WO2020027701A1 - Pharmaceutical composition intended for treating skin burn injuries - Google Patents

Pharmaceutical composition intended for treating skin burn injuries Download PDF

Info

Publication number
WO2020027701A1
WO2020027701A1 PCT/RU2019/050120 RU2019050120W WO2020027701A1 WO 2020027701 A1 WO2020027701 A1 WO 2020027701A1 RU 2019050120 W RU2019050120 W RU 2019050120W WO 2020027701 A1 WO2020027701 A1 WO 2020027701A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
asn
glu
gly
arg
thr
Prior art date
Application number
PCT/RU2019/050120
Other languages
French (fr)
Russian (ru)
Inventor
Карэн Акопович ДАДАЯН
Евгений Владимирович ЗИНОВЬЕВ
Юрий Александрович ЗОЛОТАРЕВ
Александр Карэнович ДАДАЯН
Марат Сергеевич АСАДУЛАЕВ
Илья Валерьевич АРЦИМОВИЧ
Андрей Андреевич ЖИЛИН
Original Assignee
Карэн Акопович ДАДАЯН
Евгений Владимирович ЗИНОВЬЕВ
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Карэн Акопович ДАДАЯН, Евгений Владимирович ЗИНОВЬЕВ filed Critical Карэн Акопович ДАДАЯН
Priority to FI20215223A priority Critical patent/FI129856B/en
Publication of WO2020027701A1 publication Critical patent/WO2020027701A1/en

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/32—Macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. carbomers, poly(meth)acrylates, or polyvinyl pyrrolidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like

Definitions

  • the invention relates to medicine, namely to the development and use of a new pharmaceutical product intended for the treatment of burn skin lesions.
  • a hydrogel containing the regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 is a promising method for optimizing the course of the processes of reparative regeneration in case of skin burns.
  • the RF patent No. 2557003 for the amide form of this regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 offers it as a neuroprotective and nootropic agent aimed at the prevention and treatment of Alzheimer's disease and ischemic stroke (Patent of the Russian Federation for the invention No. 2557003 dated 06/22/2015).
  • a patent is also known for the use of the regulatory hexapeptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 as an anxiolytic agent for the prevention and treatment of anxiety disorders (Patent of the Russian Federation for the invention No. 2580311 of 03/14/2016).
  • the regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 proposed as a pharmaceutical composition for treating burns, whose structure corresponds to the differentiation factor fragment 41TGENHR46, is present in the blood and central nervous system of mammals (Sewell et al., 2005).
  • the regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 is known to have a protective effect on brain hippocampal cells, protecting them from degradation caused by the toxic effect of the amyloid peptide (Kostanyan et al., 2006).
  • NMDA receptors are a functional target for the specific pharmacological effect of the regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 (Zolotarev et al., 2016).
  • the specific neuroprotective activity of the regulatory peptide is also associated with stimulation of neurosteroidogenesis, inhibition of 5-alpha reductase expression and restoration of steroid levels in pathology almost to the norm (Rzhevsky et al., 2005).
  • the protective and nootropic effects of the regulatory peptide on the model of Alzheimer's disease are expressed in the almost complete restoration of memory as a result of its chronic use (Bogachouk et al., 2016).
  • a feature of the action of the regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 is that it has a normalizing effect on pathology, while on control animals it does not adversely affect even at a dose hundreds of times higher than the therapeutic one (Lipkin et al., 2016).
  • the regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg fully retains the differentiating activity of the full-sized factor to induce differentiation and inhibit cell proliferation, including HL-60 (Kostanyan et al., 2000).
  • the regulatory peptide has the ability to interact with lipids of cell membranes, which affects the activity of cytokines involved in the proliferation and differentiation of cells along the granulocytic pathway (Sysoeva et al., 2009). It was shown that the regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg enhances redox processes in cells and increases the metabolic activity of macrophages (Danilenko et al., 2005).
  • the invention relates to medicine, in particular to the development and use of a new pharmaceutical composition intended to optimize the course of reparative regeneration processes in case of skin burns.
  • the use of the peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 as a regulatory, protective, normalizing and anti-inflammatory agent for the treatment of burn skin lesions is proposed.
  • a new composition of the anti-burn agent is proposed containing the active substance in the form of the indicated regulatory peptide (0.1-100 mg / l), a rare cross-linked acrylic polymer, Carbopol ETD 2020 (4.5 g / l), and the rest is distilled water.
  • the composition is highly effective in low doses of the regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 and is simple to use: it is used as a hydrogel.
  • the proposed pharmaceutical composition may find application in clinical practice for the treatment of burn skin lesions.
  • the technical task of this invention is the discovery of a regulatory peptide, Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 , which has antitumor, neuroprotective, nootropic and anxiolytic activity, anti-burn activity, which will determine the possibility of its use in low concentrations as a drug, in the form of a convenient dosage form (as part of a hydrogel) without undesirable side effects with good tolerance.
  • the pharmaceutical composition of the anti-burn pharmaceutical composition containing the active substance dissolved in the hydrogel contains the regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 as the active component, and Carbopol ETD 2020 as the rare cross-linked acrylic polymer, and in the following ratio of components: Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 regulatory peptide 0.1-100 mg / L Rare crosslinked acrylic polymer, Carbopol ETD 2020, - 4.5 g / l Distilled Water - Else The dosage form is given the name Healingel .
  • the use of the regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 for the treatment of burn injuries allows one to obtain a stable course of the process of reparative regeneration even at low concentrations of the peptide in the hydrogel without any undesirable side effects.
  • the severity of the anti-burn effect of this new drug which occurs against the background of traditional therapy for severe burn injuries, is realized in the form of acceleration of wound epithelization by 28 days by 71.11% (p ⁇ 0.01) and a decrease in the incidence of purulent complications by 62.5 % (p ⁇ 0.05).
  • Fig. 1 Group No. 1 (HLDF-6, 100 mg / l), day 14, massive neutrophilic leukocyte infiltration of granulation tissue, fibrin on its surface. Stained with hematoxylin, eosin, X50.
  • Fig. 2 The average number of microvessels in granulation tissue. 1 - 0.01%, 2 - 0.001%, 3 - 0.0001%, 4 - 0.00001%, 5 - hydrogel without a peptide, 6 - necrectomy.
  • Fig. 3. Group No. 4 (HLDF-6 0.1 mg / L), 28 days, coarse-fibrous connective tissue with focal lymphocyte and macrophage infiltration. Hematoxylin eosin stain, X100.
  • Fig. 4. Group No. 6 (necrectomy without treatment), 28 days, granulation tissue at the bottom of the defect. Stained with hematoxylin, eosin, X150.
  • Example 1 Study of the effect of a solution of the regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 in a hydrogel based on Carbopol ETD 2020 on the effectiveness of local treatment of skin burns.
  • the experiment involved 48 male rats of the Wistar-Kyoto strain weighing 230-250 g. All manipulations were performed under general inhalation anesthesia under aseptic conditions. The burn was reproduced according to our own original methodology (rationalization proposal of VMedA named after S.M. Kirov No. 14287/1 from 01/19/2016). After preparing the surgical field, the animal was fixed to the laboratory table. The burn area is 16 cm 2 (about 10% of body area).
  • an Electroline multimeter thermometer pair Electroline (China) was placed, which determined the temperature of the skin and the metal heating plate. Exposure time 10 s. at a temperature on the surface of the skin 95-97 o C.
  • a pharmaceutical composition for application to the wound surface was prepared by dissolving the Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 regulatory peptide in various dilutions in a Carbopol ETD 2020 based hydrogel (0.45%). A hydrogel containing the regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 was applied daily to the wound surface for 7 days.
  • Biological samples for histological examination were selected on days 14 and 28; they were fixed in 10% formalin solution, followed by passing through ascending alcohols (30-96%) and filling them with paraffin. Histological sections were stained with hematoxillin and eosin, examined by light microscopy. A histological examination of wound biopsy samples revealed that on the 14th day of observation, the morphological picture in the burn zone had a number of features, taking into account the choice of treatment method.
  • the postoperative wound in various groups of animals was of various sizes, covered with masses of fibrin, densely infiltrated with neutrophilic leukocytes (Fig. 1). The bottom of the wound defect is represented by granulation tissue that extends up to the muscle fascia.
  • Macrophages and neutrophils are located diffusely; surface layers are most densely infiltrated. In the areas adjacent to the fascia, small foci of lymphocyte infiltration are noted. In group No. 4 (HLDF-6 0.1 mg / L), mixed-cell infiltration slightly spread to the surrounding tissues, while in group No. 1 (HLDF-6 100 mg / L), No. 2 (HLDF-6 10 mg / l) and No. 3 (HLDF-6 1 mg / l), quite large foci of subepidermal leukocyte infiltration were detected. In group No. 5 (hydrogel without HLDF-6), neutrophilic leukocytes are located not only in the dermis, but also in the epidermis itself, forming a few microabscesses.
  • granulation tissue In addition, in the granulation tissue, numerous, proliferating, full-blooded vessels of the capillary type are determined. The number of microvessels in granulation tissue in the groups varied significantly (Fig. 2). On day 28, the bottom of the defect was represented by coarse-fibrous connective tissue with a large number of large fibroblasts (Fig. 3). Focal infiltration by lymphocytes and macrophages is preserved in the connective tissue. In groups No. 1 (HLDF-6 100 mg / L) and No. 4 (HLDF-6 0.1 mg / L) with a small number of neutrophilic leukocytes, while in groups No. 2 (HLDF-6 10 mg / L) and 3 (HLDF-6 1 mg / L) their amount is moderate. In group No.
  • a layer of granulation tissue with large focal infiltration mainly neutrophilic leukocytes, was located at the bottom of the defect (Fig. 4).
  • the foci were localized directly under the fibrinous exudate, on the surface of the defect.
  • the vessels in the tissue at the bottom of the defect are full-blooded, represented by multiple capillaries and a few, small venules, with proliferating endothelium.
  • the epidermis along the edges of the defect with severe acanthosis, hyperkeratosis and small focal leukocyte infiltration.
  • Zinoviev E.V Experimental evaluation of the effectiveness of adipogenic mesenchymal stem cells for the treatment of skin burns of the III degree / E.V. Zinoviev, V.N. Gypsy, M.S. Asadulaev, V.E. Yudin, R.G. Stoyanovsky, N.V. Smirnova, A.S. Shabunin, S.A. Lukyanov, T.A. Shalonia, D.V. Kostyakov. Bulletin of the Russian Military Medical Academy -2017.- No. 1.- ⁇ . 137-141. 6. Alekseev A.A.

Abstract

The invention relates to medicine, in particular to the development and application of a new pharmaceutical composition intended for optimizing the course of reparative regeneration processes in skin burns. Proposed is the use of a peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 as a regulatory, protective, normalizing, and anti-inflammatory agent for treating skin burn injuries. Proposed is a new composition of an anti-burn agent comprising an active substance in the form of said regulatory peptide (0.1-100 mg/L), a lightly crosslinked acrylic polymer Carbopol ETD 2020 (4.5 g/L), and the remainder being distilled water. The composition is highly effective at low doses of the regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 and is simple to use: it is used in the form of a hydrogel. The proposed pharmaceutical composition may be used in clinical practice to treat skin burn injuries.

Description

Фармацевтическая композиция, предназначенная для лечения ожоговых поражений кожи.A pharmaceutical composition for treating burn skin lesions.
Изобретение относится к медицине, а именно к разработке и применению нового фармацевтического средства, предназначенного для лечения ожоговых поражений кожи. Применение гидрогеля, содержащего регуляторный пептид Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2, является перспективным методом оптимизации течения процессов репаративной регенерации при ожогах кожи.The invention relates to medicine, namely to the development and use of a new pharmaceutical product intended for the treatment of burn skin lesions. The use of a hydrogel containing the regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 is a promising method for optimizing the course of the processes of reparative regeneration in case of skin burns.
Актуальность разработки препарата определяется тем, что ожоги являются одной из основных причин инвалидности взрослого и детского населения развитых стран, однако, проблема лечения таких пострадавших остается во многом не решенной (Информационный бюллетень ВОЗ, 2018). По данным Росстата в 2017 г. в Российской Федерации зарегистрировано 278,2 тысяч пациентов с диагнозом термический и химический ожог, при этом среди них 68,7 тысяч дети (Г.К.Оксенойт и др., 2017).
Современная тактика лечения ожоговых поражений является мультидисциплинарой и проводится с учетом особенностей патогенеза ожоговой болезни и её осложнений (А.А.Алексеев и др., 2002). Благодаря прогрессу медицинской науки внедрены патогенетически обоснованные методы антибактериальной терапии, иммунокоррекции местного лечения ран (А.А.Алексеев, 1999). Перспективным представляется разработка новых методов лечения поверхностных и глубоких ожоговых поражений биотехнологическими, в том числе клеточными продуктами, биополимерными раневыми покрытиями с живыми клетками - скаффолдами (Зиновьев и др., 2017, А.А.Алексеев и др., 2012).
Один из перспективных путей повышения эффективности лечения ожоговых поражений предусматривает использование ростовых стимуляторов и факторов регенерации, в частности, эпидермального, фибробластического, тромбоцитарных факторов роста: тромбоцитарный фактор роста (PDGFA+B), инсулиноподобные факторы роста (IGFI, II). Однако, в настоящий момент этот подход еще не привел к созданию лечебного средства для эффективной терапии ожоговых поражений.
Новым направлением в области создания эффективных и безопасных лекарственных средств регуляторного, протекторного, нормализующего, противоопухолевого и противовоспалительного действия является создание фармацевтических средств на основе эндогенных регуляторных пептидов, высокоэффективных и обладающих низкой токсичностью. Примером такого регуляторного пептида является пептид общей формулы Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg, обладающий противоопухолевой, протекторной и нормализующей активностью. Регуляторная активность пептида, согласно патенту РФ № 2213747, показана при индуцировании дифференциации и ингибировании пролиферации клеток раковых образований (Патент Российской Федерации на изобретение № 2213747 от 10.10.2003 г.). Патент РФ № № 2557003 на амидную форму этого регуляторного пептида Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 предлагает его в качестве нейропротекторного и ноотропного средства, направленного на профилактику и лечение болезни Альцгеймера и ишемического инсульта (Патент Российской Федерации на изобретение № 2557003 от 22.06.2015 г.). Известен также патент на использование регуляторного гексапептида Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 в качестве анксиолитического средства, направленного на профилактику и лечение тревожных расстройств (Патент Российской Федерации на изобретение № 2580311 от 14.03.2016 г.).
Предложенный в качестве фармацевтической композиции для терапии ожогов регуляторный пептид Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2, строение которого соответствует фрагменту 41TGENHR46 фактора дифференциации, присутствует в крови и ЦНС млекопитающих (Sewell и др., 2005). Известно, что регуляторный пептид Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 оказывает протекторное действие на клетки гиппокампа мозга, защищая их от деградации вызванной токсическим действием амилоидного пептида (Костанян и др., 2006). Ранее, при исследовании механизма фармакологического действия регуляторного пептида было показано что, NMDA-рецепторы являются функциональной мишенью специфического фармакологического эффекта регуляторного пептида Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 (Zolotarev и др., 2016). Специфическая нейропротекторная активность регуляторного пептида также связана со стимуляцией нейростероидогенеза, подавлением экспрессии 5-альфа редуктазы и восстановлением уровней стероидов при патологии практически до нормы (Rzhevsky и др., 2005). Протекторное и ноотропное действие регуляторного пептида на модели болезни Альцгеймера выражается в практически полном восстановлении памяти в результате его хронического применения (Bogachouk и др., 2016). Особенностью действия регуляторного пептида Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 является то, что он оказывает нормализующее действие при патологии, в то время как на контрольных животных не оказывает отрицательного воздействия даже в дозе в сотни раз превышающей терапевтическую (Липкин и др., 2016).
Установлено, что регуляторный пептид Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg полностью сохраняет дифференцирующую активность полноразмерного фактора индуцировать дифференцировку и ингибировать пролиферацию клеток, в том числе HL-60 (Костанян и др., 2000). Кроме этого, регуляторный пептид обладает способностью взаимодействовать с липидами клеточных мембран, что сказывается на активности цитокинов, задействованных в пролиферации и дифференцировке клеток по гранулоцитарному пути (Сысоева и др., 2009). Было показано, что регуляторный пептид Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg усиливает окислительно-восстановительные процессы в клетках и повышает метаболическую активность макрофагов (Даниленко и др., 2005).The relevance of the development of the drug is determined by the fact that burns are one of the main causes of disability for the adult and children of developed countries, however, the problem of treating such victims remains largely unresolved (WHO Newsletter, 2018). According to the Federal State Statistics Service, in 2017, 278.2 thousand patients with a diagnosis of thermal and chemical burns were registered in the Russian Federation, with 68.7 thousand children among them (G.K.Oksenoit et al., 2017).
The modern tactics of treating burn injuries is multidisciplinary and is carried out taking into account the peculiarities of the pathogenesis of burn disease and its complications (A.A. Alekseev et al., 2002). Thanks to the progress of medical science, pathogenetically substantiated methods of antibacterial therapy and immunocorrection of local treatment of wounds have been introduced (A.A. Alekseev, 1999). It seems promising to develop new methods for treating superficial and deep burn injuries with biotechnological, including cellular products, biopolymer wound dressings with living cells - scaffolds (Zinoviev et al., 2017, A.A. Alekseev et al., 2012).
One of the promising ways to improve the treatment of burn injuries involves the use of growth stimulants and regeneration factors, in particular, epidermal, fibroblastic, platelet growth factors: platelet growth factor (PDGFA + B), insulin-like growth factors (IGFI, II). However, at the moment, this approach has not yet led to the creation of a therapeutic agent for the effective treatment of burn lesions.
A new direction in the field of creating effective and safe drugs of regulatory, protective, normalizing, antitumor and anti-inflammatory effects is the creation of pharmaceuticals based on endogenous regulatory peptides that are highly effective and have low toxicity. An example of such a regulatory peptide is a peptide of the general formula Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg having antitumor, protective and normalizing activity. The regulatory activity of the peptide, according to the patent of the Russian Federation No. 2213747, is shown when inducing differentiation and inhibition of proliferation of cancer cells (Patent of the Russian Federation for the invention No. 2213747 from 10.10.2003). The RF patent No. 2557003 for the amide form of this regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 offers it as a neuroprotective and nootropic agent aimed at the prevention and treatment of Alzheimer's disease and ischemic stroke (Patent of the Russian Federation for the invention No. 2557003 dated 06/22/2015). A patent is also known for the use of the regulatory hexapeptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 as an anxiolytic agent for the prevention and treatment of anxiety disorders (Patent of the Russian Federation for the invention No. 2580311 of 03/14/2016).
The regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 , proposed as a pharmaceutical composition for treating burns, whose structure corresponds to the differentiation factor fragment 41TGENHR46, is present in the blood and central nervous system of mammals (Sewell et al., 2005). The regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 is known to have a protective effect on brain hippocampal cells, protecting them from degradation caused by the toxic effect of the amyloid peptide (Kostanyan et al., 2006). Previously, when studying the mechanism of the pharmacological action of the regulatory peptide, it was shown that NMDA receptors are a functional target for the specific pharmacological effect of the regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 (Zolotarev et al., 2016). The specific neuroprotective activity of the regulatory peptide is also associated with stimulation of neurosteroidogenesis, inhibition of 5-alpha reductase expression and restoration of steroid levels in pathology almost to the norm (Rzhevsky et al., 2005). The protective and nootropic effects of the regulatory peptide on the model of Alzheimer's disease are expressed in the almost complete restoration of memory as a result of its chronic use (Bogachouk et al., 2016). A feature of the action of the regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 is that it has a normalizing effect on pathology, while on control animals it does not adversely affect even at a dose hundreds of times higher than the therapeutic one (Lipkin et al., 2016).
It was established that the regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg fully retains the differentiating activity of the full-sized factor to induce differentiation and inhibit cell proliferation, including HL-60 (Kostanyan et al., 2000). In addition, the regulatory peptide has the ability to interact with lipids of cell membranes, which affects the activity of cytokines involved in the proliferation and differentiation of cells along the granulocytic pathway (Sysoeva et al., 2009). It was shown that the regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg enhances redox processes in cells and increases the metabolic activity of macrophages (Danilenko et al., 2005).
Изобретение относится к медицине, в частности к разработке и применению новой фармацевтической композиции, предназначенной для оптимизации течения процессов репаративной регенерации при ожогах кожи. Предложено применение пептида Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 в качестве регуляторного, протекторного, нормализующего и противовоспалительного средства для лечения ожоговых поражений кожи. Предложен новый состав противоожогового средства, содержащий активное вещество в виде указанного регуляторного пептида (0,1-100 мг/л), редкосшитый акриловый полимер, Carbopol ETD 2020 (4,5 г/л), и вода дистиллированная - остальное. Состав высокоэффективен в низких дозах регуляторного пептида Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 и прост в применении: используется в виде гидрогеля. Предлагаемая фармацевтическая композиция может найти применение в клинической практике для лечения ожоговых поражений кожи.The invention relates to medicine, in particular to the development and use of a new pharmaceutical composition intended to optimize the course of reparative regeneration processes in case of skin burns. The use of the peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 as a regulatory, protective, normalizing and anti-inflammatory agent for the treatment of burn skin lesions is proposed. A new composition of the anti-burn agent is proposed containing the active substance in the form of the indicated regulatory peptide (0.1-100 mg / l), a rare cross-linked acrylic polymer, Carbopol ETD 2020 (4.5 g / l), and the rest is distilled water. The composition is highly effective in low doses of the regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 and is simple to use: it is used as a hydrogel. The proposed pharmaceutical composition may find application in clinical practice for the treatment of burn skin lesions.
Использование регуляторного пептида, Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2, в качестве лекарственного препарата противоожогового действия неизвестно. Таким образом, технической задачей данного изобретения является обнаружение у регуляторного пептида, Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2, обладающего противоопухолевой, нейропротекторной, ноотропной и анксиолитической активностью, противоожоговой активности, что и определит возможность его использования в низких концентрациях в качестве лекарственного препарата, в виде удобной для применения лекарственной формы (в составе гидрогеля) без нежелательных побочных эффектов с хорошей переносимостью.The use of the regulatory peptide, Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 , as an anti-burn drug is unknown. Thus, the technical task of this invention is the discovery of a regulatory peptide, Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 , which has antitumor, neuroprotective, nootropic and anxiolytic activity, anti-burn activity, which will determine the possibility of its use in low concentrations as a drug, in the form of a convenient dosage form (as part of a hydrogel) without undesirable side effects with good tolerance.
Вышеописанный технический результат достигается тем, что известный регуляторный пептид общей формулы: Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 применяется в качестве средства для терапии ожоговых поражений кожи в виде раствора в гидрогеле на основе Carbopol ETD 2020 (Technical Data Sheet, 2007).
В лекарственном составе противоожоговой фармацевтической композиции, содержащем активное вещество, растворенное в гидрогеле, в качестве активного компонента содержится регуляторный пептид Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 , а в качестве редкосшитого акрилового полимера, - Carbopol ETD 2020, и при следующем соотношении компонентов:
Регуляторный пептид Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 - 0,1-100 мг/л
Редкосшитый акриловый полимер, Carbopol ETD 2020, - 4,5 г/л
Вода дистиллированная - Остальное
Лекарственной форме присвоено название - Хеалинггель.The above technical result is achieved by the fact that the known regulatory peptide of the general formula: Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 is used as an agent for the treatment of burn skin lesions in the form of a solution in a hydrogel based on Carbopol ETD 2020 (Technical Data Sheet , 2007).
The pharmaceutical composition of the anti-burn pharmaceutical composition containing the active substance dissolved in the hydrogel contains the regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 as the active component, and Carbopol ETD 2020 as the rare cross-linked acrylic polymer, and in the following ratio of components:
Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 regulatory peptide 0.1-100 mg / L
Rare crosslinked acrylic polymer, Carbopol ETD 2020, - 4.5 g / l
Distilled Water - Else
The dosage form is given the name Healingel .
Применение регуляторного пептида Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 для лечения ожоговых поражений позволяет получить устойчивое течение процесса репаративной регенерации уже при небольших концентрациях пептида в гидрогеле без каких-либо нежелательных побочных эффектов. Выраженность противоожогового действия этого нового лекарственного препарата, которая происходит на фоне традиционной терапии тяжелых ожоговых повреждений, реализуется в виде ускорения процессов эпителизации ран к 28 суткам на 71,11% (p<0,01) и снижению частоты развития гнойных осложнений на 62,5% (p<0,05). Недельное применение регуляторного пептида, растворенного в гидрогеле в концентрации 0,1 мг/л для терапии ожоговых повреждений, возникших при термическом ожоге кожи III степени, позволило к 28 дню достичь сокращение исходной площади ран на 94,38%. Обработка этим фармацевтическим средством, привела к уменьшению площади раны 42% (до 0,90 см2), по сравнению с группой, в которой после ранней некрэктомии такой обработки не делали. Важным преимуществом этой фармацевтической композиции для лечения ожоговых повреждений кожи является то, что его применение позволяет полностью избежать нагноения ран, которое возникает у большинства животных после ранней некрэктомии ожоговых повреждений. При гистологическом исследовании биоптатов ран также установлено, что применение регуляторного пептида приводит к существенному улучшению характера ожоговых ран.
Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что применение регуляторного пептида Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2, растворенного в гидрогеле на основе Carbopol ETD 2020, может являться перспективным методом оптимизации течения процессов репаративной регенерации при ожогах кожи. The use of the regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 for the treatment of burn injuries allows one to obtain a stable course of the process of reparative regeneration even at low concentrations of the peptide in the hydrogel without any undesirable side effects. The severity of the anti-burn effect of this new drug, which occurs against the background of traditional therapy for severe burn injuries, is realized in the form of acceleration of wound epithelization by 28 days by 71.11% (p <0.01) and a decrease in the incidence of purulent complications by 62.5 % (p <0.05). The weekly use of the regulatory peptide, dissolved in a hydrogel at a concentration of 0.1 mg / l for the treatment of burn injuries caused by thermal burns of the skin of the III degree, made it possible to achieve a reduction of the initial wound area by 94.38% by day 28. Treatment with this pharmaceutical agent resulted in a reduction in the wound area of 42% (to 0.90 cm 2 ), compared with the group in which such treatment was not done after early necrectomy. An important advantage of this pharmaceutical composition for the treatment of skin burn injuries is that its use completely avoids the suppuration of wounds that occurs in most animals after an early necrectomy of burn injuries. A histological examination of biopsy wounds also found that the use of a regulatory peptide leads to a significant improvement in the nature of burn wounds.
Thus, the data obtained indicate that the use of the regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 dissolved in a hydrogel based on Carbopol ETD 2020 can be a promising method for optimizing the course of reparative regeneration during skin burns.
Изобретение иллюстрируют рисунки и таблица:The invention is illustrated in the figures and table:
Рис. 1. Группа №1 (HLDF-6, 100 мг/л), 14 сутки, массивная инфильтрация нейтрофильными лейкоцитами грануляционной ткани, фибрин на ее поверхности. Окраска гематоксилином, эозином, Х50. Fig. 1. Group No. 1 (HLDF-6, 100 mg / l), day 14, massive neutrophilic leukocyte infiltration of granulation tissue, fibrin on its surface. Stained with hematoxylin, eosin, X50.
Рис. 2. Среднее число микрососудов в грануляционной ткани. 1- 0,01%, 2 – 0,001%, 3 – 0,0001%, 4 – 0,00001%, 5 – гидрогель без пептида, 6 – некрэктомия. Fig. 2. The average number of microvessels in granulation tissue. 1 - 0.01%, 2 - 0.001%, 3 - 0.0001%, 4 - 0.00001%, 5 - hydrogel without a peptide, 6 - necrectomy.
Рис. 3. Группа №4 (HLDF-6 0,1 мг/л), 28 сутки, грубоволокнистая соединительная ткань с очаговой инфильтрацией лимфоцитами и макрофагами. Окраска гематоксилином эозином, Х100. Fig. 3. Group No. 4 (HLDF-6 0.1 mg / L), 28 days, coarse-fibrous connective tissue with focal lymphocyte and macrophage infiltration. Hematoxylin eosin stain, X100.
Рис. 4. Группа №6 (некрэктомия без лечения), 28 сутки, грануляционная ткань на дне дефекта. Окраска гематоксилином, эозином, Х150. Fig. 4. Group No. 6 (necrectomy without treatment), 28 days, granulation tissue at the bottom of the defect. Stained with hematoxylin, eosin, X150.
Результаты планиметрической оценки эффективности ранозаживляющего действия фармацевтического средства, содержащего раствор регуляторного пептида Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 (HLDF-6) в гидрогеле на основе Carbopol ETD 2020 после проведения некрэктомии.The results of a planimetric evaluation of the wound healing effect of a pharmaceutical product containing a solution of the regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 (HLDF-6) in a Carbopol ETD 2020 hydrogel after necrectomy.
Группы сравненияComparison groups Площадь раны в сроки (сутки), см2 The area of the wound in time (day), cm 2
7 7 14 14 21 21 28 28
11 HLDF-6 100 мг/лHLDF-6 100 mg / L 8,78±1,34 *, **8.78 ± 1.34 *, ** 3,78±1,49 *, **3.78 ± 1.49 *, ** 1,80±0,82 *, **1.80 ± 0.82 *, ** 0,91±1,02 *, **0.91 ± 1.02 *, **
22 HLDF-6 10 мг/лHLDF-6 10 mg / L 12,20±1,32 *, **12.20 ± 1.32 *, ** 10,29±1,46 *, **10.29 ± 1.46 *, ** 7,88±0,83 *, **7.88 ± 0.83 *, ** 4,09±1,02 *, **4.09 ± 1.02 *, **
33 HLDF-6 1 мг/лHLDF-6 1 mg / L 11,08±1,30 *, **11.08 ± 1.30 *, ** 9,13±1,46 *, **9.13 ± 1.46 *, ** 2,93±0,83 *, **2.93 ± 0.83 *, ** 1,39±1,03 *, **1.39 ± 1.03 *, **
44 HLDF-6 0,1 мг/лHLDF-6 0.1 mg / L 11,68±1,31 *, **11.68 ± 1.31 *, ** 6,24±1,47 *, **6.24 ± 1.47 *, ** 0,94±0,81 *, **0.94 ± 0.81 *, ** 0,90±1,00 *, **0.90 ± 1.00 *, **
55 Гидрогель без HLDF-6Hydrogel without HLDF-6 9,02±1,319.02 ± 1.31 4,63±1,474.63 ± 1.47 1,42±0,841.42 ± 0.84 1,13±1,011.13 ± 1.01
66 НекрэктомияNecrectomy 12,68±1,7912.68 ± 1.79 8,49±2,458.49 ± 2.45 3,00±0,143.00 ± 0.14 1,54±0,181.54 ± 0.18
Примечание: * - достоверно p<0,05 по сравнению с гидрогелем без HLDF-6; ** - достоверно p<0,2 по сравнению с группой, в которой выполнялась ранняя хирургическая некрэктомияNote: * - significantly p <0.05 compared with a hydrogel without HLDF-6; ** - significantly p <0.2 compared with the group in which an early surgical necrectomy was performed
Результаты планиметрической оценки эффективности ранозаживляющего действия фармацевтического средства, содержащего раствор регуляторного пептида Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 (HLDF-6) в гидрогеле на основе Carbopol ETD 2020 после проведения некрэктомии.The results of a planimetric evaluation of the wound healing effect of a pharmaceutical product containing a solution of the regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 (HLDF-6) in a Carbopol ETD 2020 hydrogel after necrectomy.
Изобретение иллюстрируют примеры.
Пример 1
Изучение влияния раствора регуляторного пептида Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 в гидрогеле на основе Carbopol ETD 2020, на эффективность местного лечения ожогов кожи.
В эксперименте участвовало 48 самцов крыс линии Wistar-Kyoto массой 230-250 гр. Все манипуляции выполнялись под общим ингаляционным наркозом в асептических условиях. Ожог воспроизводили по собственной оригинальной методике (рационализаторское предложение ВМедА им. С.М. Кирова №14287/1 от 19.01.2016). После подготовки операционного поля животное фиксировали к лабораторному столу. Площадь ожога 16 см2 (около 10% от площади тела). На депилированную кожу спины животного помещали датчик электротермопары мультиметра Electroline (Китай), которым определяли температуру кожи и металлической нагревательной пластины. Время экспозиции 10 с. при температуре на поверхности кожи 95-97ºС.
Фармацевтическую композицию для нанесения на раневую поверхность готовили растворением регуляторного пептида Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 в различных разведениях в гидрогеле на основе Carbopol ETD 2020 (0,45%). Гидрогель, содержащий регуляторный пептид Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2, ежедневно наносили на поверхность раны в течение 7 суток. Всем животным спустя 60 минут после ожога выполнялась некрэктомия до собственной фасции, края раны фиксировались к подлежащим тканям узловыми швами.
Животные были разделены на 6 групп по 8 животных в каждой с учетом концентрации пептида Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 в геле. Концентрация составляла: 100 мг/л, 10 мг/л, 1 мг/л, 0,1 мг/л и 0 мг/л в группах №1, №2, №3, №4, №5, соответственно. В группе активного контроля №6 выполнялась только ранняя хирургическая некрэктомия, без последующего лечения.
Оценку эффективности лечения выполняли ежедневно, осуществляли осмотр ран, отмечали характер отделяемого, а также оценку осложнений и летальные исходы. Планиметрическим методом Л. Н. Поповой определяли площадь ожога и вычисляли индекс заживления по следующей формуле:
Индекс заживления = (S-Sn)*100/S*T
где S – площадь ожога при предыдущем измерении, мм2; Sn – площадь ожога при данном измерении, мм2, Т – интервал между измерениями, сутки.
Установлено, что выполнение ранней хирургической некрэктомии в зоне глубокого ожога кожи, с последующим нанесением гидрогеля с регуляторным пептидом Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 (HLDF-6), сопровождалось достоверным сокращением площади раны, при этом величина показателей определялась концентрацией регуляторного пептида в гидрогеле (Таблица). В частности, на 28 сутки в группе №6 в которой выполнялась только некрэктомия на площадь раны 90,38% (до 1,54 см2), при этом нагноения ран наблюдались у 5 животных из 8. На это же время в группе №5, в которой рана после некрэктомии обрабатывалась только гидрогелем, обработка привела к уменьшению площади раны 27% (до 1,13 см2) по сравнению с группой №6 и нагноения ран наблюдались у 2 животных из 8. Наилучшие результаты были получены в группе №4, в которой рана после некрэктомии обрабатывалась гидрогелем, содержащим 0,1 мг/л регуляторного пептида Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2. Обработка фармацевтическим средством, содержащим регуляторный пептид привела к уменьшению площади раны 42% (до 0,90 см2) по сравнению с группой №6 и нагноения ран у животных удалось полностью избежать. Близкие результаты были получены в группе №1, в которой рана после некрэктомии обрабатывалась гидрогелем, содержащим 100 мг/л регуляторного пептида Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2. Обработка фармацевтическим средством, содержащим регуляторный пептид в этой концентрации привела к уменьшению площади раны на 41% (до 0,91 см2) по сравнению с группой №6 и нагноения ран наблюдалось у 1 животного из 8.
Пример 2
Изучение влияния раствора регуляторного пептида Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 в гидрогеле на основе Carbopol ETD 2020 при гистологическом исследовании биоптатов ран.
Отбор биоптатов для гистологического исследования осуществляли на 14 и 28 сутки, их фиксировали в 10% растворе формалина с последующей проводкой через спирты восходящей концентрации (30-96%) и заливкой в парафин. Гистологические срезы окрашивали гематоксиллином и эозином, исследовали методами световой микроскопии.
При гистологическом исследовании биоптатов ран установлено, что на 14 сутки наблюдения морфологическая картина в зоне ожога имела ряд особенностей с учетом выбора метода лечения. Послеоперационная рана в различных группах животных была различной площади, покрыта массами фибрина, густо инфильтрированного нейтрофильными лейкоцитами (Рис. 1).
Дно раневого дефекта представлено грануляционной тканью, распространяющейся вплоть до мышечной фасции. Макрофаги и нейтрофилы располагаются диффузно, наиболее густо инфильтрированы поверхностные слои. В прилежащих к фасции отделах отмечаются небольшие очаги инфильтрации лимфоцитами. В группе № 4 (HLDF-6 0,1 мг/л) смешанно-клеточная инфильтрация незначительно распространялась на окружающие ткани, в то время как в группах № 1 (HLDF-6 100 мг/л), №2 (HLDF-6 10 мг/л) и №3 (HLDF-6 1 мг/л) констатированы достаточно крупные очаги субэпидермальной лейкоцитарной инфильтрации. В группе № 5 (гидрогель без HLDF-6) нейтрофильные лейкоциты располагаются не только в дерме, но и самом эпидермисе, формируя немногочисленные микроабсцессы. Кроме того, в грануляционной ткани определяются многочисленные, пролиферирующие, полнокровные сосуды капиллярного типа. Количество микрососудов в грануляционной ткани в группах существенно различалось (Рис. 2).
На 28 сутки дно дефекта было представлено грубоволокнистой соединительной тканью с большим количеством крупных фибробластов (Рис. 3). В соединительной ткани сохраняется очаговая инфильтрация лимфоцитами и макрофагами. В группах №1 (HLDF-6 100 мг/л) и №4 (HLDF-6 0,1 мг/л) с незначительным числом нейтрофильных лейкоцитов, в то время как в группах № 2 (HLDF-6 10 мг/л) и 3 (HLDF-6 1 мг/л) их количество умеренное. В группе № 5 число нейтрофильных лейкоцитов так же умеренное, но в ряде наблюдений выявлены мелкие внутридермальные абсцессы. В группе № 5 (гидрогель без HLDF-6) лимфо-гистиоцитарная инфильтрация более выражена, очаги несколько крупнее, сливаются друг с другом. Кроме того, в группе № 5 лейкоцитарные инфильтраты распространяются на эпидермис по краям дефекта. Сосуды соединительной ткани представлены капиллярами и мелкими венулами. Эндотелиоциты этих сосудов крупные, пролиферирующие, с округлыми гиперхромными ядрами и скудной эозинофильной цитоплазмой.
В этот же срок в биоптатах отобранных у животных группы №6, перенесших раннюю хирургическую некрэктомию без местного лечения, в отличии от других групп, на дне дефекта располагался слой грануляционной ткани с крупноочаговой инфильтрацией, преимущественно нейтрофильными лейкоцитами (Рис. 4). Очаги локализовались непосредственно под фибринозным экссудатом, на поверхности дефекта. В отдельных участках отмечается формирование грубоволокнистой соединительной ткани с многочисленными достаточно крупными фибробластами. Сосуды в ткани на дне дефекта полнокровные, представлены множественными капиллярами и немногочисленными, мелкими венулами, с пролиферирующим эндотелием. Эпидермис по краям дефекта с выраженным акантозом, гиперкератозом и мелкоочаговой лейкоцитарной инфильтрацией.The invention is illustrated by examples.
Example 1
Study of the effect of a solution of the regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 in a hydrogel based on Carbopol ETD 2020 on the effectiveness of local treatment of skin burns.
The experiment involved 48 male rats of the Wistar-Kyoto strain weighing 230-250 g. All manipulations were performed under general inhalation anesthesia under aseptic conditions. The burn was reproduced according to our own original methodology (rationalization proposal of VMedA named after S.M. Kirov No. 14287/1 from 01/19/2016). After preparing the surgical field, the animal was fixed to the laboratory table. The burn area is 16 cm 2 (about 10% of body area). On the depilated skin of the back of the animal, an Electroline multimeter thermometer pair Electroline (China) was placed, which determined the temperature of the skin and the metal heating plate. Exposure time 10 s. at a temperature on the surface of the skin 95-97 º C.
A pharmaceutical composition for application to the wound surface was prepared by dissolving the Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 regulatory peptide in various dilutions in a Carbopol ETD 2020 based hydrogel (0.45%). A hydrogel containing the regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 was applied daily to the wound surface for 7 days. 60 minutes after the burn, all animals underwent necrectomy to their own fascia, the wound edges were fixed to the underlying tissues with interrupted sutures.
Animals were divided into 6 groups of 8 animals each, taking into account the concentration of the Thr-Gly-Glu-Asn-His-His-Arg-NH 2 peptide in the gel. The concentration was: 100 mg / l, 10 mg / l, 1 mg / l, 0.1 mg / l and 0 mg / l in groups No. 1, No. 2, No. 3, No. 4, No. 5, respectively. In the active control group No. 6, only early surgical necrectomy was performed, without subsequent treatment.
Evaluation of the effectiveness of treatment was performed daily, examination of the wounds was carried out, the nature of the discharge was noted, as well as an assessment of complications and deaths. The planimetric method of L. N. Popova determined the area of the burn and calculated the healing index according to the following formula:
Healing Index = (S-Sn) * 100 / S * T
where S is the burn area in the previous measurement, mm 2 ; Sn is the burn area for a given measurement, mm2, T is the interval between measurements, day.
It was found that the performance of early surgical necrectomy in the area of a deep skin burn, followed by the application of a hydrogel with the regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 (HLDF-6), was accompanied by a significant reduction in the area of the wound, while the magnitude of the indicators was determined by the concentration of the regulatory peptide in the hydrogel (Table). In particular, on day 28 in group No. 6 in which only necrectomy was performed on the wound area of 90.38% (up to 1.54 cm 2 ), while suppuration of wounds was observed in 5 animals out of 8. At the same time in group No. 5 in which the wound after necrectomy was treated only with hydrogel, the treatment reduced the wound area by 27% (to 1.13 cm 2 ) compared to group 6 and suppuration of the wounds was observed in 2 of 8 animals. The best results were obtained in group 4 in which the wound after necrectomy was treated with a hydrogel containing 0.1 mg / L of the regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg -NH 2 . Treatment with a pharmaceutical agent containing a regulatory peptide resulted in a decrease in the wound area of 42% (to 0.90 cm 2 ) compared with group No. 6 and suppuration of wounds in animals was completely avoided. Close results were obtained in group No. 1, in which the wound after necrectomy was treated with a hydrogel containing 100 mg / L of the regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 . Treatment with a pharmaceutical agent containing a regulatory peptide at this concentration led to a decrease in the area of the wound by 41% (to 0.91 cm 2 ) compared with group No. 6 and suppuration of wounds was observed in 1 animal out of 8.
Example 2
Studying the effect of a solution of the regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 in a hydrogel based on Carbopol ETD 2020 in a histological study of wound biopsies.
Biological samples for histological examination were selected on days 14 and 28; they were fixed in 10% formalin solution, followed by passing through ascending alcohols (30-96%) and filling them with paraffin. Histological sections were stained with hematoxillin and eosin, examined by light microscopy.
A histological examination of wound biopsy samples revealed that on the 14th day of observation, the morphological picture in the burn zone had a number of features, taking into account the choice of treatment method. The postoperative wound in various groups of animals was of various sizes, covered with masses of fibrin, densely infiltrated with neutrophilic leukocytes (Fig. 1).
The bottom of the wound defect is represented by granulation tissue that extends up to the muscle fascia. Macrophages and neutrophils are located diffusely; surface layers are most densely infiltrated. In the areas adjacent to the fascia, small foci of lymphocyte infiltration are noted. In group No. 4 (HLDF-6 0.1 mg / L), mixed-cell infiltration slightly spread to the surrounding tissues, while in group No. 1 (HLDF-6 100 mg / L), No. 2 (HLDF-6 10 mg / l) and No. 3 (HLDF-6 1 mg / l), quite large foci of subepidermal leukocyte infiltration were detected. In group No. 5 (hydrogel without HLDF-6), neutrophilic leukocytes are located not only in the dermis, but also in the epidermis itself, forming a few microabscesses. In addition, in the granulation tissue, numerous, proliferating, full-blooded vessels of the capillary type are determined. The number of microvessels in granulation tissue in the groups varied significantly (Fig. 2).
On day 28, the bottom of the defect was represented by coarse-fibrous connective tissue with a large number of large fibroblasts (Fig. 3). Focal infiltration by lymphocytes and macrophages is preserved in the connective tissue. In groups No. 1 (HLDF-6 100 mg / L) and No. 4 (HLDF-6 0.1 mg / L) with a small number of neutrophilic leukocytes, while in groups No. 2 (HLDF-6 10 mg / L) and 3 (HLDF-6 1 mg / L) their amount is moderate. In group No. 5, the number of neutrophilic leukocytes is also moderate, but in a number of observations small intradermal abscesses were revealed. In group No. 5 (hydrogel without HLDF-6), lymphohistiocytic infiltration is more pronounced, foci are somewhat larger, merge with each other. In addition, in group No. 5, leukocyte infiltrates spread to the epidermis along the edges of the defect. The vessels of the connective tissue are represented by capillaries and small venules. The endothelial cells of these vessels are large, proliferating, with rounded hyperchromic nuclei and scanty eosinophilic cytoplasm.
At the same time, in biopsy samples taken from animals of group No. 6 that underwent early surgical necrectomy without local treatment, unlike other groups, a layer of granulation tissue with large focal infiltration, mainly neutrophilic leukocytes, was located at the bottom of the defect (Fig. 4). The foci were localized directly under the fibrinous exudate, on the surface of the defect. In some areas, the formation of coarse-fibrous connective tissue with numerous fairly large fibroblasts is noted. The vessels in the tissue at the bottom of the defect are full-blooded, represented by multiple capillaries and a few, small venules, with proliferating endothelium. The epidermis along the edges of the defect with severe acanthosis, hyperkeratosis and small focal leukocyte infiltration.
1.Информационный бюллетень ВОЗ.-2018. (http://www.who.int/ru/news-room/fact-sheets/detail/burns).
2. Оксенойт Г.К. Здравоохранение в России. 2017 / Г.К. Оксенойт, С.Ю. Никитина [и др.] //Здравоохранение в России. 2017: Стат.сб. /Росстат. – М., 2017. –С. 49.
3. Алексеев А.А. Современные технологии местного консервативного лечения пострадавших от ожогов / А.А. Алексеев, А.Э. Бобровников // Анналы хирургии -2002.-№ 2.-С.32-38.
4. Алексеев, А.А. Современные методы лечения ожогов и ожоговой болезни / А.А. Алексеев // Мир без ожогов. -1999.- № 1.
5. Зиновьев Е.В. Экспериментальная оценка эффективности применения адипогенных мезенхимальных стволовых клеток для лечения ожогов кожи III степени / Е.В. Зиновьев, В.Н. Цыган, М.С. Асадулаев, В.Е. Юдин, Р.Г. Стояновский, Н.В. Смирнова, А.С. Шабунин, С.А. Лукьянов, Т.А. Шалоня, Д.В. Костяков. Вестник российской военно-медицинской академии -2017.- № 1.-С. 137-141.
6. Алексеев А.А. Комплексное лечение глубоких ожогов на основе применения хирургической некрэктомии и современных биотехнологических методов / А.А. Алексеев, К.З. Салахиддинов, Б.К. Гаврилюк, Ю.И. Тюрников // Анналы хирургии -2012.-№ 6-С.41-45.
7. Патент Российской Федерации «Пептид, обладающий противоопухолевой, протекторной и нормализующей активностью, и фармацевтическая композиция», № 2213747, 10.10.2003 г.
8. Патент Российской Федерации «Пептид, обладающий нейропротекторной и ноотропной активностью, и фармацевтическая композиция на его основе», № 2557003, 22 июня 2015 г.
9. Патент Российской Федерации «Анксиолитическое средство и фармацевтическая композиция анксиолитического действия», № 2580311, 14 марта 2016.
10. Technical Data Sheet. TDS - 187. Labrizol Advanced Materials Inc. 2007
11. Sewell R.D., Gruden M.A., Pache D.M., Storozheva Z.I., Kostanyan I.A., Proshin A.T., Yurashev V.V., Sherstnev V.V. Does the human leukaemia differentiation factor fragment HLDF6 improve memory via brain DNA and protein synthesis? // J. Psychopharmacol. 2005. V. 19. № 6. P. 602–608.
12. Костанян И.А., Жохов С.С., Сторожева З.И., Прошин А.Т., Сурина Е.А., Бабиченко И.И., Шерстнев В.В., Липкин В.М. Нейропротекторное действие гексапептида HLDF-6 на нейроны гиппокампа крыс на модели болезни Альцгеймера in vitro и in vivo.// Биоорган. химия. 2006. Т. 32. № 4. С. 399–407.
13. Yu.A. Zolotarev, G.I. Kovalev, N.V. Kost, M.E. Voevodina, O.Y. Sokolov, A.K. Dadayan, E.A. Kondrakhin, E.V. Vasileva, A.P. Bogachuk, V.N. Azev,V.M. Lipkin and N.F. Myasoedov Anxiolytic activity of the neuroprotective peptide HLDF-6 and its effects on brain neurotransmitter systems in BALB/c and C57BL/6 mice J. Psychopharmacol., 2016, 30 (9), 922–935.
14. Rzhevsky DI, Zhokhov SS, Babichenko II, et al. (2005) HLDF-6 peptide affects behavioural reactions and organism functions dependent on androgen hormones in normal and castrated male mice. Regul Peptides 127: 111–121.
15. Bogachouk А.P., Storozheva Z.I., Solovjeva O.A., Sherstnev V.V., Zolotarev Yu.A., Azev V.N., Rodionov I.L., Surina E.A. and Lipkin V.M. Comparative study of the neuroprotective and nootropic activities of the carboxylate and amide forms of the HLDF-6 peptide in animal models of Alzheimer’s disease. J. Psychopharmacol., 2016, 30 (1), 78–92.
16. Липкин В.М., Золотарев Ю.А., Азев В.Н., Ржевский Д.И., Телегин Г.Б., Сторожева З.И., Ковалев Г.И., Мурашев А.Н., Богачук А.П. Разработка нового нейропротектора на основе пептида HLDF-6. «Информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии»: Материалы Международной конференции IT + M&Ec`2016 (Гурзуф, с 02 по 12 июня 2016 г.). 2016. С. 89-99.
17. Костанян И.А. Биологически активный фрагмент фактора дифференцировки клеток линии HL-60. Идентификация и свойства/ И.А. Костанян, М.В. Астапова, Е.В. Новолотская, Т.Н. Лепихова, С.М. Драницына, Г.В. Телегин, И.Л. Родионов, Л.К. Байдакова, Ю.А. Золотарев, И.М. Молотковская, В.М. Липкин //Биоорган. хим. – 2000. – Т. 26. –№7. – С. 505-511.
18. Сысоева Г.М. Влияние пептида HLDF-6 на пролиферативную активность спленоцитов в культуре клеток на фоне введения агонистов опиатных рецепторов / Г.М. Сысоева, Е.Д. Даниленко, В.И. Масычева, В.В. Самуков, И.А. Костанян // Сибирский медицинский журнал (Томск) -2009.-№ 4-С.55-59.
19. Даниленко Е.Д. Модуляция пептидом HLDF-6 функциональной активности макрофагов на фоне введения агонистов опиатных рецепторов / Е.Д. Даниленко, В.А. Фадина, В.И. Масычева, В.В. Самуков, И.А. Костанян // Медицинская иммунология -2005.-№ 1.-С.77-84.1. WHO Newsletter 2018. (http://www.who.int/en/news-room/fact-sheets/detail/burns).
2. Oksenoit G.K. Health care in Russia. 2017 / G.K. Oksenoit, S.Yu. Nikitina [et al.] // Healthcare in Russia. 2017: Stat. / Rosstat. - M., 2017. –S. 49.
3. Alekseev A.A. Modern technologies of local conservative treatment of burn victims / A.A. Alekseev, A.E. Bobrovnikov // Annals of Surgery -2002.-№ 2.-С.32-38.
4. Alekseev, A.A. Modern methods of treatment of burns and burn disease / A.A. Alekseev // World without burns. -1999.- No. 1.
5. Zinoviev E.V. Experimental evaluation of the effectiveness of adipogenic mesenchymal stem cells for the treatment of skin burns of the III degree / E.V. Zinoviev, V.N. Gypsy, M.S. Asadulaev, V.E. Yudin, R.G. Stoyanovsky, N.V. Smirnova, A.S. Shabunin, S.A. Lukyanov, T.A. Shalonia, D.V. Kostyakov. Bulletin of the Russian Military Medical Academy -2017.- No. 1.- С. 137-141.
6. Alekseev A.A. Comprehensive treatment of deep burns based on the use of surgical necrectomy and modern biotechnological methods / A.A. Alekseev, K.Z. Salahiddinov, B.K. Gavrilyuk, Yu.I. Turnikov // Annals of Surgery -2012.-No. 6-C.41-45.
7. Patent of the Russian Federation “Peptide with antitumor, protective and normalizing activity, and pharmaceutical composition”, No. 2213747, 10.10.2003
8. Patent of the Russian Federation “Peptide with neuroprotective and nootropic activity, and pharmaceutical composition based on it”, No. 2557003, June 22, 2015
9. Patent of the Russian Federation “Anxiolytic agent and pharmaceutical composition of anxiolytic action”, No. 2580311, March 14, 2016.
10. Technical Data Sheet. TDS - 187. Labrizol Advanced Materials Inc. 2007
11. Sewell RD, Gruden MA, Pache DM, Storozheva ZI, Kostanyan IA, Proshin AT, Yurashev VV, Sherstnev VV Does the human leukaemia differentiation factor fragment HLDF6 improve memory via brain DNA and protein synthesis? // J. Psychopharmacol. 2005. V. 19. No. 6. P. 602-608.
12. Kostanyan I.A., Zhokhov S.S., Storozheva Z.I., Proshin A.T., Surina E.A., Babichenko I.I., Sherstnev V.V., Lipkin V.M. The neuroprotective effect of hexapeptide HLDF-6 on rat hippocampal neurons in an in vitro and in vivo model of Alzheimer's disease // Bioorgan. chemistry. 2006. V. 32. No. 4. P. 399–407.
13. Yu.A. Zolotarev, GI Kovalev, NV Kost, ME Voevodina, OY Sokolov, AK Dadayan, EA Kondrakhin, EV Vasileva, AP Bogachuk, VN Azev, VM Lipkin and NF Myasoedov Anxiolytic activity of the neuroprotective peptide HLDF-6 and its effects on brain effects in BALB / c and C57BL / 6 mice J. Psychopharmacol., 2016, 30 (9), 922–935.
14. Rzhevsky DI, Zhokhov SS, Babichenko II, et al. (2005) HLDF-6 peptide affects behavioral reactions and organism functions dependent on androgen hormones in normal and castrated male mice. Regul Peptides 127: 111–121.
15. Bogachouk A.P., Storozheva ZI, Solovjeva OA, Sherstnev VV, Zolotarev Yu.A., Azev VN, Rodionov IL, Surina EA and Lipkin VM Comparative study of the neuroprotective and nootropic activities of the carboxylate and amide forms of the HLDF-6 peptide in animal models of Alzheimer's disease. J. Psychopharmacol., 2016, 30 (1), 78–92.
16. Lipkin V.M., Zolotarev Yu.A., Azev V.N., Rzhevsky D.I., Telegin G.B., Storozheva Z.I., Kovalev G.I., Murashev A.N., Bogachuk A.P. Development of a new neuroprotective agent based on the HLDF-6 peptide. "Information Technologies in Medicine, Biology, Pharmacology and Ecology": Materials of the International Conference IT + M & Ec`2016 (Gurzuf, from 02 to 12 June 2016). 2016.S. 89-99.
17. Kostanyan I.A. A biologically active fragment of the HL-60 cell differentiation factor. Identification and properties / I.A. Kostanyan, M.V. Astapova, E.V. Novolotskaya, T.N. Lepikhova, S.M. Dranitsyna, G.V. Telegin, I.L. Rodionov, L.K. Baydakova, Yu.A. Zolotarev, I.M. Molotkovskaya, V.M. Lipkin // Bioorgan. Chem. - 2000. - T. 26. –№7. - S. 505-511.
18. Sysoeva G.M. The effect of the peptide HLDF-6 on the proliferative activity of splenocytes in cell culture on the background of the introduction of opiate receptor agonists / G.M. Sysoeva, E.D. Danilenko, V.I. Masycheva, V.V. Samukov, I.A. Kostanyan // Siberian Medical Journal (Tomsk) -2009. No. 4-S.55-59.
19. Danilenko E.D. Modulation of the functional activity of macrophages by the peptide HLDF-6 against the background of the administration of opiate receptor agonists / E.D. Danilenko, V.A. Fadina, V.I. Masycheva, V.V. Samukov, I.A. Kostanyan // Medical Immunology -2005.-No 1.-P.77-84.

Claims (2)

  1. Применение регуляторного пептида Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 в качестве средства для лечения ожоговых повреждений кожи.The use of the regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 as an agent for the treatment of burn skin lesions.
  2. Фармацевтическая композиция для лечения ожоговых повреждений кожи, содержащая активное вещество, гидрогель и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что в качестве активного вещества содержит регуляторный пептид формулы Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2, а в качестве носителя – гидрогель на основе Carbopol ETD 2020 при следующих соотношениях компонентов:
    Регуляторный пептид Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 - 0,1-100 мг/л.
    Гидрогель на основе Carbopol ETD 2020 - 4,5 г/л.
    Вода дистиллированная – Остальное.    A pharmaceutical composition for treating skin burn injuries comprising an active substance, a hydrogel and distilled water, characterized in that the active substance contains a regulatory peptide of the formula Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 , and the carrier is a hydrogel based on Carbopol ETD 2020 with the following component ratios:
    The regulatory peptide Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 is 0.1-100 mg / L.
    Hydrogel based on Carbopol ETD 2020 - 4.5 g / l.
    Distilled water - The rest.
PCT/RU2019/050120 2018-08-01 2019-07-26 Pharmaceutical composition intended for treating skin burn injuries WO2020027701A1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FI20215223A FI129856B (en) 2018-08-01 2019-07-26 Pharmaceutical composition for the treatment of skin burn lesions

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018128188A RU2704621C1 (en) 2018-08-01 2018-08-01 Pharmaceutical composition for treating burn skin lesions
RU2018128188 2018-08-01

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2020027701A1 true WO2020027701A1 (en) 2020-02-06

Family

ID=68500675

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2019/050120 WO2020027701A1 (en) 2018-08-01 2019-07-26 Pharmaceutical composition intended for treating skin burn injuries

Country Status (3)

Country Link
FI (1) FI129856B (en)
RU (1) RU2704621C1 (en)
WO (1) WO2020027701A1 (en)

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2065445C1 (en) * 1994-06-23 1996-08-20 Институт биоорганической химии им. М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН Peptides showing regenerative-reparative action
RU2070054C1 (en) * 1993-05-21 1996-12-10 Марина Геннадьевна Маклецова Agent for burn disease treatment
RU2196603C2 (en) * 2000-03-09 2003-01-20 Красноярская государственная медицинская академия Method for treating the cases of burning disease
RU2213747C2 (en) * 1999-03-11 2003-10-10 Институт биоорганической химии им. акад. М.М.Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН Peptide eliciting antitumor, protective and normalizing activity and pharmaceutical composition
RU2557003C2 (en) * 2014-07-25 2015-07-20 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН) Peptide having neuroprotective and nootropic activity and pharmaceutical composition based thereon

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2070054C1 (en) * 1993-05-21 1996-12-10 Марина Геннадьевна Маклецова Agent for burn disease treatment
RU2065445C1 (en) * 1994-06-23 1996-08-20 Институт биоорганической химии им. М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН Peptides showing regenerative-reparative action
RU2213747C2 (en) * 1999-03-11 2003-10-10 Институт биоорганической химии им. акад. М.М.Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН Peptide eliciting antitumor, protective and normalizing activity and pharmaceutical composition
RU2196603C2 (en) * 2000-03-09 2003-01-20 Красноярская государственная медицинская академия Method for treating the cases of burning disease
RU2557003C2 (en) * 2014-07-25 2015-07-20 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН) Peptide having neuroprotective and nootropic activity and pharmaceutical composition based thereon

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MASHKOVSKY M.D: "Dekspantenol", NOVAYA VOLNA, 2012, pages 627 *

Also Published As

Publication number Publication date
RU2704621C1 (en) 2019-10-30
FI20215223A1 (en) 2021-03-01
FI129856B (en) 2022-09-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Burnstock et al. Purinergic signaling in healthy and diseased skin
Meng et al. Inhibition of the NLRP3 inflammasome provides neuroprotection in rats following amygdala kindling-induced status epilepticus
Liu et al. MicroRNA-129-5p inhibits the development of autoimmune encephalomyelitis-related epilepsy by targeting HMGB1 through the TLR4/NF-kB signaling pathway
Zhou et al. Palmitic acid induces production of proinflammatory cytokines interleukin-6, interleukin-1, and tumor necrosis factor-via a NF-B-dependent mechanism in HaCaT keratinocytes
Cheng et al. The OGF–OGFr axis utilizes the p16INK4a and p21WAF1/CIP1 pathways to restrict normal cell proliferation
Maier et al. The dorsal raphe nucleus is a site of action mediating the behavioral effects of the benzodiazepine receptor inverse agonist DMCM.
Xiong et al. Secreted amyloid precursor protein-alpha can restore novel object location memory and hippocampal LTP in aged rats
Sun et al. A novel cognitive impairment mechanism that astrocytic p-connexin 43 promotes neuronic autophagy via activation of P2X7R and down-regulation of GLT-1 expression in the hippocampus following traumatic brain injury in rats
Ackermann et al. Priming with proangiogenic growth factors and endothelial progenitor cells improves revascularization in linear diabetic wounds
Fan et al. Induction of suppressor of cytokine signaling 3 via HSF-1-HSP70-TLR4 axis attenuates neuroinflammation and ameliorates postoperative pain
Kong et al. Ketone metabolite β-hydroxybutyrate ameliorates inflammation after spinal cord injury by inhibiting the NLRP3 inflammasome
Zheng et al. The effect of topical ramipril and losartan cream in inhibiting scar formation
Zhang et al. Transforming growth factor‐β1 mediates psoriasis‐like lesions via a Smad3‐dependent mechanism in mice
UA121222C2 (en) Compositions and methods for treatment of pre-cancerous skin lesions
Ding et al. Advanced oxidative protein products cause pain hypersensitivity in rats by inducing dorsal root ganglion neurons apoptosis via NADPH oxidase 4/c-Jun N-terminal kinase pathways
Niezgoda et al. The evaluation of vitiligous lesions repigmentation after the administration of atorvastatin calcium salt and simvastatin-acid sodium salt in patients with active vitiligo (EVRAAS), a pilot study: study protocol for a randomized controlled trial
Powell et al. Inhibiting endocytosis in CGRP+ nociceptors attenuates inflammatory pain-like behavior
Liu et al. A novel nitric oxide-releasing gel for diabetic wounds
Huang et al. Zizhu ointment accelerates wound-healing of diabetic ulcers through promoting M2 macrophage polarization via downregulating the Notch4 signaling pathway
Sun et al. Effects of nanoparticle‑mediated delivery of pitavastatin on atherosclerotic plaques in ApoE‑knockout mice and THP‑1‑derived macrophages
Li et al. Levomilnacipran ameliorates lipopolysaccharide-induced depression-like behaviors and suppressed the TLR4/Ras signaling pathway
Saad et al. Thioredoxin-1 augments wound healing and promote angiogenesis in a murine ischemic full-thickness wound model
RU2704621C1 (en) Pharmaceutical composition for treating burn skin lesions
Li et al. The neuroprotective mechanism of spinal cord stimulation in spinal cord ischemia/reperfusion injury
US20210213137A1 (en) Compositions to treat ultraviolet (uv)-induced skin injury

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 19845175

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

32PN Ep: public notification in the ep bulletin as address of the adressee cannot be established

Free format text: NOTING OF LOSS OF RIGHTS PURSUANT TO RULE 112(1) EPC (EPO FORM 1205A DATED 01/06/2021)

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 19845175

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1