특이 항원, 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA), 전립선 특이 막 항원 (PSMA), 수용체 타이로신 키나아제 유사 희귀 수용체 1 (ROR1), 서바이빈 (survivin), 영양막 당단백질 (TPBG, 5T4로도 알려짐), 종양-관련 당단백질 72 (TAG72), 혈관 내피 장 인자 수용체 (VEGFR), 혈관 내피 성장 인자 수용체 2 (VEGFR2), 윌름스 종양 1 (WT-1), 병원체-특이적 항원, 또는 보편적 태그 관련 항원, 및/또는 비오틴화 분자, 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원체에 의해 발현되는 분자로 구성된 군에서 선택되는 항원이다. 본 발명의 일부 구현예에서, 항원은 B 세포 악성종양과 관련된 항원을 포함하는데, 예를 들어 다수의 공지된 B 세포 마커 중 어느 하나이다. 일부 구현예에서, 수용체에 의하여 표적화되는 항원은 CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Ig카파, Ig람다, CD79a, CD79b 또는 CD30이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 항원은 병원체- 특이적 항원 또는 병원체-발현 항원이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 항원은 바이러스 항원 (예를 들어, HIV, HCV, HBV 등으로부터의 바이러스 항원), 박테리아 항원 및/또는 기생충 항원이다.
본 발명의 일부 구현예에서, 질병 또는 장애와 관련된 항원은 고아 티로신 키나아제 수용체(orphan tyrosine kinase receptor) RORl, tEGFR, Her2, Ll-CAM, CD19, CD20, CD22, 메소텔린, CEA, 및 B형 간염 표면 항원, 항-엽산 수용체, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, EGP-2, EGP-4, 0EPHa2, ErbB2, 3, 또는 4, FBP, 태아 아세틸콜린 e 수용체, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-알파, IL-13R-알파2, kdr, 카파 경쇄, 루이스 Y, L1-세포 접착 분자, MAGE-A1, 메소텔린, MUC1, MUC16, PSCA, NKG2D 리간드, NY-ESO-1, MART-1, gp100, 종양 태아성 항원, ROR1, TAG72, VEGF-R2, 암배아성 항원 (CEA), 전립선 특이 항원, PSMA, Her2/neu, 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체r, ephrinB2, CD123, CS-1, c-Met, GD-2, 및 MAGE A3, CE7, 윌름스 종양 1 (WT-1), 사이클린 A1 (CCNA1)과 같은 사이클린, 및/또는 바이오티닐화된 분자들, 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원균에 의해 발현되는 분자들로 구성된 군에서 선택된다.
본 발명의 일부 구현예에서, 세포 치료제, 예를 들어, 입양 T 세포 치료제는 자가 조직성 전달 (autologous transfer)에 의하여 수행되는데, 자가 조직성 전달에서 세포는 상기 세포 치료제를 받는 대상체로부터 또는 그러한 대상체로부터 유래한 샘플로부터 단리 및/또는 다르게 제조된다. 따라서, 본 발명의 일부 측면에서, 세포는 대상체, 예를 들어 치료를 필요로 하는 환자로부터 유래하고, 상기 세포는, 단리 및 가공 다음에 동일한 대상체에게 투여된다.
본 발명의 일부 구현예에서, 세포 치료제, 예를 들어, 입양 T 세포 치료제는 동종 이계 전달 (allogeneic transfer)에 의해 수행되는데, 동종 이계 전달에서 세포는 상기 세포 치료제를 받거나 궁극적으로 받는 대상체, 예를 들어 제1대상체 이외의 대상체로부터 단리 및/또는 다르게 제조된다. 그러한 구현예에서, 세포는 그 후 동일한 종의 상이한 대상체, 예를 들어, 제2대상체에 투여된다. 본 발명의 일부 구현예에서, 제1 및 제2대상체는 유전적으로 동일하다. 본 발명의 일부 구현예에서, 제1 및 제2대상체는 유전적으로 유사하다. 본 발명의 일부 구현예에서, 제2대상체는 제1대상체와 동일한 HLA 클래스 또는 수퍼타입을 발현한다.
예를 들어, 볼루스 주입, 주사, 예를 들어 정맥내 또는 피하 주사, 안내 주사, 눈 주위 주사, 망막하 주사, 유리체 내 주사, 경 중격 주사, 공막하 주사, 맥락막내 주사, 전방내 주사, 결막하 주사 (subconjectval injection), 결막하 주사 (subconjuntival injection), 안각건하 주사, 안구후 주사, 안구 주위 주사 또는 후방 공막 부근 전달에 의한 임의의 적절한 수단에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 일부 구현예에서, 이들은 비경구, 폐내 및 비내, 및 국소 치료가 요망되는 경우, 병변내 투여에 의해 투여된다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다. 본 발명의 일부 구현예에서, 세포의 단일 볼루스 투여에 의해 소정의 투여량이 투여된다. 본 발명의 일부 구현예에서, 이는, 예를 들어 3일 이하의 기간에 걸쳐, 세포의 다중 볼루스 투여 또는 세포의 연속 주입 투여에 의해 투여된다.
질병의 예방 또는 치료를 위해, 적절한 투여량은 치료될 질병의 유형, 세포 또는 재조합 수용체의 유형, 질병의 중증도 및 경과, 세포가 예방적 또는 치료적 목적으로 투여되는지 여부, 이전의 치료, 대상체의 임상 기록 및 세포에 대한 반응, 주치의의 재량에 따라 달라질 수 있다. 본 발명의 일부 구현예에서, 조성물 및 세포는 한 번에 또는 일련의 치료를 통해 적절하게 대상체에게 투여된다.
본 발명의 일부 구현예에서, 세포는 항체 또는 조작된 세포 또는 수용체, 세포 독성 또는 치료제와 같은 작용제와 같은 또 다른 치료적 개입과의 조합 치료의 일부로서, 예를 들어 그와 동시에 또는 임의의 순서로 순차적으로 투여된다. 본 발명의 일부 구현예에서, 세포는 하나 이상의 추가 치료제와 함께 또는 또 다른 치료적 개입과 관련하여, 동시에 또는 임의의 순서로 순차적으로 공동 투여된다. 일부 상황에서, 세포 집단이 하나 이상의 추가 치료제의 효과를 향상시키거나, 그 반대의 경우도 그러하도록, 충분히 근접한 시간에 또 다른 치료와 공동 투여된다. 본 발명의 일부 구현예에서, 세포는 하나 이상의 추가 치료제 전에 투여된다. 본 발명의 일부 구현예에서, 세포는 하나 이상의 추가 치료제 후에 투여된다. 본 발명의 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가 작용제는, 예를 들어 지속성을 향상시키기 위해, IL-2와 같은 사이토카인을 포함한다. 본 발명의 일부 구현예에서, 이러한 방법은 화학요법 작용제의 투여를 포함한다. 본 발명의 일부 구현예에서, 상기 방법은 화학요법 작용제의 투여를 포함한다.
본 발명의 일부 구현예에서, 상기 방법은, 예를 들어 투여 전에 종양 존재량을 감소시키기 위하여 화학요법 작용제, 예를 들어 컨디셔닝 화학요법 작용제의 투여를 포함한다.
본 발명의 일부 측면에서, 면역 고갈 (immunodepleting)(예를 들어, 림프구 고갈 (lymphodepleting)) 요법을 하는 사전 컨디셔닝 (preconditioning) 대상체는 입양 세포 치료제 (ACT)의 효과를 향상시킬 수 있다.
따라서, 본 발명의 일부 구현예에서, 상기 방법은 세포 치료제의 개시 전에 대상체에게 사전 컨디셔닝 작용제를 투여하는 것을 포함하는데, 예를 들어 림프구 고갈 또는 화학치료 작용제, 예를 들어 사이클로포스파마이드, 플루다라빈 또는 그들의 조합이다. 예를 들어, 상기 대상체는 세포 치료제의 개시보다 적어도 2일 전에, 예를 들어 적어도 3, 4, 5, 6, 또는 7일 이전에 사전 컨디셔닝 작용제를 투여받는다. 본 발명의 일부 구현예에서, 상기 대상체는 세포 치료제의 개시보다 최대 7일 전에, 예를 들어 최대 6, 5, 4, 3 또는 2일 이전에 사전 컨디셔닝 작용제를 투여받는다.
본 발명의 일부 구현예에서, 대상체는 20 mg/kg 내지 100mg/kg 사이, 또는 40 mg/kg 내지 80 mg/kg 사이 또는 약 그 정도의 투여량으로 사이클로포스파마이드를 이용하여 사전 컨디셔닝된다. 본 발명의 일부 측면에서, 상기 대상체는 60 mg/kg의 또는 약 그 정도의 사이클로포스파마이드로 사전 컨디셔닝된다. 일부 구현예에서, 사이클로포스파마이드는 단일 투여로 투여되거나 또는 복수 회 투여로, 예를 들어 매일, 격일로 또는 매 3일에 투여될 수 있다. 본 발명의 일부 구현예에서, 사이클로포스파마이드는 하루 또는 이틀간 1 일 1 회 투여된다.
림프구 고갈 작용제가 플루다라빈을 포함하는 일부 구현예에서, 대상체는 플루다라빈을 1 mg/m2 내지 100 mg/m2 또는 약 그 사이의 양으로 투여받는데, 예를 들어 10 mg/m2 내지 75 mg/m2, 15 mg/m2 내지 50 mg/m2, 20 mg/m2 내지 30 mg/m2, 또는 24 mg/m2 내지 26 mg/m2 또는 약 그 사이의 양이다. 일부의 경우, 상기 대상체는 25 mg/m2의 플루다라빈을 투여받는다. 일부 구현예에서, 플루다라빈은 단일 투여로 투여되거나 또는 복수 회 투여로, 예를 들어 매일, 격일로 또는 매 3일에 투여될 수 있다. 본 발명의 일부 구현예에서, 플루다라빈은 예를 들어 1-5 일간, 예를 들어 3 내지 5일동안 매일 투여된다.
본 발명의 일부 구현예에서, 림프구 고갈 작용제는 작용제들의 조합, 예를 들어 사이클로포스파마이드 및 플루다라빈의 조합을 포함한다. 따라서, 상기 작용제의 조합물은 임의의 투여량 또는 투여 일정으로 사이클로포스파마이드를 포함할 수 있는데, 예를 들어 전술한 바와 같고, 상기 조합물은 임의의 투여량 또는 투여 일정로 플루다라빈을 포함할 수 있는데, 예를 들어 전술한 바와 같다. 예를 들어, 일부 측면에서, 제1 투여 또는 후속 투여 전에 60 mg/kg (~ 2 g/m2)의 사이클로포스파마이드 및 3 내지 5 투여량의 25 mg/m2 플루다라빈을 투여받는다.
세포의 투여 다음에, 본 발명의 일부 구현예에서, 조작된 세포 집단의 생물학적 활성을, 예를 들어 다수의 공지된 방법 중 임의의 방법에 의해 측정한다. 생체내의 경우, 예를 들어 영상화에 의해, 또는 생체 외의 경우, 예를 들어 ELISA 또는 유세포 분석기에 의해 평가할 파라미터는 조작되거나, 천연의 T 세포 또는 다른 면역 세포의 항원에 대한 특이적 결합을 포함한다. 본 발명의 특정 구현예에서, 조작된 세포가 표적 세포를 붕괴시키는 능력은, 예를 들어 문헌 [Kochenderfer et al., J. Immunotherapy, 32(7): 689-702 (2009)], 및 [Herman et al. J. Immunological Methods, 285(1): 25-40 (2004)]에 기재된 세포독성 분석과 같이, 당업계에 공지된 임의의 적절한 방법을 사용하여, 측정할 수 있다. 본 발명의 특정 구현예에서, 세포의 생물학적 활성은 CD 107a, IFNγ, IL-2 및 TNF와 같은 하나 이상의 사이토카인의 발현 및/또는 분비를 분석함으로써 측정한다. 본 발명의 일부 측면에서, 생물학적 활성은 종양 존재량 또는 부하의 감소와 같은 임상 결과를 평가함으로써 측정한다.
본 발명의 특정 구현예에서, 조작된 세포는 치료적 또는 예방법적 효능을 증가시키는 임의의 많은 방법으로 추가로 변형된다. 예를 들어, 집단에 의해 발현된 조작된 CAR 또는 TCR은 직접적으로 또는 링커를 통해 간접적으로 표적화 모이어티에 접합될 수 있다. 화합물, 예를 들어 CAR 또는 TCR을 표적화 모이어티에 접합시키는 실시법은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Wadwa et al, J. Drug Targeting 3: 1 1 1(1995)] 및 미국 특허 5,087,616를 참조한다.
A. 투약
본 발명의 일부 구현예에서, 대상체는 CAR+ T 세포의 치료 범위 및/또는 창을 달성하거나 달성하기 쉬운 투여량이 투여된다. 본 발명의 일부 구현예에서, 방법은 독성을 야기할 특정 추정된 확률 보다 낮은 피크 CAR+ 세포 수를 갖는 범위 이내의 혈액에서 피크 CAR+ 세포 수를 달성하거나 달성하기 쉬운 양인 세포의 투여량을 투여하는 단계를 포함한다. 본 발명의 일부 구현예에서, 방법은 반응 또는 지속적인 반응을 야기할 특정 추정된 확률 보다 높은 피크 CAR+ 세포 수를 갖는 범위 이내의 혈액에서 피크 CAR+ 세포 수를 달성하거나 달성하기 쉬운 양인 세포의 투여량을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 경우에는, 세포의 양은 치료학적으로 효과적인 또는 예방적으로 효과적인 양과 같은, 질병 또는 상태를 치료하기에 효과적인 양이다. 일부 경우에는, 반응을 달성할 추정될 확률은 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 이상 보다 크다. 일부 경우에는, 독성을 야기할 추정된 확률은 독성 확률 곡선 상에서 35% 이하, 30% 이하, 25% 이하, 20% 이하, 15% 이하, 10% 이하, 또는 5% 이하이다. 본 발명의 일부 구현예에서, 세포의 투여량은 반응을 달성할 이상적인 추정된 확률을 넘고 독성을 야기할 이상적인 추정된 확률 아래이다.
본 발명의 일부 구현예에서, 투여될 세포의 양 또는 투여량은 섹션 II에 기재되어 있는 바와 같이, 파라미터, 예를 들어 약물동력학적 파라미터, 및 반응 및/또는 독성의 추정된 확률에 기초한다.
본 발명의 일부 구현예에서, 방법은 대상체에서 결정된 목표 치료 범위 또는 창 이내인 피크 CAR+ 세포 농도를 달성하기 위하여 세포의 충분한 수 또는 투여량을 투여하는 단계를 포함한다. 본 발명의 일부 구현예에서, 방법은 상기 방법에 의해 치료되기 위한 대상체의 대다수 또는 상기 방법에 의해 치료되기 위한 대상체의 75% 이상과 같은, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이상 보다 크거나 대략 그 정도에서 결정된 목표 치료 범위 또는 창 이내인, 피크 CAR+ 세포 농도를 달성하기에 충분한 수 또는 투여량의 세포를 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명의 일부 구현예에서, 치료 창 또는 범위는 상기 예를 들어, 섹션 II에서 기재된 바와 같이 결정된다. 본 발명의 일부 구현예에서, 치료 범위는 반응을 달성하는 추정된 확률의 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 그 이상 보다 크거나 대략 그 정도의 반응의 추정된 확률, 및 25%, 20%, 15%, 10%, 5% 그 이하 보다 작거나 대략 그 정도인 반응의 추정된 확률관 관련된 유전적으로 조작된 세포들로 이전에 치료된 하나 이상의 대상체들의 혈액 내에서, 피크 CD3+ CAR+ T 세포 또는 ㅇ이의 CD8+ CAR+ T 세포 서브 세트의 범위에 기초한다.
본 발명의 일부 구현예에서, 치료 창 또는 범위는 세포, 예를 들어, CD3+, CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 수 및/또는 농도의 특정 범위에 기초하여 결정된다. 본 발명의 일부 구현예에서, 치료 창을 달성할 수 있는 혈액 중의 예시적인 피크 CD3+ CAR+ T 세포 농도는 혈액 내에서 마이크로리터 당 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 20, 30, 40, 50개의 CD3+ CAR+ T 세포 및 혈액 내에서 마이크로리터 당 약 200, 300, 400, 500, 600, 700 또는 750개의 CD3+ CAR+ T 세포 사이이거나 이를 포함한다.
본 발명의 일부 구현예에서, 목표 치료 범위 또는 창은 투여 후 혈액 내에서 마이크로리터 당 10개 세포 내지 마이크로리터 당 500개 세포 또는 대략 그 정도의 피크 CD3+ CAR+ T 세포 농도이다. 본 발명의 일부 구현예에서, 목표 치료 범위 또는 창은 투여 후 혈액 내에서 마이크로리터 당 2개 세포 내지 마이크로리터 당 200개 세포 또는 대략 그 정도의 피크 CD8+ CAR+ T 세포 농도이다.
본 발명의 일부 구현예에서, 대상체에서 투약하는(dosing) 방법으로, 상기 방법은 키메라 항원 수용체 (CAR)을 발현하는 T 세포를 포함하는 유전적으로 조작된 세포들의 투여량을, 질병 또는 상태를 가지는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 상기 투여량은 상기 대상체의 결정된 치료 범위 내에서 혈액 내의, 또는 상기 방법에 의해 치료되기 위하여 선택된 대상체들의 대다수 중에서 또는 상기 방법에 의해 치료되기 위하여 선택된 대상체들의 75% 이상에서 피크 CAR+ T 세포를 달성하기에 충분한 다수의 상기 유전적으로 조작된 세포들을 포함하고, 상기 치료 범위는 다음과 같은 방법이 제공된다: (i) 65% 보다 큰 또는 대략 그보다 큰 반응의 추정된 확률 및 30% 보다 작은 또는 대략 그보다 작은 독성의 추정된 확률과 연관된 상기 유전적으로 조작된 세포로 이전에 치료된 하나 이상의 대상체들의 혈액 내에서, 피크 CD3+ CAR+ T 세포 또는 그의 CD8+ CAR+ T 세포 서브 세트의 범위에 기초하고; 또는 (ii) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 10개의 세포들 내지 마이크로리터 당 500개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포; 또는 (iii) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 2개의 세포들 내지 마이크로리터 당 200개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포.
본 발명의 일부 구현예에서, 대상체에게 투약하는 방법으로, 상기 방법은 다음 단계를 포함하는 것인 방법이 제공된다: (a) 키메라 항원 수용체 (CAR)로 조작된 T 세포를 포함하는 유전적으로 조작된 세포들의 차선의 (sub-optimal) 투여량을, 질병 또는 상태를 가지는 대상체에게 투여하는 단계로, 상기 투여량은 상기 대상체의 결정된 치료 범위 내에서 혈액 내의, 또는 상기 방법에 의해 치료되기 위하여 선택된 대상체들의 대다수 중에서 또는 상기 방법에 의해 치료되기 위하여 선택된 대상체들의 75% 이상에서 피크 CAR+ T 세포를 달성하기에 불충분한 다수의 상기 유전적으로 조작된 세포들을 포함하고; 및 (b) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 단계 다음에, 상기 치료 범위 내에서 혈액 내에 피크 CAR+ T 세포를 달성하기 위하여 상기 대상체 내의 CAR+ 세포 확장 또는 증식을 향상시키는 작용제를 투여하는 단계로, 상기 치료 범위는 다음과 같다: (i) 65% 보다 큰 또는 대략 그보다 큰 반응의 추정된 확률 및 30% 보다 작은 또는 대략 그보다 작은 독성의 추정된 확률과 연관된 상기 유전적으로 조작된 세포로 이전에 치료된 하나 이상의 대상체들의 혈액 내에서, 피크 CD3+ CAR+ T 세포 또는 그의 CD8+ CAR+ T 세포 서브 세트의 범위에 기초하고; 또는 (ii) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 10개의 세포들 내지 마이크로리터 당 500개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포; 또는 (iii) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 2개의 세포들 내지 마이크로리터 당 200개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포. 본 발명의 일부 구현예에서, 대상체는 목표 치료 범위 또는 창을 달성할 수 있는 투여량이 투여된다. 본 발명의 일부 구현예에서, 투여량은 1 x 107개 이하의 CAR-발현 T 세포, 5 x 106 이하의 CAR-발현 T 세포, 1 x 106개 이하의 CAR-발현 T 세포, 2.5 x 107개 이하의 CAR-발현 T 세포, 1 x 105개 이하의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도이다.
입양 세포 치료제와 관련하여, 주어진 "투여량"의 투여는 단일 조성물 및/또는 단일 무중단 투여 (uninterrupted administration)로서, 예를 들어 단일 주사 또는 연속적 주입으로서 주어진 양 또는 세포의 수의 투여를 포함하고, 또한 3일 이하의 특정 기간에 걸쳐 다중의 개별적인 조성물이나 주입으로 제공되는, 분할 투여량으로서 주어진 양이나 세포의 수의 투여를 포함한다. 따라서, 일부 상황에서, 투여량은 특정한 단일 시점에서 개시되거나 주어진 특정 수의 세포의 단일 또는 연속 투여이다. 그러나 일부 상황에서는, 투여량은 3일 이하의 기간에 걸쳐 다회의 주사 또는 주입으로 투여되는데, 예를 들어 3일 또는 2일 동안 1회 또는 하루에 걸친 다중 주입에 의한다.
따라서, 일부 측면에서, 투여량의 세포는 단일의 약학 조성물로 투여된다. 일부 구현예에서, 투여량의 세포는 제1 투여의 세포를 총체적으로 함유하는 복수 개의 조성물로 투여된다.
"분할 투여량"이란 용어는 분할되어 하루 이상에 걸쳐 투여되는 투여량을 말한다. 이러한 유형의 투여는 본 발명의 방법에 포함되며 단일 투여량으로 간주된다.
따라서, 일부 측면에서 투여량은 분할 투여량으로서 투여될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 투여량은 2일 이상 또는 3일 이상에 걸쳐 대상체에게 투여될 수 있다. 투여량을 분할하는 예시적인 방법은 제1일에 투여량의 25%를 투여하고 제2일에 투여량의 나머지 75%를 투여하는 것을 포함한다. 다른 구현예에서, 제1 투여량의 33%는 제1일에 투여되고 나머지 67%는 제2일에 투여될 수 있다. 일부 측면에서, 투여량의 10%는 제1일에 투여되고, 투여량의 30%는 제2일에 투여되고, 투여량의 60%는 제3일에 투여된다. 일부 구현예에서, 분할 투여량은 3 일 이상에 걸쳐 이루어지지는 않는다.
일부 구현예에서, 투여량의 세포는 각각 투여량 중 일부의 세포를 함유하는 복수 개의 조성물 또는 용액의 투여에 의하여 투여될 수 있는데, 예를 들어 제1 및 제2조성물 또는 용액, 필요에 따라 더 다수의 조성물 또는 용액의 투여에 의하는 것이다. 일부 측면에서, 각각 상이한 세포 집단 및/또는 서브-유형을 함유하는 복수 개의 조성물은, 필요에 따라 특정 기간 내에 개별적이거나 독립적으로 투여된다. 예를 들어, 세포의 집단 또는 서브-유형은, 각각 CD8+ 및 CD4+ T 세포 및/또는 각각 CD8+-농축된 및 CD4+-농축된 집단, 예를 들어 각각 재조합 수용체를 발현하도록 유전적으로 조작된 세포들을 각기 포함하는 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 투여량의 투여는 CD8+ T 세포의 투여량 또는 CD4+ T 세포의 투여량을 포함하는 제1 조성물의 투여, 및 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포의 다른 투여량을 포함하는 제2 조성물의 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, 조성물 또는 투여량의 투여, 예를 들어, 복수 개의 세포 조성물의 투여는 세포 조성물을 개별적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 측면에서, 개별적인 투여는 동시에 또는 어느 순서로든 순차적으로, 수행된다. 일부 구현예에서, 투여량은 제1 조성물 및 제2 조성물을 포함하고, 제1 조성물 및 제2 조성물은 0 내지 12시간 간격으로, 0 내지 6시간 간격으로 또는 0 내지 2시간 간격으로 투여된다. 일부 구현예에서, 제1 조성물의 투여 개시 및 제2 조성물의 투여 개시는 2시간 이하의 간격으로, 1시간 이하의 또는 30분 이하의, 15분 이하의, 10분 이하의 또는 5분 이하의 간격으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1조성물의 투여 개시 및/또는 완료 및 제2 조성물의 투여의 완료 및/또는 개시는 2시간 이하, 1시간 이하, 또는 30분 이하, 15분 이하, 10분 이하 또는 5분 이하의 간격으로 수행된다.
일부 조성물에서, 제1조성물, 예를 들어 투여량 중 제1조성물은 CD4+ T 세포를 포함한다. 일부 조성물에서, 제1조성물, 예를 들어 투여량 중 제1조성물은 CD8+ T 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 조성물은 제2 조성물 이전에 투여된다.
일부 구현예에서, 세포의 투여량 또는 조성물은 정의된 비 또는 표적 비의 재조합 수용체를 발현하는 CD8+ 세포에 대한 재조합 수용체를 발현하는 CD4+ 세포, 및/또는 CD8+ 세포에 대한 CD4+ 세포를 포함하는데, 여기의 비는 임의로 대략 1:1 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1 사이로, 예를 들어 대략 1:1이다. 일부 측면에서, 표적 비 또는 원하는 비의 상이한 세포 집단 (예를 들어 CD4+:CD8+ 비 또는 CAR+CD4+:CAR+CD8+ 비, 예를 들어 1:1)을 갖는 조성물 또는 투여량의 투여는 상기 집단 중 하나를 함유하는 세포 조성물을 투여한 후 상기 집단 중 다른 것을 포함하는 개별적인 세포 조성물을 투여하는 것을 포함하는데, 여기서 투여는 상기 표적 비 또는 원하는 비로 또는 대략 그러한 비로 이루어진다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 연속적인 또는 후속하는 세포 투여량이 대상체에게 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포의 연속 투여 또는 후속 투여는 세포의 제1 투여량의 투여 개시 후 7일, 14일, 21일, 28일 또는 35일 이상 또는 약 그 이상 투여된다. 상기 세포의 연속 또는 후속 투여량은 제1투여량 이상, 대략 그와 동일하거나 그보다 적을 수 있다. 일부 구현예에서, T 세포 치료제의 투여, 예를 들어 세포의 제1 및/또는 제2투여량의 투여는 반복될 수 있다.
일부 구현예에서, 세포 투여량은 상기 제공되는 방법에 따라 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 투여량의 크기 또는 시점은 대상체의 특정 질병 또는 상태의 함수로서 결정된다. 특정 질병에 대한 투여량의 크기 또는 시점을 경험적으로 결정하는 것은 당업자의 레벨 내이다. 투여량은 질병 또는 장애 및/또는 환자 및/또는 다른 치료에 대한 특별한 속성에 따라 다를 수 있다.
일부 측면에서, 제1투여량의 투여와 연속 투여량 사이의 시간은 약 9일 내지 약 35일, 약 14일 내지 약 28일 또는 15일 내지 27일이다. 일부 구현예에서, 연속 투여량의 투여는 제1투여량 투여 후 약 14일 이상 및 약 28일 이하의 시점에서 이루어진다. 일부 측면에서, 제1 및 연속 투여 사이의 시간은 약 21일이다. 일부 구현예에서, 추가적인 투여량, 연속 투여량은 연속 투여량의 투여 후에 투여된다. 일부 측면에서, 추가적인 연속 투여량은 이전 투여량의 투여 후 적어도 약 14일 및 약 28일 이하에 투여된다. 일부 구현예에서, 추가 투여량은 이전 투여량 후에 약 14일 이하, 예를 들어 이전 투여 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13일 후에 투여된다. 일부 구현예에서, 이전 투여 후 약 14일 이하에는 투여되지 않으며 및/또는 이전 투여의 약 28일 이후에 투여하지 않는다.
일부 구현예에서, 세포의 투여량, 예를 들어, 재조합 수용체-발현 세포는, T 세포의 제1투여량 및 T 세포의 연속 투여량을 포함하는, 2가지 투여량 (예를 들어, 두 배의 투여량)을 포함하고, 여기서 제1투여량 및 제2투여량의 하나 또는 둘 모두는 T 세포의 분할 투여량의 투여를 포함한다.
특정 구현예에서, 세포, 또는 세포의 각 서브-유형 집단은 대상체에게 약 10만 내지 약 1000억 개의 세포 레벨으로 및/또는 대상체의 체중 킬로그램 당 그러한 양의 세포로 투여될 수 있는데, 예를 들어 대상체의 체중 킬로그램 당 10만 내지 약 500억 세포 (예를 들어, 약 500만 세포, 약 2500만 세포, 약 5억 세포, 약 10억 세포, 약 50억 세포, 약 200억 세포, 약 300억 세포, 약 400억 세포 또는 상기 수치들 중 임의의 2가지에 의하여 구획되는 범위), 100만 내지 약 500억 세포 (예를 들어, 약 500만 세포, 약 2500만 세포, 약 5억 세포, 약 10억 세포, 약 50억 세포, 약 200억 세포, 약 300억 세포, 약 400억 세포 또는 상기 수치들 중 임의의 2가지에 의하여 구획되는 범위), 예를 들어 약 1000만 내지 약 1000억 세포 (예를 들어, 약 2000만 세포, 약 3000만 세포, 약 4000만 세포, 약 6000만 세포, 약 7000만 세포, 약 8000만 세포, 약 9000만 세포, 약 100억 세포, 약 250억 세포, 약 500억 세포, 약 750억 세포, 약 900억 세포, 또는 상기 수치들 중 임의의 2가지에 의하여 구획되는 범위), 및 일부 경우 약 1억 세포 내지 약 500억 세포 (예를 들어 약 1억2천만 세포, 약 2억5천만 세포, 약 3억5천만 세포, 약 4억5천만 세포, 약 6억5천만 세포, 약 8억 세포, 약 9억 세포, 약 30억 세포, 약 300억 세포, 약 450억 세포) 또는 이들의 범위들 사이의 임의의 수치이다. 투여량은 질병 또는 장애 및/또는 환자 및/또는 다른 치료에 대한 특별한 속성에 따라 다를 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 값은 재조합 수용체-발현 세포의 수를 말하며; 다른 구현예에서, 이들은 투여되는 T 세포 또는 PBMC 또는 총 세포의 수를 말한다.
일부 구현예에서, 상기 세포 치료제는 0.1 x 106 세포/대상체의 체중 kg, 0.2 x 106 세포/kg, 0.3 x 106 세포/kg, 0.4 x 106 세포/kg, 0.5 x 106 세포/kg, 1 x 106 세포/kg, 2.0 x 106 세포/kg, 3 x 106 세포/kg 또는 5 x 106 세포/kg 이상 또는 약 그 이상, 또는 0.1 x 106 세포/대상체의 체중 kg, 0.2 x 106 세포/kg, 0.3 x 106 세포/kg, 0.4 x 106 세포/kg, 0.5 x 106 세포/kg, 1 x 106 세포/kg, 2.0 x 106 세포/kg, 3 x 106 세포/kg 또는 5 x 106 세포/kg이거나 대략 그 정도인 세포 수를 포함하는 투여량의 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 세포 치료제는 각각 포함하기로, (약) 0.1 x 106 세포/대상체의 체중 kg 내지 1.0 x 107 세포/kg, (약) 0.5 x 106 세포/kg 내지 5 x 106 세포/kg, (약) 0.5 x 106 세포/kg 내지 3 x 106 세포/kg, (약) 0.5 x 106 세포/kg 내지 2 x 106 세포/kg, (약) 0.5 x 106 세포/kg 내지 1 x 106 세포/kg, (약) 1.0 x 106 세포/대상체의 체중 kg 내지 5 x 106 세포/kg, (약) 1.0 x 106 세포/kg 내지 3 x 106 세포/kg, (약) 1.0 x 106 세포/kg 내지 2 x 106 세포/kg, (약) 2.0 x 106 세포/대상체의 체중 kg 내지 5 x 106 세포/kg, (약) 2.0 x 106 세포/kg 내지 3 x 106 세포/kg, 또는 (약) 3.0 x 106 세포/대상체의 체중 kg 내지 5 x 106 세포/kg인 세포 수를 포함하는 투여량의 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 세포 투여량은 (약) 2 x 105 세포/kg 내지 (약) 2 x 106 세포/kg, 예를 들어 (약) 4 x 105 세포/kg 내지 (약) 1 x 106 세포/kg 또는 (약) 6 x 105 세포/kg 내지 (약) 8 x 105 세포/kg를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 세포 투여량은 대상체의 체중 킬로그램당 2 x 105 개 이하의 세포 (예를 들어, 항원-발현, 예를 들어 CAR-발현 세포)를 포함하는데 (세포/kg), 예를 들어 (약) 3 x 105 세포/kg 이하의, (약) 4 x 105 세포/kg 이하의, (약) 5 x 105 세포/kg 이하의, (약) 6 x 105 세포/kg 이하의, (약) 7 x 105 세포/kg 이하의, (약) 8 x 105 세포/kg 이하의, (약) 9 x 105 세포/kg 이하의, (약) 1 x 106 세포/kg 이하의, 또는 (약) 2 x 106 세포/kg 이하이다. 일부 구현예에서, 상기 세포 투여량은 대상체의 체중 킬로그램당 (약) 2 x 105 개 이상 또는 (약) 2 x 105 개의 세포 (예를 들어, 항원-발현, 예를 들어 CAR-발현 세포)를 포함하는데 (세포/kg), 예를 들어 (약) 3 x 105 세포/kg 이상 또는 (약) 3 x 105 세포/kg, (약) 4 x 105 세포/kg 이상 또는 (약) 4 x 105 세포/kg, (약) 5 x 105 세포/kg 이상 또는 (약) 5 x 105 세포/kg, (약) 6 x 105 세포/kg 이상 또는 (약) 6 x 105 세포/kg, (약) 7 x 105 세포/kg 이상 또는 (약) 7 x 105 세포/kg, (약) 8 x 105 세포/kg 이상 또는 (약) 8 x 105 세포/kg, (약) 9 x 105 세포/kg 이상 또는 (약) 9 x 105 세포/kg, (약) 1 x 106 세포/kg 이상 또는 (약) 1 x 106 세포/kg, 또는 (약) 2 x 106 세포/kg 이상 또는 (약) 2 x 106 세포/kg이다.
일부 구현예에서, 세포는 원하는 투여량으로 투여되는데, 이는 일부 측면에 있어서 원하는 투여량 또는 세포 수 또는 세포 유형(들) 및/또는 원하는 세포 유형의 비를 포함한다. 따라서, 일부 구현예에서, 상기 세포의 투여량은 총 세포 수 (또는 체중 kg당 세포 수) 및 개개의 서브-유형 집단의 원하는 비, 예를 들어 CD4+ 대 CD8+ 비에 기초한다. 일부 구현예에서, 상기 세포의 투여량은 개개 집단에서 세포의, 또는 개개의 세포 유형의 원하는 총 세포 수 (또는 체중 kg당 세포 수)에 기초한다. 일부 구현예에서, 상기 투여량은 이러한 특징의 조합에 기초하는데, 예를 들어 원하는 총 세포 수, 원하는 비, 및 개개 집단에서 원하는 총 세포 수와 같은 특징이다.
일부 구현예에서, 세포 집단 또는 서브-유형, 예를 들어 CD8+ 및 CD4+ T 세포는 원하는 총 세포의 투여량, 예를 들어 원하는 T 세포의 투여량의 용인되는 차이로, 또는 그 내에서 투여된다. 일부 측면에서, 원하는 투여량은 원하는 세포의 수 또는 세포가 투여되는 대상체의 체중 단위당 원하는 세포의 수로서, 예를 들어 세포/kg이다. 일부 측면에서, 원하는 투여량은 최소한의 세포 수 또는 체중 단위당 최소한의 세포 수이거나, 또는 그보다 많다. 일부 측면에서, 원하는 투여량으로 투여된 총 세포 중에서, 각 집단 또는 서브-유형은 원하는 결과 비로 (예를 들어 CD4+ 대 CD8+ 비), 또는 그 근처에 존재하는데, 예를 들어 그러한 비의 특정 용인 차이 내이거나 오류 내이다.
일부 구현예에서, 세포는 하나 이상의 각 세포 집단 또는 서브-유형의 원하는 투여량, 예를 들어 CD4+ 세포의 원하는 투여량 및/또는 CD8+ 세포의 원하는 투여량의 용인되는 차이로 또는 그 이내로 투여된다. 일부 측면에서, 원하는 투여량은 상기 서브-유형 또는 집단의 원하는 세포 수, 또는 상기 세포가 투여되는 대상체의 체중 단위당 원하는 그러한 세포의 수, 예를 들어 세포/kg이다. 일부 측면에서, 원하는 투여량은 최소한의 세포 수 또는 체중 단위당 최소한의 세포 수이거나, 또는 그보다 많다.
따라서, 일부 구현예에서, 투여량은 총 세포의 원하는 고정 투여량 및 원하는 비에 기초하고, 및/또는 하나 이상의, 예를 들어 각각 개별적인 서브-유형 또는 서브-집단의 원하는 고정 투여량에 기초한다. 따라서, 일부 구현예에서, 투여량은 T 세포의 원하는 고정 또는 최소 투여량 및 원하는 CD4+ 대 CD8+ 세포의 비에 기초하고 및/또는 CD4+ 및/또는 CD8+ 세포의 원하는 고정 또는 최소 투여량에 기초한다.
일부 구현예에서, 세포는 다수의 세포 집단 또는 서브-유형, 예를 들어 CD4+ 및 CD8+ 세포 또는 서브 유형의 원하는 결과 비의 용인 범위에서 또는 그 이내에서 투여된다. 일부 측면에서, 원하는 비는 특정 비일 수 있고 또는 비의 범위일 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 원하는 비 (예를 들어 CD4+ 대 CD8+ 세포의 비)는 (약) 1:5 내지 (약) 5:1 (또는 약 1:5보다 크고, 약 5:1보다 작음), 또는 (약) 1:3 내지 (약) 3:1 (또는 약 1:3보다 크고, 약 3:1보다 작음), 예를 들어 (약) 2:1 내지 (약) 1:5 (또는 약 1:5보다 크고, 약 2:1보다 작음)이고, 예를 들어 (약) 5:1, 4.5:1, 4:1, 3.5:1, 3:1, 2.5:1, 2:1, 1.9:1, 1.8:1, 1.7:1, 1.6:1, 1.5:1, 1.4:1, 1.3:1, 1.2:1, 1.1:1, 1:1, 1:1.1, 1:1.2, 1:1.3, 1:1.4, 1:1.5, 1:1.6, 1:1.7, 1:1.8, 1:1.9: 1:2, 1:2.5, 1:3, 1:3.5, 1:4, 1:4.5, 또는 1:5이다. 일부 측면에서, 상기 용인되는 차이는 상기 원하는 비의 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4% 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 및 이들 범위 사이의 임의의 수치를 포함하여 그 이내이다.
특정 구현예에서, 세포의 수 및/또는 농도는 재조합 수용체 (예를 들어, CAR)-발현 세포의 수를 지칭한다. 다른 구현예에서, 상기 세포의 수 및/또는 농도는 투여된 모든 세포, T 세포 또는 말초 혈액 단핵구 세포들 (PBMCs)의 수 또는 농도를 말한다.
일부 구현예에서, 예를 들어, 대상체는 인간이고, 투여량은 5 x 108개의 총 재조합 수용체 (예를 들어, CAR)-발현 세포, T 세포, 또는 말초 혈액 단핵구 세포들 (PBMCs), 예를 들어, 2 x 106, 5 x 106, 1 x 107, 5 x 107, 1 x 108, 또는 5 x 108개와 같은, 약 1 x 106 내지 5 x 108개의 이러한 세포들을 포함한다.
일부 구현예에서, 유전적으로 조작된 세포들의 투여량은 1 x 105 내지 5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 105 내지 2.5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 105 내지 1 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 105 내지 5 x 107개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 105 내지 2.5 x 107개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 105 내지 1 x 107 개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 105 내지 5 x 106 개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 105 내지 2.5 x 106 개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 105 내지 1 x 106 개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 106 내지 5 x 108 개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 106 내지 2.5 x 108 개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 106 내지 1 x 108 개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 106 내지 5 x 107 개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 106 내지 2.5 x 107 개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 106 내지 1 x 107 개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 106 내지 5 x 106 개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 106 내지 2.5 x 106 개의 총 CAR-발현 T 세포, 2.5 x 106　 내지 5 x 108 개의 총 CAR-발현 T 세포, 2.5 x 106　 내지 2.5 x 108 개의 총 CAR-발현 T 세포, 2.5 x 106　 내지 1 x 108 개의 총 CAR-발현 T 세포, 2.5 x 106　 내지 5 x 107개의 총 CAR-발현 T 세포, 2.5 x 106　 내지 2.5 x 107개의 총 CAR-발현 T 세포, 2.5 x 106　 내지 1 x 107개의 총 CAR-발현 T 세포, 2.5 x 106　 내지 5 x 106개의 총 CAR-발현 T 세포, 5 x 106　 내지 5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 5 x 106　 내지 2.5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 5 x 106　 내지 1 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 5 x 106　 내지 5 x 107개의 총 CAR-발현 T 세포, 5 x 106　 내지 2.5 x 107개의 총 CAR-발현 T 세포, 5 x 106　 내지 1 x 107개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 107　 내지 5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 107　 내지 2.5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 107　 내지 1 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 107　 내지 5 x 107개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 107　 내지 2.5 x 107개의 총 CAR-발현 T 세포, 2.5 x 107　 내지 5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 2.5 x 107　 내지 2.5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 2.5 x 107　 내지 1 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 2.5 x 107　 내지 5 x 107개의 총 CAR-발현 T 세포, 5 x 107　 내지 5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 5 x 107　 내지 2.5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 5 x 107　 내지 1 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 108 　내지 5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 108　 내지 2.5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포,　또는 2.5 x 108　내지 5 x 108개 또는 대략 그 정도의 총 CAR-발현 T 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 유전적으로 조작된 세포들의 투여량은 적어도 1 x 105개의 CAR-발현 세포, 적어도 2.5 x 105개의 CAR-발현 세포, 적어도 5 x 105개의 CAR-발현 세포, 적어도 1 x 106개의 CAR-발현 세포, 적어도 2.5 x 106개의 CAR-발현 세포, 적어도 5 x 106개의 CAR-발현 세포, 적어도 1 x 107개의 CAR-발현 세포, 적어도 2.5 x 107개의 CAR-발현 세포, 적어도 5 x 107개의 CAR-발현 세포, 적어도 1 x 108개의 CAR-발현 세포, 적어도 2.5 x 108개의 CAR-발현 세포, 또는 적어도 5 x 108개 또는 대락 그 정도의 CAR-발현 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 세포 치료제는 각각 포괄적인, 1 x 105 내지 5 x 108개의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵구 세포들 (PBMCs), 5 x 105 내지 1 x 107개의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵구 세포들 (PBMCs) 또는 1 x 106 내지 1 x 107개의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵구 세포들 (PBMCs) 또는 대략 그 정도인 수많은 세포를 포함하는 투여량의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 치료제는 적어도 1 x 105개의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵구 세포들 (PBMCs), 이러한 세포들의 적어도 1 x 106개, 적어도 1 x 107개, 적어도 1 x 108개 또는 대략 그 정도인 수많은 세포를 포함하는 투여량의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 수는 CD3+ 또는 CD8+, 일부 경우에는 또한 재조합 수용체-발현 (예를 들어 CAR+) 세포의 전체적인 수와 관련된다. 일부 구현예에서, 세포 치료제는 각각 포괄적인, 1 x 105 내지 5 x 108개의 CD3+ 또는 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+ 또는 CD8+ 재조합 수용체-발현 세포, 5 x 105 내지 1 x 107개의 CD3+ 또는 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+ 또는 CD8+ 재조합 수용체-발현 세포, 또는 1 x 106 내지 1 x 107개의 CD3+ 또는 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+ 또는 CD8+재조합 수용체-발현 세포 또는 대략 그 정도인 수많은 세포를 포함하는 투여량의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 치료제는 각각 포괄적인, 1 x 105 내지 5 x 108개의 총 CD3+/CAR+ 또는 CD8+/CAR+ 세포, 5 x 105 내지 1 x 107개의 총 CD3+/CAR+ 또는 CD8+/CAR+ 세포, 또는 1 x 106 내지 1 x 107개의 총 CD3+/CAR+ 또는 CD8+/CAR+ 세포 또는 대략 그 정도인 수많은 세포를 포함하는 투여량의 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, T 세포의 투여량은 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포 또는 CD4+ 및 CD8+ 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 예를 들어 대상체는 인간이고, CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함하는 투여량에서 포함하는, CD8+ T 세포의 투여량은, 약 1 x 106 내지 5 x 108개의 총 재조합 수용체 (예를 들어, CAR)-발현　 CD8+ 세포, 예를 들어, 약 5 x 106 내지 1 x 108개 범위인 이러한 세포들, 이러한 세포들 1 x 107, 2.5 x 107, 5 x 107, 7.5 x 107, 1 x 108, 또는 5 x 108개의 총 이러한 세포들, 또는 앞서 언급한 값들 중 임의의 두 개 사이의 범위를 포함한다. 일부 구현예에서, 환자는 다중 투여량, 및 투여량 각각이 투여되고 또는 총 투여량은 앞서 언급한 값의 임의의 이내일 수 있다. 일부 구현예에서, 세포의 투여량은 각각 포괄적인, 1 x 107 내지 0.75 x 108개의 총 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포, 1 x 107 내지 2.5 x 107개의 총 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포, 1 x 107 내지 0.75 x 108개의 총 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 또는 대략 그 정도인 투여를 포함한다.　 일부 구현예에서, 세포의 투여량은 약 1 x 107, 2.5 x 107, 5 x 107 7.5 x 107, 1 x 108, 또는 5 x 108개의 총 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포의 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, 세포의 투여량, 예를 들어, 재조합 수용체-발현 T 세포는 단일 투여량으로 대상체에게 투여되거나 2주, 1개월, 3개월, 6개월, 1년 또는 그 이상의 기간 이내에 오직 한 번 투여된다.
일부 측면에서, 투여량의 크기는 대상체의 이전 치료 예를 들어 화학 요법, 예를 들어 화학 요법, 종양 로드, 양, 크기, 또는 정도, 범위 또는 전이 유형, 단계, 및/또는 가능성 또는 대상체의 독성 예를 들어, CRS, 대식세포 활성 증후군, 종양 용해 증후군, 신경 독성, 및/또는 투여된 세포 및/또는 재조합 수용체에 대한 숙주 면역 반응 결과가 나타날 빈도와 같은, 대상체에서 질병 존재량에 대한 반응과 같은 하나 이상의 기준에 기초하여 결정된다.
IV. 치료법을 모니터링, 평가 및 조절하는 방법
일부 구현예에서, 치료 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 방법은 면역 요법 및/또는 세포 요법을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 유전적으로 조작된 세포들, 예를 들어 키메라 항원 수용체 (CAR)과 같은 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 세포들의 투여를 수반한다. 일부 구현예에서, 방법은 세포들, 예를 들어 CAR+ 발현 세포의 투여량을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 대상체 내의 세포가 치료 범위 또는 창 이내에 있는지 여부를 결정하기 위하여, 파라미터, 예를 들어 피크 세포 농도 (Cmax)와 같은, 약물동력학적 파라미터를 모니터링하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포가 치료 범위 또는 창 이내에 있지 않다면, 치료는 예를 들어, 추가적인 투여량을 투여, 후속의 또는 추가적인 투여량을 변경, 및/또는 CAR+ T 세포 확장을 조절할 수 있는 작용제를 투여함으로써 변형될 수 있다. 일부 측면에서, 제공된 방법은 대상체의 투여량을 결정하는 방법, 또는 파라미터, 예를 들어 피크 세포 농도 (Cmax), 환자 속성 및/또는 바이오마커와 같은, 약물동력학적 파라미터의 평가에 기초하여, 대상체에게 투약하는 방법을 포함한다.
일부 측면에서, 재조합 수용체 - 발현 세포로 T 세포 요법과 같은 세포 요법과 같은 요법을 조절하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, CAR+ T 세포 확장, 증식, 확장, 생존, 활성 및/또는 기능을 조절할 수 있는, 예를 들어 CAR + T 세포확장, 증식, 생존, 활성 및/또는 기능을 증가 또는 감소시킬 수 있는 대상체에게 작용제를 세포 요법을 받고 있는 대상체에게 투여함으로써 세포 요법이 조절된다.
일부 구현예에서, 작용제는 약물동력학적 파라미터, 예를 들면, 피크 CAR + T 세포 농축, 노출 (예를 들어, AUC) 및/또는 세포 수준 또는 농도의 평가 후 투여된다. 일부 구현예에서, 작용제는 약물동력학적 파라미터, 반응 지속적인 반응 및/또는 독성의 발현과 연관 및/또는 상관관계에 있는 다른 파라미터, 환자 속성, 인자, 특징 및/또는 바이오마커의 발현의 평가 후에 투여된다.
일부 구현예에서, 질병 또는 상태를 갖는 대상체에게 질병 또는 상태를 치료하기 위한 키메라 항원 수용체 (CAR)와 같은 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전적으로 조작된 세포의 투여량을 투여하는 것을 포함하는 치료 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 유전적으로 조작된 세포의 투여량을 투여 한 후에 세포가 치료 범위 또는 창 내에 있는지를 평가하기 위해 대상체의 혈액에서 약물동력학 파라미터, 예를 들어 CAR + T 세포를 모니터링하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 유전적으로 조작된 세포가 치료 범위 내에 있지 않으면 대상체에서 CAR + T 세포 확장, 증식 및/또는 활성을 조절하거나 선택적으로 증가시키거나 감소시킬 수 있는 작용제를 대상체에 투여하는 것을 포함한다.
일부 구현예에는, 대상체의 혈액 내에서, 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전적으로 조작된 세포의 존재를 모니터링하여 세포가 치료 범위 이내에 있는지를 평가하는 것을 포함하는 치료 방법도 제공되고, 대상체는 질병 또는 상태를 치료하기 위해 유전적으로 조작된 세포의 투여량을 이전에 투여받은 적이 있다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 또한 유전적으로 조작된 세포가 치료 범위 내에 있지 않으면 대상체에서 CAR + T 세포 확장, 증식 및/또는 활성을 조절하거나 선택적으로 증가시키거나 감소시킬 수 있는 작용제를 투여하는 것을 포함한다.
일부 측면에서, 대상체의 혈액 내의 CAR+ 세포의 피크 수가 상기 치료 범위 내에 피크 CAR+ T 세포의 가장 낮은 수 이하인 경우에, CAR+ T 세포 확장 또는 증식을 증가시킬 수 있는 작용제가 상기 대상체에게 투여된다. 일부 측면에서, 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포의 피크 수가 상기 치료 범위 내에 피크 CAR+ T 세포의 가장 높은 수를 넘는 경우에, CAR+ T 세포 확장 또는 증식을 감소시킬 수 있는 작용제가 상기 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 조작된 세포의 활성을 조절하는 방법이 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 임계치 이상인 대상체로부터 수득한 샘플에서 종양 존재량 또는 염증 마커의 체적 측정치와 같은 파라미터의 레벨, 양 또는 농도를 평가하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 샘플은 키메라 항원 수용체 (CAR)을 발현하는 유전적으로 조작된 T 세포들을 포함하지 않고 및/또는 CAR을 발현하는 유전적으로 조작된 세포들을 받기 전에 대상체로부터 수득된다. 일부 구현예에서, 대상체는 CAR을 발현하는 유전적으로 조작된 세포의 확장 또는 증식을 감소시킬 수 있는 작용제의 투여를 위해 선택된다. 일부 구현예에서, CAR을 발현하는 유전적으로 조작된 세포의 확장 또는 증식을 감소시킬 수 있는 작용제는 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 대상체에서 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 유전적으로 조작된 T 세포의 확장 또는 증식을 감소시킬 수 있는 약제를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 조작된 세포의 활성을 조절하는 방법이 또한 제공되며, 대상체는 파라미터의 레벨, 양 또는 농도, 예를 들어 대상체의 샘플에서의 종양 부담 또는 염증 마커의 체적 측정치가 임계치 이상이다.
일부 구현예에서, 제공된 방법은 유전적으로 조작된 세포, 예를 들어 재조합 수용체, 예를 들어 CAR을 발현하도록 조작된 T 세포의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 조절, 예를 들어 증가 또는 감소하는 CAR + T 세포 확장, 증식 및/또는 활성을 조절할 수있는 약제는 키메라 항원 수용체 (CAR)을 발현하는 T 세포를 포함하는 유전적으로 조작된 세포의 투여량의 투여 개시 전에 또는 동시에 투여된다. 일부 측면에서, 약제를 투여하기 전에, 선택된 대상체는 유전적으로 조작된 세포의 투여 후에 독성을 나타낼 위험이 있다. 일부 구현예에서, 약제의 투여는 환자의 치료 범위 또는 창에서 피크 CAR + T 세포를 달성하기에 충분하다. 일부 구현예에서, 약제의 투여는 피크 CAR + T 세포 농도를 달성하기에 충분하고, 상기 방법으로 그렇게 처리된 대다수의 환자 혈액에서, 또는 상기 방법에 의해 그렇게 처리 된 대상체의 약 75 % 이상과 같은, 약 50 %, 60 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % 또는95 % 이상이 결정된 목표 치료 범위 또는 창 내에있다.
일부 구현예에서, 대상체에게 투여하는 방법도 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 질병 또는 상태를 갖는 대상에게 키메라 항원 수용체 (CAR)로 조작된 T 세포를 포함하는 유전적으로 조작된 세포의 준 최적 투여량을 투여하는 단계를 포함하며, 상기 투여량은 상기 대상체의 치료 범위 내에서, 또는 상기 방법에 의해 치료되기 위하여 선택된 대상체들의 대다수 중에서 또는 상기 방법에 의해 치료되기 위하여 선택된 대상체들의 75% 이상에서 피크 CAR+ T 세포를 달성하기에 충분하다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 유전자 공학적으로 조작된 세포를 투여 한 후에 치료 범위 또는 창 내에서 혈액에서 피크 CAR + T 세포를 달성하기 위해 대상에서 CAR + 세포 확장 또는 증식을 강화시키는 제제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 유전적으로 조작된 세포의 투여량은 1 x 107 이하의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 5 x 106 이하의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 2.5 x 106 이하의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 1 x 106 이하의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 2.5 x 105 이하의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도이다.
일부 구현예에서, 상기 제제의 투여 후, 이 방법은 유전적으로 조작된 세포에 동일 투여량의 투여를 포함하는 방법에 비해, 작용제 없이 대상체에서 결정된 치료적 범위 내로 혈액에서 피크 CAR + 세포의 증가된 빈도 또는 상기 방법에 의해 치료되기 위하여 선택된 대상체들의 대다수 중에서 또는 상기 방법에 의해 치료되기 위하여 선택된 대상체들의 75% 이상의 대상체에서 결정된 치료적 범위 내로 혈액에서 피크 CAR+ 세포를 달성한다.
일부 구현예에서, 치료 범위 또는 창은 본 명세서에서 예를 들어, 섹션 II 또는 다른 부분에서 기재된 바와 같이, 결정된다. 치료 범위는 약 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 이상의 추정된 반응 확률 및, 약 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% 이하의 추정된 독성 확률과 관련된 유전적으로 조작된 세포들로 이전에 치료된 하나 이상의 대상체들 중에서 혈액 내에, 피크 CD3+ CAR+ T 세포들, 또는 이의 CD8+ CAR+ T 세포 서브세트의 범위에 기초한다.
일부 구현예에서, 치료 범위 또는 창은 세포의 예를 들어, CD3 +, CD4 + 또는 CD8 + T 세포의 수 및/또는 농도의 특정 범위에 기초하여 결정된다. 일부 구현예에서, 치료 창을 달성할 수 있는 혈액 중의 예시적인 피크 CD3+ CAR+ T 세포 농도는 혈액 내에서 마이크로리터 당 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 20, 30, 40, 50개의 CD3+ CAR+ T 세포 및 혈액 내에서 마이크로리터 당 약 200, 300, 400, 500, 600, 700 또는 750개의 CD3+ CAR+ T 세포 사이이거나 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 방법은 유전적으로 조작된 세포들의 투여량 투여 후에 대상체의 혈액 내에서 CAR+ T 세포를 모니터링하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 대상체는 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 개시의 적어도 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일 또는 21일 후인 시점에 혈액 내의 CAR+ T 세포에 대하여 모니터링된다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 개시 후에, 각각 포괄적인, 11일 내지 22일, 12일 내지 18일, 14일 내지 16일, 또는 대략 그 사이의 시점에 혈액 내의 CAR+ T 세포에 대하여 모니터링된다.
또한 반응 또는 지속적인 반응을 평가하는 방법 및, 치료제에 따라서 투여하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 방법은 대상체로부터 수득한 생물학적 샘플에서, 하나 이상의 염증 마커의 피크 레벨 및/또는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전적으로 조작된 세포들의 피크 레벨을 검출하는 단계로, 상기 대상체는 질병 또는 상태를 치료하기 위하여 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여량을 이전에 투여받은 적이 있다. 일부 구현예에서, 방법은 개별적으로, 임계값에 대하여 상기 피크 레벨을 비교함으로써, 대상체가 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여에 대하여 지속적인 반응을 달성할 가능성을 결정하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 대상체는 상기 하나 이상의 염증 마커의 피크 레벨이 임계값 아래이면 지속적인 반응을 달성하기 쉽고 상기 대상체는 상기 하나 이상의 염증 마커의 피크 레벨이 임계값을 넘으면 지속적인 반응을 달성하기 쉽지 않다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 상기 유전적으로 조작된 세포들의 상기 피크 레벨이 하한 임계값과 상한 임계값 사이의 치료 범위 이내이면 지속적인 반응을 달성하기 쉽고 상기 대상체는 상기 유전적으로 조작된 세포들의 상기 피크 레벨이 하한 임계값 아래이거나 상한 임계값을 넘으면 지속적인 반응을 달성하기 쉽지 않다.
일부 구현예에서, 상기 임계값은 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내 또는 5% 이내이며 및/또는 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여를 받은 대조군 대상체들의 그룹 중에서 결정된 바와 같은 상기 염증 마커의 피크 레벨의 중앙 또는 평균의 표준 편차 이내이다. 일부 구현예에서, 임계값은 다음과 같다: 상기 체적 측정치 또는 염증 마커의 평균 값을 넘는 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내, 또는 5% 이내이고 및/또는 복수의 대조군 대상체들에서 상기 체적 측정치 또는 상기 염증 마커의 상기 평균 값을 넘는 표준 편차 이내이다. 일부 구현예에서, 임계값은 다음과 같다: 복수의 대조군 대상체들 중에서 적어도 하나의 대상체 내에서 측정된, 상기 체적 측정치 또는 염증 마커의 가장 높은 값을 넘는, 선택적으로 이러한 가장 높은 배수의 변화를 넘는 50% 이내, 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내, 또는 5% 이내이다. 일부 구현예에서, 임계값은 다음과 같다: 복수의 대조군 대상체들의 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 98% 이상 중에서 측정된 바와 같은 상기 체적 측정치 또는 염증 마커의 가장 높은 값을 넘는 값. 일부 구현예에서, 상기 복수의 대조군 대상체들은 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여량을 받기 전의 대상체 그룹이며, 여기서: 상기 그룹의 상기 대조군 대상체들 각각은 치료 범위 이내의 가장 높은 피크 CAR+ T 세포 보다 큰 혈액 내의 피크 CAR+ T 세포를 나타냈고; 상기 그룹의 상기 대조군 대상체들의 각각은 동일한 질병 또는 상태를 치료하기 위하여 상기 조작된 세포들의 투여량을 받은 후에, 독성, 선택적으로 신경 독성 또는 사이토카인 방출 증후군(cytokine release syndrome, CRS)에서, 2등급 또는 3등급 이상의 신경 독성 또는 3등급 이상의 CRS를 계속하여 나타냈으며; 상기 그룹의 상기 대조군 대상체들의 각각은 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여량의 투여 후에, 반응, 선택적으로 완전한 반응 (CR) 또는 부분적인 반응 (PR)을 나타내지 않았고; 및/또는 상기 그룹의 상기 대조군 대상체들의 각각은 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여량의 투여 후에, 선택적으로 3개월 이상 또는 6개월 이상 동안 지속적인 반응을 나타내지 않았다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 또한 반응 또는 지속적인 반응을 달성할 가능성의 평가에 기초하여, 작용제 또는 대체적인 요법을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 대상체가 지속적인 반응을 달성하기 쉽지 않다고 결정되면, 상기 유전적으로 조작된 세포들 이외에 치료제로 또는 대체적인 치료학적 처리로 치료하기 위한 대상체를 선택된다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 지속적인 반응을 달성하기 쉽지 않다고 결정되면, 상기 유전적으로 조작된 세포들 이외에 치료제 또는 대체적인 치료학적 처리를 투여된다.
일부 구현예에서, 치료제의 투여 및/또는 대체적인 치료학적 처리의 투여를위한 대상체를 선택하는 것을 포함하는 치료 방법이 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 대상체로부터 수득한 샘플에서 하나 이상의 염증 마커의 피크 레벨이 임계값 이상인; 및/또는 대상체로부터 수득한 샘플에서 키메라 항원 수용체 (CAR)를 포함하는 T 세포의 피크 레벨이 하한 임계값 이하이거나 상한 임계값 이상인, 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전적으로 조작된 세포들의 투여를 받은 대상체를 선택하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 반응은 완전한 반응 (CR), 객관적인 반응 (OR) 또는 부분적인 반응 (PR)이다. 일부 경우에서, 반응은 3개월, 4개월, 5개월 또는 6 개월 이상 동안 지속된다.
일부 구현예에서, 피크 레벨은 평가되고 및/또는 샘플은 유전적으로 조작된 세포들의 투여 개시의 적어도 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일 또는 21일 후의 시점의 대상체로부터 수득된다. 본 발명의 일부 구현예에서, 피크 레벨은 평가되고 및/또는 샘플은 유전적으로 조작된 세포들의 투여 개시 후에, 각각 포괄적인, 11일 내지 22일 또는 12일 내지 18일 또는 14일 내지 16일 또는 대략 그 정도의 시점의 대상체로부터 수득된다.
일부 구현예에서, 피크 레벨은 하나 이상의 염증 마커의 피크 레벨이며 염증 마커는 C 반응성 단백질 (CRP), IL-2, IL-6, IL-10, IL-15, TNF-알파, MIP-1알파, MIP-1베타, MCP-1, CXCL10 또는 CCL13 중에서 선택된다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 염증 마커의 피크 레벨이 평가되고, 임계값은 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내 또는 5% 이내이고 및/또는 유전적으로 조작된 세포들의 투여를 받은 대조군 대상체들의 그룹 중에서 결정된 바와 같이 염증 마커의 피크레벨의 중앙값 또는 평균의 표준 편차이내이며, 여기서 그룹의 대상체들의 각각은 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에 지속적인 반응, 선택적으로 CR 및/또는 PR, 선택적으로 3개월 또는 6개월 이상을 달성하지 않았다. 일부 예시에서, 대조군 대상체들은 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에 안정적인 질병 (SD) 또는 진행되는 질병 (PD)을, 선택적으로 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에 3개월 또는 6개월 동안 나타냈다. 일부 구현예에서, 피크 레벨은 CAR+ T 세포 또는 이의 CD8+ T 세포 서브세트의 피크 레벨이다.
일부 구현예에서, 하한 임계값 및 상한 임계값은 약 65% 보다 큰 또는 대략 그보다 큰 반응의 추정된 확률 및 약 30% 보다 작은 또는 대략 그보다 작은 독성의 추정된 확률과 연관된 유전적으로 조작된 세포로 이전에 치료된 하나 이상의 대상체들의 혈액 내에서, 피크 CD3+ CAR+ T 세포, 또는 그의 CD8+ CAR+ T 세포 서브 세트 각각의 하한 및 상한이다. 일부 구현예에서, 치료 범위는 독성의 추정된 확률이 20% 이하, 15% 이하, 10% 이하 또는 5% 이하이고 반응을 달성하는 추정된 확률은 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 그 이상 보다 큰 범위이다.
일부 구현예에서, 반응 확률은 완전한 반응 (CR), 객관적인 반응 (OR) 또는 부분적인 반응 (PR)인 반응에 기초하고, 선택적으로 여기서 반응은 지속적이며, 선택적으로 3개월 이상 또는 6개월 이상 동안 지속된다.
일부 구현예에서, 피크 CAR+ T 세포는 대상체의 혈액 내의 마이크로리터 당 CAR+ T 세포의 수로서 결정된다. 본 발명의 일부 구현예에서, 상한 임계 값은 마이크로리터 당 300개 세포들 내지 마이크로리터 당 1000개 세포들 또는 마이크로리터 당 400개 세포들 내지 마이크로리터 당 600개 세포들 또는 대략 그 정도이거나, 약 마이크로리터 당 300개 세포들, 마이크로리터 당 400개 세포들, 마이크로리터 당 500개 세포들, 마이크로리터 당 600개 세포들, 마이크로리터 당 700개 세포들, 마이크로리터 당 800개 세포들, 마이크로리터 당 900개 세포들 또는 마이크로리터 당 1000개 세포들이고; 하한 임계값은 마이크로리터 당 10개 세포들, 마이크로리터 당 9개 세포들, 마이크로리터 당 8개 세포들, 마이크로리터 당 7개 세포들, 마이크로리터 당 6개 세포들, 마이크로리터 당 5개 세포들, 마이크로리터 당 4개 세포들, 마이크로리터 당 3개 세포들, 마이크로리터 당 2개 세포들 또는 마이크로리터 당 1개 세포들 또는 대략 그 정도이다.
일부 구현예에서, 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 50% 는 3개월 이상 또는 6개월 이상 동안 지속되는 완전한 반응 (CR)을 달성하고; 및/또는 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60% 또는 적어도 70%는 3개월 이상 또는 6개월 이상 동안 지속되는 객관적인 반응 (OR)을 달성한다. 일부 구현예에서, 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 50% 보다 큰, 60% 보다 큰, 70% 보다 큰, 또는 80% 보다 큰 또는 대략 그보다 큰 대상체들은 3등급 이상의 사이토카인 방출 증후군 (CRS)를 나타내고 및/또는 2등급 이상 또는 3등급 이상의 신경 독성을 나타내며; 또는 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 40% 보다 큰, 50% 보다 큰, 또는 55% 보다 큰 또는 대략 그보다 큰 대상체들은 임의의 신경 독성 또는 (CRS)를 나타내지 않았다.
일부 구현예에서, 환자의 속성, 요소, 특징 및/또는 질병 또는 상태 및/또는 바이오카머의 발현과 같은 파라미터는 치료, 예를 들어 세포 요법의 투여 이전에 평가된다. 일부 구현예에서, 환자의 속성, 요소, 특징 및/또는 질병 또는 상태 및/또는 바이오카머의 발현과 같은 파라미터는 치료, 예를 들어 세포 요법의 투여 이전에 평가된다. 일부 구현예에서, 파라미터는 치료, 예를 들어 세포 요법의 투여 후에 평가될 수 있는 레벨 또는 측정치, 예를 들어 환자의 피크 레벨, 속성, 요소, 특징 및/또는 질병 또는 상태, 및/또는 바이오마커의 발현을 포함한다.
일부 구현예에서, 파라미터는 SPD이고, 일부 경우에는 임계값 보다 큰 SPD 값과 상관관계에 있는, 독성의 발현, 예를 들어, CRS 또는 NT이다. 일부 구현예에서, 체적 측정치는 SPD이고 상기 임계값은 ㎠ 당 30 또는 대략 그 정도, ㎠ 당 40 또는 대략 그 정도, ㎠ 당 50 또는 대략 그 정도, ㎠ 당 60 또는 대략 그 정도, 또는 ㎠ 당 70 또는 대략 그 정도이다. 일부 구현예에서, 체적 측정치는 SPD이고 상기 임계값은 ㎠ 당 30 또는 대략 그 정도, ㎠ 당 40 또는 대략 그 정도, ㎠ 당 50 또는 대략 그 정도, ㎠ 당 60 또는 대략 그 정도, 또는 ㎠ 당 70 또는 대략 그 정도이다.
일부 구현예에서, 파라미터는 LDH이고 일부 경우에는 임계값 보다 큰 LDH 값과 상관관계에 있는, 독성의 발현, 예를 들어, CRS 또는 NT이다. 일부 구현예에서, 상기 염증 마커는 LDH이고 상기 임계값은 리터 당 300 유닛이거나 대략 그 정도, 리터 당 400 유닛이거나 대략 그 정도, 리터 당 500 유닛이거나 대략 그 정도, 또는 리터 당 600 유닛이거나 대략 그 정도이다.
A. 약물동력학적 파라미터
경우에 따라, 제공된 구현예는 약물동력학적 (PK) 파라미터의 평가에 기초하여 CAR + T 세포 확장, 증식 및/또는 활성을 조절할 수 있는 약제를 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 약물동력학 파라미터는 본 명세서, 예를 들어 섹션 II.C에 기재된 임의의 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 약물동력학적 파라미터는 투여 후, 최대 (피크) 혈장 농도 (Cmax), 피크 시간 (즉, 최대 혈장 농도 (Cmax)가 발생할 때; Tmax), 최소 혈장 농도(치료제, 예를 들어 CAR+ T 세포의 투여량 사이에서 최소 혈장 농도; Cmin), 제거 반감기(T1/2) 및 곡선 아래의 면적 (즉, 치료제 CAR+ T 세포의 시간 대 혈장 농도를 플롯팅하여 생성된 곡선 아래의 면적; AUC)를 포함한다.
일부 구현예에서, 평가된 약물동력학적 파라미터는 투여된 세포의 투여량이 치료 범위 및/또는 창 이내에 있지 않거나 벗어난 경우에, 대상체는 CAR+ T 세포 확장, 증식, 및/또는 활성을 조절할 수 있는 작용제가 대상체에게 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 치료 범위 및/또는 창은 본 명세서에 기재된 임의의 것이고 및/또는 본 명세서에 기재된 임의의 약물동적학적 파라미터와 연관된다.
일부 구현예에서, 약물동력학적 파라미터, 예를 들어, 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포의 피크 수가 상기 치료 범위 내에 피크 CAR+ T 세포의 가장 낮은 수 이하인 경우에, CAR+ T 세포 확장, 증식, 및/또는 활성을 증가시킬 수 있는 작용제가 상기 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 약물동력학적 파라미터, 예를 들면, 상기 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포의 피크 수가 상기 치료 범위 내에 피크 CAR+ T 세포의 가장 높은 수 이상인 경우에, CAR+ T 세포 확장, 증식, 및/또는 활성을 감소시킬 수 있는 작용제가 상기 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 상기 작용제는 약물동력학적 파라미터, 예를 들면, 피크 CAR+ T 세포 농도, 노출 (예를 들어, AUC) 및/또는 세포 레벨 또는 농도의 평가 후에 투여된다.
일부 측면에서, 제공된 구현예는 약물동력학 파라미터, 예를 들어 혈액 중의 CAR + T 세포의 수 또는 농도를 평가 및/또는 모니터링하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 세포가 치료 범위 및/또는 창 내에 있는지를 평가하기 위해 대상체의 혈액에서 CAR + T 세포 수 및/또는 농도를 모니터링하는 것을 포함한다 .일부 구현예에서, 상기 방법은 대상체가 치료 범위 내에 있지 않다면 대상체에서 CAR+ T 세포 확장 또는 증식을 조절, 선택적으로 증가 또는 감소시킬 수 있는 작용제를 대상체에게 투여한다.
일부 구현예에서, 치료 범위 및/또는 창은 본 명세서에 기재된 파라미터의 평가에 기초한 임의의 기준에 따라 결정 및/또는 기초한다. 일부 구현예에서, 치료 범위 및/또는 창은 65% 보다 큰 또는 대략 그보다 큰 반응의 추정된 확률 및 30% 보다 작은 또는 대략 그보다 작은 독성의 추정된 확률과 연관된 상기 유전적으로 조작된 세포로 이전에 치료된 하나 이상의 대상체들의 혈액 내에서, 피크 CD3+ CAR+ T 세포 또는 그의 CD8+ CAR+ T 세포 서브 세트의 범위에 기초하고; 또는 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 10개의 세포들 내지 마이크로리터 당 500개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포; 또는 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 2개의 세포들 내지 마이크로리터 당 200개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포이다.
B. 환자 속성 및 바이오마커
경우에 따라, 제공된 구현예들은 환자의 속성, 요소, 특징 및/또는 질병 또는 상태 및/또는 바이오마커의 발현과 같은 파라미터들을 평가하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 평가된 파라미터는 약물동력학 파라미터, 반응, 지속적인 반응 및/또는 독성 발현과 연관되고 및/또는 이들과 관련된다. 일부 구현예에서, 파라미터는 환자 요소 또는 환자 속성을 포함한다. 일부 구현예에서, 파라미터는 질병의 특성, 인자 또는 특성을 포함한다. 일부 구현예에서, 파라미터는 치료 전에, 예를 들어, 세포 요법의 투여 전에 평가된다. 일부 구현예에서, 파라미터는 치료 후, 예를 들어, 세포 치료의 하나 이상의 투여량의 투여 후에 평가된다.
일부 구현예에서, 파라미터는 예를 들어, 투여 후, 최대 (피크) 혈장 농도 (Cmax), 피크 시간 (즉, 최대 혈장 농도 (Cmax)가 발생할 때; Tmax), 최소 혈장 농도(치료제, 예를 들어 CAR+ T 세포의 투여량 사이에서 최소 혈장 농도; Cmin), 제거 반감기(T1/2) 및 곡선 아래의 면적 (즉, 치료제 CAR+ T 세포의 시간 대 혈장 농도를 플롯팅하여 생성된 곡선 아래의 면적; AUC)인 약물동력학적 파라미터 이거나 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 파라미터는 환자의 단계 및/또는 환자의 질병 또는 상태의 하나 이상의 지표이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 파라미터는 종양 존재량의 지표이다. 일부 구현예에서, 종양 존재량의 지표는 종양의 체적 측정치이다. 일부 구현예에서, 체적 측정치는 종양 크기, 종양 직경, 종양 부피, 종양 질량, 종양 로드 또는 양과 같은, 병반의 측정, 종양-관련 부종, 종양-관련 괴사, 및/또는 전이의 수 또는 정도이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 병반의 면적은 모든 측정 가능한 종양의 가장 긴 직명 및 가장 긴 수직 직경의 결과물로 계산된다. 일부 경우에, 종양의 체적 측정치는 1차원의 측정이다. 일부 구현예에서, 직경의 결과물의 합 (SPD), 가장 긴 종양 직경 (LD), 가장 긴 종양 직경의 합 (SLD), 괴사, 종양 체적, 괴사 체적, 괴사-종양 비 (NTR), 종양 주위의 부종 (PTE) 및 부종-종양 비 (ETR)가 측정된다.
종양 존재량을 측정 및 평가하기 위한 예시적인 방법은 다음에 기재된 것들을 포함한다: 예를 들어, Carceller et al., Pediatr Blood Cancer. (2016) 63(8):1400-1406 및 Eisenhauer et al., Eur J Cancer. (2009) 45(2):228-247. 일부 구현예에서, 체적 측정치는 모든 측정 가능한 종양들의 가장 긴 수직 직경의 결과물의 합을 결정함으로써 측정되는 직경의 결과물의 합 (SPD)이다. 일부 측면에서, 종양 또는 병반은 가장 긴 종양 직경 (LD)에서 측정되고 및/또는 모든 측정 가능한 병반들의 가장 긴 종양 직경의 합 (SLD)을 결정함으로써 측정된다. 일부 구현예에서, 종양의 체적 측정치는 종양 괴사, 예를 들어 괴사 체적 및/또는 괴사-종양 비 (NTR)의 체적 정량화이다. Monsky et al., Anticancer Res. (2012) 32(11): 4951-4961를 참조한다. 일부 측면에서, 종양의 체적 측정치는 종양 관련 부종, 예를 들어 종양 주위의 부종 (PTE) 및/또는 부종-종양 비 (ETR)의 체적 정량화이다. 일부 구현예에서, 측정하는 단계는 대상체의 컴퓨터 단층 촬영 (CT), 양전자 방출 단층 촬영 (PET) 및/또는 자기 공명 영상 (MRI)을 사용하여 수행될 수 있다.
일부 구현예에서, 체적 측정치는 SPD이며상기 임계값은 ㎠ 당 30 또는 대략 그 정도, ㎠ 당 40 또는 대략 그 정도, ㎠ 당 50 또는 대략 그 정도, ㎠ 당 60 또는 대략 그 정도, 또는 ㎠ 당 70 또는 대략 그 정도이다. 일부 구현예에서, 체적 측정치는 SPD이며상기 임계값은 ㎠ 당 30 또는 대략 그 정도, ㎠ 당 40 또는 대략 그 정도, ㎠ 당 50 또는 대략 그 정도, ㎠ 당 60 또는 대략 그 정도, 또는 ㎠ 당 70 또는 대략 그 정도이다.
일부 구현예에서, 종양의 체적 측정치는 대상체에서 상태 또는 질병을 확인 및/또는 동정하기 위하여 일상적인 평가 또는 혈액 추출과 같은 스크리닝 세션에서 결정된다.
일부 구현예에서, 파라미터, 예를 들어 종양 존재량의 측정은 약물동력학적 파라미터와 상관관계에 있거나 및/또는 이와 연관된다. 일부 구현예에서, 약물동력학적 파라미터를 포함하는 파라미터는 반응 및/또는 지속적인 반응 및/또는 독성을 나타낼 위험, 예를 들어 CRS 또는 신경 독성 (NT)와 연관된다. 일부 구현예에서, 피크 측정은 세포 치료제의 투여 후 측정, 또는 이의 제1투여 또는 투여량, 또는 앞서 언급한 것들 중 임의의 것의 개시 후에, 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 21, 28, 30, 60 또는 90일 이상, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15주 이상 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18, 24, 48개월 이상 이내에 또는 대략 그 이내에와 같은, 세포 치료제 투여 및/또는 이의 개시 후의 특정 경과 후의 시간 이내에 피크 또는 최대 값이거나 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 파라미터는 바이오마커의 적어도 하나 또는 패널을 포함하거나 포함한다. 일부 구현예에서, 바이오마커의 발현 및/또는 존재는 약물 동태 학적 파라미터, 반응, 지속성 반응 및/또는 독성 발달과 관련된다. 일부 구현예에서, 파라미터는 특정 기준값, 예를 들면, 그와 연관된 반응 및/또는 반응 지속성 및/또는 독성을 나타낼 위험, 예 CRS 또는 신경 독성 (NT)과 비교된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 또한 환자 인자 및/또는 바이오마커의 평가에 기초하여 CAR + T 세포 확장, 증식 및/또는 활성을 조절할 수 있는 작용제를 환자에게 투여하는 것을 포함한다.
일부 측면에서, 상기 파라미터는, 예를 들면, 환자의 요인 및/또는 바이오마커는 약물동력학 파라미터와 상관관계에 있거나 연관된다. 일부 구현예에서, 약물동력학적 파라미터를 포함하는 파라미터는 반응 및/또는 지속적인 반응 및/또는 독성을 나타낼 위험, 예를 들어 CRS 또는 신경 독성 (NT)와 연관된다.
일부 구현예에서, 파라미터는 바이오마커이다. 일부 구현예에서, 파라미터는 바이오마커의 발현 및/또는 특정 바이오마커를 발현하는 세포의 수, 농도 및/또는 백분율이다. 일부 구현예에서, 파라미터는 복수의 바이오마커를 포함하는 패널에서 바이오마커 또는 각각의 바이오마커를 포함한다. 일부 구현예에서, 바이오마커는 사이토카인 및/또는 다른 혈청 또는 혈액 인자, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, 패널 내 바이오마커 또는 각 바이오마커는 사이토 카인이며, 일부 경우에는 케모카인일 수 있다. 일부 구현예에서, 패널 내 바이오마커 또는 각각의 바이오마커는 가용성 수용체를 포함한다. 일부 구현예에서, 패널 내 바이오마커 또는 각 바이오마커는 가용성 혈청 단백질을 포함한다. 예시적인 바이오마커 또는 바이오마커 패널이 본 명세서에 기재되어있다.
일부 구현예에서, 파라미터는 혈액 분석물의 레벨 및/또는 농도이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 파라미터는 염증 마커의 수준 및/또는 농도이거나 또는 이를 포함 한다. 일부 구현예에서, 혈액 분석물 및/또는 염증 마커는 인터루킨 -7 (IL-7), IL-15, 대식세포 염증 단백질 (MIP-1α)의 농도 및/또는 레벨이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 혈액 분석물 및/또는 염증 마커는 IL-6, IL-10, IL-16, 인터페론 감마 (IFN-γ), 종양 괴사 인자 알파 (TNF-α)를 , MIP-1α, MIP-1β, 단핵구 화학 유인 물질 단백질 -1 (MCP-1) 및 CXC 모티프 케모카인 10 (CXCL10)의 농도 및/또는 레벨이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 혈액 분석물 및/또는 염증 마커는 페리틴, C 반응성 단백질 (CRP), D-다이머 (피브린 분해 산물), IL-6, IL-10, IL-을 15, IL-16 , TNF-α, MIP-1α 및 MIP-1β의 농도 및/또는 레벨이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 혈액 분석물 및/또는 염증 마커 는 LDH를, 페리틴, CRP, IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α는, α2, MCP-1, IFN- 및/또는 MIP-1β의 농도 및/또는 레벨이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 혈액 분석 물 및/또는 염증 마커는 혈청 아밀로이드 A1 (SAA-1), IL-2, IL-6, IL-10, IL-15, TNF- α, MIP-1α, MIP-1β, MCP-1, CXCL10 및 CC 모티프 케모카인 리간드 13 (CCL13)의 농도 및/또는 레벨이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 혈액 분석물 및/또는 염증 마커는 LDH, 페리틴, CRP, D 다이머, SAA-1, IL-6, IL-10, IL-15, IL-16 , TNF-α, IFN-γ 및/또는 MIP-1α의 농도 및/또는 레벨이거나 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 염증 마커 (LDH 또는 C 반응성 단백질 (CRP), 적혈구 침강 속도 (ESR), 알부민, 페리틴, β2 마이크로 글로불린 (β2-M) 또는 락 테이트 탈수소 효소의 수준 또는 존재를 포함 )가 감지되고 평가된다. 일부 구현예에서, 염증 마커는 면역 분석법을 사용하여 평가된다. 예를 들어, 효소 면역 측정법 (ELISA), 효소 면역 측정법 (EIA), 방사 면역 측정법 (RIA), 표면 플라스 몬 공명 (SPR), 웨스턴 블랏, 측방 유동 분석, 면역 조직 화학, 단백질 배열 또는 면역 PCR 염증 마커를 탐지하는 데 사용됩니다. 일부 구현예에서, 제조 물품을 사용하는 것은 종양 부담을 나타내는 염증 마커를 검출하는 것을 포함한다. 어떤 경우에는 염증 마커의 분석 또는 평가가 유동 세포 계측법을 사용합니다. 어떤 경우에는 시약이 염증 표지자에 결합하는 가용성 단백질입니다. 일부 예에서, 시약은 C- 반응성 단백질 (CRP), 적혈구 침강 속도 (ESR), 알부민, 페리틴, β2 마이크로 글로불린 (β2-M) 또는 젖산 탈수소효소 (LDH)와 결합하는 단백질이다.
일부 구현예에서, 바이오마커, 예를 들어 염증 마커는 C- 반응성 단백질 (CRP)이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, CRP는 혈청, 혈장 또는 혈액과 같은 샘플로부터 인간 CRP의 정량적 측정을 얻기 위해 시험 관내 효소 - 결합 면역 흡착 분석을 사용하여 평가된다. 일부 예에서, CRP는 인간 효소 - 결합 면역 흡착 분석 (ELISA)을 사용하여 검출된다. 일부 구현예에서, 바이오마커, 예를 들어 염증 마커는 적혈구 침강 속도 (erythrocyte sedimentation rate; ESR)이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, ESR은 수직 피펫 또는 튜브에서 혈장으로부터 분리된 후 적혈구가 떨어진 거리 (밀리미터 /시)를 측정함으로써 평가된다. 일부 구현예에서, 바이오마커는 알부민이거나 알부민을 포함한다. 일부 측면에서, 알부민은 비색 시험 또는 시험 관내 효소 연쇄 면역 흡착 분석을 사용하여 평가된다. 일부 예에서, 알부민은 인간 효소 - 결합 면역 흡착 분석 (ELISA)을 사용하여 검출된다. 일부 구현예에서, 바이오마커, 예를 들어, 염증 마커는 페리틴 또는 β2 마이크로 글로불린이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 페리틴 또는 β2 마이크로 글로불린은 면역 검정법을 사용하여 평가되거나 ELISA를 사용하여 검출된다. 일부 측면에서, 바이오마커, 예를 들어, 염증 마커는 젖산 탈수소효소 (LDH) 이고, LDH는 비색 테스트 또는 시험 관내 효소 연계 면역 흡착 분석을 사용하여 평가된다.
일부 구현예에서, 상기 파라미터는 LDH이다 및 어떤 경우에는, 독성, 예 CRS 또는 NT의 발병은, 임계값 이상이되는 LDH 값과 관련된다. 일부 구현예에서, 염증 마커는 LDH이고 임계값은 리터당 약 300 유닛이거나 리터당 약 400 유닛이거나 리터당 약 500 유닛이거나 리터당 약 600 유닛이다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 바이오마커는 두 개 이상의 바이오마커를 포함한다 예를 들어 염증성 사이토 카인 및/또는 환자의 특성, 즉, 종양 부하 및/또는 염증 마커의 발현으로서, 사이토 카인. 일부 측면에서, 둘 이상의 바이오마커는 동일한 샘플로부터 동시에 측정된다. 다른 측면에서, 2 개 이상의 바이오마커는 동일한 샘플 또는 피험자로부터의 상이한 샘플로부터 측정되거나 순차적으로 측정된다.
파라미터는 예를 들어, 투여 후, 최대 (피크) 혈장 농도 (Cmax), 피크 시간 (즉, 최대 혈장 농도 (Cmax)가 발생할 때; Tmax), 최소 혈장 농도(치료제, 예를 들어 CAR+ T 세포의 투여량 사이에서 최소 혈장 농도; Cmin), 제거 반감기(T1/2) 및 곡선 아래의 면적 (즉, 치료제 CAR+ T 세포의 시간 대 혈장 농도를 플롯팅하여 생성된 곡선 아래의 면적; AUC)인 약물동력학적 파라미터 이거나 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 파라미터는 환자의 단계 및/또는 환자의 질병 또는 상태의 하나 이상의 지표이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 파라미터는 종양 존재량의 지표이다. 일부 구현예에서, 종양 존재량의 지표는 종양의 체적 측정치이다. 일부 구현예에서, 체적 측정치는 종양 크기, 종양 직경, 종양 부피, 종양 질량, 종양 로드 또는 양과 같은, 병반의 측정, 종양-관련 부종, 종양-관련 괴사, 및/또는 전이의 수 또는 정도이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 병반의 면적은 모든 측정 가능한 종양의 가장 긴 직명 및 가장 긴 수직 직경의 결과물로 계산된다. 일부 경우에, 종양의 체적 측정치는 1차원의 측정이다. 일부 구현예에서, 직경의 결과물의 합 (SPD), 가장 긴 종양 직경 (LD), 가장 긴 종양 직경의 합 (SLD), 괴사, 종양 체적, 괴사 체적, 괴사-종양 비 (NTR), 종양 주위의 부종 (PTE) 및 부종-종양 비 (ETR)가 측정된다.
일부 구현예에서, 파라미터는 환자 속성, 인자 및/또는 특성이다. 일부 구현예에서, 파라미터는 전처리 측정, 예를 들어, 기준치 측정, 주입 전 측정 및/또는 전-림프구 고갈 측정 (pre-lymphodepletion measurement)이다. 일부 구현예에서, 파라미터는 치료 전에, 예를 들어, 세포 치료의 투여 전에, 또는 그의 제 1 투여 또는 투여 전에, 또는 임의의 전술한 것 및/또는 세포 치료 전의 임파선 전 치환술의 개시 후에 평가된다. 일부 구현예에서, 파라미터는 림프절 고갈 전에 평가된다.
일부 구현예에서, 전처리 측정 또는 C 반응성 단백질 (CRP), D-다이머 (피브린 분해 산물), 페리틴, IFN-α2, IFN-γ, IL의 레벨 및/또는 농도를 포함 IL-10, IL-15, IL-16, 젖산 탈수소효소 (LDH), 대 식세포 염증 단백질 (MIP-1α), MIP-1β, MCP-1, SAA-1 및/또는 TNF-α이다.
일부 구현예에서, 높거나 변수 중 하나 이상 낮은 전처리 측정 상관 및/또는 예를 들어, 높거나 낮은 약물 동력 학적 파라미터, C와 연관된 최대 CAR 또는 AUC, + T 세포 및/또는 CRS 또는 NT (예 : 심한 CRS 또는 중증 신약)와 같은 독성의 발생률이 높거나 낮다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 파라미터의보다 높거나 낮은 전처리 측정치는 보다 높은 또는 더 낮은 반응 (예를 들어 3개월 반응), 예를 들어 CR 및 PR을 포함하는 ORR 및/또는 반응의 높거나 낮은 지속성과 상관 및/또는 관련되며,
일부 구현예에서, 하나 이상의 파라미터의 높은 전-처리 측정은 예를 들어 CAR+ T 세포의 Cmax 또는 AUC 및/또는 높은 속도 및/또는 독성의 발병률 예를 들어, CRS 또는 NT, 중증의 CRS 또는 중증의 NT와 같은 높은 약물동력학적 파라미터와 상관관계에 있어가 이와 연관된다.
일부 구현예에서, 파라미터는 예를 들어, 치료, 예를 들어 세포 치료제의 투여 후에 피크 또는 최대 처리 및/또는 주입-후 측정 및/또는 세포 치료제의 투여 후 측정, 또는 이의 제1투여 또는 투여량, 또는 앞서 언급한 것들 중 임의의 것의 개시 후인 처리-후 측정이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 피크 측정은 세포 치료제의 투여 후 측정, 또는 이의 제1투여 또는 투여량, 또는 앞서 언급한 것들 중 임의의 것의 개시 후에, 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 21, 28, 30, 60 또는 90일 이상, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15주 이상 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18, 24, 48개월 이상 이내에 또는 대략 그 이내에와 같은, 세포 치료제 투여 및/또는 이의 개시 후의 특정 경과 후의 시간 이내에 피크 또는 최대 값이거나 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 파라미터는는 사이토카인 또는 케모카인을 포함하는 염증 마커의 피크 레벨 및/또는 농도이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 파라미터 보다 낮은 피크 측정치는 CAR + T 세포의 보다 높은 약물동력학 파라미터, 예를 들어, Cmax 또는 AUC 및/또는 보다 높은 속도 및/또는 CRS 또는 NT (예 : 심한 CRS 또는 심한 NT)와 같은, 독성 발생과 상관관계에 있거나 관련된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 파라미터의보다 낮은 전처리 측정치는 반응, 예를 들어 CR 및 PR을 포함하는 ORR 및/또는 반응의 지속성, 예를 들어 3개월 반응과 상관관계에 있거나 관련된다.
일부 구현예에서, 파라미터는 사이토카인 또는 케모카인을 비롯한 염증 마커의 피크 수준 및/또는 농도이거나 또는 이를 포함한다. CC 모티프 케모카인 리간드 13 (CCL13), C- 반응성 단백질 (CRP), CXC 모티프 케모카인 10 (CXCL10), IL-2, IL-2 및 IL-2를 포함하는 바이오마커의 피크 수준 및 / Lymphotoxin-alpha (LT-α), Monocyte chemoattractant protein-1 (MCP (IL-6), IL-6, IL-5, IL- (MIP-1α), MIP-1β, 혈청 아밀로이드 A1 (SAA-1), 형질 전환 성장 인자 베타 (TGF-β) 및 종양 괴사 인자 알파 (TNF-α)를 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 파라미터의 보다 높은 피크 수준 및/또는 농도는 독성의 보다 높은 비율 및/또는 발병율, 예를 들어 심한 CRS 또는 중증 NT와 같은 CRS 또는 NT와 상관 및/또는 관련된다. 일부 구현예에서, 낮은 피크 수준 및/또는 농도는보다 높은 반응, 예를 들어 CR 및 PR을 포함하는 ORR 및/또는 3개월 반응과 같은 반응의 더 높은 지속성과 상관 및/또는 연관된다.
일부 구현예에서, 임계값은 다음과 같다: 복수의 대조군 대상체들 중에서 적어도 하나의 대상체 내에서 측정된, 상기 체적 측정치 또는 염증 마커의 가장 높은 값을 넘는, 선택적으로 이러한 가장 높은 배수의 변화를 넘는 50% 이내, 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내, 또는 5% 이내이다. 일부 구현예에서, 임계값은 다음과 같다: 복수의 대조군 대상체들의 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 98% 이상 중에서 측정된 바와 같은 상기 체적 측정치 또는 염증 마커의 가장 높은 값을 넘는 값. 일부 구현예에서, 상기 복수의 대조군 대상체들은 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여량을 받기 전의 대상체 그룹이며, 여기서: 상기 그룹의 상기 대조군 대상체들 각각은 치료 범위 이내의 가장 높은 피크 CAR+ T 세포 보다 큰 혈액 내의 피크 CAR+ T 세포를 나타냈고; 상기 그룹의 상기 대조군 대상체들의 각각은 동일한 질병 또는 상태를 치료하기 위하여 상기 조작된 세포들의 투여량을 받은 후에, 독성, 선택적으로 신경 독성 또는 사이토카인 방출 증후군(cytokine release syndrome, CRS)에서, 2등급 또는 3등급 이상의 신경 독성 또는 3등급 이상의 CRS를 계속하여 나타냈으며; 상기 그룹의 상기 대조군 대상체들의 각각은 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여량의 투여 후에, 반응, 선택적으로 완전한 반응 (CR) 또는 부분적인 반응 (PR)을 나타내지 않았고; 및/또는 상기 그룹의 상기 대조군 대상체들의 각각은 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여량의 투여 후에, 선택적으로 3개월 이상 또는 6개월 이상 동안 지속적인 반응을 나타내지 않았다.
C. 측정용 시약
일부 구현예에서는, 파라미터는, 예를 들면, 환자 인자, 바이오마커, 염증 마커 및/또는 사이토카인은 검출할 수 있는 또는 파라미터에 특이적인 하나 이상의 시약을 사용하여 검출된다. 일부 구현예에서, 파라미터의 검출 또는 평가 및/또는 치료, 예를 들어 세포 요법의 조절을 위한 키트 및 제조 물품이 제공된다.
일부 구현예에서, 선택적으로 세포 치료법을 사용하여 치료 후보자인 대상체의 생물학적 시료를 분석하기 위해 시약을 사용하기 위한 지시가 제공되며, 상기 세포 치료는 선택적으로 재조합 수용체를 발현하는 유전적으로 조적된 세포의 투여량 또는 조성물을 포함한다. 제조물을 사용하는 일부 구현예에서, CC 모티프 케모카인 리간드 13 (CCL13), C- 반응성 단백질 (CRP), CXC 모티프 케모카인 10 (CXCL10), D- 다이머 (피브린 분해 산물), 페리틴 IL-6, IL-7, IL-8, 인터페론 감마 (IFN-γ), 락트산 탈수소 효소 (LDH (IFN-γ)), IFN-α2, IFN-α2, 인터루킨 -2 (MIP-1α), MIP-1β, 단핵구 화학 유인 물질 1 (MCP-1), SAA-1, 혈청 아밀로이드 A1 (SAA-1), 종양 괴사 인자 알파 (TNF-α)의 존재 또는 레벨이 검출되고 평가된다. 제품을 사용하는 일부 구현예에서, C- 반응성 단백질 (CRP), 적혈구 침강 속도 (ESR), 알부민, 페리틴, β2 마이크로 글로불린 (β2-M) 또는 젖산 탈수소효소 (LDH)의 수준 또는 존재를 검출하고 평가했다. 또한 종양 존재량을 나타내는 하나 이상의 환자 속성, 인자 및/또는 바이오마커를 검출하고 평가하는 방법이 제공된다.
일부 구현예에서, 상기 하나 이상의 파라미터의 값을 측정하는, 예를 들면, 바이오마커, 직접 또는 간접적으로 할 수 있는 시약을 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 파라미터, 예를 들어 바이오마커는 CC 모티프 케모카인 리간드 13 (CCL13) , C- 반응성 단백질 (CRP), CXC 모티프 케모카인 10 (CXCL10), D- 다이머 (피브린 분해 산물), 페리틴 IL-6, IL-7, IL-8, 인터페론 감마 (IFN-γ), 락트산 탈수소 효소 (LDH (IFN-γ)), IFN-α2, IFN-α2, 인터루킨 -2 (MIP-1α), MIP-1β, 단핵구 화학 유인 물질 1 (MCP-1), SAA-1, 혈청 아밀로이드 A1 (SAA-1), 종양 괴사 인자 알파 (TNF-α)의 레벨 또는 존재를 검출 및 평가하였다. 제품을 사용하는 일부 구현예에서, C- 반응성 단백질 (CRP), 적혈구 침강 속도 (ESR), 알부민, 페리틴, β2 마이크로 글로불린 (β2-M) 또는 젖산 탈수소효소 (LDH)의 수준 또는 존재를 검출 및 평가하였다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 파라미터, 예를 들어 바이오마커는 LDH이거나 또는 이를 포함한다.
일부 측면에서, 시약은 바이오마커에 특이적으로 결합하는 결합 분자이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 시약은 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 시약은 바이오마커의 기질 또는 결합 파트너이거나 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 환자 속성, 인자 및/또는 바이오마커 는 면역 분석법을 사용하여 평가된다. 예를 들어 면역 분석법은 효소 결합 면역 흡착 분석법 (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA), 효소 면역 분석법 (ELA), 방사 면역 분석법 (RIA), 표면 플라스몬 공명 (surface plasmon resonance, SPR), Western Blot, Lateral flow assay, 면역 조직 화학, 단백질 어레이 또는 면역-PCR (iPCR )이 환자의 속성, 요인 및/또는 바이오마커를 탐지하는 데 사용된다. 일부 구현예에서, 제조 물품을 사용하는 것은 종양 존재량을 나타내는 환자 속성, 인자 및/또는 바이오마커를 검출하는 것을 포함한다. 어떤 경우에는 환자의 속성, 요인 및/또는 바이오마커의 분석 또는 평가에 유동 세포 계측법을 사용한다. 어떤 경우에는, 시약은 환자의 속성, 인자 및/또는 바이오마커와 결합하는 가용성 단백질이다. 일부 예에서, 시약은 C- 반응성 단백질 (CRP), 적혈구 침강 속도 (ESR), 알부민, 페리틴, β2 마이크로 글로불린 (β2-M) 또는 젖산 탈수소효소 (LDH)와 결합하는 단백질이다.
C-반응성 단백질 (CRP)를 사용하여 평가되는 일부 구현예에서, 시험관 내 효소-결합 표본의 혈청, 혈장, 혈액 또는 인간 CRP의 정량적 측정을 얻기 위해 면역 측정법을 사용한다. 일부 구현예에서, CRP는 인간 면역 보강 면역 측정법 (ELISA)을 사용하여 검출된다. 일부 구현예에서 적혈구 침강 속도 (ESR)는 적혈구가 수직 피펫 또는 튜브에서 혈장으로부터 분리된 후 떨어진 거리 (밀리미터/시)를 측정함으로써 평가된다. 일부 측면에서, 알부민은 비색 시험 또는 시험 관내 효소 연쇄 면역 흡착 분석을 사용하여 평가된다. 일부 구현예에서, 알부민은 인간 효소 - 결합 면역 흡착 분석 (ELISA)을 사용하여 검출된다. 일부 구현예에서, 페리틴 또는 β2 마이크로 글로불린 은 면역 검정을 사용하여 평가되거나 ELISA를 사용하여 검출된다. 일부 측면에서, 젖산 탈수소 효소 (LDH)는 비색 시험 또는 시험 관내 효소 연쇄 면역 흡착 분석을 사용하여 평가된다.
본 발명에서 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되며, 폴리클로날 및 모노클로날 항체를 포함하고, 예를 들어 온전한 항체 및 기능적 (항원-결합) 항체 단편, 예를 들어 항원 결합 단편 (Fab), F(ab')2 Fab' 단편, Fv 단편, 재조합 IgG (rIgG) 단편, 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 가변 중쇄 (VH) 영역, 단일쇄 항체 단편, 예를 들어 단일쇄 가변 단편 (scFv) 및 단일 도메인 항체 (예를 들어, sdAb, sdFv, 나노바디) 단편이다. 상기 용어는 유전적으로 조작된 및/또는 달린 변형된 형태의 면역글로불린들, 예를 들어 인트라바디, 펩티바디, 키메라 항체, 완전 인간 항체, 인간화 항체, 및 헤테로 컨쥬게이트 항체, 다중 특이적, 예를 들어, 이중 특이적 항체, 디아바디, 트리아바디 및 테트라바디, 탠덤 디-scFv, 탠덤 트리-scFv이다. 달리 언급하지 않는 한, 용어 "항체"는 그의 기능적 항체 단편을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 상기 용어는 또한 온전한 또는 전장 항체를 포함하는데, 예를 들어 IgG 및 그 서브 클래스, IgM, IgE, IgA 및 IgD를 포함하는 임의의 부류 또는 하위-부류의 항체이다.
제공되는 항체 중에는 항체 단편이 있다. "항체 단편"은 온전한 항체가 결합하는 항원에 결합하는 온전한 항체의 일부분을 포함하는 온전한 항체 이외의 분자를 말한다. 항체 단편의 예는 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2; 디아바디; 선형 항체; 가변 중쇄 (VH) 영역, 단일-쇄 항체 분자, 예를 들어 scFv 및 단일 도메인 VH 단일 항체; 및 항체 단편으로부터 형성되는 다중 특이적 항체를 포함한다. 특정 구현예에서, 항체는 가변 중쇄 영역 및/또는 가변 경쇄 영역, 예를 들어 scFv을 포함하는 단일-쇄 항체 단편이다.
단일-도메인 항체는 항체의 중쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부분 또는 경쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부분을 포함하는 항체 단편이다. 특정 구현예에서, 단일-도메인 항체는 인간 단일 도메인 항체이다. 일부 구현예에서, CAR은 항원에, 예를 들어 종양 세포 또는 암세포와 같은 표적화되는 질환의 세포의 암 마커 또는 표면 항원, 예를 들어 본 발명에서 기술되거나 공지된 표적 항원에 특이적으로 결합하는 항체 중쇄 도메인을 포함한다.
항체 단편은 다양한 기술에 의해 제조될 수 있으며, 예를 들어 온전한 항체의 단백질 분해성 소화 및 재조합 숙주 세포에 의한 생산이 포함되지만 이에 한정되는 것은 아니다. 일부 구현예에서, 항체는 재조합적으로-생산된 단편인데, 예를 들어 자연적으로 존재하지 않는 배열을 포함하는 단편, 예를 들어 펩타이드 링커와 같은 합성 링커에 의해 결합되는 2 개 이상의 항체 영역 또는 사슬을 갖는 것들, 및/또는 자연적으로-존재하는 온전한 항체의 효소 소화에 의해 생성될 수 없는 것들이다. 일부 구현예에서, 상기 항체 단편은 scFv이다.
"인간화된" 항체는 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 아미노산 잔기가 비-인간 CDR로부터 유래된 것이며, 모든 또는 실질적으로 모든 FR 아미노산 잔기가 인간 FR로부터 유래된 항체이다. 인간화 항체는 임의로 인간 항체로부터 유래된 항체 불변 영역의 적어도 일부분을 포함할 수 있다. 비-인간 항체의 "인간화된 형태"는 모태 비-인간 항체의 특이성 및 친화성을 유지하면서 통상 인간에 대한 면역원성을 감소시키기 위해 인간화를 거친 비-인간 항체의 변이체를 말한다. 일부 구현예에서, 인간화 항체의 일부 FR 잔기는 예를 들어, 항체 특이성 또는 친화성을 회복 또는 개선시키기 위하여 비-인간 항체 (예를 들어, 그로부터 CDR 잔기가 유도된 항체)로부터의 상응하는 잔기로 치환된다.
인간 항체는 항원 공격에 반응 인간 가변 영역으로 완전한 인간 항체 또는 본래 항체를 생성하도록 변형된 트랜스제닉 동물에 면역원을 투여함으로써 제조될 수 있다. 그러한 동물은 전형적으로 내인성 면역 글로불린 좌위를 대체하거나 또는 염색체 외에서 존재하거나 동물의 염색체에 무작위로 통합된 인간 면역 글로불린 좌위 전부 또는 일부를 포함한다. 그러한 형질 전환 동물에서, 내인성 면역 글로불린 유전자좌는 일반적으로 불 활성화되었다. 인간 항체는 또한 인간 레파토리로부터 유래 된 항체 - 암호화 서열을 함유하는 파지 디스플레이 및 무 세포 라이브러리를 포함하는 인간 항체 라이브러리로부터 유도될 수 있다.
제공된 항체 중에서도 단일 클론 항체 단편을 포함한 단일 클론 항체이다. 본 명세서에서 사용된 용어 "모노클로날 항체"는 실질적으로 균질 한 항체의 집단으로부터 또는 그 내부에서 수득 된 항체를 지칭하며, 즉, 개체군을 포함하는 개개의 항체는 자연 발생 돌연변이를 함유하거나 모노클로날 이러한 변이체는 일반적으로 소량으로 존재한다. 상이한 에피토프에 대해 지시된 상이한 항체를 전형적으로 포함하는 폴리클로 날 항체 제제와 대조적으로, 모노클로날 항체 제제의 각각의 단일 클론 항체는 항원상의 단일 에피토프에 대해 지시된다. 이 용어는 임의의 특정 방법에 의한 항체 생산을 필요로하는 것으로 해석되어서는 안된다. 모노클로날 항체는 하이브리도마로부터의 생성, 재조합 DNA 방법, 파지 - 디스플레이 및 다른 항체 디스플레이 방법을 포함 하나 이에 한정되지 않는 다양한 기술에 의해 제조될 수있다.
또한 제공된 항체는 라벨이 부착된 바이오마커에 대한 항체를 포함하는 항체 면역 접합체이다. 이 항체 면역 접합체는 연구 또는 진단 용도로 사용될 수 있다. 표지는 검출 가능한 신호를 직접 또는 간접적으로 생성할 수 있는 것이 바람직하다. 예를 들어, 표지는 방사성 불투명하거나 3H, 14C, 32P, 35S, 123I, 125I, 131I와 같은 방사성 동위 원소 일 수 있다. 플루오레신이소티오시아네이트, 로다민 또는 루시퍼린과 같은 형광 (형광 발색) 또는 화학 발광 (발색단) 화합물; 알칼라인 포스파타제, β- 갈락토시다아제 또는 양 고추냉이 과산화 효소와 같은 효소; 영상 조제; 또는 금속 이온이다. 일부 구현예에서, 라벨은 예를 들어, 신티 연구 방사성 원자 99 TC 또는 123 과 같은 I 또는 (또한, 자기 공명 영상으로 알려진, MRI), 핵 자기 공명 (NMR) 영상화를위한 스핀 라벨, 지르코늄 89 인듐 -111, 불소 -19, 탄소 -13, 질소 -15, 산소 -17, 가돌리늄, 망간 또는 철을 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다. 지르코늄 -89는 다양한 금속 킬레이트 제와 복합체를 형성 할 수 있고, 예를 들어 PET 이미징 (WO 2011/056983)과 같은 항체에 접합될 수 있다.\
일부 구현예에서, 항체 면역 접합체는 간접적으로 검출 가능하다. 예를 들어, 면역 접합체 골수 세포 집단에서 발현되고 마커에 대한 항체에 특이적인 이차 항체 는 항체 면역 접합체를 검출하는데 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 환자 속성, 요소 및/또는 바이오마커를 검출하거나 특정하는 항체가 다양하게 알려진 분석법에 의하여 그들의 물리/화학적인 특성 및/또는 생물학적 활성에 대하여 동정, 스크리닝 또는 특징화된다. 일부 측면에서, 항체는 항원 결합 활성, 세포-기반 결합 분석을 포함하는, 예를 들어 면역 분석법, ELISA, Western blotting, 및/또는 유세포 분석과 같은 잘 알려진 방법에 의해 실험된다.
D. 샘플
특정 구현예에서, 하나 이상의 환자 속성, 요소 및/또는 바이오마커는 질병 존재량을 나타내는 요소의 배수를 결정하기 위하여 두 개 이상의 시점에서 수득된 하나 이상의 샘플에서 측정, 평가 및/또는 결정된다. 일부 구현예에서, 샘플은 대상체으로부터 채취, 수집 및/또는 수득되는 생물학적 샘플이다. 특정 구현예에서, 대상체는 질병 또는 증상을 갖고 및/또는 질병 또는 증상을 갖는 것으로 의심된다. 일부 구현예에서, 대상체는 치료를 받았거나, 받을 것이거나, 치료를 받을 후보자이다. 일부 구현예에서, 치료법은 세포 치료제의 투여이다. 특정 구현예에서, 치료법은 면역 요법이다. 특정 구현예에서, 세포 치료는 질병 또는 상태를 치료 및/또는 치료할 수 있다. 일부 구현예에서, 치료법은 하나 이상의 조작 된 세포를 함유하는 세포 치료제이다. 일부 구현예에서, 조작된 세포는 재조합 수용체를 발현한다. 특정 구현예에서, 재조합 수용체는 CAR이다. 특정 구현예에서, 샘플은 치료되었거나, 치료될 후보자이거나, 치료될 후보인 사람에게서 채취, 수집 및/또는 수득된다. 특정 구현예에서, 치료 또는 세포 요법과 같은 투여로 투여하기 전에 샘플을 채취, 수집 및/또는 수득한다.
일부 구현예에서, 샘플은 키메라 항원 수용체 (CAR) 발현하는 유전적으로 조작된 T 세포를 포함하거나 CAR을 발현하는 유전적으로 조작된 T 세포의 투여를 받기 이전에 대상체로부터 수득된다.
특정 구현예에서, 샘플은, 치료를 받았거나, 받을 것이거나, 치료를 받을 후보자인 대상체로부터 채취 수집 및/또는 수득될 수 있다. 특정 구현예에서, 치료 또는 세포 요법과 같은 투여로 투여하기 전에 샘플을 채취, 수집 및/또는 수득한다. 본 명세서에 기술된 방법, 키트 및 제조 물품에 따라, 샘플은 독성 또는 독성의 위험과 관련되고 및/또는 상호 관련되는 하나 이상의 환자 속성, 인자 및/또는 바이오마커에 대해 평가될 수 있다. 면역 요법을 받기 전에 대상체체에서 수집되거나 수득된 샘플에서 검출될 수 있는 독성 및/또는 반응을 유발할 위험과 관련이 있고 및/또는 상관관계가 있는 예시적인 환자 속성, 인자 및/또는 바이오마커는 C- 반응성 단백질 (CRP), 적혈구 침강 속도 (ESR), 알부민, 페리틴, β2 마이크로글로불린 (β2-M) 또는 젖산 탈수소효소이다. 일부 구현예에서, 면역 요법을 받기 전 또는 후에 대상체에서 수집되거나 수득된 샘플에서 검출될 수있는 독성 및/또는 반응을 유발할 위험과 관련 및/또는 상관관계에 있는 환자 속성, 인자 및/또는 바이오마커는 CC 모티프 케모카인 리간드 13 (CCL13), C- 반응성 단백질 (CRP) , CXC 모티프 케모카인 10 (CXCL10), D- 다이머 (피브린 분해 제품), 페리틴, IFN-α2, 인터루킨 -2 (IL-2), IL IL-6, IL-7, IL-8, 인터페론 감마 (IFN-γ), 젖산 탈수소효소 (LDH), 대식세포 염증 단백질 (MIP-1α), MIP-1β, 단핵구 화학 유인 물질 단백질 -1 (MCP-1), SAA-1, 혈청 아밀로이드 A1 (SAA-1), 종양 괴사 인자 알파 (TNF-α) 중에서 선택된다. 따라서, 일부 측면에서, 제공된 방법은 치료 영역 또는 범위 내에서 약물동력학 파라미터를 달성할 수 있는 세포 치료제 (예를 들어, CAR-T 세포)와 같은 면역 요법을 투여하기 전에 대상을 확인하는 것에 관한 것이다. 일부 구현예에서, 제공된 방법은 예를 들어, CAR+ T 세포를 조절, 선택적으로 증가 또는 감소시킬 수 있는 작용제를 대상체에게 투여함으로써, 면역 요법 또는 세포 요법을 조절하기 위하여, 면역 요법 또는 세포 요법을 투여하기 전 또는 후에, 대상체를 동정하는 것과 관련된다. 본 명세서에 기재된 바와 같이, 방법은 대상체가 면역 요법의 투여 후에 밀접하게 모니터링되어야 하는지 여부를 결정하기 위해 사용될 수 있고, 대상체는 외래 환자 치료의 지원자이거나 또는 병원 환경에서 치료를 받아야하거나 및/또는 CAR+ 세포 확장 및/또는 증식 및/또는 독성위 위험을 예방, 치료 또는 완화하기 위한 중재적 시술을 받아야 하는 후보자이다.
일부 구현예에서, 샘플은 상태 또는 질병을 앓고 있거나 의심되는 대상에게서 채취, 수집 및/또는 수득된다. 일부 구현예에서, 대상체는 암 또는 증식성 장애를 앓고 있거나 앓고 있다고 의심된다. 특정 구현예에서, 대상체는 항원과 관련되고 및/또는 항원을 발병하는 병든 세포와 관련되는 질병 또는 상태를 갖거나 갖는 것으로 의심된다. 일부 구현예에서, 질병 또는 상태, 예를 들어, 암 또는 증식성 장애는 αvβ6 인테그린 (avb6 인테그린), B 세포 성숙 항원 (BCMA), B7-H3, B7-H6, 탄산 탈수 효소 9 (CA9, 또한 CAIX 또는 G250으로도 알려짐), 암-고환 항원, 암/고환 항원 1B (CTAG, NY-ESO-1 및 LAGE-2로도 알려짐), 배암종 항원 (CEA), 사이클린, 사이클린 A2, C-C 모티프 케모카인 리간드 1 (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD138, CD171, 표피 성장 인자 단백질 (EGFR), 절단형 표피 성장 인자 단백질 (tEGFR), III 형 상피 성장 인자 수용체 돌연변이 (EGFR vIII), 상피 당단백 2 (EPG-2), 상피 당단백 40 (EPG-40), 에프린B2, 에프린 수용체 A2 (EPHa2), 에스트로겐 수용체, Fc 수용체 유사 5 (FCRL5, Fc 수용체 상동체 5 또는 FCRH5로도 알려짐), 태아 아세틸콜린 수용체 (태아 AchR), 엽산 결합 단백질 (FBP), 엽산 수용체 알파, 강글리오사이드 GD2, O-아세틸 화 GD2 (OGD2), 강글리오사이드 GD3, 당단백질 100 (gp100), G 단백질 결합 수용체 5D (GPCR5D), Her2/neu (수용체 타이로신 키나아제 erbB2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), erbB 이량체, 인간 고분자량-흑색종-관련 항원 (HMW-MAA), 헤파티티스 B 표면 항원, 인간 백혈구 항원 A1 (HLA-A1), 인간 백혈구 항원 A2 (HLA-A2), IL-22 수용체 알파 (IL-22Ra), IL-13 수용체 알파 2 (IL-13Ra2), 키나아제 삽입 도메인 수용체 (kdr), 카파 경쇄, L1 세포 부착 분자 (L1CAM), L1-CAM의 CE7 에피토프, 류신 리치 리피트 함유 8 패밀리 멤버 A (LRRC8A), 루이스 Y, 흑색종-관련 항원 (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 메소텔린, c-Met, 쥐과 사이토메갈로바이러스 (CMV), 뮤신 1 (MUC1), MUC16, 자연 킬러 그룹 2 멤버 D (NKG2D) 리간드, 멜란 A (MART-1), 신경 세포 접착 분자 (NCAM), 종측면아성 항원, 흑색종 우선 발현 항원 (PRAME), 프로게스테론 수용체, 전립선 특이 항원, 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA), 전립선 특이 막 항원 (PSMA), 수용체 타이로신 키나아제 유사 희귀 수용체 1 (ROR1), 서바이빈 (survivin), 영양막 당단백질 (TPBG, 5T4로도 알려짐), 종양-관련 당단백질 72 (TAG72), 혈관 내피 장 인자 수용체 (VEGFR), 혈관 내피 성장 인자 수용체 2 (VEGFR2), 윌름스 종양 1 (WT-1), 병원체-특이적 항원, 또는 보편적 태그 관련 항원, 및/또는 비오틴화 분자, 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원체에 의해 발현되는 분자로 구성된 군에서 선택되는 항원이다. 본 발명의 일부 구현예에서, 항원은 B 세포 악성종양과 관련된 항원을 포함하는데, 예를 들어 다수의 공지된 B 세포 마커 중 어느 하나이다. 일부 구현예에서, 수용체에 의하여 표적화되는 항원은 CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Ig카파, Ig람다, CD79a, CD79b 또는 CD30이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 항원은 병원체- 특이적 항원 또는 병원체-발현 항원이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 항원은 바이러스 항원 (예를 들어, HIV, HCV, HBV 등으로부터의 바이러스 항원), 박테리아 항원 및/또는 기생충 항원과 연관된다. 특정 구현예에서, 대상체는 질병 또는 상태를 갖거나, CD19와 연관 및/또는 CD19를 발현하는 질병에 걸린 세포와 연관된 질병 또는 상태를 갖는다고 의심된다.
일부 구현예에서, 샘플은 B 세포 악성 종양 또는 혈액학적 악성 종양인 암 또는 증식성 질병을 앓고 있거나 갖는 것으로 의심되는 대상체로부터 채취, 수집 및/또는 수득한다. 일부 구현예에서, 암 또는 증식성 질병은 육종, 암종 또는 림프종, 선택적으로 비-호지킨 림프종 (NHL), 확산성 B 세포 림프종 (DLBCL), 백혈병, 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 급성 림프구성 백혈병 (ALL), 급성 골수성 백혈병(AML) 및 골수종이다. 일부 구현예에서, 암 또는 증식성 질병은 ALL이다. 일부 구현예에서, 대상체는 ALL을 앓거나 앓는 것으로 의심된다. 일부 구현예에서, ALL은 성인 ALL이다. 특정 구현예에서, ALL은 소아 ALL이다.
특정 구현예에서, 두 개 이상의 샘플이 치료제의 투여 이전에 대상체로부터 수득, 수집 또는 채취된다. 특정 구현예에서, 샘플은 생물학적 샘플이다. 특정 구현예에서, 샘플은 혈액 샘플, 혈장 샘플 또는 혈청 샘플이다. 특정 구현예에서, 샘플은 조직 샘플이다. 일부 구현예에서, 샘플은 생검이다. 일부 구현예에서, 샘플은 상태 또는 질병을 확인 및/또는 동정하기 위하여 일상적인 평가 또는 혈액 추출과 같은, 스크리닝 세션에서 대상체로부터 수득된다.
D. 세포 확장 및 활성 조절제
일부 구현예에서, 상기 방법은 T 세포, 예를 들어, T 세포 기반 치료를 위해 투여된 T 세포의 노출, 지속성 및 증식의 평가를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명에서 제공되는 방법에서 세포, 예를 들어 면역요법, 예를 들어 T 세포 요법을 위하여 투여된 세포의 노출, 또는 증식 연장 및/또는 지속성, 및/또는 그 세포의 세포 표현형이나 기능적 활성의 변화는 상기 T 세포의 특징을 시험관 내 또는 생체 외로 평가함으로써 측정될 수 있다. 일부 구현예에서, 그러한 평가는 본 발명에서 제공되는 세포 요법을 투여하지 전 또는 후에, 면역요법, 예를 들어 T 세포 요법에 사용되는 T 세포의 기능을 결정 또는 확인하는데 이용될 수 있다.
일부 구현예에서, T 세포의 투여 다음, 요법의 투여 전, 도중 및/또는 그 후에, 대상체에서 재조합 수용체를 발현하는 세포 (예를 들어, T 세포 기반 요법을 위하여 투여된 CAR-발현 세포)의 존재 및/또는 양이 검출된다. 특정 구현예에서, T 세포의 투여 다음, 요법의 투여 전, 도중 및/또는 그 후에, 대상체에서 재조합 수용체를 발현하는 세포의 존재 및/또는 양이 검출된다. 일부 측면에서, 예를 들어 지속성을 모니터링하기 위하여, 세포의 존재 및/또는 양은 DNA 마이크로그램당 상기 수용체, 예를 들어 CAR을 인코딩하는 DNA 또는 플라스미드의 카피 수, 또는 샘플, 예를 들어 혈액 또는 혈청의 마이크로리터당 또는 샘플의 마이크로리터당 말초 혈액 단핵구 세포 (PBMCs) 또는 백혈구 또는 T 세포의 총 수당 수용체-발현, 예를 들어 CAR-발현 세포의 수로서 정량화된다. 일부 경우, 조작된 세포, 예를 들어 재조합 수용체-발현 세포의 존재는 대상체의 다른 생물학적 샘플, 예를 들어 기관 또는 조직 샘플 (예를 들어, 질병 위치, 예를 들어 종양 샘플)에서 검출되거나 모니터링될 수 있다.
일부 측면에서, 정량적 PCR (qPCR)은 대상체의 혈액 또는 혈청 또는 기관 또는 조직 샘플 (예를 들어, 질병 위치, 예를 들어 종양 샘플)에서 재조합 수용체를 발현하는 세포 (예를 들어, T 세포 기반 요법에서 투여되는 CAR-발현 세포)의 양을 평가하는데 사용된다. 일부 경우, 재조합 수용체를 발현하는 세포의 존재 또는 양을 평가하는 방법은 조작된 세포가 투여된 대상체로부터 말초 혈액 (또는 다른 생물학적 샘플)을 추출하고, 상기 말초 혈액 또는 생물학적 샘플에서 조작된 세포의 수 또는 비율을 결정하는 것을 포함할 수 있다. 세포를 선택 및/또는 단리하는 접근법은 키메라 항원 수용체 (CAR)-특이적 항체의 사용 (예를 들어, [Brentjens et al., Sci. Transl. Med. 2013 Mar; 5(177): 177ra38]), 단백질 L (Zheng et al., J. Transl. Med. 2012 Feb; 10:29), 에피토프 태그, 예를 들어 CAR 내 특정 위치로 직접 도입된 Strep-Tag 서열의 사용으로, 이에 의하여 Strep-Tag에 대한 결합 시약이 CAR을 직접 평가하는데 이용되고 ([Liu et al. (2016) Nature Biotechnology, 34:430]; 국제 특허 출원 공개 WO2015095895) 및 CAR 폴리펩타이드에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체의 사용 (예를 들어 국제 특허 출원 공개 WO2014190273 참조)을 들 수 있다. 일부 경우, 외인성 마커 유전자가 조작된 세포 요법과 관련하여 이용되어 세포의 검출 또는 선택을 가능케 하고, 일부 경우에 또한 세포의 자살을 촉진할 수 있다. 일부 경우에, 절단된 표피 성장 인자 수용체 (EGFRt)는 형질도입된 세포에서 대상 전이유전자 (CAR 또는 TCR)와 함께 공-발현될 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 8,802,374 참조). EGFRt는 항체 세툭시맙 (Erbitux®) 또는 다른 치료용 항-EGFL 항체 또는 결합 분자에 의해 인식되는 에피토프를 포함할 수 있는데, 이는 EGFRt 컨스트럭트 및 다른 재조합 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체 (CAR)로 조작된 세포를 동정하거나 선택, 및/또는 상기 수용체를 발현하는 세포를 제거하거나 분리시키는데 사용될 수 있다. 미국 특허 8,802,374 및 [Liu et al., Nature Biotech. 2016 April; 34(4): 430-434] 참조.
일부 구현예에서, 세포는 T 세포, 예를 들어, CAR-발현 T 세포의 투여 다음 4, 14, 15, 27 또는 28 일에 또는 적어도 그 때 대상체에서 검출된다. 일부 측면에서, 세포는 T 세포, 예를 들어, CAR-발현 T 세포의 투여 다음 2, 4, 또는 6 주에 또는 적어도 그 때, 또는 3, 6, 또는 12, 18, 또는 24, 또는 30 또는 36 개월에 또는 적어도 그 때, 또는 1, 2, 3, 4, 5 년, 또는 그 이상에 또는 적어도 그 때 검출된다. 특정 구현예에서, 세포는 대상체의 부위, 예를 들어 대상체의 조직, 기관, 매쓰 또는 병변 부위 또는 그의 영역 또는 일부분의 파괴 다음 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 또는 28 일에 또는 적어도 그 때 대상체에서 검출된다. 일부 구현예에서, 세포는 대상체의 부위, 예를 들어 대상체의 조직, 기관, 매쓰 또는 병변 부위 또는 그의 영역 또는 일부분의 치료 및/또는 파괴 다음 2, 4, 또는 6 주에 또는 적어도 그 때에, 또는 3, 6, 또는 12, 18, 또는 24, 또는 30 또는 36 개월에 또는 적어도 그 때에, 또는 1, 2, 3, 4, 5년, 또는 그 이상에 또는 적어도 그 때 검출된다.
일부 구현예에서, 세포의 존재 및/또는 양은 대상체의 부위 예를 들어 대상체의 조직, 기관, 매쓰 또는 병변 부위 또는 그의 영역 또는 일부분이 치료 기간에 걸쳐 하나 이상의 치료, 절차 또는 조작으로 치료 및/또는 파괴된 후 일정 시간 후에 검출되고, 일정 시간은 최초의 치료, 절차 또는 조작의 개시로부터 측정된다. 특정 구현예에서, 세포의 존재 및/또는 양은 대상체의 부위 예를 들어 대상체의 조직, 기관, 매쓰 또는 병변 부위 또는 그의 영역 또는 일부분이 치료 기간에 걸쳐 하나 이상의 치료, 절차 또는 조작으로 치료 및/또는 파괴된 후 일정 시간 후에 검출되고, 일정 시간은 최후의 치료, 절차 또는 조작의 종결로부터 측정된다.
증식 및/또는 지속성의 표지가 되는 노출, 예를 들어, 세포 수, 예를 들어, T 세포 요법을 위하여 투여된 T 세포의 수는 상기 대상체가 노출되는 세포의 최대 수, 검출 가능한 세포의 지속 시간 또는 특정 수 또는 백분율 이상의 세포, 시간에 따른 세포 수에 대한 곡선 아래의 면적, 및/또는 그들의 조합 및 그들의 표지자의 관점에서 기술될 수 있다. 이러한 결과는 공지의 방법을 사용하여 평가될 수 있는데, 예를 들어 특정 샘플, 예를 들어 혈액, 혈청, 혈장 또는 조직, 예를 들어 종양 샘플에서 핵산 또는 DNA의 총량과 비교하여 재조합 수용체를 인코딩하는 핵산의 카피 수를 검출하는 qPCR 및/또는 상기 수용체들에 특이적인 항체를 사용하여 일반적으로 상기 수용체를 발현하는 세포를 검출하는 유세포 분석이다. 세포-기반 분석은 또한 기능성 세포의 수 또는 백분율을 검출하는데 사용될 수 있는데, 상기 기능성 세포는 예를 들어 질환 또는 질병 상태의 세포와 결합 및/또는 그를 중화 및/또는 그에 대한 반응, 예를 들어 세포독성 반응을 유도하거나 상기 수용체에 의하여 인식되는 항원을 발현할 수 있는 세포이다.
일부 측면에서, 대상체의 상기 세포에 대한 노출 증가는 세포의 증식 증가를 포함한다. 일부 구현예에서, 수용체 발현 세포, 예를 들면, CAR-발현 세포는, T-세포, 예를 들어, CAR-발현 T 세포의 투여 다음에 대상체에서 증식한다. 특정 구현예에서, 부위 (예를 들어, 대상체의 조직, 기관, 매쓰 또는 병변 부위 또는 그의 영역 또는 일부분)를 파괴하는 것은, 수용체 발현 세포, 예를 들어 CAR-발현 세포에 대한 노출 증가라는 결과를 낳는데, 예를 들어 상기 파괴 직전의 세포 증식과 비교하여 또는 상기 부위 (예를 들어 대상체의 조직, 기관, 매쓰 또는 병변 부위 또는 그의 영역 또는 일부분)의 파괴 전에 대상체에서의 세포 증식의 피크와 비교하여 대상체의 세포 증식의 증가이다.
일부 측면에서, 예를 들어 부위 (예를 들어, 대상체의 조직, 기관, 매쓰 또는 병변 부위 또는 그의 영역 또는 일부분)을 파괴하는 방법은, 예를 들어 유세포 분석에 의하여 측정되는 바, 투여된 세포의 높은 생체 내 증식이라는 결과를 낳는다. 일부 측면에서, 피크 세포의 분율이 높게 검출된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 대상체의 혈액 또는 질환-위치 또는 그들의 백혈구 분획, 예를 들어 PBMC 분획 또는 T 세포 분획 중의 T 세포, 예를 들어, CAR-발현 T 세포의 투여 다음 피크 또는 최대 수준에서, 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 90%의 세포가 재조합 수용체, 예를 들어 CAR을 발현한다.
일부 구현예에서, 예를 들어 부위 (예를 들어, 대상체의 조직, 기관, 매쓰 또는 병변 부위 또는 그의 영역 또는 일부분)를 파괴하는 방법은 대상체의 혈액 또는 혈청 또는 다른 체액 또는 기관 또는 조직에서 DNA 마이크로그램당 상기 수용체, 예를 들어 CAR를 인코딩하는 핵산 카피 100, 500, 1000, 1500, 2000, 5000, 10,000 또는 15,000 이상, 또는 말초 혈액 단핵구 세포 (PBMCs)의 총 수, 단핵구 세포의 총 수, T 세포의 총 수 또는 총 마이크로리터 수당 수용체-발현, 예를 들어 CAR-발현 세포 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 또는 0.9 이상의 최대 농도라는 결과를 낳는다. 일부 구현예에서, 상기 수용체를 발현하는 세포는, 상기 T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포의 투여 개시 다음 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36, 48, 또는 52 주 동안, 또는 그러한 투여 다음 1, 2, 3, 4, 5 년 동안 또는 그 이상, 대상체의 혈액 중 총 PBMC의 10, 20, 30, 40, 50, 또는 60% 이상으로 검출되고, 및/또는 그러한 수준으로 검출된다.
일부 측면에서, 상기 방법은, 대상체의 예를 들어 혈청, 혈장, 혈액 또는 조직, 예를 들어 종양 샘플에서, DNA 마이크로그램당 상기 재조합 수용체, 예를 들어 CAR을 인코딩하는 핵산 카피 수에 있어서 2-배 이상, 4-배 이상, 10-배 이상 또는 20-배 이상 증가라는 결과를 낳는다.
일부 구현예에서, 상기 수용체를 발현하는 세포는 대상체의 예를 들어 혈청, 혈장, 혈액 또는 조직, 예를 들어 종양 또는 병변 샘플에서, 예를 들어 특정 방법, 예를 들어 qPCR 또는 유세포 분석-기반 검출 방법에 의하여, T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포의 투여 다음 적어도 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 또는 60 일 또는 그 이상의 일수 동안, T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포의 투여 다음 적어도 (약) 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 또는 24 주 또는 그 이상의 주수 동안 검출된다. 특정 구현예에서, 상기 수용체를 발현하는 세포는 대상체의 혈청, 혈장, 혈액 또는 조직에서 부위 (예를 들어, 대상체의 조직, 기관, 매쓰 또는 병변 부위 또는 그의 영역 또는 일부분)의 치료 및/또는 파괴 다음 적어도 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 또는 60 일 또는 그 이상의 일수 동안, 상기 병변의 치료 및/또는 파괴 다음 적어도 (약) 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 또는 24 주 또는 그 이상의 주수 동안 검출된다.
일부 측면에서, 약 1 x 102, 약 1 x 103, 약 1 x 104, 약 1 x 105, 또는 약 1 x 106 또는 약 5 x 106 또는 약 1 x 107 또는 약 5 x 107 또는 약 1 x 108 개 이상의 재조합 수용체-발현, 예를 들어 CAR-발현 세포 및/또는 마이크로리터당 적어도 10, 25, 50, 100, 200, 300, 400, 또는 500, 또는 1000 개 수용체-발현 세포가 대상체에서, 또는 그의 유액, 혈장, 혈청, 조직 또는 구획에서, 예를 들어 그의 혈액, 예를 들어 말초 혈액, 또는 질환 위치, 예를 들어 병변 종양 내에서 검출 가능하거나 존재한다. 일부 구현예에서, 이러한 세포 수 또는 농도는, T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포의 투여 다음, 적어도 약 20 일간, 적어도 약 40 일간, 또는 적어도 약 60 일간, 또는 적어도 약 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12 개월간, 또는 적어도 2 또는 3 년간 대상체에서 검출 가능하다. 특정 구현예에서, 이러한 세포 수 또는 농도는, 상기 변변의 치료 및/또는 파괴 다음, 적어도 약 20 일간, 적어도 약 40 일간, 또는 적어도 약 60 일간, 또는 적어도 약 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12 개월간, 또는 적어도 2 또는 3 년간 대상체에서 검출 가능하다. 이러한 세포 수는 유세포 분석-기반의 또는 정량적 PCR-기반의 방법에 의하여 검출되고 공지의 방법을 이용하여 총 세포 수가 외삽될 수 있다. 예를 들어, [Brentjens et al., Sci Transl Med . 2013 5(177)], [Park et al, Molecular Therapy 15(4):825-833 (2007)], [Savoldo et al., JCI 121(5):1822-1826 (2011)], [Davila et al., (2013) PLoS ONE 8(4):e61338], [Davila et al., Oncoimmunology 1(9):1577-1583 (2012)], [Lamers, Blood 2011 117:72-82], [Jensen et al., Biol Blood Marrow Transplant 2010 September; 16(9): 1245-1256], [Brentjens et al., Blood 2011 118(18):4817-4828] 참조.
일부 측면에서, 예를 들어 말초 혈액 또는 골수 또는 다른 구획에서 면역조직화학, PCR 및/또는 유세포 분석에 의하여 측정되는, 100 개 세포당 재조합 수용체를 인코딩하는 핵산의 카피 수, 예를 들어 벡터 카피 수는, 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포의 투여 다음 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 5 주, 또는 적어도 약 6 주에, 또는 적어도 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8. 9, 10, 11, 또는 12 개월에 또는 적어도 2 또는 3 년에 적어도 0.01, 적어도 0.1, 적어도 1 또는 적어도 10이다. 일부 구현예에서, 게놈 CNA 마이크로그램당 상기 수용체, 예를 들어 CAR을 발현하는 벡터의 카피 수는 T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포의 투여 다음 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 또는 적어도 약 4 주에 또는 그러한 투여 다음 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12 개월 또는 적어도 2 또는 3 년에, 적어도 100, 적어도 1000, 적어도 5000 또는 적어도 10000 또는 적어도 15000 또는 적어도 20000이다.
특정 구현예에서, 면역조직화학, PCR 및/또는 유세포 분석에 의하여 측정되는, 100 개 세포당 재조합 수용체를 인코딩하는 핵산의 카피 수, 예를 들어 벡터 카피 수는, 병변의 치료 및/또는 파괴 다음 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 5 주, 또는 적어도 약 6 주에, 또는 적어도 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8. 9, 10, 11, 또는 12 개월에 또는 적어도 2 또는 3 년에 적어도 0.01, 적어도 0.1, 적어도 1 또는 적어도 10이다. 일부 구현예에서, 게놈 CNA 마이크로그램당 상기 수용체, 예를 들어 CAR을 발현하는 벡터의 카피 수는 병변의 치료 및/또는 파괴 다음 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 또는 적어도 약 4 주에 또는 병변의 치료 및/또는 파괴 다음 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12 개월 또는 적어도 2 또는 3 년에, 적어도 100, 적어도 1000, 적어도 5000 또는 적어도 10000 또는 적어도 15000 또는 적어도 20000이다.
일부 측면에서, 세포에 의하여 발현되는 수용체, 예를 들어, CAR는 대상체, 그의 혈장, 혈청, 조직 및/또는 질환 위치, 예를 들어, 종양 위치에서의 정량적 PCR (qPCR) 또는 유세포 분석법에 의해, 상기 세포의 투여 다음, 예를 들어 T 세포의 투여 개시 다음 적어도 약 3 개월, 적어도 약 6 개월, 적어도 약 12 개월, 적어도 약 1 년, 적어도 약 2 년, 적어도 약 3 년, 3 년보다 더 후의 시간에 검출 가능하다. 특정 구현예에서, 세포에 의하여 발현되는 수용체, 예를 들어, CAR는 대상체, 그의 혈장, 혈청, 조직 및/또는 질환 위치, 예를 들어, 병변 또는 종양 위치에서의 정량적 PCR (qPCR) 또는 유세포 분석법에 의해, 상기 병변의 치료 및/또는 파괴 다음 적어도 약 3 개월, 적어도 약 6 개월, 적어도 약 12 개월, 적어도 약 1 년, 적어도 약 2 년, 적어도 약 3 년, 3 년보다 더 후의 시간에 검출 가능하다. 일부 구현예에서, T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포의 투여 다음 시간 경과에 따른 대상체의 유액, 혈장, 혈청, 혈액, 조직, 기관 및/또는 질환 위치, 예를 들어 종양 위치에서의 수용체 (예를 들어 CAR)-발현 세포의 농도에 대한 곡선 아래의 면적 (AUC)이 측정된다.
V. 조작된 세포들
일부 구현예에서, 제공된 방법은 다양한 종양을 포함하는 질병 또는 상태의 치료와 같은 세포 치료의 투여와 관련된다. 일부 구현예에서, 제공된 방법에 따른 사용을 위한 T 세포 요법은 질병 또는 상태와 관련된 분자를 인식 및/또는 특이 적으로 결합하도록 설계된 재조합 수용체를 발현하고 그러한 분자에 결합 할 때 그러한 분자에 대한 면역 반응과 같은 반응을 일으키는 조작된 세포를 투여하는 것을 포함한다. 수용체는 키메라 수용체, 예를 들어, 키메라 항원 수용체 (CAR) 및 트랜스제닉 T 세포 수용체 (TCR) 또는 키메라 자기 항체 수용체 (CAAR)를 포함하는 다른 트랜스제닉 항원 수용체를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 세포는 조작된 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체 (CAR) 또는 T 세포 수용체 (TCR)와 같은 조작된 항원 수용체를 함유하거나 함유하도록 조작된다. 또한 그러한 세포의 대상체군, T 세포 또는 CD8+ 또는 CD4+ 세포와 같은 특정 유형의 세포가 농축되거나 선택된 것과 같은 그러한 세포를 함유하는 조성물 및/또는 이러한 세포가 농축된 조성물이 제공된다. 조성물 중에는 입양 세포 치료와 같은 투여용 제약 조성물 및 제형이 있다. 또한, 예를 들어, 대상체에게 세포 및 조성물을 투여하기 위한 치료 방법이 제공된다.
따라서, 일부 구현예에서, 세포는 유전자 조작을 통해 도입된 하나 이상의 핵산을 포함하고, 이에 의해 이러한 핵산의 재조합 또는 유전자 공학적 생성물을 발현한다. 일부 구현예에서, 예를 들어 사이토카인 또는 활성화 마커의 발현에 의해 측정될 때, 증식, 생존 및/또는 활성화와 같은 반응을 유도하는 자극과 결합시킴으로써 세포를 먼저 자극함으로써 유전자 전달을 수행하고, 이어서 활성화된 세포의 형질 도입 및 배양물의 임상적 적용을 위한 충분한 수의 확장을 포함한다.
A. 재조합 수용체
세포는 일반적으로 재조합 수용체, 예를 들어 항원 수용체, 예를 들어 기능적 비-TCR 항원 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체 (CAR) 및 다른 항원-결합 수용체, 예를 들어 트랜스제닉 T 세포 수용체 (TCR)를 발현한다. 또한, 수용체 중에는 기타 키메라 수용체, 예를 들어 키메라 자가항체 수용체 (CAAR)가 있다.
1. 키메라 항원 수용체 (CAR)
일부 구현예에서, 재조합 수용체는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 포함한다. 일부 구현예에서, CAR은 특정 세포 유형의 표면상에 발현되는 항원과 같은 특정 항원 (또는 마커 또는 리간드)에 특이적이다. 일부 구현예에서, 상기 항원은 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 이는 탄수화물 또는 다른 분자이다. 일부 구현예에서, 상기 항원은 정상 세포 또는 비-표적화된 세포 또는 조직과 비교하여, 질병 또는 질병 상태의 세포, 예를 들어, 종양 또는 병원성 세포에서 선택적으로 발현되거나 과발현된다. 다른 구현예에서, 항원은 정상 세포 상에서 발현되고 및/또는 조작된 세포 상에서 발현된다.
특정 구현예에서, 재조합 수용체, 예를 들어 키메라 수용체는 세포 내 신호전달 영역을 함유하는데, 이는 세포질 신호전달 도메인 (세포 내 신호전달 도메인으로도 불림), 예를 들어 T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있는 세포질 (세포 내) 영역, 예를 들어 T 세포 수용체 (TCR) 요소의 세포질 신호전달 도메인 (예를 들어, CD3-제타 (CD3ζ) 쇄의 제타쇄의 세포질 신호전달 도메인 또는 그의 기능적 변이체 또는 신호전달 부분)을 포함하고 및/또는 면역수용체 티로신계 활성화 모티프 (ITAM)를 포함한다.
일부 구현예에서, 키메라 수용체는 항원 (또는 리간드)에 특이적으로 결합하는 세포 외 결합 도메인을 더 함유한다. 일부 구현예에서, 키메라 수용체는 항원에 특이적으로 결합하는 세포 외 항원-인식 도메인을 함유하는 CAR이다. 일부 구현예에서, 항원 (또는 리간드)은 세포 표면에서 발현되는 단백질이다. 일부 구현예에서, CAR은 TCR-유사 CAR이고 항원은 가공된 펩타이드 항원, 예를 들어 TCR과 같이 주조직 적합성 복합체 (MHC) 분자의 관점에서 세포 표면상에서 인식되는 세포 내 단백질의 펩타이드 항원이다.
CAR을 포함하는 예시적인 항원 수용체 및 이러한 수용체를 조작하고 세포 내로 도입시키는 방법은, 예를 들어 국제 특허 출원 공개 번호 WO200014257, WO2013126726, WO2012/129514, WO2014031687, WO2013/166321, WO2013/071154, WO2013/123061, U.S. 특허 출원 공개 번호 US2002131960, US2013287748, US20130149337, U.S. 특허 번호: 6,451,995, 7,446,190, 8,252,592, , 8,339,645, 8,398,282, 7,446,179, 6,410,319, 7,070,995, 7,265,209, 7,354,762, 7,446,191, 8,324,353, 및 8,479,118, 및 유럽 특허 출원 번호 EP2537416에 개시된 것들 및/또는 [Sadelain et al., Cancer Discov. 2013 April; 3(4): 388-398]; [Davila et al. (2013) PLoS ONE 8(4): e61338]; [Turtle et al., Curr. Opin. Immunol., 2012 October; 24(5): 633-39]; [Wu et al., Cancer, 2012 March 18(2): 160-75]에 개시된 것들을 포함한다. 일부 측면에서, 항원 수용체는 미국 특허 7,446,190에 기재된 바와 같은 CAR 및 국제 특허 출원 공개 WO/2014055668 A1에 기재된 것들을 포함한다. CAR의 예는 전술한 간행물, 예를 들어 WO2014031687, US 8,339,645, US 7,446,179, US 2013/0149337, U.S. 특허 7,446,190, US 특허 8,389,282, [Kochenderfer et al., 2013, Nature Reviews Clinical Oncology, 10, 267-276 (2013)]; [Wang et al. (2012) J. Immunother. 35(9): 689-701]; 및 [Brentjens et al., Sci Transl Med. 2013 5(177)] 중 어느 하나에 개시된 CAR을 포함한다. 또한, WO2014031687, US 8,339,645, US 7,446,179, US 2013/0149337, U.S. 특허 7,446,190, 및 US 특허 8,389,282 참조. CAR과 같은 키메라 수용체는 일반적으로 세포 외 항원 결합 도메인, 예를 들어 항체 분자의 일부분, 일반적으로 항체의 가변 중쇄 (VH) 영역 및/또는 가변 경쇄 (VL) 영역, 예를 들어 scFv 항체 단편을 포함한다.
일부 구현예에서, 수용체에 의해 표적화되는 항원은 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 이는 탄수화물 또는 다른 분자이다. 일부 구현예에서, 항원은, 정상 세포 또는 비-표적화된 세포 또는 조직과 비교하여, 질병 또는 질병 상태의 세포, 예를 들어, 종양 또는 병원성 세포 상에서 선택적으로 발현되거나 과발현된다. 다른 구현예에서, 항원은 정상 세포 상에서 발현되고 및/또는 조작된 세포 상에서 발현된다.
일부 구현예에서, CAR은 특정 항원 (또는 마커 또는 리간드)에 대한 특이성을 가지고 구성되는데, 예를 들어 입양 요법에 의하여 표적화되는 특정 세포 유형에서 발현되는 항원, 예를 들어 암 마커 및/또는 완충 반응 (dampening response)을 유도하려는 목적의 항원, 예를 들어 정상 세포 또는 비-질병 세포 유형 상에서 발현되는 항원이다. 따라서, CAR은 전형적으로 그의 세포 외 부분에 하나 이상의 항원 결합 분자, 예를 들어 하나 이상의 항원-결합 단편, 도메인 또는 일부분, 또는 하나 이상의 항체 가변 도메인 및/또는 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, CAR은 항체 분자의 항원-결합 부분 또는 부분들을 포함하는데, 예를 들어 모노클로날 항체 (mAb)의 가변 중쇄 (VH) 및 가변 경쇄 (VL)로부터 유래되는 단일-쇄 항원 단편 (scFv)이다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 항원 수용체와 같은 재조합 수용체의 일부로서 세포 상에서 발현된다. 항원 수용체 중에는 키메라 항원 수용체 (CAR)와 같은 기능성 비-TCR 항원 수용체가 있다. 일반적으로, 펩타이드-MHC 복합체에 대한 TCR-유사 특이성을 나타내는 항체 또는 항원 결합 단편을 함유하는 CAR은 또한 TCR-유사 CAR로 지칭될 수 있다. 일부 구현예에서, TCR-유사 CAR의 MHC-펩타이드 복합체에 특이적인 세포 외 항원 결합 도메인은 하나 이상의 세포 내 신호전달 요소와 연결되는데, 일부 측면에서 링커 및/또는 막 횡단 도메인(들)을 통해서이다. 일부 구현예에서, 이러한 분자는 전형적으로 TCR과 같은 천연 항원 수용체를 통한 신호, 및 임의로, 공자극 수용체와 조합되는 이러한 수용체를 통한 신호를 모방하거나 이와 비슷할 수 있다.
일부 구현예에서, 재조합 수용체, 예를 들어 키메라 수용체 (예를 들어, CAR)는 항원 (또는 리간드)에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 리간드- 결합 도메인을 포함한다. 키메라 수용체에 의해 표적화되는 항원들 중에는, 입양 세포 요법을 통해 표적화될 질병, 질병 상태 또는 세포 유형의 관점에서 발현되는 것들이 있다. 질병 및 질병 상태 중에는, 증식성, 신생물성 및 악성 질병 및 장애가 있는데, 예를 들어 암 및 종양, 예를 들어 혈액학적 암, 면역계 암, 예를 들어 림프종, 백혈병 및/또는 골수종, 예를 들어 B, T 및 골수 백혈병, 림프종 및 다발성 골수종이다.
일부 구현예에서, 항원 (또는 리간드)은 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 이는 탄수화물 또는 다른 분자이다. 일부 구현예에서, 항원 (또는 리간드)는 정상 또는 비-표적화된 세포 또는 조직과 비교하여 질병 또는 질병 상태의 세포, 예를 들어, 종양 또는 병원성 세포에서 선택적으로 발현되거나 과발현된다.
일부 구현예에서, CAR은 세포의 표면 상에서 발현되는 항원, 예를 들어, 온전한 (intact) 항원을 특이적으로 인식하는 항체 또는 항원-결합 단편 (예를 들어, scFv)을 함유한다.
일부 구현예에서, 수용체에 의해 표적화된 항원은 αvβ6 인테그린 (avb6 인테그린), B 세포 성숙 항원 (BCMA), B7-H3, B7-H6, 탄산 탈수 효소 9 (CA9, 또한 CAIX 또는 G250으로도 알려짐), 암-고환 항원, 암/고환 항원 1B (CTAG, NY-ESO-1 및 LAGE-2로도 알려짐), 배암종 항원 (CEA), 사이클린, 사이클린 A2, C-C 모티프 케모카인 리간드 1 (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD138, CD171, 표피 성장 인자 단백질 (EGFR), 절단형 표피 성장 인자 단백질 (tEGFR), III 형 상피 성장 인자 수용체 돌연변이 (EGFR vIII), 상피 당단백 2 (EPG-2), 상피 당단백 40 (EPG-40), 에프린B2, 에프린 수용체 A2 (EPHa2), 에스트로겐 수용체, Fc 수용체 유사 5 (FCRL5, Fc 수용체 상동체 5 또는 FCRH5로도 알려짐), 태아 아세틸콜린 수용체 (태아 AchR), 엽산 결합 단백질 (FBP), 엽산 수용체 알파, 태아 아세틸콜린 수용체, 강글리오사이드 GD2, O-아세틸 화 GD2 (OGD2), 강글리오사이드 GD3, 당단백질 100 (gp100), Her2/neu (수용체 타이로신 키나아제 erbB2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), erbB 이량체, 인간 고분자량-흑색종-관련 항원 (HMW-MAA), 헤파티티스 B 표면 항원, 인간 백혈구 항원 A1 (HLA-A1), 인간 백혈구 항원 A2 (HLA-A2), IL-22 수용체 알파 (IL-22Ra), IL-13 수용체 알파 2 (IL-13Ra2), 키나아제 삽입 도메인 수용체 (kdr), 카파 경쇄, L1 세포 부착 분자 (L1CAM), L1-CAM의 CE7 에피토프, 류신 리치 리피트 함유 8 패밀리 멤버 A (LRRC8A), 루이스 Y, 흑색종-관련 항원 (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 메소텔린, c-Met, 쥐과 사이토메갈로바이러스 (CMV), 뮤신 1 (MUC1), MUC16, 자연 킬러 그룹 2 멤버 D (NKG2D) 리간드, 멜란 A (MART-1), 신경 세포 접착 분자 (NCAM), 종측면아성 항원, 흑색종 우선 발현 항원 (PRAME), 프로게스테론 수용체, 전립선 특이 항원, 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA), 전립선 특이 막 항원 (PSMA), 수용체 타이로신 키나아제 유사 희귀 수용체 1 (ROR1), 서바이빈 (survivin), 영양막 당단백질 (TPBG, 5T4로도 알려짐), 종양-관련 당단백질 72 (TAG72), 혈관 내피 장 인자 수용체 (VEGFR), 혈관 내피 성장 인자 수용체 2 (VEGFR2), 윌름 종양 1 (WT-1), G 단백질 결합 수용체 5D (GPCR5D), 병원체-특이적 항원, 또는 보편적 태그 관련 항원, 및/또는 비오틴화 분자, 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원체에 의해 발현되는 분자이다. 일부 구현예에서, 수용체에 의해 표적화된 항원은 B 세포 악성종양과 관련된 항원을 포함하는데, 예를 들어 다수의 공지된 B 세포 마커 중 어느 하나이다. 일부 구현예에서, 항원은 CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Ig카파, Ig람다, CD79a, CD79b 또는 CD30이거나 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 수용체에 의해 표적화되는 항원은 고아 티로신 키나아제 수용체 (orphan tyrosine kinase receptor) ROR1, tEGFR, Her2, L1-CAM, CD19, CD20, CD22, 메소텔린, CEA, 및 헤파티티스 B 표면 항원, 항-엽산 수용체, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, EGP-2, EGP-4, EPHa2, ErbB2, 3, 또는 4, FBP, 태아 아세틸콜린 수용체 (fetal acethycholine receptor), GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-알파, IL-13R-알파2, kdr, 카파 경쇄, 루이스 Y, L1 세포 부착 분자, MAGE-A1, 메소텔린, MUC1, MUC16, PSCA, NKG2D 리간드, NY-ESO-1, MART-1, gp100, 종측면아성 항원, ROR1, TAG72, VEGF-R2, 암 배아 항원 (CEA), 전립선 특이 항원, PSMA, Her2/neu, 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, 에프린B2, , CD123, c-Met, GD-2, 및 MAGE A3, CE7, 윌름 종양 1 (Wilms Tumor 1, WT-1), 사이클린, 예를 들어 사이클린 A1 (CCNA1), G 단백질 결합 수용체 5D (GPCR5D), 및/또는 비오티닐화 분자, 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 기타 병원체에 의하여 발현되는 분자이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, CAR은 병원체-특이적 또는 병원체-발현 항원과 결합한다. 일부 구현예에서, CAR은 바이러스성 항원 (예 : HIV, HCV, HBV 등), 세균성 항원 및/또는 기생충 항원에 특이적이다.
일부 구현예에서, CAR은 TCR-유사 항체를 함유하는데, 예를 들어 MHC-펩타이드 복합체로서 세포 표면상에 제시되는 종양-관련 항원과 같은 세포 내 항원을 특이적으로 인식하는 항체 또는 항원-결합 단편 (예를 들어, scFv)이다. 일부 구현예에서, MHC-펩타이드 복합체를 인식하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 항원 수용체와 같은 재조합 수용체의 일부로서 세포 상에서 발현될 수 있다. 항원 수용체 중에는, 키메라 항원 수용체 (CAR)와 같은 기능성 비-TCR 항원 수용체가있다. 일반적으로, 펩타이드-MHC 복합체에 대한 TCR-유사 특이성을 나타내는 항체 또는 항원-결합 단편을 함유하는 CAR은 또한 TCR-유사 CAR로 지칭될 수 있다.
"주조직 적합성 복합체 (major histocompatibility complex)" (MHC)에 대한 언급은, 일부 경우에 폴리펩타이드의 펩타이드 항원, 예를 들어 세포의 기계적 장치에 의하여 가공되는 펩타이드 항원과 복합체화할 수 있는 다형성 펩타이드 결합 위치 또는 결합 홈을 함유하는 단백질, 일반적으로 당단백질을 말한다. 일부 경우, MHC 분자는 T 세포상의 항원 수용체, 예를 들어 TCR 또는 TCR-유사 항체에 의하여 인식 가능한 형태로 항원을 제시하기 위해, 예를 들어 펩타이드와의 복합체로서, 즉 MHC-펩타이드 복합체로서 세포 표면상에 표시되거나 발현될 수 있다. 일반적으로, MHC 클래스 I 분자는 일부 경우 3 개의 α 도메인을 갖는 막에 존재하는 알파쇄 및 비-공유적으로 결합되는 β2 마이크로글로불린을 갖는 이종이량체이다. 일반적으로, MHC 클래스 II 분자는 통상 양자 모두 막에 존재하는 2 개의 막관통 당단백질인 α 및 β로 구성된다. MHC 분자는 항원 결합 위치 또는 펩타이드를 결합하기 위한 위치 및 적절한 항원 수용체에 의한 인식에 필요한 서열을 함유하는 MHC의 유효 부분을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, MHC 클래스 I 분자는 세포질에서 기원하는 펩타이드를, MHC-펩타이드 복합체가 T 세포에 의하여 인식되는, 예를 들어 일반적으로 CD8+ T 세포에 의하여, 그러나 어떤 경우 CD4+ T 세포에 의해 인식되는 세포 표면으로 전달한다. 일부 구현예에서, MHC 클래스 II 분자는 소포 시스템에서 기원하는 펩타이드를, 이들이 통상 CD4+ T 세포에 의해 인식되는 세포 표면으로 전달한다. 일반적으로, MHC 분자는 마우스에서 H-2으로 그리고 인간에서는 인간 백혈구 항원 (HLA)으로 총칭되는, 연결된 좌위 그룹에 의해 인코딩된다. 따라서, 통상 인간 MHC는 또한 인간 백혈구 항원 (HLA)으로 지칭될 수 있다.
용어 "MHC-펩타이드 복합체" 또는 "펩타이드-MHC 복합체" 또는 이들의 변형은 예를 들어, 일반적으로 MHC 분자의 결합 홈 또는 틈에서 펩타이드의 비-공유 상호 작용에 의한, 펩타이드 항원과 MHC 분자의 복합체 또는 결합을 말한다. 일부 구현예에서, MHC-펩타이드 복합체는 세포 표면상에 존재하거나 표시된다. 일부 구현예에서, MHC-펩타이드 복합체는 항원 수용체, 예를 들어 TCR, TCR-유사 CAR 또는 이의 항원-결합 부분에 의해 특이적으로 인식될 수 있다.
일부 구현예에서, 폴리펩타이드의 펩타이드, 예를 들어 펩타이드 항원 또는 에피토프는, 예를 들어 항원 수용체에 의한 인식을 위하여, MHC 분자와 결합할 수 있다. 일반적으로, 펩타이드는 폴리펩타이드 또는 단백질과 같은 보다 긴 생물학적 분자의 단편으로부터 유래되거나 이에 기초한다. 일부 구현예에서, 펩타이드는 전형적으로 약 8 내지 약 24 개의 길이이다. 일부 구현예에서, 펩타이드는 MHC 클래스 II 복합체에서의 인식을 위해 9 내지 22 개의 아미노산 또는 약 그 정도의 길이를 갖는다. 일부 구현예에서, 펩타이드는 MHC 클래스 I 복합체에서의 인식을 위해 8 내지 13 개의 아미노산 또는 약 그 정도의 길이를 갖는다. 일부 구현예에서, MHC-펩타이드 복합체와 같은 MHC 분자의 관점에서 펩타이드의 인식에 따라, TCR 또는 TCR-유사 CAR과 같은 항원 수용체는 T 세포 반응, 예를 들어 T 세포 증식, 사이토카인 생산, 세포독성 T 세포 반응 또는 다른 반응을 유도하는 T 세포에 대한 활성화 신호를 생성 또는 촉발한다.
일부 구현예에서, TCR-유사 항체 또는 항원-결합 부분은 공지되어 있거나 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다 (예를 들어, 미국 공개 출원 US 2002/0150914; US 2003/0223994; US 2004/0191260; US 2006/0034850; US 2007/00992530; US20090226474; US20090304679; 및 국제 PCT 공개 WO 03/068201 참조).
일부 구현예에서, MHC-펩타이드 복합체에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 특정 MHC-펩타이드 복합체를 함유하는 유효량의 면역원으로 숙주를 면역화함으로써 제조될 수 있다. 일부 경우, MHC-펩타이드 복합체의 펩타이드는 MHC에 결합할 수 있는 항원의 에피토프, 예를 들어, 종양 항원, 예를 들어 범용 종양 항원, 골수종 항원 또는 하기에 기술되는 다른 항원의 에피토프이다. 일부 구현예에서, 면역 반응을 이끌어 내기 위해 그 후 유효량의 면역원을 숙주에게 투여하는데, 여기서 면역원은 MHC 분자의 결합 홈에서 펩타이드의 3-차원적 제시에 대한 면역 반응을 이끌어 내기에 충분한 시간 동안 그들의 3-차원적 형태를 보유한다. 그 후, 숙주로부터 수집된 혈청을 분석하여 MHC 분자의 결합 홈에서 상기 펩타이드의 3-차원적 제시를 인식하는 원하는 항체가 생성되는지를 결정한다. 일부 구현예에서, 생성된 항체는 그 항체가 MHC 분자 단독, 관심 대상 펩타이드 단독 및 무관한 펩타이드와 MHC와의 복합체로부터 대상 MHC-펩타이드 복합체를 구별할 수 있음을 확인하기 위해 평가될 수 있다. 그 후, 원하는 항체는 분리될 수 있다.
일부 구현예에서, MHC-펩타이드 복합체에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 파지 항체 라이브러리와 같은 항체 라이브러리 디스플레이 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 일부 구현예에서, 돌연변이 Fab, scFv 또는 다른 항체 형태의 파지 디스플레이 라이브러리가 생성될 수 있으며, 여기서, 예를 들어 라이브러리 구성원은 CDR 또는 CDR들의 하나 이상의 잔기에서 돌연변이된다. 예를 들어, 미국 공개 출원 US20020150914, US2014/0294841; 및 [Cohen CJ. et al. (2003) J Mol. Recogn. 16:324-332] 참조.
본 발명에서 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되며, 폴리클로날 및 모노클로날 항체를 포함하고, 예를 들어 온전한 항체 및 기능적 (항원-결합) 항체 단편, 예를 들어 항원 결합 단편 (Fab), F(ab')2 Fab' 단편, Fv 단편, 재조합 IgG (rIgG) 단편, 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 가변 중쇄 (VH) 영역, 단일쇄 항체 단편, 예를 들어 단일쇄 가변 단편 (scFv) 및 단일 도메인 항체 (예를 들어, sdAb, sdFv, 나노바디) 단편이다. 상기 용어는 유전적으로 조작된 및/또는 달린 변형된 형태의 면역글로불린들, 예를 들어 인트라바디, 펩티바디, 키메라 항체, 완전 인간 항체, 인간화 항체, 및 헤테로 컨쥬게이트 항체, 다중 특이적, 예를 들어, 이중 특이적 항체, 디아바디, 트리아바디 및 테트라바디, 탠덤 디-scFv, 탠덤 트리-scFv이다. 달리 언급하지 않는 한, 용어 "항체"는 그의 기능적 항체 단편을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 상기 용어는 또한 온전한 또는 전장 항체를 포함하는데, 예를 들어 IgG 및 그 서브 클래스, IgM, IgE, IgA 및 IgD를 포함하는 임의의 부류 또는 하위-부류의 항체이다.
일부 구현예에서, 항원-결합 단백질, 항체 및 그의 항원 결합 단편은 전장 항체의 항원을 특이적으로 인식한다. 일부 구현예에서, 항체의 중쇄 및 경쇄는 전장일 수 있거나 항원-결합 부분 (Fab, F(ab')2, Fv 또는 단일쇄 Fv 단편 (scFv))일 수 있다. 다른 구현예에서, 항체 중쇄 불변 영역은 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD 및 IgE로부터 선택되고, 특히 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4로부터 선택되며, 더욱 특히 IgG1 (예를 들어, 인간 IgG1)이다. 또 다른 구현예에서, 항체 경쇄 불변 영역은 예를 들어 카파 또는 람다로부터 선택되고, 특히 카파이다.
제공되는 항체 중에는 항체 단편이 있다. "항체 단편"은 온전한 항체가 결합하는 항원에 결합하는 온전한 항체의 일부분을 포함하는 온전한 항체 이외의 분자를 말한다. 항체 단편의 예는 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2; 디아바디; 선형 항체; 가변 중쇄 (VH) 영역, 단일-쇄 항체 분자, 예를 들어 scFv 및 단일 도메인 VH 단일 항체; 및 항체 단편으로부터 형성되는 다중 특이적 항체를 포함한다. 특정 구현예에서, 항체는 가변 중쇄 영역 및/또는 가변 경쇄 영역, 예를 들어 scFv을 포함하는 단일-쇄 항체 단편이다.
용어 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 항체와 항원의 결합에 관여하는 항체 중쇄 또는 경쇄의 도메인을 말한다. 천연 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 (각각 VH 및 VL)은 일반적으로 유사한 구조를 가지며, 각 도메인은 4 개의 보존된 구조 영역 (FR) 및 3 개의 CDR을 포함한다. 예를 들어, [Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007)] 참조. 단일 VH 또는 VL 도메인은 항원-결합 특이성을 부여하기에 충분할 수 있다. 또한, 특정 항원에 결합하는 항체는, 각각 상보적 VL 또는 VH 도메인의 라이브러리를 스크리닝하기 위해 항원에 결합하는 항체로부터의 VH 또는 VL 도메인을 사용하여 단리될 수 있다. 예를 들어, [Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993)]; [Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991)] 참조.
단일-도메인 항체는 항체의 중쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부분 또는 경쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부분을 포함하는 항체 단편이다. 특정 구현예에서, 단일-도메인 항체는 인간 단일 도메인 항체이다. 일부 구현예에서, CAR은 항원에, 예를 들어 종양 세포 또는 암세포와 같은 표적화되는 질병의 세포의 암 마커 또는 표면 항원, 예를 들어 본 발명에서 기술되거나 공지된 표적 항원에 특이적으로 결합하는 항체 중쇄 도메인을 포함한다.
항체 단편은 다양한 기술에 의해 제조될 수 있으며, 예를 들어 온전한 항체의 단백질 분해성 소화 및 재조합 숙주 세포에 의한 생산이 포함되지만 이에 한정되는 것은 아니다. 일부 구현예에서, 항체는 재조합적으로-생산된 단편인데, 예를 들어 자연적으로 존재하지 않는 배열을 포함하는 단편, 예를 들어 펩타이드 링커와 같은 합성 링커에 의해 결합되는 2 개 이상의 항체 영역 또는 사슬을 갖는 것들, 및/또는 자연적으로-존재하는 온전한 항체의 효소 소화에 의해 생성될 수 없는 것들이다. 일부 구현예에서, 상기 항체 단편은 scFv이다.
"인간화된" 항체는 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 아미노산 잔기가 비-인간 CDR로부터 유래된 것이며, 모든 또는 실질적으로 모든 FR 아미노산 잔기가 인간 FR로부터 유래된 항체이다. 인간화 항체는 임의로 인간 항체로부터 유래된 항체 불변 영역의 적어도 일부분을 포함할 수 있다. 비-인간 항체의 "인간화된 형태"는 모태 비-인간 항체의 특이성 및 친화성을 유지하면서 통상 인간에 대한 면역원성을 감소시키기 위해 인간화를 거친 비-인간 항체의 변이체를 말한다. 일부 구현예에서, 인간화 항체의 일부 FR 잔기는 예를 들어, 항체 특이성 또는 친화성을 회복 또는 개선시키기 위하여 비-인간 항체 (예를 들어, 그로부터 CDR 잔기가 유도된 항체)로부터의 상응하는 잔기로 치환된다.
따라서, 일부 구현예에서, TCR-유사 CAR을 포함하는 키메라 항원 수용체는 항체 또는 항체 단편을 함유하는 세포 외 부분을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 항체 또는 단편은 scFv를 포함한다. 일부 측면에서, 키메라 항원 수용체는 항체 또는 단편 및 세포 내 신호전달 영역을 함유하는 세포 외 부분을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 내 신호전달 영역은 세포 내 신호전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 내 신호전달 도메인은 1차 신호전달 도메인인, T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있는 신호전달 도메인, T 세포 수용체 (TCR) 요소의 신호전달 도메인 및/또는 면역수용체 타이로신-계 활성화 모티프 (ITAM)를 포함하는 신호전달 도메인이거나 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR의 항체 일부분을 포함하는, CAR과 같은 재조합 수용체는 면역글로불린 불변 영역의 적어도 일부분을 더 포함하는데, 예를 들어 힌지 영역, 예를 들어 IgG4 힌지 영역 및/또는 CH1/CL 및/또는 Fc 영역이다. 일부 구현예에서, 그의 항체 일부분을 포함하는 CAR과 같은 재조합 수용체는 스페이서를 더 포함하는데, 이는 면역글로불린 불변 영역 또는 이들의 변이체 또는 변형된 버전의 적어도 일부분이거나 이를 포함할 수 있는데, 예를 들어 힌지 영역, 예를 들어 IgG4 힌지 영역 및/또는 CH1/CL 및/또는 Fc 영역이다. 일부 구현예에서, 재조합 수용체는 스페이서 및/또는 힌지 영역을 더 포함한다. 일부 구현예에서, 불변 영역 또는 일부분은 인간 IgG의 것, 예를 들어 IgG4 또는 IgG1의 것이다. 일부 측면에서, 불변 영역의 일부분은 항원-인식 요소, 예를 들어 scFv와, 막 횡단 도메인 사이의 스페이서 영역으로서 작용한다. 스페이서는, 스페이서가 없을 경우와 비교하여, 항원 결합 다음에 세포의 반응성 증가를 제공하는 길이의 것일 수 있다. 예시적 스페이서, 예를 들어 힌지 영역은 국제 특허 출원 공개 번호 WO2014031687에 기재된 것들을 포함한다. 일부 예에서, 스페이서는 길이가 12 개 아미노산 길이이거나 약 그 길이이거나, 또는 12 개 아미노산 이하의 길이이다. 예시적인 스페이서는 적어도 약 10 내지 229 개의 아미노산, 약 10 내지 200 개의 아미노산, 약 10 내지 175 개의 아미노산, 약 10 내지 150 개의 아미노산, 약 10 내지 125 개의 아미노산, 약 10 내지 100 개의 아미노산, 약 10 내지 75 개의 아미노산, 약 10 내지 50 개의 아미노산, 약 10 내지 40 개의 아미노산, 약 10 내지 30 개의 아미노산, 약 10 내지 20 개의 아미노산 또는 약 10 내지 15 개의 아미노산을 갖는 것들을 포함하고, 상기 열거된 범위 중 어느 하나의 끝점 사이의 임의의 정수를 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서 영역은 약 12 개 아미노산 또는 그 미만, 약 119 개 아미노산 또는 그 미만, 또는 약 229 개 아미노산 또는 그 미만을 갖는다. 예시적인 스페이서는 IgG4 힌지 단독, CH2 및 CH3 도메인에 연결된 IgG4 힌지, 또는 CH3 도메인에 연결된 IgG4 힌지를 포함한다. 예시적인 스페이서는 [Hudecek et al. (2013) Clin . Cancer Res., 19:3153], 국제 특허 출원 공개 번호 WO2014031687, 미국 특허 8,822,647 또는 공개 출원 US2014/0271635에 개시된 것들을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다.
일부 구현예에서, 불변 영역 또는 일부분은 IgG4 또는 IgG1과 같은 인간 IgG의 것이다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 ESKYGPPCPPCP (SEQ ID NO: 1에 기재)를 갖고, SEQ ID NO: 2에 기재된 서열에 의해 인코딩된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 SEQ ID NO: 3에 기재된 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 스페이서는 SEQ ID NO: 4에 기재된 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 불변 영역 또는 일부분은 IgD의 것이다. 일부 구현예에서, 스페이서는 SEQ ID NO: 5에 기재된 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 스페이서는 SEQ ID NO: 1, 3, 4 또는 5 중 어느 하나와 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상 또는 약 그 이상의 서열 상동성을 나타내는 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 스페이서는 SEQ ID NO: 26-34에 기재된 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 스페이서는 SEQ ID NO: 26-34 중 어느 하나와 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상 또는 약 그 이상의 서열 상동성을 나타내는 아미노산 서열을 갖는다.
일반적으로 항원 인식 도메인은 하나 이상의 세포 내 신호전달 요소와 연결되는데, CAR의 경우에, 예를 들어 TCR 복합체와 같은 항원 수용체 복합체를 통하여 활성화를 모방하고 및/또는 다른 세포 표면 수용체를 통하여 신호를 전달하는 신호전달 요소이다. 따라서, 일부 구현예에서, 항원-결합 성분 (예를 들어, 항체)은 하나 이상의 막횡단 및 세포 내 신호전달 도메인 또는 영역에 연결된다. 일부 구현예에서, 막횡단 도메인은 세포 외 도메인에 융합된다. 한 구현예에서, 수용체, 예를 들어 CAR의 도메인들 중 하나와 자연적으로 결합된 막횡단 도메인이 사용된다. 일부 경우에, 막횡단 도메인은 수용체 복합체의 다른 구성원과의 상호 작용을 최소화하기 위해, 동일한 또는 상이한 표면 막 단백질의 막횡단 도메인에 이러한 도메인이 결합하는 것을 회피하도록 선택되거나, 아미노산 치환에 의하여 변형된다.
일부 구현예에서, 막횡단 도메인은 천연원 또는 합성원으로부터 유도된다. 상기 유도원이 천연인 경우, 일부 측면에 있어서 상기 도메인은 임의의 막-결합 또는 막횡단 단백질로부터 유도된다. 막횡단 영역은 T 세포 수용체, CD28, CD3 엡실론, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154및 CD16의 알파, 베타 또는 제타 쇄로부터 유래 된 것들을 포함한다 (즉, 적어도 그의 막횡단 영역을 포함). 또는, 일부 구현예에서 막횡단 도메인은 합성인 것이다. 일부 측면에서, 합성 막횡단 도메인은 주로 류신 및 발린과 같은 소수성 잔기를 포함한다. 일부 측면에서, 페닐알라닌, 트립토판 및 발린의 삼중체가 합성 막횐단 도메인의 각 말단에서 발견될 것이다. 일부 구현예에서, 결합은 링커, 스페이서 및/또는 막횡단 도메인(들)에 의한다.
세포 내 신호전달 도메인 또는 영역 중에는, 천연 항원 수용체를 통한 신호, 공자극 수용체와 조합된 상기 수용체를 통한 신호 및/또는 공자극 수용체만을 통한 신호를 모방하거나 이와 비슷한 것들이 있다. 일부 구현예에서, 짧은 올리고- 또는 폴리펩타이드 링커, 예를 들어 길이가 2 내지 10 개 사이의 아미노산인 링커, 예를 들어 글리신 및 세린을 함유하는 것, 예를 들어 글리신-세린 이중체를 함유하는 링커가 존재하며, 막횡단 도메인과 CAR의 세포질 신호전달 도메인 또는 영역과의 연결을 형성한다.
수용체, 예를 들어, CAR은 일반적으로 적어도 하나의 세포 내 신호전달 요소 또는 요소들을 포함한다. 일부 구현예에서, 수용체는 T-세포 활성화 및 세포 독성을 매개하는 TCR CD3 쇄와 같은 TCR 복합체의 세포 내 요소, 예를 들어 CD3 제타 쇄를 포함한다. 따라서, 일부 측면에서, 항원-결합 부분은 하나 이상의 세포 신호전달 모듈에 연결된다. 일부 구현예에서, 세포 신호전달 모듈은 CD3 막횡단 도메인, CD3 세포 내 신호전달 도메인 및/또는 다른 CD 막횡단 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 수용체, 예를 들어, CAR은 Fc 수용체 γ, CD8, CD4, CD25 또는 CD16과 같은 하나 이상의 추가 분자의 일부분을 더 포함한다. 예를 들어, 일부 측면에서, CAR 또는 다른 키메라 수용체는, CD3-제타 (CD3-ζ) 또는 Fc 수용체 γ와, CD8, CD4, CD25 또는 CD16 사이의 키메라 분자를 포함한다.
일부 구현예에서, CAR 또는 다른 키메라 수용체의 연결 (ligation)에 따라, 수용체의 세포질 도메인 또는 세포 내 신호전달 도메인 또는 영역은 면역 세포, 예를 들어 CAR를 발현하도록 조작된 T 세포의 정상적인 효과자 기능 또는 반응 중 적어도 하나를 활성화시킨다. 예를 들어, 일부 관점에서는, CAR은 T 세포의 기능, 예를 들어 세포 용해 활성 또는 T-헬퍼 활성, 예를 들어 사이토카인 또는 다른 인자의 분비를 유도한다. 일부 구현예에서, 항원 수용체 성분 또는 공자극 분자의 세포 내 신호전달 도메인의 절단된 부분 또는 영역은 온전한 면역자극 쇄를 대신하여 사용되는데, 예를 들어 그것이 효과자 기능 신호를 전달하는 경우에 그러하다. 일부 구현예에서, 세포 내 신호전달 도메인 또는 도메인들 또는 영역은 T 세포 수용체 (TCR)의 세포질 서열을 포함하고, 일부 측면에서는 천연의 상황에서 항원 수용체 결합 다음에 그러한 수용체와 협력하여 작용하고 신호 전달을 개시하는 공-수용체의 서열을 포함하며, 및/또는 이러한 분자의 임의의 유도체 또는 변이체 및/또는 동일한 기능적 능력을 갖는 임의의 합성 서열을 포함한다.
천연 TCR의 관점에서, 완전한 활성화는 일반적으로 TCR을 통한 신호 전달뿐만 아니라 공자극 신호를 요구한다. 따라서, 일부 구현예에서, 완전한 활성화를 촉진시키기 위해, 2차 또는 공-자극 신호를 발생시키는 위한 요소가 또한 CAR에 포함된다. 다른 구현예에서, CAR은 공자극 신호를 생성하기 위한 요소를 포함하지 않는다. 일부 측면에서, 추가적인 CAR은 동일한 세포에서 발현되며, 2차 또는 공자극 신호를 생성하기 위한 요소를 제공한다.
일부 측면에서, T 세포 활성화는 2 부류의 세포질 신호전달 서열에 의하여 매개되는 것으로 기술된다: TCR을 통해 항원-의존성 1차 활성화를 개시하는 것들 (1차 세포질 신호전달 서열), 및 항원-비의존성 방식으로 작용하여 2차 또또는 공-자극 신호를 제공하는 것들 (2차 세포질 신호전달 서열). 일부 측면에서, CAR은 그러한 신호전달 요소들 중 하나 또는 양자 모두를 포함한다.
일부 측면에서, CAR은 TCR 복합체의 1차 활성화를 조절하는 1차 세포질 신호전달 서열을 포함한다. 자극 방식으로 작용하는 1차 세포질 신호전달 서열은 면역수용체 타이로신-계 활성화 모티프 또는 ITAM으로 알려진 신호전달 모티프를 함유할 수 있다. 1차 세포질 신호전달 서열을 함유하는 ITAM의 예는 TCR 제타, FcR 감마, FcR 베타, CD3 감마, CD3 델타, CD3 엡실론, CD8, CD22, CD79a, CD79b 및 CD66d로부터 유래되는 것들을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR의 세포질 신호전달 분자(들)은 세포질 신호 전달 도메인 또는 영역, 그들의 일부분, 또는 CD3 제타로부터 유래되는 서열을 함유한다.
일부 구현예에서, CAR은 공자극 수용체의 신호전달 도메인 또는 영역 및/또는 막횡단 일부분, 예를 들어 CD28, 4-1BB, OX40, DAP10 및 ICOS를 포함한다. 일부 측면에서, 동일한 CAR은 활성화 및 공자극 요소 양자 모두를 포함한다.
일부 구현예에서, 활성화 도메인은 하나의 CAR 내에 포함되는 반면, 공자극 요소는 또 다른 항원을 인식하는 다른 CAR에 의해 제공된다. 일부 구현예에서, CAR은, 양자가 동일한 세포 상에서 발현되는, 활성화 또는 자극 CAR, 공자극 CAR을 포함한다 (WO2014/055668 참조). 일부 측면에서, 세포는 하나 이상의 자극 또는 활성화 CAR 및/또는 공자극 CAR을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포는 억제성 CAR을 더 포함하는데 (iCARs, [Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5(215) (December, 2013)] 참조), 예를 들어 그에 의하여 질병-표적 CAR을 통하여 전달된 활성화 신호가 상기 억제성 CAR의 그의 리간드와의 결합에 의하여 감쇠되거나 억제되어, 예를 들어 오프-타겟 효과를 감소시키게 되는, 상기 질병 또는 질병 상태와 관련되고 및/또는 그에 특이적인 것 이외의 항원을 인식하는 CAR이다.
특정 구현예에서, 세포 내 신호전달 도메인은 CD3 (예를 들어, CD3-제타) 세포 내 도메인에 연결되는 CD28 막횡단 및 신호전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 세포 내 신호전달 도메인은 CD3 제타 세포 내 도메인에 연결되는, 키메라 CD28 및 CD137 (4-1BB, TNFRSF9) 공-자극 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, CAR은, 세포질 부분에서, 하나 이상의, 예를 들어 2 이상의 공자극 도메인 및 활성화 도메인, 예를 들어 1차 활성화 도메인을 포함한다. 예시적인 CAR은 CD3-제타, CD28 및 4-1BB의 세포 내 요소를 포함한다.
일부 구현예에서, CAR 또는 다른 항원 수용체는, 상기 수용체를 발현하는 세포의 형질도입 또는 조작을 확인하는데 사용할 수 있는 마커, 예를 들어 세포 표면 마커를 더 포함하는데, 예커대 세포 표면 수용체의 절단된 버전, 예를 들어 절단형 EGFR (tEGFR)이다. 일부 측면에서, 상기 마커는 CD34, NGFR 또는 표피 성장 인자 수용체의 전부 또는 일부 (예를 들어, 절단 형태)를 포함한다 (예를 들어, tEGFR). 일부 구현예에서, 상기 마커를 인코딩하는 핵산은 링커 서열, 예를 들어 절단 가능한 링커 서열, 예를 들어 T2A를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드와 작동 가능하게 연결된다. 예를 들어, 마커 및 필요에 따라 링커 서열은 국제 특허 출원 공개 번호 WO2014031687에 개시된 임의의 것일 수 있다. 예를 들어, 상기 마커는 필요에 따라 T2A 절단 가능 링커 서열과 같은 링커 서열에 연결된, 절단된 EGFR (tEGFR)일 수 있다. 절단된 EGFR (예를 들어, tEGFR)에 대한 예시적인 폴리펩타이드는 SEQ ID NO: 7 또는 16에 제시되는 아미노산 서열 또는 SEQ ID NO: 7 또는 16과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상 또는 적어도 약 그 이상의 서열 상동성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다. T2A 링커 서열의 예시는 SEQ ID NO: 6 또는 17에 제시되는 아미노산 서열 또는 SEQ ID NO: 6 또는 17과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상 또는 적어도 약 그 이상의 서열 상동성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 마커는, T 세포 상에서 자연적으로 발견되지 않거나 또는 T 세포의 표면 상에서 자연적으로 발견되지 않는 분자, 예를 들어 세포 표면 단백질 또는 그의 일부분이다. 일부 구현예에서, 상기 분자는 비-자기 분자 (non-self molecule), 예를 들어 비-자기 단백질로서, 즉 그 세포가 입양되어 전이될 숙주의 면역계에 의해 "자기"로 인식되지 않는 것이다.
일부 구현예에서, 마커는, 어떠한 치료적 기능을 제공하지 않으며 및/또는 예를 들어, 조작된 세포를 성공적으로 선별하기 위한 유전자 조작의 마커로서 사용되는 것 외의 어떠한 효과를 발생시키지 않는다. 다른 구현예에서, 마커는, 입양 전이 및 리간드와 접하였을 때 세포의 반응을 강화 및/또는 완충시키기 위한 공자극 또는 면역 체크 포인트 분자와 같이, 치료적 분자 또는 어떤 원하는 효과를 달리 작용하는 분자, 예를 들어 생체 내에서 마주치게 될 세포에 대한 리간드일 수 있다.
부 경우, CAR은 제1, 제2 및/또는 제3 세대 CAR로 지칭된다. 일부 측면에서, 제1 세대 CAR은 항원 결합시 CD3-쇄 유도 신호를 단독으로 제공하는 것이고; 일부 측면에서, 제2-세대 CAR은 그러한 신호 및 공자극 신호를 제공하는 것으로서, 예를 들어 CD28 또는 CD137과 같은 하나의 공자극 수용체로부터의 세포 내 신호전달 도메인을 포함하는 것이고; 일부 측면에서, 제3 세대 CAR은 상이한 공자극 수용체들의 복수의 공자극 도메인을 포함하는 것이다.
일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 항체 또는 항체 단편을 함유하는 세포 외 부분을 포함한다. 일부 측면에서, 키메라 항원 수용체는 항체 또는 단편 및 세포 내 신호전달 도메인을 함유하는 세포 외 부분을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 항체 또는 단편은 scFv를 포함하고, 상기 세포 내 도메인은 ITAM을 함유한다. 일부 측면에서, 상기 세포 내 신호전달 도메인은 CD3-제타 (CD3ζ) 쇄의 제타 쇄의 신호전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 세포 외 도메인과 세포 내 신호전달 도메인을 연결하는 막횡단 도메인을 포함한다. 일부 측면에서, 상기 막횡단 도메인은 CD28의 막횡단 부분을 함유한다. 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 T 세포 공자극 분자의 세포 내 도메인을 함유한다. 상기 세포 외 도메인 및 막횡단 도메인은 직접 또는 간접적으로 연결될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포 외 도메인 및 막횡단 도메인은 본 발명에 기재되는 임의의 것과 같은 스페이서에 의해 연결된다. 일부 구현예에서, 수용체는 그 막횡단 도메인이 유래되는 분자의 세포 외 부분을 함유하는데, 예를 들어 CD28 세포 외 부분이다. 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는, 예를 들어 막횡단 도메인 및 세포 내 신호전달 도메인 사이에, T 세포 공자극 분자로부터 유래되는 세포 내 도메인 또는 이의 기능적 변이체를 함유한다. 일부 측면에서, 상기 T 세포 공자극 분자는 CD28 또는 41BB이다.
일부 구현예에서, scFv는 FMC63로부터 유래한다. FMC63은 인간 기원의 CD19를 발현하는 Nalm-1 및 -16 세포에 대하여 만들어진 마우스 모노클로날 IgG1 항체이다 (Ling, N. R., et al. (1987). Leucocyte typing III. 302).　FMC63 항체는 SEQ ID NOS: 38 및 39로 각각 제시되는 CDRH1 및 H2, SEQ ID NOS: 40 또는 54로 제시되는 CDRH3 및 SEQ ID NOS: 35로 제시되는 CDRL1 및 SEQ ID NOS: 36 또는 55으로 제시되는 CDRL2 및 SEQ ID NOS: 37 또는 56으로 제시되는 CDRL3를 포함한다. FMC63 항체는 SEQ ID NO: 41의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 SEQ ID NO: 42의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 svFv는 SEQ ID NO: 35로 제시되는 CDRL1, SEQ ID NO: 36 또는 55로 제시되는 CDRL2, 및 SEQ ID NO: 37 또는 56로 제시되는 CDRL3를 함유하는 가변 경쇄 및/또는 SEQ ID NO: 38로 제시되는 CDRH1, SEQ ID NO: 39로 제시되는 CDRH2, 및 SEQ ID NO: 40 또는 54로 제시되는 CDRH3를 함유하는 가변 중쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 scFv는 SEQ ID NO: 41로 제시되는 FMC63의 가변 중쇄 영역 및 SEQ ID NO: 42로 제시되는 FMC63의 가변 경쇄 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 가변 중쇄 및 가변 경쇄는 링커에 의하여 연결된다. 일부 구현예에서, 상기 링커는 SEQ ID NO: 24로 제시된다. 일부 구현예에서, 상기　scFv는, 차례로, VH, 링커 및 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 svFc는 SEQ ID NO:25로 제시되는 뉴클레오타이드 서열 또는 SEQ ID NO: 25와 적어도 약 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 또는 약 그 이상의 서열 상동성을 나타내는 서열에 의하여 인코딩된다. 일부 구현예에서, 상기 scFv는 SEQ ID NO:43으로 제시되는 아미노산 서열 또는 SEQ ID NO: 43과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%, 또는 약 그 이상의 서열 상동성을 나타내는 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 SJ25C1로부터 유래한다.　 SJ25C1은 인간 기원의 CD19를 발현하는 Nalm-1 및 -16 세포에 대하여 만들어진 마우스 모노클로날 IgG1 항체이다 (Ling, N. R., et al. (1987). Leucocyte typing III. 302).　SJ25C1 항체는 SEQ ID NOS: 47-49로 각각 제시되는 CDRH1, H2 및 H3, SEQ ID NOS: 44-46으로 각각 제시되는 CDRL1, L2 및 L3를 포함한다. SJ25C1 항체는 SEQ ID NO: 50의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 SEQ ID NO: 51의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 svFv는 SEQ ID NO: 44로 제시되는 CDRL1, SEQ ID NO: 45로 제시되는 CDRL2, 및 SEQ ID NO: 46으로 제시되는 CDRL3를 함유하는 가변 경쇄 및/또는 SEQ ID NO: 47로 제시되는 CDRH1, SEQ ID NO: 48로 제시되는 CDRH2, 및 SEQ ID NO: 49로 제시되는 CDRH3를 함유하는 가변 중쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 scFv는 SEQ ID NO: 50로 제시되는 SJ25C1의 가변 중쇄 영역 및 SEQ ID NO: 51로 제시되는 SJ25C1의 가변 경쇄 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 가변 중쇄 및 가변 경쇄는 링커에 의하여 연결된다. 일부 구현예에서, 상기 링커는 SEQ ID NO: 52로 제시된다. 일부 구현예에서, 상기　scFv는, 차례로, VH, 링커 및 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 svFc는 SEQ ID NO: 53으로 제시되는 아미노산 서열 또는 SEQ ID NO: 53과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%, 또는 약 그 이상의 서열 상동성을 나타내는 서열을 포함한다.
예를 들어, 일부 구현예에서, CAR은 항체, 예를 들어, 항체 단편, CD28 또는 이의 기능적 변이체의 막횡단 부분이거나 이를 함유하는 막횡단 도메인, 및 CD28의 신호전달 부분 또는 이의 기능적 변이체 및 CD3 제타의 신호전달 부분 또는 이의 기능적 변이체를 함유하는 세포 내 신호전달 도메인을 함유한다. 일부 구현예에서, CAR은 항체, 예를 들어, 항체 단편, CD28 또는 이의 기능적 변이체의 막횡단 부분이거나 이를 함유하는 막횡단 도메인, 및 4-1BB의 신호전달 부분 또는 이의 기능적 변이체 및 CD3 제타의 신호전달 부분 또는 이의 기능적 변이체를 함유하는 세포 내 신호전달 도메인을 함유한다. 이러한 일부 구현예에서, 수용체는 인간 Ig 분자와 같은 Ig 분자의 일부분, 예를 들어 Ig 힌지, 예를 들어 IgG4 힌지를 함유하는 스페이서를 더 포함하고, 예를 들어 힌지-온리 (hinge-only) 스페이서이다.
일부 구현예에서, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR의 막횡단 도메인은 인간 CD28의 막횡단 도메인(예를 들어, 수탁 번호 No. P01747.1) 또는 이의 변이체이거나 이를 포함하는데, 예를 들어 SEQ ID NO: 8로 제시되는 아미노산 서열 또는 SEQ ID NO: 8과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상 또는 약 그 이상의 서열 상동성을 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 막횡단 도메인이고; 일부 구현예에서는, 상기 재조합 수용체의 막횡단-도메인 함유 부분은 SEQ ID NO: 9로 제시되는 아미노산 서열 또는 그와 적어도 약 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상 또는 약 그 이상의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열, 또는 예를 들어 인간 CD28의 27-아미노산 막횡단 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 T 세포 공자극 분자의 세포 내 도메인을 함유한다. 일부 측면에서, T 세포 공자극 분자는 CD28 또는 4-1BB이다.
일부 구현예에서, 재조합 수용체, 예를 들어, CAR의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 영역, 또는 요소(들)은, 인간 CD28 단백질의 세포 내 공자극 신호전달 도메인 또는 영역 또는 이들의 기능적 변이체 또는 일부분을 함유하는데, 예를 들어 천연 CD28의 186-187 위치에서 LL 내지 GG 치환을 갖는 도메인 또는 영역이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 상기 세포 내 신호전달 도메인 또는 영역은 SEQ ID NO: 10 또는 11로 제시되는 아미노산 서열 또는 SEQ ID NO: 10 또는 11과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상 또는 약 그 이상의 서열 상동성을 나타내는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 세포 내 도메인 또는 영역은 4-1BB (예를 들어, 수탁 번호 No. Q07011.1)의 세포 내 공자극 신호전달 도메인 또는 영역 또는 이들의 기능적 변이체 또는 일부분을 포함하는데, 예를 들어 SEQ ID NO: 12로 제시되는 아미노산 서열 또는 SEQ ID NO: 12와 적어도 약 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상 또는 약 그 이상의 서열 상동성을 나타내는 아미노산 서열 또는 예를 들어 인간 4-1BB의 42-아미노산 세포질 도메인이다.
일부 구현예에서, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR의 세포 내 신호전달 도메인 또는 영역은 인간 CD3 쇄와, 임의로 제타 자극 신호전달 도메인 또는 영역 또는 이의 기능적 변이체를 포함하는데, 예를 들어 인간 CD3ζ의 이소형 3 (수탁 번호 No.: P20963.2)의 112 AA 세포질 도메인 또는 영역 또는 미국 특허 7,446,190 또는 미국 특허 8,911,993에 기술된 바와 같은 CD3 제타 신호전달 도메인 또는 영역이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 상기 세포 내 신호전달 도메인 또는 영역은 SEQ ID NO: 13, 14 또는 15로 제시되는 아미노산 서열 또는 SEQ ID NO: 13, 14 또는 15와 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상 또는 약 그 이상의 서열 상동성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 측면에서, 스페이서는 오로지 IgG의 힌지 영역만을 함유하는데, 예를 들어 IgG4 또는 IgG1의 힌지 영역만, 예를 들어 SEQ ID NO: 1로 제시되는 힌지 온리 스페이서이다. 다른 구현예에서, 상기 Ig 힌지이거나 이를 함유하는데, 예를 들어, 필요에 따라 CH2 및/또는 CH3 도메인과 연결된 IgG4-유래 힌지이다. 일부 구현예에서, 상기 스페이서는 Ig 힌지인데, 예를 들어, SEQ ID NO: 4로 제시된 것과 같은 CH2 및 CH3 도메인과 연결된 IgG4 힌지이다. 일부 구현예에서, 상기 스페이서는 Ig 힌지인데, 예를 들어 SEQ ID NO: 3으로 제시된 것과 같은 CH3 도메인과만 연결된 IgG4 힌지이다. 일부 구현예에서, 상기 스페이서는 글리신-세린 풍부 서열 또는 유연 링커로 알려진 것과 같은 기타 유연 링커이거나 이를 포함한다.
예를 들어, 일부 구현예에서, CAR은 항체, 예를 들어 항체 단편, 예를 들어 scFv, 스페이서, 예를 들어 면역글로불린 분자의 일부분을 함유하는 스페이서, 예를 들어 힌지 영역 및/또는 중쇄 분자의 하나 이상의 불변 영역, 예를 들어 Ig-힌지 함유 스페이서, CD28-유래 막횡단 도메인의 전부 또는 일부분을 함유하는 막횡단 도메인, CD28-유래 세포 내 신호전달 도메인 및 CD3 제타 신호전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR은 항체 또는 단편, 예를 들어 scFv, 스페이서, 예를 들어 Ig-힌지 함유 스페이서 중 어느 하나, CD28-유래 막횡단 도메인, 4-1BB-유래 세포 내 신호전달 도메인, 및 CD3 제타-유래 신호전달 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 그러한 CAR 컨스트럭트를 인코딩하는 핵산 분자는 T2A 리보좀 스킵 요소를 인코딩하는 서열 및/또는 tEGFR 서열, 예를 들어 CAR을 인코딩하는 서열의 하류 서열을 더 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 서열은 SEQ ID NO: 6 또는 17로 제시되는 T2A 리보좀 스킵 요소 또는 SEQ ID NO: 6 또는 17과 적어도 약 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상 또는 약 그 이상의 서열 상동성을 나타내는 아미노산 서열을 인코딩한다. 일부 구현예에서, 항원 수용체를 발현하는 T 세포 (예를 들어, CAR)는 또한 비-면역원성 선별 에피토프로서 절단된 EGFR (EGFRt)를 발현하도록 생성될 수 있는데 (예를 들어, 동일한 컨스트럭트로부터 2 가지 단백질을 발현하기 위하여 T2A 리보좀 스위치에 의하여 분리되는 CAR 및 EGFRt를 인코딩하는 컨스트럭트를 도입함으로써), 이는 그 후 그러한 세포를 검출하는 마커로서 사용될 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 8,802,374 참조). 일부 구현예에서, 상기 서열은 SEQ ID NO: 7 또는 16으로 제시되는 tEGFR 서열, 또는 SEQ ID NO: 7 또는 16과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상 또는 약 그 이상의 서열 상동성을 나타내는 아미노산 서열을 인코딩한다.
대상체에 투여된 세포에 의해 발현되는 CAR과 같은 재조합 수용체는 일반적으로, 치료되는 질병 또는 질병 상태 또는 그의 세포에서 발현되고, 그와 관련되고, 및/또는 그에 특이적인 분자를 인식하거나 또는 그에 특이적으로 결합한다. 분자, 예를 들어 항원에 특이적으로 결합하면, 수용체는 일반적으로 ITAM-도입 신호와 같은 면역자극 신호를 세포 내로 전달하여, 그로 인하여 질병 또는 질병 상태를 표적하는 면역 반응을 촉진시킨다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 상기 세포는 질병 또는 질병 상태의, 또는 질병 또는 질병 상태와 관련된 세포 또는 조직에 의해 발현되는 항원에 특이적으로 결합하는 CAR을 발현한다.
2. T 세포 수용체 (TCRs)
일부 구현예에서, 표적 폴리펩타이드, 예를 들어 종양, 바이러스 또는 자가면역 단백질의 항원의 펩타이드 에피토프 또는 T 세포 에피토프를 인식하는 T 세포 수용체 (TCR) 또는 그의 항원-결합 일부분을 발현하는, T 세포와 같은 조작된 세포가 제공된다.
일부 구현예에서, "T 세포 수용체" 또는 "TCR"은 가변 α 및 β 쇄 (각각 TCRα 및 TCRβ로도 알려짐) 또는 가변 γ 및 δ 쇄 (또한 TCRα 및 TCRβ로도 알려짐), 또는 이들의 항원-결합 부분을 함유하고, MHC 분자에 결합된 펩타이드에 특이적으로 결합할 수 있는 분자이다. 일부 구현예에서, TCR은 αβ 형태이다. 통상, αβ와 γδ 형태로 존재하는 TCR은 일반적으로 구조적으로 유사하지만, 이들을 발현하는 T 세포는 별개의 해부학적 위치 또는 기능을 가질 수 있다. TCR은 세포 표면상에서 또는 가용성 형태로 발견된다. 일반적으로, TCR은, 일반적으로 주조직 적합성 복합체 (MHC) 분자에 결합된 항원을 인식하는 역할을 하는 T 세포 (또는 T 림프구)의 표면에서 발견된다.
달리 언급하지 않는 한, 용어 "TCR"은 완전 TCR 뿐만 아니라 그의 항원-결합 부분 또는 항원-결합 단편을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 일부 구현예에서, TCR은 온전한 또는 전장 TCR이고, 예를 들어 αβ 형태 또는 γδ 형태의 TCR이다. 일부 구현예에서, TCR은 전장 TCR 보다 짧지만 MHC 분자에서 결합된 특정 펩타이드에 결합하는 항원-결합 부분이고, 예를 들어 MHC-펩타이드 복합체에 결합한다. 일부 경우, TCR의 항원-결합 부분 또는 단편은 전장 또는 온전한 TCR의 구조적 도메인의 일부분만을 함유하지만, 여전히 상기 전장 TCR이 결합하는 MHC-펩타이드 복합체와 같은 펩타이드 에피토프에 결합할 수 있다. 일부 경우, 항원-결합 부분은 특정 MHC-펩타이드 복합체에 결합하기 위한 결합 위치를 형성하기에 충분한, TCR의 가변 도메인, 예를 들어 가변 α 쇄 및 가변 β 쇄를 함유한다. 일반적으로, TCR의 가변 쇄들은 펩타이드, MHC 및/또는 MHC-펩타이드 복합체의 인식에 관여하는 상보성 결정 영역을 함유한다.
일부 구현예에서, TCR의 가변 도메인은 초가변 루프 또는 상보성 결정 영역 (CDR)을 함유하는데, 이것이 일반적으로 항원 인식 및 결합 능력 및 특이성에 주로 기여한다. 일부 구현예에서, TCR의 CDR 또는 그들의 조합은 주어진 TCR 분자의 항원-결합 위치의 전부 또는 실질적으로 전부를 형성한다. TCR 쇄의 가변 영역 내 다양한 CDR은 일반적으로 구조 영역 (FR)에 의해 분리되는데, 이는 CDR과 비교하여 TCR 분자 중에서 일반적으로 가변성이 덜 나타난다 (예를 들어, [Jores et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. U.S.A. 87:9138, 1990]; [Chothia et al., EMBO J. 7:3745, 1988] 참조; 또한 [Lefranc et al., Dev. Comp. Immunol. 27:55, 2003] 참조). 일부 구현예에서, CDR3이 항원 결합 또는 특이성을 책임지는 주 CDR이거나, 또는 항원 인식을 위해 및/또는 펩타이드-MHC 복합체의 가공된 펩타이드 부분과 상호 작용하기 위하여 주어진 TCR 가변 영역상의 3 개의 CDR 중에서 가장 중요하다. 일부 상황에서, 알파 사슬의 CDR1은 특정 항원 펩타이드의 N-말단 부분과 상호 작용할 수 있다. 일부 상황에서, 베타 쇄의 CDR1은 펩타이드의 C-말단 부분과 상호 작용할 수 있다. 일부 상황에서, CDR2는 MHC-펩타이드 복합체의 MHC 부분과의 상호 작용 또는 그의 인식을 책임지는 주 CDR에 가장 크게 기여하거나 그러한 CDR이다. 일부 구현예에서, β-쇄의 가변 영역은 추가적인 초변이 영역을 함유할 수 있는데 (CDR4 또는 HVR4), 이는 일반적으로 항원 인식이 아닌 초항원 (superantigen) 결합과 관련된다 (Kotb (1995) Clinical Microbiology Reviews, 8:411-426).
일부 구현예에서, TCR은 또한 불변 도메인, 막횡단 도메인 및/또는 짧은 세포질 꼬리를 함유할 수 있다 (예를 들어, [Janeway et al., Immunobiology : The Immune System in Health and Disease, 3rd Ed., Current Biology Publications, p. 4:33, 1997] 참조). 일부 측면에서, TCR의 각 쇄는 하나의 N-말단 면역글로불린 가변 도메인, 하나의 면역글로불린 불변 도메인, 막횡단 영역 및 C-말단에서 짧은 세포질 꼬리를 가질 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 신호 전달을 매개하는 것과 관련된 CD3 복합체의 불변 단백질들과 관련된다.
일부 구현예에서, TCR 쇄는 하나 이상의 불변 도메인을 포함한다. 예를 들어, 주어진 TCR 쇄 (예를 들어, α-쇄 또는 β-쇄)의 세포 외 부분은 세포 막에 인접하여 2 개의 면역글로불린-유사 도메인을 함유할 수 있는데, 예를 들어 가변 도메인 (예를 들어, Vα 또는 Vβ; 통상 카밧 (Kabat) 번호매김에 기초하여 아미노산 1 내지 116, [Kabat et al., "Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Dept. Health and Human Services, Public Health Service National Institutes of Health, 1991, 5th ed.]) 및 불변 도메인 (예를 들어, α-쇄 불변 도메인 또는 Cα, 통상 카밧 번호매김에 기초하여 쇄 중 117 내지 259 위치 또는 β 쇄 불변 도메인 또는 Cβ, 통상 카밧에 기초하여 쇄 중 117 내지 295 위치)이다. 예를 들어, 일부 경우, 2 개의 쇄에 의해 형성된 TCR의 세포 외 부분은 2 개의 막-근위 불변 도메인 및 2 개의 막-말단 가변 도메인을 포함하는데, 가변 도메인 각각은 CDR을 함유한다. TCR의 불변 도메인은, 시스테인 잔기가 이황화 결합을 형성하여 그에 의해 TCR의 두 쇄를 연결하는 짧은 연결 서열을 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 α 및 β 쇄 각각에 추가의 시스테인 잔기를 가질 수 있어서, TCR은 불변 도메인에서 2개의 이황화 결합을 함유한다.
일부 구현예에서, TCR 쇄는 막횡단 도메인을 함유한다. 일부 구현예에서 막횡단 도메인은 양전하를 띤다. 일부 경우에는, TCR 쇄는 세포질 꼬리를 함유한다. 일부 경우, 상기 구조는 TCR이 CD3 및 그의 서브 유닛과 같은 다른 분자와 결합하는 것을 허용한다. 예를 들어, 막횡단 영역을 갖는 불변 도메인을 함유하는 TCR은 세포막 내의 단백질을 고정시키고 CD3 신호전달 장치 또는 복합체의 불변 서브 유닛과 결합 할 수 있다. CD3 신호전달 서브 유닛 (예를 들어, CD3γ, CD3δ, CD3ε 및 CD3ζ 쇄)의 세포 내 꼬리는 TCR 복합체의 신호전달 능력에 관계된 하나 이상의 면역수용체 타이로신-계 활성화 모티프 또는 ITAM을 함유한다.
일부 구현예에서, TCR은 2개의 쇄 α 및 β (또는 필요에 따라, γ 및 δ)의 이종이량체이거나 단일 쇄 TCR 컨스트럭트일 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 이황화 결합 또는 이황화 결합들에 의해 연결된 2 개의 분리 된 쇄 (α 및 β 쇄 또는 γ 및 δ 쇄)를 함유하는 이종이량체이다.
일부 구현예에서, TCR은 Vα, β 쇄의 서열과 같은 공지된 TCR 서열(들)로부터 생성될 수 있는데, 이들에 대하여 실질적으로 전장 코딩 서열이 용이하게 이용 가능하다. 세포 공급원으로부터 V 쇄 서열을 포함하는 전장 TCR 서열을 얻는 방법은 잘 알려져 있다. 일부 구현예에서, TCR을 인코딩하는 핵산은 다양한 원으로부터 얻어질 수 있는데, 예를 들어 주어진 세포 또는 세포들 내에서 또는 그로부터 분리된 TCR-인코딩 핵산의 중합 효소 연쇄 반응 (PCR) 증폭에 의하여 또는 공개적으로 입수 가능한 TCR DAN 서열을 합성함에 의하여 얻어질 수 있다.
일부 구현예에서, TCR은 생물학적 원으로부터 얻어지는데, 예를 들어 세포로부터, 예를 들어 T 세포 (예를 들어, 세포 독성 T 세포), T 세포 하이브리도마 또는 다른 공개적으로 입수 가능한 원으로부터 얻어진다. 일부 구현예에서, T 세포는 생체 내 분리된 세포로부터 수득될 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 흉선학적으로 (thymically) 선택된 TCR이다. 일부 구현예에서, TCR은 신에피토프-제한 (neoepitope-restricted) TCR이다. 일부 구현예에서, T-세포는 배양된 T-세포 하이브리도마 또는 클론일 수 있다. 일부 구현예에서, TCR 또는 그의 항원-결합 부분은 TCR의 서열 지식으로부터 합성 생성될 수 있다.
일부 구현예에서, TCR은 표적 폴리펩타이드 항원 또는 그의 표적 T 세포 에피토프에 대한 후보 TCR 라이브러리의 스크리닝하는 것으로부터 선택되거나 또는 동정된 TCR로부터 생성된다. TCR 라이브러리는 PBMCs, 비장 또는 다른 림프 기관에 존재하는 세포를 포함하여 대상체로부터 분리된 T 세포로부터 Vα 및 Vβ 레파토리를 증폭함으로써 생성될 수 있다. 일부 경우에, T 세포는 종양-침윤 림프구 (TIL)로부터 증폭될 수 있다. 일부 구현예에서, TCR 라이브러리는 CD4+ 또는 CD8+ 세포로부터 생성될 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 건강한 대상체의 정상 T 세포원, 즉 정상 TCR 라이브러리로부터 증폭될 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 질병이 있는 대상체의 T 세포원, 즉 질병이 있는 TCR 라이브러리로부터 증폭될 수 있다. 일부 구현예에서, 축퇴 (degenerate) 프라이머는 인간으로부터 수득된 T 세포와 같은 샘플에서 예를 들어 RT-PCR에 의하여 Vα 및 Vβ의 유전자 레퍼토리를 증폭시키는데 사용된다. 일부 구현예에서, scTv 라이브러리는 증폭된 산물이 클로닝되거나 어셈블리 되어 링커에 의해 분리되는 나이브 Vα 및 Vβ 라이브러리로부터 어셈블리 될 수 있다. 대상체 및 세포의 공급원에 따라 라이브러리는 HLA 대립형질-특이적일 수 있다. 또는, 일부 구현예에서, TCR 라이브러리는 모체 또는 스캐폴드 TCR 분자의 돌연변이화 또는 다양화에 의해 생성될 수 있다. 일부 측면에서, TCR은 예를 들어 α 또는 β 쇄의 돌연변이화에 의하여 지시된 진화 (directed evolution)의 대상이 된다. 일부 구현예에서, TCR의 CDR 내의 특정 잔기가 변경된다. 일부 구현예에서, 선택된 TCR은 친화적 성숙에 의해 변형될 수 있다. 일부 구현예에서, 항원 특이적 T 세포는, 예를 들어 펩타이드에 대한 CTL 활성을 평가하기 위한 스크리닝에 의하여 선택될 수 있다. 일부 측면에서, TCR, 예를 들어 항원-특이적 T 세포 상에서 존재하는 TCR은, 예를 들어 결합 활성에 의하여, 예를 들어 상기 항원에 대한 특정 친화도 또는 결합력 (avidity)에 의하여 선택될 수 있다.
일부 구현예에서, 유전적으로 조작된 항원 수용체는 재조합 T 세포 수용체 (TCR) 및/또는 자연적으로 존재하는 T 세포로부터 클로닝된 TCR을 포함한다. 일부 구현예에서, 표적 항원 (예를 들어, 암 항원)에 대한 고-친화성 T 세포 클론은 동정되고, 환자로부터 분리되며, 세포 내로 도입된다. 일부 구현예에서, 표적 항원에 대한 TCR 클론은 인간 면역계 유전자 (예를 들어, 인간 백혈구 항원 시스템, 또는 HLA)로 조작된 트랜스제닉 마우스에서 생성되었다. 예를 들어, 종양 항원 (예를 들어, [Parkhurst et al. (2009) Clin Cancer Res. 15:169-180] 및 [Cohen et al. (2005) J Immunol. 175:5799-5808] 참조). 일부 구현예에서, 파지 디스플레이가 표적 항원에 대한 TCR을 분리하는데 사용된다 (예를 들어, [Varela-Rohena et al. (2008) Nat Med. 14:1390-1395] 및 [Li (2005) Nat Biotechnol. 23:349-354] 참조).
일부 구현예에서, TCR 또는 그의 항원-결합 부분은 변형되거나 조작된 것이다. 일부 구현예에서, 지시된 진화 방법이 이용되어, 특정 MHC-펩타이드 복합체에 대한 보다 높은 친화성을 갖는 것과 같은 변화된 특성을 갖는 TCR을 생성시킨다. 일부 구현예에서, 지시된 진화는 디스플레이 방법, 예를 들어 비한정적인 예로서 효모 디스플레이 (Holler et al. (2003) Nat Immunol, 4, 55-62; Holler et al. (2000) Proc Natl Acad Sci U S A, 97, 5387-92), 파지 디스플레이 (Li et al. (2005) Nat Biotechnol , 23, 349-54) 또는 T 세포 디스플레이 (Chervin et al. (2008) J Immunol Methods, 339, 175-84)에 의하여 달성된다. 일부 구현예에서, 디스플레이 접근법은 공지된, 모체 또는 레퍼런스 TCR을 조작하는것 또는 변형하는 것을 포함한다. 예를 들어, 일부 경우에, 야생형 TCR은, 그 TCR에서 CDR의 하나 이상의 잔기가 돌연변이되는 돌연변이화된 TCR을 생성하기 위한 주형으로서 사용될 수 있고, 원하는 변경된 성질을 갖는 돌연변이체, 예를 들어 원하는 표적 항원에 대한 더 높은 친화도의 돌연변이체가 선택된다.
일부 구현예에서, 대상 TCR을 생산하거나 생성시키는 데 사용하기 위한 표적 폴리펩타이드의 펩타이드는 공지되어 있거나 당업자에 의하여 쉽게 확인될 수 있다. 일부 구현예에서, TCR 또는 항원-결합 부분을 생성시키는 데 사용하기에 적합한 펩타이드는 대상 표적 폴리펩타이드, 예를 들어 하기 기술되는 표적 폴리펩타이드에서 HLA-제한 모티프의 존재에 기초하여 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 펩타이드는 당업자에게 공지된 컴퓨터 예측 모델을 사용하여 확인된다. 일부 구현예에서, MHC 클래스 I 결합 위치를 예측하기 위한 모델로서, ProPred1 (Singh and Raghava (2001) Bioinformatics 17(12):1236-1237), 및 SYFPEITHI ([Schuler et al. (2007) Immunoinformatics Methods in Molecular Biology, 409(1): 75-93 2007] 참조)이 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 일부 구현예에서, MHC-제한된 에피토프는 HLA-A0201인데, 이는 전체 코카시언의 대략 39-46%에서 발현되며, 따라서 TCR 또는 기타 MHC-펩타이드 결합 분자를 제조하는데 사용하기 위한 MHC 항원의 적절한 선택을 대표한다.
컴퓨터 예측 모델을 이용하여 HLA-A0201-결합 모티프 및 프로테아좀 및 면역-프로테아좀의 절단 위치는 당업자에게 공지되어 있다. MHC 클래스 I 결합 위치를 예측하기 위한 그러한 모델은 ProPred1 ([Singh and Raghava, ProPred: prediction of HLA-DR binding sites. BIOINFORMATICS 17(12):1236-1237 2001]에 보다 자세히 기술됨), 및 SYFPEITHI ([Schuler et al. SYFPEITHI, Database for Searching and T-Cell Epitope Prediction. in Immunoinformatics Methods in Molecular Biology, vol 409(1): 75-93 2007] 참조)를 들 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
일부 구현예에서, TCR 또는 그의 항원 결합 부분은 결합 특성과 같은 하나 이상의 특성이 변경된, 재조합적으로 생산된 천연 단백질 또는 그들의 돌연변이된 형태일 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 인간, 마우스, 래트 또는 다른 포유 동물과 같은 다양한 동물 종 중 하나로부터 유래될 수 있다. TCR은 세포-결합된 것 또는 가용성 형태일 수 있다. 일부 구현예에서, 제공되는 방법의 목적상, TCR은 세포 표면 상에 발현된 세포-결합된 형태이다.
일부 구현예에서, TCR은 전장 TCR이다. 일부 구현예에서, TCR은 항원-결합 부분이다. 일부 구현예에서, TCR은 이량체 TCR (dTCR)이다. 일부 구현예에서, TCR은 단일-쇄 TCR (sc-TCR)이다. 일부 구현예에서, dTCR 또는 scTCR은 WO 03/020763, WO 04/033685, WO2011/044186에 기재된 바와 같은 구조를 갖는다.
일부 구현예에서, TCR은 막횡단 서열에 상응하는 서열을 함유한다. 일부 구현예에서, TCR은 세포질 서열에 상응하는 서열을 함유한다. 일부 구현예에서, TCR은 CD3과 함께 TCR 복합체를 형성할 수 있다. 일부 구현예에서, dTCR 또는 scTCR을 포함하는 임의의 TCR은 T 세포의 표면 상에 활성 TCR을 생성하는 신호전달 도메인에 연결될 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 세포 표면에서 발현된다.
일부 구현예에서, dTCR은, TCR α 쇄 가변 영역 서열에 상응하는 서열이 TCR α 쇄 불변 영역 세포 외 서열에 상응하는 서열의 N 말단에 융합된 제1 폴리펩타이드, 및 TCR β 쇄 가변 영역 서열에 상응하는 서열이 TCR β 쇄 분변 영역 세포 외 서열에 상응하는 서열의 N 말단에 융합된 제2 폴리펩타이드를 함유하는데, 상기 제1 및 제2 폴리펩타이드는 이황화 결합에 의해 연결된다. 일부 구현예에서, 상기 결합은 본래의 이량체 αβ TCR에 존재하는 본래의 내부-쇄 이황화 결합에 해당할 수 있다. 일부 구현예에서, 쇄간 이황화 결합은 천연 TCR에는 존재하지 않는다. 예를 들어, 일부 구현예에서, dTCR 폴리펩타이드 쌍의 불변 영역 세포 외 서열에 하나 이상의 시스테인이 혼입될 수 있다. 일부 경우에, 천연 및 비-천연 이황화 결합이 바람직할 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 막에 결착하기 위해 막횡단 서열을 함유한다.
일부 구현예에서, dTCR은, 가변 α 도메인, 불변 α 도메인 및 상기 불변 α 도메인의 C-말단에 부착된 제1 이합체화 모티프를 함유하는 TCR α 쇄, 및 가변 β 도메인, 불변 β 도메인 및 상기 불변 β 도메인의 C-말단에 부착된 제2 이합체화 모티프를 포함하는 TCR β 쇄를 함유하고, 상기 제1 및 제2 이합체화 모티프는 쉽게 상호 작용하여 상기 제1 이합체화 모티프의 아미노산과 상기 제2 이합체화 모티프의 아미노산 간 공유 결합을 형성하여, TCR α 쇄와 TCR β 쇄를 함께 연결한다.
일부 구현예에서, TCR은 scTCR이다. 통상, scTCR은 당업자에게 공지된 방법을 사용하여 생성될 수 있다 (예를 들어, [Soo Hoo, W. F. et al. PNAS (USA) 89, 4759 (1992)]; [Wulfing, C. and Pluckthun, A., J. Mol . Biol . 242, 655 (1994)]; [Kurucz, I. et al. PNAS (USA) 90 3830 (1993)]; 국제 공개 PCT Nos. WO 96/13593, WO 96/18105, WO99/60120, WO99/18129, WO 03/020763, WO2011/044186; 및 [Schlueter, C. J. et al. J. Mol . Biol . 256, 859 (1996)] 참조). 일부 구현예에서, scTCR은 도입된 비-천연 (non-naive) 이황화 쇄간 결합을 함유하여 TCR 쇄들의 결합을 촉진시킨다 (예를 들어, 국제 공개 PCT WO 03/020763 참조). 일부 구현예에서, scTCR은, 그의 C-말단에 융합된 이종의 류신 지퍼가 쇄 결합을 용이하게 하는 비-이황화 결합된 절단된 TCR이다 (예를 들어, 국제 공개 PCT WO 99/60120 참조). 일부 구현예에서, scTCR은 펩타이드 링커를 통해 TCRβ 가변 도메인에 공유 결합된 TCRα 가변 도메인을 함유한다 (국제 공개 PCT No. WO99/18129 참조).
일부 구현예에서, scTCR은, TCR α 쇄 가변 영역에 상응하는 아미노산 서열로 구성되는 제1 분절, TCR β 쇄 불변 도메인 세포 외 서열에 상응하는 아미노산 서열의 N 말단에 융합된 TCR β 쇄 가변 영역 서열에 상응하는 아미노산 서열로 구성되는 제2 분절, 및 상기 제1 분절의 C 말단을 상기 제2 분절의 N 말단에 연결하는 링커 서열을 함유한다.
일부 구현예에서, scTCR은, α 쇄 세포 외 불변 도메인 서열의 N 말단에 융합된 α 쇄 가변 영역 서열로 구성되는 제1 분절, 및 β 쇄 세포 외 불변 서열의 N 말단에 융합된 β 쇄 가변 영역 서열 및 막횡단 서열로 구성되는 제2 분절, 및, 필요에 따라 상기 제1 분절의 C 말단을 상기 제2 분절의 N 말단에 연결하는 링커 서열을 함유한다.
일부 구현예에서, scTCR은, β 쇄 세포 외 불변 도메인 서열의 N 말단에 융합된 TCR β 쇄 가변 영역 서열로 구성되는 제1 분절, 및 α 쇄 세포 외 불변 서열의 N 말단에 융합된 α 쇄 가변 영역 서열 및 막횡단 서열로 구성되는 제2 분절, 및, 필요에 따라 상기 제1 분절의 C 말단을 상기 제2 분절의 N 말단에 연결하는 링커 서열을 함유한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 TCR 분절을 연결시키는 scTCR의 링커는 TCR 결합 특이성을 유지하면서 단일 폴리펩타이드 가닥을 형성할 수 있는 임의의 링커일 수 있다. 일부 구현예에서, 링커 서열은 예를 들어 식 -P-AA-P-를 가질 수 있는데, 여기서 P는 프롤린이고 AA는 그 아미노산이 글리신 및 세린 인 아미노산 서열을 나타낸다. 일부 구현예에서, 상기 제1 및 제2 분절은 그들의 가변 영역 서열이 그러한 결합을 위해 배향되도록 쌍을 이룬다. 따라서 일부 경우에, 상기 링커는 상기 제1 분절의 C 말단과 상기 제2 분절의 N 말단 간의 거리를 아우르는 충분한 길이를 가지거나 그 역도 마찬가지이지만, scTCR의 그 표적 리간드로의 결합을 차단하거나 감소시킬 만큼 너무 길지는 않다. 일부 구현예에서,상기 링커는 10 내지 45 개 아미노산, 예를 들어 10 내지 30 개 아미노산, 또는 26 내지 41 개 아미노산 잔기, 예를 들어 29, 30, 31 또는 32 개의 아미노산, 또는 약 그 정도의 아미노산을 함유 할 수있다. 일부 구현예에서, 상기 링커는 식 -PGGG-(SGGGG)5-P-를 갖는데, 여기서 P는 프롤린, G는 글리신 및 S는 세린이다 (SEQ ID NO: 22). 일부 구현예에서, 상기 링커는 서열 GSADDAKKDAAKKDGKS (SEQ ID NO: 23)을 갖는다.
일부 구현예에서, scTCR은 α 쇄의 불변 도메인의 면역글로불린 영역의 잔기를, β 쇄의 불변 도메인의 면역글로불린 영역의 잔기에 연결하는 공유 이황화 결합을 함유한다. 일부 구현예에서, 천연 TCR에서 쇄간 (interchain) 이황화 결합은 존재하지 않는다. 예를 들어, 일부 구현예에서, scTCR 폴리펩타이드의 제1 및 제2 분절의 불변 영역 세포 외 서열 내로 하나 이상의 시스테인이 혼입될 수 있다. 일부 경우에, 천연 및 비-천연 이황화 결합 양자 모두가 바람직할 수 있다.
도입된 쇄간 이황화 결합을 함유하는 dTCR 또는 scTCR의 일부 구현예에서, 천연의 이황화 결합은 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 천연의 쇄간 이황화 결합을 형성하는 하나 이상의 천연 시스테인은 세린 또는 알라닌과 같은 다른 잔기로 치환된다. 일부 구현예에서, 도입된 이황화 결합은 상기 제1 및 제2 분절 상의 비-시스테인 잔기를 시스테인으로 돌연변이 시킴으로써 형성될 수 있다. TCR의 예시적인 비-천연 이황화 결합은 국제 공개 PCT 번호 WO2006/000830에 기술되어 있다.
일부 구현예에서, TCR 또는 이의 항원-결합 단편은, 10-5 내지 10-12 M과 그 안의 모든 개별 값 및 범위 또는 약 그 정도의 표적 항원에 대한 평형 결합 상수를 갖는 친화도를 나타낸다. 일부 구현예에서, 표적 항원은 MHC-펩타이드 복합체 또는 리간드이다.
일부 구현예에서, α 쇄 및 β 쇄와 같은 TCR을 인코딩하는 핵산 또는 핵산들은 PCR, 클로닝 또는 다른 적절한 수단에 의해 증폭될 수 있고, 적합한 발현 벡터 또는 벡터들 내에 클로닝 될 수 있다. 발현 벡터는 임의의 적합한 재조합 발현 벡터일 수 있으며, 임의의 적합한 숙주를 형질 전환 또는 형질 감염 시키는데 사용될 수 있다. 적합한 벡터는 전파 및 증식을 위해 또는 발현을 위해, 또는 양자 모두를 위해 설계된 것들을 포함하며, 예를 들어 플라스미드 및 바이러스이다.
일부 구현예에서, 벡터는 pUC 시리즈 (Fermentas Life Sciences), pBluescript 시리즈 (Stratagene, 미국 캘리포니아주 라호야 소재), pET 시리즈 (Novagen, 미국 위스콘신주 매디슨 소재), pGEX 시리즈 (Pharmacia Biotech, 스웨덴 웁살라 소재), 또는 pEX 시리즈 (Clontech, 미국 캘리포니아주 팔로앨토 소재)의 벡터일 수 있다. 일부 경우에서, 박테리오파지 벡터, 예를 들어 λG10, λGT11, λZapII (Stratagene), λEMBL4, 및 λNM1149가 또한 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 식물 발현 벡터가 사용될 수 있으며, 이는 pBI01, pBI101.2, pBI101.3, pBI121 및 pBIN19 (Clontech)를 포함한다. 일부 구현예에서, 동물 발현 벡터는 pEUK-Cl, pMAM 및 pMAMneo (Clontech)를 포함한다. 일부 구현예에서, 바이러스 벡터, 예를 들어 레트로바이러스 벡터가 사용된다.
일부 구현예에서, 재조합 발현 벡터는 표준 재조합 DNA 기법을 사용하여 제조할 수 있다. 일부 구현예에서, 벡터는, 벡터가 DNA- 또는 RNA-기반인지를 고려하여, 적절한 경우, 벡터가 도입될 숙주의 유형 (예를 들어, 박테리아, 균류, 식물 또는 동물)에 특이적인 조절 서열, 예를 들어 전사 및 번역 개시 및 종결 코돈을 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 벡터는 TCR 또는 항원-결합 부분 (또는 기타 MHC-펩타이드 결합 분자)를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열에 작동 가능하게 연결된 비천연 프로모터를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 프로모터는 비-바이러스 프로모터 또는 바이러스 프로모터, 예를 들어 사이토메갈로바이러스 (CMV) 프로모터, SV40 프로모터, RSV 프로모터, 및 뮤린 줄기세포 바이러스의 긴 말단 반복부에서 발견되는 프로모터일 수 있다. 당업자에 공지된 다른 프로모터가 또한 고려된다.
일부 구현예에서, T-세포 클론이 수득된 후, TCR 알파 및 베타 쇄가 단리되고 유전자 발현 벡터 내로 클로닝된다. 일부 구현예에서, TCR 알파 및 베타 유전자는 피코르나바이러스 2A 리보좀 스킵 펩타이드를 통해 연결되어, 두 쇄가 동시에 발현된다. 일부 구현예에서, TCR의 유전자 전달은 레트로바이러스 또는 렌티바이러스 벡터를 통해 또는 트랜스포존을 통해 수행된다 (예를 들어, [Baum et al. (2006) Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 13:1050-1063]; [Frecha et al. (2010) Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 18:1748-1757]; 및 [Hackett et al. (2010) Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 18:674-683] 참조).
일부 구현예에서, TCR을 인코딩하는 벡터를 생성하기 위해, 대상 TCR을 발현하는 T 세포 클론으로부터 단리된 총 cDNA로부터 α 및 β 쇄를 PCR 증폭하고 발현 벡터에 클로닝한다. 일부 구현예에서, α 및 β 쇄는 동일한 벡터 내로 클로닝된다. 일부 구현예에서, α 및 β 쇄는 상이한 벡터로 클로닝된다. 일부 구현예에서, 생성된 α 및 β 쇄는 레트로바이러스 벡터, 예를 들어, 렌티바이러스 벡터 내로 혼입된다.
3. 키메라 자가-항체 수용체 (CAARs)
일부 구현예에서, 재조합 수용체는 키메라 자가항체 수용체 (CAAR)이다. 일부 구현예에서, CAAR은 자가항체에 특이적이다. 일부 구현예에서, CAAR를 발현하는 세포, 예를 들어 CARR을 발현하도록 조작된 T 세포는 자가항체-발현 세포에 특이적으로 결합하고 이를 죽이는 데 사용될 수 있지만, 정상 항체 발현 세포에는 그러하지 아니하다. 일부 구현예에서, CAAR-발현 세포는 자가면역 질병과 같은 자기-항원의 발현과 관련된 자가면역 질병을 치료하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, CAAR-발현 세포는 궁극적으로 자가항체를 생산하고 그의 세포 표면 상에 자가항체를 표시하는 B 세포를 표적화 할 수 있고, 이들 B 세포를 치료적 개입을 위한 질병-특이적 표적으로 표시할 수 있다. 일부 구현예에서, CAAR-발현 세포는 항원-특이적 키메라 자가항체 수용체를 사용하여 질병-유발 B 세포를 표적화함으로써 자가면역 질병에서 병원성 B 세포를 효율적으로 표적화하고 사멸시키는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 재조합 수용체는 CAAR, 예를 들어 미국 특허 출원 공개 No. 2017/0051035에 개시된 임의의 것이다.
일부 구현예에서, CAAR은 자가항체 결합 도메인, 막횡단 도메인 및 세포 내 신호전달 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 내 신호전달 영역은 세포 내 신호전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 내 신호전달 영역은 1차 신호전달 도메인, T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있는 신호전달 도메인, T 세포 수용체 (TCR) 요소의 신호전달 도메인 및/또는 면역수용체 타이로신-계 활성화 모티프 (ITAM)를 포함하는 신호전달 도메인이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 내 신호전달 영역은 2차 또는 공자극 신호전달 영역 (2차 세포 내 신호전달 영역)을 포함한다.
일부 구현예에서, 자가항체 결합 도메인은 자가항원 또는 그의 단편을 포함한다. 자가항원의 선택은 표적화 될 자가항체의 유형에 달려 있다. 예를 들어, 자가항원은, 그것이 특정 질병 상태, 예를 들어 자기면역 질병, 예를 들어 자가항체-매개 자가면역 질병과 관련된, B 세포와 같은 표적 세포상의 자가항체를 인식하기 때문에 선택될 수 있다. 일부 구현예에서, 자가면역 질병은 심상성 천포창 (pemphigus vulgaris, PV)을 포함한다. 예시적인 자가항원은 데스모글레인 1 (Dsg1) 및 Dsg3을 포함한다.
4. 다중-표적화
일부 구현예에서, 세포 및 방법은 다중-표적화 전략을 포함하는데, 예를 들어 세포 상에 2 종 이상의 유전적으로 조작된 수용체의 발현으로서, 각각 동일하거나 상이한 항원을 인식하고, 통상 각각은 상이한 세포 내 신호전달 요소를 포함한다. 이러한 다중-표적화 전략은 예를 들어 국제 특허 출원 공개 WO 2014055668 A1 (활성화 및 공자극 CAR의 조합을 기재하는데, 이는 예를 들어, 오프-표적, 예를 들어 정상 세포 상에 개별적으로 존재하는 2 가지 상이한 항원을 표적으로 하지만 치료될 질병 또는 질병 상태의 세포 상에만 같이 존재함) 및 [Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5(215) (December, 2013)](활성화 및 억제성 CAR을 발현하는 세포를 기재함, 예를 들어 상기 활성화 CAR이 정상 세포나 비-질병 세포 및 치료될 질병 또는 질병 상태의 세포 양자 모두에서 발현되는 하나의 항원에 결합하고, 억제성 CAR은 정상 세포나 치료되기를 원치 않는 세포에서만 발현되는 다른 항원에 결합하는 것임)에 개시되어 있다.
예를 들어, 일부 구현예에서, 세포는 일반적으로 제1 수용체에 의하여 인식되는 항원, 예를 들어 제1 항원에 특이적 결합시, 상기 세포에 대한 활성화 신호를 유도할 수 있는 유전적으로 조작된 제1 항원 수용체 (예를 들어 CAR 또는 TCR)을 발현하는 수용체를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포는 일반적으로 제2 수용체에 의하여 인식되는 제2 항원에 특이적 결합시, 면역 세포에 대한 공자극 신호를 유도할 수 있는, 유전적으로 조작된 제2 항원 수용체 (예를 들어 CAR 또는 TCR), 예를 들어 키메라 공자극 수용체를 더 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 제1 항원 및 제2 항원은 동일하다. 일부 구현예에서, 상기 제1 항원 및 제2 항원은 상이하다.
일부 구현예에서, 상기 제1 및/또는 제2의 유전적으로 조작된 항원 수용체 (예를 들어, CAR 또는 TCR)은 세포에 활성화 신호를 유도할 수 있다. 일부 구현예에서, 수용체는 ITAM 또는 ITAM-유사 모티프를 함유하는 세포 내 신호전달 요소를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 수용체에 의해 유도된 활성화는 신호 전달 또는 세포에서 단백질 발현의 변화를 수반하는데, 그 결과 면역 반응의 개시, 예를 들어 ITAM 인산화 및/또는 ITAM-매개 신호 전달 캐스케이드의 개시, 면역학적 시냅스의 형성 및/또는 결합된 수용체 근처에서 분자들의 클러스터링 (예를 들어, CD4 또는 CD8 등), 하나 이상의 전사 인자의 활성화, 예를 들어 NF-κB 및/또는 AP-1, 및/또는 예를 들어 사이토카인과 같은 인자들의 유전자 발현, 증식, 및/또는 생존의 유도가 일어난다.
일부 구현예에서, 상기 제1 및/또는 제2 수용체는 CD28, CD137 (4-1BB), OX40 및/또는 ICOS와 같은 공자극 수용체의 세포 내 신호전달 도메인 또는 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 제1 및 제2 수용체는 상이한 공자극 수용체의 세포 내 신호전달 도메인을 포함한다. 하나의 구현예에서, 상기 제1 수용체는 CD28 공자극 신호전달 영역을 함유하고, 제2 수용체는 4-1BB 공-자극 신호전달 영역을 함유하며, 또는 그 역도 마찬가지이다.
일부 구현예에서, 제1 및/또는 제2 수용체는 ITAM 또는 ITAM-유사 모티프를 함유하는 세포 내 신호전달 도메인 및 공자극 수용체의 세포 내 신호전달 도메인 양자를 모두 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 수용체는 ITAM 또는 ITAM-유사 모티프를 함유하는 세포 내 신호전달 도메인을 함유하고, 제2 수용체는 공자극 수용체의 세포 내 신호전달 도메인을 함유한다. 동일한 세포에서 유도된 활성화 신호와 조합된 공자극 신호는 면역 반응을 결과하는 것이고, 예를 들어 견고하고 지속적인 면역 반응, 예를 들어 유전자 발현 증가, 사이토카인 및 다른 인자의 분비, 및 T 세포 매개 된 효과자 기능, 예를 들어 세포 살상이다.
일부 구현예에서, 제1 수용체만의 결합 또는 제2 수용체만의 결합은 강력한 면역 반응을 유도하지 않는다. 일부 측면에서, 단지 하나의 수용체가 결합된다면, 세포는 내성이 되거나 항원에 반응하지 않거나, 억제되거나, 및/또는 인자들을 증식하거나 분비하도록 유도되지 않거나 효과자 기능을 수행하지 않는다그러나, 일부 이러한 구현예에서, 제1 및 제2 항원을 발현하는 세포와 맞닥뜨리는 것과 같이 복수 개의 수용체가 결합될 때, 원하는 반응은 달성되는데, 예를 들어, 하나 이상의 사이토카인의 분비에 의하여 표시되는 바와 같은 완전한 면역 활성화 또는 자극, 표적 세포의 세포독성 살해와 같은 면역 효과자 기능의 증식, 지속 및/또는 수행이다.
일부 구현예에서, 두 수용체는 각각 세포에 활성화 및 억제성 신호를 유도하고, 그로써 상기 수용체 중 하나에 의한 그의 항원에 대한 결합은 상기 세포를 활성화시키거나 반응을 유도하지만, 상기 제2 억제성 수용체의 그의 항원에 대한 결합은 그 반응을 억제하거나 완충하는 신호를 유도한다. 예시로는 활성화 CAR 및 억제 CAR나 iCAR의 조합이 있다. 예를 들어, 활성화 CAR이 질병 또는 질병 상태에서 발현되지만 정상 세포 상에서도 발현되는 항원에 결합하고, 억제성 수용체가 정상 세포에서 발현되지만 질병이나 질병 상태의 세포에서는 발현되지 않는 별개의 항원에 결합하는, 그러한 전략이 이용될 수 있다.
일부 구현예에서, 다중-표적화 전략은 특정 질병 또는 질병 상태와 관련된 항원이 일시적으로 (예를 들어, 유전자 조작 관련 자극시) 또는 영구적으로 비-질병 세포 상에서 발현 및/또는 조작된 세포 자체 상에서 발현되는 경우에 이용된다. 이러한 경우에, 2 개의 독립적이고 각각 특이적인 항원 수용체의 결합을 요구함으로써, 특이성, 선택성 및/또는 효능이 개선될 수 있다.
일부 구현예에서, 복수 개의 항원, 예를 들어, 제1 및 제2 항원은 표적화될 세포, 조직 또는 질병 또는 질병 상태에서 발현되는데, 예를 들어 암 세포 상에서이다. 일부 측면에서, 상기 세포, 조직, 질병 또는 질병 상태는 다발성 골수종 또는 다발성 골수종 세포이다. 일부 구현예에서, 복수 개의 항원 중 하나 이상은 또한 일반적으로 세포 요법으로 표적화되기를 원치 않는 세포, 예를 들어 정상 또는 비-질병 세포나 조직, 및/또는 조작된 세포 그 자체 상에서 발현된다. 이러한 구현예에서, 세포의 반응을 달성하기 위하여 다수의 수용체의 결합을 요구함으로써, 특이성 및/또는 효능이 달성된다.
B. 유전자 조작을 위한 벡터와 방법
유전적으로 조작되는 요소, 예를 들어, CAR 또는 TCR과 같은 재조합 수용체의 도입을 위한 다양한 방법이 공지되어 있으며, 제공되는 방법 및 조성물과 함께 사용될 수 있다. 예시적인 방법은 상기 수용체를 인코딩하는 핵산을 전달하기 위한 것들을 포함하는데, 예를 들어 바이러스를 통하여, 예를 들어 레트로바이러스 또는 렌티바이러스를 통하여, 형질 도입, 트랜스포존 및 전기천공을 통하여 등이다.
일부 구현예에서, 예를 들어 사이토카인의 발현에 의해 측정될 때, 증식, 생존 및/또는 활성화와 같은 반응을 유도하는 자극과 결합시킴으로써 세포를 먼저 자극함으로써 유전자 전이가 수행되거나, 활성화 마커의 도입, 활성화된 세포의 형질 도입 및 배양물에서 임상 적용에 충분한 수의 확장을 포함한다.
일부 구현예에서, 재조합 핵산은, 예를 들어 유인원 바이러스 40 (SV40), 아데노바이러스, 아데노-연관 바이러스 (AAV)로부터 유래한 벡터와 같은 재조합 감염성 바이러스 입자를 사용하여, 세포 내로 전달된다. 일부 구현예에서, 재조합 핵산은 재조합 렌티바이러스 벡터 또는 레트로바이러스 벡터, 예를 들어 감마-레트로바이러스 벡터를 사용하여, T 세포 내로 전달된다 (예를 들어, 문헌 [Koste et al.(2014) Gene Therapy 2014 Apr 3. doi: 10.1038/gt.2014.25]; [Carlens et al.(2000) Exp Hematol 28(10): 1137-46]; [Alonso-Camino et al.(2013) Mol Ther Nucl Acids 2, e93]; [Park et al, Trends Biotechnol. 2011 November 29(11): 550-557] 참조).
일부 구현예에서, 레트로바이러스 벡터는 긴 말단 반복부 서열 (LTR), 예를 들어 몰로니 뮤린 백혈병 바이러스 (MoMLV), 골수 증식성 육종 바이러스 (MPSV), 뮤린 배아 줄기세포 바이러스 (MESV), 뮤린 줄기세포 바이러스 (MSCV), 비장 병소 형성 바이러스 (SFFV), 또는 아데노-연관 바이러스 (AAV)로부터 유래한 레트로바이러스 벡터를 가질 수 있다. 대부분의 레트로바이러스 벡터는 뮤린 레트로바이러스로부터 유래한다. 일부 구현예에서, 레트로바이러스는 임의의 조류 또는 포유류 세포 공급원으로부터 유래한 것을 포함한다. 레트로바이러스는 통상적으로 양쪽성이며, 이는 이들이 인간을 포함하는 여러 종의 숙주 세포를 감염시킬 수 있음을 의미한다. 일 구현예에서, 발현될 유전자는 레트로바이러스 gag, pol 및/또는 env 서열을 대체한다. 다수의 예시적 레트로바이러스 시스템이 기재된 바 있다 (예를 들어, 미국 특허 5,219,740; 6,207,453; 5,219,740; 문헌 [Miller and Rosman(1989) BioTechniques 7:980-990]; [Miller, A. D.(1990) Human Gene Therapy 1:5-14]; [Scarpa et al.(1991) Virology 180:849-852]; [Burns et al.(1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:8033-8037]; 및 [Boris-Lawrie and Temin(1993) Cur. Opin. Genet. Develop. 3:102-109]).
렌티바이러스 형질도입 방법은 공지되어 있다. 예시적 방법은, 예를 들어 문헌 [Wang et al.(2012) J. Immunother . 35(9): 689-701]; [Cooper et al.(2003) Blood. 101:1637-1644]; [Verhoeyen et al.(2009) Methods Mol Biol . 506: 97-114]; 및 [Cavalieri et al.(2003) Blood.　102(2): 497-505]에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 재조합 핵산은 전기천공을 통해 T 세포 내로 전달된다 (예를 들어, 문헌 [Chicaybam et al,(2013) PLoS ONE 8(3): e60298] 및 [Van Tedeloo et al.(2000) Gene Therapy 7(16): 1431-1437] 참조). 일부 구현예에서, 재조합 핵산은 트랜스포지션 (transposition)를 통해 T 세포 내로 전달된다 (예를 들어, 문헌 [Manuri et al.(2010) Hum Gene Ther 21(4): 427-437]; [Sharma et al.(2013) Molec Ther Nucl Acids 2, e74]; 및 [Huang et al.(2009) Methods Mol Biol 506: 115-126] 참조). 면역 세포에서 유전 물질을 도입하여, 발현시키는 다른 방법으로는 인산칼륨 형질감염 (예를 들어, 존 윌리 앤드 손 (미국 뉴욕주 뉴욕 소재)의 [Current Protocols in Molecular Biology]에 기재된 바와 같음), 원형질체 융합, 양이온성 리포솜 매개 형질감염; 텅스텐 입자 촉진 미립자 충격 (문헌 [Johnston, Nature, 346: 776-777(1990)]); 및 스트론튬 인산염 DNA 공-침전 (문헌 [Brash et al, Mol. Cell Biol, 7: 2031-2034(1987)])을 포함한다.
재조합 산물을 인코딩하는 핵산의 전달을 위한 다른 접근법 및 벡터에는, 예를 들어 국제 특허 출원 공개 WO2014055668 및 미국 특허 7,446,190에 기재된 것들이 있다.
일부 구현예에서, 세포, 예를 들어, T 세포는 증식 도중 또는 증식 후에 예를 들어 T 세포 수용체 (TCR) 또는 키메라 항원 수용체 (CAR)로 형질 감염될 수 있다. 원하는 수용체 유전자의 도입을 위한 이러한 형질 감염은 예를 들어 임의의 적합한 레트로바이러스 벡터로 수행될 수 있다. 그 후, 유전적으로 변형된 세포 집단은 초기 자극 (예를 들어, CD3/CD28 자극)으로부터 유리될 수 있고, 이어서, 예를 들어 새로 도입된 수용체를 통하여 제2 유형의 자극으로 자극될 수 있다. 이 제2 유형의 자극은 펩타이드/MHC 분자 형태의 항원 자극, 유전적으로 도입된 수용체의 동족 (가교성) 리간드 (예를 들어, CAR의 천연 리간드) 또는 (예를 들어, 수용체 내 불변 영역을 인식함으로써) 새로운 수용체의 구조 내에 직접 결합하는 기타 리간드 (항체 등)를 포함할 수 있다. 예를 들어, [Cheadle et al, "Chimeric antigen receptors for T-cell based therapy" Methods Mol Biol. 2012; 907:645-66] 또는 [Barrett et al., Chimeric Antigen Receptor Therapy for Cancer Annual Review of Medicine Vol. 65: 333-347 (2014)] 참조.
일부 경우에, 세포, 예를 들어, T 세포가 활성화되는 것을 요하지 않는 벡터가 사용될 수 있다. 이러한 일부 경우에서, 세포는 활성화 전에 선택 및/또는 형질 도입될 수있다. 따라서, 세포는, 세포의 배양 전에 또는 후에, 그리고 경우에 따라서는 상기 배양과 동시에 적어도 상기 배양의 일부분 도중에 조작될 수 있다.
일부 측면에서, 세포는 사이토카인 또는 다른 인자의 발현이 촉진되도록 추가로 조작된다. 특히, 추가적인 핵산, 예를 들어 도입을 위한 유전자는, 예를 들어 전달되는 세포의 생존 및/또는 기능을 촉진시킴으로써, 요법의 효능을 개선시키는 것; 예를 들어 생체내 생존 또는 국소화를 평가하기 위한 세포의 선택 및/또는 평가를 위한 유전자 마커를 제공하는 유전자; 예를 들어, 문헌 [Lupton S. D. et al., Mol . and Cell Biol ., 11:6 (1991)]; 및 [Riddell et al., Human Gene Therapy 3:319-338 (1992)]에 기재된 바와 같이, 생체 내에서 음성 선택에 민감성인 세포를 제조함으로써, 안전성을 개선하기 위한 유전자이며; 또한 우성 양성 선택 가능 마커와 음성 선택 가능 마커의 융합으로부터 유래한 2 기능성 선택 가능 융합 유전자의 사용을 기술하고 있는 Lupton 등에 의한 PCT/US91/08442 및 PCT/US94/05601의 공보물을 참조한다. 예를 들어, Riddell 등의 미국 특허 6,040,177, 컬럼 14 내지 17을 참조한다.
일부 구현예에서, 단일 프로모터는 단일 오픈 리딩 프레임 (ORF)에서 자기-분해 펩타이드를 인코딩하는 서열 (예를 들어, 2A 서열) 또는 프로테아제 인식 위치 (예를 들어, 퓨린)에 의하여 서로 분리되는 2 개 또는 3 개의 유전자 (예를 들어, 대사 경로를 조절하는 것과 관련된 분자를 인코딩하고 재조합 수용체를 인코딩함)를 함유하는 RNA의 발현을 지시할 수 있다. 따라서 ORF는 하나의 폴리 펩타이드를 인코딩하며, 이는 번역 도중 (2A의 경우) 또는 번역된 후에 개별 단백질들로 가공된다. 일부 경우에, T2A와 같은 펩타이드는 리보좀으로 하여금 2A 요소의 C-말단에서 펩타이드 결합의 건너뛰기 (리보좀 스킵핑)를 일으켜, 2A 서열의 말단과 다음 펩타이드 하류 사이의 분리를 유도할 수 있다 (예를 들어, [de Felipe. Genetic Vaccines and Ther . 2:13 (2004)] 및 [de Felipe et al.Traffic 5:616-626 (2004)] 참조). 다수의 2A 요소가 알려져 있다. 본 발명에 개시되는 방법 및 핵산에 사용될 수 있는 2A 서열의 예시는, 제한없이, 미국 특허 공개 번호 20070116690에 기재된 것과 같은 구제역 바이러스 (F2A, 예를 들어, SEQ ID NO: 21), 마(馬) 비염 A 바이러스 (equine rhinitis A virus)(E2A, 예를 들어 SEQ ID NO: 20), 토시아 어시그나 바이러스 (Thosea asigna virus)(T2A, 예를 들어 SEQ ID NO: 6 또는 17) 및 돼지 테스코 바이러스-1 (P2A, 예를 들어 SEQ ID NO: 18 또는 19) 이다.
C. 유전자 조작을 위한 세포 및 세포 제조
수용체를 발현하며 상기 제공되는 방법으로 투여되는 세포 중에는 조작된 세포가 있다. 유전자 조작은 일반적으로 예를 들어 레트로바이러스 형질 도입, 형질 감염 또는 형질 전환에 의해, 세포를 함유하는 조성물 내로 재조합 또는 조작된 요소를 인코딩하는 핵산을 도입하는 것을 수반한다.
일부 구현예에서, 핵산은 이종의 것, 즉 보통 세포나 그 세포로부터 얻어지는 샘플 내에 존재하지 않는 것으로, 예를 들어 다른 생물이나 세포로부터 얻은 것, 예를 들어 이는 조작되는 세포 및/또는 그러한 세포가 유래하는 생물에서 보통 발견되지 않는 것이다. 일부 구현예에서, 상기 핵산은 자연적으로 존재하지 않는 것이고, 예를 들어 자연에서 발견되지 않는 핵산, 예를 들어 다수의 상이한 세포 유형으로부터 다양한 도메인을 인코딩하는 핵산의 키메라 조합을 포함하는 것을 포함한다.
세포는 일반적으로 진핵 세포, 예를 들어 포유류 세포이며, 통상 인간 세포이다. 일부 구현예에서, 세포는 혈액, 골수, 림프 또는 림프성 기관으로부터 유래된 것으로, 면역계, 예를 들어 선천성 면역 또는 적응 면역의 세포들이고, 예를 들어 골수성 또는 림프성 세포, 예를 들어 림프구, 통상 T 세포 및/또는 NK 세포이다. 다른 예시적인 세포는 줄기 세포를 포함하는데, 예를 들어 다능성 및 전능성 줄기 세포, 예를 들어 유도된 전능성 줄기 세포 (iPSCs)이다. 세포는 통상 대상체로부터 직접적으로 단리된 및/또는 대상체로부터 단리되고 동결된 것과 같은 1차 세포이다. 일부 구현예에서, 세포는 T 세포 또는 기타 세포 유형의 하나 이상의 서브세트를 포함하는데, 예를 들어 전체 T 세포 집단, CD4+ 세포, CD8+ 세포 및 이들의 서브집단으로, 예를 들어 기능, 활성화 상태, 성숙도, 분화 잠재력, 증식, 재순환, 위치화, 및/또는 지속 능력, 항원-특이성, 항원 수용체의 유형, 특정 기관 또는 구획 내 존재 여부, 마커 또는 사이토카인 분비 프로파일, 및/또는 분화 정도에 의해 정의되는 것들이다. 치료될 대상체와 관련하여, 상기 세포는 동종 및/또는 자가일 수 있다. 상기 방법 중에는, 기존의 방법이 포함된다. 일부 측면에서, 예를 들어 기존의 기술에 대하여, 세포는 전응성 및/또는 다능성이고, 예를 들어 줄기 세포이며, 예를 들어 유도된 전능성 줄기 세포 (iPSCs)이다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 동결 보존 전 또는 후에, 대상체로부터 세포를 단리하는 것, 이들을 제조, 가공, 배양, 및/또는 조작하는 것, 및 이들을 상기 동일한 대상체에게 재-도입하는 것을 포함한다.
T 세포의, 및/또는 CD4+의, 및/또는 CD8+ T 세포의 서브-유형 및 서브집단 중에는, 나이브 T 세포 (TN), 효과자 T 세포 (TEFF), 기억 T 세포 및 이들의 서브-유형이 있는데, 예를 들어 줄기 세포 기억 T 세포 (TSCM), 중추 기억 T 세포 (TCM), 효과자 기억 T 세포 (TEM), 또는 최종 분화된 기억 T 세포, 종양-침윤 림프구 (TIL), 미성숙 T 세포, 성숙 T 세포, 헬퍼 T 세포, 세포독성 T 세포, 점막-관련 불변 T 세포 (MAIT), 자연 발생 및 적응 조절 T 세포 (Treg), 헬퍼 T 세포, 예를 들어 TH1 세포, TH2 세포, TH3 세포, TH17 세포, TH9 세포, TH22 세포, 소낭 헬퍼 T 세포, 알파/베타 T 세포, 및 델타/감마 T 세포이다.
일부 구현예에서, 세포는 자연 살해 세포 (NK 세포)이다. 일부 구현예에서, 세포는 단핵구 또는 과립구, 예를 들어 골수 세포, 대식세포, 호중구, 수지상 세포, 비만 세포, 호산구 및/또는 호염기구이다.
일부 구현예에서, 세포는 유전자 조작을 통해 도입된 하나 이상의 핵산을 포함하고, 이에 의해 그러한 핵산의 재조합 또는 유전자 조작된 생성물을 발현한다. 일부 구현예에서, 핵산은 이종의 것, 즉 보통 세포나 그 세포로부터 얻어지는 샘플 내에 존재하지 않는 것으로, 예를 들어 다른 생물이나 세포로부터 얻은 것, 예를 들어 이는 조작되는 세포 및/또는 그러한 세포가 유래하는 생물에서 보통 발견되지 않는 것이다. 일부 구현예에서, 상기 핵산은 자연적으로 존재하지 않는 것이고, 예를 들어 자연에서 발견되지 않는 핵산, 예를 들어 다수의 상이한 세포 유형으로부터 다양한 도메인을 인코딩하는 핵산의 키메라 조합을 포함하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 조작된 세포의 제조는 하나 이상의 배양 및/또는 제조 단계를 포함한다. CAR과 같은 트랜스제닉 수용체를 인코딩하는 핵산의 도입을 위한 세포는 샘플, 예를 들어 생물학적 샘플, 예를 들어 대상체로부터 얻거나 유래된 것으로부터 단리될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포가 단리된 대상체는 세포 요법을 필요로 하는 질병 또는 질병 상태를 지니거나 또는 세포 요법이 가해질 대상체이다. 일부 구현예에서, 대상체는 특정 치료적 개입이 필요한 인간이며, 예를 들어 세포가 단리, 가공 및/또는 조작되는 입양 세포 요법과 같은 치료적 개입이다.
따라서, 일부 구현예에서, 세포는 1차 세포, 예를 들어 1차 인간 세포이다. 샘플은 조직, 유액 및 대상체로부터 직접 취한 다른 샘플뿐만 아니라 하나 이상의 가공 단계로부터 결과한 샘플, 예를 들어 분리, 원심 분리, 유전자 조작 (예를 들어, 바이러스 벡터를 이용한 형질 도입), 수세 및/또는 배양으로부터 결과한 샘플을 포함한다. 생물학적 샘플은 생물학적 공급원으로부터 직접 얻은 샘플 또는 가공된 샘플일 수 있다. 생물학적 샘플은 체액, 예를 들어 혈액, 혈장, 혈청, 뇌척수액, 활액, 소변 및 땀, 조직 및 기관 샘플, 예를 들어 이들로부터 유래한 가공된 샘플을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다.
일부 측면에서, 그로부터 세포가 유래되거나 단리된 샘플은 혈액 또는 혈액-유래 샘플이거나, 또는 성분채집술 또는 백혈구 성분채집술 산물로부터 유래된 것이다. 예시적인 샘플은 전혈, 말초 혈액 단핵 세포 (PBMCs), 백혈구, 골수, 흉선, 조직 생검, 종양, 백혈병, 림프종, 림프절, 장 관련 림프 조직, 점막 관련 림프 조직, 비장, 기타 림프 조직, 간, 폐, 위장, 소장, 대장, 신장, 췌장, 유방, 뼈, 전립선, 자궁 경부, 고환, 난소, 편도선 또는 기타 기관, 및/또는 이들로부터 유래되는 세포를 포함한다. 샘플은 세포 요법과 관련하여, 예를 들어, 입양 세포 요법, 자가 및 동종 원으로부터의 샘플을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포는 세포주, 예를 들어, T 세포주에서 유래한다. 일부 구현예에서, 세포는 이종발생 (xenogeneic) 공급원, 예를 들어 마우스, 래트, 비-인간 영장류 및 돼지로부터 수득된다.
일부 구현예에서, 세포의 단리는 하나 이상의 제조 및/또는 비-친화성 기반 세포 분리 단계를 포함한다. 일부 예시에서, 세포는, 예를 들어 원치 않는 서분을 제거, 원하는 성분을 농축, 특정 시약에 민감한 세포를 용리하거나 제거하기 위하여, 하나 이상의 시약의 존재 하에서 수세, 원심 분리 및/또는 배양된다. 일부 예시에서, 세포는 하나 이상의 특성에 기초하여, 예를 들어 밀도, 부착 성질, 크기, 민감성 및/또는 특정 성분에 대한 내성에 기초하여 분리된다.
일부 예시에서, 대상체의 순환 혈액으로부터의 세포는, 예를 들어 성분채집술 또는 백혈구 성분채집술에 의하여 수득된다. 샘플은, 일부 측면에서, 림프구를 함유하는데, 예를 들어 T 세포, 단핵구, 과립구, B 세포, 다른 유핵 백혈구, 적혈구 및/또는 혈소판이고, 일부 측면에서, 적혈구 및 혈소판 이외의 세포를 함유한다.
일부 구현예에서, 대상체로부터 수집된 혈액 세포는, 예를 들어, 후속하는 가공 단계를 위해 혈장 분획을 제거하고 적절한 완충액 또는 배지에 세포를 위치시키기 위하여 수세된다. 일부 구현예에서, 세포는 인산 완충 식염수 (PBS)로 수세된다. 일부 구현예에서, 수세 용액은 칼슘 및/또는 마그네슘 및/또는 다수의 또는 모든 2가 양이온을 결여한다. 일부 측면에서, 수세 단계는 제조사의 지침에 따라 반자동 "플로우 스루 (flow-through)" 원심 분리기 (예를 들어, Cobe 2991 세포 프로세서, Baxter)에 의하여 수행한다. 일부 측면에서, 수세 단계는 제조사의 지침에 따라 접선 유동 여과 (TFF)에 의해 수행된다. 일부 구현예에서, 세포는 수세 후 다양한 생체 적합성 완충액, 예를 들어, Ca++/Mg++ 무함유 PBS에 재현탁된다. 특정 구현예에서, 혈액 세포 샘플의 성분은 제거되고 세포는 배양 배지에 직접 재현탁된다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 밀도-기반 세포 분리 방법을 포함하는데, 예를 들어 적혈구를 용리시켜 Percoll 또는 Ficoll 구배를 통해 원심 분리 함으로써 말초 혈액으로부터 백혈구를 제조하는 것이다.
일부 구현예에서, 상기 분리 방법은 세포에서 하나 이상의 특정 분자들의 발현 또는 존재에 기초하여 여러 가지 세포 유형을 분리하는 것을 포함하는데, 예를 들어 특정 분자는 표면 마커, 예를 들어 표면 단백질, 세포 내 마커 또는 핵산이다. 일부 구현예에서, 이러한 마커에 기초한 임의의 공지된 분리 방법이 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 분리는 친화도- 또는 면역친화도- 기반 분리이다. 예를 들어, 일부 측면에서, 상기 단리는 세포의 하나 이상의 마커, 통상 세포 표면 마커에 대한 발현 또는 발현 수준에 기초한 세포 및 세포 집단의 분리를 포함하는데, 이는 예를 들어 그러한 마커들에 특이적으로 결합하는 항체 또는 결합 파트너와의 배양, 일반적으로 그 후의 수세 단계와 상기 항체 또는 결합 파트너와 결합하지 않은 그러한 세포들로부터 상기 항체 또는 결합 파트너에 결합된 세포의 분리에 의한다.
이러한 분리 단계는 양성 선택 및/또는 음성 선택에 기초할 수 있는데, 양성 선택에서는 시약에 결합된 세포는 추가 사용을 위하여 보유되며, 음성 선택에서는 상기 항체 또는 결합 파트너에 결합하지 않은 세포들이 보유된다. 일부 예시에 있어서, 두 분획은 추후 사용을 위해 보유된다. 일부 측면에서, 음성 선택은 이종 집단에서 세포 유형을 특이적으로 식별하는 어떠한 항체도 이용 가능하지 않은 경우에 특히 유용할 수 있고, 그로써, 원하는 집단 이외의 세포에 의해 발현된 마커에 기초하여 분리가 가장 잘 수행된다.
분리는, 특정 마커를 발현하는 특정 세포 집단 또는 세포들을 100% 농축 또는 제거하는 결과를 나타낼 필요는 없다. 예를 들어, 마커를 발현하는 것들과 같은 특정 유형의 세포에 대한 양성 선택 또는 농축은 그러한 세포의 수 또는 백분율을 증가시키는 것을 말하지만, 그 마커를 발현하지 않는 세포가 전혀 없는 결과를 나타낼 필요는 없다. 마찬가지로, 마커를 발현하는 것과 같은 특정 유형의 세포에 대한 음성 선택, 제거 또는 희석 (depletion)은 그러한 세포의 수 또는 백분율을 감소시키는 것을 말하지만, 그러한 모든 세포를 완전히 제거하는 결과를 나타낼 필요는 없다.
일부 예시에서, 하나의 단계로부터 양성 또는 음성적으로 선택된 분획이 다른 분리 단계로 들어가는 다수 회전의 분리 단계가 수행되는데, 다른 분리 단계는 예를 들어 후속하는 양성 또는 음성 선택이다. 일부 예시에서, 단일 분리 단계는 예를 들어 음성 선택을 위하여 표적화된 마커에 각각 특이적인 복수 개의 항체 또는 결합 파트너들과 세포를 배양함으로써 다수의 마커를 발현하는 세포를 동시에 희석시킬 수 있다. 마찬가지로, 다양한 세포 유형에서 발현되는 복수 개의 항체 또는 결합 파트너와 세포를 배양함으로써 다수의 세포 유형이 동시에 양성적으로 선택될 수 있다.
예를 들어, 일부 측면에서, 특정 서브집단의 T 세포, 예를 들어 하나 이상의 표면 마커, 예를 들어, CD28+, CD62L+, CCR7+, CD27+, CD127+, CD4+, CD8+, CD45RA+, 및/또는 CD45RO+ T 세포에 대하여 양성 또는 이를 높은 수준으로 발현하는 세포가 양성 또는 음성 선택 기법에 의해 분리된다.
예를 들어, CD3+, CD28+ T 세포는, 항-CD3/항-CD28 컨쥬게이티드 자성 비드 (예를 들어, DYNABEADS® M-450 CD3/CD28 T Cell Expander)를 이용하여 양성 선택될 수 있다.
일부 구현예에서, 단리는 양성 선택에 의한 특정 세포 집단에 대한 농축이나, 음성 선택에 의한 특정 세포 집단에 대한 희석에 의하여 수행된다. 일부 구현예에서, 양성 또는 음성 선택은, 각각 양성적으로 또는 음성적으로 선택되는 세포 상에서 발현되거나 (마커+) 또는 상대적으로 더 높은 수준으로 발현되는 (마커high) 하나 이상의 표면 마커에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항체 또는 기타 결합 제제와 세포를 배양함으로써 수행된다.
일부 구현예에서, T 세포는 비-T 세포, 예를 들어 B 세포, 단핵구, 또는 기타 백혈구, 예를 들어 CD14 상에서 발현되는 마커들의 음성 선택에 의하여 PBMC 샘플로부터 분리된다. 일부 측면에서, CD4+ 또는 CD8+ 선택 단계는 CD4+ 헬퍼 및 CD8+ 세포독성 T 세포를 분리하기 위하여 사용된다. 그러한 CD4+ 및 CD8+ 집단은 하나 이상의 나이브, 기억 및/또는 효과자 T 세포 서브집단 상에서 발현되거나 상대적으로 더 높은 정도로 발현되는 마커들에 대하여 양성 또는 음성 선택함으로써 서브집단으로 더 분류될 수 있다.
일부 구현예에서, CD8+ 세포는, 예를 들어 각각의 서브집단과 관련된 표면 항원에 기초한 양성 또는 음성 선택에 의하여, 나이브, 중추 기억, 효과자 기억, 및/또는 중추 기억 줄기 세포에 대하여 더 농축되거나 희석될 수 있다. 일부 구현예에서, 중추 기억 T 세포 (TCM)에 대한 농축은 효능을 증가시키기 위하여 수행되는데, 예를 들어 투여 다음에 장기간 생존, 증식 및/또는 생착을 향상시키기 위하여 수행되고, 이는 일부 측면에서 특히 이러한 서브집단에서 양호한 (robust) 것이다. [Terakura et al. (2012) Blood.1:72-82]; [Wang et al. (2012) J Immunother. 35(9):689-701] 참조. 일부 구현예에서, TCM-농축 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포의 결합은 효능을 더 강화시킨다.
구현예들에 있어서, 기억 T 세포는 CD8+ 말초 혈액 림프구의 CD62L+ 및 CD62L- 서브세트 양자 모두에 존재한다. PBMC는, 예를 들어 항-CD8 및 항-CD62L 항체를 사용하여, CD62L-CD8+ 및/또는 CD62L+CD8+ 분획에 대하여 농축 또는 희석될 수 있다.
일부 구현예에서, 중추 기억 T 세포 (TCM)에 대한 농축은 CD45RO, CD62L, CCR7, CD28, CD3, 및/또는 CD127의 양성 또는 높은 표면 발현에 기초하고; 일부 측면에서, 이는 CD45RA 및/또는 그랜자임 B를 발현하거나 크게 발현하는 세포에 대한 음성 선택에 기초한다. 일부 측면에서, TCM 세포에 대하여 농축된 CD8+ 집단의 단리는 CD4, CD14, CD45RA를 발현하는 세포를 희석, 및 CD62L을 발현하는 세포에 대한 양성 선택 또는 농축에 의함으로써 수행된다. 한 측면에서, 중추 기억 T 세포 (TCM)에 대한 농축은 CD4 발현에 기초하여 선택되는 음성 세포 분획을 가지고 시작하여 수행되는데, 이는 CD14 및 CD45RA의 발현에 기초한 음성 선택 및 CD62L에 기초한 양성 선택이 이루어진 것이다. 일부 측면에서 이러한 선택은 동시에 수행되고 다른 측면에서는 어느 순서로든 순차적으로 수행된다. 일부 측면에서, CD8+ 세포 집단 또는 서브집단을 제조하는데 사용된 동일한 CD4 발현-기반 선택 단계는 또한 CD4+ 세포 집단 또는 서브-집단을 생성시키는데 사용되는데, 그로써 상기 CD4-기반 분리로부터의 양성 및 음성 분획들 양자 모두는 보유되고 상기 방법의 후속 단계에서 사용되며, 필요에 따라 하나 이상의 추가적인 양성 또는 음성 선택 단계가 뒤따른다.
특정 예시에서, PBMC 샘플 또는 다른 백혈구 샘플에는 CD4+ 세포의 선택이 이루어지는데, 여기서는 음성 및 양성 분획 모두가 보유된다. 그 후, 음성 분획은 CD14 및 CD45RA 또는 CD19의 발현에 기초한 음성 선택, 및 CD62L 또는 CCR7과 같은 중추 기억 T 세포의 마커 특징에 기초한 양성 선택을 받는데, 여기서 상기 양성 및 음성 선택은 어떤 순서로도 수행된다.
CD4+ T 헬퍼 세포는 세포 표면 항원을 갖는 세포 집단을 동정함으로써 나이브, 중추 기억 및 효과자 세포로 분류된다. CD4+ 림프구는 표준 방법으로 얻을 수 있다. 일부 구현예에서, 나이브 CD4+ T 림프구는 CD45RO-, CD45RA+, CD62L+, CD4+ T 세포이다. 일부 구현예에서, 중추 기억 CD4+ 세포는 CD62L+ 및 CD45RO+이다. 일부 구현예에서, 효과자 CD4+ 세포는 CD62L- 및 CD45RO-이다.
한 예시에서, 음성 선택에 의하여 CD4+ 세포를 농축하기 위해, 모노클로날 항체 칵테일은 통상 CD14, CD20, CD11b, CD16, HLA-DR 및 CD8에 대한 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 결합 파트너는 양성 및/또는 음성 선택에 대하여 세포의 분리가 가능케 하기 위해 자기 비드 또는 상자성 비드와 같은 고체 지지체 또는 기질에 결합된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 세포 및 세포 집단은 면역자기 (또는 친화자기) 분리 기법을 사용하여 분리 또는 단리된다 ([Methods in Molecular Medicine, vol. 58]: [Metastasis Research Protocols, Vol. 2]: [Cell Behavior In Vitro and In Vivo, p 17-25 Edited by: S. A. Brooks and U. Schumacher ⓒ Humana Press Inc., Totowa, NJ]에서 리뷰됨).
일부 측면에서, 분리될 세포의 샘플 또는 조성물은 작은 자화가능하거나 자기적으로 반응하는 물질, 예를 들어 자기적으로 반응하는 입자 또는 미세입자, 예를 들어 상자성 비드 (예를 들어, Dynalbeads 또는 MACS 비드)와 함께 배양된다. 상기 자기적으로 반응하는 물질, 예를 들어 입자는, 일반적으로, 분리하고자 하는 세포, 세포들 또는 세포 집단, 예를 들어 음성 또는 양성적으로 선택하고자 하는 것들 상에 존재하는 분자, 예를 들어 표면 마커에 특이적으로 결합하는 결합 파트너, 예를 들어 항체에 직접 또는 간접적으로 부착된다.
일부 구현예에서, 자성 입자 또는 비드는 특이적 결합 구성원, 예를 들어 항체 또는 다른 결합 파트너에 결합된 자기적으로 반응하는 물질을 포함한다. 자기 분리법에 사용되는 다수의 잘 알려진 자기적으로 반응하는 물질들이 있다. 적합한 자기 입자는, 본 발명에 참조로서 포함되는 Molday, 미국 특허 4,452,773, 및 유럽 특허 명세서 EP 452342B에 개시된 것들을 포함한다. 콜로이드 크기 입자, 예를 들어 Owen 미국 특허 4,795,698; Liberti 미국 특허 5,200,084에 개시된 것들은 다른 예이다.
배양은 일반적으로, 그에 의하여 상기 자성 입자 또는 비드에 부착되는 항체 또는 결합 파트너, 또는 분자, 예를 들어 2차 항체 또는 기타 그러한 항체 또는 결합 파트너에 특이적으로 결합하는 시약들이, 샘플 내 세포 상에 세포 표면 분자가 존재한다면 그 세포 표면 분자에 특이적으로 결합하는 조건 하에서 수행된다.
일부 측면에서, 샘플은 자기장 내에 위치되고, 자기적으로 반응하는 또는 자화가능한 입자들이 부착된 세포들은 자석에 끌려서 비표지된 세포들로부터 분리될 것이다. 양성 선택의 경우, 자석에 끌리는 세포가 보유되고; 음성 선택의 경우 끌리지 않은 세포 (표지가 없는 세포)가 보유된다. 일부 측면에서, 양성 및 음성 선택의 조합은 동일한 선택 단계 중에 수행되는데, 여기서 양성 및 음성 분획은 보유되고 더 가공되거나 또는 추가 분리 단계를 거친다.
특정 구현예에서, 자기적으로 반응하는 입자는 1차 항체 또는 다른 결합 파트너, 2차 항체, 렉틴, 효소 또는 스트렙타비딘으로 코팅된다. 특정 구현예에서, 자성 입자는 하나 이상의 마커에 특이적인 1차 항체의 코팅을 통해 세포에 부착된다. 특정 구현예에서, 비드보다는 세포가 1차 항체 또는 결합 파트너로 표지되고, 그 후 세포-유형 특이적인 2차 항체 또는 다른 결합 파트너 (예를 들어, 스트렙타비딘)-코팅된 자성 입자가 첨가된다. 특정 구현예에서, 스트렙타비딘-코팅된 자성 입자는 바이오티닐화 1차 또는 2차 항체와 함께 사용된다.
일부 구현예에서, 자기적으로 반응하는 입자는 후속하여 반응, 배양, 및/또는 조작될 세포에 부착된 채로 남게 되며; 일부 측면에서, 상기 입자는 환자에게 투여하기 위해 세포에 부착된 채로 남는다. 일부 구현예에서, 자화 가능한 또는 자기적으로 반응하는 입자는 세포로부터 제거된다. 세포로부터 자화 가능한 입자를 제거하는 방법은 공지되어 있으며, 예를 들어, 경쟁적 비-표지 항체 및 절단 가능한 링커와 결합된 자화 가능한 입자 또는 항체를 사용하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 자화 가능한 입자는 생분해성이다.
일부 구현예에서, 친화도-기반 선택은 자기-활성화 세포 분류 (MACS)(Miltenyi Biotec, Auburn, CA)를 통해 이루어진다. 자기 활성화 세포 분류 (MACS) 시스템은 그에 자화된 입자가 부착된 세포를 고-순도로 선택할 수 있다. 특정 구현예에서, MACS는 외부 자기장의 적용 후 비-표적종 및 표적종을 순차적으로 용리시키는 모드로 작동한다. 즉, 자화된 입자에 부착된 세포는 비부착종이 용리되는 동안 제 위치에 유지된다. 그 후, 이러한 첫 번째 용리 단계가 완료된 후, 자기장에 포획되어 용리 방지된 종은 어떤 방식으로든 자유롭게 되고 그로써 용리 및 회수될 수 있다. 특정 구현예에서, 비-표적 세포는 표지되고 이종 세포 집단으로부터 희석된다.
특정 구현예에서, 단리 또는 분리는, 상기 방법의 하나 이상의 단리, 세포 제조, 분리, 가공, 반응, 배양 및/또는 제형화 단계를 수행하는 시스템, 장치 또는 기구를 이용하여 수행된다. 일부 측면에서, 상기 시스템은 폐쇄된 또는 무균 환경에서 이들 단계들 각각을 수행하는데 사용되는데, 예를 들어, 에러, 사용자 취급 및/또는 오염을 최소화하기 위해서이다. 일 예시에서, 상기 시스템은 국제 특허 출원 공개 번호 WO2009/072003 또는 미국 특허 출원 공개 번호 US 20110003380 A1에 기재된 시스템이다.
일부 구현예에서, 상기 시스템 또는 장치는, 통합된 또는 자기-함유 시스템에서, 및/또는 자동화된 또는 프로그램 가능한 방식으로, 하나 이상의, 예를 들어, 모든 단리, 가공, 조작 및 제형화 단계를 수행한다. 일부 측면에서, 상기 시스템 또는 장치는, 상기 시스템 또는 장치와 통신하는 컴퓨터 및/또는 컴퓨터 프로그램을 포함하는데, 이는 사용자로 하여금 상기가공, 단리, 조작 및 제형화 단계를 프로그램, 제어, 그의 결과에 접근 및/또는 그의 다양항 양상들을 조정할 수 있게 한다.
일부 측면에서, 분리 및/또는 다른 단계는 ClinMACS 시스템 (Miltenyi Biotec)을 사용하여, 예를 들어 밀폐된 및 멸균 시스템에서 임상-규모 수준의 세포의 자동 분리를 위해 수행된다. 구성 요소는 통합 마이크로컴퓨터, 자기 분리 유닛, 연동 펌프 및 다양한 핀치 밸브가 포함할 수 있다. 일부 측면에서 상기 통합 컴퓨터는 기구의 모든 구성 요소를 제어하고 표준화된 순서로 반복적인 절차를 수행하도록 시스템에 지시한다. 일부 구현예에서, 자기 분리 유닛은 이동 가능한 영구 자석 및 선택 컬럼용 홀더를 포함한다. 연동 펌프는 튜브 세트 전체의 유속을 제어하며 핀치 밸브와 함께 시스템을 통한 완충액의 흐름 제어와 세포의 지속적인 현탁을 보장한다.
일부 측면에서 CliniMACS 시스템은 멸균, 비-발열원성 용액으로 공급되는 항체-결합 자성 입자를 사용한다. 일부 구현예에서, 자성 입자로 세포를 표지한 후, 세포는 과량의 입자를 제거하기 위하여 수세된다. 그 후, 세포 준비 백은 튜브 세트에 연결되는데, 이는 차례로 버퍼 함유 백 및 세포 수집 백과 연결된다. 튜브 세트는 미리 조립된 멸균 튜브들로 이루어지는데, 예를 들어 프리-컬럼 및 분리 컬럼이고, 일회용으로만 사용된다. 분리 프로그램을 시작하면 시스템이 자동으로 세포 샘플을 분리 컬럼에 적용시킨다. 표지된 세포는 컬럼 내에 보유되는 반면, 표지되지 않은 세포는 일련의 수세 단계에 의해 제거된다. 일부 구현예에서, 본 발명에 기재된 방법과 함께 사용하기 위한 세포 집단은 표지되지 않고 컬럼에 보유되지 않는다. 일부 구현예에서, 본 발명에서 기재된 방법과 함께 사용하기 위한 세포 집단은 표지되고 컬럼에 보유된다. 일부 구현예에서, 본 발명에 기재된 방법과 함께 사용하기 위한 세포 집단은 자기장의 제거 후 컬럼으로부터 용리되어 세포 수집 백 내에 수집된다.
특정 구현예에서, 분리 및/또는 다른 단계는 CliniMACS Prodigy 시스템 (Miltenyi Biotec)을 사용하여 수행된다. CliniMACS Prodigy 시스템은 원심 분리에 의한 세포의 자동화 세척 및 분획화를 가능케 하는 세포 처리체를 갖추고 있다. CliniMACS Prodigy 시스템은 또한 공급원 세포 생성물의 거시적 층을 포착하여 최적의 세포 분획화 종말점을 결정하는 온보드 카메라 및 이미지 인식 소프트웨어를 포함할 수도 있다. 예를 들어, 말초 혈액은 적혈구, 백혈구 및 혈장 층으로 자동 분리된다. CliniMACS Prodigy 시스템은 또한 세포 분화 및 증식, 항원 로딩 및 장기적 세포 배양과 같은 세포 배양 프로토콜을 수행하는 통합 세포 배양 챔버를 포함할 수 있다. 입력 포트는 멸균 제거 및 배지 보충을 가능케 하며 세포는 통합 현미경을 사용하여 모니터링될 수 있다. 예를 들어, [Klebanoff et al. (2012) J Immunother. 35(9): 651-660], [Terakuraet al. (2012) Blood.1:72-82], 및 [Wang et al. (2012) J Immunother.35(9):689-701] 참조.
일부 구현예에서, 본 발명에서 기재되는 세포 집단은 유동 세포 계측법을 통해 수집 및 농축 (또는 희석)되고, 여기서 다중 세포 표면 마커에 대해 염색된 세포는 유체 스트림으로 운반된다. 일부 구현예에서, 본 발명에서 기재되는 세포 집단은 분취 스케일 (FACS)-분류를 통해 수집 및 농축 (또는 희석)된다. 특정 구현예에서, 본 발명에서 기술되는 세포 집단은 FACS-기반 검출 시스템과 조합된 마이크로 전기기계 시스템 (MEMS) 칩의 사용에 의해 수집 및 농축 (또는 희석)된다 (예를 들어, 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2010/033140, [Cho et al. (2010) Lab Chip 10, 1567-1573]; 및 [Godin et al. (2008) J Biophoton. 1(5):355-376] 참조). 두 경우 모두에서, 세포는 다중의 마커로 표지될 수 있고, 이는 잘 구분된 T 세포 서브 세트를 고순도로 단리할 수 있게 한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 결합 파트너는 양성 및/또는 음성 선택을 위한 분리를 용이하게 하기 위해, 하나 이상의 검출 가능한 마커로 표지된다. 예를 들어, 분리는 형광으로 표지된 항체와의 결합에 기초할 수 있다. 일부 예시에서, 하나 이상의 세포 표면 마커에 특이적인 항체 또는 다른 결합 파트너의 결합에 기초하는 세포의 분리는 예를 들어 유-세포 탐지 시스템과 조합하여, 분취 스케일 (FACS)을 포함하는 형광-활성화 세포 분류기 (FACS) 및/또는 MEMS 칩에 의하여 수행된다. 이러한 방법은 다중 마커에 기초하여 동시에 양성 및 음성 선택을 가능케 한다.
일부 구현예에서, 제조 방법은 단리, 배양 및/또는 조작의 전이든 또는 후이든, 세포를 동결하는, 예를 들어 냉동 보존하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 동결 및 그에 후속하는 해동 단계는 세포 집단 내에서 과립구 및 어느 정도는 단핵구를 제거한다. 일부 구현예에서, 세포는 예를 들어, 혈장 및 혈소판을 제거하기 위한 수세 단계 다음에 냉동 용액에 현탁된다. 일부 측면에서, 임의의 다양한 공지된 동결 용액 및 파라미터가 사용될 수 있다. 일 예시는 20% DMSO 및 8% 인간 혈청 알부민 (HSA)을 함유하는 PBS 또는 다른 적합한 세포 동결 배지를 사용하는 것을 포함한다. 그 후, 이것은 배지로 1:1 희석되어, DMSO와 HSA의 최종 농도가 각각 10%와 4%가 되도록 한다. 그 후, 세포는 일반적으로 분당 1도의 속도로 -80 ℃로 동결되고 액체 질소 저장 탱크의 증기 상에 저장된다.
일부 구현예에서, 세포는 유전자 조작 전에 또는 이와 관련하여 반응 및/또는 배양된다. 배양 단계는 배양, 배양화, 자극, 활성화 및/또는 증식을 포함할 수 있다. 배양 및/또는 조작은, 배양물 또는 배양 세포용의 배양 용기, 예를 들어 유닛, 챔버, 웰, 컬럼, 튜브, 튜브 세트, 밸브, 바이알, 배양 디쉬, 백 또는 기타 컨테이너에서 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, 조성물 또는 세포는 자극 조건 또는 자극 제제의 존재하에 배양된다. 이러한 조건은 세포 집단의 증폭, 증식, 활성화 및/또는 생존을 유도하고, 항원 노출을 모방하고, 및/또는 예를 들어 재조합 항원 수용체의 도입을 위하여 유전자 조작을 위해 세포를 준비하도록 설계되는 것들을 포함한다.
상기 조건은 하나 이상의 특정 배지, 온도, 산소 함량, 이산화탄소 함량, 시간, 제제, 예를 들어 영양제, 아미노산, 항균제, 이온 및/또는 자극 인자, 예를 들어 사이토카인, 케모카인, 항원, 결합 파트너, 융합 단백질, 재조합 용해성 수용체, 및 세포를 활성화 시키도록 고안된 임의의 다른 제제를 포함한다.
일부 구현예에서, 자극 조건 또는 제제는 TCR 복합체의 세포 내 신호전달 도메인을 활성화시킬 수 있는 하나 이상의 약제, 예를 들어 리간드를 포함한다. 일부 측면에서, 상기 약제는 T 세포에서 TCR/CD3 세포 내 신호전달 캐스케이드를 시동하거나 개시시킨다. 이러한 제제는 TCR에 특이적인 것과 같은 항체, 예를 들어 항-CD3를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 자극 조건은 공자극 수용체를 자극할 수 있는 하나 이상의 약제, 예를 들어 리간드를 포함하며, 예를 들어 항-CD28이다. 일부 구현예에서, 이러한 제제 및/또는 리간드는 고체 지지체에 결합될 수 있는데, 예를 들어 비드이고 및/또는 하나 이상의 사이토카인에 결합 될 수 있다. 필요에 따라, 상기 증식 방법은 항-CD3 및/또는 항CD28 항체를 배양 배지에 (예를 들어, 적어도 약 0.5 ng/ml의 농도로) 첨가하는 단계를 더 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 자극 제제는 IL-2, IL-15 및/또는 IL-7을 포함한다. 일부 측면에서, IL-2 농도는 적어도 약 10 유닛/mL이다.
일부 측면에서, 배양은 Riddell et al.의 미국 특허 6,040,177, [Klebanoff et al.(2012) J Immunother. 35(9): 651-660], [Terakuraet al. (2012) Blood.1:72-82], 및/또는 [Wang et al. (2012) J Immunother. 35(9):689-701]에 기재된 것들과 같은 기법에 따라 수행된다.
일부 구현예에서, T-세포는, 배양-개시 조성물에 피더 세포, 예를 들어 비-분할 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)를 첨가하고 (예를 들어 그로써 결과물인 세포 집단은 증식될 최초 집단에서의 각 T 림프구에 대하여 약 5, 10, 20, 또는 40 또는 그 이상의 PBMC 피더 세포를 함유한다); 배양물을 배양함으로써 (예를 들어, T t세포의 수가 증식하기에 충분한 시간 동안) 증식된다. 일부 측면에서, 비-분할 피더 세포는 감마-조사된 PBMC 피더 세포를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, PBMC는 세포 분열을 방지하기 위해 약 3000 내지 3600 rad 범위의 감마선으로 조사된다. 일부 측면에서, 피더 세포는 T 세포 집단을 첨가하기 전에 배양 배지에 첨가된다.
일부 구현예에서, 자극 조건은 인간 T 림프구의 성장에 적합한 온도, 예를 들어 적어도 약 25℃, 일반적으로 적어도 약 30℃, 일반적으로 37℃ 또는 약 37℃를 포함한다. 필요에 따라, 배양은 피더 세포로서 비-분할 EBV-형질 전환 림프아구성 세포 (LCL)를 첨가하는 것을 더 포함할 수 있다. LCL은 약 6000 내지 10,000 rad 범위의 감마선으로 조사될 수 있다. 일부 측면에서 LCL 피더 세포는 LCL 피더 세포 대 초기 T 림프구의 비가 적어도 약 10:1 인 임의의 적합한 양으로 제공된다.
구현예들에 있어서, 항원-특이적 T 세포, 예를 들어 항원-특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포는 항원을 이용하여 나이브 또는 항원 특이적 T 림프구를 자극함으로써 수득된다. 예를 들어, 사이토메갈로바이러스 항원에 대하여 항원-특이적인 T 세포주 또는 클론은 감염된 대상체로부터 T 세포를 단리하고 동일한 항원으로 시험관 내에서 세포를 자극함으로써 생성될 수 있다.
VI. 조성물 및 제형
일부 구현예에서, 세포 요법은 조성물 또는 제형, 예를 들어 약학적 조성물 또는 제형으로서 제공된다. 이러한 조성물은 예를 들어 질병, 질병 상태 및 장애의 예방 또는 치료에 있어서, 상기 제공되는 방법에 따라 사용될 수 있고, 또는 검출, 진단 및 예후 방법에서 사용될 수 있다.
용어 "약학적 제형"은, 내부에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성이 이러한 형태 내에서 유효하도록 하고, 제형이 투여되는 대상체에 허용 가능하지 않을 정도로 유독한 추가의 성분을 함유하지 않은 제제를 지칭한다.
"약학적으로 허용 가능한 담체"는, 대상체에 유독하지 않은, 활성 성분 이외의 약학적 제형 중 성분을 지칭한다. 약학적으로 허용 가능한 담체는 완충액, 부형제, 안정화제 또는 보존제를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, 조작된 T 세포 (예를 들어, CAR T 세포)와 같은 T 세포 요법은 약학적으로 허용 가능한 담체와 함께 제형화된다. 일부 구현예에서, 담체의 선택은 부분적으로는, 특정 세포 및/또는 투여 방법에 의해 결정된다. 따라서, 다양한 적합한 제형이 존재한다. 예를 들어, 약학적 조성물은 보존제를 함유할 수 있다. 적합한 보존제는, 예를 들어 메틸파라벤, 프로필파라벤, 벤조산나트륨 및 염화벤잘코늄을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 2종 이상의 보존제의 혼합물이 사용된다. 보존제 또는 그의 혼합물은 통상적으로 총 조성물 중 약 0.0001 중량% 내지 약 2 중량%의 양으로 존재한다. 담체는, 예를 들어 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)]에 기재되어 있다. 약학적으로 허용 가능한 담체는 일반적으로, 사용되는 투여량 및 농도에서 수용체에 유독하지 않은 것이며, 인산염, 시트르산염 및 다른 유기산과 같은 완충액; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함한 항산화제; 보존제 (예를 들어, 염화옥타데실디메틸벤질 암모늄; 염화헥사메토늄, 염화벤잘코늄; 염화벤제토늄; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 메틸 또는 프로필 파라벤과 같은 알킬 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 사이클로헥사놀; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량 (약 10개 미만의 잔기)의 폴리펩타이드; 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린과 같은 단백질; 폴리비닐피롤리돈과 같은 소수성 중합체; 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신과 같은 아미노산; 글루코스, 만노스 또는 덱스트린을 포함한 단당류, 이당류 및 다른 탄수화물; EDTA와 같은 킬레이트제; 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨과 같은 당류; 나트륨과 같은 염-형성 반대-이온; 금속 복합체(예를 들어, Zn-단백질 복합체); 및/또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 같은 비이온성 계면활성제를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
일부 측면에서, 조성물 중에 완충제가 포함된다. 적합한 완충제는, 예를 들어 시트르산, 시트르산나트륨, 인산, 인산칼륨 및 다양한 다른 산 및 염을 포함한다. 일부 측면에서, 2종 이상의 완충제의 혼합물이 사용된다. 완충제 또는 그의 혼합물은 통상적으로 총 조성물 중 약 0.001 중량% 내지 약 4 중량%의 양으로 존재한다. 투여 가능한 약학적 조성물의 제조 방법이 공지되어 있다. 예시적인 방법이, 예를 들어, 문헌 [Remington: Science and Practice of Pharmacy, Lippincott Williams & Wilkins; 21st ed.(May 1, 2005)]에 더욱 상세히 기재되어 있다.
제형은 수용액을 포함할 수 있다. 제형 또는 조성물은 또한, 세포에 의해 예방되거나 치료되는 특정 지표, 질병 또는 질병 상태에 유용한 1종 이상의 활성 성분을 함유할 수 있는데, 예를 들어 그 활성은 세포에 상보성이고 및/또는 각각의 활성은 서로 유해한 영향을 주지 않는 것인 하나 이상의 활성 성분이다. 이러한 활성 성분은 의도된 목적에 유효한 양으로 조합물 중에 적절히 존재한다. 따라서, 일부 구현예에서, 약학적 조성물은 화학치료제, 예를 들어 아스파라기나제, 부술판, 카르보플라틴, 시스플라틴, 다우노루비신, 독소루비신, 플루오로우라실, 겜시타빈, 하이드록시우레아, 메토트렉세이트, 파클리탁셀, 리툭시맙, 빈블라스틴, 빈크리스틴 등과 같은 다른 약학적 활성 제제를 추가로 포함한다.
약학적 조성물은 일부 구현예에서, 질병 또는 질병 상태의 치료 또는 예방에 유효한 양, 예를 들어 치료적 유효량 또는 예방법적 유효량의 세포를 함유한다. 일부 구현예에서, 치료 대상체의 주기적 평가에 의해, 치료 또는 예방법적 효능을 모니터링한다. 수일 또는 그 이상에 걸친 반복 투여에 대하여, 질병 상태에 따라, 치료는 원하는 질병 징후에 대한 억제가 나타날 때까지 반복된다. 그러나, 다른 투여 요법이 유용할 수 있고 결정될 수 있다. 요망되는 투여량은 조성물의 단일 볼루스 투여, 조성물의 다회 볼루스 투여 또는 조성물의 연속 주입 투여에 의해 전달될 수 있다.
세포는 표준 투여 기법, 제형 및/또는 장치를 사용하여 투여될 수 있다. 상기 조성물의 저장 및 투여를 위하여, 제형 및 시린지 및 바이알과 같은 장치가 제공된다. 세포에 관하여, 투여는 자가 또는 이종의 것일 수 있다. 예를 들어, 면역반응 세포 또는 전구세포는 하나의 대상체로부터 얻어질 수 있으며, 동일한 대상체 또는 상용 가능한 상이한 대상체에 투여될 수 있다. 말초혈 유래 면역반응 세포 또는 그의 전구세포 (예를 들어, 생체내, 생체외 또는 시험관내 유래)는 카테터 투여, 전신 주사, 국소 주사, 정맥내 주사 또는 비경구 투여를 포함하여, 국소 주사를 통해 투여될 수 있다. 치료 조성물 (예를 들어, 유전자 변형된 면역반응 세포를 함유하는 약학적 조성물)의 투여 시, 이는 일반적으로 단위 투여량의 주사 가능한 형태 (용액, 현탁액, 유제)로 제형화될 것이다.
제형은 경구, 정맥내, 복강내, 피하, 폐, 경피, 근육내, 비강내, 협측, 설하 또는 좌제 투여용의 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제제 또는 세포 집단은 비경구로 투여된다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "비경구"는 정맥내, 근육내, 피하, 직장, 질 및 복강내 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 제제 또는 세포 집단은 정맥내, 복강내 또는 피하 주사에 의해, 말초 전신 전달을 사용하여, 대상체에 투여된다.
일부 구현예에서, 조성물은, 일부 측면에서 선택된 pH로 완충될 수 있는 멸균 액체 제조물, 예를 들어 등장성 수용액, 현탁액, 유제, 분산액 또는 점성 조성물로서 제공된다. 액체 제조물은 일반적으로 겔, 다른 점성 조성물 및 고체 조성물보다 제조가 용이하다. 추가로, 액체 조성물은 특히 주사에 의해 투여하기에 다소 편리하다. 한편, 점성 조성물은 특정 조직과의 접촉 시간을 연장하기 위해 적절한 점성 범위 내에서 제형화될 수 있다. 액체 또는 점성 조성물은, 예를 들어 물, 염수, 인산염 완충 염수, 폴리올 (예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 액체 폴리에틸렌 글리콜) 및 이들의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있는 담체를 포함할 수 있다.
용매, 예를 들어 적절한 담체, 희석제 또는 부형제, 예를 들어 멸균 수, 생리 염수, 글루코스, 덱스트로스 등과의 혼합물에 세포를 혼입시킴으로써, 멸균 주사용 용액을 제조할 수 있다. 조성물은 또한 동결건조될 수 있다. 조성물은 투여 경로 및 요망되는 제조물에 따라, 보조 물질, 예를 들어 습윤제, 분산제 또는 유화제 (예를 들어, 메틸셀룰로스), pH 완충제, 겔화 또는 점도 강화 첨가제, 보존제, 착향료, 착색제 등등을 함유할 수 있다. 일부 측면에서, 적절한 제조물을 제조하기 위해, 표준 텍스트를 참고할 수 있다.
항균 보존제, 산화방지제, 킬레이트제 및 완충액을 포함하여, 조성물의 안정성 및 멸균성을 향상시키는 다양한 첨가제를 첨가할 수 있다. 다양한 항균제 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르브산 등등에 의해, 미생물의 작용을 확실히 방지할 수 있다. 주사 가능한 약학적 형태의 연장된 흡수는 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들면, 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴의 사용에 의해 유도할 수 있다.
생체 내 투여에 사용되는 제형은 일반적으로 멸균된 것이다. 멸균은, 예를 들어 멸균 여과막을 통한 여과에 의해 용이하게 달성될 수 있다.
질병의 예방 또는 치료를 위하여, 적절한 투여량은 치료될 질병의 유형, 제제 또는 제제들의 유형, 세포 또는 재조합 수용체의 유형, 질병의 중증도 및 경과, 제제 또는 세포가 예방 또는 치료 목적을 위하여 투여되는가 여부, 이전의 치료, 대상체의 임상 내력 및 제제 또는 세포에 대한 반응, 및 주치의의 재량에 따른다. 일부 구현예에서, 조성물은 대상체에게 한 번에 또는 일련의 치료를 통해 적절하게 투여된다.
VII. 제조 물품 및 키트
본 명세서에서 또한 제공된 유전자 조작된 세포, 및 조작된 세포의 확장, 증식 및/또는 활성을 조절하기 위한 하나 이상의 제제, 및/또는 추가의 치료제 및/또는 조성물, 선택적으로 하나 이상의 파라미터, 예를 들어 약물 동력학 파라미터 및/또는 환자 속성 및/또는 바이오마커의 발현을 평가 및/또는 측정하기 위한 시약, 및/또는 선택적으로 사용 지침, 예를 들어, 제공된 방법에 따라, 투여 및/또는 평가에 대한 지침을 포함하는 제조 물품 또는 키트가 제공된다. 제조 물품은 용기 및 용기 상에 또는 용기와 결합된 라벨 또는 포장 삽입물을 포함할 수 있다. 적합한 용기는 예를 들어 병, 바이알, 주사기, 시험관, IV 용액 백 등을 포함한다. 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 재료로 형성될 수있다. 일부 구현 예에서, 용기는 무균 접근 포트를 갖는다. 예시적인 용기는 정맥 내 용액 봉지, 주사 바늘로 뚫을 수 있는 마개가 있는 것을 포함하는 바이알을 포함한다.
본 명세서에서 제공된 제조 물품은 포장재를 함유한다. 제공된 물질을 포장하는데 사용하기 위한 포장 물질은 당업자에게 잘 알려져있다. 예를 들어, 미국 특허 제 5,323,907 호, 제 5,052,558 호 및 제 5,033,252 호 (이들 각각은 전체가 본 명세서에 통합됨)를 참조한다. 포장 재료의 예는 블리스터 팩, 병, 튜브, 흡입기, 펌프, 백, 바이알, 용기, 주사기, 일회용 실험실 용품, 예를 들어 피펫 팁 및/또는 플라스틱 판 또는 병을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 제조 물품 또는 키트는 재료의 분배를 용이하게 하거나, 또는 예를 들어 로봇 장비에서의 사용을 용이하게하기 위해 높은 처리량 또는 대규모 방식으로 사용을 용이하게 하기 위한 장치를 포함할 수있다. 전형적으로, 포장은 그 안에 함유된 조성물과 비 반응성이다.
제조 물품 또는 키트는 조성물이 본 명세서에 기재된 상태 (예를 들어, 다발성 골수종)와 같은 특정 상태를 치료하는 데 사용될 수 있음을 나타내는 포장 삽입물을 추가로 포함할 수 있다. 대안적으로 또는 부가적으로, 제조 물품 또는 키트는 약학적으로 허용 가능한 완충액을 포함하는 다른 또는 동일한 용기를 추가로 포함할 수 있다. 그것은 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘 및/또는 주사기와 같은 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 제조 물품 또는 키트는 하나 이상의 용기, 전형적으로는 복수의 용기, 포장 물질, 및 용기 또는 용기 및/또는 포장 상에 또는 이들에 결합 된 라벨 또는 포장 삽입물을 포함하며, 예를 들어 핵산 조립 및/또는 조립된 핵산 분자 또는 핵산 분자 세트의 세포 내로의 도입, 예를 들어 제공된 방법에서 사용 된 세포의 형질 전환 또는 형질 도입, 예를 들어 T 세포, T 세포주 및/또는 T 세포 조성물을 포함한다.
일부 구현예에서, 용기는 그 자체로 또는 본 명세서에 기재된 임의의 것과 같은 조작된 세포의 확장, 증식 및/또는 활성을 조절할 수 있는 하나 이상의 작용제(들)를 함유하는 다른 조성물과 조합된 조성물을 보유한다. 제조 물품 또는 키트는 여기에 기재된 임의의 것과 같은 조작된 세포의 확장, 증식 및/또는 활성을 조절할 수 있는 하나 이상의 제제 (들)을 포함하는 조성물을 포함하는 하나 이상의 용기를 포함할 수 있다; 상기 조성물은 임의로 추가의 치료제를 포함하며, 상기 제조 물품 또는 키트는 유효량으로 대상체를 치료하기 위한 상기 라벨 또는 포장 삽입물 상에 지침을 더 포함한다.
일부 구현예에서, 제조 물품 및/또는 키트는 림프구 고갈 치료제를 추가로 포함하며, 선택적으로 림프구 고갈 치료제를 투여하기 위한 지침서를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 지침은 투여용 조성물에 수반되는 라벨 또는 포장 삽입물로서 포함될 수 있다.
일부 구현예에서, 제조 물품 및/또는 키트는 생물학적 샘플, 예를 들어 투여의 후보자 또는 치료를 투여받은 적이 있는 대상체로부터 수득한 생물학적 샘플을 분석하기 위한 하나 이상의 시약, 및 선택적으로 시약 또는 분석의 사용을 위한, 예를 들어 하나 이상의 파라미터, 예를 들어 약물동력학적 파라미터 및/또는 환자 속성 및/또는 바이오마커의 발현의 평가를 위한 지침, 및 선택적으로 사용을 위한 지침, 예를 들어 투여 및/또는 평가를 위한 지침을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 생물학적 샘플은 혈액, 혈장 또는 혈청 샘플이거나 이로부터 수득된다.
일부 구현예에서, 시약은 세포 요법의 투여 전에 또는 세포 요법의 투여 후에 사용될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 제조 물품 및/또는 키트는 특정 약물동력학적 파라미터, 반응 결과 및/또는 독성과 관련된 특정 환자 속성 및/또는 염증 마커의 수준을 측정하기 위한 시약, 및 측정을 위한 지침을 추가로 함유한다. 일부 구현예에서, 시약은 면역 측정법, 앱타머-기반 검정, 조직학적 또는 세포학적 검정 또는 mRNA 발현 수준 검정과 같은, 파라미터를 측정하기 위한 시험관 내 검정을 수행하기 위한 성분을 포함한다. 일부 구현예에서, 시험관 내 분석은 효소 결합 면역 흡착 분석 (ELISA), 면역 블로팅, 면역 침강법, 방사 면역 분석법 (RIA), 면역 염색법, 유세포 분석법, 표면 플라스몬 공명 (SPR), 화학 발광 분석법, 측방 유동 면역분석, 억제 분석 및 결합능 분석 중에서 선택된다. 일부 측면에서, 시약은 바이오마커 (예: 분석물)에 특이적으로 결합하는 결합 시약이다. 일부 경우, 결합 시약은 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 앱타머 또는 핵산 프로브이다. 일부 구현 예에서, 제조 물품은 파라미터를 평가하기 위한 본 명세서에 기재된 임의의 시약을 함유한다.
일부 구현예에서, 제조 물품 및/또는 키트는 하나 이상의 파라미터, 예를 들어 약물동력학적 파라미터 및/또는 환자 속성 및/또는 바이오마커의 발현을 검출할 수 있는 하나 이상의 시약, 예를 들어, 투여 및/또는 평가를 위한 지침, 및 치료를 위한 후보자인 대상체로부터 수득한 생물학적 샘플을 분석하기 위한 시약을 사용하기 위한 지침을 포함하고, 여기서 하나 이상의 파라미터는 CAR+ 세포, 예를 들어, CD3+, CD4+ 및/또는 CD8+ CAR+ 세포의 최대 (피크) 혈장 농도 (Cmax), 피크 시간 (즉, 최대 혈장 농도 (Cmax)가 발생할 때; Tmax), 최소 혈장 농도(치료제, 예를 들어 CAR+ T 세포의 투여량 사이에서 최소 혈장 농도; Cmin), 제거 반감기(T1/2) 및 곡선 아래의 면적 (즉, 치료제 CAR+ T 세포의 시간 대 혈장 농도를 플롯팅하여 생성된 곡선 아래의 면적; AUC), 예를 들어, 직경 결과물의 합 (SPD), 가장 긴 종양 직경 (LD), 가장 긴 종양 직경의 합 (SLD)인 종양의 체적 측정치, 괴사, 종양 부피, 괴사 부피, 괴사-종양 비율 (NTR), 종양 부근 부종 (PTE), 및 부종-종양 비율(ETR), 적혈구 침강 속도 (ESR), 알부민, β2 마이크로글로불린 (β2-M), C-C 모티프 케모마인 리간드 13 (CCL13), C-반응성 단백질 (CRP), C-X-C 모티프 케모마인 10 (CXCL10), IL-2, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-15, IL-16, 인터페론 감마 (IFN-γ), 림포톡신-알파 (LT-α), 단핵구 화학주성 단백질-1 (MCP-1), 대식세포 염증성 단백질 1 알파 (MIP-1α), MIP-1β, 혈청 아밀로이드 A1 (SAA-1), 형질전환 성장 인자 베타 (TGF-β) 및 종양 죄사 인자 알파 (TNF-α) 중에서 선택된다. 일부 구현예에서, 분석물 및/또는 파라미터의 임계값과 비료하여 대상체에서 파라미러의 존재 또는 부존재, 레벨, 양 또는 농도를 분석하기 위한 지침 또한 포함된다.
VIII. 정의
달리 정의되지 않는 한, 본 발명에 사용되는 분야의 모든 용어, 표기 및 다른 기술적 및 과학적 용어 또는 전문용어는 청구 대상이 속하는 기술 분야의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는 것으로 의도된다. 일부 경우에서, 일반적으로 이해되는 의미의 용어는 본 명세서에서 명확성 및/또는 용이한 참조를 위해 정의되며, 본 명세서에 이러한 정의가 포함된 경우에는 반드시, 당업계에서 일반적으로 이해되는 것 이상의 실질적인 차이를 나타내는 것으로 해석되어서는 안된다.
본 발명에서 사용되는 바, "대상체"는 인간 또는 다른 동물과 같은 포유류이고, 통상 인간이다. 일부 구현예에서, 면역조절 폴리펩타이드, 조작된 세포 또는 조성물이 투여되는 대상체, 예를 들어, 환자는 포유류, 통상 인간과 같은 영장류이다. 일부 구현예에서, 영장류는 원숭이 또는 유인원이다. 대상체는 남성 또는 여성이 될 수 있으며 유아, 청소년, 청년, 성인 및 노인 대상체를 포함하는 임의의 적절한 연령일 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 설치류와 같은, 비-영장류 포유류이다.
본 발명에서 사용되는 바, "치료" (및 그 문법적 변형, 예를 들어 "치료하다" 또는 "치료하는")은 질병 또는 상태 또는 장애 또는 그와 관련된 증상, 부작용 또는 결과, 또는 표현형의 완전한 또는 부분적 개선 또는 감소를 말한다. 치료의 바람직한 효과는 질병의 발생 또는 재발 방지, 증상의 완화, 질병의 직접적인 또는 간접적인 병리학적 결과의 감소, 전이 방지, 질병 진행률 감소, 상태의 개선 또는 완화, 및 관해 또는 개선된 예후를 포함하지만 이에 한정되지는 않는다. 이 용어는 질병의 완전한 치유 또는 임의의 증상에 대한 완전한 제거 또는 모든 증상 또는 결과에 대한 효과(들)을 의미하지는 않는다.
본 발명에서 사용되는 바, "질병의 발생 지체"는 질병 (예를 들어, 암)의 발생을 연기, 방해, 지연, 늦춤, 안정화, 억제 및/또는 연기하는 것을 의미한다. 이러한 지체는 질병 이력 및/또는 치료 대상인 대상체에 따라 다양한 시간 길이일 수 있다. 당업자에게 명백할 바와 같이, 충분한 또는 상당한 지체는, 대상체가 질병을 발생시키지 않는다는 점에서, 사실상 예방을 포함할 수 있다. 예를 들어, 전이 발생과 같은 말기 단계 암이 지체될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 바, "방지"는 질병에 걸리기 쉽지만 아직 그 질병으로 진단되지 않은 대상체에서 질병의 발생 또는 재발에 관한 예방을 제공하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공되는 세포 및 조성물은 질병의 발생을 지체시키거나 질병의 진행을 지연시키는데 사용된다.
본 발명에서 사용되는 바, 기능 또는 활성을 "억제"시킨다는 것은, 대상 조건 또는 파라미터를 제외하고 다른 것은 동일한 조건과 비교하였을 때, 또는 다른 조건과 비교하여 상기 기능 또는 활성을 감소시키는 것이다. 예를 들어, 종양 성장을 억제하는 세포는, 상기 세포의 부재시 종양의 성장 속도와 비교하여 상기 종양의 성장 속도를 감소시킨다.
투여의 맥락에서 작용제, 예를 들어 약학적 제형, 세포 또는 조성물의 "유효량"은 원하는 결과, 예를 들어 치료적 또는 예방적 결과를 달성하기 위하여 필요한 투여량/양으로 및 그러한 시간 동안 효과적인 양을 말한다.
작용제, 예를 들어 약학적 제형 또는 조작된 세포의 "치료적으로 유효한 양"은 원하는 치료적 결과를 달성하기 위하여, 예를 들어 질병, 상태 또는 장애의 치료, 및/또는 치료의 약물동력학적 또는 약물력학적 효과를 달성하기 위하여 필요한 투여량으로 및 그러한 시간 동안 효과적인 양을 말한다. 치료적으로 유효한 양은 대상체의 상태, 연령, 성별 및 체중, 및 투여되는 면역조절 폴리펩타이드 또는 조작된 세포와 같은 인자에 따라 달라질 수 있다. 일부 구현예에서, 제공되는 방법은 면역조절 폴리펩타이드, 조작된 세포 또는 조성물을 유효량, 예를 들어 치료적으로 유효한 양으로 투여하는 것을 포함한다.
"예방적으로 유효한 양"은 원하는 예방적 결과를 달성하기 위해 필요한 투여량으로 및 그러한 시간 동안 효과적인 양을 말한다. 반드시 그러한 것은 아니지만 통상, 예방적 투여량은 질병 발생 전 또는 초기 단계에서 대상체에게 사용되기 때문에, 상기 예방적으로 유효한 양은 치료적으로 유효한 양보다 적을 것이다.
"약학적 제형"이라는 용어는 그러한 형태로서 그 안에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성이 효과적이도록 하는, 그 제형이 투여될 대상체에 허용될 수 없을만큼 독성인 어떠한 추가 성분을 함유하지 않는 제형을 말한다.
"약학적 허용 담체"는 활성 성분 이외의, 약학적 작용제의 성분을 말하며, 이는 대상체에게 비독성이다. 약학적 허용 담체는 완충액, 부형제, 안정화제 또는 보존제를 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다.
본 발명에서 사용되는바, 뉴클레오타이드 또는 아미노산 위치가, 기재된 서열, 예를 들어 서열 목록에 기재된 서열 내 뉴클레오타이드 또는 아미노산 위치"에 대응한다"는 것은, 표준 정렬 알고리즘, 예를 들어 GAP 알고리즘을 사용하여 상기 기재된 서열과 상동성을 최대화하는 정렬시 확인된 뉴클레오타이드 또는 아미노산 위치를 말한다. 서열을 정렬시킴으로써, 당업자는 예를 들어, 보존된 아미노산 잔기 및 동일한 아미노산 잔기를 가이드로서 사용하여 대응하는 잔기를 확인할 수 있다. 일반적으로, 대응하는 위치를 확인하기 위해, 가장 높은 정도의 매치가 얻어지도록 아미노산 서열을 정렬한다 (예를 들어, [Computational Molecular Biology, Lesk, A.M., ed., Oxford University Press, New York, 1988]; [Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D.W., ed., Academic Press, New York, 1993]; [Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A.M., and Griffin, H.G., eds., Humana Press, New Jersey, 1994]; [Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987]; 및 [Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M Stockton Press, New York, 1991]; [Carrillo et al. (1988) SIAM J Applied Math 48: 1073] 참조).
본 발명에 사용되는바, 용어 "벡터"는 그것이 연결된 다른 핵산을 전파시킬 수 있는 핵산 분자를 말한다. 상기 용어는 그것이 도입된 숙주 세포의 게놈에 혼입된 벡터뿐만 아니라 자기 복제 핵산 구조로서의 벡터를 포함한다. 특정 벡터는 그들이 작동적으로 연결된 핵산의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터를 본 발명에서는 "발현 벡터"라 지칭한다. 벡터 중에는 레트로바이러스, 예를 들어 감마레트로바이러스 및 렌티 바이러스 벡터와 같은 바이러스 벡터가 있다.
용어 "숙주 세포", "숙주 세포주" 및 "숙주 세포 배양체"는 상호교환적으로 사용되며, 이러한 세포의 자손을 포함하여 외인성 핵산이 도입된 세포를 지칭한다. 숙주 세포는 "형질 전환체" 및 "형질전환된 세포"를 포함하는데, 여기에는 최초의 형질전환된 세포 및 계대의 수에 관계없이 그로부터 유래된 자손이 포함된다. 자손은 핵산 함량이 부모 세포와 완전히 동일하지는 않을 수 있고, 돌연변이를 포함할 수 있다. 본래의 형질전환 된 세포에서 스크리닝되거나 선택된 것과 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 돌연변이 자손이 본 발명에 포함된다.
본 발명에서 사용되는 바, 세포 또는 세포 집단이 특정 마커에 대해 "양성"이라는 설명은 특정 마커, 통상 표면 마커의, 세포 상의 또는 세포 내의 검출 가능한 존재를 말한다. 표면 마커를 언급할 때, 이 용어는 유세포 분석에 의하여 검출되는, 예를 들어 상기 마커에 특이적으로 결합하는 항체를 이용하여 염색하고 상기 항체를 검출함으로써 검출되는 표면 발현의 존재를 말하는데, 여기서 상기 염색은, 다른 것은 동일한 조건 하에서 이소형-매치된 대조군으로 동일한 절차를 수행하여 검출된 염색을 실질적으로 초과하는 레벨에서, 및/또는 상기 마커에 대하여 양성이라고 알려진 세포에 대한 것과 실질적으로 유사한 레벨에서, 및/또는 상기 마커에 대하여 음성이라고 알려진 세포에 대한 것보다 실질적으로 더 높은 레벨에서 유세포 분석에 의하여 검출 가능하다.
본 발명에서 사용되는 바, 세포 또는 세포 집단이 특정 마커에 대해 "음성"이라는 설명은 특정 마커, 통상 표면 마커의, 세포 상에 또는 세포 내의 실질적인 검출 가능한 존재의 부재를 말한다. 표면 마커를 언급할 때, 이 용어는 유세포 분석에 의하여 검출되는, 예를 들어 상기 마커에 특이적으로 결합하는 항체를 이용하여 염색하고 상기 항체를 검출함으로써 검출되는 표면 발현의 부재를 말하는데, 여기서 상기 염색은, 다른 것은 동일한 조건 하에서 이소형-매치된 대조군으로 동일한 절차를 수행하여 검출된 염색을 실질적으로 초과하는 레벨에서 유세포 분석에 의하여 검출되지 않고, 및/또는 상기 마커에 대하여 양성이라고 알려진 세포에 대한 것보다 실질적으로 낮은 레벨에서, 및/또는 상기 마커에 대하여 음성이라고 알려진 세포에 대한 것과 실질적으로 유사한 레벨에서 유세포 분석에 의하여 검출된다.
본 발명에서 사용되는바, 아미노산 서열 (레퍼런스 폴리펩타이드 서열)에 대해 사용되는 경우, "백분율 (%) 아미노산 서열 상동성" 및 "백분율 상동성"은, 서열들과, 최대치의 백분율 서열 상동성을 얻기 위하여 필요하다면 도입되는 갭을 정렬한 후, 상기 기준 폴리펩타이드 서열 내 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열 (예를 들어, 대상 항체 또는 단편) 내 아미노산 잔기의 백분율로서 정의되며, 상기 서열 상동성의 일부로서 어떠한 보존적 치환은 고려하지 않는다. 백분율 아미노산 서열 상동성을 결정하는 목적을 위한 서열정렬은 이 기술 분야의 기술 범위 내 다양한 방식, 예를 들어 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 메갈리안 (DNASTAR) 소프트웨어와 같은 공중이 이용 가능한 컴퓨터 소프트웨어를 이용하여 달성될 수 있다. 이 기술 분야의 숙련자는 비교되는 서열의 전체 길이에 대해 최대 정렬을 달성하는데 필요한 임의의 알고리즘을 포함하여, 서열을 정렬하기 위한 적절한 파라미터를 결정할 수있다.
본 발명에서 사용되는바, 단수 형태 "a", "an" 및 "the"는 문맥상 분명히 다르게 지시하지 않는 한 복수의 대상을 포함한다. 예를 들어, "a" 또는 "an"은 "적어도 하나" 또는 "하나 이상"을 의미한다. 본 발명에서 기술된 측면 및 변형은 측면들 및 변형들"로 이루어지는" 및/또는 "필수적으로 그로 이루어지는"을 포함하는 것으로 이해된다.
본 명세서에 걸쳐, 청구된 주제의 다양한 측면이 범위 형식으로 제시된다. 범위 형식에서의 설명은 편의상 및 간략화를 위한 것이며 청구된 주제의 범위에 대한 융통성 없는 제한으로 해석되어서는 안됨을 이해해야 한다. 따라서, 범위의 설명은 가능한 모든 하위 범위 및 그 범위 내의 개별적인 수치를 구체적으로 개시한 것으로 간주되어야 한다. 예를 들어, 값의 범위가 제공되는 경우, 그 범위의 상한과 하한 사이의 각각의 개재된 값 및 언급된 범위 내 임의의 언급된 또는 개재 된 값이 청구된 주제 내에 포함되는 것으로 이해된다. 이들과 같은 보다 작은 범위의 상한 및 하한은 독립적으로보다 더욱 작은 범위에 포함될 수 있으며, 기술된 범위 내에서 특별히 배제된 한계에 따라 청구된 대상 내에 포함된다. 명시된 범위가 하나의 한계 또는 두 한계를 포함하는 경우, 포함된 한계들 중 하나 또는 둘 모두를 제외한 범위는 청구 대상에 포함된다. 이는 범위의 폭에 관계없이 적용된다.
본 발명에서 사용되는 "약"이라는 용어는 이 기술 분야의 숙련자에게 용이하게 공지된 각각의 값에 대한 통상적인 오차 범위를 나타낸다. 본 발명에서 어떠한 값 또는 파라미터와 관련한 "약"의 언급은 그 값 또는 파라미터 자체에 대한 구현예를 포함 (및 설명)한다. 예를 들어, "약 X"을 언급하는 설명은 "X"에 대한 설명을 포함한다. 일부 구현예에서, 약이라는 용어는 ±25%, ±20%, ±10%, ±5%를 말한다.
본 발명에서 사용되는바, 조성물은 세포를 비롯한 2 이상의 산물, 물질 또는 화합물의 임의의 혼합물을 지칭한다. 이는 용액, 현탁액, 액체, 분말, 페이스트, 수성, 비수성 또는 이들의 임의의 조합일 수 있다.
본 출원에 언급된 모든 간행물, 예를 들어 특허 문헌, 과학 기사 및 데이터베이스는 각 개별 간행물이 개별적으로 참고 문헌으로 인용된 것과 동일한 정도로 모든 목적을 위해 그 전체가 참고 문헌으로 포함된다. 본 발명에서 기재된 정의가 본 발명에 참고로 인용된 특허, 출원, 공개된 출원 및 기타 간행물에 기재된 정의와 상반되거나 또는 달리 불일치하는 경우, 본 발명에 기재된 정의가 본 발명에 참고로 인용된 정의에 우선한다.
본 발명에서 사용된 섹션 표제는 단지 조직적인 목적을 위한 것이며 설명된 주제를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.
IX. 예시적인 구현예들
본 명세서에서 제공되는 구현예들은 다음과 같다:
1. 다음 단계를 포함하는 치료 방법:
(a) 질병 또는 상태를 가지고 있는 대상체에게, 상기 질병 또는 상태를 치료하기 위하여 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전적으로 조작된 세포들의 투여량을 투여하는 단계;
(b) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여량을 투여한 후에, 상기 대상체의 혈액 내의 CAR+ T 세포들을 모니터링하여 상기 세포들이 치료 범위 내에 있는지를 평가하는 단계; 및
(c) 상기 유전적으로 조작된 세포들이 치료 범위 내에 있지 않은 경우에, 상기 대상체에서, CAR+ T 세포 확장 또는 증식을 조절, 선택적으로 증가 또는 감소시킬 수 있는 작용제를 상기 대상체에게 투여하는 단계,
상기 치료 범위는 다음과 같다:
(i) 65% 보다 큰 또는 대략 그보다 큰 반응의 추정된 확률 및 30% 보다 작은 또는 대략 그보다 작은 독성의 추정된 확률과 연관된 상기 유전적으로 조작된 세포로 이전에 치료된 하나 이상의 대상체들의 혈액 내에서, 피크 CD3+ CAR+ T 세포 또는 그의 CD8+ CAR+ T 세포 서브 세트의 범위에 기초하고; 또는
(ii) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 10개의 세포들 내지 마이크로리터 당 500개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포; 또는
(iii) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 2개의 세포들 내지 마이크로리터 당 200개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포.
2. 다음 단계를 포함하는 치료 방법:
(a) 대상체의 혈액 내에, 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전적으로 조작된 세포들의 존재를 모니터링하여, 상기 세포들이 치료 범위 내에 있는지를 평가하는 단계로서, 상기 대상체는 이전에 질병 또는 상태를 치료하기 위하여 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여량이 투여된 적이 있으며; 및
(c) 상기 유전적으로 조작된 세포들이 치료 범위 내에 있지 않은 경우에, 상기 대상체에서, CAR+ T 세포 확장 또는 증식을 조절, 선택적으로 증가 또는 감소시킬 수 있는 작용제를 상기 대상체에게 투여하는 단계,
상기 치료 범위는 다음과 같다:
(i) 65% 보다 큰 또는 대략 그보다 큰 반응의 추정된 확률 및 30% 보다 작은 또는 대략 그보다 작은 독성의 추정된 확률과 연관된 상기 유전적으로 조작된 세포로 이전에 치료된 하나 이상의 대상체들의 혈액 내에서, 피크 CD3+ CAR+ T 세포 또는 그의 CD8+ CAR+ T 세포 서브 세트의 범위에 기초하고; 또는
(ii) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 10개의 세포들 내지 마이크로리터 당 500개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포; 또는
(iii) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 2개의 세포들 내지 마이크로리터 당 200개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포.
3. 제1구현예 또는 제2구현예에서, 상기 대상체의 혈액 내에 CAR+ T 세포의 피크 수가 치료 범위 내에서 피크 CAR+ T 세포의 가장 작은 수 보다 작은 경우에, CAR+ T 세포 확장 또는 증식을 증가시킬 수 있는 작용제가 상기 대상체에게 투여되는 것인 방법.
4. 제3구현예에서, 상기 작용제는 CAR-특이적 확장이 가능한 것인 방법.
5. 제4구현예에서, 상기 작용제는 상기 CAR에 대해 특이적인 항-이디오타입 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 면역 체크포인트 억작용제, 대사 경로 조절제, 아데노신 수용체 길항제, 키나아제 억작용제, 항-TGFβ 항체 또는 항-TGFβR 항체 또는 사이토카인인 방법.
6. 제1구현예 또는 제2구현예에서, 상기 대상체의 혈액 내에 CAR+ T 세포의 피크 수가 상기 치료 범위 내에서 피크 CAR+ T 세포들의 가장 큰 수 보다 큰 경우에, CAR+ T 세포 확장 또는 증식을 감소시킬 수 있는 작용제가 상기 대상체에게 투여되는 것인 방법.
7. 제6구현예에서, 상기 작용제는 스테로이드인 방법.
8. 제7구현예에서, 상기 스테로이드는 코르티코스테로이드인 방법.
9. 제7구현예 또는 제8구현예에서, 상기 스테로이드는 덱사메타손 또는 메틸프레드니솔론인 방법.
10. 제7구현예 내지 제9구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스테로이드는 각각 포괄적인, 약 1.0 mg 내지 약 40 mg, 약 1.0 mg 내지 약 20 mg, 약 2.0 mg 내지 약 20 mg, 약 5.0 mg 내지 약 25.0 mg, 약 10 mg 내지 약 20 mg, 또는 그 사이의 덱사메타손 또는 이의 등량물의 양으로 투여되는 것인 방법.
11. 제1구현예 내지 제10구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 대상체는 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 개시의 적어도 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일 또는 21일 후인 시점에 혈액 내의 CAR+ T 세포에 대하여 모니터링되는 것인 방법.
12. 제1구현예 내지 제11구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 대상체는 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 개시 후에, 각각 포괄적인, 11일 내지 22일, 12일 내지 18일, 14일 내지 16일, 또는 대략 그 사이의 시점에 혈액 내의 CAR+ T 세포에 대하여 모니터링되는 것인 방법.
13. 제1구현예 내지 제11구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 작용제는 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 개시 후 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 또는 21일 이상인 또는 대략 그 이상인 시점에 투여되는 것인 방법.
14. 제1구현예 내지 제13구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 작용제는 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 개시 후에, 각각 포괄적인, 11일 내지 22일, 12일 내지 18일, 14일 내지 16일, 또는 대략 그 사이의 시점에 투여되는 것인 방법.
15. 조작된 세포들의 활성을 조절하는 방법으로, 상기 방법은 다음 단계를 포함하는 것인 방법:
(a) 대상체로부터 수득한 샘플에서 종양 존재량(burden) 또는 염증 마커의 체적 측정치의 레벨, 양 또는 농도가 임계치 이상인 대상체를 선택하는 단계로, 상기 샘플은 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 유전적으로 조작된 T 세포를 포함하지 않고 및/또는 CAR을 발현하는 유전적으로 조작된 T 세포의 투여를 받기 이전에 상기 대상체로부터 수득되며; 및
(b) 상기 선택된 대상체에게 CAR을 발현하는 유전적으로 조작된 T 세포의 확장 또는 증식을 감소시킬 수 있는 작용제를 투여하는 단계.
16. 조작된 세포들의 활성을 조절하는 방법으로, 상기 방법은 대상체에서 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 유전적으로 조작된 T 세포의 확장 또는 증식을 감소시킬 수 있는 작용제를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 상기 대상체는 대상체로부터 수득한 샘플에서 종양 존재량 또는 염증 마커의 체적 측정치의 레벨, 양 또는 농도가 임계치 이상인 것인 방법.
17. 제15구현예 또는 제16구현예에서, 상기 작용제는 키메라 항원 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전적으로 조작된 세포들의 투여량의 투여의 개시 이전에 또는 이와 동시에 투여되는 것인 방법.
18. 제17구현예에서, 상기 방법은 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여량을 투여하는 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
19. 제15구현예 내지 제18구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 대상체는 질병 또는 상태를 가지며, 상기 유전적으로 조작된 세포들은 상기 질병 또는 상태를 치료하기 위한 것인 방법.
20. 제15구현예 내지 제19구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 작용제를 투여하기 이전에, 상기 선택된 대상체는 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에 독성을 나타낼 위험이 있는 것인 방법.
21. 제14구현예 내지 제20구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 작용제의 상기 투여는 상기 대상체의 치료 범위 내에서, 또는 상기 방법에 의해 치료되기 위하여 선택된 대상체들의 대다수 중에서 또는 상기 방법에 의해 치료되기 위하여 선택된 대상체들의 75% 이상에서 피크 CAR+ T 세포를 달성하기에 충분한 것인 방법.
22. 제21구현예에서, 상기 치료 범위는 다음과 같은 것인 방법:
(i) 65% 보다 큰 또는 대략 그보다 큰 반응의 추정된 확률 및 30% 보다 작은 또는 대략 그보다 작은 독성의 추정된 확률과 연관된 상기 유전적으로 조작된 세포로 이전에 치료된 하나 이상의 대상체들의 혈액 내에서, 피크 CD3+ CAR+ T 세포 또는 그의 CD8+ CAR+ T 세포 서브 세트의 범위에 기초하고; 또는
(ii) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 10개의 세포들 내지 마이크로리터 당 500개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포; 또는
(iii) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 2개의 세포들 내지 마이크로리터 당 200개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포.
23. 제15구현예 내지 제22구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 종양 존재량의 체적 측정치가 측정되고 상기 체적 측정치는 직경의 결과물의 합 (SPD), 가장 긴 종양 직경 (LD), 가장 긴 종양 직경의 합 (SLD), 종양 체적, 괴사 체적, 괴사-종양 비 (NTR), 종양 주위의 부종 (PTE) 및 부종-종양 비 (ETR)인 것인 방법.
24. 제15구현예 내지 제23구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 체적 측정치는 값은 직경의 결과물의 합 (SPD)인 것인 방법.
25. 제15구현예 내지 제24구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 체적 측정치는 상기 대상체의 컴퓨터 단층 촬영 (CT), 양전자 방출 단층 촬영 (PET), 및/또는 자기 공명 영상 (MRI)을 사용하여 측정되는 것인 방법.
26. 제15구현예 내지 제22구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 대상체로부터 수득한 샘플에서 염증 마커가 측정되고 상기 염증 마커는 C-반응성 단백질 (CRP), 적혈구 침강 속도 (ESR), 알부민, 페리틴, β2 마이크로글로불린 (β2-M), 젖산 탈수소효소 (LDH), 사이토카인 또는 케모카인인 것인 방법.
27. 제15구현예 내지 제22구현예 및 제26구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 염증 마커는 LDH인 것인 방법.
28. 제15구현예 내지 제22구현예 및 제26구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 염증 마커는 IL-7, IL15, MIP-1알파 또는 TNF-알파인 사이토카인 또는 케모카인인 것인 방법.
29. 제15구현예 내지 제22구현예, 제26구현예 및 제28구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 사이토카인 또는 케모카인은 대식세포 또는 단핵구 활성화와 연관되는 것인 방법.
30. 제15구현예 내지 제22구현예 및 제26구현예 내지 제29구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 샘플은 혈액 샘플, 혈장 샘플 또는 혈청 샘플이거나 이를 포함하는 것인 방법.
31. 제15구현예 내지 제22구현예 및 제26구현예 내지 제30구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 염증 마커는 비색 분석법 또는 면역 분석법을 사용하여 평가되는 것인 방법.
32. 제31구현예에서, 상기 염증 마커는 면역 분석법을 사용하여 평가되고 상기 면역 분석법은 효소 결합 면역 흡착 분석법 (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA), 효소 면역 분석법 (ELA), 방사 면역 분석법 (RIA), 표면 플라스몬 공명 (surface plasmon resonance, SPR), 웨스턴 블롯(Western Blot), 측방 유동 분석(Lateral flow assay), 면역 조직 화학, 단백질 어레이 또는 면역-PCR (iPCR) 중에서 선택되는 것인 방법.
33. 제15구현예 내지 제32구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 임계값은 다음과 같은 값인 방법:
i) 상기 체적 측정치 또는 염증 마커의 평균 값을 넘는 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내, 또는 5% 이내이고 및/또는 복수의 대조군 대상체들에서 상기 체적 측정치 또는 상기 염증 마커의 상기 평균 값을 넘는 표준 편차 이내이며;
ii) 복수의 대조군 대상체들 중에서 적어도 하나의 대상체 내에서 측정된, 상기 체적 측정치 또는 염증 마커의 가장 높은 값을 넘는, 선택적으로 이러한 가장 높은 배수의 변화를 넘는 50% 이내, 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내, 또는 5% 이내이고; 및/또는
iii) 복수의 대조군 대상체들의 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 98% 이상 중에서 측정된 바와 같은 상기 체적 측정치 또는 염증 마커의 가장 높은 값을 넘는 값.
34. 제33구현예에서, 상기 복수의 대조군 대상체들은 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여량을 받기 전의 대상체 그룹이며, 여기서:
상기 그룹의 상기 대조군 대상체들 각각은 치료 범위 이내의 가장 높은 피크 CAR+ T 세포 보다 큰 혈액 내의 피크 CAR+ T 세포를 나타냈고;
상기 그룹의 상기 대조군 대상체들의 각각은 동일한 질병 또는 상태를 치료하기 위하여 상기 조작된 세포들의 투여량을 받은 후에, 독성, 선택적으로 신경 독성 또는 사이토카인 방출 증후군(cytokine release syndrome, CRS)에서, 2등급 또는 3등급 이상의 신경 독성 또는 3등급 이상의 CRS를 계속하여 나타냈으며;
상기 그룹의 상기 대조군 대상체들의 각각은 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여량의 투여 후에, 반응, 선택적으로 완전한 반응 (CR) 또는 부분적인 반응 (PR)을 나타내지 않았고; 및/또는
상기 그룹의 상기 대조군 대상체들의 각각은 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여량의 투여 후에, 선택적으로 3개월 이상 또는 6개월 이상 동안 지속적인 반응을 나타내지 않았던 것인 방법.
35. 제15구현예 내지 제34구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 체적 측정치는 SPD이고 상기 임계값은 ㎠ 당 30 또는 대략 그 정도, ㎠ 당 40 또는 대략 그 정도, ㎠ 당 50 또는 대략 그 정도, ㎠ 당 60 또는 대략 그 정도, 또는 ㎠ 당 70 또는 대략 그 정도인 것인 방법.
36. 제15구현예 내지 제35구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 염증 마커는 LDH이고 상기 임계값은 리터 당 300 유닛이거나 대략 그 정도, 리터 당 400 유닛이거나 대략 그 정도, 리터 당 500 유닛이거나 대략 그 정도, 또는 리터 당 600 유닛이거나 대략 그 정도인 것인 방법.
37. 제15구현예 내지 제36구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 작용제는 스테로이드인 방법.
38. 제37구현예에서, 상기 스테로이드는 코르티코스테로이드인 방법.
39. 제37구현예 또는 제38구현예에서, 상기 스테로이드는 덱사메타손 또는 메틸프레드니솔론인 방법.
40. 제37구현예 내지 제39구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스테로이드는 각각 포괄적인, 약 1.0 mg 내지 약 40 mg, 약 1.0 mg 내지 약 20 mg, 약 2.0 mg 내지 약 20 mg, 약 5.0 mg 내지 약 25.0 mg, 약 10 mg 내지 약 20 mg, 또는 그 사이의 덱사메타손 또는 이의 등량물의 양으로 투여되는 것인 방법.
41. 제15구현예 내지 제40구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 체적 측정치 또는 염증 마커는 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여의 개시 이전에 1일, 2일, 3일, 4일, 6일, 8일, 12일, 16일, 20일, 24일, 28일 또는 그 이상 이내에 상기 대상체에서 측정되는 것인 방법.
42. 대상체에서 투약하는(dosing) 방법으로, 상기 방법은 키메라 항원 수용체 (CAR)을 발현하는 T 세포를 포함하는 유전적으로 조작된 세포들의 투여량을, 질병 또는 상태를 가지는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 상기 투여량은 상기 대상체의 결정된 치료 범위 내에서 혈액 내의, 또는 상기 방법에 의해 치료되기 위하여 선택된 대상체들의 대다수 중에서 또는 상기 방법에 의해 치료되기 위하여 선택된 대상체들의 75% 이상에서 피크 CAR+ T 세포를 달성하기에 충분한 다수의 상기 유전적으로 조작된 세포들을 포함하고, 상기 치료 범위는 다음과 같은 방법:
(i) 65% 보다 큰 또는 대략 그보다 큰 반응의 추정된 확률 및 30% 보다 작은 또는 대략 그보다 작은 독성의 추정된 확률과 연관된 상기 유전적으로 조작된 세포로 이전에 치료된 하나 이상의 대상체들의 혈액 내에서, 피크 CD3+ CAR+ T 세포 또는 그의 CD8+ CAR+ T 세포 서브 세트의 범위에 기초하고; 또는
(ii) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 10개의 세포들 내지 마이크로리터 당 500개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포; 또는
(iii) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 2개의 세포들 내지 마이크로리터 당 200개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포.
43. 제1구현예 내지 제42구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여량은 각각 포괄적인, 1 x 105 내지 5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 106 내지 2.5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 5 x 106 내지 1 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 107 내지 2.5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 5 x 107 내지 1 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도를 포함하는 것인 방법.
44. 제1구현예 내지 제43구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여량은 적어도 1 x 105개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 적어도 2.5 x 105개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 적어도 5 x 105개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 적어도 1 x 106개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 적어도 2.5 x 106개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 적어도 5 x 106개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 적어도 1 x 107개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 적어도 2.5 x 107개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 적어도 5 x 107개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 적어도 1 x 108개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 적어도 2.5 x 108개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 또는 적어도 5 x 108개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도인 것인 방법.
45. 대상체에게 투약하는 방법으로, 상기 방법은 다음 단계를 포함하는 것인 방법:
(a) 키메라 항원 수용체 (CAR)로 조작된 T 세포를 포함하는 유전적으로 조작된 세포들의 차선의 (sub-optimal) 투여량을, 질병 또는 상태를 가지는 대상체에게 투여하는 단계로, 상기 투여량은 상기 대상체의 결정된 치료 범위 내에서 혈액 내의, 또는 상기 방법에 의해 치료되기 위하여 선택된 대상체들의 대다수 중에서 또는 상기 방법에 의해 치료되기 위하여 선택된 대상체들의 75% 이상에서 피크 CAR+ T 세포를 달성하기에 불충분한 다수의 상기 유전적으로 조작된 세포들을 포함하고; 및
(b) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 단계 다음에, 상기 치료 범위 내에서 혈액 내에 피크 CAR+ T 세포를 달성하기 위하여 상기 대상체 내의 CAR+ 세포 확장 또는 증식을 향상시키는 작용제를 투여하는 단계로,
상기 치료 범위는 다음과 같다:
(i) 65% 보다 큰 또는 대략 그보다 큰 반응의 추정된 확률 및 30% 보다 작은 또는 대략 그보다 작은 독성의 추정된 확률과 연관된 상기 유전적으로 조작된 세포로 이전에 치료된 하나 이상의 대상체들의 혈액 내에서, 피크 CD3+ CAR+ T 세포 또는 그의 CD8+ CAR+ T 세포 서브 세트의 범위에 기초하고; 또는
(ii) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 10개의 세포들 내지 마이크로리터 당 500개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포; 또는
(iii) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 2개의 세포들 내지 마이크로리터 당 200개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포.
46. 제45구현예에서, 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여량을 투여한 후, 상기 방법은 상기 대상체의 혈액 내에 CAR+ T 세포를 모니터링하는 단계를 포함하는 것인 방법.
47. 제45구현예 또는 제46구현예에서, 상기 작용제의 투여 후에, 상기 방법은 다음을 달성하는 것인 방법:
상기 작용제 없이 유전적으로 조작된 세포들의 동일한 투여량의 투여를 포함하는 방법과 비교하여, 상기 대상체에서 결정된 치료 범위 내에서 혈액 내의 피크 CAR+ 세포의 증가된 빈도; 또는
상기 대상체의 결정된 치료 범위 내에서 혈액 내의, 또는 상기 방법에 의해 치료되기 위하여 선택된 대상체들의 대다수 중에서 또는 상기 방법에 의해 치료되기 위하여 선택된 대상체들의 75% 이상에서 피크 CAR+ 세포.
48. 제45구현예 내지 제47구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여량은 1 x 107 이하의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 5 x 106 이하의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 2.5 x 106 이하의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 1 x 106 이하의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 2.5 x 105 이하의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도인 것인 방법.
49. 제45구현예 내지 제48구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 작용제는 CAR+ T 세포의 확장, 선택적으로 CAR-특이적 확장을 증가시킬 수 있는 것인 방법.
50. 제49구현예에서, 상기 작용제는 항-이디오타입 항체 또는 CAR에 특이적인 이의 항원 결합 단편, 면역 체크포인트 억작용제, 대사 경로 조절제, 아데노신 수용체 길항제, 키나아제 억작용제, 항-TGFβ 항체 또는 항-TGFβR 항체 또는 사이토카인인 것인 방법.
51. 제1구현예 내지 제50구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 치료된 복수의 대상체들 중에서, 상기 방법은 상기 작용제의 투여 단계를 포함하지 않는 방법과 비교하여, 선택적으로 3개월 이상 또는 6개월 이상 동안 지속되는, 지속적인 반응, 선택적으로 완전한 반응 (CR) 또는 객관적인 반응 (OR) 또는 부분적인 반응 (PR)을 달성한 대상체들의 백분율의 증가를 달성하는 것인 방법.
52. 제1구현예 내지 제51구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 증가는 1.2배, 1.5배, 2배, 3배, 4배, 5배, 10배 또는 그 이상 또는 대략 그 이상인 것인 방법.
53. 제1구현예 내지 제52구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 여기서:
상기 방법에 따라 치료된 대상체들의 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 50% 는 3개월 이상 또는 6개월 이상 동안 지속되는 완전한 반응 (CR)을 달성하고; 및/또는
상기 방법에 따라 치료된 대상체들의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60% 또는 적어도 70%는 3개월 이상 또는 6개월 이상 동안 지속되는 객관적인 반응 (OR)을 달성하는 것인 방법.
54. 제1구현예 내지 제53구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 여기서:
상기 방법에 따라 치료된 대상체들의 50% 이상 또는 대략 그 이상, 60% 이상 또는 대략 그 이상, 70% 이상 또는 대략 그 이상, 또는 80% 이상 또는 대략 그 이상은 3등급 이상의 사이토카인 방출 증후군 (CRS)를 나타내고 및/또는 2등급 이상 또는 3등급 이상의 신경 독성을 나타내지 않고; 또는
상기 방법에 따라 치료된 대상체들의 40% 이상 또는 대략 그 이상, 50% 이상 또는 대략 그 이상, 또는 55% 이상 또는 대략 그 이상은 임의의 신경 독성 또는 (CRS)를 나타내지 않는 것인 방법.
55. 제1구현예 내지 제54구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 피크 CAR+ T 세포는 상기 대상체의 혈액 내에서 마이크로리터 당 CAR+ T 세포의 수로 결정되는 것인 방법.
56. 제1구현예 내지 제55구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 치료 범위는 상기 독성의 추정된 확률이 20% 이하, 15% 이하, 10% 이하 또는 5% 이하이고 상기 반응을 달성하는 추정된 확률은 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 그 이상 보다 큰 범위인 것인 방법.
57. 제1구현예 내지 제56구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 독성의 확률은 다음 중에서 선택되는 독성에 기초하는 것인 방법:
임의의 신경 독성 또는 사이토카인 방출 증후군 (CRS);
중증 독성 또는 3등급 이상의 독성;
중증 CRS 또는 3등급 이상의 CRS; 또는
중증 신경 독성, 2등급 이상의 신경 독성 또는 3등급 이상의 신경 독성.
58. 제1구현예 내지 제56구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 독성의 확률은 중증 독성 또는 3등급 이상의 독성의 확률에 기초하는 것인 방법.
59. 제57구현예 또는 제58구현예에서, 상기 중증 독성은 3-5 등급의 신경 독성인 것인 방법.
60. 제1구현예 내지 제59구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 반응 확률은 완전한 반응 (CR), 객관적인 반응 (OR) 또는 부분적인 반응 (PR)인 반응에 기초하고, 선택적으로 상기 반응은 지속적이며, 선택적으로 3개월 이상 또는 6개월 이상 동안 지속되는 것인 방법.
61. 제1구현예 내지 제60구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 반응은 상기 대상체의 골수 내에서 악성 면역글로불린 중쇄 좌위(immunoglobulin heavy chain locus, IGH)의 존재 및/또는 지수 복제(index clone)의 평가에 기초하여 결정된 골수 반응인 것인 방법.
62. 제61구현예에서, 상기 악성 IGH 및/또는 지수 복제는 유세포 분석기 또는 IgH 시퀀싱에 의해 평가되는 것인 방법.
63. 지속적인 방응의 가능성을 평가하는 방법으로, 상기 방법은 다음 단계를 포함하는 것인 방법:
(a) 대상체로부터 수득한 생물학적 샘플에서, 하나 이상의 염증 마커의 피크 레벨 및/또는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전적으로 조작된 세포들의 피크 레벨을 검출하는 단계로, 상기 대상체는 질병 또는 상태를 치료하기 위하여 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여량을 이전에 투여받은 적이 있고;
(b) 개별적으로, 임계값에 대하여 상기 피크 레벨을 비교함으로써, 대상체가 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여에 대하여 지속적인 반응을 달성할 가능성을 결정하는 단계.
64. 제63구현예에서, 여기서:
상기 대상체는 상기 하나 이상의 염증 마커의 피크 레벨이 임계값 아래이면 지속적인 반응을 달성하기 쉽고 상기 대상체는 상기 하나 이상의 염증 마커의 피크 레벨이 임계값을 넘으면 지속적인 반응을 달성하기 쉽지 않으며; 또는
상기 대상체는 상기 유전적으로 조작된 세포들의 상기 피크 레벨이 하한 임계값과 상한 임계값 사이의 치료 범위 이내이면 지속적인 반응을 달성하기 쉽고 상기 대상체는 상기 유전적으로 조작된 세포들의 상기 피크 레벨이 하한 임계값 아래이거나 상한 임계값을 넘으면 지속적인 반응을 달성하기 쉽지 않은 것인 방법.
65. 제63구현예 또는 제64구현예에서, 상기 대상체가 지속적인 반응을 달성하기 쉽지 않다고 결정되면, 상기 유전적으로 조작된 세포들 이외에 치료제로 또는 대체적인 치료학적 처리로 치료하기 위한 대상체를 선택하는 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
66. 제63구현예 내지 제65구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 대상체는 지속적인 반응을 달성하기 쉽지 않다고 결정되면, 상기 유전적으로 조작된 세포들 이외에 치료제 또는 대체적인 치료학적 처리를 투여하는 단계를 포함하는 것인 방법.
67. 다음 단계를 포함하는, 치료 방법:
(a) 대상체로부터 수득한 샘플에서 하나 이상의 염증 마커의 피크 레벨이 임계값을 넘는; 및/또는
대상체로부터 수득한 샘플에서 키메라 항원 수용체 (CAR)를 포함하는 T 세포의 피크 레벨이 하한 임계값 아래이거나 상한 임계값을 넘는,
키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전적으로 조작된 세포들의 투여를 받은 대상체를 선택하는 단계; 및
(b) 상기 대상체에게 상기 유전적으로 조작된 세포들 이외에 치료제 또는 대체적인 치료학적 처리를 투여하는 단계.
68. 제63구현예 내지 제66구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 반응은 완전한 반응 (CR), 객관적인 반응 (OR) 또는 부분적인 반응 (PR)인 것인 방법.
69. 제63구현예 내지 제66구현예 및 제68구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 반응은 3개월, 4개월, 5개월 또는 6개월 이상 동안 지속되는 것인 방법.
70. 제63구현예 내지 제69구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 피크 레벨은 평가되고 및/또는 상기 샘플은 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 개시의 적어도 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일 또는 21일 후의 시점의 상기 대상체로부터 수득되는 것인 방법.
71. 제63구현예 내지 제70구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 피크 레벨은 평가되고 및/또는 상기 샘플은 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 개시 후에, 각각 포괄적인, 11일 내지 22일 또는 12일 내지 18일 또는 14일 내지 16일 또는 대략 그 사이인 시점의 상기 대상체로부터 수득되는 것인 방법.
72. 제63구현예 내지 제71구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 피크 레벨은 하나 이상의 염증 마커의 피크 레벨이며 상기 염증 마커는 C 반응성 단백질 (CRP), IL-2, IL-6, IL-10, IL-15, TNF-알파, MIP-1알파, MIP-1베타, MCP-1, CXCL10 또는 CCL13 중에서 선택되는 것인 방법.
73. 제64구현예 내지 제72구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 하나 이상의 염증 마커의 피크 레벨이 평가되고, 상기 임계값은 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내 또는 5% 이내이며 및/또는 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여를 받은 대조군 대상체들의 그룹 중에서 결정된 바와 같은 상기 염증 마커의 피크 레벨의 중앙 또는 평균의 표준 편차 이내이고, 상기 그룹의 상기 대상체들의 각각은 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에 지속적인 반응, 선택적으로 CR 및/또는 PR, 선택적으로 3개월 또는 6개월 이상을 달성하지 않은 것인 방법.
74. 제73구현예에서, 상기 대조군 대상체들은 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에 안정적인 질병 (SD) 또는 진행되는 질병 (PD)을, 선택적으로 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에 3개월 또는 6개월 동안 나타낸 것인 방법.
75. 제63구현예 내지 제71구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 피크 레벨은 CAR+ T 세포 또는 이의 CD8+ T 세포 서브세트의 피크 레벨인 것인 방법.
76. 제64구현예 내지 제71구현예 및 제75구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 하한 임계값 및 상한 임계값은 65% 이상 또는 대략 그 이상인 반응의 추정된 확률 및 30%이하 또는 대략 그 이하인 독성의 추정된 확률과 연관된 상기 유전적으로 조작된 세포로 이전에 치료된 하나 이상의 대상체들의 혈액 내에서, 피크 CD3+ CAR+ T 세포, 또는 이의 CD8+ CAR+ T 세포 서브 세트의 치료 범위의, 각각의, 하한 및 상한인 것인 방법.
77. 제64구현예 내지 제71구현예, 제75구현예 및 제76구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 치료 범위는 상기 독성의 추정된 확률이 20% 이하, 15% 이하, 10% 이하 또는 5% 이하이고 상기 반응을 달성하는 추정된 확률은 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 그 이상 보다 큰 범위인 것인 방법.
78. 제76구현예 또는 제77구현예에서, 상기 독성의 확률은 다음 중에서 선택되는 독성에 기초하는 것인 방법:
임의의 신경 독성 또는 사이토카인 방출 증후군 (CRS);
중증 독성 또는 3등급 이상의 독성;
중증 CRS 또는 3등급 이상의 CRS; 또는
중증 신경 독성, 2등급 이상의 신경 독성 또는 3등급 이상의 신경 독성.
79. 제76구현예 내지 제78구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 반응 확률은 완전한 반응 (CR), 객관적인 반응 (OR) 또는 부분적인 반응 (PR)인 반응에 기초하고, 선택적으로 상기 반응은 지속적이며, 선택적으로 3개월 이상 또는 6개월 이상 동안 지속되는 것인 방법.
80. 제64구현예 내지 제71구현예 및 제75구현예 내지 제79구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 피크 CAR+ T 세포는 상기 대상체의 혈액 내의 마이크로리터 당 CAR+ T 세포의 수로 결정되는 것인 방법.
81. 제64구현예 내지 제71구현예 및 제75구현예 내지 제80구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 여기서:
상기 상한 임계 값은 마이크로리터 당 300개 세포들 내지 마이크로리터 당 1000개 세포들 또는 마이크로리터 당 400개 세포들 내지 마이크로리터 당 600개 세포들 또는 대략 그 사이이거나, 약 마이크로리터 당 300개 세포들, 마이크로리터 당 400개 세포들, 마이크로리터 당 500개 세포들, 마이크로리터 당 600개 세포들, 마이크로리터 당 700개 세포들, 마이크로리터 당 800개 세포들, 마이크로리터 당 900개 세포들 또는 마이크로리터 당 1000개 세포들이고;
상기 하한 임계값은 마이크로리터 당 10개 세포들 이하, 마이크로리터 당 9개 세포들 이하, 마이크로리터 당 8개 세포들 이하, 마이크로리터 당 7개 세포들 이하, 마이크로리터 당 6개 세포들 이하, 마이크로리터 당 5개 세포들 이하, 마이크로리터 당 4개 세포들 이하, 마이크로리터 당 3개 세포들 이하, 마이크로리터 당 2개 세포들 이하 또는 마이크로리터 당 1개 세포들 이하 또는 대략 그 이하인 것인 방법.
82. 제63구현예 내지 제81구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 샘플은 혈액 샘플 또는 혈장 샘플인 것인 방법.
83. 제63구현예 내지 제82구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 방법은 생체 외에서 수행되는 것인 방법.
84. 제65구현예 내지 제83구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 CAR+ T 세포의 피크 레벨은 하한 임계값 아래이고 상기 치료제는 CAR+ T 세포의 확장과 증식을 감소시킬 수 있는 작용제인 것인 방법.
85. 제84구현예에서, 상기 작용제는 스테로이드인 것인 방법.
86. 제85구현예에서, 상기 스테로이드는 코르티코스테로이드인 것인 방법.
87. 제85구현예 또는 제86구현예에서, 상기 스테로이드는 덱사메타손 또는 메틸프레드니솔론인 것인 방법.
88. 제85구현예 내지 제87구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스테로이드는 각각 포괄적인, 약 1.0 mg 내지 약 40 mg, 약 1.0 mg 내지 약 20 mg, 약 2.0 mg 내지 약 20 mg, 약 5.0 mg 내지 약 25.0 mg, 약 10 mg 내지 약 20 mg, 또는 그 사이의 덱사메타손 또는 이의 등량물의 양으로 투여되는 것인 방법.
89. 제85구현예 내지 제88구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 CAR+ T 세포의 피크 레벨은 상기 상한 임계값을 넘고 상기 치료제는 상기 CAR+ T 세포의 확장, 선택적으로 CAR-특이적 확장을 증가시킬 수 있는 작용제인 것인 방법.
90. 제89구현예에서, 상기 작용제는 항-이디오타입 항체 또는 CAR에 특이적인 이의 항원 결합 단편, 면역 체크포인트 억작용제, 대사 경로 조절제, 아데노신 수용체 길항제, 키나아제 억작용제, 항-TGFβ 항체 또는 항-TGFβR 항체 또는 사이토카인인 것인 방법.
91. 제1구현예 내지 제90구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 질병 또는 상태는 암인 것인 방법.
92. 제91구현예에서, 상기 암은 B 세포 악성 종양인 것인 방법.
93. 제92구현예에서, 상기 암은 육종, 암종, 림프종, 비-호지킨 림프종 (NHLs), 이하성 거대 B세포 림프종 (DLBCL), 백혈병, CLL, ALL, AML 및 골수종으로 구성된 군에서 선택되는 것인 방법.
94. 제93구현예에서, 상기 암은 췌장암, 방광암, 대장암, 유방암, 전립선암, 신장암, 간세포암, 폐암, 난소암, 자궁 경부암, 췌장암, 직장암, 갑상선암, 자궁암, 위암, 식도암, 두경부암, 흑색종, 신경내분비암, CNS 암, 뇌종양, 골암, 또는 연조직 육종인 것인 방법.
95. 제1구현예 내지 제94구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 대상체는 인간인 것인 방법.
96. 제1구현예 내지 제95구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 CAR은 질병 또는 상태와 연관된 항원에 특이적으로 결합하고 및/또는 상기 질병 또는 상태와 연관된 세포에서 발현되는 것인 방법.
97. 제96구현예에서, 상기 항원은 5T4, 8H9, avb6 인테그린, B7-H6, B 세포 성숙화 항원 (BCMA), CA9, 암성-고환 항원, 탄산 무수화 효소 9 (CAIX), CCL-1, CD19, CD20, CD22, CEA, B형 간염 표면 항원, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD138, CD171, 암배아성 항원(carcinoembryonic antigen, CEA), CE7, 사이클린, 사이클린 A2, c-Met, 이중 항원, EGFR, 상피 당단백질 2(epithelial glycoprotein 2, EPG-2), 상피 당단백질 40 (EPG-40), EPHa2, 에프린B2(ephrinB2), erb-B2, erb-B3, erb-B4, erbB 이합체들(dimers), EGFR vIII, 에스트로겐 수용체, 태아 AchR, 엽산 수용체 알파, 엽산 결합 단백질 (FBP), FCRL5, FCRH5, 태아 아세틸콜린 수용체(fetal acetylcholine receptor), G250/CAIX, GD2, GD3, gp100, Her2/neu (수용체 티로신 키나아제 erbB2), HMW- MAA, IL-22R-알파, IL-13 수용체 알파 2 (IL-13Ra2), 키나아제 삽입 도메인 수용체 (kdr), 카파 경쇄, 루이스 Y(Lewis Y), L1-세포 접착 분자 (L1-CAM), 흑색종-관련 항원 (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, MART-1, 메소텔린, 쥐-CMV, 뮤신 1(mucin 1, MUC1), MUC16, NCAM, NKG2D, NKG2D 리간드, NY-ESO-1, O-아세틸화 GD2 (OGD2), 종양 태아성 항원(oncofetal antigen), 흑색종에서 우선적으로 발현되는 항원(Preferentially expressed antigen of melanoma, PRAME), PSCA, 프로게스테론 수용체, 서바이빈(survivin), ROR1, TAG72, tEGFR, VEGF 수용체, VEGF-R2, 윌름스 종양 1 (Wilms Tumor 1, WT-1), 병원균-특이적 항원 중에서 선택되는 것인 방법.
98. 제1구현예 내지 제97구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 키메라 항원 수용체 (CAR)는 상기 항원에 특이적으로 결합하는 세포 외 항원-인식 도메인과 ITAM을 포함하는 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 것인 방법.
99. 제98구현예에서, 상기 세포 내 신호 전달 도메인은 CD3-제타 (CD3ζ) 사슬의 세포 내 도메인을 포함하는 것인 방법.
100. 제98구현예 또는 제99구현예에서, 상기 키메라 항원 수용체 (CAR)는 추가로 공자극(costimulatory) 신호 전달 영역을 포함하는 것인 방법.
101. 제100구현예에서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 CD28 또는 4-1BB의 신호 전달 도메인을 포함하는 것인 방법.
102. 제15구현예 또는 제16구현예에서, 상기 공자극 도메인은 4-1BB의 도메인인 것인 방법.
103. 제1구현예 내지 제102구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 세포는 T 세포인 것인 방법.
104. 제103구현예에서, 상기 T 세포는 CD4+ 또는 CD8+인 것인 방법.
105. 제1구현예 내지 제104구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 T 세포는 대상체로부터 수득한 초기의(primary) T 세포인 것인 방법.
106. 제1구현예 내지 제105구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 유전적으로 조작된 세포들의 세포는 상기 대상체에 대하여 자가 조직(autologous)인 것인 방법.
107. 제1구현예 내지 제106구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 세포는 상기 대상체에 대하여 동종 이계(allogeneic)인 것인 방법.
108. 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전적으로 조작된 세포들을 포함하는 조성물과, 피크 CAR+ T 세포가 치료 범위 이내인지를 평가한 후에 또는 평가한 결과에 기초하여 대상체에게 상기 세포의 투여량을 투여하기 위한 설명서를 포함하는, 키트로서
상기 치료 범위는 다음과 같다:
(i) 65% 보다 큰 또는 대략 그보다 큰 반응의 추정된 확률 및 30% 보다 작은 또는 대략 그보다 작은 독성의 추정된 확률과 연관된 상기 유전적으로 조작된 세포로 이전에 치료된 하나 이상의 대상체들의 혈액 내에서, 피크 CD3+ CAR+ T 세포 또는 그의 CD8+ CAR+ T 세포 서브 세트의 범위에 기초하고; 또는
(ii) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 10개의 세포들 내지 마이크로리터 당 500개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포; 또는
(iii) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 2개의 세포들 내지 마이크로리터 당 200개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포.
109. 제108구현예에서, 상기 설명서는 상기 유전적으로 조작된 세포들이 치료 범위 이내에 있는 경우에, 상기 대상체에서 CAR+ T 세포 확장 또는 증식을 조절, 선택적으로 증가 또는 감소시킬 수 있는 작용제를 상기 대상체에게 투여하는 것이라고 명시하는 것인 키트.
110. 제109구현예에서, 상기 키트는 추가로 상기 작용제를 포함하는 것인 키트.
111. CAR+ T 세포를 포함하는 유전적으로 조작된 세포들의 확장 또는 증식을 조절, 선택적으로 증가 또는 감소시킬 수 있는 작용제와, 피크 CAR+ T 세포가 치료 범위 이내에 있는지 여부를 평가한 결과에 기초하여, 대상체에게 작용제를 투여하기 위한 설명서를 포함하는, 키트로서, 상기 대상체는 상기 유전적으로 조작된 세포들을 투여 받은 적이 있으며, 상기 치료 범위는 다음과 같다:
(i) 65% 보다 큰 또는 대략 그보다 큰 반응의 추정된 확률 및 30% 보다 작은 또는 대략 그보다 작은 독성의 추정된 확률과 연관된 상기 유전적으로 조작된 세포로 이전에 치료된 하나 이상의 대상체들의 혈액 내에서, 피크 CD3+ CAR+ T 세포 또는 그의 CD8+ CAR+ T 세포 서브 세트의 범위에 기초하고; 또는
(ii) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 10개의 세포들 내지 마이크로리터 당 500개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포; 또는
(iii) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 2개의 세포들 내지 마이크로리터 당 200개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포.
112. 제109구현예 내지 제111구현예에서, 상기 설명서는 상기 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포의 피크 수가 상기 치료 범위 내에 피크 CAR+ T 세포의 가장 낮은 수 이하인 경우에, CAR+ T 세포 확장 또는 증식을 증가시킬 수 있는 작용제가 상기 대상체에게 투여된다고 명시하는 것인 키트.
113. 제112구현예에서, 상기 작용제는 CAR-특이적 확장이 가능한 것인 키트.
114. 제112구현예 또는 제113구현예에서, 상기 작용제는 항-이디오타입 항체 또는 CAR에 특이적인 이의 항원 결합 단편, 면역 체크포인트 억작용제, 대사 경로 조절제, 아데노신 수용체 길항제, 키나아제 억작용제, 항-TGFβ 항체 또는 항-TGFβR 항체 또는 사이토카인인 것인 키트.
115. 제109구현예 내지 제111구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포의 피크 수가 상기 치료 범위 내에 피크 CAR+ T 세포의 가장 높은 수 이상인 경우에, CAR+ T 세포 확장 또는 증식을 감소시킬 수 있는 작용제가 상기 대상체에게 투여되는 것인 키트.
116. 대상체 내의 CAR+ T 세포를 포함하는 유전적으로 조작된 세포들의 확장 또는 증식을 감소시킬 수 있는 작용제, 및 대상체를 대상체로부터 수득한 샘플에서 종양 존재량 또는 염증 마커의 체적 측정치의 레벨, 양 또는 농도로 평가하고 상기 레벨, 양 또는 농도가 임계치 레벨을 넘는 경우에 상기 대상체에게 상기 작용제를 투여하기 위한 설명서를 포함하는, 키트로서 상기 샘플은 키메라 항원 수용체 (CAR)을 발현하는 유전적으로 조작된 T 세포를 포함하지 않고 및/또는 CAR을 발현하는 유전적으로 조작된 T 세포의 투여를 받기 전의 상기 대상체로부터 수득되는 것인 키트.
117. 제116구현예에서, 상기 체적 측정치는 직경의 결과물의 합 (SPD), 가장 긴 종양 직경 (LD), 가장 긴 종양 직경의 합 (SLD), 종양 체적, 괴사 체적, 괴사-종양 비 (NTR), 종양 주위의 부종 (PTE) 및 부종-종양 비 (ETR)인 것인 키트.
118. 제116구현예 또는 제117구현예에서, 상기 체적 측정치는 값은 직경의 결과물의 합 (SPD)인 것인 키트.
119. 제116구현예에서, 상기 염증 마커는 C-반응성 단백질 (CRP), 적혈구 침강 속도 (ESR), 알부민, 페리틴, β2 마이크로글로불린 (β2-M), 젖산 탈수소효소 (LDH), 사이토카인 또는 케모카인인 것인 키트.
120. 제119구현예에서, 상기 염증 마커는 LDH인 것인 키트.
121. 제115구현예 내지 제120구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 작용제는 스테로이드인 것인 키트.
122. 제121구현예에서, 상기 스테로이드는 코르티코스테로이드인 것인 키트.
123. 제121구현예 또는 제122구현예에서, 상기 스테로이드는 덱사메타손 또는 메틸프레드니솔론인 것인 키트.
124. 제121구현예 내지 제124구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스테로이드는 각각 포괄적인, 약 1.0 mg 내지 약 40 mg, 약 1.0 mg 내지 약 20 mg, 약 2.0 mg 내지 약 20 mg, 약 5.0 mg 내지 약 25.0 mg, 약 10 mg 내지 약 20 mg, 또는 대략 그 사이의 덱사메타손 또는 이의 등량물의 양으로 투여하기 위하여 제형화되는 것인 키트.
125. 제108구현예 내지 제124구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 CAR은 질병 또는 상태와 연관된 항원에 특이적으로 결합하고 및/또는 상기 질병 또는 상태와 연관된 세포 내에서 발현되는 것인 키트.
126. 제108구현예 내지 제125구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 유전적으로 조작된 세포들은 T 세포, 선택적으로 CD4+ 또는 CD8+ T 세포를 포함하는 것인 키트.
127. 제108구현예 내지 제126구현예 중 어느 하나의 구현예에 기재된 키트를 포함하는, 제조물품.
128. 대상체에게 키메라 항원 수용체 (CAR)로 조작된 세포들의 투여량을 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에게 투약하는 방법으로, 상기 투여량은 결정된 치료 범위 내에서 피크 CAR 세포를 달성하기에 충분하고, 상기 치료 범위는 추정된 반응 확률 및 중증 독성 또는 3등급 이상 독성의 추정된 확률에 기초하여 결정되는 것인 방법.
129. 질병 또는 상태를 가지는 대상체에게, 세포들의 차선의 투여량을 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에게 투약하는 방법으로, 상기 투여량은 결정된 치료 범위 내에서 피크 CAR 세포를 달성하기에 불충분하고, 상기 방법은 피크 CAR+ 세포 확장이 상기 치료 범위 내에 있도록 생체 내에서 상기 CAR+ 세포 확장을 향상시키는 화합물을 투여하는 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
130. 제129구현예에서, 상기 치료 범위는 추정된 반응 확률 및 중증 독성 또는 3등급 이상 독성의 추정된 확률에 기초하여 결정되는 것인 방법.
131. 다음 단계를 포함하는 대상체에게 투약하는 방법:
질병 또는 상태를 치료하기 위하여 세포들의 투여량을, 질병 또는 상태를 가지는 대상체에게 투여하는 단계;
상기 세포들이 치료 범위 이내에 있는 경우에 혈액 내의 피크 CAR 세포들을 모니터링하여 평가하는 단계, 및
상기 대상체가 치료 범위 이내에 있지 않은 경우에, 피크 CAR+ 세포 확장이 상기 치료 범위 내에 있도록 생체 내에서 상기 CAR+ 세포 확장을 향상시키는 화합물을 투여하는 단계를 포함하는 것인 방법.
132. 제128구현예 내지 제131구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 피크 CAR 세포들은 마이크로리터 당 상기 CAR+ 세포들의 수로 결정되는 것인 방법.
133. 제128구현예 내지 제132구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 치료 범위는 상기 독성 확률 곡선 상에서 상기 독성을 유발의 추정된 확률이 20% 이하, 15% 이하, 10% 이하 또는 5% 이하이고 상기 반응을 달성하는 추정된 확률은 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 그 이상인 것인 방법.
134. 제128구현예 내지 제133구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 중증 독성은 3-5 등급의 신경 독성인 것인 방법.
135. 제128구현예 내지 제134구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 반응은 골수 반응인 것인 방법.
136. 제135구현예에서, 상기 골수 반응은 유세포 분석기 또는 IgH 시퀀싱에 의한 것인 방법.
137. 제128구현예 내지 제136구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 질병 또는 상태는 암인 것인 방법.
138. 제137구현예에서, 상기 암은 육종, 암종, 림프종, 비-호지킨 림프종 (NHLs), 이하성 거대 B세포 림프종 (DLBCL), 백혈병, CLL, ALL, AML 및 골수종으로 구성된 군에서 선택되는 것인 방법.
139. 제137구현예에서, 상기 암은 췌장암, 방광암, 대장암, 유방암, 전립선암, 신장암, 간세포암, 폐암, 난소암, 자궁 경부암, 췌장암, 직장암, 갑상선암, 자궁암, 위암, 식도암, 두경부암, 흑색종, 신경내분비암, CNS 암, 뇌종양, 골암, 또는 연조직 육종인 것인 방법.
140. 제128구현예 내지 제139구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 키메라 항원 수용체 (CAR)는 상기 항원에 특이적으로 결합하는 세포 외 항원-인식 도메인과 ITAM을 포함하는 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 것인 방법.
141. 제140구현예에서, 상기 세포 내 신호 전달 도메인은 CD3-제타 (CD3ζ) 사슬의 세포 내 도메인을 포함하는 것인 방법.
142. 제140구현예 또는 제141구현예에서, 상기 키메라 항원 수용체 (CAR)는 추가로 공자극 신호 전달 영역을 포함하는 것인 방법.
143. 제142구현예에서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 CD28 또는 4-1BB의 신호 전달 도메인을 포함하는 것인 방법.
144. 제142구현예 또는 제143구현예에서, 상기 공자극 도메인은 CD28/의 도메인인 것인 방법.
145. 제96구현예에서, 상기 항원은 ROR1, B 세포 성숙화 항원 (BCMA), tEGFR, Her2, Ll-CAM, CD19, CD20, CD22, 메소텔린, CEA, 및 B형 간염 표면 항원(hepatitis B surface antigen), 항-엽산 수용체, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, EGP-2, EGP-4, EPHa2, ErbB2, 3, 또는 4, erbB 이합체들(dimers), EGFR vIII, FBP, FCRL5, FCRH5, GPRC5D, 태아 아세틸콜린 e 수용체, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-알파, IL-13R-알파2, kdr, 카파 경쇄, 루이스 Y, L1-세포 부착 분자, (L1-CAM), 흑색종-관련 항원 (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 흑색종에서 우선적으로 발현되는 항원 (PRAME), 서바이빈, EGP2, EGP40, TAG72, B7-H6, IL-13 수용체 a2 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, 엽산 수용체-a, CD44v6, CD44v7/8, avb6 인테그린, 8H9, NCAM, VEGF 수용체들, 5T4, 태아(Foetal) AchR, NKG2D 리간드들, CD44v6, 이중 항원, 및 일반적인 태그(tag)와 관련된 항원, 암 정소 항원, 메소텔린(mesothelin), MUC1, MUC16, PSCA, NKG2D 리간드들, NY-ESO-1, MART-1, gp100, 종양 태아성 항원, ROR1, TAG72, VEGF-R2, 암배아성 항원(carcinoembryonic antigen, CEA), 전립선 특이 항원, PSMA, Her2/neu, 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, ephrinB2, CD123, c-Met, GD-2, O-아세틸화 GD2 (OGD2), CE7, 윌름스 종양(Wilms Tumor) 1 (WT-1), 사이클린, 사이클린 A2, CCL-1, CD138, 및 병원균-특이 항원에 의해 발현되는 항원들 중에서 선택되는 항원을 특이적으로 인식하거나 결합하는 것인 방법.
146. 제128구현예 내지 제145구현예 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 세포는 T 세포인 것인 방법.
147. 제146구현예에서, 상기 T 세포는 CD4+ 또는 CD8+인 것인 방법.
X. 실시예들
다음의 실시예들은 오로지 설명의 목적으로 포함되며 발명의 범위를 제한하는 것으로 의도되지 않는다.
실시예 1: 고-위험 CLL 환자들에서 피크 CAR T 세포 확장 및 반응 및 신경 독성에 기반한 골수 반응의 확률
재발성 또는 난치성 (R/R) CD19 + 만성 림프성 백혈병(chronic lymphocytic leukemia, CLL)을 앓고 있는 24명의 성인 인간 대상체에게 CD19에 특이적인 키메라 항원-수용체 (CAR)를 발현하는 자가 조직성 T 세포를 투여하고 하기에 기재된 바와 같이 평가 하였다.
CAR은 FMC63, IgG 힌지 영역, 막 횡단 영역 및 인간 41BB 및 CD3제타로부터 유래된 세포 내 신호 전달 영역으로부터 유래된 가변 영역과 함께, CD19에 특이적인 scFv (VL-링커-VH 배치 방향으로)를 포함하였다. 구조체는 CAR 발현의 대리 마커 역할을 하는, 절단된(truncated) EGFR (EGFRt)을 추가로 코딩하였고; EGFRt-코딩 영역은 T2A 스킵 시퀀스(skip sequence)에 의해 CAR 서열로부터 분리하였다. 세포 투여 전에, 환자는 백혈구 제거술을 받았고; CD4+ 및 CD8+ 모집단은 면역 친화성(immunoaffinity)-기반 농축 방법에 의해 선택하고, CAR 구조체를 갖는 바이러스 벡터로 형질 전환하고, 15일 이상 배양액에서 확장하였다.
CAR+ T 세포 주입 최소 48시간 (및 최대 96시간) 전에 시작하여, 대상체는 (a) 에토포사이드(etoposide)와 함께 또는 없이 (2/13 대상체들) 사이클로포스파마이드(cyclophosphamide) (Cy, 60 mg/kg), 또는 (b) 3-5일 동안 매일 플루다라빈(fludarabine) (flu, 25 mg/m2)과 병용하는 (cy/flu, 11/13 대상체들) 사이클로포스파마이드 (Cy, 60 mg/kg).
투여를 위한 세포는 일반적으로 약 1:1의 CAR+ CD8+ T 세포에 대한 CAR+ CD4+ T 세포 비율로 제형화하였다. 모든 대상체에 대하여 성공적으로 치료용 조성물을 제조하였다. 1/13 대상체의 경우, 세포의 목표 투여량 (2x106/kg CAR+) 보다 적은 양을 제조하였다.
대상체에게 3가지 상이한 투여량 레벨 (대상체의 무게 킬로그램 (kg) 당 2x105 (N=4) 2x106 (N=8) 또는 2x107 (N=1)개의 CAR+ T 세포들) 중 하나에서, CD4+ CAR-T 세포에 대한 CD8+ CAR+ T 세포의 비율이 약 1:1인 조성물을 주입하였다. 림프 제거(Lymphodepleting) 요법과 T 세포 주입은 외래 환자 기반 상에서 실시하였다.
사이토카인 방출 증후군 (CRS)의 발병률 및 등급은 [Lee et al, Blood. 2014;124(2):188-95]에 따라 결정하였다. 치료 후에, 대상체는 신경 독성 (혼란, 실어증, 발작, 경련, 혼수 및/또는 정신 상태의 변화를 포함하는 신경학적 합병증)을 평가하고 모니터링하여 등급 1-5 척도를 사용하여 중증도에 따라 등급을 나누었다 (예를 들어, Guido Cavaletti & Paola Marmiroli Nature Reviews Neurology 6, 657-666 (December 2010)을 참고). 3등급 (심각한 증상), 4등급 (생명을 위협하는 증상) 또는 5등급 (사망)은 중증 신경 독성을 나타내었다.
혈액 내 CD4+/EGFRt+ 또는 CD8+/EGFRt+CAR-T 세포의 수에 기초하여, 반응의 추정되는 확률 곡선 및 3-5등급 신경 독성을 나타낼 추정된 확률을 산출하였다 (도 1). 일반적으로, CAR-T 세포의 수가 증가함에 따라, 3-5등급 신경 독성을 나타낼 확률이 증가하는 동안에 반응의 확률이 증가한 후에 안정 상태에 이르렀다.
실시예 2: 항-CD19 CAR-발현 세포의 대상체로의 투여
재발 또는 난치성 (R/R) 비-호지킨 림프종 (NHL)을 앓고 있는 28명의 대상체들에게 항-CD19 키메라 항원 수용체 (CAR)을 발현하는 자가 조직성 T 세포를 투여하였다. 대상체의 통계특성 및 기저 특징들은 표 3에 개시된다. CAR은 설치류 항체로부터 유래된 항-CD19 scFv, 면역글로불린-유래 스페이서, CD28로부터 유래된 막관통 도메인, 4-1BB로부터 유래한 공자극 영역, 및 CD3-제타 세포 내 신호 전달 도메인을 함유하였다. 자가 조직성 CAR-발현 T 세포를 생성하기 위하여, 각각의 대상체들로부터의 백혈구 성분 채집술 샘플에서 면역 친화성-기반 농축으로 T 세포를 단리하고, 활성화 및 항-CD19 CAR을 인코딩하는 바이러스 벡터로 형질도입한 후, 확장시켰다 (CD8+ CAR+ 세포에 대한 CD4+의 대략 1:1 비율의 표적 비율로)
Figure pct00003
CAR-발현 T 세포의 투여 전에, 3일 동안 매일 30 mg/m2 플루다라빈 및 3일 동안 매일 300 mg/m2 사이클로포스파마이드를 대상체에게 처리하였다. 동결 보존된 세포 조성물을 정맥 내 투여하기 전에 해동시켰다. 치료학적 T 세포 투여량은 대략 1:1의 표적 비율로 제형화된 CD4+ CAR+ 세포 집단 및 제형화된 CD8+ CAR+ 집단을 투여함에 의한 특정된 (defined) 세포 조성물로서 투여하였다. 그리고 나서 d=0에, 대상체들은 정맥 내 주입에 의한 5 x 107 (DL1) 또는 1 x 108 (DL2) CAR-발현 T 세포의 단일-투여량 또는 두 배의 투여량 일정 (CD4+ CAR-발현 T 세포 및 CD8+ CAR-발현 T 세포, 각각의 분리된 주입을 통한 각각의 단일 투여량)으로 처리하였다.
다양한 투여량 일정의 CAR-T 세포 치료제로 치료된 대상체들에서 다양한 치료-응급 부작용 사건의 존재 또는 부재를 평가하였다 (표 4 및 표 5). 표 5에서 볼 수 있듯이, 어떠한 중증의 사이토카인 방출 증후군 (sCRS)(3-5등급)은 관찰되지 않았고; 대상체의 36% (10/28)에서 사이토카인 방출 증후군 (CRS)이 관찰되었다. 3-4등급의 신경 독성이 14% (4/28)의 대상체에서 관찰되었고 18% (5/28)의 대상체들이 임의 등급의 신경 독성을 나타내었다. 2등급 CRS 또는 신경 독성의 조기 개시에 대하여 1명의 대상체가 토실리주맙으로 치료받았고 4명의 환자들은 덱사메타손을 받았다. 6명의 대상체들은 예방적 항-경련제를 받았다.
Figure pct00004
Figure pct00005
상기 그룹 내 대상체들은, 단일-투여량 DL1의 마지막 CAR+ T 세포 주입 후 진행 중인 연구에서 특정 시점까지의 기간에 걸쳐 관찰된, 최상의 총 반응에 대하여 평가되었다. 총 반응의 결과를 표 6에 도시된다. 이하성 대형-세포 림프종 (DLBCL) 코호트에서 단일-투여량의 DL1으로 치료된 20명의 대상체 중, 총 반응률 (ORR) 80% (16/20)가 관찰되었고 대상체 중 60% (12/20)가 완전 관해 (CR)의 증거를 나타내었다. 대상체 중 20% (4/20)는 부분적인 반응 (PR)의 증거를, 그리고 대상체의 20% (4/20)는 진행성 질병 (PD)의 증거를 나타내었다. CAR+ T 세포 투여 전에 화학적 난치였던 대상체들 (마지막 화학-함유 요법 다음에 안정하거나 진행성 질병을 나타냈거나 자가 이식성 SCT 후 12개월 이하에 재발)에서, 총 반응률은 83%였다 (10 ORR, 7 CR, 3 PR, 2 PD, n=12). 난치였던 대상체들 (마지막 치료 다음에 완전한 완화 보다는 이하이었으나 화학적 난치로 간주되지는 않음) 중에서는, 총 반응률이 77%였다 (13 ORR, 9 CR, 4 PR, 4PD, n=17).
Figure pct00006
평가시 2가지 투여량의 DL1으로 치료받았던 3명의 DLBCL 대상체들 중, 2명은 부분적인 반응 (PR)을 나타내었고, 1명은 진행성 질병 (PD)을 나타내었다. 평가시 단일-투여량의 DL2로 치료받았던 2명의 DLBCL 대상체들 중에서, 두 대상체들 모두 CR을 달성한 것으로 관찰되었다. 평가시 단일-투여량의 DL1으로 치료된 2명의 총 대상체들을 포함한 MCL 코호트 중에서는, 1명의 PR 및 1명의 PD가 관찰되었다. 더블-히트 (double-hit) 대상체 2명, 트리플-히트 대상체 3명, 및 더블-발현자 DLBCL 4명이 치료받았고, 모두 반응을 달성하였다 (7 CR, 2 PR).
말초 혈액 중의 CAR+ T 세포의 수를, 치료-후 특정 시점에 전이 유전자-특이적 시약으로 세포를 반응시켜 측정하였다. 주입-후 특정 시점에 측정된 말초 혈액 내 CD3+/CAR+ T 세포의 수를 최고 총 반응에 따라 그룹화한, DL1의 단일 투여량으로 치료된 대상체들에 대하여 도 2a에 도시하였다. PD에서보다 반응자들 (CR/PR)에서 더 높은 CD3+/CAR+ T 세포 피크가 관찰되었다. 도 2b-2d는, 반응의 지속성에 의하여 그룹화된 반응인, 3개월에 연속된 반응 (CR/PR) 또는 PD를 달성한 대상체들에서 CD3+/CAR+ T 세포, CD4+/CAR+ T, 및 CD8+/CAR+ T 세포 레벨 (세포/μL 혈액; 평균 ± SEM)을 보여준다.
반응자들 (CR/PR) 및 PD에 대한 Cmax (CAR+ 세포/혈액 μL) 및 곡선 아래의 면적 (AUC)을 측정하였고 표 7에 도시하였다. 결과는, 시간 경과에 따라 그리고 피크 확장에서, 지속적인 반응은 더 높은 CD3+/CAR+ T 세포 레벨과 관련되어 있다는 결론과 일치하였다.
Figure pct00007
AUC 0 -28 = 0 내지 28일에 표시된 CAR+ 세포 집단에 대한 마이크로리터 당 수
실시예 3: 재발 및 난치성인 비- 호지킨 림프종 (NHL)을 앓고 있는 대상체로의 항-CD19 CAR-발현 새포의 투여
A. 대상체 및 치료
CD19에 특이적인 키메라 항원-수용체 (CAR)를 발현하는 자가 이식 T 세포를 함유하는 치료적 CAR+ T 세포 조성물을 B 세포 악성 종양이 있는 대상체에게 투여하였다. 이하성 거대 B 세포 림프종 (DLBCL), 신생 또는 변형 지연성 림프종 (NOS), 원발성 종격동 거대 b-세포 림프종 (PMBCL) 및 여포성 림프종 등급 3b (FLG3B)를 포함하는, 재발성 또는 난치성 (R/R) 공격적 비-호지킨 림프종 (NHL)을 가지는 55명의 성인 인간 대상체들에 대한 진행중인 연구에서 특정 시점을 통하여 평가한 결과가 이 실시예에 기재되어 있다. 치료된 대상체들 중에는 Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) 점수가 0과 2 사이인 대상체들이 있었다 (추적 중앙값 3.2 개월). 55명의 대상체들은 맨틀 세포 림프종 (MCL)을 가지는 대상체에는 포함되지 않았다. 이전의 동종 이계 줄기 세포 이식 (SCT)에 근거하여 제외된 대상체는 없었고, 성분 채집술이 필요한 최소한의 절대 림프구 수 (ALC)도 없었다.
결과는 특정 시점에서 55명의 대상체들의 핵심 서브 세트 (열악한 기능 상태 (ECOG 2), 변연부 림프종 (MZL)로부터 변형된 DLBCL 및/또는 만성 림프구성 백혈병 (CLL Richter's)을 가지는 대상체들을 제외한 서브 세트)(핵심 코호트)에 대하여 개별적으로 평가되었다.
전체 및 핵심 코호트의 통계특성 및 기저 특징을 표 8에 나타내었다.
Figure pct00008
투여되는 치료용 T 세포 조성물은 치료될 각 대상체로부터의 백혈구 성분 채집 샘플로부터 CD4+ 및 CD8+ 세포의 면역 친화성-기반 농축을 포함하는 공정에 의해 생성되었다. 단리된 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 활성화시키고 항-CD19 CAR을 인코딩하는 바이러스 벡터로 형질도입한 다음, 조작된 세포 집단의 증식 및 냉동 보존을 수행하였다. CAR은 설치류 항체로부터 유래하는 항 CD19 scFv, 면역글로불린-유래 스페이서, CD28 유래의 막관통 도메인, 4-1BB 유래 공자극 영역 및 CD3-제타 세포 내 신호전달 도메인을 함유하였다.
동결보존된 세포 조성물을 정맥 내 투여하기 전에 해동시켰다. 치료적 T 세포 투여량은, 대략 1:1의 표적 비율로 투여되는 제형화된 CD4+ CAR+ 세포 집단 및 제형화된 CD8+ CAR+ 집단을 투여함으로써 특정된 세포 조성물로서 투여되었다. 대상체들은 다음과 같은 단일 투여량 또는 2가지 투여량의 CAR-발현 T 세포를 투여받았다 (각각의 단일 투여량은 CD4+ CAR-발현 T 세포 및 CD8+ CAR-발현 T 세포를 분리 주입함에 의함): 5 x 107 총 CAR-발현 T 세포 (n=30)를 함유하는 투여량 레벨 1의 단일 투여량, 각 투여량은 대략 14일 파트로 투여되는 DL1의 두 배 투여량 (n=6, 투약 오류로 인하여, 2가지-투여량 일정을 통하여 두 번의 DL2 투여량을 부주의로 받은 1명의 대상체를 포함), 또한 1 x 108 (DL2) 총 CAR-발현 T 세포를 함유하는 투여량 레벨 2 (DL2)의 단일 투여량 (n=18).CAR+ T 세포 주입 3일 전에 개시하여, 대상체들은 플루다라빈 (flu, 30 mg/m2) 및 사이클로포스파마이드 (Cy, 300 mg/m2)로 림프구 고갈 화학요법을 받았다.
B. 안전성
CAR-T 세포 치료제의 치료-응급 부작용 사건 (TEAE)의 존재 또는 부재를 평가하였다. 도 3은 대상체들의 20% 이상에서 발생하는 실습 이상 및 TEAE를 경험한 것으로 관찰된 대상체의 백분율을 도시한다. 도 3에 도시된 TEAE에 부가하여, 3-4등급 환자의 5% 이상에서 다음의 사건 조건들이 관찰되었다: 백혈구 세포 수 감소 (13.6%), 뇌증 (12%), 고혈압 (7%). 관찰된 독성의 정도는 투여량 레벨 1 내지 2에서 일관적이었다.
CAR-T 세포 치료제의 투여 다음에 치료-응급 부작용 사건 (TEAE)의 존재 또는 부재를 평가하였다. 국립 암 연구소 (National Cancer Institute)-공통 독성 기준 (CTCAE), 버전 4.03 (NCI-CTCAE v4.03)에 따라 1-5 점 스케일로 등급화하여, 대상체들을 또한 신경독성 (혼란, 실어증, 뇌증, 근경련 발작, 경련, 무기력 및/또는 정신 상태 변화를 포함하는 신경학적 합병증)에 대하여 평가하고 모니터링하였다. [Common Terminology for Adverse Events (CTCAE) Version 4, U.S. Department of Health and Human Services, Published: May 28, 2009 (v4.03: June 14, 2010)]; 및 [Guido Cavaletti & Paola Marmiroli Nature Reviews Neurology 6, 657-666 (December 2010)] 참조. 사이토카인 방출 증후군 (CRS) 또한 중증도에 기초하여 등급화되어, 측정하고 모니터링하였다.
전체 코호트 대상체 중 84%에서 중증 (3등급 이상) 사이토카인 방출 증후군 (CRS) 및 중증 신경 독성은 관찰되지 않았다. 게다가, 전체 코호트 대상체 중 60%가 어떠한 등급의 CRS 또는 신경 독성도 나타내지 않았다. 투여량 레벨 사이에, 어떠한 CRS, 신경 독성 (NT), sCRS 또는 중증 신경 독성 (sNT)의 발생률 차이는 없었다. 표 9는 CAR-T 세포의 최소 하나의 투여량 28일 후의 환자에서의 사이토카인 방출 증후군 (CRS) 및 신경 독성 부작용 사건의 발생률을 요약하고 있다. 표 9에서 볼 수 있듯이, 단일 투여량의 DL2 또는 2 투여량의 DL1을 투여받은 어떤 대상체에서도 sCRS (3-4등급)이 관찰되지 않았다. 중증 신경 독성 또는 중증 CRS (3-4등급)가 대상체 전체 코호트의 16% (9/55)에서 관찰되었고, 핵심 서브 세트의 대상체의 18% (8/44)에서 관찰되었다. 대상체들 중 11% (n=6)가 토실리주맙을, 대상체들 중 24% (n=13)가 덱사메타손을 투여받았다. 전체 코호트 내 ECOG2 대상체들 중에서, 관찰된 CRS 및 신경 독성률은 각각, 71%와 29%였다.
Figure pct00009
도 4는 3.B.1에서의 분석에 대한 CRS 및/또는 신경 독성의 발병까지 관찰된 시간을 도시한 Kaplan Meier 곡선을 보여준다. 나타낸 바와 같이, CRS 발병 및 신경독성 발병까지의 시간의 중앙값은 각각 5일 및 11일이었으며, 세포 치료제의 투여 개시 후 72시간 이내에 CRS 발병을 경험한 환자는 11%에 불과했다. 1등급으로 CRS 및 신경 독성이 해소되기까지의 시간 중앙값은 각각 5일과 7일이었다. CRS 및 신경 독성의 완전한 해소까지의 시간 중앙값은 각각 5일과 11일이었다. 그 결과는 대상체들에서 CRS 또는 신경 독성의 조기 발병율이 낮았다는 결론과 일치했다.
C. 치료에 대한 반응
CAR+ T 세포의 투여 후 1, 3, 6, 7, 12, 18개월 후에 종양 존재량을 평가하는 단계를 포함하는, 반응에 대하여 대상체들을 모니터링하였다. 반응률이 표 10에 열거되어 있다. 높은 지속적인 반응률은, 강도 높게 전처리된 대상체들 또는 나쁜 예후 및/또는 재발성 또는 난치성 질병이 있는 대상체들을 포함하였던 코호트에서 관찰되었다. 핵심 (n=44) 코호트의 모든 투여량들에 걸친 대상체들에 대하여, 관찰된 전체 반응률 (ORR)은 86%였고 관찰된 완전한 반응률 (CR)은 59%였다. 핵심 코호트에서 3개월에, 전체 반응률 (ORR)은 66%였고; 그 핵심 코호트 중에서 3-개월 CR률은 50%였다. 상기 핵심 코호트에서, 3개월 ORR은 투여량 레벨 1에서 58% (11/19)였고 투여량 레벨 2에서 78%였으며; 3개월 CR률은 투여량 레벨 1에서 42% (8/19), 투여량 레벨 2에서 56% (5/9)이었고, 이는 치료 결과에 대해 제안된 투여량 반응 효과와 일치하였다. 게다가, 상기 결과는 투여량과 반응 지속성 간의 관계와 일치한다.
Figure pct00010
DL1S: DL1 1-투여량 일정; DL2S: DL2 1-투여량 일정; DL1D: DL1 2-투여량 일정;
a PD, 사망, 또는 28일 리스테이징 스캔 사건이 있는 환자들을 포함하였다. 데이터 스냅샷 <28일 이전의 치료된 환자들은 포함하지 않았다. b 분모는 PD 또는 사망 평가의 3개월 또는 이전에 효능 평가의 날 이전, 3개월 이상 이전에 CAR T 세포 치료제를 받았던 환자들의 수이다.
c 투약 오류로 인하여 DL2 2번의 투여량으로 치료된 환자 1명이 포함되어 있다.
전체 코호트 및 핵심 코호트에서 대상체의 다양한 하위 그룹들 사이의 전반적인 반응률을 도 5a 및 5b에 각각 도시되어 있다. 위험이 낮은 DLBCL 하위 그룹에서는 일반적으로 반응률이 높다. 초기의 난치성 또는 화학적 난치성을 갖거나 전에 CR을 결코 달성한 적이 없는, 더블/트리플 히트 분자 하위 유형 환자에서 3개월에 50% 이상의 ORR이 관찰되었다. 2명의 환자에서 림프종에 의한 중추 신경계 침범의 완전한 해소가 관찰되었다.
평가의 특정 시점 이전에 6개월 이상 치료된 대상체들 중, 3개월에 반응을 보인 10명의 환자 중 9명 (90%)이 6개월에도 반응을 보였다. 평가 시점에서, 반응한 핵심 서브 세트의 97% 대상체들은 생존해 있었고 추적 관찰에서 추적 관찰 기간의 중앙값은 3.2개월이었다.
대상체들의 전체 및 핵심 코호트에 대한 반응 및 총 생존의 기간에 대한 결과 (최고 총 반응 (무-반응자, CR/PR, CR 및/또는 PR)에 의해 그룹화됨)를 도 6a 및 6b에 각각 나타내었다. 나타난 바와 같이, CR인 대상체들에서 반응의 지속성 증가를 나타내면서 생존의 연장이 반응자들에게서 관찰되었다. 열악한 결과 상태인 대상체들 5/6 명이 종료되었지만 (ECOG 2), 3개월에 반응한 모든 환자는 평가 시점에 생존해 있었다.
C. 혈액 내의 CAR+ T 세포의 평가
약물 동력학적 분석을 치료-후 다양한 시점에서 말초 혈액 내의 CAR+ T 세포의 수를 평가하기 위하여 수행하였다. 도 7a에 도시된 바와 같이, 로그 스케일로 플로팅된 세포수/μL 혈액으로 측정된 (중앙값 ± 사분위수) CD4+ 및 CD8+ CAR-발현 세포는 투여된 두 투여량 레벨 모두에서 평가 과정을 통하여 검출되었다.
낮은 투여량 레벨과 비교하여, 더 높은 투여량 레벨을 투여받은 대상체들에서, 독성의 증가가 관찰되지 않고 곡선 아래의 면적 (AUC)(혈액 내에서 시간 경과에 따른 CD8+ CAR+ 세포 수)의 중앙값 증가가 관찰되었다. 비반응자 (PD)에서 보다 반응자 (CR/PR)에서 더 높은 피크의 CD8+/CAR+ T 세포 노출이 관찰되었고; 질병이 진행된 대상체에서도 3개월 및 6개월까지를 포함하여 평가 시간에 걸쳐 세포의 지속성이 관찰되었다 (도 7b). 상기 결과는 열악한 반응의 대상체들에서도, 치료가, 조작된 세포의 장기 노출 및 지속성이라는 결과를 낳는다는 결론과 일치했다. 일부 구현예에서, 예를 들어, 재발 또는 질병 진행 다음에, 예를 들어 말초 혈액에서의 세포 레벨으로 측정되는 바 대상체에서 조작된 세포가 지속되는 시점에 면역 체크 포인트 조절자 또는 기타 면역 조절 작용제의 투여와 같은 조합 접근이 사용된다. 일부 측면에서, 장기간 지속된 세포는, 다른 작용제 또는 치료의 투여 다음에 재-증식 또는 활성화되고 및/또는 항-종양 기능을 나타낸다. 신경독성이 나타난 대상체의 혈액에서 더 높은 CD4+ 및 CD8+ CAR+ T 세포 수의 중앙값이 시간 경과에 따라 일반적으로 관찰되었다 (도 7c).
D. 혈액 분석물 및 신경독성
CAR+ T 세포의 투여 전에, 대상체의 혈액에서 측정된, 사이토카인을 포함하는, 다양한 전-처리 혈액 분석물을 측정하였다. 통계학적 분석을 이용하여 신경 독성 발병 위험에 대한 잠재적인 상관관계를 평가하였다.
도 8은 CAR+ T 세포 치료제 다음에 신경 독성을 발병하지 않았던 대상체들 대 신경독성을 발병한 대상체들에서, 평가된 분석물의 중앙값 레벨을 단위로 (LDH, U/L; 페리틴, ng/mL; CRP, mg/L; 사이토카인, pg/mL) 보여준다. LDH, 페리틴, CRP, IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α, IFN-α2, MCP-1 및 MIP-1β를 포함한 특정 혈액 분석물의 레벨은 신경독성의 발병 위험 레벨과 관련된 것으로 관찰되었다 (다중도 조정없이, Wilcoxon p 값 < 0.05). 특히, 상기 결과는, 일부 구현예에서 질병 존재량에 대한 대리자인 LDH의 전-처리 레벨이 잠재적인 신경독성 위험 평가 및/또는 위험-적응 투여량 또는 특정 대상체의 치료 조정에 유용할 수 있다는 결론과 일치하였다. 또한, CAR-T 세포 조성물 투여 전의 종양 존재량은 신경독성의 발병 위험과 상관 관계가 있었다 (Spearman p 값 <0.05). 일부 측면에서, LDH 레벨은, 단독으로 및/또는 다른 전-처리 파라미터와 조합하여 평가될 수 있는데, 예를 들어 질병 존재량에 대한 다른 척도 또는 지표, 예를 들어 결과물 치수의 합 (sum of product dimensions, SPD)과 같은 체적 종양 측정 또는 다른 CT-계 또는 MRI-계 질병 존재량의 체적 측정이다. 일부 측면에서, 질병 존재량을 나타내는 하나 이상의 파라미터가 평가되고, 일부 상황에서는 상기 T 세포 치료제 다음에 신경독성의 발병 위험의 존재, 부재 또는 정도를 나타낼 수 있다. 일부 측면에서, 상기 하나 이상의 파라미터는 LDH 및/또는 체적 측정 종양 측정을 포함한다.
도 9는 전체 및 핵심 코호트 내의 개별 대상체들에 대한, 무-진행 시간 (개월)을 플로팅한 그래프를 도시한다. 각 막대는 1명의 환자를 나타낸다. 음영은 최고 총 반응을 나타내고 (각 경우에, 달리 명시되지 않은 한, 1개월에 달성됨); 텍스처는 투여량을 나타낸다 (무지 = 투여량 레벨 1 (DL1), 단일 투여량; 사선 빗금 = 투여량 레벨 2 (DL2), 단일 투여량; 수직 빗금 = 투여량 레벨 1 (DL1), 2 투여량). 수평 화살표는 진행 중 반응을 나타낸다. 특정한 개별 대상체들은 처음에는 안정한 질병 (SD) 또는 부분적 반응 (PR)을 나타내는 것으로 평가되었고 (예를 들어, 1개월에), 나중에 PR (예를 들어, SD에서 PR로 전환) 또는 CR을 달성한 것으로 관찰되었다. 이러한 경우에, 각 환자 막대의 음영은, 밝힌 바와 같이, 최고 총 반응을 나타내고, 각 대상체 막대와 함께 점무늬 (달성된 반응에 대하여 동일한 음영 일치도) 는 각 SD, PR 및/또는 CR이 언제 그 대상체에서 발생하였는지를 나타낸다. 2명의 환자에서, 림프종에 의한 CNS 침범의 완전한 해소가 관찰되었다. 1명의 대상체에서, CAR+ 세포가 재발 후 생검 다음에 증식한 것으로 관찰되었다.
실시예 4: 맨틀 세포 림프종 ( MCL )을 앓는 대상체로의 항-CD19 CAR-발현 세포의 투여
실시예 1에 기재된 바와 같이 생성시킨, CD19에 특이적인 키메라 항원-수용체 (CAR)를 발현하는 자가 조직성 T 세포를 함유하는 치료적 CAR+ T 세포 조성물을 한 가지 라인의 요법에 실패한 맨틀 세포 림프종 (MCL) 인간 대상체 4명에게 투여하였다. 동결보존된 세포 조성물을 정맥 내 투여하기 전에 해동시켰다. 치료용 T 세포 조성물을, 대략 1:1의 표적 비율로 투여되는 동일한 대상체 유래 CAR+ 조작된 T 세포의 CD4+ 및 CD8+ 제형화 집단으로 특정된 조성물 세포 생성물로서 투여하였다. 대상체들은 5 × 107 CAR-발현 T 세포를 함유하는 투여량 레벨 1 (DL1)의 단일 투여량으로 CAR-발현 T 세포의 투여량을 투여받았다 (CD4+ 및 CD8+ CAR-발현 T 세포의 분할 투여량으로서). CAR+ T 세포 주입 3일 전에 시작하여, 대상체들은 플루다라빈 (flu, 30 mg/m2)과 사이클로포스파마이드 (Cy, 300 mg/m2)를 이용한 림프구 고갈 화학요법을 받았다.
실시예 1에 기재된 바와 같이, 대상체들을 반응 및 독성에 대하여 모니터링하였다. 어떠한 대상체에서도 CRS 또는 신경 독성이 관찰되지 않았다. 치료받은 4명의 대상체들 중, 2명의 대상체가 PR (지속성 없음)을 달성하였고 2명의 환자는 진행성 질병이었다.
실시예 5: 재발성 및 난치성 비- 호지킨 림프종 (NHL) 대상체에서의 항-CD19 CAR-발현 세포의 투여 후 약물 동력학, 약물력학 및 혈액 분석물의 추가적인 평가
상기 실시예 3에 기재된 임상 연구의 후속 시점에서, 환자들의 약물동력학 및 약물력학 파라미터와 혈액 분석물이 평가되었다.
A. 대상체, 반응 및 안전성
이 실시예에서 제시되는 이 시점에서의 분석은 항-CD19 CAR-발현 세포를 투여받았던 전체 DLBCL 코호트에서의 총 91명의 대상체들 (반응에 대하여 평가된 88명 (핵심 코호트로부터 34명) 및 안전성에 대하여 평가된 91명)에 대한 평가에 기초한다. 표 11에 나타나 있듯이, 객관적인 반응률 (ORR)은 74%였고, 완전한 반응 (CR)을 보인 52%의 대상체들을 포함하였다. 임의 등급의 사이토카인 방출 증후군 (CRS)의 발생률은 35%였고, 1%는 중증의 CRS였으며; 임의 등급의 신경 독성 (NT)의 발생률은 19%였고, 1%는 중증의 NT였다.
Figure pct00011
B. 약물동력학적 평가
평가 가능한 PK를 가지는 DLBCL 코호트에서 86명의 대상체들의 투여 전의 시점 (전-처리 또는 전-림프구 고갈 화학요법 (LDC)) 및 처리-후 다양한 시점 (1일과 같은 투여의 날로)에서 말초 혈액 및 골수에서 CAR+ T 세포의 수를, 대리 마커로서 사용되는 절단된 수용체에 대하여 특이적인 항체를 사용하는 유세포 분석기, 및 키메라 항원 수용체 (CAR)을 인코딩하는 백터 내에 존재하는 마멋 간염 바이러스(woodchuck hepatitis virus) 전사-후 조절 요소 (WPRE)에 대하여 특이적인 프라이머를 사용하는 정량적인 중합효소 연쇄 반응 (qPCR)에 의해 측정하였다. 0일에서 28일 사이의 지시된 CAR+ 세포 집단에 대한 마이크로리터 당 플로팅 수 곡선 아래의 면적 (AUC0 - 28)과 CAR+ 세포의 피크 혈액 농도 (Cmax: CAR+ 세포/혈액 μL)를 평가하였다. B 세포 무형성은 말초 혈액에서 CD19로 염색하여, 유세포분석기로 평가하였다. 사이토카인은 멀티플렉스 사이토카인 분석을 사용하여 측정하였다. 안전성 분석을 위해, 서로 다른 레벨의 투여량을 받는 모든 대상체의 데이터를 수집하였다. 반응 분석을 위해, 데이터는 투여량 레벨에 의해 층화되었다. 통계 분석은 다중성 조정이 없는 양면성이였다.
도 10a는 qPCR 또는 qPCR에 의해 평가된 바와 같이, 다양한 지시된 시점에서의 혈액의 마이크로리터 당 검출된 CAR T 세포의 수를 나타낸다. 도 10b는 11일 ± 3일에 골수의 마이크로리터 대 혈액의 마이크로리터 당 CAR+ 세포를 나타낸다. 도 10a에 나타난 바와 같이, 대상체로부터 수득한 샘플에서 CAR-발현 세포의 레벨이 유세포 분석기-기반 분석 및 qPCR-분석에 의해 관찰되었다. 도 10b에 나타난 바와 같이, PK 결과를 평가한 모든 대상체 (각각 유세포 분석기 및 qPCR의 경우 각각, n=87 및 85)는 혈액 및 골수에서 검출 가능한 수의 CAR-발현 세포를 나타내었다. 결과는 CAR+ T 세포가 골수 및 혈액에 대하여 유사하게 이동하였다(traffick)는 관찰과 일치하였다.
CD4+ 및 CD8+ CAR 발현 세포의 시간에 따른 레벨 (AUC0 -28 및 Cmax에 의해 평가된 바와 같은)을 다음과 같은 상이한 환자 하위 그룹에서 비교하였다: DL1에서 CAR-발현 T 세포를 받은, 소포성 림프종으로부터 신생 또는 변형된 이하성 거대 B 세포 림프종 (DLBCL, NOS; N=27), 변형된 소포성 림프종 (tFL; N=10), 변연부 림프종 또는 만성 림프구 백혈병으로부터 변형된 DLBCL (tMZL/tCLL; N=4), 또는 맨틀 세포 림프종 (MCL; N-5). 도 11a 및 도 11b에 나타난 바와 같이, AUC0 -28 및 Cmax은 비-핵심 서브 세트에서 낮은 경향이 있는 CD4+ 및 CD8+ CAR 발현 세포의 확장을 가지는, 상이한 질병 하위 그룹에서의 대상체들 중에서 다양하였다.
C. 투여량 레벨에 의한 약물동력학적 평가
CD3+, CD4+ 및 CD8+ CAR-발현 세포에 대한 AUC0 -28 및 Cmax를 또한 투여량 레벨 1 (DL1) 및 투여량 레벨 2 (DL2)를 받은 적이 있는 대상체에 대하여 핵심 코호트에서 비교하였다 (DLBCL, NOS 또는 높은 등급의 B-세포 림프종 (더블/트리플 히트)을 가진 대상체; N = 65). 도 12a 및 도 12b 및 표 12에서 나타난 바와 같이, DL1을 받은 대상체들과 비교하여, DL2를 받은 대상체들에서 CD3+, CD4+ 및 CD8+ CAR-발현 세포에 대한 AUC0 -28 및 Cmax의 높은 중앙값이 관찰되었다. 유사하게, DL2를 받은 대상체들에서 높은 확장의 경향이 전체 DLBCL 코호트에서 관찰되었다. 3개월에 반응의 높은 지속성 (DOR) 또한 DL1을 받은 대상체들과 비교하여, DL2를 받은 대상체들에서 독성의 증가 없이, 관찰되었다. CD4+ 및 CD8+ CAR+ 세포에서 Cmax (Tmax)에 대한 중앙 시간은 DL1 및 DL2을 받은 대상체들 사이에서 유사하였다.
증가된 CAR+ T 세포 노출은 DL2 대 DL1에서 관찰되었으며, 이는 DL2 대상체에서 증가된 독성 없이 반응 지속성이 증가한 것과 일치한다.
Figure pct00012
D. 지속성
각각, 검출 가능한 CD3+, CD4+ 또는 CD8+ CAR-발현 세포 레벨 및 혈액에서 검출되는 CD19+ B-세포 레벨에 기초하여, CAR+ T 세포를 투여받았던 DLBCL 평가 대상체들에서 다양한 시점에 CAR-발현 세포 및 CD19+ B-세포 무형성증 (CD19+ B 세포의 부재 또는 낮은 숫자)의 지속을 평가하였다. 그 결과를 표 13에 나타내었다. 진행시 평가된 대상체들 (n=37) 중에서, 중앙값 0.17 세포/μL의 CD4+ CAR-발현 세포 (범위, 0-65.5 세포/μL) 및 중앙값 0.15 세포/μL의 CD8+ CAR-발현 세포 (범위, 0-131.8 세포/μL)가 관찰되었다. 재발시 (CR/PR을 달성한 후 진행) 평가된 대상체들 (n=12) 중에서, 중앙값 0.17 세포/μL의 CD4+ CAR-발현 세포 (범위 0-35.1 세포/μL) 및 중앙값 0.20 세포/μL의 CD8+ CAR-발현 세포 (범위, 0-131.8 세포/μL)가 관찰되었다. 12개월에 DLBCL인 평가 가능한 대상체의 75%에서 CAR-발현 세포의 장기 지속성이 관찰되었다. B 세포 무형성증의 장기 지속성 또한 12개월에 대상체의 75%에서, 그리고 재발 상태와 무관하게 대상체에서 관찰되었다. 그 결과는 항-CD19 CAR-발현 세포가 대부분의 대상체들에서 장기간의 지속성을 나타내었다는 결론과 일치하고, 심지어 재발 환자에서도 계속되는 낮은-레벨의 질병 조절에 대한 가능성을 제시한다.
재발한 대상체들 중에서, 91.7% (11/12)는 재발 당시 혈액에서 CAR-발현 세포가 검출 가능하였다. 이러한 결과는, 조합 요법 또는 일부 구현예에서의 다른 개입이, 소진될 수 있는 등의 CAR-발현 세포를 강화 및/또는 부양하는데 사용될 수 있다는 결론과 일치한다.
Figure pct00013
E. 약물동력학적 평가와 독성
CD4+ 및 CD8+ CAR-발현 세포에 대한 AUC0 -28 및 Cmax를 또한 임의의 등급 (이 평가에서는 1-4등급; 5등급 CRS 또는 NT는 관찰되지 않음)의 사이토카인 방출 증후군 (CRS) 또는 신경 독성 (NT)을 갖는 대상체들을 임의의 등급의 CRS 또는 NT를 나타내는 것으로 평가되지 않는 대상체들과 비교하였다. CD4+ CAR+ AUC0 -28 (Q1, Q3) 중앙값은 CRS (0등급)가 없는 것에 대하여 59 (18, 210), 및 임의의 CRS (1-4등급)에 대하여 267 (91, 1510) (p = 0.001); CD8+ CAR+ AUC0 -28 (Q1, Q3) 중앙값은 CRS (0등급)가 없는 것에 대하여 310 (36, 900), 및 임의의 CRS (1-4등급)에 대하여 605 (174, 5619) (p = 0.021); CD4+ CAR+ AUC0 -28 (Q1, Q3) 중앙값은 NT (0등급)가 없는 것에 대하여 71 (23, 244), 및 임의의 NT (1-4등급)에 대하여 1269 (184, 3057) (p = 0.003); CD8+ CAR+ AUC0 -28 (Q1, Q3) 중앙값은 NT (0등급)가 없는 것에 대하여 304 (43, 799), 및 임의의 NT (1-4등급)에 대하여 2463 (607, 7691) (p = 0.004)이었다. 상기 기재되고 도 13a-13d에 나타난 바와 같이, 시간의 경과에 따른 CD4+ 및 CD8+ CAR-발현 세포의 높은 레벨은 CRS 및 NT와 연관되어 있다.
F. 약물동력학적 평가 및 반응
CD3+ CAR+ 세포/μL (CD3+ Cmax)의 수를 CR, PR 및 PDD의 최고의 전체적인 반응 (BOR)을 갖는 대상체에서 시간의 경과에 따라 평가하였다. 도 14에 나타난 바와 같이, 보다 큰 BOR로의 경향은, 대상체들 사이의 가변성을 갖는, 보다 큰 확장을 갖는 대상체에서 관찰되었다.
G. 혈액 분석물 및 환자 파라미터에 의한 약물동력학적 평가
인터루킨-7 (IL-7), IL-15, 대식세포 염증 단백질 (MIP-1α)을 포함하는, 전-CAR+ T 세포 처리 (전-림프구 고갈 화학요법) 혈장 사이토카인 레벨을 CAR+ CD3+ 혈액 Cmax < 500 (N=7)을 나타내는 대상체와 비교하여, CAR+ CD3+ 혈액 Cmax > 500 (N=55)을 나타내는 대상체에서 평가하였다. 도 15a에 나타난 바와 같이, 높은 전-CAR+ T 세포 처리 사이토카인 혈장 레벨은 CAR+CD3+ Cmax > 500과 연관되어 있는 것으로 관찰되었다.
다양한 플라즈마 사이토카인 (IL-6, IL-10, IL-16, 인터페론 감마 (IFN-γ), 종양 괴사 인자 알파 (TNF-α), MIP-1α, MIP-1β, 단핵구 화학주성 단백질(Monocyte chemoattractant)-1 (MCP-1), 및 CXC 모티브 케모카인 10 (CXCL10))의 피크 레벨 또한 CAR+CD3+ 혈액 Cmax < 500; N=9)를 나타내는 대상체와 비교하여, CAR+ CD3+ 혈액 Cmax > 500 (N=68)을 나타내는 대상체에서 평가하였다. 도 15b에 나타난 바와 같이, 높은 피크 사이토카인 레벨은 CAR+CD3+ Cmax > 500과 연관되어 있는 것으로 관찰되었다 (Wilcoxon P값 < 0.05; 다중성 조정이 없는).
종양 존재량의 지표로서, 전-CAR+ T 세포 처리 (전-림프구 고갈 화학요법 (LCD) 체적 종양 측정 결과물 치수의 합 (SPD)과 시간의 경과에 따른 CAR+ T 노출을 나타내는, CD3+ CAR+ T 세포의 AUC0 -28 사이의 상관관계를 평가하였다. 도 16에 나타난 바와 같이, 0.32의 Spearman 상관과 p = 0.019를 갖는, 기준치 SPD와 CD3+ AUC0 -28 사이의 양의 상관관계가 관찰되었다.
H. 전-처리 환자 파라미터 및 반응 및 독성 결과
사이토카인과 페리틴, C-반응성 단백질 (CRP), D-이합체 (피브린 분해 산물), IL-6, IL-10, IL-15, IL-16 TNF-α, MIP-1α 및 MIP-1β와 같은 염증 마커를 포함하는, 전-CAR+ T 세포 처리 (전-LDC) 분석물 레벨을 임의의 등급 (여기서, 1-4등급) 사이토카인 방출 증후군 (CRS) 또는 신경 독성 (NT)를 가지는 대상체들을 임의의 CRS 또는 NT를 갖지 않는 (0등급) 대상체와 비교하였다. 이 코호트에서, 1-4 등급 CRS를 갖는 대상체들 사이에서, 하나의 CRS 이벤트를 제외한 모든 것이 1등급 또는 2등급으로 결정되었다. 도 17a (CRS) 및 도 17b (NT)에 나타난 바와 같이, 높은 피크 혈장 사이토카인 레벨 및 염증 마커 레벨은 일변량 분석에 기초하여, CRT 및 NT와 연관되어 있는 것으로 관찰되었다 (CRS (p = 0.14)에 대한 페리틴과 CRS (p = 0.09)에 대한 CRP를 제외한 모든 분석물에 대한 Wilcoxon P값 < 0.05).
젖산 탈수소효소 (LDH) 레벨과 종양 존재량의 지표인, 결과물 치수의 합 (SPD)과 같은 체적 종양 측정과 같은, 전-처리 (전-LDC) 환자 파라미터를 CRS 또는 NT를 발병하는 것으로 관찰되지 않은 대상체들과 CRS 또는 NT를 발병하는 것으로 관찰된 대상체들 사이에서 비교하였다. 도 18에 나타난 바와 같이, CRS 또는 NT를 가지는 대상체들은 SPD 및 LHD 레벨과 같은 전-처리 환자 파라미터의 높은 레벨을 나타내고; 이러한 레벨은 일변량 통계 분석으로, CRT 또는 NT와 연관되어 있는 것으로 관찰되었다. CRS 및 NT와 연관된 것으로 관찰된 다른 환자 파라미터에는 진단 이후에 짧은 시간이 포함된다 (CRS 및 NT에 대하여 각각, p = 0.05와 p = 0.09). CRS 또는 NT와 관련이 없는 것으로 관찰된 환자 파라미터에는 나이 (각각, p = 0.19 및 p = 0.54)와 이전 치료 횟수 (각각, p = 0.67 및 p = 0.59)와 환자 체중 (각각, p = 0.35 및 p = 0.44)를 포함하였다.
도 19a는 개별적인 환자들 사이의 전처리 SPD 및 LDH 레벨을 나타내며 (점들; 개개의 점들의 음영은 개별 환자가 어떠한 등급의 신경 독성 (좌측 패널)을 나타내거나 나타내지 않았는지 또는 어떤 등급의 CRS (우측 패널)를 나타내거나 나타내지 않았는지 여부를 나타냄). 도 19a에서, y축과 x축 상의 점선은 SPD ≥ 0 cm2과 LDH ≥ 500을 각각 나타낸다. 도 19a에 도시된 바와 같이, 대략 50 cm2 이상의 SPD, 및/또는 대략 500 이상의 LDH는 NT 및 CRS의 위험과 연관되어 있는 것으로 관찰되었다. 도 19a에서 점선으로 표시된 SPD 및 LDH 레벨보다 높거나 낮은 대상체에서 95% 신뢰 구간 (CI)로, CRS 또는 NT가 발병되는 것에 대하여 계산된 오즈비(odds ratio) 추정치는 도 19b에 도시되어 있다. 1을 넘는 오즈비는 CRS 또는 NT가 발병될 증가된 확률 및 가능성을 나타낸다. 나타난 바와 같이, 50 cm2 이상의 SPD, 및 500 이상의 LDH는 CRS 또는 NT가 발병될 증가된 위험과 연관되어 있는 것으로 관찰되었다. 50 cm2 이상의 SPD, 및 500 이상의 LDH는 임의의 등급의 CRS 및 NT가 발병할 위험이 대략 8배 증가된 것과 연관되어 있는 것으로 관찰되었다.
LDH, 페리틴, CRP, D-이합체, SAA-1, IL-6, IL-10, IL-15, IL-16 TNF-α, IFN-γ, 및 MIP-1α를 포함하는, 종양 존재량 (SPD), 염증 사이토카인 및 다른 혈액 분석물과 연관된 마커들을 포함하는, 다양한 전-처리 (전-LDC) 환자 파라미터를 일변량 통계 분석으로, 3개월에 지속적인 반응이 있거나 없는 대상체들과 비교하였다. 도 20에 나타나 바와 같이, 어떠한 종양 존재량의 마커,염증 또는 염증 사이코카인의 마커는 지속적인 반응을 나타내는 대상체들에서 낮은 것으로 관찰되었다 (SPD를 제외한 모든 파라미터에 대하여 p값 < 0.05 (p = 0.1274)).
I. 피크 혈액 분석물 , 반응 및 독성
사이토카인과 CRP, 혈청 아밀로이드 A1 (SAA-1), IL-2, IL-6, IL-10, IL-15, TNF-α, MIP-1α, MIP-1α, MCP-1, CXCL10 및 C-C 모티프 케모카인 리간드 13 (CCL13)와 같은 염증 마커를 포함하는, 혈액 분석물의 피크 처리-후 혈장 레벨을 1-4등급 사이토카인 방출 증후군 (CRS) 또는 신경 독성 (NT)를 가지는 대상체들과 임의의 CRT 또는 NT를 가지는 것으로 관찰되지 않는 대상체들과 비교하였다. 도 21a (CRS) 및 도 21b (NT)에 나타난 바와 같이, 높은 피크 혈장 사이토카인 레벨 및 염증 마커 레벨은 CRS 및 NT와 연관되어 있는 것으로 관찰되었다 (IL-15을 제외하고, CRS가 없는 vs. 임의의 CRS에 대하여 및 NT가 없는 vs. 임의의 NT에 대하여, Wilcoxon P값 < 0.001 (각각, P= 0.05 및 0.006).
사이토카인과 CRP, SAA-1, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-15, 림포톡신-알파(Lymphotoxin-alpha) (LT-α), TNF-α, IFN-γ, MIP-1α, MIP-1β, MCP-1, CXCL10, 및 변환 성장 인자 베타 (TGF-β)와 같은 염증 마커를 포함하는, 혈액 분석물의 피크 혈장 레벨을 안정한 질병 (SD) 또는 진행성 질병 (PD)을 갖는 대상체들과 (N=17) 비교하여, 완전한 반응 (CR) 또는 부분적인 반응 (PR)의 최고의 전체적인 반응 (BOR)을 갖는 대상체들 (N=57)에 대하여; 또는 3-개월에 CR/PR을 나타내는 대상체들 (N=35)과 비교하여, SD 또는 PD (SD/PD)를 갖는 대상체들 (N=31)에 대하여 평가하였다. 도 22a (최고의 전체적인 반응 (BOR)) 및 도 22b (3개월 반응)에 나타난 바와 같이, 낮은 피크 혈장 사이토카인 레벨 및 염증 마커 레벨은 더 좋은 BOR 및 3개월에서의 반응과 연관되어 있는 것으로 관찰되었다 (Wilcoxon P값 < 0.05; 다중성 조정이 없는).
실시예 6: 피크 CAR T 세포 수에 기초한 반응, 지속적인 반응 및 독성의 확률
반응, 지속적인 반응 및 독성의 확률이 핵심 DLBCL 집단의 평가 가능한 대상체에서, 상기 실시예 3-5에 기재된 임상 연구로부터, 항-CD19 CAR-발현 세포의 투여 후에 CAR+ 발현 세포의 피크 수에 기초하여 계산되었다. 대상체들은 실시예 5의 시점에서 분석된 것들을 포함한다.
반응의 추정된 확률 곡선 (전체적인 반응 비율, ORR: 완전한 반응 (OR) 및 부분적인 반응 (PR)을 갖는 대상체들을 포함하는), 3-개월 반응 (M3 반응; 투여 3개월 후에 CR 및 PR을 포함하는), 임의의 NT, 임의의 CRS, 3-4등급의 NT, 3-5등급의 NT 또는 2-5등급의 CRS는 CD3+, CD4+ 또는 CD8+ CAR-발현 세포들의 최대 혈액 농 도(Cmax; 세포/혈액 μL)에 기초한다. 확률 곡선에 대하여, CD3+에 대한 3개월에 CR/PR 및 CD8+에 대한 3개월에 CR/PR을 제외하고는, 선형 로지스틱 회귀분석 모델 피트가 사용되었고, 이차 모델 피크가 사용되었다.
도 23a (CD3+), 도 23b (CD8+) 및 도 23c (CD4+)에 나타난 바와 같이, 높은 CD3+, CD8+ 및 CD4+ 확장은 CRS, NT 및 반응 (ORR)의 증가된 비율과 상관관계가 있는 것으로 관찰되었다. 높은 CD3+ 및 CD8+ 확장은 높은 Cmax에서 지속적인 반응 (3개월에 CR/PR)의 감소된 확률을 유발하는 것으로 관찰되었다.
결과는 높은 종양 존재량 및 염증 바이오마커의 높은 레벨을 포함하는, 어떤 전-처리 환자 특성이, 증가된 CRS 및 신경 독성과 연관되고, CAR T 세포 확장을 증가시킨다는 결론과 일치한다. 지속성이 낮은 반응은 매우 높은 레벨의 CAR+ 세포 수 또는 확장과 관련이 있으며, CAR 확장의 어떠한 높은 정도는 높게 확장하는 CAR+ 세포의 고갈을 유발한다는 관찰과 일치한다.
본 명세서에서 제공된 일부 구현예에서, 치료 범위 또는 CAR+ T 세포의 노출의 창 또는 피크 CAR+ T 세포 레벨은 투여되는 방법 또는 조성물 또는 투여량에 의해 표적화되거나 달성되고, 투여량은 독성의 위험을 최소화하고 반응의 가능성 및/또는 반응의 지속성을 최대화 또는 최적화하도록 설계된다. 일부 구현예에서, 특정 레벨 이하의 확장 또는 노출을 갖는 대상체는 CAR-T 기능을 증진시키는 것과 같은 하나 이상의 추가적인 중재적 시술(intervention)을 투여될 수도 있다; 일부 구현예에서, 높은 레벨의 노출 또는 확장 (예를 들어, 독성의 위험 및/또는 반응의 지속성의 감소된 가능성과 연관된 것들)을 나타내는 대상체들은 조기 또는 예방 측정, 하나 이상의 관찰된 파라미터에 기초하는 것과 같이, CAR+ T 세포 확장을 감소 또는 제한 및/또는 독성 감소 또는 반응의 지속성의 개선을 목적으로 하는 것들과 같은, 하나 이상의 중재적 시술이 투여될 수도 있다.
이 시점에서 본 연구는, 증가된 CAR+ T 세포 노출과 DL2 대 DL1에서 관찰된 높은 중앙값 증가는, DL2 대상체에서 증가된 독성 없이 반응 (DOR)의 증가된 지속성과 일치한다. 그 결과는 범위를 넘는 CAR+ 세포의 확장이 지속적인 반응과 상관관계가 있지만, 매우 높은 정도의 확장은 높은 독성 위험 및/또는 낮은 반응 지속성과 연관될 수 있다는 결론과 일치한다. 항상성 및 염증 사이토카인 레벨 및 종양 존재량을 나타내는 파라미터와 같은, 기준치 환자 인자와 같은 특정 환자-특이적 인자는 일부 구현예에서 높은 정도의 확장 및 증가된 독성의 위험과 연관될 수 있다.
본 발명은, 예를 들어 본 발명의 다양한 측면을 예시하기 위해 제공되는 특정의 개시된 구현예에 대한 범위 내로 제한하려는 의도는 아니다. 기재된 조성물 및 방법에 대한 다양한 변형이 본 명세서의 기재내용 및 교시로부터 명백해질 것이다. 이러한 변형은 본 개시내용의 진정한 범위 및 사상을 벗어남이 없이 실시될 수 있으며, 본 개시내용의 범위 내에 포함되도록 의도된다.
서열들
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
SEQUENCE LISTING <110> JUNO THERAPEUTICS, INC. LI, He ALBERTSON, Tina HEIPEL, Mark SUTHERLAND, Claire <120> METHODS FOR DETERMINING DOSING IN CELL THERAPY <130> 735042009240 <140> Not Yet Assigned <141> Concurrently Herewith <150> 62/515,523 <151> 2017-06-05 <150> 62/514,765 <151> 2017-06-02 <150> 62/429,738 <151> 2016-12-03 <160> 56 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Spacer (IgG4hinge) <400> 1 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 2 <211> 36 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <223> Spacer (IgG4hinge) <400> 2 gaatctaagt acggaccgcc ctgcccccct tgccct 36 <210> 3 <211> 119 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Hinge-CH3 spacer <400> 3 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gln Pro Arg 1 5 10 15 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 20 25 30 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 35 40 45 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 50 55 60 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 65 70 75 80 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 85 90 95 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 100 105 110 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 115 <210> 4 <211> 229 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Hinge-CH2-CH3 spacer <400> 4 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe 1 5 10 15 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 20 25 30 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 35 40 45 Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 50 55 60 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser 65 70 75 80 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 85 90 95 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser 100 105 110 Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 115 120 125 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 130 135 140 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 145 150 155 160 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 165 170 175 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu 180 185 190 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 195 200 205 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 210 215 220 Leu Ser Leu Gly Lys 225 <210> 5 <211> 282 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> IgD-hinge-Fc <400> 5 Arg Trp Pro Glu Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro Thr Ala 1 5 10 15 Gln Pro Gln Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala Pro Ala 20 25 30 Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys 35 40 45 Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro 50 55 60 Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Tyr Leu Leu Thr Pro Ala Val Gln 65 70 75 80 Asp Leu Trp Leu Arg Asp Lys Ala Thr Phe Thr Cys Phe Val Val Gly 85 90 95 Ser Asp Leu Lys Asp Ala His Leu Thr Trp Glu Val Ala Gly Lys Val 100 105 110 Pro Thr Gly Gly Val Glu Glu Gly Leu Leu Glu Arg His Ser Asn Gly 115 120 125 Ser Gln Ser Gln His Ser Arg Leu Thr Leu Pro Arg Ser Leu Trp Asn 130 135 140 Ala Gly Thr Ser Val Thr Cys Thr Leu Asn His Pro Ser Leu Pro Pro 145 150 155 160 Gln Arg Leu Met Ala Leu Arg Glu Pro Ala Ala Gln Ala Pro Val Lys 165 170 175 Leu Ser Leu Asn Leu Leu Ala Ser Ser Asp Pro Pro Glu Ala Ala Ser 180 185 190 Trp Leu Leu Cys Glu Val Ser Gly Phe Ser Pro Pro Asn Ile Leu Leu 195 200 205 Met Trp Leu Glu Asp Gln Arg Glu Val Asn Thr Ser Gly Phe Ala Pro 210 215 220 Ala Arg Pro Pro Pro Gln Pro Gly Ser Thr Thr Phe Trp Ala Trp Ser 225 230 235 240 Val Leu Arg Val Pro Ala Pro Pro Ser Pro Gln Pro Ala Thr Tyr Thr 245 250 255 Cys Val Val Ser His Glu Asp Ser Arg Thr Leu Leu Asn Ala Ser Arg 260 265 270 Ser Leu Glu Val Ser Tyr Val Thr Asp His 275 280 <210> 6 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> T2A <400> 6 Leu Glu Gly Gly Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp 1 5 10 15 Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Arg 20 <210> 7 <211> 357 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> tEGFR <400> 7 Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro 1 5 10 15 Ala Phe Leu Leu Ile Pro Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly 20 25 30 Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe 35 40 45 Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala 50 55 60 Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu 65 70 75 80 Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile 85 90 95 Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu 100 105 110 Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala 115 120 125 Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu 130 135 140 Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr 145 150 155 160 Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys 165 170 175 Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly 180 185 190 Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu 195 200 205 Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys 210 215 220 Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu 225 230 235 240 Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met 245 250 255 Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala 260 265 270 His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val 275 280 285 Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His 290 295 300 Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro 305 310 315 320 Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala 325 330 335 Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly 340 345 350 Ile Gly Leu Phe Met 355 <210> 8 <211> 27 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD28 <300> <308> UniProt P10747 <309> 1989-07-01 <400> 8 Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu 1 5 10 15 Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val 20 25 <210> 9 <211> 66 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD28 <300> <308> UniProt P10747 <309> 1989-07-01 <400> 9 Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn 1 5 10 15 Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu 20 25 30 Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly 35 40 45 Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe 50 55 60 Trp Val 65 <210> 10 <211> 41 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD28 <300> <308> UniProt P10747 <309> 1989-07-01 <400> 10 Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr 1 5 10 15 Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro 20 25 30 Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser 35 40 <210> 11 <211> 41 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD28 <400> 11 Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr 1 5 10 15 Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro 20 25 30 Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser 35 40 <210> 12 <211> 42 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> 4-1BB <300> <308> UniProt Q07011.1 <309> 1995-02-01 <400> 12 Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met 1 5 10 15 Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe 20 25 30 Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu 35 40 <210> 13 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD3 zeta <400> 13 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly 1 5 10 15 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 20 25 30 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 35 40 45 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 50 55 60 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 85 90 95 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 100 105 110 <210> 14 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD3 zeta <400> 14 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Pro Pro Ala Tyr Gln Gln Gly 1 5 10 15 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 20 25 30 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 35 40 45 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 50 55 60 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 85 90 95 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 100 105 110 <210> 15 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD3 zeta <400> 15 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly 1 5 10 15 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 20 25 30 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 35 40 45 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 50 55 60 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 85 90 95 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 100 105 110 <210> 16 <211> 335 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> tEGFR <400> 16 Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu 1 5 10 15 Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile 20 25 30 Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe 35 40 45 Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr 50 55 60 Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn 65 70 75 80 Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg 85 90 95 Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile 100 105 110 Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val 115 120 125 Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp 130 135 140 Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn 145 150 155 160 Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu 165 170 175 Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser 180 185 190 Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu 195 200 205 Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln 210 215 220 Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly 225 230 235 240 Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro 245 250 255 His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr 260 265 270 Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His 275 280 285 Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro 290 295 300 Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala 305 310 315 320 Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met 325 330 335 <210> 17 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> T2A <400> 17 Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro 1 5 10 15 Gly Pro <210> 18 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2A <400> 18 Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val 1 5 10 15 Glu Glu Asn Pro Gly Pro 20 <210> 19 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2A <400> 19 Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn 1 5 10 15 Pro Gly Pro <210> 20 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> E2A <400> 20 Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser 1 5 10 15 Asn Pro Gly Pro 20 <210> 21 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> F2A <400> 21 Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val 1 5 10 15 Glu Ser Asn Pro Gly Pro 20 <210> 22 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker <220> <221> REPEAT <222> (5)...(9) <223> SGGGG is repeated 5 times <400> 22 Pro Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Pro 1 5 10 <210> 23 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker <400> 23 Gly Ser Ala Asp Asp Ala Lys Lys Asp Ala Ala Lys Lys Asp Gly Lys 1 5 10 15 Ser <210> 24 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker <400> 24 Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr 1 5 10 15 Lys Gly <210> 25 <211> 735 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> scFv <400> 25 gacatccaga tgacccagac cacctccagc ctgagcgcca gcctgggcga ccgggtgacc 60 atcagctgcc gggccagcca ggacatcagc aagtacctga actggtatca gcagaagccc 120 gacggcaccg tcaagctgct gatctaccac accagccggc tgcacagcgg cgtgcccagc 180 cggtttagcg gcagcggctc cggcaccgac tacagcctga ccatctccaa cctggaacag 240 gaagatatcg ccacctactt ttgccagcag ggcaacacac tgccctacac ctttggcggc 300 ggaacaaagc tggaaatcac cggcagcacc tccggcagcg gcaagcctgg cagcggcgag 360 ggcagcacca agggcgaggt gaagctgcag gaaagcggcc ctggcctggt ggcccccagc 420 cagagcctga gcgtgacctg caccgtgagc ggcgtgagcc tgcccgacta cggcgtgagc 480 tggatccggc agccccccag gaagggcctg gaatggctgg gcgtgatctg gggcagcgag 540 accacctact acaacagcgc cctgaagagc cggctgacca tcatcaagga caacagcaag 600 agccaggtgt tcctgaagat gaacagcctg cagaccgacg acaccgccat ctactactgc 660 gccaagcact actactacgg cggcagctac gccatggact actggggcca gggcaccagc 720 gtgaccgtga gcagc 735 <210> 26 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge <220> <221> VARIANT <222> (1)...(1) <223> Xaa1 is glycine, cysteine or arginine <220> <221> VARIANT <222> (4)...(4) <223> Xaa4 is cysteine or threonine <400> 26 Xaa Pro Pro Xaa Pro 1 5 <210> 27 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge <400> 27 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 15 <210> 28 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge <400> 28 Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 29 <211> 61 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge <400> 29 Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr His Thr Cys Pro Arg Cys Pro 1 5 10 15 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu 20 25 30 Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro 35 40 45 Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro 50 55 60 <210> 30 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge <400> 30 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro 1 5 10 <210> 31 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge <400> 31 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 32 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge <400> 32 Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 <210> 33 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge <400> 33 Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 34 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge <400> 34 Glu Val Val Val Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 35 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> FMC63 CDR L1 <400> 35 Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 36 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> FMC63 CDR L2 <400> 36 Ser Arg Leu His Ser Gly Val 1 5 <210> 37 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> FMC63 CDR L3 <400> 37 Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly 1 5 <210> 38 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> FMC63 CDR H1 <400> 38 Asp Tyr Gly Val Ser 1 5 <210> 39 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> FMC63 CDR H2 <400> 39 Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 40 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> FMC63 CDR H3 <400> 40 Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 1 5 <210> 41 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> FMC63 VH <400> 41 Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 42 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> FMC63 VL <400> 42 Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr 100 105 <210> 43 <211> 245 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> FMC63 scFv <400> 43 Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Ser Thr Ser Gly 100 105 110 Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Lys 115 120 125 Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser 130 135 140 Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser 145 150 155 160 Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile 165 170 175 Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu 180 185 190 Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn 195 200 205 Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr 210 215 220 Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser 225 230 235 240 Val Thr Val Ser Ser 245 <210> 44 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SJ25C1 CDR L1 <400> 44 Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala 1 5 10 <210> 45 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SJ25C1 CDR L2 <400> 45 Ser Ala Thr Tyr Arg Asn Ser 1 5 <210> 46 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SJ25C1 CDR L3 <400> 46 Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 47 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SJ25C1 CDR H1 <400> 47 Ser Tyr Trp Met Asn 1 5 <210> 48 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SJ25C1 CDR H2 <400> 48 Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 49 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SJ25C1 CDR H3 <400> 49 Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 50 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SJ25C1 VH <400> 50 Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 51 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SJ25C1 VL <400> 51 Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Thr Tyr Arg Asn Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 Lys Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Ser Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 52 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker <400> 52 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 53 <211> 245 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SJ25C1 scFv <400> 53 Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 115 120 125 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser 130 135 140 Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Val Thr Cys 145 150 155 160 Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys 165 170 175 Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile Tyr Ser Ala Thr Tyr Arg Asn 180 185 190 Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 195 200 205 Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser Lys Asp Leu Ala Asp Tyr Phe 210 215 220 Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr Thr Ser Gly Gly Gly Thr Lys 225 230 235 240 Leu Glu Ile Lys Arg 245 <210> 54 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> FMC63 CDR H3 <400> 54 His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 55 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> FMC63 CDR L2 <400> 55 His Thr Ser Arg Leu His Ser 1 5 <210> 56 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> FMC63 CDR L3 <400> 56 Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr 1 5

Claims (127)

  1. 다음 단계를 포함하는 치료 방법:
    (a) 질병 또는 상태를 가지고 있는 대상체에게, 상기 질병 또는 상태를 치료하기 위하여 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전적으로 조작된 세포들의 투여량을 투여하는 단계;
    (b) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여량을 투여한 후에, 상기 대상체의 혈액 내의 CAR+ T 세포들을 모니터링하여 상기 세포들이 치료 범위 내에 있는지를 평가하는 단계; 및
    (c) 상기 유전적으로 조작된 세포들이 치료 범위 내에 있지 않은 경우에, 상기 대상체에서, CAR+ T 세포 확장 또는 증식을 조절, 선택적으로 증가 또는 감소시킬 수 있는 작용제를 상기 대상체에게 투여하는 단계,
    상기 치료 범위는 다음과 같다:
    (i) 65% 보다 큰 또는 대략 그보다 큰 반응의 추정된 확률 및 30% 보다 작은 또는 대략 그보다 작은 독성의 추정된 확률과 연관된 상기 유전적으로 조작된 세포로 이전에 치료된 하나 이상의 대상체들의 혈액 내에서, 피크 CD3+ CAR+ T 세포 또는 그의 CD8+ CAR+ T 세포 서브 세트의 범위에 기초하고; 또는
    (ii) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 10개의 세포들 내지 마이크로리터 당 500개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포; 또는
    (iii) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 2개의 세포들 내지 마이크로리터 당 200개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포.
  2. 다음 단계를 포함하는 치료 방법:
    (a) 대상체의 혈액 내에, 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전적으로 조작된 세포들의 존재를 모니터링하여, 상기 세포들이 치료 범위 내에 있는지를 평가하는 단계로서, 상기 대상체는 이전에 질병 또는 상태를 치료하기 위하여 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여량이 투여된 적이 있으며; 및
    (c) 상기 유전적으로 조작된 세포들이 치료 범위 내에 있지 않은 경우에, 상기 대상체에서, CAR+ T 세포 확장 또는 증식을 조절, 선택적으로 증가 또는 감소시킬 수 있는 작용제를 상기 대상체에게 투여하는 단계,
    상기 치료 범위는 다음과 같다:
    (i) 65% 보다 큰 또는 대략 그보다 큰 반응의 추정된 확률 및 30% 보다 작은 또는 대략 그보다 작은 독성의 추정된 확률과 연관된 상기 유전적으로 조작된 세포로 이전에 치료된 하나 이상의 대상체들의 혈액 내에서, 피크 CD3+ CAR+ T 세포 또는 그의 CD8+ CAR+ T 세포 서브 세트의 범위에 기초하고; 또는
    (ii) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 10개의 세포들 내지 마이크로리터 당 500개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포; 또는
    (iii) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 2개의 세포들 내지 마이크로리터 당 200개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 대상체의 혈액 내에 CAR+ T 세포의 피크 수가 치료 범위 내에서 피크 CAR+ T 세포의 가장 작은 수 보다 작은 경우에, CAR+ T 세포 확장 또는 증식을 증가시킬 수 있는 작용제가 상기 대상체에게 투여되는 것인 방법.
  4. 제3항에 있어서, 상기 작용제는 CAR-특이적 확장이 가능한 것인 방법.
  5. 제4항에 있어서, 상기 작용제는 상기 CAR에 대해 특이적인 항-이디오타입 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 면역 체크포인트 억작용제, 대사 경로 조절제, 아데노신 수용체 길항제, 키나아제 억작용제, 항-TGFβ 항체 또는 항-TGFβR 항체 또는 사이토카인인 방법.
  6. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 대상체의 혈액 내에 CAR+ T 세포의 피크 수가 상기 치료 범위 내에서 피크 CAR+ T 세포들의 가장 큰 수 보다 큰 경우에, CAR+ T 세포 확장 또는 증식을 감소시킬 수 있는 작용제가 상기 대상체에게 투여되는 것인 방법.
  7. 제6항에 있어서, 상기 작용제는 스테로이드인 방법.
  8. 제7항에 있어서, 상기 스테로이드는 코르티코스테로이드인 방법.
  9. 제7항 또는 제8항에 있어서, 상기 스테로이드는 덱사메타손 또는 메틸프레드니솔론인 방법.
  10. 제7항 내지 제9항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 스테로이드는 각각 포괄적인, 약 1.0 mg 내지 약 40 mg, 약 1.0 mg 내지 약 20 mg, 약 2.0 mg 내지 약 20 mg, 약 5.0 mg 내지 약 25.0 mg, 약 10 mg 내지 약 20 mg, 또는 그 사이의 덱사메타손 또는 이의 등량물의 양으로 투여되는 것인 방법.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 대상체는 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 개시의 적어도 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일 또는 21일 후인 시점에 혈액 내의 CAR+ T 세포에 대하여 모니터링되는 것인 방법.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 대상체는 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 개시 후에, 각각 포괄적인, 11일 내지 22일, 12일 내지 18일, 14일 내지 16일, 또는 대략 그 사이의 시점에 혈액 내의 CAR+ T 세포에 대하여 모니터링되는 것인 방법.
  13. 제1항 내지 제11항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 작용제는 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 개시 후 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 또는 21일 이상인 또는 대략 그 이상인 시점에 투여되는 것인 방법.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 작용제는 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 개시 후에, 각각 포괄적인, 11일 내지 22일, 12일 내지 18일, 14일 내지 16일, 또는 대략 그 사이의 시점에 투여되는 것인 방법.
  15. 조작된 세포들의 활성을 조절하는 방법으로, 상기 방법은 다음 단계를 포함하는 것인 방법:
    (a) 대상체로부터 수득한 샘플에서 종양 존재량(burden) 또는 염증 마커의 체적 측정치의 레벨, 양 또는 농도가 임계치 이상인 대상체를 선택하는 단계로, 상기 샘플은 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 유전적으로 조작된 T 세포를 포함하지 않고 및/또는 CAR을 발현하는 유전적으로 조작된 T 세포의 투여를 받기 이전에 상기 대상체로부터 수득되며; 및
    (b) 상기 선택된 대상체에게 CAR을 발현하는 유전적으로 조작된 T 세포의 확장 또는 증식을 감소시킬 수 있는 작용제를 투여하는 단계.
  16. 조작된 세포들의 활성을 조절하는 방법으로, 상기 방법은 대상체에서 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 유전적으로 조작된 T 세포의 확장 또는 증식을 감소시킬 수 있는 작용제를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 상기 대상체는 대상체로부터 수득한 샘플에서 종양 존재량 또는 염증 마커의 체적 측정치의 레벨, 양 또는 농도가 임계치 이상인 것인 방법.
  17. 제15항 또는 제16항에 있어서, 상기 작용제는 키메라 항원 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전적으로 조작된 세포들의 투여량의 투여의 개시 이전에 또는 이와 동시에 투여되는 것인 방법.
  18. 제17항에 있어서, 상기 방법은 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여량을 투여하는 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
  19. 제15항 내지 제18항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 대상체는 질병 또는 상태를 가지며, 상기 유전적으로 조작된 세포들은 상기 질병 또는 상태를 치료하기 위한 것인 방법.
  20. 제15항 내지 제19항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 작용제를 투여하기 이전에, 상기 선택된 대상체는 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에 독성을 나타낼 위험이 있는 것인 방법.
  21. 제14항 내지 제20항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 작용제의 상기 투여는 상기 대상체의 치료 범위 내에서, 또는 상기 방법에 의해 치료되기 위하여 선택된 대상체들의 대다수 중에서 또는 상기 방법에 의해 치료되기 위하여 선택된 대상체들의 75% 이상에서 피크 CAR+ T 세포를 달성하기에 충분한 것인 방법.
  22. 제21항에 있어서, 상기 치료 범위는 다음과 같은 방법:
    (i) 65% 보다 큰 또는 대략 그보다 큰 반응의 추정된 확률 및 30% 보다 작은 또는 대략 그보다 작은 독성의 추정된 확률과 연관된 상기 유전적으로 조작된 세포로 이전에 치료된 하나 이상의 대상체들의 혈액 내에서, 피크 CD3+ CAR+ T 세포 또는 그의 CD8+ CAR+ T 세포 서브 세트의 범위에 기초하고; 또는
    (ii) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 10개의 세포들 내지 마이크로리터 당 500개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포; 또는
    (iii) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 2개의 세포들 내지 마이크로리터 당 200개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포.
  23. 제15항 내지 제22항 중 어느 하나의 항에 있어서, 종양 존재량의 체적 측정치가 측정되고 상기 체적 측정치는 직경의 결과물의 합 (SPD), 가장 긴 종양 직경 (LD), 가장 긴 종양 직경의 합 (SLD), 종양 체적, 괴사 체적, 괴사-종양 비 (NTR), 종양 주위의 부종 (PTE) 및 부종-종양 비 (ETR)인 것인 방법.
  24. 제15항 내지 제23항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 체적 측정치는 값은 직경의 결과물의 합 (SPD)인 것인 방법.
  25. 제15항 내지 제24항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 체적 측정치는 상기 대상체의 컴퓨터 단층 촬영 (CT), 양전자 방출 단층 촬영 (PET), 및/또는 자기 공명 영상 (MRI)을 사용하여 측정되는 것인 방법.
  26. 제15항 내지 제22항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 대상체로부터 수득한 샘플에서 염증 마커가 측정되고 상기 염증 마커는 C-반응성 단백질 (CRP), 적혈구 침강 속도 (ESR), 알부민, 페리틴, β2 마이크로글로불린 (β2-M), 젖산 탈수소효소 (LDH), 사이토카인 또는 케모카인인 것인 방법.
  27. 제15항 내지 제22항 및 제26항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 염증 마커는 LDH인 것인 방법.
  28. 제15항 내지 제22항 및 제26항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 염증 마커는 IL-7, IL15, MIP-1알파 또는 TNF-알파인 사이토카인 또는 케모카인인 것인 방법.
  29. 제15항 내지 제22항, 제26항 및 제28항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 사이토카인 또는 케모카인은 대식세포 또는 단핵구 활성화와 연관되는 것인 방법.
  30. 제15항 내지 제22항 및 제26항 내지 제29항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 샘플은 혈액 샘플, 혈장 샘플 또는 혈청 샘플이거나 이를 포함하는 것인 방법.
  31. 제15항 내지 제22항 및 제26항 내지 제30항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 염증 마커는 비색 분석법 또는 면역 분석법을 사용하여 평가되는 것인 방법.
  32. 제31항에 있어서, 상기 염증 마커는 면역 분석법을 사용하여 평가되고 상기 면역 분석법은 효소 결합 면역 흡착 분석법 (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA), 효소 면역 분석법 (ELA), 방사 면역 분석법 (RIA), 표면 플라스몬 공명 (surface plasmon resonance, SPR), 웨스턴 블롯(Western Blot), 측방 유동 분석(Lateral flow assay), 면역 조직 화학, 단백질 어레이 또는 면역-PCR (iPCR) 중에서 선택되는 것인 방법.
  33. 제15항 내지 제32항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 임계값은 다음과 같은 값인 방법:
    i) 상기 체적 측정치 또는 염증 마커의 평균 값을 넘는 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내, 또는 5% 이내이고 및/또는 복수의 대조군 대상체들에서 상기 체적 측정치 또는 상기 염증 마커의 상기 평균 값을 넘는 표준 편차 이내이며;
    ii) 복수의 대조군 대상체들 중에서 적어도 하나의 대상체 내에서 측정된, 상기 체적 측정치 또는 염증 마커의 가장 높은 값을 넘는, 선택적으로 이러한 가장 높은 배수의 변화를 넘는 50% 이내, 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내, 또는 5% 이내이고; 및/또는
    iii) 복수의 대조군 대상체들의 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 98% 이상 중에서 측정된 바와 같은 상기 체적 측정치 또는 염증 마커의 가장 높은 값을 넘는 값.
  34. 제33항에 있어서, 상기 복수의 대조군 대상체들은 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여량을 받기 전의 대상체 그룹이며, 여기서:
    상기 그룹의 상기 대조군 대상체들 각각은 치료 범위 이내의 가장 높은 피크 CAR+ T 세포 보다 큰 혈액 내의 피크 CAR+ T 세포를 나타냈고;
    상기 그룹의 상기 대조군 대상체들의 각각은 동일한 질병 또는 상태를 치료하기 위하여 상기 조작된 세포들의 투여량을 받은 후에, 독성, 선택적으로 신경 독성 또는 사이토카인 방출 증후군(cytokine release syndrome, CRS)에서, 2등급 또는 3등급 이상의 신경 독성 또는 3등급 이상의 CRS를 계속하여 나타냈으며;
    상기 그룹의 상기 대조군 대상체들의 각각은 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여량의 투여 후에, 반응, 선택적으로 완전한 반응 (CR) 또는 부분적인 반응 (PR)을 나타내지 않았고; 및/또는
    상기 그룹의 상기 대조군 대상체들의 각각은 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여량의 투여 후에, 선택적으로 3개월 이상 또는 6개월 이상 동안 지속적인 반응을 나타내지 않았던 것인 방법.
  35. 제15항 내지 제34항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 체적 측정치는 SPD이고 상기 임계값은 ㎠ 당 30 또는 대략 그 정도, ㎠ 당 40 또는 대략 그 정도, ㎠ 당 50 또는 대략 그 정도, ㎠ 당 60 또는 대략 그 정도, 또는 ㎠ 당 70 또는 대략 그 정도인 것인 방법.
  36. 제15항 내지 제35항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 염증 마커는 LDH이고 상기 임계값은 리터 당 300 유닛이거나 대략 그 정도, 리터 당 400 유닛이거나 대략 그 정도, 리터 당 500 유닛이거나 대략 그 정도, 또는 리터 당 600 유닛이거나 대략 그 정도인 것인 방법.
  37. 제15항 내지 제36항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 작용제는 스테로이드인 방법.
  38. 제37항에 있어서, 상기 스테로이드는 코르티코스테로이드인 방법.
  39. 제37항 또는 제38항에 있어서, 상기 스테로이드는 덱사메타손 또는 메틸프레드니솔론인 방법.
  40. 제37항 내지 제39항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 스테로이드는 각각 포괄적인, 약 1.0 mg 내지 약 40 mg, 약 1.0 mg 내지 약 20 mg, 약 2.0 mg 내지 약 20 mg, 약 5.0 mg 내지 약 25.0 mg, 약 10 mg 내지 약 20 mg, 또는 그 사이의 덱사메타손 또는 이의 등량물의 양으로 투여되는 것인 방법.
  41. 제15항 내지 제40항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 체적 측정치 또는 염증 마커는 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여의 개시 이전에 1일, 2일, 3일, 4일, 6일, 8일, 12일, 16일, 20일, 24일, 28일 또는 그 이상 이내에 상기 대상체에서 측정되는 것인 방법.
  42. 대상체에서 투약하는(dosing) 방법으로, 상기 방법은 키메라 항원 수용체 (CAR)을 발현하는 T 세포를 포함하는 유전적으로 조작된 세포들의 투여량을, 질병 또는 상태를 가지는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 상기 투여량은 상기 대상체의 결정된 치료 범위 내에서 혈액 내의, 또는 상기 방법에 의해 치료되기 위하여 선택된 대상체들의 대다수 중에서 또는 상기 방법에 의해 치료되기 위하여 선택된 대상체들의 75% 이상에서 피크 CAR+ T 세포를 달성하기에 충분한 다수의 상기 유전적으로 조작된 세포들을 포함하고, 상기 치료 범위는 다음과 같은 방법:
    (i) 65% 보다 큰 또는 대략 그보다 큰 반응의 추정된 확률 및 30% 보다 작은 또는 대략 그보다 작은 독성의 추정된 확률과 연관된 상기 유전적으로 조작된 세포로 이전에 치료된 하나 이상의 대상체들의 혈액 내에서, 피크 CD3+ CAR+ T 세포 또는 그의 CD8+ CAR+ T 세포 서브 세트의 범위에 기초하고; 또는
    (ii) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 10개의 세포들 내지 마이크로리터 당 500개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포; 또는
    (iii) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 2개의 세포들 내지 마이크로리터 당 200개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포.
  43. 제1항 내지 제42항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여량은 각각 포괄적인, 1 x 105 내지 5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 106 내지 2.5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 5 x 106 내지 1 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 107 내지 2.5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 5 x 107 내지 1 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도를 포함하는 것인 방법.
  44. 제1항 내지 제43항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여량은 적어도 1 x 105개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 적어도 2.5 x 105개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 적어도 5 x 105개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 적어도 1 x 106개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 적어도 2.5 x 106개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 적어도 5 x 106개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 적어도 1 x 107개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 적어도 2.5 x 107개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 적어도 5 x 107개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 적어도 1 x 108개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 적어도 2.5 x 108개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 또는 적어도 5 x 108개의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도인 것인 방법.
  45. 대상체에게 투약하는 방법으로, 상기 방법은 다음 단계를 포함하는 것인 방법:
    (a) 키메라 항원 수용체 (CAR)로 조작된 T 세포를 포함하는 유전적으로 조작된 세포들의 차선의 (sub-optimal) 투여량을, 질병 또는 상태를 가지는 대상체에게 투여하는 단계로, 상기 투여량은 상기 대상체의 결정된 치료 범위 내에서 혈액 내의, 또는 상기 방법에 의해 치료되기 위하여 선택된 대상체들의 대다수 중에서 또는 상기 방법에 의해 치료되기 위하여 선택된 대상체들의 75% 이상에서 피크 CAR+ T 세포를 달성하기에 불충분한 다수의 상기 유전적으로 조작된 세포들을 포함하고; 및
    (b) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 단계 다음에, 상기 치료 범위 내에서 혈액 내에 피크 CAR+ T 세포를 달성하기 위하여 상기 대상체 내의 CAR+ 세포 확장 또는 증식을 향상시키는 작용제를 투여하는 단계로,
    상기 치료 범위는 다음과 같다:
    (i) 65% 보다 큰 또는 대략 그보다 큰 반응의 추정된 확률 및 30% 보다 작은 또는 대략 그보다 작은 독성의 추정된 확률과 연관된 상기 유전적으로 조작된 세포로 이전에 치료된 하나 이상의 대상체들의 혈액 내에서, 피크 CD3+ CAR+ T 세포 또는 그의 CD8+ CAR+ T 세포 서브 세트의 범위에 기초하고; 또는
    (ii) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 10개의 세포들 내지 마이크로리터 당 500개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포; 또는
    (iii) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 2개의 세포들 내지 마이크로리터 당 200개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포.
  46. 제45항에 있어서, 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여량을 투여한 후, 상기 방법은 상기 대상체의 혈액 내에 CAR+ T 세포를 모니터링하는 단계를 포함하는 것인 방법.
  47. 제45항 또는 제46항에 있어서, 상기 작용제의 투여 후에, 상기 방법은 다음을 달성하는 것인 방법:
    상기 작용제 없이 유전적으로 조작된 세포들의 동일한 투여량의 투여를 포함하는 방법과 비교하여, 상기 대상체에서 결정된 치료 범위 내에서 혈액 내의 피크 CAR+ 세포의 증가된 빈도; 또는
    상기 대상체의 결정된 치료 범위 내에서 혈액 내의, 또는 상기 방법에 의해 치료되기 위하여 선택된 대상체들의 대다수 중에서 또는 상기 방법에 의해 치료되기 위하여 선택된 대상체들의 75% 이상에서 피크 CAR+ 세포.
  48. 제45항 내지 제47항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여량은 1 x 107 이하의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 5 x 106 이하의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 2.5 x 106 이하의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 1 x 106 이하의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도, 2.5 x 105 이하의 CAR-발현 T 세포 또는 대략 그 정도인 것인 방법.
  49. 제45항 내지 제48항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 작용제는 CAR+ T 세포의 확장, 선택적으로 CAR-특이적 확장을 증가시킬 수 있는 것인 방법.
  50. 제49항에 있어서, 상기 작용제는 항-이디오타입 항체 또는 CAR에 특이적인 이의 항원 결합 단편, 면역 체크포인트 억작용제, 대사 경로 조절제, 아데노신 수용체 길항제, 키나아제 억작용제, 항-TGFβ 항체 또는 항-TGFβR 항체 또는 사이토카인인 것인 방법.
  51. 제1항 내지 제50항 중 어느 하나의 항에 있어서, 치료된 복수의 대상체들 중에서, 상기 방법은 상기 작용제의 투여 단계를 포함하지 않는 방법과 비교하여, 선택적으로 3개월 이상 또는 6개월 이상 동안 지속되는, 지속적인 반응, 선택적으로 완전한 반응 (CR) 또는 객관적인 반응 (OR) 또는 부분적인 반응 (PR)을 달성한 대상체들의 백분율의 증가를 달성하는 것인 방법.
  52. 제1항 내지 제51항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 증가는 1.2배, 1.5배, 2배, 3배, 4배, 5배, 10배 또는 그 이상 또는 대략 그 이상인 것인 방법.
  53. 제1항 내지 제52항 중 어느 하나의 항에 있어서, 여기서:
    상기 방법에 따라 치료된 대상체들의 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 50% 는 3개월 이상 또는 6개월 이상 동안 지속되는 완전한 반응 (CR)을 달성하고; 및/또는
    상기 방법에 따라 치료된 대상체들의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60% 또는 적어도 70%는 3개월 이상 또는 6개월 이상 동안 지속되는 객관적인 반응 (OR)을 달성하는 것인 방법.
  54. 제1항 내지 제53항 중 어느 하나의 항에 있어서, 여기서:
    상기 방법에 따라 치료된 대상체들의 50% 이상 또는 대략 그 이상, 60% 이상 또는 대략 그 이상, 70% 이상 또는 대략 그 이상, 또는 80% 이상 또는 대략 그 이상은 3등급 이상의 사이토카인 방출 증후군 (CRS)를 나타내고 및/또는 2등급 이상 또는 3등급 이상의 신경 독성을 나타내지 않고; 또는
    상기 방법에 따라 치료된 대상체들의 40% 이상 또는 대략 그 이상, 50% 이상 또는 대략 그 이상, 또는 55% 이상 또는 대략 그 이상은 임의의 신경 독성 또는 (CRS)를 나타내지 않는 것인 방법.
  55. 제1항 내지 제54항 중 어느 하나의 항에 있어서, 피크 CAR+ T 세포는 상기 대상체의 혈액 내에서 마이크로리터 당 CAR+ T 세포의 수로 결정되는 것인 방법.
  56. 제1항 내지 제55항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 치료 범위는 상기 독성의 추정된 확률이 20% 이하, 15% 이하, 10% 이하 또는 5% 이하이고 상기 반응을 달성하는 추정된 확률은 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 그 이상 보다 큰 범위인 것인 방법.
  57. 제1항 내지 제56항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 독성의 확률은 다음 중에서 선택되는 독성에 기초하는 것인 방법:
    임의의 신경 독성 또는 사이토카인 방출 증후군 (CRS);
    중증 독성 또는 3등급 이상의 독성;
    중증 CRS 또는 3등급 이상의 CRS; 또는
    중증 신경 독성, 2등급 이상의 신경 독성 또는 3등급 이상의 신경 독성.
  58. 제1항 내지 제56항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 독성의 확률은 중증 독성 또는 3등급 이상의 독성의 확률에 기초하는 것인 방법.
  59. 제57항 또는 제58항에 있어서, 상기 중증 독성은 3-5 등급의 신경 독성인 것인 방법.
  60. 제1항 내지 제59항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 반응 확률은 완전한 반응 (CR), 객관적인 반응 (OR) 또는 부분적인 반응 (PR)인 반응에 기초하고, 선택적으로 상기 반응은 지속적이며, 선택적으로 3개월 이상 또는 6개월 이상 동안 지속되는 것인 방법.
  61. 제1항 내지 제60항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 반응은 상기 대상체의 골수 내에서 악성 면역글로불린 중쇄 좌위(immunoglobulin heavy chain locus, IGH)의 존재 및/또는 지수 복제(index clone)의 평가에 기초하여 결정된 골수 반응인 것인 방법.
  62. 제61항에 있어서, 상기 악성 IGH 및/또는 지수 복제는 유세포 분석기 또는 IgH 시퀀싱에 의해 평가되는 것인 방법.
  63. 지속적인 방응의 가능성을 평가하는 방법으로, 상기 방법은 다음 단계를 포함하는 것인 방법:
    (a) 대상체로부터 수득한 생물학적 샘플에서, 하나 이상의 염증 마커의 피크 레벨 및/또는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전적으로 조작된 세포들의 피크 레벨을 검출하는 단계로, 상기 대상체는 질병 또는 상태를 치료하기 위하여 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여량을 이전에 투여받은 적이 있고;
    (b) 개별적으로, 임계값에 대하여 상기 피크 레벨을 비교함으로써, 대상체가 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여에 대하여 지속적인 반응을 달성할 가능성을 결정하는 단계.
  64. 제63항에 있어서, 여기서:
    상기 대상체는 상기 하나 이상의 염증 마커의 피크 레벨이 임계값 아래이면 지속적인 반응을 달성하기 쉽고 상기 대상체는 상기 하나 이상의 염증 마커의 피크 레벨이 임계값을 넘으면 지속적인 반응을 달성하기 쉽지 않으며; 또는
    상기 대상체는 상기 유전적으로 조작된 세포들의 상기 피크 레벨이 하한 임계값과 상한 임계값 사이의 치료 범위 이내이면 지속적인 반응을 달성하기 쉽고 상기 대상체는 상기 유전적으로 조작된 세포들의 상기 피크 레벨이 하한 임계값 아래이거나 상한 임계값을 넘으면 지속적인 반응을 달성하기 쉽지 않은 것인 방법.
  65. 제63항 또는 제64항에 있어서, 상기 대상체가 지속적인 반응을 달성하기 쉽지 않다고 결정되면, 상기 유전적으로 조작된 세포들 이외에 치료제로 또는 대체적인 치료학적 처리로 치료하기 위한 대상체를 선택하는 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
  66. 제63항 내지 제65항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 대상체는 지속적인 반응을 달성하기 쉽지 않다고 결정되면, 상기 유전적으로 조작된 세포들 이외에 치료제 또는 대체적인 치료학적 처리를 투여하는 단계를 포함하는 것인 방법.
  67. 다음 단계를 포함하는, 치료 방법:
    (a) 대상체로부터 수득한 샘플에서 하나 이상의 염증 마커의 피크 레벨이 임계값을 넘는; 및/또는
    대상체로부터 수득한 샘플에서 키메라 항원 수용체 (CAR)를 포함하는 T 세포의 피크 레벨이 하한 임계값 아래이거나 상한 임계값을 넘는,
    키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전적으로 조작된 세포들의 투여를 받은 대상체를 선택하는 단계; 및
    (b) 상기 대상체에게 상기 유전적으로 조작된 세포들 이외에 치료제 또는 대체적인 치료학적 처리를 투여하는 단계.
  68. 제63항 내지 제66항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 반응은 완전한 반응 (CR), 객관적인 반응 (OR) 또는 부분적인 반응 (PR)인 것인 방법.
  69. 제63항 내지 제66항 및 제68항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 반응은 3개월, 4개월, 5개월 또는 6개월 이상 동안 지속되는 것인 방법.
  70. 제63항 내지 제69항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 피크 레벨은 평가되고 및/또는 상기 샘플은 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 개시의 적어도 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일 또는 21일 후의 시점의 상기 대상체로부터 수득되는 것인 방법.
  71. 제63항 내지 제70항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 피크 레벨은 평가되고 및/또는 상기 샘플은 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 개시 후에, 각각 포괄적인, 11일 내지 22일 또는 12일 내지 18일 또는 14일 내지 16일 또는 대략 그 사이인 시점의 상기 대상체로부터 수득되는 것인 방법.
  72. 제63항 내지 제71항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 피크 레벨은 하나 이상의 염증 마커의 피크 레벨이며 상기 염증 마커는 C 반응성 단백질 (CRP), IL-2, IL-6, IL-10, IL-15, TNF-알파, MIP-1알파, MIP-1베타, MCP-1, CXCL10 또는 CCL13 중에서 선택되는 것인 방법.
  73. 제64항 내지 제72항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 하나 이상의 염증 마커의 피크 레벨이 평가되고, 상기 임계값은 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내 또는 5% 이내이며 및/또는 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여를 받은 대조군 대상체들의 그룹 중에서 결정된 바와 같은 상기 염증 마커의 피크 레벨의 중앙 또는 평균의 표준 편차 이내이고, 상기 그룹의 상기 대상체들의 각각은 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에 지속적인 반응, 선택적으로 CR 및/또는 PR, 선택적으로 3개월 또는 6개월 이상을 달성하지 않은 것인 방법.
  74. 제73항에 있어서, 상기 대조군 대상체들은 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에 안정적인 질병 (SD) 또는 진행되는 질병 (PD)을, 선택적으로 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에 3개월 또는 6개월 동안 나타낸 것인 방법.
  75. 제63항 내지 제71항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 피크 레벨은 CAR+ T 세포 또는 이의 CD8+ T 세포 서브세트의 피크 레벨인 것인 방법.
  76. 제64항 내지 제71항 및 제75항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 하한 임계값 및 상한 임계값은 65% 이상 또는 대략 그 이상인 반응의 추정된 확률 및 30%이하 또는 대략 그 이하인 독성의 추정된 확률과 연관된 상기 유전적으로 조작된 세포로 이전에 치료된 하나 이상의 대상체들의 혈액 내에서, 피크 CD3+ CAR+ T 세포, 또는 이의 CD8+ CAR+ T 세포 서브 세트의 치료 범위의, 각각의, 하한 및 상한인 것인 방법.
  77. 제64항 내지 제71항, 제75항 및 제76항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 치료 범위는 상기 독성의 추정된 확률이 20% 이하, 15% 이하, 10% 이하 또는 5% 이하이고 상기 반응을 달성하는 추정된 확률은 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 그 이상 보다 큰 범위인 것인 방법.
  78. 제76항 또는 제77항에 있어서, 상기 독성의 확률은 다음 중에서 선택되는 독성에 기초하는 것인 방법:
    임의의 신경 독성 또는 사이토카인 방출 증후군 (CRS);
    중증 독성 또는 3등급 이상의 독성;
    중증 CRS 또는 3등급 이상의 CRS; 또는
    중증 신경 독성, 2등급 이상의 신경 독성 또는 3등급 이상의 신경 독성.
  79. 제76항 내지 제78항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 반응 확률은 완전한 반응 (CR), 객관적인 반응 (OR) 또는 부분적인 반응 (PR)인 반응에 기초하고, 선택적으로 상기 반응은 지속적이며, 선택적으로 3개월 이상 또는 6개월 이상 동안 지속되는 것인 방법.
  80. 제64항 내지 제71항 및 제75항 내지 제79항 중 어느 하나의 항에 있어서, 피크 CAR+ T 세포는 상기 대상체의 혈액 내의 마이크로리터 당 CAR+ T 세포의 수로 결정되는 것인 방법.
  81. 제64항 내지 제71항 및 제75항 내지 제80항 중 어느 하나의 항에 있어서, 여기서:
    상기 상한 임계 값은 마이크로리터 당 300개 세포들 내지 마이크로리터 당 1000개 세포들 또는 마이크로리터 당 400개 세포들 내지 마이크로리터 당 600개 세포들 또는 대략 그 사이이거나, 약 마이크로리터 당 300개 세포들, 마이크로리터 당 400개 세포들, 마이크로리터 당 500개 세포들, 마이크로리터 당 600개 세포들, 마이크로리터 당 700개 세포들, 마이크로리터 당 800개 세포들, 마이크로리터 당 900개 세포들 또는 마이크로리터 당 1000개 세포들이고;
    상기 하한 임계값은 마이크로리터 당 10개 세포들 이하, 마이크로리터 당 9개 세포들 이하, 마이크로리터 당 8개 세포들 이하, 마이크로리터 당 7개 세포들 이하, 마이크로리터 당 6개 세포들 이하, 마이크로리터 당 5개 세포들 이하, 마이크로리터 당 4개 세포들 이하, 마이크로리터 당 3개 세포들 이하, 마이크로리터 당 2개 세포들 이하 또는 마이크로리터 당 1개 세포들 이하 또는 대략 그 이하인 것인 방법.
  82. 제63항 내지 제81항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 샘플은 혈액 샘플 또는 혈장 샘플인 것인 방법.
  83. 제63항 내지 제82항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 방법은 생체 외에서 수행되는 것인 방법.
  84. 제65항 내지 제83항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 CAR+ T 세포의 피크 레벨은 하한 임계값 아래이고 상기 치료제는 CAR+ T 세포의 확장과 증식을 감소시킬 수 있는 작용제인 것인 방법.
  85. 제84항에 있어서, 상기 작용제는 스테로이드인 것인 방법.
  86. 제85항에 있어서, 상기 스테로이드는 코르티코스테로이드인 것인 방법.
  87. 제85항 또는 제86항에 있어서, 상기 스테로이드는 덱사메타손 또는 메틸프레드니솔론인 것인 방법.
  88. 제85항 내지 제87항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 스테로이드는 각각 포괄적인, 약 1.0 mg 내지 약 40 mg, 약 1.0 mg 내지 약 20 mg, 약 2.0 mg 내지 약 20 mg, 약 5.0 mg 내지 약 25.0 mg, 약 10 mg 내지 약 20 mg, 또는 그 사이의 덱사메타손 또는 이의 등량물의 양으로 투여되는 것인 방법.
  89. 제85항 내지 제88항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 CAR+ T 세포의 피크 레벨은 상기 상한 임계값을 넘고 상기 치료제는 상기 CAR+ T 세포의 확장, 선택적으로 CAR-특이적 확장을 증가시킬 수 있는 작용제인 것인 방법.
  90. 제89항에 있어서, 상기 작용제는 항-이디오타입 항체 또는 CAR에 특이적인 이의 항원 결합 단편, 면역 체크포인트 억작용제, 대사 경로 조절제, 아데노신 수용체 길항제, 키나아제 억작용제, 항-TGFβ 항체 또는 항-TGFβR 항체 또는 사이토카인인 것인 방법.
  91. 제1항 내지 제90항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 질병 또는 상태는 암인 것인 방법.
  92. 제91항에 있어서, 상기 암은 B 세포 악성 종양인 것인 방법.
  93. 제92항에 있어서, 상기 암은 육종, 암종, 림프종, 비-호지킨 림프종 (NHLs), 이하성 거대 B세포 림프종 (DLBCL), 백혈병, CLL, ALL, AML 및 골수종으로 구성된 군에서 선택되는 것인 방법.
  94. 제93항에 있어서, 상기 암은 췌장암, 방광암, 대장암, 유방암, 전립선암, 신장암, 간세포암, 폐암, 난소암, 자궁 경부암, 췌장암, 직장암, 갑상선암, 자궁암, 위암, 식도암, 두경부암, 흑색종, 신경내분비암, CNS 암, 뇌종양, 골암, 또는 연조직 육종인 것인 방법.
  95. 제1항 내지 제94항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 대상체는 인간인 것인 방법.
  96. 제1항 내지 제95항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 CAR은 질병 또는 상태와 연관된 항원에 특이적으로 결합하고 및/또는 상기 질병 또는 상태와 연관된 세포에서 발현되는 것인 방법.
  97. 제96항에 있어서, 상기 항원은 5T4, 8H9, avb6 인테그린, B7-H6, B 세포 성숙화 항원 (BCMA), CA9, 암성-고환 항원, 탄산 무수화 효소 9 (CAIX), CCL-1, CD19, CD20, CD22, CEA, B형 간염 표면 항원, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD138, CD171, 암배아성 항원(carcinoembryonic antigen, CEA), CE7, 사이클린, 사이클린 A2, c-Met, 이중 항원, EGFR, 상피 당단백질 2(epithelial glycoprotein 2, EPG-2), 상피 당단백질 40 (EPG-40), EPHa2, 에프린B2(ephrinB2), erb-B2, erb-B3, erb-B4, erbB 이합체들(dimers), EGFR vIII, 에스트로겐 수용체, 태아 AchR, 엽산 수용체 알파, 엽산 결합 단백질 (FBP), FCRL5, FCRH5, 태아 아세틸콜린 수용체(fetal acetylcholine receptor), G250/CAIX, GD2, GD3, gp100, Her2/neu (수용체 티로신 키나아제 erbB2), HMW- MAA, IL-22R-알파, IL-13 수용체 알파 2 (IL-13Ra2), 키나아제 삽입 도메인 수용체 (kdr), 카파 경쇄, 루이스 Y(Lewis Y), L1-세포 접착 분자 (L1-CAM), 흑색종-관련 항원 (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, MART-1, 메소텔린, 쥐-CMV, 뮤신 1(mucin 1, MUC1), MUC16, NCAM, NKG2D, NKG2D 리간드, NY-ESO-1, O-아세틸화 GD2 (OGD2), 종양 태아성 항원(oncofetal antigen), 흑색종에서 우선적으로 발현되는 항원(Preferentially expressed antigen of melanoma, PRAME), PSCA, 프로게스테론 수용체, 서바이빈(survivin), ROR1, TAG72, tEGFR, VEGF 수용체, VEGF-R2, 윌름스 종양 1 (Wilms Tumor 1, WT-1), 병원균-특이적 항원 중에서 선택되는 것인 방법.
  98. 제1항 내지 제97항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 키메라 항원 수용체 (CAR)는 상기 항원에 특이적으로 결합하는 세포 외 항원-인식 도메인과 ITAM을 포함하는 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 것인 방법.
  99. 제98항에 있어서, 상기 세포 내 신호 전달 도메인은 CD3-제타 (CD3ζ) 사슬의 세포 내 도메인을 포함하는 것인 방법.
  100. 제98항 또는 제99항에 있어서, 상기 키메라 항원 수용체 (CAR)는 추가로 공자극(costimulatory) 신호 전달 영역을 포함하는 것인 방법.
  101. 제100항에 있어서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 CD28 또는 4-1BB의 신호 전달 도메인을 포함하는 것인 방법.
  102. 제15항 또는 제16항에 있어서, 상기 공자극 도메인은 4-1BB의 도메인인 것인 방법.
  103. 제1항 내지 제102항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 세포는 T 세포인 것인 방법.
  104. 제103항에 있어서, 상기 T 세포는 CD4+ 또는 CD8+인 것인 방법.
  105. 제1항 내지 제104항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 T 세포는 대상체로부터 수득한 초기의(primary) T 세포인 것인 방법.
  106. 제1항 내지 제105항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 유전적으로 조작된 세포들의 세포는 상기 대상체에 대하여 자가 조직(autologous)인 것인 방법.
  107. 제1항 내지 제106항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 세포는 상기 대상체에 대하여 동종 이계(allogeneic)인 것인 방법.
  108. 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전적으로 조작된 세포들을 포함하는 조성물과, 피크 CAR+ T 세포가 치료 범위 이내인지를 평가한 후에 또는 평가한 결과에 기초하여 대상체에게 상기 세포의 투여량을 투여하기 위한 설명서를 포함하는, 키트로서
    상기 치료 범위는 다음과 같다:
    (i) 65% 보다 큰 또는 대략 그보다 큰 반응의 추정된 확률 및 30% 보다 작은 또는 대략 그보다 작은 독성의 추정된 확률과 연관된 상기 유전적으로 조작된 세포로 이전에 치료된 하나 이상의 대상체들의 혈액 내에서, 피크 CD3+ CAR+ T 세포 또는 그의 CD8+ CAR+ T 세포 서브 세트의 범위에 기초하고; 또는
    (ii) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 10개의 세포들 내지 마이크로리터 당 500개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포; 또는
    (iii) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 2개의 세포들 내지 마이크로리터 당 200개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포.
  109. 제108항에 있어서, 상기 설명서는 상기 유전적으로 조작된 세포들이 치료 범위 이내에 있는 경우에, 상기 대상체에서 CAR+ T 세포 확장 또는 증식을 조절, 선택적으로 증가 또는 감소시킬 수 있는 작용제를 상기 대상체에게 투여하는 것이라고 명시하는 것인 키트.
  110. 제109항에 있어서, 상기 키트는 추가로 상기 작용제를 포함하는 것인 키트.
  111. CAR+ T 세포를 포함하는 유전적으로 조작된 세포들의 확장 또는 증식을 조절, 선택적으로 증가 또는 감소시킬 수 있는 작용제와, 피크 CAR+ T 세포가 치료 범위 이내에 있는지 여부를 평가한 결과에 기초하여, 대상체에게 작용제를 투여하기 위한 설명서를 포함하는, 키트로서, 상기 대상체는 상기 유전적으로 조작된 세포들을 투여 받은 적이 있으며, 상기 치료 범위는 다음과 같다:
    (i) 65% 보다 큰 또는 대략 그보다 큰 반응의 추정된 확률 및 30% 보다 작은 또는 대략 그보다 작은 독성의 추정된 확률과 연관된 상기 유전적으로 조작된 세포로 이전에 치료된 하나 이상의 대상체들의 혈액 내에서, 피크 CD3+ CAR+ T 세포 또는 그의 CD8+ CAR+ T 세포 서브 세트의 범위에 기초하고; 또는
    (ii) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 10개의 세포들 내지 마이크로리터 당 500개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포; 또는
    (iii) 상기 유전적으로 조작된 세포들의 투여 후에, 혈액 내의 마이크로리터 당 2개의 세포들 내지 마이크로리터 당 200개의 세포들 또는 대략 그 정도인 피크 CD3+ CAR+ T 세포.
  112. 제109항 내지 제111항에 있어서, 상기 설명서는 상기 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포의 피크 수가 상기 치료 범위 내에 피크 CAR+ T 세포의 가장 낮은 수 이하인 경우에, CAR+ T 세포 확장 또는 증식을 증가시킬 수 있는 작용제가 상기 대상체에게 투여된다고 명시하는 것인 키트.
  113. 제112항에 있어서, 상기 작용제는 CAR-특이적 확장이 가능한 것인 키트.
  114. 제112항 또는 제113항에 있어서, 상기 작용제는 항-이디오타입 항체 또는 CAR에 특이적인 이의 항원 결합 단편, 면역 체크포인트 억작용제, 대사 경로 조절제, 아데노신 수용체 길항제, 키나아제 억작용제, 항-TGFβ 항체 또는 항-TGFβR 항체 또는 사이토카인인 것인 키트.
  115. 제109항 내지 제111항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포의 피크 수가 상기 치료 범위 내에 피크 CAR+ T 세포의 가장 높은 수 이상인 경우에, CAR+ T 세포 확장 또는 증식을 감소시킬 수 있는 작용제가 상기 대상체에게 투여되는 것인 키트.
  116. 대상체 내의 CAR+ T 세포를 포함하는 유전적으로 조작된 세포들의 확장 또는 증식을 감소시킬 수 있는 작용제, 및 대상체를 대상체로부터 수득한 샘플에서 종양 존재량 또는 염증 마커의 체적 측정치의 레벨, 양 또는 농도로 평가하고 상기 레벨, 양 또는 농도가 임계치 레벨을 넘는 경우에 상기 대상체에게 상기 작용제를 투여하기 위한 설명서를 포함하는, 키트로서 상기 샘플은 키메라 항원 수용체 (CAR)을 발현하는 유전적으로 조작된 T 세포를 포함하지 않고 및/또는 CAR을 발현하는 유전적으로 조작된 T 세포의 투여를 받기 전의 상기 대상체로부터 수득되는 것인 키트.
  117. 제116항에 있어서, 상기 체적 측정치는 직경의 결과물의 합 (SPD), 가장 긴 종양 직경 (LD), 가장 긴 종양 직경의 합 (SLD), 종양 체적, 괴사 체적, 괴사-종양 비 (NTR), 종양 주위의 부종 (PTE) 및 부종-종양 비 (ETR)인 것인 키트.
  118. 제116항 또는 제117항에 있어서, 상기 체적 측정치는 값은 직경의 결과물의 합 (SPD)인 것인 키트.
  119. 제116항에 있어서, 상기 염증 마커는 C-반응성 단백질 (CRP), 적혈구 침강 속도 (ESR), 알부민, 페리틴, β2 마이크로글로불린 (β2-M), 젖산 탈수소효소 (LDH), 사이토카인 또는 케모카인인 것인 키트.
  120. 제119항에 있어서, 상기 염증 마커는 LDH인 것인 키트.
  121. 제115항 내지 제120항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 작용제는 스테로이드인 것인 키트.
  122. 제121항에 있어서, 상기 스테로이드는 코르티코스테로이드인 것인 키트.
  123. 제121항 또는 제122항에 있어서, 상기 스테로이드는 덱사메타손 또는 메틸프레드니솔론인 것인 키트.
  124. 제121항 내지 제124항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 스테로이드는 각각 포괄적인, 약 1.0 mg 내지 약 40 mg, 약 1.0 mg 내지 약 20 mg, 약 2.0 mg 내지 약 20 mg, 약 5.0 mg 내지 약 25.0 mg, 약 10 mg 내지 약 20 mg, 또는 대략 그 사이의 덱사메타손 또는 이의 등량물의 양으로 투여하기 위하여 제형화되는 것인 키트.
  125. 제108항 내지 제124항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 CAR은 질병 또는 상태와 연관된 항원에 특이적으로 결합하고 및/또는 상기 질병 또는 상태와 연관된 세포 내에서 발현되는 것인 키트.
  126. 제108항 내지 제125항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 유전적으로 조작된 세포들은 T 세포, 선택적으로 CD4+ 또는 CD8+ T 세포를 포함하는 것인 키트.
  127. 제108항 내지 제126항 중 어느 하나의 항에 기재된 키트를 포함하는, 제조물품.
KR1020197019183A 2016-12-03 2017-12-01 Car-t 세포들 투여를 결정하는 방법 KR20190104528A (ko)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662429738P 2016-12-03 2016-12-03
US62/429,738 2016-12-03
US201762514765P 2017-06-02 2017-06-02
US62/514,765 2017-06-02
US201762515523P 2017-06-05 2017-06-05
US62/515,523 2017-06-05
PCT/US2017/064364 WO2018102787A1 (en) 2016-12-03 2017-12-01 Methods for determining car-t cells dosing

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20190104528A true KR20190104528A (ko) 2019-09-10

Family

ID=60935955

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020197019183A KR20190104528A (ko) 2016-12-03 2017-12-01 Car-t 세포들 투여를 결정하는 방법

Country Status (13)

Country Link
US (1) US20200078400A1 (ko)
EP (2) EP4279136A3 (ko)
JP (3) JP7227131B2 (ko)
KR (1) KR20190104528A (ko)
CN (1) CN110290807A (ko)
AU (1) AU2017368333A1 (ko)
BR (1) BR112019011065A2 (ko)
CA (1) CA3045355A1 (ko)
ES (1) ES2961666T3 (ko)
MA (1) MA46963A (ko)
MX (1) MX2019006286A (ko)
RU (1) RU2019120398A (ko)
WO (1) WO2018102787A1 (ko)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP7057669B2 (ja) 2014-10-20 2022-04-20 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド 養子細胞療法において投薬するための方法および組成物
IL310031A (en) * 2017-05-01 2024-03-01 Juno Therapeutics Inc A combination of cellular therapy and an immune modulatory compound
US11564946B2 (en) 2017-11-01 2023-01-31 Juno Therapeutics, Inc. Methods associated with tumor burden for assessing response to a cell therapy
US11851679B2 (en) 2017-11-01 2023-12-26 Juno Therapeutics, Inc. Method of assessing activity of recombinant antigen receptors
WO2019090003A1 (en) 2017-11-01 2019-05-09 Juno Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptors specific for b-cell maturation antigen (bcma)
EP3716980A1 (en) * 2017-12-01 2020-10-07 Juno Therapeutics, Inc. Methods for dosing and for modulation of genetically engineered cells
SG11202011541SA (en) * 2018-06-01 2020-12-30 Kite Pharma Inc Chimeric antigen receptor t cell therapy
US20210401887A1 (en) * 2018-10-31 2021-12-30 The Children's Hospital Of Philadelphia T cells from lymphatic fluid for diagnostic and therapeutic use
US20220011313A1 (en) * 2018-12-14 2022-01-13 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Biomarker panels for on-treatment prediction of response to immuno-oncology drugs
IL294715A (en) 2020-01-23 2022-09-01 Childrens Medical Ct Corp Inducible t-cell differentiation from human pluripotent stem cells
CN114644716A (zh) * 2022-04-07 2022-06-21 苏州大学 一种抗bxmas1嵌合抗原受体及其修饰的免疫细胞及应用
WO2023230548A1 (en) * 2022-05-25 2023-11-30 Celgene Corporation Method for predicting response to a t cell therapy

Family Cites Families (128)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2116183B (en) 1982-03-03 1985-06-05 Genentech Inc Human antithrombin iii dna sequences therefore expression vehicles and cloning vectors containing such sequences and cell cultures transformed thereby a process for expressing human antithrombin iii and pharmaceutical compositions comprising it
US4452773A (en) 1982-04-05 1984-06-05 Canadian Patents And Development Limited Magnetic iron-dextran microspheres
US4690915A (en) 1985-08-08 1987-09-01 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Adoptive immunotherapy as a treatment modality in humans
US4795698A (en) 1985-10-04 1989-01-03 Immunicon Corporation Magnetic-polymer particles
IN165717B (ko) 1986-08-07 1989-12-23 Battelle Memorial Institute
US5219740A (en) 1987-02-13 1993-06-15 Fred Hutchinson Cancer Research Center Retroviral gene transfer into diploid fibroblasts for gene therapy
US5565566A (en) 1987-04-24 1996-10-15 Discovery Therapeutics, Inc. N6 -substituted 9-methyladenines: a new class of adenosine receptor antagonists
US5033252A (en) 1987-12-23 1991-07-23 Entravision, Inc. Method of packaging and sterilizing a pharmaceutical product
US5052558A (en) 1987-12-23 1991-10-01 Entravision, Inc. Packaged pharmaceutical product
JPH065637Y2 (ja) 1988-02-12 1994-02-09 コーア株式会社 チップ部品
US5298508A (en) 1988-07-19 1994-03-29 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Irreversible inhibitors of adenosine receptors
AU4746590A (en) 1988-12-28 1990-08-01 Stefan Miltenyi Methods and materials for high gradient magnetic separation of biological materials
US5200084A (en) 1990-09-26 1993-04-06 Immunicon Corporation Apparatus and methods for magnetic separation
US5424297A (en) 1992-04-27 1995-06-13 University Of Virginia Alumni Patents Foundation Adenosine dextran conjugates
US5323907A (en) 1992-06-23 1994-06-28 Multi-Comp, Inc. Child resistant package assembly for dispensing pharmaceutical medications
WO1994009138A1 (en) 1992-10-20 1994-04-28 Cetus Oncology Corporation Interleukin-6 receptor antagonists
US5629327A (en) 1993-03-01 1997-05-13 Childrens Hospital Medical Center Corp. Methods and compositions for inhibition of angiogenesis
WO1994025462A1 (en) 1993-05-03 1994-11-10 The United States Of America, Represented By The 8-substituted 1,3,7-trialkyl-xanthine derivatives as a2-selective adenosine receptor antagonists
US5504090A (en) 1994-03-30 1996-04-02 Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for the prevention and treatment of ischemia-reperfusion organ injury
US5827642A (en) 1994-08-31 1998-10-27 Fred Hutchinson Cancer Research Center Rapid expansion method ("REM") for in vitro propagation of T lymphocytes
US5670501A (en) 1994-09-01 1997-09-23 Discovery Therapeutics, Inc. N-substituted 9-alkyladenines
WO1996013593A2 (en) 1994-10-26 1996-05-09 Procept, Inc. Soluble single chain t cell receptors
WO1996018105A1 (en) 1994-12-06 1996-06-13 The President And Fellows Of Harvard College Single chain t-cell receptor
US20020150914A1 (en) 1995-06-30 2002-10-17 Kobenhavns Universitet Recombinant antibodies from a phage display library, directed against a peptide-MHC complex
WO1997027177A2 (en) 1996-01-29 1997-07-31 The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Dihydropyridine-, pyridine-, benzopyran-4-one- and triazoloquinazoline derivatives, their preparation and their use as adenosine receptor antagonists
DE19608753C1 (de) 1996-03-06 1997-06-26 Medigene Gmbh Transduktionssystem und seine Verwendung
WO1997034634A1 (en) 1996-03-20 1997-09-25 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Single chain fv constructs of anti-ganglioside gd2 antibodies
US5635517B1 (en) 1996-07-24 1999-06-29 Celgene Corp Method of reducing TNFalpha levels with amino substituted 2-(2,6-dioxopiperidin-3-YL)-1-oxo-and 1,3-dioxoisoindolines
US6111090A (en) 1996-08-16 2000-08-29 Schering Corporation Mammalian cell surface antigens; related reagents
DK0920505T3 (da) 1996-08-16 2008-09-08 Schering Corp Pattedyrcelleoverfladeantigener og tilhörende reagenser
US5786360A (en) 1996-11-19 1998-07-28 Link Technology Incorporated A1 adenosine receptor antagonists
CA2305630C (en) 1997-10-02 2012-11-06 Sunol Molecular Corporation Soluble single-chain t-cell receptor proteins
EP1025228A4 (en) 1997-10-21 2002-09-18 Human Genome Sciences Inc HUMAN PROTEIN TR11, TR11SV1 AND TR11SV2 SIMILAR TO THE TUMOR NECROSIS FACTOR RECEPTOR
IL137409A0 (en) 1998-02-09 2001-07-24 Genentech Inc Novel tumor necrosis factor receptor homolog and nucleic acids encoding the same
TR200003391T2 (tr) 1998-05-19 2001-02-21 Avidex Limited Çözünür T hücresi reseptörü
US6326390B1 (en) 1998-08-25 2001-12-04 King Pharmaceuticals Reseach And Development, Inc. Use of adenosine A3 receptor antagonists to inhibit tumor growth
JP2002524081A (ja) 1998-09-04 2002-08-06 スローン − ケッタリング インスティチュート フォー キャンサー リサーチ 前立腺−特異的膜抗原に特異的な融合受容体およびその使用
AU2472400A (en) 1998-10-20 2000-05-08 City Of Hope CD20-specific redirected T cells and their use in cellular immunotherapy of CD20+ malignancies
US6232297B1 (en) 1999-02-01 2001-05-15 University Of Virginia Patent Foundation Methods and compositions for treating inflammatory response
US6313131B1 (en) 1999-02-16 2001-11-06 Upsher-Smith Laboratories, Inc. Method of kidney treatment
US6322771B1 (en) 1999-06-18 2001-11-27 University Of Virginia Patent Foundation Induction of pharmacological stress with adenosine receptor agonists
WO2001003720A2 (en) 1999-07-12 2001-01-18 Genentech, Inc. Promotion or inhibition of angiogenesis and cardiovascularization by tumor necrosis factor ligand/receptor homologs
WO2001050401A1 (en) 2000-01-06 2001-07-12 Hd Media, Inc. System and method for distributing and controlling the output of media in public spaces
US20040191260A1 (en) 2003-03-26 2004-09-30 Technion Research & Development Foundation Ltd. Compositions capable of specifically binding particular human antigen presenting molecule/pathogen-derived antigen complexes and uses thereof
CA2410510A1 (en) 2000-06-02 2001-12-13 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Artificial antigen presenting cells and methods of use thereof
AU2001297703B2 (en) 2000-11-07 2006-10-19 City Of Hope CD19-specific redirected immune cells
US20030045552A1 (en) 2000-12-27 2003-03-06 Robarge Michael J. Isoindole-imide compounds, compositions, and uses thereof
US7091353B2 (en) 2000-12-27 2006-08-15 Celgene Corporation Isoindole-imide compounds, compositions, and uses thereof
GB0100624D0 (en) 2001-01-10 2001-02-21 Vernalis Res Ltd Chemical compounds VII
CA2439410C (en) 2001-02-27 2011-09-06 William D. Figg Analogs of thalidomide as potential angiogenesis inhibitors
US7070995B2 (en) 2001-04-11 2006-07-04 City Of Hope CE7-specific redirected immune cells
US20090257994A1 (en) 2001-04-30 2009-10-15 City Of Hope Chimeric immunoreceptor useful in treating human cancers
PL208712B1 (pl) 2001-08-31 2011-05-31 Avidex Ltd Rozpuszczalny receptor komórek T (sTCR), rozpuszczalna αβ-postać receptora komórek T (sTCR), wielowartościowy kompleks receptora komórek T (TCR), sposób wykrywania kompleksów MHC-peptyd, środek farmaceutyczny zawierający sTCR i/lub wielowartościowy kompleks TCR, cząsteczka kwasu nukleinowego, wektor, komórka gospodarz, sposób otrzymywania całości lub części łańcucha α TCR albo całości lub części łańcucha β TCR, sposób otrzymywania rozpuszczalnego receptora komórek T (sTCR), sposób otrzymywania rozpuszczalnej αβ-postaci receptora komórek T (sTCR) oraz sposób wykrywania kompleksów MHC-peptyd
US7939059B2 (en) 2001-12-10 2011-05-10 California Institute Of Technology Method for the generation of antigen-specific lymphocytes
AU2002356962C1 (en) 2001-12-12 2008-05-01 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Methods for using extracellular adenosine inhibitors and adenosine receptor inhibitors to enhance immune response and inflammation
US6992176B2 (en) 2002-02-13 2006-01-31 Technion Research & Development Foundation Ltd. Antibody having a T-cell receptor-like specificity, yet higher affinity, and the use of same in the detection and treatment of cancer, viral infection and autoimmune disease
CA2476625A1 (en) 2002-02-20 2003-08-28 Dyax Corp. Mhc-peptide complex binding ligands
US20030170238A1 (en) 2002-03-07 2003-09-11 Gruenberg Micheal L. Re-activated T-cells for adoptive immunotherapy
US7446190B2 (en) 2002-05-28 2008-11-04 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Nucleic acids encoding chimeric T cell receptors
NZ605429A (en) 2002-09-06 2014-08-29 Amgen Inc Therapeutic human anti-il-1r1 monoclonal antibody
AU2003271904B2 (en) 2002-10-09 2009-03-05 Adaptimmune Limited Single chain recombinant T cell receptors
US20050129671A1 (en) 2003-03-11 2005-06-16 City Of Hope Mammalian antigen-presenting T cells and bi-specific T cells
AU2004244626A1 (en) 2003-05-23 2004-12-09 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services GITR ligand and GITR ligand-related molecules and antibodies and uses thereof
US20050048054A1 (en) 2003-07-11 2005-03-03 Shino Hanabuchi Lymphocytes; methods
WO2005055808A2 (en) 2003-12-02 2005-06-23 Genzyme Corporation Compositions and methods to diagnose and treat lung cancer
GB0409799D0 (en) 2004-04-30 2004-06-09 Isis Innovation Method of generating improved immune response
US20090304679A1 (en) 2004-05-27 2009-12-10 Weidanz Jon A Antibodies as T cell receptor mimics, methods of production and uses thereof
EP1773383B1 (en) 2004-05-27 2012-09-12 Jon A. Weidanz Antibodies as t cell receptor mimics, methods of production and uses thereof
US20090226474A1 (en) 2004-05-27 2009-09-10 Weidanz Jon A Antibodies as T cell receptor mimics, methods of production and uses thereof
WO2006083289A2 (en) 2004-06-04 2006-08-10 Duke University Methods and compositions for enhancement of immunity by in vivo depletion of immunosuppressive cell activity
JP5563194B2 (ja) 2004-06-29 2014-07-30 イムノコア リミテッド 改変ｔ細胞レセプターを発現する細胞
US20100111856A1 (en) 2004-09-23 2010-05-06 Herman Gill Zirconium-radiolabeled, cysteine engineered antibody conjugates
EP2343320B1 (en) 2005-03-25 2017-10-25 GITR, Inc. Anti-gitr antibodies and uses thereof
US20110212086A1 (en) 2006-01-19 2011-09-01 Genzyme Corporation GITR Antibodies For The Treatment of Cancer
EP2111231A4 (en) 2007-02-13 2010-12-15 Univ Northeastern METHODS AND COMPOSITIONS FOR IMPROVING IMMUNE RESPONSES
WO2008121420A1 (en) 2007-03-30 2008-10-09 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Constitutive expression of costimulatory ligands on adoptively transferred t lymphocytes
US7615883B2 (en) 2007-06-06 2009-11-10 Meheen H Joe Wind driven venturi turbine
ES2591281T3 (es) 2007-07-12 2016-11-25 Gitr, Inc. Terapias de combinación que emplean moléculas de enlazamiento a GITR
ES2640216T3 (es) 2007-12-07 2017-11-02 Miltenyi Biotec Gmbh Sistemas y métodos para procesamiento de células
US8479118B2 (en) 2007-12-10 2013-07-02 Microsoft Corporation Switching search providers within a browser search box
US20120164718A1 (en) 2008-05-06 2012-06-28 Innovative Micro Technology Removable/disposable apparatus for MEMS particle sorting device
JP5173594B2 (ja) 2008-05-27 2013-04-03 キヤノン株式会社 管理装置、画像形成装置及びそれらの処理方法
GB0906579D0 (en) 2009-04-16 2009-05-20 Vernalis R&D Ltd Pharmaceuticals, compositions and methods of making and using the same
JP2011526794A (ja) 2008-07-02 2011-10-20 エマージェント プロダクト デベロップメント シアトル， エルエルシー ＴＧＦ−βアンタゴニスト多重標的結合性分子
ES2961498T3 (es) 2008-08-26 2024-03-12 Hope City Método y composiciones para el funcionamiento mejorado del efecto antitumoral de las células T
JPWO2010030002A1 (ja) 2008-09-12 2012-02-02 国立大学法人三重大学 外来性ｇｉｔｒリガンド発現細胞
TWI440469B (zh) 2008-09-26 2014-06-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Improved antibody molecules
WO2010065959A1 (en) 2008-12-05 2010-06-10 Northeastern University Method of preparing adenosine-resistant anti-tumor t lymphocytes for adoptive immunotherapy
KR101790802B1 (ko) 2009-09-03 2017-10-27 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 항-ｇｉｔｒ 항체
CA2777053A1 (en) 2009-10-06 2011-04-14 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Human single-chain t cell receptors
EP2491116A4 (en) 2009-10-22 2013-12-11 Univ Jefferson CELL-BASED ANTI-RISK COMPOSITIONS AND METHOD FOR THEIR PREPARATION AND USE
GB0919054D0 (en) 2009-10-30 2009-12-16 Isis Innovation Treatment of obesity
JP5956342B2 (ja) 2009-11-03 2016-07-27 シティ・オブ・ホープＣｉｔｙ ｏｆ Ｈｏｐｅ 形質導入Ｔ細胞選択のためのトランケート上皮増殖因子レセプタ（ＥＧＦＲｔ）
EP3112382A1 (en) 2009-12-29 2017-01-04 Emergent Product Development Seattle, LLC Heterodimer binding proteins and uses thereof
JP6066732B2 (ja) 2010-03-05 2017-01-25 ザ・ジョンズ・ホプキンス・ユニバーシティー 標的免疫調節抗体および融合タンパク質に基づく組成物および方法
CA2816668C (en) * 2010-11-10 2021-03-23 Amgen Research (Munich) Gmbh Prevention of adverse effects caused by cd3 specific binding domains
BR122021026169B1 (pt) 2010-12-09 2023-12-12 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Uso de uma célula
ES2841983T3 (es) 2011-03-23 2021-07-12 Hutchinson Fred Cancer Res Método y composiciones para inmunoterapia celular
KR20140033029A (ko) 2011-04-01 2014-03-17 메모리얼 슬로안-케터링 캔서 센터 에이치엘에이 에이2에 의해 제공된 더블유티1 펩타이드에 특이적인 티 세포 수용체 유사 항체
KR102028340B1 (ko) 2011-04-13 2019-10-04 이뮤니쿰 에이비 항원-특이적 t 세포의 증식 방법
US8398282B2 (en) 2011-05-12 2013-03-19 Delphi Technologies, Inc. Vehicle front lighting assembly and systems having a variable tint electrowetting element
US20130108641A1 (en) 2011-09-14 2013-05-02 Sanofi Anti-gitr antibodies
BR112014011417B1 (pt) 2011-11-11 2021-10-13 Fred Hutchinson Cancer Research Center Polipeptídeo isolado capaz de elicitar uma resposta de célula t antígeno-específica para ciclina a1 humana, composição imunogênica compreendendo o referido polipeptídeo, bem como método para preparar células apresentadoras de antígeno, antígeno-pulsadas,e uso destas para superexpressão de ccna1
WO2013109759A1 (en) 2012-01-17 2013-07-25 Northeastern University Methods and compositions for expanding immunosuppressive t regulatory cells in vitro and uses thereof
EP2814846B1 (en) 2012-02-13 2020-01-08 Seattle Children's Hospital d/b/a Seattle Children's Research Institute Bispecific chimeric antigen receptors and therapeutic uses thereof
WO2013126726A1 (en) 2012-02-22 2013-08-29 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Double transgenic t cells comprising a car and a tcr and their methods of use
KR20150009556A (ko) 2012-05-03 2015-01-26 프레드 헛친슨 켄서 리서치 센터 증강된 친화성 t　세포 수용체 및 이의 제조 방법
US9371396B2 (en) 2012-06-15 2016-06-21 Sinomab Bioscience Limited Anti-CD22 anti-idiotypic antibodies and uses thereof
LT3338794T (lt) 2012-07-13 2020-05-25 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Car priešnavikinio aktyvumo toksiškumo reguliavimas
WO2014031687A1 (en) 2012-08-20 2014-02-27 Jensen, Michael Method and compositions for cellular immunotherapy
CN112430580A (zh) 2012-10-02 2021-03-02 纪念斯隆-凯特琳癌症中心 用于免疫疗法的组合物和方法
CN104781789B (zh) 2012-12-20 2018-06-05 三菱电机株式会社 车载装置
EP3623380A1 (en) 2013-03-15 2020-03-18 Michael C. Milone Targeting cytotoxic cells with chimeric receptors for adoptive immunotherapy
US9393268B2 (en) 2013-03-15 2016-07-19 Thomas Jefferson University Cell-based anti-cancer compositions with reduced toxicity and methods of making and using the same
TWI654206B (zh) 2013-03-16 2019-03-21 諾華公司 使用人類化抗－ｃｄ１９嵌合抗原受體治療癌症
CA2913052A1 (en) 2013-05-24 2014-11-27 Board Of Regents, The University Of Texas System Chimeric antigen receptor-targeting monoclonal antibodies
US9108442B2 (en) 2013-08-20 2015-08-18 Ricoh Company, Ltd. Image forming apparatus
US9512084B2 (en) 2013-11-29 2016-12-06 Novartis Ag Amino pyrimidine derivatives
MX2016007239A (es) 2013-12-06 2017-01-05 Celgene Corp Metodos para determinar la eficacia del farmaco para el tratamiento de linfoma difuso de celulas b grandes, mieloma multiple, y canceres mieloides.
KR20240042250A (ko) 2014-04-07 2024-04-01 노파르티스 아게 항-cd19 키메라 항원 수용체를 사용한 암의 치료
US10301370B2 (en) 2014-05-02 2019-05-28 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods of chimeric autoantibody receptor T cells
SG11201700770PA (en) 2014-08-19 2017-03-30 Novartis Ag Anti-cd123 chimeric antigen receptor (car) for use in cancer treatment
JP7057669B2 (ja) * 2014-10-20 2022-04-20 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド 養子細胞療法において投薬するための方法および組成物
MX2017005344A (es) 2014-10-27 2017-08-15 Hutchinson Fred Cancer Res Composiciones y metodos para reforzar la eficacia de inmunoterapia celular adoptiva.
IL303247A (en) * 2014-12-29 2023-07-01 Novartis Ag Methods for preparing cells expressing a chimeric receptor antigen
IL284985B2 (en) 2015-02-18 2023-03-01 Enlivex Therapeutics R& D Ltd Combined immunotherapy and cytokine control therapy for cancer treatment
JP6905163B2 (ja) * 2015-09-03 2021-07-21 ザ トラスティーズ オブ ザ ユニバーシティ オブ ペンシルバニア サイトカイン放出症候群を予測するバイオマーカー
KR20190021200A (ko) * 2016-03-22 2019-03-05 시애틀 칠드런즈 호스피탈 디/비/에이 시애틀 칠드런즈 리서치 인스티튜트 독성을 예방 또는 경감시키기 위한 조기 개재 방법

Also Published As

Publication number Publication date
EP3548084A1 (en) 2019-10-09
CN110290807A (zh) 2019-09-27
JP2020511406A (ja) 2020-04-16
WO2018102787A1 (en) 2018-06-07
JP7227131B2 (ja) 2023-02-21
EP4279136A2 (en) 2023-11-22
JP2022084710A (ja) 2022-06-07
BR112019011065A2 (pt) 2019-10-01
MX2019006286A (es) 2020-02-07
US20200078400A1 (en) 2020-03-12
ES2961666T3 (es) 2024-03-13
EP3548084B1 (en) 2023-08-23
MA46963A (fr) 2019-10-09
CA3045355A1 (en) 2018-06-07
RU2019120398A3 (ko) 2021-09-16
WO2018102787A9 (en) 2018-10-25
RU2019120398A (ru) 2021-01-12
EP4279136A3 (en) 2024-03-20
JP2024045372A (ja) 2024-04-02
AU2017368333A1 (en) 2019-06-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7299841B2 (ja) 細胞療法と免疫調節化合物の併用
KR20190104528A (ko) Car-t 세포들 투여를 결정하는 방법
US20200289565A1 (en) Combination of a cell therapy and a gamma secretase inhibitor
US11564946B2 (en) Methods associated with tumor burden for assessing response to a cell therapy
JP2023065449A (ja) 細胞療法における投薬に関する組成物、製造物品、および方法
JP2022512971A (ja) 処置およびｔ細胞調節のための方法および併用
US20190358262A1 (en) Methods for modulation of car-t cells
US20190298772A1 (en) Combination therapy of a t cell-based therapy and a btk inhibitor
US20210198372A1 (en) Methods for dosing and for modulation of genetically engineered cells
US20210128616A1 (en) Phenotypic markers for cell therapy and related methods
EP3664820B1 (en) Methods for producing genetically engineered cell compositions and related compositions
US20200239910A1 (en) Methods and compositions for preparing genetically engineered cells
JP2024016134A (ja) 細胞療法に関連する毒性に関する製造物品および方法
US20210132042A1 (en) Methods of assessing or monitoring a response to a cell therapy
RU2795454C2 (ru) Способы и композиции для получения генно-инженерных клеток

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
AMND Amendment
E902 Notification of reason for refusal
AMND Amendment
E601 Decision to refuse application
X091 Application refused [patent]
E902 Notification of reason for refusal