WO2023084869A1 - 味覚を介した昆虫の行動制御法 - Google Patents

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WO2023084869A1
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omnivorous
insect
gene
taste
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PCT/JP2022/032214
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拓也 上原
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国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New breeds of animals
    • A01K67/033—Rearing or breeding invertebrates; New breeds of invertebrates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing

Definitions

  • the present invention relates to omnivorous insects whose herbivorous behavior is suppressed.
  • Such omnivorous insects are useful as natural enemy insects for biopesticides because their feeding damage to crops is suppressed.
  • Nicotiana tabacum which is considered a promising natural enemy preparation against whiteflies and thrips in tomato cultivation, was approved as a biopesticide in 2021 and was marketed as "Bacotop" by AgriSect Co., Ltd. Since this species is an omnivorous gypsum bug, it can easily proliferate on plants that preserve natural enemies such as sesame, and can be used to ambush pests in fields before they emerge. On the other hand, if the individual density increases too much, there is a problem that it will damage the crops themselves. This property is considered to be one of the reasons why it took so long to register as a biopesticide.
  • Patent Document 1 A method of collecting data (Patent Document 1) has been proposed.
  • An object of the present invention is to provide means for solving the above problems of omnivorous insects used as biopesticides.
  • the inventors of the present invention have found that there is a taste gene related to herbivory behavior in N. tabaci, and that suppressing the expression of this gene suppresses the herbivory behavior of N. n. , found that feeding damage to crops can be suppressed, and based on this finding, the present invention was completed.
  • the present invention provides the following (1) to (15). (1) An omnivorous insect whose herbivore behavior is suppressed, wherein a taste gene related to herbivory behavior is deleted or its expression is suppressed.
  • taste genes related to herbivory behavior are (a) genes encoding amino acid sequences represented by SEQ ID NOs: 6, 18, or 28; (b) SEQ ID NOs: 2, 4, 8, 10, 12, 14; (1) to (3) characterized by being a gene partially containing a base sequence encoding the amino acid sequence represented by 16, 20, 22, 24, or 26, or (c) a homologue of said gene.
  • a biopesticide comprising the omnivorous insect according to any one of (1) to (4).
  • a method for producing an omnivorous insect with suppressed herbivorous behavior comprising the step of deleting or suppressing the expression of a taste gene related to herbivorous behavior in the omnivorous insect. How to make.
  • taste genes related to herbivory behavior are (a) genes encoding amino acid sequences represented by SEQ ID NOs: 6, 18, or 28; (b) SEQ ID NOs: 2, 4, 8, 10, 12, 14; (6) to (8) characterized by being a gene partially containing a base sequence encoding the amino acid sequence represented by 16, 20, 22, 24, or 26, or (c) a homologue of said gene 3.
  • a plant-eating behavior inhibitor against omnivorous insects which is characterized by containing a double-stranded RNA of a taste gene relating to herbivory behavior.
  • taste genes related to herbivory behavior are (a) genes encoding amino acid sequences represented by SEQ ID NOS: 6, 18, or 28; (10) to (12), characterized by being a gene partially containing a base sequence encoding the amino acid sequence represented by 16, 20, 22, 24, or 26, or (c) a homologue of said gene Herbivore behavior inhibitor according to any one of.
  • a pest control agent characterized by containing a double-stranded RNA of a taste gene related to herbivory behavior.
  • taste genes related to herbivory behavior are (a) genes encoding amino acid sequences represented by SEQ ID NOs: 6, 18, or 28; (b) SEQ ID NOs: 2, 4, 8, 10, 12, 14
  • the present invention provides a novel omnivorous insect with suppressed herbivory.
  • Such omnivorous insects are useful as natural enemy insects for biopesticides because their feeding damage to crops is suppressed.
  • Heat map of taste genes The horizontal axis indicates the ID of the homologous gene, and the vertical axis indicates various species of mistletoe. The closer to black, the higher the expression. Boxplot of sap counts on tomato agar. The top of the whisker is the maximum value, the top of the box is the third quartile, the thick line in the middle is the median, the bottom of the box is the first quartile, and the bottom of the whisker is the minimum value. The dotted line indicates the median value of the control group, which serves as a guideline for suppressing herbivory behavior of each gene. Boxplots of egg predation numbers for the striped moth.
  • the top of the whisker is the maximum value
  • the top of the box is the third quartile
  • the bold middle line is the median
  • the bottom of the box is the first quartile
  • the bottom of the whisker is the minimum value.
  • the dotted line indicates the median value of the control group, which serves as a measure of the suppression of carnivorous behavior of each gene.
  • Relative expression level of 12765 gene when EGFP and ID: 12765 dsRNA were injected. It was confirmed that the relative expression level was suppressed to 50% or less when the dsRNA of the 12765 gene was injected. Evaluation of the effects of herbivory gene-deficient individuals on plants. In the control plot, the petiole was discolored and raised in a ring shape, but in the RNAi plot, only slight discoloration (arrow) was observed.
  • the present invention will be described in detail below.
  • the omnivorous insects of the present invention are omnivorous insects in which herbivory behavior is suppressed, and taste genes related to herbivory behavior are deleted or their expression is suppressed. It is characterized by having
  • the method for producing an omnivorous insect of the present invention is a method for producing an omnivorous insect with suppressed herbivorous behavior, comprising the step of deleting or suppressing the expression of a taste gene related to herbivorous behavior in the omnivorous insect. It is characterized by
  • omnivorous insects refer to insects that have both herbivorous and carnivorous properties. Since the omnivorous insect of the present invention is mainly used as a biopesticide for pest control, it is preferably a natural enemy insect that preys on pests. In addition, the omnivorous insect is preferably an insect of the order Stinkbug, for example, an insect of the family Chrysomelidae and an insect of the family Rhinocerosidae. Examples of insects belonging to the family Nesidiocoris include insects belonging to the genus Nesidiocoris, such as N. tenuis (Reuter), and insects belonging to the family Orius include insects of the genus Orius, For example, O.
  • Nicotiana tabacum is preferred.
  • taste genes related to herbivory behavior are usually taste receptor genes that have a seven-transmembrane structure in common with G protein-coupled receptors (GPCRs), but they may be genes other than taste receptor genes.
  • GPCRs G protein-coupled receptors
  • a taste receptor gene expressed in an omnivorous insect and also expressed in herbivorous insects closely related to the omnivorous insect can be used as a taste gene related to herbivory behavior.
  • Specific examples of taste genes related to herbivory include (a) genes encoding amino acid sequences represented by SEQ ID NOS: 6, 18, or 28; , 16, 20, 22, 24, or 26, and (c) homologues of the above genes.
  • a gene encoding an amino acid sequence highly identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 6, 18, or 28, or SEQ ID NO: 2, 4, 8, 10, 12, 14, 16, 20, 22, 24 a gene partially containing a nucleotide sequence encoding an amino acid sequence highly identical to the amino acid sequence represented by 26 can be used as a taste gene related to herbivory.
  • a gene partly containing a nucleotide sequence encoding the amino acid sequence of the plant-eating behavior can also be used as a taste gene.
  • the gene consisting of the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 5, 17 or 27 and the A gene partially containing the base sequence of the herbivore can also be used as a taste gene related to herbivory behavior.
  • genes consisting of a nucleotide sequence having high identity with the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 5, 17, or 27, and SEQ ID NOS: 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, and 19 , 21, 23, or 25 can also be used as a taste gene related to herbivory behavior.
  • “high identity” refers to 90% or more identity, 95% or more identity, 97% or more identity, 98% or more identity, or 99% or more identity.
  • Suppression of taste gene expression related to herbivory behavior may affect genes in the genome (e.g., suppression of gene expression by genome editing) or may not affect genes in the genome (e.g., suppression of gene expression by RNAi method or antisense method). Moreover, even if the suppression of gene expression is complete suppression (that is, taste genes related to herbivory behavior are not expressed), incomplete suppression (that is, taste genes related to herbivory behavior are expressed, but the expression amount is reduced.). Since techniques for suppressing the expression of specific genes are well known to those skilled in the art, those skilled in the art can suppress the expression of taste genes related to herbivory behavior according to those known techniques.
  • omnivorous insects whose herbivorous behavior is suppressed refer to omnivorous insects whose herbivorous behavior is reduced compared to wild-type omnivorous insects or control omnivorous insects.
  • control omnivorous insects include omnivorous insects in which a gene such as the EGFP gene, which insects normally do not have, is subjected to an expression suppression treatment, as shown in Examples described later.
  • Omnivorous insects with suppressed herbivorous behavior include omnivorous insects with both herbivorous and carnivorous behavior suppressed, and omnivorous insects with only herbivorous behavior suppressed and normal carnivorous behavior. , omnivorous insects in which only herbivorous behavior is suppressed and carnivorous behavior is normal are preferred.
  • the omnivorous insects of the present invention include insects in which taste genes related to herbivory behavior have been artificially deleted or suppressed using RNAi, genome editing, etc., and deletions in the corresponding base sequences in field strains. Lines containing mutations such as insertions and single nucleotide polymorphisms are also included.
  • the biological pesticide of the present invention is characterized by containing the above-described omnivorous insect of the present invention.
  • the biopesticide of the present invention can be prepared and used in the same manner as known biopesticides including natural enemy insects.
  • the omnivorous insects contained in biopesticides may be eggs, larvae, adults, or a mixture of these.
  • the biopesticide of the present invention may consist only of omnivorous insects, but may also contain other ingredients contained in biopesticides containing natural enemy insects, such as extenders, heat retaining agents, moisturizers, and shock absorbers. good.
  • the pests to be controlled are the pests that are preyed on by the omnivorous insects used.
  • the pests to be controlled are whiteflies, thrips, and spider mites.
  • the crops to be used can also be determined according to the omnivorous insects to be used. For example, when using Nicotiana tabacum, the crops to be used are cucumbers and tomatoes.
  • the usage amount of the biopesticide of the present invention can be appropriately determined according to the omnivorous insects to be used, pests to be controlled, crops to be used, and the like.
  • the agent for suppressing herbivory behavior of the present invention is an agent for suppressing herbivory behavior against omnivorous insects, and is characterized by containing a double-stranded RNA of a taste gene related to herbivory behavior. It is.
  • some omnivorous insects such as the tobacco mistletoe, can damage crops themselves if their population density increases too much.
  • the phytophagous behavior inhibitor of the present invention is used against such omnivorous insects, and suppresses the phytophagous behavior of omnivorous insects to prevent damage to crops.
  • the "omnivorous insect” and the “taste gene related to herbivory behavior” in the herbivory inhibitor of the present invention are the same as the “omnivorous insect” and the “taste gene related to herbivory behavior” in the omnivorous insect of the present invention described above. Meaning.
  • the double-stranded RNA of the herbivore-related taste gene is an RNA that suppresses the expression of the herbivory-related taste gene by the RNAi method, and has a base sequence corresponding to a part of the herbivore-related taste gene, a sense strand, and its antisense strand. Which region of the taste gene related to herbivory behavior the base sequence of this double-stranded RNA has can be appropriately determined according to the type of the taste gene related to herbivory behavior.
  • the length of the double-stranded RNA is not particularly limited as long as it can suppress the expression of taste genes related to herbivory behavior, but is preferably 200 to 800 bp, more preferably 400 to 600 bp. .
  • the plant-eating behavior inhibitor of the present invention can be prepared in the same manner as general pest control agents using the RNAi method.
  • the form of the agent for suppressing herbivore behavior of the present invention is not particularly limited, and may be, for example, a solid, liquid, or gel form.
  • Specific dosage forms include powders, granules, wettable powders, water solutions, emulsions, liquids, oils, aerosols, microcapsules, pastes, fumigants, fumigants, and coatings.
  • the content of the active ingredient (double-stranded RNA) in the agent for suppressing herbivore behavior of the present invention varies depending on the dosage form, but can be, for example, 0.1 to 50% by weight.
  • the plant-eating behavior inhibitor of the present invention can be used in the same way as a general pest control agent using the RNAi method.
  • the agent for suppressing herbivory behavior of the present invention exerts its effect by allowing omnivorous insects to take in double-stranded RNA, which is an active ingredient.
  • Parenteral methods of uptake may also be used. Examples of methods for oral uptake include a method in which the herbivory inhibitor of the present invention is previously applied, sprayed, or sprayed onto crops that may be damaged by omnivorous insects.
  • the phytophagous behavior inhibitor of the present invention is added to the food that omnivorous insects prefer, and the omnivorous insects are allowed to eat the food, thereby allowing the omnivorous insects to take in the active ingredient, double-stranded RNA. is also possible.
  • the pest control agent of the present invention is characterized by containing a double-stranded RNA of a taste gene related to herbivory behavior.
  • the plant-eating behavior inhibitor of the present invention described above can suppress the plant-eating behavior of insects (omnivorous insects and herbivorous insects), and therefore can also suppress insect pest damage to useful crops. Therefore, the phytophagous behavior inhibitor of the present invention can also be used as a pest control agent.
  • the pests to be controlled are not particularly limited, and any pest that damages useful crops can be targeted for control.
  • the pest control agent of the present invention can be prepared in the same manner as the herbivory inhibitor of the present invention, and can be used in the same manner as the herbivory inhibitor of the present invention except for the insects to be used. can.
  • the mistletoe was reared for 2 days in a 1.5% agarose medium containing 10% commercial tomato juice, and allowed to freely absorb tomato agar. After that, the sap marks on the tomato agar were counted under a microscope.
  • nucleotide sequences of 15994, 64457, 3628, 81322, 6075, 2178, 11358, 16532, 8865, 71395, 16621, 25, 31188, and 12765 are represented by SEQ ID NOs: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25 and 27.
  • RNA interference individuals (Fig. 4) Regarding the effect of RNAi interference method by oral administration of dsRNA to N. tabaci, the expression level was quantified for the gene with id 12765. As a result, the expression level was suppressed to a maximum of 13% of that of the control group, and an average of approximately 50%. From this, it is considered that the individual used in the above experiment also had the suppression of gene expression.
  • the present invention relates to biopesticides, it can be used in industries such as agriculture.

Abstract

生物農薬用雑食性昆虫が作物自体を加害してしまうという問題を解決する手段の確立を目的として、植食行動が抑制された雑食性昆虫であって、植食行動に関する味覚遺伝子が欠失又は発現が抑制されていることを特徴とする雑食性昆虫を提供する。

Description

味覚を介した昆虫の行動制御法
　本発明は、植食行動が抑制された雑食性昆虫に関する。このような雑食性昆虫は、作物への食害が抑制されているので、生物農薬用天敵昆虫として有用である。
　殺虫剤使用への過度な依存は害虫の薬剤抵抗性の発達や残留農薬による健康被害などの問題の原因となっている。また、化学農薬や化学肥料を使わない有機農産物への社会ニーズも少なからずある。無農薬栽培を実現する方法の一つとして、天敵昆虫などの生物農薬を利用した農作物生産が行われており、国内で数十億円規模の市場を形成している。天敵製剤は、使用回数に制限がなく有機栽培や減農薬栽培に適合するほか、導入により農薬散布の労力低減にも利点をもつ。
　トマト栽培におけるタバココナジラミやアザミウマ類に対する天敵製剤として有望視されているタバコカスミカメは、2021年に生物農薬として認可され、（株）アグリセクトより「バコトップ」として上市された。本種は、雑食性のカスミカメムシであるため、ゴマなどの天敵温存植物上で容易に増殖でき、害虫が発生する前から圃場で待ち伏せさせることができる。一方で、個体密度が増加しすぎると、作物自体を加害してしまうという問題点を持つ。生物農薬としての登録に時間がかかったのは、この特性が一つの原因であるとされている。
　この個体密度の増加による作物への加害の問題を解決する手段として、農薬を使用してタバコカスミカメを駆除する方法やタバコカスミカメが紫色光に特異的に誘引されるという特性を活かして光源により捕集する方法（特許文献１）などが提案されている。
国際公開第2017/022333
　上述したように、タバコカスミカメなどの雑食性昆虫の作物への加害の問題を解決する手段は幾つか提案されているが、農薬使用による密度調節は天敵導入本来のメリットである有機栽培や減農薬栽培への適合や農薬散布の労力低減を失うものであり、また、紫色光による捕集は専用の捕集装置を必要とするという問題がある。本発明は、生物農薬として利用される雑食性昆虫の上記問題を解決する手段を提供することを目的とする。
　本発明者は、上記課題を解決するため鋭意検討を重ねた結果、タバコカスミカメには植食行動に関する味覚遺伝子が存在し、この遺伝子の発現を抑制することにより、タバコカスミカメの植食行動、即ち、作物への食害を抑制できることを見出し、この知見に基づき、本発明を完成するに至った。
　即ち、本発明は、以下の（１）～（１５）を提供する。
（１）植食行動が抑制された雑食性昆虫であって、植食行動に関する味覚遺伝子が欠失又は発現が抑制されていることを特徴とする雑食性昆虫。
（２）雑食性昆虫が、カスミカメムシ科又はハナカメムシ科の昆虫であることを特徴とする（１）に記載の雑食性昆虫。
（３）雑食性昆虫が、タバコカスミカメであることを特徴とする（１）に記載の雑食性昆虫。
（４）植食行動に関する味覚遺伝子が、(a)配列番号６、１８、若しくは２８で表されるアミノ酸配列をコードする遺伝子、(b)配列番号２、４、８、１０、１２、１４、１６、２０、２２、２４、若しくは２６で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を一部に含む遺伝子、又は(c)前記遺伝子のホモログであることを特徴とする（１）乃至（３）のいずれかに記載の雑食性昆虫。
（５）（１）乃至（４）のいずれかに記載の雑食性昆虫を含むことを特徴とする生物農薬。
（６）植食行動が抑制された雑食性昆虫の作製方法であって、雑食性昆虫における植食行動に関する味覚遺伝子を欠失又は発現を抑制する工程を含むことを特徴とする雑食性昆虫の作製方法。
（７）雑食性昆虫が、カスミカメムシ科又はハナカメムシ科の昆虫であることを特徴とする（６）に記載の雑食性昆虫の作製方法。
（８）雑食性昆虫が、タバコカスミカメであることを特徴とする（６）に記載の雑食性昆虫の作製方法。
（９）植食行動に関する味覚遺伝子が、(a)配列番号６、１８、若しくは２８で表されるアミノ酸配列をコードする遺伝子、(b)配列番号２、４、８、１０、１２、１４、１６、２０、２２、２４、若しくは２６で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を一部に含む遺伝子、又は(c)前記遺伝子のホモログであることを特徴とする（６）乃至（８）のいずれかに記載の雑食性昆虫の作製方法。
（１０）雑食性昆虫に対する植食行動抑制剤であって、植食行動に関する味覚遺伝子の二本鎖RNAを含有することを特徴とする植食行動抑制剤。
（１１）雑食性昆虫が、カスミカメムシ科又はハナカメムシ科の昆虫であることを特徴とする（１０）に記載の植食行動抑制剤。
（１２）雑食性昆虫が、タバコカスミカメであることを特徴とする（１０）に記載の植食行動抑制剤。
（１３）植食行動に関する味覚遺伝子が、(a)配列番号６、１８、若しくは２８で表されるアミノ酸配列をコードする遺伝子、(b)配列番号２、４、８、１０、１２、１４、１６、２０、２２、２４、若しくは２６で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を一部に含む遺伝子、又は(c)前記遺伝子のホモログであることを特徴とする（１０）乃至（１２）のいずれかに記載の植食行動抑制剤。
（１４）植食行動に関する味覚遺伝子の二本鎖RNAを含有することを特徴とする害虫防除剤。
（１５）植食行動に関する味覚遺伝子が、(a)配列番号６、１８、若しくは２８で表されるアミノ酸配列をコードする遺伝子、(b)配列番号２、４、８、１０、１２、１４、１６、２０、２２、２４、若しくは２６で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を一部に含む遺伝子、又は(c)前記遺伝子のホモログであることを特徴とする（１４）に記載の害虫防除剤。
　本明細書は、本願の優先権の基礎である日本国特許出願、特願2021-184531の明細書及び／又は図面に記載される内容を包含する。
　本発明は、植食行動が抑制された新規な雑食性昆虫を提供する。このような雑食性昆虫は、作物への食害が抑制されているので、生物農薬用天敵昆虫として有用である。
味覚遺伝子のヒートマップ。横軸は相同遺伝子のIDを、縦軸は各種カスミカメを示し、黒色に近づくほど高発現となる。 トマト寒天上の吸汁痕数のボックスプロット。ひげ上端は最大値、箱の上端は第三四分位、中央の太線は中央値、箱の下端は第一四分位、ひげの下端は最小値を示す。点線は対照区の中央値を示し、各遺伝子の植食行動抑制の目安となる。 スジコナマダラメイガ卵捕食数のボックスプロット。ひげ上端は最大値、 箱の上端は第三四分位、中央の太線は中央値、箱の下端は第一四分位、ひげの下端は最小値を示す。点線は対照区の中央値を示し、各遺伝子の肉食行動抑制の目安となる。 EGFPとID:12765のdsRNAを注入した時の12765遺伝子の相対発現量。12765遺伝子のdsRNAを注入した場合には、相対発現量は50％以下に抑制されることが確認された。 植食性遺伝子喪失個体の植物体への影響評価。対照区では葉柄が変色しリング状に隆起したが、RNAi 区ではわずかに変色した (矢印) のみであった。
　以下、本発明を詳細に説明する。
（１）雑食性昆虫及び雑食性昆虫の作製方法
　本発明の雑食性昆虫は、植食行動が抑制された雑食性昆虫であって、植食行動に関する味覚遺伝子が欠失又は発現が抑制されていることを特徴とするものである。本発明の雑食性昆虫の作製方法は、植食行動が抑制された雑食性昆虫の作製方法であって、雑食性昆虫における植食行動に関する味覚遺伝子を欠失又は発現を抑制する工程を含むことを特徴とするものである。
　本発明において「雑食性昆虫」とは、植食性と肉食性の両方の性質を持つ昆虫のことをいう。本発明の雑食性昆虫は、害虫防除のための生物農薬として主に使用するので、害虫を捕食する天敵昆虫であることが好ましい。また、雑食性昆虫は、カメムシ目の昆虫、例えば、カスミカメムシ科の昆虫やハナカメムシ科の昆虫などが好ましい。カスミカメムシ科の昆虫としては、ネシディオコリス（Nesidiocoris）属の昆虫、例えば、タバコカスミカメ（N. tenuis（Reuter））を挙げることができ、ハナカメムシ科の昆虫としては、オリウス（Orius）属の昆虫、例えば、ナミヒメハナカメムシ（O. sauteri（Poppius））、タイリクヒメハナカメムシ（O. strigicollis（Poppius））、コヒメハナカメムシ（O. minutus（Linnaeus））、ツヤヒメハナカメムシ（O. nagaii Yasunaga）、ミナミヒメハナカメムシ（O. tantillus（Motschulsky））を挙げることができる。これらの中では、タバコカスミカメが好ましい。
　植食行動に関する味覚遺伝子は、通常、Gタンパク質共役型受容体（GPCR）と共通の7回膜貫通構造を持つ味覚受容体遺伝子であるが、味覚受容体遺伝子以外の遺伝子であってもよい。雑食性昆虫において発現している味覚受容体遺伝子であって、その雑食性昆虫と近縁の植食性昆虫においても発現している味覚受容体遺伝子を、植食行動に関する味覚遺伝子とすることができる。植食行動に関する味覚遺伝子の具体例としては、(a)配列番号６、１８、若しくは２８で表されるアミノ酸配列をコードする遺伝子、(b)配列番号２、４、８、１０、１２、１４、１６、２０、２２、２４、若しくは２６で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を一部に含む遺伝子、(c)前記遺伝子のホモログを挙げることができる。また、配列番号６、１８、若しくは２８で表されるアミノ酸配列と高い同一性を有するアミノ酸配列をコードする遺伝子や配列番号２、４、８、１０、１２、１４、１６、２０、２２、２４、若しくは２６で表されるアミノ酸配列と高い同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列を一部に含む遺伝子を、植食行動に関する味覚遺伝子とすることもできる。更に、配列番号６、１８、若しくは２８で表されるアミノ酸配列において１以上（好ましくは１若しくは数個）の欠失、置換、付加等の変異が生じたアミノ酸配列をコードする遺伝子や配列番号２、４、８、１０、１２、１４、１６、２０、２２、２４、若しくは２６で表されるアミノ酸配列において１以上（好ましくは１若しくは数個）の欠失、置換、付加等の変異が生じたアミノ酸配列をコードする塩基配列を一部に含む遺伝子を、植食行動に関する味覚遺伝子とすることもできる。これらに加えて、配列番号５、１７、若しくは２７で表される塩基配列からなる遺伝子や配列番号１、３、７、９、１１、１３、１５、１９、２１、２３、若しくは２５で表される塩基配列を一部に含む遺伝子を、植食行動に関する味覚遺伝子とすることもできる。更にこれらの他にも、配列番号５、１７、若しくは２７で表される塩基配列と高い同一性を有する塩基配列からなる遺伝子や配列番号１、３、７、９、１１、１３、１５、１９、２１、２３、若しくは２５で表される塩基配列と高い同一性を有する塩基配列を一部に含む遺伝子を、植食行動に関する味覚遺伝子とすることもできる。上記において、「高い同一性」とは、90%以上の同一性、95%以上の同一性、97%以上の同一性、98%以上の同一性、又は99%以上の同一性をいう。
　植食行動に関する味覚遺伝子の発現の抑制は、ゲノム中の遺伝子に影響を与えるもの（例えば、ゲノム編集による遺伝子発現の抑制）であってもよく、ゲノム中の遺伝子に影響を与えないもの（例えば、RNAi法やアンチセンス法による遺伝子発現の抑制）であってもよい。また、遺伝子発現の抑制は、完全な抑制（即ち、植食行動に関する味覚遺伝子は発現しない。）であっても、不完全な抑制（即ち、植食行動に関する味覚遺伝子は発現するが、その発現量が減少する。）であってもよい。特定の遺伝子の発現を抑制する技術は当業者によく知られているので、当業者は、それら公知の技術に従って、植食行動に関する味覚遺伝子の発現を抑制することができる。
　本発明において「植食行動が抑制された雑食性昆虫」とは、野生型の雑食性昆虫又は対照雑食性昆虫と比較し、植食行動が低下している雑食性昆虫をいう。対照雑食性昆虫としては、後述する実施例に示すように、EGFP遺伝子のような昆虫が通常持たない遺伝子に対して発現抑制処理を行った雑食性昆虫を例示できる。植食行動を抑制した雑食性昆虫には、植食行動と肉食行動の両方が抑制された雑食性昆虫、植食行動のみが抑制され、肉食行動は正常な雑食性昆虫の両者が含まれるが、植食行動のみが抑制され、肉食行動は正常な雑食性昆虫が好ましい。
　本発明の雑食性昆虫には、RNAiやゲノム編集などを用いて、人為的に植食行動に関する味覚遺伝子を欠失又は発現を抑制した昆虫の他、野外系統で、該当する塩基配列に欠失挿入や一塩基多型などの変異を含む系統も含まれる。
（２）生物農薬
　本発明の生物農薬は、上述した本発明の雑食性昆虫を含むことを特徴とするものである。本発明の生物農薬は、天敵昆虫を含む公知の生物農薬と同様に調製し、使用することができる。
　生物農薬中に含まれる雑食性昆虫は、卵、幼虫、成虫のいずれであってもよく、これらを混合したものであってもよい。本発明の生物農薬は、雑食性昆虫のみからなってもよいが、天敵昆虫を含む生物農薬に含まれる他の成分、例えば、増量剤、保温剤、保湿剤、衝撃吸収材を含んでいてもよい。
　防除対象とする害虫は、使用する雑食性昆虫が捕食する害虫であり、例えば、タバコカスミカメを使用する場合、防除対象とする害虫は、コナジラミ、アザミウマ、ハダニなどである。使用対象とする作物も、使用する雑食性昆虫に従って決めることができ、例えば、タバコカスミカメを使用する場合、使用対象作物は、キュウリやトマトなどである。
　本発明の生物農薬の使用量は、使用する雑食性昆虫、防除対象とする害虫、使用対象とする作物などに応じて適宜決めることができる。
（３）植食行動抑制剤
　本発明の植食行動抑制剤は、雑食性昆虫に対する植食行動抑制剤であって、植食行動に関する味覚遺伝子の二本鎖RNAを含有することを特徴とするものである。上述したように、タバコカスミカメなどの一部の雑食性昆虫は個体密度が増加しすぎると、作物自体を加害してしまうことがある。本発明の植食行動抑制剤は、このような雑食性昆虫に対して使用するもので、雑食性昆虫の植食行動を抑制し、作物への加害を防止するものである。
　本発明の植食行動抑制剤における「雑食性昆虫」及び「植食行動に関する味覚遺伝子」は、上述した本発明の雑食性昆虫における「雑食性昆虫」及び「植食行動に関する味覚遺伝子」と同じ意味である。
　植食行動に関する味覚遺伝子の二本鎖RNAは、RNAi法によって植食行動に関する味覚遺伝子の発現を抑制するRNAであり、植食行動に関する味覚遺伝子の一部に相当する塩基配列を有するセンス鎖、及びそのアンチセンス鎖からなる。この二本鎖RNAが、植食行動に関する味覚遺伝子のどの領域の塩基配列を有するかは、植食行動に関する味覚遺伝子の種類などに応じて適宜決めることができる。また、二本鎖RNAの長さは、植食行動に関する味覚遺伝子の発現を抑制できる長さであれば特に限定されないが、200～800bpとすることが好ましく、400～600bpとすることがより好ましい。
　本発明の植食行動抑制剤は、RNAi法を利用した一般的な害虫防除剤と同様に調製することができる。本発明の植食行動抑制剤の形態は特に限定されず、例えば、固形状、液体状、ゲル状の形態とすることができる。具体的な剤型としては、粉剤、粒剤、水和剤、水溶剤、乳剤、液剤、油剤、エアゾル、マイクロカプセル剤、ペースト剤、燻煙剤、燻蒸剤、塗布剤などを例示できる。本発明の植食行動抑制剤中の有効成分（二本鎖RNA）の含有量は剤型によって異なるが、例えば、0.1～50重量％とすることができる。
　本発明の植食行動抑制剤は、RNAi法を利用した一般的な害虫防除剤と同様に使用することができる。本発明の植食行動抑制剤は、有効成分である二本鎖RNAを雑食性昆虫に取り込ませることによってその効果を発揮するが、取り込ませる方法は、経口的に取り込ませる方法であっても、非経口的に取り込ませる方法であってもよい。経口的に取り込ませる方法としては、雑食性昆虫が食害する可能性のある作物に、本発明の植食行動抑制剤を予め塗布、散布、又は噴霧しておく方法を挙げることができる。また、雑食性昆虫が好む餌に本発明の植食行動抑制剤を含ませておき、これを雑食性昆虫に摂食させることによって、有効成分である二本鎖RNAを雑食性昆虫に取り込ませることも可能である。
（４）害虫防除剤
　本発明の害虫防除剤は、植食行動に関する味覚遺伝子の二本鎖RNAを含有することを特徴とするものである。上述した本発明の植食行動抑制剤は、昆虫（雑食性昆虫及び植食性昆虫）の植食行動を抑制できるので、有用作物に対する害虫の食害も抑制できる。従って、本発明の植食行動抑制剤は、害虫防除剤という用途にも使用できる。
　防除対象とする害虫は特に限定されず、有用作物を食害する害虫であればどのような害虫でも防除対象とすることができる。本発明の害虫防除剤は、本発明の植食行動抑制剤と同様に調製することができ、また、使用対象とする昆虫以外は、本発明の植食行動抑制剤と同様に使用することができる。
　以下に、実施例により本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこの実施例に限定されるものではない。
（１）材料及び方法
（１－１）供試昆虫
　アグリセクトが販売するタバコカスミカメムシを室内で累代した系統を実験に用いた。飼育はプラスチック製の容器内で行い、スジコナマダラメイガの卵を餌として、アロマティカスの葉を産卵基質及び湿度調節のために用いた。飼育条件は室温25 ± 1℃、湿度60 - 70%、光条件 16時間明期8時間暗期とした。
　植食行動に関わる味覚遺伝子の探索には、茨城県つくば市大わしの農研機構圃場に生息するアカスジカスミカメ、アカヒゲホソミドリカスミカメを採集して用いた。また、NCBI sequence read archiveに公開されているナカグロカスミカメとその近縁2種 (Adelphocoris fasciaticollis, A. lineolatus) のトランスクリプトームデータを用いた。
（１－２）植食性遺伝子の探索
　Total RNAはRNAeasy の抽出プロトコールに従って抽出し、品質確認を行なったのちに、TruSeq stranded mRNAを用いてライブラリー調整した。ライブラリー調整後に、illumina Novaseq 6000によって、リード長150 bp でシークエンスした。シークエンス後の配列は、アダプター配列の除去ツールであるtrimmomaticでトリミングしFastQCを用いて品質確認を行なった。その後、Trinityを用いてde novo assambleを行い、トランスクリプトーム配列を得た。遺伝子発現量の定量ソフトであるkalistoを用いて、各種のトランスクリプトーム配列に対してRNA-seqの生データを擬似アラインメントし発現量データを得た。また、de novo assamblyによって得られた各種のアミノ酸配列データを相同遺伝子の解析ソフトであるOlthoFinderを用いて解析し、各種で相同遺伝子群（orthogroup: OG）を特定した。OGのうちから、昆虫の味覚受容体と機能推定される遺伝子群を抽出し、それらの発現プロファイルを比較することで植食性と雑食性で共通する遺伝子を探索した。
（１－３）植食性遺伝子の機能解析
　遺伝子配列の二本鎖RNA (dsRNA)を生物に投与することで、dsRNAと相補的な配列の遺伝子の機能を抑制するRNA干渉法を利用して、前項で植食性と雑食性で共通して発現していた遺伝子の機能解析を行なった。配列中から500 bpの領域を選び出し、dsRNAを合成した。dsRNA 2μlを薄く張ったパラフィルムで上下から挟み、その上にタバコカスミカメの終齢幼虫を放飼し、直径30 mmのガラスシャーレを被せ3日間飼育した。シャーレ内では餌や水分を与えず、摂取できるのはパラフィルムに口吻を挿入することで得られるdsRNA入りの水分のみとした。3日経過したタバコカスミカメは、次に市販のトマトジュースを10%含む、1.5% アガロース培地で2日間飼育し、自由にトマト寒天を吸汁させた。その後、トマト寒天上の吸汁痕を顕微鏡下で計数した。各遺伝子と対照区としてEGFPのdsRNAを経口摂取したタバコカスミカメのトマト寒天吸汁数を比較し、EGFPよりも吸汁数が少ない、すなわち植食行動が抑えられている遺伝子を明らかにした。
（１－４）植食性遺伝子喪失個体の肉食行動への影響評価
　前項で植食行動の抑制が確認できた遺伝子について、肉食行動への影響を調査するため、スジコナマダラメイガ卵の摂食実験を行なった。上述の実験と同様に、dsRNA入りの水のみを3日間経口投与した虫を用いた。ろ紙に、5 mm x 20 mmの両面テープを貼り、その上に卵を均一に付着させた。ろ紙を底面に敷いた直径30 mmのガラスシャーレ内で虫を1日飼育した。卵は通常楕円形をしているが、摂食された卵は潰れた形となる。そこで、潰れた卵の数を計数することで肉食行動を評価した。本実験では、EGFPと同等の卵摂食数、すなわち肉食行動が低下していないかを明らかにした。
（１－５）植食性遺伝子喪失個体の植物体への影響評価
　前項で植食行動の抑制が確認できた遺伝子について、植物体への影響を調査するため、トマトの苗木を使った吸汁実験を行なった。本実験でも、上述の実験と同様に、dsRNA入りの水のみを3日間経口投与した虫を用いた。トマトはミニトマト品種アイコを用い、培養土に播種後30 - 40 cm 程度まで生育した苗木を用いた。葉一枚を水切りネットで覆い、そのなかに同一のdsRNAを経口投与した虫5頭を放飼し、5日後に回収した。回収から5日後に、リング状の食害痕の個数やその程度を各遺伝子とEGFPのdsRNA摂取個体で比較した。
（１－６）RNA干渉個体の遺伝子発現量調査
　dsRNAを経口投与した個体について、RNA干渉が機能しているか調査するため、Real-time PCRを行い、ΔΔCt法で発現量を定量した。
（２）結果
（２－１）植食性遺伝子の探索 (図1)
　雑食性であるタバコカスミカメと植食性のカスミカメ5種のうち2種以上で高発現した味覚遺伝子を20種類見出した。それらの配列を個別にBLAST検索して機能アノテーションを行い、嗅覚受容体 (OR) や共受容体 (ORCO) など、味覚受容に関係が薄いと思われるものを除外し、最終的に14の遺伝子(15994, 64457, 3628, 81322, 6075, 2178, 11358, 16532, 8865, 71395, 16621, 25, 31188, 12765)を絞り込んだ。15994、64457、3628、81322、6075、2178、11358、16532、8865、71395、16621、25、31188、及び12765の塩基配列を、それぞれ配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、及び２７に示す。
（２－２）植食性遺伝子の機能解析 (図2)
　個体により吸汁痕の数には差があるものの、平均値で見るとEGFPのdsRNAを経口投与した区では、175.00個の吸汁痕が観察された。特に、味覚受容体遺伝子のdsRNAを経口投与した区のうち、EGFPの平均値よりも吸汁痕の少ない区、すなわち吸汁行動を抑制できた区は10区 (15994, 64457, 3628, 81322, 2178, 11358, 8865, 16621, 31188, 12765) 確認された。
（２－３）植食性遺伝子喪失個体の肉食行動への影響評価 (図3)
　EGFPのdsRNAを経口投与した区の平均卵捕食数は104.64個であった。味覚受容体遺伝子のdsRNAを経口投与した区のうち、64457, 2178, 11358, 31188では、卵捕食量が20%程対照区よりも低下した、一方でその他の区に関しては捕食量の低下、すなわち肉食行動の抑制は確認できなかった。なお、卵捕食量の減少と防除効果の関係性については今のところ十分な証拠がないため、天敵昆虫として不利かどうかまでは議論できない。
（２－４）RNA干渉個体の遺伝子発現量調査 (図4) 
　タバコカスミカメのdsRNA経口投与によるRNAi干渉法の効果について、id 12765の遺伝子に関して、発現量を定量した。その結果、発現量は最大で対照区の13%、平均でもおおよそ50％まで抑制されていた。このことから、上記実験で用いた個体も同様に遺伝子発現の抑制が起こっていたと考えられる。
（２－５）植食性遺伝子喪失個体の植物体への影響評価 (図5)
　EGFPのdsRNAを経口投与した対照区では葉柄が変色しリング状に隆起したが、RNA干渉区ではわずかに変色したのみであった。味覚遺伝子の機能喪失により、タバコカスミカメによる特徴的な食害痕である 木質化 (リング状の隆起) が抑えられた。以上の結果から、味覚遺伝子の制御により、天敵昆虫のみならず、害虫に関しても植物への食害を低減させることが可能となる。
　本明細書で引用した全ての刊行物、特許及び特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。
　本発明は生物農薬に関するものなので、農業などの産業において利用可能である。

Claims (15)

  1. 　植食行動が抑制された雑食性昆虫であって、植食行動に関する味覚遺伝子が欠失又は発現が抑制されていることを特徴とする雑食性昆虫。
  2. 　雑食性昆虫が、カスミカメムシ科又はハナカメムシ科の昆虫であることを特徴とする請求項１に記載の雑食性昆虫。
  3. 　雑食性昆虫が、タバコカスミカメであることを特徴とする請求項１に記載の雑食性昆虫。
  4. 　植食行動に関する味覚遺伝子が、(a)配列番号６、１８、若しくは２８で表されるアミノ酸配列をコードする遺伝子、(b)配列番号２、４、８、１０、１２、１４、１６、２０、２２、２４、若しくは２６で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を一部に含む遺伝子、又は(c)前記遺伝子のホモログであることを特徴とする請求項１乃至３のいずれか一項に記載の雑食性昆虫。
  5. 　請求項１乃至４のいずれか一項に記載の雑食性昆虫を含むことを特徴とする生物農薬。
  6. 　植食行動が抑制された雑食性昆虫の作製方法であって、雑食性昆虫における植食行動に関する味覚遺伝子を欠失又は発現を抑制する工程を含むことを特徴とする雑食性昆虫の作製方法。
  7. 　雑食性昆虫が、カスミカメムシ科又はハナカメムシ科の昆虫であることを特徴とする請求項６に記載の雑食性昆虫の作製方法。
  8. 　雑食性昆虫が、タバコカスミカメであることを特徴とする請求項６に記載の雑食性昆虫の作製方法。
  9. 　植食行動に関する味覚遺伝子が、(a)配列番号６、１８、若しくは２８で表されるアミノ酸配列をコードする遺伝子、(b)配列番号２、４、８、１０、１２、１４、１６、２０、２２、２４、若しくは２６で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を一部に含む遺伝子、又は(c)前記遺伝子のホモログであることを特徴とする請求項６乃至８のいずれか一項に記載の雑食性昆虫の作製方法。
  10. 　雑食性昆虫に対する植食行動抑制剤であって、植食行動に関する味覚遺伝子の二本鎖RNAを含有することを特徴とする植食行動抑制剤。
  11. 　雑食性昆虫が、カスミカメムシ科又はハナカメムシ科の昆虫であることを特徴とする請求項１０に記載の植食行動抑制剤。
  12. 　雑食性昆虫が、タバコカスミカメであることを特徴とする請求項１０に記載の植食行動抑制剤。
  13. 　植食行動に関する味覚遺伝子が、(a)配列番号６、１８、若しくは２８で表されるアミノ酸配列をコードする遺伝子、(b)配列番号２、４、８、１０、１２、１４、１６、２０、２２、２４、若しくは２６で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を一部に含む遺伝子、又は(c)前記遺伝子のホモログであることを特徴とする請求項１０乃至１２のいずれか一項に記載の植食行動抑制剤。
  14. 　植食行動に関する味覚遺伝子の二本鎖RNAを含有することを特徴とする害虫防除剤。
  15. 　植食行動に関する味覚遺伝子が、(a)配列番号６、１８、若しくは２８で表されるアミノ酸配列をコードする遺伝子、(b)配列番号２、４、８、１０、１２、１４、１６、２０、２２、２４、若しくは２６で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を一部に含む遺伝子、又は(c)前記遺伝子のホモログであることを特徴とする請求項１４に記載の害虫防除剤。
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Y. XIAO; L. SUN; X.‐Y. MA; K. DONG; H.‐W. LIU; Q. WANG; Y.‐Y. GUO; Z.‐W. LIU; Y.‐J. ZHANG: "Identification and characterization of the distinct expression profiles of candidate chemosensory membrane proteins in the antennal transcriptome of Adelphocoris lineolatus (Goeze)", INSECT MOLECULAR BIOLOGY, BLACKWELL SCIENTIFIC, OXFORD,, GB, vol. 26, no. 1, 26 November 2016 (2016-11-26), GB , pages 74 - 91, XP071907224, ISSN: 0962-1075, DOI: 10.1111/imb.12272 *

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