WO2021083920A1 - Composition containing prebiotic bacteria and protector strains - Google Patents

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WO2021083920A1 PCT/EP2020/080216 EP2020080216W WO2021083920A1 WO 2021083920 A1 WO2021083920 A1 WO 2021083920A1 EP 2020080216 W EP2020080216 W EP 2020080216W WO 2021083920 A1 WO2021083920 A1 WO 2021083920A1
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skin
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Stefan Gallinat
Daniel Richter
Petra SCHÖNDIENST
Svenja Lügger
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Abstract

The invention relates to a cosmetic or dermatological composition containing: at least one prebiotically active bacteria strain which has a positive influence on skin health when settling on the skin; a protector strain of the genus Lactobacillus; and at least one cosmetic adjuvant. The invention further relates to a method for the cosmetic or dermatological treatment of the skin, wherein the composition according to the invention is applied to the skin. The invention also relates to a process for preparing the cosmetic or dermatological composition according to the invention.

Description

Zusammensetzung mit probiotischen Bakterien und Protektor-Stämmen Composition with probiotic bacteria and protector strains
Die vorliegende Erfindung betrifft eine kosmetische oder dermatologische Zusammenset zung, die mindestens einen probiotisch wirksamen Bakterienstamm, der bei Ansiedlung auf der Haut die Hautgesundheit positiv beeinflusst, einen Protektor-Stamm der Gattung Lacto bacillus und mindestens einen kosmetischen Hilfsstoff umfasst. Die Erfindung betrifft ferner ein Verfahren zur kosmetischen oder dermatologischen Behandlung der Haut, bei dem man die Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung auf die Haut aufträgt. Die Erfindung be trifft ferner auch ein Verfahren zur Herstellung der kosmetischen oder dermatologischen Zu sammensetzung der vorliegenden Erfindung. The present invention relates to a cosmetic or dermatological composition which comprises at least one probiotically active bacterial strain which has a positive effect on skin health when it settles on the skin, a protector strain of the genus Lacto bacillus and at least one cosmetic adjuvant. The invention also relates to a method for the cosmetic or dermatological treatment of the skin, in which the composition of the present invention is applied to the skin. The invention also relates to a method for producing the cosmetic or dermatological composition of the present invention.
Der Wunsch, schön und attraktiv auszusehen, ist von Natur aus im Menschen verwurzelt. Auch wenn das Schönheitsideal im Laufe der Zeit Wandlungen erfahren hat, so ist das Stre ben nach einem makellosen Äußeren immer das Ziel der Menschen gewesen, da ein sympa thisches Erscheinungsbild ihr Selbstwertgefühl und die Anziehungskraft auf ihre Mitmen schen erhöht. Einen wesentlichen Anteil an einem schönen und attraktiven Äußeren hat da bei der Zustand und das Aussehen der Haut. The desire to look beautiful and attractive is inherently rooted in people. Even if the ideal of beauty has changed in the course of time, striving for a flawless appearance has always been the goal of people, as a personable appearance increases their self-esteem and the attraction to others. The condition and appearance of the skin play an important part in a beautiful and attractive appearance.
Kosmetische und dermatologische Zusammensetzungen zur Verbesserung der Hautge sundheit sind im Stand der Technik umfangreich beschrieben. In den vergangenen Jahren ist zunehmend spekuliert worden, dass Störungen der Hautgesundheit, die durch Infektionen, Stress, falsche Ernährung, Medikamente, Umweltfaktoren oder ähnliches ausgelöst werden, auf unerwünschte Veränderungen des natürlichen Hautmikrobioms zurückzuführen sein könnten. Cosmetic and dermatological compositions for improving skin health are extensively described in the prior art. In recent years there has been increasing speculation that disorders of the skin health caused by infections, stress, improper nutrition, medication, environmental factors or the like could be traced back to undesired changes in the natural skin microbiome.
Es wurden daher Behandlungsansätze vorgeschlagen, bei denen das Hautmikrobiom durch die gezielte Ansiedlung von metabolisch aktiven, probiotisch wirksamen Bakterienstämmen zu verbessern, indem die Mikrobiom-Homöostase wiederhergestellt oder aufrecht erhalten wird. US 2018/0104283 A1 beschreibt ein Verfahren, bei dem natürlich auf der Haut vor kommende Bakterienstämme der Haut zugeführt werden, um potenziell pathogene Mikroor ganismen zu verdrängen. WO 2016/172196 A1 beschreibt ein Verfahren zur Behandlung von Akne bei einem Patienten, bei denen lebende C. acnes- Stämme auf die Haut des Pati enten angesiedelt werden. Allerdings hat es sich wiederholt als schwierig erwiesen, eine ausreichende Menge der metabolisch aktiven Bakterienstämme auf der Haut anzusiedeln. Da die Haut von Bakterien dicht besiedelt ist, müssen sich Bakterien, die auf die Haut aufgetragen werden, zunächst im Mikrobiom etablieren, was aufgrund der begrenzten Nährstoffe und der komplexen Interakti onen innerhalb der verschiedenen Bakterien im Mikrobiom schwierig ist. Treatment approaches have therefore been proposed in which the skin microbiome is improved through the targeted settlement of metabolically active, probiotically effective bacterial strains by restoring or maintaining the microbiome homeostasis. US 2018/0104283 A1 describes a method in which bacterial strains naturally occurring on the skin are supplied to the skin in order to displace potentially pathogenic microorganisms. WO 2016/172196 A1 describes a method for treating acne in a patient, in which live C. acnes strains are settled on the patient's skin. However, it has repeatedly proven difficult to establish a sufficient amount of the metabolically active bacterial strains on the skin. Since the skin is densely populated by bacteria, bacteria that are applied to the skin must first establish themselves in the microbiome, which is difficult due to the limited nutrients and the complex interactions within the various bacteria in the microbiome.
Dies führt regelmäßig dazu, dass auf die Haut aufgetragene Bakterien von den Mikroorga nismen der bestehenden Hautflora verdrängt werden. Aus diesem Grund ist versucht wor den, den auf die Haut aufgetragenen Bakterien ein Wachstum zu ermöglichen, indem zu nächst die bestehende Hautflora mit einem desinfizierenden Mittel oder mit einem Antibioti kum zurückgedrängt wird. Allerdings stellen solche Maßnahmen einen verhältnismäßig schweren Eingriff in das Mikrobiom dar, aus dem sich nachhaltig unerwünschte oder sogar pathologische Verschiebungen im Mikrobiom ergeben können. This regularly leads to bacteria applied to the skin being displaced by the microorganisms of the existing skin flora. For this reason, attempts have been made to allow the bacteria applied to the skin to grow by initially pushing back the existing skin flora with a disinfectant or an antibiotic. However, such measures represent a relatively difficult intervention in the microbiome, which can result in lasting undesirable or even pathological shifts in the microbiome.
Es war daher die Aufgabe der vorliegenden Erfindung, Zusammensetzungen und Verfahren bereitzustellen, mit denen probiotisch wirksame Bakterienstämme, die die Hautgesundheit positiv beeinflussen, in ausreichender Menge auf der Haut angesiedelt und in das Mikrobiom integriert werden können. It was therefore the object of the present invention to provide compositions and methods with which probiotic bacterial strains which have a positive effect on skin health can be settled in sufficient quantities on the skin and integrated into the microbiome.
Überraschend gelöst wird die Aufgabe durch eine kosmetische Zusammensetzung, die min destens die folgenden Bestandteile umfasst oder aus diesen besteht: a) mindestens einen probiotisch wirksamen Bakterienstamm, der bei Ansiedlung auf der Haut die Hautgesundheit positiv beeinflusst; b) mindestens einen Protektor-Stamm der Gattung Lactobacillus, der die Ansiedlung des probiotisch wirksamen Bakterienstamms fördert; und c) mindestens einen kosmetischen Hilfsstoff. The object is surprisingly achieved by a cosmetic composition which comprises or consists of at least the following components: a) at least one probiotically active bacterial strain which has a positive effect on the health of the skin when it settles on the skin; b) at least one protector strain of the genus Lactobacillus, which promotes the settlement of the probiotic bacterial strain; and c) at least one cosmetic auxiliary.
Es konnte festgestellt werden, dass die gleichzeitige Verabreichung von probiotisch wirksa men Bakterienstämmen mit Lactobacillus- Stämmen dazu führt, dass die probiotischen Bak terienstämme sich signifikant besser in das bestehende Hautmikrobiom integrieren lassen.It was found that the simultaneous administration of probiotic bacterial strains with Lactobacillus strains leads to the fact that the probiotic bacterial strains can be integrated significantly better into the existing skin microbiome.
Es wird vermutet, dass Lactobacillus- Stämme die probiotischen Bakterienstämmen nach ihrer Aufbringung auf die Haut vor einer Verdrängung durch die bestehenden Mikroorganis men auf der Haut schützen. Aus diesem Grund werden die Lactobacillus- Stämme vorliegend als "Protektor-Stämme" bezeichnet. It is assumed that Lactobacillus strains protect the probiotic bacterial strains from being displaced by the existing microorganisms on the skin after they have been applied to the skin. For this reason, the Lactobacillus strains are referred to herein as "protector strains".
Die erfindungsgemäße Zusammensetzung umfasst, wie oben aufgeführt, als ersten Bestand teil einen probiotisch wirksamen Bakterienstamm, der bei Ansiedlung auf der Haut die Haut- gesundheit positiv beeinflusst. Wie vorliegend verwendet bedeutet "probiotisch wirksam", dass der betreffende Bakterienstamm bei Verabreichung an den Menschen in ausreichender Menge gesundheitsfördernde Wirkungen vermittelt. Im vorliegenden Fall wird der Begriff im Zusammenhang mit solchen Bakterienstämmen verwendet, die sich nach Verabreichung an die Haut auf dieser ansiedeln, d.h. durch Zellteilung vermehren, und durch ihre Anwesenheit in der Hautflora die Hautgesundheit positiv beeinflussen. As mentioned above, the composition according to the invention comprises, as the first component, a probiotically active bacterial strain which, when it settles on the skin, affects the skin health positively influenced. As used herein, “probiotically effective” means that the bacterial strain in question imparts health-promoting effects when administered to humans in sufficient quantities. In the present case, the term is used in connection with those bacterial strains that settle on the skin after administration to the skin, ie multiply through cell division, and have a positive effect on skin health through their presence in the skin flora.
Als probiotisch wirksame Bakterienstämme kommen im Rahmen der vorliegenden Erfindung insbesondere Bakterien der Gattung Staphylococcus und Cutibacterium in Betracht. Bei die sen Gattungen handelt es sich um solche, die in einer normalen Hautflora des Menschen regelmäßig vertreten sind. In einer besonders bevorzugten Ausführungsform gehört der min destens eine probiotisch wirksame Bakterienstamm zu einer Spezies, die ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus hominis und Cutibacterium acnes. In the context of the present invention, bacteria of the genus Staphylococcus and Cutibacterium are particularly suitable as probiotically effective bacterial strains. These genera are those that are regularly represented in normal human skin flora. In a particularly preferred embodiment, the at least one probiotically effective bacterial strain belongs to a species which is selected from the group consisting of Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus hominis and Cutibacterium acnes.
Staphylococcus epidermidis und Staphylococcus hominis sind Koagulase-negative, fakultativ pathogene, grampositive Bakterien, welche die Haut und Schleimhäute des Menschen besie delt. Vorzugsweise handelt es sich bei dem mindestens einen S. epidermidis- Stamm und/oder dem mindestens einen S. hominis-Sta nicht um einen A nti b i oti ka- res i ste nte n Stamm. Es sind S. epidermidis- Stämme und S. hominis-Stämme bekannt, die gegen herkömmliche An tibiotika wie Penicillin Resistenzen entwickelt haben und daher mit entsprechenden Präpara ten nicht behandelt werden können. Es ist in der Literatur beschrieben worden, dass S. epidermidis- Stämme und S. hominis-Stämme in der natürlichen Hautflora aktiv an der Kon trolle des Wachstums von pathogenen Erregern wie S. aureus- Stämmen beteiligt sind. Aus diesem Grund führt die Etablierung von Nicht-pathogenen S. epidermidis- Stämmen zur Ver besserung der Hautgesundheit. Staphylococcus epidermidis and Staphylococcus hominis are coagulase-negative, facultatively pathogenic, gram-positive bacteria that inhabit human skin and mucous membranes. Preferably, the at least one S. epidermidis strain and / or the at least one S. hominis strain is not an antimicrobial strain. S. epidermidis strains and S. hominis strains are known which have developed resistance to conventional antibiotics such as penicillin and therefore cannot be treated with appropriate preparations. It has been described in the literature that S. epidermidis strains and S. hominis strains are actively involved in the control of the growth of pathogenic agents such as S. aureus strains in the natural skin flora. For this reason, the establishment of non-pathogenic S. epidermidis strains leads to an improvement in skin health.
Die Spezies C. acnes bezeichnet grampositive, anaerobe, stäbchenförmige Bakterien, die bis 2016 taxonomisch nur als Propionibacterium acnes zusammengefasst wurden. Die Spe zies umfasst pathogene und nicht-pathogene Vertreter. Pathogene Vertreter dieser Spezies C. acnes tragen nach heutigen Erkenntnissen maßgeblich zur Entwicklung von Akne beim Menschen bei während nicht-pathogene Stämme für die Erhaltung einer stabilen Mikrobiom- Zusammensetzung wichtig sind. Die Spezies lässt sich in drei phylogenetisch unterscheidba re Typen einteilen, die vorliegend als Typen I, II und III bezeichnet werden. Die Bakterien vom Typ I werden weiter in die Subtypen IA, IB und IC unterteilt. Subtyp 1A wird weiter in die Untergruppen 1A1 und 1A2 unterteilt. Viele nicht-pathogene Stämme von C. acnes gehören zum (a) Typ I, Subtyp IA, Untergruppe IA2, (b) Typ I, Subtyp IB, oder (c) Typ II. Es ist daher bevorzugt, dass die erfindungsgemäße Zusammensetzung mindestens einen Stamm der Spezies C. acnes umfasst, wobei dieser Stamm vorzugsweise zum (a) Typ I, Subtyp IA, Untergruppe IA2, (b) Typ I, Subtyp IB, oder (c) Typ II gehört. In einer besonderen Ausführungsform umfasst die Zusammensetzung einen oder mehrere C. acnes Stämme vom Typ I, Subtyp IA, Untergruppe IA2. In einerweiteren besonderen Ausführungsform umfasst die Zusammensetzung einen oder mehrere C. acnes Stämme vom Typ I, Subtyp IB. In einer weiteren besonderen Ausführungsform umfasst die Zusammensetzung einen oder mehrere C. acnes Stämme vom Typ II. The species C. acnes describes gram-positive, anaerobic, rod-shaped bacteria, which until 2016 were taxonomically only grouped together as Propionibacterium acnes. The species includes pathogenic and non-pathogenic representatives. According to current knowledge, pathogenic representatives of this species, C. acnes, contribute significantly to the development of acne in humans, while non-pathogenic strains are important for maintaining a stable microbiome composition. The species can be divided into three phylogenetically different types, which are referred to here as types I, II and III. Type I bacteria are further subdivided into subtypes IA, IB and IC. Subtype 1A is further divided into subgroups 1A1 and 1A2. Many non-pathogenic strains of C. acnes belong to (a) type I, subtype IA, subgroup IA2, (b) type I, subtype IB, or (c) type II. It is therefore preferred that the composition according to the invention comprises at least one strain of the species C. acnes, this strain preferably belonging to (a) type I, subtype IA, subgroup IA2, (b) type I, subtype IB, or (c) type II heard. In a particular embodiment, the composition comprises one or more C. acnes strains of type I, subtype IA, subgroup IA2. In a further particular embodiment, the composition comprises one or more C. acnes strains of type I, subtype IB. In a further particular embodiment, the composition comprises one or more C. acnes strains of type II.
In einerweiteren besonders bevorzugten Ausführungsform umfasst die erfindungsgemäße Zusammensetzung jeweils mindestens einen Stamm vom Typ I, Subtyp IA, Untergruppe IA2, mindestens einen Stamm vom Typ I, Subtyp IB, sowie mindestens einen Stamm vom Typ II. Besonders bevorzugt ist es, dass die erfindungsgemäße Zusammensetzung mehrere Stäm me vom Typ I, Subtyp IA, Untergruppe IA2, in Kombination mit mehreren Stämmen vom Typ I, Subtyp IB, sowie mehreren Stämmen vom Typ II umfasst. In a further particularly preferred embodiment, the composition according to the invention comprises in each case at least one strain of type I, subtype IA, subgroup IA2, at least one strain of type I, subtype IB, and at least one strain of type II. It is particularly preferred that the composition according to the invention comprises several strains of type I, subtype IA, subgroup IA2, in combination with several strains of type I, subtype IB, as well as several strains of type II.
Es ist bevorzugt, dass die Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung eine Gesamtmen ge an probiotisch wirksamen Bakterien im Bereich von 104-1011 CFU/ml, und stärker bevor zugt im Bereich von 107-101° CFU/ml umfasst. It is preferred that the composition of the present invention comprises a total amount of probiotic bacteria in the range of 10 4 -10 11 CFU / ml, and more preferably in the range of 10 7 -10 1 ° CFU / ml.
Die erfindungsgemäße Zusammensetzung umfasst als zweiten Bestandteil mindestens ei nen Protektor-Stamm der Gattung Lactobacillus, der die Ansiedlung des probiotisch wirksa men Bakterienstamms fördert. Bakterien der Gattung Lactobacillus sind grampositive, mikroaerophile oder anaerobe Bakterien, die taxonomisch der Familie der Lactobacillaceae zuzuordnen sind. Es handelt sich um grampositive, in der Regel stäbchenförmige Bakterien, die Zucker und Kohlenhydrate zu Milchsäuren vergären. Bakterien der Gattung Lactobacillus sind insbesondere aus der Lebensmittelindustrie hinreichend bekannt, wo sie häufig als Star terkulturen bei der Herstellung von Milchprodukten verwendet werden. Die Gattung umfasst verschiedene Spezies, die ohne Einschränkung im Rahmen der vorliegenden Erfindung Verwendung finden können. The composition according to the invention comprises, as a second component, at least one protector strain of the genus Lactobacillus, which promotes the settlement of the probiotically active bacterial strain. Bacteria of the genus Lactobacillus are gram-positive, microaerophilic or anaerobic bacteria which taxonomically belong to the Lactobacillaceae family. These are gram-positive, usually rod-shaped bacteria that ferment sugar and carbohydrates into lactic acids. Bacteria of the genus Lactobacillus are particularly well known from the food industry, where they are often used as star cultures in the manufacture of dairy products. The genus includes various species that can be used without restriction within the scope of the present invention.
Geeignete Spezies, die in den Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung als Protek tor-Stämme dienen können, umfassen Lactobacillus delbrueckii, Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus, Lactobacillus delbrueckii subsp. delbrueckii, Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis , Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus amylolyticus, Lactobacillus amylovorus, Lactobacillus aviaries, Lactobacillus bifermentans, Lactobacillus brevis, Lacto- bacillus casei, Lactobacillus coryniformis, Lactobacillus crispatus, Lactobacillus crustorum, Lactobacillus curvatus, Lactobacillus dextrinicus, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus gasseri, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus hilgardii, Lactobacillus iners, Lactobacillus jensenii, Lactobacillus mali, Lactobacillus oryzae, Lactobacillus panis, Lactobacillus para- buchneri, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus paralimentarius, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus ruminis, Lactobacillus salivarius, Lactobacillus selangorensis. Suitable species which can serve as protector strains in the compositions of the present invention include Lactobacillus delbrueckii, Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus, Lactobacillus delbrueckii subsp. delbrueckii, Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus amylolyticus, Lactobacillus amylovorus, Lactobacillus aviaries, Lactobacillus bifermentans, Lactobacillus brevis, Lacto- bacillus casei, Lactobacillus coryniformis, Lactobacillus crispatus, Lactobacillus crustorum, Lactobacillus curvatus, Lactobacillus dextrinicus, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus gasseri, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus hilgardii, Lactobacillus iners, Lactobacillus jensenii, Lactobacillus mali, Lactobacillus oryzae, Lactobacillus panis, Lactobacillus para- buchneri, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus paralimentarius, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus ruminis, Lactobacillus salivarius, Lactobacillus selangorensis.
In einerweiteren bevorzugten Ausführungsform umfasst die Zusammensetzung der vorlie genden Erfindung zwei oder mehr Protektor-Stämme, wie beispielsweise 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 oder 10 Lactobacillus- Stämme. In einer besonders bevorzugten Ausführungsform handelt es sich bei dem mindestens einen Protektor-Stamm, der der erfindungsgemäßen Zusammen setzung beigefügt wird, um einen Stamm der Spezies Lactobacillus plantarum oder Lactoba cillus rhamnosus. In einer besonders bevorzugten Ausführungsform umfasst die erfindungs gemäße Zusammensetzung mindestens einen Stamm der Spezies Lactobacillus plantarum sowie einen Stamm der Spezies Lactobacillus rhamnosus. In einerweiteren bevorzugten Ausführungsform umfasst die erfindungsgemäße Zusammensetzung mehrere Stämme der Spezies Lactobacillus plantarum sowie mehrere Stämme der Spezies Lactobacillus rhamnosus. In a further preferred embodiment, the composition of the present invention comprises two or more protector strains, such as 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 Lactobacillus strains. In a particularly preferred embodiment, the at least one protector strain which is added to the composition according to the invention is a strain of the species Lactobacillus plantarum or Lactoba cillus rhamnosus. In a particularly preferred embodiment, the composition according to the invention comprises at least one strain of the species Lactobacillus plantarum and one strain of the species Lactobacillus rhamnosus. In a further preferred embodiment, the composition according to the invention comprises several strains of the species Lactobacillus plantarum and several strains of the species Lactobacillus rhamnosus.
Erfindungsgemäß bevorzugt ist es, dass der mindestens eine Protektor-Stamm eine antibio tisch wirksame Substanz produziert. Bei der antibiotisch wirksamen Substanz kann es sich um ein Bacteriocin handeln, das vom Lactobacillus produziert und an das umgebende Medi um sezerniert wird. Vorzugsweise produziert der Protektor-Stamm ein Bacteriocin, das aus gewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Nisin, Mersacidin, Lactocin, Acidocin B, und Entereocin P. In einerweiteren bevorzugten Ausführungsform produziert der in der erfin dungsgemäßen Zusammensetzung enthaltene Protektor-Stamm 2 oder mehrere der ge nannten Bacteriocine. It is preferred according to the invention that the at least one protector strain produces an antibiotic substance. The antibiotic substance can be a bacteriocin that is produced by the lactobacillus and secreted to the surrounding medi. The protector strain preferably produces a bacteriocin which is selected from the group consisting of nisin, mersacidin, lactocin, acidocin B, and entereocin P. In a further preferred embodiment, the protector strain contained in the composition according to the invention produces 2 or more of the called bacteriocins.
Es ist bevorzugt, dass der oder die Protektor-Stämme in Bezug auf Art und Menge so ge wählt werden, dass es zu einer Ansiedlung des mindestens einen probiotisch wirksamen Bakterienstamms kommt, die mindestens 2-fach höher ist als die entsprechende Ansiedlung des Bakterienstamms in Abwesenheit des Protektor-Stamms. Noch stärker bevorzugt ist es, dass die Ansiedlung des mindestens einen probiotisch wirksamen Bakterienstamms mindes tens 5-fach, mindestens 10-fach, mindestens 20-fach, mindestens 30-fach, mindestens 40- fach, mindestens 50-fach, mindestens 75-fach, mindestens 100-fach, mindestens 500-fach oder mindestens 1000-fach höher ist als die entsprechende Ansiedlung des Bakterien stamms in Abwesenheit des Protektor-Stamms. It is preferred that the type and amount of the protector strain (s) are selected so that the at least one probiotically effective bacterial strain settles which is at least 2 times higher than the corresponding settlement of the bacterial strain in the absence of the protector trunk. It is even more preferred that the colonization of the at least one probiotically active bacterial strain is at least 5 times, at least 10 times, at least 20 times, at least 30 times, at least 40 times, at least 50 times, at least 75 times , at least 100 times, at least 500 times or is at least 1000 times higher than the corresponding colonization of the bacterial strain in the absence of the protector strain.
Die Wirkung der Protektor-Stämme kann in einfachen Assays gemessen werden, bei denen die Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung, die mindestens einen probiotisch wirk samen Bakterienstamm, mindestens einen Lactobacillus- Stamm, und mindestens einen kosmetischen Hilfsstoff umfasst, mit einer Negativkontrolle verglichen wird. Als Negativkon trolle dient vorzugsweise eine Zusammensetzung die der zu untersuchenden Zusammenset zung weitestgehend gleicht, jedoch keinen Lactobacillus- Stamm umfasst. The effect of the protector strains can be measured in simple assays in which the composition of the present invention, which comprises at least one probiotically effective bacterial strain, at least one Lactobacillus strain, and at least one cosmetic adjuvant, is compared with a negative control. A composition that is largely similar to the composition to be examined, but does not contain a Lactobacillus strain, is preferably used as a negative control.
Es ist bevorzugt, dass die Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung eine Gesamtmen ge an Bakterien der Gattung Lactobacillus im Bereich von 104-109 CFU/ml, und stärker be vorzugt im Bereich von 106-108 CFU/ml umfasst. Dies bedeutet, dass die Protektor-Stämme im Vergleich zu den probiotisch wirksamen Stämmen in weitaus geringeren Mengen in der Zusammensetzung enthalten sein können. Da die Protektor-Stämme den probiotisch wirk samen Stämmen lediglich in der frühen Phase der Besiedelung der Haut einen Wachstums vorteil verschaffen müssen, ist ihre dauerhafte Ansiedlung nicht erforderlich. Entsprechend können die Protektor-Stämme in deutlich geringeren Inokulationdichten auf die Haut aufge bracht werden. It is preferred that the composition of the present invention comprises a total amount of bacteria of the genus Lactobacillus in the range of 10 4 -10 9 CFU / ml, and more preferably in the range of 10 6 -10 8 CFU / ml. This means that the protector strains can be contained in the composition in far smaller amounts compared to the probiotic strains. Since the protector strains only have to provide the probiotic strains with a growth advantage in the early phase of colonization of the skin, their permanent settlement is not necessary. Accordingly, the protector strains can be applied to the skin in significantly lower inoculation densities.
In einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung kommt es nach Aufbringung der erfin dungsgemäßen Zusammensetzung nicht zu einer dauerhaften Etablierung des mindestens einen Protektor-Stamms in der Hautflora des Subjekts, an den die Zusammensetzung verab reicht wird. Dies bedeutet, dass der mindestens eine Protektor-Stamm sich nicht oder nur unzureichend auf der Haut des Subjekts vermehrt. Es ist bevorzugt, dass der mindestens eine Protektor-Stamm nach 24 Stunden, vorzugsweise nach 48 Stunden und stärker bevor zugt nach 72 Stunden nicht mehr oder nur noch in einer geringen Menge auf der Haut des Subjekts nachzuweisen ist. In one embodiment of the present invention, after application of the composition according to the invention, there is no permanent establishment of the at least one protector strain in the skin flora of the subject to whom the composition is administered. This means that the at least one protector strain does not reproduce or only insufficiently reproduces on the skin of the subject. It is preferred that after 24 hours, preferably after 48 hours and more preferably after 72 hours, the at least one protector strain can no longer be detected on the skin of the subject, or only in a small amount.
Neben den probiotischen Bakterienstämmen und den Protektor-Stämmen umfasst die erfin dungsgemäße Zusammensetzung ferner auch mindestens einen kosmetischen Hilfsstoff. Bei diesem kosmetischen Hilfsstoff kann es sich um solche Substanzen handeln, die regelmäßig in kosmetischen oder dermatologischen Produkten als Hilfsstoff verwendet werden. Zu die sen Substanzen zählen Antioxidantien, Löslichkeitsvermittler, Vitamine, Farbstoffe, Träger stoffe, Füllmittel, Emulgatoren, Befeuchtungsmittel und ähnliches. In einer bevorzugten Aus führungsform handelt es sich bei dem kosmetischen Hilfsstoff um Glycerin, Panthenol, Ubichinon Q10 oder Hyaluronsäure. Da die erfindungsgemäße Zusammensetzung zur Verwendung auf der Haut formuliert ist, wird diese einen pH-Wert aufweisen, der im neutralen bis leicht sauren Bereich liegt. Somit ist es bevorzugt, dass die Zusammensetzung einen pH-Wert von 4-8, und vorzugsweise von 5-7 aufweist. In addition to the probiotic bacterial strains and the protector strains, the composition according to the invention also comprises at least one cosmetic auxiliary. This cosmetic auxiliary can be substances that are regularly used as auxiliary in cosmetic or dermatological products. These substances include antioxidants, solubilizers, vitamins, dyes, carriers, fillers, emulsifiers, humectants and the like. In a preferred embodiment, the cosmetic auxiliary is glycerol, panthenol, ubiquinone Q10 or hyaluronic acid. Since the composition according to the invention is formulated for use on the skin, it will have a pH value which is in the neutral to slightly acidic range. Thus it is preferred that the composition have a pH of 4-8, and preferably 5-7.
Bei der erfindungsgemäßen Zusammensetzung handelt es sich vorzugsweise um eine Emulsion. Diese kann in Form einer ÖI-in-Wasser-Emulsion oder einer Wasser-in-ÖI- Emulsion vorliegen. The composition according to the invention is preferably an emulsion. This can be in the form of an oil-in-water emulsion or a water-in-oil emulsion.
In einer anderen Ausführungsform beträgt der Wasseranteil in der Zusammensetzung weni ger als 5%, weniger als 4%, weniger als 3%, weniger als 2%, weniger als 1%, und beson ders bevorzugt weniger als 0,5% (Gew./Gew.). In einer besonders bevorzugten Ausfüh rungsform handelt es sich bei der erfindungsgemäßen Zusammensetzung um eine wasser freie Zusammensetzung. In another embodiment, the water content in the composition is less than 5%, less than 4%, less than 3%, less than 2%, less than 1%, and particularly preferably less than 0.5% (weight / Weight). In a particularly preferred embodiment, the composition according to the invention is an anhydrous composition.
Die erfindungsgemäße Zusammensetzung liegt vorzugsweise in Form eines Gels, einer Creme, einer Salbe oder einer Lotion vor. The composition according to the invention is preferably in the form of a gel, a cream, an ointment or a lotion.
Vorzugsweise umfasst die erfindungsgemäße Zusammensetzung kein Silikonöl, Mineralöl oder Polyethylenglycol. The composition according to the invention preferably does not comprise any silicone oil, mineral oil or polyethylene glycol.
Üblicherweise enthalten kosmetische und dermatologische Zusammensetzungen ein oder mehrere Konservierungsmittel. Im vorliegenden Fall ist es besonders vorteilhaft, Milchsäure als Konservierungsmittel zu verwenden. Da Bakterien der Gattung Lactobacillus Zucker und Kohlenhydrate zu Milchsäure verkehren, sind diese im gewissen Umfang unempfindlich ge genüber Milchsäure. Folglich führt der Zusatz von Milchsäure nicht zu einer Hemmung der metabolischen Aktivität des mindestens einen Protektor-Stamms. In einer besonders bevor zugten Ausführungsform umfasst die Zusammensetzung der Erfindung neben Milchsäure kein weiteres Konservierungsmittel. Cosmetic and dermatological compositions usually contain one or more preservatives. In the present case it is particularly advantageous to use lactic acid as a preservative. Since bacteria of the Lactobacillus genus convert sugar and carbohydrates to lactic acid, they are insensitive to lactic acid to a certain extent. Consequently, the addition of lactic acid does not lead to an inhibition of the metabolic activity of the at least one protector strain. In a particularly preferred embodiment, the composition of the invention comprises no further preservative besides lactic acid.
Die vorliegende Erfindung betrifft in einem weiteren Aspekt ein Verfahren zur Herstellung einer wie oben beschriebenen kosmetischen oder dermatologischen Zusammensetzung, Das Verfahren umfasst dabei Schritte, bei denen man zunächst eine Suspension oder ein Lyophilisat der jeweiligen Bakterienstämme herstellt. Sofern es sich um eine Suspension handelt, können zunächst zwei getrennte Suspensionen hergestellt werden, die anschließend miteinander vermischt werden. Die erste Suspension enthält dabei den mindestens einen probiotisch wirksamen Bakterienstamm, und die zweite Suspension enthält den mindestens einen Lactobacillus-Stamm. Beide Suspensionen kön nen durch Inokulation von Zellmaterial in Wasser oder einen geeigneten Puffer hergestellt werden. Anschließend können beide Suspension miteinander vermischt und mit den weite ren Bestandteilen der kosmetischen oder dermatologischen Zusammensetzung vereinigt werden. In a further aspect, the present invention relates to a method for producing a cosmetic or dermatological composition as described above. The method comprises steps in which a suspension or a lyophilizate of the respective bacterial strains is first produced. If it is a suspension, two separate suspensions can first be produced, which are then mixed with one another. The first suspension contains the at least one probiotic strain of bacteria, and the second suspension contains the at least one Lactobacillus strain. Both suspensions can be prepared by inoculating cell material in water or a suitable buffer. The two suspensions can then be mixed with one another and combined with the other constituents of the cosmetic or dermatological composition.
Sofern die Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung mit Lyophilisaten der Bakterien stämme hergestellt wird, kann zunächst ein Lyophilisat hergestellt werden, das den mindes tens einen probiotisch wirksamen Bakterienstamm umfasst, sowie getrennt davon ein zwei tes Lyophilisat, das den mindestens einen Lactobacillus- Stamm umfasst. Die beiden Lyophilisate können anschließend entweder miteinander vermischt werden und anschlie ßend mit dem mindestens einen kosmetischen Hilfsstoff in Kontakt gebracht werden, oder getrennt voneinander mit dem kosmetischen Hilfsstoff vermengt werden. If the composition of the present invention is produced with lyophilisates of the bacterial strains, a lyophilisate can first be produced which comprises the at least one probiotic bacterial strain, and separately therefrom a second lyophilisate which comprises the at least one Lactobacillus strain. The two lyophilizates can then either be mixed with one another and then brought into contact with the at least one cosmetic auxiliary substance, or mixed with the cosmetic auxiliary substance separately from one another.
Es ist jedoch aus ökonomischen Gesichtspunkten besonders bevorzugt, dass zunächst Sus pensionen der Bakterienstämme miteinander vermischt werden, die dann einer Gefriertrock nung unterzogen werden, sodass ein Lyophilisat erhalten wird, welches alle Bakterienstäm me enthält, die in die kosmetische oder dermatologische Zusammensetzung der vorliegen den Erfindung eingebracht werden sollen. Dieses Lyophilisat, welches sowohl den mindes tens einen probiotisch wirksamen Bakterienstamm als auch den mindestens einen Lactoba cillus-Stamm enthält, wird anschließend mit dem mindestens einen kosmetischen Hilfsstoff, und vorzugsweise mit mehreren kosmetischen Hilfsstoffen, vermischt, um die erfindungsge mäße Zusammensetzung bereitzustellen. From an economic point of view, however, it is particularly preferred that first suspensions of the bacterial strains are mixed with one another, which are then subjected to freeze-drying so that a lyophilisate is obtained which contains all the bacterial strains that are in the cosmetic or dermatological composition of the present invention should be introduced. This lyophilizate, which contains both the at least one probiotic bacterial strain and the at least one Lactoba cillus strain, is then mixed with the at least one cosmetic adjuvant, and preferably with several cosmetic adjuvants, in order to provide the composition according to the invention.
Geeignete Verfahren zur Gefriertrocknung oder Lyophilisation sind dem Fachmann hinläng lich bekannt. Die Gefriertrocknung umfasst das Einfrieren eines Produkts, wie beispielsweise einer Bakteriensuspension unter verringertem Druck und Zufuhr von Wärme, sodass das gefrorene Wasser im Produkt durch Sublimieren entfernt werden kann. Die meisten Produkte können auf 1-5% Restfeuchte getrocknet werden. Für die Gefriertrocknung können erfin dungsgemäß kommerziell erhältliche Geräte verwendet werden, wie beispielsweise die Lyovac™-Geräte von GEA (Berlin, Deutschland), der Gamma 2-20 Gefriertrockner LCM-1 von Christ (Osterode am Harz, Deutschland) oder der Christ Martin™ Alpha 1-2 Gefrier trockner von Fisher Scientific GmbH (Schwerte, Deutschland). In einem noch weiteren Aspekt betrifft die Erfindung ein Verfahren zur kosmetischen oder dermatologischen Behandlung der Haut, das Schritte umfasst, bei denen die oben beschrie bene kosmetische oder dermatologische Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung auf die Haut eines Subjekts, vorzugsweise eines Menschen, aufgetragen wird. Suitable methods for freeze-drying or lyophilization are well known to the person skilled in the art. Freeze drying involves freezing a product, such as a bacterial suspension, under reduced pressure and adding heat so that the frozen water in the product can be removed by sublimation. Most products can be dried to 1-5% residual moisture. In accordance with the invention, commercially available devices can be used for freeze-drying, such as the Lyovac ™ devices from GEA (Berlin, Germany), the Gamma 2-20 freeze dryer LCM-1 from Christ (Osterode am Harz, Germany) or the Christ Martin ™ Alpha 1-2 freeze dryer from Fisher Scientific GmbH (Schwerte, Germany). In yet another aspect, the invention relates to a method for the cosmetic or dermatological treatment of the skin, comprising steps in which the above-described cosmetic or dermatological composition of the present invention is applied to the skin of a subject, preferably a human.
In einer besonderen bevorzugten Ausführungsform wurde die Hautpartie, auf die die Erfin dungsmessezusammensetzung aufgetragen wird, zuvor sorgsam gereinigt. Eine solche Rei nigung kann mit einem Tensid-haltigen Reinigungsmittel erfolgen. Besonders geeignet für diesen Zweck sind Reinigungsmittel, die Benzoylperoxid umfassen, wobei jedoch auch ande re Substanzen in diesem Zusammenhang zum Einsatz gelangen können. In a particularly preferred embodiment, the area of skin to which the invention composition is applied has been carefully cleaned beforehand. Such cleaning can be done with a surfactant-containing cleaning agent. Cleaning agents which comprise benzoyl peroxide are particularly suitable for this purpose, although other substances can also be used in this context.
In einer besonders bevorzugten Ausführungsform handelt es sich bei der Zusammensetzung um eine wasserfreie Zusammensetzung. In einer solchen Zusammensetzung können die Bakterienstämme in Form eines Lyophilisats in einer Ölphase vorliegen. Erst nach Aufträgen der Zusammensetzung auf die Haut kommt das Lyophilisat mit Wasser in Kontakt, was zur Aktivierung des Wachstums und der metabolischen Aktivität der Bakterien führt In a particularly preferred embodiment, the composition is an anhydrous composition. In such a composition, the bacterial strains can be present in the form of a lyophilizate in an oil phase. Only after the composition has been applied to the skin does the lyophilizate come into contact with water, which leads to the activation of the growth and metabolic activity of the bacteria
Die Ölphase kann auf dem Gebiet der Kosmetik übliche Öle umfassen, wie beispielsweise Lecithine, Olivenöl, Sonnenblumenöl, Jojobaöl, Sojaöl, Erdnussöl, Rapsöl, Mandelöl, Palmöl, Kokosöl und Rizinusöl. The oil phase can comprise oils customary in the field of cosmetics, such as, for example, lecithins, olive oil, sunflower oil, jojoba oil, soybean oil, peanut oil, rapeseed oil, almond oil, palm oil, coconut oil and castor oil.
In einer anderen Ausführungsform der vorliegenden Erfindung handelt es sich bei der Zu sammensetzung um eine wasserhaltige Zusammensetzungen. Dies bedeutet, dass die Zu sammensetzung zumindest eine wässrige Phase enthält, in der die Bakterienstämme bei geeigneten Bedingungen aktiviert werden können. In another embodiment of the present invention, the composition is an aqueous composition. This means that the composition contains at least one aqueous phase in which the bacterial strains can be activated under suitable conditions.
Die Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung können in Form einer kosmetischen Zubereitung vorliegen, die als Maske verwendet wird. Vorzugsweise basiert die Maskenzu sammensetzung der vorliegenden Erfindung auf einem wasserfreien Pulver, welches min destens ein Alginat, mindestens ein Calicumsalz sowie mindestens ein Öl umfasst. Die Bak terien können dabei wie oben beschrieben als Lyophilisat in der Ölphase vorliegen. The compositions of the present invention may be in the form of a cosmetic preparation which is used as a mask. The mask composition of the present invention is preferably based on an anhydrous powder which comprises at least one alginate, at least one calcium salt and at least one oil. The bacteria can be present as a lyophilizate in the oil phase, as described above.

Claims

Patentansprüche Claims
1. Kosmetische oder dermatologische Zusammensetzung, umfassend a) mindestens einen probiotisch wirksamen Bakterienstamm, der bei Ansiedlung auf der Haut die Hautgesundheit positiv beeinflusst; b) mindestens einen Protektor-Stamm der Gattung Lactobacillus, der die Ansied lung des probiotisch wirksamen Bakterienstamms fördert; und c) mindestens einen kosmetischen Hilfsstoff. 1. Cosmetic or dermatological composition, comprising a) at least one probiotic strain of bacteria which has a positive effect on the health of the skin when it settles on the skin; b) at least one protector strain of the genus Lactobacillus, which promotes the settlement of the probiotic strain of bacteria; and c) at least one cosmetic auxiliary.
2. Kosmetische oder dermatologische Zusammensetzung nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass der mindestens eine probiotisch wirksame Bakterienstamm zu einer Gattung gehört, die ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Staphylococcus und Cutibacterium. 2. Cosmetic or dermatological composition according to claim 1, characterized in that the at least one probiotically active bacterial strain belongs to a genus which is selected from the group consisting of Staphylococcus and Cutibacterium.
3. Kosmetische oder dermatologische Zusammensetzung nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass der mindestens eine probiotisch wirksame Bakterienstamm zu einer Spezies gehört, die ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus hominis und Cutibacterium acnes. 3. Cosmetic or dermatological composition according to claim 2, characterized in that the at least one probiotically active bacterial strain belongs to a species which is selected from the group consisting of Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus hominis and Cutibacterium acnes.
4. Kosmetische oder dermatologische Zusammensetzung nach einem der vorherge henden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass der mindestens eine Protektor- Stamm zu einer Spezies gehört, die ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Lactobacillus rhamnosus und Lactobacillus plantarum. 4. Cosmetic or dermatological composition according to one of the preceding claims, characterized in that the at least one protector strain belongs to a species selected from the group consisting of Lactobacillus rhamnosus and Lactobacillus plantarum.
5. Kosmetische oder dermatologische Zusammensetzung nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass der mindestens eine kosmetische Hilfsstoff ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Glycerin, Panthenol, Ubichinon Q10 und Hyaluronsäure. 5. Cosmetic or dermatological composition according to claim 1, characterized in that the at least one cosmetic auxiliary is selected from the group consisting of glycerol, panthenol, ubiquinone Q10 and hyaluronic acid.
6. Kosmetische oder dermatologische Zusammensetzung nach einem der vorherge henden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die kosmetische Zusammenset zung in Form einer ÖI-in-Wasser-Emulsion oder Wasser-in-ÖI-Emulsion vorliegt. 6. Cosmetic or dermatological composition according to one of the preceding claims, characterized in that the cosmetic composition is in the form of an oil-in-water emulsion or water-in-oil emulsion.
7. Kosmetische oder dermatologische Zusammensetzung nach einem der vorherge henden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die kosmetische Zusammenset zung in Form eines Gels, einer Creme, einer Salbe oder einer Lotion vorliegt. 7. Cosmetic or dermatological composition according to one of the preceding claims, characterized in that the cosmetic composition is in the form of a gel, a cream, an ointment or a lotion.
8. Kosmetische oder dermatologische Zusammensetzung nach einem der vorherge henden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die kosmetische Zusammenset zung kein Silikonöl, Mineralöl oder Polyethylenglycol umfasst. 8. Cosmetic or dermatological composition according to one of the preceding claims, characterized in that the cosmetic composition comprises no silicone oil, mineral oil or polyethylene glycol.
9. Kosmetische oder dermatologische Zusammensetzung nach einem der vorherge henden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Gesamtmenge der probiotisch wirksamen Bakterien in der kosmetischen Zusammensetzung 104-1011 CFU/ml, und vorzugsweise 107-101° CFU/ml umfasst. 9. Cosmetic or dermatological composition according to one of the preceding claims, characterized in that the total amount of probiotic bacteria in the cosmetic composition comprises 10 4 -10 11 CFU / ml, and preferably 10 7 -10 1 ° CFU / ml.
10. Kosmetische oder dermatologische Zusammensetzung nach einem der vorherge henden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass der mindestens eine Protektor- Stamm mindestens eine antibiotisch wirksame Substanz produziert. 10. Cosmetic or dermatological composition according to one of the preceding claims, characterized in that the at least one protector strain produces at least one antibiotic substance.
11. Kosmetische oder dermatologische Zusammensetzung nach einem der vorherge henden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass der Protektor-Stamm zu einer An siedlung des probiotisch wirksamen Bakterienstamms führt, die mindestens 2-fach höher ist als die entsprechende Ansiedlung des Bakterienstamms in Abwesenheit des Protektor-Stamms. 11. Cosmetic or dermatological composition according to one of the preceding claims, characterized in that the protector strain leads to a settlement of the probiotic bacterial strain which is at least 2 times higher than the corresponding settlement of the bacterial strain in the absence of the protector strain .
12. Kosmetische oder dermatologische Zusammensetzung nach einem der vorherge henden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Zusammensetzung ferner Milchsäure als Konservierungsmittel umfasst. 12. Cosmetic or dermatological composition according to one of the preceding claims, characterized in that the composition further comprises lactic acid as a preservative.
13. Verfahren zur kosmetischen oder dermatologischen Behandlung der Haut, dadurch gekennzeichnet, dass die Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1-12 auf die Haut aufgetragen wird. 13. A method for the cosmetic or dermatological treatment of the skin, characterized in that the composition according to any one of claims 1-12 is applied to the skin.
14. Verfahren nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, dass die Haut vor dem Auf trägen der kosmetischen Zusammensetzung mit einem Tensid-haltigen Reinigungs mittel gereinigt wird. 14. The method according to claim 12, characterized in that the skin is cleaned with a surfactant-containing cleaning agent before the cosmetic composition is applied.
15. Verfahren nach Anspruch 13, dadurch gekennzeichnet, dass das Reinigungsmittel Benzoylperoxid umfasst. 15. The method according to claim 13, characterized in that the cleaning agent comprises benzoyl peroxide.
16. Verfahren zur Herstellung einer kosmetischen oder dermatologischen Zusammenset zung nach einem der Ansprüche 1-12, dadurch gekennzeichnet, dass man eine Sus pension oder ein Lyophilisat, die/das den mindestens einen probiotisch wirksamen Bakterienstamm und den mindestens einen Protektor-Stamm umfasst, mit dem min destens einen kosmetischen Hilfsstoff vermischt. 16. A process for the production of a cosmetic or dermatological composition according to any one of claims 1-12, characterized in that a suspension or a lyophilizate which has the at least one probiotic effect Bacterial strain and the at least one protector strain, mixed with the min least one cosmetic auxiliary.
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