WO2023118323A1 - Method for revealing pigment in a microorganism - Google Patents

Method for revealing pigment in a microorganism Download PDF

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WO2023118323A1
WO2023118323A1 PCT/EP2022/087278 EP2022087278W WO2023118323A1 WO 2023118323 A1 WO2023118323 A1 WO 2023118323A1 EP 2022087278 W EP2022087278 W EP 2022087278W WO 2023118323 A1 WO2023118323 A1 WO 2023118323A1
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WO
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microorganism
pigment
blue
photoactivation
spirulina
Prior art date
Application number
PCT/EP2022/087278
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French (fr)
Inventor
Pierre-Alain HOFFMANN
Sandy JOUET
Vinh Ly
Original Assignee
Kyanos Biotechnologies
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    • A23L5/00—Preparation or treatment of foods or foodstuffs, in general; Food or foodstuffs obtained thereby; Materials therefor
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    • A23L5/42—Addition of dyes or pigments, e.g. in combination with optical brighteners
    • A23L5/46—Addition of dyes or pigments, e.g. in combination with optical brighteners using dyes or pigments of microbial or algal origin

Definitions

  • the invention relates to photoactivation processes. It relates more particularly to a process for revealing pigment in a microorganism.
  • Photoactivation consists of the activation of a chemical reaction produced by incident photons.
  • Dyes are nowadays used in many fields such as paints, cosmetics or even food. Generally, they implement pigments which may or may not be natural.
  • natural and of course edible pigments are for example carotenoids and chlorophyll.
  • the objective of the present invention is to overcome the aforementioned drawbacks by proposing a process for revealing at least one pigment of interest in a microorganism in dry (dehydrated) form comprising pigments whose pigment d interest and chlorophyll, said method comprising at least one step of irradiating the microorganism with light so as to reduce the chlorophyll level of the microorganism in favor of revealing said pigment of interest.
  • the relative amounts of pigments of the microorganism vary in favor of revealing the pigment of interest. Indeed, the pigment of interest/total pigment quantity ratio varies due to the reduction in the level of chlorophyll such that the microorganism changes color by revealing said pigment of interest.
  • the chlorophyll pigment will tend to give a green color to the microorganism and, depending on the pigment of interest and the color of the latter, it is possible with the method that is the subject of the present invention to change the color of the microorganism.
  • microorganisms like foods or food matrices, can be subjected to preservation operations in order to extend their useful life. These techniques also aim to preserve the intrinsic qualities of these products, i.e. to avoid any modification of biological or chemical origin (Amit et al., “A review on mechanisms and commercial aspects of food preservation and processing » Agric & Food Secur (2017) 6:51, DOI 10.1186/s40066-017-0130-8).
  • the inventors have surprisingly and unexpectedly discovered with the method that is the subject of the present invention, that even in the dried state it is possible to modify the chemical composition of a microorganism comprising pigments including at least one pigment of interest (preferably phycocyanin) and chlorophyll, by exposing it to light irradiation, which has the effect of promoting the revelation of the pigment of interest to the detriment of chlorophyll.
  • the irradiation of the microorganism in dry form with light makes it possible to degrade the chlorophyll pigment and thus reduces the level of chlorophyll and therefore varies said ratio pigment of interest / quantity of pigment total so as to reveal the pigment of interest.
  • the dry form of the microorganism also has the advantage of facilitating the handling (transport, setting in motion, homogenization) of the microorganism, whether before, during or after the implementation of the method that is the subject of the present invention.
  • the dry form guarantees the microbiological stability of the microorganism during and after the implementation of said method.
  • This method therefore advantageously makes it possible to reveal a pigment in a microorganism and thus to change the color of the latter.
  • This microorganism then advantageously represents a natural coloring means obtained at very low cost compared to known natural pigment extraction processes.
  • the method does not involve mechanical destructuring of the microorganism.
  • the microorganism becomes colored and retains its integrity unlike microorganisms when they are used with conventional processes for extracting their pigments.
  • the risk of contamination of the microorganism is therefore also reduced compared to a process for extracting invasive pigment from the microorganism.
  • Another advantage of the method that is the subject of the present invention is that it does away with the use of solvents, as is often the case in pigment extraction methods.
  • the invention also responds to the following characteristics, implemented separately or in each of their technically effective combinations.
  • the irradiation of the microorganism is carried out for a period of at least 24 hours.
  • the irradiation step is carried out with a light having a light energy of between 1500 and 2000 ⁇ mol.m -2 .s -1 , of preferably 1700 ⁇ mol.m -2 .s -1 .
  • Irradiation carried out with a light energy of between 1500 and 2000 ⁇ mol.m ⁇ 2 .s ⁇ 1 makes it possible to obtain a revelation which is clearly visible to the naked eye of the pigment of interest without degradation of the latter.
  • Irradiation carried out with a light energy of 1700 ⁇ mol.m ⁇ 2 .s ⁇ 1 makes it possible to obtain the best result for revealing the pigment of interest.
  • the irradiation step is carried out with white light and/or with red and blue light.
  • white light is meant a light comprising all the wavelengths between 400 and 800 nm.
  • Red and blue light means light comprising a wavelength between 425 and 490 nm and a wavelength between 625 and 775 nm. Irradiation with white light and/or with red and blue light leads to the same effectiveness in revealing the pigment of interest.
  • the microorganism is a cyanobacterium, an algae or a microalgae.
  • the microorganism is edible.
  • the process that is the subject of the present invention represents a real advantage when the microorganism is edible because it is well known that certain colors make foods more palatable.
  • the process which is the subject of the present invention makes it possible to change the color of the microorganism which comprises the pigment of interest, it is therefore possible to obtain, following the implementation of the process which is the subject of the present invention, depending on the edible microorganism chosen and pigments it contains, an edible microorganism of a more palatable color than the initial color of the microorganism, making the latter or the food for which it is used as a colorant more palatable.
  • the step of irradiating with light is carried out so as to reduce the level of chlorophyll a and/or b of the microorganism.
  • This has the advantage of allowing a pigment of interest other than chlorophyll to be revealed and of giving a color other than green (provided by chlorophyll) to the microorganism.
  • the microorganism comprises phycocyanin.
  • phycocyanin is blue in color and if it is considered to be the pigment of interest, it will be possible to make the microorganism more or less blue.
  • Such a blue microorganism is particularly advantageous compared to extracted phycocyanin which is generally found in commercial powder form.
  • This phycocyanin powder is powdery and difficult to handle, which requires good protection, generates significant losses and generally requires a lot of cleaning after handling in the place where it was handled.
  • the phycocyanin powder is generally dried over a technical additive, which represents a costly additional operation and gives a hybridized final product due to the presence of the additive.
  • the blue microorganism comprising phycocyanin which can be obtained with the process which is the subject of the present invention, for example spirulina, is less powdery and therefore easier to handle than phycocyanin powder, requires less protection and cleaning, and also allows to dispense with a drying step on a technical additive that could denature the product.
  • the microorganism is chosen from Aphanizomenon flos-aquae, Spirulina platensis and Chlorella vulgaris.
  • the microorganism is in the form of a powder.
  • the present invention relates to a process for coloring a composition, for example a paint, food or cosmetic composition, said coloring process comprising: - the process for revealing at least one pigment of interest in a microorganism which is the subject of the present invention, - recovering the microorganism comprising the pigment of interest revealed and mixing it with the composition so as to color said composition.
  • the colored composition obtained is advantageously colored in a natural manner by the microorganism which has changed color, following the revelation of the pigment of interest thanks to the method of revelation which is the subject of the present invention.
  • Figure 1 is a graph illustrating the percentage increase or decrease in the expression of the red, green and blue colors calculated in relation between the value at T0, before irradiation (photoactivation), and the value at TF, after 100h of photoactivation with white light in Sun Spirulina (A) and Natur Herb Biotech Spirulina (B), on transparent adhesive tape, in comparison with their respective negative control (same spirulina on tape and surrounded by aluminum foil) ;
  • Figure 2 is a graph illustrating the increase or decrease in percentage of the expression of the colors red, green and blue calculated in relation between the value at T0, before photoactivation, and the value at TF, after 100h of photoactivation under red and blue light in Sunshine Spirulina (A) and Natur Herb Biotech Spirulina (B), on transparent adhesive tape, in comparison with their respective negative control (same spirulina on tape and surrounded by aluminum foil).
  • photoactivation will be used to define the revelation of at least one pigment in a microorganism by irradiation with light.
  • the color of powdered sun spirulina is according to the CIELab standard (23.3, -4.0, 10.7), ie RGB (56, 57, 39).
  • CIELab standard 23.3, -4.0, 10.7
  • RGB 56, 57, 39
  • RAL6007 Bottle green the closest associated color
  • a measurement zone is defined on the ribbon. Two tests are carried out in parallel, one with white light illumination and the other with blue and red light in order to identify the impact of the wavelengths on the modification of the color. The blue and red lighting has a ratio of 3 blue LEDs for 8 red LEDs. [0040] After 100 hours of exposure, the change in color is measured using a colorimeter. [0041] B. Photoactivation on a sachet [0042] Photoactivation on a sachet is carried out under the same conditions as the experiment on a ribbon, however the purpose of this experiment is to be able to recover the photoactivated powder in order to extract and compare the composition in main pigments.
  • the main pigments are phycocyanin (blue pigment) and chlorophylls a and b (green pigments).
  • Phycocyanin whose absorbance peak is at 620 nm, is soluble in water. In order to extract it, 6 ml of osmosed water are therefore added to each sachet, the preparation is homogenized, sampled, centrifuged for 4 min at 13400 rpm and finally filtered through a filter with a porosity of 0.2 ⁇ m. An absorbance measurement at 620 nm is carried out (the blank value is measured on water).
  • Chlorophyll whose absorbance peaks are at 430 nm, 445 nm, 630 nm and 645 nm is soluble in ethanol.
  • 6 ml of 96% ethanol are therefore added to each sachet, the preparation is homogenized, removed, centrifuged for 4 min at 13400 rpm and finally filtered through a filter with a porosity of 0.2 ⁇ m.
  • An absorbance measurement at 430 nm, 445 nm, 630 nm and 645 nm is carried out (the blank value is measured on 96% ethanol).
  • the ratios of maximum absorbance, linked to the presence and concentration of the different pigments, are then compared [0049] D.
  • RGB referential we can quantify the evolution of intensity in red (R), green (G) and blue (B), primary colors at the origin of all the possible shades.
  • R red
  • G green
  • B blue
  • the increase or decrease in the expression of the red, green and blue colors is calculated in relation between the value at T0, before photoactivation, and the value at TF, after 100 h of photoactivation.
  • Figure 1 shows the impact of white light photoactivation on the expression of the primary colors in Spirulina du Soleil (A) and in Spirulina Natur Herb Biotech (B).
  • the pigment profile of the spirulina powder is modified, explaining the modification of the color of the powder.
  • Photoactivation makes it possible to increase the phycocyanin/chlorophyll ratio, letting the blue of the phycocyanin express itself.
  • the chlorophyll/phycocyanin ratios of spirulina powder photoactivated with white light or not are indicated in table 4 below: [0079] [Table 4] It is observed that the absorbance of chlorophyll a is 4 times greater than that of phycocyanin without photoactivation. After 100 hours of photoactivation with white light, it is then the absorbance of phycocyanin which is greater than that of chlorophyll a. The decrease in this ratio is 80%.
  • composition of the light used that is to say the wavelengths composing it, therefore influences the modification of the relative pigment contents of the microalgal matrices treated.
  • E. Conclusions [00103] Photoactivation of spirulina powder for 100 hours at an intensity of 1700 ⁇ mol.m -2 .s -1 with white light or blue and red light (3 blue LEDs for 8 red LEDs ) makes it possible to modify the pigmentary profile of the latter. This reaction causes a change in the color of the powder visible to the naked eye. The powder, originally green, turns blue. This observation was made on two references of spirulina powder.

Abstract

The invention relates to a method for revealing at least one pigment of interest in a microorganism in dry form containing pigments including the pigment of interest and chlorophyll, said method comprising at least one step of irradiating the microorganism with light so as to reduce the chlorophyll level of the microorganism in favour of revealing the pigment of interest.

Description

Description Description
Titre de l'invention : Procédé de révélation de pigment dans un microorganisme Title of the invention: Process for revealing pigment in a microorganism
Domaine technique de l'invention Technical field of the invention
[0001 ] L’invention relève des procédés de photoactivation. Elle concerne plus particulièrement un procédé de révélation de pigment dans un microorganisme. The invention relates to photoactivation processes. It relates more particularly to a process for revealing pigment in a microorganism.
Technique antérieure Prior technique
[0002] La photoactivation consiste en l’activation d’une réaction chimique produite par des photons incidents. [0002] Photoactivation consists of the activation of a chemical reaction produced by incident photons.
[0003] Les colorants sont de nos jours utilisés dans de nombreux de domaines comme les peintures, la cosmétique oouu encore l’alimentation. Généralement, ils mettent en œuvre des pigments qui peuvent être naturels ou non. [0003] Dyes are nowadays used in many fields such as paints, cosmetics or even food. Generally, they implement pigments which may or may not be natural.
[0004] Dans certains domaines comme l’alimentation il est préférable d’utiliser des pigments naturels et bien entendu comestibles. Des pigments comestibles naturels connus sont par exemple les caroténoïdes et la chlorophylle. [0004] In certain areas, such as food, it is preferable to use natural and of course edible pigments. Known natural edible pigments are for example carotenoids and chlorophyll.
[0005] Dans le cadre des colorants apportant une coloration bleue, il existe deux additifs alimentaires issus de synthèse chimique et référencés E131 (bleu patenté V) et E133 (bleu brillant). Concernant le E131 , peu d'études ont globalement été réalisées sur ce colorant bleu de synthèse. Il existe une suspicion de potentiel allergène. Lors de sa réévaluation en 2013, l’Autorité européenne de sécurité alimentaire (EFSA Panel on Food Additives and Nutrient Sources added to Food (ANS); Scientific Opinion on the réévaluation of Patent Blue V (E 131 ) as a food additive. EFSA Journal 2013;1 1 (3) :2818. [35 pp.]) a revu la dose journalière admissible (DJA) à la baisse. Une étude, menée en 1987 par le Centre international de recherche sur le cancer (Cire), a conclu que le bleu patenté V était carcinogène chez le rat. Il demeure en revanche inclassable quant à sa carcinogénicité chez l'homme (groupe 3 selon le Cire). Son utilisation est interdite aux Etats-Unis, au Canada, en Australie et en Norvège. Concernant le E133, les études réunies et étudiées par l’Autorité européenne de sécurité alimentaire (EFSA Panel on Food Additives and Nutrient Sources added to Food (ANS); Scientific Opinion on the reevaluation of Brilliant Blue FCF (E 133) as a food additive. EFSA Journal 2010; 8(11):1853. [36 pp.]) montrent que ce colorant bleu de synthèse n'est ni carcinogène, ni génotoxique, ni reprotoxique. Une étude publiée en 2015 évoque cependant un effet cytotoxique et génotoxique possible sur des lymphocytes humains. [0006] Il existe donc, aujourd’hui, une demande croissante pour des colorants bleus, d’origine naturelle. Parmi ceux-ci, les substances colorantes bleues issues de microorganismes suscitent un intérêt particulier. Nous pouvons citer en exemple les extraits produits par raffinage de spiruline, riches en phycocyanines. [0007] Les colorants existants aujourd’hui sont ainsi souvent chers et lourds car leur procédé de fabrication implique souvent des méthodes d’extraction de pigments fastidieuses et coûteuse. [0008] Il conviendrait donc de trouver un procédé permettant d’obtenir des pigments pour la fabrication de colorants à coût réduits. Présentation de l'invention [0009] La présente invention a pour objectif de palier les inconvénients précités en proposant un procédé de révélation d’au moins un pigment d’intérêt chez un microorganisme sous forme sèche (déshydratée) comprenant des pigments dont le pigment d’intérêt et de la chlorophylle, ledit procédé comprenant au moins une étape d’irradiation du microorganisme avec de la lumière de sorte à réduire le taux de chlorophylle du microorganisme en faveur de la révélation dudit pigment d’intérêt. [0010] Grâce à ce procédé, les quantités relatives de pigments du microorganisme varient en faveur de la révélation du pigment d’intérêt. En effet, le ratio pigment d’intérêt/quantité de pigment totale varie du fait de la diminution du taux de chlorophylle de sorte que le microorganisme change de couleur par révélation dudit pigment d’intérêt. Le pigment chlorophylle aura tendance à donner une couleur verte au microorganisme et, suivant le pigment d’intérêt et la couleur de ce dernier, il est possible avec le procédé objet de la présente invention de changer la couleur du microorganisme. [0011] Il est normalement admis que les microorganismes, tout comme les aliments ou matrices alimentaires, peuvent être soumis à des opérations de conservation afin d’en allonger la durée d’utilisation. Ces techniques visent également à préserver les qualités intrinsèques de ces produits, c’est-à- dire, à éviter toute modification d’origine biologique ou chimique (Amit et al., « A review on mechanisms and commercial aspects of food preservation and processing », Agric & Food Secur (2017) 6:51, DOI 10.1186/s40066- 017-0130-8). Parmi les techniques de conservation des aliments, nous pouvons citer la déshydratation ou l’exposition à des radiations ionisantes (Rahman R., « Food preservation », 2014, http://en.banglapedia.org/index.php?title=Food_Preservation). Il apparait donc que l’exposition à une irradiation et/ou le séchage d’aliments vise habituellement à éviter toute modification de la matrice exposée, afin d’en garantir les propriétés initiales pendant une durée dite « durée de conservation ». Ainsi l’art antérieur nous enseigne qu’un microorganisme à l’état séché (déshydraté) conserve ses propriétés initiales et sa composition chimique n’est pas censé varier. Or les inventeurs, ont découvert de manière surprenante et inattendue avec le procédé objet de la présente invention, que même à l’état séché il est possible de modifier la composition chimique d’un microorganisme comprenant des pigments dont au moins un pigment d’intérêt (de préférence la phycocyanine) et de la chlorophylle, en l’exposant à une irradiation lumineuse, ce qui a pour effet de favoriser la révélation du pigment d’intérêt au détriment de la chlorophylle. [0012] En effet, contre toute attente, l’irradiation du microorganisme sous forme sèche avec de la lumière permet de dégrader le pigment chlorophylle et ainsi fait diminuer le taux de chlorophylle et donc fait varier ledit ratio pigment d’intérêt/quantité de pigment totale de sorte à révéler le pigment d’intérêt. [0013] La forme sèche du microorganisme a en plus pour avantage de faciliter la manipulation (transport, mise en mouvement, homogénéisation) du microorganisme que ce soit avant, durant ou après la mise en œuvre du procédé objet de la présente invention. De plus, la forme sèche garantie la stabilité microbiologique du microorganisme durant et après la mise en œuvre dudit procédé. [0014] Ce procédé permet donc avantageusement de révéler un pigment chez un microorganisme et ainsi de changer la couleur de ce dernier. Ce microorganisme représente alors de manière avantageuse un moyen de coloration naturel obtenu à coût très faible par rapport aux procédés d’extraction de pigments naturels connus. De plus, de manière avantageuse, le procédé n’implique pas une déstructuration mécanique du microorganisme. En effet, le microorganisme devient coloré et garde son intégrité contrairement aux microorganismes lorsqu’ils sont utilisés avec des procédé classiques d’extraction de leurs pigments. Le risque de contamination du microorganisme est donc également réduit par rapport à un procédé d’extraction de pigment invasif du microorganisme. Un autre avantage du procédé objet de la présente invention est qu’il s’affranchit de l’utilisation de solvant comme cela est souvent le cas dans les procédés d’extraction de pigments. [0015] Dans des modes de réalisation particuliers, l’invention répond en outre aux caractéristiques suivantes, mises en œuvre séparément ou en chacune de leurs combinaisons techniquement opérantes. [0016] Dans des modes de mise en œuvre particuliers du procédé objet de la présente invention, l’irradiation du microorganisme est effectuée pendant une durée d’au moins 24 heures. [0017] Dans des modes de mise en œuvre particuliers du procédé objet de la présente invention, l’étape d’irradiation se fait avec une lumière d’énergie lumineuse comprise entre 1500 et 2000 µmol.m-2.s-1, de préférence 1700 µmol.m-2.s-1. Une irradiation réalisée avec une énergie lumineuse comprise entre 1500 et 2000 µmol.m-2.s-1 permet d’obtenir une révélation bien visible à l’œil nu du pigment d’intérêt sans dégradation de ce dernier. Une irradiation réalisée avec une énergie lumineuse de 1700 µmol.m-2.s-1 permet d’obtenir le meilleur résultat de révélation de pigment d’intérêt. [0018] Dans des modes de mise en œuvre particuliers du procédé objet de la présente invention, l’étape d’irradiation est faite à la lumière blanche et/ou à la lumière rouge et bleue. On entend par lumière blanche une lumière comprenant l’ensemble des longueurs d’onde comprises entre 400 et 800 nm. On entend par lumière rouge et bleue, une lumière comprenant une longueur d’onde comprise entre 425 à 490 nm et une longueur d’onde comprise entre 625 et 775 nm. Une irradiation à la lumière blanche et/ou à la lumière rouge et bleue conduit à la même efficacité de révélation de pigment d’intérêt. [0019] La réalisation de l’irradiation du microorganisme pendant une durée d’au moins 24 heures, avec une énergie lumineuse comprise entre 1500 et 2000 µmol.m-2.s-1, de préférence 1700 µmol.m-2.s-1, et avec une lumière blanche et/ou une lumière rouge et bleue apporte un résultat de révélation de pigment d’intérêt optimal. [0020] Dans des modes de mise en œuvre particuliers du procédé objet de la présente invention, le microorganisme est une cyanobactérie, une algue ou une microalgue. [0021] Dans des modes de mise en œuvre particuliers du procédé objet de la présente invention, le microorganisme est comestible. Le procédé objet de la présente invention représente un réel avantage lorsque le microorganisme est comestible car, il est bien connu que certaines couleurs rendent plus appétant les aliments. Le procédé objet de la présente invention permettant de changer la couleur du microorganisme qui comporte le pigment d’intérêt, il est donc possible d’obtenir, suite à la mise en œuvre du procédé objet de la présente invention, en fonction du microorganisme comestible choisi et des pigments qu’il contient, un microorganisme comestible d’une couleur plus appétante que la couleur initiale du microorganisme, rendant ce dernier ou l’aliment pour lequel il est utilisé en tant que colorant plus appétant. [0022] De préférence, l’étape d’irradiation avec de la lumière est réalisée de sorte à réduire le taux de chlorophylle a et/ou b du microorganisme. Cela a pour avantage de permettre à un pigment d’intérêt autre que la chlorophylle d’être révélé et de donner une couleur autre que le vert (apportée par la chlorophylle) au microorganisme. [0023] Dans des modes de mise en œuvre particuliers du procédé objet de la présente invention, le microorganisme comprend de la phycocyanine. Un tel microorganisme est particulièrement avantageux pour le procédé objet de la présente invention car la phycocyanine est de couleur bleue et si on la considère comme étant le pigment d’intérêt, il sera possible de rendre plus ou moins bleu le microorganisme. Un tel microorganisme bleu est particulièrement avantageux comparé à de la phycocyanine extraite que l’on trouve généralement en poudre dans le commerce. Cette poudre de phycocyanine est pulvérulente et difficile à manipuler, ce qui demande de bien la protéger, engendre des pertes importantes et demande en général beaucoup de nettoyage après sa manipulation dans le lieu où elle a été manipulée. Pour éviter ce problème, la poudre de phycocyanine est en général séchée sur additif technique ce qui représente une opération supplémentaire coûteuse et donnant un produit final hybridé du fait de la présence de l’additif. Le microorganisme bleu comprenant de la phycocyanine pouvant être obtenu avec le procédé objet de la présente invention, par exemple la spiruline, est moins pulvérulent et donc plus facile à manipuler que de la poudre de phycocyanine, nécessite moins de protection et nettoyage, et permet aussi de s’affranchir d’une étape de séchage sur additif technique pouvant dénaturer le produit. [0024] Dans des modes de mise en œuvre particuliers du procédé objet de la présente invention, le microorganisme est choisi parmi Aphanizomenon flos-aquae, Spirulina platensis et Chlorella vulgaris. [0025] Dans des modes de mise en œuvre particuliers du procédé objet de la présente invention, le microorganisme est sous forme de poudre. [0026] Selon un autre aspect, la présente invention vise un procédé de coloration d’une composition, par exemple une composition de peinture, alimentaire, ou cosmétique, ledit procédé de coloration comprenant : - le procédé de révélation d’au moins un pigment d’intérêt chez un microorganisme objet de la présente invention, - la récupération du microorganisme comprenant le pigment d’intérêt révélé et son mélange avec la composition de sorte à colorer ladite composition. [0027] La composition colorée obtenue est avantageusement colorée de manière naturelle par le microorganisme qui a changé de couleur, suite à la révélation du pigment d’intérêt grâce au procédé de révélation objet de la présente invention. [0028] L’invention sera mieux comprise à la lecture de la description suivante, donnée à titre d’exemple nullement limitatif, et faite en se référant aux figures qui représentent : [0005] In the context of colorants providing a blue coloration, there are two food additives derived from chemical synthesis and referenced E131 (patent blue V) and E133 (brilliant blue). Concerning E131, few studies have generally been carried out on this synthetic blue dye. There is a suspicion of allergenic potential. During its re-evaluation in 2013, the European Food Safety Authority (EFSA Panel on Food Additives and Nutrient Sources added to Food (ANS); Scientific Opinion on the re-evaluation of Patent Blue V (E 131 ) as a food additive. EFSA Journal 2013;1 1 (3):2818.[35 pp.]) revised the Acceptable Daily Intake (ADI) downwards. A study, conducted in 1987 by the International Agency for Research on Cancer (CIRE), concluded that patent blue V was carcinogenic in rats. However, it remains unclassifiable as to its carcinogenicity in humans (group 3 according to Cire). Its use is prohibited in the United States, Canada, Australia and Norway. Regarding E133, studies collected and studied by the European Food Safety Authority (EFSA Panel on Food Additives and Nutrient Sources added to Food (ANS); Scientific Opinion on the reevaluation of Brilliant Blue FCF (E 133) as a food additive. EFSA Journal 2010; 8 (11):1853. [36 pp.]) show that this synthetic blue dye is neither carcinogenic, nor genotoxic, nor reprotoxic. A study published in 2015, however, suggests a possible cytotoxic and genotoxic effect on human lymphocytes. [0006] There is therefore today a growing demand for blue dyes of natural origin. Of these, blue coloring substances from microorganisms are of particular interest. We can cite as an example the extracts produced by refining spirulina, rich in phycocyanins. [0007] The dyes that exist today are thus often expensive and heavy because their manufacturing process often involves tedious and costly pigment extraction methods. [0008] It would therefore be necessary to find a method making it possible to obtain pigments for the manufacture of dyes at reduced cost. Presentation of the invention [0009] The objective of the present invention is to overcome the aforementioned drawbacks by proposing a process for revealing at least one pigment of interest in a microorganism in dry (dehydrated) form comprising pigments whose pigment d interest and chlorophyll, said method comprising at least one step of irradiating the microorganism with light so as to reduce the chlorophyll level of the microorganism in favor of revealing said pigment of interest. [0010] By means of this process, the relative amounts of pigments of the microorganism vary in favor of revealing the pigment of interest. Indeed, the pigment of interest/total pigment quantity ratio varies due to the reduction in the level of chlorophyll such that the microorganism changes color by revealing said pigment of interest. The chlorophyll pigment will tend to give a green color to the microorganism and, depending on the pigment of interest and the color of the latter, it is possible with the method that is the subject of the present invention to change the color of the microorganism. [0011] It is normally accepted that microorganisms, like foods or food matrices, can be subjected to preservation operations in order to extend their useful life. These techniques also aim to preserve the intrinsic qualities of these products, i.e. to avoid any modification of biological or chemical origin (Amit et al., “A review on mechanisms and commercial aspects of food preservation and processing », Agric & Food Secur (2017) 6:51, DOI 10.1186/s40066-017-0130-8). Food preservation techniques include dehydration or exposure to ionizing radiation (Rahman R., “Food preservation”, 2014, http://en.banglapedia.org/index.php?title=Food_Preservation ). It therefore appears that the exposure to irradiation and/or the drying of food is usually aimed at avoiding any modification of the exposed matrix, in order to guarantee its initial properties for a period known as the “shelf life”. Thus the prior art teaches us that a microorganism in the dried (dehydrated) state retains its initial properties and its chemical composition is not supposed to vary. However, the inventors have surprisingly and unexpectedly discovered with the method that is the subject of the present invention, that even in the dried state it is possible to modify the chemical composition of a microorganism comprising pigments including at least one pigment of interest (preferably phycocyanin) and chlorophyll, by exposing it to light irradiation, which has the effect of promoting the revelation of the pigment of interest to the detriment of chlorophyll. [0012] Indeed, against all expectations, the irradiation of the microorganism in dry form with light makes it possible to degrade the chlorophyll pigment and thus reduces the level of chlorophyll and therefore varies said ratio pigment of interest / quantity of pigment total so as to reveal the pigment of interest. [0013] The dry form of the microorganism also has the advantage of facilitating the handling (transport, setting in motion, homogenization) of the microorganism, whether before, during or after the implementation of the method that is the subject of the present invention. In addition, the dry form guarantees the microbiological stability of the microorganism during and after the implementation of said method. This method therefore advantageously makes it possible to reveal a pigment in a microorganism and thus to change the color of the latter. This microorganism then advantageously represents a natural coloring means obtained at very low cost compared to known natural pigment extraction processes. Moreover, advantageously, the method does not involve mechanical destructuring of the microorganism. Indeed, the microorganism becomes colored and retains its integrity unlike microorganisms when they are used with conventional processes for extracting their pigments. The risk of contamination of the microorganism is therefore also reduced compared to a process for extracting invasive pigment from the microorganism. Another advantage of the method that is the subject of the present invention is that it does away with the use of solvents, as is often the case in pigment extraction methods. [0015] In particular embodiments, the invention also responds to the following characteristics, implemented separately or in each of their technically effective combinations. [0016] In particular embodiments of the method which is the subject of the present invention, the irradiation of the microorganism is carried out for a period of at least 24 hours. [0017] In particular embodiments of the method that is the subject of the present invention, the irradiation step is carried out with a light having a light energy of between 1500 and 2000 μmol.m -2 .s -1 , of preferably 1700 μmol.m -2 .s -1 . Irradiation carried out with a light energy of between 1500 and 2000 μmol.m −2 .s −1 makes it possible to obtain a revelation which is clearly visible to the naked eye of the pigment of interest without degradation of the latter. Irradiation carried out with a light energy of 1700 μmol.m −2 .s −1 makes it possible to obtain the best result for revealing the pigment of interest. In particular embodiments of the method that is the subject of the present invention, the irradiation step is carried out with white light and/or with red and blue light. By white light is meant a light comprising all the wavelengths between 400 and 800 nm. Red and blue light means light comprising a wavelength between 425 and 490 nm and a wavelength between 625 and 775 nm. Irradiation with white light and/or with red and blue light leads to the same effectiveness in revealing the pigment of interest. The realization of the irradiation of the microorganism for a period of at least 24 hours, with a light energy of between 1500 and 2000 μmol.m -2 .s -1 , preferably 1700 μmol.m -2 .s -1 , and with a white light and/or a red and blue light brings a result of revealing pigment of optimal interest. [0020] In particular embodiments of the method that is the subject of the present invention, the microorganism is a cyanobacterium, an algae or a microalgae. In particular embodiments of the method that is the subject of the present invention, the microorganism is edible. The process that is the subject of the present invention represents a real advantage when the microorganism is edible because it is well known that certain colors make foods more palatable. The process which is the subject of the present invention makes it possible to change the color of the microorganism which comprises the pigment of interest, it is therefore possible to obtain, following the implementation of the process which is the subject of the present invention, depending on the edible microorganism chosen and pigments it contains, an edible microorganism of a more palatable color than the initial color of the microorganism, making the latter or the food for which it is used as a colorant more palatable. [0022] Preferably, the step of irradiating with light is carried out so as to reduce the level of chlorophyll a and/or b of the microorganism. This has the advantage of allowing a pigment of interest other than chlorophyll to be revealed and of giving a color other than green (provided by chlorophyll) to the microorganism. In particular embodiments of the method that is the subject of the present invention, the microorganism comprises phycocyanin. Such a microorganism is particularly advantageous for the method that is the subject of the present invention because phycocyanin is blue in color and if it is considered to be the pigment of interest, it will be possible to make the microorganism more or less blue. Such a blue microorganism is particularly advantageous compared to extracted phycocyanin which is generally found in commercial powder form. This phycocyanin powder is powdery and difficult to handle, which requires good protection, generates significant losses and generally requires a lot of cleaning after handling in the place where it was handled. To avoid this problem, the phycocyanin powder is generally dried over a technical additive, which represents a costly additional operation and gives a hybridized final product due to the presence of the additive. The blue microorganism comprising phycocyanin which can be obtained with the process which is the subject of the present invention, for example spirulina, is less powdery and therefore easier to handle than phycocyanin powder, requires less protection and cleaning, and also allows to dispense with a drying step on a technical additive that could denature the product. In particular embodiments of the method that is the subject of the present invention, the microorganism is chosen from Aphanizomenon flos-aquae, Spirulina platensis and Chlorella vulgaris. In particular embodiments of the method that is the subject of the present invention, the microorganism is in the form of a powder. According to another aspect, the present invention relates to a process for coloring a composition, for example a paint, food or cosmetic composition, said coloring process comprising: - the process for revealing at least one pigment of interest in a microorganism which is the subject of the present invention, - recovering the microorganism comprising the pigment of interest revealed and mixing it with the composition so as to color said composition. The colored composition obtained is advantageously colored in a natural manner by the microorganism which has changed color, following the revelation of the pigment of interest thanks to the method of revelation which is the subject of the present invention. The invention will be better understood on reading the following description, given by way of non-limiting example, and made with reference to the figures which represent:
[0029] [Fig. 1] La figure 1 est un graphe illustrant l’augmentation ou la diminution en pourcentage de l’expression des couleurs rouge, verte et bleue calculée par rapport entre la valeur à T0, avant irradiation (photoactivation), et la valeur à TF, après 100h de photoactivation à la lumière blanche chez la spiruline du soleil (A) et la spiruline Natur Herb Biotech (B), sur ruban adhésif transparent, en comparaison avec leur témoin négatif respectif (même spiruline sur ruban et entourée de papier d’aluminium) ; [0029] [Fig. 1] Figure 1 is a graph illustrating the percentage increase or decrease in the expression of the red, green and blue colors calculated in relation between the value at T0, before irradiation (photoactivation), and the value at TF, after 100h of photoactivation with white light in Sun Spirulina (A) and Natur Herb Biotech Spirulina (B), on transparent adhesive tape, in comparison with their respective negative control (same spirulina on tape and surrounded by aluminum foil) ;
[0030] [Fig. 2] La figure 2 est un graphe illustrant l’augmentation ou la diminution en pourcentage de l’expression des couleurs rouge, verte et bleue calculée par rapport entre la valeur à T0, avant photoactivation, et la valeur à TF, après 100h de photoactivation à la lumière rouge et bleue chez la spiruline du soleil (A) et la spiruline Natur Herb Biotech (B), sur ruban adhésif transparent, en comparaison avec leur témoin négatif respectif (même spiruline sur ruban et entourée de papier d’aluminium). [0030] [Fig. 2] Figure 2 is a graph illustrating the increase or decrease in percentage of the expression of the colors red, green and blue calculated in relation between the value at T0, before photoactivation, and the value at TF, after 100h of photoactivation under red and blue light in Sunshine Spirulina (A) and Natur Herb Biotech Spirulina (B), on transparent adhesive tape, in comparison with their respective negative control (same spirulina on tape and surrounded by aluminum foil).
Description des modes de réalisation Description of embodiments
[0031 ] Dans la description qui suit, le terme photoactivation sera utilisé pour définir la révélation d’au moins un pigment chez un microorganisme par irradiation avec une lumière. [0031] In the following description, the term photoactivation will be used to define the revelation of at least one pigment in a microorganism by irradiation with light.
[0032] Les expériences suivantes démontrent la modification du profil pigmentaire d’un microorganisme, la cyanobactérie Spirulina platensis communément appelée Spiruline, par irradiation avec de la lumière blanche ou de la lumière rouge et bleue, de sorte à révéler un de ses pigments. The following experiments demonstrate the modification of the pigmentary profile of a microorganism, the cyanobacterium Spirulina platensis commonly called Spirulina, by irradiation with white light or red and blue light, so as to reveal one of its pigments.
[0033] La spiruline utilisée pour les expériences est sous forme de poudre. Deux références sont comparées : La spiruline Natur Herb Biotech (Origine : Chine) et la spiruline du soleil (Origine : France). The spirulina used for the experiments is in powder form. Two references are compared: Natur Herb Biotech spirulina (Origin: China) and spirulina du soleil (Origin: France).
[0034] La couleur de la spiruline du soleil en poudre est selon le référentiel CIELab (23.3, -4.0, 10.7), soit RGB (56, 57, 39). Dans un référentiel RAL la couleur associée la plus proche est RAL6007 Vert bouteille. The color of powdered sun spirulina is according to the CIELab standard (23.3, -4.0, 10.7), ie RGB (56, 57, 39). In a RAL reference, the closest associated color is RAL6007 Bottle green.
[0035] La couleur de la spiruline Natur Herb Biotech en poudre est selon le référentiel CIELab (22.0, -16.2, 9.4), soit RGB (30, 59, 38). Dans un référentiel RAL la couleur associée la plus proche est RAL6005 Vert mousse. [0036] A. Photoactivation sur ruban [0037] Afin de photoactiver la poudre de spiruline, il est nécessaire que celle-ci soit en contact direct avec les photons de la lumière. Ainsi le poudre de spiruline est emprisonnée entre deux bandes de ruban adhésif transparent en polypropylène (RAJA ref : ADP27MC) et un éclairage d’environ 1700 μmol.m-2.s-1 est appliqué. En parallèle un témoin négatif, entouré de papier aluminium est placé dans des conditions identiques. [0038] Afin de quantifier précisément le changement de couleur, une zone de mesure est définie sur le ruban. [0039] Deux essais sont réalisés en parallèle, un avec un éclairage à la lumière blanche et l’autre à la lumière bleue et rouge afin d’identifier l’impact des longueurs d’onde sur la modification de la couleur. L’éclairage bleu et rouge comporte un ratio de 3 LED bleues pour 8 LED rouges. [0040] Au bout de 100h d’exposition, la modification de la couleur est mesurée via un colorimètre. [0041] B. Photoactivation sur sachet [0042] La photoactivation sur sachet est réalisé dans les mêmes conditions que l’expérience sur ruban, cependant le but de cette expérience est de pouvoir récupérer la poudre photoactivée afin d’extraire et de comparer la composition en pigments principaux. Ici une faible quantité de poudre, environ 0,35g, est placée dans un sachet transparent de 12cm par 6,5cm. La poudre est répartie le plus uniformément possible afin qu’elle soit au maximum en contact avec les photons de la lumière. Les conditions de durée, de qualité (lumière blanche vs lumière bleue/rouge) et d’intensité d’éclairement sont identiques à l’expérience sur ruban. [0043] C. Analyse de la photoactivation [0044] L’analyse de la couleur de la spiruline sur ruban se fait grâce à un colorimètre. La couleur est analysée selon un référentiel Lab (aussi appelé CIELAB) que l’on peut ensuite convertir en RGB ou en RAL pour plus de praticité. [0045] L’analyse de la couleur de la spiruline en sachet se fait grâce à une extraction liquide. Les pigments principaux sont la phycocyanine (pigment bleu) et les chlorophylles a et b (pigments verts). [0046] La phycocyanine, dont le pic d’absorbance se trouve à 620 nm est soluble dans l’eau. Afin de l’extraire 6 ml d’eau osmosée sont donc ajoutés à chaque sachet, la préparation est homogénéisée, prélevée, centrifugée 4 min à 13400 rpm et enfin filtrée sur filtre de porosité 0,2 μm. Une mesure d’absorbance à 620 nm est réalisée (la valeur du blanc est mesurée sur de l’eau). [0047] La chlorophylle, dont les pics d’absorbance se trouve à 430 nm, 445 nm, 630 nm et 645 nm est soluble dans l’éthanol. Afin de les extraire 6 ml d’éthanol à 96% sont donc ajoutés à chaque sachet, la préparation est homogénéisée, prélevée, centrifugée 4 min à 13400 rpm et enfin filtrée sur filtre de porosité 0,2 μm. Une mesure d’absorbance à 430 nm, 445 nm, 630 nm et 645 nm est réalisé (la valeur du blanc est mesurée sur de l’éthanol à 96%). [0048] Les ratios des maximums d’absorbance, liés à la présence et à la concentration des différents pigments, sont ensuite comparés [0049] D. Présentation des résultats [0050] I. Photoactivation sur ruban [0051] Après 100h de photoactivation les rubans sont récupérés afin d’être analysés. Les premières observations des rubans montrent une nette modification de la couleur. [0052] Afin de pouvoir identifier les couleurs une mesure au colorimètre est réalisé sur les zones préalablement définies. Les coefficients CIELab permettent d’identifier les couleurs d’une manière très précise. Or, pour l’œil humain il est difficile de discerner les subtilités. Les couleurs seront donc converties sur le référentiel RGB et sur le référentiel RAL qui sert classiquement à l’identification des couleurs. [0053] a. Photoactivation à la lumière blanche sur ruban [0054] Les résultats concernant la photoactivation sur ruban à la lumière blanche sont présentés dans le tableau 1 ci-dessous : [0055] [Table 1]
Figure imgf000011_0001
[0056] On observe de légères différences d’identification de couleur selon les référentiels CIELab et RGB à T0 (avant exposition à la lumière), ce qui est dû en partie à la répartition de la poudre sur le ruban. Certaines zones plus riches en poudre que d’autres sont en effet à l’origine de cette très légère différence. Selon le référentiel RAL, aucune différence n’est détectée et RAL7009 correspond à du Gris vert tandis que RAL6028 correspond à du vert pin. [0057] Il est important de noter que les couleurs identifiées correspondent à une mesure à travers le ruban et entraine donc une légère modification de la couleur lue, pour les poudres à T0, témoins et photoactivées. Ceci explique pourquoi la couleur de la poudre de spiruline du soleil, identifiée en RAL6007 Vert bouteille comme indiqué plus haut, apparait RAL7009 Gris vert à T0 sur les essais et la spiruline Natur Herb Biotech, identifié RAL6005 vert mousse, apparait RAL6028 Vert pin sur les essais à T0. [0058] Nous observons après 100h d’exposition (TF) à la lumière blanche une modification de la couleur sur les deux références de poudres de spiruline. Les poudres gris vert (RAL7009) et vert pin (RAL6028) sont respectivement devenues gris foncé nacré (RAL9023) et gris petit gris (RAL7000) qui s’apparentent à du bleu, contrairement à leurs témoins négatifs. Ceci indique que la photoactivation à la lumière blanche entraine bien une modification de la couleur de la poudre. [0059] Grâce au référentiel RGB nous pouvons quantifier l’évolution d’intensité en rouge (R), vert (G) et bleu (B), couleurs primaires à l’origine de toutes les nuances possibles. Afin de quantifier ce changement de couleur, l’augmentation ou la diminution de l’expression des couleurs rouge, verte et bleue est calculée par rapport entre la valeur à T0, avant photoactivation, et la valeur à TF, après 100h de photoactivation. Les résultats sont présentés en figure 1 qui montre l’impact de la photoactivation à la lumière blanche sur l’expression des couleurs primaires chez la Spiruline du Soleil (A) et chez la Spiruline Natur Herb Biotech (B). [0060] Nous observons sur la photoactivation à la lumière blanche des deux références de spiruline qu’il y a une surexpression des couleurs rouge, verte et bleue avec une dominante pour la couleur bleue qui est surexprimée à 35% lors de la photoactivation à la lumière blanche de la spiruline du soleil et à 44% lors de la photoactivation à la lumière blanche de la spiruline Natur Herb Biotech. [0061] b. Photoactivation à la lumière bleue et rouge sur ruban [0062] Les résultats concernant la photoactivation sur ruban à la lumière bleue et rouge sont présentés dans le tableau 2 ci-dessous : [0063] [Table 2]
Figure imgf000012_0001
[0064] Les mêmes observations que celles réalisées sur l’essai de photoactivation à la lumière blanche sont observées ici. En effet, la photoactivation à la lumière bleue et rouge semble avoir le même impact que l’exposition à la lumière blanche. Ces résultats seront validés à la suite de l’essai de photoactivation sur sachet. [0065] De la même manière que pour la lumière blanche, les résultats sont exploités en fonction du référentiel RGB et^afin de quantifier le changement de couleur, l’augmentation ou la diminution de l’expression des couleurs rouge, verte et bleue est calculée par rapport entre la valeur à T0 et la valeur à TF. [0066] Les résultats sont présentés en figure 2 qui montre l’impact de la photoactivation à la lumière rouge et bleue sur l’expression des couleurs primaires chez la Spiruline du Soleil (A) et chez la Spiruline Natur Herb Biotech (B). [0067] Il est observé une augmentation des valeurs R, G et B, sur les deux références de spiruline, après 100h de photoactivation à la lumière bleue et rouge. La valeur du bleu a une augmentation plus importante que les deux autres couleurs. Nous observons une augmentation de 37% de l’expression du bleu après photoactivation à la lumière bleue et rouge de la spiruline du soleil et de 49% pour la spiruline Natur Herb Biotech. [0068] Concernant l’essai sur la spiruline Natur Herb Biotech, l’augmentation des valeurs de rouge (R) et de bleu (B) est plus importante sous irradiation à la lumière bleue et rouge que sous irradiation à la lumière blanche ((R)+37%/(B)+49% vs (R)27%/(B)+44%). [0069] Afin de mieux comprendre le mécanisme les résultats de l’essai de photoactivation sur sachet sont analysés. Ainsi il est possible d’étudier l’évolution des pigments majoritaires composant la spiruline à savoir la chlorophylle et la phycocyanine. [0070] II. Photoactivation sur sachet [0071] De même que lors de la photoactivation sur ruban, au bout de 100h de photoactivation, on constate une modification de la couleur des poudres de spiruline. [0072] L’objectif de cet essai est de mettre en évidence une modification sélective des teneurs relatives en pigments, en fonction de la source lumineuse, donc des longueurs d’ondes appliquées. Ainsi, les poudres ont été mises en suspension dans de l’eau pour extraire la phycocyanine ou dans de l’éthanol pour extraire les chlorophylles. [0073] a. Photoactivation à la lumière blanche sur sachet [0074] Les modifications de couleur des poudres sont visibles à l’œil nu.^Comme pour la photoactivation sur ruban, nous observons une différence de couleur initiale des poudres de spiruline, entrainant une différence de couleur sur les poudres photoactivées. La poudre de spiruline Natur Herb Biotech permet d’obtenir un bleu plus intense que la poudre de spiruline du soleil après photoactivation. [0075] Les résultats concernant la photoactivation sur sachet à la lumière blanche sont présentés dans le tableau 3 ci-dessous : [0076] [Table 3]
Figure imgf000014_0001
[0077] La valeur de densité optique (DO) du pic majoritaire est retenue, à savoir 620 nm pour la phycocyanine, 445 nm pour la chlorophylle a et 430 nm pour la chlorophylle b. [0078] Concernant la spiruline du soleil nous observons une diminution très importante de la chlorophylle a et b après 100h de photoactivation à la lumière blanche. Le profil pigmentaire de la poudre de spiruline en est modifié expliquant la modification de la couleur de la poudre. La photoactivation permet d’augmenter le ratio phycocyanine/chlorophylle, laissant le bleu de la phycocyanine s’exprimer. Les ratios chlorophylle/phycocyanine de la poudre de spiruline du soleil photoactivée à la lumière blanche ou non sont indiqués dans le tableau 4 ci-dessous : [0079] [Table 4]
Figure imgf000014_0002
[0080] Il est observé que l’absorbance de la chlorophylle a est 4 fois plus importante que celle de la phycocyanine sans photoactivation. Après 100h de photoactivation à la lumière blanche, c’est alors l’absorbance de la phycocyanine qui est plus importante que celle de la chlorophylle a. La diminution de ce ratio est de 80%. Pour la chlorophylle b ce ratio passe de 6,3 à 1,4, soit -78%. [0081] Ceci permet de montrer que le changement de couleur de la poudre est bien lié à une modification de la teneur relative en pigments dans la microalgue traitée par photoactivation à la lumière blanche. [0082] Les observations réalisées pour la spiruline du soleil sont également applicables à la spiruline Natur Herb Biotech. [0083] Les ratios chlorophylle/phycocyanine de la poudre de spiruline Natur Herb Biotech photoactivée à la lumière blanche ou non sont indiqués dans le tableau 5 ci-dessous : [0084] [Table 5]
Figure imgf000015_0001
[0085] Il est observé que l’absorbance de la chlorophylle a est 1,9 fois plus importante que celle de la phycocyanine sans photoactivation. Après 100h de photoactivation à la lumière blanche, l’absorbance de la chlorophylle a est alors moins importante que celle de la phycocyanine. La diminution de ce ratio est de 74%. Pour la chlorophylle b ce ratio passe de 4,3 à 1, soit - 77%. [0086] Ceci permet de montrer que le changement de couleur de la poudre est bien lié à une modification de la teneur relative en pigments dans la microalgue traitée par photoactivation à la lumière blanche. [0087] b. Photoactivation à la lumière bleue et rouge sur sachet [0088] Les modifications de couleur des poudres sont visibles à l’œil nu. Les observations réalisées pour la photoactivation à la lumière blanche sont applicables à la photoactivation à la lumière bleue et rouge. [0089] Les résultats concernant la photoactivation sur sachet à la lumière bleue et rouge sont présentés dans le tableau 6 ci-dessous : [0090] [Table 6]
Figure imgf000015_0002
[0091] Comme lors de la photoactivation à la lumière blanche, pour la spiruline du soleil nous observons une diminution très importante de la chlorophylle a et b après 100h de photoactivation à la lumière bleue et rouge. Le profil pigmentaire de la poudre de spiruline en est modifié expliquant la modification de la couleur de la poudre. La photoactivation permet d’augmenter le ratio phycocyanine/chlorophylle, laissant le bleu de la phycocyanine s’exprimer. Les ratios chlorophylle/phycocyanine de la poudre de spiruline du soleil photoactivée à la lumière bleue et rouge ou non sont indiqués dans le tableau 7 ci-dessous : [0092] [Table 7]
Figure imgf000016_0001
[0093] Il est constaté que l’absorbance de la chlorophylle a est 4,9 fois plus importante que celle de la phycocyanine sans photoactivation. Après 100h de photoactivation à la lumière bleue et rouge, ce ratio passe à 1,1. La diminution de ce ratio est de 78%. Pour la chlorophylle b ce ratio passe de 7,5 à 2,1, soit -72%. [0094] Ceci permet de montrer que le changement de couleur de la poudre est bien lié à une modification de la teneur relative en pigments dans la microalgue traitée par photoactivation à la lumière bleue et rouge. [0095] Les ratios de pigments chlorophylle/phycocyanine diminuent avec la photoactivation à la lumière bleue et rouge, cependant cette diminution est moins importante qu’avec la photoactivation à la lumière blanche. Cette dernière semble plus efficace pour révéler la couleur bleue, même si cette remarque n’est pas observable de manière macroscopique à l’observation des poudres. [0096] Les observations réalisées pour la spiruline du soleil sont également applicables à la spiruline Natur Herb Biotech. [0097] Les ratios chlorophylle/phycocyanine de la poudre de spiruline Natur Herb Biotech photoactivée à la lumière bleue et rouge ou non sont indiqués dans le tableau 8 ci-dessous : [0098] [Table 8]
Figure imgf000017_0001
[0099] Nous observons que l’absorbance de la chlorophylle a est 1,4 fois plus importante que celle de la phycocyanine sans photoactivation. Après 100h de photoactivation à la lumière bleue et rouge, ce ratio passe à 0,7. La diminution de ce ratio est de 50%. Pour la chlorophylle b ce ratio passe de 3,7 à 1,6, soit -57%. [00100] Ceci permet de montrer que le changement de couleur de la poudre est bien lié à une modification de la teneur relative en pigments dans la spiruline traitée par photoactivation à la lumière bleue et rouge. [00101] Comme pour la Spiruline du soleil, le traitement par exposition à la lumière bleue et rouge semble moins efficace que celui à la lumière blanche pour modifier les ratios des différents pigments dans la spiruline Natur Herb Biotech. La composition de la lumière utilisée, c’est-à-dire les longueurs d’onde la composant, influence donc la modification des teneurs relatives en pigments des matrices microalgales traitées. [00102] E. Conclusions [00103] La photoactivation de poudre de spiruline durant 100h à une intensité de 1700 μmol.m-2.s-1 avec de la lumière blanche ou une lumière bleue et rouge (3 LED bleues pour 8 LED rouges) permet de modifier le profil pigmentaire de celle-ci. Cette réaction entraine un changement de la couleur de la poudre visible à l’œil nu. La poudre, à l’origine verte, devient bleue. Cette observation a été réalisée sur deux références de poudre de spiruline. [00104] Au regard de la modification des teneurs relatives en pigments dans la spiruline, avant et après traitement, la photoactivation à la lumière blanche semble plus efficace qu’une exposition à la lumière bleue et rouge. Cela indique que la longueur d’onde de la lumière appliquée modifie de manière différente les teneurs relatives en pigments. [00105] De manière plus générale, il est à noter que les modes de mise en œuvre et de réalisation de l’invention considérés dans les expériences ci-dessus ont été décrits à titre d’exemples non limitatifs et que d’autres variantes sont par conséquent envisageables. [00106] Notamment, l’invention a été décrite dans les expériences en considérant principalement la microalgue Spirulina platensis. Rien n’exclut cependant, dans d’autres types de réalisation, de considérer d’autres types de microorganisme pour la mise en œuvre du procédé objet de la présente invention.^ The color of Natur Herb Biotech spirulina powder is according to the CIELab standard (22.0, -16.2, 9.4), ie RGB (30, 59, 38). In a RAL standard the closest associated color is RAL6005 Moss green. [0036] A. Photoactivation on Tape [0037] In order to photoactivate the spirulina powder, it is necessary for it to be in direct contact with the photons of light. Thus the spirulina powder is trapped between two strips of transparent polypropylene adhesive tape (RAJA ref: ADP27MC) and lighting of approximately 1700 μmol.m -2 .s -1 is applied. In parallel, a negative control, wrapped in aluminum foil, is placed under identical conditions. [0038] In order to precisely quantify the color change, a measurement zone is defined on the ribbon. Two tests are carried out in parallel, one with white light illumination and the other with blue and red light in order to identify the impact of the wavelengths on the modification of the color. The blue and red lighting has a ratio of 3 blue LEDs for 8 red LEDs. [0040] After 100 hours of exposure, the change in color is measured using a colorimeter. [0041] B. Photoactivation on a sachet [0042] Photoactivation on a sachet is carried out under the same conditions as the experiment on a ribbon, however the purpose of this experiment is to be able to recover the photoactivated powder in order to extract and compare the composition in main pigments. Here a small amount of powder, about 0.35g, is placed in a transparent bag of 12cm by 6.5cm. The powder is distributed as evenly as possible so that it is in maximum contact with the photons of light. The conditions of duration, quality (white light vs. blue/red light) and intensity of illumination are identical to the tape experiment. [0043] C. Analysis of the photoactivation [0044] The analysis of the color of the spirulina on ribbon is done using a colorimeter. The color is analyzed according to a Lab reference (also called CIELAB) which can then be converted into RGB or RAL for more practicality. The analysis of the color of the spirulina in sachets is done by means of a liquid extraction. The main pigments are phycocyanin (blue pigment) and chlorophylls a and b (green pigments). Phycocyanin, whose absorbance peak is at 620 nm, is soluble in water. In order to extract it, 6 ml of osmosed water are therefore added to each sachet, the preparation is homogenized, sampled, centrifuged for 4 min at 13400 rpm and finally filtered through a filter with a porosity of 0.2 μm. An absorbance measurement at 620 nm is carried out (the blank value is measured on water). Chlorophyll, whose absorbance peaks are at 430 nm, 445 nm, 630 nm and 645 nm is soluble in ethanol. In order to extract them, 6 ml of 96% ethanol are therefore added to each sachet, the preparation is homogenized, removed, centrifuged for 4 min at 13400 rpm and finally filtered through a filter with a porosity of 0.2 μm. An absorbance measurement at 430 nm, 445 nm, 630 nm and 645 nm is carried out (the blank value is measured on 96% ethanol). [0048] The ratios of maximum absorbance, linked to the presence and concentration of the different pigments, are then compared [0049] D. Presentation of the results [0050] I. Photoactivation on tape [0051] After 100 hours of photoactivation the ribbons are collected for analysis. The first observations of the ribbons show a clear modification of the color. In order to be able to identify the colors, a colorimeter measurement is carried out on the previously defined areas. The CIELab coefficients make it possible to identify the colors in a very precise way. However, for the human eye it is difficult to discern the subtleties. The colors will therefore be converted to the RGB standard and to the RAL standard which is conventionally used for color identification. [0053] a. Photoactivation with white light on ribbon [0054] The results concerning the photoactivation on ribbon with white light are presented in Table 1 below: [0055] [Table 1]
Figure imgf000011_0001
Slight differences in color identification are observed according to the CIELab and RGB reference systems at T0 (before exposure to light), which is partly due to the distribution of the powder on the ribbon. Some areas richer in powder than others are indeed the cause of this very slight difference. According to the RAL standard, no difference is detected and RAL7009 corresponds to gray green while RAL6028 corresponds to pine green. It is important to note that the colors identified correspond to a measurement through the ribbon and therefore lead to a slight modification of the color read, for the powders at T0, controls and photoactivated. This explains why the color of the spirulina powder from the sun, identified as RAL6007 Bottle green as indicated above, appears RAL7009 Gray green at T0 on the tests and the Natur Herb Biotech spirulina, identified RAL6005 moss green, appears RAL6028 Pine green on the tests at T0. We observe after 100 h of exposure (TF) to white light a modification of the color on the two references of spirulina powders. The gray green (RAL7009) and pine green (RAL6028) powders respectively became pearly dark gray (RAL9023) and small gray gray (RAL7000) which resemble blue, unlike their negative controls. This indicates that the photoactivation with white light indeed leads to a modification of the color of the powder. [0059] Thanks to the RGB referential we can quantify the evolution of intensity in red (R), green (G) and blue (B), primary colors at the origin of all the possible shades. In order to quantify this color change, the increase or decrease in the expression of the red, green and blue colors is calculated in relation between the value at T0, before photoactivation, and the value at TF, after 100 h of photoactivation. The results are presented in Figure 1 which shows the impact of white light photoactivation on the expression of the primary colors in Spirulina du Soleil (A) and in Spirulina Natur Herb Biotech (B). We observe on the white light photoactivation of the two spirulina references that there is an overexpression of the red, green and blue colors with a dominant for the blue color which is overexpressed at 35% during the photoactivation at the spirulina white light from sunlight and 44% when white light photoactivated from Natur Herb Biotech spirulina. [0061] b. Photoactivation with blue and red light on tape [0062] The results concerning photoactivation on tape with blue and red light are presented in Table 2 below: [0063] [Table 2]
Figure imgf000012_0001
The same observations as those made on the white light photoactivation test are observed here. Indeed, photoactivation to blue and red light seems to have the same impact as exposure to white light. These results will be validated following the sachet photoactivation test. In the same way as for white light, the results are exploited according to the RGB reference frame and, in order to quantify the color change, the increase or decrease in the expression of the red, green and blue colors is calculated in relation between the value at T0 and the value at TF. The results are presented in FIG. 2 which shows the impact of photoactivation with red and blue light on the expression of the primary colors in Spirulina du Soleil (A) and in Spirulina Natur Herb Biotech (B). [0067] An increase in the R, G and B values is observed on the two spirulina references, after 100 hours of photoactivation with blue light and red. The value of blue has a larger increase than the other two colors. We observe a 37% increase in the expression of blue after photoactivation with blue and red light of the spirulina of the sun and of 49% for the spirulina Natur Herb Biotech. [0068] Regarding the test on Natur Herb Biotech spirulina, the increase in the values of red (R) and blue (B) is greater under irradiation with blue and red light than under irradiation with white light (( R)+37%/(B)+49% vs. (R)27%/(B)+44%). In order to better understand the mechanism, the results of the sachet photoactivation test are analyzed. Thus it is possible to study the evolution of the majority pigments composing spirulina, namely chlorophyll and phycocyanin. [0070] II. Photoactivation on a Sachet [0071] Just as during photoactivation on a ribbon, after 100 hours of photoactivation, a modification in the color of the spirulina powders is observed. The objective of this test is to demonstrate a selective modification of the relative pigment contents, as a function of the light source, and therefore of the wavelengths applied. Thus, the powders were suspended in water to extract the phycocyanin or in ethanol to extract the chlorophylls. [0073] a. White light photoactivation on sachet [0074] The color changes of the powders are visible to the naked eye. photoactivated powders. Natur Herb Biotech spirulina powder achieves a more intense blue than sun spirulina powder after photoactivation. [0075] The results concerning the photoactivation on a sachet with white light are presented in Table 3 below: [0076] [Table 3]
Figure imgf000014_0001
The optical density (OD) value of the majority peak is retained, namely 620 nm for phycocyanin, 445 nm for chlorophyll a and 430 nm for chlorophyll b. [0078] Concerning spirulina from the sun, we observe a very significant decrease in chlorophyll a and b after 100 hours of photoactivation in white light. The pigment profile of the spirulina powder is modified, explaining the modification of the color of the powder. Photoactivation makes it possible to increase the phycocyanin/chlorophyll ratio, letting the blue of the phycocyanin express itself. The chlorophyll/phycocyanin ratios of spirulina powder photoactivated with white light or not are indicated in table 4 below: [0079] [Table 4]
Figure imgf000014_0002
It is observed that the absorbance of chlorophyll a is 4 times greater than that of phycocyanin without photoactivation. After 100 hours of photoactivation with white light, it is then the absorbance of phycocyanin which is greater than that of chlorophyll a. The decrease in this ratio is 80%. For chlorophyll b, this ratio drops from 6.3 to 1.4, i.e. -78%. This makes it possible to show that the change in color of the powder is indeed linked to a modification of the relative content of pigments in the microalgae treated by photoactivation with white light. The observations made for spirulina du soleil are also applicable to Natur Herb Biotech spirulina. [0083] The chlorophyll/phycocyanin ratios of the Natur Herb Biotech spirulina powder photoactivated with white light or not are indicated in table 5 below: [0084] [Table 5]
Figure imgf000015_0001
It is observed that the absorbance of chlorophyll a is 1.9 times greater than that of phycocyanin without photoactivation. After 100 hours of photoactivation with white light, the absorbance of chlorophyll a is then lower than that of phycocyanin. The decrease in this ratio is 74%. For chlorophyll b, this ratio drops from 4.3 to 1, or -77%. [0086] This makes it possible to show that the change in color of the powder is indeed linked to a modification of the relative content of pigments in the microalgae treated by photoactivation with white light. [0087] b. Photoactivation with Blue and Red Light on a Sachet [0088] The color modifications of the powders are visible to the naked eye. The observations made for white light photoactivation are applicable to blue and red light photoactivation. [0089] The results concerning the photoactivation on sachet with blue and red light are presented in table 6 below: [0090] [Table 6]
Figure imgf000015_0002
As during photoactivation with white light, for spirulina from the sun we observe a very significant decrease in chlorophyll a and b after 100 hours of photoactivation with blue and red light. The profile pigmentary of the spirulina powder is modified explaining the modification of the color of the powder. Photoactivation makes it possible to increase the phycocyanin/chlorophyll ratio, letting the blue of the phycocyanin express itself. The chlorophyll/phycocyanin ratios of spirulina powder photoactivated with blue and red light or not are indicated in table 7 below: [0092] [Table 7]
Figure imgf000016_0001
It is found that the absorbance of chlorophyll a is 4.9 times greater than that of phycocyanin without photoactivation. After 100 hours of photoactivation with blue and red light, this ratio goes to 1.1. The decrease in this ratio is 78%. For chlorophyll b, this ratio drops from 7.5 to 2.1, i.e. -72%. This makes it possible to show that the change in color of the powder is indeed linked to a modification of the relative content of pigments in the microalgae treated by photoactivation with blue and red light. The chlorophyll/phycocyanin pigment ratios decrease with photoactivation with blue and red light, however this decrease is less significant than with photoactivation with white light. The latter seems more effective in revealing the blue color, even if this remark is not observable macroscopically when observing the powders. The observations made for spirulina du soleil are also applicable to Natur Herb Biotech spirulina. [0097] The chlorophyll/phycocyanin ratios of the Natur Herb Biotech spirulina powder photoactivated with blue and red light or not are indicated in table 8 below: [0098] [Table 8]
Figure imgf000017_0001
We observe that the absorbance of chlorophyll a is 1.4 times greater than that of phycocyanin without photoactivation. After 100 hours of photoactivation with blue and red light, this ratio drops to 0.7. The decrease in this ratio is 50%. For chlorophyll b, this ratio goes from 3.7 to 1.6, i.e. -57%. [00100] This makes it possible to show that the change in color of the powder is indeed linked to a modification of the relative content of pigments in the spirulina treated by photoactivation with blue and red light. [00101] As with Spirulina du soleil, treatment by exposure to blue and red light seems less effective than that to white light in modifying the ratios of the different pigments in Natur Herb Biotech spirulina. The composition of the light used, that is to say the wavelengths composing it, therefore influences the modification of the relative pigment contents of the microalgal matrices treated. [00102] E. Conclusions [00103] Photoactivation of spirulina powder for 100 hours at an intensity of 1700 μmol.m -2 .s -1 with white light or blue and red light (3 blue LEDs for 8 red LEDs ) makes it possible to modify the pigmentary profile of the latter. This reaction causes a change in the color of the powder visible to the naked eye. The powder, originally green, turns blue. This observation was made on two references of spirulina powder. [00104] With regard to the modification of the relative pigment contents in spirulina, before and after treatment, photoactivation with white light seems more effective than exposure to blue and red light. This indicates that the wavelength of the applied light differentially affects the relative pigment contents. [00105] More generally, it should be noted that the modes of implementation and embodiment of the invention considered in the experiments above have been described by way of nonlimiting examples and that other variants are therefore possible. [00106] In particular, the invention has been described in the experiments mainly considering the microalgae Spirulina platensis. However, nothing excludes, in other types of embodiment, considering other types of microorganism for the implementation of the method that is the subject of the present invention.

Claims

Revendications Revendication 1. Procédé de révélation d’au moins un pigment d’intérêt chez un microorganisme sous forme sèche comprenant des pigments dont le pigment d’intérêt et de la chlorophylle, caractérisé en ce que ledit procédé comprend au moins une étape d’irradiation du microorganisme avec de la lumière de sorte à réduire le taux de chlorophylle du microorganisme en faveur de la révélation dudit pigment d’intérêt. Revendication 2. Procédé de révélation selon la revendication 1, dans lequel l’irradiation du microorganisme est effectuée pendant une durée d’au moins 24 heures. Revendication 3. Procédé de révélation selon l’une quelconque des revendications 1 et 2, dans lequel l’étape d’irradiation se fait avec une lumière d’énergie lumineuse comprise entre 1500 et 2000 µmol.m-2.s-1, de préférence 1700 µmol.m-2.s-1. Revendication 4. Procédé de révélation selon l’une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel le microorganisme est une cyanobactérie, une algue ou une microalgue. Revendication 5. Procédé de révélation selon l’une quelconque des revendications 1 à 4, dans lequel le microorganisme est comestible. Revendication 6. Procédé de révélation selon l’une quelconque des revendications 1 à 5, dans lequel le microorganisme comprend de la phycocyanine. Revendication 7. Procédé de révélation selon l’une quelconque des revendications 1 à 6, dans lequel le microorganisme est choisi parmi Aphanizomenon flos-aquae, Spirulina platensis et Chlorella vulgaris. Revendication 8. Procédé de révélation selon l’une quelconque des revendications 1 à 7, dans lequel le microorganisme est sous forme de poudre. Revendication 9. Procédé de révélation selon l’une quelconque des revendications 1 à 8, dans lequel l’étape d’irradiation est faite à la lumière blanche et/ou à la lumière rouge et bleue. Revendication 10. Procédé de coloration d’une composition, par exemple une composition de peinture, alimentaire, ou cosmétique, ledit procédé de coloration comprenant : - le procédé de révélation d’au moins un pigment d’intérêt chez un microorganisme sous forme sèche selon l’une quelconque des revendications 1 à 9, - la récupération du microorganisme comprenant le pigment d’intérêt révélé et son mélange avec la composition de sorte à colorer ladite composition. Claim 1. Process for revealing at least one pigment of interest in a microorganism in dry form comprising pigments including the pigment of interest and chlorophyll, characterized in that said process comprises at least one step of irradiation of the microorganism with light so as to reduce the level of chlorophyll of the microorganism in favor of the revelation of said pigment of interest. Claim 2. Development process according to claim 1, in which the irradiation of the microorganism is carried out for a period of at least 24 hours. Claim 3. Development process according to any one of claims 1 and 2, in which the irradiation step is carried out with light having a luminous energy of between 1500 and 2000 μmol.m -2 .s -1 , of preferably 1700 μmol.m -2 .s -1 . Claim 4. Development process according to any one of Claims 1 to 3, in which the microorganism is a cyanobacterium, an algae or a microalgae. Claim 5. A method of revealing according to any one of claims 1 to 4, in which the microorganism is edible. Claim 6. Development method according to any one of Claims 1 to 5, in which the microorganism comprises phycocyanin. Claim 7. Development process according to any one of Claims 1 to 6, in which the microorganism is chosen from Aphanizomenon flos-aquae, Spirulina platensis and Chlorella vulgaris. Claim 8. Development process according to any one of Claims 1 to 7, in which the microorganism is in the form of a powder. Claim 9. Development method according to any one of Claims 1 to 8, in which the irradiation step is carried out with white light and/or with red and blue light. Claim 10. Process for coloring a composition, for example a paint, food or cosmetic composition, said coloring process comprising: - the process for revealing at least one pigment of interest in a microorganism in dry form according to any one of claims 1 to 9, - the recovery of the microorganism comprising the pigment of interest revealed and its mixture with the composition of so as to color said composition.
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