CN1839920A - 黄芪总苷注射剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种黄芪总苷注射剂，它是以黄芪总苷提取物为活性成分，加上药学上可接受的注射剂附加剂，制备而成的注射剂，其中黄芪总提取物中有效成分黄芪总苷的含量占80－100％，每制剂单位含黄芪总苷90～300mg。本发明药物成分明确、质量可控、性能稳定，100ml/瓶或250ml/瓶，且没有添加助溶剂和助稀释剂。室温长期留样试验结果表明制剂质量在2年内稳定(市售包装)，稳定性强。

Description

黄芪总苷注射剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种黄芪总苷注射剂，具体地，是黄芪总苷为活性成分制备而成的注射剂及其制备方法，属药物领域。

背景技术

病毒心肌炎为临床常见的心脏病之一，近十多年来其发病率呈明显上升趋势，增长近10倍，常遗留不同程度的后遗症(如心律失常、心功能不全)，严重危害人类健康，目前尚无特效药物。因此，针对病毒性心肌炎进行新药开发和研究是极为重要和必要的。现代医学认为，其病因为多种病毒感染所致，临床上绝大多数病毒性心肌炎系由柯萨奇病毒和ECHO病毒引起。针对病毒性心肌炎，实际临床目前主要采用促进心肌代谢的药物，如三磷酸腺苷、辅酶A、肌苷、环化腺苷酸、细胞色素C等。

中药黄芪来源于豆科植物黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.的根，中药黄芪及黄芪中成药产品(包括黄芪注射液及黄芪口服制剂)对病毒性心肌炎的治疗和辅助治疗具有显著的疗效，已为临床医生较为广泛地接受和采用。同时，随着对黄芪药化、药理及临床研究的不断深入，由中药黄芪提取分离总苷可获得黄芪总苷。已有大量的实验及临床研究已充分证实，黄芪所含黄芪总苷是黄芪治疗病毒性心肌炎的主要活性成分。中药黄芪类制剂既有一定的抗病毒作用，又具有调节免疫、保护心肌细胞、改善和增强心脏功能等多方面药理作用，因而其在病毒性心肌炎的治疗方面具有较大的优势和潜力。古今临床应用实践及大量现代药理研究已充分证实，中药黄芪及其提取物黄芪皂苷是临床治疗病毒性心肌炎的有效药物，其疗效可靠，作用机理明确。

目前临床使用黄芪注射剂，多为黄芪提取物制成，采用静脉输液给药，其中黄芪甲苷含量低、差异大，药效不易控制，杂质较多，病人用药后不良反应多；在每次临床用药前，必需用氯化钠溶液配制稀释，因而给临床用药带来不便，尤其容易增加静脉输液的污染机会。制备黄芪总苷注射剂(小针剂、粉针剂、葡萄糖输液及氯化钠输液)，不易制得黄芪总苷含量高、稳定性高、澄明度好、杂质含量低、符合要求的制剂。专利CN1481806公开了黄芪皂苷、黄芪多糖的药物组合物，专利CN1481806公开了黄芪总苷注射液，采用水提—醇沉法得到黄芪提取物，其中有效成分黄芪总苷的含量为5-50mg，黄芪总提取物中有效成分黄芪总苷的含量占30-90％，且需要添加助溶剂和助稀释剂；专利CN 1515295公开了黄芪注射液，相当于40g黄芪生药/250ml，黄芪甲苷量不低于8mg/250ml；专利CN1543976黄芪甲苷注射剂制剂及其制备方法，公开了黄芪甲苷原料中黄芪甲苷的重量浓度为90-100％，每瓶注射液中黄芪甲苷的含量为1-100mg，也添加了助溶剂和助稀释剂。注射剂中添加助溶剂和助稀释剂会增加发生副作用的风险，尤其容易增加静脉输液发生副作用的风险。

发明内容

本发明的技术方案是提供了一种黄芪总苷注射剂，本发明的另一技术方案是提供了该黄芪总苷注射剂的制备方法。

本发明提供了一种黄芪总苷注射剂，它是以黄芪总苷提取物为活性成分，不含助溶剂和助稀释剂，加上药学上可接受的注射剂附加剂，制备而成的注射剂。

上述黄芪总提取物中有效成分黄芪总苷的含量占80-100％，总苷的含量为每制剂单位含90～300mg。

所述的黄芪甲苷的百分含量占黄芪总苷提取物的6-50％。或，所述的注射液中黄芪甲苷的含量为每制剂单位不得少于20mg。所述的每制剂单位是指按每瓶装量限定，为100ml/瓶或250ml/瓶。

其中，所述的黄芪总苷的提取方法为：

a、将黄芪药材采用水提醇沉法或者乙醇浸渍、渗漉，收集渗漉液，浓缩，得浓缩液；

b、将a步骤的浓缩液加乙醇至含醇量达50％-80％，在0℃～5℃冷藏静置，24～48小时，滤过，滤液浓缩至每毫升相当于0.5-1.0克生药，冷藏静置，24～48小时，滤过；取滤液通过大孔吸附树脂柱，水洗至近无色，用稀乙醇洗脱，收集洗脱液，滤过，回收乙醇并浓缩至无醇味，冷藏静置，滤过，得滤液；

c、将b步骤所述的滤液，加入乙醇至含醇量达70％～95％，冷藏静置，滤过，回收乙醇，煮沸，滤过，即得黄芪总苷提取物。

其中，所述的注射剂是：粉针剂、滴注剂、注射液。

所述的注射液的pH值为：5.5～7.5。

所述的注射液是由下述重量配比的原料提取物及附加剂制备而成：

黄芪总苷提取物1-5份、注射剂用附加剂8-25份。

进一步地，所述的注射剂用附加剂为：等渗剂：pH值调节剂，所述的等渗剂为氯化钠、氯化镁、氯化钙、乳酸钠、葡萄糖、木糖醇、山梨醇或左旋糖酐中的一种或混合；所述的pH值调节剂是盐酸、醋酸、乳酸、NaOH、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、枸橼酸钠中的一种。

进一步地，所述的注射液是由如下重量配比的原料及附加剂制备而成：

黄芪总苷提取物0.40-3.50份、氯化钠9.00份、磷酸二氢钠0.5份。

本发明还提供了该黄芪总苷注射剂的制备方法，它包括如下步骤：

a.将黄芪药材采用水提醇沉法或者乙醇浸渍、渗漉，收集渗漉液，浓缩，得浓缩液；

b、将a步骤的浓缩液加乙醇至含醇量达60％-70％，在0℃-5℃冷藏静置，滤过，滤液浓缩至每毫升相当于0.5-1.0克生药，冷藏静置，过滤；取滤液通过大孔吸附树脂柱，水洗至近无色，用乙醇洗脱，收集洗脱液，滤过，回收乙醇并浓缩至无醇味，冷藏静置，滤过；加乙醇至含醇量达80％-90％，冷藏静置，滤过；回收乙醇，煮沸，滤过，即得黄芪总苷提取物；

c、取黄芪总苷、氯化钠和磷酸二氢钠适量，加注射用水至200-800ml，加入0.1％-0.2％活性炭，煮沸30分钟后，滤过，加注射用水至1000ml，用饱和氢氧化钠溶液调pH至7.2-8.2，超滤，灌封，灭菌，检验，即得。

在长期放置过程中pH值有可能会缓慢下降及pH值对澄明度影响，在灭菌前调pH值为7.2-8.2，以增加制剂稳定性。

其中，步骤b所用的大孔树脂为非极性或/和弱极性大孔吸附树脂，型号为HPD100A、HPD700、LD140以及其他类型的大孔吸附树脂，或以上不同型号的大孔吸附树脂按一定比例混合。步骤c所用超滤膜为5000-10000道尔顿。

具体地，本发明黄芪总苷是由下述方法制备而成：

1.黄芪总苷的提取

a.取黄芪药材，加水煎煮三次，合并煎煮液，滤过，滤液减压浓缩至无乙醇，得黄芪浓缩液，比重为1.15-1.25，60℃测；

b.取黄芪药材粗粉，稀乙醇为溶剂，浸渍24小时后渗漉，收集渗漉液，滤液减压浓缩至无乙醇，得黄芪浓缩液，比重为1.15-1.25，60℃测。

2.黄芪总苷的精制

将上述黄芪浓缩液加乙醇至含醇量达50％-80％，在0℃-5℃冷藏静置24-36小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至每毫升相当于0.5-1.0克生药，冷藏静置24-36小时，滤过。取滤液通过大孔吸附树脂柱，水洗至近无色，用稀乙醇洗脱，收集洗脱液，滤过，回收乙醇并浓缩至无醇味，冷藏静置24-36小时，滤过；加乙醇至含醇量达70％-90％，冷藏静置24-36小时，滤过；回收乙醇，煮沸30分钟，加水至1000ml，密封，冷藏24小时以上，滤过，检验，即得。

3.黄芪总苷注射液的制备

取黄芪总苷、氯化钠和磷酸二氢钠适量，加注射用水至200-800ml，加入0.1％-0.2％活性炭，煮沸30分钟后，滤过，加注射用水至1000ml，用饱和氢氧化钠溶液调pH至7.2-8.2，超滤，灌封，灭菌，检验，即得。

本发明还提供了该黄芪总苷注射剂在制备治疗病毒性心肌炎、心力衰竭药物中的应用。

本发明黄芪总苷注射液每瓶黄芪总苷含量高(每制剂单位中，100ml/瓶或250ml/瓶，有效成分黄芪甲苷的含量不得少于20mg，总苷的含量为90～300mg)，质量可控、稳定性高(市售包装稳定性大于2年)，澄明度好，不含助溶剂和助稀释剂，发生副作用的风险低，为临床治疗病毒性心肌炎提供一种更为方便而有效的中药制剂，满足临床用药的需要。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

具体实施方式

下面结合实施例进一步说明本发明的内容：

实施例1本发明黄芪总苷注射液1制备方法：

黄芪药材符合中国药典2000年版第一部249页黄芪项下有关规定，且黄芪药材中黄芪甲苷照高效液相色谱法进行检测，黄芪药材含黄芪甲苷(C₄₁H₆₈O₁₄)不得少于0.06％。

取500公斤黄芪饮片(2-4mm厚片，内蒙古产)，加水8倍量煎煮三次，每次1.5小时，合并煎煮液，滤过，滤液减压浓缩(温度：70℃；真空度：-0.08Mpa)至相对密度为1.15(60℃测)，用95％乙醇沉淀至含醇量达80％，冷藏静置24小时，滤过，取滤液回收乙醇并浓缩至每毫升相当于0.75克生药，冷藏静置48小时，滤过。取滤液通过LD140大孔吸附树脂柱，水洗至近无色，用80％乙醇洗脱，收集洗脱液，滤过，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.25(60℃测)，冷藏静置28小时，滤过；加95％乙醇至含醇量达90％，冷藏静置36小时，滤过；回收乙醇，煮沸30分钟，加水至50升，密封，冷藏24小时以上，滤过，检验，即得。

取黄芪总苷13升、9.0Kg氯化钠和500克磷酸二氢钠，加注射用水至400升，加入0.08％活性炭，煮沸30分钟后，滤过，加注射用水至1000升，用饱和氢氧化钠溶液调pH至7.2，滤过，灌封为250ml/瓶，灭菌，检验，即得。

实施例2本发明黄芪总苷注射液2制备方法：

取500公斤黄芪饮片(2-4mm厚片，陕西省产)，加水12倍量煎煮2次，每次2小时，合并煎煮液，滤过，滤液减压浓缩(温度：70℃；真空度：-0.08Mpa)至相对密度为1.25(60℃测)，用95％乙醇沉淀至含醇量达90％，冷藏静置27小时，滤过，取滤液回收乙醇并浓缩至每毫升相当于0.75克生药，冷藏静置36小时，滤过。取滤液通过HPD700大孔吸附树脂柱，水洗至近无色，用80％乙醇洗脱，收集洗脱液，滤过，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15(60℃测)，冷藏静置24小时，滤过；加95％乙醇至含醇量达80％，冷藏静置24小时，滤过；回收乙醇，煮沸30分钟，加水至50升，密封，冷藏24小时以上，滤过，检验，即得。

取黄芪总苷25.4升、9Kg氯化钠和500克磷酸二氢钠，加注射用水至400升，加入0.10％活性炭，煮沸30分钟后，滤过，加注射用水至1000升，用饱和氢氧化钠溶液调pH至7.5，滤过，灌封为250ml/瓶，灭菌，检验，即得。

实施例3本发明黄芪总苷注射液3制备方法：

取500公斤黄芪饮片(2-4mm厚片，山西省产)，加水8倍量煎煮三次，每次1.5小时，合并煎煮液，滤过，滤液减压浓缩(温度：70℃；真空度：-0.08Mpa)至相对密度为1.25(60℃测)，用95％乙醇沉淀至含醇量达65％，冷藏静置27小时，滤过，取滤液回收乙醇并浓缩至每毫升相当于0.75克生药，冷藏静置24小时，滤过。取滤液通过LD140大孔吸附树脂柱，水洗至近无色，用75％乙醇洗脱，收集洗脱液，滤过，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.20(60℃测)，冷藏静置28小时，滤过；加95％乙醇至含醇量达85％，冷藏静置36小时，滤过；回收乙醇，煮沸30分钟，加水至50升，密封，冷藏24小时以上，滤过，检验，即得。

取黄芪总苷95升、8.1Kg氯化钠和450克磷酸二氢钠，加注射用水至300升，加入0.12％活性炭，煮沸30分钟后，滤过，加注射用水至900升，用饱和氢氧化钠溶液调pH至7.9，滤过，灌封为100ml/瓶，灭菌，检验，即得。

实施例4本发明黄芪总苷注射液4制备方法：

取500公斤黄芪饮片(2-4mm厚片，甘肃陇南产)(切片)，加水10倍量煎煮三次，每次1小时，合并煎煮液，滤过，滤液减压浓缩(温度：70℃；真空度：-0.08Mpa)至相对密度为1.15(60℃测)，用95％乙醇沉淀至含醇量达60％，冷藏静置27小时，滤过，取滤液回收乙醇并浓缩至每毫升相当于0.75克生药，冷藏静置24小时，滤过。取滤液通过D101大孔吸附树脂柱，水洗至近无色，用80％乙醇洗脱，收集洗脱液，滤过，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15(60℃测)，冷藏静置28小时，滤过；加95％乙醇至含醇量达85％，冷藏静置36小时，滤过；回收乙醇，煮沸30分钟，加水至50升，密封，冷藏24小时以上，滤过，检验，即得。

取黄芪总苷40升、8.1Kg氯化钠和450克磷酸二氢钠，加注射用水至300升，加入0.15％活性炭，煮沸30分钟后，滤过，加注射用水至900升，用饱和氢氧化钠溶液调pH至7.9，滤过，灌封为100ml/瓶，灭菌，检验，即得。

实施例5本发明黄芪总苷注射液中黄芪甲苷、黄芪总苷的检测：

为了控制制剂质量，黄芪甲苷采用高效液相色谱—蒸发光散射法检测；黄芪总苷采用紫外分光光度法检测，以黄芪甲苷(C₄₁H₆₈O₁₄)计。

     表1  本发明黄芪总苷提取物注射液中黄芪总苷、黄芪甲苷的含量

实施例	提取物中黄芪总苷含量％	注射液中黄芪总苷mg/瓶	注射液中黄芪甲苷含量％
				实施例1	95.0	97	42.3
实施例2	86.4	189	35.3
				实施例3	89.1	285	9.5
实施例4	81.6	122	24.7

分别按原药材、黄芪总苷和成品供试品制备方法制备供试品。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。以氯仿-甲醇-水(体积比13∶7∶2)的下层溶液为展开剂，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘至斑点显色。三者图谱基本一致，说明本工艺最大限度保留了黄芪药材中黄芪甲苷同系物。黄芪甲苷同系物在水中的溶解度远远大于黄芪甲苷，而在水中的溶解度大在制药中优势是显而易见的。

实施例6本发明黄芪总苷注射液考察结果：

按实施例1-4方法制制得的三批样品进行了稳定性考查，试验结果表明制剂质量在2年内稳定，下面是按按实施例4方法制制得的三批样品(1、2、3号样品)考察结果：

                 表2  1号样品的考察结果

贮存时间	性状	鉴别	澄明度	pH值	无菌	热原	溶血	刺激性	黄芪甲甙含量(mg/ml)
										0月	浅黄色澄明液体	+	∨	6.68	∨	∨	∨	∨	0.3014
1月	浅黄色澄明液体	+	∨	6.65	∨	∨	∨	∨	0.3015
										2月	浅黄色澄明液体	+	∨	6.66	∨	∨	∨	∨	0.3021
3月	浅黄色澄明液体	+	∨	6.63	∨	∨	∨	∨	0.3034
										6月	浅黄色澄明液体	+	∨	6.62	∨	∨	∨	∨	0.3046
24月	浅黄色澄明液体	+	∨	6.60	∨	∨	∨	∨	0.3052

+-呈正反应，∨-表示符合规定

             表3  2号样品的考察结果

贮存时间	性状	鉴别	澄明度	pH值	无菌	热原	溶血	刺激性	黄芪甲甙含量(mg/ml)
										0月	浅黄色澄明液体	+	∨	6.71	∨	∨	∨	∨	0.3070
1月	浅黄色澄明液体	+	∨	6.69	∨	∨	∨	∨	0.3065
										2月	浅黄色澄明液体	+	∨	6.69	∨	∨	∨	∨	0.3064
3月	浅黄色澄明液体	+	∨	6.73	∨	∨	∨	∨	0.3068
										6月	浅黄色澄明液体	+	∨	6.68	∨	∨	∨	∨	0.3052
24月	浅黄色澄明液体	+	∨	6.65	∨	∨	∨	∨	0.3055

                  表4  3号样品的考察结果

贮存时间	性状	鉴别	澄明度	pH值	无菌	热原	溶血	刺激性	黄芪甲甙含量(mg/ml)
										0月	浅黄色澄明液体	+	∨	6.85	∨	∨	∨	∨	0.3068
1月	浅黄色澄明液体	+	∨	6.87	∨	∨	∨	∨	0.3065
										2月	浅黄色澄明液体	+	∨	6.84	∨	∨	∨	∨	0.3062
3月	浅黄色澄明液体	+	∨	6.80	∨	∨	∨	∨	0.3078
										6月	浅黄色澄明液体	+	∨	6.87	∨	∨	∨	∨	0.3113
24月	浅黄色澄明液体	+	∨	6.83	∨	∨	∨	∨	0.3098

以下通过药效学试验证明本发明的有益效果。

试验例1本发明药物注射剂对戊巴比妥钠引起猫急性心力衰竭的治疗试验：

2～4kg动物猫(北京通利动物饲养厂提供体重，雌雄兼用)分为正常对照组、阳性药组(西地兰)、黄芪总苷注射液大剂量组、黄芪总苷注射液中剂量和黄芪总苷注射液小剂量，一共5组，每组7～8只。3％戊巴比妥钠(北京化学试剂公司，批号020402，以生理盐水配制成)腹腔注射30mg/kg麻醉，颈静脉插管用于恒速滴注3％戊巴比妥钠，股静脉插管用于恒速滴注受试药物，连接心电图(ECG)肢导、气管插管、连接人工呼吸机，呼吸频率为26次/min，潮气量为29～70ml，开胸，左心室插管，连接压力换能器。ECG、左心室内压(LVP)及左心室内压微分(LVdp/dt)经Rm6240C生物信号采集处理系统连续记录于计算机中。动物手术后稳定30分钟的各项数值作为正常基础值。

以左心室内压最大上升速率(LVdp/dt_max)作为心肌收缩性指标，静脉恒速滴注3％戊巴比妥钠后，LVdp/dt_max逐渐下降，当下降到26.6～66.5kPa(200～500mmHg)，5min无上升倾向，视为形成急性心衰，然后静脉恒速滴注0.2ml/min受试药物，空白对照组滴注生理盐水，阳性药组滴注去乙酰毛花甙注射液(西地兰，上海旭东海普药业有限公司，批号010901，临用前以无菌生理盐水稀释至所需浓度)0.1mg/ml，黄芪总苷(黄芪总苷注射液，由实施例4制得)大剂量12g药材/ml，黄芪总苷注射液中剂量1g药材/ml，黄芪总苷注射液小剂量0.5g药材/ml。

3％戊巴比妥钠恒速静脉注射致猫心衰后，恒速静脉注射黄芪总苷三个浓度(12g生药/ml，1g生药/ml，0.5g生药/ml)，西地兰0.1mg/ml及生理盐水对照组，LVSP及LVdp/dtmax最大上升差值见表5。

表5  黄芪总苷恒速静注前后对心衰猫LVdp/dtmax及LVSP最大上升差值的影响

组别	药物浓度g/ml	LVSPmmHg	LVdp/dtmaxmmHg/s
				对照组		6.74±5.83	140.26±195.94
黄芪总苷	0.5	13.87±4.74*	403.29±122.06*
				1.0	12.26±8.05	369.73±297.93
	12.0	12.11±9.83	280.81±133.84
				西地兰	0.1mg/ml	41.85±24.51*	1466.68±1206.17*

注：与生理盐水对照组比^*P＜0.05。

从表5可见，以3％戊巴比妥钠致猫急性心衰，黄芪总苷浓度0.5g药材/ml恒速注射0.2ml/min，左心室内压峰值(LVSP)及左心室内压最大上升速率(LVdp/dtmax)的上升幅度高于生理盐水对照组(P＜0.05)，并显著延长动物存活时间(P＜0.01)。黄芪总苷1g生药/ml浓度恒速注射0.2ml/min，心衰猫LVSP和LVdp/dtmax上升的幅度与生理盐水对照组比无显著差别(P＞0.05)，但显著延长动物存活时间(P＜0.01)。黄芪总苷12g生药/ml对LVSP、LVdp/dtmax和动物存活时间均无明显影响(P＞0.05)。治疗量、中毒量、致死量、治疗宽度、治疗指数。

①治疗量：LVdp/dt_max上升至峰效应的1/2时的累积量；②中毒量：以出现频发心律失常为指标，计算累积量；③致死量：心电图消失10s时的累积量；④治疗宽度＝中毒量/治疗量；⑤治疗指数＝致死量/治疗量。结果见表6。

表6黄芪总苷恒速静注对心衰猫治疗量、中毒量、

致死量、治疗宽度、治疗指数的影响

组别	药物浓度g/ml	治疗量ml/kg	中毒量ml/kg	致死量ml/kg	治疗宽度中毒量/治疗量	治疗指数致死量/治疗量
							对照组	-	-	11.27±12.46	16.08±15.19	-	-
黄芪总苷西地兰	0.5	1.41±2.01	33.99±29.07#	76.07±26.45***####	63.64±75.08	166.99±181.39#
							1.0	-	25.36±14.31##	59.33±23.05**###	-	-
	12.0	-	11.09±3.53###	14.66±3.70###	-	-
							0.1mg/ml	0.93±0.59	2.19±0.58	3.74±0.71	2.80±1.10	4.95±2.24

注：生理盐水组无法求出治疗量，黄芪总苷(黄芪总苷注射液，由实施例4制得)1.0g/ml，12g/ml组与生理盐水组比无明显治疗作用。与生理盐水对照组比^**P＜0.01，^***P＜0.001。与西地兰组比#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001.

从表6可见，黄芪总苷0.5g/ml组、1.0g/kg组致死量显著高于生理盐水对照组(P＜0.01)。黄芪总苷0.5g/ml组的治疗指数显著高于西地兰组(P＜0.05)。

黄芪总苷0.5g药材/ml浓度恒速静脉滴注0.2ml/min LVSP及LVdp/dtmax最大上升幅度较生生理盐水对照组显著升高(P＜0.05)。与生理盐水组、西地兰组比非常显著延长动物存活时间(P＜0.001)。黄芪总苷0.5g药材/ml浓度组治疗指数显著高于西地兰组(P＜0.05)。

黄芪总苷1g药材/ml浓度恒速静脉滴注0.2ml/min与滴注生理盐水组比能非常显著延长动物存活时间(P＜0.01)。

黄芪总苷在0.5g药材/ml、1.0g药材/ml、12.0g药材/ml浓度恒速滴注与生理盐水组比对猫心率无明显影响。

黄芪总苷注射液过敏试验结果表明给药未引起豚鼠全身过敏反应。溶血试验未发现黄芪总苷注射液有溶血现象。黄芪总苷注射液对家兔静脉血管刺激性试验表明，对家兔静脉血管无明显刺激性。

试验例2本发明药物注射剂体内治疗小鼠CV B₃心肌炎试验

小鼠CV B₃心肌炎模型的建立

BALB/C小鼠(6周龄，体重16-18g/只，由华西医学中心实验动物管理中心提供，动物合格证：(1996)川实动质管第75号)每组10只，共三组。分别采用10^-2/ml、10^-4/ml和10^-6/ml三个浓度的CVB₃病毒液注入小鼠腹腔，0.2ml/只，。第7天观察小鼠的心率、存活情况和心肌组织病理学检测，确定注射CVB₃ ID₅₀为10^-4/ml病毒液0.2ml，可引起较典型的小鼠病毒性心肌炎。

黄芪总苷治疗小鼠CV B₃心肌炎试验

共分为六个实验组：(1)正常对照组，10只，不作任何处理；(2)病毒感染组，20只，腹腔注入CVB₃ 10^-4/ml 0.2ml，不用药；(3)黄芪总苷实验组A：20只，注入CVB₃0.2ml 2h后，用0.63g/ml黄芪总苷(黄芪总苷注射液，由实施例4制得)，0.1ml/10g体重；(4)黄芪总苷实验组B：20只，注入CV B₃0.2ml 2h后，用1.25g/ml黄芪总苷，0.1ml/10g体重；(5)黄芪总苷实验组C：20只，注入CV B₃0.2ml 2h后，用2.5g/ml黄芪总苷，0.1ml/10g体重；(6)药物对照组，10只，注入CV B₃0.2ml 2h后，注入病毒唑0.1g/kg，每日一次。

在第8天，取小鼠眼眶血，分离血清，供检测血清磷酸肌酸激酶(CK)、乳酸脱氨酶(LDH)和病毒中和抗体。处死小鼠后，称重，取心脏。

连续iv不同剂量的黄芪总苷对CV B₃心肌炎小鼠心脏重量及心脏表面病变的影响，结果见表7。

        表7  黄芪总苷对心肌炎小鼠心脏重量及心脏表面病变的影响(X±S)

组别	动物数(只)	剂量(g/kg)	体重(g)	心脏重量(g)	心脏系数(g/100g)	心表出血点个(％)	斑片状个(％)
								正常对照	10	-	18.29±0.96*	0.090±0.004**	0.494±0.026**	-	-
模型组	20	-	17.47±0.68	0.119±0.017	0.680±0.079	14(70)	11(55)
								黄芪总苷A	20	6.3	17.66±0.64	0.101±0.008**	0.573±0.031**	7(35)	5(25)
黄芪总苷B	20	12.5	17.73±0.83	0.090±0.005**	0.508±0.011**	4(20)	4(20)
								黄芪总苷C	20	25.0	18.24±0.86**	0.083±0.004**	0.457±0.014**	4(20)	4(20)
病毒唑	10	0.1	18.02±1.13	0.088±0.008**	0.487±0.025**	3(20)	2(20)

注：与模型组比较，^*p＜0.05，^**p＜0.01。

从表7可见，正常对照组小鼠与模型组小鼠心脏重量、系数比有显著差异(p＜0.01)，模型组小鼠体重下降，而正常组体重是增重，两者有显著差异，且表面无出血点，表明小鼠病毒性心肌炎模型可靠。连续iv黄芪总苷6.3、12.5、25g(生药)/kg.d 7天，结果三种剂量黄芪总苷小鼠的心脏重量、系数、出血点、出血斑均较模型组有明显抑制，对体重亦较模型组显著增加(p＜0.01)，表明黄芪总苷对CV B₃致小鼠病毒性心肌炎有显著抑制作用，表现出对小鼠心脏有良好的保护作用。保护作用的强弱与iv剂量有明显的剂量依赖性。

连续iv不同剂量的黄芪总苷对CV B₃心肌炎小鼠血清CK和LDH酶活性的影响，

结果见表8。

       表8  黄芪总苷对心肌炎小鼠血清中CK、LDH酶活性(X±SD)的影响

组别	剂量(g/kg)	CK(国际单位)	LDH(国际单位)
				正常组	-	725±85**	1855±250**
模型组	-	1212±124	3161±365
				黄芪总苷A	6.3	981±90**	2741±268**
黄芪总苷B	12.5	977±93**	2181±178**
				黄芪总苷C	25	786±82**	1920±230**
病毒唑	0.1	643±94**	1803±186**

注：与模型组比较，^*p＜0.05，^**p＜0.01。

从表8可见，模型组的CK和LDH均较正常组显著升高，p均小于0.01。表明CV B₃心肌炎可引起CK、LDH显著升高，而黄芪总苷各组的CK、LDH均较模型组有显著降低，表明连续iv黄芪总苷可阻止心肌炎病毒所致的CK、LDH升高。

连续iv不同剂量的黄芪总苷对CV B₃心肌炎小鼠血清中和抗体和心肌细胞中CV₃滴度的影响，结果见表9。

       表9  黄芪总苷对小鼠血清中和抗体和CV B₃滴度的影响

组别	动物数	剂量(g/kg)	中和抗体	心肌细胞滴度
					正常组	10	-	-	-
模型组	20	-	1∶32	1∶16
					黄芪总苷A	20	6.3	1∶16	1∶8
黄芪总苷B	20	12.5	1∶8**	1∶4**
					黄芪总苷C	20	25	1∶8**	1∶2**
病毒唑	10	0.1	1∶8**	1∶2**

注：与模型组比较，中和抗体或滴度差达4倍时，表明诊断意义，即p＜0.01。

从表9可见，正常组的血清中均未查出中和抗体和CV B₃病毒，而模型组的中和抗体和滴度分别为1∶32、1∶16，表明CV₃病毒引起心肌炎小鼠的中和抗体和心肌细胞中CV B₃升高，黄芪总苷中、高剂量组对中和抗体抑制均非常显著(p＜0.01)，三种剂量的黄芪总苷对心肌CV B₃滴度抑制均非常显著。表明黄芪总苷对心肌炎小鼠的中和抗体及心肌细胞CV B₃有良好的调节作用。

连续iv不同剂量的黄芪总苷对小鼠CV B₃心肌炎心肌病理组织积分的影响，结果见表10。

         表10  黄芪总苷对小鼠心肌病理组织积分的影响

组别	动物数	剂量(g/kg)	炎性浸润	坏死
					模型组	20	-	3.5±0.8	3.4±0.3
黄芪总苷A	20	6.3	2.4±0.5**	2.1±0.6**
					黄芪总苷B	20	12.5	1.7±0.6**	1.3±0.5**
黄芪总苷C	20	25	1.4±0.5**	0.9±0.4**
					病毒唑	10	0.1	1.2±0.4**	1.0±0.3**

注：与模型组比较，^*p＜0.05，^**p＜0.01。

从表10可知，连续iv黄芪总苷6.3、12.5、25g(生药)/kg.d对CV B₃心肌炎小鼠病理积分(炎性浸润及坏死)有显著的抑制，表明黄芪总苷对心肌炎致小鼠的病理损伤有良好的保护作用。

用黄芪总苷治疗小鼠柯萨奇病毒性心肌炎能降低血清磷酸肌酸激酶、乳酸脱氨酶水平和中和抗体，降低心肌细胞的病毒滴度，减轻病毒对心肌细胞的损伤。显示黄芪总苷对柯萨奇病毒具有杀伤作用，对心肌细胞有较好的保护作用。

体内试验表明：对感染CV B₃病毒性心肌炎BALB/C小鼠iv不同剂量的黄芪总苷6.3、12.5、25g(生药)/kg.d，连续7天，结果心肌炎小鼠的血清CK、LDH、中和抗体、心脏系数、心肌细胞中CV B₃滴度及炎性浸润面积坏死程度，与模型组比p均小于0.01，表明黄芪总苷具有较好的抗CV B₃所致病毒性心肌炎作用。

试验例3毒理学试验

一次尾静脉注射给予小鼠黄芪总苷的半数致死量为184.2g(生药)/kg。黄芪总苷大鼠长期毒性试验表明：给药7周中、低剂量组使大鼠的红细胞数、血红蛋白含量及红细胞压积增高，血糖显著增高，各给药组的其余血液学、生化学指标无异常。解剖动物时未发现肉眼可见的病理变化，脏器系数基本正常，病理检查正在进行中。

犬长期毒性试验显示：给药初期中、高剂量组动物出现明显的呕吐和搔痒症状，搔痒症状在给药后很快消失，二周后大部分动物不再出现呕吐症状。除高、中剂量引起血糖降低外，对血液生化指标均未见明显影响。

从上数据中可以看出本发明的黄芪总苷治疗病毒心肌炎小鼠的有效剂量为0.25、0.125、0.063g/kg天，而文献：中国新药与临床杂志2003年9月，22(9)：515-519，报道黄芪甲苷治疗小鼠心肌炎小鼠的有效剂量0.5g/kg天，而0.056g/kg天，0.17g/kg天治疗小鼠心肌炎小鼠无效。可以看出黄芪甲苷治疗小鼠心肌炎的有效剂量大于黄芪总苷。证明黄芪总苷中黄芪甲苷同系物在治疗病毒心肌炎小鼠有协同增效作用。

通过上述制剂参数的控制及本发明药物稳定性的测定，证明本发明注射剂在不含助溶剂和助稀释剂的情况下，同样能够达到制剂的质量要求，根据本领域技术人员的公知常识，辅料的选择对制剂的安全性影响很大，特别是注射剂中的助溶剂和助稀释剂容易造成过敏，因此，本发明的技术方案所得到的黄芪总苷注射剂达到了意想不到的有益效果，其附加剂中不含有助溶剂和助稀释剂，是由本发明的黄芪总苷提取物的特殊性质所决定的，通过药效学试验证明，原料提取物中黄芪总苷中黄芪甲苷同系物发挥了协同增效的作用，为临床提供了一种更加安全、有效的治疗病毒性心肌炎药物注射剂的新选择。

Claims (12)

1、一种黄芪总苷注射剂，其特征在于：它是以黄芪总苷提取物为活性成分，不含助溶剂和助稀释剂，加上药学上可接受的注射剂附加剂，制备而成的注射剂，其中，所述的黄芪总苷提取物中有效成分黄芪总苷的含量占80-100％，每制剂单位中黄芪总苷的含量为90～300mg。

2、根据权利要求1所述的黄芪总苷注射剂，其特征在于：所述的黄芪甲苷的百分含量占黄芪总苷提取物的6-50％。

3、根据权利要求1或2所述的黄芪总苷注射剂，其特征在于：所述的黄芪总苷的提取方法为：

a.以中药黄芪，加水煎煮或10-80％乙醇渗漉，合并煎煮液或渗漉液，减压浓缩，得黄芪浓缩液；

b、将a步骤的浓缩液加乙醇至含醇量达50％-80％，在0℃～5℃冷藏静置，24～48小时，滤过，滤液浓缩至每毫升相当于0.5-1.0克生药，冷藏静置，24～48小时，滤过；取滤液通过大孔吸附树脂柱，水洗至近无色，用稀乙醇洗脱，收集洗脱液，滤过，回收乙醇并浓缩至无醇味，冷藏静置，滤过，得滤液；

c、将b步骤所述的滤液，加入乙醇至含醇量达70％～95％，冷藏静置，滤过，回收乙醇，煮沸，滤过，即得黄芪总苷提取物。

4、根据权利要求1-3任一项所述的黄芪总苷注射剂，其特征在于：所述的注射剂是粉针剂、滴注剂、注射液。

5、根据权利要求4所述的黄芪总苷注射剂，其特征在于：所述的注射液的pH值为：5.5～7.5。

6、根据权利要求4或5所述的黄芪总苷注射剂，其特征在于：所述的注射液是由下述重量配比的原料提取物及附加剂制备而成：

黄芪总苷提取物1-5份、注射剂用附加剂8-25份。

7、根据权利要求6所述的黄芪总苷注射剂，其特征在于：所述的注射剂用附加剂为：等渗剂、pH值调节剂，所述的等渗剂为氯化钠、氯化镁、氯化钙、乳酸钠、葡萄糖、木糖醇、山梨醇或左旋糖酐中的一种或任意几种混合；所述的pH值调节剂是盐酸、醋酸、乳酸、NaOH、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、枸橼酸钠中的一种。

8、根据权利要求7所述的黄芪总苷注射剂，其特征在于：所述的注射液是由如下重量配比的原料及附加剂制备而成：

黄芪总苷提取物0.40-3.50份、氯化钠9.00份、磷酸二氢钠0.5份。

9、一种制备权利要求1-8任一项所述的黄芪总苷注射剂的方法，它包括如下步骤：

a.将黄芪药材采用水提醇沉法或者乙醇浸渍、渗漉，收集渗漉液，浓缩，得浓缩液；

b、将a步骤的浓缩液加乙醇至含醇量达50％-80％，在0℃-5℃冷藏静置24～36小时，滤过，滤液浓缩至每毫升相当于0.5-1.0克生药，冷藏静置24～36小时，过滤；取滤液通过大孔吸附树脂柱，水洗至近无色，用稀乙醇洗脱，收集洗脱液，滤过，回收乙醇并浓缩至无醇味，冷藏静置，滤过；加乙醇至含醇量达70％-90％，冷藏静置，滤过；回收乙醇，煮沸，滤过，即得黄芪总苷提取物；

c、取黄芪总苷、等渗剂、pH调节剂，加注射用水，加入注射用水总量0.1％-0.2％活性炭，煮沸30分钟后，滤过，调pH至7.2-8.2，超滤，灌封，灭菌，检验，即得。

10、根据权利要求9所述的黄芪总苷注射剂的制备方法，其特征在于：步骤b所用的大孔树脂为非极性或/和弱极性大孔吸附树脂，型号为HPD100、HPD500、D101、PD100A、HPD700、LD140中的一种或其混合。

11、根据权利要求9所述的黄芪总苷注射剂的制备方法，其特征在于：步骤c所用超滤膜为5000～10000道尔顿。

12、权利要求1-8任一项所述的黄芪总苷注射剂在制备治疗病毒性心肌炎、心力衰竭的药物中的应用。