WO2020073275A1 - 寡聚甘露糖醛酸在抑制总Tau表达、磷酸化和聚集中的应用 - Google Patents

Abstract

寡聚甘露糖醛酸作为总Tau蛋白的表达、Tau蛋白过度磷酸化和Tau蛋白聚集至少任意一种的抑制剂和在制备药物中的应用。寡聚甘露糖醛酸具有有效抑制总Tau的表达水平、Tau蛋白磷酸化和Tau蛋白聚集等功能，进而阻止Tau蛋白病的病理进程，另外，由于寡聚甘露糖醛酸无毒，从而可将寡聚甘露糖醛酸作为一种抗Tau蛋白病药物用于神经退行性疾病的治疗。

Description

寡聚甘露糖醛酸在抑制总Tau表达、磷酸化和聚集中的应用 技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体的是涉及一种寡聚甘露糖醛酸在抑制Tau蛋白聚集、总Tau蛋白表达以及过度磷酸化中的应用。

背景技术

Tau蛋白病是一种常见的神经退行性疾病，是一类在人脑中因神经元纤维缠结(NFT)的病理性聚集所致的神经变性疾病。Tau蛋白涉及微管的稳定，并主要位于中枢神经系统的神经元中。当Tau蛋白存在问题因此不再正确地稳定微管时，它们会导致如创伤性大脑损伤、额颞叶痴呆、进行性核上麻痹、皮克病、阿尔茨海默症等疾病。因此，Tau蛋白病的重要病理特征是过度磷酸化的Tau蛋白聚集形成神经纤维缠结。人Tau蛋白基因位于第17号染色体上，包含16个外显子，Tau蛋白基因可以通过转录后剪切编码为6种长短不同的Tau蛋白。完整的Tau蛋白包含N端突出区域、富含脯氨酸区和C端微管结合部位。C端主要包含4个微管结合重复序列：R1，R2，R3和R4。Tau蛋白又可分为三种类型，包括可溶性的非磷酸化Tau、异常磷酸化Tau、不溶性双螺旋丝状Tau。Tau蛋白的主要生理功能是与微管蛋白结合促进其聚合形成微管、维持微管稳定性、降低微管蛋白分子的解离、并诱导微管成束。

Tau蛋白是一种磷蛋白，在生理条件下，每个Tau蛋白分子含有1-3个磷酸基团，Tau蛋白可通过自身磷酸化水平来调节微管的组装及稳定，调节Tau蛋白的磷酸化水平主要依赖糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)和周期蛋白依赖性激酶5(CDK5)。但是在Tau蛋白病患者脑部，Tau蛋白的磷酸化水平是正常Tau蛋白的3-4倍。Tau蛋白的过度磷酸化，使其从微管上解离下来，失去对微管的调控作用，使得微管的正常组装无法进行。而从微管上解离下来的过度磷酸化Tau蛋白，自身会发生聚集，形成不溶性双螺旋丝状Tau，最终形成神经纤维缠结， 使神经元丧失基本形态，并且Tau蛋白在自身聚集过程也会产生神经毒性。

目前，治疗Tau蛋白病一般是根据Tau蛋白病的种类分别施药和实施治疗方案。比如根据具体神经退行性疾病各种治病机理研发的相关治疗药物，具体可以分为：抗氧化剂、抗炎剂和抗细胞凋亡剂等。其中，抗氧化剂包括依达拉奉、还原型谷胱甘肽、维生素E、乙酰半胱氨酸、司来吉兰、雷沙吉兰等，抗炎剂非甾体类消炎药NSAIDs、塞来昔布等，抗凋亡剂包括p53抑制剂等。尽管目前已有数十种治疗神经衰退型疾病的可筛选药物，而且许多动物实验也能肯定某些新药的疗效，但是在药物的临床实验中却不尽人意。

褐藻酸钠是一种来源于褐藻细胞壁的水溶性多糖，是由D-甘露糖醛酸和L-古罗糖醛酸通过1→4糖苷键连接而成的直链酸性多糖。大分子褐藻酸钠(褐藻胶)具有抗肿瘤、抗病毒和增强免疫等活性，褐藻多糖对人类许多重大疑难疾病都具有重要药理作用，但因其分子质量较大，1％的褐藻胶水溶液粘度可达10～2000cps，且其粘度随浓度的增大而增加，给生物活性的研究与应用带来极大的限制。国内外学者目前报道了一些关于褐藻寡糖的制备方法，如将褐藻胶分级后得到均聚甘露糖醛酸(PM)，通过降解PM得到寡聚甘露糖醛酸(MOS)，但是目前仅仅报道了寡聚甘露糖醛酸在抗甲型H1N1流感病毒方面的应用，然而，至今没有发现寡聚甘露糖醛酸用于防治Tau蛋白病中应用的相关报道。

技术问题

本发明的目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种寡聚甘露糖醛酸作为Tau蛋白病相关抑制剂或者药物中的应用，以解决现有治疗Tau蛋白病的药物临床中药效不理想的技术问题。

技术解决方案

为了实现上述发明目的，本发明的一方面，提供了寡聚甘露糖醛酸的一种应用方法。所述寡聚甘露糖醛酸作为总Tau蛋白的表达、Tau蛋白过度磷酸化和Tau蛋白聚集至少任意一种的抑制剂的应用。

优选地，所述寡聚甘露糖醛酸作为Tau蛋白在丝氨酸202、262、396、404位点磷酸化抑制剂的应用。

优选地，所述寡聚甘露糖醛酸作为GSK-3β活性抑制剂的应用。

优选地，所述Tau蛋白为具有表达Tau蛋白的细胞的Tau蛋白和/或原代神经元的Tau蛋白。

优选地，所述GSK-3β为原代神经元的GSK-3β。

具体地，所述原代神经元包括转TauP301L原代神经元。

优选地，所述寡聚甘露糖醛酸的聚合度为2-11。

本发明的另一方面，提供了寡聚甘露糖醛酸在制备预防/治疗Tau蛋白病药物中的应用。

本发明的再一方面，提供了一种预防/治疗Tau蛋白病的药物。所述预防/治疗Tau蛋白病的药物包括有效剂量的寡聚甘露糖醛酸。

本发明的又一方面，本发明还提供了一种抑制Tau蛋白过度磷酸化的方法。所述抑制Tau蛋白过度磷酸化的方法包括将有效剂量的寡聚甘露糖醛酸或预防/治疗Tau蛋白病的药物与具有表达Tau蛋白的细胞或Tau蛋白接触的步骤。

同时，提供了一种抑制Tau蛋白聚集的方法。所述抑制Tau蛋白聚集的方法包括将有效剂量的寡聚甘露糖醛酸或所述预防/治疗Tau蛋白病的药物与Tau蛋白接触的步骤。

本发明还提供了一种抑制原代神经元GSK-3β活性的方法。所述抑制原代神经元GSK-3β活性的方法将有效剂量的寡聚甘露糖醛酸或所述预防/治疗Tau蛋白病的药物与原代神经元或GSK-3β接触的步骤。

有益效果

与现有技术相比，本发明寡聚甘露糖醛酸具有以下有益效果：

经实验证明，所述寡聚甘露糖醛酸具有相对较强的抑制总Tau的表达、Tau蛋白磷酸化和Tau蛋白聚集等的功能，因此，将所述寡聚甘露糖醛酸作为总Tau的表达、Tau蛋白过度磷酸化和Tau蛋白聚集至少任意一种的抑制剂后，能够 起到有效抑制总Tau的表达、抑制Tau蛋白过度磷酸化和聚集等作用。

本发明寡聚甘露糖醛酸在制备预防/治疗Tau蛋白病药物中的应用后以及基于其该应用制备的预防/治疗Tau蛋白病药物能够用于抑制相应细胞或者原代神经元过表达Tau蛋白，同时抑制Tau蛋白过度磷酸化和异常聚集，从而最终起到预防/治疗Tau蛋白病的作用。另外，由于寡聚甘露糖醛酸无毒，其疗效好、毒副作用小。

附图说明

下面将结合附图及实施例对本发明作进一步说明，附图中：

图1为实施例1中MOS体外抑制肝素诱导的Tau蛋白聚集实验中实验组和对照组发生聚集Tau蛋白的荧光强度随着时间变化曲线图；

图2为实施例2中MOS抑制HEK293/Tau细胞Tau蛋白磷酸化实验中实验组和对照组总Tau蛋白Tau蛋白在丝氨酸202、262、396、404位点的磷酸化水平图；

图3为实施例2中MOS抑制TauP301L小鼠原代神经元Tau蛋白磷酸化实验中实验组和对照组总Tau蛋白以及Tau蛋白在丝氨酸202、262、396、404位点的磷酸化水平图；

图4为实施例3中MOS抑制TauP301L小鼠原代神经元GSK3β活性实验中实验组和对照组的GSK3β活性图。

本发明的实施方式

为了使本发明要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例与附表，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

专用名称的解释：

寡聚甘露糖醛酸(MOS)，其分子结构如下式所示：

Tau蛋白：一种磷蛋白，在生理条件下，每个Tau蛋白分子含有1-3个磷酸基团，为微管相关蛋白(microtubule-associated proteins,MAP)家族主要成员，具有高度可溶性，是由17号染色体长臂上的单基因编码。Tau蛋白可通过自身磷酸化水平来调节微管的组装及稳定，调节Tau蛋白的磷酸化水平主要依赖糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)和周期蛋白依赖性激酶5(CDK5)。

Tau蛋白病：是微管结合蛋白的一种Tau蛋白的异常疾病的总称，是一种常见的神经退行性疾病，是一类在人脑中因神经元纤维缠结(NFT)的病理性聚集所致的神经变性疾病。

糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)：是一种在进化上非常保守的丝氨酸/苏氨酸激酶。GSK-3β是调控Tau蛋白磷酸化的一个重要激酶，其在酪氨酸216位点的磷酸化，能够提高其激酶活性；但是，其在丝氨酸9位点的磷酸化却能抑制其激酶活性。另外，蛋白激酶B(Akt)则是调控GSK-3β活性的重要激酶，它可通过磷酸化GSK-3β丝氨酸9位点来降低GSK-3β的活性。

本发明的发明人基于大量研究发现，寡聚甘露糖醛酸具有相对较强的抑制总Tau的表达、Tau蛋白磷酸化和Tau蛋白聚集等等相关能力，基于此，本发明实施例提供了寡聚甘露糖醛酸在下文相关方面的应用。

一方面，本发明实施例提供了寡聚甘露糖醛酸作为总Tau的表达、Tau蛋白过度磷酸化和Tau蛋白聚集至少任意一种的抑制剂的应用。经发明人构建的相关实验得知，所述寡聚甘露糖醛酸作为活性成分，能够有效抑制Tau蛋白的过度磷酸化和Tau蛋白的聚集，还具有抑制总Tau的表达水平。

如在一实施例中，所述寡聚甘露糖醛酸具有抑制Tau蛋白在丝氨酸202、 262、396、404位点磷酸化的功能，具体如具有抑制具有表达Tau蛋白的细胞中Tau蛋白在丝氨酸202、262、396、404位点磷酸化的功能。因此，所述寡聚甘露糖醛酸可以被作为Tau蛋白在丝氨酸202、262、396、404位点磷酸化抑制剂，具体是可以在具有表达Tau蛋白的细胞中作为Tau蛋白在丝氨酸202、262、396、404位点磷酸化抑制剂的应用，以及进一步可以用于制备抑制Tau蛋白磷酸化如抑制Tau蛋白丝氨酸202、262、396、404位点磷酸化的相关药物，从而有效抑制Tau蛋白的磷酸化，如避免Tau蛋白的过度磷酸化，从而避免其从微管上解离下来，保证对微管的调控作用，使得微管的正常组装，从而实现对Tau蛋白病的预防和治疗作用。

在另一实施例中，研究发现所述寡聚甘露糖醛酸具有抑制GSK-3β活性的功能，如抑制具有表达Tau蛋白的细胞的GSK-3β活性的功能。因此，所述寡聚甘露糖醛酸可以被用于GSK-3β活性抑制剂，以及进一步可以用于制备抑制GSK-3β活性的药物，从而有效抑制GSK-3β的活性，进而抑制Tau蛋白的磷酸化，如避免Tau蛋白的过度磷酸化，保证对微管的调控作用，使得微管的正常组装，从而实现对Tau蛋白病的预防和治疗作用。

在具体实施例中，上文所述的具有表达Tau蛋白的细胞包括HEK293/Tau细胞和原代神经元。如在所述寡聚甘露糖醛酸作为Tau蛋白磷酸化抑制剂的实施例中，所述Tau蛋白可以是包括HEK293/Tau细胞和原代神经元等的Tau蛋白。在所述寡聚甘露糖醛酸作为GSK-3β活性抑制剂的实施例中，所述Tau蛋白可以是包括原代神经元等的Tau蛋白，具体可以但不仅仅为转TauP301L原代神经元。

基于上文所述寡聚甘露糖醛酸具有抑制总Tau的表达水平、Tau蛋白磷酸化和Tau蛋白聚集至少任意一种的功能和作用，因此，所述寡聚甘露糖醛酸可以被用于制备预防/治疗Tau蛋白病药物。这样，在制备的预防/治疗Tau蛋白病药物中，所述寡聚甘露糖醛酸是作为抑制总Tau的表达水平、Tau蛋白磷酸化和Tau蛋白聚集至少任一种的有效成分，从而实现预防/治疗Tau蛋白病。

另一方面，基于上文所述寡聚甘露糖醛酸所具有抑制总Tau的表达、Tau蛋白磷酸化和Tau蛋白聚集至少任意一种的功能，本发明实施例还提供了一种预防/治疗Tau蛋白病的药物。所述药物包括有效剂量的具有预防/治疗Tau蛋白病的活性成分。其中，所述活性成分包括寡聚甘露糖醛酸，当然，所述活性成分还可以包括能够有效抑制抑制总Tau的表达水平、Tau蛋白磷酸化和Tau蛋白聚集至少任意一种相关性能的其他活性成分，此处所述的“有效”是单独预防或治疗Tau蛋白病有临床效果的成分，也可以是与寡聚甘露糖醛酸进行复合后能够提高寡聚甘露糖醛酸预防或治疗Tau蛋白病有临床效果的成分。所述“有效剂量”是指能够预防或治疗Tau蛋白病的有效量，是指足以对个体显示益处或临床意义的寡聚甘露糖醛酸的量。本领域技术人员将会理解，给药的实际量或剂量以及给药时程将取决于被预防或治疗的疾病的性质和严重性、被预防或治疗的受试者的年龄和一般状况以及给药方式等。如在一实施例中，所述寡聚甘露糖醛酸的有效剂量可以是为1mg/mL。

另外，所述预防/治疗Tau蛋白病的药物还可以进一步包括药学上可接受的寡聚甘露糖醛酸的载体成分。所述药学上可接受的寡聚甘露糖醛酸的载体成分可以根据所述Tau蛋白病药物给药方式制备的相应剂型的相应载体。如在一实施例中，所述载体包括但不仅仅是矫味剂、天然高分子化合物中的至少一种。只要是能够负载所述寡聚甘露糖醛酸，并有利于其稳定和被吸收的符合医药要求的载体均在本发明公开的范围。因此，所述预防/治疗Tau蛋白病的药物可以根据临床给药的需要进行选择相应的所述载体类型，从而呈现相应的剂型。

另外，上述各实施例中所述的Tau蛋白病包括创伤性大脑损伤、额颞叶痴呆、进行性核上麻痹、皮克病、阿尔茨海默症等中的至少一种。

因此，所述预防/治疗Tau蛋白病的药物由于含有上文的寡聚甘露糖醛酸，由此，所述药物能够有效抑制总Tau蛋白的表达、Tau蛋白过度磷酸化和Tau蛋白聚集至少任意一种等作用，由此赋予所述预防/治疗的药物有效的预防/治疗Tau蛋白病作用。另外，由于寡聚甘露糖醛酸为寡糖，疗效好、毒副作用小， 安全，因而适宜。

又一方面，基于上文所述寡聚甘露糖醛酸的应用和含有所述寡聚甘露糖醛酸的药物，一实施例中，本发明实施例提供了一种抑制Tau蛋白过度磷酸化的方法。所述方法包括将有效剂量的所述寡聚甘露糖醛酸或上文所述预防/治疗Tau蛋白病的药物与具有表达Tau蛋白的细胞或Tau蛋白接触的步骤。通过所述方法能够有效抑制Tau蛋白发生磷酸化，特别是抑制Tau蛋白的过度磷酸化，具体的如抑制Tau蛋白在丝氨酸202、262、396、404位点磷酸化，从而避免其从微管上解离下来，保证对微管的调控作用，使得微管的正常组装。其中，具有表达Tau蛋白的细胞如上文所述的，可以是HEK293/Tau细胞和原代神经元如转TauP301L原代神经元。

另一实施例中，本发明实施例提供了一种抑制Tau蛋白聚集的方法。所述方法包括将有效剂量的所述寡聚甘露糖醛酸或上文所述预防/治疗Tau蛋白病的药物与Tau蛋白接触的步骤。通过所述方法能够有效抑制Tau蛋白的聚集，从而避免由于Tau蛋白的聚集形成不溶性双螺旋丝状Tau，最终形成神经纤维缠结。

另一实施例中，本发明实施例还提供了一种抑制GSK-3β活性的方法。所述方法包括将有效剂量的所述寡聚甘露糖醛酸或上文所述预防/治疗Tau蛋白病的药物与原代神经元或GSK-3β接触的步骤，从而实现抑制GSK-3β如原代神经元的GSK-3β活性。通过所述方法能够有效抑制GSK-3β的活性，从而抑制Tau蛋白的磷酸化，如避免Tau蛋白的过度磷酸化，进而避免Tau蛋白的聚集，保证对微管的调控作用。

另外，上文所述寡聚甘露糖醛酸可以按照现有常规方法制备获得，具体可以按照下述实施例中方法制备获得寡聚甘露糖醛酸。另外，上文各实施例中的寡聚甘露糖醛酸的聚合度是2-11。

现结合具体实例，对寡聚甘露糖醛酸用于抑制总Tau表达、磷酸化和聚集等应用进行进一步详细说明。

下述各实施例中实验原料以及相关试剂：

本实验的褐藻酸钠、肝素购于Sigma公司；DMEM培养基、青霉素、链霉素购于美国Hyclone公司；胎牛血清购于BI公司；细胞裂解液购于上海博彩生物科技公司；HT7、Tau5、p-Tau单克隆抗体购于德国CST公司；显影液、定影液购于Thermo Fisher Scientific公司。

寡聚甘露糖醛酸：将褐藻酸钠溶于0.5M HCl中，于90℃加热7h后期静置过夜使其分层。然后3500rpm低速离心10min得到沉淀备用。沉淀用8％NaHCO ₃溶液溶解后，用HCl调pH至2.85，静置分层，3500rpm低速离心10min后，收集上清液。向上清液中加入3倍体积的无水乙醇，醇沉24h，3500rpm低速离心得PM。称取一定量PM溶解于PBS中，加一定量的褐藻胶裂解酶，于37℃条件下恒温反应2h后，再加入等量酶液，于37℃继续反应24h；待反应结束后80℃水浴加热10min，使酶失活，冷却后用0.45μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥得到寡聚甘露糖醛酸(MOS)。

取MOS配制成浓度为1mg/ml的溶液，溶于50％MeOH和1mM NH ₄OH。设置LCMS-IT-TOF质谱仪检测条件为：Flowrate：7.5μl/min；Interface：-3.5kV；Nebulizer gas：0.5l/min；CDL temperature：200℃。通过LC/MS-IT-TOF质谱仪确定MOS的聚合度是2-11。

实施例1.MOS体外抑制肝素诱导的Tau蛋白聚集的实验：

方法：寡聚体Tau蛋白由深圳大学生命与海洋科学学院肖时锋老师馈赠。将以Tau蛋白+水、Tau蛋白+肝素作为两组对照组，实验组为：200μM寡聚体Tau蛋白加入黑色酶标板中，再分别加入硫黄素T、Tris-HCl缓冲液、肝素以及1mg/ml MOS。利用全波长荧光酶标仪，在发射光为440nm、激发光为485nm下，连续检测20h，获得各组荧光值，并用荧光值制图。

结果：通过该检测得知，在体外，利用肝素诱导Tau蛋白的聚集，向体系中加入MOS，可以有效抑制Tau蛋白聚集的发生，结果如图1所示。

实施例2.MOS降低HEK293/Tau细胞和转TauP301L小鼠原代神经元Tau 蛋白磷酸化的实验：

方法：

a.MOS降低HEK293/Tau细胞Tau蛋白磷酸化方法：实验组：将HEK293/Tau细胞(2×10 ⁶个/孔)贴壁于6孔板中，4-6h后，弃上清，加入1mg/ml MOS处理24h后，利用细胞裂解液提取总蛋白；对照组：参照实验组方法，但是不添加1mg/ml MOS；待完毕后再利用Western Blot检测的总Tau以及磷酸化Tau蛋白的表达量。

b.MOS降低转TauP301L小鼠原代神经元Tau蛋白磷酸化方法：实验组：将转TauP301L小鼠和野生型小鼠原代神经元接种在6孔板上(7×10 ⁵个/孔)，加1mg/ml MOS处理24h后，利用细胞裂解液提取总蛋白；对照组：参照实验组方法，但是不添加1mg/ml MOS；待完毕后再利用Western Blot检测的总Tau以及磷酸化Tau蛋白的表达量。

结果：

利用Western Blot法检测发现，HEK293/Tau细胞经MOS处理，其过表达的Tau蛋白能够被显著地下调；同时，Tau蛋白在丝氨酸202、262、396、404位点的磷酸化水平均有明显地下降，具体如图2所示。

在转TauP301L小鼠原代神经元中，与野生型小鼠原代神经元相比，其Tau蛋白在丝氨酸202、262、396、404位点的磷酸化水平及总Tau蛋白的水平均有显著性升高。但经MOS处理后，Tau蛋白在上述位点的磷酸化水平均会显著性下降，如图3所示。

实施例3.MOS抑制转TauP301L小鼠原代神经元GSK-3β活性的实验：

方法：实验组：将转TauP301L小鼠和野生型小鼠原代神经元接种在6孔板上(7×10 ⁵个/孔)，加1mg/ml MOS处理24h后，利用Western Blot法检测了MOS对转TauP301L小鼠原代神经元的GSK-3β和Akt磷酸化水平的影响；对照组：参照实验组方法，但是不添加1mg/ml MOS。

结果：

利用Western Blot法检测了MOS对转TauP301L小鼠原代神经元的GSK-3β和Akt磷酸化水平影响的结果如图4所示。实验结果表明，与野生型小鼠原代神经元相比，转TauP301L小鼠原代神经元的Akt磷酸化水平有所降低，总GSK-3β及其酪氨酸216位点的磷酸化水平升高，丝氨酸9位点的磷酸化水平降低，表明转TauP301L小鼠原代神经元的GSK-3β活性要高于野生型。经过MOS处理后，转TauP301L小鼠原代神经元的Akt磷酸化水平升高，GSK-3β在丝氨酸9位点的磷酸化水平升高，并且总GSK-3β的表达量减少，表明MOS能够降低转TauP301L小鼠原代神经元的GSK-3β活性。

因此，由上述实施例1-3实验结果可知，所述MOS能够有效抑制如体外抑制Tau蛋白聚集，进而抑制神经纤维缠结的形成；所述MOS可以降低HEK293/Tau细胞中Tau蛋白在丝氨酸202、262、396、404位点的磷酸化水平，并且降低总Tau蛋白的表达；所述MOS可以降低转TauP301L小鼠原代神经元中Tau蛋白在丝氨酸202、262、396、404位点的磷酸化水平；所述MOS可以抑制转TauP301L小鼠抑制糖原合成酶激酶3β的活性。基于所述MOS的该功能，进而所述MOS可以阻止Tau蛋白病的病理进程，表明MOS可能作为一种新型抗Tau蛋白病药物用于神经退行性疾病的治疗。

以上所述的实施例仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1. 寡聚甘露糖醛酸作为总Tau蛋白的表达、Tau蛋白过度磷酸化和Tau蛋白聚集至少任意一种的抑制剂的应用。
2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述寡聚甘露糖醛酸作为Tau蛋白在丝氨酸202、262、396、404位点磷酸化抑制剂的应用；和/或

   所述寡聚甘露糖醛酸作为GSK-3β活性抑制剂的应用。
3. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述Tau蛋白为具有表达Tau蛋白的细胞的Tau蛋白和/或原代神经元的Tau蛋白；

   所述GSK-3β为原代神经元的GSK-3β。
4. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述原代神经元包括转TauP301L原代神经元。
5. 根据权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于：所述寡聚甘露糖醛酸的聚合度为2-11。
6. 寡聚甘露糖醛酸在制备预防/治疗Tau蛋白病药物中的应用。
7. 一种预防/治疗Tau蛋白病的药物，其特征在于：包括有效剂量的寡聚甘露糖醛酸。
8. 一种抑制Tau蛋白过度磷酸化的方法，其特征在于：包括将有效剂量的寡聚甘露糖醛酸或权利要求7所述的药物与具有过表达Tau蛋白的细胞或Tau蛋白接触的步骤。
9. 一种抑制Tau蛋白聚集的方法，其特征在于：包括将有效剂量的寡聚甘露糖醛酸或权利要求7所述的药物与Tau蛋白接触的步骤。
10. 一种抑制GSK-3β活性的方法，其特征在于：包括将有效剂量的寡聚甘露糖醛酸或权利要求7所述的药物与原代神经元或GSK-3β接触的步骤。

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