JP2017536102A - 抗アルファ−シヌクレイン抗体及び使用方法 - Google Patents

抗アルファ−シヌクレイン抗体及び使用方法 Download PDF

Info

Publication number
JP2017536102A
JP2017536102A JP2017520354A JP2017520354A JP2017536102A JP 2017536102 A JP2017536102 A JP 2017536102A JP 2017520354 A JP2017520354 A JP 2017520354A JP 2017520354 A JP2017520354 A JP 2017520354A JP 2017536102 A JP2017536102 A JP 2017536102A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
antibody
synuclein
hvr
amino acid
disease
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2017520354A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2017536102A5 (ja
Inventor
ガイ アヤロン，
ガイ アヤロン，
ティル マウラー，
ティル マウラー，
Original Assignee
ジェネンテック， インコーポレイテッド
ジェネンテック， インコーポレイテッド
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ジェネンテック， インコーポレイテッド, ジェネンテック， インコーポレイテッド filed Critical ジェネンテック， インコーポレイテッド
Publication of JP2017536102A publication Critical patent/JP2017536102A/ja
Publication of JP2017536102A5 publication Critical patent/JP2017536102A5/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/28—Neurological disorders
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/28—Neurological disorders
    • G01N2800/2814—Dementia; Cognitive disorders
    • G01N2800/2828—Prion diseases
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/28—Neurological disorders
    • G01N2800/2835—Movement disorders, e.g. Parkinson, Huntington, Tourette

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本発明は、抗アルファ−シヌクレイン（抗α−シヌクレイン）抗体及びその使用方法に関する。【選択図】図１２Ａ—Ｂ

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１４年１０月１６日出願の米国仮出願第６２／０６４８６７号の優先権の利益を主張し、この出願はその全体が参照により本明細書に援用される。
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を含み、その全内容は本明細書において出典明示により援用される。前記ＡＳＣＩＩコピーは、２０１５年９月２８日に作成され、Ｐ３２３００−ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔと命名され、大きさは１１，０２８バイトである。
技術分野
本発明は、抗アルファ−シヌクレイン（抗α−シヌクレイン）抗体及びその使用方法に関する。
アルファ−シヌクレインは、豊富なシナプス前タンパク質である。α−シヌクレインの点突然変異ならびにα−シヌクレイン遺伝子の重複（duplications）及び三重化（triplications）は、パーキンソン病と関連している。（例えば、Polymeropoulos et al (1997) Science 276:2045-2047; Kruger et al (1998) Nat Genet 18:106-108; Zarranz et al (2004) Ann Neurol 55:164-173; Kiely et al (2013) Acta Neuropathol 125:753-769; Proukakis et al (2013) Neurology 80:1062-1064; Singleton et al (2003) Science 302:841；及びIbanez et al (2004) Lancet 364:1169-1171を参照）。更に、α−シヌクレインは、例えばパーキンソン病、レビー小体病及び多系統萎縮症などの神経変性疾患の病理学的特徴であるレビー小体と呼ばれる細胞内タンパク質凝集体の主要成分である。（例えば、Spillantini et al (1997) Nature 388:839-840; Wakabayashi et al (1997) Neurosci Lett 239:45-48; Arawaka et al (1998) Neurology 51:887-889;及びGai et al (1998) Lancet 352:547-548を参照）。
シヌクレイン病は神経変性疾患の１つのクラスを構成する；この用語は、ヒト神経系の進行性変性疾患のスペクトルを示すために広く使用される。α−シヌクレインのミスフォールディング及び細胞内凝集は、ニューロン及び／又はマクログリア細胞における異常なα−シヌクレイン免疫反応性封入体の存在を他の特性と共有するシヌクレイン病の病因において重要な因子であると考えられている。シヌクレイン病には、パーキンソン病（ＰＤ）、パーキンソン病の認知症（ＰＤＤ）、レビー小体病（ＬＢＤ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、若年発症全身性神経麻痺ジストロフィー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、純粋自律神経失調症（ＰＡＦ）、及び脳内鉄沈着を伴う神経変性症１型（ＮＢＩＡ−１）が含まれる。
α−シヌクレインに対する抗体及び、とりわけ様々なシヌクレイン病に対する治療的アプローチにおけるそれらの使用は以前に記載されている。（例えば、国際特許出願公開番号：ＷＯ１９９５／０６４０７、ＷＯ２００４／０４１０６７、ＷＯ２００５／０１３８８９、ＷＯ２００５／０４７８６０、ＷＯ２００６／０２０５８１、ＷＯ２００６／０４５０３７、ＷＯ２００７／０１２０６１、ＷＯ２００８／１０３４７２、ＷＯ２０１３／０６３５１６、ＷＯ２０１３／１１２９４５、ＷＯ２０１４／０５８９２４、ＷＯ２０１０／０６９６０３、ＷＯ２０１２／１７７９７２、ＷＯ２０１３／０６６８１８、ＷＯ２０１１／１０４６９６、ＷＯ２００９／１３３５２１、ＷＯ２０１２／０５１４９８、ＷＯ２０１１／１０７５４４、ＷＯ２００７／０１１９０７を参照；例えば、Baba et al (1998) Am J Pathol 152:879-884; Emadi et al (2004) Biochemistry 43:2871-2878; Emadi et al (2007) J Mol Biol 368:1132-1144; Masliah et al (2005) Neuron 46:857-868を参照）。しかし、とりわけ、シヌクレイン病の有効な治療のために、α−シヌクレインに対する更なる新規の抗体の必要性が存在する。
本発明は、抗α−シヌクレイン抗体、抗α−シヌクレイン抗体を含む組成物、及びそれらの使用方法に関する。
幾つかの実施態様において、本発明の単離された抗α−シヌクレイン抗体は、三つの重鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３）及び三つの軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３）を含み、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号９のアミノ酸配列を含み；
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号１０のアミノ酸配列を含み；
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号１１のアミノ酸配列を含み；
（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号６のアミノ酸配列を含み；
（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号７のアミノ酸配列を含み；かつ
（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号８のアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施態様において、本発明は、少なくとも一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、及び／又は六つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む単離された抗α−シヌクレイン抗体を提供し、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号９のアミノ酸配列を含み；
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号１０のアミノ酸配列を含み；
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号１１のアミノ酸配列を含み；
（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１は配列番号６のアミノ酸配列を含み；
（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号７のアミノ酸配列を含み；かつ
（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号８のアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施態様において、本発明は、三つの軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＬＶＲ−Ｌ３）を含む単離された抗α−シヌクレイン抗体を提供し、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号６のアミノ酸配列を含み；
（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号７のアミノ酸配列を含み；かつ
（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号８のアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施態様において、本発明は、三つの重鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３）を含む単離された抗α−シヌクレイン抗体を提供し、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号９のアミノ酸配列を含み；
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号１０のアミノ酸配列を含み；かつ
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号１１のアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施態様において、本発明は、少なくとも一つ、二つ、及び／又は三つの軽鎖超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む単離された抗α−シヌクレイン抗体を提供し、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号６のアミノ酸配列を含み；
（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号７のアミノ酸配列を含み；かつ
（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号８のアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施態様において、本発明は、少なくとも一つ、二つ、及び／又は三つの重鎖超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む単離された抗α−シヌクレイン抗体を提供し、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号９のアミノ酸配列を含み；
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号１０のアミノ酸配列を含み；かつ
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号１１のアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施態様において、本発明の単離された抗α−シヌクレイン抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、ここで、重鎖可変領域は配列番号３のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号２のアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施態様において、本発明の単離された抗α−シヌクレイン抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
幾つかの実施態様において、本発明の単離された抗α−シヌクレイン抗体は、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
幾つかの実施態様において、本発明の単離された抗α−シヌクレイン抗体は、三つの重鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３）及び三つの軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３）を含み、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号１５のアミノ酸配列を含み；
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号１６のアミノ酸配列を含み；
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号１７のアミノ酸配列を含み；
（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号１２のアミノ酸配列を含み；
（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１３のアミノ酸配列を含み；かつ
（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１４のアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施態様において、本発明は、少なくとも一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、及び／又は六つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む単離された抗α−シヌクレイン抗体を提供し、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号１５のアミノ酸配列を含み；
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号１６のアミノ酸配列を含み；
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号１７のアミノ酸配列を含み；
（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１は配列番号１２のアミノ酸配列を含み；
（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１３のアミノ酸配列を含み；かつ
（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１４のアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施態様において、本発明は、三つの軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＬＶＲ−Ｌ３）を含む単離された抗α−シヌクレイン抗体を提供し、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号１２のアミノ酸配列を含み；
（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１３のアミノ酸配列を含み；かつ
（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１４のアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施態様において、本発明は、三つの重鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３）を含む単離された抗α−シヌクレイン抗体を提供し、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号１５のアミノ酸配列を含み；
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号１６のアミノ酸配列を含み；かつ
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号１７のアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施態様において、本発明は、少なくとも一つ、二つ、及び／又は三つの軽鎖超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む単離された抗α−シヌクレイン抗体を提供し、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号１２のアミノ酸配列を含み；
（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１３のアミノ酸配列を含み；かつ
（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１４のアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施態様において、本発明は、少なくとも一つ、二つ、及び／又は三つの重鎖超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む単離された抗α−シヌクレイン抗体を提供し、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号１５のアミノ酸配列を含み；
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号１６のアミノ酸配列を含み；かつ
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号１７のアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施態様において、本発明の単離された抗α−シヌクレイン抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、ここで、重鎖可変領域は配列番号５のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号４のアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施態様において、本発明の単離された抗α−シヌクレイン抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
幾つかの実施態様において、本発明の単離された抗α−シヌクレイン抗体は、配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
本発明の抗α−シヌクレイン抗体は、α−シヌクレインのエピトープに結合する。幾つかの実施態様において、本発明の抗α−シヌクレイン抗体は、ヒトα−シヌクレインのアミノ酸残基５、８−９、１５−２２、２８、３９−４３、及び７８に結合する（配列番号１のヒトα−シヌクレインアミノ酸配列に従って番号付けされたアミノ酸残基；本明細書を通じて）。幾つかの実施態様において、本発明の抗α−シヌクレイン抗体は、ヒトα−シヌクレインのアミノ酸残基５、８−９、１５−２２、２８、及び３９−４３に結合する。幾つかの実施態様において、本発明の抗α−シヌクレイン抗体は、ヒトα−シヌクレインのアミノ酸残基５−７８を含むエピトープ又は領域に結合する：
（ＭＤＶＦＭＫＧＬＳＫＡＫＥＧＶＶＡＡＡＥＫＴＫＱＧＶＡＥＡＡＧＫＴＫＥＧＶＬＹＶＧＳＫＴＫＥＧＶＶＨＧＶＡＴＶＡＥＫＴＫＥＱＶＴＮＶＧＧＡＶＶＴＧＶＴＡＶＡ；配列番号１８）。幾つかの実施態様において、本発明の抗α−シヌクレイン抗体は、ヒトα−シヌクレインのアミノ酸残基５−４３を含むエピトープ又は領域に結合する：（ＭＤＶＦＭＫＧＬＳＫＡＫＥＧＶＶＡＡＡＥＫＴＫＱＧＶＡＥＡＡＧＫＴＫＥＧＶＬＹＶＧＳＫ；配列番号１９）。
幾つかの実施態様において、本発明の抗α−シヌクレイン抗体は、ヒトα−シヌクレインのアミノ酸残基３７−５１を含むエピトープ又は領域に結合する（ＶＬＹＶＧＳＫＴＫＥＧＶＶＨＧ；配列番号２０）。
幾つかの実施態様において、本発明の抗α−シヌクレイン抗体は、ヒトα−シヌクレインのアミノ酸残基１０４−１０５、１０７、１０９−１１１、１１３−１１６、及び１１８に結合する。幾つかの実施態様において、本発明の抗α−シヌクレイン抗体は、ヒトα−シヌクレインのアミノ酸残基１０４−１１８を含むエピトープ又は領域に結合する（ＧＫＮＥＥＧＡＰＱＥＧＩＬＥＤＭＰＶ；配列番号２１）。
幾つかの実施態様において、本発明の抗α−シヌクレイン抗体は、参照モノクローナル抗体１Ｆ７のヒトα−シヌクレインへの結合を競合的に阻害する。幾つかの実施態様において、本発明の抗α−シヌクレイン抗体は、参照モノクローナル抗体１３Ｆ３のヒトα−シヌクレインへの結合を競合的に阻害する。幾つかの実施態様において、本発明の抗α−シヌクレイン抗体は、参照モノクローナル抗体１Ｆ７と同じヒトα−シヌクレイン上のエピトープに結合する。幾つかの実施態様において、本発明の抗α−シヌクレイン抗体は、参照モノクローナル抗体１３Ｆ３と同じヒトα−シヌクレイン上のエピトープに結合する。
幾つかの実施態様において、本発明の抗α−シヌクレイン抗体は、ヒトα−シヌクレインに結合し、ここで、α−シヌクレインは、単量体であるか又は単量体形態である。他の実施態様において、本発明の抗α−シヌクレイン抗体は、ヒトα−シヌクレインに結合し、ここで、αシヌクレインは、オリゴマーであるか、又はオリゴマー若しくは凝集した形態である。
本発明はまた、本発明の抗−α−シヌクレイン抗体をコードする単離された核酸を提供する。本発明はまた、本発明の抗−α−シヌクレイン抗体をコードする核酸を含むベクターを提供する。本発明はまた、本発明の核酸又はベクターを含む宿主細胞も提供する。ベクターは、任意のタイプ、例えば、発現ベクターのような組換えベクターであり得る。種々の宿主細胞のいずれも使用することができる。一実施態様において、宿主細胞は原核細胞、例えば大腸菌である。別の実施態様において、宿主細胞は真核細胞、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞のような哺乳動物細胞である。
本発明は更に、本発明の抗α−シヌクレイン抗体を産生する方法を提供する。例えば、本発明は、抗α−シヌクレイン抗体（本明細書で定義されるように、完全長抗体及びその断片を含む）を作製するための方法を提供し、該方法は、抗体又はその断片が産生されるように、抗α−シヌクレイン抗体又はその断片をコードする本発明の組換えベクターを適切な宿主細胞中で発現させることを含む。幾つかの実施態様において、該方法は、本発明の抗α−シヌクレイン抗体（又はその断片）をコードする核酸が発現されるように、該核酸を含む宿主細胞を培養することを含む。該方法は、宿主細胞培養株又は宿主細胞培地から抗α−シヌクレイン抗体又はその断片を回収することを更に含んでもよい。
本発明はまた、本発明の抗α−シヌクレイン抗体及び薬学的に許容される担体を含む薬学的製剤も提供する。薬学的製剤は、追加の治療剤（例えば、異なる抗α−シヌクレイン抗体）を更に含んでもよい。
本発明はまた、本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む組成物を提供する。組成物は、追加の治療剤（例えば、異なる抗α−シヌクレイン抗体）を更に含んでもよい。
本発明はまた、シヌクレイン病の予防における使用のための本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む組成物を提供する。幾つかの実施態様において、本発明は、シヌクレイン病の予防における使用のための本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む薬学的組成物を提供する。本発明は更に、シヌクレイン病の治療における使用のための本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む組成物を提供する。幾つかの実施態様において、本発明は、シヌクレイン病の治療における使用のための本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む薬学的組成物を提供する。
本発明はまた、パーキンソン病の発症を予防又は遅延させることにおける使用のための本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む組成物を提供する。幾つかの実施態様において、本発明はまた、パーキンソン病の発症を予防又は遅延させることにおける使用のための本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む薬学的組成物を提供する。本発明は更に、パーキンソン病の治療における使用のための本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む組成物を提供する。幾つかの実施態様において、本発明は、パーキンソン病の治療における使用のための本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む薬学的組成物を提供する。
本発明はまた、レビー小体病の発症を予防又は遅延させることにおける使用のための本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む組成物を提供する。幾つかの実施態様において、本発明は、レビー小体病の発症を予防又は遅延させることにおける使用のための本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む薬学的組成物を提供する。本発明は更に、レビー小体病の治療における使用のための本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む組成物を提供する。幾つかの実施態様において、本発明は、レビー小体病の治療における使用のための本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む薬学的組成物を提供する。
本発明はまた、レビー小体型認知症の発症を予防又は遅延させることにおける使用のための本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む組成物を提供する。幾つかの実施態様において、本発明は、レビー小体型認知症の発症を予防又は遅延させることにおける使用のための本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む薬学的組成物を提供する。本発明は更に、レビー小体型認知症の治療における使用のための本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む組成物を提供する。幾つかの実施態様において、本発明は、レビー小体型認知症の治療における使用のための本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む薬学的組成物を提供する。
本発明はまた、多系統萎縮症の発症を予防又は遅延させることにおける使用のための本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む組成物を提供する。幾つかの実施態様において、本発明は、多系統萎縮症の発症を予防又は遅延させることにおける使用のための本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む薬学的組成物を提供する。本発明は更に、多系統萎縮症の治療における使用のための本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む組成物を提供する。幾つかの実施態様において、本発明は、多系統萎縮症の治療における使用のための本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む薬学的組成物を提供する。
本発明はまた、純粋自律神経失調症の発症を予防又は遅延させることにおける使用のための本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む組成物を提供する。幾つかの実施態様において、本発明は、純粋自律神経失調症の発症を予防又は遅延させることにおける使用のための本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む薬学的組成物を提供する。本発明は更に、純粋自律神経失調症の治療における使用のための本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む組成物を提供する。幾つかの実施態様において、本発明は、純粋自律神経失調症の治療における使用のための本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む薬学的組成物を提供する。
本発明はまた、パーキンソン病の認知症の発症を予防又は遅延させること、若年発症全身性神経麻痺ジストロフィー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病）の発症を予防又は遅延させること、又は脳内鉄沈着を伴う神経変性症１型（ＮＢＩＡ−１）の発症を予防又は遅延させることにおける使用のための本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む組成物を提供する。幾つかの実施態様において、本発明は、パーキンソン病の認知症の発症を予防又は遅延させること、若年発症全身性神経麻痺ジストロフィー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病）の発症を予防又は遅延させること、又は脳内鉄沈着を伴う神経変性症１型（ＮＢＩＡ−１）の発症を予防又は遅延させることにおける使用のための本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む薬学的組成物を提供する。．本発明は更に、パーキンソン病の認知症の治療、若年発症全身性神経麻痺ジストロフィー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病）の治療、又は脳内鉄沈着を伴う神経変性症１型（ＮＢＩＡ−１）の治療における使用のための本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む組成物を提供する。幾つかの実施態様において、本発明は、パーキンソン病の認知症の治療、若年発症全身性神経麻痺ジストロフィー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病）の治療、又は脳内鉄沈着を伴う神経変性症１型（ＮＢＩＡ−１）の治療における使用のための本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む薬学的組成物を提供する。
本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む組成物は、医薬の製造においても使用され得る。医薬は、シヌクレイン病、パーキンソン病（ＰＤ）、パーキンソン病の認知症（ＰＤＤ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、レビー小体病（ＬＢＤ）、若年発症全身性神経麻痺ジストロフィー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、純粋自律神経失調症（ＰＡＦ）、及び脳内鉄沈着を伴う神経変性症１型（ＮＢＩＡ−１）の治療、予防、又はその発症を遅延させるために使用のためであって良い。特定の実施態様において、医薬は更に、追加の治療剤（例えば、異なる抗α−シヌクレイン抗体）を更に含んでもよい。
本発明はまた、シヌクレイン病を治療する、予防する、又はその発症を遅延させるための方法を提供し、該方法は本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む組成物の有効量を、それを必要とする被験体に投与することと、それにより被験体におけるシヌクレイン病を治療する、予防する、又はその発症を遅延させることを含む。本発明はまた、パーキンソン病を治療する、予防する、又はその発症を遅延させるための方法を提供し、該方法は本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む組成物の有効量を、それを必要とする被験体に投与することと、それにより被験体におけるパーキンソン病を治療する、予防する、又はその発症を遅延させることを含む。本発明はまた、パーキンソン病の認知症を治療する、予防する、又はその発症を遅延させるための方法を提供し、該方法は本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む組成物の有効量を、それを必要とする被験体に投与することと、それにより被験体におけるパーキンソン病の認知症を治療する、予防する、又はその発症を遅延させることを含む。本発明はまた、レビー小体型認知症を治療する、予防する、又はその発症を遅延させるための方法を提供し、該方法は本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む組成物の有効量を、それを必要とする被験体に投与することと、それにより被験体におけるレビー小体型認知症を治療する、予防する、又はその発症を遅延させることを含む。本発明はまた、レビー小体病を治療する、予防する、又はその発症を遅延させるための方法を提供し、該方法は本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む組成物の有効量を、それを必要とする被験体に投与することと、それにより被験体におけるレビー小体病を治療する、予防する、又はその発症を遅延させることを含む。本発明はまた、若年発症全身性神経麻痺ジストロフィー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病）を治療する、予防する、又はその発症を遅延させるための方法を提供し、該方法は本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む組成物の有効量を、それを必要とする被験体に投与することと、それにより被験体における若年発症全身性神経麻痺ジストロフィー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病）を治療する、予防する、又はその発症を遅延させることを含む。本発明はまた、多系統萎縮症を治療する、予防する、又はその発症を遅延させるための方法を提供し、該方法は本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む組成物の有効量を、それを必要とする被験体に投与することと、それにより被験体における多系統萎縮症を治療する、予防する、又はその発症を遅延させることを含む。本発明はまた、純粋自律神経失調症を治療する、予防する、又はその発症を遅延させるための方法を提供し、該方法は本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む組成物の有効量を、それを必要とする被験体に投与することと、それにより被験体における純粋自律神経失調症を治療する、予防する、又はその発症を遅延させることを含む。本発明はまた、脳内鉄沈着を伴う神経変性症１型（ＮＢＩＡ−１）を治療する、予防する、又はその発症を遅延させるための方法を提供し、該方法は本発明の抗α−シヌクレイン抗体を含む組成物の有効量を、それを必要とする被験体に投与することと、それにより被験体における脳内鉄沈着を伴う神経変性症１型（ＮＢＩＡ−１）を治療する、予防する、又はその発症を遅延させることを含む。特定の実施態様において、上記方法の何れかにおいて、本方法は、有効量の追加の治療剤を被験体に投与することを更に含む。幾つかの実施態様において、追加の治療剤は、別の抗α−シヌクレイン抗体である。
別の態様において、本発明は、シヌクレイン病、パーキンソン病、パーキンソン病の認知症、レビー小体型認知症、レビー小体病、若年発症全身性神経麻痺ジストロフィー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病）、多系統萎縮症、純粋自律神経失調症、及び脳内鉄沈着を伴う神経変性症１型からなる群から選択される障害を治療する、予防する、又はその発症を遅延させる方法における使用のための抗α−シヌクレイン抗体を提供する。
別の態様において、本発明は、シヌクレイン病、パーキンソン病、パーキンソン病の認知症、レビー小体型認知症、レビー小体病、若年発症全身性神経麻痺ジストロフィー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病）、多系統萎縮症、純粋自律神経失調症、及び脳内鉄沈着を伴う神経変性症１型からなる群から選択される障害を治療する、予防する、又はその発症を遅延させるための医薬の製造における抗α−シヌクレイン抗体の使用を提供する。
他の態様において、本発明は、医薬の製造における本発明の核酸の使用を提供する。医薬は、シヌクレイン病、パーキンソン病（ＰＤ）、パーキンソン病の認知症（ＰＤＤ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、レビー小体病（ＬＢＤ）、若年発症全身性神経麻痺ジストロフィー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、純粋自律神経失調症（ＰＡＦ）、及び脳内鉄沈着を伴う神経変性症１型（ＮＢＩＡ−１）の治療、予防、又はその発症を遅延させるために使用のためであって良い。特定の実施態様において、医薬は更に、追加の治療剤（例えば、異なる抗α−シヌクレイン抗体）を更に含んでもよい。
他の態様において、本発明は、医薬の製造における本発明の発現ベクターの使用を提供する。医薬は、シヌクレイン病、パーキンソン病（ＰＤ）、パーキンソン病の認知症（ＰＤＤ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、レビー小体病（ＬＢＤ）、若年発症全身性神経麻痺ジストロフィー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、純粋自律神経失調症（ＰＡＦ）、及び脳内鉄沈着を伴う神経変性症１型（ＮＢＩＡ−１）の治療、予防、又はその発症を遅延させるために使用のためであって良い。特定の実施態様において、医薬は更に、追加の治療剤（例えば、異なる抗α−シヌクレイン抗体）を更に含んでもよい。
他の態様において、本発明は、医薬の製造における本発明の宿主細胞の使用を提供する。医薬は、シヌクレイン病、パーキンソン病（ＰＤ）、パーキンソン病の認知症（ＰＤＤ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、レビー小体病（ＬＢＤ）、若年発症全身性神経麻痺ジストロフィー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、純粋自律神経失調症（ＰＡＦ）、及び脳内鉄沈着を伴う神経変性症１型（ＮＢＩＡ−１）の治療、予防、又はその発症を遅延させるために使用のためであって良い。特定の実施態様において、医薬は更に、追加の治療剤（例えば、異なる抗α−シヌクレイン抗体）を更に含んでもよい。
他の態様において、本発明は、医薬の製造における本発明の製造品の使用を提供する。医薬は、シヌクレイン病、パーキンソン病（ＰＤ）、パーキンソン病の認知症（ＰＤＤ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、レビー小体病（ＬＢＤ）、若年発症全身性神経麻痺ジストロフィー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、純粋自律神経失調症（ＰＡＦ）、及び脳内鉄沈着を伴う神経変性症１型（ＮＢＩＡ−１）の治療、予防、又はその発症を遅延させるために使用のためであって良い。特定の実施態様において、医薬は更に、追加の治療剤（例えば、異なる抗α−シヌクレイン抗体）を更に含んでもよい。
他の態様において、本発明は、医薬の製造における本発明のキットの使用を提供する。医薬は、シヌクレイン病、パーキンソン病（ＰＤ）、パーキンソン病の認知症（ＰＤＤ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、レビー小体病（ＬＢＤ）、若年発症全身性神経麻痺ジストロフィー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、純粋自律神経失調症（ＰＡＦ）、及び脳内鉄沈着を伴う神経変性症１型（ＮＢＩＡ−１）の治療、予防、又はその発症を遅延させるために使用のためであって良い。特定の実施態様において、医薬は更に、追加の治療剤（例えば、異なる抗α−シヌクレイン抗体）を更に含んでもよい。
幾つかの実施態様において、本発明の抗α−シヌクレイン抗体は、モノクローナル抗体である。幾つかの実施態様において、本発明の抗α−シヌクレイン抗体は、マウス抗体である。幾つかの実施態様において、本発明の抗α−シヌクレイン抗体は、ヒト、ヒト化、又はキメラ抗体である。特定の実施態様において、本発明の抗α−シヌクレイン抗体は、ヒト、ヒト化、又はキメラ抗体である。
幾つかの実施態様において、本発明の抗α−シヌクレイン抗体は、単量体α−シヌクレインタンパク質に結合する。幾つかの実施態様において、本発明の抗α−シヌクレイン抗体は、α−シヌクレインのオリゴマー（例えば、オリゴマー形態）に結合する。幾つかの実施態様において、本発明の抗α−シヌクレイン抗体は、凝集したα−シヌクレインタンパク質に結合する。更に他の実施態様において、本発明の抗α−シヌクレイン抗体は、α−シヌクレインの単量体形態及びオリゴマー形態に結合する。
幾つかの実施態様において、本発明は、α−シヌクレインの検出における使用のための、α−シヌクレインの単量体の検出における使用のための、及び／又はα−シヌクレインのオリゴマーの検出における使用のための抗α−シヌクレイン抗体を提供する。幾つかの実施態様において、本発明は、α−シヌクレイン原線維（例えば、α−シヌクレインの原線維形態）又はα−シヌクレインの凝集した形態の検出における使用のための抗α−シヌクレイン抗体を提供する。更に他の実施態様において、本発明の抗α−シヌクレイン抗体は、例えば、シヌクレイン病、パーキンソン病（ＰＤ）、パーキンソン病の認知症（ＰＤＤ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、レビー小体病（ＬＢＤ）、若年発症全身性神経麻痺ジストロフィー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、純粋自律神経失調症（ＰＡＦ）、及び脳内鉄沈着を伴う神経変性症１型（ＮＢＩＡ−１）を含む疾患又は障害に関連するα−シヌクレインタンパク質の検出における使用のためである。検出は、インビトロ、インビボ、又はインサイチュであり得る。
幾つかの実施態様において、本発明は、被験体におけるシヌクレイノパチー疾患又は障害を診断するための方法であって、本発明の抗α−シヌクレイン抗体又はその断片を使用して診断される被験体において、α−シヌクレインのレベル、局在化、高次構造、又はそれらの組み合わせを評価すること、及び被験体におけるα−シヌクレインのレベル、局在化、高次構造、又はそれらの組み合わせを、１つ又は複数の対照被験体に由来する１つ又は複数の参照標準と比較することを含み、ここで被験体におけるα−シヌクレインのレベル、局在化、高次構造又はそれらの組み合わせと参照標準との間の差異又は類似性が、被験体がシヌクレイノパチー疾患又は障害を有するかどうかを示す方法を提供する。
図１は、ヒトα−シヌクレインのアミノ酸配列（配列番号１）を示す。 図２Ａ及び２Ｂは、それぞれ抗α−シヌクレインモノクローナル抗体１Ｆ７の軽鎖可変領域（配列番号２）及び重鎖可変領域（配列番号３）のアミノ酸配列を示す 図３Ａ及び３Ｂは、それぞれ抗α−シヌクレインモノクローナル抗体１３Ｆ３の軽鎖可変領域（配列番号４）及び重鎖可変領域（配列番号５）のアミノ酸配列を示す 図４は、抗α−シヌクレインモノクローナル抗体１Ｆ７及び抗α−シヌクレインモノクローナル抗体１３Ｆ３の重鎖及び軽鎖超可変領域のアミノ酸配列を示す。 図５は、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ７５ １０／３００ ＧＬカラムで分離した組換えヒトα−シヌクレインオリゴマーのゲル濾過クロマトグラムを示す。 図６Ａ及び６Ｂは、組換えヒトα−シヌクレイン単量体調製物及びα−シヌクレインオリゴマー調製物のそれぞれのＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す。 図７は、組換えヒトα−シヌクレインに対する抗α−シヌクレインモノクローナル抗体１Ｆ７及び抗α−シヌクレインモノクローナル抗体１３Ｆ３の結合曲線を示すデータを示す。 図８は、組換えヒトα−シヌクレインの３つの異なる形態に対する抗α−シヌクレインモノクローナル抗体１３Ｆ３及び抗α−シヌクレインモノクローナル抗体１Ｆ７の結合特性を示すデータを示す。 図９Ａ及び９Ｂはそれぞれ、組換えヒトα−シヌクレイン単独に結合する及びモル比１：０．５で結合する抗α−シヌクレインモノクローナル抗体１３Ｆ３ ＦａｂのＮＭＲスペクトルを示すデータを示す。 図１０Ａ及び１０Ｂはそれぞれ、組換えヒトα−シヌクレイン単独に結合する又はヒトα−シヌクレインの合成ペプチド（ヒトα−シヌクレインのアミノ酸残基１０５−１２３）と組み合わせて結合する抗α−シヌクレインモノクローナル抗体１３Ｆ３ ＦａｂのＮＭＲスペクトルを示すデータを示す。 図１１Ａ及び１１Ｂはそれぞれ、組換えヒトα−シヌクレイン単独に結合する及びモル比１：０．５で結合する抗α−シヌクレインモノクローナル抗体１Ｆ７ ＦａｂのＮＭＲスペクトルを示すデータを示す。 図１２Ａ及び１２Ｂはそれぞれ、ヒトα−シヌクレインタンパク質の模式図内の抗α−シヌクレインモノクローナル抗体１３Ｆ３及び抗α−シヌクレインモノクローナル抗体１Ｆ７の結合エピトープを示す。
発明の実施態様の詳細な説明
Ｉ．定義
本明細書における目的のための「アクセプターヒトフレームワーク」とは、下記に定義されるように、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークから得られる軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワーク又は重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク「から得られる」アクセプターヒトフレームワークは、その同一のアミノ酸配列を含んでもよく、又はそれはアミノ酸配列の変化を含んでもよい。幾つかの実施態様において、アミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、又は２以下である。幾つかの実施態様において、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列又はヒトコンセンサスフレームワーク配列と配列が同一である。
「親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合相互作用の総和の強度を指す。本明細書で使用する場合、特に断らない限り、「結合親和性」は、結合対（例えば、抗体と抗原）のメンバー間の１：１の相互作用を反映する本質的な結合親和性を指す。そのパートナーＹに対する分子Ｘの親和性は、一般的に解離定数（Ｋｄ）で表すことができる。親和性は、本明細書に記載したものを含む、当技術分野で知られている一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するための具体的な例示的かつ典型的な実施態様は、以下で説明される。
「親和性成熟」抗体は、その改変を有していない親抗体と比較して、その一又は複数の超可変領域（ＨＶＲ）に、抗原に対する抗体の親和性に改良を生じせしめる一又は複数の改変を持つものである。
用語「抗α−シヌクレイン抗体」及び「α−シヌクレインに結合する抗体」は、α−シヌクレインを標的とする際に診断薬及び／又は治療剤として抗体が有用であるように、十分な親和性でα−シヌクレインに結合可能である抗体を指す。一実施態様において、抗α−シヌクレイン抗体の、無関係な、非α−シヌクレインタンパク質への結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定される場合、抗体のα−シヌクレインへの結合の約１０％未満である。特定の実施態様では、α−シヌクレインに結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。特定の実施態様では、抗α−シヌクレイン抗体は、異なる種由来のα−シヌクレイン間で保存されているα−シヌクレインのエピトープに結合する。
本明細書における用語「抗体」は最も広い意味で用いられ、種々の抗体構造を包含し、限定されるものではないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、及び、所望の抗原結合活性を示す限り、抗体断片を含む。
「抗体断片」は、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体の一部分を含む、インタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例には、限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨは、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ；直鎖状抗体；単鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ）；及び抗体断片から形成された多重特異性抗体が含まれる。
参照抗体と「同じエピトープに結合する抗体」とは、競合アッセイにおいて、参照抗体のその抗原に対する結合を５０％以上阻害する抗体を指し、逆に参照抗体は、競合アッセイにおいて、抗体のその抗原に対する結合を５０％以上阻害する。例示的な競合アッセイが、本明細書において提供される。
用語「キメラ」抗体は、重鎖及び／又は軽鎖の一部分が特定の起源又は種に由来し、一方重鎖及び／又は軽鎖の残りは異なる起源又は種に由来する抗体を指す。
抗体の「クラス」は、その重鎖が保有する定常ドメイン又は定常領域のタイプを指す。抗体の５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭがあり、これらの幾つかは、更にサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩＧＡ１、及びＩｇＡ２に分けることができる。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
本明細書で用いられる「細胞傷害性剤」という用語は、細胞の機能を阻害若しくは阻止し、及び／又は細胞死若しくは細胞破壊を生ずる物質を指す。細胞傷害性剤は、限定されるものではないが、放射性同位体（例えばＡｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体）：化学療法剤又は薬物（例えばメトトレキセート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン又は他の挿入剤）；増殖阻害剤；酵素及びその断片、例えば核酸分解酵素；抗生物質；小分子毒素等の毒素、又は細菌、真菌、植物若しくは動物由来の酵素活性毒素（それらの断片及び／又は変異体を含む）、及び以下に開示される種々の抗腫瘍剤又は抗癌剤を含む。
「エフェクター機能」とは、抗体のアイソタイプにより変わる、抗体のＦｃ領域に起因する生物活性を指す。抗体エフェクター機能の例には：Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御；及びＢ細胞活性化が含まれる。
薬剤、例えば、薬学的製剤の「有効量」は、所望の治療的又予防的結果を達成するために必要な用量及び期間での有効な量を指す。
本明細書において用語「Ｆｃ領域」は、定常領域の少なくとも一部を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために用いられる。この用語は、天然配列Ｆｃ領域及び変異体Ｆｃ領域を含む。一実施態様において、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６又はＰｒｏ２３０から重鎖のカルボキシル末端にまで及ぶ。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在しても、存在してなくともよい。本明細書に明記されていない限り、Ｆｃ領域又は定常領域内のアミノ酸残基の番号付けは、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991に記載のように、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ番号付けシステムに従う。
「フレームワーク」又は「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般的に四つのＦＲドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４からなる。従って、ＨＶＲ及びＦＲ配列は、一般にＶＨ（又はＶＬ）の以下の配列に現れる：ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４。
用語「完全長抗体」、「インタクトな抗体」、及び「全抗体」は、本明細書中で互換的に使用され、天然型抗体構造と実質的に類似の構造を有するか、又は本明細書で定義されるＦｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指す。
用語「宿主細胞」、「宿主細胞株」及び「宿主細胞培養物」は互換的に使用され、外因性の核酸が導入された細胞を指し、そのような細胞の子孫を含める。宿主細胞は、「形質転換体」及び「形質転換された細胞」を含み、それには、継代の数に関係なく、それに由来する一次形質転換細胞及び子孫が含まれる。子孫は親細胞と核酸含量が完全に同一ではないかもしれず、突然変異が含まれる場合がある。本明細書には、最初に形質転換された細胞においてスクリーニング又は選択されたものと同じ機能又は生物活性を有する変異型子孫が含まれる。
「ヒト抗体」は、ヒト又はヒト細胞により産生されるか、又はヒト抗体のレパートリーや他のヒト抗体をコードする配列を利用した非ヒト起源に由来する抗体のそれに対応するアミノ酸配列を有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特に除外する。
「ヒトコンセンサスフレームワーク」とは、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に存在するアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般的に、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからのものである。一般的には、配列のサブグループは、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991), vols. 1-3にあるサブグループである。一実施態様において、ＶＬについて、サブグループは上掲のＫａｂａｔらにあるサブグループカッパＩである。一実施態様において、ＶＨについて、サブグループは上掲のＫａｂａｔらにあるサブグループＩＩＩである。
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基、及びヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。特定の実施態様において、ヒト化抗体は、少なくとも一つ、典型的には二つの可変ドメインの全てを実質的に含み、ＨＶＲ（例えばＣＤＲ）の全て又は実質的に全てが非ヒト抗体のものに対応し、ＦＲの全て又は実質的に全てがヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、任意選択的に、ヒト抗体由来の抗体定常領域の少なくとも一部を含んでもよい。抗体の「ヒト化型」、例えば、非ヒト抗体は、ヒト化を遂げた抗体を指す。
本明細書で用いられる「超可変領域」又は「ＨＶＲ」という用語は、配列が超可変である抗体可変ドメインの領域（「相補性決定領域」若しくは「ＣＤＲ」）及び／又は構造的に定義されるループ（「超可変ループ」）を形成する抗体可変ドメインの領域及び／又は抗原に接触する残基（「抗原コンタクト（antigen contact）」を含有する抗体可変ドメインの領域のそれぞれを指す。一般的に、抗体は、ＶＨに三つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、ＶＬに三つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）の計六つのＨＶＲを含む。本明細書において、例示的なＨＶＲは、
（ａ）アミノ酸残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、９１〜９６（Ｌ３）、２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、及び９６〜１０１（Ｈ３）に生じる超可変ループ（Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)）；
（ｂ）アミノ酸残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）、８９〜９７（Ｌ３）、３１〜３５ｂ（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）、及び９５〜１０２（Ｈ３）に生じるＣＤＲ（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)）；
（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ〜３６（Ｌ１）、４６〜５５（Ｌ２）、８９〜９６（Ｌ３）、３０〜３５ｂ（Ｈ１）、４７〜５８（Ｈ２）、及び９３−１０１（Ｈ３）に生じる抗原コンタクト（MacCallum et al. J. Mol. Biol. 262: 732-745 (1996)）；及び
（ｄ）ＨＶＲアミノ酸残基４６〜５６（Ｌ２）、４７〜５６（Ｌ２）、４８〜５６（Ｌ２）、４９〜５６（Ｌ２）、２６〜３５（Ｈ１）、２６〜３５ｂ（Ｈ１）、４９〜６５（Ｈ２）、９３〜１０２（Ｈ３）、及び９４〜１０２（Ｈ３）を含む、（ａ）、（ｂ）、及び／又は（ｃ）の組み合わせ
を含む。
一実施態様において、本発明の代表的な抗α−シヌクレイン抗体のＨＶＲアミノ酸残基は、図４で同定されたものを含む。
特に断らない限り、可変ドメイン内のＨＶＲ残基及び他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、本明細書では、上掲のＫａｂａｔらに従って番号付けされる。
「イムノコンジュゲート」とは、細胞傷害性剤を含むがそれに限定されない、一又は複数の異種分子にコンジュゲートした抗体である。
「個体」又は「被験体」とは、哺乳動物である。哺乳動物は、限定されないが、家畜動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、ウマ）、霊長類（例えば、ヒト、サルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、げっ歯類（例えば、マウス及びラット）を含む。特定の実施態様において、個体又は被検体はヒトである。
「単離された」抗体とは、その自然環境の成分から分離されたものである。幾つかの実施態様において、抗体は、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）又はクロマトグラフィー（例えば、イオン交換又は逆相ＨＰＬＣ）により決定されるように、９５％又は９９％を上回る純度に精製される。抗体純度の評価法の総説としては、例えば、Flatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87 (2007)を参照のこと。
「単離された」核酸とは、その自然環境の成分から分離された核酸分子を指す。単離された核酸は、核酸分子を通常含む細胞に含まれる核酸分子を含むが、しかし、その核酸分子は、染色体外又はその自然の染色体上の位置とは異なる染色体位置に存在している。
「抗α−シヌクレイン抗体をコードする分離された核酸」とは、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする一又は複数の核酸分子（又はその断片）を指し、それは、単一のベクター内又は別々のベクター内のそのような核酸分子及び宿主細胞内の一又は複数の場所に存在するそのような核酸分子を含む。
本明細書で使用される用語「モノクローナル抗体」とは、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を意味し、すなわち、例えば、天然に生じる変異を含むか又はモノクローナル抗体調製物の製造時に発生し、一般的に少量で存在している可能性のある変異体抗体を除き、集団を構成する個々の抗体は同一であり、及び／又は同じエピトープに結合する。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を通常含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。従って、修飾語「モノクローナル」は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の製造を必要とするものとして解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、限定されるものではないが、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部又は一部を含有するトランスジェニック動物を利用する方法を含めた様々な技術によって作製することができ、モノクローナル抗体を作製するためのこれらの方法及びその他の例示的な方法は本明細書に記載されている。
「ネイキッド抗体」とは、異種の部分（例えば、細胞傷害性部分）又は放射性標識にコンジュゲートしていない抗体を指す。ネイキッド抗体は薬学的製剤中に存在してもよい。
「天然型の抗体」とは、天然に生じる、様々な構造をとる免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然型のＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合している二つの同一の軽鎖と二つの同一の重鎖からなる約１５００００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各重鎖は、Ｎ末端からＣ末端にかけて、可変重鎖ドメイン又は重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）、続いて三つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）を有する。同様に、各軽鎖は、Ｎ末端からＣ末端にかけて、可変軽鎖ドメイン又は軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）、続いて定常軽鎖（ＣＬ）ドメインを有する。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）とラムダ（λ）と呼ばれる、二つの種類のうちの何れかに割り当てることができる。
用語「添付文書」は、治療製品の商品包装に通例含まれる説明書を指すのに使用され、このような治療製品の使用に関する指示、使用法、用量、投与、併用療法、禁忌及び／又は注意事項についての情報を含む。
参照ポリペプチド配列に対する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、最大の配列同一性パーセントを得るように配列を整列させ、必要に応じてギャップを導入した後の、いかなる保存的置換も配列同一性の一部とみなさない、参照ポリペプチドのアミノ酸残基と同一である候補配列のアミノ酸残基の百分率として定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のためのアラインメントは、当分野の技術の範囲内にある種々の方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアのような公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる。当業者であれば、比較する配列の全長にわたって最大のアライメントを達成するのに必要な任意のアルゴリズムを含めた、配列を整列させるための適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書において、アミノ酸配列同一性％の値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムは、ジェネンテック社によって著作され、ソースコードは米国著作権庁、ワシントンＤ．Ｃ．，２０５５９に使用者用書類とともに提出され、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７で登録されている。また、ＡＬＩＧＮ−２は、ジェネンテック社（Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）から公的に入手可能であり、又はそのソースコードからコンパイルしてもよい。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ（登録商標）のＶ４．０Ｄを含めたＵＮＩＸ（登録商標）オペレーティングシステムでの使用のためにコンパイルされる。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定されて変動しない。
アミノ酸配列比較にＡＬＩＧＮ−２が用いられる状況では、所与のアミノ酸配列Ａの、所与のアミノ酸配列Ｂとの、又はそれに対する％アミノ酸配列同一性（或いは、所与のアミノ酸配列Ｂとの、又はそれに対する％アミノ酸配列同一性を有する又は含む所与のアミノ酸配列Ａと言うこともできる）は次のように計算される：
分率Ｘ／Ｙの１００倍
ここで、Ｘは配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ−２により、ＡとＢのそのプログラムのアラインメントにおいて同一であるとして一致したスコアのアミノ酸残基の数であり、ＹはＢの全アミノ酸残基数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと異なる場合、ＡのＢに対する％アミノ酸配列同一性は、ＢのＡに対する％アミノ酸配列同一性とは異なることは理解されるであろう。特に断らない限り、本明細書で使用される全ての％アミノ酸配列同一性値は、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを使用して、直前の段落で説明したように得られる。
用語「薬学的製剤」は、その中に含有されている活性成分の生物学的活性が有効になることを可能にするような形態であって、製剤が投与される被験体にとって許容できないほど毒性である追加の成分を含まない調製物を指す。
「薬学的に許容される担体」とは、有効成分以外の薬学的製剤中の成分であって、被験体に対して非毒性である成分を指す。薬学的に許容される担体は、限定されるものではないが、緩衝液、賦形剤、安定剤又は保存剤を含む。
特に断らない限り、本明細書で使用される用語「α−シヌクレイン」は、霊長類（例えばヒト）及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物由来の任意の天然型α−シヌクレインを指す。その用語は、「完全長」のプロセシングされていないα−シヌクレイン、並びにα−シヌクレインのリン酸化形態を含む、細胞内又は細胞外でのプロセシングの結果生じる任意の形態のα−シヌクレインを包含する。その用語はまた、α−シヌクレインの天然に存在する変異体、例えば、スプライス変異体又は対立遺伝子変異体を包含する。例示的なヒトα−シヌクレインのアミノ酸配列を図１に示す（配列番号１）。
本明細書で用いられる場合、「治療（treatment）」（及び「治療する（treat）」又は「治療すること（treating）」など、その文法的変形）は、治療されている個体の自然経過を変えようと試みる臨床的介入を指し、予防のため、又は臨床病理の過程において実施され得る。治療の望ましい効果には、限定されないが、疾患の発症又は再発を予防すること、症状の緩和、疾患の直接的又は間接的な病理学的帰結の縮小、転移を予防すること、疾患の進行の速度を遅らせること、疾患状態の改善又は緩和、及び寛解又は予後の改善が含まれる。幾つかの実施態様において、本発明の抗体は、疾患の進行（development）を遅延させるか（例えば、発症（onset）を遅延させるか）、又は疾患の増悪（progression）を遅らせるために使用される。
用語「可変領域」又は「可変ドメイン」は、抗体の抗原への結合に関与する抗体の重鎖又は軽鎖のドメインを指す。通常、天然型抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれＶＨ及びＶＬ）は、各々が四つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と三つの超可変領域（ＨＶＲ）とを含む類似構造を有する。（例えば、Kindt et al., Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007)を参照されたい。）抗原結合特異性を付与するには、単一のＶＨ又はＶＬドメインで十分である。更に、ある特定の抗原に結合する複数の抗体を、その抗原に特異的に結合するある一つの抗体に由来するＶＨドメイン又はＶＬドメインを用いて単離し、相補的なＶＬドメイン又はＶＨドメインそれぞれのライブラリーをスクリーニングすることができる。例えば、Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993);Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991)を参照。
本明細書で使用される用語「ベクター」は、それが連結されている別の核酸を伝播することができる核酸分子を指す。この用語は、自己複製核酸構造としてのベクター、並びに導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターを含む。ある種のベクターは、それが作動可能に連結された核酸の発現を指示することができる。このようなベクターは、本明細書では「発現ベクター」と言う。
ＩＩ．組成物及び方法
一態様において、本発明は、抗α−シヌクレイン抗体、及びその使用に部分的に基づく。特定の実施態様において、ヒトα−シヌクレインに結合する抗体が提供される。本発明の抗体は、例えば、シヌクレイン病、パーキンソン病（ＰＤ）、パーキンソン病の認知症（ＰＤＤ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、レビー小体病（ＬＢＤ）、若年発症全身性神経麻痺ジストロフィー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、純粋自律神経失調症（ＰＡＦ）、及び脳内鉄沈着を伴う神経変性症１型（ＮＢＩＡ−１）の診断、治療及び／又は予防のために有用である。
Ａ．例示的抗α−シヌクレイン抗体
一態様において、本発明は、α−シヌクレインに結合する単離された抗体を提供する。特定の実施態様において、本発明の抗α−シヌクレイン抗体は、単量体α−シヌクレインに結合する；オリゴマーα−シヌクレインに結合する；凝集したα−シヌクレインに結合する；ヒトα−シヌクレインのアミノ酸残基５−７８内のエピトープに結合する；ヒトα−シヌクレインのアミノ酸残基５−４３内のエピトープに結合する；ヒトα−シヌクレインのアミノ酸残基５，８−９，１５−２２，２８，３９−４３、及び７８に結合する；ヒトα−シヌクレインのアミノ酸残基５，８−９，１５−２２，２８及び３９−４３に結合する；ヒトα−シヌクレインのアミノ酸残基３７−５１内のエピトープに結合する；ヒトα−シヌクレインのアミノ酸残基１０４−１１８内のエピトープに結合する；ヒトα−シヌクレインのアミノ酸残基１０４−１０５，１０７，１０９−１１１，１１３−１１６、及び１１８に結合する。
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ） 配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、又は六つのＨＶＲを含む抗α−シヌクレイン抗体を提供する。
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、又は六つのＨＶＲを含む抗α−シヌクレイン抗体を提供する。
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも一つ、少なくとも二つ、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗α−シヌクレイン抗体を提供する。更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つ、少なくとも二つ、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗α−シヌクレイン抗体を提供する。一実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも一つ、少なくとも二つ、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗α−シヌクレイン抗体を提供する。更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つ、少なくとも二つ、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗α−シヌクレイン抗体を提供する。一実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様において、本発明の抗α−シヌクレイン抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１１から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも一つ、少なくとも二つ、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン；並びに（ｂ）（ｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つ、少なくとも二つ、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
別の態様において、本発明の抗α−シヌクレイン抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１７から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも一つ、少なくとも二つ、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン；並びに（ｂ）（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つ、少なくとも二つ、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
別の態様において、配列番号３のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗α−シヌクレイン抗体が提供される。特定の実施態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗α−シヌクレイン抗体は、α−シヌクレインへ結合する能力を保持する。特定の実施態様では、配列番号３において、合計１から１０のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。特定の実施態様において、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲ外の（すなわちＦＲ内の）領域で生じる。任意選択的に、抗α−シヌクレイン抗体は、配列番号３のＶＨ配列を含み、この配列の翻訳後修飾も含む。特定の実施態様において、ＶＨは、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、一つ、二つ又は三つのＨＶＲを含む。
別の態様において、配列番号２のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、抗α−シヌクレイン抗体が提供される。特定の実施態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗α−シヌクレイン抗体は、α−シヌクレインへ結合する能力を保持する。特定の実施態様では、配列番号２において、合計１から１０のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。特定の実施態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲ外の（すなわちＦＲ内の）領域で生じる。任意選択的に、抗α−シヌクレイン抗体は、配列番号２のＶＬ配列を（この配列の翻訳後修飾を含めて）含む。特定の実施態様において、ＶＬは、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、一つ、二つ又は三つのＨＶＲを含む。
別の態様において、上記実施態様の何れかにおけるＶＨ、及び上記実施態様の何れかにおけるＶＬを含む抗α−シヌクレイン抗体が提供される。一実施態様において、抗体は、それぞれ配列番号３及び配列番号２のＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、これらの配列の翻訳後修飾も含む。
別の態様において、配列番号５のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗α−シヌクレイン抗体が提供される。特定の実施態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗α−シヌクレイン抗体は、α−シヌクレインへ結合する能力を保持する。特定の実施態様では、配列番号５において、合計１から１０のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。特定の実施態様において、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲ外の（すなわちＦＲ内の）領域で生じる。任意選択的に、抗α−シヌクレイン抗体は、配列番号５のＶＨ配列を含み、この配列の翻訳後修飾も含む。特定の実施態様において、ＶＨは、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、一つ、二つ又は三つのＨＶＲを含む。
別の態様において、配列番号４のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、抗α−シヌクレイン抗体が提供される。特定の実施態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗α−シヌクレイン抗体は、α−シヌクレインへ結合する能力を保持する。特定の実施態様では、配列番号４において、合計１から１０のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。特定の実施態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲ外の（すなわちＦＲ内の）領域で生じる。任意選択的に、抗α−シヌクレイン抗体は、配列番号４のＶＬ配列を（この配列の翻訳後修飾を含めて）含む。特定の実施態様において、ＶＬは、（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、一つ、二つ又は三つのＨＶＲを含む。
別の態様において、上記実施態様の何れかにおけるＶＨ、及び上記実施態様の何れかにおけるＶＬを含む抗α−シヌクレイン抗体が提供される。一実施態様において、抗体は、それぞれ配列番号５及び配列番号４のＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、これらの配列の翻訳後修飾も含む。
更なる態様において、本発明は、本明細書で提供される抗α−シヌクレイン抗体と同じヒトα−シヌクレインのエピトープに結合する抗体を提供する。例えば、特定の実施態様において、配列番号３のＶＨ配列及び配列番号２のＶＬ配列を含む抗α−シヌクレイン抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。他の実施態様において、配列番号３のＶＨ配列及び配列番号２のＶＬ配列を含む抗α−シヌクレイン抗体と、ヒトα−シヌクレインへの結合について競合する抗体が提供される。特定の実施態様において、配列番号１のアミノ酸残基５−４３を含むヒトα−シヌクレインの断片又は領域内のエピトープに結合する抗体が提供される。特定の実施態様において、配列番号１のアミノ酸残基５−７８を含むヒトα−シヌクレインの断片又は領域内のエピトープに結合する抗体が提供される。特定の実施態様において、配列番号１のアミノ酸残基３７−５１を含むヒトα−シヌクレインの断片又は領域内のエピトープに結合する抗体が提供される。特定の実施態様において、ヒトα−シヌクレインのアミノ酸残基５、８−９、１５−２２、２８、及び３９−４３に結合する抗体が提供される。特定の実施態様において、ヒトα−シヌクレインのアミノ酸残基５、８−９、１５−２２、２８、３９−４３、及び７８に結合する抗体が提供される。
特定の実施態様において、本発明は、配列番号１８のアミノ酸配列を含むヒトα−シヌクレインの領域に結合する抗体を提供する。他の実施態様において、本発明は、配列番号１９のアミノ酸配列を含むヒトα−シヌクレインの領域に結合する抗体を提供する。他の実施態様において、本発明は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むヒトα−シヌクレインの領域に結合する抗体を提供する。
他の実施態様において、配列番号５のＶＨ配列及び配列番号４のＶＬ配列を含む抗α−シヌクレイン抗体と同じヒトα−シヌクレインのエピトープに結合する抗体が提供される。他の実施態様において、配列番号５のＶＨ配列及び配列番号４のＶＬ配列を含む抗α−シヌクレイン抗体と、ヒトα−シヌクレインへの結合について競合する抗体が提供される。特定の実施態様において、配列番号１のアミノ酸残基１０４−１１８を含むヒトα−シヌクレインの断片又は領域内のエピトープに結合する抗体が提供される。特定の実施態様において、ヒトα−シヌクレインのアミノ酸残基１０４−１０５、１０７、１０９−１１１、１１３−１１６、１１８に結合する抗体が提供される。特定の実施態様において、本発明は、配列番号２１のアミノ酸配列を含むヒトα−シヌクレインの領域に結合する抗体を提供する。
本発明の更なる態様において、上記の実施態様の何れかに記載の抗α−シヌクレイン抗体は、キメラ、ヒト化又はヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一実施態様において、抗α−シヌクレイン抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施態様において、抗体は完全長抗体、例えばインタクトなＩｇＧ２ａ抗体又は本明細書で定義される他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。
更なる態様において、上記の実施態様の何れかに記載の抗α−シヌクレイン抗体は、以下の第１−７節に記載されているように、任意の特徴を単独で又は組み合わせて組み込むことができる。
１．抗体親和性
特定の実施態様において、本明細書で提供される抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ又は≦０．００１ｎＭ（例えば１０−８Ｍ以下、例えば１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。
一実施態様において、Ｋｄは、放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）により測定される。一実施態様において、ＲＩＡは、目的の抗体のＦａｂバージョン及びその抗原を用いて実施される。例えば、抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、非標識抗原の力価測定系の存在下で、最小濃度の（１２５Ｉ）標識抗原を用いてＦａｂを均衡化し、次いで抗Ｆａｂ抗体をコーティングしたプレートを用いて結合した抗原を捕捉することによって測定する（例としてChen, et al., J. Mol. Biol. 293:865-881(1999)を参照）。アッセイ条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、５μｇ／ｍｌの捕捉抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｓ）を含む５０ｍＭ炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）で一晩コーティングし、その後２％（ｗ／ｖ））のウシ血清アルブミンを含むＰＢＳて２〜５時間室温（およそ２３℃）でブロックする。非吸着プレート（Ｎｕｎｃ ＃２６９６２０）で、目的のＦａｂの段階希釈液と１００ｐＭ又は２６ｐＭの［１２５Ｉ］抗原を混合する（例えば、Presta et al., Cancer Res. 57:4593-4599 (1997)の抗ＶＥＧＦ抗体、Ｆａｂ−１２の評価と一致する）。ついで目的のＦａｂを一晩インキュベートする。しかし、インキュベーションは、平衡状態に達したことを確実にするために長時間にわたり（例えば、約６５時間）続いても良い。その後、混合物を捕捉プレートに移し、室温で（例えば、１時間）インキュベートする。次いで、溶液を除去し、０．１％のポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））を含むＰＢＳでプレートを８回洗浄する。プレートが乾燥したら、１５０μｌ／ウェルの閃光物質（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０ＴＭ；Ｐａｃｋａｒｄ）を添加し、このプレートをＴＯＰＣＯＵＮＴＴＭガンマカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ）で１０分間計測する。最大結合の２０％又はそれ以下を与える各Ｆａｂの濃度を、競合結合アッセイにおいて使用するために選定する。
別の実施態様によると、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定される。例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００又はＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡＣＯＲＥ、Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を使用したアッセイを、〜１０応答単位（ＲＵ）で、固定化抗原ＣＭ５チップを用いて、２５℃で実施する。一実施態様において、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ Ｉｎｃ．）が、供給業者の指示書に従い、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）で活性化される。抗原を１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍｌ（〜０．２μＭ）に希釈し、結合したタンパク質の応答単位（ＲＵ）がおよそ１０を達成するように５μｌ／分の流速で注入する。抗原の注入後、未反応基をブロックするために１Ｍのエタノールアミンを注入する。速度論的な測定のために、Ｆａｂの２倍段階希釈液（０．７８ｎＭから５００ｎＭ））を、０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０ＴＭ）界面活性剤を含有するＰＢＳ（ＰＢＳＴ）中、およそ２５ｕｌ／分の流速にて２５℃で注入する。会合速度（ｋｏｎ）と解離速度（ｋｏｆｆ）を、単純な１対１のＬａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン３．２）を使用して、会合及び解離センサーグラムを同時にフィッティングさせることにより算出する。平衡解離定数（Ｋｄ）は比率ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして算出される。例えば、Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999)を参照。上記の表面プラズモン共鳴アッセイによる結合速度が１０６Ｍ−１ｓ−１を上回る場合、会合速度は、分光計、例えば、流動停止を備えた分光光度計（stop-flow equipped spectrophometer）（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）又は撹拌キュベットを備えた８０００シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯＴＭ分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）で測定される、漸増濃度の抗原の存在下にて、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中、２５℃で、２０ｎＭの抗抗原抗体（Ｆａｂ型）の蛍光放出強度（励起＝２９５ｎｍ；放出＝３４０ｎｍ、帯域通過＝１６ｎｍ）の増加又は減少を測定する蛍光消光技術を用いて測定することができる。
２．抗体断片
特定の実施態様において、本明細書に提供される抗体は、抗体断片である。抗体断片は、限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ，及びｓｃＦｖ断片、及び下記の他の断片を含む。所定の抗体断片の総説については、Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003)を参照。ｓｃＦｖ断片の総説については、例えばPluckthuenのThe Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994)を参照。また、国際公開第９３／１６１８５号、並びに米国特許第５５７１８９４号及び第５５８７４５８号も参照のこと。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、かつインビボ半減期が増加したＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の議論については、米国特許第５８６９０４６号を参照のこと。
ダイアボディは、二価又は二重特異性でありうる二つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、欧州特許第４０４，０９７号；国際公開第１９９３／０１１６１号；Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)；及びHollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)を参照。トリアボディ及びテトラボディもHudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)に記載される。
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全て若しくは一部、又は軽鎖可変ドメインの全て若しくは一部を含む抗体断片である。特定の実施態様において、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ、Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ；例えば、米国特許第６２４８５１６（Ｂ１）号を参照）。
抗体断片は様々な技術で作成することができ、限定されないが、本明細書に記載するように、インタクトな抗体の分解、並びに組換え宿主細胞（例えば、大腸菌又はファージ）による生産を含む。
３．キメラ及びヒト化抗体
特定の実施態様において、本明細書で提供される抗体は、キメラ抗体である。特定のキメラ抗体が、例えば米国特許第４８１６５６７号及びMorrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984))に記載されている。一例において、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ又はサル等の非ヒト霊長類に由来する可変領域）及びヒト定常領域を含む。更なる例において、キメラ抗体は、クラス又はサブクラスが、親抗体のものから変化されている「クラススイッチされた」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。
特定の実施態様において、キメラ抗体はヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、親非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持しつつ、ヒトへの免疫原性を低下させるためにヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ（例えばＣＤＲ）（又はその一部）が非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（又はその一部）がヒト抗体配列に由来する、一又は複数の可変ドメインを含む。ヒト化抗体は、場合によって、ヒト定常領域の少なくとも一部も含み得る。幾つかの実施態様において、ヒト化抗体の幾つかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性又は親和性を回復又は改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換される。
ヒト化抗体及びそれらの製造方法は、例えば、Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)に総説され、更に、Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988);Queen et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:10029-10033 (1989)；米国特許第５８２１３３７号、第７５２７７９１号、第６９８２３２１号、及び第７０８７４０９号；Kashmiri et al., Methods 36:25-34 (2005) （特異性決定領域（ＳＤＲ）移植を記載する）；Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991) （「リサーフェシング」を記載する）；Dall'Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005) （「ＦＲシャフリング」を記載する）；並びにOsbourn et al., Methods 36:61-68 (2005)及びKlimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000) （ＦＲシャフリングへの「ガイド付き選択」アプローチを記載する）に記載されている。
ヒト化に用いられ得るヒトフレームワーク領域は、限定されないが、「ベストフィット」法を用いて選択されるフレームワーク領域（例えば、Sims et al.J. Immunol. 151:2296 (1993)）；軽鎖又は重鎖の可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列由来のフレームワーク領域（例えば、Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992)；及びPresta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993)を参照）；ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域又はヒト生殖細胞系フレームワーク領域（例えば、Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)を参照）；及びＦＲライブラリスクリーニング由来のフレームワーク領域（例えば、Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997)及びRosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)を参照）を含む。
４．ヒト抗体
特定の実施態様において、本明細書で提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当技術分野で公知の様々な技術を用いて生産することができる。ヒト抗体は一般的にvan Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001) 及びLonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008)に記載されている。
ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答してインタクトなヒト抗体又はヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように改変されたトランスジェニック動物に、免疫原を投与することによって調製することができる。このような動物は、典型的には内因性免疫グロブリン遺伝子座を置換するか、又は染色体外に存在するか若しくは該動物の染色体にランダムに組み込まれているヒト免疫グロブリン遺伝子座の全て又は一部を含む。このようなトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、通常は不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の総説については、Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125 (2005)を参照。また、例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥＴＭ技術を記載している、米国特許第６０７５１８１号及び６１５０５８４号；ＨｕＭａｂ（登録商標）技術を記載している米国特許第５７７０４２９号；Ｋ−Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載している米国特許第７０４１８７０号及び、ＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）技術を記載している米国特許出願公開第２００７／００６１９００号）も参照のこと。このような動物により生成されるインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることにより、更に改変され得る。
ヒト抗体は、ハイブリドーマベースの方法によって作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株が記載されている。（例えば、Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984);Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)；及びBoerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991)を参照）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術から生成されたヒト抗体は、また、Li, J. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103 (2006) 3557-3562に記載されている。更なる方法は、例えば米国特許第７１８９８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載する）及びNi, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (2006)（ヒト−ヒトハイブリドーマを記載する）に記載されている方法を含む。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）もまた、Vollmers and Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005)及びVollmers and Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185-91 (2005)に記載されている。
ヒト抗体はまた、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択されたＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによって生成することもできる。このような可変ドメイン配列は、次に所望のヒト定常ドメインと組み合わせてもよい。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技術を以下に記載する。
５．ライブラリー由来の抗体
本発明の抗体は、一又は複数の所望の活性を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって単離することができる。例えば、様々な方法が、ファージディスプレイライブラリーを生成し、所望の結合特性を有する抗体について、そのようなライブラリーをスクリーニングするために、当該技術分野で知られている。そのような方法は、例えば、Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001)に総説され、更に、例えば、McCafferty et al., Nature 348:552-554;Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991);Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992);Marks and Bradbury, in Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003);Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004);Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004);Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004);及びLee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004)に記載されている。
所定のファージディスプレイ法において、ＶＨ遺伝子及びＶＬ遺伝子のレパートリーは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により別々にクローニングされ、ファージライブラリーにおいてランダムに組換えられ、それは、次に、Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994)に記載されるように、抗原結合ファージについてスクリーニングすることができる。ファージは、典型的には単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片又はＦａｂ断片の何れかとして抗体断片を提示する。免疫化された供給源からのライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要を伴うことなく、免疫原に対して高親和性の抗体を提供する。あるいは、Griffiths, A.D. et al., EMBO J. 12 (1993) 725-734により記載されるように、ナイーブなレパートリーを（例えばヒトから）クローニングし、任意の免疫化を伴わず、広範囲の非自己抗原及びまた自己抗原への抗体の単一の供給源を提供することができる。最後に、Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992)によって記載されるように、幹細胞由来の再配列されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含むＰＣＲプライマーを用いて高度に可変なＣＤＲ３領域をコードし、インビトロでの再配列を達成することにより、ナイーブライブラリーを合成的に作成することもできる。ヒト抗体ファージライブラリーを記述する特許公報は、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、及び米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号、第２００５／０１１９４５５号、第２００５／０２６６０００号、第２００７／０１１７１２６号、第２００７／０１６０５９８号、第２００７／０２３７７６４号、第２００７／０２９２９３６号及び第２００９／０００２３６０を含む。
ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体又は抗体断片は、本明細書においてヒト抗体又はヒト抗体の断片とみなされる。
６．多重特異性抗体
特定の実施態様において、本明細書で提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも二つの異なる部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。特定の実施態様において、結合特異性のうちの一方はα−シヌクレインに対するものであり、もう一方は任意の他の抗原に対するものである。特定の実施態様において、二重特異性抗体は、α−シヌクレインの二つの異なるエピトープに結合し得る。二重特異性抗体はまた、α−シヌクレインを発現する細胞に細胞傷害性剤を局在化させるために使用することもできる。二重特異性抗体は、完全長抗体又は抗体断片として調製することができる。
多重特異性抗体を作製するための技術は、限定されないが、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の組換え共発現（Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983)）、国際公開第９３／０８８２９号、及びTraunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991)を参照）及び「ノブ−イン−ホール」（ｋｎｏｂ−ｉｎ−ｈｏｌｅ）操作（例えば、米国特許第５７３１１６８号を参照）を含む。多重特異抗体はまた、抗体のＦｃ−ヘテロ二量体分子を作成するための静電ステアリング効果を操作すること（国際公開第２００９／０８９００４Ａ１号）、２つ以上の抗体又は断片を架橋すること（例えば米国特許第４６７６９８０号；及びBrennan et al., Science, 229: 81 (1985)を参照）；二重特異性抗体を生成するためにロイシンジッパーを使用すること（例えば、Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992)を参照）；二重特異性抗体断片を作製するために「ダイアボディ」技術を使用すること（例えば、Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)を参照）；単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を使用すること（例えば、Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)を参照）；及び、例えばTutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991)に記載されているように、三重特異性抗体を調製することによって作成することができる。
「オクトパス抗体（Octopus antibody）」を含む三つ以上の機能的抗原結合部位を有する操作抗体も本明細書に含まれる（例えば、米国特許出願公開第２００６／００２５５７６Ａ１号を参照）。
本明細書中の抗体又は断片はまた、ａ−シヌクレイン及び別の異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む「二重作用ＦＡｂ」又は「ＤＡＦ」を含む（例えば、米国特許出願公開第２００８／００６９８２０号参照）。
７．抗体変異体
特定の実施態様において、本明細書に提供される抗体のアミノ酸配列変異体が企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的特性を改善することが望ましいこともある。抗体のアミノ酸配列変異体は、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な修飾を導入することにより、又はペプチド合成により調製することができる。このような修飾は、例えば抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、及び／又はそれへの挿入、及び／又はそれの置換を含む。最終構築物が所望の特性、例えば抗原結合を有していることを条件として、欠失、挿入及び置換の任意の組み合わせがなされることにより、最終構築物に到達することができる。
ａ）置換、挿入、及び欠失変異体
特定の実施態様において、一つ以上のアミノ酸置換を有する抗体変異体が提供される。置換型変異誘発の対象となる部位は、ＨＶＲとＦＲを含む。保存的置換は、「好ましい置換」と題して表１に示す。より実質的な変化が、「例示的置換」の見出しの下で表１に提供され、アミノ酸側鎖クラスを参照して以下で更に記載される。アミノ酸置換は、目的の抗体に導入することができ、その産物は、所望の活性、例えば、保持／改善された抗原結合、減少した免疫原性又は改善されたＡＤＣＣ若しくはＣＤＣについてスクリーニングされる。
アミノ酸は、共通の側鎖特性に従ってグループ化することができる。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ
（２）中性の親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ
非保存的置換は、これらのクラスのうちの一クラスのメンバーを別のクラスのもと交換することを必要とするであろう。
置換変異体の一つの種類は、親抗体（例えばヒト化又はヒト抗体）の一又は複数の超可変領域残基を置換することを伴う。一般的には、更なる研究のために選択され得られた変異体は、親抗体と比較して、特定の生物学的特性の改変（例えば、改善）（例えば、親和性の増加、免疫原性を減少）を有し、及び／又は親抗体の特定の生物学的特性を実質的に保持しているであろう。例示的な置換型変異体は、親和性成熟抗体であり、例えば、本明細書に記載されるようなファージディスプレイに基づく親和性成熟技術を用いて、簡便に生成され得る。簡潔に言えば、一又は複数のＨＶＲ残基を変異させ、変異体抗体は、ファージ上に提示され、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。
改変（例えば、置換）は、例えば抗体の親和性を向上させるために、ＨＶＲにおいて行うことができる。このような改変は、ＨＶＲの「ホットスポット」、すなわち体細胞成熟過程中に高頻度で変異を受けるコドンによってコードされた残基（例えば、Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)を参照）、及び／又は抗原と接触する残基でなされてもよく、得られる変異体ＶＨ又はＶＬが結合親和性について試験される。二次ライブラリーを構築しそこから再選択することによる親和性成熟が、例えば、Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001)に記載されている。親和性成熟の幾つかの実施態様において、多様性が、種々の方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリング、又はオリゴヌクレオチドを標的とした突然変異誘発）の何れかにより、成熟のために選択された可変遺伝子中に導入される。次いで、二次ライブラリーが作製される。次いで、ライブラリーは、所望の親和性を持つ抗体変異体を同定するためにスクリーニングされる。多様性を導入するための別の方法は、幾つかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４〜６残基）がランダム化されるＨＶＲ指向アプローチを含む。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えばアラニンスキャニング突然変異誘発又はモデリングを用いて、特異的に同定することができる。特にＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３が、しばしば標的化される。
特定の実施態様において、置換、挿入又は欠失は、これらの改変が抗原に結合する抗体の能力を実質的に低下させない限り、一又は複数のＨＶＲ内で生じ得る。例えば、実質的に結合親和性を低下させない保存的変更（例えば本明細書において提供される保存的置換）をＨＶＲ内で行うことができる。このような改変は、例えばＨＶＲ内の残基に接する抗原の外側であってもよい。上記変異体ＶＨ又はＶＬ配列の特定の実施態様では、各ＨＶＲは不変であるか、又は、わずか一つ、二つ若しくは三つのアミノ酸置換を含む。
突然変異誘発のために標的とすることができる抗体の残基又は領域を同定するための有用な方法は、Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085により記載されているように、「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。この方法では、標的残基の残基又はグループ（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ及びｇｌｕなどの荷電残基）が同定され、抗原と抗体との相互作用が影響を受けるかどうかを決定するために、中性又は負に帯電したアミノ酸（例えば、アラニン又はポリアラニン）により置換される。更なる置換が、最初の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸の位置に導入され得る。あるいは、又は加えて、抗原抗体複合体の結晶構造が、抗体と抗原との接触点を同定する。そのような接触残基及び隣接残基は、置換の候補として標的とされるか又は排除され得る。変異体は、それらが所望の特性を含むかどうかを決定するためにスクリーニングされ得る。
アミノ酸配列挿入は、一残基から百以上の残基を含有するポリペプチド長にわたるアミノ及び／又はカルボキシル末端融合、並びに単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例は、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体を含む。抗体分子の他の挿入変異体は、抗体の血清半減期を延長させる酵素（例えばＡＤＥＰＴのための）又はポリペプチドに対する抗体のＮ末端又はＣ末端への融合物を含む。
ｂ）グリコシル化変異体
特定の実施態様において、本明細書で提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度が増加又は減少するように改変される。グリコシル化部位の抗体への付加又は欠失は、一又は複数のグリコシル化部位が創出又は削除されるようにアミノ酸配列を改変することにより、簡便に達成することができる。
抗体がＦｃ領域を含む場合、それに付着する糖を変えることができる。哺乳動物細胞によって産生された天然抗体は、典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７にＮ結合により一般に付着した分岐状の二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Wright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997)を参照。オリゴ糖は、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、並びにオリゴ糖構造の「幹」のＧｌｃＮＡｃに付着したフコースを含む。幾つかの実施態様において、本発明の抗体におけるオリゴ糖の修飾は、特定の改善された特性を有する抗体変異体を作製するためになされ得る。
一実施態様において、抗体変異体は、Ｆｃ領域に（直接的に又は間接的に）付着するフコースを欠く糖鎖構造を有して提供される。例えば、そのような抗体のフコースの量は、１％から８０％、１％から６５％、５％から６５％又は２０％から４０％であり得る。フコースの量は、例えば、国際公開第２００８／０７７５４６号に記載されているように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法により測定されたＡｓｎ２９７に付着された全ての糖構造（例えば、複合体、ハイブリッド及び高マンノース構造）の合計と比べた、Ａｓｎ２９７での糖鎖内のフコースの平均量を算出することにより決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域（Ｆｃ領域残基のＥＵ番号付け）におけるおよその位置２９７に位置するアスパラギン残基を指す；しかし、Ａｓｎ２９７はまた、抗体における小さな配列多様性に起因して、位置２９７の上流又は下流の約±３アミノ酸、すなわち、位置２９４と３００との間に位置していてもよい。このようなフコシル化変異体においては、ＡＤＣＣ機能が改善している可能性がある。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ、Ｌ．）；米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号（協和発酵工業株式会社）を参照。「脱フコシル化」又は「フコース欠損」抗体変異体に関連する出版物の例としては、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号、国際公開第２０００／６１７３９号、同第２００１／２９２４６号、米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号、同第２００２／０１６４３２８号、同第２００４／００９３６２１号、同第２００４／０１３２１４０号、同第２００４／０１１０７０４号、同第２００４／０１１０２８２号、同第２００４／０１０９８６５号、国際公開第２００３／０８５１１９号、国際公開第２００３／０８４５７０号、同第２００５／０３５５８６号、同第２００５／０３５７７８号、同第２００５／０５３７４２号、同第２００２／０３１１４０号、Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004);Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)が含まれる。脱フコシル化抗体を産生できる細胞株の例は、タンパク質フコシル化を欠損しているＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ripka et al.,Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986)、Ｐｒｅｓｔａ、Ｌの米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号、及びＡｄａｍｓらの国際公開第２００４／０５６３１２号（特に実施例１１））及びノックアウト細胞株、例えばアルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Yamane-Ohnuki et al., Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)、Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006)、及び国際公開第２００３／０８５１０７号を参照）を含む。
例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分されている、二分オリゴ糖を有する抗体変異体が更に提供さ与される。このような抗体変異体においては、フコシル化が減少し及び／又はＡＤＣＣ機能が改善している可能性がある。そのような抗体変異体の例は、例えば、国際公開第２００３／０１１８７８号（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔｔら）；米国特許第６６０２６８４号（Ｕｍａｎａら）；及び米国特許出願公開第２００５／０１２３５４６号（Ｕｍａｎａら）に記載されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖内に少なくとも１つのガラクトース残基を持つ抗体変異体も提供される。このような抗体変異体はＣＤＣ機能を改善させた可能性がある。このような抗体変異体は、例えば、国際公開第１９９７／３００８７号（Ｐａｔｅｌら）；同第１９９８／５８９６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）；及び同第１９９９／２２７６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。
ｃ）Ｆｃ領域変異体
特定の実施態様では、一又は複数のアミノ酸修飾を、本明細書に提供される抗体のＦｃ領域に導入することにより、Ｆｃ領域変異体が生成される。Ｆｃ領域変異体は、一又は複数のアミノ酸位置でアミノ酸修飾（例えば置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えばヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４のＦｃ領域）を含み得る。
特定の実施態様において、本発明は全てではないが幾つかのエフェクター機能を有する抗体変異体を企図しており、該機能は、該変異体を、インビボでの抗体の半減期は重要であっても、ある種のエフェクター機能（例えば補体及びＡＤＣＣなど）は不要又は有害である用途のための望ましい候補とならしめる。ＣＤＣ活性及び／又はＡＤＣＣ活性の減少／喪失を確認するために、インビトロ及び／又はインビボでの細胞傷害性アッセイを実施することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実施して、抗体が、ＦｃγＲ結合を欠く（それ故おそらくＡＤＣＣ活性を欠く）がＦｃＲｎ結合能力を保持することを確実にすることができる。ＡＤＣＣを媒介するための初代細胞であるＮＫ細胞はＦｃγＲＩＩＩのみを発現する一方、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞でのＦｃＲの発現は、Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)の４６４頁の表３に要約されている。目的分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５５００３６２号（例えば、Hellstrom, I et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)を参照）及びHellstrom, I et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985)；5,821,337 (Bruggemann, M. et al.,J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)を参照）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ法を用いてもよい（例えばフローサイトメトリー用のＡＣＴＩＴＭ非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｃ． Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ；及びＣｙｔｏＴｏｘ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）参照）。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。これに代えて又は加えて、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、Clynes et al. (USA) 95:652-656 (1998)に開示されるように、例えば動物モデルにおいて、インビボで評価することができる。また、Ｃ１ｑ結合アッセイを、抗体が体Ｃ１ｑを結合することができないこと、従って、ＣＤＣ活性を欠くことを確認するために実施することができる。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号及び国際公開第２００５／１００４０２号のＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照のこと。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを実施することができる（例えば、Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996)、Cragg, M.S. et al., Blood 101:1045-1052 (2003)、及びCragg, M.S. and M.J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)を参照）。ＦｃＲｎ結合、及びインビボでのクリアランス／半減期の測定も、当分野で既知の方法を用いて行うことができる（例えば、Petkova, S.B. et al.,Int'l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)を参照）。
エフェクター機能が低下した抗体は、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、及び３２９のうちの一又は複数の置換を伴うものを含む（米国特許第６７３７０５６号）。このようなＦｃ変異体は、残基２６５及び２９７のアラニンへの置換を有する、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含む、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７及び３２７の二つ以上における置換を有するＦｃ変異体を含む（米国特許第７３３２５８１号）。
ＦｃＲへの改善又は減少した結合を有する特定の抗体変異体が記載されている。（例えば、米国特許第６７３７０５６号；国際公開第２００４／０５６３１２号、及びShields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)を参照）。
特定の実施態様において、抗体変異体は、ＡＤＣＣを改善する一又は複数のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８位、３３３位、及び／又は３３４位（残基のＥＵ番号付け）における置換を含むＦｃ領域を含む。
幾つかの実施態様において、例えば米国特許第６１９４５５１号、国際公開第９９／５１６４２号、及びIdusogie et al.J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)に記載されているように、改変された（すなわち改善されたか又は減少した）Ｃ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）をもたらす改変がＦｃ領域においてなされる。
半減期が延長され、胎児への母性ＩｇＧの移送を担う（Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976)及びKim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)）新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合性が改善された抗体は、米国特許出願公開第２００５／００１４９３４号（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載されている。これらの抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する一又は複数の置換を伴うＦｃ領域を含む。このようなＦｃ変異体は、Ｆｃ領域残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４又は４３４のうちの一又は複数における置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換（米国特許第７３７１８２６号）を含むものを含む。
Ｆｃ領域の変異体のその他の例に関しては、Duncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988)；米国特許第５６４８２６０号；米国特許第５６２４８２１号；及び国際公開第９４／２９３５１号も参照のこと。
ｄ）システイン操作抗体変異体
特定の実施態様において、抗体の一又は複数の残基がシステイン残基で置換されているシステイン操作抗体、例えば「チオＭＡｂ」を作製することが望ましい場合がある。特定の実施態様において、置換される残基は抗体の接近可能な部位で生じる。それらの残基をシステインで置換することにより、反応性チオール基がそれにより抗体の接近可能な部位に配置され、抗体を、他の部分（例えば薬物部分又はリンカー−薬物部分）にコンジュゲートするために使用してイムノコンジュゲートを作製してもよい（本明細書において更に記載する通り）。特定の実施態様では、以下の残基のうちの何れかの一又は複数がシステインで置換される：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔの番号付け）；重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）；及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）。システイン改変抗体は、例えば、米国特許第７５２１５４１号に記載のように生成され得る。
ｅ）抗体誘導体
特定の実施態様において、本明細書で提供される抗体は、当技術分野で知られており、容易に入手可能な追加の非タンパク質部分を含むように更に修飾することができる。抗体の誘導体化に適した部分は、限定されるものではないが、水溶性ポリマーを含む。水溶性ポリマーの非限定的な例は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダムコポリマーの何れか）、及びデキストラン又はポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレン（ｐｒｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）オキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えばグリセロール）、ポリビニルアルコール、並びにそれらの混合物を含む（ただし、これらに限定されない）。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性のために製造上の利点を有し得る。ポリマーは、任意の分子量であってよく、分枝状でも非分枝状でもよい。抗体に付着するポリマーの数は変動し得るが、一を超えるポリマーが付着する場合、それらは同じか又は異なる分子であってよい。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／又は型は、限定されるものではないが、改善されるべき抗体の特定の特性又は機能、その抗体誘導体が定まった条件下で治療に使用されるかどうかを含む考慮事項に基づいて決定することができる。
別の実施態様において、放射線への曝露によって選択的に加熱されてもよい非タンパク質部分と抗体とのコンジュゲートが提示される。一実施態様において、非タンパク質部分は、カーボンナノチューブである（Kam et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605 (2005)）。放射線は、任意の波長であってよく、通常の細胞に害を与えないが、抗体−非タンパク質部分の近位細胞が死滅する温度まで非タンパク質部分を加熱する波長を含むが、これに限定されない。
Ｂ．組換え方法及び組成物
抗体は、例えば米国特許第４８１６５６７号に記載されているような組み換え方法及び組成物を用いて製造される。一態様において、本明細書に記載の抗α−シヌクレイン抗体をコードする単離された核酸が提供される。このような核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列、及び／又は抗体のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／又は重鎖）をコードし得る。更なる実施態様では、そのような核酸を含む一又は複数のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。更なる実施態様では、そのような核酸を含む宿主細胞が提供される。一実施態様では、宿主細胞は以下を含む（例えば、以下で形質転換されている）：（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、又は（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第一ベクターと、抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第ニベクター。一実施態様において、宿主細胞は、真核生物細胞、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、又はリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施態様において、上述のように、抗体の発現に適した条件下で、抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を培養することと、任意選択的に宿主細胞（又は宿主細胞培地）から抗体を回収することとを含む、抗α−シヌクレイン抗体を作製する方法が提供される。
抗α−シヌクレイン抗体の組換え生産のために、例えば上述のような、抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞内での更なるクローニング及び／又は発現のために、一又は複数のベクターに挿入される。このような核酸は、容易に単離することができ、一般的な手順を用いて（例えば、抗体の重鎖と軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合できるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）配列決定することができる。
抗体をコードするベクターのクローニング又は発現に適した宿主細胞は、本明細書に記載の原核生物細胞又は真核細胞を含む。例えば、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要ない場合には、抗体は、細菌内で産生され得る。細菌における抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５６４８２３７号、同第５７８９１９９号及び同第５８４０５２３号を参照。（また、大腸菌における抗体断片の発現について記載している、Charlton, Methods in Molecular Biology,Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254も参照のこと）。発現の後、抗体を、可溶性画分において細菌の細胞ペーストから単離し、更に精製することができる。
原核生物に加えて、グリコシル化経路が「ヒト化」されていて、部分的又は完全なヒトのグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす真菌株及び酵母株を含めた糸状菌又は酵母などの真核微生物も、抗体をコードするベクターのための適切なクローニング宿主又は発現宿主である。Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004)及びLi et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)を参照のこと。
グリコシル化抗体の発現に適した宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）からも得られる。無脊椎動物細胞の例は、植物細胞及び昆虫細胞を含む。多数のバキュロウイルス株が同定されており、これらは特にスポドプテラ・フルギペルダ（Spodoptera frugiperda）細胞のトランスフェクションのために、昆虫細胞と組み合わせて使用することができる。
植物細胞培養物を宿主として利用することもできる。例えば、米国特許第５９５９１７７号、第６０４０４９８号、第６４２０５４８号、第７１２５９７８号、及び第６４１７４２９号（トランスジェニック植物における抗体産生に関するＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳＴＭ技術を記載）を参照のこと。
脊椎動物細胞も宿主として用いることができる。例えば、懸濁液中で増殖するように適応された哺乳動物細胞株は有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ−７）で形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株；ヒト胚腎臓株（例えば、Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)に記載された２９３細胞又は２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスのセルトリ細胞（例えば、Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)に記載されるＴＭ４細胞）；サル腎細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎細胞（ＶＥＲＯ−７６）；ヒト子宮頚癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（ＨｅｐＧ２）；マウス乳腺腫瘍細胞（ＭＭＴ０６０５６２）；例えばMather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)に記載されるＴＲＩ細胞；ＭＲＣ５細胞；及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株は、ＤＨＦＲ− ＣＨＯ細胞（Urlaub et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216(1980)）を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、並びにＹ０、ＮＳ０、及びＳｐ２／０等の骨髄腫細胞株を含む。抗体産生に適した特定の哺乳動物宿主細胞株の概説については、例えば、Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003)を参照のこと。
Ｃ．アッセイ
本明細書で提供される抗α−シヌクレイン抗体は、当技術分野で周知の種々のアッセイによって同定され、その物理的／化学的性質及び／又は生物学的活性についてスクリーニングされ、又は特徴付けされ得る。
１．結合アッセイ及びその他のアッセイ
一態様において、本発明の抗体を、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット、ＮＭＲ、Ｂｉａｃｏｒｅなどの既知の方法によって、その抗原結合活性について試験する。
別の態様において、競合アッセイを用いて、ヒトα−シヌクレインへの結合について、抗α−シヌクレインモノクローナル抗体１Ｆ７と競合するか、又は抗αシヌクレインモノクローナル抗体１３Ｆ３と競合する抗体を同定することができる。特定の実施態様において、そのような競合する抗体は、抗α−シヌクレインモノクローナル抗体１Ｆ７によって結合されるか、又は抗α−シヌクレインモノクローナル抗体１３Ｆ３によって結合される同じエピトープ（例えば直鎖状又は立体構造エピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例示的方法が、Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ)に掲載のMorris (1996) 「Epitope Mapping Protocols,」に示されている。
例示的競合アッセイにおいて、固定化α−シヌクレインが、ヒトα−シヌクレインに結合する第１標識抗体（例えば、抗α−シヌクレインモノクローナル抗体１Ｆ７又は抗α−シヌクレインモノクローナル抗体１３Ｆ３）及びヒトα−シヌクレインへの結合について第１抗体と競合するその能力について試験されている第２非標識抗体を含む溶液中でインキュベートされる。第２抗体はハイブリドーマ上清に存在してもよい。対照として、固定化したヒトα−シヌクレインを、第１標識抗体を含むが第２非標識抗体は含まない溶液中でインキュベートする。α−シヌクレインへの第１抗体の結合を許容する条件下でインキュベートした後、過剰な非結合抗体を除去し、固定化したα−シヌクレインに結合した標識の量を測定する。固定化したα−シヌクレインに結合した標識の量が対照試料と比較して試験試料中で実質的に減少している場合、それは、第２抗体がα−シヌクレインへの結合に関して第１抗体と競合していることを示している。Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY)を参照。
２．活性のアッセイ
一態様において、アッセイは、生物学的活性を有するその抗α−シヌクレイン抗体を同定するために提供される。生物学的活性は、例えば、α−シヌクレインオリゴマー形成を阻害若しくは減少させること、α−シヌクレインの凝集を阻害若しくは減少させること、又はα−シヌクレイン結合毒性を阻害、減少、若しくは予防することを含み得る。また、インビボ及び／又はインビトロでそのような生物学的活性を有する抗体も提供される。
特定の実施態様において、本発明の抗体は、そのような生物学的活性について試験される。
Ｄ．イムノコンジュゲート
本発明はまた、本明細書において一又は複数の細胞傷害性剤、例えば化学療法剤若しくは薬物、増殖阻害剤、毒素（例えばタンパク質毒素、細菌、真菌、植物若しくは動物起源の酵素的に活性な毒素又はその断片）又は放射性同位体にコンジュゲートした抗α−シヌクレイン抗体を含むイムノコンジュゲートを提供する。
一実施態様において、イムノコンジュゲートは、その中の抗体が、メイタンシノイド（米国特許第５２０８０２０号、第５４１６０６４号、及び欧州特許（ＥＰ）第０４２５２３５号を参照）；アウリスタチン、例えばモノメチルアウリスタチン薬物部分であるＤＥ及びＤＦ（ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）（米国特許第５６３５４８３号、第５７８０５８８号、及び第７４９８２９８号を参照）；ドラスタチン；カリケアマイシン又はその誘導体（米国特許第５７１２３７４号、第５７１４５８６号、第５７３９１１６号、第５７６７２８５号、第，５７７０７０１号、第５７７０７１０号、第５７７３００１号、及び第５８７７２９６号；Hinman et al., Cancer Res. 53:3336-3342 (1993)；及びLode et al., Cancer Res. 58:2925-2928 (1998)を参照）；アントラサイクリン、例えばダウノマイシン又はドキソルビシン（Kratz et al., Current Med. Chem. 13:477-523 (2006);Jeffrey et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters 16:358-362 (2006);Torgov et al., Bioconj. Chem. 16:717-721 (2005);Nagy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:829-834 (2000);Dubowchik et al., Bioorg. & Med. Chem. Letters 12:1529-1532 (2002);King et al., J. Med. Chem. 45:4336-4343 (2002)；及び米国特許第６６３０５７９号を参照）；メトトレキサート；ビンデシン；タキサン、例えばドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル（ｌａｒｏｔａｘｅｌ）、テセタキセル（ｔｅｓｅｔａｘｅｌ）、及びオルタタキセル（ｏｒｔａｔａｘｅｌ）；トリコテセン；及びＣＣ１０６５を含む（ただし、これらに限定されない）一又は複数の薬物にコンジュゲートしている抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である。
他の実施態様において、イムノコンジュゲートは、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、（緑膿菌からの）外毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ−サルシン、シナアブラギリタンパク質、ジアンチン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、ヨウシュヤマゴボウタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、ニガウリ阻害剤、クルシン、クロチン、サポンソウ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）、及びトリコテセン（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅｓ）を含む（ただし、これらに限定されない）酵素的に活性な毒素又はその断片にコンジュゲートしている、本明細書に記載の抗体を含む。
他の実施態様では、イムノコンジュゲートは、放射性原子にコンジュゲートして放射性コンジュゲートを形成する、本明細書に記載の抗体を含む。種々の放射性同位体が、放射性コンジュゲートの製造のために入手可能である。例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体を含む。検出のために用いられる場合、放射性コンジュゲートは、シンチグラフ検査用の放射性原子、例えばｔｃ９９ｍ又はＩ１２３、又は核磁気共鳴（ＮＭＲ）イメージング（磁気共鳴イメージング、ＭＲＩとしても知られている）のためのスピン標識、例えば再びヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガン又は鉄を含む。
抗体と細胞傷害性剤とのコンジュゲートは、種々の二官能性タンパク質カップリング剤、例えばＮ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオナート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えばジメチルアジピミダート ＨＣｌ）、活性エステル（例えばジスクシンイミジルスベレート）、アルデヒド（例えばグルタルアルデヒド）、ビスアジド化合物（例えばビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビス−ジアゾニウム誘導体（例えばビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えばトルエン ２，６−ジイソシアネート）、及び二活性フッ素化合物（例えば１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）を使用して作製することができる。例えば、リシンイムノトキシンは、Vitetta et al., Science 238:1098 (1987)に記載のようにして調製することができる。炭素−１４−標識１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドの抗体へのコンジュゲーションのためのキレート剤の例である。国際公開第９４／１１０２６号を参照。リンカーは、細胞内で細胞傷害性薬物の放出を容易にする「切断可能なリンカー」であってもよい。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、光不安定性リンカー、ジメチルリンカー又はジスルフィド含有リンカー（Chari et al., Cancer Res. 52:127-131 (1992)；米国特許第５２０８０２０号）が使用され得る。
本明細書に記載のイムノコンジュゲート又はＡＤＣは、限定されるものではないが、市販（例えばＰｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｃ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ．、Ｕ．Ｓ．Ａより）のＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ−ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＣＣ、スルホ−ＳＭＰＢ、及びＳＶＳＢ（スクシンイミジル−（４−ビニルスルホン）ベンゾエート）等の架橋試薬を用いて調製したものが特に考えらえる。
Ｅ．診断及び検出のための方法並びに組成物
特定の実施態様において、本明細書において提供される抗α−シヌクレイン抗体のいずれもが、生物学的試料中のα−シヌクレインの存在を検出するために有用である。本明細書で使用する「検出（する）」という用語は、定量的又は定性的検出を包含する。特定の実施態様において、生物学的試料は、脳組織などの細胞若しくは組織を含むか、又は血清、血漿、脳脊髄液などの生物学的液体を含む。
一実施態様において、診断又は検出方法に使用される抗α−シヌクレイン抗体が提供される。更なる態様において、生物学的試料中におけるα−シヌクレインの存在を検出する方法が提供される。特定の実施態様において、方法は、生物学的試料を、抗α−シヌクレイン抗体のα−シヌクレインへの結合を許容する条件下において本明細書に記載される抗α−シヌクレイン抗体と接触させること、及び抗α−シヌクレイン抗体とα−シヌクレインとの間に複合体が形成されたかどうかを検出することを含む。そのような方法は、インビトロ法又はインビボ法である。一実施態様では、抗α−シヌクレイン抗体は、抗α−シヌクレイン抗体を用いた療法に適した被験体を選択するために使用され、例えばα−シヌクレインは患者の選択のためのバイオマーカーである。
本発明の抗体を用いて診断され得る例示的な障害には、例えば、シヌクレイン病、パーキンソン病（ＰＤ）、パーキンソン病の認知症（ＰＤＤ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、レビー小体病（ＬＢＤ）、若年発症全身性神経麻痺ジストロフィー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、純粋自律神経失調症（ＰＡＦ）、及び脳内鉄沈着を伴う神経変性症１型（ＮＢＩＡ−１）が含まれる。
特定の実施態様において、標識された抗α−シヌクレイン抗体が提供される。標識は、限定されないが、（例えば、蛍光標識、発色団標識、高電子密度標識、化学発光標識、放射性標識などの）直接検出される標識又は部分、並びに、例えば、酵素反応又は分子間相互作用を介して間接的に検出される酵素又はリガンドのような部分が含まれる。このような標識の例には、限定されないが、ラジオアイソトープ３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、及び１３１Ｉ、フルオロフォア、例えば希土類キレート又はフルオレセイン及びその誘導体、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシェフェラーゼ、例えばホタルルシェフェラーゼ及び細菌ルシェフェラーゼ（米国特許第４７３７４５６号）、ルシェフェリン、２，３−ジヒドロフタルジネジオン、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリフォスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖オキシダーゼ、例えばグルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、及びグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、ヘテロサイクリックオキシダーゼ、例えばウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼを、色素前駆体、例えばＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、又はマイクロペルオキシダーゼ、ビオチン／アビジン、スピンラベル、バクテリオファージラベル、安定な遊離ラジカルなどを酸化するために過酸化水素を利用する酵素とカップリングさせたもの、などが含まれる。
Ｆ．薬学的製剤
本明細書に記載される抗α−シヌクレイン抗体の薬学的製剤は、所望の程度の純度を有するこのような抗体を、一又は複数の任意選択的な薬学的に許容される担体と混合することによって（ＲｅｍｉｎｇｔｏｎのPharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)）、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態に調製される。通常、薬学的に許容される担体は、用いられる用量及び濃度で受容者に対して非毒性であり、限定されるものではないが、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸等の緩衝液；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；防腐剤（例えばオクタデシルジメチオルベンジルアンモニウムクロリド、ヘキサメトニウムクロリド、ベンザルコニウムクロリド、ベンゼトニウムクロリド、フェノール、ブチル又はベンジルアルコール、メチル又はプロピルパラベンなどのアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３−ペンタノール、及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン又はリジン等のアミノ酸；グルコース、マンノース又はデキストリンを含む単糖類、二糖類、及びその他の糖質；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトール等の糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えばＺｎ−タンパク質錯体）；及び／又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含む。本明細書における例示的な薬学的に許容される担体は、可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）などの介在性薬物分散剤、例えばｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｉｎｃ．）などのヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質を更に含む。特定の典型的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用法は、ｒＨｕＰＨ２０を含み、米国特許出願公開第２００５／０２６０１８６号及び同第２００６／０１０４９６８に記載されている。一態様において、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼなどの一又は複数の更なるグリコサミノグリカナーゼと組み合わせられる。
例示的な凍結乾燥抗体製剤が米国特許第６２６７９５８号に記載されている。水性抗体製剤は、米国特許第６１７１５８６号及び国際公開第２００６／０４４９０８号に記載されているものを含み、後者の製剤はヒスチジン−酢酸緩衝液を含む。
本明細書中の製剤はまた、治療される特定の適応症に必要な一を超える活性成分、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的な活性を有するものを含有してもよい。例えば、異なる抗α−シヌクレイン抗体を更に提供することが望ましい場合がある。そのような活性成分は、意図された目的に有効な量で組み合わせて適切に存在する。
活性成分は、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子及びナノカプセル）又はマクロエマルジョン中において、例えばコアセルベーション技術又は界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、ヒドロキシメチルセルロース又はゼラチンマイクロカプセル及びポリ（メチルメタクリレート）マイクロカプセルのそれぞれの中に封入されていてもよい。そのような技術は、ＲｅｍｉｎｇｔｏｎのPharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)に開示されている。
徐放性製剤が調製されてもよい。徐放性調製物の好適な例は、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスを含み、このマトリックスは成形品、例えばフィルム又はマイクロカプセルの形態である。
インビボ投与に使用される製剤は、一般的に滅菌されていなければならない。滅菌状態は、例えば、滅菌濾過膜を通して濾過することにより、容易に達成される。
Ｇ．治療的方法及び組成物
本明細書で提供される抗α−シヌクレイン抗体の何れかが、治療的方法において使用され得る。
一態様において、医薬として使用のための抗α−シヌクレイン抗体が提供される。更なる態様において、シヌクレイン病、パーキンソン病（ＰＤ）、パーキンソン病の認知症（ＰＤＤ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、レビー小体病（ＬＢＤ）、若年発症全身性神経麻痺ジストロフィー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、純粋自律神経失調症（ＰＡＦ）、及び脳内鉄沈着を伴う神経変性症１型（ＮＢＩＡ１）の治療、予防、又はその発症を遅延させることに使用のための抗α−シヌクレイン抗体が提供される。
特定の実施態様において、治療の方法において使用のための抗α−シヌクレイン抗体が提供される。特定の実施態様において、本発明は、シヌクレイン病、パーキンソン病（ＰＤ）、パーキンソン病の認知症（ＰＤＤ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、レビー小体病（ＬＢＤ）、若年発症全身性神経麻痺ジストロフィー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、純粋自律神経失調症（ＰＡＦ）、又は脳内鉄沈着を伴う神経変性症１型（ＮＢＩＡ１）を有する個体を治療する方法において使用のための抗α−シヌクレイン抗体を提供する。そのような一実施態様において、該方法は、本明細書に記載のように、少なくとも一の追加の治療剤の有効量を個体に投与することを更に含む。更なる実施態様において、本発明は、α−シヌクレインの凝集及び／又はオリゴマー化を防止又は減少させることにおいて使用のための抗α−シヌクレイン抗体を提供する。特定の実施態様において、本発明は、α−シヌクレインの凝集及び／又はオリゴマー化を防止又は減少させるために個体に抗α−シヌクレイン抗体の有効量を投与することを含む、α−シヌクレインの凝集及び／又はオリゴマー化を防止又は減少させる方法において使用のための抗α−シヌクレイン抗体を提供する。上記実施態様の何れかに記載の「個体」は、好ましくはヒトである。
更なる実施態様では、本発明は、医薬の製造又は調製における抗α−シヌクレイン抗体の使用を提供する。一実施態様において、医薬は、シヌクレイン病の治療、予防、又はその発症を遅延させるためのものである。別の実施態様において、医薬は、パーキンソン病の治療、予防、又はその発症を遅延させるためのものである。別の実施態様において、医薬は、レビー小体病の治療、予防、又はその発症を遅延させるためのものである。別の実施態様において、医薬は、レビー小体型認知症の治療、予防、又はその発症を遅延させるためのものである。別の実施態様において、医薬は、若年発症全身性神経麻痺ジストロフィー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病）の治療、予防、又はその発症を遅延させるためのものである。別の実施態様において、医薬は、多系統萎縮症（ＭＳＡ）の治療、予防、又はその発症を遅延させるためのものである。別の実施態様において、医薬は、純粋自律神経失調症（ＰＡＦ）の治療、予防、又はその発症を遅延させるためのものである。別の実施態様において、医薬は、脳内鉄沈着を伴う神経変性症１型（ＮＢＩＡ１）の治療、予防、又はその発症を遅延させるためのものである。
更なる実施態様において、医薬は、シヌクレイン病を有する個体に医薬の有効量を投与することを含む、シヌクレイン病を治療する、予防する、又はその発症を遅延させる方法における使用のためのものである。更なる実施態様において、医薬は、パーキンソン病を有する個体に医薬の有効量を投与することを含む、パーキンソン病を治療する、予防する、又はその発症を遅延させる方法における使用のためのものである。更なる実施態様において、医薬は、パーキンソン病の認知症を有する個体に医薬の有効量を投与することを含む、パーキンソン病の認知症を治療する、予防する、又はその発症を遅延させる方法における使用のためのものである。更なる実施態様において、医薬は、若年発症全身性神経麻痺ジストロフィー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病）を有する個体に医薬の有効量を投与することを含む、若年発症全身性神経麻痺ジストロフィー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病）を治療する、予防する、又はその発症を遅延させる方法における使用のためのものである。更なる実施態様において、医薬は、レビー小体病を有する個体に医薬の有効量を投与することを含む、レビー小体病を治療する、予防する、又はその発症を遅延させる方法における使用のためのものである。更なる実施態様において、医薬は、レビー小体型認知症を有する個体に医薬の有効量を投与することを含む、レビー小体型認知症を治療する、予防する、又はその発症を遅延させる方法における使用のためのものである。更なる実施態様において、医薬は、多系統萎縮症を有する個体に医薬の有効量を投与することを含む、多系統萎縮症を治療する、予防する、又はその発症を遅延させる方法における使用のためのものである。更なる実施態様において、医薬は、純粋自律神経失調症を有する個体に医薬の有効量を投与することを含む、純粋自律神経失調症を治療する、予防する、又はその発症を遅延させる方法における使用のためのものである。更なる実施態様において、医薬は、脳内鉄沈着を伴う神経変性症１型を有する個体に医薬の有効量を投与することを含む、脳内鉄沈着を伴う神経変性症１型を治療する、予防する、又はその発症を遅延させる方法における使用のためのものである。特定の実施態様において、上記方法の何れか一つは、本明細書に記載のように、少なくとも一の追加の治療剤の有効量を個体に投与することを更に含む。
幾つかの態様において、医薬は、α−シヌクレインタンパク質のレベルを減少させるためのものである（例えば、α−シヌクレイン単量体を減少させる、α−シヌクレインオリゴマーを減少させる、α−シヌクレイン多量体を減少させる、α−シヌクレイン原線維を減少させる、α−シヌクレイン凝集体を減少させる）。更なる実施態様において、医薬は、α−シヌクレインタンパク質のレベルを減少させる（例えば、α−シヌクレイン単量体を減少させる、α−シヌクレインオリゴマーを減少させる、α−シヌクレイン多量体を減少させる、α−シヌクレイン原線維を減少させる、α−シヌクレイン凝集体を減少させる）ための医薬の有効量を個体に投与することを含む、個体におけるα−シヌクレインタンパク質のレベルを減少させる（例えば、α−シヌクレイン単量体を減少させる、α−シヌクレインオリゴマーを減少させる、α−シヌクレイン多量体を減少させる、α−シヌクレイン原線維を減少させる、α−シヌクレイン凝集体を減少させる）方法において使用のためのものである。上記実施態様の何れかに記載の「個体」は、ヒトであってよい。
更なる態様において、本発明は、シヌクレイン病を治療する、予防する、又はその発症を遅延させるための方法を提供する。一実施態様において、本方法は、シヌクレイン病を有する個体に、抗α−シヌクレイン抗体の有効量を投与することを含む。別の態様において、本発明は、パーキンソン病を治療する、予防する、又はその発症を遅延させるための方法を提供する。一実施態様において、本方法は、パーキンソン病を有する個体に、抗α−シヌクレイン抗体の有効量を投与することを含む。別の態様において、本発明は、レビー小体病を治療する、予防する、又はその発症を遅延させるための方法を提供する。一実施態様において、本方法は、レビー小体病を有する個体に、抗α−シヌクレイン抗体の有効量を投与することを含む。別の態様において、本発明は、レビー小体型認知症を治療する、予防する、又はその発症を遅延させるための方法を提供する。一実施態様において、本方法は、レビー小体型認知症を有する個体に、抗α−シヌクレイン抗体の有効量を投与することを含む。更に別の態様において、本発明は、多系統萎縮症を治療する、予防する、又はその発症を遅延させるための方法を提供する。一実施態様において、本方法は、多系統萎縮症を有する個体に、抗α−シヌクレイン抗体の有効量を投与することを含む。更に別の態様において、本発明は、パーキンソン病の認知症を治療する、予防する、又はその発症を遅延させるための方法を提供する。一実施態様において、本方法は、パーキンソン病の認知症を有する個体に、抗α−シヌクレイン抗体の有効量を投与することを含む。更に別の実施態様において、本発明は、若年発症全身性神経麻痺ジストロフィー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病）の治療、予防、又はその発症を遅延させるための方法を提供する。一実施態様において、本方法は、若年発症全身性神経麻痺ジストロフィー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病）を有する個体に、抗α−シヌクレイン抗体の有効量を投与することを含む。更に別の態様において、本発明は、純粋自律神経失調症を治療する、予防する、又はその発症を遅延させるための方法を提供する。一実施態様において、本方法は、純粋自律神経失調症を有する個体に、抗α−シヌクレイン抗体の有効量を投与することを含む。更に別の態様において、本発明は、脳内鉄沈着を伴う神経変性症１型を治療する、予防する、又はその発症を遅延させるための方法を提供する。一実施態様において、本方法は、脳内鉄沈着を伴う神経変性症１型を有する個体に、抗α−シヌクレイン抗体の有効量を投与することを含む。特定の実施態様において、上記方法の何れか一つは、本明細書に記載のように、少なくとも一の追加の治療剤の有効量を個体に投与することを更に含む。上記実施態様の何れかに記載の「個体」は、ヒトであってよい。
更なる態様において、本発明は、個体におけるα−シヌクレインタンパク質のレベルを減少させる方法を提供する（例えば、α−シヌクレイン単量体を減少させる、α−シヌクレインオリゴマーを減少させる、α−シヌクレイン多量体を減少させる、α−シヌクレイン原線維を減少させる、α−シヌクレイン凝集体を減少させる）。一実施態様において、本方法は、α−シヌクレイン単量体を減少させるために、α−シヌクレインオリゴマーを減少させるために、α−シヌクレイン多量体を減少させるために、α−シヌクレイン原線維を減少させるために、又はα−シヌクレイン凝集体を減少させるために、抗α−シヌクレイン抗体の有効量を個体に投与することを含む。一実施態様において、「個体」はヒトである。
更なる態様において、本発明は、例えば上述の任意の治療方法における使用のための、本明細書で提供される任意の抗α−シヌクレイン抗体を含む薬学的製剤を提供する。一実施態様において、薬学的製剤は、本明細書で提供される任意の抗α−シヌクレイン抗体及び薬学的に許容される担体を含む。他の実施態様において、薬学的製剤は、本明細書で提供される任意の抗α−シヌクレイン抗体と、少なくとも一の追加の治療剤（例えば本明細書に記載のもの）とを含む。
本発明の抗体は、単独で又は他の薬剤と組み合わせて治療において使用することができる。例えば、本発明の抗体は、少なくとも一の追加の治療剤と共投与され得る。幾つかの実施態様において、追加の治療剤は、異なる抗α−シヌクレイン抗体である。
このような上記の併用療法は、併用投与（二以上の治療剤が、同一又は別々の製剤に含まれている）、及び本発明の抗体の投与が、追加の治療剤（複数可）の投与の前、投与と同時、及び／又は投与の後に起こりうる個別投与を包含する。一実施態様において、抗α−シヌクレイン抗体の投与及び追加の治療剤の投与は、互いに約１ヶ月以内、又は約１、２若しくは３週間以内、又は約１、２、３、４、５若しくは６日間以内に生じる。
本発明の抗体（及び任意の追加の治療剤）は、非経口、肺内、及び鼻腔内を含めた任意の適切な手段により投与することができ、また、局所治療が望まれるのであれば、病巣内投与であってもよい。非経口点滴は、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内又は皮下投与を含む。投薬は、その投与が短期間か又は長期であるかどうかに部分的に依存して、任意の適切な経路、例えば、静脈内又は皮下注射などの注射により行うことができる。限定されないが、様々な時間点にわたる、単一又は複数回投与、ボーラス投与、パルス注入を含む様々な投薬スケジュールが本明細書において考慮される。
本発明の抗体は、医療実施基準に一致した様式で製剤化され、投薬され、投与される。こうした観点において考慮すべき因子として、治療される特定の疾患、治療される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床症状、疾患の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与計画、及び医師に既知のその他の因子が挙げられる。抗体は、必要ではないが任意で、問題の障害の予防又は治療のために現在使用されている一又は複数の薬剤とともに製剤化される。そのような他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗体の量、障害又は治療の種類、及び上記以外の因子によって決まる。これらは一般的には、本明細書に記載されているのと同じ用量及び投与経路で、又は本明細書に記載の用量の約１から９９％で、又は経験的に／臨床的に妥当であると決定された任意の用量及び任意の経路で使用される。
疾患の予防、治療又はその発症を遅延させるために、本発明の抗体の用量は、（単独で又は一若しくは複数の追加の治療剤との併用で用いられる場合）治療される疾患の種類、抗体の種類、疾患の重症度及び経過、抗体の投与が予防的目的か治療的目的か、治療歴、患者の病歴及び抗体に対する応答、並びに主治医の裁量に依存するであろう。本発明の抗体は、単回又は一連の治療にわたって患者へ適切に投与される。疾患の種類及び重症度に応じて、例えば一回以上の別個の投与によるか、連続注入によるかに関わらず、約１μｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ（例えば０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ）の抗体又が患者への投与のための初期候補用量となり得る。一つの典型的な１日用量は、上記の因子に応じて約１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ又はそれ以上の範囲であろう。数日以上にわたる反復投与に関しては、状態に応じて、治療は一般に疾患症状の望まれる抑制が起こるまで持続されるであろう。抗体の一の例示的投薬量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇであろう。従って、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ又は１０ｍｇ／ｋｇの一又は複数の用量（又はこれらの何れかの組み合わせ）を患者に投与してよい。このような用量は断続的に、例えば毎週又は三週毎（例えば患者が約２から約２０、例えば抗体の約６用量を受けるように）投与してよい。初期の高負荷用量の後、一以上の低用量を投与してよい。しかしながら、他の投与量レジメンが有用であり得る。この治療の進行は、従来の技術及びアッセイによって容易にモニターされる。
上記の製剤又は治療方法の何れも、抗α−シヌクレイン抗体の代わりに又はそれに加えて本発明のイムノコンジュゲートを用いて実施することができることが理解される。
Ｈ．製造品
本発明の別の態様では、上述した障害の治療、予防、及び／又は診断に有用な材料を含む製造品が提供される。製造品は、容器と容器上の又は容器に付随するラベル又は添付文書を含む。好適な容器は、例としてボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ輸液バッグなどを含む。容器はガラス又はプラスチックなどの様々な材料から形成され得る。容器は、疾患の治療、予防、及び／又は診断に効果的である、単独の又は別の組成物と併用の組成物を収容し、滅菌のアクセスポートを有し得る（例えば、容器は皮下注射針で貫通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグ又はバイアルであってもよい）。該組成物中の少なくとも一の活性剤は、本発明の抗体である。ラベル又は添付文書は、該組成物が特定の疾患の治療のために使用されることを示す。更に、製造品は、（ａ）本発明の抗体を含む組成物を中に収容する第一の容器、及び（ｂ）更なる細胞傷害性剤又はその他の治療剤含む組成物を中に収容する第二の容器を含んでもよい。本発明の本実施態様における製造品は、組成物が特定の疾患を治療するために使用され得ることを示す添付文書を更に含んでもよい。代替的に又は追加的に、製造品は、薬学的に許容される緩衝液、例えば注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液、及びデキストロース溶液を含む第二（又は第三）の容器を更に含んでもよい。製造品は、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含めた、商業的及び使用者の観点から望ましいその他の材料を更に含んでもよい。
上記のいずれの製造品も、抗α−シヌクレイン抗体の代わりに又はそれに加えて、本発明のイムノコンジュゲートを含んでもよい。
ＩＩＩ．実施例
以下は本発明の方法及び組成物の実施例である。上に提供された一般的な説明を前提として、他の様々な実施態様が実施され得ることが理解される。
実施例１．組換えヒトαシヌクレインの産生
組換えヒトα−シヌクレインは、ヒトα−シヌクレインをコードする核酸を含むｐＳＴ２３９／α−シヌクレインプラスミドでトランスフェクトされた大腸菌細菌細胞５８Ｆ３中で発現された。１Ｌの振盪フラスコ培養物からの大腸菌ペースト（１５−２０ｇペレット）を、７ＭグアニジンＨＣｌを含有する２０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８．０の１０ｍＭ（ｗ／ｖ）に可溶化した。細胞溶解物を遠心分離し、得られた上清を、６ＭグアニジンＨＣｌを含む２０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８．６で平衡化した２０ｍｌのＱｉａｇｅｎ Ｎｉ−ＮＴＡ金属キレートカラムにロードした。カラムを、５０ｍＭイミダゾール（Ｕｌｔｒｏｌグレード；Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）を含む更なる緩衝液で洗浄した。タンパク質を２５０ｍＭイミダゾールを含む緩衝液で溶出した。透析後、製造者（Ｑｉａｇｅｎ）の指示に従ってＮ末端Ｕｎｉｚｙｍｅ−ｐｏｌｙｈｉｓタグを切断した。続いて脱タグ化タンパク質を６Ｍグアニジン塩酸塩、ｐＨ６．０に透析した。
組換えヒトα−シヌクレイン単量体を産生するために、α−シヌクレインタンパク質をＰＢＳ（８ｍＭのＮａ２ＨＰＯ４、１３７ｍＭのＮａＣｌ、２ｍＭのＫＨ２ＰＯ４、２．７ｍＭのＫＣｌ、ｐＨ７．４）に透析し、次いで０．２μｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を介して濾過した。組換えヒトα−シヌクレイン可溶性オリゴマーを生成するために、透析した単量体組換えヒトα−シヌクレインタンパク質を更に５０μＭに濃縮し、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ、Ｓｉｇｍａ）と１：５０のモル比（α−シヌクレイン対ＤＨＡ）でサーモミキサー（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）を用いて３７℃、５００ＲＰＭで２時間インキュベートした。次いで、混合物全体を、２０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１５０ｍＭのＮａＣｌで予め平衡化したＳｕｐｅｒｄｅｘ ７５ １０／３００ ＧＬ（ＧＥ）カラムで精製した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル分析に基づいて、オリゴマーを含む画分を続いてプールした。精製されたα−シヌクレイン単量体及びα−シヌクレインオリゴマーを抗原として別々に使用して抗体を生成した。
図５は、上記のようにＳｕｐｅｒｄｅｘ ７５ １０／３００カラムで分離された組換えヒトα−シヌクレインオリゴマーのゲル濾過クロマトグラムを示す。図６Ａ及び図６Ｂは、クーマシーブルーで染色された２０％トリス−グリシンゲル上のα−シヌクレイン単量体（図６Ａ）及びα−シヌクレインオリゴマー（図６Ｂ）のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す。α−シヌクレインオリゴマーを上記のように調製し、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ７５ １０／３００ ＧＬカラムで分離した。レーン７ー９（オリゴマー形態）に対応するカラム画分を次いでプールし、本明細書に記載の抗体生成に使用した。
実施例２：マウスモノクローナル抗α−シヌクレイン抗体の開発と特性評価
α−シヌクレインノックアウトマウス（ＪＡＸ００３６９２、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ、ＭＥ）を、ヒトα−シヌクレイン単量体若しくはオリゴマータンパク質（上記のように調製したもの）の各々２−１０μｇを全部で８ー１３回の注射で腹腔内（ｉ．ｐ．）及び／又は足蹠注射により１週間に２回免疫化した。ｉ．ｐ．及び／又は足蹠注射を介する２ー１０μｇのヒトα−シヌクレイン単量体又はオリゴマータンパク質を用いた融合前のブーストは融合の３日前に与えられた。免疫化されたマウス由来の脾細胞及び／又はリンパ球を（これらの血清は全て、ＥＬＩＳＡによって直接コートされたヒト及びマウスのα−シヌクレイン単量体タンパク質に結合することが実証されている）、電気細胞融合（Ｃｙｔｏ Ｐｕｌｓｅ ＣＥＥＦ−５０装置、ＢＴＸ Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ、Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ、ＭＡ）を介して、Ｘ６３−Ａｇ８．６５３又はＰ３Ｘ６３−Ａｇ８Ｕ．１マウス骨髄腫細胞（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）と融合させた。Ｃｙｔｏｆｕｓｉｏｎ Ｍｅｄｉｕｍ Ｃ（ＢＴＸ Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ ４７−０００１）で２回洗浄した後、単離されたリンパ球及び骨髄腫細胞を１：１の比で混合し、次いで１０００万細胞／ｍｌでＣｙｔｏｆｕｓｉｏｎ Ｍｅｄｉｕｍ Ｃに再懸濁した；製造者の指針に従って電気細胞融合を行った。融合細胞を、ＣｌｏｎａＣｅｌｌ−ＨＹ培地Ｃ（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃａｔ＃０３８０３）中、７％ＣＯ２インキュベーター中で３７℃で一晩培養した。
翌日、融合した細胞を遠心分離し、抗マウスＩｇＧ−ＦＩＴＣ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ、ＰＡ）を用いて１０ｍｌのＣｌｏｎａＣｅｌｌ−ＨＹ培地Ｃに懸濁し、次いで、ＨＡＴ成分を含む９０ｍｌのメチルセルロースベースのＣｌｏｎａＣｅｌｌ−ＨＹ培地Ｄ（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃａｔ＃０３８０４）と穏やかに混合した。細胞をＯｍｎｉＴｒａｙプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ、ＮＹ）に蒔き、７％ＣＯ２インキュベーター内で３７℃で増殖させた。１０日間のインキュベーション後、Ｃｌｏｎｅｐｉｘ ＦＬ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ）を用いて蛍光コロニーを選択し、２００μＬ／ウェルのＣｌｏｎａＣｅｌｌ−ＨＹ培地Ｅ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃａｔ＃０３８０５）を含む９６ウェルプレート（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｃａｔ＃３５３０７５）に移した。
細胞からの上清を、ＥＬＩＳＡによって直接被覆されたヒトα−シヌクレインオリゴマー及び／又はヒト及びマウスα−シヌクレイン、β−シヌクレイン及びβ−シヌクレイン単量体タンパク質への結合について、ＩＨＣによってα−シヌクレイン、β−シヌクレイン、又はγ−シヌクレインを過剰発現するＦＦＰＥ又はＰＦＡ固定２９３細胞への結合について、及びウエスタンブロットによってマウスの脳溶解物への結合についてスクリーニングした。陽性クローンをＦＡＣＳＡｒｉａ ＩＩ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）を用いてサブクローニングし、次いでバイオリアクター（Ｉｎｔｅｇｒａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｃｈｕｒ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）中での大規模生産のために拡大した。ＲＮＡを、ＲＮｅａｓｙキット（Ｑｉａｇｅｎ、Ｈｉｌｄｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて陽性ハイブリドーマ細胞株から抽出し、ｃＤＮＡを生成し、配列決定のために増幅した。重鎖及び軽鎖の可変領域遺伝子を発現のためにｐＲＫプラスミドベクター（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）に挿入し、固有のクローン由来の関連する重鎖及び軽鎖を２９３細胞で組換え発現させた。次いで上清を前述のようにプロテインＡアフィニティークロマトグラフィーにより精製した。（Hongo et al., Hybridoma 19:303, 2000を参照）。２つのマウスモノクローナル抗体が同定され、抗α−シヌクレインモノクローナル抗体１Ｆ７（ｍＩｇＧ２ａ）及び抗α−シヌクレインモノクローナル抗体１３Ｆ３（ｍＩｇＧ２ａ）と命名された。
実施例３：ヒトα−シヌクレインに対するマウス抗α−シヌクレインモノクローナル抗体の一価親和性
Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００装置における表面プラズモン共鳴を用いて、ヒトα−シヌクレインについての抗α−シヌクレイン抗体１３Ｆ３及び１Ｆ７の一価親和性を評価した。これらの実験は、抗体捕捉フォーマットを利用し、ここでは試験抗体を、マウスＩｇＧ捕捉試薬で予め被覆したチップに結合させることによって試験抗体を固定化し、続いて溶液中のα−シヌクレインタンパク質に結合させた。
マウスＩｇＧ捕捉チップを、製造者の指示に従ってＧＥマウスＩｇＧ捕捉キットを使用して調製した。簡潔には、１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）緩衝液中の捕捉抗体の溶液に暴露する前に、ＥＤＣ／ＮＨＳの混合物でシリーズＳ ＣＭ５センサーチップを活性化した。残りの共有結合部位をエタノールアミンでブロックした。
結合を評価するために、抗αシヌクレインモノクローナル抗体１３Ｆ３及び抗αシヌクレインモノクローナル抗体１Ｆ７を、１０μｌ／分の流速で泳動緩衝液（１ｘＨＢＳＰ；１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０）中の１μｇ／ｍｌ溶液を用いて捕捉した。溶液中のヒトα−シヌクレインの結合を、３０μｌ／分の流速で、６つの異なる濃度（１桁のナノモルから１μＭを超える３倍の希釈系列にわたる濃度）及び１つの複製濃度でモニターした。アッセイは、泳動緩衝液（１×ＨＢＳＰ）で希釈した試料を用いて２５℃で行った。表面を、１０ｍＭグリシン（ｐＨ１．７）を１０μｌ／分で１８０秒間注入することにより再生した。定常状態の分析を得られたデータに適用した。組換えヒトα−シヌクレインに対するこれらの２つの抗体のそれぞれの親和性（ＫＤ）を以下の表２に示す。
上記の表２に示すように、一価の親和性（上記の平衡定数によって測定）は、モノクローナル抗体１３Ｆ３については４．５ｘ１０−７Ｍ及び４．７ｘ１０−７Ｍであり、モノクローナル抗体１Ｆ７については１．３×１０−７Ｍ及び１．８×１０−７Ｍであった。図７は、上記の実験で得られた結合曲線のグラフ表示を示す（抗体１Ｆ７は上部パネル、抗体１３Ｆ３は２つの下部パネル、ｘ軸上に抗体濃度、ｙ軸上にα−シヌクレイン）。
実施例４異なる形態のα−シヌクレインの認識
モノクローナル抗体１３Ｆ３及びモノクローナル抗体１Ｆ７の、異なる形態のヒトα−シヌクレインへの結合を、ビオチン化ニュートラビジン相互作用を介してビオチン化ヒトα−シヌクレインが固定化されたＢｉａｃｏｒｅチップを用いて調べた。潜在的結合活性作用に起因する複雑な事態（ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ）を回避するために、モノクローナル抗体１３Ｆ３及び１Ｆ７をＦａｂフォーマットで調べた。各抗α−シヌクレイン抗体のＦａｂは、固定化パパイン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いたタンパク質分解消化及びその後の当該分野で標準的な方法を用いたＦａｂ断片の精製を用いてｍＩｇＧ２ａから産生された。
ニュートラアビジン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、製品番号３１０００）を、ＧＥ Ａｍｉｎｅ Ｃｏｕｐｌｉｎｇ Ｋｉｔを使用して、シリーズＳ ＣＭ５ Ｂｉａｃｏｒｅチップ（ＧＥ）に共有結合させた。簡潔には、各フローセルをＥＤＣ／ＮＨＳにより活性化し、１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５）中の１０μｇ／ｍｌのニュートラアビジンに５分間曝露し、表面をエタノールアミンでブロックした。これにより、参照細胞ＦＣ１を含む４つのフローセルのそれぞれに約２２００−２６００応答単位（ＲＵ）のニュートラアビジンの固定化が生じた。その後、ビオチン化α−シヌクレインを、泳動緩衝液（１ｘＨＢＳＰ）中で０．５−２μｇ／ｍｌに希釈し、応答を慎重にモニターしながら３０μｌ／分で関連するフローセルを通過させることにより、所望通りに固定化した。
組換えヒトα−シヌクレインの３つの形態を並行して評価した。遺伝子的に付着したＡｖｉタグを介してビオチン化された組換えヒト単量体α−シヌクレインをフローセル２に固定化した（推定２８ＲＵを固定化）。組換えヒトオリゴマーａｖｉタグビオチン化α−シヌクレインをフローセル３に固定化した（推定２２ＲＵを固定化）。ＮＨＳ−ＰＥＧ４−ビオチンによる化学的ビオチン化の前にオリゴマー化した非ａｖｉタグ付き組換えヒトα−シヌクレインをフローセル４に固定化した（推定１５ＲＵを固定化）。
次いで、ビオチン化組換えヒトα−シヌクレインの３つの形態で被覆されたチップをある濃度範囲のモノクローナル抗体１Ｆ７及び１３Ｆ３ Ｆａｂ断片と結合させた（２μＭの最高濃度からの３倍希釈系列後の６つの濃度；複製濃度６６７ｎＭを２回評価した）。３０μｌ／分の流速並びにそれぞれ３００秒の会合及び解離時間を用いて結合を評価した。Ｆａｂ断片の注入の間に、１０ｍＭグリシン（ｐＨ１．７）を１０μｌ／分で６０秒の注入によって表面を再生した。各濃度系列を２回追跡した。
これらの分析の結果を図８に示す。モノクローナル抗体１３Ｆ３ Ｆａｂは、フローセル２に固定化されたビオチン化単量体組換えヒトα−シヌクレイン（「天然型」αシヌクレインが酵素的にビオチン化された単量体α−シヌクレイン）への結合について急速な動力学を示した。モノクローナル抗体１３Ｆ３を、フローセル３（酵素的にビオチン化されたオリゴマーα−シヌクレイン）又はフローセル４（化学的にビオチン化されたα−シヌクレインであり、オリゴマー化され、アミン結合を介して化学的にビオチン化されている）のビオチン化オリゴマー組換えヒトα−シヌクレインに結合させた場合、はるかに遅い解離を示す結合成分が観察された。加えて、迅速に解離する成分もまた観察された。そのような結合特性は、抗体１Ｆ７では観察されなかった。
Ｂｉａｃｏｒｅ分析によって得られたこれらの結果は、モノクローナル抗体１３Ｆ３ Ｆａｂが、ビオチン化α−シヌクレインオリゴマーへのマルチモーダルな結合を実証したことを示した。モノクローナル抗体１３Ｆ３は、単量体及びオリゴマーα−シヌクレインに対して質的に異なる結合特性を示した。α−シヌクレインとの抗体Ｆａｂ断片の相互作用が一価であると予想されるので、これらの結果は、オリゴマーα−シヌクレインへの結合の増強は結合活性媒介ではないことを示唆しており、α−シヌクレイン上の単量体エピトープに加えて、この抗体のオリゴマー特異的エピトープの認識と一致する。
実施例５．ＮＭＲ分光法による抗α−シヌクレインモノクローナル抗体１３Ｆ３及び抗α−シヌクレインモノクローナル抗体１Ｆ７の結合エピトープの同定
ＮＭＲを用いて、抗α−シヌクレインモノクローナル抗体１３Ｆ３及び抗α−シヌクレインモノクローナル抗体１Ｆ７の結合エピトープを以下のように同定した。ＮＭＲ試料は、Ｇｉｏｔｔｏ Ｂｉｏｔｅｃｈ（Ｓｅｓｔｏ Ｆｉｏｒｅｎｔｉｎｏ（ＦＩ）、Ｉｔａｌｙ）から購入した１ｍｇ／ｍｌ（７１μＭ）の濃度のＰＢＳ（ｐＨ７．０）中の１３Ｃ／１５Ｎ標識組換えヒトα−シヌクレインの溶液を、３ｍｍのＮＭＲチューブに１８０μｌの容量まで添加することにより調製した。抗体結合型のα−シヌクレインの複合体形成は、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中に抗体１３Ｆ３の１８ｍｇ／ｍｌ（１２０μＭ）溶液と抗体１Ｆ７の１７．８ｍｇ／ｍｌ（１１８μＭ）溶液を９μｌのアリコートでＮＭＲ試料へ添加することにより達成した。２Ｄ ＨＳＱＣ−ＴＲＯＳＹスペクトルは、Ｆａｂの濃度を増加させて記録し、プロトン−アミドクロスピーク強度をＣＣＰＮでモニターした。（Vranken et al (2005) Proteins 59:687-696を参照）。全てのスペクトルは、５ｍｍのＴＸＩクライオプローブを用いてＢｒｕｋｅｒ ６００ＭＨｚ分光計上で、較正した３００Ｋで記録した。データ解析に用いた最終モル比はα−シヌクレイン：Ｆａｂが１：０．５であった。全てのデータをＴｏｐｓｐｉｎ ３．１（Ｂｒｕｋｅｒ Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて処理し、ＣＣＰＮを用いて可視化し分析した。１３Ｃ／１５Ｎ標識α−シヌクレインの試料を、濃度７１μＭに対応する１ｍｇ／ｍｌでＰＢＳ（ｐＨ７．２）緩衝液中で測定した。ＢＭＲＢからの提出されたＮＭＲデータを用いて、受託番号６９６８のスペクトルを割り当てた。３Ｄ ＴＲＯＳＹ−ＨＮＣＯからの三重共鳴情報を用いて、公表された帰属を確認し、シグナル重複についての曖昧さを除去した。シグナル強度はＣＣＰＮで評価した。シグナル誤差は、記録されたデータのシグナル対ノイズに基づいてＣＣＰＮで外挿された。
抗α−シヌクレインモノクローナル抗体１３Ｆ３ Ｆａｂの結合についてのＮＭＲの結果は以下の通りであった。組換えヒトα−シヌクレイン単独のスペクトル及び１：０．５のモル比によるスペクトルをそれぞれ図９Ａ及び９Ｂに示す。結合エピトープは、複合体スペクトルにおけるシグナル強度の急激な減少を伴うアミノ酸残基シグナルとして同定された。アミノ酸残基は、２Ｄ Ｈｅｔｅｒｏｎｕｃｌｅａｒ Ｓｉｎｇｌｅ Ｑｕａｎｔｉｔｙ Ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ−Ｔｒａｎｓｖｅｒｓａｌ Ｒｅｌａｘａｔｉｏｎ Ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ（２Ｄ ＨＳＱＣ−ＴＲＯＳＹ）スペクトルにおけるシグナルの減少により、抗体の結合エピトープに属すると分類された。（Pervushin et al (1997) PNAS 94:12366-12371を参照）。５０を超える信号強度減衰のファクターがカットオフとして使用された。抗α−シヌクレインモノクローナル抗体１３Ｆ３ Ｆａｂについては、ヒトα−シヌクレインのアミノ酸残基１０４−１０５，１０７，１０９−１１１，１１３−１１６及び１１８がこの基準を満たす。これらの結果は、モノクローナル抗体１３Ｆ３は、ヒトα−シヌクレインのアミノ酸残基１０４−１０５，１０７，１０９−１１１，１１３−１１６及び１１８に結合することを示しており、モノクローナル抗体１３Ｆ３の結合エピトープがヒトα−シヌクレインのアミノ酸残基１０４−１１８を含み、より具体的には、ヒトα−シヌクレインのアミノ酸残基１０４−１０５，１０７，１０９−１１１，１１３−１１６及び１１８を含むことを示している。（下記の表３を参照）。
シグナル減衰に加えて、化学シフトの摂動が、ヒトα−シヌクレインに結合する抗α−シヌクレインモノクローナル抗体１３Ｆ３ Ｆａｂで観察されるアミノ酸残基９８−１０３，１１９−１２２、及び１２４−１２５について観察された。これらの化学シフト摂動は、Ｆａｂ結合の間接的効果に起因する。化学シフト摂動の効果はヒスチジン５０についても観察された；これらはわずかなｐＨ変化などの二次的な影響に起因する。グリシン１０６からのシグナルは重複している。プロリン残基１０８及び１１７はＨＳＱＣシグネチャーを有さない。残基イソロイシン１１２は、それほど強い影響を受けておらず、シグナルの減衰は１．７９であることに留意されたい。
上記の抗α−シヌクレインモノクローナル抗体１３Ｆ３ Ｆａｂの結合エピトープは、ヒトα−シヌクレインのアミノ酸残基１０５−１２３に対応するアミノ酸配列ＥＧＡＰＱＥＧＩＬＥＤＭＰＶＤＰＤＮＥ（配列番号２２）を有する合成ペプチドの添加によって更に確認された。ＮＭＲ実験（上記のように）でこの（非標識）ペプチドをＦａｂ−α−シヌクレイン複合体試料に添加すると、エピトープシグナルが再現された。（図１０Ａ及び１０Ｂを比較されたい）。
抗α−シヌクレインモノクローナル抗体１Ｆ７ Ｆａｂの結合についてのＮＭＲ結果は以下の通りであった。α−シヌクレインのこの抗体結合型の調製は、抗α−シヌクレイン抗体１３Ｆ３について上記したのと同様に、Ｆａｂ １Ｆ７をＮＭＲ試料に添加することによって達成された。２Ｄ ＨＳＱＣ−ＴＲＯＳＹスペクトルは、Ｆａｂの濃度を増加させて記録し、プロトン−アミドクロスピーク強度をモニターした。α−シヌクレイン単独のスペクトル及び１：０．５のモル比によるスペクトルをそれぞれ図１１Ａ及び１１Ｂに示す。シグナル減衰を示すアミノ酸残基（ヒトα−シヌクレインのアミノ酸残基５，８−９，１５−２２，２８，３９−４３及び７８）を、モノクローナル抗体１Ｆ７の結合エピトープとして分類した。（下記の表３を参照）。
これらのアミノ酸残基は、Ｕｌｍｅｒらによって報告されたα−シヌクレインの溶液構造にマッピングされ、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄａｔａ Ｂａｎｋに提出番号１ＸＱ８で提出された。（Bernstein et al (1977) J Mol Biol 112:535を参照）。α−シヌクレインの溶液構造に対して抗α−シヌクレインモノクローナル抗体１３Ｆ３ Ｆａｂのマッピングされたエピトープを図１２Ａに示す。α−シヌクレインの溶液構造に対して抗α−シヌクレインモノクローナル抗体１Ｆ７ Ｆａｂのマッピングされたエピトープを図１２Ｂに示す。
実施例６．ペプチドマッピングによる抗α−シヌクレインモノクローナル抗体１Ｆ７の結合エピトープの同定
ヒトα−シヌクレインの長さにわたる一連の１５−ｍｅｒペプチドを用いて、抗α−シヌクレイン抗体１Ｆ７は、ヒトα−シヌクレインのアミノ酸残基３７−５１に対応するペプチドに結合することが見出された。（ＶＬＹＶＧＳＫＴＫＥＧＶＶＨＧ；配列番号２０）。
前述の発明は理解を明確にするために例示及び実施例によってある程度詳細に説明されているが、説明及び実施例は、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書に引用される全ての特許及び科学文献の開示内容は、その全体が出典明示により援用される。

Claims (41)

  1. 三つの重鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３）及び三つの軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３）を含む単離された抗α−シヌクレイン抗体であって、ここで、
    （ａ）ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号９のアミノ酸配列を含み；
    （ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号１０のアミノ酸配列を含み；
    （ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号１１のアミノ酸配列を含み；
    （ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号６のアミノ酸配列を含み；
    （ｅ）ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号７のアミノ酸配列を含み；かつ
    （ｆ）ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号８のアミノ酸配列を含む、
    抗体。
  2. 三つの軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＬＶＲ−Ｌ３）を含む単離された抗α−シヌクレイン抗体であって、ここで、
    （ａ）ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号６のアミノ酸配列を含み；
    （ｂ）ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号７のアミノ酸配列を含み；かつ
    （ｃ）ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号８のアミノ酸配列を含む、
    抗体。
  3. 三つの重鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３）を含む単離された抗α−シヌクレイン抗体であって、ここで、
    （ａ）ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号９のアミノ酸配列を含み；
    （ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号１０のアミノ酸配列を含み；かつ
    （ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号１１のアミノ酸配列を含む、
    抗体。
  4. 重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が配列番号３のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離された抗α−シヌクレイン抗体。
  5. 配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１に記載の単離された抗α−シヌクレイン抗体。
  6. 配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１に記載の単離された抗α−シヌクレイン抗体。
  7. 三つの重鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３）及び三つの軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３）を含む単離された抗α−シヌクレイン抗体であって、ここで、
    （ａ）ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号１５のアミノ酸配列を含み；
    （ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号１６のアミノ酸配列を含み；
    （ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号１７のアミノ酸配列を含み；
    （ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号１２のアミノ酸配列を含み；
    （ｅ）ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１３のアミノ酸配列を含み；かつ
    （ｆ）ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１４のアミノ酸配列を含む、
    抗体。
  8. 三つの軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＬＶＲ−Ｌ３）を含む単離された抗α−シヌクレイン抗体であって、ここで、
    （ａ）ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号１２のアミノ酸配列を含み；
    （ｂ）ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１３のアミノ酸配列を含み；かつ
    （ｃ）ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１４のアミノ酸配列を含む、
    抗体。
  9. 三つの重鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３）を含む単離された抗α−シヌクレイン抗体であって、ここで、
    （ａ）ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号１５のアミノ酸配列を含み；
    （ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号１６のアミノ酸配列を含み；かつ
    （ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号１７のアミノ酸配列を含む、
    抗体。
  10. 重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が配列番号５のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号４のアミノ酸配列を含む、請求項７に記載の単離された抗α−シヌクレイン抗体。
  11. 配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項７に記載の単離された抗α−シヌクレイン抗体。
  12. 配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項７に記載の単離された抗α−シヌクレイン抗体。
  13. 抗体がモノクローナル抗体である、請求項１又は請求項７に記載の抗体。
  14. 抗体がヒト、ヒト化、又はキメラ抗体である、請求項１又は請求項７に記載の抗体。
  15. 抗体が単量体α−シヌクレイン及びオリゴマーα−シヌクレインからなる群から選択されるα−シヌクレインに結合する、請求項１又は請求項７に記載の抗体。
  16. 請求項１又は請求項７に記載の抗体をコードする単離された核酸。
  17. 請求項４又は請求項１０に記載の抗体をコードする単離された核酸。
  18. 請求項１６又は請求項１７に記載の核酸を含む宿主細胞。
  19. 抗体が産生されるように、請求項１８に記載の宿主細胞を培養することを含む、抗体を産生する方法。
  20. ヒトα−シヌクレインへの結合について、請求項１又は請求項４に記載の抗体と競合する抗体。
  21. 請求項１又は請求項４に記載の抗体と同じヒトα−シヌクレインのエピトープに結合する抗体。
  22. ヒトα−シヌクレインへの結合について、請求項７又は請求項１０に記載の抗体と競合する抗体。
  23. 請求項７又は請求項１０に記載の抗体と同じヒトα−シヌクレインのエピトープに結合する抗体。
  24. 抗体がヒトα−シヌクレインのアミノ酸残基５−４３を含むα−シヌクレインの領域又はエピトープに結合する、ヒトα−シヌクレインに結合する単離された抗体。
  25. 抗体がヒトα−シヌクレインのアミノ酸残基５−７８を含むα−シヌクレインの領域又はエピトープに結合する、ヒトα−シヌクレインに結合する単離された抗体。
  26. 抗体がヒトα−シヌクレインのアミノ酸残基３７−５１を含むα−シヌクレインの領域又はエピトープに結合する、ヒトα−シヌクレインに結合する単離された抗体。
  27. 抗体がヒトα−シヌクレインのアミノ酸残基１０４−１１８を含むα−シヌクレインの領域又はエピトープに結合する、ヒトα−シヌクレインに結合する単離された抗体。
  28. 請求項１又は請求項４に記載の抗体及び薬学的に許容される担体を含む薬学的製剤。
  29. 請求項７又は請求項１０に記載の抗体及び薬学的に許容される担体を含む薬学的製剤。
  30. シヌクレイン病、パーキンソン病、パーキンソン病の認知症、レビー小体型認知症、レビー小体病、若年発症全身性神経麻痺ジストロフィー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病）、多系統萎縮症、純粋自律神経失調症、及び脳内鉄沈着を伴う神経変性症１型からなる群から選択される障害を治療する、予防する、又はその発症を遅延させることにおける使用のための請求項１又は請求項７に記載の抗体。
  31. シヌクレイン病、パーキンソン病、パーキンソン病の認知症、レビー小体型認知症、レビー小体病、若年発症全身性神経麻痺ジストロフィー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病）、多系統萎縮症、純粋自律神経失調症、及び脳内鉄沈着を伴う神経変性症１型からなる群から選択される障害を治療する、予防する、又はその発症を遅延させることにおける使用のための請求項４又は請求項１０に記載の抗体。
  32. 医薬として使用のための、請求項１又は請求項７に記載の抗体。
  33. 医薬として使用のための、請求項４又は請求項１０に記載の抗体。
  34. シヌクレイン病、パーキンソン病、パーキンソン病の認知症、レビー小体型認知症、レビー小体病、若年発症全身性神経麻痺ジストロフィー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病）、多系統萎縮症、純粋自律神経失調症、及び脳内鉄沈着を伴う神経変性症１型からなる群から選択される障害を有する個体を治療するための方法であって、請求項１又は請求項７に記載の抗体の有効量を個体に投与することを含む、方法。
  35. シヌクレイン病、パーキンソン病、パーキンソン病の認知症、レビー小体型認知症、レビー小体病、若年発症全身性神経麻痺ジストロフィー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病）、多系統萎縮症、純粋自律神経失調症、及び脳内鉄沈着を伴う神経変性症１型からなる群から選択される障害を有する個体を治療するための方法であって、請求項４又は請求項１０に記載の抗体の有効量を個体に投与することを含む、方法。
  36. シヌクレイン病、パーキンソン病、パーキンソン病の認知症、レビー小体型認知症、レビー小体病、若年発症全身性神経麻痺ジストロフィー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病）、多系統萎縮症、純粋自律神経失調症、及び脳内鉄沈着を伴う神経変性症１型からなる群から選択される障害を治療する、予防する、又はその発症を遅延させるための方法であって、請求項１又は請求項７に記載の抗体の有効量を個体に投与することを含む、方法。
  37. シヌクレイン病、パーキンソン病、パーキンソン病の認知症、レビー小体型認知症、レビー小体病、若年発症全身性神経麻痺ジストロフィー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病）、多系統萎縮症、純粋自律神経失調症、及び脳内鉄沈着を伴う神経変性症１型からなる群から選択される障害を治療する、予防する、又はその発症を遅延させるための方法であって、請求項４又は請求項１０に記載の抗体の有効量を個体に投与することを含む、方法。
  38. シヌクレイン病、パーキンソン病、パーキンソン病の認知症、レビー小体型認知症、レビー小体病、若年発症全身性神経麻痺ジストロフィー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病）、多系統萎縮症、純粋自律神経失調症、及び脳内鉄沈着を伴う神経変性症１型からなる群から選択される障害を治療する、予防する、又はその発症を遅延させるための方法における使用のための請求項１又は請求項７に記載の抗体。
  39. シヌクレイン病、パーキンソン病、パーキンソン病の認知症、レビー小体型認知症、レビー小体病、若年発症全身性神経麻痺ジストロフィー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病）、多系統萎縮症、純粋自律神経失調症、及び脳内鉄沈着を伴う神経変性症１型からなる群から選択される障害を治療する、予防する、又はその発症を遅延させるための方法における使用のための請求項４又は請求項１０に記載の抗体。
  40. シヌクレイン病、パーキンソン病、パーキンソン病の認知症、レビー小体型認知症、レビー小体病、若年発症全身性神経麻痺ジストロフィー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病）、多系統萎縮症、純粋自律神経失調症、及び脳内鉄沈着を伴う神経変性症１型からなる群から選択される障害を治療する、予防する、又はその発症を遅延させるための医薬の製造における、請求項１又は請求項７に記載の抗体の使用。
  41. シヌクレイン病、パーキンソン病、パーキンソン病の認知症、レビー小体型認知症、レビー小体病、若年発症全身性神経麻痺ジストロフィー（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病）、多系統萎縮症、純粋自律神経失調症、及び脳内鉄沈着を伴う神経変性症１型からなる群から選択される障害を治療する、予防する、又はその発症を遅延させるための医薬の製造における、請求項４又は請求項１０に記載の抗体の使用。
JP2017520354A 2014-10-16 2015-10-15 抗アルファ−シヌクレイン抗体及び使用方法 Pending JP2017536102A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462064867P 2014-10-16 2014-10-16
US62/064,867 2014-10-16
PCT/US2015/055796 WO2016061389A2 (en) 2014-10-16 2015-10-15 Anti-alpha-synuclein antibodies and methods of use

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2017536102A true JP2017536102A (ja) 2017-12-07
JP2017536102A5 JP2017536102A5 (ja) 2018-11-22

Family

ID=54356660

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2017520354A Pending JP2017536102A (ja) 2014-10-16 2015-10-15 抗アルファ−シヌクレイン抗体及び使用方法

Country Status (5)

Country Link
US (2) US9732148B2 (ja)
EP (1) EP3207057A2 (ja)
JP (1) JP2017536102A (ja)
CN (1) CN107074938A (ja)
WO (1) WO2016061389A2 (ja)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2021506770A (ja) * 2017-12-14 2021-02-22 エービーエル バイオ インコーポレイテッド ａ−ｓｙｎ／ＩＧＦ１Ｒに対する二重特異抗体およびその用途
JP2022537279A (ja) * 2019-06-14 2022-08-25 エービーエル バイオ インコーポレイテッド α－ｓｙｎ／ＩＧＦ１Ｒに対する二重特異抗体およびその用途

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB201512203D0 (en) 2015-07-13 2015-08-19 Lundbeck & Co As H Agents,uses and methods
MX2019005594A (es) * 2016-11-15 2019-07-04 H Lundbeck As Agentes, usos y metodos para el tratamiento de la sinucleinopatia.
WO2018109058A1 (en) 2016-12-16 2018-06-21 H. Lundbeck A/S Agents, uses and methods
US10364286B2 (en) 2016-12-22 2019-07-30 H. Lundbeck A/S Monoclonal anti-alpha-synuclein antibodies for preventing tau aggregation
CN110494445B (zh) * 2017-01-06 2023-10-20 Abl生物公司 抗α-SYN抗体及其用途
EP3567054A4 (en) * 2017-01-06 2021-03-10 ABL Bio Inc. ANTI-ALPHA SYN ANTIBODIES AND USES THEREOF
JP7136790B2 (ja) 2017-02-17 2022-09-13 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー アルファ－シヌクレインに対する抗体およびその使用
WO2018237338A1 (en) * 2017-06-23 2018-12-27 Denali Therapeutics Inc. ANTI-ALPHA-SYNCUCIN ANTIBODIES AND METHODS OF USE
GB201720970D0 (en) 2017-12-15 2018-01-31 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
GB201720975D0 (en) 2017-12-15 2018-01-31 Ucb Biopharma Sprl Anti-alpha synuclein antibodies
CA3096222A1 (en) 2018-04-06 2019-10-10 Atyr Pharma, Inc. Compositions and methods comprising anti-nrp2 antibodies
WO2020009482A1 (ko) * 2018-07-03 2020-01-09 에이비엘바이오 주식회사 항 알파-시누클레인 항체 및 그 용도
TWI734279B (zh) * 2018-12-14 2021-07-21 美商美國禮來大藥廠 抗α-突觸核蛋白抗體及其用途
CN110172098B (zh) * 2019-05-27 2023-03-10 长春工业大学 抗α-突触核蛋白的单克隆抗体及其应用
US11807687B2 (en) 2019-10-03 2023-11-07 Atyr Pharma, Inc. Therapeutic compositions comprising anti-NRP2 antibodies
JP2023504699A (ja) * 2019-12-04 2023-02-06 エイシー イミューン ソシエテ アノニム 治療および診断のための新規な分子
WO2022079297A1 (en) * 2020-10-16 2022-04-21 Ac Immune Sa Antibodies binding to alpha-synuclein for therapy and diagnosis
CN113912713B (zh) * 2021-12-15 2022-03-08 北京凯祥弘康生物科技有限公司 一种抗α-突触核蛋白的单克隆抗体及其应用
CN114853887B (zh) * 2022-03-08 2022-12-20 骏蓦(北京)生物科技有限公司 一种特异性结合α-突触核蛋白的抗体及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2012512634A (ja) * 2008-12-19 2012-06-07 パニマ ファーマシューティカルズ アーゲー ヒト抗アルファシヌクレイン自己抗体
WO2014132210A1 (en) * 2013-02-28 2014-09-04 United Arab Emirates University Alpha-synuclein antibodies and uses thereof

Family Cites Families (118)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4737456A (en) 1985-05-09 1988-04-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Reducing interference in ligand-receptor binding assays
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
JP3101690B2 (ja) 1987-03-18 2000-10-23 エス・ビィ・２・インコーポレイテッド 変性抗体の、または変性抗体に関する改良
US5606040A (en) 1987-10-30 1997-02-25 American Cyanamid Company Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group
US5770701A (en) 1987-10-30 1998-06-23 American Cyanamid Company Process for preparing targeted forms of methyltrithio antitumor agents
ATE102631T1 (de) 1988-11-11 1994-03-15 Medical Res Council Klonierung von immunglobulin sequenzen aus den variabelen domaenen.
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
CA2026147C (en) 1989-10-25 2006-02-07 Ravi J. Chari Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
DE69129154T2 (de) 1990-12-03 1998-08-20 Genentech Inc Verfahren zur anreicherung von proteinvarianten mit geänderten bindungseigenschaften
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
EP1400536A1 (en) 1991-06-14 2004-03-24 Genentech Inc. Method for making humanized antibodies
GB9114948D0 (en) 1991-07-11 1991-08-28 Pfizer Ltd Process for preparing sertraline intermediates
EP0861893A3 (en) 1991-09-19 1999-11-10 Genentech, Inc. High level expression of immunoglobulin polypeptides
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
WO1993016185A2 (en) 1992-02-06 1993-08-19 Creative Biomolecules, Inc. Biosynthetic binding protein for cancer marker
ATE196606T1 (de) 1992-11-13 2000-10-15 Idec Pharma Corp Therapeutische verwendung von chimerischen und markierten antikörpern, die gegen ein differenzierung-antigen gerichtet sind, dessen expression auf menschliche b lymphozyt beschränkt ist, für die behandlung von b-zell-lymphoma
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
EP0714409A1 (en) 1993-06-16 1996-06-05 Celltech Therapeutics Limited Antibodies
WO1995006407A1 (en) 1993-08-30 1995-03-09 The Regents Of The University Of California Novel component of amyloid in alzheimer's disease and methods for use of same
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5712374A (en) 1995-06-07 1998-01-27 American Cyanamid Company Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US5714586A (en) 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
ES2244066T3 (es) 1997-06-24 2005-12-01 Genentech, Inc. Procedimiento y composiciones de glicoproteinas galactosiladas.
US6040498A (en) 1998-08-11 2000-03-21 North Caroline State University Genetically engineered duckweed
DE69840412D1 (de) 1997-10-31 2009-02-12 Genentech Inc Methoden und zusammensetzungen bestehend aus glykoprotein-glykoformen
US6610833B1 (en) 1997-11-24 2003-08-26 The Institute For Human Genetics And Biochemistry Monoclonal human natural antibodies
EP1034298B1 (en) 1997-12-05 2011-11-02 The Scripps Research Institute Humanization of murine antibody
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
ATE375365T1 (de) 1998-04-02 2007-10-15 Genentech Inc Antikörper varianten und fragmente davon
ES2434961T5 (es) 1998-04-20 2018-01-18 Roche Glycart Ag Ingeniería de glicosilación de anticuerpos para mejorar la citotoxicidad celular dependiente del anticuerpo
US20030175884A1 (en) 2001-08-03 2003-09-18 Pablo Umana Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
BR0008758A (pt) 1999-01-15 2001-12-04 Genentech Inc Variantes de polipeptìdeos parentais com funçãoefetora alterada, polipeptìdeos, composição ácidonucleico isolado, vetor, célula hospedeira,método para produzir uma variante depolipeptìdeo, método para o tratamento de umadesordem em mamìferos e método para produziruma região fc variante
ES2571230T3 (es) 1999-04-09 2016-05-24 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Procedimiento para controlar la actividad de una molécula inmunofuncional
US7125978B1 (en) 1999-10-04 2006-10-24 Medicago Inc. Promoter for regulating expression of foreign genes
PT1222292E (pt) 1999-10-04 2005-11-30 Medicago Inc Metodo para regulacao da transcricao de genes exogenos na presenca de azoto
CA2388245C (en) 1999-10-19 2012-01-10 Tatsuya Ogawa The use of serum-free adapted rat cells for producing heterologous polypeptides
IL149809A0 (en) 1999-12-15 2002-11-10 Genentech Inc Shotgun scanning, a combinatorial method for mapping functional protein epitopes
NZ518764A (en) 1999-12-29 2004-02-27 Immunogen Inc Cytotoxic agents comprising modified doxorubicins and daunorubicins and their therapeutic use
MXPA02010011A (es) 2000-04-11 2003-04-25 Genentech Inc Anticuerpos multivalentes y usos para los mismos.
EP3263702A1 (en) 2000-10-06 2018-01-03 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Cells producing antibody compositions
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
US7064191B2 (en) 2000-10-06 2006-06-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for purifying antibody
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
ATE378403T1 (de) 2000-11-30 2007-11-15 Medarex Inc Transchromosomale transgen-nagetiere zur herstellung von humänen antikörpern
KR100988949B1 (ko) 2001-10-25 2010-10-20 제넨테크, 인크. 당단백질 조성물
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
CA2481920A1 (en) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Antibody composition-containing medicament
WO2003085102A1 (fr) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cellule avec inhibition ou suppression de l'activite de la proteine participant au transport du gdp-fucose
CN1930288B (zh) 2002-04-09 2012-08-08 协和发酵麒麟株式会社 基因组被修饰的细胞
AU2003236018A1 (en) 2002-04-09 2003-10-20 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. METHOD OF ENHANCING ACTIVITY OF ANTIBODY COMPOSITION OF BINDING TO FcGamma RECEPTOR IIIa
JP4832719B2 (ja) 2002-04-09 2011-12-07 協和発酵キリン株式会社 ＦｃγＲＩＩＩａ多型患者に適応する抗体組成物含有医薬
JPWO2003085118A1 (ja) 2002-04-09 2005-08-11 協和醗酵工業株式会社 抗体組成物の製造方法
EP1513879B1 (en) 2002-06-03 2018-08-22 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
US8506959B2 (en) 2002-11-01 2013-08-13 Neotope Biosciences Limited Prevention and treatment of synucleinopathic and amyloidogenic disease
TW200509968A (en) 2002-11-01 2005-03-16 Elan Pharm Inc Prevention and treatment of synucleinopathic disease
EP3263596A1 (en) 2002-12-16 2018-01-03 Genentech, Inc. Immunoglobulin variants and uses thereof
EP1585767A2 (en) 2003-01-16 2005-10-19 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
US7358331B2 (en) 2003-05-19 2008-04-15 Elan Pharmaceuticals, Inc. Truncated fragments of alpha-synuclein in Lewy body disease
WO2005013889A2 (en) 2003-05-19 2005-02-17 Elan Pharmaceuticals, Inc. Truncated fragments of alpha-synuclein in lewy body disease
WO2005035586A1 (ja) 2003-10-08 2005-04-21 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. 融合蛋白質組成物
CA2542125A1 (en) 2003-10-09 2005-04-21 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for producing antibody composition by using rna inhibiting the function of .alpha.1,6-fucosyltransferase
EA025962B1 (ru) 2003-11-05 2017-02-28 Роше Гликарт Аг АНТИТЕЛА, ОБЛАДАЮЩИЕ ПОВЫШЕННОЙ АФФИННОСТЬЮ К СВЯЗЫВАНИЮ С Fc-РЕЦЕПТОРОМ И ЭФФЕКТОРНОЙ ФУНКЦИЕЙ
EP1725249B1 (en) 2003-11-06 2014-01-08 Seattle Genetics, Inc. Monomethylvaline compounds capable of conjugation to ligands
US7674599B2 (en) * 2003-11-08 2010-03-09 Elan Pharmaceuticals, Inc. Methods of using antibodies to detect alpha-synuclein in fluid samples
WO2005053742A1 (ja) 2003-12-04 2005-06-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. 抗体組成物を含有する医薬
ZA200608130B (en) 2004-03-31 2008-12-31 Genentech Inc Humanized anti-TGF-beta antibodies
US7785903B2 (en) 2004-04-09 2010-08-31 Genentech, Inc. Variable domain library and uses
BR122019012028B1 (pt) 2004-04-13 2023-09-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Anticorpos anti-p-selectina, molécula de ácido nucléico, vetor, e composição
MX2007001679A (es) 2004-08-09 2007-05-23 Elan Pharm Inc Prevencion y tratamiento de la enfermedad sinucleinopatica y amiloidogenica.
TWI380996B (zh) 2004-09-17 2013-01-01 Hoffmann La Roche 抗ｏｘ４０ｌ抗體
ES2669510T3 (es) 2004-09-23 2018-05-28 Genentech, Inc. Anticuerpos y conjugados modificados por ingeniería genética con cisteína
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
CA2657953A1 (en) 2005-07-19 2007-01-25 University Of Rochester Alpha-synuclein antibodies and methods related thereto
US8679490B2 (en) 2005-11-07 2014-03-25 Genentech, Inc. Binding polypeptides with diversified and consensus VH/VL hypervariable sequences
EP1973951A2 (en) 2005-12-02 2008-10-01 Genentech, Inc. Binding polypeptides with restricted diversity sequences
WO2007134050A2 (en) 2006-05-09 2007-11-22 Genentech, Inc. Binding polypeptides with optimized scaffolds
WO2008027236A2 (en) 2006-08-30 2008-03-06 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
US20080226635A1 (en) 2006-12-22 2008-09-18 Hans Koll Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof
DK3067066T3 (da) 2007-02-23 2019-05-20 Prothena Biosciences Ltd Forebyggelse og behandling af synukleinopatisk og amyloidogenisk sygdom
ES2478242T3 (es) * 2007-03-22 2014-07-21 Genentech, Inc. Anticuerpos anti IgE apoptóticos que se unen con el IgE unido a membrana
CN100592373C (zh) 2007-05-25 2010-02-24 群康科技(深圳)有限公司 液晶显示面板驱动装置及其驱动方法
CN105169388A (zh) * 2007-10-05 2015-12-23 基因技术公司 人源化抗体
PT2235064E (pt) 2008-01-07 2016-03-01 Amgen Inc Método de preparação de moléculas heterodiméricas de fc de anticorpos utilizando efeitos de indução eletrostática
ES2617604T3 (es) * 2008-02-08 2017-06-19 Immunas Pharma, Inc. Anticuerpos capaces de unirse específicamente a oligómeros de beta amiloides, y su utilización
TR201901497T4 (tr) 2008-04-29 2019-02-21 Bioarctic Ab Alfa-sinüklein ile ilişkili bozukluklar için terapötik ve teşhis yöntemlerinde kullanıma yönelik antikorlar ve aşılar.
US8609097B2 (en) * 2009-06-10 2013-12-17 Hoffmann-La Roche Inc. Use of an anti-Tau pS422 antibody for the treatment of brain diseases
CN102574915B (zh) * 2009-08-06 2014-10-22 伊缪纳斯制药株式会社 特异性结合Aβ寡聚体的抗体及其用途
JP5599454B2 (ja) * 2009-08-06 2014-10-01 イムナス・ファーマ株式会社 Ａβオリゴマーに特異的に結合する抗体およびその利用
EP2463369A4 (en) * 2009-08-07 2013-09-18 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd HUMANIZED ANTIBODIES AGAINST AMYLOID B OLIGOMERS
EP2539366B1 (en) 2010-02-26 2017-11-08 BioArtic Neuroscience AB Protofibril-binding antibodies and their use in therapeutic and diagnostic methods for parkinson's disease, dementia with lewy bodies and other alpha-synucleinopathies
EP2366714A1 (en) 2010-03-03 2011-09-21 Dr. Rentschler Holding GmbH & Co. KG Naturally occuring autoantibodies against alpha-synuclein that inhibit the aggregation and cytotoxicity of alpha-synuclein
EP2627357B1 (en) 2010-10-15 2017-05-03 The Board of Regents of The University of Texas System Antibodies that bind amyloid oligomers
DK2723379T3 (en) 2011-06-23 2018-10-15 Biogen Int Neuroscience Gmbh ANTI-ALPHA SYNUCLEIN BINDING MOLECULES
PT2771031T (pt) 2011-10-28 2018-05-24 Prothena Biosciences Ltd Anticorpos humanizados que reconhecem a alfa-sinucleína
CN107091931A (zh) 2011-11-02 2017-08-25 生物国际神经系统科学公司 抗α‑共核蛋白抗体诊断脑中的α‑共核蛋白的升高水平的用途
WO2013112945A1 (en) 2012-01-27 2013-08-01 Neotope Biosciences Limited Humanized antibodies that recognize alpha-synuclein
UA118441C2 (uk) 2012-10-08 2019-01-25 Протена Біосаєнсиз Лімітед Антитіло, що розпізнає альфа-синуклеїн

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2012512634A (ja) * 2008-12-19 2012-06-07 パニマ ファーマシューティカルズ アーゲー ヒト抗アルファシヌクレイン自己抗体
WO2014132210A1 (en) * 2013-02-28 2014-09-04 United Arab Emirates University Alpha-synuclein antibodies and uses thereof

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
FEBS LETTERS, 2009, VOL.583, P.787-791, JPN6019036300, ISSN: 0004256665 *
J NEUROSCI RES, 2000, VOL.59, P.528-533, JPN6019036301, ISSN: 0004256666 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2021506770A (ja) * 2017-12-14 2021-02-22 エービーエル バイオ インコーポレイテッド ａ−ｓｙｎ／ＩＧＦ１Ｒに対する二重特異抗体およびその用途
JP7212391B2 (ja) 2017-12-14 2023-01-25 エービーエル バイオ インコーポレイテッド ａ－ｓｙｎ／ＩＧＦ１Ｒに対する二重特異抗体およびその用途
JP2022537279A (ja) * 2019-06-14 2022-08-25 エービーエル バイオ インコーポレイテッド α－ｓｙｎ／ＩＧＦ１Ｒに対する二重特異抗体およびその用途
JP7348676B2 (ja) 2019-06-14 2023-09-21 エービーエル バイオ インコーポレイテッド α－ｓｙｎ／ＩＧＦ１Ｒに対する二重特異抗体およびその用途

Also Published As

Publication number Publication date
WO2016061389A2 (en) 2016-04-21
US20160108113A1 (en) 2016-04-21
WO2016061389A3 (en) 2016-06-09
US20170320940A1 (en) 2017-11-09
US9732148B2 (en) 2017-08-15
EP3207057A2 (en) 2017-08-23
CN107074938A (zh) 2017-08-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20230279109A1 (en) Anti-tim3 antibodies and methods of use
US9732148B2 (en) Anti-α-synuclein antibodies and methods of use
CN110818795B (zh) 抗tigit抗体和使用方法
US20220275076A1 (en) Anti-myostatin antibodies and methods of use
JP6568514B2 (ja) 抗タウ抗体及び使用方法
JP5841149B2 (ja) 抗テネイシンｃａ２抗体及び使用の方法
JP6242813B2 (ja) 抗ｌｒｐ５抗体及び使用方法
JP2021059591A (ja) ２種以上の抗ｃ５抗体の組み合わせおよび使用方法
JP2014534806A (ja) 抗ｍｃｓｐ抗体
JP6549278B2 (ja) 抗テオフィリン抗体および使用方法
KR102193080B1 (ko) 항-jagged 항체 및 사용 방법
JP2018520658A (ja) ヒト化抗エボラウイルス糖タンパク質抗体及びその使用
JP2019518012A (ja) 修飾された抗テネイシン抗体及び使用方法
JP7409871B2 (ja) 抗ｍａｓｐ－１抗体およびその使用方法
JP2016512489A (ja) 抗ｍｃｓｐ抗体
BR112017008986B1 (pt) Anticorpo isolado, imunoconjugado, formulação farmacêutica, e uso do anticorpo

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20181012

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20181012

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20190924

A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 20200428