WO2021045235A1

WO2021045235A1 - 低温で高い油脂分解能力を有する新規微生物

Info

Publication number: WO2021045235A1
Application number: PCT/JP2020/033836
Authority: WO
Inventors: 克敏堀
Original assignee: 国立大学法人東海国立大学機構
Priority date: 2019-09-06
Filing date: 2020-09-07
Publication date: 2021-03-11
Also published as: US20220371930A1; EP4026809A1; JPWO2021045235A1; EP4026809A4

Abstract

一つの局面において、本開示は、エステル分解能のある新たな微生物を提供する。一つの局面において、本開示は、油脂分解能のある新たな微生物の組み合わせを提供する。一つの実施形態では、本開示の微生物は、ヤロウィア（Yarrowia）属の酵母を含む。一つの実施形態では、本開示の微生物は、ヤロウィア　リポリティカ（Yarrowia　lipolytica）を含む。一つの実施形態では、本開示は、ブルクホルデリア細菌とヤロウィア酵母との組み合わせを提供する。一つの実施形態では、本開示の微生物を含む油分解剤を提供する。

Description

低温で高い油脂分解能力を有する新規微生物

　本開示は、エステル（例えば、油脂）および／または脂肪酸分解能力を有する微生物およびその使用に関する。より特定すると、トランス脂肪酸含有油脂などの従来分解が困難な油脂を分解するヤロウィア酵母（例えば、ヤロウィア　リポリティカ）に関する。また、本開示は、ブルクホルデリア細菌の油分解能力を向上させるヤロウィア酵母に関する。さらに、本開示は、油分解能力を有する微生物の組み合わせおよびその使用に関する。より特定すると、組み合わせにおける少なくとも１種の微生物単独より改善された油分解能を有する微生物の組み合わせに関する。また、本開示は、微生物の組み合わせによるリパーゼの発現増強に関する。より特定すると、ブルクホルデリア細菌とヤロウィア酵母との組み合わせに関する。

　食品工場や油脂工場の排水には多量の油分が含まれる。この油分は、活性汚泥による処理能力の低下、沈降性の低下による固液分離不全、膜分離活性汚泥法（ＭＢＲ）における膜のファウリング、嫌気消化におけるメタン発酵阻害など、様々な生物処理機能の低下を引き起こす。そのため、油分高含有排水の生物処理の前段として、例えば加圧浮上分離装置などにより油分を除去することが行われている。また、外食産業の厨房排水も油分を多く含むため、油分を除くためのグリーストラップが設置されている。加圧浮上分離装置もグリーストラップのどちらも、悪臭や害虫の発生源であること、分離した油の回収・運搬と産業廃棄物処理にかかるコスト、管理や清掃等にかかる労苦やコストなどの問題を抱えている。このような問題を解決する手段として、微生物による油分解技術が検討され、関連する微生物製剤も複数、市販されているが、設定可能な滞留時間内で望まれるレベルまで、油分濃度を微生物分解により下げるのは極めて困難である。そのため、現状では、加圧浮上分離装置や従来のグリーストラップが用いられていることがほとんどである。

　また、生ゴミの発酵処理においても、油分が多い場合は、発酵阻害や消滅型処理機における排水中への油の高含有などの問題がある。また、加圧浮上分離装置やグリーストラップにより分離回収した油性汚泥は産業廃棄物となるため、その処理には大きなコストがかかる。そこで、これらの油分を微生物で分解することが検討されているが、やはり上述の排水処理と同様に、微生物の分解能力に限界があるのが実情である。

　微生物による油分除去では、以上のように分解速度が問題になるが、特に冬場の低温による活性低下が、微生物の適用を困難にしている場合が多い。特に冬場の低温では、微生物による油脂の分解速度は極めて遅く、特定の微生物により排水処理や廃棄物処理を行うことは不可能であると考えられている。

喜田義一ら、日立化成テクニカルレポート：46号：49-54頁（２００６）

　本発明者らは、鋭意研究した結果、ユニークなエステラーゼ活性を有する新規微生物であるヤロウィア（属）に属する微生物を見出した。この微生物は、トランス脂肪酸含有油脂および／またはトランス脂肪酸を分解・資化できる局面も見出された。この微生物は、低温で油脂および／または脂肪酸を分解・資化できる局面も見出された。この微生物は、短鎖から長鎖までの脂肪酸およびそれらを含むエステル・油脂などを幅広く分解・資化できる局面も見出された。また、本発明者らは、ブルクホルデリア細菌の油分解能力を向上させるヤロウィア酵母を見出した。さらに、本発明者らは、強力に油脂および脂肪酸を分解するブルクホルデリア細菌とヤロウィア酵母との組み合わせを見出した。本開示は、本開示の微生物の組み合わせの応用、例えば油処理等にも関する。本開示は、本開示の微生物の応用、油分解能力を有する新たな微生物の組み合わせおよびこの組み合わせを用いた油分解方法を提供する。

　したがって、本開示は以下を提供する。
（項目Ａ１）
　トランス脂肪酸を分解する能力を有する、ヤロウィア酵母。
（項目Ａ２）
　トランス脂肪酸を資化する能力を有する、ヤロウィア酵母。
（項目Ａ３）
　トランス脂肪酸含有油脂を分解する能力を有する、ヤロウィア酵母。
（項目Ａ４）
　トランス脂肪酸含有油脂を資化する能力を有する、ヤロウィア酵母。
（項目Ａ５）
　１５℃においてエステル（例えば、油脂）および／または脂肪酸を分解する能力を有する、ヤロウィア酵母。
（項目Ａ６）
　１５℃においてエステル（例えば、油脂）および／または脂肪酸を資化する能力を有する、ヤロウィア酵母。
（項目Ａ７）
　前記資化または分解する能力が１５℃において保持される、上記項目のいずれか一項に記載のヤロウィア酵母。
（項目Ａ８）
　短鎖～中鎖脂肪酸（Ｃ２～Ｃ１２）含有エステルを分解する能力を有する、ヤロウィア酵母。
（項目Ａ９）
　短鎖～長鎖脂肪酸（Ｃ２以上）含有油脂を分解する能力を有する、ヤロウィア酵母。
（項目Ａ１０）
　長鎖脂肪酸（Ｃ１３以上）の４－ニトロフェニルエステルよりも短鎖～中鎖脂肪酸（Ｃ２～Ｃ１２）の４－ニトロフェニルエステルに対して高い分解活性を有し、かつ、長鎖脂肪酸（Ｃ１３以上）のトリグリセリドを分解する能力を有する、ヤロウィア酵母。
（項目Ａ１１）
　上記項目Ａにおいて特定される２つ以上の特徴を有する、上記項目のいずれか一項に記載のヤロウィア酵母。
（項目Ａ１２）
　ヤロウィア　リポリティカ（Yarrowia　lipolytica）である、上記項目のいずれか一項に記載の酵母。
（項目Ａ１３）
　受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２７３２で特定されるヤロウィア酵母ＫＨ－２株であるか、またはその誘導株であって該誘導株は、上記項目Ａのいずれか一項または複数に記載のヤロウィア酵母の特徴を有する、上記項目のいずれか一項に記載のヤロウィア酵母。
（項目Ａ１４）
　上記項目のいずれか一項に記載のヤロウィア酵母を含む、油分解剤。
（項目Ａ１５）
　さらなる油処理成分を含む、上記項目のいずれか一項に記載の油分解剤。
（項目Ａ１６）
　（ａ）トランス脂肪酸を分解するため、
　（ｂ）トランス脂肪酸含有油脂を分解するため、
　（ｃ）１５℃においてエステル（例えば、油脂）および／または脂肪酸を分解するため、
　（ｄ）短鎖～中鎖脂肪酸（Ｃ２～Ｃ１２）含有エステルを分解するため、および
　（ｅ）短鎖～長鎖脂肪酸（Ｃ２以上）含有油脂を分解するため
からなる群より選択される少なくとも１つのための、上記項目のいずれか一項に記載のヤロウィア酵母または上記項目のいずれか一項に記載の油分解剤を含む、組成物。
（項目Ａ１７）
　上記項目のいずれか一項に記載のヤロウィア酵母もしくは上記項目のいずれか一項に記載の油分解剤と、または上記項目のいずれか一項に記載の組成物と、さらなる油処理成分とを備える、エステル（例えば、油脂）分解のためのキット。
（項目Ａ１８）
　上記項目のいずれか一項に記載のヤロウィア酵母、または上記項目のいずれか一項に記載の油分解剤、上記項目のいずれか一項に記載の組成物を処理対象に作用させることを包含する、エステル（例えば、油脂）分解除去方法。
（項目Ａ１９）
　前記処理対象はトランス脂肪酸またはトランス脂肪酸含有油脂を含む、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目Ａ２０）
　（ａ）トランス脂肪酸を分解するステップ、
　（ｂ）トランス脂肪酸含有油脂を分解するステップ、
　（ｃ）１５℃においてエステル（例えば、油脂）および／または脂肪酸を分解するステップ、
　（ｄ）短鎖～中鎖脂肪酸（Ｃ２～Ｃ１２）含有エステルを分解するステップ、および
　（ｅ）短鎖～長鎖脂肪酸（Ｃ２以上）含有油脂を分解するステップ、
からなる群より選択される少なくとも一つのステップを含む、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目Ｂ１）
　ブルクホルデリア細菌を含む、リパーゼを生産するヤロウィア酵母とリパーゼを生産するブルクホルデリア細菌との組み合わせで油脂を処理するための組成物。
（項目Ｂ２）
　ヤロウィア酵母を含む、リパーゼを生産するヤロウィア酵母とリパーゼを生産するブルクホルデリア細菌との組み合わせで油脂を処理するための組成物。
（項目Ｂ３）
　ブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母の組み合わせを含む油脂処理のための組み合わせ物であって、該ブルクホルデリア細菌および該ヤロウィア酵母の両方がリパーゼを生産する、組み合わせ物。
（項目Ｂ４）
　前記ヤロウィア酵母はヤロウィア　リポリティカ（Yarrowia　lipolytica）を含む、上記項目のいずれか一項に記載の組成物または組み合わせ物。
（項目Ｂ５）
　前記ブルクホルデリア細菌はブルクホルデリア属細菌を含む、上記項目のいずれか一項に記載の組成物または組み合わせ物。
（項目Ｂ６）
　前記ブルクホルデリア細菌はブルクホルデリア　アルボリス（Burkholderia　arboris）、ブルクホルデリア　アンビファリア（Burkholderia　ambifaria）、またはブルクホルデリア　セパシア　コンプレックス（Burkholderia　cepacia　complex）を含む、上記項目のいずれか一項に記載の組成物または組み合わせ物。
（項目Ｂ７）
　前記ブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母の組み合わせが、各々の単独培養の油脂分解能の値から計算される油脂分解能よりも高い油脂分解能を有する、上記項目のいずれか一項に記載の組成物または組み合わせ物。
（項目Ｂ８）
　前記ブルクホルデリア細菌の細胞数：前記ヤロウィア酵母の細胞数が、１：２０～２０：１である、上記項目のいずれか一項に記載の組成物または組み合わせ物。
（項目Ｂ９）
　前記ブルクホルデリア細菌および前記ヤロウィア酵母の少なくとも１つが１５℃において脂肪酸を分解する能力を有する、上記項目のいずれか一項に記載の組成物または組み合わせ物。
（項目Ｂ１０）
　前記ブルクホルデリア細菌は、ブルクホルデリア　アルボリス（Burkholderia　arboris）ＫＨ－１株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２７３１で特定される菌株）、ブルクホルデリア　アンビファリア（Burkholderia　ambifaria）ＫＨ－１ＡＬ１株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２９７７で特定される菌株）、ブルクホルデリア　セパシア　コンプレックス（Burkholderia　cepacia　complex）ＫＨ－１ＡＬ２株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２９７８で特定される菌株）もしくはブルクホルデリア　セパシア　コンプレックス（Burkholderia　cepacia　complex）ＫＨ－１ＡＬ３株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２９７９で特定される菌株）、またはその誘導株である、上記項目のいずれか一項に記載の組成物または組み合わせ物。
（項目Ｂ１１）
　前記ヤロウィア酵母は、ヤロウィア　リポリティカ（Yarrowia　lipolytica）ＫＨ－２株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２７３２で特定される微生物株）、ヤロウィア　リポリティカ（Yarrowia　lipolytica）ＫＨ－２ＡＬ１株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０９１で特定される微生物株）、もしくはヤロウィア　リポリティカ（Yarrowia　lipolytica）ＫＨ－２ＡＬ３株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０９２で特定される微生物株）、またはその誘導株である、上記項目のいずれか一項に記載の組成物または組み合わせ物。
（項目Ｂ１２）
　油分解剤である、上記項目のいずれか一項に記載の組成物または組み合わせ物。
（項目Ｂ１３）
　さらなる油処理成分を含む、上記項目のいずれか一項に記載の油分解剤。
（項目Ｂ１４）
　上記項目のいずれか一項に記載の組成物もしくは組み合わせ物、または上記項目のいずれか一項に記載の油分解剤を処理対象に作用させることを包含する、油分解除去方法。
（項目Ｂ１５）
　ブルクホルデリア細菌を含む、リパーゼを生産するヤロウィア酵母のリパーゼ生産を向上させるための組成物。
（項目Ｂ１６）
　ヤロウィア酵母を含む、リパーゼを生産するブルクホルデリア細菌のリパーゼ生産を向上させるための組成物。
（項目Ｂ１７）
　ブルクホルデリア細菌を含む、リパーゼを生産するヤロウィア酵母の油脂を処理する能力を強化するための組成物。
（項目Ｂ１８）
　ヤロウィア酵母を含む、リパーゼを生産するブルクホルデリア細菌の油脂を処理する能力を強化するための組成物。
（項目Ｂ１９）
　ブルクホルデリア細菌とヤロウィア酵母とを混合して培養する工程を含む、該ブルクホルデリア細菌および該ヤロウィア酵母のうちの少なくとも１種のリパーゼ生産を向上させる方法。
（項目Ｂ２０）
　リパーゼを生産するヤロウィア酵母とリパーゼを生産するブルクホルデリア細菌との組み合わせで油脂を処理するためのブルクホルデリア細菌の使用。
（項目Ｂ２１）
　リパーゼを生産するヤロウィア酵母とリパーゼを生産するブルクホルデリア細菌との組み合わせで油脂を処理するためのヤロウィア酵母の使用。
（項目Ｂ２２）
　ブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母の組み合わせで油脂を処理のための該ブルクホルデリア細菌および該ヤロウィア酵母の使用であって、該ブルクホルデリア細菌および該ヤロウィア酵母の両方がリパーゼを生産する、使用。
（項目Ｂ２３）
　前記ヤロウィア酵母はヤロウィア　リポリティカ（Yarrowia　lipolytica）を含む、上記項目のいずれか一項に記載の使用。
（項目Ｂ２４）
　前記ブルクホルデリア細菌はブルクホルデリア属細菌を含む、上記項目のいずれか一項に記載の使用。
（項目Ｂ２５）
　前記ブルクホルデリア細菌はブルクホルデリア　アルボリス（Burkholderia　arboris）、ブルクホルデリア　アンビファリア（Burkholderia　ambifaria）、またはブルクホルデリア　セパシア　コンプレックス（Burkholderia　cepacia　complex）を含む、上記項目のいずれか一項に記載の使用。
（項目Ｂ２６）
　前記ブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母の組み合わせが、各々の単独培養の油脂分解能の値から計算される油脂分解能よりも高い油脂分解能を有する、上記項目のいずれか一項に記載の使用。
（項目Ｂ２７）
　前記ブルクホルデリア細菌の細胞数：前記ヤロウィア酵母の細胞数が、１：２０～２０：１である、上記項目のいずれか一項に記載の使用。
（項目Ｂ２８）
　前記ブルクホルデリア細菌および前記ヤロウィア酵母の少なくとも１つが１５℃において脂肪酸を分解する能力を有する、上記項目のいずれか一項に記載の使用。
（項目Ｂ２９）
　前記ブルクホルデリア細菌は、ブルクホルデリア属細菌ＫＨ－１株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２７３１で特定される菌株）、ＫＨ－１ＡＬ１株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２９７７で特定される菌株）、ＫＨ－１ＡＬ２株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２９７８で特定される菌株）もしくはＫＨ－１ＡＬ３株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２９７９で特定される菌株）、またはその誘導株である、上記項目のいずれか一項に記載の使用。
（項目Ｂ３０）
　前記ヤロウィア酵母は、ヤロウィア　リポリティカＫＨ－２株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２７３２で特定される微生物株）、ヤロウィア　リポリティカＫＨ－２ＡＬ１株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０９１で特定される微生物株）、もしくはヤロウィア　リポリティカＫＨ－２ＡＬ３株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０９２で特定される微生物株）、またはその誘導株である、上記項目のいずれか一項に記載の使用。
（項目Ｂ３１）
　さらなる油処理成分を組み合わせる、上記項目のいずれか一項に記載の使用。
（項目Ｂ３２）
　前記ブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母の組み合わせを処理対象に作用させることを包含する、上記項目のいずれか一項に記載の使用。
（項目Ｂ３３）
　リパーゼを生産するヤロウィア酵母のリパーゼ生産を向上させるためのブルクホルデリア細菌の使用。
（項目Ｂ３４）
　リパーゼを生産するブルクホルデリア細菌のリパーゼ生産を向上させるためのヤロウィア酵母の使用。
（項目Ｂ３５）
　リパーゼを生産するヤロウィア酵母の油脂を処理する能力を強化するためのブルクホルデリア細菌の使用。
（項目Ｂ３６）
　リパーゼを生産するブルクホルデリア細菌の油脂を処理する能力を強化するためのヤロウィア酵母の使用。
（項目Ｂ３７）
　ブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母のうちの少なくとも１種のリパーゼ生産を向上させるための該ブルクホルデリア細菌および該ヤロウィア酵母の使用。
（項目Ｂ３８）
　ブルクホルデリア細菌を対象に接触させる工程を含む、リパーゼを生産するヤロウィア酵母とリパーゼを生産するブルクホルデリア細菌との組み合わせで油脂を処理するための方法。
（項目Ｂ３９）
　ヤロウィア酵母を対象に接触させる工程を含む、リパーゼを生産するヤロウィア酵母とリパーゼを生産するブルクホルデリア細菌との組み合わせで油脂を処理するための方法。
（項目Ｂ４０）
　ブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母の組み合わせを対象に接触させる工程を含む、リパーゼを生産するヤロウィア酵母とリパーゼを生産するブルクホルデリア細菌との組み合わせで油脂を処理するための方法。
（項目Ｂ４１）
　前記ヤロウィア酵母はヤロウィア　リポリティカ（Yarrowia　lipolytica）を含む、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目Ｂ４２）
　前記ブルクホルデリア細菌はブルクホルデリア属細菌を含む、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目Ｂ４３）
　前記ブルクホルデリア細菌はブルクホルデリア　アルボリス（Burkholderia　arboris）、ブルクホルデリア　アンビファリア（Burkholderia　ambifaria）、またはブルクホルデリア　セパシア　コンプレックス（Burkholderia　cepacia　complex）を含む、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目Ｂ４４）
　前記ブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母の組み合わせが、各々の単独培養の油脂分解能の値から計算される油脂分解能よりも高い油脂分解能を有する、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目Ｂ４５）
　前記ブルクホルデリア細菌の細胞数：前記ヤロウィア酵母の細胞数が、１：２０～２０：１である、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目Ｂ４６）
　前記ブルクホルデリア細菌および前記ヤロウィア酵母の少なくとも１つが１５℃において脂肪酸を分解する能力を有する、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目Ｂ４７）
　前記ブルクホルデリア細菌は、ブルクホルデリア属細菌ＫＨ－１株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２７３１で特定される菌株）、ＫＨ－１ＡＬ１株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２９７７で特定される菌株）、ＫＨ－１ＡＬ２株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２９７８で特定される菌株）もしくはＫＨ－１ＡＬ３株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２９７９で特定される菌株）、またはその誘導株である、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目Ｂ４８）
　前記ヤロウィア酵母は、ヤロウィア　リポリティカＫＨ－２株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２７３２で特定される微生物株）、ヤロウィア　リポリティカＫＨ－２ＡＬ１株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０９１で特定される微生物株）、もしくはヤロウィア　リポリティカＫＨ－２ＡＬ３株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０９２で特定される微生物株）、またはその誘導株である、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目Ｂ４９）
　さらなる油処理成分を使用する、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目Ｂ５０）
　油分解除去方法である、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目Ｂ５１）
　ブルクホルデリア細菌を対象に投入する工程を含む、リパーゼを生産するヤロウィア酵母のリパーゼ生産を向上させるための方法。
（項目Ｂ５２）
　ヤロウィア酵母を対象に投入する工程を含む、リパーゼを生産するブルクホルデリア細菌のリパーゼ生産を向上させるための方法。
（項目Ｂ５３）
　ブルクホルデリア細菌を対象に投入する工程を含む、リパーゼを生産するヤロウィア酵母の油脂を処理する能力を強化するための方法。
（項目Ｂ５４）
　ヤロウィア酵母を対象に投入する工程を含む、リパーゼを生産するブルクホルデリア細菌の油脂を処理する能力を強化するための方法。
（項目Ｃ１）
　トランス脂肪酸を分解する能力を有する、ヤロウィア酵母。
（項目Ｃ２）
　トランス脂肪酸含有油脂を分解する能力を有する、ヤロウィア酵母。
（項目Ｃ３）
　１５℃においてエステルおよび／または脂肪酸を分解する能力を有する、ヤロウィア酵母。
（項目Ｃ４）
　短鎖～中鎖脂肪酸含有エステルを分解する能力を有する、ヤロウィア酵母。
（項目Ｃ５）
　短鎖～長鎖脂肪酸含有油脂を分解する能力を有する、ヤロウィア酵母。
（項目Ｃ６）
　長鎖脂肪酸（Ｃ１３以上）の４－ニトロフェニルエステルよりも短鎖～中鎖脂肪酸（Ｃ２～Ｃ１２）の４－ニトロフェニルエステルに対して高い分解活性を有し、かつ、長鎖脂肪酸（Ｃ１３以上）のトリグリセリドを分解する能力を有する、ヤロウィア酵母。
（項目Ｃ７）
　リパーゼを生産するブルクホルデリア細菌のリパーゼ生産を向上させる能力を有する、ヤロウィア酵母。
（項目Ｃ８）
　ブルクホルデリア細菌の単独培養時の油脂または脂肪酸分解能よりも高い油脂または脂肪酸分解能を前記ブルクホルデリア細菌に付与する能力を有する、ヤロウィア酵母。
（項目Ｃ９）
　前記ブルクホルデリア細菌はブルクホルデリア属細菌を含む、上記項目のいずれか一項に記載のヤロウィア酵母。
（項目Ｃ１０）
　前記ブルクホルデリア細菌はブルクホルデリア　アルボリス（Burkholderia　arboris）、ブルクホルデリア　アンビファリア（Burkholderia　ambifaria）、またはブルクホルデリア　セパシア　コンプレックス（Burkholderia　cepacia　complex）を含む、上記項目のいずれか一項に記載のヤロウィア酵母。
（項目Ｃ１１）
　項目Ｃ１～６のいずれか一項または複数に記載のヤロウィア酵母の特徴、および
　項目Ｃ７～１０のいずれか一項または複数に記載のヤロウィア酵母の特徴、
を有する、ヤロウィア酵母。
（項目Ｃ１２）
　ヤロウィア　リポリティカ（Yarrowia　lipolytica）である、上記項目のいずれか一項に記載のヤロウィア酵母。
（項目Ｃ１３）
　ヤロウィア　リポリティカＫＨ－２株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２７３２で特定される微生物株）、ヤロウィア　リポリティカＫＨ－２ＡＬ１株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０９１で特定される微生物株）、もしくはヤロウィア　リポリティカＫＨ－２ＡＬ３株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０９２で特定される微生物株）であるか、またはその誘導株であって該誘導株は、上記項目のいずれか一項に記載のヤロウィア酵母の特徴を有する、上記項目のいずれか一項に記載のヤロウィア酵母。
（項目Ｃ１４）
　上記項目のいずれか一項に記載のヤロウィア酵母を含む、油分解剤。
（項目Ｃ１５）
　さらなる油処理成分を含む、上記項目のいずれか一項に記載の油分解剤。
（項目Ｃ１６）
　（ａ）トランス脂肪酸を分解するため、
　（ｂ）トランス脂肪酸含有油脂を分解するため、
　（ｃ）１５℃においてエステルおよび／または脂肪酸を分解するため、
　（ｄ）短鎖～中鎖脂肪酸（Ｃ２～Ｃ１２）含有エステルを分解するため、および
　（ｅ）短鎖～長鎖脂肪酸（Ｃ２以上）含有油脂を分解するため
からなる群より選択される少なくとも１つのための、上記項目のいずれか一項に記載のヤロウィア酵母、または油分解剤を含む、組成物。
（項目Ｃ１７）
　上記項目のいずれか一項に記載のヤロウィア酵母もしくは油分解剤と、または上記項目のいずれか一項に記載の組成物と、さらなる油処理成分とを備える、エステル分解のためのキット。
（項目Ｃ１８）
　上記項目のいずれか一項に記載のヤロウィア酵母、油分解剤、または組成物を処理対象に作用させることを包含する、エステル分解除去方法。
（項目Ｃ１９）
　前記処理対象はトランス脂肪酸またはトランス脂肪酸含有油脂を含む、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目Ｃ２０）
　（ａ）トランス脂肪酸を分解するステップ、
　（ｂ）トランス脂肪酸含有油脂を分解するステップ、
　（ｃ）１５℃においてエステルおよび／または脂肪酸を分解するステップ、
　（ｄ）短鎖～中鎖脂肪酸（Ｃ２～Ｃ１２）含有エステルを分解するステップ、および
　（ｅ）短鎖～長鎖脂肪酸（Ｃ２以上）含有油脂を分解するステップ、
からなる群より選択される少なくとも一つのステップを含む、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目Ｃ２１）
　ブルクホルデリア細菌を含む、リパーゼを生産するヤロウィア酵母とリパーゼを生産するブルクホルデリア細菌との組み合わせで油脂または脂肪酸を処理するための組成物。
（項目Ｃ２２）
　ヤロウィア酵母を含む、リパーゼを生産するヤロウィア酵母とリパーゼを生産するブルクホルデリア細菌との組み合わせで油脂または脂肪酸を処理するための組成物。
（項目Ｃ２３）
　ブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母の組み合わせを含む油脂または脂肪酸処理のための組み合わせ物であって、該ブルクホルデリア細菌および該ヤロウィア酵母の両方がリパーゼを生産する、組み合わせ物。
（項目Ｃ２４）
　前記ヤロウィア酵母はヤロウィア　リポリティカ（Yarrowia　lipolytica）を含む、上記項目のいずれか一項に記載の組成物または組み合わせ物。
（項目Ｃ２５）
　前記ブルクホルデリア細菌はブルクホルデリア属細菌を含む、上記項目のいずれか一項に記載の組成物または組み合わせ物。
（項目Ｃ２６）
　前記ブルクホルデリア細菌はブルクホルデリア　アルボリス（Burkholderia　arboris）、ブルクホルデリア　アンビファリア（Burkholderia　ambifaria）、またはブルクホルデリア　セパシア　コンプレックス（Burkholderia　cepacia　complex）を含む、上記項目のいずれか一項に記載の組成物または組み合わせ物。
（項目Ｃ２７）
　前記ブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母の組み合わせが、各々の単独培養の油脂または脂肪酸分解能の値から計算される油脂または脂肪酸分解能よりも高い油脂または脂肪酸分解能を有する、上記項目のいずれか一項に記載の組成物または組み合わせ物。
（項目Ｃ２８）
　前記ブルクホルデリア細菌の細胞数：前記ヤロウィア酵母の細胞数が、１：２０～２０：１である、上記項目のいずれか一項に記載の組成物または組み合わせ物。
（項目Ｃ２９）
　前記ブルクホルデリア細菌および前記ヤロウィア酵母の少なくとも１つが１５℃において脂肪酸を分解する能力を有する、上記項目のいずれか一項に記載の組成物または組み合わせ物。
（項目Ｃ３０）
　前記ブルクホルデリア細菌は、ブルクホルデリア属細菌ＫＨ－１株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２７３１で特定される菌株）、ＫＨ－１ＡＬ１株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２９７７で特定される菌株）、ＫＨ－１ＡＬ２株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２９７８で特定される菌株）もしくはＫＨ－１ＡＬ３株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２９７９で特定される菌株）、またはその誘導株である、上記項目のいずれか一項に記載の組成物または組み合わせ物。
（項目Ｃ３１）
　前記ヤロウィア酵母は、ヤロウィア　リポリティカＫＨ－２株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２７３２で特定される微生物株）、ヤロウィア　リポリティカＫＨ－２ＡＬ１株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０９１で特定される微生物株）、もしくはヤロウィア　リポリティカＫＨ－２ＡＬ３株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０９２で特定される微生物株）、またはその誘導株である、上記項目のいずれか一項に記載の組成物または組み合わせ物。
（項目Ｃ３２）
　油分解剤である、上記項目のいずれか一項に記載の組成物または組み合わせ物。
（項目Ｃ３３）
　さらなる油処理成分を含む、上記項目のいずれか一項に記載の油分解剤。
（項目Ｃ３４）
　上記項目のいずれか一項に記載の組成物もしくは組み合わせ物、または油分解剤を処理対象に作用させることを包含する、油分解除去方法。
（項目Ｃ３５）
　ブルクホルデリア細菌を含む、リパーゼを生産するヤロウィア酵母のリパーゼ生産を向上させるための組成物。
（項目Ｃ３６）
　ヤロウィア酵母を含む、リパーゼを生産するブルクホルデリア細菌のリパーゼ生産を向上させるための組成物。
（項目Ｃ３７）
　ブルクホルデリア細菌を含む、リパーゼを生産するヤロウィア酵母の油脂または脂肪酸を処理する能力を強化するための組成物。
（項目Ｃ３８）
　ヤロウィア酵母を含む、リパーゼを生産するブルクホルデリア細菌の油脂または脂肪酸を処理する能力を強化するための組成物。
（項目Ｃ３９）
　ブルクホルデリア細菌とヤロウィア酵母とを混合して培養する工程を含む、該ブルクホルデリア細菌および該ヤロウィア酵母のうちの少なくとも１種のリパーゼ生産を向上させる方法。

　本開示において、上記１または複数の特徴は、明示された組み合わせに加え、さらに組み合わせて提供されうることが意図される。本開示のなおさらなる実施形態および利点は、必要に応じて以下の詳細な説明を読んで理解すれば、当業者に認識される。

　本開示の微生物もしくは微生物の組み合わせおよびこれを提供する組成物または組み合わせ物は、迅速な油脂および／または脂肪酸分解を達成し得るので、油による環境汚染の浄化、生ごみ処理、コンポスト化処理、排水処理などの廃棄物処理および堆肥化など広範な状況に適用可能であり、広範囲の油濃度に対応可能であり、また、トランス脂肪酸および同脂肪酸含有油脂を分解し得るという点で、特に食品工場などから出される排水等に代表される油含有対象の処理が可能となる。

　本開示は分解が難しい油、すなわち油種の問題も解決することができる。本開示の微生物およびこれを含む組成物は、油への水素化工程で生じるトランス脂肪酸とその含有油脂を分解し得るものであり、特にそのような脂肪酸含有油脂を多く含むマーガリン、ファットスプレッド、ショートニングなどの、従来微生物で処理できなかったものでも処理し得るという効果を奏する。特に本開示の微生物およびこれを含む組成物は、排水処理や廃棄物処理の主役微生物となる酵母（微生物）として実用レベルで利用可能な、トランス脂肪酸分解を達成する効果を提供する。

トリオレイン（左）、オレイン酸（中央）またはキャノーラ油（右）を添加した培地上で２８℃においてＫＨ－２株を３日間培養した後の写真である。エライジン酸を添加した培地上で１５℃においてＫＨ－２株を１４日間培養した後の写真である。２８℃におけるＢｉｏＲｅｍｏｖｅ３２００（ＢＲ３２００）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ、デンマーク）（左）またはＫＨ－２株（右）によるエライジン酸分解活性を示す。（ａ）は薄層クロマトグラフィーによって培養液中の脂肪酸を検出した写真である。（ｂ）はノルマルヘキサン値相当の油分を、油分測定試薬キットにより測定した結果である。左はＢＲ３２００であり、右はＫＨ－２株による分解結果である。１５℃におけるＢｉｏＲｅｍｏｖｅ３２００（ＢＲ３２００）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ、デンマーク）（左）またはＫＨ－２株（右）によるエライジン酸分解活性を示す。（ａ）は薄層クロマトグラフィーによって培養液中の脂肪酸を検出した写真である。（ｂ）はノルマルヘキサン値相当の油分を、油分測定試薬キットにより測定した結果である。左はＢＲ３２００であり、右はＫＨ－２株による分解結果である。ＫＨ－２株によるトリエライジンの分解を示す。薄層クロマトグラフィーによって培養液中の残存油分を解析した写真である。それぞれの写真は、左から、２８℃におけるトリエライジン分解、１５℃におけるトリエライジン分解を示す。ＢＳ（無機塩培地）は微生物添加なし（対照）を示し、ＫＨ－２はＫＨ－２株添加を示す。実排水におけるＫＨ－２株の油脂分解能を示す。薄層クロマトグラフィーによって培養液中の残存油分を解析した写真である。左の写真は２４時間培養後の結果を示し、右の写真は４８時間培養後の結果を示す。それぞれの列は、左から、微生物添加なし（対照）、ＢｉｏＲｅｍｏｖｅ３２００（ＢＲ３２００）添加、ＫＨ－２株添加の結果を示す。実排水におけるＫＨ－２株の油脂分解能を示す。ノルマルヘキサン値相当の油分を、油分測定試薬キットにより測定した結果である。左から、それぞれ、微生物添加なし（対照）、ＢｉｏＲｅｍｏｖｅ３２００（ＢＲ３２００）添加、ＫＨ－２株添加の結果を示す。白のバーは２４時間培養後の結果を示し、黒のバーは４８時間培養後の結果を示す。縦軸はノルマルヘキサン値（ｍｇ／Ｌ）を示す。１５℃培養（ｐＨ７．０）におけるＫＨ－２株によるキャノーラ油の分解を示す。培養開始後０時間、２４時間、４８時間および７２時間において、ノルマルヘキサン値相当の油分（残留油分）を油分測定試薬キットにより測定し、０時間の測定値を１００％としたときの割合を計算した結果（上段）、および全脂肪酸（トリグリセリド中の脂肪酸と遊離脂肪酸との合計）をガスクロマトグラフィーにより定量した結果（下段）を示す。１５℃培養（ｐＨ７．０）におけるＫＨ－２株によるキャノーラ油の分解を示す。薄層クロマトグラフィーによって培養液中の残存油分を解析した写真である。それぞれの列は、左から、培養開始後０時間、２４時間、４８時間および７２時間時点の結果を示す。２８℃培養（ｐＨ７．０）におけるＫＨ－２株によるキャノーラ油の分解を示す。培養開始後０時間、１２時間、２４時間および３０時間において、ノルマルヘキサン値相当の油分（残留油分）を油分測定試薬キットにより測定し、０時間の測定値を１００％としたときの割合を計算した結果（上段）、および全脂肪酸（トリグリセリド中の脂肪酸と遊離脂肪酸との合計）をガスクロマトグラフィーにより定量した結果（下段）を示す。２８℃培養（ｐＨ７．０）におけるＫＨ－２株によるキャノーラ油の分解を示す。薄層クロマトグラフィーによって培養液中の残存油分を解析した写真である。それぞれの列は、左から、培養開始後０時間、１２時間、２４時間および３０時間時点の結果を示す。２８℃における無菌区、ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株またはＫＨ－２ＡＬ３株によるエライジン酸分解活性を示す。（ａ）は薄層クロマトグラフィーによって培養液中の脂肪酸を検出した写真である。（ｂ）はノルマルヘキサン値相当の油分を、油分測定試薬キットにより測定した結果である。左から、無菌区、ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株、およびＫＨ－２ＡＬ３株による分解結果である。１５℃における無菌区、ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株またはＫＨ－２ＡＬ３株によるエライジン酸分解活性を示す。（ａ）は薄層クロマトグラフィーによって培養液中の脂肪酸を検出した写真である。（ｂ）はノルマルヘキサン値相当の油分を、油分測定試薬キットにより測定した結果である。左から、無菌区、ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株、およびＫＨ－２ＡＬ３株による分解結果である。２８℃における無菌区、ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株またはＫＨ－２ＡＬ３株によるトリエライジン分解活性を示す。ノルマルヘキサン値相当の油分を、油分測定試薬キットにより測定した結果である。左から、無菌区、ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株、およびＫＨ－２ＡＬ３株による分解結果である。１５℃培養（ｐＨ７．０）におけるＫＨ－２ＡＬ１株によるキャノーラ油の分解を示す。培養開始後０時間、２４時間、４８時間および７２時間において、ノルマルヘキサン値相当の油分（残留油分）を油分測定試薬キットにより測定し、０時間の測定値を１００％としたときの割合を計算した結果（上段）、および全脂肪酸（トリグリセリド中の脂肪酸と遊離脂肪酸との合計）をガスクロマトグラフィーにより定量した結果（下段）を示す。１５℃培養（ｐＨ７．０）におけるＫＨ－２ＡＬ１株によるキャノーラ油の分解を示す。薄層クロマトグラフィーによって培養液中の残存油分を解析した写真である。それぞれの列は、左から、培養開始後０時間、２４時間、４８時間および７２時間時点の結果を示す。１５℃培養（ｐＨ７．０）におけるＫＨ－２ＡＬ３株によるキャノーラ油の分解を示す。培養開始後０時間、２４時間、４８時間および７２時間において、ノルマルヘキサン値相当の油分（残留油分）を油分測定試薬キットにより測定し、０時間の測定値を１００％としたときの割合を計算した結果（上段）、および全脂肪酸（トリグリセリド中の脂肪酸と遊離脂肪酸との合計）をガスクロマトグラフィーにより定量した結果（下段）を示す。１５℃培養（ｐＨ７．０）におけるＫＨ－２ＡＬ３株によるキャノーラ油の分解を示す。薄層クロマトグラフィーによって培養液中の残存油分を解析した写真である。それぞれの列は、左から、培養開始後０時間、２４時間、４８時間および７２時間時点の結果を示す。１５℃におけるＫＨ－２株のトリエライジンまたはエライジン酸の資化能を示す。左の写真はエライジン酸含有培地での培養結果を示し、右の写真はトリエライジン含有培地での培養結果を示す。ＫＨ－２株添加条件（左）および微生物添加なし（対照、右）の結果を示す。ＫＨ－２株と洗剤との洗浄力の比較を示す。油汚れのついた換気扇フィルターを、ＫＨ－２株の培養上清、油用洗剤、一般洗剤に漬け置き洗いをした写真である。左は処理を行う前を示す。右列は、それぞれ、上段：ＫＨ－２株培養上清処理、中段：油用洗剤処理、および下段：一般洗剤処理を示す。ＫＨ－２株およびＢｉｏＲｅｍｏｖｅ３２００（ＢＲ３２００）（Novozymes、デンマーク）のパルミテライジン酸およびバクセン酸分解活性の比較を示す。１５℃で４８時間または７２時間培養を行った後、薄層クロマトグラフィーによって培養液中の脂肪酸を解析した写真である。パネルは、左から、パルミテライジン酸４８時間培養、バクセン酸４８時間培養、パルミテライジン酸７２時間培養、およびバクセン酸７２時間培養である。各パネルにおいて、右は陰性対照（ＢＳ）であり、中央はＢＲ３２００であり、左はＫＨ－２株である。ＫＨ－２株およびＢｉｏＲｅｍｏｖｅ３２００（ＢＲ３２００）（Novozymes、デンマーク）のパルミテライジン酸およびバクセン酸分解活性の比較を示す。２８℃で２４時間培養を行った後、薄層クロマトグラフィーによって培養液中の脂肪酸を解析した写真である。左のパネルはパルミテライジン酸培養、右のパネルはバクセン酸培養である。各パネルにおいて、右は陰性対照（ＢＳ）であり、中央はＢＲ３２００であり、左はＫＨ－２株である。１５℃におけるＫＨ－１株とＫＨ－２株との種々の混合比におけるキャノーラ油の分解を示す。５×１０^５細胞／ｍＬとなるような合計細胞濃度でのＫＨ－１株：ＫＨ－２株＝１０：０、９：１、５：５、１：９、および０：１０の各比における培養開始後４８時間での全脂肪酸（トリグリセリド中の脂肪酸と遊離脂肪酸との合計）の減少量（分解量）をガスクロマトグラフィーにより定量し、各々の単独培養の油脂分解能の値から計算される油脂分解能と比較した結果を示す。縦軸は、各々の単独培養の油脂分解能の値から計算される油脂分解能（１００％）と比較した各混合比における相対油脂分解能を示し、横軸は、ＫＨ－２株含有率（細胞数基準）を示す。２８℃におけるＫＨ－１株とＫＨ－２株との種々の混合比におけるキャノーラ油の分解を示す。５×１０^５細胞／ｍＬとなるような合計細胞濃度でのＫＨ－１株：ＫＨ－２株＝１０：０、９：１、５：５、１：９、および０：１０の各比（細胞数基準）における培養開始後１８時間での全脂肪酸（トリグリセリド中の脂肪酸と遊離脂肪酸との合計）の減少量（分解量）をガスクロマトグラフィーにより定量した結果を示す。縦軸は、全脂肪酸の分解量を示し、横軸は、ＫＨ－１株：ＫＨ－２株混合比率（細胞数基準）を示す。直線の破線は、各々の単独培養の油脂分解能の値から計算される油脂分解能を示す。図１６のように各々の単独培養の油脂分解能の値から計算される油脂分解能と比較した結果を計算した場合も図１６と同様の傾向を示す。２８℃におけるＫＨ－１株とＫＨ－２株との種々の混合比におけるオレイン酸の分解を示す。５×１０^５細胞／ｍＬとなるような合計細胞濃度でのＫＨ－１株：ＫＨ－２株＝１０：０、９：１、５：５、１：９、および０：１０の各比（細胞数基準）における培養開始後１８時間での全脂肪酸の減少量（分解量）をガスクロマトグラフィーにより定量した結果を示す。縦軸は、全脂肪酸の分解量を示し、横軸は、ＫＨ－１株：ＫＨ－２株混合比率（細胞数基準）を示す。直線の破線は、各々の単独培養の脂肪酸分解能の値から計算される脂肪酸分解能を示す。ＫＨ－１株＋ＫＨ－２株の共生系におけるそれぞれの微生物の遺伝子の発現量を示す。左パネルは７１時間培養時のＫＨ－１株の結果であり、縦軸は、ＫＨ－１株単独培養の場合の各遺伝子のＲＮＡ発現量を１とした場合のＫＨ－１株＋ＫＨ－２株の共生系培養の遺伝子の相対発現量を示す。ＫＨ－１株の第１のリパーゼは、配列番号１の塩基配列および配列番号２のアミノ酸配列で示される。ＫＨ－１株の第２のリパーゼは、配列番号３の塩基配列および配列番号４のアミノ酸配列で示される。右パネルは４８時間培養時のＫＨ－２株の結果であり、縦軸は、ＫＨ－２株単独培養の場合の各遺伝子のＲＮＡ発現量を１とした場合のＫＨ－１株＋ＫＨ－２株の共生系培養の遺伝子の相対発現量を示す。ＫＨ－２株の第１のリパーゼは、配列番号５の塩基配列および配列番号６のアミノ酸配列で示される。ＫＨ－２株の第２のリパーゼは、配列番号７の塩基配列および配列番号８のアミノ酸配列で示される。ＫＨ－１株単独またはＫＨ－１株＋ＫＨ－２株の共生系の培養上清によるモデル基質（４－ニトロフェニルブチレート、４－ニトロフェニルパルミテート）の分解活性を示す。左パネルは４－ニトロフェニルブチレートで評価した活性であり、右パネルは４－ニトロフェニルパルミテートで評価した活性である。各パネルにおいて、左は培養４８時間の結果を示し、右は培養７１時間の結果を示す。縦軸は、ＫＨ－１株単独培養の場合の４１０ｎｍの吸光度を１とした場合のＫＨ－１株＋ＫＨ－２株の共生系培養の吸光度の相対値を示す。

　以下、本開示を最良の形態を示しながら説明する。本明細書の全体にわたり、単数形の表現は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。従って、単数形の冠詞（例えば、英語の場合は「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」など）は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。また、本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当該分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。したがって、他に定義されない限り、本明細書中で使用される全ての専門用語および科学技術用語は、本開示の属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合、本明細書（定義を含めて）が優先する。

　以下に本明細書において特に使用される用語の定義および／または基本的技術内容を適宜説明する。なお、本明細書では、ＫＨ－１株などの株名は、場合により「株」との表示を省略することがあるが、当業者は文脈に応じて、株との表示があると適切に理解する。

　（定義等）
　本明細書において、「エステラーゼ」とは、エステルを水との化学反応で酸とアルコールに分解する加水分解酵素のことをいう。本明細書において、典型的には、エステラーゼは、脂肪酸エステルを水との化学反応で脂肪酸とアルコールに分解する加水分解酵素のことをいう。

　本明細書において「リパーゼ」とは、エステラーゼの一種であり、中性脂肪(グリセロールエステル)を加水分解して、脂肪酸とグリセロールに分解する反応を可逆的に触媒する酵素をいう。例えば、リパーゼとして、酵素番号（ＥＣ番号）でEC3.1.1.3に分類される、トリグリセロールリパーゼが挙げられる。

　本明細書において、「共生系」とは、同じ環境または系に存在する複数の種類の微生物の組み合わせを指す。また、「共生させる」とは、複数の種類の微生物の組み合わせを同じ環境または系に存在させることを指す。例えば、共生系は、ある組成物中に混合されて存在する複数の種類の微生物、ある組成物中で担体に担持されて存在する複数の種類の微生物、およびそれぞれの微生物種がある環境に別々に投入された結果として形成される複数の種類の微生物の組み合わせのいずれの意味でも使用される。一つの実施形態では、共生系におけるそれぞれの微生物種は互いに接触（融合および内包を含む）できる状態であってもよい。一つの実施形態では、共生系は、共生系における少なくとも一方の微生物種の作用（例えば、放出、分解）により生じた環境を共生系における別の微生物種が利用することができる状態であり得、この場合、それぞれの微生物種間は接触可能であってもよいし、接触可能でなくてもよい（例えば、各微生物が系において上流および下流に配置される）。共生系における少なくとも一方の微生物種の作用により生じた環境として、例えば、ある成分が減少した環境、ある成分（ある微生物種による分解で生じた成分、この成分の作用（例えば、反応）により生じた二次的成分など）が増加した環境、ある因子（ｐＨなど）が変化した環境が挙げられる。特に、共生系を構成する微生物の一つまたは複数による化学物質の分解で生じた産物が、他の微生物の炭素源などの増殖基質になる場合が、典型的な共生系の例である。また、微生物の混合系において、同じ増殖基質の分解・資化能力をもつ微生物同士は、一般的には、該基質をめぐって競争関係になることが多いため、共生系は成立しにくいと考えられる。本明細書において、「共生可能」とは、複数の種類の微生物の組み合わせが共生系を形成できる能力を有することを指す。

　本明細書において、「各々の単独培養の油脂分解能の値から計算される油脂分解能」とは、微生物の組み合わせ（例えば、ブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母）を構成する微生物株単独の油脂分解能について得られる値に基づき、各々の混合物における寄与度を考慮して計算して得られる数値を言う。代表的には、各々、それぞれ同条件（培地組成、時間、温度など）で培養した結果の値に基づいて得られる油脂分解能の値を、単純比率を乗じて得られる値の和から計算される油脂分解能の値が挙げられるがこれに限定されない。この場合、「各々の単独培養の油脂分解能の値から計算される油脂分解能の和」と表現されうる。このほか、混合時の初期比率に基づいて寄与度を考慮した値を用いてもよい。この場合は、「各々の単独培養の油脂分解能の初期値から計算される油脂分解能」と表現されうる。例えば、１種類のブルクホルデリア細菌および１種類のヤロウィア酵母からなる合計細胞濃度１×１０^５細胞／ｍＬとなる組み合わせについての「各々の単独培養の油脂分解能の値から計算される油脂分解能」は、［（このブルクホルデリア細菌１×１０^５細胞／ｍＬを単独培養した場合の油脂分解能）×（このブルクホルデリア細菌の混合割合）＋（このヤロウィア酵母１×１０^５細胞／ｍＬを単独培養した場合の油脂分解能）×（このヤロウィア酵母の混合割合）］で計算することができる。計算の基礎となる単独培養時の細胞濃度は、特に限定されず、当業者であれば適切に選択でき、適切な係数（１であってもよい）を掛けることで計算することができる。また、他の例として、初期投入微生物量に基づく油脂分解能の値（必要に応じて、微生物の増殖速度を考慮してもよい）から計算してもよい。「各々の単独培養の脂肪酸分解能の値から計算される脂肪酸分解能」および「各々の単独培養の脂肪酸分解能の値から計算される脂肪酸分解能の和」も同様の文脈で理解される。

　本明細書において、「油脂」とは、オイル状の物質を指し、油脂には、ヒドロキシル基を含有する化合物と脂肪酸とが脱水縮合して形成されるエステル基含有化合物が含まれる。代表的には、このヒドロキシル基を含有する化合物はグリセリンであるが、その他にも、ポリグリセリンなどが挙げられる。本技術分野において通常使用される意味と同様に、本明細書において、グリセリンと脂肪酸とが脱水縮合して形成されるエステル基含有化合物を「グリセリド」と呼ぶ。このヒドロキシル基を含有する化合物が複数のヒドロキシル基を有する場合、そのヒドロキシル基のうちの少なくとも１つが脂肪酸と脱水縮合してエステルを形成していれば、本明細書におけるエステル基含有化合物に該当する。本明細書において、油脂には、シス脂肪酸含有油脂、トランス脂肪酸含有油脂またはその両方が含まれていてもよい。

　油脂は、例えば、外食産業の厨房排水や、食品工場の排水などに含まれ、固液分離によりこれを除く処理設備であるグリーストラップや加圧浮上分離装置は、悪臭や害虫の発生源であり、分離した油の回収や運搬、清掃等のメンテナンスにかかる労苦やコスト、これに必要な凝集剤のコストなど、多くの問題を抱える。グリーストラップ内や工場排水処理設備内の油を消滅させるために本開示の微生物の組み合わせおよびこれを提供する組成物または組み合わせ物は用いられ得る。

　本開示は、グリーストラップ用および工場排水用微生物製剤を提供する。特に工場排水に適用すれば、加圧浮上分離装置の稼働率の低減や代替まで可能である。外食産業の厨房排水は通常１ｇ／Ｌ以上、高いときは１０ｇ／Ｌ以上もの高濃度の油脂を含んでいるだけでなく、多くのグリーストラップ内の排水の滞留時間は１０分程度と極めて短いが、本開示の微生物はこのような環境でも用いることができる。

　油脂は生ごみや畜産廃棄物、排水処理場からの汚泥などにも多く含まれる。このような固形廃棄物の処理には微生物が利用されることも多いが、含有油分が多いと処理が困難になったり、油分が残存してしまったりする。本開示の微生物の組み合わせおよびこれを提供する組成物または組み合わせ物は、そのような廃棄物中の油分の分解処理にも適用可能である。

　本明細書において、「油」は、油脂および脂肪酸を含む。

　本明細書において、「脂肪酸」とは、２～１００の炭素原子を有し、少なくとも１つのカルボキシル基を有する化合物である。代表的には、脂肪酸における炭素鎖は直鎖であるが、分枝鎖であってもよいし、環を含んでもよい。代表的には、脂肪酸は、カルボキシル基を一つ含むが、複数のカルボキシル基を含んでもよい。脂肪酸における炭素鎖はＣ＝Ｃの二重結合を含んでもよく、「トランス脂肪酸」は、本技術分野において通常使用される意味で使用され、トランス型の二重結合を有する不飽和脂肪酸を意味する。

　本明細書において、「トランス脂肪酸含有油脂」とは、トランス脂肪酸とヒドロキシル基を含有する化合物とが脱水縮合して形成される化合物を指す。トランス脂肪酸には、エライジン酸、バクセン酸などが包含されるが、本明細書中で言及する場合、トランス脂肪酸の種類に特に制限はない。トランス脂肪酸含有油脂中に存在するトランス脂肪酸の比率は、特に限定されない。二重結合の「トランス型」および「シス型」は、本技術分野において通常使用される意味で使用され、二重結合を形成した２つの炭素原子に４つの置換基（Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３およびＲ_４）が結合した以下の構造

において、Ｒ_１およびＲ_２またはＲ_３およびＲ_４が水素以外の基であり、残りの２個の置換基が水素原子である場合をシス型とよび、Ｒ_１およびＲ_４またはＲ_３およびＲ_２が水素以外の基であり、残りの２個の置換基が水素原子である場合をトランス型と呼ぶ。トランス脂肪酸は、天然には共役リノール酸やバクセン酸として微量に存在し、例えば、反芻動物の脂肪分に比較的多く含まれている。トランス脂肪酸は、不飽和脂肪酸から飽和脂肪酸を製造するための水素化工程、および不飽和脂肪酸を多く含む植物油の精製の際に生じ得る。そのため、マーガリン、ファットスプレッド、ショートニングなどには、トランス脂肪酸が比較的多く含まれ得る。

　本明細書において、「短鎖～中鎖脂肪酸含有エステル」とは、短鎖脂肪酸または中鎖脂肪酸のうちの１つ以上を含む脂肪酸のエステルを指す。「短鎖脂肪酸」、「中鎖脂肪酸」および「長鎖脂肪酸」は、本技術分野において通常使用される意味で使用され、それぞれ炭素数が２～６個、７～１２個および１３個以上の脂肪酸を意味する。短鎖脂肪酸には、酢酸（炭素数２）、酪酸（炭素数４）、カプロン酸（炭素数６）などが包含される。中鎖脂肪酸には、カプリル酸（炭素数８）、カプリン酸（炭素数１０）、ラウリン酸（炭素数１２）などが包含される。長鎖脂肪酸には、ミリスチン酸（炭素数１４）、パルミチン酸（炭素数１６）、パルミテライジン酸（炭素数１６）、ステアリン酸（炭素数１８）、オレイン酸（炭素数１８）、エライジン酸（炭素数１８）、リノール酸（炭素数１８）、バクセン酸（炭素数１８）、リノレン酸（炭素数１８）などが包含される。

　本明細書において、「ノルマルヘキサン値」とは、ノルマルヘキサンにより抽出される不揮発性物質の量であり、水中の油分（油脂、その加水分解産物など）の量を示す指標を指す。ノルマルヘキサン値は、例えば、ＪＩＳ　Ｋ　０１０２に従って求めることができる。また、ポリニッパム抽出物質測定による簡易測定試薬キットなどを用いて求めることもできる。

　本明細書において、「資化」とは、栄養源として利用することをいい、資化の対象となった物質（例えば油脂）は、分解されて、結果として消失または減少することになる。

　本明細書において、「分解」とは、エステル（例えば、油脂）および／または脂肪酸について用いる場合、対象となったエステル（例えば、油脂）および／または脂肪酸がそれより小さな分子になることをいい、例えば、グリセロールと（遊離）脂肪酸に分かれることをいい、脂肪酸がより炭素数の少ない脂肪酸に変換されることや、二酸化炭素や水にまで変換されることも分解とよぶ。

　本明細書において、「エステルを分解する能力」または「エステラーゼ活性」とは、エステルを、アルコール類と酸（例えば、遊離脂肪酸）とに加水分解する活性を指す。例えば、「エステルを分解する能力」または「エステラーゼ活性」は、微生物、微生物の組み合わせ、またはそれらの培養上清を４－ニトロフェノールと脂肪酸とのエステルと接触させ、加水分解反応により生じる４－ニトロフェノールの量を計測することによって測定してもよいし、本明細書に記載の油脂を分解する能力の測定と同様に測定してもよい。また、「エステルを分解する能力」または「エステラーゼ活性」のうちのより具体的な能力である「短鎖～中鎖脂肪酸含有エステルを分解する能力」や「短鎖～長鎖脂肪酸含有油脂を分解する能力」も同様に測定することができると理解される。

　本明細書において、（微生物などが）「リパーゼ活性を有する」とは、グリセロールと脂肪酸との脱水縮合で生じた油脂をグリセロールと遊離脂肪酸とに加水分解する活性を有することを指し、このようなリパーゼ活性は本明細書においてトリグリセリドリパーゼ活性とも称される。例えば、リパーゼ活性を有するかどうかは、微生物を添加した培地中に含まれる油脂（キャノーラ油などの動植物油、トリオレインなど）が減少することで確認することができる。

　本明細書において、微生物が「リパーゼを生産する」とは、微生物が細胞外または細胞内にリパーゼを生産することを指す。特に、細胞外にリパーゼを生産する場合、リパーゼを分泌するまたはリパーゼを分泌生産すると言う。ただしその場合、分泌されたリパーゼは菌体細胞から離れて外環境中に放出されてもよいし、細胞表層との何らかの相互作用により細胞表層にとどまってもよい。ただし、例えば、微生物がリパーゼを生産することは、以下の分解試験で測定し、同定することができる。次のいずれかの試験で分解能力が示されればよく、必ずしも全ての試験で分解が認められなければいけないものではない。
・所定の温度（例えば、１５℃、２８℃）で油脂を資化する能力があるかどうかを確認する試験。
・所定の温度（例えば、１５℃、２８℃）で油脂を含む寒天培地上で形成されるコロニーの周辺に、クリアゾーンが観察されるかどうかを確認する試験。
・油脂を炭素源として与えて所定の温度（例えば、１５℃、２８℃）で培養し、培養上清中のノルマルヘキサン値の減少量を測定する試験。
・油脂を炭素源として与えて所定の温度（例えば、１５℃、２８℃）で培養し、培養上清中の油脂および遊離脂肪酸の量の時間変化を薄層クロマトグラフィーで測定する試験。油脂の量が時間の経過とともに減少すれば分解能力がある。あるいは、遊離脂肪酸の量がいったん増えれば、分解する能力があると言える。
・油脂を炭素源として与えて所定の温度（例えば、１５℃、２８℃）で培養し、培養上清中の遊離脂肪酸の濃度をガスクロマトグラフィー、ガスクロマトグラフィー質量分析、高速液体クロマトグラフィー等の機器分析により測定する試験。遊離脂肪酸の濃度がいったん増えれば、分解する能力があると言える。
・油脂を主たる有機物（例えば、全有機物中の７０重量％以上）として含む検水を作成し、生化学的酸素要求量（BOD）を測定する試験。
・培養上清または培養細胞中のタンパク質を、電気泳動や質量分析で解析し、リパーゼの含有を確認する。
・微生物のリパーゼ遺伝子の発現を、そのｍＲＮＡを定量または検出することで確認する。
・微生物、微生物の組み合わせ、またはそれらの培養上清の「リパーゼ活性」を上述の「エステラーゼ活性」の測定法に準じて分析する。
　個々のより詳細な測定方法は、本明細書に提供されており、また、当業者であれば、任意のその他の機器・条件を使用してこれらの測定を実施することができる。

　本明細書において、「１５℃においてエステルを分解する能力」とは、（微生物などが）低温においてエステルを、アルコール類と酸とに加水分解する活性を有することを指す。１５℃において油脂を分解する能力は、本開示の微生物（ＫＨ－２株の誘導株を含む）を１５℃において４－ニトロフェノールと酸（例えば、遊離脂肪酸）とのエステルと接触させ、加水分解反応により生じる４－ニトロフェノールの量を計測することによって測定してもよいし、本明細書に記載の１５℃において油脂を分解する能力の測定と同様に測定してもよい。

　本明細書において、「１５℃において油脂を分解する能力」とは、（微生物などが）低温において油脂を、グリセロールと遊離脂肪酸とに加水分解する活性を有することを指す。１５℃において油脂を分解する能力は、以下の試験で測定し、同定することができる。次のいずれかの試験で分解能力が示されればよく、必ずしも全ての試験で分解が認められなければいけないものではない。
・１５℃で油脂を資化する能力があるかどうかを確認する試験。
・１５℃で油脂を含む寒天培地上で形成されるコロニーの周辺に、クリアゾーンが観察されるかどうかを確認する試験。
・油脂を炭素源として与えて１５℃で培養し、培養上清中のノルマルヘキサン値の減少量を測定する試験。
・油脂を炭素源として与えて１５℃で培養し、培養上清中の油脂および遊離脂肪酸の量の時間変化を薄層クロマトグラフィーで測定する試験。油脂の量が時間の経過とともに減少すれば分解能力がある。あるいは、遊離脂肪酸の量がいったん増えれば、分解する能力があると言える。
・油脂を炭素源として与えて１５℃で培養し、培養上清中の遊離脂肪酸の濃度をガスクロマトグラフィー、ガスクロマトグラフィー質量分析、高速液体クロマトグラフィー等の機器分析により測定する試験。遊離脂肪酸の濃度がいったん増えれば、分解する能力があると言える。
・油脂を主たる有機物（例えば、全有機物中の７０重量％以上）として含む検水を作成し、生化学的酸素要求量（BOD）を測定する試験。
　個々のより詳細な測定方法は、本明細書に提供されており、また、当業者であれば、任意のその他の機器・条件を使用してこれらの測定を実施することができる。

　本明細書において、「トランス脂肪酸含有油脂を資化する能力」とは、トランス脂肪酸含有油脂を資化する活性を指す。本明細書において、「トランス脂肪酸含有油脂を資化する」は、本技術分野において通常使用される意味で使用され、微生物がトランス脂肪酸含有油脂を炭素源などの栄養源として取り込むことを意味する。「資化」する場合、グリセロールと遊離脂肪酸とに加水分解することのほか、他の物質の一部に変化することも含まれる。トランス脂肪酸含有油脂を資化する能力は、以下の試験で測定し、同定することができる。次のいずれかの試験で資化能力が示されればよく、必ずしも全ての試験で資化が認められなければいけないものではない。
・トランス脂肪酸含有油脂を唯一の炭素源として含む培地で増殖可能であるかどうかを確認する試験。
・トランス脂肪酸含有油脂を唯一の炭素源として含む培地でコロニーを形成するかどうかを確認する試験。
・増殖に伴い培養上清中のノルマルヘキサン値の減少を測定する試験。
・増殖に伴い培養上清中の全脂肪酸（油脂中の脂肪酸と遊離脂肪酸との和）を、メチルエステルに変換後、その総量をガスクロマトグラフィーで測定する試験。
・増殖に伴い培養上清中の油脂および遊離脂肪酸の量を薄層クロマトグラフィーで測定する試験。
　個々のより詳細な測定方法は、本明細書に提供されており、また、当業者であれば、任意のその他の機器・条件を使用してこれらの測定を実施することができる。

　本明細書において、「トランス脂肪酸含有油脂を分解する能力」とは、トランス脂肪酸含有油脂を、グリセロールと遊離脂肪酸とに加水分解する活性を指す。トランス脂肪酸含有油脂を分解する能力は、以下の試験で測定し、同定することができる。次のいずれかの試験で分解能力が示されればよく、必ずしも全ての試験で分解が認められなければいけないものではない。
・トランス脂肪酸含有油脂を資化する能力があるかどうかを確認する試験。
・培養上清中の油脂および遊離脂肪酸の量を薄層クロマトグラフィーで測定する試験。
・トランス脂肪酸含有油脂を炭素源として与えて培養し、培養上清中のノルマルヘキサン値の減少量を測定する試験。
・培養上清中に含まれる遊離脂肪酸と油脂中の脂肪酸をメチルエステルに変換後、その濃度をガスクロマトグラフィーで測定する試験。
・培養上清中の遊離脂肪酸の濃度をガスクロマトグラフィー質量分析で測定する試験。
・培養上清中の遊離脂肪酸の濃度を高速液体クロマトグラフィーで測定する試験。
・トランス脂肪酸含有油脂を含む寒天培地上で形成されるコロニーの周辺に、クリアゾーンが観察されるかどうかを確認する試験。
・トランス脂肪酸含有油脂を主たる有機物（例えば、全有機物中の７０重量％以上）として含む検水を作成し、生化学的酸素要求量（BOD）を測定する試験。
　個々のより詳細な測定方法は、本明細書に提供されており、また、当業者であれば、任意のその他の機器・条件を使用してこれらの測定を実施することができる。

　本明細書において、「トランス脂肪酸を資化する能力」とは、トランス脂肪酸（例えば、エライジン酸、パルミテライジン酸および／またはバクセン酸）を、資化する能力を指す。トランス脂肪酸を資化する能力は、以下の試験で測定し、同定することができる。次のいずれかの試験で資化能力が示されればよく、必ずしも全ての試験で資化が認められなければいけないものではない。
・トランス脂肪酸を唯一の炭素源として含む培地で増殖可能であるかどうかを確認する試験。
・トランス脂肪酸を唯一の炭素源として含む培地でコロニーを形成するかどうかを確認する試験。
・トランス脂肪酸を炭素源として与えて培養し、増殖に伴い培養上清中のノルマルヘキサン値の減少を測定する試験。
・増殖に伴い培養上清中のトランス脂肪酸の濃度をガスクロマトグラフィーで測定する試験。
・増殖に伴い培養上清中のトランス脂肪酸の濃度をガスクロマトグラフィー質量分析で測定する試験。
・増殖に伴い培養上清中のトランス脂肪酸の濃度を高速液体クロマトグラフィーで測定する試験。
・増殖に伴い培養上清中のトランス脂肪酸の量を薄層クロマトグラフィーで測定する試験。
　個々のより詳細な測定方法は、本明細書に提供されており、また、当業者であれば、任意のその他の機器・条件を使用してこれらの測定を実施することができる。

　本明細書において、「トランス脂肪酸を分解する能力」とは、トランス脂肪酸（例えば、エライジン酸、パルミテライジン酸および／またはバクセン酸）を、分解する能力を指す。トランス脂肪酸を分解する能力は、以下の試験で測定し、同定することができる。次のいずれかの試験で分解能力が示されればよく、必ずしも全ての試験で分解が認められなければいけないものではない。
・トランス脂肪酸を資化する能力があるかどうかを確認する試験。
・培養上清中のトランス脂肪酸の量を薄層クロマトグラフィーで測定する試験。
・トランス脂肪酸を炭素源として与えて培養し、上清中のノルマルヘキサン値の減少を測定する試験。
・培養上清中のトランス脂肪酸の濃度をガスクロマトグラフィーで測定する試験。
・培養上清中のトランス脂肪酸の濃度をガスクロマトグラフィー質量分析で測定する試験。
・培養上清中のトランス脂肪酸の濃度を高速液体クロマトグラフィーで測定する試験。
・トランス脂肪酸を含む寒天培地上で形成されるコロニーの周辺に、クリアゾーンが観察されるかどうかを確認する試験。
・トランス脂肪酸を主たる有機物（例えば、全有機物中の７０重量％以上）として含む検水を作成し、生化学的酸素要求量（BOD）を測定する試験。
　個々のより詳細な測定方法は、本明細書に提供されており、また、当業者であれば、任意のその他の機器・条件を使用してこれらの測定を実施することができる。

　本明細書において、「油脂を資化する能力」とは、油脂を資化する活性を指す。本明細書において、「油脂を資化する」は、本技術分野において通常使用される意味で使用され、微生物が油脂またはその分解産物を炭素源などの栄養源として取り込むことを意味する。「資化」する場合、グリセロールと遊離脂肪酸とに加水分解することのほか、他の物質の一部に変化することも含まれる。油脂を資化する能力は、以下の試験で測定し、同定することができる。次のいずれかの試験で資化能力が示されればよく、必ずしも全ての試験で資化が認められなければいけないものではない。
・油脂を唯一の炭素源として含む培地で増殖可能であるかどうかを確認する試験。
・油脂を唯一の炭素源として含む培地でコロニーを形成するかどうかを確認する試験。
・増殖に伴い培養上清中のノルマルヘキサン値の減少を測定する試験。
・増殖に伴い培養上清中の全脂肪酸（油脂中の脂肪酸と遊離脂肪酸との和）を、メチルエステルに変換後、その総量をガスクロマトグラフィーで測定する試験。
・増殖に伴い培養上清中の油脂および遊離脂肪酸の量を薄層クロマトグラフィーで測定する試験。
　個々のより詳細な測定方法は、本明細書に提供されており、また、当業者であれば、任意のその他の機器・条件を使用してこれらの測定を実施することができる。

　本明細書において、「油脂を分解する能力」とは、油脂を、グリセロールと遊離脂肪酸とに加水分解する活性を指す。油脂を分解する能力は、以下の試験で測定し、同定することができる。次のいずれかの試験で分解能力が示されればよく、必ずしも全ての試験で分解が認められなければいけないものではない。
・油脂を資化する能力があるかどうかを確認する試験。
・培養上清中の油脂および遊離脂肪酸の量を薄層クロマトグラフィーで測定する試験。
・油脂を炭素源として与えて培養し、培養上清中のノルマルヘキサン値の減少量を測定する試験。
・培養上清中に含まれる遊離脂肪酸と油脂中の脂肪酸をメチルエステルに変換後、その濃度をガスクロマトグラフィーで測定する試験。
・培養上清中の遊離脂肪酸の濃度をガスクロマトグラフィー質量分析で測定する試験。
・培養上清中の遊離脂肪酸の濃度を高速液体クロマトグラフィーで測定する試験。
・油脂を含む寒天培地上で形成されるコロニーの周辺に、クリアゾーンが観察されるかどうかを確認する試験。
・脂肪酸含有油脂を主たる有機物（例えば、全有機物中の７０重量％以上）として含む検水を作成し、生化学的酸素要求量（BOD）を測定する試験。
　個々のより詳細な測定方法は、本明細書に提供されており、また、当業者であれば、任意のその他の機器・条件を使用してこれらの測定を実施することができる。

　本明細書において、「脂肪酸を資化する能力」とは、脂肪酸を資化する能力を指す。脂肪酸を資化する能力は、以下の試験で測定し、同定することができる。次のいずれかの試験で資化能力が示されればよく、必ずしも全ての試験で資化が認められなければいけないものではない。
・脂肪酸を唯一の炭素源として含む培地で増殖可能であるかどうかを確認する試験。
・脂肪酸を唯一の炭素源として含む培地でコロニーを形成するかどうかを確認する試験。
・脂肪酸を炭素源として与えて培養し、増殖に伴い培養上清中のノルマルヘキサン値の減少を測定する試験。
・増殖に伴い培養上清中の脂肪酸の濃度をガスクロマトグラフィーで測定する試験。
・増殖に伴い培養上清中の脂肪酸の濃度をガスクロマトグラフィー質量分析で測定する試験。
・増殖に伴い培養上清中の脂肪酸の濃度を高速液体クロマトグラフィーで測定する試験。
・増殖に伴い培養上清中の脂肪酸の量を薄層クロマトグラフィーで測定する試験。
　個々のより詳細な測定方法は、本明細書に提供されており、また、当業者であれば、任意のその他の機器・条件を使用してこれらの測定を実施することができる。

　本明細書において、「脂肪酸を分解する能力」とは、脂肪酸を、分解する能力を指す。脂肪酸を分解する能力は、以下の試験で測定し、同定することができる。次のいずれかの試験で分解能力が示されればよく、必ずしも全ての試験で分解が認められなければいけないものではない。
・脂肪酸を資化する能力があるかどうかを確認する試験。
・培養上清中の脂肪酸の量を薄層クロマトグラフィーで測定する試験。
・脂肪酸を炭素源として与えて培養し、上清中のノルマルヘキサン値の減少を測定する試験。
・培養上清中の脂肪酸の濃度をガスクロマトグラフィーで測定する試験。
・培養上清中の脂肪酸の濃度をガスクロマトグラフィー質量分析で測定する試験。
・培養上清中の脂肪酸の濃度を高速液体クロマトグラフィーで測定する試験。
・脂肪酸を含む寒天培地上で形成されるコロニーの周辺に、クリアゾーンが観察されるかどうかを確認する試験。
・脂肪酸を主たる有機物（例えば、全有機物中の７０重量％以上）として含む検水を作成し、生化学的酸素要求量（BOD）を測定する試験。
　個々のより詳細な測定方法は、本明細書に提供されており、また、当業者であれば、任意のその他の機器・条件を使用してこれらの測定を実施することができる。

　本明細書において、「油処理成分」とは、油脂および／または脂肪酸の資化および分解を補助する成分を意味する。具体的には、サーファクタントなどの、油脂および／または脂肪酸の分散化を促進する成分、油脂を脂肪酸とグリセロールとに分解する成分のほか、脂肪酸を分解するもの、グリセロールを分解するもののほか、油を吸着して処理の対象物から除去するものなどを包含する。

　本明細書において「油分解剤」とは、本開示の微生物、あるいは本開示の微生物の組み合わせの少なくとも１種の微生物を有効成分とし、単独であるいは本開示の微生物の組み合わせにおいて油脂および／または脂肪酸の分解が可能な製剤を指す。本開示の微生物の組み合わせにおいて油脂および／または脂肪酸の分解が可能な製剤は、本開示の微生物の組み合わせのうちの１種の微生物（例えば、ブルクホルデリア細菌またはヤロウィア酵母のいずれか）のみを含む組成物であって、それ自体では所望の油脂および／または脂肪酸分解能を呈さない組成物であっても、本開示の微生物の組み合わせを形成するように使用されるときに、所望の油脂および／または脂肪酸分解能を呈する場合、この組成物は、油分解剤であり得る。本開示において、油分解剤は、油処理成分と併用して使用されてもよい。この場合の油分解剤と油処理成分との併用使用のタイミングは、同時に使用しても、いずれか片方を先に使用することにしてもよい。さらに、油分解剤には、使用する微生物株または微生物株由来のエステラーゼ（例えば、リパーゼ）の活性を高める成分（例えば炭素源、窒素源）、界面活性剤、乾燥保護剤、微生物を長期間維持するための成分、防腐剤、賦形剤、強化剤、酸化防止剤等を更に含有させてもよい。

　本明細書で使用される「誘導株」、「類似株」または「変異株」は、好ましくは、限定を意図するものではないが、対象となる微生物のＤＮＡに実質的に相同な領域を含む遺伝子（例えば、１６Ｓ　ｒＤＮＡや２６Ｓ　ｒＤＮＡ）を含み、このような株は、種々の実施形態において、当該分野で公知のコンピュータ相同性プログラムによってアラインメントを行って元となる株の全ゲノムの配列と比較した際、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％同一である全ゲノム配列を有する。これは、遺伝子の変異、置換、欠失および／または付加によって改変された微生物であり、その誘導株がなお元の微生物の生物学的機能を、必ずしも同じ度合いでなくてもよいが示す微生物を意味する。１つの実施形態では、このような誘導株、類似株または変異株は、元の微生物の生物学的機能（例えば、油分解能、他方の微生物のリパーゼ産生または油分解能を強化する能力等）が同等以上である微生物が本開示において提供される。例えば、遺伝子の変異は、任意の公知の変異剤、ＵＶ、プラズマなどを使用して導入することができる。一つの実施形態では、「誘導株」、「類似株」または「変異株」は、元の株と同じ属および／または種である株である。例えば、本明細書において記載されあるいは当該分野で公知の適切で利用可能なｉｎ　ｖｉｔｒｏアッセイによって、このような微生物の生物学的機能を調べることが可能である。本明細書において遺伝子または塩基配列の「類似性」は、２以上の遺伝子配列の、互いに対する類似性の程度をいい、同一性の他配列の類似の程度が高いことをいう。「類似性」は、同一性に加え、類似の塩基についても計算に入れた数値であり、ここで類似の塩基とは、混合塩基（例えば、Ｒ＝Ａ＋Ｇ、Ｍ＝Ａ＋Ｃ、Ｗ＝Ａ＋Ｔ、Ｓ＝Ｃ＋Ｇ、Ｙ＝Ｃ＋Ｔ、Ｋ＝Ｇ＋Ｔ、Ｈ＝Ａ＋Ｔ＋Ｃ、Ｂ＝Ｇ＋Ｔ＋Ｃ、Ｄ＝Ｇ＋Ａ＋Ｔ、Ｖ＝Ａ＋Ｃ＋Ｇ、Ｎ＝Ａ＋Ｃ＋Ｇ＋Ｔ）において、一部が一致する場合をいう。

　本明細書において「タンパク質」、「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」および「ペプチド」は、本明細書において同じ意味で使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーをいう。このポリマーは、直鎖であっても分岐していてもよく、環状であってもよい。アミノ酸は、天然のものであっても非天然のものであってもよく、改変されたアミノ酸であってもよい。この用語はまた、複数のポリペプチド鎖の複合体へとアセンブルされたものを包含し得る。この用語はまた、天然または人工的に改変されたアミノ酸ポリマーも包含する。そのような改変としては、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化または任意の他の操作もしくは改変（例えば、標識成分との結合体化）が包含される。この定義にはまた、例えば、アミノ酸の1または2以上のアナログを含むポリペプチド（例えば、非天然アミノ酸などを含む）、ペプチド様化合物（例えば、ペプトイド）および当該分野において公知の他の改変が包含される。本明細書において、「アミノ酸」は、アミノ基とカルボキシル基を持つ有機化合物の総称である。本開示の実施形態に係るタンパク質または酵素が「特定のアミノ酸配列」を含むとき、そのアミノ酸配列中のいずれかのアミノ酸が化学修飾を受けていてもよい。また、そのアミノ酸配列中のいずれかのアミノ酸が塩、または溶媒和物を形成していてもよい。また、そのアミノ酸配列中のいずれかのアミノ酸がL型、またはD型であってもよい。それらのような場合でも、本開示の実施形態に係る蛋白質は、上記「特定のアミノ酸配列」を含むといえる。蛋白質に含まれるアミノ酸が生体内で受ける化学修飾としては、例えば、N末端修飾（例えば、アセチル化、ミリストイル化等）、C末端修飾（例えば、アミド化、グリコシルホスファチジルイノシトール付加等）、または側鎖修飾（例えば、リン酸化、糖鎖付加等）等が知られている。アミノ酸は、本開示の目的を満たす限り、天然のものでも非天然のものでもよい。

　本明細書において「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」および「核酸」は、本明細書において同じ意味で使用され、任意の長さのヌクレオチドのポリマーをいう。この用語はまた、「オリゴヌクレオチド誘導体」または「ポリヌクレオチド誘導体」を含む。「塩基配列」または「核酸配列」は、「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」または「核酸」において、連続する核酸塩基の順序を意味する。「オリゴヌクレオチド誘導体」または「ポリヌクレオチド誘導体」とは、ヌクレオチドの誘導体を含むか、またはヌクレオチド間の結合が通常とは異なるオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドをいい、互換的に使用される。そのようなオリゴヌクレオチドとして具体的には、例えば、2’－O－メチル－リボヌクレオチド、オリゴヌクレオチド中のリン酸ジエステル結合がホスホロチオエート結合に変換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のリン酸ジエステル結合がN3’－P5’ホスホロアミデート結合に変換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のリボースとリン酸ジエステル結合とがペプチド核酸結合に変換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のウラシルがC－5プロピニルウラシルで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のウラシルがC－5チアゾールウラシルで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のシトシンがC－5プロピニルシトシンで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のシトシンがフェノキサジン修飾シトシン（phenoxazine－modified　cytosine）で置換されたオリゴヌクレオチド誘導体、DNA中のリボースが2’－O－プロピルリボースで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体およびオリゴヌクレオチド中のリボースが2’－メトキシエトキシリボースで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体などが例示される。他にそうではないと示されなければ、特定の塩基配列はまた、明示的に示された配列と同様に、その保存的に改変された改変体（例えば、縮重コドン置換体）および相補配列を包含することが企図される。具体的には、縮重コドン置換体は、1またはそれ以上の選択された（または、すべての）コドンの3番目の位置が混合塩基および／またはデオキシイノシン残基で置換された配列を作成することにより達成され得る（Batzer　et　al.,　Nucleic　Acid　Res.19:5081(1991);Ohtsuka　et　al.,　J.　Biol.　Chem.　260:　2605-2608(1985);Rossolini　et　al.,　Mol.Cell.Probes　8:91-98(1994)）。本明細書において「核酸」はまた、遺伝子、cDNA、mRNA、オリゴヌクレオチド、およびポリヌクレオチドと互換可能に使用される。本明細書において「ヌクレオチド」は、天然のものでも非天然のものでもよい。

　本明細書において「遺伝子」とは、遺伝形質を規定する因子をいい、「遺伝子」は、「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」および「核酸」を指すことがある。

　本明細書において遺伝子の「相同性」とは、２以上の遺伝子配列の、互いに対する同一性の程度をいい、一般に「相同性」を有するとは、同一性または類似性の程度が高いことをいう。従って、ある２つの遺伝子の相同性が高いほど、それらの配列の同一性または類似性は高い。２種類の遺伝子が相同性を有するか否かは、配列の直接の比較、または核酸の場合ストリンジェントな条件下でのハイブリダイゼーション法によって調べられ得る。２つの遺伝子配列を直接比較する場合、その遺伝子配列間でＤＮＡ配列が、代表的には少なくとも５０％同一である場合、好ましくは少なくとも７０％同一である場合、より好ましくは少なくとも８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である場合、それらの遺伝子は相同性を有する。

　アミノ酸は、その一般に公知の３文字記号か、またはＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ　Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎにより推奨される１文字記号のいずれかにより、本明細書中で言及され得る。ヌクレオチドも同様に、一般に認知された１文字コードにより言及され得る。本明細書では、アミノ酸配列および塩基配列の類似性、同一性および相同性の比較は、配列分析用ツールであるＢＬＡＳＴを用いてデフォルトパラメータを用いて算出される。同一性の検索は例えば、ＮＣＢＩのＢＬＡＳＴ２．７．１（２０１７．１０．１９発行）を用いて行うことができる。本明細書における「同一性」の値は通常は上記ＢＬＡＳＴを用い、デフォルトの条件でアラインした際の値をいう。ただし、パラメータの変更により、より高い値が出る場合は、最も高い値を同一性の値とする。複数の領域で同一性が評価される場合はそのうちの最も高い値を同一性の値とする。「類似性」は、同一性に加え、類似のアミノ酸についても計算に入れた数値である。

　本開示の一実施形態において同一性等の数値である「７０％以上」は、例えば、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上、または１００％以上であってもよく、それら起点となる数値のいずれか２つの値の範囲内であってもよい。上記「同一性」は、２つもしくは複数間のアミノ酸または塩基配列において相同なアミノ酸または塩基数の割合を、上述したような公知の方法に従って算定される。具体的に説明すると、割合を算定する前には、比較するアミノ酸または塩基配列群のアミノ酸または塩基配列を整列させ、同一アミノ酸または塩基の割合を最大にするために必要である場合はアミノ酸または塩基配列の一部に間隙を導入する。整列のための方法、割合の算定方法、比較方法、およびそれらに関連するコンピュータプログラムは、当該分野で従来からよく知られている（例えば、上述したＢＬＡＳＴ等）。本明細書において「同一性」および「類似性」は、特に断りのない限りＮＣＢＩのＢＬＡＳＴによって測定された値で表すことができる。ＢＬＡＳＴでアミノ酸または塩基配列を比較するときのアルゴリズムには、Ｂｌａｓｔｐをデフォルト設定で使用できる。測定結果はPositivesまたはIdentitiesとして数値化される。この場合、「同一性」に代えて「類似性」という場合は、本明細書に記載される「類似」する「アミノ酸」または「塩基」の定義に該当するものも考慮した数値である。本明細書において、その配列間で相同性、同一性および／または類似性を有するポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、核酸、ペプチドまたはタンパク質は、互いに「改変体」と称され得る。

　本明細書において「ストリンジェント（な）条件でハイブリダイズするポリヌクレオチド」とは、当該分野で慣用される周知の条件をいう。本開示のポリヌクレオチド中から選択されたポリヌクレオチドをプローブとして、コロニー・ハイブリダイゼーション法、プラーク・ハイブリダイゼーション法あるいはサザンブロットハイブリダイゼーション法などを用いることにより、そのようなポリヌクレオチドを得ることができる。具体的には、コロニーあるいはプラーク由来のDNAを固定化したフィルターを用いて、0．7～1．0MのNaCl存在下、65℃でハイブリダイゼーションを行った後、0．1～2倍濃度のSSC（saline-sodium　citrate）溶液（1倍濃度のSSC溶液の組成は、150mM塩化ナトリウム、15mMクエン酸ナトリウムである）を用い、65℃条件下でフィルターを洗浄することにより同定できるポリヌクレオチドを意味する。「ストリンジェントな条件」は、例えば、以下の条件を採用することができる。(1)洗浄のために低イオン強度および高温度を用いる(例えば、50℃で、0.015Mの塩化ナトリウム/0.0015Mのクエン酸ナトリウム/0.1％のドデシル硫酸ナトリウム)、(2)ハイブリダイゼーション中にホルムアミド等の変性剤を用いる(例えば、42℃で、50％(v/v)ホルムアミドと0.1％ウシ血清アルブミン/0.1％フィコール/0.1％のポリビニルピロリドン/50mMのpH6.5のリン酸ナトリウムバッファー、および750mMの塩化ナトリウム、75mMクエン酸ナトリウム)、または(3)20％ホルムアミド、5×SSC、50mMリン酸ナトリウム(pH7.6)、5×デンハード液、10％硫酸デキストラン、および20mg/mlの変性剪断サケ精子DNAを含む溶液中で、37℃で一晩インキュベーションし、次に約37-50℃で1×SSCでフィルターを洗浄する。なお、ホルムアミド濃度は50％またはそれ以上であってもよい。洗浄時間は、5、15、30、60、もしくは120分、またはそれら以上であってもよい。ハイブリダイゼーション反応のストリンジェンシーに影響する要素としては温度、塩濃度など複数の要素が考えられ、詳細はAusubel　et　al.,　Current　Protocols　in　Molecular　Biology,　Wiley　Interscience　Publishers,(1995)を参照することができる。「高度にストリンジェントな条件」の例は、０．００１５Ｍ塩化ナトリウム、０．００１５Ｍクエン酸ナトリウム、６５～６８℃、または０．０１５Ｍ塩化ナトリウム、０．００１５Ｍクエン酸ナトリウム、および５０％ホルムアミド、４２℃である。ハイブリダイゼーション、Molecular　Cloning　2nd　ed.,Current　Protocols　in　Molecular　Biology,　Supplement　1-38,　DNA　Cloning　1:Core　Techniques,　A　Practical　Approach,　Second　Edition,　Oxford　University　Press(1995)などの実験書に記載されている方法に準じて行うことができる。ここで、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする配列からは、好ましくは、A配列のみまたはT配列のみを含む配列が除外される。中程度のストリンジェントな条件は、例えば、ＤＮＡの長さに基づき、当業者によって、容易に決定することができ、Sambrookら、Molecular　Cloning:A　Laboratory　Manual、第３番、Vol．１、７．４２－７．４５　Cold　Spring　Harbor　Laboratory　Press，2001に示され、そしてニトロセルロースフィルターに関し、５×ＳＳＣ、０．５％　ＳＤＳ、１．０ｍＭ　ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）の前洗浄溶液、約４０－５０℃での、約５０％ホルムアミド、２×ＳＳＣ－６×ＳＳＣ（または約４２℃での約５０％ホルムアミド中の、スターク溶液（Ｓｔａｒｋ’ｓ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ）などの他の同様のハイブリダイゼーション溶液）のハイブリダイゼーション条件、および約６０℃、０．５×ＳＳＣ、０．１％　ＳＤＳの洗浄条件の使用が含まれる。従って、本開示において使用されるポリペプチドには、本開示で特に記載されたポリペプチドをコードする核酸分子に対して、高度または中程度でストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸分子によってコードされるポリペプチドも包含される。

　本明細書において「生物学的機能」とは、ある微生物について言及するとき、その微生物が有し得る特定の機能をいい、これには、例えば、エステル（例えば、油脂）の分解（例えば、低温における分解）、リパーゼの生産、油の分解、他の微生物のリパーゼ生産を増強する能力、他の微生物の油分解活性を増強する能力等を挙げることができるがそれらに限定されない。本明細書において、生物学的機能は、対応する「生物学的活性」によって発揮され得る。本明細書において「生物学的活性」とは、ある微生物が、ある環境において有し得る活性のことをいい、種々の機能（例えば、１５℃における油の分解活性）を発揮する活性が包含される。このような生物学的活性は、当該分野において周知の技術によって測定することができる。従って、「活性」は、応答に影響する（すなわち、いくらかの曝露または刺激に応答する測定可能な影響を有する）、種々の測定可能な指標をいい、例えば、本開示の微生物のいくつかの刺激後または事象後の上流または下流のタンパク質の量あるいは他の類似の機能の尺度も含まれ得る。

　本明細書で使用されるとき、試料中の分析物の「量」は、一般には、試料の体積中で検出し得る分析物の質量を反映する絶対値を指す。しかし、量は、別の分析物量と比較した相対量も企図する。例えば、試料中の分析物の量は、試料中に通常存在する分析物の対照レベルまたは正常レベルより大きい量であってもよい。

　用語「約」は、示された値プラスまたはマイナス１０％を指す。

　本明細書において「キット」とは、通常２つ以上の区画に分けて、提供されるべき部分（例えば、本開示の微生物を含む組成物、追加的な成分、緩衝液、説明書など）が提供されるユニットをいう。安定性等のため、混合されて提供されるべきでなく、使用直前に混合して使用することが好ましいような組成物の提供を目的とするときに、このキットの形態は好ましい。そのようなキットは、好ましくは、提供される部分（例えば、微生物を含む組成物、追加的な成分）などをどのように使用するか、あるいは、どのように処理すべきかを記載する指示書または説明書を備えていることが有利である。本明細書においてキットが使用される場合、キットには、通常、本開示の微生物や組成物等の使い方などを記載した指示書などが含まれる。

　本明細書において「指示書」は、本開示の微生物または本開示の微生物の組み合わせを使用する方法を使用者に対して説明するために記載したものである。この指示書は、本開示の微生物または本開示の微生物の組み合わせの使用方法を指示する文言が記載されている。この指示書は、必要な場合は、本開示の方法が実施される国の監督官庁（例えば、日本であれば厚生労働省または農林水産省等、米国であれば食品医薬品局（ＦＤＡ）、農務省（ＵＳＤＡ）など）が規定した様式に従って作成され、その監督官庁により承認を受けた旨が明記される。指示書は、紙媒体で提供され得るが、それに限定されず、例えば、電子媒体（例えば、インターネットで提供されるホームページ、電子メール）のような形態でも提供され得る。

　（好ましい実施形態）
　以下に本開示の好ましい実施形態を説明する。以下に提供される実施形態は、本開示のよりよい理解のために提供されるものであり、本開示の範囲は以下の記載に限定されるべきでないことが理解される。従って、当業者は、本明細書中の記載を参酌して、本開示の範囲内で適宜改変を行うことができることは明らかである。また、本開示の以下の実施形態は単独でも使用されあるいはそれらを組み合わせて使用することができることが理解される。

　（新たな能力を有する微生物）
　一つの局面において、本開示は、油脂および／または脂肪酸の分解に関して新たに見出された能力を有する微生物を提供する。特に、本開示の微生物は、長鎖脂肪酸（炭素原子を１３以上、例えば１４～２２含む脂肪酸）を含むトリグリセリドに対するリパーゼ活性を有する、長鎖脂肪酸の４－ニトロフェニルエステルよりも短鎖～中鎖脂肪酸（炭素原子を２～１２含む脂肪酸）の４－ニトロフェニルエステルに対して高い加水分解活性を有する、短～長鎖脂肪酸（炭素原子を２以上含む脂肪酸）含有油脂を分解する能力を有する、短～中鎖脂肪酸（炭素原子を２～１２含む脂肪酸）含有エステルを分解する能力を有する、１５℃においてエステル（例えば、油脂）および／または脂肪酸を資化する能力を有する、１５℃においてエステル（例えば、油脂）および／または脂肪酸を分解する能力を有する、トランス脂肪酸含有油脂を資化する能力を有する、トランス脂肪酸含有油脂を分解する能力を有する、トランス脂肪酸（例えば、エライジン酸、パルミテライジン酸および／またはバクセン酸）を資化する能力を有する、および／またはトランス脂肪酸（例えば、エライジン酸、パルミテライジン酸および／またはバクセン酸）を分解する能力を有する、ブルクホルデリア細菌のリパーゼ生産を向上させる能力を有する、ブルクホルデリア細菌の脂肪酸および／または油脂分解能を向上させる能力を有する、という１つ以上の特徴を有するものである。一つの局面において、本開示は、エステル（例えば、油脂）分解能のある新たな微生物を提供する。本開示の微生物は、短鎖～長鎖脂肪酸の油脂に対する幅広い加水分解活性を有し得る。一つの局面において、本開示は、ブルクホルデリア細菌と組み合わせた場合にブルクホルデリア細菌のリパーゼ生産および／または油（脂肪酸、油脂を含む）分解能を向上させる能力を有する新たな微生物を提供する。

　一つの実施形態では、本開示の微生物は、ヤロウィア（Yarrowia）属の酵母である。ヤロウィア属の微生物は、真菌類であり、生活環の一定期間において栄養体が単細胞性を示し、細胞壁を持っている。形態的には特徴の少ない円形か楕円形をしている。ヤロウィア属には、bubula、deformans、lipolytica、porcinaおよびyakushimensisなどの種が含まれる。一つの実施形態では、本開示の微生物は、ヤロウィア　リポリティカ（Yarrowia　lipolytica）である。本発明者は、トランス脂肪酸分解・資化能力および低温エステル（例えば、油脂）分解能力を調べることで見出した新たな微生物の菌株をヤロウィア　リポリティカと同定し、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターにこれを寄託し、２０１８年６月４日に受領され、２０１８年６月１２日に受託証が発行された。受託番号はＮＩＴＥ　ＢＰ－０２７３２である。また、ヤロウィア　リポリティカのさらなる菌株（ＫＨ－２ＡＬ１株およびＫＨ－２ＡＬ３株）をさらに同定し、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターにこれらを寄託し、２０１９年１２月２３日に受領され、２０２０年１月１６日に受託証が発行された。受託番号はそれぞれ、ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０９１およびＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０９２である。一つの実施形態では、本開示の微生物は、ヤロウィア酵母ＫＨ－２株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２７３２で特定される菌株）、ＫＨ－２ＡＬ１株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０９１で特定される菌株）もしくはＫＨ－２ＡＬ３株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０９２で特定される菌株）であるか、またはその誘導株である。本開示のさらなる局面では、本開示のヤロウィア酵母は、カンジダ（Candida）属、ジゴアスカス（Zygoascus）属、オガタエア（Ogataea）属、ピチア（Pichia）属または(Aciculoconidium)属の酵母であり得る。このようなカンジダ（Candida）属の酵母としては、deformans、oslonensis、galli、phangngensis、hollandica、alimentaria、hispaniensisおよびincommunisが挙げられ、ジゴアスカス（Zygoascus）属としては、steatolyticus　var.steatolyticusが挙げられ、(Aciculoconidium)属としてはaculeatumが挙げられる。

　一つの実施形態では、本開示の微生物は、ヤロウィア酵母ＫＨ－２株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２７３２で特定される菌株）、ＫＨ－２ＡＬ１株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０９１で特定される菌株）もしくはＫＨ－２ＡＬ３株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０９２で特定される菌株）の誘導株である。ここで、誘導株とは、ヤロウィア酵母ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株を元として得られた株であることは必要とせず、ヤロウィア酵母ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株の生物学的機能を、必ずしも同じ度合いでなくてもよいが示す微生物を指す。一つの実施形態では、本開示の誘導株である微生物は、ヤロウィア酵母ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株と同様に、リパーゼ活性を有すること、低温（例えば、２５℃以下、２０℃以下、１５℃以下、１０℃以下、５℃以下など）においてエステル（例えば、トランス脂肪酸含有油脂）を資化（分解）する能力、トランス脂肪酸（例えば、エライジン酸、パルミテライジン酸および／またはバクセン酸）を資化（分解）する能力、ブルクホルデリア細菌のリパーゼ生産を向上させる能力、およびブルクホルデリア細菌の脂肪酸および／または油脂分解能を向上させる能力からなる群から選択される生物学的機能を示すが、その生物学的機能の程度はＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株と異なっていてもよい。一つの実施形態では、本開示の誘導株である微生物は、ヤロウィア（Yarrowia）属の酵母であり、より具体的には、ヤロウィア　リポリティカ（Yarrowia　lipolytica）であり得る。

　本開示の微生物（ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株の誘導株を含む）は、エステル（例えば、油脂）を唯一の炭素源として含み、ｐＨを６～８に調整した無機塩寒天培地上で単離可能であり得る。また、一つの実施形態では、本開示の微生物（ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株の誘導株を含む）は、エステル（例えば、油脂）を分散含有させた寒天培地上に生じたコロニー周辺にクリアゾーン（ハロー）が形成されるのを確認することで判別可能であり得る。一つの実施形態では、本開示の微生物（ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株の誘導株を含む）は、１５℃または２８℃、好ましくは１５℃において１０ｇ／Ｌのキャノーラ油を炭素源として添加した寒天培地上でコロニーを形成し、生育できる。限定を意図するものではないが、本開示の微生物は、最低限のエステル（例えば、油脂）資化（分解）能またはエステル（例えば、油脂）耐性を有することが有用であり得る。

　一つの実施形態では、本開示の微生物（ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株の誘導株を含む）は、エステラーゼ活性を有する。一つの実施形態では、本開示の微生物（ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株の誘導株を含む）は、長鎖脂肪酸（炭素原子を１３以上、例えば１４～２２含む脂肪酸）を含むトリグリセリドに対するリパーゼ活性を有する。一つの実施形態では、本開示の微生物（ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株の誘導株を含む）は、短～中鎖脂肪酸（炭素原子を２～１２含む脂肪酸）を含むエステル（例えば、トリグリセリド）に対するエステラーゼ活性を有する。一つの実施形態では、本開示の微生物（ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株の誘導株を含む）は、長鎖脂肪酸の４－ニトロフェニルエステルよりも短鎖～中鎖脂肪酸（炭素原子を２～１２含む脂肪酸）の４－ニトロフェニルエステルに対して高い加水分解活性を有する。一つの実施形態では、本開示の微生物（ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株の誘導株を含む）は、１５℃においてエステル（例えば、油脂）および／または脂肪酸を分解または資化する能力を有する。一つの実施形態では、本開示の微生物（ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株の誘導株を含む）は、トランス脂肪酸（例えば、エライジン酸、パルミテライジン酸および／またはバクセン酸）またはトランス脂肪酸含有油脂を、資化または分解する能力が１５℃において保持される。

　一つの実施形態では、本開示の微生物（ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株の誘導株を含む）は、１％（ｖ／ｖ）キャノーラ油添加無機塩培地に、初期菌体光学密度ＯＤ_６６０＝０．０５になるように接種した後、２８℃で２４時間、２８℃で４８時間または１５℃で４８時間培養した後、遠心分離して菌体を除去した上清１ｍｌと、０．０５ｍｏｌの脂肪酸４－ニトロフェニルエステルを１２ｍｌの３％（ｖ／ｖ）Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）　Ｘ－１００水溶液に溶解させて調製した基質溶液１ｍｌと、１５０ｍＭのＧＴＡ緩衝液（ｐＨ７．０）１ｍｌとを混合し、攪拌しながら４１０ｎｍの吸光度を１分間モニターした場合に、長鎖脂肪酸（炭素原子を１３以上含む脂肪酸）の４－ニトロフェニルエステルよりも短鎖～中鎖脂肪酸（炭素原子を２～１２含む脂肪酸）の４－ニトロフェニルエステルに対して１倍、１．５倍、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、２００倍または５００倍高い加水分解活性を有する。

　一つの実施形態では、本開示の微生物（ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株の誘導株を含む）は、トランス脂肪酸（例えば、エライジン酸、パルミテライジン酸および／またはバクセン酸）またはトランス脂肪酸含有油脂を資化する能力を有する。一つの実施形態では、本開示の微生物（ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株の誘導株を含む）は、トランス脂肪酸（例えば、エライジン酸、パルミテライジン酸および／またはバクセン酸）を分解する能力を有する。一つの実施形態では、本開示の微生物（ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株の誘導株を含む）は、トランス脂肪酸含有油脂を分解する能力を有する。

　一つの実施形態では、本開示の微生物（ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株の誘導株を含む）は、トリオレインを分解するリパーゼ活性を有する。一つの実施形態では、本開示の微生物（ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株の誘導株を含む）は、トリエライジンを分解するリパーゼ活性を有する。

　一つの実施形態では、本開示の微生物（ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株の誘導株を含む）は、低温でトランス脂肪酸を含む各種脂肪酸（オレイン酸、エライジン酸、パルミテライジン酸、バクセン酸）を分解または資化する能力を有する。

　一つの実施形態では、本開示の微生物（ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株の誘導株を含む）は、トランス脂肪酸（例えば、エライジン酸）含有油脂を含むｐＨ７．０かつ１５℃または２８℃の培地中で、トランス脂肪酸含有油脂を資化および／または分解する油脂分解能を有し得る。

　一つの実施形態では、本開示の微生物（ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株の誘導株を含む）は、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）　Ｘ－１００およびエライジン酸をそれぞれ０．２５重量％と０．２重量％の濃度で含む無機塩培地にＯＤ_６６０＝０．５または０．８となるような菌体光学密度で微生物を植菌し、ｐＨ７．０、２８℃で培養したときに２４時間後または４６時間後の上清におけるエライジン酸濃度（例えば、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）　Ｘ－１００およびエライジン酸をそれぞれ０．２５重量％と０．２重量％の濃度で含む無機塩培地にＯＤ_６６０＝０．５となるような菌体光学密度で微生物を植菌し、ｐＨ７．０、２８℃で培養したときに２４時間後の上清におけるエライジン酸濃度、またはＴｒｉｔｏｎ（登録商標）　Ｘ－１００およびエライジン酸をそれぞれ０．２５重量％と０．２重量％の濃度で含む無機塩培地にＯＤ_６６０＝０．８となるような菌体光学密度で微生物を植菌し、ｐＨ７．０、２８℃で培養したときに４６時間後の上清におけるエライジン酸濃度）が、１５００ｍｇ／Ｌ未満、１２００ｍｇ／Ｌ未満、１０００ｍｇ／Ｌ未満、９００ｍｇ／Ｌ未満、８００ｍｇ／Ｌ未満、７００ｍｇ／Ｌ未満、６００ｍｇ／Ｌ未満、５００ｍｇ／Ｌ未満、４００ｍｇ／Ｌ未満、３００ｍｇ／Ｌ未満、２００ｍｇ／Ｌ未満、１５０ｍｇ／Ｌ未満、１００ｍｇ／Ｌ未満、７０ｍｇ／Ｌ未満、５０ｍｇ／Ｌ未満、２０ｍｇ／Ｌ未満、１０ｍｇ／Ｌ未満、または５ｍｇ／Ｌ未満となるトランス脂肪酸分解能を有する。本開示の微生物（ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株の誘導株を含む）は、この条件で判定した場合に８００ｍｇ／Ｌ未満、７００ｍｇ／Ｌ未満、６００ｍｇ／Ｌ未満または５００ｍｇ／Ｌ未満、特に、７００ｍｇ／Ｌ未満まで上清におけるエライジン酸濃度を低下させる能力を有することが好ましく、このようなトランス脂肪酸分解能を有する微生物は本開示の種々の用途において有益に使用することができる。

　一つの実施形態では、本開示の微生物（ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株の誘導株を含む）は、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）　Ｘ－１００およびエライジン酸をそれぞれ０．２５重量％と０．２重量％の濃度で含む無機塩培地にＯＤ_６６０＝０．８となるような菌体光学密度で微生物を植菌し、ｐＨ７．０、１５℃で培養したときに４８時間後または９０時間後の上清におけるエライジン酸濃度が、１５００ｍｇ／Ｌ未満、１２００ｍｇ／Ｌ未満、１０００ｍｇ／Ｌ未満、９００ｍｇ／Ｌ未満、８００ｍｇ／Ｌ未満、７００ｍｇ／Ｌ未満、６００ｍｇ／Ｌ未満、５００ｍｇ／Ｌ未満、４００ｍｇ／Ｌ未満、３００ｍｇ／Ｌ未満、２００ｍｇ／Ｌ未満、１５０ｍｇ／Ｌ未満、１００ｍｇ／Ｌ未満、７０ｍｇ／Ｌ未満、５０ｍｇ／Ｌ未満、２０ｍｇ／Ｌ未満、１０ｍｇ／Ｌ未満、または５ｍｇ／Ｌ未満となるトランス脂肪酸分解能を有する。本開示の微生物（ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株の誘導株を含む）は、この条件で判定した場合に１０００ｍｇ／Ｌ未満、７００ｍｇ／Ｌ未満、５００ｍｇ／Ｌ未満、４００ｍｇ／Ｌ未満、３００ｍｇ／Ｌ未満、２００ｍｇ／Ｌ未満または１００ｍｇ／Ｌ未満、特に、５００ｍｇ／Ｌ未満まで上清におけるエライジン酸濃度を低下させる能力を有することが好ましく、このようなトランス脂肪酸分解能を有する微生物は本開示の種々の用途において有益に使用することができる。

　一つの実施形態では、本開示の微生物（ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株の誘導株を含む）は、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）　Ｘ－１００およびトリエライジンをそれぞれ０．２５重量％と０．１重量％の濃度で含む無機塩培地にＯＤ_６６０＝０．８となるような菌体光学密度で微生物を植菌し、ｐＨ７．０、２８℃で培養したときに５日間後の上清における残留油濃度が、８００ｍｇ／Ｌ未満、７００ｍｇ／Ｌ未満、６００ｍｇ／Ｌ未満、５００ｍｇ／Ｌ未満、４００ｍｇ／Ｌ未満、３５０ｍｇ／Ｌ未満、３００ｍｇ／Ｌ未満、２５０ｍｇ／Ｌ未満、２００ｍｇ／Ｌ未満、１５０ｍｇ／Ｌ未満、１００ｍｇ／Ｌ未満、７０ｍｇ／Ｌ未満、５０ｍｇ／Ｌ未満、２０ｍｇ／Ｌ未満、または１０ｍｇ／Ｌ未満となるトランス脂肪酸含有油脂分解能を有する。本開示の微生物（ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株の誘導株を含む）は、この条件で判定した場合に４００ｍｇ／Ｌ未満、３５０ｍｇ／Ｌ未満、３００ｍｇ／Ｌ未満、２５０ｍｇ／Ｌ未満、２００ｍｇ／Ｌ未満、１５０ｍｇ／Ｌ未満、または１００ｍｇ／Ｌ未満、特に、３５０ｍｇ／Ｌ未満まで上清における残留油濃度を低下させる能力を有することが好ましく、このようなトランス脂肪酸含有油脂分解能を有する微生物は本開示の種々の用途において有益に使用することができる。

　一つの実施形態では、本開示の微生物（ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株の誘導株を含む）は、１％（ｖ／ｖ）のキャノーラ油を含む無機塩培地に、最終濃度がＯＤ_６６０＝０．０５となるような菌体光学密度で微生物を植菌し、ｐＨ７．０、１５℃で培養したとき、培養開始から２４時間後の残留油分が、培養開始時の９５％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、７％未満、５％未満、２％未満、または１％未満となる油脂分解能を有する。本開示の微生物（ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株の誘導株を含む）は、この条件で判定した場合に、１５℃培養における残留油分が、６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４５％未満または４０％未満、特に、４５％未満である油脂分解能を有することが好ましく、このような低温油脂分解能を有する微生物は本開示の種々の用途において有益に使用することができる。

　一つの実施形態では、本開示の微生物（ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株の誘導株を含む）は、１％（ｖ／ｖ）のキャノーラ油を含む無機塩培地に、最終濃度がＯＤ_６６０＝０．０５となるような菌体光学密度で微生物を植菌し、ｐＨ７．０、２８℃で培養したとき、培養開始から２４時間後の残留油分が、培養開始時の５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１７％未満、１５％未満、１２％未満、１０％未満、７％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、または１％未満となる油脂分解能を有する。本開示の微生物（ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株の誘導株を含む）は、この条件で判定した場合に、２８℃培養における残留油分が、２０％未満、１７％未満、１５％未満、１２％未満、または１０％未満、特に、１０％未満である油脂分解能を有することが好ましく、このような高速油脂分解能を有する微生物は本開示の種々の用途において有益に使用することができる。

　一つの実施形態では、本開示の微生物（ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株の誘導株を含む）は、１％（ｖ／ｖ）のキャノーラ油を含む無機塩培地に、最終濃度がＯＤ_６６０＝０．０５となるような菌体光学密度で微生物を植菌し、ｐＨ７．０、１５℃および２８℃でそれぞれ培養したときに、１５℃培養における２４時間後の上清におけるノルマルヘキサン値相当の油分が、２８℃培養における２４時間後の上清におけるノルマルヘキサン値相当の油分と比較して１０００％以下、８００％以下、６００％以下、４００％以下、２００％以下、１５０％以下、１００％以下、８０％以下、６０％以下、４０％以下、２０％以下、１０％以下または５％以下となる油脂分解能を有する。本開示の微生物（ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株の誘導株を含む）は、この条件で判定した場合に、２８℃培養に比べて１５℃培養における油脂残存率が、８００％以下、７００％以下、６００％以下、５００％以下、４００％以下、特に、５００％以下である油脂分解能を有することが好ましく、このような低温油脂分解能を有する微生物は本開示の種々の用途において有益に使用することができる。

　一つの実施形態では、本開示の微生物（ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株の誘導株を含む）は、１％（ｖ／ｖ）のキャノーラ油を含む無機塩培地に、最終濃度がＯＤ_６６０＝０．０５となるような菌体光学密度で微生物を植菌し、ｐＨ７．０、１５℃および２８℃でそれぞれ培養を開始したときに、２８℃培養に比べて１５℃培養における全脂肪酸分解速度が、１０００％以上、８００％以上、６００％以上、４００％以上、２００％以上、１５０％以上、１００％以上、８０％以上、６０％以上、５０％以上、４０％以上、３０％以上、２０％以上、１０％以上または５％以上となる油脂分解能を有する。本開示の微生物（ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株の誘導株を含む）は、この条件で判定した場合に、２８℃培養に比べて１５℃培養における全脂肪酸分解速度が、５０％以上、４０％以上、３０％以上、２０％以上または１０％以上、特に、３０％以上である油脂分解能を有することが好ましく、このような低温油脂分解能を有する微生物は本開示の種々の用途において有益に使用することができる。

　一つの実施形態では、本開示のヤロウィア酵母は、リパーゼを生産するブルクホルデリア細菌のリパーゼ生産を向上させる能力を有する。一つの実施形態では、本開示のヤロウィア酵母は、ブルクホルデリア細菌の単独培養時の油脂分解能よりも高い油脂分解能を前記ブルクホルデリア細菌に付与する能力を有する。一つの実施形態では、本開示のヤロウィア酵母は、ブルクホルデリア細菌の単独培養時の脂肪酸分解能よりも高い脂肪酸分解能を前記ブルクホルデリア細菌に付与する能力を有する。一つの実施形態では、前記ブルクホルデリア細菌は、本開示の微生物の組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌のいずれかである。本明細書において以下に記載される本開示の微生物の組み合わせの任意の特徴は、本開示のヤロウィア酵母が、本開示のブルクホルデリア細菌に付与する能力についての記載でもあることが企図される。例えば、１％（ｖ／ｖ）のキャノーラ油を添加した無機塩培地にブルクホルデリア細菌とヤロウィア酵母とを１：１の混合比（細胞数基準）で細胞総数が５×１０^５細胞／ｍＬとなるような細胞濃度で混合植菌し、ｐＨ７．０、２８℃で１８時間培養した場合に、ガスクロマトグラフィー分析に基づき各々の単独培養の油脂分解能の値から計算される油脂分解能と比べて、１００％以上となるようなブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母の微生物株の組み合わせに関する開示は、同培養条件下かつ同混合比で同油脂分解能をブルクホルデリア細菌に付与するヤロウィア酵母の能力に関する開示でもある。同様に、本開示の微生物の組み合わせの特徴に関する開示は、それぞれ、本開示のヤロウィア酵母が本開示のブルクホルデリア細菌に付与する能力について記載しているに等しい。一つの実施形態では、本開示のヤロウィア酵母は、本明細書に記載のヤロウィア酵母単独に基づく１つまたは複数の能力（上述される）、および本開示の微生物の組み合わせにおいてブルクホルデリア細菌に付与する能力（下記）の両方を有する。これらの異なる側面の能力を併せ持つヤロウィア酵母は、特に、予想外である。このような異なる側面の能力を併せ持つヤロウィア酵母の例としては、例えばＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株、ＫＨ－２ＡＬ３株などを挙げることができるが、これらに限定されない。

　（油分解性の微生物の組み合わせ）
　一つの局面において、本開示は、油脂および／または脂肪酸を分解するブルクホルデリア細菌とヤロウィア酵母との組み合わせ（本明細書において、「本開示の微生物の組み合わせ」とも呼ぶ）を提供する。本明細書において、「ブルクホルデリア細菌」とは、ブルクホルデリア（Burkholderiales）目の微生物を含む細菌を指し、詳細は、本明細書において後述される。本明細書において、「ヤロウィア酵母」とは、ヤロウィア（Yarrowia）属の微生物を含む酵母を指し、詳細は、本明細書の別の箇所に記載される。種々の微生物の組み合わせの中でブルクホルデリア細菌とヤロウィア酵母との組み合わせは特に良好な油分解能を達成できる組み合わせであり得る。実施例に示されるように、ブルクホルデリア細菌とヤロウィア酵母との組み合わせにより油分解能の向上が観察された。理論に束縛されることを望むものではないが、これは、ヤロウィア酵母が油を分解した結果生じた物質が誘導物質としてブルクホルデリア細菌の油分解能を向上させたと予想されるため、ヤロウィア酵母としては同様の油分解能を有する微生物が好適に使用され得、ブルクホルデリア細菌としては同様の感受性を有する株が好適に使用され得る。同様に、ブルクホルデリア細菌が油を分解した結果生じた物質が誘導物質としてヤロウィア酵母の油分解能を向上させたと予想されるため、ブルクホルデリア細菌としては同様の油分解能を有する微生物が好適に使用され得、ヤロウィア酵母としては同様の感受性を有する株が好適に使用され得る。

　一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母の少なくとも１つはリパーゼを生産する能力を有する。一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母の両方がリパーゼを生産する能力を有する。発明者らは、それぞれが単独でリパーゼを生産するブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母の組み合わせが、類似の性質を有することで互いに競合して互いの能力を抑制し合う（総合的な油分解能が低下する）ことが予想されたにもかかわらず、予想外に高い油分解能を示すことを見出した。一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母は共生可能である。一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせにおけるヤロウィア酵母は、ブルクホルデリア細菌のリパーゼ発現および／または生産を向上させ得る。一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌は、ヤロウィア酵母のリパーゼ発現および／または生産を向上させ得る。本開示の微生物の組み合わせにおける微生物は、任意の適当な方法により培養することで製造することができる。

　一つの局面において、本開示の微生物の組み合わせは、この組み合わせにおいて使用される各微生物の油分解能力（例えば、２８℃において油脂および／または脂肪酸を分解する能力、１５℃において油脂および／または脂肪酸を分解する能力を分解する能力等）を上回る油分解能力を提供する。一つの局面において、本開示の微生物の組み合わせは、この組み合わせにおいて使用される各微生物の油分解能力（例えば、２８℃において油を分解する能力、１５℃において油を分解する能力等）の合計を上回る油分解能力を提供する。特に、油分解能力のうちのいずれかが各々の単独培養の油分解能の値から計算される油分解能を上回れば、別の能力が低下する場合であっても、その微生物の組み合わせは有用に使用され得る。一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせは、シス脂肪酸含有油脂、トランス脂肪酸含有油脂またはその両方を含む油脂を分解する能力を有する。

　一つの局面において、本開示の微生物の組み合わせは、この組み合わせにおいて使用されるブルクホルデリア細菌および／またはヤロウィア酵母のリパーゼ発現および／または生産の向上を提供する。

　一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌の細胞数とヤロウィア酵母の細胞数との比は、約１０００：１～１：１００、約１０００：１～１：５０、約１０００：１～１：２０、約１０００：１～１：１０、約１０００：１～１：５、約１０００：１～１：２、約１０００：１～１：１、約１０００：１～２：１、約１０００：１～５：１、約５００：１～１：１００、約５００：１～１：５０、約５００：１～１：２０、約５００：１～１：１０、約５００：１～１：５、約５００：１～１：２、約５００：１～１：１、約５００：１～２：１、約５００：１～５：１、約２００：１～１：１００、約２００：１～１：５０、約２００：１～１：２０、約２００：１～１：１０、約２００：１～１：５、約２００：１～１：２、約２００：１～１：１、約２００：１～２：１、約２００：１～５：１、約１００：１～１：１００、約１００：１～１：５０、約１００：１～１：２０、約１００：１～１：１０、約１００：１～１：５、約１００：１～１：２、約１００：１～１：１、約１００：１～２：１、約１００：１～５：１、約５０：１～１：１００、約５０：１～１：５０、約５０：１～１：２０、約５０：１～１：１０、約５０：１～１：５、約５０：１～１：２、約５０：１～１：１、約５０：１～２：１、約５０：１～５：１、約２０：１～１：１００、約２０：１～１：５０、約２０：１～１：２０、約２０：１～１：１０、約２０：１～１：５、約２０：１～１：２、約２０：１～１：１、約２０：１～２：１、約１０：１～１：１０、約９：１～１：９、約８：１～１：８、約１０００：１、約１００：１、約５０：１、約２０：１、約１０：１、約９：１、約８：１、約７：１、約６：１、約５：１、約２：１、約１：１、約１：２、約１：５、約１：６、約１：７、約１：８、約１：９、約１：１０、約１：１００であり得る。

　細胞数の比や細胞濃度は、任意の好適な方法を使用して決定および／または調製することができ、１つの例として、微生物の細胞数濃度と菌体の光学密度（ＯＤ_６６０）との関係について、予め検量線を作成しておくことにより、細胞数濃度の決定、および光学密度を基にした目的の細胞数濃度の微生物細胞懸濁液の調製が可能である。例えば、ＯＤ_６６０＝０．０１のＫＨ－１株は約１×１０^６細胞／ｍＬ、ＯＤ_６６０＝０．０１のＫＨ－２株は約１×１０^５細胞／ｍＬと換算され得る。

　一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌とヤロウィア酵母との乾燥重量比は、約１００：１～１：１００、約１００：１～１：５０、約１００：１～１：２０、約１００：１～１：１０、約１００：１～１：５、約１００：１～１：２、約１００：１～１：１、約１００：１～２：１、約１００：１～５：１、約５０：１～１：１００、約５０：１～１：５０、約５０：１～１：２０、約５０：１～１：１０、約５０：１～１：５、約５０：１～１：２、約５０：１～１：１、約５０：１～２：１、約５０：１～５：１、約２０：１～１：１０、約２０：１～１：５０、約２０：１～１：２０、約２０：１～１：１０、約２０：１～１：５、約２０：１～１：２、約２０：１～１：１、約２０：１～２：１、約２０：１～５：１、約１０：１～１：１００、約１０：１～１：５０、約１０：１～１：２０、約１０：１～１：１０、約１０：１～１：５、約１０：１～１：２、約１０：１～１：１、約１０：１～２：１、約１０：１～５：１、約５：１～１：１００、約５：１～１：５０、約５：１～１：２０、約５：１～１：１０、約５：１～１：５、約５：１～１：２、約５：１～１：１、約５：１～２：１、約２：１～１：１００、約２：１～１：５０、約２：１～１：２０、約２：１～１：１０、約２：１～１：５、約２：１～１：２、約２：１～１：１、約１００：１、約１０：１、約５：１、約２：１、約１：１、約１：２、約１：５、約１：１０、約１：２０、約１：５０、約１：１００であり得る。

　一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせは、１％（ｖ／ｖ）のキャノーラ油を添加した無機塩培地において所定の温度（例えば、１５℃または２８℃）で培養した場合に、各々の単独培養の油脂分解能の値から計算される油脂分解能よりも高い油脂分解能を有する。一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせは、１％（ｖ／ｖ）のキャノーラ油を添加した無機塩培地において所定の温度で培養した場合に、この組み合わせの合計細胞数と同量の細胞数のこの組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌単独またはヤロウィア酵母単独のいずれよりも高い油脂分解能を有する。一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせは、１％（ｖ／ｖ）のオレイン酸を添加した無機塩培地において所定の温度（例えば、２８℃）で培養した場合に、各々の単独培養の脂肪酸分解能の値から計算される脂肪酸分解能よりも脂肪酸分解能を有する。一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせは、１％（ｖ／ｖ）のオレイン酸を添加した無機塩培地において所定の温度で培養した場合に、この組み合わせの合計細胞数と同量の細胞数のこの組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌単独またはヤロウィア酵母単独のいずれよりも高い脂肪酸分解能を有する。この油脂および／または脂肪酸分解能は、本明細書に記載される薄層クロマトグラフィーにより試験することもでき、例えば、経時的に培養上清を回収し、油脂に相当するスポットおよび／または脂肪酸に相当するスポットが消失するまでの時間を比較することによって判定することもできる。

　一つの実施形態では、１％（ｖ／ｖ）のキャノーラ油を添加した無機塩培地にブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母を合計５×１０^５細胞／ｍＬの細胞濃度で植菌して、ｐＨ７．０、１５℃で培養したとき、培養開始から４８時間後の培養上清をガスクロマトグラフィー分析して決定した全脂肪酸が、培養開始時の９５％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、７％未満、５％未満、２％未満、または１％未満となるようなブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母の微生物株の組み合わせとその混合比とが使用される。

　一つの実施形態では、１％（ｖ／ｖ）のキャノーラ油を添加した無機塩培地にブルクホルデリア細菌とヤロウィア酵母とを細胞総数が５×１０^５細胞／ｍＬとなるような細胞濃度で混合植菌し、ｐＨ７．０、１５℃で４８時間培養した場合に、ガスクロマトグラフィー分析に基づき各々の単独培養の油脂分解能の値から計算される油脂分解能と比べて、１００％以上、１０１％以上、１０２％以上、１０３％以上、１０４％以上、１０５％以上、１０６％以上、１０７％以上、１０８％以上、１０９％以上、１１０％以上、１１５％以上、１２０％以上、または１２５％以上となるようなブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母の微生物株の組み合わせとその混合比とが使用される。

　一つの実施形態では、１％（ｖ／ｖ）のキャノーラ油を添加した無機塩培地にブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母を合計５×１０^５細胞／ｍＬの細胞濃度で植菌して、ｐＨ７．０、２８℃で培養したとき、培養開始から１８時間後の培養上清をガスクロマトグラフィー分析して決定した全脂肪酸が、培養開始時の９５％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、７％未満、５％未満、２％未満、または１％未満となるようなブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母の微生物株の組み合わせとその混合比とが使用される。

　一つの実施形態では、１％（ｖ／ｖ）のキャノーラ油を添加した無機塩培地にブルクホルデリア細菌とヤロウィア酵母とを細胞総数が５×１０^５細胞／ｍＬとなるような細胞濃度で混合植菌し、ｐＨ７．０、２８℃で１８時間培養した場合に、ガスクロマトグラフィー分析に基づき各々の単独培養の油脂分解能の値から計算される油脂分解能と比べて、１００％以上、１０１％以上、１０２％以上、１０３％以上、１０４％以上、１０５％以上、１０６％以上、１０７％以上、１０８％以上、１０９％以上、１１０％以上、１１５％以上、１２０％以上、または１２５％以上となるようなブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母の微生物株の組み合わせとその混合比とが使用される。

　一つの実施形態では、１％（ｖ／ｖ）のオレイン酸を添加した無機塩培地にブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母を合計５×１０^５細胞／ｍＬの細胞濃度で植菌して、ｐＨ７．０、１５℃で培養したとき、培養開始から４８時間後の培養上清をガスクロマトグラフィー分析して決定した全脂肪酸が、培養開始時の９５％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、７％未満、５％未満、２％未満、または１％未満となるようなブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母の微生物株の組み合わせとその混合比とが使用される。

　一つの実施形態では、１％（ｖ／ｖ）のオレイン酸を添加した無機塩培地にブルクホルデリア細菌とヤロウィア酵母とを細胞総数が５×１０^５細胞／ｍＬとなるような細胞濃度で混合植菌し、ｐＨ７．０、１５℃で４８時間培養した場合に、ガスクロマトグラフィー分析に基づき各々の単独培養の脂肪酸分解能の値から計算される脂肪酸分解能と比べて、１００％以上、１０５％以上、１１０％以上、１２０％以上、１３０％以上、１４０％以上、１５０％以上、１６０％以上、１７０％以上、１８０％以上、１９０％以上または２００％以上となるようなブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母の微生物株の組み合わせとその混合比とが使用される。

　一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせは、本開示の微生物の組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌のリパーゼ発現および／または生産を向上させる組み合わせである。一つの実施形態では、ブルクホルデリア細菌のリパーゼは、第１のリパーゼ（塩基配列：配列番号１、アミノ酸配列：配列番号２、またはこれらの改変体など）および／または第２のリパーゼ（塩基配列：配列番号３、アミノ酸配列：配列番号４、またはこれらの改変体など）を含む。一つの実施形態では、リパーゼ発現および／または生産の向上は、本開示の微生物の組み合わせを使用した場合のリパーゼ遺伝子発現（ＲＮＡ量、生産タンパク質量、分泌タンパク質量など）を、ブルクホルデリア細菌単独培養と比較した場合の結果と比較することで決定され得る。

　一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせは、１％（ｖ／ｖ）のキャノーラ油を添加した無機塩培地にＯＤ_６６０の測定値がブルクホルデリア細菌：ヤロウィア酵母＝０．０１８：０．０２になるような菌体光学密度で各微生物を植菌して、ｐＨ７．０、１５℃で培養したとき、培養開始から７１時間後の細胞から全ＲＮＡを抽出して特定のブルクホルデリア細菌リパーゼについて定量的ＰＣＲ解析を行った場合の発現量が、ＯＤ_６６０の測定値が０．０２となるような菌体光学密度でブルクホルデリア細菌単独を植菌した場合と比べて、６倍以上、７倍以上または８倍以上となるような組み合わせである。

　一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせは、本開示の微生物の組み合わせにおけるヤロウィア酵母のリパーゼ発現および／または生産を向上させる組み合わせである。一つの実施形態では、ヤロウィア酵母のリパーゼは、第１のリパーゼ（塩基配列：配列番号５、アミノ酸配列：配列番号６、またはこれらの改変体など）および／または第２のリパーゼ（塩基配列：配列番号７、アミノ酸配列：配列番号８、またはこれらの改変体など）を含む。一つの実施形態では、リパーゼ発現および／または生産の向上は、本開示の微生物の組み合わせを使用した場合のリパーゼ遺伝子発現（ＲＮＡ量、生産タンパク質量、分泌タンパク質量など）を、ヤロウィア酵母単独培養と比較した場合の結果と比較することで決定され得る。

　一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせは、１％（ｖ／ｖ）のキャノーラ油を添加した無機塩培地に２．５×１０^５細胞／ｍＬのブルクホルデリア細菌および２．５×１０^５細胞／ｍＬのヤロウィア酵母を植菌して、ｐＨ７．０、１５℃で培養したとき、培養開始から４８時間後の細胞から全ＲＮＡを抽出して特定のヤロウィア酵母リパーゼについて定量的ＰＣＲ解析を行った場合の発現量が、５×１０^５細胞／ｍＬのヤロウィア酵母単独を植菌した場合と比べて、１．１倍以上、１．２倍以上、１．５倍以上、１．７倍以上、２倍以上、５倍以上、１０倍以上または２０倍以上となるような組み合わせである。

　１つの局面では、本開示は、ヤロウィア酵母を含む、リパーゼを生産するブルクホルデリア細菌のリパーゼ生産を向上させるための組成物を提供する。あるいは、本開示は、リパーゼを生産するブルクホルデリア細菌のリパーゼ生産を向上させるためのヤロウィア酵母を提供する。別の局面では、本開示は、ブルクホルデリア細菌を含む、リパーゼを生産するヤロウィア酵母のリパーゼ生産を向上させるための組成物を提供する。あるいは、本開示は、リパーゼを生産するヤロウィア酵母のリパーゼ生産を向上させるためのブルクホルデリア細菌を提供する。本明細書に記載されるように、本開示では、２種の微生物の組合せ効果が観察されているが、これは別の見方をすると、ヤロウィア酵母の新たな機能、能力または用途として、リパーゼを生産するブルクホルデリア細菌のリパーゼ生産を向上させることがあることを見出したことに基づく発明、あるいはブルクホルデリア細菌の新たな機能、能力または用途として、リパーゼを生産するヤロウィア酵母のリパーゼ生産を向上させることを見出したことに基づく発明であるともいえる。したがって、これらの局面において、本明細書に記載される本開示の微生物の組み合わせに関する事項は、これらの新規用途においても同様に適用可能であることが理解される。

　別の局面では、本開示は、ヤロウィア酵母を含む、リパーゼを生産するブルクホルデリア細菌の油脂および／または脂肪酸を処理する能力を強化するための組成物を提供する。あるいは、本開示は、リパーゼを生産するブルクホルデリア細菌の油脂および／または脂肪酸を処理する能力を強化するためのヤロウィア酵母を提供する。さらに別の局面では、本開示は、ブルクホルデリア細菌を含む、リパーゼを生産するヤロウィア酵母の油脂および／または脂肪酸を処理する能力を強化するための組成物を提供する。あるいは、リパーゼを生産するヤロウィア酵母の油脂および／または脂肪酸を処理する能力を強化するためのブルクホルデリア細菌を提供する。本開示では、２種の微生物の組合せ効果が観察されているが、これは別の見方をすると、ヤロウィア酵母の新たな機能、能力または用途として、リパーゼを生産するブルクホルデリア細菌の油脂および／または脂肪酸を処理する能力を強化することがあることを見出したことに基づく発明、あるいはブルクホルデリア細菌の新たな機能、能力または用途として、リパーゼを生産するヤロウィア酵母の油脂および／または脂肪酸を処理する能力を強化することを見出したことに基づく発明であるともいえる。したがって、これらの局面において、本明細書に記載される本開示の微生物の組合せに関する事項は、これらの新規用途においても同様に適用可能であることが理解される。

　理論に束縛されることを望まないが、１つの好ましい実施形態では、ヤロウィア酵母を含む、リパーゼを生産するブルクホルデリア細菌のリパーゼ生産を向上させるための組成物、および／またはヤロウィア酵母を含む、リパーゼを生産するブルクホルデリア細菌の油脂および／または脂肪酸を処理する能力を強化するための組成物を提供することが好ましい理由として、比較的調製が容易であるブルクホルデリア細菌の能力を少量のヤロウィア酵母を利用することで同等またはそれ以上の油脂および／または脂肪酸分解効果を達成することができることにある。理論に束縛されることを望まないが、例えば、Ngamdee　Wら、BMC　Microbiol.　2015　Mar　3;15:56.「Competition　between　Burkholderia　pseudomallei　and　B.thailandensis」およびMitch　Rら、Appl　Microbiol　Biotechnol.　2015;　99(22):9723-9743.「Irradiation　of　Yarrowia　lipolytica　NRRL　YB-567　creating　novel　strains　with　enhanced　ammonia　and　oil　production　on　protein　and　carbohydrate　substrates」によると、ブルクホルデリア細菌の倍化時間は約３９分であり、ヤロウィア酵母の倍化時間は約１．５時間であるため、ブルクホルデリア細菌の方が増殖速度が速い。本発明者は、本開示の微生物の組み合わせが各々の単独培養の油脂および／または脂肪酸分解能の値から計算される油脂および／または脂肪酸分解能を超える油脂および／または脂肪酸分解能を有し得ることを見出したが、この知見により、本開示の微生物の組み合わせを使用することで、増殖速度の速いブルクホルデリア細菌の油脂および／または脂肪酸分解能が向上し、総合的な油脂および／または脂肪酸分解が加速するため、微生物の効率的・安定的な利用が可能になる。

　一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌は、ブルクホルデリア（Burkholderiales）目の細菌である。一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌は、ブルクホルデリア（Burkholderiaceae）科の細菌である。一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌は、ブルクホルデリア（Burkholderia）属の細菌である。ブルクホルデリア属はグラム陰性の非芽胞形成好気性の極鞭毛を持つ桿菌であり、ブルクホルデリア科の基準属である。一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌は、ブルクホルデリア　アルボリス（Burkholderia　arboris）、ブルクホルデリア　アンビファリア（Burkholderia　ambifaria）またはブルクホルデリア　セパシア（Burkholderia　cepacia）であり、好ましくは、ブルクホルデリア　アルボリスまたはブルクホルデリア　アンビファリアである。一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌は、Burkholderia　cepacia　complexに属する微生物である。Burkholderia　cepacia　complexとは、遺伝子的に非常に近いBurkholderia属の微生物の分類であり、ambifaria、anthina、arboris、cenocepacia、cepacia、contaminans、diffusa、dolosa、lata、latens、metallica、multivorans、pseudomultivorans、puraquae、pyrrocinia、seminalis、stabilis、stagnalis、territorii、ubonensis、およびvietnamiensisが含まれる（Martina　Pら、Int　J　Syst　Evol　Microbiol.　2018　Jan;68(1):14-20.）。別の実施形態では、本開示の微生物の組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌は、metallica、seminalis、anthina、ambifaria、diffusa、ubonensis、multivorans、latens、cenocepacia、vietnamiensis、pyrrocinia、stabilis、glumae、gladioli、plantarii、oklahomensis、thailandensis、mallei、pseudomalleiまたはphytofirmansであってもよい。本開示のさらなる局面では、本開示の微生物の組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌は、ラルストニア（Ralstonia）属またはシュードモナス（Pseudomonas）属の細菌であってもよい。本発明者は、１６ＳリボゾームＤＮＡの塩基配列の決定及び系統解析によって、新たな微生物の菌株（ＫＨ－１株）をブルクホルデリア　アルボリスと同定し、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターにこれを寄託し、２０１８年６月４日に受領され、２０１８年６月１２日に受託証が発行された。受託番号はＮＩＴＥ　ＢＰ－０２７３１である。また、ブルクホルデリア属の細菌の菌株（ＫＨ－１ＡＬ１株、ＫＨ－１ＡＬ２株およびＫＨ－１ＡＬ３株）をさらに同定し、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターにこれらを寄託し、２０１９年６月２６日に受領され、２０１９年７月８日に受託証が発行された。受託番号はそれぞれ、ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２９７７、ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２９７８、およびＮＩＴＥ　ＢＰ－０２９７９である。一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌は、ブルクホルデリア菌ＫＨ－１株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２７３１で特定される菌株）、ＫＨ－１ＡＬ１株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２９７７で特定される菌株）、ＫＨ－１ＡＬ２株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２９７８で特定される菌株）もしくはＫＨ－１ＡＬ３株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２９７９で特定される菌株）であるか、またはその誘導株である。

　一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌は、ブルクホルデリア菌ＫＨ－１株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２７３１で特定される菌株）、ＫＨ－１ＡＬ１株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２９７７で特定される菌株）、ＫＨ－１ＡＬ２株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２９７８で特定される菌株）もしくはＫＨ－１ＡＬ３株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２９７９で特定される菌株）の誘導株である。ここで、誘導株とは、ブルクホルデリア菌ＫＨ－１株、ＫＨ－１ＡＬ１株、ＫＨ－１ＡＬ２株もしくはＫＨ－１ＡＬ３株を元として得られた株であることは必要とせず、これらのブルクホルデリア菌株の生物学的機能を、必ずしも同じ度合いでなくてもよいが示す微生物であり、好ましくは同程度以上の生物学的活性を有する微生物を指す。一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌は、ブルクホルデリア細菌ＫＨ－１株、ＫＨ－１ＡＬ１株、ＫＨ－１ＡＬ２株もしくはＫＨ－１ＡＬ３株と同様に、リパーゼを生産する能力、および低温（例えば、２５℃以下、２０℃以下、１５℃以下、１０℃以下、５℃以下など）において油脂および／または脂肪酸を資化（分解）する能力からなる群から選択される少なくとも１つの生物学的機能を示すが、その生物学的機能の程度はＫＨ－１株、ＫＨ－１ＡＬ１株、ＫＨ－１ＡＬ２株もしくはＫＨ－１ＡＬ３株と異なっていてもよい。一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせにおける誘導株であるブルクホルデリア細菌は、ブルクホルデリア（Burkholderiaceae）科の細菌であり、より具体的には、ブルクホルデリア（Burkholderia）属の細菌であり、さらに具体的には、ブルクホルデリア　アルボリス（Burkholderia　arboris）、ブルクホルデリア　アンビファリア（Burkholderia　ambifaria）、またはBurkholderia　cepacia　complexに属する微生物である。

　本開示の微生物の組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌は、油脂を唯一の炭素源として含み、ｐＨを６～８に調整した無機塩寒天培地上で単離可能であり得る。一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌は、リパーゼを生産する。また、一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌は、寒天培地上に生じたコロニー周辺にクリアゾーン（ハロー）が形成されるのを確認することで判別可能であり得る。

　一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌は、１５℃において油脂および／または脂肪酸を分解する能力を有する。一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌は、リパーゼを生産する能力、および／または脂肪酸または油脂を資化または分解する能力が１５℃において保持される。

　一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌は、油脂や脂肪酸を含む培地中で培養すると、バイオサーファクタントを分泌し得る。

　一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌は、１０ｇ／Ｌのキャノーラ油を含む無機塩培地に、３×１０^６細胞／ｍＬまたは２×１０^６細胞／ｍＬとなるような細胞濃度で微生物を植菌し、２００ｍｌ／ｍｉｎの空気還流下、ｐＨ７．０、１５℃で培養したときに、２４または４８時間後の上清におけるノルマルヘキサン値相当の油分が、９ｇ／Ｌ未満、８ｇ／Ｌ未満、７ｇ／Ｌ未満、６ｇ／Ｌ未満、５ｇ／Ｌ未満、４ｇ／Ｌ未満、３ｇ／Ｌ未満、２ｇ／Ｌ未満、１ｇ／Ｌ未満、０．７ｇ／Ｌ未満、０．５ｇ／Ｌ未満、０．２ｇ／Ｌ未満、０．１ｇ／Ｌ未満、０．０７ｇ／Ｌ未満、０．０５ｇ／Ｌ未満、０．０２ｇ／Ｌ未満、または０．０１ｇ／Ｌ未満となる油脂分解能を有する。特に、本開示の微生物の組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌は、この条件で判定した場合に２×１０^６細胞／ｍＬの細胞濃度で植菌し４８時間培養した場合に約６ｇ／Ｌ未満までノルマルヘキサン値相当の油分を低下させる油脂分解能を有することが好ましく、３×１０^６細胞／ｍＬの細胞濃度で植菌し２４時間培養した場合に６ｇ／Ｌ未満までノルマルヘキサン値相当の油分を低下させる油脂分解能を有することが特に好ましく、このような低温油脂分解能を有する微生物は本開示の種々の用途において有益に使用することができる。

　一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌は、１０ｇ／Ｌのキャノーラ油を含む無機塩培地に、最終濃度が３×１０^６細胞／ｍＬとなるような細胞濃度で微生物を植菌し、２００ｍｌ／ｍｉｎの空気還流下、ｐＨ７．０、１５℃および２８℃でそれぞれ培養したときに、１５℃培養における２４時間後の上清におけるノルマルヘキサン値相当の油分が、２８℃培養における２４時間後の上清におけるノルマルヘキサン値相当の油分と比較して１０００％以下、８００％以下、６００％以下、４００％以下、２００％以下、１５０％以下、１００％以下、８０％以下、６０％以下、４０％以下、２０％以下、１０％以下または５％以下となる油脂分解能を有する。本開示の微生物の組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌は、この条件で判定した場合に、２８℃培養に比べて１５℃培養における油脂残存率が、８００％以下、７００％以下、６００％以下、５００％以下、４００％以下、特に、７００％以下である油脂分解能を有することが好ましく、このような低温油脂分解能を有する微生物は本開示の種々の用途において有益に使用することができる。

　一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌は、１０ｇ／Ｌのキャノーラ油を含む無機塩培地に、最終濃度が３×１０^６細胞／ｍＬとなるような細胞濃度で微生物を植菌し、２００ｍｌ／ｍｉｎの空気還流下、ｐＨ７．０、１５℃および２８℃でそれぞれ培養を開始したときに、２８℃培養に比べて１５℃培養における全脂肪酸分解速度が、１０００％以上、８００％以上、６００％以上、４００％以上、２００％以上、１５０％以上、１００％以上、８０％以上、６０％以上、５０％以上、４０％以上、３０％以上、２０％以上、１０％以上または５％以上となる油脂分解能を有する。本開示の微生物の組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌は、この条件で判定した場合に、２８℃培養に比べて１５℃培養における全脂肪酸分解速度が、５０％以上、４０％以上、３０％以上、２０％以上または１０％以上、特に、３０％以上である油脂分解能を有することが好ましく、このような低温油脂分解能を有する微生物は本開示の種々の用途において有益に使用することができる。

　一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせにおけるヤロウィア酵母は、本明細書に記載の任意のヤロウィア（Yarrowia）属の酵母であり得る。

　本開示の微生物の組み合わせにおける少なくとも１種の微生物は、油脂を唯一の炭素源として含み、ｐＨを６～８に調整した無機塩寒天培地上で単離可能であり得る。また、一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせにおける少なくとも１種の微生物は、寒天培地上に生じたコロニー周辺にクリアゾーン（ハロー）が形成されるのを確認することで判別可能であり得る。一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせにおける１種の微生物は、１５℃または２８℃、好ましくは１５℃において１０ｇ／Ｌのキャノーラ油を炭素源として添加した寒天培地上でコロニーを形成し、生育できることが好ましく、本開示の微生物の組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母の両方が同条件でコロニーを形成し、生育できることがより好ましい。本開示の微生物の組み合わせにおいて、ブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母がどちらも最低限の油脂資化（分解）能を有していることが有用であり得る。

　一つの実施形態では、微生物の油脂および脂肪酸の分解・資化能力は、培地中に残存する油脂に含まれる脂肪酸および分解により生じた遊離脂肪酸をガスクロマトグラフィーで定量することにより評価できる。具体的な定量手順を示すと、まず、培養上清３ｍＬを塩酸により酸性にし、等量の酢酸エチルを加える。５分間攪拌後遠心し、酢酸エチル層１ｍＬを別容器に移して溶媒を蒸発させて濃縮する。クロロホルム１ｍｌに溶解し、メタノリシス溶液（メタノール：硫酸＝１７：３）を４ｍＬ加えて１００℃で２時間加熱し、油脂中の脂肪酸および遊離脂肪酸をメチルエステル化させる。その後、クロロホルム：純水＝１：１の溶液を添加して攪拌した後、クロロホルム層を０．５％オクタン酸メチルと１：１の割合で混合し、ガスクロマトグラフィーで分析し、全脂肪酸のメチルエステルを定量する。試薬の量や抽出溶媒の種類などについては適宜変更することができ、例えば、以下のような代替的な手順が可能である。培養上清１ｍＬを塩酸により酸性にし、２ｍＬのクロロホルムを加える。２分間攪拌後遠心し、クロロホルム層１ｍＬを別容器に移して溶媒を蒸発させて濃縮する。メタノリシス溶液（メタノール：硫酸＝１７：３）を２ｍＬ加えて１００℃で２時間加熱し、油脂中の脂肪酸および遊離脂肪酸をメチルエステル化させる。その後、クロロホルム２ｍＬ、純水１ｍＬを加えて攪拌の後、クロロホルム層をガスクロマトグラフィーで分析し、全脂肪酸のメチルエステルを定量する。

　一つの実施形態では、微生物の油脂および脂肪酸の分解・資化能力は、培地中に残存する油脂および分解生成物である脂肪酸を薄層クロマトグラフィーで分析することにより評価できる。具体的な手順を示すと、まず、培養上清に等量のクロロホルムを加えることによって、油脂を抽出する。この抽出物５μＬを、クロロホルム、アセトンおよびメタノールを、体積比でそれぞれ９６：４：１の比率で含む展開溶媒を使用し、シリカゲルコートプレート上に展開する。展開溶媒の比率などについては適宜変更することができ、例えば、クロロホルム、アセトンおよびメタノールを、体積比でそれぞれ９６：４：２の比率としても、良好な結果を得ることができる。プレートをモリブトリン酸ｎ水和物により処理し、油脂および／または脂肪酸を発色させる。

　一つの実施形態では、微生物のエステル（例えば、油脂）および脂肪酸の分解・資化能力は、それぞれの油脂または脂肪酸を唯一の炭素源とする培地での増殖能を調べることで評価できる。

　一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせにおける微生物は、エステラーゼ（例えば、リパーゼ）を生産する能力がある。

　一つの実施形態では、リパーゼ活性は、パルミチン酸と４－ニトロフェノールとのエステルである４－ニトロフェニルパルミテート（４－ＮＰＰ）を基質として用いて酵素反応を行い、エステルの加水分解により生じたｐ－ニトロフェノールの量を４１０ｎｍの吸光度を測定することによって決定できる。まず、４－ＮＰＰ（１８．９ｍｇ）を３％（ｖ／ｖ）Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）　Ｘ―１００（１２ｍｌ）に加え、７０℃で溶解して基質溶液とする。基質溶液１ｍＬ、イオン交換水０．９ｍＬおよび１５０ｍＭ　ＧＴＡ緩衝液（１５０ｍＭ　３，３－ジメチルグルタル酸、１５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ，および１５０ｍＭ　２－アミノ－２－メチル－１，３－プロパンジオールにＮａＯＨまたはＨＣｌを加えてｐＨ７．０に調製）１ｍＬをセルに入れ、２８℃で５分間保温する。これに培養上清を０．１ｍＬ添加して、攪拌しながら４１０ｎｍの値を測定する。リパーゼ活性は、１μモルの４－ニトロフェノールを生産する酵素量を１ユニット（Ｕ）と定義して活性測定を行い、培養上清１ｍＬ当たりのユニットを算出する。

　一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせにおける微生物は、弱酸性条件（例えば、ｐＨ約５．５～６．０）において増殖・油分解可能であり得る。

　一つの実施形態では、微生物の増殖能力は、菌体の光学密度として６６０ｎｍの吸光度（濁度）を測定する方法や、コロニーフォーミングユニット（ＣＦＵ）を測定する方法などで調べることができる。後者では、寒天培地上に培養液の原液および希釈液を一定量塗り拡げ、静置培養により形成されたコロニーを計数する。

　当業者は、上記の測定法を適当に使用してＫＨ－１株、ＫＨ－１ＡＬ１株、ＫＨ－１ＡＬ２株、ＫＨ－１ＡＬ３株もしくはＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株、ＫＨ－２ＡＬ３株の誘導株を試験して、上記の生物学的機能（およびその程度）を有する誘導株を取得することができる。

　一つの実施形態では、本開示の微生物の組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌および／またはヤロウィア酵母は、ＫＨ－１株＋このヤロウィア酵母またはこのブルクホルデリア細菌＋ＫＨ－２株の結果が、ＫＨ－１株単独またはＫＨ－２株単独と同等またはより優れていることを基準に選択することができる。

　一つの実施形態では、例えば、１％（ｖ／ｖ）のキャノーラ油を添加した無機塩培地にＫＨ－１株＋ヤロウィア酵母またはブルクホルデリア細菌＋ＫＨ－２株を合計５×１０^５細胞／ｍＬの細胞濃度で植菌して、ｐＨ７．０、１５℃で４８時間培養するか、またはｐＨ７．０、２８℃で１８時間培養したときの培養上清をガスクロマトグラフィー分析して決定した全脂肪酸測定値が、同条件におけるＫＨ－１株＋ＫＨ－２株の全脂肪酸測定値と比較して、２００％未満、１８０％未満、１６０％未満、１４０％未満、１２０％未満、１００％未満、７０％未満、または５０％未満である場合、そのブルクホルデリア細菌および／またはヤロウィア酵母は好適に使用され得る。

　一つの実施形態では、１％（ｖ／ｖ）のキャノーラ油を添加した無機塩培地にＯＤ_６６０の測定値がＫＨ－１株：ヤロウィア酵母またはブルクホルデリア細菌：ＫＨ－２株＝０．０１８：０．０２になるような菌体光学密度で各微生物を植菌して、ｐＨ７．０、１５℃で７１時間培養した細胞から全ＲＮＡを抽出して特定のブルクホルデリア細菌リパーゼについて定量的ＰＣＲ解析を行った場合の発現量が、同条件におけるＫＨ－１株＋ＫＨ－２株の混合培養時のブルクホルデリア細菌リパーゼの発現量と比較して、５０％以上、７０％以上、１００％以上、１２０％以上、１４０％以上、１６０％以上、１８０％以上、２００％以上である場合、そのブルクホルデリア細菌および／またはヤロウィア酵母は好適に使用され得る。

　一つの実施形態では、１％（ｖ／ｖ）のキャノーラ油を添加した無機塩培地にＫＨ－１株：ヤロウィア酵母またはブルクホルデリア細菌：ＫＨ－２株＝２．５×１０^５細胞／ｍＬ：２．５×１０^５細胞／ｍＬになるように各微生物を植菌して、ｐＨ７．０、１５℃で４８時間培養した細胞から全ＲＮＡを抽出して特定のヤロウィア酵母リパーゼについて定量的ＰＣＲ解析を行った場合の発現量が、同条件におけるＫＨ－１株＋ＫＨ－２株の混合培養時のヤロウィア酵母リパーゼの発現量と比較して、５０％以上、７０％以上、１００％以上、１２０％以上、１４０％以上、１６０％以上、１８０％以上、２００％以上である場合、そのブルクホルデリア細菌および／またはヤロウィア酵母は好適に使用され得る。

　（組成物または組み合わせ物）
　一つの局面において、本開示は、本開示の微生物を含む組成物または組み合わせ物を提供する。一つの局面において、本開示は、本開示の微生物の培養上清を含む組成物または組み合わせ物を提供する。本開示の微生物は、任意の適当な方法により培養することで製造することができる。一つの実施形態では、組成物または組み合わせ物は油分解剤である。一つの実施形態では、トランス脂肪酸（例えば、エライジン酸、パルミテライジン酸および／またはバクセン酸）を分解するため、トランス脂肪酸含有油脂を分解するため、１５℃においてエステル（例えば、油脂）および／または脂肪酸を分解するため、短鎖～中鎖脂肪酸（Ｃ２～Ｃ１２）含有エステルを分解するため、および／または短鎖～長鎖脂肪酸（Ｃ２以上）含有油脂を分解するための、油分解剤である。一つの実施形態では、組成物は脂肪酸分解剤である。本開示の脂肪酸分解剤によって処理することで、脂肪酸に含まれる炭素数よりも少ない炭素を含む化合物が生成され得る。一つの実施形態では、組成物はトランス脂肪酸（例えば、エライジン酸、パルミテライジン酸および／またはバクセン酸）分解剤である。

　一つの局面において、本開示は、本開示の微生物の組み合わせにおける少なくとも１種の微生物を含む組成物または組み合わせ物を提供する。この態様においては、組成物（必要に応じて、本開示の微生物の組み合わせとなるような微生物と組み合わせて）または組み合わせ物において本開示の微生物の組み合わせが提供される。本開示の微生物の組み合わせにおける少なくとも１種の微生物は、任意の適当な方法により培養することで製造することができる。この組成物または組み合わせ物において使用される本開示の微生物の組み合わせは、上記された本開示の微生物の組み合わせのいずれであってもよい。

　一つの実施形態では、本開示の組成物または組み合わせ物は油分解剤である。一つの実施形態では、本開示の組成物は、本開示の微生物の組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母のうちの一方を含む、該ブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母のうちの他方のリパーゼ発現および／または生産を向上させるための組成物であり、一つの実施形態では、リパーゼは、ブルクホルデリア細菌の第１のリパーゼ（塩基配列：配列番号１、アミノ酸配列：配列番号２、またはこれらの改変体など）、第２のリパーゼ（塩基配列：配列番号３、アミノ酸配列：配列番号４、またはこれらの改変体など）、ヤロウィア酵母の第１のリパーゼ（塩基配列：配列番号５、アミノ酸配列：配列番号６、またはこれらの改変体など）および／または第２のリパーゼ（塩基配列：配列番号７、アミノ酸配列：配列番号８、またはこれらの改変体など）を含む。一つの実施形態では、所定の温度（例えば、１５℃、２８℃）において油脂および／または脂肪酸を分解するため、短鎖～中鎖脂肪酸（Ｃ２～Ｃ１２）含有油脂を分解するため、および／または短鎖～長鎖脂肪酸（Ｃ２以上）含有油脂を分解するための、油分解剤である。油分解剤は、本開示の微生物の組み合わせのうちの１種の微生物（例えば、ブルクホルデリア細菌またはヤロウィア酵母のいずれか）のみを含み、それ自体では所望の油脂および／または脂肪酸分解能を呈さない場合であっても、本開示の微生物の組み合わせを形成するように使用されるときに、所望の油脂および／または脂肪酸分解能を呈すればよい。一つの実施形態では、組成物は脂肪酸分解剤である。本開示の脂肪酸分解剤によって処理することで、脂肪酸に含まれる炭素数よりも少ない炭素を含む化合物が生成され得る。

　（適用対象）
　一つの実施形態では、本開示の油分解剤を適用する油脂として、例えば、植物性油脂（綿実油、菜種油、大豆油、トウモロコシ油、オリーブ油、サフラワー油、米油、ごま油、パーム油、ヤシ油、落花生油等）、動物性油脂（ラード、牛脂、乳脂肪等）、魚油、これらの油脂の加工品（マーガリン、ショートニング、バター等）、絶縁油、潤滑油などが挙げられるが、これらに限定されない。油脂は、エマルジョンの形態で存在していてもよいし、遊離の状態で存在していてもよい。

　具体的な実施形態としては、本開示の油分解剤を適用する油脂として、トランス脂肪酸（例えば、エライジン酸、パルミテライジン酸および／またはバクセン酸）を含む油脂が挙げられ、そのような油脂としては、水素添加して製造される油脂などの加工品（マーガリン、ショートニング、バター等）が挙げられるがこれに限定されない。水素を添加することで不飽和脂肪酸の二重結合の数が減り、飽和脂肪酸の割合が増えるが、これによって、トランス脂肪酸が生成する場合がある。水素添加によって製造されるマーガリン、ファットスプレッド、ショートニングや、それらを原材料に使ったパン、ケーキ、ドーナツなどの洋菓子、揚げ物などにトランス脂肪酸が含まれるとされる。植物や魚からとった油を精製する工程で、好ましくない臭いを取り除くために高温で処理を行う。この際に、油に含まれているシス型の不飽和脂肪酸からトランス脂肪酸ができるため、サラダ油などの精製した植物油にも微量のトランス脂肪酸が含まれるとされる。

　本開示の油分解剤または脂肪酸分解剤を適用する対象は、特に制限されず、例えば、産業排水、家庭排水、産業廃棄物、家庭廃棄物（生ゴミなど）、畜産廃棄物、養殖場（およびその排水）、畜舎（およびその排水）、と殺場（およびその排水）、油により汚染された土壌、油により汚染された水（海、池、川、動物用飲用水など）、動物の体表、水槽（養殖用、鑑賞用など）、任意の油汚染製品（食器、機械部品など）、厨房等に設置されるグリーストラップ、排水管、ファットバーグ、変圧器などから漏れた絶縁油や劣化した絶縁油などが挙げられるが、これらに限定されない。「グリーストラップ」とは、排水中の油を分離し、収集するための装置であり、典型的には３槽から構成される。第１槽はバスケットを備え、食材片や残飯などを捕捉する。第２槽では油水が分離される。油と分離した排水は第３槽に送られ、沈降性のゴミなどが除去される。飲食店や病院、ホテル等の業務用厨房にはグリーストラップの設置が義務づけられている。グリーストラップに適用する際は、別に分解処理槽を設けてもよいが、油分解剤や微生物を直接グリーストラップに投入してグリーストラップ内で分解処理することもできる。

　本開示の微生物の組み合わせは、低温での処理の効率も高いことから、低温処理が望ましい実施形態であり得る。例えば、産業排水、家庭排水、産業廃棄物、家庭廃棄物（生ゴミなど）、油により汚染された土壌、油により汚染された水（海、池、川、動物用飲用水など）などの、２０℃未満（例えば、１５℃）での処理が想定される例も、本開示の微生物の組み合わせによって処理される対象として好ましい一例である。

　具体的には、製剤などを投入ないし添加したり、または本開示の微生物の組み合わせのうちの１種または複数種を固定化した担体などを排水経路や排水貯留槽、グリーストラップ内等に設置したりする。グリーストラップ外に、別途、専用の分解処理槽を設けることにしてもよい。

　一つの実施形態では、排水としては、飲食店、病院、ホテル等の排水、家庭排水、食品加工工場、油加工工場等から排出される産業排水などが挙げられるが、これらに限定されない。

　（使用形態）
　本開示の微生物の組み合わせ、組み合わせ物または組成物の形態としては、例えば、液体状態、固体状態などが挙げられる。液体状態の微生物の組み合わせ、組み合わせ物または組成物としては、微生物の培養液、培養液から微生物を遠心分離などにより集菌した後、水や緩衝液或いは培養液などに再度分散させたものなどが例示される。固体状態の微生物または組成物としては、遠心分離やプレス圧縮等により脱水したもの、固体と液体の中間のようなペースト状態・マヨネーズ状態のもの、乾燥（例えば、減圧乾燥、凍結乾燥）した乾燥体などが例示される。固体の形状として、例えば、粉末、顆粒、錠剤などが挙げられる。また、本開示の微生物の組み合わせは、微生物または培養上清が担体に固定された状態で提供されてもよい。

　一つの実施形態において、本開示の微生物の組み合わせおよびこれを提供する組成物または組み合わせ物は、微生物合計が約１×１０^８細胞／ｍＬ、約１×１０^７細胞／ｍＬ、約１×１０^６細胞／ｍＬ、約１×１０^５細胞／ｍＬ、約１×１０^４細胞／ｍＬ、約１×１０^３細胞／ｍＬ、約１×１０^２細胞／ｍＬ、約１０細胞／ｍＬまたは約１細胞／ｍＬの細胞濃度となるように液体に添加され得る。

　（適用環境）
　本開示の微生物の組み合わせおよびこれを提供する組成物または組み合わせ物は、任意の好適な環境下で使用できる。一つの実施形態において、本開示の微生物の組み合わせおよびこれを提供する組成物または組み合わせ物は、１０～６０℃、１２～５０℃、１５～４０℃、２０～３５℃、６０℃未満、５０℃未満、４０℃未満、３０℃未満、２５℃未満、２０℃未満、１５℃未満、約６０℃、約５０℃、約４０℃、約３０℃、約２５℃、約１５℃、または約１０℃の環境で使用され得る。

　一つの実施形態において、本開示の微生物の組み合わせおよびこれを提供する組成物または組み合わせ物は、ｐＨ４～１２、ｐＨ５～１１、ｐＨ６～１０、ｐＨ７～９、ｐＨ５．５～８．５、約ｐＨ４、約ｐＨ５、約ｐＨ６、約ｐＨ７、約ｐＨ８、約ｐＨ９、約ｐＨ１０、または約ｐＨ１１の環境で使用され得る。

　一つの実施形態において、本開示の微生物の組み合わせおよびこれを提供する組成物または組み合わせ物は、０．０５ｍｇ／Ｌ以上、０．１ｍｇ／Ｌ以上、０．５ｍｇ／Ｌ以上、または１ｍｇ／Ｌ以上の溶存酸素濃度（ＤＯ）の環境で使用され得る。

　一つの実施形態において、本開示の微生物の組み合わせおよびこれを提供する組成物または組み合わせ物は、１００～４００００ｍｇ／Ｌ、２００～３００００ｍｇ／Ｌ、３００～３００００ｍｇ／Ｌのノルマルヘキサン値の環境中（例えば、排水中）で使用され得る。汚泥のスラリーや生ごみ処理などの固形廃棄物（水を含んでもよい）では、より高濃度に油脂が存在する場合があるが、一つの実施形態において、本開示の微生物の組み合わせおよびこれを提供する組成物または組み合わせ物は、このような固形廃棄物に対しても有用に適用され得る。

　一つの実施形態において、本開示の微生物、組成物または組み合わせ物は、５０重量％以上、２０重量％以上、１０重量％以上、７重量％以上、５重量％以上、２重量％以上、１重量％以上、０．７重量％以上、０．５重量％以上、０．２重量％以上、０．１重量％以上、０．０７重量％以上、０．０５重量％以上、０．０２重量％以上、０．０１重量％以上、０．００７重量％以上、０．００５重量％以上、０．００２重量％以上または０．００１重量％以上のトランス脂肪酸を含む対象に添加され得る。

　一つの実施形態において、本開示の微生物、組成物または組み合わせ物は、含まれるエステル（例えば、油脂）の中のトランス脂肪酸が占める割合が５０重量％以上、２０重量％以上、１０重量％以上、７重量％以上、５重量％以上、２重量％以上、１重量％以上、０．７重量％以上、０．５重量％以上、０．２重量％以上、０．１重量％以上、０．０７重量％以上、０．０５重量％以上、０．０２重量％以上、０．０１重量％以上、０．００７重量％以上、０．００５重量％以上、０．００２重量％以上または０．００１重量％以上である対象に添加され得る。

　一つの実施形態において、本開示の微生物、微生物の組み合わせおよびこれを提供する組成物または組み合わせ物を添加する対象には、窒素が微生物に利用可能な形態、好ましくはアンモニウム塩、硝酸塩、硫酸塩、又は有機窒素化合物、より好ましくは硫酸アンモニウム、尿素、アミノ酸、又はペプトン、トリプトン、カザミノ酸などのペプチドを含む形態で存在していてもよい。存在する窒素の量は、Ｃ／Ｎ＝２～５０の範囲であり得、好ましくはＣ／Ｎ＝２～３０、より好ましくはＣ／Ｎ＝２～２０の範囲であり得る。ただし、Ｃ／Ｎとは、排水中に含まれるノルマルヘキサン由来炭素原子と窒素原子の重量比である。一つの実施形態において、これらの範囲となるように窒素をさらに添加してもよい。

　一つの実施形態において、本開示の微生物、微生物の組み合わせおよびこれを提供する組成物または組み合わせ物を添加する対象には、リン（Ｐ）が微生物が利用可能な形態、好ましくはリン酸塩又は核酸、より好ましくはリン酸塩の形態で存在していてもよい。存在するリンの量は、窒素に対してＮ／Ｐ＝１～２０となる量であり得る。ただし、Ｎ／Ｐとは、排水中に含まれる窒素原子とリン原子の重量比である。一つの実施形態において、これらの範囲となるようにリンをさらに添加してもよい。

　一つの実施形態において、本開示の微生物、微生物の組み合わせおよびこれを提供する組成物または組み合わせ物は、塩、界面活性剤、光、電流、撹拌操作、ばっ気操作、またはこれらの任意の組み合わせが存在する条件で使用されてもよい。

　一つの実施形態において、本開示の微生物、微生物の組み合わせおよびこれを提供する組成物または組み合わせ物は、本開示の微生物を殺傷し、生育を抑制する物質（塩素、抗生物質など）を除去した後で適用してもよい。

　一つの実施形態において、本開示の微生物、微生物の組み合わせおよびこれを提供する組成物または組み合わせ物は、微生物を固定できる担体とともに使用されてもよい。このような担体を使用することでウォッシュアウトを効果的に避けられ得る。担体の材質としては、微生物を固定できるものであれば特に制限なく、例えば、炭素繊維（ＰＡＮ系、ピッチ系、フェノール樹脂系等）、ポリエチレン樹脂、ポリプロピレン樹脂、ポリウレタン樹脂、ポリスチレン樹脂、ポリ塩化ビニル樹脂、ポリ酢酸ビニル樹脂、ポリビニルアルコール樹脂、ポリエチレングリコール樹脂、アクリル樹脂、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、カラギーナン、デキストリン、セラミックス、シリコン、金属、木炭、活性炭、鉱物（ゼオライト、珪藻土等）、およびこれらの複合体などが挙げられる。微生物の固定化率及び微生物の作用効率を高めるために、多孔質又は繊維状の担体を用いることが好ましい。また、ゲル状担体に微生物を包含させてもよい。担体の形状は、例えば、立方体状、直方体状、円柱状、球状、円板状、シート状、膜状などが挙げられる。微生物の固定化技術については、例えば、「微生物固定化法による排水処理（須藤隆一編著、産業用水調査会）」や「微生物固定化法による水処理―担体固定化法包括固定化法生物活性炭法（新しい水処理シリーズ(1))（望月　和博、堀　克敏、立本英機(著)、株式会社エヌ・ティー・エス）」などを参照のこと。

　（追加成分）
　一つの実施形態において、本開示の微生物、微生物の組み合わせおよびこれを提供する組成物または組み合わせ物は、追加の成分と組み合わされて使用してもよい。一つの実施形態において、追加の成分は、組成物または組み合わせ物に添加されていてもよいし、微生物、微生物の組み合わせまたは組成物とは別個に使用されてもよく、別個に使用される場合には、キットとして提供されてもよい。

　一つの実施形態において、追加の成分として、使用する微生物の活性を高める成分（例えば炭素源、窒素源）、界面活性剤、乾燥保護剤、微生物を長期間維持するための成分、防腐剤、賦形剤、強化剤、酸化防止剤、他の微生物が挙げられるが、これらに限定されず任意の好適な成分を使用することができる。

　一つの実施形態において、他の微生物として、グリセロールを分解（資化）する微生物、タンパク質、アミノ酸、核酸、または多糖類（例えば、セルロース）を分解（資化）する微生物などが挙げられる。他の微生物は、本開示の微生物と共生可能であることが好ましい。

　グリセロールを分解（資化）する微生物としては、例えば、真性細菌、酵母、糸状真菌類を用いることができる。好ましくは、カンジダ属酵母を用いる。カンジダ属酵母の具体例はカンジダ　シリンドラセアＳＬ１Ｂ２である（受託番号ＮＩＴＥ　Ｐ－７１４で独立行政法人製品評価技術基盤機構　特許微生物寄託センターに寄託されている）。当該菌株はグリセロール資化能に優れる。グリセロールを分解（資化）する微生物を併用することで、グリセロールの蓄積による油脂分解速度の低下が防止され、一層効率的な油脂分解が達成可能となり得る。

　（微生物を使用する方法）
　一つの局面において、本開示は、本開示の微生物、組成物または組み合わせ物を処理対象に作用させることを包含する、エステル（例えば、油脂）および／または脂肪酸分解除去方法を提供する。この処理対象は、トランス脂肪酸（例えば、エライジン酸、パルミテライジン酸および／またはバクセン酸）またはトランス脂肪酸含有油脂を含んでいてもよい。処理対象は、本開示の微生物、組成物または組み合わせ物を適用することができる任意の本明細書に記載の処理対象であり得る。本開示のエステル（例えば、油脂）および／または脂肪酸分解除去方法は、本開示の微生物、組成物または組み合わせ物を適用することができる任意の本明細書に記載の環境において実施することができる。一つの実施形態において、本開示のエステル（例えば、油脂）および／または脂肪酸分解除去方法は、トランス脂肪酸（例えば、エライジン酸、パルミテライジン酸および／またはバクセン酸）を分解するステップ、トランス脂肪酸含有油脂を分解するステップ、１５℃においてエステル（例えば、油脂）および／または脂肪酸を分解するステップ、短鎖～中鎖脂肪酸（Ｃ２～Ｃ１２）含有エステルを分解するステップ、および／または短鎖～長鎖脂肪酸（Ｃ２以上）含有油脂を分解するステップを含み得る。本開示のエステル（例えば、油脂）および／または脂肪酸分解除去方法では、本開示の微生物、組成物または組み合わせ物と組み合わせて使用され得る任意の本明細書に記載の追加成分を使用することができる。

　一つの局面において、本開示は、本開示の微生物の組み合わせおよびこれを提供する組成物または組み合わせ物を処理対象に作用させることを包含する、油脂および／または脂肪酸分解除去方法を提供する。一つの局面において、本開示は、本開示の微生物の組み合わせにおけるブルクホルデリア細菌とヤロウィア酵母とを混合して（例えば、共生させて）培養する工程を含む、該ブルクホルデリア細菌および該ヤロウィア酵母のうちの少なくとも１種のリパーゼ生産を向上させる方法を提供する。本開示の微生物の組み合わせは、組み合わせとして適用されてもよいし、それぞれの微生物（またはこれを含む組成物）を適用した結果として本開示の微生物の組み合わせとなるように適用してもよく、本明細書では、いずれの実施形態も本開示の微生物の組み合わせを作用、適用または投入すると記載する。

　一つの実施形態において、本開示のエステル（例えば、油脂）および／または脂肪酸分解除去方法は、本開示の微生物、微生物の組み合わせおよびこれを提供する組成物または組み合わせ物を油脂分解槽に投入する工程を含み、投入は、連続的であっても、逐次的であってもよい。油脂分解槽のＨＲＴ（水理学的滞留時間）は、通常１２時間以上、好ましくは１８時間以上、より好ましくは２０時間以上、更に好ましくは２４時間以上である。ノルマルヘキサンが１００００ｍｇ／Ｌを超える排水について、８０％以上のノルマルヘキサン値の低減を期待する場合は、ＨＲＴを通常１８時間以上、好ましくは２０時間以上、より好ましくは２４時間以上であり得る。ノルマルヘキサン値が３０００ｍｇ／Ｌ以下の排水について、８０％以上のノルマルヘキサン値の低減を期待する場合は、ＨＲＴは通常８時間以上、好ましくは１２時間以上、より好ましくは１８時間以上であり得る。

　油脂分解槽の微生物濃度は排水中のエステル（例えば、油脂）および／または脂肪酸濃度に依存する場合があり、油脂および／または脂肪酸濃度が高いほど菌体濃度が高く維持され得る。油脂分解槽が発泡する場合は、対策として、ＨＲＴを短くする、シャワリング、消泡剤添加などの消泡操作を行うことができる。ただし、消泡剤は微生物の生育を阻害し得るので、添加量は当該事項を考慮して設定することが望ましい。

　油脂分解槽からの流出水のノルマルヘキサン値は、流入水のノルマルヘキサン値が３００ｍｇ／Ｌ程度以下の低濃度排水の場合、好ましくは６０ｍｇ／Ｌ以下、より好ましくは３０ｍｇ／Ｌ以下である。流入水のノルマルヘキサン値が３０００ｍｇ／Ｌ程度の中濃度排水の場合、好ましくは６００ｍｇ／Ｌ以下、より好ましくは３００ｍｇ／Ｌ以下、更に好ましくは１５０ｍｇ／Ｌ以下、最も好ましくは３０ｍｇ／Ｌ以下である。流入水のノルマルヘキサン値が１００００ｍｇ／Ｌ程度の高濃度排水の場合、好ましくは１０００ｍｇ／Ｌ以下、より好ましくは５００ｍｇ／Ｌ以下、更に好ましくは１００ｍｇ／Ｌ以下、最も好ましくは３０ｍｇ／Ｌ以下である。流入水のノルマルヘキサン値が３００００ｍｇ／Ｌ程度以上の超高濃度排水の場合、好ましくは３０００ｍｇ／Ｌ以下、より好ましくは１０００ｍｇ／Ｌ以下、更に好ましくは３００ｍｇ／Ｌ以下である。

　一つの実施形態において、本開示の方法により、油脂および／または脂肪酸含有排水のノルマルヘキサン値を、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、更に好ましくは９５％以上、最も好ましくは９９％以上低下させることができる。その結果、多くの排水において、油脂分解槽からの流出水のノルマルヘキサン値を、多くの自治体で下水道への放流基準値となっている３０ｍｇ／Ｌ未満に下げることも可能である。この基準値を達成すると、ノルマルヘキサン値だけに着目すれば、後段の活性汚泥処理などの本処理すら不要となり得る。

　油脂分解槽からの流出水中において、投入した微生物の量が増加している必要はない。流出水中の投入した微生物の量は、投入した量に対して、好ましくは０．０１倍以上、より好ましくは０．１倍以上、更に好ましくは０．５倍以上、最も好ましくは１倍以上である。

　本開示の油脂および／または脂肪酸分解除去方法は、上記工程以外にも追加の工程を含むことができる。そのような工程としては、例えば、油脂分解槽からの流出水の全部又は一部を再度油脂分解槽に戻す工程などが挙げられる。しかしながら、本開示の方法では、このような返送処理を行わなくても十分な油脂および／または脂肪酸分解効果が得られ得るので、油脂分解槽からの流出水の全部又は一部を再度油脂分解槽に戻すことは必須ではない。

　（一般技術）
　本明細書において用いられる分子生物学的手法、生化学的手法、微生物学的手法は、当該分野において周知であり慣用されるものであり、例えば、Savli,　H.,　Karadenizli,　A.,　Kolayli,　F.,　Gundes,　S.,　Ozbek,　U.,　and　Vahaboglu,　H.　2003.　Expression　stability　of　six　housekeeping　genes:A　proposal　for　resistance　gene　quantification　studies　of　Pseudomonas　aeruginosa　by　real-time　quantitative　RT-PCR.　J.　Med.　Microbiol.　52:403-408.、Marie-Ange　Teste,　Manon　Duquenne,　Jean　M　Francois　and　Jean-Luc　Parrou　2009.Validation　of　reference　genes　for　quantitative　expression　analysis　by　real-time　RT-PCR　in　Saccharomyces　cerevisiae.　BMC　Molecular　Biology　10:99、石井誠治、奥村弘、松原チヨ、二宮扶実、吉岡浩、2004年、「熱感応性ポリマーを用いた水中油分の簡易測定方法」Vol.46、No.12、「用水と排水」などに記載されており、これらは本明細書において関連する部分（全部であり得る）が参考として援用される。

　（注記）
　本明細書において「または」は、文章中に列挙されている事項の「少なくとも１つ以上」を採用できるときに使用される。「もしくは」も同様である。本明細書において「２つの値」の「範囲内」と明記した場合、その範囲には２つの値自体も含む。

　本明細書において引用された、科学文献、特許、特許出願などの参考文献は、その全体が、各々具体的に記載されたのと同じ程度に本明細書において参考として援用される。

　以上、本開示を、理解の容易のために好ましい実施形態を示して説明してきた。以下に、実施例に基づいて本開示を説明するが、上述の説明および以下の実施例は、例示の目的のみに提供され、本開示を限定する目的で提供したのではない。従って、本発明の範囲は、本明細書に具体的に記載された実施形態にも実施例にも限定されず、特許請求の範囲によってのみ限定される。

　以下に実施例を記載する。必要な場合、以下の実施例で用いる生物の取り扱いは、必要な場合、名古屋大学や監督官庁およびカルタヘナ法において規定される基準を遵守した。試薬類は具体的には実施例中に記載した製品を使用したが、他メーカー（Sigma－Aldrich、富士フイルム、和光純薬、ナカライ、R&D　Systems、USCN　Life　Science　INC、関東化学、フナコシ、東京化成、Ｍｅｒｃｋ等）の同等品でも代用可能である。また、特に記述がない限り、各種油脂や脂肪酸等の培地への添加濃度は、培地中での該物質の最終濃度を指し、パーセント表記については、油脂や脂肪酸が液体の性状のものは容量／容量（ｖ／ｖ％）で、固体の性状のものは重量／容量（ｗ／ｖ％）のことを表している。

　（実施例１：トランス脂肪酸含有油脂を資化・分解し得る微生物の同定）
　酵母の保存集団を培養し、そこから微生物を分離した。分離した微生物について、低温環境下（１５℃）で培養可能かどうかを調べるために、キャノーラ油（日清キャノーラ油、日清オイリオ、東京）を唯一の炭素源として含む寒天培地上に各微生物を画線植菌して、１５℃で５日間培養した。その結果、油脂を栄養源とする低温で培養可能な微生物が見出された。

　また、各微生物の低温（１５℃）における油脂分解能を調べた。各微生物のコロニーを、１０ｇ／Ｌのキャノーラ油を唯一の炭素源として含む２０ｍＬの無機塩培地（Ｎａ_２ＨＰＯ_４　３．５ｇ／Ｌ、ＫＨ_２ＰＯ_４　２．０ｇ／Ｌ、（ＮＨ_４）_２ＳＯ_４　４．０ｇ／Ｌ、ＭｇＣｌ_２・６Ｈ_２Ｏ　０．３４ｇ／Ｌ、ＦｅＳＯ_４・７Ｈ_２Ｏ　２．８ｍｇ／Ｌ、ＭｎＳＯ_４・５Ｈ_２Ｏ　２．４ｍｇ／Ｌ、ＣｏＣｌ_２・６Ｈ_２Ｏ　２．４ｍｇ／Ｌ、ＣａＣｌ_２・２Ｈ_２Ｏ　１．７ｍｇ／Ｌ、ＣｕＣｌ_２・２Ｈ_２Ｏ　０．２ｍｇ／Ｌ、ＺｎＳＯ_４・７Ｈ_２Ｏ　０．３ｍｇ／Ｌ、およびＮａ_２ＭｏＯ_４　０．２５ｍｇ／Ｌ）に、爪楊枝を使って植菌し、１００ｍＬ三角フラスコ中で培養した。その結果、低温で油脂を分解、資化して増殖する微生物が見出された。

　次に、各微生物のトランス脂肪酸の分解・資化能を調べた。唯一の炭素源としてエライジン酸を０．２％の終濃度で添加した２ｍＬの無機塩培地（上記組成）に、終菌体光学密度ＯＤ_６６０＝０．０４となるように各微生物を植菌した。１５ｍＬのハーモニー遠沈管（エルエムエス、東京）中、２８℃、１３０ｒｐｍで２４時間培養を行った。その結果、トランス脂肪酸であるエライジン酸を分解、資化して増殖可能な微生物が見出された。

　これらの試験により、分離したある微生物株は、油脂を栄養源とする低温環境下で培養可能であり、低温で油脂を資化（分解）することができ、トランス脂肪酸含有油脂およびトランス脂肪酸を分解・資化することが見出され、この新規株をＫＨ－２株と命名した。

　その後の解析により、ＫＨ－２株は、Yarrowia　lipolyticaであることが判明した。
　ここでは、ＫＨ－２株に注目して解析を行ったが、同様の試験により油脂および／または脂肪酸分解能を調べることによって他の株の油脂および／または脂肪酸分解能も特定することができる。

（実施例２：ＫＨ－２株の油脂・脂肪酸資化・分解能力）
　ＫＨ－２株について、トリオレイン、オレイン酸またはキャノーラ油（上記）を唯一の炭素源として含む寒天培地（油脂または脂肪酸終濃度１％、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）　Ｘ－１００終濃度０．２５％、ポリビニルアルコール終濃度０．５％、無機塩寒天培地（無機塩培地に１．５％の寒天を含む）（ｐＨ７．０））上に菌を画線植菌して、２８℃で３日間培養した。無機塩培地の組成は、Ｎａ_２ＨＰＯ_４　３．５ｇ／ＬＫＨ－２株ＰＯ_４　２．０ｇ／Ｌ、（ＮＨ_４）_２　ＳＯ_４４．０ｇ／Ｌ、ＭｇＣｌ_２・６Ｈ_２Ｏ　０．３４ｇ／Ｌ、ＦｅＳＯ_４・７Ｈ_２Ｏ　２．８ｍｇ／Ｌ、ＭｎＳＯ_４・５Ｈ_２Ｏ　２．４ｍｇ／Ｌ、ＣｏＣｌ_２・６Ｈ_２Ｏ　２．４ｍｇ／Ｌ、ＣａＣｌ_２・２Ｈ_２Ｏ　１．７ｍｇ／Ｌ、ＣｕＣｌ_２・２Ｈ_２Ｏ　０．２ｍｇ／Ｌ、ＺｎＳＯ_４・７Ｈ_２Ｏ　０．３ｍｇ／Ｌ、およびＮａ_２ＭｏＯ_４　０．２５ｍｇ／Ｌである。その結果を図１に示す。どの寒天培地上にもコロニーが形成され、ＫＨ－２株は、代表的な油脂含有植物油であるキャノーラ油、トリグリセリド油脂であるトリオレイン、これら油脂の分解産物で遊離脂肪酸の典型的な例であるオレイン酸を分解、資化し、増殖可能であることが示された。

　さらに、ＫＨ－２株について、エライジン酸を唯一の炭素源として含む寒天培地（エライジン酸終濃度０．１％、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）　Ｘ－１００終濃度０．２５％、無機塩寒天培地（ｐＨ７．０））上に菌を画線植菌して、１５℃で１４日間培養した。その結果を図２に示す。寒天培地上にコロニーが形成され、代表的なトランス脂肪酸であるエライジン酸を分解、資化し、増殖可能であることが示された。

（実施例３Ａ：２８℃におけるＫＨ－２株のトランス脂肪酸分解能力）
　ＫＨ－２株およびＢｉｏＲｅｍｏｖｅ３２００（ＢＲ３２００）（Novozymes、デンマーク）の２８℃におけるトランス脂肪酸分解能力を比較した。菌体を、０．２％のエライジン酸、０．２５％のＴｒｉｔｏｎ（登録商標）　Ｘ－１００を含む２０ｍＬの無機塩培地（上記組成、ｐＨ７．０）に終菌体光学密度ＯＤ_６６０＝０．５（HITACHI　U-2810分光光度計（日立製作所、東京））のＫＨ－２株またはメーカー推奨濃度の５倍である５×１０^６ＣＦＵ／ｍｌのＢＲ３２００となるように植菌し、２８℃において１３０ｒｐｍで振盪しながら２４時間培養した。

　培養後の上清中の油脂を薄層クロマトグラフィーで解析した。具体的には、培養上清に等量のクロロホルムを加え、攪拌した後、クロロホルム層１２μｌをシリカゲルプレートにアプライし、クロロホルム：アセトン：メタノール（９６：４：２）溶液で展開した。展開後、モリブトリン酸ｎ水和物液（２．４ｇ／６０ｍｌエタノール）を噴霧し、１１０℃で１２分加熱することで脂肪酸を可視化し、培地に残存する脂肪酸量を比較した（図３Ａ（ａ））。

　また、２４時間培養上清０．５ｍＬを、油分測定試薬キット（共立理化学研究所、東京）（ポリニッパム抽出物質測定法による測定試薬キット）を製造元の推奨プロトコルに従って使用して解析した（図３Ａ（ｂ））。

　ＫＨ－２株は強力なトランス脂肪酸分解能力があることが見出された。

（実施例３Ｂ：１５℃におけるＫＨ－２株のトランス脂肪酸分解能力）
　ＫＨ－２株およびＢｉｏＲｅｍｏｖｅ３２００（ＢＲ３２００）（Novozymes、デンマーク）の１５℃におけるトランス脂肪酸分解能力を比較した。菌体を、０．２％のエライジン酸、０．２５％のＴｒｉｔｏｎ（登録商標）　Ｘ－１００を含む２０ｍＬの無機塩培地（上記組成、ｐＨ７．０）に終菌体光学密度ＯＤ_６６０＝０．８（HITACHI　U-2810分光光度計（日立製作所、東京））のＫＨ－２株またはメーカー推奨濃度の８倍である８×１０^６ＣＦＵ／ｍｌのＢＲ３２００となるように植菌し、１５℃において１３０ｒｐｍで振盪しながら４８時間培養した。

　培養後の上清中の油脂を薄層クロマトグラフィーで解析した。具体的には、培養上清に１／２量のクロロホルムを加え、攪拌した後、クロロホルム層５μｌをシリカゲルプレートにアプライし、クロロホルム：アセトン：メタノール（９６：４：１）溶液で展開した。展開後、モリブトリン酸ｎ水和物液（２．４ｇ／６０ｍｌエタノール）を噴霧し、１１０℃で１２分加熱することで脂肪酸を可視化し、培地に残存する脂肪酸量を比較した（図３Ｂ（ａ））。

　また、４８時間培養後に上清０．５ｍＬを、油分測定試薬キット（共立理化学研究所、東京）（ポリニッパム抽出物質測定法による測定試薬キット）を製造元の推奨プロトコルに従って使用して解析した（図３Ｂ（ｂ））。

　ＫＨ－２株は低温（１５℃）でも強力なトランス脂肪酸分解能力があることが見出された。

（実施例４Ａ：ＫＨ－２株のトランス脂肪酸含有油脂分解能力）
　ＫＨ－２株の１５℃および２８℃におけるトランス脂肪酸含有油脂の分解能力を試験した。０．１％のトリエライジンを含む無機塩培地（ＢＳ）に終菌体光学密度ＯＤ_６６０＝０．８（HITACHI　U-2810分光光度計（日立製作所、東京））のＫＨ－２株を植菌し、１５℃または２８℃において１３０ｒｐｍで振盪しながら６日間培養した。微生物を添加しなかった対照試料と比較した。

　培養後の上清中の油脂を薄層クロマトグラフィーで解析した。具体的には、培養上清に等量のクロロホルムを加え、攪拌した後、クロロホルム層１２μｌをシリカゲルプレートにアプライし、クロロホルム：アセトン：メタノール（９６：４：２）溶液で展開した。展開後、モリブトリン酸ｎ水和物液（２．４ｇ／６０ｍｌエタノール）を噴霧し、１１０℃で１２分加熱することで油脂と遊離脂肪酸を可視化し、培地に残存する油脂及びその分解産物である脂肪酸量を比較した（図４）。
　ＫＨ－２株は常温（２８℃）でも低温（１５℃）でもトランス脂肪酸含有油脂を分解する能力があることが見出された。

（実施例５：実排水におけるＫＨ－２株の油脂分解能力）
　実排水を使用して、ＫＨ－２株とＢｉｏＲｅｍｏｖｅ３２００（ＢＲ３２００）（Novozymes、デンマーク）との油脂分解能を比較した（図５）。
　水素添加油脂を使用している食品工場からのトランス脂肪酸含有油脂を多く含む廃水サンプルに無機塩培地（上記）相当の窒素分（硫酸アンモニウム）とリンを添加して培養した。ＫＨ－２株はＬＢ培地にて培養し、無機塩培地で２回洗浄した後、菌体光学密度ＯＤ_６６０＝０．１（HITACHI　U-2810分光光度計（日立製作所、東京））となるように植菌し、ＢＲ３２００はメーカー推奨濃度の１０倍である１×１０^７ＣＦＵ／ｍｌで植菌した。微生物を添加しなかった対照試料とも比較した。２８℃で培養し、２４時間および４８時間後にサンプルを採取した。サンプルは薄層クロマトグラフィー（シリカゲルプレートにアプライし、クロロホルム：アセトン：メタノール（９６：４：１）溶液で展開後、モリブトリン酸ｎ水和物で可視化）（図５Ａ）および油分測定試薬キット（ノルマルヘキサン値測定、上記）（図５Ｂ）を使用して解析した。ＢＲ３２００は過剰量でも分解の進行が遅かったのに対し、ＫＨ－２株は優れた分解能力を示した。

（実施例６：１５℃におけるＫＨ－２株の油脂分解能力）
　ＫＨ－２株の菌体を、１％キャノーラ油（日清キャノーラ油、日清オイリオ）を含む無機塩培地（ｐＨ７）に終菌体光学密度ＯＤ_６６０＝０．０５（HITACHI　U-2810分光光度計（日立製作所、東京））となるように植菌し、１５℃においてファーメンターで培養した。培養の０時間、２４時間、４８時間および７２時間時点でサンプルを採取し、サンプリングした培養液から遠心分離により菌体を除去し、この上清において、ノルマルヘキサン値相当の油分を油分測定試薬キット（ノルマルヘキサン抽出、上記）により測定し（図６Ａ、上段）、全脂肪酸（トリグリセリド中の脂肪酸と遊離脂肪酸との総量）をガスクロマトグラフィーにより定量し（図６Ａ、下段）、薄層クロマトグラフィー（シリカゲルプレートにアプライし、クロロホルム：アセトン：メタノール（９６：４：１）溶液で展開後、モリブトリン酸ｎ水和物で可視化）で解析した（図６Ｂ）。ガスクロマトグラフィーによる定量は以下のように行った。培養上清３ｍｌを塩酸により酸性にし、等量の酢酸エチルを添加した。５分間攪拌後遠心分離し、酢酸エチル層１ｍｌを耐有機溶媒チューブに移し完全に蒸発させた。クロロホルム１ｍｌに溶解し、メタノール：硫酸＝１７：３で混合したメタノリシス溶液を４ｍｌ添加し、１００℃で２時間加熱することにより、全脂肪酸をメチルエステル化した。クロロホルム：純水＝１：１の割合で混合した溶液を添加して十分攪拌した後、クロロホルム層と０．５％オクタン酸メチル(内部標準)を１：１で混合し、ＦＩＤ検出器を搭載したガスクロマトグラフィー（ＧＣ-１７Ａ（島津製作所、京都））により解析した。
　これらの結果から、ＫＨ－２株は低温でも高い油脂分解・資化能力を有することが確認された。

（実施例７：２８℃におけるＫＨ－２株の油脂分解能力）
　ＫＨ－２株の菌体を、１％キャノーラ油（日清キャノーラ油、日清オイリオ）を含む無機塩培地（ｐＨ７）に終菌体光学密度ＯＤ_６６０＝０．０５（HITACHI　U-2810分光光度計（日立製作所、東京））となるように植菌し、２８℃においてファーメンターで培養した。培養の０時間、１２時間、２４時間および３０時間時点でサンプルを採取し、サンプリングした培養液から遠心分離により菌体を除去し、この上清において、実施例６と同様に、ノルマルヘキサン値相当の油分を測定し（図７Ａ、上段）、全脂肪酸をガスクロマトグラフィーにより定量し（図７Ａ、下段）、薄層クロマトグラフィーで解析した（図７Ｂ）。
　ＫＨ－２株は２８℃では極めて迅速に油脂を分解し、１２時間で最初に培地に含有された１％の油脂の７０％以上が分解され、２４時間以内に油脂も脂肪酸もほぼ消滅した。

（実施例８：追加の株による脂肪酸および油脂分解）
　油脂含有排水が流出する食品工場近傍の河川から試料を採取し、そこから微生物を分離した。分離した微生物について、低温環境下（１５℃）でリパーゼを生産し、油脂を分解可能か調べた。その結果、低温で油脂を分解することができる微生物が見出された。これらの微生物株を、それぞれ、ＫＨ－２ＡＬ１株およびＫＨ－２ＡＬ３株と命名した。

　ＫＨ－２ＡＬ１株およびＫＨ－２ＡＬ３株をさらに特徴付けるために２６Ｓ　ｒＤＮＡの遺伝子配列解析を行った。
　ＫＨ－２ＡＬ１株は、２６Ｓ　ｒＤＮＡの部分塩基配列がYarrowia　lipolyticaに相同率１００％で一致したため、Yarrowia　lipolyticaと同定された。
　ＫＨ－２ＡＬ３株は、２６Ｓ　ｒＤＮＡの部分塩基配列がYarrowia　lipolyticaに相同率１００％で一致したため、Yarrowia　lipolyticaと同定された。

　これらの株についてもトランス脂肪酸分解能、トランス脂肪酸含有油脂分解能および油脂分解能を調べた。

（トランス脂肪酸分解）
　実施例３と同様に、ＫＨ－２ＡＬ１株およびＫＨ－２ＡＬ３株についてもトランス脂肪酸の分解能力を試験した。菌体を、０．２％のエライジン酸、０．２５％のＴｒｉｔｏｎ（登録商標）　Ｘ－１００を含む１０ｍＬの無機塩培地（上記組成、ｐＨ７．０）に終菌体光学密度ＯＤ_６６０＝０．８（HITACHI　U-2810分光光度計（日立製作所、東京））のＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株またはＫＨ－２ＡＬ３株となるように植菌し、１３０ｒｐｍで振盪しながら２８℃で４６時間または１５℃で９０時間培養した。実施例３と同様に、薄層クロマトグラフィー（２８℃；図８Ａ（ａ）、１５℃；図８Ｂ（ａ））および油分測定試薬キットによる分析（２８℃；図８Ａ（ｂ）、１５℃；図８Ｂ（ｂ））を行い、培養上清における油脂分解を調べた。

　ＫＨ－２ＡＬ１株およびＫＨ－２ＡＬ３株は、ＫＨ－２株と同様のトランス脂肪酸分解能力を有することが見出された。

（トランス脂肪酸含有油脂分解）
　実施例４と同様に、ＫＨ－２ＡＬ１株およびＫＨ－２ＡＬ３株についてもトランス脂肪酸含有油脂の分解能力を試験した。０．１％のトリエライジンおよび０．２５％のＴｒｉｔｏｎ（登録商標）　Ｘ－１００を含む無機塩培地（ＢＳ）に終菌体光学密度ＯＤ_６６０＝０．８（HITACHI　U-2810分光光度計（日立製作所、東京））のＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株またはＫＨ－２ＡＬ３株を植菌し、２８℃において１３０ｒｐｍで振盪しながら５日間培養した。微生物を添加しなかった対照試料と比較した。実施例３と同様に、培養上清における油脂分解を調べた。油分測定試薬キットによる分析結果を図９に示す。

　ＫＨ－２ＡＬ１株およびＫＨ－２ＡＬ３株は、ＫＨ－２株と同様のトランス脂肪酸含有油脂分解能力を有することが見出された。

（油脂分解）
　ＫＨ－２ＡＬ１株またはＫＨ－２ＡＬ３株の菌体を、１％キャノーラ油（日清キャノーラ油、日清オイリオ）を含む無機塩培地（ｐＨ７）に終菌体光学密度ＯＤ_６６０＝０．０５（HITACHI　U-2810分光光度計（日立製作所、東京））となるように植菌し、１５℃においてファーメンターで７２時間培養した。培養上清を使用して、油分測定試薬キットによる分析（図１０Ａ、図１１Ａ、上段）、ガスクロマトグラフィーによる全脂肪酸分析（図１０Ａ、図１１Ａ、下段）、および薄層クロマトグラフィー分析（図１０Ｂ、図１１Ｂ）を行った。

　これらの結果から、本開示のヤロウィア酵母は、低温でも高い油脂分解・資化能力を有することが確認された。

（実施例９：１５℃におけるＫＨ－２株のトランス脂肪酸およびその含有油脂の資化能力）
　ＫＨ－２株の１５℃におけるトランス脂肪酸およびその含有油脂の資化能力を試験した。０．２％のエライジン酸またはエライジン酸換算で０．２％のトリエライジンと、０．２５％のＴｒｉｔｏｎ（登録商標）　Ｘ－１００とを含む無機塩培地（ｐＨ７．０）に終菌体光学密度ＯＤ_６６０＝０．０８（HITACHI　U-2810分光光度計（日立製作所、東京））のＫＨ－２株の菌体を植菌し、１５℃において１３０ｒｐｍで振盪しながら５日間培養した。微生物を添加しなかった対照試料と比較した。結果を図１２に示す。
　ＫＨ－２株を植菌した試料では、培地が濁っていることが観察され、このことから、ＫＨ－２株は、１５℃でもエライジン酸またはトリエライジンを唯一の炭素源とする環境下で増殖可能であり、これらの化合物を資化する能力があることが示された。

（実施例１０：ＫＨ－２株と洗剤との洗浄力の比較）
　油汚れのついた換気扇フィルターを、ＫＨ－２株の培養上清（培養条件：１％キャノーラ油添加無機塩培地（上記組成）、初期菌体光学密度ＯＤ_６６０＝０．０１になるよう接種、２８℃、７０時間培養。培養後、遠心分離して菌体を除去した上清を、水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨが８．０になるように調整した）、油用洗剤（天然酵素洗剤ニコエコ台所用（ニコエコ、長野）説明書に従って１４３倍に水で希釈）、一般洗剤（ファミリー（登録商標）（花王、東京）、説明書に従い、６６６倍に希釈）に室温（２５℃）で漬け置き洗いした（図１３）。洗浄時間は、ＫＨ－２株培養上清、油用洗剤、一般洗剤、それぞれ３０分間、２時間、４時間とした。
　一般洗剤と油用洗剤ではそれぞれ２時間、４時間の浸漬洗浄でも油汚れを完全に落とすことはできなかったが、ＫＨ－２株では３０分間の浸漬洗浄で新品のようにフィルターは真っ白になった。

（実施例１１：各種エステル分解）
　ＫＨ－２株の培養上清において分解されるエステルの基質特異性を調べた。
　１％キャノーラ油添加無機塩培地（上記組成）、初期菌体光学密度ＯＤ_６６０＝０．０５になるようにＫＨ－２株を接種した後、２８℃で２４時間、２８℃で４８時間または１５℃で４８時間培養した後、遠心分離して菌体を除去した上清を使用した。

　５種類の脂肪酸（酢酸（Ｃ２）、酪酸（Ｃ４）、オクタン酸（Ｃ８）、ラウリル酸（Ｃ１２）、パルミチン酸（Ｃ１６））の４－ニトロフェニルエステル（基質）のいずれか０．０５ｍｏｌと、１２ｍｌの３％（ｖ／ｖ）Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）　Ｘ－１００水溶液とを混合し、７０℃で融解して基質溶液を調製した。
　基質溶液、１５０ｍＭのＧＴＡ緩衝液（ｐＨ７．０）および各上清を１ｍｌずつ混合し、攪拌しながら４１０ｎｍ（加水分解により生じる４－ニトロフェノールに対応する）の吸光度を１分間モニターした。

　結果を以下の表に示す。５種類の基質の中で最大の分解（４－ニトロフェノール遊離）が観察されたものを１００％として、各基質で生じた４－ニトロフェノール遊離量の％を表示する。

　一般に、微生物のリパーゼ活性は、４－ニトロフェノールと長鎖脂肪酸（例えば、パルミチン酸）とのエステル（４－ニトロフェニルエステル）をモデル基質として使用して、その加水分解活性で測定される。加水分解産物である４－ニトロフェノールが黄色を呈するため、比色法により簡単に定量評価できる。この際、動植物油脂（トリグリセリド）の分解活性と相関させるため、通常、動植物油脂を構成する長鎖脂肪酸（例えば、Ｃ１６以上）と４－ニトロフェノールとのエステルが用いられる。しかし、ＫＨ－２株は、長鎖脂肪酸と４－ニトロフェノールとのエステル基質に対する活性は低く、短鎖脂肪酸（Ｃ６以下）または中鎖脂肪酸（Ｃ７～１２）とのエステル基質に対する活性が高いことが分かった。すなわち、当業者が通常行う実験（長鎖脂肪酸と４－ニトロフェノールとのエステルの分解能を調べる実験）に基づくと、ＫＨ－２株は長鎖脂肪酸のトリグリセリドを分解する能力を持たないという結論が導かれる。しかし、本発明者は、上記の実施例に示されるように、ＫＨ－２株が長鎖脂肪酸のトリグリセリドを分解する高い活性を有することを見出し、これは、全く予想外の知見であるといえる。また、この結果から、本開示の微生物は、短鎖～長鎖脂肪酸の油脂に対する幅広いリパーゼ活性を有し得ると予測される。

（実施例１２：種々のトランス脂肪酸の資化・分解能）
　ＫＨ－２株がトランス脂肪酸であるパルミテライジン酸（１６：１）およびバクセン酸（１８：１）を分解する活性をＢｉｏＲｅｍｏｖｅ３２００（ＢＲ３２００）（Novozymes、デンマーク）と比較した。

　ＫＨ－２株およびＢＲ３２００を、それぞれ、パルミテライジン酸またはバクセン酸の終濃度が０．２％かつＴｒｉｔｏｎ（登録商標）　Ｘ－１００の終濃度が０．２５％となるように調製した無機塩培地（上記組成、ｐＨ７）５ｍＬに、HITACHI　U-2810分光光度計（日立製作所、東京）を使用して、菌体光学密度による最終濃度がＯＤ_６６０＝０．５となるようにＫＨ－２株を植菌し、メーカー推奨濃度の５倍である５×１０^６ＣＦＵ／ｍｌとなるようにＢＲ３２００を植菌した。これを１３０ｒｐｍで振盪しながら１５℃で４８時間または７２時間、あるいは２８℃で２４時間培養した後、それぞれの株の培養上清を取得した。微生物を使用しなかった対照試料も用意した。

　その後、薄層クロマトグラフィーによって培養液中の残存油分を解析した。具体的には、サンプルの２分の１の量のクロロホルムで脂肪酸を抽出し、抽出液６μｌをシリカゲルプレートにアプライし、クロロホルム：アセトン：メタノール（９６：４：２）溶液で展開した。展開後、実施例４と同様にモリブトリン酸ｎ水和物による発色反応で脂肪酸を可視化し、培地中に残存する脂肪酸量を比較した（図１４、図１５）。

　ＫＨ－２株は、２８℃では２４時間以内に、１５℃では４８～７２時間以内に、パルミテライジン酸およびバクセン酸を完全に分解可能であった。他方、ＢＲ３２００には、これら脂肪酸の分解能力はなかった。このように、本開示の微生物は、種々のトランス脂肪酸およびトランス脂肪酸含有油脂を資化・分解可能であり得る。

（実施例１３：類縁株の取得）
　以下のようにして類縁株が取得され得る。
　酵母保存ライブラリー、土壌、河川、湖水、活性汚泥など様々な分離源にＰＢＳを加えて希釈系列を調製し、トリエライジンまたはエライジン酸を唯一の炭素源とする無機塩寒天培地にスプレッディングする。あるいは、０．３～１重量％のショートニングを含む無機塩培地に、上記分離源を１～１０重量％添加し、乳化と微生物の増殖が認められるまで１５℃または２８℃で培養する。この集積培養を任意の回数繰り返したのちに、培養液の希釈系列を調製し、上述のとおりスプレッディングしてもよい。植菌後の寒天培地を１５℃または２８℃で静置培養することでコロニーを得る。その中で、コロニー周辺にクリアゾーンを形成したものを中心にピックアップし、２ｍＬほどの無機塩寒天培地（上述の濃度のトリエライジンまたはトリエライジン酸を含む）に植菌し、１５℃または２８℃で培養する。培養後、培養上清の油脂の分解の程度を薄層クロマトグラフィーで解析することにより、低温で油脂分解可能またはトランス脂肪酸含有油脂分解能力を有する微生物を得る。

（実施例１４：装置内での使用）
　１０ｍＬ／Ｌのキャノーラ油を含む無機塩培地でＫＨ－２株を２×１０^９細胞／ｍＬまで培養し、培養原液とする。これを１０倍希釈して微生物製剤（２×１０^８細胞／ｍＬ）とする。これを自動増幅投入装置の微生物保存タンク中に冷蔵保存し、種菌とする。この種菌を、同装置の培養増幅槽中の無機塩培地中に、毎日１／１００量ずつ自動植菌し、微生物数が１００倍、すなわち微生物製剤と同じ細胞濃度になるまで培養する。これを油分解処理槽の排水量の１／１０００投入することで、油処理水中の分解菌の微生物濃度を２×１０^５細胞／ｍＬとし、２４時間、トランス脂肪酸含有油脂を多く含む排水を排出する食品工場からの排水を分解処理する。この時の季節は冬で、処理中の水温は１２～１７℃の間で変動する。その結果、微生物を投入しない対照例と比較して顕著なノルマルヘキサン値の低減が観察される。

（実施例１５：他の実施形態）
　消滅型生ゴミ処理機にＫＨ－２株を１×１０^６細胞／ｍＬとなるように植菌し、２５～３５℃で１２～２４時間、処理する。生ゴミ処理機から出る排水中のノルマルヘキサン値を測定する。ＫＨ－２株を投入しない対照例と比較して顕著な値の低減が観察される。

　浮上分離により回収した油性汚泥を培養槽に投入し、その投入重量の１０～１０００％の重量の無機塩培地を加える。ここにＫＨ－２株を１×１０^５細胞／ｍＬとなるように植菌し、攪拌曝気しながら、２０～３５℃の間で１２～２４０時間、インキュベートする。その後、処理済み液のノルマルヘキサン値による油分量の測定、あるいは水分を蒸発させた後に残った油を主成分とする残渣の重量を測定することにより、油性汚泥の分解・減少量を調べる。その結果、ＫＨ－２株を投入しない対照例と比較して顕著な油性汚泥分解が認められる。

　グリーストラップに木炭、各種プラスチック、セラミックス片などの担体を投入し、適量（例えば、１×１０^５細胞／ｍＬ）のＫＨ－２株を毎日、食堂の操業終了後に自動投入する。毎日、操業開始直前に採水し、ノルマルヘキサン値を分析する。１週間後には、ＫＨ－２株を投入しない対照例と比較して顕著なノルマルヘキサン値の低下が認められる他、グルーストラップ自体の見た目も、油の付着や浮遊が減るなどの効果が認められる。

（実施例１６：有用な油脂分解能を有する微生物の組み合わせ）
　ブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母には油脂分解能を有する株が存在する。これらの株を、油脂分解能を有する別の微生物株と組み合わせることで油脂分解能の優れた微生物の組み合わせを得ることができる。

　実施例ではブルクホルデリア細菌およびいくつかのヤロウィア酵母の代表的な組み合わせを用いて、共培養による油脂分解能を試験した。ブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母の組み合わせで、優れた油脂分解能が観察された。以下、詳述する。

　共にリパーゼ分泌能力と油脂分解能力を有するブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母の組み合わせを共培養して、油脂分解能を試験し、共培養した場合に油脂分解能の優れた組み合わせを得る。ブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母の共生系を、キャノーラ油（日清キャノーラ油、日清オイリオ、東京）を終濃度で１％（ｖ／ｖ）含む無機塩培地（Ｎａ_２ＨＰＯ_４　３．５ｇ／Ｌ、ＫＨ_２ＰＯ_４　２．０ｇ／Ｌ、（ＮＨ_４）_２ＳＯ_４　４．０ｇ／Ｌ、ＭｇＣｌ_２・６Ｈ_２Ｏ　０．３４ｇ／Ｌ、ＦｅＳＯ_４・７Ｈ_２Ｏ　２．８ｍｇ／Ｌ、ＭｎＳＯ_４・５Ｈ_２Ｏ　２．４ｍｇ／Ｌ、ＣｏＣｌ_２・６Ｈ_２Ｏ　２．４ｍｇ／Ｌ、ＣａＣｌ_２・２Ｈ_２Ｏ　１．７ｍｇ／Ｌ、ＣｕＣｌ_２・２Ｈ_２Ｏ　０．２ｍｇ／Ｌ、ＺｎＳＯ_４・７Ｈ_２Ｏ　０．３ｍｇ／Ｌ、およびＮａＭｏＯ_４　０．２５ｍｇ／Ｌ）中で共培養し、培養上清を取得し、薄層クロマトグラフィー分析や、ガスクロマトグラフィー分析などにより油脂の分解を試験した。その結果、優れた油脂分解能を有する、ブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母の共生系を見出した。この共生系において有用に使用され得る微生物株として、例えば、ＫＨ－１株（Burkholderia　arboris）およびＫＨ－２株（Yarrowia　lipolytica）が見出された。

　以下の実施例では、この代表的組み合わせに注目して解析を行ったが、同様の試験により油脂分解能を調べることによって他の有用な組み合わせを見出すことができる。

（実施例１７：共生系の油脂分解能力のさらなる分析）
　種々の混合比率のＫＨ－１株およびＫＨ－２株の組み合わせの種々の温度における油脂分解能を試験した。

（１５℃での分析）
　キャノーラ油（日清キャノーラ油、日清オイリオ、東京）を終濃度で１％（ｖ／ｖ）含む無機塩培地（上記組成、ｐＨ７）に、ＫＨ－１株およびＫＨ－２株を、合計細胞濃度が５×１０^５細胞／ｍＬになるように、ＫＨ－１株：ＫＨ－２株＝１０：０、９：１、５：５、１：９、および０：１０（細胞数基準）の比でそれぞれ添加し、１５℃で培養した。４８時間培養した時点において取得した培養上清について、下記の手順に従って、ガスクロマトグラフィーによる全脂肪酸分析を行った。

　ガスクロマトグラフィーによる全脂肪酸分析　培養上清３ｍｌを塩酸により酸性にし、等量の酢酸エチルを添加した。５分間攪拌後遠心分離し、酢酸エチル層１．５ｍｌを耐有機溶媒チューブに移し完全に蒸発させた。クロロホルム１ｍｌに溶解し、メタノール：硫酸＝１７：３のメタノリシス溶液を４ｍｌ添加し、１００℃で２時間加熱することにより、全脂肪酸をメチルエステル化した。クロロホルム：純水＝１：１の割合で混合した溶液を添加して十分攪拌した後、クロロホルム層と０．５％オクタン酸メチル(内部標準)を１：１で混合し、ＦＩＤ検出器を搭載したガスクロマトグラフィー（ＧＣ-１７Ａ（島津製作所、京都））により分析した。

（結果）
　ガスクロマトグラフィー分析の結果を図１６に示す。ＫＨ－１株およびＫＨ－２株の共生系は、種々の混合比率において各々の単独培養の油脂分解能の値から計算される油脂分解能を超える油脂分解能を示した。ＫＨ－１株単独およびＫＨ－２株単独の結果から観察されるように、ＫＨ－１株およびＫＨ－２株それぞれが単独でリパーゼを生産し、このような類似の性質を有する微生物は互いに競合し、結果として互いの能力を抑制し合う（総合的な油脂分解能が低下する）ことが通常予想されるが、発明者らは、予想外に共生系における油脂分解能の向上を見出した。

（２８℃での分析）
　ＫＨ－１株およびＫＨ－２株の組み合わせの油脂分解能を２８℃においても試験した。

　キャノーラ油（日清キャノーラ油、日清オイリオ、東京）を終濃度で１％（ｖ／ｖ）含む無機塩培地（上記組成、ｐＨ７）に、ＫＨ－１株およびＫＨ－２株を、合計細胞濃度が５×１０^５細胞／ｍＬになるように、ＫＨ－１株：ＫＨ－２株＝１０：０、９：１、５：５、１：９、および０：１０（細胞数基準）の比でそれぞれ添加し、２８℃で培養した。１８時間培養した時点において取得した培養上清について、上記と同様にガスクロマトグラフィーによる全脂肪酸分析を行った。

（結果）
　ガスクロマトグラフィー分析の結果を図１７に示す。ＫＨ－１株およびＫＨ－２株の共生系は、種々の混合比率において各々の単独培養の油脂分解能の値から計算される油脂分解能を超える油脂分解能を示した。このように、ＫＨ－１株およびＫＨ－２株の共生系は、種々の温度域において高い油脂分解能を有する。

（実施例１８：共生系の脂肪酸分解能力の分析）
　種々の混合比率のＫＨ－１株およびＫＨ－２株の組み合わせの脂肪酸分解能を試験した。
（２８℃での分析）
　ＫＨ－１株およびＫＨ－２株の組み合わせの油脂分解能を２８℃において試験した。

　オレイン酸を終濃度で１％（ｖ／ｖ）含む無機塩培地（上記組成、ｐＨ７）に、ＫＨ－１株およびＫＨ－２株を、合計細胞濃度が５×１０^５細胞／ｍＬになるように、ＫＨ－１株：ＫＨ－２株＝１０：０、９：１、５：５、１：９、および０：１０（細胞数基準）の比でそれぞれ添加し、２８℃で培養した。１８時間培養した時点において取得した培養上清について、上記と同様にガスクロマトグラフィーによる全脂肪酸分析を行った。

（結果）
　ガスクロマトグラフィー分析の結果を図１８に示す。ＫＨ－１株およびＫＨ－２株の共生系は、種々の混合比率において各々の単独培養の場合を超える脂肪酸分解能を示した。このように、ＫＨ－１株およびＫＨ－２株の共生系は、高い脂肪酸分解能を有する非常に好ましい組み合わせであることが分かった。

（実施例１９：共生系における遺伝子発現）
　ＫＨ－１株およびＫＨ－２株の共生系において各々の遺伝子発現の変化を調べた。

（ＫＨ－１株の分析）
　まず、共生系におけるＫＨ－１株の遺伝子発現を分析した。

　手順は以下の通りであった。ＫＨ－１株およびＫＨ－２株をＬＢ培地で一晩培養後、ＰＢＳ緩衝液で２回洗浄し培地成分を除去した。キャノーラ油（日清キャノーラ油、日清オイリオ、東京）を終濃度で１％（ｖ／ｖ）含む無機塩培地（上記組成）３ＬにＯＤ_６６０の測定値が０．０２のＫＨ－１株単独、またはＯＤ_６６０の測定値がＫＨ－１株：ＫＨ－２株＝０．０１８：０．０２になるような菌体光学密度で各微生物を植菌した後、１５℃のファーメンターで培養した。７１時間培養後、Ｃｉｃａ　ｇｅｎｅｕｓ　ＲＮＡ　Ｐｒｅｐ　Ｋｉｔ（Ｆｏｒ　Ｔｉｓｓｕｅ）（関東化学）を使用して全ＲＮＡを抽出した。

　全ＲＮＡを鋳型とし、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ^ＴＭ　ＲＴ　ｒｅａｇｅｎｔ　Ｋｉｔ　ｗｉｔｈ　ｇＤＮＡ　Ｅｒａｓｅｒ　Ｐｅｒｆｅｃｔ　Ｒｅａｌ　Ｔｉｍｅ（タカラバイオ社）を使用して、ゲノムＤＮＡを除去し、ｃＤＮＡを合成した。その後、キットに付属の希釈溶液を使用してｃＤＮＡ原液を３倍に希釈した。ＫＨ－１株の第１のリパーゼおよび第２のリパーゼをコードする遺伝子に特異的な合成プライマーを使用して、Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（登録商標）　ＳｔｅｐＯｎｅＰｌｕｓ^ＴＭ　（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）により、定量リアルタイムＲＴ－ＰＣＲを行った。ここで、ＫＨ－１株の第１のリパーゼおよび第２のリパーゼとは、その代表的なアミノ酸配列および塩基配列が配列番号１～４で示されるものを指す。ＰＣＲ反応は、ＰｏｗｅｒＵｐ^ＴＭ　ＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ　Ｍａｓｔｅｒ　Ｍｉｘ（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）（１０μｌ）、各プライマー（終濃度０．５μＭ）、ｃＤＮＡ（１μｌ）を含む２０μｌ溶液中で実施した。ＰＣＲ反応はファストサイクリングモードを使用し、９５℃で２分の変性を１サイクル行った後、９５℃で３秒間、６０℃で３０秒間のサイクルを４０回反復するプログラムで行った。

　発現レベルは、ＲＮＡポリメラーゼ、シグマ７０（ｒｐｏＤ）の発現レベルで正規化した。データは溶融曲線がシングルピークであることを確認した後、比較Ｃｔ法（ΔΔＣｔ法）により解析した。

（結果）
　結果を図１９の左パネルに示す。ＫＨ－１株およびＫＨ－２株の共生系では、ＫＨ－１株単独と比較して、ＫＨ－１株の第１のリパーゼおよび第２のリパーゼの発現が予想外に向上していた。このことは、ＫＨ－２株の存在が、ＫＨ－１株のリパーゼ発現の増強を誘導することを示している。理論に束縛されることを望むものではないが、ＫＨ－２株により生じた油脂分解物が誘導物質として機能してＫＨ－１株のリパーゼの発現を活性化していると予想される。そのため、ヤロウィア酵母としては同様の油脂分解能を有する微生物が好適に使用され得、ブルクホルデリア細菌としては同様の感受性を有する株が好適に使用され得ると予想される。

（ＫＨ－２株の分析）
　同様に、共生系におけるＫＨ－２株の遺伝子発現を分析した。

　上記と同様に、ＫＨ－１株およびＫＨ－２株をＬＢ培地で一晩培養後、ＰＢＳ緩衝液で２回洗浄し培地成分を除去した。キャノーラ油（日清キャノーラ油、日清オイリオ、東京）を終濃度で１％（ｖ／ｖ）含む無機塩培地（上記組成）３Ｌに５×１０^５細胞／ｍＬのＫＨ－２株単独、または２．５×１０^５細胞／ｍＬのＫＨ－１株＋２．５×１０^５細胞／ｍＬのＫＨ－２株になるよう植菌した後、１５℃のファーメンターで４８時間培養した。

　上記のＫＨ－１株と同様に、全ＲＮＡを抽出し、ｃＤＮＡを合成し、ＫＨ－２株の第１のリパーゼ、第２のリパーゼのリパーゼをコードする遺伝子に特異的な合成プライマーを使用して、定量リアルタイムＲＴ－ＰＣＲを行った。ここで、ＫＨ－２株の第１のリパーゼ、第２のリパーゼとは、その代表的なアミノ酸配列および塩基配列が配列番号５～８で示されるものを指す。上記のＫＨ－１株と同様に、ＰＣＲ反応を行った。

　発現レベルは、アルファ－１，２－マンノシルトランスフェラーゼ（ａｌｇ９）の発現レベルで正規化した。データは溶融曲線がシングルピークであることを確認した後、比較Ｃｔ法（ΔΔＣｔ法）により解析した。

（結果）
　結果を図１９の右パネルに示す。ＫＨ－１株およびＫＨ－２株の共生系では、ＫＨ－２株単独と比較して、ＫＨ－２株の第１のリパーゼおよび第２のリパーゼの発現が予想外に向上していた。このことは、ＫＨ－１株の存在もまた、ＫＨ－２株のリパーゼ発現の増強を誘導することを示しており、ＫＨ－１株により生じた油脂分解物が誘導物質として機能してＫＨ－２株のリパーゼの発現を活性化していると予想される。そのため、ブルクホルデリア細菌としては同様の油脂分解能を有する微生物が好適に使用され得、ヤロウィア酵母としては同様の感受性を有する株が好適に使用され得ると予想される。

（実施例２０：共生系培養上清のリパーゼ活性）
　ＫＨ－１株およびＫＨ－２株の培養物上清のリパーゼ活性をモデル基質を使用して測定した。

　ＫＨ－１株およびＫＨ－２株をＬＢ培地で一晩培養後、ＰＢＳ緩衝液で２回洗浄し培地成分を除去した。キャノーラ油（日清キャノーラ油、日清オイリオ、東京）を終濃度で１％（ｖ／ｖ）含む無機塩培地（上記組成）３ＬにＯＤ_６６０の測定値が０．０２のＫＨ－１株単独、またはＯＤ_６６０の測定値がＫＨ－１株：ＫＨ－２株＝０．０１８：０．０２になるような菌体光学密度で各微生物を植菌した後、１５℃のファーメンターで培養した。その上清を、培養開始４８時間後および７１時間後に取得した。４－ニトロフェニルパルミテートまたは４－ニトロフェニルブチレートを３％（ｖ／ｖ）Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）　Ｘ－１００水溶液に添加して７０℃で加温し、終濃度５ｍＭの基質溶液を調製した。基質溶液、１５０ｍＭ　ＧＴＡ緩衝液（ｐＨ７．０）および培養上清をそれぞれ６０μＬずつ混合し、４１０ｎｍの吸光度（遊離の４－ニトロフェノール示す）を室温で１分間モニターした。

　結果を図２０に示す。ＫＨ－１株およびＫＨ－２株の共生系の培養上清は、ＫＨ－１株単独の培養上清と比較して、強力なリパーゼ活性を示した。このように、本開示の微生物の組み合わせは生産されたリパーゼにより種々の油脂を分解できることが理解される。

（実施例２１：他の株の同定）
　別種株の取得
　油脂含有排水が流出する食品工場近傍の河川から試料を採取し、そこから微生物を分離した。分離した微生物について、低温環境下（１５℃）でリパーゼを生産し、油脂を分解可能か調べた。その結果、低温で油脂を分解することができる微生物が見出された。これらの微生物株を、それぞれ、ＫＨ－１ＡＬ１株、ＫＨ－１ＡＬ２株、およびＫＨ－１ＡＬ３株と命名した。

　ＫＨ－１ＡＬ１株、ＫＨ－１ＡＬ２株、およびＫＨ－１ＡＬ３株をさらに特徴付けるために１６Ｓ　ｒＤＮＡの遺伝子配列解析を行った。
　ＫＨ－１ＡＬ１株は、１６Ｓ　ｒＤＮＡの部分塩基配列がBurkholderia　ambifariaに相同率１００％で一致したため、Burkholderia　ambifariaと同定された。
　ＫＨ－１ＡＬ２株は、１６Ｓ　ｒＤＮＡの部分塩基配列がBurkholderia　contaminansに相同率９９．９％で一致し、分子系統樹上ではB.　seminalis、B.　territorii、B.　cepacia（それぞれ、１６Ｓ　ｒＤＮＡの部分塩基配列における相同性は９９．７％、９９．７％、９９．８％）と同じ群に分類された。その結果、ＫＨ－１ＡＬ２株は、Burkholderia　cepacia　complexの細菌であると同定された。
　ＫＨ－１ＡＬ３株は、１６Ｓ　ｒＤＮＡの部分塩基配列がBurkholderia　contaminansに相同率９９．９％で一致し、分子系統樹上ではB.　seminalis、B.　territorii、B.　cepacia（それぞれ、１６Ｓ　ｒＤＮＡの部分塩基配列における相同性は９９．７％、９９．７％、９９．８％）と同じ群に分類された。その結果、ＫＨ－１ＡＬ３株は、Burkholderia　cepacia　complexの細菌であると同定された。
　Burkholderia　cepacia　complexとは、遺伝子的に非常に近いBurkholderia属の微生物の分類であり、ambifaria、anthina、arboris、cenocepacia、cepacia、contaminans、diffusa、dolosa、lata、latens、metallica、multivorans、pseudomultivorans、puraquae、pyrrocinia、seminalis、stabilis、stagnalis、territorii、ubonensis、およびvietnamiensisが含まれる（Martina　Pら、Int　J　Syst　Evol　Microbiol.　2018　Jan;68(1):14-20.）。
　分析の結果、Burkholderia　cepacia　complexに属する種々の細菌が、高い油脂および／または脂肪酸分解能力を示したため、Burkholderia　cepacia　complexに属する細菌は、特に有用に利用できると期待される。

　（実施例２２：他の組み合わせを用いた共生系）
　実施例１７と同様に、実施例８および２１で同定した代替株を加え、ＫＨ－１株、ＫＨ－１ＡＬ１株、ＫＨ－１ＡＬ３株の単独またはそれぞれの細胞数の１０分の１をＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株、またはＫＨ－２ＡＬ３株で置き換えた混合培養の比較を行い、油脂分解能を試験した。

　キャノーラ油（日清キャノーラ油、日清オイリオ、東京）を終濃度で１％（ｖ／ｖ）含む無機塩培地（上記組成、ｐＨ７）に、ＫＨ－１株、ＫＨ－１ＡＬ１株もしくはＫＨ－１ＡＬ３株の単独、またはこれらとＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株もしくはＫＨ－２ＡＬ３株との組み合わせを、合計細胞濃度が２×１０^６細胞／ｍＬになるように添加し、１５℃で培養した。４８時間培養した時点において取得した培養上清について、上記と同様に、油分測定試薬キット（共立理化学研究所、東京）（ポリニッパム抽出物質測定法による測定試薬キット）を使用して解析した。

（結果）
　各条件における結果を以下の表に示す。

　本開示のいずれのブルクホルデリア細菌についても、本開示のヤロウィア酵母と組み合わせることでさらなる油脂分解能の向上が観察された。このように、本開示のブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母の組み合わせは、予想外に優れた油脂分解能を達成する。

　（実施例２３：リパーゼによるトランス脂肪酸含有油脂の分解）
　実施例１９のＫＨ－１株の第１および第２のリパーゼによるトリエライジンの分解活性、ならびにＫＨ－２株の第１および第２のリパーゼによるトリエライジンの分解活性を調べる。

　ＫＨ－１株および／またはＫＨ－２株の培養物、または目的のリパーゼを発現させるように遺伝子導入した大腸菌株の培養物から、ＫＨ－１株の第１のリパーゼ、ＫＨ－１株の第２のリパーゼ、ＫＨ－２株の第１のリパーゼ、およびＫＨ－２株の第２のリパーゼを、疎水性カラムクロマトグラフィーなどによって精製する。これらの精製リパーゼとトリエライジンとを混合してトリエライジンの分解を調べる。

　ＫＨ－１株の第１および第２のリパーゼも、ＫＨ－２株の第１および第２のリパーゼも、トランス体のトリグリセリドであるトリエライジンを分解することが示された。本開示の共生系では、ＫＨ－１株の第１および第２のリパーゼ、ならびにＫＨ－２株の第１および第２のリパーゼの発現が向上し得るため（実施例１９）、トランス脂肪酸含有油脂を含め種々の油脂が効率的に分解されることが期待される。

（実施例２４：確認試験）
　油脂の分解の確認は、上記のガスクロマトグラフィー分析以外にも実施例３のような油分分析、薄層クロマトグラフィー分析などによって行ってもよい。

　実施例２０と同様に培養上清を取得し、これをキャノーラ油と混合してインキュベートする。ＫＨ－１株およびＫＨ－２株の共生系の培養上清は、ＫＨ－１株単独の培養上清と比較して、強力なリパーゼ活性を示す。

　実施例１７で試験したブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母の混合比以外でも、例えば、１９：１、１：１９などの細胞数比になるように添加し１５℃または２８℃で培養する。上記と同様に、いずれかの微生物単独よりも優れた油脂分解が確認され得る。

　ブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母それぞれの微生物の増殖曲線を作成し、その結果から所定の時間、例えば２４時間で得られる微生物量を求める。所定の時間内に調製できる各微生物量を組み合わせて油脂分解能を測定する。各々の単独培養の油脂分解能の値から計算される油脂分解能を超える油脂分解能が達成される組み合わせは、優れた油脂分解能を達成する。

　ブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母を混合培養により同時増殖させる。一定時間ごとに混合培養液をサンプリングし、それぞれの微生物濃度を算出することで、混合培養時における微生物の細胞濃度比を求める。一定時間、例えば２４時間培養後に得られる混合培養液を使って、その混合比における油脂分解能を調べる。各々の単独培養の油脂分解能の値から計算される油脂分解能を超えることを確認する。

（実施例２５：共生系で有用なブルクホルデリア細菌・ヤロウィア酵母の追加の代替株の取得）
　以下のようにして本開示の微生物の組み合わせにおいて使用され得る微生物の代替株が取得され得る。
　微生物保存ライブラリー、土壌、河川、湖水、活性汚泥など様々な分離源にＰＢＳを加えて希釈系列を調製し、キャノーラ油を唯一の炭素源とする無機塩寒天培地にスプレッディングする。植菌後の寒天培地を１５℃または２８℃で静置培養することでコロニーを得る。その中で、コロニー周辺にクリアゾーンを形成したものを中心にピックアップし、ＫＨ－１株、ＫＨ－１ＡＬ１株、ＫＨ－１ＡＬ３株、ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株、またはＫＨ－２ＡＬ３株とともにキャノーラ油添加無機塩培地に植菌し、１５℃または２８℃で培養する。培養後、培養上清の油脂の分解の程度を薄層クロマトグラフィーで解析することにより、ＫＨ－１株、ＫＨ－１ＡＬ１株、ＫＨ－１ＡＬ３株、ＫＨ－２株、ＫＨ－２ＡＬ１株、またはＫＨ－２ＡＬ３株単独と比較して優れた油脂分解能力を有する微生物を得る。

（実施例２６：装置内での使用）
　上記実施例と同様にブルクホリデリア細菌およびヤロウィア酵母を培養し、培養原液とする。これを希釈して微生物製剤とする。これを自動増幅投入装置の微生物保存タンク中に冷蔵保存し、種菌とする。この種菌を、同装置の培養増幅槽中の無機塩培地中に、適量ずつ自動植菌し、微生物数が微生物製剤と同様の細胞濃度になるまで培養する。これを油分解処理槽の排水量に対して適量投入することで、油処理水中の分解菌の微生物濃度を目的濃度に調整し、油脂を多く含む排水を排出する食品工場からの排水を分解処理する。その結果、微生物を投入しない対照例と比較して顕著なノルマルヘキサン値の低減が観察される。

（実施例２７：追加の応用例）
　消滅型生ゴミ処理機に適量のブルクホリデリア細菌およびヤロウィア酵母を植菌して適温で処理する。生ゴミ処理機から出る排水中のノルマルヘキサン値を測定する。微生物を投入しない対照例と比較して顕著な値の低減が観察される。

　浮上分離により回収した油性汚泥を培養槽に投入し、適量の無機塩培地を加える。ここに適量のブルクホリデリア細菌およびヤロウィア酵母を植菌し、攪拌曝気しながら、適温でインキュベートする。その後、処理済み液のノルマルヘキサン値による油分量の測定、あるいは水分を蒸発させた後に残った油を主成分とする残渣の重量を測定することにより、油性汚泥の分解・減少量を調べる。その結果、微生物を投入しない対照例と比較して顕著な油性汚泥分解が認められる。

　グリーストラップに木炭、各種プラスチック、セラミックス片などの担体を投入し、適量のブルクホリデリア細菌およびヤロウィア酵母を毎日、食堂の操業終了後に自動投入する。経時的に、操業開始直前に採水し、ノルマルヘキサン値を分析する。微生物を投入しない対照例と比較して顕著なノルマルヘキサン値の低下が認められる他、グルーストラップ自体の見た目も、油の付着や浮遊が減るなどの効果が認められる。

　（注記）
　以上のように、本開示の好ましい実施形態を用いて本開示を例示してきたが、本発明は、特許請求の範囲によってのみその範囲が解釈されるべきであることが理解される。本明細書において引用した特許、特許出願及び他の文献は、その内容自体が具体的に本明細書に記載されているのと同様にその内容が本明細書に対する参考として援用されるべきであることが理解される。

　本出願は、２０１９年９月６日に日本国特許庁に出願された特願２０１９－１６３２５２号および２０２０年１月８日に日本国特許庁に出願された特願２０２０－００１７４４号に対する優先権の利益を主張し、その内容全体が本明細書に援用される。

　本開示は、エステル（例えば、油脂）および／または脂肪酸分解能を有する微生物およびこれを含む組成物を提供し、このような微生物または組成物を使用することで、エステル（例えば、油脂）および／または脂肪酸を多く含む食品工場排水などによる環境負荷を低減させることができる。また、本開示は、油脂および／または脂肪酸分解能を有する微生物の組み合わせを提供し、このような微生物の組み合わせを使用することで、油脂および／または脂肪酸を多く含む食品工場排水などによる環境負荷を低減させることができる。

　ＫＨ－１（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２７３１）
　ＫＨ－１ＡＬ１（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２９７７）
　ＫＨ－１ＡＬ２（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２９７８）
　ＫＨ－１ＡＬ３（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２９７９）
　ＫＨ－２（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２７３２）
　ＫＨ－２ＡＬ１（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０９１）
　ＫＨ－２ＡＬ３（ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０９２）

配列番号１　ＫＨ－１株の第１のリパーゼの成熟塩基配列
配列番号２　ＫＨ－１株の第１のリパーゼの成熟アミノ酸配列
配列番号３　ＫＨ－１株の第２のリパーゼの成熟塩基配列
配列番号４　ＫＨ－１株の第２のリパーゼの成熟アミノ酸配列
配列番号５　ＫＨ－２株の第１のリパーゼの代表的塩基配列の成熟配列
配列番号６　ＫＨ－２株の第１のリパーゼの代表的アミノ酸配列の成熟配列
配列番号７　ＫＨ－２株の第２のリパーゼの代表的塩基配列の成熟配列
配列番号８　ＫＨ－２株の第２のリパーゼの代表的アミノ酸配列の成熟配列

Claims

　トランス脂肪酸を分解する能力を有する、ヤロウィア酵母。
　トランス脂肪酸含有油脂を分解する能力を有する、ヤロウィア酵母。
　１５℃においてエステルおよび／または脂肪酸を分解する能力を有する、ヤロウィア酵母。
　短鎖～中鎖脂肪酸含有エステルを分解する能力を有する、ヤロウィア酵母。
　短鎖～長鎖脂肪酸含有油脂を分解する能力を有する、ヤロウィア酵母。
　長鎖脂肪酸（Ｃ１３以上）の４－ニトロフェニルエステルよりも短鎖～中鎖脂肪酸（Ｃ２～Ｃ１２）の４－ニトロフェニルエステルに対して高い分解活性を有し、かつ、長鎖脂肪酸（Ｃ１３以上）のトリグリセリドを分解する能力を有する、ヤロウィア酵母。
　リパーゼを生産するブルクホルデリア細菌のリパーゼ生産を向上させる能力を有する、ヤロウィア酵母。
　ブルクホルデリア細菌の単独培養時の油脂または脂肪酸分解能よりも高い油脂または脂肪酸分解能を前記ブルクホルデリア細菌に付与する能力を有する、ヤロウィア酵母。
　前記ブルクホルデリア細菌はブルクホルデリア属細菌を含む、請求項７または８に記載のヤロウィア酵母。
　前記ブルクホルデリア細菌はブルクホルデリア　アルボリス（Burkholderia　arboris）、ブルクホルデリア　アンビファリア（Burkholderia　ambifaria）、またはブルクホルデリア　セパシア　コンプレックス（Burkholderia　cepacia　complex）を含む、請求項７～９のいずれか一項に記載のヤロウィア酵母。
　請求項１～６のいずれか一項または複数に記載のヤロウィア酵母の特徴、および
　請求項７～１０のいずれか一項または複数に記載のヤロウィア酵母の特徴、
を有する、ヤロウィア酵母。
　ヤロウィア　リポリティカ（Yarrowia　lipolytica）である、請求項１～１１のいずれか一項に記載のヤロウィア酵母。
　ヤロウィア　リポリティカＫＨ－２株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２７３２で特定される微生物株）、ヤロウィア　リポリティカＫＨ－２ＡＬ１株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０９１で特定される微生物株）、もしくはヤロウィア　リポリティカＫＨ－２ＡＬ３株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０９２で特定される微生物株）であるか、またはその誘導株であって該誘導株は、請求項１～１１のいずれか一項または複数に記載のヤロウィア酵母の特徴を有する、請求項１～１２のいずれか一項に記載のヤロウィア酵母。
　請求項１～１３のいずれか一項に記載のヤロウィア酵母を含む、油分解剤。
　さらなる油処理成分を含む、請求項１４に記載の油分解剤。
　（ａ）トランス脂肪酸を分解するため、
　（ｂ）トランス脂肪酸含有油脂を分解するため、
　（ｃ）１５℃においてエステルおよび／または脂肪酸を分解するため、
　（ｄ）短鎖～中鎖脂肪酸（Ｃ２～Ｃ１２）含有エステルを分解するため、および
　（ｅ）短鎖～長鎖脂肪酸（Ｃ２以上）含有油脂を分解するため
からなる群より選択される少なくとも１つのための、請求項１～１３のいずれか一項に記載のヤロウィア酵母、または請求項１４もしくは１５に記載の油分解剤を含む、組成物。
　請求項１～１３のいずれか一項に記載のヤロウィア酵母もしくは請求項１４または１５に記載の油分解剤と、または請求項１６に記載の組成物と、さらなる油処理成分とを備える、エステル分解のためのキット。
　請求項１～１３のいずれか一項に記載のヤロウィア酵母、または請求項１４もしくは１５に記載の油分解剤、または請求項１６に記載の組成物を処理対象に作用させることを包含する、エステル分解除去方法。
　前記処理対象はトランス脂肪酸またはトランス脂肪酸含有油脂を含む、請求項１８に記載の方法。
　（ａ）トランス脂肪酸を分解するステップ、
　（ｂ）トランス脂肪酸含有油脂を分解するステップ、
　（ｃ）１５℃においてエステルおよび／または脂肪酸を分解するステップ、
　（ｄ）短鎖～中鎖脂肪酸（Ｃ２～Ｃ１２）含有エステルを分解するステップ、および
　（ｅ）短鎖～長鎖脂肪酸（Ｃ２以上）含有油脂を分解するステップ、
からなる群より選択される少なくとも一つのステップを含む、請求項１８または１９に記載の方法。
　ブルクホルデリア細菌を含む、リパーゼを生産するヤロウィア酵母とリパーゼを生産するブルクホルデリア細菌との組み合わせで油脂または脂肪酸を処理するための組成物。
　ヤロウィア酵母を含む、リパーゼを生産するヤロウィア酵母とリパーゼを生産するブルクホルデリア細菌との組み合わせで油脂または脂肪酸を処理するための組成物。
　ブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母の組み合わせを含む油脂または脂肪酸処理のための組み合わせ物であって、該ブルクホルデリア細菌および該ヤロウィア酵母の両方がリパーゼを生産する、組み合わせ物。
　前記ヤロウィア酵母はヤロウィア　リポリティカ（Yarrowia　lipolytica）を含む、請求項２１～２３のいずれか一項に記載の組成物または組み合わせ物。
　前記ブルクホルデリア細菌はブルクホルデリア属細菌を含む、請求項２１～２４のいずれか一項に記載の組成物または組み合わせ物。
　前記ブルクホルデリア細菌はブルクホルデリア　アルボリス（Burkholderia　arboris）、ブルクホルデリア　アンビファリア（Burkholderia　ambifaria）、またはブルクホルデリア　セパシア　コンプレックス（Burkholderia　cepacia　complex）を含む、請求項２１～２５のいずれか一項に記載の組成物または組み合わせ物。
　前記ブルクホルデリア細菌およびヤロウィア酵母の組み合わせが、各々の単独培養の油脂または脂肪酸分解能の値から計算される油脂または脂肪酸分解能よりも高い油脂または脂肪酸分解能を有する、請求項２１～２６のいずれか一項に記載の組成物または組み合わせ物。
　前記ブルクホルデリア細菌の細胞数：前記ヤロウィア酵母の細胞数が、１：２０～２０：１である、請求項２１～２７のいずれか一項に記載の組成物または組み合わせ物。
　前記ブルクホルデリア細菌および前記ヤロウィア酵母の少なくとも１つが１５℃において脂肪酸を分解する能力を有する、請求項２１～２８のいずれか一項に記載の組成物または組み合わせ物。
　前記ブルクホルデリア細菌は、ブルクホルデリア属細菌ＫＨ－１株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２７３１で特定される菌株）、ＫＨ－１ＡＬ１株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２９７７で特定される菌株）、ＫＨ－１ＡＬ２株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２９７８で特定される菌株）もしくはＫＨ－１ＡＬ３株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２９７９で特定される菌株）、またはその誘導株である、請求項２１～２９のいずれか一項に記載の組成物または組み合わせ物。
　前記ヤロウィア酵母は、ヤロウィア　リポリティカＫＨ－２株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２７３２で特定される微生物株）、ヤロウィア　リポリティカＫＨ－２ＡＬ１株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０９１で特定される微生物株）、もしくはヤロウィア　リポリティカＫＨ－２ＡＬ３株（受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－０３０９２で特定される微生物株）、またはその誘導株である、請求項２１～３０のいずれか一項に記載の組成物または組み合わせ物。
　油分解剤である、請求項２１～３１のいずれか一項に記載の組成物または組み合わせ物。
　さらなる油処理成分を含む、請求項３２に記載の油分解剤。
　請求項２１～３１のいずれか一項に記載の組成物もしくは組み合わせ物、または請求項３２または３３に記載の油分解剤を処理対象に作用させることを包含する、油分解除去方法。
　ブルクホルデリア細菌を含む、リパーゼを生産するヤロウィア酵母のリパーゼ生産を向上させるための組成物。
　ヤロウィア酵母を含む、リパーゼを生産するブルクホルデリア細菌のリパーゼ生産を向上させるための組成物。
　ブルクホルデリア細菌を含む、リパーゼを生産するヤロウィア酵母の油脂または脂肪酸を処理する能力を強化するための組成物。
　ヤロウィア酵母を含む、リパーゼを生産するブルクホルデリア細菌の油脂または脂肪酸を処理する能力を強化するための組成物。
　ブルクホルデリア細菌とヤロウィア酵母とを混合して培養する工程を含む、該ブルクホルデリア細菌および該ヤロウィア酵母のうちの少なくとも１種のリパーゼ生産を向上させる方法。