WO2021182874A1 - 안정성이 증진된 액상 약제학적 조성물 - Google Patents

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이승하
김한수
김인애
이나영
김수신
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Definitions

  • It relates to a liquid pharmaceutical composition with improved stability, and more particularly, to a stable liquid pharmaceutical composition comprising a protein.
  • TNF- ⁇ tumor necrosis factor-alpha
  • adalimumab HUMIRA®, Abbvie Corporation.
  • Adalimumab is a human monoclonal antibody that down-regulates the inflammatory response associated with autoimmune diseases by inhibiting human TNF- ⁇ activity and preventing it from activating the TNF receptor.
  • Approved medical indications for adalimumab include rheumatoid arthritis, psoriatic arthritis, ankylosing spondylitis, Crohn's disease, ulcerative colitis, moderate to severe chronic psoriasis, and juvenile idiopathic arthritis.
  • Adalimumab is a recombinant human immunoglobulin G1 monoclonal antibody that selectively binds to TNF- ⁇ in the body and inhibits the immune response caused by tumor necrosis factor-alpha. This antibody is also known as D2E7.
  • Adalimumab consists of 1330 amino acids and has a molecular weight of approximately 148 kilodaltons. Adalimumab is disclosed and claimed in US Pat. No. 6,090,382, the disclosure of which is incorporated herein by reference in its entirety.
  • a protein drug such as an antibody
  • An object of the present invention is to develop a stable formulation capable of reducing the instability of an antibody protein when developing an adalimumab biosimilar.
  • the present invention provides an aqueous liquid composition for enhancing the stability of a protein drug, specifically, a pharmaceutical composition comprising a protein drug.
  • pH is from about 4.0 to about 8.0 or from about 5.0 to about 5.5.
  • Histidine-free means that it does not contain histidine in a detectable amount or does not contain histidine in an amount sufficient to exhibit a significant effect, and does not completely contain histidine (about 0 mM) or substantially (eg, about 50 nM or less, about 40 nM or less, about 30 nM or less, about 20 nM or less, about 10 nM or less, about 5 nM or less, about 1 nM or less).
  • Another example provides a container comprising the pharmaceutical composition, wherein the pharmaceutical composition has stability to temperature changes.
  • the pharmaceutical composition provided herein may further include a buffer.
  • the buffer may have a pH of about 4.0 to about 8.0 or a pH of about 5.0 to about 5.5.
  • the buffer may be one or more or two or more (eg, one, two, three, or four) selected from the group consisting of citrate, phosphate, acetate, and succinate.
  • the buffer may include citrate.
  • the buffer may include at least one selected from the group consisting of phosphate, succinate, and acetate. In this case, the buffer may not contain citrate.
  • the buffer may include phosphate.
  • the buffer may include phosphate and not citrate.
  • the buffer may include (1) phosphate and (2) succinate or acetate.
  • the buffer may include (1) phosphate and (2) succinate or acetate, but not citrate.
  • the pharmaceutical composition provided herein may further include a polyol.
  • the polyol may be a tonicity agent or a stabilizer.
  • the polyol may be at least one selected from the group consisting of sugars and sugar alcohols, and specifically, sorbitol, mannitol, meglumine, trehalose, sucrose, maltose, lactose, glucose, xylitol, arabitol, erythrite It may be at least one selected from the group consisting of ritol, lactitol, maltitol, inositol, and the like.
  • the polyol may be sorbitol, mannitol, or a combination thereof.
  • the polyol includes sorbitol, and sugars and sugar alcohols other than sorbitol (eg, mannitol, meglumine, trehalose, sucrose, maltose, lactose, glucose, xylitol, arabitol, erythritol) , lactitol, maltitol, inositol, etc.) may be selected from one or more or those that do not include all of them, for example, those that do not include mannitol.
  • sugars and sugar alcohols other than sorbitol eg, mannitol, meglumine, trehalose, sucrose, maltose, lactose, glucose, xylitol, arabitol, erythritol
  • lactitol, maltitol, inositol may be selected from one or more or those that do not include all of them, for example, those that do not include mannitol.
  • the polyol includes mannitol, and sugars and sugar alcohols other than mannitol (eg, sorbitol, meglumine, trehalose, sucrose, maltose, lactose, glucose, xylitol, arabitol, erythritol) , lactitol, maltitol, inositol, etc.) may be selected from one or more or those that do not include all of them, for example, those that do not include sorbitol.
  • sugars and sugar alcohols other than mannitol eg, sorbitol, meglumine, trehalose, sucrose, maltose, lactose, glucose, xylitol, arabitol, erythritol
  • lactitol, maltitol, inositol may be selected from one or more or those that do not include all of them, for example, those that do not include sorbitol.
  • the pharmaceutical composition provided herein may be one that does not contain polysorbates (eg, polysorbate 80) except for polysorbate 20.
  • the pharmaceutical composition may further include a buffer and a polyol.
  • the buffer and polyol are the same as described above.
  • the pharmaceutical composition may further include citrate and sorbitol. In another example, the pharmaceutical composition may further include citrate and sorbitol, and may not include one or more selected from sugars and sugar alcohols other than sorbitol or all of them.
  • the pharmaceutical composition may further include phosphate and mannitol. In another example, the pharmaceutical composition may further include phosphate and mannitol, and may not include citrate. In another example, the pharmaceutical composition may further include phosphate and mannitol, and may not include one or more selected from sugars and sugar alcohols other than mannitol or all of them. In another example, the pharmaceutical composition may be one that further includes phosphate and mannitol, does not include citrate, and does not include one or more selected from sugars and sugar alcohols other than mannitol or all of them.
  • the pharmaceutical composition may further include (1) phosphate, (2) succinate or acetate, and (3) mannitol.
  • the pharmaceutical composition may further include (1) phosphate, (2) succinate or acetate, and (3) mannitol, but not citrate.
  • the pharmaceutical composition further comprises (1) phosphate, (2) succinate or acetate, and (3) mannitol, and does not contain one or more selected from sugars and sugar alcohols other than mannitol, or both. it may not be
  • the pharmaceutical composition further comprises (1) phosphate, (2) succinate or acetate, and (3) mannitol, does not contain citrate, and is selected from sugars and sugar alcohols other than mannitol. It may be one that does not include the above or all of them.
  • Another example provides a device or container comprising the pharmaceutical composition.
  • the disease may be a disease in which an anti-TNF ⁇ antibody, such as adalimumab, has therapeutic, ameliorating, and/or prophylactic effects.
  • an anti-TNF ⁇ antibody such as adalimumab
  • Another example provides a method of treating a disease comprising administering to a subject in need thereof an anti-TNF ⁇ antibody, such as adalimumab, the pharmaceutical composition.
  • the administering may be performed using a device or container including the pharmaceutical composition.
  • the present invention provides an aqueous liquid composition for enhancing the stability of a protein drug, specifically, a liquid pharmaceutical composition comprising a protein drug.
  • the aqueous liquid composition may include the components described below and the remaining amount of an aqueous medium (water (purified water), physiological saline, water for injection, etc.).
  • long term storage stability or “long term stability” may mean that the pharmaceutical composition can be stored in a stable state for at least 3 months, for at least 6 months, for at least 1 year, for at least 2 years.
  • the "storage” refers to storing the pharmaceutical composition as a liquid at 2 to 8° C., freezing it at -20° C. or lower temperature, or freezing and thawing one or more times. It can be understood as a concept that includes all cases.
  • stable state refers to loss of biological activity and/or loss of structural stability (eg, aggregation, degradation, denaturation (acidic or basic) of a protein (eg, adalimumab) contained in a pharmaceutical composition during storage) , oxidation, etc.) may be understood to mean 20% or less, 15% or less, 10% or less, or 5% or less compared to the initial storage.
  • free or “substantially free of A” means that material A is not present at all or is present in trace amounts without substantially affecting the properties of the composition. may mean that If there is no mention of the content of substance A, it can be understood to mean an “undetectable amount”. Unless otherwise specifically stated herein, “free” means “substantially free of A", including cases in which A is not present at all. can be interpreted as
  • anti-TNF ⁇ antibody refers to an antibody that binds to TNF ⁇ and modulates its biological activity.
  • Tumor necrosis factor-alpha (TNF alpha, TNF ⁇ ) is a cytokine produced by various types of cells such as mononuclear leukocytes and macrophages by stimulation of endotoxin and the like.
  • TNF ⁇ is a major mediator of major inflammatory, immune, and pathophysiological responses that activate TNF receptors to induce responses such as T-cell activation and thymocyte proliferation.
  • the anti-TNF alpha antibody may be in the form of a full-length antibody or an antibody fragment including an antigen-binding portion thereof, but is not particularly limited thereto.
  • the anti-TNF ⁇ antibody may be a human immunoglobulin G1 monoclonal antibody, and more specifically, may be adalimumab.
  • Adalimumab was developed by applying phage display technology as the first fully human antibody developed as a drug, and its affinity was enhanced by mutating the CDRs.
  • Adalimumab also called D2E7, has a molecular weight of about 148 kD consisting of 1330 amino acids.
  • Adalimumab is sold under the trade name Humira, and Humira is used to treat Crohn's disease, ankylosing spondylitis, psoriatic arthritis, ulcerative colitis, etc. Detailed information is readily available to those skilled in the art in known databases.
  • adalimumab also refers to a modification of the amino acid structure (deletion, addition, and/or substitution of amino acids), and/or glycosylation, without affecting polypeptide function. It can be interpreted as meaning including a characteristically modified adalimumab.
  • the anti-TNF alpha antibody in the pharmaceutical compositions provided herein may be included in a therapeutically effective amount. Specifically, about 25 to about 200 mg/ml, about 25 to about 175 mg/ml, about 25 to about 150 mg/ml, about 25 to about 125 mg/ml, about 25 to about 100 mg/ml, about 25 to about 75 mg/ml, about 25 to about 50 mg/ml, about 30 to about 200 mg/ml, about 30 to about 175 mg/ml, about 30 to about 150 mg/ml, about 30 to about 125 mg/ml ml, about 30 to about 100 mg/ml, about 30 to about 75 mg/ml, about 30 to about 50 mg/ml, about 50 to about 200 mg/ml, about 50 to about 175 mg/ml, about 50 to about 150 mg/ml, about 50 to about 125 mg/ml, about 50 to about 100 mg/ml, about 75 to about 200 mg/ml, about 75 to about 175 mg/ml, about 75 to about
  • Histidine contained in the pharmaceutical composition provided in the present invention may function as a stabilizer or buffer, and based on the total pharmaceutical composition, about 50 mM or more, about 51 mM or more, about 52 mM or more, or about 59 At a concentration greater than or equal to mM, such as about 50 mM to about 100 mM, about 50 mM to about 89 mM, about 50 mM to about 80 mM, about 50 mM to about 69 mM, about 50 mM to about 65 mM, about 50 mM to about 62 mM, about 50 mM to about 59 mM, about 51 mM to about 100 mM, about 51 mM to about 89 mM, about 51 mM to about 80 mM, about 51 mM to about 69 mM, about 51 mM to about 65 mM , about 51 mM to about 62 mM, about 51 mM to about 59 mM, about 52
  • the histidine may be included in the form of histidine and/or a pharmaceutically acceptable salt thereof (eg, hydrochloride, etc.) and/or hydrate (eg, monohydrate, etc.) (eg, histidine hydrochloride monohydrate).
  • a pharmaceutically acceptable salt thereof eg, hydrochloride, etc.
  • hydrate eg, monohydrate, etc.
  • histidine hydrochloride monohydrate eg, histidine hydrochloride monohydrate
  • the term “histidine” refers to histidine, a pharmaceutically acceptable salt form thereof (eg, hydrochloride, etc.), and a hydrate form (eg, monohydrate, etc.) thereof (eg, histidine hydrochloride). It may be interpreted as including one or more selected from the group consisting of monohydrate (Histidine hydrochloride monohydrate, etc.).
  • the histidine may function as an antioxidant (anti-oxidant agent), anti-aggregation agent (anti-aggregation agent), or both.
  • the pharmaceutical composition provided in the present invention may not include or substantially not include at least one (eg, all) selected from the group consisting of amino acids other than histidine and pharmaceutically acceptable salts thereof.
  • the pharmaceutical composition provided in the present invention is at least one selected from the group consisting of arginine, lysine, proline, glycine, methionine, glutamine, and pharmaceutically acceptable salts thereof (eg, hydrochloride, hydrate, etc.) (eg, all of them) may or may not include substantially none.
  • the surfactant may be selected from all pharmaceutically acceptable surfactants capable of uniformly dispersing the protein in the liquid composition medium.
  • the surfactant may be a nonionic surfactant, and specifically, polysorbates (eg, polysorbate 20 (polyoxyethylene (20) sorbitan monolaurate), polysorbate 40 (polyoxyethylene (20) sorbitan monopalmitate), polysorbate 60 (polyoxyethylene (20) ) sorbitan monostearate), polysorbate 65 (polyoxyethylene (20) sorbitan tristearate), polysorbate 80 (polyoxyethylene (20) sorbitan monooleate), polysorbate 85 (polyoxyethylene 20 sorbitan trioleate) (the number after polyoxyethylene (20) is an oxyethylene group (means the total number of (-(CH 2 CH 2 O)-)), poloxamer (PEO-PPO-PEO copolymer; PEO: poly(ethylene oxide), PPO: poly(propylene oxide)), sorbitan esterit
  • the content of a surfactant, such as polysorbate 20, included in the pharmaceutical composition is, based on the total pharmaceutical composition, from about 0.01% (w/v) to about 0.2% (w/v), about 0.01% (w/v) to about 0.1% (w/v), about 0.01% (w/v) to about 0.08% (w/v), about 0.03% (w) /v) to about 0.2% (w/v), about 0.03% (w/v) to about 0.1% (w/v), about 0.03% (w/v) to about 0.08% (w/v), about greater than 0.04% (w/v) and less than or equal to about 0.2% (w/v), greater than or equal to about 0.04% (w/v) and less than or equal to about 0.1% (w/v), greater than or equal to about 0.04% (w/v) and less than or equal to about 0.04% (w/v) 0.08% (w/v) or less, about
  • the buffer has a function of adjusting the pH of the formulation, and all buffers commonly used in the preparation of protein formulations may be used without limitation. Specifically, one or more or two or more selected from the group consisting of citrate, phosphate, acetate, succinate, and pharmaceutically acceptable salts and/or hydrates thereof (eg, monohydrate, etc.) may be doing
  • the pharmaceutically acceptable salt may be at least one selected from the group consisting of sodium salt, potassium salt, succinate, phosphate, and the like, but is not limited thereto.
  • citrate refers to citrate, a pharmaceutically acceptable salt thereof (eg, sodium citrate), and a hydrate thereof (eg, citric acid monohydrate). )), one or more selected from the group consisting of, for example, one or more selected from the group consisting of citrate, sodium citrate, and citrate monohydrate (eg, one, two, or three). have.
  • phosphate may be interpreted as meaning at least one selected from the group consisting of phosphate, a pharmaceutically acceptable salt thereof (eg, sodium salt), and a hydrate thereof. .
  • succinate shall be interpreted to mean one or more selected from the group consisting of succinate, a pharmaceutically acceptable salt thereof (eg, sodium salt), and a hydrate thereof.
  • acetate may be interpreted to mean at least one selected from the group consisting of acetate, a pharmaceutically acceptable salt thereof (eg, sodium salt), and a hydrate thereof. .
  • the buffer may have a pH of about 4.0 to about 8.0, and a pH of about 4.0 to about 7.5, about 4.0 to about 7, about 4.0 to about 6.5, about 4.0 to about 6, about 4.0 to about 5.5, about 4.5 to about 7.5, about 4.5 to about 7, about 4.5 to about 6.5, about 4.5 to about 6, about 4.5 to about 5.5 , about 4.8 to about 7.5, about 4.8 to about 7, about 4.8 to about 6.5, about 4.8 to about 6, about 4.8 to about 5.6, about 5.0 to about 7.5, about 5.0 to about 7, about 5.0 to about 6.5, about 5.0 to about 6, about 5.0 to about 5.5, about 5.2 to about 7.5, about 5.2 to about 7.2, about 5.2 to about 7, about 5.2 to about 6.8, about 5.2 to about 6.6, about 5.2 to about 6.5, about 5.5 to about 7.5, about 5.5 to about 7.2, about 5.5
  • the buffer is, based on the total pharmaceutical composition, about 0.1 mM to about 50 mM, about 0.1 mM to about 40 mM, about 0.1 mM to about 30 mM, about 0.1 mM to about 20 mM, about 0.1 mM to about 12 mM , about 0.1 mM to about 10 mM, about 0.1 mM to about 7.8 mM, about 0.1 mM to about 6 mM, about 0.1 mM to about 4 mM, about 0.1 mM to about 3 mM, about 0.1 mM to about 2.7 mM, about 1 mM to about 50 mM, about 1 mM to about 40 mM, about 1 mM to about 30 mM, about 1 mM to about 20 mM, about 1 mM to about 12 mM, about 1 mM to about 10 mM, about 1 mM to about 7.8 mM, about 1 mM to about 6 mM
  • the buffer comprises citrate, and based on the total pharmaceutical composition, from about 0.1 mM to about 50 mM, from about 0.1 mM to about 40 mM, from about 0.1 mM to about 30 mM, from about 0.1 mM to about 20 mM, about 0.1 mM to about 12 mM, about 0.1 mM to about 10 mM, about 1 mM to about 50 mM, about 1 mM to about 40 mM, about 1 mM to about 30 mM, about 1 mM to about 20 mM, about 1 mM to about 12 mM, about 1 mM to about 10 mM, about 2 mM to about 50 mM, about 2 mM to about 40 mM, about 2 mM to about 30 mM, about 2 mM to about 20 mM, about 2 mM to about 12 mM, about 2 mM to about 10 mM, about 2.5 mM to about 50 mM, from
  • the buffer may include one or more (eg, one, two or three kinds) selected from the group consisting of phosphate, succinate, and acetate.
  • the buffer may include phosphate. In another example, the buffer may include phosphate and no or substantially no citrate. In another example, the buffer may include (1) phosphate and (2) succinate or acetate. In another example, the buffer may include (1) phosphate and (2) succinate or acetate, and may be free or substantially free of citrate.
  • the phosphate content is, based on the total pharmaceutical composition, about 0.1 mM to about 10 mM, about 0.1 mM to about 7.8 mM, about 0.1 mM to about 6 mM, about 0.1 mM to about 4 mM, about 0.1 mM to about 3 mM, about 0.1 mM to about 2.7 mM, about 1 mM to about 10 mM, about 1 mM to about 7.8 mM, about 1 mM to about 6 mM, about 1 mM to about 4 mM, about 1 mM to about 3 mM, about 1 mM to about 2.7 mM, about 2 mM to about 10 mM, about 2 mM to about 7.8 mM, about 2 mM to about 6 mM, about 2 mM to about 2.7 mM, about 2.5 mM to about 10 mM, about 2.5 mM to about 7.8 mM, about 2.5 mM to about 6 m
  • the content of the succinate and/or acetate is, based on the total pharmaceutical composition, about 0.1 mM to about 20 mM, about 0.1 mM to about 12 mM, about 0.1 mM to about 10 mM, about 0.1 mM to about 7.8 mM, about 0.1 mM to about 6 mM, about 0.1 mM to about 5.4 mM, about 1 mM to about 20 mM, about 1 mM to about 12 mM, about 1 mM to about 10 mM, about 1 mM to about 7.8 mM, about 1 mM to about 6 mM, about 1 mM to about 5.4 mM, about 2 mM to about 20 mM, about 2 mM to about 12 mM, about 2 mM to about 10 mM, about 2 mM to about 7.8 mM, about 2 mM to about 6 mM, about 2 mM to about 5.4 mM, about 2.5 m
  • the polyol may be at least one selected from the group consisting of sugars and sugar alcohols, for example, sorbitol, mannitol, meglumine, trehalose, sucrose, maltose, lactose, glucose, xylitol, arabitol. , may be at least one selected from the group consisting of erythritol, lactitol, maltitol, inositol, and the like.
  • the polyol, such as sorbitol may be used as a tonicity agent or a stabilizer.
  • the polyol, such as mannitol may be used as a tonicity agent or a stabilizer.
  • the polyol may be sorbitol, mannitol, or a combination thereof.
  • the polyol may include sorbitol, and may not include or substantially not include at least one selected from sugars and sugar alcohols other than sorbitol, or all of them.
  • the polyol may include mannitol and may not include or substantially not include one or more selected from sugars and sugar alcohols other than mannitol, or all of them.
  • the content of the polyol is, based on the total pharmaceutical composition, from about 0.01 to about 10% (w/v), about 0.01 to about 8 % (w/v), about 0.01 to about 6 % (w/v), about 0.01 to about 4 % (w/v), about 0.01 to about 3.5 % (w/v), about 0.01 to about 3.3 % (w/v), from about 0.01 to about 3.3 % (w/v), from about 0.01 to about 2.6 % (w/v), from about 0.01 to about 2 % (w/v), from about 0.01 to about 1 % (w/v), from about 0.05 to about 10 % (w/v), about 0.05 to about 8 % (w/v), about 0.05 to about 6 % (w/v), about 0.05 to about 4 % (w/v), about 0.05 to about 3.5 % (w/v), about 0.05 to about 3.3 % (w/v), about 0.05 to about 3.3 % (w/v), about 0.05 to about
  • the pH of the pharmaceutical composition provided herein may be from about 4 to about 8, specifically, the pH is from about 4.0 to about 7.5, from about 4.0 to about 7, from about 4.0 to about 6.5, from about 4.0 to about 6, about 4.0 to about 5.5, about 4.5 to about 7.5, about 4.5 to about 7, about 4.5 to about 6.5, about 4.5 to about 6, about 4.5 to about 5.5, about 4.8 to about 7.5, about 4.8 to about 7, about 4.8 to about 6.5, about 4.8 to about 6, about 4.8 to about 5.6, about 5.0 to about 7.5, about 5.0 to about 7, about 5.0 to about 6.5, about 5.0 to about 6, about 5.0 to about 5.5, about 5.2 to about 7.5, about 5.2 to about 7.2, about 5.2 to about 7, about 5.2 to about 6.8, about 5.2 to about 6.6, about 5.2 to about 6.5, about 5.5 to about 7.5, about 5.5 to about 7.2, about 5.5 to about 7, about 5.5 to about 6.8, about 5.5 to about 6.6, about
  • the pharmaceutical composition provided herein may be one that does not contain or substantially does not contain at least one selected from the group consisting of ammonium salts, such as ammonium chloride, ammonium sulfate, ammonium carbonate, ammonium nitrate, and the like.
  • the pharmaceutical composition provided herein is sodium chloride, sodium sulfate, potassium chloride, sodium hydroxide, potassium hydroxide, ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), or all of them, or substantially free of them.
  • EDTA ethylenediaminetetraacetic acid
  • the pharmaceutical composition may further include a pharmaceutically acceptable carrier, diluent, and/or excipient.
  • the pharmaceutically acceptable carriers are commonly used, and include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, starch, acacia gum, calcium phosphate, alginate, gelatin, calcium silicate, microcrystalline cellulose, polyvinylpi.
  • Rollidone, cellulose, water (eg, purified water), physiological saline, syrup, methyl cellulose, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, at least one selected from the group consisting of mineral oil, etc. may include, but is not limited thereto.
  • the pharmaceutical composition provided herein may have superior stability compared to a composition not containing histidine, a composition containing polysorbate 80 instead of polysorbate 20, or both.
  • the histidine-free composition may be completely free (about 0 mM) or substantially free of histidine.
  • the composition comprising polysorbate 80 (in place of polysorbate 20) instead of polysorbate 20 contains polysorbate 80 in an amount of 0.01 to 0.2% (w/v) based on the total pharmaceutical composition. ), 0.01 to 0.15% (w/v), 0.01 to 0.12% (w/v), 0.01 to 0.1% (w/v), 0.04 to 0.2% (w/v), 0.04 to 0.15% (w/v) ), 0.04 to 0.12% (w/v), 0.04 to 0.1% (w/v), 0.08 to 0.2% (w/v), 0.08 to 0.15% (w/v), 0.08 to 0.12% (w/v) ), or may be included in an amount of 0.08 to 0.1% (w/v), but is not limited thereto.
  • the pharmaceutical composition provided herein is characterized by excellent stability.
  • excellent stability or “kept stable” may mean that the structure and/or physical, chemical, and/or biological properties of a protein in the composition are maintained during storage (eg, storage low protein polymer formation rate, low protein aggregation rate, low protein degradation rate, high protein (drug) content, low denaturation rate, low amino acid (eg methionine residue) oxidation level, etc.).
  • the light stability may mean that the structure, and/or physical, chemical, and/or biological properties of the protein in the composition under photo stress conditions are maintained (eg, low protein polymer formation rate during storage, low protein Aggregation rate, low protein degradation rate, high protein (drug) content, low denaturation rate, low amino acid (eg methionine residue) oxidation level, etc.).
  • the light stability can be measured (or determined or identified or analyzed) by low amino acid (eg, methionine residue) oxidation levels under light exposure conditions.
  • the improvement in light stability may mean that the oxidation level of amino acid residues of the antibody is reduced (antioxidation) under light load conditions.
  • the amino acid residue may be one or more methionine present in the heavy and/or light chain of the antibody (anti-TNF ⁇ antibody, such as adalimumab), such as methionine at position 256 of the heavy chain of the antibody.
  • anti-TNF ⁇ antibody such as adalimumab
  • the antioxidant effect on amino acid residues of the antibody in the pharmaceutical composition under such light load conditions may be due to the action of histidine contained in the pharmaceutical composition.
  • the light load condition may be in accordance with the standards of the 'Q1B Stability Test Light Stability Test of New Drug Substances and New Drug Products' (see Reference Example 2; base group) (base), dark control group (Dark control), light exposure (Light-exposure), for example, 1.2 million lux hours or more and 200 Wh/m 2 (watt hours/square meter) or more conditions.
  • the pharmaceutical composition provided herein has an oxidation rate (%Met 256 ) of the 256th methionine residue of the antibody heavy chain measured under the light exposure conditions of about 64% or less, about 63% or less, about 62% or less , about 61% or less, about 60% or less, about 59% or less, about 58% or less, about 57% or less, about 56% or less, about 55% or less, about 54% or less, about 53% or less, about 52% or less , about 51% or less, about 50% or less, about 49% or less, about 48% or less, about 47% or less, about 46% or less, about 45% or less, about 44% or less, about 43% or less, about 42% or less , or about 41% or less (the lower limit being a value selected from the range of greater than 0% and less than or equal to 41%, such as about 0%, about 5%, about 10%, about 15%, about 20%, about 25%, about 30 %, about 35%, or about 40%).
  • the oxidation rate (%Met 256 ) of the 256th methionine residue of the antibody heavy chain measured under the light exposure conditions is measured under light exposure conditions of a composition not containing histidine.
  • the pharmaceutical compositions provided herein the antibody 256th methionine residue of the heavy chain determined from the light exposure conditions, the oxidation rate (% Met 256) underlying the group of (without applying light exposure, 5 ⁇ 3 °C) or
  • the difference value ( ⁇ %Met 256 ) for %Met 256 in the dark control group (treated with light blocking (eg, blocking with foil) under the same light exposure conditions) was 65% or less, 60% or less, 55% or less, 54% or less, 53% or less, 50% or less, 45% or less, 40% or less, 35% or less, 30% or less, 29% or less, 28% or less, 27% or less, 26% or less, 25% or less, or 24 % or less (the lower limit can be, but is not limited to, a value selected from the range of greater than 0% and less than or equal to 24%, such as, but not limited to, about 0%, about 5%, about 10%, about 15%, or about 20%) can be
  • the pharmaceutical composition provided herein has a basal group (light) of the oxidation rate (%Met 256 ) of the 256th methionine residue of the antibody heavy chain measured under the light exposure conditions, compared to a composition not containing histidine.
  • the difference ( ⁇ %Met 256 ) for %Met 256 of no exposure application, 5 ⁇ 3° C.) or dark control (treated with light blocking (eg, with foil) under the same light exposure conditions) was about 10 % or more, about 11% or more, about 12% or more, about 13% or more, about 14% or more, about 15% or more, about 16% or more, about 17% or more, about 18% or more, about 19% or more, about 20 % or more, about 21% or more, about 22% or more, about 23% or more, about 24% or more, or about 25% or more (the upper limit is a value selected from the range of 25% to 100%, about 26%, about 27%, about 28 %, about 29%, about 30%, about 35%, about 40%, about 45%, or about 50%) may be less.
  • the improvement of the light stability may mean that the aggregation rate of the antibody in the composition is reduced (anti-aggregation) under light load conditions.
  • the effect of reducing the aggregation rate (anti-aggregation) of the antibody under such light load conditions may be due to the action of histidine included in the pharmaceutical composition.
  • the protein aggregation rate may mean a content ratio of aggregates in the composition, and the 'aggregate' is a high molecular weight product formed by aggregation of the anti-TNF ⁇ antibody protein included in the composition of the present invention (High Molecular Weight). ; HMW), and in other words, it can be referred to as an aggregate.
  • HMW High Molecular Weight
  • the protein aggregation rate is expressed as the content of aggregates (%HMW or HMW%) or the amount of change or difference in the content of aggregates ( ⁇ %HMW or ⁇ HMW%) in the composition measured under the light load conditions as described above.
  • the pharmaceutical composition provided herein has a content (%HMW) (eg, measured by SE-HPLC) of aggregates in the composition measured under the light exposure condition of about 15% or less, about 14% or less, about 13% or less, about 12% or less, about 11% or less, about 10% or less, about 9.5% or less, about 9% or less, or about 8.5% or less, wherein the lower limit is a value selected from the range of greater than 0% and less than or equal to 8.5% , such as, but not limited to, about 0%, about 0.1%, about 0.5%, about 1%, or about 2%).
  • %HMW eg, measured by SE-HPLC
  • the pharmaceutical composition provided herein has an aggregate content (%HMW) (eg, measured by SE-HPLC) of about 4 under the light exposure condition, compared to a composition not containing histidine. % or more, about 5% or more, about 6% or more, about 7% or more, about 8% or more, about 9% or more, or about 10% or more (the upper limit is a value selected from the range of 10% to 100%, about 11%, about 15%, about 20%, about 25%, about 30%, about 35%, about 40%, about 45% or about 50%) may be less.
  • %HMW aggregate content
  • the pharmaceutical composition provided herein is a change or difference value ( ⁇ %HMW) of the content of aggregates in the composition measured under the light load condition, that is, the aggregate content under the light exposure condition and the basal group or cancer
  • the thermal stability and/or freeze-melt stability may be measured under heat stress conditions (eg, 0 to 8 weeks or 0 to 4 weeks (eg, 0 weeks, 1 week, 2 weeks, 3 weeks, 4 weeks at 40 ⁇ 2°C). weeks or 8 weeks)) and/or freeze-thaw conditions (Freeze/thaw conditions; for example, 'Freeze at -70°C ⁇ 10°C for 18 hours or longer' and 'Thaw at room temperature (25°C) for at least 1 hour (thaw) ) ' may mean that the structure and/or physical, chemical, and/or biological properties of the protein in the composition are maintained upon storage or storage (eg, at least one time point selected during storage or storage period).
  • the thermal stability and/or freeze-melt stability may be measured (or determined or identified or analyzed) as a protein aggregation rate, a protein denaturation rate, or a combination thereof measured under heat-severe conditions and/or freeze-melt conditions.
  • the improvement of the thermal stability and/or freeze-melt stability may mean that the protein aggregation rate, protein denaturation rate, or both of them are lowered under heat-severe conditions and/or freeze-melt conditions.
  • the protein aggregation rate is,
  • the content of aggregates in the composition (% HMW or HMW %) at any selected time point during the storage (or storage) period, including the beginning of storage (or storage),
  • the term 'denaturation rate' refers to the degree to which the anti-TNF ⁇ antibody protein contained in the composition of the present invention becomes acidic different from its original properties (content of acidic variants; %Acidic or Acidic%) or the degree to which it becomes basic (content of basic variants; %Basic or Basic%).
  • the protein denaturation rate is,
  • - content of acidic variants in the composition (% Acidic or Acidic %) at any time selected during the storage (or storage) period, including the time of storage (or storage) initiation;
  • the amount of change or difference ( ⁇ %Acidic) in the content of the acidic variant in the composition at any selected interval during the storage (or storage) period, including the storage (or storage) start time,
  • the pharmaceutical composition provided herein is administered at a temperature of 40 ⁇ 2° C. for a period of 0 weeks to 8 weeks, 0 weeks to 4 weeks, or 0 weeks to 2 weeks (from the start of storage to the end of storage) at any selected time point (e.g., 0, 1, 2, 4 or 8 weeks) or over the entire period of time), the aggregate content (%HMW) in the composition (e.g., as measured by SE-HPLC) about 1.0% or less, about 0.97% or less, about 0.94% or less, about 0.91% or less, about 0.87% or less, about 0.84% or less, about 0.81% or less, about 0.79% or less, about 0.76% or less, about 0.72% or less, about 0.70% or less, about 0.69% or less, or about 0.68% or less, the lower limit of which is greater than zero, such as about 0.0001%, about 0.0005%, about 0.001%, about 0.004%, about 0.007%, or about 0.01%.
  • the pharmaceutical composition provided herein is administered at a temperature of 40 ⁇ 2° C. for 0 to 8 weeks, compared to a composition comprising (eg, at the same concentration) polysorbate 80 instead of polysorbate 20. , 0 to 4 weeks, or 0 to 2 weeks (the period from the start of storage to the end of storage) at any time selected (eg, 0 weeks, 1 week, 2 weeks, 4 weeks, or 8 weeks) or at least about 0.005%, at least about 0.01%, at least about 0.015%, at least about 0.02%, at least about 0.04%, at least about 0.06 agglomerates content (%HMW) (eg, as measured by SE-HPLC) in the composition over the entire period % or more, or about 0.08% or more (the upper limit is a value selected from the range of 0.08% to 100%, about 0.1%, about 1%, about 1.5%, about 5%, about 10%, about 20%, about 30%, about 40% or about 50%, but is not limited thereto) may be less.
  • the pharmaceutical composition provided herein is administered at a temperature of 40 ⁇ 2° C. for 0 weeks to 8 weeks, 0 Any time (e.g., 0 weeks, 1 week, 2 weeks, 4 weeks or 8 weeks) or all selected from weeks to 4 weeks, or from 0 weeks to 2 weeks (the period from the start of storage to the end of storage) agglomerate content (%HMW) (eg, as measured by SE-HPLC) in the composition in a period of at least about 0.1%, at least about 0.15%, at least about 0.2%, at least about 0.25%, at least about 0.3%, at least about 0.35% , about 0.4% or more, about 0.45% or more, about 0.5% or more, or about 0.55% or more (the upper limit is a value selected from the range of 0.55% to 100%, about 0.6%, about 1%, about 1.5%, about 5%, about 10%, about 20%, about 30%, about 40% or about 50%) may be less.
  • %HMW agglomerate content
  • the pharmaceutical composition provided herein is administered at a temperature of 40 ⁇ 2° C. for 0 weeks to 8 weeks, 0 weeks to 4 weeks, or 0 weeks to 2 weeks (eg, 0 weeks, 1 week, 2 weeks). week, 4 weeks, or 8 weeks) of about 1.0% or less, about 0.97% or less, about 0.94% or less, about 0.91% or less, about 0.87% or less, about 0.84% or less , about 0.81% or less, about 0.79% or less, about 0.76% or less, about 0.72% or less, about 0.70% or less, about 0.68% or less, about 0.66% or less, about 0.64% or less, about 0.62% or less, about 0.60% or less , about 0.58% or less, about 0.56% or less, about 0.54% or less, about 0.52% or less, about 0.50% or less, about 0.48% or less, about 0.46% or less, about 0.44% or less, about 0.42% or less, about 0.40% or less , about 0.40% or
  • the pharmaceutical composition provided herein is administered at a temperature of 40 ⁇ 2° C. for 0 weeks to 8 weeks, 0
  • the amount of change ( ⁇ %HMW) in the agglomerate content in the composition over weeks to 4 weeks, or 0 to 2 weeks is about 0.02% or more, about 0.04 % or more, about 0.06% or more, about 0.08% or more, about 0.1% or more, about 0.15% or more, about 0.2% or more, about 0.25% or more, about 0.3% or more, about 0.35% or more, or about 0.38% or more (upper limit may be a value selected from the range of 0.38% to 100%, about 0.4%, about 1%, about 1.5%, about 5%, about 10%, about 20%, about 30%, about 40% or about 50%, but not limited thereto).
  • the pharmaceutical composition provided herein is administered at a temperature of 40 ⁇ 2° C. for a period of 0 weeks to 8 weeks, 0 weeks to 4 weeks, or 0 weeks to 2 weeks (from the start of storage to the end of storage) period) at any time selected (e.g., 0 weeks, 1 week, 2 weeks, 4 weeks, or 8 weeks) or the content of acidic variants (%Acidic) in the composition (e.g., as measured by CEX-HPLC or icIEF) at the total period.
  • the pharmaceutical composition provided herein is administered at a temperature of 40 ⁇ 2° C. for 0 weeks to 8 weeks, 0 Any time selected (eg, 0 weeks, 1 week, 2 weeks, 4 weeks or 8 weeks) or an entire period of time from weeks to 4 weeks, or from 0 weeks to 2 weeks (the period from the start of storage to the end of storage)
  • the acidic variant content (%Acidic) e.g., measured by CEX-HPLC or icIEF) in the composition in % or more, about 7% or more, about 8% or more, about 9% or more, or about 10% or more (the upper limit is a value selected from the range of 10% to 100%, about 11%, about 15%, about 20%, about 25 %, about 30%, about 35%, about 40%, about 45% or about 50%) may be less.
  • the pharmaceutical composition provided herein is administered at a temperature of 40 ⁇ 2° C. for 0 weeks to 8 weeks, 0 weeks to 4 weeks, or 0 weeks to 2 weeks (eg, 1 week, 2 weeks, 4 weeks). week or 8 weeks) of about 25% or less, about 24% or less, about 23% or less, about 22% or less, about 21% or less, about 20% or less, about 19% or less, about 18% or less, about 17.5% or less, about 17% or less, about 16.5% or less, about 16% or less, about 15.5% or less, about 15% or less, about 14.5% or less, about 14% or less, about 13.5% or less, about 13% or less, about 12.5% or less, about 12% or less, about 11.5% or less, about 11% or less, about 10.5% or less, about 10% or less, about 9.5% or less, or about 9% or less and the lower limit thereof may be a value greater than 0, for example, about 0.0001%, about 0.0005%, about 0.001%, about 0.005%, about 0.0
  • the pharmaceutical composition provided herein is administered at a temperature of 40 ⁇ 2° C. for 0 weeks to 8 weeks, 0
  • the amount of change ( ⁇ %HMW) in the agglomerate content in the composition for weeks to 4 weeks, or 0 to 2 weeks is about 1% or more, about 1.5% or more, about 2% or more, about 3% or more, about 4% or more, about 5% or more, about 6% or more, about 7% or more, about 8% or more, about 9% or more, about 10% or more, about 11% or more, about 12% or more, or about 13% or more (the upper limit is a value selected from the range of 13% to 100%, about 14%, about 15%, about 20%, about 25%, about 30%, about 35%, about 40% , about 45% or about 50%, but is not limited thereto) may be less.
  • the pharmaceutical composition provided herein has an aggregate content (%HMW) in the composition (eg, measured by SE-HPLC) of about 1.0 after 5 cycles of freeze-thaw at -70 ⁇ 10°C/25°C conditions. % or less, about 0.97% or less, about 0.94% or less, about 0.91% or less, about 0.87% or less, about 0.84% or less, about 0.81% or less, about 0.79% or less, about 0.76% or less, about 0.72% or less, about 0.70 % or less, about 0.68% or less, about 0.66% or less, about 0.64% or less, about 0.62% or less, about 0.60% or less, about 0.58% or less, about 0.57% or less, about 0.56% or less, about 0.55% or less, about 0.54 % or less, about 0.53% or less, about 0.52% or less, about 0.51% or less, about 0.50% or less, about 0.49% or less, or about 0.48% or less, the lower limit of which
  • the pharmaceutical composition provided herein is frozen- at -70 ⁇ 10°C/25°C conditions as compared to a composition comprising (eg, at the same concentration) polysorbate 80 instead of polysorbate 20
  • the agglomerate content (%HMW) in the composition (eg, as measured by SE-HPLC) after 5 cycles of melting is at least about 0.005%, at least about 0.01%, at least about 0.015%, at least about 0.02%, at least about 0.04%, at least about 0.06% or more, about 0.08% or more, or about 0.1% or more (the upper limit is a value selected from the range of 0.1% to 100%, about 0.2%, about 0.5%, about 1%, about 5%, about 10%, about 15%, about 40%, about 45%, or about 50%, but is not limited thereto).
  • the pharmaceutical composition provided herein has an acidic variant content (%Acidic) (eg, measured by icIEF) in the composition after 5 cycles of freeze-thaw at -70 ⁇ 10°C/25°C conditions of about 27% or less, about 26.91% or less, or about 26.85% or less, the lower limit of which is greater than zero, such as about 0.0001%, about 0.0005%, about 0.001%, about 0.005%, about 0.01%, about 0.05%, or about 0.1%.
  • %Acidic acidic variant content
  • the pharmaceutical composition provided herein is freeze-thawed at -70 ⁇ 10°C/25°C conditions as compared to a composition comprising polysorbate 80 (eg, at the same concentration) instead of polysorbate 20 the content of acidic variants (%Acidic) (e.g., as measured by icIEF) in the composition after 5 cycles of at least about 0.005%, at least about 0.01%, at least about 0.1%, at least about 0.12%, at least about 0.15%, at least about 0.2%, about 0.5% or more, about 0.7% or more, or about 1% or more (the upper limit is a value selected from the range of 1% to 100%, about 1.1%, about 1.5%, about 2%, about 5%, about 10%, about 15 %, about 40%, about 45%, or about 50%, but is not limited thereto).
  • the pharmaceutical composition provided herein is the amount of change or difference in the content of the acidic variant in the composition before and after performing 5 cycles of freeze-thaw at -70 ⁇ 10°C/25°C conditions ( ⁇ %Acidic) (such as , measured by icIEF) is about 3% or less, about 2.6% or less, about 2.5% or less, about 2.45% or less, about 2% or less, about 1.9% or less, about 1.8% or less, about 1.7% or less, about 1.6% or less , about 1.5% or less, about 1.4% or less, about 1.3% or less, about 1.2% or less, about 1.1% or less, or about 1.0% or less, the lower limit of which is greater than zero, such as about 0.0001%, about 0.0005%, about 0.001%, about 0.005%, about 0.01%, about 0.05%, or about 0.1%.
  • the pharmaceutical composition provided herein is frozen- at -70 ⁇ 10°C/25°C conditions as compared to a composition comprising (eg, at the same concentration) polysorbate 80 instead of polysorbate 20
  • the amount of change or difference ( ⁇ %Acidic) in the content of the acidic variant in the composition before and after performing 5 melting cycles is about 0.1% or more, about 0.2% or more, about 0.3% or more, about 0.4% or more, about 0.5% or more, about 0.6 % or more, about 0.7% or more, about 0.8% or more, about 0.9% or more, about 1% or more, about 1.5% or more, or about 2% or more (the upper limit is a value selected from the range of 2% to 100%, about 2.1%, about 2.5%, about 3%, about 5%, about 10%, about 15%, about 40%, about 45% or about 50%) may be less.
  • the pharmaceutical composition provided herein, or a container comprising the same is at a temperature of 5 ⁇ 3° C. for about 32 months to about 52 months, about 34 months to about 50 months, about 36 months to about 48 months, about After storage for 36 months, or about 48 months, about 28 days to about 35 days, about 28 days to about 32 days, about 28 days at room temperature of 30 ⁇ 2° C. and 60 ⁇ 5% relative humidity (RH). Stability may be maintained when stored for days to about 30 days, about 28 days, or about 30 days.
  • the room temperature storage stability is measured (or determined by at least one selected from the group consisting of transparency, color, pH, protein concentration, TNF ⁇ binding activity, TNF ⁇ neutralizing activity, purity, protein aggregation rate, charge variant, and the number of particles) or confirmed or analyzed).
  • the pharmaceutical composition provided herein or a container comprising the same is stored at a temperature of 5 ⁇ 3° C. for 32 months to 52 months, specifically 36 months to 48 months, 36 months or 48 months, and then 30 ⁇ 2 When stored at a temperature of °C 28 to 35 days, specifically 30 days, it may have one or more characteristics selected from the following:
  • the turbidity may be about 30 nephelometric turbidity units (NTU) or less, about 25 NTU or less, about 22 NTU or less, about 20 NTU or less, about 19 NTU or less, about 18 NTU or less, or about 17 NTU or less, and the lower limit thereof is 0 to It may be a value selected from among 10 NTU, but is not limited thereto.
  • NTU nephelometric turbidity units
  • TNF ⁇ binding activity is about 80% or more, about 85% or more, about 90% or more, about 91% or more, about 92% or more, about 93% or more, about 94% or more, about 95% or more, about 96% or more, about It may be 97% or more, about 98% or more, about 100% or more, about 102% or more, about 104% or more, or about 106% or more, and the upper limit thereof may be a value selected from the range of 107% to 125%, but is limited thereto. it's not going to be
  • TNF ⁇ neutralizing activity is about 70% or more, about 75% or more, about 80% or more, about 85% or more, about 86% or more, about 90% or more, about 91% or more, about 92% or more, about 93% or more, about 94% or more, about 95% or more, about 96% or more, about 97% or more, about 98% or more, about 99% or more, about 100% or more, about 101% or more, about 102% or more, about 103% or more, about It may be 104% or more, or about 105% or more, and the upper limit thereof may be a value selected from the range of 105% to 133%, but is not limited thereto.
  • the upper limit value may be a numerical value selected from 97% to 100%, but is not limited thereto.
  • the agglomerate content (%HMW) (eg, as measured by SE-HPLC) may be about 5% or less, about 4% or less, about 3% or less, about 2% or less, about 1% or less, about 0.9% or less,
  • the lower limit may be a value greater than 0%, for example, about 0%, about 0.001%, about 0.01%, about 0.1%, about 1%, but is not limited thereto.
  • Acid variant content (e.g., as measured by icIEF) can be about 45% or less, about 43% or less, about 40% or less, about 38% or less, about 36% or less, about 34% or less, about 33% or less and the lower limit thereof is a value greater than zero, such as about 0%, about 1%, about 5%, about 10%, about 11%, about 12%, about 13%, about 14%, about 15%, or about It may be 16%, but is not limited thereto.
  • Main protein content (eg, measured by icIEF) is about 50% or more, about 51% or more, about 52% or more, about 53% or more, about 54% or more, about 55% or more, about 55% or more , or at least about 56%, the upper limit of which is a value selected from the range of 50% to 100%, such as about 95%, about 93%, about 93%, about 90%, about 87%, about 85%, about 83%. , about 80%, about 78%, about 75%, or about 74%, but is not limited thereto.
  • the basic variant content (%basic) (e.g., as measured by icIEF) is about 20% or less, about 19% or less, about 18% or less, about 17% or less, about 16% or less, about 15% or less, or about 14% or less.
  • the lower limit may be a value greater than 0, for example, about 0%, about 1%, about 2%, about 3%, about 4%, about 5%, or about 6%, but is not limited thereto. no.
  • the number of particles having an average particle size of 10 ⁇ m or more in 0.8 mL of the composition is 6000 or less, 5000 or less, 4000 or less, 3000 or less, 2500 or less, 2000 or less, 1900 or less, 1800 or less, 1700 or less, 1600 or less or less, 1500 or less, 1400 or less, 1300 or less, 1200 or less, 1100 or less, or 1000 or less;
  • the number of particles having an average particle size of 25 ⁇ m or more in 0.8 mL of the composition is 600 or less, 500 or less, 400 or less, 300 or less, 200 or less, 100 or less, 70 or less, 50 or less, 40 or less, 30 or less or less, or 20 or less.
  • the pharmaceutical composition provided herein may be isotonic with the living body.
  • the liquid composition has an osmotic pressure of about 200 mOsm/kg to about 400 mOsm/kg, about 250 mOsm/kg to about 400 mOsm/kg, about 200 mOsm/kg to about 350 mOsm/kg, about 250 mOsm/kg to about 350 mOsm/kg, about 200 to about 300 mOsm/kg, or about 250 to about 300 mOsm/kg.
  • such an osmotic pressure may be controlled by polyols and/or amino acids.
  • a device, kit, or container comprising a pharmaceutical composition provided herein.
  • the device, kit, or container may be used primarily for parenteral administration (eg, subcutaneous administration), and may include a vial, pack, or syringe filled with the pharmaceutical composition, such as a pre-filled Pre-filled syringe (PFS); Needle size: 20 to 40G, such as 25G, 26G, 27G, 28G, 29G, or 30G), a pre-filled pen (PFP), etc.
  • the filled pharmaceutical composition based on the content of the active ingredient anti-TNF ⁇ antibody (eg, adalimumab), may include one or more unit dosage forms (unit dosage form).
  • the pharmaceutical compositions provided herein may be contained within a dispenser device which, if desired, may contain vials, packs, or one or more unit dosage forms comprising the active ingredient.
  • the dispenser device may comprise a syringe containing a single dose of a liquid formulation of the pharmaceutical composition prepared for injection.
  • the syringe may be accompanied by instructions for administration.
  • the device may be selected from Inject-ease®, Genject®, syringe pen (eg, GenPen®), needleless device (eg, MediJector®, BioJector®, etc.), but is limited thereto no.
  • the contained pharmaceutical composition may have stability against temperature change.
  • the temperature change may mean performing exposure to a low temperature condition (eg, -5 ⁇ 3° C.) one or more times, for example, 3 cycles after exposure to a high temperature condition (eg, 30 ⁇ 2° C.).
  • the stability to temperature change is, TNF ⁇ binding activity, TNF ⁇ neutralizing activity, number of particles, oxidation of amino acid residues, transparency, pH, protein concentration, protein aggregation rate, purity, charge variants, and the group consisting of endotoxins It may be measured (or determined or confirmed or analyzed) by one or more selected from.
  • the device, kit, or container is exposed to a high temperature condition (with 65 ⁇ 5% RH) of 30 ⁇ 2 ° C for 48 hours and then exposed to a low temperature condition at -5 ⁇ 3 ° C for 48 hours as one cycle.
  • a high temperature condition with 65 ⁇ 5% RH
  • a low temperature condition at -5 ⁇ 3 ° C for 48 hours as one cycle.
  • the included pharmaceutical composition may have one or more characteristics selected from the following:
  • TNF ⁇ binding activity is about 90% or more, about 91% or more, about 92% or more, about 93% or more, about 94% or more, about 95% or more, about 96% or more, about 97% or more, or about 98% or more ( The upper limit may be a value selected from the range of 100% to 125%),
  • TNF ⁇ neutralizing activity is about 90% or more, about 91% or more, about 92% or more, about 93% or more, about 94% or more, about 95% or more, about 96% or more, about 97% or more, about 98% or more, about 99% or more, about 100% or more, about 101% or more, about 102% or more, about 103% or more, about 104% or more, or about 105% or more (the upper limit may be a value selected from the range of 100% to 133%) ,
  • the oxidation rate of methionine at position 34 of the antibody heavy chain is about 1.5% or less, about 1.4% or less, about 1.3% or less, about 1.2% or less, about 1.1% or less, about 1.0% or less, about 0.9% or less, about 0.8% or less , about 0.7% or less, or about 0.6% or less (the lower limit being a value greater than 0, such as about 0.0001%, about 0.0005%, about 0.001%, about 0.005%, about 0.01%, about 0.05%, or about 0.1% may be),
  • the oxidation rate of methionine at position 83 of the antibody heavy chain is about 1.3% or less, about 1.2% or less, about 1.1% or less, about 1.0% or less, about 0.9% or less, about 0.8% or less, about 0.7% or less, about 0.6% or less , about 0.5% or less, or about 0.4% or less (the lower limit is a value greater than 0, such as about 0.0001%, about 0.0005%, about 0.001%, about 0.005%, about 0.01%, about 0.05%, or about 0.1% may be),
  • the oxidation rate of methionine at position 256 of the antibody heavy chain is about 6.0% or less, about 5.7% or less, about 5.5% or less, about 5.4% or less, about 5.3% or less, about 5.2% or less, about 5.1% or less, about 5.0% or less , about 4.9% or less, about 4.8% or less, or about 4.9% or less (the lower limit can be a number greater than 0, such as about 0.01%, about 0.05%, about 0.1%, about 0.5%, or about 1%) ),
  • the oxidation rate of methionine at position 432 of the antibody heavy chain is about 0.5% or less, about 0.4% or less, about 0.3% or less, about 0.2% or less, about 0.1% or less, about 0.05% or less, or not determined (not detected; oxidation methionine at position 432 is not oxidized to a detectable level) (the lower limit is selected from values including 0);
  • the oxidation rate of methionine at the 4th position of the antibody light chain is about 1.5% or less, about 1.3% or less, about 1.2% or less, about 1.1% or less, about 1.0% or less, about 0.9% or less, about 0.8% or less, about 0.7% or less , about 0.6% or less, or about 0.5% or less (the lower limit is a value greater than 0, such as about 0.0001%, about 0.0005%, about 0.001%, about 0.005%, about 0.01%, about 0.05%, or about 0.1% may be),
  • Turbidity is 25 NTU (nephelometric turbidity unit) or less, 22 NTU or less, 20 NTU or less, 19 NTU or less, 18 NTU or less, or 17 NTU or less (the lower limit is selected from 0 to 10 NTU),
  • the number of particles having an average particle size of 10 ⁇ m or more in 0.8 mL of the composition is 5000 or less, 4000 or less, 3000 or less, 2500 or less, 2000 or less, 1900 or less, 1800 or less, 1700 or less, 1600 or less, or 1500 less than dogs,
  • the number of particles having an average particle diameter of 25 um or more in 0.8 mL of the composition is 500 or less, 400 or less, 300 or less, 200 or less, 100 or less, 70 or less, 50 or less, 40 or less, 30 or less, or 20 no more than dogs, and
  • a pharmaceutical composition for treating a disease comprising the pharmaceutical composition or a device comprising the same is provided.
  • a method of treating a disease comprising administering to a subject in need thereof an anti-TNF ⁇ antibody, such as adalimumab, a pharmaceutically effective amount of the pharmaceutical composition.
  • the method of treatment may further include, prior to the administering, identifying a subject in need of administration of an anti-TNF ⁇ antibody, such as adalimumab.
  • the disease may be selected from among diseases in which a therapeutic effect can be obtained by administration of an anti-TNF ⁇ antibody, for example, adalimumab.
  • the disease may be an immune-related disease, for example, arthritis (eg, rheumatoid arthritis, psoriatic arthritis, idiopathic arthritis, osteoarthritis-related arthritis, etc.), axial spondyloarthritis (eg, ankylosing spondylitis, severe other than ankylosing spondylitis) axial spondyloarthritis, etc.), Crohn's disease (e.g., adult (age 18+) Crohn's disease, pediatric (6-17 years old) Crohn's disease, etc.), psoriasis (e.g., adult (age 18+) or pediatric (4-17 years old) plaque psoriasis), ulcerative colitis, Behçet's enterocolitis, rhinitis suppurative, uveitis
  • the subject in need of administration of the anti-TNF ⁇ antibody, such as adalimumab, will be significantly treated (removed, alleviated, alleviated, or ameliorated, etc.) by administration of the anti-TNF ⁇ antibody, such as adalimumab.
  • the subject may have a disease or disorder that may be The disease or disorder may be selected from the diseases described above.
  • the pharmaceutical composition provided herein may be administered by a parenteral route.
  • parenteral administration eg, injection
  • it may be administered by intravenous administration or subcutaneous administration.
  • Parenteral administration may be by bolus injection or continuous infusion.
  • the pharmaceutical composition provided herein may be formulated in a formulation suitable for the route of administration.
  • the pharmaceutical composition may be formulated as an injection, injectable ready-to-use, etc., but is not limited thereto.
  • the pharmaceutical composition is formulated such that the total amount or pharmaceutically effective amount of the included anti-TNF ⁇ antibody, such as adalimumab, is included in one formulation, or two or more (eg, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10) may be formulated to be included in a divided formulation.
  • the formulated composition may be included in the unit dosage form of the device described above.
  • the pharmaceutical composition includes the entire amount of an anti-TNF ⁇ antibody, such as adalimumab, contained in one formulation at a time (eg, within 1 minute, within 30 seconds, within 20 seconds, or within 10 seconds).
  • a time eg, within 1 minute, within 30 seconds, within 20 seconds, or within 10 seconds.
  • administered in the body It may be administered to the body slowly for 5 minutes or more, 10 minutes or more, 30 minutes or more, 60 minutes or more, 90 minutes or more, 120 minutes or more, 150 minutes or more, 180 minutes or more, 210 minutes or more, or 240 minutes or more,
  • the present invention is not limited thereto.
  • the administration target of the pharmaceutical composition may be selected from mammals including primates (humans, etc.), rodents (mouse, rat, guinea pig, hamster, rabbit, etc.), cat, dog, pig, cow, horse, and the like.
  • a pharmaceutical composition provided herein or a pharmaceutically effective amount of an anti-TNF ⁇ antibody (eg, adalimumab) contained therein may be effective in a desired pharmacological effect, such as elimination, alleviation, alleviation, or amelioration of symptoms. It may mean an amount or dosage in a composition that can It can vary depending on factors such as response sensitivity, previous therapy, clinical history, and the like. Dosage may be adjusted at the discretion of the attending physician.
  • the pharmaceutically effective amount may be administered at one time, or may be administered in two or more multiple doses.
  • the pharmaceutical composition, the content of the anti-TNF ⁇ antibody is a desired effective amount, for example, about 200 mg or less, about 150 mg or less, about 100 mg or less, about 50 mg, or 40 mg administered 1 to 3 times per week over a period of at least 3 weeks at a dose that is conducive (e.g., 0.8 mL of a composition having an antibody concentration of 50 mg/ml or 0.4 mL of a composition having an antibody concentration of 100 mg/ml if the effective amount of the antibody is 40 mg) can be
  • the pharmaceutical formulation may be prepared in a general bulk formulation, and the components of the pharmaceutical composition may be adjusted to a higher concentration than the concentration required for administration, and may be appropriately diluted prior to administration.
  • the present invention provides an aqueous liquid composition, specifically a pharmaceutical composition, which enables a protein, such as an anti-TNF ⁇ antibody, to stably maintain its physical, chemical, and/or biological efficacy, thereby providing a polymer and It is possible to stably maintain the pharmacological effect of the protein by inhibiting the generation of aggregates, generation of fragments, denaturation into charged variants, and oxidation of amino acid residues.
  • a protein such as an anti-TNF ⁇ antibody
  • Figure 2a is a graph showing the %HMW of protein in the formulation under light load conditions according to the amino acid type and concentration of the antibody formulation according to an embodiment.
  • Figure 2b is a graph showing the %Monomer of the protein in the formulation under light load conditions according to the amino acid type and concentration of the antibody formulation according to an embodiment.
  • Figure 2c is a graph showing the %LMW of protein in the formulation under light load conditions according to the amino acid type and concentration of the antibody formulation according to an embodiment.
  • 11a to 11d are results of quality evaluation of a prefilled syringe prefilled with a protein (adalimumab; 50 mg/mL) formulation according to an embodiment tested by temperature excursions (11a: %HMW, 11b: % Total purity, 11c: TNF ⁇ binding activity, 11d: TNF ⁇ neutralizing activity).
  • 12a to 12e show the quality evaluation results of a prefilled syringe prefilled with a protein (adalimumab; 50 mg/mL) formulation according to an embodiment tested for storage stability at room temperature (12a: %HMW, 12b: % Total purity, 12c: %Main, 12d: TNF ⁇ binding activity, 12e: TNF ⁇ neutralizing activity).
  • SE-HPLC Size Exclusion-High Performance Liquid Chromatography analysis was performed using Waters' HPLC system according to the manufacturer's manual. A total of three peaks are separated according to the retention time (molecular weight of the protein), and these three peaks are HMW peak (protein aggregation), monomer in the order of the shorter retention time (larger protein molecular weight). peak, and LMW peak (proteolysis).
  • the formulation was subjected to a sample stability test for light load (Photo-stress) under the conditions of Table 1 below.
  • Cool White Fluorescent Lamp ⁇ 1.2 M lux hours Cool White Fluorescent Lamp: ⁇ 1.2 M lux hours N/A (Not applicable) Near Ultraviolet Lamp: ⁇ 200 Watt hours/square meter Near Ultraviolet Lamp: ⁇ 200 Watt hours/square meter Chamber Environmental Conditions: 5 ⁇ 3°C Chamber Environmental Conditions: 25 ⁇ 2°C/60 ⁇ 5% RH (relative humidity) Chamber Environmental Conditions: 25 ⁇ 2°C/60 ⁇ 5% RH (relative humidity)
  • the % oxidation rate of amino acid residues in the protein included in the formulation was measured using Waters' liquid-chromatography-mass spectrometry (LC-MS) at the 256th methionine of the adalimumab heavy chain ( The mass of amino acid residues (methionine) was measured. After performing the LC-MS experiment, the relative %Oxidation value was analyzed using the MassLynxTM program.
  • LC-MS Waters' liquid-chromatography-mass spectrometry
  • Relative % oxidation (control intensity of oxidized peptide*100)/ ⁇ (control intensity of non-oxidized peptide)+(control intensity of oxidized peptide) ⁇
  • CEX-HPLC Cation Exchange-High Performance Liquid Chromatography
  • Acidic%(content ratio of Acidic variants, %Acidic) ⁇ area of acidic/area of (acidic + main + basic) ⁇ *100)
  • the icIEF (imaged capillary isoelectric focusing) analysis method identifies the charge variant of a protein according to the isoelectric point (pI) of a capillary containing an amphoteric electrolyte.
  • pI isoelectric point
  • iCE3 the manufacturer Acidic isoform, main isoform, and basic isoform were analyzed and performed according to the manual of
  • HACH Model 2100AN Way Explanation visible features color Visual inspection Color evaluation of samples using Brown standard B1-B8 clarity Turbidity measurement (HACH Model 2100AN) Assess the transparency of the sample visible particles visual inspection Determination of the number of visible particles in a sample pH pH pH measurement (Thermo Scientific Orion star A211) Assessing the pH of the sample chemical analysis protein concentration A 280 measurement (UV-VIS spectrophotometer) Assessing protein (antibody) concentration in a sample physicochemical analysis HMW impurities SE-HPLC Measurement of high molecular weight (HMW) impurity content ratio in sample overall purity CE-SDS Determination of total impurities in the sample LMW impurities CE-SDS Determination of content ratio of low molecular weight (LMW) impurities (eg NGHC) in a sample Charge isoforms CEX-HPLC, icIEF Determination of charge variants including acidic, main, and basic variants subvisible particles particulate HIAC 9703 + HRLD-
  • the pH of the samples was measured using a Thermo Scientific Orion star A211 (combination of pH electrode and temperature probe; Thermo Scientific) adjusted to pH 4, 7, and 10 prior to use.
  • Protein concentration was measured using absorbance at 280 nm wavelength. Specifically, all samples tested were diluted to a concentration of 1 mg/mL, based on the expected concentration of each sample in 0.9% (w/v) NaCl solution, and the absorbance at 280 nm (A280) was measured by UV-VIS It was measured with a spectrophotometer (Agilent), and the obtained results were normalized using 0.9% (w/v) NaCl solution as a blank solution.
  • High molecular weight impurities in the sample were measured using size exclusion-high performance liquid chromatography (SE-HPLC) (Reference Example 1).
  • the overall purity of the sample was evaluated by measuring the prevalence of non-glycosylated heavy chain (NGHC) using capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfate (CE-SDS) under non-reducing conditions. did.
  • NGHC non-glycosylated heavy chain
  • CE-SDS capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfate
  • the charge variant level in the sample was measured using CEX-HPLC (Reference Example 4) and icIEF (Reference Example 5).
  • TNF- ⁇ binding activity of the antibody (adalimumab) contained in the sample was measured by CIBA (competitive inhibition binding assay) using FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer). TNF- ⁇ binding was measured by time-resolved fluorescence resonance energy transfer (TR-FRET).
  • Adalimumab was labeled with a fluorescent europium (Eu) chelate (PerkinElmer) and human TNF- ⁇ was labeled with a Cy5 fluorophore, and used for analysis. Eu-labeled adalimumab bound to Cy5-labeled TNF- ⁇ generates a fluorescence signal.
  • an antibody (adalimumab) in a fluorescently unlabeled sample When an antibody (adalimumab) in a fluorescently unlabeled sample is added thereto, the unlabeled antibody competes with Eu-labeled adalimumab for binding to Cy5-labeled TNF- ⁇ . Therefore, as the antibody in the sample binds to Cy5-labeled TNF- ⁇ , the generation of fluorescence is inhibited, and the measured fluorescence signal level is inversely proportional to the binding level of the unlabeled antibody in the sample to TNF- ⁇ .
  • Eu-labeled adalimumab and Cy5-labeled TNF- ⁇ at a predetermined concentration and volume were sequentially added to an assay plate containing a reference standard and sample, and incubated with gentle stirring at room temperature, fluorescence generated Signal levels were measured by time-resolved fluorimetry (EnVisionTM, PerkinElmer).
  • the TNF- ⁇ binding activity of adalimumab in the sample was calculated as a relative value (% relative binding activity) to a reference standard using Parallel Line Analysis (PLA) software (Stegmann Systems).
  • the reference standard means a reference material having a reference value assigned to 100%, and by comparing and analyzing the dose curves of the sample and the standard through the PLA program, % relative binding activity (% relative binding) activity) can be calculated.
  • the TNF- ⁇ neutralizing activity of the antibody (adalimumab) contained in the sample was measured using a luciferase reporter gene system.
  • a cell line engineered to contain a luciferase reporter gene (293-NF- ⁇ B-luc cell line (CVCL_KS34) was transfected with human NF upstream of a luciferase reporter gene.
  • a cell line engineered to include a - ⁇ B response element, TNF- ⁇ binds to TNFR on the cell surface, thereby activating NF- ⁇ B signaling and promoting luciferase reporter gene expression).
  • Particles with an average particle diameter of 2 ⁇ m or more, 5 ⁇ m or more, 8 ⁇ m or more, 10 ⁇ m or more, and 25 ⁇ m or more were counted by HIAC 9703+ and HRLD 400 instrument (Beckman Coulter, Inc.).
  • endotoxin activates Limulus Amebocyte Lysate (LAL) to cause gelation
  • endotoxin was detected and quantified using a Bio Tek Elx808 IU Microplate Reader System (Bio Tek Instruments).
  • the type and concentration range of the amino acid having a favorable effect on the stability of the protein formulation was identified. Specifically, for a formulation containing a high concentration of protein, light stability under light load conditions was confirmed in terms of antioxidant effect and anti-aggregation effect.
  • Anti-TNF ⁇ antibody (Adalimumab; anti-TNF ⁇ monoclonal antibody; CAS Registry Number: 331731-18-1) 100 mg/mL as a protein, and an aqueous liquid formulation having the composition shown in Table 3 below was prepared. :
  • PS 20 polysorbate
  • PS 80 polysorbate 80
  • the oxidation rate (%Met 256 ) of Met 256 (the 256th methionine residue) in the protein under light load was measured.
  • the light load conditions refer to Reference Example 2, and the oxidation rate (% Met 256 ) of Met 256 in the protein was measured with reference to Reference Example 3.
  • the oxidation rate of Met 256 and its change according to the type of amino acid under the light exposure condition appeared in the order Arg-HCl > Amino acid-free > His, and the light stability of the formulation was affected by the amino acid-free formulation and Arg-HCl It was found that the histidine containing formulation was more suitable than the containing formulation.
  • the histidine-containing formulation had the same composition as the commercially available Humira® 100 mg/mL (pH 5.2, 4.2% mannitol, 0.1% PS 80) and amino acid (Met 256) compared to the amino acid-free formulation (Sample No. 7). ) oxidation rate and its change amount were significantly low, confirming that the antioxidant effect was excellent.
  • histidine has activity as an antioxidant.
  • the histidine content in the antibody formulation is greater than or equal to 10 mM and less than or equal to 80 mM (eg, about 59 mM), the antioxidant effect was most excellent.
  • the His concentration has a better anti-aggregation effect than 59 mM.
  • the %Monomer and %LMW results also showed that the formulations containing histidine (Sample Nos. 1, 2, 5, and 6) did not contain amino acids or contained amino acids other than histidine (eg, arginine). It shows that the aggregation effect is excellent.
  • Anti-TNF ⁇ antibody (Adalimumab; anti-TNF ⁇ monoclonal antibody; CAS Registry Number: 331731-18-1) 50 mg/mL as a protein, and an aqueous liquid formulation having the composition shown in Table 8 below was prepared. :
  • the oxidation rate (%Met 256 ) of Met 256 (the 256th methionine residue), which is known as the main oxidized site in the protein under light load conditions, was measured. measured.
  • the light load conditions refer to Reference Example 2, and the oxidation rate (%Met 256 ) of Met 256 in the protein was measured with reference to Reference Example 3.
  • the histidine-containing formulation had 24.50% lower %Met 256 than the histidine-free formulation even in the formulation with a low protein concentration under the light exposure condition.
  • the histidine-containing formulation was ⁇ %Met than the histidine-free formulation. It was confirmed that 256 was 25.90% ( ⁇ %Met 256 compared to the basal group) and 25.25% ( ⁇ %Met 256 compared to the dark control group) lower.
  • anti-TNF ⁇ antibody Adalimumab; anti-TNF ⁇ monoclonal antibody; CAS Registry Number: 331731-18-1
  • 50mg/mL is included as a protein and an aqueous liquid formulation having the composition shown in Table 10 was prepared:
  • the formulations containing polysorbate 20 (Samples 1 to 4) had an initial %HMW of 0.48-0.51% when the concentration was increased, while polysorbate 80 containing The formulations (samples 5 to 8) showed that when the concentration was increased, the initial %HMW started from 0.49% and increased to 0.68%.
  • the initial %HMW value of the formulation containing 0.2% polysorbate 20 (Sample 4) was 0.17% lower than that of the formulation containing 0.2% polysorbate 80 (Sample 8), and the 2nd week % of the formulation containing 0.2% polysorbate 20 (Sample 8)
  • the HMW value was 0.09% lower than that of the formulation containing 0.2% polysorbate 80.
  • freeze-thaw conditions Freeze/thaw, 5 cycle; FT5; each cycle: 'Freeze at -70°C ⁇ 10°C for 18 hours or more (Freeze)' + 'Room temperature (25) % HMW (High molecular weight %) of the protein in thaw') for 1 hour or more at °C
  • Freeze/thaw 5 cycle
  • FT5 FT5; each cycle: 'Freeze at -70°C ⁇ 10°C for 18 hours or more (Freeze)' + 'Room temperature (25) % HMW (High molecular weight %) of the protein in thaw') for 1 hour or more at °C
  • the average value of the results obtained by repeating the test three times is shown in Table 12 and FIG. 5 below.
  • the formulations containing polysorbate 20 when the concentration was increased, the initial %HMW was maintained at 0.48-0.51%, while polysorbate 80 containing The formulations (samples 5 to 8) showed that when the concentration was increased, the initial %HMW started from 0.49% and increased to 0.68%.
  • the formulation containing 0.2% polysorbate 20 compared to the formulation containing 0.2% polysorbate 80 (Sample 8), the Initial %HMW value and the %HMW value after F5 were 0.17% and 0.1% lower, respectively. , it was confirmed that the stability was excellent.
  • test formulations and control formulations of the following composition were prepared:
  • Test formulation 1 adalimumab 50 mg/ml, pH 5.2, 10 mM Na-citrate, 59 mM histidine, 2.5% (w/v) sorbitol, 0.08% (w/v) polysorbate 20;
  • Test formulation 2 adalimumab 100 mg/ml, pH 5.2, 2.5 mM Na-citrate, 59 mM histidine, 2.5% (w/v) sorbitol, 0.08% (w/v) polysorbate 20;
  • Control formulation 1 (formulation of the same composition as Cyltezo®): adalimumab 50 mg/ml, pH 5.2, 24.7 mM Na-acetate, 8.1% trehalose, 0.1% polysorbate 80;
  • Control formulation 2 (formulation of the same composition as Amgevita®): adalimumab 50 mg/ml, pH 5.2, 10 mM acetic acid, 9.0% sucrose, 0.1% polysorbate 80
  • Control formulation 3 (formulation of the same composition as Cyltezo®, except that it contains 100 mg/ml instead of 50 mg/ml adalimumab): adalimumab 100 mg/ml, pH 5.2, 24.7 mM Na-acetate, 8.1% Trehalose, 0.1% Polysorbate 80;
  • Control Formulation 4 (formulation of the same composition as Amgevita®, except that it contained 100 mg/ml instead of 50 mg/ml adalimumab): adalimumab 100 mg/ml, pH 5.2, 10 mM acetic acid, 9.0% sucrose ose, 0.1% polysorbate 80;
  • Control formulation 5 (formulation of the same composition as Humira® (100 mg/mL) formulation): adalimumab 100 mg/ml, pH 5.2, 4.2% (w/v) mannitol, 0.1% (w/v) polysorbate bait 80.
  • % HMW High Molecular Weight (%): %HMW
  • test formulations containing histidine and polysorbate 20 contained histidine and polysorbate 20 at both protein concentrations of 50 mg/mL and 100 mg/mL. As compared to the control formulations without it, both %HMW and ⁇ %HMW at each measurement time point were significantly lower, confirming excellent stability.
  • % Acidic content of acid variants of the protein in the formulations at 0 weeks, 2 weeks, and 4 weeks ratio
  • test formulations containing histidine and polysorbate 20 were both histidine and polysorbate 20 at protein concentrations of 50 mg/mL and 100 mg/mL. Compared with the control formulations not containing it, both %Acidic and ⁇ %Acidic at each measurement time point were significantly lower, confirming excellent stability.
  • freeze-thaw conditions Freeze/thaw, 5 cycle; FT5; each cycle: 'Freeze at -70°C ⁇ 10°C for 18 hours or more (Freeze)' + 'Room temperature (25) °C) for 1 hour or longer thaw (thaw) ') of the protein was measured according to the icIEF analysis method according to Reference Example 5.
  • the formulation containing polysorbate 20 as a surfactant showed a lower ⁇ %Acidic value overall, compared to the formulation containing polysorbate 80.
  • the ⁇ %Acidic value of the polysorbate 20-containing formulation was about 2.5% or less, which was significantly lower than that of the polysorbate 80-containing formulation.
  • the formulation containing polysorbate 20 decreased the ⁇ %Acidic value as the concentration of polysorbate 20 increased, whereas the formulation containing polysorbate 80 had polysorbate 80.
  • the ⁇ % Acidic value tends to increase as the concentration of sorbate 80 increases. From these results, it can be confirmed that the formulation containing polysorbate 20 has better stability than the formulation containing polysorbate 80, and particularly when the concentration of polysorbate 20 is 0.08% or more, stability is excellent.
  • composition of the antibody formulation (sample) used in this example is as follows:
  • the antibody formulation tested in this example was filled and 3 cycles (each cycle: high temperature (30 ⁇ 2°C) exposure and low temperature (-5 ⁇ 3°C) exposure) Treated pre-filled syringes were analyzed for %HMW by SE-HPLC, %Total purity by non-reducing CE-SDS, TNF- ⁇ binding assay. 4 key quality attributes regarding % relative binding activity by assay) and % relative potency by cell based TNF- ⁇ neutralization assay (critical quality) In terms of attributes, CQA), compared with the baseline, no significant change was observed, and the results satisfied the stability acceptance criteria.
  • Example 4 For the formulation sample of Example 4 stored for 48 months under long-term storage conditions (5 ⁇ 3° C.), 0 days, 15 days, and 30 days storage under room temperature conditions (30 ⁇ 2° C. and 60 ⁇ 5% RH); The physical properties of Table 19 were measured at the time point of 30 days. A specific measurement method is the same as that performed in Example 4.
  • the antibody formulation samples tested in this Example were stored for 48 months at long-term storage conditions (5 ⁇ 3° C.), and then at room temperature conditions (30 ⁇ 2° C. and 60° C.). ⁇ 5% RH) for 30 days, %HMW by SE-HPLC, %Total purity by non-reducing CE-SDS, TNF- ⁇ binding assay 4 critical quality attributes regarding % relative binding activity by ) and % relative potency by cell based TNF- ⁇ neutralization assay (neutralization assay) , compared with the baseline (day 0) in terms of CQA), no significant change was observed, and the results satisfied the stability acceptance criteria.
  • %Main by icIEF was also compared with the baseline (day 0), and no significant change was observed, and the result satisfies the stability acceptance criteria.
  • the pharmaceutical composition of the present invention exhibits significantly improved patient convenience and longer commercial period compared to the original and its biosimilar.

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Abstract

안정성이 증진된 액상의 약제학적 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로, 단백질을 포함하는 안정한 액상의 약제학적 조성물이 제공된다.

Description

안정성이 증진된 액상 약제학적 조성물
안정성이 증진된 액상의 약제학적 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로, 단백질을 포함하는 안정한 액상의 약제학적 조성물에 관한 것이다.
종양괴사인자-알파(TNF-α)관련 자가면역 질환, 예컨대 예컨대 류머티스 관절염, 건선 및 기타 자가면역 질환의 치료가 FDA-승인 약물 예컨대 아달리무맙(휴미라(HUMIRA)®, 애브비 코포레이션(Abbvie Corporation))의 사용을 통해 달성되었다. 아달리무맙은 인간 TNF-α 활성을 억제하여 이것이 TNF 수용체를 활성화시키는 것을 방지함으로써, 자가면역 질환과 연관된 염증성 반응을 하향-조절하는 인간 모노클로날 항체이다. 아달리무맙에 대한 승인된 의학적 적응증은 류머티스 관절염, 건선성 관절염, 강직성 척추염, 크론병, 궤양성 결장염, 중등도 내지 중증의 만성 건선, 및 소아 특발성 관절염을 포함한다.
아달리무맙은 체내에서 TNF-α에 선택적으로 결합하여 종양괴사인자-알파에 의한 면역반응을 저해하는 재조합 인간 면역글로불린 G1 단일클론성 항체이다. 이러한 항체는 또한 D2E7로서 공지되어 있다. 아달리무맙은 1330개의 아미노산으로 이루어지고, 대략 148킬로달톤의 분자량을 갖는다. 아달리무맙은 미국 특허 제6,090,382호에 개시되고 특허청구되어 있으며, 이러한 개시는 본원에 이의 전문이 인용에 의해 포함되어 있다.
항체와 같은 단백질 의약품의 경우, 저장 및/또는 보관기간 동안 그 생리활성을 잃지 않고, 단백질이 단편화 및/또는 응집이나 입자화되지 않고, 산화/환원 등의 변성이 일어나지 않도록 적절한 제형으로 제조하는 것이 매우 중요하다. 따라서 여러 단백질 의약품의 제형에 대한 연구가 활발하게 일어나고 있다.
본 발명에서는 아달리무맙(Adalimumab) 바이오시밀러(biosimilar) 개발 시, 항체 단백질의 불안정성을 감소시킬 수 있는 안정한 제형을 개발하는 것을 목적으로 한다.
이에, 본 발명에서는 단백질 약물의 안정성을 증진시키기 위한 수성(aqueous) 액상 조성물, 구체적으로는 단백질 약물을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
일 예는
항-TNFα 항체;
히스티딘
; 및
폴리소르베이트 20
을 포함하고,
pH가 pH가 약 4.0 내지 약 8.0 또는 약 5.0 내지 약 5.5인, 약제학적 조성물을 제공한다.
상기 약제학적 조성물은 다음 중 하나 이상의 특징을 갖는 것일 수 있다:
(i) 히스티딘을 포함하지 않는(Histidine-free) 조성물과 비교하여 광 안정성이 개선; 및
(ii) 폴리소르베이트 20 대신 폴리소르베이트 80을 포함하는(polysorbate 80-containing) 조성물과 비교하여 열 안정성, 동결 용융 안정성, 또는 이들 모두가 개선.
상기 히스티딘을 포함하지 않는(Histidine-free)은 히스티딘을 검출 가능한 양으로 포함하지 않거나 유의미한 효과를 나타낼 정도의 양으로 포함하지 않음을 의미하는 것으로, 히스티딘을 완전히 포함하지 않거나(약 0 mM), 실질적으로 포함하지 않는 것(예컨대 약 50 nM 이하, 약 40 nM 이하, 약 30 nM 이하, 약 20 nM 이하, 약 10 nM 이하, 약 5 nM 이하, 약 1 nM 이하)을 의미한다.
다른 예는 상기 약제학적 조성물을 포함하고, 상기 약제학적 조성물은 온도 변화에 대한 안정성을 갖는, 컨테이너를 제공한다.
본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물은 완충액을 추가로 포함하는 것일 수 있다. 상기 완충액은 pH가 약 4.0 내지 약 8.0 또는 pH 약 5.0 내지 약 5.5인 것일 수 있다. 상기 완충액은 시트레이트, 포스페이트, 아세테이트, 및 숙시네이트로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상 또는 2종 이상 (예컨대, 1종, 2종, 3종, 또는 4종)일 수 있다. 일 예에서, 상기 완충액은, 시트레이트를 포함하는 것일 수 있다. 다른 예에서, 상기 완충액은 포스페이트, 숙시네이트, 및 아세테이트로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함하는 것일 수 있다. 이 때, 상기 완충액은 시트레이트를 포함하지 않는 것일 수 있다. 일 구체예에서, 상기 완충액은 포스페이트를 포함하는 것일 수 있다. 다른 구체예에서, 상기 완충액은 포스페이트를 포함하고 시트레이트를 포함하지 않는 것일 수 있다. 다른 구체예에서 상기 완충액은 (1) 포스페이트 및, (2) 숙시네이트 또는 아세테이트를 포함하는 것일 수 있다. 다른 예에서, 상기 완충액은 (1) 포스페이트 및, (2) 숙시네이트 또는 아세테이트를 포함하고, 시트레이트를 포함하지 않는 것일 수 있다.
본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물은 폴리올을 추가로 포함하는 것일 수 있다. 본 발명에서 상기 폴리올은 등장화제(Tonicity Agent) 또는 안정화제(stabilizer)인 것일 수 있다. 상기 폴리올은 당 및 당알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있으며, 구체적으로, 솔비톨, 만니톨, 메글루민, 트레할로오스, 슈크로오스, 말토오스, 락토오스, 글루코오스, 자일리톨, 아라비톨, 에리트리톨, 락티톨, 말티톨, 이노시톨 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다. 일 예에서, 상기 폴리올은 솔비톨, 만니톨, 또는 이의 조합일 수 있다. 일 예에서, 상기 폴리올은 솔비톨을 포함하고, 솔비톨을 제외한 당 및 당알코올 (예컨대, 만니톨, 메글루민, 트레할로오스, 슈크로오스, 말토오스, 락토오스, 글루코오스, 자일리톨, 아라비톨, 에리트리톨, 락티톨, 말티톨, 이노시톨 등) 중 선택된 하나 이상 또는 이들 모두를 포함하지 않는 것, 예컨대, 만니톨을 포함하지 않는 것일 수 있다. 다른 예에서, 상기 폴리올은 만니톨을 포함하고, 만니톨을 제외한 당 및 당알코올 (예컨대, 솔비톨, 메글루민, 트레할로오스, 슈크로오스, 말토오스, 락토오스, 글루코오스, 자일리톨, 아라비톨, 에리트리톨, 락티톨, 말티톨, 이노시톨 등) 중 선택된 하나 이상 또는 이들 모두를 포함하지 않는 것, 에컨대, 솔비톨을 포함하지 않는 것일 수 있다.
본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물은 폴리소르베이트 20을 제외한 폴리소르베이트류 (예컨대, 폴리소르베이트 80)을 포함하지 않는 것일 수 있다.
상기 약제학적 조성물은 완충액 및 폴리올을 추가로 포함하는 것일 수 있다. 상기 완충액 및 폴리올은 앞서 설명한 바와 같다.
일 예에서, 상기 약제학적 조성물은 시트레이트 및 솔비톨을 추가로 포함하는 것일 수 있다. 다른 예에서, 상기 약제학적 조성물은 시트레이트 및 솔비톨을 추가로 포함하고, 솔비톨을 제외한 당 및 당알코올 중 선택된 하나 이상 또는 이들 모두를 포함하지 않는 것일 수 있다.
다른 예에서, 상기 약제학적 조성물은 포스페이트 및 만니톨을 추가로 포함하는 것일 수 있다. 다른 예에서, 상기 약제학적 조성물은 포스페이트 및 만니톨을 추가로 포함하고, 시트레이트를 포함하지 않는 것일 수 있다. 다른 예에서, 상기 약제학적 조성물은 포스페이트 및 만니톨을 추가로 포함하고, 만니톨을 제외한 당 및 당알코올 중 선택된 하나 이상 또는 이들 모두를 포함하지 않는 것일 수 있다. 다른 예에서, 상기 약제학적 조성물은 포스페이트 및 만니톨을 추가로 포함하고, 시트레이트를 포함하지 않고, 만니톨을 제외한 당 및 당알코올 중 선택된 하나 이상 또는 이들 모두를 포함하지 않는 것일 수 있다.
다른 예에서, 상기 약제학적 조성물은 (1) 포스페이트, (2) 숙시네이트 또는 아세테이트, 및 (3) 만니톨을 추가로 포함하는 것일 수 있다. 다른 예에서, 상기 약제학적 조성물은 (1) 포스페이트, (2) 숙시네이트 또는 아세테이트, 및 (3) 만니톨을 추가로 포함하고, 시트레이트를 포함하지 않는 것일 수 있다. 다른 예에서, 상기 약제학적 조성물은 (1) 포스페이트, (2) 숙시네이트 또는 아세테이트, 및 (3) 만니톨을 추가로 포함하고, 만니톨을 제외한 당 및 당알코올 중 선택된 하나 이상 또는 이들 모두를 포함하지 않는 것일 수 있다. 다른 예에서, 상기 약제학적 조성물은 (1) 포스페이트, (2) 숙시네이트 또는 아세테이트, 및 (3) 만니톨을 추가로 포함하고, 시트레이트를 포함하지 않고, 만니톨을 제외한 당 및 당알코올 중 선택된 하나 이상 또는 이들 모두를 포함하지 않는 것일 수 있다.
다른 예는 상기 약제학적 조성물을 포함하는 디바이스 또는 컨테이너를 제공한다.
다른 예는 질병 치료를 위한, 상기 약제학적 조성물을 포함하는 디바이스 또는 컨테이너를 제공한다. 상기 질병은 항-TNFα 항체, 예컨대, 아달리무맙이 치료, 개선, 및/또는 예방 효과를 갖는 질병일 수 있다.
다른 예는 항-TNFα 항체, 예컨대, 아달리무맙의 투여를 필요로 하는 대상에게 상기 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 질병의 치료 방법을 제공한다. 상기 투여하는 단계는 상기 약제학적 조성물을 포함하는 디바이스 또는 컨테이너 사용하여 수행되는 것일 수 있다.
본 발명에서는 단백질 약물의 안정성을 증진시키기 위한 수성(aqueous) 액상 조성물, 구체적으로는 단백질 약물을 포함하는 액상 약제학적 조성물을 제공한다. 상기 수성 액상 조성물(액상 약제학적 조성물)은 하기 기재된 성분 및 잔량의 수성 매질 (물 (정제수), 생리식염수, 주사 용수 등)을 포함하는 것일 수 있다.
용어의 정의
용어 "약(about)" 또는 "대략(approximately)"은 일반적으로 주어진 값 또는 범위의 상하 20% 이내, 10% 이내, 5% 이내, 4% 이내, 3% 이내, 2% 이내 또는 1% 이내의 값 또는 범위를 포함하는 의미로 해석될 수 있다.
용어 "장기간 저장 안정성" 또는 "장기간 안정성"은 약제학적 조성물이 3개월 이상 동안, 6개월 이상 동안, 1년 이상 동안, 2년 이상 동안 안정한 상태로 저장할 수 있음을 의미할 수 있다. 일 예에서, 상기 "저장"은 약제학적 조성물을 액체로서 2 내지 8℃에서 저장하거나, -20℃에서 또는 더 낮은 온도로 냉동시키거나, 1회 이상 냉동되고 해동되는 등의 가혹 조건에서 수행되는 되는 경우를 모두 포함하는 개념으로 이해될 수 있다.
용어 "안정한 상태"는, 저장 기간 동안의 약제학적 조성물에 함유된 단백질(예컨대, 아달리무맙)의 생물학적 활성의 손실 및/또는 구조적 안정성의 손실 (예, 응집, 분해, 변성 (산성 또는 염기성), 산화 등) 정도가, 저장 초기와 비교하여, 20% 이하, 15% 이하, 10% 이하, 또는 5% 이하인 것을 의미하는 것으로 이해될 수 있다.
용어 "A를 포함하지 않는(free)" 또는 "A를 실질적으로 포함하지 않는(substantially free)"은 물질 A가 전혀 존재하지 않거나, 조성물의 특성에 실질적으로 어떠한 영향을 미치지 않으면서 미량으로 존재하는 것을 의미하는 것일 수 있다. 물질 A의 함량의 언급이 없는 경우, "검출 불가능한 양"을 의미하는 것으로 이해될 수 있다. 본 명세서에서 특별히 구별되어 기재되지 않는 한, "A를 포함하지 않는(free)"은 A가 전혀 존재하지 않는 경우를 포함하여 "A를 실질적으로 포함하지 않는(substantially free)" 경우를 포괄하는 의미로 해석될 수 있다.
(1) 항-TNFα 항체
본 발명에서 항-TNFα 항체는, TNFα에 결합하여 이의 생물학적 활성을 조절하는 항체를 말한다. 종양괴사인자-알파 (TNF alpha, TNFα)는 엔도톡신 등의 자극에 의해 단핵백혈구 및 대식세포 등의 다양한 종류의 세포에 의해 만들어지는 사이토카인이다. TNFα는 TNF 수용체를 활성화시켜 T-세포 활성화, 흉선세포 증식 등의 반응을 유도하는 역할을 하는 주요 염증성, 면역성, 병리생리학적 반응의 주요 매개체이다.
상기 항-TNF 알파 항체는 전장 항체 또는 이의 항원 결합 부위를 포함하는 항체 단편의 형태일 수 있으나, 특별히 이에 제한되지 않는다. 구체적으로 상기 항-TNFα 항체는, 인간 면역글로불린 G1 단일클론성 항체일 수 있으며, 보다 구체적으로는 아달리무맙(adalimumab)일 수 있다.
아달리무맙은 의약품으로 개발된 최초의 완전 인간항체로 파아지 디스플레이 기술을 적용하여 개발되었고 CDR에 돌연변이를 일으켜 친화력이 증강되었다. 아달리무맙은 D2E7이라고도 불리며, 1330개의 아미노산으로 이루어진 약 148kD의 분자량을 가지고 있다. 아달리무맙은 휴미라라는 상품명으로 판매되고 있으며, 휴미라는 류마티스 관절염 치료제로 판매허가를 받은 후 크론병, 강직성 척추염, 건선성 관절염, 궤양성 대장염 등의 치료에 사용되고 있으며, 상기 아달리무맙에 대한 더 자세한 정보는 공지의 데이터베이스에서 당업자가 용이하게 입수할 수 있다.
본 명세서에 사용된 바로서, 용어 "아달리무맙"은 또한, 폴리펩타이드 기능에 영향을 주지 않는 범위에서, 아미노산 구조가 변형되거나 (아미노산의 결실, 첨가, 및/또는 치환), 및/또는 당화 특성이 변형된 아달리무맙을 포함하는 의미로 해석될 수 있다.
본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물 내의 항-TNF 알파 항체는 치료학적 유효량으로 포함될 수 있다. 구체적으로, 약 25 내지 약 200 mg/ml, 약 25 내지 약 175 mg /ml, 약 25 내지 약 150 mg/ml, 약 25 내지 약 125 mg/ml, 약 25 내지 약 100 mg/ml, 약 25 내지 약 75 mg/ml, 약 25 내지 약 50 mg/ml, 약 30 내지 약 200 mg/ml, 약 30 내지 약 175 mg /ml, 약 30 내지 약 150 mg/ml, 약 30 내지 약 125 mg/ml, 약 30 내지 약 100 mg/ml, 약 30 내지 약 75 mg/ml, 약 30 내지 약 50 mg/ml, 약 50 내지 약 200 mg/ml, 약 50 내지 약 175 mg /ml, 약 50 내지 약 150 mg/ml, 약 50 내지 약 125 mg/ml, 약 50 내지 약 100 mg/ml, 약 75 내지 약 200 mg/ml, 약 75 내지 약 175 mg/ml, 약 75 내지 약 150 mg/ml, 약 75 내지 약 125 mg/ml, 약 75 내지 약 100 mg/ml, 약 100 내지 약 200 mg/ml, 약 100 내지 약 175 mg/ml, 약 100 내지 150 mg/ml, 약 100 내지 약 125 mg/ml, 약 150 내지 약 200 mg/ml, 약 150 내지 약 175 mg/ml, 약 50 mg/ml, 약 100 mg/ml, 또는 약 200 mg/ml일 수 있다.
(2) 아미노산
본 발명에서 제공되는 약제학적 조성물에 포함된 히스티딘은, 안정화제 또는 완충액의 기능을 할 수 있으며, 전체 약제학적 조성물 기준으로, 약 50 mM 이상, 약 51 mM 이상, 약 52 mM 이상, 또는 약 59 mM 이상의 농도, 예컨대 약 50 mM 내지 약 100 mM, 약 50 mM 내지 약 89 mM, 약 50 mM 내지 약 80 mM, 약 50 mM 내지 약 69 mM, 약 50 mM 내지 약 65 mM, 약 50 mM 내지 약 62 mM, 약 50 mM 내지 약 59 mM, 약 51 mM 내지 약 100 mM, 약 51 mM 내지 약 89 mM, 약 51 mM 내지 약 80 mM, 약 51 mM 내지 약 69 mM, 약 51 mM 내지 약 65 mM, 약 51 mM 내지 약 62 mM, 약 51 mM 내지 약 59 mM, 약 52 mM 내지 약 100 mM, 약 52 mM 내지 약 89 mM, 약 52 mM 내지 약 80 mM, 약 52 mM 내지 약 69 mM, 약 52 mM 내지 약 65 mM, 약 52 mM 내지 약 62 mM, 약 52 mM 내지 약 59 mM, 약 54 mM 내지 약 100 mM, 약 54 mM 내지 약 89 mM, 약 54 mM 내지 약 80 mM, 약 54 mM 내지 약 69 mM, 약 54 mM 내지 약 64 mM, 약 54 mM 내지 약 62 mM, 약 54 mM 내지 약 59 mM, 약 56 mM 내지 약 100 mM, 약 56 mM 내지 약 89 mM, 약 56 mM 내지 약 80 mM, 약 56 mM 내지 약 69 mM, 약 56 mM 내지 약 65 mM, 약 56 mM 내지 약 62 mM, 약 56 mM 내지 약 59 mM, 약 59 mM 내지 약 100 mM, 약 59 mM 내지 약 89 mM, 약 59 mM 내지 약 80 mM, 약 59 mM 내지 약 69 mM, 약 59 mM 내지 약 65 mM, 약 59 mM 내지 약 62 mM, 또는 약 59 mM의 농도로 포함될 수 있다.
상기 히스티딘은 히스티딘 및/또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 형태 (예컨대, 염산염 등) 및/또는 수화물 형태 (예컨대, 모노하이드레이트 등) (예컨대, 히스티딘 하이드로클로라이드 모노하이드레이트(Histidine hydrochloride monohydrate) 등)로 포함될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 명세서에서, 별도의 언급이 없는 한, 용어 "히스티딘"은 히스티딘, 이의 약학적으로 허용가능한 염 형태 (예컨대, 염산염 등), 및 이의 수화물 형태 (예컨대, 모노하이드레이트 등) (예컨대, 히스티딘 하이드로클로라이드 모노하이드레이트(Histidine hydrochloride monohydrate) 등)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것으로 해석될 수 있다.
본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물에 있어서, 상기 히스티딘은 항산화제(anti-oxidant agent), 항응집제(anti-aggregation agent), 또는 이들 모두로서 기능하는 것일 수 있다.
본 발명에서 제공되는 약제학적 조성물은 히스티딘을 제외한 아미노산 및 이들의 약학적으로 허용가능한 염으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상 (예컨대, 이들 모두)을 포함하지 않거나 실질적으로 포함하지 않는 것일 수 있다. 일 예에서, 본 발명에서 제공되는 약제학적 조성물은 아르기닌, 라이신, 프롤린, 글라이신, 메티오닌, 글루타민, 및 이들의 약학적으로 허용 가능한 염 (예컨대, 염산염, 수화물 등)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상 (예컨대, 이들 모두)을 포함하지 않거나 실질적으로 포함하지 않는 것일 수 있다.
(3) 계면활성제
본 발명에서 계면활성제는, 단백질을 액상 조성물 매질에 고르게 분산시킬 수 있는 약학적으로 허용 가능한 모든 계면활성제들로부터 선택된 것일 수 있다. 상기 계면활성제는 비이온성 계면활성제일 수 있으며, 구체적으로, 폴리소르베이트류(예컨대, polysorbate 20(polyoxyethylene (20) sorbitan monolaurate), polysorbate 40(polyoxyethylene (20) sorbitan monopalmitate), polysorbate 60(polyoxyethylene (20) sorbitan monostearate), polysorbate 65(polyoxyethylene (20) sorbitan tristearate), polysorbate 80(polyoxyethylene (20) sorbitan monooleate), polysorbate 85(polyoxyethylene 20 sorbitan trioleate)(상기 폴리옥시에틸렌 뒤의 수치 (20)은 옥시에틸렌기(-(CH2CH2O)-)의 총 개수를 의미함), 폴록사머(PEO-PPO-PEO 공중합체; PEO: poly(ethylene oxide), PPO: poly(propylene oxide)), 소르비탄 에스테르(예컨대, 소르비탄 폴리에톡시레이트(sorbitan polyethoxylates) 등), 폴리에틸렌-폴리프로필렌 글리콜, 폴리옥시에틸렌 화합물(예컨대, 폴리옥시에틸렌-스테아레이트, 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르(알킬: C1-C30), 폴리옥시에틸렌 모노라이릴 에테르, 알킬페닐 폴리옥시에틸렌 코폴리머(알킬: C1-C30) 등), 소듐 도데실 설페이트(sodium dodecyl sulphate, SDS) 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다. 보다 구체적으로, 보다 우수한 제형 안정성을 달성하기 위하여, 상기 계면활성제는 폴리소르베이트 20일 수 있다. 일 예에서, 본 발명의 제형은 폴리소르베이트 20을 포함하고, 폴리소르베이트 80을 포함하지 않는 것일 수 있다.
본 발명의 제형에서의 단백질의 안정성을 보다 증진시키기 위하여, 상기 약제학적 조성물에 포함된 계면활성제, 예컨대 폴리소르베이트 20의 함량은, 전체 약제학적 조성물 기준으로, 약 0.01%(w/v) 내지 약 0.2%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 0.1%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 0.08%(w/v), 약 0.03%(w/v) 내지 약 0.2%(w/v), 약 0.03%(w/v) 내지 약 0.1%(w/v), 약 0.03%(w/v) 내지 약 0.08%(w/v), 약 0.04%(w/v) 초과 및 약 0.2%(w/v) 이하, 약 0.04%(w/v) 초과 및 약 0.1%(w/v) 이하, 약 0.04%(w/v) 초과 및 약 0.08%(w/v) 이하, 약 0.05%(w/v) 내지 약 0.2%(w/v), 약 0.05%(w/v) 내지 약 0.1%(w/v), 약 0.05%(w/v) 내지 약 0.08%(w/v), 약 0.01%(w/v), 약 0.03%(w/v), 약 0.04%(w/v), 약 0.05%(w/v), 약 0.08%(w/v), 약 0.1%(w/v) 또는 약 0.2%(w/v)일 수 있다.
(4) 완충액
본 발명에서 완충액은, 제형의 pH를 조절하는 기능을 하는 것으로, 단백질 제형 제조에 통상적으로 사용되는 모든 완충액을 제한없이 사용할 수 있다. 구체적으로, 시트레이트, 포스페이트, 아세테이트, 숙시네이트, 및 이들의 약학적으로 허용 가능한 염 및/또는 수화물(예컨대, 모노하이드레이트(monohydrate) 등)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상 또는 2종 이상을 포함하는 것일 수 있다. 상기 약학적으로 허용 가능한 염은 나트륨염, 칼륨염, 숙신산염, 인산염 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서 별도의 언급이 없는 한, 용어 "시트레이트"는 시트레이트, 이의 약학적으로 허용 가능한 염(예컨대, 시트르산나트륨(sodium citrate)), 및 이의 수화물 (예컨대, 시트르산모노하이드레이트(citric acid monohydrate))로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상, 예컨대, 시트레이트, 시트르산나트륨, 및 시트르산모노하이드레이트로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상 (예컨대, 1종, 2종 또는 3종)을 의미하는 것으로 해석될 수 있다.
본 명세서에서 별도의 언급이 없는 한, 용어 "포스페이트"는 포스페이트, 이의 약학적으로 허용 가능한 염(예컨대, 나트륨염), 및 이의 수화물로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 의미하는 것으로 해석될 수 있다.
본 명세서에서 별도의 언급이 없는 한, 용어 "숙시네이트"는 숙시네이트, 이의 약학적으로 허용 가능한 염(예컨대, 나트륨염), 및 이의 수화물로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 의미하는 것으로 해석될 수 있다.
본 명세서에서 별도의 언급이 없는 한, 용어 "아세테이트"는 아세테이트, 이의 약학적으로 허용 가능한 염(예컨대, 나트륨염), 및 이의 수화물로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 의미하는 것으로 해석될 수 있다.
본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물에 포함되는 항-TNF 알파 항체 단백질의 안정성을 증진시키기 위하여, 상기 완충액은 pH가 약 4.0 내지 약 8.0인 것일 수 있으며, pH가 약 4.0 내지 약 7.5, 약 4.0 내지 약 7, 약 4.0 내지 약 6.5, 약 4.0 내지 약 6, 약 4.0 내지 약 5.5, 약 4.5 내지 약 7.5, 약 4.5 내지 약 7, 약 4.5 내지 약 6.5, 약 4.5 내지 약 6, 약 4.5 내지 약 5.5, 약 4.8 내지 약 7.5, 약 4.8 내지 약 7, 약 4.8 내지 약 6.5, 약 4.8 내지 약 6, 약 4.8 내지 약 5.6, 약 5.0 내지 약 7.5, 약 5.0 내지 약 7, 약 5.0 내지 약 6.5, 약 5.0 내지 약 6, 약 5.0 내지 약 5.5, 약 5.2 내지 약 7.5, 약 5.2 내지 약 7.2, 약 5.2 내지 약 7, 약 5.2 내지 약 6.8, 약 5.2 내지 약 6.6, 약 5.2 내지 약 6.5, 약 5.5 내지 약 7.5, 약 5.5 내지 약 7.2, 약 5.5 내지 약 7, 약 5.5 내지 약 6.8, 약 5.5 내지 약 6.6, 약 5.5 내지 약 6.5, 약 6.0 내지 약 7.5, 약 6.0 내지 약 7.2, 약 6.0 내지 약 7, 약 6.0 내지 약 6.8, 약 6.0 내지 약 6.6, 약 6.0 내지 약 6.5, 약 6.4 내지 약 7.5, 약 6.4 내지 약 7.2, 약 6.4 내지 약 7, 약 6.4 내지 약 6.8, 약 6.4 내지 약 6.6, 약 6.4 내지 약 6.5, 약 5.2, 약 5.3, 약 5.4, 또는 약 6.5인 것일 수 있다.
상기 완충액은, 전체 약제학적 조성물 기준으로, 약 0.1 mM 내지 약 50 mM, 약 0.1 mM 내지 약 40 mM, 약 0.1 mM 내지 약 30 mM, 약 0.1 mM 내지 약 20 mM, 약 0.1 mM 내지 약 12 mM, 약 0.1 mM 내지 약 10 mM, 약 0.1 mM 내지 약 7.8 mM, 약 0.1 mM 내지 약 6 mM, 약 0.1 mM 내지 약 4 mM, 약 0.1 mM 내지 약 3 mM, 약 0.1 mM 내지 약 2.7 mM, 약 1 mM 내지 약 50 mM, 약 1 mM 내지 약 40 mM, 약 1 mM 내지 약 30 mM, 약 1 mM 내지 약 20 mM, 약 1 mM 내지 약 12 mM, 약 1 mM 내지 약 10 mM, 약 1 mM 내지 약 7.8 mM, 약 1 mM 내지 약 6 mM, 약 1 mM 내지 약 4 mM, 약 1 mM 내지 약 3 mM, 약 1 mM 내지 약 2.7 mM, 약 2 mM 내지 약 50 mM, 약 2 mM 내지 약 40 mM, 약 2 mM 내지 약 30 mM, 약 2 mM 내지 약 20 mM, 약 2 mM 내지 약 12 mM, 약 2 mM 내지 약 10 mM, 약 2 mM 내지 약 7.8 mM, 약 2 mM 내지 약 6 mM, 약 2 mM 내지 약 2.7 mM, 약 2.5 mM 내지 약 50 mM, 약 2.5 mM 내지 약 40 mM, 약 2.5 mM 내지 약 30 mM, 약 2.5 mM 내지 약 20 mM, 약 2.5 mM 내지 약 12 mM, 약 2.5 mM 내지 약 10 mM, 약 2.5 mM 내지 약 7.8 mM, 약 2.5 mM 내지 약 6 mM, 약 2.7 mM 내지 약 50 mM, 약 2.7 mM 내지 약 40 mM, 약 2.7 mM 내지 약 30 mM, 약 2.7 mM 내지 약 20 mM, 약 2.7 mM 내지 약 12 mM, 약 2.7 mM 내지 약 10 mM, 약 2.7 mM 내지 약 7.8 mM, 약 2.7 mM 내지 약 6 mM, 약 2.7 mM 내지 약 5.4 mM, 약 3 mM 내지 약 50 mM, 약 3 mM 내지 약 40 mM, 약 3 mM 내지 약 30 mM, 약 3 mM 내지 약 20 mM, 약 3 mM 내지 약 12 mM, 약 3 mM 내지 약 10 mM, 약 3 mM 내지 약 7.8 mM, 약 3 mM 내지 약 6 mM, 약 3 mM 내지 약 5.4 mM, 약 1 mM, 약 2.5 mM, 약 2.6 mM, 약 2.7 mM, 약 2.8 mM, 약 2.9 mM, 약 4.8 mM, 약 4.9 mM, 약 5 mM, 약 5.1 mM, 약 5.2 mM, 약 5.3 mM, 약 5.4 mM, 약 7.2 mM, 약 7.3 mM, 약 7.4 mM, 약 7.5 mM, 약 7.6 mM, 약 7.7 mM, 약 7.8 mM, 약 9.8 mM, 또는 약 10 mM의 농도로 포함될 수 있다.
일 예에서, 상기 완충액은 시트레이트를 포함하고, 전체 약제학적 조성물 기준으로, 약 0.1 mM 내지 약 50 mM, 약 0.1 mM 내지 약 40 mM, 약 0.1 mM 내지 약 30 mM, 약 0.1 mM 내지 약 20 mM, 약 0.1 mM 내지 약 12 mM, 약 0.1 mM 내지 약 10 mM, 약 1 mM 내지 약 50 mM, 약 1 mM 내지 약 40 mM, 약 1 mM 내지 약 30 mM, 약 1 mM 내지 약 20 mM, 약 1 mM 내지 약 12 mM, 약 1 mM 내지 약 10 mM, 약 2 mM 내지 약 50 mM, 약 2 mM 내지 약 40 mM, 약 2 mM 내지 약 30 mM, 약 2 mM 내지 약 20 mM, 약 2 mM 내지 약 12 mM, 약 2 mM 내지 약 10 mM, 약 2.5 mM 내지 약 50 mM, 약 2.5 mM 내지 약 40 mM, 약 2.5 mM 내지 약 30 mM, 약 2.5 mM 내지 약 20 mM, 약 2.5 mM 내지 약 12 mM, 약 2.5 mM 내지 약 10 mM, 약 3 mM 내지 약 50 mM, 약 3 mM 내지 약 40 mM, 약 3 mM 내지 약 30 mM, 약 3 mM 내지 약 20 mM, 약 3 mM 내지 약 12 mM, 약 3 mM 내지 약 10 mM, 약 9.8 mM, 또는 약 10 mM의 농도로 포함될 수 있다.
다른 예에서, 상기 완충액은 포스페이트, 숙시네이트, 및 아세테이트로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상 (예컨대, 1종, 2종 또는 3종)을 포함할 수 있다.
일 예에서, 상기 완충액은 포스페이트를 포함할 수 있다. 다른 예에서, 상기 완충액은 포스페이트를 포함하고 시트레이트를 포함하지 않거나 실질적으로 포함하지 않는 것일 수 있다. 다른 예에서 상기 완충액은 (1) 포스페이트 및, (2) 숙시네이트 또는 아세테이트를 포함하는 것일 수 있다. 다른 예에서, 상기 완충액은 (1) 포스페이트 및, (2) 숙시네이트 또는 아세테이트를 포함하고, 시트레이트를 포함하지 않거나 실질적으로 포함하지 않는 것일 수 있다.
상기 포스페이트 함량은, 전체 약제학적 조성물 기준으로, 약 0.1 mM 내지 약 10 mM, 약 0.1 mM 내지 약 7.8 mM, 약 0.1 mM 내지 약 6 mM, 약 0.1 mM 내지 약 4 mM, 약 0.1 mM 내지 약 3 mM, 약 0.1 mM 내지 약 2.7 mM, 약 1 mM 내지 약 10 mM, 약 1 mM 내지 약 7.8 mM, 약 1 mM 내지 약 6 mM, 약 1 mM 내지 약 4 mM, 약 1 mM 내지 약 3 mM, 약 1 mM 내지 약 2.7 mM, 약 2 mM 내지 약 10 mM, 약 2 mM 내지 약 7.8 mM, 약 2 mM 내지 약 6 mM, 약 2 mM 내지 약 2.7 mM, 약 2.5 mM 내지 약 10 mM, 약 2.5 mM 내지 약 7.8 mM, 약 2.5 mM 내지 약 6 mM, 약 2.5 mM 내지 약 2.7 mM, 약 1 mM, 약 2.5 mM, 약 2.6 mM, 약 2.7 mM, 약 2.8 mM, 또는 약 2.9 mM일 수 있다.
상기 숙시네이트 및/또는 아세테이트의 함량은, 전체 약제학적 조성물 기준으로, 약 0.1 mM 내지 약 20 mM, 약 0.1 mM 내지 약 12 mM, 약 0.1 mM 내지 약 10 mM, 약 0.1 mM 내지 약 7.8 mM, 약 0.1 mM 내지 약 6 mM, 약 0.1 mM 내지 약 5.4 mM, 약 1 mM 내지 약 20 mM, 약 1 mM 내지 약 12 mM, 약 1 mM 내지 약 10 mM, 약 1 mM 내지 약 7.8 mM, 약 1 mM 내지 약 6 mM, 약 1 mM 내지 약 5.4 mM, 약 2 mM 내지 약 20 mM, 약 2 mM 내지 약 12 mM, 약 2 mM 내지 약 10 mM, 약 2 mM 내지 약 7.8 mM, 약 2 mM 내지 약 6 mM, 약 2 mM 내지 약 5.4 mM, 약 2.5 mM 내지 약 20 mM, 약 2.5 mM 내지 약 12 mM, 약 2.5 mM 내지 약 10 mM, 약 2.5 mM 내지 약 7.8 mM, 약 2.5 mM 내지 약 6 mM, 약 2.5 mM 내지 약 5.4 mM, 약 3 mM 내지 약 20 mM, 약 3 mM 내지 약 12 mM, 약 3 mM 내지 약 10 mM, 약 3 mM 내지 약 7.8 mM, 약 3 mM 내지 약 6 mM, 약 3 mM 내지 약 5.4 mM, 약 4.8 mM, 약 4.9 mM, 약 5 mM, 약 5.1 mM, 약 5.2 mM, 약 5.3 mM, 또는 약 5.4 mM일 수 있다.
(5) 폴리올
본 발명에서 폴리올은, 당 및 당알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있으며, 예컨대, 솔비톨, 만니톨, 메글루민, 트레할로오스, 슈크로오스, 말토오스, 락토오스, 글루코오스, 자일리톨, 아라비톨, 에리트리톨, 락티톨, 말티톨, 이노시톨 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다. 본 발명에서 상기 폴리올, 예컨대 솔비톨은 등장화제(Tonicity Agent) 또는 안정화제(stabilizer) 로서 사용되는 것일 수 있다. 다른 예에서, 상기 폴리올, 예컨대, 만니톨은 등장화제(Tonicity Agent) 또는 안정화제(stabilizer)로서 사용되는 것일 수 있다.
일 예에서, 상기 폴리올은 솔비톨, 만니톨, 또는 이의 조합일 수 있다. 일 예에서, 상기 폴리올은 솔비톨을 포함하고, 솔비톨을 제외한 당 및 당알코올 중 선택된 하나 이상 또는 이들 모두를 포함하지 않거나 실질적으로 포함하지 않는 것일 수 있다.
다른 예에서, 상기 폴리올은 만니톨을 포함하고 만니톨을 제외한 당 및 당알코올 중 선택된 하나 이상 또는 이들 모두를 포함하지 않거나 실질적으로 포함하지 않는 것일 수 있다.
본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물에서 단백질의 안정성을 보다 증진시키거나, 등장화제로서 작용하기 위하여, 상기 폴리올의 함량은, 전체 약제학적 조성물 기준으로, 약 0.01 내지 약 10 %(w/v), 약 0.01 내지 약 8 %(w/v), 약 0.01 내지 약 6 %(w/v), 약 0.01 내지 약 4 %(w/v), 약 0.01 내지 약 3.5 %(w/v), 약 0.01 내지 약 3.3 %(w/v), 약 0.01 내지 약 2.6 %(w/v), 약 0.01 내지 약 2 %(w/v), 약 0.01 내지 약 1 %(w/v), 약 0.05 내지 약 10 %(w/v), 약 0.05 내지 약 8 %(w/v), 약 0.05 내지 약 6 %(w/v), 약 0.05 내지 약 4 %(w/v), 약 0.05 내지 약 3.5 %(w/v), 약 0.05 내지 약 3.3 %(w/v), 약 0.05 내지 약 2.6 %(w/v), 약 0.05 내지 약 2 %(w/v), 약 0.05 내지 약 1 %(w/v), 약 0.1 내지 약 10 %(w/v), 약 0.1 내지 약 8 %(w/v), 약 0.1 내지 약 6 %(w/v), 약 0.1 내지 약 4 %(w/v), 약 0.1 내지 약 3.5 %(w/v), 약 0.01 내지 약 3.3 %(w/v), 약 0.01 내지 약 2.6 %(w/v), 약 0.1 내지 약 2 %(w/v), 약 0.1 내지 약 1 %(w/v), 약 1 내지 약 10 %(w/v), 약 1 내지 약 8 %(w/v), 약 1 내지 약 6 %(w/v), 약 1 내지 약 4 %(w/v), 약 1 내지 약 3.5 %(w/v), 약 1 내지 약 3.3 %(w/v), 약 1 내지 약 2.6 %(w/v), 약 1 내지 약 2 %(w/v), 약 1.5 내지 약 10 %(w/v), 약 1.5 내지 약 8 %(w/v), 약 1.5 내지 약 6 %(w/v), 약 1.5 내지 약 4 %(w/v), 약 1.5 내지 약 3.5 %(w/v), 약 1.5 내지 약 3.3 %(w/v), 약 1.5 내지 약 2.6 %(w/v), 약 2 내지 약 10 %(w/v), 약 2 내지 약 8 %(w/v), 약 2 내지 약 6 %(w/v), 약 2 내지 약 4 %(w/v), 약 2 내지 약 3.5 %(w/v), 약 2 내지 약 3.3 %(w/v), 약 2 내지 약 2.6 %(w/v), 약 2.3 내지 약 10 %(w/v), 약 2.3 내지 약 8 %(w/v), 약 2.3 내지 약 6 %(w/v), 약 2.3 내지 약 4 %(w/v), 약 2.3 내지 약 3.5 %(w/v), 약 2.3 내지 약 3.3 %(w/v), 약 2.3 내지 약 2.6 %(w/v), 약 2.5 내지 약 10 %(w/v), 약 2.5 내지 약 8 %(w/v), 약 2.5 내지 약 6 %(w/v), 2.5 내지 약 4 %(w/v), 약 2.5 내지 약 3.5 %(w/v), 약 2.5 내지 약 3.3 %(w/v), 약 2.5 내지 약 3 %(w/v), 약 2.3%(w/v), 약 2.4%(w/v), 약 2.5%(w/v), 약 2.6%(w/v), 약 2.7%(w/v), 약 2.8%(w/v), 약 2.9%(w/v), 약 3%(w/v), 약 3.1%(w/v), 약 3.2%(w/v), 또는 약 3.3%(w/v)일 수 있다.
(6) pH
본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물의 pH는 약 4 내지 약 8인 것일 수 있으며, 구체적으로, pH가 약 4.0 내지 약 7.5, 약 4.0 내지 약 7, 약 4.0 내지 약 6.5, 약 4.0 내지 약 6, 약 4.0 내지 약 5.5, 약 4.5 내지 약 7.5, 약 4.5 내지 약 7, 약 4.5 내지 약 6.5, 약 4.5 내지 약 6, 약 4.5 내지 약 5.5, 약 4.8 내지 약 7.5, 약 4.8 내지 약 7, 약 4.8 내지 약 6.5, 약 4.8 내지 약 6, 약 4.8 내지 약 5.6, 약 5.0 내지 약 7.5, 약 5.0 내지 약 7, 약 5.0 내지 약 6.5, 약 5.0 내지 약 6, 약 5.0 내지 약 5.5, 약 5.2 내지 약 7.5, 약 5.2 내지 약 7.2, 약 5.2 내지 약 7, 약 5.2 내지 약 6.8, 약 5.2 내지 약 6.6, 약 5.2 내지 약 6.5, 약 5.5 내지 약 7.5, 약 5.5 내지 약 7.2, 약 5.5 내지 약 7, 약 5.5 내지 약 6.8, 약 5.5 내지 약 6.6, 약 5.5 내지 약 6.5, 약 6.0 내지 약 7.5, 약 6.0 내지 약 7.2, 약 6.0 내지 약 7, 약 6.0 내지 약 6.8, 약 6.0 내지 약 6.6, 약 6.0 내지 약 6.5, 약 6.4 내지 약 7.5, 약 6.4 내지 약 7.2, 약 6.4 내지 약 7, 약 6.4 내지 약 6.8, 약 6.4 내지 약 6.6, 약 6.4 내지 약 6.5, 약 5.0, 약 5.2, 약 5.3, 약 5.4, 약 5.5 또는 약 6.5인 것일 수 있다.
(7) 기타 첨가제
본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물은 암모늄염, 예컨대, 염화암모늄, 황산암모늄, 탄산암모늄, 질산암모늄 등으로 구성된 군에서 선택되는 1종 이상을 포함하지 않거나 실질적으로 포함하지 않는 것일 수 있다. 다른 예에서, 본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물은 염화나트륨, 황산나트륨, 염화칼륨, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 에틸렌다이아민테트라아세트산(ethylenediaminetetraacetic acid, EDTA), 또는 이들 모두를 포함하지 않거나 실질적으로 포함하지 않는 것일 수 있다.
또한, 상기 약제학적 조성물은 약학적으로 허용되는 담체, 희석제, 및/또는 부형제를 추가로 포함할 수 있다. 상기 약학적으로 허용되는 담체는 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 슈크로오스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알지네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물(예컨대, 정제수), 생리식염수, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘, 미네랄 오일 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함할 수 있으며, 이에 제한되는 것은 아니다.
(8) 물성
본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물은 히스티딘을 포함하지 않는 조성물, 폴리소르베이트 20 대신 폴리소르베이트 80을 포함하는 조성물, 또는 이들 모두와 비교하여 안정성이 우수한 것일 수 있다.
일 예에서, 상기 히스티딘을 포함하지 않는 조성물은 히스티딘을 완전히 포함하지 않거나(약 0 mM), 실질적으로 포함하지 않는 것일 수 있다.
일 예에서, 상기 폴리소르베이트 20 대신 (폴리소르베이트 20을 대체하여) 폴리소르베이트 80을 포함하는 조성물은 폴리소르베이트 80를, 전체 약제학적 조성물을 기준으로, 0.01 내지 0.2%(w/v), 0.01 내지 0.15%(w/v), 0.01 내지 0.12%(w/v), 0.01 내지 0.1%(w/v), 0.04 내지 0.2%(w/v), 0.04 내지 0.15%(w/v), 0.04 내지 0.12%(w/v), 0.04 내지 0.1%(w/v), 0.08 내지 0.2%(w/v), 0.08 내지 0.15%(w/v), 0.08 내지 0.12%(w/v), 또는 0.08 내지 0.1%(w/v)의 양으로 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
안정성
본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물은 안정성이 우수한 것을 특징으로 한다. 본 명세서에서 "안정성이 우수하다" 또는 "안정하게 유지된다" 함은 보관 시에 조성물 내의 단백질의 구조, 및/또는 물리적, 화학적, 및/또는 생물학적 특성이 유지됨을 의미할 수 있다(예컨대, 보관 중의 낮은 단백질 중합체 형성률, 낮은 단백질 응집률, 낮은 단백질 분해율, 높은 단백질(약물) 함유율, 낮은 변성률, 낮은 아미노산(예컨대, 메티오닌 잔기) 산화 수준 등).
본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물은 다음 중 하나 이상의 특징을 갖는 것일 수 있다:
(i) 히스티딘을 포함하지 않는(Histidine-free) 조성물과 비교하여 광 안정성이 개선; 및
(ii) 폴리소르베이트 20 대신 폴리소르베이트 80을 포함하는(polysorbate 80-containing) 조성물과 비교하여 열 안정성, 동결 용융 안정성, 또는 이들 모두가 개선.
상기 광 안정성은 광 부하(photo stress) 조건에서의 조성물 내의 단백질의 구조, 및/또는 물리적, 화학적, 및/또는 생물학적 특성이 유지됨을 의미할 수 있다(예컨대, 보관 중의 낮은 단백질 중합체 형성률, 낮은 단백질 응집률, 낮은 단백질 분해율, 높은 단백질(약물) 함유율, 낮은 변성률, 낮은 아미노산(예컨대, 메티오닌 잔기) 산화 수준 등). 일 예에서, 상기 광 안정성은 광 노출 조건에서의 낮은 아미노산(예컨대, 메티오닌 잔기) 산화 수준으로 측정(또는 결정 또는 확인 또는 분석)될 수 있다.
일 예에서, 상기 광 안정성의 개선은 광 부하 조건에서 상기 항체의 아미노산 잔기의 산화 수준이 감소된 것(항산화)을 의미할 수 있다. 일 예에서, 상기 아미노산 잔기는 항체 (항-TNFα 항체, 예컨대, 아달리무맙)의 중쇄 및/또는 경쇄에 존재하는 하나 이상의 메티오닌일 수 있으며, 예컨대, 상기 항체의 중쇄의 256번째 위치의 메티오닌일 수 있다. 이와 같은 광 부하 조건에서의 약제학적 조성물 내 항체의 아미노산 잔기에 대한 항산화 효과는 상기 약제학적 조성물에 포함된 히스티딘의 작용에 의한 것일 수 있다.
일 예에서, 상기 광 부하 조건은, 의약품규제조화위원회(ICH) 가이드라인 'Q1B 안정성 시험 신규 원료의약품 및 신규완제의약품의 광안정성 시험'의 기준을 따르는 것일 수 있으며 (참고예 2 참조; 기저군(base), 암대조군 (Dark control), 광 노출(Light-exposured), 예컨대, 1.2 million lux hours 이상 및 200 Wh/m2 (watt hours/square meter) 이상의 조건을 의미할 수 있다.
일 예에서, 본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물은, 상기 광 노출 조건에서 측정된 항체 중쇄의 256번째 메티오닌 잔기의 산화율(%Met256)이 약 64% 이하, 약 63% 이하, 약 62% 이하, 약 61% 이하, 약 60% 이하, 약 59% 이하, 약 58% 이하, 약 57% 이하, 약 56% 이하, 약 55% 이하, 약 54% 이하, 약 53% 이하, 약 52% 이하, 약 51% 이하, 약 50% 이하, 약 49% 이하, 약 48% 이하, 약 47% 이하, 약 46% 이하, 약 45% 이하, 약 44% 이하, 약 43% 이하, 약 42% 이하, 또는 약 41% 이하(하한값은 0% 초과 및 41% 이하의 범위 중에서 선택된 수치, 예컨대, 약 0%, 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 또는 약 40%일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님)일 수 있다.
다른 예에서, 본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물은, 상기 광 노출 조건에서 측정된 항체 중쇄의 256번째 메티오닌 잔기의 산화율(%Met256)이, 히스티딘을 포함하지 않는 조성물의 광 노출 조건에서 측정된 %Met256와 비교하여, 약 10% 이상, 약 11% 이상, 약 12% 이상, 약 13% 이상, 약 14% 이상, 약 15% 이상, 약 16% 이상, 약 17% 이상, 약 18% 이상, 약 19% 이상, 약 20% 이상, 약 21% 이상, 약 22% 이상, 약 23% 이상, 약 24% 이상 또는 약 25% 이상 (상한값은 25% 내지 100% 범위 중에서 선택된 수치, 약 26%, 약 27%, 약 28%, 약 29%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45% 또는 약 50%일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님) 낮은 것일 수 있다.
다른 예에서, 본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물은, 상기 광 노출 조건에서 측정된 항체 중쇄의 256번째 메티오닌 잔기의 산화율(%Met256)의 기저군 (광 노출 적용 없음, 5±3℃) 또는 암대조군(동일한 광 노출 조건에서 빛을 차단한 상태(예컨대, 호일로 차단)로 처리됨)의 %Met256에 대한 차이값(Δ%Met256)이 65% 이하, 60% 이하, 55% 이하, 54% 이하, 53% 이하, 50% 이하, 45% 이하, 40% 이하, 35% 이하, 30% 이하, 29% 이하, 28% 이하, 27% 이하, 26% 이하, 25% 이하, 또는 24% 이하(하한값은 0% 초과 및 24% 이하의 범위 중에서 선택된 수치, 예컨대, 약 0%, 약 5%, 약 10%, 약 15%, 또는 약 20%일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님)일 수 있다.
다른 예에서, 본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물은, 히스티딘을 포함하지 않는 조성물과 비교하여, 상기 광 노출 조건에서 측정된 항체 중쇄의 256번째 메티오닌 잔기의 산화율(%Met256)의 기저군 (광 노출 적용 없음, 5±3℃) 또는 암대조군(동일한 광 노출 조건에서 빛을 차단한 상태(예컨대, 호일로 차단)로 처리됨)의 %Met256에 대한 차이값(Δ%Met256)이 약 10% 이상, 약 11% 이상, 약 12% 이상, 약 13% 이상, 약 14% 이상, 약 15% 이상, 약 16% 이상, 약 17% 이상, 약 18% 이상, 약 19% 이상, 약 20% 이상, 약 21% 이상, 약 22% 이상, 약 23% 이상, 약 24% 이상 또는 약 25% 이상 (상한값은 25% 내지 100% 범위 중에서 선택된 수치, 약 26%, 약 27%, 약 28%, 약 29%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45% 또는 약 50%일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님) 적은 것일 수 있다.
일 예에서, 상기 광 안정성의 개선은 광 부하 조건에서 상기 조성물 내 상기 항체의 응집률이 감소된 것(항응집)을 의미할 수 있다. 이와 같은 광 부하 조건에서의 항체의 응집률 감소(항응집) 효과는 상기 약제학적 조성물에 포함된 히스티딘의 작용에 의한 것일 수 있다.
상기 단백질 응집률은 조성물 내 응집물(aggregate)의 함량비를 의미할 수 있고, 상기 '응집물(aggregate)'은 본 발명의 조성물에 포함된 항-TNFα 항체 단백질이 응집되어 형성된 고분자 생성물(High Molecular Weight; HMW)을 의미하고, 다른 말로 응집체라고도 할 수 있다.
상기 광 안정성에 있어서, 단백질 응집률은 상기와 같은 광 부하 조건에서 측정된 조성물 내 응집물의 함량(%HMW 또는 HMW%) 또는 응집물의 함량의 변화량 또는 차이값 (Δ%HMW 또는 ΔHMW%)으로 표현될 수 있다.
일 예에서, 본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물은, 상기 광 노출 조건에서 측정된 조성물 내 응집물의 함량(%HMW)(예컨대, SE-HPLC로 측정)이 약 15% 이하, 약 14% 이하, 약 13% 이하, 약 12% 이하, 약 11% 이하, 약 10% 이하, 약 9.5% 이하, 약 9% 이하, 또는 약 8.5% 이하(하한값은 0% 초과 및 8.5% 이하의 범위 중에서 선택된 수치, 예컨대, 약 0%, 약 0.1%, 약 0.5%, 약 1%, 또는 약 2%일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님)일 수 있다.
일 예에서, 본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물은, 히스티딘을 포함하지 않는 조성물과 비교하여, 상기 광 노출 조건에서 측정된 응집물의 함량(%HMW)(예컨대, SE-HPLC로 측정)이 약 4% 이상, 약 5% 이상, 약 6% 이상, 약 7% 이상, 약 8% 이상, 약 9% 이상, 또는 약 10% 이상 (상한값은 10% 내지 100% 범위 중에서 선택된 수치, 약 11%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45% 또는 약 50%일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님) 적은 것일 수 있다.
일 예에서, 본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물은, 상기 광 부하 조건에서 측정된 조성물 내 응집물의 함량의 변화량 또는 차이값(Δ%HMW), 즉 광 노출 조건에서의 응집물 함량과 기저군 또는 암대조군 조건에서의 응집률 함량과의 차이값 [Δ%HMW = (광 노출 조건에서의 %HMW) - (기저군 또는 암대조군 조건에서의 %HMW)]이 약 15% 이하, 약 14% 이하, 약 13% 이하, 약 12% 이하, 약 11% 이하, 약 10% 이하, 약 9.5% 이하, 약 9% 이하, 약 8.8% 이하, 약 8.6% 이하, 약 8.5% 이하, 또는 약 8% 이하(하한값은 0% 초과 및 8% 이하의 범위 중에서 선택된 수치, 예컨대, 약 0%, 약 0.1%, 약 0.5%, 약 1%, 또는 약 2%일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님)일 수 있다.
일 예에서, 본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물은, 히스티딘을 포함하지 않는 조성물과 비교하여, 상기 광 부하 조건에서 측정된 조성물 내 응집물의 함량의 변화량 또는 차이값[Δ%HMW= (광 노출 조건에서의 %HMW) - (기저군 또는 암대조군 조건에서의 %HMW)]이 약 3% 이상, 약 4% 이상, 약 5% 이상, 약 5.5% 이상, 약 6% 이상, 약 7% 이상, 약 8% 이상, 약 9% 이상, 약 10% 이상, 약 11% 이상, 또는 약 12% 이상 (상한값은 12% 내지 100% 범위 중에서 선택된 수치, 약 13%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45% 또는 약 50%일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님) 적은 것일 수 있다.
상기 열 안정성 및/또는 동결 용융 안정성은 열 가혹 조건(Heat stress Condition; 예컨대, 40±2℃에서 0 내지 8주 또는 0 내지 4주 (예, 0주, 1주, 2주, 3주, 4주 또는 8주)) 및/또는 동결 용융 조건(Freeze/thaw condition; 예컨대, '-70℃±10℃에서 18시간 이상 냉동(Freeze)' 및 '상온(25℃)에서 1시간 이상 해동(thaw)'의 3~5 cycles)에서 저장 또는 보관시 조성물 내의 단백질의 구조, 및/또는 물리적, 화학적, 및/또는 생물학적 특성이 유지됨을 의미할 수 있다 (예컨대, 저장 또는 보관 기간 중 선택된 하나 이상의 시점에서의 낮은 단백질 중합체 형성률, 낮은 단백질 응집률, 낮은 단백질 분해율, 높은 단백질(약물) 함유율, 낮은 변성률, 낮은 아미노산(예컨대, 메티오닌 잔기) 산화 수준 등).
일 예에서, 상기 열 안정성 및/또는 동결 용융 안정성은 열 가혹 조건 및/또는 동결 용융 조건에서 측정된 단백질 응집률, 단백질 변성률, 또는 이들의 조합으로 측정(또는 결정 또는 확인 또는 분석)될 수 있다. 일 예에서, 상기 열 안정성 및/또는 동결 용융 안정성의 개선은 열 가혹 조건 및/또는 동결 용융 조건에서 단백질 응집률, 단백질 변성률, 또는 이들 모두가 낮아진 것을 의미할 수 있다.
상기 열 안정성 및/또는 동결 용융 안정성에 있어서, 단백질 응집률은,
- 보관(또는 저장) 개시 시점을 포함하여 보관(또는 저장) 기간 중 선택된 임의의 시점에서의 조성물 내 응집물의 함량(%HMW 또는 HMW%),
- 보관(또는 저장) 개시 시점을 포함하여 보관(또는 저장) 기간 중 선택된 임의의 구간에서의 조성물 내 응집물의 함량의 변화량 또는 차이값(Δ%HMW)
- -70±10℃/25℃ 조건에서 동결-용융 5 사이클 후의 조성물 내 응집물의 함량(%HMW 또는 HMW%), 및/또는
- -70±10℃/25℃ 조건에서 동결-용융 5 사이클 수행 전후의 조성물 내 응집물의 함량의 변화량 또는 차이값(Δ%HMW)
으로 표현될 수 있다.
본 명세서에 사용된 바로서, 용어 '변성률'은 본 발명의 조성물에 포함된 항-TNFα 항체 단백질이 원래의 성질과 다르게 산성을 띠게 되는 정도(산성 변이체(acidic variants)의 함량; %Acidic 또는 Acidic%) 또는 염기성을 띠게 되는 정도(염기성 변이체(basic variants)의 함량; %Basic 또는 Basic%)를 의미하는 것일 수 있다.
일 예에서, 상기 단백질 변성률은,
- 보관(또는 저장) 개시 시점을 포함하여 보관(또는 저장) 기간 중 선택된 임의의 시점에서의 조성물 내 산성 변이체의 함량 (%Acidic 또는 Acidic%),
- 보관(또는 저장) 개시 시점을 포함하여 보관(또는 저장) 기간 중 선택된 임의의 구간에서의 조성물 내 산성 변이체의 함량의 변화량 또는 차이값(Δ%Acidic),
- -70±10℃/25℃ 조건에서 동결-용융 5 사이클 후의 조성물 내 산성 변이체의 함량(%Acidic 또는 Acidic%), 및/또는
- -70±10℃/25℃ 조건에서 동결-용융 5 사이클 수행 전후의 조성물 내 산성 변이체의 함량의 변화량 또는 차이값(Δ%Acidic = (FT5 %Acidic) - (Initial %Acidic))
으로 표현될 수 있다.
일 예에서, 본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물은, 40±2℃의 온도에서 0주 내지 8주, 0주 내지 4주, 또는 0주 내지 2주 동안의 기간(보관 개시시부터 보관 종료시까지의 기간) 중 선택된 임의의 시점(예컨대, 0주, 1주, 2주, 4주 또는 8주) 또는 전체 기간에 걸쳐서, 조성물 내 응집물 함량(%HMW)(예컨대, SE-HPLC로 측정)이 약 1.0% 이하, 약 0.97% 이하, 약 0.94% 이하, 약 0.91% 이하, 약 0.87% 이하, 약 0.84% 이하, 약 0.81% 이하, 약 0.79% 이하, 약 0.76% 이하, 약 0.72% 이하, 약 0.70% 이하, 약 0.69% 이하 또는 약 0.68% 이하일 수 있고, 그 하한값은 0을 초과하는 수치, 예컨대, 약 0.0001%, 약 0.0005%, 약 0.001%, 약 0.004%, 약 0.007%, 또는 약 0.01%일 수 있다.
일 예에서, 본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물은, 폴리소르베이트 20 대신 폴리소르베이트 80을 (예컨대, 동일 농도로) 포함하는 조성물과 비교하여, 40±2℃의 온도에서 0주 내지 8주, 0주 내지 4주, 또는 0주 내지 2주 동안의 기간(보관 개시시부터 보관 종료시까지의 기간) 중 선택된 임의의 시점(예컨대, 0주, 1주, 2주, 4주 또는 8주) 또는 전체 기간에서의 조성물 내 응집물 함량(%HMW)(예컨대, SE-HPLC로 측정)이 약 0.005% 이상, 약 0.01% 이상, 약 0.015% 이상, 약 0.02% 이상, 약 0.04% 이상, 약 0.06% 이상, 또는 약 0.08% 이상 (상한값은 0.08% 내지 100% 범위 중에서 선택된 수치, 약 0.1%, 약 1%, 약 1.5%, 약 5%, 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40% 또는 약 50%일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님) 적은 것일 수 있다.
일 예에서, 본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물은, 히스티딘을 포함하지 않고 폴리소르베이트 20 대신 폴리소르베이트 80을 포함하는 조성물과 비교하여, 40±2℃의 온도에서 0주 내지 8주, 0주 내지 4주, 또는 0주 내지 2주 동안의 기간(보관 개시시부터 보관 종료시까지의 기간) 중 선택된 임의의 시점(예컨대, 0주, 1주, 2주, 4주 또는 8주) 또는 전체 기간에서의 조성물 내 응집물 함량(%HMW)(예컨대, SE-HPLC로 측정)이 약 0.1% 이상, 약 0.15% 이상, 약 0.2% 이상, 약 0.25% 이상, 약 0.3% 이상, 약 0.35% 이상, 약 0.4% 이상, 약 0.45% 이상, 약 0.5% 이상, 또는 약 0.55% 이상 (상한값은 0.55% 내지 100% 범위 중에서 선택된 수치, 약 0.6%, 약 1%, 약 1.5%, 약 5%, 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40% 또는 약 50%일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님) 적은 것일 수 있다.
일 예에서, 본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물은, 40±2℃의 온도에서 0주 내지 8주, 0주 내지 4주, 또는 0주 내지 2주 동안(예컨대, 0주, 1주, 2주, 4주 또는 8주)의 조성물 내 응집물 함량의 변화량(Δ%HMW)이 약 1.0% 이하, 약 0.97% 이하, 약 0.94% 이하, 약 0.91% 이하, 약 0.87% 이하, 약 0.84% 이하, 약 0.81% 이하, 약 0.79% 이하, 약 0.76% 이하, 약 0.72% 이하, 약 0.70% 이하, 약 0.68% 이하, 약 0.66% 이하, 약 0.64% 이하, 약 0.62% 이하, 약 0.60% 이하, 약 0.58% 이하, 약 0.56% 이하, 약 0.54% 이하, 약 0.52% 이하, 약 0.50% 이하, 약 0.48% 이하, 약 0.46% 이하, 약 0.44% 이하, 약 0.42% 이하, 약 0.40% 이하, 약 0.38% 이하, 약 0.36% 이하, 약 0.34% 이하, 약 0.32% 이하, 약 0.30% 이하, 약 0.28% 이하, 또는 약 0.26% 이하일 수 있고, 그 하한값은 0을 초과하는 수치, 예컨대, 약 0.0001%, 약 0.0005%, 약 0.001%, 약 0.005%, 약 0.01%, 약 0.05%, 또는 약 0.1%일 수 있다.
일 예에서, 본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물은, 히스티딘을 포함하지 않고 폴리소르베이트 20 대신 폴리소르베이트 80을 포함하는 조성물과 비교하여, 40±2℃의 온도에서 0주 내지 8주, 0주 내지 4주, 또는 0주 내지 2주 동안(예컨대, 0주, 1주, 2주, 4주 또는 8주)의 조성물 내 응집물 함량의 변화량(Δ%HMW)이 약 0.02% 이상, 약 0.04% 이상, 약 0.06% 이상, 약 0.08% 이상, 약 0.1% 이상, 약 0.15% 이상, 약 0.2% 이상, 약 0.25% 이상, 약 0.3% 이상, 약 0.35% 이상, 또는 약 0.38% 이상 (상한값은 0.38% 내지 100% 범위 중에서 선택된 수치, 약 0.4%, 약 1%, 약 1.5%, 약 5%, 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40% 또는 약 50%일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님) 적은 것일 수 있다.
일 예에서, 본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물은 40±2℃의 온도에서 0주 내지 8주, 0주 내지 4주, 또는 0주 내지 2주 동안의 기간(보관 개시시부터 보관 종료시까지의 기간) 중 선택된 임의의 시점(예컨대, 0주, 1주, 2주 4주 또는 8주) 또는 전체 기간에서의 조성물 내 산성 변이체 함량(%Acidic)(예컨대, CEX-HPLC 또는 icIEF 로 측정)이 약 45% 이하, 약 43% 이하, 약 40% 이하, 약 38% 이하, 약 36% 이하, 약 34% 이하, 약 32% 이하, 약 30% 이하, 약 28% 이하, 또는 약 26% 이하일 수 있고, 그 하한값은 0을 초과하는 수치, 예컨대, 약 0.0001%, 약 0.0005%, 약 0.001%, 약 0.005%, 약 0.01%, 약 0.05%, 또는 약 0.1%일 수 있다.
일 예에서, 본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물은, 히스티딘을 포함하지 않고 폴리소르베이트 20 대신 폴리소르베이트 80을 포함하는 조성물과 비교하여, 40±2℃의 온도에서 0주 내지 8주, 0주 내지 4주, 또는 0주 내지 2주 동안의 기간(보관 개시시부터 보관 종료시까지의 기간) 중 선택된 임의의 시점(예컨대, 0주, 1주, 2주 4주 또는 8주) 또는 전체 기간에서의 조성물 내 산성 변이체 함량(%Acidic)(예컨대, CEX-HPLC 또는 icIEF 로 측정)이 약 1% 이상, 약 2% 이상, 약 3% 이상, 약 4% 이상, 약 5% 이상, 약 6% 이상, 약 7% 이상, 약 8% 이상, 약 9% 이상, 또는 약 10% 이상 (상한값은 10% 내지 100% 범위 중에서 선택된 수치, 약 11%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45% 또는 약 50%일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님) 적은 것일 수 있다.
일 예에서, 본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물은, 40±2℃의 온도에서 0주 내지 8주, 0주 내지 4주, 또는 0주 내지 2주 동안(예컨대, 1주, 2주, 4주 또는 8주)의 조성물 내 산성 변이체 함량의 변화량(Δ%Acidic)이 약 25% 이하, 약 24% 이하, 약 23% 이하, 약 22% 이하, 약 21% 이하, 약 20% 이하, 약 19% 이하, 약 18% 이하, 약 17.5% 이하, 약 17% 이하, 약 16.5% 이하, 약 16% 이하, 약 15.5% 이하, 약 15% 이하, 약 14.5% 이하, 약 14% 이하, 약 13.5% 이하, 약 13% 이하, 약 12.5% 이하, 약 12% 이하, 약 11.5% 이하, 약 11% 이하, 약 10.5% 이하, 약 10% 이하, 약 9.5% 이하, 또는 약 9% 이하일 수 있고, 그 하한값은 0을 초과하는 수치, 예컨대, 약 0.0001%, 약 0.0005%, 약 0.001%, 약 0.005%, 약 0.01%, 약 0.05%, 또는 약 0.1%일 수 있다.
일 예에서, 본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물은, 히스티딘을 포함하지 않고 폴리소르베이트 20 대신 폴리소르베이트 80을 포함하는 조성물과 비교하여, 40±2℃의 온도에서 0주 내지 8주, 0주 내지 4주, 또는 0주 내지 2주 동안(예컨대, 1주, 2주, 4주 또는 8주)의 조성물 내 응집물 함량의 변화량(Δ%HMW)이 약 1% 이상, 약 1.5% 이상, 약 2% 이상, 약 3% 이상, 약 4% 이상, 약 5% 이상, 약 6% 이상, 약 7% 이상, 약 8% 이상, 약 9% 이상, 약 10% 이상, 약 11% 이상, 약 12% 이상, 또는 약 13% 이상 (상한값은 13% 내지 100% 범위 중에서 선택된 수치, 약 14%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45% 또는 약 50%일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님) 적은 것일 수 있다.
일 예에서, 본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물은, -70±10℃/25℃ 조건에서 동결-용융 5 사이클 후의 조성물 내 응집물 함량(%HMW)(예컨대, SE-HPLC로 측정)이 약 1.0% 이하, 약 0.97% 이하, 약 0.94% 이하, 약 0.91% 이하, 약 0.87% 이하, 약 0.84% 이하, 약 0.81% 이하, 약 0.79% 이하, 약 0.76% 이하, 약 0.72% 이하, 약 0.70% 이하, 약 0.68% 이하, 약 0.66% 이하, 약 0.64% 이하, 약 0.62% 이하, 약 0.60% 이하, 약 0.58% 이하, 약 0.57% 이하, 약 0.56% 이하, 약 0.55% 이하, 약 0.54% 이하, 약 0.53% 이하, 약 0.52% 이하, 약 0.51% 이하, 약 0.50% 이하, 약 0.49% 이하, 또는 약 0.48% 이하일 수 있고, 그 하한값은 0을 초과하는 수치, 예컨대, 약 0.0001%, 약 0.0005%, 약 0.001%, 약 0.005%, 약 0.01%, 약 0.05%, 또는 약 0.1%일 수 있다.
일 예에서, 본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물은, 폴리소르베이트 20 대신 폴리소르베이트 80을 (예컨대, 동일 농도로) 포함하는 조성물과 비교하여, -70±10℃/25℃ 조건에서 동결-용융 5 사이클 후의 조성물 내 응집물 함량(%HMW)(예컨대, SE-HPLC로 측정)이 약 0.005% 이상, 약 0.01% 이상, 약 0.015% 이상, 약 0.02% 이상, 약 0.04% 이상, 약 0.06% 이상, 약 0.08% 이상, 또는 약 0.1% 이상 (상한값은 0.1% 내지 100% 범위 중에서 선택된 수치, 약 0.2%, 약 0.5%, 약 1%, 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 40%, 약 45% 또는 약 50%일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님) 적은 것일 수 있다.
일 예에서, 본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물은, -70±10℃/25℃ 조건에서 동결-용융 5 사이클 후의 조성물 내 산성 변이체 함량(%Acidic)(예컨대, icIEF로 측정)이 약 27% 이하, 약 26.91% 이하 또는 약 26.85% 이하일 수 있고, 그 하한값은 0을 초과하는 수치, 예컨대, 약 0.0001%, 약 0.0005%, 약 0.001%, 약 0.005%, 약 0.01%, 약 0.05%, 또는 약 0.1%일 수 있다.
일 예에서, 본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물은, 폴리소르베이트 20 대신 폴리소르베이트 80을 (예컨대 동일 농도로) 포함하는 조성물과 비교하여, -70±10℃/25℃ 조건에서 동결-용융 5 사이클 후의 조성물 내 산성 변이체 함량(%Acidic)(예컨대, icIEF로 측정)이 약 0.005% 이상, 약 0.01% 이상, 약 0.1% 이상, 약 0.12% 이상, 약 0.15% 이상, 약 0.2% 이상, 약 0.5% 이상, 약 0.7% 이상, 또는 약 1% 이상 (상한값은 1% 내지 100% 범위 중에서 선택된 수치, 약 1.1%, 약 1.5%, 약 2%, 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 40%, 약 45%, 또는 약 50%일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님) 적은 것일 수 있다.
일 예에서, 본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물은, -70±10℃/25℃ 조건에서 동결-용융 5 사이클 수행 전후의 조성물 내 산성 변이체의 함량의 변화량 또는 차이값(Δ%Acidic) (예컨대, icIEF로 측정)이 약 3% 이하, 약 2.6% 이하, 약 2.5% 이하, 약 2.45% 이하, 약 2% 이하, 약 1.9% 이하, 약 1.8% 이하, 약 1.7% 이하, 약 1.6% 이하, 약 1.5% 이하, 약 1.4% 이하, 약 1.3% 이하, 약 1.2% 이하, 약 1.1% 이하, 또는 약 1.0% 이하일 수 있고, 그 하한값은 0을 초과하는 수치, 예컨대, 약 0.0001%, 약 0.0005%, 약 0.001%, 약 0.005%, 약 0.01%, 약 0.05%, 또는 약 0.1%일 수 있다.
일 예에서, 본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물은, 폴리소르베이트 20 대신 폴리소르베이트 80을 (예컨대, 동일 농도로) 포함하는 조성물과 비교하여, -70±10℃/25℃ 조건에서 동결-용융 5 사이클 수행 전후의 조성물 내 산성 변이체의 함량의 변화량 또는 차이값(Δ%Acidic)이 약 0.1% 이상, 약 0.2% 이상, 약 0.3% 이상, 약 0.4% 이상, 약 0.5% 이상, 약 0.6% 이상, 약 0.7% 이상, 약 0.8% 이상, 약 0.9% 이상, 약 1% 이상, 약 1.5% 이상, 또는 약 2% 이상 (상한값은 2% 내지 100% 범위 중에서 선택된 수치, 약 2.1%, 약 2.5%, 약 3%, 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 40%, 약 45% 또는 약 50%일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님) 적은 것일 수 있다.
일 예에서, 본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물 또는 그를 포함하는 컨테이너는, 5±3℃ 온도에서 약 32개월 내지 약 52개월, 약 34개월 내지 약 50개월, 약 36개월 내지 약 48개월, 약 36개월, 또는 약 48개월 보관된 이후, 30±2℃의 실온 및 60±5%의 상대 습도(Relative humidity, RH)에서 약 28일 내지 약 35일, 약 28일 내지 약 32일, 약 28일 내지 약 30일, 약 28일 또는 약 30일 저장한 경우 안정성이 유지되는 것일 수 있다. 일 예에서, 상기 실온 저장 안정성은, 투명도, 색, pH, 단백질 농도, TNFα 결합 활성, TNFα 중화 활성, 순도, 단백질 응집률, 전하 변이체, 미립자 개수로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상으로 측정(또는 결정 또는 확인 또는 분석)되는 것일 수 있다.
구체적으로, 본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물 또는 그를 포함하는 컨테이너는, 5±3℃ 온도에서 32개월 내지 52개월, 구체적으로는 36개월 내지 48개월, 36개월 또는 48개월 저장된 이후, 30±2℃의 온도에서 28일 내지 35일, 구체적으로는 30일 보관된 경우, 다음 중에서 선택된 하나 이상의 특징을 갖는 것일 수 있다:
탁도가 약 30 NTU(nephelometric turbidity unit) 이하, 약 25 NTU 이하, 약 22 NTU 이하, 약 20 NTU 이하, 약 19 NTU 이하, 약 18 NTU 이하, 또는 약 17 NTU 이하일 수 있고, 그 하한값은 0 내지 10 NTU 중에서 선택된 수치일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
TNFα 결합 활성이 약 80% 이상, 약 85% 이상, 약 90% 이상, 약 91% 이상, 약 92% 이상, 약 93% 이상, 약 94% 이상, 약 95% 이상, 약 96% 이상, 약 97% 이상, 약 98% 이상, 약 100% 이상, 약 102% 이상, 약 104% 이상, 또는 약 106% 이상일 수 있고, 그 상한값은 107% 내지 125% 범위에서 선택된 수치일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
TNFα 중화 활성이 약 70% 이상, 약 75% 이상, 약 80% 이상, 약 85% 이상, 약 86% 이상, 약 90% 이상, 약 91% 이상, 약 92% 이상, 약 93% 이상, 약 94% 이상, 약 95% 이상, 약 96% 이상, 약 97% 이상, 약 98% 이상, 약 99% 이상, 약 100% 이상, 약 101% 이상, 약 102% 이상, 약 103% 이상, 약 104% 이상, 또는 약 105% 이상일 수 있고, 그 상한값은 105% 내지 133% 범위에서 선택된 수치일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
전체 순도(Total purity) 가 약 90% 이상, 약 91% 이상, 약 92% 이상, 약 93% 이상, 약 94% 이상, 약 95% 이상, 약 96% 이상, 또는 약 97% 이상일 수 있고, 그 상한값은 97% 내지 100% 범위에서 선택된 수치일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
응집물의 함량(%HMW)(예컨대, SE-HPLC로 측정)이 약 5%이하, 약 4%이하, 약3%이하, 약 2%이하, 약 1%이하, 약 0.9%이하일 수 있고, 그 하한값은 0%를 초과하는 수치, 예컨대, 약 0%, 약 0.001%, 약 0.01%, 약 0.1%, 약 1%일 수 있으나, 이에 제한 되는 것은 아니다.
산성 변이체 함량(%Acidic)(예컨대, icIEF 로 측정)이 약 45% 이하, 약 43% 이하, 약 40% 이하, 약 38% 이하, 약 36% 이하, 약 34% 이하, 약 33% 이하일 수 있고, 그 하한값은 0을 초과하는 수치, 예컨대, 약 0%, 약 1%, 약 5%, 약 10%, 약 11%, 약 12%, 약 13%, 약 14%, 약 15% 또는 약 16%일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
Main 단백질의 함량(%Main)(예컨대, icIEF 로 측정)이 약 50% 이상, 약 51% 이상, 약 52% 이상, 약 53% 이상, 약 54% 이상, 약 55% 이상, 약 55% 이상, 또는 약 56% 이상이고, 그 상한값은 50% 내지 100% 범위 중에서 선택된 수치, 예컨대, 약 95%, 약 93%, 약 93%, 약 90%, 약 87%, 약 85%, 약 83%, 약 80%, 약 78%, 약 75% 또는 약 74%일 수 있으나, 이에 제한 되는 것은 아니다.
염기성 변이체 함량(%basic)(예컨대, icIEF 로 측정)이 약 20% 이하, 약 19% 이하, 약 18% 이하, 약 17% 이하, 약 16% 이하, 약 15% 이하, 또는 약 14% 이하일 수 있고, 그 하한값은 0을 초과하는 수치, 예컨대, 약 0%, 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 또는 약 6%일 수 있으나, 이에 제한 되는 것은 아니다.
조성물 0.8mL 내의 평균 입경이 10 um 이상인 입자수가 6000개 이하, 5000개 이하, 4000개 이하, 3000개 이하, 2500개 이하, 2000개 이하, 1900개 이하, 1800개 이하, 1700개 이하, 1600개 이하, 1500개 이하, 1400개 이하, 1300개 이하, 1200개 이하, 1100개 이하, 또는 1000개 이하,
조성물 0.8mL 내의 평균 입경이 25 um 이상인 입자수가 600개 이하, 500개 이하, 400개 이하, 300개 이하, 200개 이하, 100개 이하, 70개 이하, 50개 이하, 40개 이하, 30개 이하, 또는 20개 이하.
삼투압
본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물은 생체와 등장성인 것일 수 있다. 구체적으로, 상기 액상 조성물은 삼투압이 약 200 mOsm/kg 내지 약 400 mOsm/kg, 약 250 mOsm/kg 내지 약 400 mOsm/kg, 약 200 mOsm/kg 내지 약 350 mOsm/kg, 약 250 mOsm/kg 내지 약 350 mOsm/kg, 약 200 내지 약 300 mOsm/kg 또는 약 250 내지 약 300 mOsm/kg 인 것일 수 있다. 한편, 이와 같은 삼투압은 폴리올 및/또는 아미노산 등에 의하여 조절될 수 있다.
(9) 디바이스, 키트, 또는 컨테이너
일 예에서, 본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물을 포함하는 디바이스, 키트, 또는 컨테이너가 제공된다. 상기 디바이스, 키트, 또는 컨테이너는, 주로 비경구 투여(예컨대, 피하 투여)를 위한 용도로 사용될 수 있으며, 상기 약제학적 조성물이 충진된 바이알, 팩(pack), 시린지 (syringe; 예컨대, 미리 충진된 주사기(pre-filled syringe; PFS); 바늘 사이즈: 20 내지 40G, 예컨대, 25G, 26G, 27G, 28G, 29G, 또는 30G), 미리 충진된 펜(pre-filled pen; PFP) 등의 형태일 수 있으며, 상기 충진된 약제학적 조성물은, 활성 성분인 항-TNFα 항체 (예컨대, 아달리무맙) 함량을 기준으로, 하나 이상의 단위 용량 형태(unit dosage form)를 포함하는 것일 수 있다.
일 예에서, 본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물은, 목적하는 경우, 바이알, 팩 또는 활성 성분을 포함하는 하나 이상의 단위 용량 형태를 함유할 수 있는 디스펜서 장치 내에 포함될 수 있다. 하나의 양태에서, 디스펜서 장치는 주사용으로 준비된 상기 약제학적 조성물의 액체 제형의 단일 용량(single dose; 1회 투여량)을 포함하는 시린지를 포함할 수 있다. 시린지는 투여를 위한 지시서를 동반할 수 있다. 다른 예에서, 상기 디바이스는 Inject-ease®, Genject®, 주사기 펜 (예켠대, GenPen®), 바늘없는 장치 (예를 들면, MediJector®, BioJector® 등) 등에서 선택된 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물을 포함하는 디바이스, 키트, 또는 컨테이너에서, 상기 포함된 약제학적 조성물이 온도 변화에 대한 안정성을 갖는 것일 수 있다. 일 예에서, 상기 온도 변화는 고온 조건 (예, 30±2℃) 노출 후 저온 조건 (예, -5±3℃) 노출을 1회 이상, 예컨대, 3 cycle 수행하는 것을 의미할 수 있다. 일 예에서, 상기 온도 변화에 대한 안정성은, TNFα 결합 활성, TNFα 중화 활성, 미립자 개수, 아미노산 잔기의 산화, 투명도, pH, 단백질 농도, 단백질 응집률, 순도, 전하 변이체, 및 내독소로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상으로 측정(또는 결정 또는 확인 또는 분석)되는 것일 수 있다.
일 구체예에서, 상기 디바이스, 키트, 또는 컨테이너는, 48시간 동안 30±2℃의 고온 조건(with 65±5% RH) 노출 후 48시간 동안 -5±3℃ 저온 조건 노출을 1 cycle로 하여 총 3 cycle 수행 후 (총 144시간의 고온 조건 노출 및 144시간의 저온 조건 노출), 포함된 약제학적 조성물이 다음 중에서 선택된 하나 이상의 특징을 갖는 것일 수 있다:
TNFα 결합 활성이 약 90% 이상, 약 91% 이상, 약 92% 이상, 약 93% 이상, 약 94% 이상, 약 95% 이상, 약 96% 이상, 약 97% 이상, 또는 약 98% 이상 (상한값은 100% 내지 125% 범위에서 선택된 수치일 수 있음),
TNFα 중화 활성이 약 90% 이상, 약 91% 이상, 약 92% 이상, 약 93% 이상, 약 94% 이상, 약 95% 이상, 약 96% 이상, 약 97% 이상, 약 98% 이상, 약 99% 이상, 약 100% 이상, 약 101% 이상, 약 102% 이상, 약 103% 이상, 약 104% 이상, 또는 약 105% 이상 (상한값은 100% 내지 133% 범위에서 선택된 수치일 수 있음),
항체 중쇄의 34번째 위치의 메티오닌의 산화율이 약 1.5% 이하, 약 1.4% 이하, 약 1.3% 이하, 약 1.2% 이하, 약 1.1% 이하, 약 1.0% 이하, 약 0.9% 이하, 약 0.8% 이하, 약 0.7% 이하, 또는 약 0.6% 이하 (하한값은 0을 초과하는 수치, 예컨대, 약 0.0001%, 약 0.0005%, 약 0.001%, 약 0.005%, 약 0.01%, 약 0.05%, 또는 약 0.1%일 수 있음),
항체 중쇄의 83번째 위치의 메티오닌의 산화율이 약 1.3% 이하, 약 1.2% 이하, 약 1.1% 이하, 약 1.0% 이하, 약 0.9% 이하, 약 0.8% 이하, 약 0.7% 이하, 약 0.6% 이하, 약 0.5% 이하, 또는 약 0.4% 이하 (하한값은 0을 초과하는 수치, 예컨대, 약 0.0001%, 약 0.0005%, 약 0.001%, 약 0.005%, 약 0.01%, 약 0.05%, 또는 약 0.1%일 수 있음),
항체 중쇄의 256번째 위치의 메티오닌의 산화율이 약 6.0% 이하, 약 5.7% 이하, 약 5.5% 이하, 약 5.4% 이하, 약 5.3% 이하, 약 5.2% 이하, 약 5.1% 이하, 약 5.0% 이하, 약 4.9% 이하, 약 4.8% 이하, 또는 약 4.9% 이하 (하한값은 0을 초과하는 수치, 예컨대, 약 0.01%, 약 0.05%, 약 0.1%, 약 0.5%, 또는 약 1%일 수 있음),
항체 중쇄의 432번째 위치의 메티오닌의 산화율이 약 0.5% 이하, 약 0.4% 이하, 약 0.3% 이하, 약 0.2% 이하, 약 0.1% 이하, 약 0.05% 이하, 또는 측정되지 않음 (미검출; 산화된 432번째 위치의 메티오닌이 검출 가능한 수준으로 산화되지 않음) (하한값은 0을 포함하는 수치 중에서 선택됨),
항체 경쇄의 4번째 위치의 메티오닌의 산화율이 약 1.5% 이하, 약 1.3% 이하, 약 1.2% 이하, 약 1.1% 이하, 약 1.0% 이하, 약 0.9% 이하, 약 0.8% 이하, 약 0.7% 이하, 약 0.6% 이하, 또는 약 0.5% 이하 (하한값은 0을 초과하는 수치, 예컨대, 약 0.0001%, 약 0.0005%, 약 0.001%, 약 0.005%, 약 0.01%, 약 0.05%, 또는 약 0.1%일 수 있음),
탁도가 25 NTU(nephelometric turbidity unit) 이하, 22 NTU 이하, 20 NTU 이하, 19 NTU 이하, 18 NTU 이하, 또는 17 NTU 이하 (하한값은 0 내지 10 NTU 중에서 선택됨),
전체 순도(Total purity) 가 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 또는 96% 이상,
조성물 0.8mL 내의 평균 입경이 10 um 이상인 입자수가 5000개 이하, 4000개 이하, 3000개 이하, 2500개 이하, 2000개 이하, 1900개 이하, 1800개 이하, 1700개 이하, 1600개 이하, 또는 1500개 이하,
조성물 0.8mL 내의 평균 입경이 25 um 이상인 입자수가 500개 이하, 400개 이하, 300개 이하, 200개 이하, 100개 이하, 70개 이하, 50개 이하, 40개 이하, 30개 이하, 또는 20개 이하, 및
내독소 함량이 10 EU/mL 이하, 9 EU/mL 이하, 8 EU/mL 이하, 7 EU/mL 이하, 6 EU/mL 이하, 5.5 EU/mL 이하, 또는 5 EU/mL 이하.
(10) 질병의 치료
일 예에서, 상기 약제학적 조성물 또는 이를 포함하는 디바이스를 포함하는 질병 치료를 위한 약학 조성물이 제공된다. 다른 예에서, 항-TNFα 항체, 예컨대, 아달리무맙의 투여를 필요로 하는 대상에게 상기 약제학적 조성물의 약학적 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 질병의 치료 방법을 제공한다. 상기 치료 방법은, 상기 투여하는 단계 이전에, 항-TNFα 항체, 예컨대, 아달리무맙의 투여를 필요로 하는 대상을 확인하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
상기 질병은 항-TNFα 항체, 예컨대, 아달리무맙의 투여에 의하여 치료 효과를 볼 수 있는 질병 중에서 선택된 것일 수 있다. 상기 질병은 면역 관련 질병일 수 있으며, 예를 들어, 관절염 (예컨대, 류마티스 관절염, 건선성 관절염, 특발성 관절염, 골부착부위염 관련 관절염 등), 축성 척추관절염 (예컨대, 강직성 척추염, 강직성 척추염 이외의 중증 축성 척추관절염 등), 크론병 (예컨대, 성인(18세 이상) 크론병, 소아 (6~17세) 크론병 등), 건선 (예컨대, 성인 (18세 이상) 또는 소아 (4~17세) 판상 건선), 궤양성 대장염, 베체트 장염, 화농성 한선염, 포도막염 (예컨대, 비-감염성 중간 포도막염, 후포도막염, 전체포도막염 등) 등으로 이루어진 군에서 선택될 수 있다.
상기 항-TNFα 항체, 예컨대, 아달리무맙의 투여를 필요로 하는 대상은 항-TNFα 항체, 예컨대, 아달리무맙의 투여에 의하여 유의미하게 치료 (증상의 제거, 감경, 완화, 또는 개선 등)될 수 있는 질환 또는 장애를 갖는 대상일 수 있다. 상기 질병 또는 장애는 앞서 설명한 질병 중에서 선택될 수 있다.
(11) 투여경로, 투여량, 제형화
본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물은 비경구적 경로로 투여되는 것일 수 있다. 비경구 투여 (예컨대, 주사)인 경우에는 정맥내 투여, 또는 피하 투여으로 투여할 수 있다. 비경구 투여는 볼루스(bolus) 주사 또는 연속 주입에 의한 것일 수 있다.
본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물은 상기 투여 경로에 적합한 제형으로 제형화된 것일 수 있다. 일 예에서, 상기 약제학적 조성물은 주사제, 주사 가능한 즉시사용형 (ready-to-use) 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
다른 예에서, 상기 약제학적 조성물은 포함된 항-TNFα 항체, 예컨대, 아달리무맙의 전량 또는 약학적 유효량이 하나의 제형에 포함되도록 제형화되거나, 2개 이상 (예컨대, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개)의 제형에 나누어 포함되도록 제형화된 것일 수 있다. 상기 제형화된 조성물은 앞서 설명한 디바이스의 단위 투여형태에 포함될 수 있다.
다른 예에서, 상기 약제학적 조성물은 하나의 제형에 포함된 항-TNFα 항체, 예컨대, 아달리무맙의 전량이 일시(예컨대, 1분 이내, 30초 이내, 20초 이내, 또는 10초 이내)에 체내 투여되거나; 5분 이상, 10분 이상, 30분 이상, 60분 이상, 90분 이상, 120분 이상, 150분 이상, 180분 이상, 210분 이상, 또는 240분 이상 동안 서서히 체내에 투여되는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 약제학적 조성물의 투여 대상은 영장류 (인간 등), 설치류 (마우스, 래트, 기니아 피그, 햄스터, 토끼 등), 고양이, 개, 돼지, 소, 말 등을 포함하는 포유동물 중에서 선택될 수 있다.
본 명세서에서 제공된 약제학적 조성물 또는 여기에 포함된 항-TNFα 항체 (예컨대, 아달리무맙)의 약학적 유효량은 소망하는 약리적 효과, 예컨대, 증상의 제거, 감경, 완화, 또는 개선에 효과를 타나낼 수 있는 조성물 내 함량 또는 투여량을 의미할 수 있으며, 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태(상태의 중증도), 음식, 투여 시간, 투여 간격, 투여 경로, 배설 속도, 반응 감응성, 이전 요법, 임상 이력 등과 같은 요인들에 의해 다양하게 정해질 수 있다. 용량은 담당 의사의 판단에 따라 조절될 수 있다. 상기 약학적 유효량은 1회에 투여되거나, 분량하여 2 이상 다회에 걸쳐 투여될 수 있다.
일 예에서, 상기 약제학적 조성물은, 항-TNFα 항체 (예컨대, 아달리무맙)의 함량이 소망하는 유효량, 예를 들어, 약 200mg 이하, 약 150mg 이하, 약 100mg 이하, 약 50mg, 또는 40mg이 되도록 하는 용량 (예를 들어, 항체의 유효량이 40mg인 경우 항체 농도 50mg/ml인 조성물 0.8mL 또는 항체 농도 100mg/ml인 조성물 0.4mL)으로 3주 이상의 기간에 걸쳐 1주당 1회 내지 3회 투여될 수 있다. 다른 예에서, 상기 약제학적 제형은 일반적인 벌크 제형으로 제조될 수 있고, 약제학적 조성물의 성분은 투여에 요구되는 농도보다 고농도로 조절되고, 투여 전에 적합하게 희석되어 사용될 수 있다.
본 발명은 단백질, 예컨대, 항-TNFα 항체가 물리적, 화학적, 및/또는 생물학적 효능을 안정적으로 유지할 수 있도록 하는 수성 액상 조성물, 구체적으로 약제학적 조성물을 제공함으로써, 단백질의 보관 중 발생할 수 있는 중합체 및/또는 응집체(Aggregate) 생성, 분해물(Fragment)의 생성, 전하 변이체(charged variants) 로의 변성, 아미노산 잔기의 산화를 억제하여 단백질의 약리 효과를 안정적으로 유지시킬 수 있다.
도 1은 일 실시예에 따른 단백질(아달리무맙: 100 mg/mL) 제형의 광 부하시 단백질 내 아미노산(Met256)의 산화율(평균값: n=3)을 아미노산 종류 및 농도에 따라 보여주는 그래프이다.
도 2a는 일 실시예에 따른 항체 제형의 아미노산 종류 및 농도에 따른 광 부하 조건에서의 제형 내 단백질의 %HMW를 보여주는 그래프이다.
도 2b는 일 실시예에 따른 항체 제형의 아미노산 종류 및 농도에 따른 광 부하 조건에서의 제형 내 단백질의 %Monomer를 보여주는 그래프이다.
도 2c는 일 실시예에 따른 항체 제형의 아미노산 종류 및 농도에 따른 광 부하 조건에서의 제형 내 단백질의 %LMW를 보여주는 그래프이다.
도 3은 일 실시예에 따른 단백질(아달리무맙: 50 mg/mL) 제형의 광 부하시 단백질 내 아미노산(Met256)의 산화율(평균값: n=2)을 히스티딘 포함 여부에 따라 보여주는 그래프이다.
도 4는 SE-HPLC 분석법으로 측정한, 일 실시예에 따른 단백질(아달리무맙: 50 mg/mL) 제형의 40±2℃에서 2주 동안 보관시의 제형 내 단백질의 %HMW(High molecular weight%)(평균값: n=3)를 계면활성제 종류 및 농도에 따라 보여주는 그래프이다.
도 5는 SE-HPLC 분석법으로 측정한, 일 실시예에 따른 단백질(아달리무맙: 50 mg/mL) 제형의 동결/용융 조건(Freeze/thaw, 5 cycle)에서의 제형 내 단백질의 %HMW(평균값: n=3)를 계면활성제 종류 및 농도에 따라 보여주는 그래프이다.
도 6은 SE-HPLC 분석법으로 측정한, 일 실시예에 따른 단백질(아달리무맙; 50 mg/mL) 제형의 40±2℃에서 4주 동안 보관시의 제형 내 단백질의 %HMW(평균값: n=3)를 히스티딘 포함 여부 및 계면활성제 종류에 따라 보여주는 그래프이다.
도 7은 SE-HPLC 분석법으로 측정한, 일 실시예에 따른 단백질(아달리무맙; 100 mg/mL) 제형의 40±2℃에서 4주 동안 보관시의 제형 내 단백질의 %HMW(평균값: n=3)를 히스티딘 포함 여부 및 계면활성제 종류에 따라 보여주는 그래프이다.
도 8은 일 실시예에 따른 단백질(아달리무맙; 50 mg/mL) 제형의 40±2℃에서 4주 동안 보관시의 제형 내 단백질의 %Acidic (산성 변이체(Acidic variants)의 함량비)(평균값: n=3)를 히스티딘 포함 여부 및 계면활성제 종류에 따라 보여주는 그래프이다.
도 9는 일 실시예에 따른 단백질(아달리무맙; 100 mg/mL) 제형의 40±2℃에서 4주 동안 보관시의 제형 내 단백질의 %Acidic(평균값: n=3)를 히스티딘 포함 여부 및 계면활성제 종류에 따라 보여주는 그래프이다.
도 10은 icIEF 분석법으로 측정한, 일 실시예에 따른 단백질(아달리무맙: 50 mg/mL) 제형의 동결/용융 조건(Freeze/thaw, 5 cycle)에서의 제형 내 단백질의 %Acidic(평균값: n=3)를 계면활성제 종류 및 농도에 따라 보여주는 그래프이다.
도 11a 내지 11d는 온도 이탈(Temperature excursions)로 시험한 일 실시예에 따른 단백질(아달리무맙; 50 mg/mL) 제형이 미리 충진된 prefilled syringe의 품질 평가 결과(11a: %HMW, 11b: %Total purity, 11c: TNFα 결합활성, 11d: TNFα 중화활성)를 보여준다.
도 12a 내지 도 12e는 실온에서의 저장 안정성을 시험한 일 실시예에 따른 단백질(아달리무맙; 50 mg/mL) 제형이 미리 충진된 prefilled syringe의 품질 평가 결과(12a: %HMW, 12b: %Total purity, 12c: %Main, 12d: TNFα 결합활성, 12e: TNFα 중화활성)를 보여준다.
이하 본 발명을 실시예 및 시험예를 통하여 더욱 상세히 설명한다. 그러나, 이들 실시예 및 시험예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명을 제한하는 것으로 해석되어서는 아니된다.
참고예
참고예 1. SE-HPLC 분석
SE-HPLC(Size Exclusion-High Performance Liquid Chromatography) 분석법은 Waters社의 HPLC system을 사용하여 제조사 매뉴얼에 따라서 수행하였다. 머무름시간(Retention time) (단백질의 분자량)에 따라 총 3개의 피크(peak)로 분리 되며, 이 3 개의 peak는 Retention time이 짧은 (단백질의 분자량이 큰) 순서대로 HMW peak (단백질 응집), Monomer peak, 및 LMW peak (단백질 분해)에 해당된다.
- %HMW (High molecular weight%) = {area of HMW/area of (HMW + monomer + LMW)}*100)
- %Monomer (Monomer weight%) = {area of monomer/area of (HMW + monomer + LMW)}*100)
- %LMW(Low molecular weight%) = {area of LMW/area of (HMW + monomer + LMW)}*100)
참고예 2. 광 부하 (Photo-stress)
제형을 다음의 표 1의 조건으로 광 부하(Photo-stress)에 대한 샘플 안정성 실험을 수행하였다.
기저군 (Base, initial) 암대조군 (Dark control) * 광노출군 (Light-exposured)
N/A (Not applicable) 백색 형광 램프(Cool White Fluorescent Lamp) : ≥1.2 M lux hours 백색 형광 램프(Cool White Fluorescent Lamp) : ≥1.2 M lux hours
N/A (Not applicable) 근자외선 램프(Near Ultraviolet Lamp) : ≥ 200 Watt hours/square meter 근자외선 램프(Near Ultraviolet Lamp) : ≥ 200 Watt hours/square meter
챔버 환경 조건(Chamber Environmental Conditions) : 5 ±3℃ 챔버 환경 조건(Chamber Environmental Conditions) : 25±2℃/60±5% RH(relative humidity) 챔버 환경 조건(Chamber Environmental Conditions) : 25±2℃/60±5% RH(relative humidity)
* 암대조군 (Dark control)은 샘플을 호일에 싼 후 상기 조건으로 실험 수행하였다.
- 의약품규제조화위원회(ICH) 가이드라인 'Q1B 안정성 시험 신규 원료의약품 및 신규완제의약품의 광안정성 시험'
참고예 3. 아미노산 잔기 %산화율(%oxidation level) 측정
제형에 포함된 단백질 내의 아미노산 잔기의 %산화율을 Waters社의 액체크로마토그래피-질량분석법(liquid-chromatography-mass spectrometry, LC-MS)를 사용하여 아달리무맙 중쇄(Adalimumab heavy chain)의 256번째 메티오닌(methionine) 아미노산 잔기의 질량(mass)을 측정하였다. LC-MS 실험 수행 후 MassLynx™ 프로그램을 이용하여 상대 %산화(relative %Oxidation) 값을 분석하였다.
상대 %산화 = (산화 펩타이드의 컨트롤 강도*100)/{(비산화 펩타이드의 컨트롤 강도)+(산화 펩타이드의 컨트롤 강도)}
참고예 4. CEX-HPLC 분석
CEX-HPLC (Cation Exchange-High Performance Liquid Chromatography) 분석법은 Waters社의 HPLC system을 사용하여 제조사 매뉴얼에 따라서 수행하였다. Retention time (단백질의 전하)에 따라 총 3개의 peak로 분리되며, 이 3개의 peak는 Retention time이 짧은 순서대로 Acidic peak, Main peak, 및 Basic peak에 해당된다.
- Acidic%(Acidic variants의 함량비, %Acidic) = {area of acidic/area of (acidic + main + basic)}*100)
- Main%(Main 단백질의 함량비, %Main) = {area of main/area of (acidic + main + basic)} *100)
- Basic%(Basic variants의 함량비, %Basic) = {area of basic/area of (acidic + main + basic)}*100)
참고예 5. icIEF 분석
icIEF (imaged capillary isoelectric focusing) 분석법은 양쪽 성 전해질을 함유하는 모세관의 등전위 점 (pI)에 따라 단백질의 전하 변이체(charge variant)를 확인하는 것으로써, icIEF instrument (ProteinSimple, iCE3)을 사용하여, 제조사의 매뉴얼에 따라서 acidic isoform, main isoform, 및 basic isoform을 분석하여 수행하였다.
참고예 6. 항체 함유 제품(pre-filled syringe) 품질 (안정성) 시험
항체 함유 제품 샘플의 안정성을 하기 표 2에 정리된 방법으로 평가하였다:
카테고리 제형 안정성 평가 항목 방법 설명
가시적 특징 색(color) 육안 조사 (Visual inspection) Brown standard B1-B8을 이용하여 샘플의 색 평가
투명도(clarity) 탁도 측정 (HACH Model 2100AN) 샘플의 투명도 평가
가시 입자 (visible particles) 육안 조사 샘플 내 가시 입자 개수 측정
pH pH pH 측정 (Thermo Scientific Orion star A211) 샘플의 pH 평가
화학적 분석 단백질 농도 A280 측정 (UV-VIS spectrophotometer) 샘플 내 단백질(항체) 농도 평가
물리화학적 분석 HMW 불순물 SE-HPLC 샘플 내 고분자량 (HMW) 불순물 함량비 측정
전체적 순도 CE-SDS 샘플 내 전체 불순물 측정
LMW 불순물 CE-SDS 샘플 내 저분자량 (LMW) 불순물 (예, NGHC) 함량비 측정
전하 아이소폼(Charge isoforms) CEX-HPLC, icIEF Acidic, main, basic variants를 포함하는 전하 변이체 측정
미립자 (subvisible particles) 미립자 HIAC 9703 + HRLD-400 평균 입경 25um 이상, 10um 이상, 8um 이상, 5um 이상, 2um 이상인 입자 개수 측정
생물학적 활성 TNF-alpha 결합 활성 FRET Reference standard에 대한 상대적 결합 정도 측정
TNF-alpha 중화 활성 Luciferase reporter gene system assay Reference standard에 대한 상대적 potency 측정
6.1. 가시 미립자의 존재 여부, 색, 및 투명도
육안 검사를 통하여, 제형 내의 가시 미립자의 존재 여부 및 색 (Brown standard: B1-B8)을 평가하였다. 제형의 투명도는 Turbidimeter (HACH Model 2100AN)를 이용하여 측정하였다.
6.2. pH
샘플의 pH는 사용 전 pH 4, 7, 및 10으로 조정된 Thermo Scientific Orion star A211 (pH electrode 및 temperature probe의 조합; Thermo Scientific)를 이용하여 측정하였다.
6.3. 단백질 농도
단백질 농도는 280nm 파장에서의 흡광도를 이용하여 측정하였다. 구체적으로, 시험된 모든 샘플을, 0.9%(w/v) NaCl 용액에서의 각 샘플의 기대 농도를 기준으로, 1 mg/mL 농도로 희석하고, 280 nm에서의 흡광도(A280)를 UV-VIS spectrophotometer (Agilent)로 측정하고, 얻어진 결과는 0.9%(w/v) NaCl 용액을 블랭크 용액(blank solution)으로 사용하여 정규화(normalization)하였다.
6.4. 고분자량(High molecular weight; HMW) 불순물
샘플 내의 고분자량 불순물은 크기 배제-고성능액체크로마토그래피(SE-HPLC)을 사용하여 측정하였다 (참고예 1).
6.5. 전체 순도(Total purity)
샘플의 전체 순도는 비환원 조건에서 모세관 SDS 전기영동법(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfate, CE-SDS)을 사용하여 비글리코실화 중쇄(non-glycosylated heavy chain; NGHC)의 출현율(prevalence)을 측정하여 평가하였다.
6.6. 전하 변이체 (Charge variants)
샘플 내의 전하 변이체 수준을 CEX-HPLC (참고예 4) 및 icIEF (참고예 5)를 이용하여 측정하였다.
6.7. TNF-α 결합 활성 (TNF-α binding affinity)
샘플에 포함된 항체(아달리무맙)의 TNF-α 결합 활성을 FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer)를 이용한 CIBA(competitive inhibition binding assay)으로 측정하였다. TNF-α 결합은 TR-FRET(time-resolved fluorescence resonance energy transfer)에 의하여 측정하였다. 아달리무맙을 형광 유로퓸(fluorescent europium (Eu)) 킬레이트 (PerkinElmer)로 표지하고 인간 TNF-α를 Cy5 형광단(fluorophore)으로 표지하여 분석에 사용하였다. Cy5-표지 TNF-α와 결합한 Eu-표지 아달리무맙은 형광 신호를 발생시킨다. 여기에 형광 비표지된 샘플 내 항체(아달리무맙)을 첨가하면, 상기 비표지된 항체가 Cy5-표지 TNF-α와 결합에 있어서 Eu-표지 아달리무맙과 경쟁한다. 따라서, 샘플 내 항체가 Cy5-표지 TNF-α와 결합할수록 형광 발생이 저해되어, 측정된 형광 신호 수준은 샘플 내 비표지된 항체의 TNF-α와의 결합 수준과 반비례한다. 표준품 (reference standard) 및 샘플을 넣은 분석 플레이트(assay plate)에 정해진 농도 및 부피의 Eu-표지 아달리무맙 및 Cy5-표지 TNF-α를 순서대로 첨가하고, 실온에서 약하게 교반하면서 배양하고, 발생한 형광 신호 수준을 시간 분해 형광측정법(time-resolved fluorimetry) (EnVision™, PerkinElmer)으로 측정하였다. 샘플 내 아달리무맙의 TNF-α 결합 활성은 Parallel Line Analysis (PLA) software (Stegmann Systems)를 이용하여 표준품 (reference standard)에 대한 상대값(%relative binding activity)으로 계산하였다. 상기 표준품(reference standard)은 100%로 부여(assign)된 기준값을 가지는 기준 물질을 의미하고, 샘플과 표준품의 선량 곡선(dose curves)을 PLA 프로그램을 통해 비교 분석하여 %상대 결합 활성(%relative binding activity)을 계산할 수 있다.
6.8. TNF-α 중화 활성 (TNF-α neutralization)
샘플에 포함된 항체(아달리무맙)의 TNF-α 중화 활성을 루시퍼라제 리포터 유전자(luciferase reporter gene system)를 이용하여 측정하였다. 샘플을 TNF-α와 함께 미리-배양한 후, 루시퍼라제 리포터 유전자를 포함하도록 조작된 세포주 (293-NF-κB-luc cell line(CVCL_KS34)을 루시퍼라제 리포터 유전자(luciferase reporter gene) 상류에 인간 NF-κB 반응요소(response element)를 포함하도록 조작한 세포주, TNF-α가 세포 표면의 TNFR에 결합함으로써 NF-κB 시그널링이 활성화되고, 루시퍼라제 리포터 유전자 발현이 촉진됨)와 함께 배양하였다. 96-웰 조직 배양 플레이트에서 샘플을 인간 TNF-α와 1:1(v/v) 비율로 혼합하고 실온에서 30-90분간 배양하였다. 그 후, 상기 준비된 세포를 상기 96-웰 플레이트에 넣어주고 24시간 배양 후, microplate reader (EnVision™, PerkinElmer) 상에서 Steady-Glo® Luciferase Assay System (Promega)을 이용하여 발광 신호를 측정함으로써, 아달리무맙의 TNF-α 중화 역가(neutralization potency)를 측정하였다. 아달리무맙의 TNF-α 중화 활성은 Parallel Line Analysis (PLA) software (Stegmann Systems)를 이용하여 표준품 (reference standard)에 대한 상대값(%relative potency)으로 계산하였다. 상기 표준품(reference standard)은 100%로 부여(assign)된 기준값을 가지는 기준 물질을 의미한다.
6.9. 크기 별 입자 개수
평균 입경 2 μm 이상, 5 μm 이상, 8 μm 이상, 10 μm 이상, 및 25 μm 이상인 입자를 HIAC 9703+ 및 HRLD 400 instrument (Beckman Coulter, Inc.)로 계수하였다.
6.10. 내독소 (Endotoxin)
내독소(Endotoxin)가 LAL (Limulus Amebocyte Lysate)을 활성화시켜 겔화(gelation)를 일으키는 반응에 기초하여, Bio Tek Elx808 IU Microplate Reader System (Bio Tek Instruments)를 사용하여 내독소의 검출 및 정량화하였다.
실시예 1. 아미노산 스크리닝
1-1. 고농도 단백질 함유하는 제형의 광부하 조건에서의 광 안정성
아미노산 종류 및 농도에 따른 단백질 제형의 안정성을 평가하여, 단백질 제형 안정성에 유리한 효과를 가지는 아미노산의 종류 및 농도 범위를 확인하였다. 구체적으로 고농도 단백질 함유하는 제형에 대해 광부하 조건에서의 광 안정성을 항산화 효과 및 항응집 효과 측면에서 확인하였다.
1-1-1. 고농도 단백질 함유 제형의 준비
단백질로서 항-TNFα 항체 (아달리무맙(Adalimumab); anti-TNFα monoclonal antibody; CAS Registry Number:　331731-18-1) 100mg/mL를 포함하고, 다음의 표 3의 조성을 갖는 수성 액상 제형을 준비하였다:
Sample No. 단백질 농도 (mg/mL) pH 버퍼
(Buffer)		 부형제 1
(Excipient 1)		 부형제 2
(Excipient 2)		 계면활성제
(Surfactant)
1 100 5.2 2.6 mM Na-phosphate 59 mM His 3.0% mannitol 0.08% PS 20
2 2.6 mM Na-phosphate + 5 mM Na-succinate
3 N/A 5.0% mannitol
4 59 mM Arg-HCl 3.0% mannitol
5 10 mM His 4.5% mannitol
6 80 mM His 2.0% mannitol
7* N/A N/A 4.2% mannitol 0.1% PS80
(*: Humira®의 100 mg/mL 아달리무맙을 포함하는 제형과 제형 성분이 동일한 샘플;
PS 20: polysorbate 20, PS 80: polysorbate 80;
N/A: not applicable;
%: %(w/v))
1-1-2. 항산화(anti-Oxidation) 효과
상기 표 3에서 준비된 제형들에 대하여, 광 부하 시의 단백질의 내 Met256 (256번째 메티오닌 잔기)의 산화율(%Met256)을 측정하였다. 광 부하 조건은 참고예 2를 참조하고, 단백질의 내 Met256의 산화율(%Met256)은 참고예 3을 참조하여 측정하였다.
상기 산화율 측정은 3회 반복(N=3) 수행되었으며, 얻어진 결과의 평균값을 하기의 표 4 및 도 1에 나타내었다:
광 부하 조건에서의 아미노산 (Met256) 산화율 (%Met256) 및 아미노산 산화율의 변화량 (Δ%Met256)
Sample No. %Met256 Δ%Met256
Base Dark-control Light-exposured [Light-exposured %Met256] - [Base %Met256] [Light-exposured %Met256] - [Dark-control %Met256]
1 4.23 4.43 55.80 51.57 51.37
SD 0.06 0.31 1.04 1.08 1.34
2 4.67 4.57 57.07 52.40 52.50
SD 0.42 0.32 0.49 0.10 0.66
3 4.37 4.57 77.77 73.40 73.20
SD 0.12 0.40 2.99 3.04 3.35
4 4.23 4.57 80.83 76.60 76.27
SD 0.21 0.32 4.03 3.82 3.72
5 4.07 4.57 70.23 66.17 65.67
SD 0.21 0.25 0.35 0.38 0.31
6 4.20 4.80 57.63 53.43 52.83
SD 0.26 0.46 3.51 3.62 3.88
7 4.13 4.43 73.27 69.13 68.83
SD 0.21 0.35 2.11 1.92 1.76
상기 결과에서 확인되는 바와 같이, 광 노출 조건에서의 아미노산 종류에 따른 Met256 산화율 및 그 변화량이 Arg-HCl > Amino acid-free > His 순서로 나타나, 제형의 광 안정성에는 아미노산 불포함 제형 및 Arg-HCl 포함 제형보다 히스티딘 포함 제형이 더 적합한 것으로 확인되었다. 또한, 히스티딘 포함 제형은 시판되는 Humira® 100 mg/mL (pH 5.2, 4.2% mannitol, 0.1% PS 80)와 동일한 조성을 갖는 Amino acid-free 제형 (샘플 No. 7)과 비교하여도 아미노산 (Met256) 산화율 및 그 변화량이 현저히 낮아, 항산화 효과가 우수한 것을 확인할 수 있었다.
또한, 히스티딘의 농도 별 분석 결과, 아미노산 산화율 변화량이 10 mM His > 59 mM His ≒ 80 mM His 순서로 확인되었으며, 이는 His이 59 mM 이상의 농도로 포함된 제형에서, 보다 우수한 항산화 효과가 있다는 것을 보여준다.
위와 같이, 히스티딘이 항산화제로서의 활성을 가지는 것을 확인하였다. 특히, 항체 제형 내 히스티딘 함량이 10mM 이상 또는 초과이고 80mM 이하인 경우(예컨대, 약 59mM)에 항산화 효과가 가장 우수한 것으로 나타났다.
1-1-3. 항응집(anti-Aggregation) 효과
상기 표 3에서 준비된 제형들에 대하여, 참고예 2의 광 부하 조건에서의 단백질의 %HMW(High molecular weight%), %monomer(monomer weight%), 및 %LMW(Low molecular weight%)를 참고예 1에 따라서 SE-HPLC 분석법으로 측정하였다. 상기 시험을 3회 반복(N=3)하여 얻어진 결과의 평균값을 하기의 표 5 내지 표 7 및 도 2a 내지 2c에 나타내었다.
광 부하 조건에서의 %HMW
Sample No. %HMW Δ%HMW
Base Dark-control Light-exposured [Light-exposured %HMW]- [Base %HMW] [Light-exposured %HMW] - [Dark-control %HMW]
1 0.35 0.46 8.92 8.57 8.46
SD 0.01 0.02 0.15 0.14 0.13
2 0.33 0.43 8.19 7.86 7.76
SD 0.00 0.01 0.12 0.12 0.12
3 0.65 0.79 18.13 17.49 17.34
SD 0.02 0.03 0.61 0.60 0.58
4 0.40 0.50 20.79 20.39 20.29
SD 0.00 0.01 0.85 0.85 0.86
5 0.47 0.58 14.53 14.07 13.96
SD 0.01 0.01 0.34 0.34 0.34
6 0.31 0.40 7.45 7.14 7.05
SD 0.00 0.01 0.20 0.20 0.20
7 0.77 0.95 19.14 18.38 18.20
SD 0.01 0.01 0.26 0.26 0.26
광 부하 조건에서의 %Monomer
Sample No. %Monomer Δ%Monomer
Base Dark-control Light-exposured [Light-exposured %Monomer] - [Base %Monomer] [Light-exposured %Monomer] - [Dark-control %Monomer]
1 99.40 99.29 89.62 -9.77 -9.66
SD 0.01 0.02 0.17 0.16 0.15
2 99.42 99.31 90.37 -9.05 -8.94
SD 0.00 0.01 0.11 0.11 0.12
3 99.10 98.95 79.97 -19.13 -18.98
SD 0.01 0.03 0.62 0.61 0.60
4 99.35 99.25 77.40 -21.95 -21.85
SD 0.00 0.01 0.83 0.83 0.84
5 99.28 99.17 83.73 -15.56 -15.44
SD 0.01 0.02 0.35 0.34 0.35
6 99.44 99.40 91.15 -8.29 -8.25
SD 0.02 0.11 0.23 0.25 0.30
7 98.98 98.80 78.93 -20.05 -19.88
SD 0.01 0.01 0.24 0.24 0.24
광 부하 조건에서의 %LMW
Sample No. %LMW Δ%LMW
Base Dark-control Light-exposured [Light-exposured %LMW] - [Base %LMW] [Light-exposured %LMW] - [Dark-control %LMW]
1 0.25 0.25 1.46 1.21 1.21
SD 0.00 0.00 0.02 0.02 0.02
2 0.25 0.25 1.44 1.19 1.19
SD 0.00 0.01 0.02 0.02 0.02
3 0.25 0.26 1.89 1.64 1.64
SD 0.01 0.01 0.02 0.03 0.03
4 0.25 0.26 1.81 1.56 1.55
SD 0.00 0.01 0.02 0.02 0.02
5 0.25 0.26 1.74 1.49 1.48
SD 0.00 0.01 0.02 0.02 0.02
6 0.25 0.20 1.40 1.15 1.20
SD 0.01 0.10 0.03 0.04 0.11
7 0.25 0.25 1.93 1.68 1.68
SD 0.01 0.00 0.03 0.03 0.03
상기 결과에서 확인되는 바와 같이, 광 노출 조건에서의 %HMW 및 %HMW 변화량을 확인한 결과, Arg-HCl > Amino acid-free > His 순서로 나타나, 아미노산 불포함 제형 또는 Arg-HCl 포함 제형보다 히스티딘 포함 제형이 항응집 효과가 더욱 개선됨을 확인할 수 있었고, 이러한 효과는 아미노산 불포함 제형인 Humira® 100 mg/mL (pH 5.2, 4.2% mannitol, 0.1% PS 80)와 동일한 조성을 갖는 샘플 7과 비교하였을 때도 유사한 경향성을 보인다.
또한, His 농도별 광 노출 조건에서의 %HMW 및 %HMW 변화량 크기가 10 mM His > 59 mM His ≒ 80 mM His 순서로 나타나, 59 mM 내지 80 mM His 함유 제형이 10 mM His 함유 제형보다 항응집 효과가 우수함이 확인되었다.
이는 His 농도가 59 mM 이상인 경우 보다 우수한 항응집 효과를 가짐을 보여준다. 또한, %Monomer 및 %LMW 결과 역시 히스티딘을 포함하는 제형 (샘플 번호 1, 2, 5, 및 6)이 아미노산을 포함하지 않거나 히스티딘 이외의 아미노산 (예, 아르기닌)을 포함하는 제형과 비교하여, 항응집 효과가 우수함을 보여준다.
1-2. 저농도 단백질을 함유하는 제형의 광 부하 조건에서의 광 안정성
상기 실시예 1-1에서 광 안정성 효과가 우수한 것으로 확인된 히스티딘을 함유하고, 저농도 단백질을 함유하는 제형의 광 부하 조건에서의 광 안정성을 평가하였다.
단백질로서 항-TNFα 항체 (아달리무맙(Adalimumab); anti-TNFα monoclonal antibody; CAS Registry Number:　331731-18-1) 50mg/mL를 포함하고, 다음의 표 8의 조성을 갖는 수성 액상 제형을 준비하였다:
Sample No. 단백질 농도 (mg/mL) pH 버퍼
(Buffer)		 부형제 1
(Excipient 1)		 부형제 2
(Excipient 2)		 계면활성제
(Surfactant)
1 50 5.2 10 mM Na-citrate 59 mM His 2.5% sorbitol 0.08%
PS 20
2 N/A
(N/A: not applicable; %: %(w/v))
상기 준비된 히스티딘(His)-포함 제형 및 히스티딘-free 제형에 대하여, 광 부하 조건에서의 단백질 내의 주요 산화 부위(Main oxidized site)로 알려진 Met256 (256번째 메티오닌 잔기)의 산화율(%Met256)을 측정하였다. 광 부하 조건은 참고예 2를 참조하고, 단백질 내의 Met256의 산화율(%Met256)은 참고예 3을 참조하여 측정하였다.
상기 산화율 측정은 2회 반복(N=2) 수행되었으며, 얻어진 결과의 평균값을 하기의 표 9 및 도 3에 나타내었다:
광 부하 조건에서의 아미노산 (Met256) 산화율 (%Met256) 및 아미노산 산화율의 변화량 (Δ%Met256)
Sample No. %Met256 Δ%Met256
Base Dark-control Light-exposured [Light-exposured %Met256] - [Base %Met256] [Light-exposured %Met256] - [Dark-control %Met256]
1 Average 16.50 17.10 40.40 23.90 23.30
SD (N=2) 0.14 0.42 0.57 0.42 0.99
2 Average 15.10 16.35 64.90 49.80 48.55
SD (N=2) 0.28 0.07 4.95 4.67 4.88
상기 표 9에서 보는 바와 같이, 광 노출 조건에서 단백질 농도가 낮은 제형에서도 히스티딘-포함 제형이 히스티딘-불포함 (His-free) 제형보다 %Met256가 24.50% 낮은 것을 확인하였다. 또한, 히스티딘 포함 여부에 따른 기저군(Base) 및 암대조군(Dark control) 대비 광 노출군의 아미노산 산화율의 변화량 (Δ%Met256) 분석 결과, 히스티딘-포함 제형이 히스티딘-불포함 제형보다 Δ%Met256가 25.90% (기저군 대비 Δ%Met256) 및 25.25% (암대조군 대비 Δ%Met256) 낮은 것을 확인하였다. 이러한 결과는 상기 실시예 1-1의 고농도 단백질 포함 제형에서의 실험 결과와 동일한 경향성을 보여주는 것으로 확인되어, 결국 히스티딘-포함 제형이 히스티딘-불포함 제형과 비교하여 단백질 중의 아미노산 잔기의 항산화 효과가 우수함을 보여주며, 단백질 제형에서의 히스티딘의 항산화제로서의 기능을 입증한다.
실시예 2. 계면활성제 스크리닝
2-1. 계면활성제의 종류에 따른 단백질 제형의 안정성
계면활성제의 종류에 따른 단백질 제형의 안정성을 평가하기 위하여, 단백질로서 항-TNFα 항체 (아달리무맙(Adalimumab); anti-TNFα monoclonal antibody; CAS Registry Number:　331731-18-1) 50mg/mL를 포함하고, 다음의 표 10의 조성을 갖는 수성 액상 제형을 준비하였다:
sample No. 단백질 농도 (mg/mL) pH 버퍼
(Buffer)		 부형제 1
(Excipient 1)		 부형제 2
(Excipient 2)		 계면활성제
(Surfactant)
1 50 5.2 10 mM Na-citrate 59 mM His 2.5% sorbitol 0.04% PS 20
2 0.08% PS 20
3 0.1% PS 20
4 0.2% PS 20
5 0.04% PS 80
6 0.08% PS 80
7 0.1% PS 80
8 0.2% PS 80
(PS 20: polysorbate 20, PS 80: polysorbate 80;
%: %(w/v))
2-1-1. 열 가혹 조건 (Heat stress Condition)에서의 제형 안정성
상기 실시예 2-1에서 준비된 제형들을 40±2℃에서 2주간 저장 후, 0주(initial), 1주, 및 2주차의 제형 내 단백질의 %HMW (High molecular weight%)를 참고예 1에 따라서 SE-HPLC 분석법으로 측정하였다. 상기 측정은 3회 반복(n=3)하였으며, 얻어진 결과의 평균값을 하기의 표 11 및 도 4에 나타내었다.
40℃에서 2주간 저장 시 %HMW
Sample No. %HMW
Initial 1 Wk 2 Wk
1 Average 0.48 0.62 0.67
SD (N=3) 0.00 0.01 0.00
2 Average 0.49 0.62 0.67
SD (N=3) 0.00 0.00 0.00
3 Average 0.49 0.63 0.68
SD (N=3) 0.00 0.01 0.00
4 Average 0.51 0.64 0.69
SD (N=3) 0.01 0.01 0.00
5 Average 0.49 0.62 0.67
SD (N=3) 0.00 0.00 0.01
6 Average 0.51 0.63 0.68
SD (N=3) 0.01 0.01 0.01
7 Average 0.57 0.67 0.70
SD (N=3) 0.01 0.01 0.01
8 Average 0.68 0.79 0.78
SD (N=3) 0.01 0.01 0.02
표 11 및 도 4에 나타난 바와 같이, 폴리소르베이트 20을 포함하는 제형(샘플 1~4)은, 농도 증가 시, initial %HMW가 0.48-0.51%를 유지되는 반면, 폴리소르베이트 80을 포함하는 제형(샘플 5~8) 은 농도 증가 시, initial %HMW가 0.49%에서 시작하여 0.68%까지 증가하는 것으로 나타났다. 특히, 0.2% 폴리소르베이트 20 포함 제형(샘플 4)의 initial %HMW 값은 0.2% 폴리소르베이트 80 포함 제형(샘플 8) 대비 0.17% 낮게 나타나고, 0.2% 폴리소르베이트 20 포함 제형의 2주차 %HMW 값은 0.2% 폴리소르베이트 80 포함 제형 대비 0.09% 낮게 나타났다.
2-1-2. 동결 용융 조건 (Freeze/thaw condition)에서의 제형 안정성
상기 실시예 2-1에서 준비된 제형들에 대하여, 동결 용융 조건 (Freeze/thaw, 5 cycle; FT5; 각 cycle: '-70℃±10℃에서 18시간 이상 냉동(Freeze)' + '상온(25℃)에서 1시간 이상 해동(thaw)')에서의 단백질의 %HMW (High molecular weight%)를 참고예 1에 따라서 SE-HPLC 분석법으로 측정하였다. 상기 시험을 3회 반복(n=3)하여 얻어진 결과의 평균값을 하기의 표 12 및 도 5에 나타내었다.
FT5 (Freeze/thaw, 5 cycle) 조건에서의 %HMW
Sample No. %HMW
Initial FT5
1 Average 0.48 0.48
SD (N=3) 0.00 0.00
2 Average 0.49 0.48
SD (N=3) 0.00 0.00
3 Average 0.49 0.48
SD (N=3) 0.00 0.01
4 Average 0.51 0.49
SD (N=3) 0.01 0.00
5 Average 0.49 0.49
SD (N=3) 0.00 0.01
6 Average 0.51 0.49
SD (N=3) 0.01 0.00
7 Average 0.57 0.50
SD (N=3) 0.01 0.01
8 Average 0.68 0.59
SD (N=3) 0.01 0.02
표 12 및 도 5에 나타난 바와 같이, 폴리소르베이트 20을 포함하는 제형(샘플 1~4)은, 농도 증가 시, initial %HMW가 0.48-0.51%로 유지되는 반면, 폴리소르베이트 80을 포함하는 제형(샘플 5~8)은 농도 증가 시, initial %HMW가 0.49%에서 시작하여 0.68%까지 증가하는 것으로 나타났다. 특히, 0.2% 폴리소르베이트 20 포함 제형(샘플 4)은, 0.2% 폴리소르베이트 80 포함 제형(샘플 8) 대비, Initial %HMW 값과 F5 수행 후 %HMW 값이 각각 0.17% 및 0.1% 낮게 나타나서, 안정성 우수한 것으로 확인되었다.
2-2. 히스티딘 및 폴리소르베이트 20 함유 제형의 안정성 평가
2-2-1. 제형의 준비
상기 실시예 1 및 2-1에서 제형 안정성이 우수한 것으로 확인된 히스티딘과 폴리소르베이트 20을 포함한 단백질 제형을 다양한 제형 실시예와 열 안정성을 평가하였다.
이를 위하여, 다음과 같은 조성의 시험 제형과 대조 제형을 준비하였다:
- 시험 제형 1: 아달리무맙 50 mg/ml, pH 5.2, 10mM Na-시트레이트, 59mM 히스티딘, 2.5%(w/v) 솔비톨, 0.08%(w/v) 폴리소르베이트 20;
- 시험 제형 2: 아달리무맙 100 mg/ml, pH 5.2, 2.5mM Na-시트레이트, 59mM 히스티딘, 2.5%(w/v) 솔비톨, 0.08%(w/v) 폴리소르베이트 20;
- 대조 제형 1 (Cyltezo®와 동일 조성의 제형): 아달리무맙 50 mg/ml, pH 5.2, 24.7 mM Na-아세테이트, 8.1% 트레할로오스, 0.1% 폴리소르베이트 80;
- 대조 제형 2 (Amgevita®와 동일 조성의 제형): 아달리무맙 50 mg/ml, pH 5.2, 10 mM 아세트산, 9.0% 슈크로오스, 0.1% 폴리소르베이트 80
- 대조 제형 3 (아달리무맙 50 mg/ml 대신 100 mg/ml를 포함한 것을 제외하고 Cyltezo®와 동일 조성의 제형): 아달리무맙 100 mg/ml, pH 5.2, 24.7 mM Na-아세테이트, 8.1% 트레할로오스, 0.1% 폴리소르베이트 80;
- 대조 제형 4 (아달리무맙 50 mg/ml 대신 100 mg/ml를 포함한 것을 제외하고 Amgevita®와 동일 조성의 제형): 아달리무맙 100 mg/ml, pH 5.2, 10 mM 아세트산, 9.0% 슈크로오스, 0.1% 폴리소르베이트 80;
- 대조 제형 5 (Humira® (100 mg/mL) 제형과 동일 조성의 제형): 아달리무맙 100 mg/ml, pH 5.2, 4.2%(w/v) 만니톨, 0.1%(w/v) 폴리소르베이트 80.
2-2-2. 열가혹 조건에서의 제형 안정성
%HMW
상기 실시예 2-2-1에서 준비된 시험 제형들과 대조 제형들을 40±2℃에서 4주 동안 저장 후, 0주, 1주, 2주, 및 4주차의 제형 내 단백질의 %HMW(High Molecular Weight(%): %HMW)을 참고예 1에 따라서 SE-HPLC 분석법으로 측정하였다. 또한, 상기 측정된 %HMW 값을 이용하여, 1주, 2주, 및 4주 동안의 %HMW 변화량(Δ%HMW = (해당 주차의 %HMW) - (0주차 %HMW))을 계산하였다.
상기 얻어진 %HMW와 Δ%HMW 결과의 평균값(N=3)을 표 13 및 도 6 (단백질 농도 50 mg/mL 제형), 및 표 14 및 도 7 (단백질 농도 100 mg/mL 제형)에 나타내었다:
제형 %HMW Δ%HMW
0주차 1주차 2주차 4주차 1주차 2주차 4주차
시험 제형 1 Average 0.20 0.35 0.43 0.57 0.15 0.23 0.37
SD (N=3) 0.00 0.01 0.01 0.01
대조 제형 1 Average 0.48 0.70 0.82 1.07 0.22 0.34 0.60
SD (N=3) 0.01 0.04 0.05 0.06
대조 제형 2 Average 0.46 0.68 0.79 1.05 0.24 0.32 0.59
SD (N=3) 0.02 0.03 0.03 0.05
제형 %HMW Δ%HMW
0주차 1주차 2주차 4주차 1주차 2주차 4주차
시험 제형 2 Average 0.27 0.55 0.69 0.95 0.27 0.41 0.68
SD (N=3) 0.01 0.03 0.03 0.02
대조 제형 3 Average 0.59 1.01 1.19 1.56 0.43 0.60 0.98
SD (N=3) 0.05 0.05 0.03 0.06
대조 제형 4 Average 0.58 1.10 1.28 1.68 0.52 0.72 1.10
SD (N=3) 0.02 0.01 0.01 0.04
대조 제형 5 Average 0.53 0.90 1.33 1.60 0.37 0.80 1.07
SD (N=3) 0.01 0.01 0.02 0.05
표 13 및 14과 도 6 및 7의 결과로부터, 히스티딘과 폴리소르베이트 20을 포함하는 시험 제형들은, 단백질 농도 50 mg/mL 및 100 mg/mL인 경우 모두에서, 히스티딘과 폴리소르베이트 20을 포함하지 않는 대조 제형들과 비교하여, 각 측정 시점에서의 %HMW 및 Δ%HMW 이 모두 현저하게 낮게 나타나서, 안정성이 우수함이 확인되었다.
%Acidic
또한, 상기 실시예 2-2-1에서 준비된 시험 제형들과 대조 제형들을 40±2℃에서 4주간 저장 후, 0주, 2주, 및 4주차의 제형 내 단백질의 %Acidic (Acidic variants의 함량비)을 참고예 4의 CEX-HPLC 분석법 (대조 제형 1, 2, 3, 및 4) 또는 참고예 5의 icIEF 분석법(시험 제형 1 및 2, 및 대조 제형 5)으로 측정하였다. 또한, 상기 측정된 %Acidic 값을 이용하여 %Acidic의 변화량 (Δ%Acidic = (해당 주차의 %Acidic) - (0주차 %Acidic))를 계산하였다.
상기 얻어진 %Acidic과 Δ%Acidic 결과(평균값: N=3)를 표 15 및 도 8 (단백질 농도 50 mg/mL 제형), 및 표 16 및 도 9 (단백질 농도 100 mg/mL 제형)에 나타내었다:
제형 %Acidic Δ%Acidic
0주차 2주차 4주차 2주차 4주차
시험 제형 1 Average 25.32 35.33 42.40 10.01 17.08
SD (N=3) 0.62 1.64 0.66
대조 제형 1 Average 26.50 40.65 55.02 14.16 28.52
SD (N=3) 0.89 0.75 1.34
대조 제형 2 Average 25.93 41.35 56.23 15.42 30.30
SD (N=3) 0.30 0.61 1.00
제형 %Acidic Δ%Acidic
0주차 2주차 4주차 2주차 4주차
시험 제형 2 Average 24.79 33.79 39.28 8.99 14.49
SD (N=3) 0.41 0.41 0.80
대조 제형 3 Average 25.26 38.37 51.46 13.11 26.20
SD (N=3) 1.39 0.78 1.23
대조 제형 4 Average 24.58 39.19 52.84 14.61 28.26
SD (N=3) 0.44 0.30 0.62
대조 제형 5 Average 25.08 35.87 45.07 10.78 19.98
SD (N=3) 1.99 0.78 0.92
표 15 및 16와 도 8 및 도 9의 결과로부터, 히스티딘과 폴리소르베이트 20을 포함하는 시험 제형들은, 단백질 농도 50 mg/mL 및 100 mg/mL인 경우 모두에서, 히스티딘과 폴리소르베이트 20을 포함하지 않는 대조 제형들과 비교하여, 각 측정 시점에서의 %Acidic 및 Δ%Acidic이 모두 현저하게 낮게 나타나서, 안정성이 우수함이 확인되었다.
실시예 3. 계면활성제(폴리소르베이트 20) 농도 최적화
상기 실시예 2-1에서 준비된 제형들에 대하여, 동결 용융 조건 (Freeze/thaw, 5 cycle; FT5; 각 cycle: '-70℃±10℃에서 18시간 이상 냉동(Freeze)' + '상온(25℃)에서 1시간 이상 해동(thaw)')에서의 단백질의 %Acidic을 참고예 5에 따라서 icIEF 분석법으로 측정하였다. 또한, 상기 측정된 %Acidic 값을 이용하여, FT5 수행 전후의 %Acidic 변화량 (Δ%Acidic)을 측정하였다 [Δ%Acidic = (FT5 %Acidic) - (Initial %Acidic)]. 상기 시험을 3회 반복(n=3)하여 얻어진 결과의 평균값을 하기의 표 17 및 도 10에 나타내었다:
FT5 (Freeze/thaw, 5 cycle) 조건에서의 %Acidic
Formulation %Acidic Δ%Acidic [(FT5 %Acidic) - (Initial %Acidic)]
Initial FT5
0.04% PS 20 Average 23.92 26.91 2.99
SD (N=3) 0.28 0.22 0.46
0.08% PS 20 Average 24.40 26.82 2.42
SD (N=3) 0.46 0.43 0.88
0.1% PS 20 Average 24.79 25.62 0.83
SD (N=3) 0.34 0.85 0.83
0.2% PS 20 Average 24.93 25.72 0.79
SD (N=3) 0.39 0.79 1.09
0.04% PS 80 Average 24.22 26.92 2.70
SD (N=3) 0.31 0.36 0.10
0.08% PS 80 Average 23.82 26.97 3.15
SD (N=3) 0.32 0.05 0.28
0.1% PS 80 Average 23.64 26.94 3.29
SD (N=3) 0.34 0.19 0.20
0.2% PS 80 Average 23.74 27.37 3.63
SD (N=3) 0.58 0.31 0.43
표 17 및 도 10에 나타난 바와 같이, 계면활성제로서 폴리소르베이트 20을 포함하는 제형은, 폴리소르베이트 80을 포함하는 제형과 비교하여, 전반적으로 Δ%Acidic 값이 낮게 나타났다. 특히, 농도가 0.08% 이상인 경우에, 폴리소르베이트 20 포함 제형의 Δ%Acidic 값이 약 2.5% 이하로, 폴리소르베이트 80 포함 제형과 비교하여, 현저하게 낮은 것으로 나타났다. 구체적으로, 계면활성제 농도가 0.08% 이상인 범위에서, 폴리소르베이트 20를 포함하는 제형은 폴리소르베이트 20의 농도가 높아질수록 Δ%Acidic 값이 감소하는 반면, 폴리소르베이트 80을 포함하는 제형은 폴리소르베이트 80의 농도가 높아질수록 Δ%Acidic 값이 증가하는 경향을 보이는 것으로 확인되었다. 이러한 결과로부터 폴리소르베이트 20 포함 제형이 폴리소르베이트 80 포함 제형보다 안정성이 우수할 뿐 아니라, 폴리소르베이트 20의 농도가 0.08% 이상인 경우 특히 안정성이 우수함을 확인할 수 있다.
실시예 4. 항체 함유 제품의 품질 평가 - 온도 이탈 (Temperature excursions) 시험
항체를 함유하는 제형의 제품화, 저장, 유통 과정, 및 임상 시험 동안에, 제형의 권장 온도를 벗어나는 온도 이탈(Temperature excursions)이 발생하여, 적절한 처방에 장애가 될 수 있다. 본 실시예에서는 상기 실시예 1 내지 3에서 안정성이 우수한 것으로 확인된 항체 (아달리무맙) 제형의 저장 안정성을 확인하기 위하여, 고온 및 저온 조건에 단시간 노출시킨 후의 pre-filled syringe (PFS) 제품에서의 제형 안정성을 평가하였다.
본 실시예에 사용된 항체 제형(샘플)의 조성은 다음과 같다:
아달리무맙 50 mg/ml, pH 5.2, 10mM Na-시트레이트, 59mM 히스티딘, 2.5%(w/v) 솔비톨, 0.08%(w/v) 폴리소르베이트 20.
상기 항체 (아달리무맙) 제형이 단일 용량 (0.8mL)으로 미리 충진된 시린지 (pre-filled syringe)를 준비하고 (n=132), 충진된 시린지를 이용하여 동결/해동을 3 사이클 수행하였다. 각 사이클은 고온(30±2℃ 및 65±5% relative humidity (RH))에 48시간 노출 후 저온(-5±3℃)에 48시간 노출시켜 수행하였다 (3 사이클: 총 144시간 고온(30±2℃) 노출 및 총 144 시간 저온(-5±3℃) 노출). 그 후, 다음과 같은 다양한 항목들에 대한 평가 방법으로 분석을 수행하였다: 외관, pH, 단백질 농도, 용기 밀폐 정도(container closure integrity), 단백질 응집률(%HMW), 순도, 전하 변이체(charge variants; 예, %Acidic, %Main, %Basic), 아미노산 잔기의 산화, 내독소(endotoxin), 미립자(particulates), 및 생물학적 활성.
상기 동결/해동 처리(3 thermal cycles)가 항체 제형 제품(pre-filled syringe)의 품질에 미치는 영향을 baseline(5℃에서 보관된 항체 제형)과 비교하여 다음의 표 18에 나타내고, 이 중에서 %HMW, %Total purity, TNFα 결합활성, 및 TNFα 중화활성을 각각 도 11a 내지 도 11d (11a: %HMW, 11b: %Total purity, 11c: TNFα 결합 활성, 11d: TNFα 중화 활성)에 나타내었다:
극한 온도 사이클링 조건(Extreme temperature cycling conditions)에서의 항체 제형 제품(3 cycled sample)의 품질
시험 항목(Test Item) 시험 방법(Test method) 기준치(Baseline) Temperature Cycle 3
색(Color) 참고예 6.1 무색(Colourless) B8 ≤ Sample < B7
투명도(Clarity) 참고예 6.1 (Nephelometric Turbidity Unit; NTU) 18 NTU 17 NTU
가시 입자(Visuable particles) 참고예 6.1 입자가 거의 없음(Practically free from particles) 입자가 거의 없음(Practically free from particles)
pH 참고예 6.2 5.3 5.3
단백질 농도 (mg/mL) 참고예 6.3 51.6 49.7
고분자 응집물 (불순물) (%HMW) 참고예 6.4 및 참고예 1 0.2% 0.2%
전체 순도(Total purity) 참고예 6.5 (CE-SDS; Capillary Electrophoresis-Sodium Dodecyl Sulfate, Non-reducing) 96.8% 96.6%
단일 최고 불순물(Single highest impurity) 2.1 2.0
Main peak icIEF (참고예 6.6 및 참고예 5) 8.6 8.6
%Acidic 21.8 25.0
%Main 67.1 64.5
%Basic 11.2 10.5
TNFα 결합 활성
(%relative binding activity)		 Competitive Binding Assay (FRET) (참고예 6.7) 92% 98%
TNFα 중화 활성(%relative potency) Cell-based, NF-κB Reporter Gene assay (참고예 6.8) 94% 105%
10 um 이상 입자수 (particles /syringe) 참고예 6.9 1521 1494
25 um 이상 입자수 (particles /syringe) 15 18
2 um 이상 입자수 (particles /syringe) 12217 13111
5 um 이상 입자수 (particles /syringe) 6257 6882
8 um 이상 입자수 (particles /syringe) 2476 2579
내독소(Endotoxin) Endotoxin Units per ml (EU/mL) (참고예 6.10) < 5 EU/mL < 5 EU/mL
%acidic CEX-HPLC (참고예 6.6 및 참고예 4) 23.5 24.0
%main 67.2 65.2
%basic 9.3 10.9
중쇄 Met34의 %산화 참고예 3 0.6 0.6
중쇄 Met83의 %산화 0.3 0.4
중쇄 Met256의 %산화 5.8 4.7
중쇄 Met432의 %산화 Not detected Not detected
경쇄 Met4의 %산화 0.2 0.5
상기 표 18 및 도 11a-11d에서 확인되는 바와 같이, 본 실시예에서 시험된 항체 제형이 충진되고 3 cycles (각 cycle: 고온(30±2℃) 노출 및 저온(-5±3℃) 노출) 처리된 미리 충진된 시린지(pre-filled syringes)는, SE-HPLC에 의한 %HMW, 비환원(non-reducing) CE-SDS에 의한 %전체 순도(%Total purity), TNF-α 결합 분석(binding assay)에 의한 %상대 결합 활성(%relative binding activity) 및 세포 기반(cell based) TNF-α 중화 분석(neutralization assay)에 의한 %상대 역가(%relative potency)에 관한 4개의 주요 품질 속성(critical quality attributes, CQA) 면에서 기준치(baseline)와 비교하여, 유의미한 변화가 관찰되지 않았으며, 안정성 허용 기준(stability acceptance criteria)을 만족하는 결과를 나타내었다.
그 외에도, 본 실시예에서 시험된 항체 제형 제품(prefilled syringe) 내의 항체의 전하 변이체, 아미노산 잔기의 산화 정도, 내독성 수준, 외관 (투명도, 육안 관찰 가능한 입자 등), pH, 단백질 농도, 및 미립자 수준 역시, reference와 비교하여 유의미한 차이를 보이지 않았으며, 안정성 허용 기준 (stability acceptance criteria)를 만족하는 결과를 나타내었다.
또한 시험된 미리 충진된 시린지(pre-filled syringe)들 중 어느 것도 용기의 밀폐 저하(closure breaches)가 관찰되지 않았다.
이상 살펴본 바와 같이, 본 실시예에서 시험된 항체 제형이 제품화 직후에 수 차례의 동결/해동 사이클 (thermal cycles)에 노출된 경우에도 제품 내 안정성이 우수함이 확인되었다. 이러한 결과는 항체 제형 제품의 선적 또는 보관 동안의 온도 이탈(temperature excursions)의 영향을 예측 가능하게 하여, 항체 처방에 도움을 줄 수 있을 것으로 기대된다.
실시예 5. 실온에서의 저장 안정성 평가 - 환자 편의 안정성 연구(Patient Convenience Stability Study)
장기간 저장 조건(5±3℃)에서 48개월 동안 보관된 실시예 4의 제형 샘플에 대하여, 실온 조건(30±2℃ 및 60±5% RH) 하에서 30일 동안 보관하면서 0일, 15일, 30일 시점에 표 19의 물성을 측정하였다. 구체적인 측정 방법은 실시예 4에서 수행한 바와 같다.
실온 저장 조건에서의 안정성 결과(30 ± 2ºC/65 ± 5% RH)
시험 항목(Test Item) 시점(Time Point)
0 Day 15 Days 30 Days
외관(Appearance) 색(Color) B8 < sample < B7 N/A B9 < sample < B8
투명도(Clarity) 17 17
가시 입자(Visible particles) 입자가 거의 없음(Practically free from particles) 입자가 거의 없음(Practically free from particles)
pH 5.3 5.3
단백질 함량(Protein content) (A280) 50.1 50.7
Size exclusion chromatography
(SE-HPLC)		 0.7 0.8 0.9
CE-SDS
(non-reducing)		 96.9 95.6 96.1
1.9 1.9 1.7
icIEF 29 31 33
62 59 56
9 10 11
FRET에 의한 TNF-α에 대한 CIBA(Competitive inhibition binding assay) 102 100 106
NF-κB 리포터 유전자에 의한 TNF-α 중화 분석 93 100 86
입자상 물질(Particulate matter) 6 N/S 12
1,231 923
N/A: not applicable
상기 표 19 및 도 12a-12e에서 확인되는 바와 같이, 본 실시예에서 시험된 항체 제형 샘플은 장기간 저장 조건 (5±3℃)에서 48개월 동안 보관된 이후, 실온 조건(30±2℃ 및 60±5% RH) 하에서 30일 동안 시험한 결과, SE-HPLC에 의한 %HMW, 비환원(non-reducing) CE-SDS에 의한 %전체 순도(%Total purity), TNF-α 결합 분석(binding assay)에 의한 %상대 결합 활성(%relative binding activity) 및 세포 기반(cell based) TNF-α 중화 분석(neutralization assay)에 의한 %상대 역가(%relative potency)에 관한 4개의 주요 품질 속성(critical quality attributes, CQA) 면에서 기준치(baseline)(0일)와 비교하여, 유의미한 변화가 관찰되지 않았으며, 안정성 허용 기준(stability acceptance criteria)을 만족하는 결과를 나타내었다.
또한 icIEF에 의한 %Main 역시 기준치(baseline)(0일)와 비교하여, 유의미한 변화가 관찰되지 않았으며, 안정성 허용 기준(stability acceptance criteria)을 만족하는 결과를 나타내었다.
따라서, 본 발명의 약제학적 조성물은 오리지널 및 그의 바이오시밀러 대비 현저히 개선된 환자들의 저장 편의성(Patient Convenience), 더 긴 상용 기간 특성을 나타낸다.

Claims (46)

  1. 항-TNFα 항체, 히스티딘 및 폴리소르베이트 20을 포함하고,
    pH는 5.0 내지 5.5 이고,
    다음 중 선택된 하나 이상의 특징을 갖는 약제학적 조성물;
    (i) 히스티딘을 포함하지 않는 조성물(Histidine-free)과 비교하여 광 안정성이 개선; 및
    (ii) 폴리소르베이트 20 대신 폴리소르베이트 80을 포함하는 조성물(polysorbate 80-containing)과 비교하여 열 안정성, 동결 용융 안정성, 또는 이들 모두가 개선.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 광 안정성의 개선은 광 노출 조건에서 항체의 아미노산 잔기의 산화율 및/또는 응집물의 함량(%High Molecular Weight; %HMW)이 감소된 것인, 약제학적 조성물
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 조성물은, 히스티딘을 포함하지 않는 조성물과 비교하여, 광 노출 조건에서 상기 항체의 아미노산 잔기의 산화율 및/또는 응집물의 함량(%High Molecular Weight; %HMW)이 적은 것인, 약제학적 조성물
  4. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 광 노출 조건은 1.2 million lux hours 이상 및 200 watt hours/square meter 이상인 것인, 약제학적 조성물.
  5. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체의 아미노산 잔기는 항체 중쇄의 256번째 위치의 메티오닌 잔기인 것인 약제학적 조성물.
  6. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 아미노산 잔기의 산화율은 광 노출 조건에서의 항체 중쇄의 256번째 위치의 메티오닌 잔기의 산화율(%Met256)로 측정되며, %Met256이 64% 이하인, 약제학적 조성물.
  7. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 아미노산 잔기의 산화율은 광 노출 조건에서의 항체 중쇄의 256번째 위치의 메티오닌 잔기의 산화율(%Met256)로 측정되며, 히스티딘을 포함하지 않는 조성물의 광 노출 조건에서의 %Met256와 비교하여 15% 이상 적은 것인, 약제학적 조성물.
  8. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 아미노산 잔기의 산화율의 변화량은 광 노출 조건에서의 항체 중쇄의 256번째 위치의 메티오닌 잔기의 산화율(%Met256)과 기저군 또는 암대조군의 %Met256에 대한 차이값(Δ%Met256)으로 측정되며, Δ%Met256이 55% 이하인, 약제학적 조성물.
  9. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 아미노산 잔기의 산화율의 변화량은 광 노출 조건에서의 항체 중쇄의 256번째 위치의 메티오닌 잔기의 산화율(%Met256)과 기저군 또는 암대조군의 %Met256에 대한 차이값(Δ%Met256)으로 측정되며,
    히스티딘을 포함하지 않는 조성물과 비교하여, Δ%Met256이 10% 이상 적은 것인, 약제학적 조성물.
  10. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 응집물의 함량(%High Molecular Weight; %HMW)은 광 노출 조건에서의 응집물의 함량으로 측정되며, %HMW이 15% 이하인, 약제학적 조성물.
  11. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 응집물의 함량은 광 노출 조건에서의 응집물의 함량으로 측정되며, 히스티딘을 포함하지 않는 조성물의 광 노출 조건에서의 %HMW 와 비교하여 5% 이상 적은 것인, 약제학적 조성물.
  12. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 응집물의 함량의 변화량은 광 노출 조건에서의 응집물의 함량과 기저군 또는 암대조군의 응집물의 함량에 대한 차이값(Δ%HMW)으로 측정되며, Δ%HMW 이 15% 이하인, 약제학적 조성물.
  13. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 응집물의 함량의 변화량은 광 노출 조건에서의 응집물의 함량과 기저군 또는 암대조군의 응집물의 함량에 대한 차이값(Δ%HMW)으로 측정되며, 히스티딘을 포함하지 않는 조성물과 비교하여, 3% 이상 적은 것인, 약제학적 조성물.
  14. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 히스티딘은 항산화제(anti-oxidant agent), 항응집제(anti-aggregation agent), 또는 이들 모두로서 기능하는 것인, 약제학적 조성물.
  15. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 열 안정성의 개선은 40±2℃에서 2주 보관 동안의 응집물의 함량(%High Molecular Weight; %HMW)으로 측정되는 것인, 약제학적 조성물.
  16. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은, 폴리소르베이트 20 대신 폴리소르베이트 80을 포함하는 조성물(polysorbate 80-containing)과 비교하여, 40±2℃에서 2주 보관 후의 응집물의 함량(%High Molecular Weight; %HMW)이 적은 것인, 약제학적 조성물
  17. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 40±2℃에서 2주 보관 동안의 응집물의 함량(%High Molecular Weight; %HMW)이 0.70% 이하인 것인, 약제학적 조성물.
  18. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 동결 용융 안정성의 개선은 -70±10℃/25℃ 조건에서 동결-용융 5 사이클 후 응집물의 함량(%High Molecular Weight; %HMW)으로 측정되는 것인, 약제학적 조성물.
  19. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은, 폴리소르베이트 20 대신 폴리소르베이트 80을 포함하는 조성물(polysorbate 80-containing)과 비교하여, -70±10℃/25℃에서 동결-용융 5 cycle 후(Freeze-thaw 5 cycle)의 응집물의 함량(%High Molecular Weight; %HMW)이 적은 것인, 약제학적 조성물
  20. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 -70±10℃/25℃에서 동결-용융 5 cycle 후의 응집물의 함량(%High Molecular Weight; %HMW)이 0.49% 이하인 것인, 약제학적 조성물.
  21. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 동결 용융 안정성의 개선은 -70±10℃/25℃ 조건에서 동결-용융 5 사이클 후 산성 변이체의 함량(%Acidic)으로 측정되는 것인, 약제학적 조성물.
  22. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은, 폴리소르베이트 20 대신 폴리소르베이트 80을 포함하는 조성물(polysorbate 80-containing)과 비교하여, -70±10℃/25℃에서 동결-용융 5 cycle 후(Freeze-thaw 5 cycle)의 산성 변이체의 함량(%Acidic) 또는 -70±10℃/25℃에서 동결-용융 5 cycle 수행 전후의 %Acidic 변화량(Δ%Acidic)이 적은 것인, 약제학적 조성물
  23. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 -70±10℃/25℃에서 동결-용융 5 cycle 후의 산성 변이체의 함량(%Acidic)이 27% 이하인 것인, 약제학적 조성물.
  24. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은, 폴리소르베이트 20 대신 폴리소르베이트 80을 포함하는 조성물과 비교하여, -70±10℃/25℃에서 동결-용융 5 cycle 후의 산성 변이체의 함량(%Acidic)이 0.1% 이상 낮은 것인, 약제학적 조성물.
  25. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 -70±10℃/25℃에서 동결-용융 5 cycle 수행 전후의 %Acidic 변화량(Δ%Acidic)이 2.5% 이하인 것인, 약제학적 조성물.
  26. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은, 폴리소르베이트 20 대신 폴리소르베이트 80을 포함하는 조성물과 비교하여, -70±10℃/25℃에서 동결-용융 5 cycle 수행 전후의 %Acidic 변화량(Δ%Acidic)이 0.2% 이상 낮은 것인, 약제학적 조성물.
  27. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 5±3℃ 온도에서 32개월 내지 52개월 저장된 이후, 30±2℃의 온도에서의 보관 기간이 28일 내지 35일인 것인, 약제학적 조성물.
  28. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 5±3℃ 온도에서 36개월 내지 48개월 저장된 이후, 30±2℃의 온도에서의 보관 기간이 30일인 것인, 약제학적 조성물.
  29. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 5±3℃ 온도에서 32개월 내지 52개월 저장된 이후, 30±2℃의 온도에서 28일 내지 35일 보관된 경우, 다음 중에서 선택된 하나 이상의 특징을 갖는 것인, 약제학적 조성물:
    탁도가 20 NTU(nephelometric turbidity unit) 이하,
    TNFα 결합 활성이 약 90% 이상,
    TNFα 중화 활성이 약 80% 이상,
    전체 순도(Total purity) 가 93% 이상,
    응집물의 함량(%HMW)이 2% 이하,
    산성 변이체 함량(%Acidic)이 33% 이하,
    Main 단백질의 함량(%Main)이 55% 이상,
    염기성 변이체 함량(%basic)이 14% 이하,
    조성물 0.8mL 내의 평균 입경이 10 um 이상인 입자수가 1500개 이하,
    조성물 0.8mL 내의 평균 입경이 25 um 이상인 입자수가 40개 이하, 및
    내독소 함량이 8 EU/mL 이하.
  30. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-TNFα 항체는 아달리무맙인 것인, 약제학적 조성물.
  31. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-TNFα 항체는 약 50mg/mL 또는 약 100mg/mL의 농도인 것인 약제학적 조성물.
  32. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 히스티딘은 50 mM 내지 89 mM 인 것인, 약제학적 조성물.
  33. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 히스티딘은 약 59 mM 인 것인, 약제학적 조성물.
  34. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 히스티딘을 제외한 아미노산은 포함하지 않는 것인, 약제학적 조성물.
  35. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 폴리소르베이트 20은 0.04%(w/v) 초과 0.2%(w/v)이하의 농도로 포함되는 것인, 약제학적 조성물.
  36. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 폴리소르베이트 20은 약 0.08%(w/v) 인 것인 약제학적 조성물.
  37. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 폴리소르베이트 80을 포함하지 않는 것인, 약제학적 조성물.
  38. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 솔비톨, 만니톨, 메글루민, 트레할로오스, 슈크로오스, 말토오스, 락토오스, 글루코오스, 자일리톨, 아라비톨, 에리트리톨, 락티톨, 말티톨 및 이노시톨로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 더 포함하는 것인, 약제학적 조성물.
  39. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 시트레이트를 더 포함하는 것인, 약제학적 조성물.
  40. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 포스페이트, 숙시네이트 및 아세테이트로 이루어진 군에서 1종 이상을 더 포함하는 것인, 약제학적 조성물.
  41. 제40항에 있어서,
    상기 조성물은 시트레이트를 포함하지 않는 것인, 약제학적 조성물.
  42. 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 염화암모늄, 황산암모늄, 탄산암모늄, 질산암모늄, 염화나트륨, 황산나트륨, 염화칼륨, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 및 에틸렌다이아민테트라아세트산(ethylenediaminetetraacetic acid, EDTA)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함하지 않는 것인, 약제학적 조성물.
  43. 제1항 내지 42항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물을 포함하고,
    상기 약제학적 조성물은, 48시간 동안 30±2℃의 고온 조건 노출 및 48시간 동안 -5±3℃ 저온 조건 노출을 3 cycle 수행시 온도 변화에 대한 안정성을 갖는 것인, 컨테이너.
  44. 제43항에 있어서,
    상기 온도 변화에 대한 안정성은, TNFα 결합 활성, TNFα 중화 활성, 미립자 개수, 아미노산 잔기의 산화, 투명도, pH, 단백질 농도, 단백질 응집률, 순도, 전하 변이체, 및 내독소로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상으로 측정되는 것인, 컨테이너.
  45. 제43항 또는 제44항에 있어서, 48시간 동안 30±2℃의 고온 조건 노출 및 48시간 동안 -5±3℃ 저온 조건 노출을 3 cycle 수행 후, 상기 약제학적 조성물은 다음 중에서 선택된 하나 이상의 특징을 갖는 것인, 컨테이너:
    TNFα 결합 활성이 약 90% 이상,
    TNFα 중화 활성이 약 90% 이상,
    항체 중쇄의 34번째 위치의 메티오닌의 산화율이 약 1.1% 이하,
    항체 중쇄의 83번째 위치의 메티오닌의 산화율이 약 0.9% 이하,
    항체 중쇄의 256번째 위치의 메티오닌의 산화율이 약 6.0% 이하,
    항체 중쇄의 432번째 위치의 메티오닌의 산화율이 약 0.5% 이하,
    항체 경쇄의 4번째 위치의 메티오닌의 산화율이 약 0.9% 이하,
    탁도가 20 NTU(nephelometric turbidity unit) 이하,
    전체 순도(Total purity) 가 94%(w/v) 이상,
    조성물 0.8mL 내의 평균 입경이 10 um 이상인 입자수가 2500개 이하,
    조성물 0.8mL 내의 평균 입경이 25 um 이상인 입자수가 100개 이하, 및
    내독소 함량이 8 EU/mL 이하.
  46. 제40항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 컨테이너는 바이알, PFS(pre-filled syringe), 또는 PFP(pre-filled pen)를 포함하는 것인, 컨테이너.
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