WO2022181934A1 - 알러지, 아토피 및 가려움 개선용 기능성 소재의 스크리닝 방법 - Google Patents

알러지, 아토피 및 가려움 개선용 기능성 소재의 스크리닝 방법 Download PDF

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WO2022181934A1
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treating
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biotin
capture protein
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조용완
임혜원
제한울
김영빈
경규리
김영숙
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주식회사 세바바이오텍
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Definitions

  • the present invention relates to a screening method for a functional material having allergy, atopy and itch alleviation activity.
  • Korea's plastic surgery population has increased (one in 77 people) at the world's highest ratio of plastic surgery population to the population, and there is a need to develop care products for skin care that has become sensitive after plastic surgery and cosmetic procedures.
  • the treatment for atopic dermatitis which is a representative disease of sensitive dermatitis, uses steroids, immunosuppressants, antibiotics, etc., but has a disadvantage that it can be used only for a short period of time due to side effects such as abnormal immune function when used for a long period of time.
  • An object of the present invention is to provide a method for screening a material capable of improving allergy, atopy, and skin itchiness.
  • the method for screening a functional material comprises the steps of: treating a capture protein on a substrate coated with a linker material; It may include the steps of treating the biotin-bound IgE substrate and treating the biotin-bound IgE-treated substrate with fluorescence-labeled streptavidin.
  • the step of processing the capture protein after the step of processing the capture protein, it may further comprise the step of processing BSA to prevent non-specific binding.
  • the method before treating the fluorescently-labeled streptavidin, the method may further include washing and drying the biotin-bound IgE-treated substrate.
  • the step of washing and drying the substrate on which the capture protein has been processed may be further included.
  • the step of analyzing the degree of binding between the IgE and the capture protein may be further included.
  • the capture protein may be Fc ⁇ R1.
  • the screening method according to the embodiments of the present invention has the advantage of being able to conveniently check the actual binding by directly analyzing the interaction between the target protein, IgE, and the receptor, and has a relatively low cost and high efficiency compared to other methods such as ELISA plate. has the effect of representing
  • 1 is a schematic diagram of protein binding used in the screening method of the present invention.
  • the present invention relates to the steps of treating a capture protein on a substrate coated with a linker material, treating a candidate functional material on the substrate on which the capture protein has been treated, IgE having biotin bound to the substrate on which the candidate functional material is treated It provides a functional material screening method comprising the steps of treating, and treating the biotin-bound IgE-treated substrate with fluorescence-labeled streptavidin.
  • IgE the main immune antibody that causes an allergic reaction in a human body, and the IgE receptor (Fc ⁇ R1) on the surface of dendritic cells combine, histamine is released through intracellular signaling.
  • Fc ⁇ R1 the IgE receptor
  • the previously developed anti-inflammatory analysis method which is a method for evaluating the efficacy of improving skin sensitivity, uses the ELISA method to inhibit the production of nitric oxide (NO) and measure the secreted inflammation-related factors (INF-r, IL-1b).
  • NO nitric oxide
  • INF-r, IL-1b secreted inflammation-related factors
  • the functional material screening method of the present invention has the feature of being able to quickly and conveniently analyze the actual binding by directly analyzing the interaction between the target protein, IgE, and its receptor, and can act in vivo rather than as a peptide.
  • IgE target protein
  • the functional material screening method of the present invention has the feature of being able to quickly and conveniently analyze the actual binding by directly analyzing the interaction between the target protein, IgE, and its receptor, and can act in vivo rather than as a peptide.
  • human whole protein there is an advantage that in vitro activity can be equally applied in actual in vivo.
  • the functional material screening method of the present invention when used, it is possible to analyze close to 400 samples at a time, accurate analysis results can be derived with a very small amount of samples, and a short period of 3 to 12 hours
  • the advantage is that the analysis can be completed in time.
  • FIG. 1 is a schematic diagram of protein binding used in the screening method of the present invention.
  • a linker 120 material capable of fixing a capture protein 130 to a substrate 110 is coated, and a linker 120 material is coated substrate.
  • the linker 120 and the capture protein 130 specifically bind through the step of processing the capture protein 130 to 110 .
  • biotin-bound IgE 140 is treated to bind capture protein 130 and biotin-bound IgE 140
  • fluorescently labeled streptavidin 150 is treated to fluorescently label the biotin site. Streptavidin 150 is bound. When all bonds are formed in the structure shown in FIG. 1, fluorescence is exhibited.
  • the functional material candidate inhibits the binding of the biotin-bound IgE 140 and the capture protein 130 by processing the functional material candidate, the degree of fluorescence is reduced. do. Therefore, the results can be analyzed by observation with a microarray scanner. The scan result was expressed as a numerical value between 0 and 65535, which is a value of 2 16 .
  • the capture protein 130 may be Fc ⁇ R1 that can affect histamine secretion from the surface of mast cells while specifically binding to IgE.
  • Fc ⁇ R1 100 ⁇ g/ml, Anti-Fc ⁇ R1 Ab 1:100, and Anti-Mouse IgG Ab 1:100 were divided into input (+) and non-injection (-), and four results were obtained. 3 is disclosed.
  • Anti-Fc ⁇ R1 Ab which is an Fc ⁇ R1-specific antibody
  • Anti-Mouse IgG Ab which is an antibody (secondary antibody) specific to Anti-Fc ⁇ R1 Ab
  • the protein chip was treated in the same manner as in Example except that Anti-Fc ⁇ R1 Ab and Anti-Mouse IgG Ab were used instead of natural extracts, IgE and streptavidin.
  • the protein chip was treated in the same manner as in Example except that 0.5 ⁇ l of natural material extract and 1.0 ⁇ l of DMSO buffer were used instead of 0.5 ⁇ l of IgE.
  • the protein chip was treated in the same manner as in Example except that 0.5 ⁇ l of DMSO buffer was used instead of 0.5 ⁇ l of the natural material extract.
  • Comparative Example 1 is fluorescently labeled using Anti-Fc ⁇ R1 Ab, an Fc ⁇ R1-specific antibody, as a primary antibody, and Anti-Mouse IgG Ab, an Anti-Fc ⁇ R1 Ab-specific antibody, as a secondary antibody.
  • Comparative Example 2 is the fluorescence detection level in the absence of IgE
  • Comparative Example 3 is the fluorescence detection level in the absence of an artificial interfering element between IgE and Fc ⁇ R1. Comparative Example 3 serves as a reference for the results of Examples 1 to 28 to be screened, and the effect of inhibiting the binding of IgE and Fc ⁇ R1 can be confirmed through a relative comparison with Comparative Example 3.
  • Example 9 the natural material of Example 9 (3-20-92), Example 12 (3-19-93) and Example 6 (3-20-80) inhibits the binding of IgE and Fc ⁇ R1 higher than other materials It is confirmed to exhibit an effect, and Example 1 (3-20-53) and Example 13 (3-19-104) rather increase the binding of IgE and Fc ⁇ R1 to cause allergy, atopy and itch. .

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Abstract

본 발명에 따른 기능성 소재 스크리닝 방법은, 링커 물질이 코팅된 기판에 캡처 단백질을 처리하는 단계, 상기 캡처 단백질이 처리된 기판에 기능성 소재 후보물질을 처리하는 단계, 상기 기능성 소재 후보물질이 처리된 기판에 바이오틴이 결합된 IgE를 처리하는 단계, 및 상기 바이오틴이 결합된 IgE가 처리된 기판에 형광 표지된 스트렙트아비딘(Streptavidin)을 처리하는 단계를 포함한다.

Description

알러지, 아토피 및 가려움 개선용 기능성 소재의 스크리닝 방법
본 발명은 알러지, 아토피 및 가려움 개선 활성을 갖는 기능성 소재의 스크리닝 방법에 관한 것이다.
최근 미세먼지, 황사 및 급격한 계절변화와 생활 패턴의 급격한 변화로 빈번한 피부 트러블로 불편함을 호소하는 민감성 피부가 급증하고 있다. 전체 인구의 약 30~40%가 불편함을 느끼며, 국내 여성의 55%, 남성의 38.9%로 보고된 바 있다.
민감성 피부는 자극감을 느끼게 되는데 이는 피부 신경의 분포나 개수 감도의 차이 또는 장벽 기증에 따라 나타나며, 피부 자극감은 신경섬유는 Aδ와 C 섬유(fiber)가 관련되어 있고, 이는 따가움, 화끈거림 등 피부에서 약한 불쾌감을 느끼는데 관여한다. 또한, 장벽 기능의 저하도 많은 민감성 피부에서 관찰되는 특징 중 하나로 자극감 외에 홍조, 알레르기 등이 나타난다.
게다가 우리나라는 인구 대비 성형인구 세계 최고 비율로 성형인구가 증가(77명당 1명꼴)하였고 성형 및 미용시술 이후 민감해진 피부 관리를 위한 케어 제품 개발이 필요한 실정이다.
한편, 민감성 피부염의 대표적인 질환인 아토피 피부염 치료제는 스테로이드 제제, 면역억제제, 항생제 등이 사용되나 장기간 사용 시 면역기능 이상 등 부작용이 발생하여 단기간만 사용할 수 있다는 단점이 있다.
따라서, 독성과 부작용이 적은 알러지, 아토피 및 피부 가려움을 개선할 수 있는 효과적이면서 안전한 소재의 개발이 필요한 실정이다.
<선행기술문헌>
<특허문헌>
대한민국 등록특허 제10-1600333호
본 발명의 목적은, 알러지, 아토피 및 피부 가려움을 개선할 수 있는 소재를 스크리닝 할 수 있는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 일 실시예에 따른 기능성 소재 스크리닝 방법은, 링커 물질이 코팅된 기판에 캡처 단백질을 처리하는 단계 상기 캡처 단백질이 처리된 기판에 기능성 소재 후보물질을 처리하는 단계 상기 기능성 소재 후보물질이 처리된 기판에 바이오틴이 결합된 IgE를 처리하는 단계 및 상기 바이오틴이 결합된 IgE가 처리된 기판에 형광 표지된 스트렙트아비딘(Streptavidin)을 처리하는 단계를 포함할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 캡처 단백질을 처리하는 단계 이후에, 비특이적 결합을 막기 위해 BSA를 처리하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 형광 표지된 스트렙트아비딘(Streptavidin)을 처리하는 단계 이전에, 상기 바이오틴이 결합된 IgE가 처리된 기판을 세척 및 건조하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 기능성 소재 후보물질을 처리하는 단계 이전에, 상기 캡처 단백질이 처리된 기판을 세척 및 건조하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 형광 표지된 스트렙트아비딘(Streptavidin)을 처리하는 단계 이후에, 상기 IgE와 상기 캡처 단백질 사이의 결합 정도를 분석하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 캡처 단백질은 FcεR1일 수 있다.
본 발명의 실시예들에 따른 스크리닝 방법은 타겟 단백질인 IgE와 수용체 사이의 상호작용을 직접적으로 분석함으로써 실제 결합 여부를 간편하게 확인할 수 있다는 장점이 있고, ELISA 플레이트 등 다른 방법에 비해 상대적으로 저비용으로 고효율을 나타낼 수 있는 효과가 있다.
도 1은 본 발명의 스크리닝 방법에 사용되는 단백질 결합의 모식도이다.
도 2는 본 발명의 실험예 1에 따른 결과를 나타내는 표 및 그래프이다.
도 3은 본 발명의 실험예 2에 따른 결과를 나타내는 표 및 그래프이다.
도 4는 본 발명의 실험예 3에 따른 결과를 나타내는 그래프이다.
다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미이다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥상 가지는 의미와 일치하는 의미인 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.
본 발명은 링커 물질이 코팅된 기판에 캡처 단백질을 처리하는 단계, 상기 캡처 단백질이 처리된 기판에 기능성 소재 후보물질을 처리하는 단계, 상기 기능성 소재 후보물질이 처리된 기판에 바이오틴이 결합된 IgE를 처리하는 단계, 및 상기 바이오틴이 결합된 IgE가 처리된 기판에 형광 표지된 스트렙트아비딘(Streptavidin)을 처리하는 단계를 포함하는 기능성 소재 스크리닝 방법을 제공한다.
사람의 생체 내에서 알러지 반응을 일으키는 주된 면역 항체인 IgE와 비만세포(Dendritic cell)의 표면에 존재하는 IgE 수용체(FcεR1)가 결합하면서 세포 내 신호전달 과정을 통해 히스타민이 방출되고 이로 인해 여러 자극들이 나타나게 된다. 즉, IgE와 FcεR1 사이의 상호작용(interaction)을 방해할 수 있는 소재를 발굴할 경우, 아토피 피부염의 예방, 개선 또는 치료용 유효성분으로 사용이 가능하다.
특히, 특정 알러젠(allergen)이 들어와서 IgE에 결합되더라도 FcεR1에 결합하는 것을 방해할 수 있다면 아토피 피부염 뿐만 아니라 알러지 반응이 나타나지 않을 것이다.
기존에 개발된 피부 민감성 개선 효능평가를 위한 방법인 염증억제 분석방법은 nitric oxide(NO) 생성 억제, 분비된 염증관련인자(INF-r, IL-1b)를 ELISA법으로 측정하는 기술을 사용하였으나, 이 같은 ELISA 방법은 kit를 활용하여 60~90만 원 이상으로 최대 20개 샘플을 활용할 수 있지만, 이러한 방법은 한 번에 여러 샘플을 분석하기에 많은 비용이 소요되는 문제점이 있다.
본 발명의 기능성 소재 스크리닝 방법은 타겟 단백질인 IgE와 이의 수용체 사이의 상호작용을 직접적으로 분석함으로써 실제 결합 여부를 신속하고 편리하게 분석할 수 있는 특징이 있으며, peptide가 아닌 실제 in vivo에서도 작용이 가능한 인간 whole protein을 사용함으로써 in vitro 활성이 실제 in vivo에서도 똑같이 적용될 수 있다는 장점이 있다.
뿐만 아니라 소형화 및 고집적화가 가능하기 때문에 ELISA plate 등 다른 방법에 비해 상대적으로 저비용으로 고효율을 나타낼 수 있다는 장점이 있다.
즉, 본 발명의 기능성 소재 스크리닝 방법을 이용할 경우, 약 400개에 가까운 시료의 분석이 한 번에 가능하며, 매우 소량의 시료로 정확한 분석결과를 도출할 수 있고, 3시간~12시간 이내의 짧은 시간 안에 분석을 완료할 수 있다는 장점이 있다.
도 1은 본 발명의 스크리닝 방법에 사용되는 단백질 결합의 모식도이다. 도 1을 참조하면, 본 발명에 따른 기능성 소재 스크리닝 방법은, 기판(110)에 캡처 단백질(130)을 고정할 수 있는 링커(120) 물질이 코팅되어 있고, 링커(120) 물질이 코팅된 기판(110)에 캡처 단백질(130)을 처리하는 단계를 거쳐 링커(120)와 캡처 단백질(130)이 특이적 결합을 한다. 이후, 바이오틴이 결합된 IgE(140)를 처리하여 캡처 단백질(130)과 바이오틴이 결합된 IgE(140)가 상호 결합하고, 형광 표지된 스트렙트아비딘(150)을 처리하여 바이오틴 부위에 형광 표지된 스트렙트아비딘(150)이 결합하게 된다. 도 1과 같은 구조로 모든 결합이 이루어질 경우, 형광을 나타내게 된다.
캡처 단백질(130)을 처리하는 단계 이후, 기능성 소재 후보물질을 처리하여 기능성 소재 후보물질이 바이오틴이 결합된 IgE(140)와 캡처 단백질(130)의 결합을 저해하는 경우, 형광의 정도가 감소하게 된다. 따라서 마이크로어레이 스캐너로 관찰하여 결과를 분석할 수 있다. 스캔 결과는 나타나는 형광값을 0 부터 216값인 65535 사이의 수치로 표현하였다.
캡처 단백질(130)은 IgE에 특이적으로 결합하면서 비만세포 표면에서 히스타민 분비에 영향을 줄 수 있는 FcεR1일 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예로 한정되는 것은 아니다.
실험예 1
형광 특성이 도 1의 구조에서 특이적으로 검출되는 것을 확인하기 위하여, FcεR1 100 ㎍/ml, IgE(Biotin) 1:100 dil., Streptavidin(Cy5) 1: 100을 투입(+), 미투입(-)으로 구분하여 6가지 결과를 도 2에 개시하였다.
도 2를 참조하면, FcεR1 100 ㎍/ml, IgE(Biotin) 1:100 dil., Streptavidin(Cy5) 1: 100이 순차적으로 모두 처리된 왼쪽 첫 번째 결과에서 높은 형광이 확인되었고, 나머지 결과들은 일부 비특이적 결합에 의한 형광을 나타내기는 하지만 임계적으로 매우 낮은 형광을 나타내는 것을 확인할 수 있다.
따라서 도 1의 구성이 이루어졌을 때, 형광이 검출되는 것을 확인할 수 있다.
실험예 2
FcεR1이 제대로 고정되었는지를 확인하기 위하여, FcεR1 100 ㎍/ml, Anti-FcεR1 Ab 1:100, Anti-Mouse IgG Ab 1:100을 투입(+), 미투입(-)으로 구분하여 4가지 결과를 도 3에 개시하였다.
도 3을 참조하면, FcεR1을 처리한 뒤 FcεR1 특이적 항체인 Anti-FcεR1 Ab을 처리하고 이후 Anti-FcεR1 Ab에 특이적 항체(2차 항체)인 Anti-Mouse IgG Ab을 처리하여 Anti-Mouse IgG Ab에 결합된 형광이 검출되는지를 확인하는 것이다. 상기 3 가지가 모두 처리된 경우인 왼쪽 첫 번째 결과에서 높은 형광이 확인되었고, 나머지 결과들은 일부 비특이적 결합에 의한 형광을 나타내기는 하지만 임계적으로 매우 낮은 형광을 나타내는 것을 확인할 수 있다.
실시예 1 내지 28
각 well 내부가 단백질이 고정될 수 있도록 표면이 Linker 물질로 코팅된 단백질칩(자체 제작)에 1X PBS(10% PEG-200, pH 7.4) 완충용액에 적당한 농도로 FcεR1을 희석한 용액을 가하여 4 ℃에서 8시간 이상 고정시키고, 1X PBST(0.5% Tween-20, pH 7.4) 용액으로 10분간 2회 세척하고 비특이적 결합을 방지하기 위하여 1% BSA(1X PBS, pH 7.4) 용액에 담가 상온에서 Shaking 하면서 1시간 동안 Blocking 한다. 이후 1X PBST(0.5% Tween-20, pH 7.4) 용액으로 10분간 2회 세척하고 증류수로 rinsing 한 다음 질소 가스를 이용하여 웰에 남아있는 물기를 건조한다. 천연 소재 리스트 중 28개의 추출물을 각 well에 0.5 ㎕씩 spotting 한 다음, 같은 위치에 biotin이 결합된 IgE 용액을 0.5 ㎕씩 spotting 하고 건조되지 않도록 wet box에 넣어 상온에서 1시간 동안 배양한다. 앞서 단계와 동일한 방법으로 wash & dry 한 다음 상기 biotin과 강하게 결합하는 Streptavidin(Cy5-labelled) 용액을 1 ㎕씩 spotting 하고 wet box에 넣어 상온에서 1시간 동안 배양하여 단백질칩을 처리하였다.
비교예 1(PC1)
천연 소재 추출물, IgE 및 스트렙트아비딘 대신 Anti-FcεR1 Ab 및 Anti-Mouse IgG Ab를 사용한 것 이외에 실시예와 동일한 방법으로 단백질칩을 처리하였다.
비교예 2(NC1)
천연 소재 추출물 0.5 ㎕ 및 IgE 0.5 ㎕ 대신 DMSO buffer 1.0 ㎕를 사용한 것 이외에 실시예와 동일한 방법으로 단백질칩을 처리하였다.
비교예 3(PC2)
천연 소재 추출물 0.5 ㎕ 대신 DMSO buffer 0.5 ㎕를 사용한 것 이외에 실시예와 동일한 방법으로 단백질칩을 처리하였다.
실험예 3
비교예 1, 비교예 2, 비교예 3 및 실시예 1 내지 28 각각의 단백질칩을 마이크로어레이 스캐너(microarray scanner)로 관찰하여 결과를 분석하였다. 스캔 결과는 각각의 well에서 나타나는 형광값을 0 부터 216값인 65535 사이의 수치로 표현하였다.
도 4는 실험예 3에 따른 스캔 결과를 나타내는 그래프이다. 도 4를 참조하면, 비교예 1(PC1)은 FcεR1 특이적 항체인 Anti-FcεR1 Ab를 1차 항체로, Anti-FcεR1 Ab 특이적 항체인 Anti-Mouse IgG Ab를 2차 항체로 사용하여 형광 표지한 것이고, 비교예 2(NC1)는 IgE가 없는 경우의 형광 검출 수준이며, 비교예 3(PC2)은 IgE와 FcεR1 사이에 인위적인 방해요소가 없는 경우의 형광 검출 수준이다. 비교예 3이 스크리닝 하고자 하는 실시예 1 내지 28의 결과값들의 기준이 되고 비교예 3에 대한 상대적인 비교를 통해 IgE와 FcεR1의 결합 방해 효과를 확인할 수 있다.
도 4에서는 실시예 9(3-20-92), 실시예 12(3-19-93) 및 실시예 6(3-20-80)의 천연 소재가 다른 소재들 대비 높은 IgE와 FcεR1의 결합 방해 효과를 나타내는 것으로 확인되고, 실시예 1(3-20-53) 및 실시예 13(3-19-104)는 오히려 IgE와 FcεR1의 결합을 증가시키는 것으로 알러지, 아토피 및 가려움을 유발하는 것으로 확인된다.
상술한 바와 같이, 본 발명의 바람직한 실시예를 참조하여 설명하였지만 해당 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 하기의 특허청구범위에 기재된 본 발명의 사상 및 영역으로부터 벗어나지 않는 범위 내에서 본 발명을 다양하게 수정 및 변경시킬 수 있음을 이해할 수 있을 것이다.
<부호의 설명>
110: 기판 120: 링커
130: 캡처 단백질 140: 바이오틴 결합된 IgE
150: 형광 표지된 스트렙트아비딘

Claims (6)

  1. 링커 물질이 코팅된 기판에 캡처 단백질을 처리하는 단계;
    상기 캡처 단백질이 처리된 기판에 기능성 소재 후보물질을 처리하는 단계;
    상기 기능성 소재 후보물질이 처리된 기판에 바이오틴이 결합된 IgE를 처리하는 단계; 및
    상기 바이오틴이 결합된 IgE가 처리된 기판에 형광 표지된 스트렙트아비딘(Streptavidin)을 처리하는 단계;
    를 포함하는 것을 특징으로 하는 기능성 소재 스크리닝 방법.
  2. 제1 항에 있어서,
    상기 캡처 단백질을 처리하는 단계 이후에,
    비특이적 결합을 막기 위해 BSA를 처리하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 기능성 소재 스크리닝 방법.
  3. 제1 항에 있어서,
    상기 형광 표지된 스트렙트아비딘(Streptavidin)을 처리하는 단계 이전에,
    상기 바이오틴이 결합된 IgE가 처리된 기판을 세척 및 건조하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 기능성 소재 스크리닝 방법.
  4. 제1 항에 있어서,
    기능성 소재 후보물질을 처리하는 단계 이전에,
    상기 캡처 단백질이 처리된 기판을 세척 및 건조하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 기능성 소재 스크리닝 방법.
  5. 제1 항에 있어서,
    형광 표지된 스트렙트아비딘(Streptavidin)을 처리하는 단계 이후에,
    상기 IgE와 상기 캡처 단백질 사이의 결합 정도를 분석하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 기능성 소재 스크리닝 방법.
  6. 제1 항에 있어서,
    상기 캡처 단백질은 FcεR1인 것을 특징으로 하는 기능성 소재 스크리닝 방법.
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