BR112019008481A2 - Vacinas de mrna de nanopartículas lipídicas - Google Patents

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Heidenreich Regina
J. Hope Michael
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Lutz Johannes
Mui Barbara
Petsch Benjamin
Rauch Susanne
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Abstract

a invenção se refere a mrna compreendendo nanopartículas lipídicas e usos médicos do mesmo. as nanopartículas lipídicas da presente invenção compreendem um lipídeo catiônico de acordo com a fórmula (i), (ii) ou (iii) e/ou um lipídeo peg de acordo com a fórmula (iv) bem como um composto de mrna compreendendo uma sequência de mrna codificando um peptídeo ou proteína antigênicos. a invenção adicionalmente se relaciona com o uso das referidas nanopartículas lipídicas como vacinas ou medicamentos, em particular em relação à vacinação da influenza ou raiva.

Description

VACINAS DE MRNA DE NANOPARTÍCULAS LIPÍDICAS Antecedentes da invenção [0001] A presente invenção se refere a mRNA compreendendo nanopartícuias lipidicas úteis como vacinas à base de mRNA. Adicionalmente, a presente invenção se refere a uma composição compreendendo o mRNA compreendendo nanoparticulas lipidicas e ao uso do mRNA compreendendo nanoparticulas lipidicas ou a composição para a preparação de uma composição farmacêutica, especialmente uma vacina, por exemplo para uso na profilaxia ou tratamento de doenças infecciosas, doenças tumorais ou cancerígenas, alergias ou doenças autoimunes. A presente invenção descreve adicionalmente um método de tratamento ou profilaxia das doenças acima mencionadas.
[0002] A terapia genética e a vacinação genética pertencem aos métodos mais promissores e de rápido desenvolvimento da medicina moderna. Essas podem conferir opções altamente específicas e individuais para a terapia de uma grande variedade de doenças.
[0003] A vacinação genética permite evocar uma resposta imunitária desejada a antigenos selecionados, tais como componentes característicos de superfícies bacterianas, partículas virais, antigenos tumorais ou semelhantes. Geralmente, a vacinação é uma das conquistas cruciais da medicina moderna. No entanto, vacinas eficazes estão atualmente disponíveis apenas para um número limitado de doenças. Consequentemente, as infecções que não são evitáveis pela vacinação ainda afetam milhões de pessoas todos os anos.
Petição 870190039457, de 26/04/2019, pág. 24/744
2/542 [0004] Comumente, as vacinas podem ser subdivididas em vacinas de primeira, segunda e terceira geração. As vacinas de primeira geração são, tipicamente, vacinas para organismos totais. Essas são baseadas quer em patógenos vivos e atenuados ou mortos, por exemplo, vírus, bactérias ou semelhantes. A principal desvantagem das vacinas vivas e atenuadas é o risco de reversão para variantes ameaçadoras à vida. Assim, embora atenuados, esses patógenos ainda podem, intrinsecamente, carregar riscos imprevisíveis. Os patógenos mortos podem não ser tão eficazes quanto desejado para gerar uma resposta imunitária específica. De modo a minimizar esses riscos, foram desenvolvidas vacinas de segunda geração. Essas são, tipicamente, vacinas de subunidade, consistindo em antigenos definidos ou componentes proteicos recombinantes que são derivados de patógenos.
[0005] As vacinas genéticas, isto é, vacinas para vacinação genética, são geralmente entendidas como vacinas de terceira geração. Essas são tipicamente compostas por moléculas de ácido nucleico geneticamente modificadas que permitem a expressão de fragmentos de peptídeo ou proteína (antígeno) característicos para um patógeno ou de um antígeno tumoral in vivo. As vacinas genéticas são expressas depois da administração a um paciente após a captação pelas células alvo. A expressão dos ácidos nucleicos administrados resulta na produção das proteínas codificadas. No caso dessas proteínas serem reconhecidas como estranhas pelo sistema imunitário do paciente, é desencadeada uma resposta imunitária.
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3/542 [0006] Tanto o DNA como o RNA podem ser usados como moléculas de ácido nucleico para administração no contexto da vacinação genética. O DNA é conhecido por ser relativamente estável e fácil de manusear. No entanto, o uso de DNA envolve o risco de inserção indesejada dos fragmentos de DNA administrados no genoma do paciente, resultando potencialmente em eventos mutagênicos, tais como a perda de função dos genes prejudicados. Como um risco adicional, emergiu a geração indesejada de anticorpos antiDNA. Outra desvantagem é o nivel limitado de expressão do peptideo ou proteína codificados que é atingível após a administração do DNA uma vez que o DNA tem de entrar no núcleo de modo a ser transcrito antes do mRNA resultante poder ser traduzido. Entre outras razões, o nível de expressão do DNA administrado irá depender da presença de fatores de transcrição específicos que regulam a transcrição do DNA. Na ausência de tais fatores, a transcrição do DNA não irá produzir quantidades satisfatórias de RNA. Como resultado, o nivel obtido de peptideo ou proteína traduzidos é limitado.
[0007] Ao usar RNA em vez de DNA para vacinação genética, o risco de integração genômica indesejada e geração de anticorpos anti-DNA é minimizado ou evitado. No entanto, o RNA é considerado como sendo uma espécie molecular bastante instável que pode ser facilmente degradada por RNAses ubíquas.
[0008] As vacinas de mRNA compreendendo mRNA codificando o antígeno complexado com protamina já são descritas na técnica anterior (por exemplo, Petsch et al., Nat Biotechnol. Dez de 2012; 30 (12) : 1210-6., Schnee et
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4/542 al., PLoS Negl Trop Dis. 23 de jun 2016; 10(6) :e0004746., EP1083232, W02010/037539, WO2012/116811, WO2012/116810, e WO2015/024665) . O documento WO2016/17633 0 também descreve composições de nanopartícuias lipídicas compreendendo RNA modificado por nucleosídeo codificando diferentes antigenos.
[0009] Mesmo que tenham sido efetuados muitos progressos nos últimos anos, ainda existe uma necessidade na técnica para conferir um método eficiente para a vacinação de mRNA, o que permite induzir uma resposta imunitária adaptativa, em que a administração não é gravemente prejudicada pela degradação precoce do antígeno ou por uma tradução ineficiente do mRNA devido à liberação ineficiente do mRNA na célula. Além disso, existe uma necessidade urgente para diminuir a dose de vacinas de mRNA de modo a diminuir possíveis preocupações de segurança e tornar as vacinas acessíveis para o terceiro mundo.
[0010] Existem muitos desafios associados à entrega de ácidos nucleicos para efetuar uma resposta desejada em um sistema biológico. Terapêuticas à base de ácido nucleico, tais como as vacinas, têm enorme potencial, mas permanece uma necessidade de uma entrega mais eficaz de ácidos nucleicos para locais apropriados dentro de uma célula ou organismo de modo a obter esse potencial.
[0011] No entanto, dois problemas enfrentam atualmente o uso de oligonucleotídeos em contextos terapêuticos. Primeiro, os RNAs livres são suscetíveis à digestão por nuclease no plasma. Em segundo, os RNAs livres têm capacidade limitada para obter acesso ao compartimento intracelular onde reside o mecanismo de tradução relevante.
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5/542
As nanoparticulas lipidicas formadas a partir de lipideos catiônicos com outros componentes lipidicos, tais como lipideos neutros, colesterol, PEG, lipideos PEGuilados e oligonucleotideos têm sido usadas de modo a bloquear a degradação dos RNAs no plasma e a facilitar a captação celular dos oligonucleotideos.
[0012] Permanece a necessidade de melhorar os lipideos catiônicos e as nanoparticulas lipidicas para a entrega de oligonucleotideos. De preferência, essas nanoparticulas lipidicas forneceríam proporções ótimas de fármaco:lipideos, protegeríam o ácido nucleico da degradação e depuração no soro, seriam adequadas para entrega sistêmica ou local, e forneceríam entrega intracelular do ácido nucleico. Além disso, essas partículas de ácido nucleico-lipídeo devem ser bem toleradas e conferir um índice terapêutico adequado, de tal modo que o tratamento do paciente a uma dose eficaz do ácido nucleico não esteja associado a toxicidade inaceitável e/ou risco para o paciente. A presente invenção confere essas e vantagens relacionadas.
Sumário da Invenção [0013] A presente invenção confere mRNA compreendendo nanoparticulas lipidicas ou composições farmacêuticas compreendendo as referidas nanoparticulas, bem como os usos das mesmas. O mRNA compreendendo nanoparticulas lipidicas de acordo com a invenção compreende :
(i) um lipídeo catiônico com a fórmula (I):
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6/542
R1a R2a
R3a
R4a
Figure BR112019008481A2_D0001
ou um sal, tautômero, ou estereoisômero do mesmo farmaceuticamente em
Rlb, R2a, R2b R3b R4a R4b R 5 R6
R7, R8, R9 que R
Ί 2
L , L , a, b, c, d e e
R3a são conforme definido no presente documento;
e/ou um lipideo catiônico com a fórmula (II):
R1a
R2a
R3a
R4a
R5
Figure BR112019008481A2_D0002
R6
Gl
N
G?
R7
G? R8
N
R9 ou um sal tautômero pró-fármaco ou estereoisômero do mesmo farmaceuticamente aceitável, em
Rlb
R2a, R2b
R3a, R3b, R' R4b
R5, R6, R7, R8, R9 que
L1,
L2, G1
G2, G3 a, b, c e d são conforme definido no presente documento;
e/ou preferencialmente um lipideo catiônico com a fórmula III:
R3 ^G3 r2 (III)
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7/542 ou um sal, tautômero, pró-fármaco ou estereoisômero do mesmo farmaceuticamente aceitável, em que R1, R2, R3, L1, L2, G1, G2, e G3 presente documento.
são conforme definido no a fórmula (IV) e/ou um lipídeo PEG com
O
Figure BR112019008481A2_D0003
(IV) em que R8 e R9 são cada um, independentemente, uma alquila de cadeia linear ou ramificada, saturada ou não saturada, contendo 10 a 30 átomos de carbono, em que a cadeia alquila é opcionalmente interrompida por uma ou mais ligações éster;
e w tem um valor médio variando de 30 a 60;
e opcionalmente um lipídeo neutro e/ou um esteroide ou análogo esteroide, em que o composto mRNA está encapsulado na, ou associado à, referida nanopartícuia lipídica.
[0014] A presente invenção adicionalmente confere composições farmacêuticas compreendendo as referidas nanopartícuias lipídicas, bem como métodos para a produção das referidas nanopartícuias. Em um aspecto adicional, a invenção se refere a usos médicos das nanopartícuias lipídicas ou da composição farmacêutica compreendendo as mesmas.
[0015] Em um aspecto adicional, a invenção se refere a métodos de profilaxia médica ou tratamento usando o referido mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas.
Definições
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8/542 [0016] Por uma questão de clareza e de legibilidade, as seguintes informações e definições de antecedentes científicos são conferidas. Quaisquer características técnicas divulgadas por esse meio podem fazer parte de cada uma das modalidades da invenção. Definições e explicações adicionais podem ser conferidas no contexto da presente divulgação.
[0017] A menos que definido de outra forma, ou a menos que o contexto específico exija de outra forma, todos os termos técnicos usados no presente documento têm o mesmo significado que é comumente entendido por um perito no campo técnico relevante.
[0018] A menos que o contexto indique ou exija o contrário, as palavras compreende, compreendem e compreendendo e expressões semelhantes devem ser interpretadas em um sentido aberto e inclusivo, como incluindo, mas não limitado a na presente descrição e nas reivindicações.
[0019] As expressões uma modalidade, uma modalidade específica e semelhantes significam gue uma funcionalidade, propriedade ou característica particular, ou um grupo particular ou combinação de funcionalidades, propriedades ou características, conforme referido em combinação com a expressão respectiva, está presente em pelo menos uma das modalidades da invenção. A ocorrência dessas expressões em vários locais ao longo da presente descrição não se refere necessariamente à mesma modalidade. Além disso, as funcionalidades, propriedades ou características específicas podem ser combinadas de qualquer forma adequada em uma ou mais modalidades.
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9/542 [0020] As formas singulares um, uma, e o/a devem ser entendidas como incluindo referências plurais a não ser que o contexto dite claramente de outro modo.
[0021] Porcentagens no contexto de números devem ser entendidas como relativas ao número total dos itens respectivos. Em outros casos, e a menos que o contexto dite o contrário, as porcentagens devem ser entendidas como porcentagens em peso (% em peso).
[0022] No contexto da invenção, uma composição se refere a qualquer tipo de composição em que os ingredientes especificados podem ser incorporados, opcionalmente em conjunto com quaisquer constituintes adicionais, habitualmente com pelo menos um portador ou excipiente farmaceuticamente aceitável. Desse modo, a composição pode ser uma composição seca tal como um pó ou grânulos, ou uma unidade sólida tal como uma forma liofilizada ou um comprimido. Alternativamente, a composição pode estar na forma liquida, e cada constituinte pode ser incorporado independentemente na forma dissolvida ou dispersa (por ex., suspensa ou emulsionada) . Em uma das modalidades preferidas, a composição é formulada como uma composição sólida estéril, tal como um pó ou uma forma liofilizada para reconstituição com um portador liquido aquoso. Tal formulação também é preferida para aquelas versões da composição que compreendem uma carga de ácido nucleico tal como descrito em detalhe adicional abaixo.
[0023] Conforme usado no presente documento, um composto significa uma substância química, que é um material consistindo em moléculas tendo essencialmente a
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10/542 mesma estrutura e propriedades químicas. Para um composto molecular pequeno, as moléculas são tipicamente idênticas em relação à sua composição atômica e configuração estrutural. Para um composto macromolecular ou polimérico, as moléculas de um composto são altamente semelhantes, mas nem todas são necessariamente idênticas. Por exemplo, um segmento de um polímero que é designado por consistir em 50 unidades monoméricas também pode conter moléculas individuais com, por exemplo, 48 ou 53 unidades monoméricas.
[0024] Um composto lipidoide, também simplesmente referido como lipidoide, é um composto semelhante a lipídeo, isto é um composto anfifílico com propriedades físicas do tipo lipídico. No contexto da presente invenção o termo lipídeo é considerado como abrangendo lipidoides.
[0025] A menos que um significado diferente seja claro a partir do contexto específico, o termo catiônico significa que a respectiva estrutura carrega uma carga positiva, quer permanentemente ou não permanentemente, mas em resposta a certas condições, tais como o pH. Desse modo, o termo catiônico abrange tanto permanentemente catiônico como cationizável.
[0026] Conforme usado no presente documento, permanentemente catiônico significa que o respectivo composto, ou grupo ou átomo, é carregado positivamente a qualquer valor de pH ou atividade iônica de hidrogênio do seu ambiente. Tipicamente, a carga positiva é resultante da presença de um átomo de nitrogênio quaternário. Onde um composto carrega uma pluralidade de tais cargas positivas,
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11/542 esse pode ser referido como permanentemente policatiônico, o que é uma subcategoria de permanentemente catiônico.
[0027] Componente/composto catiônico: O termo componente/composto catiônico se refere tipicamente a uma molécula carregada, que é carregada positivamente (cátion) a um valor de pH tipicamente de cerca de 1 a 9. Em algumas modalidades, o componente/composto catiônico é preferencialmente carregado a um valor de pH de ou abaixo de 9 (por exemplo, 5 a 9), de ou abaixo de 8 (por exemplo, 5 a 8), ou abaixo de 7 (por exemplo, 5 a 7), mais preferencialmente a valores fisiológicos de pH, por exemplo, cerca de 7,3 a 7,4. Consequentemente, um peptideo proteína, polissacarídeo, lipídeo ou polímero catiônico, de acordo com uma modalidade da presente invenção é carregado positivamente sob condições fisiológicas, particularmente sob condições salinas fisiológicas da célula in vivo. Noutra modalidade preferida, a nanopartícuia lipídica, o peptideo, proteína, polissacarídeo, lipídeo ou polímero catiônico de acordo com a presente invenção está descarregado, tem uma carga neutra ou é respectivamente eletricamente neutro sob condições fisiológicas, particularmente sob condições salinas fisiológicas da célula in vivo. Um peptideo ou proteína catiônico contém preferencialmente um maior número de aminoácidos catiônicos, por ex. , um maior número de Arg, His, Lys ou Orn do que outros resíduos de aminoácidos (em particular mais aminoácidos catiônicos do que resíduos de aminoácidos aniônicos como Asp ou Glu) ou contém blocos predominantemente formados por resíduos de aminoácidos
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12/542 catiônicos. A expressão catiônica também se pode referir a componentes/compostos policatiônicos.
[0028] O componente/composto catiônico também se pode referir a um lipídeo catiônico capaz de ser carregado positivamente. Os lipídeos catiônicos exemplificativos incluem um ou mais grupos amina(s) que carregam a carga positiva. Os lipídeos catiônicos preferidos são ionizáveis, pelo que podem existir em uma forma positivamente carregada ou neutra, dependendo do pH. A ionização do lipídeo catiônico afeta a carga superficial de uma nanopartícuia lipídica (LNP) sob diferentes condições de pH. Esse estado de carga pode influenciar a absorção de proteínas plasmáticas, depuração sanguínea e distribuição de tecidos (Semple, SC, et al., Adv. Drug Deliv Rev 32:3-17 (1998)) bem como a capacidade de formar estruturas não em bicamada (Hafez, IM, et al. , Gene Ther 8:1188-1196 (2001)) crítica para a entrega intracelular de ácidos nucleicos. Conforme descrito noutro local, o pKa de lipídeos catiônicos formulados está correlacionado com a eficácia das LNPs para entrega de ácidos nucleicos (ver Jayaraman et al., Angewandte Chemie, International Edition (2012), 51 (34), 8529-8533; Semple et al, Nature Biotechnology 28, 172-176 (2010)) . Em algumas modalidades da presente invenção, a gama preferida de pKa é de cerca de 5 a cerca de 7.
[0029] No presente contexto, o prefixo poli se refere a uma pluralidade de átomos ou grupos tendo a respectiva propriedade em um composto. Se colocado entre parênteses, a presença de uma pluralidade é opcional. Por exemplo, (poli)catiônicos significa catiônicos e/ou
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13/542 policatiônicos. No entanto, a ausência do prefixo não deve ser interpretada de forma a excluir uma pluralidade. Por exemplo, um composto policatiônico também é um composto catiônico e pode ser referido como tal.
[0030] Cationizável significa que um composto, ou grupo ou átomo, está carregado positivamente a um pH mais baixo e não carregado a um pH mais elevado do seu ambiente. Também em ambientes não aquosos, onde não pode ser determinado qualquer valor de pH, um composto, grupo ou átomo cationizável é carregado positivamente a uma concentração elevada de ions de hidrogênio e não carregada a uma baixa concentração ou atividade de ions de hidrogênio. Isso depende das propriedades individuais do composto cationizável ou policationizável, em particular, do pKa do respectivo grupo ou átomo cationizável, ao pH ou concentração de ion de hidrogênio no qual esse é carregado ou não carregado. Em ambientes aquosos diluídos, a fração de compostos, grupos ou átomos cationizáveis que carregam uma carga positiva pode ser estimada usando a chamada equação de Henderson-Hasselbalch, que é bem conhecida dos peritos na técnica.
[0031] Por exemplo, em algumas modalidades, se um composto ou porção é cationizável, é preferido que seja positivamente carregado a um valor de pH de cerca de 1 a 9, preferencialmente 4 a 9, 5 a 8 ou mesmo 6 a 8, mais preferencialmente a um valor de pH de ou inferior a 9, de ou inferior a 8, de ou inferior a 7, mais preferencialmente a valores de pH fisiológico, por exemplo cerca de 7,3 a 7,4, isto é sob condições fisiológicas, particularmente sob condições salinas fisiológicas da célula in vivo. Em outras
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14/542 modalidades, é preferível que o composto ou porção cationizável seja predominantemente neutro a valores fisiológicos de pH, por exemplo, cerca de 7,0-7,4, mas se torna positivamente carregado a valores inferiores de pH. Em algumas modalidades, a gama preferida de pKa para o composto ou porção cationizável é de cerca de 5 a cerca de 7 .
[0032] Ácido nucleico: O termo ácido nucleico significa qualquer molécula de DNA ou RNA. O termo pode ser usado para um polinucleotídeo e/ou oligonucleotídeo. Onde quer que no presente documento seja feita referência a um ácido nucleico ou sequência de ácido nucleico codificando uma proteína e/ou peptídeo particular, o referido ácido nucleico ou sequência de ácido nucleico, respectivamente, preferencialmente também compreende sequências reguladoras permitindo em um hospedeiro adequado, por ex. um ser humano, a sua expressão, isto é, transcrição e/ou tradução da sequência de ácido nucleico codificando a proteína ou peptídeo particular.
[0033] Modificação nucleósica: no contexto da presente invenção, o termo modificação nucleósica se refere a moléculas de mRNA ou compostos compreendendo nucleosídeos, que normalmente não são parte de mRNA, preferencialmente nucleosídeos não naturais. Em particular, o termo se refere preferencialmente a nucleosídeos de mRNA diferentes de adenina, guanina, citosina, uracila e, em alguns casos, timina.
[0034] Peptídeo: Um peptídeo é um oligômero ou polímero de pelo menos dois monômeros de aminoácidos. Normalmente, os monômeros são ligados por ligações
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15/542 peptídicas. 0 termo peptídeo não limita o comprimento da cadeia polimérica de aminoácidos. Em algumas modalidades da presente invenção, um peptídeo pode, por exemplo, conter menos de 50 unidades monoméricas. Os peptídeos mais longos são também denominados polipeptídeos, tipicamente possuindo 50 a 600 unidades monoméricas, mais especificamente 50 a 300 unidades monoméricas.
[0035] Proteína: Uma proteína consiste tipicamente em um ou mais peptídeos e/ou polipeptídeos dobrados em uma forma tridimensional, facilitando uma função biológica.
[0036] Gripe pandêmica ou influenza pandêmica: Uma pandemia de influenza pode ocorrer quando um (novo) vírus da influenza não humana ganha a capacidade de transmissão eficiente e sustentada de humano-a-humano e depois se dissemina globalmente. Os vírus da influenza que têm o potencial de causar uma pandemia são referidos como vírus da influenza com potencial pandêmico ou vírus da influenza pandêmica.
[0037] Exemplos de vírus da influenza com potencial pandêmico incluem a influenza das aves A (H5N1) e a influenza das aves A (H7N9) , que são dois tipos diferentes de vírus de gripe das aves. Esses são vírus não humanos (ou seja, eles são novos entre os seres humanos e circulam entre as aves em algumas partes do mundo), de modo que há pouca ou nenhuma imunidade contra esses vírus entre as pessoas. As infecções humanas com esses vírus ocorreram raramente, mas se qualquer um desses vírus mudasse de tal forma que fosse capaz de infectar facilmente
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16/542 humanos e se disseminar facilmente de pessoa para pessoa, podería resultar em uma pandemia de influenza.
[0038] Vacina contra a influenza/gripe pandêmica ou vacina da influenza/gripe pandêmica: Uma vacina direcionada contra um vírus da influenza pandêmica é denominada no presente documento por vacina contra a influenza/gripe pandêmica ou vacina da influenza/gripe pandêmica.
[0039] Temporada da influenza/gripe: A temporada da gripe é um período de tempo recorrente anualmente, caracterizado pela prevalência de surtos de influenza (gripe). A temporada ocorre durante a metade fria do ano em cada hemisfério. A atividade da influenza pode às vezes ser prevista e até rastreada geograficamente. Embora o início da atividade principal da gripe em cada temporada varie de acordo com a localização, em qualquer local específico, essas pequenas epidemias geralmente levam cerca de 3 semanas até ao pico e outras 3 semanas para diminuírem significativamente. Vacinas contra a gripe têm sido usadas para diminuir os efeitos da temporada de gripe; a vacinação contra a pneumonia diminui adicionalmente os efeitos e as complicações da temporada da gripe. Uma vez que o hemisfério norte e o hemisfério sul têm inverno em diferentes épocas do ano, na verdade existem duas temporadas da gripe em cada ano.
[0040] Vacina contra a influenza/gripe sazonal ou vacina da influenza/gripe sazonal: Uma vacina direcionada contra o vírus da influenza que ocorre sazonalmente em uma temporada de gripe é denominada vacina
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17/542 contra a influenza/gripe sazonal ou vacina da influenza/gripe sazonal.
[0041]
Sistema imunitário:
sistema imunitário pode proteger os organismos da infecção. Se um patógeno romper uma barreira física de um organismo e entrar nesse organismo, o sistema imunitário inato confere uma resposta imediata, mas não específica. Se os patógenos escaparem dessa resposta inata, os vertebrados possuem uma segunda camada de proteção, o sistema imunitário adaptativo. No presente documento, o sistema imunitário adapta a sua resposta durante uma infecção de modo a melhorar o seu reconhecimento do patógeno. Essa resposta melhorada é então retida depois de o patógeno ter sido eliminado, na forma de uma memória imunitária, e permite que o sistema imunitário adaptativo se prepare para ataques mais rápidos e mais fortes cada vez que esse patógeno é encontrado. De acordo com isso, o sistema imunitário compreende o sistema imunitário inato e adaptativo. Cada uma dessas duas partes contém os chamados componentes humorais e celulares.
[0042]
Resposta imunitária: Uma resposta imunitária pode tipicamente ser tanto uma reação específica do sistema imunitário adaptativo a um antígeno específico (denominada de resposta imunitária específica ou adaptativa) como uma reação não específica do sistema imunitário inato (denominada de resposta imunitária não específica ou inata) . A invenção se refere ao núcleo para reações específicas (respostas imunitárias adaptativas) do sistema imunitário adaptativo. Particularmente, se refere a respostas imunitárias adaptativas a infecções por vírus
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18/542 tais como, por exemplo, vírus da influenza. No entanto, essa resposta específica pode ser apoiada por uma reação não específica adicional (resposta imunitária inata). Desse modo, a invenção também se refere a um composto para estimulação simultânea do sistema imunitário inato e adaptativo para evocar uma resposta imunitária adaptativa eficiente.
[0043] Sistema imunitário adaptativo: O sistema imunitário adaptativo é composto por células e processos sistêmicos altamente especializados que eliminam ou impedem o crescimento patogênico. A resposta imunitária adaptativa confere o sistema imunitário dos vertebrados com a capacidade de reconhecer e de se lembrar de patógenos específicos (para gerar imunidade) e de se preparar para ataques mais fortes cada vez que o patógeno é encontrado. O sistema é altamente adaptável por causa da hipermutação somática (um processo de aumento da frequência de mutações somáticas) e recombinação V(D)J (uma recombinação genética irreversível de segmentos de genes do receptor de antígeno). Esse mecanismo permite que um pequeno número de genes gere um vasto número de diferentes receptores de antígeno, que são então expressos de maneira única em cada linfócito individual. Uma vez que o rearranjo gênico leva a uma mudança irreversível no DNA de cada célula, toda a progênie (descendência) dessa célula irá herdar genes codificando a mesma especificidade do receptor, incluindo as células da Memória B e as células da Memória T que são as principais para a imunidade específica de longa duração. A teoria da rede imunitária é uma teoria de como o sistema imunitário adaptativo funciona, que é baseada nas
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19/542 interações entre as regiões variáveis dos receptores das células T, das células B e das moléculas produzidas pelas células T e pelas células B que possuem regiões variáveis.
[0044] Resposta imunitária adaptativa: A resposta imunitária adaptativa é tipicamente entendida como sendo específica do antigeno. A especificidade antigênica permite a geração de respostas que são adaptadas a antigenos, patógenos ou células infetadas por patógenos, específicos. A capacidade de preparar essas respostas adaptadas é mantida no corpo por células de memória. Se um patógeno infectar o corpo mais de uma vez, essas células de memória específicas são usadas para o eliminar rapidamente. Nesse contexto, o primeiro passo de uma resposta imunitária adaptativa é a ativação de células T específicas de antigenos naife ou diferentes células imunitárias capazes de induzir uma resposta imunitária específica de antigeno por células apresentadoras de antigeno. Isso ocorre nos tecidos e órgãos linfoides através dos quais as células T naife passam constantemente. Os tipos de células que podem servir como células apresentadoras de antigeno são, inter alia, células dendriticas, macrófagos e células B. Cada uma dessas células tem uma função distinta em suscitar respostas imunitárias. As células dendriticas absorvem antigenos por fagocitose e macropinocitose e são estimuladas por contato com, por exemplo, um antigeno estranho para migrar para o tecido linfoide local, onde se diferenciam em células dendriticas maduras. Os macrófagos ingerem antigenos particulados tais como bactérias e são induzidos por agentes infecciosos ou outros estímulos apropriados para
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20/542 expressar moléculas de MHC. A capacidade única de as células B se ligarem e internalizarem antígenos proteicos solúveis através dos seus receptores também pode ser importante para induzir células T. A apresentação do antígeno nas moléculas de MHC leva à ativação de células T que induzem a sua proliferação e diferenciação em células T efetoras armadas. A função mais importante das células T efetoras é a morte de células infetadas por células T citotóxicas CD8+ e a ativação de macrófagos por células Thl que em conjunto formam imunidade mediada por células, e a ativação de células B por ambas as células Th2 e Thl de modo a produzir diferentes classes de anticorpos, conduzindo, desse modo, a resposta imunitária humoral. As células T reconhecem um antígeno pelos seus receptores de células T que não reconhecem e ligam diretamente o antígeno, mas em vez disso reconhecem fragmentos de peptídeos curtos, por ex., de antígenos proteicos derivados de patógenos, que estão ligados a moléculas de MHC nas superfícies de outras células.
[0045] Imunidade celular/resposta imunitária celular: A imunidade celular está tipicamente relacionada com a ativação de macrófagos, células naturais assassinas (NK), linfócitos T citotóxicos específicos de antígeno e a liberação de várias citocinas em resposta a um antígeno. De um modo mais geral, a imunidade celular não está relacionada com anticorpos, mas com a ativação de células do sistema imunitário. Uma resposta imunitária celular é caracterizada, por exemplo, pela ativação de linfócitos T citotóxicos específicos para o antígeno que são capazes de induzir apoptose em células do corpo que exibem epítopos de
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21/542 um antígeno na sua superfície, tais como células infetadas por vírus, células com bactérias intracelulares e células cancerígenas apresentando antígenos tumorais; ativando macrófagos e células assassinas naturais, permitindo-lhes destruir os patógenos; e estimulando as células a secretarem uma variedade de citocinas que influenciam a função de outras células envolvidas em respostas imunitárias adaptativas e respostas imunitárias inatas.
[0046] Imunidade humoral/resposta imunitária humoral: A imunidade humoral se refere tipicamente à produção de anticorpos e aos processos acessórios que a podem acompanhar. Uma resposta imunitária humoral pode ser tipicamente caracterizada, por exemplo, pela ativação de Th2 e produção de citocinas, formação de centro germinativo e permuta de isótipos, maturação de afinidade e geração de células de memória. A imunidade humoral também se pode referir tipicamente às funções efetoras de anticorpos, que incluem neutralização de patógeno e toxina, ativação do complemento clássico e promoção de fagocitose e eliminação do patogênio por opsonina.
[0047] Sistema imunitário inato: O sistema imunitário inato, também conhecido como sistema imunitário não específico, compreende as células e os mecanismos que defendem o hospedeiro da infecção por outros organismos de maneira não específica. Isso significa que as células do sistema inato reconhecem e respondem aos patógenos de maneira genérica, mas, ao contrário do sistema imunitário adaptativo, não conferem imunidade duradoura ou protetora ao hospedeiro. O sistema imunitário inato pode ser, por exemplo, ativado por ligantes de receptores de padrões
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22/542 moleculares associados a patógenos (ΡΆΜΡ), por exemplo, receptores do tipo Toll (TLRs) ou outras substâncias auxiliares, tais como lipopolissacarídeos, TNF-alfa, ligante CD40 ou citocinas, monocinas, linfocinas, interleucinas ou quimiocinas, IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23, IL24, IL-25, IL-26, IL-27, IL-28, IL-29, IL-30, IL-31, IL-32, IL-33, IFN-alfa, IFN-beta, IFN-gama, GM-CSF, G-CSF, M-CSF, LT-beta, TNF-alfa, fatores de crescimento e hGH, um ligante do receptor do tipo Toll humano TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10, um ligante do receptor do tipo toll de murino TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10, TLR11, TLR12 ou TLR13, um ligante de um receptor do tipo NOD, um ligante de um receptor do tipo RIG-I, um ácido nucleico imunoestimulador, um RNA imunoestimulador (RNAis), um CpG-DNA, um agente antibacteriano, ou um agente antiviral. Tipicamente, uma resposta do sistema imunitário inato inclui o recrutamento de células imunitárias para os locais de infecção, através da produção de fatores químicos, incluindo mediadores químicos especializados, denominados citocinas; ativação da cascata do complemento; identificação e remoção de substâncias estranhas presentes em órgãos, tecidos, sangue e linfa, por glóbulos brancos especializados; ativação do sistema imunitário adaptativo através de um processo conhecido como apresentação de antígeno; e/ou atuando como uma barreira física e química para agentes infecciosos.
[0048] Adjuvante/componente adjuvante: Um adjuvante ou um componente adjuvante no sentido mais amplo
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23/542 é tipicamente um agente ou composição (por exemplo, farmacológico ou imunitário) que pode modificar, por exemplo, melhorar a eficácia de outros agentes, tais como um fármaco ou vacina. Convencionalmente, o termo se refere no contexto da invenção a um composto ou composição que serve como um portador ou substância auxiliar para imunogênios e/ou outros compostos farmaceuticamente ativos. É para ser interpretado em um sentido amplo e se refere a um amplo espectro de substâncias que são capazes de aumentar a imunogenicidade de antígenos incorporados ou coadministrados com um adjuvante em questão. No contexto da presente invenção, um adjuvante irá, de um modo preferido, melhorar o efeito imunogênico específico dos agentes ativos da presente invenção. Tipicamente, adjuvante ou componente adjuvante têm o mesmo significado e podem ser usados mutuamente. Os adjuvantes podem ser divididos, por exemplo, em imunopotenciadores, sistemas de distribuição antigênica ou mesmo combinações dos mesmos.
[0049] O termo adjuvante é tipicamente entendido como não compreendendo agentes que conferem imunidade por si próprios. Um adjuvante auxilia o sistema imunitário, não especificamente, a melhorar a resposta imunitária específica do antígeno, por exemplo, promovendo a apresentação de um antígeno ao sistema imunitário ou a indução de uma resposta imunitária inata não específica. Além disso, um adjuvante pode preferencialmente modular a resposta imunitária específica do antígeno, por exemplo, mudando a resposta específica do antígeno à base de Th2 dominante para uma resposta específica do antígeno mais à base de Thl ou vice-versa. Assim, um adjuvante pode modular
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24/542 favoravelmente a expressão/secreção de citocinas, apresentação de antígeno, tipo de resposta imunitária, etc.
[0050] RNA imunoestimulador: Um RNA imunoestimulador (RNAis) no contexto da invenção pode tipicamente ser um RNA que é capaz de induzir uma resposta imunitária inata em si. Normalmente, não possui um quadro de leitura aberta e, por conseguinte, não confere um antígeno ou imunogênio peptídico, mas suscita uma resposta imunitária inata, por exemplo, ligando-se a um tipo específico de receptor do tipo Toll (TLR) ou outros receptores adequados. No entanto, é claro que também mRNAs com um quadro de leitura aberta e codificando um peptídeo/proteína (por exemplo, uma função antigênica) podem induzir uma resposta imunitária inata.
[0051] Antígeno: No contexto da presente invenção, antígeno se refere tipicamente a uma substância que pode ser reconhecida pelo sistema imunitário, preferencialmente pelo sistema imunitário adaptativo, e é capaz de desencadear uma resposta imunitária específica do antígeno, por ex., por formação de anticorpos e/ou células T específicas de antígeno como parte de uma resposta imunitária adaptativa. Tipicamente, um antígeno pode ser ou pode compreender um peptídeo ou proteína que pode ser apresentado pelo MHC a células T. No sentido da presente invenção, um antígeno pode ser o produto de tradução de uma molécula de ácido nucleico fornecida, de um modo preferido, um mRNA, conforme definido no presente documento. Nesse contexto, também fragmentos, variantes e derivados de peptídeos e proteínas compreendendo pelo menos um epítopo são entendidos como antígeno.
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25/542 [0052] Epitopo (também denominado determinante antigênico) : Epitopos de células T ou partes das proteínas no contexto da presente invenção podem compreender fragmentos tendo preferencialmente um comprimento de cerca de 6 a cerca de 20 ou ainda mais aminoácidos, por ex., fragmentos como processados e apresentados por moléculas de MHC de classe I, preferencialmente com um comprimento de cerca de 8 a cerca de 10 aminoácidos, por ex. , 8, 9 ou 10 (ou mesmo 11 ou 12 aminoácidos), ou fragmentos como processados e apresentados por moléculas MHC de classe II, tendo preferencialmente um comprimento de cerca de 13 ou mais aminoácidos, por ex., 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 ou até mais aminoácidos, em que esses fragmentos podem ser selecionados a partir de qualquer parte da sequência de aminoácidos. Esses fragmentos são tipicamente reconhecidos por células T na forma de um complexo consistindo no fragmento peptídico e em uma molécula de MHC.
[0053] Os epitopos de célula B são tipicamente fragmentos localizados na superfície exterior de antígenos de proteína ou de peptideo (nativos) conforme definido no presente documento, tendo preferencialmente 5 a 15 aminoácidos, mais tendo preferencialmente 5 a 12 aminoácidos, ainda mais tendo preferencialmente 6 a 9 aminoácidos, que podem ser reconhecidos por anticorpos, ou seja, na sua forma nativa.
[0054] Tais epitopos de proteínas ou peptídeos podem, além disso, ser selecionados a partir de qualquer uma das variantes mencionadas no presente documento de tais proteínas ou peptídeos. Nesse contexto, os determinantes
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26/542 antigênicos podem ser epitopos conformacionais ou descontínuos que são compostos por segmentos das proteínas ou peptídeos conforme definido no presente documento que são descontínuos na sequência de aminoácidos das proteínas ou peptídeos conforme definido no presente documento mas são reunidos nos epítopos de estrutura tridimensional ou contínuos ou lineares que são compostos por uma única cadeia polipeptídica.
[0055] Vacina: Uma vacina é tipicamente entendida como sendo um material profilático ou terapêutico que confere pelo menos um antígeno ou função antigênica. O antígeno ou a função antigênica pode estimular o sistema imunitário adaptativo do corpo de modo a conferir uma resposta imunitária adaptativa.
[0056] mRNA conferindo antígeno: Um mRNA conferindo antígeno no contexto da invenção pode ser tipicamente um mRNA, possuindo pelo menos um quadro de leitura aberta que pode ser traduzido por uma célula ou um organismo conferido com esse mRNA. O produto dessa tradução é um peptídeo ou proteína que pode atuar como um antígeno, preferencialmente como um imunogênio. O produto também pode ser uma proteína de fusão composta por mais do que um imunogênio, por ex., uma proteína de fusão que consiste em dois ou mais epítopos, peptídeos ou proteínas derivados dos mesmos ou de proteínas virais diferentes, em que os epítopos, peptídeos ou proteínas podem estar ligados por sequências de ligação.
[0057] (Sequência de) mRNA artificial: Um (a sequência de) mRNA artificial pode tipicamente ser entendido como sendo uma molécula de mRNA, que não ocorre
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27/542 naturalmente. Por outras palavras, uma molécula de mRNA artificial pode ser entendida como uma molécula de mRNA não natural. Essa molécula de mRNA pode ser não natural devido à sua sequência individual (que não ocorre naturalmente) e/ou devido a outras modificações, por exemplo, modificações estruturais de nucleotideos que não ocorrem naturalmente. Tipicamente, as moléculas de mRNA artificiais podem ser concebidas e/ou geradas por métodos de engenharia genética de modo a corresponderem a uma sequência artificial desejada de nucleotideos (sequência heteróloga). Nesse contexto, uma sequência artificial é geralmente uma sequência que pode não ocorrer naturalmente, isto é, difere da sequência de tipo selvagem em pelo menos um nucleotideo. 0 termo tipo selvagem pode ser entendido como uma sequência que ocorre na natureza. Além disso, o termo molécula de ácido nucleico artificial não se restringe a significar uma única molécula mas é, tipicamente, entendido como compreendendo um conjunto de moléculas idênticas. Por conseguinte, se pode referir a uma pluralidade de moléculas idênticas contidas em uma alíquota.
[0058] mRNA bi-/multicistrônico: mRNA, que tipicamente pode ter dois quadros de leitura aberta (ORE) (bicistrônico) ou mais (multicistrônico) (regiões de codificação ou sequências de codificação). Um quadro de leitura aberta nesse contexto é uma sequência de vários tripletos de nucleotideos (códons) que podem ser traduzidos em um peptideo ou proteína. A tradução desse mRNA produz dois (bicistrônicos) ou mais (multicistrônicos) produtos de tradução distintos (desde que os ORFs não sejam idênticos).
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Para expressão em eucariotas, esses mRNA podem, por exemplo, compreender uma sequência do local de entrada ribossomal interna (IRES).
[0059] mRNA monocistrônico: Um mRNA monocistrônico pode tipicamente ser um mRNA, que compreende apenas um quadro de leitura aberta (sequência de codificação ou região de codificação). Um quadro de leitura aberta nesse contexto é uma sequência de vários tripletos de nucleotídeos (códons) que podem ser traduzidos em um peptídeo ou proteína.
[0060] Estrutura 5'-CAP: Um 5'-CAP tipicamente é um nucleotídeo modificado (análogo GAP), particularmente um nucleotídeo guanina, adicionado à extremidade 5' de uma molécula de mRNA. De preferência, o 5'-GAP é adicionado usando uma ligação 5'-5'-trifosfato (também denominada mVGpppN). Exemplos adicionais de estruturas 5'-GAP incluem glicerila, resíduo abásico desoxi invertido (porção), nucleotídeo 4',5'-metileno, nucleotídeo 1-(beta-Deritrofuranosil), nucleotídeo 4'-tio, nucleotídeo carbocíclico, nucleotídeo 1,5-anidro-hexitol, Lnucleotídeos, alfa-nucleotídeo, nucleotídeo de base modificada, nucleotídeo treo-pentofuranosila, nucleotídeo 3',4'-seco-acíclico, nucleotídeo de 3,4-di-hidroxibutila acíclica, nucleotídeo de 3,5-di-hidroxipentila acíclica, porção de nucleotídeo 3'-3'-invertido, porção abásica 3'3'-invertida, porção de nucleotídeo 3'-2'-invertido, porção abásica 3'-2'-invertida, fosfato de 1,4-butanodiol, 3'fosforamidato, hexilfosfato, fosfato de amino-hexila, 3'fosfato, 3'-fosforotioato, fosforoditioato, ou porção de metilfosfonato de ponte ou de não ponte. Essas estruturas
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5'-CAP modificadas podem ser usadas no contexto da presente invenção de modo a modificar a sequência de mRNA da composição inventiva. Estruturas adicionais 5'-CAP modificadas que podem ser usadas no contexto da presente invenção são CAP1 (metilação adicional da ribose do nucleotídeo adjacente de mVGpppN), CAP2 (metilação adicional da ribose do 2o nucleotídeo a jusante do mVGpppN), cap3 (metilação adicional da ribose do 3o nucleotídeo a jusante do mVGpppN), cap4 (metilação adicional da ribose do 4o nucleotídeo a jusante do mVGpppN), ARCA (análogo da CAP antirreversa), ARCA modificada (por exemplo, ARCA modificado fosfotioato), inosina, Nl-metil-guanosina, 2'-fluoro-guanosina, 7-desazaguanosina, 8-oxo-guanosina, 2-amino-guanosina, guanosinaLNA, e 2-azido-guanosina.
[0061] No contexto da presente invenção, uma estrutura 5'-CAP também pode ser formada na síntese química de RNA ou na transcrição in vitro de RNA (cobertura cotranscricional) usando análogos de cCAP, ou uma estrutura CAP pode ser formada in vitro usando enzimas de encapsulamento (por exemplo, kits de encapsulamento disponíveis comercialmente).
[00 62] Análogo de CAP: Um análogo de CAP se refere a um di-nucleotídeo não polimerizável que tem funcionalidade de CAP na medida em que facilita a tradução ou localização, e/ou previne a degradação da molécula de RNA, quando incorporado na extremidade 5' da molécula de RNA. Não polimerizável significa que o análogo de CAP irá ser incorporado apenas no terminal 5', uma vez que não tem um 5'-trifosf ato e, portanto, não pode ser alargado na
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30/542 direção de 3' por uma polimerase de RNA dependente do modelo.
[0063] Os análogos de GAP incluem, mas não estão limitados a, uma estrutura química selecionada a partir do grupo consistindo em mVGpppG, mVGpppA, mVGpppC; análogo de GAP não metilado (por exemplo, GpppG); análogo de GAP dimetilado (por exemplo, m2,7GpppG), análogo de GAP trimetilado (por exemplo, m2,2,7GpppG), análogos dimetilados simétricos de GAP (por exemplo, m7Gpppm7G) ou análogos antirreversos de GAP (por exemplo, ARCA; m7,2'OmeGpppG, m7,2'dGpppG, m7,3'OmeGpppG, m7,3'dGpppG e os seus derivados de tetrafosfato) (Stepinski et al., 2001. RNA 7(10) :1486-95) .
[0064] Análogos de GAP adicionais foram anteriormente descritos (US 7,074,596, WG2008/016473, WO2008/157688, WO2009/149253, WO2011/015347, e WG2013/059475). A síntese de análogos de GAP dinucleotídeos substituídos por N7-(4-clorofenoxietila) foi recentemente descrita (Kore et al. (2013) Bioorg. Med. Chem. 21 (15) : 4570-4).
[0065] Sequência poli(C): Uma sequência poli (C) é tipicamente uma sequência longa de nucleotídeos citosina, tipicamente cerca de 10 a cerca de 200 nucleotídeos citosina, preferencialmente cerca de 10 a cerca de 100 nucleotídeos citosina, mais preferencialmente cerca de 10 a cerca de 70 nucleotídeos citosina ou ainda mais preferencialmente cerca de 20 a cerca de 50 ou mesmo cerca de 20 a cerca de 30 nucleotídeos de citosina. Uma sequência poli(C) pode preferencialmente estar localizada
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31/542 na 3' da região de codificação compreendida por um ácido nucleico.
[0066] Sequência/cauda poli-A: Uma cauda poliA, também denominada cauda 3'-poli(A) ou sequência poli(A) é tipicamente uma sequência longa de nucleotídeos de adenosina de até 400 nucleotídeos de adenosina, por exemplo, a partir de cerca de 25 a cerca de 400, de preferência de cerca de 50 a cerca de 400, mais preferencialmente de cerca de 50 a cerca de 300, ainda mais preferencialmente de cerca de 50 a cerca de 250, mais preferencialmente de cerca de 60 a cerca de 250 nucleotídeos de adenosina, adicionados à extremidade 3' de um RNA. Além disso, sequências poli(A), ou caudas poli(A) podem ser geradas in vitro por poliadenilação enzimática do RNA, por ex. , usando polimerases Poli(A) derivadas de E. coli ou levedura.
[0067] Poliadenilação: A poliadenilação é tipicamente entendida como sendo a adição de uma sequência poli (A) a uma molécula de ácido nucleico, tal como uma molécula de RNA, por ex. , a um mRNA prematuro. A poliadenilação pode ser induzida por um denominado sinal de poliadenilação. Esse sinal está preferencialmente localizado dentro de um trecho de nucleotídeos na extremidade 3' de uma molécula de ácido nucleico, tal como uma molécula de RNA, para ser poliadenilada. Um sinal de poliadenilação compreende tipicamente um hexâmero consistindo em nucleotídeos de adenina e uracila/timina, de preferência a sequência de hexâmero AAUAAA. Outras sequências, preferencialmente sequências de hexâmeros, também são concebíveis. A poliadenilação ocorre tipicamente
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32/542 durante o processamento de um pré-mRNA (também denominado de mRNA prematuro). Tipicamente, a maturação de RNA (desde o pré-mRNA para o mRNA maduro) compreende o passo de poliadenilação.
[0068] Região não traduzida 3' (3'-UTR): A 3'UTR é tipicamente a parte de um mRNA que está localizado entre a região de codificação da proteína (isto é, o quadro de leitura aberta) e a sequência poli (A) do mRNA. Uma 3'UTR do mRNA não é traduzido em uma sequência de aminoácidos. A sequência 3'-UTR é geralmente codificada pelo gene que é transcrito no respectivo mRNA durante o processo de expressão gênica. A sequência genômica é primeiro transcrita em mRNA prematuro, o qual compreende introns opcionais. O mRNA prematuro é então adicionalmente processado em mRNA maduro em um processo de maturação. Esse processo de maturação compreende os passos de cobertura 5', emendando o mRNA prematuro de forma a excisar introns opcionais e modificações da extremidade 3', tais como poliadenilação da extremidade 3' do mRNA prematuro e clivagens endo- ou por exonuclease opcionais, etc. No contexto da presente invenção, uma 3'-UTR corresponde à sequência de um mRNA maduro que está localizado a 3' em relação ao códon de paragem da região de codificação da proteína, de preferência imediatamente a 3' em relação ao códon de paragem da região de codificação da proteína e que se prolonga para o lado 5' da sequência poli (A) , de preferência para o nucleotídeo imediatamente a 5' da sequência poli(A). O termo corresponde a significa que a sequência 3'-UTR pode ser uma sequência de RNA, tal como na sequência de mRNA usada para definir a sequência 3'-UTR, ou
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33/542 uma sequência de DNA que corresponde a essa sequência de RNA. No contexto da presente invenção, o termo uma 3'-UTR de um gene, tal como uma 3'-UTR de um gene de albumina, é a sequência que corresponde à 3'-UTR do mRNA maduro derivado desse gene, isto é, o mRNA obtido por transcrição do gene e maturação do mRNA prematuro. 0 termo 3'-UTR de um gene engloba a sequência de DNA e a sequência de RNA da 3’-UTR.
[0069] Região não traduzida 5' (5'-UTR): Uma 5'-UTR é tipicamente entendida como sendo uma secção particular do RNA mensageiro (mRNA) . Está localizada a 5' do quadro de leitura aberta do mRNA. Tipicamente, a 5'-UTR começa com o local de início da transcrição e termina um nucleotídeo antes do códon de iniciação do quadro de leitura aberta. A 5'-UTR pode compreender elementos para controlar a expressão gênica, também denominados de elementos reguladores. Tais elementos reguladores podem ser, por exemplo, locais de ligação ribossomal ou um Trato de Oligopirimidina 5'-Terminal. A 5'-UTR pode ser modificada pós-transcricionalmente, por exemplo, através da adição de um 5'-CAP. No contexto da presente invenção, um 5'-UTR corresponde à sequência de um mRNA maduro que está localizado entre o 5'-CAP e o códon de iniciação. Preferencialmente, a 5'-UTR corresponde à sequência que se prolonga desde um nucleotídeo localizado a 3' até ao 5'CAP, preferencialmente desde o nucleotídeo localizado imediatamente a 3' até ao 5'-CAP, a um nucleotídeo localizado a 5' até ao códon de iniciação da região de codificação da proteína, de preferência ao nucleotídeo localizado imediatamente a 5' do códon de iniciação da
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34/542 região de codificação da proteína. 0 nucleotideo localizado imediatamente a 3' da 5'-GAP de um mRNA maduro corresponde tipicamente ao local de iniciação da transcrição. 0 termo corresponde a significa que a sequência 5'-UTR pode ser uma sequência de RNA, tal como na sequência de mRNA usada para definir a sequência 5'-UTR, ou uma sequência de DNA que corresponde a essa sequência de RNA. No contexto da presente invenção, o termo uma 5'-UTR de um gene, tal como uma 5'-UTR de um gene TOP, é a sequência que corresponde à 5'-UTR do mRNA maduro derivado desse gene, isto é, o mRNA obtido por transcrição do gene e maturação do mRNA prematuro. 0 termo 5'-UTR de um gene engloba a sequência de DNA e a sequência de RNA da 5'-UTR.
[0070] Trato de Oligopirimidina 5'-Terminal (TOP) : O trato de oligopirimidina 5'-terminal (TOP) é tipicamente um trecho de nucleotideos de pirimidina localizados na região 5'-terminal de uma molécula de ácido nucleico, tal como a região 5'-terminal de determinadas moléculas de mRNA ou a região 5'-terminal de uma entidade funcional, por exemplo, a região transcrita, de determinados genes. A sequência começa com uma citidina, que geralmente corresponde ao local de iniciação da transcrição, e é seguida por um trecho de usualmente cerca de 3 a 30 nucleotideos de pirimidina. Por exemplo, o TOP pode incluir 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 ou até mais nucleotideos. O trecho de pirimidina e, desse modo, o 5'-TOP termina um nucleotideo 5' com o primeiro nucleotideo de purina localizado a jusante do TOP. O RNA mensageiro que contém um trato de oligopirimidina 5'
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35/542 terminal é frequentemente referido como mRNA TOP. Consequentemente, os genes que conferem tais RNAs mensageiros são referidos como genes TOP. As sequências TOP foram, por exemplo, encontradas em genes e mRNAs codificando fatores de alongamento de peptídeos e proteínas ribossomais.
[0071] motivo TOP: No contexto da presente invenção, um motivo TOP é uma sequência de ácido nucleico que corresponde a um 5'-TOP conforme definido acima. Desse modo, um motivo TOP no contexto da presente invenção é, de um modo preferido, um trecho de nucleotídeos de pirimidina tendo um comprimento de 3-30 nucleotídeos. De preferência, o motivo TOP consiste em pelo menos 3 nucleotídeos de pirimidina, preferencialmente pelo menos 4 nucleotídeos de pirimidina, preferencialmente pelo menos 5 nucleotídeos de pirimidina, mais preferencialmente pelo menos 6 nucleotídeos, mais preferencialmente pelo menos 7 nucleotídeos, o mais preferencialmente pelo menos 8 nucleotídeos de pirimidina, em que o trecho de nucleotídeos de pirimidina começa preferencialmente na sua extremidade 5' com um nucleotídeo de citosina. Em genes TOP e mRNAs TOP, o motivo TOP começa, de preferência, na sua extremidade 5' com o local de início da transcrição e termina um nucleotídeo 5' para o primeiro resíduo de purina no referido gene ou mRNA. Um motivo TOP, no sentido da presente invenção está, de preferência, localizado na extremidade 5' de uma sequência que representa uma 5'-UTR ou na extremidade 5' de uma sequência que codifica para uma 5'-UTR. Desse modo, de preferência, um trecho de 3 ou mais nucleotídeos de pirimidina é denominado de motivo TOP no
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36/542 sentido da presente invenção se esse trecho se situar na extremidade 5' de uma respectiva sequência, tal como o mRNA da invenção, o elemento da 5'-UTR do mRNA da invenção, ou a sequência de ácido nucleico que é derivada a partir da 5'UTR de um gene TOP conforme descrito no presente documento. Por outras palavras, um trecho de 3 ou mais nucleotídeos de pirimidina que não está localizado na extremidade 5' de uma 5'-UTR ou de um elemento 5'-UTR mas em qualquer local dentro de uma 5'-UTR ou elemento de 5'-UTR preferencialmente não é referido como motivo TOP.
[0072] gene TOP: Os genes TOP são tipicamente caracterizados pela presença de um trato de oligopirimidina 5'-terminal. Além disso, a maioria dos genes TOP é caracterizada por uma regulação translacional associada com o crescimento. No entanto, também são conhecidos genes TOP com uma regulação translacional específica do tecido. Conforme definido acima, a 5'-UTR de um gene TOP corresponde à sequência de uma 5'-UTR de um mRNA maduro derivado de um gene TOP, que se prolonga preferencialmente desde o nucleotídeo localizado a 3' para o 5'-GAP para o nucleotídeo localizado a 5' para o códon de iniciação. Uma 5'-UTR de um gene TOP tipicamente não compreende quaisquer códons de iniciação, de preferência sem AUGs a montante (uAUGs) ou quadros de leitura aberta a montante (uORFs). Desse modo, os AUGs a montante e os quadros de leitura aberta a montante são tipicamente entendidos como AUGs e quadros de leitura aberta que ocorrem a 5' do códon de iniciação (AUG) do quadro de leitura aberta que deve ser traduzido. As 5'-UTRs dos genes TOP são geralmente bastante curtas. Os comprimentos das 5'-UTRs dos genes TOP podem
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37/542 variar entre 20 nucleotídeos até 500 nucleotídeos, e são tipicamente inferiores a cerca de 200 nucleotídeos, de preferência inferiores a cerca de 150 nucleotídeos, mais preferencialmente inferiores a cerca de 100 nucleotídeos. Exemplos de 5'-UTRs de genes TOP no sentido da presente invenção são as sequências de ácido nucleico que se prolongam desde o nucleotídeo na posição 5 até ao nucleotídeo localizado imediatamente a 5' do códon de iniciação (por ex., o ATG) nas sequências de acordo com as SEQ ID. NOs: 1-1363, SEQ ID NO: 1395, SEQ ID NO: 1421 e SEQ ID NO: 1422 do pedido de patente internacional W02013/143700 ou homólogos ou variantes dos mesmos, cuja divulgação é incorporada no presente documento por referência. Nesse contexto, um fragmento particularmente preferido de uma 5'-UTR de um gene TOP é uma 5'-UTR de um gene TOP sem o motivo 5'-TOP. O termo 5'-UTR de um gene TOP se refere preferencialmente à 5'-UTR de um gene TOP que ocorre naturalmente.
[0073] Fragmento de uma sequência de ácido nucleico, particularmente um mRNA: Um fragmento de uma sequência de ácido nucleico consiste em um trecho contínuo de nucleotídeos correspondendo a um trecho contínuo de nucleotídeos na sequência de ácido nucleico de comprimento total que é a base para a sequência de ácido nucleico do fragmento, que representa pelo menos 20%, preferencialmente pelo menos 30%, mais preferencialmente pelo menos 40%, mais
preferencialmente pelo menos 50%, ainda mais
preferencialmente pelo menos 60%, ainda mais
preferencialmente pelo menos 70%, ainda mais
preferencialmente pelo menos 80%, e o mais
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38/542 preferencialmente pelo menos 90% da sequência de ácido nucleico de comprimento total. Um tal fragmento, no sentido da presente invenção, é de preferência um fragmento funcional da sequência de ácido nucleico de comprimento total.
[0074] Nesse contexto, um fragmento de uma sequência de ácido nucleico, por exemplo, um fragmento de uma sequência de mRNA, é de um modo preferido, uma sequência de ácido nucleico codificando um fragmento de uma proteína ou de uma variante da mesma, conforme descrito no presente documento. Mais preferencialmente, a expressão fragmento de uma sequência de ácido nucleico se refere a uma sequência de ácido nucleico possuindo uma identidade de sequência de pelo menos 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99%, preferencialmente de pelo menos 70%, mais preferencialmente de pelo menos 80%, ainda mais preferencialmente de pelo menos 85%, ainda mais preferencialmente de pelo menos 90% e o mais preferencialmente de pelo menos 95% ou mesmo 97%, com uma respectiva sequência de ácido nucleico de comprimento total.
[0075] Variante de uma sequência de ácido nucleico, particularmente um mRNA: Uma variante de uma sequência de ácido nucleico se refere a uma variante de sequências de ácido nucleico que forma a base de uma sequência de ácido nucleico. Por exemplo, uma sequência de ácido nucleico variante pode exibir uma ou mais deleções, inserções, adições e/ou substituições de nucleotídeos em comparação com a sequência de ácido nucleico a partir da
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39/542 qual a variante é derivada. De preferência, uma variante de uma sequência de ácido nucleico é pelo menos 40%, preferencialmente pelo menos 50%, mais preferencialmente pelo menos 60%, mais preferencialmente pelo menos 70%, ainda mais preferencialmente pelo menos 80%, ainda mais preferencialmente pelo menos 90%, o mais preferencialmente pelo menos 95% idêntica à sequência de ácido nucleico da qual a variante é derivada. De preferência, a variante é uma variante funcional. Uma variante de uma sequência de ácido nucleico pode ter pelo menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 99% de identidade de nucleotídeos ao longo de um trecho de 10, 20, 30, 50, 75 ou 100 nucleotídeos de tal sequência de ácido nucleico.
[0076] Ácido nucleico estabilizado, preferencialmente mRNA: Um ácido nucleico estabilizado, preferencialmente mRNA tipicamente, exibe uma modificação aumentando a resistência à degradação in vivo (por exemplo, degradação por uma exo- ou endo-nuclease) e/ou degradação ex vivo (por exemplo, através do processo de fabricação anterior à administração da vacina, por exemplo, no decurso da preparação da solução de vacina a ser administrada) . A estabilização do RNA pode, por exemplo, ser conseguida conferindo uma estrutura 5'-GAP, uma cauda Poli-A ou qualquer outra modificação da UTR. Isso também pode ser conseguido por modificação química ou modificação do teor em G/C do ácido nucleico. Vários outros métodos são conhecidos na técnica e são concebíveis no contexto da invenção.
[0077] Transcrição de RNA In vitro: Os termos transcrição de RNA in vitro ou transcrição in vitro se
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40/542 referem a um processo em que o RNA é sintetizado em um sistema isento de células (in vitro). 0 DNA, particularmente o DNA plasmidico, é usado como modelo para a geração de transcritos de RNA. O RNA pode ser obtido por transcrição in vitro dependente de DNA de um modelo de DNA apropriado, o qual, de acordo com a presente invenção é, preferencialmente, um modelo de DNA plasmidico linearizado. O promotor para controlar a transcrição in vitro pode ser qualquer promotor para qualquer polimerase de RNA dependente de DNA. Exemplos particulares de polimerases de RNA dependentes de DNA são as polimerases de RNA T7, T3 e SP6. Um modelo de DNA para transcrição de RNA in vitro pode ser obtido por clonagem de um ácido nucleico, em particular cDNA correspondente ao respectivo RNA a transcrito in vitro, e introduzindo-o em um vetor apropriado para transcrição in vitro, por exemplo em DNA plasmidico. Em uma modalidade preferida da presente invenção, o modelo de DNA é linearizado com uma enzima de restrição adequada, antes de ser transcrito in vitro. O cDNA pode ser obtido por transcrição reversa de mRNA ou síntese química. Além disso, o modelo de DNA para a síntese de RNA in vitro também pode ser obtido por síntese genética.
[0078] Métodos para a transcrição in vitro são conhecidos na técnica (ver, por exemplo, Geall et al. (2013) Semin. Immunol. 25(2) : 152-159; Brunelle et al. (2013) Methods Enzymol. 530:101-14) . Os reagentes usados no referido método incluem tipicamente:
1) um modelo de DNA linearizado com uma sequência promotora que tem uma elevada afinidade de ligação com a
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41/542 sua respectiva polimerase de RNA, tal como polimerases de RNA codificadas por bacteriófago;
2) trifosfatos de ribonucleosídeo (NTPs) para as quatro bases (adenina, citosina, guanina e uracila);
3) opcionalmente um análogo de GAP conforme definido acima (por exemplo, m7G(5') ppp(5')G (m7G) ) ;
4) uma polimerase de RNA dependente de DNA capaz de se ligar à sequência promotora dentro do modelo de DNA linearizado (por ex., polimerase de RNA de T7, T3 ou SP6);
5) opcionalmente um inibidor de ribonuclease (RNase) para inativar qualquer RNase contaminante;
6) opcionalmente uma pirofosfatase para degradar o pirofosfato, que pode inibir a transcrição;
7) MgC12, que fornece ions Mg2+ como um cofator para a polimerase;
8) um tampão para manter um valor de pH adequado, que também pode conter antioxidantes (por exemplo, DTT) e/ou poliaminas tais como a espermidina em concentrações ótimas.
[0079] Proteína de comprimento total: 0 termo proteína de comprimento total conforme usado no presente documento se refere tipicamente a uma proteína que compreende substancialmente a sequência de aminoácidos completa da proteína que ocorre naturalmente. No entanto, as substituições de aminoácidos, por exemplo, devido a mutação na proteína, também estão englobadas no termo proteína de comprimento total.
[0080] Fragmentos de proteínas: Fragmentos de proteínas ou peptídeos no contexto da presente invenção podem, tipicamente, compreender uma sequência de uma
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42/542 proteína ou peptideo conforme definido no presente documento, que é, em relação com a sua sequência de aminoácidos (ou a sua molécula de ácido nucleico codificada), N-terminalmente e/ou C-terminalmente truncada em comparação com a sequência de aminoácidos da proteína original (nativa) (ou a sua molécula de ácido nucleico codificada). Tal truncagem pode assim ocorrer quer ao nível dos aminoácidos, quer correspondendo com o nível dos ácidos nucleicos. Uma identidade de sequência em relação a um tal fragmento conforme definido no presente documento pode, portanto, se referir preferencialmente à totalidade da proteína ou peptideo conforme definido no presente documento ou à totalidade da molécula de ácido nucleico (de codificação) dessa proteína ou peptideo.
[0081: ] Neste contexto, um fragmento de uma
proteína pode tipicamente compreender uma sequência de
aminoácidos pos suindo uma identidade de sequência de pelo
menos 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99%, preferencialmente de pelo menos 70%, mais preferencialmente de pelo menos 80%, ainda mais preferencialmente de pelo menos 85%, ainda mais preferencialmente de pelo menos 90% e o mais preferencialmente de pelo menos 95% ou mesmo 97%, com uma sequência de aminoácidos da respectiva proteína de comprimento total de ocorrência natural.
[0082] Fragmentos de proteínas ou peptídeos no contexto da presente invenção podem ainda compreender uma sequência de uma proteína ou peptideo conforme definido no presente documento, que tem um comprimento de, por exemplo,
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43/542 pelo menos 5 aminoácidos, preferencialmente um comprimento de pelo menos 6 aminoácidos, preferencialmente de pelo menos 7 aminoácidos, mais preferencialmente de pelo menos 8
aminoácidos, ainda mais preferencialmente de pelo menos 9
aminoácidos ; ainda mais preferencialmente de pelo menos 10
aminoácidos ; ainda mais preferencialmente de pelo menos 11
aminoácidos ; ainda mais preferencialmente de pelo menos 12
aminoácidos ; ainda mais preferencialmente de pelo menos 13
aminoácidos ; ainda mais preferencialmente de pelo menos 14
aminoácidos ; ainda mais preferencialmente de pelo menos 15
aminoácidos ; ainda mais preferencialmente de pelo menos 16
aminoácidos ; ainda mais preferencialmente de pelo menos 17
aminoácidos ; ainda mais preferencialmente de pelo menos 18
aminoácidos ; ainda mais preferencialmente de pelo menos 19
aminoácidos ; ainda mais preferencialmente de pelo menos 20
aminoácidos ; ainda mais preferencialmente de pelo menos 25
aminoácidos ; ainda mais preferencialmente de pelo menos 30
aminoácidos ; ainda mais preferencialmente de pelo menos 35
aminoácidos ; ainda mais preferencialmente de pelo menos 50
aminoácidos ; ou o : mais preferencialmente de pelo menos 100
aminoácidos. Por exemplo, esse fragmento pode ter um
comprimento de cerca de 6 a cerca de 20 ( du ainda mais
aminoácidos, por ex., fragmentos como processados e
apresentados por moléculas de MHC de classe I, tendo
preferencialmente ' um comprimento de cerca de 8 a cerca de
10 aminoácidos, por ex. , 8, 9 ou 10 (ou mesmo 6, 7, 11 ou
12 aminoácidos), ou fragmentos como processados e
apresentados por molé cuias MHC de classe II tendo
preferencialmente um comprimento de cerca de 13 ou mais aminoácidos, por ex., 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 ou até
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44/542 mais aminoácidos, em que esses fragmentos podem ser selecionados a partir de qualquer parte da sequência de aminoácidos. Esses fragmentos são tipicamente reconhecidos por células T na forma de um complexo consistindo no fragmento peptídico e em uma molécula de MHC, isto é, os fragmentos não são tipicamente reconhecidos na sua forma nativa. Os fragmentos de proteínas ou de peptídeos podem compreender pelo menos um epítopo dessas proteínas ou peptídeos. Além disso, também os domínios de uma proteína, tal como o domínio extracelular, o domínio intracelular ou o domínio transmembranar e versões encurtadas ou truncadas de uma proteína podem ser entendidos como compreendendo um fragmento de uma proteína.
[0083] Variantes de proteínas: Variantes de proteínas ou peptídeos conforme definido no contexto da presente invenção podem ser gerados, tendo uma sequência de aminoácidos que difere da sequência original em uma ou mais mutações, tal como um ou mais aminoácido(s) substituído(s), inserido(s) e/ou deletado(s). De um modo preferido, esses fragmentos e/ou variantes têm a mesma função biológica ou atividade específica em comparação com a proteína nativa de comprimento total, por ex., a sua propriedade antigênica específica. Variantes de proteínas ou peptídeos conforme definido no contexto da presente invenção podem compreender substituição(ões) conservativa(s) de aminoácidos em comparação com a sua sequência fisiológica nativa, isto é não mutada. Essas sequências de aminoácidos, assim como as suas sequências nucleotídicas de codificação, em particular, abrangem o termo variantes conforme definido no presente documento. Substituições para as quais os
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45/542 aminoácidos, originários da mesma classe, são permutados uns pelos outros são denominadas de substituições conservativas. Em particular, esses são aminoácidos tendo cadeias laterais alifáticas, cadeias laterais carregadas positiva ou negativamente, grupos aromáticos nas cadeias laterais ou aminoácidos, cujas cadeias laterais podem entrar em pontes de hidrogênio, por ex., cadeias laterais que têm uma função hidroxila. Isso significa que, por exemplo, um aminoácido tendo uma cadeia lateral polar é substituído por outro aminoácido tendo uma cadeia lateral igualmente polar, ou, por exemplo, um aminoácido caracterizado por uma cadeia lateral hidrofóbica é substituído por outro aminoácido tendo uma cadeia lateral igualmente hidrofóbica (por exemplo, serina (treonina) por treonina (serina) ou leucina (isoleucina) por isoleucina (leucina)). As inserções e substituições são possíveis, em particular, naquelas posições de sequência que não causam modificação na estrutura tridimensional ou não afetam a região de ligação. Modificações em uma estrutura tridimensional por inserção(ões) ou deleção(ões) podem ser facilmente determinadas, por exemplo, usando espectros de CD (espectros de dicroísmo circular) (Urry, 1985, Absorption, Circular Dichroism and ORD of Polypeptides, em: Modern Physical Methods in Biochemistry, Neuberger et al. (ed.), Elsevier, Amesterdã).
[0084] Uma variante de uma proteína ou peptideo pode ter pelo menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 99% de identidade de aminoácidos ao longo de um trecho de 10, 20, 30, 50, 75 ou 100 aminoácidos de tal proteína ou peptideo.
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46/542 [0085]
Além disso, variantes de proteínas ou peptídeos conforme definidas no presente documento, que podem ser codificadas por uma molécula de ácido nucleico, também podem compreender aquelas sequências, em que os nucleotídeos da sequência de ácido nucleico de codificação são permutados de acordo com a degeneração do código genético, sem conduzir a uma alteração da respectiva sequência de aminoácidos da proteína ou peptídeo, isto é, a sequência de aminoácidos ou pelo menos parte da mesma pode não diferir da sequência original em uma ou mais mutações no sentido acima.
[0086]
Identidade de uma sequência: De modo a determinar a porcentagem para a qual duas sequências são idênticas, por ex., sequências de ácidos nucleicos ou sequências de aminoácidos conforme definido no presente documento, de preferência as sequências de aminoácidos codificadas por uma sequência de ácido nucleico do portador polimérico conforme definido no presente documento ou as próprias sequências de aminoácidos, as sequências podem ser alinhadas de modo a serem subsequentemente comparadas umas com as outras. Portanto, por exemplo, uma posição de uma primeira sequência pode ser comparada com a posição correspondente da segunda sequência. Se uma posição na primeira sequência é ocupada pelo mesmo componente (resíduo) como é o caso em uma posição na segunda sequência, as duas sequências são idênticas nessa posição. Se esse não for o caso, as sequências diferem nessa posição. Se ocorrerem inserções na segunda sequência em comparação com a primeira sequência, os intervalos podem ser inseridos na primeira sequência de modo a permitir um
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47/542 alinhamento adicional. Se ocorrerem deleções na segunda sequência em comparação com a primeira sequência, os intervalos podem ser inseridos na segunda sequência de modo a permitir um alinhamento adicional. A porcentagem à qual duas sequências são idênticas é então uma função do número de posições idênticas dividido pelo número total de posições incluindo aquelas posições que estão ocupadas apenas em uma sequência. A porcentagem na qual duas sequências são idênticas pode ser determinada usando um algoritmo matemático. Um exemplo preferido, mas não limitativo, de um algoritmo matemático que pode ser usado é o algoritmo de Karlin et al. (1993), PNAS EUA, 90: 58735877 ou Altschul et al. (1997), Nucleic Acids Res., 25: 3389-3402. Tal algoritmo é integrado no programa BLAST. Sequências que são idênticas às sequências da presente invenção até certo ponto podem ser identificadas por esse programa.
[0087] Derivado de uma proteína ou peptídeo: Um derivado de um peptídeo ou proteína é tipicamente entendido como sendo uma molécula que é derivada de outra molécula, tal como o referido peptídeo ou proteína. Um derivado de um peptídeo ou proteína também engloba fusões compreendendo um peptídeo ou proteína usado na presente invenção. Por exemplo, a fusão compreende uma etiqueta, tal como, por exemplo, um epítopo, por exemplo, um epítopo FLAG ou um epítopo V5. Por exemplo, o epítopo é um epítopo FLAG. Um tal marcador é útil para, por exemplo, purificar a proteína de fusão.
[0088] Quantidade farmaceuticamente eficaz: Uma quantidade farmaceuticamente eficaz no contexto da
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48/542 invenção é tipicamente entendida como sendo uma quantidade que é suficiente para induzir uma resposta imunitária.
[0089] Portador/portador polimérico: Um portador no contexto da invenção pode tipicamente ser um composto que facilita o transporte e/ou complexação de outro composto. O referido portador pode formar um complexo com o outro composto referido. Um portador polimérico é um portador que é formado por um polímero.
[0090] Veículo: Um agente, por exemplo, um
portador, que tipicamente pode ser usado dentro de uma
composição farmacêutica ou vacina para facilitar a
administração dos componentes da composição farmacêutica ou
vacina a um indivíduo.
[0091] Injeção a jato: O termo injeção a jato, conforme usado no presente documento, se refere a um método de injeção sem agulha, em que um fluido contendo pelo menos uma sequência de mRNA da invenção e, opcionalmente, excipientes adicionais adequados é forçado através de um orifício, gerando assim um fluxo líquido ultrafino de alta pressão que é capaz de penetrar na pele dos mamíferos e, dependendo das configurações da injeção, no tecido subcutâneo ou no tecido muscular. Em princípio, o fluxo líquido forma um buraco na pele, através do qual o fluxo líquido é empurrado para dentro do tecido alvo. De um modo preferido, a injeção a jato é usada para injeção intradérmica, subcutânea ou intramuscular da sequência de mRNA de acordo com a invenção. Em uma modalidade preferida, a injeção a jato é usada para injeção intramuscular da sequência de mRNA de acordo com a invenção. Em uma modalidade preferida adicional, a injeção a jato é usada
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49/542 para injeção intradérmica da sequência de mRNA de acordo com a invenção .
Descrição Detalhada da Invenção [0092] A presente invenção se baseia na descoberta surpreendente dos inventores de que o mRNA codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos compreendidos em nanopartícuias lipídicas (LNPs) induz respostas imunitárias específicas do antígeno muito eficazes contra o peptídeo ou proteína antigênicos codificados em uma dosagem muito baixa e regime de dosagem que não requer administração frequente.
[0093] As vantagens adicionais do mRNA da invenção codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos compreendidos em nanopartícuias lipídicas (LNP) são:
□ Indução de uma forte resposta imunitária
humoral
□ Indução de memória de células B
□ Início mais rápido da proteção imunitária
□ Longevidade das respostas imunitárias
induzidas
□ Indução de amplas respostas celulares de
células T
□ Indução de um ambiente pró-inflamatório
(local e transitório)
□ Ausência de indução de resposta sistêmica de
citocinas ou quimiocinas
□ Bem tolerado, sem efeitos colaterais, não
tóxico
□ Características de estabilidade vantajosa
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50/542 □ Formulação compatível com muitos antígenos diferentes: viabilidade dos coquetéis de antígeno maiores com base na mesma tecnologia (de produção) □ Sem imunidade de vetor, isto é, a tecnologia pode ser usada para vacinar o mesmo sujeito várias vezes contra múltiplos (diferentes) antígenos □ Velocidade, adaptabilidade, simplicidade e escalabilidade da produção [0094] Em particular, a invenção se refere a mRNA compreendendo nanopartículas lipídicas e uso do mesmo. De modo a serem adequadas para a presente invenção, as nanopartículas lipídicas compreendem pelo menos:
(i) um lipídeo catiônico e/ou um lipídeo PEG conforme definido abaixo; e (ii) um composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA codificando um peptídeo ou proteína antigênicos.
[0095] O mRNA compreendendo nanopartículas lipídicas pode compreender compostos adicionais, tais como um ou mais lipídeos neutros, esteroides e combinações dos referidos compostos. Compostos adequados serão descritos em detalhe abaixo.
[0096] O composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA codificando um peptídeo ou proteína antigênicos pode ser uma molécula de mRNA. Em uma modalidade da invenção, o composto de mRNA é um mRNA natural e não modificado. Dentro do contexto da presente invenção, o mRNA natural e não modificado engloba o mRNA gerado in vitro, sem modificações químicas ou alterações na sequência.
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51/542 [0097] Em uma modalidade alternativa da invenção, o composto de mRNA compreende um mRNA artificial. No contexto da presente invenção, o mRNA artificial engloba mRNA com modificações químicas, modificações de sequência ou sequências não naturais.
[0098] Em uma modalidade preferida da invenção, o composto de mRNA não compreende modificações de nucleosídeos, em particular sem modificações de base. Em uma modalidade adicional, o composto de mRNA não compreende modificações de 1-metilpseudouridina. Em uma modalidade preferida, o mRNA compreende apenas os nucleosídeos existentes naturalmente. Em uma modalidade preferida adicional, o composto de mRNA não compreende qualquer modificação química e, opcionalmente, compreende modificações da sequência. Em uma modalidade preferida da invenção adicional, o composto de mRNA compreende apenas os nucleosídeos naturalmente existentes, adenina, uracila, guanina e citosina.
[0099] De acordo com certas modalidades da presente invenção, a sequência de mRNA é mono-, bi- ou multicistrônica, preferencialmente conforme definido no presente documento. As sequências de codificação em um mRNA bi- ou multicistrônico codificam, preferencialmente, peptídeos ou proteínas distintos, conforme definido no presente documento, ou um fragmento ou variante dos mesmos. De preferência, as sequências de codificação codificando dois ou mais peptídeos ou proteínas podem ser separadas no mRNA bi- ou multicistrônico por pelo menos uma sequência IRES (local de entrada ribossomal interna), conforme definido abaixo. Desse modo, o termo codificando dois ou
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52/542 mais peptídeos ou proteínas pode significar, sem estar limitado por isso, que o mRNA bi- ou mesmo multicistrônico, pode codificar, por exemplo, pelo menos dois, três, quatro, cinco, seis ou mais (de preferência diferentes) peptídeos ou proteínas ou os seus fragmentos ou variantes dentro das definições conferidas no presente documento. Mais preferencialmente, sem estar limitado a esses, o mRNA biou mesmo multicistrônico, pode codificar, por exemplo, pelo menos dois, três, quatro, cinco, seis ou mais (de preferência diferentes) peptídeos ou proteínas conforme definido no presente documento ou os seus fragmentos ou variantes conforme definido no presente documento. Nesse contexto, uma sequência denominada de IRES (local de entrada ribossomal interna) conforme definido acima pode funcionar como um único local de ligação ao ribossoma, mas também pode servir para conferir um mRNA bi- ou mesmo multicistrônico conforme definido acima, que codifica vários peptídeos ou proteínas que devem ser traduzidos pelos ribossomas independentemente uns dos outros. Exemplos de sequências IRES, que podem ser usadas de acordo com a invenção, são as de picornavírus (por ex. EMDV), pestivírus (CFFV), poliovirus (PV), vírus da encefalomiocardite (ECMV), vírus da febre aftosa (EMDV), vírus da hepatite C (HCV), vírus da peste suína clássica (CSFV), vírus do leucoma do camundongo (MLV), vírus da imunodeficiência símia (SIV) ou vírus da paralisação por críquete (CrPV).
[0100] De acordo com uma modalidade adicional a pelo menos uma região de codificação da sequência de mRNA de acordo com a invenção pode codificar pelo menos dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito e mais peptídeos ou
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53/542 proteínas (ou fragmentos e derivados dos mesmos) conforme definido no presente documento ligado com ou sem uma sequência ligante de aminoácido, em que a referida sequência ligante pode compreender ligantes rígidos, ligantes flexíveis, ligantes cliváveis (por exemplo, peptídeos de autoclivagem) ou uma combinação dos mesmos.
Aí, os peptídeos ou proteínas podem ser idênticos ou diferentes ou uma combinação dos mesmos. Combinações de peptídeo ou proteína particulares podem ser codificadas pelo referido mRNA codificando pelo menos dois peptídeos ou proteínas conforme explicado no presente documento (também referido no presente documento como constructos multiantígeno/mRNA).
[0101] Em um aspecto particular da invenção, as nanoparticulas lipidicas compreendem um composto de mRNA, compreendendo uma sequência de mRNA codificando um peptídeo ou proteína antigênicos, ou um fragmento, variante ou derivado do mesmo.
[0102] Esses peptídeos ou proteínas antigênicos podem ser derivados a partir de antigenos patogênicos, antigenos tumorais, antigenos alergênicos ou autoantígenos autoimunes, preferencialmente conforme definido no presente documento. No contexto da presente invenção, os peptídeos ou proteínas antigênicos, preferencialmente, excluem as luciferases.
Antigenos patogênicos:
[0103] Tais antigenos patogênicos são derivados a partir de organismos patogênicos, em particular organismos patogênicos bacterianos, virais ou protozoológicos (multicelulares) , que evocam uma reação
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54/542 imunitária no sujeito, em particular um sujeito mamífero, mais particularmente um ser humano. Mais especificamente, os antígenos patogênicos são preferencialmente antígenos de superfície, por exemplo, proteínas (ou fragmentos de proteínas, por ex., a porção exterior de um antígeno de superfície) localizados na superfície do organismo viral ou bacteriano ou protozoológico.
[0104] Antígenos patogênicos são antígenos peptídicos ou proteicos preferencialmente derivados a partir de um patógeno associado com doença infecciosa que são preferencialmente selecionados a partir de antígenos derivados dos patógenos Acinetobacter baumannii, gênero Anaplasma, Anaplasma phagocytophilum, Ancylostoma braziliense, Ancylostoma duodenale, Arcanobacterium haemolyticum, Ascaris lumbricoides, gênero Aspergillus, Astroviridae, gênero Babesia, Bacillus anthracis, Bacillus cereus, Bartonella henselae, vírus BK, Blastocystis hominis, Blastomyces dermatitidis, Bordetella pertússis, Borrelia burgdorferi, gênero Borrelia, Borrelia spp, gênero Brucella, Brugia malayi, família Bunyaviridae, Burkholderia cepacia e outras espécies Burkholderia, Burkholderia mallei, Burkholderia pseudomallei, família Caliciviridae, gênero Campylobacter, Candida albicans, Candida spp, Chlamydia trachomatis, Chlamydophila pneumoniae, Chlamydophila psittaci, prion CJD, Clonorchis sinensis, Clostridium botulinum, Clostridium difficile, Clostridium perfringens, Clostridium perfringens, Clostridium spp, Clostridium tetani, Coccidioides spp, coronavirus, Corynebacterium diphtheriae, Coxiella burnetii, virus da febre hemorrágica da Crimeia-Congo, Cryptococcus
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55/542 neoformans, gênero Cryptosporidium, Citomegalovírus (CMV), virus da Dengue (DEN-1, DEN-2, DEN-3 e DEN-4), Dientamoeba fragilis, virus do Ebola (EBOV), gênero Echinococcus, Ehrlichia chaffeensis, Ehrlichia ewingii, gênero Ehrlichia, Entamoeba histolytica, gênero Enterococcus, gênero Enterovirus, Enterovirus, principalmente virus Coxsackie A e Enterovirus 71 (EV71), Epidermophyton spp, virus de Epstein-Barr (EBV), Escherichia coll 0157:H7, 0111 e 0104:H4, Fasciola hepatica e Fasciola gigantica, prion FFI, superfamilia de Filarioidea, Flavivirus, Francisella tularensis, gênero Fusobacterium, Geotrichum candidum, Giardia intestinalis, Gnathostoma spp, prion GSS, virus Guanarito, Haemophilus ducreyi, Haemophilus influenzae, Helicobacter pylori, Henipavirus (virus Hendra, virus Nipah), virus da hepatite A, virus da hepatite B (VHB), Virus da Hepatite C (HCV), Virus da Hepatite D, Virus da Hepatite E, Virus Herpes simplex 1 e 2 (HSV-1 e HSV-2), Histoplasma capsulatum, HIV (virus da imunodeficiência humana), Hortaea werneckii, Bocavírus humano (HBoV), virus do herpes humano 6 (HHV-6) e virus do herpes humano 7 (HHV7), metapneumovirus humano (hMPV), virus do papiloma humano (HPV), virus parainfluenza humano (HPIV), virus da encefalite japonesa, vírus JC, virus Junin, Kingella kingae, Klebsiella granulomatis, prion de Kuru, virus de Lassa, Legionella pneumophila, gênero Leishmania, gênero Leptospira, Listeria monocytogenes, virus da coriomeningite linfocitica (LCMV), virus Machupo, Malassezia spp, virus Marburg, virus do sarampo, Metagonimus yokagawai, Microsporidia phylum, virus do Molluscum contagiosum (MCV), vírus da caxumba, Mycobacterium leprae e Mycobacterium
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56/542 lepromatosis, Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium ulcerans, Mycoplasma pneumoniae, Naegleria fowleri, Necator americanus, Neisseria gonorrhoeae, Neisseria meningitidis, Nocardia asteroides, Nocardia spp., Onchocerca volvulus, Orientia tsutsugamushi, família Orthomyxoviridae (Influenza), Paracoccidioides brasiliensis, Paragonimus spp, Paragonimus westermani, Parvovirus B19, gênero Pasteurella, gênero Plasmodium, Pneumocystis jirovecii, Poliovirus, vírus da Raiva, vírus Respiratório Sincicial (RSV), Rinovirus, rinoviroses, Rickettsia akari, gênero Rickettsia, Rickettsia prowazekii, Rickettsia rickettsii, Rickettsia typhi, vírus da febre Rift Valley, Rotavirus, virus da Rubeola, vírus Sabia, gênero Salmonella, Sarcoptes scabiei, coronavirus SARS, gênero Schistosoma, gênero Shigella, vírus sem nome, Hantavirus, Sporothrix schenckii, gênero Staphylococcus, gênero Staphylococcus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes, Strongyloides stercoralis, gênero Taenia, Taenia solium, vírus da encefalite da carraça (TBEV), Toxocara canis ou Toxocara cati, Toxoplasma gondii, Treponema pallidum, Trichinella spiralis, Trichomonas vaginalis, Trichophyton, spp, Trichuris trichiura, Trypanosoma brucei, Trypanosoma cruzi, Ureaplasma urealyticum, virus da Varicela-zoster (VZV), vírus da Varicela-zoster (VZV), Varíola maior ou Varíola menor, prion vCJD, virus da encefalite equina venezuelana, Vibrio cholerae, virus do Nilo Ocidental, virus da encefalite equina ocidental, Wuchereria bancrofti, vírus da febre amarela, Yersinia enterocolitica, Yersinia pestis e Yersinia pseudotuberculosis .
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57/542 [0105] Nesse contexto, são particularmente preferidos os antígenos dos patógenos selecionados a partir do vírus Influenza, vírus respiratório sincicial (RSV), vírus Herpes simplex (HSV), vírus do papiloma humano (HPV), vírus da imunodeficiência humana (HIV), Plasmodium, Staphylococcus aureus, vírus da dengue, Chlamydia trachomatis, Citomegalovírus (CMV), virus da Hepatite B (HBV), Mycobacterium tuberculosis, vírus da raiva e virus da febre amarela.
[0106] Além disso, o antígeno patogênico (antígeno derivado a partir de um patógeno associado com a doença infecciosa) pode ser preferencialmente selecionado a partir dos seguintes antígenos: Proteína da membrana externa A OmpA, proteína Bap associada a biofilme, proteína portadora MucK (Acinetobacter baumannii, infecções por Acinetobacter)); glicoproteína VSG de superfície variável, proteína MAPP15 associada a microtúbulos, TSA transsialidase (Trypanosoma brucei, doença do sono africano (African trypanosomiasis)); antígeno p24 do HIV, proteínas de invólucro do HIV (Gpl20, Gp41, Gpl60), poliproteína GAG, proteína Nef de fator negativo, trans-ativador da transcrição Tat (HIV (Vírus da imunodeficiência humana), AIDS (síndrome da imunodeficiência adquirida)); proteína de aderência inibível por galactose GIAP, antígeno 29 kDa Eh29, lectina Gal/GalNAc, proteína CRT, antígeno imunodominante 125 kDa, proteína M17, adesina ADH112, proteína STIRP (Entamoeba histolytica, Amioebiase) ; Proteínas de superfície principais 1-5 (MSPla, MSPlb, MSP2, MSP3, MSP4, MSP5), proteínas do sistema de secreção do tipo IV (VirB2, VirB7, VirBll, VirD4) (gênero Anaplasma,
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Anaplasmose); antigeno de proteção PA, fator de edema EF, fator letal LF, proteínas de homologia da camada S - SLH (Bacillus anthracis, Anthrax); acranolisina, fosfolipase D, proteína de ligação ao colágeno CbpA (Arcanobacterium haemolyticum, infecção por Arcanobacterium haemolyticum); proteína nucleocapsídeo NP, precursor da glicoproteina GPC, glicoproteina GP1, glicoproteina GP2 (virus Junin, febre hemorrágica argentina); proteínas da camada de quitinaproteína, antigeno de superfície A14 de 14 kDa, proteína de esperma principal MSP, proteína de organização de polimerização de MSP - MPOP, proteína de fibra de MSP - 2 MFP2, guinase ativadora de polimerização de MSP - MPAK, proteína ALB tipo ABA-1, proteína ABA-1, cuticulina CUT-1 (Ascaris lumbricoides, Ascariase); alérgeno de 41 kDa - Asp vl3, alérgeno Asp f3, rodela de proteína de superfície conidial principal A, proteinase Peplp, proteína ancorada a GPI Gellp, proteína ancorada a GPI Crflp (gênero Aspergillus, Aspergilose); proteína da família VP26, proteína VP29 (Astroviridae, infecção por Astrovirus); proteína associada com Roptria 1 RAP-1, antígenos de superfície de merozoítos MSA-1, MSA-2 (al, a2, b, c), 12D3, 11C5, 21B4, P29, antigeno de superfície de eritrócitos variante VESA1, Antigeno de Membrana Apical 1 AMA-1 (gênero Babesia, Babesiose); hemolisina, enterotoxina C, PXO1-51, glicolato oxidase, portador ABC, proteína de ligação a penicilina, proteína da família portadora de zinco, pseudouridina sintase RSU, proteína replicadora do plasmídeo RepX, oligoendopeptidase F, proteína da membrana do profago, proteína HemK, antigeno flagelar H, antigeno da superfície celular de 28,5-kDa (Bacillus cereus, infecção
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59/542 por Bacillus cereus); antígeno T grande LT, antígeno T pequeno, proteína capsídica VP1, proteína capsídica VP2 (vírus BK, infecção por vírus BK); Proteína 29 kDa, antígenos tipo caspase-3, glicoproteínas (Blastocystis hominis, infecção por Blastocystis hominis); adesina de superfície de levedura WI-1 (Blastomyces dermatitidis, Blastomicose); nucleoproteína N, polimerase L, proteína de matriz Z, glicoproteína GP (vírus Machupo, febre hemorrágica boliviana); proteína de superfície externa A OspA, proteína de superfície externa OspB, proteína de superfície externa OspC, proteína de ligação a decorina A DbpA, proteína de ligação a decorina B DbpB, proteína de núcleo Fia do filamento flagelar 41 kDa, precursor de proteína da membrana básica A BmpA (antígeno imunodominante P39) , precursor da lipoproteína de 22 kDa da superfície externa (antígeno IPLA7), lipoproteína de superfície variável vlsE (gênero Borrelia, infecção por Borrelia); neurotoxinas Botulinum BoNT/Al, BoNT/A2, BoNT/A3, BoNT/B, BoNT/C, BoNT/D, BoNT/E, BoNT/F, BoNT/G, domínio F Hc de toxina botulínica recombinante FHc (Clostridium botulinum, Botulismo (e botulismo infantil)); nucleocapsídeo, precursor da glicoproteína (vírus Sabia, febre hemorrágica brasileira); dismutase superoxida de cobre/zinco SodC, bacterioferritina Bfr, proteína ribossomal 50S RplL, proteína contendo o domínio transmembrana tipo OmpA 0mp31, proteína imunogênica de 39 kDa - M5 P39, proteína de ligação a zinco periplasmática portador de zinco ABC znuA, proteína imunogênica periplasmática Bp26, proteína ribossomal 30S - S12 RpsL, gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase Gap, precursor da proteína imunogênica de
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60/542 membrana externa de 25 kDa - Omp25, proteína invasora B lalB, fator desencadeante Tig, chaperona molecular DnaK, peptidil-prolil cis-trans isomerase putativa SurA, lipoproteína 0mpl9, proteína da membrana externa MOtY 0mpl6, proteína da membrana externa conservada D15, malato desidrogenase Mdh, componente do sistema de secreção Tipo IV (T4SS) VirJ, lipoproteína de função desconhecida BAB1_O187 (gênero Brucella, Brucelose); membros da família portadora ABC (LolC, OppA e PotF), proteína transmembranar do sistema de liberação de lipoproteína putativa LolC/E, flagelina FliC, motilidade intracelular de Burkholderia A BimA, fator de alongamento bacteriano-Tu - EF-Tu, proteína do tipo OmpA de 17 kDa, proteína de codificação de boaA, proteína de codificação de boaB (Burkholderia cepacia e outras espécies de Burkholderia, infecção por Burkholderia); micolil-transferase Ag85A, proteína de choque térmico Hsp65, proteína TB10.4, antígeno de 19 kDa, proteína PstS3, proteína de choque térmico Hsp70 (Mycobacterium ulcerans, úlcera de Buruli); proteínas do capsídeo viral do norovirus maior e menor VP1 e VP2, poliproteína do genoma, proteína do capsídeo de Sapoviurus VP1, proteína Vp3, poliproteína do geoma (família Caliciviridae, infecção por Calicivirus (Norovirus e Sapovirus)); proteína da membrana externa principal PorA, flagelina FlaA, antígeno de superfície CjaA, proteína de ligação a fibronectina CadF, proteína portadora de ABC de ligação a aspartato/glutamato PeblA, proteína FspAl, proteína FspA2 (gênero Campylobacter, Campilobacteriose); enzima glicolítica enolase, aspartil proteinases secretadas SAP1-10, proteína da parede celular ligada a
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61/542 glicofosfatidilinositol (GPI), proteína Hyrl, proteína relacionada com o complemento do receptor 3 - CR3-RP, adesina Als3p, proteína de choque térmico de 90 kDa hsp90, proteína de hidrofobicidade da superfície celular CSH (geralmente Candida albicans e outras espécies de Candida, Candidiase); Antígeno 17-kDa, proteína P26, adesinas triméricas autoportadoras TAAs, adesina Bartonella A BadA, proteínas da membrana externa variavelmente expressas Vomps, proteína Pap3, proteína HbpA, proteinase associada com o invólucro HtrA, proteína OMP89, proteína GroEL, proteína LalB, proteína OMP43, succiniltransferase de di-hidrolipoamida SucB (Bartonella henselae, doença do arranhão do gato); proteína de superfície amastigota-2, proteína de superfície específica de amastigota SSP4, cruzipaina, trans-sialidase TS, glicoproteina de superfície tripomastigota TSA-1, proteína reguladora do complemento CRP-10, proteína G4, proteína G2, proteína do bastão paroxonemal PAR2, componente paraflagelar Pari, proteínas de superfície associadas com mucina MPSP (Trypanosoma cruzi, Doença de Chagas (tripanossomíase americana)); glicoproteínas de invólucro (gB, gC, gE, gH, gl, gK, gL) (vírus Varicela-zóster (VZV), varicela); proteína da membrana externa principal MOMP, proteína da membrana externa provável PMPC, proteína do complexo de membrana externa B OmcB, proteínas de choque térmico Hsp60 HSP10, proteína IncA, proteínas do sistema de secreção tipo III, proteína de cadeia pequena ribonucleotídeo redutase NrdB, proteína plasmídica Pgp3, proteína externa de clamídia N CopN, antígeno CT521, antígeno CT425, antígeno CT043, antígeno TC0052, antígeno TC0189, antígeno TC0582, antígeno
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TC0660, antígeno TC0726, antígeno TC0816, antígeno TC0828 (Chlamydia trachomatis, Clamídia); proteína de baixa resposta de cálcio E LCrE, proteína externa de clamídia N CopN, proteína quinase de serina/treonina PknD, proteína portadora de acila S-maloniltransferase FabD, proteína de ligação de DNA de cadeia simples Ssb, proteína da membrana externa principal MOMP, proteína da membrana externa 2 0mp2, família de proteínas de membrana polimórfica (Pmpl, Pmp2, Pmp3, Pmp4, Pmp5, Pmp6, Pmp7, Pmp8, Pmp9, PmplO, Pmp11, Pmp12, Pmp13, Pmp14, Pmp15, Pmp16, Pmp17, Pmp18, Pmpl9, Pmp20, Pmp21) (Chlamydophila pneumoniae, infecção por Chlamydophila pneumoniae); toxina B da cólera CTB, pilina corregulada por toxina TcpA, pilina corregulada por toxina TcpF, proteína biossíntese de pilus F corregulada por toxina TcpF, subunidade A da enterotoxina da cólera, subunidade B da enterotoxina da cólera, enterotoxina ST estável ao calor, hemaglutinina sensível à manose MSHA, proteína da membrana externa U Porin ompU, proteína Poring B, proteína da membrana polimórfica D (Vibrio cholerae, Cólera); propionil-CoA carboxilase PCC, proteína 14-3-3, proibitina, proteinases de cisteína, glutationa transferases, gelsolina, catepsina L proteinase CatL, Proteína Tegumental de 20,8 kDa TP20.8, proteína tegumentar de 31,8 kDa TP31.8, fosfatase ácida lisofosfatídica LPAP, (Clonorchis sinensis, Clonorquiase); proteínas da camada superficial SLPs, antígeno de desidrogenase de glutamato GDH, toxina A, toxina B, proteinase de cisteína Cwp84, proteinase de cisteína Cwpl3, proteinase de cisteína Cwpl9, proteína da parede celular CwpV, proteína flagelar FliC, proteína flagelar FliD (Clostridium difficile, infecção por
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Clostridium difficile); rinovírus: proteínas do capsideo VP1, VP2, VP3, VP4; coronavirus: proteínas S, proteínas de invólucro E, proteínas de membrana M, proteínas de nucleocapsideo N (geralmente rinovírus e coronavirus), resfriado comum (rinofaringite viral aguda, coriza aguda)); proteína prion Prp (prion CJD, doença de Creutzfeldt-Jakob (CJD)); proteína de invólucro Gc, proteína de invólucro Gn, proteínas de nucleocapsideo (vírus da febre hemorrágica da Crimeia-Congo, febre hemorrágica da Crimeia-Congo (CCHF)); helicase de RNA de DEAD-caixa associada a virulência VAD1, galactoxilomanana-proteína GalXM, glucuronoxilomanana GXM, manoproteina MP (Cryptococcus neoformans, Criptococose) ; proteína ribossomal ácida P2 CpP2, antigenos de mucina Mucl, Muc2, Muc3, Muc4, Muc5, Muc6, Muc7, proteína de
aderência de superfície CP20, proteína de superfície CP23,
proteína de superfície CP12, proteína de superfície CP21,
proteína de superfície CP40, proteína de superfície CP60,
proteína de superfície CP15, glicopeptídeos gp40 associados com a superfície, glicopeptídeos gpl5 associados com a superfície, proteína da parede do oocisto AB, profilina PRF, apirase (gênero Cryptosporidium, Criptosporidiose); ácido graxo e proteína de ligação de retinol-1 FAR-1, inibidor do tecido da metaloproteinase TIMP (TMP), proteinase cisteína ACEY-1, proteinase cisteína ACCP-1, antígeno de superfície Ac-16, proteína secretada 2 ASP-2, metaloproteinase 1 MTP-1, inibidor da aspartil-proteinase API-1, antígeno associado à superfície SAA-1, anticoagulante inibidor da serina proteinase secretada pelo fator Xa específico para adultos AP, proteinase aspártica tipo catepsina D - ARR-1 (geralmente Ancylostoma
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64/542 braziliense; vários outros parasitas, larva migrans cutânea (CLM) ) ; proteinases tipo catepsina L, antígeno de 53/25kDa, membros da família de 8kDa, proteína cisticercose com uma atividade tipo tripsina marginal TsAg5, proteína oncosfera TSOL18, proteína oncosfera TSOL45-1A, lactato desidrogenase A LDHA, lactato desidrogenase B LDHB (Taenia solium, Cisticercose); antígeno pp65, proteína da membrana ppl5, proteína de tegumento proximal do capsídeo ppl50, proteína M45, DNA polimerase UL54, helicase UL105, glicoproteína gM, glicoproteína gN, glicoproteína H, glicoproteína B - gB, proteína UL83, proteína UL94, proteína UL99 (Citomegalovírus (CMV), Infecção por citomegalovírus); proteína C do capsídeo, proteína da prémembrana prM, proteína M da membrana, proteína do invólucro E (domínio I, domínio II, domínio II), proteína NS1, proteína NS2A, proteína NS2B, proteína NS3, proteína NS4A, proteína 2K, proteína NS4B, proteína NS5 (Vírus da dengue (DEN-1, DEN-2, DEN-3 e DEN-4)-Flavivírus, febre da dengue); proteína de 39 kDa (Dientamoeba fragilis, Dientamoebiasis); toxina da difteria precursora Tox, toxina da difteria DT, sortase específica para pilina SrtA, proteína de pilina de eixo SpaA, proteína de pilina de ponta SpaC, proteína de pilina menor SpaB, proteína associada com a superfície DIP1281 (Corynebacterium diphtheriae, Difteria); glicoproteína GP, nucleoproteína NP, proteína de matriz secundária VP24, proteína de matriz principal VP40, ativador de transcrição VP30, cofator de polimerase VP35, RNA polimerase L (Vírus da ebola (EBOV), febre hemorrágica de Ebola); proteína prion (príon de vCJD, variante da doença de Creutzfeldt-Jakob (vCJD, nvCJD)); proteína B do
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65/542 sistema UvrABC, proteína Flpl, proteína Flp2, proteína Flp3, proteína TadA, receptor de hemoglobina HgbA, proteína da membrana externa TdhA, proteína CpsRA, regulador CpxR, proteína SapA, antígeno de 18 kDa, proteína da membrana externa NcaA, proteína LspA, proteína LspAl, proteína LspA2, proteína LspB, componente da membrana externa DsrA, lectina DltA, lipoproteína Hlp, proteína principal da membrana externa OMP, proteína da membrana externa 0mpA2 (Haemophilus ducreyi, cancroide); aspartil-proteinase 1 Pepl, fosfolipase B PLB, alfa-manosidase 1 ΆΜΝ1, glucanosiltransferase GEL1, urease URE, proteína de matriz peroxissômica Pmpl, antígeno rico em prolina Pra, proteína reativa de células T humanas TcrP (Coccidioides immitis e Coccidioides posadasii, Cocidioidomicose); alérgeno Tri r 2, proteína de choque térmico 60 Hsp60, actina fúngica Act, antígeno Tri r2, antígeno Tri r4, antígeno Tri tl, proteína IV, glicerol-3-fosfato desidrogenase Gpdl, osmossensor HwSholA, osmossensor HwSholB, histidina quinase HwHhkVB, alérgeno Mala s 1, alérgeno Mala s 11, tiorredoxina Trx Mala s 13, alérgeno Mala f, alérgeno Mala s (usualmente Trichophyton spp, Epidermophyton spp., Malassezia spp., Hortaea werneckii, Dermatofitose); proteína EG95, proteína EG10, proteína EG18, proteína EgA31, proteína EM18, antígeno EPC1, antígeno B, antígeno 5, proteína P29, proteína 14-3-3, proteína 8-kDa, miofilina, proteína de choque térmico 20 HSP20, glicoproteína GP-89, proteína de ligação a ácidos graxos FAPB (gênero Echinococcus, Echinococcosis); proteína de superfície principal 2 MSP2, proteína de superfície principal 4 MSP4, variante de MSP SGV1, variante de MSP - SGV2, proteína da membrana externa
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OMP, proteína da membrana externa 19 OMP-19, proteína antigênica principal MAPI, proteína antigênica principal MAPI-2, proteína antigênica principal MAP1B, proteína antigênica principal MAPI-3, proteína de codificação de Erum2510, proteína GroEL, proteína GroES, proteínas da membrana externa principais de 30 kDa, proteína GE de 100kDa, proteína GE de 130-kDa, proteína GE de 160-kDa (gênero Ehrlichia, Erliquiose); antígeno secretado SagA, proteínas tipo sagA - SalA e SalB, adesina colágena Sem, proteínas de superfície Fmsl (EbpA (fm), Fms5 (EbpB (fm), Fms9 (EpbC (fm) e FmslO, proteína EbpC (fm), glicoproteina imunoprotetora de 96 kDa G1 (gênero Enterococcus, infecção por Enterococcus), poliproteina do genoma, polimerase 3D, proteína do capsideo viral VP1, proteína do capsideo viral VP2, proteína do capsideo viral VP3, proteína do capsideo viral VP4, proteinase 2A, proteinase 3C (gênero Enterovirus, infecção por Enterovirus); proteínas de membrana externa OM, proteína da membrana externa de 60 kDa, antígeno da superfície celular OmpA, antígeno da superfície celular OmpB (sca5), proteína da membrana externa de 134 kDa, proteína da membrana externa de 31 kDa, proteína da membrana externa de 29,5 kDa, proteína da superfície celular SCA4, proteína da superfície celular Adri (RP827), proteína da superfície celular Adr2 (RP828), proteína da superfície celular SCA1, proteína de invasão invA, proteína de divisão celular fts, proteínas de secreção da família see, proteínas de virulência virB, tlyA, tlyC, proteína tipo parvulina Plp, translotase préproteína SecA, antígeno da proteína de superfície de 120kDa SPA, antígeno complexo de 138 kD, proteína principal de
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100-kD (proteína I), proteína intracitoplasmática D, antígeno da proteína de superfície protetora SPA (Rickettsia prowazekii, tifo epidêmico); Antígenos nucleares de Epstein-Barr (EBNA-1, EBNA-2, EBNA-3A, EBNA3B, EBNA-3C, proteína líder EBNA (EBNA-LP)), proteínas de membrana latente (LMP-1, LMP-2A, LMP-2B), antígeno precoce EBV-EA, antígeno de membranar EBV-MA, antígeno do capsídeo viral EBV-VCA, nuclease alcalina EBV-AN, glicoproteína H, glicoproteína gp350, glicoproteína gpllO, glicoproteína gp42, glicoproteína gHgL, glicoproteína gB (Vírus de Epstein-Barr (EBV), Mononucleose Infecciosa do Vírus de Epstein-Barr); proteína do capsídeo VP2, proteína do capsídeo VP1, proteína principal NS1 (Parvovirus B19, Eritema infeccioso (quinta doença)); antígeno pp65, glicoproteína 105, proteína do capsídeo principal, glicoproteína do invólucro H, proteína U51 (vírus do herpes humano 6 (HHV-6) e vírus do herpes humano 7 (HHV-7), Exanthem subitum); tiorredoxina-glutationa redutase TGR, catepsinas LI e L2, proteína tipo Kunitz KTM, leucina aminopeptidase LAP, proteinase de cisteína Fas2, proteína tipo saposina-2 - SAP-2, tiorredoxinoperoxidases TPx, Prx1, Prx-2, proteinase de cisteína de catepsina I CL3, catepsina proteinase L - CL1, fosfoglicerato quinase PGK, proteína secretora de 27 kDa, proteína HSP35alfa de 60 kDa, glutationa transferase GST, antígeno tegumentar de 28,5 kDa 28,5 kDa TA, proteinase de catepsina B3 - CatB3, cistatina stefin-1 tipo I, catepsina L5, catepsina Llg e catepsina B, proteína de ligação a ácidos graxos FABP, leucina aminopeptidases LAP (Fasciola hepatica e Fasciola gigantica, Fasciolose); proteína de prion (prion FFI,
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Insônia familiar fatal (FFI)); proteína tipo homóloga a alérgeno de veneno VAL-1, larval transcrito abundante ALT1, larval transcrito abundante ALT-2, tiorredoxina peroxidase TPX, homólogo a alérgeno de veneno VAH, tiorredoxina peroxidase 2 TPX-2, proteína antigênica SXP (peptídeos N, Nl, N2 e N3), proteína associada com ativação-1 - ASP-1, Tiorredoxina TRX, transglutaminase BmTGA, glutationa-S-transferases GST, miosina, homólogo a alérgeno de veneno VAH, colagenase de 175 kDa, gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase GAPDH, colágeno cuticular Col-4, proteínas acídicas larvares segregadas SLAPs, quitinase CHI-1, proteína de ligação à maltose MBP, enzima glicolítica frutose-1,6-bifosfato aldolase Fba, tropomiosina TMY-1, produto gênico específico para o nematódeo OvB20, oncocistatina CPI-2, Cox-2 (Superfamília de filarioidea, filariose); PLC de fosfolipase C, enterotoxina B instável ao calor, componente Ib da toxina lota, proteína CPE1281, piruvato ferredoxina oxidorredutase, fator de alongamento G EF-G, perfringolisina 0 Pfo, gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase GapC, Frutose-bifosfato aldolase Alf2, enterotoxina de Clostridium perfringens CPE, alfa-toxina AT, alfa toxoide ATd, epsilon-toxoide ETd, proteína HP, grande citotoxina TpeL, endo-beta-N-acetilglucosaminidase Naglu, fosfogliceromutase Pgm (Clostridium perfringens, intoxicação alimentar por Clostridium perfringens); leucotoxina IktA, adesão FadA, proteína da membrana externa RadD, proteína de ligação à arginina de elevado peso molecular (gênero Fusobacterium, infecção por Fusobacterium); fosfolipase C - PLC, enterotoxina B
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69/542 instável ao calor, componente da toxina lota Ib, proteína CPE1281, piruvato de ferredoxina oxidorredutase, fator de alongamento G EF-G, perfringolisina 0 Pfo, gliceraldeído-3fosfato desidrogenase GapC, frutose-bifosfato de aldolase Alf2, enterotoxina de Clostridium perfringens CPE, alfatoxina AT, alfa-toxoide ATd, epsilon-toxoide ETd, proteína HP, grande citotoxina TpeL, endo-beta-Nacetilglucosaminidase Naglu, fosfogliceromutase Pgm (geralmente Clostridium perfringens; outras espécies de Clostridium, gangrena Gas (Mionecrose clostrídica)); lipase A, lipase B, peroxidase Decl (Geotrichum candidum, Geotricose); proteína prion (prion GSS, síndrome de Gerstmann-Strãussler-Scheinker (GSS)); proteínas de parede cística CWP1, CWP2, CWP3, proteína de superfície variante VSP, VSP1, VSP2, VSP3, VSP4, VSP5, VSP6, antígeno de 56 kDa, piruvato ferredoxina oxidorredutase PFOR, álcool desidrogenase E ADHE, alfa-giardina, alfa8-giardina, alfalgiardina, beta-giardina, proteinases de cisteína, glutationa-S-transferase GST, arginina desiminase ADI, frutose-1,6-bifosfato aldolase FBA, antígenos de trofozoíto Giardia GTA (GTA1, GTA2), ornitina carboxilatransferase OCT, proteína tipo asseblina de fibras esfriadas SALP, proteína tipo uridinofosforila UPL, alfa-tubulina, betatubulina (Giardia intestinalis, Giardíase); membros da família portadora ABC (LolC, OppA e PotF), proteína transmembranar do sistema liberador de lipoproteína putativa LolC/E, flagelina FliC, motilidade intracelular de Burkholderia A BimA, fator de alongamento bacteriano-Tu EFTu, proteína tipo OmpA de 17 kDa, proteína de codificação boaA (Burkholderia mallei, Mormo); ciclofilina CyP,
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70/542 proteína de larvas de terceiro estágio de 24 kDa - GS24, produtos de secreção e excreção ESPs (40, 80, 120 e 208 kDa) (Gnathostoma spinigerum e Gnathostoma hispidum, Gnatostomiase); proteínas pilinas, subunidade associada com pilinas secundárias pilC, subunidade associada com a pilina principal e variantes pilE, pilS, proteína de variação de fase porA, Porina B PorB, proteína TraD, antígeno de membrana externa Neisserial H.8, antígeno de 70kDa, proteína da membrana externa PI, proteínas de membrana externa PIA e PIB, antígeno W, proteína de superfície A NspA, proteína de ligação à transferrina TbpA, proteína de ligação à transferrina TbpB, PBP2, proteína de codificação de mtrR, proteína de codificação ponA, permease de membrana FbpBC, sistema de proteína FbpABC, proteínas LbpAB, proteína da membrana externa Opa, portador de membrana FetA, regulador reprimido por ferro MpeR (Neisseria gonorrhoeae, Gonorreia); proteína da membrana externa A OmpA, proteína da membrana externa C OmpC, proteína da membrana externa K17 0mpK17 (Klebsiella granulomatis, Granuloma inguinal (Donovanose)); proteína de ligação a fibronectina Sfb, proteína de ligação a fibronectina/fibrinogênio FBP54, proteína de ligação a fibronectina FbaA, proteína M tipo 1 Emml, proteína M tipo 6 Emm6, proteína de ligação a imunoglobulina 35 Sib35, proteína de superfície R28 Spr28, superóxido dismutase SOD, peptidase C5a ScpA, antígeno I/II Agl/II, adesina AspA, proteína de ligação a alfa2-macroglobulina relacionada com G - GRAB, proteína fibrilar superficial M5 (Streptococcus pyogenes, infecção por estreptococos do Grupo A) ; Antígeno β da proteína C, proteínas arginina desiminase, adesina
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BibA, proteína BPS de 105 kDA, antígenos de superfície c, antígenos de superfície R, antígenos de superfície X, proteína resistente à tripsina Rl, proteína resistente à tripsina R3, proteína resistente à tripsina R4, proteína imunogênica de superfície Sip, proteína de superfície Rib, proteína repetida rica em leucina LrrG, proteína repetida rica em serina Srr-2, alfa-antígeno de proteína C - Bca, antígeno Beta - Bag, antígeno de superfície Epsilon, proteína tipo alfa ALP1, antígeno de superfície da proteína tipo alfa ALP5 delta, proteína tipo alfa ALP2, proteína tipo alfa ALP3, proteína tipo alfa ALP4, proteína Cbeta Bac (Streptococcus agalactiae, infecção por estreptococos do Grupo B); proteína de ligação a transferrina 2 Tbp2, fosfatase P4, proteína da membrana externa P6, lipoproteína associada a peptídeoglicano Pai, proteína D, proteína E, proteína de aderência e de penetração Hap, proteína da membrana externa 26 Omp26, proteína da membrana externa P5 (Fimbrin), proteína da membrana externa D15, proteína da membrana externa 0mpP2, 5'-nucleotidase NucA, proteína da membrana externa Pl, proteína da membrana externa P2, lipoproteína da membrana externa Pcp, lipoproteína E, proteína da membrana externa P4, fuculoquinase FucK, [Cu,Zn]-superóxido dismutase SodC, proteinase HtrA, proteína 0145, alfa-galactosilceramida (Haemophilus influenzae, infecção por Haemophilus influenzae); polimerase 3D, proteína do capsídeo viral VP1, proteína do capsídeo viral VP2, proteína do capsídeo viral VP3, proteína do capsídeo viral VP4, proteinase 2A, proteinase 3C (Enterovirus, principalmente vírus Coxsackie A e Enterovirus 71 (EV71), doença das mãos, pés e boca
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72/542 (HFMD))); RNA polimerase L, proteína L, glicoproteina Gn, glicoproteina Go, proteína de nucleocapsideo S, glicoproteina de invólucro Gl, nucleoproteina NP, proteína N, poliproteina M (vírus sem nome, Hantavirus, Sindrome Pulmonar de Hantavirus (HPS)); proteína de choque térmico HspA, proteína de choque térmico HspB, citrato sintase GltA, proteína UreB, proteína de choque térmico Hsp60, proteína ativadora de neutrófilos NAP, catalase KatA, citotoxina vacuolante VacA, urease alfa UreA, urease beta Ureb, proteína CpnlO, proteína groES proteína de choque térmico HsplO, proteína MopB, proteína de 10 kDa associada a citotoxicidade CAG, antigeno de 36 kDa, beta-lactamase HcpA, Beta-lactamase HcpB (Helicobacter pylori, infecção por Helicobacter pylori); proteínas de membrana integral, proteínas propensas à agregação, antigeno O, antigenos toxina Stx2B, antigeno toxina StxlB, fragmento de antigeno de adesão Int28, proteína EspA, proteína EspB, Intimina, proteína Tir, proteína IntC300, proteína Eae (Escherichia coll 0157:H7, 0111 e 0104:H4, síndrome hemolítico-urêmico (HUS)); RNA polimerase L, proteína L, glicoproteina Gn, glicoproteina Gc, proteína de nucleocapsideo S, glicoproteina de invólucro Gl, nucleoproteina NP, proteína N, poliproteina M (família Bunyaviridae, febre Hemorrágica com síndrome renal (HERS)); glicoproteina G, proteína de matriz M, nucleoproteina N, proteína de fusão F, polimerase L, proteína W, proteína C, fosfoproteína p, proteína não estrutural V (henipavírus (vírus Hendra, vírus Nipah), infecções por Henipavírus); poliproteina, glicoproteina Gp2, antigeno de superfície da hepatite A - HBAg, proteína 2A, proteína do vírus VP1, proteína do vírus VP2, proteína
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73/542 do virus VP3, proteína do vírus VP4, proteína PIB, proteína P2A, proteína P3AB, proteína P3D (Vírus da Hepatite A, Hepatite A); antígeno de superfície da Hepatite B - HBsAg, antígeno nuclear da Hepatite B HbcAg, polimerase, proteína Hbx, proteína de superfície intermediária preS2, proteína de superfície L, proteína S grande, proteína do vírus VP1, proteína do vírus VP2, proteína do vírus VP3, proteína do vírus VP4, (vírus da hepatite B (HBV), hepatite B); glicoproteína de invólucro El gp32 gp35, glicoproteína de invólucro E2 NS1 gp68 gp70, proteína C de capsídeo, proteína nuclear Core, poliproteína, proteína do vírus VP1, proteína do vírus VP2, proteína do vírus VP3, proteína do vírus VP4, antígeno G, proteína NS3, proteína NS5A, (Vírus da Hepatite C, Hepatite C); proteína do vírus VP1, proteína do vírus VP2, proteína do vírus VP3, proteína do vírus VP4, antígeno delta da hepatite grande, antígeno delta da hepatite pequena (Vírus da hepatite D, hepatite D); proteína do vírus VP1, proteína do vírus VP2, proteína do vírus VP3, proteína do vírus VP4, proteína do capsídeo E2 (Vírus da Hepatite E, Hepatite E) ; glicoproteína L UL1, DNA-glicosilase de uracila UL2, proteína UL3, proteína UL4, proteína de replicação de DNA UL5, proteína portal UL6, proteína de maturação de virion UL7, DNA helicase UL8, proteína de ligação à origem de replicação UL9, glicoproteína M UL10, proteína UL11, exonuclease alcalina UL12, proteína quinase de serina-treonina UL13, proteína de tegumento UL14, terminase UL15, proteína de tegumento UL16, proteína UL17, proteína de capsídeo VP23 UL18, proteína de capsídeo principal VP5 UL19, proteína da membrana UL20, proteína de tegumento UL21, Glicoproteína H (UL22),
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Timidina Quinase UL23, proteína UL24, proteína UL25, proteína de capsídeo P40 (UL26, VP24, VP22A), glicoproteína B (UL27), proteína ICP18.5 (UL28), proteína principal de ligação ao DNA ICP8 (UL29), DNA polimerase UL30, proteína da matriz nuclear UL31, glicoproteína de invólucro UL32, proteína UL33, proteína da membrana nuclear interna UL34, proteína de capsídeo VP26 (UL35), proteína do tegumento grande UL36, proteína da junção de capsídeo UL37, proteína VP19C (UL38), redutase do ribonucleotídeo (Subunidade grande) UL39, redutase do ribonucleotídeo (Subunidade pequena) UL40, proteína tegumentar/proteína encerramento do hospedeiro virion VHS (UL41), fator de processividade de DNA polimerase UL42, proteína da membrana UL43, glicoproteína C (UL44), proteína da membrana UL45, proteínas de tegumento VP11/12 (UL46), proteína de tegumento VP13/14 (UL47), proteína de maturação do virion VP16 (UL48, Alfa-TIF), proteína de invólucro UL49, dUTP difosfatase UL50, proteína de tegumento UL51, proteína do complexo de DNA helicase/primase UL52, glicoproteína K (UL53), proteína de regulação transcricional IE63 (ICP27, UL54), proteína UL55, proteína UL56, proteína de replicação viral ICP22 (IE68, US1), proteína US2, proteína quinase de serina/treonina US3, glicoproteína G (US4), glicoproteína J (US5), glicoproteína D (US6), glicoproteína I (US7), glicoproteína E (US8), proteína de tegumento US9, proteína do capsídeo/tegumento US10, proteína Vmw21 (US11), proteína ICP47 (IE12, US12), ativador transcricional principal ICP4 (IE175, RS1), ubiquitina ligase E3 ICPO (IE110), proteína relacionada com latência 1 - LRP1, proteína relacionada com latência 2 - LRP2, fator de neurovirulência RL1 (ICP34.5),
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75/542 transcrito associado com latência LAT (virus Herpes simplex 1 e 2 (HSV-1 e HSV-2), Herpes simplex); proteína de choque térmico Hsp60, proteína da superfície celular H1C, peptidase de dipeptidila de tipo IV DppIV, antígeno M, proteína de 70 kDa, proteína tipo histona de 17 kDa (Histoplasma capsulatum, Histoplasmose); proteína de ligação a ácido graxo e retinol -1 FAR-1, inibidor do tecido da metaloproteinase TIMP (TMP), proteinase de cisteína ACEY-1, proteinase de cisteína ACCP-1, antígeno de superfície Ac-16, proteína secretada 2 ASP-2, metaloproteinase 1 MTP-1, inibidor da aspartil-proteinase API-1, antígeno associado à superfície SAA-1, antígeno associado à superfície SAA-2, fator Xa secretado específico de adultos, inibidor da serina proteinase anticoagulante AP, proteinase aspártica D tipo catepsina ARR-1, glutationa S-transferase GST, proteinase aspártica APR-1, acetilcolinesterase AChE (Ancylostoma duodenale e Necator americanus, infecção por ancilostomídeos); proteína NS1, proteína NP1, proteína VP1, proteína VP2, proteína VP3 (bocavírus humano (HBoV), infecção por bocavírus humano); proteína de superfície principal 2 - MSP2, proteína de superfície principal 4 - MSP4, variante de MSP - SGV1, variante de MSP - SGV2, proteína da membrana externa OMP, proteína da membrana externa 19 - OMP-19, proteína antigênica principal MAPI, proteína antigênica principal MAP1-2, proteína antigênica principal MAP1B, proteína antigênica principal MAP1-3, proteína de codificação de Erum2510, proteína GroEL, proteína GroES, proteínas de membrana externa principal de 30-kDA, proteína GE de 100kDa, proteína GE de 130-kDa, proteína GE de 160-kDa
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76/542 (Ehrlichia ewingii, erliquiose ewingii humana); proteínas de superfície principal 1-5 (MSPla, MSPlb, MSP2, MSP3, MSP4, MSP5), proteínas do sistema de secreção tipo IV VirB2, VirB7, VirBll, VirD4 (Anaplasma phagocytophilum, anaplasmose granulocitica humana (HGA)); proteína NS1, pequena proteína hidrofóbica NS2, proteína SH, proteína de fusão F, glicoproteína G, proteína de matriz M, proteína de matriz M2-1, proteína de matriz M2-2, fosfoproteína P, nucleoproteína N, polimerase L (metapneumovírus humano (hMPV), infecção por metapneumovírus humano); proteína de superfície principal 2 - MSP2, proteína de superfície principal 4 - MSP4, variante de MSP - SGV1, variante de MSP
SGV2, proteína da membrana externa OMP, proteína da membrana externa 19 - OMP-19, proteína antigênica principal MAPI, proteína antigênica principal MAP1-2 proteína antigênica principal MAP1B, proteína antigênica principal MAP1-3, proteína de codificação de Erum2510, proteína GroEL, proteína GroES, proteínas de membrana externa principal de 30-kDA, proteína GE de 100-kDa, proteína GE de 130-kDa, proteína GE de 160-kDa (Ehrlichia chaffeensis, erliquiose monocítica humana); proteína de replicação El, proteína reguladora E2, proteína E3, proteína E4, proteína E5, proteína E6, proteína E7, proteína E8, proteína de capsídeo principal Ll, proteína de capsídeo secundária L2 (vírus do papiloma humano (HPV), infecção por vírus do papiloma humano (HPV)); proteína de fusão F, hemaglutinina-
neuramidase HN, glicoproteína G, proteína de matriz M,
fosfoproteína P , nucleoproteína N, polimerase L (vírus da
parainfluenza Humana (HPIV), infecção por vírus da
parainfluenza Humana); Hemaglutinina (HA), Neuraminidase
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77/542 (NA), Nucleoproteins (NP), proteína Ml, proteína M2, proteína NS1, proteína NS2 (proteína NEP: proteína de exportação nuclear), proteína PA, proteína PB1 (proteína polimérica básica 1), proteína PB1-F2 e proteína PB2 (família Orthomyxoviridae, vírus Influenza (gripe)); poliproteína do genoma, proteína E, proteína M, proteína C de capsídeo (vírus da encefalite japonesa, encefalite japonesa); toxina RTX, pili tipo IV, subunidade pilus principal PilA, fatores de transcrição reguladores PilS e PilR, proteína sigma54, proteínas da membrana externa (Kingella kingae, infecção por Kingella kingae); proteína prion (prion Kuru, Kuru); nucleoproteins N, polimerase L, proteína de matriz Z, glicoproteína GP (vírus de Lassa, febre de Lassa); lipoproteína associada a peptídeoglicano PAL, chaperonina de 60 kDa - Cpn60 (groEL, HspB), pilins tipo IV - PilE, proteína da membrana externa MIP, proteína da membrana externa principal MompS, metaloproteinase de zinco MSP (Legionella pneumophila, Legionelose (doença do Legionário, febre de Pontiac)); P4 nuclease, proteína WD, ribonucleotídeo redutase M2, glicoproteína da membrana de superfície Pg46, proteinase de cisteína CP, proteína regulada por glicose 78 - GRP-78, proteína tipo antígeno específica de estágio S - A2, ATPase El, beta-tubulina, proteína de choque térmico 70 Hsp70, KMP-11, glicoproteína GP63, proteína BT1, nucleotídeo hidrolase NH, proteína da superfície celular Bl, proteína PI tipo proteína ribossomal Pl, esterol 24-c-metiltransferase SMT, proteína LACK, histona Hl, proteína SPB1, antioxidante específico de tiol TSA, antígeno proteico STI1, peptidase de sinalização SP, histona H2B, antígeno de superfície PSA-2, cisteína
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78/542 proteinase b Cpb (gênero Leishmania, Leishmaniose); proteína da membrana principal I, antigeno rico em serina de 45 kDa, caperonina de 10 kDa GroES, antigeno HSP kDa, amino-oxononanoato sintase AONS, proteína recombinase A RecA, acetil-/propionil-coenzima A carboxilase alfa, racemase de alanina, chaperonina de 60 kDa 2, proteína tipo ESAT-6 EcxB (L-ESAT-6), proteína Lsr2, proteína ML0276, hemaglutinina HBHA de ligação a Heparina, proteína de choque térmico 65 - Hsp65, proteína de codificação mycPl ou ML0041, proteína de codificação htrA2 ou ML0176, proteína de codificação htrA4 ou ML2659, proteína de codificação de gcp ou ML0379, proteína de codificação de clpC ou ML0235 (Mycobacterium leprae e Mycobacterium lepromatosis, Lepra); proteína da membrana externa LipL32, proteína da membrana LIC10258, proteína da membrana LP30, proteína da membrana LIC12238, proteína tipo Ompa - Lsa66, proteína de superfície LigA, proteína de superfície LigB, proteína da membrana externa principal OmpLl, proteína da membrana externa LipL41, proteína LigAni, proteína de superfície LcpA, proteína de adesão LipL53, proteína da membrana externa UpL32, proteína de superfície Lsa63, flagelina FlaBl, lipoproteína da membrana LipL21, proteína da membrana pL40, adesina de superfície leptospiral Lsa27, proteína da membrana externa OmpL36, proteína da membrana externa OmpL37, proteína da membrana externa OmpL47, proteína da membrana externa OmpL54, aciltransferase LpxA (Gênero Leptospira, Leptospirose); precursor de listeriolisina O Hly (LLO), proteína associada com a invasão - lap (P60), proteína reguladora de listeriolisina
PrfA, metaloproteinase de zinco Mpl, fosfolipase C
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79/542 especifica de fosfatidilinositol - PLC (PlcA, PlcB), 0acetiltransferase - Oat, permease de portador ABC Im.G_1771, proteína de adesão LAP, receptor de LAP Hsp60, adesina LapB, hemolisina listeriolisina 0 LLO, proteína ActA, Internalina A - InlA, proteína InlB (Listeria monocytogenes, Listeriose) ; proteína de superfície externa A - OspA, proteína de superfície externa OspB, proteína de superfície externa OspC, proteína de ligação a decorina A DbpA, proteína de ligação a decorina B - DbpB, proteína de núcleo Fla do filamento flagelar 41 kDa, proteína da membrana básica A BmpA (antígeno imunodominante P39), precursor de lipoproteina de superfície externa de 22 kDa (antígeno IPLA7), lipoproteina de superfície variável vlsE (geralmente Borrelia burgdorferi e outras espécies de Borrelia, doença de Lyme (borreliose de Lyme)); proteína tipo homóloga a alérgeno de veneno VAL-1, transcrito larval abundante ALT-1, transcrito larval abundante ALT-2, tiorredoxina peroxidase TPX, homólogo a alérgeno de vespideo VAH, tiorredoxina peroxidase 2 TPX-2, proteína antigênica SXP (peptídeos N, Nl, N2 e N3), ativação associada com proteina-1 ASP-1, tiorredoxina TRX, transglutaminase BmTGA, glutationa-S-transferases GST, miosina, homólogo a alérgeno de vespideo VAH, colagenase de 175 kDa, gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase GAPDH, colágeno cuticular Col- 4, Proteínas Acídicas de Larvas Secretadas SLAPs, quitinase CHI-1, proteína de ligação à maltose MBP, enzima glicolitica frutose-1,6-bifosfato aldolase Fba, tropomiosina TMY-1, produto gênico específico de nematódeo OvB20, oncocistatina CPI-2, proteína Cox-2 (Wuchereria bancrofti e Brugia malayi, filariose linfática
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80/542 (elefantiase)); glicoproteina GP, proteína de matriz Z, polimerase L, nucleoproteina N (virus da coriomeningite linfocitica (LCMV), coriomeningite linfocitica); proteína anônima relacionada com a trombospondina TRAP, Proteína de superfície do esporozoita 2 - SSP2, antígeno da membrana apical 1 - AMAI, antígeno de membrana roptria RMA1, antígeno de repetição básica acídica ABRA, proteína transversal de células PF, proteína Pvs25, proteína de superfície merozoíte 1 - MSP-1, proteína de superfície merozoíte 2 - MSP-2, antígeno de superfície de eritrócitos infetados por anel, antígeno de estágio RESALiver 3 - LSA3, proteína Eba-175, serina de repetição de antígeno 5 SERA-5, proteína circunsporozoíte CS, proteína de superfície merozoíte 3 - MSP3, proteína de superfície merozoíte 8 - MSP8, enolase PF10, proteína de eritrócito de hepatócito HEP17 de 17 kDa, proteína da membrana de eritrócito 1 - EMP1, proteína de superfície de Kbetamerozoíte 4/5 MSP 4/5, proteína de choque térmico Hsp90, proteína rica em glutamato GLURP, proteína de superfície merozoíte 4 - MSP-4, proteína STARP, CRA precursor de antígeno relacionado com a proteína circumsporozoite (gênero Plasmodium, Malária); nucleoproteina N, proteína associada com a membrana VP24, nucleoproteina menor VP30, cofator de polimerase VP35, polimerase L, proteína de matriz VP40, glicoproteina de invólucro GP (vírus Marburg, febre hemorrágica de Marburg (MHF)); proteína C, proteína de matriz M, fosfoproteína P, proteína V não estrutural, glicoproteina H de hemaglutinina, polimerase L, nucleoproteina N, proteína de fusão F (vírus do sarampo, sarampo); membros da família
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81/542 portadora ABC (LolC, OppA e PotF), proteína transmembranar do sistema de liberação de lipoproteina putativa LolC/E, flagelina Flic, motilidade intracelular de Burkholderia A BimA, fator de alongamento bacteriano-Tu EF-Tu, proteína tipo OmpA de 17 kDa, proteína de codificação boaA, proteína de codificação boaB (Burkholderia pseudomallei, Melioidose (doença de Whitmore)); proteínas pilinas, subunidade associada a pilina secundária - pile, subunidades e variantes de pilina principal pilE, pilS, proteína de variação de fase porA, Porina B PorB, proteína TraD, antígeno de membrana externa Neisserial H.8, antígeno de 70kDa, proteína da membrana externa PI, proteínas de membrana externa PIA e PIB, antígeno W, proteína de superfície A NspA, proteína de ligação à transferrina TbpA, proteína de ligação à transferrina TbpB, PBP2, proteína de codificação mtrR, proteína de codificação ponA, permease de membrana FbpBC, sistema de proteína FbpABC, proteínas LbpAB, proteína da membrana externa Opa, portador da membrana externa FetA, regulador reprimido por ferro MpeR, proteína de ligação ao fator H - fHbp, adesina NadA, proteína NhbA, repressor FarR (Neisseria meningitidis, doença meningocócica) ; proteína de 66 kDa, proteína de 22 kDa (geralmente Metagonimus yokagawai, Metagonimiase) ; proteínas de tubo polar (34, 75 e 170 kDa em Glugea, 35, 55 e 150 kDa em Encephalitozoon), proteína relacionada com quinesina, subunidade maior de RNA polimerase II, proteína da membrana integral ou similar YIPA, proteína antissilenciamento 1, fator de transcrição de choque térmico HSF, proteína quinase, timidina quinase, proteína nucleolar tipo NOP-2 (Microsporidia phylum,
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Microsporidiose) ; regulador de apoptose tipo CASP8 e FADD, glutationa peroxidase GPX1, RNA helicase NPH-II NPH2, subunidade catalítica de polimerase Poli(A) - PAPL, proteína de invólucro principal P43K, subunidade do fator de transcrição precoce de 70 kDa - VETFS, subunidade do fator de transcrição precoce de 82 kDa - VETFL, metaloendopeptidase tipo Gl, trifosfatase de nucleosideo I NPH1, proteína de replicação A28 tipo MC134L, RNA subunidade de polimease de 7 kDa RPO7 (virus do molusco contagioso (MCV), molusco contagioso (MC) ) ; proteína de matriz M, fosfoproteína P/V, pequena proteína hidrofóbica SH, nucleoproteína N, proteína V, glicoproteína de fusão F, hemaglutinina-neuraminidase HN, RNA polimerase L (vírus da papeira, papeira); Proteínas de membrana externa OM, antígeno da superfície celular OmpA, antígeno da superfície celular OmpB (sca5), proteína da superfície celular SCA4, proteína da superfície celular SCA1, proteína intracitoplasmática D, proteína da camada superficial cristalina SLP, antígeno proteico de superfície protetora SPA (Rickettsia typhi, Tifo Murino (Tifo endêmico)); adesina Pl, adesão P30, proteína pll6, proteína P40, proteína citoesquelética HMW1, proteína citoesquelética HMW2, proteína citoesquelética HMW3, proteína de codificação MPN152, proteína de codificação MPN426, proteína de codificação MPN456, proteína de codificação MPN-500 (Mycoplasma pneumoniae, pneumonia por Mycoplasma) ; NocA, proteína reguladora dependente de ferro, VapA, VapD, VapF, VapG, proteinase caseinolítica, proteína de 43-kDa associada à ponta de filamento, proteína P24, proteína P61, proteína de 15-kDa, proteína de 56 kDa (geralmente Nocardia
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83/542 asteroides e outras espécies de Nocardia, Nocardiose) ; proteína tipo homólogo a alérgeno de veneno VAL-1, transcrito larval abundante ALT-1, transcrito larval abundante ALT-2, tiorredoxina peroxidase TPX, homólogo a alérgeno de vespideo VAH, tiorredoxina peroxidase 2 TPX-2, proteína antigênica SXP (peptídeos N, Nl, N2 e N3), proteína associada com ativação-1 ASP-1, Tiorredoxina TRX, transglutaminase BmTGA, glutationa-S-transferases GST, miosina, homólogo a alérgeno de vespideo VAH, colagenase de 175 kDa, gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase GAPDH, colágeno cuticular Col-4, Proteínas Acídicas de Larvas Secretadas SLAPs, quitinase CHI-1, proteína de ligação a maltose MBP, enzima glicolitica frutose-1,6-bifosfato aldolase Fba, tropomiosina TMY-1, produto gênico específico para nematódeos OvB20, oncocistatina CPI-2, Cox-2 (Onchocerca volvulus, Oncocercose (cegueira dos rios)); glicoproteína secretada de 43 kDa, glicoproteína gpO, glicoproteína gp75, antígeno Pb27, antígeno Pb40, proteína de choque térmico Hsp65, proteína de choque térmico Hsp70, proteína de choque térmico Hsp90, proteína PIO, triosefosfato isomerase TPI, Paracocina lectina de ligação de N-acetil-glucosamina, proteína de 28 kDa Pb28 (Paracoccidioides brasiliensis, Paracocidioidomicose (blastomicose da américa do sul)); proteinase de cisteína tipo cruzipaina de 28 kDa - Pw28CCP (usualmente Paragonimus wessermani e outras espécies de Paragonimus, Paragonimiase); proteína da membrana externa OmpH, proteína da membrana externa Omp28, proteína PM1539, proteína PM0355, proteína PM1417, proteína de reparação MutL, proteína BcbC, proteína PM0305, formato desidrogenase-N,
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84/542 proteína PM0698, proteína PM1422, DNA girase, lipoproteína PlpE, proteína adesiva Cp39, receptor de sistema de aquisição heme HasR, proteína capsular de 39 kDa, OMP IROMP regulada por ferro, proteína OmpA87 da membrana externa, proteína fimbrial Ptf, proteína da subunidade fimbrial PtfA, proteína de ligação de transferrina Tbpl, enzima esterease MesA, toxina multocida Pasteurella PMT, proteína adesiva Cp39 (gênero Pasteurella, Pasteurelose); hemaglutinina filamentosa FhaB, adenilato ciclase CyaA, precursor da subunidade 4 da toxina pertússis PtxD, precursor de pertactina Prn, subunidade 1 da toxina PtxA, proteína Cpn60, proteína brkA, precursor da subunidade 2 da toxina pertússis PtxB, precursor da subunidade 3 da toxina pertússis PtxC, precursor da subunidade 5 da toxina pertússis PtxE, pertactina Prn, proteína Fim2, proteína Fim3; (Bordetella pertússis, Pertússis (Coqueluche)); Antígeno de cápsula El, antígeno V associado a virulência, proteína efetora secretada LcrV, antígeno V, proteinase da membrana externa Pia, proteína efetora secretada YopD, proteína secretada putativa - tirosina fosfatase YopH, subunidade principal do complexo de agulha YscF, proteína quinase YopO, proteína autoportadora putativa YapF, portador ABC de membrana interna YbtQ (Irp7), proteína de ligação de açúcar putativa YPO0612, proteína de choque térmico 90 HtpG, proteína sulfatase putativa YdeN, proteína portadora de lipoproteína da membrana externa LolA, chaperona de secreção YerA, lipoproteína putativa YP00420, proteína ativadora de hemolisina HpmB, receptor de membrana externa de pesticina/yersiniabactina Psn, proteína efetora segregada YopE, proteína efetora segregada YopF, proteína
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85/542 efetora segregada YopK, proteína da membrana externa YopN, proteína da membrana exterior YopM, precursor de coagulase/fibrinolisina Pla; (Yersinia pestis, Peste); proteína PhpA, adesina de superfície PsaA, pneumolisina Ply, proteinase dependente de ATP Clp, proteína lipoato ligase LplA, proteína ancorada à superfície da parede celular psrP, sortase SrtA, glutamil-tRNA sintetase GltX, proteína de ligação a colina A CbpA, proteína de superfície pneumocócica A PspA, proteína de superfície pneumocócica C PspC, 6-fosfogluconato desidrogenase Gnd, proteína de ligação ao ferro PiaA, Mureína hidrolase LytB, proteína LytC, proteinase Al (Streptococcus pneumoniae, infecção pneumocócica); proteína de superfície principal B, proteinase tipo quexina KEX1, proteína A12, antígeno P55 de 55 kDa, glicoproteína de superfície principal Msg (Pneumocystis jirovecii, pneumonia por Pneumocystis (PCP)); poliproteína do genoma, polimerase 3D, proteína de capsídeo viral VP1, proteína de capsídeo viral VP2, proteína de capsídeo viral VP3, proteína de capsídeo viral VP4, proteinase 2A, proteinase 3C (Poliovirus, Poliomielite) ; proteína Nfal, exendina-3, lipase secretora, proteinase tipo catepsina B, proteinase de cisteína, catepsina, peroxirredoxina, proteína CrylAc (geralmente Naegleria fowleri, meningoencefalite amebiana primária (PAM)); agnoproteína, antígeno T grande, antígeno T pequeno, proteína de capsídeo principal VP1, proteína de capsídeo secundário VP2 (vírus JC, leucoencefalopatia multifocal progressiva); proteína de baixa resposta ao cálcio E LCrE, proteína externa de clamídia N CopN, proteína quinase de serina/treonina PknD, proteína portadora de acila S
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86/542 maloniltransferase FabD, proteína de ligação a DNA de cadeia simples Ssb, proteína da membrana externa principal MOMP, proteína da membrana externa 2 0mp2, família de proteínas de membrana polimórfica (Pmpl, Pmp2, Pmp3, Pmp4, Pmp 5, Pmp 6, Pmp 7, Pmp 8, Pmp 9, Pmp10, Pmp11, Pmp12, Pmp13, Pmpl4, Pmpl5, Pmpl6, Pmpl7, Pmpl8, Pmpl9, Pmp20, Pmp21) (Chlamydophila psittaci, Psitacose); proteína da membrana externa Pl, proteína de choque térmico B HspB, portador de peptideo ABC, proteína de ligação a GTP, proteína IcmB, ribonuclease R, fosfatase SixA, proteína DsbD, proteína da membrana externa TolC, proteína de ligação a DNA PhoB, ATPase DotB, proteína de choque térmico B HspB, proteína da membrana Coml, proteína de 28 kDa, glicosidase de DNA-3metiladenina I, proteína da membrana externa OmpH, proteína da membrana externa AdaA, Proteína T de sistema de clivagem de glicina (Coxiella burnetii, febre Q) ; nucleoproteina N, proteína estrutural L grande, fosfoproteina P, proteína de matriz M, glicoproteina G (vírus da raiva, raiva); proteína de fusão F, nucleoproteina N, proteína de matriz M, proteína de matriz M2-1, proteína de matriz M2-2, fosfoproteina P, proteína hidrofóbica pequena SH, glicoproteina de superfície principal G, polimerase L, proteína não estrutural 1 NS1, proteína não estrutural 2 NS2 (Vírus sincicial respiratório (RSV), infecção por vírus sincicial respiratório); poliproteína do genoma, polimerase 3D, proteína de capsídeo viral VP1, proteína de capsídeo viral VP2, proteína de capsídeo viral VP3, proteína de capsídeo viral VP4, proteinase 2A, proteinase 3C (rinovírus, infecção por rinovírus); proteínas da membrana externa OM, antígeno da superfície celular OmpA, antígeno
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87/542 da superfície celular OmpB (sca5), proteína da superfície celular SCA4, proteína da superfície celular SCA1, proteína PS120, proteína intracitoplasmática D, antígeno da proteína de superfície de proteção SPA (gênero Rickettsia, infecção por Rickettsial); proteínas da membrana externa OM, antígeno da superfície celular OmpA, antígeno da superfície celular OmpB (sca5), proteína da superfície celular SCA4, proteína da superfície celular SCA1, proteína intracitoplasmática D (Rickettsia akari, Varicela por rickettsia); glicoproteína de invólucro GP, polimerase L, nucleoproteína N, proteína não estrutural NSS (vírus da febre de Rift Valley, febre de Rift Valley (RVF)); proteínas da membrana externa OM, antígeno da superfície celular OmpA, antígeno da superfície celular OmpB (sca5), proteína da superfície celular SCA4, proteína da superfície celular SOAI, proteína intracitoplasmática D (Rickettsia rickettsii, febre maculosa das Montanhas Rochosas (RMSF)); proteína não estrutural 6 NS6, proteína não estrutural 2 NS2, proteína de capsídeo intermediária VP6, proteína de capsídeo interna VP2, proteína não estrutural 3 NS3, RNA polimerase L dirigida a RNA, proteína VP3, proteína não estrutural 1 NS1, proteína não estrutural 5 NS5, glicoproteína de capsídeo externo VP7, glicoproteína não estrutural 4 NS4, proteína de capsídeo externo VP4 (Rotavirus, infecção por Rotavirus); poliproteína P200, glicoproteína El, glicoproteína E2, proteína NS2, proteína C de capsídeo (vírus da Rubéola, Rubéola); chaperonina GroEL (MopA), inositol fosfato fosfatase SopB, proteína de choque térmico HslU, proteína chaperona DnaJ, proteína TviB, proteína IroN, flagelina FliC, proteína de invasão
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SipC, glicoproteína gp43, proteína da membrana externa LamB, proteína da membrana externa PagC, proteína da membrana externa TolC, proteína da membrana externa NmpC, proteína da membrana externa FadL, proteína de transporte SadA, transferase WgaP, proteínas efetoras SifA, SteC, SseL, SseJ e SseF (gênero Salmonella, Salmonelose); proteína 14, proteína não estrutural NS7b, proteína não estrutural NS8a, proteína 9b, proteína 3a, nucleoproteína N, proteína não estrutural NS3b, proteína não estrutural NS6, proteína 7a, proteína não estrutural NS8b, proteína da membrana M, proteína da membrana pequena de invólucro EsM, poliproteína replicase la, glicoproteína da espícula S, poliproteína replicase lab, coronavirus SARS, SARS (síndrome respiratória aguda grave), proteinase de serina, Antígeno de Sarcoptes atípico 1 ASAI, glutationa Stransferases GST, proteinase de cisteína, proteinase de serina, apolipoproteína (Sarcoptes scabiei, escabiose), glutationa S-transferases GST, paramiosina, hemoglinase SM32, antígeno de ovo principal, proteína de ligação a ácidos graxos de 14 kDa - Sml4, antígeno de superfície larval principal P37, antígeno tegumentar de 22,6 kDa, calpaína CANP, trifosfato isomerase Tim, proteína de superfície 9B, proteína de capsídeo externo VP2, proteína da membrana integral de 23 kDa - Sm23, superóxido de Cu/Zn dismutase, glicoproteína Gp, miosina (gênero Schistosoma, Schistosomiase (Bilharziose)); chaperonina de 60 kDa, antígeno específico do tipo de 56 kDa, piruvato fosfato diquinase, 4-hidroxibenzoato octapreniltransferase (Orientia tsutsugamushi, Tifo do mato); desidrogenase GuaB, proteína de invasão Spa32, invasina IpaA, invasina IpaB,
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89/542 invasina IpaC, invasina IpaD, invasina IpaH, invasina IpaJ (gênero Shigella, Shigelose (Disenteria Bacilar)); proteína P53, homólogo de proteína virion US10, regulador transcricional IE63, transativador transcricional IE62, proteinase P33, proteína do fator alfa-indutor de 74 kDa, desoxiuridina 5'-trifosfato nucleotido-hidrolase, transativador transcricional IE4, homólogo da proteína da membrana UL43, homólogo da fosfoproteina nuclear UL3, homólogo da proteína nuclear UL4, proteína de ligação à origem de replicação, proteína da membrana 2, fosfoproteina 32, proteína 57, fator de processividade de DNA polimerase, proteína portal 54, DNA primase, homólogo de proteína de tegumento UL14, homólogo de proteína de tegumento UL21, homólogo de proteína de tegumento UL55, homólogo da subunidade tripartite terminase UL33, homólogo da subunidade tripartite terminase UL15, proteína de ligação a capsídeo 44, proteína de empacotamento de virions 43 (vírus Varicela-zóster (VZV), Herpes zóster (Herpes zoster)); homólogo da desidrogenase de 3-beta hidroxi-5-eno esferoide truncada, proteína da membrana de virion A13, proteína A19, proteína A31, homólogo da proteína A35 truncada, homólogo da proteína A37.5, proteína A47, proteína A49, proteína A51, proteína tipo semaforina A43, inibidor de proteinase de serina 1, inibidor de proteinase de serina 2, inibidor de proteinase de serina 3, proteína A6, proteína B15, proteína Cl, proteína C5, proteína C6, proteína F7, proteína F8, proteína F9, proteína Eli, proteína F14, proteína F15, proteína F16 (Varíola maior ou Varíola menor, varíola (Varíola)); adesina/glicoproteína gp70, proteinases (Sporothrix schenckii, esporotricose); proteína de ligação
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90/542 heme-ferro IsdB, adesina colagênica Cna, fator aglutinante A ClfA, proteína MecA, proteína de ligação a fibronectina A - FnbA, enterotoxina tipo A - EntA, enterotoxina tipo B EntB, enterotoxina tipo C - EntCl, enterotoxina tipo C EntC2, enterotoxina tipo D - EntD, enterotoxina tipo E EntE, toxina da sindrome do choque tóxico-1 TSST-1, estafiloquinase, proteína de ligação a penicilina 2a PBP2a (MecA), antígeno de secreção SssA (gênero staphylococcus, intoxicação alimentar por estafilococos); proteína de ligação heme-ferro IsdB, adesina colagênica Cna, fator aglutinante A ClfA, proteína MecA, proteína de ligação de fibronectina A FnbA, enterotoxina tipo A - EntA, enterotoxina tipo B - EntB, enterotoxina tipo C - EntCl, enterotoxina tipo C - EntC2, enterotoxina tipo D - EntD, enterotoxina tipo E - EntE, toxina da sindrome do choque tóxico-1 TSST-1, estafiloquinase, proteína de ligação a penicilina 2a PBP2a (MecA), antígeno secretor SssA (gênero Staphylococcus por ex., aureus, infecção por estafilococo); antígeno Ss-IR, antígeno NIE, estrongilastacina, Na +-K + ATPase Sseat-6, tropomisina SsTmy-1, proteína LEC-5, antígeno P5 de 41 kDa, proteína larval de 41 kDa, proteína larval de 31 kDa, proteína larval de 28 kDa (Strongyloides stercoralis, Estrongiloidiase) ; glicerofosfodiéster fosfodiesterase GlpQ (Gpd), proteína da membrana externa TmpB, proteína Tp92, antígeno TpFl, proteína de repetição Tpr, proteína de repetição F TprF, proteína de repetição G TprG, proteína de repetição I TprI, proteína de repetição J TprJ, proteína de repetição K TprK, proteína de membrana treponêmica A TmpA, lipoproteina, Tppl5 de 15 kDa, antígeno de membrana de 47 kDa, miniferritina TpFl, adesina Tp0751,
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91/542 lipoproteína TP0136, proteína TpN17, proteína TpN47, proteína da membrana externa TP0136, proteína da membrana externa TP0155, proteína da membrana externa TP0326, proteína da membrana externa TP0483, proteína da membrana externa TP0956 (Treponema pallidum, Sífilis); Proteinases tipo catepsina L, antigeno de 53/25-kDa, membros da família de 8kDa, proteína cisticercose com atividade marginal tipo tripsina TsAg5, proteína oncosfera TSOL18, proteína oncosfera TSOL45-1A, lactato desidrogenase A LDHA, lactato desidrogenase B LDHB (gênero Taenia, Teníase); toxina do tétano TetX, toxina do tétano C TTC, proteína da camada S de 140 kDa, subunidade beta da f lavoproteína CT3, fosfolipase (lecitinase) , proteína de fosfoportadora HPr (Clostridium tetani, Tétano (Trismo)); poliproteina do genoma, proteína E, proteína M, proteína C de capsídeo (Vírus da encefalite transmitida por carrapatos (TBEV), encefalite transmitida por carrapatos); Antigeno de 58-kDa, antigenos de 68-kDa, antigeno excretor-secretor de larvas Toxocara TES, glicoproteina de 32 kDa, glicoproteina TESTO, glicoproteina GP31, antigeno excretor-secretor TcES-57, antigeno de fluido perientérico Pe, antigenos de extrato solúvel Ex, antigenos excretor-secretor de larvas ES, antigeno TES-120, alérgeno poliproteico TBA-1, proteinase cisteína tipo catepsina L - c-cpl-1, proteína de 26 kDa (Toxocara canis ou Toxocara cati, Toxocaríase (migrans de larva ocular (OLM) e migrans de larva visceral (VLM))); proteínas micronemas (MIC1, MIC2, MIC3, MIC4, MIC5, MIC6, MIC7, MIC8), proteína roptria Rop2, proteínas roptria (Ropl, Rop2, Rop3, Rop4, Rop5, Rop6, Rop7, Ropl6, RjoplT), proteína SR1, antigeno de superfície P22, antigeno
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92/542 principal p24, antígeno de superfície principal p30, proteínas granulares densas (GRA1, GRA2, GRA3, GRA4, GRA5, GRA6, GRA7, GRA8, GRA9, GRA10), antígeno de 28 kDa, antígeno de superfície SAG1, antígeno relacionado com SAG2, nucleosideo-trifosfatase 1, nucleosideo-trifosfatase 2, proteína Stt3, proteína contendo domínio tipo HesB, proteinase tipo romboide 5, toxomepsina 1 (Toxoplasma gondii, Toxoplasmose); Glicoproteína segregada de 43 kDa, glicoproteína segregada de 53 kDa, paramiosina, antígeno Ts21, antígeno Ts87, antígeno p46000, antígenos TSL-1, caveolina-1 CAV-1, antígeno de larva recém-nascida de 49 kDa, homólogo de prosaposina, proteinase de serina, inibidor de proteinase de serina, glicoproteína de 45 kDa Gp45 (Trichinella spiralis, Triquinelose); fatores de transcrição tipo Myb (Mybl, Myb2, Myb3), proteína de adesão AP23, proteína de adesão AP33, proteína adesina AP33-3, adesinas AP51, adesina AP65, proteína de adesão AP65-1, alfa-actinina, proteína associada à cinesina, teneurina, proteinase de 62 kDa, proteinase de serina tipo subtilisina SUBI, gene de proteinase de cisteína 3 CP3, alfa-enolase Enol, proteinase de cisteína CP30, proteínas de choque térmico (Hsp70, Hsp60), proteína imunogênica P270, (Trichomonas vaginalis, Tricomoniase); beta-tubulina, proteína de 47 kDa, proteinase-1 tipo leucócito secretor SLP-1, proteína de 50 kDa - TT50, antígeno de 17 kDa, proteína de 43/47 kDa (Trichuris trichiura, Tricuríase (infecção de Whillworm) ) ; proteína ESAT-6 (EsxA) , antígeno filtrado de 10 kDa EsxB, antígeno secretado 85-B FBPB, proteína A de ligação a fibronectina FbpA (Ag85A), proteinase de serina PepA, proteína da família PPE PPE18,
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93/542 proteína D de ligação de fibronectins FbpD, proteína imunogênica MPT64, proteína secretada MPT51, catalaseperoxidase-peroxinitritase T KATG, lipoproteína de ligação a fosfato periplásmica PSTS3 (PBP-3, Phos-1), hemaglutinina Hbha de ligação de heparins regulada por ferro, proteína da família PPE PPE14, proteína da família PPE PPE68, proteína Mtb72F, proteína Apa, proteína imunogênica MPT63, lipoproteína de ligação ao fosfato periplasmática PSTS1 (PBP-1), chaperons molecular DnaK, lipoproteína da superfície celular Mpt83, lipoproteína P23, proteína permease do sistema de transporte de fosfato pstA, antígeno de 14 kDa, proteína de ligação de fibronectins C - FbpCl, Alanina desidrogenase TB43, Glutamina sintetase 1, proteína ESX-1, proteína CFP10, proteína TB10.4, proteína MPT83, proteína MTB12, proteína MTB8, proteínas tipo Rpf, proteína MTB32, proteína MTB39, cristalina, proteína de choque térmico HSP65, proteína PST-S (geralmente Mycobacterium tuberculosis, Tuberculose); proteína da membrana externa FobA, proteína da membrana externa FobB, lócus de crescimento intracelular IglCl, lócus de crescimento intracelular IglC2, aminotransferase Wbtl, chaperonina GroEL, proteína da membrana principal de 17 kDa - TUL4, lipoproteína LpnA, proteína da família quitinase 18, isocitrato desidrogenase, proteína da família Nif3, proteína de glicosilação de pili tipo IV, proteína da membrana exterior tolC, proteína da família de ligação FAD, proteína da membrana externa multimérica pilins de tipo IV, proteína de sensor de dois componentes KdpD, proteína chaperons DnaK, proteína TolQ (Francisella tularensis, Tularemia); Antígeno MB, urease, proteína GyrA, proteína
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GyrB, proteína ParC, proteína ParE, proteínas de membrana associadas a lipídeo LAMP, timidina quinase TK, fosfolipase PL-A1, fosfolipase PL-A2, fosfolipase PL-C, antígeno de 96 kDa expresso na superfície (Ureaplasma urealyticum, infecção por Ureaplasma urealyticum); poliproteína não estrutural, poliproteína estrutural, proteína CP de capsídeo, proteína El, proteína E2, proteína E3, proteinase Pl, proteinase P2, proteinase P3 (vírus da encefalite equina venezuelana, encefalite equina venezuelana); glicoproteína GP, proteína de matriz Z, polimerase L, nucleoproteína N (vírus Guanarito, febre hemorrágica venezuelana); poliproteína, proteína E, proteína M, proteína C de capsídeo, proteinase NS3, proteína NS1, proteína NS2A, proteína AS2B, proteína NS4A, proteína NS4B, proteína NS5 (vírus do Nilo Ocidental, Febre do Nilo Ocidental); proteína CP de capsídeo, proteína El, proteína E2, proteína E3, proteinase P2 (vírus da encefalite equina ocidental, encefalite equina ocidental); poliproteína do genoma, proteína E, proteína M, proteína C de capsídeo, proteinase NS3, proteína NS1, proteína NS2A, proteína AS2B, proteína NS4A, proteína NS4B, proteína NS5 (vírus da febre amarela, febre amarela); proteína de direcionamento de Yop putativo YobB, proteína efetora YopD, proteína efetora YopE, proteína YopH, proteína efetora YopJ, proteína de translocação de proteína YopK, proteína efetora YopT, proteína YpkA, proteína de biossíntese flagelar FlhA, peptidase M48, sistema de efluxo de potássio KefA, regulador transcricional RovA, adesina Ifp, proteína translocadora LcrV, proteína PcrV, invasina Inv, porina tipo OmpF de proteína da membrana externa, adesina YadA,
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95/542 proteína quinase C, fosfolipase Cl, proteína PsaA, proteína tipo manosiltransferase WbyK, proteína YscU, antígeno YPMa (Yersinia pseudotuberculosis, infecção por Yersinia pseudotuberculosis); proteína efetora YopB, chaperonina de 60 kDa, proteína WbcP, proteína tirosina fosfatase YopH, proteína YopQ, enterotoxina, permease de galactosídeo, redutase NrdE, proteína YasN, Invasina Inv, adesina YadA, porina da membrana externa F OmpF, proteína UspAl, proteína EibA, proteína Hia, proteína da superfície celular Ail, chaperona SycD, proteína LcrD, proteína LcrG, proteína LcrV, proteína SycE, proteína YopE, proteína reguladora TyeA, proteína YopM, proteína YopN, proteína YopO, proteína YopT, proteína YopD, proteinase ClpP, proteína MyfA, proteína FilA e proteína PsaA (Yersinia enterocolitica, Yersiniose).
[0107] Os parênteses na secção anterior indicam o patógeno particular ou a família de patógenos dos quais o(s) antígeno(s) é/são derivados(s) e a doença infecciosa com a qual o patógeno está associado.
Influenza:
[0108] Em uma modalidade particularmente preferida do primeiro aspecto da invenção, o composto de mRNA compreende uma sequência de mRNA compreendendo uma região de codificação, codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de hemaglutinina (HA), neuraminidase (NA), nucleoproteína (NP), proteína matriz 1 (Ml), proteína matriz 2 (M2), proteína não estrutural 1 (NS1), proteína não estrutural 2 (NS2), proteína de exportação nuclear (NEP), proteína polimerase ácida (PA), proteína polimerase básica PB1, PB1-F2, ou
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96/542 proteína polimerase básica 2 (PB2) de um vírus da influenza ou um fragmento ou variante do mesmo.
[0109] Nesse contexto, a sequência de aminoácidos do pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos pode ser selecionada a partir de qualquer peptídeo, ou proteína, derivado de hemaglutinina (HA) , neuraminidase (NA), nucleoproteina (NP), proteína matriz 1 (Ml), proteína matriz 2 (M2), proteína não estrutural 1 (NS1), proteína não estrutural 2 (NS2), proteína de exportação nuclear (NEP) , proteína polimerase ácida (PA) , proteína polimerase básica PB1, PB1-F2, ou proteína polimerase básica 2 (PB2) de um vírus da influenza ou um fragmento ou variante ou a partir de qualquer peptídeo ou proteína do vírus influenza sinteticamente manipulado.
[0110] Em uma modalidade preferida da presente invenção, a região de codificação codifica pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de hemaglutinina (HA) e/ou neuraminidase (NA) de um vírus influenza ou um fragmento ou variante do mesmo. Nesse contexto, a hemaglutinina (HA) e a neuraminidase (NA) podem ser escolhidas do mesmo vírus influenza ou a partir de diferentes vírus influenza.
[0111] Nesse contexto, é particularmente preferido que a pelo menos uma região de codificação codifique pelo menos uma proteína de comprimento total de hemaglutinina (HA), neuraminidase (NA), nucleoproteina (NP), proteína matriz 1 (Ml), proteína matriz 2 (M2), proteína não estrutural 1 (NS1), proteína não estrutural 2 (NS2), proteína de exportação nuclear (NEP), proteína polimerase ácida (PA), proteína polimerase básica PB1, PB1Petição 870190039457, de 26/04/2019, pág. 119/744
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F2, ou proteína polimerase básica 2 (PB2) de um vírus da influenza ou uma variante do mesmo.
[0112]
Em modalidades particularmente preferidas a pelo menos uma região de codificação codifica pelo menos uma proteína de comprimento total de hemaglutinina (HA) e/ou pelo menos uma proteína de comprimento total de neuraminidase (NA) de um vírus influenza ou uma variante da mesma.
[0113]
O termo proteína de comprimento total conforme usado no presente documento se refere tipicamente a uma proteína que compreende substancialmente a sequência de aminoácidos completa da proteína que ocorre naturalmente. Conforme usado no presente documento, o termo proteína de comprimento total se refere, de um modo preferido, à sequência de comprimento total de uma proteína conforme indicado na listagem de sequências da presente invenção, i. e., a uma sequência de aminoácidos conforme definido por qualquer uma das SEQ ID NOs listadas na listagem de sequências (SEQ ID NOs: 1-30504 ou SEQ ID NO: 224269 ou SEQ ID NO: 224309) ou a um aminoácido conferido na base de dados sob o respectivo número de acesso à base de dados.
Sequências Preferidas da Presente Invenção:
[0114]
Nesse contexto, adicionalmente preferido que a pelo menos uma sequência de codificação da sequência de mRNA da presente invenção codifique, pelo menos, um peptídeo ou proteína antigênicos que é derivado a partir de uma proteína hemaglutinina (HA) de um vírus influenza A; ou
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98/542 uma proteína hemaglutinina (HA) de um vírus influenza B; ou uma proteína neuraminidase (NA) de um vírus influenza A; ou uma proteína neuraminidase (NA) de um vírus influenza B; ou
ou um fragmento ou variante da mesma, em que a
proteína hemaglutinina (HA) de um vírus influenza A ou a
proteína hemaglutinina (HA) de um vírus influenza B ou a
proteína neuraminidase (NA) de um vírus influenza A ou a
proteína neuraminidase (NA) de um vírus influenza B é
selecionada a partir das proteínas hemaglutinina (HA) ou das proteínas neuraminidase (NA), conforme listado na listagem de sequências da presente invenção.
[0115] A lista de sequências divulga todas as proteínas hemaglutinina (HA) do vírus influenza A ou influenza B e todas as proteínas neuraminidase do vírus influenza A ou influenza B (NA) que são preferidas na presente invenção. Cada peptídeo ou proteína antigênicos preferido e a sua sequência de codificação podem ser identificados com o elemento de dados mostrado sob o identificador numérico <223>. Por outras palavras, cada sequência preferida de hemaglutinina (HA) ou neuraminidase (NA) a partir de um vírus influenza A ou B pode ser identificada através do número de acesso à base de dados específico (isto é, um número de acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico do GenBank) através da leitura da lista de sequências, entradas sob o identificador numérico <223>.
[0116] Em suma, cada sequência preferida é representada pelo seu número de acesso de Proteína ou de
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99/542 ácido Nucleico do GenBank, que é novamente representada com sete SEQ ID NO distintas preferidas na listagem de sequências (proteína, ácido nucleico de tipo selvagem, otimizações de ácido nucleico 1 a 5) . Isso é evidente a partir do identificador numérico <223>.
[0117] Ou seja, a primeira entrada consecutiva de um número de acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico do GenBank específico na listagem de sequências sob o identificador numérico <223> indica a SEQ ID NO: correspondente à respectiva SEQUÊNCIA DE AMINOÁCIDO (isto é, a SEQ ID NO da Sequência de Proteína de tipo selvagem).
[0118] Além disso, a segunda entrada consecutiva de um número de acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico do GenBank específico na listagem de sequências sob o identificador numérico <223> corresponde à SEQUÊNCIA DE ÁCIDO NUCLEICO do mRNA de tipo selvagem codificando a proteína (isto é, a SEQ ID NO da Sequência de Nucleotídeo de tipo selvagem).
[0119] Além disso, as seguintes cinco entradas consecutivas de um número de acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico do GenBank específico na listagem de sequência sob o identificador numérico <223> conferem as SEQ ID NOs correspondentes a cinco SEQUÊNCIAS DE ÁCIDO NUCLEICO MODIFICADAS/OTIMIZADAS diferentes das sequências conforme descritas no presente documento que codificam a proteína tendo preferencialmente a sequência de aminoácidos conforme definido pela primeira entrada consecutiva para um número de acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico do GenBank específico na listagem de sequências (isto é SEQ ID NO da Sequência Nucleotídica Otimizada).
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100/542 [0120] Consequentemente, uma referência a um número de acesso específico de Proteína ou de ácido Nucleico do GenBank específico é igual a uma referência ao bloco de sete sequências conforme descrito acima (proteína = 1, ácido nucleico = 2, sequências otimizadas = 3-7).
[0121] Um exemplo seria o primeiro número de acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico do GenBank que é mencionado na listagem de sequências, isto é, sob o identificador numérico da SEQ ID NO: 1 <223>: AAA16879. Se o número de acesso AAA16879 for pesquisado ao longo da listagem de sequências é evidente que, conforme descrito acima, sete SEQ ID NO estão ligadas a esse número de acesso: SEQ ID NO:1, SEQ ID NQ:32013, SEQ ID NQ:64025, SEQ ID NQ:96037, SEQ ID NQ:128049, SEQ ID NQ:160061, e SEQ ID NO:192073.
[0122] De acordo com a explicação acima, para a SEQ ID NO:1, o identificador numérico <223> lê sequência proteica derivada e/ou modificada (wt) da hemaglutinina __InfluenzaA AAA16879;
para a SEQ ID NO: 32013, o identificador numérico <223> lê sequência de CDS derivada e/ou modificada (wt) da hemaglutinina __InfluenzaA AAA16879;
para a SEQ ID NO: 64025, o identificador numérico <223> lê sequência de CDS derivada e/ou modificada (optl) da hemaglutinina __InfluenzaA AAA16879;
para a SEQ ID NO: 96037, o identificador numérico <223> lê sequência de CDS derivada e/ou modificada (opt2) da hemaglutinina __InfluenzaA AAA16879;
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101/542 para a SEQ ID NO: 128049, o identificador numérico <223> lê sequência de CDS derivada e/ou modificada (opt3) da hemaglutinina __InfluenzaA AAAI6879;
para a SEQ ID NO: 160061, o identificador numérico <223> lê sequência de CDS derivada e/ou modificada (opt4) da hemaglutinina __InfluenzaA AAAI6879; e para a SEQ ID NO: 192073, o identificador numérico <223> lê sequência de CDS derivada e/ou modificada (opt5) da hemaglutinina __InfluenzaA AAAI6879.
[0123] Portanto, uma referência a AAA16879 é igual a uma referência às sete sequências conforme descrito acima (proteína = Ia sequência, ácido nucleico = 2a sequência, cinco sequências otimizadas diferentes = 3a - 7a sequência).
[0124] Um segundo exemplo seria o segundo número de acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico do GenBank que é mencionado na listagem de sequências, isto é, sob o identificador numérico da SEQ ID NO:2 <223>: AAA16880. O número de acesso AAA16880 está ligado a essas sete sequências na listagem de sequências: SEQ ID NOs: 2 (proteína), 32014 (ácido nucleico de tipo selvagem), 64026 (otimização 1), 96038 (otimização 2), 128050 (otimização 3), 160062 (otimização 4) e 192074 (otimização 5). Assim sendo, uma referência a AAA16880 é igual a uma referência às sete sequências conforme descrito acima.
[0125] Uma ilustração adicional dessa circunstância pode ser vista nas figuras exemplificativas 20-24, que mostram a estrutura da listagem de sequências, ao exemplificar as proteínas hemaglutinina (HA) e proteínas
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neuraminidase (NA) dos vírus influenza A e B e as
glicoproteínas do vírus da raiva:
proteínas de hemaglutinina (HA)
exemplificativas do vírus influenza A (Figura 20);
proteínas de hemaglutinina (HA)
exemplificativas do vírus influenza B (Figura 21);
proteínas de neuraminidase (NA)
exemplificativas do vírus influenza A (Figura 22);
proteínas de neuraminidase (NA)
exemplificativas do vírus influenza B (Figura 23) ;
glicoproteínas exemplificativas do virus da raiva (Figura 24).
[0126] No presente documento é feita referência ao conteúdo das figuras 20-24 do documento PCT/EP2016/075843 depositado em 26 de outubro de 2016, ou seja, o pedido prioritário do presente pedido de patente internacional, que é incorporado no presente documento por referência.
[0127] Em modalidades específicas, o peptídeo ou proteína do vírus influenza é derivado a partir de um vírus (estirpe) influenza A, B ou C.
[0128] O vírus influenza A pode ser selecionado a partir do vírus influenza A caracterizado por uma hemaglutinina (HA) selecionada a partir do grupo consistindo em Hl, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, Hll, H12, H13, H14, H15, H16, H17 e H18. De um modo preferido, o vírus influenza A é selecionado a partir de um vírus influenza caracterizado por uma hemaglutinina (HA) selecionada do grupo consistindo em Hl, H3, H5 ou H9.
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103/542 [0129] Além disso, são particularmente preferidos virus da influenza A caracterizados por uma neuraminidase (NA) selecionada a partir do grupo consistindo em Nl, N2, N3, N4, N5, N6, N7, N8, N9, N10 e Nil. 0 mais preferencialmente, o virus influenza A é caracterizado por uma neuraminidase (NA) selecionada a partir do grupo consistindo em Nl, N2 e N8.
[0130] Em modalidades particularmente preferidas, o virus influenza A é selecionado a partir do
grupo consistindo em H1N1, H1N2, H2N2, H3N1, H3N2, H3N8,
H5N1, H5N2, H5N3, H5N8, H5N9 , H7N1, H7N2, H7N3, H7N4, H7N7,
H7N9, H9N2, H10N8 e H10N7, preferencialmente a partir de
H1N1, H3N2, H5N1 e [0131] H5N8 . Nesse contexto, é particularmente
preferido que a pelo menos uma região de codificação da sequência de mRNA da invenção codifique, pelo menos, um peptideo ou proteína antigênicos derivado a partir de hemaglutinina (HA) e/ou pelo menos um peptideo ou proteína antigênicos derivado a partir de neuraminidase (NA) de um vírus influenza A selecionado a partir do grupo consistindo em H1N1, H1N2, H2N2, H3N1, H3N2, H3N8, H5N1, H5N2, H5N3, H5N8, H5N9, H7N1, H7N2, H7N3, H7N4, H7N7, H7N9, H9N2, H10N8 e H10N7, preferencialmente a partir de H1N1, H3N2, H5N1, H5N8 ou um fragmento ou variante dos mesmos.
[0132] No contexto da presente invenção, um fragmento de uma proteína ou uma variante da mesma codificado por pelo menos uma região de codificação da sequência de mRNA de acordo com a invenção pode tipicamente compreender uma sequência de aminoácidos possuindo uma identidade de sequência de pelo menos 5%, 10%, 20%, 30%,
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40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99%, preferencialmente de pelo menos 70%, mais preferencialmente de pelo menos 80%, ainda mais preferencialmente de pelo menos 85%, ainda mais preferencialmente de pelo menos 90% e o mais preferencialmente de pelo menos 95% ou mesmo 97%, com uma sequência de aminoácidos da respectiva proteína de comprimento total de ocorrência natural ou uma variante da mesma, preferencialmente de acordo com as SEQ ID NOs: 130504 .
[0133] Em modalidades específicas, o peptídeo ou proteína antigênicos são derivados de uma proteína hemaglutinina (HA) de um vírus influenza A de acordo com as SEQ ID NOs: 1-14031.
[0134] Nesse contexto, é adicionalmente preferido que a pelo menos uma sequência de codificação da sequência de mRNA da presente invenção codifique, pelo menos, um peptídeo ou proteína antigênicos que é derivado a partir de uma proteína hemaglutinina (HA) de um vírus influenza A, ou um fragmento ou variante da mesma, em que a proteína hemaglutinina (HA) de um vírus influenza A é selecionada a partir das proteínas hemaglutinina (HA) listadas na listagem de sequências (ver SEQ ID NOs: 1-32012 ou SEQ ID NO: 224269 ou SEQ ID NO: 224309 e explicação na secção Sequências preferidas da presente invenção). Nessa secção, cada hemaglutinina (HA) é identificada pelo número de acesso à base de dados da proteína correspondente (ver a listagem de sequências do identificador numérico <223> que indica o N° . de Acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico (GenBank)). Se o respectivo N° de Acesso de Proteína ou de
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Ácido Nucleico (GenBank) for pesquisado adicionalmente na listagem de sequências, a próxima SEQ ID NO: que mostra o referido N° de Acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico (GenBank) sob o identificador numérico <223> correspondente à sequência de ácido nucleico do mRNA de tipo selvagem codificando a referida proteína. Se novamente o respectivo N° de Acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico (GenBank) for pesquisado adicionalmente na listagem de sequências, as próximas cinco SEQ ID NOs que mostrarem o respectivo N° de Acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico sob o identificador numérico <223> correspondem a cinco sequências de ácido nucleico modificadas/otimizadas do mRNA conforme descrito no presente documento que codificam a proteína tendo preferencialmente a respectiva sequência de aminoácidos conforme mencionado antes (primeira entrada possuindo o respectivo N° de Acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico (GenBank)).
[0135] Particularmente preferidas nesse contexto são as seguintes sequências da proteína HA:
proteína HA da influenza A/Vietnã/1203/2004 (H5N1) (SEQ ID NOs: 13861-13871) proteína HA da influenza A/Vietnã/1194/2004 (H5N1); (SEQ ID NOs: 13859-13860)
- proteína HA da influenza A/Hong Kong/4801/2014 (H3N2); (SEQ ID NOs: 13853-13856) proteína HA da influenza A/Países Baixos/602/2009 (H1N1); (SEQ ID NOs: 13848-13850)
- proteína HA da influenza A/Califórnia/07/2009 (H1N1); (SEQ ID NOs: 13836-13844)
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106/542 proteína HA da influenza A/Michigan/45/2015 (H1N1); (SEQ ID NOs: 13845-13847) [0136] Em modalidades específicas, o peptídeo ou proteína antigênicos são derivados de uma proteína hemaglutinina (HA) de um vírus influenza B de acordo com as SEQ ID NOs: 26398-28576.
[0137] Nesse contexto, é adicionalmente preferido que a pelo menos uma sequência de codificação da sequência de mRNA da presente invenção codifique, pelo menos, um peptídeo ou proteína antigênicos que é derivado a partir de uma proteína hemaglutinina (HA) de um vírus influenza B, ou um fragmento ou variante da mesma, em que a proteína hemaglutinina (HA) de um vírus influenza B é selecionada a partir das proteínas hemaglutinina (HA) listadas na listagem de sequências (ver SEQ ID NOs: 1-32012 ou SEQ ID NO: 224269 ou SEQ ID NO: 224309 e explicação na secção Sequências preferidas da presente invenção). Nessa secção, cada hemaglutinina (HA) é identificada pelo número de acesso à base de dados da proteína correspondente (ver a listagem de sequências do identificador numérico <223> que indica o N° . de Acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico (GenBank)). Se o respectivo N° de Acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico (GenBank) for pesquisado adicionalmente na listagem de sequências, a próxima SEQ ID NO: que mostra o referido N° de Acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico (GenBank) sob o identificador numérico <223> correspondente à sequência de ácido nucleico do mRNA de tipo selvagem codificando a referida proteína. Se novamente o respectivo N° de Acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico (GenBank) for pesquisado adicionalmente na listagem de sequências, as
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107/542 próximas cinco SEQ ID NOs que mostrarem o respectivo N° de Acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico sob o identificador numérico <223> correspondem a cinco sequências de ácido nucleico modificadas/otimizadas do mRNA conforme descrito no presente documento que codificam a proteína tendo preferencialmente a respectiva sequência de aminoácidos conforme mencionado antes (primeira entrada possuindo o respectivo N° de Acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico (GenBank)). Particularmente preferidas nesse contexto são as seguintes sequências da proteína HA:
proteína HA da influenza B/Phuket/3037/2013 (EPI540671; SEQ ID NOs: 28530-28532) proteína HA da influenza B/Brisbane/60/2008 (SEQ ID NOs: 28524-28529) [0138] Em modalidades específicas adicionais, o peptídeo ou proteína antigênicos são derivados de uma proteína neuraminidase (NA) de um vírus influenza A de acordo com as SEQ ID NOs: 14032-26397, 224309, ou 224310.
[0139] Nesse contexto, é adicionalmente preferido que a pelo menos uma sequência de codificação da sequência de mRNA da presente invenção codifique, pelo menos, um peptídeo ou proteína antigênicos que é derivado a partir de uma proteína neuraminidase (NA) de um vírus influenza A, ou um fragmento ou variante da mesma, em que a proteína neuraminidase (NA) de um vírus influenza A é selecionada a partir das proteínas neuraminidase (NA) listadas na listagem de sequências (ver SEQ ID NOs: 1-32012 ou SEQ ID NO: 224269 ou SEQ ID NO: 224309 e explicação na secção Sequências preferidas da presente invenção). Nessa secção, cada neuraminidase (NA) é identificada pelo número
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108/542 de acesso à base de dados da proteína correspondente (ver a listagem de sequências do identificador numérico <223> que indica ο N° . de Acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico (GenBank)). Se o respectivo N° de Acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico (GenBank) for pesquisado adicionalmente na listagem de sequências, a próxima SEQ ID NO: que mostra o referido N° de Acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico (GenBank) sob o identificador numérico <223> correspondente à sequência de ácido nucleico do mRNA de tipo selvagem codificando a referida proteína. Se novamente o respectivo N° de Acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico (GenBank) for pesquisado adicionalmente na listagem de sequências, as próximas cinco SEQ ID NOs que mostrarem o respectivo N° de Acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico sob o identificador numérico <223> correspondem a cinco sequências de ácido nucleico modificadas/otimizadas do mRNA conforme descrito no presente documento que codificam a proteína tendo preferencialmente a respectiva sequência de aminoácidos conforme mencionado antes (primeira entrada possuindo o respectivo N° de Acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico (GenBank)).
[0140] Particularmente preferidas nesse contexto são as seguintes sequências da proteína NA:
- Proteína NA da influenza Α/Hong Kong/4801/2014 (H3N2): SEQ ID NOs: 26251-26254 Proteína NA da influenza A/Califórnia/7/2009 (HlNl)pdmO9: SEQ ID NOs: 26238-26243 Proteína NA da influenza A/Vietnã/1194/2004 (H5N1): SEQ ID NOs: 224310
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Proteína NA da influenza A/Vietnã/1203/2004) (H5N1): SEQ ID NOs: 26255-26257
Proteína NA da influenza A/Paises Baixos/602/2009 (H1N1): SEQ ID NOs: 26246-26250
Proteína NA da influenza A/Michigan/45/2015 (H1N1); (SEQ ID NOs: 26244-26245) [0141] Em modalidades específicas adicionais, o peptídeo ou proteína antigênicos são derivados de uma proteína neuraminidase (NA) de um vírus influenza B de acordo com as SEQ ID NOs: 28577-30504.
[0142] Nesse contexto, é adicionalmente preferido que a pelo menos uma sequência de codificação da sequência de mRNA da presente invenção codifique, pelo menos, um peptídeo ou proteína antigênicos que é derivado a partir de uma proteína neuraminidase (NA) de um vírus influenza B, ou um fragmento ou variante da mesma, em que a proteína neuraminidase (NA) de um vírus influenza B é selecionada a partir das proteínas neuraminidase (NA) listadas na listagem de sequências (ver SEQ ID NOs: 1-32012 ou SEQ ID NO: 224269 ou SEQ ID NO: 224309 e explicação na secção Sequências preferidas da presente invenção). Nessa secção, cada neuraminidase (NA) é identificada pelo número de acesso à base de dados da proteína correspondente (ver a listagem de sequências do identificador numérico <223> que indica o N° . de Acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico (GenBank)). Se o respectivo N° de Acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico (GenBank) for pesquisado adicionalmente na listagem de sequências, a próxima SEQ ID NO: que mostra o referido N° de Acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico (GenBank) sob o identificador numérico <223> correspondente
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110/542 à sequência de ácido nucleico do mRNA de tipo selvagem codificando a referida proteína. Se novamente o respectivo N° de Acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico (GenBank) for pesquisado adicionalmente na listagem de sequências, as próximas cinco SEQ ID NOs que mostrarem o respectivo N° de Acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico sob o identificador numérico <223> correspondem a cinco sequências de ácido nucleico modificadas/otimizadas do mRNA conforme descrito no presente documento que codificam a proteína tendo preferencialmente a respectiva sequência de aminoácidos conforme mencionado antes (primeira entrada possuindo o respectivo N° de Acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico (GenBank)).
[0143] Particularmente preferidas nesse contexto são as seguintes sequências da proteína NA:
Proteína NA da influenza B/Brisbane/60/2008: SEQ ID NOs: 30455-30460
Proteína NA da influenza B/Phuket/3037/2013: SEQ ID NOs: 30461-30462 [0144] Além disso, nesse contexto, a região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado de hemaglutinina (HA) e/ou neuraminidase (NA) de um vírus influenza ou um fragmento, variante ou derivado do mesmo, pode ser selecionada de qualquer sequência de ácido nucleico compreendendo uma região de codificação codificando hemaglutinina (HA) ou neuraminidase (NA) derivada de qualquer vírus da influenza isolado ou um fragmento ou variante do mesmo.
[0145] Em uma modalidade preferida, a presente invenção confere, desse modo, uma sequência de mRNA
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111/542 compreendendo pelo menos uma região de codificação, em que a região de codificação codificando a hemaglutinina (HA) de um vírus influenza A compreende ou consiste em qualquer uma das sequências de ácido nucleico conforme divulgado na listagem de sequências, (isto é, SEQ ID NOs: 32013-46043; 64025-78055, 224085-224106, 96037-110067, 128049-142079, 160061-174091, 192073-206103; ver explicação acima e explicação sob a secção Sequências preferidas da presente invenção) ou um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0146] Nesse contexto, é particularmente preferido que a sequência de mRNA de acordo com a invenção compreenda pelo menos uma região de codificação codificando hemaglutinina (HA) de um vírus influenza A compreendendo uma sequência de RNA selecionada de sequências de RNA sendo idêntica ou pelo menos 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica com as sequências de RNA conforme divulgado na listagem de sequências, ver explicação acima e explicação sob a secção Sequências preferidas da presente invenção, (SEQ ID NOs: 32013-46043; 64025-78055, 224085-224106, 96037-110067, 128049-142079, 160061-174091, 192073-206103) ou um fragmento ou variante das mesmas.
[0147] Em modalidades particularmente preferidas, a sequência de mRNA compreende pelo menos uma região de codificação codificando a hemaglutinina (HA) de um vírus influenza A compreendendo uma sequência de RNA selecionada a partir das seguintes sequências de RNA:
- mRNA codificando a proteína HA da influenza A/Vietnã/1203/2004 (H5N1), preferencialmente sequências de
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112/542 mRNA de acordo com as SEQ ID NOs: 45873-45883, 77885-77895, 109897-109907, 141909-141919, 173921-173931, 205933-205943.
- mRNA codificando a proteína HA da influenza A/Vietnã/1194/2004 (H5N1), preferencialmente sequências de mRNA de acordo com as SEQ ID NOs: 45871, 45872, 77883, 77884, 109895, 109896, 141907, 141908, 173919, 173920, 205931, 205932.
- mRNA codificando a proteína HA da influenza A/Hong Kong/4801/2014 (H3N2), preferencialmente sequências de mRNA de acordo com as SEQ ID NOs: 45865-45868, 7787777877, 109889-109889, 141901-141901, 173913-173913, 205925205925.
- mRNA codificando a proteína HA da influenza A/Paises Baixos/602/2009 (H1N1), preferencialmente sequências de mRNA de acordo com as SEQ ID NOs: 4586045862, 77872-77874, 109884-109886, 173908-173910, 205920205922 .
- mRNA codificando a proteína HA da influenza A/Califórnia/07/2009 (H1N1), preferencialmente sequências de mRNA de acordo com as SEQ ID NOs: 45848-45856, 7786077868, 109872-109880, 141884-141892, 173896-173904, 205908205916
- mRNA codificando a proteína HA da influenza A/Michigan/45/2015 (H1N1), preferencialmente sequências de mRNA de acordo com as SEQ ID NOs: 45857-45859, 77869-77871, 109881-109883, 141893-141895, 173905-173907, 205917-205919.
[0148] Em uma modalidade preferida, a presente invenção confere, desse modo, uma sequência de mRNA compreendendo pelo menos uma região de codificação, em que a região de codificação codificando a hemaglutinina (HA) de
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113/542 um virus influenza B compreende ou consiste em qualquer uma
das sequências de ácido nucleico conforme divulgado na
listagem de sequências tendo um identificador numérico
<223> que inicia por sequência de CDS derivada e/ou
modificada (wt) ou sequência de CDS derivada e/ou
modificada (optl) , sequência de CDS derivada e/ou
modificada (opt2) , sequência de CDS derivada e/ou
modificada (opt3) , sequência de CDS derivada e/ou
modificada (opt4) ou sequência de CDS derivada e/ou
modificada (opt5) ou, respectivamente, ' 'coluna B ou
coluna C da Tabela 2 ou Figuras 21 do documento
PCT/EP2016/075843, SEQ ID NOs: 58410-60588 , 90422-92600,
224107-224112, 122434-124612, 154446-156624, 186458-188636, 218470-220648 ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0149] Nesse contexto, é particularmente preferido que a sequência de mRNA de acordo com a invenção compreenda pelo menos uma região de codificação codificando hemaglutinina (HA) de um vírus influenza B compreendendo uma sequência de RNA selecionada de sequências de RNA sendo idênticas ou pelo menos 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idênticas com as sequências de RNA conforme divulgado na listagem de sequências tendo um identificador numérico
<223> que inicia por sequência de CDS derivada e/ou
modificada (wt) ou sequência de CDS derivada e/ou
modificada (optl) Π Π r sequência de CDS derivada e/ou
modificada (opt2) Π Π r sequência de CDS derivada e/ou
modificada (opt3) Π Π r sequência de CDS derivada e/ou
modificada (opt4) OU sequência de CDS derivada e/ou
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114/542 modificada (opt5) ou, respectivamente, coluna B ou coluna C da Tabela 2 ou Figuras 21 do documento PCT/EP2016/075843, SEQ ID NOs : 58410-60588, 90422-92600, 224107-224112, 122434-124612, 154446-156624, 186458-188636, 218470-220648 ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0150] Em modalidades particularmente preferidas, a sequência de mRNA compreende pelo menos uma região de codificação codificando a hemaglutinina (HA) de um vírus influenza B compreendendo uma sequência de RNA selecionada a partir das seguintes sequências de RNA:
- mRNA codificando a proteína HA da influenza B/Phuket/3037/2013 preferencialmente sequências de mRNA de acordo com as SEQ ID NOs: 60542-60544, 92554-92556, 124566124568, 156578-156580, 188590-188592, 220602-220604.
- mRNA codificando a proteína HA da influenza B/Brisbane/60/2008 (GI: 223950973; FJ766840.1) preferencialmente sequências de mRNA de acordo com as SEQ ID NOs: 60536-60541, 92548-92553, 124560-124565, 156572156577, 188584-188589, 220596-220601.
[0151] Em uma modalidade preferida, a presente invenção confere, desse modo, uma sequência de mRNA compreendendo pelo menos uma região de codificação, em que a região de codificação codificando a neuraminidase (NA) de um vírus influenza A compreende ou consiste em qualquer uma das sequências de ácido nucleico conforme divulgado na listagem de sequências tendo um identificador numérico <223> que inicia por sequência de CDS derivada e/ou modificada (wt) ou sequência de CDS derivada e/ou modificada (optl), sequência de CDS derivada e/ou
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115/542
modificada (opt2; ) , Π sequência de CDS derivada e/ou
modificada (opt3 ) , Π sequência de CDS derivada e/ou
modificada (opt4) ou sequência de CDS derivada e/ou
modificada (opt5; ) ou, respectivamente, coluna B ou
coluna C da Tabela 3 ou Figuras 22 do documento
PCT/EP2016/075843, SEQ ID NOs: 46044-58409, 224311, 224312, 78056-90421, 224113, 224313-224317, 110068-122433, 142080154445, 174092-186457, 206104-218469 ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0152] Nesse contexto, é particularmente preferido que a sequência de mRNA de acordo com a invenção compreenda pelo menos uma região de codificação codificando neuraminidase (NA) de um vírus influenza A compreendendo uma sequência de RNA selecionada de sequências de RNA sendo idênticas ou pelo menos 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idênticas com as sequências de RNA conforme divulgado na listagem de sequências tendo um identificador numérico
<223> que inicia por sequência de CDS derivada e/ou
modificada (wt) ou sequência de CDS derivada e/ou
modificada (optl) Π Π r sequência de CDS derivada e/ou
modificada (opt2) Π Π r sequência de CDS derivada e/ou
modificada (opt3) Π Π r sequência de CDS derivada e/ou
modificada (opt4) OU sequência de CDS derivada e/ou
modificada (opt5) OU, respectivamente, coluna B ou
coluna C da Tabela 3 ou Figuras 22 do documento
PCT/EP2016/ 075843, SEQ ] 1D NOs: 46044-58 409, 224311, 22 4312,
78056-90421 , 224113, 22 4313-224317 , 11 0068- 122433, 142080-
154445, 174092-186457, 206104-218469 ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
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116/542 [0153] Em modalidades particularmente preferidas, a sequência de mRNA compreende pelo menos uma região de codificação codificando a neuraminidase (NA) de um vírus influenza A compreendendo uma sequência de RNA selecionada a partir das seguintes sequências de RNA:
- mRNA codificando a proteína NA da influenza A/Hong Kong/4801/2014 (H3N2) : SEQ ID NOs: 58263-58266, 90275-90278, 122287-122290, 154299-154302, 186311-186314, 218323-218326.
- mRNA codificando a proteína NA da influenza A/Califórnia/7/2009 (HlNl)pdmO9: SEQ ID NOs: 58250-58255, 90262-90267, 122274-122279, 154286-154291, 186298-186303, 218310-218315.
- mRNA codificando a proteína NA da influenza A/Vietnã/1194/2004 (H5N1): SEQ ID NO: 224312.
- mRNA codificando a proteína NA da influenza A/Vietnã/1203/2004) (H5N1): SEQ ID NOs: 58267-58269, 9027990281, 122291-122293, 154303-154305, 186315-186317, 218327218329.
- mRNA codificando a proteína NA da influenza A/Michigan/45/2015 (H1N1), preferencialmente sequências de mRNA de acordo com as SEQ ID NOs: 58256-58257, 90268-90269, 122280-122281, 154292-154293, 186304-186305, 218316-218317.
- mRNA codificando a proteína NA da influenza A/Países Baixos/602/2009 (H1N1), preferencialmente sequências de mRNA de acordo com as SEQ ID NOs: 5825858262, 90270-90274, 122282-122286, 154294-154298, 186306186310, 218318-218322.
[0154] Em uma modalidade preferida, a presente invenção confere, desse modo, uma sequência de mRNA
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117/542 compreendendo pelo menos uma região de codificação, em que a região de codificação codificando a neuraminidase (NA) de um vírus influenza B compreende ou consiste em qualquer uma
das sequências de ácido nucleico conforme divulgado na
listagem de sequências tendo um identificador numérico
<223> que inicia por sequência de CDS derivada e/ou
modificada (wt) ou sequência de CDS derivada e/ou
modificada (optl) , sequência de CDS derivada e/ou
modificada (opt2) , sequência de CDS derivada e/ou
modificada (opt3) , sequência de CDS derivada e/ou
modificada (opt4) ou sequência de CDS derivada e/ou
modificada (opt5) ou, respectivamente, ' 'coluna B ou
coluna C da Tabela 4 ou Figuras 23 do documento
PCT/EP2016/075843, SEQ ID NOs: 60589-62516 , 92601-94528,
124613-126540, 156625-158552, 188637-190564, 220649-222576 ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0155] Nesse contexto, é particularmente preferido que a sequência de mRNA de acordo com a invenção compreenda pelo menos uma região de codificação codificando neuraminidase (NA) de um vírus influenza B compreendendo uma sequência de RNA selecionada de sequências de RNA sendo idênticas ou pelo menos 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idênticas com as sequências de RNA conforme divulgado na listagem de sequências tendo um identificador numérico
<223> que inicia por sequência de CDS derivada e/ou
modificada (wt) ou sequência de CDS derivada e/ou
modificada (optl) , sequência de CDS derivada e/ou
modificada (opt2) , sequência de CDS derivada e/ou
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118/542 modificada (opt3), sequência de CDS derivada e/ou modificada (opt4) ou sequência de CDS derivada e/ou modificada (opt5) ou, respectivamente, coluna B ou coluna C da Tabela 4 ou Figuras 23 do documento PCT/EP2016/075843, SEQ ID NOs: 60589-62516, 92601-94528, 124613-126540, 156625-158552, 188637-190564, 220649-222576 ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0156] Em modalidades particularmente preferidas, a sequência de mRNA compreende pelo menos uma região de codificação codificando a neuraminidase (NA) de um vírus influenza B compreendendo uma sequência de RNA selecionada a partir das seguintes sequências de RNA:
- mRNA codificando a proteína NA da influenza B/Brisbane/60/2008 (GI: 223950973; FJ766840.1): SEQ ID NOs: 62467-62472, 94479-94484, 126491-126496, 158503-158508, 190515-190520, 222527-222532.
- mRNA codificando a proteína NA da influenza B/Phuket/3073/2013): SEQ ID NOs: 62473-62474, 94485-94486, 126497-126498, 158509-158510, 190521-190522, 222533-222534.
Raiva:
[0157] Em uma modalidade particularmente preferida do primeiro aspecto da invenção, o composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA compreende uma região de codificação, codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado da glicoproteína G de um vírus da raiva ou um fragmento ou variante da mesma.
[0158] Nesse contexto, a sequência de aminoácidos de pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos pode ser selecionada a partir de qualquer
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119/542 peptideo ou proteína derivada de uma glicoproteína de um vírus da raiva ou um fragmento ou variante ou de qualquer peptideo ou proteína do vírus da raiva sinteticamente manipulados.
[0159] Em uma modalidade preferida da presente invenção, a região de codificação codifica pelo menos um peptideo ou proteína antigênicos derivado a partir de uma glicoproteína de um vírus da raiva ou um fragmento ou variante da mesma.
[0160] Nesse contexto, é particularmente preferido que a pelo menos uma região de codificação codifique pelo menos uma proteína de tamanho total de uma glicoproteína de um vírus da raiva ou uma variante do mesmo.
[0161] Conforme usado no presente documento, o termo proteína de tamanho total se refere preferencialmente à sequência de comprimento total da proteína indicada na listagem de sequências da presente invenção. Mais preferencialmente, o termo proteína de tamanho total se refere preferencialmente a uma sequência de aminoácidos conforme definido por qualquer uma das SEQ ID NOs listadas na listagem de sequências (SEQ ID NOs: 30505-32012) ou a um aminoácido conferido na base de dados sob o respectivo número de acesso à base de dados.
[0162] Nesse contexto, é adicionalmente preferido que a pelo menos uma sequência de codificação da sequência de mRNA da presente invenção codifique, pelo menos, um peptideo ou proteína antigênicos que é derivado a partir de uma glicoproteína de um vírus da raiva, ou um fragmento ou variante da mesma, em que a glicoproteína de
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120/542 um vírus da raiva é selecionada a partir da glicoproteína de um vírus da raiva listada na listagem de sequências (ver SEQ ID NOs: 1-32012 ou SEQ ID NO: 224269 ou SEQ ID NO: 224309 e explicação na secção Sequências preferidas da presente invenção). Nessa secção, cada glicoproteína de um vírus da raiva é identificada pelo número de acesso à base de dados da proteína correspondente (ver a listagem de sequências do identificador numérico <223> que indica o N°. de Acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico (GenBank)). Se o respectivo N° de Acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico (GenBank) for pesquisado adicionalmente na listagem de sequências, a próxima SEQ ID NO: que mostra o referido N° de Acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico (GenBank) sob o identificador numérico <223> correspondente à sequência de ácido nucleico do mRNA de tipo selvagem codificando a referida proteína. Se novamente o respectivo N° de Acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico (GenBank) for pesquisado adicionalmente na listagem de sequências, as próximas cinco SEQ ID NOs que mostrarem o respectivo N° de Acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico sob o identificador numérico <223> correspondem a cinco sequências de ácido nucleico modificadas/otimizadas do mRNA conforme descrito no presente documento que codificam a proteína tendo preferencialmente a respectiva sequência de aminoácidos conforme mencionado antes (primeira entrada possuindo o respectivo N° de Acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico (GenBank)).
[0163] Particularmente preferidas nesse contexto são as seguintes sequências de glicoproteína: SEQ ID NOs: 31986, 31073, 31102.
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121/542 [0164] Além disso, nesse contexto, a região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado de glicoproteína de um vírus da raiva ou um fragmento, variante ou derivado do mesmo, pode ser selecionada de qualquer sequência de ácido nucleico compreendendo uma região de codificação codificando glicoproteína derivada de qualquer vírus da raiva isolado ou um fragmento ou variante da mesma.
[0165] Em uma modalidade preferida, a presente invenção confere, desse modo, uma sequência de mRNA compreendendo pelo menos uma região de codificação, em que a região de codificação codificando a glicoproteína de um vírus da raiva compreende ou consiste em qualquer uma das sequências de ácido nucleico divulgada na listagem de sequências, (ver a explicação acima; preferencialmente as SEQ ID NOs: 62517-64024; 224270, 224274, 94529-96036, 224271-224273, 126541-128048, 158553-160060, 190565-192072, 222577-224084) ou um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0166] Nesse contexto, é particularmente preferido que a sequência de mRNA de acordo com a invenção compreenda pelo menos uma região de codificação codificando uma glicoproteína derivada de qualquer vírus da raiva compreendendo uma sequência de RNA selecionada de sequências de RNA sendo idêntica ou pelo menos 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica com as sequências de RNA conforme divulgado na listagem de sequências (ver explicação acima, preferencialmente as SEQ ID NOs: 6251764024; 224270, 224274, 94529-96036, 224271-224273, 126541
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128048, 158553-160060, 190565-192072, 222577-224084) ou um fragmento ou variante das mesmas.
[0167] Em modalidades particularmente preferidas, a sequência de mRNA compreende pelo menos uma região de codificação codificando glicoproteina de um virus da raiva (RABV-G) compreendendo uma sequência de RNA selecionada a partir das seguintes sequências de RNA:
[0168] mRNA codificando glicoproteina do virus da raiva (estirpe de Pasteur), preferencialmente sequências de mRNA de acordo com as SEQ ID NOs: 63998, 96010, 128022, 160034, 192046, 224058.
ebola:
[0169] Virus do ebola: Os Ebolavirus e os Marburgvirus geneticamente relacionados são patógenos humanos que causam doenças graves. Os Ebolavirus e os Marburgvirus são filovirus, que são virus encapsulados que apresentam um genoma de RNA de cadeia negativa. A família de Filoviridae compreende três gêneros: Ebolavirus, Marburgvirus e Cuevavírus. O gênero de Cuevavírus e de Marburgvirus incluem apenas uma espécie, ou seja, Lloviu cuevavírus (vírus Lloviu-LLOV) e Marburg marburgvirus, respectivamente, que é subdividido em vírus Marburg (MARV) e vírus Ravn (RAW). O gênero Ebolavirus compreende cinco espécies conhecidas, ou seja, Bundibugyo ebolavirus (vírus Bundibugyo - BDBV), Reston ebolavirus (vírus Reston RESTV), Sudan ebolavirus (vírus do Sudão -SUDV), Tai Forest ebolavirus (vírus da floresta tailandesa -TAFV) (= ebolavirus da Costa do Marfim) e Zaire ebolavirus (virus do Ebola - EBOV). Embora os cuevavírus tenham sido isolados a partir de morcegos e o seu potencial como patógeno em seres
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123/542 humanos permaneça desconhecido, tanto o Ebolavirus como o Marburgvírus são patógenos humanos que causam a doença por Ebolavirus (EVD) e Marburgvírus, respectivamente, caracterizados por febre hemorrágica e uma taxa de mortalidade extremamente elevada. No contexto da presente invenção, qualquer vírus, membro de vírus, estirpe de vírus, tipo de vírus, subtipo de vírus, isolado de vírus, variante de vírus ou serotipo de vírus ou rearranjo genético de um vírus que pertença ou esteja relacionado ou seja derivado a partir dos vírus das famílias e gêneros listados acima são considerados um vírus Ebola.
[0170] Em uma modalidade particularmente preferida do primeiro aspecto da invenção, o composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA compreende uma região de codificação, codificando pelo menos um peptideo ou proteína antigênicos derivado da glicoproteína (GP) e/ou a proteína de matriz 40 (VP40) e/ou a nucleoproteína (NP) de um vírus do gênero Ebolavirus ou Marburgvírus ou um fragmento, variante ou derivado do mesmo.
[0171] Nesse contexto, a sequência de aminoácidos de pelo menos um peptideo ou proteína antigênicos pode ser selecionada a partir de qualquer peptideo ou proteína derivada de uma glicoproteína (GP) e/ou da proteína de matriz 40 (VP40) e/ou da nucleoproteína (NP) uma glicoproteína de um vírus do ebola ou um fragmento ou variante ou de qualquer peptideo ou proteína do vírus ebola sinteticamente manipulado.
[0172] Em uma modalidade preferida da presente invenção, a região de codificação codifica pelo menos um peptideo ou proteína antigênicos derivado a partir de uma
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124/542 glicoproteína de um vírus do ebola ou um fragmento ou variante da mesma. Nesse contexto, é particularmente preferido que a pelo menos uma região de codificação codifique pelo menos uma proteína de tamanho total de uma glicoproteína de um vírus do ebola ou uma variante do mesmo.
[0173] Particularmente preferidas nesse contexto são as seguintes sequências de aminoácidos da glicoproteína do ebola: SEQ ID NOs: 1 a 6 do pedido de patente WQ2016097065, ou fragmentos ou variantes dessas sequências. Nesse contexto, as SEQ ID NOs: 1 a 6 da WQ2016097065 e a divulgação relacionada com as SEQ ID NOs: 1 a 6 da WQ2016097065 são incorporadas no presente documento por referência.
[0174] Particularmente preferidas nesse contexto são as seguintes sequências de aminoácidos da VP40 do ebola: SEQ ID NOs: 7 a 12 do pedido de patente WQ2016097065, ou fragmentos ou variantes dessas sequências. Nesse contexto, as SEQ ID NOs: 7 a 12 da WQ2016097065 e a divulgação relacionada com as SEQ ID NOs: 7 a 12 da WQ2016097065 são incorporadas no presente documento por referência.
[0175] Particularmente preferidas nesse contexto são as seguintes sequências de aminoácidos da NP do ebola: SEQ ID NOs: 13 a 18 do pedido de patente WQ2016097065, ou fragmentos ou variantes dessas sequências. Nesse contexto, as SEQ ID NOs: 13 a 18 da WQ2016097065 e a divulgação relacionada com as SEQ ID NOs: 13 a 18 da WQ2016097065 são incorporadas no presente documento por referência.
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125/542 [0176] Em uma modalidade preferida, a presente invenção confere uma sequência de mRNA compreendendo pelo menos uma região de codificação, em que a região de codificação codificando um peptídeo ou proteína antigênicos conforme especificado no presente documento de um vírus Ebola compreende ou consiste em qualquer uma das sequências de ácido nucleico de acordo com as SEQ ID NOs: 20 a 27 do pedido de patente W02016097065, ou fragmentos ou variantes dessas sequências. Nesse contexto, as SEQ ID NOs: 20 a 27 da WQ2016097065 e a divulgação relacionada com as SEQ ID NOs: 20 a 27 da WQ2016097065 são incorporadas no presente documento por referência.
[0177] Em modalidades particularmente preferidas, a sequência de mRNA compreende pelo menos uma região de codificação codificando a glicoproteína de um vírus do Ebola. Em modalidades particularmente preferidas, a sequência de mRNA compreende pelo menos uma região de codificação codificando a VP40 de um vírus do Ebola. Em modalidades particularmente preferidas, a sequência de mRNA compreende pelo menos uma região de codificação codificando a NP de um vírus do Ebola.
[0178] Em modalidades particularmente preferidas, a sequência de mRNA compreende pelo menos uma região de codificação codificando um peptídeo ou proteína antigênicos de um vírus do ebola compreendendo uma sequência de RNA selecionada das seguintes sequências de RNA:
mRNA codificando a proteína GP do vírus do ebola: SEQ ID NOs: 37-39 do pedido de patente WQ2016097065, ou fragmentos ou variantes dessas sequências. Nesse
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126/542 contexto, as SEQ ID NOs: 37-39 da WQ2016097065 e a divulgação relacionada com as SEQ ID NOs: 37-39 da WQ2016097065 são incorporadas no presente documento por referência.
mRNA codificando VP40 do vírus do ebola: SEQ ID NOs: 40-42 do pedido de patente WO2016097065, ou fragmentos ou variantes dessas sequências. Nesse contexto, as SEQ ID NOs: 40-42 da WQ2016097065 e a divulgação relacionada com as SEQ ID NOs: 40-42 da WQ2016097065 são incorporadas no presente documento por referência.
mRNA codificando NP do vírus do ebola: SEQ ID NOs: 43-44 do pedido de patente WO2016097065, ou fragmentos ou variantes dessas sequências. Nesse contexto, as SEQ ID NOs: 43-44 da WQ2016097065 e a divulgação relacionada com as SEQ ID NOs: 43-44 da WQ2016097065 são incorporadas no presente documento por referência.
[0179] Particularmente preferida é a sequência de mRNA compreendendo uma sequência de codificação codificando o GP de acordo com a SEQ ID NO: 224362.
Antígenos tumorais: [0180] Preferivelmente, a pelo menos uma sequência de codificação do composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA de acordo com a invenção codifica um antígeno tumoral, preferencialmente conforme definido no presente documento, ou um fragmento ou variante do mesmo, em que o antígeno tumoral é de preferência selecionado do grupo consistindo em lA01_HLA-A/m; 1A02; 5T4; ACRBP; AFP; AKAP4; alfa-actinina-_4/m; alfa-metilacilcoenzima_A_racemase; ANDR; ART-4; ARTCl/m; AURKB; B2MG; B3GN5; B4GN1; B7H4; BAGE-1; BASI; BCL-2; bcr/abl; beta
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127/542 catenina/m; BING-4; BIRC7; BRCAl/m; BY55; calreticulina; CAMEL; CASP-8/m; CASPA; catepsina_B; catepsina_L; CD1A; CD1B; GDIS; CD1D; CD1E; CD20; CD22; CD276; CD33; CD3E; CD3Z; CD44_Isoforma_l; CD44_Isoforma_6; CD4; CD52; CD55; CD56; CD80; CD86; CD8A; CDC27/m; CDE30; CDK4/m; CDKN2A/m; CEA; CEAM6; CH3L2; CLCA2; CML28; CML66; COA-l/m; proteína tipo_coactosina; colágeno_XXIII; COX-2; CP1B1; CSAG2; CT45A1; CT55; CT-_9/BRD6; CTAG2_Isoforma_LAGE-lA; CTAG2_Isoforma_LAGE-lB; CTCFL; Cten; ciclina_Bl; ciclina_Dl; cyp-B; DAM-10; DEP1A; E7; EF1A2; EFTUD2/m; EGFR; EGLN3; ELF2/m; EMMPRIN; EpCam; EphA2; EphA3; ErbB3; ERBB4; ERG; ETV6; EWS; EZH2; FABP7; FCGR3A_Versão_l; FCGR3A_Versão_2; FGF5; FGFR2; fibronectina; FOS; FOXP3; FUT1; G250; GAGE-1; GAGE-2; GAGE-3; GAGE-4; GAGE-5; GAGE-6; GAGE7b; GAGE-8_(GAGE-2D); GASR; GnT-V; GPC3; GPNMB/m; GRM3; HAGE; hepsina; Her2/neu; HLA-A2/m; homeobox_NKX3.1; HOMTES-85; HPG1; HS71A; HS71B; HST-2; hTERT; iCE; IF2B3; IL10; IL-13Ra2; IL2-RA; IL2-RB; IL2-RG; IL-5; IMP3; ITA5; ITB1; ITB6; calicreina-2; calicreina-4; KI20A; KIAA0205; KIF2C; KK-LC-1; LDLR; LGMN; LIRB2; LY6K; MAGA5; MAGA8; MAGAB; MAGE-A10; MAGE-Al2; MAGE-Al; MAGE-A2; MAGE-A3; MAGE-A4; MAGE-A6; MAGE-A9; MAGE-BIO; MAGE-B16; MAGE-B17; MAGE-_B1; MAGE-B2; MAGE-B3; MAGE-B4; MAGE-B5; MAGE-B6; MAGE-CI; MAGEC2; MAGE-C3; MAGE-D1; MAGE-D2; MAGE-D4; MAGE-_E1; MAGEE1_(MAGE1); MAGE-E2; MAGE-F1; MAGE-H1; MAGEL2; mamaglobina_A; MART-l/melana-A; MART-2; MC1_R; M-CSF; mesotelina; MITF; MMP1_1; MMP7; MUC-1; MUM-l/m; MUM-2/m; MYCN; MYO1A; MYO1B; MYO1C; MYOID; MYO1E; MYO1F; MYO1G; MYO1H; NA17; NA88-A; Neo-PAP; NFYC/m; NGEP; NPM; NRCAM; NSE; NUF2; NY-ESO-1; OA1; OGT; OS-9; osteocalcina;
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128/542 osteopontina; p53; PAGE-4; PAI-1; PAI-2; PAP; PATE; PAX3; PAX5; PD1L1; PDCD1; PDEF; PECAI; PGCB; PGFRB; Pim-1_Quinase; Pin-1; PLAC1; PMEL; PML; POTEF; POTE; FRAME; PRDX5/m; PRM2; prosteina; proteinase-3; PSA; PSB9; PSCA; PSGR; PSM; PTPRC; RAB8A; RAGE-1; RARA; RASH; RASK; RASN; RGS5; RHAMM/CD168; RHOC; RSSA; RUI; RU2; RUNX1; S-100; SAGE; SART-_1; SART-2; SART-3; SEPR; SERPINB5; SIA7F; SIA8A; SIAT9; SIRT2/m; SOXIO; SP17; SPNXA; SPXN3; SSX-1; SSX-2; SSX3; SSX-4; ST1A1; STAG2; STAMP-1; STEAP-1; Survivina-2B; survivina; SYCP1; SYT-SSX-1; SYT-SSX-2; TARP; TCRg; TF2AA; TGFB1; TGFR2; TGM-4; TIE2; TKTL1; TPI/m; TRGV11; TRGV9; TRPC1; TRP-p8; TSG10; TSPY1; TVC_(TRGV3); TX101; tirosinase; TYRP1; TYRP2; UFA; VEGFR1; WT1; e XAGE1.
[0181] Outros antigenos úteis para a presente
invenção s ão mostrados abaixo no presente : documento (nomes
de genes seguidos por parenteses com NOs de acesso a
proteína):
lA01_HLA-A/m (UniProtKB: P30443) ; 1A02
(UniProtKB : P01892); 5T4 (UniProtKB: Q13641) ; ACRBP
(UniProtKB : Q8NEB7); AFP (UniProtKB: P02771) ; AKAP4
(UniProtKB : Q5JQC9); alfa-actinina-_ 4/m (UniProtKB:
B4DSX0); alfa-actinina -_4/m (UniProtKB: B4E337); alfa-
actinina-_ 4/m (UniProtKB: 043707); alfa-metilacil-
coenzima_A _racemase (UniProtKB: A0A024RE16); alf a-
metilacil- coenzima_A_racemase (UniProtKB : A8KAC3) ; ANDR
(UniProtKB : P10275); ART-4 (UniProtKB: Q9ULX3); ARTCl/m
(UniProtKB : P52961); AURKB (UniProtKB : Q96GD4) ; B2MG
(UniProtKB : P61769); B3GN5 (UniProtKB: Q9BYG0); B4GN1
(UniProtKB : Q00973); B7H4 (UniProtKB: Q7Z7D3); BAGE-1
(UniProtKB : Q13072); BASI (UniProtKB: P35613); BCL-2
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(UniProtKB: A9QXG9); bcr/abl (UniProtKB: A9UEZ4); bcr/abl
(UniProtKB: A9UEZ7); bcr/abl (UniProtKB: A9UEZ8); bcr/abl
(UniProtKB: A9UEZ9); bcr/abl (UniProtKB: A9UF00); bcr/abl
(UniProtKB: A9UF01); bcr/abl (UniProtKB: A9UF03); bcr/abl
(UniProtKB: A9UF04); bcr/abl (UniProtKB: A9UF05); bcr/abl
(UniProtKB: A9UF06); bcr/abl (UniProtKB: : A9UF08) ; beta-
catenina/m (UniProtKB: P35222) ; beta-catenina/m (UniProtKB:
Q8WYA6); BING-4 (UniProtKB: 015213); BIRC7 (UniProtKB: Q96CA5); BRCAl/m (UniProtKB: A0A024R1V0); BRCAl/m (UniProtKB: A0A024R1V7); BRCAl/m (UniProtKB: A0A024R1Z8); BRCAl/m (UniProtKB: A0A068BFX7); BRCAl/m (UniProtKB: C6YB45); BRCAl/m (UniProtKB: C6YB47); BRCAl/m (UniProtKB: G3XAC3); BY55 (UniProtKB: 095971); calreticulina (UniProtKB: B4DHR1); calreticulina (UniProtKB: B4E2Y9); calreticulina (UniProtKB: P27797); calreticulina (UniProtKB: Q96L12); CAMEL (UniProtKB: 095987); CASP-8/m (UniProtKB: Q14790); CASPA (UniProtKB: Q92851-4); catepsina_B (UniProtKB: A0A024R374); catepsina_B (UniProtKB: P07858); catepsina_L (UniProtKB: A0A024R276); catepsina_L (UniProtKB: P07711); catepsina_L (UniProtKB:
Q9HBQ7) r CD1A (UniProtKB: P06126 CD1B (UniProtKB
P29016) r CD1C (UniProtKB: P29017 CD1D (UniProtKB
P15813) r CD1E (UniProtKB: P15812 CD2 0 (UniProtKB
P11836) r CD22 (UniProtKB: 060926: CD22 (UniProtKB
P20273) r CD22 (UniProtKB: Q0EAF5) r CD276 (UniProtKB
Q5ZPR3) r CD33 (UniProtKB: B4DF51 CD33 (UniProtKB
P20138) r CD33 (UniProtKB: Q546G0 CD3E (UniProtKB
P07766) r CD3Z (UniProtKB: P20963) ; CD4 4 Isoforma
(UniProtKB: P16070); CD44_Isoforma_6 (UniProtKB: P16070-6);
CD4 (UniProtKB: P01730); CD52 (UniProtKB: P31358); CD52
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(UniProtKB: Q6IBD0) ; CD52 (UniProtKB: : V9HWN9 ) ; CD55
(UniProtKB: B1AP15) ; CD55 (UniProtKB : D3DT85 ) ; CD55
(UniProtKB: D3DT86) ; CD55 (UniProtKB: : P08174 ) ; CD5 6
(UniProtKB: P13591) ; CD8 0 (UniProtKB: : A0N0P2 ) ; CD8 0
(UniProtKB: P33681) ; CD8 6 (UniProtKB: : P42081 ) ; CD8A
(UniProtKB: P01732); CDC27/m (UniProtKB: G5EA36); CDC27/m
(UniProtKB: P30260) ; CDE30 (UniProtKB: P28908); CDK4/m
(UniProtKB: A0A024RBB6); CDK4/ m (UniProtKB: P11802) ; CDK4/m
(UniProtKB: Q6LC83); CDK4/m ( OniProtKB: Q96BE9); CDKN2A/m
(UniProtKB: D1LYX3); CDKN2A/m (UniProtKB: G3XAG3); CDKN2A/m
(UniProtKB: K7PML8); CDKN2A/m (UniProtKB: L8E941); CDKN2A/m
(UniProtKB: Q8N726); CEA (Seg . de ref.: NP_004354 ) ; CEAM6
(UniProtKB: P40199) ; CH3L2 (UniProtKB: Q15782) ; CLCA2
(UniProtKB: Q9UQC9) ; CML28 (UniProtKB: Q9NQT4) ; CML66
(UniProtKB: Q96RS6); COA-l/m (UniProtKB: Q5T124); proteína
tipo_coactosina(UniProtKB: Q14019); colágeno_XXIII (UniProtKB: L8EAS4); colágeno_XXIII (UniProtKB: Q86Y22); COX-2 (UniProtKB: Q6ZYK7); CP1B1 (UniProtKB: Q16678); CSAG2 (UniProtKB: Q9Y5P2-2); CSAG2 (UniProtKB: Q9Y5P2); CT45A1 (UniProtKB: Q5HYN5); CT55 (UniProtKB: Q8WUE5); CT-_9/BRD6 (UniProtKB: Q58F21); CTAG2_Isoforma_LAGE-lA (UniProtKB: 075638-2); CTAG2_Isoforma_LAGE-lB (UniProtKB: 075638); CTCFL (UniProtKB: Q8NI51); Cten (UniProtKB: Q8IZW8); ciclina_Bl (UniProtKB: P14635); ciclina_Dl (UniProtKB: P24385); cyp-B (UniProtKB: P23284); DAM-10 (UniProtKB: P43366); DEP1A (UniProtKB: Q5TB30); E7 (UniProtKB: P03129); E7 (UniProtKB: P06788); E7 (UniProtKB: P17387); E7 (UniProtKB: P06429); E7 (UniProtKB: P27230); E7 (UniProtKB: P24837); E7 (UniProtKB: P21736); E7 (UniProtKB: P26558); E7 (UniProtKB: P36831); E7 (UniProtKB: P36833); E7 (UniProtKB:
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Q9QCZ1); E7 (UniProtKB: Q81965); E7 (UniProtKB: Q80956) ;
EF1A2 (UniProtKB: Q05639); EFTUD2/m (UniProtKB: Q15029);
EGFR (UniProtKB: A0A0B4J1Y5); EGFR (UniProtKB: E7BSV0);
EGFR (UniProtKB: L0R6G1); EGFR (UniProtKB : P00533-2 ); EGFR
(UniProtKB : P00533); EGFR (UniProtKB: Q147T7); EGFR
(UniProtKB : Q504U8); EGFR (UniProtKB: Q8NDU8); EGLN3
(UniProtKB : Q9H6Z9); ELF2/m (UniProtKB: B7Z720); : EMMPRIN
(UniProtKB : Q54A51); EpCam (UniProtKB: P16422); EphA2
(UniProtKB : P29317); EphA3 (UniProtKB: P29320); EphA3
(UniProtKB : Q6P4R6); ErbB3 (UniProtKB: B3KWG5); ErbB3
(UniProtKB : B4DGQ7); ERBB4 (UniProtKB : Q15303) ; ERG
(UniProtKB : Pl1308); ETV6 (UniProtKB: P41212) ; EWS
(UniProtKB : Q01844); EZH2 (UniProtKB: F2YMM1); EZH2
(UniProtKB : G3XAL2); EZH2 (UniProtKB: L0R8 55) ; EZH2
(UniProtKB : Q15910); EZH2 (UniProtKB: S4S3R8); FABP7
(UniProtKB : 015540); FCGR3A_Versão_l (UniProtKB: P08637);
FCGR3A_Versão_2 (CCDS: CCDS1232.1); FGF5 (UniProtKB:
P12034); FGF5 (UniProtKB: Q60518); FGFR2 (UniProtKB:
P21802); fibronectina (UniProtKB: A0A024R5I6); fibronectina (UniProtKB: A0A024RB01); fibronectina (UniProtKB:
A0A024RDT9); fibronectina (UniProtKB: A0A024RDV5); fibronectina (UniProtKB: A6NH44); fibronectina (UniProtKB: A8K6A5); fibronectina (UniProtKB: B2R627); fibronectina (UniProtKB: B3KXM5); fibronectina (UniProtKB: B4DIC5); fibronectina (UniProtKB: B4DN21); fibronectina (UniProtKB: B4DS98); fibronectina (UniProtKB: B4DTH2); fibronectina (UniProtKB: B4DTK1); fibronectina (UniProtKB: B4DU16); fibronectina (UniProtKB: B7Z3W5); fibronectina (UniProtKB: B7Z939); fibronectina (UniProtKB: G5E9X3); fibronectina (UniProtKB: Q9H382); FOS (UniProtKB: P01100); FOXP3
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(UniProtKB: Q9BZS1); FUT1 (UniProtKB : P19526); G250
(UniProtKB: Q16790); GAGE-1 (Genbank: ΑΆΑ82744); GAGE-2
(UniProtKB: Q6NT46); GAGE-3 (UniProtKB: Q13067); GAGE-4
(UniProtKB: Q13068); GAGE-5 (UniProtKB: Q13069); GAGE-6
(UniProtKB: Q13070); GAGE7b (UniProtKB : 076087); GAGE-
8_(GAGE-2D) (UniProtKB: Q9UEU5); GASR (UniProtKB: P32239); GnT-V (UniProtKB: Q09328); GPC3 (UniProtKB: I6QTG3); GPC3 (UniProtKB: P51654); GPC3 (UniProtKB: Q8IYG2); GPNMB/m (UniProtKB: A0A024RA55); GPNMB/m (UniProtKB: Q14956); GPNMB/m (UniProtKB: Q8IXJ5); GPNMB/m (UniProtKB: Q96F58); GRM3 (UniProtKB: Q14832); HAGE (UniProtKB: Q9NXZ2); hepsina (UniProtKB: B2ZDQ2); hepsina (UniProtKB: P05981); Her2/neu (UniProtKB: B4DTR1); Her2/neu (UniProtKB: L8E8G2); Her2/neu (UniProtKB: P04626); Her2/neu (UniProtKB: Q9UK79); HLA-A2/m (UniProtKB: Q95387); HLA-A2/m (UniProtKB: Q9MYF8); homeobox_NKX3.1 (UniProtKB: Q99801); HOM-TES-85 (UniProtKB: B2RBQ6); HOM-TES-85 (UniProtKB: Q9P127); HPG1 (Pubmed:
12543784) ; HS71A (UniProtKB : P0DMV8 ) ; HS71B (UniProtKB
P0DMV9); HST-2 (UniProtKB: P10767) ; hTERT (UniProtKB
094807) ; ICE (UniProtKB: 000748); IF2B3 (UniProtKB
000425); IL10 (UniProtKB: P22301); IL-13Ra2 (UniProtKB
QI4627) ; IL2-RA (UniProtKB: P01589) ; IL2-RB (UniProtKB
P14784); IL2-RG (UniProtKB : P31785 ); IL-5 (UniProtKB
P05113); IMP3 (UniProtKB: Q9NV31) ; ITA5 (UniProtKB
P08648) ; ITB1 (UniProtKB: P05556) ; ITB6 (UniProtKB
P18564); calicreina-2 (UniProtKB: A0A024R4J4); calicreina-2 (UniProtKB: A0A024R4N3); calicreina-2 (UniProtKB: B0AZU9); calicreina-2 (UniProtKB: B4DU77); calicreina-2 (UniProtKB: P20151); calicreina-2 (UniProtKB: Q6T774); calicreina-2 (UniProtKB: Q6T775); calicreina-4 (UniProtKB: A0A0C4DFQ5) ;
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133/542 calicreína-4 (UniProtKB: Q5BQA0); calicreína-4 (UniProtKB: Q96PT0); calicreína-4 (UniProtKB: Q96PT1); calicreína-4 (UniProtKB: Q9Y5K2); KI20A (UniProtKB: 095235); KIAA0205 (UniProtKB: Q92604); KIF2C (UniProtKB: Q99661); KK-LC-1 (UniProtKB: Q5H943); LDLR (UniProtKB: P01130); LGMN (UniProtKB: Q99538); LIRB2 (UniProtKB: Q8N423); LY6K (UniProtKB: Q17RY6); MAGA5 (UniProtKB: P43359); MAGA8 (UniProtKB: P43361); MAGAB (UniProtKB: P43364); MAGE-A10 (UniProtKB: A0A024RC14); MAGE-A12 (UniProtKB: P43365);
MAGE-A1 (UniProtKB: P43355); MAGE-A2 (UniProtKB: P43356); MAGE-A3 (UniProtKB: P43357); MAGE-A4 (UniProtKB:
A0A024RC12) ; MAGE-A4 (UniProtKB: P43358); MAGE-A4
(UniProtKB: Q1RN33); MAGE-A6 (UniProtKB : A8K072); MAGE-A6
(UniProtKB: P43360); MAGE-A6 (UniProtKB : Q6FHI5); MAGE-A9
(UniProtKB: P43362); MAGE-B10 (UniProtKB: : Q96LZ2); MAGE-B16
(UniProtKB: A2A368); MAGE-B17 (UniProtKB: : A8MXT2); MAGE-_B1
(UniProtKB: Q96TG1); MAGE-B2 (UniProtKB : 015479); MAGE-B3
(UniProtKB: 015480); MAGE-B4 (UniProtKB : 015481); MAGE-B5
(UniProtKB: Q9BZ81); MAGE-B6 (UniProtKB : Q8N7X4); MAGE-C1
(UniProtKB: 060732); MAGE-C2 (UniProtKB : Q9UBF1); MAGE-C3
(UniProtKB: Q8TD91); MAGE-D1 (UniProtKB : Q9Y5V3); MAGE-D2
(UniProtKB: Q9UNF1); MAGE-D4 (UniProtKB: Q96JG8); MAGE-_E1
(UniProtKB: Q6IAI7); MAGE-E1 JMAGEl) (UniProtKB: Q9HCI5);
MAGE-E2 (UniProtKB: Q8TD90); MAGE-F1 (UniProtKB: Q9HAY2);
MAGE-H1 (UniProtKB: Q9H213); MAGEL2 (UniProtKB: Q9UJ55);
mamaglobina_A (UniProtKB: Q13296); mamaglobina_A (UniProtKB: Q6NX70); MART-l/melana-A (UniProtKB: Q16655);
MART-2 (UniProtKB: Q5VTY9); MC1_R (UniProtKB: Q01726); MC1_R (UniProtKB: Q1JUL4); MC1_R (UniProtKB: Q1JUL6); MC1_R (UniProtKB: Q1JUL8); MCI R (UniProtKB: Q1JUL9); MCI R
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(UniProtKB : Q1JUM0); MCI _R (UniProtKB: QIJUM2); MC1_R
(UniProtKB : Q1JUM3); MCI _R (UniProtKB: QIJUM4); MC1_R
(UniProtKB : Q1JUM5); MCI _R (UniProtKB: Q6UR92); MC1_R
(UniProtKB : Q6UR94); MCI _R (UniProtKB: Q6UR95); MC1_R
(UniProtKB : Q6UR96); MCI _R (UniProtKB: Q6UR97); MC1_R
(UniProtKB : Q6UR98); MCI _R (UniProtKB: Q6UR99); MC1_R
(UniProtKB : Q6URA0); MCI _R (UniProtKB: Q86YW1); MC1_R
(UniProtKB : V9Q5S2); MCI _R (UniProtKB: V9Q671); MC1_R
(UniProtKB : V9Q783); MCI _R (UniProtKB: V9Q7F1); MC1_R
(UniProtKB : V9Q8N1); MCI _R (UniProtKB: V9Q977); MC1_R
(UniProtKB : V9Q9P5); MCI _R (UniProtKB: V9Q9R8); MC1_R
(UniProtKB : V9QAE0); MCI _R (UniProtKB: V9QAR2); MC1_R
(UniProtKB : V9QAW3); MCI _R (UniProtKB: V9QB02); MC1_R
(UniProtKB : V9QB58); MCI _R (UniProtKB: V9QBY6); MC1_R
(UniProtKB : V9QC17); MCI _R (UniProtKB: V9QC66); MC1_R
(UniProtKB : V9QCQ4); MCI _R (UniProtKB: V9QDF4); MC1_R
(UniProtKB : V9QDN7); MCI _R (UniProtKB: V9QDQ6); M-CSF
(UniProtKB : P09603); mesotelina (UniProtKB : Q13421 ) ; MITE
(UniProtKB : 075030-8) ; MITE (UniProtKB: 075030-9) ; MITE
(UniProtKB : 075030); MMP1_1 (UniProtKB: B3KQS8) ; MMP7
(UniProtKB : P09237); MUC- 1 (Genbank: AAA60019) ; MUM-l/m
(Seq. de ref.: NP_116242) r MUM-2/m (UniProtKB: Q9Y5R8);
MYCN (UniProtKB: P041 98) ; : MY01A (UniProtKB: : Q9UBC5) ; MYOIB
(UniProtKB : 043795); MYO1C (UniProtKB: 000159); MYOID
(UniProtKB : 094832); MYO IE (UniProtKB: Q12965); MYO IF
(UniProtKB : 000160); MYO1G (UniProtKB: B0I1T2); MYO1H (Seq.
de ref.: 1 \TP_001094891) ; NA17 (UniProtKB: Q3V5L5); NA88-A
(Pubmed: 10790436); Neo-PAP (UniProtKB: Q9BWT3); NFYC/m
(UniProtKB : Q13952); NGEP (UniProtKB: Q6IWH7) ; NPM
(UniProtKB : P06748); NRCAM (UniProtKB: Q92823: 1 ; NSE
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135/542
(UniProtKB: P09104) ; NUF2 (UniProtKB: Q9BZD4); NY-ESO-1
(UniProtKB: P78358 ) ; 0A1 (UniProtKB: P51810); OGT
(UniProtKB: 015294: I ; OS-9 (UniProtKB: B4DH11); OS-9
(UniProtKB: B4E321: l ; OS-9 (UniProtKB: B7Z8E7); OS-9
(UniProtKB: Q13438) ; osteocalcina (UniProtKB: P02818);
osteopontina (UniProtKB: A0A024RDE2); osteopontina
(UniProtKB: A0A024RDE6); osteopontina (UniProtKB:
A0A024RDJ0); osteopontina (UniProtKB: B7Z351); osteopontina
(UniProtKB: F2YQ21); osteopontina (UniProtKB: P10451) ; p53
(UniProtKB: P04637) ; PAGE-4 (UniProtKB: 060829); PAI-1
(UniProtKB: P05121: 1 ; PAI-2 (UniProtKB: P05120); PAP
(UniProtKB: Q06141 ) ; PAP (UniProtKB: Q53S56); PATE
(UniProtKB: Q8WXA2: 1 ; PAX3 (UniProtKB: P23760); PAX 5
(UniProtKB: Q02548) ; PD1L1 (UniProtKB: Q9NZQ7); PDCD1
(UniProtKB: Q15116) ; PDEF (UniProtKB: 095238); PECA1
(UniProtKB: P16284) ; PGCB (UniProtKB: Q96GW7); PG ERB
(UniProtKB: P09619); Pim-1_-Quinase (UniProtKB:
A0A024RD25); Pin-1 (UniProtKB : 015428); Pin-1 (UniProtKB:
Q13526); Pin-1 (UniProtKB: Q49AR7); PLAC1 (UniProtKB: Q9HBJ0); PMEL (UniProtKB: P40967); PML (UniProtKB: P29590); POTEF (UniProtKB: A5A3E0); POTE (UniProtKB: Q86YR6); FRAME (UniProtKB: A0A024R1E6); FRAME (UniProtKB: P78395); PRDX5/m (UniProtKB: P30044); PRM2 (UniProtKB: P04554); prosteina (UniProtKB: Q96JT2); proteinase-3 (UniProtKB: D6CHE9); proteinase-3 (UniProtKB: P24158); PSA (UniProtKB: P55786); PSB9 (UniProtKB: P28065); PSCA (UniProtKB: D3DWI6); PSCA (UniProtKB: 043653); PSGR (UniProtKB: Q9H255); PSM (UniProtKB: Q04609); PTPRC (Seq. de ref.: NP_002829); RAB8A (UniProtKB: P61006); RAGE-1 (UniProtKB: Q9UQ07); RARA (UniProtKB: P10276); RASH (UniProtKB: P01112); RASK
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136/542
(UniProtKB: P01116) ; RASN (UniProtKB: P01111), ; RGS5
(UniProtKB: 015539); RHAMM/CD168 (UniProtKB: 075330 ) ; RHOC
(UniProtKB: P08134) i; RSSA (UniProtKB: P08865) ; RU1
(UniProtKB: Q9UHJ3) ; RU2 (UniProtKB: Q9UHG0); RUNX1
(UniProtKB: Q01196) ; S-100 (UniProtKB: V9HW39) ; SAGE
(UniProtKB: Q9NXZ1); SART-_1 (UniProtKB: 043290); SART-2
(UniProtKB: Q9UL01) ; SART-3 (UniProtKB: Q15020) ; SEPR
(UniProtKB: Q12884) ; SERPINB5 (UniProtKB: P36952), ; SIA7 F
(UniProtKB: Q969X2) ; SIA8A (UniProtKB: Q92185); STAT 9
(UniProtKB: Q9UNP4) ; SIRT2/] m (UniProtKB: A0A024R0G8);
SIRT2/m (UniProtKB: Q8IXJ6); SOXIO (UniProtKB: P56693);
SP17 (UniProtKB: Q15506); SPNXA (UniProtKB : Q9NS26) ; SPXN3
(UniProtKB: Q5MJ09) ; SSX-1 (UniProtKB: Q16384); SSX-2
(UniProtKB: Q16385) ; SSX3 (UniProtKB: Q99909); SSX-4
(UniProtKB: 060224) ; ST1A1 (UniProtKB: P50225); ST AG 2
(UniProtKB: Q8N3U4-2 ); STAMP-1 (UniProtKB: Q8NFT2); STEAP-1
(UniProtKB: A0A024RA63); STEAP-1 (UniProtKB: Q9UHE8); Survivina-2B (UniProtKB: 015392-2); survivina (UniProtKB: 015392); SYCP1 (UniProtKB: A0A024R0I2); SYCP1 (UniProtKB: B7ZLS9) ; SYCP1 (UniProtKB: Q15431); SYCP1 (UniProtKB: Q3MHC4); SYT-SSX-1 (UniProtKB: A4PIV7); SYT-SSX-1 (UniProtKB: A4PIV8); SYT-SSX-2 (UniProtKB: A4PIV9); SYTSSX-2 (UniProtKB: A4PIW0); TARP (UniProtKB: Q0VGM3); TCRg
(UniProtKB: A2JGV3); TF2AA (UniProtKB: P52655); TGFB1
(UniProtKB: P01137) ; TGFR2 (UniProtKB: P37173); TGM-4
(UniProtKB: B2R7D1); TIE2 (UniProtKB: Q02763); TKTL1
(UniProtKB: P51854) ; TPI/m (UniProtKB: P60174); TRGV11
(UniProtKB: Q99601) ; TRGV9 (UniProtKB: A4D1X2); TRGV9
(UniProtKB: Q 9 9 6 0 3) ; TRGV9 (UniProtKB: Q 9 9 6 0 4 ) ; TRPC1
(UniProtKB: P48995); TRP-p8 (UniProtKB: Q7Z2W7); TSG10
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(UniProtKB: Q9BZW7); TSPY1 (UniProtKB: Q0 1534); TVC_(TRGV3)
(Genbank: Ml 3231.1) ; TX101 (UniProtKB: Q9BY14-2);
tirosinase (UniProtKB: A0A024DBG7) ; tirosinase (UniProtKB:
L8B082); tirosinase (UniProtKB: L8B086); tirosinase
(UniProtKB: L8B0B9); tirosinase (UniProtKB : 075767);
tirosinase (UniProtKB: : P14679); tirosinase (UniProtKB:
U3M8N0); tirosinase (UniProtKB: U3M9D5); tirosinase
(UniProtKB: U3M9J2); TYRP1 (UniProtKB: : P17643) ; TYRP2
(UniProtKB: P40126); UPA (UniProtKB: Q96NZ 9) ; VEGFR1
(UniProtKB: B5A924); WT1 (UniProtKB: A0A0H5AUY0); WT1
(UniProtKB: P19544); WT1 (UniProtKB: Q06250) ; XAGE1
(UniProtKB: Q9HD64).
Inibidores do ponto de verificação [0182] Foram descobertas moléculas de superfície de células T reguladoras negativas, gue são positivamente reguladas em células T ativadas de modo a amortecer a sua atividade, reduzindo, desse modo, a eficácia das referidas células T ativadas na morte de células tumorais. Essas moléculas inibitórias foram denominadas moléculas coestimulatórias negativas devido à sua homologia com a molécula coestimuladora de células T CD28. Essas proteínas, também referidas como proteínas do ponto de verificação imunitário, funcionam em múltiplas vias, incluindo a atenuação de sinais de ativação precoce, competição por coestimulação positiva e inibição direta de células apresentadoras de antígeno (Bour-Jordan et ai., 2011 Immunol Rev. 241(1):180-205).
[0183 ] No contexto da presente invenção, um
modulador do pontos de verificação é tipicamente uma
molécula, tal como uma proteína (por exemplo, um
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138/542 anticorpo), um receptor negativo dominante, um receptor chamariz ou um ligante ou um fragmento ou varianteda mesma, que modula a função de uma proteína do pontode verificação imunitário, por exemplo, inibe ou reduza atividade dos inibidores do ponto de verificação (ou moléculas do ponto de verificação inibitório) ou estimula ou melhora a atividade dos estimuladores do ponto de verificação (ou das moléculas do ponto de verificação estimulatório). Portanto, os moduladores do ponto de verificação, conforme definido no presente documento, influenciam a atividade das moléculas do ponto de verificação.
[0184] Nesse contexto, as moléculas do ponto de verificação inibitório são definidas como inibidores do ponto de verificação e podem ser usadas como sinônimos. Além disso, as moléculas do ponto de verificação estimulatório são definidas como estimuladores do ponto de verificação e podem ser usadas como sinônimos.
[0185] De um modo preferido, o modulador do ponto de verificação é selecionado de anticorpos agonistas, anticorpos antagonistas, ligantes, receptores negativos dominantes e receptores de chamariz ou combinações dos mesmos.
[0186] Os métodos para gerar e usar anticorpos codificados por mRNA são conhecidos na técnica (por exemplo, W02008/083949 ou PCT/EP2017/060226).
[0187] As moléculas de ponto de verificação inibitório preferidas que podem ser inibidas por um modulador de ponto de verificação no contexto da invenção são PD-1, PD-L1, CTLA-4, PD-L2, LAG3, TIM3/HAVCR2, 2B4,
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139/542
A2aR, B7H3, B7H4, BTLA, CD30, CD160, CD155, GAL9, HVEM, ID01, IDO2, KIR, LAIR1 e VISTA.
[0188] As moléculas de ponto de verificação estimulatório preferidas que podem ser estimuladas por um modulador de ponto de verificação no contexto da invenção são CD2, CD27, CD28, CD40, CD137, CD226, CD276, GITR, ICOS, 0X40 e CD70.
[0189] De acordo com uma modalidade preferida, a composição farmacêutica ou vacina compreendendo RNAs da invenção para uso conforme descrito no presente documento, em que o uso compreende - como um ingrediente farmaceuticamente ativo adicional - um modulador de ponto de verificação selecionado a partir do grupo consistindo no modulador de ponto de verificação é selecionada a partir do grupo consistindo em um inibidor de PD-1, um inibidor de PD-L1, um inibidor de PD-L2, um inibidor de CTLA-4, um inibidor de LAG3, um inibidor de TIM3, um inibidor de TIGIT, um estimulador de 0X40, um estimulador de 4-1BB, um estimulador de CD40L, um estimulador de CD28 e um estimulador de GITR.
[0190] De acordo com uma modalidade preferida, o modulador de ponto de verificação, conforme usado no presente documento, tem como alvo um membro da via de PD-1. Os membros da via de PD-1 são tipicamente proteínas, que estão associadas com a sinalização de PD-1. Por um lado, esse grupo compreende proteínas que induzem a sinalização de PD-1 a montante de PD-1 como, por exemplo, os ligantes de PD-1, PD-L1 e PD-L2 e o receptor de transdução de sinal PD-1. Por outro lado, esse grupo compreende proteínas de transdução de sinal a jusante do receptor de PD-1.
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140/542
Particularmente preferidos como membros da via de PD-1 no contexto da presente invenção são PD-1, PD-L1 e PD-L2.
[0191] No contexto da presente invenção, um antagonista da via de PD-1 (ou inibidor de PD-1) é preferencialmente definido como um composto capaz de prejudicar a sinalização da via de PD-1, preferencialmente sinalização mediada pelo receptor de PD-1. Por conseguinte, o antagonista da via de PD-1 pode ser qualquer antagonista dirigido contra qualquer membro da via de PD-1 capaz de antagonizar a sinalização da via de PD-1.
[0192] Em uma modalidade preferida, o modulador de ponto de verificação usado no presente documento é um inibidor de PD-1 ou um inibidor de PD-L1, em que o inibidor de PD-1 é preferencialmente um anticorpo antagonista dirigido contra PD-1 e o inibidor de PD-L1 é preferencialmente um anticorpo antagonista dirigido contra PD-L1.
[0193] Nesse contexto, o antagonista pode ser um anticorpo antagonista conforme definido no presente documento, tendo como alvo qualquer membro da via de PD-1, preferencialmente um anticorpo antagonista dirigido contra o receptor PD-1, PD-L1 ou PD-L2. Tal anticorpo antagonista pode também ser codificado por um ácido nucleico. Além disso, o antagonista da via de PD-1 pode ser um fragmento do receptor de PD-1 bloqueando a atividade dos ligantes de PD1. B7-1 ou fragmentos do mesmo também podem atuar como ligantes antagonistas de PD1. Adicionalmente, um antagonista da via de PD-1 pode ser uma proteína compreendendo (ou um ácido nucleico codificando para) uma sequência de aminoácidos capaz de se ligar a PD-1 mas
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141/542 impedindo a sinalização de PD-1, por exemplo inibindo a interação de PD-1 e B7-H1 ou B7-DL (WO 2014/127917; WO2012062218).
[0194] Particularmente preferidos são os anticorpos anti-PDl Nivolumab (MDX-1106/BMS-936558/ONO4538), (Brahmer et al., 2010. J Clin Oncol. 2 8(19):3167-75,PMID: 20516446); Pidilizumab (CT-011), (Berger et al. , 2008. Clin Cancer Res. 14(10):3044-51,- PMID: 18483370); Pembrolizumab (MK-3475, SCH 900475); AMP-224, e MEDI0680 (AMP-514).
[0195] Particularmente preferidos são também os anticorpos anti-PD-Ll MDX-1105/BMS-936559 (Brahmer et al. 2012. N Engl J Med. 366(26):2455-65,- PMID: 22658128); atezolizumab (MPDL3280A/RG7446); durvalumab (MEDI4736); e avelumab (MSB0010718).
[0196] De acordo com outra modalidade, o modulador do ponto de verificação usado no presente documento é um estimulador de 0X40. O 0X40 é um membro da superfamília de receptores TNFR e é expresso na superfície de linfócitos T CD4+ e CD8+ de mamíferos ativados por antígenos. O ligante de 0X40 (OX40L, também conhecido como gp34, ACT-4-L e CD252) é uma proteína que interage especificamente com o receptor 0X40. O termo OX40L inclui a totalidade do ligante 0X40, ligante 0X40 solúvel e proteínas de fusão compreendendo uma porção funcionalmente ativa do ligante 0X40 ligada covalentemente a uma segunda porção, por exemplo, um domínio proteico. Também estão incluídas dentro da definição de OX40L as variantes que variam em sequência de aminoácidos a partir de OX40L de ocorrência natural, mas que retêm a capacidade de se ligar
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142/542 especificamente ao receptor de 0X40. Adicionalmente incluídos dentro da definição de OX40L estão as variantes do mesmo, que aumentam a atividade biológica do 0X40. Um agonista 0X40 é uma molécula que induz ou aumenta a atividade biológica de 0X40, por exemplo, transdução de sinal mediada por 0X40. Um agonista de 0X40 é, de preferência, definido no presente documento como uma molécula de ligação capaz de se ligar especificamente a 0X40. Desse modo, o agonista de 0X40 pode ser qualquer ligação agonista a 0X40 e capaz de estimular a sinalização de 0X40. Nesse contexto, o agonista de 0X40 pode ser um anticorpo agonista que se liga a 0X40.
[0197] Os agonistas de 0X40 e os anticorpos monoclonais anti-OX40 estão descritos nos documentos W01995/021251, W01995/012673 e WO1995/21915. Particularmente preferido é o anticorpo anti-OX40 9B12, um anticorpo monoclonal de murino anti-OX40 dirigido contra o domínio extracelular do 0X40 humano (Weinberg et ai., 2006. J. Immunother. 29(6):575-585).
[0198] Noutra modalidade, o modulador de ponto de verificação conforme usado no presente documento é um anticorpo antagonista que é selecionado a partir do grupo consistindo em anti-CTLA4, anti-PDl, anti-PD-Ll, antiVista, anti-Tim-3, anti-TIGIT, anti-LAG-3, e anti-BTLA.
[0199] Preferencialmente, um anticorpo antiCTLA4 que pode ser usado como um modulador de ponto de verificação é dirigido contra o antígeno 4 de linfócitos T citotóxicos (CTLA-4). 0 CTLA-4 é expresso principalmente dentro do compartimento intracelular das células T. Após um estímulo potente ou de longa duração para uma célula T
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143/542 naife através do receptor de célula T (TCR), o CTLA-4 é transportado para a superfície celular e concentrado na sinapse imunitária. 0 CTLA-4 compete então com o CD28 para o CD80/CD86 e modula de forma negativa a sinalização de TCR através dos efeitos na sinalização de Akt. Desse modo, ο CTLA-4 funciona fisiologicamente como um amortecedor do sinal (Weber, J. 2010. Semin. Oncol. 37 (5) :430-9) .
[0200] Em modalidades preferidas, a composição farmacêutica ou vacina compreendendo RNAs da invenção é para uso conforme descrito no presente documento, em que o uso compreende - como um ingrediente farmaceuticamente ativo adicional - um antagonista de CTLA4, que é preferencialmente um anticorpo antagonista dirigido contra CTLA4 (anticorpo anti-CTLA4). O termo antagonista de CTLA4, conforme usado no presente documento, compreende qualquer composto, tal como um anticorpo, que antagonize a função fisiológica de CTLA4. No contexto da presente invenção, o termo anticorpo anti-CTLA4 se pode referir a um anticorpo antagonista dirigido contra CTLA4 (ou um fragmento ou variante funcional do referido anticorpo) ou a um ácido nucleico, preferencialmente um RNA, codificando o referido anticorpo antagonista (ou um seu fragmento funcional). Um fragmento ou variante funcional de um anticorpo anti-CTLA4 atua, preferencialmente, como um antagonista de CTLA4. Mais preferencialmente, o termo anticorpo anti-CTLA4 se refere a um anticorpo monoclonal dirigido contra CTLA4 (ou um fragmento funcional ou variante de tal anticorpo) ou a um ácido nucleico codificando um anticorpo monoclonal dirigido contra CTLA4 (ou um fragmento ou variante funcional de tal anticorpo). O
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144/542 termo anticorpo anti-CTLA4 conforme usado no presente documento se pode referir à cadeia de anticorpo pesada ou leve, respectivamente, ou também se refere a ambas as cadeias de anticorpo (cadeia pesada e leve) ou a um fragmento ou variante de qualquer uma dessas cadeias. Preferencialmente, o fragmento ou variante de um anticorpo anti-CTLA4, conforme usado no presente documento, é um fragmento ou variante funcional, preferencialmente, conforme descrito no presente documento.
[0201] Particularmente preferidos são os anticorpos anti-CTLA-4 ipilimumab (Yervoy®), tremelimumab, e AGEN-1884. Anticorpos anti-CTLA4 adicionais preferidos, conforme usado no presente documento, compreendem BMS 734016; BMS-734016; BMS734016; MDX 010; MDX 101; MDX-010; MDX-101; MDX-CTLA-4; MDX-CTLA4; MDX010; Winglore; e Yervoy, ou um fragmento ou variante funcional de qualquer um desses anticorpos.
[0202] De acordo com uma modalidade adicional, o modulador de ponto de verificação, conforme usado no presente documento, é pelo menos um anticorpo descrito na Tabela 1 ou um fragmento ou variante do mesmo.
Tabela 1: Anticorpos dirigidos contra moléculas de ponto de verificação
Nome Alvo
Urelumab 4-1BB/CD137
PF-05082566 4-1BB/CD137
8H9 B7-H3
Enoblituzumab B7-H3
Ipilimumab CD152/CTLA4
Ticilimumab (= CD152/CTLA-
tremelimumab) 4
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145/542
Tremelimumab CD152/CTLA4
Varlilumab CD27
Teneliximab CD40
Vorsetuzumab mafodotina CD70
Lirilumab KIR2D
GSK-3174998 0X4 0
MEDI-6469 0X4 0
MEDI-6383 0X4 0
MEDI-0562 0X4 0
PF-04518600 0X4 0
RG-7888 0X4 0
PF-06801591 PD-1
BGBA-317 PD-1
MEDI-0680 PD-1
MK-3475 PD-1
Nivolumab PD-1
PDR-001 PD-1
Pembrolizumab PD-1
Pidilizumab PD-1
REGN-2810 PD-1
SHR-1210 PD-1
TSR-042 PD-1
MDX-1106 PD-1
Merck 3745 PD-1
CT- 011 PD-1
MEDI-0680 PD-1
PDR001 PD-1
REGN2810 PD-1
BGB-108 PD-1
BGB-A317 PD-1
ΆΜΡ-224 PD-1
Atezolizumab PD-L1 (CD274)
Avelumab PD-L1 (CD274)
BMS-936559 PD-L1 (CD274)
Durvalumab PD-L1 (CD274)
MEDI-4736 PD-L1 (CD274)
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146/542
MPDL33280A PD-L1 (CD274)
YW243.55.S70 PD-L1 (CD274)
MDX-1105 PD-L1 (CD274)
MSB0010718C PD-L1 (CD274)
Terapia padrão [0203] Mais preferencialmente, o sujeito que recebe a composição farmacêutica ou vacina compreendendo RNAs da invenção, a combinação dos mesmos ou a composição farmacêutica ou vacina compreendendo o(s) referido(s) RNA(s) é um paciente sofrendo de uma doença tumoral ou cancerosa conforme descrito no presente documento e que recebeu ou recebe quimioterapia (por exemplo, quimioterapia de primeira linha ou de segunda linha), radioterapia, quimiorradiação (combinação de quimioterapia e radioterapia), inibidores de quinase, terapia de anticorpos e/ou moduladores de ponto de verificação (por exemplo, inibidores de CTLA4, inibidores da via de PD1) ou um paciente que alcançou resposta parcial ou doença estável depois de ter recebido um ou mais dos tratamentos acima especificados. Mais preferencialmente, o sujeito é um paciente sofrendo de uma doença tumoral ou cancerosa conforme descrito no presente documento e que recebeu ou recebe um composto convencionalmente usado em qualquer uma dessas doenças conforme descrito no presente documento, mais preferencialmente um paciente que recebe ou recebeu um modulador de ponto de verificação.
[0204] Os compostos seguintes são compostos preferidos que preferencialmente são usados em terapias
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147/542 padrão e podem ser aplicados em combinação com as composições farmacêuticas ou vacinas compreendendo RNAs da invenção: Cetuximab (Erbitux), ligação paclitaxel albumina (Abraxane), (gimeracila + oteracila + tegafur) (TS-1), Docetaxel (Docetaxel, Doxel, Taxotere, Docetaxel An, Docel, Nanoxel M, Tautax, Docetaxel -AS, Docetaxel-M, Qvidadotax, Relidoce, Taxelo, Oncodocel, Doxotel, Pacancer, Docetrust, Dodetax, Dodabur, Soulaxcin, Taxedol, Docefim, Docetaxel, Ribodocel, Critidoc, Asodoc, Chemodoc, Docelibbs, Docenat, Dincilezan, Dostradixinol, Docefrez, Camitotic, Oncotaxel, Somatixel, Belotaxel, Qvidadotax, Taxceus, Cetadocure, Docetaxel CT, Tevaxter, Docirena, Eurotere, Axtere, Celotax, Taxanit, Drobanos, Cetado, Doxocad, Taxceus, Egidox, Tedocad, Docecad, Docelex, Docetax, Docetaxel, Docetere, Dotax,Taxuba, Monotaxel, Taceedo, Detaxl, Docet, Docetaxel, Ferdotax, Wintaxel), (tegafur + uracila) (Uft, Uft E, Tefudex, Unitoral, Luporal, Tagracila), Fluorouracila (5-FU), (gimeracila + oteracila + tegafur) ODT (Combinação de TS-1 OD), sulfato de bleomicina (Tecnomicina, Cinaleo, Bleomicina, Bloicin-S, Bonar, Bleocina, Sulfato de Bleomicina, Bleo, Bleocel, Bleotex, Oncobleo, Bleonco, Bleosol, Lioble, Sulfato de Bleomicina, Blenamax, Bleomicina, Blenoxane, Bleomicina, Bleomicina Bellon, Bleoprim), carboplatina (Carboplatina, Platamine CS, Carbaccord, Carboplatina, Carboplatino, Paraplatina, Carbosina, Tecnocarb, Carbomerck, Paract, Carboplatina CTRS, Carboplatina Intsel Chimos, Carboplatina, Carbokem, Carbotinol, Fauldcarbo, Evocarb, Citoplatina, Platina), ciprofloxacina (Hipoflox, Ufexila), cloridrato de ciprofloxacina (Ciprofloxacina Pharma, Prodin, Ciproxina),
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148/542 cisplatina (Cisplatina, Estritina, Ifapla, Accocit, Unistina, Cancertina, Cisplan, Citoplax, Nuoxina, Placis, Cisplatino, Displanor, Randa, Cispla, Fauldcispla, Briplatina, Platinex, Platinol, Platinex, Riboplatina, Cisplatina, Platistina CS, Platosina, Accocit, Cisplatino) ciclofosfamida (Endoxan, Ciclofosfamida), doxifluridina (Doxifluridina, May Vladimir), doxorrubicina (Cloridrato de doxorrubicina, Adriamicina RDF, doxorrubicina, doxorrubicina PFS), epirrubicina, Cloridrato (Brecila, Cloridrato de Epirrubicina, Epirrubicina, Farmorrubicina, Nuovodox, Adnexa, 4-Eppedo, Favicina), fluorouracila (Agicila, Fluorouracila, Fauldfluor, Oncourcila, Flocila, 5 Flucel), ácido fólico + metotrexato (Truxofol), adenovirus humano de tipo 5 (recombinante) (Oncorine), hidroxiurea (Oxirea, Durea, Mielostato, Riborea, Unidrea, Ondrea, Hidrano, Leukocel, Hidroxiurea, Hidrea), ifosfamida (Holoxano, Ifosfamida EG), levamisol (Zirsol), metotrexato, Metotrexato (Tratobeno, Metotrexato, Fresexato, Neometo, Fauldmetro, Metotrexato Sódico, Metocel, Hitas, Metaccord, Metofil, Metotrexato, Traxacord, Plastomet, Tevatrex, Metrex, Caditrex, Carditrex, Vibzi, Imutrex, Biotrexato, Metorex, Mexato, Neotrexato, Oncotrex, Remtrex, Trixilem, Hi-Trex, Metorex, Trex, Unitrexato, Ebetrexac, Fauldexato, Lantarelo, Maxtrex, Miantrex CS, Reumatrex, Folex, Folex PFS, Abitrexato, Tevameto, Trexal, Emtexato, Abitrexato, Meadow), mitomicina (Mitomicina C, Mitomicina, Mitonco, Liomito), nedaplatina (Jiebaishu, Aoxianda, Aqupla), nimesulida (Nimulida), nimotuzumab (Biomab EGER, Laedemab), nitrofurantoina (Furatsilina), ofloxacina (Entof), paclitaxel (Paclitaxel, Taxol), sulfato de peplomicina
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149/542 (Pepleo), picibanila (Picibanila), pirarrubicina (Cloridrato de Pirarrubicina, Terarrubicina, Pinorrubina) , glicididazol de sódio (CMNa), tegafur (Utefos, Icarus, Futraful, Tegafur Gimeracila Oteracila Potássio), temoporfina (Foscan), Cloridrato de topotecano (Topotecano), ubenimex (Ubenimex), sulfato de vinblastina (Vinblastina, Vblastina), sulfato de vincristina (Vincristina, Sulfato de Vincristina, Vincristina, Sutivina, sulfato de vindesina (Eldisina), carboplatina (Carboplatina Qualimed, Carboplatina, Carboplatino, Carboplatina), cisplatina (Cisplatina), docetaxel (Kamdocon, Naltoxater, Docetaxel), fluorouracila (Fluorouracila, Fluorouracila, Fluorouracila), metotrexato (Metotrexato de sódio, Mexato, Mexato Aq, Biometrox, Medsatrexate, Otaxem), sulfato de vincristina (Oncovina), fluorouracila, malato de sunitinib, acitretina, fibrina selante, cetuximab, cetuximab, erlotinib, cisplatina; docetaxel; fluorouracila, fármaco anticâncer não divulgado, gefitinib, pravastatina de sódio, sirolimus, quimioterapia não divulgada, cisplatina; docetaxel; fluorouracila, sirolimus, fluorouracila; taxano não divulgado, Cloridrato de aminolevulinato de metila, cisplatina; docetaxel; fluorouracila, Cloridrato de erlotinib, cetuximab, imiquimod, medicina herbal chinesa não divulgada, aspirina; maleato de enalaprila, quimioterapia não divulgada, cetuximab, (gimeracila + oteracila + tegafur); carboplatina; cisplatina, cisplatina; fluorouracila; nimotuzumab, carboplatina; ligação de albumina paclitaxel, cisplatina; nedaplatina, bleomicina, nedaplatina, cisplatina; paclitaxel, ligação de albumina paclitaxel,
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150/542 (gimeracila + oteracila + tegafur), bleomicina; quimioterapia não divulgada, apatinib; docetaxel, suplemente imunimodulador não divulgado, BCM-95, Cloridrato de ácido aminolevulinico, nedaplatina, cisplatina; palifermina, cetuximab, gefitinib, bevacizumab, belagenpumatucel-L, cisplatina; tirapazamine, cisplatina; tirapazamina, cisplatina; gemcitabina; paclitaxel; topotecano; vinorelbina, cisplatina; fluorouracila, panitumumab, carboplatina; docetaxel; Cloridrato de gemcitabina; tartrato de vinorelbina, amifostina; fluorouracila, cisplatina; fluorouracila, carboplatina; paclitaxel, tirapazamina, cisplatina; epoetina alfa, figitumumab, melfalana; fator de necrose tumoral alf, cisplatina, cisplatina; fluorouracila, cisplatina; quimioterapia não divulgada, docetaxel, contusugene ladenovec, cisplatina; fluorouracila; paclitaxel, docetaxel, vacina do papillomavirus humano [serotipos 16, 18] (bivalente) , isotretinoina, cisplatina; fluorouracila, misonidazol, paclitaxel, palifermina, endostatina, pilocarpina, cisplatina; docetaxel; filgrastim; fluorouracila; paclitaxel, cisplatina; docetaxel; filgrastim; fluorouracila; paclitaxel, cisplatina; Cloridrato de irinotecano, cisplatina; gemcitabina, cisplatina; epirrubicina; fluorouracila; quimioterapia não divulgada, Cloridrato de aminolevulinato de metila, carboplatina; paclitaxel, carbogeno; dióxido de carbono; niacinamida, cisplatina; fluorouracila, talimogene laherparepvec, epoetina alfa, cisplatina; fluorouracila; panitumumab, cisplatina; fluorouracila, cisplatina; fluorouracila, aldesleucina, cisplatina; fluorouracila,
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151/542 cisplatina; paclitaxel, cisplatina; fluorouracila, fluorouracila; leucovorin; lobaplatina, cisplatina, cisplatina; mercaptano de etila; ifosfamida; mesna; mitolactol, doxorrubicina; levamisol, (tegafur + uracila) , cisplatina; fluorouracila, cisplatina; vinorelbine, carboplatina; cisplatina; Cloridrato de gemcitabine, Corinebacterium parvum; doxorrubicina, capecitabina; cisplatina; fluorouracila; paclitaxel, fluorouracila; leucovorin; methotrexate, rAd-p53, cetuximab; cisplatina; docetaxel, PV-10, Cloridrato de aminolevulinato de metila, cisplatina; fluorouracila, paclitaxel; Cloridrato de topotecano, carboplatina; cisplatina; paclitaxel, cisplatina; Cloridrato de topotecano, cisplatina; etopósido, docetaxel; fluorouracila, aspirina, cisplatina; gemcitabina, Lactobacillus brevis CD2, cisplatina; docetaxel, fosbretabulin trometamina, panitumumab, fluorouracila, paclitaxel, carboplatina; cisplatina; docetaxel; fluorouracila, fluorouracila, Cloridrato de erlotinibe, cisplatina; quimioterapia não divulgada; vinorelbine, (gimeracila + oteracila + tegafur); carboplatina, cetuximab, contusugene ladenovec, cetuximab, Cloridrato de aminolevulinato de metila, ciclofosfamida, (gimeracila + oteracila + tegafur); cisplatina, ligação de albumina paclitaxel, carboplatina; paclitaxel, cisplatina; gemcitabine, capecitabine; cisplatina, docetaxel, Z-100, cisplatina; ifosfamida; paclitaxel, nimotuzumab, Cloridrato de irinotecano, celecoxib; metotrexato, Nutrison, carboplatina; cisplatina; fluorouracila; paclitaxel, cisplatina; paclitaxel, cisplatina; docetaxel; vinorelbine, paclitaxel, (gimeracila + oteracila + tegafur); cisplatina,
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152/542 carboplatina; paclitaxel, Cloridrato de aminolevulinato de metila, Albin, cisplatina; fluorouracila, porfimer de sódio, carboplatina; cisplatina; tocotrienol; vinorelbina, (gimeracila + oteracila + tegafur); cisplatina; paclitaxel, docetaxel, ipilimumab, cisplatina, VB-4847, celecoxib; thalidomide, cisplatina; epirrubicina; fluorouracila, cisplatina; fluorouracila, fluorouracila, carboplatina; paclitaxel, cetuximab; cisplatina; docetaxel, células assassinas indutoras de citocina autóloga, cisplatina; docetaxel; fluorouracila, cisplatina; epirrubicina; fluorouracila, tergenpumatucel-L, cetuximab; cisplatina; docetaxel, Elental, cisplatina; nimotuzumab; paclitaxel, ácido eicosapentaenoico; suplemento nutricional não divulgado, palbociclib, pembrolizumab (Keytruda) , nimotuzumab, apatorsen e dacomitinib.
Indicações de tumor [0205] Conforme usado no presente documento, os termos tumor, câncer ou doença cancerosa se referem a uma doença maligna, que é preferencialmente selecionada a partir do grupo consistindo em Carcinoma adenocistico (carcinoma cistico adenoide), carcinoma Adrenocortical, cânceres relacionados com AIDS, linfoma relacionado com AIDS, Câncer anal, Câncer do apêndice, Astrocitoma, Carcinoma basocelular, Câncer do dueto biliar, Câncer de bexiga, Câncer ósseo, Osteosarcoma/Histiocitoma fibroso maligno, Glioma de tronco encefálico, Tumor cerebral, Astrocitoma cerebelar, Astrocitoma cerebral/glioma maligno, ependimoma, meduloblastoma, tumores neuroectodérmicos supratentorial primitivos, glioma da via visual e hipotalâmico, Câncer de mama,
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153/542
Adenomas/carcinoides brônquicos, Linfoma de Burkitt, Tumor carcinoide da infância, Tumor carcinoide gastrointestinal, Carcinoma de primário desconhecido, Linfoma do sistema nervoso central primário, Astrocitoma cerebelar da infância, Astrocitoma cerebral da infância/Glioma maligno, Câncer cervical, Cânceres infantis, Leucemia linfocitica crônica, Câncer do cólon, Linfoma cutâneo de células T incluindo Micose Fungoide e síndrome de Sezary, tumor de células redondas pequenas desmoplásicas, Câncer endometrial, Ependimoma, câncer do esôfago, Sarcoma de Ewing na família Ewing dos tumores, Tumor de células germinativas extracranianas da infância, Tumor de células germinativas extragonadal, Câncer do dueto biliar extrahepático, Melanoma intraocular, Retinoblastoma, Câncer da vesícula biliar, Câncer gástrico (Estômago), Tumor carcinoide gastrointestinal, Tumor estromal gastrointestinal (GIST), Tumor de células germinativas extracraniano, extragonadal ou do ovário, Tumor trofoblástico gestacional, Glioma do tronco cerebral, Astrocitoma Cerebral da Infância, Glioma da Via Visual Infantil e Hipotalâmico, Carcinoide gástrico, Leucemia das células pilosas, Câncer da cabeça e pescoço, Câncer do coração, Câncer hepatocelular (fígado), Linfoma de Hodgkin, Câncer relacionado com o Vírus do Papiloma Humano (HPV), Câncer hipofaríngico, glioma hipotalâmico da infância e da via visual, Melanoma Intraocular, Carcinoma de Células das Ilhotas (Pâncreas Endócrino), Sarcoma de Kaposi, Câncer do Rim (câncer de células renais), Câncer da Laringe, Câncer da Cavidade Labial e Oral, Lipossarcoma, Câncer do Fígado, Câncer do Pulmão de Células não Pequenas, Câncer do Pulmão
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154/542 de Pequenas Células, Linfomas, Linfoma Relacionado com a AIDS, Linfoma de Burkitt, Linfoma de Hodgkin, Linfomas não Hodgkin, Linfoma do Sistema Nervoso Central Primário, Histiocitoma Fibroso Maligno do Osso/Osteossarcoma, Meduloblastoma Infantil, Melanoma, Melanoma Intraocular (Olho), Carcinoma de Células de Merkel, Mesotelioma Maligno Adulto, Mesotelioma Infantil, Câncer da Cabeça ou Pescoço, Câncer da Boca, Sindrome de Neoplasia Endócrina Múltipla Infantil, Mieloma múltiplo/Neoplasia de células plasmáticas, Mieloma múltiplo (Câncer da medula óssea), Câncer da cavidade nasal e dos seios paranasais, Carcinoma nasofaringeo, Neuroblastoma, Câncer oral, Câncer de orofaringe, Osteossarcoma/histiocitoma fibroso maligno dos ossos, Câncer do ovário, Câncer epitelial de ovário (tumor epitelial-estroma de superfície), tumor das células germinativas do ovário, tumor de baixo potencial maligno ovariano, câncer do pâncreas, Câncer das células ilhotas pancreáticas, Câncer dos seios e câncer da cavidade nasal, Câncer de paratireoide, Câncer do pênis, Câncer da faringe, Feocromocitoma, Astrocitoma pineal, Germinoma pineal, Pioloblastoma infantil e Tumores neuroectodérmicos suprassensorial primitivos, Adenoma pituitário, Neoplasia de células plasmáticas/plasmocitoma/Mieloma múltiplo, Blastoma pleuropulmonar, Linfoma do sistema nervoso central primárario, Câncer da próstata, Câncer retal, Carcinoma das células renais (câncer do rim), Câncer da pélvis renal e do ureter, Retinoblastoma, Rabdomiossarcoma infantil, Câncer da glândula salivar, Sarcoma da família Ewing de tumores, Sarcoma de Kaposi, Sarcoma de partes moles, Sarcoma uterino, Câncer de pele (não melanoma), Câncer de pele
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155/542 (melanoma), Carcinoma de pele de célula Merkel, Câncer do intestino delgado, Carcinoma das células escamosas, Câncer de pescoço escamoso metastático com primário oculto, sarcoma de tecido mole (STS), tumor neuroectodérmico primitivo suprassensorial da infância, Câncer testicular (seminoma e não seminoma), Câncer da garganta, Timoma infantil, Timoma e carcinoma tímico, câncer da tireoide, câncer da tireoide infantil, câncer de células transicionais da pelve renal e ureter, Tumor trofoblástico gestacional, Câncer do útero, Câncer do útero endometrial, Sarcoma uterino, Câncer vaginal, glioma da via visual infantil e glioma hipotalâmico, câncer da vulva e Tumor de Wilms da infância (câncer dos rins).
Antigenos alergênicos [0206]
Antígenos associados com alergia doença alérgica (Antígenos alergênicos ou alérgicos) são de preferência derivados a partir de uma fonte selecionada da lista consistindo em:
Acarus spp (Aca s 1
Aca s 10, Aca s 10.0101, Aca s 13, Aca s 13.0101, Aca s 2, Aca s 3, Aca s 7, Aca s 8), Acanthocybium spp (Aca so 1), Acanthocheilonema spp (Aca v 3, Aca v 3.0101), Acetes spp (Ace ja 1), Actinidia spp (Act a 1, Act c 1, Act c 10, Act c 10.0101, Act c 2, Act c 4, Act c 5, Act c 5.0101, Act c 8, Act c 8.0101, Act c Quitinase, Act d 1, Act d 1.0101, Act d 10, Act d 10.0101, Act d 10.02 01, Act d 11, Act d 11.0101, Act d 2, Act d 2.0101, Act d 3, Act d 3.0101, Act d 3.02, Act d 4, Act d 4.0101, Act d 5, Act d 5.0101, Act d 6, Act d 6.0101, Act d 7, Act d 7.0101, Act d 8, Act d 8.0101, Act d 9, Act d 9.0101, Act d Quitinase, Act e 1, Act e 5), Acyrthosiphon
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156/542 spp (Acy pi 7, Acy pi 7.0101, Acy pi 7.0102), Adenia spp (Ade v RIP), Aedes spp (Aed a 1, Aed a 1.0101, Aed a 2, Aed
a 2.0101, Aed a 3, Aed a 3 .0101, Aed a 4, Aed a 7, Aed a
7.0101, Aed a 7.0102, Aed a 7.0103, Aed a 7.0104, Aed a
7.0105, Aed a 7.0106, Aed a 7.0107, Aed a 7.0108, Aed a
7.0109, Aed a 7.0110, Aed a 7.0111, Aed al 1, Aed al 3, Aed
al de 37kD, Aed v de 37kD, Aed v de 63kD) , Aegilops spp (Aeg ta 28, Aeg ta alf a_Gliadin, Aeg urn 28, Aeg un 28), Aethaloperca spp (Aet ro 1), Agropyron spp (Agr c 7), Agrostis spp (Agr ca 1, Agr ca 5, Agr g 1, Agr g 4, Agr s 5), Agrobacterium spp (Agr sp CP4 EPSPS), Ailuropoda spp (Ail me Fosvitina, Ail me TCTP) , Aix spp (Aix ga 1, Aix sp 1), Aleuroglyphus spp (Ale o 1, Ale o 10, Ale o 10.0101, Ale o 10.0102, Ale o 13, Ale o 14, Ale o 2, Ale o 20, Ale o 3, Ale o 5, Ale o 7, Ale o 8, Ale o 9), Allium spp (All a 3, All a Alliin lyase, All c 3, All c de 30kD, All c 4, All c Alliin lyase, All p Alliin lyase, All s Alliin lyase), Alnus spp (Ain g 1, Ain g 1.0101, Ain g 1/Bet v 1/Cor a 1 TPC7, Ain g 1/Bet v 1/Cor a 1 TPC9, Ain g 2, Ain g 4, Ain g 4.0101), Alopochen spp (Alo ae 1), Alopecurus spp (Alo p 1, Alo p 5), Alternaria spp (Alt a 1, Alt a 1.0101, Alt a 1.0102, Alt a 10, Alt a 10.0101, Alt a 12, Alt a 12.0101, Alt a 13, Alt a 13.0101, Alt a 2, Alt a 3, Alt a 3.0101, Alt a 4, Alt a 4.0101, Alt a 5, Alt a 5.0101, Alt a 6, Alt a 6.0101, Alt a 7, Alt a 7.0101, Alt a de 7 0kD, Alt a 8, Alt a 8.0101, Alt a 9, Alt a MnSOD, Alt a NTF2, Alt a TCTP, Alt ar 1, Alt arg 1, Alt b 1, Alt bl 1, Alt br 1, Alt c 1, Alt ca 1, Alt ce 1, Alt ch 1, Alt ci 1, Alt co 1, Alt cr 1, Alt ct 1, Alt cu 1, Alt cy 1, Alt d 1, Alt du 1, Alt e 1, Alt et 1, Alt eu 1, Alt ga 1, Alt gr 1, Alt j 1, Alt 1 1,
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Alt io 1, Alt m 1, Alt me 1, Alt mi 1, Alt mo 1, Alt o 1,
Alt P 1, Alt ph 1, Alt po 1, Alt ps 1, Alt r 1, Alt s 1,
Alt se 1, Alt sm 1, Alt so 1, Alt su 1, Alt t 1, Alt te 1,
Alt to 1), Amaranthus spp (Ama r 2, i kma r 2.0101, Ama V 2,
Ama v 2.0101, Ama v 2.02 01), Ambrosia spp (Amb a 1, Amba
1.0101, Amb a 1.0 2 01, Amb a 1.0 2 0 2, Amb a 1.0 3 01, Amba
1.0 3 0 2, Amb a 1.0 3 0 3, Amb a 1.0 3 0 4, Amb a 1.0 3 0 5, Amba
1.0 4 01, Amb a 1.0 4 0 2, Amb a 1.0 5 01, Amb a 1.0 5 0 2, Amba 10,
Amb a 10.0101, Amb a 3, Amb a 3.0101, Amb a 4, Amb a
4.0101, Amb a 5, Amb a 5.0101, Amb a 6, Amb a 6.0101, Amb a
7, Amb a 7.0101, Amb a 8, Amb a . 8. 0101, Amb a 8.0102, Amb a
9, Amb a 9.0101, Amb a 9.0102, Amb a CPI, Amb p 1, Amb p 5, Amb p 5.0101, Amb p 5.0 2 01, Amb t 5, Amb t 5.0101, Amb t 8), Ammothea spp (Amm h 7, Amm h 7.0101), Anadara spp (Ana br 1), Ananas spp (Ana c 1, Ana c 1.0101, Ana c 2, Ana c 2.0101, Ana c 2.0101 (MUXF3)), Anas spp (Ana ca 1),
Anarhichas spp (Ana 1 1), Anacardium spp (Ana o 1, Ana o 1.0101, Ana o 1.0102, Ana o 2, Ana o 2.0101, Ana o 3, Ana o 3.0101), Anas spp (Ana p 1, Ana p 2, Ana p 3), Anguilla spp (Ang a 1, Ang j 1), Anisakis spp (Ani s 1, Ani s 1.0101, Ani s 10, Ani s 10.0101, Ani s 11, Ani s 11.0101, Ani s 12, Ani s 12.0101, Ani s 2, Ani s 2.0101, Ani s de 24kD, Ani s 3, Ani s 3.0101, Ani s 4, Ani s 4.0101, Ani s 5, Ani s 5.0101, Ani s 6, Ani s 6.0101, Ani s 7, Ani s 7.0101, Ani s 8, Ani s 8.0101, Ani s 9, Ani s 9.0101, Ani s CCOS3, Ani s Citocromo B, Ani s FBPP, Ani s NADHDS4L, Ani s NARaS, Ani s PEPB, Ani s Troponina) , Annona spp (Ann c Quitinase) , Anopheles spp (Ano da 17, Ano da 17.0101, Ano da 27, Ano da 2 7.0101, Ano da 7, Ano da 7.0101, Ano g 7, Ano g 7.0101) , Anser spp (Ans a 1, Ans a 2, Ans a 3, Ans in 1) ,
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Anthoxanthum spp (Ant o 1, Ant o 1.0101, Ant o 12, Ant o 13, Ant o 2, Ant o 4, Ant o 5, Ant o 6, Ant o 7), Apis spp (Api c 1, Api c 1.0101, Api c 10, Api c 2, Api c 4, Api d
I, Api d 1.0101, Api d 4, Api fl 4), Apium spp (Api g 1, Api g 1.0101, Api g 1.0201, Api g 2, Api g 2.0101, Api g 3, Api g 3.0101, Api g 4, Api g 4.0101, Api g 5, Api g 5.0101, Api g 6, Api g 6.0101), Apis spp (Api m 1, Api m 1.0101, Api m 10, Api m 10.0101, Api m 11, Api m 11.0101, Api m
II. 0201, Api m de 13kD, Api m 2, Api m 2.0101, Api m 3, Api m 3.0101, Api m 4, Api m 4.0101, Api m 5, Api m 5.0101, Api m 6, Api m 6.0101, Api m 7, Api m 7.0101, Api m 8, Api m 8.0101, Api m 9, Api m 9.0101, Api m A1-A2, Api m A1-A2-A3, Api m Apalbumina 1, Api m Apalbumina 2, Api me 1, Api me 4), Arachis spp (Ara d 2, Ara d 6, Ara f 3, Ara f 4, Ara h 1, Ara h 1.0101, Ara h 10, Ara h 10.0101, Ara h 10.0102, Ara h 11, Ara h 11.0101, Ara h 2, Ara h 2.0101, Ara h 2.0102, Ara h 2.0201, Ara h 2.0202, Ara h 3, Ara h 3.0101, Ara h 4, Ara h 4.0101, Ara h 5, Ara h 5.0101, Ara h 6, Ara h 6.0101, Ara h 7, Ara h 7.0101, Ara h 7.0201, Ara h 7.0202, Ara h 8, Ara h 8.0101, Ara h 8.0201, Ara h 9, Ara h 9.0101, Ara h 9.0201, Ara h Aglutinina, Ara h Oleosina de 18kD, Ara 1 2, Ara 1 6), Arabidopsis spp (Ara t 3, Ara t 8, Ara t GLP) , Archosargus spp (Arc pr 1), Archaeopotamobius spp (Arc s 8, Arc s 8.0101), Aequipecten spp (Arg 1 1), Argas spp (Arg r 1, Arg r 1.0101), Ariopsis spp (Ari fe 1), Armoracia spp (Arm r HRP), Arrhenatherum spp (Arr e 1, Arr e 5), Artemisia spp (Art a 1, Art ap 1), Artemia spp (Art fr 1, Art fr 1.0101, Art fr 5, Art fr 5.0101), Arthrobacter spp (Art gl CO), Achorion spp (Art gy 7), Artocarpus spp (Art h de 17kD, Art h 4), Arthrospira spp (Art pl
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159/542 beta_Phycocyanin), Artemisia spp (Art v 1, Art v 1.0101, Art v 1.0102, Art v 1.0103, Art v 1.0104, Art v 1.0105, Art v 1.0106, Art v 1.0107, Art v 2, Art v 2.0101, Art v 3, Art v 3.0101, Art v 3.0201, Art v 3.0202, Art v 3.0301, Art v 4, Art v 4.0101, Art v 4.0201, Art v de 47kD, Art v 5, Art v 5.0101, Art v 6, Art v 6.0101, Art v de 60kD), Arthroderma spp (Art va 4), Ascaris spp (Asc 1 3, Asc 1 3.0101, Asc 1 3.0102, Asc 1 de 34kD, Asc s 1, Asc s 1.0101, Asc s 3, Asc s 3.0101, Asc s GST), Aspergillus spp (Asp aw Glucoamilase, Asp c 22, Asp f 1, Asp f 1.0101, Asp f 10, Asp f 10.0101, Asp f 11, Asp f 11.0101, Asp f 12, Asp f
12.0101, Asp f 13, Asp f 13.0101, Asp f 15, Asp f 15.0101, Asp f 16, Asp f 16.0101, Asp f 17, Asp f 17.0101, Asp f 18,
Asp f 18.0101, Asp f 2, Asp f 2.0101, Asp f 22, Asp f
22.0101, Asp f 23, Asp f 23.0101, Asp f 27, Asp f 27.0101, Asp f 28, Asp f 2 8.0101, Asp f 2 9, Asp f 2 9.0101, Asp f 3, Asp f 3.0101, Asp f 34, Asp f 34.0101, Asp f 4, Asp f 4.0101, Asp f 5, Asp f 5.0101, Asp f de 56kD, Asp f 6, Asp f 6.0101, Asp f 7, Asp f 7.0101, Asp f 8, Asp f 8.0101, Asp f 9, Asp f 9.0101, Asp f AfCalAp, Asp f AT_V, Asp f Catalase, Asp f Quitosanase, Asp f CP, Asp f DPPV, Asp f FDH, Asp f gama_Actina, Asp f Glucosidase, Asp f GPI, Asp f GST, Asp f GT, Asp f TAO, Asp f IPMI, Asp f LPL1, Asp f
LPL3, Asp f Manosidase, Asp f MDH, Asp f PL, Asp f PUP, Asp f RPS3, Asp f SXR, Asp fl 13, Asp fl 13.0101, Asp fl 18, Asp fl 2, Asp fl 21, Asp fl 3, Asp fl 4, Asp fl 7, Asp fl 8, Asp fl 9, Asp me Seaprose, Asp n 14, Asp n 14.0101, Asp n 18, Asp n 18.0101, Asp n 25, Asp n 25.0101, Asp n 30, Asp n Glucoamilase, Asp n Hemicelulase, Asp n Pectinase, Asp o 13, Asp o 13.0101, Asp o 21, Asp o 21.0101, Asp o 3, Asp o
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4, Asp ο 7, Asp ο 8, Asp o Lactase, Asp o Lipase, Asp oc 13, Asp r 1, Asp sa AP, Asp sp Glucoamilase, Asp sp Glucoseoxidase, Asp sp PL, Asp sp PME, Asp sy 13, Asp v 13, Asp v 13.0101, Asp v Catalase A, Asp v Enolase, Asp v GAPDH, Asp v MDH, Asp v SXR), Asparagus spp (Aspa o 1, Aspa o 1.01, Aspa o 1.02, Aspa o 17kD, Aspa o 4), Aspergillus spp (Aspe ni 2, Aspe ni 3, Aspe ni 4, Aspe ni 7, Aspe ni 8, Aspe ni 9) , Avena spp (Ave s 1, Ave s 12, Ave s 13, Ave s 2, Ave s 4, Ave s 5, Ave s 7) , Babylonia spp (Bab ja 1) , Bacillus spp (Bac al Subtilisin, Bac cl Subtilisin, Bac 1 Subtilisin, Bac li aA, Bac li Subtilisin), Bactrocera spp (Bac ol 27, Bac ol 27.0101), Bacillus spp (Bac sp aAl, Bac sp aA3, Bac sp Decarboxilase, Bac st amyM, Bac su Subtilisin, Bac t CrylAb, Bac t CrylFa, Bac t Cry3Bbl, Bac
t Cry9c) , Bagre spp (Bag ma 1) , Balistes spp (Bal ca 1) ,
Balanus spp (Bal r 1, Bal r 1.0101), Beauveria spp (Bea b
Aid, Bea l b Enol, Bea b f2, Bea b Hex), Bertholletia spp
(Ber e 1 , Ber e 1.0101, Ber e 2, Ber e 2. .0101), Beryx spp
(Ber sp 1), Betula spp (Bet ab 1, Bet al 1, Bet ch 1, Bet
co 1, Bet da 1, Bet gr 1, Bet hu 1, Bet le 1, Bet me 1, Bet
n 1, Bet p 1, Bet pa 1, Bet po 1, Bet pu 1, Bet pu 2, Bet
pu 4, Bet pu 6, Bet pu 7, Bet : sc 1, Bet ut : 1, Bet v 1, Bet
v 1 Bl- Bl-Bl, Bet v 1 fv Mai 4x, Bet v 1.0101, Bet v
1.0102, Bet v 1.0103, Bet v 1.0201, Bet v 1.0301, Bet v
1.0401, Bet v 1.0402, Bet v 1.0501, Bet v 1.0601, Bet v
1.0602, Bet v 1.0701, Bet v 1.0801, Bet v 1.0901, Bet v
1.1001, Bet v 1.1101, Bet v 1.1201, Bet v 1.1301, Bet v
1.1401, Bet v 1.1402, Bet v 1.1501, Bet v 1.1502, Bet v
1.1601, Bet v 1.1701, Bet v 1.1801, Bet v 1.1901, Bet v
1.2001, Bet v 1.2101, Bet v 1.2201, Bet v 1.2301, Bet v
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1.2401, Bet v 1.2501, Bet v 1.2601, Bet v 1.2701, Bet v 1.2801, Bet v 1.2901, Bet v 1.3001, Bet v 1.3101, Bet v 2, Bet v 2.0101, Bet v 3, Bet v 3.0101, Bet v 4, Bet v 4.0101, Bet v 6, Bet v 6.0101, Bet v 6.0102, Bet v 7, Bet v 7.0101, Bet v 8, Bet v Glucanase) , Beta spp (Beta v 1, Beta v 1.0101, Beta v 2, Beta v 2.0101), Blattella spp (Bia g 1, Bia g 1.0101, Bia g 1.0102, Bia g 1.0103, Bia g 1.0201, Bia g 1.0202, Bia g 2, Bia g 2.0101, Bia g 2.0201, Bia g de 36kD, Bia g 4, Bia g 4.0101, Bia g 4.0201, Bia g 5, Bia g 5.0101, Bia g 5.0201, Bia g 6, Bia g 6.0101, Bia g 6.0201, Bia g 6.0301, Bia g 7, Bia g 7.0101, Bia g 8, Bia g 8.0101, Bia g 9, Bia g Enolase, Bia g GSTD1, Bia g RACK1, Bia g TPI, Bia g Tripsina, Bia g Vitelogenina), Blatta spp (Bia o 1, Bia o 7), Blomia spp (Bio t 1, Bio t 1.0101, Bio t 1.0201, Bio t 10, Bio t 10.0101, Bio t 10.0102, Bio t 11, Bio t 11.0101, Bio t 12, Bio t 12.0101, Bio t 12.0102, Bio t 13, Bio t 13.0101, Bio t 14, Bio t 15, Bio t 18, Bio t 19, Bio t 19.0101, Bio t 2, Bio t 2.0101, Bio t 2.0102, Bio t 2.0103, Bio t 20, Bio t 21, Bio t 21.0101, Bio t 3, Bio t 3.0101, Bio t 4, Bio t 4.0101, Bio t 5, Bio t 5.0101, Bio t 6, Bio t 6.0101, Bio t 7, Bio t 8, Bio t 9, Bio t HSP70), Bombus spp (Bom ar 4, Bom hy 4, Bom p 1, Bom p 1.0101, Bom p 2, Bom p 3, Bom p 4, Bom p 4.0101, Bom t 1, Bom t 1.0101, Bom t 4, Bom t 4.0101), Bombyx spp (Bomb m 1, Bomb m 1.0101, Bomb m 7, Bomb m 7.0101, Bomb m 7.0102, Bomb m 7.0103, Bomb m 7.0104, Bomb m 7.0105, Bomb m 7.0106), Boophilus spp (Boo m 1, Boo m 7, Boo m 7.0101), Bos spp (Bos d 2, Bos d 2.0101, Bos d 2.0102, Bos d 2.0103, Bos d 3, Bos d 3.0101, Bos d 4, Bos d 4.0101, Bos d 5, Bos d 5.0101, Bos d 5.0102, Bos d 6, Bos d 6 (MDA), Bos d 6.0101,
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Bos d 7, Bos d 7.0101, Bos d 8, Bos d 8 alfaSl, Bos d 8 alfaS2, Bos d 8 beta, Bos d 8 capa, Bos d alfa2I, Bos d alfa2I.0101, Bos d Quimosina, Bos d Fibrina, Bos d Gelatina, Bos d HG, Bos d Insulina, Bos d Lactoferrina, Bos d Lactoperoxidase, Bos d Mioglobina, Bos d OBP, Bos d OSCP, Bos d Fosvitina, Bos d PLA2, Bos d PRVB, Bos d Trombina, Bos d TI, Bos gr ALA, Bos gr Mioglobina), Bothrops spp (Bot as 1, Bot at 1), Bouteloua spp (Bou g 1), Biting spp (Bov ov 1), Brama spp (Bra du 1), Brassica spp (Bra j 1, Bra j 1.0101, Bra η 1, Bra n 1.0101, Bra n 4, Bra n 7, Bra n 8, Bra n PG, Bra ni 8, Bra o 3, Bra o 3.0101, Bra r 1, Bra r 1.0101, Bra r 2, Bra r 2.0101, Bra r 3, Bra r 4, Bra r 7), Bromus spp (Bro a 1, Bro a 4), Brosme spp (Bro br 1), Bromus spp (Bro 1 1, Bro 1 5, Bro 1 7), Brugia spp (Bru m 3, Bru m 3.0101, Bru m Bm33), Bubalus spp (Bub b ALA, Bub b BLG, Bub b Caseina, Bub b Caseina alfaSl, Bub b Caseina alfaS2, Bub b Caseina beta, Bub b Caseina capa), Caenorhabditis spp (Cae b 3, Cae b 3.0101, Cae br 3, Cae br 3.0101, Cae e 3, Cae e 3.0101, Cae e 3.0102, Cae re 13, Cae re 13.0101), Cajanus spp (Caj c 1), Caligus spp (Cal cl 1, Cal cl 1.0101, Cal cl 1.0102), Calamus spp (Cal le 1), Callinectes spp (Cal s 2), Camelus spp (Cam d ALA, Cam d Caseina, Cam d Caseina alfaSl, Cam d Caseina alfaS2, Cam d Caseina beta, Cam d Caseina capa), Camponotus spp (Cam fl 7, Cam fl 7.0101), Canis spp (Can f 1, Can f 1.0101, Can f 2, Can f 2.0101, Can f 3, Can f 3.0101, Can f 4, Can f 4.0101, Can f 5, Can f 5.0101, Can f 6, Can f 6.0101, Can f tipo Feldl, Can tipo f Homs2, Can f Fosvitina, Can f TCTP), Canthidermis spp (Can ma 1), Cancer spp (Can mg 2, Can p 1), Cannabis spp (Can s 3), Candida spp (Cand a 1, Cand a
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1.0101, Cand a 3, Cand a 3.0101, Cand a CAAP, Cand a CyP, Cand a Enolase, Cand a FPA, Cand a MnSOD, Cand a PGK, Cand b 2, Cand b 2.0101, Cand b FDH, Cand r Lipase), Capsicum spp (Cap a 1, Cap a 1.0101, Cap a de 17kD, Cap a 2, Cap a 2.0101, Cap a de 30kD, Cap a Glucanase, Cap ch de 17kD) , Caprella spp (Cap e 1), Capra spp (Cap h ALA, Cap h BLG, Cap h Caseina, Cap h Caseina alfaSl, Cap h Caseina alfaS2, Cap h Caseina beta, Cap h Caseina capa, Cap h GSA) , Capitulum spp (Cap m 1), Carassius spp (Car au 1), Carpinus
spp (Car b 1, Car b 1.0101, Car b 1.0102, Car b 1.0103, Car
b 1.0104, Car b 1.0105, Car b 1.0106, Car b 1.0107, Car b
1.0108, Car b 1.0109, Car b 1 .0110, Car b 1.0111, Car b
1.0112, Car b 1.0113, Car b 1 .0201, Car b 1.0301, Car b
1.0302, Car b 2, Car b 4), Caranx spp (Car cr 1), Carya spp
(Car 1 1, Car 1 1.0101, Car 1 2, Car 1 4, C (ar 1 4.0101) ,
Carcinus spp (Car ma 2), Caryota spp (Car mi 2), Carica spp (Car p 1, Car p Quitinase, Car p Quimopapaina, Car p Endoproteinase), Castanea spp (Cas c de 24kD, Cas s 1, Cas s 1.0101, Cas s 1.0102, Cas s 1.0103, Cas s 2, Cas s 5, Cas s 5.0101, Cas s 8, Cas s 8.0101, Cas s 9, Cas s 9.0101), Catharanthus spp (Cat r 1, Cat r 1.0101, Cat r de 17kD, Cat r 2), Caulolatilus spp (Cau ch 1), Cavia spp (Cav p 1, Cav p 1.0101, Cav p 2, Cav p 2.0101, Cav p 3, Cav p 3.0101, Cav p Gelatina, Cav p GSA), Centropristis spp (Cen s 1), Cephalopholis spp (Cep so 1), Charybdis spp (Cha f 1, Cha f 1.0101), Chaetodipterus spp (Cha fa 1), Chamaecyparis spp (Cha o 1, Cha o 1.0101, Cha o 2, Cha o 2.0101), Chenopodium spp (Che a 1, Che a 1.0101, Che a 2, Che a 2.0101, Che a 3, Che a 3.0101), Chironomus spp (Chi k 1, Chi k 10, Chi k 10.0101), Chinchilla spp (Chi 1 de 21kD_a, Chi 1 de
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21kD_b), Chionoecetes spp (Chi o 1, Chi o 1.0101, Chi o 2, Chi o 4, Chi o 6, Chi o alfa_Actina, Chi o SERCA) , Chironomus spp (Chi t 1, Chi t 1.0101, Chi t 1.0201, Chi t 2, Chi t 2.0101, Chi t 2.0102, Chi t 3, Chi t 3.0101, Chi t 4, Chi t 4.0101, Chi t 5, Chi t 5.0101, Chi t 6, Chi t 6.0101, Chi t 6.0201, Chi t 7, Chi t 7.0101, Chi t 8, Chi t 8.0101, Chi t 9, Chi t 9.0101), Chlamys spp (Chi n 1), Chloephaga spp (Chi pi 1), Chortoglyphus spp (Cho a 10), Chrysomela spp (Chr tr 7, Chr tr 7.0101), Cicer spp (Cic a 2S Albumina, Cic a Albumina), Cichorium spp (Cic i 1), Cimex spp (Cim 1 Nitroforin), Citrus spp (Cit 1 1, Cit 1 3, Cit 1 3.0101), Citrullus spp (Cit la 2, Cit la MDH, Cit la TRI), Citrus spp (Cit r 3, Cit r 3.0101, Cit s 1, Cit s 1.0101, Cit s 2, Cit s 2.0101, Cit s 3, Cit s 3.0101, Cit s 3.0102, Cit s IFR) , Cladosporium spp (Cla c 14, Cla c 14.0101, Cla c 9, Cla c 9.0101, Cla h 1, Cla h 10, Cla h 10.0101, Cla h 12, Cla h 12.0101, Cla h 2, Cla h 2.0101,
Cla h de 42kD, Cla h 5, Cla h 5.0101, Cla h 6, Cla h
6.0101, Cla h 7, Cla h 7.0101, Cla h 8, Cla h 8 CSP, Cla h
8.0101, Cla h 9, Cla h 9.0101, Cla h abH, Cla h GST, Cla h
HChl, Cla h HSP70 , Cla h NTF2, Cla h TCTP) , Clostridium spp
(Clo hi Colagenase, Clo t Toxoide) , Clupea spp (Clu h 1, Clu h 1.0101, Clu h 1.0201, Clu h 1.0301), Cocos spp (Coc n 2, Coc n 4, Coc n 5), Coccidioides spp (Coc po 8), Coffea spp (Cof a 1, Cof a 1.0101), Columba spp (Col 1 PSA), Coprinus spp (Cop c 1, Cop c 1.0101, Cop c 2, Cop c 2.0101, Cop c 3, Cop c 3.0101, Cop c 4, Cop c 5, Cop c 5.0101, Cop
c 6, Cop c 7, Cop c 7 .0101), Corylus spp (Cor a 1, Cor a
1.0101, Cor a 1.0102, Cor a 1.0103, Cor a 1. 0104, Cor a
1.0201, Cor a 1.0301, Cor a 1.0401, Cor a 1. 0402, Cor a
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1.0403, Cor a 1.0404, Cor a 10, Cor a 10.0101, Cor a 11,
Cor a 11.0101, Cor a 12, Cor a 12.0101, Cor a 13, Cor a
13.0101 , Cor a 14, Co r a 14.0101 , Cor a 2, Cor a 2 .0101,
Cor a 2.0102, Cor a 8, Cor a 8.0101, Cor a 9, Cor a
9.0101), Corynebacterium spp (Cor d Toxoide), Corylus spp (Cor he 1), Coryphaena spp (Cor hi 1), Coriandrum spp (Cor s 1, Cor s de llkD, Cor s 2), Cotoneaster spp (Cot 1 3), Crangon spp (Cra c 1, Cra c 1.0101, Cra c 2, Cra c 2.0101, Cra c 4, Cra c 4.0101, Cra c 5, Cra c 5.0101, Cra c 6, Cra c 6.0101, Cra c 8, Cra c 8.0101), Crassostrea spp (Cra g 1), Cricetus spp (Cri c HSA) , Crivellia spp (Cri pa 1), Crocus spp (Cro s 1, Cro s 1.0101, Cro s 2, Cro s 2.0101, Cro s 3, Cro s 3.01, Cro s 3.02), Cryptomeria spp (Cry j 1, Cry j 1.0101, Cry j 1.0102, Cry j 1.0103, Cry j 2, Cry j 2.0101, Cry j 2.0102, Cry j 3, Cry j 3.1, Cry j 3.2, Cry j 3.3, Cry j 3.4, Cry j 3.5, Cry j 3.6, Cry j 3.7, Cry j 3.8, Cry j 4, Cry j AP, Cry j Quitinase, Cry j CPA9, Cry j IFR, Cry j LTP, Cry j P1-P2), Cryphonectria spp (Cry p AP) , Ctenocephalides spp (Cte f 1, Cte f 1.0101, Cte f 2, Cte f 2.0101, Cte f 3, Cte f 3.0101), Ctenopharyngodon spp (Cte id 1), Cucumis spp (Cue m 1, Cue m 1.0101, Cue m 2, Cue m 2.0101, Cue m 3, Cue m 3.0101, Cue m Lecl7, Cue m MDH) , Cucurbita spp (Cue ma de 18kD, Cue ma 2, Cue p 2, Cue p AscO), Cucumis spp (Cue s 2), Culicoides spp (Cui n 1, Cui n 10, Cui n 11, Cui n 2, Cui n 3, Cui n 4, Cui n 5, Cui n 6, Cui n 7, Cui n 8, Cui n 9, Cui n HSP70), Culex spp (Cui q de 28kD, Cui q de 35kD, Cui q 7, Cui q 7.0101, Cui q
7.0102), Culicoides spp (Cui so 1), Cuminum spp (Cum c 1,
Cum c 2), Cupressus spp (Cup a 1, Cup a 1.0101, Cup a 1.02,
Cup a 2, Cup a 3, Cup a 4, Cup a 4.0101, Cup s 1, Cup s
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1.0101, Cup s 1.0102, Cup s 1.0103, Cup s 1.0104, Cup s 1.0105, Cup s 3, Cup s 3.0101, Cup s 3.0102, Cup s 3.0103, Cup s 8), Cochliobolus spp (Cur 1 1, Cur 1 1.0101, Cur 1 2, Cur 1 2.0101, Cur 1 3, Cur 1 3.0101, Cur 1 4, Cur 1 4.0101, Cur 1 ADH, Cur 1 GST, Cur 1 MnSOD, Cur 1 Orizin, Cur 1 Trx, Cur 1 ZPS1), Cyanochen spp (Cya cy 1), Cynoscion spp (Cyn ar 1), Cynosurus spp (Cyn cr 1, Cyn cr 5), Cynodon spp (Cyn d 1, Cyn d 1.0101, Cyn d 1.0102, Cyn d 1.0103, Cyn d 1.0104, Cyn d 1.0105, Cyn d 1.0106, Cyn d 1.0107, Cyn d 1.0201, Cyn d 1.0202, Cyn d 1.0203, Cyn d 1.0204, Cyn d 10, Cyn d 11, Cyn d 12, Cyn d 12.0101, Cyn d 13, Cyn d 15, Cyn d 15.0101, Cyn d 2, Cyn d 22, Cyn d 22.0101, Cyn d 23, Cyn d 23.0101, Cyn d 24, Cyn d 24.0101, Cyn d 4, Cyn d 5, Cyn d 6, Cyn d 7, Cyn d 7.0101), Cynoscion spp (Cyn ne 1), Cynomys spp (Cyn sp Lipocalin), Cyprinus spp (Cyp c 1, Cyp c 1.01, Cyp c 1.02), Daboia spp (Dab ru 1), Dactylis spp (Dac g 1, Dac g 1.01, Dac g 1.0101, Dac g 1.02, Dac g 12, Dac g 13, Dac g 2, Dac g 2.0101, Dac g 3, Dac g 3.0101, Dac g 4, Dac g 4.0101, Dac g 5, Dac g 5.0101, Dac g 7), Dama spp (Dam d CSA) , Danio spp (Dan re 1, Dan re 2, Dan re alfa2I, Dan re CK) , Dasyatis spp (Das ak 1, Das am 1, Das sa 1), Daucus spp (Dau c 1, Dau c 1.0101, Dau c 1.0102, Dau c 1.0103, Dau c 1.0104, Dau c 1.0105, Dau c 1.0201, Dau c 1.0301, Dau c 3, Dau c 4, Dau c 4.0101, Dau c CyP) , Decapterus spp (Dec ru 1), Dendronephthya spp (Den n 1, Den n 1.0101), Dermatophagoides spp (Der f 1, Der f 1.0101, Der f 1.0102, Der f 1.0103, Der f 1.0104, Der f 1.0105, Der f 1.0106, Der f 1.0107, Der f 1.0108, Der f 1.0109, Der f 1.0110, Der f 10, Der f 10.0101, Der f 10.0102, Der f 11, Der f 11.0101, Der f 13, Der f 13.0101, Der f 14, Der f
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14.0101, Der f 15, Der f 15.0101, Der f 16, Der f 16.0101, Der f 17, Der f 17.0101, Der f 18, Der f 18.0101, Der f 2, Der f 2.0101, Der f 2.0102, Der f 2.0103, Der f 2.0104, Der f 2.0105, Der f 2.0106, Der f 2.0107, Der f 2.0108, Der f 2.0109, Der f 2.0110, Der f 2.0111, Der f 2.0112, Der f 2.0113, Der f 2.0114, Der f 2.0115, Der f 2.0116, Der f 2.0117, Der f 20, Der f 21, Der f 22, Der f 22.0101, Der f 3, Der f 3.0101, Der f 4, Der f 5, Der f 6, Der f 6.0101, Der f 7, Der f 7.0101, Der f 8, Der f 9, Der f HSP70), Dermanyssus spp (Der g 10, Der g 10.0101), Dermatophagoides
spp (Der m 1, Der m 1.0101, Der p 1, Der p 1.0101, Der P
1.0102, Der p 1.0103, Der p 1.0104, Der p 1.0105, Der P
1.0106, Der p 1.0107, Der p 1.0108, Der p 1.0109, Der P
1.0110, Der p 1.0111, Der p 1.0112, Der p 1.0113, Der P
1.0114, Der p 1.0115, Der p 1.0116, Der p 1.0117, Der P
1.0118, Der p 1.0119, Der p 1.0120, Der p 1.0121, Der P
1.0122, Der p 1.0123, Der p 1.0124 , Der P 1 o, Der P
10.0101, Der p 10.0102, Der p 10.0103, Der P 11 λ Der P
11.0101, Der p 13, Der p 14, Der p 14. 0101, Der p 15, Der P
18, Der p 2, Der p 2.0101, Der p 2.0102, Der p 2.0103, Der p 2.0104, Der p 2.0105, Der p 2.0106, Der p 2.0107, Der p 2.0108, Der p 2.0109, Der p 2.0110, Der p 2.0111, Der p 2.0112, Der p 2.0113, Der p 2.0114, Der p 2.0115, Der p 20, Der p 20.0101, Der p 21, Der p 21.0101, Der p 23, Der p 23.0101, Der p 3, Der p 3.0101, Der p 4, Der p 4.0101, Der p 5, Der p 5.0101, Der p 5.0102, Der p 6, Der p 6.0101, Der p 7, Der p 7.0101, Der p 8, Der p 8.0101, Der p 9, Der p 9.0101, Der p 9.0102, Der p P1-P2, Der p P2-P1, Der s 1, Der s 2, Der s 3), Dianthus spp (Dia c RIP) , Dicranopteris spp (Die 1 2S Albumina) , Diospyros spp (Dio k de 17kD, Dio
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168/542 k 4, Dio k IFR) , Dioscorea spp (Dio p TSP), Diplodus spp (Dip ho 1), Distichlis spp (Dis s 1, Dis s 7), Ditrema spp (Dit te 1), Dolichovespula spp (Doi a 1, Doi a 2, Doi a 5, Doi a 5.0101), Dolichos spp (Doi b Aglutinina), Dolichovespula spp (Doi m 1, Doi m 1.0101, Doi m 1.02, Doi m 2, Doi m 2.0101, Doi m 5, Doi m 5.0101, Doi m 5.02), Drosophila spp (Dro an 7, Dro an 7.0101, Dro er 7, Dro er 7.0101, Dro er 7.0102, Dro gr 7, Dro gr 7.0101, Dro gr 7.0102, Dro m 7, Dro m 7.0101, Dro m 7.0102, Dro m 7.0103, Dro m 7.0104, Dro m 7.0105, Dro m 7.0106, Dro m 7.0107, Dro m 7.0108, Dro m 7.0109, Dro m 7.0110, Dro m 7.0111, Dro m 7.0112, Dro m 7.0113, Dro m 9, Dro m MnSOD, Dro mo 7, Dro mo 7.0101, Dro pp 7, Dro pp 7.0101, Dro se 7, Dro se 7.0101, Dro si 7, Dro si 7.0101, Dro si 7.0102, Dro vi 7, Dro vi 7.0101, Dro wi 7, Dro wi 7.0101, Dro y 7, Dro y 7.0101, Dro y 7.0102, Dro y 7.0103), Echium spp (Ech p Citocromo C), Elaeis spp (Ela g 2, Ela g Bd31kD), Elops spp (Elo sa 1), Embellisia spp (Emb a 1, Emb 1 1, Emb nz 1, Emb t 1), Engraulis spp (Eng e 1), Enteroctopus spp (Ent d 1), Epinephelus spp (Epi bl 1, Epi co 1, Epi fl 1, Epi me 1, Epi mo 1), Epicoccum spp (Epi p 1, Epi p 1.0101, Epi p de 12kD, Epi p GST), Epinephelus spp (Epi po 1, Epi un 1), Equisetum spp (Equ a de 17kD), Equus spp (Equ as 4, Equ as DSA, Equ bu 4, Equ c 1, Equ c 1.0101, Equ c 2, Equ c 2.0101, Equ c 2.0102, Equ c 3, Equ c 3.0101, Equ c 4, Equ c 4.0101, Equ c 5, Equ c 5.0101, Equ c ALA, Equ c BLG, Equ c Caseina, Equ c Caseina beta, Equ c Caseina capa, Equ c PRVB, Equ he 4, Equ z ZSA), Erimacrus spp (Erl 1 1, Erl 1 1.0101, Erl 1 1.0102), Eriocheir spp (Erl s 1, Erl s 1.0101, Erl s 2), Erwinia spp (Erw ch Asparaginase),
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Escherichia spp (Esc c Asparaginase, Esc c beta GAL), Esox spp (Eso 1 1), Euphausia spp (Eup p 1, Eup p 1.0101), Euphasia spp (Eup s 1, Eup s 1.0101), Euroglyphus spp (Eur m 1, Eur m 1.0101, Eur m 1.0102, Eur m 1.0103, Eur m 10, Eur m 14, Eur m 14.0101, Eur m 2, Eur m 2.0101, Eur m 2.0102, Eur m 3, Eur m 3.0101, Eur m 4, Eur m 4.0101),
Evynnis spp (Evy j 1), Fagopyrum spp (Fag e 1, Fage
1.0101, Fag e de lOkD, Fag e de 19kD, Fag e 2, Fage
2.0101, Fag e TI), Fagus spp (Fag s 1, Fag s 1.0101, Fags
2, Fag s 4), Fagopyrum spp (Fag t 1, Fag t lOkD, Fag t 2, Fag t 2.0101), Fells spp (Eel d 1, Eel d 1.0101, Eel d 2, Eel d 2.0101, Eel d 3, Eel d 3.0101, Eel d 4, Eel d 4.0101, Eel d 5, Eel d 5.0101, Eel d 6, Eel d 6.0101, Eel d 7, Eel d 7.0101, Eel d 8, Eel d 8.0101, Eel d IgG), Fenneropenaeus spp (Fen c 1, Fen c 2, Fen me 1, Fen me 1.0101), Festuca spp (Fes e 1, Fes e 13, Fes e 4, Fes e 5, Fes e 7, Fes p 1, Fes p 13, Fes p 4, Fes p 4.0101, Fes p 5, Fes r 1, Fes r 5), Ficus spp (Fic c de 17kD, Fic c 4, Fic c Ficin), Foeniculum spp (Foe v 1, Foe v 2), Forsythia spp (For s 1), Forcipomyia spp (For t 1, For t 1.0101, For t 2, For t 2.0101, For t 7, For t FPA, For t Miosina, For t TPI), Fragaria spp (Fra a 1, Fra a 1.0101, Fra a 3, Fra a 3.0101, Fra a 3.0102, Fra a 3.0201, Fra a 3.0202, Fra a 3.0203, Fra a 3.0204, Fra a 3.0301, Fra a 4, Fra a 4.0101, Fra c 1), Fraxinus spp (Fra e 1, Fra e 1.0101, Fra e 1.0102, Fra e 1.0201, Fra e 12, Fra e 2, Fra e 3, Fra e 9), Fragaria spp (Fra v 1), Fusarium spp (Fus c 1, Fus c 1.0101, Fus c 2, Fus c 2.0101, Fus c 3, Fus s 1, Fus s 45kD, Fus sp Lipase), Gadus spp (Gad c 1, Gad c 1.0101, Gad c APDH, Gad m 1, Gad m 1.0101, Gad m 1.0102, Gad m 1.0201, Gad m 1.0202, Gad m
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45kD, Gad m Gelatina, Gad ma 1), Gallus spp (Gal d 1, Gal d 1.0101, Gal d 2, Gal d 2.0101, Gal d 3, Gal d 3.0101, Gal d 4, Gal d 4.0101, Gal d 5, Gal d 5.0101, Gal d 6, Gal d 6.0101, Gal d Apo I, Gal d Apo VI, Gal d GPI, Gal d HG, Gal d IgY, Gal d L-PGDS, Gal d Ovomucina, Gal d Fosvitina, Gal d PRVB, Gal la 4), Galleria spp (Gal m 18kD, Gal m de 24kD) , Gallus spp (Gal so 4), Gamarus spp (Gam s TM) , Gelonium spp (Gel m RIP), Geothelphusa spp (Geo de 1), Glossina spp (Gio m 5, Gio m 5.0101, Gio m 7, Gio m 7.0101, Gio m 7.0102, Gio m 7.0103), Glycine spp (Gly a Bd30K, Gly ar Bd30K, Gly ca Bd30K, Gly cl Bd30K, Gly cu Bd30K, Gly cy Bd30K), Glycyphagus spp (Gly d 10, Gly d 10.0101, Gly d 13, Gly d 2, Gly d 2.0101, Gly d 2.0201, Gly d 2.03, Gly d 2/Lep d 2 LI, Gly d 2/Lep d 2 L2, Gly d 2/Lep d 2 L3, Gly d 2/Lep d 2 L4, Gly d 2/Lep d 2 Rl, Gly d 2/Lep d 2 R2, Gly d 2/Lep d 2 R3, Gly d 2/Lep d 2 R4, Gly d 2/Lep d 2 R5, Gly d 20, Gly d 3, Gly d 5, Gly d 5.01, Gly d 5.02, Gly d 7, Gly d 8), Glycine spp (Gly f Bd30K, Gly 1 Bd30K, Gly m 1, Gly m 1.0101, Gly m 1.0102, Gly m 2, Gly m 2.0101, Gly m 2S Albumina, Gly m 3, Gly m 3.0101, Gly m 3.0102, Gly m de 39kD, Gly m 4, Gly m 4.0101, Gly m 5, Gly m 5.0101, Gly m 5.0201, Gly m 5.0301, Gly m 5.0302, Gly m de 50kD, Gly m 6, Gly m 6.0101, Gly m 6.0201, Gly m 6.0301, Gly m 6.0401, Gly m 6.0501, Gly m de 68kD, Gly m Aglutinina, Gly m Bd28K, Gly m Bd30K, Gly m Bd60K, Gly m CPI, Gly m EAP, Gly m TI, Gly mi Bd30K, Gly s Bd30K, Gly t Bd30K, Gly to Bd30K), Gossypium spp (Gos h Vicilin), Haemophilus spp (Hae in P6) , Haemaphysalis spp (Hae 1 7, Hae 1 7.0101, Hae q 7, Hae q 7.0101), Haliotis spp (Hal a 1, Hal d 1, Hal di 1, Hal di PM, Hal m 1, Hal m 1.0101, Hal r 1, Hal r de 49kD, Hal ru
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1), Harmonia spp (Har a 1, Har a 1.0101, Har a 2, Har a 2.0101), Harpegnathos spp (Har sa 7, Har sa 7.0101, Har sa 7.0102), Helianthus spp (Hei a 1, Hei a 1.0101, Hei a 2, Hei a 2.0101, Hei a 2S Albumina, Hei a 3, Hei a 3.0101, Hei a 4), Helix spp (Hei ap 1, Hei as 1, Hei as 1.0101), Heligmosomoides spp (Hei p 3, Hei p 3.0101), Helianthus spp (Hei tu 1), Hemanthias spp (Hem le 1), Hemifusus spp (Hem t 1), Heterodera spp (Het g 3, Het g 3.0101), Hevea spp (Hev b 1, Hev b 1.0101, Hev b 10, Hev b 10.0101, Hev b 10.0102, Hev b 10.0103, Hev b 11, Hev b 11.0101, Hev b 11.0102, Hev b 12, Hev b 12.0101, Hev b 13, Hev b 13.0101, Hev b 14, Hev b 14.0101, Hev b 2, Hev b 2.0101, Hev b 3, Hev b 3.0101, Hev b 4, Hev b 4.0101, Hev b 5, Hev b 5.0101, Hev b 6, Hev b 6.01, Hev b 6.02, Hev b 6.0202, Hev b 6.03, Hev b 7, Hev b 7.01, Hev b 7.02, Hev b 7.D2, Hev b 7.S2, Hev b 8, Hev b 8.0101, Hev b 8.0102, Hev b 8.0201, Hev b 8.0202, Hev b 8.0203, Hev b 8.0204, Hev b 9, Hev b 9.0101, Hev b Proteína de ligação a citrato, Hev b GAPDH, Hev b HSP80, Hev b IFR, Hev b subunidade de Proteassoma, Hev b Rotamase, Hev b SPI, Hev b Trx, Hev b UDPGP) , Hexagrammos spp (Hex ot 1), Hippoglossus spp (Hip h 1), Hippoglossoides spp (Hip pi 1), Hippoglossus spp (Hip st 1), Hirudo spp (Hir me Hirudin), Holcus spp (Hol 1 1, Hol 1 1.0101, Hol 1 1.0102, Hol 1 2, Hol 1 4, Hol 1 5, Hol 1 5.0101, Hol 1 5.0201), Holocnemus spp (Hol pl 9, Hol pl Hemocianina) , Homarus spp (Hom a 1, Hom a 1.0101, Hom a 1.0102, Hom a 1.0103, Hom a 3, Hom a 3.0101, Hom a 4, Hom a 6, Hom a 6.0101, Hom g 1, Horn g 2), Homo spp (Hom s 1, Horn s 1.0101, Hom s 2, Hom s 2.0101, Horn s 3, Hom s 3.0101, Hom s 4, Hom s 4.0101, Hom s 5, Horn s 5.0101, Hom s AAT, Hom s ACTH, Horn s Adalimumab, Horn s ALA,
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Hom s alfa_Actina, Hom s alf a-Galactosidase, Hom s APDH, Hom s Arilsulfatase B, Hom s Caseina, Hom s CyP A, Hom s CyP B, Hom s CyP C, Hom s DSF70, Hom s DSG3, Hom s eIF6, Hom s Etanercept, Hom s Fator IX, Hom s Fator VII, Hom s Fator VIII, Hom s G-CSF, Hom s Glucocerebrosidase, Hom s Glucosidase, Hom s HLA-DR-alfa, Hom s HSA, Hom s Iduronidase, Hom s Idursulfase, Hom s IgA, Hom s Insulina, Hom s Lactoferrina, Hom s Laminin gama_2, Hom s MnSOD, Hom s Oxitocina, Hom s P2, Hom s Fosvitina, Hom s Profilina, Hom s PSA, Hom s RP1, Hom s TCTP, Hom s TL, Hom s TPA, Hom s TPO, Hom s Transaldolase, Hom s Trx, Hom s Tubulina-alfa, Hom s/Mus m Basiliximab, Hom s/Mus m Cetuximab, Hom s/Mus m Cetuximab (Gal-Gal), Hom s/Mus m Infliximab, Hom s/Mus m
Natalizumab, Hom s/Mus m Omalizumab, Hom s/Mus m
Palivizumab, Hom s/Mus m Rituximab, Hom s/Mus m
Tocilizumab, Hom s/Mus m Trastuzumab), Hoplostethus spp
(Hop a 1), Hordeum spp (Hor v 1, Hor v 12, Hor v 12.0101, Hor v 13, Hor v 14, Hor v 15, Hor v 15.0101, Hor v 16, Hor v 16.0101, Hor v 17, Hor v 17.0101, Hor v de 18kD, Hor v 2, Hor v 21, Hor v 21.0101, Hor v 28, Hor v 33, Hor v 4, Hor v 5, Hor v 5.0101, Hor v BDAI, Hor v BTI), Humicola spp (Hum em Celulase) , Humulus spp (Hum j 1, Hum j 1.0101, Hum j de lOkD, Hum j 2), Huso spp (Hus h 1), Hylocereus spp (Hyl un LTP), Hymenocephalus spp (Hym st 1), Hyperoglyphe spp (Hyp by 1), Hypophthalmichthys spp (Hyp mo 1), Hypophthalmichthy spp (Hyp no 1), Ictalurus spp (let fu 1, let p 1), Imperata spp (Imp c 4, Imp c 5, Imp c VUIel), Ixodes spp (Ixo r 2, Ixo sc 7, Ixo sc 7.0101), Jasus spp (Jas la 1, Jas la 1.0101, Jas la 1.0102), Juglans spp (Jug ca 1, Jug ca 2, Jug ci 1, Jug ci 2, Jug n 1, Jug n 1.0101, Jug n 2, Jug n
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2.0101, Jug r 1, Jug r 1.0101, Jug r 2, Jug r 2.0101, Jug r 3, Jug r 3.0101, Jug r 4, Jug r 4.0101, Jug r 5), Juniperus spp (Jun a 1, Jun a 1.0101, Jun a 1.0102, Jun a 2, Jun a 2.0101, Jun a 3, Jun a 3.0101, Jun c 1, Jun o 1, Jun o 4, Jun o 4.0101, Jun r 3, Jun r 3.1, Jun r 3.2, Jun v 1, Jun v 1.0101, Jun v 1.0102, Jun v 3, Jun v 3.0101, Jun v 3.0102, Jun v 4), Katsuwonus spp (Kat p 1), Kyphosus spp (Kyp se 1), Lachnolaimus spp (Lac ma 1), Lachesis spp (Lac mu 1), Lactuca spp (Lac s 1, Lac s 1.0101), Lagocephalus spp (Lag la 1), Larus spp (Lar a 1, Lar a 2, Lar a 3), Larimichthys spp (Lar po 1), Lates spp (Lat c 1), Lateolabrax spp (Lat ja 1), Lathyrus spp (Lat oc Aglutinina) , Leiostomus spp (Lei xa 1), Lens spp (Len c 1, Len c 1.0101, Len c 1.0102, Len c 1.0103, Len c 2, Len c 2.0101, Len c 3, Len c 3.0101, Len c Aglutinina), Leopardus spp (Leo p 1), Lepidoglyphus spp (Lep d 10, Lep d 10.0101, Lep d 12, Lep d 13, Lep d 13.0101, Lep d 2, Lep d 2.0101, Lep d 2.0102, Lep d 2.0201, Lep d 2.0202, Lep d 3, Lep d de 39kD, Lep d 5, Lep d 5.0101, Lep d 5.0102, Lep d 5.0103, Lep d 7, Lep d 7.0101, Lep d 8, Lep d alfa Tubulina) , Lepomis spp (Lep gi 1), Leptomelanosoma spp (Lep i 1), Lepomis spp (Lep ma 1), Lepisma spp (Lep s 1, Lep s 1.0101, Lep s 1.0102), Lepeophtheirus spp (Lep sa 1, Lep sa 1.0101, Lep sa 1.0102, Lep sa 1.0103), Leptailurus spp (Lep se 1), Lepidorhombus spp (Lep w 1, Lep w 1.0101), Lethocerus spp (Let in 7, Let in 7.0101, Let in 7.0102), Leuciscus spp (Leu ce 1), Lewia spp (Lew in 1), Ligustrum spp (Lig v 1, Lig v 1.0101, Lig v 1.0102, Lig v 2), Lilium spp (Lil 1 2, Lil 1 PG), Limanda spp (Lim fe 1), Limnonectes spp (Lim m 1), Limulus spp (Lim p 1, Lim p 1.0101, Lim p 2, Lim p LPA), Liposcelis spp (Lip
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174/542 b 1, Lip b 1.0101), Litchi spp (Lit c 1, Lit c 1.0101, Lit c IFR, Lit c TRI), Lithobates spp (Lit ca 1), Litopenaeus spp (Lit se 1, Lit v 1, Lit v 1.0101, Lit v 2, Lit v 2.0101, Lit v 3, Lit v 3.0101, Lit v 4, Lit v 4.0101), Filiaria spp (Loa io 3, Loa io 3.0101), Lobotes spp (Lob su 1), Locusta spp (Loc m 7, Loc m 7.0101), Loligo spp (Lol b 1, Lol e 1) , Lolium spp (Lol m 2, Lol m 5, Lol p 1, Lol p 1.0101, Lol p 1.0102, Lol p 1.0103, Lol p 10, Lol p 11, Lol p 11.0101, Lol p 12, Lol p 13, Lol p 2, Lol p 2.0101, Lol p 3, Lol p 3.0101, Lol p 4, Lol p 4.0101, Lol p 5, Lol p 5.0101, Lol p 5.0102, Lol p 7, Lol p CyP, Lol p FT, Lol p Legumina), Lonomia spp (Lon o 7, Lon o 7.0101), Lophodytes spp (Lop cu 1), Lophonetta spp (Lop sp 1), Lupinus spp (Lup a 1, Lup a alfa_Conglutina, Lup a delta_Conglutina, Lup a gama_Conglutina, Lup an 1, Lup an 1.0101, Lup an alfa_Conglutina, Lup an delta_Conglutina, Lup an gama_Conglutina, Lup 1 de 17kD), Lutjanus spp (Lut a 1, Lut c 1, Lut cy 1, Lut gr 1, Lut gu 1, Lut jo 1) , Lutraria spp (Lut p 1), Lutjanus spp (Lut pu 1, Lut sy 1), Lycopersicon spp (Lyc e 1, Lyc e 1.0101, Lyc e IIS Globulina, Lyc e 2, Lyc e 2.0101, Lyc e 2.0102, Lyc e 3, Lyc e 3.0101, Lyc e 4, Lyc e 4.0101, Lyc e ARP60S, Lyc e Quitinase, Lyc e Glucanase, Lyc e Peroxidase, Lyc e PG, Lyc e PME, Lyc e PR23, Lyc e Vicilin) , Maconellicoccus spp (Mac h 7, Mac h 7.0101), Macruronus spp (Mac ma 1, Mac n 1), Maclura spp (Mac po de 17kD) , Macrobrachium spp (Mac ro 1, Mac ro
1.0101 , Mac ro Hemocyanin) , Macropus spp (Macr s Gelatin)
Malus spp (Mai d 1, Mai d 1.0101, Mai d 1.0102, Mai d
1.0103 , Mai d 1.0104, Mai d 1.0105, Mai d 1.0106, Mai d
1.0107 , Mai d 1.0108, Mai d 1.0109, Mai d 1.0201, Mai d
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1.0202, Mal d 1.0203, Mal d 1.0204, Mal d 1.0205, Mal d
1.0206, Mal d 1.0207, Mal d 1.0208, Mal d 1.0301, Mal d
1.0302, Mal d 1.0303, Mal d 1.0304, Mal d 1.0401, Mal d
1.0402, Mal d 1.0403, Mal d 2, Mal d 2.0101 Mal d 3, Mal d
3.0101, Mal d 3.0102, Mal d 3.0201, Mal d 3.0202, Mal d
3.0203, Mal d 4, Mal d 4.0101 , Mal d 4.0102, Mal d 4.0201
Mal d 4.0202, Mal d 4.0301, Mal d 4.0302), Malpighia spp (Mal g 4, Mal g Hevein) , Malus spp (Mal p 1), Malassezia spp (Mala f 2, Mala f 2.0101, Mala f 3, Mala f 3.0101, Mala f 4, Mala f 4.0101, Mala g 10, Mala s 1, Mala s 1.0101, Mala s 10, Mala s 10.0101, Mala s 11, Mala s 11.0101, Mala s 12, Mala s 12.0101, Mala s 13, Mala s 13.0101, Mala s 5, Mala s 5.0101, Mala s 6, Mala s 6.0101, Mala s 7, Mala s 7.0101, Mala s 8, Mala s 8.0101, Mala s 9, Mala s 9.0101), Manihot spp (Man e 5, Man e 5.0101, Man e FPA, Man e
GAPDH), Mangifera spp (Man 1 1, Man 1 de 14kD, Man 1 2, Man
3, Man 1 3.01, Man 1 3.02, Man 1 Quitinase), Marsupenaeus spp (Mar j 1, Mar j 1.0101, Mar j 2, Mar j 4), Matricaria spp (Mat c de 17kD) , Mecopoda spp (Mec e 7), Megalobrama spp (Meg am 2, Meg am CK) , Megathura spp (Meg c Hemocianina), Megalops spp (Meg sp 1), Melanogrammus spp (Mel a 1), Meleagris spp (Mel g 1, Mel g 2, Mel g 3, Mel g PRVB, Mel g TSA) , Melicertus spp (Mel 1 1), Menticirrhus spp (Men am 1), Mercurialis spp (Mer a 1, Mer a 1.0101), Merluccius spp (Mer ap 1, Mer au 1, Mer bi 1, Mer ca 1, Mer ga 1, Mer hu 1), Merlangius spp (Mer me 1), Merluccius spp (Mer mr 1, Mer pa 1, Mer po 1, Mer pr 1, Mer se 1) , Meriones spp (Mer un de 23kD), Metarhizium spp (Met a 30), Metapenaeopsis spp (Met ba 1), Metapenaeus spp (Met e 1, Met e 1.0101, Met e 2), Metasequoia spp (Met gl 2),
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Metapenaeus spp (Met j 1, Met j 2), Metanephrops spp (Met ja 1), Metapenaeopsis spp (Met la 1), Metanephrops spp (Met t 2), Micromesistius spp (Mic po 1), Micropogonias spp (Mic un 1), Mimachlamys spp (Mim n 1), Momordica spp (Mom c RIP), Morus spp (Mor a de 17kD, Mor a 4), Morone spp (Mor am 1), Morus spp (Mor n 3, Mor n 3.0101), Morone spp (Mor sa 1, Mor sc 1), Mugil spp (Mug c 1), Muraenolepis spp (Mur mi 1), Musa spp (Mus a 1, Mus a 1.0101, Mus a 2, Mus a
2.0101, Mus a 3, Mus a 3.0101, Mus a 4, Mus a 4.0101, Mus a 5, Mus a 5.0101, Mus a 5.0102), Mus spp (Mus m 1, Mus m
1.0101, Mus m 1.0102, Mus m 2, Mus m Gelatina, Mus m IgG, Mus m MSA, Mus m Muromonab, Mus m Fosvitina) , Mustela spp (Mus p de 17kD), Musa spp (Mus xp 1, Mus xp 2, Mus xp 5), Mycteroperca spp (Myc bo 1, Myc mi 1, Myc ph 1), Myceliophthora spp (Myc sp Lacase), Myrmecia spp (Myr p 1, Myr p 1.0101, Myr p 2, Myr p 2.0101, Myr p 2.0102, Myr p 3, Myr p 3.0101), Mytilus spp (Myt e 1, Myt g 1, Myt g PM), Myzus spp (Myz p 7, Myz p 7.0101), Nemorhedus spp (Nae go Hya), Necator spp (Nec a Calreticulin), Nemipterus spp (Nem vi 1), Neosartorya spp (Neo fl 1, Neo fl 22), Neochen spp (Neo ju 1), Neoscona spp (Neo n 7, Neo n 7.0101), Nephelium spp (Nep 1 GAPDH) , Nephrops spp (Nep n 1, Nep n DF9) , Neptunea spp (Nep po 1, Nep po 1.0101), Nicotiana spp (Nic t 8, Nic t Osmotina, Nic t Vilin), Nimbya spp (Nim c 1, Nim s 1), Nippostrongylus spp (Nip b Agl), Nycticebus spp (Nyc c 1), Octopus spp (Oct f 1, Oct 1 1, Oct v 1, Oct v 1.0101, Oct v PM), Ocyurus spp (Ocy ch 1), Olea spp (Ole e 1, Ole e 1.0101, Ole e 1.0102, Ole e 1.0103, Ole e 1.0104, Ole e 1.0105, Ole e 1.0106, Ole e 1.0107, Ole e 10, Ole e 10.0101, Ole e 11, Ole e 11.0101, Ole e 11.0102, Ole e 12,
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Ole e 13, Ole e 2, Ole e 2.0101, Ole e 3, Ole e 3.0101, Ole e de 36kD, Ole e 4, Ole e 4.0101, Ole e 5, Ole e 5.0101, Ole e 6, Ole e 6.0101, Ole e 7, Ole e 7.0101, Ole e 8, Ole e 8.0101, Ole e 9, Ole e 9.0101), Ommastrephes spp (Omm b 1, Omm b 1.0101), Oncorhynchus spp (One ke 1, One ke de 18kD, One ke alfa2I, One ke Vitellogenina, One m 1, One m 1.0101, One m 1.0201, One m alfa2I, One m Protamina, One m Vitelogenina, One ma 1, One ma FPA, One ma FSA, One ma TPI, One n 1), Onchocerca spp (One o 3, One o 3.0101), Oncorhynchus spp (One ts 1), Onchocerca spp (One v 3, One v 3.0101), Oratosquilla spp (Ora o 1, Ora o 1.0101), Oreochromis spp (Ore a 1, Ore mo 1, Ore mo 2, Ore mo FPA, Ore mo SCAF7145, Ore ni 1, Ore ni de 18kD, Ore ni de 45kD), Ornithonyssus spp (Orn sy 10, Orn sy 10.0101, Orn sy 10.0102), Oryctolagus spp (Ory c 1, Ory c 1.0101, Ory c 2, Ory c Caseina, Ory c Fosvitina, Ory c RSA), Oryza spp (Ory s 1, Ory s 1.0101, Ory s 11, Ory s 12, Ory s 12.0101, Ory s 13, Ory s 14, Ory s de 17kD, Ory s de 19kD, Ory s 2, Ory s 23, Ory s 3, Ory s 7, Ory s aA_TI, Ory s GLP52, Ory s GLP63, Ory s Glioxalase I, Ory s NRA), Ostrya spp (Ost c 1, Ost c 1.0101), Ovis spp (Ovi a ALA, Ovi a BLG, Ovi a Caseina, Ovi a Caseina alfaSl, Ovi a Caseina alfaS2, Ovi a Caseina beta, Ovi a Caseina capa, Ovi a Fosvitina, Ovi a SSA) , Pachycondyla spp (Pae c 3), Pagrus spp (Pag m 1, Pag pa 1), Pampus spp (Pam ar 1, Pam c 1), Pandalus spp (Pan b 1, Pan b 1.0101), Pangasius spp (Pan bo 1), Pandalus spp (Pan e 1, Pan e 1.0101, Pan e 4), Panulirus spp (Pan h 1, Pan hy 1), Pangasius spp (Pan hy de 18kD, Pan hy de 45kD), Panulirus spp (Pan j 1), Panthera spp (Pan 1 1, Pan o 1, Pan p 1), Panulirus spp (Pan s 1, Pan s 1.0101), Panthera
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178/542 spp (Pan t 1), Pan spp (Pan tr TCTP), Papaver spp (Pap s de 17kD, Pap s 2, Pap s de 34kD) , Papilio spp (Pap xu 7, Pap xu 7.0101, Pap xu 7.0102), Paralichthys spp (Par a 1), Parasilurus spp (Par as 1, Par c 1), Paralithodes spp (Par c 1.0101, Par c 1.0102, Par f 1), Parthenium spp (Par h 1), Parietaria spp (Par j 1, Par j 1.0101, Par j 1.0102, Par j 1.0103, Par j 1.0201, Par j 2, Par j 2.0101, Par j 2.0102, Par j 3, Par j 3.0101, Par j 3.0102, Par j 4, Par j 4.0101, Par j J1-J2), Paralichthys spp (Par le 1), Parietaria spp (Par m 1, Par o 1, Par o 1.0101), Paralichthys spp (Par ol 1, Par ol alfa2I), Parahucho spp (Par pe Vitelogenina) , Passiflora spp (Pas e Quitinase, Pas e Heveina), Paspalum spp (Pas n 1, Pas n 1.0101, Pas n 13), Patinopecten spp (Pat y 1), Pediculus spp (Ped h 7, Ped h 7.0101), Penaeus spp (Pen a 1, Pen a 1.0101, Pen a 1.0102, Pen a 1.0102 (103-117), Pen a 1.0102 (109-123), Pen a 1.0102 (1-15), Pen a 1.0102 (115-129), Pen a 1.0102 (121-135), Pen a 1.0102 (127-141), Pen a 1.0102 (13-27), Pen a 1.0102 (133-147), Pen a 1.0102 (139-153), Pen a 1.0102 (145-159)), Partantepenaeus spp (Pen a 1.0102 (151-165)), Penaeus spp (Pen a 1.0102 (157-171), Pen a 1.0102 (163-177), Pen a 1.0102 (169-183), Pen a 1.0102 (175-189), Pen a 1.0102 (181-195), Pen a 1.0102 (187-201), Pen a 1.0102 (193-207), Pen a 1.0102 (19-33), Pen a 1.0102 (199-213), Pen a 1.0102 (205-219), Pen a 1.0102 (211-225), Pen a 1.0102 (217-231), Pen a 1.0102 (223-237), Pen a 1.0102 (229-243)),
Farfantepenaeus spp (Pen a 1.0102 (235-249)), Penaeus spp (Pen a 1.0102 (241-255), Pen a 1.0102 (247-261), Pen a
1.0102 (253-267), Pen a 1.0102 (25-39), Pen a 1.0102 (259273), Pen a 1.0102 (265-279), Pen a 1.0102 (270-284), Pen a
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1.0102 (31-45), Pen a 1.0102 (37-51), Pen a 1.0102 (43-57), Pen a 1.0102 (49-63)), Farfantepenaeus spp (Pen a 1.0102 (55-69)), Penaeus spp (Pen a 1.0102 (61-75), Pen a 1.0102 (67-81), Pen a 1.0102 (7-21), Pen a 1.0102 (73-87), Pen a 1.0102 (79-93), Pen a 1.0102 (85-99), Pen a 1.0102 (91105), Pen a 1.0102 (97-111), Pen a 1.0103), Penicillium spp (Pen b 13, Pen b 13.0101, Pen b 26, Pen b 26.0101, Pen c 1, Pen c 13, Pen c 13.0101, Pen c 18, Pen c 19, Pen c 19.0101, Pen c 2, Pen c 22, Pen c 22.0101, Pen c 24, Pen c 24.0101, Pen c 3, Pen c 3.0101, Pen c 30, Pen c 30.0101, Pen c 32, Pen c 32.0101, Pen c MnSOD, Pen ch 13, Pen ch 13.0101, Pen ch 18, Pen ch 18.0101, Pen ch 20, Pen ch 20.0101, Pen ch 31, Pen ch 31.0101, Pen ch 33, Pen ch 33.0101, Pen ch 35, Pen ch 35.0101, Pen ch MnSOD), Penaeus spp (Pen 1 1, Pen 1 1.0101, Pen m 1, Pen m 1.0101, Pen m 1.0102, Pen m 2, Pen m 2.0101, Pen m 3, Pen m 3.0101, Pen m 4, Pen m 4.0101, Pen m 6, Pen m 6.0101), Penicillium spp (Pen o 18, Pen o 18.0101), Penaeus spp (Pena o 1, Pena o 1.0101), Periplaneta spp (Per a 1, Per a 1.0101, Per a 1.0102, Per a 1.0103, Per a 1.0104, Per a 1.0105, Per a 1.0201, Per a 10, Per a 10.0101, Per a 2, Per a 3, Per a 3.0101, Per a 3.0201, Per a 3.0202, Per a 3.0203, Per a 4, Per a 5, Per a 6, Per a 6.0101, Per a 7, Per a 7.0101, Per a 7.0102, Per a 7.0103, Per a 9, Per a 9.0101, Per a Catepsina, Per a FABP, Per a Tripsina, Per f 1, Per f 7, Per f 7.0101), Perna spp (Per v 1), Persea spp (Pers a 1, Pers a 1.0101, Pers a 4), Petroselinum spp (Pet c 1, Pet c 2, Pet c 3), Phalaris spp (Pha a 1, Pha a 1.0101, Pha a 5, Pha a 5.0101, Pha a 5.02, Pha a 5.03, Pha a 5.04), Phaseolus spp (Pha v 3, Pha v 3.0101, Pha v 3.02 01, Pha v aAI, Pha v aAI.0101, Pha v
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Quitinase, Pha v PHA, Pha v Faseolina) , Phleum spp (Phi p 1, Phi p 1.0101, Phi p 1.0102, Phi p 11, Phi p 11.0101, Phi p 12, Phi p 12.0101, Phi p 12.0102, Phi p 12.0103, Phi p 13, Phi p 13.0101, Phi p 2, Phi p 2.0101, Phi p 3, Phi p
3.0101, Phi P 3.0102, Phi p 4, Phi p 4.0101, Phi p 4 .0102,
Phi p 4 . 0201 r Phi p 4.0202, Phi p 4.0203, Ph) L p 4.0204, Phi
p 5, Phi p c ).0101, Phi p 5 .0102, Phi p 5.0103, Phi p
5.0104, Phi P 5.0105, Phi P 5.0106, Phi p 5.0107, Phi p
5.0108, Phi P 5.0109, Phi P 5.0201, Phi p 5.0202, Phi p
5.0203, Phi P 5.0204, Phi P 5.0205, Phi p 5.0206, Phi p
5.0207, Phi P 6, Phi p 6.0101, Phi p 6.0102, Phi p 7, Phi p
7.0101, Phi P P1-P2-P5-P6, Phi . p P2-P6, Phi p P5-P1, Phi p
P6-P2), Phoenix spp (Pho d 2, Pho d 2.0101, Pho d de 40kD,
Pho d de 90kD) , Phodopus spp (Pho s de 21kD) , Phoma spp (Pho t 1), Phragmites spp (Phr a 1, Phr a 12, Phr a 13, Phr a 4, Phr a 5), Phytolacca spp (Phy a RIP), Pimpinella spp (Pirn a 1, Pirn a 2), Pinna spp (Pin a 1), Piper spp (Pip n de 14kD, Pip n de 28kD) , Pisum spp (Pis s 1, Pis s 1.0101,
Pis s 1.0102, Pis s 2, Pis s 2.0101, Pis s 5, Pis s
Aglutinina, Pis s Albumina) , Pistacia spp (Pis v 1, Pis v 1.0101, Pis v 2, Pis v 2.0101, Pis v 2.0201, Pis v 3, Pis v 3.0101, Pis v 4, Pis v 4.0101, Pis v 5, Pis v 5.0101), Platanus spp (Pla a 1, Pla a 1.0101, Pla a 2, Pla a 2.0101, Pla a 3, Pla a 3.0101, Pla a 8), Platichthys spp (Pla f 1), Plantago spp (Pla 1 1, Pla 1 1.0101, Pla 1 1.0102, Pla 1 1.0103, Pla 1 Citocromo C), Platanus spp (Pla oc 1, Pla or 1, Pla or 1.0101, Pla or 2, Pla or 2.0101, Pla or 3, Pla or 3.0101, Pla or 4, Pla or CyP, Pla r 1), Plectropomus spp (Pie ar 1), Pleospora spp (Pie h 1), Plectropomus spp (Pie le 1), Plodia spp (Pio 1 1, Pio 1 1.0101, Pio 1 2, Pio 1
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2.0101), Poa spp (Poa p 1, Poa p 1.0101, Poa p 10, Poa p 12, Poa p 13, Poa p 2, Poa p 4, Poa p 5, Poa p 5.0101, Poa p 6, Poa p 7), Polistes spp (Pol a 1, Pol a 1.0101, Pol a
2, Pol a 2.0101, Pol a 5, Pol a 5.0101, Pol d 1, Pol d 1.0101, Pol d 1.0102, Pol d 1.0103, Pol d 1.0104, Pol d 4, Pol d 4.0101, Pol d 5, Pol d 5.0101, Pol e 1, Pol e 1.0101,
Pol e 2, Pol e 4, Pol e 4.0101, Pol e 5, Pol e 5.0101, Pol f 5, Pol f 5.0101, Pol g 1, Pol g 1.0101, Pol g 2, Pol g 4, Pol g 5, Pol g 5.0101, Pol he MLT, Pol m 5, Pol m 5.0101), Polypedilum spp (Pol n 1), Pollicipes spp (Pol po 1), Pollachius spp (Pol vi 1), Polybia spp (Poly p 1, Poly p 1.0101, Poly p 2, Poly p 5, Poly s 5, Poly s 5.0101), Pomatomus spp (Pom sa 1), Pongo spp (Pon ab HSA) , Pontastacus spp (Pon 1 4, Pon 1 4.0101, Pon 1 7, Pon 1 7.0101), Portunus spp (Por s 1, Por s 1.0101, Por s 1.0102, Por tr 1, Por tr 1.0101), Protortonia spp (Pro ca 38kD) , Procumbarus spp (Pro cl 1, Pro cl 1.0101, Pro cl de 21kD) , Prosopis spp (Pro j de 20kD) , Prunus spp (Pru ar 1, Pru ar 1.0101, Pru ar 3, Pru ar 3.0101, Pru av 1, Pru av 1.0101, Pru av 1.0201, Pru av 1.0202, Pru av 1.0203, Pru av 2, Pru av 2.0101, Pru av 3, Pru av 3.0101, Pru av 4, Pru av 4.0101, Pru c 1, Pru d 1, Pru d 2, Pru d 3, Pru d 3.0101, Pru d 4, Pru du 1, Pru du 2, Pru du 2S Albumina, Pru du 3, Pru du 3.0101, Pru du 4, Pru du 4.0101, Pru du 4.0102, Pru du 5, Pru du 5.0101, Pru du 6, Pru du 6.0101, Pru du 6.0201, Pru du Conglutina, Pru p 1, Pru p 1.0101, Pru p 2, Pru p 2.0101, Pru p 2.0201, Pru p 2.0301, Pru p 3, Pru p 3.0101, Pru p 3.0102, Pru p 4, Pru p 4.0101, Pru p 4.0201, Pru sa 3), Psilocybe spp (Psi c 1, Psi c 1.0101, Psi c 2, Psi c 2.0101), Psoroptes spp (Pso o 1, Pso o 10, Pso o
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10.0101, Pso ο 11, Pso ο 13, Pso ο 14, Pso ο 2, Pso ο 21, Pso ο 3, Pso ο 5, Pso ο 7) , Puma spp (Pum c 1) , Punica spp (Pun g 3), Pyrus spp (Pyr c 1, Pyr c 1.0101, Pyr c 3, Pyr c 3.0101, Pyr c 4, Pyr c 4.0101, Pyr c 5, Pyr c 5.0101, Pyr py 2), Quercus spp (Que a 1, Que a 1.0101, Que a 1.0201, Que a 1.0301, Que a 1.0401, Que a 2, Que a 4), Rachycentron spp (Rac ca 1), Rana spp (Ran e 1, Ran e 1.0101, Ran e 2, Ran e 2.0101), Ranina spp (Ran ra 1), Rangifer spp (Ran t BLG), Rattus spp (Rat n 1, Rat n 1.0101, Rat n Caseina, Rat n Gelatina, Rat n IgG, Rat n Fosvitina, Rat n RSA, Rat n Transferrina), Rhizomucor spp (Rhi m AP), Rhizopus spp (Rhi nv Lipase, Rhi o Lipase), Rhomboplites spp (Rho au 1), Rhodotorula spp (Rho m 1, Rho m 1.0101, Rho m 2, Rho m 2.0101), Ricinus spp (Ric c 1, Ric c 1.0101, Ric c 2, Ric c 3, Ric c 8, Ric c RIP), Rivulus spp (Riv ma 1), Robinia spp (Rob p 2, Rob p 4, Rob p Glucanase) , Rosa spp (Ros r 3), Roystonea spp (Roy e 2), Rubus spp (Rub i 1, Rub i 1.0101, Rub i 3, Rub i 3.0101, Rub i Quitinase, Rub i CyP) , Saccharomyces spp (Sac c Carboxipeptidase Y, Sac c CyP, Sac c Enolase, Sac c Glucosidase, Sac c Invertase, Sac c MnSOD, Sac c P2, Sac c Profilina) , Salvelinus spp (Sal f 1), Salsola spp (Sal k 1, Sal k 1.0101, Sal k 1.0201, Sal k 1.0301, Sal k 1.0302, Sal k 2, Sal k 2.0101, Sal k 3, Sal k 3.0101, Sal k 4, Sal k 4.0101, Sal k 4.0201, Sal k 5, Sal k 5.0101), Salvelinus spp (Sal le Vitelogenina), Salmo spp (Sal s 1, Sal s 1.0101, Sal s 1.0201, Sal s 2, Sal s 2.0101, Sal s Gelatina), Sambucus spp (Sam n 1), Sander spp (San lu 1), Saponaria spp (Sap o RIP), Sardinops spp (Sar m 1), Sarkidiornis spp (Sar ml 1), Sardina spp (Sar p 1), Sarcoptes spp (Sar s 1, Sar s 14, Sar s 3, Sar s GST, Sar s
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PM), Sardinops spp (Sar sa 1, Sar sa 1.0101), Schistosoma spp (Sch j GST, Sch j PM, Sch j Sj22, Sch j Sj67, Sch ma Sm20, Sch ma Sm21, Sch ma Sm22, Sch ma Sm31), Sciaenops spp (Sci oc 1), Scomber spp (Sco a 1), Scombermorus spp (Sco ca 1), Scomberomorus spp (Sco g 1), Scomber spp (Sco j 1, Sco ma 1, Sco s 1), Scolopendra spp (Sco y 7, Sco y 7.0101), Scylla spp (Scy o 1, Scy o 1.0101, Scy o 2, Scy pa 1, Scy pa 2, Scy s 1, Scy s 1.0101, Scy s 2), Sebastes spp (Seb fa 1, Seb in 1, Seb m 1, Seb m 1.0101, Seb m 1.0201), Secale spp (Sec c 1, Sec c 12, Sec c 13, Sec c 2, Sec c 20, Sec c 20.0101, Sec c 20.0201, Sec c 28, Sec c 3, Sec c 4, Sec c 4.0101, Sec c 4.0201, Sec c 5, Sec c 5.0101, Sec c aA_TI, Sec c aA_TI.0101), Senecio spp (Sen j MDH, Sen j PL), Sepia spp (Sep e 1, Sep e 1.0101), Sepioteuthis spp (Sep 1 1, Sep 1 1.0101), Sepia spp (Sep m 1), Seriola spp (Ser d 1, Ser la 1), Sergestes spp (Ser lu 1), Seriola spp (Ser q 1, Ser ri 1), Sesamum spp (Ses 1 1, Ses 1 1.0101, Ses 1 2, Ses 1 2.0101, Ses 1 3, Ses 1 3.0101, Ses 1 4, Ses 1 4.0101, Ses 1 5, Ses 1 5.0101, Ses 1 6, Ses 1 6.0101, Ses 1 7, Ses 1 7.0101, Ses 1 8), Shigella spp (Shi bo GST, Shi dy GST), Simulia spp (Sim vi 1, Sim vi 2, Sim vi 3, Sim vi 4, Sim vi de 70kD), Sinapis spp (Sin a 1, Sin a 1.0101, Sin a 1.0104, Sin a 1.0105, Sin a 1.0106, Sin a 1.0107, Sin a 1.0108, Sin a 2, Sin a 2.0101, Sin a 3, Sin a 3.0101, Sin a 4, Sin a 4.0101), Sinonovacula spp (Sin c 1, Sin c 1.0101), Solenopsis spp (Sol g 2, Sol g 2.0101, Sol g 3, Sol g 3.0101, Sol g 4, Sol g 4.0101, Sol g 4.0201, Sol 1 1, Sol 1 1.0101, Sol 1 2, Sol 1 2.0101, Sol 1 3, Sol 1 3.0101, Sol 1 4, Sol 1 4.0101), Solenocera spp (Sol me 1), Solenopsis spp (Sol r 1, Sol r 2, Sol r 2.0101, Sol r 3, Sol r 3.0101, Sol
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184/542 s 2, Sol s 2.0101, Sol s 3, Sol s 3.0101, Sol s 4), Solea spp (Sol so 1, Sol so TPI), Solanum spp (Sola t 1, Sola t 1.0101, Sola t 2, Sola t 2.0101, Sola t 3, Sola t 3.0101, Sola t 3.0102, Sola t 4, Sola t 4.0101, Sola t 8, Sola t Glucanase) , Sorghum spp (Sor b 1, Sor h 1, Sor h 1.0101, Sor h 12, Sor h 7), Sparus spp (Spa a 1), Sphyrna spp (Sph ti 1), Spirulina spp (Spi mx beta_Ficocianina) , Spinacia spp (Spi o 2, Spi o RuBisCO), Squilla spp (Squ ac 1, Squ ac 1.0101, Squ o 1, Squ o 1.0101), Staphylococcus spp (Sta a FBP, Sta a SEA, Sta a SEB, Sta a SEC, Sta a SED, Sta a SEE, Sta a TSST), Stachybotrys spp (Sta c 3, Sta c 3.0101, Sta c Celulase, Sta c Hemolisina, Sta c SchS34, Sta c Estaquirase A), Stemphylium spp (Ste b 1, Ste c 1, Ste v 1), Stolephorus spp (Sto 1 1), Struthio spp (Str c 1, Str c 2, Str c 3), Streptococcus spp (Str dy Estreptoquinase), Streptomyces spp (Str g Pronase), Streptococcus spp (Str pn PspC) , Strongylocentrotus spp (Str pu 18kD, Str pu Vitellogenin), Streptococcus spp (Str py SPEA, Str py SPEC, Str py Estreptoquinase), Strongyloides spp (Str st 45kD), Streptomyces spp (Str v PAT), Styela spp (Sty p 1), Suidasia spp (Sul m 1, Sul m 13, Sul m 2, Sul m 3, Sul m 5, Sul m 5.01, Sul m 5.02, Sul m 5.03, Sul m 6, Sul m 7, Sul m 8, Sul m 9), Sus spp (Sus s ACTH, Sus s ALA, Sus s Amilase, Sus s BLG, Sus s Caseina, Sus s Caseina alfaSl, Sus s Caseina alfaS2, Sus s Caseina beta, Sus s Caseina capa, Sus s Gelatina, Sus s HG, Sus s Insulina, Sus s Lipase, Sus s Pepsina, Sus s Fosvitina, Sus s PRVB, Sus s PSA, Sus s TCTP) , Syntelopodeuma spp (Syn y 7, Syn y 7.0101), Syringa spp (Syr v 1, Syr v 1.0101, Syr v 1.0102, Syr v 1.0103, Syr v 2, Syr v 3, Syr v 3.0101), Tabanus spp (Tab y 1, Tab y
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1.0101, Tab y 2, Tab y 2.0101, Tab y 5, Tab y 5.0101), Tadorna spp (Tad ra 1), Talaromyces spp (Tai st 22, Tai st 3, Tai st 8), Taraxacum spp (Tar o de 18kD) , Taxodium spp (Tax d 2), Tegenaria spp (Teg d Hemocyanin), Teladorsagia spp (Tel ci 3), Thaumetopoea spp (Tha p 1, Tha p 1.0101, Tha p 2, Tha p 2.0101), Theragra spp (The c 1), Thermomyces spp (The 1 Lipase, The sp Lipase, The sp Xilanase), Thunnus spp (Thu a 1, Thu a 1.0101, Thu a Colágeno, Thu al 1, Thu at 1, Thu o 1, Thu o Colágeno), Thuja spp (Thu oc 3, Thu p 1), Thunnus spp (Thu t 1, Thu to 1), Thyrsites spp (Thy at 1), Thyrophygus spp (Thy y 7, Thy y 7.0101), Todarodes spp (Tod p 1, Tod p 1.0101, Tod p 1.0102), Toxoptera spp (Tox c 7, Tox c 7.0101), Toxocara spp (Tox ca TES120, Tox ca TES26, Tox ca TES30), Toxoplasma spp (Tox g HSP70), Trachypenaeus spp (Tra c 1), Trachinotus spp (Tra ca 1), Trachurus spp (Tra j 1, Tra j Gelatina, Tra tr Gelatina), Triticum spp (Tri a 1, Tri a de lOkD, Tri a 12, Tri a 12.0101, Tri a 12.0102, Tri a 12.0103, Tri a 12.0104, Tri a 13, Tri a 14, Tri a 14.0101, Tri a 14.0201, Tri a 15, Tri a 15.0101, Tri a 18, Tri a 18.0101, Tri a 19, Tri a 19.0101, Tri a 2, Tri a 21, Tri a 21.0101, Tri a de 23kd, Tri a 25, Tri a 25.0101, Tri a 26, Tri a 26.0101, Tri a 27, Tri a 27.0101, Tri a 28, Tri a 28.0101, Tri a 29, Tri a 29.0101, Tri a 29.0201, Tri a 3, Tri a 30, Tri a 30.0101, Tri a 31, Tri a 31.0101, Tri a 32, Tri a 32.0101, Tri a 33, Tri a 33.0101, Tri a 34, Tri a 34.0101, Tri a 35, Tri a 35.0101, Tri a 36, Tri a 36.0101, Tri a 37, Tri a 37.0101, Tri a 4, Tri a 4.0101, Tri a 4.0201, Tri a 5, Tri a 7, Tri a aA_SI, Tri a alfa_Gliadina, Tri a bA, Tri a Bd36K, Tri a beta_Gliadina, Tri a Quitinase, Tri a CM16, Tri a DH, Tri a
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Endoquitinase, Tri a gama_Gliadina, Tri a Germina, Tri a Gliadina, Tri a GST, Tri a LMW Glu, Tri a LMW-GS B16, Tri a LMW-GS P42, Tri a LMW-GS P73, Tri a LTP2, Tri a omega2_Gliadina, Tri a Peroxidase, Tri a Peroxidase 1, Tri a SPI, Tri a TLP, Tri a Tritina, Tri a XI), Tritirachium spp (Tri al Proteinase K), Tribolium spp (Tri ca 17, Tri ca 17.0101, Tri ca 7, Tri ca 7.0101), Trichostrongylus spp (Tri co 3, Tri co 3.0101), Trichophyton spp (Tri eq 4), Trigonella spp (Tri fg 1, Tri fg 2, Tri fg 3, Tri fg 4), Trichosanthes spp (Tri k RIP), Trichiurus spp (Tri le 1), Triticum spp (Tri m Peroxidase), Trichophyton spp (Tri me 2, Tri me 4), Trisetum spp (Tri p 1, Tri p 5), Trichinella spp (Tri ps 3, Tri ps 3.0101), Trichophyton spp (Tri r 2, Tri r 2.0101, Tri r 4, Tri r 4.0101), Trichoderma spp (Tri rs Cellulase), Triticum spp (Tri s 14), Trichophyton spp
(Tri sc 2, Tri sc 4, Tri so 2 ), Trichinella spp (Tri sp 3,
Tri sp 3.0101, Tri sp 3.0102, Tri sp 3.0103, Tri sp 3 . 0104,
Tri sp 3.0105, Tri sp 3.0106) , Trichophyton spp (Tri t 1,
Tri t 1 .0101, Tri t 4, Tri t 4.0101), Triticum spp (Tri td
14, Tri td aA_TI), Trichoderma spp (Tri v Celulase), Trichophyton spp (Tri ve 4), Triatoma spp (Tria p 1, Tria p 1.0101), Triplochiton spp (Trip s 1), Turbo spp (Tur c 1, Tur c PM), Tyrophagus spp (Tyr p 1, Tyr p 10, Tyr p 10.0101, Tyr p 10.0102, Tyr p 13, Tyr p 13.0101, Tyr p 2,
Tyr p 2.0101, Tyr P 24, Tyr p 24.0101, Tyr P 3, Tyr P
3.0101 , Tyr p 4, Tyr P 5, Tyr p 5.01, Tyr p 5 . 02, Tyr P
5.03, Tyr p 7, Tyr P alf a Tubulina), Ulocladium spp (Ulo a
1, Ulo at 1, Ulo b 1, Ulo c 1, Ulo co 1, Ulo cu 1, Ulo mu
1, Ulo ob 1, Ulo se 1, Ulo su 1, Ulo tu 1), Uncia spp (Unc u 1), Urophycis spp (Uro te 1), Vaccinium spp (Vac m 3),
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Varroa spp (Var j de 13kD), Venerupis spp (Ven ph 1, Ven ph 1.0101), Vespula spp (Ves f 1, Ves f 2, Ves f 5, Ves f 5.0101, Ves g 1, Ves g 2, Ves g 5, Ves g 5.0101, Ves m 1, Ves m 1.0101, Ves m 2, Ves m 2.0101, Ves m 5, Ves m 5.0101, Ves m MLT, Ves p 1, Ves p 2, Ves p 5, Ves p 5.0101, Ves s
1, Ves s 1.0101, Ves s 2, Ves s 5, Ves s 5.0101, Ves v 1, Ves v 1.0101, Ves v 2, Ves v 2.0101, Ves v 2.0201, Ves v 3, Ves v 3.0101, Ves v 5, Ves v 5.0101, Ves v 5-Pol a 5, Ves vi 5, Ves vi 5.0101), Vespa spp (Vesp c 1, Vesp c 1.0101, Vesp c 2, Vesp c 5, Vesp c 5.0101, Vesp c 5.0102, Vesp m 1, Vesp m 1.0101, Vesp m 5, Vesp m 5.0101, Vesp ma 1, Vesp ma
2, Vesp ma 5, Vesp ma MLT, Vesp v MLT), Vigna spp (Vig r 1, Vig r 1.0101, Vig r de 17kD, Vig r 5, Vig r 8S Globulina, Vig r Albumina, Vig r beta-Conglicinina) , Vitis spp (Vit v 1, Vit v 1.0101, Vit v 4, Vit v 5, Vit v Glucanase, Vit v TLP), Xiphias spp (Xip g 1, Xip g 1.0101, Xip g de 25kD) ,
Zea spp (Zea m 1, Zea m 1.0101, Zea m 11, Zea m 12, Zea m
12.0101, Zea m 12.0102, Zea m 12.0103, Zea m 12.0104, Zea m
12.0105, Zea m 13, Zea m 14, Zea m 14.0101, Zea m 14. 0102,
Zea m 2, Zea m 20S, Zea m 22, Zea m 25, Zea m 25.0101 , Zea
m de 27kD Zeina, Zea m 3, Zea m 4, Zea m 5, Zea m de 50kD
Zeina, Zea m 7, Zea m Quitinase, Zea m Gl, Zea m G2, Zea m
PAG, Zea m Zml3), Zeus spp (Zeu fa 1), Ziziphus spp ( Ziz m
1, Ziz m 1.0101), Zoarces spp (Zoa a ISP III), Zygophyllum spp (Zyg f 2).
[0207] Nesse contexto, os termos entre
parênteses indicam os antigenos alergênicos preferidos (alérgenos) da fonte particular.
[0208] O mais preferencialmente, o antígeno alergênico é preferencialmente derivado a partir de uma
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188/542 fonte (por exemplo, uma planta (por exemplo, gramineas ou uma árvore), um produto natural (por exemplo, leite, frutos secos, etc.), uma fonte fúngica (por ex., Aspergillus) ou uma fonte bacteriana ou a partir de uma fonte animal ou veneno de origem animal (por ex., gato, cão, veneno de abelhas, etc.), preferencialmente selecionado a partir da lista consistindo em pólen de gramineas (por exemplo, pólen de centeio), pólen de árvores (ex: pólen de avelã, bétula, amieiro, cinza) pólen de flores, pólen de ervas (por exemplo, pólen de artemisia), ácaros (por exemplo, Der f 1, Der p 1, Eur m 1, Der m 1 Der f 2, Der p 2, Eur m 2, Tyr p 2, Lep d 2), mofo (por exemplo, alérgenos de Acremonium, Aspergillus, Cladosporium, Fusarium, Mucor, Penicillium, Rhizopus, Stachybotrys, Trichoderma ou Alternaria), animais (por exemplo, Fel dl, Fel d2, Fel d3 ou Fel d4 de gatos), alimentos (por ex., alérgenos de peixes (por exemplo, robalo, bacalhau, solha), frutos do mar (por exemplo, caranguejo, lagosta, camarão), ovo, trigo, frutos secos (por ex., amendoins, amêndoas, castanhas, nozes), soja, leite, etc.) ou veneno de insetos (por ex., alérgenos originários do veneno de vespas, zangões, vespas, formigas, mosquitos ou carrapatos) .
Autoantigenos autoimunes: [0209] Autoantigenos autoimunes, isto é, antigenos associados com doença autoimune ou autoantigenos, podem estar associados com uma doença autoimune que afete pelo menos um ou mais dos seguintes sistemas de órgãos: o sistema circulatório, o sistema digestivo, o sistema endócrino, o sistema excretor, o sistema imunitário, o sistema tegumentar, o sistema muscular, o sistema nervoso,
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189/542 o sistema reprodutor, o sistema respiratório, o sistema esquelético, de preferência com o sistema cardiovascular, o sistema neuroendócrico, o sistema musculoesquelético ou o sistema gastrointestinal. Aí o sistema circulatório é o sistema de orgãos que permite bombear e canalizar o sangue para e a partir do corpo e pulmões com coração, sangue e vasos sanguíneos. 0 sistema digestivo permite a digestão e o processamento de alimentos com glândulas salivares, esôfago, estômago, fígado, vesícula biliar, pâncreas, intestino, cólon, reto e ânus. 0 sistema endócrino permite a comunicação dentro do corpo usando hormônios produzidos pelas glândulas endócrinas tais como o hipotálamo, pituitária ou hipófise, corpo pineal ou glândula pineal, glândula tireoide, glândula paratireoide e glândulas suprarrenais. 0 sistema excretor compreende rins, ureteres, bexiga e uretra e está envolvido no equilíbrio de fluidos, no equilíbrio eletrolítico e na excreção de urina. 0 sistema imunitário compreende estruturas envolvidas na transferência de linfa entre os tecidos e a corrente sanguínea, a linfa e os nódulos e vasos que podem ser responsáveis pelo transporte de componentes celulares e humorais do sistema imunitário. Esse é responsável pela defesa contra agentes causadores de doenças e compreende, entre outros, leucócitos, amígdalas, adenoides, timo e baço. 0 sistema tegumentar compreende pele, cabelos e unhas. 0 sistema muscular permite o movimento com os músculos em conjunto com o sistema esquelético que compreende ossos, cartilagens, ligamentos e tendões e confere suporte estrutural. 0 sistema nervoso é responsável por recolher, transferir e processar informação e
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190/542 compreende o cérebro, a medula espinal e os nervos. O sistema reprodutivo compreende os órgãos sexuais, tais como ovários, trompas de falópio, útero, vagina, glândulas mamárias, testículos, dueto deferente, vesículas seminais, próstata e pênis. O sistema respiratório compreende os órgãos usados para a respiração, faringe, laringe, traqueia, brônquios, pulmões e diafragma e atua em conjunto com o sistema circulatório.
[0210] Autoantígenos autoimunes (antígenos associados com doença autoimune ou autoantígenos) são selecionados a partir de autoantígenos associados com doenças autoimunes selecionadas a partir da doença de Addison (adrenalite autoimune, Morbus Addison), alopecia areata, anemia de Addison (Morbus Biermer), anemia hemolitica autoimune (AIHA), anemia hemolitica autoimune (AIHA) do tipo frio (doença da hemaglutinina a frio, anemia hemolitica autoimune a frio (AIHA) (doença da aglutinina a frio), (CHAD)), anemia hemolitica autoimune (AIHA) do tipo quente (AIHA quente, anemia hemolitica autoimune quente (AIHA) ) , anemia hemolitica autoimune de Donath-Landsteiner (hemoglobinúria paroxistica a frio), sindrome antifosfolipide (SAF), aterosclerose, artrite autoimune, arterite temporal, arterite de Takayasu (doença de Takayasu, doença do arco aórtico), arterite temporal/arterite de células gigantes, gastrite crônica autoimune, infertilidade autoimune, doença da orelha interna autoimune (AIED), doença de Basedow (Morbus Basedow), doença de Bechterew (Morbus Bechterew, espondilite anquilosante, espondilite anquilosante), sindrome de Behçet (Morbus Behçet), doença do intestino
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191/542 incluindo doença inflamatória intestinal autoimune (incluindo oolite ulcerosa (Morbus Crohn, doença de Crohn), cardiomiopatia, particularmente cardiomiopatia autoimune, cardiomiopatia dilatada idiopática (DCM), dermatite da doença celiaca (enteropatia mediada pelo glúten), sindrome da disfunção imune de fadiga crônica (CFIDS), polineuropatia desmielinizante inflamatória crônica (PDIC), poliartrite crônica, sindrome de Churg-Strauss, penfigoide cicatricial, sindrome de Cogan, sindrome CREST (sindrome com calcinose cutânea, fenômeno de Raynaud, distúrbios de motilidade do esôfago, esclerodactilia e teleangiectasia), doença de Crohn (Morbus Crohn, colite ulcerosa), dermatite herpetiforme duradoura, doenças dermatológicas autoimunes, dermatomiosite, Diabetes, Diabetes mellitus de Tipo 1 (diabetes tipo I, Diabetes mellitus insulino-dependente), Diabetes Mellitus de Tipo 2 (diabetes tipo II), crioglobulinemia mista essencial, crioglobulinemia mista essencial, fibromialgia, fibromiosite, sindrome de Goodpasture (glomerulonefrite mediada por anti-GBM), doença enxerto versus hospedeiro, sindrome de Guillain-Barré (GBM, Polirradiculoneurite), doenças autoimunes hematológicas, tireoidite de Hashimoto, hemofilia, hemofilia adquirida, hepatite, hepatite autoimune, particularmente formas autoimunes de hepatite crônica, fibrose pulmonar idiopática (FPI), púrpura trombocitopênica idiopática, púrpura imunotrombocitopênica (Morbus Werlhof; ITP), nefropatia por IgA, infertilidade, infertilidade autoimune, artrite reumatoide juvenil (Morbus Still, sindrome de Still), sindrome de Lambert-Eaton, líquen plano, líquen escleroso, lúpus eritematoso, lúpus eritematoso sistêmico (LEM), lúpus
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192/542 eritematoso (forma discoide), artrite de Lyme (doença de Lyme, artrite borrelia), doença de Ménierè (Morbus Ménierè); doença mista do tecido conjuntivo (DMTC), esclerose múltipla (EM, encefalomielite disseminada, doença de Charcot), miastenia grave (miastenia, MG) , miosite, polimiosite, doenças autoimunes neurais, neurodermite, pênfigo vulgar, penfigoide bolhoso, penfigóide cicatrizante; poliarterite nodosa (periartite nodosa), policondrite (pancrondrite), sindrome poliglandular (autoimune) (sindrome de PGA, sindrome de Schmidt), polimialgia reumática, agamaglobulinemia primária, cirrose biliar primária CBP, colangite autoimune primária), esclerose sistêmica progressiva (PSS), psoriase, Psoriase vulgar, fenômenos de Raynaud, sindrome de Reiter (Morbus Reiter, sindrome sinovial conjuntivo uretral)), artrite reumatóide (AR, poliartrite crônica, doença reumática das articulações, febre reumática), sarcoidose (Morbus Boeck, doença de Besnier-Boeck-Schaumann), sindrome do homem rígido, Esclerodermia, Escleroderma, sindrome de Sjõgren, oftalmia simpatética; Intolerância transitória ao glúten, rejeição de órgãos transplantados, uveíte, uveíte autoimune, vasculite, vitiligo (leucoderma, pele piebold) e doença de Wegner (Morbus Wegner, granulomatose de Wegner).
[0211] Essas e outras proteínas que atuam como autoantígenos autoimunes são entendidas como sendo terapêuticas, uma vez que se destinam a tratar o sujeito, em particular um mamífero, mais particularmente um ser humano, vacinando com um autoantígeno que é expresso pelo mamífero, por exemplo, o próprio humano e que desencadeia uma resposta imunitária indesejada, que não é levantada em
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193/542 um sujeito saudável. Por conseguinte, tais proteínas que atuam como autoantígenos são tipicamente de origem de mamíferos, em particular de origem humana.
Particularmente preferidos nesse contexto são autoantígenos autoimunes (autoantígenos) selecionados a partir de: proteína básica de mielina (MBP), proteína proteolipídica (PLP) e glicoproteina de oligodendrócito de mielina (MOG), em cada caso associada com esclerose múltipla (EM);
CD44, preproinsulina, proinsulina, insulina, decaroxilase de ácido glutâmico (GAD65), antígeno insulinoma tipo tirosina fosfatase 2 (IA2), portador de zinco (ZnT8) e proteína de choque térmico 60 (HSP60), em cada caso associado ao diabetes tipo I;
proteína de ligação a retinoide interfotoreceptora (IRBP) associada a uveíte autoimune;
receptor de acetilcolina AchR e receptor do fator de crescimento tipo insulina-1 (IGF-1R), em cada caso associado com miastenia grave;
Proteína M a partir de estreptococos betahemolíticos (pseudoautoantígeno) associados à febre reumática;
Fator inibidor da migração de macrófagos associado com a artrite;
Complexo Ro/La RNP, alfa e beta-fodrina, autoantígeno de células ilhotas, poli(ADP)ribose polimerase (PARP), NuMA, NOR-90, autoantígeno Ro60 e antígeno p27, em cada caso associado com a síndrome de Sjõgren;
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194/542 autoantigeno R06O, lipoproteinas de baixa densidade, antigenos Sm do complexo de ribonucleoproteinas nucleares pequenas U-l (B/B', DI, D2, D3, E, F, G) e ribonucleoproteinas RNP, em cada caso associado ao lúpus eritematoso;
- oxLDL, beta(2)GPI, HSP60/65 e oxLDL/beta(2)GPI, em cada caso associado com Aterosclerose;
receptor beta-adrenérgico (1) cardíaco associado com cardiomiopatia dilatada idiopática (DCM);
- histidil-RNAt-sintetase (HisRS) associada com a miosite;
topoisomerase I associada com a doença esclerodérmica. [0212] Além disso, noutras modalidades, o referido autoantigeno autoimune está associado com a respectiva doença autoimune, como por exemplo IL-17, proteínas de choque térmico e/ou qualquer receptor de células T idiopáticas patogênicas ou quimiocinas o qual é expresso pelas células imunitárias envolvidas na resposta autoimune na referida doença autoimune (tal como quaisquer doenças autoimunes descritas no presente documento).
[0213] De preferência a pelo menos uma região de codificação do composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA de acordo com a invenção compreende pelo menos duas, três, quatro, cinco, seis, sete, oito ou mais sequências de ácido nucleico idênticas ou com uma identidade de sequência de pelo menos 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99%, preferencialmente de pelo menos 70%, mais preferencialmente de pelo menos
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80%, ainda mais preferencialmente de pelo menos 85%, ainda mais preferencialmente de pelo menos 90% e mais preferencialmente de pelo menos 95% ou mesmo 97%, com qualquer uma das sequências de ácido nucleico divulgadas na listagem de sequências (ou respectivamente nas Tabelas 1-5 ou Figuras 20-24 do documento PCT/EP2016/075843), ou um fragmento ou variante de qualquer uma das referidas sequências de ácido nucleico.
[0214] Preferivelmente, a sequência de mRNA compreendendo pelo menos uma região de codificação conforme definido no presente documento compreende tipicamente um comprimento de cerca de 50 até cerca de 20.000, ou 100 a cerca de 20.000 nucleotídeos, preferencialmente de cerca de 250 a cerca de 20.000 nucleotídeos, mais preferencialmente de cerca de 500 a cerca de 10.000, ainda mais preferencialmente de cerca de 500 a cerca de 5.000.
[0215] De acordo com uma modalidade adicional, a sequência de mRNA de acordo com a invenção é uma sequência de mRNA artificial conforme definido no presente documento.
[0216] De acordo com uma modalidade adicional, o composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA de acordo com a invenção é uma sequência de mRNA modificada, de preferência uma sequência de mRNA modificada, conforme descrito no presente documento. Nesse contexto, uma modificação conforme definido no presente documento conduz, preferencialmente, a uma estabilização da sequência de mRNA de acordo com a invenção. Mais preferencialmente, a invenção confere, desse modo, uma sequência de mRNA
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196/542 estabilizada compreendendo pelo menos uma região de codificação conforme definido no presente documento.
[0217] De acordo com uma modalidade, o composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA da presente invenção pode, desse modo, ser conferido como uma sequência de mRNA estabilizado, isto é, como um mRNA que é essencialmente resistente à degradação in vivo (por exemplo, por uma exo ou endo-nuclease) . Tal estabilização pode ser efetuada, por exemplo, por uma cadeia principal de fosfato modificado do mRNA da presente invenção. Uma modificação da cadeia principal no contexto da presente invenção é uma modificação na qual os fosfatos da cadeia principal dos nucleotideos contidos no mRNA são quimicamente modificados. Os nucleotideos que podem ser preferencialmente usados no presente contexto contêm, por exemplo, uma cadeia principal de fosfato modificada com fosforotioato, de preferência pelo menos um dos oxigênios do fosfato contido na cadeia principal de fosfato sendo substituído por um átomo de enxofre. Os mRNA estabilizados adicionalmente podem incluir, por exemplo: análogos de fosfato não iônicos, tais como, por exemplo, fosfonatos de alquila e arila, em que o oxigênio do fosfonato carregado é substituído por um grupo alquila ou arila, ou fosfodiésteres e alquilfosfotriésteres, nos quais o resíduo de oxigênio está presente na forma alquilada. Tais modificações da cadeia principal incluem tipicamente, sem implicar qualquer limitação, modificações do grupo consistindo em metilfosfonatos, fosforamidatos e fosforotioatos (por exemplo, citidina-5'-O-(1-tiofosfato)).
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197/542 [0218] No que se segue, são descritas modificações especificas, que são preferencialmente capazes de estabilizar o mRNA conforme definido no presente documento.
Modificações químicas:
[0219] O termo modificação de mRNA, tal como é usado no presente documento, se pode referir a modificações químicas compreendendo modificações na cadeia principal, bem como modificações de açúcar ou modificações de base.
[0220] Nesse contexto, um(a) (sequência de) mRNA modificado(a) conforme definido no presente documento pode conter análogos/modificações de nucleotídeos, por exemplo, modificações na cadeia principal, modificações de açúcar ou modificações de base. Uma modificação da cadeia principal no contexto da presente invenção é uma modificação, na qual os fosfatos da cadeia principal dos nucleotídeos contidos em um composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA, conforme definido no presente documento, são quimicamente modificados. Uma modificação de açúcar no contexto da presente invenção é uma modificação química do açúcar dos nucleotídeos do composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA conforme definido no presente documento. Alem disso, uma modificação de base no contexto da presente invenção é uma modificação química da porção base dos nucleotídeos do composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA. Nesse contexto, análogos de nucleotídeos ou modificações são preferencialmente selecionados a partir de análogos de
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198/542 nucleotídeos, que são aplicáveis para transcrição e/ou tradução.
Modificações de Açúcar:
[0221] Os nucleosídeos e nucleotídeos modificados, que podem ser incorporados em um composto de mRNA modificado compreendendo uma sequência de mRNA conforme descrito no presente documento, podem ser modificados na porção de açúcar. Por exemplo, o grupo hidroxila 2' (OH) pode ser modificado ou substituído por vários substituintes óxi ou desóxi diferentes. Exemplos de modificações óxi do grupo hidroxila 2' incluem, mas não estão limitados a, alcóxi ou arilóxi (-OR, por ex, R = H, alquila, cicloalquila, arila, aralquila, heteroarila ou açúcar); polietilenoglicóis (PEG), -O(CH2CH2O)nCH2CH2OR; ácidos nucleicos bloqueados (LNA) nos quais a hidroxila 2' está ligada, por exemplo, por uma ponte de metileno, ao carbono 4' do mesmo açúcar ribose; e grupos amino (-0amino, em que o grupo amino, por ex. , NRR, pode ser alquilamino, dialquilamino, heterociclilo, arilamino, diarilamino, heteroarilamino ou di-heteroarilamino, etilenodiamina, poliamino) ou aminoalcóxi.
[0222] Modificações desóxi incluem hidrogênio, amino (p. ex. NH2; alquilamino, dialquilamino, heterociclilo, arilamino, diarilamino, heteroarilamino, diheteroarilamino ou aminoácido) ; ou o grupo amino pode ser ligado ao açúcar através de um ligante, em que o ligante compreende um ou mais dos átomos C, N e 0.
[0223] 0 grupo açúcar também pode conter um ou mais carbonos que possuem a configuração estereoquímica oposta à do carbono correspondente na ribose. Desse modo,
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199/542 um mRNA modificado pode incluir nucleotideos contendo, por exemplo, arabinose como o açúcar.
Modificações da cadeia principal:
[0224] A cadeia principal de fosfato pode ainda ser modificada nos nucleosideos e nucleotideos modificados, que podem ser incorporados em um composto de mRNA modificado compreendendo uma sequência de mRNA conforme descrito no presente documento. Os grupos fosfato da cadeia principal podem ser modificados por substituição de um ou mais dos átomos de oxigênio por um substituinte diferente. Além disso, os nucleosideos e nucleotideos modificados podem incluir a substituição completa de uma porção fosfato não modificada por um fosfato modificado conforme descrito no presente documento. Exemplos de grupos fosfato modificados incluem, mas não estão limitados a, fosforotioato, fosforosselenatos, borano fosfatos, borano fosfato ésteres, hidrogeno fosfonatos, fosforoamidatos, alquil ou aril fosfonatos e fosfotriésteres. Os fosforoditioatos têm ambos os oxigênios não ligados, substituídos por enxofre. O ligante fosfato também pode ser modificado pela substituição de um oxigênio de ligação com nitrogênio (fosforamidatos ligados), enxofre (fosforotioatos ligados) e carbono (metileno-fosfonatos ligados).
Modificações de Base:
[0225] Os nucleosideos e nucleotideos modificados, que podem ser incorporados em um composto de mRNA modificado compreendendo uma sequência de mRNA conforme descrito no presente documento, podem ser adicionalmente modificados na porção de nucleobase.
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Exemplos de nucleobases encontradas no mRNA incluem, mas não estão limitadas a, adenina, guanina, citosina e uracila. Por exemplo, os nucleosideos e nucleotídeos descritos no presente documento podem ser quimicamente modificados na face principal estriada. Em algumas modalidades, as modificações químicas da estria principal podem incluir um grupo amino, um grupo tiol, um grupo alquila ou um grupo halo.
[0226] Em modalidades particularmente preferidas da presente invenção, os análogos/modificações de nucleotídeos são selecionados a partir de modificações de bases, que são preferencialmente selecionadas a partir de 2-amino-6-cloropurineribosido-5'-trifosfato, 2Aminopurino-ribosido-5'-trifosfato; 2-aminoadenosino-5'trifosfato, 2'-Amino-2'-desoxicitidino-trifosfato, 2tiocitidino-5'-trifosfato, 2-tiouridino-5'-trifosfato, 2'Fluorotimidino-5'-trifosfato, 2'-O-Metil-inosino-5'trifosfato, 4-tiouridino-5'-trifosfato, 5aminoalilcitidino-5'-trifosfato, 5-aminoaliluridino-5' trifosfato, 5-bromocitidino-5'-trifosfato, 5-bromouridino5'-trifosfato, 5-Bromo-2'-desoxicitidino-5'-trifosfato, 5Bromo-2'-desoxiuridino-5'-trifosfato, 5-iodocitidino-5'trifosfato, 5-Iodo-2'-desoxicitidino-5'-trifosfato, 5iodouridino-5'-trifosfato, 5-Iodo-2'-desoxiuridino-5'trifosfato, 5-metilcitidino-5'-trifosfato, 5-metiluridino5'-trifosfato, 5-Propinil-2'-desoxicitidino-5'-trifosfato, 5-propinil-2'-desoxiuridino-5'-trifosfato, 6-azacitidino5'-trifosfato, 6-azauridino-5'-trifosfato, 6cloropurineribosido-5'-trifosfato, 7-desazaadenosino-5'trifosfato, 7-desazaguanosino-5'-trifosfato, 8Petição 870190039457, de 26/04/2019, pág. 223/744
201/542 azaadenosino-5'-trifosfato, 8-azidoadenosino-5'-trifosfato, benzimidazol-ribosido-5'-trifosfato, Nl-metiladenosino-5'trifosfato, Nl-metilguanosino-5'-trifosfato, N6metiladenosino-5'-trifosfato, 06-metilguanosino-5'trifosfato, pseudouridino-5'-trifosfato ou puromicino-5'trifosfato, xantosino-5'-trifosfato. É dada preferência particular aos nucleotídeos para modificações de bases selecionadas a partir do grupo de nucleotídeos de base modificada consistindo em 5-metilcitidino-5'-trifosfato, 7desazaguanosino-5'-trifosfato, 5-bromocitidino-5'trifosfato e pseudouridino-5'-trifosfato. [0227] Em algumas modalidades, os nucleosideos modificados incluem piridin-4-ona ribonucleosídeo, 5-azauridina, 2-tio-5-aza-uridina, 2-tiouridina, 4-tiopseudouridina, 2-tio-pseudouridina, 5-hidroxiuridina, 3metiluridina, 5-carboximetil-uridina, 1-carboximetilpseudouridina, 5-propinil-uridina, 1-propinilpseudouridina, 5-taurinometiluridina, 1-taurinometilpseudouridina, 5-taurinometil-2-tio-uridina, 1taurinometil-4-tio-uridina, 5-metil-uridina, 1-metilpseudouridina, 4-tio-l-metil-pseudouridina, 2-tio-l-metilpseudouridina, 1-metil-l-desaza-pseudouridina, 2-tio-lmetil-l-desaza-pseudouridina, di-hidrouridina, dihidropseudouridina, 2-tio-di-hidrouridina, 2-tio-dihidropseudouridina, 2-metoxi-uridina, 2-metoxi-4-tiouridina, 4-metoxi-pseudouridina e 4-metoxi-2-tiopseudouridina. [0228] Em algumas modalidades, os nucleosideos modificados incluem 5-aza-citidina, pseudo-isocitidina, 3metil-citidina, N4-acetilcitidina, 5-formilcitidina, N4
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202/542 metilcitidina, 5-hidroximetilcitidina, 1-metil-pseudoisocitidina, pirrolo-citidina, pirrolo-pseudo-isocitidina, 2-tio-citidina, 2-tio-5-metil-citidina, 4-tio-pseudoisocitidina, 4-tio-l-metil-pseudo-isocitidina, 4-tio-lmetil-l-desaza-pseudo-isocitidina, 1-metil-l-desaza-pseudoisocitidina, zebularina, 5-aza-zebularina, 5-metilzebularina, 5-aza-2-tio-zebularina, 2-tio-zebularina, 2metoxi-citidina, 2-metoxi-5-metil-citidina, 4-metoxipseudo-isocitidina e 4-metoxi-l-metil-pseudo-isocitidina.
[0229] Noutras modalidades, os nucleosideos modificados incluem 2-aminopurina, 2,6-diaminopurina, 7desaza-adenina, 7-desaza-8-aza-adenina, 7-desaza-2aminopurina, 7-desaza-8-aza-2-aminopurina, 7-desaza-2,6diaminopurina, 7-desaza-8-aza-2,6-diaminopurina, 1metiladenosina, N6-metiladenosina, N6-isopenteniladenosina, N6-(cis-hidroxi-isopentenil)adenosina, 2-metiltio-N6-(cishidroxiisopentenil)adenosina, N6gl1ciniicarbamo11adenosina, N6-treonilcarbamo11adenosina,
2-met11tio-N6-treonilcarbamo11adenosina, N6,N6dimetiladenosina, 7-metiladenina, 2-metiltioadenina e 2metoxi-adenina. [0230] Noutras modalidades, os nucleosideos modificados incluem inosina, 1-metil-inosina, wiosina, wibutosina, 7-desaza-guanosina, 7-desaza-8-aza-guanosina, 6-tio-guanosina, 6-tio-7-desaza-guanosina, 6-tio-7-desaza8-aza-guanosina, 7-metil-guanosina, 6-tio-7-metilguanosina, 7-metilinosina, 6-metoxi-guanosina, 1metilguanosina, N2-metilguanosina, N2,N2-dimetilguanosina, 8-oxo-guanosina, 7-metil-8-oxo-guanosina, 1-metil-6-tioPetição 870190039457, de 26/04/2019, pág. 225/744
203/542 guanosina, N2-metil-6-tio-guanosina e N2,N2-dimetil-6-tioguanosina.
[0231] Em algumas modalidades, o nucleotídeo pode ser modificado na face principal estriada e pode incluir a substituição de hidrogênio no C-5 da uracila com um grupo metila ou um grupo halo. Em modalidades específicas, um nucleosídeo modificado é 5'-O-(ltiofosfato)-adenosina, 5'-O-(1-tiofosfato)-citidina, 5'-O(1-tiofosfato)-guanosina, 5 '-O-(1-tiofosfato)-uridina ou 5'-O-(1-tiofosfato)-pseudouridina.
[0232] Noutras modalidades específicas, um mRNA modificado pode compreender modificações nucleosídicas selecionadas a partir de 6-aza-citidina, 2-tio-citidina, atio-citidina, pseudo-iso-citidina, 5-aminoalil-uridina, 5iodo-uridina, Nl-metil-pseudouridina, 5,6-di-hidrouridina, α-tio-uridina, 4-tio-uridina, 6-aza-uridina, 5-hidroxiuridina, deoxi-timidina, 5-metil-uridina, Pirrolo-citidina, inosina, α-tio-guanosina, 6-metil-guanosina, 5-metilcitidina, 8-oxo-guanosina, 7-desaza-guanosina, Nl-metiladenosina, 2-amino-6-Cloro-purina, N6-metil-2-amino-purina, pseudo-iso-citidina, 6-Cloro-purina, N6-metil-adenosina, atio-adenosina, 8-azido-adenosina, 7-desaza-adenosina.
[0233] Em uma modalidade muito específica da invenção, o composto de mRNA não compreende uma modificação de base conforme descrito acima.
Modificação lipídica:
[0234] De acordo com uma modalidade adicional, um composto de mRNA modificado compreendendo uma sequência de mRNA, conforme definido no presente documento, pode conter uma modificação lipídica. Um tal mRNA modificado por
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204/542 lipideos compreende tipicamente um mRNA conforme definido no presente documento. Tal mRNA modificado por lipideo, conforme definido no presente documento, tipicamente compreende adicionalmente, pelo menos, um ligante covalentemente ligado a esse mRNA e, pelo menos, um lipideo ligado covalentemente com o respectivo ligante. Alternativamente, o mRNA modificado por lipideo compreende pelo menos um mRNA conforme definido no presente documento e pelo menos um lipideo (bifuncional) covalentemente ligado (sem um ligante) com esse mRNA. De acordo com uma terceira alternativa, o mRNA modificado por lipideo compreende uma molécula de mRNA conforme definido no presente documento, pelo menos um ligante covalentemente ligado a esse mRNA e pelo menos um lipideo covalentemente ligado com o respectivo ligante e também pelo menos um lipideo (bifuncional) covalentemente ligado (sem um ligante) com esse mRNA. Nesse contexto, é particularmente preferido que a modificação lipidica esteja presente nas extremidades terminais de uma sequência de mRNA linear.
Modificações de sequência:
Modificação de teor em G/C:
[0235] De acordo com outra modalidade, o mRNA compreendendo nanoparticulas lipidicas compreende um composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA, que pode ser modificada, e, desse modo, estabilizada, ao modificar o teor em guanosina/citosina (G/C) da sequência de mRNA, de preferência de pelo menos uma região de codificação do composto de mRNA compreendendo uma sequênciade mRNA da presente invenção.
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205/542 [0236] Em uma modalidade particularmente preferida da presente invenção, o teor em G/C da região de codificação do composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA da presente invenção é modificado, particularmente aumentado, em comparação com o teor em G/C da região de codificação do respectivo mRNA de tipo selvagem, isto é, o mRNA não modificado. A sequência de aminoácidos codificada pelo mRNA preferencialmente, é não modificada em comparação com a sequência de aminoácidos codificada pelo respectivo mRNA de tipo selvagem. Essa modificação da sequência de mRNA da presente invenção se baseia no facto de a sequência de qualquer região de mRNA a ser traduzida ser importante para a tradução eficiente desse mRNA. Desse modo, a composição do mRNA e a sequência de vários nucleotideos são importantes. Em particular, as sequências tendo um teor aumentado em G (guanosina)/C (citosina) são mais estáveis do que as sequências tendo um teor aumentado em A (adenosina)/U (uracila) . De acordo com a invenção, os códons do mRNA são, por isso, variados em comparação com o respectivo mRNA de tipo selvagem, enquanto mantêm a sequência de aminoácidos traduzida, de tal modo que incluem uma quantidade aumentada de nucleotideos G/C. Em relação ao fato de que vários códons codificarem para um e o mesmo aminoácido (a denominada degeneração do código genético), os códons mais favoráveis para a estabilidade podem ser determinados (o denominado uso de códon alternativo). Dependendo do aminoácido a ser codificado pelo mRNA, existem várias possibilidades de modificação da sequência de mRNA, em comparação com a sua sequência de tipo selvagem. No caso dos aminoácidos, que são codificados por
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206/542 códons, que contêm exclusivamente nucleotídeos G ou C, não é necessária qualquer modificação do códon. Desse modo, os códons para Pro (CCC ou CCG), Arg (CGC ou CGG), Ala (GCC ou GCG) e Gly (GGC ou GGG) não requerem modificação, uma vez que não estão presentes A ou U. Em contraste, os códons que contêm nucleotídeos A e/ou U podem ser modificados por substituição de outros códons, que codificam para os mesmos aminoácidos mas não contêm A e/ou U. Exemplos desses são: os códons para Pro podem ser modificados a partir de CCU ou CCA para CCC ou CCG; os códons para Arg podem ser modificados a partir de CGU ou CGA ou AGA ou AGG para CGC ou CGG; os códons para Ala podem ser modificados a partir de GCU ou GCA para GCC ou GCG; os códons para Gly podem ser modificados de GGU ou GGA para GGC ou GGG. Noutros casos, embora os nucleotídeos A ou U não possam ser eliminados dos códons, é no entanto possível diminuir o teor em A e U usando códons que contêm um teor mais baixo de nucleotídeos A e/ou U. Exemplos desses são: os códons para Phe podem ser modificados de UUU para UUC; os códons para Leu podem ser modificados de UUA, UUG, CUU ou CUA para CUC ou CUG; os códons para Ser podem ser modificados de UCU ou UCA ou AGU para UCC, UCG ou AGG; o códon para Tyr pode ser modificado de UAU para UAC; o códon para Cys pode ser modificado de UGU para UGC; o códon para His pode ser modificado de CAU para CAC; o códon para Gin pode ser modificado de CAA para CAG; os códons para Ile podem ser modificados de AUU ou AUA para AUG; os códons para Thr podem ser modificados de AGU
ou ACA para AGG ou AGG; o códon para Asn pode ser
modificado de AAU para AAC; o códon para Lys pode ser
modificado de ΑΆΑ para AAG; os códons para Vai podem ser
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207/542 modificados de GUU ou GUA para GUC ou GUG; o códon para Asp pode ser modificado de GAU para GAC; o códon para Glu pode ser modificado de GAA para GAG; o códon de paragem UAA pode ser modificado para UAG ou UGA. No caso dos códons para Met (AUG) e Trp (UGG) , por outro lado, não há possibilidade de modificação da sequência. As substituições listadas acima podem ser usadas individualmente ou em todas as combinações possíveis para aumentar o teor em G/C da sequência de mRNA da presente invenção em comparação com o seu mRNA de tipo selvagem particular (isto é a sequência original). Desse modo, por exemplo, todos os códons para Thr que ocorrem na sequência de tipo selvagem podem ser modificados para ACC (ou ACG) . De preferência, no entanto, por exemplo, são usadas combinações das possibilidades de substituição acima:
substituição de todos os códons codificando para Thr na sequência original (mRNA de tipo selvagem) para ACC (ou ACG) e substituição de todos os códons codificando originalmente para Ser para UGG (ou UGG ou AGC) ;
substituição de todos os códons codificando para lie na sequência original para AUG e substituição de todos os códons codificando originalmente para Lys para AAG e substituição de todos os códons codificando originalmente para Tyr para UAG;
substituição de todos os códons codificando para Vai na sequência original para GUC (ou GUG) e substituição de todos os códons codificando originalmente para Glu para GAG e
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208/542
substituição de todos os códons codificando
originalmente para Ala para GCC (ou gcg: l e
substituição de todos os códons codificando
originalmente para Arg para CGC (ou cgg:
substituição de todos os códons codificando para
Vai na sequência original para GUC (ou GUG) e
substituição de todos os códons codificando
originalmente para Glu para GAG e
substituição de todos os códons codificando
originalmente para Ala para GCC (ou gcg: ) e
substituição de todos os códons codificando
originalmente para Gly para GGC (ou ggg: ) e
substituição de todos os códons codificando
originalmente para Asn para AAC;
substituição de todos os códons codificando para
Vai na sequência original para GUC (ou GUG) e
substituição de todos os códons codificando
originalmente para Phe para UUC e
substituição de todos os códons codificando
originalmente para Cys para UGC e
substituição de todos os códons codificando
originalmente para Leu para GUG (ou cuc: ) e
substituição de todos os códons codificando
originalmente para Gin para GAG e
substituição de todos os códons codificando
originalmente para Pro para GCC (ou gcg: ); etc.
[0237] Preferivelmente, o teor em G/C da região de codificação do composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA da presente invenção é aumentado em pelo menos 7%, mais preferencialmente em pelo menos 15%,
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209/542 particularmente preferencialmente em pelo menos 20%, em comparação com o teor em G/C na região de codificação do RNA de tipo selvagem, que codifica para um antígeno conforme definido no presente documento ou um fragmento ou variante do mesmo. De acordo com uma modalidade específica, pelo menos 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, mais preferencialmente pelo menos 70%, ainda mais preferencialmente pelo menos 80% e mais preferencialmente pelo menos 90%, 95% ou mesmo 100% dos códons substituíveis na região de codificação para um peptídeo, ou proteína, conforme definido no presente documento ou um fragmento ou variante do mesmo ou a sequência completa da sequência de mRNA de tipo selvagem são substituídos, aumentando, desse modo, o teor em G/C da referida sequência. Nesse contexto, é particularmente preferível aumentar o teor em G/C da sequência de mRNA da presente invenção, de preferência pelo menos uma região de codificação da sequência de mRNA de acordo com a invenção, até um máximo (isto é, 100% de códons substituíveis) em comparação com a sequência de tipo selvagem. De acordo com a invenção, uma modificação adicional preferida da sequência de mRNA da presente invenção se baseia na descoberta de que a eficácia da tradução também é determinada por uma frequência diferente na ocorrência de tRNA nas células. Desse modo, se os denominados códons raros estão presentes na sequência de mRNA da presente invenção em uma extensão aumentada, a correspondente sequência de mRNA modificada é traduzida em um grau significativamente pior do que no caso em que estão presentes códons codificando tRNA relativamente frequentes. De acordo com a invenção, na sequência de
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210/542 mRNA modificada da presente invenção, a região que codifica para um peptídeo, ou proteína, conforme definido no presente documento ou um fragmento ou variante do mesmo, é modificada em comparação com a região correspondente da sequência de mRNA de tipo selvagem de tal modo que pelo menos um códon da sequência do tipo selvagem, que codifica para um tRNA que é relativamente raro na célula, é permutado por um códon, que codifica para um tRNA que é relativamente frequente na célula e transporta o mesmo aminoácido que o tRNA relativamente raro. Através dessa modificação, a sequência do mRNA da presente invenção é modificada de modo a que sejam inseridos os códons para os quais estão disponíveis tRNA de ocorrência frequente. Por outras palavras, de acordo com a invenção, por essa modificação todos os códons da sequência de tipo selvagem, que codificam para um tRNA que é relativamente raro na célula, podem em cada caso ser permutados por um códon, que codifica para um tRNA que é relativamente frequente na célula e que, em cada caso, transporta o mesmo aminoácido que o tRNA relativamente raro. Quais os tRNA que ocorrem com relativa frequência na célula e quais os que, em contraste, ocorrem relativamente raramente, são conhecidos por um perito na técnica; conforme, por exemplo, Akashi, Curr. Opin. Genet Dev. 2001, 11(6): 660-666. Os códons, que usam para o aminoácido particular o tRNA que ocorre com maior frequência, por exemplo, o códon Gly, que usa o tRNA, que ocorre com maior frequência na célula (humana), são particularmente preferidos. De acordo com a invenção, é particularmente preferível ligar o teor em G/C sequêncial que é aumentado, em particular maximizado, na sequência de
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211/542 mRNA modificada da presente invenção, com os códons frequentes sem modificar a sequência de aminoácidos da proteína codificada pela região de codificação da sequência de mRNA. Essa modalidade preferida permite o fornecimento de uma sequência de mRNA (modificada) particularmente traduzida e estabilizada da presente invenção. A determinação de uma sequência modificada de mRNA da presente invenção conforme descrito acima (teor aumentado em G/C; permuta de tRNA) pode ser efetuada usando o programa de computador explicado no documento WO02/098443 cujo conteúdo divulgado é incluído no seu âmbito completo na presente invenção. Usando esse programa de computador, a sequência de nucleotídeos de qualquer sequência de mRNA desejada pode ser modificada com o auxílio do código genético ou da natureza degenerativa do mesmo, de tal modo que resulta um teor máximo de G/C, em combinação com o uso de códons que codificam para tRNA que ocorrem tão frequentemente quanto possível na célula, a sequência de aminoácidos codificada pela sequência de mRNA modificada não sendo preferencialmente modificada em comparação com a sequência não modificada. Alternativamente, também é possível modificar apenas o teor em G/C ou apenas o uso de códons em comparação com a sequência original. 0 códigofonte no Visual Basic 6.0 (ambiente de desenvolvimento usado: Microsoft Visual Studio Enterprise 6. 0 com o Servicepack 3) também é descrito no documento WO02/098443. Em uma modalidade adicional preferida da presente invenção, o teor em A/U no ambiente do local de ligação ao ribossoma da sequência de mRNA da presente invenção é aumentado em comparação com o teor em A/U no ambiente do local de
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212/542 ligação ao ribossoma do respetivo mRNA de tipo selvagem. Essa modificação (um teor aumentado em A/U em torno do local de ligação ao ribossoma) aumenta a eficiência da ligação do ribossoma ao mRNA. Uma ligação efetiva dos ribossomas ao local de ligação ao ribossoma (sequência de Kozak: SEQ ID NO: 224307 ou SEQ ID NO: 224308, a forma AUG do códon de iniciação) tem por sua vez o efeito de uma tradução eficiente do mRNA. De acordo com uma modalidade adicional da presente invenção, a sequência de mRNA da presente invenção pode ser modificada em relação a elementos de sequência potencialmente desestabilizantes. Particularmente, a região de codificação e/ou a região 5' e/ou 3' não traduzida dessa sequência de mRNA pode ser modificada em comparação com o respectivo mRNA de tipo selvagem de tal modo que essa não contém elementos de sequência desestabilizadora, a sequência de aminoácidos codificada da sequência de mRNA modificado preferencialmente não sendo modificada em comparação com o seu respectivo mRNA de tipo selvagem. É sabido que, por exemplo, em sequências de mRNA eucarióticos, ocorrem elementos de sequência desestabilizadora (DSE), aos quais as proteínas de sinal se ligam e regulam a degradação enzimática do mRNA in vivo. Para estabilização adicional da sequência de mRNA modificada, opcionalmente na região que codifica pelo menos um peptídeo, ou proteína, conforme definido no presente documento ou um fragmento ou variante do mesmo, uma ou mais dessas modificações comparadas com a correspondente região de mRNA de tipo selvagem pode portanto ser efetuada, de modo que nenhum ou substancialmente nenhum elemento de sequência
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213/542 desestabilizadora esteja contido na mesma. De acordo com a invenção, os DSE presentes nas regiões não traduzidas (3' e/ou 5'-UTR) também podem ser eliminados da sequência de mRNA da presente invenção por tais modificações. Tais sequências desestabilizadoras são, por exemplo, sequências ricas em AU (AURES), que ocorrem em secções 3'-UTR de numerosos mRNA instáveis (Caput et al., Proc. Natl. Acad. Sei. EUA 1986, 83: 1670 a 1674). A sequência de mRNA da presente invenção é, por conseguinte, preferencialmente modificada em comparação com o respectivo mRNA de tipo selvagem, de tal modo que a sequência de mRNA da presente invenção não contém essas sequências desestabilizadoras. Isso também se aplica àqueles motivos de sequência que são reconhecidos por possíveis endonucleases, por exemplo, a sequência GAACAAG, que está contida no segmento 3'-UTR do gene codificando o receptor da transferrina (Binder et ai., EMBO J. 1994, 13: 1969 a 1980). Esses motivos de sequência também são preferencialmente removidos na sequência de mRNA da presente invenção.
[0238] De acordo com uma modalidade preferida, a presente invenção confere mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas em que o mRNA compreende uma sequência de mRNA conforme definido no presente documento compreendendo pelo menos uma região de codificação, em que a região de codificação compreende ou consiste em qualquer uma das sequências (modificadas) de RNA conforme divulgado na listagem de sequências tendo um identificador numérico <223> que inicia com sequência CDS derivada e/ou modificada (optl), sequência CDS derivada e/ou modificada (opt2), sequência CDS derivada e/ou modificada (opt3),
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214/542 sequência CDS derivada e/ou modificada (opt4), ou sequência CDS derivada e/ou modificada (opt5), ou respectivamente coluna C das Tabelas 1-5 ou Figuras 20-24 do documento PCT/EP2016/075843, ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0239] De acordo com uma modalidade particularmente preferida, a presente invenção confere mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas em que o mRNA compreende uma sequência de mRNA conforme definido no presente documento compreendendo pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado de hemaglutinina (HA) de um vírus influenza A, em que a região de codificação compreende ou consiste em qualquer uma das sequências (modificadas) de RNA de acordo com as SEQ TD NOs: 64025-78055, 224085224106, 192073-206103 ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0240] De acordo com uma modalidade adicional particularmente preferida, a presente invenção confere mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas em que o mRNA compreende uma sequência de mRNA conforme definido no presente documento compreendendo pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado de hemaglutinina (HA) de um vírus influenza B, em que a região de codificação compreende ou consiste em qualquer uma das sequências (modificadas) de RNA de acordo com as SEQ TD NOs: 90422-92600, 224107224112, 218470-220648 ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
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215/542 [0241] De acordo com uma modalidade adicional particularmente preferida, a presente invenção confere mRNA compreendendo nanoparticulas lipidicas em que o mRNA compreende uma sequência de mRNA conforme definido no presente documento compreendendo pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado de neuraminidase (NA) de um vírus influenza A, em que a região de codificação compreende ou consiste em qualquer uma das sequências (modificadas) de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 78056-90421, 224113, 224313-224317, 206104-218469, ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0242] De acordo com uma modalidade adicional particularmente preferida, a presente invenção confere mRNA compreendendo nanoparticulas lipidicas em que o mRNA compreende uma sequência de mRNA conforme definido no presente documento compreendendo pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado de neuraminidase (NA) de um vírus influenza B, em que a região de codificação compreende ou consiste em qualquer uma das sequências (modificadas) de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 92601-94528, 220649-222576 ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0243] De acordo com uma modalidade adicional particularmente preferida, a presente invenção confere mRNA compreendendo nanoparticulas lipidicas em que o mRNA compreende uma sequência de mRNA conforme definido no presente documento compreendendo pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína
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216/542 antigênicos derivado de glicoproteina de um vírus da Raiva, em que a região de codificação compreende ou consiste em qualquer uma das sequências (modificadas) de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 94529-96036, 224271-224273, 222577224084 ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0244] Em uma modalidade preferida adicional, a pelo menos uma região de codificação das sequência de mRNA de acordo com a invenção compreendem ou consistem em uma sequência de RNA idêntica ou possuindo uma identidade de sequência de pelo menos 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99%, preferencialmente de pelo menos 70%, mais preferencialmente de pelo menos 80%, ainda mais preferencialmente de pelo menos 85%, ainda mais preferencialmente de pelo menos 90% e o mais preferencialmente de pelo menos 95% ou mesmo 97%, com qualquer uma das sequências (modificadas) de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 64025-96036, 192073-224084 ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0245] De acordo com uma modalidade particularmente preferida, a pelo menos uma região de codificação da sequência de mRNA de acordo com a invenção compreende ou consiste em uma sequência de RNA tendo uma identidade de sequência de pelo menos 80% com qualquer uma das sequências (modificadas) de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 64025-96036, 192073-224084 ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
Sequências adaptadas ao uso de códon humano:
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217/542
[0246] De acordo com a invenção, uma
modificação adicional preferida do composto de mRNA
compreendendo uma sequência de mRNA compreendida no mRNA do mRNA compreendendo nanoparticulas lipidicas da presente invenção se baseia na constatação de que os códons codificando o mesmo aminoácido ocorrem tipicamente em diferentes frequências. De acordo com a invenção, no composto de mRNA modificado compreendendo uma sequência de mRNA da presente invenção, a região de codificação conforme definido no presente documento é, de preferência, modificada em comparação com a correspondente região de codificação do respectivo mRNA de tipo selvagem de tal modo que a frequência dos códons codificando o mesmo aminoácido corresponde à frequência desse códon que ocorre naturalmente de acordo com o uso de códons humanos conforme, por exemplo, mostrado na Tabela la (tabela de uso de códons humanos).
[0247] Por exemplo, no caso do aminoácido alanina (Ala) presente em uma sequência de aminoácidos codificada pela pelo menos uma região de codificação do composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA de acordo com a invenção, a região de codificação de tipo selvagem é preferencialmente adaptada de um modo em que o códon GCC é usado com uma frequência de 0,40, o códon GCT é usado com uma frequência de 0,28, o códon GCA é usado com uma frequência de 0,22 e o códon GCG é usado com uma frequência de 0,10, etc. (ver a Tabela la).
Tabela la: Tabela de uso de códons humanos
Aminoácido códon fração /1000 Aminoácido códon fração /1000
Ala GCG 0, 10 7,4 Pro CCG 0, 11 6, 9
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218/542
Ala GCA 0,22 15, 8 Pro CCA 0,27 16,9
Ala GCT 0,28 18,5 Pro CCT 0,29 17,5
Ala GGG* 0,40 27,7 Pro CGG* 0,33 19, 8
Cys TGT 0,42 10, 6 Gin GAG* 0,73 34,2
Cys TGC* 0,58 12, 6 Gin CAA 0,27 12,3
Asp GAT 0,44 21,8 Arg AGG 0,22 12,0
Asp GAC* 0,56 25, 1 Arg AGA* 0,21 12,1
Glu GAG* 0,59 39, 6 Arg CGG 0, 19 11,4
Glu GAA 0,41 29, 0 Arg CGA 0, 10 6, 2
Phe TTT 0,43 17, 6 Arg CGT 0, 09 4,5
Phe TTC* 0,57 20,3 Arg CGG 0, 19 10,4
Gly GGG 0,23 16,5 Ser AGT 0, 14 12,1
Gly GGA 0,26 16,5 Ser AGG* 0,25 19, 5
Gly GGT 0, 18 10, 8 Ser TCG 0, 06 4,4
Gly GGG* 0,33 22,2 Ser TCA 0, 15 12,2
His CAT 0,41 10, 9 Ser TCT 0, 18 15, 2
His GAC* 0,59 15, 1 Ser TGC 0,23 17,7
lie ATA 0, 14 7,5 Thr AGG 0, 12 6, 1
lie ATT 0,35 16,0 Thr AGA 0,27 15, 1
lie ATC* 0,52 20, 8 Thr ACT 0,23 13, 1
Lys AAG* 0, 60 31,9 Thr ACC* 0,38 18,9
Lys ΑΆΑ 0,40 24,4 Vai GTG* 0,48 28,1
Leu TTG 0, 12 12,9 Vai GTA 0, 10 7, 1
Leu TTA 0, 06 7,7 Vai GTT 0, 17 11, 0
Leu CTG* 0,43 39, 6 Vai GTG 0,25 14,5
Leu CTA 0, 07 7,2 Trp TGG* 1 13,2
Leu CTT 0, 12 13,2 Tyr TAT 0,42 12,2
Leu CTG 0,20 19, 6 Tyr TAG* 0,58 15, 3
Met ATG* 1 22,0 Paragem TGA* 0, 61 1, 6
Asn AAT 0,44 17, 0 Paragem TAG 0, 17 0, 8
Asn AAG* 0,56 19, 1 Paragem TAA 0,22 1, 0
* códon mais frequente [0248] De acordo com uma modalidade preferida, a presente invenção confere mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas em que o mRNA compreende uma sequência de mRNA conforme definido no presente documento compreendendo pelo menos uma região de codificação em que a
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219/542 região de codificação compreende ou consiste em qualquer uma das sequências (modificadas) de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 12 8 049-160060, ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0249] De acordo com uma modalidade particularmente preferida, a presente invenção confere mRNA compreendendo nanoparticulas lipidicas em que o mRNA compreende uma sequência de mRNA conforme definido no presente documento compreendendo pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptideo ou proteína antigênicos derivado de hemaglutinina (HA) de um vírus influenza A, em que a região de codificação compreende ou consiste em qualquer uma das sequências (modificadas) de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 128049-142079, ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0250] De acordo com uma modalidade adicional particularmente preferida, a presente invenção confere mRNA compreendendo nanoparticulas lipidicas em que o mRNA compreende uma sequência de mRNA conforme definido no presente documento compreendendo pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptideo ou proteína antigênicos derivado de hemaglutinina (HA) de um vírus influenza B, em que a região de codificação compreende ou consiste em qualquer uma das sequências (modificadas) de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 15444 6-156624, ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0251] De acordo com uma modalidade adicional particularmente preferida, a presente invenção confere mRNA compreendendo nanoparticulas lipidicas em que o mRNA compreende uma sequência de mRNA conforme definido no
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220/542 presente documento compreendendo pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado de neuraminidase (NA) de um vírus influenza A, em que a região de codificação compreende ou consiste em qualquer uma das sequências (modificadas) de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 142080-154445, ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0252] De acordo com uma modalidade adicional particularmente preferida, a presente invenção confere mRNA compreendendo nanopartículas lipídicas em que o mRNA compreende uma sequência de mRNA conforme definido no presente documento compreendendo pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado de neuraminidase (NA) de um vírus influenza B, em que a região de codificação compreende ou consiste em qualquer uma das sequências (modificadas) de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 156625-158552, ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0253] De acordo com uma modalidade adicional particularmente preferida, a presente invenção confere mRNA compreendendo nanopartículas lipídicas em que o mRNA compreende uma sequência de mRNA conforme definido no presente documento compreendendo pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado de glicoproteína de um vírus da Raiva, em que a região de codificação compreende ou consiste em qualquer uma das sequências (modificadas) de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 158553-160060, ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
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221/542 [0254] De acordo com uma modalidade adicional particularmente preferida, a presente invenção confere mRNA compreendendo nanopartículas lipídicas em que o mRNA compreende uma sequência de mRNA conforme definido no presente documento compreendendo pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado de um vírus do ebola, em que a região de codificação compreende ou consiste em qualquer uma das sequências (modificadas) de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 20-44 do pedido de patente WQ2016097065, ou fragmentos ou variantes dessas sequências. Nesse contexto, as SEQ ID NOs: 20-44 da WQ2016097065 e a divulgação relacionada com as SEQ ID NOs: 20-44 da WQ2016097065 são incorporadas no presente documento por referência.
[0255] Em uma modalidade preferida adicional, a pelo menos uma região de codificação das sequência de mRNA de acordo com a invenção compreendem ou consistem em uma sequência de RNA idêntica ou possuindo uma identidade de sequência de pelo menos 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99%, preferencialmente de pelo menos 70%, mais preferencialmente de pelo menos 80%, ainda mais preferencialmente de pelo menos 85%, ainda mais preferencialmente de pelo menos 90% e o mais preferencialmente de pelo menos 95% ou mesmo 97%, com qualquer uma das sequências (modificadas) de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 128049-160060, ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0256] De acordo com uma modalidade particularmente preferida, a pelo menos uma região de
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222/542 codificação da sequência de mRNA de acordo com a invenção compreende ou consiste em uma sequência de RNA tendo uma identidade de sequência de pelo menos 80% com qualquer uma das sequências (modificadas) de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 128049-160060, ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
Sequências otimizadas por códon:
[0257] Conforme descrito acima é preferido, de acordo com a invenção, que todos os códons da sequência de tipo selvagem, que codificam para um tRNA, que é relativamente raro na célula, são permutados por um códon, que codifica para um tRNA que é relativamente frequente na célula e que, em cada caso, transporta o mesmo aminoácido que o tRNA relativamente raro. Desse modo, é particularmente preferido que os códons mais frequentes sejam usados para cada aminoácido codificado (ver a Tabela la, Tabela de uso de códons humanos, os códons mais frequentes estão marcados com asteriscos). Tal procedimento de otimização aumenta o índice de adaptação de códon (CAI) e, em ultimo caso, maximiza o CAI. No contexto da invenção, sequências com CAI aumentado ou maximizado são tipicamente referidas como sequências otimizadas por códons e/ou sequências com CAI aumentado e/ou maximizado. De acordo com uma modalidade preferida, o composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA da presente invenção compreende pelo menos uma região de codificação, em que a região/sequência de codificação é otimizada por códons conforme descrito no presente documento. Mais preferencialmente, o índice de adaptação de códon (CAI) da pelo menos uma sequência de codificação é pelo menos 0,5, pelo menos 0,8, pelo menos
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0,9 ou pelo menos 0,95. O mais preferencialmente, o índice de adaptação de códon (CAI) da pelo menos uma sequência de codificação é 1.
[0258] Por exemplo, no caso do aminoácido alanina (Ala) presente na sequência de aminoácidos codificada pela pelo menos uma sequência de codificação do RNA de acordo com a invenção, a sequência de codificação do tipo selvagem é adaptada de uma forma que o códon humano GCC mais frequente é sempre usado para o referido aminoácido, ou para o aminoácido Cisteína (Cys), a sequência de tipo selvagem é adaptada de modo a que o códon humano TGC mais frequente seja sempre usado para o referido aminoácido, etc.
[0259] De acordo com uma modalidade preferida, a presente invenção confere mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas em que o mRNA compreende uma sequência de mRNA conforme definido no presente documento compreendendo pelo menos uma região de codificação em que a região de codificação compreende ou consiste em qualquer uma das sequências (modificadas) de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 160 0 61-192 072, ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0260] De acordo com uma modalidade particularmente preferida, a presente invenção confere mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas em que o mRNA compreende uma sequência de mRNA conforme definido no presente documento compreendendo pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado de hemaglutinina (HA) de um vírus influenza A, em que a região de codificação compreende ou
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224/542 consiste em qualquer uma das sequências (modificadas) de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 160061-174091, ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0261] De acordo com uma modalidade adicional particularmente preferida, a presente invenção confere mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas em que o mRNA compreende uma sequência de mRNA conforme definido no presente documento compreendendo pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado de hemaglutinina (HA) de um vírus influenza B, em que a região de codificação compreende ou consiste em qualquer uma das sequências (modificadas) de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 186458-188636, ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0262] De acordo com uma modalidade adicional particularmente preferida, a presente invenção confere mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas em que o mRNA compreende uma sequência de mRNA conforme definido no presente documento compreendendo pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado de neuraminidase (NA) de um vírus influenza A, em que a região de codificação compreende ou consiste em qualquer uma das sequências (modificadas) de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 174092-186457, ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0263] De acordo com uma modalidade adicional particularmente preferida, a presente invenção confere mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas em que o mRNA compreende uma sequência de mRNA conforme definido no presente documento compreendendo pelo menos uma região de
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225/542 codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado de neuraminidase (NA) de um vírus influenza B, em que a região de codificação compreende ou consiste em qualquer uma das sequências (modificadas) de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 188637-190564, ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0264] De acordo com uma modalidade adicional particularmente preferida, a presente invenção confere mRNA compreendendo nanoparticulas lipidicas em que o mRNA compreende uma sequência de mRNA conforme definido no presente documento compreendendo pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado de glicoproteina de um vírus da Raiva, em que a região de codificação compreende ou consiste em qualquer uma das sequências (modificadas) de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 190565-192072, ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0265] Em uma modalidade preferida adicional, a pelo menos uma região de codificação das sequência de mRNA de acordo com a invenção compreendem ou consistem em uma sequência de RNA idêntica ou possuindo uma identidade de sequência de pelo menos 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99%, preferencialmente de pelo menos 70%, mais preferencialmente de pelo menos 80%, ainda mais preferencialmente de pelo menos 85%, ainda mais preferencialmente de pelo menos 90% e o mais preferencialmente de pelo menos 95% ou mesmo 97%, com qualquer uma das sequências (modificadas) de RNA de acordo
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226/542 com as SEQ ID NOs: 160061-192072, ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0266] De acordo com uma modalidade particularmente preferida a pelo menos uma região de codificação da sequência de mRNA de acordo com a invenção compreende ou consiste em uma sequência de RNA tendo uma identidade de sequência de pelo menos 80% com qualquer uma das sequências (modificadas) de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 160061-192072 ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
Sequências otimizadas para C:
[0267] De acordo com outra modalidade, o composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA da presente invenção pode ser modificado através da modificação, preferencialmente, aumentando o teor em citosina (C) da sequência de mRNA, de preferência da região de codificação da sequência de mRNA.
[0268] Em uma modalidade particularmente preferida da presente invenção, o teor em C da região de codificação da sequência de mRNA da presente invenção é modificado, preferencialmente aumentado, em comparação com o teor em C da região de codificação do respectivo mRNA de tipo selvagem, isto é, o mRNA não modificado. A sequência de aminoácidos codificada por pelo menos uma região de codificação da sequência de mRNA da presente invenção é, preferencialmente, não modificada em comparação com a sequência de aminoácidos codificada pelo respectivo mRNA de tipo selvagem.
[0269] Em uma modalidade preferida da presente invenção, a sequência de mRNA modificada é modificada de
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227/542 tal modo que é alcançado pelo menos 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% ou 80%, ou pelo menos 90% do teor máximo de citosina teoricamente possível ou mesmo um teor máximo de citosina.
[0270] Em modalidades adicionais preferidas, pelo menos 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou mesmo 100% dos códons do mRNA alvo sequência de tipo selvagem, que são otimizáveis quanto ao teor em citosina, são substituídos por códons tendo um teor em citosina mais elevado do que os presentes na sequência de tipo selvagem.
[0271] Em uma modalidade adicional preferida, alguns dos códons da sequência de codificação de tipo selvagem podem adicionalmente ser modificados de tal modo que um códon para um tRNA relativamente raro na célula é permutado por um códon para um tRNA relativamente frequente na célula, desde que o códon substituinte para um tRNA relativamente frequente tenha o mesmo aminoácido que o tRNA relativamente raro do códon de tipo selvagem original. De preferência, todos os códons para um tRNA relativamente raro são substituídos por um códon para um tRNA relativamente frequente na célula, exceto os códons codificando aminoácidos, que são exclusivamente codificados por códons não contendo qualquer citosina, ou exceto para glutamina (Gin), que é codificado por dois códons, cada um contendo o mesmo número de citosinas.
[0272] Em uma modalidade adicional preferida da presente invenção, o mRNA alvo modificado é modificado de tal modo que pelo menos 80%, ou pelo menos 90% do teor máximo de citosina teoricamente possível ou mesmo um teor máximo de citosina é conseguido por meio de códons, que
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228/542 codificam para tRNA relativamente frequentes na célula, em que a sequência de aminoácidos permanece inalterada.
[0273] Devido à degenerescência de ocorrência natural do código genético, mais do que um códon pode codificar um aminoácido particular. Desse modo, 18 dos 20 aminoácidos que ocorrem naturalmente são codificados por mais de um códon (com Tryp e Met sendo uma exceção) , por exemplo, por 2 códons (por exemplo, Cys, Asp, Glu) , por três códons (por exemplo, lie), por 4 códons (por exemplo, Al, Gly, Pro) ou por 6 códons (por exemplo, Leu, Arg, Ser). No entanto, nem todos os códons codificando o mesmo aminoácido são usados com a mesma frequência em condições in vivo. Dependendo de cada organismo, é estabelecido um perfil típico de uso de códons.
[0274] O termo códon otimizável quanto ao teor em citosina, conforme usado no contexto da presente invenção, se refere a códons que exibem um menor teor em citosinas do que outros códons codificando o mesmo aminoácido. Consequentemente, qualquer códon de tipo selvagem, que pode ser substituído por outro códon codificando o mesmo aminoácido e exibindo um maior número de citosinas dentro desse códon, é considerado como sendo otimizável por citosina (otimizável por C) . Qualquer uma dessas substituições de um códon de tipo selvagem otimizável por C pelo códon específico de C otimizado dentro de uma região de codificação de tipo selvagem aumenta o seu teor geral em C e reflete uma sequência de mRNA modificada enriquecida em C. De acordo com uma modalidade preferida, a sequência de mRNA da presente invenção, preferencialmente a pelo menos uma região de
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229/542 codificação da sequência de mRNA da presente invenção compreende ou consiste em uma sequência de mRNA maximizada em C contendo códons otimizados quanto a C para todos os códons potencialmente otimizáveis quanto a C. Por conseguinte, 100% ou todos os códons otimizáveis quanto a C, teoricamente substituíveis, são de preferência substituídos por códons otimizados quanto C ao longo da totalidade do comprimento da região de codificação.
[0275] Nesse contexto, os códons otimizáveis quanto ao teor em citosina são códons, que contêm um número menor de citosinas do que outros códons codificando o mesmo aminoácido.
[027 6] Qualquer um dos códons GCG, GCA, GCU codifica para o aminoácido Ala, que pode ser permutado pelo códon GCG codificando o mesmo aminoácido, e/ou o códon UGU que codifica para Cys pode ser permutado pelo códon UGC codificando o mesmo aminoácido, e/ou o códon GAU que codifica para Asp pode ser permutado pelo códon GAC codificando o mesmo aminoácido, e/ou o códon UUU que codifica para Phe pode ser permutado para o códon UUC codificando o mesmo aminoácido, e/ou qualquer um dos códons GGG, GGA, GGU que codificam Gly pode ser permutado pelo códon GGG codificando o mesmo aminoácido, e/ou o códon GAU que codifica para His pode ser permutado pelo códon GAC codificando o mesmo aminoácido, e/ou
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230/542 qualquer um dos códons AUA, AUU que codificam para lie pode ser permutado pelo códon AUC, e/ou qualquer um dos códons UUG, UUA, GUG, CUA, CUU codificando Leu pode ser permutado pelo códon GUC codificando o mesmo aminoácido, e/ou o códon AAU que codifica para Asn pode ser permutado pelo códon AAC codificando o mesmo aminoácido, e/ou qualquer um dos códons GCG, CCA, CCU codificando Pro pode ser permutado pelo códon GCC codificando o mesmo aminoácido, e/ou qualquer um dos códons AGG, AGA, CGG, CGA, CGU codificando Arg pode ser permutado pelo códon CGG codificando o mesmo aminoácido, e/ou qualquer um dos códons AGU, AGG, UGG, UCA, UCU codificando Ser pode ser permutado pelo códon UCC codificando o mesmo aminoácido, e/ou qualquer um dos códons AGG, ACA, AGU codificando Thr pode ser permutado pelo códon ACC codificando o mesmo aminoácido, e/ou qualquer um dos códons GUG, GUA, GUU codificando Vai pode ser permutado pelo códon GUC codificando o mesmo aminoácido, e/ou o códon UAU codificando Tyr pode ser permutado pelo códon UAC codificando o mesmo aminoácido.
[0277] Em qualquer um dos casos acima, o número de citosinas é aumentado em 1 por códon permutado. A permuta de todos os códons não otimizados quanto a C (correspondendo a códons otimizáveis quanto a C) da região de codificação resulta em uma sequência de codificação
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231/542 maximizada quanto a C. No contexto da invenção, pelo menos 70%, preferencialmente pelo menos 80%, mais preferencialmente pelo menos 90%, dos códons não otimizados quanto a C dentro da pelo menos uma região de codificação da seguência de mRNA de acordo com a invenção são substituídos por códons otimizados quanto a C.
[0278] Pode ser preferido que para alguns aminoácidos a porcentagem de códons otimizáveis quanto a C substituídos por códons otimizados quanto a C seja inferior a 70%, enquanto que para outros aminoácidos a porcentagem de códons substituídos é superior a 70% para satisfazer a porcentagem total de otimização quanto a C de, pelo menos, 70% de todos os códons de tipo selvagem, otimizáveis quanto a C, da região de codificação.
[0279] De preferência, em uma sequência de mRNA otimizada quanto a C da invenção, pelo menos 50% dos códons de tipo selvagem otimizáveis quanto a C para qualquer aminoácido são substituídos por códons otimizados quanto a C, por exemplo, qualquer sequência de mRNA modificada enriquecida quanto a C preferencialmente contém pelo menos 50% de códons otimizados quanto a C em posições de códon de tipo selvagem codificando qualquer um dos aminoácidos acima mencionados Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, lie, Leu, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Vai e Tyr, preferencialmente pelo menos 60%.
[0280] Nesse contexto códons codificando aminoácidos, que não são otimizáveis quanto ao teor em citosina e que são, no entanto, codificados por pelo menos dois códons, podem ser usados sem qualquer processo de seleção adicional. No entanto, o códon da sequência de tipo
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232/542 selvagem que codifica para um tRNA relativamente raro na célula, por ex., uma célula humana, pode ser permutado por um códon que codifica para um tRNA relativamente frequente na célula, em que ambos codificam para o mesmo aminoácido. Em conformidade, o códon relativamente raro GAA codificando para Glu pode ser permutado pelo códon GAG relativamente frequente codificando para o mesmo aminoácido e/ou o códon relativamente raro AAA codificando para Lys pode ser permutado pelo códon AAG relativamente frequente codificando para o mesmo aminoácido, e/ou o códon relativamente raro CAA codificando para Gin pode ser permutado pelo códon GAG relativamente frequente codificando para o mesmo aminoácido.
[0281] Nesse contexto, os aminoácidos Met (AUG) e Trp (UGG) , que são codificados por apenas um códon cada, permanecem inalterados. Os códons de paragem não são otimizados quanto ao teor em citosina, no entanto, os códons de paragem relativamente raros âmbar, ocre (UAA, UAG) podem ser permutados pelo códon de paragem opala (UGA), que é relativamente frequente.
[0282] As substituições individuais listadas acima podem ser usadas individualmente, bem como em todas as combinações possíveis, de modo a otimizar o teor em citosina da sequência de mRNA modificada em comparação com a sequência de mRNA de tipo selvagem.
[0283] Por conseguinte, a pelo menos uma sequência de codificação conforme definido no presente documento pode ser alterada em comparação com a região de codificação do respectivo mRNA de tipo selvagem de tal modo que um aminoácido codificado por pelo menos dois ou mais
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233/542 códons, dos quais um compreende uma citosina adicional, tal códon pode ser permutado pelo códon otimizado quanto a C compreendendo uma citosina adicional, em que o aminoácido está preferencialmente inalterado em comparação com a sequência de tipo selvagem.
[0284] De acordo com uma modalidade preferida, a presente invenção confere mRNA compreendendo nanopartículas lipídicas em que o mRNA compreende uma sequência de mRNA conforme definido no presente documento compreendendo pelo menos uma região de codificação em que a região de codificação compreende ou consiste em qualquer uma das sequências (modificadas) de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 96037-128048, ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0285] De acordo com uma modalidade particularmente preferida, a presente invenção confere mRNA compreendendo nanopartículas lipídicas em que o mRNA compreende uma sequência de mRNA conforme definido no presente documento compreendendo pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado de hemaglutinina (HA) de um vírus influenza A, em que a região de codificação compreende ou consiste em qualquer uma das sequências (modificadas) de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 96037-110067, ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0286] De acordo com uma modalidade adicional particularmente preferida, a presente invenção confere mRNA compreendendo nanopartículas lipídicas em que o mRNA compreende uma sequência de mRNA conforme definido no presente documento compreendendo pelo menos uma região de
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234/542 codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado de hemaglutinina (HA) de um vírus influenza B, em que a região de codificação compreende ou consiste em qualquer uma das sequências (modificadas) de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 122434-124 612, ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0287] De acordo com uma modalidade adicional particularmente preferida, a presente invenção confere mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas em que o mRNA compreende uma sequência de mRNA conforme definido no presente documento compreendendo pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado de neuraminidase (NA) de um vírus influenza A, em que a região de codificação compreende ou consiste em qualquer uma das sequências (modificadas) de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 110068-122433, ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0288] De acordo com uma modalidade adicional particularmente preferida, a presente invenção confere mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas em que o mRNA compreende uma sequência de mRNA conforme definido no presente documento compreendendo pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado de neuraminidase (NA) de um vírus influenza B, em que a região de codificação compreende ou consiste em qualquer uma das sequências (modificadas) de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 124613-126540, ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0289] De acordo com uma modalidade adicional particularmente preferida, a presente invenção confere mRNA
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235/542 compreendendo nanopartículas lipídicas em que o mRNA compreende uma sequência de mRNA conforme definido no presente documento compreendendo pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado de glicoproteína de um vírus da Raiva, em que a região de codificação compreende ou consiste em qualquer uma das sequências (modificadas) de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 126541-128048, ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0290] Em uma modalidade preferida adicional, a pelo menos uma região de codificação das sequências de mRNA de acordo com a invenção compreendem ou consistem em uma sequência de RNA idêntica ou possuindo uma identidade de sequência de pelo menos 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99%, preferencialmente de pelo menos 70%, mais preferencialmente de pelo menos 80%, ainda mais preferencialmente de pelo menos 85%, ainda mais preferencialmente de pelo menos 90% e o mais preferencialmente de pelo menos 95% ou mesmo 97%, com qualquer uma das sequências (modificadas) de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 96037-128048, ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0291] De acordo com uma modalidade particularmente preferida, a pelo menos uma região de codificação do composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA de acordo com a invenção compreende ou consiste em uma sequência de RNA tendo uma identidade de sequência de pelo menos 80% com qualquer uma das sequências (modificadas) de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 96037
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128048, ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0292] De acordo com uma modalidade particularmente preferida, a presente invenção confere mRNA compreendendo nanoparticulas lipídicas em que o mRNA compreende uma sequência de mRNA, compreendendo pelo menos uma região de codificação conforme definido no presente documento, em que o teor em G/C da pelo menos uma região de codificação da sequência de mRNA é aumentado em comparação com o teor em G/C da região de codificação correspondente do correspondente mRNA de tipo selvagem e/ou em que o teor em C da pelo menos uma região de codificação da sequência de mRNA é aumentado em comparação com o teor em C da região de codificação correspondente do mRNA de tipo selvagem correspondente, e/ou em que os códons na pelo menos uma região de codificação da sequência de mRNA estão adaptados para uso de códons humanos, em que o índice de adaptação de códons (CAI) é preferencialmente aumentado ou maximizado na, pelo menos, uma região de codificação da sequência de mRNA, e em que a sequência de aminoácidos codificada pela sequência de mRNA, preferencialmente, não está sendo modificada em comparação com a sequência de aminoácidos codificada pelo correspondente mRNA de tipo selvagem.
Estrutura 5'-CAP:
[0293] De acordo com outra modalidade preferida da invenção, uma sequência modificada de mRNA conforme definido no presente documento, pode ser modificada pela adição de uma denominada estrutura 5'CAP, que preferencialmente estabiliza o mRNA conforme
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237/542 descrito no presente documento. Um 5'-GAP é uma entidade, tipicamente uma entidade nucleotídica modificada, que geralmente cobre a extremidade 5' de um mRNA maduro. Um 5'-GAP pode ser tipicamente formado por um nucleotídeo modificado, particularmente por um derivado de um nucleotídeo guanina. De preferência, o 5'-GAP está ligado ao terminal 5' através de uma ligação 5'-5'-trifosfato. Um 5'-GAP pode ser metilado, por ex. , m7GpppN, em que N é o nucleotídeo 5' terminal do ácido nucleico portador do 5'CAP, tipicamente a extremidade 5' de um mRNA. m7GpppN é a estrutura 5'-GAP, que ocorre naturalmente no mRNA transcrito pela polimerase II e por isso, preferencialmente, não é considerado como modificação compreendida em um mRNA modificado nesse contexto. Consequentemente, uma sequência modificada de mRNA da presente invenção pode compreender um m7GpppN como 5'-GAP, mas adicionalmente a sequência de mRNA modificada compreende tipicamente pelo menos uma modificação adicional conforme definido no presente documento.
[0294] Exemplos adicionais de estruturas 5'CAP incluem glicerila, resíduo abásico desóxi invertido (porção), nucleotídeo 4',5'-metileno, nucleotídeo 1-(betaD-eritrofuranosil), nucleotídeos 4'-tio, nucleotídeos carbocíclico, nucleotídeo 1,5-anidro-hexitol, Lnucleotídeos, alfa-nucleotídeo, nucleotídeo de base modificada, nucleotídeo treo-pentofuranosila, nucleotídeo 3',4'-seco-acíclico, nucleotídeo de 3,4-di-hidroxibutila acíclica, nucleotídeo de 3,5-di-hidroxipentila acíclica, porção de nucleotídeos 3'-3'-invertidos, porção abásica 3'3'-invertida, porção de nucleotídeos 3'-2'-invertidos,
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238/542 porção abásica 3'-2'-invertida, fosfato de 1,4-butanodiol, 3'-fosforamidato, hexilfosfato, fosfato de amino-hexila, 3'-fosfato, 3'-fosforotioato, fosforoditioato ou porção de metilfosfonato de ponte ou de não ponte. Essas estruturas 5'-GAP modificadas são consideradas como, pelo menos, uma modificação nesse contexto.
[0295] Estruturas 5'-CAP modificadas particularmente preferidas são capl (metilação da ribose do nucleotídeo adjacente de m7G), cap2 (metilação adicional da ribose do 2° nucleotídeo a jusante de m7G), cap3 (metilação adicional da ribose do 3° nucleotídeo a jusante de m7G) , cap4 (metilação da ribose do 4° nucleotídeo a jusante de m7G) , ARCA (análogo da GAP antirreversa), ARCA modificado (por exemplo, ARCA modificado por fosfotioato), inosina, Nl-metil-guanosina, 2'-fluoro-guanosina, 7-desazaguanosina, 8-oxo-guanosina, 2-amino-guanosina, guanosinaLNA e 2-azido-guanosina. Consequentemente, o RNA de acordo com a invenção compreende, preferencialmente, uma estrutura 5’-GAP.
Sequência/cauda poli(A):
[0296] De acordo com uma modalidade adicional preferida, o composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA da presente invenção pode conter uma cauda poli-A no terminal 3' de tipicamente cerca de 10 a 200 nucleotídeos de adenosina, preferencialmente cerca de 10 a 100 nucleotídeos de adenosina, mais preferencialmente cerca de 40 a 80 nucleotídeos de adenosina ou ainda mais preferencialmente cerca de 50 a 70 nucleotídeos de adenosina.
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239/542 [0297] Preferencialmente, a sequência poli(A) no composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA da presente invenção é derivada a partir de um modelo de DNA por transcrição in vitro de RNA. Alternativamente, a sequência poli(A) também pode ser obtida in vitro por métodos comuns de síntese química sem ser necessariamente transcrita a partir de um DNA-progenitor. Além disso, as sequências poli(A), ou as caudas poli(A) podem ser geradas por poliadenilação enzimática do RNA de acordo com a presente invenção, usando kits de poliadenilação comercialmente disponíveis e protocolos correspondentes conhecidos na técnica.
[0298] Alternativamente, o mRNA conforme descrito no presente documento compreende opcionalmente um sinal de poliadenilação, que no presente documento é definido como um sinal, que transporta poliadenilação para um RNA (transcrito) por fatores proteicos específicos (por exemplo fator de especificidade de divagem e poliadenilação (CPSF) , fator de estimulação de divagem (CstF) , fatores de divagem I e II (CF I e CF II), poli (A) polimerase (PAR)). Nesse contexto, é preferido um sinal de consenso de poliadenilação compreendendo a sequência de consenso NN(U/T)ANA. Em um aspecto particularmente preferido, o sinal de poliadenilação compreende uma das seguintes sequências: AA(U/T)AAA ou A(U/T)(U/T)AAA (em que a uridina está usualmente presente no RNA e a timidina está usualmente presente no DNA).
Sequência poli(C):
[0299] De acordo com uma modalidade adicional preferida, o composto de mRNA compreendendo uma sequência
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240/542 de mRNA da presente invenção pode conter uma cauda poli(C) no terminal 3' de tipicamente cerca de 10 a 200 nucleotideos de citosina, preferencialmente cerca de 10 a 100 nucleotideos de citosina, mais preferencialmente cerca de 20 a 70 nucleotideos de citosina ou ainda mais preferencialmente cerca de 20 a 60 ou mesmo 10 a 40 nucleotideos de citosina.
[0300] Em uma modalidade preferida, o composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA compreende, de preferência, na direção 5' para 3':
a) uma estrutura 5'-GAP, preferencialmente m7GpppN;
b) pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos,
c) opcionalmente, uma sequência poli(A) compreendendo, de preferência, 64 adenosinas;
d) opcionalmente, uma sequência poli(C) compreendendo, de preferência, 30 citosinas.
[0301] Em uma modalidade mais preferida, a sequência de mRNA compreende, de preferência, na direção 5' para 3':
a) uma estrutura 5'-GAP, preferencialmente m7GpppN;
b) pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de uma proteína de um vírus influenza ou da raiva ou um fragmento ou variante da mesma,
c) opcionalmente, uma sequência poli(A) compreendendo, de preferência, 64 adenosinas;
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241/542
d) opcionalmente, uma sequência poli(C) compreendendo, de preferência, 30 citosinas.
[0302] Em uma modalidade particularmente preferida, a sequência de mRNA compreende, de preferência, na direção 5' para 3':
a) uma estrutura 5'-GAP, preferencialmente mVGpppN;
b) pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de uma proteína de um vírus influenza ou vírus da raiva ou um fragmento ou variante da mesma, preferencialmente compreendendo ou consistindo em qualquer uma das sequências de ácido nucleico conforme divulgado na listagem de sequências tendo um identificador numérico
<223> que inicia por sequência de CDS derivada e/ou
modificada (wt) ou sequência de CDS derivada e/ou
modificada (optl) Η T r 'sequência de CDS derivada e/ou
modificada (opt2) Η H r sequência de CDS derivada e/ou
modificada (opt3) Η T r 'sequência de CDS derivada e/ou
modificada (opt4) OU sequência de CDS derivada e/ou
modificada (opt5) OU , respectivamente, coluna B ou
coluna C das Tabelas 1-5 ou Figuras 20- 24 do documento
PCT/EP2016/ 075843, SEQ TD NOs: 32013-64024, ou SEQ TD NOs:
64025-224084, ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências),
c) opcionalmente, uma sequência poli(A) compreendendo, de preferência, 64 adenosinas;
d) opcionalmente, uma sequência poli(C) compreendendo, de preferência, 30 citosinas.
UTRs :
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242/542 [0303] Em uma modalidade preferida, o composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA de acordo com a invenção compreende pelo menos um elemento 5'- ou 3'-UTR. Nesse contexto, um elemento UTR compreende ou consiste em uma sequência de ácido nucleico, que é derivada a partir de 5'- ou 3'-UTR de qualquer gene de ocorrência natural ou que é derivada a partir de um fragmento, um homólogo ou uma variante do 5'- ou 3'-UTR de um gene. Preferencialmente, o elemento 5' ou 3'-UTR usado de acordo com a presente invenção é heterólogo para, pelo menos, uma região de codificação da sequência de mRNA da invenção. Mesmo que sejam preferidos elementos 5' ou 3'-UTR derivados de genes de ocorrência natural, também podem ser usados elementos UTR de engenharia sintética no contexto da presente invenção.
Elementos 3'-UTR:
[0304] O termo elemento 3'-UTR se refere tipicamente a uma sequência de ácido nucleico, que compreende ou consiste em uma sequência de ácido nucleico que é derivada a partir de um 3'-UTR ou de uma variante de um 3'-UTR. Um elemento 3'-UTR no sentido da presente invenção pode representar o 3'-UTR de um RNA, preferencialmente um mRNA. Desse modo, no sentido da presente invenção, preferencialmente, um elemento 3'-UTR pode ser o 3'-UTR de um RNA, preferencialmente de um mRNA, ou pode ser o modelo de transcrição para um 3'-UTR de um RNA. Desse modo, um elemento 3'-UTR é preferencialmente uma sequência de ácido nucleico que corresponde ao 3'-UTR de um RNA, de preferência ao 3'-UTR de um mRNA, tal como um mRNA obtido por transcrição de um construto de vetor
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243/542 geneticamente modificado. De preferência, o elemento 3'-UTR cumpre a função de um 3'-UTR ou codifica uma sequência que cumpre a função de um 3'-UTR.
[0305] De preferência o pelo menos um elemento 3'-UTR compreende ou consiste em uma sequência de ácido nucleico derivada a partir do 3'-UTR de um gene de cordado, de preferência um gene de vertebrado, mais preferencialmente um gene de mamífero, o mais preferencialmente um gene humano, ou de variante do 3'-UTR de um gene de cordado, preferencialmente um gene de vertebrado, mais preferencialmente um gene de mamífero, o mais preferencialmente um gene humano.
[0306] De preferência, o composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA da presente invenção compreende um elemento 3'-UTR, que pode ser derivado a partir de um gene que se refere a um mRNA com uma semiviva aumentada (que confere um mRNA estável), por exemplo um elemento 3'-UTR conforme definido e descrito abaixo. De preferência, o elemento 3'-UTR é uma sequência de ácido nucleico derivada de um 3'-UTR de um gene, codificando preferencialmente um mRNA estável, ou de um homólogo, um fragmento ou uma variante do referido gene.
[0307] Em uma modalidade particularmente preferida, o elemento 3'-UTR compreende ou consiste em uma sequência de ácido nucleico, que é derivada de um 3'-UTR de um gene selecionado a partir do grupo consistindo em um gene de albumina, um gene de α-globina, um gene de βglobina, um gene de tirosina hidroxilase, um gene de lipoxigenase e um gene de colágeno alfa, tal como um gene de colágeno alfa 1 (I), ou de uma variante de um 3'-UTR de
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244/542 um gene selecionado a partir do grupo consistindo em um gene de albumina, um gene de α-globina, um gene de βglobina, um gene de tirosina hidroxilase, um gene de lipoxigenase e um gene de colágeno alfa, tal como um gene de colágeno alfa 1 (I) de acordo com as SEQ ID NOs: 13691390 do pedido de patente WO2013/143700, cuja divulgação é incorporada no presente documento por referência, ou de um homólogo, um fragmento ou uma variante do mesmo. Em uma modalidade particularmente preferida, o elemento 3'-UTR compreende ou consiste em uma sequência de ácido nucleico que é derivada de um 3'-UTR de um gene de albumina, preferencialmente um gene de albumina de vertebrado, mais preferencialmente um gene de albumina de mamífero, o mais preferencialmente um gene da albumina humana de acordo com a SEQ ID NO: 224301 ou SEQ ID NO: 224303 ou as sequências de RNA correspondentes de SEQ ID NO: 224300 ou SEQ ID NO: 224304 .
[0308] Albumina humana 3’-UTR SEQ ID NO 224301 CAT CACAT T TAAAAGCAT C T CAGC C TAG CAT GAGAATAAGAGAAAGAAAAT GAAGAT CA
AAAGCTTATTCATCTGTTTTTCTTTTTCGTTGGTGTAAAGCCAACACCCTGTCTAAAAA
ACATAAATTTCTTTAATCATTTTGCCTCTTTTCTCTGTGCTTCAATTAATAAAAAATGG
AAAGAATCT (correspondendo à SEQ ID NO:
1369 do pedido de patente WO2013/143700).
[0309] Nesse contexto, é particularmente
preferido que o composto de mRNA compreendendo uma
sequência de mRNA de acordo com a invenção compreenda um
elemento 3’-UTR compreendendo uma sequência de RNA
correspondente der ivada a partir dos ácidos nucleicos de
do pedido de patente acordo com as SEQ ID NOs: 1369-1390
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W02013/143700 ou um fragmento, homólogo ou variante da mesma.
[0310] O mais preferencialmente, o elemento 3'-UTR compreende a sequência de ácido nucleico derivada a partir de um fragmento do gene de albumina humana de acordo com a SEQ ID NO: 224303. albumina7 3'-UTR
CAT CACAT T TAAAAGCAT C T CAGC C TAG CAT GAGAATAAGAGAAAGAAA ATGAAGATCAATAGCTTATTCATCTCTTTTTCTTTTTCGTTGGTGTAAAGCCAACACCC TGTCTAAAAAACATAAATTTCTTTAATCATTTTGCCTCTTTTCTCTGTGCTTCAATTAA TAAAAAATGGAAAGAACCT (SEQ ID NO: 224303 correspondendo à SEQ ID NO: 1376 do pedido de patente WQ2013143700).
[0311] Nesse contexto, é particularmente preferido que o elemento 3'-UTR da sequência de mRNA de acordo com a presente invenção compreenda ou consista em uma sequência de RNA correspondente da sequência de ácido nucleico de acordo com a SEQ ID NO: 224301 ou SEQ ID NO: 224303 conforme mostrado nas SEQ ID NOs: 224302 ou SEQ ID NO: 224304.
[0312] Noutra modalidade particularmente preferida, o elemento 3'-UTR compreende ou consiste em uma sequência de ácido nucleico que é derivada de um 3'-UTR de um gene de a- ou β-globina, preferencialmente um gene de ceou β-globina de vertebrado, mais preferencialmente um gene de a- ou β-globina de mamífero, o mais preferencialmente um gene da a- ou β-globina humana de acordo com as SEQ ID NOs: 224291, 224293, 224295, 224297 ou as sequências de RNA correspondentes das SEQ ID NOs: 224292, 224294, 224296,
224298.
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246/542
3'-UTR de hemoglobina de Homo sapiens, alfa 1 (HBA1)
GCTGGAGCCTCGGTGGCCATGCTTCTTGCCCCTTGGGCCTCCCCCCAGC CCCTCCTCCCCTTCCTGCACCCGTACCCCCGTGGTCTTTGAATAAAGTCTGAGTGGGCG GC (SEQ ID NO: 224291 correspondendo à SEQ ID NO: 1370 do pedido de patente WO2013/143700).
3'-UTR de hemoglobina de Homo sapiens, alfa 2 (HBA2)
GCTGGAGCCTCGGTAGCCGTTCCTCCTGCCCGCTGGGCCTCCCAACGGG CCCTCCTCCCCTCCTTGCACCGGCCCTTCCTGGTCTTTGAATAAAGTCTGAGTGGGCAG (SEQ ID NO: 224293 correspondendo à SEQ ID NO: 1371 do pedido de patente WO2013/143700).
3'-UTR de hemoglobina de Homo sapiens, beta (HBB) GCTCGCTTTCTTGCTGTCCAATTTCTATTAAAGGTTCCTTTGTTCCCTA AGTCCAACTACTAAACTGGGGGATATTATGAAGGGCCTTGAGCATCTGGATTCTGCCTA ATAAAAAACATTTATTTTCATTGC (SEQ ID NO: 224295 correspondendo à SEQ ID NO: 1372 do pedido de patente WO2013/143700).
[0313] Por exemplo, o elemento 3'-UTR pode compreender ou consistir no centro, porção de ligação ao complexo α do 3'-UTR de um gene de α-globina, tal como de um gene de α-globina humana, ou um homólogo, um fragmento, ou uma variante de um gene de α-globina, de preferência de acordo com a SEQ ID NO: 224297.
[0314] Centro, porção de ligação ao complexo α do 3'-UTR de um gene de α-globina (também designada no presente documento como muag)
GCCCGATGGGCCTCCCAACGGGCCCTCCTCCCCTCCTTGCACCG (SEQ ID NO: 224297 correspondendo à SEQ ID NO: 1393 do pedido de patente WO2013/143700).
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247/542 [0315] Nesse contexto é particularmente preferido que o elemento 3'-UTR da sequência de mRNA de acordo com a invenção compreenda ou consista em uma sequência de RNA correspondente da sequência de ácido nucleico de acordo com a SEQ ID NO: 224297 conforme mostrado na SEQ ID NO: 224298, ou um homólogo, um fragmento ou variante do mesmo.
[0316] O termo uma sequência de ácido nucleico que é derivada do 3'-UTR de um gene [...] se refere preferencialmente a uma sequência de ácido nucleico que é baseada na sequência 3'-UTR de um gene [...] ou em uma parte do mesmo, tal como no 3'-UTR de um gene de albumina, um gene de α-globina, um gene de β-globina, um gene de tirosina hidroxilase, um gene de lipoxigenase, ou um gene colágeno alfa, tal como um gene colágeno alfa 1 (I), preferencialmente de um gene de albumina ou de uma parte do mesmo. Esse termo inclui sequências que correspondem à totalidade da sequência 3'-UTR, isto é, a sequência 3'-UTR de comprimento total de um gene, e sequências correspondendo a um fragmento da sequência 3'UTR de um gene, tal como um gene de albumina, gene de aglobina, gene de de β-globina, gene de tirosinahidroxilase, gene de lipoxigenase ou gene de colágeno alfa, tal como um gene de colágeno alfa 1 (I), preferencialmente de um gene de albumina.
[0317] O termo uma sequência de ácido nucleico que é derivada de uma variante do 3'-UTR de um gene [...] se refere preferencialmente a uma sequência de ácido nucleico, que é baseada em uma variante da sequência 3'-UTR de um gene, tal como em uma uma variante do 3'-UTR
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248/542 de um gene de albumina, um gene de a-globina, um gene de βglobina, um gene de tirosina hidroxilase, um gene de lipoxigenase, ou um gene colágeno alfa, tal como um gene colágeno alfa 1 (I), ou em uma parte do mesmo conforme descrito acima. Esse termo inclui sequências que correspondem à totalidade da sequência da variante do 3'UTR de um gene, isto é, a variante de comprimento total da sequência 3'-UTR de um gene, e sequências correspondentes a um fragmento da sequência 3'-UTR variante de um gene. Um fragmento nesse contexto consiste, preferencialmente, em um trecho contínuo de nucleotídeos correspondendo a um trecho contínuo de nucleotídeos na variante de comprimento total de 3'-UTR, que representa pelo menos 20%, preferencialmente pelo menos 30%, mais preferencialmente pelo menos 40%, mais
preferencialmente pelo menos 50%, ainda mais
preferencialmente pelo menos 60%, ainda mais
preferencialmente pelo menos 70%, ainda mais
preferencialmente pelo menos 80%, e o mais
preferencialmente pelo menos 90% da variante de comprimento
total de 3'-UTR. Um tal fragmento ou variante, no sentido
da presente invenção, é de preferência um fragmento funcional ou variante conforme descrito no presente documento.
[0318] De acordo com uma modalidade preferida, o composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA de acordo com a invenção compreende uma estrutura 5'-GAP e/ou pelo menos um elemento de região 3' não traduzida (elemento 3'-UTR), preferencialmente conforme definido no presente documento. Mais preferencialmente, o RNA adicionalmente
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249/542 compreende um elemento 5'-UTR conforme definido no presente documento.
[0319] Em uma modalidade preferida, o composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA compreende, de preferência, na direção 5' para 3':
a) uma estrutura 5'-GAP, preferencialmente mVGpppN;
b) pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos,
c) opcionalmente, um elemento 3'-UTR, preferencialmente compreendendo ou consistindo em uma sequência de ácido nucleico que é derivada a partir de um gene de alfa globina, preferencialmente compreendendo a sequência de RNA correspondente à sequência de ácido nucleico de acordo com a SEQ ID NO: 224297 conforme mostrado na SEQ ID NO: 224298, um homólogo, um fragmento ou uma variante da mesma;
d) opcionalmente, uma sequência poli(A) compreendendo, de preferência, 64 adenosinas;
e) opcionalmente, uma sequência poli(C) compreendendo, de preferência, 30 citosinas.
[0320] Em uma modalidade preferida, a
sequência de mRNA compreende, de preferência, na direção 5'
para 3': a) uma estrutura 5’-GAP, preferencialmente
m7GpppN; b) pelo menos uma região de codificação
codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos, preferencialmente derivado a partir de uma proteína de um
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250/542 virus influenza ou urn virus da Raiva ou um fragmento ou variante da mesma,
c) opcionalmente, um elemento 3'-UTR, preferencialmente compreendendo ou consistindo em uma sequência de ácido nucleico que é derivada a partir de um gene de alfa globina, preferencialmente compreendendo a sequência de RNA correspondente à sequência de ácido nucleico de acordo com a SEQ ID NO: 224297 conforme mostrado na SEQ ID NO: 224298, um homólogo, um fragmento ou uma variante da mesma;
d) opcionalmente, uma sequência poli(A) compreendendo, de preferência, 64 adenosinas;
e) opcionalmente, uma sequência poli(C) compreendendo, de preferência, 30 citosinas.
[0321] Em uma modalidade particularmente preferida, a sequência de mRNA compreende, de preferência, na direção 5' para 3':
a) uma estrutura 5'-GAP, preferencialmente m7GpppN;
b) pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos preferencialmente derivado a partir de uma proteína de um vírus influenza ou vírus da Raiva ou um fragmento ou variante da mesma, preferencialmente compreendendo ou consistindo em qualquer uma das sequências de ácido nucleico conforme divulgado na listagem de sequências tendo um identificador numérico <223> que inicia por sequência de CDS derivada e/ou modificada (wt) ou sequência de CDS derivada e/ou modificada (optl), sequência de CDS derivada e/ou modificada (opt2), sequência de CDS
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251/542 derivada e/ou modificada (opt3), sequência de CDS derivada e/ou modificada (opt4) ou sequência de CDS derivada e/ou modificada (opt5) ou, respectivamente, coluna B ou coluna C das Tabelas 1-5 ou Figuras 20-24 do documento PCT/EP2016/075843, SEQ ID NOs: 32013-64024, ou SEQ ID NOs: 64025-224084, ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências,
c) opcionalmente, um elemento 3'-UTR, preferencialmente compreendendo ou consistindo em uma sequência de ácido nucleico que é derivada a partir de um gene de alfa globina, preferencialmente compreendendo a sequência de RNA correspondente à sequência de ácido nucleico de acordo com a SEQ ID NO: 224297 conforme mostrado na SEQ ID NO: 224298, um homólogo, um fragmento ou uma variante da mesma;
d) opcionalmente, uma sequência poli(A) compreendendo, de preferência, 64 adenosinas;
e) opcionalmente, uma sequência poli(C) compreendendo, de preferência, 30 citosinas; e
Elementos 5'-UTR:
[0322] Em uma modalidade particularmente preferida, o pelo menos um composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA compreende pelo menos um elemento de região 5' não traduzido (elemento 5'-UTR). Preferivelmente o, pelo menos, um elemento 5'-UTR compreende ou consiste em uma sequência de ácido nucleico, que é derivada a partir do 5'-UTR de um gene TOP ou que é derivada a partir de um fragmento, homólogo ou variante do 5'-UTR de um gene TOP.
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252/542 [0323] É particularmente preferido que o elemento 5'-UTR não compreenda um motivo TOP ou um 5'-TOP, conforme definido acima.
Em algumas modalidades, a sequência de ácido nucleico do elemento 5'-UTR, que é derivado a partir de um 5'-UTR de um gene TOP, termina na sua extremidade 3' com um nucleotídeo localizado na posição 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 a montante do códon de iniciação (por ex. , A(U/T)G) do gene ou mRNA do qual é derivado. Desse modo, o elemento 5'-UTR não compreende qualquer parte da região de codificação da proteína. Desse modo, preferencialmente, a única parte de codificação de proteína da pelo menos uma sequência de mRNA é conferida pela região de codificação.
[0324] A sequência de ácido nucleico derivada da 5'-UTR de um gene TOP é preferencialmente derivada a partir de um gene TOP eucariótico, preferencialmente um gene TOP vegetal ou animal, mais preferencialmente um gene TOP de cordado, ainda mais preferencialmente um gene TOP de vertebrado, mais preferencialmente um gene TOP de mamífero, tal como um gene TOP humano.
[0325] Por exemplo, o elemento 5'-UTR é preferencialmente selecionado a partir dos elementos 5'-UTR compreendendo ou consistindo em uma sequência de ácido nucleico, que é derivada a partir de uma sequência de ácido nucleico selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 1-1363, SEQ ID NO: 1395, SEQ ID NO: 1421 e SEQ ID NO: 1422 do pedido de patente WO2013/143700, cuja divulgação é incorporada no presente documento por referência, a partir dos homólogos das SEQ ID NOs: 1-1363, SEQ ID NO: 1395, SEQ ID NO: 1421 e SEQ ID NO: 1422 do
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253/542 pedido de patente W02013/143700, a partir de uma variante dos mesmos, ou preferencialmente a partir de uma sequência de RNA correspondente. O termo homólogos das SEQ ID NOs: 1-1363, SEQ ID NO: 1395, SEQ ID NO: 1421 e SEQ ID NO: 1422 do pedido de patente WO2013/143700, se refere a sequências de outras espécies que não o homo sapiens, que são homólogas às sequências de acordo com as SEQ ID NOs: 11363, SEQ ID NO: 1395, SEQ ID NO: 1421 e SEQ ID NO: 1422 do pedido de patente WO2013/143700.
[0326] Em uma modalidade preferida, o elemento 5'-UTR do composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA de acordo com a invenção compreende ou consiste em uma sequência de ácido nucleico, que é derivada a partir de uma sequência de ácido nucleico que se prolonga desde a posição nucleotídica 5 (isto é o nucleotídeo que está localizado na posição 5 na sequência) para a posição nucleotídica imediatamente 5' do códon de iniciação (localizada na extremidade 3' das sequências), por ex., a posição nucleotídica imediatamente 5' da sequência ATG, de uma sequência de ácido nucleico selecionada a partir das SEQ ID NOs: 1-1363, SEQ ID NO: 1395, SEQ ID NO: 1421 e SEQ ID NO: 1422 do pedido de patente WO2013/143700, a partir dos homólogos das SEQ ID NOs: 1-1363, SEQ ID NO: 1395, SEQ ID NO: 1421 e SEQ ID NO: 1422 do pedido de patente WQ2013/143700, a partir de uma variante dos mesmos, ou de uma sequência de RNA correspondente. É particularmente preferido que o elemento 5'-UTR seja derivado a partir de uma sequência de ácido nucleico que se prolonga desde a posição nucleotídica imediatamente 3' para o 5'-TOP para a posição nucleotídica imediatamente 5' do códon de iniciação
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254/542 (localizada na extremidade 3' das sequências), por ex., a posição nucleotidica imediatamente 5' da sequência ATG, de uma sequência de ácido nucleico selecionada a partir das SEQ ID NOs: 1-1363, SEQ ID NO: 1395, SEQ ID NO: 1421 e SEQ ID NO: 1422 do pedido de patente W02013/143700, a partir dos homólogos das SEQ ID NOs: 1-1363, SEQ ID NO: 1395, SEQ ID NO: 1421 e SEQ ID NO: 1422 do pedido de patente WQ2013/143700, a partir de uma variante dos mesmos, ou de uma sequência de RNA correspondente.
[0327] Em uma modalidade particularmente preferida, o elemento 5'-UTR compreende ou consiste em uma sequência de ácido nucleico que é derivada a partir de um 5'-UTR de um gene TOP codificando uma proteína ribossomal ou de uma variante de um 5'-UTR de um gene TOP codificando uma proteína ribossomal. Por exemplo, o elemento 5'-UTR compreende ou consiste em uma sequência de ácido nucleico, que é derivada a partir de um 5'-UTR de uma sequência de ácido nucleico de acordo com qualquer uma das SEQ ID NOs: 67, 170, 193, 244, 259, 554, 650, 675, 700, 721, 913, 1016, 1063, 1120, 1138 e 1284-1360 do pedido de patente W02013/143700, uma sequência de RNA correspondente, um homólogo da mesma, ou uma variante da mesma, conforme descrito no presente documento, de preferência com ausência do motivo 5'-TOP. Conforme descrito acima, a sequência que se prolonga desde a posição 5 para o nucleotídeo imediatamente 5' para o ATG (que está localizado na extremidade 3' das sequências) corresponde à 5'-UTR das referidas sequências.
[0328] Preferencialmente, o elemento 5'-UTR compreende ou consiste em uma sequência de ácido nucleico
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255/542 que é derivada a partir de um 5'-UTR de um gene TOP codificando uma proteína Grande ribossomal (RPL) ou de um homólogo ou variante de um 5'-UTR de um gene TOP codificando uma proteína Grande ribossomal (RPL). Por exemplo, o elemento 5'-UTR compreende ou consiste em uma sequência de ácido nucleico, que é derivada a partir de um 5'-UTR de uma sequência de ácido nucleico de acordo com qualquer uma das SEQ ID NOs: 67, 259, 1284-1318, 1344, 1346, 1348-1354, 1357, 1358, 1421 e 1422 do pedido de patente W02013/143700, uma sequência de RNA correspondente, um homólogo da mesma, ou uma variante da mesma, conforme descrito no presente documento, de preferência com ausência do motivo 5'-TOP.
[0329] Em uma modalidade particularmente preferida, o elemento 5'-UTR compreende ou consiste em uma sequência de ácido nucleico que é derivada do 5'-UTR de um gene da proteína Grande ribossomal 32, preferencialmente a partir de um gene da proteína Grande ribossomal 32 (L32) de vertebrado, mais preferencialmente a partir de um gene da proteína Grande ribossomal 32 (L32) de mamífero, o mais preferencialmente de um gene da proteína Grande ribossomal 32 (L32) humana, ou de uma variante do 5'UTR de um gene da proteína Grande ribossomal 32, preferencialmente de um gene da proteína Grande ribossomal 32 (L32) de vertebrado, mais preferencialmente de um gene da proteína Grande ribossomal 32 (L32) de mamífero, o mais preferencialmente de um gene da proteína Grande ribossomal 32 (L32) humana, em que, preferencialmente, o elemento 5'-UTR não compreende o 5'TOP do referido gene.
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256/542 [0330] Consequentemente, em uma modalidade particularmente preferida, o elemento 5'-UTR compreende ou consiste em uma sequência de ácido nucleico, que tem uma identidade de pelo menos cerca de 40%, preferencialmente de pelo menos cerca de 50%, preferencialmente de pelo menos cerca de 60%, preferencialmente de pelo menos cerca de 70%,
mais preferencialmente de pelo menos cerca de 80%, mais
preferencialmente de pelo menos cerca de 90%, ainda mais
preferencialmente de pelo menos cerca de 95%, ainda mais
preferencialmente de pelo menos 99% da sequência de ácido
nucleico de acordo com a SEQ ID NO: 224287 ou SEQ ID NO: 224288 (5'-UTR da proteína Grande ribossomal humana 32 com ausência do trato oligopirimidina 5'-terminal: GGCGCTGCCTACGGAGGTGGCAGCCATCTCCTTCTCGGCATC; correspondendo à SEQ ID NO: 1368 do pedido de patente WO2013/143700) ou preferencialmente à sequência de RNA correspondente, ou em que pelo menos um elemento 5'-UTR compreende ou consiste em um fragmento de uma sequência de ácido nucleico, que tem uma identidade de pelo menos cerca de 40%, preferencialmente de pelo menos cerca de 50%, preferencialmente de pelo menos cerca de 60%, preferencialmente de pelo menos cerca de 70%, mais preferencialmente de pelo menos cerca de 80%, mais preferencialmente de pelo menos cerca de 90%, ainda mais preferencialmente de pelo menos cerca de 95%, ainda mais preferencialmente de pelo menos 99% da sequência de ácido nucleico de acordo com a SEQ ID NO: 224287 ou mais preferencialmente com uma sequência de RNA correspondente (SEQ ID NO: 224288), em que, preferencialmente, o fragmento é conforme descrito acima, ou seja, um trecho contínuo de
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257/542 nucleotideos representando pelo menos 20%, etc. de 5'-UTR de comprimento total. De preferência, o fragmento apresenta um comprimento de pelo menos cerca de 20 nucleotideos ou mais, de preferência de pelo menos cerca de 30 nucleotideos ou mais, mais preferencialmente de pelo menos cerca de 40 nucleotideos ou mais. Preferencialmente, o fragmento é um fragmento funcional conforme descrito no presente documento.
[0331] Em algumas modalidades, o composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA de acordo com a invenção compreende um elemento 5'-UTR, que compreende ou consiste em uma sequência de ácido nucleico, que é derivada do 5'-UTR de um gene TOP de vertebrado, tal como um mamífero, por exemplo, um gene TOP humano, selecionado a
partir de RPSA, RPS2, RPS3, RPS3A, RPS4, RPS5, RPS6 , RPS7,
RPS8, RPS9, RPS10, RPS11, RPS12, RPS13, RPS14, RPS15,
RPS15A , RPS16, RPS17, RPS18, RPS19, RPS20, RPS21, RPS23,
RPS24, RPS25, RPS26, RPS27, RPS27A, RPS28, RPS29, RPS30,
RPL3, RPL4, RPL5, RPL6, RPL7, RPL7A, RPL8, RPL9, RPL10,
RPL10A , RPL11, RPL12, RPL13, RPL13A, RPL14, RPL15, RPL17,
RPL18, RPL18A, RPL19, RPL21, RPL22, RPL23, RPL23A, RPL24,
RPL26, RPL27, RPL27A, RPL28, RPL29, RPL30, RPL31, RPL32,
RPL34, RPL35, RPL35A, RPL36, RPL36A, RPL37, RPL37A, RPL38,
RPL39, RPL40, RPL41, RPLP0, RPLP1, RPLP2, RPLP3, RPLP0,
RPLP1, RPLP2, EEF1A1, EEF1B2, EEF1D , EEF1G, EEF2, EIF3E,
EIF3F, EIF3H, EIF2S3 , EIF3C, EIF3K, EIF3EIP, EIF4A2,
PABPC1 , HNRNPA1, TPT1, TUBB1, UBA52, NPM1, ATP5G2, GNB2L1,
NME2, UQCRB, ou a partir de um homólogo ou variante do mesmo, em que preferencialmente o elemento 5'-UTR não compreende um motivo TOP ou o 5'-TOP dos referidos genes, e
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258/542 em que opcionalmente o elemento 5'-UTR começa na sua extremidade 5' com um nucleotídeo localizado na posição 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 a jusante do trato oligopirimidina do terminal 5' (TOP) e em que adicionalmente, opcionalmente, o elemento 5'-UTR que é derivado a partir de um 5'-UTR de um gene TOP termina na sua extremidade 3' com um nucleotídeo localizado na posição 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 a montante do códon de iniciação (A(U/T)G) do gene do qual é derivado.
[0332] Em modalidades adicionais particularmente preferidas, o elemento 5'-UTR compreende ou consiste em uma sequência de ácido nucleico, que é derivada do 5'-UTR de um gene de proteína Grande ribossomal 32 (RPL32), um gene de proteína Grande ribossomal 35 (RPL35), um gene de proteína Grande ribossomal 21 (RPL21), uma sintase de ATP, transporte de H+, complexo El mitocondrial, subunidade alfa 1, gene do músculo cardíaco (ATP5A1), um gene de hidroxiesteroide desidrogenase 4 (17-beta) (HSD17B4), um gene induzido por andrógeno 1 (AIG1), um gene de subunidade do citocromo c oxidase Vic (COX6C) , ou um gene de N-acilsfingosina amido-hidrolase (ceramidase ácida) 1 (ASAH1) ou de uma variante do mesmo, preferencialmente de um gene de proteína Grande ribossomal 32 de vertebrado (RPL32), um gene de proteína Grande ribossomal 35 de vertebrado (RPL35), um gene de proteína Grande ribossomal 21 de vertebrado (RPL21), uma ATP sintase de vertebrado, transporte H+, complexo El mitocondrial, subunidade alfa 1, um gene do músculo cardíaco (ATP5A1), um gene de hidroxiesteroide desidrogenase 4 (17-beta) de vertebrado (HSD17B4), um gene induzido por andrógeno 1 de vertebrado
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259/542 (AIG1), um gene de subunidade do citocromo c oxidase Vic de vertebrado (COX6C), ou um gene de N-acilsfingosina amidohidrolase (ceramidase ácida) 1 de vertebrado (ASAHI) ou de uma variante do mesmo, mais preferencialmente a partir de um gene de proteína Grande ribossomal 32 de mamífero (RPL32) um gene de proteína Grande ribossomal 35 (RPL35), um gene de proteína Grande ribossomal 21 (RPL21), uma ATP sintase de mamífero, transporte H+, complexo Fl mitocondrial, subunidade alfa 1, um gene do músculo cardíaco (ATP5A1), um gene de hidroxiesteroide desidrogenase 4 (17-beta) de mamífero (HSD17B4), um gene induzido por andrógeno 1 de mamífero (AIG1), um gene de subunidade do citocromo c oxidase Vic de mamífero (COX6C), ou um gene de N-acilsfingosina amido-hidrolase (ceramidase
ácida) 1 de mamífero (ASAH1) ou de uma variante do mesmo, o
mais preferencialmente a partir de um gene de proteína
Grande ribossomal 32 humano (RPL32), um gene de proteína
Grande ribossomal 35 humano (RPL35), um gene de proteína
Grande ribossomal 2 1 humano (RPL21 ) , uma ATP sintase
humana, transporte H+, complexo Fl mitocondrial, subunidade alfa 1, um gene do músculo cardíaco (ATP5A1), um gene de hidroxiesteroide desidrogenase 4 (17-beta) humano (HSD17B4), um gene induzido por andrógeno 1 humano (AIG1), um gene de subunidade do citocromo c oxidase Vic humano (COX6C), ou um gene de N-acilsfingosina amido-hidrolase (ceramidase ácida) 1 humano (ASAHI) ou de uma variante do mesmo, em que preferencialmente o elemento 5'UTR não compreende ο 5'-TOP do referido gene.
[0333] Consequentemente, em uma modalidade particularmente preferida, o elemento 5'-UTR compreende ou
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260/542 consiste em uma sequência de ácido nucleico, que tem uma identidade de pelo menos cerca de 40%, preferencialmente de pelo menos cerca de 50%, preferencialmente de pelo menos cerca de 60%, preferencialmente de pelo menos cerca de 70%, mais preferencialmente de pelo menos cerca de 80%, mais preferencialmente de pelo menos cerca de 90%, ainda mais preferencialmente de pelo menos cerca de 95%, ainda mais preferencialmente de pelo menos 99% da sequência de ácido nucleico de acordo com a SEQ ID NO: 1368 ou SEQ ID NOs: 1412-1420 do pedido de patente WO2013/143700, ou com a sequência de RNA correspondente, ou em que pelo menos um elemento 5'-UTR compreende ou consiste em um fragmento de uma sequência de ácido nucleico, que tem uma identidade de pelo menos cerca de 40%, preferencialmente de pelo menos cerca de 50%, preferencialmente de pelo menos cerca de 60%, preferencialmente de pelo menos cerca de 70%, mais preferencialmente de pelo menos cerca de 80%,mais preferencialmente de pelo menos cerca de 90%, aindamais preferencialmente de pelo menos cerca de 95%, aindamais preferencialmente de pelo menos 99% da sequência de ácido nucleico de acordo com a SEQ ID NO: 1368 ou SEQ ID NOs: 1412-1420 do pedido de patente WO2013/143700, em que, preferencialmente, o fragmento é conforme descrito acima, ou seja, um trecho contínuo de nucleotídeos representando pelo menos 20%, etc. de 5'-UTR de comprimento total. De preferência, o fragmento apresenta um comprimento de pelo menos cerca de 20 nucleotídeos ou mais, de preferência de pelo menos cerca de 30 nucleotídeos ou mais, mais preferencialmente de pelo menos cerca de 40 nucleotídeos ou
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261/542 mais. Preferencialmente, o fragmento é um fragmento funcional conforme descrito no presente documento.
[0334] Consequentemente, em uma modalidade particularmente preferida, o elemento 5'-UTR compreende ou consiste em uma sequência de ácido nucleico, que tem uma identidade de pelo menos cerca de 40%, preferencialmente de pelo menos cerca de 50%, preferencialmente de pelo menos cerca de 60%, preferencialmente de pelo menos cerca de 70%, mais preferencialmente de pelo menos cerca de 80%, mais preferencialmente de pelo menos cerca de 90%, ainda mais preferencialmente de pelo menos cerca de 95%, ainda mais preferencialmente de pelo menos 99% da sequência de ácido nucleico de acordo com a SEQ ID NO: 224289 (5'-UTR da ATP5A1 com ausência do trato oligopirimidina 5'-terminal: GCGGCTCGGCCATTTTGTCCCAGTCAGTCCGGAGGCTGCGGCTGCAGAAGTACCGCCTG CGGAGTAACTGCAAAG; correspondendo com a SEQ ID NO: 224289 do pedido de patente WO2013/143700) ou preferencialmente com a sequência de RNA correespondente (SEQ ID NO: 224290), ou em que o pelo menos um elemento 5'-UTR compreende ou consiste em um fragmento da sequência de ácido nucleico, que tem uma identidade de pelo menos cerca de 40%, preferencialmente de pelo menos cerca de 50%, preferencialmente de pelo menos cerca de 60%, preferencialmente de pelo menos cerca de 70%, mais preferencialmente de pelo menos cerca de 80%, mais preferencialmente de pelo menos cerca de 90%, ainda mais preferencialmente de pelo menos cerca de 95%, ainda mais preferencialmente de pelo menos 99% da sequência de ácido nucleico de acordo com a SEQ ID NO: 224289 ou mais preferencialmente com uma sequência de RNA correspondente (SEQ ID NO: 224290), em que, preferencialmente, o fragmento
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262/542 é conforme descrito acima, ou seja, um trecho contínuo de nucleotídeos representando pelo menos 20%, etc. de 5'-UTR de comprimento total. De preferência, o fragmento apresenta um comprimento de pelo menos cerca de 20 nucleotídeos ou mais, de preferência de pelo menos cerca de 30 nucleotídeos ou mais, mais preferencialmente de pelo menos cerca de 40 nucleotídeos ou mais. Preferencialmente, o fragmento é um fragmento funcional conforme descrito no presente documento.
[0335] Preferencialmente, o pelo menos um elemento 5'-UTR e o pelo menos um elemento 3'-UTR atuam sinergicamente para aumentar a produção de proteína a partir de pelo menos uma sequência de mRNA tal como descrito acima.
[0336] De acordo com uma modalidade preferida, o composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA de acordo com a invenção compreende, de preferência, na direção 5' para 3':
a) uma estrutura 5'-GAP, preferencialmente mVGpppN;
b) opcionalmente, um elemento 5'-UTR que preferencialmente compreende ou consiste em uma sequência de ácido nucleico que é derivada a partir de um gene 5'-UTR ou TOP, mais preferencialmente compreendendo ou consistindo na sequência de RNA correspondente de uma sequência de ácido nucleico de acordo com a SEQ ID NO: 224287, conforme mostrado na SEQ ID NO: 224288, um homólogo, um fragmento ou uma variante da mesma;
c) pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos
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263/542 preferencialmente derivado a partir de uma proteína de um vírus influenza ou um vírus da Raiva, ou um fragmento ou variante da mesma, preferencialmente compreendendo ou consistindo em qualquer uma das sequências de ácido nucleico conforme divulgado na listagem de sequências tendo um identificador numérico <223> que inicia por sequência de CDS derivada e/ou modificada (wt) ou sequência de CDS
derivada e/ou modificada (optl), sequência de CDS
derivada e/ou modificada (opt2), sequência de CDS
derivada e/ou modificada (opt3), sequência de CDS
derivada e/ou modificada (opt4) ou sequência de CDS
derivada e/ou modificada (opt5) ou, , respectivamente,
coluna B ou coluna C das Tabelas 1- 5 ou Figuras 20 -24
do documento PCT/EP2016/075843, SEQ ID NOs: 32013-64024, ou SEQ ID NOs: 64025-224084, ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências,
d) opcionalmente, um elemento 3'-UTR que preferencialmente compreende ou consiste em uma sequência de ácido nucleico que é derivada a partir de um gene conferindo um mRNA estável, mais preferencialmente compreendendo ou consistindo na sequência de RNA correspondente de uma sequência de ácido nucleico de acordo com a SEQ ID NO: 224291, 224293, 224295, 224297, 224299, 224301 ou 224303, preferencialmente de acordo com a SEQ ID
NO: 224297 ou SEQ ID NO: 224303 ou um homólogo, um
fragmento ou uma variante da mesma; e) opcionalmente, uma sequência poli(A)
compreendendo, f) de preferência, opcionalmente, 64 adenosinas; e uma sequência poli (C)
compreendendo, de preferência, 30 citosinas.
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Haste-ansa de histona:
[0337] Em uma modalidade particularmente preferida, a sequência de mRNA do composto de mRNA de acordo com a invenção compreende uma sequência/estrutura de haste-ansa de histona. Tais sequências de haste-ansa de histona são preferencialmente selecionadas a partir de sequências de haste-ansa de histona conforme divulgado no documento W02012/019780, cuja divulgação é incorporada no presente documento por referência.
[0338] Uma sequência de haste-ansa de histona, adequada para ser usada na presente invenção, é preferencialmente selecionada a partir de pelo menos uma das seguintes fórmulas (V) ou (VI):
fórmula (V) (sequência de haste-ansa sem elementos limítrofes da haste):
[N0-2GN3-5] [ Nq-4 ( U/T ) Nq-4 ] [N3-5CN0-2] hastel ansa haste2 fórmula (VI) (sequência de haste-ansa com elementos limítrofes da haste):
Nl-6 [N0-2GN3-5] [ N0-4 (U/T ) N0-4 ] [N3-5CN0-2] Ni-g r-' '-------v-------''--------------v--------------' '-------v-------' '~r~> hastel haste 1 ansa haste 2 haste 2 elementoslimítrofes elementos limítrofes em que: os elementos limítrofes Ni-6 da hastel ou haste2 são uma sequência consecutiva de 1 a 6, preferencialmente de 2 a 6, mais preferencialmente de 2 a 5, ainda mais preferencialmente de 3 a 5, o mais preferencialmente de 4 a 5 ou 5 N, em que cada N é, independentemente uns dos
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265/542 outros, selecionado a partir de um nucleotídeo selecionado a partir de A, U, T, G e C, ou um análogo nucleotídico do mesmo;
hastel [No-2GN3_5] é complementarmente reverso ou parcialmente complementarmente reverso com o elemento haste2, e é uma sequência consecutiva entre 5 a 7 nucleotídeos ;
em que Nq-2 é uma sequência consecutiva de 0 a 2, preferencialmente de 0 a 1, mais preferencialmente de 1 N, em que cada N é, independentemente uns dos outros, selecionado a partir de um nucleotídeo selecionado a partir de A, U, T, G e C, ou um análogo nucleotídico do mesmo;
em que N3-5 é uma sequência consecutiva de 3 a 5, preferencialmente de 4 a 5, mais preferencialmente de 4 N, em que cada N é, independentemente uns dos outros, selecionado a partir de um nucleotídeo selecionado a partir de A, U, T, G e C, ou um análogo nucleotídico do mesmo, e em que G é guanosina ou um análogo da mesma, e pode ser opcionalmente substituído por uma citidina ou um análogo da mesma, desde que o seu nucleotídeo complementar citidina na haste2 seja substituído por guanosina;
a sequência de ansa [N0_4 (U/T) N0_4] está localizada entre os elementos hastel e haste2, e é uma sequência consecutiva de 3 a 5 nucleotídeos, mais preferencialmente de 4 nucleotídeos;
em que cada N0_4 é, independentemente uns dos outros, uma sequência consecutiva de 0 a 4, preferencialmente de 1 a 3, mais preferencialmente de 1 a 2 N, em que cada N é, independentemente uns dos outros,
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266/542 selecionado a partir de um nucleotídeo selecionado a partir de A, U, T, G e C, ou um análogo nucleotídico do mesmo; e em que U/T representa uridina, ou opcionalmente timidina;
haste2 [N3-5CNo-2] é complementarmente reverso ou parcialmente complementarmente reverso com o elemento hastel, e é uma sequência consecutiva entre 5 a 7 nucleotídeos;
em que N3-5 é uma sequência consecutiva de 3 a 5, preferencialmente de 4 a 5, mais preferencialmente de 4 N, em que cada N é, independentemente uns dos outros, selecionado a partir de um nucleotídeo selecionado a partir de A, U, T, G e C, ou um análogo nucleotídico do mesmo;
em que N0-2 é uma sequência consecutiva de 0 a 2, preferencialmente de 0 a 1, mais preferencialmente de 1 N, em que cada N é, independentemente uns dos outros, selecionado a partir de um nucleotídeo selecionado a partir de A, U, T, G ou C, ou um análogo nucleotídico do mesmo; e em que C é citidina ou um análogo da mesma, e pode ser opcionalmente substituído por uma guanosina ou um análogo da mesma, desde que o seu nucleosídeo complementar guanosina na hastel seja substituído por citidina;
em que hastel e haste2 são capazes de emparelhar bases umas com as outras formando uma sequência complementar reversa, em que o emparelhamento de bases pode ocorrer entre hastel e haste2, por exemplo, pelo emparelhamento de bases de Watson-Crick dos nucleotídeos A e U/T ou G e C ou por emparelhamento não Watson-Crick de bases por exemplo, emparelhamento de bases oscilantes, emparelhamento de bases
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267/542 reverso de Watson-Crick, emparelhamento de bases de Hoogsteen, emparelhamento de bases reverso de Hoogsteen ou são capazes de emparelhar bases umas com as outras formando uma sequência complementar parcialmente reversa, em que pode ocorrer um emparelhamento de bases incompleto entre hastel e haste2, com base em que uma ou mais bases em uma haste não tem uma base complementar na sequência complementar reversa da outra haste.
[0339] De acordo com uma modalidade adicional preferida, a sequência de mRNA da invenção do composto de mRNA pode compreender pelo menos uma sequência de hasteansa de histona de acordo com pelo menos uma das seguintes fórmulas especificas (Va) ou (Via):
fórmula (Va) (sequência de haste-ansa sem elementos limítrofes da haste):
[N0-1GN3-5] [ Ni-3 ( U/T ) Nq-2 ] [N3-5CN0-1] '----------v----------' '-------------------v-------------------' '----------y---------hastel ansa haste2 fórmula (Via) (sequência de haste-ansa com elementos limítrofes da haste):
N2-5 [N0-1GN3-5] [ Ní-3 (U/T ) N0-2 ] [N3-5CN0-1] N2-5 hastel hastel ansa haste2 haste2 elementoslimítrotes elementos limítrofes em que: N, C, G, T e U são conforme definidos acima.
[0340] De acordo com uma modalidade adicional particularmente mais preferida, o pelo menos um mRNA do composto da invenção pode compreender pelo menos uma
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268/542 sequência de haste-ansa de histona de acordo com pelo menos uma das seguintes fórmulas específicas (Vb) ou (VIb):
fórmula (Vb) (sequência de haste-ansa sem elementos limítrofes da haste):
[NiGN4] [N2(U/T)Ni] [N4CNi] hastel ansa haste2 fórmula (VIb) (sequência de haste-ansa com elementos limítrofes da haste):
N4-5 [NiGN4] [N2(U/T)Ni] [N4CNi] N4_5 hastel hastel ansa haste2 haste2 elementos limítrofes elementos limítrofes em que:
N, C, G, T e U são conforme definidos acima.
[0341] Uma sequência de haste-ansa de histona preferida particular é a sequência CAAAGGCTCTTTTCAGAGCCACCA (de acordo com a SEQ ID NO: 224305) ou mais preferencialmente a sequência de RNA correspondente CAAAGGCUCUUUUCAGAGCCACCA (de acordo com a SEQ ID NO: 224306).
[0342] Qualquer uma das modificações acima pode ser aplicada ao composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA da presente invenção e adicionalmente a qualquer mRNA conforme usado no contexto da presente invenção e podem ser, se adequado ou necessário, combinadas umas com as outras em qualquer combinação, desde que essas combinações de modificações não interfiram umas com as outras na respectiva sequência de mRNA. Um perito na técnica será capaz de fazer a sua escolha em conformidade.
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269/542 [0343] O composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA de acordo com a invenção, que compreende pelo menos uma região de codificação conforme definido no presente documento, pode compreender preferencialmente um 5'-UTR e/ou um 3'-UTR contendo, preferencialmente, pelo menos uma haste-ansa de histona. O 3'-UTR da sequência de mRNA de acordo com a invenção, preferencialmente, também compreende uma sequência poli(A) e/ou poli(C), conforme definido no presente documento. Os elementos individuais do 3'-UTR podem ocorrer no mesmo em qualquer ordem de 5' para 3' ao longo da sequência da sequência de mRNA da presente invenção. Adicionalmente, elementos adicionais, conforme descrito no presente documento, também podem estar contidos, tais como uma sequência estabilizadora conforme definido no presente documento (por ex., derivada do UTR de um gene de globina) , sequências IRES, etc. Cada um dos elementos também pode ser repetido na sequência de mRNA de acordo com a invenção, pelo menos uma vez (particularmente em construtos di- ou multicistrônicos), de preferência duas vezes ou mais. Como um exemplo, os elementos individuais podem estar presentes na sequência de mRNA de acordo com a invenção na seguinte ordem:
5' - região de codificação - haste-ansa de histona - sequência poli(A)/(C) - 3'; ou
5' - região de codificação - sequência poli(A)/(C) - haste-ansa de histona - 3'; ou
5' - região de codificação - haste-ansa de histona - sinal de poliadenilação - 3'; ou
5' - região de codificação - sinal de poliadenilação - haste-ansa de histona - 3'; ou
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270/542
5' - região de codificação - haste-ansa de histona - haste-ansa de histona - sequência poli(A)/(C) 3 ' ; ou
5' - região de codificação - haste-ansa de histona - haste-ansa de histona - sinal de poliadenilação 3 ' ; ou
5' - região de codificação - sequência de estabilização - sequência poli(A)/(C) - haste-ansa de histona - 3'; ou
5' - região de codificação - sequência de estabilização - sequência poli(A)/(C) - sequência poli(A)/(C) - haste-ansa de histona - 3'; etc.
[0344] De acordo com uma modalidade adicional, o composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA da presente invenção compreende preferencialmente pelo menos um dos seguintes elementos estruturais: um elemento de região não traduzida 5'- e/ou 3' (elemento UTR), particularmente um elemento 5'-UTR, que preferencialmente compreende ou consiste em uma sequência de ácido nucleico que é derivada do 5'-UTR de um gene TOP ou de um fragmento, homólogo ou uma variante do mesmo, ou um elemento 5'- e/ou 3'-UTR que pode, preferencialmente, ser derivado a partir de um gene que confere um mRNA estável ou a partir de um homólogo, fragmento ou variante do mesmo; uma estrutura de haste-ansa de histona, de preferência uma haste-ansa de histona na sua região 3' não traduzida; uma estrutura 5'CAP; uma cauda poli-A; ou uma sequência poli(C).
[0345] Em uma modalidade o composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA compreende, de preferência, na direção 5' para 3':
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271/542
a) uma estrutura 5'-GAP, preferencialmente
m7GpppN; b) pelo menos uma região de codificação
codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos,
c) opcionalmente, um elemento 3'-UTR, compreendendo ou consistindo em uma sequência de ácido nucleico que é derivada a partir de um gene de alfa globina, preferencialmente compreendendo a sequência de RNA correspondente à sequência de ácido nucleico de acordo com a SEQ ID NO: 224291, 224293, ou 224297, preferencialmente de acordo com a SEQ ID NO: 224297, ou um homólogo, um fragmento ou uma variante da mesma;
d) opcionalmente, uma sequência poli(A) compreendendo, de preferência, 64 adenosinas;
e) opcionalmente, uma sequência poli(C) compreendendo, de preferência, 30 citosinas; e
f) opcionalmente, uma haste-ansa de histona, preferencialmente compreendendo a sequência de RNA de acordo com a SEQ ID NO: 224306.
[0346] Em uma modalidade particularmente preferida, o composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA compreende, de preferência, na direção 5' para 3':
a) uma estrutura 5'-GAP, preferencialmente m7GpppN;
b) pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de uma proteína de um vírus influenza ou vírus da raiva ou um fragmento ou variante da mesma, preferencialmente compreendendo ou consistindo em qualquer uma das sequências de ácido nucleico conforme divulgado na
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272/542 listagem de sequências tendo um identificador numérico
<223> que inicia por sequência de CDS derivada e/ou
modificada (wt) ou sequência de CDS derivada e/ou
modificada (optl) Π T r 'sequência de CDS derivada e/ou
modificada (opt2) Π Π r sequência de CDS derivada e/ou
modificada (opt3) Π T r 'sequência de CDS derivada e/ou
modificada (opt4) OU sequência de CDS derivada e/ou
modificada (opt5) OU , respectivamente, coluna B ou
coluna C das Tabelas 1-5 ou Figuras 20- 24 do documento
PCT/EP2016/ 075843, SEQ ID NOs: 32013-64024, ou SEQ ID NOs:
64025-224084, ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências,
c) opcionalmente, um elemento 3'-UTR, compreendendo ou consistindo em uma sequência de ácido nucleico que é derivada a partir de um gene de alfa globina, preferencialmente compreendendo a sequência de RNA correspondente à sequência de ácido nucleico de acordo com a SEQ ID NO: 224291, 224293, ou 224297, preferencialmente de acordo com a SEQ ID NO: 224297, ou um homólogo, um fragmento ou uma variante da mesma;
d) opcionalmente, uma sequência poli(A) compreendendo, de preferência, 64 adenosinas;
e) opcionalmente, uma sequência poli(C) compreendendo, de preferência, 30 citosinas; e
f) opcionalmente, uma haste-ansa de histona, preferencialmente compreendendo a sequência de RNA de acordo com a SEQ ID NO: 224306.
[0347] De acordo com outra modalidade particularmente preferida, o composto de mRNA compreendendo
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273/542 uma sequência de mRNA de acordo com a invenção compreende, de preferência, na direção 5' para 3':
a) uma estrutura 5'-GAP, preferencialmente m7GpppN;
b) um elemento 5'-UTR que compreende ou consiste em uma sequência de ácido nucleico que é derivada a partir de um gene 5'-UTR ou TOP, preferencialmente compreendendo
ou consistindo na sequência de RNA correspondente de uma
sequência de ácido nucleico de aco rdo com a SEQ TD NO:
224287 ou SEQ ID NO : 224289 conforme mostrado na SEQ TD NO:
224288 ou SEQ ID NO: 224290, um homólogo, um fragmento ou uma variante da mesma;
c) pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos preferencialmente derivado a partir de uma proteína de um vírus influenza ou um vírus da Raiva, ou um fragmento ou variante da mesma, preferencialmente compreendendo ou consistindo em qualquer uma das sequências de ácido nucleico conforme divulgado na listagem de sequências tendo um identificador numérico <223> que inicia por sequência de CDS derivada e/ou modificada (wt) ou sequência de CDS
derivada e/ou modificada (optl), sequência de CDS
derivada e/ou modificada (opt2), sequência de CDS
derivada e/ou modificada (opt3), sequência de CDS
derivada e/ou modificada (opt4) ou sequência de CDS
derivada e/ou modificada (opt5) ou, , respectivamente,
coluna B ou coluna C das Tabelas 1- 5 ou Figuras 20 -24
do documento PCT/EP2016/075843, SEQ TD NOs: 32013-64024, ou
SEQ TD NOs: 64025-224084, ou de um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências,
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d) opcionalmente, um elemento 3'-UTR compreendendo ou consistindo em uma sequência de ácido nucleico que é derivada a partir de um gene conferindo um mRNA estável, mais preferencialmente compreendendo ou consistindo na sequência de RNA correspondente de uma sequência de ácido nucleico de acordo com a SEQ ID NO: 224301 ou SEQ ID NO: 224303 conforme mostrado na SEQ ID NO: 224302 ou SEQ ID NO: 224304, um homólogo, um fragmento ou uma variante da mesma;
e) opcionalmente, uma sequência poli(A) compreendendo, de preferência, 64 adenosinas;
f) opcionalmente, uma sequência poli(C) compreendendo, de preferência, 30 citosinas; e
g) opcionalmente, uma haste-ansa de histona, preferencialmente compreendendo a sequência de RNA de acordo com a SEQ ID NO: 224306.
[0348] Em modalidades particularmente preferidas, o composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA de acordo com a invenção compreende as seguintes sequências de mRNA (ou sequências de RNA sendo idênticas ou pelo menos 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99%, idênticas com as seguintes sequências de RNA) :
Influenza A HA:
- mRNA codificando a proteína HA da influenza A/Vietnã/1194/2004 (H5N1), de acordo com as SEQ ID NOs: 224198-224201, 224203-224210.
- mRNA codificando a proteína HA da influenza A/Hong Kong/4801/2014 (H3N2), de acordo com as SEQ ID NOs: 224181-224194.
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275/542
- mRNA codificando a proteína HA da influenza A/Paises Baixos/602/2009 (H1N1), de acordo com as SEQ ID NOs: 224163-224175.
- mRNA codificando a proteína HA da influenza A/Califórnia/07/2009 (H1N1), de acordo com as SEQ ID NOs: 224117-224126, 224129, 224130, 224131, 224132
- mRNA codificando a proteína HA da influenza A/Michigan/45/2015 (H1N1) vírus tipo pdm09 de acordo com as SEQ ID NOs: 224133-224142-224162.
Influenza B HA:
- mRNA codificando a proteína HA da influenza B/Phuket/3037/2013 de acordo com as SEQ ID NOs: 224246224255, 224256, 224257.
- mRNA codificando a proteína HA da influenza B/Brisbane/60/2008 (GI: 223950973; FJ766840.1) de acordo com as SEQ ID NOs: 224236-224245.
Influenza A NA:
- mRNA codificando a proteína NA da influenza A/Califórnia/07/2009 (H1N1), de acordo com as SEQ ID NOs: 224319-224323.
- mRNA codificando a proteína NA da influenza A/Michigan/45/2015 (H1N1) vírus tipo pdm09 de acordo com as SEQ ID NOs: 224324-224325.
- mRNA codificando a proteína NA da influenza A/Países Baixos/602/2009 (H1N1), de acordo com as SEQ ID NOs: 224326-224335.
- mRNA codificando a proteína NA da influenza A/Hong Kong/4801/2014 (H3N2), de acordo com as SEQ ID NOs: 224336-224339.
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276/542
- mRNA codificando a proteína NA da influenza
A/Vietnã/1194/2004 (H5N1), de acordo com as SEQ ID NOs:
224342-224343 .
- mRNA codificando a proteína NA da influenza
A/Vietnã/1203/2004 (H5N1), de acordo com as SEQ ID NOs:
224344-224345.
Influenza B NA:
mRNA codificando a proteína NA da gripe B/Brisbane/60/2008 (GI: 223950973; FJ766840.1) de acordo com as SEQ ID NOs: 224348-224349.
- mRNA codificando a proteína NA da influenza
B/Phuket/3037/2013 de acordo com as SEQ ID NOs: 224350-
224351. [0349] As sequências de mRNA ma is preferidas
incluem: [0350] Uma sequência de mRNA compreendendo
pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de hemaglutinina (HA) de um vírus influenza A de acordo com as SEQ ID NOs: 1-14031, ou um fragmento ou variante da mesma.
[0351] Uma sequência de mRNA sendo idêntica ou pelo menos 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica com a sequência de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 3201346043, 64025-78055, 224085-224106, 96037-110067, 128049142079, 160061-174091, 192073-206103 ou um fragmento ou variante das mesmas.
[0352] Uma sequência de mRNA compreendendo pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de
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277/542 hemaglutinina (HA) de um virus influenza B de acordo com as SEQ ID NOs: 26398-28576, ou um fragmento ou variante da mesma .
[0353] Uma sequência de mRNA sendo idêntica ou pelo menos 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica com a sequência de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 5841060588, 90422-92600, 224107-224112, 122434-124612, 154446156624, 186458-188636, 218470-220648 ou um fragmento ou variante das mesmas.
[0354] Uma sequência de mRNA compreendendo pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de neuraminidase (NA) de um vírus influenza A de acordo com as SEQ ID NOs: 14032-26397, 224309, ou 224310 ou um fragmento ou variante da mesma.
[0355] Uma sequência de mRNA sendo idêntica ou pelo menos 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica com a sequência de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 110068122433, 78056-90421, 224113, 224313-224317, 110068-122433, 142080-154445, 174092-186457, 206104-218469 ou um fragmento ou variante das mesmas.
[0356] Uma sequência de mRNA compreendendo pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de neuraminidase (NA) de um vírus influenza B de acordo com as SEQ ID NOs: 28577-30504, ou um fragmento ou variante da mesma.
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278/542 [0357] Uma sequência de mRNA sendo idêntica ou pelo menos 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica com as sequências de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 60589-62516, 92601-94528, 124613-126540, 156625-158552, 188637-190564, 220649-222576 ou um fragmento ou variante das mesmas.
[0358] Uma sequência de mRNA compreendendo pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado da glicoproteina G (RAV-G, RAVBV-G ou RABV-G), nucleoproteina N (RAV-N), fosfoproteína P (RAV-P), proteína de matriz M (RAV-M) ou RNA polimerase L (RAV-L) de um vírus da Raiva ou um fragmento, variante do mesmo.
[0359] Uma sequência de mRNA compreendendo pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado da glicoproteina G (RAV-G, RAVBV-G ou RABV-G) de um vírus da raiva de acordo com as SEQ ID NOs: 30505-32012, ou um fragmento ou variante das mesmas.
[0360] Uma sequência de mRNA compreendendo pelo menos uma sequência de RNA selecionada a partir de sequências de RNA sendo idênticas ou pelo menos 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idênticas com as sequências de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 62517-64024, 224270, 224274, 94529-96036, 224271-224273, 126541-128048, 158553160060, 190565-192072, 222577-224084 ou um fragmento ou variante das mesmas.
Peptídeos de sinal:
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279/542 [0361] De acordo com outra modalidade particularmente preferida, a sequência de mRNA de acordo com a invenção pode adicionalmente ou alternativamente codificar um peptídeo sinal de secreção. Tais peptídeos de sinal são sequências, que tipicamente exibem um comprimento de cerca de 15 a 30 aminoácidos e estão, preferencialmente, localizadas no terminal N do peptídeo codificado, sem estarem limitadas pelo mesmo. Os peptídeos de sinal, conforme definido no presente documento, preferencialmente permitem o transporte do antigeno, proteína antigênica ou peptídeo antigênico conforme codificado pela pelo menos uma sequência de mRNA em um compartimento celular definido, preferencialmente a superfície celular, o retículo endoplasmático (ER) ou o compartimento endossomallisossomal. Exemplos de sequências peptídicas de sinal de secreção conforme definido no presente documento incluem, sem estarem limitadas a essas, sequências de sinal de moléculas MHC clássicas ou não clássicas (por ex. sequências de sinal de moléculas de MHC I e II, por ex., da molécula MHC de classe I HLA-A*0201), sequências de sinal de citocinas ou imunoglobulinas conforme definido no presente documento, sequências de sinal da cadeia invariante de imunoglobulinas ou anticorpos conforme definido no presente documento, sequências de sinal de Lampl, Tapasin, Erp57, Calretinicina, Calnexina e outras proteínas associadas a membranas ou de proteínas associadas com o retículo endoplasmático (ER) ou o compartimento endossomal-lisossomal. Mais preferencialmente, as sequências de sinal da molécula de MHC de classe I HLAA*0201 podem ser usadas de acordo com a presente invenção.
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Por exemplo, um peptídeo de sinal derivado a partir de HLAA é preferencialmente usado de modo a promover a secreção do antígeno codificado conforme definido no presente documento ou um fragmento ou variante do mesmo. De um modo mais preferido, um peptídeo de sinal de HLA-A é fundido com um antígeno codificado, conforme definido no presente documento, ou um fragmento ou variante do mesmo.
Produção de mRNA:
[03 62] O mRNA de acordo com a presente invenção pode ser preparado usando qualquer modo conhecido na técnica, incluindo métodos sintéticos, tais como, por exemplo, síntese de RNA em fase sólida, bem como métodos in vitro, tais como reações de transcrição in vitro em RNA, particularmente conforme descrito nos exemplos.
[0363] Como referido, o composto de mRNA de acordo com a invenção está encapsulado na, ou associado a, uma nanopartícuia lipídica.
[0364] O termo nanopartícuia lipídica, também referido como LNP, se refere a uma partícula tendo pelo menos uma dimensão na ordem dos nanômetros (por exemplo, 1-1.000 nm) que inclui um ou mais lipídeos, por exemplo um lipídeo de Fórmula (I), (II) ou (III) . Em algumas modalidades, tais nanopartícuias lipídicas compreendem um lipídeo catiônico (por exemplo, um lipídeo de Fórmula (I), (II) ou (III)) e um ou mais excipientes selecionados a partir de lipídeos neutros, lipídeos carregados, lipídeos esteroides e conjugados de polímero (por ex., um lipídeo peguilado tal como um lipídeo peguilado de fórmula (IV)). Em algumas modalidades, o mRNA, ou uma porção do mesmo, é encapsulado na porção lipídica da
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281/542 nanopartícuia lipidica ou um espaço aquoso envolvido por alguma ou pela totalidade da porção lipidica da nanopartícuia lipidica, protegendo-a, desse modo, da degradação enzimática ou outros efeitos indesejáveis induzidos pelos mecanismos do organismo hospedeiro ou células, por exemplo, uma resposta imunitária adversa. Em algumas modalidades, o mRNA ou uma porção desse está associado com as nanopartícuias lipídicas.
[0365] No contexto da presente invenção, as nanopartícuias lipídicas não estão restritas a qualquer morfologia particular, e devem ser interpretadas de modo a incluir qualquer morfologia gerada quando um lipídeo catiônico e opcionalmente um ou mais lipídeos adicionais são combinados, por exemplo, em um meio aquoso e/ou na presença de um composto de ácido nucleico. Por exemplo, um lipossoma, um complexo lipídico, um lipoplexo e semelhantes estão dentro do âmbito de uma nanopartícuia lipidica.
[0366] Em várias modalidades, as nanopartícuias lipídicas têm um diâmetro médio de cerca de 30 nm a cerca de 150 nm, de cerca de 40 nm a cerca de 150 nm, de cerca de 50 nm a cerca de 150 nm, de cerca de 60 nm a cerca de 130 nm, de cerca de 70 nm a cerca de 110 nm, de cerca de 70 nm a cerca de 100 nm, de cerca de 80 nm a cerca de 100 nm, de cerca de 90 nm a cerca de 100 nm, de cerca de 70 a cerca de 90 nm, de cerca de 80 nm a cerca de 90 nm, de cerca de 70 nm a cerca de 80 nm, ou cerca de 30 nm, 35 nm, 40 nm, 45 nm, 50 nm, 55 nm, 60 nm, 65 nm, 70 nm, 75 nm, 80 nm, 8 5 nm, 90 nm, 95 nm, 100 nm, 105 nm, 110 nm, 115 nm, 120 nm, 125 nm, 130 nm, 135 nm, 140 nm, 145 nm ou 150 nm, e são substancialmente não tóxicas. Em certas modalidades, o
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282/542 mRNA, quando presente nas nanoparticulas lipídicas, é resistente em solução aquosa à degradação com uma nuclease. Conforme usado no presente documento, o diâmetro médio pode ser representado pela média z conforme determinado por dispersão de luz dinâmica.
[0367] Um LNP pode compreender qualquer lipídeo capaz de formar uma partícula à qual a uma ou mais moléculas de ácido nucleico estão ligadas, ou em que uma ou mais moléculas de ácido nucleico estão encapsuladas. O termo lipídeo se refere a um grupo de compostos orgânicos que são derivados de ácidos graxos (por exemplo, ésteres) e são geralmente caracterizados por serem insolúveis em água mas solúveis em muitos solventes orgânicos. Os lipídeos são geralmente divididos em pelo menos três classes: (1) lipídeos simples, que incluem gorduras e óleos, bem como ceras; (2) lipídeos compostos que incluem fosfolipídeos e glicolipídeos; e (3) lipídeos derivados tais como esteroides.
[0368] Em uma modalidade, a LNP compreendendo mRNA compreende um ou mais lipídeos catiônicos, conforme definido no presente documento, e um ou mais lipídeos estabilizadores. Os lipídeos estabilizadores incluem lipídeos neutros e lipídeos peguilados.
[0369] Conforme mencionado, a LNP compreende um lipídeo catiônico. O lipídeo catiônico é de preferência cationizável, isto é, torna-se protonado à medida que o pH é diminuído abaixo do pKa do grupo ionizável do lipídeo, mas é progressivamente mais neutro a valores de pH mais elevados. Quando carregado positivamente, o lipídeo é então capaz de se associar com ácidos nucleicos carregados
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283/542 negativamente. Em certas modalidades, o lipídeo catiônico compreende um lipídeo zwitteriônico que assume uma carga positiva na diminuição do pH. A LNP pode compreender qualquer lipídeo capaz de formar uma partícula à qual a uma ou mais moléculas de ácido nucleico estão ligadas, ou em que uma ou mais moléculas de ácido nucleico estão encapsuladas.
[0370] Em certas modalidades, a LNP pode compreender qualquer lipídeo catiônico ou cationizável adicional, isto é, qualquer de um número de espécies lipídicas que possuem uma carga positiva líquida a um pH seletivo, tal como pH fisiológico. Tais lipídeos incluem, mas não estão limitados a, cloreto de N,N-dioleil-N,Ndimetilamônio (DODAC); cloreto de N-(2,3dioleiloxi)propil)-N,N,N-trimetilamônio (DOTMA); Brometo de N,N-diestearil-N,N-dimetilamônio (DDAB); Cloreto de N(2,3dioleoiloxi)propil)-N,N,N-trimetilamônio (DOTAP); 3-(N(N',N'-dimetilaminoetano)-carbamoil)colesterol (DC-Chol), trifluoracetato de N-(1-(2,3-dioleoiloxi)propil)N-2(espermitacarboxamido)etil)-N,N-dimetilamônio (DOSPA), carboxispermina de dioctadecilamidoglicila (DOGS), propano de 1,2-dioleoil-3-dimetilamônio (DODAP), N, N-dimetil-2,3dioleoiloxi)propilamina (DODMA), e brometo de N-(l,2dimiristiloxiprop-3-il)-N,N-dimetil-N-hidroxietilamônio (DMRIE).
[0371] Adicionalmente, estão disponíveis várias preparações comerciais de lipídeos catiônicos que podem ser usados na presente invenção. Esses incluem, por exemplo, LIPOFECTIN® (lipossomas catiônicos disponíveis comercialmente compreendendo DOTMA e 1,2-dioleoil-sn-3
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284/542 fosfoetanolamina (DOPE), a partir da GIBCO/BRL, Grand Island, NI); LIPOFECTAMINE® (lipossomas catiônicos comercialmente disponíveis compreendendo trifluoroacetato de N-(l-(2,3-dioleiloxi)prop!1)-N-(2(espermocarboxamido)etil)-N,N-dimetilamônio (DOSPA) e (DOPE), a partir da GIBCO/BRL); e TRANSFECTAM® (lipídeos catiônicos comercialmente disponíveis compreendendo carboxiespermina de dioctadecilamidoglicila (DOGS) em etanol a partir de Promega Corp., Madison, Wis.). Os seguintes lipídeos são catiônicos e têm uma carga positiva abaixo do pH fisiológico: DODAP, DODMA, DMDMA, 1,2dilinoleiloxi-N,N-dimetilaminopropano (DLinDMA), 1,2dilinoleniloxi-N,N-dimetilaminopropano (DLenDMA).
[0372] Em uma modalidade, o lipídeo catiônico adicional é um aminoácido lipídico. Os lipídeos amino adequados úteis na invenção incluem aqueles descritos no documento W02012/016184, incorporados no presente documento na sua totalidade por referência. Os lipídeos amino representativos incluem, mas não estão limitados a, 1,2dilinoleoxi-3-(dimetilamino)acetoxipropano (DLin-DAC), 1,2dilinoleioxi-3-morfolinopropano (DLin-MA), 1,2-dilinoleoil3-dimetilaminopropano (DLinDAP), 1,2-dilinoleil-tio-3dimetilaminopropano (DLin-S-DMA), l-linoleoil-2linoleiloxi-3-dimetilaminopropano (DLin-2-DMAP), sal de cloreto de 1,2-dilinoleiloxi-3-trimetilaminopropano (DLinTMA.C1), sal de cloreto de 1,2-dilinoleoil-3trimetilaminopropano (DLin-TPA.Cl) , 1,2-dilinoleiloxi-3-(Nmetilpiperazino)propano (DLin-MPZ), 3-(N,Ndilinoleilamino)-1,2-propanodiol (DLinAP), 3-(N,Ndioleilamino)-1,2-propanodiol (DOAP), 1,2-dilinoleiloxo-3Petição 870190039457, de 26/04/2019, pág. 307/744
285/542 (2-N, N-dimetilamino)etoxipropano (DLin-EG-DMA) e 2,2dilinoleil-4-dimetilaminometil-[1,3]-dioxolano (DLin-KDMA) . [0373] Lipideos amino adequados incluem aqueles que têm a fórmula:
Figure BR112019008481A2_D0004
em que Ri e R2 ou são a mesma ou diferente alquila Cio_C24 independentemente opcionalmente substituída, alquenila Ci0-C24 opcionalmente substituída, alquinila Ci0-C24 opcionalmente substituída ou acila Cio-C24 opcionalmente substituída;
R3 e R4 ou são a mesma ou diferente alquila Ci-C6 independentemente opcionalmente substituída, alquenila C2C6 opcionalmente substituída, ou alquinila C2-C6 opcionalmente substituída, ou R3 e R4 podem se juntar para formar um anel heterocíclico opcionalmente substituído de 4 a 6 átomos de carbono e 1 ou 2 heteroátomos escolhidos de entre nitrogênio e oxigênio;
Rs ou está ausente ou presente e, quando presente é hidrogênio ou alquila Ci-Ce ; m, n, e p ou são iguais ou diferentes e independentemente 0 ou 1 com a condição de m, n e p não serem simultaneamente 0; q é 0, 1, 2, 3 ou 4; e
Y e Z ou são iguais ou diferentes e independentemente O, S ou NH. Em uma modalidade, Ri e R2 são cada um linoleila, e o lipídeo amino é um lipídeo amino de
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286/542 dilinoleila. Em uma modalidade, o lipideo amino é um lipídeo amino de dilinoleila.
[0374] Um lipídeo amino de dilinoleila útil representativo tem a fórmula:
Figure BR112019008481A2_D0005
DIJn-K-DM. em que néO, 1, 2, 3 ou 4.
[0375] Em uma modalidade, o lipídeo catiônico é um DLin-K-DMA. Em uma modalidade, o lipídeo catiônico é DLin-KC2-DMA (DLin-K-DMA acima, em que n é 2).
Em uma modalidade, a LNP compreende (i) um componente lipídeo catiônico de Fórmula (I) :
Figure BR112019008481A2_D0006
conforme definido abaixo ou um sal, tautômero, pró-fármaco ou estereoisômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, e (ii) um composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptideo ou proteína antigênicos, em que o composto de mRNA está encapsulado na, ou associado à, referida nanopartícuia lipídica. Em relação ao composto de mRNA, à sequência de
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287/542 mRNA e ao peptídeo ou proteína antigênicos, é feita referência à descrição dessas características incluindo as respectivas opções e preferências acima. Em uma das modalidades preferidas, o composto de mRNA não compreende uma modificação de nucleosídeos. Noutra modalidade, não compreende modificação de base. Em uma modalidade adicional, não compreende uma modificação de 1metilpseudouridina. Em uma modalidade adicional, o composto de mRNA apenas compreende os nucleosídeos naturais adenina, guanina, citosina e uracila. Além disso, se o lipídeo catiônico for o composto 1-6 conforme definido abaixo, a nanopartícuia lipídica não é uma nanopartícuia lipídica compreendendo o composto 1-6, DSPC, colesterol e o lipídeo PEG de fórmula (IVa) em uma razão de cerca de 50:10:38.5:1.5 que encapsula mRNA não modificado, modificado por 1-metilpseudouridina ou otimizado quanto a códon codificando uma hemaglutinina de influenza PR8 ou Cal/7/2009 ou uma proteína de invólucro R3A independente de CD4 de HIV-1.
[0376] Em relação à Fórmula (I): L e L cada um, independentemente, -O(C=O)-, (C=O)O- ou uma ligação dupla de carbono-carbono;
Rla e Rlb são, em cada ocorrência, independentemente quer (a) H ou alquila C1-C12, ou (b) Rla é H ou alquila C1-C12, e Rlb em conjunto com o átomo de carbono ao qual está ligado é tomado em conjunto com um Rlb adjacente e o átomo de carbono ao qual está ligado de modo a formar uma ligação dupla carbono-carbono;
R2a e R2b são, em cada ocorrência, independentemente quer (a) H ou alquila C1-C12, ou (b) R2a é
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H ou alquila C1-C12, e R2b em conjunto com o átomo de carbono ao qual está ligado é tomado em conjunto com um R2b adjacente e o átomo de carbono ao qual está ligado de modo a formar uma ligação dupla carbono-carbono;
R3a e R3b são, em cada ocorrência, independentemente quer (a) H ou alquila C1-C12, ou (b) R3a é H ou alquila C1-C12, e R3b em conjunto com o átomo de carbono ao qual está ligado é tomado em conjunto com um R3b adjacente e o átomo de carbono ao qual está ligado de modo a formar uma ligação dupla carbono-carbono;
R4a e R4b são, em cada ocorrência, independentemente quer (a) H ou alquila C1-C12, ou (b) R4a é H ou alquila C1-C12, e R4b em conjunto com o átomo de carbono ao qual está ligado é tomado em conjunto com um R4b adjacente e o átomo de carbono ao qual está ligado de modo a formar uma ligação dupla carbono-carbono;
R5 e R6 são cada um, independentemente, metila ou cicloalquila;
R7 é, em cada ocorrência, independentemente H ou alquila C1-C12;
R8 e R9 são cada um, independentemente, alquila C1-C12; ou R8 e R9 em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados, formam um anel heterocíclico de 5, 6 ou 7 membros compreendendo um átomo de nitrogênio;
a e d são cada um, independentemente, um número inteiro de 0 a 24;
b e c são cada um, independentemente, um número inteiro de 1 a 24; e e é 1 ou 2.
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289/542 [0377] Em determinadas modalidades de Fórmula (I), pelo menos um de Rla, R2a, R3a ou R4a é alquila C1-C12, ou, pelo menos, um de L ou L e -O(C=O)- ou -(C=O)O-. Em outras modalidades, Rla e Rlb não são isopropila quando a é 6 ou n-butila quando a é 8.
[0378] Em modalidades ainda adicionais de Fórmula (I), pelo menos um de Rla, R2a, R3a ou R4a é alquila C1-C12, ou, pelo menos, um de L ou L e -O(C=O)- ou (C=O)O-; e
Rla e Rlb não são isopropila quando a é 6 ou n butila quando a é 8.
[0379] Em outras modalidades de Fórmula (I), R8 e R9 são cada um, independentemente, alquila C1-C12; ou R8 e R9 em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados, formam um anel heterocíclico de 5, 6 ou 7 membros compreendendo um átomo de nitrogênio;
Em determinadas modalidades de Fórmula (I),
Ί 2 qualquer um de L ou L pode ser -0(C=0)- ou uma ligação
dupla carbono-carbono. L e L podem, cada um, ser -0(C=0)-
ou podem, cada um, ser uma ligação dupla de carbono-
carbono.
[0380] Em algumas modalidades de Fórmula (I),
Ί 2 um de L ou L e -O(C=O)-. Em outras modalidades de Formula (I), ambos L1 e L2 são -O(C=O)-.
[0381] Em algumas modalidades de Fórmula (I), um de L ou L e -(C=O)O-. Em outras modalidades de Formula (I), ambos L1 e L2 são -(C=O)O-.
[0382] Em algumas outras modalidades de Formula (I), um de L ou L e uma ligação dupla carbonoPetição 870190039457, de 26/04/2019, pág. 312/744
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Ί2 carbono. Em outras modalidades, ambos L e L são uma ligação dupla carbono-carbono.
[0383] Em ainda outras modalidades de Fórmula
Ί ο12 (I), um de L ou L e -O(C=O)- e o outro de L ou L e 12 (C=O)O-. Em mais modalidades, um de L ou L e -O(C=O)- e o outro de L ou L e uma ligação dupla carbono-carbono. Em ainda mais modalidades, um de L ou L e -(C=O)O- e o outro de L ou L e uma ligação dupla carbono-carbono.
[0384] É entendido que a ligação dupla carbono-carbono, conforme usada ao longo da especificação, se refere a uma das seguintes estruturas:
Figure BR112019008481A2_D0007
em que Ra e Rb são, em cada ocorrência, independentemente, H ou um substituinte. Por exemplo, em algumas modalidades, Ra e Rb são, em cada ocorrência, independentemente, H, alquila C1-C12 ou cicloalquila, por exemplo, H ou alquila C1-C12.
[0385] Noutras modalidades, os compostos lipídicos de Fórmula (I) têm a seguinte estrutura (Ia):
Figure BR112019008481A2_D0008
R9 (Ia) [0386] Noutras modalidades, os compostos lipídicos de Fórmula (I) têm a seguinte estrutura (Ib):
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O R2a R3a Ο
Figure BR112019008481A2_D0009
R9 (lb) [0387] Ainda noutras modalidades, os compostos lipidicos de Fórmula (I) têm a seguinte estrutura (Ic):
Figure BR112019008481A2_D0010
[0388] Em certas modalidades do composto lipidico de Fórmula (I), a, b, c e d são cada um, independentemente, um número inteiro de 2 a 12 ou um número inteiro de 4 a 12. Em outras modalidades, a, b, c e d são cada um, independentemente, um número inteiro de 8 a 12 ou 5 a 9. Em algumas certas modalidades, a é 0. Em algumas modalidades, a é 1. Em outras modalidades, a é 2. Em mais modalidades, a é 3. Em ainda outras modalidades, a é 4. Em algumas modalidades, a é 5. Em outras modalidades, a é 6. Em mais modalidades, a é 7. Em ainda outras modalidades, a é 8. Em algumas modalidades, a é 9. Em outras modalidades, a é 10. Em mais modalidades, a é 11. Em ainda outras modalidades, a é 12. Em algumas modalidades, a é 13. Em outras modalidades, a é 14. Em mais modalidades, a é 15. Em ainda outras modalidades, a é 16.
[0389] Em algumas outras modalidades de Fórmula (I), b é 1. Em outras modalidades, b é 2. Em mais
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292/542 modalidades, b é 3. Em ainda outras modalidades, b é 4. Em algumas modalidades, b é 5. Em outras modalidades, b é 6. Em mais modalidades, b é 7. Em ainda outras modalidades, b é 8. Em algumas modalidades, b é 9. Em outras modalidades, b é 10. Em outras modalidades, b é 11. Em ainda outras modalidades, b é 12. Em algumas modalidades, b é 13. Em outras modalidades, b é 14. Em outras modalidades, b é 15. Em ainda outras modalidades, b é 16.
[0390] Em algumas mais modalidades de Fórmula (I), c é 1. Em outras modalidades, c é 2. Em mais modalidades, c é 3. Em ainda outras modalidades, c é 4. Em algumas modalidades, c é 5. Em outras modalidades, c é 6. Em mais modalidades, c é 7. Em ainda outras modalidades, c é 8. Em algumas modalidades, c é 9. Em outras modalidades, c é 10. Em mais modalidades, c é 11. Em ainda outras modalidades, c é 12. Em algumas modalidades, c é 13. Em outras modalidades, c é 14. Em mais modalidades, c é 15. Em ainda outras modalidades, c é 16.
[0391] Em algumas certas outras modalidades de Fórmula (I), d é 0. Em algumas modalidades, d é 1. Em outras modalidades, d é 2. Em mais modalidades, d é 3. Em ainda outras modalidades, d é 4. Em algumas modalidades, d é 5. Em outras modalidades, d é 6. Em mais modalidades, d é 7. Em ainda outras modalidades, d é 8. Em algumas modalidades, d é 9. Em outras modalidades, d é 10. Em mais modalidades, d é 11. Em ainda outras modalidades, d é 12. Em algumas modalidades, d é 13. Em outras modalidades, d é 14. Em mais modalidades, d é 15. Em ainda outras modalidades, d é 16.
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293/542 [0392] Em algumas outras várias modalidades de Fórmula (I), a e d são o mesmo. Em algumas outras modalidades, b e c são o mesmo. Em algumas outras modalidades específicas, a e d são o mesmo e b e c são o mesmo.
[0393] A soma de a e b e a soma de c e d na Fórmula (I) são fatores que podem ser variados de modo a obter um lipídeo de fórmula I tendo as propriedades desejadas. Em uma modalidade, a e b são escolhidos de tal modo que a sua soma é um número inteiro variando de 14 a 24. Em outras modalidades, c e d são escolhidos de tal modo que a sua soma é um número inteiro variando de 14 a 24. Em modalidade adicional, a soma de a e b e a soma de c e d são a mesma. Por exemplo, em algumas modalidades, a soma de a e b e a soma de c e d são ambas o mesmo número inteiro que pode variar de 14 a 24. Ainda em mais modalidades, a, b, c e d são selecionados de tal forma que a soma de a e b e a soma de c e d é 12 ou superior.
[0394] Em algumas modalidades de Fórmula (I), e é 1. Em outras modalidades, e é 2.
[0395] Os substituintes em Rla, R2a, R3a e R4a de Fórmula (I) não são particularmente limitados. Em certas modalidades Rla, R2a, R3a e R4a são H em cada ocorrência. Em certas outras modalidades, pelo menos, um de Rla, R2a, R3a e R4a é alquila C1-C12. Em certas outras modalidades, pelo menos, um de Rla, R2a, R3a e R4a é alquila Ci-C8. Em certas outras modalidades, pelo menos, um de Rla, R2a, R3a e R4a é alquila Ci-Ce· Em algumas das modalidades anteriores, a alquila Ci-C8 é metila, etila, n-propila, iso-propila, nbutila, iso-butila, terc-butila, n-hexila ou n-octila.
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294/542 [0396] Em certas modalidades de Fórmula (I), Rla, Rlb, R4a e R4b são alquila C1-C12 em cada ocorrência.
[0397] Em modalidades adicionais de Fórmula (I), pelo menos um de Rlb, R2b, R3b e R4b é H ou Rlb, R2b, R3b e R4b são H em cada ocorrência.
[0398] Em certas modalidades de Fórmula (I), Rlb juntamente com o átomo de carbono ao qual está ligado é tomado em conjunto com um Rlb adjacente e o átomo de carbono ao qual está ligado de modo a formar uma ligação dupla carbono-carbono. Em outras modalidades do acima exposto, R4b juntamente com o átomo de carbono ao qual está ligado é tomado em conjunto com um R4b adjacente e o átomo de carbono ao qual está ligado de modo a formar uma ligação dupla carbono-carbono.
[0399] Os substituintes em R5 e R6 de Fórmula (I) não são particularmente limitados nas modalidades anteriores. Em certas modalidades um ou ambos de R5 ou R6 é metila. Em certas outras modalidades um ou ambos de R5 ou R6 é cicloalquila, por exemplo, ciclo-hexila. Nessas modalidades, a cicloalquila pode estar substituída ou não substituída. Em certas outras modalidades a cicloalquila está substituída com alquila C1-C12, por exemplo tercbutila.
[0400] Os substituintes em R7 não estão particularmente limitados nas modalidades anteriores de Fórmula (I). Em certas modalidades, pelo menos um de R7 é H. Em algumas outras modalidades, R7 é H em cada ocorrência. Em certas outras modalidades, R7 é alquila CiC12.
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295/542 [0401] Em certas outras das modalidades anteriores de Fórmula (I), um de R8 ou R9 é metila. Em outras modalidades, ambos R8 e R9 são metila.
[0402] Em algumas modalidades diferentes de Fórmula (I), R8 e R9, em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados, formam um anel heterocíclico de 5, 6 ou 7 membros. Em algumas modalidades do acima exposto, R8 e R9, em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados, formam um anel heterocíclico de 5 membros, por exemplo, um anel de pirrolidinila.
[0403] Em várias modalidades diferentes, o lipídeo de Fórmula (I) tem uma das estruturas apresentadas na Tabela 7 (Lipídeos Representativos de Fórmula (I)) abaixo.
Tabela 7: Lipídeos Representativos de Fórmula (I)
No. Estrutura Método de Prep.
1-1 M O o 0 —z \ B
1-2 1 θ o 1 1 1 1 A
1-3 o o o —Z\ A
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296/542
Figure BR112019008481A2_D0011
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297/542
No. Estrutura Método de Prep.
1-9 Ο 1 I 1 O I 1 B
Ι- ΙΟ i'p o o —\ )=° ° / \ -Z.—7 —Z\ A
I- 11 ms o o —\ )=° ° / \ -Z.—7 —~z. \ A
I- 12 o o —\ )=° ° / \ -Z.—7 —-z. \ A
I- 13 'z— !—Z / \ ° o=\ '—c o o A
I- 14 1 111 o 1 1 A
I- 15 o o —\ )=° ° / \ z—7 —Z\ A
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298/542
No. Estrutura Método de Prep.
I- 16 ο ο — A
I- 17 'ζ— >—ζ / \ ° ο=ς '— ο ο A
I- 18 ο A
I- 19 ο A
I- 20 JÍ ο ο A
I- 21 ο ο —\ )=° ° / \ -Ζ.—> —Ζ\ A
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299/542
No. Estrutura Método de Prep.
I- 22 Ο '—\ \=O ) \ ° / )=° z—> — A
I- 23 Χζχ/χ^ο^χχ/χ/χ/χζ 0 A
I- 24 o 1 A
I- 25 CUto^Jx^X^X^X/ 1 1 'x^X^x^X^Xfl/O^Jx^X^X^X^ O A
I- 26 k^X o ^°xx^Xx^Xx^XxxX=x^x=x/X^X/ O A
I- 27 \ z— !—Z ° \ \ ° / ( °\ /—\ ° A
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300/542
No. Estrutura Método de Prep.
I- 28 ο ο A
I- 29 'ζ— ,—ζ / \ /° ο=\ '—\ ο ο A
I- 30 0 A
I- 31 0 C
I- 32 οζ '---( \=ο ) \ ° / )=° Z-* Ι~--^ C
I- 33 0 C
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301/542
No. Estrutura Método de Prep.
I- 34 1 í? B
I- 35 1 L oil o 1 1 B
I- 36 0^0. 1 1 1 0 C
I- 37 Λ o o C
I- 38 1 π Jk 1 0 B
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302/542
Figure BR112019008481A2_D0012
conforme definido no presente documento e um ou mais excipientes selecionados a partir de lipideos neutros, lipideos esteroides e peguilados. Em algumas modalidades, o lipideo de fórmula (I) é composto 1-5. Em algumas modalidades, o lipideo de fórmula (I) é composto 1-6.
[0405] Noutra modalidade, a nanoparticula lipidica compreende (i) um lipideo catiônico com a estrutura de Fórmula (II):
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303/542
Figure BR112019008481A2_D0013
G\ /G\
N R7
G3 R8 N R9 (id conforme adicionalmente definido abaixo ou um sal, tautômero, pró-fármaco ou estereoisômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, e (ii) um composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos, em que o composto de mRNA está encapsulado na, ou associado à, referida nanopartícuia lipídica. Em relação ao composto de mRNA, à sequência de mRNA e ao peptídeo ou proteína antigênicos, é feita referência à descrição dessas características incluindo as respectivas opções e preferências acima. Em uma das modalidades preferidas, o composto de mRNA não compreende uma modificação de nucleosídeos. Noutra modalidade, não compreende modificação de base. Em uma modalidade adicional, não compreende uma modificação de 1-metilpseudouridina. Em uma modalidade adicional, o composto de mRNA apenas compreende os nucleosídeos de existência natural adenina, guanina, citosina e uracila. [0406] A Fórmula (II) é adicionalmente definida de modo a que:
L e L são cada um, independentemente, -0(C=0)-, -(C=0)0-, -C(=O)-, -O-, -S(O)X-, -S-S-, -C(=O)S-, -SC(=O)-,
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-NRaC (=0)-, -C(=O)NRa-, -NRaC (=0) NRa, -00(=0) NRa-, -NRaC(=0)0- ou uma ligação direta;
G1 é alquileno Ci-C2, -(0=0)-, -0(0=0)-, -SC (=0)-, -NRaC(=0)- ou uma ligação direta;
G2 é -C (=0)-, -(0=0)0-, -0(=0) S-, -0(=0) NRa ou uma ligação direta; ο
G e alquileno Ci-C6;
Ra é H ou alquila C1-C12;
Rla e Rlb são, em cada ocorrência, independentemente quer: (a) H ou alquila C1-C12; ou (b) Rla é H ou alquila C1-C12, e Rlb em conjunto com o átomo de carbono ao qual está ligado é tomado em conjunto com um Rlb adjacente e o átomo de carbono ao qual está ligado de modo a formar uma ligação dupla carbono-carbono;
R2a e R2b são, em cada ocorrência, independentemente quer: (a) H ou alquila C1-C12; ou (b) R2a é H ou alquila C1-C12, e R2b em conjunto com o átomo de carbono ao qual está ligado é tomado em conjunto com um R2b adjacente e o átomo de carbono ao qual está ligado de modo a formar uma ligação dupla carbono-carbono;
R3a e R3b são, em cada ocorrência, independentemente quer: (a) H ou alquila C1-C12; ou (b) R3a é H ou alquila C1-C12, e R3b em conjunto com o átomo de carbono ao qual está ligado é tomado em conjunto com um R3b adjacente e o átomo de carbono ao qual está ligado de modo a formar uma ligação dupla carbono-carbono;
R4a e R4b são, em cada ocorrência, independentemente quer: (a) H ou alquila C1-C12; ou (b) R4a é H ou alquila C1-C12, e R4b em conjunto com o átomo de carbono ao qual está ligado é tomado em conjunto com um R4b
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305/542 adjacente e o átomo de carbono ao qual está ligado de modo a formar uma ligação dupla carbono-carbono;
R5 e R6 são cada um, independentemente, H ou me t i1a;
R7 é alquila C4-C2o;
R8 e R9 são cada um, independentemente, alquila C1-C12; ou R8 e R9 em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados, formam um anel heterociclico de 5, 6 ou 7 membros;
a, b, c e d são cada um, independentemente, um número inteiro de 1 a 24; e x é 0, 1 ou 2.
[0407] Em algumas modalidades de Fórmula (II), L e L são cada um, independentemente,
-O(C=O)-, -(C=O)O- ou uma ligação direta. Em outras modalidades, G e G são cada um, independentemente, -(C=O)- ou uma ligação direta. Em algumas modalidades diferentes,L e L são cada um, independentemente,-0(C=0)-, -(C=0)0- ou uma ligação direta; e G and G são cada um, independentemente, -(C=0)- ou uma ligação direta.
[0408] Em algumas modalidades diferentes de Formula (II), L e L são cada um, independentemente, C(=0)-, -0-, -S(0)x-, -S-S-, -C(=O)S-, -SC(=O)-, -NRa-, NRaC(=O)-, -C(=O)NRa-, -NRaC (=0) NRa, -OC(=O)NRa-, -NRaC (=0) 0-NRaS (0) xNRa-, -NRaS(O)x- or -S(O)xNRa-.
[0409] Noutra das modalidades anteriores de
Fórmula (II), o composto lipidico tem uma das seguintes estruturas (IIA) ou (IIB):
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306/542
Figure BR112019008481A2_D0014
R9 R8 (iia)
N. Ο
Figure BR112019008481A2_D0015
R9. G3
I
R8 (I IB) [0410] Em algumas modalidades de Fórmula (II), o composto lipidico tem estrutura (HA). Em outras modalidades, o composto lipidico tem estrutura (IIB).
[0411] Em qualquer uma das modalidades anteriores de Formula (II), um de L ou L e -O(C=O)-. Por exemplo, em algumas modalidades, cada um de L e L e O(C=O)-.
[0412] Em algumas modalidades diferentes de Formula (II), um de L ou L e -(C=O)O-. Por exemplo, em Ί 2 algumas modalidades, cada um de L e L e -(C=O)O-.
[0413] Em modalidades diferentes de Fórmula (II), um de L ou L e uma ligação direta. Conforme usado no presente documento, uma ligação direta significa que o grupo (por exemplo, L ou L ) esta ausente. Por exemplo, em Ί 2 algumas modalidades, cada um de L e L e uma ligação direta.
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307/542 [0414] Em outras modalidades diferentes de Fórmula (II) para, pelo menos, uma ocorrência de Rla e Rlb, Rla é H ou alquila C1-C12, e Rlb em conjunto com o átomo de carbono ao qual está ligado é tomado em conjunto com um Rlb adjacente e o átomo de carbono ao qual está ligado de modo a formar uma ligação dupla carbono-carbono.
[0415] Em ainda outras modalidades diferentes de Fórmula (II) para, pelo menos, uma ocorrência de R4a e R4b, R4a é H ou alquila C1-C12, e R4b em conjunto com o átomo de carbono ao qual está ligado é tomado em conjunto com um R4b adjacente e o átomo de carbono ao qual está ligado de modo a formar uma ligação dupla carbono-carbono.
[0416] Em mais modalidades de Fórmula (II) para, pelo menos, uma ocorrência de R2a e R2b, R2a é H ou alquila C1-C12, e R2b em conjunto com o átomo de carbono ao qual está ligado é tomado em conjunto com um R2b adjacente e o átomo de carbono ao qual está ligado de modo a formar uma ligação dupla carbono-carbono.
[0417] Em outras modalidades diferentes de Fórmula (II) para, pelo menos, uma ocorrência de R3a e R3b, R3a é H ou alquila C1-C12, e R3b em conjunto com o átomo de carbono ao qual está ligado é tomado em conjunto com um R3b adjacente e o átomo de carbono ao qual está ligado de modo a formar uma ligação dupla carbono-carbono.
[0418] Em várias outras modalidades de Fórmula (II), o composto lipidico tem uma das seguintes estruturas (IIC) ou (IID):
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Figure BR112019008481A2_D0016
(IIC) ou
Figure BR112019008481A2_D0017
R8 (IID) em que e, f, g e h são cada um, independentemente, um número inteiro de 1 a 12.
[0419] Em algumas modalidades de Fórmula (II), o composto lipidico tem estrutura (IIC). Em outras modalidades, o composto lipidico tem estrutura (IID).
[0420] Em várias modalidades de estruturas (IIC) ou (IID), e, f, g e h são cada um, independentemente, um número inteiro de 4 a 10.
[0421] Em certas modalidades de Fórmula (II), a, b, c e d são cada um, independentemente, um número inteiro de 2 a 12 ou um número inteiro de 4 a 12. Em outras modalidades, a, b, c e d são cada um, independentemente, um número inteiro de 8 a 12 ou 5 a 9. Em algumas certas modalidades, a é 0. Em algumas modalidades, a é 1. Em
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309/542 outras modalidades, a é 2. Em mais modalidades, a é 3. Em ainda outras modalidades, a é 4. Em algumas modalidades, a é 5. Em outras modalidades, a é 6. Em mais modalidades, a é 7. Em ainda outras modalidades, a é 8. Em algumas modalidades, a é 9. Em outras modalidades, a é 10. Em mais modalidades, a é 11. Em ainda outras modalidades, a é 12. Em algumas modalidades, a é 13. Em outras modalidades, a é 14. Em mais modalidades, a é 15. Em ainda outras modalidades, a é 16.
[0422] Em algumas modalidades de Fórmula (II), b é 1. Em outras modalidades, b é 2. Em mais modalidades, b é 3. Em ainda outras modalidades, b é 4. Em algumas modalidades, b é 5. Em outras modalidades, b é 6. Em mais modalidades, b é 7. Em ainda outras modalidades, b é 8. Em algumas modalidades, b é 9. Em outras modalidades, b é 10. Em mais modalidades, b é 11. Em ainda outras modalidades, b é 12. Em algumas modalidades, b é 13. Em outras modalidades, b é 14. Em mais modalidades, b é 15. Em ainda outras modalidades, b é 16.
[0423] Em algumas modalidades de Fórmula (II), c é 1. Em outras modalidades, c é 2. Em mais modalidades, c é 3. Em ainda outras modalidades, c é 4. Em algumas modalidades, c é 5. Em outras modalidades, c é 6. Em mais modalidades, c é 7. Em ainda outras modalidades, c é 8. Em algumas modalidades, c é 9. Em outras modalidades, c é 10. Em mais modalidades, c é 11. Em ainda outras modalidades, c é 12. Em algumas modalidades, c é 13. Em outras modalidades, c é 14. Em mais modalidades, c é 15. Em ainda outras modalidades, c é 16.
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310/542 [0424] Em algumas certas modalidades de Fórmula (II), d é 0. Em algumas modalidades, d é 1. Em outras modalidades, d é 2. Em mais modalidades, d é 3. Em ainda outras modalidades, d é 4. Em algumas modalidades, d é 5. Em outras modalidades, d é 6. Em mais modalidades, d é 7. Em ainda outras modalidades, d é 8. Em algumas modalidades, d é 9. Em outras modalidades, d é 10. Em mais modalidades, d é 11. Em ainda outras modalidades, d é 12. Em algumas modalidades, d é 13. Em outras modalidades, d é 14. Em mais modalidades, d é 15. Em ainda outras modalidades, d é 16.
[0425] Em algumas modalidades de Fórmula (II), e é 1. Em outras modalidades, e é 2. Em mais modalidades, e é 3. Em ainda outras modalidades, e é 4. Em algumas modalidades, e é 5. Em outras modalidades, e é 6. Em mais modalidades, e é 7. Em ainda outras modalidades, e é 8. Em algumas modalidades, e é 9. Em outras modalidades, e é 10. Em mais modalidades, e é 11. Em ainda outras modalidades, e é 12.
[0426] Em algumas modalidades de Fórmula (II), f é 1. Em outras modalidades, f é 2. Em mais modalidades, f é 3. Em ainda outras modalidades, f é 4. Em algumas modalidades, f é 5. Em outras modalidades, fé 6. Em mais modalidades, f é 7. Em ainda outras modalidades, f é 8. Em algumas modalidades, f é 9. Em outras modalidades, f é 10. Em mais modalidades, f é 11. Em ainda outras modalidades, f é 12.
[0427] Em algumas modalidades de Fórmula (II), g é 1. Em outras modalidades, g é 2. Em mais modalidades, g é 3. Em ainda outras modalidades, g é 4. Em algumas
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311/542 modalidades, g é 5. Em outras modalidades, g é 6. Em mais modalidades, g é 7. Em ainda outras modalidades, g é 8. Em algumas modalidades, g é 9. Em outras modalidades, g é 10. Em mais modalidades, g é 11. Em ainda outras modalidades, g é 12.
[0428] Em algumas modalidades de Fórmula (II), h é 1. Em outras modalidades, e é 2. Em mais modalidades, h é 3. Em ainda outras modalidades, h é 4. Em algumas modalidades, e é 5. Em outras modalidades, h é 6. Em mais modalidades, h é 7. Em ainda outras modalidades, h é 8. Em algumas modalidades, h é 9. Em outras modalidades, h é 10. Em mais modalidades, h é 11. Em ainda outras modalidades, h é 12.
[0429] Em algumas outras várias modalidades de Fórmula (II), a e d são o mesmo. Em algumas outras modalidades, b e c são o mesmo. Em algumas outras modalidades especificas e a e d são o mesmo e b e c são o mesmo.
[0430] A soma de a e b e a soma de c e d de Fórmula (II) são fatores que podem ser variados de modo a obter um lipídeo tendo as propriedades desejadas. Em uma modalidade, a e b são escolhidos de tal modo que a sua soma é um número inteiro variando de 14 a 24. Em outras modalidades, c e d são escolhidos de tal modo que a sua soma é um número inteiro variando de 14 a 24. Em modalidade adicional, a soma de a e b e a soma de c e d são a mesma. Por exemplo, em algumas modalidades, a soma de a e b e a soma de c e d são ambas o mesmo número inteiro que pode variar de 14 a 24. Ainda em mais modalidades, a, b, c e d
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312/542 são selecionados de tal forma que a soma de a e b e a soma de c e d é 12 ou superior.
[0431] Os substituintes em Rla, R2a, R3a e R4a de Fórmula (II) não são particularmente limitados. Em algumas modalidades, pelo menos um de Rla, R2a, R3a e R4a é H. Em certas modalidades, pelo menos um de Rla, R2a, R3a e R4a são H em cada ocorrência. Em certas outras modalidades, pelo menos, um de Rla, R2a, R3a e R4a é alquila C1-C12. Em certas outras modalidades, pelo menos, um de Rla, R2a, R3a e R4a é alquila Ci-Cg. Em certas outras modalidades, pelo menos, um de Rla, R2a, R3a e R4a é alquila Ci-Ce. Em algumas das modalidades anteriores, a alquila Ci-Cg é metila, etila, npropila, iso-propila, n-butila, iso-butila, terc-butila, nhexila ou n-octila.
Em certas modalidades de Fórmula (II), Rla, Rlb, R4a e R4b são alquila C1-C12 em cada ocorrência.
[0432] Em modalidades adicionais de Fórmula (II), pelo menos um de Rlb, R2b, R3b e R4b é H ou Rlb, R2b, R3b e R4b são H em cada ocorrência.
[0433] Em certas modalidades de Fórmula (II), Rlb juntamente com o átomo de carbono ao qual está ligado é tomado em conjunto com um Rlb adjacente e o átomo de carbono ao qual está ligado de modo a formar uma ligação dupla carbono-carbono. Em outras modalidades do acima exposto, R4b juntamente com o átomo de carbono ao qual está ligado é tomado em conjunto com um R4b adjacente e o átomo de carbono ao qual está ligado de modo a formar uma ligação dupla carbono-carbono.
[0434] Os substituintes em R5 e R6 de Fórmula (II) não são particularmente limitados nas modalidades
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313/542 anteriores. Em certas modalidades um de R5 ou R6 é metila. Em outras modalidades cada um de R5 ou R6 é metila.
[0435] Os substituintes em R7 de Fórmula (II) não são particularmente limitados nas modalidades anteriores. Em certas modalidades, R7 é alquila Ce-Cie· Em algumas outras modalidades, R7 é alquila Ce-Cg. Em algumas dessas modalidades, R7 é substituído com -(C=O)ORb, O(C=O)Rb, -C(=O)Rb, -ORb, -S(O)xRb, -S-SRb, -C (=0) SRb,
-SC(=O)Rb, -NRaRb, -NRaC(=O)Rb, -C(=O)NRaRb, NRaC (=0) NRaRb,
-0C (=0) NRaRb, -NRaC (=0) 0Rb, -NRaS (0) xNRaRb, NRaS(0)xRb ou -S(0)xNRaRb, em que: Ra é H ou alquila C1-C12; Rb é alquila CiC15,· e x é 0, 1 ou 2. Por exemplo, em algumas modalidades, R7 é substituído com -(C=O)ORb ou -O(C=O)Rb.
[0436] Em várias das modalidades anteriores de Fórmula (II), Rb é alquila C1-C15 ramificada. Por exemplo, em algumas modalidades, Rb possui uma das seguintes estruturas:
Figure BR112019008481A2_D0018
Figure BR112019008481A2_D0019
Figure BR112019008481A2_D0020
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314/542 [0437] Em certas outras das modalidades anteriores de Fórmula (II), um de R8 ou R9 é metila. Em outras modalidades, ambos R8 e R9 são metila.
[0438] Em algumas modalidades diferentes de
Fórmula (II), R8 e R9, em conjunto com o átomo de
nitrogênio ao qual estão ligados, formam um anel
heterociclico de 5, 6 ou 7 membros. Em algumas modalidades do acima exposto, R8 e R9, em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados, formam um anel heterociclico de 5 membros, por exemplo, um anel de pirrolidinila. Em algumas modalidades diferentes do acima exposto, R8 e R9, em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados, formam um anel heterociclico de 6 membros, por exemplo, um anel de piperazinila.
[0439] Em ainda outras modalidades dos o lipideos anteriores de Formula (II), G e alquileno C2-C4, por exemplo alquileno C3.
[0440] Em várias modalidades diferentes, o composto lipidico tem uma das estruturas apresentadas na Tabela 8 (Lipideos Representativos de Fórmula (II)) abaixo.
Tabela 8: Lipideos Representativos de Fórmula (II)
No. Estrutura Método de Prep.
II- 1 1 D
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315/542
No. Estrutura Método de Prep.
II- 2 1 D
II- 3 / n n D
II- 4 o o \=o \=o tf-2 o7 — E
II- 5 1 T D
II- 6 i T / n x/-\x- n D
II- 7 1 Ί / N N D
II- 8 D
II- 9 \ -z.— /° z—\ °\ / \ / O < D
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316/542
Figure BR112019008481A2_D0021
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317/542
No. Estrutura Método de Prep.
IT- 16 1 T Ε
IT- 17 ο=ς >=ς ο ο λ— Ζ d — D
IT- 18 'ζ— /° ζ—γ Ο ο 2=0 )=° D
IT- 19 / Ν Ν 0 D
IT- 20 0 ι /'ρ/^·· / 'γ' Q D
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318/542
Figure BR112019008481A2_D0022
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319/542
No. Estrutura Método de Prep.
IT- 26 0 / cr ο E
IT- 27 \ ~Z.— /° z—/ / °\ / \ /— /=o o o E
IT- 28 0 V'N. _N. E
IT- 29 / o o \=o \=o \— z oz —z \ E
IT- 30 Il II 1 0 E
IT- 31 I o o à=° \=o \— z oz ^---^ E
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320/542
Figure BR112019008481A2_D0023
compreendem um lipideo de Fórmula (II), um composto de mRNA conforme descrito acima e um ou mais excipientes selecionados a partir de lipideos neutros, lipideos esteroides e peguilados. Em algumas modalidades, o lipideo de Fórmula (II) é composto II-9. Em algumas modalidades, o lipideo de Fórmula (II) é composto 11-10. Em algumas
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321/542 modalidades, o lipídeo de Fórmula (II) é composto 11-11. Em algumas modalidades, o lipídeo de Fórmula (II) é composto 11-12. Em algumas modalidades, o lipídeo de Fórmula (II) é composto 11-32.
[0442] Em uma modalidade adicional, a LNP compreende (i) um lipídeo catiônico de Fórmula (III):
R3 ^G3 .id /N. /I*
Ri ^G1 ^G2 R2 (III) conforme adicionalmente definido abaixo ou um sal, tautômero, pró-fármaco ou estereoisômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, e (ii) um composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos, em que o composto de mRNA está encapsulado na, ou associado à, referida nanopartícuia lipídica. Em relação ao composto de mRNA, à sequência de mRNA e ao peptídeo ou proteína antigênicos, é feita referência à descrição dessas características incluindo as respectivas opções e preferências acima. Em uma das modalidades preferidas, o composto de mRNA não compreende uma modificação de nucleosídeos. Noutra modalidade, não compreende modificação de base. Em uma modalidade adicional, não compreende uma modificação de 1-metilpseudouridina. Ainda em uma modalidade adicional, o composto de mRNA apenas compreende os nucleosídeos naturais adenina, guanina, citosina e uracila.
[0443] A Fórmula (III) é adicionalmente definida de modo a que:
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322/542 um de L1 ou L2 é -0 (C=0) -, - (C=0) 0-, -C(=0)-, -0, -S(0)x-, -S-S-, -C(=O)S-, SC(=O)-, -NRaC(=O)-,
-C(=O)NRa-, -NRaC (=0) NRa-, -OC(=O)NRa- ou NRaC(=O)O-, e o outro de L1 ou L2 é -0 (C=0) -, - (C=0) 0-, -C(=0)-, -0-, -S(0)x-, -S-S-, -C(=O)S-, SC(=O)-, -NRaC(=O)-, -C(=O)NRa-, -NRaC (=0) NRa-, -OC(=O)NRa- ou NRaC(=0)0- ou uma ligação direta;
G e G são cada um, independentemente, alquileno C1-C12 não substituído ou alquenileno C1-C12; o
G e alquileno C1-C24, alquenileno C1-C24, cicloalquileno C3-C8, cicloalquenileno C3-C8;
Ra é H ou alquila C1-C12;
R e R são cada um, independentemente, alquila C6-C24 ou alquenila C6-C24;
R3 é H, OR5, CN, -C(=O)OR4, -OC(=O)R4 ou NR5C (=0) R4;
R4 é alquila C1-C12;
R5 é H ou Ci-Ce alquila; e x é 0, 1 ou 2.
[0444] Em algumas das modalidades anteriores de Fórmula (III), o lipídeo tem uma das seguintes estruturas (IIIA) ou (IIIB) :
Figure BR112019008481A2_D0024
em que:
A é um anel cicloalquila ou cicloalquileno de 3 a 8 membros;
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R6 é, em cada ocorrência, independentemente H, OH ou alquila C1-C24;
n é um número inteiro variando de 1 a 15.
[0445] Em algumas das modalidades anteriores de Fórmula (III), o lipídeo tem uma estrutura (IIIA), e noutras modalidades, o lipídeo tem estrutura (IIIB).
[0446] Noutras modalidades de Fórmula (III), o lipídeo tem uma das seguintes estruturas (IIIC) ou (IIID):
Figure BR112019008481A2_D0025
(HID) em que y e z são cada um, independentemente, números inteiros variando de 1 a 12.
[0447] Em qualquer uma das modalidades anteriores de Formula (III), um de L ou L e -0(C=0)-. Por exemplo, em algumas modalidades, cada um de L e L e O(C=O)-. Em algumas modalidades diferentes de qualquer um dos anteriores, L e L são cada um, independentemente, (C=O)O- ou -O(C=O)-. Por exemplo, em algumas modalidades, cada um de L e L e
-(C=O)O-.
[0448] Em algumas modalidades diferentes de Fórmula (III), o lipídeo tem uma das seguintes estruturas (IIIE) ou (IIIF):
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324/542
Figure BR112019008481A2_D0026
(HIE) ou
R3
O G3 Ο R\ /N. JL ,r2 0 G1 G2 O (IIIF) [0449] Em algumas das modalidades anteriores de Fórmula (III), o lipideo tem uma das seguintes estruturas (IIIG), (IIIH), (IIII) ou (IIIJ):
Figure BR112019008481A2_D0027
(HID (HIG) ;
ou
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325/542 [0450] Em algumas das modalidades anteriores de Fórmula (III), n é um número inteiro variando de 2 a 12, por exemplo, de 2 a 8 ou de 2 a 4. Por exemplo, em algumas modalidades, n é 3, 4, 5 ou 6. Em algumas modalidades, n é 3. Em algumas modalidades, n é 4. Em algumas modalidades, n é 5. Em algumas modalidades, n é 6.
[0451] Em algumas outras das modalidades anteriores de Fórmula (III), y e z são cada um, independentemente, um número inteiro de 2 a 10. Por exemplo, em algumas modalidades, y e z são cada um, independentemente, um número inteiro variando de 4 a 9 ou de 4 a 6.
[0452] Em algumas das modal! dades anteriores
de Fórmula (III ), R6 é H. Em outra das modalidades
anteriores, R6 é alquila C1-C24. Em outras modalidades R6 é
OH.
[0453] Em algumas modalidades de Fórmula o (III), G e não substituído. Em outras modalidades G3 e o substituído. Em varias modalidades diferentes, G e alquileno C1-C24 linear ou alquenileno C1-C24 linear.
[0454] Em algumas outras modalidades anteriores de Formula (III), R ou R , ou ambos, são alquenila C6-C24. Por exemplo, em algumas modalidades, R1 e o
R , cada um, independentemente tem a seguinte estrutura:
R7a
Figure BR112019008481A2_D0028
R7b em que:
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326/542
R7a e R7b são, em cada ocorrência, independentemente H ou alquila C1-C12; e a é um número inteiro de 2 a 12, em que R7a, R7b e a são, cada um, selecionados de tal modo que R e R compreendem, cada um, independentemente, de 6 a 20 átomos de carbono. Por exemplo, em algumas modalidades, a é um número inteiro variando de 5 a 9 ou de 8 a 12.
[0455] Em algumas das modalidades anteriores de Fórmula (III), pelo menos uma ocorrência de R7a é H. Por exemplo, em algumas modalidades, R7a é H em cada ocorrência. Em outras modalidades diferentes dos anteriores, pelo menos, uma ocorrência de R7b é alquila CiCg · Por exemplo, em algumas modalidades, a alquila Ci-Cg é metila, etila, n-propila, iso-propila, n-butila, isobutila, terc-butila, n-hexila ou n-octila.
[0456] Em diferentes modalidades de Fórmula (III), R ou R , ou ambos, tem uma das seguintes estruturas:
Figure BR112019008481A2_D0029
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327/542 [0457] Em algumas das modalidades anteriores de Fórmula (III), R3 é OH, CN, -C(=O)OR4, -OC(=O)R4 ou NHC(=O)R4. Em algumas modalidades, R4 é metila ou etila.
[0458] Em várias modalidades diferentes, o lipídeo catiônico de Fórmula (III) tem uma das estruturas apresentadas na Tabela 9 (Compostos Representativos de Fórmula (III)) abaixo.
Tabela 9: Compostos Representativos de Fórmula (III)
No. Estrutura Método de Prep.
III-l L ° o F
III-2 L o O F
III-3 L ° 0 F
III-4 o o=( ° z o r F
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328/542
No. Estrutura Método de Prep.
HI-5 0 1 ° F
HI-6 0 1 ° F
HI-7 I o F
HI-8 L ° 0 F
HI-9 OH I O o F
III- 10 X o i—Z. ° \ \ ° 2 ( °\ /—\ ° F
Hill ° '—\ \=° ) \ ° / •Z—f T F
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329/542
No. Estrutura Método de Prep.
HI- 12 BB o o —\ )=° ° / \ Z—* o T F
HI- 13 0^0 0 F
HI- 14 ΞΕ o ,—Z °\ \ o \ /—( °=\ \ / ° F
HI- 15 o F
HI- 16 0 G
HI- 17 I O y—Z °\ \ o \ / °=\ /—\ ° G
HI- 18 ° '—\ )=° ) \ ° / )=° z—' o I G
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330/542
No. Estrutura Método de Prep.
HI- 19 X O y-Z O=( ( O / ( O=\ /--\ O G
HI- 20 X O y—Z O=( \ o \ ( o=\ /—\ ° G
HI- 21 X o y-Z O=( \ O / ( O=( /--\ O G
HI- 22 o 1 ° G
HI- 23 L ° 0 G
HI- 24 0 1 0 G
HI- 25 0 1 ° G
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331/542
No. Estrutura Método de Prep.
HI- 26 I o »—Z. o \ °=/ 2 \ / ° / \ o=( G
HI- 27 I o y-Z o \ °=^ \ \ / ° / \ o=( G
HI- 28 L 0 0 G
HI- 29 L 0 O G
HI- 30 Η N^— OH I O o G
HI- 31 L 0 O G
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332/542
No. Estrutura Método de Prep.
III- 32 / / ° / \ \ ° \ / \ \ /=° / / ° '—\ O > 1 o X G
III- 33 O L 0 0 G
III- 34 O L o o G
III- 35 L ° 0 G
III- 36 O L 0 0 G
[0459] Em algumas modalidades, as LNPs compreendem um lipídeo de Fórmula (III), um composto de mRNA conforme descrito acima e um ou mais excipientes selecionados a partir de lipídeos neutros, lipídeos esteroides e peguilados. Em algumas modalidades, o lipídeo de Fórmula (III) é composto III-3. Em algumas modalidades, o lipídeo de Fórmula (III) é composto III-7.
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333/542 [0460] No contexto da presente invenção, LNPIII-3 significa uma nanoparticula lipidica conforme definido no presente documento compreendendo o composto lipidico catiônico III-3, de acordo com as tabelas acima. Outras nanopartícuias lipídicas são referenciadas de forma análoga.
[0461] Em certas modalidades, o lipídeo catiônico de Fórmula (I), (II) ou (III) está presente na LNP em uma quantidade de cerca de 30 a cerca de 95 moles porcento, em relação ao teor lipidico total da LNP. Se mais do que um lipídeo catiônico é incorporado dentro da LNP, tais percentagens se aplicam aos lipídeos catiônicos combinados. Em uma modalidade, o lipídeo catiônico está presente na LNP em uma quantidade de cerca de 30 a cerca de 70 moles porcento. Em uma modalidade, o lipídeo catiônico está presente na LNP em uma quantidade de cerca de 40 a cerca de 60 moles porcento, tal como cerca de 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 ou 60 moles porcento, respectivamente.
[0462] Em algumas modalidades da invenção, a LNP compreende uma combinação ou mistura de quaisquer dos lipídeos descritos acima.
[0463] Em uma das modalidades preferidas, a nanoparticula lipidica compreende um lipídeo catiônico selecionado a partir do grupo de:
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334/542
Figure BR112019008481A2_D0030
[0464] Em uma modalidade adicional, a invenção se refere a um mRNA compreendendo nanoparticulas lipidicas compreendendo:
(i) um lipideo PEG com a fórmula (IV)
Figure BR112019008481A2_D0031
(IV) em que R8 e R9 são cada um, independentemente, uma alquila de cadeia linear ou ramificada, saturada ou não saturada, contendo 10 a 30 átomos de carbono, em que a cadeia alquila é opcionalmente interrompida por uma ou mais ligações éster;
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335/542 e w tem um valor médio variando de 30 a 60; e (ii) um composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos; em que o composto de mRNA está encapsulado na, ou associado à, referida nanopartícuia lipídica. Em relação ao composto de mRNA, à sequência de mRNA e ao peptídeo ou proteína antigênicos, é feita referência à descrição dessas características incluindo as respectivas opções e preferências acima. Em uma das modalidades preferidas, o composto de mRNA não compreende uma modificação de nucleosídeos. Noutra modalidade, não compreende modificação de base. Em uma modalidade adicional, não compreende uma modificação de 1metilpseudouridina. Além disso, se o lipideo PEG for o composto (IVa), a nanopartícuia lipídica não é uma nanopartícuia lipídica compreendendo o composto 1-6, DSPC, colesterol e o lipideo PEG (IVa) em uma razão de cerca de 50:10:38,5:1,5 que encapsula mRNA não modificado, modificado por 1-metilpseudouridina ou otimizado quanto a códon codificando uma hemaglutinina de influenza PR8 ou Cal/7/2009 ou uma proteína de invólucro R3A independente de CD4 de HIV-1. Em uma das modalidades preferidas, a nanopartícuia lipídica compreende (i) um lipideo catiônico de acordo com a fórmula (I), (II) ou (III) conforme definido acima, (ii) um composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos conforme descrito no presente documento, e (iii) um lipideo PEG fórmula (IV); em que o composto de mRNA está encapsulado na, ou associado à, referida nanopartícuia lipídica.
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336/542 [0465] A quantidade do lipídeo ou lipidoide permanentemente catiônico também deve ser selecionada tendo em conta a quantidade de carga de ácido nucleico. Em uma modalidade, essas quantidades são selecionadas de modo a resultar em uma razão N/P da(s) nanopartícuia(s) ou da composição na gama de cerca de 0,1 a cerca de 20. Nesse contexto, a razão N/P é definida como a razão molar dos átomos de nitrogênio (N) dos grupos contendo nitrogênio básico do lipídeo ou lipidoide para os grupos fosfato (P) do ácido nucleico que é usado como carga. A razão N/P pode ser calculada com base no facto de, por exemplo, 1 pg de RNA conter tipicamente cerca de 3 nmol de resíduos de fosfato, desde que o RNA exiba uma distribuição estatística de bases. O valor N do lipídeo ou lipidoide pode ser calculado com base no seu peso molecular e no teor relativo de grupos permanentemente catiônicos e - se presentes cationizáveis.
[0466] Normalmente se acredita que tais baixas proporções N/P sejam prejudiciais para o desempenho e eficácia ín vivo de tais complexos portadores-de-carga, ou nanopartícuias carregadas com ácido nucleico. No entanto, os inventores descobriram que essas proporções de N/P são de facto úteis no contexto da presente invenção, em particular quando se pretende a administração local ou extravascular das nanopartícuias. No presente documento, as nanopartícuias, respectivamente, foram consideradas eficazes e, ao mesmo tempo, bem toleradas.
[0467] Em certas modalidades, a LNP compreende um ou mais lipídeos adicionais que estabilizam a formação de partículas durante a sua formação.
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337/542 [0468] Os lipideos estabilizadores adequados incluem lipideos neutros e lipideos aniônicos. 0 termo lipídeo neutro se refere a qualquer um de um número de espécies lipídicas que existem quer em uma forma zwitteriônica neutra ou não carregada a pH fisiológico. Lipideos neutros representativos incluem diacilfosfatidilcolinas, diacilfosfatidiletanolaminas, ceramidas, esfingomielinas, di-hidroesfingomielinas, cefalinas e cerebrosídeos.
[0469] Lipideos neutros exemplares incluem, por exemplo, distearoilfosfatidilcolina (DSPC), dioleoilfosfatidilcolina (DOPC), dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC), dioleoil-fosfatidilglicerol (DOPG), dipalmitoilfosfatidilglicerol (DPPG), dioleoilfosf atidiletanolamina (DOPE), palmitoiloleoilfosfatidilcolina (POPC), palmitoiloleoilfosfatidiletanolamina (POPE) 4-(N-maleimidometil)-ciclohexano-l-carboxilato de dioleoil-fosfatidiletanolamina (DOPE-mal), dipalmitoilfosfatidiletanolamina (DPPE), dimiristoilfosfoetanolamina (DMPE), distearoilfosf atidiletanolamina (DSPE), 16-0-monometila PE, 16-0dimetila PE, 18-1-trans PE, l-estearioil-2-oleoilfosfatidiletanolamina (SOPE) e 1,2-dielaidoil-sn-glicero-3fosfoetanolamina (transDOPE). Em uma modalidade, o lipídeo neutro é 1,2-distearoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DSPC).
[0470] Em algumas modalidades, as LNPs compreendem um lipídeo neutro selecionado a partir de DSPC, DPPC, DMPC, DOPC, POPC, DOPE e SM. Em várias modalidades, a razão molar do lipídeo catiônico (por exemplo, lipídeo de
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338/542
Fórmula (I), (II) ou (III)) para o lipideo neutro varia entre cerca de 2:1 e cerca de 8:1.
[0471]
Em várias modalidades
LNPs adicionalmente compreendem um esteroide ou análogo de esteroide. Um esteroide é um composto que compreende a seguinte cadeia principal de carbono:
[0472]
Em certas modalidades esteroide ou análogo esteroide é colesterol. Em algumas dessas modalidades, a razão molar do lipideo catiônico (por exemplo, lipideo de Fórmula (I), (II) ou (III)) para o colestrol varia entre cerca de 5:1 e 1:1.
[0473]
O termo lipideo aniônico se refere a qualquer lipideo que está carregado negativamente a pH fisiológico. Esses lipideos incluem fosfatidilglicerol, cardiolipina diacilfosfatidilserina ácido diacilfosfatidico, N-dodecanoilfosfatidiletanolaminas, N succinilfosfatidiletanolaminas glutarilfosfatidiletanolaminas, lisilfosfatidilglicerois, palmitoiloleiolfosfatidilglicerol (POPG) e outros grupos modificadores aniônicos ligados a lipideos neutros.
[0474]
Em certas modalidades a LNP compreende glicolipideos (por exemplo, monossialogangliosideo GMi) .
[0475] Em algumas modalidades, as LNPs compreendem um lipideo conjugado com polímero. 0 termo lipideo conjugado com polímero se refere a uma molécula compreendendo tanto uma porção lipídica como uma porção
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339/542 polimérica. Um exemplo de um lipideo conjugado de polímero é um lipideo peguilado. 0 termo lipideo peguilado se refere a uma molécula compreendendo tanto uma porção lipídica como uma porção polietilenoglicólica. Os lipideos peguilados são conhecidos na técnica e incluem 1(monometoxi-polietilenoglicol)-2,3-dimiristoilglicerol (PEG-s-DMG) e semelhantes.
[0476] Em certas modalidades, a LNP compreende um lipideo estabilizante adicional que é um lipideo de polietilenoglicol (lipideo peguilado). Os glicolipídeos de polietileno adequados incluem fosfatidiletanolamina modificada por PEG, ácido fosfatídico modificado por PEG, ceramidas modificadas por PEG (por exemplo, PEG-CerC14 ou PEG-CerC20), dialquilaminas modificadas por PEG, diacilgliceróis modificados por PEG, dialquilgliceróis modificados por PEG. Lipideos de polietilenoglicol representativos incluem PEG-c-DOMG, PEG-c-DMA e PEG-s-DMG. Em uma modalidade, o lipideo de polietilenoglicol é N[ (metoxipoli (etilenoglicol) 2000) carbamil] -1,2dimiristiloxipropil-3-amina (PEG-c-DMA). Em uma modalidade, o lipideo de polietilenoglicol é PEG-c-DOMG. Noutras modalidades, as LNPs compreendem um diacilglicerol peguilado (PEG-DAG), tal como 1-(monometoxipolietilenoglicol)-2,3-dimiristoilglicerol (PEG-DMG), uma fosfatidiletanolamina peguilada (PEG-PE), um diacilglicerol de succinato de PEG (PEG-S-DAG) tal como 4-0-(2',3'di (tetradecanoiloxi)propil-1-0-(ωmetoxi(polietoxi)etil)butanodioato (PEG-S-DMG), uma ceramida peguilada (PEG-cer), ou um dialcoxipropilcarbamato de PEG tal como ω-metoxi(polietoxi)etil-N-(2,3Petição 870190039457, de 26/04/2019, pág. 362/744
340/542 di (tetradecanoxi)propil)carbamato ou 2,3di(tetradecanoxi)propil-N-(ωmetoxi(polietoxi)etil)carbamato. Em várias modalidades, a razão molar do lipídeo catiônico para o lipídeo peguilado varia entre cerca de 100:1 e cerca de 25:1.
[0477] Conforme mencionado, o mRNA compreendendo nanopartícuia lipídica pode compreender um lipídeo peguilado possuindo a estrutura de Fórmula (IV):
Figure BR112019008481A2_D0032
Rs (IV) ou um sal, tautômero ou estereoisômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:
R8 e R9 são cada um, independentemente, uma alquila de cadeia linear ou ramificada, saturada ou não saturada, contendo 10 a 30 átomos de carbono, em que a cadeia alquila é opcionalmente interrompida por uma ou mais ligações éster; e w tem um valor médio variando entre 30 e 60 .
[0478] Em algumas das modalidades anteriores do lipídeo peguilado (IV), R8 e R9 não são ambos noctadecila quando w é 42. Em algumas outras modalidades, R8 e R9 são cada um, independentemente, uma alquila de cadeia linear ou ramificada, saturada ou não saturada contendo 10 a 18 átomos de carbono. Em algumas modalidades, R8 e R9 são cada um, independentemente, uma alquila de cadeia linear ou ramificada, saturada ou não saturada contendo 12 a 16 átomos de carbono. Em algumas modalidades, R8 e R9 são cada um, independentemente, uma alquila de cadeia linear ou
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341/542 ramificada, saturada ou não saturada contendo 12 átomos de carbono. Em algumas modalidades, R8 e R9 são cada um, independentemente, uma alquila de cadeia linear ou ramificada, saturada ou não saturada contendo 14 átomos de carbono. Em outras modalidades, R8 e R9 são cada um, independentemente, uma alquila de cadeia linear ou ramificada, saturada ou não saturada contendo 16 átomos de carbono. Em ainda outras modalidades, R8 e R9 são cada um, independentemente, uma alquila de cadeia linear ou ramificada, saturada ou não saturada contendo 18 átomos de carbono. Em ainda outras modalidades, R8 é uma cadeia de alquila linear ou ramificada, saturada ou não saturada, contendo 12 átomos de carbono e R9 é uma cadeia de alquila linear ou ramificada, saturada ou não saturada, contendo 14 átomos de carbono.
[0479] Em várias modalidades, w abrange uma gama que é selecionada de tal modo que a porção PEG de (IV) tenha um peso molecular médio de cerca de 400 a cerca de 6.000 g/mol. Em algumas modalidades, o w médio é de cerca de 50 .
[0480] Em uma modalidade preferida, R8 e R9 são cadeias de alquila saturada.
[0481] Em uma modalidade adicional preferida, o lipídeo PEG é de fórmula (IVa).
Figure BR112019008481A2_D0033
Figure BR112019008481A2_D0034
(IVa), em que n tem um valor médio variando de 30 a60, tal como cerca de 3012, 3212, 3412, 3612, 3812, 4012, 4212,
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342/542
44±2, 46±2, 48±2, 50±2, 52±2, 54±2, 56±2, 58±2 ou 60±2. Em uma modalidade mais preferida, n é cerca de 49.
[0482] Em outras modalidades, o lipídeo peguilado tem uma das seguintes estruturas:
Figure BR112019008481A2_D0035
Figure BR112019008481A2_D0036
em que n é um número inteiro selecionado de tal modo que o peso molecular médio do lipídeo peguilado é de cerca de 2.500 g/mol, o mais preferencialmente n é cerca de 49.
[0483] Em certas modalidades, o lipídeo está presente na LNP em uma quantidade de cerca de 1 a cerca de 10 moles porcento, em relação ao teor lipídico total da nanopartícuia. Em uma modalidade, o lipídeo PEG está presente na LNP em uma quantidade de cerca de 1 a cerca de 5 moles porcento. Em uma modalidade, o lipídeo PEG está presente na LNP em cerca de 1 mole porcento a cerca de 1,5 mole porcento.
[0484] Em certas modalidades, a LNP compreende uma ou mais porções alvo que são capazes de direcionar a LNP para uma célula ou população de células. Por exemplo,
Petição 870190039457, de 26/04/2019, pág. 365/744
343/542 em uma modalidade, a porção de direcionamento é um ligante que dirige a LNP para um receptor encontrado em uma superfície celular.
[0485] Em certas modalidades, a LNP compreende um ou mais domínios de internalização. Por exemplo, em uma modalidade, a LNP compreende um ou mais domínios que se ligam a uma célula para induzir a internalização da LNP. Por exemplo, em uma modalidade, o um ou mais domínios de internalização se ligam a um receptor encontrado em uma superfície celular de modo a induzir a absorção mediada por receptores da LNP. Em certas modalidades, a LNP é capaz de ligar uma biomolécula in vivo, onde a biomolécula ligada à LNP pode então ser reconhecida por um receptor da superfície celular de modo a induzir a internalização. Por exemplo, em uma modalidade, a LNP se liga à ApoE sistêmica, o que leva à absorção da LNP e da carga associada.
[0486] Outras LNPs exemplificativas e a sua fabricação são descritos na técnica, por exemplo, na publicação do pedido de patente dos E.U.A, US20120276209, Semple et ai., 2010, Nat Biotechnol., 28(2):172-176; Akinc et ai., 2010, Mol Ther., 18(7) : 1357-1364; Basha et ai., 2011, Mol Ther, 19(12) : 2186-2200; Leung et ai., 2012, J Phys Chem C Nanomater Interfaces, 116(34): 18440-18450; Lee et ai., 2012, Int J Cancer., 131(5) : E781-90; Belliveau et ai., 2012, Mol Ther nucleic Acids, 1: e37; Jayaraman et ai., 2012, Angew Chem Int Ed Engl., 51(34): 8529-8533; Mui et ai., 2013, Mol Ther Nucleic Acids. 2, el39; Maier et ai., 2013, Mol Ther., 21(8): 1570-1578; e Tam et ai., 2013, Nanomedicine, 9(5): 665-74, cada um dos quais é incorporado
Petição 870190039457, de 26/04/2019, pág. 366/744
344/542 no presente documento a titulo de referência na sua totalidade.
[0487] Em modalidades preferidas, as nanopartícuias lipídicas têm um diâmetro médio desde cerca de 30 nm a cerca de 150 nm, desde cerca de 40 nm a cerca de 150 nm, desde cerca de 50 nm a cerca de 150 nm, desde cerca de 60 nm a cerca de 130 nm, desde cerca de 70 nm a cerca de 110 nm, desde cerca de 70 nm a cerca de 100 nm, desde cerca de 80 nm a cerca de 100 nm, desde cerca de 90 nm a cerca de 100 nm, desde cerca de 70 a cerca de 90 nm, desde cerca de 80 nm a cerca de 90 nm, desde cerca de 70 nm a cerca de 80 nm, ou cerca de 30 nm, 35 nm, 40 nm, 45 nm, 50 nm, 55 nm, 60 nm, 65 nm, 70 nm, 75 nm, 80 nm, 85 nm, 90 nm, 95 nm, 100 nm, 105 nm, 110 nm, 115 nm, 120 nm, 125 nm, 130 nm, 135 nm, 140 nm, 145 nm ou 150 nm, e são substancialmente não tóxicos. Conforme mencionado, o diâmetro médio pode corresponder à média z conforme determinado por dispersão de luz dinâmica.
[0488] Noutra modalidade preferida da invenção, as nanopartícuias lipídicas têm um diâmetro hidrodinâmico na gama de desde cerca 50 nm a cerca de 300 nm, ou desde cerca de 60 nm a cerca de 250 nm, desde cerca de 60 nm a cerca de 150 nm, ou desde cerca de 60 nm a cerca de 120 nm, respectivamente.
[0489] Em certas modalidades, o mRNA, quando presente nas nanopartícuias lipídicas, é resistente em
solução aquosa à degradação com uma nuclease.
[0490] A quantidade total de mRNA nas
nanopartícuias lipídicas varia e pode ser definida
dependendo da razão p/p entre mRNA e lipideos totais. Em
Petição 870190039457, de 26/04/2019, pág. 367/744
345/542 uma modalidade da invenção, a razão entre mRNA e lipídeos totais da invenção é inferior a 0,06 p/p, preferencialmente, entre 0,03 e 0,04 p/p.
[0491] Em algumas modalidades, as LNPs compreendem um lipídeo de Fórmula (I), (II) ou (III), um composto de mRNA conforme definido acima, um lipídeo neutro, um esteroide e um lipídeo peguilado. Em algumas modalidades, o lipídeo de Fórmula (I) é composto 1-6, ou o lipídeo de fórmula (III) é o composto III-3, o lipídeo neutro é DSPC, o esteroide é colesterol e o lipídeo peguilado é o composto de fórmula (IVa).
[0492] Em certas modalidades, a LNP compreende uma ou mais porções alvo que são capazes de direcionar a LNP para uma célula ou população de células. Por exemplo, em uma modalidade, a porção de direcionamento é um ligante que dirige a LNP para um receptor encontrado em uma superfície celular.
[0493] Em certas modalidades, a LNP compreende um ou mais domínios de internalização. Por exemplo, em uma modalidade, a LNP compreende um ou mais domínios que se ligam a uma célula para induzir a internalização da LNP. Por exemplo, em uma modalidade, o um ou mais domínios de internalização se ligam a um receptor encontrado em uma superfície celular de modo a induzir a absorção mediada por receptores da LNP. Em certas modalidades, a LNP é capaz de ligar uma biomolécula in vivo, onde a biomolécula ligada à LNP pode então ser reconhecida por um receptor da superfície celular de modo a induzir a internalização. Por exemplo, em uma modalidade, a LNP se liga à ApoE sistêmica, o que leva à absorção da LNP e da carga associada.
Petição 870190039457, de 26/04/2019, pág. 368/744
346/542 [0494] Em particular, a invenção se refere às seguintes modalidades específicas não limitativas.
[0495] Em uma modalidade preferida, a invenção se refere a um mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas compreendendo um lipídeo catiônico de acordo com a fórmula (I), (II) ou (III) conforme definido acima e um composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptideo ou proteína antigênicos conforme definido acima, em que, se o lipídeo catiônico é de fórmula 1-6, a nanopartícuia lipídica não é uma nanopartícuia lipídica compreendendo a fórmula 1-6, DSPC, colesterol e um lipídeo PEG de fórmula (IVA) a uma razão de cerca de 50:10:38,5:1,5 que encapsula mRNA não modificado, modificado por 1metilpseudouridina ou otimizado quanto a códon codificando uma hemaglutinina de influenza PR8 ou Cal/7/2009 ou uma proteína de invólucro R3A independente de CD4 de HIV-1.
[0496] Uma modalidade preferida adicional se refere a um mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas compreendendo um lipídeo PEG de acordo com a fórmula (IV) conforme definido acima e um composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptideo ou proteína antigênicos, em que, se o lipídeo catiônico é de fórmula 1-6, a nanopartícuia lipídica não é uma nanopartícuia lipídica compreendendo a fórmula 1-6, DSPC, colesterol e um lipídeo PEG de fórmula (IVa) a uma razão de cerca de 50:10:38,5:1,5 que encapsula mRNA não modificado, modificado por 1-metilpseudouridina ou otimizado quanto a códon codificando uma hemaglutinina de influenza PR8 ou Cal/7/2009 ou uma proteína de invólucro R3A independente de CD4 de HIV-1.
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347/542 [0497] Em uma modalidade preferida específica, a invenção se refere a um mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas compreendendo um lipídeo catiônico de acordo com a fórmula (I), (II) ou (III), um lipídeo PEG de acordo com a fórmula (IV), um composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos, um esteroide e um lipídeo neutro, em que, preferencialmente, se o lipídeo catiônico é de fórmula 1-6, a nanoparticula lipidica não é uma nanoparticula lipidica compreendendo a fórmula 1-6, DSPC, colesterol e um lipídeo PEG de fórmula (IVa) a uma razão de cerca de 50:10:38,5:1,5 que encapsula mRNA não modificado, modificado por 1-metilpseudouridina ou otimizado quanto a códon codificando uma hemaglutinina de influenza PR8 ou Cal/7/2009 ou uma proteína de invólucro R3A independente de CD4 de HIV-1, preferencialmente o peptídeo ou proteína antigênicos são derivados de antígenos patogênicos, antígenos tumorais, antígenos alergênicos ou autoantígenos autoimunes ou um fragmento ou variante dos mesmos, mais preferencialmente o antígeno patogênico é derivado a partir de um vírus influenza ou da raiva.
[0498] Em uma modalidade adicional preferida, a invenção se refere a um mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas compreendendo: um lipídeo catiônico selecionado a partir de
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348/542
Figure BR112019008481A2_D0037
Figure BR112019008481A2_D0038
Figure BR112019008481A2_D0039
ou
Figure BR112019008481A2_D0040
um lipideo PEG com a estrutura
Figure BR112019008481A2_D0041
em que n tem um valor médio na gama de 30 a 60, preferencialmente, cerca de 49, opcionalmente, um lipideo neutro, preferencialmente, 1,2-distearoil-sn-glicero-3fosfocolina (DSPC) e, opcionalmente, um esteroide, preferencialmente colesterol, em que a razão molar do lipideo catiônico para o DSPC está opcionalmente na gama de
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349/542
cerca de 2 :1 a 8:1, em que a razão molar do lipídeo
catiônico para o colesterol está opcionalmente na gama de
cerca de 2 : 1 a [0499 1: 1. Em uma modalidade preferida, a invenção
se refere a um mRNA compreendendo nanoparticulas lipidicas compreendendo: um lipídeo catiônico com fórmula (I), (II) ou (III) e/ou lipídeo PEG com fórmula (IV), opcionalmente um lipídeo neutro, preferencialmente 1,2-distearoil-snglicero-3-fosfocolina (DSPC) e opcionalmente um esferoide, preferencialmente colesterol, em que a razão molar do lipídeo catiônico para o DSPC está opcionalmente na gama de cerca de 2:1 a 8:1, em que a razão molar do lipídeo catiônico para o colesterol está opcionalmente na gama de cerca de 2:1 a 1:1 e uma composição de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA codificando um peptídeo ou proteína antigênicos, em que a sequência de mRNA compreende, adicionalmente, de preferência na direção 5' para 3', os seguintes elementos:
a) uma estrutura 5'-GAP, preferencialmente mVGpppN,
b) pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos,
c) uma cauda poli(A), preferencialmente consistindo em 10 a 200, 10 a 100, 40 a 80 ou 50 a 70 nucleotídeos adenosina,
d) opcionalmente, uma cauda poli(C), preferencialmente consistindo em 10 a 200, 10 a 100, 20 a 70, 20 a 60 ou 10 a 40 nucleotídeos citosina, e
e) opcionalmente, uma haste-ansa de histona,
f) e opcionalmente um elemento 3'-UTR.
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350/542 [0500] Em uma modalidade mais preferida, a invenção se refere a um mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas compreendendo: um lipideo catiônico selecionado a partir de
Figure BR112019008481A2_D0042
Figure BR112019008481A2_D0043
ou
Figure BR112019008481A2_D0044
e/ou um lipideo PEG com a estrutura
Figure BR112019008481A2_D0045
em que n tem um valor médio variando de 30 a 60, preferencialmente cerca de 49,
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351/542 e um composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA codificando um peptídeo ou proteína antigênicos, em que preferencialmente o peptídeo ou proteína antigênicos são derivados a partir de antígenos patogênicos, antígenos tumorais, antígenos alergênicos ou autoantígenos autoimunes ou um fragmento ou variante dos mesmos, mais preferencialmente o antígeno é derivado a partir de um vírus influenza ou da raiva, opcionalmente, um lipídeo neutro, preferencialmente, 1,2-distearoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DSPC) e, opcionalmente, um esteroide, preferencialmente colesterol, em que a razão molar do lipídeo catiônico para o DSPC está opcionalmente na gama de cerca de 2:1 a 8:1, em que a razão molar do lipídeo catiônico para o colesterol está opcionalmente na gama de cerca de 2:1 a 1:1, em que a sequência de mRNA compreende opcionalmente
a) uma estrutura 5'-CAP, e/ou
b) uma sequência poli(A), e/ou
c) uma sequência poli(C).
[0501] Em uma modalidade mais preferida, a sequência de mRNA compreende uma região de codificação codificando o pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos, em que a sequência de mRNA compreende uma modificação de sequências selecionada a partir de uma modificação do teor em G/C, uma modificação de códons, uma otimização quanto a códons ou uma otimização-C da sequência.
[0502] Em uma modalidade específica, a invenção se refere a um mRNA compreendendo nanopartícuias
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352/542 lipídicas compreendendo: um lipideo catiônico selecionado a partir de
Figure BR112019008481A2_D0046
Figure BR112019008481A2_D0047
opcionalmente um ou lipideo PEG com a estrutura
Figure BR112019008481A2_D0048
em que n tem um valor médio variando de 30 a 60, preferencialmente cerca de 49, e um composto de mRNA, compreendendo uma sequência de mRNA
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353/542 opcionalmente um lipídeo neutro, preferencialmente 1,2-distearoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DSPC) e opcionalmente, um esteroide, preferencialmente colesterol, em que a razão molar do lipídeo catiônico para o DSPC está opcionalmente na gama de cerca de 2:1 a 8:1, em que a razão molar do lipídeo catiônico para o colesterol está opcionalmente na gama de cerca de 2:1 a 1:1, em que a sequência de mRNA compreende adicionalmente, preferencialmente, na direção 5' para 3', os seguintes elementos:
a) uma estrutura 5'-CAP, preferencialmente mVGpppN,
b) pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos, preferencialmente o peptídeo ou proteína antigênicos são derivados a partir de antígenos patogênicos, antígenos tumorais, antígenos alergênicos ou autoantígenos autoimunes ou um fragmento ou variante dos mesmos, mais preferencialmente o antígeno patogênico é derivado a partir de um vírus influenza ou da raiva;
c) uma cauda poli(A), preferencialmente consistindo em 10 a 200, 10 a 100, 40 a 80 ou 50 a 70 nucleotideos adenosina,
d) opcionalmente, uma cauda poli(C), preferencialmente consistindo em 10 a 200, 10 a 100, 20 a 70, 20 a 60 ou 10 a 40 nucleotideos citosina, e
e) opcionalmente, uma haste-ansa de histona,
f) e opcionalmente um elemento 3'-UTR.
Petição 870190039457, de 26/04/2019, pág. 376/744
354/542 [0503] Em uma modalidade preferida particular, a composição (farmacêutica) ou a vacina de acordo com a invenção compreendendo mRNA compreende nanoparticulas lipidicas, que têm uma razão molar de aproximadamente 50:10:38,5:1,5, preferencialmente 47,5:10:40,8:1,7 ou mais preferencialmente 47,4:10:40,9:1,7 (isto é, proporção (mol%) de lipideo catiônico, DSPC, colesterol e lipideo PEG; solubilizado em etanol).
[0504] Em modalidades particulares preferidas, a nanoparticula lipidica é um mRNA compreendendo nanoparticulas lipidicas conforme acima definido, em que preferencialmente o peptídeo ou proteína antigênicos são derivados a partir de hemaglutinina (HA), neuraminidase (NA), nucleoproteina (NP), proteína matriz 1 (Ml), proteína matriz 2 (M2), proteína não estrutural 1 (NS1), proteína não estrutural 2 (NS2), proteína de exportação nuclear (NEP), proteína polimerase ácida (PA), proteína polimerase básica PB1, PB1-F2, ou proteína polimerase básica 2 (PB2) de um vírus da influenza ou um fragmento ou variante da mesma. Mais preferencialmente, o peptídeo ou proteína antigênicos são derivados a partir de hemaglutinina (HA) ou neuraminidase (NA) de um vírus influenza ou um fragmento ou variante da mesma. Ainda mais preferencialmente, o peptídeo ou proteína antigênicos são pelo menos uma proteína de comprimento total de hemaglutinina (HA) e/ou pelo menos uma proteína de comprimento total de neuraminidase (NA) de um vírus influenza ou uma variante da mesma. Em uma modalidade adicional preferida, o vírus influenza é selecionado a partir de um vírus influenza A, B ou C. Em uma modalidade particularmente preferida, o vírus influenza A é
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355/542 selecionado a partir de um vírus influenza caracterizado por uma hemaglutinina (HA) selecionada a partir do grupo consistindo em Hl, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, Hll, H12, H13, H14, H15, H16, H17 e H18 e/ou o vírus influenza A é selecionado a partir de um vírus influenza caracterizado por uma neuraminidase (NA) selecionada a partir do grupo consistindo em Nl, N2, N3, N4, N5, N6, N7, N8, N9, N10 e Nil. Preferencialmente, o vírus influenza A é selecionado a partir do grupo consistindo em H1N1, H1N2, H2N2, H3N1, H3N2, H3N8, H5N1, H5N2, H5N3, H5N8, H5N9, H7N1, H7N2, H7N3, H7N4, H7N7, H7N9, H9N2 e H10N7, preferencialmente a partir de H1N1, H3N2, H5N1. Mais preferencialmente, a sequência de mRNA compreende pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de hemaglutinina (HA) de um vírus influenza ou um fragmento ou variante da mesma e pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de neuraminidase (NA) de um vírus influenza ou um fragmento ou variante da mesma. Em uma modalidade especificamente preferida, a sequência de mRNA compreende pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de hemaglutinina (HA) e/ou pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de neuraminidase (NA) de um vírus influenza A selecionado a partir do grupo consistindo em H1N1, H1N2, H2N2, H3N1, H3N2, H3N8, H5N1, H5N2, H5N3, H5N8, H5N9, H7N1, H7N2, H7N3, H7N4, H7N7, H7N9, H9N2 e H10N7, preferencialmente a partir de H1N1, H3N2, H5N1 ou um fragmento ou variante dos mesmos.
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356/542 [0505]
A invenção se refere ainda a um método nanoparticulas lipidicas de preparação das referidas
Figure BR112019008481A2_D0049
catiônico de fórmula (I)
R9 conforme definido acima ou um sal, tautômero, pró-fármaco ou estereoisômero farmaceuticamente aceitável
Figure BR112019008481A2_D0050
G3 R8
N conforme definido acima ou um sal, tautômero, pró-fármaco ou estereoisômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, e e/ou de fórmula III:
R3 ^G3 /N. /I*
Ri ^G1 ^G2 R2 (III)
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357/542 conforme definido acima ou um sal, tautômero, pró-fármaco ou estereoisômero farmaceuticamente aceitável do mesmo;
e/ou
b) um lipídeo PEG com a fórmula (IV):
Figure BR112019008481A2_D0051
conforme definido acima;
c) pelo menos um composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos; e
d) opcionalmente um esteroide; e
e) opcionalmente um lipídeo neutro;
(ii) solubilizar o lipídeo catiônico e/ou o lipídeo PEG e, opcionalmente, o lipídeo neutro e/ou o esteroide ou um esteroide derivado em etanol;
(ill) misturar a solução lipidica etanólica com uma solução aquosa compreendendo o polinucleotídeo de mRNA (iv) remover o etanol de modo a formar nanopartícuias lipídicas encapsulando ou associando com o polinucleotídeo de mRNA; e opcionalmente (v) separar ou purificar as nanopartícuias lipídicas.
[0506] O etanol pode ser removido por qualquer método adequado que não afecte negativamente os lipídeos ou as nanopartícuias lipídicas em formação. Em uma modalidade da invenção, o etanol é removido por diálise. Em uma
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358/542 modalidade alternativa, o etanol é removido por diafiltração.
[0507] A separação e a purificação opcionais das nanoparticulas lipídicas também podem ser realizadas por qualquer método adequado. Preferencialmente, as nanoparticulas lipídicas são filtradas, de um modo mais preferido, as nanoparticulas lipídicas são separadas ou purificadas por filtração através de um filtro estéril.
[0508] A invenção se refere ainda a uma composição farmacêutica compreendendo pelo menos uma nanopartícuia lipídica de acordo com a presente invenção. A nanopartícuia lipídica pode compreender um composto de mRNA compreendendo uma sequência codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos conforme definido no presente documento.
[0509] Em uma modalidade da invenção, a sequência de mRNA codifica um peptídeo ou proteína antigênicos. Em uma modalidade alternativa da invenção, a sequência de mRNA codifica mais do que um peptídeo ou proteína antigênicos.
[0510] Em uma modalidade da invenção, a composição farmacêutica compreende uma nanopartícuia lipídica de acordo com a invenção, em que a nanopartícuia lipídica compreende mais do que um composto de mRNA, em que cada um compreende uma sequência de mRNA diferente codificando um peptídeo ou proteína antigênicos.
[0511] Em uma modalidade alternativa da invenção, a composição farmacêutica compreende uma segunda nanopartícuia lipídica, em que o composto de mRNA compreendido pela segunda nanopartícuia lipídica é
Petição 870190039457, de 26/04/2019, pág. 381/744
359/542 diferente do composto de mRNA compreendido pela primeira nanopartícuia lipídica.
[0512] Em um aspecto adicional, a presente invenção se refere a uma composição compreendendo mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas em que o mRNA compreende uma sequência de mRNA compreendendo, pelo menos, uma região de codificação, conforme definido no presente documento, e um portador farmaceuticamente aceitável. A composição de acordo com a invenção é preferencialmente fornecida como uma composição farmacêutica ou como uma vacina.
[0513] De acordo com uma modalidade preferida, a composição (farmacêutica) ou a vacina de acordo com a invenção compreende mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas compreendendo pelo menos um mRNA compreendendo pelo menos uma sequência de mRNA conforme definido acima, em que a pelo menos uma região de codificação de pelo menos uma seguência de mRNA codifica, pelo menos, um peptídeo ou proteína antigênicos preferencialmente derivado a partir de uma proteína de um vírus influenza ou vírus da Raiva, preferencialmente qualquer uma das proteínas ou glicoproteínas de hemaglutinina (HA) ou neuraminidase (NA), conforme divulgado na listagem de sequências da presente invenção ou, respectivamente, nas Tabelas 1-5 ou Figuras 20-24 do documento PCT/EP2016/075843 ou um fragmento ou variante de qualquer uma dessas proteínas.
[0514] Preferivelmente, a composição (farmacêutica) ou a vacina de acordo com a invenção compreende mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas compreendendo pelo menos um mRNA compreendendo pelo menos
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360/542 uma sequência de mRNA conforme definido acima, em que a pelo menos uma sequência de codificação da pelo menos uma sequência de mRNA compreende ou consiste em uma sequência de ácido nucleico codificando, pelo menos, um peptídeo ou proteína antigênicos preferencialmente derivado a partir de uma proteína de um vírus influenza, preferencialmente qualquer uma das proteínas hemaglutinina (HA) ou neuraminidase (NA), conforme definido na listagem de sequências ou respectivamente nas Tabelas 1-4 ou Figuras 20-23 do documento PCT/EP2016/075843, ou um fragmento ou variante das mesmas, em que a proteína derivada a partir de uma proteína de um vírus influenza preferencialmente compreende ou consiste em qualquer uma das sequências de aminoácidos definidas na listagem de sequências ou respectivamente nas Tabelas 1-4 ou Figuras 20-23 do documento PCT/EP2016/075843, preferencialmente nas SEQ ID NOs: 1-30504 da listagem de sequências ou respectivamente nas Tabelas 1-4 ou Figuras 20-23 da PCT/EP2016/075843, ou um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências. Alternativamente, o peptídeo ou proteína antigênicos são derivados a partir de um vírus da Raiva, de preferência a partir da glicoproteína de um vírus da Raiva, preferencialmente compreendendo ou consistindo em qualquer uma das sequências de aminoácidos divulgadas na listagem de sequências, ou respectivamente na Tabela 5 ou na Figura 24 do documento PCT/EP2016/075843, preferencialmente nas SEQ ID NOs: 30505-32012 da listagem de sequências, ou um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0515] Preferencialmente, a composição (farmacêutica) ou a vacina de acordo com a invenção
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361/542 compreende mRNA compreendendo nanoparticulas lipidicas compreendendo pelo menos um mRNA compreendendo pelo menos uma sequência de mRNA conforme definido acima, em que a pelo menos uma sequência de codificação da sequência de mRNA compreende ou consiste em um sequência de ácido nucleico codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de uma proteína de um vírus influenza ou vírus da Raiva, ou um fragmento ou variante da mesma, em que o peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de uma proteína de um vírus influenza ou vírus da Raiva preferencialmente compreende ou consiste em uma sequência de aminoácidos tendo uma identidade de sequência
de pelo menos 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%,
85%, 86%, 87%, 88' %, 89- %, 90%, 91%, 92% , 93%, 94%, 95%, 96%,
97%, 98% ou 99%, preferencialmente de pelo menos 70%, mais
preferencialmente de pelo menos 80%, ainda mais
preferencialmente de pelo menos 85%, ainda mais
preferencialmente de pelo menos 90% e o mais
preferencialmente de pelo menos 95% ou mesmo 97%, com
qualquer uma das sequências de aminoácidos divulgadas na
listagem de sequências, preferencialmente SEQ ID NOs: 132012, ou respectivamente coluna A das Tabelas 1-5 ou Figuras 20-24 do documento PCT/EP2016/075843, ou um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0516] Mais preferencialmente, a composição (farmacêutica) ou a vacina de acordo com a invenção compreende mRNA compreendendo nanoparticulas lipidicas compreendendo pelo menos um mRNA compreendendo pelo menos uma sequência de mRNA conforme definido acima, em que a pelo menos uma sequência de codificação da pelo menos uma
Petição 870190039457, de 26/04/2019, pág. 384/744
362/542 sequência de mRNA compreende ou consiste em uma sequência de ácido nucleico codificando pelo menos um peptideo ou proteína antigênicos derivado a partir de uma proteína de um vírus influenza ou vírus da Raiva, ou um fragmento ou variante da mesma, em que o peptideo ou proteína antigênicos derivado a partir de uma proteína de um vírus influenza ou vírus da Raiva preferencialmente compreende ou consiste em uma sequência de aminoácidos tendo uma identidade de sequência de pelo menos 80% com qualquer uma das sequências de aminoácidos divulgadas na listagem de sequências, preferencialmente nas SEQ ID NOs: 1-32012, ou respectivamente na coluna A das Tabelas 1-5 ou nas Figuras 20-24 do documento PCT/EP2016/075843, ou um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0517] Em modalidades preferidas, a composição (farmacêutica) ou a vacina de acordo com a invenção compreende mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas compreendendo pelo menos um mRNA compreendendo pelo menos uma sequência de mRNA conforme definido acima, em que a pelo menos uma sequência de codificação da pelo menos uma sequência de mRNA compreende ou consiste em qualquer uma das sequências de ácido nucleico divulgadas na listagem de sequências, preferencialmente SEQ ID NOs: 32013-64024 ou SEQ ID NOs: 64025-224084, ou colunas B ou C das Tabelas 1-5 ou Figuras 20-24 do documento PCT/EP2016/075843, ou um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0518] De acordo com outra modalidade, a composição (farmacêutica) ou a vacina de acordo com a invenção compreende mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas compreendendo pelo menos um mRNA compreendendo
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363/542 pelo menos uma sequência de mRNA conforme definido acima, em que a pelo menos uma sequência de codificação da sequência de mRNA compreende ou consiste em uma sequência
de ácido nucleico tendo uma identidade de sequência de pelo
menos 5%, 10%, 20! è, 30% , 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%,
87%, 88%, 89%, 90 %, 91% , 92%, 93%, 94% , 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99%, preferencialmente de pelo menos 70%, mais
preferencialmente de pelo menos 80%, ainda mais
preferencialmente de pelo menos 85%, ainda mais
preferencialmente de pelo menos 90% e o mais
preferencialmente de pelo menos 95% ou mesmo 97%, com
qualquer uma das sequências de ácido nucleico divulgadas na listagem de sequências, preferencialmente SEQ ID NOs: 32013-64024 ou SEQ ID NOs: 64025-224084, ou, respetivamente, coluna B ou coluna C das Tabelas 1-5 ou Figuras 20-24 do documento PCT/EP2016/075843, ou um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0519] De acordo com uma modalidade particularmente preferida, a composição (farmacêutica) ou a vacina de acordo com a invenção compreende mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas compreendendo pelo menos um mRNA compreendendo pelo menos uma sequência de mRNA conforme definido acima, em que a pelo menos uma sequência de codificação da pelo menos uma sequência de mRNA compreende ou consiste em qualquer uma das sequências de ácido nucleico tendo uma identidade de sequência de pelo menos 80% com qualquer uma das sequências de ácido nucleico divulgadas na listagem de sequências, preferencialmente nas SEQ ID NOs: 32013-64024 ou SEQ ID NOs: 64025-224084, ou, respetivamente, coluna B ou coluna C das Tabelas 1-5 ou
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364/542
Figuras 20-24 do documento PCT/EP2016/075843, ou um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0520] Mais preferencialmente, a composição (farmacêutica) ou a vacina de acordo com a invenção compreende mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas compreendendo pelo menos um mRNA compreendendo pelo menos uma sequência de mRNA conforme definido acima, em que a pelo menos uma sequência de codificação da pelo menos uma sequência de mRNA compreende ou consiste em qualquer uma das sequências de ácido nucleico divulgadas na listagem de sequências ou, respetivamente, coluna C das Tabelas 1-5 ou Figuras 20-24 do documento PCT/EP2016/075843, ou SEQ ID NOs: 64025-224084, ou um fragmento ou variante de qualquer uma dessas sequências.
[0521] No contexto da presente invenção, a composição (farmacêutica) ou vacina pode compreender mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas compreendendo mRNA codificando um ou mais dos peptídeos, ou proteínas, antigênicos conforme definido no presente documento, preferencialmente derivado a partir de uma proteína de um vírus influenza ou vírus da Raiva conforme definido no presente documento ou um fragmento ou variante da mesma.
[0522] A composição (farmacêutica) ou vacina de acordo com a invenção pode, desse modo, compreender mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas compreendendo pelo menos um mRNA compreendendo pelo menos uma sequência de mRNA compreendendo pelo menos uma região de codificação, codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos, preferencialmente derivado a partir de uma proteína de um vírus influenza ou vírus da Raiva ou um fragmento ou
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365/542 variante da mesma, em que a pelo menos uma região de codificação da pelo menos uma sequência de mRNA codifica um peptídeo ou proteína antigênicos específico, por exemplo, derivado a partir de uma proteína de um vírus influenza definido no presente documento ou um fragmento ou uma variante da mesma.
[0523] Alternativamente, a composição (farmacêutica) ou vacina da presente invenção pode compreender mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas compreendendo pelo menos um composto de mRNA compreendendo pelo menos uma sequência de mRNA de acordo com a invenção, em que a pelo menos uma sequência de mRNA codifica pelo menos dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez, onze ou doze peptídeos, ou proteínas, antigênicos distintos, por exemplo, derivados a partir de uma proteína de um vírus influenza, conforme definido no presente documento, ou um fragmento ou variante da mesma.
[0524] Nesse contexto, é particularmente preferido que o pelo menos um composto de mRNA compreendido na composição (farmacêutica) ou vacina seja um mRNA bi- ou multicistrônico, conforme definido no presente documento, que codifica pelo menos dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez, onze ou doze peptídeos, ou proteínas, antigênicos distintos, por exemplo, derivados a partir de uma proteína de um vírus influenza. Misturas entre essas modalidades também são consideradas, tais como composições compreendendo mais do que uma sequência de mRNA, em que pelo menos uma sequência de mRNA pode ser monocistrônica, enquanto pelo menos uma outra sequência de mRNA pode ser bi- ou multicistrônica.
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366/542 [0525] A composição (farmacêutica) ou vacina de acordo com a presente invenção, preferencialmente a pelo menos uma sequência de codificação da sequência de mRNA aí compreendida, pode, desse modo, compreender qualquer combinação das sequências de ácido nucleico conforme definido no presente documento.
[0526] Preferencialmente, a composição (farmacêutica) ou vacina compreende mRNA compreendendo nanoparticulas de lipideo compreendendo uma pluralidade ou mais de uma das sequências de mRNA de acordo com a invenção, em que cada sequência de mRNA compreende pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de uma proteína de um vírus influenza ou um fragmento ou variante da mesma.
[0527] Em uma modalidade particularmente preferida, a composição compreende pelo menos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 6, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80 ou 100 sequências de mRNA diferentes, cada uma codificando, pelo menos, um peptídeo ou proteína antigênicos, preferencialmente, derivado a partir de uma proteína de um vírus influenza ou um fragmento ou variante da mesma, conforme definido acima, preferencialmente derivado a partir de hemaglutinina (HA) ou neuraminidase (NA) de um vírus influenza ou um fragmento ou variante das mesmas.
[0528] Em uma modalidade mais preferida, a composição compreende pelo menos 4 sequências de mRNA diferentes, cada uma codificando, pelo menos, um peptídeo ou proteína antigênicos, preferencialmente, derivado a
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367/542 partir de uma proteína de um vírus influenza ou um fragmento ou variante da mesma, conforme definido acima, preferencialmente derivado a partir de hemaglutinina (HA) ou neuraminidase (NA) de um vírus influenza ou um fragmento ou variante das mesmas.
[0529] Nesse contexto, é particularmente preferido que cada sequência de mRNA codifique, pelo menos, um peptídeo ou proteína antigênicos diferente derivado a partir de proteínas do mesmo patógeno, por exemplo, vírus influenza, em que é particularmente preferido que o peptídeo ou proteína antigênicos seja derivado a partir de proteínas diferentes do mesmo patógeno, por exemplo, vírus influenza. Preferivelmente, a composição compreende pelo menos duas sequências de mRNA, em que pelo menos uma sequência de mRNA codifica pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de hemaglutinina (HA) do vírus influenza e pelo menos uma sequência de mRNA codifica pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de neuraminidase (NA) do mesmo vírus influenza.
[0530] Noutra modalidade preferida, cada sequência de mRNA codifica, pelo menos, um peptídeo ou proteína antigênicos diferente derivado a partir de proteínas de patógenos diferentes, por exemplo, vírus influenza. De preferência, cada sequência de mRNA codifica pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de hemaglutinina (HA) e/ou neuraminidase (NA) de diferentes vírus influenza.
[0531] Preferivelmente, a composição (farmacêutica) ou vacina de acordo com a presente invenção
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368/542 compreende uma pluralidade de sequências de mRNA codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de hemaglutinina (HA) e/ou neuraminidase (NA) de um vírus influenza, em que pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de hemaglutinina (HA) e/ou neuraminidase (NA) de 2, 3, 4, 5, 6, 7, 6, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80 ou 100 vírus influenza diferentes é codificado pela pluralidade de sequências de mRNA.
[0532] Nesse contexto, é particularmente preferido que a composição (farmacêutica) ou vacina compreende pelo menos um mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas compreendendo um composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de uma proteína do vírus influenza A Hl, preferencialmente hemaglutinina (HA) e/ou neuraminidase (NA), pelo menos uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de uma proteína do vírus influenza A H3, preferencialmente hemaglutinina (HA) e/ou neuraminidase (NA) , pelo menos uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de uma proteína do vírus influenza A H5, preferencialmente hemaglutinina (HA) e/ou neuraminidase (NA), e opcionalmente pelo menos uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de uma proteína do vírus influenza A H7, preferencialmente hemaglutinina (HA) e/ou neuraminidase (NA), e/ou opcionalmente pelo menos uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a
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369/542 partir de uma proteína do vírus influenza A H9, preferencialmente hemaglutinina (HA) e/ou neuraminidase (NA) .
[0533] Preferencialmente, a composição (farmacêutica) ou vacina compreende pelo menos um mRNA compreendendo nanoparticulas lipidicas compreendendo um composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptideo ou proteína antigênicos derivado a partir de hemaglutinina (HA) e/ou pelo menos uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptideo ou proteína antigênicos derivado a partir de neuraminidase (NA) do vírus influenza A Hl, pelo menos uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptideo ou proteína antigênicos derivado a partir de hemaglutinina (HA) e/ou pelo menos uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptideo ou proteína antigênicos derivado a partir de neuraminidase (NA) do vírus influenza A H3, pelo menos uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptideo ou proteína antigênicos derivado a partir de hemaglutinina (HA) e/ou pelo menos uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptideo ou proteína antigênicos derivado a partir de neuraminidase (NA) do vírus influenza A H5 e, opcionalmente, pelo menos uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptideo ou proteína antigênicos derivado, preferencialmente, a partir de hemaglutinina (HA) e/ou pelo menos uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptideo ou proteína antigênicos derivado a partir de neuraminidase (NA) do vírus influenza A H7, e/ou opcionalmente pelo menos uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptideo ou proteína antigênicos derivado,
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370/542 preferencialmente, a partir de hemaglutinina (HA) e/ou pelo menos uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de neuraminidase (NA) do vírus influenza A H9.
[0534] Em uma modalidade específica, a composição (farmacêutica) ou vacina compreende pelo menos um mRNA compreendendo nanoparticulas lipidicas compreendendo um composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de hemaglutinina (HA) e/ou pelo menos uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de neuraminidase (NA) do vírus influenza A H1N1, pelo menos uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de hemaglutinina (HA) e/ou pelo menos uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de neuraminidase (NA) do vírus influenza A H3N2, pelo menos uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de hemaglutinina (HA) e/ou pelo menos uma sequência de mRNA neuraminidase (NA) do vírus influenza A H5N1.
[0535] Adicionalmente, a composição (farmacêutica) ou vacina preferencialmente compreende adicionalmente pelo menos um mRNA compreendendo nanoparticulas lipidicas compreendendo um composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de hemaglutinina (HA) e/ou pelo menos uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos
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371/542 derivado a partir de neuraminidase (NA) de pelo menos um vírus influenza B, encapsulado ou associado com mRNA compreendendo nanoparticulas lipidicas de acordo com a invenção.
[0536] Nesse contexto, é particularmente preferido que a composição (farmacêutica) ou vacina compreenda mRNA compreendendo nanoparticulas lipidicas compreendendo mRNA compreendendo uma pluralidade de sequências de mRNA codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de hemaglutinina (HA) e/ou pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de neuraminidase (NA) de influenza
A/Países Baixos/602/2009 e/ou
A/Califórnia/7/2009,
A/Hong Kong/4801/2014,
B/Brisbane/60/2008, e
A/Vietnã/1203/2004;
ou de influenza
A/Califórnia/07/2009 (H1N1),
A/Hong Kong/4801/2014 (H3N2), B/Brisbane/60/2008, B/Phuket/3073/2013, e opcionalmente A/Michigan/45/2015 (H1N1) vírus tipo pdm09.
[0537] Em uma modalidade mais preferida, a composição farmacêutica ou vacina compreende pelo menos 4 sequências de mRNA diferentes derivadas a partir de antígenos do vírus influenza conforme definido acima encapsulados ou associados com mRNA compreendendo nanoparticulas lipidicas de acordo com a invenção.
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372/542 [0538] Preferencialmente, nesse contexto, a(s) sequência(s) de mRNA compreende(m) ou consiste(m) nas seguintes sequências de RNA da Tabela 11 (sequências de RNA preferidas):
Tabela 11: sequências de RNA preferidas
Estirpe / Organismo HA NA
A/Países Baixos/602/2009 SEQ ID NO: 224163 SEQ ID NO: 224326
A/Califórnia/7/2009 SEQ ID NO: 224117 SEQ ID NO: 224318
A/Hong Kong/4801/2014 SEQ ID NO: 224181 SEQ ID NO: 224336
A/Vietnã/1203/2004 ou SEQ ID NO: SEQ ID NO:
A/Vietnã/1194/2004 224198 224342 ou SEQ ID NO: 224344
B/Brisbane/60/2008 SEQ ID NO: 224236 SEQ ID NO: 224348
B/Phuket/3073/2013 SEQ ID NO: 224246 SEQ ID NO: 224350
A/Michigan/45/2015 (H1N1) SEQ ID NO: SEQ ID NO:
vírus tipo pdm09 224133 224324
[0539] Em uma modalidade especificamente
preferida, a composição farmacêutica ou vacina é uma vacina de influenza tetravalente, compreendendo nanopartícuias lipídicas, que compreendem compostos de mRNA conforme definido acima.
[0540] Particularmente preferido nesse contexto é a combinação de mRNAs codificando as seguintes sequências de proteínas (por ex., para preparar um coquetel tetravalente):
- proteína HA da influenza A/Hong Kong/4801/2014 (H3N2) (preferencialmente selecionada a partir do grupo consistindo nas SEQ TD NOs: 13853, 13854, 13855 e 13856); e/ou
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373/542
- proteína HA da influenza A/Califórnia/07/2009 (H1N1) (preferencialmente selecionada a partir do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 13836, 13837, 13838, 13839, 13840, 13841, 13842, 13843 e 13844); e/ou proteína HA da influenza B/Phuket/3037/2013 (EPI540671) (preferencialmente selecionada a partir do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 28530, 28531 e 28532); e/ou proteína HA da influenza B/Brisbane/60/2008 (preferencialmente selecionada a partir do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 28524, 28525, 28526, 28527, 28528 e 28529). [0541] Adicionalmente particularmente preferido nesse contexto é a combinação de mRNAs codificando as seguintes sequências de proteínas (por ex., para preparar um coquetel trivalente):
- proteína NA da influenza A/Hong Kong/4801/2014 (H3N2) (preferencialmente selecionada a partir do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 26251, 26252, 26253 e 26254); e/ou
- proteína NA da influenza A/Califórnia/7/2009 (HlNl)pdmO9 (preferencialmente selecionada a partir do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 26238, 26239, 26240,
26241, 26242 e 26243); e/ou proteína NA da influenza B/Brisbane/60/2008 (preferencialmente selecionada a partir do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 30455, 30456, 30457, 30458, 30459 e 30460). [0542] Ainda adicionalmente particularmente preferido nesse contexto é a combinação de mRNAs
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374/542 codificando as seguintes sequências de proteínas (por ex., para preparar um coquetel tetravalente):
proteína HA da influenza A/Países Baixos/602/2009 (H1N1) (preferencialmente selecionada a partir do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 13848, 13849 e 13850); e/ou
- proteína HA da influenza A/Hong Kong/4801/2014 (H3N2) (preferencialmente selecionada a partir do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 13853, 13854, 13855 e 13856); e/ou proteína HA da influenza B/Brisbane/60/2008 (preferencialmente selecionada a partir do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 28524, 28525, 28526, 28527, 28528 e 28529); e/ou proteína HA da influenza A/Vietnã/1194/2004 (H5N1) (preferencialmente selecionada a partir do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 13859 e 13860). [0543] Também particularmente preferido nesse contexto é a combinação de mRNAs codificando as seguintes sequências de proteínas (por ex., para preparar um coquetel septavalente):
- proteína HA da influenza A/Hong Kong/4801/2014 (H3N2) (preferencialmente selecionada a partir do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 13853, 13854, 13855 e 13856); e/ou
- proteína HA da influenza A/Califórnia/07/2009 (H1N1) (preferencialmente selecionada a partir do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 13836, 13837, 13838, 13839, 13840, 13841, 13842, 13843 e 13844); e/ou
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375/542 proteína HA da influenza B/Phuket/3037/2013 (EPI540671) (preferencialmente selecionada a partir do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 28530, 28531, e 28532); e/ou proteína HA da influenza B/Brisbane/60/2008 (preferencialmente selecionada a partir do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 28524, 28525, 28526, 28527, 28528 e 28529); e/ou
- proteína NA da influenza A/Hong Kong/4801/2014 (H3N2) (preferencialmente selecionada a partir do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 26251, 26252, 26253 e 26254); e/ou
- proteína NA da influenza A/Califórnia/7/2009 (HlNl)pdmO9 (preferencialmente selecionada a partir do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 26238, 26239, 26240,
26241, 26242 e 26243); e/ou proteína NA da influenza B/Brisbane/60/2008 (preferencialmente selecionada a partir do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 30455, 30456, 30457, 30458, 30459 e 30460). [0544] A composição de acordo com a invenção também pode compreender adjuvantes e excipientes adequados farmaceuticamente aceitáveis. Em modalidades preferidas, o adjuvante é preferencialmente adicionado a fim de aumentar as propriedades imunoestimuladoras da composição. Nesse contexto, um adjuvante pode ser entendido como qualquer composto, o qual é adequado para suportar a administração e distribuição da composição de acordo com a invenção. Além disso, um tal adjuvante pode, sem estar ligado ao mesmo, iniciar ou aumentar uma resposta imunitária do sistema
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376/542 imunitário inato, isto é, uma resposta imunitária não específica. Por outras palavras, quando administrada, a composição de acordo com a invenção inicia tipicamente uma resposta imunitária adaptativa devido a um antígeno conforme definido no presente documento ou um fragmento ou variante do mesmo, que é codificado pela pelo menos uma sequência de codificação do mRNA da invenção contido na composição da presente invenção. Adicionalmente, a composição de acordo com a invenção pode gerar uma resposta imunitária inata (de suporte) devido à adição de um adjuvante conforme definido no presente documento à composição de acordo com a invenção.
[0545] Um tal adjuvante pode ser selecionado a partir de qualquer adjuvante conhecido por um perito na técnica e adequado para o presente caso, isto é, suportando a indução de uma resposta imunitária em um mamífero. Preferencialmente, o adjuvante pode ser selecionado a partir do grupo consistindo em, sem estar limitado a esse, TDM, MDP, dipeptídeo de muramila, plurónicos, solução de alúmen, hidróxido de alumínio, ADJUMERTM (polifosfazeno); gel de fosfato de alumínio; glucanos de algas; algamulina; gel de hidróxido de alumínio (alúmen); gel de hidróxido de alumínio altamente adsorvente de proteína; gel de hidróxido de alumínio de baixa viscsidade; AF ou SPT (emulsão de esqualano (5%), Tween 80 (0,2%), Pluronic L121 (1,25%), solução salina tamponada com fosfato, pH 7,4); AVRIDINETM (propanodiamina); BAY R1005TM (hidroacetato de (N-(2desoxi-2-L-leucilamino-b-D-glucopiranosil)-N-octadecildodecanoil-amida); CALCITRIOLTM (1-alfa,25-di-hidroxivitamina D3); gel de fosfato de cálcio; CAPTM
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377/542 (nanopartícuias de fosfato de cálcio), holotoxina da cólera, proteína de fusão A-D do fragmento da proteína toxina Al da cólera, subunidade B da toxina da cólera, CRL 1005 (copolímero em bloco P1205), lipossomas contendo citocina, DDA (brometo de dimetildioctadecilamônio); DHEA (de-hidroepiandrosterona); DMPC (dimiristoilfosfatidilcolina); DMPG (dimiristoilfosfatidilglicerol) ; DOC/complexo de alúmen (sal sddico do ácido desoxicólico) ; adjuvante completo de Freund; adjuvante incompleto de Freund; inulina gama; adjuvante de Gerbu (mistura de: i) N-acetilglucosaminil(Pl-4 )-N-acetilmuramil-L-alanil-D-glutamina (GMDP), ii) cloreto de dimetildioctadecilamônio (DDA), iii) complexo de sal de zinco-L-prolina (ZnPro-8); GM-CSF); GMDP (Nacetilglucosaminil-(bl-4)-N-acetilmuramil-L-alanil-Disoglutamina); imiquimod (1-(2-metilpropil)-IH-imidazo[4,5c]quinolina-4-amina); ImmTherTM (dipalmitato de Nacetilglucosaminil-N-acetilmuramil-L-Ala-D-isoGlu-L-Alaglicerol); DRVs (imunolipossomas preparados a partir de vesículas de desidratação-reidratação); interferon-gama; interleucina-lbeta; interleucina-2; interleucina-7; interleucina-12; ISCOMSTM; ISCOPREP 7.0.3. TM; lipossomas; LOXORIBINETM (7-alil-8-oxoguanosina) ; Adjuvante oral de LT (enterotoxina-protoxina labial de E. coll); microsferas e microparticuias de qualquer composição; MF59TM; (emulsão esqualeno-água); MONTANIDE ISA 51TM (adjuvante incompleto de Freund purificado); MONTANIDE ISA 720TM (adjuvante de óleo metabolizável); MPLTM (3-Q-desacil-4'-monofosforillipídeo A) ; MTP-PE e lipossomas de MTP-PE (sal de monossódio de N-acetil-L-alanil-D-isoglutaminil-L-alaninaPetição 870190039457, de 26/04/2019, pág. 400/744
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2-(1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-(hidroxifosforiloxi)) etilamida); MURAMETIDETM (Nac-Mur-L-Ala-D-Gln-0CH3); MURAPALMITINETM e D-MURAPALMITINETM (Nac-Mur-L-Thr-DisoGIn-sn-gliceroldipalmitoila); NAGO (neuraminidasegalactose oxidase); nanoesferas ou nanoparticulas de qualquer composição, NISVs (vesículas surfactantes não iônicas), PLEURANTM (β-glucano), PLGA, PGA e PLA (homo- e co-pollmeros de ácido lático e ácido glicólico;
microesferas/nanoesferas) ; PLURONIC L121TM; PMMA (metacrilato de polimetila), PODDSTM (microesferas proteinóides), derivados de carbamato de polietileno; polirA: poli-rU (complexo de ácido poliadenilicopoliuridilico), polissorbato 80 (Tween 80); cocleatos de proteína (Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL); STIMULONTM (QS-21); Quil-A (saponina de Quil-A); S-28463 (4-amino-otec-dimetil-2-etoximetil-lH-imidazo[4,5 c]quinolina-l-etanol) , SAF-1TM (formulação de adjuvante Syntex); proteolipossomas de Sendai e matrizes lipidicas contendo Sendai; Span-85 (trioleato de sorbitano); Specol (emulsão de Marcol 52, Span 85 e Tween 85); esqualeno ou Robane® (2,6,10,15,19,23-hexametiltetracosano e
2,6,10,15,19,23-hexametil-2,6,10,14,18,22-tetracosahexano); esteariltirosina (cloridrato de octadeciltirosina); Theramid® (N-acetilglucosaminil-Nacetilmuramil-L-Ala-D-isoGlu-L-Ala-dipalmitoxipropilamida); Theronyl-MDP (TermurtideTM ou [thr 1]-MDP; N-acetilmuramilL-treonil-D-isoglutamina); partículas Ty (Ty-VLPs ou partículas tipo virus); lipossomas de Walter-Reed (lipossomas contendo lipídeo A adsorvido em hidóxrido de alumínio) e lipopeptideos, incluindo Pam3Cys, em particular
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379/542 sais de alumínio, tais como Adju-phos, Al-hidrogel, Rehidragel; emulsões, incluindo CFA, SAF, IFA, MF59, Provax, TiterMax, Montanide, Vaxfectina; copolímeros, incluindo Optivax (CRL1005), L121, Poloaxmer4010), etc.; lipossomas, incluindo Stealth, cocleates, incluindo BIORAL; adjuvantes derivado de plantas, incluindo QS21, Quil A, Iscomatrix, ISCOM; adjuvantes adequados para coestimulação incluindo Tomatina, biopolímeros, incluindo PLG, PMM, Inulina; adjuvantes derivado de micróbios, incluindo sequências de ácido nucleico de Romurtide, DETOX, MPL, CWS, Manose, sequências de ácido nucleico CpG, CpG7909, ligantes de TLR 1-10 humano, ligantes de TLR 1-13 murine, ISS-1018, IC31, Imidazoquinolinas, Amipligen, Ribi529, IMOxina, IRIVs, VLPs, toxina da cólera, toxina lábil ao calor, Pam3Cys, Flagelina, âncora GPI, LNFPIII/Lewis X, peptídeos antimicrobianos, UC-1V150, proteína de fusão RSV, cdiGMP; e adjuvantes adequados como antagonistas incluindo o neuropeptídeo CGRP.
[0546] Particularmente preferido, um adjuvante pode ser selecionado a partir de adjuvantes, que suportam a indução de uma resposta Thl-imune ou a maturação de células T naife, tais como GM-CSF, IL-12, IFNy, qualquer ácido nucleico imunoestimulador, conforme definido acima, preferencialmente um RNA imunoestimulador, DNA CpG, etc.
[0547] Em uma modalidade adicional preferida também é possível que a composição da invenção contenha, adicionalmente aos componentes de mRNA que conferem antígeno, outros componentes que sejam selecionados a partir do grupo compreendendo: antígenos adicionais (por exemplo, na forma de um peptídeo ou proteína) ou
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380/542 adicionalmente ácidos nucleicos codificando o antígeno; um agente imunoterapêutico adicional; uma ou mais substâncias auxiliares; ou qualquer outro composto, que é conhecido por ser imunoestimulante devido à sua afinidade de ligação (como ligantes) aos receptores tipo Toll humanos; e/ou um ácido nucleico adjuvante, preferencialmente um RNA imunoestimulador (RNAis).
[0548] A composição da presente invenção adicionalmente pode conter uma ou mais substâncias auxiliares de modo a aumentar a sua imunogenicidade ou capacidade imunoestimuladora, se desejado. Uma ação sinergística do mRNA conforme definido no presente documento e de uma substância auxiliar, que pode opcionalmente estar contida na composição da invenção, é preferencialmente conseguida dessa forma. Dependendo dos vários tipos de substâncias auxiliares, vários mecanismos podem ser considerados a esse respeito. Por exemplo, compostos que permitem a maturação de células dendríticas (DC), por exemplo, lipopolissacarídeos, TNF-alfa ou ligante CD40, formam uma primeira classe de substâncias auxiliares adequadas. Em geral, é possível usar como substância auxiliar qualquer agente que influencie o sistema imunitário na forma de um sinal de perigo (LPS, GP96, etc.) ou citocinas, tais como GM-CFS, que permitem que uma resposta imunitária seja melhorada e/ou influenciada de maneira direcionada. As substâncias auxiliares particularmente preferidas são as citocinas, tais como monocinas, linfocinas, interleucinas ou quimiocinas, que adicionalmente promovem a resposta imunitária inata, tais como IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9,
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IL-10, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23, IL-24, IL-25, IL-26, IL-27, IL-28, IL-29, IL-30, IL-31, IL-32, IL-33, IFN-alfa, IFNbeta, IFN-gama, GM-CSF, G-CSF, M-CSF, LT-beta ou TNF-alfa, fatores de crescimento, tais como hGH.
[0549] Adjuvantes adequados podem além disso ser selecionados a partir de ácidos nucleicos tendo a fórmula GlXmGn, em que: G é guanosina, uracila ou um análogo de guanosina ou uracila; X é guanosina, uracila, adenosina, timidina, citosina ou um análogo dos nucleotídeos acima mencionados; 1 é um número inteiro de 1 a 40, em que quando 1 = 1 G é guanosina ou um análogo da mesma, quando 1 > 1 pelo menos 50% dos nucleotídeos são guanosina ou um análogo da mesma; m é um número inteiro e é pelo menos 3; em que quando m = 3 X é uracila ou um análogo da mesma, quando m > 3 ocorrem pelo menos 3 uracilas sucessivas ou análogos de uracila; n é um número inteiro de 1 a 40, em que quando n = 1 G é guanosina ou um análogo da mesma, quando n > 1 pelo menos 50% dos nucleotídeos são guanosina ou um análogo da mesma, ou fórmula: (NuGlXmGnNv)a, em que: G é guanosina (guanina), uridina (uracila) ou um análogo de guanosina (guanina) ou uridina (uracila), preferencialmente guanosina (guanina) ou um análogo da mesma; X guanosina (guanina), uridina (uracila), adenosina (adenina), timidina (timina), citidina (citosina) ou um análogo desses nucleotídeos (nucleosídeos), preferencialmente uridina (uracila) ou um análogo da mesma; N é uma sequência de ácido nucleico tendo um comprimento de cerca de 4 a 50, preferencialmente de cerca de 4 a 40, mais preferencialmente de cerca de 4 a 30 ou 4 a 20 ácidos
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382/542 nucleicos, sendo cada N independentemente selecionado a partir de guanosina (guanina), uridina (uracila), adenosina (adenina), timidina (timina), citidina (citosina) ou um análogo desses nucleotídeos (nucleosídeos); a é um número inteiro de 1 a 20, preferencialmente de 1 a 15, o mais preferencialmente de 1 a 10; 1 é um número inteiro de 1 a 40, em que quando 1 = 1, G é guanosina (guanina) ou um análogo da mesma, quando 1 > 1, pelo menos 50% desses nucleotídeos (nucleosídeos) são guanosina (guanina) ou um análogo da mesma; m é um número inteiro e é pelo menos 3; em que quando m = 3, X é uridina (uracila) ou um análogo da mesma e, quando m > 3, ocorrem pelo menos 3 uridinas sucessivas (uracilas) ou análogos de uridina (uracila); n é um número inteiro de 1 a 40, em que quando n = 1, G é guanosina (guanina) ou um análogo da mesma, quando n> 1, pelo menos 50% desses nucleotídeos (nucleosídeos) são guanosina (guanina) ou um análogo da mesma; u, v podem ser independentemente um do outro um número inteiro de 0 a 50, preferencialmente em que quando u = 0, v > 1, ou quando v = 0, u ã 1; em que a molécula de ácido nucleico de fórmula (NuGlXmGnNv)a tem um comprimento de pelo menos 50 nucleotídeos, preferencialmente de pelo menos 100 nucleotídeos, mais preferencialmente de pelo menos 150 nucleotídeos, ainda mais preferencialmente de pelo menos 200 nucleotídeos e o mais preferencialmente de pelo menos 250 nucleotídeos.
[0550] Outros adjuvantes adequados podem além disso ser selecionados a partir de ácidos nucleicos tendo a fórmula: ClXmCn, em que: C é citosina, uracila ou um análogo de citosina ou uracila; X é guanosina, uracila,
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383/542 adenosina, timidina, citosina ou um análogo dos nucleotídeos acima mencionados; 1 é um número inteiro de 1 a 40, em que quando 1 = 1 C é citosina ou um análogo da mesma, quando 1 > 1 pelo menos 50% dos nucleotídeos são citosina ou um análogo da mesma; m é um número inteiro e é pelo menos 3; em que quando m = 3 X é uracila ou um análogo da mesma, quando m > 3 ocorrem pelo menos 3 uracilas sucessivas ou análogos de uracila; n é um número inteiro de 1 a 40, em que quando n = 1 C é citosina ou um análogo da mesma, quando n > 1 pelo menos 50% dos nucleotídeos são citosina ou um análogo da mesma.
[0551] Nesse contexto, a divulgação dos documentos W02008/014979 e W02009/095226 também é incorporada no presente documento por referência.
[0552] Em um aspecto adicional, a presente invenção fornece uma vacina, que é baseada no mRNA compreendendo nanoparticulas lipidicas de acordo com a invenção compreendendo pelo menos um composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA compreendendo a região de codificação conforme definido no presente documento. A vacina de acordo com a invenção é preferencialmente uma composição (farmacêutica) conforme definido no presente documento.
[0553] Por conseguinte, a vacina de acordo com a invenção se baseia nos mesmos componentes que a composição (farmacêutica) descrita no presente documento. Na medida em que, se pode referir à descrição da composição (farmacêutica) conforme fornecida no presente documento. Preferencialmente, a vacina de acordo com a invenção compreende pelo menos um mRNA compreendendo nanoparticulas
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384/542 lipidicas compreendendo pelo menos uma sequência de mRNA conforme definido no presente documento e um portador farmaceuticamente aceitável. Em modalidades, onde a vacina compreende mais do que uma sequência de mRNA (tal como uma pluralidade de sequências de RNA de acordo com a invenção, em que cada uma codifica preferencialmente um peptideo ou proteína antigênicos distinto) encapsulada em mRNA compreendendo nanoparticulas lipidicas, a vacina pode ser fornecida fisicamente de forma separada e pode ser administrada por passos de administração separados. A vacina de acordo com a invenção pode corresponder à composição (farmacêutica) conforme descrito no presente documento, especialmente quando as sequências de mRNA são conferidas por uma única composição. No entanto, a vacina da invenção também pode ser fornecida fisicamente separada. Por exemplo, em modalidades, em que a vacina compreende mais do que uma sequência/espécie de mRNA encapsulada em mRNA compreendendo nanoparticulas lipidicas conforme definido no presente documento, essas espécies de RNA podem ser conferidas de tal modo que, por exemplo, duas, três, quatro, cinco ou seis composições separadas, que podem conter pelo menos uma espécie/sequência de mRNA cada (por ex. três espécies/sequências de mRNA distintas), cada uma codificando peptídeos, ou proteínas, antigênicos distintos, que podem ou não ser combinados. Além disso, a vacina da invenção pode ser uma combinação de pelo menos duas composições distintas, cada composição compreendendo, pelo menos, um mRNA codificando, pelo menos, um dos peptídeos, ou proteínas, antigênicos definidos no presente documento. Alternativamente, a vacina pode ser conferida como uma
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385/542 combinação de pelo menos um mRNA, preferencialmente pelo menos dois, três, quatro, cinco, seis ou mais mRNAs, cada um codificando um dos peptídeos, ou proteínas, antigênicos definidos no presente documento. A vacina pode ser combinada de modo a conferir uma única composição antes do seu uso ou pode ser usada de tal modo que seja necessária mais do que uma administração para administrar as diferentes sequências/espécies de mRNA codificando qualquer um dos peptídeos, ou proteínas, antigênicos encapsulados no mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas conforme definido no presente documento. Se a vacina contiver pelo menos um mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas, tipicamente compreendendo pelo menos duas sequências de mRNA, codificando as combinações de antígenos definidas no presente documento, pode por exemplo ser administrado por uma única administração (combinando todas as sequências/espécies de mRNA), por, pelo menos, duas administrações. Adequadamente; qualquer combinação de mRNA mono-, bi- ou multicistrônico codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos ou qualquer combinação de antígenos conforme definido no presente documento (e opcionalmente antígenos adicionais), conferidos como entidades separadas (contendo uma espécie de mRNA) ou como entidades combinadas (contendo mais do que uma espécie de mRNA), é entendida como uma vacina de acordo com a presente invenção. De acordo com uma modalidade particularmente preferida da vacina da invenção, o pelo menos um antígeno, preferencialmente, uma combinação conforme definido no presente documento de pelo menos dois, três, quatro, cinco, seis ou mais antígenos codificados pela composição da
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386/542 invenção como um todo, é fornecido como um mRNA individual (monocistrônico), que é administrado separadamente.
[0554] Tal como com a composição (farmacêutica) de acordo com a presente invenção, as entidades da vacina podem ser fornecidas na forma líquida e ou na forma seca (por exemplo, liofilizada). Podem conter componentes adicionais, em particular componentes adicionais que permitam o seu uso farmacêutico. A vacina ou a composição (farmacêutica) pode, por exemplo, conter adicionalmente um portador farmaceuticamente aceitável e/ou substâncias auxiliares e aditivos e/ou adjuvantes adicionais.
[0555] A vacina ou composição (farmacêutica) compreende tipicamente uma quantidade segura e eficaz do composto de mRNA de acordo com a invenção conforme definido no presente documento, codificando um peptídeo ou proteína antigênicos conforme definido no presente documento ou um fragmento ou variante do mesmo ou uma combinação de antígenos, encapsulados dentro e/ou associado com as nanopartícuias lipídicas. Conforme usado no presente documento, quantidade segura e eficaz significa uma quantidade do mRNA que é suficiente para induzir significativamente uma modificação positiva do câncer ou de uma doença ou distúrbio relacionado com o câncer. Ao mesmo tempo, no entanto, uma quantidade segura e eficaz é pequena o suficiente para evitar efeitos secundários graves, isto é, para permitir uma relação sensata entre a vantagem e o risco. A determinação desses limites normalmente está dentro do âmbito do julgamento médico sensato. Em relação à vacina ou composição (farmacêutica)
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387/542 da presente invenção, a expressão quantidade segura e eficaz significa, preferencialmente, uma quantidade do mRNA (e portanto do antigeno codificado) que é adequada para estimular o sistema imunitário adaptativo de tal modo que não é conseguida qualquer reação imunitária excessiva ou prejudicial mas, preferencialmente, também nenhuma reação imunitária abaixo de um nível mensurável. Uma tal quantidade segura e eficaz do mRNA da composição (farmacêutica) ou vacina conforme definido no presente documento pode ser adicionalmente selecionada em dependência do tipo de mRNA, por exemplo, mRNA monocistrônico, bi- ou mesmo multicistrônico, uma vez que um mRNA bi- ou mesmo multicistrônico pode conduzir a uma expressão significativamente mais elevada do(s) antigeno(s) codificado (s) do que o uso de uma quantidade igual de mRNA monocistrônico. Uma quantidade segura e eficaz do mRNA da composição (farmacêutica) ou vacina conforme definido acima irá ainda mais variar mais em relação com a condição particular a ser tratada e também com a idade e condição física do paciente a ser tratado, a gravidade da condição, a duração do tratamento, a natureza da terapia acompanhante, do portador farmaceuticamente aceitável particular usado, e fatores semelhantes, dentro do conhecimento e experiência do médico acompanhante. A vacina ou composição de acordo com a invenção pode ser usada de acordo com a invenção para humanos e também para fins medicinais veterinários, tal como uma composição farmacêutica ou como uma vacina.
[0556] Em uma modalidade preferida, o mRNA compreendendo nanoparticulas lipidicas da composição
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388/542 (farmacêutica), vacina ou kit de partes de acordo com a invenção é fornecido na forma liofilizada. Preferivelmente, o mRNA liofilizado compreendendo nanopartícuias lipídicas é reconstituído em um tampão adequado, vantajosamente baseado em um portador aquoso, antes da administração, por ex., solução de Ringer-Lactato, solução de Ringer, uma solução tampão de fosfato. Em uma modalidade preferida, a composição (farmacêutica), a vacina ou o kit de partes de acordo com a invenção contêm pelo menos um, dois, três, quatro, cinco, seis ou mais compostos de mRNA, que podem ser fornecidos como uma única espécie de nanopartícuias lipídicas, ou separadamente para cada espécie de LNP, opcionalmente na forma liofilizada (opcionalmente em conjunto com pelo menos um aditivo adicional) e que são preferencialmente reconstituídas separadamente em um tampão adequado (tal como solução de Ringer-Lactato) antes do seu uso de modo a permitir administração individual de cada um dos mRNAs (monocistrônicos).
[0557] A vacina ou composição (farmacêutica) de acordo com a invenção pode conter tipicamente um portador farmaceuticamente aceitável. A expressão portador farmaceuticamente aceitável, conforme usado no presente documento, preferencialmente inclui a base líquida ou não líquida da vacina da invenção. Se a vacina da invenção for fornecida na forma líquida, o portador será água, tipicamente água livre de pirogênio; solução salina isotônica ou soluções tamponadas (aquosas), por exemplo soluções tamponadas com fosfato, citrato, etc. Particularmente para injeção da vacina da invenção, pode ser usada água ou preferencialmente um tampão, mais
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389/542 preferencialmente um tampão aquoso, contendo um sal de sódio, preferencialmente pelo menos 50 mM de um sal de sódio, um sal de cálcio, preferencialmente pelo menos 0,01 mM de um sal de cálcio e, opcionalmente, um sal de potássio, preferencialmente pelo menos 3 mM de um sal de potássio. De acordo com uma modalidade preferida, os sais de sódio, cálcio e, opcionalmente, potássio podem ocorrer na forma de seus halogenetos, por exemplo, cloretos, iodetos ou brometos, na forma dos seus hidróxidos, carbonates, hidrogenocarbonatos ou sulfatos, etc. Sem estar limitado a esses, exemplos de sais de sódio incluem por ex., NaCl, NaI, NaBr, Na2CO3, NaHCO3, Na2SO4, exemplos dos sais opcionais de potássio incluem por ex. , KC1, Kl, KBr, K2CO3, KHCO3, K2SO4, e exemplos de sais de cálcio incluem por ex., CaC12, CaI2, CaBr2, CaCO3, CaSO4, Ca(OH)2. Além disso, os ânions orgânicos dos cátions acima mencionados podem estar contidos no tampão. De acordo com uma modalidade mais preferida, o tampão adequado para injeção conforme definido acima, pode conter sais selecionados a partir de cloreto de sódio (NaCl), cloreto de cálcio (CaC12) e opcionalmente cloreto de potássio (KC1), em que ânions adicionais podem estar presentes adicionais nos cloretos. O CaC12 também pode ser substituído por outro sal tal como o KC1. Tipicamente, os sais no tampão de injeção estão presentes em uma concentração de pelo menos 50 mM de cloreto de sódio (NaCl), pelo menos 3 mM de cloreto de potássio (KC1) e pelo menos 0,01 mM de cloreto de cálcio (CaC12) . O tampão de injeção pode ser hipertônico, isotônico ou hipotônico com referência ao meio de referência específico, ou seja, o tampão pode ter um teor
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390/542 em sal superior, idêntico ou inferior com referência ao meio de referência específico, em que preferencialmente podem ser usadas essas concentrações dos sais acima mencionados, que não conduzem a danos das células devido a osmose ou outros efeitos de concentração. Os meios de referência são, por exemplo, em métodos in vivo que ocorrem líquidos tais como sangue, linfa, líquidos citosólicos ou outros líquidos corporais, ou por ex., líquidos, que podem ser usados como meios de referência em métodos in vitro, tais como tampões ou líquidos comuns. Tais tampões ou líquidos comuns são conhecidos por um perito na técnica.
[0558] No entanto, um ou mais enchimentos ou diluentes ou compostos encapsulantes sólidos ou líquidos compatíveis também podem ser usados, os quais são adequados para administração a uma pessoa. O termo compatível tal como usado no presente documento significa que os constituintes da vacina da invenção são capazes de serem misturados com o mRNA de acordo com a invenção conforme definido no presente documento, de tal maneira que não corra qualquer interação, o que iria reduzir substancialmente a eficácia farmacêutica da vacina da invenção sob condições típicas de uso. Transportadores, enchimentos e diluentes farmaceuticamente aceitáveis devem, evidentemente, ter pureza suficientemente elevada e toxicidade suficientemente baixa para os tornar adequados para administração a uma pessoa a ser tratada. Alguns exemplos de compostos que podem ser usados como portadores, enchimentos ou constituintes farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos são açúcares, tais como, por exemplo, lactose,
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391/542 glucose, trealose e sacarose; amidos, tais como, por exemplo, amido de milho ou amido de batata; dextrose; celulose e seus derivados, tais como, por exemplo, carboximetilcelulose de sódio, etilcelulose, acetato de celulose; tragacanto em pó; malte; gelatina; sebo; deslizantes sólidos, tais como, por exemplo, ácido esteárico, estearato de magnésio; sulfato de cálcio; óleos vegetais, tais como, por exemplo, óleo de amendoim, óleo de semente de algodão, óleo de sésamo, azeite, óleo de milho e óleo a partir de teobroma; polióis, tais como, por exemplo, polipropilenoglicol, glicerol, sorbitol, manitol e polietilenoglicol; ácido algínico.
[0559] A escolha de um portador farmaceuticamente aceitável é determinada, em princípio, pela maneira em que a composição farmacêutica ou vacina de acordo com a invenção é administrada. A composição ou vacina pode ser administrada, por exemplo, sistemicamente ou localmente. As vias de administração sistêmica em geral incluem, por exemplo, vias transdérmicas, orais, parenterais, incluindo injeções subcutâneas, intravenosas, intramusculares, intra-arteriais, intradérmicas e intraperitoneais e/ou vias de administração intranasais. As vias para administração local em geral incluem, por exemplo, vias de administração tópica mas também injeções intradérmicas, transdémicas, subcutâneas ou intramusculares, ou injeções intralesionais, intracranianas, intrapulmonares, intracardíacas e sublinguais. Mais preferencialmente, a composição ou vacinas de acordo com a presente invenção podem ser administradas por via intradérmica, subcutânea ou
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392/542 intramuscular, preferencialmente por injeção, que pode ser sem agulha e/ou injeção com agulha. As composições/vacinas são portanto preferencialmente formuladas na forma líquida ou sólida. A quantidade adequada da vacina ou composição de acordo com a invenção a ser administrada pode ser determinada por experiências de rotina, por exemplo, usando modelos animais. Tais modelos incluem, sem implicar qualquer limitação, modelos de coelho, ovelha, camundongo, rato, cão e primata não humano. As formas de dosagem unitária preferidas para injeção incluem soluções estéreis de água, soro fisiológico ou misturas das mesmas. 0 pH de tais soluções deve ser ajustado para um pH fisiologicamente tolerável, tal como cerca de 7,4. Os portadores adequados para injeção incluem hidrogéis, dispositivos para liberação controlada ou retardada, ácido poliláctico e matrizes de colágeno. Os portadores farmaceuticamente aceitáveis adequados para aplicação tópica incluem aqueles que são adequados para uso em loções, cremes, géis e semelhantes. Se a composição ou vacina da invenção for para ser administrada peroralmente, os comprimidos, cápsulas e semelhantes são a forma de dosagem unitária preferida. Os portadores farmaceuticamente aceitáveis para a preparação de formas de dosagem unitária que podem ser usados para administração oral são bem conhecidos na técnica anterior. A sua escolha irá depender de considerações secundárias, tais como sabor, custos e armazenamento, que não são críticos para os fins da presente invenção, e que podem ser feitos sem dificuldade por um perito na técnica.
[0560] A vacina ou composição da invenção pode adicionalmente conter uma ou mais substâncias auxiliares de
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393/542 modo a aumentar ainda mais a imunogenicidade. Uma ação sinergística do mRNA contido na composição da invenção e de uma substância auxiliar, que pode opcionalmente ser coformulada (ou formulada separadamente) com a vacina ou composição da invenção, conforme descrito acima, é preferencialmente conseguida dessa forma. Dependendo dos vários tipos de substâncias auxiliares, vários mecanismos podem desempenhar um papel nesse sentido. Por exemplo, compostos que permitem a maturação de células dendríticas (DC), por exemplo, lipopolissacarídeos, TNF-alfa ou ligante CD40, formam uma primeira classe de substâncias auxiliares adequadas. Em geral, é possível usar como substância auxiliar qualquer agente que influencie o sistema imunitário na forma de um sinal de perigo (LPS, GP96, etc.) ou citocinas, tais como GM-CFS, que permitem que uma resposta imunitária produzida pelo adjuvante imunoestimulado de acordo com a invenção seja melhorada e/ou influenciada de maneira direcionada. As substâncias auxiliares particularmente preferidas são as citocinas, tais como monocinas, linfocinas, interleucinas ou quimiocinas, que - além da indução da resposta imunitária adaptativa pelo pelo menos um antígeno codificado promovem a resposta imunitária inata, tais como IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-19, IL-20, IL-21,
IL-22, IL-23, IL-24, IL-25, IL-26, IL-27, IL-28, IL-29, IL-
30, IL-31, IL-32, IL- -33, IFN-alfa, IFN-beta, IFN-gama, GM-
CSF, G-CSF, M-CSF, LT-beta ou TNF-alfa, fatores de
crescimento, tais como hGH. Preferencialmente, esses
agentes ou compostos aumentadores da imunogenicidade são
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394/542 conferidos separadamente (não coformulados com a vacina ou composição da invenção) e administrados individualmente.
[0561] Aditivos adicionais que podem ser incluídos na vacina ou composição da invenção são emulsionantes, tais como, por exemplo, Tween; agentes molhantes, tais como, por exemplo, laurilsulfato de sódio; agentes corantes; agentes que transmitem sabor, portadores farmacêuticos; agentes formadores de comprimidos; estabilizadores; antioxidantes; conservantes.
[0562] A vacina ou composição da invenção também pode conter adicionalmente qualquer composto adicional, que é conhecido por ser imunoestimulante devido à sua afinidade de ligação (como ligantes) a receptores tipo Toll humanos TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10, ou devido à sua afinidade de ligação (como ligantes) aos receptores tipo Toll de murinos TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10, TLR11, TLR12 ou TLR13.
[0563] Outra classe de compostos, que podem ser adicionados a uma vacina ou composição da invenção nesse contexto, podem ser ácidos nucleicos CpG, em particular, CpG-RNA ou CpG-DNA. Um CpG-RNA ou CpG-DNA pode ser um CpG-DNA de cadeia simples (ss CpG-DNA), um CpG-DNA de cadeia dupla (dsDNA), um CpG-RNA de cadeia simples (ss CpG-RNA) ou um CpG-RNA de cadeia dupla (ds CpG-RNA). O ácido nucleico CpG está preferencialmente na forma de CpGRNA, mais preferencialmente na forma de CpG-RNA de cadeia simples (ss CpG-RNA). O ácido nucleico CpG contém, preferencialmente, pelo menos uma ou mais sequências dinucleotídicas (mitogênicas) de citosina/guanina
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395/542 (motivo(s) CpG) . De acordo com uma primeira alternativa preferida, pelo menos um motivo CpG contido nessas sequências, isto é, a C (citosina) e a G (guanina) do motivo CpG, não é metilado. Todas as citosinas ou guaninas adicionais opcionalmente contidas nessas sequências podem ser metiladas ou não metiladas. De acordo com uma alternativa adicional preferida, no entanto, a C (citosina) e a G (guanina) do motivo CpG também podem estar presentes na forma metilada.
[0564] De acordo com outro aspecto da presente invenção, a presente invenção também confere um kit, em particular, um kit de partes, compreendendo o composto de mRNA compreendendo a sequência de mRNA conforme definido no presente documento e pelo menos um lipídeo de acordo com a fórmula (I), (IT), (III) ou (IV) conforme definido acima. Em uma modalidade adicional, o kit compreende uma nanopartícuia lipídica conforme definido acima ou a composição (farmacêutica) compreendendo uma nanopartícuia lipídica conforme definido acima, e/ou a vacina de acordo com a invenção, opcionalmente um veículo líquido para solubilização e opcionalmente instruções técnicas com informação sobre a administração e dosagem do mRNA compreendendo nanoparticulas lipidicas, a composição e/ou a vacina. As instruções técnicas podem conter informação sobre a administração e dosagem do mRNA compreendendo nanoparticulas lipidicas, a composição e/ou a vacina. Tais kits, preferencialmente kits de partes, podem ser aplicados, por exemplo, para qualquer uma das aplicações ou usos acima mencionados, preferencialmente para o uso da nanopartícuia lipídica de acordo com a invenção (para a
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396/542 preparação de um medicamento da invenção, preferencialmente uma vacina) para o tratamento ou profilaxia de infecções por virus influenza ou doenças ou distúrbios relacionados com o mesmo. Os kits também podem ser aplicados para o uso da nanopartícuia lipídica, a composição ou a vacina conforme definido no presente documento (para a preparação de uma vacina da invenção) para o tratamento ou profilaxia de infecções por vírus influenza ou doenças ou distúrbios relacionados com as mesmas, em que as nanopartícuias lipídicas, a composição e/ou a vacina podem ser capazes de induzir ou intensificar uma resposta imunitária em um mamífero conforme definido acima. Tais kits podem adicionalmente ser aplicados para o uso da nanopartícuia lipídica, a composição ou a vacina conforme definido no presente documento (para a preparação de uma vacina da invenção) para modular, preferencialmente para induzir, por exemplo, para induzir ou aumentar, uma resposta imunitária em um mamífero conforme definido acima e, preferencialmente, para suportar o tratamento ou profilaxia de infecções por vírus influenza ou doenças ou distúrbios relacionados com o mesmo. Os kits de partes, como uma forma especial de kits, podem conter uma ou mais composições idênticas ou diferentes e/ou uma ou mais vacinas idênticas ou diferentes conforme descrito no presente documento em partes diferentes do kit. Os kits de partes podem também conter uma (por exemplo uma) composição, uma (por exemplo uma) vacina e/ou o mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas de acordo com a invenção em diferentes partes do kit, por exemplo, cada parte do kit contendo um mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas conforme definido no
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397/542 presente documento, preferencialmente codificando um antígeno distinto. De preferência, o kit ou o kit de partes contém como parte um veículo para solubilizar o mRNA de acordo com a invenção, o veículo opcionalmente sendo uma solução de lactato de Ringer. Qualquer um dos kits acima pode ser usado em um tratamento ou profilaxia conforme definido acima.
[0565] Noutra modalidade desse aspecto, o kit de acordo com a presente invenção pode adicionalmente conter pelo menos um adjuvante. Em uma modalidade adicional, o kit de acordo com a presente invenção pode adicionalmente conter pelo menos um componente farmaceuticamente ativo adicional, preferencialmente, um composto terapêutico adequado para tratamento e/ou profilaxia de câncer ou um distúrbio relacionado. Além disso, noutra modalidade, o kit pode conter adicionalmente partes e/ou dispositivos necessários ou adequados para a administração da composição ou da vacina de acordo com a invenção, incluindo agulhas, aplicadores, emplastros, dispositivos de injeção.
[0566] Em um aspecto adicional, a invenção se refere com o uso de mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas ou a composição farmacêutica como um medicamento. Em uma modalidade alternativa, a presente invenção se refere ao uso da composição farmacêutica ou do mRNA compreendendo o lipídeo no fabrico de um medicamento. Em particular, o referido medicamento é para aumentar de forma terapêutica ou profilática uma resposta imunitária de um sujeito com necessidade da mesma.
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398/542 [0567] Em uma modalidade preferida, ο medicamento é para a prevenção ou tratamento de câncer ou doenças tumorais, doenças infecciosas, alergias ou doenças autoimunes ou distúrbios relacionados com essas.
[0568] Em particular, o medicamento é para o tratamento de um sujeito, preferencialmente um vertebrado. Em uma modalidade preferida, o sujeito é um mamífero, preferencialmente, selecionado a partir do grupo compreendendo cabra, gado bovino, suíno, cão, gato, burro, macaco, símio, um roedor, tal como um camundongo, hamster, coelho e, particularmente, humano.
[0569] Em uma modalidade preferida particular, o medicamento é uma vacina, preferencialmente, uma vacina contra tumores, influenza ou raiva. Em uma modalidade específica, o medicamento é uma vacina da raiva usada no tratamento da raiva.
[0570] O medicamento pode ser administrado de qualquer maneira adequada. Preferencialmente, o medicamento é para administração parentérica, em particular, injeção.
[0571] A invenção se refere ainda a um método para aumentar uma resposta imunitária em um sujeito com necessidade da mesma, compreendendo a administração ao sujeito de uma nanopartícuia lipidica conforme definida acima ou uma composição farmacêutica conforme definida acima.
[0572] Em um aspecto adicional, a invenção se refere a um método para prevenção ou tratamento de câncer ou doenças tumorais, doenças infecciosas, alergias ou doenças ou distúrbios autoimunes relacionados com as mesmas em um sujeito com necessidade das mesmas, compreendendo a
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administração ao suj eito de uma nanopartícuia lipídica
conforme definido acima ou uma composição farmacêutica
conforme definido [0573] acima. De acordo com um aspecto da presente
invenção, o mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas, a composição (farmacêutica) ou a vacina podem ser usadas de acordo com a invenção (para a preparação de um medicamento) para o tratamento ou profilaxia de câncer ou doenças tumorais, doenças infecciosas, alergias ou doenças autoimunes ou distúrbios relacionados com as mesmas. Nesse contexto, é particularmente preferido o tratamento ou profilaxia de infecções pelo vírus Influenza ou pelo vírus da Raiva.
[0574] Além disso, também estão incluídos na presente invenção métodos de tratamento ou de prevenção de doenças cancerígenas ou tumorais, doenças infecciosas, alergias ou doenças autoimunes ou distúrbios relacionados com as mesmas, preferencialmente conforme definido no presente documento, através da administração a um sujeito com necessidade da mesma, de uma quantidade farmaceuticamente eficaz do mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas, a composição (farmacêutica) ou a vacina de acordo com a invenção. Tal método compreende tipicamente um primeiro passo opcional de preparação do mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas, a composição ou a vacina da presente invenção, e um segundo passo, compreendendo a administração (de uma quantidade farmaceuticamente eficaz) da referida composição ou vacina a um paciente/indivíduo com necessidade da mesma. Um sujeito com necessidade da mesma será tipicamente um
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400/542 mamífero. No contexto da presente invenção, o mamífero é preferencialmente selecionado a partir do grupo compreendendo, sem estar limitado a ele, por exemplo, cabra, gado bovino, suíno, cão, gato, burro, macaco, símio, um roedor, tal como um camundongo, hamster, coelho e, particularmente, humano. Em algumas modalidades da invenção, o sujeito é uma ave, preferencialmente uma galinha.
[0575] Nesse contexto, preferencialmente incluídos na presente invenção estão métodos de tratamento ou prevenção de infecções por vírus influenza ou vírus da Raiva ou distúrbios relacionados com as mesmas.
[0576] A invenção também se refere ao uso do mRNA compreendendo nanoparticulas lipidicas, a composição ou a vacina de acordo com a invenção, preferencialmente para induzir uma resposta imunitária em um mamífero, preferencialmente para o tratamento ou profilaxia de doenças cancerígenas ou tumorais, doenças infecciosas, alergias ou doenças ou distúrbios autoimunes relacionados com as mesmas, preferencialmente de infecções por vírus influenza ou vírus da Raiva ou um estado relacionado conforme definido no presente documento.
[0577] A presente invenção compreende ainda o uso do mRNA compreendendo nanoparticulas lipidicas, a composição (farmacêutica) ou a vacina de acordo com a invenção conforme definido no presente documento para modulação, preferencialmente para indução ou aumento, de uma resposta imunitária em um mamífero conforme definido no presente documento, mais preferencialmente para prevenção e/ou tratamento de infecções por vírus influenza, ou de
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401/542 doenças ou distúrbios relacionados com as mesmas. Nesse contexto, o apoio ao tratamento ou profilaxia de infecções por virus influenza pode ser qualquer combinação de um método convencional de terapia da influenza, tal como terapia com antivirals tais como inibidores da neuraminidase (por exemplo, oseltamivir e zanamivir) e inibidores da proteína M2 (por exemplo, derivado de adamantano) e uma terapia usando o RNA ou a composição farmacêutica conforme definido no presente documento. O apoio do tratamento ou a profilaxia de infecções por vírus influenza também pode ser considerado em qualquer uma das outras modalidades definidas no presente documento. Consequentemente, qualquer uso do mRNA compreendendo nanoparticulas lipídicas, da composição (farmacêutica) ou da vacina de acordo com a invenção em coterapia com qualquer outra abordagem, preferencialmente uma ou mais das abordagens terapêuticas acima, em particular em combinação com antivirals está dentro do âmbito da presente invenção.
[0578] Para administração, preferencialmente qualquer uma das vias de administração pode ser usada conforme definido no presente documento. Em particular, é usada uma via de administração, que é adequada para tratar ou prevenir uma infecção por vírus influenza conforme definido no presente documento ou doenças ou distúrbios relacionados com as mesmas, através da indução ou melhoramento de uma resposta imunitária adaptativa com base em um antígeno codificado pelo mRNA compreendendo nanoparticulas lipídicas de acordo com a invenção. A administração da composição e/ou da vacina de acordo com a invenção pode então ocorrer antes, concorrente e/ou
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402/542 subsequente à administração de outra composição e/ou vacina conforme definido no presente documento, que pode adicionalmente - conter outro mRNA compreendendo nanopartícuia lipídica ou combinação de mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas codificando um antígeno diferente ou combinação de antígenos, em que cada antígeno codificado pela sequência de mRNA de acordo com a invenção é preferencialmente adequado para o tratamento ou profilaxia de infecções por vírus influenza e doenças ou distúrbios relacionados com os mesmos. Nesse contexto, um tratamento conforme definido no presente documento também pode compreender a modulação de uma doença associada com a infecção pelo vírus influenza e de doenças ou distúrbios relacionados com a mesma.
[0579] De acordo com uma modalidade preferida desse aspecto da invenção, a composição (farmacêutica) ou a vacina de acordo com a invenção é administrada por injeção. Qualquer técnica de injeção adequada conhecida na técnica pode ser empregue. Preferencialmente, a composição da invenção é administrada por injeção, preferencialmente, por injeção sem agulha, por exemplo, por injeção a jato.
[0580] Em uma modalidade, a composição da invenção compreende pelo menos um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez, onze, doze ou mais mRNAs conforme definido no presente documento, cada um dos quais é preferencialmente injetado separadamente, preferencialmente por injeção sem agulha. Alternativamente, a composição da invenção compreende pelo menos um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez, onze, doze ou mais mRNA, em que são administrados pelo menos um,
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403/542 dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez, onze, doze ou mais mRNAs, preferencialmente por injeção conforme definido no presente documento, tal como uma mistura.
[0581] Em um aspecto adicional, a invenção se refere a um método de imunização de um sujeito contra um antígeno ou uma combinação de antígenos.
[0582] O protocolo de imunização para a imunização de um sujeito contra um antígeno ou uma combinação de pelo menos dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez, onze, doze ou mais antígenos conforme definido no presente documento compreende tipicamente uma série de doses ou dosagens únicas da composição (farmacêutica) ou da vacina de acordo com a invenção. Uma dosagem unitária, conforme usado no presente documento, se refere à primeira dose/dose inicial, uma segunda dose ou quaisquer outras doses, respectivamente, que são preferencialmente administradas de modo a impulsionar a reação imunitária. Nesse contexto, cada dosagem unitária compreende preferencialmente a administração do mesmo antígeno ou a mesma combinação de antígenos conforme definido no presente documento, em que o intervalo entre a administração de duas doses únicas pode variar desde pelo menos um dia, preferencialmente 2, 3, 4, 5, 6 ou 7 dias até, pelo menos uma, semana, preferencialmente 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 semanas. Os intervalos entre dosagens únicas podem ser constantes ou variar ao longo do protocolo de imunização, por exemplo, os intervalos podem ser mais curtos no início e mais longos no final do protocolo. Dependendo do número total de dosagens
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404/542 únicas e do intervalo entre dosagens únicas, o protocolo de imunização se pode prolongar ao longo de um período de tempo gue dura preferencialmente pelo menos uma semana, mais preferencialmente várias semanas (por exemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12 semanas), ainda mais preferencialmente vários meses (por exemplo, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18 ou 24 meses) . Cada dosagem unitária engloba preferencialmente a administração de um antígeno, preferencialmente de uma combinação de pelo menos dois, três, guatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez, onze, doze ou mais antígenos conforme definido no presente documento e pode portanto envolver pelo menos uma, preferencialmente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12 injeções. Em alguns casos, a composição ou a vacina de acordo com a invenção administrada é como uma dosagem unitária tipicamente em uma injeção. No caso em que a vacina de acordo com a invenção compreende formulações de mRNA separadas codificando antígenos distintos, conforme definido no presente documento, o número mínimo de injeções efetuadas durante a administração de uma dose unitária corresponde ao número de componentes separados da vacina. Em certas modalidades, a administração de uma dosagem unitária pode abranger mais do que uma injeção para cada componente da vacina (por exemplo, uma formulação de mRNA específica compreendendo um mRNA codificando, por exemplo, um peptídeo ou proteína antigênicos conforme definido no presente documento). Por exemplo, partes do volume total de um componente individual da vacina podem ser injetadas em diferentes partes do corpo, envolvendo, desse modo, mais do que uma injeção. Em um exemplo mais específico, uma dosagem
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405/542 unitária de uma vacina compreendendo quatro formulações de mRNA separadas, cada uma das quais é administrada em duas partes do corpo diferentes, compreende oito injeções. Tipicamente, uma dosagem unitária compreende todas as injeções necessárias para administrar todos os componentes da vacina, em que um único componente pode envolver mais do que uma injeção conforme descrito acima. No caso, quando a administração de uma dose unitária da vacina de acordo com a invenção engloba mais do que uma injeção, a injeção é essencialmente efetuada simultaneamente ou concorrentemente, isto é, tipicamente de um modo escalonado no tempo dentro do período de tempo requerido para o praticante efetuar os passos de injeção única, uma após a outra. Por conseguinte, a administração de uma dose unitária se prolonga, preferencialmente, ao longo de um período de tempo de vários minutos, por exemplo, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 30 ou 60 minutos.
[0583] A administração do mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas, conforme definido no presente documento, a composição (farmacêutica) ou a vacina de acordo com a invenção pode ser realizada em um tratamento escalonado no tempo. Um tratamento escalonado no tempo pode ser por ex. , a administração do mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas, a composição ou a vacina anteriores, concorrentemente e/ou subsequentemente a uma terapia convencional de infecções por vírus influenza ou doenças ou distúrbios relacionados com o mesmo, por exemplo, através da administração do mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas, a composição ou a vacina antes, concorrentemente e/ou subsequentemente a uma terapia ou uma
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406/542 administração de um terapêutico adequado para o tratamento ou profilaxia de infecções pelo vírus influenza ou doenças ou distúrbios relacionados com o mesmo. Esse tratamento escalonado no tempo pode ser realizado usando, por exemplo, um kit, preferencialmente um kit de partes conforme definido no presente documento.
[0584] O tratamento escalonado no tempo pode adicionalmente ou alternativamente também compreender uma administração do mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas conforme definido no presente documento, a composição (farmacêutica) ou a vacina de acordo com a invenção em uma forma, em que o mRNA codificando um peptídeo ou proteína antigênicos conforme definido no presente documento ou um fragmento ou uma variante, do mesmo, preferencialmente fazendo parte da composição ou da vacina, é administrado paralelamente, antes ou subsequentemente a outro mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas conforme definido acima, preferencialmente fazendo parte da mesma composição ou vacina da invenção. De preferência, a administração (de todos os mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas) ocorre dentro de uma hora, mais preferencialmente dentro de 30 minutos, ainda mais preferencialmente dentro de 15, 10, 5, 4, 3 ou 2 minutos ou mesmo dentro de 1 minuto. Esse tratamento escalonado no tempo pode ser realizado usando, por exemplo, um kit, preferencialmente um kit de partes conforme definido no presente documento.
[0585] Em uma modalidade preferida, a composição farmacêutica ou a vacina da presente invenção é administrada repetidamente, em que cada administração
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407/542 compreende preferencialmente a administração individual de pelo menos um mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas da composição ou vacina da invenção. Em cada momento de administração, o pelo menos um mRNA pode ser administrado mais de uma vez (por exemplo, 2 ou 3 vezes) . Em uma modalidade particularmente preferida da invenção, pelo menos duas, três, quatro, cinco, seis ou mais sequências de mRNA (cada uma codificando um antigeno distinto dos antígenos conforme definido no presente documento) encapsuladas ou associadas com mRNA compreendendo nanopartícuias lipídicas conforme definido acima, em que as sequências de mRNA fazem parte de compostos de mRNA da mesma ou de diferentes nanopartícuias lipídicas, são administradas em cada momento, em que cada mRNA é administrado duas vezes por injeção, distribuído pelos quatro membros.
[0586] Os seguintes Esquemas de Reação ilustram métodos para fazer lipídeos de Fórmula (I), (II) ou (III). ESQUEMA DE REAÇÃO GERAL 1
Figure BR112019008481A2_D0052
Figure BR112019008481A2_D0053
[0587] As modalidades do lipídeo de Fórmula (I) (por exemplo, o composto A-5) podem ser preparadas de acordo com o Esquema de Reação Geral 1 (Método A), em que R é uma alquila Ci-C24 saturada ou não saturada ou cicloalquila saturada ou não saturada, méOoulené um número inteiro de 1 a 24. Fazendo referência ao Esquema de
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408/542
Reação Geral 1, os compostos de estrutura A-l podem ser adquiridos a partir de fontes comerciais ou preparados de acordo com métodos familiares dos peritos na técnica. Uma mistura de A-l, A-2 e DMAP é tratada com DCC para dar o brometo A-3. Uma mistura do brometo A-3, uma base (por exemplo, N, N-diisopropiletilamina) e a N,N-dimetildiamina A-4 é aquecida a uma temperatura e tempo suficientes para produzir A-5 após qualquer passo de processamento e/ou purificação.
ESQUEMA DE REAÇÃO GERAL 2 ° O
R^OI
OH ---—---► O
B-1
Figure BR112019008481A2_D0054
Figure BR112019008481A2_D0055
Figure BR112019008481A2_D0056
B-3
O
Figure BR112019008481A2_D0057
O R
B-5 [0588] Outras modalidades do composto de Fórmula (I) (por exemplo, o composto B-5) podem ser preparadas de acordo com o Esquema de Reação Geral 2 (Método B), em que R é uma alquila C1-C24 saturada ou não saturada ou cicloalquila saturada ou não saturada, m é 0 ou 1 e n é um número inteiro de 1 a 24. Conforme mostrado no Esquema de Reação Geral 2, os compostos de estrutura B-1 podem ser adquiridos a partir de fontes comerciais ou preparados de acordo com métodos familiares dos peritos na
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409/542 técnica. Uma solução de B-1 (1 equivalente) é tratada com cloreto de ácido B-2 (1 equivalente) e uma base (por exemplo, trietilamina). O produto em bruto é tratado com um agente oxidante (por exemplo, clorocromato de piridina) e o produto intermediário B-3 é recuperado. Uma solução de B-3 em bruto, um ácido (por exemplo, ácido acético) e N,Ndimetilaminoamina B-4 é então tratada com um agente redutor (por exemplo, triacetoxiboro-hidreto de sódio) de modo a obter B-5 após qualquer processamento e/ou purificação necessários.
[0589] Se deve notar que, embora os materiais de partida A-l e B-1 sejam descritos acima como incluindo apenas carbonos de metileno saturados, os materiais de partida que incluem ligações duplas carbono-carbono também podem ser empregues para a preparação de compostos que incluem ligações duplas carbono-carbono.
ESQUEMA DE REAÇAO GERAL 3
Figure BR112019008481A2_D0058
Figure BR112019008481A2_D0059
o
C-5
Figure BR112019008481A2_D0060
Figure BR112019008481A2_D0061
o
C-7
0590] Modalidades di
C-9 es do lipídeo de Fórmula (I) (por exemplo, o composto C-7 ou C9) podem ser preparadas de acordo com o Esquema de Reação Geral 3 (Método C), em que R é uma alquila C1-C24 saturada ou não
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410/542 saturada ou cicloalquila saturada ou não saturada, m é 0 ou e n é um número inteiro de 1 a 24. Fazendo referência ao Esquema de Reação Geral 3, os compostos de estrutura C-l podem ser adquiridos a partir de fontes comerciais ou preparados de acordo com métodos familiares dos peritos na técnica.
ESQUEMA DE REAÇÃO GERAL 4
Figure BR112019008481A2_D0062
D-5
A A . R- V* 5. V’V'ÇVV R'r Ríl: i
ÍU Ju Ks[0591] As modalidades do composto de Fórmula (II) (por exemplo, compostos D-5 e D-7) podem ser preparados de acordo com o Esquema de Reação Geral 4 (Método D), em que Rla, Rlb, R2a, R2b, R3a, R3b, R4a, R4b, R5, R6, R8, R9, L1, L2, G1, G2, G3, a, b, c e d são conforme definido no presente documento, e R7' representa R7 ou um grupo alquila C3-C19. Fazendo referência ao Esquema de
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Reação Geral 1, os compostos de estrutura D-l e D-2 podem ser adquiridos a partir de fontes comerciais ou preparados de acordo com métodos familiares dos peritos na técnica. Uma solução de D-l e D-2 é tratada com um agente redutor (por exemplo, triacetoxiboro-hidreto de sódio) de modo a obter D-3 após qualquer processamento necessário. Uma solução de D-3 e uma base (por exemplo, trimetilamina, DMAP) é tratada com cloreto de acila D-4 (ou ácido carboxílico e DCC) de modo a obter D-5 após qualquer trabalho e/ou purificação necessários. D-5 pode ser reduzido com LÍA1H4 D-6 para dar D-7 após qualquer trabalho e/ou purificação necessários.
ESQUEMA DE REAÇÃO GERAL 5 ε·ι ν' ''χηγ-η'
Ê4
RV r?!í fv:
Figure BR112019008481A2_D0063
ε-4
Ys-QaiiOH
Figure BR112019008481A2_D0064
R?» R«
V Ϊ R'L: .-ík ,R? q'··' >Γ'
I.
Figure BR112019008481A2_D0065
[0592]
As modalidades do lipídeo de Fórmula (por exemplo, compostos E-5) podem ser preparados de acordo com o Esquema de Reação Geral rIs Rlb R2a R2b R3a R3b R4a R4b (Método
R5, R6, R7,
E) , em
R8, R9, que
L1,
2
L , G , a, b, c e d são conforme definido no presente
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412/542 documento. Fazendo referência ao Esquema de Reação Geral 2, os compostos de estrutura E-l e E-2 podem ser adquiridos a partir de fontes comerciais ou preparados de acordo com métodos familiares dos peritos na técnica. Uma mistura de E-l (em excesso), E-2 e uma base (por exemplo, carbonato de potássio) é aquecida de modo a obter E-3 após qualquer processamento (por exemplo acila E-4 (ou após qualquer necessário. Uma solução de E-3 e uma base trimetilamina, DMAP) é tratada com cloreto de ácido carboxílico e DCC) de modo a obter E-5 trabalho e/ou purificação necessários.
ESQUEMA DE REAÇÃO GERAL 6
o.
p3b N^othp xKVC
R3a
Tb OTHP
F-1
R8 zN. 3^H2
R9 G
F-2
R8 H QÀp3'N
R9 G3 p3b 'V.OTHP
R3a
CK _R7
F-3
I ν'
OTHP
R7
R8 Γ
R9 G3
R3b Τχ,ΟΤΗΡ
R3a p-TSA RÃ
R8 Γ
N Ã ,9'N'g3
R! 'θ R3b ύλ0Η
R3a
HO
R1b aR5
OTHP
F-5
F-6
Tb OH
R4b d R6
R7
R8 OA^N
R9 G3
O '°vojk;
Afc R4b d R
R3a llbO ] R1a
F-9 [0593]
Outras modalidades do composto de
Fórmula (II) (por
F-9) são preparados de acordo com o
Esquema de Reação
Geral 6 (Método F). Conforme ilustrado no
Esquema de Reação Geral 6, uma cetona apropriadamente protegida é reagida sob condições de aminação
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413/542 redutora com a amina F-2 de modo a render F-3. A acilação de F-3 com cloreto ácido F-4 rende o produto acilado F-5. A remoção do grupo protetor de álcool em F-5 seguido por reação com F-7 e/ou F-8 e reagente de ativação apropriado (por ex. , DCC) rende o composto desejado F-9.
ESQUEMA DE REAÇÃO GERAL 7
Figure BR112019008481A2_D0066
[0594] O Esquema de Reação Geral 7 confere um método exemplificativo (Método G) para a preparação de Lipideos de Formula (III) . G , G , R e R no Esquema de Reação Geral 7 são conforme definido no presente documento para a Fórmula (III), e G1' se refere a um homólogo de G1 com menos um carbono. Os compostos de estrutura G-l são adquiridos ou preparados de acordo com métodos conhecidos na técnica. A reação de G-l com o diol G-2 sob condições de condensação apropriadas (por exemplo, DCC) rende o éster/álcool G-3, que pode então ser oxidado (por exemplo, PCC) para o aldeído G-4. A reação de G-4 com a amina G-5 sob condições de aminação redutora rende um lipideo de Fórmula (III) .
[0595] Se deve notar que várias estratégias alternativas para a preparação de lipideos de Fórmula (III) estão disponíveis para os peritos na técnica. Por exemplo, outros lipideos de Formula (III) em que L e L sejam
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414/542 diferentes de éster podem ser preparados de acordo com métodos análogos usando o material de partida apropriado. Além disso, o Esquema de Reação Geral 6 descreve a preparação de lipideos de Formula (III), em que G e G são os mesmos; no entanto, esse não é um aspecto requerido da invenção e são possíveis modificações no esquema de reação acima, de modo a renderem compostos em que G e G sejam diferentes.
[0596] Será apreciado pelos peritos na técnica que, no processo descrito no presente documento, os grupos funcionais de compostos intermediários podem necessitar de ser protegidos por grupos protetores adequados. Tais grupos funcionais incluem hidróxi, amino, mercapto e ácido carboxílico. Grupos protetores adequados para hidróxi incluem trialquilsilila ou diarilalquilsilila (por exemplo, t-butildimetilsilila, t-butildifenilsilila ou trimetilsilila), tetra-hidropiranila, benzila e semelhantes. Grupos protetores adequados para amino, amidino e guanidino incluem t-butoxicarbonila, benziloxicarbonila e semelhantes. Grupos protetores adequados para o mercapto incluem -C(O)-R'' (em que R' ' é alquila, arila ou arilalquila), p-metoxibenzila, tritila e semelhantes. Grupos protetores adequados para o ácido carboxílico incluem ésteres de alquila, arila ou arilalquila. Grupos protetores podem ser adicionados ou removidos de acordo com técnicas padrão, as quais são conhecidas pelos peritos na técnica e conforme descrito no presente documento. O uso de grupos protetores é descrito em pormenor em Green, T.W. e P.G.M. Wutz, Protective Groups in Organic Synthesis (1999), 3a Ed., Wiley. Como um perito
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415/542 na técnica apreciaria, o grupo protetor também pode ser uma resina polimérica, tal como uma resina de Wang, uma resina de Rink ou uma resina de cloreto de 2-clorotritila.
[0597] Preparação de composições de nanoparticulas lipídicas:
As LNPs foram preparadas conforme se segue. Os lipideos catiônicos, DSPC, colesterol e lipideo PEG foram solubilizados em etanol. As nanoparticulas lipídicas (LNP) foram preparadas em uma razão de peso total de aproximadamente 10:1 a 30:1. Resumidamente, o mRNA foi diluído para 0,05 a 0,2 mg/mL em 10 a 50 mM de tampão citrato, pH 4. Bombas de seringa foram usadas para misturar a solução de lipideo etanólico com a solução aquosa de mRNA em uma razão de cerca de 1:5 a 1:3 (vol/vol) com taxas de fluxo total acima de 15 mL/min. O etanol foi então removido e o tampão externo substituído por PBS por diálise. Finalmente, as nanoparticulas lipídicas foram filtradas através de um filtro estéril poroso de 0,2 pm. O tamanho de partícula de nanoparticulas lipídicas era de 70-90 nm de diâmetro, conforme determinado por dispersão de luz quase elástica usando um Malvern Zetasizer Nano (Malvern, RU).
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Itens
Item 1. Uma nanopartícuia lipidica compreendendo (1) um lipídeo catiônico com a fórmula I:
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ou um sal, tautômero, pró-fármaco ou estereoisômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:
LI e L2 cada um, independentemente, -0 (C=0) -, _(C=0)0- ou uma ligação dupla de carbono-carbono;
Rla e Rlb são, em cada ocorrência, independentemente quer (a) H ou alquila C1-C12, ou (b) Rla é H ou alquila C1-C12, e Rlb em conjunto com o átomo de carbono ao qual está ligado é tomado em conjunto com um Rlb adjacente e o átomo de carbono ao qual está ligado de modo a formar uma ligação dupla carbono-carbono;
R2a e R2b são, em cada ocorrência, independentemente quer (a) H ou alquila C1-C12, ou (b) R2a é H ou alquila C1-C12, e R2b em conjunto com o átomo de carbono ao qual está ligado é tomado em conjunto com um R2b adjacente e o átomo de carbono ao qual está ligado de modo a formar uma ligação dupla carbono-carbono;
R3a e R3b são, em cada ocorrência, independentemente quer (a) H ou alquila C1-C12, ou (b) R3a é H ou alquila C1-C12, e R3b em conjunto com o átomo de carbono ao qual está ligado é tomado em conjunto com um R3b
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417/542 adjacente e o átomo de carbono ao qual está ligado de modo a formar uma ligação dupla carbono-carbono;
R4a e R4b são, em cada ocorrência, independentemente quer (a) H ou alquila C1-C12, ou (b) R4a é H ou alquila C1-C12, e R4b em conjunto com o átomo de carbono ao qual está ligado é tomado em conjunto com um R4b adjacente e o átomo de carbono ao qual está ligado de modo a formar uma ligação dupla carbono-carbono;
R5 e R6 são cada um, independentemente, metila ou cicloalquila;
R7 é, em cada ocorrência, independentemente H ou alquila C1-C12;
R8 e R9 são cada um, independentemente, alquila C1-C12; ou R8 e R9 em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados, formam um anel heterocíclico de 5, 6 ou 7 membros compreendendo um átomo de nitrogênio;
a e d são cada um, independentemente, um número inteiro de 0 a 24;
b e c são cada um, independentemente, um número inteiro de 1 a 24; e e é 1 ou 2;
(ii) um composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptideo ou proteína antigênicos, em que o composto de mRNA opcionalmente não compreende uma modificação de nucleósideo, em particular não uma modificação de base, em que o composto de mRNA está encapsulado na, ou associado à, referida nanopartícuia lipídica.
Item 2. Uma nanopartícuia lipídica compreendendo
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418/542 (i) um lipídeo catiônico com a fórmula II:
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ou um sal, tautômero, pró-fármaco ou estereoisômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:
LI e L2 são cada um, independentemente, 0(C=0), (C=0)0, C (=0) , 0, S(0)x, S S, C(=O)S,
SC(=O), NRaC (=0) , C(=0)NRa, NRaC(=0)NRa,
0C(=0)NRa, NRaC(=0)0, ou uma ligação direta;
G1 é alquileno C1-C2, -(C=0), -0(C=0), SC(=O), NRaC(=0)- ou uma ligação direta;
G2 é -C (=0) , (C=0)0-, C(=O)S-, C(=0)NRa ou uma ligação direta;
G3 é alquileno C1-C6;
Ra é H ou alquila C1-C12;
Ria e Rlb são, em cada ocorrência, independentemente quer: (a) H ou alquila C1-C12; ou (b) Ria é H ou alquila C1-C12, e Rlb em conjunto com o átomo de carbono ao qual está ligado é tomado em conjunto com um Rlb adjacente e o átomo de carbono ao qual está ligado de modo a formar uma ligação dupla carbono-carbono;
R2a e R2b são, em cada ocorrência, independentemente quer: (a) H ou alquila C1-C12; ou (b) R2a é H ou alquila C1-C12, e R2b em conjunto com o átomo de
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419/542 carbono ao qual está ligado é tomado em conjunto com um R2b adjacente e o átomo de carbono ao qual está ligado de modo a formar uma ligação dupla carbono-carbono;
R3a e R3b são, em cada ocorrência, independentemente quer: (a) H ou alquila C1-C12; ou (b) R3a é H ou alquila C1-C12, e R3b em conjunto com o átomo de carbono ao qual está ligado é tomado em conjunto com um R3b adjacente e o átomo de carbono ao qual está ligado de modo a formar uma ligação dupla carbono-carbono;
R4a e R4b são, em cada ocorrência, independentemente quer: (a) H ou alquila C1-C12; ou (b) R4a é H ou alquila C1-C12, e R4b em conjunto com o átomo de carbono ao qual está ligado é tomado em conjunto com um R4b adjacente e o átomo de carbono ao qual está ligado de modo a formar uma ligação dupla carbono-carbono;
R5 e R6 são cada um, independentemente, H ou me 111a;
R7 é alquila C4-C20;
R8 e R9 são cada um, independentemente, alquila C1-C12; ou R8 e R9 em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados, formam um anel heterocíclico de 5, 6 ou 7 membros;
a, b, c e d são cada um, independentemente, um número inteiro de 1 a 24; e x é 0, 1 ou 2;
(11) um composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos, em que o composto de mRNA opcionalmente não compreende uma modificação de nucleósideo, em particular não uma modificação de base;
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420/542 em que o composto de mRNA está encapsulado na, ou associado à, referida nanoparticula lipídica.
Item 3. Uma nanoparticula lipídica compreendendo (i) um lipideo catiônico com a fórmula III:
R3 ^G3 /I2
Ri ^G1 ^G2 R2 (III) ou um sal, tautômero, pró-fármaco ou estereoisômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:
Ll ou L2 são cada um, independentemente, -O(C=O), -(C=0)0-, -C(=O)-, -O-, -S(O)x-, -S-S-, C(=O)S-, SC(=O)-, -NRaC(=O)-, -C(=O)NRa-, NRaC(=0)NRa, -OC(=O)NRa- ou
NRaC(=0)0-, preferencialmente Ll ou L2 são -0(0=0)- ou (0=0)0-;
G1 e G2 são cada um, independentemente, alquileno C1-C12 não substituído ou alquenileno C1-C12;
G3 é alquileno C1-C24, alquenileno C1-C24, cicloalquileno C3-C8 ou cicloalquenileno C3-C8;
Ra é H ou alquila C1-C12;
RI e R2 são cada um, independentemente, alquila C6-C24 ou alquenila C6-C24;
R3 é H, 0R5, CN, C(=0)0R4, 0C(=0)R4 ou NR5C(=0)R4;
R4 é alquila C1-C12;
R5 é H ou alquila C1-C16; e x é 0, 1 ou 2;
(ii) um composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptídeo ou
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421/542 proteína antigênicos, em que o composto de mRNA opcionalmente não compreende uma modificação de nucleósideo, em particular não uma modificação de base;
em que o composto de mRNA está encapsulado na, ou associado à, referida nanoparticula lipidica.
Item 4. Uma nanoparticula lipidica compreendendo:
(i) um lipídeo PEG com a fórmula (IV)
O / o 1 I pw I
R8 (IV) em que R8 e R9 são cada um, independentemente, uma alquila de cadeia linear ou ramificada, saturada ou não saturada, contendo 10 a 30 átomos de carbono, em que a cadeia alquila é opcionalmente interrompida por uma ou mais ligações éster;
e w tem um valor médio variando de 30 a 60; e (ii) um composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos, em que o composto de mRNA opcionalmente não compreende uma modificação de nucleósideo, em particular não uma modificação de base;
em que o composto de mRNA está encapsulado na, ou associado à, referida nanoparticula lipidica.
Item 5. A nanoparticula lipidica de acordo com qualquer um dos itens 1 a 3, adicionalmente compreendendo (iii) um lipídeo PEG com a fórmula (IV):
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Ο
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R'; (IV) em que R8 e R9 são cada um, independentemente, uma alquila de cadeia linear ou ramificada, saturada ou não saturada, contendo 10 a 30 átomos de carbono, em que a cadeia alquila é opcionalmente interrompida por uma ou mais ligações éster;
e w tem um valor médio variando de 30 a 60.
Item 6. A nanopartícuia lipídica de acordo com o item 3 ou 5, em que o lipídeo catiônico é um composto de fórmula III, e em que:
LI e L2 são cada um, independentemente, -O(C=O)ou (C=0)-0-;
G3 é alquileno C1-C24 ou alquenileno C1-C24;
R3 é H ou OR5.
Item 7. A nanopartícuia lipídica de acordo com qualquer um dos itens 3, 5 ou 6, em que o lipídeo catiônico é um composto de fórmula III, e em que:
LI e L2 são cada um, independentemente, -O(C=O)ou (C=0)-0-;
RI e R2 cada um, independentemente, tem uma das seguintes estruturas:
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Item 8. A nanoparticula lipidica de acordo com qualquer um dos itens 3 ou 5 a 7, em que o lipideo catiônico é um composto de fórmula III, e em que R3 é OH.
Item 9. A nanoparticula lipidica de acordo com qualquer um dos itens 1 a 3 ou 5 a 8, em que o lipideo catiônico é selecionado a partir das estruturas 1-1 a 1-41, II-l a 11-34 ou III-l a III-36, ou Tabela 7: Lipideos Representativos de Fórmula (I), Tabela 8: Lipideos Representativos de Fórmula (II), ou Tabela 9: Lipideos Representativos de Fórmula (III) .
Item 10. A nanoparticula lipidica de acordo com qualquer um dos itens 1 a 3 ou 5 a 9, em que o lipideo catiônico é selecionado a partir de:
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Item 11. A nanoparticula lipidica de acordo com qualquer um dos itens 4 a 10, em que o lipideo PEG R8 e R9 são alquilas de cadeia saturada.
Item 12. A nanoparticula lipidica de acordo com o item 11, em que o lipideo PEG é
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Ο
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em que n tem um valor médio variando de 30 a 60.
Item 13. A nanopartícuia lipídica de acordo com qualquer um dos itens 1 a 12, em que o composto de mRNA compreende pelo menos uma modificação química, e em que o composto de mRNA preferencialmente não compreende uma modificação nucleosídica em que a referida modificação nucleosídica é opcionalmente uma modificação de base, e em que a referida modificação de base é opcionalmente uma modificação de 1-metilpseudouridina.
Item 14. A nanopartícuia lipídica de acordo o item 13, em que a modificação química é selecionada a partir do grupo compreendendo modificações de açúcar, modificações de cadeia principal e modificações lipídicas.
Item 15. A nanopartícuia lipídica de acordo com qualquer um dos itens 1 a 14, em que a sequência de mRNA é uma sequência de mRNA artificial.
Item 16. A nanopartícuia lipídica de acordo com qualquer um dos itens 1 a 15, em que região de codificação da sequência de mRNA codificando o pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos compreende uma modificação de sequência.
Item 17. A nanopartícuia lipídica de acordo com o item 16, em que a modificação de sequência é selecionada a partir de modificação do teor em G/C, uma modificação de
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426/542 códon, uma otimização quanto a códon ou uma otimização-C da sequência.
Item 18. A nanopartícuia lipídica de acordo com o item 17, em que o teor em G/C da região de codificação da sequência de mRNA é aumentado em comparação com o teor em G/C da sequência de codificação correspondente do mRNA de tipo selvagem, ou em que o teor em C da região de codificação da sequência de mRNA é aumentado em comparação com o teor em em C da sequência de codificação correspondente do mRNA de tipo selvagem, ou em que o uso de códons na região de codificação da sequência de mRNA é adaptado para uso de códons humanos, ou em que o índice de adaptação de códon (CAI) é aumentado ou maximizado na região de codificação da sequência de mRNA, em que a sequência de aminoácidos codificada da sequência de mRNA preferencialmente não está sendo modificada em comparação com a sequência de aminoácidos codificada do mRNA de tipo selvagem.
Item 19. A nanopartícuia lipídica de acordo com qualquer um dos itens 1 a 18, em que a sequência de mRNA adicionalmente compreende
a) uma estrutura 5'-GAP, e/ou
b) uma sequência poli(A), e/ou
c) uma sequência poli(C).
Item 20. A nanopartícuia lipídica de acordo com o item 19, em que a sequência de mRNA compreende uma sequência poli(A), em que a sequência poli(A) compreende uma sequência de cerca de 25 a cerca de 400 nucleotídeos de adenosina, preferencialmente uma sequência de cerca de 50 a cerca de 400 nucleotídeos de adenosina, mais
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427/542 preferencialmente uma sequência de cerca de 50 a cerca de 300 nucleotídeos de adenosina, ainda mais preferencialmente uma sequência de cerca de 50 a cerca de 250 nucleotídeos de adenosina, o mais preferencialmente uma sequência de cerca de 60 a cerca de 250 nucleotídeos de adenosina.
Item 21. A nanopartícuia lipídica de acordo com qualquer um dos itens 1 a 19, em que a sequência de mRNA adicionalmente compreende pelo menos uma haste-ansa de histona.
Item 22. A nanopartícuia lipídica de acordo com o item 21, em que a pelo menos uma haste-ansa de histona compreende uma sequência de ácido nucleico de acordo com as seguintes fórmulas (V) ou (VI):
fórmula (V) (sequência de haste-ansa sem elementos limítrofes da haste): [N0-2GN3-5] [N0-4 (U/T)N0-4] [N3-5CN0-2] »- T -> V_______________________________Z ' —y--------->
hastel ansa haste2 fórmula (VI) (sequência de haste-ansa com elementos limítrofes da haste):
Ni-e [N0-2GN3-5] [Np-4 (U/T)N0-4j (N3-5CN0-2 \ Nvj hastel hastel ansa haste2 haste2 elementos limítrofes elementos limítrofes em que: os elementos limítrofes Nl-6 da hastel ou haste2 são uma sequência consecutiva de 1 a 6, preferencialmente de 2 a 6, mais preferencialmente de 2 a 5, ainda mais preferencialmente de 3 a 5, o mais preferencialmente de 4 a 5 ou 5 N, em que cada N é, independentemente uns dos outros, selecionado a partir de um nucleotídeo selecionado
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428/542 a partir de A, U, T, G e C, ou um análogo nucleotídico do mesmo;
hastel [N0-2GN3-5] é complementarmente reverso ou parcialmente complementarmente reverso com o elemento haste2, e é uma sequência consecutiva entre 5 a 7 nucleotídeos;
em que NO-2 é uma sequência consecutiva de 0 a 2, preferencialmente de 0 a 1, mais preferencialmente de 1 N, em que cada N é, independentemente uns dos outros, selecionado a partir de um nucleotídeo selecionado a partir de A, U, T, G e C, ou um análogo nucleotídico do mesmo;
em que N3-5 é uma sequência consecutiva de 3 a 5, preferencialmente de 4 a 5, mais preferencialmente de 4 N, em que cada N é, independentemente uns dos outros, selecionado a partir de um nucleotídeo selecionado a partir de A, U, T, G e C, ou um análogo nucleotídico do mesmo, e a sequência de ansa [NO-4(U/T)NO-4] está localizada entre os elementos hastel e haste2, e é uma sequência consecutiva de 3 a 5 nucleotídeos, mais preferencialmente de 4 nucleotídeos;
em que cada NO-4 é, independentemente uns dos outros, uma sequência consecutiva de 0 a 4, preferencialmente de 1 a 3, mais preferencialmente de 1 a 2 N, em que cada N é, independentemente uns dos outros, selecionado a partir de um nucleotídeo selecionado a partir de A, U, T, G e C, ou um análogo nucleotídico do mesmo; e em que U/T representa uridina, ou opcionalmente timidina;
haste2 [N3-5CN0-2] é complementarmente reverso ou parcialmente complementarmente reverso com o elemento
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429/542 hastel, e é uma sequência consecutiva entre 5 a 7 nucleotídeos ;
em que N3-5 é uma sequência consecutiva de 3 a 5, preferencialmente de 4 a 5, mais preferencialmente de 4 N, em que cada N é, independentemente uns dos outros, selecionado a partir de um nucleotídeo selecionado a partir de A, U, T, G e C, ou um análogo nucleotídico do mesmo;
em que NO-2 é uma sequência consecutiva de 0 a 2, preferencialmente de 0 a 1, mais preferencialmente de 1 N, em que cada N é, independentemente uns dos outros, selecionado a partir de um nucleotídeo selecionado a partir de A, U, T, G e C, ou um análogo nucleotídico do mesmo; e em que C é citidina ou um análogo da mesma, e pode ser opcionalmente substituído por uma guanosina ou um análogo da mesma, desde que o seu nucleotídeo complementar guanosina na hastel seja substituído por citidina;
Item 23. A nanoparticula lipidica de acordo com o item 21 ou 22, em que a pelo menos uma haste-ansa de histona compreende uma sequência de ácido nucleico de acordo com a SEQ ID NO: 224305 e/ou mais preferencialmente uma sequência de RNA de acordo com a SEQ ID NO: 224306.
Item 24. A nanoparticula lipidica de acordo com qualquer um dos itens 19 a 23, em que a sequência de mRNA compreende uma sequência poli(A), preferencialmente compreendendo 10 a 200, 10 a 100, 40 a 80 ou 50 a 70 nucleotídeos de adenosina e/ou uma sequência poli (C), preferencialmente compreendendo 10 a 200, 10 a 100, 20 a 70, 20 a 60 ou 10 a 40 nucleotídeos de citosina.
Item 25. A nanoparticula lipidica de acordo com qualquer um dos itens 1 a 24, em que a sequência de mRNA
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430/542 compreende, preferencialmente na direção 5' para 3', os seguintes elementos:
a) uma estrutura 5'-GAP, preferencialmente mVGpppN,
b) pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptideo ou proteína antigênicos,
c) uma cauda poli(A), preferencialmente consistindo em 10 a 200, 10 a 100, 40 a 80 ou 50 a 70 nucleotideos adenosina,
d) opcionalmente, uma cauda poli(C), preferencialmente consistindo em 10 a 200, 10 a 100, 20 a 70, 20 a 60 ou 10 a 40 nucleotideos citosina, e
e) opcionalmente, uma haste-ansa de histona, preferencialmente compreendendo a sequência de RNA de acordo com a SEQ ID NO: 224306
Item 26. A nanopartícuia lipídica de acordo com qualquer um dos itens 1 a 25, em que a sequência de mRNA compreende um elemento 3'-UTR.
Item 27. A nanopartícuia lipídica de acordo com o item 26, em que o pelo menos um elemento 3'-UTR compreende ou consiste em uma sequência de ácido nucleico que é derivada a partir de um 3'-UTR de um gene conferindo um mRNA estável ou a partir de um homólogo, um fragmento ou uma variante do mesmo.
Item 28. A nanopartícuia lipídica de acordo com o item 2 6 ou 27, em que o elemento 3'-UTR compreende uma sequência de ácido nucleico derivado a partir de um 3'-UTR de um gene de α-globina, preferencialmente compreendendo a sequência de RNA correspondente da sequência de ácido
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431/542 nucleico de acordo com a SEQ ID NO: 224297, um homólogo, um fragmento, ou uma variante da mesma.
Item 29. A nanoparticula lipidica de acordo com qualquer um dos itens 26 a 28, em que o pelo menos um elemento 3'-UTR compreende uma sequência de ácido nucleico, que é derivado a partir do 3'-UTR de um gene de albumina de vertebrado ou a partir de uma variante do mesmo, preferencialmente a partir do 3'-UTR de um gene de albumina de mamífero ou de uma variante do mesmo, mais preferencialmente a partir do 3'-UTR de um gene de albumina humana ou de uma variante do mesmo, ainda mais preferencialmente a partir do 3'-UTR do gene de albumina humana de acordo com o número de acesso GenBank NM_000477.5, ou a partir de um fragmento ou variante do mesmo .
Item 30. A nanoparticula lipidica de acordo com qualquer um dos itens 26 a 29, em que o elemento 3'-UTR é derivado a partir de uma sequência de ácido nucleico de acordo com a SEQ ID NO: 224301 ou 224303, preferencialmente a partir de uma sequência de RNA correspondente, ou um homólogo, um fragmento ou uma variante da mesma.
Item 31. A nanoparticula lipidica de acordo com qualquer um dos itens 1 a 30, em que a sequência de mRNA compreende, preferencialmente na direção 5' para 3', os seguintes elementos:
a) uma estrutura 5'-GAP, preferencialmente m7GpppN,
b) pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos,
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c) um elemento 3'-UTR, compreendendo ou consistindo em uma sequência de ácido nucleico que é derivada a partir de um gene de alfa globina, preferencialmente compreendendo a sequência de RNA correspondente à sequência de ácido nucleico de acordo com a SEQ ID NO: 224297, um homólogo, um fragmento ou uma variante da mesma;
d) uma cauda poli(A), preferencialmente consistindo em 10 a 200, 10 a 100, 40 a 80 ou 50 a 70 nucleotideos adenosina,
e) opcionalmente, uma cauda poli(C), preferencialmente consistindo em 10 a 200, 10 a 100, 20 a 70, 20 a 60 ou 10 a 40 nucleotideos citosina, e
f) opcionalmente, uma haste-ansa de histona, preferencialmente compreendendo a sequência de RNA de acordo com a SEQ ID NO: 224306.
Item 32. A nanoparticula lipidica de acordo com qualquer um dos itens 1 a 31, em que a sequência de mRNA compreende um elemento 5'-UTR.
Item 33. A nanoparticula lipidica de acordo com o item 32, em que o elemento 5'-UTR compreende ou consiste em uma sequência de ácido nucleico que é derivada a partir do 5'-UTR de um gene TOP preferencialmente a partir de uma sequência de RNA correspondente, um homólogo, um fragmento, ou uma variante da mesma, preferencialmente sem o motivo 5'TOP.
Item 34. A nanoparticula lipidica de acordo com o item 33, em que o elemento 5'-UTR compreende ou consiste em uma sequência de ácido nucleico que é derivada a partir de um 5'-UTR de um gene TOP codificando uma proteína
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433/542 ribossomal, preferencialmente a partir de uma sequência de RNA correspondente ou a partir de um homólogo, um fragmento, ou uma variante da mesma, preferencialmente sem o motivo 5'TOP.
Item 35. A nanoparticula lipídica de acordo com o item 34, em que o elemento 5'-UTR compreende ou consiste em uma sequência de ácido nucleico que é derivada a partir de um 5'-UTR de um gene TOP codificando uma proteína Grande ribossomal (RPL) ou a partir de um homólogo, um fragmento ou variante do mesmo, preferencialmente, sem o motivo 5'TOP e, mais preferencialmente, compreendendo ou consistindo em uma seguência de RNA correspondente da sequência de ácido nucleico de acordo com a SEQ ID NO: 224287.
Item 36. A nanoparticula lipídica de acordo com o item 35, em que o elemento 5'-UTR que é derivado a partir de um 5'-UTR de um gene TOP compreende ou consiste em uma sequência de RNA correspondente de uma sequência de ácido nucleico de acordo com a SEQ ID NO: 224287 ou 224289.
Item 37. A nanoparticula lipídica de acordo com qualquer um dos itens 1 a 36, em que a sequência de mRNA compreende, preferencialmente na direção 5' para 3', os seguintes elementos:
a) uma estrutura 5'-GAP, preferencialmente m7GpppN,
b) um elemento 5'-UTR que compreende ou consiste em uma sequência de ácido nucleico que é derivada a partir de um gene 5'-UTR ou TOP, preferencialmente compreendendo ou consistindo na sequência de RNA correspondente de uma sequência de ácido nucleico de acordo com a SEQ ID NO:
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224287 ou 224289, um homólogo, um fragmento ou uma variante da mesma;
c) pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos;
d) um elemento 3'-UTR, compreendendo ou consistindo em uma sequência de ácido nucleico que é derivada a partir de um gene de albumina, preferencialmente compreendendo a sequência de RNA correspondente à sequência de ácido nucleico de acordo com a SEQ ID NO: 224303, um
homólogo, um e) fragmento ou uma uma cauda variante poli(A), da mesma; preferencialmente
consistindo nucleotídeos em 10 a 200, 10 adenosina, a 100, 40 a 80 ou 50 a 70
f) opcionalmente, uma cauda poli(C),
preferencialmente consistindo em 10 a 200, 10 a 100, 20 a
70, 20 a 60 ou 10 a 40 nucleotídeos citosina, e
g) opcionalmente, uma haste-ansa de histona, preferencialmente compreendendo a sequência de RNA de acordo com a SEQ ID NO: 224306.
Item 38. A nanopartícuia lipídica de acordo com qualquer um dos itens 1 a 37, em que o peptídeo ou proteína antigênicos são derivados a partir de antígenos patogênicos, antígenos tumorais, antígenos alergênicos ou autoantígenos autoimunes ou um fragmento ou variante dos mesmos.
Item 39. A nanopartícuia lipídica de acordo com o item 38, em que o antígeno patogênico é derivado a partir de um vírus influenza ou vírus da raiva.
Item 40. A nanopartícuia lipídica de acordo com o item 39, em que o peptídeo ou proteína antigênicos são
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435/542 derivados a partir de hemaglutinina (HA), neuraminidase (NA), nucleoproteína (NP), proteína matriz 1 (Ml), proteína matriz 2 (M2), proteína não estrutural 1 (NS1), proteína não estrutural 2 (NS2), proteína de exportação nuclear (NEP), proteína polimerase ácida (PA), proteína polimerase básica PB1, PB1-F2, ou proteína polimerase básica 2 (PB2) de um vírus da influenza ou um fragmento ou variante da mesma.
Item 41. A nanopartícuia lipídica de acordo com o item 40, em que o peptídeo ou proteína antigênicos são derivados a partir de hemaglutinina (HA) ou neuraminidase (NA) de um vírus influenza ou um fragmento ou variante da mesma.
Item 42. A nanopartícuia lipídica de acordo com o item 41, em que o peptídeo ou proteína antigênicos são pelo menos uma proteína de comprimento total de hemaglutinina (HA) e/ou pelo menos uma proteína de comprimento total de neuraminidase (NA) de um vírus influenza ou uma variante da mesma.
Item 43. A nanopartícuia lipídica de acordo com qualquer um dos itens 39 a 40, em que o vírus influenza é selecionado a partir de um vírus influenza A, B, ou C.
Item 44 . A nanopartícuia lipídica de acordo com
o item 43, em que o vírus influenza A é selecionado a
partir de um vírus influenza caracterizado por uma
hemaglutinina (HA) selecionada a partir do grupo
consistindo em Hl, H2, H3, H4, H5 , H6, H7, H8 , H9, H10,
Hll, H12, H13, H14, H15, H16, H17 e H18 .
Item 45. A nanopartícuia lipídica de acordo com
o item 43 ou 44, em que o vírus influenza A é selecionado a
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partir de um vírus influenza caracterizado por uma
neuraminidase (NA) selecionada a partir do grupo
consistindo em Nl, N2 , N3, N4, N5, N6, N7, N8, N9, N10, e
Nil.
Item 46. A nanopartícuia lipídica de acordo com
qualquer um dos itens 43 a 45, em que o vírus influenza A é selecionado a partir do grupo consistindo em H1N1, H1N2, H2N2, H3N1, H3N2, H3N8, H5N1, H5N2, H5N3, H5N8, H5N9, H7N1, H7N2, H7N3, H7N4, H7N7, H7N9, H9N2, e H10N7, preferencialmente a partir de H1N1, H3N2, H5N1.
Item 47. A nanopartícuia lipídica de acordo com qualquer um dos itens 39 a 4 6, em que a sequência de mRNA compreende pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de hemaglutinina (HA) de um vírus influenza ou um fragmento ou variante da mesma e pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de neuraminidase (NA) de um vírus influenza ou um fragmento ou variante da mesma.
Item 48. A nanopartícuia lipídica de acordo com qualquer um dos itens 39 a 47, em que a sequência de mRNA compreende pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de hemaglutinina (HA) e/ou pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de neuraminidase (NA) de um vírus influenza A selecionado a partir do grupo consistindo em H1N1, H1N2, H2N2, H3N1, H3N2, H3N8, H5N1, H5N2, H5N3, H5N8, H5N9, H7N1, H7N2, H7N3, H7N4, H7N7, H7N9, H9N2, e H10N7, preferencialmente a partir de H1N1, H3N2, H5N1 ou um fragmento ou variante dos mesmos.
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Item 49. A nanoparticula lipídica de acordo com qualquer um dos itens 39 a 48, em que a sequência de mRNA compreende pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de hemaglutinina (HA) de um vírus influenza A de acordo com as SEQ ID NOs: 1-14031, ou um fragmento ou variante da mesma.
Item 50. A nanoparticula lipídica de acordo com qualquer um dos itens 39 a 49, em que a sequência de mRNA compreende pelo menos uma sequência de RNA selecionada a partir de sequências de RNA sendo idênticas ou pelo menos 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idênticas com as sequências de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 32013-46043, 64025-78055, 96037-110067, 128049-142079, 160061-174091, 192073-206103 ou um fragmento ou variante das mesmas.
Item 51. A nanoparticula lipídica de acordo com qualquer um dos itens 39 a 50, em que a sequência de mRNA compreende pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de hemaglutinina (HA) de um vírus influenza B de acordo com as SEQ ID NOs: 26398-28576, ou um fragmento ou variante da mesma.
Item 52. A nanoparticula lipídica de acordo com qualquer um dos itens 39 a 51, em que a sequência de mRNA compreende pelo menos uma sequência de RNA selecionada a partir de sequências de RNA sendo idênticas ou pelo menos 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idênticas com as sequências de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 58410-60588,
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90422-92600, 122434-124612, 154446-156624, 186458-188636, 218470-220648 ou um fragmento ou variante das mesmas.
Item 53. A nanoparticula lipidica de acordo com qualquer um dos itens 39 a 52, em que a sequência de mRNA compreende pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de neuraminidase (NA) de um vírus influenza A de acordo com as SEQ ID NOs: 14032-26397, ou um fragmento ou variante da mesma.
Item 54. A nanoparticula lipidica de acordo com qualquer um dos itens 39 a 53, em que a sequência de mRNA compreende pelo menos uma sequência de RNA selecionada a partir de sequências de RNA sendo idênticas ou pelo menos 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idênticas com as sequências de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 46044-58409, 78056-90421, 110068-122433, 142080-154445, 174092-186457, 206104-218469 ou um fragmento ou variante das mesmas.
Item 55. A nanoparticula lipidica de acordo com qualquer um dos itens 39 a 54, em que a sequência de mRNA compreende pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de neuraminidase (NA) de um vírus influenza B de acordo com as SEQ ID NOs: 28577-30504, ou um fragmento ou variante da mesma.
Item 56. A nanoparticula lipidica de acordo com qualquer um dos itens 39 a 55, em que a sequência de mRNA compreende pelo menos uma sequência de RNA ou uma mistura de sequências de RNA selecionadas a partir de sequências de RNA sendo idênticas ou pelo menos 50%, 60%, 70%, 80%, 85%,
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86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idênticas com as sequências de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 60589-62516, 92601-94528, 124613-126540, 156625-158552, 188637-190564, 220649-222576 ou um fragmento ou variante das mesmas.
Item 57. A nanoparticula lipídica de acordo com qualquer um dos itens 39 a 56, em que a sequência de mRNA compreende pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado da glicoproteina G (RAV-G, RAVBV-G ou RABV-G), nucleoproteína N (RAV-N), fosfoproteína P (RAV-P), proteína de matriz M (RAV-M) ou RNA polimerase L (RAV-L) de um vírus da Raiva ou um fragmento, variante do mesmo.
Item 58. A nanoparticula lipídica de acordo com qualquer um dos itens 39 a 57, em que a sequência de mRNA compreende pelo menos uma região de codificação codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos derivado a partir de glicoproteina G (RAV-G, RAVBV-G ou RABV-G) de um vírus da Raiva de acordo com as SEQ ID NOs: 30505-32012, ou um fragmento ou variante da mesma.
Item 59. A nanoparticula lipídica de acordo com qualquer um dos itens 39 a 58, em que a sequência de mRNA compreende pelo menos uma sequência de RNA selecionada a partir de sequências de RNA sendo idênticas ou pelo menos 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idênticas com as sequências de RNA de acordo com as SEQ ID NOs: 62517-64024, 94529-96036, 126541-128048, 158553-160060, 190565-192072, 222577-224084 ou um fragmento ou variante das mesmas.
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Item 60. A nanoparticula lipídica de acordo com qualquer um dos itens 1 a 59, em que o composto de mRNA compreende pelo menos duas sequências de mRNA, em que as, pelo menos, duas sequências de mRNA codificam dois peptídeos e/ou proteínas antigênicos diferentes.
Item 61. A nanoparticula lipídica de acordo com qualquer um dos itens 1 a 59, compreendendo pelo menos dois compostos de mRNA diferentes, cada composto compreendendo uma sequência de mRNA que codifica pelo menos um peptideo ou proteína antigênicos.
Item 62. A nanoparticula lipídica de acordo com qualquer um dos itens 1 a 61, adicionalmente compreendendo:
(iv) um lipídeo neutro; e/ou (v) um esteroide ou análogo de esteroide.
Item 63. A nanoparticula lipídica de acordo com o item 62, em que o lipídeo neutro é selecionado a partir do grupo compreendendo distearoilfosfatidilcolina (DSPC), dioleoil-fosfatidilcolina (DOPC), dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC), dioleoilfosf atidilglicerol (DOPG), dipalmitoilfosfatidilglicerol (DPPG), dioleoil-fosfatidiletanolamina (DOPE), palmitoiloleoil-fosfatidilcolina (POPC), palmitoiloleoilfosfatidiletanolamina (POPE) e 4-(N-maleimidometil)-ciclohexano-l-carboxilato de dioleoil-fosfatidiletanolamina (DOPE-mal), dipalmitoilfosfatidiletanolamina (DPPE), dimiristoilfosfoetanolamina (DMPE), distearoilfosf atidiletanolamina (DSPE), 16-0-monometila PE, 16-0dimetila PE, 18-1-trans PE, l-estearioil-2-oleoilfosfatidiletanolamina (SOPE) e 1,2-dielaidoil-sn-glicero-3fosfoetanolamina (transDOPE).
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Item 64. A nanoparticula lipidica de acordo com o item 63 em que o lipideo neutro é 1,2-distearoil-snglicero-3-fosfocolina (DSPC), e em que a razão molar do lipideo catiônico para DSPC está opcionalmente na gama de cerca de 2: 1 a 8 : 1.
Item 65. A nanoparticula lipidica de acordo com qualquer um dos itens 62 a 64, em que o esteróide é colestrol, e em que a razão molar do lipideo catiônico para colesterol está opcionalmente na gama de cerca de 2: lai : 1
Item 66. Um método para a preparação de uma nanoparticula lipidica de acordo com qualquer um dos itens 5 a 67, compreendendo os passos de:
(i) fornecer
a) um lipideo catiônico de fórmula (I)
Figure BR112019008481A2_D0074
conforme definido acima ou um sal, tautômero, pró-fármaco ou estereoisômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, e e/ou de fórmula (II)
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Figure BR112019008481A2_D0075
G\ /G\
N R7
G3 R8
N
R9 (id conforme definido acima ou um sal, tautômero, pró-fármaco ou estereoisômero farmaceuticamente aceitável do mesmo;
e/ou de fórmula 111:
R3 ^G3 ,L1. /N. /I3
R1 G1 G2 R2 (Hi) conforme definido acima ou um sal, tautômero, pró-fármaco ou estereoisômero farmaceuticamente aceitável do mesmo;
e/ou
b) um lipideo PEG com a fórmula (IV):
O
Figure BR112019008481A2_D0076
(IV) conforme definido acima;
c) pelo menos um composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos, em que o composto de mRNA opcionalmente não compreende uma modificação de nucleósideo, em particular não uma modificação de base; e
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d) opcionalmente um esteroide; e
e) opcionalmente um lipídeo neutro;
(ii) solubilizar o lipídeo catiônico e/ou o lipídeo PEG e, opcionalmente, o lipídeo neutro e/ou o esteroide ou um esteroide derivado em etanol;
(iii) misturar a solução lipídica etanólica com uma solução aquosa compreendendo o polinucleotídeo de mRNA (iv) remover o etanol; e opcionalmente (v) separar ou purificar as nanopartícuias lipídicas.
Item 67 . 0 método de acordo com o item 66, em
que no passo (iv) o etano 1 é removido por diálise ou
diafiltração.
Item 68 . 0 método de acordo com o item 66 ou 67,
em que no passo (v) as nanopartícuias lipídicas são
purificadas por filtração, preferencialmente por filtração através de um filtro estéril.
Item 69. Uma composição farmacêutica compreendendo pelo menos uma nanopartícuia lipídica de acordo com qualquer um dos itens 1 a 65.
Item 70. A composição farmacêutica de acordo com o item 69, compreendendo pelo menos uma primeira e uma segunda nanopartícuia lipídica de acordo com qualguer um dos itens 1 a 65, em que o composto de mRNA compreendido pela segunda nanopartícuia lipídica é diferente do composto de mRNA compreendido pela primeira nanopartícuia lipídica.
Item 71. A composição farmacêutica de acordo com o item 69 ou 70, adicionalmente compreendendo um adjuvante ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
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Item 72. Uma nanoparticula lipidica de acordo com qualquer um dos itens 1 a 65 ou uma composição farmacêutica de acordo com qualquer um dos itens 69 a 71 para uso como um medicamento.
Item 73. A nanoparticula lipidica ou a composição farmacêutica para uso de acordo com o item 72, em que o medicamento é para melhoramento terapêutico ou profilático de uma resposta imunitária de um sujeito com necessidade do mesmo.
Item 74. A nanoparticula lipidica ou a composição farmacêutica para uso de acordo com o item 72 ou 73, em que o medicamento se destina à prevenção ou tratamento de câncer ou doenças tumorais, doenças infecciosas, alergias ou doenças autoimunes ou distúrbios relacionados com as mesmas.
Item 75. A nanoparticula lipidica ou a composição farmacêutica para uso de acordo com qualquer um dos itens 72 a 74, em que o medicamento é uma vacina.
Item 76. A nanoparticula lipidica ou a composição farmacêutica para uso de acordo com o item 75, em que o medicamento é uma vacina contra tumores, influenza ou raiva.
Item 77. A nanoparticula lipidica ou a composição farmacêutica para uso de acordo com o item 7 6, em que o medicamento é uma vacina da raiva usada em tratamentos da raiva.
Item 78. A nanoparticula lipidica ou a composição farmacêutica para uso de acordo com qualquer um dos itens 72 a 77, em que o sujeito é um vertebrado, preferencialmente um mamífero.
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Item 79. A nanoparticula lipídica ou a composição farmacêutica para uso de acordo com qualquer um dos itens 72 a 78, em que o medicamento é para administração parenteral e em que a administração parenteral compreende injeção.
Item 80. A nanoparticula lipídica ou a composição farmacêutica para uso de acordo com qualquer um dos itens 78 a 79, em que o sujeito é uma ave, preferencialmente galinha, ou um mamífero, preferencialmente selecionado a partir do grupo compreendendo cabra, gado bovino, suíno, cão, gato, burro macaco, símio, um roedor tal como camundongo, hamster, coelho e, particularmente, ser humano.
Item 81. Um método para aumentar uma resposta imunitária em um sujeito com necessidade da mesma, compreendendo administrar ao sujeito uma nanoparticula lipídica de acordo com qualquer um dos itens 1 a 65 ou uma composição farmacêutica de acordo com qualquer um dos itens 69 a 72.
Item 82. Um método para prevenção ou tratamento de câncer ou doenças tumorais, doenças infecciosas, alergias ou doenças autoimunes ou distúrbios relacionados com as mesmas em um sujeito com necessidade do mesmo, compreendendo administrar ao sujeito uma nanoparticula lipídica de acordo com qualquer um dos itens 1 a 65 ou uma composição farmacêutica de acordo com qualquer um dos itens 69 a 72.
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Figuras [0598] As figuras mostradas a seguir são meramente ilustrativas e irão descrever a presente invenção de uma forma adicional. Essas figuras não devem ser interpretadas como limitando a presente invenção às mesmas.
[0599] Figura 1A-1B: mostra os resultados da imagem de bioluminescência de camundongos após injeção intraperitoneal de Luciferina após 24h (Figura IA) e após 48h (Figura 1B) . O mRNA formulado com LNP conduziu a uma expressão proteica significativamente aumentada e dependente de dose após aplicação intramuscular, em comparação com a mesma quantidade de mRNA não formulado.
[0600] Figuras 2A-2G: mostram a expressão de PpLuc medida 48 h após a injeção i.m. em lisados de órgãos. As Unidades de Luz Relativa da Luciferase (RLU) de órgãos individuais foram relatadas para cada grupo (Figura 2A = cérebro, Figura 2B = coração, Figura 2C = rim, Figura 2D = fígado, Figura 2E = pulmão, Figura 2F = músculo, Figura 2G = baço).
[0601] Figuras 3A-3B: mostram títulos HI 21 dias após a vacinação inicial com três HA-mRNA formulados com LNP diferentes (Figura 3A) e 14 dias após a vacinação de reforço (Figura 3B) . A linha tracejada indica o titulo de proteção HI definido convencionalmente de 1:40.
[0602] Figuras 4A-4D: mostram os resultados dos ensaios de ELISA, 21 dias após a primeira vacinação e 14 dias após a vacinação de reforço com três mRNA formulados com LNP diferentes e 14 dias após a vacinação de reforço (subtipos de IgG dia 21 após iniciador são mostrados na Figura 4A, os subtipos de IgGl dia 14 após o
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447/542 reforço são mostrados na Figura 4B, os subtipos de IgG2a dia 21 após iniciador são mostrados na Figura 4G, os subtipos de IgG2a dia 14 após reforço são mostrados na Figura 4D).
[0603] Figuras 5A-5C: mostram os resultados do ensaio de células T após indução de células T específicas do antígeno, usando coloração intracelular de citocinas. A Figura 5A mostra IFNy/TNFa produzindo células T CD4, a Figura 5B mostra IFNy/TNFa produzindo células T CD8 e a Figura 5C mostra IFNy/CD107+ produzindo células T CD8.
[0604] Figuras 6A-6B: mostram títulos HI 21 dias após a vacinação inicial com três HA-mRNA formulados com LNP diferentes (Figura 6A) e 14 dias após a vacinação de reforço (Figura 6B) . A linha tracejada indica o título de proteção HI definido convencionalmente de 1:40.
[0605] Figuras 7A-7D: mostram os resultados dos ensaios de ELISA, 21 dias após a primeira vacinação e 14 dias após a vacinação de reforço com três mRNA formulados com LNP diferentes e 14 dias após a vacinação de reforço (subtipos de IgG dia 21 após iniciador são mostrados na Figura 7A, os subtipos de IgGl dia 14 após o reforço são mostrados na Figura 7B, os subtipos de IgG2a dia 21 após iniciador são mostrados na Figura 7C, os subtipos de IgG2a dia 14 após reforço são mostrados na Figura 7D).
[0606] Figuras 8A-8C: mostram os resultados do ensaio de células T após indução de células T específicas do antígeno, usando coloração intracelular de citocinas. A Figura 8A mostra IFNy/TNFa produzindo células T CD4, a
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Figura 5B mostra IFNy/TNFa produzindo células T CD8 e a Figura 8C mostra IFNy/CD107+ produzindo células T CD8.
[0607] Figuras 9A-9B: mostram títulos HI 21 dias após a vacinação inicial com três HA-mRNA formulados com LNP diferentes (Figura 6A) e 14 dias após a vacinação de reforço (Figura 6B) usando apenas Ipg de HA-mRNA formulado com LNP. A linha tracejada indica o título de proteção HI definido convencionalmente de 1:40.
[0608] Figuras 10A-10D: mostram os resultados dos ensaios de ELISA, 21 dias após a primeira vacinação e 14 dias após a vacinação de reforço com três mRNA formulados com LNP diferentes e 14 dias após a vacinação de reforço (subtipos de IgG dia 21 após iniciador são mostrados na Figura 10A, os subtipos de IgGl dia 14 após o reforço são mostrados na Figura 10B, os subtipos de IgG2a dia 21 após iniciador são mostrados na Figura 10C, os subtipos de IgG2a dia 14 após reforço são mostrados na Figura 10D).
[0609] Figura 11: mostra as respostas imunitárias de células T medidas por produção de IFNy usando Elispot.
[0610] Figura 12: mostra os resultados de uma análise de título de anticorpo após vacinação intramuscular de NHP com mRNA codificando HA formulado com LNP-III-3.
[0611] Figura 13: mostra os títulos neutralizantes do vírus da raiva (VNTs) após vacinação intramuscular de NHPs com mRNA codificando RABV-G formulado com LNP-III-3.
[0612] Figura 14: mostra a análise do título de HI após vacinação com HA-mRNA formulado com LNP-III-3.
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449/542 [0613] Figuras 15A-15D: mostram os resultados de uma análise de citocina após vacinação com mRNA formulado com LNP-III-3 (Figura 15A = IFNy, Figura 15B = IL-6, Figura 15C = IL-8, Figura 15D = TNF).
[0614] Figuras 16A-16B: mostram os títulos neutralizantes do vírus da raiva (VNTs) após vacinação intramuscular de camundongos com o mRNA codificando RABV-G formulado por LNP-III-3 (Figura 16A = VNT dia 21; Figura 16B = VNT dia 35).
[0615] Figuras 17A-17C: mostram os resultados de ensaios de células T de camundongos imunizados duas vezes com 5 pg, 1 pg e 0,5 pg de mRNA formulado com LNP no dia 35 (Figura 17A mostra IFNy/TNFa produzindo células T CD4, Figura 17B mostra IFNy/TNFa produzindo células T CD8 e a Figura 17C mostra células FNy/CD107+ produzindo células T CD8) . O controle DMSO negativo é indicado por uma linha tracejada nos gráficos.
[0616] Figuras 18A-18D:mostram os resultados de uma análise de danos no fígado, ou seja, a determinação dos níveis de AST no dia 1 e 21 (Figuras 18A-18B) e os níveis de ALT no dia 1 e 21 (Figuras 18C-18D).
[0617] Figuras 19A-19D: mostram a detecção de uma resposta imunitária específica de HA (resposta imunitária de células B) através da detecção de anticorpos IgG2a dirigidos contra o vírus influenza particular, ou seja InfluenzaA/Califórnia/7/2009 (H1N1; Figura 19A) , Influenza A/Hong Kong/4801/2014 (H3N2; Figura 19B) , Influenza B/Brisbane/60/2008 (B; Figura 19C) e InfluenzaA/Vietnã/1203/2004 (H5N1; Figura 19D).
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450/542 [0618] Figura 20: mostra proteínas de hemaglutinina (HA) exemplificativas do vírus influenza A (ver a secção Sequências Preferidas da Presente Invenção; Legenda: Primeira coluna: N°. de Acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico (GenBank); segunda coluna (A) : Sequência de Proteína de tipo selvagem SEQ ID NO:; terceira coluna (B): Sequência de Nucleotídeo de tipo selvagem SEQ ID NO:; quarta coluna (C): Sequência de Nucleotídeo Otimizada SEQ ID NO:) [0619] Figura 21: mostra proteínas de hemaglutinina (HA) exemplificativas do vírus influenza B (ver a secção Sequências Preferidas da Presente Invenção; Legenda: Primeira coluna: N°. de Acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico (GenBank); segunda coluna (A) : Sequência de Proteína de tipo selvagem SEQ ID NO:; terceira coluna (B): Sequência de Nucleotídeo de tipo selvagem SEQ ID NO:; quarta coluna (C): Sequência de Nucleotídeo Otimizada SEQ ID NO:) [0620] Figura 22: mostra proteínas de neuraminidase (NA) exemplificativas do vírus influenza A (ver a secção Sequências Preferidas da Presente Invenção; Legenda: Primeira coluna: N°. de Acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico (GenBank); segunda coluna (A) : Sequência de Proteína de tipo selvagem SEQ ID NO:; terceira coluna (B): Sequência de Nucleotídeo de tipo selvagem SEQ ID NO:; quarta coluna (C): Sequência de Nucleotídeo Otimizada SEQ ID NO:) [0621] Figura 23: mostra proteínas de neuraminidase (NA) exemplificativas do vírus influenza B
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451/542 (ver a secção Sequências Preferidas da Presente Invenção; Legenda: Primeira coluna: N° . de Acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico (GenBank); segunda coluna (A) : Sequência de Proteína de tipo selvagem SEQ ID NO:; terceira coluna (B): Sequência de Nucleotídeo de tipo selvagem SEQ ID NO:; quarta coluna (C): Sequência de Nucleotídeo Otimizada SEQ ID NO:) [0622] Figura 24: mostra glicoproteínas exemplificativas do vírus da Raiva (ver a secção Sequências Preferidas da Presente Invenção; Legenda: Primeira coluna: N°. de Acesso de Proteína ou de Ácido Nucleico (GenBank); segunda coluna (A) : Sequência de Proteína de tipo selvagem SEQ ID NO:; terceira coluna (B): Sequência de Nucleotídeo de tipo selvagem SEQ ID NO:; quarta coluna (C): Sequência de Nucleotídeo Otimizada SEQ ID NO:) [0623] Figura 25: mostra a presença de anticorpos IgGl e IgG2 totais específicos para Influenza H1N1 (A/Califórnia/7/2009) de camundongos vacinados com uma combinação de quatro mRNAs codificando diferentes antígenos de Influenza (C-F) em comparação com controles injetados com RiLa (A) ou Influsplit (B) . Para cada configuração (AF) , são mostrados três momentos do tempo diferentes (d21, d35 e d49) . Esquema de vacinação, ver a Tabela A. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 12 .
[0624] Figura 26: mostra os títulos HI específicos para Influenza H1N1 (A/Califórnia/7/2009) de camundongos vacinados com uma combinação de quatro mRNAs codificando diferentes antígenos de Influenza (C-F) em
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452/542 comparação com controles injetados com RiLa (A) ou Influsplit (B). Para cada configuração (A-F), são mostrados três momentos do tempo diferentes (d21, d35 e d49). Esquema de vacinação, ver a Tabela A. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 12.
[0625] Figura 27: mostra a presença de anticorpos IgGl e IgG2 totais específicos para Influenza H3N2 (A/Hong Kong/4801/2014) de camundongos vacinados com uma combinação de quatro mRNAs codificando diferentes antígenos de Influenza (C-F) em comparação com controles injetados com RiLa (A) ou Influsplit (B). Para cada
configuração (A-F) , são mostrados três momentos do tempo
diferentes ( d21, d35 e d49) . Esquema de vacinação, ver a
Tabela A. Uma descrição detalhada da experiência é
fornecida no Exemplo 12.
[0626] Figura 28: mostra os títulos HI
específicos para Influenza H3N2 (A/Hong Kong/4801/2014) de
camundongos vacinados com uma combinação de quatro mRNAs codificando diferentes antígenos de Influenza (C-F) em comparação com controles injetados com RiLa (A) ou Influsplit (B). Para cada configuração (A-F), são mostrados três momentos do tempo diferentes (d21, d35 e d49). Esquema de vacinação, ver a Tabela A. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 12.
[0627] Figura 29: mostra a presença de anticorpos IgGl e IgG2 totais específicos para Influenza B (B/Brisbane/60/2008) de camundongos vacinados com uma combinação de quatro mRNAs codificando diferentes antígenos de Influenza (C-F) em comparação com controles injetados com RiLa (A) ou Influsplit (B) . Para cada configuração (A
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F) , são mostrados três momentos do tempo diferentes (d21, d35 e d49) . Esquema de vacinação, ver a Tabela A. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 12 .
[0628] Figura 30: mostra a presença de anticorpos IgGl e IgG2 totais específicos para Influenza B (B/Phuket/3073/2013) de camundongos vacinados com uma combinação de quatro mRNAs codificando diferentes antígenos de Influenza (C-F) em comparação com controles injetados com RiLa (A) ou Influsplit (B) . Para cada configuração (AF) , são mostrados três momentos do tempo diferentes (d21, d35 e d49) . Esquema de vacinação, ver a Tabela A. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 12 .
[0629] Figura 31: mostra que a vacinação de camundongos com uma combinação de quatro mRNAs codificando para diferentes antígenos de Influenza (C-F) induziu as respostas das células T CD4+ contra H1N1 (A/Califórnia/7/2009), H3N2 (A/Hong Kong/4801/2014), Influenza B (B/Brisbane/60/2008), Influenza B (B/Phuket/3073/2013) (1-4 respectivamente). Como controle, as células foram estimuladas com tampão (5). Como controles adicionais, os camundongos foram injetados com Rila (A) ou Influsplit (B) . Esquema de vacinação, ver a Tabela A. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 12 .
[0630] Figura 32: mostra que a vacinação de camundongos com uma combinação de quatro mRNAs codificando para diferentes antígenos de Influenza (C-F) induziu as respostas das células T CD8+ contra H1N1
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454/542 (A/Califórnia/7/2009) (1) . Como controle, as células foram estimuladas com tampão (5) . Como controles adicionais, os camundongos foram injetados com Rila (A) ou Influsplit (B). Esquema de vacinação, ver a Tabela A. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 12.
[0631] Figura 33: mostra a presença de anticorpos IgGl e IgG2 totais específicos para Influenza H1N1 (A/Califórnia/7/2009) de camundongos vacinados com uma combinação de quatro mRNAs codificando diferentes antigenos de Influenza (C-E) em comparação com controles injetados com RiLa (A) ou Fluarix (B) . Para cada configuração (A-E) , são mostrados três momentos do tempo diferentes (d21, d35 e d49) . Esquema de vacinação, ver a Tabela B. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 13.
[0 632] Figura 34: mostra os títulos HI específicos para Influenza H1N1 (A/Califórnia/7/2009) de camundongos vacinados com uma combinação de quatro mRNAs codificando diferentes antigenos de Influenza (C-E) em comparação com controles injetados com RiLa (A) ou Fluarix (B) . Para cada configuração (A-E), são mostrados três momentos do tempo diferentes (d21, d35 e d49) . Esquema de vacinação, ver a Tabela B. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 13.
[0633] Figura 35: mostra a presença de anticorpos IgGl e IgG2 totais específicos para Influenza H3N2 (A/Hong Kong/4801/2014) de camundongos vacinados com uma combinação de quatro mRNAs codificando diferentes antigenos de Influenza (C-E) em comparação com controles injetados com RiLa (A) ou Fluarix (B) . Para cada configuração (A-E), são mostrados três momentos do tempo
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455/542 diferentes (d21, d35 e d49) . Esquema de vacinação, ver a Tabela B. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 13.
[0634] Figura 36: mostra os títulos HI específicos para Influenza H3N2 (A/Hong Kong/4801/2014) de camundongos vacinados com uma combinação de quatro mRNAs codificando diferentes antígenos de Influenza (C-E) em comparação com controles injetados com RiLa (A) ou Fluarix (B) . Para cada configuração de vacinação (A-E) , são mostrados três momentos do tempo diferentes (d21, d35 e d49) . Esquema de vacinação, ver a Tabela B. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 13.
[0 635] Figura 37: mostra a presença de anticorpos IgGl e IgG2 totais específicos para Influenza B (B/Brisbane/60/2008) de camundongos vacinados com uma combinação de quatro mRNAs codificando diferentes antígenos de Influenza (C-E) em comparação com controles injetados com RiLa (A) ou Fluarix (B) . Para cada configuração (A-E) , são mostrados três momentos do tempo diferentes (d21, d35 e d49) . Esquema de vacinação, ver a Tabela B. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 13.
[0636] Figura 38: mostra a presença de anticorpos IgGl e IgG2 totais específicos para Influenza H5N1 (A/Vietnã/1203/2004) de camundongos vacinados com uma combinação de quatro mRNAs codificando diferentes antígenos de Influenza (C-E) em comparação com controles injetados com RiLa (A) ou Fluarix (B) . Para cada configuração (A-E) , são mostrados três momentos do tempo diferentes (d21, d35 e d49) . Esquema de vacinação, ver a Tabela B. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 13.
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456/542 [0637] Figura 39: mostra que a vacinação de camundongos com uma combinação de quatro mRNAs codificando para diferentes antígenos de Influenza (C-E) induziu as respostas das células T CD4+ contra H1N1 (A/Califórnia/7/2009), H3N2 (A/Hong Kong/4801/2014), Influenza B (B/Brisbane/60/2008), H5N1 (A/Vietnã/1203/2004) (1-4 respectivamente). Como controle, as células foram estimuladas com tampão (5) . Como controles adicionais, os camundongos foram injetados com Rila (A) ou Influsplit (B). Esquema de vacinação, ver a Tabela B. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 13.
[0638] Figura 40: mostra que a vacinação de camundongos com uma combinação de quatro mRNAs codificando para diferentes antígenos de Influenza (C-F) induziu as respostas das células T CD8+ contra H1N1 (A/Califórnia/7/2009), H5N1 (A/Vietnã/1203/2004) (1 e 2). Como controle, as células foram estimuladas com tampão (3). Como controles adicionais, os camundongos foram injetados com Rila (A) ou Influsplit (B). Esquema de vacinação, ver a Tabela B. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 13.
[0639] Figura 41: mostra a presença de ligação de anticorpos específicos de neuraminidase NI (A/Califórnia/7/2009) em títulos de ELLA (títulos de inibição de 50%) em amostras de soro de camundongos que foram vacinados com mRNA formulado com LNP codificando para neuraminidase de Influenza NI (A/Califórnia/7/2009) (C e D) em comparação com um controle injetado com RiLa (A) ou Influsplit® (B) . Esquema de vacinação, ver a Tabela C. Uma
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457/542 descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 14 .
[0640] Figura 42: mostra que a vacinação de camundongos com mRNA codificando para a neuraminidase da influenza NI (A/Califnia/7/2009) induziu as respostas das células T CD4+ contra a neuraminidase (C e D). Como controles, os camundongos foram injetados com Rila (A) ou Influsplit® (B) . Esquema de vacinação, ver a Tabela C. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 14 .
[0641] Figura 43: mostra que a vacinação de camundongos com mRNA codificando para a neuraminidase da influenza NI (A/Califnia/7/2009) induziu as respostas das células T CD8+ contra a Neuraminidase (C e D). Como controles, os camundongos foram injetados com Rila (A) ou Influsplit® (B) . Esquema de vacinação, ver a Tabela C. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 14 .
[0642] Figura 44: mostra que os mRNA formulados com LNP codificando para o RAVBV-G induzem um ambiente pró-inflamatório. Os níveis de citocinas no músculo para quatro diferentes momentos do tempo (4h, 14h, 24h e 96h) são mostrados (TNF, IL6). A seta indica a série de dados para camundongos vacinados com mRNA formulado com LNP. Os valores representam a média de 6 amostras com DP. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 15.
[0643] Figura 45: mostra que os mRNA formulados com LNP codificando para o RAVBV-G induzem um ambiente pró-inflamatório. Os níveis de citocinas em dLNs
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458/542 para quatro diferentes momentos do tempo (4h, 14h, 24h e 96h) são mostrados (TNF, IL6) . A seta indica a série de dados para camundongos vacinados com mRNA formulado com LNP. Os valores representam a média de 6 amostras com DP. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 15.
[0644] Figura 46: mostra não existência de libertação sistêmica de TNF após vacinação i.m. com mRNAs formulados com LNP codificando para o RAVBV-G. Os níveis de citocinas no soro por quatro períodos diferentes (4h, 14h, 24h e 96h) são mostrados (TNF, IL6). A seta indica a série de dados para camundongos vacinados com mRNA formulado com LNP. Os valores representam a média de 6 amostras com DP. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 15.
[0645] Figura 47: mostra que os mRNA formulados com LNP codificando para o RAVBV-G induzem um ambiente pró-inflamatório. Os níveis de quemocinas no músculo para quatro diferentes momentos do tempo (4h, 14h, 24h e 96h) são mostrados (MIP-lbeta, CXCL9). A seta indica a série de dados para camundongos vacinados com mRNA formulado com LNP. Os valores representam a média de 6 amostras com DP. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 15.
[0646] Figura 4 8: mostra que os mRNA formulados com LNP codificando para o RAVBV-G induzem um ambiente pró-inflamatório. Os níveis de quemocinas em dLNs para quatro diferentes momentos do tempo (4h, 14h, 24h e 96h) são mostrados (MIP-lbeta, CXCL9). A seta indica a série de dados para camundongos vacinados com mRNA
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459/542 formulado com LNP. Os valores representam a média de 6 amostras com DP. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 15.
[0647] Figura 49: mostra que os mRNA formulados com LNP codificando para o RAVBV-G induzem um ambiente pró-inflamatório. Os níveis de quemocinas no soro para quatro diferentes momentos do tempo (4h, 14h, 24h e 96h) são mostrados (MIP-lbeta, CXCL9). A seta indica a série de dados para camundongos vacinados com mRNA formulado com LNP. Os valores representam a média de 6 amostras com DP. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 15.
[0648] Figura 50A-50B: mostra que os mRNA de F * formulados com LNP induzem um aumento no número e na ativação tanto de células imunitárias inatas como adaptativas dentro dos dLNs. Na Figura 50A, são mostrados os números de células T CD4+, células NK, células CDllb+ Grl+ (monócitos e granolócitos) e células totais em dLNs para três momentos do tempo diferentes (4h, 24h e 48h). Na Figura 50B, são mostradas as frequências de células T CD4+, células T CD8+, células B e células NK expressando o marcador de ativação CD69 para três momentos do tempo diferentes (4h, 24h e 48h) . A seta indica a série de dados para camundongos injetados com mRNA formulado com LNP. Os valores representam a média de 6 amostras com DP. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 15.
[0649] Figura 51: mostra que a vacinação de macacos com mRNAs formulados com LNP codificando para RABVG induz títulos neutralizantes do vírus da raiva (VNTs)
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460/542 após vacinação i.m. única. Duas concentrações de mRNA são mostradas (1 pg e 10 pg) antes da vacinação (pré dose) e após a primeira vacinação (pós iniciador). As linhas a tracejado indicam os títulos protetores de VNTs convencionalmente definidos. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 16.
[0650] Figura 52: mostra a cinética de VNTs após a vacinação (vacinação inicial no dia 0, vacinação de reforço no dia 28) de macacos com mRNAs formulados com LNP codificando para RABV-G. As linhas a tracejado indicam os títulos protetores de VNTs convencionalmente definidos. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 16.
[0651] Figura 53: Duas concentrações de mRNA são mostradas (1 pg e 10 pg) antes do reforço (pré recuperação) e após a vacinação de reforço (pós recuperação). As linhas a tracejado indicam os títulos protetores de VNTs convencionalmente definidos. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 16.
[0652] Figura 54: As vacinas de mRNA de RAVBVG formulado com LNP induzem respostas imunes funcionais mais fortes contra a raiva do que uma vacina licenciada em NHPs. As VNTs de Raiva nos soros de NHPs (n = 2 machos, 2 fêmeas por grupo) vacinados com mRNA de RAVBV-G formulado com LNP nos dias 0 e 28, ou com a vacina de vírus da raiva inativado Rabipur® nos dias 0 e 28 (um reforço) . As linhas a tracejado indicam os títulos protetores de VNTs convencionalmente definidos. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 16.
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461/542 [0653] Figura 55: As vacinas de mRNA de RAVBVG formulado com LNP induzem células T CD4+ específicas de RABV-G em macacos. São mostradas as frequências de células de IFNy+/IL-2+ CD4+ específicas de RABV-G no sangue, 7 dias após a última vacinação (dia 35). As PBMCs ou foram estimuladas com uma biblioteca de peptídeos sobrepostos cobrindo a proteína RABV-G (peptídeos RABV-G) ou (meios) não estimulados e analisadas por ICS. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 16.
[0654] Figura 56: As vacinas de mRNA de RAVBVG formulado com LNP induzem células T CD8+ específicas de RABV-G em macacos. São mostradas as frequências de células T CD8 IENv+/GrzB+ específicas de RABV-G no sangue, 7 dias após a última vacinação (dia 35). As PBMCs ou foram estimuladas com uma biblioteca de peptídeos sobrepostos cobrindo a proteína RABV-G (peptídeos RABV-G) ou (meios) não estimulados e analisadas por ICS. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 16.
[0655] Figura 57: mostra que a vacinação de macacos com mRNAs formulados com LNP codificando para antígenos HA de influenza das estirpes H1N1 ou H3N2 induz anticorpos funcionais após vacinação i.m. única. Os títulos de HI antes da vacinação (pré dose) e após a vacinação inicial (pós iniciador) são mostrados. As linhas a tracejado indicam os títulos protetores de HI convencionalmente definidos. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 17.
[0656] Figura 58: mostra a cinética dos títulos de HI (média com SEM) após vacinação (vacinação inicial no dia 0, vacinação de reforço no dia 28) de
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462/542 macacos com mRNAs formulados com LNP codificando para HA de H1N1. 0 curso temporal de títulos HI é mostrado durante até 544 dias. As linhas a tracejado indicam os títulos protetores de HI convencionalmente definidos. Triângulos: Pontos de dados para macacos vacinados com 10pg; Retângulos: Pontos de dados para macacos vacinados com 1 pg. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 17.
[0 657] Figura 59: As vacinas de mRNA de H3N2HA formulado com LNP induziram respostas imunes funcionais mais fortes contra a influenza do que uma vacina licenciada em NHPs. São mostrados os títulos de HI de H3N2 em soros de NHPs nos dias 0 e 28 com mRNA de H3N2-HA formulado com LNP ou a vacina com o adjuvante Fluad®. As linhas a tracejado indicam os títulos protetores de HI convencionalmente definidos. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 17.
[0 658] Figura 60: As vacinas de mRNA de H3N2HA formulado com LNP induzem células T CD4+ específicas de H3N2 em macacos. As PBMCs ou foram estimuladas com uma biblioteca de peptídeos sobrepostos cobrindo a proteína H3N2-HA (peptídeos H3N2-HA) ou (meios) não estimulados e analisadas por ICS. Figura 60A: São mostradas as frequências de células de IFNy+/IL-2+ CD4+ específicas de H3N2-HA no sangue, 7 dias após a última vacinação (dia 35). Figura 60B: São mostradas as frequências de células de TNFa+/IL-2+ CD4+ específicas de H3N2-HA no sangue, 7 dias após a última vacinação (dia 35) . Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 17.
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463/542 [0659] Figuras 61A-61B: mostram os títulos neutralizantes do vírus da raiva (VNTs) após vacinação intramuscular de camundongos com o mRNA codificando RABV-G formulado por LNP-III-3 (Figura 60A = VNT dia 21; Figura 60B = VNT dia 35). Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 7.
[0660] Figuras 62A-62B: mostram os títulos neutralizantes do vírus da raiva (VNTs) após vacinação intramuscular de camundongos com o mRNA codificando RABV-G formulado por LNP-III-3 (Figura 60A = VNT dia 21; Figura 60B = VNT dia 35) aplicando LNPs que foram armazenados a 5 °C durante três meses. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 20.
[0661] Figuras 63A-63D: mostra que a vacinação de furões com a vacina de mRNA tetravalente formulado com LNP induz anticorpos funcionais. Dados apresentados para os grupos indicados (grupo A-D), medidos no dia 0, dia 21, dia 35 e dia 49, respectivamente. Figura 63A: títulos HI para HA A/Califórnia/07/09; Figura 63B: títulos HI para HA A/Hong Kong/4801/2014; Figura 63C: títulos HI para HA B/Brisbane/60/2008; Figura 63D: títulos MN para HA B/Phuket/3073/2013. O controle positivo (Grupo D, Fluad) não é mostrado, pois o Fluad não contém HA B/Phuket. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 22 .
[0662] Figura 64:mostra que a vacinação de camundongos com a vacina de NA mRNA trivalente formulada com LNP induz ligação de anticorpos NA de influenza. ELLA (50% título de inibição) são mostrados. A Figura 64A mostra os títulos de ELLA para a influenza NI A/Califórnia/7/2009
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464/542 para os grupos indicados; A Figura 64B mostra os títulos de ELLA para a influenza NI A/Hong Kong/4801/2014 para os grupos indicados; A Figura 64C mostra os títulos de ELLA para NA B/Brisbane/60/2008 para os grupos indicados. 1 = vacina de mRNA, 2 = controle; 3 = controle de tampão. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 24 .
[0663] Figura 65: mostra a presença de anticorpos IgGl e IgG2a totais específicos para HA de H1N1 A/Califórnia/7/2009 de camundongos vacinados com a vacina de mRNA de HA/NA septavalente formulada com LNP. Para cada configuração (grupo 1-6), são mostrados três momentos do tempo diferentes (d21, d35 e d49) (ELISA) . Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 25.
[0664] Figura 66: mostra a presença de anticorpos IgGl e IgG2a totais específicos para HA de H3N2 A/Hong Kong/4801/2014 de camundongos vacinados com a vacina de mRNA de HA/NA septavalente formulada com LNP. Para cada configuração (grupo 1-6), são mostrados três momentos do tempo diferentes (d21, d35 e d49) (ELISA) . Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 25.
[0665] Figura 67: mostra a presença de anticorpos IgGl e IgG2a totais específicos para HA de B/Brisbane/60/2008 de camundongos vacinados com a vacina de mRNA de HA/NA septavalente (ELISA). Para cada configuração (grupo 1-6) , são mostrados três momentos do tempo
diferentes (d21, d35 e d49) . Uma descrição detalhada da
experiência é fornecida no Exemplo 25.
[ 0666] Figura 68: mostra a presença de
anticorpos IgGl e IgG2a totais para HA de
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B/Phuket/3073/2013 de camundongos vacinados com a vacina de mRNA de HA/NA septavalente formulado com LNP (ELISA). Para cada configuração (grupo 1 - grupo 6) , são mostrados três momentos do tempo diferentes (d21, d35 e d49) . Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 25.
[0667] Figura 69: mostra a presença de anticorpos específicos para NA de HlNlA/Califórnia/7/2009 de camundongos vacinados com a vacina de mRNA de HA/NA septavalente formulado com LNP (ELISA) . Para cada configuração (grupo 1 - grupo 6), são mostrados três momentos do tempo diferentes (d21, d35 e d49) . Figura 69A: anticorpos específicos para NA de HlNlA/Califórnia/7/2009; Figura 69B: anticorpos específicos para NA de H3N2 A/Hong Kong/4801/2014; Figura 69C: anticorpos específicos para NA de B/Brisbane/60/2008. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 25.
[0668] Figura 70: mostra que a vacinação de camundongos com a vacina de mRNA de HA/NA septavalente formulada com LNP induz anticorpos funcionais. Os dados apresentados para os grupos indicados (grupo 1 - grupo 6), medidos no dia 49. Figura 63A: títulos HI para HA A/Califórnia/07/09; Figura 63B: títulos HI para HA A/Hong Kong/4801/2014. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 25.
[0669] Figura 71: mostra que a vacina de mRNA de GP (ebola) formulada com LNP induz respostas fortes de anticorpos IgGl e IgG2a em camundongos. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 26.
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466/542 [0670] Figura 72: mostra que a vacina de mRNA formulada com LNP induz títulos de HI fortes e duráveis quando administrados subcutaneamente. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 27.
[0671] Figura 73: mostra uma comparação de células T CD8 positivas específicas de Ova no sangue no dia 7 após a vacinação com 1 pg de Ova mRNA formulado com LNP (Componente A) e 32 pg de Ova mRNA formulado com protamina (Componente B). 1 pg de Ova mRNA formulado com LNP (Componente A) induz níveis mais elevados de células T CD8 positivas específicas para o antígeno em circulação após aplicação intradérmica. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 28.
[0672] Figura 74: mostra uma comparação de células T CD8 positivas específicas de Ova no sangue no dia 21 após a vacinação de reforço de animais com 1 pg de mRNA de OVA formulado com LNP (Componente A) e 32 pg de Ova mRNA formulado com protamina (Componente B). 1 pg de mRNA de OVA formulado com LNP (Componente A) induz níveis mais reforçados de células T CD8 positivas específicas para antígeno em circulação após aplicação intradérmica. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 28 .
[0673] Figura 75: mostra uma comparação de células T CD8 positivas específicas de Ova multifuncional no sangue, após a vacinação com 1 pg de Ova mRNA formulado com LNP (Componente A) e 32 pg de Ova mRNA formulado com protamina (Componente B) . 1 pg de vacina de Ova mRNA formulado com LNP (Componente A) induz níveis elevados de células T CD8 positivas multifuncionais após aplicação
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467/542 intradérmica. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 28.
[0674] Figura 76: mostra uma comparação de títulos IgG2c específicos de OVA, após a vacinação com 1 pg de Ova mRNA formulado com LNP (Componente A) e 32 pg de Ova mRNA formulado com protamina (Componente B). 1 pg de vacina de Ova mRNA formulado com LNP (Componente A) conduz a títulos de IgG2c específicos de OVA aumentados após
aplicação intradérmica. Uma descrição detalhada da
experiência é fornecida no [0675] Figura Exemplo 2 8. 77: mostra uma comparação do
crescimento médio do tumor em camundongos portadores de
tumor após vacinação com 1 pg de Ova mRNA formulado com LNP
(Componente A) e PpLuc mRNA formulado com protamina
irrelevante (Componente B) • i ug de Ova mRNA formulado com
LNP (Componente A) diminuiu fortemente o volume médio do tumor em comparação com o outro tratamento com um mRNA irrelevante (Componente B). Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 29.
[0676] Figura 78: mostra uma comparação da sobrevivência geral do tumor em camundongos com desafio tumoral após vacinação com 1 pg de Ova mRNA formulado com LNP (Componente A) e PpLuc mRNA formulado com protamina irrelevante (Componente B) . 1 pg de Ova mRNA formulado com LNP (Componente A) aumentou fortemente a sobrevivência de camundongos com desafio tumoral em comparação com os outros tratamentos (Componente B e Tampão). Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 29.
[0677] Figura 79: mostra uma comparação do crescimento médio do tumor em camundongos portadores de
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468/542 tumor após vacinação com 1 pg de Trp2 mRNA formulado com LNP (Componente A) e PpLuc mRNA formulado com protamina irrelevante (Componente B) em combinação com dois inibidores de pontos de controle anti-PDl e anti-CTLA4. 1 pg de Trp2 mRNA formulado com LNP (Componente A) diminuiu fortemente o volume médio do tumor em comparação com o outro tratamento com um mRNA irrelevante (Componente B) em combinação com inibidores dos ponto de verificação ou um anticorpo de controle. Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 30.
[0678] Figura 80: mostra uma comparação da sobrevivência do camundongo com desafio tumoral após vacinação com 1 pg de Trp2 mRNA formulado com LNP (Componente A) e PpLuc mRNA formulado com protamina irrelevante (Componente B) em combinação com dois inibidores dos pontos de controle anti-PDl e anti-CTLA4. 1 pg de Trp2 mRNA formulado com LNP (Componente A) aumentou a sobrevivência do camundongo com desafio tumoral em comparação com o outro tratamento (Componente B em combinação com inibidores dos ponto de verificação ou um anticorpo de controle). Uma descrição detalhada da experiência é fornecida no Exemplo 30.
Exemplos [0679] A invenção é adicionalmente descrita em detalhe por referência aos seguintes exemplos experimentais. Esses exemplos são fornecidos apenas para fins ilustrativos e não devem ser limitados, a menos que especificado de outra forma. Desse modo, a invenção não deve, de modo algum, ser interpretada como sendo limitada aos exemplos seguintes, mas, pelo contrário, deve ser
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469/542 entendida como englobando todas e quaisquer variações que se tornam evidentes como resultado dos ensinamentos fornecidos no presente documento.
[0680] Sem descrição adicional, se acredita que um perito na técnica pode, usando a descrição precedente e os seguintes exemplos ilustrativos, fazer e usar a presente invenção e praticar os métodos reivindicados. Por conseguinte, os seguintes exemplos de trabalho apontam especificamente as modalidades preferidas da presente invenção e não devem ser interpretadas como limitando de qualquer forma o restante da divulgação.
Exemplo 1: Preparação de Construtos de mRNA [0681] Para os presentes exemplos, as sequências de DNA codificando proteínas diferentes foram preparadas e usadas para reações subsequentes de transcrição in vitro de RNA. As sequências de DNA codificando as proteínas foram preparadas modificando a sequência de DNA de codificação de tipo selvagem introduzindo uma sequência otimizada por GC para estabilização. As sequências foram introduzidas em um vetor pUC19 derivado. Para estabilização adicional e/ou tradução aumentada, foram introduzidos elementos UTR 5' e/ou 3' da região de codificação.
Os seguintes construtos de mRNA foram usados nos exemplos:
Photinus pyralis luciferase:
- 5'-TOP-UTR derivado a partir da sequência de codificação enriquecida com proteína -GC- ribossomal 32L4 codificando PpLuc-3'-UTR derivada a partir do gene de albumina - um trecho de 64 adenosinas - um trecho de 30
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470/542 citosinas - uma sequência de haste-ansa de histona (SEQ ID NO: 224286).
Hemaglutinina de Influenza (HA):
- 5'-TOP-UTR derivado a partir da sequência de codificação enriquecida com proteína -GC- ribossomal 32L4 codificando HA de Influenza A/California/07/2009 (H1N1)
3'-UTR derivada a partir do gene de albumina - um trecho de 64 adenosinas - um trecho de 30 citosinas - uma sequência de haste-ansa de histona (SEQ ID NO: 224118)
- Sequência de codificação enriquecida com -GCcodificando HA de Influenza A/Califórnia/07/2009 (H1N1)
3'-UTR derivada a partir de globina alfa humana (muag) - um trecho de 64 adenosinas - um trecho de 30 citosinas - uma sequência de haste-ansa de histona (SEQ ID NO: 224117)
- Sequência de codificação enriquecida com -GCcodificando HA de Influenza A/Hong Kong/4801/2014 (H3N2) 3'-UTR derivada a partir de globina alfa humana (muag) - um trecho de 64 adenosinas - um trecho de 30 citosinas - uma sequência de haste-ansa de histona (SEQ ID NO: 224181)
- Sequência de codificação enriquecida com -GCcodificando HA de Influenza B/Brisbane/60/2008 - 3'-UTR derivada a partir de globina alfa humana (muag) - um trecho de 64 adenosinas - um trecho de 30 citosinas - uma sequência de haste-ansa de histona (SEQ ID NO: 224236) .
- Sequência de codificação enriquecida com -GCcodificando HA de Influenza A/Vietnã/1203/2004 (H5N1) - 3'UTR derivada a partir de globina alfa humana (muag) - um trecho de 64 adenosinas - um trecho de 30 citosinas - uma sequência de haste-ansa de histona (SEQ ID NO: 224200).
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471/542
- Sequência de codificação enriquecida com -GCcodificando HA de Influenza A/Países Baixos/602/2009 (H1N1) - 3'-UTR derivada a partir de globina alfa humana (muag) um trecho de 64 adenosinas - um trecho de 30 citosinas uma sequência de haste-ansa de histona (SEQ ID NO: 224166).
- Sequência de codificação enriquecida com -GCcodificando HA de Influenza B/Brisbane/60/2008 - 3'-UTR derivada a partir de globina alfa humana (muag) - um trecho de 64 adenosinas - um trecho de 30 citosinas - uma sequência de haste-ansa de histona (SEQ ID NO: 224236) .
- Sequência de codificação enriquecida com -GCcodificando HA de Influenza B/Phuket/3073/2013 - 3'-UTR derivada a partir de globina alfa humana (muag) - um trecho de 64 adenosinas - um trecho de 30 citosinas - uma sequência de haste-ansa de histona (SEQ ID NO: 224246) .
Neuraminidase NA de Influenza:
- Sequência de codificação enriquecida com -GCcodificando NA de Influenza A/Califórnia/07/2009 (H1N1)
3'-UTR derivada a partir de globina alfa humana (muag) - um trecho de 64 adenosinas - um trecho de 30 citosinas - uma sequência de haste-ansa de histona (SEQ ID NO: 224318).
- Sequência de codificação enriquecida com -GCcodificando NA de Influenza A/Hong Kong/4801/2014 (H3N2) 3'-UTR derivada a partir de globina alfa humana (muag) - um trecho de 64 adenosinas - um trecho de 30 citosinas - uma sequência de haste-ansa de histona (SEQ ID NO: 224336).
- Sequência de codificação enriquecida com -GCcodificando NA de Influenza B/Brisbane/60/2008 - 3'-UTR derivada a partir de globina alfa humana (muag) - um trecho
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472/542 de 64 adenosinas - um trecho de 30 citosinas - uma sequência de haste-ansa de histona (SEQ ID NO: 224348) .
Raiva :
RABV-G A: - Sequência de codificação enriquecida com -GC- codificando glicoproteina (RABV-G) da estirpe de Pasteur (número de acesso GenBank: AAA47218.1) 3'-UTR derivada a partir de globina alfa humana (muag) - um trecho de 64 adenosinas - um trecho de 30 citosinas - uma sequência de haste-ansa de histona (SEQ ID NO: 224276)
RABV-G B: - 5'-TOP-UTR derivado a partir da sequência de codificação enriquecida com proteína -GCcodificando glicoproteina (RABV-G) da estirpe de Pasteur (número de acesso GenBank: AAA47218.1) - 3'-UTR derivada a partir do gene da albumina - um trecho de 64 adenosinas um trecho de 30 citosinas - uma sequência de haste-ansa de histona (SEQ ID NO: 224280) .
ebola:
GP do Virús ebola: sequência de codificação enriquecida - GC codificando a glicoproteina de ZEBOV Serra Leoa 2014; 5'-TOP-UTR derivada a partir da proteína ribossomal 32L4 - 3'-UTR derivado a partir do gene da albumina (SEQ ID NO: 224362).
[0682] Os construtos de DNA plasmático obtidas foram transformadas e propagadas em bactérias (Escherichia coli) usando protocolos comuns conhecidos na técnica. Subsequentemente, os plasmídeos de DNA são linearizados enzimaticamente usando EcoRI e transcritos in vitro usando transcrição in vitro de polimerase de RNA de T7 dependente de DNA na presença de uma mistura de nucleotídeo e análogo de CAP (m7GpppG) sob condições tampão adequadas. Os mRNAs
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473/542 obtidos foram purificados usando PureMessenger® (CureVac, Tübingen, Alemanha; W02008/077592 Al) e foram usados para experimentação adicional. Os NHP foram administrados com RABV-G A como formulação de protamina e RABV-G B como formulação LNP. As composições compreendendo mais do que um mRNA codificando diferentes proteínas/antígenos Influenza também podem ser produzidas de acordo com procedimentos conforme descrito no pedido PCT/EP2016/082487.
Exemplo de Formulação LNP [0683] As nanoparticulas lipidicas, os lipídeos catiônicos e os lipídeos conjugados com polímero (lipideo PEG) foram preparados e testados de acordo com os procedimentos gerais descritos nos documentos PCT N°s WO 2015/199952, WO 2017/004143 e WO 2017/075531, cujas descrições completas são incorporadas no presente documento por referência. O mRNA formulado em nanoparticulas lipidicas (LNP) foi preparado usando um amino-lipídeo ionizável (lipideo catiônico), fosfolipídeo, colesterol e um lipideo PEGuilado. As LNPs foram preparadas conforme se segue. Lipídeos catiônicos, DSPC, colesterol e lipideo PEG foram solubilizados em etanol em uma razão molar de aproximadamente 50:10:38,5:1,5 ou 47,5:10:40,8:1,7. As LNPs para os Exemplos incluíram, por exemplo, o composto lipídico catiônico III-3 e os componentes anteriores. As nanoparticulas lipidicas (LNP) compreendendo o composto III-3 foram preparadas a uma razão de mRNA para Lipideo Total de 0,03 a 0,04 p/p. Resumidamente, o mRNA foi diluído para 0,05 a 0,2 mg/mL em 10 a 50 mM de tampão citrato, pH 4. Bombas de seringa foram usadas para misturar a solução de lipideo etanólico com a solução aquosa de mRNA em uma
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474/542 razão de cerca de 1:5 a 1:3 (vol/vol) com taxas de fluxo total acima de 15 mL/min. 0 etanol foi então removido e o tampão externo substituído por PBS por diálise. Finalmente, as nanopartícuias lipídicas foram filtradas através de um filtro estéril poroso de 0,2 pm. O tamanho do diâmetro de partícula de nanopartícuias lipídicas era de 60-90 nm, conforme determinado por dispersão de luz quase elástica usando um Malvern Zetasizer Nano (Malvern, RU). Para outros compostos lipídicos catiônicos mencionados na presente especificação, o processo de formulação é semelhante.
Exemplo 2: Expressão de Ppluc após aplicação i.m. de mRNA formulado com LNP [0684] A expressão de luciferase (Ppluc) em camundongos BALB/c foi determinada 24h e 48h após injeção intramuscular (i.m.) no M. tibialis.
[0685] Por isso, 0,1 pg, 1 pg e 10 pg de mRNA codificando para Ppluc foram formulados com LNP de modo a render a respectiva formulação de LNP de acordo com a Tabela I. Como um controle serviu mRNA de Ppluc não formulado (10 pg e 1 pg). No momento Oh, quatro camundongos por grupo foram transfetados com mRNA de Ppluc de acordo com o esquema mostrado na tabela I.
Tabela I (Exemplo 2): Esquema de transfecção
Grupo Tratamento Dose de mRNA [pg] Via (Volume) Camundongos #
A mRNA de Ppluc formulado com LNP-II-9 10 i.m. (25 pL) 4
B mRNA de Ppluc formulado com LNP-II-9 1 i.m. (25 pL) 4
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c mRNA de Ppluc formulado com LNP-II-9 0, 1 i.m. (25 pL) 4
D mRNA de Ppluc formulado com LNP-II-10 10 i.m. (25 pL) 4
E mRNA de Ppluc formulado com LNP-II-10 1 i.m. (25 pL) 4
F mRNA de Ppluc formulado com LNP-II-10 0, 1 i.m. (25 pL) 4
G mRNA de Ppluc formulado com LNP-III-3 10 i.m. (25 pL) 4
H mRNA de Ppluc formulado com LNP-III-3 1 i.m. (25 pL) 4
I mRNA de Ppluc formulado com LNP-III-3 0, 1 i.m. (25 pL) 4
J mRNA de Ppluc não formulado 10 i.m. (25 pL) 4
K mRNA de Ppluc não formulado 1 i.m. (25 pL) 5
[0686] Após 24h e 48h, a imagem de bioluminescência in vivo de camundongos foi realizada com um sistema de imagem IVIS Lumina II, 10 minutos após a injeção intraperitoneal de Luciferina, usando um tempo de exposição de 60s. Os valores de bioluminescência foram quantificados medindo o fluxo de fótons (fótons/segundo) na região de interesse. Após 48 horas, os camundongos foram sacrificados e foram coletados músculo, pulmão, fígado, baço, cérebro, rim e coração, congelados em gelo seco e armazenados a -80 °C para análise posterior. As amostras de órgãos foram lisadas durante 3 minutos a alta velocidade em uma lise de tecido (Qiagen, Hilden, Alemanha). Em seguida,
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476/542 foram adicionados 800 pL de tampão de lise e as soluções resultantes foram submetidas a outros 6 minutos a alta velocidade na lise de tecido. Após 10 minutos de centrifugação a 13500 rpm a 4 °C os sobrenadantes foram misturados com tampão de luciferina (glicilglicina a 25 mM, MgSO4 a 15 mM, ATP a 5 mM, luciferina a 62,5 μΜ) e a luminescência foi detectada usando um leitor de placas Chameleon (Hidex).
Resultados:
[0687] Conforme pode ser visto na Figura IA e Figura 1B, o mRNA formulado com LNP levou a uma expressão de proteína significativamente aumentada após a aplicação intramuscular, em comparação com a mesma quantidade de mRNA não formulado após 24h (Figura IA) e 48h (Figura 1B) . Foi observada uma expressão de Ppluc dependente da dose.
[0688] Conforme mostrado nas Figuras 2A-2G, a expressão de PpLuc foi medida 48 h após a injeção i.m. em lisados de órgãos. Unidades de Luz Relativa da Luciferase (RLU) a partir de órgãos individuais foram relatadas para cada grupo. Conforme esperado, foi observada forte expressão de luciferase no local da injeção. Notavelmente, apenas na dose mais elevada de 10 pg de mRNA formulado com LNP, a expressão de luciferase foi detectada no baço e em menor grau no fígado, rim e pulmão (Figura 2A = cérebro, Figura 2B = coração, Figura 2C = rim, Figura 2D = fígado, Figura 2E = pulmão, Figura 2E = músculo, Figura 2G = baço).
Exemplo 3: Imunogenicidade após aplicação intramuscular (i.m.) de mRNA formulado com LNP [0689] HA-mRNA formulados com LNP foi usado para testar a imunogenicidade após aplicação intramuscular
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477/542 (i.m.). Especificamente, uma sequência de HA-mRNA de H1N1 (Holanda 2009) enriquecida em GC como formulação de LNP foi aplicada conforme descrito acima.
[0690] Para a vacinação, 8 camundongos BALB/c foram injetados intramuscularmente no M. tibialis de ambas as pernas (25 pL por perna) de acordo com o esquema de vacinação mostrado na Tabela II. Conforme aparente, 10 pg de mRNA codificando Influenza HA foi formulado com LNP (conforme descrito acima) de modo a render a respectiva formulação de LNP para vacinação; mRNA não formulado (10 pg) serviu como controle.
Tabela II (Exemplo 3): Esquema de vacinação
Grupo Tratamento Dose de RNA Via (Volume) Camundongos #
A mRNA de HA formulado com LNP-II-9 1 Opg i.m. 25 pL por perna 8
B mRNA de HA formulado com LNP-II-10 1 Opg i.m. 25 pL por perna 8
C mRNA de HA formulado com LNP-III-3 1 Opg i.m. 25 pL por perna 8
D mRNA de HA não formulado 1 Opg i.m. 25 pL por perna 8
E Tampão RiLa - i.m. 25 pL por perna 8
[0691] No dia 0, uma vacinação inicial foi administrada. Os animais vacinados com tampão serviram como controle negativo. No dia 21, uma amostra de sangue foi coletada a partir do seio retrobulbar e uma vacinação de reforço foi administrada. Após 35 dias, os camundongos foram sacrificados e amostras de sangue e órgãos (baço) foram coletadas para análise posterior. Os esplenócitos
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478/542 foram isolados no dia 35 e estimulados com uma biblioteca de peptídeos de HA para análise de células T.
[0692]
Para os ensaios de imunogenicidade, os títulos de inibição da Hemaglutinação (HI) foram analisados nos soros 3 semanas após o iniciador e 2 semanas após o reforço. As frequências de células T CD4+ e CD8+ ativadas, especificas de HA e multifuncionais (ΙΕΝ-γ+/ΤΝΕ+) foram medidas por coloração intracelular e citometria de fluxo. ELISA foi aplicado de modo a determinar os títulos de anticorpos.
Ensaio de inibição da hemaglutinação:
[0693]
Ensaios de inibição da hemaglutinação (HI) foram usados para analisar títulos de anticorpos antiHA funcionais. Os soros de camundongos foram inativados pelo calor (56 °C, 30 min), incubados com caulim (Carl
Roth, Alemanha) e pré-adsorvidos em glóbulos vermelhos de frango (CRBC; Lohmann Tierzucht, Alemanha). 50 μΐ de diluições duas vezes de soros pré-tratados foram incubadas durante 45 min com 4 unidades de hemaglutinação (HAU) de virus Influenza A/Califórnia/7/2009 (H1N1) inativado (NIBSC, Reino Unido) e 50 pL de 0,5% CRBC foram adicionados. Os títulos de HI foram determinados pelo recíproco da maior diluição do soro capaz de inibir a hemaglutinação.
ELISA:
[0694]
Detecção de uma resposta imunitária específica de antígeno (resposta imunitária de células B) foi realizada através da detecção de anticorpos IgGl e IgG2a específicos de influenza. Desse modo, as amostras de sangue foram coletadas a partir dos camundongos vacinados
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479/542 dias após o iniciador e 14 dias após o reforço e os soros terem sido preparados. Placas MaxiSorb (Nalgene Nunc International) foram revestidas com o vírus inativado. Após o bloqueio com IxPBS contendo 0,05% de Tween-20 e 1% de BSA, as placas foram incubadas com soro de camundongo diluído (conforme indicado). Subsequentemente, foi adicionado um anticorpo secundário acoplado a biotina (IgGl e IgG2a anticamundongo, Pharmingen). Após a lavagem, a placa foi incubada com peroxidase de rábano-estreptavidina e subsequentemente a conversão do substrato ABTS (ácido 2,2'-azino-bis(3-etil-benzotiazolino-6-sulfónico) foi medida.
Coloração de citocinas intracelulares:
[0695] A indução de células T específicas para o antígeno foi determinada 14 dias após o reforço, usando coloração intracelular de citocinas (ICS). Os esplenócitos de camundongos vacinados e de controle foram isolados e estimulados com uma biblioteca de peptídeos HA (PepMix™ Influenza A (HA/Califórnia (H1N1)), JPT) e anticorpo antiCD28 (BD Biosciences) durante 6 horas a 37 °C na presença do inibidor de transporte de proteínas contendo GolgiPlug Brefeldin A (BD Biosciences). Após estimulação, as células foram lavadas e coradas para citocinas intracelulares usando o reagente Cytofix/Cytoperm (BD Biosciences) de acordo com as instruções do fabricante. Os anticorpos seguintes foram usados para a coloração: CD8-APC H7 (1:100), CD4-BD Horizon V450 (1:200) (BD Biosciences), Thyl.2-FITC (1:300), TNFa-PE (1:100), IFN-y-APC (1:100) (eBioscience), e incubadas com FcyR-bloco diluído 1:100. O Aqua Dye foi usado para distinguir células vivas/mortas
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480/542 (Invitrogen). As células foram adquiridas usando um citômetro de fluxo Canto II (BD Biosciences) e os dados de citometria de fluxo foram analisados usando o software FlowJo (Tree Star).
Resultados:
Resultados de Ensaios de inibição da hemaglutinação (HI):
[0696] O HA-mRNA formulado com LNP originou títulos de HI muito elevados já após a vacinação inicial conforme evidente a partir da Figura 3A, ou seja, todos os 3 LNPs diferentes compreendendo mRNA de HA a uma dose de 10 pg induziram títulos de HI acima do limiar de 1:40, 21 dias após a vacinação inicial. Em contraste, o mRNA não formulado não atingiu o limiar de 1:40. Os títulos de HI aumentaram ainda mais após a vacinação de reforço, conforme é aparente a partir da Figura 3B (14 dias após a vacinação de reforço). A linha tracejada indica o título de proteção HI definido convencionalmente de 1:40.
Resultados dos ensaios ELISA:
[0697] O HA-mRNA formulado com LNP induziu títulos de anticorpo funcionais significativamente mais elevados, ambos os subtipos IgGl e IgG2a, quando comparados com mRNA não formulado já após uma injeção i.m. única como aparente a partir das Figuras 4A-4D, 21 dias após vacinação inicial e 14 dias após a vacinação de reforço. Resultados dos ensaios de células T:
[0698] Conforme aparente a partir das Figuras 5A-5C, se observou que o HA-mRNA formulado com LNP induziu significativamente níveis mais elevados de células T CD4+ e células T CD8+ multifuncionais específicas de antígeno em
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481/542 comparação com mRNA não formulado. 0 meio de controle conforme esperado nunca gerou uma resposta.
Exemplo 4: Imunogenicidade após aplicação intradérmica (i.d.) de mRNA formulado com LNP [0 699] HA-mRNA formulados com LNP foi usado para testar a imunogenicidade após aplicação intradérmica (i.d.). Especificamente, uma sequência de HA-mRNA de H1N1 (Holanda 2009) enriquecida em GC formulada com LNP foi aplicada conforme descrito acima.
[0700] Desse modo, 8 camundongos por grupo foram, cada um, vacinados por via intradérmica de acordo com o esquema de vacinação mostrado na Tabela ITT. Conforme aparente, 10 pg de HA-mRNA foi formulado com LNP (conforme descrito acima) de modo a render a respectiva formulação de LNP para a vacinação; mRNA de HA não formulado (10 pg) serviu como controle.
Tabela ITT (Exemplo 4): Esquema de vacinação
Grupo Tratamento Dose de RNA Via (Volume) Camundongos #
A mRNA de HA formulado com LNPII-9 1 Opg i.d. (25 pL) 8
B mRNA de HA formulado com LNP11-10 1 Opg i.d. (25 pL) 8
C mRNA de HA formulado com LNPIII-3 1 Opg i.d. (25 pL) 8
D mRNA de HA não formulado 1 Opg i.d. (25 pL) 8
E Tampão RiLa - i.d. (25 pL) 8
[0701] No momento de 0 dias, uma vacinação inicial foi administrada a 8 camundongos por grupo. No dia
21, uma amostra de sangue foi coletada e uma vacinação de
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482/542 reforço foi administrada. Após 35 dias, os camundongos foram sacrificados e amostras de sangue e órgãos (baço) foram coletadas para análise posterior.
[0702] Para ensaios de imunogenicidade, o titulo HI foi medido. ELISA foi aplicado de modo a determinar os títulos de anticorpos. Adicionalmente, a resposta imunitária de células T CD4 (IFNy/TNFa produzindo células T CD4) e a resposta imunitária de células T CD8 (IFNy/TNFa produzindo células T CD8 e CD107+ IFNy produzindo células T CD8) foi avaliada 14 dias após a vacinação de reforço. A indução de células T específicas para o antígeno foi determinada usando coloração intracelular de citocinas (ICS) . Os ensaios foram realizados conforme descrito acima.
Resultados: Resultados de Ensaios de inibição da hemaglutinação (HI):
[0703] O HA-mRNA formulado com LNP conduziu a títulos de HI muito elevados já após a vacinação inicial em comparação com o mRNA não formulado, como é aparente a partir da Figura 6A. Os títulos de HI aumentaram ainda mais após a vacinação de reforço, conforme é aparente a partir da Figura 6B. Resultados dos ensaios ELISA:
[0704] O HA-mRNA formulado com LNP induziu títulos de anticorpo funcionais significativamente mais elevados, ambos os subtipos IgGl e IgG2a, quando comparados com mRNA não formulado já após uma injeção i.d. única como aparente a partir das Figuras 7A-7D. Resultados dos ensaios de células T:
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483/542 [0705] Conforme aparente a partir das Figuras 8A-8C, se observou que o HA-mRNA formulado com LNP induziu significativamente níveis mais elevados de células T CD4+ e T CD8+ multifuncionais específicas de antígeno em comparação com mRNA não formulado. O meio de controle conforme esperado nunca gerou uma resposta.
Exemplo 5: Imunogenicidade após aplicação intramuscular (i.m.) de 1 pg de mRNA formulado com LNP [0706] No exemplo que se segue, a quantidade de 1 pg de HA-mRNA (H1N1 (Países Baixos 2009) - sequência de HA-mRNA da formulação de LNP foi usada para testar a imunogenicidade após aplicação intramuscular (i.m.) conforme descrito acima.
Desse modo, 8 camundongos BALB/c por grupo foram, cada um, vacinados intramuscularmente em uma perna de acordo com o esquema de vacinação mostrado na Tabela IV. Conforme aparente, 1 pg de HA-mRNA foi formulado com LNP (conforme descrito acima) de modo a render a respectiva formulação de LNP para a vacinação; mRNA de HA não formulado (10 pg) serviu como controle.
Tabela IV (Exemplo 5): Esquema de vacinação
Grupo Tratamento Dose de RNA Via (Volume) Camundongos #
A HA-mRNA formulado com LNP-III-3 Ipg i.m. (25 pL) 8
B HA-mRNA não formulado 1 Opg i.m. (25 pL) 8
C Tampão RiLa — i.m. (25 pL) 8
[0707] No momento de 0 dias, uma vacinação inicial foi administrada a 8 camundongos por grupo. No dia
21, uma amostra de sangue foi coletada e uma vacinação de
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484/542 reforço foi administrada. Após 35 dias, os camundongos foram sacrificados e amostras de sangue e órgãos (baço) foram coletadas para análise posterior.
[0708] Para ensaios de imunogenicidade, o titulo HI foi medido. ELISA foi aplicado de modo a determinar os títulos de anticorpos. Adicionalmente, os esplenócitos congelados foram estimulados com uma biblioteca de peptídeos sobrepostos de HA e as respostas imunitárias de células T foram avaliadas através da medição da produção de IFNy usando Elispot.
Resultados:
Resultados dos ensaios de imunogenicidade:
[0709] 1 pg de HA-mRNA, formulado com LNP, induziu títulos HI acima do limiar de 1:40 já após a vacinação inicial, como é aparente a partir da Figura 9A. Os títulos de HI aumentaram ainda mais após a vacinação de reforço, conforme é aparente a partir da Figura 9B.
Resultados dos ensaios ELISA:
[0710] Ipg de HA-mRNA, formulado com LNP induziu títulos de anticorpo funcionais significativamente mais elevados, ambos os subtipos IgGl e IgG2a, quando comparados com mRNA não formulado já após uma injeção i.m. única (ver as Figuras 10A-7D). Resultados dos ensaios de células T:
[0711] 1 pg de HA-mRNA, formulado com LNP, levou ao aumento da produção de IFNy, em comparação com o mRNA não formulado. O meio de controle conforme esperado nunca gerou uma resposta (ver a Figura 11).
Exemplo 6: Vacinação de HA-mRNA e RABV-G mRNA de macacos
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485/542 [0712] A vacina mRNA da raiva codificou a glicoproteína (RABV-G) da estirpe de Pasteur (número de acesso do GenBank: AAA47218.1). Construtos de mRNA otimizados (RABV-G A e B) foram usados, os quais contêm ORFs idênticas mas UTRs diferentes. As vacinas de RABV-G mRNA formuladas com protamina continham RABV-G mRNA A. As vacinas de RABV-G mRNA não formuladas ou formuladas com LNP continham RABV-G mRNA B (conforme descrito acima), salvo indicação em contrário.
Formulação de RNA de protamina [0713] Para a preparação de mRNA complexado quanto a protamina (formulação RNActive®), os construtos de mRNA de antígenos obtidos foram complexados com protamina antes do uso em experiências de vacinação em in vivo. A complexação do mRNA consiste em uma mistura de 50% de mRNA livre e 50% de mRNA complexado com protamina na razão de peso de 2:1. Primeiro, o mRNA foi complexado com protamina através da adição de solução de lactato de protamina-Ringer ao mRNA. Após incubação durante 10 minutos, quando os complexos foram gerados de forma estável, foi adicionado mRNA livre e a concentração final da vacina foi ajustada com solução de lactato de Ringer.
[0714] As vacinas de HA-mRNA e RABV-G mRNA formuladas com LNP, conforme preparadas no exemplo anterior, foram usadas para vacinação. Quatro macacos cinomolgos nulíparos e não gestantes (Macaca fascicularis) foram vacinados por injeção intramuscular nos dias 1 e 29 com HA-mRNA formulado com LNP-III ou RABV-G mRNA (1 pg ou 10 pg, mRNA conforme descrito acima) ou HA-mRNA formulado com protamina ou RABV-G mRNA (240 pg) no músculo bíceps
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486/542 femoral (500 pL) . Como controle negativo foi injetado tampão. Amostras de soro foram coletadas a partir da veia femoral nos dias 0, 29 e 50.
[0715] A detecção de uma resposta imunitária específica de antígeno foi realizada nos dias 0, 29 e 50.
Ensaio de inibição da hemaglutinação:
[0716] Ensaios de inibição da hemaglutinação (HI) foram usados para analisar títulos de anticorpos antiHA funcionais. Soro de primatas não humanos (NHP) foram incubados com enzima destruidora de receptores (RDEII, Denka Seiken, Japão) a 37 °C durante a noite, inativados (56 °C, 60 minutos) e incubados com caulim. 50 pi de diluições duas vezes de soros pré-tratados foram incubadas durante 45 min com 4 unidades de hemaglutinação (HAU) de vírus Influenza A/Califórnia/7/2009 (H1N1) inativado (NIBSC, Reino Unido) e 50 pL de 0,5% CRBC foram adicionados. Os títulos de HI foram determinados pelo recíproco da maior diluição do soro capaz de inibir a hemaglutinação.
Análise de anticorpos:
[0717] Os títulos de IgG específicos de HA em soros de NHP foram medidos por ELISA usando vírus A/Califórnia/7/2009 (H1N1) inativado para revestimento (1 pg/mL) e IgG-HRP total anti-humano (ImmunoResearch) como anticorpo de detecção. Os títulos neutralizantes do vírus antirraiva (VNTs) no soro foram analisados pelo Eurovir® Hygiene-Labor GmbH, Alemanha, usando o teste FAVN (teste de Neutralização do Vírus Fluorescente do Anticorpo) e o Standard Challenge Virus CVS-11 de acordo com o protocolo da OMS.
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487/542
Análise de citocinas:
[0718] Foram coletadas amostras de sangue de NHPs nos dias 1 e 29 para imunização com HA e dia 1 para imunização com RABV-G a partir de todos os NHPs antes da administração e 6 e 24 horas após a dosagem de modo a determinar biomarcadores de inflamação (G-CSF, IFNy, IL-Ιβ, IL-2, IL 4, IL-5, IL-6, IL-8 e TNF). O plasma foi analisado usando o kit PRCYTOMAG-40K baseado em Luminex (MD MILLIPORE).
Temperatura corporal:
[0719] A temperatura corporal dos NHPs foi determinada pela medida retal mesmo antes e às 0,5, 2, 6 e 24 horas após cada dose. Resultados:
[0720] Como resultado geral, uma administração intramuscular unitária de uma dose de 1 pg de mRNA, formulado com LNP-III-3, surpreendentemente induziu títulos de anticorpos protetores em todos os primatas não humanos vacinados nas duas indicações de raiva e influenza.
Resultados da análise de títulos de anticorpos:
[0721] Os resultados da análise de títulos de anticorpos neutralizantes são mostrados na Figura 12. A vacinação intramuscular de NHP com mRNA codificando HA formulado com LNP-III-3, surpreendentemente, conduziu a forte indução de anticorpos neutralizantes de uma maneira dependente da dose, já após a vacinação inicial com HA-mRNA formulado com LNP-III-3. Resultados dos títulos neutralizantes do vírus da raiva (VNTs):
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488/542 [0722] Conforme mostrado na Figura 13, a vacinação intramuscular de NHPs com mRNA codificando RABV-G formulado com LNP-III-3 conduziu a uma forte indução de anticorpos neutralizantes de uma maneira dependente da dose surpreendentemente já após a vacinação inicial com apenas 1 pg de RABV-G-mRNA formulado com LNP-III-3 mostrando um VNT de > 1 UI/mL (valor mediano) após vacinação inicial e aproximadamente 50 UI/mL (valor mediano) após vacinação de reforço (VNT igual ou superior ao titulo de anticorpo especificado pela OMS de 0,5 UI/mL considerado como um correlato de proteção) . A vacinação unitária com 10 pg de RABV-G-mRNA formulado com LNP-III-3 induziu um titulo de anticorpo mediano de 17 UI/mL. Após uma segunda vacinação, os títulos atingiram uma mediana de 419 UI/mL.
Resultados Título HI:
[0723] O HA-mRNA formulado com LNP-III-3 conduziu a títulos de HI muito elevados já após a vacinação inicial como é aparente a partir da Figura 14. Em detalhe, a vacinação com 10 pg de HA-mRNA formulado com LNP-III-3 induziu em todos os animais os títulos de HI em ou acima do título HI de 1:40, que é considerado protetor em humanos. Uma vez mais, os títulos de HI aumentaram ainda mais após a segunda vacinação (de reforço) , conforme é aparente a partir da Figura 14.
[0724] Os animais que receberam 1 pg de HAmRNA formulado com LNP-III-3 necessitaram de uma segunda vacinação para atingir o título de proteção em 3 de 4 animais, enquanto nenhum dos animais que recebeu 240 pg de HA-mRNA formulado com protamina exibiu títulos de HI detectáveis.
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489/542
Resultados da análise de citocinas:
[0725] As concentrações sistêmicas de citocinas após a vacinação com mRNA formulado com LNP-III-3 permaneceram abaixo do nível de detecção para IL-Ιβ, IL 4, IL-5, IL-6, IFN-γ e TNF ou não aumentaram para IL-2, IL-8 e G-CSF (Figuras 15A-15D). É importante ressaltar que concentrações mais baixas das citocinas pró-inflamatórias TNF, IFN-γ e IL-6 foram induzidas pelas formulações de LNP em comparação com as formulações de protamina, que são geralmente bem toleradas em humanos.
Resultados da temperatura corporal e outros resultados:
[0726] A aplicação intramuscular de mRNA formulado com LNP-III-3 em primatas não humanos não mostrou impacto na temperatura corporal ou no peso corporal [dados não mostrados]. Os locais de injeção mostraram apenas ligeiro eritema e/ou edema em 1 de 4 animais em cada grupo que recebeu o HA-mRNA formulado com LNP-III-3, que se resolveu 24 a 96 horas após a injeção e sem reações no local da injeção após a vacinação com as formulações de RABV-G-mRNA [dados não mostrados]. Em resumo, o mRNA formulado com LNP-III-3 foi bem tolerado pelos NHPs.
Exemplo 7: Imunogenicidade após aplicação intramuscular (i.m.) de doses baixas RABV-G mRNA formulado com LNP [0727] A quantidade de 0,5 pg de RABV-G-mRNA formulado com LNP foi usado para testar a imunogenicidade após aplicação intramuscular (i.m.). A sequência que foi usada é mostrada na SEQ ID NO: 224276.
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490/542 [0728] Desse modo, os camundongos BALB/c foram cada um vacinados de acordo com o esquema de vacinação mostrado na Tabela Va por via intramuscular em uma perna. O RABV-G mRNA não formulado (40 pg) serviu como um controle.
Tabela Va (Exemplo 7): Esquema de vacinação
Sexo da estirpe Camundongos # Tratamento RNA/camundongo Via, Volume Cronograma de imunização Sangramento retrobular
Fêmea BALB/c 10 5 pg de RABV-G mRNA formulado com LNP-III-3 i . m. lx25pL d0, d21 dl, d21, d35
Fêmea BALB/c 10 1 pg de RABV-G mRNA formulado com LNP-III-3 i . m. lx25pL dO, d21 dl, d21, d35
Fêmea BALB/c 10 0,5pg de RABV-G mRNA formulado com LNP-III-3 i . m. lx25pL dO, d21 dl, d21, d35
Fêmea BALB/c 10 0,lpg de RABV-G mRNA formulado com LNP-III-3 i . m. lx25pL dO, d21 dl, d21, d35
Fêmea BALB/c 10 0,05pg de RABV-G mRNA formulado com LNP-III-3 i . m. lx25pL dO, d21 dl, d21, d35
Fêmea BALB/c 10 0,0Ipg de RABV-G mRNA formulado com LNP-III-3 i . m. lx25pL dO, d21 dl, d21, d35
Fêmea BALB/c 10 40 pg de RABV-G mRNA não formulado i . m. lx25pL dO, d21 dl, d21, d35
Fêmea BALB/c 6 PBS i . m. 2x25pL dO, d21 dl, d21, d35
Fêmea BALB/c 6 32pg RNActivo (formuação de protamina) i . d. 2x50pL dO, d21 dl, d21, d35
[0729] No momento de 0 c .ias, uma vacinação
inicial foi administrada a 8 camundongos por grupo e uma amostra de sangue foi coletada um dia depois. No dia 21, uma amostra de sangue foi coletada e uma vacinação de reforço foi administrada. As vacinações iniciais e de reforço foram efetuadas em diferentes pernas, ou seja, perna esquerda e direita, respectivamente. Após 35 dias, os camundongos foram sacrificados e amostras de sangue e
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491/542 órgãos (baço e fígado) foram coletadas para análise posterior.
[0730] Para os ensaios de imunogenicidade, o VNT foi medido conforme descrito anteriormente, ou seja, os títulos neutralizantes do vírus antirraiva (VNTs) no soro foram analisados pelo Eurovir® Hygiene-Labor GmbH, Alemanha, usando o teste FAVN (teste de Neutralização do Vírus Fluorescente do Anticorpo) e o Standard Challenge Virus CVS-11 de acordo com o protocolo da OMS.
[0731] A resposta imunitária de células T CD4 (IFNy/TNFa produzindo células T CD4) e a resposta imunitária de células T CD8 (IFNy/TNFa produzindo células T CD8 e CD107+ IFNy produzindo células T CD8) foram avaliadas. Os ensaios foram realizados conforme descrito anteriormente. A histologia das amostras de fígado de animais vacinados com 5 pg de LNP ou controles de tampão foi examinada. Os níveis de soro de ALT/AST foram examinados em amostras de soro tomadas dl e d21. AST/ALT e fígado foram analisados por mfd Diagnostics GmbH, Alemanha.
Resultados: Resultados dos títulos neutralizantes do vírus da raiva (VNTs):
[0732] Conforme mostrado nas Figuras 16A-16B, a vacinação intramuscular de camundongos com mRNA codificando RABV-G formulado com LNP-III-3 conduziu a uma forte indução de anticorpos neutralizantes de uma maneira dependente da dose, surpreendentemente, já após a vacinação inicial com 0,5 pg de RABV-G-mRNA formulado com LNP-III-3. O padrão da OMS de 0,5 UI/mL é indicado por uma linha tracejada nos gráficos. Consequentemente, doses de 5 pg, 1
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492/542 pg e surpreendentemente também 0,5 pg de RABV-G mRNA formulado com LNP-III-3 induziu respostas que foram significativamente superiores em comparação com 40 pg de mRNA não formulado após vacinação inicial (Figura 16A) . Nenhum VNT foi induzido após a vacinação inicial com 0,05 pg e 0,01 pg de mRNA formulado com LNP-III-3. 0,1 pg de mRNA formulado com LNP-III-3 induziu VNTs após vacinação inicial que eram iguais ou superiores ao padrão da OMS em 5 de 10 animais. Os VNTs até aumentaram após a vacinação de reforço (Figura 16B).
[0733] Como os níveis de VNT das Figuras 16A/16B pareciam ser ainda mais elevados mas foram limitados através de detecção experimental de VNT (as amostras diluídas pareciam estar ainda em saturação), foi realizada uma experiência semelhante e foram geradas novas análises de VNT (ver esquema de vacinação mostrado na
Tabela Vb). O tampão de PBS serviu como um controle.
Tabela Vb (Exemplo 7): Esquema de vacinação
Sexo da estirpe Camundongos # Tratamento RNA/camundongo Via, Volume Cronograma de imunização Sangramento retrobular
Fêmea BALB/c 14 0,lpg de RABV-G mRNA formulado com LNP-III-3 i . m. 1χ25μΣ d0, d21 d21, d35
Fêmea BALB/c 14 0,3pg de RABV-G mRNA formulado com LNP-III-3 i . m. 1χ25μΣ dO, d21 d21, d35
Fêmea BALB/c 14 0,9pg de RABV-G mRNA formulado com LNP-III-3 i . m. 1χ25μΣ dO, d21 d21, d35
Fêmea BALB/c 6 PBS i . m. 2x25pL dO, d21 d21, d35
[0734] Conforme provado nas Figuras 61A-61B, a vacinação intramuscular de camundongos com mRNA codificando
RABV-G formulado com LNP-III-3 conduziu a uma muito forte indução de anticorpos neutralizantes de uma maneira
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493/542 dependente da dose, surpreendentemente, já após a vacinação inicial com 0,1 pg, 0,3 pg e 0,9 pg de RABV-G-mRNA formulado com LNP-III-3. O padrão da OMS de 0,5 UI/mL é indicado por uma linha tracejada nos gráficos. Consequentemente, doses de 0,1 pg, 0,3 pg e 0,9 pg de RABVG mRNA formulado com LNP-III-3 induziu respostas que foram significativamente superiores em comparação com experiências anteriores com mRNA não formulado após vacinação inicial. Os VNTs até aumentaram após a vacinação de reforço (Figura 60B; dados mostram mediana - testada com Mann-Whitney).
Resultados: Resultados dos ensaios de células T: [0735] As respostas das células T foram observadas em camundongos imunizados duas vezes com 5 pg, 1 pg e 0,5 pg, como é aparente a partir das Figuras 17A-17C. Consequentemente, 0,5 pg de mRNA, formulado com LNP já induziu significativamente níveis elevados de células T CD4+ e T CD8+ multifuncionais específicas de antígeno em comparação com mRNA não formulado. O controle DMSO negativo conforme esperado nunca gerou uma resposta, conforme indicado pela linha tracejada nos gráficos.
Resultados da análise do dano hepático:
[0736] Foi realizada histologia de 5 pg de mRNA de RABV-G LNP e de animais de controle administrados com tampão. Não foi observado qualquer achado patológico em nenhum dos animais testados. Os níveis de AST aumentaram no dia 1 após a vacinação com a dose mais elevada de LNPs (5 pg) , mas diminuíram ao longo do tempo e voltaram para os níveis de base no dia 21 (ver Figuras 18A-18D) . Linhas
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494/542 tracejadas indicam os níveis padrão de AST/ALT murino. Apenas alguns animais apresentaram níveis elevados de AST no dia 21, em todos os outros animais os níveis de AST/ALT não tinham achados patológicos.
Exemplo 8: Experiência de vacinação com uma combinação de mRNA codificando HA de quatro vírus influenza diferentes [0737] Para vacinação, 9 camundongos por grupo foram injetados intramuscularmente duas vezes com uma composição compreendendo mRNA formulado com LNP codificando HA de 4 estirpes diferentes de vírus influenza: A/Califórnia/7/2009 (H1N1), A/Hong Kong/4801/2014 (H3N2), B/Brisbane/60/2008 (B) e A/Vietnã/1203/2004 (H5N1). Desse modo, os quatro mRNA foram misturados em uma razão de 1:1:1:1 e depois formulados conforme descrito acima. Como controle, foi injetado Fluarix Quadrivalent 2015-2016, uma vacina viral dividida compreendendo 4 estirpes diferentes de vírus influenza inativadas (A/Califórnia/7/2009, A/Suíça/9715293/2013, B/Phuket/3073/2013, e B/Brisbane/60/2008) indicadas para imunização ativa para a prevenção de doenças causadas por vírus da influenza subtipo A e vírus tipo B. Como controle negativo, foi injetado tampão de lactato de Ringer.
[0738] A detecção de uma resposta imunitária específica de HA (resposta imunitária de células B) foi realizada através da detecção de anticorpos IgG2a direcionados contra o vírus influenza particular. Desse modo, as amostras de sangue foram coletadas a partir dos camundongos vacinados três semanas após a vacinação e os soros terem sido preparados. Placas MaxiSorb (Nalgene Nunc
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International) foram revestidas com a proteína HA recombinante. Após o bloqueio com IxPBS contendo 0,05% de Tween-20 e 1% de BSA, as placas foram incubadas com soro de camundongo diluído (conforme indicado). Subsequentemente, foi adicionado um anticorpo secundário acoplado a biotina (IgG2a anticamundongo, Pharmingen). Após a lavagem, a placa foi incubada com peroxidase de rábano-estreptavidina, seguida pela adição do Reagente Amiplex UltraRed (Invitrogen) e subsequente quantificação do produto fluorescente.
Resultados:
[0739] Os resultados apresentados nas Figuras 19A-19D demonstram que os anticorpos IgG específicos de HA dirigidos contra os diferentes vírus influenza podem ser detectados após vacinação intramuscular unitária com a vacina baseada em LNP compreendendo os quatro diferentes mRNA, cada um codificando um antígeno HA de um vírus influenza diferente (Influenza A/Califórnia/7/2009 (H1N1; Figura 19A), Influenza A/Hong Kong/4801/2014 (H3N2; Figura 19B), Influenza B/Brisbane/60/2008 (B, Figura 19C) e Influenza A/Vietnã/1203/2004 (H5N1, Figura 19D).
[0740] Esses dados provam que os mRNA codificados por antígenos, por exemplo, de diferentes vírus influenza, podem ser combinados em uma composição/vacina.
[0741] Em contraste com Fluarix, a vacina multivalente de mRNA formulada com LNP-III-3 induziu respostas de anticorpos IgG2a em animais naife contra todos os subtipos e a baixa dose de mRNA foi imunogênica em camundongos, surpreendentemente, após injeção intramuscular unitária.
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Exemplo 9: Experiência de vacinação com uma combinação de mRNAs codificando HA e NA de virus influenza diferentes [0742] Para vacinação, 8 camundongos por grupo são injetados intramuscularmente com uma composição compreendendo mRNA formulado com LNP codificando HA de 4 estirpes diferentes de virus influenza: A/Califórnia/7/2009 (H1N1) e/ou A/Países Baixos/602/2009 (H1N1), A/Hong Kong/4801/2014 (H3N2), B/Brisbane/60/2008 e A/Vietnã/1203/2004 (H5N1) e NA de 3 estirpes diferentes de virus influenza: A/Califórnia/7/2009 (H1N1), A/Hong Kong/4801/2014 (H3N2), e B/Brisbane/60/2008.
[0743] Em uma outra experiência de vacinação, 8 camundongos por grupo são injetados intramuscularmente com uma composição compreendendo sequências de mRNA codificando HA de InfluenzaA/Califórnia/7/2009 (H1N1) e/ou A/Países Baixos/602/2009 (H1N1), A/Hong Kong/4801/2014 (H3N2), B/Brisbane/60/2008 e B/Phuket/3073/2013 e NA de 3 estirpes diferentes de virus influenza: A/Califórnia/7/2009 (H1N1), A/Hong Kong/4801/2014 (H3N2), e B/Brisbane/60/2008.
[0744] Como controle, é injetado Influvac® Tetravalente 2016-2017, uma vacina viral dividida compreendendo 4 estirpes diferentes de virus influenza inativadas (A/Califórnia/7/2009, A/Hong Kong/4801/2014, B/Phuket/3073/2013, e B/Brisbane/60/2008) indicadas para imunização ativa para a prevenção de doenças causadas por vírus da influenza subtipo A e vírus tipo B. Como controle negativo, é injetado tampão de lactato de Ringer.
[0745] A detecção de uma resposta imunitária específica de HA (resposta imunitária de células B) é
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497/542 realizada através da detecção de anticorpos IgG2a direcionados contra o virus influenza particular, conforme descrito acima.
[0746] As respostas imunitárias específicas de NA (resposta imunitária de células B) dirigidas contra o vírus influenza particular são determinadas usando o ensaio de inibição de NA (NAI).
Exemplo 10: Síntese do composto 1-3:
[0747] Uma solução de 6—(2T— hexildecanoiloxi)hexan-l-al (2,4 g) , ácido acético (0,33 g) e 4-aminobutan-l-ol (0,23 g) em cloreto de metileno (20 mL) foi tratada com triacetoxiboro-hidreto de sódio (1,3 g) ao longo de duas horas. A solução foi lavada com solução aquosa de bicarbonate de sódio. A fase orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio anidro, filtrada e o solvente foi removido. O resíduo foi passado por uma coluna de silica gel usando um gradiente de metanol/cloreto de metileno (08/100-92%), rendendo o composto 3 como um óleo incolor (0,4 g) ·
Exemplo 11: Síntese de um lipídeo de PEG representativo [0748] O lipídeo peguilado IVa (PEG-DMA) foi preparado em que n se aproxima do centro da gama de unidades repetidas de ôxido de etileno no lipídeo peguilado. Síntese de IVa-1 e IVa-2:
[0749] A uma solução de ácido mirístico (6 g, 26 mmol) em tolueno (50 mL) se adicionou cloreto de oxalila (39 mmol, 1,5 equivalentes, 5 g) à RT. Consequentemente, 39 mmol de cloreto de oxalila são 1,5 equivalentes molares em
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498/542 relação ao material de partida ácido miristico (26 mmoles x 1,5 = 39 mmoles). Após a mistura resultante ter sido aquecida a 70 °C durante 2 h, a mistura foi concentrada. O resíduo foi retomado em tolueno e novamente concentrado. O óleo residual foi adicionado através de uma seringa a uma solução concentrada de amônia (20 mL) a 10 ° C. A mistura de reação foi filtrada e lavada com água. O sólido branco foi seco em vácuo. O produto desejado foi obtido como um sólido branco (3,47 g, 15 mmol, 58,7%) .
Síntese de IVa-3:
[0750]
À suspensão de 20-2 (3,47 g, 15 mmol) em THF (70 mL) foi adicionado em porções de hidreto de alumínio e litio (1,14 g, 30 mmol) à RT durante um período de 30 minutos. De seguida, a mistura foi suavemente aquecida até refluxo (banho de óleo a 65 °C) durante a noite. A mistura foi arrefecida até 5 °C, e sulfato de sódio 9 hidratado foi adicionado. A mistura foi agitada ao longo de 2 horas, filtrada através de uma camada de celite, lavada com 15% de MeOH em DCM (200 mL) . O filtrado e as lavagens foram combinados e concentrados. O sólido residual foi seco em vácuo. O produto desejado foi obtido como um sólido branco (2,86 g, 13,4 mmol, 89,5%) .
Síntese de IVa-4:
[0751]
A uma solução de ácido miristico (3,86g, 16,9 mmol) em benzeno (40 mL) e DMF (1 gota) se adicionou cloreto de oxalila (25,35 mmol, 1,5 equivalentes, 3,22g) à RT. Consequentemente, 25,35 mmol de cloreto de oxalila são 1,5 equivalentes molares em relação ao material de partida ácido miristico (16,9 mmol x 1,5 = 25,35 mmol). A mistura foi agitada à RT por 1,5 h. Aquecida a 60 °C por
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499/542 min. A mistura foi concentrada. 0 resíduo foi retomado em tolueno e novamente concentrado. O óleo residual (amarelo claro) foi coletado em 20 mL de benzeno e adicionado por meio de seringa a uma solução de 20-3 (2,86 g, 13,4 mmol) e trietilamina (3,53 mL, 1,5 equivalentes) em benzeno (40 mL) a 10 °C. Por conseguinte, 3,53 mL de trietilamina são 1,5 equivalentes molares em relação aos 13,4 mmol de 20-3, isto é, um excesso molar de 50% desse reagente em comparação com o material de partida para esse passo. Após adição, a mistura resultante foi agitada à RT durante a noite. A mistura da reação foi diluída com água e foi ajustada para pH de 6-7 com H2SO4 a 20%. A mistura foi filtrada e lavada com água. Um sólido pálido foi obtido. O produto em bruto foi recristalizado a partir de metanol. Isso deu o composto desejado como um sólido esbranquiçado (5,65 g, 13 mmo1, 100%).
Síntese de IVa-5:
[0752] À suspensão de 20-4 (5, 65 g, 13 mmol) em THF (60 mL) foi adicionado em porções hidreto de alumínio e lítio (0,99 g, 26 mmol) à RT durante um período de 30 minutos. De seguida, a mistura foi suavemente aquecida até refluxo durante a noite. A mistura foi arrefecida até 0 °C e sulfato de sódio 9 hidratado. A mistura foi agitada ao longo de 2 horas, depois filtrada através de uma almofada de celite e silica gel e lavada com éter primeiro. O filtrado ficou turvo e a precipitação se formou. A filtraçâo deu um sólido branco. O sólido foi recristalizado a partir de MeOH e um sólido cristalino incolor (2,43 g).
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500/542 [0753] A almofada de celite e silica gel foi então lavada com 5% de MeOH em DCM (400 mL) e depois com 10% de MeOH em DCM com 1% de trietilamina (300 mL) . As fracções contendo o produto desejado foram combinadas e concentradas. Um sólido branco foi obtido. O sólido foi recristalizado a partir de MeOH e um sólido cristalino incolor (0,79 g) . Os dois sólidos acima (2,43 g e 0,79 g) foram combinados e secos sob vácuo (3,20 g, 60%) . 1HNMR (CDC13 a 7,27ppm) δ: 2,58 (tipo t, 7,2Hz, 4H) , 1,52-1,44 (m, 4H) , 1,33-1,24 (m, 44H) , 0,89 (tipo t, 6,6 Hz, 6H) , 2,1-1,3 (muito amplo, 1H).
Síntese de IVa:
[0754] A uma solução de 20-5 (7 mmol, 2,87 g) e trietilamina (30 mmol, 4,18 mL) em DCM (100 mL) foi adicionada uma solução de mPEG-NHS (a partir de NOF, 5,0 mmol, 9,97 g, PEG PM aprox. 2.000, n = cerca de 45) em DCM (120 mL, ) . Após 24 h a solução de reação foi lavada com água (300 mL) . A fase aquosa foi extraída duas vezes com DCM (100 mL x 2) . Os extratos de DCM foram combinados, lavados com salmoura (100 mL) . A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada, parcialmente concentrada. A solução concentrada (cerca de 300 mL) foi arrefecida a aproximadamente 15 °C. A filtração deu um sólido branco (1,030 g, a amina de partida não reagida) . À filtração se adicionou Et3N (1,6 mmol, 0,222 mL, 4 equivalentes) e anidrido acético (1,6 mmol, 164 mg) . A mistura foi agitada à RT durante 3 h e depois concentrada até um sólido. O sólido residual foi purificado por cromatografia em coluna em silica gel (0-8% de metanol em DCM). Isso deu o produto desejado como um sólido branco (9,211 g) . 1HNMR (CDC13 a
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7,27ppm) δ: 4,19 (s, 2H), 3,83-3,45 (m, 180200H), 3,38 (s, 3H) , 3,28 (tipo t, 7,6 Hz, 2H, CH2N) , 3,18 (tipo t, 7,8 Hz, 2H, CH2N), 1,89 (s, 6,6 H, água), 1,58-1,48 (m, 4H), 1,361,21 (m, 48-50H), 0,88 (tipo t, 6,6 Hz, 6H).
Exemplo 12: Experiência de vacinação com uma combinação de mRNAs formulados com LNP-III-3 codificando HA de virus influenza diferentes [0755] Camundongos BALB/c fêmeas foram imunizados intramuscularmente (i.m.) com composições de vacina de mRNA formulado com LNP-III-3 com doses, vias de aplicação e cronogramas de vacinação conforme indicado na Tabela A (sequências de mRNA de acordo com o Exemplo 1) . Como um controle negativo, um grupo de camundongos foi injetado com tampão (lactato de Ringer, Rila) . Como um controle positivo, um grupo de camundongos foi vacinado com uma vacina contra Influenza aprovada (Influsplit® tetra 2016/2017; A/Califórnia/07/2009, A/Hong Kong/4801/2014, B/Brisbane/60/2008, B/Phuket/3073/2013) . Todos os animais foram injetados com a respectiva composição no dia 0 e no dia 21. Amostras de sangue foram coletadas nos dias 21, 35 e 49 para a determinação da ligação de títulos de anticorpo (usando ELISA) e bloqueio de títulos de anticorpo (usando um ensaio de HI). As respostas de células T foram analisadas por coloração intracelular de citocinas (ICS) usando esplenócitos isolados no dia 49. As descrições detalhadas das experiências executadas são fornecidas abaixo.
Tabela A: Regime de imunização (Exemplo 12)
Grupo N° de camundongos Grupos de tratamento (composições de controle e mRNA) Dose / formulação Tratamento
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A 6 Tampão RiLa - i.m., 2x 25 pL
B 6 Influsplit® 1/10 dose humana i.m., 2x 25 pL
C 9 H1N1 A/Paises Baixos/602/2009 H3N2 A/Hong Kong/4801/2014 HA B/Brisbane/60/2008 HA B/Phuket/3073/2013 1 pg (0,25 pg cada) LNP-III-3 formulado i.m., 1 x 25 pL
D 9 H1N1 A/Paises Baixos/602/2009 H3N2 A/Hong Kong/4801/2014 HA B/Brisbane/60/2008 HA B/Phuket/3073/2013 4 pg (1 pg cada) LNP-III-3 formulado i.m., 1 x 25 pL
E 9 H1N1 A/ Califórnia/07/2 009 H3N2 A/Hong Kong/4801/2014 HA B/Brisbane/60/2008 HA B/Phuket/3073/2013 1 pg (0,25 pg cada) LNP-III-3 formulado i.m., 1 x 25 pL
F 9 H1N1 A/ Califórnia/07/2 009 H3N2 A/Hong Kong/4801/2014 HA B/Brisbane/60/2008 HA B/Phuket/3073/2013 4 pg (1 pg cada) LNP-III-3 formulado i.m., 1 x 25 pL
12.1. Determinação de anticorpos IgGl e IgG2a específicos da proteína anti-HA por ELISA:
[0756] O ensaio ELISA foi essencialmente efetuado conforme vulgarmente conhecido na técnica, ou conforme descrito acima. O ELISA foi realizado para cada antígeno compreendido na composição da vacina de mRNA (conforme indicado na Tabela A) . Os resultados são mostrados na Figura 25 (H1N1 (A/Califórnia/7/2009)), Figura 27 (H3N2 (A/Hong Kong/4801/2014) ) , Figura 29 (Influenza B (B/Brisbane/60/2008)) e Figura 30 (Influenza B (B/Phuket/3073/2013) ) .
12.2. Ensaio de inibição da hemaglutinação (HI) :
[0757] | Em uma placa de 96 poços, os soros
obtidos foram misturados com o antígeno HA H1N1
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503/542 (A/Califórnia/07/2009 (H1N1); NIBSC) ou antígeno HA H3N2 e glóbulos vermelhos (4% eritrócitos; Lohmann Tierzucht). Na presença de anticorpos neutralizantes de HA, pode ser observada uma inibição da hemaglutinação de eritrócitos. O
nível mais baixo de soro titulado que resultou em uma
inibição visível da hemaglutinação foi o resultado do
ensaio. Os resultados são mostrados na Figura 26 (H1N1
(A/Califórnia/7/2009)) e na Figura 28 (H3N2 (A/Hong
Kong/4801/2014)).
12.3. Detecção de respostas de células T:
[0758] Esplenócitos de camundongos vacinados foram isolados de acordo com um protocolo padrão conhecido na técnica. Resumidamente, os baços isolados foram triturados através de um filtro de células e lavados em PBS/1% de FBS seguido de lise de glóbulos vermelhos. Após um passo de lavagem extenso com PBS/1% de FBS, os esplenócitos foram semeados em placas de 96 poços (2 χ 106 células por poço). As células foram estimuladas com um conjunto de peptídeos 15mer sobrepostos de H1N1 (A/Califórnia/07/2009) de modo a determinar as respostas das células T CD8+ ou foram estimuladas com proteína HA recombinante de modo a determinar as respostas das células T CD4+. Após estimulação, as células foram lavadas e coradas para citocinas intracelulares usando o reagente Cytofix/Cytoperm (BD Biosciences) de acordo com as instruções do fabricante. Os anticorpos seguintes foram usados para a coloração: CD3-FITC (1:100), CD8-PE-Cy7 (1:200), TNF-PE (1:100), IFNy-APC (1:100) (eBioscience), CD4-BD Horizon V450 (1:200) (BD Biosciences) e se incubou com o Fcy-bloco diluído a 1:100. O Aqua Dye foi usado para
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504/542 distinguir células vivas/mortas (Invitrogen). As células foram adquiridas usando um citômetro de fluxo Canto II (Beckton Dickinson). Os dados de citometria de fluxo foram analisados usando o pacote de software FlowJo (Tree Star, Inc.) . Os resultados para as células T CD4+ são mostrados na Figura 31; os resultados para as células T CD8+ são mostrados na Figura 32.
Resultados:
[0759] Os dados mostram que os anticorpos IgGl e IgG2a podiam ser detectados após a vacinação com as vacinas de combinação de mRNA formulado com LNP. Notavelmente, para todos os antígenos codificados por mRNA compreendidos na respectiva combinação, podiam ser detectados anticorpos IgGl e IgG2a específicos, demonstrando que todos os mRNA compreendidos nas respectivas composições são traduzidos em proteína e desencadeiam uma resposta imunitária humoral em camundongos conforme mostrado na Figura 25 (H1N1 A/Califórnia/7/2009)), Figura 27 (H3N2 (A/Hong Kong/4801/2014) ) , Figura 29 (Influenza B (B/Brisbane/60/2008)) e Figura 30 (Influenza B (B/Phuket/3073/2013)). Em comparação com camundongos vacinados com a vacina aprovada Influsplit®, as respostas foram mais fortes ou pelo menos igualmente fortes para todos os antígenos testados.
[0760] Anticorpos neutralizantes funcionais foram demonstrados para H1N1 (A/Califórnia/7/2009) e H3N2 (A/Hong Kong/4801/2014) (ver Figuras 26 e 28) . Em comparação com camundongos vacinados com a vacina aprovada Influsplit®, a indução de anticorpos neutralizantes funcionais foi mais pronunciada e mais durável para as
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505/542 vacinas de combinação de mRNA. Notavelmente, a vacina de combinação de mRNA testada frequentemente alcançou títulos de HI > 40 já após uma imunização.
[0761] A Figura 31 mostra que as combinações de mRNA de influenza testadas estimularam respostas robustas de células T CD4+ ΙΕΝγ/ΤΝΕ-α no baço de camundongos imunizados para todos os antígenos.
[0762] A Figura 32 mostra que as combinações de mRNA de influenza testadas estimularam respostas robustas de células T CD8+ ΙΕΝ-γ/ΤΝΕ-α no baço de camundongos imunizados conforme mostrado para H1N1 (A/Califórnia/07/2009) , enquanto que, notadamente, a vacina Influsplit® aprovada não induziu respostas de células T CD8+ .
[0763] Globalmente, os dados demonstram que as vacinas de combinação baseadas em mRNA formulado com LNP para antígenos HA derivados a partir de diferentes vírus influenza (tipos A e tipos B) induzem respostas imunitárias humorais fortes e duradouras e respostas imunitárias celulares mediadas por células T.
Exemplo 13: Experiência de vacinação com uma combinação de mRNAs formulados com LNP-III-3 codificando HA de vírus influenza diferentes [0764] Camundongos BALB/c fêmeas foram imunizados intramuscularmente (i.m.) com composições de vacina de mRNA formulado com LNP-III-3 com doses, vias de aplicação e cronogramas de vacinação conforme indicado na Tabela B (Sequências de mRNA de acordo com o Exemplo 1) . Como um controle negativo, um grupo de camundongos foi injetado com tampão (lactato de Ringer, Rila ) . Como um
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506/542 controle positivo, um grupo de camundongos foi vacinado com uma vacina contra Influenza aprovada (Fluarix®; A/Califórnia/07/2009, A/Suiça/9715293/2013, B/Brisbane/60/2008, B/Phuket/3073/2013) . Todos os animais foram vacinados no dia 0 e no dia 21. Amostras de sangue foram coletadas nos dias 21, 35 e 49 para a determinação da ligação de títulos de anticorpo (usando ELISA), bloqueio de títulos de anticorpo (usando um ensaio de HI), e a determinação dos títulos de neutralização de vírus (VNTs). As respostas de células T foram analisadas por coloração intracelular de citocinas (ICS) usando esplenócitos isolados no dia 49. As descrições detalhadas das experiências executadas são fornecidas abaixo.
Tabela B: Regime de imunização (Exemplo 13)
Grupo N° de camundongos Grupos de tratamento (controle / composições de mRNA) Dose / formulação Tratamento
A 6 Tampão RiLa — i.m., 2x 25 pL
B 6 Fluarix® 1/10 dose humana i.m., 2x 25 pL
C 9 H1N1 A/Países Baixos/602/2009 H3N2 A/Hong Kong/4801/2014 HA B/Brisbane/60/2008 H5N1 A/Vietnã/1203/2004 0,25 pg (0,06 pg cada) LNP-III-3 formulado i. m. , 1 x 25 pL
D 9 H1N1 A/Países Baixos/602/2009 H3N2 A/Hong Kong/4801/2014 HA B/Brisbane/60/2008 H5N1 A/Vietnã/1203/2004 1 pg (0,25 pg cada) LNP-III-3 formulado i. m. , 1 x 25 pL
Petição 870190039457, de 26/04/2019, pág. 529/744
507/542
E 9 H1N1 A/Países Baixos/602/2009 H3N2 A/Hong Kong/4801/2014 HA B/Brisbane/60/2008 H5N1 A/Vietnã/1203/2004 4pg (Ipg cada) LNP-III-3 formulado i.m., 1 x 25 pL
13.1. Determinação de anticorpos IgGI L e IgG2a
específicos da proteína anti-HA por ELISA: [0765] O ensaio ELISA foi essencialmente efetuado conforme vulgarmente conhecido na técnica, ou conforme descrito acima. O ELISA foi realizado para cada antígeno compreendido na composição da vacina de mRNA (conforme indicado na Tabela B) . Os resultados são mostrados na Figura 33 (H1N1 (A/Califórnia/7/2009)), Figura 35 (H3N2 (A/Hong Kong/4801/2014)), Figura 37 (Influenza B (B/Brisbane/60/2008)) e Figura 38 (H5N1 (A/Vietnã/1203/2004)).
13.2. Ensaio de inibição da hemaglutinação (HI) e ensaio de neutralização do vírus:
[0766] O ensaio de HI foi realizado conforme descrito acima. Os resultados são mostrados na Figura 34 ((H1N1 (A/Califórnia/7/2009)) e na Figura 36 (H3N2 (A/Hong Kong/4801/2014)).
13.3. Detecção de respostas de células T:
[0767] Esplenócitos de camundongos vacinados foram isolados de acordo com um protocolo padrão conhecido na técnica. A experiência ICS foi realizada essencialmente conforme descrito no Exemplo 12. Os resultados para as células T CD4+ são mostrados na Figura 39; os resultados para as células T CD8+ são mostrados na Figura 40.
Resultados:
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508/542 [0768] Os dados mostram que os anticorpos IgGl e IgG2a podiam ser detectados após a vacinação com as vacinas de combinação de mRNA formulado com LNP. Notavelmente, para todos os antígenos codificados por mRNA compreendidos na respetiva combinação, podiam ser detectados anticorpos IgGl e IgG2a específicos, demonstrando que todos os mRNA compreendidos nas respectivas composições são traduzidos em proteína e desencadeiam uma resposta imunitária humoral em camundongos conforme mostrado na Figura 33 (H1N1 A/Califórnia/7/2009)), Figura 35 (H3N2 (A/Hong Kong/4801/2014)), Figura 37 (Influenza B (B/Brisbane/60/2008)) e Figura 38 H5N1 (A/Vietnã/1203/2004)). Em comparação com camundongos vacinados com a vacina aprovada Fluarix®, as respostas foram mais fortes ou pelo menos igualmente fortes para todos os antígenos testados, mesmo para a dose mais baixa de vacina de mRNA testada.
[0769] Anticorpos neutralizantes funcionais foram demonstrados para H1N1 (A/Califórnia/7/2009) e H3N2 (A/Hong Kong/4801/2014) (ver Figura 34 e Figura 36) . Em comparação com camundongos vacinados com a vacina aprovada Fluarix®, a indução de anticorpos neutralizantes funcionais foi mais pronunciada e mais durável para as vacinas de combinação de mRNA. Notavelmente, a vacina de combinação de mRNA testada alcançou títulos de HI > 40 já após uma imunização para a dose testada mais elevada.
[0770] A Figura 39 mostra que as combinações de mRNA de influenza testadas estimularam respostas robustas de células T CD4+ ΙΕΝγ/ΤΝΕ-α no baço de
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509/542 camundongos imunizados para todos os antigenos, com respostas mais elevadas conforme observado para Fluarix®.
[0771] A Figura 40 mostra que as combinações de mRNA de influenza testadas estimularam respostas robustas de células T CD8+ IFN-y/TNF-a no baço de camundongos imunizados conforme mostrado para H1N1 (A/Califórnia/07/2009) e H5N1 (A/Vietnã/1203/2004), enquanto que, notadamente, a vacina Fluarix® aprovada não induziu respostas de células T CD8+.
[0772] Globalmente, os dados demonstram que as vacinas de combinação baseadas em mRNA formulado com LNP para antígenos HA derivados a partir de diferentes vírus influenza (tipos A e tipos B) induzem respostas imunitárias humorais fortes e duradouras e respostas imunitárias celulares mediadas por células T.
Exemplo 14: Experiência de vacinação com mRNA formulado com LNP-III-3 codificando Neuraminidase ΝΑΙ de vírus influenza:
[0773] Camundongos BALB/c fêmeas foram imunizados intramuscularmente (i.m.) com composições de vacina de mRNA formulado com LNP-III-3 com doses, vias de aplicação e cronogramas de vacinação conforme indicado na Tabela C (Sequências de mRNA de acordo com o Exemplo 1) . Como um controle negativo, um grupo de camundongos foi injetado com tampão (lactato de Ringer, Rila). Como um controle positivo, um grupo de camundongos foi vacinado com Influsplit Tetra® 2016/2017 (A/Califórnia/7/2009 (H1N1); A/Hong Kong/4801/2014 (H3N2); B/Brisbane/60/2008; B/Phuket/3073/2013). Todos os animais foram vacinados no dia 0 e no dia 21. Amiostras de sangue foram coletadas nos
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510/542 dias 21, 35 e 49 para determinação de respostas imunitárias. As respostas de células T foram analisadas por coloração intracelular de citocinas (ICS) usando esplenócitos isolados no dia 49.
Tabela C: Regime de imunização (Exemplo 14)
Configuração N° de camundongos Grupos de tratamento (controle / composições de mRNA) Dose / formulação Via, Volume
A 6 Rila - i.m., 1 x 25 pL
B 6 Influsplit Tetra® 2016/2017 1/10 da dose humana i.m., 2 x 25 pL
C 6 NA1 A/ Califórnia/07/2 009 1 pg; LNPIII-3 formulado i.m., 1 x 25 pL
D 6 NA1 A/ Califórnia/07/2 009 2,5 pg; LNPIII-3 formulado i.m., 1 x 25 pL
14.1. Determinação de respostas imunitárias para
NI NA (A/Califórnia/7/2009):
[0774] Anticorpos específicos de NA funcionais foram analisados usando um ensaio de lectina ligado a enzima (ELLA), essencialmente realizado como anteriormente descrito na técnica. O ELLA foi realizado em placas de 96 poços revestidos com um substrato de grande glicoproteína fetuína. O NA cliva os ácidos siálicos terminais da fetuína, expondo o penúltimo açúcar, galactose. A aglutinina de amendoim (PNA) é uma lectina com especificidade para galactose e, portanto, a extensão da dessialilação pode ser quantificada usando um conjugado de PNA-peroxidase de rábano, seguido pela adição de um substrato de peroxidase cromogênica. A densidade óptica medida é proporcional à atividade de NA. Para medir os títulos de anticorpos inibidores de NA funcionais (NI), diluições em série de soros foram incubadas em placas revestidas com fetuína com vírus A/Califórnia/7/2009 (H1N1)
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511/542 (pré-tratado com Triton-X-100). 0 recíproco da maior diluição do soro que resulta em > 50% de inibição da atividade de NA é designado como o título de anticorpo de NI. O resultado é mostrado na Figura 41.
[0775] Para determinar as respostas de células T, foi realizada uma experiência de ICS, essencialmente conforme descrito acima. As células foram estimuladas com uma mistura de peptídeos específicos de NA e as respostas das células T CD8+ e as respostas das células T CD4+ foram determinadas. Os resultados são mostrados na Figura 42 (CD4+) e Figura 43 (CD4+).
Resultados:
[0776] Conforme mostrado nas Figuras 41, podem ser detectadas respostas imunitárias funcionais fortes e específicas em camundongos vacinados com mRNA formulado com LNP codificando para NA1 A/Califórnia/2009, enquanto que apenas respostas fracas podem ser determinadas para camundongos injetados com a vacina Influsplit®.
[0777] Conforme mostrado nas Figuras 42 e 43, a vacina NA1 mRNA testada estimulou respostas robustas de células T CD4+ e CD8+ no baço de camundongos imunizados como se mostra, enquanto que, nomeadamente, a vacina Influsplit® aprovada não induz respostas de células T CD8+.
Exemplo 15: Experiência de vacinação com mRNAs formulados com LNP-III-3 codificando o antígeno do vírus da
raiva em camundongos e avaliação do ambiente pró-
inflamatório e injeção de mRNA marcado com fluorescência
formulado com LNP-III-3 (F *-mRNA) em camundongos e análise
da composição e estado de ativação de células imunitárias
na drenagem dos gânglios linfáticos (dLNs).
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512/542 [0778] O F*-mRNA corresponde a um PpLuc mRNA marcado com fluorescência (60%-UTP-40%-5-Amiinoalil-UTP) que não pode ser traduzido em uma proteína devido à marcação (SEQ ID NO: 224286).
[0779] A ativação do sistema imunitário inato é necessária para montar respostas imunitárias adaptativas eficazes após a vacinação. Por isso, o mRNA formulado com LNP-III-3 da invenção de acordo com a invenção foi testado quanto à sua potência para (transientemente) induzir citocinas e quimiocinas pró-inflamatórias após administração i.m. de RABV-G mRNA formulado com LNP em camundongos.
[0780] Camundongos BALB/c (n = 6/grupo) foram vacinados i.m. com 10 pg de RABV-G mRNA não formulado (mRNA) ou formulado com LNP (mRNA/LNP) , ou com controle de tampão. Os tecidos musculares, dLNs e amostras de soro foram isolados 4h, 14h, 24h e 96h após a aplicação i.m. e o teor de citocinas ou quimiocinas foi medido em lisados proteicos e soros através de Cytometric Bead Array (CBA). Os resultados são mostrados nas Figuras 44-49.
[0781] Para elucidar se o ambiente próinflamatório se traduz em ativação e mudanças na composição das células imunitárias, foi analisado o número e o status de ativação dos leucócitos nos dLNs. Para assegurar que qualquer efeito observado fosse independente da proteína codificada por mRNA, foi usado um mRNA marcado de forma fluorescente que não pode ser traduzido (F*-mRNA). Camundongos BALB/c (n = 3/grupo) foram injetados i.m. em ambas as pernas com 10 pg de não formulado (F*mRNA) ou formulado com LNP (F*mRNA/LNP) , ou com tampão. Os dLNs
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513/542 direito e esquerdo foram isolados 4h, 24h e 48h após a aplicação i.m. e analisados separadamente por citometria de fluxo. Os números de cada população de células (50A) e a frequência de células imunitárias ativadas (50B) nos dLNs são mostrados nas Figuras 50A/B.
Resultados:
[0782] Conforme mostrado nas Figuras 44-46, o RABV-G mRNA formulado com LNP induz uma liberação pronunciada mas transitória das citocinas pró-inflamatórias TNF e IL-6 com concentrações de pico 14h após a injeção. De modo importante para a segurança da abordagem, a liberação de citocinas foi local e não foi observada qualquer liberação sistêmica de TNF (no soro). Transitoriamente, foram detectadas concentrações de IL-6 10 vezes mais baixas no soro em comparação com o local de injeção, que voltou à linha de base 96h após a injeção (ver Figura 46).
[0783] Conforme mostrado nas Figuras 47-49, o RABV-G mRNA formulado com LNP induz uma liberação pronunciada mas transitória das quimiocinas próinf lamatórias . Entre as quimiocinas altamente reguladas positivamente estavam a MIP-Ιβ, que desempenha um papel crucial na quimiotaxia de macrófagos, monócitos e células NK, e a CXCL-9, que recruta células T, células NK e células NKT para o local da inflamação. Além disso, houve uma elevação transitória nas concentrações de MCP-1, MTP-la e CXCL1, que atraem uma variedade de células imunitárias, tais como monócitos, macrófagos, células dendríticas e neutrófilos. Também observamos um aumento transitório nas concentrações séricas das quimiocinas descritas acima, mas
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514/542 em uma extensão muito menor em comparação com aquelas detectadas no local da injeção ou nos dLNs.
[0784] Conforme mostrado nas Figuras 50A e 50B, a injeção intramuscular do F*-mRNA formulado com LNP induziu um forte aumento na celularidade, que estava ausente após injeção de F*-mRNA não formulado. A elevação mais forte no número de células foi observada 24 horas após a injeção, com exceção das células NK que aumentaram ao longo do tempo. As células CDllb+ Grl+, consistindo principalmente em monócitos e granulócitos, foram responsáveis pelo maior aumento de leucócitos. O aumento da celularidade em dLNs foi acompanhado por uma forte ativação de ambas as células imunitárias inatas e adaptativas, que atingiu o pico 24 horas após a injeção, quando mais de 90% das células T e B expressaram o marcador de ativação CD69.
[0785] Tomados em conjunto, esses resultados sugerem que a injeção i.m. de vacinas de mRNA formulado com LNP induz um vasto meio imunoestimulador local mas transitório, o que é relevante para a indução de fortes respostas imunitárias adaptativas.
Exemplo 16: Experiência de vacinação com mRNAs formulados com LNP-III-3 codificando o antígeno do virus da raiva em primatas não humanos:
[0786] As vacinas de RABV-G mRNA formuladas com LNP-III-3, conforme preparadas no exemplo anterior, foram usadas para vacinação.
[0787] Os estudos com macacos cinomolgos (Macaca fascicularis) foram conduzidos em Envigo CRS, SAU, Santa Perpétua de Mogoda, Espanha. Os animais eram de origem vietnamita, criados em cativeiro, nulíparos e não
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515/542 grávidos. Os animais tinham no início do tratamento uma idade de 2,5 a 3,5 anos e um peso corporal de 2,2-3,3 kg. Os NHPs foram vacinados i.m. nos dias 0 e 28 no músculo bíceps femoral com uma dose única de 500 pL. A vacinação com a vacina de raiva humana autorizada Rabipur® (Novartis) foi realizada i.m. em NHPs com a dose humana total de acordo com o programa de profilaxia pré-exposição nos dias 0, 7 e 28 ou em um cronograma reduzido nos dias 0 e 28. VNTs de macacos vacinados foram analisados conforme descrito acima. As respostas das células T (CD4+ e CD8+) foram analisadas conforme descrito acima. Os resultados são mostrados nas Figuras 51-55.
Resultados:
[0788] A Figura 51 mostra que já uma única imunização i.m. com 1 pg de RABV-G-mRNA formulado com LNP induziu VNTs robustos em ou acima do título de proteção de 0,5 UI/mL em todos os animais no dia 28 após a vacinação inicial. A imunogenicidade observada foi dependente da dose com uma dose de mRNA 10 vezes superior, originando VNTs 10 vezes mais elevados.
[0789] A Figura 52 mostra que as respostas primárias observadas poderíam ser reforçadas com uma segunda vacinação com RABV-G-mRNA no dia 28, resultando em um aumento de 20 vezes nos VNTs. A monitorização dos títulos de anticorpo ao longo de seis meses demonstrou que após o declínio inicial, os títulos estabilizaram a um nível de proteção de cerca de 40 UI/mL para a dose de 10 pg de mRNA e cerca de 4 UI/mL para a dose de 1 pg de mRNA.
[0790] A Figura 53 mostra a existência da memória das células B. Para demonstrar a existência de
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516/542 memória das células B, cinco meses após a vacinação completa, foi realizada uma terceira vacinação (vacinação de recuperação) e os VNTs foram medidos cinco dias mais tarde. Em ambos os grupos de dose se observou um aumento muito rápido de 10 vezes nos VNTs, demonstrando a indução de uma forte resposta de recuperação pela vacina de mRNA.
[0791] A Figura 54 mostra que a vacina RABV-GmRNA formulada com LNP induziu títulos de anticorpo neutralizante de proteção acima de 0,5 UI/mL após uma vacinação única, o que era comparável ou mais elevada em comparação com uma dose humana total da vacina da raiva licenciada Rabipur®. Quatro semanas após uma vacinação única, os VNTs medidos para macacos vacinados com mRNA aumentaram dramaticamente em comparação com os macacos vacinados com Rabipur®. A vacinação de reforço no dia 28 aumentaram ainda mais os níveis de VNT atingindo até 1000 UI/mL para macacos vacinados com mRNA superando os VNTs induzidos por Rabipur® por um fator de 10. Esses dados sugerem que a vacinação com duas injeções da vacina RABV-GmRNA formulada com LNP é suficiente para induzir proteção contra infecções por vírus da raiva. Para a dose de 100 pg de RABV-G-mRNA formulado com LNP, mesmo uma administração única pode ser suficiente para induzir títulos de anticorpos protetores e sustentados. Essa é uma vantagem particular sobre a vacina da raiva do estado atual da técnica Rabipur® que tem de ser aplicada três vezes.
[0792] As Figuras 55 e 56 mostra que a vacina RABV-G mRNA formulada com LNPda invenção induziu respostas celulares específicas após a vacinação, efeitos que não foram observados em animais em Rabipur® vacinados. Células
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T CD4+ de IFN-Y+/IL-2+ específicas de RABV-G (Figura 55) foram observadas para ambas as doses de vacina de mRNA, enquanto células T CD8+ de IFN-v+/GrzB+ específicas de RABV-G (Figura 56) foram detectadas em animais recebendo a dose de 100 pg. Notavelmente, apenas foram observadas pequenas respostas celulares em macacos que receberam Rabipur®.
Exemplo 17: Experiência de vacinação com mRNAs formulados com LNP-III-3 codificando antígenos HA de influenza H1N1 ou de influenza H3N2 em primatas não humanos:
[0793] As vacinas de HA-mRNA formulada com LNP-III-3 Influenza A/Califórnia/7/2009 (H1N1) ou de HAmRNA Influenza A/Hong Kong/4801/2014 (H3N2) conforme descrito no exemplo anterior foram usadas para a vacinação.
[0794] Os estudos com macacos cinomolgos (Macaca fascicularis) foram conduzidos em Envigo CRS, SAU, Santa Perpétua de Mogoda, Espanha. Os animais eram de origem vietnamita, criados em cativeiro, nulíparos e não grávidos. Os animais tinham no início do tratamento uma idade de 2,5 a 3,5 anos e um peso corporal de 2,2-3,3 kg. Os NHPs foram vacinados com 10 pg quer da vacina H1N1-HA ou H3N2-HA e se mediram os anticorpos funcionais contra os respectivos vírus por meio de ensaios de inibição da hemaglutinação (HI). Como controle, um grupo de animais foi vacinado com uma dose humana total de Fluad®.
[0795] Os NHPs naife foram vacinados i.m. com 10 pg guer da vacina H1N1-HA ou H3N2-HA nos dias 0 e 28 no músculo bíceps femoral com uma dose única de 500 pL. Anticorpos funcionais contra os respectivos vírus foram
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518/542 medidos por ensaios de inibição de hemaglutinação (HI) . Os resultados são mostrados nas Figuras 57-59. As respostas das células T foram analisadas conforme descrito acima. Os resultados são mostrados nas Figuras 60A-B.
Resultados:
[0796] A Figura 57 mostra que já uma única imunização i.m. com 10 pg de H1N1-HA mRNA ou H3N2-HA mRNA formulado com LNP induziu títulos de HI em ou acima do título de 1:40 em todos os animais no dia 28 após a vacinação inicial o que é considerado como sendo protetor no ser humano.
[0797] A Figura 58 mostra que as respostas primárias observadas poderíam ser reforçadas com uma segunda vacinação com o respectivo H1N1-HA mRNA no dia 28, resultando em um forte aumento dos títulos de HI medidos. A monitoração dos títulos de anticorpos por mais de 12 meses (544 dias) demonstrou que após o declínio inicial os títulos estabilizaram em um título H1N1 HI protetor de cerca de 640. De modo importante, todos os animais vacinados mantiveram os títulos HI claramente acima do limite de proteção até ao final do período de observação um ano após a vacinação, confirmando a notável longevidade da resposta imunitária humoral específica do antígeno H1N1 HA.
[0798] A Figura 59 mostra que a vacina de H3N2-HA mRNA formulada com LNP induz títulos de H3N2-HI protetores após uma vacinação única com respostas comparáveis à potente vacina da gripe Fluad® (temporada 2016/17; contém os antígenos de superfície HA e neuraminidase das estirpes de influenza H1N1, H3N2 e B/Brisbane, bem como o adjuvante MF59C.1) . Uma dose única
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519/542 da vacina de mRNA formulada com LNP foi suficiente para induzir títulos H3N2-HI protetores, comparáveis aos títulos induzidos por uma dose humana total de Fluad®. Uma segunda dose aumentou adicionalmente os títulos de HI, com um efeito muito mais forte para a vacina H3N2-HA mRNA formulada com LNP.
[0799] A Figura 60 mostra que a vacina inventiva de H3N2-HA mRNA formulada com LNP induziu respostas de células T CD4+ de IFN-Y+/IL-2+ específicas e respostas de células T CD4+ de TNFa+/IL-2+ após a vacinação, efeitos que não foram observados em animais vacinados com Fluad®.
Exemplo 18: Experiência de vacinação com uma combinação de mRNAs codificando diferentes antígenos de influenza em primatas não humanos [0800] Primatas não humanos (NHPs) são imunizados (6 animais por grupo) com vacinas de mRNA formulado com LNP-III-3 com doses, vias de aplicação e cronogramas de vacinação conforme indicado na Tabela D (Sequências de mRNA, preferencialmente, de acordo com o Exemplo 1) . Como vacinas, é usada uma composição de mRNA compreendendo quatro antígenos HA (HA tetravalente) ou uma composição de mRNA compreendendo sete antígenos de HA+NA (quatro HA, três NA, heptavalente ouHA+NA septavalente) . Todos os animais são vacinados no dia 0 e no dia 28. Amostras de sangue são coletadas nos dias 0, 14, 28, 56, 77 e 84 para determinação de respostas imunitárias. As respostas de células T são analisadas por coloração intracelular de citocinas (ICS) usando esplenócitos isolados. Análise de respostas imunitárias essencialmente
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520/542 realizadas conforme descrito acima (ELLA, ensaio de HI, ELISA, ICS, VNTs).
Tabela D: regime de imunização
Tratamento Dose / formulação Via, Volume
HA A/Califórnia/7/2009 H1N1 HA A/Hong Kong/4801/2014 H3N2 HA B/Brisbane/60/2008 HA B/Phuket/3073/2013 HA Tetravalente 4 0 pg* LNP-III-3 1 .m. , 50 0 pL
HA A/Califórnia/7/2009 H1N1 HA A/Hong Kong/4801/2014 H3N2 HA B/Brisbane/60/2008 HA B/Phuket/3073/2013 HA Tetravalente 200 pg* LNP-III-3 1 .m. , 50 0 pL
NA1 A/Califórnia/07/2009 NA2 A/Hong Kong/4801/2014 NA B/Brisbane/60/2008) HA A/Califórnia/7/2009 H1N1 HA A/Hong Kong/4801/2014 H3N2 HA B/Brisbane/60/2008 HA B/Phuket/3073/2013 HA+NA Septavalente 7 0 pg* LNP-III-3 1 .m. , 50 0 pL
NA1 A/Califórnia/07/2009 NA2 A/Hong Kong/4801/2014 NA B/Brisbane/60/2008) HA A/Califórnia/7/2009 H1N1 HA A/Hong Kong/4801/2014 H3N2 HA B/Brisbane/60/2008 HA B/Phuket/3073/2013 HA+NA Septavalente 350 pg* LNP-III-3 1 .m. , 50 0 pL
Vacinas licenciadas 1 dose humana 1 .m. , 50 0 pL
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521/542 * Cada MRNA representado igualmente na composição, ou seja, 4 x 10 pg, 4 x 50 pg, 7 x 10 pg ou 7 x 50 pg
Exemplo 19: Desenvolvimento clinico de uma vacina de mRNA de influenza formulada com LNP-III-3 [0801] Para demonstrar a segurança e a eficiência da composição da vacina de RNA de Influenza, um ensaio clínico aleatório, duplo cego e controlado por placebo (fase I) é iniciado.
[0802] Para o desenvolvimento clínico, o RNA de grau GMP é produzido usando um processo GMP estabelecido, implementando vários controles de qualidade no nível de DNA e nível de RNA, conforme descrito em detalhe no documento WO 2016/180430 Al.
[0803] No ensaio clínico, os voluntários humanos (sujeitos adultos, 18-45 anos de idade) são intramuscularmente (i.m.) injetados durante pelo menos duas vezes com uma composição de mRNA compreendendo um mRNA codificando para um antigeno de influenza conforme especificado no presente documento (monovalente, H3N2 A/Hong Kong/4801/2014), ou com uma composição de mRNA compreendendo quatro antígenos de influenza HA conforme especificado no presente documento (HA tetravalente), ou com uma composição de mRNA compreendendo quatro antígenos de influenza HA e três de influenza NA conforme especificado no presente documento (HA + NA septavalente) ou com uma composição de mRNA compreendendo múltiplos antígenos de influenza HA e múltiplos de influenza NA conforme especificado no presente documento (HA + NA multivalente). Adicionalmente, é tratado um grupo de
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522/542 voluntários idosos (idosos > 65 anos de idade). A concepção dos estudos é indicada nas Tabelas E-H abaixo.
Tabela E: Concepção clínica de um estudo tetravalente de influenza HA
Grupo Tratamento mRNA total por dose (pg) Formulação / Via Volume de dose clinica (mL) N° de sujeitos humanos adultos
1 Controle (solução salina) 0 — 0,5 30
2 HA tetravalente 20* LNP-III-3 (i.m.) 0,5 30
3 HA tetravalente 40* LNP-III-3 (i.m.) 0,5 30
4 HA tetravalente 80* LNP-III-3 (i.m.) 0,5 30
5 Controle de vacina licenciada — i.m. 0,5 30
6 idoso s vacina de mRNA 4 0 ou 80* LNP-III-3 (i.m.) 0,5 30
* cada mRNA representado igualmente na composição
Tabela F: Concepção clínica de um estudo de influenza monovalente (H3N2)
Grupo Tratamento mRNA total por dose (pg) Formulação / Via Volume de dose clínica (mL) N° de sujeitos humanos adultos
1 Controle (solução salina) 0* i.m. 0,5 30
2 HA monovalente 20* LNP-III-3 (i.m.) 0,5 30
3 HA monovalente 40* LNP-III-3 (i.m.) 0,5 30
4 HA monovalente 80* LNP-III-3 (i.m.) 0,5 30
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523/542
5 Controle de vacina licenciada — i.m. 0,5 30
6 idoso s HA monovalente 4 0 ou 80* LNP-III-3 (i.m.) 0,5 30
* cada mRNA representado igualmente na composição
Tabela G: Concepção clínica de um estudo heptavalente/septavalente de influenza HA+NA
Grupo Tratamento mRNA total por dose (pg) Formulação / Via Volume de dose clinica (mL) N° de sujeitos humanos adultos
1 Controle (solução salina) 0 i.m. 0,5 30
2 HA+NA septavalente 20* LNP-III-3 (i.m.) 0,5 30
3 HA+NA septavalente 40* LNP-III-3 (i.m.) 0,5 30
4 HA+NA septavalente 80* LNP-III-3 (i.m.) 0,5 30
5 Controle de vacina licenciada — i.m. 0,5 30
6 idoso s HA+NA septavalente 4 0 ou 80* LNP-III-3 (i.m.) 0,5 30
* cada mRNA representado igualmente na composição
Tabela H: Concepção clínica de um estudo multivalente de influenza HA+NA
Grupo Tratamento mRNA total por dose (pg) Formulação / Via Volume de dose clínica (mL) N° de sujeitos humanos adultos
1 Controle (solução salina) 0 i.m. 0,5 30
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2 Multivalente HA+NA 20* LNP-III-3 (i.m.) 0,5 30
3 Multivalente HA+NA 40* LNP-III-3 (i.m.) 0,5 30
4 Multivalente HA+NA 80* LNP-III-3 (i.m.) 0,5 30
5 Controle de vacina licenciada — i.m. 0,5 30
6 idoso s Multivalente HA+NA 4 0 ou 80* LNP-III-3 (i.m.) 0,5 30
* cada mRNA representado igualmente na composição [0804] De modo a avaliar o perfil de segurança das composições para vacinas de influenza de acordo com a invenção, os sujeitos são monitorados após a administração (sinais vitais, avaliações de tolerância no local de vacinação, análise hematológica).
[0805] A eficácia da imunização é analisada pela determinação dos títulos de HI e ensaio de ELLA. Amiostras de sangue são coletadas no dia 0 como linha de base e após a vacinação completa. Os soros são analisados quanto a anticorpos funcionais (ensaio de HI, ELLA, VNTs (teste de FAVN) ) . Além disso, é realizado um ensaio REFIT de modo a analisar a presença de VNTs precoces usando o teste de inibição de focos fluorescentes rápido usando a estirpe de vírus de desafio CVS 11 adaptada à cultura de células conforme recomendado pela Organização Mundial de Saúde Animal. Resumidamente, os soros inativados pelo calor são testados em diluições duplas em série quanto ao seu potencial para neutralizar uma dose infecciosa de 100 culturas de tecidos a 50% de CVS. As diluições de soros são incubadas com vírus durante cerca de 70 min a 37 °C (em uma incubadora com camisa de aquecimento com CO2 a 5%). 30.000
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525/542 células BHK-21 são adicionadas por poço. As culturas de células infetadas são incubadas durante 22 horas a 37 °C e C02 a 5%. As células são fixadas usando acetona a 80%/ PBS a 20% a -20 °C durante 10 min e coradas usando globulina antirraiva conjugada com FITC. As placas são lavadas duas vezes usando PBS e o excesso de PBS é removido. As culturas de células são pontuadas positivas ou negativas quanto à presença do vírus da raiva detectado por sinais positivos para FITC. As células pontuadas negativas nos poços tratados com soro representam a neutralização do vírus da raiva. Cada teste de RFFIT inclui soro padrão OMS ou OIE (soro de referência positivo), que serve como referência para a padronização do ensaio. A atividade de neutralização dos soros de teste é calculada com referência ao soro padrão fornecido pela OMS e apresentado como Unidades Internacionais/mL (UI/mL).
[0806] Além disso, um subconjunto de sujeitos saudáveis é desafiado com o vírus influenza vivo ou placebo através de administração oral. Os sujeitos são seguidos após o desafio para sintomas de doença associados à influenza, infecção e respostas imunitárias.
Exemplo 20: Estabilidade de LNPs (LNP-III-3) armazenado a 5 °C durante 3 meses [0807] Para comparar imunogenicidade e a reactogenicidade do RABV-G mRNA formulado com LNP-III-3 armazenado a 5 °C durante 3 meses, a imunogenicidade foi avaliada através da determinação das respostas humorais, incluindo anticorpos funcionais e respostas imunitárias celulares duas semanas após a vacinação de reforço (ver Tabela J).
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526/542 [0808] Os títulos
RABV-G foram determinados por vírus conforme descrito acima.
Tabela J: Protocolo de anticorpos específicos de
Ensaio de Neutralização de de imunização (do Exemplo
Sexo da estirpe Camundongos # Tratamento RNA/camundongo Via, Volume Cronograma de imunização Sangramento retrobular
Fêmea BALB/c 8 0,9 pg de RABV-G mRNA formulado com LNP-III-3 (lote de LNP preparado de fresco) i.m. 1 x 25 pL d0, d21 dO, d21, d35
Fêmea BALB/c 8 0,9 pg de RABV-G mRNA formulado com LNP-III-3 (lote de LNP armazenado a 5 °C ao longo de três me s e s) i.m. 1 x 25 pL dO, d21 dO, d21, d35
Fêmea BALB/c 8 0,3pg de RABV-G mRNA formulado com LNP-III-3 (lote de LNP preparado de fresco) i.m. 1 x 25 pL dO, d21 dO, d21, d35
Fêmea BALB/c 8 0,9 pg de RABV-G mRNA formulado com LNP-III-3 (lote de LNP armazenado a 5 °C ao longo de três me s e s) i.m. 1 x 25 pL dO, d21 dO, d21, d35
Fêmea BALB/c 6 PBS i.m. 2 x 25 pL dO, d21 dO, d21, d35
[0809] Como é evidente a partir das Figuras
62A e 62B, surpreendentemente a estabilidade de LNPs não foi influenciada negativamente após armazenamento a 5 °C durante três meses, ou seja, tais LNPs apenas mostraram efeitos menores in vivo e foram suficientes para gerar VNTs muito elevados após vacinação inicial e após reforço.
Exemplo 21: Análise de toxicidade de LNPs (LNPIII-3)
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527/542 [0810] O objetivo desse exemplo foi avaliar a toxicidade dos LNPs da invenção (LNP-III-3). Para esse fim, vários estudos de toxicidade ín vivo foram realizados em diferentes modelos de animais (por exemplo, camundongos, ratos ou coelhos) com diferentes doses de mRNA (por ex. 1 pg, 10 pg, 40 pg, 100 pg ou 200 pg) . Os resultados mostraram que os LNPs da invenção não apresentaram toxicidade significativa in vivo, evidenciada pela análise de reações locais, dor, consumo de alimentos, peso corporal, peso de órgãos, química clínica (ou seja, não foi observada qualquer alteração relacionada com a substância de teste) e hematologia (ou seja, não foram observadas alterações relacionadas com a substância de teste) . Apenas pequenas reações locais, tais como eritemas e edemas, isto é, reações normais às vacinas que geralmente ocorrem dentro de 1-3 dias, foram encontradas numa minoria dos animais vacinados com, por exemplo, 10 pg e 100 pg.
Exemplo 22: Experiência de vacinação com uma combinação de mRNAs formulados com LNP-III-3 codificando HA de vírus influenza diferentes em furões:
[0811] Furões (Mustela putoríus furo; 6-12 meses de idade) foram imunizados intramuscularmente (i.m.) com composições de vacina de mRNA formulado com LNP-III-3 compreendendo construtos de mRNA codificando H1N1 A/Califórnia/07/2009, H3N2 A/Hong Kong/4801/2014, HA B/Brisbane/60/2008, e HA B/Phuket/3073/2013, daqui para a frente referidas como vacina de mRNA tetravalente(ver a Tabela K) . Sequências de mRNA respectivas de acordo com o Exemplo 1. Como controle positivo, um grupo de furões foi vacinado com uma vacina de Influenza aprovada (Fluad® tetra
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2016/2017). Todos os animais foram injetados com a respectiva composição no dia 0 e no dia 21. Amostras de sangue foram coletadas nos dias 0, 21, 35 e 49 para a determinação do bloqueio de títulos de anticorpo para cada antígeno codificado (usando um ensaio de HI conforme descrito acima e ensaio de MN). Os resultados são mostrados na Figura 63.
Tabela K: Regime de imunização (Exemplo 22)
Grup o N° de furões Grupos de tratamento Dose Tratamento
A 3 vacina de mRNA tetravalente 160 pg (40 pg cada mRNA) i.m., 1 x 250 pL
B 3 vacina de mRNA tetravalente 40 pg (10 pg cada mRNA) i.m., 1 x 250 pL
C 3 vacina de mRNA tetravalente 10 pg (2,5 pg cada mRNA) i.m., 1 x 250 pL
D 6 Fluarix® dose humana total i.m., 2 x 250 pL
Resultados:
[0812] Conforme mostrado na Figura 63, os títulos de anticorpos bloqueadores foram detectados para cada antígeno de codificação. As Figuras 63A e B mostram que para H1N1 e H3N2 foi observada uma clara resposta de dose e que os títulos de HI protetores (> 40) foram induzidos após a segunda vacinação para todos os grupos testados. Notavelmente, para o grupo de 160 pg e para o grupo de 80 pg, os títulos de HI protetores foram já atingidos após a vacinação inicial. As Figuras 63C e D mostram que os títulos de HI protetores também foram detectáveis para B/Brisbane para a concentração de 160pg. Os títulos MN foram observados para B/Phuket (Figura 63D).
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529/542 [0813] Globalmente, os resultados demonstram que a vacina de mRNA tetravalente usada no presente documento induz respostas de anticorpos funcionais para todos os quatro antígenos. Além disso, as respostas de anticorpos foram comparáveis às observadas para a vacina aprovada Fluad, mostrando o enorme potencial da vacina formulada com LNP da invenção.
Exemplo 23: Experiência de vacinação de desafio com uma combinação de mRNAs formulados com LNP-III-3 codificando HA de vírus influenza diferentes em furões:
[0814] Furões (Mustela putoríus furo; 6-12 meses de idade) são imunizados intramuscularmente (i.m.) com a vacina de mRNA tetravalente formulado com LNP-III-3 do Exemplo 22. Como um controle positivo, os grupos são vacinados com Fluad® tetra 2016/2017. Como um controle
negativo, os grupos são inj etados com placebo. Para cada
grupo, 6 animais são tratados ( :fase de imunizaçãona
Tabela L). [0815] Para simular uma infecção da temporada
passada com o vírus influenza, alguns grupos também são infetados antes da experiência de vacinação com o vírus influenza. O grupo 5-8 está infetado com o vírus H3N2 A/Fukui/20/2004 e o grupo 13-16 foi infetado com a linhagem
Yamagata B/Massachusetts/2/2012 (ver fase inicial na
Tabela L) [0816] Após imunização, os furões são
desafiados por via intratraqueal com o vírus influenza. 0
grupo 5-8 foi desafiado com o vírus HA A/Países
Baixos/602/2009 e o grupo 13-16 foi desafiado com a linhagem Victoria B/Brisbane/60/2008 (ver fase de desafio
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530/542 na Tabela L). Nos dias 1-3 seguintes, os furões de desafio de virus são analisados quanto à carga de virus (nariz, garganta, cotonetes) e parâmetros de saúde (febre, peso corporal) . 4 dias após o desafio com virus, os animais são submetidos a eutanásia e analisados quanto a respostas imunitárias (títulos de HI, IgG, Mn, etc.).
Tabela L: Procedimento Experimental (Exemplo 23)
fase inicial Cronograma de vacinação Fase de desafio
1 Sem tratamento placebo dia 49 H1N1 influenza A Nariz, Garganta, Cotonetes, Peso corporal
2 Fluad dia 49
3 vacina de mRNA tetravalente dia 49
4 dia 28 dia 49
5 H3N2 dia 21 placebo dia 49
6 Fluad dia 49
7 vacina de mRNA tetravalente dia 49
8 H3N2 dia 0 dia 28 dia 49
9 Sem tratamento placebo dia 49 B Brisbane Nariz, Garganta, Cotonetes, Peso corporal
10 Fluad dia 49
11 vacina de mRNA tetravalente dia 49
12 dia 28 dia 49
13 B Massachusetts dia 21 placebo dia 49
14 Fluad dia 49
15 vacina de mRNA tetravalente dia 49
16 B Massachusetts dia 0 dia 28 dia 49
Exemplo 24: Experiência de vacinação com mRNAs formulados com LNP-III-3 codificando três antígenos de NA diferentes (Vacina de NA mRNA trivalente) [0817] Conforme exemplarmente mostrado no Exemplo 14, o mRNA formulado com LNP-III-3 codificando a neuraminidase induz respostas imunitárias fortes e eficazes. No presente exemplo, uma composição de mRNA trivalente compreendendo mRNA codificando NA de Influenza A/Califórnia/07/2009 (H1N1), mRNA codificando NA Influenza
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A/Hong Kong/4801/2014 (H3N2) e mRNA codificando NA de Influenza B/Brisbane/60/2008 foi vacinada (no presente documento referido como vacina de NA mRNA trivalente). Sequências de mRNA respectivas de acordo com o Exemplo 1.
[0818] Os camundongos BALB/c fêmeas foram injetados no dia 0 e no dia 21 com uma vacina de NA mRNA trivalente, Influsplit Tetra (2016/2017) como controle positivo ou um controle de tampão (RiLa) de acordo com um regime conforme fornecido na Tabela M abaixo. As amostras de soro foram tomadas para a determinação de títulos de anticorpos específicos (ensaio de ELLA, realizado de acordo com o Exemplo 14) . Os resultados do ensaio de ELLA são mostrados na Figura 64.
Tabela M: Regime de imunização (Exemplo 24)
Grupo N° de c amundongo s Grupos de tratamento Dose Tratamento
1 13 vacina de NA mRNA trivalente LNP-III-3 formulado 7,5 pg (2,5 pg cada mRNA) 1.m. , 1 x 25 pL
2 6 Influsplit Tetra 2016/2017 Dose humana total 1.m. , 1 x 25 pL
3 3 Tampão RiLa 1.m. , 1 x 25 pL
Resultados:
[0819] Conforme mostrado nas Figuras 64, podem ser detectadas respostas imunitárias funcionais fortes e especificas em camundongos vacinados com mRNA formulado com LNP codificando para três antígenos de NA diferentes (vacina de NA mRNA trivalente) . Em comparação com as respostas detectadas após a vacinação com uma dose humana total de Influsplit Tetra, as respostas obtidas com a vacina de NA mRNA formulada com LNP-III-3 trivalente da invenção foram mais pronunciadas. Os resultados mostram que, para cada antígeno de NA, foram induzidas respostas
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532/542 imunitárias funcionais fortes após a vacinação com uma vacina de NA mRNA trivalente formulada com LNP-III-3.
Exemplo 25: Experiência de vacinação com mRNAs formulados com LNP-III-3 codificando três antígenos de NA diferentes e quatro antígenos de HA diferentes (Vacina de mRNA septavalente) [0820] Conforme exemplarmente mostrado nos Exemplos acima, as vacinas de HA mRNA tetravalente e as vacinas de NA mRNA trivalente formuladas com LNP-III-3 induzem respostas imunitárias fortes e eficazes para cada antígeno codificado. No presente exemplo, uma composição de mRNA formulada com LNP-III-3 codificando três antígenos NA diferentes (mRNA codificando NA de Influenza A/Califórnia/07/2009 (H1N1), mRNA codificando NA de Influenza A/Hong Kong/4801/2014 (H3N2) e mRNA codificando NA de Influenza B/Brisbane/60/2008 foi vacinado) e quatro diferentes antígenos HA (mRNA codificando HA de Influenza A/Califórnia/07/2009 (H1N1), mRNA codificando HA de Influenza A/Hong Kong/4801/2014 (H3N2) e mRNA codificando HA de Influenza B/Brisbane/60/2008 e mRNA codificando HA de Influenza B) foi vacinado (no presente documento referido como vacina de mRNA de HA/NA septavalente). Sequências de mRNA respectivas de acordo com o Exemplo 1.
[0821] Camundongos BALB/c fêmeas foram injetados i.m. no dia 0 e no dia 21 com a vacina de HA mRNA formulada com LNP-III-3 tetravalente, com a vacina de NA mRNA formulado com LNP-III-3 trivalente ou com a vacina de HA/NA mRNA formulado com LNP-III-3 septavalente. Como um controle positivo, um grupo de camundongos foi injetado com Influsplit Tetra® 2016/2017. Como um controle negativo, um
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533/542 grupo de camundongos foi injetado com tampão de Rila. As amostras de soro para a análise de respostas imunitárias (título de HI, ELISA) foram coletadas no dia 21, 35, 49 (ensaios realizados conforme descrito acima). Esplenócitos coletados no dia 49 (ICS) . Os detalhes experimentais são fornecidos na Tabela N. OS resultados de ELISA e de títulos de HI são mostrados nas Figuras 65-70.
Tabela N: Regime de imunização (Exemplo 25)
Grupo N° de camundongos Grupos de tratamento Dose Tratamento
1 8 vacina de HA mRNA tetravalente 4 pg (1 pg cada) i.m., 1 x 2 5 pL
2 8 vacina de NA mRNA trivalente 3 pg (1 pg cada) i.m., 1 x 2 5 pL
3 8 vacina de HA/NA mRNA septavalente 7 pg (1 pg cada) i.m., 1 x 2 5 pL
4 8 vacina de HA/NA mRNA septavalente 7 pg (0,5 pg cada)
5 6 Influsplit Tetra 1/10 dose humana i.m., 2 x 2 5 pL
6 6 RiLa — i.m., 1 x 2 5 pL
Resultados:
[0822] Os resultados mostram que a vacina de HA/NA mRNA formulada com LNP-III-3 septavalente induz respostas imunitárias fortes e eficazes em camundongos vacinados.
[0823] A Figura 65-Figura 68: mostra a presença de anticorpos IgGl e IgG2a totais para cada um dos quatro antígenos HA. Nota: Não foram detectadas diferenças entre as respostas imunitárias detectadas em camundongos vacinados com a vacina de HA mRNA tetravalente, mostrando que a adição de construtos adicionais de mRNA codificando
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534/542 antígenos de NA não reduziu a efetividade da vacina de mRNA septavalente.
[0824] A Figura 69: mostra a presença de anticorpos específicos para cada um dos três antígenos NA. Nota: Não foram detectadas diferenças entre as respostas imunitárias detectadas em camundongos vacinados com a vacina de NA mRNA trivalente, mostrando que a adição de construtos adicionais de mRNA codificando antígenos de HA não reduziu a efetividade da vacina de mRNA septavalente.
[0825] Figura 70: mostra que a vacinação de camundongos com a vacina de HA/NA mRNA formulada com LNP septavalente induz anticorpos funcionais.
Exemplo 26: Experiência de vacinação com mRNAs formulados com LNP-III-3 codificando ebola GP [0826] No presente exemplo, a formulação de mRNA LNP-III-3 da invenção foi comparada com um formato de vacina de mRNA estabelecido (formulação de Protamina; ver Exemplo 6) usando mRNA codificando glicoproteína GP do vírus do ebola (ZEBOV GP Serra Leoa 2014) .
[0827] Formulação de protamina de mRNA codificando GP do vírus do ebola (SEQ ID NO: 224362) conforme descrito no Exemplo 6. Formulação de LNP de mRNA codificando GP do vírus do ebola (SEQ ID NO: 224362) conforme descrito acima.
[0828] Imunogenicidade da vacina de mRNA do GP do ebola em camundongos:
Camundongos BALB/c fêmeas foram injetados no dia 0 e no dia 21 com um mRNA formulado com LNP-III-3 codificando GP do vírus do ebola (RNA ID R3875; intramuscular (i.m.)) ou mRNA formulado com protamina
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535/542 codificando GP do vírus do ebola (RNA ID R3875; intradérmico (i.d.)). Como um controle negativo, um grupo de camundongos foi injetado com tampão de Rila. As amostras de soro para a análise dos títulos finais de IgG (ELISA) foram coletadas no dia 35. 0 ELISA foi realizado usando proteína GP recombinante de Mayinga (sem o domínio transmamembranar) para o revestimento. Os resultados de ELISA são mostrados na Figura 71. 0 contorno da vacinação experimental é fornecido na Tabela O.
Tabela O: Regime de imunização (Exemplo 26)
Grupo N° de camundongos Grupos de tratamento Dose Tratamento
1 8 GP ebola, formulado com protamina 8 Opg i.d., 1 x 50 pL
2 8 GP ebola, formulado com LNP 5pg i.m., 1 x 2 5 pL
3 8 GP ebola, formulado com LNP 7 pg (1 pg cada) i.m., 1 x 2 5 pL
4 8 RiLa 7 pg (0,5 pg cada) i.d., 1 x 50 pL
Resultados:
[0829] A Figura 71 mostra que o mRNA formulado com LNP-III-3 codificando o GP do vírus ebola induz respostas imunitárias humorais fortes em camundongos (aplicação i.m.). Em comparação com o formato de vacina de mRNA de protamina estabelecido (aplicação i.d.), a quantidade de mRNA necessária para uma resposta imunitária semelhante podería ser drasticamente reduzida. Além disso, as vacinas de mRNA formulado com LNP-III-3 podem ser aplicadas intramuscularmente, o que é uma característica importante para vacinas profiláticas (aplicação
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536/542 intramuscular segura e isente de falhas da vacina, por exemplo, em seres humanos).
Exemplo 27: Experiência de vacinação com mRNAs formulados com LNP-III-3 codificando H3N2 administrado por via subcutânea [0830] Conforme descrito nos exemplos anteriores, as vacinas de mRNA formulado com LNP-III-3 induzem respostas imunitárias fortes e eficazes quando administradas por via intramuscular ou intradérmica (por exemplo, ver o Exemplo 4) . Para avaliar a eficácia do formato da vacina da invenção para outras vias de administração adequadas, foi testada a injeção subcutânea.
[0831] Primatas não humanos (Macaca fascícularís) foram injetados com mRNA formulado com LNPIII-3 codificando Influenza A/Hong Kong/4801/2014 H3N2 (sequências de mRNA de acordo com o Exemplo 1). Três grupos
foram vacinados por via subcutânea (sc) com diferentes
doses de vacina (10 Hg, 50 pg, 100 pg) e um grupo de
contro le foi vacinado por via intramuscular. Os títulos de
HI no dia 0, dia 28, dia 49 e dia 70 foram determinados
conforme descrito no presente documento. Os resultados da
experi ência são mostrados na Figura 72. 0 contorno da
vacinação experimental é fornecido na Tabela P.
Tabela P: Regime de imunização (Exemplo 27)
Grupo N° de NHP Grupos de tratamento Dose e via Tratamento
1 8 H3N2 formulado com LNP-III-3 10 pg, subcutâneo Dia 0, dia 28
2 8 H3N2 formulado com LNP-III-3 50 pg, subcutâneo Dia 0, dia 28
3 8 H3N2 formulado com LNP-III-3 100 pg, subcutâneo Dia 0, dia 28
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4 8 H3N2 formulado com LNP-III-3 100 pg, i.m. Dia 0, dia 28
[0832] Resultados: Conforme mostrado na Figura 72, o formato de vacina de mRNA formulado com LNP-III-3 da invenção induz títulos de anticorpos protetores fortes contra o antígeno codificado quando administrado por via subcutânea. Notavelmente, os títulos de HI foram comparáveis aos obtidos por meio da administração i.m.. Além disso, os títulos protetores já foram obtidos após uma administração (dia 28) . Títulos protetores estáveis foram detectados para animais vacinados s.c. para 50 pg e 100 pg. Resumindo o acima, os resultados demonstram que o formato de vacina de mRNA formulado com LNP-III-3 da invenção é adequado para administração intradérmica, intramuscular e também subcutânea.
Exemplo 28: Experiência de vacinação com a vacina de OVA mRNA formulada comLNP-III-3 [0833] Para vacinação, 9 camundongos (C57 BL/6) por grupo foram injetados intradermicamente 3 vezes dentro de 3 semanas com 1 pg de Ova mRNA formulado com LNP (Componente A) e 32 pg de Ova mRNA formulado com protamina (Componente B), como controle negativo de RiLa foi injetado (ver Tabela Q).
[0834] Os níveis de células T CD8 positivas específicas de antígeno em circulação foram medidos com dextrâmeros específicos de OVA (se ligam a receptores de células T específicos de antígenos de células CD8 positivas) nos dias 7 e 21. 1 pg de vacina de Ova mRNA formulado com LNP (Componente A) induz níveis elevados e reforçáveis de células T CD8 positivas específicas para o
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538/542 antigeno em circulação após aplicação intradérmica (ver
Figura 73 e Figura 74).
Tabela Q: Componentes, tratamento e diluição de
RNA (Exemplo 28)
Componente Tratamento Dose de RNA Via (Volume) Camundongos #
A OVA mRNA formulado em LNP Ipg i.d (25 pL) /1 local de inj eção 9
B Ova mRNA formulado com protamina 32pg i.d (100 pL) /4 locais de inj eção (estado atual da técnica) 9
C Tampão RiLa i.d (25 pL) /1 local de inj eção 3
[0835] Os níveis de células T CD8 positivas específicas de antigeno multifuncionais (IFNy/TNFa) foram medidos por coloração de citocinas intracelulares (ICS). Desse modo, os esplenócitos foram isolados a partir dos camundongos vacinados uma semana após a última vacinação e as células T CD8 positivas foram estimuladas com peptídeos específicos de OVA (SIINFEKL and TEWTSSNVMEERKIKV) (ver Figura 75) . A Figura 75 mostra que 1 pg de vacina de Ova mRNA formulado com LNP (Componente A) induz níveis elevados de células T CD8 positivas multifuncionais após aplicação intradérmica em comparação com Ova mRNA formulado com protamina (Componente B).
[0836] A detecção de respostas imunitárias de células B foi realizada através da deteção de títulos de
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539/542
IgG2c específicos para OVA. Desse modo, as amostras de soro foram coletadas a partir dos camundongos vacinados uma semana após a última vacinação e analisadas por ELISA. 1 pg da vacina de OVA-mRNA formulado com LNP conduz a títulos de IgG2c específicos de OVA aumentados após aplicação intradérmica em comparação com Ova mRNA formulado com protamina (ver Figura 76).
[0837] Os resultados demonstram que o formato de vacina de mRNA formulado com LNP-III-3 da invenção é adequado para induzir respostas antitumorais ín vivo e, desse modo, usáveis para vacinação contra tumor.
Exemplo 29: Experiência de desafio do tumor com a vacina de OVA mRNA formulada comLNP-III-3 [0838] Camundongos C57BL/6 foram injetados por via subcutânea (s.c.) com 3xl05 células E.G7-OVA por camundongo (em um volume de 100 pL de PBS) no flanco direito no dia 0 da experiência. A terapia intradérmica (i.d.) começou no dia 4 e continuou duas vezes por semana durante três semanas. Os camundongos foram injetados com 1 pg de OVA mRNA e um PpLuc mRNA irrelevante formulado nos LNPs. Para controlar os efeitos antitumorais devidos ao procedimento de injeção, os camundongos foram injetados com tampão (RiLa).
[0839] Os resultados da experiência são
mostrados na Figura 77 e na Figura 78, em que a Figura 77
mostra o efeito da composição da invenção no crescimento do
tumor e a Figura 78 mostra o efeito da composição da
invenção na sobrevivência.
[0840] O crescimento do tumor foi monitorado medindo o tamanho tumoral em três dimensões usando um
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540/542 compasso de calibre. O volume tumoral foi calculado de acordo com a fórmula seguinte:
, . 3. length(mm) χπχ width2 (mm2) volume(mm ) =------------------------[0841] Os resultados na Figura 77 mostram que o Componente A da invenção (Ova mRNA formulado com LNP) diminuiu fortemente o volume tumoral mediano em comparação com o outro tratamento com um mRNA irrelevante (Componente B). Adicionalmente, os resultados na Figura 78 mostram que o Componente A da invenção (Ova mRNA formulado com LNP) aumentou fortemente a sobrevivência de camundongos com desafio tumoral em comparação com os outros tratamentos (Componente B e Tampão).
Tabela R: Componentes, tratamento e diluição de
RNA (Exemplo 29)
Componente Tratamento Dose de RNA Via (Volume) Cronograma Camundongos #
A OVA mRNA formulado em LNP Ipg i.d (25 pL) / 1 local de inj eção 2 x semana 10
B PpLuc mRNA formulado em LNP Ipg i.d (25 pL) / 1 local de inj eção 2 x semana 10
C RiLa i.d (25 pL) /1 local de inj eção 2 x semana 6
Os resultados demonstram que o formato de vacina de mRNA formulado com LNP-III-3 da invenção é adequado para a vacinação contra tumores.
Exemplo 30: Experiência de vacinação com vacina de mRNA de antígenos associados a tumor endógeno formulado
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541/542 com LNP-III-3 em combinação com inibidor de ponto de verificação [0842] Camundongos C57BL/6 foram injetados por via subcutânea (s.c.) com IxlO5 células B16.F10 (linha de células de melanoma de murino) por camundongo no flanco direito no dia 0 da experiência. No dia 6 após o desafio tumoral, os camundongos foram vacinados por via intradérmica com Trp2 mRNA formulado com LNP (Componente A) e PpLuc mRNA formulado com LNP irrelevante (Componente B). Adicionalmente, os inibidores do ponto de verificação imunológico anti-PDl (Clone: RMP1-14) e anti-CTLA4 (clone: 9H10) (ambos BioXCell) foram administrados intraperitonealmente (i.p.), a mediana do tamanho do tumor e as taxas de sobrevivência foram analisados. De modo a excluir um efeito antitumoral devido aos inibidores do ponto de verificação, os camundongos foram injetados com o componente B e um anticorpo de controle (IgG2a de rato, BioXCell).
[0843] Camundongos portadores de tumor tratados com vacina contra mTrp2 e inibidores de ponto de verificação anti-PDl e anti-CTLA4 mostram crescimento tumoral retardado e sobrevivência aumentada em comparação com outros tratamentos com mRNA irrelevante (Componente B) em combinação com inibidores de ponto de verificação antiPDl e anti-CTLA4 ou um anticorpo de controle (ver Figura 79 e 80) .
Tabela S: Componentes, tratamento e diluição de RNA/Anticorpo
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542/542
Tratamento dose de RNA (i.d.) volume Anticorpo (i.p.) Cronograma Camundongos #
A mTrp2 mRNA formulado em LNP Ipg / 25μ1 Anti-PDl + anti-CTLA4 2 x semana 10
B PpLuc mRNA formulado em LNP Ipg / 25μ1 Isótipo 2 x semana 10
C PpLuc mRNA formulado em LNP Ipg / 25μ1 Anti-PDl + anti-CTLA4 2 x semana 10
[0844] Os resultados c emonstram que o formato
de vacina de mRNA formulado com LNP-III-3 da invenção é adequado para a combinação com inibidores de ponto de verificação para terapia antitumoral.

Claims (9)

  1. REIVINDICAÇÕES
    1. Nanoparticula lipídica compreendendo (i) um lipídeo catiônico com a fórmula III:
    R3 ^G3 /N.
    R1 G1 G2 R2 (III) ou um sal, tautômero, pró-fármaco ou estereoisômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:
    L ou L são cada um, independentemente, -0(C=0), -(C=0)0-, -C(=0)-, -0-, -S(0)x-, -S-S-, -C(=O)S-, SC(=0)-,
    -NRaC(=O)-, -C(=O)NRa-, -NRaC (=0) NRa-, -OC(=O)NRaou -NRaC(=O)O-, preferencialmente L1 ou L2 é -0(C=0)- ou
    -(C=0)0-;
    G e G são cada um, independentemente, alquileno C1-C12 não substituído ou alquenileno Ci-Ci2;
    o
    G e alquileno Ci-C24, alquenileno Ci-C24, cicloalquileno C3-C8, ou cicloalquenileno C3-C8;
    Ra é H ou alquila Ci-Ci2;
    R e R são cada um, independentemente, alquila C6-C24 ou alquenila C6-C24;
    R3 é H, OR5, CN, -C(=O)OR4, -OC(=O)R4 ou NR5C (=0) R4;
    R4 é alquila Ci-Ci2;
    R5 é H ou Ci-Ce alquila; e x é 0, 1 ou 2;
    (ii) um composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênica, em que o composto de mRNA
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  2. 2/55 opcionalmente não compreende uma modificação de nucleósideo, em particular não uma modificação de base;
    em que o composto de mRNA está encapsulado na, ou associado à, referida nanopartícuia lipídica.
    2. Nanopartícuia lipídica compreendendo:
    (i) um lipídeo PEG com a fórmula (IV)
    O
    Figure BR112019008481A2_C0001
    (IV) em que R8 e R9 são cada um, independentemente, uma alquila de cadeia linear ou ramificada, saturada ou não saturada, contendo 10 a 30 átomos de carbono, em que a cadeia alquila é opcionalmente interrompida por uma ou mais ligações éster;
    e w tem um valor médio variando de 30 a 60; e (ii) um composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos, em que o composto de mRNA opcionalmente não compreende uma modificação de nucleósideo, em particular não uma modificação de base;
    em que o composto de mRNA está encapsulado na, ou associado à, referida nanopartícuia lipídica.
  3. 3. Nanopartícuia lipídica compreendendo (i) um lipídeo catiônico com a fórmula I:
    Figure BR112019008481A2_C0002
    Petição 870190039457, de 26/04/2019, pág. 567/744
    3/55 ou um sal, tautômero, pró-fármaco ou estereoisômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:
    L1 o e L cada um, independentemente, -0(C=0)_, C=0)0- ou uma ligação dupla de carbono-carbono; Rla e Rlb são, , em cada ocorrência,
    independentemente quer (a) H ou alquila C1-C12, ou (b) Rla é H ou alquila C1-C12, e Rlb em conjunto com o átomo de carbono ao qual está ligado é tomado em conjunto com um Rlb adjacente e o átomo de carbono ao qual está ligado de modo a formar uma ligação dupla carbono-carbono;
    R2a e R2b são, em cada ocorrência, independentemente quer (a) H ou alquila C1-C12, ou (b) R2a é H ou alquila C1-C12, e R2b em conjunto com o átomo de carbono ao qual está ligado é tomado em conjunto com um R2b adjacente e o átomo de carbono ao qual está ligado de modo a formar uma ligação dupla carbono-carbono;
    R3a e R3b são, em cada ocorrência, independentemente quer (a) H ou alquila C1-C12, ou (b) R3a é H ou alquila C1-C12, e R3b em conjunto com o átomo de carbono ao qual está ligado é tomado em conjunto com um R3b adjacente e o átomo de carbono ao qual está ligado de modo a formar uma ligação dupla carbono-carbono;
    R4a e R4b são, em cada ocorrência, independentemente quer (a) H ou alquila C1-C12, ou (b) R4a é H ou alquila C1-C12, e R4b em conjunto com o átomo de carbono ao qual está ligado é tomado em conjunto com um R4b adjacente e o átomo de carbono ao qual está ligado de modo a formar uma ligação dupla carbono-carbono;
    Petição 870190039457, de 26/04/2019, pág. 568/744
  4. 4/55
    R5 e R6 são cada um, independentemente, metila ou cicloalquila;
    R7 é, em cada ocorrência, independentemente H ou alquila C1-C12;
    R8 e R9 são cada um, independentemente, alquila C1-C12; ou R8 e R9 em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados, formam um anel heterocíclico de 5, 6 ou 7 membros compreendendo um átomo de nitrogênio;
    a e d são cada um, independentemente, um número inteiro de 0 a 24;
    b e c são cada um, independentemente, um número inteiro de 1 a 24; e e é 1 ou 2;
    e (ii) um composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos, em que o composto de mRNA opcionalmente não compreende uma modificação de nucleósideo, em particular não uma modificação de base, em que o composto de mRNA está encapsulado na, ou associado à, referida nanoparticula lipidica.
    4. Nanoparticula lipidica compreendendo (i) um lipideo catiônico com a fórmula II:
    Figure BR112019008481A2_C0003
    G\ /G\
    N R7
    G3 .R8
    N
    Petição 870190039457, de 26/04/2019, pág. 569/744
  5. 5/55 ou um sal, tautômero, pró-fármaco ou estereoisômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:
    L e L são cada um, independentemente, -0(C=0)-, -(C=0)0-, -C(=0)-, -0-, -S(0)x-, -S-S-, -C(=O)S-,
    -SC(=O)-, -NRaC(=0)-, -C(=0)NRa-, -NRaC (=0) NRa-, OC(=O)NRa-, -NRaC(=0)0-, ou uma ligação direta;
    G1 é alquileno Ci-C2, -(C=0)-, -0 (C=0) -, -SC(=O)-, -NRaC(=0)- ou uma ligação direta
    G2 é -C(=0)-, -(C=0)0-, -C(=O)S-, -C(=0)NRa- ou uma ligação direta; o
    G e alquileno Ci-Ce;
    Ra é H ou alquila C1-C12;
    Rla e Rlb são, em cada ocorrência, independentemente quer: (a) H ou alquila C1-C12; ou (b) Rla é H ou alquila C1-C12, e Rlb em conjunto com o átomo de carbono ao qual está ligado é tomado em conjunto com um Rlb adjacente e o átomo de carbono ao qual está ligado de modo a formar uma ligação dupla carbono-carbono;
    R2a e R2b são, em cada ocorrência, independentemente quer: (a) H ou alquila C1-C12; ou (b) R2a é H ou alquila C1-C12, e R2b em conjunto com o átomo de carbono ao qual está ligado é tomado em conjunto com um R2b adjacente e o átomo de carbono ao qual está ligado de modo a formar uma ligação dupla carbono-carbono;
    R3a e R3b são, em cada ocorrência, independentemente quer: (a) H ou alquila C1-C12; ou (b) R3a é H ou alquila C1-C12, e R3b em conjunto com o átomo de carbono ao qual está ligado é tomado em conjunto com um R3b
    Petição 870190039457, de 26/04/2019, pág. 570/744
  6. 6/55 adjacente e o átomo de carbono ao qual está ligado de modo a formar uma ligação dupla carbono-carbono;
    R4a e R4b são, em cada ocorrência, independentemente quer: (a) H ou alquila C1-C12; ou (b) R4a é H ou alquila C1-C12, e R4b em conjunto com o átomo de carbono ao qual está ligado é tomado em conjunto com um R4b adjacente e o átomo de carbono ao qual está ligado de modo a formar uma ligação dupla carbono-carbono;
    R5 e R6 são cada um, independentemente, H ou me t i1a;
    R7 é alquila C4-C20;
    R8 e R9 são cada um, independentemente, alquila C1-C12; ou R8 e R9 em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados, formam um anel heterocíclico de 5, 6 ou 7 membros;
    a, b, c e d são cada um, independentemente, um número inteiro de 1 a 24; e x é 0, 1 ou 2;
    e (ii) um composto de mRNA compreendendo uma sequência de mRNA codificando pelo menos um peptídeo ou proteína antigênicos, em que o composto de mRNA opcionalmente não compreende uma modificação de nucleósideo, em particular não uma modificação de base;
    em que o composto de mRNA está encapsulado na, ou associado à, referida nanoparticula lipídica.
    5. Nanoparticula lipídica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 3 ou 4, adicionalmente compreendendo:
    (iii) um lipideo PEG com a fórmula (IV):
    Petição 870190039457, de 26/04/2019, pág. 571/744
  7. 7/55
    Figure BR112019008481A2_C0004
    w
    Rs (IV) em que R8 e R9 são cada um, independentemente, uma alquila de cadeia linear ou ramificada, saturada ou não saturada, contendo 10 a 30 átomos de carbono, em que a cadeia alquila é opcionalmente interrompida por uma ou mais ligações éster;
    e w tem um valor médio variando de 30 a 60.
    6. Nanoparticula lipídica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4 ou 5, em que o lipídeo catiônico é um composto de fórmula III, e em que:
    L e L são cada um, independentemente, -O(C=O)ou (C=0)-0-;
    o
    G e alquileno C1-C24 ou alquenileno C1-C24; e R3 é H ou OR5.
    7. Nanoparticula lipídica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, ou 6, em que o lipídeo catiônico é um composto de fórmula III, e em que:
    L e L são cada um, independentemente, -O(C=O)ou (C=0)-0-; e
    R e R cada um, independentemente, tem uma das seguintes estruturas:
    Figure BR112019008481A2_C0005
    Figure BR112019008481A2_C0006
    Figure BR112019008481A2_C0007
    Petição 870190039457, de 26/04/2019, pág. 572/744
  8. 8/55
    8. Nanoparticula lipídica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6 ou 7, em que o lipídeo catiônico é um composto de fórmula III, e em que R3 é OH.
  9. 9. Nanoparticula lipídica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8, em que o lipídeo catiônico é selecionado a partir das estruturas 1-1 a 1-41, II-l a 11-34 ou III-l a III-36:
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Families Citing this family (212)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR112015018989B1 (pt) 2013-02-22 2023-11-14 Curevac Ag Combinação de vacina/inibidor da via de pd-1, inibidor da via de pd-1 e vacina de rna
AU2014310934B2 (en) 2013-08-21 2019-09-12 CureVac SE Respiratory syncytial virus (RSV) vaccine
BR112016024644A2 (pt) 2014-04-23 2017-10-10 Modernatx Inc vacinas de ácido nucleico
US9738593B2 (en) 2014-06-25 2017-08-22 Acuitas Therapeutics Inc. Lipids and lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids
ES2946969T3 (es) 2014-12-12 2023-07-28 CureVac SE Moléculas de ácido nucleico artificiales para una expresión proteica mejorada
WO2016180430A1 (en) 2015-05-08 2016-11-17 Curevac Ag Method for producing rna
WO2016193206A1 (en) 2015-05-29 2016-12-08 Curevac Ag A method for producing and purifying rna, comprising at least one step of tangential flow filtration
IL283545B2 (en) 2015-06-29 2023-09-01 Acuitas Therapeutics Inc Lipids and nanoparticulate lipid formulations for delivery of nucleic acids
US11364292B2 (en) 2015-07-21 2022-06-21 Modernatx, Inc. CHIKV RNA vaccines
MX2018001511A (es) 2015-08-04 2018-08-01 Univ Duke Polimeros furtivos desordenados de forma intrinseca codificados geneticamente para suministro y metodos para usar los mismos.
PT3350157T (pt) 2015-09-17 2022-03-18 Modernatx Inc Compostos e composições para administração intracelular de agentes terapêuticos
WO2017064146A1 (en) 2015-10-12 2017-04-20 Curevac Ag Automated method for isolation, selection and/or detection of microorganisms or cells comprised in a solution
CA3002912A1 (en) 2015-10-22 2017-04-27 Modernatx, Inc. Nucleic acid vaccines for varicella zoster virus (vzv)
EP4011451A1 (en) 2015-10-22 2022-06-15 ModernaTX, Inc. Metapneumovirus mrna vaccines
CA3002819A1 (en) 2015-10-22 2017-04-27 Modernatx, Inc. Sexually transmitted disease vaccines
EP3364981A4 (en) 2015-10-22 2019-08-07 ModernaTX, Inc. VACCINE AGAINST THE HUMAN CYTOMEGALOVIRUS
EP3364950A4 (en) 2015-10-22 2019-10-23 ModernaTX, Inc. VACCINES AGAINST TROPICAL DISEASES
PL3368507T3 (pl) 2015-10-28 2023-03-27 Acuitas Therapeutics Inc. Nowe preparaty lipidów i nanocząstek lipidowych do dostarczania kwasów nukleinowych
EP3373965A1 (en) 2015-11-09 2018-09-19 CureVac AG Rotavirus vaccines
EP3964200A1 (en) 2015-12-10 2022-03-09 ModernaTX, Inc. Compositions and methods for delivery of therapeutic agents
US11752213B2 (en) 2015-12-21 2023-09-12 Duke University Surfaces having reduced non-specific binding and antigenicity
CN108778308A (zh) 2015-12-22 2018-11-09 库瑞瓦格股份公司 生产rna分子组合物的方法
WO2017109161A1 (en) 2015-12-23 2017-06-29 Curevac Ag Method of rna in vitro transcription using a buffer containing a dicarboxylic acid or tricarboxylic acid or a salt thereof
SG10201913630YA (en) 2016-02-17 2020-03-30 Curevac Ag Zika virus vaccine
EP3423595A1 (en) 2016-03-03 2019-01-09 CureVac AG Rna analysis by total hydrolysis
WO2017210476A1 (en) 2016-06-01 2017-12-07 Duke University Nonfouling biosensors
CA3023174A1 (en) 2016-06-09 2017-12-14 Curevac Ag Hybrid carriers for nucleic acid cargo
JP6980780B2 (ja) 2016-10-21 2021-12-15 モデルナティーエックス， インコーポレイテッド ヒトサイトメガロウイルスワクチン
US10925958B2 (en) 2016-11-11 2021-02-23 Modernatx, Inc. Influenza vaccine
WO2018096179A1 (en) 2016-11-28 2018-05-31 Curevac Ag Method for purifying rna
CN110582304A (zh) 2016-12-08 2019-12-17 库尔维科公司 用于治疗或预防肝脏疾病的rna
WO2018104540A1 (en) 2016-12-08 2018-06-14 Curevac Ag Rnas for wound healing
US11464847B2 (en) 2016-12-23 2022-10-11 Curevac Ag Lassa virus vaccine
US11141476B2 (en) 2016-12-23 2021-10-12 Curevac Ag MERS coronavirus vaccine
US11524066B2 (en) 2016-12-23 2022-12-13 CureVac SE Henipavirus vaccine
US11648200B2 (en) 2017-01-12 2023-05-16 Duke University Genetically encoded lipid-polypeptide hybrid biomaterials that exhibit temperature triggered hierarchical self-assembly
CA3050914A1 (en) * 2017-01-27 2018-08-02 The Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine, Inc. Vaccine compositions of herpesvirus envelope protein combinations to induce immune response
MA52262A (fr) * 2017-03-15 2020-02-19 Modernatx Inc Vaccin à large spectre contre le virus de la grippe
ES2911186T3 (es) 2017-03-15 2022-05-18 Modernatx Inc Formas cristalinas de aminolípidos
US11752206B2 (en) * 2017-03-15 2023-09-12 Modernatx, Inc. Herpes simplex virus vaccine
MA47787A (fr) 2017-03-15 2020-01-22 Modernatx Inc Vaccin contre le virus respiratoire syncytial
US11045540B2 (en) 2017-03-15 2021-06-29 Modernatx, Inc. Varicella zoster virus (VZV) vaccine
US11969506B2 (en) 2017-03-15 2024-04-30 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticle formulation
MA47790A (fr) 2017-03-17 2021-05-05 Modernatx Inc Vaccins à base d'arn contre des maladies zoonotiques
AU2018240515A1 (en) 2017-03-24 2019-08-01 CureVac SE Nucleic acids encoding CRISPR-associated proteins and uses thereof
US11905525B2 (en) 2017-04-05 2024-02-20 Modernatx, Inc. Reduction of elimination of immune responses to non-intravenous, e.g., subcutaneously administered therapeutic proteins
US11357856B2 (en) 2017-04-13 2022-06-14 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for delivery of active agents
CA3061612A1 (en) 2017-04-28 2018-11-01 Acuitas Therapeutics, Inc. Novel carbonyl lipids and lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids
US11554097B2 (en) 2017-05-15 2023-01-17 Duke University Recombinant production of hybrid lipid-biopolymer materials that self-assemble and encapsulate agents
KR102636537B1 (ko) 2017-05-31 2024-02-15 울트라제닉스 파마수티컬 인코포레이티드 글리코겐 축적 질환 유형 iii에 대한 치료제
US11786607B2 (en) 2017-06-15 2023-10-17 Modernatx, Inc. RNA formulations
US11680083B2 (en) 2017-06-30 2023-06-20 Duke University Order and disorder as a design principle for stimuli-responsive biopolymer networks
CN111328287A (zh) 2017-07-04 2020-06-23 库瑞瓦格股份公司 新型核酸分子
KR20200047524A (ko) * 2017-08-10 2020-05-07 이쉥 바이오파마(싱가포르)피티이 리미티드 B형 간염 바이러스 감염을 치료 및/또는 예방하기 위한 조성물 및 이의 용도
CA3073020A1 (en) 2017-08-16 2019-02-21 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for use in lipid nanoparticle formulations
WO2019036000A1 (en) * 2017-08-17 2019-02-21 Acuitas Therapeutics, Inc. LIPIDS FOR USE IN LIPID NANOPARTICLE FORMULATIONS
US11542225B2 (en) 2017-08-17 2023-01-03 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for use in lipid nanoparticle formulations
EP3668520A4 (en) 2017-08-17 2021-05-12 The Trustees Of The University Of Pennsylvania MODIFIED RNA VACCINES CODING FOR HERPES SIMPLEX VIRUS GLYCOPROTEINS AND THEIR USES
US11524932B2 (en) 2017-08-17 2022-12-13 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for use in lipid nanoparticle formulations
EP3668522A4 (en) * 2017-08-18 2021-04-21 Modernatx, Inc. EFFECTIVE RNA-BASED VACCINES
US11602557B2 (en) 2017-08-22 2023-03-14 Cure Vac SE Bunyavirales vaccine
WO2019046809A1 (en) 2017-08-31 2019-03-07 Modernatx, Inc. METHODS OF MANUFACTURING LIPID NANOPARTICLES
US10653767B2 (en) 2017-09-14 2020-05-19 Modernatx, Inc. Zika virus MRNA vaccines
RU2020117848A (ru) 2017-11-08 2021-12-08 Куревак Аг Адаптиция последовательности phk
WO2019115635A1 (en) 2017-12-13 2019-06-20 Curevac Ag Flavivirus vaccine
US11525158B2 (en) 2017-12-21 2022-12-13 CureVac SE Linear double stranded DNA coupled to a single support or a tag and methods for producing said linear double stranded DNA
MA54676A (fr) 2018-01-29 2021-11-17 Modernatx Inc Vaccins à base d'arn contre le vrs
CA3091558A1 (en) * 2018-04-17 2019-10-24 Curevac Ag Novel rsv rna molecules and compositions for vaccination
EP3801467A1 (en) * 2018-05-30 2021-04-14 Translate Bio, Inc. Messenger rna vaccines and uses thereof
BR112020026537A2 (pt) * 2018-06-27 2021-04-06 Medicago Inc. Mutantes de hemaglutinina do vírus influenza
WO2020002525A1 (en) 2018-06-27 2020-01-02 Curevac Ag Novel lassa virus rna molecules and compositions for vaccination
WO2020028806A1 (en) 2018-08-02 2020-02-06 Duke University Dual agonist fusion proteins
EP3836964A1 (en) * 2018-08-15 2021-06-23 University of Florida Research Foundation, Inc. Methods of sensitizing tumors to treatment with immune checkpoint inhibitors
AU2019335055A1 (en) 2018-09-04 2021-03-25 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Compositions and methods for organ specific delivery of nucleic acids
JP7425066B2 (ja) 2018-09-04 2024-01-30 ザ ボード オブ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティー オブ テキサス システム 核酸を臓器特異的送達するための組成物および方法
SG11202101619UA (en) * 2018-09-18 2021-04-29 Univ Gent Therapeutic nanoparticles and methods of use thereof
EP3864163B1 (en) 2018-10-09 2024-03-20 The University of British Columbia Compositions and systems comprising transfection-competent vesicles free of organic-solvents and detergents and methods related thereto
WO2020081938A1 (en) * 2018-10-18 2020-04-23 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for lipid nanoparticle delivery of active agents
EP3866848A1 (en) * 2018-10-19 2021-08-25 Nouscom AG Teleost invariant chain cancer vaccine
WO2020095812A1 (ja) 2018-11-08 2020-05-14 富士フイルム株式会社 積層圧電素子および電気音響変換器
KR102077772B1 (ko) * 2018-11-29 2020-02-17 주식회사 바이오앱 광견병 예방용 백신 조성물 및 이의 제조 방법
WO2020118115A1 (en) 2018-12-06 2020-06-11 Arcturus Therapeutics, Inc. Compositions and methods for treating ornithine transcarbamylase deficiency
EP3897702A2 (en) 2018-12-21 2021-10-27 CureVac AG Rna for malaria vaccines
US11453639B2 (en) * 2019-01-11 2022-09-27 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for lipid nanoparticle delivery of active agents
EP3920950A1 (en) 2019-02-08 2021-12-15 CureVac AG Coding rna administered into the suprachoroidal space in the treatment of ophtalmic diseases
CN113747915A (zh) * 2019-02-21 2021-12-03 森蒂瓦克斯公司 优化的疫苗组合物及其制备方法
EP3956459A4 (en) * 2019-04-15 2023-01-11 Precision Nanosystems Inc NONVIRAL MODIFICATION OF T LYMPHOCYTE GENE EXPRESSION
CN110124019B (zh) * 2019-04-22 2022-09-23 海南医学院 细菌化肿瘤细胞疫苗及其制备方法
CA3142949A1 (en) * 2019-06-14 2020-12-17 Dnalite Therapeutics, Inc. Compositions and methods for biological delivery vehicles
US20220313813A1 (en) 2019-06-18 2022-10-06 Curevac Ag Rotavirus mrna vaccine
US11512314B2 (en) 2019-07-12 2022-11-29 Duke University Amphiphilic polynucleotides
MX2022001870A (es) 2019-08-14 2022-05-30 Curevac Ag Combinaciones y composiciones de arn con propiedades inmunoestimuladoras disminuidas.
AR120080A1 (es) 2019-09-19 2022-02-02 Modernatx Inc Compuestos lipídicos de cola ramificada y composiciones para la administración intracelular de agentes terapéuticos
AU2020352552A1 (en) 2019-09-23 2022-03-17 Omega Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating hepatocyte nuclear factor 4-alpha (HNF4α) gene expression
EP4048807A1 (en) 2019-09-23 2022-08-31 Omega Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating apolipoprotein b (apob) gene expression
MX2022007680A (es) 2019-12-20 2022-09-26 Curevac Ag Nanoparticulas lipidicas para administracion de acidos nucleicos.
EP3886897A1 (en) 2020-02-04 2021-10-06 CureVac AG Coronavirus vaccine
US11241493B2 (en) 2020-02-04 2022-02-08 Curevac Ag Coronavirus vaccine
US11576966B2 (en) 2020-02-04 2023-02-14 CureVac SE Coronavirus vaccine
IL295507A (en) * 2020-02-14 2022-10-01 Etherna Immunotherapies Nv intranasal mrna vaccines
WO2021173965A1 (en) * 2020-02-28 2021-09-02 Massachusetts Institute Of Technology Identification of variable influenza residues and uses thereof
CN113151312B (zh) * 2020-03-02 2022-12-09 中国科学院微生物研究所 新型冠状病毒SARS-CoV-2 mRNA疫苗及其制备方法和应用
JP2023519173A (ja) 2020-03-09 2023-05-10 アークトゥラス・セラピューティクス・インコーポレイテッド 免疫応答を誘導するための組成物及び方法
CA3173528A1 (en) 2020-03-11 2021-09-16 Omega Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating forkhead box p3 (foxp3) gene expression
TW202204622A (zh) 2020-04-09 2022-02-01 大陸商蘇州艾博生物科技有限公司 針對冠狀病毒之核酸疫苗
WO2021205077A1 (en) 2020-04-09 2021-10-14 Finncure Oy Mimetic nanoparticles for preventing the spreading and lowering the infection rate of novel coronaviruses
CN114206827B (zh) 2020-04-09 2023-05-23 苏州艾博生物科技有限公司 脂质纳米颗粒组合物
GB2594365B (en) 2020-04-22 2023-07-05 BioNTech SE Coronavirus vaccine
KR20230021649A (ko) * 2020-04-22 2023-02-14 메디카고 인코포레이티드 시알산과의 상호작용이 감소된 변형된 인플루엔자 헤마글루티닌을 포함하는 상부구조
EP3993828A1 (en) * 2020-05-29 2022-05-11 CureVac AG Nucleic acid based combination vaccines
BR112022024932A2 (pt) * 2020-06-19 2022-12-27 Intervet Int Bv Vacina contra vírus da influenza a suína compreendendo um constructo de ácido nucleico que possui uma ordem específica de genes
WO2021255222A1 (en) * 2020-06-19 2021-12-23 Intervet International B.V. Swine influenza a virus vaccine comprising two distinct rna replicon particles
AU2021296914A1 (en) * 2020-06-26 2023-01-19 Carisma Therapeutics Inc. mRNA transfection of immune cells
CN115803333A (zh) * 2020-07-02 2023-03-14 生命技术公司 三核苷酸帽类似物、其制备和用途
JP2023535365A (ja) 2020-07-16 2023-08-17 アクイタス セラピューティクス インコーポレイテッド 脂質ナノ粒子に使用するためのカチオン性脂質
EP4172194A1 (en) 2020-07-31 2023-05-03 CureVac SE Nucleic acid encoded antibody mixtures
CN114073762B (zh) * 2020-08-12 2023-07-21 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 一种含有Omp19和VirB8蛋白的布鲁氏菌病双组分疫苗
CN114073677B (zh) * 2020-08-20 2023-06-09 深圳深信生物科技有限公司 一种脂质纳米颗粒
US11406703B2 (en) 2020-08-25 2022-08-09 Modernatx, Inc. Human cytomegalovirus vaccine
EP4157344A2 (en) 2020-08-31 2023-04-05 CureVac SE Multivalent nucleic acid based coronavirus vaccines
TW202233232A (zh) * 2020-11-06 2022-09-01 法商賽諾菲公司 遞送mRNA疫苗的脂質奈米顆粒
EP4243787A1 (en) 2020-11-16 2023-09-20 BioNTech SE Pharmaceutical compositions comprising particles and mrna and methods for preparing and storing the same
TW202237148A (zh) 2020-11-16 2022-10-01 德商拜恩迪克公司 包含rna之lnp組合物以及製備、儲存及使用彼之方法
US20240041785A1 (en) * 2020-11-16 2024-02-08 BioNTech SE Compositions and methods for stabilization of lipid nanoparticle mrna vaccines
WO2022218503A1 (en) 2021-04-12 2022-10-20 BioNTech SE Lnp compositions comprising rna and methods for preparing, storing and using the same
AU2021385572A1 (en) 2020-11-25 2023-06-22 Akagera Medicines, Inc. Lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids, and related methods of use
EP4034548A4 (en) * 2020-11-30 2023-06-28 Guangzhou Argorna Biopharmaceuticals Co., Ltd. Coronavirus vaccines and uses thereof
CN112480217B (zh) * 2020-11-30 2022-04-08 广州阿格纳生物医药制造有限公司 基于SARS-CoV-2的S抗原蛋白的疫苗和组合物
CA3171051A1 (en) 2020-12-22 2022-06-30 Curevac Ag Pharmaceutical composition comprising lipid-based carriers encapsulating rna for multidose administration
WO2022137133A1 (en) 2020-12-22 2022-06-30 Curevac Ag Rna vaccine against sars-cov-2 variants
KR20230164648A (ko) 2020-12-22 2023-12-04 큐어백 에스이 SARS-CoV-2 변이체에 대한 RNA 백신
CN112741078B (zh) * 2020-12-24 2022-03-25 山东省海洋科学研究院(青岛国家海洋科学研究中心) 一种大泷六线鱼精子生产性冷冻保存方法
US20230000970A1 (en) * 2021-01-11 2023-01-05 Modernatx, Inc. Seasonal rna influenza virus vaccines
WO2022155195A1 (en) * 2021-01-12 2022-07-21 Peranteau William Ionizable lipid nanoparticles for in utero mrna delivery
WO2022162027A2 (en) 2021-01-27 2022-08-04 Curevac Ag Method of reducing the immunostimulatory properties of in vitro transcribed rna
CN113144186B (zh) * 2021-02-09 2023-09-29 中国医学科学院医学生物学研究所 一种水痘-带状疱疹疫苗组合物及其制备方法和应用
IL305644A (en) * 2021-03-05 2023-11-01 Modernatx Inc VLP enteroviral vaccines
AU2022245247A1 (en) * 2021-03-24 2023-10-05 Modernatx, Inc. Branched tail lipid compounds and compositions for intracellular delivery of therapeutic agents
WO2022200574A1 (en) 2021-03-26 2022-09-29 Glaxosmithkline Biologicals Sa Immunogenic compositions
CA3171429A1 (en) 2021-03-31 2022-09-30 Alexander SCHWENGER Syringes containing pharmaceutical compositions comprising rna
CN115197079A (zh) * 2021-04-08 2022-10-18 厦门赛诺邦格生物科技股份有限公司 一种聚乙二醇化脂质及其修饰的脂质体、含该脂质体的药物组合物及其制剂和应用
WO2022215036A1 (en) 2021-04-08 2022-10-13 Vaxthera Sas Coronavirus vaccine comprising a mosaic protein
WO2022218891A2 (en) 2021-04-12 2022-10-20 BioNTech SE Rna compositions comprising a buffer substance and methods for preparing, storing and using the same
AU2022258335A1 (en) * 2021-04-13 2023-11-23 Modernatx, Inc. Respiratory virus combination vaccines
CN117015511A (zh) 2021-04-22 2023-11-07 创技公司株式会社 脂质纳米颗粒的制备方法及其制备装置
WO2022225368A1 (ko) 2021-04-22 2022-10-27 (주)인벤티지랩 지질 나노입자의 제조 방법 및 이의 제조 장치
EP4329775A1 (en) * 2021-04-30 2024-03-06 Trustees Of Tufts College Lipidoid nanoparticles for the treatment of diseases and disorders
WO2022233880A1 (en) 2021-05-03 2022-11-10 Curevac Ag Improved nucleic acid sequence for cell type specific expression
CN113354742A (zh) * 2021-05-10 2021-09-07 重庆市畜牧科学院 一种布鲁氏杆菌基因工程亚单位疫苗及其制备方法和应用
JPWO2022244825A1 (pt) 2021-05-19 2022-11-24
WO2022245888A1 (en) * 2021-05-19 2022-11-24 Modernatx, Inc. Seasonal flu rna vaccines and methods of use
CN114149337B (zh) 2021-07-07 2022-04-29 天津键凯科技有限公司 一种用于核酸递送的新型可电离脂质及其lnp组合物
EP4367242A2 (en) 2021-07-07 2024-05-15 Omega Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating secreted frizzled receptor protein 1 (sfrp1) gene expression
CN113264842B (zh) 2021-07-21 2022-03-01 苏州科锐迈德生物医药科技有限公司 一种脂质化合物及包含其的脂质载体、核酸脂质纳米粒组合物和药物制剂
WO2023001286A1 (zh) 2021-07-23 2023-01-26 天津键凯科技有限公司 一种多元甘醇修饰的脂质化合物及其制备方法和应用
CA3171750A1 (en) 2021-07-30 2023-02-02 Tim SONNTAG Mrnas for treatment or prophylaxis of liver diseases
CN113577258B (zh) * 2021-07-31 2024-04-16 山东兴瑞生物科技有限公司 一种双靶点mRNA疫苗及其制备方法
WO2023031855A1 (en) 2021-09-03 2023-03-09 Glaxosmithkline Biologicals Sa Substitution of nucleotide bases in self-amplifying messenger ribonucleic acids
CA3230031A1 (en) 2021-09-03 2023-03-09 Patrick Baumhof Novel lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids
AU2022336664A1 (en) 2021-09-03 2024-01-18 CureVac SE Novel lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids comprising phosphatidylserine
WO2023053017A2 (en) * 2021-09-28 2023-04-06 Seqirus Inc. Ionizable cationic compounds for messenger rna delivery
WO2023057596A1 (en) * 2021-10-06 2023-04-13 Leon-Nanodrugs Gmbh Method for preparing lipid nanoparticles
WO2023056912A1 (en) * 2021-10-08 2023-04-13 Suzhou Abogen Biosciences Co., Ltd. Nucleic acid vaccines for vzv
WO2023061460A1 (zh) * 2021-10-15 2023-04-20 厦门赛诺邦格生物科技股份有限公司 含氮的阳离子脂质及其应用
WO2023069498A1 (en) 2021-10-22 2023-04-27 Senda Biosciences, Inc. Mrna vaccine composition
WO2023073228A1 (en) 2021-10-29 2023-05-04 CureVac SE Improved circular rna for expressing therapeutic proteins
KR20230061895A (ko) * 2021-10-29 2023-05-09 주식회사 아이큐어비앤피 지질 나노입자 및 세포 투과성을 갖는 신규 펩타이드의 복합체
WO2023077170A1 (en) * 2021-11-01 2023-05-04 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding integrin beta-6 and methods of use thereof
CA3237139A1 (en) * 2021-11-05 2023-05-11 Sanofi Hybrid multivalent influenza vaccines comprising hemagglutinin and neuraminidase and methods of using the same
WO2023096858A1 (en) 2021-11-23 2023-06-01 Senda Biosciences, Inc. A bacteria-derived lipid composition and use thereof
CN114099546A (zh) * 2021-12-06 2022-03-01 武汉汉密顿生物科技股份有限公司 一种基因修饰的人脐带间充质干细胞制剂在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用
WO2023122080A1 (en) 2021-12-20 2023-06-29 Senda Biosciences, Inc. Compositions comprising mrna and lipid reconstructed plant messenger packs
CN114196556B (zh) * 2021-12-31 2023-08-01 重庆大学 一种高毒力蝗绿僵菌菌株及其构建方法
CN114957027B (zh) * 2022-01-13 2023-05-19 北京悦康科创医药科技股份有限公司 一种阳离子脂质化合物、包含其的组合物及用途
WO2023136689A1 (ko) * 2022-01-17 2023-07-20 에스티팜 주식회사 생분해성 에스터 결합을 포함하는 이온화 가능한 지질 및 이를 포함하는 지질나노입자
WO2023144193A1 (en) 2022-01-25 2023-08-03 CureVac SE Mrnas for treatment of hereditary tyrosinemia type i
WO2023147090A1 (en) 2022-01-27 2023-08-03 BioNTech SE Pharmaceutical compositions for delivery of herpes simplex virus antigens and related methods
WO2023144330A1 (en) 2022-01-28 2023-08-03 CureVac SE Nucleic acid encoded transcription factor inhibitors
WO2023143600A1 (zh) * 2022-01-30 2023-08-03 康希诺生物股份公司 一种用于核酸递送的新型可电离脂质及其lnp组合物和疫苗
WO2023148303A1 (de) 2022-02-02 2023-08-10 Mslsolutions Gmbh Verfahren zur medikament- und impfstoffherstellung
DE102022115653A1 (de) 2022-02-02 2023-08-03 Mslsolutions Gmbh Verfahren zur Medikament- und Impfstoffherstellung
WO2023154451A1 (en) 2022-02-10 2023-08-17 Christiana Care Gene Editing Institute, Inc. Methods for lipid nanoparticle delivery of crispr/cas system
CN114921481B (zh) * 2022-02-25 2024-01-30 上海赛伦生物技术股份有限公司 一种狂犬病病毒修饰性mRNA疫苗及其制备方法
WO2023165681A1 (en) 2022-03-01 2023-09-07 BioNTech SE Rna lipid nanoparticles (lnps) comprising a polyoxazoline and/or polyoxazine polymer
WO2023172547A1 (en) * 2022-03-11 2023-09-14 National Health Research Institutes Nucleic acid-lipid nanoparticle and method using the same
CN114848808B (zh) * 2022-03-24 2023-04-25 四川大学 基于阳离子脂多肽及细胞因子的免疫增强剂及制法、应用
WO2023193892A1 (en) 2022-04-05 2023-10-12 BioNTech SE Nucleic acid compositions comprising an inorganic polyphosphate and methods for preparing, storing and using the same
WO2023196914A1 (en) * 2022-04-08 2023-10-12 Modernatx, Inc. Influenza nucleic acid compositions and uses thereof
WO2023201270A2 (en) 2022-04-13 2023-10-19 Caribou Biosciences, Inc. Therapeutic applications of crispr type v systems
WO2023201432A1 (en) * 2022-04-20 2023-10-26 Sunshine Biopharma Inc. Composition for the inhibition of nrf2 and uses thereof in cancer therapy
WO2023230295A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 BioNTech SE Rna compositions for delivery of monkeypox antigens and related methods
WO2023227608A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Glaxosmithkline Biologicals Sa Nucleic acid based vaccine encoding an escherichia coli fimh antigenic polypeptide
WO2023242817A2 (en) 2022-06-18 2023-12-21 Glaxosmithkline Biologicals Sa Recombinant rna molecules comprising untranslated regions or segments encoding spike protein from the omicron strain of severe acute respiratory coronavirus-2
WO2023250427A2 (en) * 2022-06-22 2023-12-28 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Formulations for modulating myc expression
CN114989182B (zh) * 2022-06-23 2023-06-23 尧唐(上海)生物科技有限公司 脂质化合物、包含其的组合物及应用
US11878055B1 (en) 2022-06-26 2024-01-23 BioNTech SE Coronavirus vaccine
WO2024011033A1 (en) 2022-07-07 2024-01-11 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Immunogens and methods for inducing an immune response
CN115094573B (zh) * 2022-07-18 2024-03-22 南通大学 一种抗菌纳米敷料及其制备方法
WO2024028325A1 (en) 2022-08-01 2024-02-08 BioNTech SE Nucleic acid compositions comprising amphiphilic oligo ethylene glycol (oeg)-conjugated compounds and methods of using such compounds and compositions
CN114989027B (zh) * 2022-08-03 2023-01-31 深圳市瑞吉生物科技有限公司 用于递送核酸的阳离子脂质化合物和组合物及用途
WO2024031051A1 (en) 2022-08-05 2024-02-08 Life Technologies Corporation Lipids for nucleic acid delivery
CN116769786A (zh) * 2022-09-07 2023-09-19 贵州大学 飞蝗气味结合蛋白LmOBP11基因及其编码蛋白与应用
WO2024054882A1 (en) * 2022-09-09 2024-03-14 Spark Therapeutics, Inc. Enhancing non-viral dna delivery and expression
WO2024063789A1 (en) 2022-09-23 2024-03-28 BioNTech SE Compositions for delivery of malaria antigens and related methods
WO2024064931A1 (en) 2022-09-23 2024-03-28 BioNTech SE Compositions for delivery of liver stage antigens and related methods
WO2024063788A1 (en) 2022-09-23 2024-03-28 BioNTech SE Compositions for delivery of malaria antigens and related methods
WO2024064934A1 (en) 2022-09-23 2024-03-28 BioNTech SE Compositions for delivery of plasmodium csp antigens and related methods
WO2024068545A1 (en) 2022-09-26 2024-04-04 Glaxosmithkline Biologicals Sa Influenza virus vaccines
WO2024089229A1 (en) 2022-10-28 2024-05-02 CureVac SE Improved formulations comprising lipid-based carriers encapsulating rna
WO2024089638A1 (en) 2022-10-28 2024-05-02 Glaxosmithkline Biologicals Sa Nucleic acid based vaccine
CN116785424B (zh) * 2023-08-17 2023-11-03 山东兴瑞生物科技有限公司 一种mRNA多价流感疫苗及其制备方法
CN117511969B (zh) * 2024-01-04 2024-03-19 华南农业大学 一种mRNA、制备方法、用途和疫苗

Family Cites Families (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5821332A (en) 1993-11-03 1998-10-13 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Receptor on the surface of activated CD4+ T-cells: ACT-4
US5759546A (en) 1994-02-04 1998-06-02 Weinberg; Andrew D. Treatment of CD4 T-cell mediated conditions
US6242566B1 (en) 1994-02-10 2001-06-05 Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Ligand (ACT-4-L) to a receptor on the surface of activated CD4+ T-cells
EP1541690A3 (en) 1999-09-09 2005-07-27 CureVac GmbH Transfer of mRNA using polycationic compounds
EP2305699B1 (de) 2001-06-05 2014-08-13 CureVac GmbH Stabilisierte mRNA mit erhöhtem G/C-Gehalt und optimierter Codon Usage für die Impfung gegen Schlafkrankheit, Leishmaniose und Toxoplasmose
US7074596B2 (en) 2002-03-25 2006-07-11 Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College Synthesis and use of anti-reverse mRNA cap analogues
EP2476756A1 (en) * 2005-06-15 2012-07-18 Massachusetts Institute of Technology Amine-containing lipids and uses thereof
CA2659301A1 (en) 2006-07-28 2008-02-07 Applera Corporation Dinucleotide mrna cap analogs
AU2007280690C1 (en) 2006-07-31 2012-08-23 Curevac Gmbh Nucleic acid of formula (I): GIXmGn, or (II): CIXmCn, in particular as an immune-stimulating agent/adjuvant
DE102006061015A1 (de) 2006-12-22 2008-06-26 Curevac Gmbh Verfahren zur Reinigung von RNA im präparativen Maßstab mittels HPLC
DE102007001370A1 (de) 2007-01-09 2008-07-10 Curevac Gmbh RNA-kodierte Antikörper
CN104072561B (zh) 2007-06-19 2017-12-22 路易斯安那州州立大学及农业机械学院管理委员会 信使rna帽的抗‑反向硫代磷酸类似物的合成和用途
EP2548960B1 (en) 2008-01-31 2018-01-31 CureVac AG Nucleic acids comprising formula (nugixmgnv)a and derivatives thereof as an immunostimulating agents/adjuvant
PL215513B1 (pl) 2008-06-06 2013-12-31 Univ Warszawski Nowe boranofosforanowe analogi dinukleotydów, ich zastosowanie, czasteczka RNA, sposób otrzymywania RNA oraz sposób otrzymywania peptydów lub bialka
WO2010037408A1 (en) 2008-09-30 2010-04-08 Curevac Gmbh Composition comprising a complexed (m)rna and a naked mrna for providing or enhancing an immunostimulatory response in a mammal and uses thereof
EP2281579A1 (en) 2009-08-05 2011-02-09 BioNTech AG Vaccine composition comprising 5'-Cap modified RNA
WO2011140627A1 (en) 2009-11-04 2011-11-17 The University Of British Columbia Nucleic acid-containing lipid particles and related methods
WO2011143230A1 (en) * 2010-05-10 2011-11-17 Alnylam Pharmaceuticals Methods and compositions for delivery of active agents
US20130323269A1 (en) 2010-07-30 2013-12-05 Muthiah Manoharan Methods and compositions for delivery of active agents
WO2012019630A1 (en) 2010-08-13 2012-02-16 Curevac Gmbh Nucleic acid comprising or coding for a histone stem-loop and a poly(a) sequence or a polyadenylation signal for increasing the expression of an encoded protein
EP2910572B1 (en) 2010-11-11 2017-09-06 Versitech Limited Soluble pd-1 variants, fusion constructs, and uses thereof
WO2012116715A1 (en) 2011-03-02 2012-09-07 Curevac Gmbh Vaccination in newborns and infants
WO2012116714A1 (en) 2011-03-02 2012-09-07 Curevac Gmbh Vaccination in elderly patients
US8969545B2 (en) 2011-10-18 2015-03-03 Life Technologies Corporation Alkynyl-derivatized cap analogs, preparation and uses thereof
US20140308304A1 (en) * 2011-12-07 2014-10-16 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipids for the delivery of active agents
WO2013143555A1 (en) * 2012-03-26 2013-10-03 Biontech Ag Rna formulation for immunotherapy
CN108929880A (zh) 2012-03-27 2018-12-04 库瑞瓦格股份公司 包含5′toputr的人工核酸分子
WO2014028487A1 (en) * 2012-08-13 2014-02-20 Massachusetts Institute Of Technology Amine-containing lipidoids and uses thereof
BR112015018989B1 (pt) 2013-02-22 2023-11-14 Curevac Ag Combinação de vacina/inibidor da via de pd-1, inibidor da via de pd-1 e vacina de rna
BR112016001192A2 (pt) 2013-08-21 2017-08-29 Curevac Ag Vacina contra a raiva
BR112016024644A2 (pt) * 2014-04-23 2017-10-10 Modernatx Inc vacinas de ácido nucleico
US9738593B2 (en) 2014-06-25 2017-08-22 Acuitas Therapeutics Inc. Lipids and lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids
EP3233113A1 (en) 2014-12-16 2017-10-25 CureVac AG Ebolavirus and marburgvirus vaccines
JP2018526321A (ja) * 2015-04-27 2018-09-13 ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア 適応免疫応答を誘導するためのヌクレオシド修飾ｒｎａ
WO2016180430A1 (en) 2015-05-08 2016-11-17 Curevac Ag Method for producing rna
IL283545B2 (en) 2015-06-29 2023-09-01 Acuitas Therapeutics Inc Lipids and nanoparticulate lipid formulations for delivery of nucleic acids
PT3350157T (pt) * 2015-09-17 2022-03-18 Modernatx Inc Compostos e composições para administração intracelular de agentes terapêuticos
PL3368507T3 (pl) 2015-10-28 2023-03-27 Acuitas Therapeutics Inc. Nowe preparaty lipidów i nanocząstek lipidowych do dostarczania kwasów nukleinowych

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AU2022235588A1 (en) 2023-03-02

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