WO2024106505A1 - 豚臓器又はその由来物を含む移植材の製造方法 - Google Patents

豚臓器又はその由来物を含む移植材の製造方法 Download PDF

Info

Publication number
WO2024106505A1
WO2024106505A1 PCT/JP2023/041257 JP2023041257W WO2024106505A1 WO 2024106505 A1 WO2024106505 A1 WO 2024106505A1 JP 2023041257 W JP2023041257 W JP 2023041257W WO 2024106505 A1 WO2024106505 A1 WO 2024106505A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
isolator
environment
piglet
virus
organ
Prior art date
Application number
PCT/JP2023/041257
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
比呂志 長嶋
和明 中野
慎一 松本
Original Assignee
株式会社ポル・メド・テック
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 株式会社ポル・メド・テック filed Critical 株式会社ポル・メド・テック
Publication of WO2024106505A1 publication Critical patent/WO2024106505A1/ja

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues

Definitions

  • the present invention relates to a method for producing transplant materials containing pig organs or their derivatives suitable for medical purposes such as organ transplantation.
  • pigs with a hygienic level suitable for medical use are essential.
  • the hygienic level of pigs used in xenotransplantation must be designated pathogen free (DPF) (Non-Patent Documents 1-3).
  • the present invention was made in consideration of the problems with the conventional technology, and aims to provide a method for producing transplant materials that can obtain DPF pig organs from sows raised in a non-DPF environment.
  • the present inventors have found that when fetuses or piglets are born, infection from sows to fetuses or piglets does not occur except through placental infection, and that by removing fetuses or piglets from the uterus in a sterile environment in an isolator and extracting organs from the adult pigs in which the fetuses, piglets, or piglets were born, DPF pig organs can be obtained from sows raised in a non-DPF environment.
  • the present invention has been completed based on the above findings. That is, the present invention is as follows.
  • ⁇ 1> Removing the uterus from sows raised in a non-DPF environment, storing the removed uterus in a sterile environment in an isolator after decontamination processing; Removal of the fetus or piglet from the uterus is carried out in a sterile environment in an isolator; A method for producing a transplant material containing a pig organ or a product derived therefrom, comprising optionally resuscitating and raising the fetus or piglet, and carrying out the resuscitation and raising in a sterile environment in an isolator, and removing an organ from the fetus, piglet, or adult pig from which the piglet was raised, wherein the removed organ is DPF.
  • ⁇ 2> The method according to ⁇ 1>, wherein the non-DPF environment is a specific pathogen free (SPF) environment.
  • SPF pathogen free
  • ⁇ 3> The method according to ⁇ 1>, wherein the removal of the organ is carried out while the organ is inflated by injecting a physiologically acceptable liquid into the piglet's body.
  • ⁇ 4> The method according to ⁇ 1>, wherein the removal of the uterus is performed after anesthetizing the sow, and the removal of the uterus is completed within 25 minutes after the initiation of anesthesia.
  • ⁇ 5> The method according to ⁇ 4>, wherein the anesthesia is inhalation anesthesia.
  • ⁇ 6> The method according to ⁇ 1>, wherein the sow is negative for infection by a transplacental infectious pathogen and is positive or negative for infection by other pathogens.
  • ⁇ 7> The removal and resuscitation, the rearing, and the extraction are each carried out in a sterile environment in a separate isolator; The method according to ⁇ 1>, wherein piglets are moved between isolators through a sterile environment space within a sleeve connecting the isolators.
  • ⁇ 8> The method according to ⁇ 7>, wherein there are two or more isolators for rearing, and the isolators for rearing are stacked in the height direction.
  • a method for producing a transplant material can be provided that enables obtaining DPF pig organs from sows raised in a non-DPF environment. Furthermore, according to the present invention, since it is not necessary to raise sows within the DPF facility, mass production requires only the addition of an isolator, and transplant materials containing DPF pig organs or their derivatives can be mass-produced at low cost.
  • FIG. 1 is a diagram showing an outline of the process of removing the uterus from the sow, the decontamination treatment of the removed uterus, the removal of the fetus or piglet, and the isolator for removing the piglet in the production method of the present invention.
  • FIG. 1 is a diagram showing an outline of the rearing of fetuses or piglets and an isolator for rearing in the production method of the present invention.
  • FIG. 1 is a diagram showing an outline of an organ extraction isolator for extracting organs from fetuses, piglets, or adult pigs from which piglets have grown in the production method of the present invention.
  • FIG. 1 is a diagram showing an outline of the process of removing the uterus from the sow, the decontamination treatment of the removed uterus, the removal of the fetus or piglet, and the isolator for removing the piglet in the production method of the present invention.
  • FIG. 1 is a diagram showing an outline of an isolator for raising adult pigs.
  • FIG. 1 is a schematic diagram showing an embodiment in which two or more rearing isolators are stacked and housed in the vertical direction via racks (shelves).
  • FIG. 1 shows the correlation between the time required from the start of anesthesia to hysterectomy and the resuscitation rate of the removed fetuses or piglets.
  • the method for producing a transplant material containing a pig organ or a product derived therefrom according to the present invention comprises the steps of: removing the uterus from a sow raised in an environment that is not free of designated pathogens; The removed uterus is decontaminated and then housed in a sterile environment in an isolator.
  • the removal of the fetus or piglet from the uterus is carried out in a sterile environment in an isolator;
  • resuscitating and rearing the fetus or piglet and carrying out the resuscitation and rearing in a sterile environment in an isolator; and removing an organ from the fetus, piglet, or adult pig from which the piglet was born, the removed organ being a DPF.
  • infection from the mother pig to the fetus or piglet does not occur except through placental infection.
  • a fetus or piglet is removed from the uterus of a mother pig raised in a non-DPF environment in a sterile environment inside an isolator, and an organ is extracted from the adult pig into which the fetus, piglet, or piglet was raised, thereby providing a production method for a transplant material that can obtain a DPF pig organ or a product derived therefrom.
  • the designated pathogens in Japan include the following: [Viruses]: Porcine parvovirus, porcine herpesvirus, African swine fever virus, swine pox virus, porcine enterovirus, swine vesicular disease virus, swine vesicular rash virus , vesicular stomatitis virus, hog cholera virus, Japanese encephalitis virus , porcine transmissible gastroenteritis virus, swine influenza virus , foot and mouth disease virus, encephalomyocarditis virus, rabies virus , porcine adenovirus, astrovirus, Getah virus , porcine reproductive and respiratory syndrome virus, porcine epidemic diarrhea virus Russ, Reovirus, Porcine Cytomegalovirus , Porcine Hemagglutinating Encephalomyelitis, Porcine Respiratory Coronavirus, Porcine Rubulavirus, Calicivirus, Porcine Lymphotropic Herpesvirus, Porcine Hepatitis E Virus
  • Viruses various adenoviruses, encephalomyocarditis virus, influenza virus (pig, bird, human), lymphocytic chorionitis virus (LCMV), Nipah virus (Hendra-like), Menangle virus, porcine circovirus, porcine cytomegalovirus (PCMV), porcine endogenous retrovirus (PERV), porcine hepatitis E virus, porcine lymphotropic herpesvirus (PLHV), porcine parvovirus (PPV), porcine reproductive and respiratory syndrome virus, pseudorabies virus, rabies virus, rotavirus, torque teno virus [Bacteria]: various Actinobacillus (e.g., Klebsiella pneumoniae), Bordetella bronchiseptica, Brucella suis, various Camp
  • the above designated pathogens in the United States include the following (N Engl J Med 2022 387 35-44 Genetically Modified Porcine-to-Human Cardiac Xenotransplantation).
  • the pathogens exemplified above as designated pathogens of the WHO may or may not be applied as the above designated pathogens in the United States.
  • Viruses Hepatitis E virus, gamma herpes virus, influenza A virus, porcine cytomegalovirus, porcine circovirus type 2, porcine circovirus type 3, porcine epidemic diarrhea virus (S gene), porcine deltacoronavirus, porcine transmissible gastroenteritis virus, porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV), porcine endogenous retrovirus A, porcine endogenous retrovirus B, porcine endogenous retrovirus C [Bacteria]: Mycoplasma hyopneumoniae
  • the above designated pathogens in the EP include the following (REPORT ON THE STATE OF THE ART IN THE FIELD OF XENOTRANSPLANTATION France, 21 February 2003 CDBI/CDSP-XENO (2003) 1).
  • Viruses African swine fever virus (African swine fever virus), border disease virus, Borna virus, bovine viral diarrhea virus, swine fever virus, eastern equine encephalitis virus, encephalomyocarditis virus, foot-and-mouth disease virus, hemagglutinating encephalomyelitis virus, hantavirus, human adenovirus, parainfluenza virus, human rhinovirus, influenza A (H1N1 and H3N2), Japanese encephalitis virus, lymphocytic chorionitis virus, murine parainfluenza virus (Sendai), Nipah virus, other human influenza viruses, porcine circovirus, porcine cytomegalovirus, porcine endogenous retrovirus ( PERV
  • Viruses Adenovirus (pig), swine fever virus, encephalomyocarditis virus, foot-and-mouth disease virus, human influenza virus, Japanese encephalitis virus, porcine circovirus type 2, porcine cytomegalovirus, porcine gamma herpesvirus, porcine influenza virus, porcine parvovirus, porcine reproductive and respiratory syndrome virus, porcine transmissible gastroenteritis virus, pseudorabies virus, rabies virus, rotavirus, swine vesicular disease virus [Bacteria]: Actinobacillus pleuropneumoniae, Borrelia bronchiseptica, Brucella genus, Leptospira genus, Mycobacterium avium-intracellulare complex (MAC), Mycobacterium bovis, Mycobacterium tuberculosis, Mycoplasma hyopneumoniae, Pasteurella multocida, Salmonella typhi, Serpulina hyodysenteria
  • the isolator 1 includes a housing 2 having a structure capable of creating a space isolated from the outside world with the inside being made a sterile environment in order to prevent contamination from the outside world (outside the isolator 1).
  • isolated refers to the state in which, when there are two spaces, microorganisms such as viruses and bacteria, visible substances, and non-volatile chemical substances cannot travel between one space and the other. Isolation can be performed for any space (for example, the outside world).
  • the material of the housing 2 is not particularly limited, but examples thereof include plastics (soft plastics (soft polyvinyl chloride, etc.), hard plastics), and metals (for example, stainless steel, iron, etc.).
  • the isolator 1 may have an intake section 3 equipped with a filter described later for feeding in sterile air (for example, sterile air from which microorganisms, viruses, etc. have been removed by passing through a filter described later), an exhaust section 4 for feeding out internal air, and one or more opening/closing sections 5 (preferably two or more opening/closing sections) that can be opened and closed for loading and unloading.
  • sterile air for example, sterile air from which microorganisms, viruses, etc. have been removed by passing through a filter described later
  • an exhaust section 4 for feeding out internal air
  • one or more opening/closing sections 5 preferably two or more opening/closing sections
  • airtightness can be defined as a state or property in which, when there is a partitioned space, gas cannot pass between the space (inside the isolator) and the outside of the space (outside the isolator).
  • the space referred to here is not limited to the internal space of one isolator, but also includes a state or property in which gas cannot pass between the internal spaces of the isolators connected together (for example, via the opening/closing portion 5 and the detachable sleeve 7) and the internal spaces of the isolators communicate with each other, as described later, and the connected internal spaces.
  • the airtightness can be confirmed by, for example, checking that there is no air leakage when continuously measured using a multi-environment measuring device (testo-435).
  • the isolator may have an intake section 3 equipped with a filter described below for feeding in sterile air (for example, sterile air from which microorganisms, viruses, etc. have been removed through a filter described below), and an exhaust section 4 for feeding out internal air.
  • sterile air for example, sterile air from which microorganisms, viruses, etc. have been removed through a filter described below
  • exhaust section 4 for feeding out internal air. This allows a sterile environment to be maintained within the isolator.
  • the term "filter” refers to a filter that does not allow pathogens (e.g., microorganisms such as bacteria and viruses, preferably designated pathogens), dust, etc., but allows only gas to pass through.
  • pathogens e.g., microorganisms such as bacteria and viruses, preferably designated pathogens
  • filters include HEPA filters (High Efficiency Particulate Air), ULPA (Ultra Low Penetration Air) filters, and highly breathable dust-removing filters (Mitsubishi Paper's EP series), and the HEPA filters may be of either a separator type or a non-separator type.
  • HEPA filters or ULPA filters are more preferable.
  • the intake section 3 and the exhaust section 4 may be simply circular openings, or may have tubes connected to them.
  • the intake section 3 and the exhaust section 4 may also be provided with valves. It is preferable that the intake section 3 and the exhaust section 4 have a structure that allows them to be airtightly connected to the housing 2.
  • Valves are attached to the intake section 3 and the exhaust section 4 as necessary, and provide a function of regulating the inflow and outflow of gas, etc.
  • the term "valve” refers to a device that controls the inflow and outflow or flow direction of gas or liquid flowing through a pipe or the like. The valve can provide a function of enabling the inside of the isolator 1 to maintain airtightness against the outside world.
  • Examples of the sterile environment within the isolator 1 include an environment of cleanliness of ISO class 5 (class 100) or higher according to the international standard ISO 14644-1 (JIS compliant) and an environment of cleanliness of grade A or higher according to the EU-GMP guidelines (EU standards for pharmaceutical manufacturing management and quality control).
  • An environment of cleanliness of ISO class 4 (class 10) or higher is preferable, and an environment of cleanliness of ISO class 3 (class 1) or higher is more preferable.
  • the term "cleanliness" refers to the level of cleanliness in a certain space (e.g., inside an isolator).
  • Such cleanliness can be, for example, a state in which there are no pathogens for pigs (e.g., specific viruses, bacteria, etc.), and preferably a state in which there are no designated pathogens.
  • the cleanliness can be set by using the above-mentioned filter.
  • the isolator 1 can have one or more opening/closing sections 5 (preferably two or more opening/closing sections 5) for loading and unloading.
  • the opening/closing section 5 used for loading and unloading can also serve as a connection section (preferably a detachable connection section) to the disinfection tank (decontamination tank) 6 described later, and in the case where there are multiple isolators 1 as described later, can also serve as a connection section (preferably a detachable connection section) between the respective isolators.
  • the opening/closing part 5 of each isolator can be connected while maintaining isolation from the outside world and/or airtightness, and is preferably detachably connectable to the opening/closing part of another isolator via a sleeve (connector) 7 that is detachable from the opening/closing part 5.
  • the sleeve 7 can detachably connect the internal spaces of the isolators to each other.
  • the sleeve 7 may also serve as a pass box.
  • each isolator by removing (disconnecting) each isolator, the external environment of each isolator (e.g., a non-DPF environment or a DPF environment) can be independently selected, and the installation location of each isolator can also be independently selected for each isolator.
  • a non-DPF environment or a DPF environment e.g., a non-DPF environment or a DPF environment
  • the installation location of each isolator can also be independently selected for each isolator.
  • connection means that when two parts have a structure that allows them to be connected, the two parts (e.g., the opening/closing part 5) can be connected as necessary, and it is preferable that they can be connected while maintaining isolation and/or airtightness.
  • the isolator may be fitted with packing to maintain isolation and/or airtightness. Such packing may be fitted, for example, to the connection parts of each part, or to the connection part with a disinfection tank (decontamination tank), the detachable connection parts between the isolators 1, the detachable connection part with the sleeve 7, etc.
  • the shape of the opening/closing part 5 is not particularly limited, but may be, for example, a square, rectangle, square, circle (e.g., approximately circle or perfect circle), ellipse, etc., depending on the usage mode of the isolator 1, and may be tubular, and is preferably a shape having a function of connecting two spaces (e.g., the inside of the isolator 1).
  • the opening/closing part 5 may be openable and sealable by itself, or may be openable and sealable by using another means (e.g., a valve).
  • a valve is attached to the opening/closing part 5 as necessary, and imparts a function of regulating the inflow and outflow of gas, etc.
  • a valve may be provided that enables the isolation of the inside of the isolator 1 from the outside world when disconnecting the connection with the disinfection tank (decontamination tank) 6, the detachable connection between each isolator 1, the detachable connection with the sleeve 7, etc.
  • Such valves are well known in the art.
  • the isolator is provided with right and left gloves 9 (preferably gloves made of soft plastic (more preferably soft polyvinyl chloride) or rubber) as shown in Figures 1 and 2.
  • the isolator 1 preferably, the breeding isolator (fetus or piglet breeding isolator) 20, the adult pig breeding isolator 21, or the organ removal isolator 30
  • the isolator 1 (preferably a breeding isolator (fetus or piglet breeding isolator) 20, an adult pig breeding isolator 21, or an organ extraction isolator 30) is suitable for immobilizing the piglet or adult pig (for example, immobilization during breeding, injection, organ extraction, etc.).
  • an injection preferably a remote injection
  • anesthesia injection can be performed by the mechanical arm inside the isolator 1 (preferably a breeding isolator (fetus or piglet breeding isolator) 20, an adult pig breeding isolator 21, or an organ extraction isolator 30).
  • a breeding isolator for example, a breeding isolator (fetus or piglet breeding isolator) 20, an adult pig breeding isolator 21, or an organ extraction isolator 30.
  • a surgical instrument e.g., a scalpel
  • the isolator 1 (preferably the piglet removal isolator or the organ removal isolator 30) can have a set of pre-sterilized surgical instruments (for example, scalpels) placed inside.
  • the above-mentioned isolator 1 preferably a breeding isolator (fetus or piglet breeding isolator) 20, adult pig breeding isolator 21
  • the isolator 1 (preferably the organ removal isolator 30) can have an openable and sealable organ storage container 31 (preferably a sterilized openable and sealable organ storage container) placed inside in advance.
  • the inside of the isolator 1 can be sterilized by any method such as hydrogen peroxide, peracetic acid, ozone gas, formalin gas, ultraviolet light, radiation ( ⁇ -ray irradiation), plasma, etc., to make the inside of the isolator 1 a sterile environment.
  • the non-DPF environment (environment that is not designated pathogen-free) in which the sow 11 is raised is not particularly limited as long as it is not a DPF environment, but examples thereof include an SPF (Specific Pathogen Free) environment, an environment with a cleanliness of ISO class 7 (class 10,000) or higher according to the international standard ISO standard 14644-1 (JIS compliant), and an environment with a cleanliness of grade B or higher according to the EU-GMP guidelines.
  • SPF Specific Pathogen Free
  • ISO class 7 class 10,000
  • ISO standard 14644-1 JIS compliant
  • EU-GMP guidelines an environment with a cleanliness of grade B or higher according to the EU-GMP guidelines.
  • the sow 11 refers to a pregnant female pig in the pregnancy period from conception to parturition, and is preferably a female pig in the final stage of pregnancy.
  • the present inventors have found that infection from the sow 11 to the fetus or piglet 8 does not occur in principle, except via transplacental infection. It is preferable that the sow 11 tests negative for infection by transplacental pathogens and tests positive or negative for infection by other pathogens. This can prevent transplacental infection of fetuses or piglets 8 and adult pigs 22, and contribute to the conversion of the ultimately obtained extracted organs to DPF. Furthermore, the manufacturing method of the present invention can be applied to sows 11 that are positive for pathogens other than those that are transplacental infectious, so the cost of manufacturing the transplant material can be reduced.
  • sow 11 tests positive for a pathogen other than a transplacental infectious pathogen
  • vertical infection of the fetus or piglet 8 does not occur, so there is no need to test the sow 11 for infection with pathogens other than a transplacental infectious pathogen, and this eliminates the waiting time until the results of the above tests become known, which was a bottleneck (rate-limiting factor) in the transplant material production process.
  • transplacental infectious pathogens examples include porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus, Aujeszky's disease virus, porcine circovirus type 2, parvovirus, Japanese encephalitis virus, swine fever virus, swinepox virus, Leptospira, Brucella suis, Erysipelothrix rhusiopathiae, and Toxoplasma.
  • PRRS porcine reproductive and respiratory syndrome
  • Aujeszky's disease virus porcine circovirus type 2
  • parvovirus Japanese encephalitis virus
  • swine fever virus swinepox virus
  • Leptospira Brucella suis
  • Erysipelothrix rhusiopathiae examples include Toxoplasma.
  • the method for removing the uterus 12 from the sow 11 shown in FIG. 1 is not particularly limited, and may be performed on an optional operating table 13 or not.
  • Examples of the method include abdominal or vaginal hysterectomy by a conventional method (for example, a conventional method after placing the pig in a supine position), and hysterectomy by Caesarean section.
  • the uterus may also be removed after laparotomy by a conventional method.
  • the anesthesia may be general anesthesia or local anesthesia, but general anesthesia is preferred.
  • the inventors have found that anesthesia has an effect on the vital signs (particularly resuscitation rate) of the piglets being delivered. From the viewpoint of the vital signs of the fetus or piglet 8 being removed, it is preferable that the removal of the uterus 12 is completed within 25 minutes after the start of the anesthesia, and it is even more preferable that the removal of the fetus or piglet is completed within 27 minutes after the start of the anesthesia.
  • Either inhalation anesthesia or intravenous anesthesia (deep anesthesia) may be used, but inhalation anesthesia is preferred from the viewpoint of reducing the penetration of the anesthesia into the fetus or piglet and improving the resuscitation rate of the fetus or piglet 8 that is removed.
  • any anesthetic antagonist or respiratory stimulant may or may not be administered to the fetus or piglet at any time (e.g., at the time of removal or at the time of resuscitation) and by any method (e.g., injection).
  • the above-mentioned removal of the uterus 12 may be performed in a non-DPF environment (an environment that is not free of designated pathogens) or in a DPF environment, with a non-DPF environment being preferred from the viewpoint of not requiring a complicated and large-scale DPF facility.
  • a non-DPF environment an environment that is not free of designated pathogens
  • a non-DPF environment being preferred from the viewpoint of not requiring a complicated and large-scale DPF facility.
  • an SPF environment, an environment with a cleanliness of ISO class 7 (class 10,000) or higher, an environment with a cleanliness of grade B or higher according to the EU-GMP guidelines, etc. are more preferred.
  • the decontamination process of the excised uterus shown in FIG. 1 may include decontamination or disinfection of the uterus with any disinfection medium (decontamination medium), and more specifically, may include immersion or contact of the uterus with the disinfection medium (decontamination medium), washing of the uterus with the disinfection medium (decontamination medium), and the like.
  • the above-mentioned hysterectomy treatment and decontamination treatment can prevent infection from the birth canal from the sow to the fetus or piglet, and can contribute to making the finally obtained extracted organs DPF. As shown in Fig.
  • one end of the disinfection tank (decontamination tank) 6 filled with the disinfection medium (decontamination medium) is connected to the inside of the isolator (preferably while maintaining the airtightness of the isolator) via an opening/closing part 5.
  • the inside and outside of the isolator are isolated (i.e., not communicated) by the disinfection medium (decontamination medium) filled in the disinfection tank 6. It is preferable to place the excised uterus 12 in the disinfection tank 6 and pass it through the disinfection tank and the inside of the connected parts to deliver (and accommodate) the uterus 12 in the isolator 1.
  • the decontamination or disinfection medium may be any decontamination or disinfection liquid (e.g., peracetic acid), or a decontamination or disinfection gas, etc., and from the viewpoint of avoiding contact, a decontamination or disinfection liquid is preferred.
  • the environment (external environment) in which the disinfection tank 6 filled with the disinfection medium (decontamination medium) for carrying out the decontamination treatment is installed may be a non-DPF environment or a DPF environment, with a non-DPF environment being preferred from the viewpoint of not requiring a complicated and large-scale DPF facility.
  • an SPF environment, an environment with a cleanliness of ISO class 7 (class 10,000) or higher, an environment with a cleanliness of grade B or higher according to the EU-GMP guidelines, etc. are more preferred.
  • the inside of the isolator 1 can be sterilized by any method, such as ozone gas, formalin gas, ultraviolet light, radiation (gamma ray irradiation), or plasma, to create a sterile environment inside the isolator.
  • any method such as ozone gas, formalin gas, ultraviolet light, radiation (gamma ray irradiation), or plasma, to create a sterile environment inside the isolator.
  • the removal of the fetus or piglet from the uterus is performed in a sterile environment in an isolator, and optionally includes resuscitation and rearing of the fetus or piglet, in which case the resuscitation and rearing are performed in a sterile environment in an isolator.
  • the above "optionally including resuscitation and rearing of the fetus or piglet, and carrying out the resuscitation and rearing in a sterile environment in an isolator” means that the resuscitation and rearing of the fetus or piglet may be carried out in a sterile environment in an isolator, or may not be carried out in a sterile environment in an isolator, and it is preferable to carry out the resuscitation and rearing of the fetus or piglet in a sterile environment in an isolator.
  • the sterile environment may be either a non-DPF environment or a DPF environment, but is preferably a clean class environment such as a general surgical operating room, more preferably an SPF environment, an environment with a cleanliness of ISO class 6 (class 1,000) or higher, or an environment with a cleanliness of grade B or higher in the EU-GMP guidelines, even more preferably an environment with a cleanliness of ISO class 5 (class 100) or higher, or an environment with a cleanliness of grade A or higher in the EU-GMP guidelines, preferably an environment with a cleanliness of ISO class 4 (class 10) or higher, and particularly preferably an environment with a cleanliness of ISO class 3 (class 1) or higher.
  • a clean class environment such as a general surgical operating room, more preferably an SPF environment, an environment with a cleanliness of ISO class 6 (class 1,000) or higher, or an environment with a cleanliness of grade B or higher in the EU-GMP guidelines, even more preferably an environment with a cleanliness of ISO class 5 (class 100) or higher, or an environment with a cleanliness
  • the removal isolator and the resuscitation isolator may be separate isolators, or the removal isolator may also function as the resuscitation isolator.
  • the isolator 1 preferably includes right and left hand gloves 9, preferably made of soft plastic (more preferably soft polyvinyl chloride) or rubber, so that the fetus or piglet 8 can be removed from the uterus 12 (and resuscitated, if necessary) using both hands through the right and left gloves 9. As shown in FIG.
  • the removal of the fetus or piglet 8 from the uterus 12 is not particularly limited as long as the fetus or piglet 8 can be removed in the sterile environment inside the isolator, and can be performed by any method (e.g., manual technique) through the right and left gloves 9.
  • the removal of the fetus or piglet from the uterus is preferably performed by manipulating the pre-positioned sterilized surgical instruments (eg scalpels) through the right and left gloves 9. More specifically, the surgical instrument (eg, scalpel) is operated to incise the uterus and amniotic membrane (preferably simultaneously) to remove the fetus or piglet 8.
  • the surgical instrument eg, scalpel
  • the inside of the uterus is sterile.
  • the resuscitation of the piglet is not particularly limited as long as it is possible to resuscitate the fetus or piglet, and is preferably performed in a sterile environment inside the isolator. Resuscitation can be performed by any method (e.g., manual technique) such as washing the body surface of the fetus (newborn) or piglet through the right and left gloves, for example, by wiping off amniotic fluid from the body, oral cavity, and nostrils. As described above, the inside of the isolator 1, which is made a sterile environment, is isolated from the outside of the isolator 1.
  • the environments in which the isolator in which the fetus or piglet removal operation is performed and the isolator in which the resuscitation operation is performed may be independently either a non-DPF environment or a DPF environment.
  • a non-DPF environment is preferable, and from the viewpoint of avoiding the inadvertent introduction of pathogens into the inside of the isolator, an SPF environment, an environment with a cleanliness of ISO class 7 (class 10,000) or higher, an environment with a cleanliness of grade B or higher according to the EU-GMP guidelines, or the like is more preferable.
  • the rearing of the fetus or piglet after the resuscitation and the rearing of the adult pig 22 from which the piglet has grown may be carried out either outside or inside the isolator, but even if the rearing is carried out outside the isolator, it is preferable to rear them in a sterile environment such as a clean class environment of a general surgical operating room as described above. As shown in Fig.
  • the rearing of the fetus or piglet after the resuscitation and the rearing of the adult pig 22 from which the piglet has grown are preferably carried out in a sterile environment inside the isolator, and it is more preferable to artificially rear them with water, milk replacer, artificial milk, and feed 10 (preferably sterilized water, milk replacer, artificial milk, and feed) that have been placed in advance inside the isolator.
  • water, milk replacer, artificial milk, and feed 10 preferably sterilized water, milk replacer, artificial milk, and feed
  • the position of the opening/closing part 5, which can be connected to the opening/closing part 5 of another isolator via a sleeve 7 as necessary, is preferably at a height of 25 cm or more from the position where the fetuses or piglets 8 and adult pigs 22 are raised (for example, the floor 15 described below), more preferably at a height of 30 cm or more, even more preferably at a height of 35 cm or more, particularly preferably at a height of 40 cm or more, particularly preferably at a height of 50 cm or more, and most preferably at a height of 60 cm or more.
  • a floor 15 for arranging or raising fetuses, piglets, and adult pigs may or may not be provided inside the isolator 1, and the inside of the isolator may or may not be divided into an upper and lower section by the floor 15.
  • the material of the floor includes wood, metal (stainless steel, iron, etc.), plastic, etc.
  • a floor having a mesh structure is preferred, and for example, a lattice or wire netting (expanded metal, mesh wire netting, iron netting, etc.) is preferred.
  • a feces storage tank may or may not be provided under the floor within the isolator to store the feces that falls under the floor.
  • a rearing isolator 20 which will be described later, has the above-mentioned floor 15 and a feces and urine storage tank, as shown in FIG.
  • the manure storage tank is preferably a vacuum-type manure storage tank connected by a pipe to the underfloor of the isolator 1 (preferably the rearing isolator (fetus or piglet rearing isolator) 20, the adult pig rearing isolator 21).
  • the inside of the isolator 1 preferably the rearing isolator (fetus or piglet rearing isolator) 20, the adult pig rearing isolator 21
  • the feces storage tank may or may not be connected to the outside world (outside the isolator) maintained at negative pressure via another pipe.
  • Each of the pipes may or may not have a valve from the viewpoint of air pressure control.
  • the feces and urine storage tank may or may not be under negative pressure using a vacuum blower.
  • the isolator 1 may or may not have shelves within it. 2, by providing shelves inside the isolator 1, it is possible to store, for example, the above-mentioned water, milk replacer, artificial milk, and feed 10 (preferably sterilized water, milk replacer, artificial milk, and feed) for artificial feeding. This allows for sanitary management of the water, milk replacer, artificial milk, and feed 10 for artificial feeding without contamination by feces and urine.
  • the inside of the isolator 1, which is made a sterile environment is isolated from the outside of the isolator 1.
  • the environment in which the isolator for raising fetuses, piglets, and adult pigs is installed i.e., the external environment of the isolator
  • the external environment of the isolator may be either a non-DPF environment or a DPF environment.
  • a non-DPF environment is preferable, and from the viewpoint of avoiding the inadvertent introduction of pathogens into the inside of the isolator, an SPF environment, an environment with a cleanliness of ISO class 7 (class 10,000) or higher, an environment with a cleanliness of grade B or higher according to the EU-GMP guidelines, or the like is more preferable.
  • the rearing period can be appropriately set depending on the type of organ removed, the purpose of use, etc.
  • the rearing period is preferably until the animals reach 1 week of age or older, more preferably until they reach 2 weeks of age or older, and even more preferably until they reach 3 weeks of age or older.
  • the upper limit of the rearing period is preferably 2 months or less, more preferably 1 month or less, and even more preferably 4 weeks or less.
  • organs e.g., heart, kidney
  • the rearing period is preferably 6 months or more, and more preferably 1 year or more.
  • the upper limit of the rearing period is preferably 2 years or less, and more preferably 1 year and 6 months or less.
  • the present invention involves removing organs from fetuses, piglets, or adult pigs from which piglets have grown.
  • the removal of the organ may or may not be performed in a sterile environment within an isolator, but is preferably performed in a sterile environment within an isolator. Even if the above-mentioned removal of organs is not performed inside an isolator (i.e., outside an isolator), it is preferable to perform the above-mentioned sterile environment.
  • the above-mentioned sterile environment may be either a non-DPF environment or a DPF environment, but is preferably a clean class of a general surgical operating room, more preferably an SPF environment, an environment with a cleanliness of ISO class 6 (class 1,000) or higher, an environment with a cleanliness of grade B or higher according to the EU-GMP guidelines, even more preferably an environment with a cleanliness of ISO class 5 (class 100) or higher, an environment with a cleanliness of grade A or higher according to the EU-GMP guidelines, preferably an environment with a cleanliness of ISO class 4 (class 10) or higher, and particularly preferably an environment with a cleanliness of ISO class 3 (class 1) or higher.
  • a clean class of a general surgical operating room more preferably an SPF environment, an environment with a cleanliness of ISO class 6 (class 1,000) or higher, an environment with a cleanliness of grade B or higher according to the EU-GMP guidelines, even more preferably an environment with a cleanliness of ISO class 5 (class 100) or higher, an environment with a cleanliness
  • the removal of organs 14 from the fetus, piglet 8, or the adult pig 22 from which the piglet has grown is performed in the isolator, it is preferable to operate the sterilized surgical instruments (e.g., scalpels) that have been placed in advance in the isolator through the right and left gloves 9. More specifically, the fetus or piglet 8, or adult pig 22, which may or may not be anesthetized, is placed in a supine position, for example, and then an abdominal opening is performed using the surgical instrument (e.g., a scalpel) to remove any organs 14.
  • the surgical instrument e.g., a scalpel
  • the extraction is preferably performed in a state where the organ 14 in the body of the fetus or piglet 8 and the adult pig 22 is inflated by injecting a physiologically acceptable liquid into the organ 14.
  • a physiologically acceptable liquid examples include ETK solution (ET-Kyoto solution), HTK solution (histidine-tryptophan-ketoglutarate solution), physiological saline, UW solution (University of Wisconsin solution), infusion solution (extracellular fluid), water, phosphate buffer solution, etc., with ETK solution being preferred.
  • the position of the opening/closing part 5, which can be connected to the opening/closing part 5 of another isolator via a sleeve 7 as necessary, is preferably at a height of 25 cm or more from the position where the fetuses or piglets 8 and adult pigs 22 are raised (for example, the floor 15 described below), more preferably at a height of 30 cm or more, even more preferably at a height of 35 cm or more, particularly preferably at a height of 40 cm or more, particularly preferably at a height of 50 cm or more, and most preferably at a height of 60 cm or more.
  • the extracted organ 14 is stored in an openable and sealable organ storage container 31 (preferably a sterilized openable and sealable organ storage container) that has been placed beforehand inside the isolator, and after the container 31 is sealed, it can be transported outside the isolator (for example, via the opening and closing unit 5).
  • the opening and closing unit 5 may be in the form of a pass box. This prevents the organ 14 from being contaminated even if the external environment of the isolator is a non-DPF environment, which can contribute to making the organ 14 a DPF.
  • organs 14 examples include internal organs (e.g., pancreas, kidneys, ureters, bladder, liver, heart, stomach, intestines, etc.), reproductive organs (e.g., ovaries, testes, etc.), bone marrow (e.g., hematopoietic organs), brain, eyes, nose, mouth, skin, and nerves, with internal organs and reproductive organs being preferred, internal organs and reproductive organs being more preferred, and pancreas (e.g., pancreatic islets) and kidneys (e.g., metanephros, particularly the urinary organs including the metanephros, ureters, and bladder) being even more preferred.
  • internal organs e.g., pancreas, kidneys, ureters, bladder, liver, heart, stomach, intestines, etc.
  • reproductive organs e.g., ovaries, testes, etc.
  • bone marrow e.g., hematopoietic
  • the inside of the isolator 1, which is made a sterile environment, is isolated from the outside of the isolator 1. Therefore, the environment in which the isolator for removing the organ 14 is installed (i.e., the external environment of the isolator) may be either a non-DPF environment or a DPF environment.
  • a non-DPF environment is preferable, and from the viewpoint of avoiding the inadvertent introduction of pathogens into the inside of the isolator, an SPF environment, an environment with a cleanliness of ISO class 7 (class 10,000) or higher, an environment with a cleanliness of grade B or higher according to the EU-GMP guidelines, or the like is more preferable.
  • the extracted organ 14 may be a medical grade DPF (designated pathogen free) organ or a product derived therefrom.
  • DPF designated pathogen free
  • the isolated organ 14 When the isolated organ 14 is derived from a piglet fetus, it has low immunogenicity and is free of designated pathogens, and is therefore suitable as a transplant material (preferably a xenotransplant material).
  • the extracted organ 14 when the extracted organ 14 is derived from an adult pig, it is suitable for maturation in terms of size, function, etc., and is also free of designated pathogens, making it suitable as a transplant material (preferably a xenotransplant material).
  • ⁇ Multiple isolators> The removal of the fetus or piglet 8 from the uterus, resuscitation, rearing, and removal of the organs from the fetus, piglet, or adult pig 22 may or may not be performed consistently in a single isolator the inside of which is maintained in a sterile environment. However, it is preferable that the removal of the fetus or piglet from the uterus, resuscitation, rearing, and removal of the organs from the fetus, piglet, or adult pig are performed in two or more separate isolators the inside of which is maintained in a sterile environment.
  • each isolator corresponding to each of the above operations is installed (i.e., the external environment of each isolator) to be independently selected for each of the above operations (each isolator) to be a non-DPF environment or a DPF environment.
  • the installation location of each isolator can be independently selected for each isolator.
  • the removal of the piglet from the uterus (piglet removal isolator 1), the resuscitation, the rearing (raising isolator 20), and the extraction (organ extraction isolator 30) are each performed in separate isolators whose interiors are maintained in a sterile environment.
  • the rearing isolator 20 may be, or may not be, a plurality of separate types of isolators, such as an isolator 20 for rearing fetuses or piglets, an isolator 21 for rearing adult pigs, etc., in which the height of the internal floor 15, water, feed 10, etc. are adjusted according to the growth conditions, as shown in FIG. 4 .
  • the removal of the fetus or piglet from the uterus, resuscitation, rearing, and the removal of the organs 14 from the fetus or piglet 8 and the adult pig 22 are carried out using separate isolators that maintain a sterile environment inside. It is preferable that the isolators can be connected while maintaining isolation from the outside world and airtightness, and can be detachably connected to the opening/closing part 5 via a detachable sleeve (coupler) 7.
  • the sleeve (coupler) 7 can detachably connect the internal spaces of the isolators to each other.
  • each isolator By connecting as described above, fetuses or piglets 8 and adult pigs 22 can be moved between the isolators.
  • the external environment of each isolator e.g., a non-DPF environment or a DPF environment
  • the installation location of each isolator can also be independently selected for each isolator.
  • the inside of the sleeve 7 (preferably the sleeve for transporting piglets) is sterilized by any method such as hydrogen peroxide, peracetic acid, ozone gas, formalin gas, ultraviolet light, radiation ( ⁇ -ray irradiation), plasma, etc. before use.
  • This allows the fetus or piglet 8 and adult pig 22 to be moved between the isolators through the sterile environment space within the sleeve connecting each isolator, and ultimately, for example, the organs 14 from the fetus or piglet 8 and adult pig 22 can be moved into the internal space of the isolator for removal.
  • the material of the sleeve 7 is not particularly limited, but examples thereof include plastics (soft plastics (soft polyvinyl chloride, etc.), hard plastics), metals (for example, stainless steel, iron, etc.), and the like.
  • pre-sterilized surgical instruments e.g., scalpels
  • the fetus or piglet removal isolator 1 which is separate from the breeding isolators 20, 21, or the organ removal isolator 30, contamination of the surgical instruments with feed, feces, urine, etc. of the fetus or piglet 8 and adult pig 22 can be avoided.
  • pre-sterilized surgical instruments e.g., scalpels
  • the operation of removing the fetus or piglet from the uterus, the resuscitation operation, the rearing operation, and the operation of extracting the organs from the fetus, piglet, or adult pig 22 are performed in two or more separate isolators, respectively, from the viewpoint of performing each operation in parallel to improve mass productivity, two or more isolators may be used in combination for each operation.
  • a plurality of isolators 1 for removing the fetus or piglet may be used in combination
  • a plurality of isolators for resuscitation may be used in combination
  • a plurality of isolators 20 for rearing may be used in combination
  • a plurality of isolators 30 for extracting organs may be used in combination.
  • the time required for the fetus or piglet removal and resuscitation work, and the organ extraction work is several hours, whereas the time required for the rearing work takes several weeks and can be a rate-limiting work.
  • the rearing isolators 20 and 21 have an extremely low rotation speed for reuse, which can become a bottleneck in the production of transplant materials.
  • two isolators 1 for removing fetuses or piglets may be used in combination
  • two isolators for resuscitation may be used in combination
  • three or more isolators 20, 21 for rearing may be used in combination
  • two isolators 30 for extracting organs may be used in combination.
  • the installation floor area may become large. From the perspective of reducing the floor space required for high-standard breeding facilities that require huge air conditioning equipment to maintain a germ-free environment, and from the perspective of significantly reducing equipment maintenance costs, As shown in Fig. 5, when there are two or more rearing isolators 20, 21, it is preferable to arrange the two or more rearing isolators 20, 21 so that they are stacked in the height direction. It is also preferable to house the isolators 20, 21 in a rack 23 (shelf) having a plurality of shelves (extending in the width direction) that divide the isolators 20, 21 at least in the height direction.
  • a rack having further shelves (extending in the height direction) that divide the isolators in the width direction is used, and a single isolator or a plurality of isolators for raising piglets from the same sow is housed in each divided space.
  • the dimensions of the isolator can be appropriately designed according to the number of fetuses, piglets, and adult pigs to be housed, and it is preferable that the isolator has a space sufficient for raising fetuses, piglets, and adult pigs, for example, a volume of about 30 times or more the total size of the pigs to be housed.
  • the dimensions may be, for example, but are not limited to, a length of 100-1000 cm, 150-500 cm, or 200-300 cm, a width of 100-1000 cm, 150-500 cm, or 200-300 cm, or a height of 50-500 cm, 100-300 cm, or 150-250 cm.
  • the isolator may or may not have one or more observation windows, but preferably has two or more observation windows, more preferably, for example, two, three or four.
  • the observation window can be provided on the top (top surface) and/or side (side surface) of the isolator.
  • a part of the top and side of the isolator can be inclined, and the observation window can be provided on the inclined surface (also called the inclined portion).
  • the observation window can be provided on the top, side, and/or inclined portion of the isolator.
  • the size, shape, and material of each observation window can be the same or different.
  • the observation window includes, for example, an observation window frame and a hard window material.
  • the observation window and the observation window frame can be rectangular, rectangular, square, circular (e.g., approximately circular or perfect circular), elliptical, etc., depending on the usage mode of the isolator.
  • the rigid window material can be a rigid film, for example, a vinyl plate.
  • the dimensions of the observation window and the observation window frame are not particularly limited, and can be, for example, an elliptical, rectangular, rectangular, or square frame having an area (inner area of the frame) of about 50 cm 2 to 8000 cm 2 , or 300 cm 2 to 5000 cm 2 , but are not limited thereto.
  • the rigid window material for example, a vinyl plate, for example, a transparent rigid polyvinyl chloride plate
  • the rigid window material can have a thickness of, for example, 0.05 mm to 5 mm.
  • the observation window is made of a hard window material, transparent hard vinyl chloride (a thin plate with a thickness of 0.1 mm), which is bonded to an observation window frame with an adhesive.
  • the observation window frame can also function as the packing mentioned above.
  • the surface of the rigid window material may or may not be subjected to any anti-fogging treatment (e.g., water-repellent treatment, super-water-repellent treatment, etc.), but it is preferable that it is.
  • the rigid window material has less diffuse reflection than soft plastic materials that can corrugate, for example, approximately the same as that exhibited by transparent rigid polyvinyl chloride.
  • the rigid window material can be, but is not limited to, clear polyvinyl chloride sheet.
  • the isolator (e.g., intake section 3) may or may not include an air conditioner 16 that actively controls at least one parameter selected from the group consisting of temperature, humidity, oxygen concentration, and carbon dioxide concentration within the isolator.
  • the temperature inside the isolator is maintained within a range of, for example, 5°C to 38°C, preferably within a range of 10°C to 35°C.
  • the humidity inside the isolator is maintained within a range of, for example, 0% to 100% (relative humidity), preferably within a range of 40% to 70%.
  • the oxygen concentration inside the isolator is preferably the concentration in normal fresh air. Conditions that result in low oxygen (for example, 5%) should be avoided in order to avoid adverse effects on the pigs.
  • the carbon dioxide concentration inside the isolator is preferably the concentration in fresh air. Conditions that result in high carbon dioxide (for example, about 50% or more) should be avoided in order to avoid adverse effects on the pigs.
  • pathogens such as bacteria, fungi, and viruses
  • ⁇ Reference Example 3> Pregnant sows that were confirmed to carry a transplacental infectious pathogen (porcine circovirus) by antibody testing were prepared and raised in an SPF environment. After that, they were given inhalation anesthesia and underwent abdominal hysterectomy after laparotomy in the usual manner. As shown in FIG. 1, the multiple excised uteri were placed in a disinfection tank filled with a disinfectant, washed and passed through it to decontaminate them, and then placed in an isolator for removing piglets, the inside of which had been sterilized in advance and maintained in a sterile environment.
  • a transplacental infectious pathogen porcine circovirus
  • a sterilized scalpel or the like that had been placed in advance inside the isolator for removing piglets was used through gloves to simultaneously incise the uterus and amniotic membrane, and the piglets were removed and resuscitated in the usual manner (3 piglets).
  • Blood samples were taken from the three newborn piglets that were removed and resuscitated, and the presence or absence of porcine circovirus infection was examined by PCR using a primer pair that selectively (preferably specifically) binds to the nucleic acid of the porcine circovirus. The results are shown in Table 4 below.
  • sows to which the production method of the present invention is applied are preferably negative for infection by transplacental infectious pathogens.
  • Example> Among several pregnant sows raised in an SPF environment, about 20 pregnant sows that were confirmed to be negative for transplacental infectious pathogens were given inhalation anesthesia, and abdominal hysterectomy was performed after laparotomy in a conventional manner. The pregnant sows were not tested for infection with pathogens other than transplacental infectious pathogens, but are presumed to be positive based on the trends described in Reference Example 1 above.
  • the multiple excised uteri were placed in a disinfection tank filled with a disinfectant, washed and passed through it to decontaminate them, and then housed in an isolator for removing piglets, the inside of which had been sterilized in advance and maintained in a sterile environment (an environment with a cleanliness of about ISO class 5 (class 100) or EU-GMP guideline grade A).
  • a high-performance HEPA filter was installed in the intake section of the isolator, and the inside was maintained in a sterile environment.
  • a sterilized scalpel or the like that had been placed in advance inside the isolator for removing piglets was used through gloves to simultaneously incise the uterus and amniotic membrane, and the piglets were removed and resuscitated in the usual manner.
  • mice were divided into three groups, one of which was subjected to the following test A, the other to the following test B, and the remaining group was raised as described below, until finally organs were removed.
  • Test A Correlation test between the time required from the start of anesthesia to hysterectomy and the resuscitation rate of the piglets taken out The time required from the start of inhalation anesthesia to the removal of the piglets was measured, and the correlation between the time required and the resuscitation rate of the piglets was tested. The results are shown in Figure 6.
  • FIG. 6 is a graph showing the correlation between the time required from the start of anesthesia to hysterectomy and the resuscitation rate of the delivered piglets.
  • Test B Testing for the presence (infection) of pathogens (viruses, protozoa, and bacteria) in newborn piglets immediately after removal (immediately after birth) Blood was collected from the six newborn piglets that were removed, and the presence (infection) of the following 67 types of viruses, one type of protozoa, and bacteria was tested by PCR.
  • pathogens viruses, protozoa, and bacteria
  • viruses porcine circovirus type 1, porcine circovirus type 2, porcine lymphotropic herpesvirus type 1, porcine lymphotropic herpesvirus type 2, porcine cytomegalovirus, encephalomyocarditis virus, porcine parvovirus, porcine rotavirus A, porcine rotavirus B American type, porcine rotavirus B Vietnam type, porcine rotavirus C, mammalian reovirus, porcine enterovirus, porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus, porcine reproductive and respiratory syndrome virus, hepatitis E virus, porcine transmissible gastroenteritis virus, porcine influenza virus H1N1 type, porcine influenza virus H3N2 type, porcine respiratory coronavirus, swine fever virus, swine pox virus, African swine fever virus, Aujeszky's disease virus, Getah virus, Japanese encephalitis virus, porcine epidemic diarrhea virus, swine vesicular
  • Toxoplasma For the protozoan (Toxoplasma), a PCR test was conducted to determine the presence or absence of infection with the protozoan using a primer pair that specifically binds to the nucleic acid of each protozoan (JP Patent Publication No. 2021-023243).
  • the 16S ribosomal RNA is shared by all bacteria and contains regions that are highly conserved across bacterial species (eg, conserved regions C1-C9).
  • Various bacteria Yersinia, Bordetella bronchiseptica, Clostridium, Tuberculosis (human, bovine, avian), Salmonella, Escherichia coli, Bacillus anthracis, Erysipelothrix rhusiopathiae, Pasteurella, Shigella dysenteriae, Haemophilus, Staphylococcus, Brucella, Haemopartonella, Mycoplasma, Listeria, Actinobacillus, Streptococcus, Pseudomonas aeruginosa, Cutinomyces porcina, Campylobacter, Actinobacillus, Chlamydia, Coxiella, Lawsonia, Leptospira (Leptopira), Porcine Pelosrozone, etc
  • Test B The results of Test B are shown in Table 5 below. As is clear from the results of Test B shown in Table 5 above, it was confirmed that the presence (infection) of pathogens (viruses, protozoa, and bacteria) was not detected in piglets removed in a sterile environment from the decontaminated uteruses extracted from pregnant sows raised in an SPF environment.
  • pathogens viruses, protozoa, and bacteria
  • the piglet removal isolator was connected to a newly prepared breeding isolator maintained in a sterilized, germ-free environment (an environment with a cleanliness of about ISO class 5 (class 100) or EU-GMP guideline grade A) via a piglet transfer sleeve, and the piglets were transferred to the breeding isolator through the germ-free environment space within the sleeve.
  • a high-performance HEPA filter was installed in the intake section of the breeding isolator to maintain the inside in a germ-free environment.
  • multiple piglets were raised with sterilized water, milk replacer, artificial milk, and feed for artificial feeding until they reached three weeks of age (the appropriate age for organ removal).
  • the rearing isolator and a newly prepared organ harvesting isolator maintained in a sterilized, germ-free environment (an environment with a cleanliness of about ISO class 5 (class 100) or EU-GMP guideline grade A) were connected via a piglet transfer sleeve, and the piglets were transferred to the organ harvesting isolator through the germ-free environment space inside the sleeve.
  • a high-performance HEPA filter was installed in the intake section of the organ harvesting isolator to maintain the inside in a germ-free environment. As shown in FIG.
  • a sterilized scalpel or the like that had been placed in advance inside the organ extraction isolator was operated through a glove to perform abdominal surgery, and the pancreas was extracted.
  • the efficiency of the extraction was greatly improved by injecting ETK solution into the organs in the piglet's body to expand the organs during the extraction.
  • viruses porcine circovirus type 1, porcine circovirus type 2, porcine lymphotropic herpesvirus type 1, porcine lymphotropic herpesvirus type 2, porcine cytomegalovirus, encephalomyocarditis virus, porcine parvovirus, porcine rotavirus A, porcine rotavirus B American type, porcine rotavirus B Vietnam type, porcine rotavirus C, mammalian reovirus, porcine enterovirus, porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus, porcine reproductive and respiratory syndrome virus, hepatitis E virus, porcine transmissible gastroenteritis virus, porcine influenza virus H1N1 type, porcine influenza virus H3N2 type, porcine respiratory coronavirus, swine fever virus, swine pox virus, African swine fever virus, Aujeszky's disease virus, Getah virus, Japanese encephalitis virus, porcine epidemic diarrhea virus, swine vesicular
  • a PCR test was performed to determine whether or not infection with the protozoan (Toxoplasma) was present using a primer pair that specifically binds to the nucleic acid of the protozoan.
  • pancreas extracted by the manufacturing method of the present invention is not infected with pathogens (viruses, protozoa, and bacteria) and maintains a DPF state. It can be said that it is suitable as a transplant material (preferably a xenotransplant material).
  • Isolator (isolator for removing piglets) 2 Housing 3 Intake section 4 Exhaust section 5 Opening/closing section 6 Disinfection tank (decontamination tank) 7 Sleeve 8 Piglet 9 Glove 10 Water, milk replacer, artificial milk, feed for artificial feeding 11 Sow 12 Uterus 13 Operating table 14 Organs 15 Bed 16 Air conditioner 20 Rearing isolator (fetus or piglet rearing isolator) 21 Adult pig rearing isolator 22 Adult pig 23 Rack 30 Organ removal isolator 31 Organ storage container

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Apparatus For Disinfection Or Sterilisation (AREA)

Abstract

ＤＰＦではない環境下で飼育された母豚から、ＤＰＦである豚臓器を取得することができる移植材の製造方法を提供すること。 非ＤＰＦ（Ｄｅｓｉｇｎａｔｅｄ　Ｐａｔｈｏｇｅｎ　Ｆｒｅｅ）環境下で飼育された母豚から子宮を摘出すること、　摘出した前記子宮をデコンタミネーション処理後にアイソレータ内の無菌環境に収容すること、　前記子宮からの胎仔又は子豚の取出しをアイソレータ内の無菌環境で行うこと、　任意で前記胎仔又は子豚の蘇生及び飼育を含み、かつ、前記蘇生及び飼育をアイソレータ内の無菌環境で行い、及び　前記胎仔、子豚、又は子豚が生育した成豚から臓器を摘出することを含む、前記摘出した臓器がＤＰＦである、豚臓器又はその由来物を含む移植材の製造方法。

Description

豚臓器又はその由来物を含む移植材の製造方法
　本発明は、臓器移植等の医療用として好適な豚臓器又はその由来物を含む移植材の製造方法に関する。
　豚の膵島を糖尿病患者への移植等の異種移植療法の臨床応用実現には、医療に使用し得る衛生レベルの豚（医療グレード豚）が不可欠である。異種移植に用いる豚の衛生レベルは、指定病原体フリー（ｄｅｓｉｇｎａｔｅｄ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｆｒｅｅ：ＤＰＦ）であることが求められている（非特許文献１～３）。
　例えば、カナダ、ヨーロッパ諸国、ニュージーランド等における異種移植の研究開発例では、臓器ドナー豚の飼育のために高額な施設を建築し、高い衛生条件を達成している。
　しかしながら、上記医療グレードのＤＰＦの衛生レベルを達成するためには、外界から隔離を行うための特殊で高度な環境を維持するために煩雑で大がかりな施設の建築を要する。このような特殊で高度な環境の維持は煩雑で莫大なコストが発生するという欠点を有しており、さらに一度ある施設を建設すると、建設された施設は、厳重に規定された条件を満たす必要があり特殊な構造をしていることから、増床等の改装は困難という問題もある。
「異種移植の実施に伴う公衆衛生上の感染症問題に関する指針」平成１３年度厚生科学研究費厚生科学特別研究事業主任研究者吉倉廣（国立感染症研究所長） Fishman JA.Infectious disease risks in xenotransplantation. Am J Transplant.2018;18:1857-1864. Wynyard S, Nathu D, Garkavenko O, et al. Microbiological safety of the first clinical pig islet xenotransplantation trial in New Zealand. Xenotransplantation 2014; 21: 309-323.
　例えば、異種移植用の医療グレードのＤＰＦ臓器の従来法による調製では、母豚の飼育、帝王切開、豚胎仔飼育、臓器摘出の全工程をＤＰＦ環境下で行わざるを得ない。特に、大きく育って飼育に広大な床面積を要する母豚の飼育を、隔離を行う等のＤＰＦ環境下で飼育することは、特殊で高度な環境を維持するための煩雑で大がかりな施設の建築を要し、莫大なコストが発生するという問題があった。
　本発明は、このような従来技術の問題に鑑みてなされたものであり、ＤＰＦではない環境下で飼育された母豚から、ＤＰＦである豚臓器を取得することができる移植材の製造方法を提供することを目的とする。
　本発明者らは、上記課題について鋭意検討した結果、胎仔又は子豚の出生に際し、母豚から胎仔又は子豚への感染は、経胎盤感染以外の感染は発生しないこと、及び
　アイソレータ内の無菌環境で上記子宮から胎仔又は子豚の取り出しを行い、かつ当該胎仔、子豚、又は子豚が生育した成豚から臓器を摘出することにより、ＤＰＦではない環境下で飼育された母豚から、ＤＰＦの豚臓器を取得することができることを見出した。本発明は、上記知見に基づき完成されるに至ったものである。
　すなわち本発明は以下の通りである。
　＜１＞非ＤＰＦ環境下で飼育された母豚から子宮を摘出すること、
　摘出した前記子宮をデコンタミネーション処理後にアイソレータ内の無菌環境に収容すること、
　前記子宮からの胎仔又は子豚の取出しをアイソレータ内の無菌環境で行うこと、
　任意で前記胎仔又は子豚の蘇生及び飼育を含み、かつ、前記蘇生及び飼育をアイソレータ内の無菌環境で行い、及び
　前記胎仔、子豚、又は子豚が生育した成豚から臓器を摘出することを含む、前記摘出した臓器がＤＰＦである、豚臓器又はその由来物を含む移植材の製造方法。
　＜２＞前記非ＤＰＦ環境がＳＰＦ（Ｓｐｅｃｉｆｉｃ　Ｐａｔｈｏｇｅｎ　Ｆｒｅｅ）環境である、＜１＞に記載の方法。
　＜３＞臓器の前記摘出が、前記子豚の躯体中の前記臓器に生理学的に許容される液を注入して前記臓器を膨張させた状態で行われる、＜１＞に記載の方法。
　＜４＞子宮の前記摘出が、前記母豚への麻酔後に行われ、子宮の前記摘出が、前記麻酔開始後２５分以内に終わる、＜１＞に記載の方法。
　＜５＞前記麻酔が吸入麻酔である、＜４＞に記載の方法。
　＜６＞前記母豚は、経胎盤感染性病原体による感染が陰性であり、かつそれ以外の病原体による感染が陽性又は陰性である、＜１＞に記載の方法。
　＜７＞前記取出し及び蘇生と、前記飼育と、前記摘出とが、それぞれ、別個のアイソレータ内の無菌環境で行われ、
　アイソレータ同士を連結したスリーブ内の無菌環境空間を通じて、子豚をアイソレータ間で移動させる、＜１＞に記載の方法。
　＜８＞前記飼育のためのアイソレータが２以上存在し、前記飼育のための前記アイソレータを高さ方向に重ねて配置する、＜７＞に記載の方法。
　本発明によれば、ＤＰＦではない環境下で飼育された母豚から、ＤＰＦである豚臓器を取得することができる移植材の製造方法を提供することができる。
　また、本発明によれば、母豚のＤＰＦ施設内での飼育は要しないことから、量産化にはアイソレータの増設のみで足り、低コストでＤＰＦの豚臓器又はその由来物を含む移植材を量産し得る。
本発明の製造方法における母豚から子宮の摘出工程、摘出した上記子宮のデコンタミネーション処理、胎仔又は子豚の取出し、及び、子豚の取出し用アイソレータの概略を示す図である。 本発明の製造方法における胎仔又は子豚の飼育、及び飼育用アイソレータの概略を示す図である。 本発明の製造方法における胎仔、子豚又は子豚が生育した成豚からの臓器摘出、及び臓器摘出用アイソレータの概略を示す図である。 成豚飼育用アイソレータの概略を示す図である。 ２以上の飼育のためのアイソレータを高さ方向にラック（棚）を介して重ねて収容する実施形態を示す概略図である。 麻酔開始後子宮摘出までの所要時間と、取り出される胎仔又は子豚の蘇生率との相関を示す図である。
　以下、本発明の実施態様について詳細に説明するが、本発明は、以下の実施態様に何ら限定されるものではなく、本発明の目的の範囲内において、適宜変更を加えて実施することができる。
≪豚臓器を含む移植材の製造方法≫
　本発明の豚臓器又はその由来物を含む移植材の製造方法は、指定病原体フリーではない環境下で飼育された母豚から子宮を摘出すること、
　摘出した上記子宮をデコンタミネーション処理後にアイソレータ内の無菌環境に収容すること、
　上記子宮からの胎仔又は子豚の取出しをアイソレータ内の無菌環境で行うこと、
　任意で前記胎仔又は子豚の蘇生及び飼育を含み、かつ、前記蘇生及び飼育をアイソレータ内の無菌環境で行い、及び
　前記胎仔、子豚、又は子豚が生育した成豚から臓器を摘出することを含み、前記摘出した臓器がＤＰＦである。
　胎仔又は子豚の出生に際し、母豚から胎仔又は子豚への感染は、経胎盤感染以外の感染は発生しないことから、本発明の製造方法によれば、ＤＰＦではない環境下で飼育された母豚から、アイソレータ内の無菌環境で上記子宮から胎仔又は子豚の取り出しを行い、かつ当該胎仔、子豚、又は子豚が生育した成豚から臓器を摘出することにより、ＤＰＦの豚臓器又はその由来物を取得することができる移植材の製造方法を提供することができる。
　日本における上記指定病原体としては以下が挙げられる。
〔ウイルス〕：豚パルボウイルス、豚ヘルペスウイルス、アフリカ豚コレラウイルス（アフリカ豚熱ウイルス）、豚ポックスウイルス、豚エンテロウイルス、豚水疱病ウイルス、豚水疱疹ウイルス、水疱性口炎ウイルス、豚コレラウイルス（豚熱ウイルス）、日本脳炎ウイルス、豚伝染性胃腸炎ウイルス、豚インフルエンザウイルス、口蹄疫ウイルス、脳心筋炎ウイルス、狂犬病ウイルス、豚デノウイルス、アストロウイルス、ゲタウイルス、豚繁殖・呼吸障害症候群ウイルス、豚流行性下痢ウイルス、レオウイルス、豚サイトメガロウイルス、豚血球凝集性脳脊髄炎、豚呼吸器型コロナウイルス、豚ルブラウイルス、カリシウイルス、豚リンパ球向性ヘルペスウイルス、豚Ｅ型肝炎ウイルス、メナングウイルス、ニパウイルス、ハンタウイルス、東部・西部ウマ脳炎ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、ボルナウイルス、アボイウイルス、ポリオーマウイルス、豚内在性レトロウイルス
〔細菌〕：エルシニア菌、気管支敗血症菌、クロストリジウム属、結核（ヒト型、ウシ型、鳥型菌）、サルモネラ菌、大腸菌、炭疽菌、豚丹毒菌、パスツレラ菌、豚赤痢菌、ヘモフィルス菌、ブドウ球菌、ブルセラ菌、ヘモパルトネラ、マイコプラズマ属、リステリア菌、アクチノバチルス菌、連鎖球菌、緑膿菌、豚クチノミセス、アクチノバチルス属、キャンピロバクター属、クラミジア、コクシエラ、ローソニア、レプトスピラ属、豚エペロスロゾーン
〔真菌〕：真菌類、トリコフィトン属他皮膚糸状菌
〔原虫〕：トキソプラズマ、コクシジウム、パランチジウム、クリプトスポリジウム、サーコシスティス、パベシア、トリパノソーマ属、豚回虫、トキソカラ、エキノコッカス、紅色毛様線虫、蛭状鉤頭虫、肺虫、糞線虫、有鉤条虫、繊毛虫、毛様線虫、豚鞭虫、その他外部寄生虫
〔日本以外の国からの導入を含め、最も厳密にコントロールされているミニ豚に残っている可能性がある微生物〕：豚サイトメガロウイルス、豚ガンマヘルペスウイルス、豚サーコウイルス、豚内在性レトロウイルス１，２、豚スピューマウイルス
　上記中、下線部は人獣共通感染症である。
　世界保健機関（ＷＨＯ）では、上記指定病原体として以下を挙げている（Second WHO Global Consultation on Regulatory Requirements for Xenotransplantation Clinical Trials, October 17-19 2011, WHO, Geneva, Switzerland）。
〔ウイルス〕：アデノウイルス各種、脳心筋炎ウイルス、インフルエンザウイルス（豚、鳥、ヒト）、リンパ球性絨毛膜炎ウィルス（ＬＣＭＶ）、ニパウイルス（ヘンドラ様）、メナングルウイルス、豚サーコウイルス、豚サイトメガロウイルス（ＰＣＭＶ）、豚内在性レトロウイルス（ＰＥＲＶ）、豚Ｅ型肝炎ウイルス、豚リンパ球向性ヘルペスウイルス（ＰＬＨＶ）、豚パルボウイルス（ＰＰＶ）、豚繁殖・呼吸障害症候群ウイルス、疑似狂犬病ウイルス、狂犬病ウイルス、ロタウィルス、トルクテノウイルス
〔細菌〕：アクチノバチルス各種（例えば、肺炎桿菌）、気管支敗血症菌、ブルセラ・スイス、キャンピロバクター各種（例えば、コリ、ジェジュニ）、クラミジア・シッタシ、クロストリジウム・ディフィシル、コリネバクテリウム各種（例えば、ピオゲネス、スイス）、ヘモフィルス各種（例えば、パラスイス、スイス）、クレブシエラ各種（例えば、肺炎桿菌）、レジオネラ・ニューモフィラ、レプトスピラ各種、リステリア・モノサイトゲネス、マイコバクテリウム各種（例えば、ウシ型結核菌、ヒト型結核菌、非結核性抗酸菌）、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ、ノカルジア各種、パスツレラ各種（例えば、ヘモリチカ、ムルトシダ、肺パスツレラ）、シュードモナス各種（例えば、エルギノーザ、シュードマレイ）、サルモネラ（例えば、チフス菌、ティフィムリウム、コレレスイス）、セルプリーナ・ハイオディセンテリア、赤痢菌各種、ブドウ球菌各種（例えば、黄色ブドウ球菌、ハイカス）、連鎖球菌各種（例えば、肺炎レンサ球菌、豚レンサ球菌）、ストロンギロイデス各種（例えば、ランソミ）、エルシニア菌各種（例えば、エンテロコリチカ、シュードツベルクローシス）
〔真菌〕：アスペルギルス各種、カンジダ各種、クリプトコッカス各種、ヒストプラスマ・カプスラーツム、小胞子菌各種、白癬菌各種
〔原虫〕：回虫各種、クリプトスポリジウム各種（例えば、パルバム）、エキノコッカス、イソスポラ各種、ネオスポラ、ストロンギロイデス・ステルコラーリス、トキソプラズマ・ゴンディ、旋毛虫
　米国における上記指定病原体としては以下が挙げられる（N Engl J Med 2022 387 35-44 Genetically Modified Porcine-to-Human Cardiac Xenotransplantation）。ＷＨＯの指定病原体として上記例示された病原体も、米国における上記指定病原体として適用されてもされなくてもよい。
〔ウイルス〕：Ｅ型肝炎ウイルス、γヘルペスウイルス、Ａ型インフルエンザウイルス、豚サイトメガロウイルス、豚サーコウイルス２型、豚サーコウイルス３型、豚流行性下痢ウイルス（Ｓ遺伝子）、豚デルタコロナウイルス、豚伝染性胃腸炎ウイルス、豚繁殖・呼吸障害症候群ウイルス（ＰＲＲＳＶ）、豚内在性レトロウイルスＡ、豚内在性レトロウイルスＢ、豚内在性レトロウイルスＣ
〔細菌〕：マイコプラズマ・ハイオニューモニエ
　ＥＰにおける上記指定病原体としては以下が挙げられる（REPORT ON THE STATE OF THE ART IN THE FIELD OF XENOTRANSPLANTATION Strasbourg, 21 February 2003  CDBI/CDSP-XENO (2003) 1）。
〔ウイルス〕：アフリカ豚コレラウイルス（アフリカ豚熱ウイルス）、ボーダー病ウイルス、ボルナウイルス、牛ウイルス性下痢ウイルス、豚熱ウイルス、東部馬脳炎ウイルス、脳心筋炎ウイルス、口蹄疫ウイルス、赤血球凝集性脳脊髄炎ウイルス、ハンタウイルス、ヒトアデノウイルス、パラインフルエンザウイルス、ヒトライノウイルス、インフルエンザＡ（Ｈ１Ｎ１型及びＨ３Ｎ２型）、日本脳炎ウイルス、リンパ球性絨毛膜炎ウィルス、マウスパラインフルエンザウイルス（センダイ）、ニパウイルス、その他のヒトインフルエンザウイルス、豚サーコウイルス、豚サイトメガロウイルス、豚内在性レトロウイルス（ＰＥＲＶ）、豚エンテロウイルス、豚流行性下痢ウイルス、豚パルボウイルス、豚呼吸器ウイルス、豚呼吸器コロナウイルス、疑似狂犬病ウイルス、狂犬病ウイルス、ロタウィルス、繁殖障害症候群ウイルス、豚Ｅ型肝炎ウイルス、豚痘ウイルス、伝染性胃腸炎ウイルス、水疱性口炎ウイルス
〔細菌〕：気管支敗血症菌、炭疽菌、豚丹毒菌、レプトスピラ属、マイコバクテリウム属、クラミジア・シッタシ、パスツレラ・ムルトシダ、キャンピロバクター属、豚レンサ球菌、リステリア属、大腸菌、ブルセラ・スイス、サルモネラ属
〔原虫〕：トキソプラズマ・ゴンディ、旋毛虫
〔その他〕：伝達性海綿状脳症（ＴＳＥ）病原体
　中国における上記指定病原体としては以下が挙げられる（Xenotransplantation-New Insights, 2017 chap5 67-91 ISBN978-953-51-3356-8 Xenotransplantation_for_Islets_from_Clinical_Side）。
〔ウイルス〕：アデノウイルス（豚）、豚熱ウイルス、脳心筋炎ウイルス、口蹄疫ウイルス、ヒトインフルエンザウイルス、日本脳炎ウイルス、豚サーコウイルス２型、豚サイトメガロウイルス、豚γヘルペスウイルス、豚インフルエンザウイルス、豚パルボウイルス、豚繁殖・呼吸障害症候群ウイルス、豚伝染性胃腸炎ウイルス、疑似狂犬病ウイルス、狂犬病ウイルス、ロタウィルス、豚水疱病ウイルス
〔細菌〕：アクチノバシラス・プルロニューモニエ、気管支敗血症菌、ブルセラ属、レプトスピラ属、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ａｖｉｕｍ－ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ　ｃｏｍｐｌｅｘ（ＭＡＣ）、ウシ型結核菌、ヒト型結核菌、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ、パスツレラ・ムルトシダ、チフス菌、セルプリーナ・ハイオディセンテリア、赤痢菌、豚レンサ球菌２型
〔真菌〕：クリプトコッカス・ネオフォルマンス、ヒストプラスマ・カプスラーツム、病原性皮膚真菌
〔原虫〕：豚回虫、エキノコッカス属、外部寄生虫、イソスポラ属、肥大吸虫、ネオスポラ、ストロンギロイデス・ランソミ、トキソプラズマ・ゴンディ、旋毛虫
　以下、図１～５を参照して本発明の豚臓器又はその由来物を含む移植材の製造方法について説明する。
　＜アイソレータ＞
　　（筐体）
　図１～５に示したように、アイソレーター１は、外界（アイソレータ１の外部）からの汚染を防止するために、内部を無菌環境とされて外界と隔離された空間を創製し得る構造を有する筐体２を含む。
　本明細書において、「隔離」とは、ある２つの空間があったとき、その一方の空間と、他方の空間との間で、ウイルス、細菌等の微生物、可視可能な物質及び非揮発性の化学物質の行き来ができないことをいう。隔離は、任意の空間（たとえば、外界）に対して行われる。
　上記筐体２の材質としては、特に制限はないが、プラスチック（軟質プラスチック（軟質ポリ塩化ビニルなど）、硬質プラスチック）、金属（例えば、ステンレス、鉄等）などが挙げられる。
　　（吸気部３、排気部４及び開閉部５）
　図１に示したように、上記アイソレータ１は、無菌空気（例えば、後述するフィルターを通って微生物、ウイルス等が除去された無菌空気）を送り込む後述するフィルターを具備する吸気部３及び内部空気を送り出す排気部４、並びに、搬入及び搬出を行うための１又は２以上の開放及び密閉が可能な開閉部５（好ましくは２以上の開閉部）を有し得る。
　上記アイソレータ１において、開閉部５を密閉した状態では、無菌空気を送り込む上記吸気部３及び内部空気を送り出す上記排気部４を除いて、気密性が確保されることが好ましい。
　これにより、上記アイソレータ１の外部が、指定病原体フリーではない環境であっても外気が上記アイソレータ１内に流入することによる微生物、ウイルスの混入を防ぐことができる。また、制御されない上記アイソレータ１内の内部空気の外部への流出による、内部気圧の予想外の圧力低下、気密性低下に起因する、その後の外気の流入を防ぐことができる。
　本明細書において「気密性」とは、区切られたある空間があったとき、その空間（アイソレータ内部）が、その空間の外側（アイソレータ外部）に対して気体が行き来することができない状態又は性質ということができる。ここでいう空間とは、１つのアイソレータの内部空間に限定されず、後述するように、複数のアイソレータを（例えば、開閉部５と着脱可能なスリーブ７を介して）連結して各アイソレータの内部空間を連通した場合、連通された内部空間に対して、外部空間から気体が行き来することができない状態又は性質も包含される。
　上記気密性は、例えばマルチ環境測定機器（ｔｅｓｔｏ－４３５）にて連続測定したときに空気漏洩がないこと等により確認することができる。
　上記アイソレータは無菌空気（例えば、下記フィルターを通って微生物、ウイルス等が除去された無菌空気）を送り込む下記フィルターを具備する吸気部３及び内部空気を送り出す排気部４を有し得る。
　これにより、上記アイソレータ内が無菌的な環境が保たれ得る。
　本明細書において「フィルター」とは、病原体（例えば、細菌、ウィルスなどの微生物、好ましくは指定病原体）、塵などを通さず、気体のみを通すようなものをいう。そのようなフィルターとしては、ＨＥＰＡフィルター（Ｈｉｇｈ　Ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ　Ｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ　Ａｉｒ）、ＵＬＰＡ（Ｕｌｔｒａ　Ｌｏｗ　Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ　Ａｉｒ）フィルター、高通気性除塵フィルター（三菱製紙のＥＰシリーズ）等が挙げられ、ＨＥＰＡフィルターは、セパレーター形であってもノンセパレ一ター形であってもよい。上記フィルターとしては、微生物の行き来を遮断することができるフィルターが好ましく、また、滅菌状態を保持することができるという機能を有するフィルターが好ましい。ＨＥＰＡフィルター又はＵＬＰＡフィルターがより好ましい。
　上記吸気部３及び排気部４は、単なる円状のような開口部であってもよく、吸気部３及び排気部４に管が接続されたものでもよい。吸気部３及び排気部４にはまた、弁が備えられていてもよい。吸気部３及び排気部４は、上記筐体２と気密可能に連結され得る構造を有することが好ましい。弁は、必要に応じて上記上記吸気部３及び排気部４に取り付けられ、気体などの出入りを調節する機能を付与する。
　本明細書において「弁」とは、管などを流れる気体又は液体の出入りあるいは流れの方向を調節する装置をいう。
　弁は、上記アイソレータ１内部と外界に対する気密性を保つことを可能にする機能を付与し得る。
　上記アイソレータ１内の無菌環境としては、例えば、国際標準ＩＳＯ基準１４６４４－１（ＪＩＳ準拠）でＩＳＯクラス５（クラス１００）以上の清浄度の環境、ＥＵ－ＧＭＰガイドライン（ＥＵの医薬品の製造管理および品質管理に関する基準）でグレードＡ以上の清浄度の環境が挙げられ、ＩＳＯクラス４（クラス１０）以上の清浄度の環境が好ましく、ＩＳＯクラス３（クラス１）以上の清浄度の環境がより好ましい。
　本明細書において「清浄度」とは、ある空間（例えば、アイソレータの内部）の清浄のレベルをいう。そのような清浄度としては、例えば、豚にとっての病原体（例えば、特定のウィルス、細菌など）を含まない状態が挙げられ、指定病原体を含まない状態が好ましい。清浄度の設定は、上述したフィルターを使用することによって行うことができる。
　上述のように、上記アイソレータ１は、搬入及び搬出を行う１又は２以上の開閉部５（好ましくは２以上の開閉部５）を有し得る。
　搬入及び搬出を行う開閉部５は、後述する消毒槽（除染槽）６との連結部（好ましくは着脱可能な連結部）を兼ねることができ、また、後述するようにアイソレータ１が複数存在する場合には、各アイソレータ同士の連結部（好ましくは着脱可能な連結部）を兼ねることができる。
　図１～４に示したように、各アイソレータの開閉部５は、外界からの隔離性及び／又は気密性を維持しつつ連結することができ、かつ開閉部５と着脱可能なスリーブ（連結器）７を介して他のアイソレータの開閉部と着脱可能に連結可能であることが好ましい。上記スリーブ７は各アイソレータの内部空間同士を着脱可能に連結可能である。上記スリーブ７はパスボックスの形態を兼ねていてもよい。
　上記連結することにより、各アイソレータ間を成豚、胎仔又は子豚８を移動させることができる。
　一方、取り外す（脱する）ことにより、各アイソレータ毎に各アイソレータの外部環境（例えば、非ＤＰＦ環境又はＤＰＦ環境）を独立して選択することができ、また、各アイソレータの設置場所も各アイソレータ毎に独立して選択することができる。
　上記アイソレータ内に外気が流入した際に、微生物、ウイルス等の病原体の混入を防ぐ観点から、各アイソレータ同士の取り外し（脱）、又は、上記スリーブ７の取り外し（脱）は、ＤＰＦ環境下で行うことが好ましい。
　本明細書において「連結可能」とは、ある２つの部分が連結され得る構造を有する場合、必要に応じてその２つの部分（例えば、開閉部５）を連結することができることをいい、隔離性及び／又は気密性を維持しつつ連結可能であることが好ましい。
　上記アイソレータには、隔離性及び／又は気密性を保つためにパッキンが取り付けられ得る。そのようなパッキンは、例えば、各部分の接続部分に取り付け得るし、消毒槽（除染槽）との連結部、各アイソレータ１同士の着脱可能な連結部、上記スリーブ７との着脱可能な連結部等にも取り付け得る。
　上記開閉部５の形状としては特に制限はないが、上記アイソレータ１の使用態様に応じて、例えば、四角形、長方形、正方形、円形（例えば略円形又は正円形）、楕円形等とすることができ、管状のものが付随していてもよく、ある２つの空間（例えば、アイソレータ１の内部）を連結する機能を有する形状であることが好ましい。上記開閉部５は、それ自体が開放可能及び密閉可能であってもよく、別の手段（例えば、弁）を用いることによって開放可能及び密閉可能であってもよい。弁は、必要に応じて上記開閉部５に取り付けられ、気体などの出入りを調節する機能を付与する。
　例えば、消毒槽（除染槽）６との連結部、各アイソレータ１同士の着脱可能な連結部、上記スリーブ７との着脱可能な連結部等との連結を解除する場合に、上記アイソレータ１の内部と外界との隔離を保つことを可能にする弁を備えることができる。このような弁は当該分野において周知である。
　　（グローブ）
　以降説明する子宮摘出、胎仔又は子豚８の取出しの作業性（好ましくは、上記に加えて、蘇生、飼育、臓器摘出の作業性）の観点から、上記アイソレータは、図１及び２に示したように、右手用及び左手用グローブ９（好ましくは、軟質プラスチック製（より好ましくは、軟質ポリ塩化ビニル製）若しくはゴム製グローブ）をそれぞれ備えていることが好ましい。
　　（機械アーム）
　上記アイソレータ１（好ましくは、飼育用アイソレータ（胎仔又は子豚飼育用アイソレータ）２０、成豚飼育用アイソレータ２１、臓器摘出用アイソレータ３０）は内部に、外界から操作（好ましくは、遠隔操作）可能な機械アームを備えていなくてもよいが、備えていることが好ましい。上記機械アームとしては、外界から操作である限り、材質、機能、モジュール等に特に制限はない。
　上記アイソレータ１（好ましくは、飼育用アイソレータ（胎仔又は子豚飼育用アイソレータ）２０、成豚飼育用アイソレータ２１、臓器摘出用アイソレータ３０）内での上記子豚、上記成豚の固定作業（例えば、飼育時、注射時、臓器摘出時等の固定作業）に好適である。
　また、上記機械アームに注射器を担持させることにより、外界からの操作で注射（好ましくは、遠隔注射）を可能にするためである。例えば、上記アイソレータ１（好ましくは、飼育用アイソレータ（胎仔又は子豚飼育用アイソレータ）２０、成豚飼育用アイソレータ２１、臓器摘出用アイソレータ３０）内部で、上記機械アームにより麻酔注射を行うことができる。特に、上記子豚、上記成豚からの臓器１４の摘出の際の麻酔注射に好適である。
　また、上記機械アームに手術器具（例えば、メス）を担持させることにより、臓器１４の摘出手術も行い得る。
　　（予め内部に収容して置く物）
　上記アイソレータ１（好ましくは、子豚の取出し用アイソレータ、又は、臓器摘出用アイソレータ３０）は内部に、予め滅菌済みの手術器具（例えば、メス）を一式、配置しておくことができる。
　また、上記アイソレータ１（好ましくは、飼育用アイソレータ（胎仔又は子豚飼育用アイソレータ）２０、成豚飼育用アイソレータ２１）は内部に、予め、人工哺育用の、水、代用乳、人工乳、飼料１０（好ましくは、滅菌済みの、水、代用乳、人工乳、飼料）などを一式、配置しておくことができる。
　また、上記アイソレータ１（好ましくは、臓器摘出用アイソレータ３０）は内部に、予め、開放及び密閉可能な臓器収容用容器３１（好ましくは、滅菌済の開放及び密閉可能な臓器収容用容器）を配置しておくことができる。
　上記アイソレータ１は使用前に、上記アイソレータ１内部を、過酸化水素、過酢酸、オゾンガス、ホルマリンガス、紫外線、放射線（γ線照射）、プラズマ等の任意の方法により滅菌し、上記アイソレータ１内部を無菌環境とすることができる。
　＜母豚１１の飼育＞
　母豚１１を飼育する上記非ＤＰＦ環境（指定病原体フリーではない環境）としては、ＤＰＦ環境ではない限り特に制限はないが、ＳＰＦ（Ｓｐｅｃｉｆｉｃ　Ｐａｔｈｏｇｅｎ　Ｆｒｅｅ）環境、国際標準ＩＳＯ基準１４６４４－１（ＪＩＳ準拠）でＩＳＯクラス７（クラス１０，０００）以上の清浄度の環境、ＥＵ－ＧＭＰガイドラインでグレードＢ以上の清浄度の環境等が挙げられ、煩雑で大がかりなＤＰＦ施設を要することなく、母豚１１の経胎盤感染性病原体による感染を回避する観点から、ＳＰＦ環境、ＩＳＯクラス６（クラス１，０００）以上の清浄度の環境、ＥＵ－ＧＭＰガイドラインでグレードＢ以上の清浄度の環境が好ましく、ＳＰＦ環境がより好ましい。
　上記母豚１１の飼育方法としては、上記非ＤＰＦ環境で飼育する限り特に制限はない。
　本発明において、母豚１１とは、受胎から分娩までの妊娠期にある妊娠雌豚を意味し、妊娠末期の雌豚が好ましい。
　本発明者らは、母豚１１から胎仔又は子豚８への感染は、経胎盤感染以外の感染は原則発生しないことを見出している。
　上記母豚１１は、経胎盤感染性病原体による感染が陰性であり、かつそれ以外の病原体による感染が陽性又は陰性であることが好ましい。
　これにより、胎仔又は子豚８、成豚２２への経胎盤感染を防ぎ、最終的に得られる摘出臓器のＤＰＦ化に寄与し得る。
　また、経胎盤感染性以外の病原体が陽性の母豚１１でも、本発明の製造方法に適用することができるから、移植材製造コストを低減することができる。
　また、母豚１１が経胎盤感染性以外の病原体がたとえ陽性であったとしても、胎仔又は子豚８への垂直感染が発生しないことから、母豚１１について、経胎盤感染性以外の病原体感染の検査を要せず、移植材製造プロセスにおいてボトルネック（律速）となっていた上記検査の結果判明までの待機時間を省略することができる。
　上記の通り、本発明の製造方法は、母豚１１について、経胎盤感染性以外の病原体感染の検査を行わないことが好ましい。
　上記経胎盤感染性病原体としてはブタ繁殖・呼吸症候群（ＰＲＲＳ）ウイルス、オーエスキー病ウイルス、豚サーコウイルス２型、パルボウイルス、日本脳炎ウイルス、豚熱ウイルス、豚痘ウイルス、レプトスピラ、ブルセラ・スイス、豚丹毒菌、トキソプラズマが挙げられる。
　＜子宮１２の摘出＞
　図１に示した母豚１１から子宮１２の摘出方法としては特に制限はなく、任意の手術台１３上で行っても行わなくてもよく、常法（例えば、仰臥位にした後の常法）による、腹式若しくは膣式子宮摘出術、帝王切開による子宮摘出術などが挙げられ、常法による開腹後に子宮摘出を行ってもよい。
　摘出前に母豚１１に麻酔を施すことが好ましい。
　上記麻酔としては全身麻酔であっても局所麻酔であってもよいが全身麻酔が好ましい。
　本発明者らは、取り出される子豚のバイタルサイン（特に蘇生率）への麻酔による影響を見出している。
　取り出される胎仔又は子豚８のバイタルサインの観点から、子宮１２の上記摘出が、上記麻酔開始後２５分以内に終わることが好ましく、上記麻酔開始後２７分以内に上記胎仔又は子豚の取出しが終わることがより好ましい。
　吸入麻酔であっても静脈麻酔（による深麻酔）であってもよいが、麻酔の胎仔又は子豚への浸透を低減して、取り出される胎仔又は子豚８の蘇生率を向上する観点から、吸入麻酔が好ましい。
　取り出される胎仔又は子豚の蘇生率を向上させる観点から、任意の麻酔拮抗剤又は呼吸促進剤を任意の時期（例えば、取出し時又は蘇生時）に任意の方法（例えば、注射）により胎仔又は子豚に投与してもしなくてもよい。
　子宮１２の上記摘出は、非ＤＰＦ環境（指定病原体フリーではない環境）で行われても、ＤＰＦ環境で行われてもよく、煩雑で大がかりなＤＰＦ施設を要しない観点から、非ＤＰＦ環境が好ましい。摘出子宮１２への不用意な病原体付着を回避する観点から、ＳＰＦ環境、ＩＳＯクラス７（クラス１０，０００）以上の清浄度の環境、ＥＵ－ＧＭＰガイドラインでグレードＢ以上の清浄度の環境等がより好ましい。
　＜デコンタミネーション処理＞
　図１に示した上記摘出子宮のデコンタミネーション処理は、任意の消毒媒体（除染媒体）による上記子宮の除染又は消毒等が挙げられ、より具体的には、上記子宮の上消毒媒体（除染媒体）への浸漬又は接触、上記子宮の上記消毒媒体（除染媒体）による洗浄等が挙げられる。
　上記子宮摘出処理及び上記デコンタミネーション処理により、母豚から胎仔又は子豚への経産道の感染を防ぎ、最終的に得られる摘出臓器のＤＰＦ化に寄与し得る。
　図１に示したように、上記消毒媒体（除染媒体）を満たした（充填した）消毒槽（除染槽）６の一端が開閉部５を介して上記アイソレータ内と連結（好ましくは上記アイソレータの気密性が維持された状態での連結）することが好ましい。この際、アイソレータ内部と、外部とが、消毒槽６に充填された消毒媒体（除染媒体）により隔離されている（すなわち、連通していない）ことがより好ましい。
　摘出した上記子宮１２を上記消毒槽６に投入して上記消毒槽内、及び上記連結している部分の内部を通過させ上記アイソレータ１内に上記子宮１２を送達（及び収容）することが好ましい。これにより、上記消毒媒体（除染媒体）と接触後の上記子宮の外界若しくは外気との接触を回避できるからである。
　上記除染媒体又は消毒媒体としては、任意の、除染液若しくは消毒液（例えば、過酢酸）、又は、除染ガス若しくは消毒ガス等が挙げられ、上記接触回避の観点から、除染液若しくは消毒液が好ましい。
　上記デコンタミネーション処理を行う上記消毒媒体（除染媒体）を充填した消毒槽６を設置する環境（外部環境）としては、非ＤＰＦ環境であっても、ＤＰＦ環境であってもよく、煩雑で大がかりなＤＰＦ施設を要しない観点から、非ＤＰＦ環境が好ましい。摘出子宮１２への不用意な病原体付着を回避する観点から、ＳＰＦ環境、ＩＳＯクラス７（クラス１０，０００）以上の清浄度の環境、ＥＵ－ＧＭＰガイドラインでグレードＢ以上の清浄度の環境等がより好ましい。
　摘出した上記子宮１２の収容前に上記アイソレータ１内部を、オゾンガス、ホルマリンガス、紫外線、放射線（γ線照射）、プラズマ等の任意の方法により滅菌し、上記アイソレータ内部を無菌環境とすることができる。
　＜胎仔又は子豚の取出し、蘇生、飼育＞
　本発明において、上記子宮からの胎仔又は子豚の取出しをアイソレータ内の無菌環境で行う。さらに任意で前記胎仔又は子豚の蘇生及び飼育を含み、その場合には前記蘇生及び飼育をアイソレータ内の無菌環境で行う。
　つまり、上記「任意で前記胎仔又は子豚の蘇生及び飼育を含み、かつ、前記蘇生及び飼育をアイソレータ内の無菌環境で行」うことは、アイソレータ内の無菌環境で前記胎仔又は子豚の蘇生及び飼育を行ってもよいし、アイソレータ内の無菌環境で前記胎仔又は子豚の蘇生及び飼育を行わなくてもよいことを意味し、アイソレータ内の無菌環境で前記胎仔又は子豚の蘇生及び飼育を行うことが好ましい。アイソレータ内の無菌環境で前記胎仔又は子豚の蘇生及び飼育を行わない場合であっても、下記のような無菌的な環境で前記胎仔又は子豚の蘇生及び飼育することが好ましい。
　アイソレータ内で行わない場合（つまり、アイソレータ外）の無菌的な環境としては、非ＤＰＦ環境又はＤＰＦ環境のいずれであってもよいが、一般的な外科手術室のクリーンクラスの環境であることが好ましく、ＳＰＦ環境、ＩＳＯクラス６（クラス１，０００）以上の清浄度の環境、ＥＵ－ＧＭＰガイドラインでグレードＢ以上の清浄度の環境がより好ましく、ＩＳＯクラス５（クラス１００）以上の清浄度の環境、ＥＵ－ＧＭＰガイドラインでグレードＡ以上の清浄度の環境が更に好ましく、ＩＳＯクラス４（クラス１０）以上の清浄度の環境が好ましく、ＩＳＯクラス３（クラス１）以上の清浄度の環境が特に好ましい。
　後述するように、取出し用アイソレータ、蘇生用アイソレータとは、別個のアイソレータであってもよいし、取出し用アイソレータが、蘇生用アイソレータを兼ねてもよい。
　上述のように、上記アイソレータ１は、右手用及び左手用グローブ９（好ましくは、軟質プラスチック製（より好ましくは、軟質ポリ塩化ビニル製）若しくはゴム製グローブ）をそれぞれ備えていることが好ましい。これにより、右手用及び左手用グローブ９越しに、上記子宮１２からの胎仔又は子豚８の取出し（及び、必要に応じて蘇生作業）を両手で行うことができる。
　図１に示したように、上記子宮１２からの胎仔又は子豚８の取出しは、上記アイソレータ内の無菌環境で胎仔又は子豚８を取出せ得る限り特に制限はなく、上記右手用及び左手用グローブ９越しに任意の方法（例えば、手技）で行い得る。
　上記子宮からの胎仔又は子豚の取出しは上記右手用及び左手用グローブ９越しに、予め配置しておいた滅菌済みの上記手術器具（例えば、メス）を操作して行うことが好ましい。
　より具体的には、上記手術器具（例えば、メス）を操作して子宮及び羊膜を（好ましくは同時に）切開して、胎仔又は子豚８を取出すことが挙げられる。
　なお、指定病原体フリーではない環境下で飼育された母豚１１から摘出した子宮１２内であっても、子宮内は無菌的である。
　上記子豚の蘇生は、上記胎仔又は子豚を蘇生できる限り特に制限はなく、上記アイソレータ内の無菌環境で行うことが好ましく、上記右手用及び左手用グローブ越しに、上記胎仔（新生仔）又は子豚の体と口腔、鼻孔の羊水を拭き取る等の体表面の洗浄等の任意の方法（例えば、手技）で蘇生させることが挙げられる。
　アイソレータ１の無菌環境とされた内部は、上述のように、アイソレータ１の外部から隔離されていることから、胎仔又は子豚の取出し作業を行うアイソレータ及び蘇生作業を行うアイソレータを設置する環境（すなわち、アイソレータの外部環境）は各々独立に非ＤＰＦ環境又はＤＰＦ環境のいずれであってもよく、煩雑で大がかりなＤＰＦ施設を要しない観点から、非ＤＰＦ環境が好ましく、アイソレータ内部への不用意な病原体の混入を回避する観点から、ＳＰＦ環境、ＩＳＯクラス７（クラス１０，０００）以上の清浄度の環境、ＥＵ－ＧＭＰガイドラインでグレードＢ以上の清浄度の環境等がより好ましい。
　上記蘇生後の上記胎仔又は子豚の飼育、子豚が生育した成豚２２の飼育は、上記アイソレータ外で飼育しても上記アイソレータ内で飼育してよいが、上記アイソレータ外で飼育する場合であっても、上述したような一般的な外科手術室のクリーンクラスの環境等の無菌的な環境で飼育することが好ましい。図２に示したように、上記蘇生後の上記胎仔又は子豚の飼育、子豚が生育した成豚２２の飼育は、上記アイソレータ内の無菌環境で飼育することが好ましく、上記アイソレータ内に予め配置しておいた、水、代用乳、人工乳、飼料１０（好ましくは、滅菌済みの、水、代用乳、人工乳、飼料）で人工哺育することがより好ましい。
　上記のように、アイソレータ１内に予め配置して置くことによりアイソレータ１内部の外部からの隔離性を維持することができ、飼育時において、水、代用乳、人工乳、飼料等の搬入（例えば、開閉部５を介した搬入）に伴う外気流入による病原体の混入を防止し、最終的に得られる摘出臓器のＤＰＦ化に寄与し得る。
　必要に応じてスリーブ７を介して他のアイソレータの開閉部５と連結可能な開閉部５の位置は、胎仔又は子豚８、成豚２２を飼育する位置（例えば、下記床１５）に対して、２５ｃｍ以上の高さを有することが好ましく、３０ｃｍ以上の高さを有することがより好ましく、３５ｃｍ以上の高さを有することが更に好ましく、４０ｃｍ以上の高さを有することが特に好ましく、５０ｃｍ以上の高さを有することがとりわけ好ましく、６０ｃｍ以上の高さを有することが最も好ましい。
　これにより、胎仔又は子豚８、成豚が他のアイソレータへ自力で移動してしまうことを防止し、脱走を防止することができる。
　上記高さの上限値としては特に制限はないが、例えば、１６０ｃｍ以下、１４０ｃｍ以下、１２０ｃｍ以下、１００ｃｍ以下、９０ｃｍ以下等が挙げられる。
　上記アイソレータ１内に胎仔、子豚、成豚を配置ないし飼育するための床１５を設けても設けなくてもよく、上記床１５を境に上記アイソレータ内部を上部と下部とに分けても分けなくてもよい。上記床の材質としては特に制限はなく、木材、金属材（ステンレス、鉄等）プラスチック材等が挙げられる。
　上記床１５としては、糞尿を床下に落下させ、胎仔又は子豚８、成豚２２を糞尿で汚染させることなく衛生管理する観点から、網目構造を有する床が好ましく、例えば、簀子、金網（エキスパンドメタル、メッシュ金網、鉄網等）が好ましい。
　床下に落下した糞尿を貯留するため、上記アイソレータ内の床下に糞尿貯留槽を設けても設けなくてもよい。
　飼育の観点から、特に、図２に示したように、後述する飼育用のアイソレータ２０が、上記床１５及び糞尿貯留槽を有することが好ましい。
　特に、子豚から成豚への生育のような長期間（例えば、４週間以上、好ましくは３か月以上、より好ましくは６か月以上、更に好ましくは、１年以上、特に好ましくは１年６か月以上）の飼育における衛生管理の観点から、上記糞尿貯留槽は、上記アイソレータ１（好ましくは飼育用アイソレータ（胎仔又は子豚飼育用アイソレータ）２０、成豚飼育用アイソレータ２１）内の床下と管で連結されたバキューム式の糞尿貯留槽が好ましい。この際、外界に対して上記アイソレータ１（好ましくは飼育用アイソレータ（胎仔又は子豚飼育用アイソレータ）２０、成豚飼育用アイソレータ２１）内は陽圧に維持されていることが好ましい。これにより、上記管を介して気圧差により糞尿を吸引して上記糞尿貯留槽を運ぶことができる。
　この際、上記糞尿貯留槽は、別の管を介して、外界（アイソレータ外）は陰圧に維持された外界（アイソレータ外）に連結していてもいなくてもよい。上記各管は気圧制御の観点から弁を有していてもいなくてもよい。
　上記糞尿貯留槽は、バキュームブロアにより陰圧化されていてもいなくてもよい。
　上記アイソレータ１内に棚を有していてもいなくてもよい。
　図２に示したように、上記アイソレータ１内に棚を具備することにより、例えば、上述した、人工哺育用の、水、代用乳、人工乳、飼料１０（好ましくは、滅菌済みの、水、代用乳、人工乳、飼料）などを収容しておくことができる。これにより、人工哺育用の、水、代用乳、人工乳、飼料１０を糞尿で汚染させることなく衛生管理することができる。
　アイソレータ１の無菌環境とされた内部は、上述のように、アイソレータ１の外部から隔離されていることから、胎仔、子豚、成豚の飼育を行うアイソレータを設置する環境（すなわち、アイソレータの外部環境）は非ＤＰＦ環境又はＤＰＦ環境のいずれであってもよく、煩雑で大がかりなＤＰＦ施設を要しない観点から、非ＤＰＦ環境が好ましく、アイソレータ内部への不用意な病原体の混入を回避する観点から、ＳＰＦ環境、ＩＳＯクラス７（クラス１０，０００）以上の清浄度の環境、ＥＵ－ＧＭＰガイドラインでグレードＢ以上の清浄度の環境等がより好ましい。
　飼育期間としては、臓器摘出の種類、使用目的等に応じて適宜設定し得る。
　前駆細胞の収集、その後の数週間の分化誘導培養等に供する臓器（例えば、膵臓）の摘出を目的とする場合、飼育期間としては、１週齢以上になるまで飼育することが好ましく、２週齢以上になるまで飼育することがより好ましく、３週齢以上になるまで飼育することが更に好ましい。
　この際の飼育の期間の上限としては、２か月齢以下が好ましく、１か月齢以下がより好ましく、４週齢以下が更に好ましい。
　一方、大きさ、機能等の成熟を要する臓器（例えば、心臓、腎臓）の摘出を目的とする場合（つまり、子豚が生育した成豚２２からの摘出が好ましい場合）、飼育期間としては、６か月以上が好ましく、１年以上がより好ましい。この際の飼育の期間の上限としては、２年以下が好ましく、１年６か月齢以下がより好ましい。
　＜胎仔、子豚、又は子豚が生育した成豚からの臓器摘出＞
　本発明は、胎仔、子豚、又は子豚が生育した成豚から臓器を摘出することを含む。
　臓器の上記摘出はアイソレータ内の無菌環境で行っても、行わなくてもよいが、アイソレータ内の無菌環境で行うことが好ましい。
　臓器の上記摘出をアイソレータ内で行わない場合（つまり、アイソレータ外）であっても、上述した無菌的な環境で行うことが好ましい。上記無菌的な環境としては、非ＤＰＦ環境又はＤＰＦ環境のいずれであってもよいが、一般的な外科手術室のクリーンクラスであることが好ましく、ＳＰＦ環境、ＩＳＯクラス６（クラス１，０００）以上の清浄度の環境、ＥＵ－ＧＭＰガイドラインでグレードＢ以上の清浄度の環境がより好ましく、ＩＳＯクラス５（クラス１００）以上の清浄度の環境、ＥＵ－ＧＭＰガイドラインでグレードＡ以上の清浄度の環境が更に好ましく、ＩＳＯクラス４（クラス１０）以上の清浄度の環境が好ましく、ＩＳＯクラス３（クラス１）以上の清浄度の環境が特に好ましい。
　図３に示したように、上記胎仔、子豚８、又は子豚が生育した成豚２２からの臓器１４の上記摘出を上記アイソレータ内で行う場合、上記右手用及び左手用グローブ９越しに、上記アイソレータ内に予め配置しておいた滅菌済みの上記手術器具（例えば、メス）を操作して行うことが好ましい。
　より具体的には、麻酔していてもいなくてもよい上記胎仔又は子豚８、成豚２２を、例えば仰臥位にした後、上記手術器具（例えば、メス）を操作して開腹手術を行い、任意の臓器１４を摘出することが挙げられる。
　上記摘出は、上記胎仔又は子豚８の躯体及び上記臓器１４がいずれも数センチメートル程度の細かい作業となる場合、上記摘出は、上記胎仔又は子豚８、成豚２２の躯体中の上記臓器１４に生理学的に許容される液を注入して上記臓器１４を膨張させた状態で行われることが好ましい。上記臓器１４を膨張させることにより作業性を向上するためである。
　生理学的に許容される上記液としては、ＥＴＫ液（ＥＴ－Ｋｙｏｔｏ液）、ＨＴＫ液（ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ－ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ－ｋｅｔｏｇｌｕｔａｒａｔｅ液）、生理食塩水、ＵＷ液（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ液）、輸液（細胞外液）、水、リン酸緩衝液等が挙げられ、ＥＴＫ液が好ましい。
　必要に応じてスリーブ７を介して他のアイソレータの開閉部５と連結可能な開閉部５の位置は、上記胎仔又は子豚８、成豚２２を飼育する位置（例えば、下記床１５）に対して、２５ｃｍ以上の高さを有することが好ましく、３０ｃｍ以上の高さを有することがより好ましく、３５ｃｍ以上の高さを有することが更に好ましく、４０ｃｍ以上の高さを有することが特に好ましく、５０ｃｍ以上の高さを有することがとりわけ好ましく、６０ｃｍ以上の高さを有することが最も好ましい。
　上記胎仔又は子豚８、成豚２２が他のアイソレータへ自力で移動してしまうことを防止し、脱走を防止することができる。
　上記高さの上限値としては特に制限はないが、例えば、１６０ｃｍ以下、１４０ｃｍ以下、１２０ｃｍ以下、１００ｃｍ以下、９０ｃｍ以下等が挙げられる。
　上記のように、上記アイソレータ内部に、予め配置しておいた開放及び密閉可能な臓器収容用容器３１（好ましくは、滅菌済の開放及び密閉可能な臓器収容用容器）に、摘出された臓器１４を収容し、容器３１を密閉後、上記アイソレータ外部に（例えば、開閉部５を介して）搬出することができる。この場合、開閉部５はパスボックスの形態であってもよい。
　これにより、アイソレータの外部環境が非ＤＰＦ環境であっても、臓器１４が汚染されず、臓器１４のＤＰＦ化に寄与し得る。
　上記臓器１４としては、内臓（例えば、膵臓、腎臓、尿管、膀胱、肝臓、心臓、胃、腸等）、生殖器（例えば、卵巣、精巣等）、骨髄（例えば、造血器官）、脳、眼、鼻、口、皮膚、神経が挙げられ、内臓、生殖器が好ましく、内臓、生殖器がより好ましく、膵臓（例えば、膵島）、腎臓（例えば、後腎、特に、後腎、尿管及び膀胱を含む泌尿器）がさらに好ましい。
　アイソレータ１の無菌環境とされた内部は、上述のように、アイソレータ１の外部から隔離されていることから、臓器１４の摘出を行うアイソレータを設置する環境（すなわち、アイソレータの外部環境）は非ＤＰＦ環境又はＤＰＦ環境のいずれであってもよく、煩雑で大がかりなＤＰＦ施設を要しない観点から、非ＤＰＦ環境が好ましく、アイソレータ内部への不用意な病原体の混入を回避する観点から、ＳＰＦ環境、ＩＳＯクラス７（クラス１０，０００）以上の清浄度の環境、ＥＵ－ＧＭＰガイドラインでグレードＢ以上の清浄度の環境等がより好ましい。
　上記摘出した臓器１４として医療グレードのＤＰＦ（指定病原体フリー）の臓器又はその由来物を得ることができる。
　上記摘出した臓器１４は、子豚胎仔由来である場合、免疫原性が低く、また、指定病原体フリーであることから、移植材（好ましくは、異種移植材）として好適である。
　一方、上記摘出した臓器１４が、成豚由来である場合、大きさ、機能等の成熟が好適であり、また、指定病原体フリーであることから、移植材（好ましくは、異種移植材）として好適である。
　＜アイソレータの複数化＞
　上記子宮からの胎仔又は子豚８の取出し、蘇生、飼育、上記胎仔、子豚又は成豚２２からの臓器の上記摘出は、内部を無菌環境に維持した単一のアイソレータ内で一貫して行っても行わなくてもよいが、上記子宮からの胎仔又は子豚の取出し作業、蘇生作業、飼育作業、上記胎仔、子豚又は成豚からの臓器の上記摘出作業は、それぞれ、内部を無菌環境に維持した２以上の別個のアイソレータ内で行うことが好ましい。これにより、上記各作業に対応する各アイソレータを設置する環境（すなわち、各アイソレータの外部環境）を非ＤＰＦ環境又はＤＰＦ環境に上記各作業毎（各アイソレータ毎）に独立して選択することができる。また、各アイソレータの設置場所も各アイソレータ毎に独立して選択することができる。
　さらに、所要時間が相違する上記各作業を別個のアイソレータ内で行うことにより作業効率及び管理性を向上し得る。
　図１～４に示したように、上記子宮からの子豚の取出し（子豚の取出し用アイソレータ１）と、上記蘇生と、上記飼育（飼育用アイソレータ２０）と、上記摘出（臓器摘出用アイソレータ３０）とが、それぞれ、内部を無菌環境に維持した別個のアイソレータ内で行うことがより好ましい。
　特に、飼育用アイソレータ２０は、図４に示したように、生育状況に応じて内部の床１５の高さ、水、飼料１０等を調整した、胎仔又は子豚飼育用アイソレータ２０、成豚飼育用アイソレータ２１等の別個の複数種のアイソレータとしてもしなくてもよい。
　上記子宮からの胎仔又は子豚の取出し、蘇生、飼育、上記胎仔又は子豚８、成豚２２からの臓器１４の上記摘出は、それぞれ、内部を無菌環境に維持した別個のアイソレータを使用する場合、
　各アイソレータは、外界からの隔離性及び気密性を維持しつつ連結することができ、かつ開閉部５と着脱可能なスリーブ（連結器）７を介して着脱可能に連結可能であることが好ましい。上記スリーブ（連結器）７は各アイソレータの内部空間同士を着脱可能に連結可能である。
　上記連結することにより、各アイソレータ間を胎仔又は子豚８、成豚２２を移動させることができる。
　一方、取り外す（脱する）ことにより、各アイソレータ毎に各アイソレータの外部環境（例えば、非ＤＰＦ環境又はＤＰＦ環境）を独立して選択することができ、また、各アイソレータの設置場所も各アイソレータ毎に独立して選択することができる。
　上記アイソレータ内に外気が流入した際に、微生物、ウイルス等の病原体の混入を防ぐ観点から、各アイソレータ同士の取り外し（脱）、又は、上記スリーブ７の取り外し（脱）は、ＤＰＦ環境下で行うことが好ましい。
　上記スリーブ７（好ましくは、子豚移動用スリーブ）は、内部を過酸化水素、過酢酸、オゾンガス、ホルマリンガス、紫外線、放射線（γ線照射）、プラズマ等の任意の方法により滅菌してから使用することが好ましい。
　これにより、各アイソレータ同士を連結したスリーブ内の無菌環境空間を通じて、胎仔又は子豚８、成豚２２をアイソレータ間で移動させることができ、例えば、最終的には、上記胎仔又は子豚８、成豚２２からの臓器１４の上記摘出するためのアイソレータの内部空間へ移動させることができる。
　上記スリーブ７の材質としては、特に制限はないが、プラスチック（軟質プラスチック（軟質ポリ塩化ビニルなど）、硬質プラスチック）、金属（例えば、ステンレス、鉄等）などが挙げられる。
　飼育用アイソレータ２０、２１とは別個の胎仔又は子豚の取出し用アイソレータ１、又は、臓器摘出用アイソレータ３０内部に、予め滅菌済みの手術器具（例えば、メス）を配置しておくことにより、胎仔又は子豚８、成豚２２の飼料、糞尿等による上記手術器具の汚染を回避し得る。
　また、図２に示したように、胎仔又は子豚の取出し用アイソレータ１等とは別個の飼育用のアイソレータ２０内部に予め、人工哺育用の、水、代用乳、人工乳、飼料１０（好ましくは、滅菌済みの、水、代用乳、人工乳、飼料）などを一式、配置しておくことにより、胎仔又は子豚８取出し時の、血液、羊水等の体液等による人工哺育用の、水、代用乳、人工乳、飼料１０の汚染を回避し得る。
　また、図３に示したように、飼育用アイソレータ２０、２１とは別個の臓器摘出用アイソレータ３０内部に、予め、開放及び密閉可能な臓器収容用容器３１を配置しておくことにより、胎仔又は子豚８、成豚２２の飼料、糞尿等による上記容器３１の汚染を回避し得る。
　上記子宮からの胎仔又は子豚の取出し作業、蘇生作業、飼育作業、上記胎仔、子豚又は成豚２２からの臓器の上記摘出作業を、それぞれ、２以上の別個のアイソレータ内で行う場合、各々の作業を並行して行い量産性を向上させる観点から、各作業について２以上の複数個のアイソレータを併用してもよい。例えば、胎仔又は子豚の取出し用アイソレータ１を複数個併用してもよいし、蘇生用アイソレータを複数個併用してもよいし、飼育用アイソレータ２０を複数個併用してもよいし、臓器摘出用アイソレータ３０を複数個併用してもよい。
　胎仔又は子豚の取出し作業及び蘇生作業、並びに、臓器摘出作業の所要時間は数時間であるのに対して、飼育作業の所要時間は数週間を要し律速作業となり得る。換言すると、胎仔又は子豚の取出し用アイソレータ１、蘇生用アイソレータ並びに、臓器摘出用アイソレータ３０に対して、飼育用アイソレータ２０、２１は、再使用の回転速度が極端に低く、移植材の製造のボトルネックになり得る。
　飼育作業の上記律速性を回避する観点から、飼育用アイソレータ２０、２１を複数個併用することが好ましい。
　各作業について２以上の複数個のアイソレータを併用する場合、各作業についてのアイソレータの併用個数同士は、同数であっても、異数であってもよい。例えば、胎仔又は子豚の取出し用アイソレータ１を２個併用してもよいし、蘇生用アイソレータを２個併用してもよいし、飼育用アイソレータ２０、２１を３個以上併用してもよいし、臓器摘出用アイソレータ３０を２個併用してもよい。
　飼育用アイソレータ２０、２１を複数個併用する場合、設置床面積が嵩み得る。
　無菌環境を維持するための巨大な空調設備を要する高規格飼育施設の床面積を低減する観点、及び、設備維持費の大幅な削減の観点から、
　図５に示したように、上記飼育用アイソレータ２０、２１が２以上存在する場合、２以上の上記飼育用アイソレータ２０、２１を高さ方向に重ねて配置することが好ましい。また、上記アイソレータ２０、２１は、少なくとも高さ方向に関して区画化する（幅方向に延びる）複数の棚板を有するラック２３（棚）に収容することが好ましい。より好ましくは、幅方向に関して区画化する（高さ方向に延びる）棚板をさらに有するラックを使い、区画化された各空間に、単一のアイソレータ又は同一母豚由来の子豚を飼育する複数のアイソレータを収容する。
　＜アイソレータのその他構成＞
　上記アイソレータの寸法は、胎仔、子豚、成豚の収容数に応じて適宜、設計することができ、胎仔、子豚、成豚を飼育するに十分な空間を有することが好ましい。例えば、収容される豚総計のサイズの約３０倍以上の容積を有することが挙げられる。
　例えば１００～１０００ｃｍ、１５０～５００ｃｍ、又は２００～３００ｃｍ等の長さ、例えば１００～１０００ｃｍ、１５０～５００ｃｍ、又は２００～３００ｃｍ等の幅、例えば５０～５００ｃｍ、１００～３００ｃｍ、又は１５０～２５０ｃｍ等の高さを有し得るが、寸法はこれに限らない。
　上記アイソレータは、１又は２以上の観察窓を有していてもいなくてよく、２以上の観察窓を有していることが好ましく、例えば２つ、３つ、又は４つしていることがより好ましい。
　観察窓は上記アイソレータの上部（上面）及び／又は側部（側面）に設けることができる。上記アイソレータの上部及び側部の一部を傾斜させ、該傾斜面（傾斜部ともいう）に観察窓を設けることができる。観察窓は、上記アイソレータの上部、側部、及び／又は傾斜部に設けることができる。それぞれの観察窓の寸法、形状、及び材料は、同一でも異なってもよい。
　観察窓は、例えば、観察窓枠及び硬質窓材料を有する。
　観察窓及び観察窓枠は、上記アイソレータの使用態様に応じて、四角形、長方形、正方形、円形（例えば略円形又は正円形）、楕円形等とすることができる。硬質窓材料は硬質フィルム、例えばビニール板であり得る。観察窓及び観察窓枠の寸法は特に制限はなく、例えば５０ｃｍ２～８０００ｃｍ２、３００ｃｍ２～５０００ｃｍ２程度の面積（枠の内側の面積）を有する楕円形、四角形、長方形、又は正方形の枠であり得るがこれに限らない。ある実施形態において、硬質窓材料、例えばビニール板、例えば透明硬質塩化ビニール板は、例えば、０．０５ｍｍ～５ｍｍの厚みを有するものであり得る。
　観察窓は、硬質窓材料として透明硬質塩化ビニール（０．１ｍｍ厚の薄い板）を、接着剤で、観察窓枠に接着して構成する。観察窓枠は上述したパッキンとしても機能し得る。
　曇りによる支障なく細かい作業を遂行する観点から、上記硬質窓材料の表面が任意の曇り止め加工（例えば、撥水加工、超撥水加工等）されていてもいなくてもよいが、されていることが好ましい。
　光の反射の支障なく細かい作業を遂行する観点から、上記硬質窓材料は、波打つことのできる軟質プラスチック材料と比較して乱反射が少ないことが好ましく、例えば透明硬質塩化ビニールが示す程度に乱反射が少ないことが挙げられる。
　硬質窓材料は透明塩化ビニール板であり得るがこれに限らない。
　図１に示したように、上記アイソレータ（例えば吸気部３）は、アイソレータ内の温度、湿度、酸素濃度、二酸化炭素濃度よりなる群から選択される少なくとも１つのパラメータの能動的な制御を行うエアコンディショナー１６を具備していてもいなくてもよい。
　アイソレータ内温度は例えば５℃から３８℃までの範囲内に保持され、好ましくは１０℃から３５℃までの範囲内に保持される。アイソレータ内湿度は例えば０％から１００％（相対湿度）までの範囲内に保持され、好ましくは４０％から７０％までの範囲内に保持される。アイソレータ内酸素濃度は、通常の新鮮な空気における濃度であることが好ましい。豚に悪影響を与えないため、低酸素（例えば、５％）状態となるような条件は避けるべきである。アイソレータ内二酸化炭素濃度は、新鮮な空気における濃度であることが好ましい。豚に悪影響を与えないため、高二酸化炭素（例えば、約５０％以上）となるような条件は避けるべきである。
　以下に本発明の実施例を示し、本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではなく、本発明の技術的思想を逸脱しない範囲内で種々の応用が可能である。
＜参考例１＞
　ＤＰＦではない環境下で飼育された妊娠母豚から自然分娩によって得られた子豚について口腔内、消化管内、体表等に病原体を保有する個体の存在を検査した。結果を下記表１及び２に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
 　上記表１から明らかなように、母豚には豚呼吸器・繁殖障害症候群ウイルス等の病原体に感染されている個体が存在した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
 　上記表２から明らかなように、ＤＰＦではない環境下で飼育された妊娠母豚から自然分娩によって得られた子豚は、産道の通過及び母豚からの哺乳によって口腔内、消化管内、体表等に様々な菌、真菌、ウイルス等の病原体を保有するに至っていることが分かる。
＜参考例２＞
　帝王切開によれば、母豚からの経産道感染は免れ得る。
　ＤＰＦではない環境で飼育した妊娠母豚から帝王切開により出生した子豚３頭について、２頭は内部を滅菌後の無菌環境を維持されたアイソレータ内で２週齢まで飼育した。
　残りの１頭は、アイソレータ外飼育に相当する態様として内部が未滅菌のアイソレータ内で２週齢まで飼育した。
　３頭それぞれの口腔、皮膚及び糞便について細菌の存在を検査した。
　結果を下記表３に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
 　上記表３に示した結果から明らかなように、アイソレータ外飼育に相当する態様として内部が未滅菌のアイソレータ内で飼育した子豚は、肺炎桿菌（Klebsiella pneumoniae）、黄色葡萄球菌（Staphyrococcus aureus）、溶血性連鎖球菌（α-Sreptococcus）、コリネバクテリウム（Corynebacterium spp.）及びエンテロコッカス（Enterococcus spp.）が陽性であった。
　なお、内部が無菌環境に維持されたアイソレーター内で飼育した子豚は、細菌の存在は検出されなかった。
＜参考例３＞
　抗体検査により経胎盤感染性病原体（豚サーコウイルス）を保有することを確認した妊娠母豚を用意し、ＳＰＦ環境下で飼育した後、吸入麻酔を行い、常法により開腹後に腹式子宮摘出を行った。
　図１に示したように、上記摘出した複数の子宮を消毒液を満たした消毒槽に投入、洗浄及び通過させてデコンタミネーションし、予め内部が滅菌済で無菌環境に維持された子豚取出し用アイソレータ内に収容した。
　子豚取出し用アイソレータ内に予め配置しておいた滅菌済みのメス等をグローブ越しに操作して子宮及び羊膜を同時に切開して子豚を取出し常法により蘇生した（子豚３頭）。
　取り出し蘇生された新生子豚３頭について血液を採取し、豚サーコウイルスの核酸に選択的に（好ましくは特異的に）結合するプライマー対を使用して豚サーコウイルスの感染の有無をＰＣＲ法により検査した。結果を下記表４に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
 　上記表４に示した結果から明らかなように、母豚が保有する豚サーコウイルスが子豚２頭に経胎盤感染したことが確認された。
　本発明の製造方法に適用する母豚は、経胎盤感染性病原体による感染が陰性であることが好ましいと言える。
＜実施例＞
　ＳＰＦ環境下で飼育した複数の妊娠母豚のうち、経胎盤感染性病原体が陰性であることを確認した約２０頭の妊娠母豚に吸入麻酔を行い、常法により開腹後に腹式子宮摘出を行った。上記妊娠母豚は、経胎盤感染性病原体以外の病原体の感染検査を行わなかったが、上記参考例１に記載の通りの傾向で陽性であるものと推定される。
　図１に示したように、上記摘出した複数の子宮を消毒液を満たした消毒槽に投入、洗浄及び通過させてデコンタミネーションし、予め内部が滅菌済で無菌環境（ＩＳＯクラス５（クラス１００）又はＥＵ－ＧＭＰガイドライングレードＡ程度の清浄度の環境）に維持された子豚取出し用アイソレータ内に収容した。上記アイソレータの吸気部に高性能ＨＥＰＡフィルターを設置し内部を無菌環境に維持した。
　子豚取出し用アイソレータ内に予め配置しておいた滅菌済みのメス等をグローブ越しに操作して子宮及び羊膜を同時に切開して子豚を取出し常法により蘇生した。
　上記複数を３つの群に分け、１つの群について下記試験Ａを行い、もう１つの群について下記試験Ｂを行い、残りの群については、後述するように飼育し、最終的には臓器摘出まで行った。
　（試験Ａ）麻酔開始後子宮摘出までの所要時間と、取り出される子豚の蘇生率との相関試験
　上記吸入麻酔開始から子豚の取出しまで所要時間を計測し、上記所要時間と子豚蘇生率との相関を試験した。結果を図６に示す。
　図６は、麻酔開始後子宮摘出までの所要時間と、取り出される子豚の蘇生率との相関を示す図である。
　（試験Ａの結果）
　図６に示した結果から明らかなように、子宮摘出が吸引麻酔開始から２５分を超えるＮｏ．１～３の群は、それぞれ、蘇生率７５％（蘇生個体３頭／取り出した個体４頭）、７５％（蘇生個体３頭／取り出した個体４頭）、６０％（蘇生個体３頭／取り出した個体５頭）であった。
　一方、子宮摘出が吸引麻酔開始から２５分以内のＮｏ．４～６の群はいずれも、蘇生率１００％であった（蘇生個体９頭／取り出した個体９頭、蘇生個体７頭／取り出した個体７頭、蘇生個体６頭／取り出した個体６頭）。
　子宮摘出が吸引麻酔開始から２５分以内が蘇生率の観点から好ましいと言える。
　（試験Ｂ）取出し直後（出生直後）の新生子豚の病原体（ウイルス、原虫及び細菌）の存在（感染）の有無の試験
　取り出された新生子豚６頭について血液を採取し、下記ウイルス６７種、下記原虫１種及び細菌の存在（感染）の有無をＰＣＲ法により試験した。
　具体的には、様々なウイルス（豚サーコウイルス１型、豚サーコウイルス２型、豚リンパ球向性ヘルペスウイルス１型、豚リンパ球向性ヘルペスウイルス２型、豚サイトメガロウイルス、脳心筋炎ウイルス、豚パルボウイルス、豚ロタウイルスＡ、豚ロタウイルスＢアメリカ型、豚ロタウイルスＢベトナム型、豚ロタウイルスＣ、哺乳類レオウイルス、豚エンテロウイルス、豚赤血球凝集性脳脊髄炎ウイルス、豚繁殖・呼吸障害症候群ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、豚伝染性胃腸炎ウイルス、豚インフルエンザウイルスＨ１Ｎ１型、豚インフルエンザウイルスＨ３Ｎ２型、豚呼吸器コロナウイルス、豚熱ウイルス、豚ポックスウイルス、アフリカ豚熱ウイルス、オーエスキー病ウイルス、ゲタウイルス、日本脳炎ウイルス、豚流行性下痢ウイルス、豚水疱病ウイルス、豚水疱疹ウイルス、水疱性口炎ウイルスｎｅｗ　ｊｅｒｓｅｙ、水疱性口炎ウイルスｉｎｄｉａｎａ、口蹄疫ウイルス、リッサ（狂犬病）ウイルス１、リッサウイルス２、リッサウイルス３、リッサウイルス４、リッサウイルス５、リッサウイルス６、リッサウイルス７、豚アデノウイルス、豚アストロウイルス１、豚アストロウイルス３、豚アストロウイルス４、豚アストロウイルス５、メナングルウイルス、ニパウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、ボルナウイルス、アポイウイルス、ウシウイルス性下痢ウイルス１型、ウシウイルス性下痢ウイルス２型、ウシウイルス性下痢ウイルス３型、ウシ伝染性鼻気管炎ウイルス、豚トルクテノウイルス１型、豚トルクテノウイルス２型、サポウイルス３型、サポウイルス６型、サポウイルス７ａ型、サポウイルス７ｂ型、サポウイルス７ｃ型、サポウイルス８型、サポウイルス９型、サポウイルス１０型、ノロウイルスＡ型、ノロウイルスＢ型、豚ルブラウイルス、豚内在性レトロウルス）に対して各ウイルスの核酸に特異的に結合するプライマー対を使用して上記様々なウイルスによる感染の有無をＰＣＲ試験した（特開２０２１－０２３２４３号）。
　原虫（トキソプラズマ）に対して各原虫の核酸に特異的に結合するプライマー対を使用して上記原虫による感染の有無をＰＣＲ試験した（特開２０２１－０２３２４３号）。
　１６ＳリボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）は全ての細菌が共有し、細菌種を超えて保存性が高い領域（例えば、保存領域Ｃ１～Ｃ９）を有する。
　様々な細菌（エルシニア菌、気管支敗血症菌、クロストリジウム、結核（ヒト型、ウシ型、鳥型）、サルモネラ、大腸菌、炭疽菌、豚丹毒菌、パスツレラ菌、豚赤痢菌、ヘモフィルス菌、ブドウ球菌、ブルセラ菌、ヘモパルトネラ、マイコプラズマ、リステリア菌、アクチノバチルス菌、連鎖球菌、緑膿菌、豚クチノミセス、キャンピロバクター属、アクチノバチルス属、クラミジア、コクシエラ、ローソニア、レプトスピラ（レプトピラ）、豚ペロスロゾーン等）間の細菌１６Ｓ　ｒＲＮＡの保存領域に含まれる共通塩基配列に特異的に結合するプライマー対を使用して様々な細菌による感染の有無をＰＣＲ試験した（特開２０２１－０２３２４３号）。
　（試験Ｂの結果）
　試験Ｂの結果を下記表５に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
 　上記表５に示した試験Ｂの結果から明らかなように、ＳＰＦ環境下で飼育した妊娠母豚から摘出しデコンタミネーションした子宮から無菌環境下で取り出した子豚は、病原体（ウイルス、原虫及び細菌）の存在（感染）は検出されないことが確認された。
　（飼育）
　取り出して蘇生した複数の子豚のうち、上記試験Ａ及びＢに供していない残りの１群については、上記子豚取出し用アイソレータと、新たに用意した滅菌済の無菌環境（ＩＳＯクラス５（クラス１００）又はＥＵ－ＧＭＰガイドライングレードＡ程度の清浄度の環境）に維持された飼育用アイソレータとを子豚移動用スリーブを介して連結し、スリーブ内の無菌環境空間を通じて、子豚を飼育用アイソレータに移動させた。上記飼育用アイソレータの吸気部に高性能ＨＥＰＡフィルターを設置し内部を無菌環境に維持した。
　飼育用のアイソレータ内部に、予め、人工哺育用の滅菌済みの、水、代用乳、人工乳、飼料により、３週齢（臓器摘出適期）になるまで複数の子豚を飼育した。
　（一般細菌及び真菌の培養検査）
　３週齢（臓器摘出適期）の子豚５頭、及びそれが収容されていた飼育用のアイソレータについて一般細菌及び真菌（例えばトリコフィトン属他皮膚糸状菌）の培養検査を行った。結果を下記表６に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000006
 　上記表６に示した検査結果から明らかなように、本発明の製造方法において３週齢まで飼育された子豚は病原体に感染しておらず、ＤＰＦ状態を維持しているといえる。
　（子豚から膵臓摘出）
　３週齢の上記子豚について、上記飼育用アイソレータと、新たに用意した滅菌済の無菌環境（ＩＳＯクラス５（クラス１００）又はＥＵ－ＧＭＰガイドライングレードＡ程度の清浄度の環境）に維持された臓器摘出用アイソレータとを子豚移動用スリーブを介して連結し、スリーブ内の無菌環境空間を通じて、子豚を臓器摘出用アイソレータに移動させた。上記臓器摘出用アイソレータの吸気部に高性能ＨＥＰＡフィルターを設置し内部を無菌環境に維持した。
　図３に示したように、臓器摘出用アイソレータ内に予め配置しておいた滅菌済みのメス等をグローブ越しに操作して開腹手術を行い、膵臓を摘出した。
　上記摘出に際し、上記子豚の躯体中の上記臓器にＥＴＫ液を注入して上記臓器を膨張させた状態で行うことにより作業性が大幅に向上した。
　（摘出膵臓及び血液の病原体（ウイルス、原虫及び細菌）の存在（感染）の有無の試験）
　上記摘出膵臓（及び血液）について、下記ウイルス６１種、下記原虫１種及び細菌の存在（感染）の有無をＰＣＲ法により試験した。
　具体的には、様々なウイルス（豚サーコウイルス１型、豚サーコウイルス２型、豚リンパ球向性ヘルペスウイルス１型、豚リンパ球向性ヘルペスウイルス２型、豚サイトメガロウイルス、脳心筋炎ウイルス、豚パルボウイルス、豚ロタウイルスＡ、豚ロタウイルスＢアメリカ型、豚ロタウイルスＢベトナム型、豚ロタウイルスＣ、哺乳類レオウイルス、豚エンテロウイルス、豚赤血球凝集性脳脊髄炎ウイルス、豚繁殖・呼吸障害症候群ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、豚伝染性胃腸炎ウイルス、豚インフルエンザウイルスＨ１Ｎ１型、豚インフルエンザウイルスＨ３Ｎ２型、豚呼吸器コロナウイルス、豚熱ウイルス、豚ポックスウイルス、アフリカ豚熱ウイルス、オーエスキー病ウイルス、ゲタウイルス、日本脳炎ウイルス、豚流行性下痢ウイルス、豚水疱病ウイルス、豚水疱疹ウイルス、水疱性口炎ウイルスｎｅｗ　ｊｅｒｓｅｙ、水疱性口炎ウイルスｉｎｄｉａｎａ、口蹄疫ウイルス、リッサウイルス２、リッサウイルス４、リッサウイルス５、リッサウイルス６、リッサウイルス７、豚アデノウイルス、豚アストロウイルス１、豚アストロウイルス３、豚アストロウイルス４、豚アストロウイルス５、メナングルウイルス、ニパウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、ボルナウイルス、アポイウイルス、ウシウイルス性下痢ウイルス１型、ウシウイルス性下痢ウイルス２型、ウシウイルス性下痢ウイルス３型、ウシ伝染性鼻気管炎ウイルス、豚トルクテノウイルス１型、豚トルクテノウイルス２型、サポウイルス６型、サポウイルス８型、サポウイルス９型、サポウイルス１０型、ノロウイルスＡ型、ノロウイルスＢ型、豚ルブラウイルス、豚内在性レトロウルス）に対して各ウイルスの核酸に特異的に結合するプライマー対を使用して上記様々なウイルスによる感染の有無をＰＣＲ試験した。
　原虫（トキソプラズマ）の核酸に特異的に結合するプライマー対を使用して上記原虫による感染の有無をＰＣＲ試験した。
　様々な細菌間の細菌１６Ｓ　ｒＲＮＡの保存領域に含まれる共通塩基配列に特異的に結合するプライマー対を使用して様々な細菌による感染の有無をＰＣＲ試験した。
　結果を下記表７に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000007
 　上記表７に示した検査結果から明らかなように、本発明の製造方法によって摘出された膵臓は病原体（ウイルス、原虫及び細菌）に感染しておらず、ＤＰＦ状態を維持していることが分かる。移植材（好ましくは、異種移植材）として好適といえる。
　１　アイソレータ（子豚の取出し用アイソレータ）
　２　筐体
　３　吸気部
　４　排気部
　５　開閉部
　６　消毒槽（除染槽）
　７　スリーブ
　８　子豚
　９　グローブ
　１０　人工哺育用の、水、代用乳、人工乳、飼料
　１１　母豚
　１２　子宮
　１３　手術台
　１４　臓器
　１５　床
　１６　エアコンディショナー
　２０　飼育用アイソレータ（胎仔又は子豚飼育用アイソレータ）
　２１　成豚飼育用アイソレータ
　２２　成豚
　２３　ラック
　３０　臓器摘出用アイソレータ
　３１　臓器収容用容器

Claims (8)

  1. 　非ＤＰＦ（Ｄｅｓｉｇｎａｔｅｄ　Ｐａｔｈｏｇｅｎ　Ｆｒｅｅ）環境下で飼育された母豚から子宮を摘出すること、
    　摘出した前記子宮をデコンタミネーション処理後にアイソレータ内の無菌環境に収容すること、
    　前記子宮からの胎仔又は子豚の取出しをアイソレータ内の無菌環境で行うこと、
    　任意で前記胎仔又は子豚の蘇生及び飼育を含み、かつ、前記蘇生及び飼育をアイソレータ内の無菌環境で行い、及び
    前記胎仔、子豚、又は子豚が生育した成豚からの臓器を摘出することを含む、
    　前記摘出した臓器がＤＰＦである、
    　豚臓器又はその由来物を含む移植材の製造方法。
  2. 　前記非ＤＰＦ環境がＳＰＦ（Ｓｐｅｃｉｆｉｃ　Ｐａｔｈｏｇｅｎ　Ｆｒｅｅ）環境である、請求項１に記載の方法。
  3. 　臓器の前記摘出が、前記子豚の躯体中の前記臓器に生理学的に許容される液を注入して前記臓器を膨張させた状態で行われる、請求項１に記載の方法。
  4. 　子宮の前記摘出が、前記母豚への麻酔後に行われ、子宮の前記摘出が、前記麻酔開始後２５分以内に終わる、請求項１に記載の方法。
  5. 　前記麻酔が吸入麻酔である、請求項４に記載の方法。
  6. 　前記母豚は、経胎盤感染性病原体による感染が陰性であり、かつそれ以外の病原体による感染が陽性又は陰性である、請求項１に記載の方法。
  7. 　前記取出し及び蘇生と、前記飼育と、前記摘出とが、それぞれ、別個のアイソレータ内の無菌環境で行われ、
    　アイソレータ同士を連結したスリーブ内の無菌環境空間を通じて、子豚をアイソレータ間で移動させる、請求項１に記載の方法。
  8. 　前記飼育のためのアイソレータが２以上存在し、前記飼育のための前記アイソレータを高さ方向に重ねて配置する、請求項７に記載の方法。
PCT/JP2023/041257 2022-11-16 2023-11-16 豚臓器又はその由来物を含む移植材の製造方法 WO2024106505A1 (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2022-183587 2022-11-16
JP2022183587 2022-11-16

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2024106505A1 true WO2024106505A1 (ja) 2024-05-23

Family

ID=91084545

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2023/041257 WO2024106505A1 (ja) 2022-11-16 2023-11-16 豚臓器又はその由来物を含む移植材の製造方法

Country Status (1)

Country Link
WO (1) WO2024106505A1 (ja)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1991011457A1 (en) * 1990-01-24 1991-08-08 Buckley Douglas I Glp-1 analogs useful for diabetes treatment

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1991011457A1 (en) * 1990-01-24 1991-08-08 Buckley Douglas I Glp-1 analogs useful for diabetes treatment

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
NAKANO KAZUAKI, KOKI HASEGAWA, RYO INOUE, TAKESHI YAMADA, RIKIYA EBISUTANI, KYOGA HIRAIDE, AYUKO UCHIKURA, HITOMI MATSUNARI, MASAH: "P.183 - Production of medical grade pigs usingthe uterectomy-isolated rearing (U-iR) method", XENOTRANSPLANTATION, WILEY-BLACKWELL PUBLISHING, INC., US, vol. 26, no. 5, 183, 1 September 2019 (2019-09-01), US , pages 75 - 76, XP093170671, ISSN: 0908-665X, DOI: 10.1111/xen.12553 *
NAKANO, KAZUAKI: "Production of DPF Pigs by Total Hysterectomy and Rearing in Isolator", ABSTRACTS OF THE ANNUAL MEETING OF JAPANESE SOCIETY FOR XENOTRANSPLANTATION, vol. 20, 10 March 2018 (2018-03-10), pages 33 *
OHASHI, SEIICHI; YAMADA, SHUNJI; KAWASHIMA, KENJI; YOSHIOKA, KOJI; MIKAMI, OSAMU; SHIMOJI, YOSHIHIRO; NAKAMURA, YOSHIO; KIMURA, JU: "Studies on improvements for production techniques of Hysterectomy-produced and colostrum-deprived (HPCD) piglets and their microbiological quality", BULLETIN OF THE NATIONAL INSTITUTE OF ANIMAL HEALTH, NOUGYOU GIJUTSU KENKYUU KIKOU, DOUBUTSU EISEI KENKYUUJO, JP, vol. 125, 1 March 2019 (2019-03-01), JP , pages 27 - 29, XP009555168, ISSN: 1347-2542 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN113490412B (zh) 异种移植制品和方法
JP2017524947A (ja) 閉回路無菌デバイス、並びに全無菌連鎖における回収、移送及び処理方法
WO2017166458A1 (zh) 一种动物血浆、血清或血液的生物安全性质量控制系统
Hanson et al. Viral transmission and fibreoptic endoscopy
WO2024106505A1 (ja) 豚臓器又はその由来物を含む移植材の製造方法
CN101420921B (zh) 外科手术隔离器
Cox et al. A pseudo-outbreak of Mycobacterium chelonae infections related to bronchoscopy
Penna et al. The presterilization microbial load on used medical devices and the effectiveness of hydrogen peroxide gas plasma against Bacillus subtilis spores
Fulford et al. Decontamination of tried‐in orthodontic molar bands
Kaiser et al. Lentiviral vector-mediated gene therapy of hepatocytes ex vivo for autologous transplantation in swine
Levenson et al. A plastic isolator for operating in a sterile environment
LoGRIPPO et al. Procedure for bone sterilization with beta-propiolactone
Okamoto et al. Production of germfree mice by embryo transfer
Newton Methods in germfree animal research
Rahija Gnotobiotics
Gunzer et al. Gnotobiotic piglets as an animal model for oral infection with O157 and non-O157 serotypes of STEC
WO2004062360A1 (en) Method of producing specific pathogen free hamster for the preparation of a variety of biological products
Bjöersdorff et al. Microbiological characterization of porcine fetal islet‐like cell clusters for intended clinical xenografting
Depledge et al. Aseptic techniques for lung function testing
Stegmayr et al. Reduced risk for peritonitis in CAPD with the use of a UV connector box
Abumelha et al. Effectiveness and duration of endodontic files sterilization
TIPTON et al. Some aspects of wound healing in the germfree animal
CN210302019U (zh) 一种急诊外科骨折患者用消毒装置
Cushnie et al. Procedures and equipment for the production and rearing of gnotobiotic lambs
Basic et al. Gnotobiology 21

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 23891652

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1